KR20240049627A - 혈장 칼리크레인 결합 단백질 및 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서의 이의 용도 - Google Patents

Abstract

혈장 칼리크레인 결합 단백질, 예컨대 활성 혈장 칼리크레인에 결합하는 항체 및 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서 이러한 단백질을 사용하는 방법이 본 명세서에 제공된다.

Description

혈장 칼리크레인 결합 단백질 및 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서의 이의 용도 {PLASMA KALLIKREIN BINDING PROTEINS AND USES THEREOF IN TREATING HEREDITARY ANGIOEDEMA}

관련 출원에 대한 상호 참조

본원은 2014년 1월 21일자로 출원된 미국 가출원 제61/929,716호, 2014년 2월 25일자에 출원된 미국 가출원 제61/944,361호, 및 2014년 7월 7일자로 출원된 미국 가출원 제62/021,397호의 우선권의 이익을 주장한다. 이들 언급된 출원의 각각의 전체 내용은 본 명세서에 참고로 인용된다.

혈장 칼리크레인은 상이한 염증성, 심혈관, 감염성 (패혈증) 및 종양학 질환을 위한 접촉 시스템 및 잠재적인 약물 표적의 세린 프로테아제 성분이다(Sainz I. M. et al., Thromb Haemost 98, 77-83, 2007). 접촉 시스템은 프롤릴카복시펩티다제에 의해 내피 세포 표면 상의 또는 외래 또는 음으로 하전된 표면에 대한 노출 시 XIIa 인자에 의해 활성화된다(Sainz I. M. et al., Thromb Haemost 98, 77-83, 2007). 혈장 칼리크레인의 활성화는 XII 인자의 피드백 활성화를 통해 내재 응고를 증폭시키고, 전염증성 노나펩타이드 브라디키닌의 생성을 통해 염증을 증대시킨다. 순환 시 주요 키니노게나제로서, 혈장 칼리크레인은 주로 맥관구조에서 브라디키닌의 생성을 담당한다. 혈장 칼리크레인의 주요 천연 저해제인 C1-저해제 단백질(C1-INH)에서의 유전자 결핍은 유전성 혈관부종(hereditary angioedema: HAE)을 발생시킨다. HAE를 갖는 환자는 미공지 트리거가 대개 참여하는 통증이 있는 부종의 급성 공격을 겪는다(Zuraw B. L. et al., N Engl J Med 359, 1027-1036, 2008).

본 개시내용은 부분적으로, 80nM 초과의 항체의 혈장 농도를 유지시키는, 인간 혈장 칼리크레인의 활성 형태에 결합하는 항체의 용량(예컨대, 100㎎ 내지 300㎎)이 유전성 혈관부종을 치료하는 데 있어서 유리한(예컨대, 예방학적) 효과를 나타내기에 충분하다는 것을 보여주는, 약동학적 연구 및 약동학적 모델링으로부터 추론된 예상치 못한 결과에 기초한다. 추가로, 2주마다 100㎎의 양 또는 4주마다 300㎎의 양에서 DX-2930을 투여하는 것은 80nM 초과의 정상 상태 혈장 약물 농도를 유지시킬 것이고, 2주마다 300㎎의 양에서 DX-2930을 투여하는 것은 200nM 초과의 대리 혈장 약물 농도를 유지시킬 것이다.

본 개시내용은 또한 부분적으로, 인간 혈장 칼리크레인의 활성 형태에 결합하는 항체가 3.0㎎/㎏ 이하의 단일 용량에서 용량 제한 독성의 증거 없이 다양한 용량(0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏)에서 유전성 혈관부종(HAE)을 치료하는 데 있어서 우수한 치료학적 효과를 나타낸다는 예상치 못한 발견에 기초한다. 약동학적 결과는 DX-2930이 건강한 대상체에 대한 단일 주사 후 용량군에 걸쳐 선형의 용량 의존적 노출 및 17일 내지 20일의 평균 제거 반감기를 가진다는 것을 나타낸다. 2개의 상이한 탐색적 바이오마커 검정으로부터의 약역학적 결과는 용량 및 시간 의존적 방식으로 생체외 혈장 칼리크레인 저해를 확인시켜준다.

따라서, 본 개시내용의 일 양상은 HAE(예컨대, I형, II형 또는 III형)를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은, 대상체에서의 항체의 혈장 농도가 약 80nM 초과이도록, 유효량(예컨대, 100㎎ 내지 400㎎ 또는 100 내지 300㎎)으로 pKal의 활성 형태에 결합하는 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 항체(예컨대, DX-2930)는 2주마다 100㎎으로 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 항체(예컨대, DX-2930)는 2주 또는 4주마다 300㎎으로 투여된다.

본 개시내용의 또 다른 양상은 HAE(예컨대, I형, II형 또는 III형)를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 (a) 활성 혈장 칼리크레인에 결합하는 항체(예컨대, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 이를 필요로 하는 대상체에게 제1 투약량으로 투여하는 단계; (b) 대상체에서의 항체의 혈장 농도를 측정하는 단계; 및 (c) 항체의 혈장 농도가 약 80nM 미만인 경우, 항체를 대상체에게 제2 투약량으로 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 제1 투약량, 제2 투약량 또는 둘 다는 100㎎ 내지 400㎎ 또는 100㎎ 내지 300㎎(예컨대, DX-2930의 100㎎ 또는 300㎎)이다. 몇몇 실시형태에서, 제2 투약량은 제1 투약량보다 많다.

따라서, 본 개시내용의 일 양상은 HAE(예컨대, I형, II형 또는 III형)를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 단리된 항체의 단일 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체(예컨대, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편)는 활성 혈장 칼리크레인에 결합한다(예컨대, 프리칼리크레인(prekallikrein)에 결합하지 않는다). 임의로, 상기 방법은 치료 전에 및 후에 대상체에서 크레아티닌 포스포키나제의 수치를 모니터링하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 항체의 단일 용량은 0.1 내지 3㎎/㎏(예컨대, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏)이다.

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 유전성 HAE를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 활성 혈장 칼리크레인에 결합하는 단리된 항체(예컨대, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편)(예컨대, 활성 인간 혈장 칼리크레인에 결합하지만 인간 프리칼리크레인에 결합하지 않는 항체)의 복수의 용량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 2개의 연속 용량의 각각은 적어도 2주 간격(예컨대, 3주, 4주, 5주 또는 6주 간격)이다. 몇몇 실시형태에서, 복수의 용량의 적어도 하나의 용량은 0.1 내지 3㎎/㎏이다. 예컨대, 복수의 용량의 각각의 용량은 3㎎/㎏이다. 몇몇 예에서, 항체는 예컨대 6달 동안 달마다(예컨대, 28일마다) 투여된다.

훨씬 또 다른 양상에서, 본 개시내용은 HAE를 치료하는 방법을 특징으로 하고, 상기 방법은 (ⅰ) 활성 혈장 칼리크레인에 결합하는 단리된 항체(예컨대, 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편)(예컨대, 인간 활성 혈장 칼리크레인에 결합하지만 인간 프리칼리크레인에 결합하지 않는 항체)의 하나 이상의 용량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계, (ⅱ) 마지막 용량 후 대상체에서 항체에 의해 혈장 칼리크레인의 저해 수준을 측정하는 단계, 및 (ⅲ) 저해 수준이 최소 치료학적 수준(minimum therapeutic level)보다 낮은 경우, 항체의 추가의 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 하나 이상의 용량은 0.1 내지 3㎎/㎏(예컨대, 각각의 용량에 대해 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏)이다. 일 예에서, 최소 치료학적 수준은 약 80nM 미만의 항체의 혈청 또는 혈장 농도를 나타낸다.

본 명세서에 기재된 임의의 방법에서, 항-칼리크레인 항체는 전장 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 활성 혈장 칼리크레인에 결합하고, 프리칼리크레인에 결합하지 않는다.

본 명세서에 기재된 임의의 하나의 방법의 몇몇 실시형태에서, 항체는 DX-2930과 동일한 에피토프에 결합하거나, 활성 혈장 칼리크레인에 대한 결합에 대해 DX-2930과 경쟁한다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 DX-2930과 동일한 중쇄 CDR, DX-2930과 동일한 경쇄 CDR, 또는 둘 다를 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 전장 IgG 항체, 또는 이의 항원 결합 단편인 DX-2930이다.

본 명세서에 기재된 임의의 하나의 방법의 몇몇 실시형태에서, 항체는 피하 투여에 의해 투여될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는 HAE 공격을 겪거나, 이것을 가지는 것으로 의심되거나, 이것의 위험이 있는 인간 환자이다. 예컨대, 본 명세서에 기재된 방법은 HAE의 예방학적 치료를 위한 것이다.

본 명세서에 기재된 임의의 하나의 방법의 몇몇 실시형태에서, 상기 방법은 치료 전에 및 후에, 또는 치료 기간 동안 대상체에서 크레아티닌 포스포키나제의 수치를 모니터링하는 단계를 추가로 포함한다. 크레아티닌 포스포키나제 상승이 관찰되는 경우, 항체(예컨대, DX-2930)의 용량은 감소할 수 있거나, 치료는 종료될 수 있다.

훨씬 또 다른 양상에서, 본 개시내용은 대상체에서 유전성 혈관부종(HAE)을 치료하는 것의 최적 투약량(예컨대, 최적 예방학적 투약량)을 결정하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) 활성 혈장 칼리크레인(예컨대, DX-2930 또는 이의 항원 결합 단편)에 결합하는 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 이를 필요로 하는 대상체에게 초기 투약량으로 (예컨대, 피하로) 투여하는 단계; (b) 대상체에서의 항체의 혈장 농도를 측정하는 단계; 및 (c) 항체의 혈장 농도가 약 80nM 미만인 경우 항체의 투약량을 증가시키는 단계를 포함하고; 약 80nM 초과의 항체의 혈장 농도를 유지시키는 투약량은 대상체에 대한 최적 예방 투약량으로서 선택된다. 몇몇 실시형태에서, 대상체는 항체가 투여되는 시간에 HAE 증상을 나타내지 않는 인간 환자이다. 몇몇 실시형태에서, 초기 투약량은 약 100㎎ 내지 400㎎ 또는 100㎎ 내지 300㎎(예컨대, DX-2930의 100㎎ 또는 300㎎)이다.

상기 기재된 방법은 치료 전에 및 후에, 또는 치료 기간 동안 대상체에서 크레아티닌 포스포키나제의 수치를 모니터링하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 방법은 크레아티닌 포스포키나제 상승이 관찰되는 경우 항체의 투약량을 감소시키거나 치료를 종료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 임의의 방법에서, 항체의 혈장 농도는 혈장 칼리크레인 활성 검정 또는 면역 검정에 의해 측정될 수 있다.

(a) HAE를 치료하거나 HAE를 치료하기 위한 물질의 최적 투약량을 결정하기 위해 사용되는 약제학적 조성물, 본 명세서에 기재된 임의의 항-칼리크레인 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 (b) HAE의 치료를 위한 약제를 제조하기 위한 약제학적 조성물의 용도가 본 개시내용의 범위 내에 또한 있다. 의도된 목적을 위한 항체의 용도는 본 명세서에 기재된 바와 같은 투약 조건 하에 수행될 수 있다.

본 발명의 하나 이상의 실시양태의 상세내용은 하기 설명에 기재되어 있다. 본 발명의 다른 특징 또는 이점은 하기 도면 및 여러 실시형태의 상세한 설명, 및 또한 첨부된 청구항으로부터 명확할 것이다.

도 1은 건강한 대상체에 대한 피하(SC) 투여 후 평균 DX-2930 농도를 나타내는 그래프이다. 각각의 용량 코호트에 대한 농도-시간 도면은 로그 스케일로 표시되어 있다. 오차 막대는 표준 편차이다. 프로필은 선형의 용량 의존적 노출을 나타낸다. 용량군에 걸친 부분 제거 단계는, 모든 용량이 균일한 방식으로 거동한다는 점에서, 용량 독립적 동역학을 가지는 훌륭히 거동하는 항체와 일치한다.
도 2는 건강한 대상체에서 28일마다 피하 투여를 통한 3㎎/㎏ DX-2930에 의한 반복 투약 후 예측된 혈장 농도를 도시하는 그래프이다.
도 3은 질환 병태의 예방을 위한 약제의 용도의 일반 원칙을 도시하는 그래프이다.
도 4는 HAE의 예방을 위한 DX-2930의 용도의 일반 원칙을 도시하는 그래프이다.
도 5는 실험실내 pKal에 대한 DX-2930 및 에칼란타이드(ecallantide)의 비교적인 저해 활성을 도시하는 그래프이다.
도 6은 HAE의 치료 및/또는 예방을 위해 DX-2930 혈장 농도를 80nM 이상에서 계속해서 유지시키는 것의 요건에 관한 대안적인 가설을 도시하는 그래프이다. 대안적으로, 필요한 DX-2930 혈장 농도는 HAE의 치료 및/또는 예방을 위해 80nM보다 낮거나 높을 수 있다.
도 7은 DX-2930의 단일 용량 3㎎/㎏의 투여 후 80nM 이상의 혈장 약물 수준이 달성된다는 것을 보여주는 그래프이다.
도 8은 건강한 대상체에서 28일마다 피하로 전달된 3㎎/㎏으로 투약하는 만성 DX-2930의 약동학적(PK) 모델링을 도시하는 그래프이다.
도 9는 건강한 대상체에서 28일마다 3㎎/㎏ SC에서의 DX-2930의 약역학적(PD) 효과를 도시하는 그래프이다.
도 10은 DX-2930의 단일 용량(3㎎/㎏) 후 약역학적(PD) 및 약동학적(PK) 데이터를 도시하는 그래프이다. PD 데이터는 시간에 따른 pKal 활성의 상대 저해(%)로서 작도된다. PK 데이터는 시간에 따른 혈장 DX-2930 농도(nM)로서 작도된다. *: 5일에서의 3㎎/㎏ 대 위약에 대한 P 값 < 0.05.
도 11은 네이티브 생물학적 기질(2-사슬 HMWK의 생성으로서 측정된 HMWK 절단)에 대한 DX-2930의 약역학적(PD) 활성을 도시하는 그래프이다.
도 12는 DX-2930의 3㎎/㎏의 단일 투여 후 시간에 따른 지속적인 DX-2930 바이오활성을 도시하는 그래프이다. *: 3㎎/㎏ 및 28일 대 투약 전에 대한 P 값 < 0.05.

정의

편의를 위해, 본 발명의 추가의 설명 전에, 명세서, 실시예 및 첨부된 청구범위에 사용된 소정의 용어가 본 명세서에 정의되어 있다. 다른 용어는 본 명세서에 나타난 것처럼 정의된다.

단수 형태 "일", "하나" 및 "이것"은 문맥이 명확히 다르게 나타내지 않는 한 복수 언급을 포함한다.

용어 "항체"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인(가변 구역) 또는 면역글로불린 가변 도메인(가변 구역) 서열을 포함하는 단백질을 의미한다. 예컨대, 항체는 중쇄(H) 가변 구역(본 명세서에서 VH 또는 HV로 축약), 및 경쇄(L) 가변 구역(본 명세서에서 VL 또는 LV이라 축약)을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항체는 2개의 중쇄(H) 가변 구역 및 2개의 경쇄(L) 사슬 가변 구역을 포함한다. 용어 "항체"는 항체의 항원 결합 단편(예컨대, 단쇄 항체, Fab 및 sFab 단편, F(ab')₂, Fd 단편, Fv 단편, scFv 및 도메인 항체(dAb) 단편(de Wildt et al., Eur J Immunol. 1996; 26(3):629-39.) 및 완전한 항체를 포함한다. 항체는 IgA, IgG, IgE, IgD, IgM(및 이의 아형)의 구조적 특징을 가질 수 있다. 항체는 임의의 공급원 유래일 수 있지만, 영장류(인간 및 비인간 영장류) 및 영장류화가 바람직하다.

VH 및 VL 구역은 "프레임워크 구역"("framework region: FR")이라 칭하는 더 보존된 구역 사이의 "상보성 결정 구역"("complementarity determining region: CDR")이라 칭하는 초가변 구역으로 추가로 세분될 수 있다. 프레임워크 구역 및 CDR의 정도는 정의되어 있다(문헌[Kabat, E.A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH 간행물 91-3242호, 및 Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917] 참조). 카밧 정의가 본 명세서에서 사용된다. 각각의 VH 및 VL은 통상적으로, 아미노 말단으로부터 카복시 말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된, 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어진다.

본 명세서에 사용되는 바대로, "면역글로불린 가변 도메인 서열"은 하나 이상의 CDR 구역이 항원 결합 부위에 적합한 입체구성에 위치하도록 면역글로불린 가변 도메인의 구조를 형성할 수 있는 아미노산 서열을 의미한다. 예컨대, 서열은 천연 발생 가변 도메인의 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함할 수 있다. 예컨대, 서열은 1개, 2개 이상의 N 또는 C 말단 아미노산, 내부 아미노산을 생략할 수 있거나, 하나 이상의 삽입 또는 추가적인 말단 아미노산을 포함할 수 있거나, 다른 변경을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 항원 결합 부위, 예컨대 혈장 칼리크레인과 우선적으로 상호작용하는 구조를 형성하기 위해 또 다른 면역글로불린 가변 도메인 서열과 회합할 수 있다.

항체의 VH 또는 VL 사슬은 중쇄 또는 경쇄 불변 구역의 전부 또는 일부를 추가로 포함하여 각각 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 사슬을 형성할 수 있다. 일 실시양태에서, 항체는 2개의 중쇄 면역글로불린 사슬 및 2개의 경쇄 면역글로불린 사슬의 사합체이고, 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 사슬은 예컨대 이황화 결합에 의해 상호 연결된다. IgG에서, 중쇄 불변 구역은 CH1, CH2 및 CH3인 3개의 면역글로불린 도메인을 포함한다. 경쇄 불변 구역은 CL 도메인을 포함한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 구역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 구역은 통상적으로 전통적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq) 및 면역계(예컨대, 이팩터 세포)의 다양한 세포를 포함하는, 숙주 조직 또는 인자에 대한 항체의 결합을 매개한다. 면역글로불린의 경쇄는 카파 또는 람다의 유형일 수 있다. 일 실시양태에서, 항체는 글라이코실화된다. 항체는 항체 의존적 세포독성 및/또는 보체 매개 세포독성에 대해 기능적일 수 있다.

항체의 하나 이상의 구역은 인간 또는 효과적으로 인간일 수 있다. 예컨대, 하나 이상의 가변 구역은 인간 또는 효과적으로 인간일 수 있다. 예컨대, 하나 이상의 CDR은 인간, 예컨대 HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 및/또는 LC CDR3일 수 있다. 경쇄(LC) 및/또는 중쇄(HC) CDR의 각각은 인간일 수 있다. HC CDR3은 인간일 수 있다. 하나 이상의 프레임워크 구역은 인간, 예컨대 HC 및/또는 LC의 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4일 수 있다. 예컨대, Fc 구역은 인간일 수 있다. 일 실시형태에서, 모든 프레임워크 구역은 예컨대 인간 체세포 세포, 예컨대 면역글로불린을 생성하는 조혈 세포 또는 비조혈 세포로부터 유래한 인간이다. 일 실시양태에서, 인간 서열은 예컨대 생식선 핵산에 의해 코딩된 생식선 서열이다. 일 실시양태에서, 선택된 Fab의 프레임워크(FR) 잔기는 가장 유사한 영장류 생식선 유전자, 특히 인간 생식선 유전자에서 상응하는 잔기의 아미노산 유형으로 전환될 수 있다. 하나 이상의 불변 구역은 인간 또는 효과적으로 인간일 수 있다. 예컨대, 면역글로불린 가변 도메인, 불변 구역, 불변 도메인(CH1, CH2, CH3 및/또는 CL1), 또는 전체 항체의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 98% 또는 100%는 인간 또는 효과적으로 인간일 수 있다.

항체의 전부 또는 일부는 면역글로불린 유전자 또는 이의 분절에 의해 코딩될 수 있다. 예시적인 인간 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파(IgA1 및 IgA2), 감마(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), 델타, 엡실론 및 뮤 불변 구역 유전자, 및 많은 면역글로불린 가변 구역 유전자를 포함한다. 전장 면역글로불린 "경쇄"(약 25KDa 또는 약 214개의 아미노산)는 NH2 말단(약 110개의 아미노산)에서 가변 구역 유전자에 의해 코딩되고, COOH 말단에서 카파 또는 람다 불변 구역 유전자에 의해 코딩된다. 전장 면역글로불린 "중쇄"(약 50KDa 또는 약 446개의 아미노산)는 유사하게 가변 구역 유전자(약 116개의 아미노산) 및 다른 상기 언급된 불변 구역 유전자 중 하나, 예컨대 (약 330개의 아미노산을 코딩하는) 감마에 의해 코딩된다. HC CDR3이 약 3개의 아미노산 잔기로부터 35개 초과의 아미노산 잔기로 변하므로, 인간 HC의 길이가 상당히 변한다.

전장 항체의 용어 "항원 결합 단편"은 관심 있는 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 전장 항체의 하나 이상의 단편을 의미한다. 전장 항체의 용어 "항원 결합 단편" 내에 포함되고 기능성을 보유하는 결합 단편의 예는 (ⅰ) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ⅱ) 힌지 구역에서 이황화 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')₂ 단편; (ⅲ) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (ⅳ) 항체의 단일 암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (ⅴ) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (ⅵ) 단리된 상보성 결정 구역(CDR)을 포함한다. 게다가, VL 및 VH인 Fv 단편의 2개의 도메인이 별개의 유전자에 의해 코딩되더라도, 이들이, 단쇄 Fv(scFv)로서 공지된 1가 분자를 형성하도록 VL 및 VH 구역이 쌍을 지은, 단일 단백질 사슬을 만들게 하는, 합성 링커에 의해 재조합 방법을 이용하여 이들은 연결될 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제5,260,203호, 제4,946,778호 및 제4,881,175호; 문헌[Bird et al. (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]을 참조한다.

항체 단편은 당해 분야의 당업자에게 공지된 종래의 기술을 포함하는 임의의 적절한 기술을 이용하여 얻어질 수 있다. 용어 "단일특이적 항체"는 특정한 표적, 예컨대 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는 항체를 의미한다. 이 용어는 "단일클론 항체" 또는 "단일클론 항체 조성물"(이는 항체가 어떻게 생성되는지와 무관하게 본 명세서에 사용된 바대로 단일 분자 조성물의 항체 또는 이의 단편 제제를 의미함)을 포함한다.

항체는, 결합 특성이 실질적으로 보유되는 한, 프레임워크 구역에서의 하나 이상의 비생식선 아미노산을 항체의 상응하는 생식선 아미노산으로 복귀시킴으로써 "생식선화"된다.

저해 상수(Ki)는 저해제 효력의 측정치를 제공하고; 이것은 효소 활성을 반으로 감소시키는 데 필요한 저해제의 농도이고, 효소 또는 기질 농도에 의존하지 않는다. 겉보기 Ki(K_i,app)는 반응의 정도(예컨대, 효소 활성)에 대한 상이한 농도의 저해제(예컨대, 저해 결합 단백질)의 저해 효과를 측정함으로써; 모리슨 식(Morrison equation)(식 1)에 대한 저해제 농도의 함수가 겉보기 Ki 값의 예측치를 생성하면서, 유사-1차 속도 상수의 변화를 맞춤으로써, 상이한 기질 농도에서 얻어진다. Ki는 기질 농도에 대한 K_i,app의 도면의 선형 회귀 분석으로부터 추출된 y 절편으로부터 얻어진다.

식 1

식 중, ν는 측정된 속도이고; ν₀은 저해제의 부재 하의 속도이고; K_i,app는 겉보기 저해 상수이고; I는 전체 저해제 농도이고; E는 전체 효소 농도이다.

본 명세서에 사용된 바대로, "결합 친화도"는 겉보기 결합 상수 또는 K_A를 의미한다. K_A는 분해 상수(K_D)의 역수이다. 결합 항체는, 예컨대 특정한 표적 분자에 대해 적어도 10⁵, 10⁶, 10⁷, 10⁸, 10⁹, 10¹⁰ 및 10¹¹M^-1의 결합 친화도를 가질 수 있다. 제2 표적에 비해 제1 표적에 대한 결합 항체의 더 높은 친화도 결합은 제2 표적의 결합에 대한 K_A(또는 숫자 값 K_D)보다 제1 표적의 결합에 대한 더 높은 K_A(또는 더 적은 숫자 값 K_D)로 표시될 수 있다. 이러한 경우에, 결합 항체는 제2 표적(예컨대, 제2 입체구성의 동일한 단백질 또는 이의 모방체; 또는 제2 단백질)에 비해 제1 표적(예컨대, 제1 입체구성의 단백질 또는 이의 모방체)에 대해 특이성을 갖는다. (예컨대, 특이성 또는 다른 비교에 대한) 결합 친화도의 차이는 적어도 1.5, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 37.5, 50, 70, 80, 91, 100, 500, 1000, 10,000 또는 10⁵배일 수 있다.

결합 친화도는 평형 투석, 평형 결합, 겔 여과, ELISA, 표면 플라스몬 공명 또는 (예컨대, 형광 검정을 이용한) 분광법을 포함하는 다양한 방법에 의해 결정될 수 있다. 결합 친화도를 평가하기 위한 예시적인 조건은 HBS-P 완충제(10mM HEPES(pH 7.4), 150mM NaCl, 0.005%(v/v) 계면활성제 P20) 중에 있다. 이 기술은 결합 단백질(또는 표적) 농도의 함수로서 결합 및 유리 결합 단백질의 농도를 측정하도록 이용될 수 있다. 결합된 결합 단백질의 농도([결합])는 유리 결합 단백질의 농도([유리]) 및 표적에서의 결합 단백질에 대한 결합 부위의 농도와 관련되고, 여기서 (N)은 하기 식에 의해 표적 분자마다 결합 부위의 수이다:

[결합] = Nㆍ[유리]/((1/K_A) + [유리]).

K_A를 정확히 결정하는 것이 항상 필요한 것이 아니더라도, 이것이 때때로 예컨대 ELISA 또는 FACS 분석과 같은 방법을 이용하여 측정된 친화도의 정량적 측정을 얻기에 충분하므로 K_A에 비례하고, 따라서 친화도의 정성적 측정을 얻도록, 또는 실험실내 또는 생체내 검정과 같은 기능적 검정에서, 예컨대 활성에 의해 친화도의 추론을 얻도록, 더 높은 친화도가 예컨대 2배 더 높은지를 결정하는 것과 같은 비교에 사용될 수 있다.

용어 "결합 항체"(또는 "결합 단백질"은 본 명세서에 상호 교환되어 사용됨)는 표적 분자와 상호작용할 수 있는 항체를 의미한다. 이 용어는 "리간드"와 상호 교환되어 사용된다. "혈장 칼리크레인 결합 항체"는 혈장 칼리크레인과 상호작용(예컨대, 결합)할 수 있는 항체를 의미하고, 특히 혈장 칼리크레인과 우선적으로 또는 특이적으로 상호작용하고/하거나 이를 저해하는 항체를 포함한다. 항체는 동일한 조건 하에 항체의 부재 하에 혈장 칼리크레인의 활성과 비교하여 혈장 칼리크레인의 활성을 감소시키는 경우 혈장 칼리크레인을 저해한다.

"보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기에 의해 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당해 분야에 정의되어 있다. 이 패밀리는 염기성 측쇄(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예컨대, 글라이신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다.

결합 단백질의 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 아미노산 잔기가 본 명세서에 기재된 결합 단백질에 대한 하나 이상의 돌연변이(예컨대, 치환(예컨대, 보존적 치환 또는 비필수 아미노산의 치환), 삽입 또는 결실)를 포함할 수 있다. 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 본 명세서에 기재된 결합 단백질에 대한 돌연변이(예컨대, 치환(예컨대, 보존적 치환 또는 비필수 아미노산의 치환), 삽입 또는 결실)(예컨대, 적어도 1개, 2개, 3개, 또는 4개 및/또는 15개 미만, 12개, 10개, 9개, 8개, 7개, 6개, 5개, 4개, 3개 또는 2개의 돌연변이), 예컨대 단백질 기능에 대한 실질적인 효과를 가지지 않는 돌연변이를 가질 수 있다. 돌연변이는 프레임워크 구역, CDR 및/또는 불변 구역에 존재할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 돌연변이는 프레임워크 구역에 존재한다. 몇몇 실시형태에서, 돌연변이는 CDR에 존재한다. 몇몇 실시형태에서, 돌연변이는 불변 구역에 존재한다. 특정한 치환이 관용성인지, 즉 생물학적 특성, 예컨대 결합 활성에 부정적으로 영향을 미지니 않는지의 여부는 예컨대 돌연변이가 보존적인지의 여부를 평가함으로써 또는 문헌[Bowie, et al. (1990) Science 247:1306-1310]의 방법에 의해 예측될 수 있다.

"효과적으로 인간" 면역글로불린 가변 구역은, 면역글로불린 가변 구역이 정상 인간에서 면역원 반응을 발생시키지 않도록, 충분한 수의 인간 프레임워크 아미노산 위치를 포함하는 면역글로불린 가변 구역이다. "효과적으로 인간" 항체는, 항체가 정상 인간에서 면역원 반응을 발생시키지 않도록, 충분한 수의 인간 아미노산 위를 포함하는 항체이다.

"에피토프"는 결합 단백질(예컨대, 항체, 예컨대 Fab 또는 전장 항체)에 의해 결합된 표적 화합물 상의 부위를 의미한다. 표적 화합물이 단백질인 경우, 이 부위는 전부 아미노산 성분으로 이루어지거나, 전부 단백질의 아미노산의 화학 변형(예컨대, 글라이코실 모이어티)으로 이루어지거나, 이들의 조합으로 이루어질 수 있다. 중첩하는 에피토프는 적어도 하나의 공통의 아미노산 잔기, 글라이코실기, 포스페이트기, 설페이트기 또는 다른 분자 특징을 포함한다.

제1 결합 항체가 제2 결합 항체가 결합하는 표적 화합물 상의 동일한 부위에 결합하거나, 제2 결합 항체가 결합하는 부위와 중첩(예컨대, 아미노산 서열 또는 다른 분자 특징(예컨대, 글라이코실기, 포스페이트기 또는 설페이트기)의 면에서, 예컨대 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 중첩)하는 부위에 결합하는 경우, 제1 결합 항체는 제2 결합 항체와 "동일한 에피토프에 결합한다".

에피토프에 대한 제1 결합 항체의 결합이 에피토프에 결합하는 제2 결합 항체 의 양을 (예컨대, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 이상) 감소시키는 경우, 제1 결합 항체는 제2 결합 항체와 "결합에 대해 경쟁한다". 경쟁은 직접적(예컨대, 제1 결합 항체는 제2 결합 항체가 결합한 에피토프와 동일하거나 이와 중첩하는 에피토프에 결합함) 또는 간접적(예컨대, 에피토프에 대한 제1 결합 항체의 결합은 에피토프에 결합하는 제2 결합 항체의 능력을 감소시키는 표적 화합물의 입체 변화를 발생시킴)일 수 있다.

2개의 서열 사이의 "상동성" 또는 "서열 동일성"(이 용어는 본 명세서에서 상호 교환되어 사용됨)의 계산을 하기와 같이 수행한다. 최적 비교 목적을 위해 서열을 정렬한다(예컨대, 최적 정렬을 위해 제1 아미노산 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘 다에서 갭이 도입될 수 있고, 비교 목적을 위해 비상동성 서열을 버릴 수 있음). 최적 정렬은 12의 갭 패널티(gap penalty), 4의 갭 연장 패널티(gap extend penalty) 및 5의 프레임 시프트 갭 패널티(frameshift gap penalty)를 갖는 블러섬(Blossum) 62 스코어링 매트릭스를 갖는 GCG 소프트웨어 패키지에서 GAP 프로그램을 이용하여 최고의 점수로서 결정된다. 이후, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교한다. 제1 서열에서의 위치를 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드가 점유하는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다(본 명세서에 사용된 바대로 아미노산 또는 핵산 "동일성"은 아미노산 또는 핵산 "상동성"과 동일함). 2개의 서열 사이의 동일성의 백분율은 서열이 공유한 동일한 위치의 수의 함수이다.

바람직한 실시양태에서, 비교 목적을 위해 정렬된 기준 서열의 길이는 기준 서열의 길이의 적어도 30%, 바람직하게는 적어도 40%, 더 바람직하게는 적어도 50%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 60% 및 훨씬 더 바람직하게는 적어도 70%, 80%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98% 또는 100%이다. 예컨대, 기준 서열은 면역글로불린 가변 도메인 서열의 길이일 수 있다.

"인간화된" 면역글로불린 가변 구역은, 면역글로불린 가변 구역이 정상 인간에서 면역원성 반응을 발생시키지 않도록, 충분한 수의 인간 프레임워크 아미노산 위치를 포함하도록 변형된 면역글로불린 가변 구역을 의미한다. "인간화된" 면역글로불린의 상세내용은 예컨대 미국 제6,407,213호 및 미국 제5,693,762호를 포함한다.

"단리된" 항체는 단리된 항체가 얻어질 수 있는 천연 샘플의 적어도 하나의 성분의 적어도 90%로부터 제거된 항체를 의미한다. 항체는 관심 있는 종 또는 종의 집단이 중량-중량 기준으로 적어도 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 92, 95, 98, 또는 99% 순수한 경우 "적어도" 소정의 정도의 순도일 수 있다.

해당 방법에 의해 치료되는 "환자", "대상체" 또는 "숙주"(이들 용어는 상호 교환되어 사용됨)는 인간 또는 비인간 동물을 의미할 수 있다.

용어 "프리칼리크레인" 및 "프리혈장 칼리크레인"은 본 명세서에서 상호 교환되어 사용되고, 프리칼리크레인으로도 공지된 활성 혈장 칼리크레인의 지모겐 형태를 의미한다.

본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "실질적으로 동일한"(또는 "실질적으로 상동성인")은, 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열이 유사한 활성, 예컨대 결합 활성, 결합 우선성 또는 생물학적 활성을 가지도록(또는 가지는 단백질을 코딩하도록), 제2 아미노산 또는 핵산 서열과 충분한 수의 동일한 또는 동등한(예컨대, 유사한 측쇄를 가짐, 예컨대 보존된 아미노산 치환) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 함유하는 제1 아미노산 또는 핵산 서열을 의미하도록 본 명세서에서 사용된다. 항체의 경우에, 제2 항체는 동일한 특이성을 가지고, 동일한 항원에 대해 적어도 50%, 적어도 25%, 또는 적어도 10%의 친화도를 가진다.

본 명세서에 개시된 서열과 유사하거나 상동성인(예컨대, 적어도 약 85% 서열 동일성) 서열은 또한 본원의 일부이다. 몇몇 실시형태에서, 서열 동일성은 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 본 명세서에 기재된 항체에 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, DX-2930)에 HC 및/또는 LC 프레임워크 구역(예컨대, HC 및/또는 LC FR 1, 2, 3 및/또는 4)에 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, DX-2930)에 HC 및/또는 LC CDR(예컨대, HC 및/또는 LC CDR1, 2 및/또는 3)에서 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, DX-2930)에 불변 구역(예컨대, CH1, CH2, CH3 및/또는 CL1)에서 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다.

또한, 핵산 분절이 가닥의 보체에 선택적 하이브리드화 조건(예컨대, 매우 엄격한 하이브리드화 조건) 하에 하이브리드화할 때 실질적인 동일성이 존재한다. 핵산은 전체 세포 중에, 세포 용해물 중에 또는 부분 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다.

임의의 분야 공지된 방법에 의해 통계 유의성을 결정할 수 있다. 예시적인 통계 시험은 스튜던트 T-시험, 만 휘트니(Mann Whitney) U 비모수 시험 및 윌콕손(Wilcoxon) 비모수 통계 시험을 포함한다. 몇몇 통계학적으로 유의적인 관계는 0.05 또는 0.02 미만의 P 값을 갖는다. 특정한 결합 단백질은 통계적으로 유의적인 예컨대 특이성 또는 결합의 차이(예컨대, 0.05 또는 0.02 미만의 P　값)를 나타낼 수 있다. 2개의 상태 사이의 구별 가능한 정성적 또는 정량적 차이를 나타내는 예컨대 용어 "유도한다", "저해한다", "강화한다", "상승시킨다", "증가시킨다", "감소시킨다" 등은 2개의 상태 사이의 차이, 예컨대 통계학적으로 유의적인 차이를 의미할 수 있다.

"치료학적으로 효과적인 투약량"은 바람직하게는 비처리 대상체에 비해 통계학적으로 유의적인 정도 또는 적어도 약 20%, 더 바람직하게는 적어도 약 40%, 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 60% 및 훨씬 더 바람직하게는 적어도 약 80%로, 측정 가능한 매개변수, 예컨대 혈장 칼리크레인 활성을 조절한다. 측정 가능한 매개변수, 예컨대 질환 관련 매개변수를 조절하는 화합물의 능력은 인간 장애 및 병태에서 효능을 예견하는 동물 모델 시스템에서 평가될 수 있다. 대안적으로, 조성물의 이 특성은 실험실내 매개변수를 조절하는 화합물의 능력을 검사함으로써 평가될 수 있다.

용어 "치료하는"은 본 명세서에 사용되는 바대로, 질환, 질환의 증상 또는 질환에 대한 소인을 치유하거나, 고치거나, 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 구제하거나, 개량하거나, 개선하거나, 이에 영향을 미칠 목적으로, 알레르기 질환, 알레르기 질환의 증상 또는 알레르기 질환에 대한 소인을 가지는 대상체에 대한 하나 이상의 활성제를 포함하는 조성물의 도포 또는 투여를 의미한다. "예방 치료로서" 또한 공지된 "예방학적 치료"는 노출됐거나 노출될 수 있는 질환으로부터 사람을 보호하거나, 이 질환에 대한 위험을 감소시키는 것을 목표로 하는 치료를 의미한다.

대상체에서의 질환을 "예방하는"의 용어는 대상체를 약제학적 치료로 처리하는 것, 예컨대 질환의 적어도 하나의 증상이 예방되게 하는 약물의 투여, 즉 이것이 원치않는 병태의 발생에 대해 숙주를 보호하도록 원치않는 병태(예컨대, 숙주 동물의 질환 또는 다른 원치않는 상태)의 임상 표출 전에 투여되는 것을 의미한다. 질환을 "예방하는"은 또한 "예방" 또는 "예방학적 치료"로 칭해질 수 있다.

"예방학적 유효량"은 원하는 예방학적 결과를 성취하는 데 필요한 효과적인 양, 투약량 및 시간 기간을 의미한다. 통상적으로, 예방학적 용량이 질환 전에 또는 이의 초기 병기에 대상체에서 사용되므로, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량보다 낮을 것이다.

혈장 칼리크레인 결합 항체

본 명세서에 기재된 방법에서 사용을 위한 혈장 칼리크레인 결합 항체는 전체-길이(예컨대, IgG(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA(예컨대, IgA1, IgA2), IgD, 및 IgE)일 수 있거나, 항원-결합 단편(예컨대, Fab, F(ab')2 또는 scFv 단편)을 포함할 수 있다. 결합 항체는 2개의 중쇄 면역글로불린 및 2개의 경쇄 면역글로불린을 포함할 수 있거나, 단쇄 항체일 수 있다. 혈장 칼리크레인 결합 항체는 재조합 단백질, 예를 들어, 인간화된, CDR 그래프팅된, 키메라, 탈면역화된, 또는 시험관내 발생된 항체일 수 있고, 임의로 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 불변 영역을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 단일클론 항체이다.

일 양상에서, 본 개시내용은 혈장 칼리크레인(예컨대, 인간 혈장 칼리크레인 및/또는 뮤린 칼리크레인)에 결합하고 적어도 하나의 면역글로불린 가변 영역을 포함하는 항체(예컨대, 단리된 항체)를 특징으로 한다. 예를 들어, 항체는 중쇄(HC) 면역글로불린 가변 도메인 서열 및/또는 경쇄(LC) 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체는 혈장 칼리크레인, 예컨대, 인간 혈장 칼리크레인 및/또는 뮤린 칼리크레인에 결합하고 이를 저해한다.

항체는 하나 이상의 하기 특성을 포함할 수 있다: (a) 인간 CDR 또는 인간 프레임워크 영역; (b) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인의 CDR과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 동일한 1개 이상(예컨대, 1개, 2개 또는 3개)의 CDR을 포함하고; (c) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인의 CDR과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 동일한 1개 이상(예컨대, 1개, 2개 또는 3개)의 CDR을 포함하고; (d) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 동일하고(예컨대, 전체에서 또는 프레임워크 영역 또는 CDR에서); (e) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% 동일하고(예컨대, 전체에서 또는 프레임워크 영역 또는 CDR에서); (f) 항체는 본 명세서에 기재된 항체에 의해 결합된 에피토프에 결합하거나, 본 명세서에 기재된 항체와 결합에 대하여 경쟁하고; (g) 영장류 CDR 또는 영장류 프레임워크 영역; (h) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인의 CDR1과 적어도 1개 아미노산 내지 2개 또는 3개의 아미노산 이하가 상이한 CDR1을 포함하고; (i) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인의 CDR2와 적어도 1개 아미노산 내지 2개 또는 3개의 아미노산 이하가 상이한 CDR2를 포함하고; (j) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인의 CDR3과 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 이하가 상이한 CDR3을 포함하고; (k) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인의 CDR1과 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 이하가 상이한 CDR1을 포함하고; (l) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인의 CDR2와 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개 또는 4개의 아미노산 이하가 상이한 CDR2를 포함하고; (m) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인의 CDR3과 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산 이하가 상이한 CDR3을 포함하고; (n) LC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 LC 가변 도메인과 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 아미노산 이하가 상이하고(예컨대, 전체에서 또는 프레임워크 영역 또는 CDR에서); (o) HC 면역글로불린 가변 도메인 서열은 본 명세서에 기재된 HC 가변 도메인과 적어도 1개의 아미노산 내지 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 아미노산 이하가 상이하다(예컨대, 전체에서 또는 프레임워크 영역 또는 CDR에서).

혈장 칼리크레인 결합 단백질은 단리된 항체일 수 있다(예컨대, 다른 단백질을 적어도 70, 80, 90, 95, 또는 99% 함유하지 않는다). 몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체, 또는 이의 조성물은 혈장 칼리크레인 결합 항체에 비해 불활성 또는 부분적 활성(예컨대, 혈장 칼리크레인에 5000 nM 이상의 K_i,app으로 결합됨)인 항체 절단 단편(예컨대, DX-2930)으로부터 단리된다. 예를 들어, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 이러한 항체 절단 단편을 적어도 70% 함유하지 않고; 다른 실시형태에서, 결합 항체는 불활성 또는 부분적 활성인 항체 절단 단편을 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 심지어 100% 함유하지 않는다.

혈장 칼리크레인 결합 항체는 혈장 칼리크레인, 예컨대, 인간 혈장 칼리크레인을 추가로 저해할 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 프리칼리크레인(예컨대, 인간 프리칼리크레인 및/또는 뮤린 프리칼리크레인)에 결합하지 않지만, 혈장 칼리크레인(예컨대, 인간 혈장 칼리크레인 및/또는 뮤린 칼리크레인)의 활성 형태에는 결합한다.

특정한 실시형태에서, 항체는 혈장 칼리크레인, 또는 이의 단편의 촉매 도메인의 활성 부위에 또는 그 근처에 결합하거나, 또는 혈장 칼리크레인의 활성 부위와 겹치는 에피토프에 결합한다.

몇몇 양상에서, 항체는 동일한 에피토프에 결합하거나, 본 명세서에 기재된 항체와 결합에 대하여 경쟁한다.

항체는 적어도 10⁵, 10⁶, 10⁷, 10⁸, 10⁹, 10¹⁰ 및 10¹¹ M^-1의 결합 친화도로 혈장 칼리크레인, 예컨대, 인간 혈장 칼리크레인에 결합할 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 1×10^-3, 5×10^-4 s^-1, 또는 1×10^-4 s^-1보다 느린 K_off로 인간 혈장 칼리크레인에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 1×10², 1×10³, 또는 5×10³ M^-1s^-1보다 빠른 K_on로 인간 혈장 칼리크레인에 결합한다. 일 실시형태에서, 항체는 혈장 칼리크레인에 결합하지만 조직 칼리크레인 및/또는 혈장 프리칼리크레인에 결합하지 않는다(예컨대, 항체는 혈장 칼리크레인보다 결합하는 것보다 조직 칼리크레인 및/또는 혈장 프리칼리크레인에 덜 효과적으로(예컨대, 음성 대조군과 비교하여, 예컨대, 5, 10, 50, 100, 또는 1000배 적게 또는 전혀) 결합한다).

일 실시형태에서, 항체는 인간 혈장 칼리크레인 활성을, 예컨대, 10^-5, 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9, 및 10^-10 M 미만의 Ki로 저해한다. 항체는, 예를 들어, 100nM, 10nM, 1, 0.5, 또는 0.2nM 미만의 IC₅₀을 지닐 수 있다. 예를 들어, 항체는 혈장 칼리크레인 활성뿐만 아니라, 인자 XIIa(예컨대, 인자 XII로부터) 및/또는 브래디키닌(예컨대, 고분자량 키니노겐(HMWK)으로부터)의 생성을 조절할 수 있다. 항체는 혈장 칼리크레인 활성, 및/또는 인자 XIIa(예컨대, 인자 XII로부터) 및/또는 브래디키닌(예컨대, 고분자량 키니노겐(HMWK)으로부터)의 생성을 저해할 수 있다. 인간 혈장 칼리크레인에 대한 항체의 친화도는 100 nm 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 1 nM 미만, 0.5 nM 미만의 K_D를 특징으로 할 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 혈장 칼리크레인을 저해하지만, 조직 칼리크레인을 저해하지 않는다(예컨대, 항체는 혈장 칼리크레인을 저해하는 것보다 조직 칼리크레인을 덜 효과적으로(예컨대, 음성 대조군과 비교하여, 예컨대, 5, 10, 50, 100, 또는 1000배 적게 또는 전혀) 저해한다.

몇몇 실시형태에서, 항체는 1000, 500, 100, 5, 1, 0.5 또는 0.2 nM 미만의 겉보기 저해 상수(K_i,app)를 갖는다.

혈장 칼리크레인 결합 항체는 단일 폴리펩타이드(예컨대, scFv) 또는 상이한 폴리펩타이드(예컨대, IgG 또는 Fab)에 이의 HC 및 LC 가변 도메인 서열을 지닐 수 있다.

일 실시형태에서, HC 및 LC 가변 도메인 서열은 동일한 폴리펩타이드 쇄의 구성요소이다. 다른 경우에, HC 및 LC 가변 도메인 서열은 상이한 폴리펩타이드 쇄의 구성요소이다. 예를 들어, 항체는 IgG, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4이다. 항체는 가용성 Fab일 수 있다. 다른 실시에 있어서, 항체는 Fab2', scFv, 미니바디, scFv::Fc 융합, Fab::HSA 융합, HSA::Fab 융합, Fab::HSA::Fab 융합, 또는 본원의 결합 단백질 중 하나의 항원 조합 부위를 포함하는 다른 분자를 포함한다. 이들 Fab의 VH 및 VL 영역은 IgG, Fab, Fab2, Fab2', scFv, 페길화된 Fab, 페길화된 scFv, 페길화된 Fab2, VH::CH1::HSA+LC, HSA::VH::CH1+LC, LC::HSA + VH::CH1, HSA::LC + VH::CH1, 또는 다른 적절한 구조물로서 제공될 수 있다.

일 실시형태에서, 항체는 인간 또는 인간화된 항체이거나 인간에서 비면역원성이다. 예를 들어, 항체는 하나 이상의 인간 항체 프레임워크 영역, 예컨대, 모든 인간 프레임워크 영역, 또는 인간 프레임워크 영역과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 동일한 프레임워크 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체는 인간 Fc 도메인, 또는 인간 Fc 도메인과 적어도 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 Fc 도메인을 포함한다.

일 실시형태에서, 항체는 영장류 또는 영장류화된 항체이거나 인간에서 비면역원성이다. 예를 들어, 항체는 하나 이상의 영장류 항체 프레임워크 영역, 예컨대, 모든 영장류 프레임워크 영역, 또는 영장류 프레임워크 영역과 적어도 85, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 동일한 프레임워크 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체는 영장류 Fc 도메인, 또는 영장류 Fc 도메인과 적어도 95, 96, 97, 98, 또는 99% 동일한 Fc 도메인을 포함한다. "영장류"는 인간(Homo sapiens), 침팬지(Pan troglodytes 및 Pan paniscus(보노보)), 고릴라(Gorilla gorilla), 긴팔원숭이, 원숭이, 여우원숭이, 아이아이원숭이(Daubentonia madagascariensis), 및 안경원숭이를 포함한다.

몇몇 실시형태에서, 인간 혈장 칼리크레인에 대한 영장류 항체의 친화도는 1000, 500, 100, 10, 5, 1, 0.5 nM 미만, 예컨대, 10 nM 미만, 1 nM 미만, 또는 0.5 nM 미만의 K_D를 특징으로 한다.

특정한 실시형태에서, 항체는 마우스 또는 토끼로부터의 서열을 포함하지 않는다(예컨대, 뮤린 또는 토끼 항체가 아니다).

몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에서 사용되는 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 DX-2930 또는 이의 기능적 변이체, 또는 DX-2930와 동일한 에피토프에 결합하거나, 활성 혈장 칼리크레인에의 결합에 대하여 DX-2930에 대항하여 경쟁하는 항체일 수 있다.

하나의 예에 있어서, DX-2930의 기능적 변이체는 DX-2930와 동일한 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또 다른 예에 있어서, DX-2930의 기능적 변이체는 DX-2930의 V_H 및 V_L에서의 것들과 비교하여 V_H 또는 V_L의 FR에서 하나 이상의 돌연변이(예컨대, 보존적 치환)를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 이러한 돌연변이는 하나 이상의 CDR과 상호작용하는 것이 예상되는 잔기에서 발생하지 않고, 이는 일상적인 기술에 의해 결정될 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 기능적 변이체는 DX-2930의 하나 이상의 CDR 영역 내에 1개 이상(예컨대, 1개, 2개 또는 3개)의 돌연변이를 함유한다. 바람직하게는, 이러한 기능적 변이체는 모체와 동일한, 항원-결합의 원인이 되는 영역/잔기를 보유한다. 다른 실시형태에서, DX-2930의 기능적 변이체는 DX-2930의 V_H의 것과 적어도 85%(예컨대, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 동일한 아미노산 서열를 포함하는 V_H 쇄 및/또는 DX-2930의 V_L의 것과 적어도 85%(예컨대, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 갖는 V_L 쇄를 포함할 수 있다. 이들 변이체는 혈장 칼리크레인의 활성 형태에 결합할 수 있고, 바람직하게는 프리칼리크레인에 결합하지 않는다.

두 아미노산 서열의 "퍼센트 동일성"은 문헌[Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993]에서와 같이 변형된 문헌[Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990]의 알고리즘을 사용하여 결정된다. 이러한 알고리즘은 문헌[Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버젼 2.0)으로 도입된다. BLAST 단백질 검색을 XBLAST 프로그램, 스코어=50, 단어길이=3으로 수행하여, 관심대상 단백질 분자의 상동 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 두 서열 사이에 갭이 존재하는 경우, 문헌[Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997]에 기재된 바와 같은 Gapped BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램(예컨대, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터를 사용할 수 있다.

항체 제조

본 명세서에 기재된 바와 같은 PKal에 결합할 수 있는 항체는 당해 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York]을 참조한다.

몇몇 실시형태에서, 표적 항원(예컨대, 인간 PKal 또는 이의 촉매 도메인)에 특이적인 항체는 통상적인 하이브리도마 기술에 의해 제조될 수 있다. KLH와 같은 담체 단백질에 임의로 커플링된 전체-길이 표적 항원 또는 이의 단편은 그 항원에 결합하는 항체를 생성시키기 위한 호스트 동물을 면역화하는데 사용될 수 있다. 호스트 동물의 면역화의 경로 및 일정은 추가로 본 명세서에 기재되는 바와 같이 일반적으로 항체 자극 및 제조를 위한 확립되고 통상적인 기술과 일치한다. 마우스, 인간화된, 및 인간 항체의 제조를 위한 일반적인 기술은 당해 분야에 공지되어 있고 본 명세서에 기재되어 있다. 인간을 포함한 임의의 포유동물 대상체 또는 이로부터 세포를 생성하는 항체는 인간을 포함한 포유동물의 하이브리도마 세포주를 생성하는 역할을 하도록 조작될 수 있다는 것이 예상된다. 전형적으로, 호스트 동물은 본 명세서에 기재된 바를 포함하여 면역원으로 복강내, 근육내, 경구, 피하, 발바닥내, 및/또는 피내 접종될 수 있다.

문헌[Kohler, B. and Milstein, C.(1975) Nature 256:495-497]의 일반적인 체세포 혼성화 기술 또는 문헌[Buck, D. W., et al., In Vitro, 18:377-381(1982)]에 의해 변형된 기술을 사용하여 림프구 및 불멸화된 골수종 세포로부터 하이브리도마를 제조할 수 있다. X63-Ag8.653 및 솔크 인스티튜트(Salk Institute, Cell Distribution Center, 미국 캘리포니아주의 샌디에이고에 소재)로부터의 것들을 포함하지만 이에 한정되지 않는 이용가능한 골수종 세포주를 혼성화에 사용할 수 있다. 일반적으로, 기술은 폴리에틸렌 글리콜과 같은 퓨소겐(fusogen)을 사용하거나 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 전기적 수단으로 골수종 세포 및 림프 세포를 융합시키는 것을 포함한다. 융합 후, 세포를 융합 배지로부터 분리하고, 하이포크산틴-아미노프테린-티미딘(HAT) 배지와 같은 선택 성장 배지에서 성장시켜 혼성화되지 않은 모 세포를 제거한다. 혈청으로 보충되거나 보충되지 않은, 본 명세서에 기재된 임의의 배지를 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마를 배양하는데 사용할 수 있다. 또 다른 대안적인 세포 융합 기술로서, EBV 불멸화된 B 세포를 사용하여 본 명세서에 기재된 항-PKal 단일클론 항체를 제조할 수 있다. 목적하는 경우, 하이브리도마를 확장시키고 서브클로닝하고, 상청액을 통상적인 면역검정 과정(예컨대, 방사면역검정, 효소 면역검정, 또는 형광 면역검정)으로 항-면역원 활성에 대해 검정한다.

항체의 공급원으로서 사용될 수 있는 하이브리도마는 PKal 활성을 방해할 수 있는 단일클론 항체를 생성하는 모체 하이브리도마의 모든 유도체, 자손 세포를 포함한다. 이러한 항체를 생성하는 하이브리도마는 공지된 과정을 사용하여 시험관내 또는 생체내 성장될 수 있다. 목적하는 경우, 황산암모늄 침전, 겔 전기영동, 투석, 크로마토그래피, 및 초미세여과와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 과정에 의해 단일클론 항체는 배양 배지 또는 체액으로부터 단리될 수 있다. 목적하지 않은 활성이 존재하는 경우, 예를 들어, 고체상에 부착된 면역원으로 만들어진 흡착제 위에서 제조를 수행하고, 목적하는 항체를 면역원으로부터 용리시키거나 방출시킴으로써 이를 제거할 수 있다. 이작용성 또는 유도체화제, 예를 들어, 말레이미도벤조일 설포석신이미드 에스터(시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시석신이미드(리신 잔기를 통한), 글루타르알데하이드, 석시닉 무수물, SOCl, 또는 R1N=C=NR를 사용하는, 면역화되는 종에서 면역원성인 단백질, 예컨대, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 또는 대두 트립신 저해제에 접합된 표적 아미노산 서열을 함유하는 표적 항원 또는 단편에 의한 호스트 동물의 면역화는 항체(예컨대, 단일클론 항체)의 집단(population)을 수득할 수 있고, 여기서 R 및 R1은 상이한 알킬 기이다.

목적하는 경우, 관심대상(예컨대, 하이브리도마에 의해 제조된) 항체(단일클론 또는 다중클론)를 서열화할 수 있고, 그 다음, 폴리뉴클레오타이드 서열을 발현 또는 전파를 위한 벡터로 클로닝할 수 있다. 관심대상 항체를 인코딩하는 서열을 호스트 세포에서 벡터 내에 유지할 수 있고, 그 다음, 호스트 세포를 확장시키고 추가의 사용을 위하여 냉동할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오타이드 서열을 항체의 "인간화" 또는 친화도(친화도 성숙화) 또는 항체의 기타 특성의 개선을 위한 유전자 조작을 위하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 항체가 인간에서 임상 시험 및 치료에 사용되는 경우, 면역 반응을 회피하기 위하여 불변 영역은 인간 불변 영역과 더 유사하게 조작될 수 있다. 항체 서열을 유전자 조작하여 표적 항원에 대한 더 큰 친화도 및 PKal의 활성을 저해하는 더 큰 효능을 수득하는 것이 바람직할 수 있다. 당해 분야의 숙련가에게 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 변화가 항체에 대해 만들어질 수 있고, 여전히 표적 항원에 대한 이의 특이적인 결합을 유지할 수 있다는 것이 명백할 것이다.

다른 실시형태에서, 완전한 인간 항체는 특이적 인간 면역글로불린 단백질을 발현하도록 조작된 상업적으로 이용가능한 마우스를 사용하여 수득될 수 있다. 더 바람직한(예컨대, 완전한 인간 항체) 또는 더 양호한 면역 반응을 생성하도록 디자인된 형질전환 동물을 인간화된 또는 인간 항체의 생성을 위하여 사용할 수 있다. 이러한 기술의 예는 제노마우스(Xenomouse)^RTM(Amgen, Inc., 캘리포니아주의 프리몬트에 소재) 및 HuMAb-마우스(HuMAb-Mouse)^RTM 및 TC 마우스(TC Mouse)^TM(Medarex, Inc., 뉴저지주의 프린스턴에 소재)이다. 또 다른 대안에 있어서, 항체는 파지 디스플레이 또는 효모 기술에 의해 재조합적으로 만들어질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,565,332호; 제5,580,717호; 제5,733,743호; 및 제6,265,150호; 및 문헌[Winter et al., (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-455]을 참조한다. 대안적으로, 파지 디스플레이 기술(McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-553)은 비면역화된 공여자로부터의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 시험관내 인간 항체 및 항체 단편을 제조하는데 사용될 수 있다.

온전한 항체(전체-길이 항체)의 항원-결합 단편은 일상적인 방법을 통해 제조될 수 있다. 예를 들어, F(ab')2 단편은 항체 분자 및 F(ab')2 단편의 다이설파이드 브릿지를 환원시킴으로써 발생될 수 있는 Fab 단편의 펩신 소화에 의해 제조될 수 있다.

유전자 조작된 항체, 예를 들어, 인간화된 항체, 키메라 항체, 단쇄 항체, 및 2특이적 항체는, 예컨대, 통상적인 재조합 기술을 통해 제조될 수 있다. 하나의 예에 있어서, 표적 항원에 특이적인 단일클론 항체를 인코딩하는 DNA를 통상적인 과정을 사용하여(예컨대, 단일클론 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리하고 서열화할 수 있다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원 역할을 한다. 일단 단리되면, DNA를 하나 이상의 발현 벡터 내로 배치할 수 있고, 그 다음, 호스트 세포, 예를 들어, 달리 면역글로불린 단백질을 제조하지 않는 이.콜라이(E. coli) 세포, 시미안 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염시켜 재조합 호스트 세포에서 단일클론 항체의 합성을 수득한다. 예컨대, PCT 공개 제WO 87/04462호를 참조한다. 그 다음, 예를 들어, 상동 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인의 코딩 서열을 치환(Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851)하거나, 면역글로불린 코딩 서열을 비-면역글로불린 폴리펩타이드의 모든 또는 부분적 코딩 서열을 공유적으로 결합시켜, DNA를 변형할 수 있다. 이러한 방식으로, 표적 항원의 결합 특이성을 갖는 유전자 조작된 항체, 예를 들어, "키메라" 또는 "하이브리드" 항체가 제조될 수 있다.

"키메라 항체"의 제조를 위하여 개발된 기술은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 예컨대, 문헌[Morrison et al.(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 6851]; [Neuberger et al.(1984) Nature 312, 604]; 및 [Takeda et al.(1984) Nature 314:452]을 참조한다.

인간화된 항체를 구성하는 방법은 또한 당해 분야에 잘 알려져 있다. 예컨대, 문헌[Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029-10033(1989)]을 참조한다. 하나의 예에서, 모체 비-인간 항체의 VH 및 VL의 가변 영역은 당해 분야에 알려진 방법에 따라 3차원 분자 모델링 분석의 대상이 될 수 있다. 그 다음, 정확한 CDR 구조의 형성에 중요하다고 예상되는 프레임워크 아미노산 잔기는 동일한 분자 모델링 분석을 사용하여 확인된다. 동시에, 모체 비-인간 항체의 것과 상동인 아미노산 서열을 갖는 인간 VH 및 VL 쇄는 검색 질의로서 모체 VH 및 VL 서열을 사용하여 임의의 항체 유전자 데이타베이스로부터 확인된다. 그 다음, 인간 VH 및 VL 어셉터 유전자가 선택된다.

선택된 인간 어셉터 유전자 내의 CDR 영역은 모체 비-인간 항체 또는 이의 기능적 변이체로부터의 CDR 영역으로 대체될 수 있다. 필요한 경우, CDR 영역(상기 기재 참조)과 상호작용 하는데 중요하다고 예상되는 모체 쇄의 프레임워크 영역 내의 잔기는 인간 어셉터 유전자에서 상응하는 잔기를 대신하는데 사용될 수 있다.

중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열 및 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 연결함으로써, 단쇄 항체를 재조합 기술을 통해 제조할 수 있다. 바람직하게는, 유연한 링커가 두 가변 영역 사이에 도입된다. 대안적으로, 단쇄 항체의 제조에 대하여 기재된 기술(미국 특허 제4,946,778호 및 제4,704,692호)은 파지 또는 이스트 scFv 라이브러리를 제조하기 위해 개조될 수 있고, PKal에 특이적인 scFv 클론은 일상적인 과정에 따라 라이브러리로부터 확인될 수 있다. 양성 클론은 PKal 활성을 저해하는 것들을 확인하기 위한 추가의 스크리닝의 대상이 될 수 있다.

당해 분야에 알려진 방법 및 본 명세서에 기재된 방법에 따라 수득된 항체는 당해 분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 특성화될 수 있다. 예를 들어, 하나의 방법은 항원이 결합하는 에피토프를 확인하는 것, 또는 "에피토프 맵핑"이다. 단백질 위의 에피토프 위치의 맵핑 및 특성화를 위한 당해 분야에 알려진 많은 방법이 존재하고, 이는 예를 들어, 문헌[Chapter 11 of Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999]에 기재된 바와 같은, 항체-항원 복합체의 결정 구조의 해소, 경쟁 검정, 유전자 단편 발현 검정, 및 합성 펩타이드-기반 검정을 포함한다. 추가의 예에 있이서, 에피토프 맵핑은 항체가 결합하는 서열을 결정하는데 사용될 수 있다. 에피토프는 선형 에피토프, 즉, 아미노산의 단일 신장에 함유된 선형 에피토프, 또는 단일 신장(1차 구조 선형 서열)에 필수적으로 함유되지 않을 수 있는 아미노산의 3차원 상호작용에 의해 형성된 형태 에피토프일 수 있다. 다양한 길이(예컨대, 적어도 4-6 아미노산 길이)의 펜타이드는 단리되거나 합성(예컨대, 재조합적으로)될 수 있고, 항체와의 결합 검정에 사용될 수 있다. 또 다른 예에 있어서, 항체가 결합하는 에피토프는 표적 항원 서열로부터 유래된 오버랩핑 펩타이드를 사용하고 항체에 의한 결합을 결정함으로써 체계적인 스크리닝에서 결정될 수 있다. 유전자 단편 발현 검정에 따라, 표적 항원을 인코딩하는 개방 판독 프레임은 무작위적으로 또는 특이적 유전자 구조물에 의해 단편화되고, 항원의 발현된 단편의 시험되는 항체와의 반응성이 측정된다. 유전자 단편은, 예를 들어, PCR에 의해 제조될 수 있고, 그 다음, 방사성 아미노산의 존재하에 시험관내 단백질로 전사 및 번역된다. 그 다음, 방사성 표지된 항원 단편에 대한 항체의 결합은 면역침강 및 겔 전기영동으로 측정된다. 특정한 에피토프는 또한 파지 입자의 표면 위에 나타난 무작위 펩타이드 서열의 큰 라이브러리(파지 라이브러리)를 사용하여 확인될 수 있다. 대안적으로, 오버랩핑 펩타이드 단편의 정의된 라이브러리는 단순 결합 검정에서 시험 항체에의 결합에 대하여 시험될 수 있다. 추가의 예에 있어서, 항원 결합 도메인의 돌연변이생성, 도메인 스와핑 실험 및 알라닌 스캐닝 돌연변이생성은 에피토프 결합에 요구되는 잔기, 충분한 잔기 및/또는 필요한 잔기를 확인하기 위하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 도메인 스와핑 실험은 표적 항원의 돌연변이체를 사용하여 수행될 수 있고, 여기서 PKal 폴리펩타이드의 다양한 단편은 매우 연관되지만, 항원적으로 별개인 단백질(뉴로트로핀 단백질 패밀리의 또 다른 멤버와 같은)로부터의 서열로 대체(스와핑)된다. 돌연변이체 PKal(예컨대, 하기 실시예 2에 기재된 이러한 돌연변이체)에 대한 항체의 결합을 평가함으로써, 항체 결합에 대한 특정한 항원 단편의 중요성을 평가할 수 있다.

대안적으로, 동일한 항원에 결합하는 것으로 알려진 다른 항체를 사용하여 경쟁 검정을 수행하여 항체가 다른 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정할 수 있다. 경쟁 검정은 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.

당해 분야에 알려진 임의의 적합한 방법, 예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은 에피토프 맵핑 방법은 항-PKal 항체가 본 명세서에 기재된 바와 같은 PKal의 하나 이상의 특이적 잔기/분절에 결합하는지 여부를 측정하는데 적용될 수 있다. 추가로, 항체의 PKal의 하나 이상의 이러한 정의된 잔기와의 상호작용은 일상적인 기술을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 결정 구조는 하기 실시예 1에 기재된 방법에 따라 측정될 수 있고, PKal의 잔기와 항체의 하나 이상의 잔기 사이의 거리가 따라서 측정될 수 있다. 이러한 거리를 기반으로, PKal의 특이적 잔기가 항체의 하나 이상의 잔기와 상호작용하는지 여부가 측정될 수 있다. 추가로, 경쟁 검정 및 표적 돌연변이생성 검정과 같은 적합한 방법은 돌연변이체 PKal와 같은 또 다른 표적과 비교하여 후보 항-PKal 항체의 PKal에 대한 바람직한 결합을 측정하는데 적용될 수 있다.

대안적으로, 항-PKal 항체는 당해 분야에 알려진 방법에 따라 디스플레이 라이브러리와 같은 항체 라이브러리로부터 확인될 수 있다.

일단 항-PKal 항체가 당해 분야에 알려진 임의의 방법을 사용하여 확인되고 본 명세서에 기재된 치료에서 사용하기에 적합한 항체인 것으로 확인되면, 이러한 항체는 표준 재조합 핵산 방법을 통해 제조될 수 있다.

일반적으로, 단백질을 인코딩하는 핵산 서열은 핵산 발현 벡터 내로 클로닝된다. 물론, 단백질이 다중 폴리펩타이드 쇄를 포함하는 경우, 각각의 쇄는 동일하거나 상이한 세포에서 발현되는 발현 벡터, 예컨대, 동일하거나 상이한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.

몇몇 항체, 예컨대, Fab는 박테리아 세포, 예컨대, 이.콜라이 세포로부터 제조될 수 있다(예컨대, 문헌[Nadkarni, A. et al., 2007 Protein Expr Purif 52(1):219-29] 참조). 예를 들어, Fab가 디스플레이 엔티티와 박테리오파지 단백질(또는 이의 단편) 사이의 억제성 중지 코돈을 포함하는 파지 디스플레이 벡터에서 서열에 의해 인코딩되는 경우, 벡터 핵산은 중지 코돈을 억제할 수 없는 박테리아 세포 내로 이동될 수 있다. 이러한 경우에 있어서, Fab는 유전자 III 단백질에 융합되지 않고, 주변세포질 및/또는 배지로 분비되지 않는다.

항체는 또한 진핵 세포에서 제조될 수 있다. 일 실시형태에서, 항체(예컨대, scFv의 항체)는 피치아(Pichia)(예컨대, 문헌[Powers et al., 2001, J. Immunol. Methods. 251:123-35]; [Schoonooghe S. et al., 2009 BMC Biotechnol. 9:70]; [Abdel-Salam, HA. et al., 2001 Appl Microbiol Biotechnol 56(1-2):157-64]; [Takahashi K. et al., 2000 Biosci Biotechnol Biochem 64(10):2138-44]; [Edqvist, J. et al., 1991 J Biotechnol 20(3):291-300] 참조), 한세울라(Hanseula), 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)와 같은 이스트 세포에서 발현된다. 당해 분야의 숙련가는, 예를 들어, 산소 조건(예컨대, 문헌[Baumann K., et al. 2010 BMC Syst. Biol. 4:141] 참조), 삼투몰농도(예컨대, 문헌[Dragosits, M. et al., 2010 BMC Genomics 11:207] 참조), 온도(예컨대, 문헌[Dragosits, M. et al., 2009 J Proteome Res. 8(3):1380-92] 참조), 발효 조건(예컨대, 문헌[Ning, D. et al. 2005 J. Biochem. 및 Mol. Biol. 38(3): 294-299] 참조), 이스트의 균주(예컨대, 문헌[Kozyr, AV et al. 2004 Mol Biol(Mosk) 38(6):1067-75]; [Horwitz, AH. et al., 1988 Proc Natl Acad Sci U S A 85(22):8678-82]; [Bowdish, K. et al. 1991 J Biol Chem 266(18):11901-8] 참조), 항체 제조를 개선시키기 위한 단백질의 과발현(예컨대, 문헌[Gasser, B. et al., 2006 Biotechol. Bioeng. 94(2):353-61] 참조), 배양의 산성 수준(예컨대, 문헌[Kobayashi H., et al., 1997 FEMS Microbiol Lett 152(2):235-42] 참조), 기질 및/또는 이온의 농도(예컨대, 문헌[Ko JH. et al., 2996 Appl Biochem Biotechnol 60(1):41-8] 참조)를 최적화함으로써 이스트에서 항체 제조를 최적화할 수 있다. 추가로, 이스트 시스템은 확장된 반감기를 갖는 항체(예컨대, 문헌[Smith, BJ. et al. 2001 Bioconjug Chem 12(5):750-756] 참조)를 제조하는데 사용될 수 있다.

하나의 바람직한 실시형태에서, 항체는 포유동물 세포에서 제조된다. 클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현하기 위하여 바람직한 포유동물 호스트 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예컨대, 문헌[Kaufman and Sharp, 1982, Mol. Biol. 159:601 621]에 기재된 바와 같은 DHFR 선택성 마커와 함께 사용되는, 문헌[Urlaub and Chasin, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기재된 dhfr- CHO 세포를 포함함), 림프구 세포주, 예컨대, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포, COS 세포, HEK293T 세포(J. Immunol. Methods(2004) 289(1-2):65-80), 및 형질전환 동물, 예컨대, 형질전환 포유동물로부터의 세포를 포함한다. 예를 들어, 세포는 유방 상피 세포이다.

몇몇 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 식물 또는 무-세포(cell-free)계 시스템(예컨대, 문헌[Galeffi, P., et al., 2006 J Transl Med 4:39] 참조)에서 제조된다.

다양화된 면역글로불린 도메인을 인코딩하는 핵산 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 호스트 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예컨대, 복제의 개시점)과 같은 추가의 서열, 및 선택성 마커 유전자를 보유할 수 있다. 선택성 마커 유전자는 벡터가 도입된 호스트 세포의 선택을 촉진한다(예컨대, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예를 들어, 전형적으로 선택성 마커 유전자는 벡터가 도입된 호스트 세포 위의 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 내성을 부여한다. 바람직한 선택성 마커 유전자는 다이하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭과 함께 dhfr ^- 호스트 세포에서 사용을 위한 것) 및 neo 유전자(G418 선택을 위한 것)를 포함한다.

항체 또는 이의 항원-결합 부분의 재조합 발현을 위한 예시적인 시스템에 있어서, 항체 중쇄 및 항체 경쇄를 둘 다 인코딩하는 재조합 발현 벡터는 인산칼슘-매개된 형질감염에 의하여 dhfr ^- CHO 세포 내로 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 인핸서/프로모터 조절 인자(예컨대, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 인자 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 인자와 같이 SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유도됨)에 각각 작동적으로 연결되어(operatively linked) 유전자의 높은 수준의 전사를 만든다. 재조합 발현 벡터는 또한 DHFR 유전자를 보유하고, 이는 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 가능하게 한다. 선택된 형질전환체 호스트 세포는 배양되어 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하고, 온전한 항체는 배양 배지로부터 회수된다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여, 재조합 발현 벡터를 제조하고, 호스트 세포를 형질감염시키고, 형질전환체를 위해 선택하고, 호스트 세포를 배양하고, 항체를 배양 배지로부터 회수한다. 예를 들어, 일부 항체는 단백질 A 또는 단백질 G 커플링된 매트릭스가 있는 친화도 크로마토그래피에 의해 단리될 수 있다.

Fc 도메인을 포함하는 항체에 대하여, 항체 제조 시스템은 Fc 영역이 글리코실화된 항체를 제조할 수 있다. 예를 들어, IgG 분자의 Fc 도메인은 CH2 도메인의 아스파라긴 297에서 글리코실화된다. 이러한 아스파라긴은 바이안텐나리(biantennary)형 올리고당에 의한 변형을 위한 부위이다. 이러한 글리코실화가 Fcg 수용체 및 보체 C1q에 의해 매개되는 이펙터 기능에 필요하다는 것이 입증되었다(Burton and Woof, 1992, Adv. Immunol. 51:1-84; Jefferis et al., 1998, Immunol. Rev. 163:59-76). 일 실시형태에서, Fc 도메인은 아스파라긴 297에 상응하는 잔기를 적절하게 글리코실화하는 포유동물 발현 시스템에서 제조된다. Fc 도메인은 또한 다른 진핵 전사후 변형을 포함할 수 있다.

항체는 또한 형질전환 동물에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,849,992호는 형질전환 포유동물의 유선에서 항체를 발현하는 방법을 기재한다. 전이유전자는 유즙-특이적 프로모터 및 관심대상 항체를 인코딩하는 핵산 및 분비를 위한 신호 서열을 포함하도록 구성된다. 이러한 형질전환 포유동물의 암컷에 의해 생성된 유즙은, 그 안에서 분비된, 관심대상 항체를 포함한다. 항체는 유즙으로부터 정제될 수 있거나, 몇몇 적용에 있어서 직접적으로 사용될 수 있다.

약제학적 조성물

본 명세서에 기재된 하나 이상의 항체는 조성물, 예컨대, 약제학적으로 허용 가능한 조성물 또는 약제학적 조성물 중에 존재할 수 있다. 혈장 칼리크레인 결합 항체는 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화될 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 100㎎ 내지 300㎎(예컨대, 투약량 100㎎ 또는 300㎎의 DX-2930)은 임의로 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 조성물, 예컨대, 약제학적으로 허용 가능한 조성물 또는 약제학적 조성물 중에 존재한다.

약제학적으로 허용 가능한 담체는 생리학적으로 혼화성인 임의의 및 모든 용매, 분산매, 코팅제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 바람직하게는, 담체는 정맥내, 근육내, 피하, 비경구, 척추, 또는 표피 투여(예컨대, 주사 또는 주입)에 적합하지만, 흡입 및 비강내 투여에 적합한 담체가 또한 고려된다.

약제학적으로 허용 가능한 염은 화합물의 목적하는 생물학적 활성을 보유하고, 임의의 목적하지 않는 독물학적 효과를 부여하지 않는 염이다(예컨대, 문헌[Berge, S.M., et al., 1977, J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조). 이러한 염의 예는 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 산 부가 염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 아인산 등과 같은 비독성 무기산, 뿐만 아니라 지방족 모노- 및 다이카복실산, 페닐-치환된 알칸산, 하이드록시 알칸산, 방향족산, 지방족 및 방향족 설폰산 등과 같은 비독성 유기산으로부터 유도된 것들을 포함한다. 염기 부가 염은 나트륨, 마그네슘, 칼슘 등과 같은 알칼리 토금속, 뿐만 아니라 N,N'-다이벤질에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 클로로프로카인, 콜린, 다이에탄올아민, 에틸렌다이아민, 프로카인 등과 같은 비독성 유기 아민으로부터 유도된 것들을 포함한다.

조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어, 액체, 반고체 및 고체 투약형, 예를 들어, 액체 용액(예컨대, 주사가능 및 주입가능 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 필, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 형태는 의도된 투여 방식 및 치료학적 적용에 따라 좌우될 수 있다. 많은 조성물은 주사가능 또는 주입가능 용액 형태, 예를 들어, 항체와 함께 인간 투여를 위하여 사용되는 것들과 유사한 조성물이다. 예시적인 투여 방식은 비경구(예컨대, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내)이다. 일 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 복강내 주사에 의해 투여된다.

본원에서 사용되는 바와 같은 구 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여됨"은 일반적으로 주사에 의한, 장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 제한없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경유, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.

조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 분산액, 리포솜, 또는 고농도의 약물에 적합한 다른 규칙 구조로서 제형화될 수 있다. 무균 주사가능 용액은 적절한 용매 중의 필요한 양의 결합 단백질을 상기 열거된 하나의 성분 또는 성분들의 조합과 함께 혼입시키고, 필요한 경우, 여과 살균을 후속적으로 수행함으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산매 및 상기 열거된 것들 중 필요한 다른 성분을 함유하는 무균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 무균 주사가능 용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 활성 성분의 분말과 이의 이전의 무균 여과된 용액으로부터의 임의의 추가의 목적하는 성분의 합을 수득하는 진공 건조 및 냉동 건조이다. 용액의 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사가능 조성물의 지속된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물 중에 포함함으로써 야기될 수 있다.

혈장 칼리크레인 결합 항체는 정맥내 주사 또는 주입을 포함한 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 몇몇 치료학적 적용을 위하여, 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 약 1 내지 100㎎/㎡ 또는 7 내지 25㎎/㎡의 용량에 도달하는 30, 20, 10, 5, 또는 1㎎/분 미만의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 투여 경로 및/또는 방식은 목적하는 결과에 따라 다양할 것이다. 특정한 실시형태에서, 활성 화합물은, 임플란트, 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함한 제어된 방출 제형과 같이, 신속한 방출로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조될 수 있다. 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스터, 및 폴리락트산과 같은 생분해성, 생체적합성 중합체가 사용될 수 있다. 이러한 제형의 많은 제조 방법이 이용가능하다. 예컨대, 문헌[Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., 1978, Marcel Dekker, Inc., New York]을 참조한다.

약제학적 조성물은 의학 장치에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 장치, 예컨대, 무바늘 피하 주사 장치, 펌프, 또는 임플란트에 의해 투여될 수 있다.

특정한 실시형태에서, 혈장 칼리크레인 결합 단백질은 생체내 적절한 분포를 보장하도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 혈액-뇌 관문(BBB)은 매우 높은 친수성의 화합물을 배제시킨다. 본 명세서에 기재된 치료학적 화합물이 BBB를 통과하는 것을 보장하기 위하여(목적하는 경우), 이들은, 예를 들어, 리포솜으로 제형화될 수 있다. 리포솜의 제작 방법에 대하여, 예컨대, 미국 특허 제4,522,811호; 제5,374,548호; 및 제5,399,331호를 참조한다. 리포솜은 특이적 세포 또는 기관으로 선택적으로 수송되는 하나 이상의 모이어티를 포함할 수 있고, 따라서 표적화된 약물 전달을 개선시킬 수 있다(예컨대, 문헌[V.V. Ranade, 1989, J. Clin. Pharmacol. 29:685] 참조).

투약량 요법은 최적의 목적하는 반응(예컨대, 치료학적 반응)을 제공하기 위하여 조절된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있고, 몇 부분으로 나뉜 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 용량은 긴급 치료 상황에 의해 지시되는 바에 따라 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 투여의 용이함과 투약량의 단일성을 위하여 비경구 조성물을 투약량 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 바와 같은 투약량 단위 형태는 치료되는 대상체를 위하여 단일한 투약량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 나타내고; 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 목적하는 치료학적 효과를 생성하도록 계산된 활성 화합물의 미리측정된 양을 함유한다. 투약량 단위 형태를 위한 사양은 (a) 활성 화합물의 고유한 특성 및 달성되는 특정한 치료학적 효과, 및 (b) 개체의 민감성 처리에 있어서 이러한 활성 화합물을 조제하는 당해 분야의 고유한 한계에 따라 지시되거나 직접적으로 좌우될 수 있다.

본 명세서에 기재된 항체의 치료학적 또는 예방학적 유효량의 예시적이고 비제한적인 범위는 0.1-20㎎/kg, 보다 바람직하게는 1-10㎎/kg이다. 항-혈장 칼리크레인 항체는, 예컨대, 정맥내 주입에 의하여, 예컨대, 약 1 내지 100 mg/㎡ 또는 약 5 내지 30 mg/㎡의 용량에 도달하는 30, 20, 10, 5, 또는 1㎎/분 미만의 속도로 투여될 수 있다. 투약량 값은 완화되는 상태의 유형 및 중증도에 따라 다양할 수 있다. 특정한 대상체에 대하여, 특이적 투약량 요법은 조성물을 투여하거나 투여를 감독하는 사람의 개별적인 요구 및 전문적인 판단에 따라 시간에 따라 조절될 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, DX-2930)의 치료학적 또는 예방학적 유효량은 30 내지 400mg, 30 내지 300mg, 30 내지 250mg, 30 내지 200㎎, 30 내지 150㎎, 30 내지 100㎎, 30 내지 50㎎, 50 내지 400㎎, 50 내지 300㎎, 50 내지 250㎎, 50 내지 200㎎, 50 내지 150㎎, 50 내지 100㎎, 100 내지 400㎎, 100 내지 300㎎, 100 내지 250㎎, 100 내지 200㎎, 100 내지 150㎎, 150 내지 400㎎, 150 내지 300㎎, 150 내지 250㎎, 150 내지 200㎎, 200 내지 400㎎, 200 내지 300㎎, 200 내지 250㎎, 250 내지 400㎎, 250 내지 300㎎, 또는 300 내지 400㎎, 또는 그 사이의 임의의 정수이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 30 내지 300㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 300㎎ 이상이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 400㎎ 이상이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 100 내지 300㎎(100㎎, 150㎎, 200㎎, 250㎎ 또는 300㎎)이다.

몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, DX-2930)의 치료학적 또는 예방학적 유효량은 30㎎, 40㎎, 50㎎, 60㎎, 70㎎, 80㎎, 90㎎, 100㎎, 110㎎, 120㎎, 130㎎, 140㎎, 150㎎, 160㎎, 170㎎, 180㎎, 190㎎, 200㎎, 210㎎, 220㎎, 230㎎, 240㎎, 250㎎, 260㎎, 270㎎, 280㎎, 290㎎, 300㎎, 310㎎, 320㎎, 330㎎, 340㎎, 350㎎, 360㎎, 370㎎, 380㎎, 390㎎ 또는 400㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 30㎎, 100㎎ 또는 300㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 100㎎ 또는 300㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 100㎎이다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 300㎎이다.

몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 적어도 6회, 적어도 7회, 적어도 8회, 적어도 9회, 적어도 10회, 또는 그 이상 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 매일, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 또는 그 이상 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 100㎎ 또는 300㎎이고, 양은 2주마다 또는 4주마다 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 100㎎이고, 항체의 이러한 양은 2주마다 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 300㎎이고, 항체의 이러한 양은 2주마다 또는 4주마다 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 300㎎이고, 항체의 이러한 양은 2주마다 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 300㎎이고, 양은 4주마다 투여된다.

몇몇 실시형태에서, 치료학적 또는 예방학적 유효량은 항체의 혈장 또는 혈청 농도를 약 80nM 이상(예컨대, 100nM 이상, 150nM 이상, 또는 약 200nM)로 유지하는 양이다. 몇몇 실시형태에서, 항체의 양은 항체의 혈장 또는 혈청 농도를 약 80-300nM, 예컨대, 80-100nM, 80-120nM, 80-150nM, 100-150nM, 100-200nM, 150-200nM, 또는 200-300nM 범위로 유지하는데 유효하다. 혈장 또는 혈청 농도는 적합한 검정, 예컨대, 혈장 칼리크레인 활성 검정, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들, ELISA 검정과 같은 면역 기반 검정, 또는 본 명세서에 기재된 절단된 키니노겐을 측정하기 위한 웨스턴블롯 검정, 또는 질량 분석을 사용하여 측정될 수 있다.

본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 혈장 칼리크레인 결합 단백질의 "치료학적 유효량" 또는 "예방학적 유효량"을 포함할 수 있다.

키트

하나 이상의 본 명세서에 기재된 혈장 칼리크레인 결합 항체는 키트, 예컨대, 키트의 구성요소로 제공될 수 있다. 예를 들어, 키트는 (a) 혈장 칼리크레인 결합 항체, 예컨대, 혈장 칼리크레인 결합 항체를 포함하는 조성물(예컨대, 약제학적 조성물), 및, 임의로 (b) 정보 자재를 포함한다. 정보 자재는 본 명세서에 기재된 방법 및/또는, 예컨대, 본 명세서에 기재된 방법을 위한 혈장 칼리크레인 결합 항체의 사용에 관한 서술용, 교육용, 홍보용 또는 기타 자재일 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 혈장 칼리크레인 결합 항체, 예컨대, DX-2930의 하나 이상의 용량을 포함한다. 몇몇 실시형태에서, 하나 이상의 용량은 100㎎ 또는 300㎎이다.

키트의 정보 자재는 그 형태가 한정되지 않는다. 일 실시형태에서, 정보 자재는 화합물의 생산, 화합물의 분자량, 농도, 만료일, 배치 또는 생산지 정보 등에 대한 정보를 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 정보 자재는 항체를 사용하여 질병 및 병태, 예컨대, 혈장 칼리크레인 연관 질환 또는 병태를 치료하거나 예방하거나 진단하는 것에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 정보 자재는 혈장 칼리크레인 결합 항체를 본 명세서에 기재된 방법을 수행하는 적합한 방식으로, 예컨대, 적합한 용량, 투약형, 투여 방식 또는 투약 요법(예컨대, 본 명세서에 기재된 용량, 투약형, 투약 요법 또는 투여 방식)으로 투여하는 것에 관한 설명서를 포함할 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 정보 자재는 혈장 칼리크레인 결합 항체를 적합한 대상체, 예컨대, 인간, 예컨대, 혈장 칼리크레인 연관 질환 또는 병태를 지니거나 지닐 위험이 있는 인간에게 투여하는 것에 대한 설명서를 포함한다. 예를 들어, 자재는 혈장 칼리크레인 결합 단백질을 본 명세서에 기재된 장애 또는 병태, 예컨대, 혈장 칼리크레인 연관 질환을 지닌 환자에게, 예컨대, 본 명세서에 기재된 투약 요법에 따라 투여하는 것에 대한 설명서를 포함한다. 키트의 정보 자재는 그 형태가 한정되지 않는다. 많은 경우에 있어서, 정보 자재, 예컨대, 설명서는 인쇄물로 제공될 수 있지만 컴퓨터 판독가능 자재와 같은 다른 형식일 수도 있다.

혈장 칼리크레인 결합 항체는 임의의 형태, 예컨대, 액체, 건조된 또는 동결건조된 형태로 제공될 수 있다. 혈장 칼리크레인 결합 항체는 실질적으로 순수하고/순수하거나 무균인 것이 바람직하다. 혈장 칼리크레인 결합 항체가 액체 용액으로 제공되는 경우, 액체 용액은 바람직하게는 수성 용액이고, 무균 수성 용액이 바람직하다. 혈장 칼리크레인 결합 항체가 건조된 형태로 제공되는 경우, 재구성은 일반적으로 적합한 용매의 첨가에 의한다. 용매, 예컨대, 무균수 또는 버퍼는 임의로 키트 내에 제공될 수 있다.

키트는 혈장 칼리크레인 결합 항체를 함유하는 조성물을 위한 하나 이상의 컨테이너를 포함할 수 있다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 조성물 및 정보 자재를 위한 분리된 컨테이너, 칸막이 또는 구획을 함유한다. 예를 들어, 조성물은 병, 바이알, 또는 주사기에 함유될 수 있고, 정보 자재는 컨테이너와 연관되어 함유될 수 있다. 다른 실시형태에서, 키트의 분리된 요소는 단일한, 분리되지 않은 컨테이너 내에 함유될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 정보 자재가 라벨의 형태로 부착되어 있는 병, 바이알 또는 주사기에 함유된다. 몇몇 실시형태에서, 키트는 복수(예컨대, 팩)의 개별적인 컨테이너를 포함하고, 각각은 하나 이상의 혈장 칼리크레인 결합 항체의 단위 투약형(예컨대, 본 명세서에 기재된 투약형)을 함유한다. 예를 들어, 키트는 복수의 주사기, 앰플, 포일 봉지, 또는 블리스터 팩을 포함하고, 각각은 혈장 칼리크레인 결합 항체의 단일 단위 용량을 함유한다. 키트의 컨테이너는 공기 밀폐성, 방수성(예컨대, 수분 또는 증발의 변화에 불투과성), 및/또는 차광성일 수 있다.

키트는 임의로 조성물의 투여에 적합한 장치, 예컨대, 주사기, 또는 임의의 이러한 전달 장치를 포함한다. 일 실시형태에서, 장치는 항체의 계량된 용량을 분산하는 임플란트형 장치이다. 기재내용은 또한, 예컨대, 본 명세서에 기재된 구성요소를 조합함으로써, 키트를 제공하는 방법을 특징으로 한다.

치료

몇몇 양상에서, 기재내용은 HAE의 치료에서 활성 혈장 칼리크레인(예컨대, 인간 활성 혈장 칼리크레인)에 결합하는 항체의 사용을 제공한다. 본 명세서에 기재된 치료에서 사용하기에 적합한 항체는 DX-2930 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 이의 기능적 변이체, DX-2930와 동일한 에피토프에 결합하는 항체, 또는 인간 활성 혈장 칼리크레인에의 결합에 대하여 DX-2930에 대항하여 경쟁하는 항체를 포함한다.

유전성 혈관부종

유전성 혈관부종(HAE)은 또한 "퀸케(Quincke) 부종", C1 에스터라제 저해제 결핍증, C1 저해제 결핍증 및 유전성 혈관신경성 부종(HANE)으로 공지되어 있다. HAE는 예컨대 사지, 얼굴, 생식기, 위장관 및 기도에 영향을 미칠 수 있는 심각한 종창(혈관부종)의 재발성 삽화를 특징으로 한다. HAE의 증상은 예컨대 팔, 다리, 입술, 눈, 혀 및/또는 목의 종창; 목 종창 및 갑작스런 목쉼을 포함할 수 기도 폐색; 명확한 원인이 없는 복부 경련의 반복 삽화; 및/또는 장의 종창(중증일 수 있고, 복부 경련, 구토, 탈수, 설사, 통증 및/또는 쇼크를 발생시킬 수 있음)을 포함한다. 이 HAE를 갖는 개인의 약 ⅓이 공격 동안 윤곽성 홍반이라 불리는 가렵지 않은 발진을 전개시킨다.

기도의 종창은 삶을 위협할 수 있고, 몇몇 환자에서 사망을 야기한다. 사망률은 15-33%로 추정된다. HAE는 매년 약 15,000-30,000개의 응급실 방문을 발생시킨다.

외상 또는 스트레스, 예컨대 치아 시술, 질병(예컨대, 바이러스 질병, 예컨대 감기 및 독감), 월경 및 수술은 혈관부종의 공격을 촉발할 수 있다. HAE의 급성 공격을 예방하기 위해, 환자는 이전에 야기된 공격을 갖는 특수 자극을 피하도록 시도할 수 있다. 그러나, 많은 경우에, 공지된 촉발물질 없이 공격이 발생한다. 통상적으로, HAE 증상은 처음에 어린이에서 나타나고, 사춘기 동안 악화된다. 대체로, 치료되지 않은 개인은 1주 내지 2주마다 공격을 갖고, 대부분의 삽화는 약 3일 내지 4일 동안 지속한다(ghr.nlm.nih.gov/condition/hereditary-angioedema). 공격의 빈도 및 기간은 유전성 혈관부종을 갖는 사람 중에서, 심지어 동일한 가족의 사람 중에서 매우 변한다.

I형, II형 및 III형으로 공지된 3개의 유형의 HAE가 존재하고, 이들 모두 본 명세서에 기재된 방법에 의해 치료될 수 있다. HAE가 50,000명 중 1명의 사람에게 영향을 미치고, I형이 사례의 약 85%를 차지하며, II형이 사례의 약 15%를 차지하고, III형이 매우 희귀한 것으로 추정된다. III형이 가장 새로 기재된 형태이고, 원래 여성에게만 발생하는 것으로 생각되었지만, 이환된 남성을 갖는 가족이 확인되었다.

HAE는 상염색체 우성 패턴으로 유전되어서, 이환된 사람은 1명의 이환된 부모로부터 돌연변이를 유전 받을 수 있다. 유전자에서의 새로운 돌연변이가 또한 발생할 수 있고, 따라서 HAE는 이의 가족에서 장애의 병력을 갖지 않은 사람에서 또한 발생할 수 있다. 사례의 20-25%는 새로운 자발적 돌연변이로부터 생기는 것으로 추정된다.

세르핀G1 유전자의 돌연변이는 유전성 혈관부종 I형 및 II형을 발생시킨다. 세르핀G1 유전자는 염증을 조절하는 데 중요한 C1 저해제 단백질을 만드는 명령을 제공한다. C1 저해제는 염증을 촉진하는 소정의 단백질의 활성을 차단한다. 유전성 혈관부종 I형을 발생시키는 돌연변이는 혈액 중 C1 저해제의 수치를 감소시킨다. 반대로, II형을 발생시키는 돌연변이는 비정상적으로 작용하는 C1 저해제를 생성시킨다. 적절한 수치의 기능적 C1 저해제 없이는, 과도한 양의 브래디키닌이 생성된다. 브래디키닌은 혈관벽을 통해 신체 조직으로 유체의 누출을 증가시킴으로써 염증을 촉진한다. 신체 조직에서의 과도한 유체 축적은 유전성 혈관부종 I형 및 II형을 갖는 개인에서 보이는 종창의 삽화를 발생시킨다.

F12 유전자의 돌연변이는 유전성 혈관부종 III형의 몇몇 경우와 연관된다. F12 유전자는 응고 XII 인자를 만드는 명령을 제공한다. 혈액 응고(응혈)에서의 중요한 역할 이외에, XII 인자는 또한 염증의 중요한 자극제이고, 브래디키닌의 생성에 관여한다. F12 유전자의 소정의 돌연변이는 활성이 증가한 XII 인자를 생성시킨다. 그 결과, 더 많은 브래디키닌이 생성되고, 혈관벽은 더 누출이 되어, 종창의 삽화를 발생시킨다. 유전성 혈관부종 III형의 다른 원인은 공지되어 있지 않다. 하나 이상의 아직 확인되지 않은 유전자의 돌연변이는 이 경우에 장애에 원인이 될 수 있다.

HAE는 알레르기 또는 다른 의학 병증으로부터 생긴 혈관부종의 다른 형태와 유사하게 존재할 수 있지만, 이것은 원인 및 치료에서 상당히 다르다. 유전성 혈관부종이 알레르기로 오진될 때, 이것은 항히스타민, 스테로이드 및/또는 에피네프린(통상적으로 HAE에서 비효과적이지만, 에피네프린은 삶을 위협하는 반응에 사용될 수 있음)으로 가장 흔히 치료된다. 오진은 또한 복부 종창을 갖는 환자에 대해 불필요한 탐색적 수술을 발생시키고, 몇몇 HAE 환자에서 복부 통증은 정신신체증(psychosomatic)으로 부정확하게 진단된다.

C1 저해제 치료제, 및 HAE에 대한 다른 치료제는 문헌[Kaplan, A.P., J Allergy Clin Immunol, 2010, 126(5):918-925]에 기재되어 있다.

HAE 공격의 급성 치료는 가능한 빨리 부종의 진행을 중지시키도록 제공된다. 정맥내 투여되는 공여자 혈액으로부터의 C1 저해제 농축물은 하나의 급성 치료이지만; 이 치료는 많은 나라에서 이용 가능하지 않다. C1 저해제 농축물이 이용 가능하지 않은 응급 상황에서, 새로 냉동된 혈장(fresh frozen plasma: FFP)이 또한 C1 저해제를 함유하므로, 이를 대안으로서 사용할 수 있다.

유럽에서 1979년 이후로 인간 혈액으로부터 유래한 정제된 C1 저해제가 사용되었다. 몇몇 C1 저해제 치료제가 미국에서 현재 이용 가능하고, 2종의 C1 저해제 제품이 캐나다에서 현재 이용 가능하다. 급성 공격을 위해 2009년에 식품의약청(F.D.A.)이 살균된 베리네트(Berinert) P(CSL Behring)를 허가하였다. 예방을 위해 2008년에 식품의약청이 나노여과된 신리지(Cinryze)(ViroPharma)를 허가하였다. 루신(Rhucin)(Pharming)은 인간 혈액 매개 병원균으로 인해 감염성 질환 전달의 위험을 보유하지 않는 개발 하에 재조합 C1 저해제이다.

급성 HAE 공격의 치료는 또한 통증 경감을 위한 약제 및/또는 IV 유체를 포함할 수 있다.

다른 치료 양상은 C1 저해제의 합성을 자극하거나 C1 저해제 소비를 감소시킬 수 있다. 안드로겐 약제, 예컨대 다나졸은 C1 저해제의 생성을 자극함으로써 공격의 빈도 및 중증도를 감소시킬 수 있다.

헬리코박터 파일로리(helicobacter pylori)는 복부 공격을 촉발할 수 있다. 에이치. 파일로리를 치료하는 항생제는 복부 공격을 감소시킬 수 있다.

더 새로운 치료는 접촉 캐스케이드를 공격한다. 에칼란타이드(KALBITOR(등록상표), DX-88, Dyax)는 혈장 칼리크레인을 저해하고, 미국에서 승인되었다. 이카티반트(Icatibant)(FIRAZYR(등록상표), Shire)는 브래디키닌 B2 수용체를 저해하고, 유럽 및 미국에서 승인되었다.

HAE의 진단은 예컨대 가족 병력 및/또는 혈액 시험에 의존할 수 있다. HAE I형, II형 및 III형과 연관된 실험실 발견은 예컨대 문헌[Kaplan, A.P., J Allergy Clin Immunol, 2010, 126(5):918-925]에 기재되어 있다. I형 HAE에서, C4의 수치와 같이 C1 저해제의 수치가 감소하지만, C1q 수치는 정상이다. II형 HAE에서, C1 저해제의 수치는 정상이거나 증가하지만; C1 저해제 기능은 비정상이다. C4 수치는 감소하고, C1q 수치는 정상이다. III형에서, C1 저해제, C4 및 C1q의 수치는 모두 정상일 수 있다.

HAE의 증상은, 예컨대 질의서, 예컨대 환자, 임상의 또는 가족 구성원이 완료한 질의서를 사용하여 평가될 수 있다. 이러한 질의서는 당해 분야에 공지되어 있고, 예컨대 육안 아날로그 스케일을 포함한다. 예컨대, 문헌[McMillan, C.V. et al. Patient. 2012;5(2):113-26]을 참조한다.

항-PKal 항체에 의한 HAE의 치료

본 개시내용은 예컨대 본 명세서에 기재된 투약 스케줄에 따라 HAE를 가지거나 가지는 것으로 의심되는 대상체에게 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 항체)를 투여함으로써 유전성 혈관부종(HAE)을 치료하는(예컨대, 하나 이상의 증상을 경감시키거나, 안정화시키거나, 제거하는) 방법을 제공한다. 예컨대, 본 명세서에 기재된 투약 스케줄에 따라, 또는 제2 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 예컨대 하나의 다른 물질과 조합하여, 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 항체)를 투여함으로써 HAE를 치료하는 방법이 추가적으로 제공된다. 본 개시내용은 예컨대 본 명세서에 기재된 투약 스케줄에 따라 HAE를 발생시킬 위험에 있는 대상체(예컨대, HAE를 가지는 가족 구성원을 가지거나 이에 대한 유전적 소인을 가지는 대상체)에게 본 명세서에 기재된 항체(예컨대, 예방학적 유효량의 본 명세서에 기재된 항체)를 투여함으로써 HAE 또는 이의 증상을 예방하는 방법을 또한 제공한다. 몇몇 예에서, 대상체는 치료의 시작 시 HAE 증상을 가지지 않는 인간 환자일 수 있다.

예컨대, 본 명세서에 기재된 바대로 혈장 칼리크레인에 결합하는 항체는 특히 인간 대상체에서 치료학적 및 예방학적 유용성을 가진다. 이 항체는 예컨대 혈장 칼리크레인 연관 질환을 포함하는 다양한 장애 및 병태를 치료하고/하거나, 예방하고/하거나, 진단하기 위해 대상체에게, 또는 심지어 예컨대 실험실내 또는 생체외 배양물 중의 세포에 투여된다. 예컨대, 이 결합 단백질은 배양물 중의 세포로부터 방출된 혈장 칼리크레인의 효과를 변형시키기 위해 사용될 수 있다(Lilla et al., J. Biol Chem. 284(20):13792-13803 (2009)). 치료한다는 것은 장애, 장애의 증상 또는 장애에 대한 소인을 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 치유하거나, 감소시키거나, 개선하거나, 이에 영향을 미치기에 효과적인 양을 투여하는 것을 포함한다. 치료는 또한 질환 또는 병태의 개시를 지연시키거나, 예컨대 예방하거나 이의 악화를 예방할 수 있다.

칼리크레인 결합 항체 및 다른 물질을 투여하는 방법이 "약제학적 조성물"에 또한 기재되어 있다. 사용된 분자의 적합한 투약량은 대상체의 연령 및 체중 및 사용된 특정한 약물에 따라 달라질 수 있다. 항체는 예컨대 혈장 칼리크레인과 이의 기질(예컨대, XII 인자 또는 HMWK) 사이의 원치 않는 상호작용을 저해하고 감소시키기 위한 경쟁적 물질로서 사용될 수 있다. 항체의 용량은 환자에서, 특히 질환의 부위에서 혈장 칼리크레인의 활성의 90%, 95%, 99% 또는 99.9%를 차단하기에 충분한 양일 수 있다. 이는 0.1, 1.0, 3.0, 6.0 또는 10.0㎎/㎏을 필요로 할 수 있다. 150,000g/몰(2개의 결합 부위)의 분자 질량을 가지는 IgG의 경우, 이 용량은 5ℓ의 혈액 용적에 대해 대략 18nM, 180nM, 540nM, 1.08μΜ 및 1.8μΜ의 결합 부위에 상응한다.

일 실시형태에서, 항체는 예컨대 생체내 혈장 칼리크레인의 활성을 감소시키도록(예컨대, 혈장 칼리크레인의 적어도 하나의 활성을 저해하도록, 예컨대 Xlla 인자 및/또는 브래디키닌 생성을 감소시키도록) 사용된다. 결합 단백질은 그 자체로 사용되거나 세포독성 약물, 세포독소 효소 또는 방사성 동위원소와 같은 물질에 접합될 수 있다.

항체는 천연 보체 의존적 세포독성(CDC) 또는 항체 의존적 세포내 세포독성(ADCC)을 통해 항원 발현 세포를 제거하기 위해 생체내 직접적으로 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체는 보체 결합 이팩터 도메인, 예컨대 IgGl, -2, 또는 -3으로부터의 Fc 부분 또는 보체에 결합하는 IgM의 상응하는 부분을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 표적 세포의 집단은 본 명세서에 기재된 항체 및 적절한 이팩터 세포에 의해 생체외 치료된다. 치료는 보체 또는 혈청 함유 보체의 첨가에 의해 보충될 수 있다. 추가로, 본 명세서에 기재된 항체에 의해 코팅된 표적 세포의 식세포작용은 보체 단백질의 결합에 의해 개선될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 보체 결합 이팩터 도메인을 포함하는 항체에 의해 코팅된 표적 세포는 보체에 의해 용해된다.

혈장 칼리크레인 결합 항체를 투여하는 방법은 "약제학적 조성물"에 기재되어 있다. 사용된 분자의 적합한 투약량은 대상체의 연령 및 체중 및 사용된 특정한 약물에 따라 달라질 것이다. 항체는 예컨대 천연 또는 병리학적 물질과 혈장 칼리크레인 사이의 원치않는 상호작용을 저해하거나 감소시키기 위한 경쟁적 물질로서 사용될 수 있다.

본 명세서에 기재된 바와 같은 항체의 치료학적 유효량은 HAE를 가지거나, 이를 가지는 것으로 의심되거나, 이의 위험에 있는 대상체에게 투여되어서, 장애를 치료할 수 있다(예컨대, 장애의 증상 또는 특징을 경감시키거나 개선하고/하거나, 질환 진행을 느리게 하고/하거나, 안정화시키고/시키거나, 싸울 수 있다).

본 명세서에 기재된 항체는 치료학적 유효량으로 투여될 수 있다. 항체의 치료학적 유효량은 대상체에 대한 단일 또는 다수의 용량 투여 시, 이러한 치료의 부재 하에 예상되는 것을 넘는 정도로 대상체를 치료하는 데, 예컨대 대상체에서의 장애의 적어도 하나의 증상을 치유하거나, 경감시키거나, 완화하거나, 개선하는 데 효과적인 양이다.

투약량 섭생은 최적의 원하는 반응(예컨대, 치료학적 반응)을 제공하도록 조정될 수 있다. 예컨대, 단일 볼루스가 투여될 수 있고, 여러 분할 용량은 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 용량은 치료학적 상황의 긴급성에 의해 표시된 바대로 비례하여 감소하거나 증가할 수 있다. 투여 용이성 및 투약량의 균일성을 위해 투약량 단위 형태로 비경구 조성물을 제제화하는 것이 특이 유리하다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 투약량 단위 형태는 치료되는 대상체에 대한 통합 투약량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 의미하고; 각각의 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 원하는 치료학적 효과를 생성하도록 계산된 미리 한정된 분량의 활성 화합물을 함유한다.

몇몇 실시형태에서, 항체(예컨대, DX-2930)는 단일 용량으로, 예컨대 0.1 내지 3㎎/㎏으로 투여된다. 다른 실시형태에서, 이것은 다수의 용량, 예컨대 1-4주마다, 예컨대 2주마다 또는 달마다(예컨대, 28일마다) 1회 투여로 투여된다. 다수의 용량의 각각은 0.1 내지 3㎎/㎏의 범위일 수 있다. 몇몇 경우에, 환자는 적합한 시간 기간 동안 1-4주마다, 예컨대 2주마다 또는 달마다 1회 다수의 용량이 투여되고, 이어서 동일한 또는 더 낮은 용량에서 달마다 또는 2달마다 유지 치료에 의해 추적관찰될 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 환자는 치료 전에 및 후에 또는 치료의 기간 동안 부작용(예컨대, 크레아티닌 포스파타제 수준의 상승) 및/또는 항체에 의한 pKal의 저해 수준(예컨대, 항체의 혈청 또는 혈장 농도 또는 pKal 활성 수준)에 대해 모니터링될 수 있다. 부작용이 관찰되는 경우, 항체의 용량은 감소할 수 있거나, 치료는 종료될 수 있다. 저해 수준이 최소 치료학적 수준보다 낮은 경우, 항체의 추가의 용량이 환자에게 투여될 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 항체(예컨대, DX-2930)의 혈장 또는 혈청 농도는 치료의 효율을 평가하기 위해 치료 기간 동안(예컨대, 초기 투약량 후) 측정될 수 있다. 항체의 혈장 또는 혈청 농도가 약 80nM 미만인 경우, 추적관찰 투약량이 필요할 수 있고, 이것은 초기 투약량과 동일하거나 더 높을 수 있다. 항체의 혈장 또는 혈청 농도는 예컨대 면역 검정 또는 MS 검정에 의해 대상체로부터 얻은 혈장 또는 혈청 샘플에서 항체의 단백질 수준을 결정함으로써 측정될 수 있다. 항체의 혈장 또는 혈청 농도는 항체에 의해 치료된 대상체로부터 얻은 혈장 또는 혈청 샘플에서 pKal의 저해 수준을 결정함으로써 또한 측정될 수 있다. 이러한 검정은 본 명세서에 기재된 절단된 키니노겐을 측정하기 위해 합성 기질 검정 또는 웨스턴블롯(Westernblot) 검정을 포함할 수 있다.

대안적으로 또는 또한, 크레아티닌 키나제의 혈장 또는 혈청 수준은 치료 과정 동안 모니터링될 수 있다. 크레아티닌 키나제의 혈장 또는 혈청 수준이 치료 동안 상승하는 것으로 밝혀질 때, 항체의 투약량을 감소할 수 있거나, 치료는 종료될 수 있다.

몇몇 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-pKal 항체(예컨대, DX-2930 또는 이의 항원 결합 단편)의 최적 투약량(예컨대, 최적 예방학적 투약량 또는 최적 치료학적 투약량)은 하기와 같이 결정될 수 있다. 항체는 초기 용량에서 치료를 필요로 하는 대상체에게 제공된다. 대상체에서의 항체의 혈장 농도가 측정된다. 혈장 농도가 80nM 미만인 경우, 항체의 용량은 후속 투여에서 증가한다. 약 80nM 초과의 항체 혈장 농도를 유지시키는 항체의 투약량은 대상체에 대한 최적 투약량으로서 선택될 수 있다. 대상체의 크레아티닌 포스포키나제 수준은 치료 과정 동안 모니터링될 수 있고, 그 대상체에 대한 최적 투약량은 크레아티닌 포스포키나제 수준에 기초하여 추가로 조정될 수 있고, 예컨대 항체의 투약량은 감소할 수 있고, 크레아티닌 포스포키나제의 상승이 치료 동안 관찰된다.

병용 치료

본 명세서에 기재된 항-혈장 칼리크레인 항체는 혈장 칼리크레인 활성과 연관된 질환 또는 병태, 예컨대 본 명세서에 기재된 질환 또는 병태를 치료하기 위한 하나 이상의 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 예컨대, 혈장 칼리크레인 결합 항체는 수술, 또 다른 항-혈장 칼리크레인 Fab 또는 IgG(예컨대, 본 명세서에 기재된 또 다른 Fab 또는 IgG), 또 다른 혈장 칼리크레인 저해제, 펩타이드 저해제, 또는 소분자 저해제에 의해 치료학적으로 또는 예방학적으로 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 혈장 칼리크레인 결합 항체와 병용 치료에서 사용될 수 있는 혈장 칼리크레인 저해제의 예는 예컨대 WO 제95/21601호 또는 WO 제2003/103475호에 기재된 혈장 칼리크레인 저해제를 포함한다.

하나 이상의 혈장 칼리크레인 저해제는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 혈장 칼리크레인 결합 항체와 병용되어 사용될 수 있다. 예컨대, 병용은 저해제의 더 낮은 용량이 필요하게 할 수 있고, 그래서 부작용이 감소한다.

본 명세서에 기재된 혈장 칼리크레인 결합 항체는 HAE를 치료하기 위한 하나 이상의 현재의 치료제와 병용되어 투여될 수 있다. 예컨대, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 DX-2930 또는 이의 기능적 변이체는 제2 항-HAE 치료제, 예컨대 에칼란타이드, C1 에스터라제 저해제(예컨대, CINRYZE(상표명)), 아프로티닌(TRASYLOL(등록상표)) 및/또는 브래디키닌 B2 수용체 저해제(예컨대, 이카티반트(FIRAZYR(등록상표)))와 동시 사용될 수 있다.

용어 "병용"은 동일한 환자를 치료하기 위한 2개 이상의 물질 또는 치료제의 사용을 의미하고, 물질 또는 치료제의 사용 또는 작용은 시간상 중첩된다. 물질 또는 치료제는 동시에(예컨대, 환자에게 투여되는 단일 제제로서 또는 동시에 투여된 2개의 별개의 제제로서) 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 순차 투여는 다른 시간에 제공되는 상이한 투여이다. 일 물질 및 또 다른 물질의 투여 사이의 시간은 분, 시간, 일 또는 주일 수 있다. 본 명세서에 기재된 혈장 칼리크레인 결합 항체의 사용은 예컨대 투여되는 또 다른 물질과 연관된 부작용을 감소시키기 위해 또 다른 치료제의 투약량을 감소시키기 위해 또한 사용될 수 있다. 따라서, 병용은 혈장 칼리크레인 결합 항체의 부재 하에 사용되는 것보다 적어도 10, 20, 30 또는 50% 더 낮은 투약량으로 제2 물질을 투여하는 것을 포함할 수 있다.

병용 치료는 다른 치료제의 부작용을 감소시키는 물질을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 상기 물질은 혈장 칼리크레인 연관 질환 치료의 부작용을 감소시키는 물질일 수 있다.

추가의 정교화 없이, 상기 설명에 기초하여, 당해 분야의 당업자는 본 발명을 이의 최대 정도로 이용할 수 있는 것으로 생각된다. 하기 구체적인 실시형태는 따라서 단지 예시적이고 어떤 방법으로든 본 개시내용의 나머지를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 명세서에 인용된 모든 공보는 본 명세서에 언급된 목적 또는 대상에 대해 참조문헌으로 인용된다.

실시예

실시예 1: 건강한 지원자에서의 DX-2930의 단일 상승 용량 연구

0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 및 3㎎/㎏의 DX-2930의 용량을 이용하여 건강한 지원자에서의 단일 상승 용량 연구를 수행하였다. 각각의 지원자에 대한 데이터를 얻고, 각각의 용량의 안정성을 결정하기 위해 분석하였다. DX-2930에 대한 중쇄 및 경쇄 완전 및 가변 서열이 하기 제공되고, 신호 서열은 이탤릭체이다. CDR은 볼드체이고 밑줄표시된다.

DX-2930 중쇄 아미노산 서열(451 아미노산, 49439.02Da)

DX-2930 경쇄 아미노산 서열(213 아미노산, 23419.08Da)

DX-2930 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열

DX-2930 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열

1a상 연구 설계

이 연구는 무작위이고, 이중 맹검이며, 위약 제어되었다. 단일 및 상승 용량 DX-2930을 건강한 대상체에게 피하로 투여하였다. 참가자들을 4개의 대상체 코호트 중 하나에 무작위로 배정하였고, 각각은 단일 용량(0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏)에 상응한다. 각각의 코호트는 6명의 활성 약물 치료된 대상체 및 2명의 위약 치료된 대상체를 함유하였다. 투약 스케줄의 완료 후 16주 동안 모든 대상체를 모니터링하였다.

안정성 결과

DX-2930은 3.0㎎/㎏ 이하의 단일 용량에서 용량 제한 독성의 증거 없이 매우 내약성이었다. 따라서, 이 연구는 DX-2930와 관련한 임의의 임상적으로 상당한 안정성 신호의 증거를 생성하지 않았다.

임상 실험실 결과는 임의의 부작용에 대해 DX-2930과 위약 사이의 임상적으로 유의적인 불균형을 나타내지 않았다. 가장 흔히 보고된 부작용은 두통(DX-2930 치료된 대상체 중 25% 및 위약 치료된 대상체 중 25%)을 포함한다. 부작용은 심각하지 않았고, 모든 부작용은 해결되었다.

활력 징후, 신체 검사 및 심전도(ECG)의 분석은 0.1㎎/㎏의 용량을 받은 1명의 대상체에서 상부 호흡기 감염을 입증하였지만, 조사자들은 감염이 경증이고 치료와 무관하다는 것을 보고하였다. 달리, 연구 대상체의 활력 징후, 신체 검사 및 심전도(ECG)에 의한 비정상이 관찰되지 않았다.

항-약물 항체 시험은 혈청전환의 증거를 생성하지 않았다.

중증 AE를 가지는 오직 2명의 대상체는 맹검 조사자들에 의해 치료 관련된 것으로 보고되었다. 0.1㎎/㎏의 DX-2930이 투약된 1명의 대상체(모든 DX-2930 치료된 대상체의 4.2%)에서 902U/ℓ[기준 범위: 21-215U/ℓ]의 크레아티닌 포스포키나제 평가가 관찰되었다. 위약이 투여된 1명의 대상체(모든 위약 치료된 대상체의 12.5%)에서 1967U/ℓ[기준 범위: 32-294U/ℓ]의 크레아티닌 포스포키나제 평가가 관찰되었다. 결과는 임의의 다른 AE와 연관된 실험실 비정상 또는 임상적인 중요성을 나타내는 발견을 나타내지 않았다. 어떤 대상체에서 주사 부위 반응이 없었다.

약역학적(PD) 및 약동학적(PK) 결과

표 3은 각각의 용량 코호트에 대한 약동학적 매개변수 예상치를 제공한다. 평균 C_max 및 AUC_last 값은 우수하게 행동하는 항체와 일치하는 엄격한 선형 용량 의존성을 나타낸다. 긴 반감기를 가지는 약물은 안정한 정상 상태 혈액 수준을 달성하기 위해 드문 투약 스케줄을 허용한다. DX-2930은 모든 용량군에 걸쳐 거의 3주의 일관된 연장된 반감기를 나타냈다.

HAE의 예방을 위한 치료학적 후보물질은 드문 투약 및 논리적 기술적 투약 근거가 가능하게 하는 긴 반감기 및 예측 가능한 약동학적 프로필을 가져야 한다. DX-2930은 일관된 약동학적 프로필을 제공하여서, HAE를 가지는 환자에게 상당한 치료학적 이익을 제공하는 투약 섭생의 종료를 허용한다.

건강한 대상체에서 단일 용량 후 DX-2930의 약동학적(PK) 매개변수를 평가하였다. 단일 3㎎/㎏ 투약 후, 80nM의 표적 수준을 초과하는 혈장 약물 농도가 획득되었다. 대략 80nM 초과의 약물 수준은 대략 10일 동안 유지되었다(도 7). 약물 수준은 정상 상태가 도달할 때까지 약물의 반복 투여 시 계속해서 축적될 것이다. 오직 DX-2930의 단일 용량 후에도, 80nM의 표적을 초과하는 약물 수준이 획득되고 연장된 시간 기간 동안 유지되었다. 이 연구로부터의 PK 데이터는 표적화된 80nM 수준 초과의 혈장 약물 농도를 획득하고 이어서 이를 계속해서 유지하기 위한 투약 전략의 실행가능성을 지지한다. 게다가, HAE 예방과 관련한 충분한 혈장 칼리크레인 저해를 획득하기에 필요한 바대로 80nM 초과의 더 높은 약물 수준이 달성될 수 있다.

DX-2930의 약역학적(PD) 평가를 수행하였다. DX-2930을 추가로 구명하기 위해, 분자의 약역학적 프로필을 평가하기 위해 대상체의 혈장 샘플에서 탐색적 바이오마커 검정을 생체외 수행하였다. 인공 형광 기질을 사용하는 혈장 칼리크레인 활성 검정 및 브래디키닌이 생성된 혈장 칼리크레인의 네이티브 기질인 키니노겐의 절단을 측정하는 웨스턴 블롯 검정의 2개의 독립적 검정을 수행하였다.

이 검정은 반정량적이다. 데이터 점은 따라서 이 실험 내의 다른 데이터 점과 관련하여 해석되어야 하고 검정에 걸쳐 또는 다른 검정 시스템에 비교되지 않아야 한다. 이 검정은 C1-저해제의 정상 수준을 가지는 정상 대상체 혈장에서 수행된다. 결과적으로, 이 바이오마커 검정에 사용된 건강한 대상체는 HAE 공격을 발생시키지 않는다. 이 바이오마커 평가의 목표는 투약된 대상체로부터의 혈장에서의 DX-2930이 혈장 칼리크레인에 대해 저해 활성을 가진다는 것을 확인하는 것이다. 마찬가지로 중요하게, 약역학적 결과가 관찰된 PK 프로필을 확증하는지를 평가하기 위해 이 연구를 수행하였다.

도 9는 DX-2930의 약역학적 효과를 도시한다. 연구 약물 치료된 대상체로부터의 혈장을 생체외 활성화하여 접촉 시스템 경로를 유도하고 이로써 혈장 칼리크레인 생성 및 활성을 자극한다. 형광 검정을 통해 pKal 활성을 측정하였다. 1 및 3㎎/㎏ 군으로부터의 데이터가 표시되어 있다. 혈장 칼리크레인 저해가 특히 1 및 3㎎/㎏ 용량군에서 확실히 명확하다. 0.1㎎/㎏ 또는 위약 군에서 상당한 저해가 관찰되지 않았다. 관찰된 저해는 둘 다 용량 및 시간 의존적이고, DX-2930의 저해 활성을 확인시켜준다. DX-2930의 PD 효과는 DX-2930에 대한 PK 데이터를 확증한다.

DX-2930의 치료학적 용도

효과적인 예방을 위해, 효율에 대한 요건은 관련 약물 표적이 연속 기준으로 최소 필요한 양 초과의 수준에서 저해되는 것이다. 저해 포괄범위에서의 갭은 최소이거나 모두 회피된다. 저해의 수준이 최소 필요한 수준 아래로 하락하는 경우, 개인은 병리학적 과정의 활성화에 생물학적으로 취약하고 질환 사건에 대해 임상적으로 위험에 처할 수 있다.

HAE는 예방의 널리 확립된 원칙으로부터 면제되지 않는다. HAE에서, 혈장 칼리크레인은 혈관부종 공격의 발병에 중요한 검증된 약물 표적을 나타낸다. HAE 공격의 예방은 혈장 칼리크레인 저해가 최소 치료학적 수준 초과로 계속해서 유지될 것을 필요로 할 수 있다. 시간에 걸친 포괄범위의 갭은 취약성의 기간을 피하기 위해 최소화된다. 이 필요성은 HAE 공격에서 중요한 역학을 하도록 가정되는 양성 피드백 루프의 현상에 의해 추가로 강조된다. 이 캐스케이드의 개시 시, 혈장 칼리크레인의 활성화는 XII 인자 활성화를 발생시키고, 이것은 결국 더 많은 혈장 칼리크레인 생성을 추진한다.

DX-2930 및 HAE 공격의 급성 치료에 대해 미국에서 승인된 공지된 치료제인 에칼란타이드에 의한 혈장 칼리크레인의 저해를 실험실내 검정에서 비교하였다. 이 시스템에서, 접촉 시스템을 개시시키고 프리칼리크레인을 활성 혈장 칼리크레인으로 전환시키는 물질에 인간 혈장을 노출시켰다.

환자에서의 투약 후 혈장 중의 에칼란타이드의 피크 농도인, 80nM이 혈장 칼리크레인 활성의 오직 부분 저해를 제공한다. 80nM의 이 농도 범위 주위에, 이 검정 결과는 DX-2930이 에칼란타이드에 필적하는 효력을 가진다는 것을 보여준다(도 5). 80nM이 HAE 공격에 관한 혈장 칼리크레인 수준인 것으로 보이는 것을 고려하고, 이 농도 범위에서 혈장 칼리크레인을 저해하는 데 있어서의 에칼란타이드에 DX-2930의 필적하는 효력을 고려하면, 80nM의 혈장 약물 농도 초과로 DX-2930을 유지시키는 것이 HAE 공격을 방해할 것이라는 것이 가정된다(도 6). DX-2930 혈장 약물 수준에 대한 80nM 표적이 현재 이용 가능한 데이터 및 질환 생물학의 이해에 기초하여 탄탄한 것으로 보인다. 80nM이 초기 표적이지만, 치료학적 용량을 달성하기 위해 DX-2930의 더 낮거나 더 높은 약물 수준이 필요할 수 있다.

실시예 2: HAE 환자에서의 DX-2930의 다수의 상승 용량 연구

DX-2930의 다수의 용량이 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏의 투약량으로 HAE 환자에게 투여된다. 도 2는 DX-2930의 3㎎/㎏ 용량의 반복 투약 후 달성되는 예측된 혈장 농도를 제공한다. 초기 농도 프로필은 건강한 대상체에서의 단일 용량 투여 시 관찰된 프로필과 일치한다.

만성 투약 후 DX-2930의 약역학적 및 약동학적 거동을 예측하기 위해 PK 모델링을 수행할 수 있다. 도 8은 건강한 대상체에서 28일마다 DX-2930이 3㎎/㎏으로 투약된 가상적인 시나리오를 나타낸다. 이 모델링의 결과는, 정상 상태가 달성된 후, 반복 투여가 초기에 표적화된 80nM 수준 주위로 또는 초과로 약물 농도를 계속해서 유지시킬 것이라는 것을 제안한다(이 한계치 값의 토의를 위해 실시예 2를 참조한다).

1주 떨어져 제공된 DX-2930의 2개의 투여 후 HAE 환자에서의 DX-2930의 안정성 및 효율을 평가한다. HAE 공격을 방해하는 데 있어서 (상이한 용량에서의) DX-2930의 효율을 평가하기 위한 추적관찰 연구에 사용하기 위한 투약량(들)을 결정하기 위해 (약동학과 함께) 바이오마커 데이터를 평가한다.

실시예 3. 유전성 혈관부종의 장기간 예방을 조사하는 데 있어서 투약 섭생의 약리학적 모델링

방법

합성 기질 검정을 이용하여 에칼란타이드 및 DX-2930에 의한 pKal의 실험실내 저해를 평가하였다. 건강한 대상체에서 피하 DX-2930의 단일 상승 용량 연구로부터의 약동학적(PK) 데이터를 이용하여 모델링을 수행하였다.

결과

실험실내 pKal 검정에서, DX-2930 및 에칼란타이드는 80nM 농도에서 필적하는 약역학적(PD) 활성을 나타냈다. 80nM 미만의 pKal 저해제의 혈장 농도는 오직 부분 예방학적 효과를 제공하여서, 저용량 가설에 비해 중간 용량 및 고용량 가설에 추가의 신빙성을 준다. 따라서, 80nM 초과로 DX-2930 약물 수준을 계속해서 유지시키는 것은 중간 용량 가설에 의해 기술되는 pKal 저해의 수준을 획득해야 한다. PK 모델링은 만성 DX-2930 투약이 2주마다의 100㎎(또는 4주마다의 300㎎)과 함께 80nM 초과 및 2주마다의 300㎎과 함께 200nM 초과의 정상 상태 혈장 약물 농도를 생성시킬 것이라는 것을 나타낸다.

다른 실시형태

본 명세서에 개시된 모든 특징은 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 본 명세서에 개시된 각각의 특징은 대안적인 특징에 의해 대체되어 동일한, 동등한 또는 유사한 목적을 제공할 수 있다. 따라서, 달리 명확히 기재되지 않은 한, 개시된 각각의 특징은 오직 동등한 또는 유사한 특징의 총체적 시리즈의 예이다.

상기 설명으로부터, 당해 분야의 당업자는 본 발명의 필수적인 특징을 쉽게 확신할 수 있고, 이의 정신 및 범위를 벗어남이 없이, 본 발명의 다양한 변화 및 변형을 다양한 용법 및 조건에 적용하도록 이것을 만들 수 있다. 따라서, 다른 실시형태가 또한 청구범위 내에 있다.

<110> Dyax Corp. <120> PLASMA KALLIKREIN BINDING PROTEINS AND USES THEREOF IN TREATING HEREDITARY ANGIOEDEMA <130> WO2015/112578 <140> PCT/US2015/012212 <141> 2015-01-21 <150> US 62/021,397 <151> 2014-07-07 <150> US 61/944,361 <151> 2014-02-25 <150> US 61/929,716 <151> 2014-01-21 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 1 Met Gly Trp Ser Cys Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly Ala 1 5 10 15 His Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro 20 25 30 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser 35 40 45 His Tyr Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60 Trp Val Ser Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp 65 70 75 80 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 85 90 95 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Tyr Arg Arg Ile Gly Val Pro Arg Arg Asp Glu Phe Asp 115 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200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly 450 <210> 12 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 12 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (7)

1. 유전성 혈관부종(hereditary angioedema: HAE)을 치료하는데 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
   상기 조성물은 활성 혈장 칼리크레인(active plasma kallikrein)에 결합하는 항체를 포함하고; 상기 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에서의 상기 항체의 혈장 농도가 80nM 초과가 되도록 2주 마다 또는 4주 마다 300 mg의 항체 유효량으로 상기 대상체에게 투여되며; 상기 항체는 서열번호 5의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HC CDR1) 서열, 서열번호 6의 HC CDR2 서열, 서열번호 7의 HC CDR3 서열, 서열번호 8의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LC CDR1) 서열, 서열번호 9의 LC CDR2 서열, 서열번호 10의 LC CDR3 서열을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 2주마다 300㎎으로 투여되는, 약제학적 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 피하 투여되고/되거나 상기 항체는 예방학적 치료를 위해 투여되는, 약제학적 조성물.
4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대상체는 HAE를 가지거나, HAE를 가지는 것으로 의심되거나, 또는 HAE의 위험이 있는 인간 환자인, 약제학적 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 항체가 서열번호 3의 HC 가변 도메인 서열 및 서열번호 4의 LC 가변 도메인 서열을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 항체가 전장 항체 또는 그의 항원 결합 단편인, 약제학적 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 11의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호 12의 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.