KR20240056926A - Composition for enhancing immunity and preventing, ameliorating or treating inflammatory bowel disease comprising Fritillaria thunbergii extract as effective component - Google Patents

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하현일
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Abstract

본 발명은 절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 염증성 장질환 동물모델에서 절패모 추출물을 투여하였을 때, DSS 투여에 의한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 마우스 대식세포에서 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물 처리로 인해 대식세포 증식과 NO 및 사이토카인(TNF-α 및 IL-6) 생성이 증가되므로, 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 건강기능성 식품 또는 의약품에 매우 유용하게 사용될 수 있다. The present invention relates to a composition for improving immunity and preventing, ameliorating or treating inflammatory bowel disease, which contains extract of snail hair as an active ingredient. The extract of snail hair is administered to an animal model of inflammatory bowel disease induced by dextran sulfate sodium (DSS). When administered, weight loss and shortening of colon length caused by DSS administration are suppressed, and treatment of mouse macrophages with the cut hair extract and its crude polysaccharide fraction results in macrophage proliferation and production of NO and cytokines (TNF-α and IL-6). Since this increases, it can be very useful in health functional foods or medicines for improving immunity and preventing, improving or treating inflammatory bowel disease.

Description

절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for enhancing immunity and preventing, ameliorating or treating inflammatory bowel disease comprising Fritillaria thunbergii extract as effective component}Composition for enhancing immunity and preventing, ameliorating or treating inflammatory bowel disease comprising Fritillaria thunbergii extract as effective component}

본 발명은 절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for improving immunity and preventing, improving, or treating inflammatory bowel disease, comprising an extract of jaundice as an active ingredient.

면역계는 자연저항, 비특이성 면역체계 및 특이성 면역체계로 구분할 수 있다. 자연저항(1차 방어선)이란 미생물을 위시한 모든 침입자들을 그들의 종류에 관계없이 막아내는 해부생리학적 요소들을 말하며, 비특이적 면역(2차 방어선)은 자연저항을 돌파하여 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식세포로 구성된 방어체계를, 그리고 특이성 면역계(3차 방어선)는 림프구들로 구성된 면역체계를 말하는데, 이 중 특이성 면역계는 기억능 및 자기와 비자기를 구분할 수 있는 능력을 지닌 고도로 발달한 면역체계이다. 또한, 백혈구는 2차 또는 3차 방어선을 구성하여 1차 방어선을 돌파하여 체내에 들어온 이물을 담당하게 되며, 세균, 바이러스 감염 또는 염증 반응 시, 대식세포 및 림프구 활성의 조절은 의약품의 치료 효과 결정에 있어서 중추적인 역할을 한다.The immune system can be divided into natural resistance, non-specific immune system, and specific immune system. Natural resistance (first line of defense) refers to anatomical and physiological elements that block all invaders, including microorganisms, regardless of their type, and non-specific immunity (second line of defense) refers to phagocytes that eliminate invaders that break through natural resistance and enter the body. The specific defense system (third line of defense) refers to an immune system composed of lymphocytes. Among these, the specific immune system is a highly developed immune system with memory and the ability to distinguish between self and non-self. In addition, white blood cells form the second or third line of defense and take charge of foreign substances that have broken through the first line of defense and entered the body. In case of bacterial or viral infection or inflammatory response, the regulation of macrophage and lymphocyte activity determines the therapeutic effect of the medicine. plays a central role in

대식세포(Macrophage)는 다양한 기능을 가진 세포로 산화적 스트레스 상황에서 여러 가지 사이토카인(cytokine)과 일산화질소(NO)를 생성하여 면역체계에서 중요한 역할을 한다. 특히 대식세포에서 리포다당류(Lipopolysaccharide; LPS), 사이토카인, TNF-α와 같은 자극에 의해 발현되는 iNOS(inducible Nitric Oxide synthease)는 장시간 동안 다량의 NO를 생산하여, NFκB 활성을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 활성화된 대식세포에 의한 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion, O2 -), 과산화수소(hydrogen peroxide, H2O2)와 같은 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 및 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생산은 비특이적 면역에 있어서 중요한 세포독성 및 세포활성 억제 기작이다. 따라서 안전한 천연화합물과 대식세포에서의 ROS 및 NO의 생성의 상관관계에 관련한 다양한 연구들이 수행되고 있다.Macrophages are cells with various functions and play an important role in the immune system by producing various cytokines and nitric oxide (NO) in oxidative stress situations. In particular, iNOS (inducible nitric oxide synthase), which is expressed in macrophages by stimuli such as lipopolysaccharide (LPS), cytokines, and TNF-α, is known to produce large amounts of NO for a long time and promote NFκB activity. . Reactive oxygen species (ROS) such as superoxide anion (O 2 - ), hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), and nitric oxide (NO) by activated macrophages. Production is an important cytotoxic and cell activity inhibition mechanism in non-specific immunity. Therefore, various studies are being conducted on the correlation between safe natural compounds and the production of ROS and NO in macrophages.

한편, 염증성 장질환(Inflammatory bowel disease, IBD)은 궤양성 대장염, 크론병 또는 베체트병 등을 포함하는 질환으로, 염증 세포의 활성화가 중요한 병인인 것으로 알려져 있고 항염증제, 면역 억제제 등으로 염증세포의 활성화 억제 등을 통한 치료가 필요하다. 즉, 장질환이라고 하더라도 그 구체적 병인 등에 따라 치료방법이 달라야 하며, 특히 염증성 장질환의 경우 염증 관련 증상에 대한 억제 및 완화 방안의 마련이 질환 치료에 가장 중요한 인자이다. 장 면역계의 지속적이거나 부적절한 활성화는 만성 점막성 염증의 병리생리에서 중요한 역할을 하며, 특히 호중구, 대식세포, 림프구 및 비만세포의 침윤에 의해 결국 점막 파괴 및 궤양을 초래한다.Meanwhile, inflammatory bowel disease (IBD) is a disease that includes ulcerative colitis, Crohn's disease, or Behcet's disease. Activation of inflammatory cells is known to be an important etiology, and activation of inflammatory cells with anti-inflammatory drugs, immunosuppressants, etc. Treatment through suppression is necessary. In other words, even if it is an intestinal disease, the treatment method must be different depending on the specific etiology, etc. In particular, in the case of inflammatory bowel disease, the most important factor in treating the disease is the preparation of measures to suppress and alleviate inflammation-related symptoms. Persistent or inappropriate activation of the intestinal immune system plays an important role in the pathophysiology of chronic mucosal inflammation, especially through infiltration of neutrophils, macrophages, lymphocytes, and mast cells, ultimately leading to mucosal destruction and ulceration.

염증성 장질환이 있으면 장관의 점막에서 다양한 염증성 사이토카인들이 분비된다. TNF-α는 궤양성 대장염 환자의 대장 루멘과 대장 상피세포에서 높게 나타나며, 최근 연구에 의하면, TNF-α는 궤양성 대장염의 병인으로 중요한 역할을 한다고 알려졌다. 항-TNF-α 항체인 인플릭시맵(infliximab)은 종기의 치료뿐만 아니라, 기존에 치료되지 않던 크론병의 치료에 효과적이라고 알려져 있으나, 이러한 치료법은 비용이 많이 들고, 일부 환자에게서는 수액 반응 또는 전염성 합병증과 같은 부작용이 야기된다. 현재 염증성 장질환 치료제로는 프로스타글란딘(prostaglandins)의 생성을 차단하는 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid; 5-ASA) 계통 약물 예를 들어, 설파살라진 등을 이용하거나 스테로이드류의 면역억제제를 사용하고 있다. 설파살라진은 복부허실(fullness), 두통, 발진, 간질환, 백혈구 감소증, 무과립구증, 남성 불임 등과 같은 부작용 또는 역효과를 일으키기 쉽다.In inflammatory bowel disease, various inflammatory cytokines are secreted from the intestinal mucosa. TNF-α is highly expressed in the colonic lumen and colonic epithelial cells of patients with ulcerative colitis, and recent studies have shown that TNF-α plays an important role in the pathogenesis of ulcerative colitis. Infliximab, an anti-TNF-α antibody, is known to be effective not only in the treatment of boils but also in the treatment of previously untreated Crohn's disease, but this treatment is expensive, and in some patients, it can cause fluid reactions or infectious complications. The same side effects occur. Currently, inflammatory bowel disease treatments include 5-aminosalicylic acid (5-ASA) drugs that block the production of prostaglandins, such as sulfasalazine, or steroid-type immunosuppressants. . Sulfasalazine is prone to side effects or adverse effects such as abdominal fullness, headache, rash, liver disease, leukopenia, agranulocytosis, and male infertility.

한편, 절패모(Fritillariae Thunbergii Bulbs)는 다년생초본으로 우리나라 북부지방의 심산지역, 함경남도 갑산, 백두산의 산지초원에 자생한다. 높이는 25cm 안팎이며 인경은 백색이고 5~6개의 육질 인편으로 되어 있으며 둥글고 밑부분에 수염뿌리가 달린다. 원줄기는 곧게 자라며 잎은 대생 또는 3개씩 윤생하고 선형이며 길이 10cm로서 엽병이 없고 끝이 뾰족하며 윗부분의 잎은 덩굴손처럼 말린다. Meanwhile, Fritillariae Thunbergii Bulbs is a perennial herb that grows naturally in the mountainous meadows of the northern part of Korea, Gapsan in South Hamgyong Province, and Mt. Baekdu. The height is about 25cm, the peduncle is white, consists of 5 to 6 fleshy scales, and is round with a whisker root at the bottom. The main stem grows straight, and the leaves are opposite or whorled in groups of three, linear, 10 cm long, without petioles, with sharp ends, and the upper leaves are curled like tendrils.

면역증강 또는 염증성 장질환 관련 선행기술로는 한국공개특허 제2022-0108739호에는 사인 추출물을 포함하는 염증성 장질환 개선, 완화, 예방 또는 치료용 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1536652호에는 울금 추출물을 포함하는 면역증강용 조성물이 개시되어 있지만, 본 발명의 절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관해 전혀 개시된 바 없다. As prior art related to immune enhancement or inflammatory bowel disease, Korea Patent Publication No. 2022-0108739 discloses a composition for improving, alleviating, preventing or treating inflammatory bowel disease containing extract of sine, and Korean Patent No. 1536652 discloses turmeric. Although a composition for enhancing immunity containing the extract has been disclosed, there has been no disclosure at all regarding a composition for enhancing immunity and preventing, improving, or treating inflammatory bowel disease containing the extract of the Japanese herbal medicine of the present invention as an active ingredient.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 염증성 장질환 동물모델에서 절패모 추출물을 투여하였을 때, DSS 투여에 의한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 마우스 대식세포에서 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물 처리로 인해 대식세포 증식과 NO 및 사이토카인(TNF-α 및 IL-6) 생성이 증가되는 것을 통해 면역증진 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.The present invention was developed in response to the above-mentioned needs, and provides a composition for improving immunity and preventing, improving, or treating inflammatory bowel disease, which contains an extract of dextran sulfate sodium (DSS) as an active ingredient. When administered with the extract of the shellfish extract in an animal model of intestinal disease, weight loss and shortening of the colon length caused by DSS administration are suppressed, and treatment with the extract and its crude polysaccharide fraction in mouse macrophages results in macrophage proliferation, NO, and cytokines. The present invention was completed by confirming the immune-enhancing effect through increased production of (TNF-α and IL-6).

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In order to solve the above problems, the present invention provides an immune booster containing Fritillaria thunbergii extract or a crude polysaccharide fraction thereof as an active ingredient; and a health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. Additionally, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease containing an extract of Fritillaria thunbergii or a crude polysaccharide fraction thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다. In addition, the present invention provides an immune-enhancing device containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and feed additives for preventing or improving inflammatory bowel disease.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an immune-enhancing device containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and a veterinary composition for preventing or treating inflammatory bowel disease.

본 발명은 절패모 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증진 및 염증성 장질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 염증성 장질환 동물모델에서 절패모 추출물을 투여하였을 때, DSS 투여에 의한 체중감소 및 대장길이 단축이 억제되고, 마우스 대식세포에서 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물 처리로 인해 대식세포 증식과 NO 및 사이토카인(TNF-α 및 IL-6) 생성이 증가되는 것을 통해 면역증진 효과가 있다.The present invention relates to a composition for improving immunity and preventing, ameliorating or treating inflammatory bowel disease, which contains extract of snail hair as an active ingredient. The extract of snail hair is administered to an animal model of inflammatory bowel disease induced by dextran sulfate sodium (DSS). When administered, weight loss and colon length shortening caused by DSS administration are suppressed, and treatment of mouse macrophages with the cut hair extract and its crude polysaccharide fraction results in macrophage proliferation and production of NO and cytokines (TNF-α and IL-6). This increase has an immune-boosting effect.

도 1은 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 염증성 장질환 마우스 모델에서 본 발명의 절패모 추출물을 처리하였을 때, DSS 투여에 의한 체중감소(A) 및 대장길이 단축(B)에 대한 억제 효과를 나타낸 것이다. ##는 정상군 대비 음성대조군의 대장길이가 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.01임을 의미하고, * 및 **는 음성대조군 대비 절패모 열수 추출물 투여군, 절패모 에탄올 추출물 투여군 또는 양성대조군의 대장길이가 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, **는 p<0.01임을 의미한다.
도 2는 DSS(dextran sulfate sodium)로 유도된 염증성 장질환 마우스 모델에서 본 발명의 절패모 추출물을 처리하였을 때, DSS 투여에 의한 장간막 림프절 무게(A) 및 비장 무게(B)의 증가 억제 효과를 나타낸 것이다. ##는 정상군 대비 음성대조군의 장간막 림프절 및 비장의 무게가 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01임을 의미하고, *는 음성대조군 대비 절패모 열수추출물 투여군, 절패모 에탄올추출물 투여군 또는 양성대조군의 장간막 림프절 또는 비장의 무게가 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, p<0.05을 의미한다.
도 3은 본 발명의 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 농도별로 처리하였을 때, Raw 264.7 세포 생존율을 확인한 결과이다. * 및 **는 아무것도 처리하지 않은 군 대비 본 발명의 절패모 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 해당 농도로 처리한 군에서 세포생존율이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, *는 p<0.05이고, **는 p<0.01임을 의미한다.
도 4는 본 발명의 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 농도별로 처리하였을 때, NO(Nitric oxide) 생성에 대한 분석 결과이다. Normal은 아무것도 처리하지 않은 군이고, LPS는 LPS를 처리한 군이다.
도 5는 본 발명의 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 농도별로 처리하였을 때, TNF-α(tumor necrosis factor-α) 및 IL-6(interleukin-6) 생성에 대한 분석 결과이다. Normal은 아무것도 처리하지 않은 군이고, LPS는 LPS를 처리한 군이다.
Figure 1 shows the inhibitory effect on weight loss (A) and colon length shortening (B) caused by DSS administration when the dextran sulfate sodium (DSS)-induced inflammatory bowel disease mouse model was treated with the extract of the present invention. It is shown. ## indicates a statistically significant decrease in the colon length of the negative control group compared to the normal group, meaning p < 0.01, * and ** indicate the group treated with hot water extract of the cuttlefish extract, the group administered with the ethanol extract of the cuttlefish plant, or the positive control group compared to the negative control group. This means that the colon length increased statistically significantly, * means p<0.05, and ** means p<0.01.
Figure 2 shows the inhibitory effect on the increase in mesenteric lymph node weight (A) and spleen weight (B) by DSS administration when the inflammatory bowel disease mouse model induced by DSS (dextran sulfate sodium) was treated with the extract of the present invention. It is shown. ## indicates a statistically significant increase in the weight of the mesenteric lymph nodes and spleen in the negative control group compared to the normal group, meaning p<0.01, and * means the group treated with hot-water extract of the antler root, the group administered the ethanol extract of the angiosperm root compared to the negative control group, or the positive group. The weight of the mesenteric lymph nodes or spleen in the control group was statistically significantly reduced, meaning p<0.05.
Figure 3 shows the results of confirming the Raw 264.7 cell survival rate when the cut-out hair extract and its crude polysaccharide fraction of the present invention were treated at different concentrations. * and ** indicate a statistically significant increase in cell viability in the group treated with the cuttlefish extract of the present invention or its crude polysaccharide fraction at the corresponding concentration compared to the untreated group, * is p < 0.05, * * means p<0.01.
Figure 4 shows the analysis results of NO (Nitric oxide) production when the extract of the present invention and its crude polysaccharide fraction were treated at different concentrations. Normal is a group in which nothing was processed, and LPS is a group in which LPS was processed.
Figure 5 shows the results of analysis of the production of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) when the extract of the present invention and its crude polysaccharide fraction were treated at different concentrations. Normal is a group in which nothing was processed, and LPS is a group in which LPS was processed.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides an immune-enhancing device containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and a health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease.

상기 절패모 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:The cut hair extract can be prepared by a method comprising the following steps, but is not limited to this:

(1) 절패모에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;(1) Extracting by adding an extraction solvent to the broken hair;

(2) 단계 (1)의 추출물을 여과하는 단계; 및(2) filtering the extract of step (1); and

(3) 단계 (2)의 여과한 추출물을 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.(3) Concentrating and drying the filtered extract of step (2) to prepare an extract.

상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 물 또는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다.In step (1), the extraction solvent is preferably selected from water, C 1 -C 4 lower alcohol, or a mixture thereof, more preferably water or ethanol, but is not limited thereto.

상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 절패모 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 5~15배 첨가하는 것이다. 추출시간은 0.5~10시간인 것이 바람직하며, 0.5~5시간이 더욱 바람직하지만 이에 한정하지 않는다. 상기 방법에 있어서, 단계 (3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무 건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.In the above manufacturing method, all conventional methods known in the art can be used as the extraction method, such as filtration, hot water extraction, immersion extraction, reflux cooling extraction, and ultrasonic extraction. The extraction solvent is preferably added in an amount of 1 to 20 times the weight of the broken hair for extraction, and more preferably, it is added in an amount of 5 to 15 times. The extraction time is preferably 0.5 to 10 hours, more preferably 0.5 to 5 hours, but is not limited to this. In the above method, the vacuum concentration in step (3) is preferably performed using a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto. In addition, drying is preferably performed by reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, or freeze drying, but is not limited thereto.

본 발명의 절패모 추출물의 조다당 분획물은 절패모 열수 추출물을 비열처리 공정으로 분획한 분획물이거나 에탄올과 같이 유기용매에 침전시켜 분획한 분획물일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. The crude polysaccharide fraction of the cut-off hair extract of the present invention may be a fraction obtained by fractionating a hot-water extract of cut-throat hair extract through a non-heat treatment process or a fraction obtained by precipitation in an organic solvent such as ethanol, but is not limited thereto.

상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.The composition is preferably manufactured in a dosage form selected from powder, granule, pill, tablet, capsule, candy, syrup and beverage, but is not limited thereto.

본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 절패모 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취하는 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. When using the health functional food composition of the present invention as a food additive, the cuttlefish extract can be added as is or used together with other foods or food ingredients, and can be used appropriately according to conventional methods. The mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention or improvement). Generally, when producing a food or beverage, the composition of the present invention is added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, based on the raw materials. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.There are no special restrictions on the types of foods above. Examples of foods to which the extract can be added include meat, sausages, bread, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, tea, drinks, These include alcoholic beverages and vitamin complexes, and include all health functional foods in the conventional sense.

본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로 덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마린, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린 또는 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100중량부 당 0.01~0.1중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.When the composition of the present invention is used as a health drink, it may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like conventional drinks. The above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As a sweetener, natural sweeteners such as thaumarin and stevia extract or synthetic sweeteners such as saccharin or aspartame can be used. The ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g, per 100 g of the composition of the present invention. The composition of the present invention contains various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal neutralizer, pH adjuster, stabilizer, preservative, glycerin, alcohol, carbonic acid. It may contain carbonating agents used in beverages. Additionally, the composition of the present invention may contain pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice beverages, and vegetable beverages. These ingredients can be used independently or in combination. The ratio of these additives is not very important, but the composition of the present invention is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. Additionally, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease containing an extract of Fritillaria thunbergii or a crude polysaccharide fraction thereof as an active ingredient.

상기 염증성 장질환은 바람직하게는 궤양성 대장염, 크론병 또는 베체트병일 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.The inflammatory bowel disease may preferably be ulcerative colitis, Crohn's disease, or Behcet's disease, but is not limited thereto.

본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.The composition of the present invention may further include pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or diluents in addition to the above active ingredients, and may be in various oral or parenteral dosage forms. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include capsules, powders, granules, tablets, pills, etc. These solid preparations contain one or more compounds and at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose, or lactose ( It is prepared by mixing lactose, gelatin, etc. Additionally, in addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, etc. are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc. In addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. . Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspension solvents may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao, laurel, glycero gelatin, etc. can be used. When administering parenterally, it is preferable to choose external dermal application or intraperitoneal, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dura, or intracerebrovascular injection.

본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat the disease with a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the level of the effective amount is determined by the type, severity, and activity of the patient's disease. , can be determined based on factors including sensitivity to the drug, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, concurrently used drugs, and other factors well known in the medical field. The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can achieve maximum effect with the minimum amount without side effects, and this can be easily determined by a person skilled in the art.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The dosage of the composition of the present invention varies depending on the patient's weight, age, gender, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and severity of disease. The composition of the present invention can be used alone or in combination with surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and methods using biological response modifiers.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides an immune-enhancing device containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and feed additives for preventing or improving inflammatory bowel disease.

본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.The feed additive of the present invention corresponds to supplementary feed under the Feed Management Act. In the present invention, the term 'feed' may mean any natural or artificial diet, meal, etc., or a component of the meal, for or suitable for eating, ingestion, and digestion by animals. The type of feed is not particularly limited, and feed commonly used in the art can be used. Non-limiting examples of the feed include plant feeds such as grains, roots and fruits, food processing by-products, algae, fiber, pharmaceutical by-products, oils and fats, starches, cucurbits or grain by-products; Examples include animal feeds such as proteins, inorganic substances, fats and oils, minerals, fats and oils, single-cell proteins, zooplanktons or food. These may be used alone or in combination of two or more types.

또한, 본 발명은 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an immune-enhancing device containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and a veterinary composition for preventing or treating inflammatory bowel disease.

본 발명의 절패모 추출물을 포함하는 수의학적 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 절패모 추출물을 포함하는 수의학적 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 세탄올, 스테아릴알콜, 유동파라핀, 솔비탄모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 메칠파라벤, 프로필파라벤 및 광물유를 들 수 있다.The veterinary composition containing the cut hair extract of the present invention may further include appropriate excipients and diluents according to conventional methods. Excipients and diluents that may be included in the veterinary composition containing the extract of snail hair of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, and gelatin. , calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, cetanol, stearyl alcohol, liquid. Examples include paraffin, sorbitan monostearate, polysorbate 60, methylparaben, propylparaben, and mineral oil.

본 발명에 따른 절패모 추출물을 포함하는 수의학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 의한 수의학적 조성물은 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다.The veterinary composition containing the cut hair extract according to the present invention may further include fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, spices, emulsifiers, preservatives, etc. The veterinary composition according to the present invention is administered to an animal after being administered. Can be formulated using methods well known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient, and the dosage form can be powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, solutions, syrups, aerosols, It may be in the form of soft or hard gelatin capsules, suppositories, sterile injectable solutions, sterile external preparations, etc.

본 발명에 의한 수의학적 조성물은 동물의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있고, 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The veterinary composition according to the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the animal, but can be administered once or several times a day, and the dosage increases or decreases depending on the route of administration, degree of disease, sex, weight, age, etc. It can be. Accordingly, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any way.

이하, 본 발명의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail through examples. However, the following examples only illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.

<재료 및 방법> <Materials and Methods>

1. 동물사육조건1. Animal rearing conditions

두열바이오텍으로부터 6주령 수컷 마우스(C57BL/6)를 구입하여 1주일 동안 적응시킨 후 실험에 사용하였으며, 적응기간 중 일반 상태를 관찰하여 건강한 상태의 마우스를 실험에 사용하였다. 시험기간 중 실험동물은 폴리카보네이트(polycarbonate) 케이지에 사육하였고, 사료는 마우스 전용 사료 AIN-93G(두열바이오텍, 서울)를 자유 급이 하였다. 음수는 역삼투(Reverse osmosis; RO)수를 자유 급이하였다.A 6-week-old male mouse (C57BL/6) was purchased from Duyeol Biotech and used in the experiment after being acclimatized for one week. During the adaptation period, the general condition was observed and healthy mice were used in the experiment. During the test period, the experimental animals were kept in polycarbonate cages, and were fed ad libitum AIN-93G (Duyeol Biotech, Seoul), a mouse-specific feed. Negative water was freely supplied with reverse osmosis (RO) water.

2. 염증성 장질환 유도 동물실험2. Animal testing to induce inflammatory bowel disease

마우스에 염증성 장질환을 유도하기 위해 2.5%(w/v) 덱스트란 나트륨 황산염(Dextran sulfate sodium; DSS, MP Biomedicals) 음수를 제조하였다. 실험군은 정상군, 음성대조군, 양성대조군(mesalazine, 200 mg/kg), 절패모 열수추출물 투여군(100 mg/kg) 및 절패모 에탄올추출물 투여군(100 mg/kg)으로 나누어 실험하였으며, 시료투여는 마우스 존대를 이용하여 경구 투여하였다. 정상군을 제외한 실험군에 2.5% DSS 음수를 8일 동안 자유 급이한 후 5일 간 정상음수로 교체하였고, 시료는 13일간 매일 투여하였다. 시료투여 마지막날 마우스를 희생하여 염증성 장질환에 대한 개선효과를 분석하였다.To induce inflammatory bowel disease in mice, 2.5% (w/v) dextran sodium sulfate (DSS, MP Biomedicals) drinking water was prepared. The experimental group was divided into a normal group, a negative control group, a positive control group (mesalazine, 200 mg/kg), a group administered with a hot water extract of the snail root (100 mg/kg), and a group administered with an ethanol extract from the snail root (100 mg/kg). Sample administration was conducted It was administered orally using a mouse pad. The experimental group, excluding the normal group, was freely fed 2.5% DSS drinking water for 8 days and then replaced with normal drinking water for 5 days, and the samples were administered daily for 13 days. On the last day of sample administration, mice were sacrificed to analyze the improvement effect on inflammatory bowel disease.

3. 염증성 장질환 개선 효능실험3. Efficacy test to improve inflammatory bowel disease

시험기간 동안 매일 각 실험군의 체중을 측정하였으며, 마우스를 희생한 후 각 실험군의 대장조직, 장간막 림프절 및 비장을 적출하여 대장의 길이, 장간막 림프절 및 비장 무게를 측정하여 분석하였다.During the test period, the body weight of each experimental group was measured every day. After sacrificing the mice, the colon tissue, mesenteric lymph nodes, and spleen of each experimental group were removed and the length of the colon, mesenteric lymph nodes, and spleen weight were measured and analyzed.

4. 세포생존율 분석4. Cell viability analysis

대식세포주인 RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 2×104 세포/웰의 농도로 분주한 후, 본 발명의 절패모 추출물을 농도별(0.23, 0.69, 2.06, 6.17, 18.5, 55.6, 167 및 500㎍/㎖)로 처리하여 37℃, 5% CO2 조건으로 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 세포에 CCK-8 어세이를 수행하였다. 이후, ELISA 리더(BioTek Instruments, Winooski, VT)를 이용하여 450nm의 흡광도를 측정하였고, 이후 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포생존율(% of control)을 계산하였다.RAW 264.7 cells, a macrophage cell line, were distributed in a 96-well plate at a concentration of 2 × 10 4 cells/well, and then the hair extract of the present invention was added at different concentrations (0.23, 0.69, 2.06, 6.17, 18.5, 55.6, 167, and 500). ㎍/㎖) and cultured for 24 hours at 37°C and 5% CO 2 conditions. CCK-8 assay was performed on cells after culture. Afterwards, the absorbance at 450 nm was measured using an ELISA reader (BioTek Instruments, Winooski, VT), and the relative cell viability (% of control) was calculated by comparison with the control group.

5. NO(Nitric oxide) 생성 분석5. NO (Nitric oxide) production analysis

RAW 264.7 세포를 96웰 배양 플레이트에 2×104 세포/웰 조건으로 분주하여 24시간 동안 안정화시킨 후, LPS(0.1㎍/㎖) 처리와 더불어 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 농도별(6.17, 18.5, 55.6, 167 및 500㎍/㎖)로 각각 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양 후 각각의 세포 배양액을 분리하여, 1:1의 그리스 시약(Griess reagent) 혼합액(0.1% N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride diluted in sterile water, 1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid) 을 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하고 NO 생성량 변화를 분석하였다.RAW 264.7 cells were distributed in a 96-well culture plate at 2 , 18.5, 55.6, 167, and 500㎍/㎖) and cultured for 24 hours. After 24 hours of incubation, each cell culture was separated, and 540 cells were grown using a 1:1 Griess reagent mixture (0.1% N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride diluted in sterile water, 1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid). Absorbance was measured at ㎚ and changes in NO production were analyzed.

6. 사이토카인 생성 분석6. Cytokine production analysis

RAW 264.7 세포를 96웰 배양 플레이트에 2×104 세포/웰 조건으로 분주하여 24시간 동안 안정화시킨 후, LPS(0.1㎍/㎖) 처리와 더불어 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 농도별(6.17, 18.5, 55.6, 167 및 500㎍/㎖)로 각각 처리하였다. 24시간 배양 후 TNF-α 및 IL-6의 생성량을 효소면역측정법(ELISA, Quantikine ELISA Kit, R&D system, USA)을 이용하여 450㎚에서 흡광도를 측정하였다.RAW 264.7 cells were distributed in a 96-well culture plate at 2 , 18.5, 55.6, 167, and 500㎍/㎖) respectively. After 24 hours of incubation, the production of TNF-α and IL-6 was measured by absorbance at 450 nm using an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA, Quantikine ELISA Kit, R&D system, USA).

7. 통계처리7. Statistical processing

본 발명에서 획득한 데이터는 평균±표준오차로 나타냈으며, 통계분석은 던넷 테스트(Dunnett's test)를 수반하는 일원배치 분산분석으로 계산하였다.The data obtained in the present invention were expressed as mean ± standard error, and statistical analysis was calculated by one-way analysis of variance accompanied by Dunnett's test.

제조예 1. 절패모 추출물의 제조Preparation Example 1. Preparation of cut-off hair extract

(1) 절패모 열수 추출물(1) Cut-throat moss thermal water extract

절패모 500g을 증류수 3.5ℓ에 넣고 3시간 동안 환류추출(Heating mantle) 후 정성여과지(Qualitative Filter Paper, φ185mm)로 여과하여 동결 건조하여 수득한 절패모 열수 추출물을 사용하였다.500 g of cut hair was placed in 3.5 liters of distilled water, refluxed (heating mantle) for 3 hours, filtered through qualitative filter paper (ϕ185mm), and freeze-dried to obtain a hot water extract of cut hair.

(2) 절패모 에탄올 추출물(2) Ethanol extract of cuttlefish hair

절패모 500g을 70%(v/v) 에탄올 3.5ℓ에 넣고 3시간 동안 환류추출(Heating mantle) 후 정성여과지(Qualitative Filter Paper, φ185mm)로 여과 및 침지한 후 회전 농축기(Rotary evaporator)로 농축한 다음 동결 건조하였다. 500 g of cut hair was placed in 3.5 liters of 70% (v/v) ethanol, extracted under reflux (heating mantle) for 3 hours, filtered and soaked with Qualitative Filter Paper (ϕ185mm), and then concentrated with a rotary evaporator. Then it was freeze-dried.

(3) 절패모 조다당 분획물(3) Crude polysaccharide fraction of cuttlefish

상기 제조된 절패모 열수 추출물 1g을 물 10㎖에 용해하여 1시간 동안 교반 추출한 후 에탄올 30㎖을 첨가하여 24시간 침전시키고 4℃에서 30분간 2,000rpm으로 원심분리하여 상등액과 잔사로 분리하였다. 남은 잔사를 -70℃에서 동결 건조하여 절패모 조다당 분획물을 얻었다. 1 g of the above-prepared hot water extract of Jeolpaemo was dissolved in 10 ml of water, stirred and extracted for 1 hour, then 30 ml of ethanol was added, precipitated for 24 hours, centrifuged at 2,000 rpm for 30 minutes at 4°C, and separated into supernatant and residue. The remaining residue was freeze-dried at -70°C to obtain a crude polysaccharide fraction of cut hair.

실시예 1. 절패모 추출물의 염증성 장질환 개선 효능 확인Example 1. Confirmation of inflammatory bowel disease improvement efficacy of cuttlefish extract

동물모델에서 절패모 추출물의 염증성 장질환 개선효과를 확인하기 위해 C57BL/6 마우스에 13일 동안 절패모 추출물을 경구 투여하였으며, 시험개시 시 2.5% DSS 음수를 8일 동안 자유 급이하고 5일간 정상음수를 교체급이하여 염증성 장질환을 유도한 후 마우스를 희생하였다. 염증성 장질환 동물모델에서 마우스 체중, 대장의 길이, 장간막 림프절 및 비장 무게에 대한 변화를 관찰하였다. In order to confirm the effect of the spore hair extract on improving inflammatory bowel disease in an animal model, the sage hair extract was orally administered to C57BL/6 mice for 13 days. At the start of the test, 2.5% DSS water was freely fed for 8 days, and the mice remained normal for 5 days. After inducing inflammatory bowel disease by replacing drinking water, the mice were sacrificed. In an inflammatory bowel disease animal model, changes in mouse body weight, colon length, mesenteric lymph nodes, and spleen weight were observed.

그 결과, 도 1에 개시한 바와 같이 정상군 대비 DSS만을 급여한 음성대조군에서 통계적으로 유의미하게 체중이 감소되었고, 이에 반해 본 발명의 절패모 추출물을 투여한 군에서 DSS 투여에 의해 감소되었던 체중이 증가되고, 단축된 대장의 길이가 통계적으로 유의미하게 증가된 것을 확인하였다. As a result, as shown in Figure 1, there was a statistically significant decrease in body weight in the negative control group fed only DSS compared to the normal group. In contrast, in the group administered the cuttlefish extract of the present invention, the body weight reduced by DSS administration was It was confirmed that the increased and shortened colon length increased statistically significantly.

또한, DSS 투여로 인해 증가된 장간막 림프절 및 비장의 무게가 절패모 추출물 투여로 인해 통계적으로 유의미하게 감소된 것을 확인하였다(도 2).In addition, it was confirmed that the weight of the mesenteric lymph nodes and spleen, which were increased due to DSS administration, was statistically significantly reduced due to the administration of spleen hair extract (Figure 2).

실시예 2. 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물의 면역증진 효능 확인Example 2. Confirmation of immune-enhancing efficacy of cuttlefish extract and its crude polysaccharide fraction

(1) 세포생존율(1) Cell viability

절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물의 면역증진효과를 검증하기 위해 RAW 264.7 세포에서 세포증식 변화를 관찰하였다. To verify the immune-boosting effect of the cuttlefish extract and its crude polysaccharide fraction, changes in cell proliferation were observed in RAW 264.7 cells.

그 결과, 도 3에 개시한 바와 같이 아무것도 처리하지 않은 군과 비교하여 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물을 처리한 각 실험군에서 대식세포의 증식이 농도 의존적으로 증가되었다As a result, as shown in Figure 3, the proliferation of macrophages was increased in a concentration-dependent manner in each experimental group treated with the cut-out hair extract and its crude polysaccharide fraction compared to the untreated group.

(2) NO 및 사이토카인(TNF-α 및 IL-6)(2) NO and cytokines (TNF-α and IL-6)

절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물 처리에 따른 NO 및 사이토카인(TNF-α 및 IL-6) 생성이 증가된 것을 확인하였으며(도 4 및 도 5), 이를 통해 본 발명의 절패모 추출물 및 이의 조다당 분획물은 면역증진 효능이 있음을 알 수 있었다.It was confirmed that the production of NO and cytokines (TNF-α and IL-6) was increased due to treatment with the cut-out hair extract and its crude polysaccharide fraction (Figures 4 and 5), through which the cut-out hair extract and its crude oil of the present invention were confirmed to be increased. It was found that the polysaccharide fraction has an immune-enhancing effect.

Claims (8)

절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.Immunity enhancement containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and health functional food compositions for preventing or improving inflammatory bowel disease. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.The method of claim 1, wherein the extract is an immune booster, characterized in that it is extracted using water, a lower alcohol of C 1 to C 4 , or a mixture thereof; and health functional food compositions for preventing or improving inflammatory bowel disease. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.The method of claim 1, wherein the composition is manufactured in any one formulation selected from powder, granule, pill, tablet, capsule, candy, syrup and beverage; and health functional food compositions for preventing or improving inflammatory bowel disease. 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease containing an extract of Fritillaria thunbergii or a crude polysaccharide fraction thereof as an active ingredient. 제4항에 있어서, 상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염, 크론병 또는 베체트병인 것을 특징으로 하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.The pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease according to claim 4, wherein the inflammatory bowel disease is ulcerative colitis, Crohn's disease, or Behcet's disease. 제4항에 있어서, 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.The pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease according to claim 4, further comprising a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, or diluent in addition to the active ingredient. 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제.Immunity enhancement containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and feed additives for preventing or improving inflammatory bowel disease. 절패모(Fritillaria thunbergii) 추출물 또는 이의 조다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 면역증진; 및 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 수의학적 조성물.Immunity enhancement containing Fritillaria thunbergii extract or its crude polysaccharide fraction as an active ingredient; and veterinary compositions for preventing or treating inflammatory bowel disease.
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