KR20240051948A - 피라졸로피리디논 화합물 - Google Patents
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Abstract
본원에는 T 세포를 활성화시키고, T 세포 증식을 촉진하고, 및/또는 항종양 활성을 나타내기 위한 화학식 (I)의 화합물, 암을 치료하기 위해 본원에 개시된 화합물을 사용하는 방법, 및 이를 포함하는 약제학적 조성물이 개시된다.
Description
본원에는 T 세포를 활성화시키고, T 세포 증식을 촉진하고, 및/또는 항종양 활성을 나타내기 위한 화학식 (I)의 화합물, 암을 치료하기 위해 본원에 개시된 화합물을 사용하는 방법, 및 이를 포함하는 약제학적 조성물이 개시된다.
디아실글리세롤 키나아제(DGK; diacylglycerol kinase)는 디아실글리세롤(DAG; diacylglycerol)을 인산화하고 포스파티드산(PA; phosphatidic acid)으로 전환시키는 지질 키나아제의 계열이다. DGK의 기질로서, DAG는 G-단백질 커플링 수용체(GPCR; G-protein coupled receptor) 및 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM; immunoreceptor tyrosine-based activation motif)-보유 수용체를 포함하는, 다양한 세포-표면 수용체의 활성화에 반응하여 포스포리파아제 C(PLC; phospholipase C) 가수분해에 의해 원형질 막에서 이노시톨 인지질 및 기타 인지질로부터 생성된다(Rhee, Sue Goo. Annual review of biochemistry. 2001, 70.1: 281-312). DAG는 단백질 키나아제 C(PKC; protein kinase C), 단백질 키나아제 D(PKD; protein kinase D) 계열, 및 Ras 구아닐 뉴클레오티드 방출 단백질(RasGRP; Ras guanyl nucleotide releasing protein)을 포함하는 많은 다운스트림 효과기를 모집하고 활성화하는 주요 세포내 제2 전달자 중 하나이며, 이는 차례로 NF-κB를 활성화하고 세포외 조절 키나아제(ERK; extracellular regulated kinase) 경로를 활성화한다(, Isabel 등 Biochemical Journal. 2008, 409.1: 1-18, Joshi, Rohan P. 등 International Journal of Molecular Sciences. 2013,14.4: 6649-6673). DAG를 소비함으로써, DGK는 DAG 매개 신호전달의 역치 및 지속시간을 제어하고 조정한다. 포유동물 DGK 계열은 10개의 상이한 구성원을 포함하고, 여기서 DGKα, DGKζ 및 DGKδ는 림프양 조직에서 풍부하게 발현되는 세 가지 주요 이소형이다(Joshi, Rohan P. 등 International Journal of Molecular Sciences. 2013,14.4: 6649-6673).
암 면역요법은 숙주 면역 체계를 조작하고 강화하여 암 세포를 인지하고 공격하는 암 치료의 일종이다. 대다수의 연구는 CTLA-4 및 PD-1/PD-L1과 같은, 면역 체크포인트 억제제를 표적화하여 종양 부위 내에서 탈진된 CD8+ T 세포를 회복시키는 데 중점을 두었다. 정상적인 상황에서 해로운 자가면역 질환을 예방하는 말초 T 세포 관용이 종양에 의해 하이재킹되어(hijacked) 발암 과정에서 항-종양 면역 반응을 방해할 수 있다는 것이 밝혀졌다(, Simone 등 Frontiers in Immunology. 2020, 11: 2461). T 세포 무반응(anergy)은 T 세포 관용의 가장 중요한 메커니즘 중 하나이며, 종양 미세환경의 면역억제 성질에 기여하는 종양 침윤 T 세포에서 발생하는 것으로 보고되었다(Abe, Brian T., 및 Fernando Macian. Oncoimmunology. 2013, 2.2: e22679). 무반응-연관 전사 인자 초기 성장 반응 유전자2(Egr2; early growth response gene2)는 Dgka 및 Dgkz 프로모터에 직접 결합하여 이들의 발현을 증가시킨다(Zheng, Yan 등 Journal of Experimental Medicine 2012, 209.12: 2157-2163; Zheng, Yan 등 Molecular Immunology. 2013, 55.3-4: 283-291). 무반응 T 세포에서, DGKα 및 DGKζ는 모두 TCR의 다운스트림의 DAG-신호전달을 음성 조절하고 TCR 활성화의 강도를 감소시키는 데 중요한 역할을 한다(Chen, Shelley S. 등 Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2016, 4: 130). 따라서, DGKα 및 DGKζ를 발현하는 면역 세포는 종양 침윤된 T 세포의 저반응성(hyporesponsiveness)을 역전시키기 위한 잠재적인 표적으로서 조사되었다. DGKα 또는 DGKζ의 유전적 결실이 사이토카인 생성 및 T 세포의 증식을 향상시키는 것으로 입증되었다(Olenchock, Benjamin A. 등 Nature immunology. 2006, 7.11: 1174-1181; Zhong, Xiao-Ping 등 Nature immunology. 2003, 4.9: 882-890). 마우스 또는 인간 키메라 항원 수용체(CAR; chimeric antigen receptor)-T 세포 모두에서 DGKα 또는 DGKζ 단일 녹아웃은 항원 발현 표제 세포와 공동배양될 때 향상된 시험관내 세포독성 및 사이토카인 분비에 의해 결정된 바와 같이 우수한 효과기 기능을 나타냈다(Riese, Matthew J. 등 Cancer Research. 2013, 73.12: 3566-3577; Jung, In-Young 등 Cancer Research. 2018, 78.16: 4692-4703). MesoCAR-형질도입 DGKα 또는 DGKζ 결핍 T 세포는 또한 중피종에 대해 상당히 향상된 생체내 활성을 나타냈다(Riese, Matthew J. 등 Cancer Research. 2013, 73.12: 3566-3577). DGKζ-/- 마우스는 정위 및 피하 이식 모델 모두에서 향상된 종양 억제 효능을 나타냈다(Wesley, Erin M. 등 Immunohorizons. 2018, 2.4: 107-118; Wee, Susan 등 AACR; Cancer Res 2019;79(13 Suppl):Abstract nr 936). T 세포 조절 기능 외에도, DGKα 및 DGKζ는 모두 종양 부위에서 NK 세포 활성화 조정에도 관여한다(Prinz, Petra U. 등 International Journal of Cancer. 2014. 135.8: 1832-1841; Yang, Enjun 등 The Journal of Immunology. 2016, 197.3: 934-941). 또한, DGKζ는 성숙 B 세포의 활성화 역치를 제어하는 데 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다(Wheeler, Matthew L. 등 Science Signaling. 2013, 6.297: ra91-ra91). 요약하면, 모든 이러한 전임상 데이터는 DGKα 및 DGKζ의 표제 억제가 암에 대한 면역력을 촉진하는 데 치료학적으로 유익할 수 있음을 시사한다.
기존의 항-CTLA-4 및 항-PD-1 요법은 다양한 종양 유형을 가진 환자의 서브세트에서 명확한 임상적 이점을 나타냈지만, 강력하고 지속적인 임상적 항-종양 효능을 달성하기 위해 신규한 면역요법을 개발해야 하는 의학적 필요성은 여전히 충족되지 않았다. 전-임상 데이터는 항종양 면역력을 개선하기 위한 DGKα 및 DGKζ 표적화 요법 개발에 큰 잠재력이 있음을 강력히 시사한다.
상기 필요성은 신규한 코어 구조를 갖고 DGKα 및 DGKζ의 목적하는 억제를 나타내는 본원에 개시된 화합물을 제공함으로써 충족되었다. 일부 구현예에 있어서, 본원에 개시된 화합물은 DGKα 및 DGKζ 모두의 이중 억제 활성을 나타낸다. 일부 구현예에 있어서, 본원에 개시된 화합물은 DGKζ에 비해 DGKα의 선택적 억제 활성을 나타낸다. 일부 구현예에 있어서, 본원에 개시된 화합물은 DGKα에 비해 DGKζ의 선택적 억제 활성을 나타낸다.
본원에 개시된 것은 화학식 (I)의 화합물,
(I)
또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 제공하고
여기서
X1은 C 또는 N이고,
X2 및 X3의 각각은 -N- 또는 -CH-로부터 독립적으로 선택되고;
기호 는 단일 또는 이중 결합이고,
R1은 수소, 또는 중수소, 할로겐, 하이드록시, 알콕시 또는 사이클로알킬로 임의로 치환된 알킬이고;
R2는 수소, 할로겐, 알킬 또는 시아노이되, 단, X1이 N이고 X1에 부착된 결합 이 이중 결합인 경우 R2는 부재하고;
R4는 수소, 할로겐 또는 알킬이고, 여기서 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환되고, 여기서 R4a는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 -C1-6알킬, -C1-6알콕시 또는 -C3-8사이클로알킬로 임의로 치환되고;
R5는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, R5a-C(O)-, R5a-C(O)O-, R5a-O-C(O)-, R5a-C(O)NR5b-, R5a-NR5b-C(O)-, R5a-SO2- 또는 헤테로사이클릴이고, 여기서 상기 알킬 또는 알케닐은 비치환되거나 할로겐, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, 또는 NR5cR5d로 치환되고; 여기서 상기 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴의 각각은 비치환되거나 알킬, 시아노 또는 할로겐 치환된 알킬, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, NR5cR5d, 또는 R5c-SO2-로 치환되고, 여기서 R5a 및 R5b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 여기서 R5c 및 R5d는 수소 또는 알킬이고;
R6은 수소, 할로겐, 비치환되거나 할로겐 또는 시아노로 치환된 알킬이되, 단, R6이 부착된 질소에 부착된 결합 이 이중 결합인 경우 R6은 부재하고;
R7, R9, R8, 및 R10의 각각은 독립적으로 수소, 알킬, 알콕시, 또는 -C(O)R7a이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 할로겐, 시아노, 하이드록시, 또는 알콕시로 치환되고, 여기서 R7a는 수소, 알킬, 또는 알콕시이되, 단, R7 및 R9 중 적어도 하나는 수소가 아니거나;
R7 및 R9는 각각 수소이고 R8 및 R10은 함께 2개의 교두보(bridgehead) 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교(bridge)를 형성하거나; R8 및 R10은 각각 수소이고 R7 및 R9는 함께 2개의 교두보 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성하고;
L1은 직접 결합, -O-, -N(RL)-, -알킬렌- 또는 -C(O)-이고, 여기서 상기 -알킬렌-은 비치환되거나 -C(O)NRL1로 치환되고, RL은 수소 또는 알킬이고, 여기서 RL1은 수소, 알킬, 또는 알콕시알킬이고;
Cy1은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된, 아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기서 R3a는 중수소, 하이드록시, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴옥시로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 시아노, 또는 헤테로사이클릴로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다.
일부 구현예에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 아속(subgenus) 중 어느 하나이고:
여기서 변수는 본원에서와 같이 정의된다.
R
1
의 정의
일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 또는 중수소, 할로겐, 하이드록시, 알콕시 또는 사이클로알킬로 임의로 치환된 알킬이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 또는 중수소, 할로겐, 하이드록시, 알콕시 또는 사이클로알킬로 임의로 치환된 C1-4알킬이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 또는 중수소, 또는 할로겐으로 임의로 치환된 C1-3알킬이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 또는 중수소로 임의로 치환된 C1-3알킬이다.
일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 메틸, 메틸-d3, 에틸, 이소프로필, 2-하이드록시에틸, 2-메톡시에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 또는 사이클로프로필메틸이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 수소, 메틸, 에틸 또는 메틸-d3이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 메틸 또는 메틸-d3이다. 일부 구현예에 있어서, R1은 메틸이다.
R
2
의 정의
일부 구현예에 있어서, R2는 수소, 할로겐, 알킬 또는 시아노이되, 단, X1이 N이고 X1에 부착된 결합 이 이중 결합인 경우 R2는 부재한다. 일부 구현예에 있어서, R2는 수소, 할로겐, C1-4알킬 또는 시아노이다. 일부 구현예에 있어서, R2는 수소, F, Br, Cl 또는 CN이다.
R
4
의 정의
일부 구현예에 있어서, R4는 수소, 할로겐 또는 알킬이고, 여기서 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환되고, 여기서 R4a는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 -C1-6알킬, -C1-6알콕시 또는 -C3-8사이클로알킬로 임의로 치환된다. 일부 구현예에 있어서, R4는 수소, 할로겐 또는 C1-4알킬이고, 여기서 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환된다. 일부 구현예에 있어서, R4는 수소, 할로겐 또는 C1-4알킬이고, 여기서 알킬은 할로겐으로 임의로 치환된다.
일부 구현예에 있어서, R4는 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 트리플루오로메틸, 에틸, 또는 2,2,2-트리플루오로에틸이다. 일부 구현예에 있어서, R4는 수소이다.
R
5
의
정의
일부 구현예에 있어서, R5는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, R5a-C(O)-, R5a-C(O)O-, R5a-O-C(O)-, R5a-C(O)NR5b-, R5a-NR5b-C(O)-, R5a-SO2- 또는 헤테로사이클릴이고, 여기서 상기 알킬 또는 알케닐은 비치환되거나 할로겐, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, 또는 NR5cR5d로 치환되고; 여기서 상기 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴의 각각은 비치환되거나 알킬, 시아노 또는 할로겐 치환된 알킬, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, NR5cR5d, 또는 R5c-SO2-로 치환되고, 여기서 R5a 및 R5b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 및 여기서 R5c 및 R5d는 수소 또는 알킬이다.
일부 구현예에 있어서, R5는 수소, 알킬, 알케닐 또는 알키닐이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 시아노로 치환된다. 일부 구현예에 있어서, R5는 C1-4알킬, C2-4알케닐 또는 C2-4알키닐이고, 여기서 상기 알킬은 시아노로 치환된다.
일부 구현예에 있어서, R5는 수소, CN-CH2-, -CH2C(O)-OMe, -CH(CH3)CN, 옥시란-2-일메틸-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 프로프-1-엔-2-일, 부트-2-엔-1-일, 부트-3-엔-1-일, 메틸, 이소프로필, -CH2CH2-O-Me, -CH2C(O)NH2, -CH2CH2-OH, 사이클로프로필-CH2-, -CH2CH2N(CH3)2, CH3-SO2-, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로프로필-C(O)-, 1-시아노사이클로프로필, 2-시아노사이클로프로필, 2-시아노사이클로부틸, 3-(시아노메틸)-1-(에틸설포닐)아제티딘-3-일, 또는 1-시아노-2-사이클로펜틸에트-2-일이다. 바람직하게는, R5는 수소, CN-CH2-, -CH2C(O)-OMe, -CH(CH3)CN, 옥시란-2-일메틸-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일이다. 보다 바람직하게는, R5는 CN-CH2-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일이다.
일부 구현예에 있어서, R5는 CN-CH2-, -CH(CH3)CN, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일이다. 일부 구현예에 있어서, R5는 CN-CH2-이다. 일부 구현예에 있어서, R5는 -CH(CH3)CN이다. 일부 구현예에 있어서, R5는 프로프-2-인-1-일이다. 일부 구현예에 있어서, R5는 부트-2-인-1-일이다. 일부 구현예에 있어서, R5는 프로프-1-엔-2-일이다.
R
6
의 정의
일부 구현예에 있어서, R6은 부재하거나, 수소, 할로겐, 비치환되거나 할로겐 또는 시아노로 치환된 알킬이되, 단, R6이 부착된 질소에 부착된 결합 이 이중 결합인 경우 R6은 부재한다. 일부 구현예에 있어서, R6은 부재한다. 일부 구현예에 있어서, R6은 수소, F, Br, Cl 또는 비치환되거나 시아노로 치환된 C1-4알킬이다.
R
7
/ R
9
,
R
8
/ R
10
의 정의
일부 구현예에 있어서, R7, R9, R8, 및 R10의 각각은 독립적으로 수소, 알킬, 또는 -C(O)R7a이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 할로겐, 시아노, 하이드록시, 또는 알콕시로 치환되고, 여기서 R7a는 수소, 알킬, 또는 알콕시이되, 단, R7 및 R9 중 적어도 하나는 수소가 아니다.
일부 구현예에 있어서, R7 및 R9의 각각은 독립적으로 수소, 알킬, 또는 -C(O)R7a이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 할로겐, 시아노, 하이드록시, 또는 알콕시로 치환되고, 여기서 R7a는 수소, 알킬, 또는 알콕시이다. 일부 구현예에 있어서, R7 및 R9의 각각은 독립적으로 C1-4알킬이다. 일부 구현예에 있어서, R7 및 R9의 각각은 독립적으로 C1-2알킬이다.
일부 구현예에 있어서, R7 및 R9는 각각 독립적으로 수소, 메틸, 에틸, 메톡시메틸, 1-하이드록시에틸, 2-메톡시에틸, 시아노메틸, 하이드록시에틸, 하이드록시메틸, 메톡시카르보닐, 디플루오로메틸이되, 단, R7 및 R9 중 적어도 하나는 수소가 아니다.
일부 구현예에 있어서, R8 및 R10은 각각 수소이다.
일부 구현예에 있어서, R7은 메틸이고, R9는 메틸이거나; R7은 에틸이고, R9는 에틸이거나; R7은 메틸이고, R9는 에틸이거나; R7은 메틸이고, R9는 메톡시카르보닐이거나; R7은 수소이고, R9는 메틸이거나; R7은 수소이고, R9는 에틸이다.
일부 구현예에 있어서, R7 및 R9는 각각 수소이고 R8 및 R10은 함께 2개의 교두보 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다. 일부 구현예에 있어서, R7 및 R9는 각각 수소이고 R8 및 R10은 함께 2개의 교두보 원자 외에 1개의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다. 일부 구현예에 있어서, R7 및 R9는 각각 수소이고 R8 및 R10은 함께 2개의 교두보 원자 외에 2개의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다.
일부 구현예에 있어서, R8 및 R10은 각각 수소이고 R7 및 R9는 함께 2개의 교두보 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다. 일부 구현예에 있어서, R8 및 R10은 각각 수소이고 R7 및 R9는 함께 2개의 교두보 원자 외에 1개의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다. 일부 구현예에 있어서, R8 및 R10은 각각 수소이고 R7 및 R9는 함께 2개의 교두보 원자 외에 2개의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성한다.
L
1
의 정의
일부 구현예에 있어서, L1은 직접 결합, -O-, -N(RL)-, -알킬렌- 또는 -C(O)-이고, 여기서 RL은 수소 또는 알킬이다. 일부 구현예에 있어서, L1은 C1-4알킬렌, 바람직하게는 C1-2알킬렌이다. 일부 구현예에 있어서, L1은 직접 결합, -CH2-, -CH(CH3)-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CHF2)-, -N(H)-, -N(CH3)-, -O-, -CH(C(O)-NHCH2CH2OCH3)- 또는 -C(CH3)2-이다. 일부 구현예에 있어서, L1은 -CH2- 또는 -CH(CH3)-이다.
X
2
및 X
3
의 정의
일부 구현예에 있어서, X2 및 X3은 N 또는 CH이다. 일부 구현예에 있어서, X2는 N이고, X3은 N이거나; X2는 N이고, X3은 CH이거나; X2는 CH이고, X3은 N이거나; X2는 CH이고, X3은 N이다.
Cy
1
의 정의
일부 구현예에 있어서, Cy1은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된 아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로사이클릴옥시로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 시아노 또는 헤테로사이클릴로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된 아릴이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로사이클릴옥시로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 시아노 또는 헤테로사이클릴로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된 아릴이고, 여기서 R3a는 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 중수소-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, R3b-O-C(O)-, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로사이클릴-치환된 알킬로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴옥시는 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된 아릴이고, 여기서 R3a는 중수소, 플루오로, 브로모, 클로로, 메틸, 메틸-d3, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 메톡시, 메톡시메틸, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 디플루오로, 에톡시, 이소프로폭시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 사이클로프로필, 1-하이드록시에틸, 에틸, 1,1-디플루오로에틸, 시아노, 디메톡시, 디클로로, 사이클로프로필-, 아세트아미도, 1-메톡시에틸, 시아노메틸, 카르바모일, 메톡시카르보닐, 디메틸카르바모일, (디플루오로메톡시)메틸, 아미노, 1-(디플루오로메톡시)에틸, 아제티딘-1-일, 2-메톡시프로판-2-일, 1-메톡시사이클로프로필, 옥세탄-3-일, (옥세탄-3-일)메톡시, 옥세탄-3-일옥시, (테트라하이드로푸란-3-일)메톡시, (테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시, 1-메틸아제티딘-3-일, 또는 1-하이드록시아제티딘-3-일로부터 선택된다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 페닐이다. 일부 구현예에 있어서, Cy1은 위치 4에서 본원에 개시된 바와 같은 하나의 R3a로 치환되고 다른 위치에서 R3a로 임의로 치환된 페닐이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 나프탈레닐이다. 일부 구현예에 있어서, Cy1은 나프탈렌-1-일, 나프탈렌-2-일, 나프탈렌-3-일, 나프탈렌-4-일이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일, 3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일, 또는 이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로사이클릴 또는 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로사이클릴이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 또는 시아노로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 바람직하게는 R3a는 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬 또는 헤테로 사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이다. 일부 구현예에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로사이클릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환된 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 1,4-디옥사닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 디하이드로피리디닐이다. 일부 구현예에 있어서, Cy1은 테트라하이드로푸란-2-일, 테트라하이드로푸란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-2-일, 테트라하이드로-2H-피란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-4-일, 1,4-디옥산-2-일, 1,4-디옥산-3-일, 피페리딘-1-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피페라진-1-일, 피페라진-2-일, 피페라진-3-일, 피페라진-4-일, 1,2-디하이드로피리딘-3-일, 1,2-디하이드로피리딘-4-일, 1,2-디하이드로피리딘-5-일, 또는 1,2-디하이드로피리딘-6-일이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 피페리디닐(예를 들어, 피페리딘-1-일) 또는 피페라지닐(예를 들어, 피페라진-4-일)이고, 이는 위치 4에서 1개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환되고 다른 위치에서 R3a로 임의로 치환된다.
일부 구현예에 있어서, 상기 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로사이클릴은 크로마닐, 바람직하게는 크로만-2-일, 크로만-3-일, 크로만-4-일, 또는 크로만-6-일; 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일; 5,6,7,8-테트라하이드로퀴녹살린-2-일; 또는 벤조[d][1,3]디옥솔-5-일이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴 또는 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 또는 시아노로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 바람직하게는 R3a는 중수소, 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c)-, R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 보다 바람직하게는 R3a는 중수소, 플루오로, 브로모, 클로로, 메틸, 메틸-d3, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 메톡시, 메톡시메틸, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 디플루오로, 에톡시, 이소프로폭시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 사이클로프로필, 1-하이드록시에틸, 에틸, 1,1-디플루오로에틸, 시아노, 디메톡시, 디클로로, 사이클로프로필-, 아세트아미도, 1-메톡시에틸, 시아노메틸, 카르바모일, 메톡시카르보닐, 디메틸카르바모일, (디플루오로메톡시)메틸, 아미노, 1-(디플루오로메톡시)에틸, 아제티딘-1-일, 2-메톡시프로판-2-일, 1-메톡시사이클로프로필, 옥세탄-3-일, 1-메틸아제티딘-3-일, 또는 1-하이드록시아제티딘-3-일로부터 선택된다.
일부 구현예에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환된 피라졸릴, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐 또는 피리다지닐이다. 일부 구현예에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환된 1H-이미다졸-2-일, 1H-이미다졸-4-일, 1H-이미다졸-5-일, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일, 1H-인돌-2-일, 1H-인돌-3-일, 1H-인돌-4-일, 1H-인돌-5-일, 1H-인돌-6-일, 1H-인돌-7-일, 피라진-2-일, 또는 피리다진-4-일이다.
일부 구현예에 있어서, 상기 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환된 인돌릴, 벤조[d]이미다졸릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다조피리디닐, 벤조옥사졸릴, 벤조[d]티아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 나프티리디닐, 디옥시노피리디닐(dioxinopyridineyl), 퀴녹살리닐, 벤조[d]이미다졸릴, 또는 이미다조[4,5-b]피리디닐이다. 일부 구현예에 있어서, 상기 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 본원에 개시된 바와 같은 R3a로 치환된 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1H-벤조[d]이미다졸-5-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 1H-벤조[d]이미다졸-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 벤조[d]옥사졸-2-일, 벤조[d]옥사졸-4-일, 벤조[d]옥사졸-5-일, 벤조[d]옥사졸-6-일, 벤조[d]옥사졸-7-일, 벤조[d]티아졸-2-일, 벤조[d]티아졸-4-일, 벤조[d]티아졸-5-일, 벤조[d]티아졸-6-일, 벤조[d]티아졸-7-일, 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-8-일, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 1,8-나프티리딘-2-일, 1,8-나프티리딘-3-일, 1,8-나프티리딘-4-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-8-일, 퀴녹살린-6-일-2,3-d2, 1H-인돌-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 또는 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 퀴녹살리닐, 예를 들어, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 바람직하게는 퀴녹살린-6-일이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 여기서 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 또는 시아노로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 바람직하게는 R3a는 중수소, 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c)-, R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 보다 바람직하게는 R3a는 중수소, 플루오로, 브로모, 클로로, 메틸, 메틸-d3, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 메톡시, 메톡시메틸, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 디플루오로, 에톡시, 이소프로폭시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 사이클로프로필, 1-하이드록시에틸, 에틸, 1,1-디플루오로에틸, 시아노, 디메톡시, 디클로로, 사이클로프로필-, 아세트아미도, 1-메톡시에틸, 시아노메틸, 카르바모일, 메톡시카르보닐, 디메틸카르바모일, (디플루오로메톡시)메틸, 아미노, 1-(디플루오로메톡시)에틸, 아제티딘-1-일, 2-메톡시프로판-2-일, 1-메톡시사이클로프로필, 옥세탄-3-일, 1-메틸아제티딘-3-일, 1-하이드록시아제티딘-3-일, (2,2-디메틸모르폴리노)메틸, 4-((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸, 또는 (4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸로터 선택된다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 퀴녹살린-6-일이고, 여기서 R3a는 중수소, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 이소프로폭시, 디플루오로메톡시, 플루오로, 클로로, 시아노, 아미노, 또는 사이클로프로필이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은
a) 페닐, 2-(트리플루오로메톡시)페닐, 2-메톡시페닐, 2-(메톡시메틸)페닐, 2-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐, 4-플루오로-2-메톡시페닐, 4-플루오로-2-메틸페닐, 2-브로모-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(메틸설포닐)페닐, 4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-클로로-4-플루오로페닐, 2,4-디플루오로페닐, 2-에톡시-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-이소프로폭시페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐, 2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐, 2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐, 2-사이클로프로필-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(1-하이드록시에틸)페닐, 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐, 2-에틸-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-메톡시-4-플루오로페닐, 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐, 2-시아노-4-플루오로페닐, 4-플루오로-3-(메톡시메틸)페닐, 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2,6-디메톡시페닐, 2,4-디플루오로-6-메톡시페닐, 2,6-디클로로-4-플루오로페닐, 4-사이클로프로필페닐, 4-메톡시페닐, 4-플루오로페닐, 4-사이클로프로필-페닐, 4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-메틸페닐, 4-(디플루오로메틸)페닐, 4-이소프로폭시페닐, 2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-3-메톡시페닐, 2,6-디플루오로페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-아세트아미도페닐, 4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐, 2-(시아노메틸)-4-플루오로페닐, 3,4-디플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-카르바모일-4-플루오로페닐, 2-메톡시카르보닐-4-플루오로페닐, 2-(디메틸카르바모일)-4-플루오로페닐, 2-((디플루오로메톡시)메틸)-4-플루오로페닐, 2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐, 2-(아제티딘-1-일)-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(2-메톡시프로판-2-일)페닐, 4-(트리플루오로메틸)페닐, 3-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐, 4-플루오로-2-(옥세탄-2-일)페닐, 4-플루오로-2-(1-메틸아제티딘-3-일)페닐, 4-플루오로-2-(1-하이드록시아제티딘-3-일)페닐, 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐; 2-에틸-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-메톡시-4-플루오로페닐; 2,6-디플루오로-4-메톡시페닐; 2,5-디플루오로-4-메톡시페닐; 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐, 나프탈렌-2-일; 2-플루오로-4-메틸페닐; 4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐; 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐; 또는 4-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)페닐; 또는
b) 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일, 3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일, 또는 ; 또는
c) 테트라하이드로푸란-2-일, 테트라하이드로푸란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-2-일, 테트라하이드로-2H-피란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-4-일, 1,4-디옥산-2-일, 1,4-디옥산-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피페라진-2-일, 피페라진-3-일, 1,2-디하이드로피리딘-3-일, 1,2-디하이드로피리딘-4-일, 1,2-디하이드로피리딘-5-일, 1,2-디하이드로피리딘-6-일, 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일, 5,6,7,8-테트라하이드로퀴녹살린-2-일, 2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일, 또는 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일; 또는
d) 크로만-2-일, 크로만-3-일, 크로만-4-일, 크로만-6-일; 또는
e) 1H-피라졸-3-일, 1H-피라졸-4-일, 1H-피라졸-5-일, 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1H-이미다졸-2-일, 1H-이미다졸-4-일, 1H-이미다졸-5-일, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일, 1H-인돌-2-일, 1H-인돌-3-일, 1H-인돌-4-일, 1H-인돌-5-일, 1H-인돌-6-일, 1H-인돌-7-일, 3-메톡시피리딘-2-일, 3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘2-일, 3-플루오로-5-메틸피리딘-2-일, 5-클로로피리딘-2-일, (5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일, 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일, 5,6-디메틸피리딘-2-일, 6-메톡시-5-메틸피리딘-2-일, 4-플루오로-6-이소프로폭시피리딘-3-일, 6-이소프로폭시피리딘-3-일, 2-메톡시피리딘-3-일, 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일, 6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일, 6-메틸피리딘-3-일, 6-사이클로프로필피리딘-3-일, 6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일, 6-플루오로피리딘-3-일, 3-메톡시피리딘-4-일, 3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일, 5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일, 5-클로로-1-에틸-1H-이미다졸-2-일, 1-에틸-2-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-5-일, -에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일, -에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일, 1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일, 5-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-피라졸-4-일, 1-에틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일, 3-클로로-1-에틸-1H-피라졸-5-일, 1-에틸-4-메틸-1H-피라졸-5-일, 5-이소프로폭시피리딘-2-일, 6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일, 3,5-디플루오로피리딘-2-일, 3,5-디플루오로피리딘-4-일, 1-에틸-4-시아노-1H-피라졸-3-일, 5-플루오로피리딘-2-일, 5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일, 5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일, 피라진-2-일, 5,6-디메틸피라진-2-일, 5-메틸피라진-2-일 또는 3-(트리플루오로메틸)피리다진-4-일; 또는
f) 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1H-벤조[d]이미다졸-5-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 1H-벤조[d]이미다졸-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일, 2-메틸-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 벤조[d]옥사졸-2-일, 벤조[d]옥사졸-4-일, 벤조[d]옥사졸-5-일, 벤조[d]옥사졸-6-일, 벤조[d]옥사졸-7-일, 벤조[d]티아졸-2-일, 벤조[d]티아졸-4-일, 벤조[d]티아졸-5-일, 2-메틸벤조[d]티아졸-5-일, 벤조[d]티아졸-6-일, 벤조[d]티아졸-7-일, 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-8-일, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 1,8-나프티리딘-2-일, 1,8-나프티리딘-3-일, 1,8-나프티리딘-4-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-8-일, 3-메틸퀴녹살린-6-일, 3-메톡시퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-6-일-2,3-d2, 1-에틸-1H-인돌-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-프로필-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-7-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 3-에틸-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1-에틸-1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일, 3-아미노퀴녹살린-6-일, 3-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 2-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-바이플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-(1,1-바이플루오로에틸)퀴녹살린-6-일, 2-중수소-3-메틸퀴녹살린-6-일, 2-중수소-3-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-5-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-7-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-5-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-메틸-7-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디메틸-퀴녹살린-6-일, 3-에틸-퀴녹살린-6-일, 3-클로로-퀴녹살린-6-일, 4-메톡시-퀴녹살린-6-일, 3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일, 3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일, 3-사이클로프로필-퀴녹살린-6-일, 2-하이드록시-3-메틸퀴녹살린-6-일, 또는 3-(메틸-d3)퀴녹살린-6-일; 또는
g) 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일, 2,3-디하이드로-1H-인덴-2-일, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-1-일, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-2-일, 또는 6,7,8,9-테트라하이드로-5H-벤조[7]아눌렌-5-일이다.
일부 구현예에 있어서, Cy1은 2-(트리플루오로메톡시)페닐; 2-메톡시페닐; 2-(메톡시메틸)페닐; 2-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐; 4-플루오로-2-메톡시페닐; 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐; 4-플루오로-2-메틸페닐; 2-브로모-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(메틸설포닐)페닐; 4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-클로로-4-플루오로페닐; 2,4-디플루오로페닐; 2-에톡시-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-이소프로폭시페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐; 2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐; 2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐; 2-사이클로프로필-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(1-하이드록시에틸)페닐; 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐; 2-에틸-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-메톡시-4-플루오로페닐; 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐; 4-플루오로-3-(메톡시메틸)페닐; 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-2,6-디메톡시페닐; 2,4-디플루오로-6-메톡시페닐; 2,6-디클로로-4-플루오로페닐; 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일; 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일; 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일; 3-메톡시피리딘-2-일; 2-메톡시피리딘-3-일; 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일; 6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일; 3-메톡시피리딘-4-일; 5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일; 5-클로로-1-에틸-1H-이미다졸-2-일; 1-에틸-2-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-5-일; 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1-에틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일; 3-클로로-1-에틸-1H-피라졸-5-일; 1-에틸-4-메틸-1H-피라졸-5-일; 퀴놀린-3-일; 퀴놀린-2-일; 퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일; 3-아미노퀴녹살린-6-일; 3-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-바이플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-(1,1-바이플루오로에틸)퀴녹살린-6-일; 2-중수소-3-메틸퀴녹살린-6-일; 2-중수소-3-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-5-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-7-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-5-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸-7-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 퀴녹살린-6-일-2,3-d2; 1-에틸-1H-인돌-2-일; 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-프로필-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-7-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일; 3-에틸-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일; 1-에틸-1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일; 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 3-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일; 4-사이클로프로필페닐; 4-메톡시페닐; 4-플루오로페닐; 4-사이클로프로필-페닐; 4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-메틸페닐; 4-(디플루오로메틸)페닐; 4-이소프로폭시페닐; 2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐; 2,4-디플루오로페닐; 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-3-메톡시페닐; 2,6-디플루오로페닐; 2,6-디플루오로-4-메톡시페닐; 2,5-디플루오로-4-메톡시페닐; 나프탈렌-2-일; 3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일; 크로만-4-일; 크로만-6-일; 4,4-디플루오로크로만-6-일; 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-1-일; 2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일; 5-이소프로폭시피리딘-2-일; 6-이소프로폭시피리딘-3-일; 6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일; 3,5-디플루오로피리딘-2-일; 3,5-디플루오로피리딘-4-일; 1-에틸-4-시아노-1H-피라졸-3-일; 퀴놀린-2-일; 이소퀴놀린-3-일; 이소퀴놀린-6-일; 이소퀴놀린-7-일; 1,8-나프티리딘-2-일; 퀴녹살린-6-일; 퀴녹살린-2-일; [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일; 벤조[d]티아졸-2-일; 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일; 3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일; 4-(트리플루오로메톡시)페닐; 4-플루오로페닐; 4-아세트아미도페닐; 피리딘-2-일; 피리딘-3-일; 피리딘-4-일; 5-플루오로피리딘-2-일; 피라진-2-일; 피리미딘-2-일; 퀴놀린-7-일; 3-메틸이소퀴놀린-7-일; 퀴녹살린-6-일; 퀴놀린-6-일; 퀴놀린-7-일; 또는 피리미딘-4-일이다.
일부 구현예에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (If)의 화합물이고
(If)
여기서 R1, R2, R4, R5, R7, R8, R9, R10, X2, X3, L1, Cy1은 화학식 (I)에서와 같이 정의된다.
정의
하기 용어는 명세서 전반에 걸쳐 나타낸 의미를 갖는다:
첨부된 청구범위를 포함하여, 본원에 사용된 바와 같이, “a”, "an", 및 "the"와 같은 단어의 단수형은 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 상응하는 복수형 참조를 포함한다.
용어 “또는”은 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 용어 "및/또는"을 의미하고, 이와 상호교환적으로 사용된다.
용어 "알킬"은 동일한 탄소 원자로부터 하나의 수소 원자를 제거하여 알칸으로부터 유도된 선형 및 분지형 포화 탄화수소기로부터 선택되는 탄화수소기를 지칭하고, 이는 1 내지 18개, 예컨대, 1 내지 12개, 추가로, 예컨대, 1 내지 10개, 보다 추가로, 예컨대, 1 내지 8개, 또는 1 내지 6개, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 포함한다. 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 알킬기(즉, C1-6 알킬)의 예는 메틸, 에틸, 1-프로필 또는 n-프로필("n-Pr"), 2-프로필 또는 이소프로필("i-Pr"), 1-부틸 또는 n-부틸("n-Bu"), 2-메틸-1-프로필 또는 이소부틸("i-Bu"), 1-메틸프로필 또는 s-부틸("s-Bu"), 1,1-디메틸에틸 또는 t-부틸("t-Bu"), 1-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸 및 3,3-디메틸-2-부틸기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 알킬기는, 예를 들어, -CD3, -CD2CD3 등과 같이 임의로 중수소가 풍부할 수 있다. 용어 "알킬렌"은 동일한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거하여 알칸으로부터 유도된 선형 및 분지형 포화 탄화수소기로부터 선택되는 탄화수소기를 지칭하고, 이는 1 내지 6개, 예컨대, 1 내지 4개의 탄소 원자, 추가로, 예컨대, 1 내지 3개, 보다 추가로, 예컨대, 1, 2 또는 3개의 탄소 원자를 포함하며, 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-CH2CH2-), 1-메티메틸렌(-CH(CH3)-), 또는 트리메틸렌(-CH2CH2CH2-)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 “할로겐"은 플루오로(F), 클로로(Cl), 브로모(Br) 및 요오도(I)를 지칭한다.
용어 “할로알킬"은 하나 이상의 수소가 플루오로, 클로로, 브로모, 및 요오도와 같은 하나 이상의 할로겐 원자로 대체된 알킬기를 지칭한다. 할로알킬의 예는 할로C1-8알킬, 할로C1-6알킬 또는 할로 C1-4알킬을 포함하지만, -CF3, -CH2Cl, -CH2CF3, -CCl2, CF3 등에 제한되는 것은 아니다.
용어 "알킬옥시" 또는 "알콕시"는 산소 원자를 통해 모분자 모이어티에 부착된 상기 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 알킬옥시, 예를 들어, C1-6알킬옥시 또는 C1-4 알킬옥시의 예는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 프로폭시, n-부톡시, tert-부톡시, 펜톡시 및 헥속시 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않다.
용어 “아미노"는 -NH2를 지칭한다.
용어 "알케닐"은 적어도 하나의 C = C 이중 결합 및 2 내지 18개, 예컨대, 2 내지 8개, 추가로, 예컨대, 2 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 선형 및 분지형 탄화수소기로부터 선택되는 탄화수소기를 지칭한다. 알케닐기, 예를 들어, C2-6 알케닐의 예는 에테닐 또는 비닐, 프로프-1-에닐, 프로프-2-에닐, 2-메틸프로프-1-에닐, 부트-1-에닐, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 부타-1,3-디에닐, 2-메틸부타-1,3-디에닐, 헥스-1-에닐, 헥스-2-에닐, 헥스-3-에닐, 헥스-4-에닐, 및 헥사-1,3-디에닐기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "알키닐"은 적어도 하나의 C≡C 삼중 결합 및 2 내지 18개, 예컨대, 2 내지 8개, 추가로, 예컨대, 2 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는, 선형 및 분지형 탄화수소기로부터 선택되는 탄화수소기를 지칭한다. 알키닐기, 예를 들어, C2-6 알키닐의 예는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐(프로파르길), 1-부티닐, 2-부티닐, 및 3-부티닐기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "사이클로알킬"은 융합된, 가교된 또는 스피로 사이클로알킬을 포함하는 모노사이클릭 및 폴리사이클릭(예를 들어, 바이사이클릭 및 트리사이클릭)기를 포함하는 포화 사이클릭 탄화수소기로부터 선택되는 탄화수소기를 지칭한다.
예를 들어, 사이클로알킬기는 3 내지 12개, 예컨대, 3 내지 10개, 추가로, 예컨대, 3 내지 8개, 추가로, 예컨대, 3 내지 6개, 3 내지 5개, 또는 3 내지 4개의 탄소 원자를 포함할 수 있다. 보다 추가로, 예를 들어, 사이클로알킬기는 3 내지 12개, 예컨대, 3 내지 10개, 추가로, 예컨대, 3 내지 8개, 3 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 모노사이클릭기로부터 선택될 수 있다. 모노사이클릭 사이클로알킬기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐, 1-사이클로헥스-3-에닐, 사이클로헥사디에닐, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐, 사이클로데실, 사이클운데실, 및 사이클로도데실기를 포함한다. 특히, 포화 모노사이클릭 사이클로알킬기, 예를 들어, C3-8사이클로알킬의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸기를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 바람직한 구현예에 있어서, 사이클로알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 및 사이클로헥실을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 3 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 모노사이클릭 고리(C3-6 사이클로알킬로 약칭됨)이다. 바이사이클릭 사이클로알킬기의 예는 [4,4], [4,5], [5,5], [5,6] 및 [6,6] 고리 시스템으로부터 선택되는 융합된 바이사이클릭 고리, 또는 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 바이사이클로[2.2.2]옥탄, 및 바이사이클로[3.2.2]노난으로부터 선택되는 가교된 바이사이클릭 고리로서 배열된 7 내지 12개의 고리 원자를 갖는 것들을 포함한다. 바이사이클릭 사이클로알킬기의 추가 예는 [5,6] 및 [6,6] 고리 시스템으로부터 선택되는 바이사이클릭 고리로서 배열된 것들을 포함한다.
용어 "중수소화"는 화학 구조 또는 유기 기 또는 라디칼을 변형하기 위해 본원에 사용되고, 여기서 하나 이상의 탄소-결합 수소(들)는, 예를 들어, "중수소화-알킬", "중수소화-사이클로알킬", "중수소화-헤테로사이클로알킬", "중수소화-아릴", "중수소화-모르폴리닐" 등과 같이 하나 이상의 중수소(들)로 대체된다. 예를 들어, 상기에 정의된 용어 "중수소화-알킬"은 탄소에 결합된 적어도 하나의 수소 원자가 중수소로 대체된, 본원에 정의된 바와 같은 알킬기를 지칭한다. 중수소화 알킬기에서, 적어도 하나의 탄소 원자는 중수소에 결합되며; 하나의 탄소 원자가 하나 초과의 중수소에 결합되는 것이 가능하고; 또한 알킬기 내의 하나 초과의 탄소 원자가 하나의 중수소에 결합되는 것도 가능하다.
단독으로 또는 다른 용어와 조합하여 사용되는 용어 "아릴"은 하기로부터 선택되는 기를 지칭한다:
5원 및 6원 카르보사이클릭 방향족 고리, 예를 들어, 페닐;
7원 내지 12원 바이사이클릭 고리 시스템과 같은 바이사이클릭 고리 시스템, 여기서 적어도 하나의 고리는 카르보사이클릭 및 방향족임, 예를 들어, 나프틸 및 인다닐; 및,
10원 내지 15원 트리사이클릭 고리 시스템과 같은 트리사이클릭 고리 시스템, 여기서 적어도 하나의 고리는 카르보사이클릭 및 방향족임, 예를 들어, 플루오레닐.
용어 "방향족 탄화수소 고리" 및 "아릴"은 본원의 개시내용 전반에 걸쳐 상호교환적으로 사용된다. 일부 구현예에 있어서, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 탄화수소 고리는 5 내지 10개의 고리-형성 탄소 원자를 갖는다(즉, C5-10 아릴). 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 탄화수소 고리의 예는 페닐, 나프트-1-일, 나프트-2-일, 안트라세닐, 페난트레닐 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 방향족 탄화수소 고리는 나프탈렌 고리(나프트-1-일 또는 나프트-2-일) 또는 페닐 고리이다. 일부 구현예에 있어서, 방향족 탄화수소 고리는 페닐 고리이다.
용어 "헤테로아릴"은 하기로부터 선택되는 기를 지칭한다:
- 질소(N), 황(S) 및 산소(O)로부터 선택되는, 적어도 하나의 헤테로원자, 예를 들어, 1 내지 4개, 또는, 일부 구현예에 있어서, 1 내지 3개, 일부 구현예에 있어서, 1 내지 2개의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 원자는 탄소인, 5원, 6원 또는 7원 방향족 모노사이클릭 고리;
- 고리 구성원(들)으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는, 적어도 하나의 헤테로원자, 예를 들어, 1 내지 4개, 또는, 일부 구현예에 있어서, 1 내지 3개, 또는, 다른 구현예에 있어서, 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 원자는 탄소인, 7원 내지 12원 바이사이클릭 고리, 여기서 적어도 하나의 고리는 방향족이고 적어도 하나의 헤테로원자는 방향족 고리에 존재함; 및
- 고리 구성원(들)으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는, 적어도 하나의 헤테로원자, 예를 들어, 1 내지 4개, 또는, 일부 구현예에 있어서, 1 내지 3개, 또는, 다른 구현예에 있어서, 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 원자는 탄소인, 11원 내지 14원 트리사이클릭 고리, 여기서 적어도 하나의 고리는 방향족이고 적어도 하나의 헤테로원자는 방향족 고리에 존재함.
헤테로아릴기 내의 S 및 O 원자의 총 수가 1을 초과하는 경우, 해당 헤테로원자는 서로 인접하지 않는다. 일부 구현예에 있어서, 헤테로아릴기 내의 S 및 O 원자의 총 수는 2 이하이다. 일부 구현예에 있어서, 방향족 헤테로사이클 내의 S 및 O 원자의 총 수는 1 이하이다. 헤테로아릴기가 하나 초과의 헤테로원자 고리 구성원을 함유하는 경우, 헤테로원자는 동일하거나 상이할 수 있다. 헤테로아릴기의 고리(들) 내의 질소 원자는 산화되어 N-옥사이드를 형성할 수 있다.
용어 "임의로 산화된 황"은 -S-, SO 또는 SO2를 지칭한다.
용어 "방향족 헤테로사이클릭 고리" 및 "헤테로아릴"은 본원의 개시내용 전반에 걸쳐 상호교환적으로 사용된다. 일부 구현예에 있어서, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리는 질소(N), 황(S) 및 산소(O)로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3, 또는 4개의 헤테로원자 고리 구성원을 포함하고 나머지 고리 구성원은 탄소인, 5-, 6-, 7-, 8-, 9- 또는 10개의 고리 형성 구성원을 갖는다. 일부 구현예에 있어서, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리는 질소(N), 황(S) 및 산소(O)로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 헤테로원자 고리 구성원을 포함하는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 고리이다. 일부 구현예에 있어서, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리는 5원 내지 6원 헤테로아릴 고리이고, 이는 모노사이클릭이며 질소(N), 황(S) 및 산소(O)로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는다. 일부 구현예에 있어서, 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리는 8원 내지 10원 헤테로아릴 고리이고, 이는 바이사이클릭이며 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 헤테로원자 고리 구성원을 갖는다.
헤테로아릴기 또는 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 방향족 헤테로사이클릭 고리의 예는 (우선순위 1로 지정된 연결 위치부터 번호가 매겨진) 1H-피라졸릴(예컨대, 1H-피라졸-3-일, 1H-피라졸-4-일 또는 1H-피라졸-5-일), 피리딜 또는 피리디닐(예컨대, 2-피리딜, 3-피리딜, 또는 4-피리딜), 신놀리닐, 피라지닐, 피리미디닐(예컨대, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일 또는 2,4-피리미디닐, 3,5-피리미디닐), 이미다졸릴(예컨대, 1H-이미다졸-2-일, 1H-이미다졸-4-일, 1H-이미다졸-5-일, 또는 2,4-이미다졸릴), 이미다조피리디닐, 이소옥사졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴(예컨대, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 또는 1,3,4-티아디아졸릴), 테트라졸릴, 티에닐(예컨대, 티엔-2-일, 티엔-3-일), 트리아지닐, 벤조티에닐, 푸릴 또는 푸라닐, 벤조푸릴, 벤조이미다졸릴, 인돌릴(예컨대, 1H-인돌-2-일, 1H-인돌-3-일, 1H-인돌-4-일, 1H-인돌-5-일, 1H-인돌-6-일 또는 1H-인돌-7-일), 이소인돌릴, 인돌리닐, 옥사디아졸릴(예컨대, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 또는 1,3,4-옥사디아졸릴), 프탈라지닐, 피라지닐(예컨대, 피라진-2-일), 피리다지닐, 피롤릴, 트리아졸릴(예컨대, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 또는 1,3,4-트리아졸릴), 퀴놀리닐(예컨대, 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 또는 퀴놀린-7-일), 이소퀴놀리닐(예컨대, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일, 또는 이소퀴놀린-8-일), 피라졸릴, 피롤로피리디닐(예컨대, 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일), 피라졸로피리디닐(예컨대, 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-5-일), 프테리디닐, 퓨리닐, 1-옥사-2,3-디아졸릴, 1-옥사-2,4-디아졸릴, 1-옥사-2,5-디아졸릴, 1-옥사-3,4-디아졸릴, 1-티아-2,3-디아졸릴, 1-티아-2,4-디아졸릴, 1-티아-2,5-디아졸릴, 1-티아-3,4-디아졸릴, 푸라자닐(예컨대, 푸라잔-2-일, 푸라잔-3-일), 벤조푸라자닐, 벤조티오페닐, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴(예컨대, 벤조[d]옥사졸-2-일, 벤조[d]옥사졸-4-일, 벤조[d]옥사졸-5-일, 벤조[d]옥사졸-6-일 또는 벤조[d]옥사졸-7-일), 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐(예컨대, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일 또는 퀴녹살린-8-일), 나프티리디닐(예컨대, 1,8-나프티리딘-2-일, 1,8-나프티리딘-3-일, 또는 1,8-나프티리딘-4-일), 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리디닐(예컨대, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일, 또는 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-8-일), 푸로피리디닐, 벤조티아졸릴(예컨대, 벤조[d]티아졸-2-일, 벤조[d]티아졸-4-일, 벤조[d]티아졸-5-일, 벤조[d]티아졸-6-일 또는 벤조[d]티아졸-7-일), 벤조[d]이미다졸릴(예컨대, 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1H-벤조[d]이미다졸-5-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일 또는 1H-벤조[d]이미다졸-7-일), [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리디닐(예컨대, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일, 또는 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일), 3H-이미다조[4,5-b]피리디닐(예컨대, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일 또는 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일), 1H-이미다조[4,5-b]피리디닐(예컨대, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일), [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리디닐(예컨대, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, 1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일 또는 [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일), 인다졸릴(예컨대, 1H-인다졸-5-일) 및 5,6,7,8-테트라하이드로이소퀴놀린을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
또한, "헤테로사이클릴"과 융합된 "헤테로아릴"은 "헤테로아릴"로서 정의된다.
"헤테로사이클릴", "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클릭"은 상호교환가능하고 고리 구성원으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 구성원은 탄소이고, 모노사이클릭, 융합된, 가교된, 및 스피로 고리를 포함하며, 즉, 모노사이클릭 헤테로사이클릴, 가교된 헤테로사이클릴, 스피로 헤테로사이클릴, 및 융합된 헤테로사이클릭기를 함유하는 비-방향족 헤테로사이클릴기를 지칭한다.
용어 "모노사이클릭 헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 고리 구성원이 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는 헤테로원자인 모노사이클릭기를 지칭한다. 헤테로사이클은 포화되거나 부분 포화될 수 있다.
예시적인 모노사이클릭 4원 내지 9원 헤테로사이클릴기는 (우선순위 1로 지정된 연결 위치부터 번호가 매겨진) 피롤리딘-1-일, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 이미다졸리딘-2-일, 이미다졸리딘-4-일, 피라졸리딘-2-일, 피라졸리딘-3-일, 피페리딘-1-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 2,5-피페라지닐, 피라닐, 모르폴리닐, 모르폴리노, 모르폴린-2-일, 모르폴린-3-일, 옥시라닐, 아지리딘-1-일, 아지리딘-2-일, 아조칸-1-일, 아조칸-2-일, 아조칸-3-일, 아조칸-4-일, 아조칸-5-일, 티이라닐, 아제티딘-1-일, 아제티딘-2-일, 아제티딘-3-일, 옥세타닐, 티에타닐, 1,2-디티에타닐, 1,3-디티에타닐, 디하이드로피리디닐, 테트라하이드로피리디닐, 티오모르폴리닐, 티옥사닐, 피페라지닐, 호모피페라지닐, 호모피페리디닐, 아제판-1-일, 아제판-2-일, 아제판-3-일, 아제판-4-일, 옥세파닐, 티에파닐, 1,4-옥사티아닐, 1,4-디옥세파닐, 1,4-옥사티에파닐, 1,4-옥사아제파닐, 1,4-디티에파닐, 1,4-티아제파닐 및 1,4-디아제파닐, 1,4-디티아닐, 1,4-아자티아닐, 옥사제피닐, 디아제피닐, 티아제피닐, 디하이드로티에닐, 디하이드로피라닐, 디하이드로푸라닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로티오피라닐, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 인돌리닐, 2H-피라닐, 4H-피라닐, 1,4-디옥사닐, 1,3-디옥솔라닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 디티아닐, 디티올라닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 피리미디노닐, 또는 1,1-디옥소티오모르폴리닐을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 "스피로 헤테로사이클릴"은 하나의 공통 탄소 원자(스피로 원자라고 함)를 통해 연결된 고리를 갖고, 고리 구성원으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 구성원은 탄소인, 5원 내지 20원 폴리사이클릭 헤테로사이클릴을 지칭한다. 스피로 헤테로사이클릴기의 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖지 않는다. 바람직하게는 스피로 헤테로사이클릴은 6원 내지 14원, 보다 바람직하게는 7원 내지 12원이다. 공통 스피로 원자의 수에 따라, 스피로 헤테로사이클릴은 모노-스피로 헤테로사이클릴, 디-스피로 헤테로사이클릴, 또는 폴리-스피로 헤테로사이클릴로 구분되고, 바람직하게는 모노-스피로 헤테로사이클릴 또는 디-스피로 헤테로사이클릴을 지칭하며, 보다 바람직하게는 4원/4원, 3원/5원, 4원/5원, 4원/6원, 5원/5원, 또는 5원/6원 모노-스피로 헤테로사이클릴을 지칭한다.
용어 "융합된 헤테로사이클릭기"는 5원 내지 20원 폴리사이클릭 헤테로사이클릴기를 지칭하고, 여기서 시스템 내의 각각의 고리는 고리 구성원으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하며, 나머지 고리 구성원은 탄소인, 또 다른 고리와 인접한 원자 쌍(탄소와 탄소 원자 또는 탄소와 질소 원자)을 공유한다. 융합된 헤테로사이클릭기의 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖지 않는다. 바람직하게는, 융합된 헤테로사이클릴은 6원 내지 14원, 보다 바람직하게는 7원 내지 10원이다. 구성원 고리의 수에 따라, 융합된 헤테로사이클릴은 바이사이클릭, 트리사이클릭, 테트라사이클릭, 또는 폴리사이클릭 융합된 헤테로사이클릴로 구분되고, 바람직하게는 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 융합된 헤테로사이클릴, 보다 바람직하게는 5원/5원, 또는 5원/6원 바이사이클릭 융합된 헤테로사이클릴을 지칭한다. 융합된 헤테로사이클의 대표적인 예는 하기 기 옥타하이드로사이클로펜타[c]피롤(예를 들어, 옥타하이드로사이클로펜타[c]피롤-2-일), 옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤릴, 옥타하이드로이소인돌릴, 이소인돌리닐(예를 들어, 이소인돌린-2-일), 옥타하이드로-벤조[b][1,4]디옥신을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
용어 “가교된 헤테로사이클릴"은 5원 내지 14원 폴리사이클릭 헤테로사이클릭 알킬기를 지칭하고, 여기서 시스템 내의 모든 2개의 고리는 2개의 분리된 원자를 공유하며, 고리 구성원으로서 질소, 산소 또는 임의로 산화된 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하고, 나머지 고리 구성원은 탄소이다. 가교된 헤테로사이클릴기의 하나 이상의 고리는 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 고리 중 어느 것도 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖지 않는다. 바람직하게는, 가교된 헤테로사이클릴은 6원 내지 14원, 보다 바람직하게는 7원 내지 10원이다. 구성원 고리의 수에 따라, 가교된 헤테로사이클릴은 바이사이클릭, 트리사이클릭, 테트라사이클릭 또는 폴리사이클릭 가교된 헤테로사이클릴로 구분되고, 바람직하게는 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 가교된 헤테로사이클릴, 보다 바람직하게는 바이사이클릭 또는 트리사이클릭 가교된 헤테로사이클릴을 지칭한다. 가교된 헤테로사이클릴의 대표적인 예는 하기 기: 2-아자바이사이클로[2.2.1]헵틸, 아자바이사이클로[3.1.0]헥실, 2-아자바이사이클로[2.2.2]옥틸 및 2-아자바이사이클로[3.3.2]데실을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 개시된 화합물은 비대칭 중심을 함유할 수 있고 따라서 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. "거울상이성질체"는 서로 비-가시중첩성(superimposable) 거울상인 화합물의 두 입체이성질체를 지칭한다. 본원에 개시된 화합물이 둘 이상의 비대칭 중심을 보유하는 경우, 이는 추가적으로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 넓은 종류의 입체이성질체에 속한다. 실질적으로 순수한 분해된 거울상이성질체, 이의 라세미 혼합물뿐만 아니라 부분입체이성질체의 혼합물로서 모든 이러한 가능한 입체이성질체가 포함되는 것으로 의도된다. 본원에 개시된 화합물 및/또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 모든 입체이성질체가 포함되는 것으로 의도된다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 하나의 이성질체에 대한 참조는 임의의 가능한 이성질체에 적용된다. 이성질체 조성이 지정되지 않은 경우, 모든 가능한 이성질체가 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "실질적으로 순수한"은 표제 입체이성체가 임의의 다른 입체이성질체(들)의 중량 기준으로, 35% 이하, 예컨대, 30% 이하, 추가로, 예컨대, 25% 이하, 보다 추가로, 예컨대, 20% 이하를 함유한다는 것을 의미한다. 일부 구현예에 있어서, 용어 "실질적으로 순수한"은 표제 입체이성체가 임의의 다른 입체이성체(들)의 중량 기준으로, 10% 이하, 예를 들어, 5% 이하, 예컨대, 1% 이하를 함유한다는 것을 의미한다.
본원에 개시된 화합물이 올레핀 이중 결합을 함유하는 경우, 달리 명시되지 않는 한, 이러한 이중 결합은 E 및 Z 기하 이성질체를 모두 포함하는 것을 의미한다.
본원에 개시된 화합물이 이-치환된 사이클로헥실 또는 사이클로부틸기를 함유하는 경우, 사이클로헥실 또는 사이클로부틸 고리 상에서 발견되는 치환기는 시스 및 트랜스 형성을 채택할 수 있다. 시스 형성은 두 치환기가 모두 탄소 상의 2개의 치환기 위치 중 상부에서 발견된다는 것을 의미하는 반면, 트랜스는 이들이 반대쪽에 있다는 것을 의미한다.
반응 생성물을 서로 및/또는 출발 물질로부터 분리하는 것이 유리할 수 있다. 각각의 단계 또는 일련의 단계의 목적하는 생성물은 기술분야에서 통상적인 기술에 의해 목적하는 정도의 균질성으로 분리 및/또는 정제(이하 분리)된다. 전형적으로 이러한 분리는 다상 추출, 용매 또는 용매 혼합물로부터의 결정화, 증류, 승화, 또는 플래시 컬럼 크로마토그래피를 수반한다. 플래시 컬럼 크로마토그래피는, 예를 들어: 역상 및 순상; 크기 배제; 이온 교환; 고압, 중압 및 저압 액체 플래시 컬럼 크로마토그래피 방법 및 장치; 소규모 분석; 모의 이동층("SMB; simulated moving bed") 및 분취용 박층 또는 후층 플래시 컬럼 크로마토그래피뿐만 아니라 소규모 박층 및 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피를 포함하는 임의의 수의 방법을 수반할 수 있다. 통상의 기술자는 목적하는 분리를 달성할 가능성이 가장 높은 기술을 적용할 것이다.
"부분입체이성질체"는 2개 이상의 카이랄 중심을 갖지만 서로 거울상이 아닌 화합물의 입체이성질체를 지칭한다. 부분입체이성질체 혼합물은 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예컨대, 플래시 컬럼 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 그 물리적 화학적 차이를 기반으로 개별 부분입체이성질체로 분리될 수 있다. 거울상 이성질체는 적절한 광학 활성 화합물(예를 들어, 카이랄 알코올 또는 모셔 산 클로라이드(Mosher's acid chloride)와 같은 카이랄 보조제)과의 반응에 의해 거울상이성질체 혼합물을 부분입체이성질체 혼합물로 전환하고, 부분입체이성질체를 분리하고 개별 부분입체이성질체를 상응하는 순수한 거울상이성질체로 전환(예를 들어, 가수분해)함으로써 분리될 수 있다. 거울상이성질체는 또한 카이랄 HPLC 컬럼을 사용하여 분리될 수도 있다. 단일 입체이성질체, 예를 들어, 실질적으로 순수한 거울상이성질체는 광학 활성 분해제를 사용하는 부분입체이성질체의 형성과 같은 방법을 사용하여 라세미 혼합물의 분해에 의해 수득될 수 있다[Eliel, E. 및 Wilen, S. Stereochemistry of Organic Compounds. New York: John Wiley & Sons, Inc., 1994; Lochmuller, C. H. 등 "Flash column chromatographyic resolution of enantiomers: Selective review." J. Chromatogr., 113(3) (1975): pp. 283-302]. 본 발명의 카이랄 화합물의 라세미 혼합물은 (1) 카이랄 화합물과의 이온성, 부분입체이성질체성 염의 형성 및 분별 결정화 또는 기타 방법에 의한 분리, (2) 카이랄 유도체화 시약과의 부분입체이성질체성 화합물의 형성, 부분입체이성질체의 분리, 및 순수한 입체이성질체로의 전환, 및 (3) 카이랄 조건 하에서 직접 실질적으로 순수하거나 풍부한 입체이성질체의 분리를 포함하는, 임의의 적합한 방법에 의해 분리 및 단리될 수 있다. 참조: Wainer, Irving W., Ed. Drug Sterechemistry: Analytical Methods and Pharmacology. New York: Marcel Dekker, Inc., 1993. 화합물 내 카이랄 중심의 절대 배열은 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예를 들어, 단결정 X-선 결정학 또는 표적화 단백질과의 관심 화합물의 공-결정 형성을, 때로는 분광학 기술, 예를 들어, NMR 분광학과 커플링하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 화합물 내 카이랄 중심의 절대 배열은 화합물의 X-선 단결정 구조로부터 설명될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 화합물의 X-선 결정 구조에 의해 설명된 카이랄 중심의 절대 배열을 사용하여 동일하거나 유사한 합성 방법론으로부터 수득된 중간체 또는 또 다른 화합물 내 상응하는 카이랄 중심의 절대 배열을 추론할 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한 염"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 등이 없이 인간 및 하급 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 염을 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 염은 본원에 개시된 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 인 시츄(in situ) 제조될 수 있거나, 유리 염기 기능을 적합한 유기산과 반응시키거나 산성 기를 적합한 염기와 반응시킴으로써 별도로 제조될 수 있다.
"선택적 억제 활성" 또는 "선택성"은 DGKα 및 DGKζ에 대한 억제 정도의 차이를 지칭하고; 또 다른 이소형에 비해 특정 이소형에 대해 영향을 미치는 억제 정도가 클수록, 억제제가 해당 특정 이소형에 대해 나타내는 선택성은 더 커진다. 일부 구현예에 있어서, "DGKζ에 비해 DGKα의 선택적 억제 활성을 나타내는 화합물"은 DGKζ에 대한 IC50 및 DGKα에 대한 IC50의 비율이 약 20 이상인, DGKα에 대한 IC50이 약 2000 nM 이하임을 나타내는 화합물을 지칭하고; "DGKα에 비해 DGKζ의 선택적 억제 활성을 나타내는 화합물"은 DGKα에 대한 IC50 및 DGKζ에 대한 IC50의 비율이 약 20 이상인, DGKζ에 대한 IC50이 약 2000 nM 이하임을 나타내는 화합물을 지칭하며; "이중 억제 활성을 나타내는 화합물"은 IC50이 500nM 이하이고 두 IC50 값의 비율이 20 이하인, DGKα 및 DGKζ 모두에 대한 억제 활성을 나타내는 화합물을 지칭한다.
또한, 본원에 개시된 화합물이 산 부가염으로서 수득되는 경우, 산 염의 용액을 염기성화하여 유리 염기가 수득될 수 있다. 반대로, 생성물이 유리 염기인 경우, 약제학적으로 허용가능한 부가염과 같은, 부가염은 염기 화합물로부터 산 부가염을 제조하는 통상적인 절차에 따라, 유리 염기를 적합한 유기 용매에 용해시키고 용액을 산으로 처리함으로써 생성될 수 있다. 통상의 기술자는 무독성의 약제학적으로 허용가능한 부가염을 제조하기 위해 과도한 실험 없이 사용될 수 있는 다양한 합성 방법론을 인지할 것이다.
본원에 정의된 바와 같이, "이의 약제학적으로 허용가능한 염"은 적어도 하나의 화학식 (I)의 화합물의 염, 및 화학식 (I)의 화합물의 입체이성질체의 염, 예컨대, 거울상이성질체의 염, 및/또는 부분입체이성질체의 염을 포함한다.
용어 "투여", "투여하는", "치료하는" 및 "치료"는 동물, 인간, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 적용될 때, 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 대한 외인성 약제, 치료제, 진단제, 또는 조성물의 접촉을 의미한다. 세포의 치료는 세포에 대한 시약의 접촉뿐만 아니라 유체에 대한 시약의 접촉을 포괄하고, 여기서 유체는 세포와 접촉한다. 용어 "투여" 및 "치료"는 또한, 예를 들어, 시약, 진단제, 결합 화합물, 또는 또 다른 세포에 의한 세포의 시험관내 및 생체외 처리를 의미한다. 용어 "대상체"는 본원에서 임의의 유기체, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물(예를 들어, 래트, 마우스, 개, 고양이, 토끼) 및 가장 바람직하게는 인간을 포함한다.
용어 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 질환, 또는 질환 또는 장애의 임상 증상 중 적어도 하나를 치료하기 위해 대상체에게 투여될 때, 질환, 장애, 또는 증상에 대한 치료에 영향을 미치기에 충분한, 화합물과 같은, 활성 성분의 양을 지칭한다. "치료학적 유효량"은 화합물, 질환, 장애, 및/또는 질환 또는 장애의 증상, 질환, 장애의 중증도, 및/또는 질환 또는 장애의 증상, 치료되는 대상체의 연령, 및/또는 치료되는 대상체의 체중에 따라 변화할 수 있다. 임의의 주어진 경우에 적절한 양은 통상의 기술자에게 명백할 수 있거나 일상적인 실험에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에 있어서, "치료학적 유효량"은 대상체의 질환 또는 장애를 상기에 정의된 바와 같이 "치료"하는 데 효과적인 본원에 개시된 적어도 하나의 화합물 및/또는 이의 적어도 하나의 입체이성질체, 및/또는 이의 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 염의 양이다. 병용 요법의 경우, "치료학적 유효량"은 질환, 장애 또는 병태의 효과적인 치료를 위한 병용 대상물의 총량을 지칭한다.
본원에 개시된 화합물을 포함하는 약제학적 조성물은 필요로 하는 대상체에게 경구, 흡입, 직장, 비경구 또는 국소 투여를 통해 투여될 수 있다. 경구 투여의 경우, 약제학적 조성물은 정제, 산제, 과립, 캡슐 등과 같은 일반 고체 제형, 물 또는 오일 현탁액과 같은 액체 제형 또는 시럽, 용액, 현탁액 등과 같은 기타 액체 제형일 수 있고; 비경구 투여의 경우, 약제학적 조성물은 용액, 수용액, 오일 현탁액 농축물, 동결건조 분말 등일 수 있다. 바람직하게는, 약제학적 조성물의 제형은 정제, 코팅 정제, 캡슐, 좌제, 비강 스프레이 또는 주사제로부터 선택되고, 보다 바람직하게는 정제 또는 캡슐이다. 약제학적 조성물은 정확한 투여량으로 단일 단위 투여될 수 있다. 또한, 약제학적 조성물은 추가적인 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 개시된 약제학적 조성물의 모든 제형은 약제학적 분야의 통상적인 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 활성 성분을 하나 이상의 부형제와 혼합한 후, 목적하는 제형을 제조할 수 있다. "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 목적하는 약제학적 제형에 대해 적합한 통상적인 약제학적 담체를 지칭하고, 예를 들어: 희석제, 비히클, 예컨대, 물, 다양한 유기 용매 등, 충전제, 예컨대, 전분, 수크로스 등, 결합제, 예컨대, 셀룰로오스 유도체, 알기네이트, 젤라틴 및 폴리비닐피롤리돈(PVP; polyvinylpyrrolidone); 습윤제, 예컨대, 글리세롤; 붕해제, 예컨대, 한천, 칼슘 카르보네이트 및 소듐 바이카르보네이트; 흡수 향상제, 예컨대, 4차 암모늄 화합물; 계면활성제, 예컨대, 헥사데칸올; 흡수 담체, 예컨대, 카올린 및 비누 클레이(soap clay); 윤활제, 예컨대, 활석, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜 등이 있다. 또한, 약제학적 조성물은 분산제, 안정화제, 증점제, 착화제, 완충제, 침투 향상제, 중합체, 방향물질, 감미료, 및 염료를 추가로 포함한다.
용어 “질환"은 임의의 질환, 불편함, 질병, 증상 또는 징후를 지칭하고, 용어 "장애" 또는 "병태"와 상호교환될 수 있다.
문맥상 달리 요구하지 않는 한, 본 명세서 및 뒤따르는 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함하다(comprise)", 및 "포함하다(comprises)" 및 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 그 이후의 특징의 존재를 명시하도록 의도되지만, 하나 이상의 기타 특징의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. 본원에 사용될 때 용어 "포함하는(comprising)"은 용어 "함유하는(containing)", " 포함하는(including)" 또는 때때로 "갖는(having)"으로 대체될 수 있다.
본 명세서 및 뒤따르는 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "Cn-m"은 엔드포인트를 포함하는 범위를 나타내고, 여기서 n 및 m은 정수이며 탄소의 수를 나타낸다. 예는 C1-8, C1-6 등을 포함한다.
본 문서의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 다른 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 의미를 갖는다.
일반 합성 스킴
그 염을 포함하여, 본원에 개시된 화합물은 공지된 유기 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있고 다양한 가능한 합성 경로 중 임의의 경로에 따라 합성될 수 있다.
본원에 개시된 화합물을 제조하기 위한 반응은 유기 합성 분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 선택될 수 있는 적합한 용매에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도, 예를 들어, 실온 내지 용매의 끓는점 범위일 수 있는 온도에서 출발 물질, 중간체, 또는 생성물과 실질적으로 비-반응성일 수 있다. 주어진 반응은 하나의 용매 또는 용매의 혼합물에서 수행될 수 있다.
적절한 보호기의 선택은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
반응은 NMR, UV, HPLC, LC-MS 및 TLC와 같은, 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 화합물은 HPLC 및 순상 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피를 포함하여, 다양한 방법에 의해 정제될 수 있다.
카이랄 분석 HPLC가 상이한 카이랄 실시예의 체류 시간 분석을 위해 사용되었고, 사용된 컬럼, 이동상, 용매 비율에 따라 하기와 같은 방법으로 조건이 구분되었다. 호모카이랄(homochiral) 실시예의 제조는 통상의 기술자에게 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 절대 입체화학은 신규하게 형성된 탄소-질소 결합에서 지정되지 않았다.
본원에 개시된 화합물은 하기 스킴 I 내지 V에 따라 제조할 수 있다.
스킴 I
여기서 R1 내지 R9 및 R8L(L1-Cy1에 상응함)의 치환은 화학식 (I)에 언급된 바와 같이 정의된다.
스킴 I에서, 상업적으로 이용가능한 화합물 1을 THP 또는 SEM으로 보호하여 화합물 2를 얻는다. 화합물 2를 환원 조건(예컨대, Pd-C /H2, 또는 Fe 분말/NH4Cl) 하에서 환원시켜 화합물 3을 아민으로서 형성한다. 화합물 3을 아세틸 클로라이드 또는 아세트산 무수물에 의해 아세틸화하여 화합물 4를 얻은 후, 적절한 R1-X/R1-OTf와 염기성 조건(예컨대, Cs2CO3, NaH, 또는 t-BuOK) 하에서 반응시켜 화합물 5를 얻는다. 화합물 5를 염기성 조건(예컨대, LiHMDS, NaHMDS, 또는 KHMDS) 하에서 추가로 사이클화하여 화합물 6을 얻는다. 화합물 6을 트리플루오로메틸설포네이트(trifluoromethulfonate) 시약(예컨대, Tf2O, 또는 PhNTf2) 또는 포스포릴 클로라이드와 반응시켜 화합물 7을 얻는다. 화합물 7을 적절한 카이랄 2차 아민과 친핵성 방향족 치환 반응에 의해 반응시켜 화합물 8을 얻는다. 화합물 8의 아민 상의 보호기를 제거하여 산성 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액) 하에서 화합물 9를 얻는다. 알킬화제(예컨대, 알킬할라이드 또는 설포네이트)를 이용한 처리 또는 알데히드 또는 케톤을 이용한 환원성 알킬화에 의한 2차 아민 화합물 9의 N-알킬화에 의해 3차 아민 화합물 10을 제조하며, 이는 상응하는 알코올을 이용한 아민의 포스포늄 염 매개 알킬화를 통해 가장 빈번하게 사용되는 절차이다(Florencio Zaragoza 및 Henrik Stephensen, J. Org. Chem. 2001, 66, 2518-2521). 화합물 10을 산 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액)을 사용하여 탈보호시켜 화합물 11을 얻는다. 화합물 11과 구리-촉매화 Chan-Lam 반응을 사용하는 상응하는 알케닐 보레이트 또는 염기성 조건(예컨대, Cs2CO3, NaH, 또는 t-BuOK) 하에서 상응하는 알킬 할라이드, 축합 반응 조건(예컨대, Et3N/HATU)을 사용하는 상응하는 알킬 설포닐 클로라이드/지방족 아실 클로라이드와의 알킬화, 알케닐화 반응, 아실화 반응 또는 설포닐화 반응과 같은, 일상적인 반응 방법으로 화학식 12의 화합물(여기서 R2는 H임)을 제공하고, 화학식 12의 화합물(여기서 R2는 H임)과 친전자성 할로겐화 시약(예컨대, NBS, NCS, 또는 selectfluor)과의 할로겐화로 화학식 12의 화합물(여기서 R2는 F, Cl, 또는 Br임)을 제공한 후, 화학식 I의 화합물(여기서 R2는 Br임)을 또한 사용하여 일반적으로 Zn(CN)2 및 2,4,6-트리메틸보록신과의 Pd-촉매 커플링 반응에 의해 화학식 12의 화합물(여기서 R2는 CN, 또는 Me임)을 생성할 수 있다.
화합물 10은 또한 하기 스킴 II에 의해 제조할 수도 있다.
스킴 II
스킴 II에서, 알킬화제(예컨대, 알킬 할라이드 또는 설포네이트)를 이용한 처리 또는 알데히드 또는 케톤을 이용한 환원성 알킬화에 의한 2차 아민 화합물 1b의 N-알킬화에 의해 화합물 2b를 제조하며, 이는 상응하는 알코올을 이용한 아민의 포스포늄 염 매개 알킬화를 통해 가장 빈번하게 사용되는 절차이다. 화합물 2b를 산 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액)을 사용하여 탈보호시켜 화합물 3b를 얻는다. 화합물 3b를 화합물 7과 친핵성 방향족 치환 반응에 의해 반응시켜 화합물 10을 얻는다.
화학식 12의 화합물은 또한 하기 스킴 III에 의해 제조할 수도 있다.
스킴 III
스킴 III에서, 화합물 8의 아민 상의 보호기를 산성 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액) 하에서 제거하여 화합물 1c를 얻고, 화합물 1c를 피페라진의 질소-원자 상에서 Boc2O로 선택적으로 보호하여 화합물 2c를 얻고, 화합물 2c와 상응하는 알킬 할라이드의 염기성 조건(예컨대, Cs2CO3, NaH, 또는 t-BuOK) 하에서의 알킬화 반응에 의해 화합물 3c를 제공하고, 이를 산 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액)을 사용하여 탈보호시켜 화합물 4c를 얻고, 알킬화제(예컨대, 알킬 할라이드, 설포네이트 등)를 이용한 처리 또는 알데히드 또는 케톤을 이용한 환원성 알킬화에 의한 2차 아민 화합물 4b의 N-알킬화에 의해 화학식 I의 화합물을 제조하며, 이는 상응하는 알코올을 이용한 아민의 포스포늄 염 매개 알킬화를 통해 가장 빈번하게 사용되는 절차이다.
본원에 개시된 화합물 10d는 또한 하기 스킴 IV에 의해 제조할 수도 있다.
스킴 IV
스킴 IV에서, 화합물 4와 적절한 R1X(예컨대, PMB-Cl, 또는 DMB-Cl)의 알킬화 반응을 통해 염기성 조건(예컨대, Cs2CO3, 또는 NaH) 하에서 PG2의 설치를 진행하여 화합물 5d를 얻고; 이를 염기성 조건(예컨대, 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드, 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드, 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드...) 하에서 사이클화하여 화합물 6d를 얻은 후, 이를 트리플루오로메틸설포네이트 시약(예컨대, 트리플루오로메탄설폰산 무수물, N-페닐비스(트리플루오로메탄설폰)이미드) 또는 포스포릴 클로라이드와 반응시켜 화합물 7d를 얻고, 이를 상응하는 2차 아민 3b와 친핵성 방향족 치환 반응에 의해 반응시켜 화합물 8d를 얻는다. 화합물 8d의 보호기를 강산 조건(예컨대, TfOH, 또는 TFA) 하에서 제거하여 화합물 9d를 얻고, 이를 상응하는 알킬할라이드를 이용한 처리에 의한 화합물 9d의 피라졸 상에서의 선택적 N-알킬화를 거쳐 화학식 10d의 화합물을 제공한다.
화학식 10A의 화합물은 또한 하기 스킴 V에 의해 제조할 수도 있다.
스킴 V
스킴 V에서, 상업적으로 이용가능한 화합물 1A의 아미노분해 반응을 통해 화합물 2A를 제공하고, 이는 적절한 환원 조건(예컨대, Pd-C/H2, 또는 Fe 분말/NH4Cl)을 이용한 환원을 거쳐 화합물 3A를 제공한다. 이후, 화합물 3A를 상응하는 설포닐 클로라이드와 염기성 조건(예컨대, Et3N, 또는 피리딘) 하에서 반응시켜 화합물 4A를 제공하고, 이를 적절한 R1X/R1OTf와 염기성 조건(예컨대, K2CO3, Cs2CO3, 또는 NaH) 하에서 반응시켜 화합물 5A를 얻는다. 화합물 5A의 아민 상의 보호기를 2-메르캅토아세트산으로 제거하여 화합물 6A를 얻는다. 염기성 조건(예컨대, NaH) 하에서 1,1'-카르보닐디이미다졸을 이용한 화합물 6A의 처리로 사이클화 화합물 7A를 제공하고, 포스포릴 클로라이드를 이용한 염소화를 통해 아민 모이어티 3b의 설치를 진행하여 염소화 중간체를 얻고 이를 가수분해를 방지하기 위해 3b와 반응시켜 화합물 8A를 얻고, 이를 산 조건(예컨대, TFA 또는 1,4-디옥산 중 HCl의 4M 용액)을 사용하여 탈보호시켜 화합물 9A를 얻고, 화합물 9A와 상응하는 알킬 할라이드와의 염기성 조건(예컨대, Cs2CO3, 또는 NaH) 하에서의 알킬화 반응으로 화학식 10A의 화합물을 제공한다.
실시예
하기 실시예는 순전히 예시적인 것으로 의도되며 어떤 식으로든 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 달리 명시되지 않는 한, 하기에 기재된 실시예의 실험 방법은 종래의 방법이다. 달리 명시되지 않는 한, 시약 및 물질은 모두 상업적으로 이용가능하다. 이용되는 모든 용매 및 화학물질은 분석 등급 또는 화학적 순도를 갖는다. 용매는 사용하기 전에 모두 재증류된다. 무수 용매는 모두 표준 방법 또는 참조 방법에 따라 제조된다. 플래시 컬럼 크로마토그래피용 실리카 겔(100-200 메시) 및 박층 플래시 컬럼 크로마토그래피(TLC; thin-layer chromatography)용 실리카 겔(GF254)은 중국의 Tsingdao Haiyang Chemical Co., Ltd. 또는 Yantai Chemical Co., Ltd.에서 상업적으로 이용가능하고; 모두 석유 에테르(60-90℃)/에틸 아세테이트(v/v)로 용출되며, 달리 명시되지 않는 한 요오드 또는 에탄올 중 몰리브덴인산의 용액으로 시각화된다. 달리 명시되지 않는 한, 모든 추출 용매는 무수 Na2SO4 상에서 건조된다.
1H NMR 스펙트럼은 내부 표준으로서 TMS(테트라메틸실란)를 이용하는 Bruck-400 핵 자기 공명 분광계 상에서 기록된다. LC/MS 데이터는 214 nm 및 254 nm에서 검출되는 다이오드 어레이 검출기(DAD; diode array detector), 및 이온 트랩(ESI 공급원)이 장착된 Agilent1100 고성능 액체 플래시 컬럼 크로마토그래피-이온 트랩 질량 분석기(LC-MSD Trap)를 사용하여 기록된다. 시약을 제외한 모든 화합물 명칭은 ChemDraw®에 의해 생성되었다. 단결정 X-선 결정학은 화합물에서 카이랄 중심의 절대 배열을 설명하는 데 사용된다. 예를 들어, 본원에 개시된 화합물, 예를 들어, 화합물 A2a, 화합물 A2b, 화합물 A22a, 화합물 A22b, 화합물 A133, 화합물 A134, 화합물 A269c, 화합물 A269d, 화합물 A274, 화합물 A301, 화합물 A302, 화합물 A303, 화합물 A317, 화합물 A318, 화합물 A319 또는 화합물 A336은 단결정 X-선 결정학에 의해 목적하는 배열을 갖는 것으로 결정되었다.
합성
중간체 1: 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린
단계 A: 퀴녹살린-6-카르복실산 메톡시-메틸-아미드
DCM(1 L) 중 퀴녹살린-6-카르복실산(52.2 g, 0.3 mol)의 용액에 HATU(136.8 g, 0.36 mmol), DIPEA(155 g, 1.2 mol) 및 N,N-디메틸-하이드록실아민 하이드로클로라이드 염(35 g, 0.36 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(67 g, 99%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 9.05 (s, 2H), 8.31 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.03 (dd, J = 8.7, 1.8 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.36 (s, 3H) ppm. MS: M/e 218 (M+1)+.
단계 B: 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
THF(500 mL) 중 퀴녹살린-6-카르복실산 메톡시-메틸-아미드(67 g, 0.3 mol)의 용액에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(133 mL, 3M, 0.39 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 수성 NH4Cl을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:3)에 의해 정제하여 표제 화합물(41 g, 77%)을 얻었다. MS: M/e 173 (M+1)+.
단계 C: 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
NaBH4(6.7 g, 0.17 mol)를 EtOH(200 ml) 중 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(40 g, 0.23 mol)에 0℃에서 1시간 동안 첨가하였다. 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 EA로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(29 g, 62%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.11 - 8.00 (m, 2H), 7.86 (t, J = 12.6 Hz, 1H), 5.52 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.07 - 4.92 (m, 1H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 175 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(200 ml) 중 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(22 g, 0.13 mol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(32 g, 0.15 mol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(46 g, 0.19 mol) 및 DIPEA(65 g, 0.5 mol)의 용액. 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하고 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 물을 첨가하여 생성된 잔류물을 희석하고, EA로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(32 g, 68%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 8.92 (dq, J = 5.4, 1.8 Hz, 2H), 8.09 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 6.0, 1.3 Hz, 1H), 7.95 - 7.89 (m, 1H), 4.19 - 4.01 (m, 1H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.41 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.33 - 3.05 (m, 1H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 1.98 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 1.39 (d, J = 2.4 Hz, 9H), 1.33 - 1.23 (m, 4H), 1.20 - 1.03 (m, 2H), 1.00 - 0.83 (m, 3H) ppm. MS: M/e 371 (M+1)+.
단계 E: 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(중간체 1)
TFA(90 mL)를 DCM(300 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(32 g)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 수성 층을 포화 Na2CO3 용액으로 pH를 12-13으로 조정한 후, DCM으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척한 후, 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 중간체 1을 얻었다.
부분입체이성질체의 혼합물로서 생성된 잔류물 중간체 1(18 g)을 C18 컬럼(이동상 B: MeOH; 이동상 A: H2O(0.5% NH3H2O))에 의해 카이랄 분해를 실행하여 중간체 1a(이전 피크, 8 g, 34%) 및 중간체 1b(이후 피크, 8 g, 34%)를 얻었다.
중간체 1a : 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.93 (dd, J = 6.8, 1.7 Hz, 2H), 8.14 - 8.02 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 8.7, 1.7 Hz, 1H), 4.46 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 10.7, 2.3 Hz, 1H), 2.72 - 2.59 (m, 2H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 2.05-2.01 (m, 1H), 1.83 (s, 1H), 1.51 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 10.3 Hz, 1H), 1.08 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 271 (M+1)+.
중간체 1b : 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 (dd, J = 5.5, 1.7 Hz, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.12 - 8.05 (m, 2H), 4.82 (s, 1H), 3.50 - 3.40 (m, 1H), 3.23 (s, 2H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.67 - 2.50 (m, 2H), 1.58 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 1.44 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 1.16 (dd, J = 6.5, 2.6 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 271 (M+1)+.
중간체 2: 4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
단계 A: 메틸 4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
THF(0.6 L) 중 메틸 4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실레이트(85.5 g, 0.5 mol) 및 TsOH.H2O(9.5 g, 0.05 mol)의 용액에 DHP(84 g, 1 mol)를 여러 부분으로 나누어 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(121 g, 94%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.38 (s, 1H), 5.43 (dd, J = 2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.15 - 4.05 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.78 - 3.68 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 1H), 2.01 - 1.85 (m, 2H), 1.76 - 1.60 (m, 3H) ppm. MS: M/e 278 (M+23)+.
단계 B: 메틸 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
MeOH(300 mL) 중 메틸 4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(64 g & 57 g, 2개 배치)의 용액에 (6 g)을 첨가하였다. 혼합물을 H2 분위기 하의 실온에서 교반하고, 여과시키고 MeOH로 세척하였다. 조합한 여액을 농축시켜 표제 화합물(96 g, 90%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.21 (s, 1H), 5.33 (dd, J = 2.4, 9.6 Hz, 1H), 4.11 - 4.02 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.71 - 3.62 (m, 1H), 2.12 - 1.90 (m, 3H), 1.76 - 1.52 (m, 3H) ppm.MS: M/e 226 (M+1)+.
단계 C: 메틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
피리딘(0.4 L) 중 메틸 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(96 g, 426 mmol)의 용액에 Ac2O(60 mL)를 적가하여 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고 농축 건조시켰다. 잔류물을 PE/EA로 재결정화하여 표제 화합물(84 g, 74%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.99 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 5.46 - 5.36 (m, 1H), 4.12 - 4.03 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.74 - 3.60 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.14 - 1.96 (m, 3H), 1.75 - 1.54 (m, 3H) ppm. MS: M/e 268 (M+1)+.
단계 D: 메틸 4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(0.5 L) 중 메틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(84 g, 314.6 mmol)의 용액에 Cs2CO3(306 g, 943 mmol)에 이어서, CH3I(134 g, 943 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온(RT)에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, DCM으로 세척하였다. 여액을 농축시킨 후, 수득된 잔류물을 물로 희석하고, DCM(400 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물(92 g, 미정제)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.67 (s, 1H), 5.47 - 5.36 (m, 1H), 4.16 - 4.03 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.77 - 3.65 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.09 -1.90 (m, 2H), 1.87 (s, 3H), 1.80 - 1.56 (m, 3H) ppm MS: M/e 282 (M+1)+.
단계 E: 7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(0.8 L) 중 메틸 4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(88 g, 313 mmol)의 용액에 LiHMDS의 용액(~500 mL, 1 mol/L, ~1.6 당량)을 -70℃에서 적가하였다(현탁액이 형성됨). 반응물을 0.5시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하고, 실온으로 서서히 가온하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 수 상을 수집하고, 시트르산으로 pH 3~4로 처리하고, 실온에서 0.5시간 동안 교반하여 현탁액을 얻었다. 현탁액을 여과시키고, 건조시켜 표제 화합물(45.5 g)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.24 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.51 (dd, J = 2.4 Hz, 10.0 Hz, 1H), 4.00 - 3.88 (m, 1H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 2.19 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.89 (m, 2H), 1.80 - 1.64 (m, 1H), 1.61 - 1.50 (m, 2H) ppm. MS: M/e 250 (M+1)+.
단계 F: 4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(중간체 2)
THF(0.5 L) 중 7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(49.8 g, 200 mmol)의 용액에 K2CO3(55 g, 400 mmol)에 이어서, 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(100 g, 943 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, EA로 세척하였다. 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 추가로 EA/PE를 이용한 슬러리화에 적용하여 표제 화합물(70 g, 90%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.58 (dd, J = 2.8 Hz, 8.0 Hz, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.82 - 3.70 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 2.26 - 1.96 (m, 3H), 1.81 - 1.61 (m, 3H) ppm. MS: M/e 382 (M+1)+.
중간체 3: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 메틸 (R)-2-(벤질아미노)부타노에이트
CH3CN(1000 mL) 중 메틸 (R)-2-아미노부타노에이트(100.0 g, 0.85 mol)의 용액에 벤질 브로마이드(146.1 g, 0.85 mol)를 N2 분위기 하의 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(1000 mL)에 용해시키고 물(1000 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(106 g, 60%)을 얻었다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 B: 메틸 (R)-2-((S)-N-벤질-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄아미도)부타노에이트
DCM(2000 mL) 중 메틸 (R)-2-(벤질아미노)부타노에이트(117.0 g, 0.56 mol), (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄산(170.5 g, 0.84 mmol) 및 4-메틸모르폴린(113.1 g, 1.12 mmol)의 용액에 HATU(319.0 g, 0.84 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 물에 의해 켄칭하고 물(1500 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 생성물(178 g, 80%)을 얻었다. MS: M/e 393 (M+1)+.
단계 C: 메틸 (R)-2-((S)-2-아미노-N-벤질부탄아미도)부타노에이트
1,4-디옥산(100 mL) 중 메틸 (R)-2-((S)-N-벤질-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄아미도)부타노에이트(178 g, 0.45 mol)의 용액에 HCl(400 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하고, 진공 하에서 농축시켜 미정제 생성물(200 g, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 293(M+1)+.
단계 D: (3S,6R)-1-벤질-3,6-디에틸피페라진-2,5-디온
EA(1000 mL) 중 메틸 (R)-2-((S)-2-아미노-N-벤질부탄아미도)부타노에이트(200 g, 미정제)의 용액에 수성 NaHCO3(300 mL)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MTBE로 분쇄하여 표제 화합물(61 g, 2단계에 대해 52%, ee: 97%)을 얻었다. MS: M/e 261 (M+1)+.
단계 E: (2R,5S)-1-벤질-2,5-디에틸피페라진
THF(1000 mL) 중 LiAlH4(26.5 g, 0.69 mol)의 용액에 THF(500 mL) 중 (3S,6R)-1-벤질-3,6-디에틸피페라진-2,5-디온(61.0 g, 0.23 mol)을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물(27 mL)에 의해 0℃에서 서서히 켄칭하였다. 이어서, 1N NaOH 수용액(54 mL) 및 물(81 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 형성된 백색 침전물을 여과에 의해 제거하였다. 필터 케이크를 EA(500 mL)로 세척하였다. 조합한 여액을 증발시켰다. 생성된 잔류물을 톨루엔에 용해시켰다. 용매를 진공 하에서 제거 건조하여 표제 화합물(51 g, 95%)을 제공하였다. MS: M/e 233 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-벤질-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(50 mL) 중 중간체 2(3.8 g, 10 mmol), (2R,5S)-1-벤질-2,5-디에틸피페라진(3.6 g, 15 mmol) 및 DIPEA(6.4 g, 50 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 밤새 105℃로 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.2 g, 90%)을 얻었다. MS: M/e 464 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(중간체 3))
MeOH(50 mL) 중 7-((2S,5R)-4-벤질-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(4.2 g, 9.1 mmol) 및 Pd/C(420 mg, 물 중 10%)의 혼합물을 N2 분위기(50 psi) 하의 실온에서 밤새 진탕시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시켰다. 필터 케이크를 EA(50 mL)로 세척하였다. 조합한 여액을 농축 건조시켜 표제 화합물(3.2 g, 94%)을 얻었다. MS: M/e 374 (M+1)+.
중간체 4: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A:
tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트.
CH3CN(12 mL) 중 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(1.0 g, 5.75 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(1.68 g, 6.90 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(2.1 g, 8.62 mmol)의 용액에 DIPEA(3.71 g, 28.75 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.1 g, 48%)을 얻었다. MS: M/e 399 (M+1)+.
단계 B: 6-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린 .
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(500 mg, 1.26 mmol)의 용액에 실온에서 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(TFA 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(300 mg, 80%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.83 (s, 2H), 8.06 (s, 2H), 7.98-7.69 (m, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.10-2.73 (m, 2H), 2.62-2.39 (m, 2H), 2.33-2.04 (m, 3H), 1.95-1.67 (m, 2H), 1.66-1.57 (m, 1H), 1.46-1.34 (m, 2H), 1.32-1.14 (m, 2H), 1.05-0.96 (m, 1.5H), 0.94-0.86 (m, 3H), 0.76-0.71 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 299 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(15 mL) 중 6-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(286 mg, 0.96 mmol) 및 중간체 2(305 mg, 0.8 mmol)의 용액에 DIPEA(206 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하의 90℃에서 96시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM / MeOH = 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(280 mg, 66%)을 얻었다. MS: M/e 530 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(중간체 4)
DCM(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(280 mg, 0.53 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TFA(2 mL)의 또 다른 부분을 반응물에 첨가하고 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM의 혼합물로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고 DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM / MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 42%)을 얻었다. MS: M/e 446 (M+1)+.
중간체 5: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH(20 mL) 중 중간체 3(3 g, 8.04 mmol)의 교반된 용액에 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주말에 걸쳐 교반하고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 THF/H2O(50 mL/20 mL, v/v)로 처리하고, K2CO3(3.3 g, 24.1 mmol)에 이어서, Boc2O(1.75 g, 8.04 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 시트르산으로 pH = 4~5로 산성화하고, EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4 g, 45%)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF/H2O(10 mL/2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(1.4 g, 3.6 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(1.49 g, 10.8 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(482.4 mg, 7.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하고, H2O(30 mL)에 붓고, EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1 g, 65%)을 얻었다. MS: M/e 429 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(중간체 5)
CH2Cl2(15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(1 g, 2.34 mmol)의 교반된 용액에 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 5시간 동안 교반하고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 포화 수성 NaHCO3로 pH = 10~11로 염기성화하고, CH2Cl2/ IPA(3/1, 30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(752 mg, 98%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (s, 1H), 5.59 (s, 2H), 5.35 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.08 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.04 (dd, J = 12.8, 4.4 Hz, 1H), 2.80 - 2.72 (m, 1H), 2.65 - 2.59 (m, 1H), 1.83 - 1.72 (m, 1H), 1.64 - 1.41 (m, 3H), 0.87 - 0.75 (m, 8H) ppm. MS: M/e 329 (M+1)+.
중간체 6: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 메틸 (R)-2-(벤질아미노)부타노에이트.
CH3CN(700 mL) 중 메틸 (R)-2-아미노부타노에이트 하이드로겐 클로라이드(100 g, 651 mmol) 및 K2CO3(225 g, 1.628 mol)의 용액에 (브로모메틸)벤젠(122.5 g, 716 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 여과 후, 반응 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(70 g, 52%)을 얻었다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 B:
메틸 (R)-2-((S)-N-벤질-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)부타노에이트.
DCM(400 mL) 중 메틸 (R)-2-(벤질아미노)부타노에이트(35 g, 169 mmol), (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(48 g, 254 mmol) 및 HATU(116 g, 304 mmol)의 용액에 NMM(43 g, 422 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaCl(100 mL)로 실온에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM(300 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(45 g, 70%)을 얻었다. MS: M/e 379 (M+1)+.
단계 C: 메틸 (R)-2-((S)-2-아미노-N-벤질프로판아미도)부타노에이트 하이드로겐 클로라이드.
DCM(250 mL) 중 메틸 (R)-2-((S)-N-벤질-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판아미도)부타노에이트(45 g, 119 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(119 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(32 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 279 (M+1)+.
단계 D: (3S,6R)-1-벤질-6-에틸-3-메틸피페라진-2,5-디온.
NaHCO3(150 mL, 4M) 중 메틸 (R)-2-((S)-2-아미노-N-벤질프로판아미도)부타노에이트 하이드로겐 클로라이드(32 g, 102 mmol)의 용액에 EA(150 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(22 g, 87%)을 얻었다. MS: M/e 247 (M+1)+.
단계 E: (2R,5S)-1-벤질-2-에틸-5-메틸피페라진.
THF(300 mL) 중 (3S,6R)-1-벤질-6-에틸-3-메틸피페라진-2,5-디온(20 g, 81.3 mmol)의 용액에 0℃에서 LiAlH4(6.2 g, 163 mmol)를 부분으로 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 36시간 동안 교반하고 H2O(6.2 mL)에 이어서, NaOH(6.2 mL, 20%) 및 H2O(12.4 mL)를 0℃에서 첨가하여 반응 용액을 켄칭하였다. 여과 후, 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(11 g, 61%)을 얻었다. MS: M/e 219 (M+1)+.
단계 F: tert-부틸 (2S,5R)-4-벤질-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
.
DCM(200 mL) 중 (2R,5S)-1-벤질-2-에틸-5-메틸피페라진(11 g, 50 mmol) 및 Boc2O(12 g, 55 mmol)의 용액에 Et3N(7.6 g, 75 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaCl(100 mL)로 실온에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM(200 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(14 g, 69%)을 얻었다. MS: M/e 319 (M+1)+.
단계 G: tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
.
MeOH(60 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-벤질-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(10 g, 31.4 mmol) 및 Pd/C(2.5 g, 물 중 10%)의 용액에 실온에서 AcOH(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 분위기 하에서 3회 탈기시키고, H2 분위기 하의 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 여과 후, 조합한 유기 층을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(AcOH 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH ~10으로 염기성화하고 EA(80 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(5.5 g, 77%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.21-4.09 (m, 1H), 3.72-3.69 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.24-3.19 (dd, J = 13.7, 4.0 Hz, 1H), 3.14-3.10 (dd, J = 12.8, 4.7 Hz, 1H), 2.86-2.75 (m, 1H), 2.53-2.49 (dd, J = 12.8, 2.7 Hz, 1H), 2.33-2.12 (m, 1H), 1.65-1.54 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.25-1.24 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 0.98-0.91 (m, 3H) ppm. MS: M/e 229 (M+1)+.
단계 H: tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
밀봉 튜브를 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(5 g, 28.7 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(6.5 g, 28.7 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(8.3 g, 34.4 mmol), DIPEA(7.4 g, 57.4 mmol) 및 아세토니트릴(100 ml)로 충전하였다. 반응 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 용매를 제거하였다. 물을 첨가하고 수성 물질을 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(10.5 g, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 385 (M+1)+.
단계 I: 6-(1-((2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린
DCM(100 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(10.5 g)의 용액에 TFA(30 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 물에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 EA로 추출하였다. 수성 층을 포화 수성 Na2CO3로 pH를 12-13으로 조정하고 DCM(50 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(4.6 g)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 285 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
디옥산(5 mL) 중 6-(1-((2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(568 mg, 2 mmol)의 용액에 트리에틸아민 하이드로클로라이드, 중간체 2(914 mg, 2.4 mmol) 및 DIPEA(774 mg, 6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 주말 동안 100℃에서 교반하고, 농축 건조시켰다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(100 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물(1 g, 95%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (dd, J = 6.0, 4.0 Hz, 2H), 8.16 - 8.01 (m, 3H), 7.99 - 7.93 (m, 1H), 5.65 - 5.52 (m, 2H), 5.49 (s, 1H), 4.09 - 3.91 (m, 2.5H), 3.75 (dd, J = 15.1, 10.3 Hz, 1H), 3.56 (s, 1.5H), 3.44 (s, 3H), 3.25 - 3.01 (m, 1H), 2.95 - 2.80 (m, 1H), 2.26 - 2.12 (m, 2H), 2.07 - 1.98 (m, 2H), 1.77 (d, J = 20.1 Hz, 2H), 1.64 (dd, J = 13.3, 5.9 Hz, 3H), 1.48 - 1.42 (m, 4.5H), 1.22 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H), 0.91-0.85 (m, 3H) ppm. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 K: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(중간체 6)
MeOH(4 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(300 mg)의 용액에 HCl(2 mL, 디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물(350 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 432 (M+1)+.
중간체 7: 4-(4-메톡시벤질)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
단계 A: 에틸 4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DCM(100 mL) 중 에틸 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(5 g, 20.92 mmol), 4-메톡시벤즈알데히드(2.85 g, 20.92 mmol), 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(6.65 g, 31.38 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(500 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(7.23 g, 96%)을 얻었다. MS: M/e 360 (M+1)+
단계 B: 에틸 4-(N-(4-메톡시벤질)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
피리딘(20 mL) 중 에틸 4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1 g, 2.785 mmol), 아세트산 무수물(5 mL)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이를 물에 용해시켰다. 생성된 용액을 DCM(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.1 g, 98%)을 얻었다. MS: M/e 402 (M+1)+
단계 C: 7-하이드록시-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF 중 에틸 4-(N-(사이클로프로필메틸)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1.1 g, 2.743 mmol)의 용액에 N2 하에서 LiHMDS(4.1 mL, 4.1 mmol)를 -78℃에서 적가하고 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 AcOH/물로 켄칭하고 DCM(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(800 mg, 82%)을 얻었다. MS: M/e 356 (M+1)+.
단계 D: 4-(4-메톡시벤질)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(중간체 7)
DMF(15 mL) 중 7-하이드록시-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(800 mg, 2.253 mmol), 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(1.2 g, 3.380 mmol) 및 K2CO3(933 mg, 6.761 mmol)의 혼합물을 N2 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(50 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(520 mg, 47%)을 얻었다. MS: M/e 488 (M+1)+.
중간체 8: 4-(3,4-디메톡시벤질)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트.
단계 A: 에틸 4-((3,4-디메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DCM(100 mL) 중 에틸 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(5 g, 20.92 mmol), 3,4-디메톡시벤즈알데히드(3.47 g, 20.92 mmol), 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(6.65 g, 31.38 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(250 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(7.33 g, 90%)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 B: 에틸 4-(N-(3,4-디메톡시벤질)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
피리딘(20 mL) 중 에틸 4-((3,4-디메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1 g, 2.571 mmol), 아세트산 무수물(5 mL)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고 이를 물에 용해시켰다. 생성된 용액을 DCM(100 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.95 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 C: 4-(3,4-디메톡시벤질)-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF 중 에틸 4-(N-(3,4-디메톡시벤질)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(0.95 g, 2.205 mmol)의 용액에 N2 하에서 LiHMDS(3.3 mL, 3.3 mmol)를 -78℃에서 적가하고 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 AcOH로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM(200 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(720 mg, 85%)을 얻었다. MS: M/e 386 (M+1)+.
단계 D: 4-(3,4-디메톡시벤질)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(중간체 8)
DMF(15 mL) 중 4-(3,4-디메톡시벤질)-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(720 mg, 1.87 mmol), 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(1 g, 2.805 mmol), K2CO3(516 mg, 3.740 mmol)의 혼합물을 N2 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(100 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(720 mg, 75%)을 얻었다. MS: M/e 518 (M+1)+.
중간체 9: 4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온
단계 A: 4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
에틸-4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(8 g, 29.7 mmol)에 MeOH(80 mL) 중 NH3(7M)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE/EA로 슬러리화 처리하여 표제 화합물(6.8 g, 95%)을 얻었다. MS: M/e 241 (M+1)+.
단계 B: 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
MeOH(100 mL) 중 4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(6.2 g, 25.8 mmol)의 용액에 Pd/C(0.6 g, 물 중 10%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 분위기 하의 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고 MeOH로 세척하였다. 조합한 여액을 농축시켜 표제 화합물(5.1 g, 94%)을 얻었다. MS: M/e 211 (M+1)+.
단계 C: 4-((2,4-디니트로페닐)설폰아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
THF(0.2 L) 중 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(4.6 g, 21.9 mmol) 및 TEA(3.33 g, 33 mmol)의 용액에 2,4-디니트로벤젠설포닐 클로라이드(6.11 g 23 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 물로 희석하고 DCM(100 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(5.3 g, 55%)을 얻었다. MS: M/e 441 (M+1)+.
단계 D: 4-((N-메틸-2,4-디니트로페닐)설폰아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
DMF(60 mL) 중 4-((2,4-디니트로페닐)설폰아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(5.3 g, 12 mmol)의 용액에 K2CO3(3.3 g, 24 mmol)에 이어서, CH3I(3.4 g, 24 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 물로 희석하고 DCM(100 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(4.8 g, 88%)을 얻었다. MS: M/e 455 (M+1)+.
단계 E: 4-(메틸아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
DCM(40 mL) 중 4-((N-메틸-2,4-디니트로페닐)설폰아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(4.8 g, 10.57 mmol) 및 TEA(2.13 g, 21.14 mmol)의 용액에 2-메르캅토아세트산(1.36 g, 14.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM:IPA(3:1, 100 mL x 5)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.8 g, 75%)을 얻었다. MS: M/e 225 (M+1)+.
단계 F: 4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온(중간체 9)
DMF(15 mL) 중 4-(메틸아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(680 mg, 3 mmol)의 용액에 NaH(240 mg, 6 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 1시간 후, CDI(972 mg, 6 mmol)를 반응물에 첨가하고 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O로 켄칭하고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.6 g, 80%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.19 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 5.55 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 3.98 - 3.89 (m, 1H), 3.74 - 3.63 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.15 - 1.85 (m, 3H), 1.78 - 1.63 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H) ppm. MS: M/e 251 (M+1)+.
중간체 10: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(중간체 10A)
CH3CN(15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.56 g, 12 mmol) 및 중간체 2(3.81 mg, 10 mmol)의 용액에 DIPEA(3.87 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(150 mL)로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.9 g, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 446 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(중간체 10B)
DCM(20 mL) 중 중간체 10A(4.9 g, 미정제)의 용액에 TFA(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화하고, DCM:IPA(3:1, 80 mL x 3)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 5:1, MeOH 중 1 mol/L NH3)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.9 g, 2단계에 대해 84%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.03 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.60 - 5.32 (m, 1H), 4.85 - 4.76 (m, 1H), 4.53 - 4.42 (m, 1H), 4.11 - 3.96 (m, 1H), 3.82 - 3.70 (m, 1H), 3.69 - 3.57 (m, 2H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.04 - 2.92 (m, 1H), 2.30 - 2.00 (m, 3H), 1.85 - 1.60 (m, 3H), 1.42 - 1.30 (m, 6H) ppm. MS: M/e 346 (M+1)+.
단계 C: tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH(20 mL) 중 중간체 10B(3 g, 8.70 mmol)의 교반된 용액에 디옥산/HCl(g)(4.0 M, 5 mL)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 주말에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 THF/H2O(50 mL/20 mL)로 처리하고, K2CO3(3.60 g, 26.08 mmol)에 이어서, Boc2O(1.90 g, 8.70 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 시트르산으로 pH=4~5로 산성화하고, EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.7 g, 54%)을 얻었다. MS: M/e 362 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF/H2O(10 mL/2 mL) 중 단계 C의 화합물(1.7 g, 4.71 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(1.95 g, 14.1 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(1.18 g, 7.06 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(30 mL)에 붓고, EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 69%)을 얻었다. MS: M/e 401 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH2Cl2(15 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(1.3 g, 3.25 mmol)의 교반된 용액에 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 수성 NaHCO3로 pH=10~11로 염기성화하고, CH2Cl2/IPA(3/1, 30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(870 mg, 89%)을 얻었다. MS: M/e 301 (M+1)+.
중간체 11: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-2-에틸-5-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(중간체 11A)
CH3CN(200 mL) 중 중간체 2(19 g, 50 mmol), tert-부틸 (2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-카르복실레이트(12.54 g, 55 mmol) 및 DIPEA(12.9 g, 0.1 mol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 밤새 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 CH2Cl2(200 mL)에 용해시키고 H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(20 g, 83.5%)을 얻었다. MS: M/e 460 (M+1)+.
단계 B:
7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(50 mL) 중 중간체 11A(6 g, 12.5 mmol)의 교반된 용액에 디옥산/HCl(g)(4.0 M, 50 mL)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 50℃에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었고, 이를 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 276 (M+1)+.
단계 C: tert-부틸 (2R,5S)-2-에틸-5-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(12.5 mmol)을 THF/H2O(80 mL/80 mL)에 용해시킨 후, NaHCO3로 pH=7~8로 염기성화하였다. 반응 혼합물에 NaHCO3(2.1 g, 25 mmol)에 이어서, Boc2O(3.28 g, 15 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(3.8 g, 81%)을 얻었다. MS: M/e 376 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(부트-2-인-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF/H2O(30 mL/10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2-에틸-5-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(3.8 g, 10.1 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(2.78 g, 20.2 mmol)에 이어서, 1-브로모부트-2-인(2.02 g, 15.2 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 부은 후, EtOAc(40 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.2 g, 51%)을 얻었다. MS: M/e 428 (M+1)+.
단계 E: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(50 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(부트-2-인-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.2 g, 5.15 mmol)의 교반된 용액에 TMSOTf(2.3 g, 10.3 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 Na2CO3로 켄칭하고, CH2Cl2/IPA(3/1, 50 mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(1.8 g, 99%)을 얻었다. MS: M/e 328 (M+1)+.
중간체 12: 5-브로모-4-플루오로-2-이소프로폭시피리딘
클로로포름(15 ml) 중 5-브로모-4-플루오로피리딘-2-올(764 mg, 4 mmol)의 용액에 2-요오도프로판(743 mg, 4.4 mmol) 및 실버 카르보네이트(1.32 g, 4.8 mmol)를 첨가하고 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(700 mg, 75%)을 얻었다. MS: M/e 234 (M+1)+.
중간체 13: 1-(5-클로로피리딘-2-일)에탄-1-올
THF(20 mL) 중 5-클로로피콜린알데히드(200 mg, 1.42 mmol)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드(0.9 mL, 1.42 mmol)를 -78℃에서 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(100 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 67%)을 얻었다. MS: M/e 158 (M+1)+.
중간체 14: 3-브로모-1-메틸이소퀴놀린
DMF(10 mL) 중 1,3-디브로모이소퀴놀린(1.15 g, 4 mmol) 및 LiCl(185 mg, 4.4 mmol)의 혼합물에 테트라메틸스탄난(787 mg, 4.4 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(280 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 밤새 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(630 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 222 (M+1)+.
중간체 15: 테트라하이드로-2H-피란-4-일 4-메틸벤젠설포네이트
DCM(20 mL) 중 테트라하이드로-2H-피란-4-올(1.02 g, 10 mmol) 및 TEA(2 g, 20 mmol)의 용액에 0℃에서 TsCl(2.28 g, 12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H2O로 희석하고, DCM(80 mL)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4 g, 55%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.73 - 4.65 (m, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 2H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 1.91 - 1.69 (m, 4H), ppm.
중간체 16: 7-브로모-3-메틸이소퀴놀린
단계 A: N-(3-브로모벤질)-1,1-디메톡시프로판-2-아민
DCM(10 mL) 중 (3-브로모페닐)메탄아민(744 mg, 4 mmol), 1,1-디메톡시프로판-2-온(472 mg, 4 mmol)의 혼합물. 이어서, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(1.27 g, 6 mmol)를 한 번에 첨가하고 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 켄칭하였다. 이어서, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 조합한 유기 층을 NaCl의 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물(1 g, 미정제)을 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 288 (M+1)+.
단계 B: 7-브로모-3-메틸이소퀴놀린(중간체 16)
클로로설폰산(3 mL)에 N-(3-브로모벤질)-1,1-디메톡시프로판-2-아민(1 g, 미정제)을 적가하였다. 반응 혼합물을 100℃로 20분 동안 가열한 후, 냉각시키고 K2CO3(수성)에 부었다. 수성 현탁액을 EtOAc로 추출하였다. 유기 부분을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(260 mg, 34% 수율)을 얻었다. MS: M/e 222 (M+1)+.
중간체 17: (4-브로모페닐)(4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메탄온
CH2Cl2(10 mL) 중 4-브로모벤조산(500 mg, 2.5 mmol), 4,4-디플루오로피페리딘(333 mg, 2.75 mmol), HATU(1.15 g, 3 mmol) 및 DIPEA(645 mg, 5 mmol)의 용액을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(705 mg, 92.7%)을 얻었다. MS: M/e 304/306 (M+1)+.
중간체 18: 2-(6-브로모피리딘-3-일)-2-메틸프로판니트릴
THF(5 ml) 중 NaH(60%, 360 mg, 9 mmol)의 현탁액에 THF(5 mL) 중 2-(6-브로모피리딘-3-일)아세토니트릴(591 mg, 3.0 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 기간의 완료 시, 메틸 요오다이드(1.06 g, 7.5 mmol)를 첨가한 후 추가적으로 16시간 동안 교반을 계속하였다. 이 시간 후, 포화 암모늄 클로라이드 용액을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭한 후 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합한 유기 부분을 감압 하에서 농축시키고 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EtOAc: PE = 25분 내에 0 내지 50%)에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 19%)을 얻었다. MS: M/e 225 (M+1)+.
중간체 19: 2-브로모-3-플루오로-5-이소프로폭시피리딘
DMF(5 ml) 중 NaH(60%, 300 mg, 7.5 mmol)의 현탁액에 DMF(5 mL) 중 프로판-2-올(270 mg, 4.5 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 기간의 완료 시, 2-브로모-3,5-디플루오로피리딘(582 mg, 3 mmol)을 첨가한 후 추가적으로 16시간 동안 교반을 계속하였다. 이 시간 후, 포화 암모늄 클로라이드 용액을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭한 후 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합한 유기 부분을 감압 하에서 농축시키고 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EtOAc: PE = 20분 내에 0-50%)에 의해 정제하여 표제 화합물(460 mg, 66%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.95 - 7.82 (m, 1H), 6.92 (dd, J = 9.7, 1.9 Hz, 1H), 4.54 (hept, J = 5.9 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 6.1 Hz, 6H) ppm. MS: M/e 234 (M+1)+.
중간체 20: 1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-올
단계 A: 1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온
톨루엔(100 mL) 중 5-브로모-2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔(9.5 g, 40.1 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(17.5 g, 48.5 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(1.4 g, 2.0 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 HCl/디옥산(4M, 30 mL)의 용액을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 염수(50 mL x 2), NaHCO3(50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(12.5 g, 미정제)을 얻었고, 이를 임의의 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H).
단계 B: 1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-올(중간체 20)
MeOH(100 mL) 중 1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-온(12.5 g, 미정제)의 용액에 NaBH4(1.2 g, 35.3 mmol)를 0℃에서 부분으로 나누어 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물에 염수(200 mL)를 첨가하고, EtOAc(100 mL x 3)로 추출하였다. 추출물을 조합하고 염수(100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(5.9 g, 2단계에 대해 73%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.36 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.31 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.69 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
화합물 A1: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(20 mL) 중 중간체 2(1.15 g, 3 mmol) 및 중간체 1(0.9 g, 3.32 mmol)의 용액에 DIPEA(0.77 g, 6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하의 90℃에서 60시간 동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 물(50 mL)로 희석하고 DCM(80 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시키고, 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.34 g, 89%)을 얻었다. MS: M/e 502 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.34 g, 2.67 mmol)의 용액에 TFA(20 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TFA(10 mL)의 또 다른 부분을 첨가하고 반응물을 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM의 혼합물로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH 7~8로 염기성화하고 DCM: IPA(6:1, 60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A1(0.75 g, 67%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.93 - 8.82 (m, 2H), 8.20 - 7.96 (m, 3H), 7.80 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.12 - 4.92 (m, 0.5H), 4.82 - 4.50 (m, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 0.5H), 4.05 - 3.90 (m, 0.5H), 3.86 - 3.77 (m, 0.5H), 3.75 - 3.62 (m, 1H), 3.52 - 3.42 (m, 0.5H), 3.46 (s, 3H), 3.02 - 2.65 (m, 2H), 2.30 - 2.15 (m, 0.5H), 1.55 - 1.35 (m, 4.5H), 1.27 - 1.16 (m, 3H), 1.12 - 0.96 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 418 (M+1)+.
화합물 A2: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(417 mg, 1 mmol) 및 K2CO3(276 mg, 2 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(250 mg, 1.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A2(350 mg, 76%)를 얻었고, 이를 카이랄 분취용-HPLC에 의해 화합물 A2a(60 mg) 및 화합물 A2b(90 mg)로 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A2: 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.84 (m, 2H), 8.15 - 8.01 (m, 3H), 7.95 - 7.90 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 2H), 4.96 - 4.88 (m, 0.5H), 4.65 - 4.50 (m, 1H), 4.35 - 4.20 (m, 0.5H), 4.04 - 3.93 (m, 0.5H), 3.88 - 3.78 (m, 0.5H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.51 - 3.43 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.03 (m, 0.5H), 2.98 - 2.80 (m, 1.5H), 2.25 - 2.16 (m, 0.5H), 1.51 - 1.38 (m, 4.5H), 1.26 - 1.17 (m, 3H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A2a(이전 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.15 - 8.01 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.02 - 4.86 (m, 1H), 4.36 - 4.20 (m, 1H), 4.02 - 3.91 (m, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 2.98 - 2.85 (m, 2H), 1.44 (t, J = 5.6 Hz, 6H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A2b(이후 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.14 - 8.01 (m, 3H), 7.93 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.75 - 4.46 (m, 2H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.74 - 3.64 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.91 - 2.82 (m, 1H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.17 - 1.18 (m, 6H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A16: 1-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)사이클로프로판-1-카르보니트릴
DMSO(1 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(23 mg, 0.05 mmol) 및 NaH(8 mg, 0.2 mmol)의 용액에 1,2-디브로모에탄(28 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하고 분취용-HPLC에 의해 추가 정제하여 표제 화합물 A16(3 mg, 12%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.80 (m, 2H), 8.00 - 7.92 (m, 4H), 5.59 (s, 1H), 4.75 - 4.23 (m, 2H), 4.09 - 3.64 (m, 2H), 3.51 - 3.44 (m, 0.5H), 3.45 (s, 3H), 3.19 - 2.76 (m, 2H), 2.28 - 2.16 (m, 0.5H), 2.05 - 1.88 (m, 4H), 1.72 - 1.05 (m, 9H) ppm. MS: M/e 483 (M+1)+
화합물 A17: 2-사이클로프로필-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
톨루엔(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(13 mg, 0.03 mmol), 사이클로프로필보론산(3 mg, 0.045 mmol) 및 Na2CO3(6 mg, 0.06 mmol)의 용액에 Cu(OAc)2(6 mg, 0.03 mmol) 및 2,2'-바이피리딘(4 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 O2 하의 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(25 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A17(3 mg, 21%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.84 (m, 2H), 8.15 - 8.05 (m, 3H), 7.88 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 4.77 - 4.35 (m, 1.5H), 4.00 - 3.79 (m, 2H), 3.72 - 3.60 (m, 1.5H), 3.51 - 3.42 (m, 0.5H), 3.42 (s, 3H), 3.16 - 2.79 (m, 2H), 2.26 - 2.14 (m, 0.5H), 1.55 - 1.40 (m, 4H), 1.24 - 1.15 (m, 6H), 1.13 - 1.02 (m, 3H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A19: 2-(3-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)-1-(에틸설포닐)아제티딘-3-일)아세토니트릴
CH3CN(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(13 mg, 0.03 mmol)의 용액에 2-(1-(에틸설포닐)아제티딘-3-일리덴)아세토니트릴(8 mg, 0.045 mmol) 및 DBU(9 mg, 0.06 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 19(6 mg, 33%)를 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.84 (m, 2H), 8.19 - 8.16 (m, 1H), 8.14 - 8.01 (m, 3H), 5.58 (s, 1H), 4.90 - 4.87 (m, 0.5H), 4.75 - 4.50 (m, 3H), 4.45 - 4.32 (m, 0.5H), 4.29 - 4.20 (m, 2H), 4.02 - 3.92 (m, 0.5H), 3.86 - 3.78 (m, 0.5H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.61 - 3.54 (m, 2H), 3.50 - 3.44 (m, 0.5H), 3.46 (s, 3H), 3.18 - 3.04 (m, 2.5H), 2.97 - 2.80 (m, 1.5H), 2.24 - 2.17 (m, 0.5H), 1.51 - 1.37 (m, 4.5H), 1.36 - 1.27 (m, 3H), 1.26 - 1.18 (m, 3H), 1.09 - 1.03 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 604 (M+1)+.
화합물 A20: 3-사이클로펜틸-3-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)프로판니트릴
CH3CN(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(13 mg, 0.03 mmol)의 용액에 3-사이클로펜틸아크릴로니트릴(8 mg, 0.045 mmol) 및 DBU(9 mg, 0.06 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A20(6 mg, 33%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.84 (m, 2H), 8.16 - 7.98 (m, 3H), 7.94 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 5.58 - 5.52 (m, 1H), 4.75 - 4.32 (m, 2H), 4.02 - 3.92 (m, 0.5H), 3.88 - 3.76 (m, 0.5H), 3.74 - 3.60 (m, 1H), 3.50 - 3.45 (m, 0.5H), 3.45 (s, 3H), 3.25 - 3.00 (m, 2.5H), 2.97 - 2.80 (m, 1.5H), 2.68 - 2.42 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 0.5H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.78 - 1.50 (m, 4H), 1.49 - 1.41 (m, 4.5H), 1.40 - 1.17 (m, 7H), 1.09 - 1.01 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 539 (M+1)+.
화합물 A22: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(252 mg, 0.6 mmol) 및 K2CO3(166 mg, 1.2 mmol)의 용액에 1-브로모부트-2-인(120 mg, 0.9 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A22(140 mg, 50%)를 얻었고, 이를 카이랄-분취용-HPLC에 의해 추가 분리하여 화합물 A22a(50 mg) 및 화합물 A22b(50 mg)를 산출하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A22a(이전 이성질체, 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 -8.80 (m, 2H), 8.15 - 7.98 (m, 3H), 7.90 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.80 - 4.45 (m, 2H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.71 - 3.59 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.22 - 2.14 (m, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.52 - 1.38 (m, 3H), 1.24 - 1.12 (m, 6H) ppm. MS: M/e 470 (M+1)+.
화합물 A22b(이후 이성질체, 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 -8.80 (m, 2H), 8.16 - 8.00 (m, 3H), 7.90 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 5.02 - 4.86 (m, 1H), 4.40 - 4.15 (m, 1H), 4.01 - 3.91 (m, 1H), 3.51 - 3.38 (m, 4H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 2.95 - 2.81 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.48 - 1.36 (m, 6H), 1.04 (d, J = 4.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 470 (M+1)+.
화합물 A23: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMF(5 mL) 중 중간체 4(14 mg, 0.03 mmol) 및 K2CO3(8 mg, 0.06 mmol)의 용액에 1-브로모부트-2-인(6 mg, 0.045 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A23(2 mg, 13%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.86 (m, 2H), 8.16 - 7.95 (m, 3H), 7.89 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 0.5H), 3.95 - 3.84 (m, 0.5H), 3.58 - 3.49 (m, 0.5H), 3.44 (s, 3H), 3.31 - 3.28 (2H), 3.24 - 3.14 (m, 0.5H), 3.12 - 3.02 (m, 0.5H), 2.98 - 2.87 (m, 0.5H), 2.77 - 2.62 (m, 1H), 2.46 - 2.29 (m, 1H), 2.21 - 2.10 (m, 0.5H), 2.06 - 1.91 (m, 0.5H), 1.84 (s, 3H), 1.76 - 1.50 (m, 3H), 1.50 - 1.36 (m, 3H), 1.10 - 0.90 (m, 3H), 0.72 - 0.49 (m, 3H) ppm. MS: M/e 498 (M+1)+.
화합물 A24: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
톨루엔(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(13 mg, 0.03 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(10 mg, 0.06 mmol) 및 Na2CO3(6 mg, 0.06 mmol)의 용액에 Cu(OAc)2(6 mg, 0.03 mmol) 및 2,2'-바이피리딘(4 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 O2 하의 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(25 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A24(1 mg, 7%)를 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.95 - 8.80 (m, 2H), 8.35 - 7.95 (m, 4H), 5.65 - 5.45 (m, 2H), 4.75 - 4.23 (m, 2H), 4.03 - 3.62 (m, 2H), 3.54 - 3.40 (m, 4.5H), 3.17 - 2.73 (m, 2H), 2.50 - 2.16 (m, 3.5H), 1.55 - 1.39 (m, 4H), 1.55 - 1.39 (m, 4H), 1.14 - 1.02 (m, 1H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A25: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
톨루엔(3 mL) 중 중간체 4(14 mg, 0.03 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(10 mg, 0.06 mmol) 및 Na2CO3(6 mg, 0.06 mmol)의 용액에 Cu(OAc)2(5 mg, 0.03 mmol) 및 2,2'-바이피리딘(5 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 O2 하의 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A25(1 mg, 6%)를 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.84 (m, 2H), 8.19 (s, 1H), 8.16 - 8.00 (m, 3H), 5.58 - 5.47 (m, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.12 - 4.02 (m, 0.5H), 3.95 - 3.82 (m, 0.5H), 3.62 - 3.52 (m, 0.5H), 3.45 (s, 3H), 3.31 - 3.28 (2H), 3.26 - 3.20 (m, 0.5H), 3.16 - 3.04 (m, 0.5H), 2.98 - 2.86 (m, 0.5H), 2.80 - 2.69 (m, 1H), 2.46 - 2.29 (m, 4H), 2.26 - 2.14 (m, 0.5H), 2.08 - 1.94 (m, 0.5H), 1.80 - 1.55 (m, 3H), 1.49 - 1.40 (m, 3H), 1.10 - 0.94 (m, 3H), 0.71 - 0.49 (m, 3H) ppm. MS: M/e 486 (M+1)+.
화합물 A26: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: tert-부틸(2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(214 mg, 1 mmol), (4-(트리플루오로메톡시)페닐)메탄올(576 mg, 3 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(729 mg, 3 mmol)의 용액에 DIPEA(774 mg, 6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 병에 밀봉하고 90℃에서 16시간 동안 가열한 후, 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA: PE = 1:4)에 의해 정제하여 표제 화합물(380 mg, 94%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.38 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.28 - 4.16 (m, 1H), 3.72 - 3.56 (m, 2H), 3.50 - 3.40 (m, 1H), 3.36 - 3.24 (m, 1H), 3.05 - 2.85 (m, 1H), 2.78 - 2.64 (m, 1H), 2.20 - 2.12 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.28 - 1.18 (m, 3H), 1.04 - 0.92 (m, 3H) ppm. MS: M/e 389 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2,5-디메틸-1-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진
DCM(10 mL) 중 tert-부틸(2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-카르복실레이트(380 mg 1 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 포화 NaHCO3 용액에 용해시키고 DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE= 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 70%)을 얻었다. MS: M/e 289 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(6 mL) 중 (2R,5S)-2,5-디메틸-1-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진(86 mg, 0.3 mmol) 및 중간체 2(76 mg, 0.2 mmol)의 용액에 DIPEA(78 mg, 0.6 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 60시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(80 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH= 15 :1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 32%)을 얻었다. MS: M/e 520 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.096 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH= 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(22 mg, 50%)을 얻었다. MS: M/e 436 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
톨루엔(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(4-(트리플루오로메톡시)벤질)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(22 mg, 0.046 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란(16 mg, 0.092 mmol) 및 Na2CO3(10 mg, 0.092 mmol)의 용액에 Cu(OAc)2(8 mg, 0.046 mmol) 및 2,2'-바이피리딘(7 mg, 0.046 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 O2(벌룬) 하의 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(50 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A26(3 mg, 13%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.18 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 5.60 - 5.50 (m, 2H), 4.92 (s, 1H), 4.76 - 4.55 (m, 2H), 3.76 - 3.66 (m, 1H), 3.65 - 2.54 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 3.02 - 3.08 (m, 1H), 2.99 - 2.90 (m, 1H), 2.41 - 2.37 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 1.33 (d, J = 3.6 Hz, 3H), 1.14 (d, J = 3.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A28: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(5 mL) 중 중간체 4(90 mg, 0.2 mmol) 및 K2CO3(55 mg, 0.4 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(66 mg, 0.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A28(90 mg)을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었고, 이를 카이랄-분취용-HPLC에 의해 추가 분리하여 화합물 A28a(26 mg) 및 화합물 A28b(20 mg)를 산출하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A28a(이전 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.93 - 8.84 (m, 2H), 8.12 - 8.01 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.12 - 4.00 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.39 - 3.26 (m, 3H), 3.14 - 3.04 (m, 1H), 3.00 - 2.89 (m, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 1H), 2.26 - 2.10 (m, 1H), 1.96 - 1.79 (m, 1H), 1.70 - 1.54 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 3H), 1.06 - 0.85 (m, 3H), 0.74 - 0.65 (m, 3H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A28b(이후 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 - 8.84 (m, 2H), 8.15 - 7.98 (m, 3H), 7.93 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.62 - 3.50 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.35 - 3.28 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 1H), 2.80 - 2.68 (m, 1H), 2.38 - 2.30 (m, 1H), 2.06 - 1.90 (m, 1H), 1.80 - 1.55 (m, 3H), 1.48 - 1.37 (m, 3H), 1.12 - 1.00 (m, 3H), 0.65 - 0.48 (m, 3H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A29: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트.
CH3CN(4 mL) 중 1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에탄-1-올(600 mg, 3.26 mmol), tert-부틸 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(1050 mg, 4.9 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(1584 mg, 6.52 mmol)의 용액에 DIPEA(2103 mg, 16.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(800 mg, 65%)을 얻었다. MS: M/e 381 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-1-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진.
DCM(25 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(800 mg, 2.105 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(6 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(400 mg, 68%)을 얻었고 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 281 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(5 mL) 중 (2R,5S)-1-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진(400 mg, 1.428 mmol) 및 중간체 2(597 mg, 1.57 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(921 mg, 7.14 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(450 mg, 74%)을 얻었다. MS: M/e 512 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(15 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(450 mg, 1.054 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(6 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(40 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(380 mg, 84%)을 얻었다. MS: M/e 428 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(10 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(380 mg, 0.889 mmol) 및 K2CO3(246 mg, 1.779 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(223 mg, 1.334 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(45 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 화합물 A29(200 mg)를 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A29a(86 mg) 및 화합물 A29b(88 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A29: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 16.3, 9.8 Hz, 2H), 5.62 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 5.41 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.93 - 3.64 (m, 1H), 3.28 (s, 3H), 2.93 - 2.61 (m, 7H), 1.30 - 1.16 (m, 6H), 1.12 - 0.97 (m, 3H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 2H). MS: M/e 467 (M+1)+
화합물 A29a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ7.93 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.08-7.05 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.61-4.56 (m, 1H), 4.53 (s, 3H), 3.86 (s, 1H), 3.63-3.59 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 2.82-2.79 (d, J = 12 Hz, 1H), 2.17-2.14 (d, J = 12 Hz, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.18 (s, 6H) ppm. MS: M/e 467 (M+1)+.
화합물 A29b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ7.92 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.13-7.11 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.06-7.04 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.66-4.59 (m, 4H), 3.94 (s, 1H), 3.43-3.42 (m, 7H), 3.01-2.89 (m, 3H),1.40-1.39 (d, J = 4 Hz, 3H), 1.30-1.29 (d, J = 4 Hz, 3H), 1.00-0.99 (d, J = 4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 467 (M+1)+.
화합물 A46: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 및 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물
단계 A: 5-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀 및 4-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀의 혼합물.
DMF(50 mL) 중 4-브로모벤젠-1,2-디올(10.0 g, 52.9 mmol) 및 Li2CO3(5.8 g, 79.4 mmol)의 용액에 DMF(50 mL) 중 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔(8.6 g, 63.7 mmol)의 용액을 첨가하고 혼합물을 60℃에서 2일 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 생성된 현탁액을 여과시켰다. 여액을 EA(200 mL) 및 H2O(200 mL)로 처리한 후, 수성 HCl(1 M)로 pH ~ 5로 산성화하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 위치 이성질체의 표제 화합물(4.7 g, 37%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 243, 245 (M+1)+.
단계 B: 7-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신 및 6-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신의 혼합물.
HCOOH(50 mL) 중 5-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀 및 4-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀의 혼합 생성물의 용액을 5시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EA(100 mL)로 희석하고, 포화 NH4Cl(50 mL x 2), 포화 수성 NaHCO3(50 mL), 염수(50 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.5 g, 33%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 243, 245 (M+1)+.
단계 C: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온 및 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온의 혼합물.
톨루엔(20 mL) 중 7-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신 및 6-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신(1.4 g, 5.76 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(4.1 g, 11.3 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(200 mg, 0.286 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(20 mL) 및 H2O(20 mL)로 희석하였다. 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과시켰다. 수성 층을 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)로 처리하고, 5분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 염수(20 mL), 포화 수성 NaHCO3(20 mL x 2), 염수(20 mL)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(630 mg, 53%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 207 (M+1)+.
단계 D: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올 및 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올의 혼합물.
MeOH(10 mL) 중 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온 및 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온(630 mg, 3.06 mmol)의 용액에 NaBH4(232 mg, 6.12 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 처리하고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(620 mg, 97%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 209 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물.
MeCN(2 mL) 중 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올 및 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올(180 mg, 0.86 mmol), 중간체 10B(130 mg, 0.38 mmol) 및 DIPEA(350 mg, 2.7 mmol)의 용액을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH= 15/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(180 mg, 88%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 536 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물.
MeOH(3 mL) 중 [7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온](160 mg, 0.3 mmol)의 교반된 혼합물에 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(180 mg, 미정제)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 452 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물.
MeCN(3 mL) 중 [7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물](170 mg, 0.37 mmol), K2CO3(200 mg, 1.45 mmol) 및 H2O(0.5 mL)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(100 mg, 0.60 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 5 mL의 염수로 희석하고, EA(5 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(5 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH= 15:1)에 의해 정제하여 화합물 A46a(1.5 mg) 및 화합물 A46b(24 mg)로서 명명된, 2개의 분획을 얻었다.
화합물 A46a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.00 - 6.86 (m, 2H), 6.82 - 6.70 (m, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.93 - 5.69 (m, 1H), 5.50 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.95 - 3.83 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.48 - 3.35 (m, 1H), 3.28 - 3.03 (m, 2H), 2.95 - 2.74 (m, 1H), 2.74 - 2.54 (m, 2H), 2.39 - 2.25 (m, 1H), 1.34 - 1.30 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 6.0 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.96 - 6.66 (m, 3H), 5.55 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 4.87 - 4.18 (m, 2H), 3.88 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.46 - 3.37 (m, 4H), 3.03 - 2.90 (m, 1H), 2.87 - 2.23 (m, 2H), 1.42 - 1.30 (m, 9H), 1.29 - 1.18 (m, 3H), 1.15 - 0.93 (m, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물로서 또 다른 배치의 150 mg 화합물 A46을 통상의 기술자가 인지할 수 있는 화합물 A46에 대해 상기에 기재된 바와 같은 절차에 따라 제조하였다.
혼합물로서 화합물 A46(150 mg)을 2회의 카이랄 분취용-HPLC 조건에 의해 각각 4개의 이성질체, 화합물 A46c(9 mg), 화합물 A46d(9 mg), 화합물 A46e(14 mg) 및 화합물 A46f(10 mg)로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A46c(제1 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.91 (s, 1H), 6.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.74 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.30 (s, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.60 - 3.49 (m, 1H), 3.46 - 3.37 (m, 4H), 3.37 - 3.31 (m, 1H), 3.04 - 2.91 (m, 2H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.32 (s, 6H), 1.29 - 1.26 (m, 3H), 0.98 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46d(제2 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 6.88 - 6.76 (m, 3H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.57 - 3.46 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 3.02 - 2.89 (m, 2H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.33 (s, 6H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46e(제3 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.00 - 6.79 (m, 2H), 6.79 - 6.65 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.71 - 4.42 (m, 2H), 3.89 (s, 2H), 3.70 - 3.52 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.04 - 2.52 (m, 2H), 2.47 - 2.22 (m, 1H), 1.33 - 1.28 (m, 9H), 1.22 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.19 - 1.06 (m, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46f(제4 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 6.88 - 6.72 (m, 3H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.65 - 4.85 (m, 1H), 4.57 (s, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.69 - 3.51 (m, 2H), 3.49 - 3.34 (m, 4H), 2.71 (dd, J = 12.0, 3.6 Hz, 1H), 2.27 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.32 - 1.28 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46d 및 화합물 A46f는 하기와 같은 또 다른 방법으로 합성할 수도 있다:
화합물 A46d 및 화합물 A46f의 혼합물: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 1-(4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)에탄-1-온.
DMF(80 mL) 중 1-(4-브로모-2-하이드록시페닐)에탄-1-온(10.0 g, 46.7 mmol), K2CO3(12.9 g, 93.6 mmol)의 혼합물에 1-(클로로메틸)-4-메톡시벤젠(7.3 g, 46.7 mmol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 혼합물에 H2O(200 mL)를 첨가하고 EtOAc(100 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(100 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(13.8 g, 88%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.58 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.19 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.45 (s, 3H) ppm.
단계 B: 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페닐 아세테이트.
CH2Cl2(150 mL) 중 1-(4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)에탄-1-온(12.8 g, 38.3 mmol)의 교반된 용액에 3-클로로벤조퍼옥소산(22.0 g, 95.6 mmol)을 실온에서 부분으로 나누어 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 64시간 동안 교반하였다. 현탁액을 여과시키고 여액을 NaHCO3(50 mL x 3), 염수(50 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(13.5 g, 미정제)을 얻었다.
단계 C: 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페놀.
THF(100 mL) 중 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페닐 아세테이트(13.0 g, 37 mmol)의 용액에 NaOH의 수용액(4M, 50 mL)을 실온에서 첨가하고 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(2 M)로 pH~3으로 산성화하였다. 혼합물을 EtOAc(100 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(6.8 g, 2단계 60%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.29 (s, 1H), 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.13 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.85 (m, 3H), 6.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 3.76 (s, 3H) ppm.
단계 D: 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)벤젠.
DMF(50 mL) 중 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)페놀(6.8 g, 22.1 mmol), K2CO3(9.1 g, 66.3 mmol)의 혼합물에 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔(8.6 g, 63.7 mmol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, 염수(50 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(6.71 g, 84%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.22 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.99 - 6.89 (m, 3H), 5.04 (s, 2H), 5.02 (s, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.46 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 1.74 (s, 3H) ppm.
단계 E: 5-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀.
아세트산(50 mL) 중 4-브로모-2-((4-메톡시벤질)옥시)-1-((2-메틸알릴)옥시)벤젠(5.7 g, 15.7 mmol)의 용액을 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고 잔류물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, NaHCO3(수성 20 mL x 2), 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(120 g의 실리카-겔 컬럼)에 의해 정제하여 표제 화합물(3.4g, 89%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.47 (s, 1H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 6.89 - 6.80 (m, 2H), 5.05 (s, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 1.76 (s, 3H) ppm. MS: M/e 243 (M+1)+
단계 F: 7-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신.
HCOOH(60 mL) 중 5-브로모-2-((2-메틸알릴)옥시)페놀(3.36 g, 13.9 mmol)의 용액을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고 생성된 잔류물을 EA(50 mL)로 희석하고, H2O(20 mL x 3), NaHCO3(20 mL x 2), 염수(20 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(980 mg, 29%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.95 - 6.89 (m, 1H), 6.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 2H), 1.33 (s, 6H) ppm.
단계 G: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온.
톨루엔(20 mL) 중 7-브로모-2,2-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신(980 mg, 4.05 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(2.17 g, 6.01 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(140 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 EA(40 mL) 및 20 mL의 H2O로 희석하였다. 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과시켰다. 유기 층을 HCl/디옥산(4M, 3 mL)으로 처리하고, 2분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 염수(20 mL x 2), NaHCO3(20 mL x 2), 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(530 mg, 64%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 - 7.44 (m, 2H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.94 (s, 2H), 2.53 (s, 3H), 1.36 (s, 6H) ppm.
단계 H: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올.
MeOH(5 mL) 중 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-온(530 mg, 2.57 mmol)의 용액에 NaBH4(98 mg, 2.57 mmol)를 0℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO3(20 mL)로 처리하고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(515 mg, 96%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 6.83 - 6.71 (m, 3H), 4.99 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.66 - 4.49 (m, 1H), 3.88 (s, 2H), 1.28 - 1.24 (m, 9H).
단계 I: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(2 mL) 중 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올(208 mg, 1.0 mmol), 중간체 10(210 mg, 0.7 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(510 mg, 2.1 mmol)의 용액에 DIPEA(540 mg, 4.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 EA(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 분취용-HPLC에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(60 mg, 17%, 혼합물로서)을 얻었고, 이를 카이랄 분취용-HPLC에 의해 화합물 A46d(14 mg) 및 화합물 A46f(16 mg)로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A 46d(이전 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 6.88 - 6.76 (m, 3H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.88 (s, 2H), 3.57 - 3.46 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 3.02 - 2.89 (m, 2H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.33 (s, 6H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A46f: (이후 피크): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 6.88 - 6.72 (m, 3H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.65 - 4.85 (m, 1H), 4.57 (s, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.69 - 3.51 (m, 2H), 3.49 - 3.34 (m, 4H), 2.71 (dd, J = 12.0, 3.6 Hz, 1H), 2.27 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.32 - 1.28 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A47: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 에틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
피리딘(5 mL) 중 에틸 4-((사이클로프로필메틸)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(200 mg, 0.8368 mmol), 아세트산 무수물(2 mL)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, DCM(100 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 85.05%)을 얻었다. MS: M/e 282 (M+1)+
단계 B: 에틸 4-(N-에틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(5 mL) 중 에틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(200 mg, 0.7117 mmol), 요오도에탄(167 mg, 1.068 mmol) 및 Cs2CO3(464 mg, 1.423 mmol)의 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, DCM(100 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 90.94%)을 얻었다. MS: M/e 310 (M+1)+
단계 C: 4-에틸-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF 중 에틸 4-(N-에틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(200 mg, 0.6473 mmol)의 용액에 N2 하에서 LiHMDS(1 mL, 1 mmol)를 -78℃에서 적가하고 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 AcOH로 켄칭하고, DCM(80 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 49.43%)을 얻었다. MS: M/e 264 (M+1)+
단계 D: 4-에틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
DMF(5 mL) 중 4-에틸-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(130 mg, 0.4943 mmol), 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(265 mg, 0.7414 mmol), K2CO3(134 mg, 0.9886 mmol)의 혼합물을 N2 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM(50 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 76.83%)을 얻었다. MS: M/e 396 (M+1)+
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 4-에틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(150 mg, 0.3796 mmol), 6-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(170 mg, 0.5696 mmol), DIPEA(245 mg, 1.899 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM(50 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 29.10%)을 얻었다. MS: M/e 544 (M+1)+
단계 F: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(2 mL) 및 DCM(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg, 0.1105 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 농축시키고 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 98.58%)을 얻었다. MS: M/e 460 (M+1)+
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-에틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.1089 mmol), 2-요오도아세토니트릴(36 mg, 0.2179 mmol), K2CO3(45 mg, 0.3268 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(50 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(18 mg, 33.18%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.94 (s, 2H), 8.14 - 8.01 (m, 3H), 7.96 (s, 1H), 5.60 (s, 2H), 5.38 (s, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.94 - 3.77 (m, 3H), 3.21 - 2.93 (m, 3H), 2.88 - 2.61 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 3H), 1.41 - 1.33 (m, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.06 - 0.78 (m, 4H), 0.68 - 0.40 (m, 3H) ppm. MS: M/e 499 (M+1)+
화합물 A52:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(벤조[d]티아졸-2-일)에탄-1-올
HCL(30 mL, 4M) 중 2-아미노벤젠티올(1.25 g, 10 mmol) 및 2-하이드록시프로판산(1.08 g, 12 mmol)의 혼합물을 밤새 가열 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물에 부었다. 다음으로, 암모니아로 pH를 10-11로 조정하였다. 혼합물을 여과시키고, 생성된 잔류물을 물로부터 재결정화하여 표제 화합물(450 mg, 25%)을 얻었다. MS: M/e 180 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(2 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(170 mg, 0.7 mmol), 1-(벤조[d]티아졸-2-일)에탄-1-올(200 mg, 1.1 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(97 mg, 1.4 mmol) 및 DIPEA(450 mg, 3.5 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 100:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(280 mg, 79%, 80% 순도)을 얻었다. MS: M/e 403(M+1)+.
단계 C: 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸
DCM(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(280 mg, 80% 순도)의 용액에 TFA(2 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축시켜 표제 화합물(160 mg, 미정제)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 295 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN 중 중간체 2(77 mg, 0.2 mmol), 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)벤조[d]티아졸(60 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(128 mg, 1 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 47%)을 얻었다. MS: M/e 535 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.09 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(0.5 mL, 2 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고 이를 분취용-TLC(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(15 mg, 37%)을 얻었다. MS: M/e 451 (M+1)+.
단계 F:
7-2-(7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 단계 E의 화합물(15 mg, 0.03 mmol) 및 K2CO3(4.6 mg, 0.06 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(8.5 mg, 0.05 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(10 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(8 mg, 48%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.95 - 7.90 (m, 3H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 5.61 - 5.58 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.37 (br s, 1H), 3.48 - 3.46 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.15 - 3.10 (m, 2H), 2.94 - 2.68 (m, 3H), 2.20 - 2.16 (m, 1H), 1.98 - 1.90 (m, 3H), 1.65 - 1.54 (m, 3H), 1.05 - 0.78 (m, 6H) ppm. MS: M/e 490 (M+1)+.
화합물 A62: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(이소퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(이소퀴놀린-7-일)에탄-1-온
톨루엔(60 mL) 중 7-브로모이소퀴놀린(4.9 g, 23.55 mmol) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(11 g, 30.6 mmol)의 용액에 Pd(PPH3)2Cl2(1.61 g, 2.35 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O/EA로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과시키고, EA로 세척하였다. 여액을 수집하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 미정제물을 THF(80 mL)에 용해시키고, 3N HCl(20 mL)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.3 g, 57%)을 얻었다. MS: M/e 172 (M+1)+.
단계 B: 1-(이소퀴놀린-7-일)에탄-1-올
빙냉 배스에서 MeOH(60 mL) 중 1-(이소퀴놀린-7-일)에탄-1-온(2.33 g, 13.6 mmol)의 용액에 NaBH4(516 mg, 13.6 mmol)를 여러 부분으로 나누어 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉수로 켄칭하고, DCM(80 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.2 g, 51%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.25 (s, 1H), 8.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.91 - 7.85 (m, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 5.39 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.94 - 4.81 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm.MS: M/e 174 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(이소퀴놀린-7-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 1-(이소퀴놀린-7-일)에탄-1-올(70 mg, 0.4 mmol), 중간체 5(65 mg, 0.2 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(97 mg, 0.4 mmol)의 용액에 DIPEA(103 mg, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(97 mg, 0.4 mmol)의 또 다른 부분을 첨가하고 100℃에서 26시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH =15:1) 및 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(8 mg, 8%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.21 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.41 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.11 - 8.02 (m, 1H), 8.00 - 7.88 (m, 3H), 7.86 - 7.78 (m, 1H), 5.59 - 5.51 (m, 1H), 5.49 - 5.43 (m, 2H), 4.04 - 3.96 (m, 0.5H), 3.91 - 3.81 (m, 0.5H), 3.59 - 3.50 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.32 - 3.28 (m, 2.5H), 3.26 - 3.17 (m, 0.5H), 3.11 - 3.03 (m, 0.5H), 2.97 - 2.86 (m, 0.5H), 2.75 - 2.64 (m, 0.5H), 2.55 - 2.30 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 0.5H), 2.06 - 1.92 (m, 0.5H), 1.91 - 1.78 (m, 0.5H), 1.76 - 1.51 (m, 2.5H), 1.49 - 1.36 (m, 3H), 1.05 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 0.65 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.54 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 484 (M+1)+.
화합물 A63: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 1-(1,8-나프티리딘-2-일)에탄-1-올.
THF(30 mL) 중 1,8-나프티리딘-2-카르브알데히드(600 mg, 3.794 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, CH3MgBr(1.6 mL, Et2O 중 3M)을 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(45 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(400 mg, 61%)을 얻었다. MS: M/e 175 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트.
CH3CN(2 mL) 중 1-(1,8-나프티리딘-2-일)에탄-1-올(200 mg, 1.156 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(281 mg, 1.156 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(562 mg, 2.312 mmol)의 용액에 DIPEA(747 mg, 5.780 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 26%)을 얻었다. MS: M/e 399 (M+1)+.
단계 C: 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-1,8-나프티리딘.
DCM(6 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(120 mg, 0.300 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(60 mg, 66%)을 얻었다. MS: M/e 299 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(2 mL) 중 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-1,8-나프티리딘(60 mg, 0.201 mmol) 및 중간체 2(92 mg, 0.242 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(130 mg, 1.005 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 75%)을 얻었다. MS: M/e 530 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
DCM(6 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.151 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(50 mg, 75%)을 얻었다. MS: M/e 446 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(1,8-나프티리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.112 mmol) 및 K2CO3(46 mg, 0.336 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(28 mg, 0.169 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(10 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(6 mg, 11%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.21-9.19 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 8.69-8.59 (m, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.86-7.76 (m, 2H), 5.70-5.78 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.50 (s, 2H), 5.15-5.11 (m, 1H), 3.91-3.78 (m, 3H), 3.72-3.58 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 2.83-2.69 (m, 1H), 2.13-1.95 (m, 3H), 1.93-1.91 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 1.85-1.75 (m, 3H), 1.24-1.15 (m, 1H), 1.05-1.01 (m, 2H), 0.93-0.80 (m, 3H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A65: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물.
+
단계 A: 3-메틸퀴녹살린-6-카르복실산 및 2-메틸퀴녹살린-6-카르복실산의 혼합물
MeOH(100 mL) 중 3,4-디아미노벤조산(10 g, 65.72 mmol) 및 2-옥소프로판알(14.21 g, 물 중 40%)의 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(90% 순도)을 얻었고 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 189 (M+1)+.
단계 B: N-메톡시-N,3-디메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드 및 N-메톡시-N,2-디메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드의 혼합물
DMF(150 mL) 중 3-메틸퀴녹살린-6-카르복실산(12 g, 64.2 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민(9.2 g, 96.26 mmol) 및 HATU(36.6 g, 96.26 mmol)의 용액에 NaHCO3(16.2 g, 192.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(60 mL)로 켄칭하고 EA(300 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(11 g, 74%)을 얻었다. MS: M/e 232 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온 및 1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온의 혼합물.
무수 THF(100 mL) 중 N-메톡시-N,3-디메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드(8.6 g, 37.2 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. CH3MgBr(18.6 mL, 55.8 mmol, 3M)을 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(60 mL)로 켄칭하고 EA(150 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(50 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(4.0 g, 57%)을 얻었다. MS: M/e 187 (M+1)+.
단계 D: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올 및 1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올의 혼합물.
MeOH(30 mL) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(1.15 g, 6.18 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(188 mg, 4.94 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 켄칭하고 EA(45 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(600 mg, 52%)을 얻었다. MS: M/e 189 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물.
CH3CN(2 mL) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(98 mg, 0.519 mmol), 중간체 3(150 mg, 0.432 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(210 mg, 0.864 mmol)의 용액에 DIPEA(279 mg, 2.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 47%)을 얻었다. MS: M/e 544 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물.
MeOH(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.184 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(80 mg, 94%)을 얻었다. MS: M/e 460 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물.
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.174 mmol) 및 K2CO3(72 mg, 0.522 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(44 mg, 0.261 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(13 mg, 15%)을 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.81 (s, 1H), 8.07-7.93 (m, 4H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.04-3.88 (m, 1H), 3.63-3.58 (m, 1H), 3.31 (s, 3H), 3.10-2.77 (m, 2H), 2.76-2.63 (m, 4H), 2.61-2.38 (m, 1H), 2.17-1.88 (m, 2H), 1.88-1.61 (m, 2H), 1.45-1.41 (m, 3H), 1.60 (m, 1H), 1.43-0.98 (m, 3H), 0.56-0.42 (m, 3H) ppm. MS: M/e 499 (M+1)+.
화합물 A69: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올
MeOH(20 mL) 중 1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(1.1 g, 5.3 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(243 mg, 6.40 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 켄칭하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(900 mg, 82%)을 얻었다. MS: M/e 191 (M-17)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(5 mL) 중 1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(1.0 g, 4.81 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(1.17 g, 4.81 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(1.17 g, 9.62 mmol)의 용액에 DIPEA(3.1 g, 24.05 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.1 g, 53%)을 얻었다. MS: M/e 433 (M+1)+.
단계 C: (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진
DCM(20 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(1.0 g, 2.3 mmol)의 용액에 실온에서 HCl/디옥산(6 mL, 4M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(700 mg, 91%)을 얻었고 이를 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 333 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진(700 mg, 2.1 mmol) 및 중간체 2(953 mg, 2.5 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(1354 mg, 10.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.0 g, 85%)을 얻었다. MS: M/e 564 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(화합물 A231)
MeOH(20 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.0 g, 1.77 mmol)의 용액에 실온에서 HCl/디옥산(10 mL, 4M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(700 mg, 82%)을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었고, 이 중 일부를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A231a(10 mg) 및 화합물 A231b(10 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A231a: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.76 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 5.65 (s, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.48-3.42 (m, 4H), 3.09-2.99 (m, 1H), 2.75-2.65 (m, 1H), 2.32-2.22 (m, 1H), 1.87-1.55 (m, 5H), 1.50-1.46 (m, 1H), 1.29-1.25 (m, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.61-0.56 (m, 3H) ppm. MS: M/e 480 (M+1)+.
화합물 A231b: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.62 (s, 1H), 7.68-7.66 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.43 (s, 2H), 7.32-7.29 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.22-4.21 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 (m, 1H), 2.91 (m, 2H), 2.36-2.34 (m, 1H), 2.05-2.00 (m, 1H), 1.78-1.72 (m, 1H), 1.62-1.56 (m, 3H), 1.37-1.31 (m, 1H), 1.29-1.23 (m, 3H), 0.90-0.86 (t, J = 8 Hz, 3H), 0.71-0.67 (t, J = 8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 480 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(화합물 A69)
DMF(20 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(700 mg, 1.46 mmol) 및 K2CO3(403 mg, 2.92 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(366 mg, 2.19 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 미정제 화합물 A69(600 mg)를 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A69a(106 mg) 및 화합물 A69b(150 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A69a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92-7.91 (m, 1H), 7.80 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.28-4.23 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.32-3.30 (m, 3H), 2.92-2.88 (m, 2H), 2.40-2.38 (m, 1H), 2.11-2.07 (m, 1H), 1.80-1.76 (m, 1H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.36-1.32 (m, 3H), 0.95-0.91 (t, J = 8 Hz, 3H), 0.78-0.74 (t, J = 8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A69b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.95-7.91 (m, 1H), 7.87 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.10-4.07 (m, 1H), 3.52-3.51(m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.18-3.14 (m, 1H), 2.76-2.65 (m, 1H), 2.39-2.29 (m, 1H), 1.95-1.91 (m, 1H), 1.70-1.66 (m, 2H), 1.55-1.51 (m, 1H), 1.36-1.32 (m, 3H), 1.03-0.99 (t, J = 8 Hz, 3H), 0.67-0.63 (t, J = 8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A71: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(1.5 g, 6.2 mmol), 1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에탄-1-올(1.58 g, 9.3 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(3.0 g, 12.4 mmol) 및 DIPEA(3.96 g, 31 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH = 100:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.1 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 395 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진
DCM(20 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(2.1 g, 5.3 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축시켜 미정제 생성물(1.6 g)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 295 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN 중 중간체 2(773 mg, 2.03 mmol), (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진(600 mg, 2.03 mmol) 및 DIPEA(mg, mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(750 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 526 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(400 mg, 0.76 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(1.9 mL, 7.6 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(20 mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고 이를 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(280 mg, 84%)을 얻었다. MS: M/e 442 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(280 mg, 0.64 mmol) 및 K2CO3(178 mg, 12.8 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(160 mg, 0.96 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 염수(20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켜 화합물 A71을 수득하였다. 화합물 A71을 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 2개의 화합물 화합물 A71a(38 mg, 12%) 및 화합물 A71b(미정제)를 얻었다. 화합물 A71b(미정제)를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A71b(19 mg, 6%)를 얻었다.
화합물 A71a: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.74 - 6.66 (m, 2H), 5.54 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.10 (br s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.01 (m, 2H), 2.68 - 2.55 (m, 2H), 2.39 - 2.5 (m, 1H), 2.01 (br s, 1H), 1.65 - 1.48 (m, 4H), 1.35 - 1.21 (m, 3H), 1.05 - 0.98 (m, 3H), 0.72 - 0.68 (m, 3H) ppm. MS: M/e 481 (M+1)+.
화합물 A71b: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.90 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.76 - 6.69 (m, 2H), 5.52 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.31 (br s, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.41 (s, 3H), 3.35 - 3.23 (m, 1H), 2.93 - 2.63 (m, 4H), 2.45 (br s, 1H), 2.02 (br s, 1H), 1.78 (br s, 1H), 1.52 - 1.48 (m, 2H), 1.30 - 1.25 (m, 3H), 0.99 - 0.92 (m, 3H), 0.75 - 0.68 (m, 3H) ppm. MS: M/e 481(M+1)+.
화합물 A79: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeCN(10 mL) 중 1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에탄-1-올(200 mg, 1.1 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(290 mg, 1.2 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(550 mg, 2.3 mmol) 및 DIPEA(700 mg, 5.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 역 C18 컬럼(물, 0.05%TFA/MeCN)에 의해 정제하여 표제 화합물(140 mg, 32%)을 얻었다. MS: M/e 409 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진
DCM(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라즈(140 mg, 0.34 mmol)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 물로 용해시키고 포화 수성 NaHCO3로 pH = 9로 조정하였다. 수성 층을 EA(25 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 50:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 76%)을 얻었다. MS: M/e 309 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeCN(5 mL) 중 (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진(80 mg, 0.26 mmol)의 용액에 중간체 2(148 mg, 0.39 mmol) 및 DIPEA(100 mg, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하여 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 40:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 93%)을 얻었다. MS: M/e 540 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(130 mg, 0.24 mmol)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 물로 용해시키고 포화 수성 NaHCO3로 pH=9로 조정하였다. 수성 층을 (DCM: i-PrOH = 4:1, 25 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 30:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(65 mg, 59%)을 얻었다. MS: M/e 456 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(20 mg, 0.044 mmol)의 용액에 K2CO3(18 mg, 0.13 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(11 mg, 0.065 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(7.8 mg, 36%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.75 - 7.51 (m, 1H), 7.23 - 6.95 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.68 - 4.48 (m, 2H), 4.15 - 3.80 (m, 1H), 3.55 - 3.30 (m, 7H), 3.25 - 3.01 (m, 1H), 2.95 - 2.70 (m, 1H), 2.65 - 2.30 (m, 1H), 2.29 - 2.02 (m, 1H), 2.00 - 1.75 (m, 1H), 1.74 - 1.33 (m, 3H), 1.32 - 1.20 (m, 4H), 1.15 - 0.80 (m, 3H), 0.75 - 0.51 (m, 3H) ppm. MS: M/e 495(M+1)+.
화합물 A84: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 중간체 3(100 mg, 0.27 mmol), 1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에탄-1-올(83 mg, 0.54 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(131 mg, 0.54 mmol) 및 DIPEA(350 mg, 2.7 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 59%)을 얻었다. MS: M/e 510 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.16 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(1 mL, 4 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 PH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고 이를 분취용-TLC(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(20 mg, 29%)을 얻었다. MS: M/e 426 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메틸페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(20 mg, 0.05 mmol) 및 K2CO3(13 mg, 0.09 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(12 mg, 0.07 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(10 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.2 mg, 10%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.58 - 7.45 (m, 1H), 6.91 - 6.81 (m, 2H), 5.55 - 5.47 (m, 3H), 3.97 - 3.87 (m, 1H), 3.51 - 3.42 (m, 4H), 3.19 - 3.02 (m, 1H), 2.82 - 2.62 (m, 3H), 2.47 - 2.29 (m, 4H), 1.75 - 1.61 (m, 3H), 1.35 - 1.24 (m, 5H), 1.55 - 0.88 (m, 3H), 0.69 - 0.63 (m, 2H) ppm. MS: M/e 465 (M+1)+.
화합물 A95:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-하이드록시에틸)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 에틸 4-(N-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(10 ml) 중 에틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1 g, 3.56 mmol), tert-부틸(2-요오도에톡시)디메틸실란(1.53 g, 5.35 mmol) 및 Cs2CO3(2.32 g, 7.12 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후 60℃에서 2일 동안 교반하였다. 완료 후, 혼합물을 물(15 ml)에 부은 후 EA(20 ml X 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 0-50% EA를 이용하는 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.37 g, 24%)을 얻었다. MS: M/e 440 (M+1)+.
단계 B: 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(10 ml) 중 에틸 4-(N-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(0.37 g, 0.84 mmol)의 교반된 용액에 N2 하의 -60℃에서 LiHMDS(1M, 1.6 ml, 1.6 mmol)를 적가하였다. 용액을 -60℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 H2O(1 ml)로 켄칭하고 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH를 이용하는 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(250 mg, 75%)을 연황색 고체로서 얻었다. MS: M/e 394 (M+1)+.
단계 C: 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
THF(10 ml) 중 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-7-하이드록시-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(250 mg, 0.63 mmol), 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(340 mg, 0.95 mmol) 및 K2CO3(175 mg, 1.27 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 0-30% EA를 이용하는 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(290 mg, 87%)을 얻었다. MS: M/e 526 (M+1)+.
단계 D: 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeCN(6 ml) 중 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(290 mg, 0.55 mmol), 6-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(165 mg, 0.55 mmol) 및 DIPEA(214 mg, 1.66 mmol)의 혼합물을 110℃에서 4일 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 30%-100% EA를 이용하는 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(140 mg, 38%)을 얻었다. MS: M/e 674 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-하이드록시에틸)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 ml) 중 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(140 mg, 0.21 mmol)의 용액에 HCl/디옥산(4M, 2 ml, 8 mmol)을 적가한 후 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(98 mg, 100%)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 476 (M+1)+.
단계 F: 4-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(5 ml) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-하이드록시에틸)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(98 mg, 0.21 mmol), DIPEA(81 mg, 0.63 mmol) 및 DMAP(촉매량)의 용액에 TBSCl(55 mg, 0.36 mmol)을 첨가한 후 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 반응 혼합물을 DCM(10 ml)으로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(20:1)를 이용하는 분취용-TLC에 의해 정제하여 미정제 생성물(120 mg, 100%)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 590 (M+1)+.
단계 G: 2-(4-(2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)에틸)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 ml) 중 단계 F의 화합물(60 mg, 0.10 mmol), 2-요오도아세토니트릴(25.5 mg, 0.15 mol) 및 K2CO3(28 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 혼합물을 물(15 ml)에 부은 후 EA(20 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(63 mg)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 629 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-하이드록시에틸)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
THF(5 ml) 중 단계 G의 화합물(63 mg, 0.1 mmol) 및 TBAF(1M, 0.15 ml, 0.15 mmol)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(15:1)를 이용하는 분취용-TLC에 이어서 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.98-8.89 (m, 2H), 8.15 - 8.02 (m, 2H), 8.00-7.92 (m, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 4.82 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 4.05 (d, J = 6.3 Hz, 0.5H), 3.90 (d, J = 6.4 Hz, 0.5H), 3.85 (s, 2H), 3.58 (dd, J = 14.0, 4.0 Hz, 2H), 3.49-3.35 (m, 1H), 3.33-3.28 (m, 1H), 3.14 (s, 1H), 2.99 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 9.9 Hz, 0.5H), 2.62 (d, J = 10.7 Hz, 0.5H), 2.32 (d, J = 7.3 Hz, 0.5H), 2.25 (d, J = 12.0 Hz, 0.5H), 2.16-1.86 (m, 1H), 1.73 - 1.46 (m, 3H), 1.37 (dd, J = 14.1, 6.2 Hz, 3H), 0.97 (dd, J = 26.9, 20.2 Hz, 3H), 0.57 (dd, J = 33.3, 26.6 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 515 (M+1)+.
화합물 A96:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-메톡시에틸)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(0.5 ml) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(2-하이드록시에틸)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(8 mg, 0.016 mmol), CH3I(2.4 mg, 0.017 mmol) 및 K2CO3(3.2 mg, 0.023 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 혼합물을 물(10 ml)에 부은 후 EA(10 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(0.57 mg, FA 염)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.86 (m, 2H), 8.65 - 8.41 (m, 1H), 8.14 - 7.98 (m, 4H), 5.83 - 5.70 (m, 1H), 5.57 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.08 (d, J = 7.8 Hz, 0.5H), 4.04 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.92 (d, J = 6.3 Hz, 0.5H), 3.82 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.58 (d, J = 12.7 Hz, 0.5H), 3.40-3.33 (m, 0.5H), 3.29 - 3.19 (m, 3H), 3.11 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.86-2.65 (m, 3H), 2.46-2.35 (m, 1H), 2.25-1.98 (m, 1H), 1.62 (s, 2H), 1.45 (dd, J = 10.8, 6.5 Hz, 3H), 1.38-1.25 (m, 2H), 1.11-0.96 (m, 3H), 0.72-0.53 (m, 3H) ppm. MS: M/e 529 (M+1)+.
화합물 A97: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(10 mL) 중 중간체 6(510 mg, 1.2 mmol) 및 K2CO3(330 mg, 2.4 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(300 mg, 1.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(40 mL)로 희석하고 염수(20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 미정제 생성물 화합물 A97을 얻었다. 미정제 생성물을 카이랄 분리에 의해 정제하여 화합물 A97a(24 mg), 화합물 A97b(34 mg)를 얻었다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A97a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 8.13 - 8.02 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.09 - 4.05 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.32 - 3.31 (m, 2H), 3.08 - 2.95 (m, 2H), 2.93 (br s, 1H), 2.44 (br s, 1H), 1.65 - 1.61 (m, 2H), 1.46 - 1.44 (m, 6H), 0.72 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471.3 (M+1)+.
화합물 A97b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 8.09 - 8.03 (m, 3H), 7.93 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.42 (br s, 1H), 3.94 - 3.92 (m 1H), 3.61 - 3.58 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.24 - 3.21 (m, 1H), 2.85 - 2.81 (m, 2H), 2.27 - 2.21 (m, 1H), 1.78 - 1.56 (m, 2H), 1.45 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.24 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.09 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471.3 (M+1)+.
화합물 A98:
2-(7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 벤질-D-알라니네이트
CH3CN(200 mL) 중 메틸 D-알라니네이트(20.0 g, 0.19 mol)의 용액에 벤질 브로마이드(32.5 g, 0.19 mol)를 N2 분위기 하의 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 생성된 잔류물을 EA(500 mL)에 용해시키고, 물(500 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 10 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(17 g, 46%)을 얻었다. MS: M/e 194 (M+1)+.
단계 B: 메틸 N-벤질-N-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부타노일)-D-알라니네이트
DCM(500 mL) 중 메틸 (R)-2-(벤질아미노)부타노에이트(17.0 g, 0.09 mol), (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄산(26.8 g, 0.13 mol) 및 4-메틸모르폴린(18.2 g, 0.18 mol)의 용액에 HATU(49.4 g, 0.13 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 의해 켄칭하고 물(1500 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(25 g, 75%)을 얻었다. MS: M/e 379 (M+1)+.
단계 C: (3S,6R)-1-벤질-3-에틸-6-메틸피페라진-2,5-디온
1,4-디옥산(20 mL) 중 메틸 (R)-2-((S)-N-벤질-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄아미도)부타노에이트(25 g, 66 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(100 mL, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 H2O에 용해시키고 수성 NaHCO3로 중화시켜 pH = 9로 조정하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, EA(500 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 g, 92%)을 얻었다. MS: M/e 247 (M+1)+.
단계 D: (2R,5S)-1-벤질-5-에틸-2-메틸피페라진
THF(200 mL) 중 LiAlH4(6.9 g, 0.18 mol)의 용액에 (3S,6R)-1-벤질-3-에틸-6-메틸피페라진-2,5-디온(15.0 g, 0.06 mol)을 서서히 첨가하였고 이를 THF(100 mL)에 0℃에서 용해시켰다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물(7 mL)에 의해 서서히 0℃에서 켄칭하였다. 이어서, 1N NaOH 수용액(14 mL) 및 물(28 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 형성된 백색 침전물을 셀라이트를 통해 여과에 의해 제거하였다. 필터 케이크를 EA(500 mL)로 세척하였다. 조합한 여액을 증발시켰다. 생성된 잔류물을 톨루엔에 용해시키고 건조시켜 표제 화합물(12 g, 91%)을 제공하였다. MS: M/e 219 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-벤질-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(50 mL) 중 중간체 2(2.3 g, 6 mmol), (2R,5S)-1-벤질-2,5-디에틸피페라진(2 g, 9 mmol) 및 DIPEA(3.9 g, 30 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.2 g, 82%)을 얻었다. MS: M/e 450 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(30 mL) 중 7-((2S,5R)-4-벤질-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(2.2 g, 4.9 mmol) 및 Pd/C(220 mg, 물 중 10%)의 혼합물을 N2 분위기(50 psi) 하의 실온에서 밤새 진탕시켰다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시켰다. 필터 케이크를 EA(50 mL)로 세척하였다. 조합한 여액을 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 74%)을 얻었다. MS: M/e 360 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.3 g, 3.6 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(940 mg, 5.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(1.4 g, 5.4 mmol) 및 DIPEA(4.7 mg, 36 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(320 mg, 17%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 H: 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(320 mg, 0.62 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(10 mL, 40 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 중화시켜 pH = 8로 조정하였다. 유기 층을 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 56%)을 얻었다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 I: 2-(7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2-에틸-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(150 mg, 0.34 mmol) 및 K2CO3(97 mg, 0.68 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(85 mg, 0.51 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(10 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 미정제 생성물 화합물 A98을 얻었다. 미정제 생성물을 카이랄 분리에 의해 화합물 A98a(27 mg) 및 화합물 A98b(41 mg)로 정제하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A98a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.88 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 8.12 - 8.02 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.99 - 3.97 (m, 1H), 3.47 (br s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.33 - 3.31 (m, 2H), 3.09 - 2.89 (m, 3H), 2.17 - 2.15 (m, 1H), 1.92 - 1.90 (m, 1H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A98b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.87 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 8.10 - 8.01 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 3.83 - 3.81 (m, 1H), 3.68 - 3.65 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.33 - 3.31 (m, 2H), 2.79 - 2.77 (m, 1H), 2.35 - 2.32 (m, 1H), 1.98 - 1.96 (m, 1H), 1.72 - 1.70 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.19 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.58 (t, J = 7.5 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A99:
2-(7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-D-세릴-L-알라니네이트
CH2Cl2(200 mL) 중 ((벤질옥시)카르보닐)-D-세린(11.95 g, 50 mmol) 및 메틸 D-알라니네이트 하이드로클로라이드(7 g, 50 mmol)의 교반된 혼합물에 HATU(22.9 g, 60 mmol)에 이어서, DIPEA(19 g, 0.15 mol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(200 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 H2O(200 mL)로 추가 세척하고 여과시켰다. 케이크를 수집하고, 건조시켜 표제 화합물(28 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 325 (M+1)+.
단계 B: (3R,6S)-3-(하이드록시메틸)-6-메틸피페라진-2,5-디온
MeOH(200 mL) 중 메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-D-세릴-L-알라니네이트(16.2 g, 50 mmol)의 용액에 Pd/C(2 g, 물 중 10%)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 H2(1 atm) 하에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고 여액을 ~100 mL로 농축시켰다. 생성된 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 MTBE(200 mL)를 첨가하고 여과시켰다. 케이크를 수집하고, 건조시켜 표제 화합물(3.5 g, 44.3%)을 얻었다. MS: M/e 159(M+1)+.
단계 C: ((2S,5S)-5-메틸피페라진-2-일)메탄올 하이드로클로라이드
THF-BH3(1.0 M, 140 mL) 중 (3R,6S)-3-(하이드록시메틸)-6-메틸피페라진-2,5-디온(3.5 g, 22.2 mmol)의 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. MeOH(20 mL)를 서서히 첨가하여 반응물을 0℃에서 켄칭한 후, 농축된 HCl(10 mL)을 첨가하였다. 생성된 고체를 여과시키고, 케이크를 수집하고, 건조시켜 표제 화합물(4.5 g, 100%)을 얻었다. MS: M/e 131 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeOH(100 mL) 중 ((2S,5S)-5-메틸피페라진-2-일)메탄올 하이드로클로라이드(4.5 g, 22.2 mmol) 및 Et3N(8.9 g, 88.8 mmol)의 교반된 용액에 MeOH(10 mL) 중 Boc2O(14.5 g, 66.6 mmol)의 용액을 0~5℃에서 적가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 50 ℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 EA/H2O(100 mL/100 mL)로 처리하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/EA=100/1~1/1)에 의해 정제하여 디-tert-부틸 (2S,5S)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1,4-디카르복실레이트(7.5 g, 100%)를 얻었고, 이를 수성 EtOH/NaOH(50 mL/50 mL)에 용해시키고 혼합물을 80℃에서 2일 동안 교반하였다. 대부분의 EtOH를 제거하여 수성 층을 얻었고 이를 수성 HCl(3 M)로 pH = 9~10으로 산성화한 후, EA(40 mL x 10)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(4.6 g, 91%)을 얻었다. MS: M/e 231 (M+1)+.
단계 E: tert-부틸 (2S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH2Cl2(50 mL) 중 tert-부틸 (2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.12 g, 9.2 mmol)의 교반된 용액에 Et3N(1.86 g, 18.4 mmol)에 이어서, DMAP(114 mg, 0.92 mmol), 이어서 TBSCl(2.08 g, 13.8 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 처리하고, CH2Cl2(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA = 2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.72 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 345 (M+1)+.
단계 F: tert-부틸 (2S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(172 mg, 0.5 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(174 mg, 1 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(364.5 mg, 1.5 mmol) 및 DIPEA(645 mg, 5 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 붓고, EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 52%)을 얻었다. MS: M/e 501 (M+1)+.
단계 G: ((2S,5S)-5-메틸-1-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)메탄올
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5S)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(130 mg, 0.26 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하고 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 287 (M+1)+.
단계 H: 7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 2(33 mg, 0.26 mmol), ((2S,5S)-5-메틸-1-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)메탄올(0.26 mmol) 및 DIPEA(100.6 mg, 0.78 mmol)의 혼합물을 75℃에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(13 mg)을 얻었다. MS: M/e 518 (M+1)+.
단계 I: 7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH/CH2Cl2(5 mL/3 mL) 중 7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(87 mg, 0.168 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하고 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 포화 수성 NaHCO3로 처리한 후, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(54 mg, 74%)을 얻었다. MS: M/e 434 (M+1)+.
단계 J: 2-(7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(4 mL) 중 7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(54 mg, 0.124 mmol), 2-요오도아세토니트릴(42 mg, 0.25 mmol) 및 K2CO3(34.5 g, 0.25 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 51%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.93 (s, 2H), 8.19 - 7.90 (m, 4H), 5.62 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 5.45 (d, J = 18 Hz, 1H), 5.08 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.05 (m, 2H), 3.82 - 3.38 (m, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.19 (d, J = 11.6 Hz, 0.5H), 2.98 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.89 - 2.62 (m, 2H), 2.24 (d, J = 11.2 Hz, 0.5H), 1.52-1.35 (m,, 3H), 1.23 (s, 1.5H), 1.06 (s, 1.5H) ppm. MS: M/e 473 (M+1)+.
화합물 A100: 2-(7-((2S,5S)-5-(메톡시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(7-((2S,5S)-5-(클로로메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH2Cl2(5 mL) 중 2-(7-((2S,5S)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(23 mg, 0.05 mmol)의 교반된 용액에 Et3N(10 mg, 0.1 mmol)에 이어서, MeSO2Cl(6.7 mg, 0.06 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 CH2Cl2(10 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 491 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5S)-5-(메톡시메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 2-(7-((2S,5S)-5-(클로로메틸)-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(10 mg, 0.02 mmol)의 혼합물을 50℃에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(3 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.90-8.85 (m, 2H), 8.14 - 7.99 (m, 3H), 7.94 (s, 1H), 5.62-5.57 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.40 - 4.20 (m, 1H), 4.15-4.01 (m, 1H), 3.85 - 3.67 (m, 2H), 3.66 - 3.47 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.97 - 2.74 (m, 2H), 2.39 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.27 - 2.01 (m, 1H), 1.54 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.52-1.46 (m, 3H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.26-1.18 (m, 3H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A101:
2-(7-((2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(15 mL) 중 중간체 2(1.143 g, 3 mmol), tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(0.83 g, 3.6 mmol) 및 DIPEA(774 mg, 6 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 주말에 걸쳐 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 붓고 EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(930 mg, 67%)을 얻었다. MS: M/e 462 (M+1)+.
단계 B: 7-((2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(400 mg, 0.87 mmol)의 교반된 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 수성 NaHCO3로 처리하고, EA(10 mL)로 추출하였다. 유기 층을 폐기하고 수성 층을 CH2Cl2/IPA(2/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(130 mg, 41%)을 얻었다. MS: M/e 362 (M+1)+.
단계 C: 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(10 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(130 mg, 0.36 mmol)의 교반된 용액에 Et3N(73 mg, 0.72 mmol)에 이어서, DMAP(4.5 mg, 0.036 mmol)를 첨가하였다. 이어서, TBSCl(84.6 mg, 0.54 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL), 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(70 mg, 41%)을 얻었다. MS: M/e 476(M+1)+.
단계 D: 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(70 mg, 0.66이리딘66뉴이녹살린-6-일)에탄-1-올(76.7 mg, 0.44 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(107 mg, 0.44 mmol) 및 DIPEA(189 mg, 1.47 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 54%)을 얻었다. MS: M/e 632 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2R,5R)-2-(하이드록시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(5 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.079 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하고 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/2 mL)에 용해시키고 이에 K2CO3(21.8 mg, 0.158 mmol)에 이어서 2-요오도아세토니트릴(26.4 mg, 0.158 mmol)을 첨가한 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(21 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.85 (m, 2H), 8.14 - 7.97 (m, 3H), 7.96 - 7.91 (m, 1H), 5.68 - 5.59 (m, 1H), 5.50 - 5.43 (m, 2H), 4.17 - 4.09 (m, 0.5H), 4.03 - 3.64 (m, 4.5H), 3.50 - 3.39 (m, 4H), 3.06 - 2.46 (m, 3H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.20 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 473 (M+1)+.
화합물 A102:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 7(177 mg, 0.36 mmol) 및 중간체 1(108 mg, 0.4 mmol)의 용액에 DIPEA(93 mg, 0.72 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 56시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 68%)을 얻었다. MS: M/e 608 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(150 mg, 0.247 mmol)의 용액에 트리플루오로메탄설폰산(4 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 얼음물로 켄칭하고, 포화 Na2CO3 용액으로 PH 7~8로 염기성화하고, DCM/IPA(6/1, 60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 15%)을 얻었다. MS: M/e 404 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.037 mmol) 및 K2CO3(10 mg, 0.074 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(7 mg, 0.041 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1 mg, 6%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.43 (s, 1H), 8.98 - 8.87 (m, 2H), 8.16 - 7.90 (m, 3H), 7.71 (s, 1H), 5.56 (s, 2H), 5.29 - 5.24 (m, 1H), 4.02 - 3.86 (m, 1H), 3.81 - 3.75 (m, 0.5H), 3.62 - 3.48 (m, 1.5H), 3.30 - 3.23 (m, 0.5H), 2.99 - 2.92 (m, 1H), 2.90 - 2.66 (m, 2H), 2.15 - 1.95 (m, 0.5H), 1.42 - 1.28 (m, 5H), 1.16 - 1.08 (m, 2H), 1.00 - 0.94 (m, 2H) ppm. MS: M/e 443 (M+1)+.
화합물 A103: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 3(150 mg, 0.4 mmol), 1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(114 mg, 0.6 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(194 mg, 0.8 mmol)의 용액에 DIPEA(155 mg, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 45%)을 얻었다. MS: M/e 546 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.183 mmol)의 용액에 TFA(8 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화하고, DCM/IPA(3/1, 60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH = 10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 59%)을 얻었다. MS: M/e 462 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.11 mmol) 및 K2CO3(30 mg, 0.22 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(28 mg, 0.165 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 40%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.94 - 7.91 (m, 1H), 7.69 - 7.54 (m, 4H), 5.54 (s, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 2H), 3.89 - 3.81 (m, 0.5H), 3.74 - 3.66 (m, 0.5H), 3.55 - 3.46 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.31 - 3.26 (m, 2.5H), 3.20 - 3.10 (m, 0.5H), 3.06 - 2.98 (m, 0.5H), 2.92 - 2.83 (m, 0.5H), 2.72 - 2.63 (m, 0.5H), 2.41 - 2.25 (m, 1H), 2.19 - 2.06 (m, 0.5H), 2.00 - 1.75 (m, 1H), 1.75 - 1.49 (m, 2.5H), 1.39 - 1.28 (m, 3H), 1.03 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.96 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 0.70 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.62 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
또 다른 배치의 화합물 A103(575 mg)을 통상의 기술자가 인지할 수 있는 상기에 기재된 절차에 따라 제조하였다. 이어서, 혼합물로서 화합물 A103(575 mg)을 카이랄 분취용-HPLC 에 의해 화합물 A103a(145 mg) 및 화합물 A103b(195 mg)로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A103a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.83 - 4.20 (m, 1H), 3.91 - 3.80 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.28 (s, 2H), 3.02 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.88 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.38 (s, 1H), 2.21 - 2.05 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 1H), 1.62 - 1.47 (m, 2H), 1.35 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.70 (t, J = 6.8 Hz, 3H). MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A103b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 4H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.75 - 3.85 (m, 1H), 3.75 - 3.64 (m, 1H), 3.51 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.30 - 3.29 (m, 1H), 3.16 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.67 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.30 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.85 (m, 1H), 1.80 - 1.45 (m, 3H), 1.33 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.62 (t, J = 6.8 Hz, 3H). MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A111: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: (2R,5S)-1-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진
Tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(150 mg)를 DCM(3 mL)에 용해시키고 TFA(2 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 정제 없이 다음 단계에서 사용되는 표제 화합물(200 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 343 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
아세토니트릴(2 mL) 중 (2R,5S)-1-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진(34 mg, 0.1 mmol)의 용액에 중간체 2(76 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(65 mg, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 주말 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH: DCM=20분 내에 0-10%)에 의해 정제하여 생성물(60 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 574 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1.5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg)의 용액에 HCl(g)(디옥산 중 4 M, 2 ml)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(50 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 490 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 미정제)의 용액에 포타슘 카르보네이트(55 mg, 0.4 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(25 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 미정제물을 분취용-TLC(DCM:MeOH =13:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(3 mg, 5%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.78 - 7.64 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 7.16 (dd, J = 15.9, 7.3 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 4.23-4.18 (m, 1H), 3.49 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.18 - 2.99 (m, 1H),2.90- 2.69 (m, 2H), 2.42 - 2.23 (m, 1H), 2.03-1.80 (m, 1H), 1.88 - 1.63 (m, 2H), 1.56 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 1.28 - 1.23 (m, 3H), 0.94-0.76 (m, 3H) ,0.74-0.63 (m, 3H) ppm. MS: M/e 529 (M+1)+.
화합물 A115: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 mL) 중 중간체 5(30 mg, 0.09 mmol)의 용액에 1-(4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(56 mg, 0.27 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(118 mg, 0.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하여 미정제 생성물 화합물 A115를 제공하였다. 화합물 A115를 분취용-TLC(DCM: MeOH = 20:1)에 의해 정제하고 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A115a(1.23 mg) 및 화합물 A115b(0.53 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A115a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.41 (m, 2H), 5.58 - 5.50 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.05 - 4.01 (m, 1H), 3.49 - 3.44 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.22 - 3.15 (m, 1H), 2.80 - 2.57 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.19 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 1.93 - 1.47 (m, 4H), 1.33 - 1.18 (m, 4H), 1.15 - 0.97 (m, 3H), 0.78 - 0.48 (m, 3H) ppm. MS: M/e 515 (M+1)+.
화합물 A115b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.16 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 2.97 - 2.80 (m, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.37 - 1.85 (m, 3H), 1.60 - 1.41 (m, 2H), 1.32 - 1.21 (m, 4H), 1.05 - 0.90 (m, 3H), 0.75 - 0.52 (m, 3H) ppm.MS: M/e 515 (M+1)+.
화합물 A119:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: N-메톡시-N-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르복스아미드
THF(15 ml) 중 3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르복실산(1 g, 5.56 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.65 g, 6.63 mmol), HATU(2.53 g, 6.66 mmol) 및 DIPEA(2.15 g, 16.67 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(30 ml)에 용해시키고, 수성 NaHCO3(10 ml X 2), 염수(10 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 후 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.2 g, 100%)을 얻었다. MS: M/e 224 (M+1)+.
단계 B: 1-에틸-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르복스아미드
MeCN(15 ml) 중 N-메톡시-N-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르복스아미드(1.2 g, 5.38 mmol), 요오도에탄(0.97 g, 6.22 mmol) 및 K2CO3(2.23 g, 16.16 mmol)의 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(140 mg)을 얻었다. MS: M/e 252 (M+1)+.
단계 C: 1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-온
THF(6 ml) 중 1-에틸-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르복스아미드(140 mg, 0.56 mmol)의 용액에 N2 하의 -60℃에서 MeMgBr(3M, 0.37 ml, 1.11 mmol)을 적가하였다. 용액을 자연적으로 실온으로 가온하고 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 물(2 ml)로 켄칭하고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE : EA(2:1)를 이용하는 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(55 mg, 48%)을 얻었다. MS: M/e 207 (M+1)+.
단계 D: 1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올
MeOH(6 ml) 중 1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-온(55 mg, 0.27 mmol) 및 NaBH4(11 mg, 0.29 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(10 ml)에 용해시키고, 수성 NH4Cl(6 ml) 및 염수(6 ml)로 세척하고, 건조시킨 후 농축시켜 미정제 생성물(55 mg, 100%)을 제공하였고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 209 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 ml) 중 중간체 5(43 mg, 0.13 mmol), 1-(1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올(27 mg, 0.13 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(95 mg, 0.39 mmol) 및 DIPEA(84 mg, 0.65 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켜 화합물 A119를 수득하였다. 화합물 A119를 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 A119a(0.65 mg) 및 화합물 A119b(0.75 mg)를 얻었다.
화합물 A119a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.98 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.37 (s, 1H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.98 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 3.32 - 3.31 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.16 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.98 (s, 1H), 2.81 (dd, J = 11.9, 3.9 Hz, 1H), 2.75 - 2.66 (m, 1H), 2.40 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 1H), 1.51-1.47 (m, 2H), 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 1.31 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.79 (s, 3H), 0.71 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A119b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 4.25 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.78 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.28 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.98 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 2.55 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 2.35 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 1H), 1.60-1.40 (m, 2H), 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 1.27 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.61 (t, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A126: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트.
MeCN(10 mL) 중 1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에탄-1-올(670 mg, 3.7 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(600 mg, 2.48 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(1.5 g, 6.2 mmol) 및 DIPEA(1.6 g, 12.4 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(410 mg, 41%)을 얻었다. MS: M/e 405 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-1-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진.
EA(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(360 mg, 0.89 mmol)의 교반된 용액에 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(380 mg, HCl 염)을 얻었다. MS: M/e 305 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeCN(3 mL) 중 (2R,5S)-1-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진(160 mg, 0.52 mmol), 중간체 2(200 mg, 0.52 mmol) 및 DIPEA(500 mg, 3.87 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, NaSO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(70 mg, 25%)을 얻었다. MS: M/e 536 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(65 mg, 0.12 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물을 HCl 염(55 mg, 94%)으로서 얻었다. MS: M/e 452 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
MeCN(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(55 mg, 0.11 mmol) 및 수성 K2CO3의 용액(3M, 0.5 mL)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(38 mg, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg, 22%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 6.90 - 6.70 (m, 3H), 5.54 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.22 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 3.68 - 3.55 (m, 1H), 3.52 - 3.38 (m, 4H), 3.30 - 3.21 (m, 2H), 3.15 - 2.93 (m, 1H), 2.89 - 2.54 (m, 1H), 2.53 - 2.39 (m, 1H), 2.17 - 1.87 (m, 1H), 1.85 - 1.44 (m, 3H), 1.34 - 1.21 (m, 3H), 1.05 - 0.91 (m, 3H), 0.75 - 0.61 (m, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A127:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeCN(10 ml) 중 1-(p-톨릴)에탄-1-올(1 g, 7.35 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(1.8 g, 7.44 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(3.6 g, 14.81 mmol) 및 DIPEA(5.7 g, 44.19 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 0-5% EA를 이용하는 플래시 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.66 g, 63%)을 얻었다. MS: M/e 361 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진
DCM(20 ml) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(1.66 g, 4.61 mmol) 및 TFA(4 ml)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(20 ml)에 용해시키고, 수성 NaHCO3(15 ml), 염수(15 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(1.19 g, 100%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 261 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeCN(10 ml) 중 (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진(1.19 g, 4.58 mmol), 중간체 2(1.5 g, 3.94 mmol) 및 DIPEA(1.52 g, 11.78 mmol)의 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시킨 후 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.6 g, 83%)을 얻었다. MS: M/e 492 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(16 ml) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.6 g, 3.26 mmol) 및 HCl/디옥산(4M, 4 ml)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(1.3 g, 100%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 408 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4, 5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(15 ml) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(p-톨릴)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.3 g, 3.19 mmol), 2-요오도아세토니트릴(0.67 g, 4.01 mmol) 및 K2CO3(0.88 g, 6.38 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후 60℃에서 24시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 혼합물을 물(50 ml)에 부은 후 EA(20 ml X 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(15 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH /DCM)에 의해 정제하고 분획을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물 화합물 A127을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 B)에 의해 화합물 A127a(118 mg) 및 화합물 A127b(76 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A127: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 11.4, 8.0 Hz, 2H), 7.14 (dd, J = 18.0, 7.7 Hz, 3H), 5.54 (s, 1H), 5.46 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 3.73 - 3.47 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.20 - 2.97 (m, 1H), 2.73 (m, 1H), 2.40 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.32 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 2.15 - 1.77 (m, 2H), 1.71 - 1.46 (m, 3H), 1.31 (dd, J = 15.6, 6.4 Hz, 3H), 0.96-0.86 (m, 4H), 0.67-0.60 (m, 3H) ppm.MS: M/e 447(M+1)+.
화합물 A127a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.98 (s, 1H), 7.22 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 3.64 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.34 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.07 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 2.34-2.27 (m, 4H), 2.07-1.93 (m, 1H), 1.66 - 1.54 (m, 1H), 1.54 - 1.36 (m, 2H), 1.25 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.59 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 447 (M+1)+.
화합물 A127b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.98 (s, 1H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.38 (s, 1H), 3.52 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.36 (s, 1H), 3.34 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.02 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.30-2.23 (m, 4H), 1.93-1.78 (m, 1H), 1.61 - 1.39 (m, 3H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.54 (t, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 447 (M+1)+.
화합물 A129:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(8 mL) 중 중간체 7(500 mg, 1 mmol) 및 6-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(360 mg, 1.2 mmol)의 용액에 DIPEA(258 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 56시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(410 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 636 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(410 mg, 0.64 mmol)의 용액에 트리플루오로메탄설폰산(6 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 얼음물로 켄칭하고, 포화 Na2CO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM:IPA(6:1, 60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(71 mg, 25%)을 얻었다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(71 mg, 0.16 mmol) 및 K2CO3(47 mg, 0.34 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(42 mg, 0.25 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 56시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(14 mg, 18%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.94 - 8.84 (m, 2H), 8.16 - 7.95 (m, 3H), 7.77 -7.72 (m, 1H), 5.52 - 5.40 (m, 3H), 4.14 - 3.85 (m, 1H), 3.64 - 3.53 (m, 0.5H), 3.40 - 3.20 (m, 2.5H), 3.27 - 3.18 (m, 0.5H), 3.14 - 3.04 (m, 0.5H), 2.99 - 2.90 (m, 0.5H), 2.80 - 2.70 (m, 0.5H), 2.48 - 2.32 (m, 1H), 2.25 - 2.10 (m, 0.5H), 2.05 - 1.83 (m, 1H), 1.80 - 1.54 (m, 2.5H), 1.50 - 1.38 (m, 3H), 1.07 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.99 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.69 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H), 0.57 (t, J = 7.6 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A133: 2-(6-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(30 mg, 0.07 mmol)(화합물 A2a)의 용액에 NCS(10 mg, 0.08 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물(10 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg, 38%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.89 - 8.87 (m, 2H), 8.14 - 8.03 (m, 3H), 7.98 (s, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.62 - 4.58 (m, 1H), 4.20 - 4.16 (m, 1H), 3.87 - 3.80 (m, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.32 - 3.31 (m, 1H), 3.15 - 3.10 (m, 1H), 2.74 - 2.59 (m, 2H), 1.51 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A134:
2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴.
단계 A: 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(80 mg, 0.18 mmol)(화합물 A2a)의 용액에 NBS(35 mg, 0.20 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물(10 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 43%)을 얻었다. MS: M/e 535 (M+1)+.
단계 B: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴.
DMF(2 mL) 중 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(40 mg, 0.08 mmol), Pd(PPh3)4(23 mg, 0.02 mmol) 및 Zn(CN)2(19 mg, 0.16 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 100℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(5 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용-TLC(DCM: MeOH=15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(13.8 mg, 38%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 8.14 - 8.05 (m, 3H), 7.99 (s, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.01 - 3.96 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.18 - 3.15 (m, 1H), 3.02 - 2.97 (m, 2H), 2.81 - 2.72 (m, 1H), 1.66 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.6 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 482 (M+1)+.
화합물 A136: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 3-브로모-5-플루오로-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드
THF(10 ml) 중 3-브로모-5-플루오로피콜린산(1 g, 4.57 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(0.54 g, 5.51 mmol), HATU(2.1 g, 5.53 mmol) 및 DIPEA(1.8 g, 13.95 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(20 ml)로 희석하고, 수성 NaHCO3(10 ml), 염수(10 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시킨 후 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.1 g, 92%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.45 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 7.6, 2.2 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.41 (s, 3H) ppm.
단계 B: 5-플루오로-N-메톡시-N-메틸-3-(트리플루오로메틸)피콜린아미드
DMF(10 ml) 중 3-브로모-5-플루오로-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드(1 g, 3.80 mmol), 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로설포닐)아세테이트(0.8 g, 4.17 mmol) 및 CuI(220 mg, 1.16 mmol)의 혼합물을 N2 하의 120℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 혼합물을 물(20 ml)에 붓고, EA(15 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.84 g, 88%)을 얻었다. MS: M/e 253 (M+1)+.
단계 C: 1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온
THF(10 ml) 중 5-플루오로-N-메톡시-N-메틸-3-(트리플루오로메틸)피콜린아미드(0.84 g, 3.33 mmol)의 용액에 N2 하의 -60℃에서 MeMgBr(3M, 1.22 ml, 3.66 mmol)을 적가하였다. 용액을 자연적으로 실온으로 가온하고 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 물(10 ml)로 켄칭하고, EA(15 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(245 mg, 36%)을 얻었다. MS: M/e 208 (M+1)+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H) ppm.
단계 D: 1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올
MeOH(4 ml) 중 1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(245 mg, 1.18 mmol) 및 NaBH4(45 mg, 1.18 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 물(1 ml)로 켄칭한 후 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(15 ml)에 용해시키고, 수성 NaHCO3(10 ml), 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(210 mg, 85%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 8.2, 2.6 Hz, 1H), 5.18 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 1.47 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 ml) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), 1-(5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올(48 mg, 0.23 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.53 mmol)의 혼합물을 100℃에서 3일 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(2.86 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.93 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 8.34 (s, 0.48H, HCOOH), 8.19 (td, J = 9.2, 6.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 5.36 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.26 (s, 4H), 3.21 - 3.09 (m, 1H), 3.03 (s, 2H), 2.80 (d, J = 10.4 Hz, 0.5H), 2.24 (d, J = 11.0 Hz, 0.5H), 1.88-1.72 (m, 0.5H), 1.58 (s, 1.5H), 1.37 (dd, J = 31.7, 6.4 Hz, 4.5H), 1.11 (s, 0.5H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 0.77 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 0.69 (t, J = 7.8 Hz, 1.5H), 0.54 (t, J = 7.8 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 520 (M+1)+.
화합물 A137: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에탄-1-올.
MeOH(30 mL) 중 1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에탄-1-온(2.0 g, 11.89 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(497 mg, 13.08 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 켄칭하고 EA(45 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 171(M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트.
CH3CN(2 mL) 중 1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에탄-1-올(335 mg, 1.97 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(450 mg, 1.97 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(955 mg, 3.93 mmol)의 용액에 DIPEA(1270 mg, 9.85 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(180 mg, 24%)을 얻었다. MS: M/e 381 (M+1)+.
단계 C: (2R,5S)-2-에틸-1-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-5-메틸피페라진.
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(90 mg, 0.237 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(4 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(50 mg, 76%)을 얻었고, 이를 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 281 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(1 mL) 중 (2R,5S)-2-에틸-1-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-5-메틸피페라진(45 mg, 0.160 mmol) 및 중간체 2(73 mg, 0.192 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(103 mg, 0.80 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 61%)을 얻었다. MS: M/e 512 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(4 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.1 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 물에 용해시키고 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하였다. 생성된 혼합물을 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(35 mg, 81%)을 얻었다. MS: M/e 428 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(35 mg, 0.073 mmol) 및 K2CO3(20 mg, 0.146 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(24 mg, 0.146 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 화합물 A137(9 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.50-7.47 (m, 1H), 6.78-6.69 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.61-4.35 (m, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.34 (s, 3H), 3.28-3.26 (m, 1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 2.78-2.75 (m, 1H), 2.51-2.46 (m, 1H), 1.36-1.34 (m, 2H), 1.30-1.24 (m, 6H), 0.80-0.76 (m, 3H) ppm. MS: M/e 467 (M+1)+.
화합물 A143:
2-(7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5R)-5-(메톡시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(92.2 mg, 0.2 mmol)의 교반된 용액에 NaH(60%, 24 mg, 0.6 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(76 mg, 80%)을 얻었다. MS: M/e 476(M+1)+.
단계 B: 7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(메톡시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(76 mg, 0.165 mmol)의 교반된 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 Na2CO3로 염기성화하고 EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(미정제, 100%)을 얻었다. MS: M/e 376 (M+1)+.
단계 C: 7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(미정제, 0.165 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(86.1 mg, 0.495 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(120 mg, 0.495 mmol) 및 DIPEA(213 mg, 1.65 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 및 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 34%)을 얻었다. MS: M/e 532 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(5 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(메톡시메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.056 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/1 mL)에 용해시키고 K2CO3(15.2 mg, 0.11 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(18.8 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.85 (m, 2H), 8.14 - 7.97 (m, 3H), 7.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.61 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.05 - 3.95 (m, 1H), 3.86 - 3.57 (m, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.34 (s, 2H), 3.22 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.12 (s, 1H), 3.04 - 2.76 (m, 3H), 2.47 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 1.49 - 1.41 (m, 3H), 1.23 - 1.04 (m, 3H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+
화합물 A144:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 1-(1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에탄-1-올.
MeOH(30 mL) 중 N1-에틸벤젠-1,2-디아민(500 mg, 3.67 mmol), 2-하이드록시프로판산(2 mL, 물 중 85%)의 용액에 농축된 HCl(3 mL)을 첨가하였다. 혼합 용액을 12시간 동안 환류시켰다. 이어서, 혼합물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 DCM(50 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 14%)을 얻었다. MS: M/e 191 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(2 mL) 중 1-(1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에탄-1-올(38 mg, 0.2 mmol), 중간체 5(33 mg, 0.1 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(49 mg, 0.2 mmol)의 용액에 DIPEA(65 mg, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(3 mg, 6%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93-7.92 (m,1H), 7.51 (m, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.28-7.24 (m, 2H), 5.56-5.33 (m, 3H), 4.88 (m, 1H), 4.47-4.37 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.22-2.99 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.53-2.44 (m, 1H), 2.17-2.02 (m, 2H), 1.63-1.54 (m, 3H), 1.52-1.46 (m, 3H), 1.46-1.32 (m, 3H), 1.28-0.96 (m, 2H), 0.89-0.62 (m, 6H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A145:
2-(7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 중간체 2(415 mg, 1.09 mmol)의 용액에 tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(300 mg, 0.84 mmol) 및 DIPEA(324 mg, 2.51 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(280 mg, 57%)을 얻었다. MS: M/e 590 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(200 mg, 0.169 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 4시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 물에 용해시켰다. 수성 물질을 포화 수성 NahCO3로 pH=9로 조정하고 (DCM:IPA = 4:1)로 추출하여 표제 화합물(100 mg)을 얻었다. MS: M/e 376 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(30 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.26 mmol)의 용액에 Et3N(54 mg, 0.53 mmol) tert-부틸클로로디메틸실란(60 mg, 0.39 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 50:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 77%)을 얻었다. MS: M/e 490 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(8 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.204 mmol)의 용액에 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(47 mg, 0.26 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(150 mg, 0.61 mmol) 및 DIPEA(263 mg, 2.04 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 50:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 61%)을 얻었다. MS: M/e 646 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.12 mmol)의 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하여 표제 화합물(30 mg)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 448 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(1.5 mL) / 물(0.2 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.067 mmol) 미정제물의 용액에 K2CO3(46 mg, 0.33 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 후, 2-요오도아세토니트릴(56 mg, 0.33 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaCl에 의해 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 6%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.98 - 8.85 (m, 2H), 8.20 - 7.97 (m, 3H), 7.93 (s, 1H), 5.66 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.02 - 3.75 (m, 1H), 3.74 - 3.58 (m, 2H), 3.54 - 3.33 (m, 5H), 3.25 - 3.01 (m, 1H), 2.98 - 2.65 (m, 2H), 2.49 -1.60 (m, 3H), 1.45 (t, J = 6.2 Hz, 3H), 1.25 - 1.00 (m , 3H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A149: 2-(7-((2S,5R)-4-(2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 2-(7-((2S,5R)-4-(2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(1 mL) 중 중간체 5(45 mg, 0.137 mmol), 2,3-디하이드로-1H-인덴-1-올(37 mg, 0.274 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(67 mg, 0.274 mmol)의 용액에 DIPEA(88 mg, 0.685 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2(3회)로 탈기시킨 후 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 화합물 149를 수득하였다. 화합물 149를 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물 A149a(5 mg) 및 화합물 A149b(4 mg)를 얻었다.
화합물 A149a: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.96(s, 1H), 7.42-7.41(m, 1H), 729-7.27 (m, 3H), 5.52-5.42 (m, 4H), 4.71 (s, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.73-3.67 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.25-2.87 (m, 5H), 2.34-2.26 (m, 2H), 1.71-1.48 (m, 4H), 1.00 (t, J = 4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 445 (M+1)+.
화합물 A149b: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.94 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.23-7.17 (m, 3H), 5.57 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.49-4.45 (m, 1H), 3.44-3.43 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.30-2.23 (m, 2H), 3.13-2.81 (m, 4H), 2.43-2.20 (m, 3H), 1.99-1.95 (m, 1H), 1.78-1.74 (m, 2H), 1.60-1.56 (m, 1H), 0.97 (t, J = 8 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 445 (M+1)+.
화합물 A152: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A:((2-브로모-5-플루오로벤질)옥시)(tert-부틸)디메틸실란
DCM(40 mL) 중 (2-브로모-5-플루오로페닐)메탄올(3 g, 14.6 mmol)의 용액에 TBSCl(4.3 g, 29.2 mmol) 및 Et3N(5.9 g, 58.5 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 세척하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.2 g, 90%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 4.62 (s, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.09 (s, 6H) ppm.
단계 B: 1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올
THF(30 mL) 중 ((2-브로모-5-플루오로벤질)옥시)(tert-부틸)디메틸실란(3 g, 9.4 mmol)의 용액에 n-BuLi(7.9 mL,1.6M,12.7mmol)을 -78℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물에 아세트알데히드(1.6 g, 47 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 Nh4Cl에 의해 켄칭하고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(760 mg)을 얻었다. MS: M/e 267(M+1-18)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(10 mL) 중 1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(171 mg, 0.6 mmol)의 용액에 중간체 3(150 mg, 0.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(390 mg, 1.6 mmol) 및 DIPEA(516 mg, 4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 EA 내로 용해시켰다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(미정제, 0.4 mmol)의 용액에 TBAF(0.6 mL, 0.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 25:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 2단계 28%)을 얻었다. MS: M/e 526 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg, 0.11 mmol)의 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하여 표제 화합물(미정제)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) / 물(0.35 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(하이드록시메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg, 0.136 mmol) 미정제물의 용액에 K2CO3(94 mg, 0.68 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(114 mg, 0.68 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaCl에 의해 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제한 후, 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.58 - 7.15 (m, 2H), 7.08 - 6.90 (m, 1H), 5.61 - 5.49 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.75 - 4.55 (m, 2H), 4.20 - 3.99 (m, 1H), 3.60 - 3.33 (m, 4H), 3.25 - 2.70 (m, 2H), 2.70 - 2.22 (m, 2H), 2.20 -1.75 (m, 2H), 1.74 - 1.41 (m , 3H), 1.40 -1.25 (m, 3H), 1.24 -0.80 (m, 3H), 0.75 -0.53 (m, 3H) ppm. MS: M/e 481 (M+1)+.
화합물 A154: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 중간체 9(108 mg, 0.4 mmol)의 용액에 DIPEA(103 mg, 0.8 mmol)에 이어서, POCl3(122 mg, 0.8 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 CH3CN(3 mL)에 용해시키고, 중간체 1(50 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(50 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EA(60 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 20%)을 얻었다. MS: M/e 503 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
MeOH(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(40 mg, 0.079 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4M HCl의 용액(4 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 56시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM:IPA(4:1, 40 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(21 mg, 63%)을 얻었다. MS: M/e 419 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(21 mg, 0.05 mmol) 및 K2CO3(14 mg, 0.1 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(13 mg, 0.075 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(6 mg, 26%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 - 8.84 (m, 2H), 8.16 - 8.00 (m, 3H), 7.96 - 7.86 (m, 1H), 5.72 - 5.30 (m, 3H), 5.20 - 5.00 (m, 0.5H), 4.80 - 4.58 (m, 0.5H), 4.01 - 3.89 (m, 1H), 3.86 - 3.65 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.19 - 2.69 (m, 2.5H), 2.31 - 2.20 (m, 0.5H), 1.65 - 1.24 (m, 6H), 1.16 - 1.09 (m, 1H), 1.02 - 0.92 (m, 2H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A156: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
단계 A: 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(70 mg, 0.15 mmol)의 용액에 NBS(32 mg, 0.18 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물(10 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 61%)을 얻었다. MS: M/e 549 (M+1)+.
단계 B: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
DMF(2 mL) 중 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(50 mg, 0.09 mmol), Pd(PPh3)4(23 mg, 0.02 mmol) 및 Zn(CN)2(21 mg, 0.18 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 100℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(5 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(17 mg, 38%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD- δ 8.88 - 8.87 (m, 2-), 8.15 - 8.07 (m, 3H), 8.01 - 7.99 (m, 1H), 5.51 - 5.49 (m, 1H), 5.48 (m, 2H), 4.10 - 4.08 (m, 1H), 3.98 - 3.95 (m, 1H), 3.45 - 3.43 (m, 3H), 3.20 - 3.13 (m, 1H), 3.01 - 2.08 (m, 1H), 2.55 - 2.53 (m, 1H), 2.32 - 2.29 (m, 1H), 1.47 - 1.45 (m, 3H), 1.40 - 1.28 (m, 5H), 0.97 - 0.93 (m, 2H), 0.63 - 0.60 (m, 2H) ppm. MS: M/e 496 (M+1)+.
화합물 A158:
2-((2S,5R)-1-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5R)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-5-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH2Cl2(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(112 mg, 0.243 mmol)의 교반된 용액에 Et3N(50 mg, 0.486 mmol)을 첨가한 후, MsCl(55.6 mg, 0.486 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)에 붓고, CH2Cl2(20 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 38%)을 얻었다. MS: M/e 540 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2R,5S)-5-(시아노메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-5-(((메틸설포닐)옥시)메틸)피페라진-1-카르복실레이트(50 mg, 0.09 mmol)의 교반된 용액에 Cs2CO3(88 mg, 0.27 mmol)에 이어서, TMSCN(18.4 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 70℃에서 5일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 471 (M+1)+.
단계 C: 2-((2S,5R)-5-메틸-1-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-2-일)아세토니트릴
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-5-(시아노메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(30 mg, 0.064 mmol)의 교반된 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 Na2CO3로 염기성화한 후, CH2Cl2(10 mL x3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(23 mg, 97%)을 얻었다. MS: M/e 371 (M+1)+.
단계 D: 2-((2S,5R)-5-메틸-1-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 mL) 중 2-((2S,5R)-5-메틸-1-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-2-일)아세토니트릴(23 mg, 0.062 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(32.4 mg, 0.186 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(45.2 mg, 0.186 mmol) 및 DIPEA(80 mg, 0.62 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 46%)을 얻었다. MS: M/e 527 (M+1)+.
단계 E: 2-((2S,5R)-1-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 2-((2S,5R)-5-메틸-1-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-2-일)아세토니트릴(15 mg, 0.028 mmol)의 교반된 용액에 HCl(1 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/1 mL)에 용해시키고 K2CO3(11.6 mg, 0.084 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(9.35 mg, 0.056 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.84 (m, 2H), 8.16 - 7.92 (m, 4H), 5.72 - 5.62 (m, 1H), 5.53 - 5.46 (m, 2H), 4.05-3.96 (M, 0.5H), 3.91 - 3.72 (m, 1.5H), 3.67 - 3.57 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.28 - 2.84 (m, 5H), 2.39 (d, J = 12.4 Hz, 0.6H), 2.06-1.98 (m, 0.4H), 1.51-1.44(m, 3H), 1.23-1.04 (m, 3H) ppm. MS: M/e 482 (M+1)+.
화합물 A159:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-((2-클로로-6-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-올
DMF(5 mL) 중 2-클로로-6-요오도피리딘-3-올(2.55 g, 10 mmol)의 용액에 1,3-디옥솔란-2-온(1.76 g, 20 mmol) 및 K2CO3(2.78 g, 20 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 보호 하의 150℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O에 붓고 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.1 g, 70%)을 얻었다. MS: m/e 300 (M+1)+.
단계 B: 6-요오도-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘
톨루엔(15 mL) 중 2-((2-클로로-6-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-올(2 g, 6.7 mmol)의 용액에 TBAF(1M, 0.5 mL) 및 KOH(560 mg, 10 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 H2O에 용해시켰다. 수성 물질을 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 29%)을 얻었다. MS: m/e 264 (M+1)+.
단계 C: 1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-온
톨루엔(15 mL) 중 6-요오도-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(500 mg, 2 mmol)의 용액에 Pd(PPh3)2Cl2(70 mg, 0.1 mmol) 및 에틸 트리부틸스탄난카르복실레이트(1.08 g, 3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2 분위기 하의 110℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 H2O에 용해시켰다. 수성 물질을 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 84%)을 얻었다. MS: m/e 180 (M+1)+.
단계 D: 1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올
EtOH(15 mL) 중 1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-온(480 mg, 2.67 mmol)의 용액에 NaBH4(405 mg, 11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 H2O에 용해시켰다. 수성 물질을 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(400 mg, 83%)을 얻었다. MS: m/e 182 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(5 mL) 중 중간체 5(40 mg, 0.12 mmol)의 용액에 1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올(50 mg, 0.28 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄(120 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(1.29 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고 질소 보호 하의 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 H2O에 용해시켰다. 수성 물질을 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.37 mg, 2.3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.95 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 4.29 (s, 2H), 3.73 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.46 (d, J = 14.7 Hz, 4H), 3.13 (s, 1H), 3.00 - 2.68 (m, 3H), 2.09 - 1.94 (m, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.20 - 1.05 (m, 1H), 0.96 (s, 3H), 0.88 - 0.80 (m, 1H), 0.79 - 0.65 (m, 2H) ppm. MS: m/e 492 (M+1)+.
화합물 A161: 2-(7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 tert-부틸 (R)-3-에틸피페라진-1-카르복실레이트(2 g, 9.3 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(2.4 g, 13.9 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(4.5 g, 18.6 mmol) 및 DIPEA(6 g, 46.5 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 100:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.8 g, 53%)을 얻었다. MS: M/e 371 (M+1)+.
단계 B: 6-(1-((R)-2-에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린
DCM(20 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(1.8 g, 4.9 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM(20 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 수성 NaOH로 세척하고 농축시켜 표제 화합물(1.2 g)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 271 (M+1)+.
단계 C: 7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN 중 중간체 2(1.6 g, 4.4 mmol), 6-(1-((R)-2-에틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(1.2 g, 4.4 mmol) 및 DIPEA(2.8 g, 22 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(720 mg, 33%)을 얻었다. MS: M/e 502 (M+1)+.
단계 D: 7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(5 mL) 중 7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(720 mg, 1.4 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(3.6 mL, 14 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM(20 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 수성 NaOH로 세척하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(380 mg, 65%)을 얻었다. MS: M/e 418 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(5 mL) 중 7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(380 mg, 0.91 mmol) 및 K2CO3(252 mg, 1.82 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(228 mg, 1.41 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 염수(20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 A161(240 mg, 85% 순도)을 얻었다. 화합물 A161(20 mg, 미정제)을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물 A161a(5 mg) 및 화합물 A161b(2 mg)를 얻었다.
화합물 A161a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 - 8.87 (m, 2H), 8.12 - 8.06 (m, 3H), 7.94 (s, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.42 - 4.37 (m, 2H), 3.88 - 3.75 (m, 1H), 3.62 - 3.58 (m, 1H), 3.50 - 3.46 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.14 - 3.09 (m, 1H), 2.71 - 2.54 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 2H), 1.52 - 1.48 (m, 3H), 1.12 - 1.08 (m, 3H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A161b((이후 피크)): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.89 - 8.88 (m, 2H), 8.13 - 7.99 (m, 3H), 7.91 (s, 1H), 5.60 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.48 - 4.32 (m, 2H), 4.01 - 3.96 (m, 1H), 3.61 - 3.52 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.14 - 2.95 (m, 2H), 2.61 - 2.56 (m, 1H), 1.80 - 1.56 (m, 5H), 0.85 - 0.81 (m, 3H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A162: 2-(6-클로로-7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(6-클로로-7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(50 mg, 0.11 mmol)의 용액에 NCS(15 mg, 0.12 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물(10 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15: 1)에 의해 정제하여 화합물 A162a(10 mg) 및 화합물 A162b(7 mg)로서 명명된, 화합물 A162의 2개의 이성질체를 얻었다.
화합물 A162a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.12 - 8.10 (m, 3H), 7.97 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.38 (br s, 1H), 4.06 - 4.01 (m, 1H), 3.80 - 3.58 (m, 3H), 3.52 (s, 3H), 3.11 (br s, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.55 (br s, 1H), 1.83 - 1.79 (m, 2H), 1.48 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A162b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.13 - 7.99 (m, 3H), 7.95 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.41 (br s, 1H), 4.06 - 4.01 (m, 1H), 3.80 - 3.56 (m, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.23 (br s, 1H), 2.89 (br s, 1H), 2.55 (br s, 1H), 1.86 - 1.57 (m, 5H), 1.01 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+
화합물 A164: 2-(7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-하이드록시에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(80 mg, 0.136 mmol)의 용액에 TBAF(0.2 mL, 0.203 mmol)를. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 25:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 94%)을 얻었다. MS: M/e 476(M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-메톡시에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF(1.5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-5-(2-하이드록시에틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(60 mg, 0.126 mmol)의 용액에 NaH/60%(10 mg, 0.253 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, CH3I(54 mg, 0.379 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EA로 추출하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 50:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 81%)을 얻었다. MS: M/e 490.4(M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-하이드록시에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.1 mmol)의 용액에 TFA(0.4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 물에 용해시켰다. 수성 층을 (DCM: IPA = 4:1)로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3로 세척하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(35 mg, 88%)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(8 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(35 mg, 0.089 mmol)의 용액에 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(24 mg, 0.134 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(65 mg, 0.27 mmol) 및 DIPEA(116 mg, 0.89 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 25:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 60%)을 얻었다. MS: M/e 546 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.055 mmol)의 용액에 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하여 표제 화합물을 얻었고 이를 추가 정제과정 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 462(M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) / 물(0.3 mL) 중 7-((2S,5R)-2-(2-메톡시에틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.065 mmol) 미정제물의 용액에 K2CO3(45 mg, 0.33 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(54 mg, 0.33 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaCl에 의해 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 25:1)에 의해 정제한 후, 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.66 mg, 14%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.98 - 8.80 (m, 2H), 8.20 - 7.94 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.02 - 3.75 (m, 1H), 3.74 - 3.60 (m, 2H), 3.54 - 3.33 (m, 6H), 3.29 - 3.15 (m, 1H), 3.14 - 2.70 (m, 5H), 2.47 -2.00 (m, 2H), 1.58 - 1.30 (m, 3H), 1.25 - 1.00 (m, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A166: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 3-아미노-6-브로모피리딘-2(1H)-온
H2O(5 mL) 중 6-브로모-2-메톡시피리딘-3-아민(1 g, 5 mmol)의 용액에 HBr(물 중 33%, 10 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 포화 수성 NaHCO3로 pH를 7-8로 조정하여 현탁액을 얻었다. 필터 케이크를 여과에 의해 수집하고 건조시켜 표제 화합물(570 mg, 61%)을 얻었다. MS: m/e 190(M+1)+.
단계 B: 6-브로모-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-2(3H)-온
THF(10 mL) 중 3-아미노-6-브로모피리딘-2(1H)-온(190 mg, 1 mmol)의 용액에 2-클로로아세틸 클로라이드(135 mg, 1.2 mL) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. DMF 중 생성된 잔류물(5 ml)의 용액에 K2CO3(278 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반한 후 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 H2O에 붓고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(220 mg, 97%)을 얻었다. MS: m/e 230 (M+1)+.
단계 C: 6-브로모-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진
THF(15 mL) 중 6-브로모-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-2(3H)-온(200 mg, 0.97 mmol)의 용액에 BH3-THF(1 M, 2 mL)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O에 붓고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 53%)을 얻었다. MS: m/e 216(M+1)+.
단계 D: 6-브로모-1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진
DMF(5 mL) 중 6-브로모-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진(110 mg, 0.516 mmol)의 용액에 CH3I(141 mg, 1 mmol) 및 K2CO3(278 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O에 붓고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 68%)을 얻었다. MS: m/e 230 (M+1)+.
단계 E: 1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-카르브알데히드
THF(10 mL) 중 6-브로모-1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진(150 mg, 0.6 mmol)의 교반된 용액을 -78℃로 냉각시키고 질소 분위기 하에서 n-BuLi(헥산 중 1 M, 0.6 mmol, 0.6 mL)을 적가하였다. 20분 동안 교반한 후, THF(2 mL) 중 DMF(79 mg, 1 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 서서히 가온하고 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl에 붓고 EA(15 mL x 3)에 의해 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 37%)을 얻었다. MS: M/e 179(M+1)+.
단계 F: 1-(1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-일)에탄-1-올
THF(10 mL) 중 1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-카르브알데히드(40 mg, 0.22 mmol)의 교반된 용액을 0℃로 냉각시키고 질소 분위기 하에서 CH3MgBr(헥산 중 1 M, 02 mmol, 0.2 mL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 서서히 가온하고 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O에 붓고 EA(15 mL x 3)에 의해 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 24%)을 얻었다. MS: M/e 195 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
아세토니트릴(5 mL) 중 중간체 5(20 mg, 0.06 mmol)의 용액에 1-(1-메틸-2,3-디하이드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]옥사진-6-일)에탄-1-올(10 mg, 0.05 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄(125 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉하고 질소 보호 하의 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.88 mg, 3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.97 (s, 1H), 7.05 (t, J = 10.2 Hz, 2H), 5.60 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.45 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 3.63 (s, 2H), 3.46 (d, J = 12.2 Hz, 4H), 3.36 (s, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.69 (s, 1H), 2.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.08 - 1.94 (m, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.58 (d, J = 14.2 Hz, 2H), 1.30 (s, 6H), 1.08 (s, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A168:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(40 mg, 0.09 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 80℃로 가열하였다. Selectfluor(47 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EA(20 mL)로 희석하고 H2O(10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 23%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.89 - 8.87 (m, 2H), 8.15 - 8.00 (m, 3H), 7.96 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.77 - 4.76 (m, 1H), 4.08 - 4.06 (m, 1H), 3.81 - 3.78 (m, 1H), 3.67 - 3.65 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.18 - 3.15 (m, 1H), 2.82 - 2.80 (m, 2H), 1.49 - 1.45 (m, 6H), 1.09 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 475 (M+1)+.
화합물 A169:
2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
DMF(2 mL) 중 2-(6-브로모-7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(50 mg, 0.09 mmol), Pd(PPh3)4(23 mg, 0.02 mmol) 및 Zn(CN)2(21 mg, 0.18 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 100℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(5 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 4%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 - 8.86 (m, 2H), 8.09 - 7.95 (m, 4H), 5.51 (s, 2H), 4.36 - 4.26 (m, 3H), 4.07 - 4.04 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.15 - 3.12 (m, 1H), 2.76 - 2.63 (m, 2H), 1.69 - 1.66 (m, 1H), 1.55 - 1.54 (m, 1H), 1.48 - 1.46 (m, 3H), 1.04 - 1.02 (m, 2.5H), 0.83 - 0.80 (m, 0.5H) ppm. MS: M/e 482 (M+1)+.
화합물 A170: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에탄-1-올
THF 중 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)벤즈알데히드(208 mg, 1 mmol)의 용액에 N2 분위기 하의 0-5℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(1 M, 1.2 mL)를 서서히 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 45%)을 얻었다. MS: m/e 225 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
아세토니트릴(5 mL) 중 중간체 3(50 mg, 0.13 mmol)의 용액에 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)벤즈알데히드(50 mg, 0.22 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄(125 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밀봉하고 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 40%)을 얻었다. MS: M/e 580 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.05 mmol)의 용액에 TFA(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3의 수용액으로 켄칭하고 DCM에 의해 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 40%)을 얻었다. MS: M/e 496 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(10 mg, 0.02 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(16 mg, 0.1 mmol) 및 K2CO3(27.8 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 11%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 1H), 7.20 - 7.09 (m, 2H), 5.54 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.31 (s, 0.5H), 4.20 (s, 0.5H), 3.43 (m, 5H), 3.12 (s, 1H), 2.96 (s, 1H), 2.90 (s, 1H), 2.79 (s, 1H), 2.04 (s, 2H), 1.66 (s, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.02 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 0.92 (d, J = 19.8 Hz, 2H), 0.74 (t, J = 7.4 Hz, 1.5H), 0.55 (s, 1.5H) ppm.MS: M/e 535 (M+1)+.
화합물 A171: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에탄-1-온.
톨루엔(20 mL) 중 1-브로모-2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로벤젠(2.41 g, 10.0 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(7.22 g, 20.0 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(350 mg, 0.50 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 HCl(10 mL, 디옥산 중 4M)을 첨가하고 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(30 mL)로 희석하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.02 g, 99%)을 얻었다. MS: M/e 205 (M+1)+.
단계 B: 1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에탄-1-올.
MeOH(30 mL) 중 1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에탄-1-온(2.02 g, 9.9 mmol)의 용액에 NaBH4(570 mg, 15 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(15 mL)로 켄칭하고 EA(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(15 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.8 g, 90%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.67 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 6.99 (m, 3H), 5.28 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 189 (M-17)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
MeCN(1 mL) 중 중간체 5(33 mg, 0.1 mmol), 1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(52 mg, 0.25 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(85 mg, 0.35 mmol) 및 DIPEA(80 mg, 0.62 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH =20:1)에 의해 정제하여 부분입체이성질체 화합물 A171의 혼합물을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 B)에 의해 화합물 A171a(5 mg) 및 화합물 171b(6 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A171a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.64 (dd, J = 8.8, 6.8 Hz, 1H), 7.07 - 7.00 (m, 1H), 6.96 (dd, J = 10.0, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 74.0, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.22 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.32 - 3.31 (m, 1H), 3.29 - 3.23 (m, 1H), 2.98 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.88 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 1H), 2.14 - 2.02 (m, 1H), 1.87 - 1.74 (m, 1H), 1.60 - 1.46 (m, 2H), 1.38 - 1.24 (m, 4H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.74 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 517 (M+1)+.
화합물 171b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.73 (dd, J = 8.8, 6.8 Hz, 1H), 7.01 (td, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.95 (dd, J = 10.0, 2.0 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 73.6 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.07 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.48 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.31 (s, 1H), 3.12 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.66 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.30 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.05 - 1.87 (m, 1H), 1.74 - 1.45 (m, 3H), 1.35 - 1.27 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz 3H), 1.02 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.65 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 517 (M+1)+.
화합물 A172: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올
THF(20 mL) 중 1-브로모-2-(디플루오로메틸)-4-플루오로벤젠(200 mg, 0.8889 mmol)의 용액에 nBuLi(0.8 mL, 1.333 mmol)을 -78℃에서 적가하고 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 아세트알데히드(78 mg, 1.778 mmol)를 -78℃에서 적가하고 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(100 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 1 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 71%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.79 - 7.49 (m, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 7.34 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.25 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 6.7 Hz, 3H). M/e 191 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 중간체 5(50 mg, 0.1524 mmol), 1-(2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(58 mg, 0.3049 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(74 mg, 0.3049 mmol), DIPEA(98 mg, 0.7622 mmol)의 혼합물을 N2 하의 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 켄칭하고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH =20:1)에 의해 정제하여 부분입체이성질체 화합물 A172의 혼합물을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A172a(15 mg, 20%) 및 화합물 A172b(10 mg, 13%)로 추가 분리하였다.
화합물 A172a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.26 (dd, J = 19.9, 9.0 Hz, 2H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.98 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.18 (d, J = 10.8 Hz, 3H), 2.89 - 2.73 (m, 1H), 2.69 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 2.25 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 1.96 - 1.85 (m, 1H), 1.71 - 1.53 (m, 3H), 1.32 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.59 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+
화합물 A172b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.70 - 7.59 (m, 1H), 7.34 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.09 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.29 - 3.26 (m, 1H), 3.08 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 3.00 - 2.55 (m, 3H), 2.37 (s, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.85 (dd, J = 14.0, 6.7 Hz, 1H), 1.79 - 1.38 (m, 3H), 1.36 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.03 - 0.88 (m, 3H), 0.68 (t, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+
화합물 A177: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 4-(3,4-디메톡시벤질)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(2 mL) 중 6-(1-((2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(200 mg, 0.702 mmol) 및 중간체 8(399 mg, 0.772 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(181 mg, 1.404 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 44%)을 얻었다. MS: M/e 652 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
TFA(3 mL) 및 TfOH(3 mL) 중 4-(3,4-디메톡시페닐)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(200 mg, 0.307 mmol)의 용액을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물에 용해시켰다. 수성 물질을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 DCM(35 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 78%)을 얻었다. MS: M/e 418 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.240 mmol) 및 K2CO3(67 mg, 0.464 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(44 mg, 0.264 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 화합물 A177을 수득하였다. 화합물 A177을 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물 A177a(23 mg) 및 화합물 A177b(24 mg)를 얻었다.
화합물 A177a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.51 (s, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.09-8.13 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.93-7.91 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.61-7.57 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.68-4.64 (m, 2H), 4.03-3.98 (m, 1H), 3.30-3.27 (m, 1H), 3.01-2.99 (m, 1H), 2.86-2.83 (m, 1H), 2.45-2.43 (d, J = 8 Hz, 1H), 1.59-1.57 (m, 2H), 1.43-1.25 (m, 6H), 0.70 (t, J = 4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A177b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.68 (s, 1H), 8.84 (s, 2H), 8.11-8.08 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.99-7.96 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.86-4.40 (m, 2H), 3.88-3.84 (m, 1H), 3.58-3.54 (m, 1H), 3.20-3.16 (m, 1H), 2.82-2.77 (m, 1H), 2.24-2.20 (m, 1H), 1.79-1.76 (m, 1H), 1.60-1.56 (m, 1H), 1.46-1.42 (m, 3H), 1.25-1.21 (m, 3H), 1.05 (t, J = 8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 457 (M+1)+.
화합물 A179: 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 2-(7-((3R)-3-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(170 mg, 0.37 mmol)의 용액에 NBS(65 mg, 0.37 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 H2O(20 mL)로 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 화합물 A179(120 mg, 61%)를 혼합물로서 얻었다. 화합물 A179(20 mg, 혼합물)를 분취용-TLC에 의해 추가 정제하여 화합물 A179a(2 mg) 및 화합물 A179b(2 mg)를 얻었다.
화합물 A179a: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 - 8.87 (m, 2H), 8.12 - 7.99 (m, 3H), 7.94 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.38 (br s, 1H), 4.01 - 3.98 (m, 1H), 3.83 - 3.78 (m, 1H), 3.68 - 3.64 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 2.88 - 2.85 (m, 1H), 2.56 - 2.54 (m, 1H), 1.56 - 1.54 (m, 3H), 0.90 - 0.88 (m, 3H), 0.72 - 0.68 (m, 3H) ppm. MS: M/e 535 (M+1)+.
화합물 A179b: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 - 8.86 (m, 2H), 8.11 - 8.10 (m, 3H), 7.97 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.38 (br s, 1H), 4.01 - 4.00 (m, 1H), 3.73 - 3.71 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 2.76 - 2.70 (m, 3H), 2.52 - 2.50 (m, 1H), 1.83 - 1.80 (m, 2H), 1.50 - 1.47 (m, 3H), 1.01 - 0.98 (m, 3H) ppm. MS: M/e 535 (M+1)+.
화합물 A180:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 5-브로모-2-(디플루오로메톡시)피리딘
DMF(20 mL) 중 5-브로모피리딘-2-올(1 g, 5.75 mmol), ClCF2COONa(0.876 g, 5.75 mmol), Cs2CO3(2.81 g, 8.62 mmol)의 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 물로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 물(20 mL), 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA = 100: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(220 mg, 17%)을 얻었다. MS: M/e 224 (M+1)+.
단계 B: 1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에탄-1-온
톨루엔(5 mL) 중 5-브로모-2-(디플루오로메톡시)피리딘(220 mg, 0.99 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(543 mg, 1.5 mmol) 및 Pd(PPh3)4(120 mg, 0.01 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 10℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 HCl 디옥산 용액(5 mL, 4M)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(PE : EA = 20 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(90 mg, 49%)을 얻었다. MS: M/e 188 (M+1)+.
단계 C: 1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에탄-1-온(90 mg, 0.49 mmol)의 용액에 NaBH4(20 mg, 0.5 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(2 mL)에 의해 켄칭하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 190 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 중간체 5(35 mg, 0.1 mmol), 3-(1-하이드록시에틸)피리딘-2(1H)-온(40 mg, 0.2 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(52 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(130 mg, 1 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 미정제 생성물 화합물 A180을 얻었다. 화합물 A180을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 2개의 화합물 화합물 A180a(2 mg) 및 화합물 A180b(2 mg)를 얻었다.
화합물 A180a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.76 - 7.74 (m, 2H), 7.62 (s, 1H), 6.61 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.69 - 3.67 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.31 - 3.30 (m, 1H), 2.93 - 2.83 (m, 2H), 2.75 - 2.55 (m, 2H), 2.49 - 2.46 (m, 1H), 2.08 - 2.06 (m, 1H), 1.82 - 1.80 (m, 1H), 1.57 - 1.54 (m, 2H), 1.33 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 (t, J = 7.5 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 500 (M+1)+.
화합물 A180b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.76 (t, J = 60.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.64 (m, 1H), 6.58 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.52 - 3.44 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.10 - 3.07 (m, 1H), 2.79 - 2.61 (m, 2H), 2.49 - 2.46 (m, 1H), 1.90 - 1.87 (m, 1H), 1.69 - 1.65 (m, 2H), 1.52 - 1.50 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.73 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 500 (M+1)+.
화합물 A181:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
의 혼합물
단계 A: 1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-카르브알데히드 및 1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-카르브알데히드의 혼합물
밀봉된 튜브에 4-메틸-1H-이미다졸-2-카르브알데히드(220 mg, 2 mmol), 요오도에탄(343 mg, 2.2 mmol), 포타슘 카르보네이트(552 mg, 4 mmol) 및 DMF(5 ml)를 충전하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 물을 첨가하고 수성 물질을 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 생성물(250 mg, 미정제)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 139 (M+1)+.
단계 B: 1-(1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-일)에탄-1-올 및 1-(1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)에탄-1-올의 혼합물
THF(5 mL) 중 [1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-카르브알데히드 및 1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-카르브알데히드](250 mg, 1.8 mmol)의 용액에 0℃에서 MeMgBr(Et2O 중 3.0 M, 1 mL, 2.7 mmol)을 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 포화 수성 NH4Cl(40 mL) 및 EA(20 mL)를 첨가하였다. 수성 상을 EA(2x20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 생성물(1: 1, H-NMR에 의해 비율 확인, 160 mg)을 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.77 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.80 - 4.67 (m, 2H), 3.93 (dtd, J = 21.8, 14.7, 7.3 Hz, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.42 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.27 - 1.18 (m, 6H) ppm. MS: M/e 155 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물
MeCN(3 mL) 중 [1-(1-에틸-4-메틸-1H-이미다졸-2-일)에탄-1-올 및 1-(1-에틸-5-메틸-1H-이미다졸-2-일)에탄-1-올](34 mg, 0.22 mmol)의 용액에 중간체 5(60 mg, 0.18 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(87 mg, 0.36 mmol) 및 DIPEA(93 mg, 0.72 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 생성물(2 mg, 3%)을 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.37 (s, 1H, HCOOH), 7.94 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.20 - 6.97 (m, 1H), 5.56 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 4.44 - 4.13 (m, 4H), 3.56 - 3.37 (m, 4H), 2.93-2.87 (m, 2H), 2.50 - 2.37 (m, 0.5H), 2.33-2.29 (m, 3H), 2.18 (d, J = 12.3 Hz, 0.5H), 1.97 - 1.60 (m, 3H), 1.57 - 1.33 (m, 8H), 1.02 (t, J = 7.3 Hz, 1.5H), 0.87-0.83 (m, 3H), 0.73 (t, J = 7.3 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 465 (M+1)+.
화합물 A182: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸
DMSO(30 mL) 중 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸(1.8 g, 14.8 mmol)의 용액에 KOH(1.46 g, 22.1 mmol, 85%)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 브로모에탄(2 g, 18.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물(250 mL)에 붓고 5N NaOH(50 mL)로 처리한 후, DCM(200 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 물(100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 g, 90%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (s, 1H), 3.83 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.48 (s, 2H), 2.64 - 2.46 (m, 2H), 1.92 - 1.72 (m, 4H), 1.38 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm.
단계 B: 1-(1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에탄-1-올
THF(15 mL) 중 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸(500 mg, 3.3 mmol)의 용액에 n-BuLi(2.9 mL,1.6M, 4.6 mmol)을 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 아세트알데히드(567 mg, 16.6 mmol)를 첨가하고 -70℃ 미만에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl에 의해 켄칭하고 EA에 의해 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(510 mg)을 얻었다. MS: M/e 195 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 mL) 중 중간체 5(30 mg, 0.091 mmol)의 용액에 1-(1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일)에탄-1-올(35 mg, 0.183 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(89 mg, 0.37 mmol) 및 DIPEA(118 mg, 0.91 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 B)에 의해 정제하여 표제 화합물(1 mg, 3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 5.59 - 5.45 (m, 3H), 4.32 - 3.80 (m, 4H), 3.54 - 3.31 (m, 5H), 2.98 - 2.60 (m, 4H), 2.58 - 2.30 (m, 5H), 1.95 - 1.51 (m, 6H), 1.50 - 1.23 (m, 6H), 1.05 -0.60 (m, 6H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A183:
2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드
DCM(14 mL) 중 4-아미노-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(0.5 g, 2.38 mmol) 및 4-메톡시벤즈알데히드(323 mg, 2.38 mmol)의 용액에 NaBH(OAc)3(1 g 4.76 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.6 g, 76%)을 얻었다. MS: M/e 331 (M+1)+.
단계 B: 4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온
DMF(10 mL) 중 4-((4-메톡시벤질)아미노)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복스아미드(560 mg, 1.7 mmol)의 용액에 NaH(136 mg, 3.4 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 1시간 후, 상기 용액에 CDI(550 mg, 3.4 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 80℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O로 켄칭하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.28 g, 46%)을 얻었다. MS: M/e 357 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온(100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 DIPEA(72 mg, 0.56 mmol)에 이어서, POCl3(88 mg, 0.57 mmol) 및 촉매량의 DMF를 첨가하였다. 반응물을 밀봉된 튜브에서 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고 EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 CH3CN(3 mL)에 용해시키고, 6-(1-((2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(40 mg, 0.14 mmol) 및 DIPEA(51 mg, 0.4 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EA(60 mL x 3)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 45%)을 얻었다. MS: M/e 623 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
TFA(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(80 mg, 0.128 mmol)의 용액에 트리플루오로메탄설폰산(4 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭하고, 포화 수성 Na2CO3로 pH 7~8로 염기성화하고 DCM:IPA(3:1, 60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(27 mg, 50%)을 얻었다. MS: M/e 419 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(27 mg, 0.06 mmol) 및 K2CO3(18 mg, 0.13 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(16 mg, 0.096 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EA(60 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 화합물 A183을 수득하고, 분취용-HPLC(방법 B)에 의해 추가 정제하여 화합물 A183a(2 mg) 및 화합물 A183b(2 mg)를 얻었다.
화합물 A183a(이전 이성질체): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 8.16 - 8.10 (m, 1H), 8.08 - 8.00 (m, 2H), 7.77 - 7.69 (m, 1H), 6.00 - 5.85 (m, 0.5H), 5.60 - 5.48 (m, 1.5H), 5.42 (s, 1H), 5.38 - 5.28 (m, 0.5H), 5.02 - 4.93 (m, 0.5H), 4.15 - 4.00 (m, 1H), 3.66 - 3.52 (m, 0.5H), 3.25 - 3.16 (m, 0.5H), 3.05 - 2.90 (m, 2H), 2.55 - 2.40 (m, 1H), 1.71 - 1.35 (m, 8H), 0.80 - 0.65 (m, 3H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A183b(이후 이성질체): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.87 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 8.14 - 8.02 (m, 3H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 5.89 - 5.80 (m, 0.5H), 5.72 - 5.60 (m, 0.5H), 5.56 - 5.40 (m, 2H), 5.31 - 5.22 (m, 0.5H), 5.15 - 5.02 (m, 0.5H), 3.96 - 3.80 (m, 2H), 3.52 - 3.42 (m, 0.5H), 3.28 - 3.21 (m, 0.5H), 2.91 - 2.65 (m, 2H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 1.70 - 1.50 (m, 2H), 1.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.13 - 1.01 (m, 3H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A189:
2,2'-(6-시아노-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2,4(5H)-디일)디아세토니트릴
단계 A: 4-(3,4-디메틸벤질)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 4-(3,4-디메틸벤질)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(120 mg, 0.25 mmol), 6-(1-((2R,5S)-2-에틸-5-메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(107 mg, 0.38 mmol) 및 DIPEA(170 mg, 1.3 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 78%)을 얻었다. MS: M/e 620 (M+1)+.
단계 B: 6-브로모-4-(3,4-디메틸벤질)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 4-(3,4-디메틸벤질)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(120 mg, 0.19 mmol)의 용액에 NBS(34 mg, 0.19 mmol)를 실온에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하고 물(10 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 82%)을 얻었다. MS: M/e 698 (M+1)+.
단계 C: 6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(2 mL) 중 6-브로모-4-(3,4-디메틸벤질)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(110 mg, 0.15 mmol)의 용액에 TfOH(5 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고 수성 물질을 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 분리하고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 76%)을 얻었다. MS: M/e 496 (M+1)+.
단계 D: 2,2'-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2,4(5H)-디일)디아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg, 0.12 mmol) 및 K2CO3(34 mg, 0.24 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(30 mg, 0.18 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(10 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(18 mg, 26%)을 얻었다. MS: M/e 574 (M+1)+.
단계 E: 2,2'-(6-시아노-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2,4(5H)-디일)디아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 2,2'-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2,4(5H)-디일)디아세토니트릴(18 mg, 0.03 mmol), Pd(PPh3)4(12 mg, 0.01 mmol) 및 Zn(CN)2(8 mg, 0.06 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 100℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(5 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.56 mg, 10%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 - 8.87 (m, 2H), 8.17 - 8.06 (m, 4H), 5.55 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 3.97 - 3.95 (m, 2H), 2.85 - 2.53 (m, 3H), 2.34 - 2.31 (m, 1H), 1.49 - 1.42 (m, 6H), 1.05 - 0.84 (m, 6H) ppm. MS: M/e 521 (M+1)+.
화합물 A194: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-플루오로-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(1 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(40 mg, 0.088 mmol)의 용액에 DMF(1 mL) 및 CH3CN(1 mL) 중 Selectfluor(47 mg, 0.132 mmol)을 80℃에서 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 5분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용매를 감압 하에서 농축시켜 화합물 A194를 수득하였다. 화합물 A194를 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물 A194a(7 mg) 및 화합물 A194b(3 mg)를 얻었다.
화합물 A194a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.23 (s, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.13-7.93 (m, 3H), 7.52 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.49-4.51 (m, 1H), 4.11-3.86 (m, 2H), 3.72-3.54 (m, 1H), 3.10-3.07 (m, 1H), 2.81-2.62 (m, 1H), 2.41-2.37 (m, 1H), 2.06-2.02 (m, 1H), 1.90-1.76 (m, 1H), 1.47-1.43 (m, 3H), 1.27-1.23 (m, 2H), 1.23-0.86 (m, 2H), 0.75-0.54 (m, 2H) ppm. MS: M/e 475 (M+1)+.
화합물 A194b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.13 (s, 1H), 8.84 (s, 2H), 8.10-7.99 (m, 3H), 7.52 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.51-4.11 (m, 1.5 H), 4.90-3.50 (m, 2H), 3.13-2.83 (m, 1.5H), 2.20-2.16 (m, 1H), 1.83-1.79 (m, 2H), 1.44-1.40 (m, 3H), 1.28-1.25 (m, 4H), 1.00-0.96 (m, 3H) ppm. MS: M/e 475 (M+1)+.
화합물 A196: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-온(412 mg, 2 mmol)의 용액에 NaBH4(80 mg, 2 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O(2 mL)에 의해 켄칭하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA = 10 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(380 mg, 92%)을 얻었다. MS: M/e 209 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(240 mg, 1 mmol), 1-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)에탄-1-올(315 mg, 1.5 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(394 mg, 1.5 mmol) 및 DIPEA(650 mg, 5 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH = 100:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(180 mg, 42%)을 얻었다. MS: M/e 433 (M+1)+.
단계 C: (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진
DCM(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(180 mg, 0.42 mmol)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM(10 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 수성 NaOH(1 M)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(110 mg, 79%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 333 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN 중 중간체 2(150 mg, 0.39 mmol), (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진(110 mg, 0.33 mmol) 및 DIPEA(260 mg, 2 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 105℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 44%)을 얻었다. MS: M/e 564 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.14 mmol)의 용액에 HCl(0.5 mL, 2 mmol, 디옥산 중 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)에 용해시키고 수성 NaOH(1 M)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg)을 부분입체이성질체 화합물 A275의 혼합물로서 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A275a(2 mg) 및 화합물 A275b(2 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A275a: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.49 (s, 1H), 8.08 - 7.93 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.65 - 7.48 (m, 2H), 5.35 (s, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.40 - 3.31 (m, 2H), 3.31 - 3.21 (m, 4H), 3.10 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.59 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.02 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.88 - 1.71 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 1H), 1.55 - 1.31 (m, 2H), 1.24 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.55 - 0.35 (m, 3H). MS: M/e 480 (M+1)+.
화합물 A275b: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.50 (s, 1H), 8.11 - 7.96 (m, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.67 - 7.50 (m, 2H), 5.35 (s, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 1H), 3.30 - 3.26 (m, 4H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 2.99 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.59 - 2.51 (m, 1H), 2.25 - 2.15 (m, 1H), 2.15 - 1.99 (m, 1H), 1.80 - 1.65 (m, 1H), 1.62 - 1.46 (m, 1H), 1.46 - 1.31 (m, 1H), 1.22 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.00 - 0.76 (m, 3H), 0.64 (t, J = 7.2 Hz, 3H). MS: M/e 480 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.08 mmol) 및 K2CO3(24 mg, 0.17 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(22 mg, 0.13 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고 염수(10 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 미정제 화합물 A196을 얻었다. 미정제 화합물 A196을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A196a(9 mg) 및 화합물 A196b(9 mg)를 얻었다.
화합물 A196a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.07 - 8.05 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.42 - 7.39 (m, 2H), 5.55 (s, 1H), 5-47 (s, 2H), 4.03 - 4.02 (m, 1H), 3.52 -3.48 (m, 1H), 3-43 (s, 3H), 3.30 - 3-19 (m, 2H), 2.85 - 2.68 (m, 2H), 2.16 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 1.93 (br s, 1H), 1.69 - 1.63 (m, 2H), 1.51 - 1.48 (m, 1H), 1.30 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.06 - 1.04 (m, 3H), 0.60 - 0.58 (m, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A196b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.08 - 8.06 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 2H), 5.57 (s, 1H), 5-46 (s, 2H), 4.19 - 4.18 (m, 1H), 3-43 (s, 3H), 3.33 - 3-31 (m, 2H), 3.10 - 3-09 (m, 1H), 2.95 - 2.78 (m, 2H), 2.35 - 2.30 (m, 2H), 1.87 - 1.84 (m, 1H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 - 0.99 (m, 3H), 0.74 - 0.73 (m, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A200: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
단계 A: 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(15 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(120 mg, 0.263 mmol)의 용액에 0℃에서 NBS(47 mg, 0.263 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 켄칭하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 43%)을 얻었다. MS: M/e 535 (M+1)+.
단계 B: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴.
DMF(2 mL) 중 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메트A97일-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(42 mg, 0.079 mmol), Zn(CN)2(28 mg, 0.157 mmol) 및 Pd(PPh3)4(37 mg, 0.032 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 화합물 A200을 수득하였다. 화합물 A200을 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A200a(2 mg, 5%) 및 화합물 A200b(3 mg, 8%)를 얻었다.
화합물 A200a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.16 (s, 1H), 8.85 (s, 2H), 8.14-8.10 (m, 2H), 8.04-8.00 (m, 1H), 7.93-7.90 (m, 1H), 5.11 (s, 3H), 4.02 (s, 1H), 3.84 (s, 1H), 3.52 (s, 1H), 3.15-3.11 (m, 1H), 2.87-2.83 (m, 1H), 2.53-2.49 (m, 1H), 1.63-1.58 (m, 4H), 1.45-1.43 (m, 4H), 0.61 (s, 3H) ppm. MS: M/e 482 (M+1)+.
화합물 A200b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.94 (s, 1H), 8.85-8.84 (m, 2H), 8.13-8.09 (m, 1H), 8.09-8.04 (m, 2H), 7.95-7.93 (m, 1H), 5.14-5.10 (m, 3H), 4.08 (s, 1H), 3.89-3.87 (m, 1H), 3.51-3.47 (m, 1H), 3.26-2.22 (m, 1H), 2.94-2.90 (m, 1H), 2.32-2.29 (m, 1H), 1.58-1.42 (m, 8H), 0.94 (s, 3H) ppm. MS: M/e 482 (M+1)+.
화합물 A202: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트.
CH3CN(2 mL) 중 1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(350 mg, 1.682 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(462 mg, 2.020 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(613 mg, 2.523 mmol)의 용액에 DIPEA(1085 mg, 8.410 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(350 mg, 50%)을 얻었다. MS: M/e 419 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2-에틸-1-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-5-메틸피페라진.
DCM(15 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(250 mg, 0.598 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 물에 용해시켰다. 수성 물질을 수성 Na2CO3(4M)로 pH~10으로 염기화성하고 EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(170 mg, 89%)을 얻었다. MS: M/e 319 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(2 mL) 중 (2R,5S)-2-에틸-1-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-5-메틸피페라진(160 mg, 0.503 mmol) 및 중간체 2(210 mg, 0.553 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(130 mg, 1.006 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 72%)을 얻었다. MS: M/e 550 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(10 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(150 mg, 0.273 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(4 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 물에 용해시켰다. 수성 물질을 수성 Na2CO3(4M)로 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(100 mg, 79%)을 얻었다. MS: M/e 466 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(8 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.172 mmol) 및 K2CO3(47 mg, 0.344 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(43 mg, 0.258 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 화합물 A202를 수득하였다. 화합물 A202를 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 화합물 A202a(70 mg) 및 화합물 A202b(141 mg)를 얻었다.
화합물 A202a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71-7.67 (m, 1H), 7.43 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.64-5.62 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.68-4.40 (m, 1H), 4.24-4.22 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.31-3.27 (m, 1H), 2.98-2.94 (m, 1H), 2.77-2.74 (m, 1H), 2.38-2.36 (m, 1H), 2.05-1.86 (m, 1H), 1.67-1.63 (m, 1H), 1.65-1.60 (m, 1H), 1.52-1.49 (m, 6H), 0.75 (m, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A202b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81-7.77 (m, 1H), 7.42-7.40 (m, 2H), 7.29-7.27 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.19-5.15 (m, 2H), 4.78-4.51 (m, 2H), 4.07-4.03 (m, 1H), 3.46-3.42 (m, 4H), 3.09-3.04 (m, 1H), 2.82-2.78 (m, 1H), 2.16-2.13 (m, 1H), 1.78-1.73 (m, 1H), 1.51-1.47 (m, 1H), 1.22-1.18 (m, 3H), 1.06-1.02 (m, 3H), 1.03-0.98 (m, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A205: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(4-플루오로-2-비닐페닐)에탄-1-올
DCM(10 mL) 중 1-(4-플루오로-2-비닐페닐)에탄-1-온(300 mg, 1.829 mmol)의 용액에 소듐 보로하이드라이드(139 mg, 3.658 mmol)를 0℃에서 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 켄칭하고, DCM(100 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(290 mg, 96%)을 얻었다.
단계 B: 1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에탄-1-올
MeOH(20 mL) 중 1-(4-플루오로-2-비닐페닐)에탄-1-올(290 mg, 1.074 mmol), Pd/C(20 mg, 물 중 10%)의 혼합물을 H2 분위기(1 atm) 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고 농축시켜 표제 화합물(290 mg, 99%)을 얻었다.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 3(100 mg, 0.2681 mmol), 1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에탄-1-올(90 mg, 0.5362 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(130 mg, 0.5362 mmol), DIPEA(173 mg, 1.340 mmol)의 혼합물을 N2 하의 105℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 57%)을 얻었다. MS: M/e 524 (M+1)+
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(2 mL) 및 DCM(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.1487 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 농축시키고 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(48 mg, 71.48%)을 얻었다. MS: M/e 440 (M+1)+
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-에틸-4-플루오로페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(48 mg, 0.1093 mmol), 2-요오도아세토니트릴(37 mg, 0.2187 mmol), K2CO3(45 mg, 0.3280 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(50 mL)으로 추출하고 물로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg, 23%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.67 - 7.48 (m, 1H), 7.05 - 6.73 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.03 - 3.89 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.92 - 2.60 (m, 5H), 2.46 - 2.08 (m, 2H), 1.88 - 1.39 (m, 4H), 1.36 - 1.18 (m, 7H), 1.07 - 0.91 (m, 3H), 0.74 - 0.55 (m, 3H) ppm. MS: M/e 479 (M+1)+
화합물 A206: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(5 mL) 중 중간체 3(20 mg, 0.0536 mmol), 3-(트리플루오로메틸)벤조산(15 mg, 0.0804 mmol), HATU(31 mg, 0.0804 mmol) 및 TEA(16 mg, 0.1609 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(10 mL)으로 추출하고 물(5 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC로 정제하여 표제 화합물(25 mg, 86%)을 얻었다. MS: M/e 546 (M+1)+
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(2 mL) 및 DCM(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(25 mg, 0.046 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 농축시키고 분취용-TLC(DCM : MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 462 (M+1)+
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(3-(트리플루오로메틸)벤조일)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.032 mmol), 2-요오도아세토니트릴(8 mg, 0.049 mmol), K2CO3(9 mg, 0.065 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20 mL)로 켄칭하고, DCM(50 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 61%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.96 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.78 - 7.65 (m, 3H), 5.64 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.86 - 4.52 (m, 2H), 3.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.54 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 3.48 (s, 1H), 3.44 (d, J = 2.2 Hz, 3H), 2.91 - 2.68 (m, 1H), 1.94 - 1.65 (m, 4H), 1.08 - 0.98 (m, 3H), 0.82 - 0.63 (m, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+
화합물 A209: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 5-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실산
농축된 HNO3(6 mL)의 용액에 0℃에서 농축된 H2SO4(6 mL)를 적가하였다. 이어서, 생성된 용액을 50℃로 가열하고 5-메틸-1H-피라졸-3-카르복실산(4 g, 31.74 mmol)을 여러 부분으로 나누어 첨가하여 온도를 60℃ 미만으로 유지하였다. 반응물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 얼음물에 부었다. 현탁액이 형성되었고 이를 여과시켰다. 필터 케이크를 건조시켜 표제 화합물(5.06 g, 93%)을 얻었다. MS: M/e 172 (M+23)+.
단계 B: 에틸 5-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실레이트
EtOH(20 mL) 중 5-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실산(5.06 g, 29.59 mmol)의 용액에 농축된 H2SO4(2 mL)를 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고, EA(80 mL)로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물(5.75 g, 97%)을 얻었다. MS: M/e 200 (M+1)+.
단계 C: 에틸 5-메틸-4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
THF(40 mL) 중 에틸 5-메틸-4-니트로-1H-피라졸-3-카르복실레이트(5.85 g, 29.39 mmol) 및 TsOH.H2O(560 mg, 2.94 mmol)의 용액에 DHP(4.93 g, 58.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE=1:5)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.6 g, 55%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H), 4.04 - 3.92 (m, 1H), 3.74 - 3.62 (m, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 2.06 - 1.95 (m, 1H), 1.74 - 1.62 (m, 3H),1.42 - 1.34 (m, 3H) ppm.
단계 D: 에틸 4-아미노-5-메틸-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
MeOH(50 mL) 중 에틸 5-메틸-4-니트로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(4.6 g, 16.25 mmol)의 용액에 10%의 Pd/C(460 mg, 물 중 10%)를 첨가하였다. 혼합물을 H2 분위기(벌룬) 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과시키고, MeOH로 세척하였다. 조합한 여액을 농축시켜 표제 화합물(3.8 g, 92%)을 얻었다. MS: M/e 254 (M+1)+.
단계 E: 에틸 4-아세트아미도-5-메틸-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
피리딘(50 mL) 중 에틸 4-아미노-5-메틸-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(3.8 g, 15.01 mmol)의 용액에 Ac2O(10 mL)를 적가하여 온도를 20℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE/EA를 이용하는 슬러리화에 적용하여 표제 화합물(3.8 g, 85%)을 얻었다. MS: M/e 296 (M+1)+.
단계 F: 에틸 5-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(30 mL) 중 에틸 4-아세트아미도-5-메틸-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(3.8 g, 12.88 mmol)의 용액에 Cs2CO3(12.6 g, 38.6 mmol)에 이어서, CH3I(5.5 g, 38.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA: PE=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(3.85 g, 96%)을 얻었다. MS: M/e 310 (M+1)+.
단계 G: 7-하이드록시-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(20 mL) 중 에틸 5-메틸-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(618 mg, 2 mmol)의 용액에 LiHMDS의 용액(4 mL, 1 mol/L)을 -70℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 포화 시트르산 용액으로 pH 3~4로 켄칭하고, DCM:IPA(5:1, 60 mL x 3)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH =10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 19%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.08 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 5.51 (dd, J = 2.4 Hz, 9.6 Hz, 1H), 3.93 - 3.82 (m, 1H), 3.74 - 3.61 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 2.62 (s, 3H), 2.42 - 2.24 (m, 1H), 2.10 - 1.96 (m, 1H), 1.94 - 1.84 (m, 1H), 1.76 - 1.62 (m, 1H), 1.59 - 1.48 (m, 2H) ppm. MS: M/e 264 (M+1)+.
단계 H: 3,4-디메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
THF(5 mL) 중 7-하이드록시-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.38 mmol)의 용액에 K2CO3(105 mg, 0.76 mmol)에 이어서, 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(203 mg, 0.57 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA: PE=1: 2)에 의해 정제하여 표제 화합물(85 mg, 90%)을 얻었다. MS: M/e 396 (M+1)+.
단계 I: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 3,4-디메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(85 mg, 0.215 mmol) 및 중간체 1(70 mg, 0.258 mmol)의 용액에 DIPEA(55 mg, 0.43 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 100℃에서 48시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH=15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(65 mg, 59%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 J: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(65 mg, 0.126 mmol)의 용액에 TFA(6 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기화성하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH= 12: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(28 mg, 51%)을 얻었다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 K: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(28 mg, 0.065 mmol) 및 K2CO3(18 mg, 0.138 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(16 mg, 0.0975 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 및 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC((DCM : MeOH =15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4 mg, 12%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 - 8.84 (m, 2H), 8.21 - 8.00 (m, 3H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.75 - 4.45 (m, 1H), 4.35 - 4.15 (m, 0.5H)，4.05 - 3.75 (m, 1H), 3.72 - 3.64 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.50 - 3.40 (m, 0.5H), 3.35 - 3.31 (m, 0.5H), 3.16 - 2.80 (m, 2H), 2.73 (s, 3H), 2.25 - 2.20 (m, 0.5H), 1.62 - 1.35 (m, 4.5H), 1.22 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.14 - 1.00 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A218: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
중간체 11A(11.5 g, 25.05 mmol)를 DCM 중 TFA의 용액(1:5, 100 mL)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(200 mL)로 켄칭하고 DCM(50 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(100 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(8.4 g, 93%)을 얻었다. MS: M/e 360 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeCN(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.27 mmol), 1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(150 mg, 0.72 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(270 mg, 1.11 mmol) 및 DIPEA(250 mg, 1.95 mmol)의 혼합물을 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(5 mL)로 희석하고, 염수(2 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(45 mg, 29%)을 얻었다. MS: M/e 550 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.07 mmol)의 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4M)을 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 켄칭하고 DCM(2 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(2 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(25 mg, 75%)을 얻었다. MS: M/e 466 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(1 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(25 mg, 0.05 mmol) 및 K2CO3(55 mg, 0.40 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(25 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켜 화합물 A218을 수득하였다. 화합물 A218을 함유하는 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하고 분취용-HPLC(방법 B)에 의해 화합물 A218a(2 mg) 및 화합물 A218b(4 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A218a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.19 - 8.04 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.51 - 7.34 (m, 2H), 5.59 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.28 - 4.07 (m, 1H), 3.50 - 3.39 (m, 3H), 3.29 - 3.25 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 2H), 2.90 - 2.72 (m, 1H), 2.33 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 1.72 - 1.57 (m, 1H), 1.56 - 1.48 (m, 1H), 1.46 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A218b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.13 - 8.03 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.47 - 7.31 (m, 2H), 5.58 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.12 - 3.96 (m, 1H), 3.53 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.33 - 3.31 (m, 2H), 3.21 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.84 - 2.74 (m, 1H), 2.02 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.85 - 1.66 (m, 1H), 1.58 - 1.44 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.18 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.07 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A220: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 9(266 mg, 1 mmol, 광학 이성질체)의 용액에 DIPEA(258 mg, 2 mmol)에 이어서, POCl3(307 mg, 2 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고, EA(60 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 CH3CN(4 mL)에 용해시키고, 중간체 1a(162 mg, 0.6 mmol, 광학 이성질체) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH =15: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(75 mg, 14%)을 얻었다. MS: M/e 503 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(57 mg, 0.149 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM: IPA(4: 1, 60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH =10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(31 mg, 50%)을 얻었다. MS: M/e 419 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(31 mg, 0.074 mmol) 및 K2CO3(14 mg, 0.148 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(19 mg, 0.111 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=15: 1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(27 mg, 79%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.85 (m, 2H), 8.16 - 8.02 (m, 3H), 7.97 - 7.86 (m, 1H), 6.00 - 5.85 (m, 0.5H), 5.56 (s, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.40 - 5.28 (m, 1H), 4.77 - 4.65 (m, 0.5H), 4.02 - 3.89 (m, 1H), 3.76 - 3.64 (m, 0.5H), 3.40 (s, 3H), 3.36 - 3.31 (m, 0.5H), 3.09 - 2.89 (m, 3H), 1.64 - 1.48 (m, 3H), 1.44 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 458 (M+1)+.
화합물 A224: 2-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2-시아노-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트
밀봉된 튜브에 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(220 mg, 0.5 mmol), 아연 시아나이드(88 mg, 0.75 mmol), Pd(PPh3)4(60 mg, 0.05 mmol) 및 DMF(5 ml)를 충전하였다. 혼합물을 120℃에서 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 물을 첨가하고 수성 물질을 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA: PE = 25분 내에 0-100%)에 의해 정제하여 생성물 300 mg(미정제)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 B: 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴
DCM(4 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2-시아노-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-카르복실레이트(100 mg, 미정제)의 용액에 TFA(1.5 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고 물로 희석하였다. 혼합물을 EA로 추출하였다. 수성 상을 포화 소듐 카르보네이트 용액으로 pH를 12-13으로 조정하고 DCM으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(40 mg, 54%)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 290 (M+1)+.
단계 C: 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴
디옥산(2 mL) 중 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴(40 mg, 0.14 mmol)의 용액에 중간체 2(103 mg, 0.27 mmol) 및 DIPEA(54 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 생성물(50 mg, 69%)을 얻었다. MS: M/e 521 (M+1)+.
단계 D: 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴
MeOH(3 mL) 중 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴(50 mg)의 용액에 HCl(1 ml, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(25 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 437 (M+1)+.
단계 E: 2-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴
DMF(2 mL) 중 2-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로벤조니트릴(25 mg, 미정제)의 용액에 포타슘 카르보네이트(24 mg, 0.17 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(14 mg, 0.1 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켜 화합물 A224를 수득하였다. 화합물 A224를 함유하는 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 화합물 A224a(1 mg, 3.7%) 및 화합물 A224b(1 mg, 3.7%)를 얻었다.
화합물 A224a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 8.8, 5.5 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 1H), 7.45 (td, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.19 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.36 (s, 2H), 2.99 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.79 (s, 1H), 2.40 (s, 1H), 2.11 (s, 1H), 1.86 - 1.73 (m, 1H), 1.69 - 1.54 (m, 2H), 1.42 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.78 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A224b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.75 (dd, J = 8.7, 5.5 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 1H), 7.44 (td, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.97 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.22 - 3.11 (m, 1H), 2.76 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 2.10 - 1.85 (m, 2H), 1.80 - 1.64 (m, 2H), 1.52 (dd, J = 13.8, 7.5 Hz, 1H), 1.40 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.61 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A225: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-(메톡시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 (R)-2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-하이드록시프로판아미도)부타노에이트
CH2Cl2(100 mL) 중 메틸 (R)-2-아미노부타노에이트 하이드로클로라이드(7.2 g, 30 mmol), ((벤질옥시)카르보닐)-L-세린(5 g, 33 mmol), HATU(13.8 g, 36 mmol) 및 DIPEA(7.7 g, 60 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O, 수성 시트르산, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(9 g, 88.7%)을 얻었다. MS: M/e 339 (M+1)+.
단계 B: (3R,6S)-3-에틸-6-(하이드록시메틸)피페라진-2,5-디온
MeOH(80 mL) 중 메틸 (R)-2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-하이드록시프로판아미도)부타노에이트(9 g, 26.6 mmol)의 교반된 용액에 Pd/C(1 g, 물 중 10%)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 H2(1 atm) 하에서 주말에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시켰다. 여액을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고 여과시켰다. 케이크를 수집하고, 건조시켜 표제 화합물(2.8 g, 61%)을 얻었다. MS: M/e 173 (M+1)+.
단계 C: ((2R,5R)-5-에틸피페라진-2-일)메탄올
BH3-THF(1.0 M, 50 mL) 중 (3R,6S)-3-에틸-6-(하이드록시메틸)피페라진-2,5-디온(2.8 g, 16.3 mmol)의 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 0℃에서 켄칭하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 145 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH(50 mL) 중 ((2R,5R)-5-에틸피페라진-2-일)메탄올(미정제, 16.3 mmol)의 교반된 용액에 Et3N(6.4 g, 64 mmol)에 이어서, Boc2O(10.6 g, 48.8 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 60℃에서 주말에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻고, EA(100 mL)로 처리하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 중간체 디-tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)피페라진-1,4-디카르복실레이트(0.81 g)를 무색 오일로서 얻었고, 이를 EtOH(20 mL)에 용해시키고, 수성 NaOH(0.8 g, 5 mL H2O 중)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 95℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 시트르산으로 pH =10~11로 산성화하고, EA(10 mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(230 mg, 6%)을 얻었고, 이를 정치시킨(standing) 후 고체화하였다. MS: M/e 245 (M+1)+.
단계 E: tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
디옥산(10 mL) 중 중간체 2(326 mg, 0.85 mmol), tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)피페라진-1-카르복실레이트(230 mg, 0.94 mmol) 및 DIEPA(220 mg, 1.7 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 120℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(210 mg, 52%)을 얻었다. MS: M/e 476 (M+1)+.
단계 F: tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(메톡시메틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
THF(5 mL) 중 NaH(60%, 24 mg, 0.6 mmol)의 교반된 현탁액에 THF(2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(95 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, MeI(85.2 mg, 0.6 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 490 (M+1)+.
단계 G: 7-((2R,5R)-5-에틸-2-(메톡시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(메톡시메틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(미정제, 0.2 mmol)의 교반된 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 수성 Na2CO3로 pH=10~12로 염기성화하고, CH2Cl2: IPA(3: 1, 15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 중간체(60 mg, 0.154 mmol)를 얻었고, 이를 CH3CN(3 mL)에 용해시키고, 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(80 mg, 0.462 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(112 mg, 0.462 mmol) 및 DIPEA(200 mg, 1.54 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 14%)을 얻었다. MS: M/e 546 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-(메톡시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(5 mL) 중 7-((2R,5R)-5-에틸-2-(메톡시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.028 mmol)의 교반된 용액에 HCl(1,4-디옥산 중 4 M, 2 mL)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/0.5 mL)에 용해시키고, K2CO3(15.18 mg, 0.11 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(2 방울)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)에 붓고, EA(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2: MeOH=10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.85 (m, 2H), 8.15 - 7.90 (m, 4H), 5.63 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.14 - 3.99 (m, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 1H), 3.81 - 3.68 (m, 1H), 3.63 - 3.47 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.36 (s, 1H), 3.28 - 3.19 (m, 2H), 3.11 (s, 2H), 3.04 - 2.92 (m, 0.5H), 2.81 - 2.73 (m, 0.5H), 2.53 - 2.42 (m, 1H), 1.74 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.05 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 0.68 (t, J = 7.4 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A229: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-(하이드록시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-(하이드록시메틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(115 mg, 0.24 mmol)의 교반된 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻고, pH=10~12로 염기성화하고, CH2Cl2:IPA(3:1, 15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 CH2Cl2(5 mL)에 용해시키고, Et3N(48.5 mg, 0.48 mmol)을 첨가한 후, DMAP(3 mg, 0.024 mmol)에 이어서, TBSCl(54.7 mg, 0.363 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2: MeOH=10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 26%)을 얻었다. MS: M/e 490(M+1)+.
단계 B: 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.0613 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(32 mg, 0.18 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(44 mg, 0.18 mmol) 및 DIPEA(79 mg, 0.613 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2: MeOH=10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 51%)을 얻었다. MS: M/e 646 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-(하이드록시메틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-5-에틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(20 mg, 0.03 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/0.5 mL)에 용해시키고 K2CO3(16.56 mg, 0.12 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(2 방울)을 첨가하였다. 이어서, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2: MeOH=10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.91 - 8.84 (m, 2H), 8.14 - 7.98 (m, 3H), 7.93 (s, 1H), 5.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.19 - 4.03 (m, 1H), 3.96 - 3.73 (m, 2H), 3.63 - 3.55 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.27 - 3.19 (m, 2H), 3.01 - 2.74 (m, 2H), 2.59 - 2.37 (m, 1H), 1.79 - 1.57 (m, 2H), 1.52 - 1.40 (m, 3H), 1.04 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H), 0.68 (t, J = 7.2 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A232: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올
THF(8 ml) 중 1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르브알데히드(200 mg, 1.12 mmol)의 용액에 N2 하의 -60℃에서 MeMgBr(3M, 0.41 ml, 1.23 mmol)을 적가하였다. 용액을 자연적으로 실온으로 가온하고 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 H2O(10 ml)로 켄칭한 후 EA(10 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 수성 NaHCO3(10 ml), 염수(10 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시킨 후 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(217 mg, 100%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 195 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 ml) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), 1-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올(44 mg, 0.23 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.53 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(20:1)를 이용하는 분취용-TLC 및 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.90-7.80 (m, 1H), 5.58 (s, 2H), 5.34 (s, 1H), 3.87 (s, 0.5H), 3.85 (d, J = 4.3 Hz, 3H), 3.67 (d, J = 5.9 Hz, 0.5H), 3.27 (s, 2.5H), 3.23 (s, 3H), 3.15 (s, 0.5H), 2.91 (d, J = 11.1 Hz, 0.5H), 2.74 (s, 1H), 2.51 (d, J = 18.8 Hz, 1H), 2.37 (d, J = 11.5 Hz, 0.5H), 1.90-1.73 (m, 1H), 1.60-1.26 (m, 3H), 1.22 (t, J = 8.0 Hz, 3H), 0.89 - 0.75 (m, 3H), 0.69 - 0.56 (m, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A233: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올
THF(8 ml) 중 1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-카르브알데히드(200 mg, 1.12 mmol)의 용액에 N2 하의 -60℃에서 MeMgBr(3M, 0.41 ml, 1.23 mmol)을 적가하였다. 용액을 실온으로 자연적으로 가온하고 실온에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 H2O(10 ml)로 켄칭한 후 EA(10 ml x 2)로 추출하였다. 유기 층을 수성 NaHCO3(10 ml), 염수(10 ml)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시킨 후 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(217 mg, 100%)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 195 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 ml) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), 1-(1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)에탄-1-올(44 mg, 0.23 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.53 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(20:1)를 이용하는 분취용-TLC 및 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(13.6 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.94 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 24.7 Hz, 1H), 5.58 (s, 2H), 5.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.99-3.93 (m, 0.5H), 3.91 (s, 3H), 3.73 (q, J = 5.6 Hz, 0.5H), 3.27 (s, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.12 (d, J = 14 Hz, 0.5H), 2.93 (d, J = 9.0 Hz, 0.5H), 2.81-2.61 (m, 1H), 2.56-2.48 (m, 1H), 2.39 - 2.27 (m, 1H), 1.87-1.72 (m, 1H), 1.58-1.29 (m, 3H), 1.24 (dd, J = 19.6, 6.3 Hz, 3H), 0.90-0.73 (m, 3H), 0.69-0.56 (m, 3H) ppm. MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A236: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeCN(2 mL) 중 중간체 10B(100 mg, 0.29 mmol), 1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(230 mg, 1.1 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(290 mg, 1.2 mmol) 및 DIPEA(400 mg, 3.1 mmol)의 혼합물을 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(35 mg, 22%)을 얻었다. MS: M/e 536 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(25 mg, 0.047 mmol)의 용액에 HCl(1 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, NH3(2 mL, MeOH 중 7M)로 염기성화하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DCM(10 mL)으로 처리하고, 여과시키고 여액을 농축 건조시켜 표제 화합물(15 mg, 70%)을 얻었다. MS: M/e 452 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.033 mmol), K2CO3(25 mg, 0.18 mmol) 및 H2O(2 방울)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(20 mg, 0.12 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(3 mL x 5)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 A236을 수득하고, 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A236a(1.4 mg) 및 화합물 A236b(0.9 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A236a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.12 - 7.99 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.48 - 7.30 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.00 - 3.87 (m, 1H), 3.82 - 3.46 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 2.88 - 2.68 (m, 2H), 2.01 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.33 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.22 - 1.10 (m, 6H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A236b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.15 - 8.05 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.48 - 7.33 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.16 - 4.02 (m, 1H), 3.50 - 3.37 (m, 5H), 3.09 - 3.00 (m, 1H), 2.94 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.87 - 2.76 (m, 2H), 1.45 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A238: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMF(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.083 mmol), 1-브로모부트-2-인(23 mg, 0.17 mmol), K2CO3(34 mg, 0.25 mmol) 및 H2O(100 mg, 5.5 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 A238을 수득하고, 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A238a(1.64 mg) 및 화합물 A238b(2.16 mg)를 얻었다.
화합물 A238a(이전 피크). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.04 (dd, J = 9.6, 5.6 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.47 - 7.32 (m, 2H), 5.60 - 5.41 (m, 1H), 5.14 - 4.93 (m, 2H), 4.08 - 3.96 (m, 1H), 3.54 - 3.39 (m, 4H), 3.21 - 3.13 (m, 1H), 2.73 - 2.62 (m, 1H), 2.15 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.78 (m, 4H), 1.78 - 1.37 (m, 4H), 1.36 - 1.22 (m, 4H), 1.15 - 0.95 (m, 3H), 0.70 - 0.45 (m, 3H) ppm. MS: M/e 532 (M+1)+.
화합물 A238b(이후 피크). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.13 - 8.02 (m, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.49 - 7.34 (m, 2H), 5.53 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.25 - 4.11 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.13 - 3.04 (m, 1H), 2.97 - 2.64 (m, 2H), 2.38 - 2.09 (m, 2H), 2.08 - 1.76 (m, 4H), 1.72 - 1.34 (m, 3H), 1.33 - 1.17 (m, 4H), 1.10 - 0.84 (m, 3H), 0.79 - 0.51 (m, 3H) ppm. MS: M/e 532 (M+1)+.
화합물 A240: 3-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴
단계 A: 4-브로모-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드
DCM(100 mL) 중 4-브로모-1H-피라졸-5-카르복실산(2 g, 10.5 mmol)의 용액에 N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(5 g, 52.3 mmol), HATU(6 g, 15.7 mmol) 및 DIPEA(6.7 g, 52.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/ MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.9 g, 37%)을 얻었다. MS: M/e 234 (M+1)+.
단계 B: 4-브로모-1-에틸-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-3-카르복스아미드
DMF(15 mL) 중 4-브로모-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(0.9 g, 3.86 mmol)의 용액에 요오도에탄(1.8 g, 11.6 mmol), K2CO3(1.6 g, 11.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고 EA로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 4-브로모-1-에틸-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-3-카르복스아미드(540 mg) 및 4-브로모-1-에틸-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드(210 mg)를 얻었다. MS: M/e 262 (M+1)+.
단계 C: 1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에탄-1-온
THF(10 mL) 중 4-브로모-1-에틸-N-메톡시-N-메틸-1H-피라졸-3-카르복스아미드(0.3 g, 1.15 mmol)의 용액에 CH3MgBr(0.76 ml, 2.3 mmol, 3M)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 81%)을 얻었다. MS: M/e 217 (M+1)+
단계 D: 1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에탄-1-온(0.2 g, 0.92 mmol)의 용액에 NaBH4(52 mg, 1.38 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(180 mg, 89%)을 얻었다. MS: M/e 201 (M-17)+
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에탄-1-올(59 mg, 0.268 mmol)의 용액에 중간체 3(50 mg, 0.134 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(130 mg, 0.536 mmol) 및 DIPEA(173 mg, 1.34 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (40 mg, 52%)을 얻었다. MS: M/e 574 (M+1)+.
단계 F: 3-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴
THF(3 mL) /물(0.8 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-브로모-1-에틸-1H-피라졸-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.026 mmol)의 용액에 tBuXPhos Pd G3(5 mg)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 521 (M+1)+.
단계 G: 3-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴
DCM(1 mL) 중 3-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴(15 mg, 0.029 mmol)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 물에 용해시키고 수성 물질을 포화 수성 NaHCO3로 pH = 9로 조정하였다. 수성 층을 (DCM: i-PrOH = 4:1)로 추출하였다. 유기 층을 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(8 mg, 63%)을 얻었다. MS: M/e 437 (M+1)+.
단계 H: 3-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴
DMF(2 mL) 중 3-(1-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)에틸)-1-에틸-1H-피라졸-4-카르보니트릴(8 mg, 0.018 mmol)의 용액에 K2CO3(26 mg, 0.189 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(6 mg, 0.037 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaCl에 의해 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 15:1)에 의해 정제하고 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.04 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.24 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.25 - 4.12 (m, 2H), 4.10 - 3.75 (m, 1H),3.55 - 3.34 (m, 4H), 3.10 - 2.60 (m, 4H), 2.55 - 2.25 (m, 1H), 2.12- 1.97 (m, 1H), 1.80 -1.51 (m, 3H), 1.49 -1.35 (m, 6H), 1.05 -0.80 (m, 3H), 0.79 -0.60 (m, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A243 및 A244: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-3-(트리플루오로메틸)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-3-(트리플루오로메틸)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴; 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-3-(트리플루오로메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-3-(트리플루오로메틸)-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴
화합물 A243(15 mg, 43%) 및 화합물 A244(6 mg, 17%)를 통상의 기술자가 인지할 수 있는 적절한 조건 하에서 중간체 1a를 사용하여 화합물 A209에 대해 기재된 바와 유사한 절차에 따라 제조하였다. 단일 위치 이성질체를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 분리하였다.
화합물 A243(이전 이성질체): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.84 (m, 2H), 8.15 - 8.01 (m, 3H), 5.67 (s, 3H), 4.87 - 4.79 (m, 1H), 4.35 - 4.12 (m, 1H), 4.04 - 3.91 (m, 1H), 3.57 - 3.42 (m, 4H), 3.16 - 3.03 (m, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 2H), 1.52 - 1.38 (m, 6H), 1.07 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 525 (M+1)+.
화합물 A244(이후 이성질체): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.94 - 8.86 (m, 2H), 8.22 - 7.94 (m, 3H), 6.57 - 6.32 (m, 1H), 5.86 - 5.62 (m, 1.3H), 5.49 - 5.25 (m, 0.7H), 5.14 - 5.00 (m, 0.3H), 4.75 - 4.57 (m, 0.7H), 3.65 (s, 3H), 3.55 - 3.31 (m, 2H), 3.25 - 3.10 (m, 1H),-2.82 - 2.45 (m, 2H), 2.26 - 2.05 (m, 1H), 1.82 - 1.55 (m, 3H), 1.27 - 0.99 (m, 6H) ppm. MS: M/e 525 (M+1)+.
화합물 A245: 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 3-클로로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온
DMF(10 mL) 중 중간체 9(270 mg, 1.1 mmol)의 용액에 NCS(150 mg, 1.1 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, DCM:IPA(4:1, 60 mL x 4)로 추출하고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(320 mg, 미정제)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.38 (s, 1H), 5.63 (dd, J = 2.8 Hz，9.6 Hz, 1H), 3.89 - 3.79 (m, 1H), 3.69 - 3.57 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.30 - 2.15 (m, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.83 (m, 1H), 1.76 - 1.60 (m, 1H), 1.57 - 1.45 (m, 2H) ppm MS: M/e 285 (M+1)+.
단계 B: 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 3-클로로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5,7(6H)-디온(230 mg, 0.8 mmol)의 용액에 DIPEA(208 mg, 1.6 mmol)에 이어서, POCl3(245 mg, 1.6 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 희석하고, EA(50 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 CH3CN(4 mL)에 용해시키고, 중간체 1a(217 mg, 0.6 mmol, 광학 이성질체) 및 DIPEA(208 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, EA(60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH =15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 9%)을 얻었다. MS: M/e 537 (M+1)+.
단계 C: 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
DCM(1 mL) 중 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(40 mg, 0.0746 mmol)의 용액에 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM(40 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH =10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 60%)을 얻었다. MS: M/e 453 (M+1)+.
단계 D: 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(20 mg, 0.044 mmol) 및 K2CO3(12 mg, 0.088 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(5 mg, 0.066 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH =15:1) 및 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 50%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.85(m, 2H), 8.16 - 8.01 (m, 3H), 5.92 - 5.76 (m, 0.5H), 5.65 - 5.45 (m, 2H), 5.39 - 5.23 (m, 1H), 4.78 - 4.58 (m, 0.5H), 4.02 - 3.91 (m, 1H), 3.76 - 3.67 (m, 0.5H), 3.64 (s, 3H), 3.38 - 3.32 (m, 0.5H), 3.10 - 2.88 (m, 3H), 1.66 - 1.47 (m,3H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 492 (M+1)+.
화합물 A247: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 중간체 10B의 생성물(69 mg, 0.2 mmol), 1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(82.4 mg, 0.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(146 mg, 0.6 mmol) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(36 mg, 34%)을 얻었다. MS: M/e 534 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(36 mg, 0.067 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/0.5 mL)에 용해시키고 K2CO3(28 mg, 0.201 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(22.55 mg, 0.134 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(15 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.77 (s, 1H), 8.50 - 8.39 (m, 1H), 8.27 - 8.03 (m, 1H), 7.96 - 7.85 (m, 2H), 6.43 - 6.38 (m, 2H), 6.17 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.31 (s, 0.5H), 4.82 - 4.58 (m, 1H), 4.30 - 4.16 (m, 2H), 4.04 (s, 3H), 4.02 - 3.96 (m, 0.5H), 3.70 - 3.38 (m, 2H), 2.80 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.10 - 1.95 (m, 5H), 1.90 - 1.78 (m, 3H), 1.68 (d, J = 6.4 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 489 (M+1)+.
화합물 A254: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-브로모-2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로벤젠
BAST(4.4 g, 20 mmol) 및 MeOH(2 방울)의 용액에 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-온(2.2 g, 10 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3에 적가하고, EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.6 g, 67%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.61 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 9.2, 3.2 Hz, 1H), 7.00 (td, J = 8.4, 3.2 Hz, 1H), 2.05 (t, J = 18.4 Hz, 3H) ppm.
단계 B: 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로벤즈알데히드
THF(20 mL) 중 1-브로모-2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로벤젠(1.6 g, 6.69 mmol)의 교반된 용액에 n-BuLi(1.6 M, 4.6 mL, 7.36 mmol)을 -80℃ 미만에서 적가하였다. 이어서, DMF(602 mg, 8.03 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 -80℃에서 켄칭하고 EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(450 mg, 36%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.41 (s, 1H), 8.11 (dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 7.29 - 7.23 (m, 1H), 2.09 (t, J = 18.4 Hz, 3H) ppm.
단계 C: 1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올
THF(10 mL) 중 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로벤즈알데히드(188 mg, 1 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 0.37 mL, 1.1 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(132 mg, 65%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73 (dd, J = 9.6, 5.6 Hz, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 5.34 (q, J = 5.6 Hz, 1H), 1.98 (t, J = 18.4 Hz, 3H), 1.49 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 중간체 10B의 생성물(69 mg, 0.2 mmol), 1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(81.6 mg, 0.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(146 mg, 0.6 mmol) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(38 mg, 36%)을 얻었다. MS: M/e 532 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(38 mg, 0.07 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/0.5 mL)에 용해시키고 K2CO3(20 mg, 0.14 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(23.1 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.07 - 7.95 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.28 - 7.17 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.27 - 3.99 (m, 1H), 3.79 - 3.58 (m, 1.5H), 3.43 (s, 3H), 3.42 - 3.36 (m, 0.5H), 3.08 - 2.80 (m, 3H), 2.11 - 1.92 (m, 4H), 1.47 - 0.99 (m, 9H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A257: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 4-(N-(메틸
-d
3
)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(15 mL) 중 메틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(2.67 g, 10 mmol)의 용액에 Cs2CO3(9.78 g, 30 mmol)에 이어서, CD3I(4.35 g, 30 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.47 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 285 (M+1)+.
단계 B: 7-하이드록시-4-(메틸-d3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(40 mL) 중 메틸 4-(N-(메틸-d3)아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(2.47 g, 8.67 mmol)의 용액에 LiHMDS(~14 mL, 1 mol/L, ~1.6 당량)의 용액을 -70℃에서 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하고, 실온으로 서서히 가온하고, EA(80 mL)로 추출하였다. 수 층을 수집하고, 시트르산으로 pH 3~4로 처리하고, DCM:IPA(3:1, 60 mL x 3)로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.47 g, 66%)을 얻었다. MS:M/e 253(M+1)+.
단계 C: 4-(메틸-d3)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
THF/DMF(20 mL/10 mL) 중 7-하이드록시-4-(메틸-d 3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(1.47 g, 5.8 mmol)의 용액에 K2CO3(1.6 g, 11.6 mmol)에 이어서, 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)설포닐)메탄설폰아미드(2.07 g, 5.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE = 1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.87 g, 39%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.58 (dd, J = 2.8 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.10 - 4.00 (m, 1H), 3.82 - 3.70 (m, 1H), 2.26 - 1.96 (m, 3H), 1.82 - 1.63 (m, 3H) ppm. MS: M/e 385 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 4-(메틸-d3)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(115 mg, 0.3 mmol) 및 (2R,5S)-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진(100 mg, 0.33 mmol)의 용액에 DIPEA(78 mg, 0.62 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 60시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(90 mg, 56%)을 얻었다. MS: M/e 539 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(90 mg, 0.167 mmol)의 용액에 TFA(6 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. TFA의 또 다른 부분(10 mL)을 첨가하고 반응물을 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM:IPA(4:1, 60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(45 mg, 67%)을 얻었다. MS: M/e 455 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(45 mg, 0.1 mmol) 및 K2CO3(69 mg, 0.5 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(22 mg, 0.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(24 mg, 48%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.15 - 8.02 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.46 - 7.35 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.15 - 4.05 (m, 0.5H), 3.96 - 3.88 (m, 0.5H), 3.71 - 3.59 (m, 1H), 3.44 - 3.36 (m, 0.5H), 3.31 - 3.28 (m, 2H), 3.07 - 2.90 (m, 1H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 0.5H), 1.44 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H), 1.33 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H), 1.26 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H), 1.17 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.0 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 494 (M+1)+.
화합물 A258: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 4-아세트아미도-5-플루오로-1H-피라졸-3-카르복실레이트
CH3CN(150 mL) 중 메틸 4-아세트아미도-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(4 g, 15 mmol)의 용액에 Selectfluor(10.35 g, 30 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(160 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.24 g, 8%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.21 (s, 3H) ppm.MS: M/e 202 (M+1)+.
단계 B: 메틸 4-아세트아미도-5-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
THF(10 mL) 중 메틸 4-아세트아미도-5-플루오로-1H-피라졸-3-카르복실레이트(830 mg, 4.13 mmol) 및 TsOH.H2O(76 mg, 0.4 mmol)의 용액에 3,4-디하이드로-2H-피란(693 mg, 8.26 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(400 mg, 34%)을 얻었다. MS: M/e 286(M+1)+.
단계 C: 메틸 5-플루오로-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(10 mL) 중 메틸 4-아세트아미도-5-플루오로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(610 mg, 2.14 mmol)의 용액에 Cs2CO3(2.09 g, 6.42 mmol)에 이어서, CH3I(0.91 g, 6.42 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.58 g, 82%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.22 - 6.14 (m, 1H), 4.09 - 3.98 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.76 - 3.64 (m, 1H), 3.17 - 3.10 (m, 3H), 2.45 - 2.28 (m, 1H), 2.16 - 2.07 (m, 1H), 2.01 - 1.84 (m, 4H), 1.78 - 1.63 (m, 3H) ppm. MS: M/e 300 (M+1)+.
단계 D: 3-플루오로-7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(10 mL) 중 메틸 5-플루오로-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(0.58 g, 1.93 mmol)의 용액에 LiHMDS의 용액(3.1 mL, 1 mol/L)을 -70℃에서 적가하였다. 반응물을 -70℃에서 2시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하고, EA(80 mL)로 추출하였다. 수 층을 수집하고, 시트르산으로 PH 3~4로 처리하고, DCM:IPA(4:1, 60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EA/PE를 이용하는 슬러리화에 적용하여 표제 화합물(95 mg, 18%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.98 (s, 1H), 5.86 (d, J = 10 Hz, 1H), 5.76 (s, 1H), 3.94 - 3.84 (m, 1H), 3.61 - 3.50 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 2.25 - 2.10 (m, 1H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.92 - 1.82 (m, 1H), 1.72 - 1.57 (m, 1H), 1.54 - 1.44 (m, 2H) ppm. MS: M/e 268 (M+1)+.
단계 E: 3-플루오로-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
DCM(6 mL) 중 3-플루오로-7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(95 mg, 0.355 mmol)의 용액에 DMAP(1 mg) 및 TEA(107 mg, 1.06 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, DCM(1 mL) 중 Tf2O(100 mg, 0.355 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, DCM(40 mL x 3)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 400 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 3-플루오로-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(미정제, 0.355 mmol) 및 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(중간체 1a)(95 mg, 0.355 mmol, 광학 이성질체)의 용액에 DIPEA(130 mg, 1.06 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH= 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(8 mg, 2단계에 대해 4%)을 얻었다. MS: M/e 520 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(8 mg, 0.0154 mmol)의 용액에 TFA(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축 건조시켜 표제 화합물(8 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 436 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-3-플루오로-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(8 mg, 미정제) 및 K2CO3(25 mg, 0.154 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(3 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MEOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.5 mg, 2단계에 대해 61%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 - 8.87 (m, 2H), 8.16 - 7.96 (m, 3H), 6.35 - 6.18 (m, 1H), 5.49 - 5.41 (m, 1H), 5.24 - 5.12 (m, 1H), 4.65 - 4.35 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.56 - 3.42 (m, 1H), 3.40 - 3.31 (m, 2H), 2.90 - 2.65 (m, 2H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 1.75 - 1.53 (m, 3H), 1.25 - 1.19 (m, 3H), 1.17 - 1.08 (m, 3H) ppm. MS: M/e 475 (M+1)+.
화합물 A259: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 (R)-2-((2S,3R)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-하이드록시부탄아미도)부타노에이트
DCM(300 mL) 중 ((벤질옥시)카르보닐)-L-트레오닌(15.0 g, 0.06 mol), 메틸 (R)-2-아미노부타노에이트(6.9 g, 0.06 mol) 및 DIPEA(15.5 g, 0.12 mol)의 용액에 HATU(34.3 g, 0.09 mol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 의해 켄칭하고 물(500 mL x 2), HCl(200 mL, 1 N) 및 염수(500 mL x 2)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(19 g, 89%)을 얻었다. MS: M/e 353 (M+1)+.
단계 B: (3R,6S)-3-에틸-6-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-2,5-디온
MeOH(100 mL) 중 (3R,6S)-3-에틸-6-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-2,5-디온(19 g, 0.05 mol)의 용액에 Pd/C(1.9 g, 물 중 10%)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2(50 psi) 분위기 하의 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 여과시켰다. 여액을 밀봉된 튜브에서 100℃로 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과시키고 농축시켜 표제 화합물(5.9 g, 59%)을 얻었다. MS: M/e 187 (M+1)+.
단계 C: (R)-1-((2R,5R)-5-에틸피페라진-2-일)에탄-1-올
BH3 THF 용액(200 mL) 중 (3R,6S)-3-에틸-6-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-2,5-디온(5.9 g, 0.03 mol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 밤새 환류 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. MeOH(60 mL)를 서서히 첨가한 후, 5M HCl(16 mL)을 첨가하고 반응 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 생성된 현탁액을 여과시켜 표제 화합물(3.2 g, 45%)을 얻었다. MS: M/e 159(M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-1-카르복실레이트
MeOH(10 mL) 중 (R)-1-((2R,5R)-5-에틸피페라진-2-일)에탄-1-올(1 g, 4.4 mmol), Et3N(1.3 g, 13.2 mmol)의 용액에 Boc-무수물(2.2 g, 10 mmol)을 실온에서 15분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EtOH(40 mL)에 용해시키고 물(20 mL) 중 NaOH(880 mg, 22 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(10 : 1, 20 mL)에 용해시키고 여과시켰다. 생성된 여액을 농축시켜 표제 화합물(820 mg, 94%)을 얻었다.
단계 E: tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(3 mL) 중 4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(270 mg, 0.7 mmol), tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-1-카르복실레이트(260 mg, 1 mmol) 및 DIPEA(450 mg, 3.5 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 90℃로 밤새 가열하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 32%)을 얻었다. MS: M/e 490 (M+1)+.
단계 F: 7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-2-에틸-5-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(110 mg, 0.2 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaOH(1 N)에 의해 중화시키고 DCM(20 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 농축시켜 표제 화합물(80 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 G: 7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMSO(2 mL) 중 7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.2 mmol), 6-(1-클로로에틸)퀴녹살린(190 mg, 1.0 mmol) 및 DIPEA(130 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 120℃로 마이크로웨이브에서 2시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 혼합물을 EA 및 염수로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용-TLC(DCM:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 2%)을 얻었다. MS: M/e 546 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DCM(5 mL) 중 7-((2R,5R)-5-에틸-2-((R)-1-하이드록시에틸)-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(110 mg, 0.2 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 NaOH(1 N)로 중화시키고 DCM(20 mL x 2)으로 추출하였다. 유기 층을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DMF(3 mL)에 용해시킨 후, K2CO3(13 mg) 및 요오도아세토니트릴(16 mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O로 켄칭하고 EA(20 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(0.21 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.89 - 8.87 (m, 2H), 8.50 (br s, 1H), 8.14 - 7.91 (m, 4H), 5.49 - 5.47 (m, 2H), 5.35 - 5.33 (m, 1H), 4.66 (s, 3H), 4.06 - 4.04 (m, 0.5H), 3.87 - 3.85 (m, 0.5H), 3.47 (s, 3H), 2.80 - 2.74 (m, 2H), 2.22 - 2.17 (m, 1H), 2.03 - 2.02 (m, 1H), 1.65 - 1.55 (m, 2H), 1.49 - 1.42 (m, 2H), 0.91 - 0.60 (m, 7H). MS: M/e 465 (M+1)+.
화합물 A260: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 7(361 mg, 0.73 mmol) 및 중간체 1a(200 mg, 0.73 mmol, 광학 이성질체)의 용액에 DIPEA(190 mg, 1.46 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(356 mg, 80%)을 얻었다. MS: M/e 608 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-(4-메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(350 mg, 0.576 mmol)의 용액에 트리플루오로메탄설폰산(6 mL)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 18시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 얼음물로 켄칭하고, 포화 Na2CO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM:IPA(4:1, 80 mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 43%)을 얻었다. MS: M/e 404 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.248 mmol) 및 K2CO3(70 mg, 0.5 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(46 mg, 0.278 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 12:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(24 mg, 21%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.88 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.15 - 8.03 (m, 3H), 7.74 (s, 1H), 5.49 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.03 - 4.89 (m, 1H), 4.45 - 4.26 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 1H), 3.53 - 3.44 (m, 1H), 3.14 - 3.04 (m, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 2H), 1.50 - 1.41 (m, 6H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 443 (M+1)+.
화합물 A261: 2-(7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH2Cl2(60 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.3 g, 10 mmol) 및 벤즈알데히드(1.23 g, 12 mmol)의 혼합물을 2시간 동안 교반한 후, NaBH(OAc)3(4.24 g, 20 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 주말에 걸쳐 교반하였다. H2O(50 mL)를 혼합물에 첨가하고 CH2Cl2(60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.7 g, 84%)을 얻었다. MS: M/e 321 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-포르밀-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH2Cl2(10 mL) 중 옥살릴 디클로라이드의 생성물(2.14 g, 16.88 mmol)의 교반된 용액에 CH2Cl2(10 mL) 중 DMSO(2.6 g, 33.76 mmol)의 용액을 -78℃에서 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, CH2Cl2(20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-(하이드록시메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.7 g, 8.44 mmol)의 용액을 -78℃에서 20분의 기간에 걸쳐 적가한 후, 추가로 30분 동안 교반한 후, Et3N(6.82 g, 67.52 mmol)을 -78℃에서 적가하고 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 -70℃에서 켄칭한 후, 실온으로 가온하고, 혼합물을 CH2Cl2(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 H2O(20 mL)로 처리하고 PE:TBME(30 mL x 3, 1:1, v/v)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(2.3 g, 86%)을 얻었고, 이는 직접 다음 단계에서 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.76 (s, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 5H), 4.21 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 4.05 (s, 1H), 3.96 (s, 2H), 3.42 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.24 (dd, J = 13.6, 5.2 Hz, 1H), 3.01 (dd, J = 11.6, 4.4 Hz, 1H), 2.37 (dd, J = 11.6, 2.4 Hz, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.13 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm MS: M/e 319 (M+1)+.
단계 C: tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-(디플루오로메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH2Cl2(20 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-포르밀-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(2.3 g, 7.23 mmol)의 교반된 용액에 CH2Cl2(10 mL) 중 DAST(2.32 g, 14.5 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 반응물을 한 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3로 켄칭하고 CH2Cl2(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.33 g, 54%)을 얻었다. MS: M/e 341 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5R)-5-(디플루오로메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
IPA/AcOH(30 mL/2 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-4-벤질-5-(디플루오로메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(1.3 g, 3.85 mmol)의 교반된 용액에 Pd/C(300 mg, 물 중 10%)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 H2(4 atm) 하에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시켰다. 여액을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(820 mg, 86%)을 얻었다. MS: M/e 195 (M-56+1)+.
단계 E: tert-부틸 (2R,5R)-5-(디플루오로메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
톨루엔(5 mL) 중 중간체 2의 생성물(55 mg, 0.22 mmol), tert-부틸 (2R,5R)-5-(디플루오로메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(55 mg, 0.22 mmol), Pd2(dba)3(37 mg, 0.04 mmol), XPhos(38 mg, 0.08 mmol) 및 Cs2CO3(215 mg, 0.66 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(30 mL)로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(41 mg, 19%)을 얻었다. MS: M/e 482 (M+1)+.
단계 F: 7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5R)-5-(디플루오로메틸)-2-메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(41 mg, 0.085 mmol)의 교반된 용액에 TFA(1.5 mL)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3로 pH=8~9로 염기성화한 후, CH2Cl2(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(28 mg, 85%)을 얻었다. MS: M/e 382 (M+1)+.
단계 G: 7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(28 mg, 0.073 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(25.6 mg, 0.147 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(53.2 mg, 0.219 mmol) 및 DIPEA(94 mg, 0.73 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 26%)을 얻었다. MS: M/e 538 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 7-((2R,5R)-2-(디플루오로메틸)-5-메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(10 mg, 0.019 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 DMF/H2O(3 mL/0.5 mL)에 용해시키고 K2CO3(7.8 mg, 0.057 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(6.27 mg, 0.038 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(15 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(0.24 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 - 8.84 (m, 2H), 8.16 - 7.93 (m, 4H), 6.62 - 6.32 (m, 1H), 5.67 (d, J = 30.8 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 24 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.04 - 3.49 (m, 4H), 3.45 (s, 3H), 3.22 - 3.15 (m, 0.5H), 3.03 - 2.93 (m, 1.5H), 2.50 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 1.50 - 1.43 (m, 3H), 1.24 - 1.04 (m, 3H) ppm. MS: M/e 493 (M+1)+.
화합물 A262: 2-(7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
DMF(10 mL) 중 퀴녹살린-6-카르브알데히드(1.58 g, 10 mmol) 및 세슘 플루오라이드(200 mg, 1.32 mmol)의 용액에 (디플루오로메틸)트리메틸실란(2.48 g, 20 mmol)을 N2 하에서 적가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 2N HCl 용액(10 mL)으로 켄칭하고, 물로 희석하고, EA(60 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE/EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 23%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.97 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 8.19 - 8.10 (m, 2H), 7.96 - 7.90 (m, 1H), 6.54 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.36 - 6.03 (m, 1H), 5.19 - 5.05 (m, 1H) ppm. MS: M/e 211 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
밀봉된 튜브에 2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(105 mg, 0.5 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(160 mg, 0.75 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(364 mg, 1.5 mmol), DIPEA(258 mg, 2 mmol) 및 아세토니트릴(3 ml)을 충전하였다. 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하고 수성 물질을 EA로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA:PE=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(45 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 407 (M+1)+.
단계 C: 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2,2-디플루오로에틸)퀴녹살린
DCM(2 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(50 mg)에 TFA(1 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시키고 물로 희석하였다. 혼합물을 EA로 추출하였다. 수성 물질을 포화 소듐 카르보네이트 용액으로 pH를 12-13으로 조정하고 DCM:MeOH(10:1)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(30 mg, 81%)을 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 307 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
아세토니트릴(2 mL) 중 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2,2-디플루오로에틸)퀴녹살린(30 mg, 0.1 mmol)에 중간체 2(76 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(65 mg, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 74%)을 얻었다. MS: M/e 538 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1.5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg)의 용액에 HCl(2 ml, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(30 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 454 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(2,2-디플루오로-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 미정제)의 용액에 포타슘 카르보네이트(55 mg, 0.4 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(25 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=13:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1 mg, 2%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.92 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 8.21 (s, 1H), 8.14 (dd, J = 12.5, 8.6 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 13.8, 6.2 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 6.60-6.25 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.26 (s, 2H), 3.70 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.96 (s, 2H), 2.51 - 2.30 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 493 (M+1)+.
화합물 A263: 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 5-클로로-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트
DMF(8 mL) 중 메틸 4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(2.24 g, 8 mmol)의 용액에 NCS(1.28 g, 9.6 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE=1:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(890 mg, 35%)을 얻었다. MS: M/e 316 (M+1)+.
단계 B: 3-클로로-7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
THF(20 mL) 중 메틸 5-클로로-4-(N-메틸아세트아미도)-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-3-카르복실레이트(1.07 g, 3.4 mmol)의 용액에 LiHMDS(6.8 mL, 1 mol/L)의 용액을 -70℃에서 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 물로 켄칭하고, 실온으로 서서히 가온하고, EA(100 mL)로 추출하였다. 수 층을 수집하고, 시트르산으로 pH 3~4로 처리하고, DCM:IPA(4:1, 60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MEOH=10:1)에 의해 정제하고 추가로 EA/PE를 이용하는 슬러리화에 적용하여 표제 화합물(140 mg, 15%)을 얻었다. MS:M/e 284 (M+1)+.
단계 C: 3-클로로-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트
DCM(5 mL) 중 3-클로로-7-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(140 mg, 0.494 mmol)의 용액에 DMAP(1 mg) 및 TEA(175 mg, 1.5 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 이어서, DCM(1 mL) 중 Tf2O(140 mg, 0.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 416 (M+1)+.
단계 D: 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 3-클로로-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(미정제) 및 6-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(중간체 1a)(90 mg, 0.33 mmol, 광학 이성질체)의 용액에 DIPEA(129 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하의 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 2단계에 대해 19%)을 얻었다. MS: M/e 536 (M+1)+.
단계 E: 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.093)의 용액에 TFA(3 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM(50 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH =10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 47%)을 얻었다. MS: M/e 452 (M+1)+.
단계 F: 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온, 또는 3-클로로-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(20 mg, 0.044 mmol) 및 K2CO3(12 mg, 0.088 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(5 mg, 0.066 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg, 22%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 - 8.85 (m, 2H), 8.14 - 8.01 (m, 3H), 5.59 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.86 - 4.80 (m, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 1H), 4.02 - 3.93 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.49 - 3.42 (m, 1H), 3.13 - 3.02 (m, 1H), 2.98 - 2.84 (m, 2H), 1.44 (t, J = 6.0 Hz, 6H), 1.06 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A265: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(3,4-디메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(2 mL) 중 (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진(365 mg, 1.10 mmol) 및 중간체 8(568 mg, 1.10 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA(426 mg, 3.30 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(600 mg, 78%)을 얻었다. MS: M/e 700 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
TFA(5 mL) 및 TFOH(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(3,4-디메톡시벤질)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(600 mg, 0.858 mmol)의 용액을 70℃에서 36시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시키고 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 DCM(50 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 38%)을 얻었다. MS: M/e 466 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(8 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(150 mg, 0.323 mmol) 및 K2CO3(134 mg, 0.969 mmol)의 용액에 실온에서 2-요오도아세토니트릴(59 mg, 0.355 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물(23 mg, 14%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.59 (s, 1H), 8.08-7.62 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.32-7.30 (m, 1H), 7.29-7.26 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.13 (s, 2H), 4.27-3.97 (m, 1H), 3.58-3.47 (m, 1H), 3.26-3.19 (m, 1H), 3.04-3.01 (m, 0.5H), 2.86-2.58 (m, 1H), 2.52-2.02 (m, 2.5H), 1.90-1.49 (m, 4H), 1.39-1.25 (m, 3H), 1.05-0.85 (m, 3H), 0.70-0.55 (m, 3H). MS: M/e 505 (M+1)+.
화합물 A266: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 중간체 9(125 mg, 0.5 mmol)의 용액에 DIPEA(129 mg, 1 mmol)에 이어서, POCl3(135 mg, 1 mmol) 및 한 방울의 DMF를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, (2R,5S)-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진(120 mg, 0.4 mmol) 및 DIPEA(645 mg, 5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 5%)을 얻었다. MS: M/e 537 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(15 mg, 0.0279 mmol)의 용액에 TFA(4 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었다. MS: M/e 453 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(미정제) 및 K2CO3(40 mg, 0.27 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(5 mg, 0.055 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg, 2단계에 대해 36%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.16 - 8.01 (m, 1H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.36 (m, 2H), 5.90 - 5.46(m, 3H), 5.38 - 5.30 (m, 0.5H), 5.17 - 5.08 (m, 0.5H), 4.75 - 4.60 (m, 0.5H), 4.12 - 4.00 (m, 0.5H), 3.94 - 3.85 (m, 0.5H), 3.75 - 3.45 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.05 - 2.68 (m, 2H), 2.08 - 2.00 (m, 0.5H), 1.59 (d, J = 6.8 Hz, 0.5H), 1.51(d, J = 6.8 Hz, 0.5H), 1.37 - 1.25 (m, 5H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 0.92 (d, J = 6.4 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 492 (M+1)+.
화합물 A267: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-클로로-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(5 mL) 중 중간체 9(0.2 g, 0.8 mmol)의 용액에 DIPEA(207 mg, 1.6 mmol) 및 POCl3(245 mg, 1.6 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다.
단계 B: tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(5 mL) 중 (미정제, 0.8 mmol)의 용액에 DIPEA(1 g, 8 mmol) 및 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(516 mg, 2.4 mmol)를 80℃에서 밤새 첨가하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(270 mg)을 얻었다. MS: M/e 447 (M+1)+.
단계 C: tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-브로모-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-2,5-디메틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)피페라진-1-카르복실레이트(270 mg, 0.605 mmol)의 용액에 NBS(162 mg, 0.91 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg)을 얻었다. MS: M/e 525 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2R,5S)-4-(3,4-디메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
디옥산(10 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3-브로모-4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(0.27 g, 0.52 mmol)의 용액에 K2CO3(142 mg, 1.04 mmol), Pd(dppf)Cl2(39 mg, 0.05 mmol) 및 2,4,6-트리메틸-1,3,5-트리옥산(2.08 mL, 1M, 2.08 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표적 화합물(70 mg)을 얻었다. MS: M/e 461(M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
DCM(4 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(3,4-디메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(70 mg, 0.15 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 물로 용해시키고 포화 NaHCO3로 pH=9로 조정하였다. 수성 층을 (DCM: IPA = 4:1)로 추출하고 유기 층을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg)을 얻었다. MS: M/e 361 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(40 mg, 0.07 mmol)의 용액에 1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에탄-1-올(45 mg, 0.22 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(71 mg, 0.29 mmol) 및 DIPEA(94 mg, 0.7 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(25 mg, 40%)을 얻었다. MS: M/e 551 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
MeOH(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(25 mg, 0.045 mmol)의 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL)/물(0.4 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3,4-디메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(미정제, 0.05 mmol) 미정제물의 용액에 K2CO3(31 mg, 0.23 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 후, 2-요오도아세토니트릴(38 mg, 0.225 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaCl에 의해 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 농축시켜 화합물 A267을 함유하는 잔류물을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A267a(0.84 mg) 및 화합물 A267b(0.63 mg)를 얻었다.
화합물 A267a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.06 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 5.81 - 5.59 (m, 1H), 5.51 (t, J = 12.6 Hz, 2H), 5.12 - 4.82 (m, 1H), 3.95 - 3.84 (m, 1H), 3.68 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.53 - 3.38 (m, 1H), 2.83 - 2.68 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.02 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.39 - 1.17 (m, 6H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 3H). MS: M/e 506 (M+1)+.
화합물 A267b(이후 피크) : 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.16 - 8.05 (m, 1H), 7.43 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 5.53-5.49 (m, 2H), 5.43 - 5.28 (m, 1H), 4.75 - 3.98 (m, 2H), 3.62 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 2H), 2.84 - 2.78 (s, 2H), 2.70 (d, J = 13.9 Hz, 3H), 1.56-1.52 (m, 3H), 1.26 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H).MS: M/e 506 (M+1)+.
화합물 A268: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 퀴녹살린-6-카르복실레이트-2,3-d2
THF(20 mL) 중 메틸 2,3-디클로로퀴녹살린-6-카르복실레이트(1.27 g, 5 mmol)의 교반된 용액에 PddppfCl2(283 mg, 0.5 mmol) 및 NaBD4(420 mg, 10 mmol)에 이어서, DIPEA(1.29 g, 10 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 N2 하의 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CD3OD(5 mL)로 켄칭하고 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 붓고, EA(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(373 mg, 39%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.66 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H) ppm. MS: M/e 191 (M+1)+.
단계 B: 퀴녹살린-6-카르복실-2,3-d2산
THF(10 mL) 중 메틸 퀴녹살린-6-카르복실레이트-2,3-d2(373 mg, 1.96 mmol)의 교반된 용액에 H2O(2 mL) 중 LiOH.H2O(165 mg, 3.92 mmol)의 용액을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 HCl로 pH=3~4로 산성화하고 EA(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(334 mg, 97%)을 얻었다. MS: M/e 177 (M+1)+.
단계 C: N-메톡시-N-메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드-2,3-d2
DMF(10 mL) 중 퀴녹살린-6-카르복실-2,3-d2산(334 mg, 1.9 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(222.3 mg, 2.28 mmol), HATU(8.71 mg, 2.28 mmol) 및 DIPEA(490 mg, 3.8 mmol)의 혼합물을 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(20 mL)에 붓고 EA(15 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(296 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 220 (M+1)+.
단계 D: 1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에탄-1-온
THF(10 mL) 중 N-메톡시-N-메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드-2,3-d2(110 mg, 0.5 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 0.2 mL, 0.6 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 반응물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(48 mg, 55%)을 얻었다. MS: M/e 175 (M+1)+.
단계 E: 1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에탄-1-올
EtOH(5 mL) 중 1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에탄-1-온(48 mg, 0.276 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(8.4 mg, 0.22 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 반응물을 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(44 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 177 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 중간체 10B(69 mg, 0.2 mmol), 1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에탄-1-올(44 mg, 0.25 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(146 mg, 0.6 mmol) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 20%)을 얻었다. MS: M/e 504 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일-2,3-d2)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(20 mg, 0.04 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었다. DMF/H2O(3 mL/0.5 mL) 중 생성된 잔류물의 용액에 K2CO3(16.6 mg, 0.12 mmol)에 이어서, 2-요오도아세토니트릴(13.3 mg, 0.08 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2:MeOH=10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(6 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.14 - 8.01 (m, 3H), 7.93 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.60 (s, 1H), 4.28 (s, 0.5H), 4.02 - 3.80 (m, 1H), 3.74 - 3.65 (m, 1H), 3.51 - 3.45 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.14 - 3.05 (m, 0.5H), 2.98 - 2.82 (m, 2H), 2.22 (d, J = 12.0 Hz, 0.5H), 1.51 - 1.41 (m, 4.5H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 459 (M+1)+.
화합물 A269: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물
CH3CN(10 mL) 중 중간체 10B(345 mg, 2 mmol), 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올 및 1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올의 혼합물(396 mg, 2 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(729 mg, 3 mmol) 및 DIPEA(1.29 g, 10 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(50 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 58%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 및 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴의 혼합물
MeOH(5 mL) 중 단계 A의 생성물(300 mg, 0.58 mmol)에 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4.0 M)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 수성 Na2CO3로 희석하고 CH2Cl2: IPA(3 :1, v/v, 50 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 및 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온의 혼합물(110 mg, 44%)인 표제 생성물을 얻었다. 생성물을 DMF(4 mL)에 용해시키고 K2CO3(141 mg, 1.02 mmol)에 이어서, 2-클로로아세토니트릴(77 mg, 1.02 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A269(100 mg)를 혼합물로서 얻었고, 이를 3회의 카이랄 분취용-HPLC 조건에 의해 각각, 4개의 이성질체, 화합물 A269a(14 mg), 화합물 A269b(18 mg), 화합물 A269c(5 mg) 및 화합물 A269d(3 mg)를 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A269a(제1 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (s, 1H), 8.04 - 7.96 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.88 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.94 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.49-3.45 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.03 (m, 1H), 2.96 - 2.85 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.54 - 1.38 (m, 6H), 1.05 (d, J = 6.5 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269b(제2 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴, 또는 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(2-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.97 (s, 2H), 7.92 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.79 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.73 - 3.62 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.84 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.21 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.45 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.26 - 1.16 (m, 6H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269c(제3 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((R)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.78 (s, 1H), 8.09 - 7.86 (m, 4H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.59 (s, 2H), 3.80 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.73 - 3.61 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.86 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.21 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.22 (dd, J = 11.6, 6.4 Hz, 6H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269d(제4 피크, 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴): 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99- 7.90 (m, 3H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.36 - 4.20 (m, 1H), 3.99 - 3.90 (m, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.48 - 1.39 (m, 6H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269 (RII) 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-메틸퀴녹살린
7-브로모-2-클로로퀴녹살린(20 g, 82 mmol) 및 철 아세틸아세토네이트(2.9 g, 8.2 mmol)를 건조 THF(150 mL)에 용해시켰다. 메틸 마그네슘 브로마이드(에틸 에테르 중 3M)의 용액(30 ml, 91 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 EA로 희석하고 1M 수성 HCl로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하고 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 5:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(14.5 g, 79%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.89 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.9, 2.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H). MS: M/e 223 (M+1)+.
단계 B: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
DMF/H2O(300 mL) 중 7-브로모-2-메틸퀴녹살린(22 g, 0.1 mol) 및 Cs2CO3(48.6 g, 0.15 mol)의 용액에 1-(비닐옥시)부탄(80 g, 0.8 mol), Pd(OAc)2(1.8 g, 0.08 mol) 및 DPPP(9.88 g, 0.24 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하의 116℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 2N HCl(175 mL)로 처리하고 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(150 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(13 g, 70%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.83 (s, 1H), 8.60 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 1.6 Hz, 8.8 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.76 (s, 3H) ppm.MS: M/e 187 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(170 ml) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(17.7 g, 95.16 mmol)의 용액에 NaBH4(6.7 g, 0.17 mol)를 여러 부분으로 나누어 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 의해 켄칭하고, DCM(300 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(14 g, 79%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.17 - 5.09 (m, 1H), 2.77 (s, 3H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 189(M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(5 ml) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(200 mg, 1.1 mmol), 중간체 10B(345 mg, 1 mmol) 및 DIPEA(645 mg, 5 mol)의 용액에 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(729 mg. 3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 병에서 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 물을 첨가하여 생성된 잔류물을 희석하고, EA(80 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 38%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(5 ml) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(200 mg, 0.38 mmol)의 용액에 디옥산(2 mL) 중 4M HCl의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 디옥산(2 mL) 중 4M HCl의 또 다른 부분을 첨가하고 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 흑색 잔류물(150 mg)을 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(8 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(150 mg, 0.34 mmol) 및 K2CO3(524 mg, 3.8 mmol)의 혼합물에 2-클로로아세토니트릴(114 mg, 1.52 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH=15/1)에 의해 정제하여 부분입체이성질체 화합물 A269c 및 화합물 A269d의 혼합물인, 표제 화합물(30 mg, 2단계에 대해 16%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 - 8.77 (m, 1H), 8.11 - 7.90 (m, 4H), 5.57 (s, 1H), 5.49 - 5.43 (m, 2H), 5.01 - 4.90 (m, 0.5H), 4.70 - 4.50 (m, 1H), 4.35 - 4.20 (m, 0.5H), 3.99 - 3.88 (m, 0.5H), 3.84 - 3.76 (m, 0.5H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.52 - 3.44 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.14 - 3.04 (m, 0.5H), 2.97 - 2.82 (m, 1.5H), 2.78 - 2.75 (m, 3H), 2.26 - 2.18 (m, 0.5H), 1.50 - 1.38 (m, 4.5H), 1.28 - 1.16 (m, 4H), 1.08 - 1.05 (m, 1.5H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269d는 하기와 같은 또 다른 방법을 통해서 합성할 수도 있다:
화합물 A269d: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-메틸퀴녹살린
7-브로모-2-클로로퀴녹살린(20 g, 82 mmol) 및 철 아세틸아세토네이트(2.9 g, 8.2 mmol)를 건조 THF(150 mL)에 용해시켰다. 메틸 마그네슘 브로마이드(에틸 에테르 중 3M)(30 ml, 91 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 EA로 희석하고 1M 수성 HCl로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하고 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE : EA = 5:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(14.5 g, 79%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.89 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.9, 2.0 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H). MS: M/e 223 (M+1)+.
단계 B: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
DMF/H2O(300 mL) 중 7-브로모-2-메틸퀴녹살린(22 g, 0.1 mol) 및 Cs2CO3(48.6 g, 0.15 mol)의 용액에 1-(비닐옥시)부탄(80 g, 0.8 mol), Pd(OAc)2(1.8 g, 0.08 mol) 및 DPPP(9.88 g, 0.24 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하의 116℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 2N HCl(175 mL)로 처리하고 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(150 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(13 g, 70%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.83 (s, 1H), 8.60 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 1.6 Hz, 8.8 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.76 (s, 3H) ppm.MS: M/e 187 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(170 ml) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(17.7 g, 95.16 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(6.7 g, 0.17 mol)를 여러 부분으로 나누어 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 의해 켄칭하고, DCM(300 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(14 g, 79%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.71 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.75 (dd, J = 1.6 Hz, 8.4 Hz, 1H), 5.17 - 5.09 (m, 1H), 2.77 (s, 3H), 1.60 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 189(M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(200 ml) 중 1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(14 g, 74.4 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(20.7 g, 096.72 mmol) 및 DIPEA(37 g, 0.286 mol)의 용액에 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(27 g, 111.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브에서 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 물에 재용해시켰다. 생성된 용액을 EA(200 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(24 g, 84%)을 얻었다. MS: M/e 385 (M+1)+.
단계 E: 7-((S)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린, 또는 7-((R)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린
TFA(70 mL)를 DCM(200 ml) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트(24.1 g)에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 물로 희석하였다. 생성된 수성 층을 EA(400 mL)로 추출한 후, 포화 수성 Na2CO3로 pH를 12-13으로 조정한 후, DCM : IPA(4:1, 200 mL x 5)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 부분입체이성질체의 혼합물로서 생성된 잔류물(18 g)을 C18 컬럼(이동상 B: MeOH; 이동상 A: H2O(0.5% NH3H2O))에 의한 카이랄 분해를 실행하여 표제 화합물 7-((S)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(이전 피크, 단일 부분입체이성질체, 6.3 g, 35%) 및 7-((R)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(이후 피크, 단일 부분입체이성질체, 7.3 g, 40%)을 얻었다.
7-((S)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(이전 피크): 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.82 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 2.0 Hz, 8.4 Hz, 1H), 4.47 - 4.37 (m, 1H), 2.95 (dd, J = 2.0, 10.4 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.69 - 2.57 (m, 2H), 2.37 - 2.29 (m, 1H), 2.07 - 1.98 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.45 - 1.36 (m, 1H), 1.08 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.86 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 285 (M+1)+.
7-((R)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(이후 피크): 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.81 (s, 1H), 7.99 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 4.44 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.96 (d, J = 41.3 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 11.5, 1.9 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.48 (s, 1H), 2.14 (dd, J = 11.1, 2.1 Hz, 1H), 1.89 (t, J = 10.6 Hz, 1H), 1.36 (t, J = 12.2 Hz, 3H), 1.13 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.80 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 285 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
1,4-디옥산(30 mL) 중 7-((S)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(4.0 g, 14.0 mmol) 및 중간체 2(6.4 g, 16.8 mmol)의 용액에 DIPEA(4.3 g, 33.5 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 물로 희석하였다. 생성된 용액을 EA(100 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(5.6 g, 77%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
TFA(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(0.4 g, 0.77 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고, DCM : IPA(4:1, 60 mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.18 g, 54%)을 얻었다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(5 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(180 mg, 0.42 mmol) 및 K2CO3(173 mg, 1.26 mmol)의 혼합물에 2-클로로아세토니트릴(63 mg, 0.84 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(80 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(115 mg, 76%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99- 7.90 (m, 3H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.36 - 4.20 (m, 1H), 3.99 - 3.90 (m, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.48 - 1.39 (m, 6H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A269c는 또한 7-((R)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린을 출발 물질로서 사용하여 적절한 조건 하에서 화합물 A269d에 대해 상기에 기재된 바와 유사한 절차에 따라 제조하였으며, 이는 통상의 기술자에 의해 인지될 수 있다.
화합물 A269c: 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.77 (s, 1H), 8.08-7.84 (m, 4H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 3.79 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 10.4 Hz, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.20 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 1.45 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.21 (dd, J = 11.8, 6.4 Hz, 6H) ppm.MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A270: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-메톡시퀴녹살린
MeOH(50 mL) 중 7-브로모-2-클로로퀴녹살린(4.86 g, 20 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(5.52 g, 40 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(4.8 g)을 얻었다. MS: M/e 239/241 (M+1)+.
단계 B: 에틸 3-메톡시퀴녹살린-6-카르복실레이트
DMF/EtOH(4 mL/20 mL) 중 7-브로모-2-메톡시퀴녹살린(3.8 g, 16 mmol), CH3COONa(5.2 g, 64 mmol), PddppfCl2(580 mg, 0.8 mmol)의 혼합물을 CO(2 MPa) 하의 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 현탁액이 형성되었다. 필터 케이크를 여과에 의해 수집하고 건조시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었고, 이를 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 233 (M+1)+.
단계 C: 3-메톡시퀴녹살린-6-카르복실산
MeOH(100 mL) 중 에틸 3-메톡시퀴녹살린-6-카르복실레이트(미정제, 20 mmol)의 교반된 용액에 H2O(10 mL) 중 NaOH(1.6 g, 40 mmol)의 용액을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 용매 MeOH를 제거하였다. 생성된 수성 층을 수성 HCl로 pH = 3~4로 산성화하여 현탁액을 얻었다. 필터 케이크를 여과에 의해 수집하고 건조시켜 표제 화합물(2.9 g, 71%)을 얻었다. MS: M/e 205 (M+1)+.
단계 D: N,3-디메톡시-N-메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드
DMF(20 mL) 중 3-메톡시퀴녹살린-6-카르복실산(2.9 g, 14.2 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(1.66 g, 17.1 mmol), HATU(6.5 g, 17.1 mmol) 및 DIPEA(3.7 g, 28.4 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)에 붓고 EA(20 mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.8 g, 51%)을 얻었다. MS: M/e 248 (M+1)+.
단계 E: 1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
THF(10 mL) 중 N,3-디메톡시-N-메틸퀴녹살린-6-카르복스아미드(0.99 g, 4 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 1.47 mL, 4.4 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이를 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(670 mg, 83%)을 얻었다. MS: M/e 203 (M+1)+.
단계 F: 1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(5 mL) 중 1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(670 mg, 3.3 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(100 mg, 2.65 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 반응물을 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(30 mL)에 붓고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(667 mg, 99%)을 얻었다. MS: M/e 205 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 중간체 10B(69 mg, 0.2 mmol), 1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(81.6 mg, 0.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(146 mg, 0.6 mmol) 및 DIPEA(258 mg, 2 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA)에 의해 정제하여 표제 화합물(61 mg, 57%)을 얻었다. MS: M/e 532 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeOH(5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(61 mg, 0.11 mmol)의 교반된 용액에 HCl(2 mL, 4.0 M, 1,4-디옥산 중)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 H2O로 처리하고, 수성 Na2CO3로 pH = 9~10으로 염기성화하고, EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온을 혼합물로서 얻었다. 상기 생성물을 DMF(5 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액에 K2CO3(30.1 mg, 0.32 mmol)에 이어서, 2-클로로아세토니트릴(8.6 mg, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응물을 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(15 mL)에 붓고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2: MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(16 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.43 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.01 - 7.91 (m, 2H), 7.86 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.70 - 4.22 (m, 2H), 4.11 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 3.98 - 3.73 (m, 1H), 3.73 - 3.64 (m, 1H), 3.47 (d, J = 3.2 Hz, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.15 - 2.73 (m, 2H), 2.31 - 2.18 (m, 0.5H), 1.49 - 1.40 (m, 4.5H), 1.22 (dd, J = 10.8, 6.4 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A271: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
THF(3 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2-브로모-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(100 mg, 0.24 mmol)의 용액에 n-BuLi(0.3 mL, 0.48 mmol)을 -78℃에서 첨가하였다. 1시간 후, 옥세탄-3-온(18 mg, 0.25 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 -78℃에서 2시간 동안 유지하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA:PE = 2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(90 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 409 (M+1)+.
단계 B: 3-(2-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로페닐)옥세탄-3-올
DCM(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(90 mg, 0.22 mmol)의 용액에 TFA(1 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(70 mg)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 309 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(3 mL) 중 3-(2-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-5-플루오로페닐)옥세탄-3-올(70 mg, 미정제) 및 중간체 2(70 mg, 0.2 mmol)의 용액에 DIEA(258 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 켄칭하고 EA(60 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg)을 얻었다. MS: M/e 540 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(12 mg, 0.02 mmol)의 용액에 TFA(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(12 mg)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 456 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(3-하이드록시옥세탄-3-일)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(12 mg, 0.0222 mmol) 및 K2CO3(30 mg, 0.2 mmol)의 혼합물에 2-클로로아세토니트릴(10 mg, 0.12 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(40 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4 mg, 2단계에 대해 36%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.94 - 7.90 (m, 1H), 7.85 - 7.65 (m, 1H), 7.16 - 6.90 (m, 2H), 5.58 - 5.54 (m, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 2H), 5.22 - 5.14 (m, 1H), 5.08 - 5.02 (0.5 H), 4.84 - 4.72 (m, 2H), 4.65 - 4.40 (m, 1.5H)，3.85 - 3.50 (m, 3H), 3.45 - 3.41 (m, 3H), 3.08 - 2.92 (m, 1.5H), 2.86 - 2.72 (m, 1H), 2.25 - 2.15 (m, 0.5H), 1.46 - 1.29 (m, 5H), 1.21 - 1.12 (m, 4H) ppm. MS: M/e 495 (M+1)+.
화합물 A274:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
1,4-디옥산(5 mL) 중 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(247 mg, 0.514 mmol)(단일 부분입체이성질체로서 NBS를 사용하여 화합물 A2a의 브롬화를 통해 수득됨), Pd2(dba)3(24 mg, 0.026 mmol) 및 tBuXPhos(22 mg, 0.051 mmol)의 용액에 KOH(0.51 mL, 1.54 mmol, 3M)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시키고 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl(10 mL)로 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(25 mg, 9%)을 얻었다. MS: M/e 518 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-하이드록시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(25 mg, 0.05 mmol) 및 Cs2CO3(32 mg, 0.10 mmol)의 용액에 CH3I(14 mg, 0.10 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl(2 mL)로 켄칭하고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(15 mg, 59%)을 얻었다. MS: M/e 532 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
DCM(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(15 mg, 0.028 mmol)의 용액에 HCl(1 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용매를 제거하여 미정제 생성물을 HCl 염으로서 얻었다. 생성된 미정제 생성물을 물에 용해시켰다. 수성 물질을 수성 Na2CO3(4M)로 pH=10으로 염기성화하고 EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(10 mg, 79%)을 얻었다. MS: M/e 448 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-메톡시-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(10 mg, 0.022 mmol) 및 K2CO3(6 mg, 0.044 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(6 mg, 0.033 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(10 mL)로 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(4 mg)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.90 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 8.15 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.05 (dd, J = 8.7, 1.5 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 4.70-4.64 (m, 1H), 4.33-4.28 (m, 1H), 3.83-3.76 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.49 (s, 3H), 3.38-3.32 (m, 2H), 2.87-2.83 (m, 1H), 2.73-2.68 (m, 1H), 1.56 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.15 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A276: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 4-(메틸-d3)-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(115 mg, 0.3 mmol) 및 (2R,5S)-2,5-디에틸-1-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진(119 mg, 0.36 mmol)의 용액에 DIPEA(78 mg, 0.62 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 N2 하의 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(50 mL)로 희석하고 EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시켜 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 567 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(110 mg, 0.19 mmol)의 용액에 TFA(5 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(110 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 483 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-(메틸-d3)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(110 mg, 미정제) 및 K2CO3(276 mg, 2 mmol)의 용액에 2-클로로아세토니트릴(28 mg, 0.38 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH = 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(24 mg, 2단계에 대해 24%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.10 - 8.00 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.23 - 4.14 (m, 0.5H), 4.08 - 3.98 (m, 0.5H), 3.55 - 3.44 (m, 0.5H), 3.31 - 3.28 (m, 2H), 3.24 - 3.16 (m, 0.5H), 3.13 - 3.06 (m, 0.5H), 2.96 - 2.82 (m, 0.5H), 2.74 - 2.62 (m, 0.5H), 2.35 - 2.26 (m, 0.5H), 2.24 - 2.12 (m, 1H), 1.98 - 1.80 (m, 1H), 1.76 - 1.45 (m, 3H), 1.29 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 1.11 - 0.91 (m, 3H), 0.73 (t, J = 6.4 Hz, 1.5H), 0.58 (t, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 522 (M+1)+.
화합물 A278: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-에틸퀴녹살린
건조 THF(15 ml) 중 7-브로모-2-클로로퀴녹살린(1.21 g, 5 mmol) 및 철(III) 아세틸아세토네이트(175 mg, 0.5 mmol)의 용액에 EtMgBr(THF 중 1M, 7 ml)을 0℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 HCl(1 M)로 켄칭하고 EA(25 mL x 2)로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(1 g, 85%)을 얻었다. MS: M/e 237 (M+1)+.
단계 B: 1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(15 mL) 중 7-브로모-2-에틸퀴녹살린(1 g, 4.2 mmol)의 용액에 1-에톡시-1-(트리부틸스탄닐)에텐(2 g, 5.5 mmol) 및 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(294 mg, 0.42 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 이어서, 상기 혼합물에 수성 HCl(1,4-디옥산 중 4 N, 20 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 포화 소듐 바이카르보네이트 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 14%)을 얻었다. MS: M/e 201 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
메탄올(4 mL) 중 1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(120 mg, 0.6 mmol)의 용액에 소듐 보로하이드라이드(18 mg, 0.48 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM 및 물에 용해시켰다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(120 mg)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 203 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
밀봉된 튜브에 1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(120 mg, 0.59 mmol), 중간체 10B(136 mg, 0.4 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(291 mg, 1.2 mmol), DIEA(260 mg, 2 mmol) 및 아세토니트릴(5 ml)을 충전하였다. 혼합물을 100℃에서 밤새 교반한 후, 실온으로 냉각시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고 수성 물질을 EA(25 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 28%)을 얻었다. MS: M/e 530 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(60 mg)의 혼합물에 HCl(1,4-디옥산 중 4 M, 2 ml)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(50 mg)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 446 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(3-에틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(50 mg, 0.11 mmol)의 혼합물에 포타슘 카르보네이트(77 mg, 0.56 mmol) 및 2-요오도아세토니트릴(38 mg, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=13:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(7 mg, 13%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.92 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 12.1, 8.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.02 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 7.94 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.47 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 54.2, 6.3 Hz, 1H), 3.60 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.34 (s, 4H), 3.14 - 3.06 (m, 2H), 3.03 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.83 - 2.71 (m, 1H), 2.26 - 2.11 (m, 1H), 1.42 (dt, J = 7.5, 3.7 Hz, 4H), 1.37 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 1.30 (s, 3H), 1.17 (t, J = 6.1 Hz, 3H), 1.03 (d, J = 6.5 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A279:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-하이드록시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
디옥산(8 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(81 mg, 0.172 mmol)의 교반된 용액에 수성 HCl(2.0 M, 2 mL)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3로 pH=9~10으로 염기성화하고, EA(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2 : MeOH = 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 17%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.16 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.83 - 7.76 (m, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.84 - 3.73 (m, 1H), 3.69 - 3.58 (m, 2H), 3.50 - 3.46 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.07 - 2.79 (m, 3H), 2.21 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 1.46 - 1.34 (m, 4H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 473 (M+1)+.
화합물 A280:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-클로로퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
POCl3(0.5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-하이드록시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(8 mg, 0.017 mmol)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.5 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.83 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.15 - 8.08 (m, 1H), 8.05 - 7.98 (m, 2H), 7.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.69 - 4.50 (m, 2H), 4.01 - 3.79 (m, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 1H), 3.51 - 3.44 (m, 0.5H), 3.44 (s, 3H), 3.14 - 3.05 (m, 0.5H), 2.96 - 2.84 (m, 1.5H), 2.20 (d, J = 12.4 Hz, 0.5H), 1.48 - 1.41 (m, 4H), 1.26 - 1.18 (m, 4H), 1.06 (d, J = 6.4 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 491 (M+1)+.
화합물 A281:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 6-브로모-2-메톡시퀴녹살린
MeOH(15 ml) 중 6-브로모-2-클로로퀴녹살린(2 g, 8.23 mmol) 및 NaOMe(MeOH 중 5.4 M, 6.1 ml, 32.94 mmol)의 용액을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EA(30 ml)에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 염수(10 ml x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(1.95 g, 100%)을 얻었다. MS: M/e 239,241 (M+1)+.
단계 B: 1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(10 ml) 중 6-브로모-2-메톡시퀴녹살린(500 mg, 2.1 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(986 mg, 2.73 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(147 mg, 0.21 mmol)의 용액을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 HCl(1,4-디옥산 중 4 M, 5 ml)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 EA(30 ml)에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 염수(15 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EA/PE)에 의해 정제하여 표제 화합물(260 mg, 61%)을 얻었다. MS: M/e 203 (M+1)+.
단계 C: 1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(3 ml) 중 1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(130 mg, 0.64 mmol) 및 NaBH4(25 mg, 0.66 mmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 완료된 후, 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EA(30 ml)에 용해시켰다. 생성된 혼합물을 염수(15 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(130 mg, 99%)을 얻었다. MS: M/e 205 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 ml) 중 중간체 5(140 mg, 0.43 mmol), 1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(130 mg, 0.64 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(311 mg, 1.28 mmol) 및 DIEA(551 mg, 4.27 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 A281(40 mg)을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다. 화합물 A281(10 mg)을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 분리하여 화합물 A281a(1.2 mg) 및 화합물 A281b(1.4 mg)를 얻었다.
화합물 A281a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.84 (dd, J = 20.2, 9.2 Hz, 2H), 5.60 (s, 2H), 5.40 (s, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.96 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.31 - 3.28 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.13 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.97 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.32 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.13-1.98 (m, 1H), 1.72-1.61 (m, 1H), 1.59-1.42 (m, 2H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.59 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 515 (M+1)+.
화합물 A281b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.59 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.83 (s, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.82 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.50-3.38 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.11 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.59 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.26 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.68 - 1.57 (m, 1H), 1.56 - 1.43 (m, 2H), 1.33 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.98 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.47 (t, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 515 (M+1)+.
화합물 A282:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-하이드록시퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
디옥산(4 ml) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(30 mg, 0.058 mmol) 및 수성 HCl(2 N, 2 ml)의 용액을 100℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물의 2개의 이성질체, 화합물 A282a(3.5 mg) 및 화합물 A282b(4.1 mg)를 얻었다.
화합물 A282a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 3.83 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.27 (s, 5H), 3.10 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.32 (s, 1H), 2.10-1.95 (m, 1H), 1.70-1.58 (m, 1H), 1.55-1.41 (m, 2H), 1.31 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.61 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A282b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d) δ 12.41 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 5.39 (s, 1H), 3.69 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 3.06 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 2.26 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.94-1.79 (m, 1H), 1.61 - 1.42 (m, 3H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.51 (t, J = 7.1 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 501 (M+1)+.
화합물 A284: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-하이드록시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
1,4-디옥산(4 ml) 중 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-메톡시퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(80 mg, 0.16 mmol) 및 수성 HCl(2 N, 2 ml)의 용액을 100℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 반응 용액을 EA(15 ml)로 희석하고, 염수(10 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ 12.41 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.75 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 13.6, 8.5 Hz, 1H), 5.61 (s, 2H), 5.41 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.01 - 4.27 (m, 1H), 3.72 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H), 3.59 (q, J = 6.9 Hz, 0.5H), 3.56-3.46 (m, 1H), 3.43 (s, 0.5H), 3.27 (s, 3H), 3.23 (s, 0.5H), 3.04-2.87 (m, 1H), 2.80 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 2.66 (d, J = 10.9 Hz, 0.5H), 2.11 (d, J = 12.4 Hz, 0.5H), 1.29 (dd, J = 13.2, 6.9 Hz, 4.5H), 1.08 (dd, J = 6.1, 3.3 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 473 (M+1)+.
화합물 A286: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-올
MeOH(150 mL) 중 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-온(21.7 g, 100 mmol)의 용액에 NaBH4(2.28 g, 60 mmol)를 0℃에서 부분으로 나누어 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(50 mL)로 처리하였다. 생성된 수성 물질을 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(21.5 g, 98%)을 라세미체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.59 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 1H), 7.35 (dd, J = 10.0, 3.2 Hz, 1H), 7.07 (td, J = 8.4, 3.2 Hz, 1H), 5.55 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.97 - 4.80 (m, 1H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 B: 1-브로모-4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)벤젠.
THF(100 mL) 중 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-올(10.0 g, 45.6 mmol)의 용액에 NaH(5.0 g, 125 mmol)를 0℃에서 부분으로 나누어 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. MeI(10.0 g, 70.4 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 100 mL의 H2O에 붓고 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(10 g, 94%)을 라세미체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.65 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 10.0, 3.2 Hz, 1H), 7.14 (td, J = 8.4, 3.2 Hz, 1H), 4.64 - 4.52 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.4 Hz, 4H).
단계 C: 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에탄-1-온.
톨루엔(100 mL) 중 1-브로모-4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)벤젠(5.0 g, 21.4 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(10.1 g, 28.0 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(750 mg, 1.07 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 HCl(1,4-디옥산 중 4M, 15 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(100 mL)로 희석하고, 염수(100 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.6 g, 37%)을 라세미체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 10.4, 2.8 Hz, 1H), 7.25 (td, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 4.93 - 4.74 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 D: 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에탄-1-올.
MeOH(20 mL) 중 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에탄-1-온(1.6 g, 8.2 mmol)의 용액에 NaBH4(186 mg, 4.9 mmol)를 0℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EA(50 mL)에 용해시켰다. 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(760 mg, 48%)을 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 - 7.45 (m, 1H), 7.15 - 6.99 (m, 2H), 5.25 - 5.06 (m, 1H), 5.06 - 4.86 (m, 1H), 4.78 - 4.60 (m, 1H), 3.18 - 3.05 (m, 3H), 1.41 - 1.25 (m, 6H).
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeCN(1 mL) 중 중간체 10B(100 mg, 0.29 mmol), 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에탄-1-올(150 mg, 0.76 mmol), DIEA(225 mg, 1.74 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(247 mg, 1.01 mmol)의 혼합물을 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(85 mg, 56%)을 혼합물로서 얻었다. MS: M/e 526 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
MeOH(4 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(80 mg, 0.15 mmol)의 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 농축시켜 미정제 표제 화합물(75 mg)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 442 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(1.5 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(75 mg, 미정제), K2CO3(104 mg, 0.75 mmol) 및 H2O(27 mg, 1.5 mmol)의 혼합물에 2-요오도아세토니트릴(34 mg, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(20 mL)로 희석하였다. 유기 층을 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 A286을 수득하였고, 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A286a(6.5 mg) 및 화합물 A286b(8.0 mg)를 각각 2개의 이성질체의 혼합물로서 얻었다.
화합물 A286a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.79 - 7.66 (m, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 1H), 7.04 - 6.94 (m, 1H), 5.60 - 5.53 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.83 - 4.71 (m, 1H), 4.68 - 4.39 (m, 2H), 3.95 - 3.82 (m, 1H), 3.70 - 3.55 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.25 - 3.18 (m, 3H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.26 - 2.13 (m, 1H), 1.41 - 1.26 (m, 6H), 1.24 - 1.14 (m, 6H). MS: M/e 481 (M+1)+.
화합물 A286b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.71 - 7.51 (m, 1H), 7.21 - 7.07 (m, 1H), 7.05 - 6.93 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.03 - 4.86 (m, 2H), 3.98 - 3.87 (m, 1H), 3.45 - 3.37 (m, 4H), 3.27 - 3.20 (m, 3H), 3.07 - 2.50 (m, 4H), 1.47 - 1.34 (m, 6H), 1.33 - 1.25 (m, 3H), 1.07 - 0.95 (m, 3H). MS: M/e 481 (M+1)+.
화합물 A287: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(시아노메틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
화합물 A287, 및 이의 분리된 이성질체 화합물 A287a(10 mg) 및 화합물 A287b(9 mg)를 통상의 기술자가 인지할 수 있는 적절한 조건 하에서 화합물 A29, 화합물 A29a 및 화합물 A29b에 대해 기재된 절차에 따라 제조하였다.
화합물 A287a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.71 - 7.57 (m, 1H), 7.15 (dd, J = 9.6, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (td, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.75 - 4.30 (m, 2H), 4.25 - 4.06 (m, 2H), 3.86 - 3.75 (m, 1H), 3.68 - 3.55 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.84 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.13 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 6H). MS: M/e 462 (M+1)+.
화합물 A287b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 8.4, 6.0 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 9.6, 2.4 Hz, 1H), 7.08 (td, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.09 - 4.86 (m, 2H), 4.36 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 13.2, 3.2 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.96 (dd, J = 12.0, 4.0 Hz, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 2H), 1.40 - 1.33 (m, 6H), 1.00 (d, J = 6.8 Hz, 3H). MS: M/e 462 (M+1)+.
화합물 A294: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 6-브로모-2,3-디메틸퀴녹살린.
MeOH(40 mL) 중 4-브로모벤젠-1,2-디아민(2.5 g, 13.37 mmol)의 용액에 바이아세틸(1.26 g, 14.70 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(3 g, 95%)을 얻었다. MS: M/e 236 (M+1)+.
단계 B: 1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온.
톨루엔(30 mL) 중 6-브로모-2,3-디메틸퀴녹살린(1.28 g, 5.424 mmol), Pd(PPh3)2Cl2(762 mg, 1.085 mmol) 및 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(3.92 g, 10.847 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 혼합 용액을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, HCl(4mL, 1,4-디옥산 중 4M)을 첨가하고, 혼합 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에서 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(800 mg, 74%)을 얻었다. MS: M/e 201 (M+1)+.
단계 C: 1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올.
MeOH(30 mL) 중 1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(800 mg, 4.0 mmol)의 용액에 NaBH4(152 mg, 4.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(727 mg, 90%)을 얻었다. MS: M/e 203 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
CH3CN(2 mL) 중 1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(176 mg, 0.870 mmol), 중간체 10B(150 mg, 0.435 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(211 mg, 0.870 mmol)의 용액에 DIEA(168 mg, 1.305 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(220 mg, 96%)을 얻었다. MS: M/e 530 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온.
DCM(10 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(220 mg, 0.416 mmol)의 용액에 실온에서 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4M)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 미정제 생성물(HCl 염)을 얻었다. 미정제 생성물을 Na2CO3(4M)에 의해 pH~10으로 염기성화하고 EA(35 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(170 mg, 92%)을 얻었다. MS: M/e 446 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
DMF(8 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(170 mg, 0.382 mmol) 및 K2CO3(105 mg, 0.764 mmol)의 용액에 실온에서 2-클로로아세토니트릴(43 mg, 0.573 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 NaCl(20 mL)로 실온에서 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. (70 mg, 38%). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.98-7.90 (m, 3H), 7.89-7.85 (m, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 4.68-4.62 (m, 1H), 4.34-4.20 (m, 0.5 H), 3.96-3.88 (m, 0.5 H), 3.83-3.75 (m, 0.5 H), 3.70-3.67 (m, 1H), 3.48-3.44 (m, 0.5H), 3.43 (s, 3H), 3.12-3.06 (m, 0.5H), 2.94-2.91 (m, 1H), 2.90-2.82 (m, 0.5 H), 2.78-2.73 (m, 0.5 H), 2.74 (s, 6H), 2.26-2.18 (m, 0.5 H), 1.46-1.41 (m, 4.5 H), 1.24-1.19 (m, 3.5 H), 1.08-1.02 (m, 1H). MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A295: 2-(7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (3R,4R)-3-하이드록시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트
EtOH(20 mL) 중 tert-부틸 7-옥사-3-아자바이사이클로[4.1.0]헵탄-3-카르복실레이트(1.5 g, 7.53 mmol) 및 K2CO3(1.04 g, 7.53 mmol)의 용액에 3-(트리플루오로메틸)페놀(1.22 g, 7.53 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 과량의 EtOH로 세척하였다. 여액을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 혼합물, tert-부틸 (3R,4R)-4-하이드록시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트 함유)을 얻었다. MS: M/e 362 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 (3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트
THF(20 mL) 중 tert-부틸 (3R,4R)-3-하이드록시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트(1.3 g, 혼합물, 3.6 mmol, tert-부틸 (3R,4R)-4-하이드록시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트 함유)의 용액에 NaH(0.43 g, 10.8 mmol, 미네랄 오일 중 60%)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. THF(10 mL) 중 요오도에탄(1.1 g, 7.2 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 밤새 환류 교반하였다. 반응물을 0℃에서 냉각시키고, H2O에 의해 켄칭하고 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.7 g, 73%, 혼합물, tert-부틸 (3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트 함유)을 얻었다. MS: M/e 390 (M+1)+.
단계 C: (3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 (3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트(0.7 g, 1.8 mmol, tert-부틸 (3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-카르복실레이트 함유)의 용액에 HCl(10 mL, 10 mmol, 디옥산 중 4M)을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 수성 NaHCO3에 의해 중화시키고 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.45 g, 57%, 혼합물, (3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘 함유)을 얻었다. MS: M/e 290 (M+1)+.
단계 D: 7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeCN(2 ml) 중 4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일 트리플루오로메탄설포네이트(193 mg, 0.51 mmol), (3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘(150 mg, 0.51 mmol, (3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘 함유) 및 DIPEA(193 mg, 1.5 mmol)의 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(160 mg, 59%, 혼합물, 7-((3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온)을 얻었다. MS: M/e 521(M+1)+.
단계 E: 7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(2 mL) 중 7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.08 mmol, 7-((3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 함유)의 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 물/DCM의 혼합물로 희석하고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH 7~8로 염기성화하고 DCM(60 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 42%, 혼합물, 7-((3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 함유)을 얻었다. MS: M/e 437 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((3R,4R)-3-에톡시-4-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.09 mmol, 혼합물, 7-((3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온 함유) 및 K2CO3(25 mg, 0.18 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(25 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(10 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 혼합물, 15% 2-(7-((3R,4R)-4-에톡시-3-(3-(트리플루오로메틸)페녹시)피페리딘-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴 함유)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.95 (s, 1H), 7.47 - 7.45 (m, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 3H), 5.68 (s, 1H), 5.50 (s, 2H), 4.58 - 4.54 (m, 3H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.95 - 3.92 (m, 1H), 3.76 - 3.74 (m, 1H), 3.57 - 3.53 (m, 2H), 3.45 (s, 3H), 2.30 - 2.25 (m, 1H), 1.82 - 1.80 (m, 1H), 1.06 - 0.88 (m, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A296: 2-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드
단계 A: 에틸 2-브로모-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세테이트
DCM(30 mL) 중 에틸 2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세테이트(2 g, 8.6 mmol), NBS(1.8 g, 10.3 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 물(10 mL)로 켄칭하고, 디클로로메탄(100 mL x 3)으로 추출하고 염수(30 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(MeOH: DCM=0-10%)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.4 g, 90%)을 얻었다. MS: M/e 311 (M+1)+.
단계 B: 에틸 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세테이트
CH3CN(2 mL) 중 중간체 3(200 mg, 0.54 mmol), 에틸 2-브로모-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세테이트(166 mg, 0.54 mmol) 및 DIPEA(138 mg, 1.1 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 80℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 46%)을 얻었다. MS: M/e 604 (M+1)+.
단계 C: 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트산
MeOH(10 mL) 중 에틸 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세테이트(150 mg, 0.25 mmol) 및 NaOH(20 mg, 0.5 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 수성 HCl에 의해 켄칭하고 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 15 : 1)에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 576(M+1)+.
단계 D: 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드
DCM(10 mL) 중 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트산(130 mg, 0.22 mol) 및 2-메톡시에탄-1-아민(17 mg, 0.22 mol)의 용액에 HATU(172 mg, 0.45 mmol) 및 TEA(114 mg, 1.13 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 633 (M+1)+.
단계 E: 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드
MeOH(2 mL) 중 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드(130 mg, 0.21 mmol)의 용액에 HCl 디옥산 용액(0.5 mL, 2 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 미정제 생성물을 DCM(10 mL)으로 용해시키고 수성 NaOH로 pH = 8로 중화시켰다. 유기 층을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM : MeOH = 10:1)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(80 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 549 (M+1)+.
단계 F: 2-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드
DMF(3 mL) 중 2-((2R,5S)-2,5-디에틸-4-(4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)피페라진-1-일)-N-(2-메톡시에틸)-2-(4-(트리플루오로메틸)페닐)아세트아미드(100 mg, 0.18 mmol) 및 K2CO3(50 mg, 0.37 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(46 mg, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(64 mg, 60%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.74 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.71 - 7.62 (m, 2H), 5.57 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 2.3 Hz, 2H), 4.36 - 4.24 (m, 1H), 3.59 (d, J = 13.9 Hz, 1H), 3.46 - 3.42 (m, 5H), 3.41 - 3.34 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.05 - 2.92 (m, 1H), 2.88 - 2.46 (m, 2H), 2.45 - 1.98 (m, 2H), 1.98 - 1.72 (m, 1H), 1.71 - 1.64 (m, 1H), 1.62 - 1.23 (m, 2H), 1.04 - 0.91 (m, 3H), 0.79 - 0.51 (m, 3H). MS: M/e 588 (M+1)+
화합물 A297: 2-(7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(2-클로로프로판-2-일)-4-플루오로벤젠
DCM(25 ml) 중 2-(4-플루오로페닐)프로판-2-올(2 g, 12.99 mmol) 및 SOCl2(2.32 g, 19.50 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(2.2 g, 100%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 - 7.52 (m, 2H), 7.06 - 6.98 (m, 2H), 1.98 (s, 6H) ppm
단계 B: tert-부틸 (2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeCN(12 ml) 중 1-(2-클로로프로판-2-일)-4-플루오로벤젠(2.2 g, 12.72 mmol) 및 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(5.44 g, 25.42 mmol)의 용액을 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 0-20% EA를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(320 mg, 7.2%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 - 7.45 (m, 2H), 6.96 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 4.22-3.90 (m, 1H), 3.61 (s, 1H), 3.27 (s, 2H), 2.84 (dd, J = 12.1, 4.1 Hz, 1H), 2.11 (dd, J = 12.0, 2.3 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J = 7.6 Hz, 6H), 1.06 (t, J = 6.8 Hz, 6H) ppm.
단계 C: (2R,5S)-1-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진
MeOH(5 ml) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(160 mg, 0.48 mmol) 및 HCl(디옥산 중 4M, 4 ml, 16 mmol)의 용액을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(114 mg, 100%)을 얻었다. MS: M/e 251 (M+1)+
단계 D: 7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 ml) 중 (2R,5S)-1-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진(114 mg, 0.46 mmol), 중간체 2(261 mg, 0.69 mmol) 및 DIPEA(176 mg, 1.36 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-5% MeOH를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 482 (M+1)+
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(1.5 ml) 중 7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(100 mg, 0.21 mmol) 및 HCl(디옥산 중 4M, 1.5 ml, 6 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(82.5 mg, 100%)을 얻었다. MS: M/e 398 (M+1)+
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 ml) 중 7-((2S,5R)-4-(2-(4-플루오로페닐)프로판-2-일)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(82.5 mg, 0.21 mmol), 2-클로로아세토니트릴(63.2 mg, 0.83 mmol) 및 K2CO3(86 mg, 0.62 mmol)의 용액을 실온에서 5.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 EA(15 ml)로 희석하고 염수(10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DCM:MeOH(15:1)를 이용하는 분취용-TLC에 의해 정제한 후 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(15 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.17 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.58 (dd, J = 8.8, 5.6 Hz, 2H), 7.12 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 5.62 (s, 2H), 5.37 (s, 1H), 4.45 (s, 1H), 3.63-3.35 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.94 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 2.23 (dd, J = 12.0, 2.8 Hz, 1H), 1.39 (s, 6H), 1.08 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.02 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 437 (M+1)+.
화합물 A298: 2-(7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 2,5-디메틸-4-((3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트
톨루엔(20 mL) 중 7-브로모-2-메틸퀴녹살린(440 mg, 2 mmol), tert-부틸 4-아미노-2,5-디메틸피페리딘-1-카르복실레이트(550 mg, 2.4 mmol) 및 tBuONa(400 mg, 4 mmol)의 용액에 tBuXPhos(170 mg, 0.4 mmol) 및 tBuXPhos-Pd G3(160 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(100 mL x 3)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 40%)을 얻었다. MS: M/e 371 (M+1)+.
단계 B: tert-부틸 2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트
DMF(1 mL) 중 tert-부틸 2,5-디메틸-4-((3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트(36 mg, 0.1 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(8 mg, 60%, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 15분 후, DMF(0.5 mL) 중 CH3I(21 mg, 0.15 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온 ~ 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(PE/EA = 1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg, 13%)을 얻었다. MS: M/e 385 (M+1)+.
단계 C: N-(2,5-디메틸피페리딘-4-일)-N,3-디메틸퀴녹살린-6-아민
DCM(1 mL) 중 tert-부틸 2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-카르복실레이트(8 mg)의 용액에 TFA(0.2 ml)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(10 m, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 285 (M+1)+.
단계 D:
7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
아세토니트릴(2 mL) 중 N-(2,5-디메틸피페리딘-4-일)-N,3-디메틸퀴녹살린-6-아민(10 mg, 미정제)의 용액에 중간체 2(8 mg, 0.02 mmol) 및 DIPEA(25 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(EA/ PE=1/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg, 2단계에 대해 45%)을 얻었다. MS: M/e 516 (M+1)+.
단계 E: 7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DCM(1 mL) 중 7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(5 mg)의 용액에 TFA(3 ml)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(6 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 432 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(1 mL) 중 7-(2,5-디메틸-4-(메틸(3-메틸퀴녹살린-6-일)아미노)피페리딘-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(6 mg, 미정제)의 용액에 포타슘 카르보네이트(27 mg, 0.2 mmol) 및 2-클로로아세토니트릴(3 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc(50 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 미정제물을 분취용-TLC(DCM/MeOH=20/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.3 mg, 2단계에 대해 6.5%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD)δ 8.42 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.85 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.62 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 5.51 (s, 2H), 4.24 - 4.12 (m, 1H), 3.64 - 3.58 (m, 0.5H), 3.46 (s, 3H), 3.19 - 3.06 (m, 1.5H), 2.96 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 2H), 2.06 - 1.98 (m, 0.5H), 1.79 - 1.71 (m, 1H), 1.64 - 1.56 (m, 0.5H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 471 (M+1)+.
화합물 A301: 2-알릴-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(86 mg, 0.2 mmol)의 용액에 1N LiOH(0.2 mL) 및 3-브로모프로프-1-엔(48 mg, 0.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 생성물(28 mg, 29%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 6.15 - 5.95 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.31 - 5.19 (m, 2H), 5.01 - 4.88 (m, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.36 - 4.20 (m, 1H), 3.99 - 3.85 (m, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.48 - 1.39 (m, 6H), 1.03 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 472 (M+1)+.
화합물 A302: 2-(부트-2-엔-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMAc(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(86 mg, 0.2 mmol)(단계 G에서 화합물 A 269d에 대해 기재된 바와 같은 절차에 따라 제조)의 용액에 1N LiOH(0.2 mL) 및 1-클로로부트-2-엔(18 mg, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 41%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 - 7.73 (m, 1H), 5.91 - 5.65 (m, 2H)，5.52 (s, 1H), 5.02 - 4.89 (m, 1.5H), 4.82 - 4.76 (m, 1.5H), 4.42 - 4.15 (m, 1H), 3.99 - 3.85 (m, 1H), 3.50 - 3.43 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 1H), 2.97 - 2.86 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.83 - 1.70 (m, 3H), 1.50 - 1.35 (m, 6H), 1.03 (d, J = 5.6 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 486 (M+1)+.
화합물 A303: 2-(3,3-디플루오로알릴)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(86 mg, 0.2 mmol)(단계 G에서 화합물 A 269d에 대해 기재된 바와 같은 절차에 따라 제조) 및 Cs2CO3(130 mg, 0.4 mmol)의 용액에 3-브로모-3,3-디플루오로프로프-1-엔(32 mg, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 56시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg, 41%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 4.89 - 4.78 (m, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.45 - 4.20 (m, 1H), 4.00 - 3.85 (m, 1H), 3.52 - 3.42 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.11 - 3.02 (m, 1H), 2.98 - 2.84 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.48 - 1.36 (m, 6H), 1.04 (d, J = 6.0 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 508 (M+1)+.
화합물 A304: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-메틸이소퀴놀린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(3 ml) 중 중간체 10(50 mg, 0.17 mmol), 1-(3-메틸이소퀴놀린-6-일)에탄-1-올(31 mg, 0.17 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(121 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(108 mg, 0.83 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(28 mg, 36%)을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.09 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.08 - 8.00 (m, 1H), 7.92 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.81 - 7.75 (m, 2H), 7.63 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 4.60 (s, 1H), 3.90 - 3.73 (m, 1H), 3.70 - 3.64 (m, 1H), 3.46 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.19 - 2.95 (m, 1H), 2.95 - 2.77 (m, 2H), 2.66 (d, J = 2.5 Hz, 3H), 1.44 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 3H), 1.20 - 1.02 (m, 3H). MS: M/e 470 (M+1)+
화합물 A309: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(하이드록시메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-(브로모메틸)퀴녹살린
CCl4(30 mL) 중 7-브로모-2-메틸퀴녹살린(2 g, 9.0 mmol), NBS(1.6 g, 9.0 mmol), AIBN(148 mg, 0.9 mmol)의 용액을 90℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.9 g, 70%)을 얻었다. MS: M/e 301 (M+1)+.
단계 B: (7-브로모퀴녹살린-2-일)메틸 아세테이트
CH3CN(30 mL) 중 7-브로모-2-(브로모메틸)퀴녹살린(2 g, 9.0 mmol), 18-크라운-6(1.6 g, 9.0 mmol), KOAc(148 mg, 0.9 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 74%)을 얻었다. MS: M/e 281 (M+1)+.
단계 C: (7-아세틸퀴녹살린-2-일)메틸 아세테이트
톨루엔(10 mL) 중 (7-브로모퀴녹살린-2-일)메틸 아세테이트(1.3 g, 4.64 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(2.01 g, 5.57 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(325 mg, 0.46 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 용액에 HCl(0.3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA로 희석하고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(800 mg, 71%)을 얻었다. MS: M/e 245 (M+1)+.
단계 D: 1-(3-(하이드록시메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
MeOH(10 mL) 중 (7-아세틸퀴녹살린-2-일)메틸 아세테이트(800 mg, 3.27 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(905 mg, 6.56 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(550 mg, 83%)을 얻었다. MS: M/e 203 (M+1)+.
단계 E: 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
DCM(20 mL) 중 1-(3-(하이드록시메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(550 mg, 2.72 mmol) 및 이미다졸(278 mg, 4.08 mmol)의 교반된 용액에 TBDMSCl(449 mg, 2.99 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(700 mg, 81%)을 얻었다. MS: M/e 317 (M+1)+.
단계 F: 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(700 mg, 2.21 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(84 mg, 2.21 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 CH2Cl2/IPA(3/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(650 mg, 92%)을 얻었다. MS: M/e 319 (M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 중간체(400 mg, 1.34 mmol)의 용액에 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(424 mg, 1.34 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(968 mg, 4 mmol) 및 DIPEA(860 mg, 6.66 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(520 mg, 65%)을 얻었다. MS: M/e 601 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(하이드록시메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
THF(5 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(400 mg, 0.67 mmol)의 용액에 TBAF(0.5 mL, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물 A309(254 mg, 78%)를 얻었고, 이를 카이랄 분취용-HPLC에 의해 화합물 A309a(35 mg) 및 화합물 A309b(41 mg)로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A309: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.00 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.13 - 8.02 (m, 2H), 7.98 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 4.94 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.00 - 3.80 (m, 1H), 3.69 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.48 (s, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.16 - 2.85 (m, 2H), 2.85 - 2.62 (m, 1H), 1.51 - 1.22 (m, 6H), 1.22 - 1.01 (m, 3H). MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A309a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.99 (s, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 2H), 7.98 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.82 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 3.44 (s, 3H), 2.87 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.22 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 1.46 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.25 - 1.19 (m, 6H). MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A309b(이후 피크) : 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.00 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.95 (s, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.96 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.43 (s, 4H), 3.08 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 11.9 Hz, 2H), 1.44 (t, J = 6.0 Hz, 7H), 1.05 (d, J = 6.3 Hz, 3H). MS: M/e 487 (M+1)+
화합물 A310: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-사이클로프로필퀴녹살린
7-브로모-2-클로로퀴녹살린(2.43 g, 10 mol) 및 철 아세틸아세토네이트(176 mg, 0.5 mmol)를 건조 THF(30 mL)에 용해시켰다. 사이클로프로필마그네슘 브로마이드(THF 중 1M) 용액(11 ml, 11 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 수용액으로 켄칭하고 EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 컬럼 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.2 g, 48%)을 얻었다. MS: M/e 249 (M+1)+.
단계 B: 1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(50 mL) 중 7-브로모-2-사이클로프로필퀴녹살린(1.2 g, 4.8 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(5.2 g, 14.5 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(336 mg, 0.048 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 용액에 HCl(5 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 29%)을 얻었다. MS: M/e 213 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(10 mL) 중 1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(300 mg, 1.42 mmol)의 용액에 NaBH4(27 mg, 0.71 mmol)를 0℃에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 물로 처리하고, DCM으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(230 mg, 77%)을 얻었다. MS: M/e 215 (M+1)+.
단계 D: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
MeCN(4 mL) 중 1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(214 mg, 1 mmol), tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(257 mg, 1.2 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(363 mg, 1.5 mmol) 및 DIPEA(516 mg, 4 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(330 mg, 80%)을 얻었다. MS: M/e 411 (M+1)+.
단계 E: 2-사이클로프로필-7-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(330 mg)의 교반된 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(150 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 311 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMAc(4 mL) 중 2-사이클로프로필-7-(1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)퀴녹살린(150 mg, 0.48 mmol), 중간체 2(280 mg, 0.72 mmol) 및 DIPEA(309 mg, 2.4 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 77%)을 얻었다. MS: M/e 542 (M+1)+.
단계 G: 7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-다이하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(3 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(200 mg)의 용액에 HCl(g)(디옥산 중 4 M, 3 ml)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(150 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. MS: M/e 458 (M+1)+.
단계 H: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(84 mg, 0.18 mmol) 및 K2CO3(74 mg, 0.54 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(34 mg, 0.20 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 H2O(10 mL)로 희석하고, EtOAc(5 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(CH2Cl2/MeOH = 13/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 2%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.03 - 7.96 (m, 1H), 7.89 (dd, J = 16.8, 10.2 Hz, 3H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 3.98-3.70 (m, 1H), 3.68 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 16.8 Hz, 4H), 3.15-3.05 (m, 1H), 2.91 (s, 1H), 2.83 (s, 1H), 2.42 - 2.18 (m, 2H), 1.43 (dd, J = 10.9, 6.6 Hz, 5H), 1.24 - 1.17 (m, 6H), 1.04 (d, J = 6.6 Hz, 2H) ppm. MS: M/e 497 (M+1)+.
화합물 A311:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: 7-브로모-2-비닐퀴녹살린
톨루엔(50 mL) 중 7-브로모-2-클로로퀴녹살린(3.0 g, 12.32 mmol), 트리부틸(비닐)스탄난(4.3 g, 13.55 mmol) 및 Pd(PPh3)4(2.85 g, 2.464 mmol)의 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 반응물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.5 g, 52%)을 얻었다. MS: M/e 235 (M+1)+
단계 B: 7-브로모퀴녹살린-2-카르브알데히드.
THF(30 mL) 및 H2O(30 mL) 중 7-브로모-2-비닐퀴녹살린(1.4 g, 5.983 mmol)의 용액에 OSO4(76 mg, 0.300 mmol)에 이어서, NaIO4(3.84 g, 17.950 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA(60 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH= 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.0 g, 71%)을 얻었다. MS: M/e 237 (M+1)+
단계 C: 7-브로모-2-(디플루오로메틸)퀴녹살린.
DCM(50 mL) 중 7-브로모퀴녹살린-2-카르브알데히드(1.0 g, 4.237 mmol)의 용액에 0℃에서 DAST(2.05 g, 12.712 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 DCM(45 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(660 mg, 60%)을 얻었다. MS: M/e 259 (M+1)+
단계 D: 1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(35 mL) 중 7-브로모-2-(디플루오로메틸)퀴녹살린(660 mg, 2.558 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.85 g, 5.116 mmol), Pd(PPh3)2Cl2(360 mg, 0.512 mmol)의 용액을 N2 하의 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(20 mL)로 켄칭하고, EA(30 mL x 2)로 추출하고, 조합하고, 염수(20 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(20 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(4 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(30 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH ~8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 8:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 88%)을 얻었다. MS: M/e 223 (M+1)+
단계 E: 1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
CH3OH(10 mL) 중 1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(500 mg, 2.251 mmol)의 용액에 NaBH4(86 mg, 2.252 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, EA(30 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(448 mg, 89%)을 얻었다. MS: M/e 225 (M+1)+
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 ml) 중 중간체 10(80 mg, 0.267 mmol), 1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(120 mg, 0.533 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(130 mg. 0.533 mmol) 및 DIPEA(103 mg, 0.801 mmol)의 용액. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=15:1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(25 mg, 19%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.13 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.23-8.09 (m, 3H), 7.93 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.99 (td, J = 54.5, 3.6 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 4.89-4.86 (m, 0.5H), 4.67-4.23 (m, 1.5H), 4.00 (q, J = 6.4 Hz, 0.5H), 3.85 (q, J = 6.5 Hz, 0.5H), 3.74-3.64 (m, 1H), 3.52-3.40 (m, 3.5H), 3.09 (dd, J = 11.8, 3.9 Hz, 0.5H), 3.00-2.81 (m, 1.5H), 2.21 (d, J = 12.3 Hz, 0.5H), 1.52-1.39 (m, 4.5H), 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 507 (M+1)+.
화합물 A312: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(7-브로모퀴녹살린-2-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 7-브로모-2-클로로퀴녹살린(1 g, 4 mol)의 용액에 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.8 g, 5 mol) 및 Pd(PPh3)4(701 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기에 의해 보호하고 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, HCl/디옥산(4M, 10 ml)을 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물에 H2O를 첨가하고 NaHCO3 수용액에 의해 pH 7-8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 50%)을 얻었다. M/e 251(M+1)+.
단계 B: 7-브로모-2-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린
DAST(2 ml) 중 1-(7-브로모퀴녹살린-2-일)에탄-1-온(186 mg, 0.74 mmol)의 용액에 MeOH(1 방울)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉하고 80℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(170 mg, 85%)을 얻었다. MS: M/e 273 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 7-브로모-2-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린(170 mg, 0.625 mol)의 용액에 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(361 mg, 1 mol) 및 Pd(PPh3)4(140 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기에 의해 보호하고 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, HCl/1,4-디옥산(4M, 10 ml)을 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물에 H2O를 첨가하고 NaHCO3 수용액에 의해 pH 7-8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(100 mg, 68%)을 얻었다. M/e 237(M+1)+.
단계 D: 1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
NaBH4(38 mg, 1 mmol)를 EtOH(20 ml) 중 1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(100 mg, 0.42 mol)에 0℃에서 1시간 동안 첨가하였다. 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 50%)을 얻었다. MS: M/e 239 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 1-(3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(50 mg, 0.2 mmol), 중간체 10(40 mg, 0.13 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(120 mg, 1 mmol)의 용액에 DIPEA(250 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(10.68 mg, 15.9%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.24 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.25 - 8.06 (m, 3H), 7.99 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 5.61 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 5.41 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.04 - 3.92 (m, 1H), 3.83 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.55 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 3.28 (s, 3H), 3.01 - 2.94 (m, 1H), 2.86-2.67 (m, 2H), 2.21 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.16 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.12 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 1.38 (dd, J = 10.9, 6.5 Hz, 3H), 1.31 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H), 1.11 (dd, J = 9.5, 6.5 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H). MS: M/e 521 (M+1)+.
화합물 A313: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-(메틸-
d
3
)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-(메틸
-d
3
)퀴녹살린
D2O(4 ml) 및 DMF(8 ml) 중 7-브로모-2-메틸퀴녹살린(850 mg, 3.81 mmol) 및 PhCOOH(465 mg, 3.81 mmol)의 용액을 150℃에서 2일 동안 교반하였다. 용액을 EA(20 ml)로 희석하고 염수(10 ml x 2)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 0-15% EA를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(700 mg, 81%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.90 (s, 1H), 8.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H) ppm.
단계 B: 1-(3-(메틸
-d
3
)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(6 ml) 중 7-브로모-2-(메틸-d 3 )퀴녹살린(300 mg, 1.33 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(719 mg, 1.99 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(93 mg, 0.13 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. HCl(디옥산 중 4M, 2 ml)을 상기 용액에 첨가하고 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 용액을 EA(15 ml)로 희석한 후 염수(10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 10-30% EA를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물(200 mg, 79%)을 얻었다. MS: M/e 190 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-(메틸
-d
3
)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
EtOH(7 ml) 중 1-(3-(메틸-d 3)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(200 mg, 1.05 mmol) 및 NaBH4(20 mg, 0.53 mmol)의 용액을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 용액을 EA(20 ml)로 희석한 후 염수(10 ml x 2)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 20-60% EA를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 100%)을 얻었다. MS: M/e 192 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-(메틸-
d
3
)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(6 ml) 중 중간체 10(222 mg, 0.74 mmol), 1-(3-(메틸-d 3 )퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(200 mg, 1.05 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(542 mg, 2.23 mmol) 및 DIPEA(958 mg, 7.43 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc(20 ml)로 희석하고 염수(10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A313을 얻었고, 이를 카이랄 분취용-HPLC에 의해 화합물 A313a(17 mg) 및 화합물 A313b(10 mg)로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
화합물 A313: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.82 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.20 (s, 0.15H), 8.08 - 7.98 (m, 2H), 7.94 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 7.86 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.41 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.89 (q, J = 6.3 Hz, 0.5H), 3.75 (q, J = 6.6 Hz, 0.5H), 3.60-3.50 (m, 1H), 3.34 (s, 4H), 2.98-2.92 (m, 0.5H), 2.89 - 2.64 (m, 2H), 2.10 (d, J = 11.7 Hz, 0.5H), 1.38 (t, J = 6.5 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 1.11 (t, J = 5.6 Hz, 3.5H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 474 (M+1)+
화합물 A313a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.81 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.41 (s, 1H), 3.76 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.62 - 3.50 (m, 2H), 3.33 - 3.32 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.73 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 2.10 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.37 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.11 (t, J = 5.6 Hz, 6H) ppm. MS: M/e 474 (M+1)+.
화합물 A313b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.83 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.40 (s, 1H), 3.89 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 3.33 - 3.32 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 3.26 (s, 1H), 2.95 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 2.86 - 2.75 (m, 2H), 1.35 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.30 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 6.5 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 474 (M+1)+.
화합물 A314: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린 및 6-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린의 혼합물
CH3OH(60 mL) 및 H2O(60 mL) 중 3,3-디브로모-1,1,1-트리플루오로프로판-2-온(5.77 g, 21.4 mmol) 및 CH3COONa(8.44 g, 106.9 mmol)의 용액을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 4-브로모벤젠-1,2-디아민(2.0 g, 10.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 여과 후, 혼합물을 EA(35 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(3.2 g)을 얻었다. 표제 화합물(1.6 g)을 카이랄 분취용-SFC에 의해 6-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(620 mg, 이전 피크) 및 7-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(680 mg, 이후 피크)으로 추가 분리하였다. 카이랄 분리 조건은 하기에 나타나 있다.
7-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린 및 6-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린의 혼합물: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.18 (s, 1H), 8.47-8.38 (m, 1H), 8.10 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 7.7 Hz, 1H).
6-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.18 (s, 1H), 8.42 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H) ppm. MS: M/e 277 (M+1)+
7-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.19 (s, 1H), 8.43 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 9.0, 1.9 Hz, 1H). MS: M/e 277 (M+1)+
단계 B: 1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(20 mL) 중 7-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(360 mg, 1.304 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(942 mg, 2.609 mmol), Pd(PPh3)2Cl2(183 mg, 0.261 mmol)의 용액을 N2 하의 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(30 mL)로 켄칭하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 조합하고, 염수(30 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(30 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(30 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 처리하고, 염수(30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 6:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 96%)을 얻었다. MS: M/e 241 (M+1)+
단계 C: 1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
CH3OH(15 mL) 중 1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(300 mg, 1.25 mmol)의 용액에 NaBH4(48 mg, 1.25 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, EA(35 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(290 mg, 96%)을 얻었다. MS: M/e 243 (M+1)+
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
CH3CN(1 ml) 중 중간체 10(70 mg, 0.233 mmol), 1-(3-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(85 mg, 0.358 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(113 mg. 0.466 mmol) 및 DIPEA(90 mg, 0.699 mmol)의 용액. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=15:1)에 의해 정제하고 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 표제 화합물(17 mg, 14%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.23 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.33-8.15 (m, 3H), 7.93 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 4.98-4.88 (m, 0.5H), 4.73-4.27 (m, 1.5H), 4.03 (q, J = 6.5 Hz, 0.5H), 3.88 (q, J = 6.4 Hz, 0.5H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.52-3.48 (m, 0.5H), 3.47 (s, 3H), 3.09 (dd, J = 11.6, 3.8 Hz, 0.5H), 2.97-2.84 (m, 1.5H), 2.20 (d, J = 12.7 Hz, 0.5H), 1.47 (dd, J = 12.9, 6.5 Hz, 4.5H), 1.23 (t, J = 6.5 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 525 (M+1)+.
화합물 A315:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온
톨루엔(25 mL) 중 6-브로모-2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린(440 mg, 1.594 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.15 g, 3.189 mmol), Pd(PPh3)2Cl2(224 mg, 0.319 mmol)의 용액을 N2 하의 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(30 mL)로 켄칭하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 조합하고, 염수(30 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(30 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(30 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 처리하고, 염수(30 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 6:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(360 mg, 94%)을 얻었다. MS: M/e 241 (M+1)+
단계 B: 1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
CH3OH(15 mL) 중 1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(360 mg, 1.5 mmol)의 용액에 NaBH4(57 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, EA(35 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 83%)을 얻었다. MS: M/e 243 (M+1)+
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-(1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(1 ml) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(70 mg, 0.233 mmol), 1-(2-(트리플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(85 mg, 0.358 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(113 mg, 0.466 mmol) 및 DIPEA(90 mg, 0.699 mmol)의 용액. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=15:1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(19 mg, 16%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.25 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.29-8.13 (m, 3H), 7.93 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.7 Hz, 2H), 4.98-4.92 (m, 0.5H), 4.68-4.30 (m, 1.5H), 4.03 (d, J = 6.5 Hz, 0.5H), 3.88 (d, J = 6.5 Hz, 0.5H), 3.70 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.52-2.43 (m, 0.5H), 3.47 (s.3H), 3.13-3.05 (m, 0.5H), 2.98-2.85 (m, 1.5H), 2.25-2.19 (m, 0.5H), 1.47 (dd, J = 12.9, 6.5 Hz, 4.5H), 1.23 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.07 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H) ppm. MS: M/e 525 (M+1)+.
화합물 A316:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-하이드록시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 6-브로모-2-메톡시-3-메틸퀴녹살린.
MeOH(20 mL) 중 6-브로모-2-클로로-3-메틸퀴녹살린(740 mg, 2.89 mmol)의 용액에 CH3ONa(312 mg, 5.78 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(700 mg, 96%)을 얻었다. MS: M/e 253 (M+1)+.
단계 B: 1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온.
톨루엔(10 mL) 중 6-브로모-2-메톡시-3-메틸퀴녹살린(700 mg, 2.78 mmol), 트리부틸 (1-에톡시비닐)스탄난(1.2 g, 3.33 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(175 mg, 0.25 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(50 mL)로 켄칭하고, EA(25 mL x 3)로 추출하고, 조합하고, 염수(25 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(20 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(6 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(50 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(420 mg, 70%)을 얻었다. MS: M/e 217 (M+1)+.
단계 C: 1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-온(420 mg, 1.9 mmol)의 용액에 NaBH4(72 mg, 1.9 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3로 처리하고, EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(320 mg, 76%)을 얻었다. MS: M/e 219 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(280 mg, 1.28 mmol), 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(257 mg, 0.85 mmol) 및 (시아노메틸) 트리메틸포스포늄 요오다이드(311 mg, 1.28 mmol)의 용액에 DIPEA(548 mg, 4.25 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH =15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(95 mg, 22%)을 얻었다. MS: M/e 501 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-하이드록시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DCM(2 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-메톡시-3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(55 mg, 0.11 mmol)의 용액에 BBr3(1.1 mL, 1.1 mmol, DCM 중 1 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. n-헥산을 혼합물에 첨가하였다. 황색 고체가 침전된 후, 이를 여과시켰다. 생성된 고체를 포화 수성 NaHCO3(5 mL)에 용해시키고 DCM(10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.52 mg, 3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.99 (s, 1H), 7.61 - 7.58 (m, 1H), 7.45 - 7.43 (m, 1H), 7.24 - 7.19 (m, 1H), 5.62 (s, 2H), 5.41 - 5.39 (m, 1H), 3.65 - 3.51 (m, 3H), 3.27 (s, 3H), 2.78 - 2.69 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.15 - 2.13 (m, 1H), 1.26 - 1.24 (m, 5H), 1.12 - 1.05 (m, 4H), 0.92 - 0.91 (m, 2H) ppm. MS: M/e 487 (M+1)+.
화합물 A317: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-6-플루오로-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(47 mg, 0.1 mmol, 화합물 A269d)의 혼합물에 Select F 시약(53 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(17 mg, 34%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1H NMR (40- MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.02 - 7.91 (m, 3H), 5.46 (s, 2H), 4.80 - 4.67 (m, 1H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.83 - 3.74 (m, 1H), 3.69 - 3.61 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.20 - 3.12 (m, 1H), 2.84 - 2.75 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.51 - 1.40 (m, 6H), 1.08 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 489 (M+1)+.
화합물 A318: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
단계 A: 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(47 mg, 0.1 mmol, 화합물 A269d)(47 mg, 0.1 mmol)의 혼합물에 CH3CN(1 mL) 중 NBS(18 mg, 0.1 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(50 mg, 90%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. MS: M/e 549 (M+1)+.
단계 B: 2-(시아노메틸)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
DMF(2 mL) 중 2-(6-브로모-7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(50 mg, 0.09 mmol)의 혼합물에 Zn(CN)2(31 mg, 0.27 mmol) 및 Pd(PPh3)4(31 mg, 0.027 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, DCM(60 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH=15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(10 mg, 22%)을 단일 부분입체이성질체로서 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 - 7.92 (m, 3H), 5.50 (s, 2H), 4.89 - 4.86 (m, 1H), 4.01 - 3.85 (m, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.31 - 3.28 (m, 1H), 3.21 - 3.10 (m, 1H), 3.04 - 2.88 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 1.66 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.0 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 496 (M+1)+.
화합물 A319: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
CH3CN(10 mL) 중 중간체 9(200 mg, 0.8 mmol)의 용액에 포스포러스 옥시클로라이드(135 mg, 0.88 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 7-((S)-1-((2R,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)에틸)-2-메틸퀴녹살린(273 mg, 0.96 mmol) 및 DIPEA(310 mg, 2.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(180 mg, 43%)을 얻었다. MS: M/e 517 (M+1)+.
단계 B: 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(180 mg)의 교반된 용액에 1,4-디옥산 용액 중 HCl(2 mL, 8 mmol, 4M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(160 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 433(M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-2-일)아세토니트릴
DMF(10 mL) 중 7-((2S,5R)-2,5-디메틸-4-((S)-1-(3-메틸퀴녹살린-6-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-d]피리미딘-5-온(120 mg, 0.28 mmol) 및 K2CO3(76 mg, 0.56 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(70 mg, 0.42 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA(80 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(70 mg, 43%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 8.79 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.96 - 7.87 (m, 2H), 6.01 - 5.87 (m, 0.5H), 5.55 (s, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.76 - 4.64 (m, 0.5H), 3.93 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.75 - 3.70 (m, 0.5H), 3.40 (s, 3H), 3.37-3.35 (m, 0.5H), 3.03-2.90 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 1.56-1.54 (m, 3H), 1.43 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.5 Hz, 3H). MS: M/e 472 (M+1)+.
화합물 A322: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
:
단계 A: 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온
톨루엔(8 mL) 중 5-브로모벤조[d]티아졸(200 mg, 0.93 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(677 mg, 1.86 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(66 mg, 0.09 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 HCl(1 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적하하여 켄칭하고 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(60 mg, 36%)을 얻었다. MS: M/e 178 (M+1)+.
단계 B: 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올
MeOH(3 mL) 중 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-온(60 mg, 0.34 mmol)의 용액에 NaBH4(13 mg, 0.34 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(70 mg)을 얻었다. MS: M/e 180 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(벤조[d]티아졸-5-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1-(벤조[d]티아졸-5-일)에탄-1-올(41 mg, 0.23 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(110 mg, 0.45 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM: MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.25 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.15 - 8.00 (m, 2H), 7.92 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (d, J = 5.1 Hz, 2H), 4.83 - 4.18 (m, 1H), 4.02 - 3.52 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.26 - 2.66 (m, 3H), 2.49 - 2.33 (m, 1H), 2.26 - 1.53 (m, 4H), 1.41 (dd, J = 12.6, 6.5 Hz, 3H), 1.01 (dt, J = 27.8, 7.4 Hz, 3H), 0.62 (dt, J = 42.4, 7.4 Hz, 3H)'ppm. MS: M/e 490 (M+1)+.
화합물 A323: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(벤질옥시)-5-브로모벤즈알데히드
CH3CN(100 mL) 중 5-브로모-2-하이드록시벤즈알데히드(10 g, 50 mol)의 용액에 BnBr(10 g, 60 mol) 및 K2CO3(13.9 g, 100 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기에 의해 보호하고 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고 H2O를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(13.36 g, 92%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.45 (s, 1H), 7.94 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.45 - 7.31 (m, 6H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H). MS: M/e 291 (M+1)+.
단계 B: 2-(벤질옥시)-5-브로모페닐 포르메이트
DCM(100 mL) 중 2-(벤질옥시)-5-브로모벤즈알데히드(13.36 g, 46 mol)의 용액에 m-CPBA(11.7 g, 69 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 EA로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(11.8 g, 84.2%)을 얻었다. MS: M/e 307 (M+1)+.
단계 C: 2-(벤질옥시)-5-브로모페놀
MeOH(50 mL) 및 H2O(50 ml) 중 2-(벤질옥시)-5-브로모페닐 포르메이트(11.8 g, 44 mol)의 용액에 K2CO3(9 g, 65 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과시켰다. 필터 케이크를 건조시켜 표제 화합물(8 g, 62.5%)을 얻었다. MS: M/e 279 (M+1)+.
단계 D: 메틸 2-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)-4-브로모부타노에이트
DMF(30 mL) 중 2-(벤질옥시)-5-브로모페놀(2.78 g, 10 mol)의 용액에 메틸 2,4-디브로모부타노에이트(5.2 g, 20 mol) 및 K2CO3(5.6 g, 40 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 EA로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(3.7 g, 82%)을 얻었다. MS: M/e 457 (M+1)+.
단계 E: 메틸 1-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)사이클로프로판-1-카르복실레이트
THF(15 mL) 중 메틸 2-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)-4-브로모부타노에이트(3.7 g, 8.1 mol)의 용액에 t-BuOK(1.12 g, 10 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 EA로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.5 g, 843.3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 7.05 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 1.63 (dd, J = 8.4, 5.2 Hz, 2H), 1.37 (dd, J = 8.4, 5.1 Hz, 2H). MS: M/e 377 (M+1)+.
단계 F: (1-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)사이클로프로필)메탄올
THF(10 mL) 중 메틸 1-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)사이클로프로판-1-카르복실레이트(800 mg, 2.11 mol)의 용액에 LiAlH4(170 mg, 4.5 mol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물에 H2O(0.2 ml), 15% NaOH 수용액(0.2 ml) 및 H2O(0.6 ml)를 첨가하고 여과시켰다. 여액을 Na2SO4 상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(450 mg, 61.3%)을 얻었다. MS: M/e 349 (M+1)+.
단계 G: 4-브로모-2-(1-(하이드록시메틸)사이클로프로폭시)페놀
DCM(15 mL) 중 (1-(2-(벤질옥시)-5-브로모페녹시)사이클로프로필)메탄올(600 mg, 1.71 mol)의 용액에 TMSI(1M, 3.5 ml, 3.5 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 EA로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(300 mg, 68%)을 얻었다. MS: M/e 259 (M+1)+.
단계 H: 7-브로모-3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]
THF(15 mL) 중 4-브로모-2-(1-(하이드록시메틸)사이클로프로폭시)페놀(300 mg, 1.2 mol)의 용액에 PPh3(365 mg, 1.4 mol) 및 DIAD(283 mg, 1.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물에 H2O를 첨가하고 EA로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(250 mg, 86.8%)을 얻었다. MS: M/e 241 (M+1)+.
단계 I: 1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 7-브로모-3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판](250 mg, 1 mol)의 용액에 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(541 mg, 1.5 mol) 및 Pd(PPh3)4(140 mg, 0.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기에 의해 보호하고 100℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, HCl/디옥산(4M, 10 ml)을 첨가하고 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 잔류물에 H2O를 첨가하고 NaHCO3 수용액에 의해 pH 7-8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 58.8%)을 얻었다. M/e 205 (M+1)+.
단계 J: 1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에탄-1-올
NaBH4(38 mg, 1 mmol)를 EtOH(20 ml) 중 1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에탄-1-온(120 mg, 0.58 mol)에 0℃에서 1시간 동안 첨가하였다. 물을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 혼합물을 EA로 추출하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 33.3%)을 얻었다. MS: M/e 207 (M+1)+.
단계 K: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 1-(3H-스피로[벤조[b][1,4]디옥신-2,1'-사이클로프로판]-7-일)에탄-1-올(40 mg, 0.2 mmol), 중간체 10(30 mg, 0.1 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(120 mg, 1 mmol)의 용액에 DIPEA(250 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl(20 mL)로 실온에서 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA(35 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.03 mg, 4.51%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.87 - 6.79 (m, 3H), 5.55 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 1.7 Hz, 2H), 4.57 (s, 1H), 4.28 (d, J = 18.9 Hz, 1H), 4.15 - 4.09 (m, 2H), 3.55 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 2.95 (dd, J = 11.6, 4.2 Hz, 1H), 2.80 (dd, J = 11.8, 2.3 Hz, 0.5H), 2.70 (dd, J = 12.1, 4.0 Hz, 0.5H), 1.37 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 1.32 - 1.27 (m, 3H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H), 1.11 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H), 1.03 - 0.96 (m, 3H), 0.85 - 0.80 (m, 2H). MS: M/e 489 (M+1)+.
화합물 A324:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(3 ml) 중 중간체 10(50 mg, 0.17 mmol), 화합물 A159의 단계 D로부터의 1-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올(30 mg, 0.17 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(121 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(108 mg, 0.83 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(30 mg, 39%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.68 - 4.50 (m, 1H), 4.46 - 4.40 (m, 2H), 4.30 - 4.25 (m, 2H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 3.61 - 3.55 (m, 1H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.42 - 3.32 (m, 1H), 3.14 - 2.85 (m, 1H), 2.83 - 2.76 (m, 1H), 1.36 (dd, J = 13.3, 6.6 Hz, 3H), 1.33 - 1.18 (m, 3H), 1.16 - 0.98 (m, 3H). MS: M/e 464 (M+1)+
화합물 A325: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-클로로-6-(하이드록시메틸)피리딘-3-올
물(50 mL) 중 2-클로로피리딘-3-올(2 g, 15.50 mmol), 포름알데히드(37%, 12.6 g, 155 mmol), NaHCO3(3.9 g, 46.5 mmol)의 용액을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축된 HCl로 켄칭하고 CH2Cl2/IPA(3/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(2.1 g, 85%)을 얻었다. MS: M/e 160 (M+1)+.
단계 B: 1-((2-클로로-6-(하이드록시메틸)피리딘-3-일)옥시)프로판-2-온
ACN(100 mL) 중 2-클로로-6-(하이드록시메틸)피리딘-3-올(2.1 g, 13.21 mmol), 1-클로로프로판-2-온(1.46 g, 15.85 mmol), KI(219 mg, 1.32 mmol) 및 K2CO3(3.65 g, 26.42 mmol)의 용액을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.7 g, 95%)을 얻었다. MS: M/e 216 (M+1)+.
단계 C: 6-클로로-5-(2-옥소프로폭시)피콜린알데히드
DCM(30 mL) 중 1-((2-클로로-6-(하이드록시메틸)피리딘-3-일)옥시)프로판-2-온(2.7 g, 12.56 mmol) 및 데스-마틴 페리오디난(Dess-Martin Periodinane)(6.4 g, 15.07 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.6 g, 97%)을 얻었다. MS: M/e 214 (M+1)+.
단계 D: 1-((2-클로로-6-(1-하이드록시에틸)피리딘-3-일)옥시)-2-메틸프로판-2-올
건조 THF(200 mL) 중 6-클로로-5-(2-옥소프로폭시)피콜린알데히드(2.6 g, 12.21 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(1.0 M, 30.5 mL, 30.5 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 그 후, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(100 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(2.6 g, 87%)을 얻었다. MS: M/e 246 (M+1)+.
단계 E: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올
톨루엔(30 mL) 중 1-((2-클로로-6-(1-하이드록시에틸)피리딘-3-일)옥시)-2-메틸프로판-2-올(1 g, 4.08 mmol), Pd(OAc)2(91 mg, 0.41 mmol), BINAP(254 mg, 0.41 mmol) 및 Cs2CO3(2.66 g, 8.16 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(550 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 210 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(3 ml) 중 중간체 10(50 mg, 0.17 mmol), 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올(35 mg, 0.17 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(121 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(108 mg, 0.83 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(28 mg, 34%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.33 (s, 1H), 7.93 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.0, 4.9 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.48 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.71 - 3.59 (m, 2H), 3.49 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.13 - 2.79 (m, 2H), 2.77 - 2.27 (m, 1H), 1.47 - 1.39 (m, 6H), 1.39 - 1.36 (m, 3H), 1.36 - 1.25 (m, 3H), 1.25 - 0.98 (m, 3H). MS: M/e 492 (M+1)+.
화합물 A326:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복실레이트
DMAc(30 mL) 중 메틸 6-클로로-5-하이드록시니코티네이트(2 g, 10.70 mmol), 2,2-디메틸옥시란(3.85 g, 53.48 mmol)의 용액을 140℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.85 mg, 77%)을 얻었다. MS: M/e 224 (M+1)+.
단계 B: 2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복실산
MeOH(10 mL) 중 메틸 2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복실레이트(1.85 g, 0.58 mmol)의 교반된 용액에 수성 NaOH(2.0 M, 2 mL)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 수성 층을 얻었고, 이를 수성 HCl로 pH=3~4로 산성화한 후, CH2Cl2/IPA(3/1, 20mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(1.67 g, 96.3%)을 얻었다. MS: M/e 210 (M+1)+.
단계 C: N-메톡시-N,2,2-트리메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복스아미드
CH2Cl2(20 mL) 중 2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복실산(500 mg, 2.369 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(278 mg, 2.87 mmol), HATU(1.1 g, 2.87 mmol) 및 DIEPA(617 mg, 4.78 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(550 mg, 91%)을 얻었다. MS: M/e 253 (M+1)+.
단계 D: 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에탄-1-온
건조 THF(10 mL) 중 N-메톡시-N,2,2-트리메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-카르복스아미드(200 mg, 0.79 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 0.26 mL, 0.79 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 그 후, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 48%)을 얻었다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 E: 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에탄-1-온(80 mg, 0.39 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(29 mg, 0.77 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 CH2Cl2/IPA(3/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(50 mg, 62%)을 얻었다. MS: M/e 210 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 ml) 중 중간체 10(50 mg, 0.17 mmol), 1-(2,2-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)에탄-1-올(35 mg, 0.17 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(121 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(108 mg, 0.83 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 49%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.13 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.72 - 3.46 (m, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.05 - 2.58 (m, 4H), 1.38 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.36 - 1.32 (m, 6H), 1.30 - 1.18 (m, 3H), 1.15 - 1.00 (m, 3H). MS: M/e 492 (M+1)+.
화합물 A328: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-올
THF(20 mL) 중 2-브로모-5-플루오로벤즈알데히드(2 g, 10 mmol)의 용액에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(4 mL, 3M, 12 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 수성 NH4Cl을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 잔류물을 얻었다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE:EA=5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.8 g, 83%)을 얻었다. MS: M/e 219 (M+1)+.
단계 B: 1-브로모-2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로벤젠
CH2Cl2(2.1 mL), H2O(2.1 mL) 중 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-올(1.6 g, 7.3 mmol), KOAc(2.8 g, 29.2 mmol)의 용액에 TMSCF2Br(2.9 g, 14.6 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 CH2Cl2(50 mL)로 희석하고 염수로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 콤비 플래시에 의해 정제하여 표제 화합물(280 mg, 14%)을 얻었다.
단계 C: 1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-온
톨루엔(5 mL) 중 1-브로모-2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로벤젠(320 mg, 1.2 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(500 mg, 1.4 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(70 mg, 0.1 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(50 mL)로 켄칭하고, EA(25 mL x 3)로 추출하고, 조합하고, 염수(25 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(20 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(2 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(50 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH~8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(240 mg, 87%)을 얻었다.
단계 D: 1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-온(240 mg, 1.0 mmol)의 용액에 NaBH4(57 mg, 1.5 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3로 처리하고, EA(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 83%)을 얻었다.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 1-(2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐)에탄-1-올(60 mg, 0.3 mmol), 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b] 피리딘-2-일)아세토니트릴(65 mg, 0.2 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸 포스포늄 요오다이드(97 mg, 0.4 mmol)의 용액에 DIPEA(103 mg, 0.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(50 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM:MeOH =15:1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(4.3 mg, 3%)을 얻었다. 1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.05 (s, 1H), 7.75 - 7.63 (m, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 2H), 6.97 - 6.59 (m, 1H), 5.68 (s, 2H), 5.48 - 5.45 (m, 1H), 3.95 - 3.88 (m, 1H), 3.56 - 3.54 (m, 1H), 3.34 (s, 3H), 2.91 - 2.80 (m, 1H), 2.09 - 1.95 (m, 1H), 1.55 - 1.54 (m, 3H), 1.38 - 1.31 (m, 6H), 1.17 - 1.11 (m, 3H), 0.99 - 0.92 (m, 2H) ppm. MS: M/e 503 (M+1)+.
화합물 A329:
2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴.
단계 A: ((1-(2-브로모-5-플루오로페닐)비닐)옥시)(tert-부틸)디메틸실란
DCM(100 mL) 중 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)에탄-1-온(4.0 g, 18.43 mmol) 및 Et3N(7.45 g, 73.72 mmol)의 용액에 TBSOTf(9.74 g, 36.86 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, DCM(100 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(4 g, 64%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.67 (dd, J = 8.8, 5.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 9.3, 3.1 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.13 (s, 6H).
단계 B: (1-(2-브로모-5-플루오로페닐)사이클로프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란.
DCM(30 mL) 중 디에틸아연(2 ml, 4.0 mmol, 2M)의 용액을 N2 분위기 하의 0℃에서 3회 탈기시켰다. 이어서, TFA(456 mg, 4 mmol)를 매우 서서히 첨가하였다. 10분 후, I2CH2(1072 mg, 4.0 mmol)를 첨가하였다. 5분 후, ((1-(2-브로모-5-플루오로페닐)비닐)옥시)(tert-부틸)디메틸실란(660 mg, 2.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, DCM(100 mL x 2)으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 73%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (dd, J = 8.7, 5.4 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 9.1, 3.1 Hz, 1H), 6.86 (ddd, J = 11.2, 8.3, 3.0 Hz, 1H), 1.13 (dd, J = 7.4, 5.4 Hz, 2H), 0.92 (dd, J = 7.3, 5.5 Hz, 2H), 0.78 (s, 9H), 0.12 (d, J = 2.9 Hz, 6H).
단계 C: 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)사이클로프로판-1-올.
THF(30 mL) 중 (1-(2-브로모-5-플루오로페닐)사이클로프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란(500 mg, 1.453 mmol)의 용액에 TBAF(4.3 mL, 1M, 4.36 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EA(45 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(310 mg, 93%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 (dd, J = 8.7, 5.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 1H), 6.91 (td, J = 8.3, 3.1 Hz, 1H), 1.28-1.24 (m, 2H), 0.98 (dd, J = 7.2, 5.7 Hz, 2H), 0.91 (s, 1H).
단계 D: 1-브로모-4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)벤젠
THF(30 mL) 중 1-(2-브로모-5-플루오로페닐)사이클로프로판-1-올(300 mg, 1.304 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(156 mg, 60%, 3.912 mmol)를 첨가하였다. 이어서, CH3I(370 mg, 2.608 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 EA(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(200 mg, 63%)을 얻었다.
단계 E: 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에탄-1-온
톨루엔(20 mL) 중 1-브로모-4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)벤젠, 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(592 mg, 1.639 mmol), Pd(PPh3)2Cl2(115 mg, 0.164 mmol)의 용액을 N2 하의 90℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3(20 mL)로 켄칭하고, EA(30 mL x 2)로 추출하고, 조합하고, 염수(20 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 오일을 THF(20 mL)로 희석하였다. 이어서, 용액에 HCl(4 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 적가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA(30 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH ~8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 88%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (dd, J = 8.4, 5.8 Hz, 1H), 7.01 (td, J = 8.2, 2.5 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 9.8, 2.5 Hz, 1H), 3.07 (s, 3H), 2.61 (s, 3H), 1.25-1.19 (m, 2H), 1.10-1.05 (m, 2H).
단계 F: 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에탄-1-올
CH3OH(10 mL) 중 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에탄-1-온(150 mg, 0.721 mmol)의 용액에 NaBH4(110 mg, 2.885 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, EA(30 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(PE: EA= 5:1)에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 79%)을 얻었다.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 ml) 중 중간체 10(86 mg, 0.286 mol), 1-(4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐)에탄-1-올(120 mg, 0.571 mol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(139 mg, 0.571 mol) 및 DIPEA(111 mg, 0.858 mol)의 용액. 혼합 용액을 N2 분위기 하에서 3회 탈기시켰다. 이어서, 혼합 용액을 105℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM: MeOH=15:1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(38 mg, 27%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.99 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.84-7.66 (m, 1H), 7.19 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 5.40 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.42-4.26 (m, 1H), 3.60-3.43 (m, 1H), 3.28 (s, 3H), 3.25-3.04 (m, 2H), 3.00 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 2.93-2.75 (m, 2H), 2.72-2.56 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.18-1.12 (m, 2H), 1.11-1.03 (m, 4H), 0.99 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 493 (M+1)+
화합물 A331: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4,4-디플루오로크로만-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 6-브로모스피로[크로만-4,2'-[1,3]디티올란]
DCM(40 mL) 중 6-브로모-크로만-4-온(2.0 g, 8.8 mmol)의 교반된 용액에 0℃에서 1,2-에탄디티올(1.6 g, 17.6 mmol) 및 보론 트리플루오라이드 에테레이트(640 mg, 4.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후 이를 1.0 N NaOH 용액에 부었다. 혼합물을 DCM으로 추출하고 유기 층을 분리하고, 농축시키고 실리카 크로마토그래피(PE 중 10% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물(2.3 g, 86%)을 얻었다.
단계 B: 6-브로모-4,4-디플루오로크로만
DCM(50 mL) 중 N-요오도숙신이미드(3.4 g, 15 mmol)의 현탁액을 -70℃로 냉각시킨다. 하이드로겐 플루오라이드 피리딘 착물(4.2 g, 30 mmol, 70%)을 적가한다. DCM(-70℃에서 냉각) 중 6-브로모스피로[크로만-4,2'-[1,3]디티올란](2.3 g, 7.6 mmol)의 용액을 적가하고 혼합물을 -70℃에서 30분 동안 교반한다. 이어서, 반응 용액을 헥산 및 DCM의 혼합물에 붓고 생성된 혼합물을 여과시킨다. 여액을 소듐 바이설파이트 수용액으로 세척하였다. 유기 상을 농축시키고 실리카 크로마토그래피(PE 중 10% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물(1.3 g, 68%)을 얻었다.
단계 C: 1-(4,4-디플루오로크로만-6-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 6-브로모-4,4-디플루오로크로만(500 mg, 2 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.4 g, 4 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(140 mg, 0.2 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 EA(50 mL)로 희석하고, 염수(20 mL x 2)로 세척하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고 유기 층을 HCl/디옥산(4M, 5 mL)으로 처리하고, 염수(20 mL x 2), NaHCO3(20 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(320 mg, 75%)을 얻었다.
단계 D: 1-(4,4-디플루오로크로만-6-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 5-아세틸-2-메틸이소인돌린-1,3-디온(320 mg, 1.5 mmol)의 용액에 NaBH4(80 mg, 2.1 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO3(50 mL)로 처리하고, EA(50 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 추출물을 염수(50 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(280 mg, 86%)을 얻었다.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4,4-디플루오로크로만-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(5 mL) 중 1-(4,4-디플루오로크로만-6-일)에탄-1-올(60 mg, 0.28 mmol), 2-(7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴(71 mg, 0.18 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸 포스포늄 요오다이드(68 mg, 0.28 mmol)의 용액에 DIPEA(116 mg, 0.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EA(10 mL x 2)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM:MeOH =15:1) 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(0.88 mg, 1%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80 - 8.50 (m, 1H), 7.59 - 7.43 (m, 2H), 7.05 - 7.00 (m, 1H), 5.75 - 5.65 (m, 1H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 4.50 - 4.25 (m, 4H), 4.01 - 3.95 (m, 1H), 3.55 - 3.25 (s, 5H), 3.07 - 2.95 (m, 1H), 2.75 - 2.62 (m, 1H), 2.52 - 2.48 (m, 2H), 2.02 - 1.88 (m, 3H), 1.57 - 1.55 (m, 3H), 1.30 - 1.18 (m, 3H) ppm. MS: M/e 497 (M+1)+.
화합물 A332: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(15 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(912 mg, 4 mmol), (4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메탄올(1.3 g, 4.8 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(1.9 g, 8 mmol) 및 DIPEA(2 g, 16 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 100℃로 밤새 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(EtOAc/PE=1/3)에 의해 정제하여 표제 화합물(700 mg, 36%)을 얻었다. MS: M/e 482 (M+1)+.
단계 B: (2R,5S)-2-에틸-1-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-5-메틸피페라진
DCM(10 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트(700 mg, 1.5 mmol)의 용액에 TFA(3 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물(1.4 g, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 382 (M+1)+.
단계 C: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 ml) 중 중간체 2(76 mg, 0.2 mmol), (2R,5S)-2-에틸-1-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-5-메틸피페라진(106 mg, 0.28 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 N2 분위기 하에서 90℃로 밤새 가열하였다. 용매를 진공 하에서 제거하였다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH=13/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 33%)을 얻었다. MS: M/e 613 (M+1)+.
단계 D: 7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
MeOH(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(40 mg, 0.065 mmol)의 용액에 디옥산 중 HCl(g) 용액(2 mL, 8 mmol, 4M)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용매를 진공 하에서 제거하여 표제 화합물(40 mg, 미정제)을 얻었고, 이를 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 529 (M+1)+.
단계 E: 2-(7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
DMF(2 mL) 중 7-((2S,5R)-5-에틸-4-((4-플루오로페닐)(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)메틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(30 mg, 0.056 mmol) 및 K2CO3(24 mg, 0.17 mmol)의 용액에 2-요오도아세토니트릴(19 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고 염수(20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC(DCM/MeOH=13/1)에 의해 정제하여 표제 화합물(12 mg, 37%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79-8.72 (m, 1H), 8.16 - 7.96 (m, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.66 - 7.53 (m, 2H), 7.07 (q, J = 8.9 Hz, 2H), 5.60 (s, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.03-4.94 (m, 1H), 3.58-3.43 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.13-2.99 (m, 1H), 2.88 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 2.58 (s, 1H), 2.49-2.34 (m, 1H), 1.73 - 1.54 (m, 2H), 1.44 (dd, J = 9.8, 6.6 Hz, 3H), 0.70 (dd, J = 16.7, 7.5 Hz, 3H). MS: M/e 568 (M+1)+.
화합물 A335: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-4-(1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(부트-2-인-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
DMF/H2O(5 mL/2 mL) 중 중간체 10에 대한 단계 C의 화합물(361 mg, 1 mmol)의 교반된 용액에 K2CO3(276 mg, 2 mmol)에 이어서, 1-브로모부트-2-인(266 mg, 2 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(50 mL)로 처리하고 EtOAc(15 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(192 mg, 46.5%)을 얻었다. MS: M/e 414 (M+1)+.
단계 B: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH2Cl2(5 mL) 중 tert-부틸 (2R,5S)-4-(2-(부트-2-인-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(192 mg, 0.46 mmol)의 교반된 용액에 TFA(2 mL)를 첨가하였다. 그 후, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 수성 K2CO3로 pH=9~10으로 염기성화하고, CH2Cl2/IPA(3/1, 30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(135 mg, 93%)을 얻었다. MS: M/e 314 (M+1)+.
단계 C: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-4-(1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(4 mL) 중 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(104.8 mg, 0.335 mmol), 1-(3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일)에탄-1-올(75 mg, 0.335 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(243 mg, 1 mmol) 및 DIPEA(432 mg, 3.35 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(58 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.13 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.21 - 8.09 (m, 3H), 7.90 (s, 1H), 7.15 - 6.83 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.77 - 4.18 (m, 2H), 4.04 - 3.80 (m, 1H), 3.72 - 3.61 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.11 - 2.81 (m, 2H), 2.18 (d, J = 12.0 Hz, 0.5H), 1.85 (s, 3H), 1.50 - 1.40 (m, 4.5H), 1.20 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 2H) ppm. MS: M/e 520 (M+1)+.
화합물 A337: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-(2-클로로피리딘-3-일)에탄-1-올
THF(10 mL) 중 메틸 2-(2-클로로피리딘-3-일)아세테이트(500 mg, 2.5 mmol)의 용액에 LiAlH4의 용액(1M, 3.7 mL, 3.7 mmol)을 서서히 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하고, 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(330 mg,83%)을 얻었다. MS: M/e 158 (M+1)+.
단계 B: 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘
톨루엔(15 mL) 중 2-(2-클로로피리딘-3-일)에탄-1-올(300 mg, 1.9 mmol)의 혼합물에 NaH(60%, 0.15 g, 3.8 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 갈색 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(190 mg, 82%)을 얻었다. MS: M/e 122 (M+1)+.
단계 C:
2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘 7-옥사이드
DCM(20 mL) 중 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘(0.19 g, 1.57 mmol)의 용액에 3-클로로벤조퍼옥소산(540 mg, 3.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.14 g, 60%)을 얻었다. MS: M/e 138 (M+1)+.
단계 D:
2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-카르보니트릴
CH3CN(5 mL) 중 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘 7-옥사이드(0.12 g, 0.87 mmol)의 용액에 TMSCN(434 mg, 4.4 mmol), Et3N(354 mg, 3.5 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 62%)을 얻었다. MS: M/e 147 (M+1)+.
단계 E: 1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-온
THF(3 mL) 중 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-카르보니트릴(80 mg, 0.54 mmol)의 혼합물에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(0.55 mL, 3M, 1.54 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 표제 화합물(80 mg)을 얻었다. MS: M/e 164 (M+1)+.
단계 F: 1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-온(80 mg, 0.49 mmol)의 용액에 NaBH4(19 mg, 0.49 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(70 mg)을 얻었다. MS: M/e 166(M+1)+.
단계 G: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 mL) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1-(2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일)에탄-1-올(50 mg, 0.3 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(110 mg, 0.45 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피(DCM/ MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물(16 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 1H), 7.04 (dd, J = 22.9, 7.4 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 4.64 (td, J = 8.7, 3.5 Hz, 3H), 3.79 - 3.49 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.29 - 3.21 (m, 3H), 3.16 - 2.29 (m, 3H), 2.15 - 1.48 (m, 4H), 1.31 (dd, J = 12.8, 6.6 Hz, 3H), 0.97 (dt, J = 24.1, 7.4 Hz, 3H), 0.78 - 0.65 (m, 3H) ppm. MS: M/e 476 (M+1)+.
화합물 A339: 2-(4-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)프로필)페닐)-2-메틸프로판니트릴
단계 A: 2-(4-(1-하이드록시프로필)페닐)-2-메틸프로판니트릴
2-(4-브로모페닐)-2-메틸프로판니트릴(448 mg, 2 mmol)을 테트라하이드로푸란(5 mL)에 용해시키고 -78℃로 냉각시켰다. 헥산 중 n-부틸리튬의 용액(1.6 M, 1.9 mL, 3 mmol)을 저온의 반응 혼합물에 적가하고 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 프로피온알데히드(174 mg, 3 mmol)를 -78℃에서 적가하였다. 첨가가 완료되면, 반응물을 0℃까지 1시간 동안 가온하였다. 포화 수성 암모늄 클로라이드 및 물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고 유기 층을 염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(270 mg, 66%)을 얻었다. MS: M/e 204 (M+1)+.
단계 B: 2-(4-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)프로필)페닐)-2-메틸프로판니트릴
MeCN(3 mL) 중 2-(4-(1-하이드록시프로필)페닐)-2-메틸프로판니트릴(30 mg, 0.15 mmol), 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(72 mg, 0.3 mmol) 및 DIPEA(77 mg, 0.6 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(8 mg, 10%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.57 - 7.47 (m, 2H), 7.41 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 5.54 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.65-3.40 (m, 5H), 3.19 (s, 1H), 2.99 (s, 1H), 2.73 - 2.30 (m, 2H), 1.94 (s, 2H), 1.86 - 1.60 (m, 9H), 1.49 (s, 2H),1.06- 0.94 (m, 3H), 0.76-0.55 (m, 6H) ppm. MS: M/e 514 (M+1)+.
화합물 A341: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 4-(4-브로모벤질)-2,2-디메틸모르폴린
아세토니트릴(10 ml) 중 1-브로모-4-(브로모메틸)벤젠(500 mg, 2 mmol), 2,2-디메틸모르폴린(253 mg, 2.2 mmol) 및 DIPEA(774 mg, 3 mmol)의 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(610 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 284 (M+1)+.
단계 B: 1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-온
톨루엔(5 mL) 중 4-(4-브로모벤질)-2,2-디메틸모르폴린(600 mg, 2.12 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.15 g, 3.2 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(147 mg, 0.21 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 용액에 TFA(1 mL)를 적가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 포화 수성 Na2CO3로 pH ~ 8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(70 mg, 13%)을 얻었다. MS: M/e 248 (M+1)+.
단계 C: 1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-올
MeOH(3 mL) 중 1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-온(70 mg, 0.28 mmol)의 용액에 NaBH4(10 mg, 0.28 mmol)를 0℃에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 처리하고, DCM으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(70 mg, 미정제)을 추가 정제 없이 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 250 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
MeCN(2 mL) 중 1-(4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-올(70 mg, 0.28 mmol), 중간체 10(76 mg, 0.25 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(121 mg, 0.5 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 2%, FA 염)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.23 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.48 - 7.34 (m, 4H), 5.57 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.85- 4.37 (m, 2H), 3.94 - 3.77 (m, 2H), 3.69 (d, J = 18.9 Hz, 4H), 3.44 (s, 3H), 3.19 - 3.03 (m, 1H), 2.94 (dd, J = 22.1, 11.4 Hz, 1H), 2.57 (s, 2H), 2.49 - 2.31 (m, 3H), 1.49 - 1.05 (m, 15H) ppm. MS: M/e 532 (M+1)+.
화합물 A343: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)벤조에이트
CH2Cl2(10 mL) 중 메틸 4-포르밀벤조에이트(802 mg, 5 mmol), (2S,6R)-2,6-디메틸모르폴린(575 mg, 5 mmol) 및 AcOH(0.5 mL)의 용액을 2시간 동안 교반한 후, NaBH(OAc)3(1.59 g, 7.5 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석한 후, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(480 mg, 36.5%)을 얻었다. MS: M/e 264 (M+1)+.
단계 B: 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)벤조산
MeOH(5 mL) 중 메틸 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)벤조에이트(480 mg, 1.83 mmol)의 교반된 용액에 수성 NaOH(2.0 M, 2 mL)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 수성 층을 얻었고, 이를 수성 HCl로 pH=3~4로 산성화한 후, CH2Cl2/IPA(3/1, 20mL x 4)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(420 mg, 92.2%)을 얻었다. MS: M/e 250 (M+1)+.
단계 C: 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)-N-메톡시-N-메틸벤즈아미드
CH2Cl2(10 mL) 중 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)벤조산(420 mg, 1.62 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(189 mg, 1.94 mmol), HATU(741 mg, 1.94 mmol) 및 DIEPA(418 mg, 3.24 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(130 mg, 22.7%)을 얻었다. MS: M/e 293 (M+1)+.
단계 D: 1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-온
건조 THF(10 mL) 중 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)-N-메톡시-N-메틸벤즈아미드(130 mg, 0.43 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 0.17 mL, 0.52 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 그 후, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 18%)을 얻었다. MS: M/e 248 (M+1)+.
단계 E: 1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-온(20 mg, 0.078 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(3 mg, 0.078 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고 CH2Cl2/IPA(3/1, 10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물(20 mg, 99%)을 얻었다. MS: M/e 250 (M+1)+.
단계 F: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(4 mL) 중 중간체 5(32.8 mg, 0.1 mmol), 1-(4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐)에탄-1-올(20 mg, 0.08 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(72.9 mg, 0.3 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(3 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.41 - 7.25 (m, 4H), 5.54 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.46 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 3.77 - 3.55 (m, 3H), 3.52 (s, 2H), 3.50 - 3.45 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.26 - 2.82 (m, 2H), 2.74 (t, J = 10.6 Hz, 2H), 2.65 - 2.32 (m, 2H), 2.15 - 1.92 (m, 1H), 1.86 - 1.47 (m, 6H), 1.38 - 1.29 (m, 3H), 1.10 (t, J = 5.6 Hz, 6H), 1.05 - 0.91 (m, 3H), 0.62 (dt, J = 35.2, 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 560 (M+1)+.
화합물 A345: 2-(4-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴
단계 A: 2-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴
건조 디메틸포름아미드(5 mL) 중 60% 소듐 하이드라이드(360 mg, 9 mmol)의 교반된 현탁액에 질소 하에서 건조 디메틸포름아미드(5 mL) 중 2-(4-브로모-3-플루오로페닐)아세토니트릴(642 mg, 3 mmol)의 용액을 적하하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 건조 디메틸포름아미드(1 mL) 중 요오도메탄(1.06 g, 7.5 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고 에틸 아세테이트(20 ml* 3)로 추출하였다. 조합한 유기 추출물을 포화 소듐 클로라이드 용액으로 세척한 후, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과시키고 진공에서 증발시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(330 mg, 46%)을 얻었다. MS: M/e 242 (M+1)+.
단계 B: 2-(4-아세틸-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴
톨루엔(3 mL) 중 2-(4-브로모-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴(120 mg, 0.5 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(270 mg, 0.75 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(35 mg, 0.05 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 용액에 HCl(0.5 mL, 농축)을 적가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH ~ 8로 처리하고, 염수(20 mL)로 세척하고, 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(40 mg, 39%)을 얻었다. MS: M/e 206 (M+1)+.
단계 C: 2-(3-플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)-2-메틸프로판니트릴
MeOH(2 mL) 중 2-(4-아세틸-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴(40 mg, 0.2 mmol)의 용액에 NaBH4(7 mg, 0.16 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 잔류물을 포화 수성 NaHCO3(10 mL)로 처리하고, DCM(10 mL x 3)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물(40 mg, 미정제)을 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 D: 2-(4-(1-((2R,5S)-4-(2-(시아노메틸)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-7-일)-2,5-디에틸피페라진-1-일)에틸)-3-플루오로페닐)-2-메틸프로판니트릴
MeCN(1 mL) 중 2-(3-플루오로-4-(1-하이드록시에틸)페닐)-2-메틸프로판니트릴(25 mg, 0.12 mmol), 중간체 5(33 mg, 0.1 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(48 mg, 0.2 mmol) 및 DIPEA(51 mg, 0.4 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(2 mg, 4%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.64 (dt, J = 30.7, 7.8 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 11.3 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.22-3.99 (m, 1H), 3.54 - 3.40 (m, 4H), 3.12 (s, 1H), 2.93 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 2.69 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 2.47 - 2.32 (m, 1H), 2.13-1.90 (m, 1H), 1.73 (d, J = 5.8 Hz, 5H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.40 - 1.25 (m, 6H), 1.06 - 0.93 (m, 3H), 0.80-0.59 (m, 3H) ppm. MS: M/e 518 (M+1)+.
화합물 A347: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 2-브로모-5-(디플루오로메틸)피리딘
CH2Cl2(40 mL) 중 6-브로모니코틴알데히드(1.86 g, 10 mmol)의 교반된 용액에 CH2Cl2(5 mL) 중 DAST(3.2 g, 20 mmol)의 용액을 0℃에서 적가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3로 켄칭하고, CH2Cl2(40 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.6 g, 76.9%)을 얻었다. MS: M/e 208/210 (M+1)+.
단계 B: 1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온
톨루엔(20 mL) 중 2-브로모-5-(디플루오로메틸)피리딘(1.6 g, 7.7 mmol)의 교반된 용액에 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(2.6 g, 7.2 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(270 mg, 0.385 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고 수성 HCl(2.0 M, 5 mL)로 10분 동안 세척하였다. 이어서, EtOAc(30 mL x 2)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(400 mg, 30%)을 얻었다. MS: M/e 172 (M+1)+.
단계 C: 1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(400 mg, 2.34 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(89 mg, 2.34 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고 EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(80 mg, 20%)을 얻었다. MS: M/e 174 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(4 mL) 중 중간체 5(32.8 mg, 0.1 mmol), 1-(5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올(26 mg, 0.15 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(72.9 mg, 0.3 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물 A347(미정제)을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A347a(6 mg) 및 화합물 A347b(8 mg)를 얻었다.
화합물 A347a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.64 (s, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.88 - 3.79 (m, 1H), 3.57-3.51 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.82-2.75 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 1H), 1.79 - 1.63 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.65 (t, J = 6.8 Hz, 3H)ppm. MS: M/e 484 (M+1)+.
화합물 A347b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.65 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.91 (t, J = 55.6 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.06 - 3.98 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.41 - 3.35 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.06 - 2.91 (m, 2H), 2.36 (s, 1H), 2.17 - 2.04 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 1H), 1.64 - 1.53 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.73 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 484 (M+1)+
화합물 A348: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올
THF(10 mL) 중 5-(트리플루오로메틸)피콜린알데히드(525 mg, 3 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 1 mL, 3 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(30 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(420 mg, 73.2%)을 얻었다. MS: M/e 192(M+1)+.
단계 B: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(4 mL) 중 중간체 5(32.8 mg, 0.1 mmol), 1-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올(29 mg, 0.15 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(72.9 mg, 0.3 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물 화합물 A348(미정제)을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 추가 정제하여 화합물 A348a(8 mg) 및 화합물 A348b(7 mg)를 얻었다.
화합물 A348a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.92 - 3.81 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.19-3.12 (m, 1H), 2.83-2.76 (m, 1H), 2.26-2.20 (m, 1H), 2.01 - 1.46 (m, 4H), 1.37 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.66 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 502 (M+1)+.
화합물 A348b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.80 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.12 - 4.02 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.37 (s, 1H), 2.16 - 1.77 (m, 2H), 1.66 - 1.51 (m, 2H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 6.8 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 502 (M+1)+
화합물 A350: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 5-브로모-2-사이클로프로필피리딘
THF(10 mL) 중 2,5-디브로모피리딘(2.37 g, 10 mmol) 및 Pd(PPh3)4(1.05 g, 1 mmol)의 용액에 사이클로로필아연 클로라이드(THF 중 0.5M, 22 mL, 11 mmol)를 첨가하고 혼합물을 아르곤 분위기 하의 70℃에서 밤새 교반하였다. 23℃로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 진공에서 용매를 제거하여 갈색 오일을 남겼고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4 g, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 198 (M+1)+.
단계 B: 1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 5-브로모-2-사이클로프로필피리딘(600 mg, 3 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(1.6 g, 4.5 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(210 mg, 0.3 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 용액에 TFA(0.5 mL)를 적가하고 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3로 pH ~ 8로 처리하고, 염수(20 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(80 mg, 16%)을 얻었다. MS: M/e 162 (M+1)+.
단계 C: 1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에탄-1-올
MeOH(2 mL) 중 1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에탄-1-온(80 mg, 0.5 mmol)의 용액에 NaBH4(15 mg, 0.4 mmol)를 실온에서 첨가하고 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 처리하고, DCM으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(20 mg, 25%)을 얻었다. MS: M/e 164 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 mL) 중 1-(6-사이클로프로필피리딘-3-일)에탄-1-올(30 mg, 0.18 mmol), 중간체 5(40 mg, 0.12 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(58 mg, 0.24 mmol) 및 DIPEA(62 mg,0.48 mmol)의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-TLC에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4 mg, 3%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.32 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.26 - 7.14 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.85-3.60 (m, 1H), 3.54 - 3.42 (m, 4H), 3.28 - 3.11 (m, 1H), 3.03-2.82(m, 1H), 2.74 - 2.24 (m, 2H), 2.08 (s, 1H), 1.99 - 1.76 (m, 1H), 1.74 - 1.49 (m, 3H), 1.42 - 1.27 (m, 5H), 1.08 - 0.89 (m, 6H), 0.67 (dt, J = 13.9, 6.7 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 474 (M+1)+.
화합물 A351: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에탄-1-온
톨루엔(10 mL) 중 5-브로모-2-(디플루오로메틸)피리딘(1 g, 4.83 mmol), 트리부틸(1-에톡시비닐)스탄난(2.1 g, 5.79 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(339 mg, 0.48 mmol)의 혼합물을 N2 하의 100℃에서 밤새 교반하였다. 용액에 HCl(0.3 mL, 1,4-디옥산 중 4 M)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EA로 희석하고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(520 mg, 63%)을 얻었다. MS: M/e 172 (M+1)+.
단계 B: 1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에탄-1-올
MeOH(15 mL) 중 1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에탄-1-온(150 mg, 0.87 mmol)의 용액에 NaBH4(33 mg, 0.87 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(200 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(120 mg, 79%)을 얻었다. MS: M/e 174 (M+1)+.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(3 ml) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), 1-(6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일)에탄-1-올(26 mg, 0.15 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(98 mg, 0.76 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 완료된 후, 용액을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물 A351을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A351a(24 mg) 및 화합물 A351b(20 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A351a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.63 (s, 1H), 8.04 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.73 (t, J = 55.1 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.87 - 4.12 (m, 3H), 3.94 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.02 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.92 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.44 - 2.27 (m, 1H), 2.16 - 2.04 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 1H), 1.65 - 1.51 (m, 2H), 1.40 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.74 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS: M/e 484 (M+1)+.
화합물 A351b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.67 (s, 1H), 8.05 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.68 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.72 (t, J = 55.3 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.85 - 4.23 (m, 2H), 3.78 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.73 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.99 - 1.83 (m, 1H), 1.76 - 1.62 (m, 2H), 1.62 - 1.48 (m, 1H), 1.37 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 6.7 Hz, 3H), 0.63 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS: M/e 484 (M+1)+.
화합물 A352: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A:
5-하이드록시-6-요오도피콜린산
NH3.H2O(30 mL) 중 5-하이드록시피리딘-2-카르복실산(1 g, 6.8 mmol, 95%)의 교반된 용액에 H2O(40 mL) 중 KI(5.97 g, 34 mmol) 및 I2(1.82 g, 6.8 mmol)의 용액을 실온에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 HCl(1M)로 pH=3으로 산성화하였다. 생성된 혼합물을 EA(3 x 150 mL)로 추출하였다. 조합한 수 층을 감압 하에서 농축시켜 표제 화합물(1 g, 55%)을 얻었다. MS: M/e 266(M+1)+.
단계 B:
메틸 5-하이드록시-6-요오도피콜리네이트.
MeOH 중 5-하이드록시-6-요오도피리딘-2-카르복실산(1 g, 3.7 mmol)의 교반된 용액에 SOCl2(1.3 mL, 18 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 역 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(600 mg, 53%)을 얻었다. MS: M/e 280 (M+1)+.
단계 C:
메틸 6-요오도-5-((2-메틸알릴)옥시)피콜리네이트.
아세톤 중 메틸 5-하이드록시-6-요오도피리딘-2-카르복실레이트(500 mg, 1.6 mmol), 3-브로모-2-메틸프로프-1-엔(250 mg, 1.8 mmol) 및 K2CO3(609 mg, 4.1 mmol)의 용액을 질소 분위기 하의 60℃에서 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(500 mg, 89%)을 얻었다. MS: M/e 334 (M+1)+.
단계 D:
메틸 3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복실레이트.
벤젠 중 메틸 6-요오도-5-[(2-메틸프로프-2-엔-1-일)옥시]피리딘-2-카르복실레이트(500 mg, 1.5 mmol), n-Bu3SnH(689 mg, 2.25 mmol) 및 AIBN(26 mg, 0.15 mmol)의 용액을 질소 분위기 하의 80℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 생성된 혼합물에 KF(10%, 5 mL)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 EA(3 x 50 mL)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 후, 여액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(240 mg, 77%)을 얻었다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 E:
3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복실산.
MeOH(4 mL)/ 물(1 mL) 중 메틸 3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복실레이트(0.2 g, 0.97 mmol)의 용액에 LiOH.H2O(58 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고 시트르산으로 pH = 5~6으로 산성화하고, DCM(20 mL x 2)으로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(0.18 g, 96%)을 얻었다. MS: M/e 194 (M+1)+.
단계 F:
N-메톡시-N,3,3-트리메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복스아미드.
DMF(2 mL) 중 3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복실산(0.14 g, 0.72 mmol)의 용액에 HATU(548 mg, 1.4 mmol), DIPEA(465 mg, 3.6 mol) 및 N,N-디메틸-하이드록실아민 하이드로클로라이드 염(210 mg, 2.2 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(120 mg, 70%)을 얻었다. MS: M/e 237 (M+1)+.
단계 G: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에탄-1-온
THF(5 mL) 중 N-메톡시-N,3,3-트리메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-카르복스아미드(120 mg, 0.51 mmol)의 혼합물에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(0.33 mL, 3M, 1.02 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 수성 NH4Cl을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 회전 증발기를 사용하여 농축시켜 표제 화합물(110 mg)을 얻었다. MS: M/e 192 (M+1)+.
단계 H: 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에탄-1-온(110 mg, 0.57 mmol)의 용액에 NaBH4(21 mg, 0.57 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(100 mg)을 얻었다. MS: M/e 194 (M+1)+.
단계 I: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(1 mL) 중 중간체 5(30 mg, 0.09 mmol)의 용액에 1-(3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일)에탄-1-올(26 mg, 0.14 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(67 mg, 0.27 mmol) 및 DIPEA(118 mg, 0.9 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(3 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 23.9, 8.4 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.3, 5.3 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.00 - 3.67 (m, 1H), 3.50 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.30 - 2.65 (m, 3H), 2.35 (dd, J = 23.5, 11.2 Hz, 1H), 2.14 - 1.50 (m, 4H), 1.38 (d, J = 1.8 Hz, 6H), 1.33 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.99 (dt, J = 27.2, 7.4 Hz, 3H), 0.69 (dt, J = 20.0, 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 504 (M+1)+.
화합물 A354: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 3-플루오로-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)피콜린아미드
CH2Cl2(15 mL) 중 3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피콜린산(418 mg, 2 mmol), N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드(234 mg, 2.4 mmol), HATU(917 mg, 2.4 mmol) 및 DIEPA(516 mg, 4 mmol)의 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(430 mg, 85.3%)을 얻었다. MS: M/e 253 (M+1)+.
단계 B: 1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온
건조 THF(10 mL) 중 3-플루오로-N-메톡시-N-메틸-5-(트리플루오로메틸)피콜린아미드(430 mg, 1.7 mmol)의 교반된 용액에 MeMgBr(3.0 M, 0.6 mL, 1.79 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 그 후, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응물을 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(미정제)을 얻었고, 이를 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 208 (M+1)+.
단계 C: 1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올
MeOH(10 mL) 중 1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-온(미정제, 1.7 mmol)의 교반된 용액에 NaBH4(65 mg, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)에 붓고 EtOAc(10 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(150 mg, 42%)을 얻었다. MS: M/e 210 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(4 mL) 중 중간체 5(32.8 mg, 0.1 mmol), 1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)에탄-1-올(31.3 mg, 0.15 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(72.9 mg, 0.3 mmol) 및 DIPEA(129 mg, 1 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(15 mL)로 희석하고, H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 A354(미정제)를 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 화합물 A354a(3 mg) 및 화합물 A354b(4 mg)를 얻었다.
화합물 A354a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.74 (s, 1H), 7.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.35 - 4.25 (m, 1H), 3.57 - 3.47 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.35-3.25 (m, 2H), 3.15 - 2.85 (m, 2H), 2.46 - 2.37 (m, 1H), 1.93 - 1.79 (m, 1H), 1.70 - 1.50 (m, 3H), 1.46 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.66 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 520 (M+1)+.
화합물 A354b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.73 (s, 1H), 7.99 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.51 - 4.41 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.38-3.25 (m, 4H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 2.86 - 2.77 (m, 1H), 1.83 - 1.56 (m, 4H), 1.52 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.91 - 0.76 (m, 6H) ppm. MS: M/e 520 (M+1)+
화합물 A362: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 5-(브로모디플루오로메톡시)-3-플루오로피콜리네이트
NMP(20 mL) 중 메틸 3-플루오로-5-하이드록시피콜리네이트(1.71 g, 10 mmol)의 교반된 용액에 NaH(60%, 0.8 g, 20 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 디브로모디플루오로메탄(6.3 g, 30 mmol)을 첨가하고 혼합물을 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(30 mL)로 켄칭하고, EtOAc(20 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.9 g, 63.3%)을 얻었다. MS: M/e 300/302 (M+1)+.
단계 B: 메틸 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피콜리네이트
CH2Cl2(30 mL) 중 메틸 5-(브로모디플루오로메톡시)-3-플루오로피콜리네이트(1.9 g, 6.33 mmol)의 용액에 AgBF4(1.84 g, 9.5 mmol)를 N2 하의 -70℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.4 g, 92.5%)을 얻었다. MS: M/e 240 (M+1)+.
단계 C: 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피콜린산
MeOH(5 mL) 중 메틸 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피콜리네이트(478 mg, 2 mmol)의 교반된 용액에 수성 NaOH(2.0 M, 2 mL)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 잔류물을 얻었고, 이를 H2O에 용해시키고 시트르산으로 pH=3~4로 산성화하고 EtOAc(15 mL x 3)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(400 mg, 88.9%)을 얻었다. MS: M/e 226 (M+1)+.
화합물 A362, 및 이의 분리된 이성질체 화합물 A362a(12 mg) 및 A362b(14 mg)를 통상의 기술자가 인지할 수 있는 적절한 조건 하에서 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피콜린산을 사용하여 화합물 A354, 화합물 A354a 및 A354b에 대해 기재된 바와 유사한 절차에 따라 제조하였다.
화합물 A362a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.45 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.73 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.23 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.32 - 3.30 (m, 2H), 3.12 - 3.05 (m, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.43 - 2.33 (m, 1H), 1.94 - 1.79 (m, 1H), 1.68 - 1.47 (m, 3H), 1.45 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.99 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.64 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 536 (M+1)+.
화합물 A362b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.45 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.73 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.39 (dd, J = 13.2, 6.4 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.37-3.33 (M, 1H), 3.32 - 3.30 (m, 2H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 2.85-2.77 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 1.85 - 1.53 (m, 4H), 1.50 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.82 (q, J = 7.6 Hz, 6H) ppm. MS: M/e 536 (M+1)+
화합물 A368: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(2,6-나프티리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 3-브로모-4-(디메톡시메틸)피리딘.
MeOH(5 mL) 중 3-브로모이소니코틴알데히드(1 g, 5.4 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠설폰산(1.1 g, 6.5 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 5시간 동안 교반하였다. NaHCO3의 포화 용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 DCM으로 추출한 후, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1.1 g, 88%)을 얻었다. MS: M/e 232 (M+1)+.
단계 B:
4-(디메톡시메틸)니코틴알데히드.
THF(15 mL) 중 3-브로모-4-(디메톡시메틸)피리딘(1.1 g, 4.7 mmol)의 용액에 n-BuLi의 용액(mL, 1 mol)을 -78℃에서 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, DMF(1 g, 14.2 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 -60℃ 미만에서 2시간 동안 교반하고, NH4Cl의 포화 용액에 의해 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EA로 추출한 후, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(0.5 g, 58%)을 얻었다. MS: M/e 182 (M+1)+.
단계 C: 메틸 (E)-2-아세트아미도-3-(4-(디메톡시메틸)피리딘-3-일)아크릴레이트.
DCM(15 mL) 중 4-(디메톡시메틸)니코틴알데히드(500 mg, 2.7 mmol)의 용액에 아세틸아미노-(디메톡시-포스포릴)-아세트산 메틸 에스테르(717 mg, 3 mmol) 및 1.8-디아자바이사이클로[5.4.0]운데스-7-엔(456 mg, 3 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 붓고, 디클로로메탄으로 추출하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(600 mg)을 얻었다. MS: M/e 295 (M+1)+.
단계 D: 메틸 2,6-나프티리딘-3-카르복실레이트.
톨루엔(15 mL) 중 메틸 (E)-2-아세트아미도-3-(4-(디메톡시메틸)피리딘-3-일)아크릴레이트(600 mg, 2 mmol)의 혼합물에 4-메틸벤젠설폰산(0.36 g, 1.8 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 갈색 잔류물을 EA에 용해시키고, NaHCO3의 포화 용액으로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(200 mg, 51%)을 얻었다. MS: M/e 189 (M+1)+.
단계 E:
2,6-나프티리딘-3-카르복실산
MeOH(4 mL)/ 물(1 mL) 중 메틸 2,6-나프티리딘-3-카르복실레이트(0.2 g, 1.06 mmol)의 용액에 LiOH.H2O(64 mg, 1.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고 HCl(1M)로 pH = 5~6으로 산성화하고, (DCM: MeOH =10:1)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(0.16 g, 86%)을 얻었다. MS: M/e 175 (M+1)+.
화합물 A368, 및 이의 분리된 이성질체 화합물 A368a(2 mg) 및 A368b(1.5 mg)를 통상의 기술자가 인지할 수 있는 적절한 조건 하에서 2,6-나프티리딘-3-카르복실산을 사용하여 화합물 A354, 화합물 A354a 및 A354b에 대해 기재된 바와 유사한 절차에 따라 제조하였다.
화합물 A368a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.39 (s, 2H), 8.65 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.03 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 4.82 - 4.15 (m, 2H), 4.00 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 3.60 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.22 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.39 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.17 - 1.55 (m, 4H), 1.47 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.59 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A368b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.41 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 8.65 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.03 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 4.80 - 4.16 (m, 2H), 4.20 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.41 - 3.35 (m, 1H),, 3.04 (d, J = 2.6 Hz, 2H), 2.49 (s, 1H), 2.20 - 1.56 (m, 4H), 1.51 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.96 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.71 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 485 (M+1)+.
화합물 A375: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에탄-1-온
CH3CN(5 mL) 중 1-(4-하이드록시페닐)에탄-1-온(272 mg, 2 mmol)의 용액에 3-요오도테트라하이드로푸란(440 mg, 2.2 mmol) 및 K2CO3(552 mg, 4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 병에서 100℃에서 밤새 교반하였다. 3-요오도테트라하이드로푸란(440 mg, 2.2 mmol)의 또 다른 부분을 첨가하고 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O로 희석하고, EtOAc(80 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(250 mg, 60%)을 얻었다. MS: M/e 207 (M+1)+.
단계 B: 1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에탄-1-올
MeOH(5 mL) 중 1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에탄-1-온(250 mg, 1.2 mmol)의 용액에 NaBH4(46 mg, 1.2 mmol)를 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O(10 mL)로 켄칭하고 EtOAc(80 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(180 mg, 72%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.04 - 4.94 (m, 2H), 4.70 - 4.60 (m, 1H), 3.95 - 3.69 (m, 4H), 2.26 - 2.10 (m, 1H), 1.99 - 1.88 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H) ppm.
단계 C: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(1 mL) 중 1-(4-((테트라하이드로푸란-3-일)옥시)페닐)에탄-1-올(42 mg, 0.2 mmol), 중간체 5(32 mg, 0.1 mmol) 및 (시아노메틸) 트리메틸 포스포늄 요오다이드(72 mg, 0.3 mmol)의 용액에 DIPEA(64 mg, 0.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 병에 밀봉하고 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물로 희석하고, EtOAC(60 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(5 mg, 10%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.93 - 7.89 (m, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 6.92 - 6.82 (m, 2H), 5.54 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.04 - 4.96 (m, 1H), 4.02 - 3.80 (m, 4H), 3.75 - 3.45 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.35 -3.31 (m, 1H), 3.21 - 2.78 (m, 2H), 2.65 -2.05 (m, 4H), 2.04 - 1.45 (m, 4H), 1.36 - 1.26 (m, 3H), 1.05 - 0.90 (m, 3H), 0.75 - 0.55 (m, 3H) ppm. MS: M/e 519 (M+1)+.
화합물 A381: 2-(7-((2S,5R)-4-(1-(6-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)피리딘-3-일)에틸)-2,5-디에틸피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 메틸 6-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)니코티네이트
CH2Cl2(15 mL) 중 메틸 6-포르밀니코티네이트(825 mg, 5 mmol), 4,4-디플루오로피페리딘(666 mg, 5.5 mmol) 및 AcOH(0.5 mL)의 용액을 2시간 동안 교반한 후, NaBH(OAc)3(2.12 g, 10 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 혼합물을 CH2Cl2(20 mL)로 희석하였다. 유기 층을 H2O, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(790 mg, 58.5%)을 얻었다. MS: M/e 271 (M+1)+.
단계 B: 6-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)니코틴산
MeOH(5 mL) 중 메틸 6-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)니코티네이트(790 mg, 2.93 mmol)의 교반된 용액에 수성 NaOH(4.0 M, 2 mL)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시켜 수성 층을 얻었고, 이를 수성 HCl로 pH = 3~4로 산성화한 후, CH2Cl2 /IPA(3/1, 30 mL x 6)로 추출하였다. 조합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(606 mg, 80.8%)을 얻었다. MS: M/e 257 (M+1)+.
화합물 A381, 및 이의 분리된 이성질체 화합물 A381a(3 mg) 및 A381b(6 mg)를 통상의 기술자가 인지할 수 있는 적절한 조건 하에서 6-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)니코틴산을 사용하여 화합물 A354, 화합물 A354a 및 A354b에 대해 기재된 바와 유사한 절차에 따라 제조하였다.
화합물 A381a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.49 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 3.92 - 3.85 (m, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.43 (s, 3H), 3.35 - 3.25 (m, 3H), 3.05 - 2.87 (m, 2H), 2.77 - 2.65 (m, 4H), 2.38 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 2.16 - 1.98 (m, 5H), 1.89 - 1.51 (m, 3H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.72 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 567 (M+1)+.
화합물 A381b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.52 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.47 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.72 - 3.67 (m, 1H), 3.55 - 3.46 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.35-3.25 (m, 2H) 3.21 - 3.13 (m, 1H), 2.73 - 2.57 (m, 5H), 2.30 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.08 - 1.91 (m, 5H), 1.72-1.52 (m, 3H), 1.36 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.60 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 567 (M+1)+.
화합물 A383:
2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
단계 A: 4-(4-브로모벤질)모르폴린
DCM(15 ml) 중 4-브로모벤즈알데히드(1 g, 5.41 mmol), 모르폴린(0.56 g, 6.44 mmol) 및 STAB(2.3 g, 10.85 mmol)의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 염수(10 ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 PE 중 15-30% EtOAc를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(1 g, 72%)을 얻었다. MS: M/e 256,258 (M+1)+.
단계 B: 1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에탄-1-온
톨루엔(15 ml) 중 4-(4-브로모벤질)모르폴린(1 g, 3.91 mmol), 에틸 트리부틸스탄난카르복실레이트(2.1 g, 5.82 mmol) 및 Pd(PPh3)2Cl2(137 mg, 0.20 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 용액을 실온으로 냉각시켰다. HCl/1,4-디옥산(4M, 2 ml)을 첨가하고 실온에서 10분 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc(15 ml)로 희석하고, 수성 Na2CO3(10 ml x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 DCM 중 0-10% MeOH를 이용하는 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(530 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 220 (M+1)+.
단계 C: 1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에탄-1-올
MeOH(5 ml) 중 1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에탄-1-온(530 mg, 2.42 mmol) 및 NaBH4(92 mg, 2.42 mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 용액을 EtOAc(20 ml)로 희석하고, 염수(10 ml x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축 건조시켜 표제 화합물(530 mg, 미정제)을 얻었다. MS: M/e 222 (M+1)+.
단계 D: 2-(7-((2S,5R)-2,5-디에틸-4-(1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-2H-피라졸로[4,3-b]피리딘-2-일)아세토니트릴
CH3CN(2 ml) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol), 1-(4-(모르폴리노메틸)페닐)에탄-1-올(67.4 mg, 0.30 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(111 mg, 0.46 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.53 mmol)의 용액을 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 ml)로 희석하고 염수(10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A383(20 mg)을 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A383a(6 mg) 및 화합물 A383b(7 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A383a(이전 피크): 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.97 (s, 1H), 7.28 (q, J = 8.0 Hz, 4H), 5.60 (s, 2H), 5.38 (s, 1H), 3.67 (q, J = 6.3 Hz, 1H), 3.57 (t, 4H), 3.44 (s, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.26 (s, 3H), 3.10 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 2.74 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 2.34 (s, 5H), 2.09 - 1.94 (m, 1H), 1.69 - 1.54 (m, 1H), 1.49 - 1.37 (m, 2H), 1.27 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.58 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 532 (M+1)+.
화합물 A383b(이후 피크): 1H NMR(400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.98 (s, 1H), 7.32 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.61 (s, 2H), 5.37 (s, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 5H), 3.44 (s, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.04 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.48 (s, 2H), 2.32 (s, 4H), 2.22 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 1.93-1.79 (m, 1H), 1.64-1.36 (m, 3H), 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.48 (t, J = 6.7 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 532 (M+1)+.
화합물 A390: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 5-브로모-2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔
톨루엔(50 mL) 중 4-브로모벤젠-1,2-디올(7.6 g, 40.2 mmol) 및 아세톤(4.7 g, 80.4 mmol)의 혼합물에 PBr3(4.4 g, 16.3 mmol)를 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO3(20 mL)로 켄칭하고, EtOAc(50 mL x 2)로 추출하였다. 추출물을 조합하고 염수(50 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(6.6 g, 72%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.64 (s, 7H).
단계 B: 1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-올
THF(60 mL) 중 5-브로모-2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔(6.1 g, 26.6 mmol)의 -70℃ 용액에 n-BuLi(1.6 M, 18.5 mL, 29.6 mmol)을 N2 하에서 적가하였다. -70℃에서 30분 동안 교반한 후, THF(5 mL) 중 아세트알데히드(2.4 g, 54.5 mmol)의 용액을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고 30분 동안 교반하였다. NH4Cl의 수용액(50 mL)을 첨가하고 혼합물을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 유기물을 조합하고 염수(50 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(4.3 g, 83%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.79 (s, 1H), 6.76 - 6.67 (m, 2H), 5.01 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.68 - 4.52 (m, 1H), 1.61 (s, 6H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
단계 C: tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트
CH3CN(2 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(220 mg, 1.0 mmol), 1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에탄-1-올(200 mg, 1.0 mmol) 및 (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(610 mg, 2.5 mmol)의 혼합물에 DIPEA(500 mg, 3.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(250 mg, 64%)을 얻었다. MS: M/e 391 (M+1)+.
단계 D: (2R,5S)-1-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진
EA(1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(150 mg, 0.38 mmol)의 용액에 HCl/디옥산(4 M, 2 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(125 mg, 99%)을 얻었다. MS: M/e 291 (M+1)+.
단계 E: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMAc(1 mL) 중 (2R,5S)-1-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진(100 mg, 0.3 mmol), 중간체 2(131 mg, 0.34 mmol) 및 DIPEA(175 mg, 1.35 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 고진공 하에서 농축시키고 EA(20 mL)로 희석하고, 염수(10 mL x 2)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물(110 mg, 70%)을 얻었다. MS: M/e 522 (M+1)+.
단계 F: 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
EtOAc(1.0 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(110 mg, 0.21 mmol)의 용액에 HCl/1,4-디옥산(4 M, 1 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 표제 화합물(76 mg, 82%)을 얻었다. MS: M/e 438 (M+1)+.
단계 G: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
DMF(1 mL) 중 7-((2S,5R)-4-(1-(2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)에틸)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온(76 mg, 0.17 mmol), K2CO3(71 mg, 0.51 mmol) 및 H2O(100 mg, 5.5 mmol)의 혼합물에 1-브로모부트-2-인(35 mg, 0.26 mmol)을 실온에서 첨가하고 혼합물을 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(10 mL)로 희석하고, 염수(5 mL x 3)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과시키고 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 및 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(19 mg, 23%)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.90 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.80 - 6.71 (m, 1H), 6.71 - 6.61 (m, 1H), 5.53 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.75 - 4.17 (m, 1H), 3.76 - 3.35 (m, 6H), 3.08 - 2.94 (m, 1H), 2.91 - 2.82 (m, 1H), 2.81 - 2.29 (m, 1H), 1.87 (s, 3H), 1.68 - 1.61 (m, 6H), 1.38 - 1.18 (m, 6H), 1.17 - 0.96 (m, 3H). MS: M/e 490 (M+1)+.
화합물 A393: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(이소퀴놀린-3-일)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 1-(이소퀴놀린-3-일)에탄-1-올
MeOH(8 mL) 중 1-(이소퀴놀린-3-일)에탄-1-온(200 mg, 1.17 mmol)의 용액에 NaBH4(45 mg, 1.17 mmol)를 실온에서 첨가하고 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물(200 mg)을 얻었다. MS: M/e 174 (M+1)+.
단계 B: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-4-(1-(이소퀴놀린-3-일)에틸)-2-메틸피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 중간체 5(50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1-(이소퀴놀린-3-일)에탄-1-올(80 mg, 0.46 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(110 mg, 0.45 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 정제하여 표제 화합물(27 mg)을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.22 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 8.14 - 8.07 (m, 1H), 8.02 - 7.88 (m, 3H), 7.82 - 7.63 (m, 2H), 5.55 (s, 1H), 5.03 (dd, J = 12.1, 2.2 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.18 - 3.91 (m, 1H), 3.64 - 3.54 (m, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.39 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.25 - 3.01 (m, 1H), 2.91 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 2.56 - 2.22 (m, 1H), 1.84 (d, J = 9.2 Hz, 3H), 1.80 - 1.55 (m, 2H), 1.49 (dd, J = 10.1, 6.7 Hz, 3H), 1.34 (dd, J = 55.6, 6.5 Hz, 3H), 1.08 - 0.69 (m, 3H) ppm. MS: M/e 483(M+1)+.
화합물 A394: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-2-일)에틸)피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
단계 A: 1-(퀴녹살린-2-일)에탄-1-올
THF(20 mL) 중 퀴녹살린-2-카르브알데히드(1 g, 6.3 mmol)의 혼합물에 0℃에서 메틸 마그네슘 브로마이드(3.2 mL, 3M, 9.5 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. NH4Cl의 포화 용액을 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 이어서, 생성된 유기 층을 농축시켜 표제 화합물(1 g)을 얻었고, 이를 직접 다음 단계에서 사용하였다. MS: M/e 175 (M+1)+.
단계 B: 2-(부트-2-인-1-일)-7-((2S,5R)-5-에틸-2-메틸-4-(1-(퀴녹살린-2-일)에틸) 피페라진-1-일)-4-메틸-2,4-디하이드로-5H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-온
CH3CN(2 mL) 중 중간체 11(50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 1-(퀴녹살린-2-일)에탄-1-올(80 mg, 0.46 mmol), (시아노메틸)트리메틸포스포늄 요오다이드(110 mg, 0.45 mmol) 및 DIPEA(197 mg, 1.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 밤새 교반하였다. 반응 용매를 감압 하에서 제거하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, Na2SO4에 의해 건조시키고, 여과시키고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 플래시 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 A394(50 mg)를 얻었고, 이를 분취용-HPLC(방법 A)에 의해 화합물 A394a(7 mg) 및 화합물 A394b(8 mg)로 추가 분리하였다.
화합물 A394a(이전 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.18 (s, 1H), 8.08 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 7.84 (p, J = 8.5 Hz, 2H), 5.53 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 5.04 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.42 (s, 1H), 4.09 - 4.00 (m, 1H), 3.61 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.22 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 2.94 - 2.88 (m, 1H), 2.18 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 1.86 (s, 3H), 1.80 - 1.57 (m, 2H), 1.53 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.21 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.08 (t, J = 7.3 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 484 (M+1)+.
화합물 A394b(이후 피크): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.12 (s, 1H), 8.14 - 8.06 (m, 2H), 7.92 - 7.79 (m, 3H), 5.56 (s, 1H), 5.02 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 4.78 - 4.57 (m, 2H), 4.26 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.37 (s, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 2.87 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 2.48 (s, 1H), 1.84 (d, J = 2.3 Hz, 3H), 1.73 - 1.61 (m, 2H), 1.55 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.36 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 3H) ppm. MS: M/e 484 (M+1)+.
하기 화합물은 적절한 조건 하에서 유사한 절차에 따라 제조하였다:
하기 화합물은 또한 본원에 개시된 유사한 절차에 의해 제조할 수도 있다.
검정
1)
생화학적 DGK IC
50
검정
DGKζ, DGKα 및 DGKδ의 효소 반응은 지질 미셀 기질을 이용하는 ADP-Glo 검정을 사용하여 실행하였다. 전장 DGKζ(서열번호 2의 인-하우스 단백질(in-house protein) M1-V929)는 바큘로바이러스 발현 시스템에서 발현하였다. 전장 DGKα(D21-10BG, SignalChem) 및 전장 DGKδ(D23-10G, SignalChem)는 구입하였다. 지질 미셀은 DAG(Sigma, 317505-10MG) 및 PS(Sigma, P7769-100MG)를 클로로포름으로 용해시킨 후 클로로포름을 회전 증발기에 의해 추가 제거하여 제조하였다. 생성된 생성물을 25 mM HEPES pH 7.0, 0.5 mM EDTA 및 160 mM 옥틸 β-D 글루코피라노시드를 함유하는 완충액에 격렬한 혼합 및 초음파 처리(IID, Scientz)에 의해 재현탁시켰다.
본원에 개시된 화합물에 대한 억제 활성 테스트는 50 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0.01% BSA, 0.1 mM Na3VO4, 0.005% Tween-20 및 0.01 mM CaCl2를 함유하는 검정 완충액에서 실온에서 수행하였다. DMSO 중 화합물을 D300e 디지털 디스펜서(Tecan)를 사용하여 흑색 384 웰 플레이트(Corning 4514)의 웰에 분배하였다. 화합물의 최종 농도 범위는 1.55~10000 nM 또는 23.3~150000 nM이었다. 3 μL 2× 효소 용액을 웰에 첨가하였다. 1시간 동안 인큐베이션한 후, 160 μM DAG 및 280 μM ATP를 함유하는 3 μL 2× 기질 용액을 웰에 첨가하여 반응을 개시하였다. 1시간 반응 후, 5 μL ADP-Glo 시약(Promga V9101)을 첨가하고 40분 동안 인큐베이션하였다. 10 μL 키나아제 검출 시약을 첨가하고 30분 동안 인큐베이션하였다. 발광은 마이크로플레이트 판독기(PHERAstar FSX, BMG labtech) 상에서 측정하였다. IC50은 증가하는 농도의 화합물의 존재 하에 효소 활성의 억제를 기반으로 계산한다. 선택된 화합물은 DGKδ에 대한 억제 활성을 갖지 않았다. DGKζ 및 DGKα에 대해 본원에 개시된 화합물의 IC50은 표 1에 나타나 있다.
인간 DGKζ의 바큘로바이러스 발현
인간 His-TEV-DGK-제타-pFastBac1 및 인간 바큘로바이러스 샘플은 제조업체의 프로토콜에 따라 Bac-to-Bac 바큘로바이러스 발현 시스템(Invitrogen)을 사용하여 생성되었다. DGK-제타의 발현에 사용된 DNA는 서열번호 1을 갖는다. 바큘로바이러스 증폭은 감염된 SF9 세포를 1:2000 바이러스/세포 비율로 사용하여 달성되었으며, 형질감염-후 27℃에서 96시간 동안 성장시켰다.
각각의 단백질에 대해 스케일 업된(scaled up) 발현은 CORNING의 플라스크 3L에서 수행하였다. SF900TM II SFM 곤충 배지(Expression System)에서 성장한 4L의 3x106개의 세포/mL Sf9 세포(Expression System, Invitrogen)를 바이러스 스톡으로 1:200 바이러스/세포 비율로 감염시키고, 형질감염-후 27℃에서 48시간 동안 성장시켰다. 감염된 세포 배양물은 SORVALL LYNX6000 원심분리기에서 4℃ 6000 rpm으로 15분 동안 원심분리하여 수확하였다. 세포 펠렛은 -80℃에서 보관하였다.
인간 DGK-제타의 정제
상기 기재된 바와 같이 생성된 전장 인간 DGKζ를 Sf9 바큘로바이러스-감염된 곤충 세포 페이스트로부터 정제하였다. 초음파 처리 방법을 사용하여 세포를 용해시키고, 용해물을 원심분리에 의해 정화시켰다. 정화된 용해물을 AKTA Purifier 시스템 상에서 2개의 연속적인 컬럼 크로마토그래피 단계를 사용하여, ~90% 균질성으로 정제하였다. 2단계 컬럼 크로마토그래피는 니켈 친화성 수지 포획(즉, Ni-NTA Agarose, Qiagen)에 이어서, 크기 배제 크로마토그래피(즉, Hiload16/60 Superdex200 prep grade, GE Healthcare)를 포함하였다. 단백질을 전달하고 -80℃에 보관하였다. 제형 완충액은 단백질에 대해 동일하였다: 25 mM Tris, 150mmol/L NaCl, 2mM DTT, pH8.0.
서열번호 1은 His-TEV-hDGKζ-(M1-V929)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열임:
ATGCATCACCATCACCATCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAGGGATCCATGGAACCCCGTGATGGTAGCCCCGAAGCTCGTAGCTCCGATTCCGAGTCCGCCAGCGCTTCCTCCTCCGGTAGCGAACGTGACGCTGGTCCCGAGCCCGACAAAGCTCCCCGTCGTCTGAATAAGCGCCGTTTTCCCGGTCTCCGTCTGTTCGGCCACCGCAAGGCCATCACTAAGTCCGGTCTCCAGCATCTGGCTCCTCCTCCTCCTACCCCCGGTGCTCCTTGCTCCGAATCCGAGCGCCAGATTCGCTCCACTGTGGATTGGTCCGAAAGCGCCACCTATGGTGAGCATATCTGGTTCGAGACCAACGTCTCCGGCGACTTCTGTTATGTCGGTGAGCAATACTGTGTGGCTCGTATGCTGCAGAAGTCCGTGTCCCGCCGTAAATGCGCCGCTTGCAAAATCGTGGTCCATACCCCTTGCATCGAGCAACTGGAGAAAATCAACTTCCGCTGCAAGCCCAGCTTTCGTGAGTCCGGTTCCCGCAACGTGCGCGAACCTACTTTCGTGCGCCACCACTGGGTGCATCGTCGTCGCCAAGACGGCAAATGCCGCCACTGCGGCAAAGGTTTTCAGCAGAAATTCACCTTCCACAGCAAGGAGATCGTCGCCATCAGCTGCAGCTGGTGCAAACAAGCTTACCATTCCAAAGTGAGCTGCTTCATGCTCCAGCAGATCGAAGAGCCTTGCTCTCTGGGTGTGCATGCTGCTGTCGTGATTCCCCCTACTTGGATTCTGCGTGCTCGCCGTCCCCAGAACACTCTGAAGGCCTCCAAAAAGAAGAAGCGCGCCAGCTTCAAGCGTAAGAGCTCCAAAAAGGGTCCCGAAGAGGGCCGTTGGCGTCCCTTCATCATCCGCCCTACTCCTTCCCCTCTGATGAAGCCTCTGCTGGTCTTCGTCAACCCTAAGAGCGGCGGCAACCAAGGTGCTAAAATCATCCAGTCCTTCCTCTGGTATCTGAACCCTCGTCAAGTGTTCGACCTCAGCCAAGGCGGTCCTAAGGAGGCTCTGGAGATGTACCGCAAGGTCCACAATCTGCGCATCCTCGCTTGTGGTGGCGATGGCACCGTGGGCTGGATTCTGTCCACTCTGGACCAACTGCGTCTGAAACCTCCCCCCCCCGTGGCTATTCTGCCTCTCGGTACCGGCAACGATCTGGCTCGTACTCTGAATTGGGGTGGTGGCTACACCGATGAGCCCGTGTCCAAGATTCTGTCCCACGTCGAAGAAGGCAATGTCGTCCAACTGGACCGTTGGGACCTCCACGCCGAACCCAACCCCGAGGCTGGCCCCGAGGACCGTGACGAGGGCGCTACTGACCGTCTGCCCCTCGACGTCTTCAATAATTACTTCTCTCTGGGCTTTGACGCTCACGTGACTCTGGAATTTCATGAAAGCCGCGAGGCCAACCCCGAGAAGTTCAATTCCCGTTTCCGCAACAAGATGTTCTACGCTGGCACCGCCTTCAGCGACTTCCTCATGGGCTCCAGCAAGGACCTCGCTAAGCATATCCGCGTGGTGTGCGATGGCATGGATCTGACCCCTAAGATCCAAGATCTGAAGCCCCAATGTGTCGTGTTTCTGAACATCCCCCGCTACTGCGCTGGTACTATGCCTTGGGGCCATCCCGGTGAACACCATGACTTCGAACCTCAGCGTCATGATGACGGCTATCTGGAGGTGATCGGTTTCACCATGACCTCCCTCGCTGCTCTGCAAGTGGGTGGCCACGGCGAACGTCTGACTCAATGCCGCGAGGTGGTGCTGACCACCAGCAAAGCCATCCCCGTCCAAGTGGATGGTGAGCCTTGCAAGCTGGCCGCCTCCCGTATCCGTATCGCTCTCCGCAATCAAGCTACCATGGTCCAGAAGGCCAAACGCCGCAGCGCTGCTCCTCTCCACAGCGACCAACAACCCGTCCCCGAACAGCTGCGCATCCAAGTGTCCCGTGTCAGCATGCATGACTACGAGGCTCTGCACTACGACAAGGAACAGCTGAAGGAAGCCAGCGTGCCTCTGGGTACTGTGGTCGTGCCCGGTGACAGCGATCTGGAGCTCTGCCGTGCCCACATCGAGCGTCTGCAGCAAGAGCCCGACGGTGCTGGTGCCAAGAGCCCTACTTGCCAAAAACTCTCCCCCAAGTGGTGTTTCCTCGACGCTACCACCGCCAGCCGCTTCTACCGCATTGATCGCGCCCAAGAGCATCTGAACTATGTCACCGAGATCGCTCAAGACGAGATCTACATCCTCGACCCCGAACTCCTCGGTGCTAGCGCCCGTCCCGACCTCCCCACTCCTACCTCCCCTCTGCCCACTTCCCCTTGTTCCCCCACCCCTCGTAGCCTCCAAGGTGATGCTGCCCCTCCTCAAGGTGAGGAGCTCATTGAGGCCGCTAAGCGTAACGATTTCTGCAAGCTCCAAGAGCTGCATCGTGCTGGTGGCGACCTCATGCACCGCGATGAGCAGAGCCGCACTCTGCTGCACCACGCTGTGTCCACTGGTAGCAAGGACGTGGTGCGCTATCTGCTGGACCACGCTCCTCCCGAGATCCTCGACGCTGTGGAAGAAAACGGCGAGACTTGCCTCCACCAAGCTGCTGCTCTGGGTCAACGTACCATCTGCCACTACATCGTCGAAGCTGGTGCTTCTCTGATGAAGACCGACCAGCAAGGTGATACTCCCCGTCAGCGCGCCGAGAAAGCCCAAGACACCGAACTGGCTGCCTATCTGGAGAACCGTCAGCACTACCAGATGATTCAGCGTGAAGACCAAGAGACCGCCGTGTAA
서열번호 2는 His-TEV-hDGKζ-(M1-V929)의 아미노산 서열임:
MEPRDGSPEARSSDSESASASSSGSERDAGPEPDKAPRRLNKRRFPGLRLFGHRKAITKSGLQHLAPPPPTPGAPCSESERQIRSTVDWSESATYGEHIWFETNVSGDFCYVGEQYCVARMLQKSVSRRKCAACKIVVHTPCIEQLEKINFRCKPSFRESGSRNVREPTFVRHHWVHRRRQDGKCRHCGKGFQQKFTFHSKEIVAISCSWCKQAYHSKVSCFMLQQIEEPCSLGVHAAVVIPPTWILRARRPQNTLKASKKKKRASFKRKSSKKGPEEGRWRPFIIRPTPSPLMKPLLVFVNPKSGGNQGAKIIQSFLWYLNPRQVFDLSQGGPKEALEMYRKVHNLRILACGGDGTVGWILSTLDQLRLKPPPPVAILPLGTGNDLARTLNWGGGYTDEPVSKILSHVEEGNVVQLDRWDLHAEPNPEAGPEDRDEGATDRLPLDVFNNYFSLGFDAHVTLEFHESREANPEKFNSRFRNKMFYAGTAFSDFLMGSSKDLAKHIRVVCDGMDLTPKIQDLKPQCVVFLNIPRYCAGTMPWGHPGEHHDFEPQRHDDGYLEVIGFTMTSLAALQVGGHGERLTQCREVVLTTSKAIPVQVDGEPCKLAASRIRIALRNQATMVQKAKRRSAAPLHSDQQPVPEQLRIQVSRVSMHDYEALHYDKEQLKEASVPLGTVVVPGDSDLELCRAHIERLQQEPDGAGAKSPTCQKLSPKWCFLDATTASRFYRIDRAQEHLNYVTEIAQDEIYILDPELLGASARPDLPTPTSPLPTSPCSPTPRSLQGDAAPPQGEELIEAAKRNDFCKLQELHRAGGDLMHRDEQSRTLLHHAVSTGSKDVVRYLLDHAPPEILDAVEENGETCLHQAAALGQRTICHYIVEAGASLMKTDQQGDTPRQRAEKAQDTELAAYLENRQHYQMIQREDQETAV*
2) 세포 배양 및 DGKα/ζ 녹아웃 Jurkat 세포주 작제
Jurkat 세포 및 인간 PBMC를 5% CO2가 포함된 가습된 37℃ 환경에서 10% 소 태아 혈청(FBS, Thermo Scientific), 100 단위/mL 페니실린 및 0.1 mg/mL 스트렙토마이신(Gibco)이 보충된 RPMI 1640 배지(Gibco)에서 유지하였다. 힌지, 막관통 및 세포질 도메인을 포함하는 마우스 CD8α의 C-말단 도메인(113-220)에 융합된 항-인간 CD3 mAb OKT3의 단일 사슬 가변 단편(scFv; single chain variable fragment)을 발현하는, HepG2-OS8 세포를 5% CO2가 포함된 가습된 37℃ 환경에서 10% 소 태아 혈청(FBS, Thermo Scientific), 100 단위/mL 페니실린 및 0.1 mg/mL 스트렙토마이신(Gibco)이 보충된 MEM 배지(Gibco)에서 유지하였다.
Jurkat 세포를 인간 DGKα 또는 DGKζ를 표적화하는 spCas9 및 sgRNA를 발현하는 렌티바이러스로 감염시켰다. DGKα/ζ로 안정적으로 녹아웃된 세포 클론을 RPMI 1640 완전 배지에서 확립하고 유지하였다. 단일 세포 클론에서의 eSPCas9-Lenticrispr DGKα 또는 DGKζ sgRNA의 녹아웃 효율은 게놈 서열분석 및 면역블로팅 방법을 사용하여 결정하였다. 선택된 화합물은 DGKα/ζ KO jurkat 세포에서 DGKα 또는 DGKζ 독립적인 IL-2 생성을 유도하지 않았다.
3)
비-자극 인산화 ERK 검출 검정
세포 비-자극 phospho-ERK는 AlphaLISA-기반 방법(Beaudet, Lucille 등 Nature Methods. 2008, 5.12: an8-an9)을 사용하여 측정하였다. Jurkat 세포를 T75 플라스크에서 계대배양하였다. 다음날, 성장 배지를 무혈청 RPMI 1640으로 4시간 동안 또는 밤새 교체하였다. 이어서, 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고 화합물로 처리하였다. 2시간 동안의 화합물 처리 후, 용해 완충액(PerkinElmer)을 각각의 웰에 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 진탕하면서 30분 동안 인큐베이션하였다. 96-웰 플레이트의 각각의 웰로부터의 총 10 μL의 세포 용해물을 384-웰 백색 검정 플레이트로 이동시켰다. Phosphor-ERK는 제조업체 매뉴얼(PerkinElmer)에 기재된 바와 같이 AlphaLISA 키트(Cat#ALSU-PERK-A10K)를 사용하여 정량화하였다. AlphaLISA 신호는 PHERAstar FSX 판독기(BMG Labtech)를 사용하여 측정하였다. 선택된 화합물은 TCR 활성화 없이 Jurkat 세포에서 ERK 인산화를 향상시키지 않았다.
4)
인간 PBMC에서의 IL-2 생성 검정
동결된 인간 PBMC를 RPMI 1640 배지에서 해동시키고 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. OS8 과발현 HepG2 세포를 384-웰 플레이트에 밤새 시딩하였다. 다음날, PBMC를 384-웰 플레이트에 첨가한 후 화합물로 처리하였다. PBMC 및 HepG2-OS8 세포를 37℃에서 48시간 동안 공동-배양하였다. 배양 상청액은 제조업체 매뉴얼(Cisbio)에 기재된 바와 같이 TR-FRET-기반 방법(Degorce, 등 Current chemical genomics. 2009, 3: 22)에 의한 IL-2 농도의 후속 측정을 위해 수집하였다. FRET 신호는 PHERAstar FSX 판독기(BMG Labtech)를 사용하여 측정하였다. 선택된 화합물은 인간 PBMC 검정에서 우수한 효능을 나타냈다.
5)
BALB/c 마우스에서의 탐색적(Explorative) 급성 독성 연구
테스트 물질을 비히클 제형(DMA: 30% solutol HS-15(w/v): 식염수 = 20:20:60)에 용해시키고 꼬리 정맥을 통해 BALB/c 마우스에 2 및/또는 10 mg/kg의 용량을 주사하였다. 주사 후 2시간 이내에 지속적인 임상 관찰을 실행하였다. 선택된 화합물은 2 및/또는 10 mg/kg의 용량에서 내약성이 뛰어났다.
임의의 선행 기술 간행물이 본원에 언급된 경우, 이러한 참조는 간행물이 임의의 국가에서 기술분야의 통상적인 일반 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것으로 간주되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
문맥이 표현적 언어 또는 필요한 암시로 인해 달리 요구하는 경우를 제외하고, 본 발명의 뒤따르는 청구범위 및 앞선 설명에서, 단어 "포함하다(comprise)" 또는 "포함하다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 포괄적인 의미로 사용되며, 즉, 언급된 특징의 존재를 지정하지만 본 발명의 다양한 구현예에서 추가 특징의 존재 또는 추가를 배제하지 않는 것이다.
본원에서 식별 인용으로 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
Claims (36)
- 화학식 (I)의 화합물,
(I)
또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로서,
여기서
X1은 C 또는 N이고,
X2 및 X3의 각각은 -N- 또는 -CH-로부터 독립적으로 선택되고;
기호 는 단일 또는 이중 결합이고,
R1은 수소, 또는 중수소, 할로겐, 하이드록시, 알콕시 또는 사이클로알킬로 임의로 치환된 알킬이고;
R2는 수소, 할로겐, 알킬 또는 시아노이되, 단, X1이 N이고 X1에 부착된 상기 결합 이 이중 결합인 경우 R2는 부재하고;
R4는 수소, 할로겐, 또는 알킬이고, 여기서 상기 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환되고, 여기서 R4a는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 -C1-6알킬, -C1-6알콕시 또는 -C3-8사이클로알킬로 임의로 치환되고;
R5는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, R5a-C(O)-, R5a-C(O)O-, R5a-O-C(O)-, R5a-C(O)NR5b-, R5a-NR5b-C(O)-, R5a-SO2- 또는 헤테로사이클릴이고, 여기서 상기 알킬 또는 알케닐은 비치환되거나 할로겐, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, 또는 NR5cR5d로 치환되고; 여기서 상기 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴의 각각은 비치환되거나 알킬, 시아노 또는 할로겐 치환된 알킬, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, NR5cR5d, 또는 R5c-SO2-로 치환되고, 여기서 R5a 및 R5b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 여기서 R5c 및 R5d는 수소 또는 알킬이고;
R6은 수소, 할로겐, 비치환되거나 할로겐 또는 시아노로 치환된 알킬이되, 단, R6이 부착된 질소에 부착된 상기 결합 이 이중 결합인 경우 R6은 부재하고;
R7, R9, R8, 및 R10의 각각은 독립적으로 수소, 알킬, 알콕시, 또는 -C(O)R7a이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 할로겐, 시아노, 하이드록시, 알콕시 또는 -C(O)R7a로 치환되고, 여기서 R7a는 수소, 알킬, 또는 알콕시이되, 단, R7 및 R9 중 적어도 하나는 수소가 아니거나;
R7 및 R9는 각각 수소이고 R8 및 R10은 함께 2개의 교두보(bridgehead) 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성하거나; R8 및 R10은 각각 수소이고 R7 및 R9는 함께 2개의 교두보 원자 외에 적어도 하나의 -CH2- 모이어티를 함유하는 가교를 형성하고;
L1은 직접 결합, -O-, -N(RL)-, -알킬렌- 또는 -C(O)-이고, 여기서 상기 -알킬렌-은 비치환되거나 -C(O)NRL1로 치환되고, RL은 수소 또는 알킬이고, 여기서 RL1은 수소, 알킬, 또는 알콕시알킬이고;
Cy1은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된, 아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기서 R3a는 중수소, 하이드록시, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴옥시로부터 선택되고, 여기서 상기 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 시아노 또는 헤테로사이클릴로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬인, 화합물. - 제1항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 아속(subgenus) 중 어느 하나이고:
여기서 변수는 본원에서와 같이 정의되는 것인, 화합물. - 제1항에 있어서, R1은 수소, 또는 중수소, 할로겐, 하이드록시, 알콕시 또는 사이클로알킬로 임의로 치환된 C1-4알킬이고; 바람직하게는 R1은 수소, 또는 중수소, 또는 할로겐으로 임의로 치환된 C1-3알킬이고; 보다 바람직하게는 R1은 수소, 또는 중수소로 임의로 치환된 C1-3알킬인, 화합물.
- 제1항에 있어서, R1은 수소, 메틸, 메틸-d3, 에틸, 이소프로필, 2-하이드록시에틸, 2-메톡시에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 2,2-디플루오로에틸, 또는 사이클로프로필메틸이고; 바람직하게는 R1은 수소, 메틸, 에틸 또는 메틸-d3이고; 보다 바람직하게는 R1은 메틸 또는 메틸-d3인, 화합물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 수소, 할로겐, C1-4알킬 또는 시아노이고; 바람직하게는 R2는 수소, F, Br, Cl 또는 CN인, 화합물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 수소, 할로겐 또는 알킬이고, 여기서 상기 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환되고, 여기서 R4a는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬이고, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬은 -C1-6알킬, -C1-6알콕시 또는 -C3-8사이클로알킬로 임의로 치환되고; 바람직하게는 R4는 수소, 할로겐 또는 C1-4알킬이고, 여기서 상기 알킬은 할로겐 또는 -OR4a로 임의로 치환되고; 보다 바람직하게는 R4는 수소, 할로겐 또는 C1-4알킬이고, 여기서 상기 알킬은 할로겐으로 임의로 치환되는 것인, 화합물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R4는 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 메틸, 트리플루오로메틸, 에틸, 또는 2,2,2-트리플루오로에틸이고; 바람직하게는 R4는 수소인, 화합물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, R5a-C(O)-, R5a-C(O)O-, R5a-O-C(O)-, R5a-C(O)NR5b-, R5a-NR5b-C(O)-, R5a-SO2- 또는 헤테로사이클릴이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, 또는 NR5cR5d로 치환되고; 여기서 상기 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴의 각각은 비치환되거나 알킬, 시아노 또는 할로겐 치환된 알킬, 시아노, -C(O)OR5c, -C(O)R5c, -C(O)NR5cR5d, 헤테로사이클릴, 알콕시, 하이드록시, 사이클로알킬, NR5cR5d, 또는 R5c-SO2-로 치환되고, 여기서 R5a 및 R5b는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 또는 사이클로알킬이고; 여기서 R5c 및 R5d는 수소 또는 알킬인, 화합물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 수소, 알킬, 알케닐 또는 알키닐이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 시아노로 치환되고; 바람직하게는 R5는 C1-4알킬, C2-4알케닐 또는 C2-4알키닐이고, 여기서 상기 알킬은 시아노로 치환되는 것인, 화합물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 수소, CN-CH2-, -CH2C(O)-OMe, -CH(CH3)CN, 옥시란-2-일메틸-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 프로프-1-엔-2-일, 메틸, 이소프로필, -CH2CH2-O-Me, -CH2C(O)NH2, -CH2CH2-OH, 사이클로프로필-CH2-, -CH2CH2N(CH3)2, CH3-SO2-, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로프로필-C(O)-, 1-시아노사이클로프로필, 2-시아노사이클로프로필, 2-시아노사이클로부틸, 3-(시아노메틸)-1-(에틸설포닐)아제티딘-3-일, 또는 1-시아노-2-사이클로펜틸에트-2-일이고; 바람직하게는, R5는 수소, CN-CH2-, -CH2C(O)-OMe, -CH(CH3)CN, 옥시란-2-일메틸-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일이고; 보다 바람직하게는, R5는 CN-CH2-, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일이고; 보다 바람직하게는 R5는 CN-CH2-, -CH(CH3)CN, 프로프-2-인-1-일, 부트-2-인-1-일, 또는 프로프-1-엔-2-일인, 화합물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 부재하는 것인, 화합물.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, R7 및 R9의 각각은 독립적으로 수소, 알킬, 또는 -C(O)R7a이고, 여기서 상기 알킬은 비치환되거나 할로겐, 시아노, 하이드록시, 또는 알콕시로 치환되고, 여기서 R7a는 수소, 알킬, 또는 알콕시이고; 바람직하게는 R7 및 R9의 각각은 독립적으로 C1-4알킬이고; 보다 바람직하게는 R7 및 R9의 각각은 독립적으로 C1-2알킬인, 화합물.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R7 및 R9는 각각 독립적으로 수소, 메틸, 에틸, 메톡시메틸, 2-메톡시에틸, 시아노메틸, 하이드록시에틸, 하이드록시메틸, 메톡시카르보닐, 디플루오로메틸이되, 단, R7 및 R9의 적어도 하나는 수소가 아닌 것인, 화합물.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R7은 메틸이고, R9는 메틸이거나; R7은 에틸이고, R9는 에틸이거나; R7은 메틸이고, R9는 에틸이거나; R7은 메틸이고, R9는 메톡시카르보닐이거나; R7은 수소이고, R9는 메틸이거나; R7은 수소이고, R9는 에틸인, 화합물.
- 제2항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피페라진 고리 상의 2-위치 탄소는 S-배열이고, 상기 피페라진 고리 상의 5-위치 탄소는 R-배열인, 화합물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, R8 및 R10은 각각 수소인, 화합물.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 직접 결합, -O-, -N(RL)-, -알킬렌- 또는 -C(O)-이고, 여기서 RL은 수소 또는 알킬이고; 바람직하게는 L1은 C1-4알킬렌, 바람직하게는 C1-2알킬렌이고; 보다 바람직하게는 L1은 직접 결합, -CH2-, -CH(CH3)-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CHF2)-, -N(H)-, -N(CH3)-, -O-, -CH(C(O)-NHCH2CH2OCH3)- 또는 -C(CH3)2-이고; 보다 더 바람직하게는 L1은 -CH2- 또는 CH(CH3)-인, 화합물.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, X2는 N이고, X3은 N이거나; X2는 N이고, X3은 CH이거나; X2는 CH이고, X3은 N이거나; X2는 CH이고, X3은 N이고; 바람직하게는 X2는 N이고, X3은 N인, 화합물.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 치환기 R3a로 치환된, 아릴, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 또는 사이클로알킬이고, 여기서 R3a는 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 중수소-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, R3b-O-C(O)-, 헤테로사이클릴, 또는 헤테로사이클릴-치환된 알킬로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬, 헤테로사이클릴 또는 헤테로사이클릴옥시는 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
바람직하게는 R3a는 중수소, 플루오로, 브로모, 클로로, 메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 메톡시, 메톡시메틸, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 디플루오로, 에톡시, 이소프로폭시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 사이클로프로필, 1-하이드록시에틸, 에틸, 1,1-디플루오로에틸, 시아노, 디메톡시, 디클로로, 사이클로프로필-, 아세트아미도, 1-메톡시에틸, 시아노메틸, 카르바모일, 메톡시카르보닐, 디메틸카르바모일, (디플루오로메톡시)메틸, 아미노, 1-(디플루오로메톡시)에틸, 아제티딘-1-일, 2-메톡시프로판-2-일, 1-메톡시사이클로프로필, 옥세탄-3-일, 1-메틸아제티딘-3-일, 또는 1-하이드록시아제티딘-3-일로부터 선택되는 것인, 화합물. - 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은 페닐인, 화합물.
- 제20항에 있어서, Cy1은 위치 4에서 본원에 개시된 바와 같은 하나의 R3a로 치환되고 다른 위치에서 R3a로 임의로 치환되는 페닐인, 화합물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일, 3,4-다이하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일, 또는 인, 화합물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로사이클릴 또는 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로사이클릴인, 화합물.
- 제23항에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로사이클릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 1,4-디옥사닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 또는 디하이드로피리디닐인, 화합물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴 또는 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴인, 화합물.
- 제25항에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3으로 치환된, 피라졸릴, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐 또는 피리다지닐인, 화합물.
- 제25항에 있어서, 상기 모노사이클릭 5원 내지 9원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3으로 치환된, 1H-이미다졸-2-일, 1H-이미다졸-4-일, 1H-이미다졸-5-일, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일, 1H-인돌-2-일, 1H-인돌-3-일, 1H-인돌-4-일, 1H-인돌-5-일, 1H-인돌-6-일, 1H-인돌-7-일, 피라진-2-일, 또는 피리다진-4-일인, 화합물.
- 제25항에 있어서, 상기 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3으로 치환된, 인돌릴, 벤조[d]이미다졸릴, 트리아졸로피리디닐, 이미다조피리디닐, 벤조옥사졸릴, 벤조[d]티아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 나프티리디닐, 디옥시노피리디닐, 퀴녹살리닐, 벤조[d]이미다졸릴, 또는 이미다조[4,5-b]피리디닐인, 화합물.
- 제25항에 있어서, 상기 바이사이클릭 7원 내지 10원 헤테로아릴은 각각 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된, 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1H-벤조[d]이미다졸-5-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 1H-벤조[d]이미다졸-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 벤조[d]옥사졸-2-일, 벤조[d]옥사졸-4-일, 벤조[d]옥사졸-5-일, 벤조[d]옥사졸-6-일, 벤조[d]옥사졸-7-일, 벤조[d]티아졸-2-일, 벤조[d]티아졸-4-일, 벤조[d]티아졸-5-일, 벤조[d]티아졸-6-일, 벤조[d]티아졸-7-일, 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-8-일, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 1,8-나프티리딘-2-일, 1,8-나프티리딘-3-일, 1,8-나프티리딘-4-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-8-일, 퀴녹살린-6-일-2,3-d2, 1H-인돌-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 또는 피라졸로[1,5-a]피리딘-2-일인, 화합물.
- 제25항에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된, 퀴녹살리닐, 예를 들어, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 바람직하게는 퀴녹살린-6-일이고, 여기서 R3a는 중수소, 알콕시, 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c), R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 여기서 상기 기 알킬 또는 알콕시의 상기 알킬 모이어티는 비치환되거나 중수소, 할로겐, 알콕시, 하이드록시, 또는 시아노로 치환되고; 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 바람직하게는 R3a는 중수소, 알콕시, 할로겐-치환된 알콕시, 알콕시알킬-, 알킬, 할로겐-치환된 알킬, 할로겐, R3b-SO2-, 사이클로알킬, 하이드록시알킬-, 시아노, R3b-C(O)-N(R3c)-, 시아노-치환된 알킬, N(R3bR3c)-C(O)-, N(R3bR3c)-, R3b-O-C(O)-, 또는 헤테로사이클릴로부터 선택되고, 상기 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴은 비치환되거나 알콕시, 알킬, 할로겐, 또는 하이드록시로 치환되고, 여기서 R3b 및 R3c는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬이고; 보다 바람직하게는 R3a는 중수소, 플루오로, 브로모, 클로로, 메틸, 메틸-d3, 디플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 메톡시, 메톡시메틸, 트리플루오로메틸, 메틸설포닐, 디플루오로, 에톡시, 이소프로폭시, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 사이클로프로필, 1-하이드록시에틸, 에틸, 1,1-디플루오로에틸, 시아노, 디메톡시, 디클로로, 사이클로프로필-, 아세트아미도, 1-메톡시에틸, 시아노메틸, 카르바모일, 메톡시카르보닐, 디메틸카르바모일, (디플루오로메톡시)메틸, 아미노, 1-(디플루오로메톡시)에틸, 아제티딘-1-일, 2-메톡시프로판-2-일, 1-메톡시사이클로프로필, 옥세탄-3-일, 1-메틸아제티딘-3-일, 1-하이드록시아제티딘-3-일, (2,2-디메틸모르폴리노)메틸, 4-((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸, 또는 (4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸로부터 선택되는 것인, 화합물.
- 제25항에 있어서, Cy1은 비치환되거나 1, 2 또는 3개의 R3a로 치환된 퀴녹살린-6-일이고, 여기서 R3a는 중수소, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸, 메톡시, 이소프로폭시, 디플루오로메톡시, 플루오로, 클로로, 시아노, 아미노, 또는 사이클로프로필인, 화합물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은
a) 페닐, 2-(트리플루오로메톡시)페닐, 2-메톡시페닐, 2-(메톡시메틸)페닐, 2-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐, 4-플루오로-2-메톡시페닐, 4-플루오로-2-메틸페닐, 2-브로모-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(메틸설포닐)페닐, 4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-클로로-4-플루오로페닐, 2,4-디플루오로페닐, 2-에톡시-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-이소프로폭시페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐, 2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐, 2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐, 2-사이클로프로필-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(1-하이드록시에틸)페닐, 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐, 2-에틸-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-메톡시-4-플루오로페닐, 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐, 2-시아노-4-플루오로페닐, 4-플루오로-3-(메톡시메틸)페닐, 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2,6-디메톡시페닐, 2,4-디플루오로-6-메톡시페닐, 2,6-디클로로-4-플루오로페닐, 4-사이클로프로필페닐, 4-메톡시페닐, 4-플루오로페닐, 4-사이클로프로필-페닐, 4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-메틸페닐, 4-(디플루오로메틸)페닐, 4-이소프로폭시페닐, 2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-3-메톡시페닐, 2,6-디플루오로페닐, 4-(트리플루오로메톡시)페닐, 4-아세트아미도페닐, 4-플루오로-2-(1-메톡시에틸)페닐, 2-(시아노메틸)-4-플루오로페닐, 3,4-디플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐, 2-카르바모일-4-플루오로페닐, 2-메톡시카르보닐-4-플루오로페닐, 2-(디메틸카르바모일)-4-플루오로페닐, 2-((디플루오로메톡시)메틸)-4-플루오로페닐, 2-(1-(디플루오로메톡시)에틸)-4-플루오로페닐, 2-(아제티딘-1-일)-4-플루오로페닐, 4-플루오로-2-(2-메톡시프로판-2-일)페닐, 4-(트리플루오로메틸)페닐, 3-(트리플루오로메틸)페닐, 4-플루오로-2-(1-메톡시사이클로프로필)페닐, 4-플루오로-2-(옥세탄-2-일)페닐, 4-플루오로-2-(1-메틸아제티딘-3-일)페닐, 4-플루오로-2-(1-하이드록시아제티딘-3-일)페닐, 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐; 2-에틸-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-메톡시-4-플루오로페닐; 2,6-디플루오로-4-메톡시페닐; 2,5-디플루오로-4-메톡시페닐; 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐, 나프탈렌-2-일; 2-플루오로-4-메틸페닐; 4-((2,2-디메틸모르폴리노)메틸)페닐; 4-(((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)메틸)페닐; 또는 4-((4,4-디플루오로피페리딘-1-일)메틸)페닐; 또는
b) 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일, 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일, 3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일, 또는 ; 또는
c) 테트라하이드로푸란-2-일, 테트라하이드로푸란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-2-일, 테트라하이드로-2H-피란-3-일, 테트라하이드로-2H-피란-4-일, 1,4-디옥산-2-일, 1,4-디옥산-3-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피페라진-2-일, 피페라진-3-일, 1,2-디하이드로피리딘-3-일, 1,2-디하이드로피리딘-4-일, 1,2-디하이드로피리딘-5-일, 1,2-디하이드로피리딘-6-일, 또는 2,3-디하이드로푸로[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일, 3,3-디메틸-2,3-디하이드로푸로[3,2-b]피리딘-5-일, 5,6,7,8-테트라하이드로퀴녹살린-2-일, 2,2-디메틸벤조[d][1,3]디옥솔-5-일, 또는 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일; 또는
d) 크로만-2-일, 크로만-3-일, 크로만-4-일, 크로만-6-일; 또는
e) 1H-피라졸-3-일, 1H-피라졸-4-일, 1H-피라졸-5-일, 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1H-이미다졸-2-일, 1H-이미다졸-4-일, 1H-이미다졸-5-일, 피리딘-2-일, 피리딘-3-일, 피리딘-4-일, 피리미딘-2-일, 피리미딘-4-일, 피리미딘-5-일, 1H-인돌-2-일, 1H-인돌-3-일, 1H-인돌-4-일, 1H-인돌-5-일, 1H-인돌-6-일, 1H-인돌-7-일, 3-메톡시피리딘-2-일, 3-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘2-일, 3-플루오로-5-메틸피리딘-2-일, 5-클로로피리딘-2-일, (5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일, 3-플루오로-5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일, 5,6-디메틸피리딘-2-일, 6-메톡시-5-메틸피리딘-2-일, 4-플루오로-6-이소프로폭시피리딘-3-일, 6-이소프로폭시피리딘-3-일, 2-메톡시피리딘-3-일, 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일, 6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일, 6-메틸피리딘-3-일, 6-사이클로프로필피리딘-3-일, 6-(디플루오로메틸)피리딘-3-일, 6-플루오로피리딘-3-일, 3-메톡시피리딘-4-일, 3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일, 5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일, 5-클로로-1-에틸-1H-이미다졸-2-일, 1-에틸-2-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-5-일, -에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일, -에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일, 1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일, 5-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-피라졸-4-일, 1-에틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일, 3-클로로-1-에틸-1H-피라졸-5-일, 1-에틸-4-메틸-1H-피라졸-5-일, 5-이소프로폭시피리딘-2-일, 6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일, 3,5-디플루오로피리딘-2-일, 3,5-디플루오로피리딘-4-일, 1-에틸-4-시아노-1H-피라졸-3-일, 5-플루오로피리딘-2-일, 5-(디플루오로메틸)피리딘-2-일, 5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일, 피라진-2-일, 5,6-디메틸피라진-2-일, 5-메틸피라진-2-일 또는 3-(트리플루오로메틸)피리다진-4-일; 또는
f) 1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1H-벤조[d]이미다졸-4-일, 1H-벤조[d]이미다졸-5-일, 1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 1H-벤조[d]이미다졸-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-2-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-5-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-8-일, 2-메틸-[1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 3H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-6-일, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-7-일, 벤조[d]옥사졸-2-일, 벤조[d]옥사졸-4-일, 벤조[d]옥사졸-5-일, 벤조[d]옥사졸-6-일, 벤조[d]옥사졸-7-일, 벤조[d]티아졸-2-일, 벤조[d]티아졸-4-일, 벤조[d]티아졸-5-일, 2-메틸벤조[d]티아졸-5-일, 벤조[d]티아졸-6-일, 벤조[d]티아졸-7-일, 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4-일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4-일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일, 이소퀴놀린-8-일, 퀴녹살린-2-일, 퀴녹살린-3-일, 퀴녹살린-4-일, 퀴녹살린-5-일, 퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-7-일, 퀴녹살린-8-일, 1,8-나프티리딘-2-일, 1,8-나프티리딘-3-일, 1,8-나프티리딘-4-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-8-일, 3-메틸퀴녹살린-6-일, 3-메톡시퀴녹살린-6-일, 퀴녹살린-6-일-2,3-d2, 1-에틸-1H-인돌-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-프로필-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-에틸-7-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일, 3-에틸-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 1-에틸-1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일, 3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일, 3-아미노퀴녹살린-6-일, 3-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 2-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-바이플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-(1,1-바이플루오로에틸)퀴녹살린-6-일, 2-중수소-3-메틸퀴녹살린-6-일, 2-중수소-3-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-5-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-7-메톡시퀴녹살린-6-일, 3-메틸-5-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 3-메틸-7-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일, 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일, 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일, 2,3-디메틸-퀴녹살린-6-일, 3-에틸-퀴녹살린-6-일, 3-클로로-퀴녹살린-6-일, 4-메톡시-퀴녹살린-6-일, 3-(디플루오로메틸)퀴녹살린-6-일, 3-(1,1-디플루오로에틸)퀴녹살린-6-일, 또는 3-사이클로프로필-퀴녹살린-6-일, 2-하이드록시-3-메틸퀴녹살린-6-일, 또는 3-(메틸-d3)퀴녹살린-6-일; 또는
g) 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일, 2,3-디하이드로-1H-인덴-2-일, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-1-일, 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-2-일, 또는 6,7,8,9-테트라하이드로-5H-벤조[7]아눌렌-5-일인, 화합물. - 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Cy1은
2-(트리플루오로메톡시)페닐; 2-메톡시페닐; 2-(메톡시메틸)페닐; 2-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐; 4-플루오로-2-메톡시페닐; 4-플루오로-2-(메톡시메틸)페닐; 4-플루오로-2-메틸페닐; 2-브로모-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(메틸설포닐)페닐; 4-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-클로로-4-플루오로페닐; 2,4-디플루오로페닐; 2-에톡시-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-이소프로폭시페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메톡시)페닐; 2-(디플루오로메톡시)-4-플루오로페닐; 2-(디플루오로메틸)-4-플루오로페닐; 2-사이클로프로필-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(1-하이드록시에틸)페닐; 4-사이클로프로필-2-메톡시페닐; 2-에틸-4-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 2-메톡시-4-플루오로페닐; 2-(1,1-디플루오로에틸)-4-플루오로페닐; 4-플루오로-3-(메톡시메틸)페닐; 3-메틸-2-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-2,6-디메톡시페닐; 2,4-디플루오로-6-메톡시페닐; 2,6-디클로로-4-플루오로페닐; 2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일; 3,3-디메틸-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일; 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-4-일; 3-메톡시피리딘-2-일; 2-메톡시피리딘-3-일; 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일; 6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일; 3-메톡시피리딘-4-일; 5-플루오로-3-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일; 5-클로로-1-에틸-1H-이미다졸-2-일; 1-에틸-2-(트리플루오로메틸)-1H-이미다졸-5-일; 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-에틸-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1-메틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일; 5-(디플루오로메틸)-1-메틸-1H-피라졸-4-일; 1-에틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일; 3-클로로-1-에틸-1H-피라졸-5-일; 1-에틸-4-메틸-1H-피라졸-5-일; 퀴놀린-3-일; 퀴놀린-2-일; 퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸퀴녹살린-6-일; 3-사이클로프로필퀴녹살린-6-일; 3-아미노퀴녹살린-6-일; 3-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-바이플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-(1,1-바이플루오로에틸)퀴녹살린-6-일; 2-중수소-3-메틸퀴녹살린-6-일; 2-중수소-3-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-5-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-7-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-메틸-5-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 3-메틸-7-트리플루오로메틸퀴녹살린-6-일; 퀴녹살린-6-일-2,3-d2; 1-에틸-1H-인돌-2-일; 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-프로필-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-5-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-에틸-7-(트리플루오로메틸)-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 1-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일; 3-에틸-3H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일; 1-에틸-1H-이미다조[4,5-b]피리딘-2-일; 1-에틸-4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸-2-일; 3-메톡시퀴녹살린-6-일; 3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일; 4-사이클로프로필페닐; 4-메톡시페닐; 4-플루오로페닐; 4-사이클로프로필-페닐; 4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-메틸페닐; 4-(디플루오로메틸)페닐; 4-이소프로폭시페닐; 2-플루오로-4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐; 2,4-디플루오로페닐; 4-사이클로프로필-2-플루오로페닐; 4-플루오로-2-(트리플루오로메틸)페닐; 3-메톡시-4-(트리플루오로메틸)페닐; 4-플루오로-3-메톡시페닐; 2,6-디플루오로페닐; 2,6-디플루오로-4-메톡시페닐; 2,5-디플루오로-4-메톡시페닐; 나프탈렌-2-일; 3,4-디하이드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일; 크로만-4-일; 크로만-6-일; 4,4-디플루오로크로만-6-일; 1,2,3,4-테트라하이드로나프탈렌-1-일; 2,3-디하이드로-1H-인덴-1-일; 5-이소프로폭시피리딘-2-일; 6-이소프로폭시피리딘-3-일; 6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일; 3,5-디플루오로피리딘-2-일; 3,5-디플루오로피리딘-4-일; 1-에틸-4-시아노-1H-피라졸-3-일; 퀴놀린-2-일; 이소퀴놀린-3-일; 이소퀴놀린-6-일; 이소퀴놀린-7-일; 1,8-나프티리딘-2-일; 퀴녹살린-6-일; 퀴녹살린-2-일; [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딘-7-일; 벤조[d]티아졸-2-일; 2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일; 3,3-디메틸-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-6-일; 4-(트리플루오로메톡시)페닐; 4-플루오로페닐; 4-아세트아미도페닐; 피리딘-2-일; 피리딘-3-일; 피리딘-4-일; 5-플루오로피리딘-2-일; 피라진-2-일; 피리미딘-2-일; 퀴놀린-7-일; 이소퀴놀린-7-일, 3-메틸이소퀴놀린-7-일; 퀴녹살린-6-일; 퀴놀린-6-일; 퀴놀린-7-일; 또는 피리미딘-4-일인, 화합물. - 화합물 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로서, 상기 화합물은 예시된 화합물 중 어느 하나인, 화합물.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 화합물 또는 이의 입체이성질체 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 질환을 치료하는 방법으로서, 치료학적 유효량의 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 질환은 암인, 방법.
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