KR20240057227A - 유산균 복합 균주를 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 조성물 - Google Patents

유산균 복합 균주를 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선의 활성을 나타내는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 3종 균주, 그 배양액, 또는 이들의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 세포 독성이 없고, 피부 미백에 우수한 효과가 있으며, 피부 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에도 우수한 효과가 있으므로 화장품과 식품 분야에서 유용하게 이용 가능하다.
또한, 본 발명의 조성물은 인체에 매우 안전할 뿐만 아니라, 안정성도 매우 탁월하다.

Description

유산균 복합 균주를 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 조성물{Composition with Skin Whitening, Moisturizing, Barrier Strengthening, Exfoliating, and Itch Improvement Property Comprising Complex Strain of Lactobacillus sp. as Active Ingredient}
본 발명은 유산균 복합 균주를 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 조성물에 관한 것이다.
생물체의 항상성(homeostasis)을 유지하는 과정에서 중요한 역할을 담당하고 있는 물질 중 일부가 각종 생물체 유래의 생리 활성 물질이다. 지금까지 수많은 생리 활성 물질에 관해 많은 연구가 진행되고 있으며, 그 중, 미생물, 식물, 또는 동물체 등에서 분리된 생리 활성을 갖는 물질에 관한 연구는 생명과학 및 의학 분야에서 매우 중요한 영역이다.
피부 탄력 증진, 미백, 항산화 등에 효과가 있는 것으로 알려진 물질로, 종래 개발된 비타민C, 레티노익산, 형질전환생장인자(transforming growth factor, TGF) 등이 있다. 그러나, 비타민C, 레티노익산, 형질전환생장인자(transforming growth factor, TGF), 동물태반 유래의 단백질(JP 1996-231370A), 베툴린산(betulinic acid, JP 1996-208424A), 클로렐라 추출물(JP 2001-072567A) 등의 소재들은 피부에 적용할 때 발생하는 자극과 발적 등의 안전성 문제로 사용량에 제한이 있거나, 그 효과가 미미하여 실질적으로 피부에 효과를 기대할 수 없다는 문제점이 있었다.
또한, 최근에는 천연물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질을 화장료에 도입하여 피부 자체의 고유 방어 기능을 더욱 강화함으로써 피부에 작용하는 기능성을 증가시키는 화장품의 개발이 활발하게 진행되는 추세이며, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 피부 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증에 효과가 있는 물질보다 효과가 더욱 우수한 천연소재의 개발이 절실히 요망되고 있다.
한편, 화장품 소재는 안전성, 효능, 물성 등이 균형을 이루어야 한다. 또한, 경제성 확보도 중요한 요인으로서 화장품용 소재는 다양한 개발 방법, 천연물 추출과 미생물 등에 의한 발효를 이용하여 피부 투과, 노화 억제, 생리활성, 안전성 및 물성을 최적화하여 개발하게 된다. 또한, 화장품과 식품 및 의약품의 경계가 무너지면서 화장품의 안정성과 의약품, 건강기능식품 등의 효과성을 겸비한 복합 기능성 원료 및 바이오 소재를 통해 다양한 코스메슈티컬 제품들이 높은 성장세를 이어가고 있다.
이러한 배경 아래에서, 본 발명자들은 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선 등 피부 상태 개선에 우수한 효과를 나타내는 유산균 소재들의 조합에 관하여 연구를 수행하였으며, 다양한 피부 상태 개선 효과를 나타내는 유산균의 조합을 찾기 위해 예의 연구노력한 결과, 콩 또는 김치 등 식품에서 분리 동정된 3종 균주의 조합이 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에 우수한 활성을 나타내어 피부 상태 개선의 목적으로도 유용하게 활용될 수 있음을 확인하고, 본　발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에 활성을 나타내는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 3종 균주, 그 배양액, 또는 이들의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 여러 가지 천연물질들을 대상으로 피부상태 개선의 효과를 탐색하였고, 다양한 식품류에서 유래한 유산균 소재들의 피부 상태 개선 효과에 주목하여 우수한 유산균 소재들의 조합을 발굴하고자 연구노력하였다. 그 결과, 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 3종 복합 균주의 배양액 및 이의 추출물이 피부 미백에 시너지 효과를 나타내는 동시에 피부 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에도 우수한 효과가 있음을 입증하였으며, 피부에 적용 시에도 안전성에 문제가 없음을 확인하고(도 1 참조), 본 발명을 완성하였다.
또한, 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY 균주는 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국생명공학연구원(KCTC)에 국제기탁하여 수탁번호 KCTC 15085BP를 부여받았고, 상기 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 균주는 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국생명공학연구원(KCTC)에 국제기탁하여 수탁번호 KCTC 15099BP를 부여받았으며, 상기 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC 균주는 부다페스트 조약 하의 국제기탁기관인 한국생명공학연구원(KCTC)에 국제기탁하여 수탁번호 KCTC 15084BP를 부여받았다. 본 발명에서 "바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY 균주", "TIMMAY 균주", 및 "TIMMAY"는 같은 의미로 혼용하여 사용할 수 있고, "락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 균주", "PINKBLANC 균주", 및 "PINKBLANC"은 같은 의미로 혼용하여 사용할 수 있으며, "류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC 균주", "ELASTIC 균주" 및 "ELASTIC"은 같은 의미로 혼용하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은 유산균 배양액의 추출 처리에 따라 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 본 발명의 상기 추출물은 바람직하게 추출 후 건조 분말 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 3종 복합 균주 배양액의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 추출방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명에서 상기 3종 복합 균주의 배양액을 추출하는데 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 및 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바람직하게, 물, 저급알코올, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸아세테이트를 단독으로 사용하거나 2종 이상 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 열수 추출 또는 냉침 추출한 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위해 여과, 예를 들어 나일론 등을 이용해 입자를 걸러내거나 냉동여과법 등을 이용해 여과한 후, 그대로 사용하거나 이를 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등을 이용해 건조하여 사용할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물은 멜라닌 생성을 저해하여 피부 미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 3종 균주 배양액 추출물이 멜란-A 세포에 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었고, 피부 세포에서 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 피부 미백과 관련된 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인하였다(도 2 및 도 3 참조).
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물은 히알루론산 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 3종 균주 배양액 추출물이 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용될 수 있음을 확인하였다(도 4 참조).
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물은 필라그린 유전자 발현을 증가시켜 피부 장벽 강화 활성을 갖는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 3종 균주 배양액 추출물이 프로필라그린(profilaggrin) 유전자의 발현을 증가시켜 피부 장벽 형성에 기여하고, 피부 상태 개선에 우수한 효과를 나타냄을 확인한 바 있다(도 5 참조).
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물은 피부 각질 제거 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 3종 균주 배양액 추출물이 단일 균주의 배양액 추출물과 비교하여 더욱 우수한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었고, 이러한 효과는 시중에서 판매되고 있는 상용제품들과 비교하여도 더욱 우수하여 각질 제거와 관련된 용도로 유용하게 활용될 수 있음을 확인한 바 있다(표 2 참조).
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물은 TSLP(Thymic stromal lymphopoietin) 생성을 억제하여 아토피 피부염 또는 피부 가려움증 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 본 발명의 3종 균주 배양액 추출물 처리군이 단일 균주의 배양액 추출물 처리군과 비교하여 TLSP 유전자 발현이 현저하게 감소된 것을 확인할 수 있었고, 3종 균주 조합에 따른 시너지 효과를 확인한 바 있다(도 6 참조).
본 발명의 화장료 조성물은 식용 가능한 유산균 소재에서 유래하여 인체에 해가 없으며, 그 첨가로 인해 화장품의 물질의 품질을 손상하지 않으므로 화장료 조성물에 포함되어 사용되는데 적합하다. 특히, 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질제거 및 가려움증 개선과 관련된 기능이 있으므로, 기능성 화장료 조성물에 포함되어 사용되는 것이 바람직하다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 마스크팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클린저, 샴푸, 린스 및 헤어 트리트먼트에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC의 3종 균주, 배양액, 또는 이의 복합추출물은 구체적으로는 건조 중량으로, 화장료 조성물 총 중량의 0.0001 중량% 내지 50 중량%로 포함될 수 있으며, 보다 구체적으로는 0.0005 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 상기 범위 내에서 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질제거 및 가려움증 개선에 대한 우수한 효능을 나타내는 이점이 있으며, 조성물의 제형이 안정화되는 이점이 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 추출물은 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에 우수한 효과를 나타내어 피부 상태 개선을 위한 식품 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 본 발명의 3종 복합 균주와 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에 대한 효과는 상기에서 설명한 바와 같다. 상기 식품 조성물은 건강기능식품의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 배양액, 또는 그 추출물과 이들의 가공물의 형태로 포함될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 유효성분 이외에 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, "식품 보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품 보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품 보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에 있어서, "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법으로 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식용가능한 복합 유산균을 원료로 하여 식품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나며, 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선 효과를 증진하기 위한 보조제로 섭취할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있고, 기능성 식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용하여 사용할 수 있다. 아울러 본 발명의 건강기능식품은 당업자의 선택에 따라 식품에 포함될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함된다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(1) 본 발명은 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선의 활성을 나타내는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 3종 균주, 그 배양액, 또는 이들의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.
(2) 본 발명의 조성물은 세포 독성이 없고, 피부 미백에 우수한 효과가 있으며, 피부 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선에도 우수한 효과가 있으므로 화장품과 식품 분야에서 유용하게 이용 가능하다.
(3) 또한, 본 발명의 조성물은 인체에 매우 안전할 뿐만 아니라, 안정성도 매우 탁월하다.
도 1은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC, 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 인간피부섬유아세포(NHDF)의 세포 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 2는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC, 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 멜란-A 세포의 생존율을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC, 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 멜라닌 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 4는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC, 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 히알루론산 생성량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 프로필라그린(profilaggrin) 유전자의 발현 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC의 단일(BS, LR, LM) 또는 이들의 복합추출물(Tripple Le-Bacillus) 처리에 따른 TSLP mRNA 발현량 변화를 측정하여 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1. 균주 선발 및 추출
1-1. 균주 선발
김치 등 전통 발효식품과 콩 시료를 채취하여 멸균 식염수를 사용하여 희석한 후, BCP 아가(agar)에 도말하여 배지가 노란색으로 변한 콜로니를 채취하고, MRS 배지에 단독 배양하였다.
분리된 균주의 동정을 위해 16S rRNA 염기서열 분석을 통해 분리된 균주들은 공시균주인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DSM 10, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) JCM 1136, 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ATCC 8293 균주와 99% 이상의 상동성을 나타내는 것을 확인하였다. 상기 분리된 3종 균주를 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC 균주로 각각 명명하였고, 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 수탁하여 각각 KCTC 15085BP, KCTC 15099BP, 및 KCTC 15084BP의 기탁번호를 부여받았다.
1-2. 균주 추출물의 제조
MRS 브로스(Difco) 100mL에 실시예 1-1에서 분리동정한 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)를 각각 접종하고, 37℃ 항온기에서 OD 600nm에서 1.0이 될 때까지 배양하여 배양물을 획득하였다. 배양액 10㎖를 4℃에서 4,000rpm으로 20분간 원심분리하여 상층액만을 모았다. 이렇게 얻은 각각의 균주 배양액을 동결건조하여 분말 형태의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) TIMMAY 배양액 추출물(제조예 1), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) PINKBLANC 배양액 추출물(제조예 2) 및 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ELASTIC 균주 배양액 추출물(제조예 3)을 수득하였다.
또한, 상기 3종 균주 배양액 추출물을 동량으로 혼합하여 3종 균주 배양액의 복합추출물을 제조하였다(제조예 4).
실시예 2. 세포독성 시험(MTT Assay)을 통한 세포 보호 효과 확인
실시예 1에서 준비한 3종 균주의 단일추출물과 이들의 복합추출물이 갖는 인간피부섬유아세포(human dermal fibroblasts, NHDFs)에 대한 세포 독성을 시험하였다.
세포독성은 MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] 비색정량분석법(colorimetric assay)을 사용하여 측정하였다. MTT(Methyl thiazol tetrazolium) 분석은 세포 생존 능력을 측정하기 위해 사용되는 것으로, MTT가 보라색을 생성하는 포마잔 염색으로 바꾸는 것이다. 인큐베이션 72시간 후, 배지의 부피는 1㎖로 감소하였고, 1㎎/㎖ MTT의 100㎕는 각 벽에 첨가되었다. 이후, 인간피부섬유아세포(human dermal fibroblasts, NHDFs)를 37℃에서 2시간 동안 5%의 CO2 및 95%의 O2 존재 하에 배양하였다. 인간피부섬유아세포에 상기 실시예 1-2에서 제조한 균주의 단일 또는 복합추출물을 농도별(10, 30, 100㎍/㎖)로 처리하였으며, 이후 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 1mg/mL의 MTT를 처리하고 3시간 후, 세포에 MTT 처리로 인해 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO 용매로 녹여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
실험 결과를 정리한 [도 1]을 참조하면, 인간피부섬유아세포(human dermal fibroblasts, NHDFs)는 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 배양액 추출물에 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었으며, 이들 3종 균주 배양액의 복합추출물을 처리한 시험군(제조예 4)에서는 UVB 조사군(150mJ/cm2)을 기준으로 하여 각각 106%(10㎍/mL), 110%(30㎍/mL) 및 121%(100㎍/mL) 개선된 세포증식률을 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 본 발명의 3종 균주 배양액의 복합추출물은 세포독성이 없으며, 피부 세포의 생장을 촉진하는 등 세포 보호 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있었다.
실시예 3. 피부 미백 활성
본 발명의 3종 균주 배양액의 복합추출물이 보유한 미백 효과를 검증하기 위해, 선행문헌(Hosoi et al., 1985)에 보고된 방법을 수정하여 멜라닌 함량을 측정하였다. 먼저, 멜란-A 세포에 상기 실시예 1-2에서 제조한 균주의 단일 또는 복합추출물을 농도별(10, 30, 100㎍/㎖)로 3일 동안 처리한 후, 배지를 제거하고, PBS(phosphate buffer saline)로 두 번씩 세척하였다. 이후, 멜라닌을 용해하기 위해, 1N의 NaOH 400㎕를 첨가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 405㎚의 흡수 파장에서 멜라닌 함량을 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복하여 측정되었다.
멜란-A 세포의 세포 생존률을 정리하여 나타낸 [도 2]를 참조하면, 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP) 배양액의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물은 멜란-A 세포에 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 멜라닌 함량 분석 결과를 정리한 [도 3]을 참조하면, 시료 무처리군에 비해 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물 처리군에서는 멜라닌 생성량이 감소하는 것으로 나타났는데, 단일추출물 처리군에 비해 복합추출물 처리군에서 멜라닌 함량 감소 현상이 더욱 뚜렷하게 관찰되었다.
구체적으로 시료 무처리군에 비해 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주의 단일추출물 처리군에서는 멜라닌 함량이 각각 5%(10㎍/㎖), 9%(30㎍/㎖), 및 12%(100㎍/㎖) 감소하였고, 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 처리군에서는 멜라닌 함량이 각각 1%(10㎍/㎖), 6%(30㎍/㎖), 및 8%(100㎍/㎖) 감소한 것으로 나타났다. 다만, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주의 단일추출물 처리군에서의 멜라닌 함량은 무처리군과 크게 차이가 없는 것으로 나타났다.
이러한 단일추출물의 효과에 비해, 이들 3종 균주의 복합추출물 처리군에서는 시료 무처리군에 비해 멜라닌 함량이 각각 9%(10㎍/㎖), 17%(30㎍/㎖), 및 29%(100㎍/㎖) 감소한 것으로 관찰되었고, 3종 균주 조합에 따른 시너지 효과가 관찰되었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명에 따른 유산균 3종 균주의 복합추출물이 피부 세포에서 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하여 피부 미백과 관련된 용도로 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 4. 피부 보습 활성
바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP) 배양액의 단일추출물과 이들의 복합추출물이 갖는 피부 보습 효과를 검증하기 위해 시료 처리 유무에 따른 히알루론산(Hyaluronan) 합성량 변화를 분석하였다.
히알루론산(HA, Hyaluronan, Hyaluronic acid)은 주로 표피 각질형성세포와 진피 섬유아세포에 의해 합성되며, 수분과 결합하여 세포가 정상적으로 활동할 수 있는 환경을 조성하는 중요한 역할을 하는 물질이다. 피부에서 히알루론산의 감소는 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나이다. 따라서 본 실험에서는 인간각질형성세포 내에서 히알루론산의 생성량을 확인하였다.
인간각질형성세포(HaCaT)를 24 well 세포배양 접시에 1㎖의 배양액을 넣고 약 1×105 농도로 세포를 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상기 실시예 1-2에서 준비한 3종 균주의 단일추출물과 이들의 복합추출물(제조예 1 내지 4)을 각각 10, 30, 및 100㎍/㎖ 농도로 포함한 배지로 교체하고 24시간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7,500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)한 뒤, ELISA 방법을 이용하여 Hyaluronan(Hyaluronan kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 발현량 변화를 확인하였다.
실험 결과를 정리한 [도 4]를 참조하면, 3종 균주의 단일추출물과 이들의 복합추출물을 처리한 실험군에서는 히알루론산(Hyaluronan)의 생성량이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 확인할 수 있었는데, 3종 단일추출물 처리에 비해 이들의 복합추출물의 처리에 따른 히알루론산 생성량이 더욱 증가한 것으로 관찰되었다.
구체적으로, 시료 무처리군에 비해 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주의 단일추출물을 처리한 실험군에서는 히알루론산의 생성량이 각각 103%(30㎍/㎖) 및 104%(100㎍/㎖) 증가하였고, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주의 단일추출물을 처리한 실험군에서는 히알루론산의 생성량이 각각 107%(30㎍/㎖) 및 111%(100㎍/㎖) 증가하였으며, 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물을 처리한 실험군에서는 히알루론산의 생성량이 각각 109%(10㎍/㎖), 117%(30㎍/㎖) 및 123%(100㎍/㎖) 증가하였다. 이에 비해, 이들 3종 균주 배양액의 복합추출물을 처리한 실험군에서는 시료 무처리군에 비해 히알루론산의 생성량이 각각 114%(10㎍/㎖), 129%(30㎍/㎖) 및 138%(100㎍/㎖) 증가한 것을 확인하였고, 각각의 단일추출물에 비해 피부 보습에 우수한 시너지 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 3종 복합추출물은 피부 세포에서 히알루론산 생성을 효과적으로 증가시켜 피부 보습과 관련된 용도로 매우 효과적으로 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 5. 피부 장벽 강화 활성
바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물 처리에 따른 필라그린(Filaggrin, FLG, 각질층 형성 인자) 유전자 발현 변화를 분석하였다.
먼저, 인간각질형성세포(HaCaT)를 세포주로 사용하였고, 100mm 세포 배양 접시에 10% FBS를 첨가한 DMEM 배지를 사용하여 세포를 1×106 농도로 접종하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, 상기 3종 균주 배양액의 단일추출물과 이들의 복합추출물을 각각 10, 30, 및 100㎍/㎖ 농도가 되도록 DMEM 배지에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여, 24시간 동안 동일 조건에서 추가 배양하였다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 세포를 회수하고, RNA를 분리하였다. RT-PCR은 PCR 기기(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)를 이용하였고, 사이버그린(SYBR Green supermix, Applied Biosystems, 미국) 시약을 프로필라그린(profilaggrin) 및 GAPDH, 그리고 cDNA와 함께 첨가하여 94℃에서 5분 동안 중합효소 활성화, 95℃ 30초, 54℃ 1분, 72℃ 1분간 40 사이클로 중합 반응을 수행하였다.
사용한 프라이머는 다음과 같다:
- Propilaggrin : 정방향 5′-AAG CTT CAT GGT GAT GCG AC-3′, 역방향 5′-TCA AGC AGA AGA GGA AGG CA-3′
- GAPDH: 정방향 5'-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3', 역방향 5'-CCA CCA CCC TGT TGC TGT AG-3'.
상기와 같은 프라이머를 이용하여 RT-PCR 수행하고, 실험 결과를 [도 5]에 정리하였다.
필라그린은 표피 과립층에서 케라토히알린과립(keratohyalin granule)을 형성하는 단백질인 프로필라그린(profilaggrin)의 형태로 존재하다가, 각질형성세포의 최종 분화과정에서 필라그린으로 분해된 후에 각질세포 막을 형성할 때 케라틴 필라멘트를 응집하여 각질세포의 단단하고 편평한 구조를 형성함으로써 피부장벽에서 벽돌(brick) 역할을 수행하게 된다.
실험 결과를 정리한 [도 5]를 참조하면, 시료 무처리군에 비해 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물 처리군에서는 프로필라그린(profilaggrin)의 mRNA 발현량이 증가한 것으로 나타났는데, 단일추출물 처리군에 비해 복합추출물 처리군에서 발현량 증가가 더욱 뚜렷하게 관찰되었다.
구체적으로 시료 무처리군에 비해 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주의 단일추출물 처리군에서는 프로필라그린의 mRNA 발현량이 각각 102%(10㎍/㎖), 103%(30㎍/㎖), 및 111%(100㎍/㎖) 증가하였으며, 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 처리군에서는 프로필라그린의 mRNA 발현량이 각각 106%(10㎍/㎖), 108%(30㎍/㎖), 및 113%(100㎍/㎖) 증가한 것으로 나타났다.
이러한 단일추출물에 비해, 본 발명의 3종 균주의 복합추출물 처리군에서는 시료 무처리군에 비해 프로필라그린의 mRNA 발현량이 각각 116%(10㎍/㎖), 128%(30㎍/㎖), 및 137%(100㎍/㎖) 증가한 것으로 관찰되어 프로필라그린(profilaggrin)의 mRNA 발현량이 단일추출물 대비 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었고, 3종 균주 조합에 따른 시너지 효과가 관찰되었다.
상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 3종 복합추출물은 프로필라그린(profilaggrin) 유전자의 발현을 증가시켜 피부 장벽 형성에 기여함으로써 피부 상태 개선에 우수한 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.
실시예 6. 피부 각질 제거 활성
바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물의 피부 각질 제거 활성을 분석하였다.
바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물을 0.005%(w/v) 농도로 하이드로 젤에 포집시킨 후, 이를 판형의 부직포에 2mm의 두께로 도포하여 피부 각질 제거용 패치를 제조하였다. 상기 피부 각질 제거용 패치를 얼굴 부위의 각질 제거에 사용하여 각질 제거 능력을 시험하였다.
피험자 선정은 20~30대 남녀를 대상으로 시험안내사항을 공지 받은 후 자의에 따라 시험 참가 동의서에 서명한 자를 선정하였다. 이때 피부질환을 포함하는 급, 만성 신체 질환이 없는 건강한 자를 선정하였고, 피험자 수는 통계적 비교가 가능하기 위해 다수의 유효 데이터를 확보하였다. 상기 기준에 의하여 선정된 피시험자라 할지라도 시험 부위에 소양감이나 홍반 등의 이상 반응이 발생하는 경우는 실험 진행 중 주시험자와 연구원의 판단 아래 제외하였고, 총 20명의 피험자에 대한 시험을 진행하였다.
설문조사 과정에서 피험자들의 객관적인 평가를 위해 사용한 제품에 대한 정보 및 피부 측정 데이터는 피험자에게 공개하지 않았다. 또한, 본 시험에서는 피험자들이 제품을 사용하고 피부를 측정한 뒤 설문조사를 시행하였다.
피부 각질 제거 실험은 심플 모나딕 조사(Simple Monadic Test) 방법의 품질 평가를 실시하여 하기 [표 1]의 5점 척도의 결과로 평가하여, 하기 [표 2]에 나타내었다. 본 발명의 복합추출물과 성능을 비교하기 위해 시중에서 판매되고 있는 A 및 B 제품을 비교예로 사용하였다.
[표 1]
[표 2]
각질 제거 시험 결과를 정리한 상기 [표 2]를 참조하면, 7일 동안 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물이 포함된 패치 제품을 사용한 경우에 각질의 양이 감소한 것을 임상적으로 확인할 수 있었고, 단일추출물에 비해 복합추출물의 효과가 더욱 우수한 것을 확인할 수 있었다. 이러한 효과는 시중에서 판매되고 있는 상용제품들과 비교하여도 더욱 우수한 것을 확인할 수 있었다.
상기 결과를 통해 각질 제거와 관련된 용도로 바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 3종 복합추출물이 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 7. TSLP 발현 억제를 통한 피부 가려움 개선
사이토카인인 TSLP(thymic stromal lymphopoietin)는 IL-17, IL-6, CD11c+ 골수 수지상세포(myeloid dendritic cell)를 유도하여 Th2 염증반응을 일으키는 것으로 알려져 있으며, 아토피 피부염도 Th2 매개성 면역질환으로 알려져 있다.
또한, 최근에는 TSLP(Thymic stromal lymphopoietin)가 피부염의 중증도와 연관되어 있고, 가려움 증세의 원인이라고 알려져 피부 가려움증의 마커로 사용되고 있다(Wilson SR et al., The epithelial cell-derived atopic dermatitis cytokine TSLP activates neurons to induce itch. Cell. 2013;155(2):285-95).
바실러스 서브틸리스 TIMMAY, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물이 TSLP 단백질의 발현에 미치는 영향을 검증하기 위해 인간각질형성세포(HaCaT)를 대상으로 실험을 수행하였다.
인간각질형성세포(HaCaT, 1×106/well)를 FBS DMEM 배지에서 24시간 배양한 후, FBS 없는 DMEM 배지에 실시예 1에서 제조된 제조예 1 내지 3의 배양액 추출물을 각각 10㎍/㎖, 30㎍/㎖ 및 100㎍/㎖ 농도로 첨가하고, TNF-α 및 IFN-γ(10ng/㎖)을 희석하여 처리한 후, 추가 배양하였다. 24시간 경과 후, 상층액을 7,500rpm, 5min, 4℃ 조건에서 원심분리하여 400-800μL 정도의 부피로 회수하여 새로운 e-tube에 옮겨준 후, 각 well의 상층액을 human TSLP ELISA kit(R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)를 사용하여 제조사 프로토콜에 따라 정량하였다. 비교실험을 위해 덱사메타손(10㎍/㎖)을 처리한 시험군을 양성대조군으로 사용하였다.
실험 결과를 정리한 [도 6]을 참조하면, TNF-α 및 IFN-γ(10ng/㎖) 처리에 의해 과발현된 TSLP 단백질의 생성량이 3종 균주의 단일추출물 또는 이들의 복합추출물의 처리로 유의적으로 억제됨을 확인할 수 있었다.
구체적으로 시료 무처리군에 비해 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주의 단일추출물 처리군에서는 TLSP의 mRNA 발현량이 10%(100㎍/㎖) 감소하였고, 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주의 단일추출물 처리군에서는 TSLP의 mRNA 발현량이 각각 5%(10㎍/㎖), 8%(30㎍/㎖) 및 10%(100㎍/㎖) 감소하였으며, 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주의 단일추출물 처리군에서는 TSLP의 mRNA 발현량이 각각 9%(10㎍/㎖), 15%(30㎍/㎖) 및 23%(100㎍/㎖) 감소한 것으로 분석되어, 단일 추출물의 TLSP 발현 감소 효과는 다소 미미한 것으로 나타났다.
이러한 단일추출물들에 비해, 본 발명의 3종 균주 복합추출물 처리군에서는 시료 무처리군에 비해 TSLP mRNA 발현량이 각각 25%(10㎍/㎖), 39%(30㎍/㎖) 및 47%(100㎍/㎖) 감소한 것으로 관찰되어 단일추출물과 비교하여 TLSP 발현이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었고, 3종 균주 조합에 따른 시너지 효과가 관찰되었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC) KCTC15085BP 20220920 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC) KCTC15099BP 20220926 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC) KCTC15084BP 20220920

Claims (7)

  1. 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 멜라닌 생성을 저해하여 피부 미백 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 히알루론산 합성을 촉진하여 피부 보습 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 필라그린 유전자 발현을 증가시켜 피부 장벽 강화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 피부 각질 제거 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 TSLP(Thymic stromal lymphopoietin) 생성을 억제하여 아토피 피부염 또는 피부 가려움증 개선 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 화장료 조성물.
  7. 바실러스 서브틸리스 TIMMAY 균주(기탁번호 KCTC 15085BP), 락토바실러스 람노서스 PINKBLANC 균주(기탁번호 KCTC 15099BP) 및 류코노스톡 메센테로이드 ELASTIC 균주(기탁번호 KCTC 15084BP)의 3종 복합 균주, 그 배양액, 또는 이들의 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 식품 조성물.
KR1020220137724A 2022-10-24 2022-10-24 유산균 복합 균주를 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 보습, 장벽강화, 각질 제거 및 가려움증 개선용 조성물 KR20240057227A (ko)

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