KR20240004584A

KR20240004584A - 탈유비퀴티나아제-표적화 키메라 및 관련된 방법

Info

Publication number: KR20240004584A
Application number: KR1020237040245A
Authority: KR
Inventors: 라이디아 보이케; 더스틴 리어드 도발라; 나타니엘 제임스 헤닝; 매튜 제임스 헤쎄; 강 리우; 제프리 엠. 맥켄나; 다니엘 케이. 노무라; 마르쿠스 에버하드 쉴레; 제시카 니콜 스프래들린; 존 에이. 탈라리코; 칼 씨. 워드; 멜리사 피게띠
Original assignee: 노파르티스 아게; 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아
Priority date: 2021-04-29
Filing date: 2022-04-29
Publication date: 2024-01-11
Also published as: EP4329815A1; AU2022265718A1; MX2023012852A; CA3216614A1; WO2022232634A1; JP2024515828A; IL307863A; BR112023022315A2; US20240252655A1

Abstract

본원에는 표적 단백질의 조정(예를 들어, 안정화)을 위해 특정 탈유비퀴티나아제를 표적 단백질로 리크루팅하도록 기능하는 이작용성 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체, 및 이의 사용 방법이 기재되어 있다.

Description

탈유비퀴티나아제-표적화 키메라 및 관련된 방법

관련 출원

본 출원은 2022년 2월 18일자로 출원된 미국 가출원 제63/311,781호; 2021년 10월 28일자로 출원된 미국 가출원 제63/273,118호; 2021년 5월 10일자로 출원된 미국 가출원 제/186,739호; 및 2021년 4월 29일자로 출원된 미국 가출원 제63/181,796호의 이익 및 우선권을 주장한다. 상술한 출원 각각의 전문은 그 전체가 본원에서 참고로 포함된다.

본 개시내용의 분야

본원에는, 예를 들어 표적 단백질의 안정화 및/또는 질병, 질환 또는 병태의 치료를 위한, 표적 단백질 및 탈유비퀴티나아제 둘 모두에 결합하는 이작용성 화합물 및 관련된 조성물 및 사용 방법이 기재되어 있다.

유비퀴틴-프로테아솜 경로(UPP)는 단백질 분해, 품질 관리, 수송 및 신호전달을 비롯한 다양한 세포 기능에서 역할을 하는 중요한 과정이다. 유비퀴틴 및 기타 유비퀴틴-유사 단백질(종합적으로, "Ubl")은, 특정 변형에 따라 프로테아솜에 의한 분해를 위해 이들 단백질을 궁극적으로 표적화하거나, 기타 방식으로 단백질 기능에 영향을 미치는 특정한 단백질 기질에 공유 부착된다. 그러나, 이들 Ubl은 표적 단백질로부터 Ubl을 가수분해하는 탈유비퀴티나아제(DUB)의 작용을 통해 제거될 수 있다. 유비퀴틴화된 표적 단백질로부터의 Ubl의 제거는 안정성의 개선 및 프로테아솜 분해의 방지를 비롯한 여러 가지 방식으로 표적 단백질의 기능을 조정할 수 있다. 특정 세포성 단백질의 분해가 질병의 진행과 연관이 있으므로, 특정 단백질을 안정화시키고 이들의 분해를 지연 또는 저해하기 위한 새로운 수단이 요구되고 있다.

도 1은 본원에 기재된 예시적인 이작용성 화합물의 일반적인 구성 뿐만 아니라, 표적 단백질(예를 들어, 유비퀴틴화된 표적 단백질)의 수준을 탈유비퀴틴화 및 안정화시키기 위해 탈유비퀴티나아제(DUB)를 표적 단백질로 리크루팅할 때의 이들의 사용을 보여주는 개략도이다.
도 2a 및 도 2b는 후보 탈유비퀴티나아제를 확인하기 위해 본원에 기재된 활성-기반 단백질 프로파일링(ABPP) 스크린의 결과를 보여주는 원 그래프이다. 도 2a는 시험된 65개 중 65개의 탈유비퀴티나아제가 탐침-변형 시스테인을 함유하고 있다는 것을 보여준다. 도 2b는 시험된 65개 중 39개의 탈유비퀴티나아제가 ABPP 데이터 세트 전체에 걸쳐 10개 초과의 전체 스펙트럼 계수를 나타내고, 이들 39개 중 24개의 탈유비퀴티나아제(62%)는 촉매 또는 활성 부위 시스테인의 표지를 나타냈다는 것을 보여준다.
도 3a는 ABPP 스크린에서 확인된 탈유비퀴티나아제 중 10개가 특정 탈유비퀴티나아제용 탐침-변형 시스테인 펩타이드에 대한 전체 총 스펙트럼 계수의 50% 초과를 나타내는 하나의 탐침-변형 시스테인을 함유한다는 것을 보여주는 그래프이다.
도 3b는 촉매 시스테인 91(C91)과 비교하여 시스테인 23(C23)이 탐침 스크린에 의해 표지된 우세 부위로서 확인된 탈유비퀴티나아제 OTUB1에 대한 화학 단백체 데이터(chemoproteomic data) 분석을 보여주는 그래프이다.
도 4는 ABPP에 의한 OTUB1에 대한 결합제를 확인하기 위해 재조합 탈유비퀴티나아제(OTUB1)의 IA-로다민 표지와 경쟁하는 시스테인-반응성 라이브러리의 공유결합 리간드 스크린 결과를 보여주는 그래프이다. 비히클 DMSO 또는 시스테인-반응성 공유결합 리간드(50 μM)를 IA-로다민 표지(500 nM, 30분, 실온) 이전에 실온에서 30분 동안 OTUB1과 함께 예비 인큐베이션하였다. 이어서, OTUB1을 SDS/PAGE에 의해 분리하고, 겔 내 형광(in-gel fluorescence)을 평가하였으며, 기재된 바와 같았다.
도 5는 OTUB1의 IA-로다민 결합의 투여량-반응성 저해를 보여주는 겔-기반 ABPP 확인 이미지이다. 비히클(DMSO) 또는 예시적인 DUB 리크루터(화합물 100)을 IA-로다민 표지(500 nM, 30분, 실온) 이전에 37℃에서 30분 동안 OTUB1과 함께 예비 인큐베이션하였다. 이어서, OTUB1을 SDS/PAGE에 의해 분리하고, 겔 내 형광을 평가하였다. 단백질 로딩은 은 염색(silver staining)에 의해 예시된다. 상기 나타낸 겔은 그룹 당 n = 3개인 생물학적으로 독립적인 샘플의 대표적인 겔이다.
도 6은 예시적인 DUB 리크루터(화합물 100)에 공유 결합된 OTUB1로부터의 트립신 분해 펩타이드를 액체 크로마토그래피-직렬 질량 분광 분석(LC-MS/MS)한 것이며, 화합물 100이 C23을 선택적으로 표적화한다는 것을 보여주었으며, 촉매 C91의 변형은 검출 불가능하였다.
도 7은 디-유비퀴틴으로부터의 모노유비퀴틴 방출을 모니터링하는 시험관 내 재구성된 OTUB1 탈유비퀴틴화 활성 검정의 겔-기반 분석이며, 예시적인 DUB 리크루터(화합물 100)가 OTUB1 탈유비퀴틴화 활성을 저해하지 않는다는 것을 증명하였다. 이들 연구는 OTUB1과 복합체에서 결합하여 OTUB1 활성을 자극하는 E2 유비퀴틴 리가아제인 OTUB1-자극 유비퀴틴 접합 효소 E2 D1(UBE2D1)의 존재 하에 수행되었다.
도 8은 구조-활성 관계(SAR)를 탐구하기 위해 추가의 예시적인 DUB 리크루터에 결합하는 OTUB1의 겔-기반 분석 이미지를 제공한다.
도 9a 및 도 9b는 OTUB1에 대한 예시적인 이작용성 화합물인 화합물 200 및 화합물 201의 겔-기반 ABPP 분석 이미지를 보여준다. 각각의 실험에서, 비히클(DMSO) 또는 이작용성 화합물을 실온에서 30분 동안 IA-로다민(100 nM)을 첨가하기 전에 37℃에서 30분 동안 재조합 OTUB1과 사전 인큐베이션하였다. OTUB1을 SDS/PAGE 상에서 흘려보내고, 겔 내 형광을 평가하였다. 단백질 로딩을 은 염색에 의해 평가하였다.
도 10a 및 도 10b는 돌연변이 CFTR 수준에 대한 예시적인 이작용성 화합물의 효과를 보여주는 이미지이다. 도 9a 및 도 9b에 나타나 있는 바와 같이, ΔF508-CFTR을 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 비히클 DMSO, 화합물 200(10 μM), 화합물 201(10 μM), 루마카프토르(lumacaftor)(10 μM) 또는 화합물 100(10 μM)으로 24시간 동안 처리하고, 돌연변이 CFTR 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 도 10b는 도 10a로부터 획득한 데이터의 정량화를 보여준다.
도 11a 및 도 11b는 예시적인 이작용성 화합물인 화합물 201의 메커니즘의 분석을 보여주는 이미지이다. ΔF508-CFTR를 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 비히클(DMSO), 루마카프토르(100 μM) 또는 화합물 100(100 μM)로 1시간 동안 전처리한 후, 화합물 201(10 μM)로 24시간 동안 처리하였다. 도 11a에 나타나 있는 바와 같이, 돌연변이 CFTR 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 도 11b는 도 11a로부터 획득한 데이터의 정량화를 보여준다.
도 12a 내지 도 12c는 이작용성 화합물 화합물 201-매개 돌연변이 CFTR 안정화에 대한 OTUB1 녹다운의 효과를 보여주는 이미지이다. ΔF508-CFTR을 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 si대조군 또는 siOTUB1 올리고뉴클레오타이드로 48시간 동안 일시적으로 형질감염시킨 후, 세포를 비히클 DMSO 또는 화합물 201(10 μM)로 16시간 동안 처리하였다. 도 12a에 나타나 있는 바와 같이, 돌연변이 CFTR, OTUB1 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 도 12b는 CFTR 수준(%)에 대해 도 12a로부터 획득한 데이터의 정량화를 보여주는 반면, 도 12c에는 OTUB 수준(%)에 대한 데이터가 요약되어 있다.
도 13은 예시적인 이작용성 화합물을 이용한 CFTR 풀다운 연구(CFTR pulldown study)를 보여주는 이미지이다. DF508-CFTR을 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 비히클 DMSO 또는 예시적인 이작용성 화합물(10 mM)로 24시간 동안 처리하고, CFTR 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 블롯은 그룹 당 n = 3인 생물학적으로 독립적인 샘플을 나타낸다.
도 14는 예시적인 이작용성 화합물을 이용한 CFTR 풀다운 연구를 보여주는 이미지이다. DF508-CFTR을 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 비히클 DMSO 또는 표 2에서 제공된 예시적인 이작용성 화합물(10 mM)로 24시간 동안 처리하고, CFTR 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 본 이미지에서, NJH-2-057은 화합물 201을 지칭한다.
도 15a 내지 도 15d는 재조합 단백질 및 고유 질량 분광법(MS)-기반 접근법을 이용하여 시험관 내에서의 CFTR, 예시적인 이작용성 화합물(화합물 201) 및 OTUB1 사이의 3원 복합체의 형성을 확인한 이미지이다. 도 15a 내지 도 15c는 DMSO (도 15a), DUB 리크루터 화합물 100 단독(도 15b) 또는 이작용성 화합물 화합물 201(도 15c)의 존재 하의 CFTR-OTUB1 복합체 형성의 고유 질량 스펙트럼을 보여준다. 이들 실험 조건 하에 낮은 표적 결합 수준을 잠재적으로 나타내는 본 실험에 사용된 비변형 OTUB1 및 DF508-보유 CFTR 뉴클레오타이드 결합 도메인에 가장 높은 강도의 신호가 상응하나, 유의한 CFTR-OTUB1 복합체 형성이 화합물 201에 의해 관측되었지만, DMSO 비히클 또는 화합물 100의 처리에 의해서는 관측되지 않았다.
도 16a 내지 도 16d는 종양 억제제 키나아제 WEE1을 표적화하기 위한 본원에 기재된 예시적인 이작용성 화합물의 사용을 예시한 이미지이다. HEP3B 세포를 DMSO 비히클 또는 보르테조밉(bortezomib)(1 mM)으로 24시간 동안 처리하였다. WEE1 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 도 16b는 WEE1을 표적화하도록 설계된 4개의 예시적인 이작용성 화합물의 구조를 보여준다. 도 16c는 HEP3B 세포를 DMSO 비히클, 4개의 이작용성 화합물, 보르테조밉, 화합물 100 또는 AZD1775로 1 mM로 24시간 동안 처리한 실험의 겔-기반 분석을 보여준다. WEE1 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. (a) 및 (b)에 나타낸 블롯은 그룹 당 n = 3개인 생물학적으로 독립적인 샘플의 대표적인 블롯이다. 막대 그래프의 데이터에는 그룹 당 n = 3개인 생물학적으로 독립적인 샘플에서 얻어진 개개의 생물학적 복제값 및 평균 ± sem이 나타나 있다.
도 17은 예시적인 이작용성 화합물을 이용한 CFTR 풀다운 연구를 보여주는 이미지이다. DF508-CFTR을 발현하는 CFBE41o-4.7 세포를 비히클 DMSO 또는 표 2에서 제공된 예시적인 이작용성 화합물(10 mM)로 24시간 동안 처리하고, CFTR 및 로딩 대조군 GAPDH 수준을 웨스턴 블로팅에 의해 평가하였다. 본 이미지에서, NJH-2-057은 화합물 201을 지칭하고, LEB-3-162는 화합물 230을 지칭하고, NJH-02-153은 화합물 231을 지칭한다.
도 18a 내지 도 18c는 구조-활성 관계(SAR)를 탐구하기 위해 예시적인 DUB 리크루터에 결합하는 탈유비퀴티나아제 USP15의 겔-기반 분석 이미지이다.
도 18d는 촉매 시스테인 298(C298)과 비교하여 시스테인 264(C264) 및 시스테인 381(C381)이 탐침 스크린에 의해 표지된 우세 부위로서 확인된 USP15에 대한 화학 단백체 데이터 분석을 보여주는 그래프이다.
도 19a 및 도 19b는 구조-활성 관계(SAR)를 탐구하기 위해 예시적인 DUB 리크루터에 결합하는 탈유비퀴티나아제 OTUD5의 겔-기반 분석 이미지이다.

본원에는 표적 단백질의 조정(예를 들어, 안정화)을 위해 특정 탈유비퀴티나아제를 표적 단백질로 리크루팅하도록 기능하는 이작용성 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체, 및 이의 사용 방법이 기재되어 있다. 암, 호흡기 질병 및 신경성 질병과 같은 많은 질병의 진행은 특정 주요 단백질의 활성 유비퀴틴화 및 분해를 수반한다. 이와 같이, 의도된 탈유비퀴틴화를 통한 이들 주요 단백질의 표적화된 안정화는 질병의 진행을 저해하고 세포 또는 개체에서 치료적 이점을 제공할 수 있다. 본 발명자들은 화학 단백체 공유결합 리간드 발견 방법을 사용하여 한 세트의 이작용성 화합물을 설계하였으며, 이들 화합물은 표적 단백질에 결합할 수 있는 표적 리간드 및 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 DUB 리크루터 둘 모두를 포함한다. 그 중에서도, 이들 이작용성 화합물은 탈유비퀴티나아제를 유비퀴틴화된 단백질에 인접시켜 Ubl의 유도 제거 및 잠재적인 표적 단백질 안정화를 가능케 할 수 있다.

표적 단백질

하나의 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질(예를 들어, 본원에 기재된 표적 단백질)에 결합할 수 있는 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 제공한다. 표적 단백질은 임의의 부류의 단백질, 예를 들어 세포(예를 들어, 포유동물 세포, 식물 세포, 진균 세포, 곤충 세포, 박테리아 세포) 또는 바이러스 입자에서 발견되는 임의의 단백질일 수 있다. 일부 실시형태에서, 단백질은 가용성 단백질 또는 막 단백질이다. 일부 실시형태에서, 단백질은 가용성 단백질이다. 일부 실시형태에서, 단백질은 막 단백질이다. 표적 단백질은 번역 후 변형, 예를 들어 당 모이어티, 아실 모이어티, 지질 모이어티를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은, 예를 들어 아스파라긴, 세린, 트레오닌, 티로신 또는 트립토판 잔기에 글리코실화되어 있다.

예시적인 표적 단백질은 효소(예를 들어, 키나아제, 가수분해효소, 포스파타아제, 리가아제, 이소메라아제, 산화 환원 효소), 수용체, 막 채널, 호르몬, 전사 인자, 종양 억제제, 이온 채널, 세포사멸 인자, 종양 형성 단백질, 후생유전학적 조절자 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 효소(예를 들어, 키나아제 또는 포스파타아제)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질는 키나아제(예를 들어, PKN1, BCR, MAP4K4, TYK2, MAP4K2, EPHB4, MAP4K5, MAP3K2, DDR1, TGFBR1, RIPK2, TNK1, LYN, STK10, PKMYT1, LYN, EGFR, EPHA1, GAK, SIK2, MAP2K2, SLK, PRKACB, EPHA2, WEE1 또는 글루코키나아제)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 종양 억제제 키나아제(예를 들어, WEE1)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 WEE1 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 리가아제(예를 들어, E3 리가아제, 예를 들어 MDM2)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 수용체이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 전사 인자(예를 들어, MYC)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 호르몬이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 종양 억제제(예를 들어, TP53, AXIN1, BAX, CDKN1A, CKDN1C, PTEN 또는 SMAD4)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 유전 질환(예를 들어, SMN1/2, GLUT1, CFTR, 페닐알라닌 하이드록실라아제(PAH), 푸마릴아세토아세테이트 가수분해효소(FAH) 또는 산 알파-글루코시다아제(GAA))과 관련이 있다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 막 채널(예를 들어, CFTR)이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 CFTR 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, CFTR은 서열 돌연변이(예를 들어, 부류 I, 부류 II, 부류 III, 부류 IV 또는 부류 V 돌연변이)를 포함한다. 일부 실시형태에서, CFTR, SMN1/2, GLUT1, PAH, FAH 또는 GAA는 서열 돌연변이, 예를 들어 부가 돌연변이, 결실 돌연변이 또는 치환 돌연변이(예를 들어, ΔF508-CFTR)를 포함한다. 일부 실시형태에서, CFTR은 G551D, R177H 및 A445E로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 돌연변이를 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 BAX 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 STING 또는 이의 단편이다.

일부 실시형태에서, 표적 단백질은 유비퀴틴 또는 유비퀴틴-유사 단백질(본원에서 종합적으로 "Ubl"로서 지칭됨)을 이용하여 변형된다. 일부 실시형태에서, Ubl은 유비퀴틴이다. 일부 실시형태에서, Ubl은 SUMO, NEDD8 또는 Agp12이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 모노유비퀴틴화 또는 폴리유비퀴틴되어 있다. 표적 단백질은, 예를 들어 리신 아미노산 잔기 상에 적어도 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 Ubl 사슬을 함유할 수 있다. 표적 단백질은 임의의 방식으로 연결된 폴리유비퀴틴 사슬, 예를 들어 K48-연결 폴리유비퀴틴 사슬, K63-연결 폴리유비퀴틴 사슬, K29-연결 폴리유비퀴틴 사슬 또는 K33-연결 폴리유비퀴틴 사슬을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 복수의 폴리유비퀴틴 사슬을 포함한다. 일부 실시형태에서, Ubl을 포함하는 표적 단백질은 Ubl 결합 도메인(예를 들어, 유비퀴틴 결합 도메인)을 포함하는 단백질에 결합할 수 있다.

표적 단백질은, 예를 들어 야생형 표적 단백질 대비 이의 불안정성을 증가시키거나 이의 활성을 손상시키는 특징을 포함할 수 있다. 예를 들어, 표적 단백질은 돌연변이 또는 미스폴딩(misfolding)될 수 있다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은, 예를 들어 야생형 표적 단백질 대비 결합 파트너에 대한 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 감소된 결합 능력을 갖는다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은, 예를 들어 야생형 표적 단백질보다 활성이 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 낮다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은, 예를 들어 야생형 표적 단백질보다 활성이 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 높다.

탈유비퀴티나아제

본원에는 탈유비퀴티나아제(DUB)에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하는 이작용성 화합물이 기재되어 있다. 탈유비퀴티나아제는 Ubl-Ubl 결합 또는 Ubl-표적 단백질 결합을 가수분해에 관여하는 큰 부류의 프로테아제를 포함하며, 다수의 세포 과정에서 역할을 한다. 탈유비퀴티나아제는 폴리유비퀴틴 사슬로부터의 유리 유비퀴틴 단량체의 생성, 폴리유비퀴틴 사슬 크기의 조정, 및 유비퀴틴화된 표적 단백질의 제거에 의한 유비퀴틴 신호전달의 반전을 비롯한 몇몇 기능을 수행한다. 탈유비퀴티나아제 기능의 오조절(misregulation)은 암, 대사성 질병, 유전 질환, 반수체 기능부전 표적(haploinsufficiency target) 및 신경성 질병을 비롯한 많은 질병과 연관이 있다. 대략 80개의 상이한 작용성 탈유비퀴티나아제가 현재까지 인간 세포에서 확인되었다.

본 개시내용은 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 DUB 리크루터를 포함하는 이작용성 화합물을 특징으로 한다. 탈유비퀴티나아제는, 예를 들어 세포 내의 임의의 탈유비퀴티나아제(시스테인 프로테아제 탈유비퀴티나아제 및 메탈로프로테아제 탈유비퀴티나아제를 포함함)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는, 예를 들어 촉매 부위 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 시스테인 프로테아제이다. 탈유비퀴티나아제는 전장 단백질 또는 이의 단편일 수 있다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 단일 활성 부위를 포함한다. 기타 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 다작용성 단백질의 하나의 기능이다. 예시적인 탈유비퀴티나아제는 BAP1, CYLD, OTUB1, OTUB2, OTUD3, OTUD5, OTUD7A, OTUD7B, TNFAIP3, UCHL1, UCHL3, UCHL5, USP10, USP11, USP12, USP13, USP14, USP15, USP16, USP17L1, USP17L2, USP17L24, USP17L3, USP17L5, USP18, USP19, USP2, USP20, USP21, USP22, USP24, USP25, USP26, USP27X, USP28, USP3, USP30, USP31, USP33, USP34, USP35, USP36, USP37, USP38, USP4, USP40, USP41, USP42, USP43, USP44, USP45, USP46, USP47, USP48, USP49, USP5, USP50, USP51, USP54, USP7, USP8, USP9X, VCPIP1, WDR48, YOD1, ZRANB1 및 ZUP1, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 WDR48, YOD1, OYUD3, OTUB1, USP8, USP5, USP16, UCHL3, UCHL1 및 USP14, 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 WDR48, YOD1, OYUD3, OTUB1, OTUD5, USP8, USP5, USP14, USP15, USP16, UCHL3, 및 UCHL1, 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 표 1에 나열된 탈유비퀴티나아제이다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 OTUB1 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 OTUD5 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 USP15 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함한다.

본 개시내용의 이작용성 화합물은 공유결합 또는 비공유결합 방식으로 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)은 탈유비퀴티나아제 내부의 촉매 부위 이외의 다른 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)는 탈유비퀴티나아제 내부의 다른 자리 입체성 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 탈유비퀴티나아제의 활성을 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 탈유비퀴티나아제의 활성을 0.1% 내지 50%, 1% 내지 50%, 1% 내지 25%, 1% 내지 10%, 0.1% 내지 10%, 1% 내지 5% 또는 0.1% 내지 2% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 탈유비퀴티나아제의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다.

이작용성 화합물(예를 들어, 본원에 기재된 이작용성 화합물)은, 예를 들어 탈유비퀴티나아제 내부의 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, 티올 모이어티)에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 시스테인 아미노산 잔기는 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기이다. 일부 실시형태에서, 시스테인 아미노산 잔기는 탈유비퀴티나아제의 표면 상에 존재한다. 일부 실시형태에서, 시스테인 아미노산 잔기는 탈유비퀴티나아제 상에 또는 그 내부에 존재한다. 일부 실시형태에서, 시스테인 아미노산 잔기는 촉매 시스테인 아미노산 잔기가 아니다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 촉매 시스테인 아미노산 잔기보다 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 탈유비퀴티나아제의 촉매 부위 내의 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, 촉매 시스테인)에 실질적으로 결합하지 않는다.

하부 세트의 인간 탈유비퀴티나아제 내부의 예시적인 변형 부위는 하기 표 1에 제공된다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 탈유비퀴티나아제 내부의 단일 부위(예를 들어, 표 1에 요약된 시스테인 아미노산 잔기 중 하나)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 탈유비퀴티나아제 내부의 복수의 부위(예를 들어, 표 1에 요약된 복수의 시스테인 아미노산 잔기)에 결합한다.

일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 OTUB1(Uniprot ID: Q96FW1)이다. 본원에 기재된 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 임의의 시스테인 잔기, 예를 들어 C23, C91, C204 또는 C212에 결합(예를 들어 공유 결합)할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 촉매 시스테인 아미노산에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1의 표면 상의 시스테인 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 상의 또는 그 내부의 시스테인 잔기에 결합한다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C23에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C91에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C204에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C212에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 다른 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, C91, C204 또는 C212)보다 C23에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C91보다 C23에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 C91에 실질적으로 결합하지 않는다.

일부 실시형태에서, OTBU1에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 OTUB1의 활성 대비 OTUB1의 활성을 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUB1 서열 내부의 C23에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 OTUB1의 활성을 0.1% 내지 50%, 1% 내지 50%, 1% 내지 25%, 1% 내지 10%, 0.1% 내지 10%, 1% 내지 5% 또는 0.1% 내지 2% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUB1에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 OTUB1의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUB1 서열 내부의 C23에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 OTUB1의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다.

일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 OTUD5(Uniprot ID: Q96G74)이다. 본원에 기재된 이작용성 화합물은 OTUB1 서열 내부의 임의의 시스테인 잔기, 예를 들어 C491, C434, C519, C247, C142 또는 C143에 결합(예를 들어, 공유 결합)할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 촉매 시스테인 아미노산에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5의 표면 상의 시스테인 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 상의 또는 그 내부의 시스테인 잔기에 결합한다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C491에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C434에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C519에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C247에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C142에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C143에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 다른 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, C491, C519, C247, C142 또는 C143)보다 C434에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 OTUD5 서열 내부의 C244에 실질적으로 결합하지 않는다.

일부 실시형태에서, OTUD5에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 OTUD5의 활성 대비 OTUD5의 활성을 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUD5 서열 내부의 C434에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 OTUD5의 활성을 0.1% 내지 50%, 1% 내지 50%, 1% 내지 25%, 1% 내지 10%, 0.1% 내지 10%, 1% 내지 5% 또는 0.1% 내지 2% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUD5에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 OTUD5의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUD5 서열 내부의 C434에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 OTUD5의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다.

일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 USP15(Uniprot ID: Q9Y4E8)이다. 본원에 기재된 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 임의의 시스테인 잔기, 예를 들어 C139, C264, C289, C298, C306, C381, C448, C451, C462, C506, C570, C633, C809, C812 또는 C873에 결합(예를 들어, 공유 결합)할 수 있다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 촉매 시스테인 아미노산에 결합하지 않는다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15의 표면 상의 시스테인 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 상의 또는 그 내부의 시스테인 잔기에 결합한다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C139에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C264에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C289에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C298에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C306에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C381에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C448에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C451에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C462에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C506에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C570에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C633에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C809에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C812에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C873에 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 다른 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, C139, C264, C289, C298, C306, C381, C448, C451, C462, C506, C570, C633, C809, C812 또는 C873)보다 C264에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 USP15 서열 내부의 C298에 실질적으로 결합하지 않는다.

일부 실시형태에서, USP15에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 USP15의 활성 대비 USP15의 활성을 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, USP15 서열 내부의 C264 또는 C381에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 이작용성 화합물의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 USP15의 활성을 0.1% 내지 50%, 1% 내지 50%, 1% 내지 25%, 1% 내지 10%, 0.1% 내지 10%, 1% 내지 5% 또는 0.1% 내지 2% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, USP15에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 USP15의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다. 일부 실시형태에서, OTUD5 서열 내부의 C264 또는 C381에 대한 이작용성 화합물(예를 들어, DUB 리크루터)의 결합은 OTUD5의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다.

이작용성 화합물

본 개시내용에는 표적 단백질 및 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는, 예를 들어 표적 단백질 및 탈유비퀴티나아제에 동시에 결합할 수 있는 이작용성 화합물이 기재되어 있다. 이론에 결부되지 않고, 이들 이작용성 화합물은, 유비퀴틴화된 표적 단백질로부터 하나 이상의 Ubl 단백질을 제거하여 탈유비퀴티나아제가 표적 단백질을 조정(예를 들어, 이를 안정화 및/또는 이의 분해를 방지)할 수 있도록, 탈유비퀴티나아제가 유비퀴틴화된 표적 단백질에 인접하도록 작용할 수 있다.

일부 실시형태에서, 조정은 (i) 표적 단백질의 폴딩 조정; (ii) 표적 단백질의 반감기 조정; (iii) 프로테아솜으로의 표적 단백질의 수송 조정; (iv) 표적 단백질의 유비퀴틴화 수준 조정; (v) 표적 단백질의 분해(예를 들어, 프로테아솜 분해) 조정; (vi) 표적 단백질 신호전달 조정; (vii) 표적 단백질 국부화 조정; (viii) 리소좀으로의 표적 단백질의 수송 조정; (ix) 다른 단백질과 표적 단백질의 상호작용 조정 중 하나 이상을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i)를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (ii)를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i)을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (iii)을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (iv)를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (v)를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (vi)을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (vii)을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (viii)을 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (ix)를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 2개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 3개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 4개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 5개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 6개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 7개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 중 8개를 포함한다. 일 실시형태에서, 조정은 (i) 내지 (ix) 각각을 포함한다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화학식 I의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I]

상기 식에서, (i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고; (ii) L1는 링커를 포함하고; (iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함한다. 화학식 I의 이작용성 화합물의 성분들 각각은 본원에 차례로 기재되어 있다.

표적 리간드

이작용성 화합물 내부의 표적 리간드는 표적 단백질 또는 기타 관심 단백질에 결합할 수 있는 소분자 모이어티이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 본원에 기재된 표적 단백질, 예를 들어 효소, 수용체, 막 채널, 호르몬, 전사 인자, 종양 억제제, 이온 채널, 세포사멸 인자, 종양 형성 단백질, 후생유전학적 조절자 또는 이의 단편에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 키나아제(예를 들어, PKN1, BCR, MAP4K4, TYK2, MAP4K2, EPHB4, MAP4K5, MAP3K2, DDR1, TGFBR1, RIPK2, TNK1, LYN, STK10, PKMYT1, LYN, EGFR, EPHA1, GAK, SIK2, MAP2K2, SLK, PRKACB, EPHA2, WEE1 또는 글루코키나아제)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 종양 억제제 키나아제(예를 들어, WEE1)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 리가아제(예를 들어, E3 리가아제, 예를 들어 MDM2)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 전사 인자(예를 들어, MYC)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 종양 억제제(예를 들어, TP53, AXIN1, BAX, CDKN1A, CKDN1C, PTEN 또는 SMAD4)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 반수체 기능부전 표적(예를 들어, SMN1/2, GLUT1, CFTR, PAH, FAH 또는 GAA)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 막 채널(예를 들어, CFTR)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 CFTR 또는 이의 단편(예를 들어, ΔF508-CFTR)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 서열 돌연변이(예를 들어, 부류 I, 부류 II, 부류 III, 부류 IV 또는 부류 V 돌연변이)를 포함하는 CFTR에 결합한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 G551D, R177H 및 A445E로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 돌연변이를 포함하는 CFTR에 결합한다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 CFTR 강화제(CFTR potentiator)이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 이바카프토르(ivacaftor), 루마카프토르, 테자카프토르(tezacaftor), 엘렉사카포르(elexacaftor) 또는 이센티카프토르(icenticaftor) 또는 이의 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 각각이 그 전체가 참고로 포함되는 미국 특허 제7,999,113호; 미국 특허 제8,247,436호; 미국 특허 제8,410,274호; WO 2011/133953; 및 WO 2018/037350 중 하나 이상에서 개시된 화합물이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-a]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, X는 O이다. 일부 실시형태에서, Z는 O이다. 일부 실시형태에서, X 및 Z 각각은 독립적으로 O이다. 일부 실시형태에서, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, R^7a 및 R^7b 각각은 독립적으로 할로(예를 들어, 플루오로)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 CF₂이다. 일부 실시형태에서, R^3a 및 R^3b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^4a 및 R^4b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^3a, R^3b, R^4a, R^4b 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^5'는 C_1-6 알킬(예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시형태에서, R¹은 H이다. 일부 실시형태에서, p는 0이다. 일부 실시형태에서, p'는 1이다. 일부 실시형태에서, q는 0이다. 일부 실시형태에서, p 및 q 각각은 독립적으로 0이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 C_1-6 알킬이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 메틸이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-b]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, X는 O이다. 일부 실시형태에서, Z는 O이다. 일부 실시형태에서, X 및 Z 각각은 독립적으로 O이다. 일부 실시형태에서, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, R^7a 및 R^7b 각각은 독립적으로 할로(예를 들어, 플루오로)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 CF₂이다. 일부 실시형태에서, R^3a 및 R^3b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^4a 및 R^4b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^3a, R^3b, R^4a, R^4b 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^5'는 C_1-6 알킬(예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시형태에서, R¹은 H이다. 일부 실시형태에서, R²는 H이다. 일부 실시형태에서, R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, p는 0이다. 일부 실시형태에서, p'는 1이다. 일부 실시형태에서, q는 0이다. 일부 실시형태에서, p 및 q 각각은 독립적으로 0이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 C_1-6 알킬이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 메틸이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-c의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-c]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; 각각의 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-d의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-d]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-ei의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-ei]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-e-ii의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-e-ii]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-e-iii의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-e-iii]

상기 식에서, 각각은 독립적으로 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-f의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-f]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-g-i의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-g-i]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-g-ii의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-g-ii]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 루마카프토르 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-g-iii의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-g-iii]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-a 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-a]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; L1 및 DUB 리크루터는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, X는 O이다. 일부 실시형태에서, Z는 O이다. 일부 실시형태에서, X 및 Z 각각은 독립적으로 O이다. 일부 실시형태에서, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 할로(예를 들어, 플루오로)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 CF₂이다. 일부 실시형태에서, R^3a 및 R^3b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^4a 및 R^4b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^3a, R^3b, R^4a, R^4b 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^5'는 C_1-6 알킬(예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시형태에서, R¹은 H이다. 일부 실시형태에서, p는 0이다. 일부 실시형태에서, p'는 1이다. 일부 실시형태에서, q는 0이다. 일부 실시형태에서, p 및 q 각각은 독립적으로 0이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'은 C_1-6 알킬이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 메틸이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-b-i 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-b-i]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; L1 및 DUB 리크루터는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, X는 O이다. 일부 실시형태에서, Z는 O이다. 일부 실시형태에서, X 및 Z 각각은 독립적으로 O이다. 일부 실시형태에서, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 할로(예를 들어, 플루오로)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 C(R^7a)(R^7b)이다. 일부 실시형태에서, X는 O이고, Z는 O이고, Y는 CF₂이다. 일부 실시형태에서, R^3a 및 R^3b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^4a 및 R^4b는 각각 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^3a, R^3b, R^4a, R^4b 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^5'는 C_1-6 알킬(예를 들어, 메틸)이다. 일부 실시형태에서, R¹은 H이다. 일부 실시형태에서, R²는 H이다. 일부 실시형태에서, R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, p는 0이다. 일부 실시형태에서, p'는 1이다. 일부 실시형태에서, q는 0이다. 일부 실시형태에서, p 및 q 각각은 독립적으로 0이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 C_1-6 알킬이다. 일부 실시형태에서, p는 0이고, q는 0이고, p'는 1이고, R^5'는 메틸이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-b-ii 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-b-ii]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-c 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-c]

상기 식에서, L1 및 DUB 리크루터는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-d 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-d]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-ei 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-ei]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-e-ii 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-e-ii]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-e-iii 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-e-iii]

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 이바카프토르의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-f 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-f]

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 테자카프토르의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-g 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-g]

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 엘렉사카포르의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-h 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-h]

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 이센티카프토르의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-i 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-i]

표적 리간드는 표적 단백질의 활성을 조정할 수 있거나 조정할 수 없다(예를 들어, 활성을 감소 또는 저해할 수 있거나 감소 또는 저해할 수 없다). 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 CFTR 저해제이며, 이때 CFTR에 대한 표적 리간드의 결합은, 예를 들어 이의 활성을 약 1%, 2%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% 또는 그 이상 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 각각이 그 전체가 본원에서 참고로 포함되는 WO 2014/097147; WO 2014/097148; 문헌[Verkman et al (2009) J Med Chem 6447]; 및 문헌[Verkman et al (2013) ACS Med Chem Lett 456] 중 임의의 것에 기재된 CFTR 저해제이다. 일부 실시형태에서, 표적화 리간드는 삼환식 CFTR 저해제이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 IV-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다:

[화학식 IV-a]

.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 PPQ-102 또는 이의 유도체이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 IV-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다:

[화학식 IV-b]

.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 BPO-27 또는 이의 유도체이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 키나아제 저해제이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 종양 억제제 키나아제 저해제, 예를 들어 WEE1 저해제이다. 예시적인 WEE1 저해제는 AZD1775(즉, MK1775, 아다보세르팁(adavosertib)), MK-3652 또는 이와 관련 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 AZD1775 또는 이의 관련 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 각각이 그 전체가 본원에서 참고로 포함되는 WO 2007/126122, WO 2011/035743, WO 2008/153207, WO 2009/151997 및 US 2011/1035601 중 하나 이상에서 개시된 화합물이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-h의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-h]

상기 식에서, 각각의 R²⁰, R²⁴ 및 R²⁵는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R²¹ 및 R²³은 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²²는 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; m 및 n은 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고; 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, R²⁰은 C_1-6 헤테로알킬(예를 들어, C(CH₃)₂OH)이다. 일부 실시형태에서, R²¹은 C_1-6 알케닐(예를 들어, CH₂CH=CH₂)이다. 일부 실시형태에서, R²²는 H이다. 일부 실시형태에서, R²³은 H이다. 일부 실시형태에서, m은 1이다. 일부 실시형태에서, n 및 p 각각은 독립적으로 0이다.

일부 실시형태에서, 표적 리간드는 AZD1775 또는 이의 유도체이다. 일부 실시형태에서, 표적 리간드는 화학식 I-i의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 I-i]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다. 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이며, 이때 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-j 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-j]

상기 식에서, 각각의 R²⁰, R²⁴ 및 R²⁵는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R²¹ 및 R²³은 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²²는 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; m 및 n은 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고; L1 및 DUB 리크루터는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-k 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-k]

링커

본 개시내용은 링커(즉, L1)에 의해 분리된 표적 리간드 및 DUB 리크루터를 포함하는 이작용성 화합물을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 링커는 표적 리간드에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 링커는 DUB 리크루터에 공유 결합된다. 일부 실시형태에서, 링커는 표적 리간드 및 DUB 리크루터 둘 모두에 공유 결합된다.

링커는 개열 가능한 링커 또는 개열 불가능한 링커일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 개열 불가능한 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는 생리학적 조건에서 분해 또는 가수분해되지 않는다. 일부 실시형태에서, 링커는, 예를 들어 샘플 또는 개체의 세포(예를 들어, 세포 소기관) 또는 혈청 중에서 개열되지 않는 결합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 할로알킬, 에테르, 아민, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커는 알킬렌 또는 헤테로알킬렌을 포함한다.

일부 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는 화학식 III-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 III-a]

상기 식에서, R^12a, R^12b, R^13a, R^13b, R^14a 및 R^14b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나; R^12a와 R^12b, R^13a와 R^13b, 및 R^14a와 R^14b 각각은 독립적으로 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고; W는 C(R^15a)(R^15b), O, N(R¹⁶) 또는 S이고; R^15a 및 R^15b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나; R^15a 및 R^15b는 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고; R¹⁶은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; o 및 x는 각각 독립적으로 0과 10 사이의 정수이고; 는 화학식 I의 표적 리간드에 대한 부착점을 나타내고; 는 화학식 I의 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, R^12a, R^12b, R^13a 및 R^13b 각각은 독립적으로 H이다. 일부 실시형태에서, R^14a 및 R^14b 각각은 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성한다. 일부 실시형태에서, W는 N(R¹⁶)(예를 들어, NH)이다. 일부 실시형태에서, o는 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, p는 1, 2 및 3으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, L1은 화학식 III-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 III-b]

상기 식에서, o는 0과 10 사이의 정수이고; 는 화학식 I의 표적 리간드에 대한 부착점을 나타내고; 는 화학식 I의 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, L1은 화학식 III-c의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 III-c]

상기 식에서, R"는 H 또는 C_1-6 알킬이고, o는 0과 10 사이의 정수이고; 는 화학식 I의 표적 리간드에 대한 부착점을 나타내고; 는 화학식 I의 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다. 일부 실시형태에서, o는 1이다. 일부 실시형태에서, o는 2이다. 일부 실시형태에서, o는 3이다.

일부 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는,

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이때 "*"는 표적 리간드 또는 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는 본원에 기재된 링커의 변이체이며, 예를 들어 이때 링커(예를 들어, L1)는, 예를 들어 표적 리간드 또는 DUB 리크루터에 대한 부착점에 추가적인 C₁-C₆ 알킬 또는 C₁-C₆ 헤테로알킬 모이어티를 포함한다.

일부 실시형태에서, 링커는 개열 가능한 링커, 예를 들어 생리학적 조건에서 분해 또는 가수분해되는 링커이다. 일부 실시형태에서, 링커는, 예를 들어 샘플 또는 개체의 세포(예를 들어, 세포 소기관) 또는 혈청 중에서 개열 가능한 결합을 포함한다. 예를 들어, 링커는 pH 민감성(예를 들어, 산 분해성 또는 염기 분해성)일 수 있거나, 효소의 작용을 통해 개열될 수 있다. 일 실시형태에서, 링커의 가수분해율은 효소의 부재 하의 링커의 가수분해율과 비교하여 적어도 0.5배(예를 들어, 적어도 1배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 4배, 5배, 7.5배, 10배, 12.5배, 15배, 20배, 25배, 50배, 75배, 100배, 250배, 500배, 750배, 1,000배 또는 그 이상) 증가된다. 일부 실시형태에서, 효소는 에스테라아제이다. 일 실시형태에서, 링커는 에스테르, 이황화물, 티올, 히드라존, 에테르 또는 아미드를 포함한다.

일 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는,

일 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는,

일 실시형태에서, L1은 화학식 L1-I의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 L1-I]

상기 식에서, R^7a 및 R^7b 각각은 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬 및 할로이고; G는 존재하지 않거나, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴, 아릴-(C_1-6)알킬렌, 헤테로아릴-(C_1-6)알킬렌, 아릴-(C_1-6)헤테로알킬렌, 헤테로아릴-(C_1-6)헤테로알킬렌 또는 -NR'-(여기서, R'는 H임), C_1-6 알킬 또는 -(CH₂)_1-2-C(O)₂H이며, 이때 각각의 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴은 0개 내지 6개 존재하는 R^c(여기서, R^c는 할로, -C(O)OCH₂-아릴 및 -C(O)OCH₂-헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택됨)에 의해 치환되고; y는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이고; 각각의 "*" 및 "**"는 독립적으로 화학식 I의 표적 리간드 또는 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다.

일 실시형태에서, L1은,

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이때 "*" 및 "**"는 각각 독립적으로 표적 리간드 또는 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 링커(예를 들어, L1)는 본원에 기재된 링커의 변이체이며, 예를 들어 이때 링커(예를 들어, L1)는, 예를 들어 표적 리간드 또는 DUB 리크루터에 대한 부착점에 추가적인 C₁-C₆ 알킬 또는 C₁-C₆ 헤테로알킬 모이어티를 포함한다.

DUB 리크루터

이작용성 화합물 내부의 DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 시스테인 아미노산 잔기에 결합할 수 있는 소분자 모이어티이다. DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 공유 또는 비공유 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는, 예를 들어 티올 또는 티오에스테르 결합을 통해 탈유비퀴티나아제에 공유 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 비공유, 예를 들어 이온 결합한다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는, 예를 들어 세포 내의 임의의 탈유비퀴티나아제(시스테인 프로테아제 탈유비퀴티나아제 및 메탈로프로테아제 탈유비퀴티나아제를 포함함)에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는, 예를 들어 촉매 부위 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 시스테인 프로테아제 탈유비퀴티나아제에 결합한다. DUB 리크루터는 전장 탈유비퀴티나아제 또는 이의 단편에 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제의 표면에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제의 내부 공동에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 BAP1, CYLD, OTUB1, OTUB2, OTUD3, OTUD5, OTUD7A, OTUD7B, TNFAIP3, UCHL1, UCHL3, UCHL5, USP10, USP11, USP12, USP13, USP14, USP15, USP16, USP17L1, USP17L2, USP17L24, USP17L3, USP17L5, USP18, USP19, USP2, USP20, USP21, USP22, USP24, USP25, USP26, USP27X, USP28, USP3, USP30, USP31, USP33, USP34, USP35, USP36, USP37, USP38, USP4, USP40, USP41, USP42, USP43, USP44, USP45, USP46, USP47, USP48, USP49, USP5, USP50, USP51, USP54, USP7, USP8, USP9X, VCPIP1, WDR48, YOD1, ZRANB1 및 ZUP1, 또는 이의 단편 또는 변이체로 이루어진 군으로부터 선택되는 탈유비퀴티나아제에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 WDR48, YOD1, OYUD3, OTUB1, USP8, USP5, USP16, UCHL3, UCHL1 및 USP14, 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 탈유비퀴티나아제에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 WDR48, YOD1, OYUD3, OTUB1, OTUD5, USP8, USP5, USP14, USP15, USP16, UCHL3 및 UCHL1, 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 탈유비퀴티나아제에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 OTUB1 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 OTUD5 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 USP15 또는 이의 단편 또는 변이체에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 표 1에 나열된 탈유비퀴티나아제에 결합한다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 촉매 부위 이외의 다른 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 다른 자리 입체성 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 DUB 리크루터의 결합은 DUB 리크루터의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 탈유비퀴티나아제의 활성을 0.1%, 0.5%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 DUB 리크루터의 결합은 DUB 리크루터의 부재 하의 탈유비퀴티나아제의 활성 대비 탈유비퀴티나아제의 활성을 0.1% 내지 50%, 1% 내지 50%, 1% 내지 25%, 1% 내지 10%, 0.1% 내지 10%, 1% 내지 5% 또는 0.1% 내지 2% 이상으로 조정하지 않는다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제에 대한 DUB 리크루터의 결합은 탈유비퀴티나아제의 활성(예를 들어, 탈유비퀴티나아제 활성)을 실질적으로 조정(예를 들어, 저해)하지 않는다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 촉매 부위 이외의 다른 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 다른 자리 입체성 부위에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제 내부의 시스테인 아미노산 잔기에 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 촉매 아미노산 잔기(예를 들어, 촉매 시스테인 아미노산 잔기)보다 다른 자리 입체성 아미노산 잔기(예를 들어, 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기)에 우선적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제의 촉매 부위 내의 시스테인 아미노산 잔기(예를 들어, 촉매 시스테인)에 실질적으로 결합하지 않는다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 아미드, 헤테로사이클릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 사이클로알킬, 카르보닐, 에스테르, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아실 또는 아크릴아미드로 이루어진 군으로부터 선택되는 작용기를 포함한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 헤테로사이클릴(예를 들어, 피페라지노닐)을 포함한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 아크릴아미드 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 헤테로아릴(예를 들어, 푸란 모이어티)를 포함한다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화학식 V-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 V-a]

상기 식에서, 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n 은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화학식 V-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 V-b]

상기 식에서, 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화학식 V-d의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 V-d]

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화학식 V-e의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 V-e]

상기 식에서, R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; n은 0, 1, 또는 2이고, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화학식 V-f의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[화학식 V-f]

상기 식에서, 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9이고, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, 고리(A)는 헤테로아릴(예를 들어, 단환식 헤테로아릴)이다. 일부 실시형태에서, 고리(A)는 5원 헤테로아릴(예를 들어, 푸라닐)이다. 일부 실시형태에서, R⁸은 친전자성 모이어티이다. 일부 실시형태에서, R⁸은 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, 아지도, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환된다. 일부 실시형태에서, R⁸은 C_2-6 알케닐(예를 들어, CH=CH₂)이다. 일부 실시형태에서, n은 0이다.

일부 실시형태에서, R⁸은 친전자성 모이어티이다. 일부 실시형태에서, R⁸은,

중 하나로부터 선택되는 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이며, 이때,

R¹⁶은 H, 할로겐, -CX¹⁶ ₃, -CHX¹⁶ ₂, -CH₂X¹⁶, -CN, -SO_n16R^16A, -SO_v16NR^16AR^16B, -NHNR^116AR^16B, -ONR^16AR^16B, -NHC(O)NHNR^16AR^16B, -N(O)_m16, -NR^16AR^16B, -C(O)R^16A, -C(O)-OR^16A, -C(O)NR^16AR^16B, -OR^16A, NHC(O)NR^16AR^16B, -NR^16ASO₂R^16B, -NR^16AC(O)R^16B, -NR^16AC(O)OR^16B, -NR^16AOR^16B, -OCX¹⁶ ₃, -OCHX¹⁶ ₂, -OCH₂X¹⁶, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 헤테로아릴이며, 이때 각각의 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0개 내지 12개의 R²⁵로 치환되고;

R¹⁷은 H, 할로겐, -CX¹⁷ ₃, -CHX¹⁷ ₂, -CH₂X¹⁷, -CN, -SO_n17R^17A, -SO_v17NR^17AR^17B, -NHNR^17AR^17B, -ONR^17AR^17B, -NHC(O)NHNR^17AR^17B, -NHC(O)NR^17AR^17B, -N(O)_m17, -NR^17AR^17B, -C(O)R^17A, -C(O)-OR^17A, -C(O)NR^17AR^17B, -OR^17A, -NR^17ASO₂R^17B, -NR^17AC(O)R^17B, -NR^17AC(O)OR^17B, -NR^17AOR^17B, -OCX¹⁷ ₃, -OCHX¹⁷ ₂, -OCH₂X¹⁷, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 각각의 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0개 내지 12개의 R²⁵로 치환되고;

R¹⁸은 H, 할로겐, -CX¹⁸ ₃, -CHX¹⁸ ₂, -CH₂X¹⁸, -CN, -SO_n18R^18A, -SO_v18NR^18AR^18B, -NHNR^18AR^18B, -ONR^18AR^18B, -NHC(O)NHNR^18AR^18B, -NHC(O)NR^18AR^18B, -N(O)_m18, -NR^18AR^18B, -C(O)R^18A, -C(O)-OR^18A, -C(O)NR^18AR^18B, -OR^18A, -NR^18ASO₂R^18B, -NR^18AC(O)R^18B, -NR^18AC(O)OR^18B, -NR^18AOR^18B, -OCX¹⁸ ₃, -OCHX¹⁸ ₂, -OCH₂X¹⁸, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 각각의 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0개 내지 12개의 R²⁵로 치환되고;

R¹⁹는 H, 할로겐, -CX¹⁹ ₃, -CHX¹⁹ ₂, -CH₂X¹⁹, -CN, -SO_n19R^19A, -SO_v19NR^19AR^19B, -NHNR^19AR^19B, -ONR^19AR^19B, -NHC(O)NHNR^19AR^19B, -NHC(O)NR^19AR^19B, -N(O)_m19, -NR^19AR^19B, -C(O)R^19A, -C(O)-OR^19A, -C(O)NR^19AR^19B, -OR^19A, -NR^19ASO₂R^19B, -NR^19AC(O)R^19B, -NR^19AC(O)OR^19B, -NR^19AOR^19B, -OCX¹⁹ ₃, -OCHX¹⁹ ₂, -OCH₂X¹⁹, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 각각의 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 0개 내지 12개의 R²⁵로 치환되고;

R^16A, R^16B, R^17A, R^17B, R^18A, R^18B, R^19A 및 R^19B는 각각 독립적으로 H, -CX₃, -CHX₂, -CH₂X, -CN, -OH, -COOH, -CONH₂, C_1-6 알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴이거나;

동일한 질소 원자에 결합된 R^16A 및 R^16B 치환기는 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

동일한 질소 원자에 결합된 R^17A 및 R^17B 치환기는 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

동일한 질소 원자에 결합된 R^18A 및 R^18B 치환기는 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

동일한 질소 원자에 결합된 R^19A 및 R^19B 치환기는 선택적으로 연결되어 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴을 형성할 수 있고;

각각의 X, X¹⁶, X¹⁷, X¹⁸ 및 X¹⁹는 독립적으로 -F, -Cl, -Br 또는 -I이고;

n16, n17, n18 및 n19는 독립적으로 0 내지 4의 정수이고;

m16, m17, m18, m19, v16, v17, v18 및 v19은 독립적으로 1 또는 2이다.

일부 실시형태에서, R⁸은,

으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이때 친전자성 모이어티는 임의의 위치에서 화학식 V-a의 구조에 결합된다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는,

또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이때 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는,

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화합물 100 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다:

[화합물 100]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화합물 114 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다:

[화합물 114]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

일부 실시형태에서, DUB 리크루터는 화합물 116 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다:

[화합물 116]

상기 식에서, 는 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타낸다.

[구조 II-k]

상기 식에서, 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; 표적 리간드 및 L1은 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-l 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-l]

상기 식에서, 표적 리간드 및 L1은 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-m 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-m]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; L1은 화학식 I에서 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-n 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-n]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이고; L1은 화학식 I에서 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-o 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-o]

상기 식에서, X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고; Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고; 고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고; R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고; 각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고; R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고; 각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고; 각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고; R^12a, R^12b, R^13a, R^13b, R^14a 및 R^14b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나; R^12a와 R^12b, R^13a와 R^13b, 및 R^14a와 R^14b 각각은 독립적으로 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고; W는 C(R^15a)(R^15b), O, N(R¹⁶) 또는 S이고; R^15a 및 R^15b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나; R^15a 및 R^15b는 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고; R¹⁶은 H 또는 C_1-6 알킬이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; o 및 x는 각각 독립적으로 0과 10 사이의 정수이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; q는 0, 1, 2 또는 3이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-v 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-v]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-p 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-p]

상기 식에서, o는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, o는 0이다. 일부 실시형태에서, o는 1이다. 일부 실시형태에서, o는 2이다. 일부 실시형태에서, o는 3이다. 일부 실시형태에서, o는 4이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-q 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-q]

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-r 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-r]

상기 식에서, W는 헤테로사이클릴(예를 들어, 단환식 헤테로사이클릴 또는 이환식 헤테로사이클릴)이다. 일부 실시형태에서, W는 질소-함유 헤테로사이클릴이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-s 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-s]

상기 식에서, W는 헤테로사이클릴(예를 들어, 단환식 헤테로사이클릴 또는 이환식 헤테로사이클릴)이고; R²³은 H 또는 C_1-6 알킬이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, W는 질소-함유 헤테로사이클릴이다. 일부 실시형태에서, R²³은 C_1-6 알킬이다. 일부 실시형태에서, p는 1 또는 2이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-t 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-t]

상기 식에서, W는 헤테로사이클릴(예를 들어, 단환식 헤테로사이클릴 또는 이환식 헤테로사이클릴)이고; R²³은 H 또는 C_1-6 알킬이고; p는 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, W는 질소-함유 헤테로사이클릴이다. 일부 실시형태에서, R²³은 H이다. 일부 실시형태에서, p은 1 또는 2이다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-u 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는다:

[구조 II-u]

[구조 II-j]

상기 식에서, 각각의 R²⁰, R²⁴ 및 R²⁵는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R²¹ 및 R²³은 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²²는 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; m 및 n'는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고; L1은 화학식 I에서 정의된 바와 같다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 표 2에 나열된 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로 이루어진 군으로부터 선택된다.

일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 200 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 201 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 202 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 203 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 204 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 205 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 206 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 207 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 208 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 209 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 210 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 211 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 212 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 213 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 214 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 215 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 216 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 217 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 218 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 219 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 220 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 221 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 222 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 223 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 224 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 225 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 226 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 227 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 228 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 229 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 230 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 231 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 232 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 233 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 234 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 235 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다. 일부 실시형태에서, 이작용성 화합물은 화합물 236 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체이다.

정의

선택된 화학적 정의

특정한 작용기 및 화학적 용어의 정의는 하기에 보다 상세하게 기재되어 있다. 화학 원소는 문헌[CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.]의 표지 뒷면의 원소 주기율표에 따라 식별되며, 특정한 작용기는 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 정의된다. 또한, 유기 화학의 일반 원리 뿐만 아니라 특정 작용성 모이어티 및 반응성은 문헌[Thomas Sorrell, Organic Chemistry, University Science Books, Sausalito, 1999]; 문헌[Smith and March, March's Advanced Organic Chemistry, 5^th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2001]; 문헌[Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York, 1989]; 및 문헌[Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 3^rd Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 1987]에 기재되어 있다.

본원에서 사용된 약어는 화학 및 생물학 분야 내의 이들의 통상적인 의미를 갖는다. 본원에 개시된 화학적 구조 및 화학식은 화학 분야에 알려진 화학적 원자가의 표준 규칙에 따라 구성된다.

값의 범위가 나열되면 이 범위 내의 각각의 값 및 하위 범위를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, "C₁-C₆ 알킬" 또는 "C_1-6 알킬"은 C₁, C₂, C₃, C₄, C₅, C₆, C₁-C₆, C₁-C₅, C₁-C₄, C₁-C₃, C₁-C₂, C₂-C₆, C₂-C₅, C₂-C₄, C₂-C₃, C₃-C₆, C₃-C₅, C₃-C₄, C₄-C₆, C₄-C₅ 및 C₅-C₆ 알킬을 포함하는 것으로 의도된다.

하기 용어는 하기에 제시된 의미를 갖도록 의도되며, 본 발명의 설명 및 의도된 범주를 이해하는 데 유용하다.

"알킬"이란 용어는 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 포화 탄화수소기의 라디칼("C_1-6 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 알킬기는 1개 내지 5개의 탄소 원자를 갖는다("C_1-5 알킬"). 일부 실시형태에서, 알킬기는 1개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다("C_1-4 알킬"). 일부 실시형태에서, 알킬기는 1개 내지 3개의 탄소 원자를 갖는다("C_1-3 알킬"). 일부 실시형태에서, 알킬기는 1개 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다("C_1-2 알킬"). 일부 실시형태에서, 알킬기는 1개의 탄소 원자를 갖는다("C₁ 알킬"). 일부 실시형태에서, 알킬기는 2개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다("C_2-6 알킬"). C_1-6 알킬기의 예로는 메틸(C₁), 에틸(C₂), 프로필(C₃)(예를 들어, n-프로필, 이소프로필), 부틸(C₄)(예를 들어, n-부틸, tert-부틸, sec-부틸, 이소부틸), 펜틸(C₅)(예를 들어, n-펜틸, 3-펜타닐, 아밀, 네오펜틸, 3-메틸-2-부타닐, 3급 아밀) 및 헥실(C₆)(예를 들어, n-헥실)을 들 수 있다.

"알킬렌"은 알킬기의 2가 라디칼, 예를 들어 -CH₂-, -CH₂CH₂- 및 -CH₂CH₂CH₂-를 지칭한다.

"헤테로알킬"은 모 사슬 내부(이의 인접한 탄소 원자 사이에 삽입됨) 및/또는 이의 하나 이상의 말단 위치(들) 내에 위치한 산소, 질소 또는 황으로부터 선택된 적어도 하나의 헤테로원자(예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 헤테로원자)를 추가로 포함하는 알킬기를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 10개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-10 알킬")를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 9개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-9 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 8개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-8 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 7개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-7 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 6개의 탄소 원자 및 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-6 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 5개의 탄소 원자 및 1개 또는 2개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-5 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 4개의 탄소 원자 및 1개 또는 2개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-4 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 3개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-3 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 1개 내지 2개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_1-2 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 1개의 탄소 원자 및 1개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C₁ 알킬")이다. 일부 실시형태에서, 헤테로알킬기는 모 사슬 내부에 2개 내지 6개의 탄소 원자 및 1개 또는 2개의 헤테로원자를 갖는 포화 기("헤테로C_2-6 알킬")이다. 달리 명시하지 않는 한, 헤테로알킬기의 각각의 예는 독립적으로 하나 이상의 치환기로 불포화되거나("불포화 헤테로알킬"), 포화될 수 있다("포화 헤테로알킬"). 특정 실시형태에서, 헤테로알킬기는 불포화 헤테로C_1-10 알킬이다. 특정 실시형태에서, 헤테로알킬기는 포화 헤테로C_1-10 알킬이다.

"헤테로알킬렌"은 헤테로알킬기의 2가 라디칼을 지칭한다.

"알콕시" 또는 "알콕실"은 -O-알킬 라디칼을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 알콕시기는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, tert-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시, n-헥속시 및 1,2-디메틸부톡시이다. 일부 실시형태에서, 알콕시기는 저급 알콕시, 즉 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 알콕시이다. 일부 실시형태에서, 알콕시기는 1개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "아릴"이란 용어는 지정된 개수의 고리 탄소 원자를 갖는 안정한 방향족, 단환식 또는 이환식 고리 라디칼을 지칭한다. 아릴기의 예로는 페닐, 1-나프틸, 2-나프틸 등을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 마찬가지로, "아릴 고리"란 관련 용어는 지정된 개수의 고리 탄소 원자를 갖는 안정한 방향족, 단환식 또는 이환식 고리를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "헤테로아릴"이란 용어는 지정된 개수의 고리 원자를 갖고 질소, 산소 및 황으로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 안정한 방향족, 단환식 또는 이환식 고리 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴 라디칼은 탄소 원자 또는 헤테로원자를 통해서 결합될 수 있다. 헤테로아릴기의 예로는 푸릴, 피롤일, 티에닐, 피라졸일, 이미다졸일, 티아졸일, 이소티아졸일, 옥사졸일, 이소옥사졸일, 트리아졸일, 테트라졸일, 피라지닐, 피리다지닐, 피리미딜, 피리딜, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌일, 인다졸일, 옥사디아졸일, 벤조티아졸일, 퀴녹살리닐 등을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 마찬가지로, "헤테로아릴 고리"라는 관련 용어는 지정된 개수의 고리 원자를 갖고 질소, 산소 및 황으로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 안정한 방향족, 단환식 또는 이환식 고리를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "사이클로알킬"이란 용어는 지정된 개수의 고리 탄소 원자를 갖는 안정한 포화 또는 불포화, 비방향족, 단환식 또는 이환식(융합, 가교 또는 스피로) 고리 라디칼을 지칭한다. 사이클로알킬기의 예로는 상기에서 확인된 사이클로알킬기, 사이클로부테닐, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐 등을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일 실시형태에서, 탄소의 지정된 개수는 C₃-C₁₂이다. 마찬가지로, "탄소 환식 고리"라는 관련 용어는 지정된 개수의 고리 탄소 원자를 갖는 안정한 포화 또는 불포화, 비방향족, 단환식 또는 이환식(융합, 가교 또는 스피로) 고리를 지칭한다. 일 실시형태에서, 사이클로알킬은 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 일 실시형태에서, 사이클로알킬은 0개 내지 4개 존재하는 R^a(여기서, 각각의 R^a는 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕실 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택됨)에 의해 치환될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "헤테로사이클릴"이란 용어는 지정된 개수의 고리 원자를 갖고 질소, 산소 및 황으로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 안정한 포화 또는 불포화, 비방향족, 단환식 또는 이환식(융합, 가교 또는 스피로) 고리 라디칼을 지칭한다. 헤테로사이클릴 라디칼은 탄소 원자 또는 헤테로원자를 통해 결합될 수 있다. 일 실시형태에서, 탄소의 지정된 개수는 C₃-C₁₂이다. 헤테로사이클릴기의 예로는 아제티디닐, 옥세타닐, 피롤리닐, 피롤리디닐, 테트라하이드로푸릴, 테트라하이드로티에닐, 피페리딜, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 모르폴리닐, 퍼하이드로아제피닐, 테트라하이드로피리디닐, 테트라하이드로아제피닐, 옥타하이드로피롤로피롤일 등을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 마찬가지로, "헤테로환식 고리"란 관련 용어는 지정된 개수의 고리 원자를 갖고 질소, 산소 및 황으로부터 개별적으로 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 포함하는 안정한 포화 또는 불포화, 비방향족, 단환식 또는 이환식(융합, 가교 또는 스피로) 고리를 지칭한다. 일 실시형태에서, 헤테로사이클릴은 치환되거나 치환되지 않을 수 있다. 일 실시형태에서, 헤테로사이클릴은 0개 내지 4개 존재하는 R^a(여기서, 각각의 R^a는 C_1-6 알킬, C_1-6 알콕실 및 할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택됨)에 의해 치환될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "스피로사이클로알킬" 또는 "스피로사이클릴"은 고리 둘 모두가 단일 원자를 통해 연결된 탄소원성(carbogenic) 이환식 고리 시스템을 의미한다. 고리는 크기 및 특성이 상이할 수 있거나, 크기 및 특성이 동일할 수 있다. 예로는 스피로펜탄, 스피로헥산, 스피로헵탄, 스피로옥탄, 스피로노난 또는 스피로데칸을 들 수 있다. 스피로사이클 내의 고리 중 하나 또는 둘 모두는 다른 고리 탄소 환식, 헤테로환식, 방향족 또는 헤테로방향족 고리에 융합될 수 있다. 예를 들어, (C₃-C₁₂)스피로사이클로알킬은 3개 내지 12개의 탄소 원자를 함유하는 스피로사이클이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "스피로헤테로사이클로알킬" 또는 "스피로헤테로사이클릴"은 고리 중 적어도 하나가 헤테로사이클인 스피로사이클을 의미하며, 이때 탄소 원자 중 적어도 하나는 헤테로원자로 치환될 수 있다(예를 들어, 탄소 원자 중 적어도 하나는 고리 중 적어도 하나에서 헤테로원자로 치환될 수 있음). 스피로헤테로사이클 내의 고리 중 하나 또는 둘 모두는 다른 고리 탄소 환식, 헤테로환식, 방향족 또는 헤테로방향족 고리에 융합될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, "할로" 또는 "할로겐"은 불소(플루오로, -F), 염소(클로로, -Cl), 브롬(브로모, -Br) 또는 요오드(요오도, -I)를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "할로알킬"은 하나 이상의 할로겐으로 치환된 알킬기를 의미한다. 할로알킬기의 예로는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 펜타플루오로에틸 및 트리클로로메틸을 들 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용된 바와 같이, "치환된"은, "선택적으로"란 용어가 선행하든 그렇지 않든, 지정된 모이어티의 하나 이상의 수소가 적합한 치환기로 교체된다는 것을 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 각각의 표현, 예를 들어 알킬, m, n 등의 정의는 임의의 구조에서 1회 초과로 나타나는 경우에 동일한 구조의 다른 곳의 정의와는 별개인 것으로 의도된다.

본 개시내용의 다양한 실시형태가 본원에 기재되어 있다. 각각의 실시형태에 명시된 특징은 기타 명시된 특징(하기 실시형태에 나타낸 바와 같은 것을 포함함)과 조합되어 본 개시내용의 추가의 실시형태를 제공할 수 있는 것으로 인식될 것이다.

하기 실시형태에서 도시된 화학식의 치환기 또는 변수의 조합은 각각의 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용 가능한 것으로 이해된다.

본원에 기재된 특정 화합물은 특정한 기하학 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 화합물의 특정 거울상 이성질체가 요구되는 경우, 이는 비대칭 합성에 의해 또는 키랄 보조제를 이용한 유도체화(derivation)에 의해 제조될 수 있으며, 여기서 얻어진 부분 입체 이성질체 혼합물이 분리되고, 보조기는 개열되어 목적하는 순수한 거울상 이성질체를 제공한다. 대안적으로, 분자가 아미노와 같은 염기성 작용기 또는 카르복실과 같은 산성 작용기를 함유하는 경우, 적절한 광학 활성 산 또는 염기와 함께 부분 입체 이성질체 염를 형성한 후, 이렇게 형성된 부분 입체 이성질체를 당해 기술분야에 잘 알려진 분별 결정화 또는 크로마토그래피 수단에 의해 분해하고, 후속적으로 순수한 거울상 이성질체를 회수한다.

달리 언급하지 않는 한, 본원에 도시된 구조는 또한 이 구조의 기하학(또는 배위) 형태; 예를 들어 각각의 비대칭 중심에 대한 R 및 S 구성, Z 및 E 이중 결합 이성질체 및 Z 및 E 배위 이성질체를 포함한다는 것을 의미한다. 따라서, 개시된 화합물의 단일의 입체 화학 이성질체 뿐만 아니라 거울상 이성질체, 부분 입체 이성질체 및 기하학(또는 배위) 혼합물은 본 개시내용의 범주 내에 있다. 달리 언급하지 않는 한, 본원에 기재된 화합물의 모든 호변이성질체 형태는 본 개시내용의 범주 내에 있다. 또한, 달리 언급하지 않는 한, 본원에 도시된 구조는 또한 하나 이상의 동위원소 농축 원자가 존재하는 경우에만 상이한 화합물을 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 중수소 또는 삼중수소에 의한 수소의 교체 또는 ¹³C 또는 ¹⁴C 풍부 탄소에 의한 탄소의 교체를 포함하는 상기 개시된 구조를 갖는 화합물이 본 개시내용의 범주 내에 있다. 이 같은 화합물은, 예를 들어 분석 도구로서, 생물학적 검정에서 탐침으로서, 또는 본 개시내용에 따른 치료제로서 유용하다.

조성물의 "거울상 이성질체 과량" 또는 "거울상 이성질체 과량(%)"은 하기에 나타나 있는 방정식을 사용하여 계산될 수 있다. 하기 실시예에서, 조성물은 90%의 하나의 거울상 이성질체, 예를 들어 S 거울상 이성질체 및 10%의 다른 거울상 이성질체, 즉 R 거울상 이성질체를 함유한다. ee = (90 - 10)/100 × 100 = 80%.

따라서, 90%의 하나의 거울상 이성질체 및 10%의 다른 거울상 이성질체를 함유하는 조성물은 80%의 거울상 이성질체 과량을 갖는 것으로 간주된다. 본원에 기재된 화합물 또는 조성물은 화합물의 하나의 형태, 예를 들어 S 거울상 이성질체를 적어도 50%, 75%, 90%, 95% 또는 99%의 거울상 이성질체 과량으로 함유할 수 있다. 다시 말해, 이 같은 화합물 또는 조성물은 R 거울상 이성질체보다 S 거울상 이성질체를 거울상 이성질체 과량으로 함유한다.

특정한 거울상 이성질체가 바람직한 경우, 이는 일부 실시형태에서 상응하는 거울상 이성질체가 실질적으로 없이 제공될 수 있으며, 또한 "광학적으로 풍부한" 것으로 지칭될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "광학적으로 풍부한"은 화합물이 상당히 높은 비율의 하나의 거울상 이성질체로 구성된다는 것을 의미한다. 특정 실시형태에서, 화합물은 적어도 약 90 중량%의 바람직한 거울상 이성질체로 구성된다. 기타 실시형태에서, 화합물은 적어도 약 95 중량%, 98 중량% 또는 99 중량%의 바람직한 거울상 이성질체로 구성된다. 바람직한 거울상 이성질체는 당업자에게 알려져 있는 임의의 방법(키랄 고압 액체 크로마토그래피(HPLC) 및 비대칭 합성에 의해 제조된 키랄 염의 형성 및 결정화를 포함함)에 의해 라세미 혼합물로부터 단리될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Jacques et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, New York, 1981)]; 문헌[Wilen, et al., Tetrahedron 33:2725 (1977)]; 문헌[Eliel, E.L. Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962)]; 문헌[Wilen, S.H. Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972)]을 참고한다.

본원에 기재된 모든 방법은, 본원에서 달리 표시하지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 실시예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "~와 같은")의 사용은 단지 본 개시내용을 보다 잘 예시하기 위한 것이며, 달리 청구된 본 개시내용의 범주를 제한하지 않는다.

임의의 얻어진 이성질체 혼합물은, 예를 들어 구성성분의 물리화학적 차이에 기초하여 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수하거나 실질적으로 순수한 기하학 또는 광학적 이성질체, 부분 입체 이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.

임의의 얻어진 최종 생성물 또는 중간체의 임의의 라세미체는 알려진 방법에 의해, 예를 들어 광학적 활성 산 또는 염기를 이용하여 얻어진 부분 입체 이성질체 염의 분리 및 광학적 활성의 산성 또는 염기성 화합물의 유리화에 의해 광학 대척체(optical antipode)로 분해될 수 있다. 따라서, 특히 염기성 모이어티는 광학적 활성 산, 예를 들어 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄퍼-10-설폰산과 함께 형성된 염의 분별 결정화에 의해 본원에 기재된 화합물을 광학적 대척체로 분해하기 위해 사용될 수 있다. 라세미 생성물은 또한 키랄 흡착제를 사용하는 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 분해될 수 있다.

기타 정의

하기 정의는 본 개시내용 전반에 걸쳐 사용되는 보다 일반적인 용어이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 본 개시내용의 문맥(특히, 청구범위의 문맥)에서 사용되는 단수형("a" 및 "an") 용어 및 유사한 용어는 본원에서 달리 표시하지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수 둘 모두를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "약"이란 용어는 당업계에서 전형적인 허용오차 범위 내에 있음을 의미한다. 예를 들어, "약"은 평균으로부터 약 2의 표준 편자로서 이해될 수 있다. 특정 실시형태에서, 약은 ±10%를 의미한다. 특정 실시형태에서, 약은 ±5%를 의미한다. 일련의 숫자 또는 범위 앞에 약이 존재하는 경우, "약"은 일련의 숫자 또는 범위 각각을 수식할 수 있는 것으로 이해된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "획득하다" 또는 "획득하는"은 값 또는 물리적 엔티티(physical entity)를 "직접 획득" 또는 "간접 획득"함으로써 값(예를 들어, 수치 또는 이미지) 또는 물리적 엔티티(예를 들어, 샘플)를 소유하는 것을 지칭한다. "직접 획득"이란 값 또는 물리적 엔티티를 수득하기 위한 과정을 수행하는 것(예를 들어, 분석 방법 또는 프로토콜을 수행하는 것)을 의미한다. "간접 획득"이란 다른 당사자 또는 출처(예를 들어, 물리적 엔티티 또는 값을 직접 획득한 제3자 실험실)로부터 값 또는 물리적 엔티티를 취득하는 것을 지칭한다. 값 또는 물리적 엔티티를 직접 획득하는 것은 물리적 물질의 물리적 변화 또는 기계 또는 장치의 사용을 포함하는 과정을 수행하는 것을 포함한다. 값을 직접 획득하는 예로는 인간 개체로부터 샘플을 수득하는 것을 들 수 있다. 값을 직접 획득하는 것은 질량 분광 데이터를 획득하기 위해 기계 또는 장치, 예를 들어 질량 분광계를 사용하는 과정을 수행하는 것을 포함한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "투여하다", "투여하는" 또는 "투여"란 용어는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 이식, 흡수, 소화, 주사, 흡입 또는 다른 방식으로 도입하는 것을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "병태", "질병" 및 "질환" 이란 용어는 상호 교환 가능하게 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "분해하다", "분해하는" 또는 "분해"란 용어는 표적 단백질의 생물학적 활성(특히, 이상 활성)을 감소 또는 제거하는 정도까지의 세포성 프로테아솜 시스템에 의한 표적 단백질의 부분 또는 완전 분해를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "저해하다", "저해" 또는 "저해하는"이란 용어는 주어진 병태, 증상, 또는 질환 또는 질병의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 유의한 감소를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "표적 단백질의 조정" 또는 "표적 단백질 활성의 조정"이란 용어는 표적 단백질의 적어도 하나의 특징의 변경을 의미한다. 예를 들어, 조정은, (i) 표적 단백질의 폴딩 조정; (ii) 표적 단백질의 반감기 조정; (iii) 프로테아솜으로의 표적 단백질의 수송 조정; (iv) 표적 단백질의 유비퀴틴화 수준 조정; (v) 표적 단백질의 분해(예를 들어, 프로테아솜 분해) 조정; (vi) 표적 단백질 신호전달 조정; (vii) 표적 단백질 국부화 조정; (viii) 리소좀으로의 표적 단백질의 수송 조정; (ix) 다른 단백질과 표적 단백질의 상호작용 조정 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 표적 단백질의 조정은 단백질의 폴딩을 개선하고, 단백질의 반감기를 증가시키고, 프로테아솜으로의 표적 단백질의 수송을 방지하고, 표적 단백질의 유비퀴틴화 수준을 감소시키고, 표적 단백질의 분해를 방지하고, 표적 단백질 신호전달을 개선하고, 표적 단백질 신호전달을 개선하고, 리소좀으로의 표적 단백질의 수송을 방지하고, 다른 단백질과의 표적 단백질의 상호작용을 방지하는 것 중 하나 이상을 지칭한다.

표적 단백질의 조정은 표적 단백질의 수준을 생체 내 또는 시험관 내에서 안정화시킴으로써 달성될 수 있다. 안정화된 표적 단백질의 양은, 본원에 기재된 이작용성 화합물을 이용한 처리 이전에 측정된 바와 같이 존재하는 표적 단백질의 초기 양 또는 수준과 비교할 때 본원에 기재된 이작용성 화합물을 이용한 처리 이후에 잔류하는 표적 단백질의 양을 비교함으로써 측정될 수 있다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 30%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 40%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 50%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 60%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 70%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 80%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 90%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 95%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 95% 초과의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 초기 수준과 비교하여 적어도 약 99%의 표적 단백질이 조정(예를 들어, 안정화)된다.

일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 30% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 40% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 50% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 60% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 70% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 80% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 90% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 95% 내지 약 99%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다. 일 실시형태에서, 표적 단백질은 초기 수준과 비교하여 약 90% 내지 약 95%의 양으로 조정(예를 들어, 안정화)된다.

"펩타이드", "폴리펩타이드" 및 "단백질"란 용어는 상호 교환 가능하게 사용되며, 펩타이드 결합에 의해 공유 결합된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 지칭한다. 단백질 또는 펩타이드는 적어도 2개의 아미노산을 함유해야 하며, 여기에 포함될 수 있는 아미노산의 최대 개수에 대해 어떠한 제한도 두지 않는다. 폴리펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 서로 연결된 2개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 이 용어는, 예를 들어 당업계에서 또한 펩타이드, 올리고펩타이드 및 올리고머로서 흔히 지칭되는 짧은 사슬, 및 많은 유형이 존재하는 단백질로서 당업계에 일반적으로 지칭되는 보다 긴 사슬 둘 모두를 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "표적 단백질에 대한 선택성"이란 용어는, 예를 들어 본원에 기재된 이작용성 화합물이 다른 단백질 또는 단백질들보다 우선하여 표적 단백질에 결합하거나, 다른 단백질 또는 단백질보다 훨씬 더 표적 단백질에 결합한다는 것을 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "개체"란 용어는 동물을 지칭한다. 전형적으로, 동물은 포유동물이다. 또한, 개체는, 예를 들어 영장류(예를 들어, 인간, 남성 또는 여성), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 물고기, 새 등을 지칭한다. 일 실시형태에서, 개체는 영장류이다. 바람직한 실시형태에서, 개체는 인간이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 본원에 기재된 화합물의 "치료학적 유효량"이란 용어는 개체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 저해를 유도하거나, 증상을 완화시키거나, 병태를 완화시키거나, 질병의 진행을 감속 또는 지연시키거나, 질병 등을 예방할 본원에 기재된 화합물의 양을 지칭한다. 하나의 실시형태에서, "치료학적 유효량"이란 용어는, 개체에 투여되는 경우에 (1) (i) 표적 단백질에 의해 매개되거나, (ii) 표적 단백질의 활성과 연관이 있거나, (iii) 표적 단백질의 활성(정상 또는 비정상적인 활성)을 특징으로 하는 병태 또는 질환 또는 질병을 적어도 부분적으로 완화, 예방 및/또는 개선하거나, (2) 표적 단백질의 활성을 감소 또는 저해하거나, (3) 표적 단백질의 발현을 감소 또는 저해하는 데 효과적인, 본원에 기재된 화합물의 양을 지칭한다. 이들 효과는, 예를 들어 표적 단백질을 안정화시키거나 표적 단백질의 분해를 방지하여 표적 단백질의 양을 증가시킴으로써 달성될 수 있다. 하나의 실시형태에서, "치료학적 유효량"이란 용어는, 세포 또는 조직, 또는 비세포성 생물학적 물질 또는 매질에 투여되는 경우에 표적 단백질 수준의 감소를 적어도 방지하거나 부분적으로 방지하거나; 예를 들어 표적 단백질에 공유 결합된 Ubl을 제거하여 표적 단백질의 활성을 적어도 유지하거나 부분적으로 증가시키는 데 효과적인, 본원에 기재된 화합물의 양을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 임의의 질병 또는 질환을 "치료하다", "치료하는" 또는 이의 "치료"란 용어는 일 실시형태에서 질병 또는 질환을 개선시키는 것(즉, 질병 또는 이의 임상적 증상 중 적어도 하나의 발병을 감속 또는 억제 또는 감소하는 것)을 지칭한다. 일 실시형태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 인식 불가능한 것을 비롯하여 적어도 하나의 물리적 파라미터를 완화 또는 개선시키는 것을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, "예방하는"이란 용어는 병태 또는 질병의 빈도를 감소시키거나 이의 증상의 발병을 지연시키는 것을 지칭한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 개체가 치료로부터 생물학적 또는 의학적으로 이익을 얻거나, 삶의 질에서 이익을 얻는 경우에 개체는 이 같은 치료를 "필요로" 한다.

약학적으로 허용 가능한 염

본원에 기재된 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 또한 본원에 기재된 용도로 인해 또한 고려된다. 본원에서 사용된 바와 같이, "염" 또는 "염들"이란 용어는 본원에 기재된 화합물의 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭한다. "염"은 특히 "약학적 허용 가능한 염"을 포함한다. "약학적으로 허용 가능한 염"이란 용어는 본원에 개시된 화합물의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염을 지칭하며, 이는 전형적으로 생물학적으로 바람직하지 않거나, 달리 바람직하지 않은 것은 아니다. 많은 경우, 본원에 개시된 화합물은 아미노기 및/또는 카르복실기 또는 이와 유사한 기의 존재로 인해 산 및 염기 염을 형성할 수 있다.

약학적으로 허용 가능한 산 부가염은 무기산 및 유기산으로 형성될 수 있다.

염이 유래할 수 있는 무기산은, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.

염이 유래할 수 있는 유기산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 톨루엔설폰산, 설포살리실산 등을 포함한다.

약학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 무기 및 유기 염기로 형성될 수 있다.

염이 유래할 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄염 및 주기율표의 I족 내지 XII족의 금속을 포함한다. 특정 실시형태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리에서 유래하고; 특히 적합한 염은 암모늄염, 칼륨염, 나트륨염, 칼슘염 및 마그네슘염을 포함한다.

염이 유래할 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1차, 2차 및 3차 아민, 치환된 아민(자연적으로 발생하는 치환된 아민을 포함함), 환식 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.

일부 실시형태에서, 화학식 I의 이작용성 화합물은 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/브롬화수소산염, 바이카르보네이트/카르보네이트, 바이설페이트/설페이트, 캄퍼설포네이트, 카프레이트, 클로라이드/염산염, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말리에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 납실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올리에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/인산수소/인산이수소, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설포살리실레이트, 설페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 시나포에이트 염 형태로서 제공된다.

약학 조성물

다른 실시형태는 본원에 기재된 하나 이상의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체(들)을 포함하는 약학 조성물이다. "약학적으로 허용 가능한 담체"란 용어는 임의의 대상 조성물 또는 이의 성분을 전달 또는 수송하는 것과 관련이 있는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질과 같은 약학적으로 허용 가능한 물질, 조성물 또는 비히클을 지칭한다. 각각의 담체는 대상 조성물 및 이의 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않다는 점에서 "허용 가능해야" 한다. 약학적으로 허용 가능한 담체로서 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예로는 (1) 락토오스, 글루코오스 및 수크로오스와 같은 당; (2) 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; (3) 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트와 같은 셀룰로오스 및 이의 유도체; (4) 분말형 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 코코아 버터 및 좌제 왁스와 같은 부형제; (9) 땅콩 기름, 목화씨유, 홍화유, 참기름, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두유와 같은 오일; (10) 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; (11) 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; (12) 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; (13) 한천; (14) 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; (15) 알긴산; (16) 발열원 제거수(pyrogen-free water); (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알코올; (20) 포스페이트 완충액 용액; 및 (21) 약학적 제형에 이용되는 기타 무독성의 상용성 물질을 들 수 있다.

본원에 기재된 조성물은 경구, 비경구, 흡입 분무에 의해, 국소, 직장내, 비강내, 설측, 질내 또는 이식된 저장소를 통해 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "비경구"란 용어는 피하, 정맥 내, 근육 내, 관절 내, 활액 내, 흉골 내, 경막 내, 간 내, 병변 내 및 두개 내 주사 또는 주입 기법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 조성물은 경구, 복강 내 또는 정맥 내 투여된다. 본 개시내용의 조성물의 멸균 주사 형태는 수성 또는 유지성 현탁액일 수 있다. 이들 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 당해 기술분야에 알려진 기법에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사 제제는 또한 무독성의 비경구용으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 허용 가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 사용될 수 있다. 또한, 멸균 고정유는 흔히 용매 또는 현탁 매질로서 이용된다.

이를 위해, 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 비롯한 임의의 무자극 고정유가 이용될 수 있다. 올레산 및 이의 글리세리드 유도체와 같은 지방산은, 특히 폴리옥시에틸화된 버전인 올리브 오일 또는 피마자유와 같은 천연의 약학적으로 허용 가능한 오일에서와 같이 주사제의 제조에 유용하다. 또한, 이들 오일 용액 또는 현탁액은 약학적으로 허용 가능한 투여 형태의 제형(유화액 및 현탁액을 포함함)에 흔히 이용되는 카르복시메틸 셀룰로오스 또는 유사한 분산제와 같은 장쇄 알코올 희석제 또는 분산제를 함유할 수 있다. 흔히 사용되는 기타 계면 활성제, 예를 들어 약학적으로 허용되는 고체, 액체 또는 기타 투여 형태의 제조에 흔히 사용되는 Tween^®, Spans 및 기타 유화제 또는 생체이용성 강화제가 또한 제형화 목적으로 사용될 수 있다.

본원에 기재된 약학적으로 허용 가능한 조성물은 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 수용액을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 경구용으로 허용 가능한 투여 형태로 경구 투여될 수 있다. 경구용 정제의 경우, 흔히 사용되는 담체는 락토오스 및 옥수수 전분을 포함한다. 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제가 또한 전형적으로 첨가된다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 유용한 희석제는 락토오스 및 건조 옥수수 전분을 포함한다. 경구용으로 수성 현탁액이 요구되는 경우, 유효 성분은 유화제 및 현탁제와 조합된다. 필요한 경우, 특정 감미제, 방향제 또는 착색제가 또한 첨가된다.

대안적으로, 본 개시내용의 약학적으로 허용 가능한 조성물은 직장 투여용 좌제의 형태로 투여될 수 있다. 이들은 실온에서는 고체이지만 직장 온도에서는 액체이어서 직장에서 녹아 약물을 방출하는 적합한 무자극 부형제와 약제를 혼합함으로써 제조될 수 있다. 이 같은 물질은 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.

또한, 본 개시내용의 약학적으로 허용 가능한 조성물은, 특히 치료 표적(눈, 피부 또는 하부 위장관의 질병을 포함함)이 국소 적용에 의해 용이하게 접근 가능한 부위 또는 장기를 포함하는 경우에 국소 투여될 수 있다. 적합한 국소 제형은 이들 부위 또는 장기 각각에 대해 용이하게 제조된다. 하부 위장관에 대한 국소 적용은 직장 좌제 제형(상기 참조)에서 또는 적합한 관장제 제형에서 이루어질 수 있다. 국소용 경피 패치가 또한 사용될 수 있다.

국소 적용을 위해, 약학적으로 허용 가능한 조성물은 하나 이상의 담체에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 연고로 제형화될 수 있다. 본 개시내용의 화합물의 국소 투여용 담체는 광유, 액체 바셀린, 백색 바셀린, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 대안적으로, 약학적으로 허용 가능한 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체에 현탁 또는 용해된 활성 성분을 함유하는 적합한 로션 또는 크림으로 제형화될 수 있다. 적합한 담체는 광유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알코올, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알코올 및 물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 개시내용의 약학적으로 허용 가능한 조성물은 비강 에어로졸 또는 흡입에 의해 투여될 수 있다. 이 같은 조성물은 약학적 제형 분야에서 잘 알려진 기법에 따라 제조되며, 벤질 알코올 또는 기타 적합한 보존제, 생체이용률을 향상시키기 위한 흡수 촉진제, 플루오르화탄소 및/또는 기타 통상적인 가용화제 또는 분산제를 이용하여 염수 중의 용액으로서 제조될 수 있다. 조성물을 단일 투여 형태로 제조하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 본 개시내용의 화합물의 양은 치료될 숙주, 특정 투여 모드에 따라 달라질 것이다. 바람직하게는, 조성물은, 이들 조성물을 투여받은 환자에게 저해제를 0.01 ㎎/kg 내지 100 ㎎/kg 체중/일의 양으로 투여될 수 있도록 제형화되어야 한다.

동위원소 표지된 화합물

본원에 기재된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체는 또한 화합물의 동위원소 표지된 형태뿐만 아니라, 표지되지 않은 형태를 나타내기 위한 것이다. 동위원소 표지된 화합물은, 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 교체된다는 것을 제외하고 본원에 제공된 화학식으로 나타낸 구조를 갖는다. 본원에 기재된 화합물 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예를 들어 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸F, 31P, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I 각각을 들 수 있다. 본 개시내용은 본원에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 ³H 및 ¹⁴C와 같은 방사성 동위원소가 존재하거나 ²H 및 ¹³C과 같은 비방사성 동위원소가 존재하는 것을 포함한다. 이 같은 동위원소 표지된 화합물은 대사성 연구(¹⁴C를 이용함), 반응 속도론 연구(예를 들어, ²H 또는 ³H를 이용함), 검출 또는 이미징 기법, 예를 들어 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영(SPECT)(약물 또는 기질 조직 분포 검정을 포함함)에 유용하거나, 환자의 방사성 치료에 유용하다. 특히, ¹⁸F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 본원에 기재된 동위원소 표지된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체는 일반적으로 당업자에게 알려진 통상적인 기법에 의해 제조될 수 있거나, 앞서 사용된 표지되지 않은 시약 대신에 적절한 동위원소 표지된 시약을 사용하여 첨부된 실시예 및 제조에서 기재된 것과 유사한 과정에 의해 제조될 수 있다.

게다가, 보다 중질의 동위원소, 특히 중수소(즉, ²H 또는 D)를 이용한 치환은 보다 높은 대사 안정성, 예를 들어 생체 내 반감기 증가 또는 투여 요건의 감소, 또는 치료 지수의 개선에서 기인하는 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 이러한 맥락에서 중수소는 본원에 기재된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체의 치환기로서 간주되는 것으로 이해된다. 이 같은 보다 중질의 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 농축 인자에 의해 정의될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, "동위원소 농축 인자"란 용어는 명시된 동위원소의 동위원소 존재비와 천연 존재비 사이의 비율을 의미한다. 본원에 기재된 화합물 내의 치환기가 중수소로 표시되는 경우, 이 같은 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3,500(각각의 지정된 중수소 원자에서의 52.5%의 중수소 혼입), 적어도 4,000(60%의 중수소 혼입), 적어도 4,500(67.5%의 중수소 혼입), 적어도 5,000(75%의 중수소 혼입), 적어도 5,500(82.5%의 중수소 혼입), 적어도 6,000(90%의 중수소 혼입), 적어도 6,333.3(95%의 중수소 혼입), 적어도 6,466.7(97%의 중수소 혼입), 적어도 6,600(99%의 중수소 혼입) 또는 적어도 6,633.3(99.5%의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 인자를 갖는다

복용량

본원에 기재된 화합물(약학적으로 허용 가능한 염 및 중수소화된 변이체를 포함함)의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. LD₅₀은 개체군의 50%에 치명적인 투여량이다. ED₅₀은 개체군의 50%에서 치료적으로 유효한 투여량이다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 투여량 비율(LD₅₀/ED₅₀)이 치료 지수이다. 큰 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 화합물이 사용될 수 있지만, 감염되지 않은 세포에 대한 잠재적인 손상을 최소화하고, 그에 따라 부작용을 줄이기 위해 이 같은 화합물을 감염된 조직 부위로 표적화하는 전달 시스템을 설계하는 데 주의를 기울여야 한다.

세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 복용량 범위를 공식화하는 데 사용될 수 있다. 이 같은 화합물의 복용량은 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED₅₀을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있을 수 있다. 복용량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 달라질 수 있다. 임의의 화합물의 경우, 치료적 유효 투여량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추정될 수 있다. 투여량은 세포 배양에서 측정할 때 IC₅₀(즉, 증상의 최대 저해율의 절반을 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 이 같은 정보는 인간에서 유용한 투여량을 보다 정확하게 결정하기 위해 사용될 수 있다. 혈장 내 수준은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.

임의의 특정한 환자에 대한 특정 복용량 및 치료 용법은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반 건강, 성별, 식이, 투여 시간, 배설 속도, 약물 조합, 치료 의사의 판단 및 치료할 특정 질병의 중증도를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 또한, 조성물 내에서 본원에 기재된 화합물의 양은 조성물 내의 특정한 화합물에 따라 달라질 것이다.

사용 방법

하나의 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질의 조정을 필요로 하는 개체에서 표적 단백질, 예를 들어 본원에 기재된 표적 단백질을 조정하는 방법을 특징으로 하며, 이때 이 방법은 개체에게 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 조정은, (i) 표적 단백질의 폴딩 조정; (ii) 표적 단백질의 반감기 조정; (iii) 프로테아솜으로의 표적 단백질의 수송 조정; (iv) 표적 단백질의 유비퀴틴화 수준 조정; (v) 표적 단백질의 분해(예를 들어, 프로테아솜 분해) 조정; (vi) 표적 단백질 신호전달 조정; (vii) 표적 단백질 국부화 조정; (viii) 리소좀으로의 표적 단백질의 수송 조정; (ix) 다른 단백질과 표적 단백질의 상호작용 조정 중 하나 이상을 포함한다.

다른 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질의 안정화를 필요로 하는 개체에서 표적 단백질, 예를 들어 본원에 기재된 표적 단백질을 안정화시키는 방법을 특징으로 하며, 이때 이 방법은 개체에게 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 안정화는, 예를 들어 기준 표준물질과 비교하여 표적 단백질의 반감기를 증가하거나, 표적 단백질로부터 Ubl을 제거하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, 안정화는 표적 단백질의 기능을 개선시킨다.

다른 양태에서, 본 개시내용은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 투여할 때 탈유비퀴티나아제, 예를 들어 본원에 기재된 탈유비퀴티나아제 및 표적 단백질을 포함하는 단백질 복합체를 형성하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 단백질 복합체는 시험관 내(예를 들어, 샘플 내) 또는 생체 내(예를 들어, 세포 또는 조직 내, 예를 들어 개체 내)에서 형성된다. 단백질 복합체의 제형은 당해 기술분야에 알려진 임의의 방법, 예를 들어 질량 분광법(고유 질량 분광법) 또는 SDS PAGE에 의해 관찰 및 특성 분석될 수 있다. 일부 실시형태에서, 단백질 복합체의 형성은, 예를 들어 기준 표준물질과 비교하여 표적 단백질의 수준을 조정하며, 예를 들어 표적 단백질의 반감기를 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 단백질의 형성은, 예를 들어 기준 표준물질과 비교하여 표적 단백질로부터의 Ubl의 제거를 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 탈유비퀴티나아제는 OTUB1이다. 일부 실시형태에서, 표적 단백질은 CFTR을 포함한다.

다른 실시형태는 Ubl의 제거를 필요로 하는 개체에서 표적 단백질, 예를 들어 본원에 기재된 표적 단백질로부터 Ubl(예를 들어, 유비퀴틴 또는 유비퀴틴-유사 단백질)을 제거하기 위한 방법이며, 이때 이 방법은 개체에게 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다.

다른 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질, 예를 들어 본원에 기재된 표적 단백질의 활성을 유지, 개선 또는 증가시키는 방법을 제공하며, 이때 이 방법은 개체에게 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시형태에서, 표적 단백질의 활성의 유지, 개선 또는 증가는 본원에 기재된 이작용성 화합물(예를 들어, 이작용성 화합물 내의 DUB 리크루터), 예를 들어 화학식 I의 화합물을 이용하여 탈유비퀴티나아제(예를 들어, 표 1의 탈유비퀴티나아제)를 리크루팅하고, 표적 단백질, 이작용성 화합물 및 탈유비퀴티나아제의 3원 복합체를 형성하여 표적 단백질의 활성을 유지, 개선 또는 증가시키는 것을 포함한다.

다른 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질, 예를 들어 본원에 기재된 표적 단백질에 의해 매개되는 질병, 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 특징으로 하며, 이때 이 방법은 개체에게 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 호흡기 질환, 증식성 질환, 자가 면역 질환, 자가 염증성 질환, 염증성 질환, 대사성 질환, 신경 질환 및 감염성 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 호흡기 질환, 증식성 질환, 자가 면역 질환, 자가 염증성 질환, 염증성 질환, 신경 질환 및 감염성 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 호흡기 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 증식성 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 자가 염증성 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 염증성 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 대사성 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 신경 질환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 감염성 질병을 포함한다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 암이다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 낭포성 섬유증이다. 일부 실시형태에서, 질병, 질환 또는 병태는 당뇨병(예를 들어, 연소자 성인기 발병 당뇨병 2형(MODY2))이다.

다른 양태에서, 본 개시내용은 표적 단백질의 저해 또는 조정을 필요로 하는 개체에서 표적 단백질을 저해 또는 조정하는 데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 제공한다.

다른 실시형태는 질병 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에서 호흡기 질환, 증식성 질환, 자가 면역 질환, 자가 염증성 질환, 염증성 질환, 신경 질환 및 감염성 질병 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에서의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체의 용도이다.

실시예

본 개시내용은 하기 실시예 및 합성 도식에 의해 추가로 예시되며, 이는 본 개시내용을 범주 또는 진의에서 본원에 기재된 특정 절차에 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 실시예는 특정 실시형태를 예시하기 위해 제공되며, 그 결과 본 개시내용의 범주에 대한 어떠한 제한도 의도되지 않은 것으로 이해되어야 한다. 본 개시내용의 진의 및/또는 첨부된 청구범위의 범주에서 벗어나지 않는 한 당업자에게 제안될 수 있는 다양한 기타 실시형태, 이의 변형예 및 등가물에 의존할 수 있다는 것이 추가로 이해되어야 한다.

본 개시내용의 화합물은 유기 합성 분야에서 알려져 있는 방법에 의해 제조될 수 있다. 모든 방법에서, 민감성 기 또는 반응성 기에 대한 보호기는 일반 화학 원리에 따라 필요한 경우 이용될 수 있는 것으로 이해된다. 보호기는 표준 유기 합성 방법에 따라 조작된다(문헌[T.W. Green and P.G.M. Wuts (1999) Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons]). 이들 기는 당업자에게 매우 명백한 방법을 사용하여 편리한 화합물 합성 단계에서 제거된다.

일반적인 방법

시스테인-반응성 공유결합 리간드 라이브러리를 앞서 합성 및 설명하거나, Enamine으로부터 구매하였다. 루마카프토르를 Medchemexpress로부터 구매하였다.

세포 배양

CFBE41o-4.7 ΔF508-CFTR 인간 CF 기관지 상피세포를 Millipore Sigma(SCC159)로부터 구매하였다. CFBE41o-4.7 ΔF508-CFTR 인간 CF 기관지 상피세포를 10%(v/v) 소 태아 혈청(FBS)을 함유하는 MEM(Gibco)에서 배양하고, 5% CO₂와 함께 37℃로 유지하였다.

겔-기반 활성-기반 단백질 프로파일링(ABPP)

재조합 OTUB1(0.1 ㎍/샘플)을 25 ㎕의 PBS 중에서 DMSO 비히클 또는 공유결합 리간드 또는 이작용성 화합물로 37℃에서 30분 동안 전처리하고, 후속적으로 IA-로다민(Setareh Biotech)으로 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 4 × 환원용 Laemmli SDS 샘플 로딩 완충액(Alfa Aesar)을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 95℃에서 5분 동안 가열 후, 샘플을 예비 캐스팅된 4% 내지 20% Criterion TGX 겔(Bio-Rad) 상에서 분리하였다. ChemiDoc MP(Bio-Rad)를 이용하여 탐침-표지된 단백질을 겔 내 형광에 의해 분석하였다.

탈유비퀴티나아제 활성 검정

앞서 기재된 방법을 이용하여 OTUB1 활성에 대한 DUB 리크루터의 효과를 평가하였다. 재조합 OTUB1(500 nM)을 DMSO 또는 화합물 100(50 mM)과 함께 1시간 동안 사전 인큐베이션하였다. 검정을 개시하기 위해, 전처리된 OTUB1 효소를 250 nM OTUB1, 1.5 μM 디-Ub, 12.5 μM UBE2D1 및 5 mM DTT의 최종 농도가 되도록 디-Ub 반응 믹스와 1:1 혼합하였다. 반응 믹스의 일부를 제거하고 Laemmli 완충액을 첨가하여 반응을 종료함으로써 시간이 경과함에 따라 웨스턴 블로팅에 의해 모노-Ub의 출현을 모니터링하였다. 나타낸 블롯은 그룹 당 n = 3인 생물학적으로 독립적인 실험으로부터의 대표적인 겔이다.

웨스턴 블로팅

단백질을 SDS/PAGE에 의해 분해하고, rans-Blot Turbo 전달 시스템(Bio-Rad)을 이용하여 니트로셀룰로오스 막으로 전달하였다. Tween 20(TBS-T) 용액을 함유하는 트리스-완충 염수 중에서 5% BSA를 이용하여 막을 실온에서 30분 동안 차단하고, TBS-T로 세척하고, 제조사별로 권장되는 희석제에서 희석된 1차 항체를 이용하여 4℃에서 하룻밤 동안 탐침하였다. TBS-T로 3회 세척한 후, 막을 TBS-T 중의 5% BSA 중에서 1:10,000로 희석하여 IR680- 또는 IR800-접합된 2차 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 암실에서 인큐베이션하였다. TBST로 추가로 3회 세척한 후, Odyssey Li-Cor형광 스캐너를 이용하여 블롯을 시각화하였다. 추가적인 1차 항체 인큐베이션을 수행할 때 ReBlot Plus Strong 항체 박리 용액(EMD Millipore)을 이용하여 막을 박리하였다. 본 연구에 사용된 항체는 CFTR(Cell Signaling Technologies, Rb mAb #78335), CFTR(R&D Systems, Ms mAb, #MAB25031), CFTR(Millipore, Ms mAb, #MAB3484), CFTR(Prestige, Rb pAb, #HPA021939), GAPDH(Proteintech, Ms mAb, #60004-1-Ig), OTUB1(Abcam, Rb mAb, #ab175200, [EPR13028(B)]), CTNNB1(Cell Signaling Technologies, Rb mAb, #8480) 및 WEE1(Cell Signaling Technologies, #4936)이었다.

IsoTOP-ABPP 화학 단백체 실험

이전에 보고된 바와 같이 IsoTOP-ABPP 연구를 실시하였다. DUB에 대한 본 발명자의 전체 화학 단백체 데이터 분석은 이전에 평가된 455개의 개별 isoTOP-ABPP 실험으로부터 수득되었다. 이들 데이터는 231MFP, A549, HeLa, HEK293T, HEK293A, UM-ChoR1, PaCa2, PC3, HUH7, NCI-H460, THP1, SKOV3, U2OS 및 K562 세포를 포함한 다양한 인간 세포주로부터 집계되었다. 모든 isoTOP-ABPP 데이터 세트를 IA-알킨 탐침을 사용하여 앞서 기재된 바와 같이 준비하였다. PBS 중의 탐침 초음파 처리에 의해 세포를 용균하고, BCA 검정에 의해 단백질 농도를 측정하였다. 세포 수집 및 용균 이전에 세포를 DMSO 비히클 또는 공유결합 리간드(1,000x DMSO 저장액)로 4시간 동안 처리하였다. 이어, 단백체를 IA-알킨 표지(DUB 리간드 가능성 분석(DUB ligandability analysis)의 경우 100 μM 및 화합물 201의 시스테인-반응성을 프로파일링하는 경우 200 mM)로 실온에서 1시간 동안 표지하였다. CuAAC를 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 (1 mM, Strem, 15-7400), 트리스[(1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸]아민(34 μM, Sigma, 678937), 황산구리(II)(1 mM, Sigma, 451657) 및 비오틴-링커-아지드를 순차적으로 첨가하여 사용하였으며, 이때 링커는 담배 식각 바이러스(TEV) 프로테아제 인식 서열 뿐만 아니라, 대조군 및 처리된 단백체를 각각 처리하기 위한 동위원소적 경질 또는 중질 발린으로 기능화되었다. CuAAC 이후, 단백체를 6,500 g에서의 원심분리에 의해 침전시키고, 빙냉 메탄올로 세척하고, 1:1 대조군:처리군 비율로 조합하고, 다시 세척한 후, 1.2% SDS-PBS 중에서 5분 동안 80℃까지 가열하여 변성 및 재가용화하였다. 불용성 성분을 6,500 g에서의 원심분리에 의해 침전시키고, 가용성 단백체를 5 ㎖의 0.2% SDS-PBS 중에서 희석하였다. 표지된 단백질을 4℃에서 하룻밤 동안 회전시키면서 스트렙타비딘-아가로스 비드(샘플 당 170 ㎕의 재현탁된 비드; Thermo Fisher, 20349)에 결합시켰다. 비드-연결된 단백질을 PBS 및 물로 각각 3회 세척하여 농축한 후, 6 M 우레아/PBS에 재현탁하고, TCEP(1 mM, Strem, 15-7400)에서 환원시키고, 요오도아세트아미드(18 mM, Sigma)로 알킬화시킨 후, 세척하고, 2 M 우레아/PBS에 재현탁하고, 0.5 ㎍/㎕의 서열 분석 등급의 트립신(Promega, V5111)으로 하룻밤 동안 트립신 처리하였다. 트립신 분해 펩타이드를 용출 제거하였다. 비드를 PBS 및 물로 각각 3회 세척하고, TEV 완충 용액(물, TEV 완충액, 100 μM 디티오트레이톨)으로 세척하고, Ac-TEV 프로테아제(Invitrogen, 12575-015)가 포함된 완충액에서 재현탁하고, 하룻밤 동안 인큐베이션하였다. 펩타이드를 물에 희석하고, 포름산(1.2 M, Fisher, A117-50)으로 산성화하고, 분석용으로 준비하였다.

IsoTOP-ABPP 질량 분광 분석

모든 화학 단백체 실험에서 얻은 펩타이드를 4 ㎝의 Aqua C18 역상 수지(Phenomenex, 04A-4299)로 채워진 250 ㎛ 내경의 융합 실리카 모세관 튜빙에 가압 로딩하였으며, 이때 수지는 사전에 100% 완충액 A에서 100% 완충액 B로의 구배를 이용하여 Agilent 600 시리즈 고성능 액체 크로마토그래프 상에서 10분에 걸쳐 평형화된 후, 100% 완충액 B로 5분간 세척되고, 100% 완충액 A로 5분간 세척되었다. 이어서, 샘플을 MicroTee PEEK 360 ㎛ 피팅(Thermo Fisher Scientific p-888)을 사용하여 isoTOP-ABPP 연구를 위한 10 ㎝ Aqua C18 역상 수지 및 3 ㎝의 강양이온 교환 수지로 충전된 13 ㎝ 레이저-풀링 칼럼에 부착하였다. 5-단계 다차원 단백질 식별 기술(MudPIT) 프로그램을 사용하고, 0%, 25%, 50%, 80% 및 100% 염이 부가된 500 mM 아세트산암모늄 수용액을 사용하고, 완충액 A 중의 5% 내지 55% 완충액 B의 구배(완충액 A: 95:5 물:아세토니트릴, 0.1% 포름산; 완충액 B: 80:20 아세토니트릴:물, 0.1% 포름산)를 사용하는 Q Exactive Plus 질량 분광계(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 샘플을 분석하였다. 데이터를 동적 배제(dynamic exclusion)가 활성화된 데이터-종속 획득 모드(60초)로 수집하였다. 1회의 전체 질량 분광(MS1) 스캔(400 내지 1,800의 질량 대 전하 비율(m/z))이 이루어진 후에 n번째로 가장 풍부한 이온에 대해 15회의 MS2 스캔이 이루어졌다. 가열 모세관 온도를 200℃로 설정하고, 나노분무 전압을 2.75 kV로 설정하였다.

Raw Extractor v.1.9.9.2(Scripps Research Institute)를 사용하여 MS1 및 MS2 파일 형식으로 데이터를 추출하고, IP2 v.3(Integrated Proteomics Application, Inc.)의 ProLuCID 검색 방법을 사용하여 Uniprot 인간 데이터베이스에 대해 검색하였다. 카르복시아미노메틸화(+57.02146)를 위한 정적 변형 및 메티오닌 산화 및 경질 또는 중질 TEV 태그(각각 +464.28596 또는 +470.29977)를 위한 최대 2개의 차등 변형을 이용하여 시스테인 잔기를 검색하였다. 펩타이드는 전적으로 트립신 분해 펩타이드이고 TEV 변형을 함유하도록 요구되었다. ProLUCID 데이터를 DTASelect를 통해 여과하여 5% 미만의 펩타이드 위양성 비율을 구현하였다. 3개 중 2개의 생물학적 복제물에 대해 명백한 이들 탐침-변형 펩타이드만이 이들의 동위원소 경질 대 중질 비율에 대해 해석하였다. 2보다 큰 비율을 나타내는 탐침-변형 펩타이드의 경우, 본 발명자들은 3개의 생물학적 복제물 모두에 존재하고, 통계적으로 유의하며, 모든 생물학적 복제물에 대해 양호한 품질의 MS1 피크 형상을 나타내는 이들 표적에 대한 해석만을 수행하였다. 경질 대 중질 동위원소 탐침-변형 펩타이드 비율은, 펩타이드와 연관된 모든 펩타이드-스펙트럼 정합에 대해 각각의 복제물 쌍의 경질 대 중질 전구체 존재비의 평균을 취하여 계산하였다. 쌍 존재비의 불변성 및 처리군과 대조군 사이의 변화 유의성을 추정하기 위한 노력으로 쌍 존재비를 사용하여 쌍 샘플 t-검정 P 값을 계산하였다. P 값은 Benjamini-Hochberg 방법을 사용하여 교정되었다.

녹다운 연구

Dharmacon으로부터 구입한 siRNA를 이용하여 RNA 간섭을 수행하였다. CFBE41o-4.7 세포를 6 ㎝ 플레이트 당 400,000개 세포로 접종하고, 하룻밤 동안 부착하도록 방치하였다. 세포를 8 ㎖의 형질감염 시약, 즉 DharmaFECT 1(Dharmacon #T-2001-02), DharmaFECT 4(Dharmacon, T-2004-02) 또는 리포펙타민 2000(ThermoFisher #11668027)을 사용하여 33 nM의 비표적화(ON-TARGETplus 비표적화 대조군 풀, Dharmacon #D-001810-10-20) 또는 항-CFTR siRNA(Dharmacon, 주문 제작)로 형질감염시켰다. 형질감염 시약을 OPTIMEM(ThermoFisher #31985070) 배지에 첨가하고, 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 한편, siRNA를 동량의 OPTIMEM에 첨가하였다. 이어서, OPTIMEM 중의 형질감염 시약 및 siRNA의 용액을 모으고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 4 ㎖의 MEM 당 33 nM siRNA 및 8 ㎖의 형질감염 시약을 제공하기 위해 이들 모은 용액을 완전 MEM으로 희석하고, 배지를 교체하였다. 세포를 형질감염 시약과 함께 24시간 동안 인큐베이션하였으며, 이 시점에 배지를 DMSO 또는 10 mM 화합물 201을 함유하는 배지로 교체하고, 추가의 24시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 수확하고, 웨스턴 블롯팅으로 단백질 존재비를 분석하였다.

정량적 TMT 단백체 분석

정량적 TMT 기반 단백체 분석을 앞서 기재된 바와 같이 수행하였다. 획득된 MS 데이터를 Mascot v 2.5.1 검색 엔진(Matrix Science, 영국 런던 소재)을 활용하는 Proteome Discoverer v. 2.2.0.388 소프트웨어(Thermo)를 펩타이드-스펙트럼 정합 필터링을 위한 퍼콜레이터 검증 노드(Percolator validation node)와 함께 사용하여 처리하였다. 흔한 오염물질의 서열이 추가된 Uniprot 단백질 데이터베이스(표준 인간 및 마우스 서열, EBI, 영국 캠브리지 소재)에 대해 데이터를 검색하였다. 펩타이드 검색 허용 오차(peptide search tolerance)는 전구체 및 단편의 경우 각각 10 ppm 및 0.8 Da로 설정되었다. 트립신 개열 특이성(P가 뒤따르는 경우를 제외하고 K, R에서의 개열)으로 인해 최대 2회의 오류 개열이 허용되었다. 시스테인의 카르바미도메틸화를 고정 변형으로 설정하고, 메티오닌 산화, N-말단 및 리신 잔기의 TMT 변형을 가변 변형으로 설정하였다. Proteome Discoverer의 퍼콜레이터 검증 노드를 통해 실험 당 모든 개별 샘플에 대한 조합된 Mascot 검색 결과로 구성된 완전한 데이터 세트 수준에서 펩타이드 및 단백질 식별에 대한 데이터 검증을 수행하였다. 리포터 이온 비율의 계산을 20 ppm 윈도우로부터 선택된, 가장 확실한 중심을 갖는 합산된 존재비를 사용하여 수행하였다. 전체 데이터 세트 내의 주어진 식별 단백질에 대한 고유한 할당인 펩타이드-대-스펙트럼 정합만이 단백질 정량화에 고려된다. 퍼콜레이터-추정 1% 미만의 오류 발견률(FDR) 컷오프를 사용하여 고신뢰 단백질 식별을 기록하였다. 조정된 p-값을 결정하기 위해 Benjamini-Hochberg 보정과 함께 배경-기반 ANOVA를 사용하여 차등 존재비 유의성을 추정하였다.

실시예 1: 리간드 가능한 시스테인 잔기를 갖는 탈유비퀴티나아제의 식별

다양한 복합 단백체 내의 IA-알킨을 이용한 시스테인-반응성 탐침 표지의 화학 단백체 데이터 세트에서 발굴한 65개 DUB 중에서, 탐침-변형 시스테인은 65개의 DUB 중 100% 모두에서 식별되었다(도 2a). 탐침-변형 시스테인을 나타내는 65개의 DUB 중에서, 이들 DUB 중 39개는 본 발명자의 화학 단백체 데이터 세트 전체에서 10 초과의 전체 스펙트럼 계수를 나타냈다(도 2b). 24개의 DUB, 즉 이들 39개의 DUB 중 62%는 DUB 촉매 또는 활성 부위 시스테인의 표지를 나타냈다. 특정 DUB에 대한 탐침-변형 시스테인 펩타이드에 대한 50% 초과의 전체 총 스펙트럼 계수를 나타내는 탐침-변형 시스테인이 존재하는 10개의 DUB가 식별되었다. 이들 10개의 DUB 중 7개는 알려진 촉매 시스테인을 표적화하지 않으며, 3개는 촉매 시스테인을 표적화한다("cat"으로 약칭됨; 도 3a). OTUB1 IA-알킨 표지에 대한 전체 화학 단백체 데이터 분석에 따르면 C23이 촉매(cat) C91과 비교하여 IA-알킨에 의해 표지된 우세 부위인 것으로 나타났다(도 3b).

실시예 2: 예시적인 탈유비퀴티나아제(OTUB1)를 표적화하는 시스테인 표지제의 식별

예시적인 재조합 탈유비퀴티나아제 OTUB1의 IA-로다민 표지와 경쟁하는 시스테인-반응성 라이브러리에 대한 공유결합 리간드 스크린을 수행하여 겔-기반 활성-기반 단백질 프로파일링(ABPP)을 통해 OTUB1에 대한 소분자 결합제를 식별하였다. 비히클 DMSO 또는 시스테인-반응성 공유결합 리간드(50 mM)를 IA-로다민 표지(500 nM, 30분, 실온) 전에 실온에서 30분 동안 OTUB1과 함께 사전 인큐베이션하였다. 도 4를 참고한다. 이어, OTUB1을 SDS/PAGE에 의해 분리하고, 겔 내 형광을 평가하고, 정량화하였다. 겔 내 형광의 겔-기반 ABPP 데이터는 도 5에 나타나 있다.

실시예 3: 예시적인 이작용성 화합물의 합성

화학적 합성 및 특성분석

출발 물질, 시약 및 용매를 상업 공급업체로부터 구입하였으며, 별도의 언급이 없는 한 추가 정제 없이 사용하였다. 모든 반응을 박층 크로마토그래피(TLC; TLC 실리카 겔 60 F₂₅₄, Sepulco Millipore Sigma)에 의해 모니터링하였다. Biotage Sfar^® 또는 Silicycle 순상 실리카 플래시 칼럼(5 g, 10 g, 25 g 또는 40 g)이 구비된 Biotage Isolera를 사용하여 반응 생성물을 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. ¹H NMR 및 ¹³C NMR 스펙트럼을 5 ㎜ 1H/BB Prodigy 극저온 탐침이 장착된 400 MHz Bruker Avance I 분광계 또는 600 MHz Bruker Avance III 분광계 상에 기록하였다. 화학적 이동을 테트라메틸실란(TMS)으로부터의 다운필드로 백만분율(ppm, δ) 단위로 기록하였다. 결합 상수(J)는 Hz 단위로 기록한다. 스핀 다중도를 br(광범위), s(단일항), d(이중항), t(삼중항), q(4중항) 및 m(다중항)으로 기재한다.

일반 절차 A :

카르복실산(1.0 당량)을 디클로로메탄(DCM; 0.1 M) 중에 용해하였다. 아민(1.25 당량)을 첨가한 후, 디이소프로필에틸아민(DIEA; 4.0 당량), 하이드로벤조트리아질(HOBt; 0.2 당량) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 염산염(EDCI; 2.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 1 M HCl로 세척하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 아미드를 제공하였다.

일반 절차 B :

Boc-보호된 아민을 DCM(0.1 M) 중에 용해하고, 트리플루오로아세트산(TFA)을 첨가하여 1:2의 TFA:DCM 비율을 제공하였다. 용액을 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 휘발성 물질을 증발시키고, 얻어진 오일을 DCM에 다시 용해하고, 포화 NaHCO₃ 수용액으로 처리하였다. 이어서, 얻어진 혼합물을 DCM으로 3회 추출한 후, 모은 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하여 추가의 정제 없이 아민을 제공하였다.

일반 절차 C :

중간체 3과 같은 tert-부틸 에스테르(30 ㎎, 0.086 mmol, 3.0 당량)를 DCM(600 ㎖) 중에 용해하였다. TFA(300 ㎖)를 첨가하고, 용액을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 증발시키고, DCM(1 ㎖)을 첨가하고, 증발시켜 일부 과량의 TFA이 잔류하였지만 카르복실산 중간체를 얻었다. 이러한 중간체를 디메틸포르아미드(DMF; 500 ㎖) 및 DIEA(150 ㎖, 30 당량) 중에 용해하고, 적당한 아민(0.029 mmol, 1.0 당량)을 첨가한 후, 1-(비스(디메틸아미노)메틸렌-1H-1,2,3-트리아졸로(4,5-b)피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트(HATU; 30 ㎎, 0.079 mmol, 2.7 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc 또는 4:1 CHCl₃:IPA로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 최종 화합물을 제공하였다.

일반 절차 D:

디옥산 중에 용해된 적당한 브로마이드의 용액에 N,N'-디메틸에틸렌디아민(0.25 당량), K₂CO₃(3.0 당량), CuI(0.1 당량) 및 적당한 아미드 결합 파트너(1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 탈기하고, 분위기를 질소로 교체하고, 100℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. 일단 냉각되면 완료된 반응 혼합물에 포화 NH₄Cl을 첨가하였으며, 이를 20분 동안 교반한 후, 셀라이트를 통해 여과하였으며, 셀라이트 패드를 에틸 아세테이트(EtOAc)로 세척하였다. 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, 염수로 2회 세척하고, NaSO₄로 건조한 후, 진공 하에 농축하였다. 얻어진 미정제 혼합물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 통해 정제하였다.

일반 절차 E:

적당한 아민을 탄산칼륨(3.0 당량)과 함께 테트라하이드로푸란(THF) 및 물(2:1 THF:H₂O)에 용해하였다. 반응 혼합물에 벤질 클로로포르메이트(1 내지 2 당량)를 적가하고, 이어서 이를 실온에서 하룻밤 동안 격렬하게 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 2회 세척하고, 농축하고, 얻어진 미정제물을 플래시 칼럼 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.

일반 절차 F :

결합된 생성물을 DCM 중에 용해한 후, 출발 물질의 소모가 TLC를 통해 관찰될 때(15분 내지 30분)까지 TFA(1:2 TFA:DCM)를 적가하였다. 이이서, 혼합물을 DCM로 2회 세척하였으며, 추가의 정제 없이 즉시 사용하였다.

일반 절차 G :

에탄올(EtOH; 0.2 M) 중의 Cbz-보호된 화합물의 혼합물에 Pd/C(10 중량%)를 첨가하고, 분위기를 H₂(벌룬(balloon))로 교체하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 동안 격렬하게 교반한 후, DCM으로 희석하고, 주사기 필터(0.45 ㎛)를 통해 여과하고, 농축하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다.

일반 절차 H :

아민 출발 물질을 얼음 상의 DCM 중에 용해하였다. 이어서, 출발 물질의 소모가 TLC에 의해 관찰될 때(0.5시간 내지 2시간)까지 반응 혼합물에 트리에틸아민(TEA; 3.0 당량) 및 아크릴로일 클로라이드(1.5 당량)를 첨가하였다. 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, H₂O로 세척한 후, 염수로 세척하고, 농축하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.

[반응식 1]

화합물 200의 합성

tert -부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(1): tert-부틸 디에틸포스포노아세테이트(971 ㎎, 0.908 ㎖, 3.85 mmol)를 THF(22 ㎖) 중에 용해하고, 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서, 2-브로모푸란-2-카르브알데히드(613 ㎎, 3.50 mmol)를 5분에 걸쳐 분할하여 첨가하였다. 끈적끈적한 고체가 침전하므로 반응물을 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 물을 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 15% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(782 ㎎, 2.86 mmol, 82%)을 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.26 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 1.55 (s, 9H).

벤질 (E)-4-(5-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(2): tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(1.62 g, 5.94 mmol)를 디옥산(30 ㎖) 중에 용해하고, 벤질 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(1.4 g, 5.94 mmol), K₂CO₃(2.46 g, 17.8 mmol), N,N'-디메틸디아미노에탄(0.167 ㎖, 1.49 mmol) 및 CuI(114 ㎎, 0.59 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 40시간 동안 환류하면서 질소 하에 교반한 후, 실온까지 냉각시켰다. 5 ㎖의 포화 NH₄Cl 수용액을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 EtOAc에서 희석하고, 셀라이트로 여과하였으며, 물을 첨가하고, 혼합물을 분배하고, 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 35% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(1.95 g, 4.59 mmol, 77%)을 제공하였다. LC/MS [M+2H-tBu]⁺ m/z 계산치: 371.18, 실측치: 373.1. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.45-7.24 (m, 6H), 6.98 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.08 (dd, J = 15.7, 3.4 Hz, 1H), 5.14 (dd, J = 4.4, 2.3 Hz, 2H), 4.22 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.77 (s, 2H), 1.47 (s, 9H).

tert -부틸 3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트(3 또는 중간체 1): 벤질 (E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(1.95 g, 4.59 mmol)를 EtOH(25 ㎖) 중에 용해하고, Pd/C(200 ㎎, 10 중량%의 Pd)를 첨가하였다. 반응물을 H₂ 분위기 하에 방치하고, 하룻밤 동안 격렬하게 교반한 후, 셀라이트를 통해 2회 여과하고, 농축하였다. 이어서, 미정제 생성물을 DCM(25 ㎖) 중에 다시 용해하고, 0℃까지 냉각시키고, TEA(1.28 ㎖, 9.18 mmol)로 처리한 후, DCM(5 ㎖) 중의 아크릴로일 클로라이드(445 ㎖, 5.51 mmol) 용액을 2분에 걸쳐 첨가하였다. 20분 동안 교반한 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 얻어진 미정제 오일을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 75% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(3)(846 ㎎, 2.43 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 53%)을 수득하였다. 표제 화합물(3)을 -20℃에 저장하여 분해를 방지하였다. LC/MS [M+2H-tBu]⁺ m/z 계산치: 293.1, 실측치: 293.1. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.64-6.46 (m, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 24.9 Hz, 2H), 4.06-3.82 (m, 4H), 2.88 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.54 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

tert -부틸(3-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)프로필)카르바메이트(4a): 루마카프토르(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤조산)(18 ㎎, 0.04 mmol), tert-부틸(3-아미노프로필)카르바메이트(14 ㎎, 0.08 mmol), DIEA(35 ㎖, 0.20 mmol) 및 HOBt(5.4 ㎎, 0.04 mmol)를 DCM(1 ㎖) 중에 용해한 후, EDCI HCl(15 ㎎, 0.05 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2일 동안 교반한 후, 물을 첨가하였으며, 혼합물을 분배하고, 수성층을 DCM으로 2회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 얻어진 미정제 오일을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 오일로서 표제 화합물(4a)(23 ㎎, 0.038 mmol, 94%)을 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 609.24, 실측치: 609.3. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.88 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60-7.49 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.30-7.18 (m, 2H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.54 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.27 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.78 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.76-1.70 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.19 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(3-아미노프로필)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5a): Boc-보호된 아민(4a)(23 ㎎, 0.038 mmol)을 DCM(1 ㎖) 중에 용해하고, TFA(1 ㎖)를 첨가하였으며, 용액을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 휘발성 물질을 증발시키고, 얻어진 오일을 DCM 중에 다시 용해하고, 포화 NaHCO₃ 수용액으로 처리하였다. 이어서, 얻어진 혼합물을 DCM으로 3회 추출하고, 모은 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하여 무색 오일로서 표제 화합물(5a)(15 ㎎, 0.029 mmol, 78%)을 제공하였으며, 이를 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 509.19, 실측치: 509.2. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 10.73 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.66 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.95-7.85 (m, 3H), 7.79-7.66 (m, 2H), 7.60 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.56-7.49 (m, 2H), 7.41-7.30 (m, 2H), 3.33 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 2.88-2.77 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.79 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 1.52 (dd, J = 4.9, 2.5 Hz, 2H), 1.19-1.15 (m, 2H).

N-(3-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)프로필)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 200): 중간체 1(tert-부틸 3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트)(14 ㎎, 0.04 mmol)를 DCM(0.6 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.3 ㎖)를 첨가하였으며, TLC에 의해 모니터링할 때 출발 물질이 소모될 때까지 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, DCM을 첨가하고, 다시 증발시켰다. 잔류물을 DCM(1.5 ㎖) 중에 용해하고, DIEA(140 ㎖, 0.80 mmol)를 첨가한 후, N-(3-아미노프로필)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5.4 ㎎, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 이어서, EDCI HCl(15 ㎎, 0.08 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 얻어진 현탁액을 DCM으로 3회 추출하였다. 모든 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조한 후, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 5% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 1:1 물:아세토니트릴(2 ㎖)에서의 동결건조 이후 분말로서 표제 화합물(화합물 200, 9.5 ㎎, 0.012 mmol, 30%)을 수득하였다. HRMS [M+H]⁺ m/z 계산치: 783.2949, 실측치: 783.2954. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.93-7.87 (m, 1H), 7.83 (dt, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57-7.45 (m, 2H), 7.29 (s, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.43-6.33 (m, 2H), 6.19 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.47-4.31 (m, 2H), 4.04-3.78 (m, 4H), 3.36 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.32-3.23(m, 2H), 2.96 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.55 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.74 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.69-1.58 (m, 2H), 1.16 (q, J = 3.9 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 172.5, 171.8, 167.4, 165.0, 155.5, 149.8, 148.9, 145.0, 144.1, 143.6, 141.0, 140.2, 134.9, 134.6, 131.8, 131.7, 130.0, 128.5, 127.8, 127.0, 126.6, 126.5, 126.3, 112.9, 112.4, 110.2, 107.6, 101.3, 36.0, 35.9, 35.2, 31.2, 29.5, 24.4, 19.2, 17.2

화합물 202의 합성

tert -부틸(4-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)부틸)카르바메이트(4b): 루마카프토르(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤조산)(181 ㎎, 0.40 mmol), tert-부틸(5-아미노펜틸)카르바메이트(121 ㎎, 0.60 mmol), DIEA(350 ㎖, 2.00 mmol) 및 HOBt(54 ㎎, 0.4mmol)를 일반 절차 A에 따라 반응시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 투명한 오일로서 표제 화합물(4b)(240 ㎎, 0.38 mmol, 95%)을 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 637.28, 실측치: 637.3. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.80 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 3.17 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 3.49 (q, J = 7.0, 6.8, 6.3 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.56 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.46 (s, 11H), 1.36-1.27 (m, 2H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 0.97-0.89 (m, 2H).

N-(4-아미노부틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5b): 일반 절차 B에 따라 Boc-보호된 아민(4b)(240 ㎎, 0.038 mmol)을 탈보호하여 무색 오일로서 아민(5b)(104 ㎎, 0.20 mmol, 정량)를 제공하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 523.2, 실측치: 523.2. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.13 (dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1H), 7.85 (tt, J = 8.5, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.62 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (ddt, J = 7.7, 2.9, 1.5 Hz, 1H), 7.50 (td, J = 7.6, 3.0 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.57-3.46 (m, 2H), 3.27 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 2.80 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 2.28 (d, J = 2.5 Hz, 3H), 1.98 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 1.86 (s, 1H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.72 (dd, J = 8.1, 6.3 Hz, 1H), 1.63-1.53 (m, 1H), 1.20 (qd, J = 4.0, 1.1 Hz, 2H)).

N-(5-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)펜틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 202): 중간체 1(tert-부틸 3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트)(30 ㎎, 0.086 mmol)를 DCM(0.6 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.3 ㎖)를 첨가하였으며, 출발 물질이 소모될 때까지 용액을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, DCM을 첨가하고, 다시 증발시켰다. 잔류물을 DCM(1.5 ㎖) 중에 용해하고, DIEA(150 ㎖, 0.86 mmol)를 첨가한 후, N-(4-아미노부틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5b)(15 ㎎, 0.029 mmol)를 첨가하였다. 이어서, HATU(30 ㎎, 0.079 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 얻어진 현탁액을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축한 후, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 5% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 고체로서 화합물 202(9.5 ㎎, 0.012 mmol, 30%)를 수득하였다. HRMS (ESI): m/z 계산치: 797.3032, 실측치: 797.3109. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.84 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.53 (d, J = 24.7 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 5.83 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 28.2 Hz, 2H), 4.07-3.79 (m, 4H), 3.73 (tt, J = 9.8, 4.9 Hz, 1H), 3.45 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.27 (q, J = 6.2 Hz, 2H), 3.20 (qd, J = 7.4, 3.4 Hz, 1H), 2.94 (q, J = 6.1, 5.0 Hz, 2H), 2.52 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.77 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.63-1.51 (m, 2H), 1.19 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.8, 167.4, 165.0, 155.5, 149.9, 148.9, 144.7, 144.1, 143.6, 141.0, 140.2, 134.9, 134.7, 133.4, 131.8, 131.7, 128.5, 127.6, 127.0, 126.6, 126.4, 112.9, 112.4, 110.2, 107.4, 101.2, 55.5, 43.5, 39.6, 39.0, 34.9, 31.2, 26.8, 26.7, 24.3, 19.2, 18.6, 17.2, 17.2, 12.5.

화합물 201의 합성

tert -부틸(5-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)펜틸)카르바메이트(4c): 루마카프토르(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤조산)(181 ㎎, 0.40 mmol), tert-부틸(5-아미노펜틸)카르바메이트(121 ㎎, 0.60 mmol), DIEA(350 ㎕, 2.00 mmol) 및 HOBt(54 ㎎, 0.4mmol)를 DCM(6 ㎖) 중에 용해한 후, EDCI HCl(153 ㎎, 0.50 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 물을 첨가하였으며, 혼합물을 분배하고, 수성층을 DCM으로 2회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 얻어진 미정제 오일을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 4c(240 ㎎, 0.38 mmol, 95%)를 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 637.28, 실측치: 637.3. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.80 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 3.17 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 4.61 (s, 1H), 3.49 (q, J = 7.0, 6.8, 6.3 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.56 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.46 (s, 11H), 1.36-1.27 (m, 2H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 0.97-0.89 (m, 2H).

N-(5-아미노펜틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5c): 4c(240 ㎎, 0.038 mmol)를 DCM(2 ㎖) 중에 용해하고, TFA(2 ㎖)를 첨가하였으며, 용액을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 휘발성 물질을 증발시키고, 얻어진 오일을 DCM 중에 다시 용해하고, 포화 NaHCO₃ 수용액으로 처리하였다. 층을 분리한 후, 수성층을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하여 오일로서 표제 화합물(5c)(184 ㎎, 0.34 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 85%)을 수득하였으며, 이를 다음 단계에서 추가의 정제 없이 사용하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 537.22, 실측치: 537.2. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57-7.50 (m, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.30 (s, 1H), 3.45 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 2.74 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.65-1.59 (m, 2H), 1.57-1.47 (m, 2H), 1.48-1.40 (m, 2H), 1.33-1.23(m, 2H), 1.20-1.12 (m, 2H), 0.91-0.85 (m, 2H).

N-(5-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)펜틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 201): 3(tert-부틸 3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트)(70 ㎎, 0.20 mmol)을 DCM(1.0 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.8 ㎖)를 첨가하였으며, TLC에 의해 모니터링할 때 출발 물질이 소모될 때까지 용액을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, DCM을 첨가하고, 다시 증발시켰다. 잔류물을 DMF(1.5 ㎖) 중에 용해하고, DIEA(150 ㎕, 0.86 mmol)를 첨가한 후, 중간체 5c(N-(5-아미노펜틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드)(54 ㎎, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 이어서, HATU(152 ㎎, 0.4mmol)를 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 얻어진 현탁액을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 1 M HCl로 2회, 포화 NaHCO₃으로 2회, 5% LiCl로 2회 세척하고, 염수로 세척하였으며, Na₂SO₄ 상에서 건조한 후, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 4% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 1:1 물:아세토니트릴(2 ㎖)에서의 동결건조 이후 분말로서 화합물 202(35 ㎎, 0.043 mmol, 43%)를 수득하였다. HRMS [M+H]⁺ m/z 계산치: 811.3262, 실측치: 811.3267. ¹ H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.85 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.81 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 2H), 6.22 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.4, 1.8 Hz, 2H), 4.54-4.32 (m, 2H), 4.07-3.79 (m, 4H), 3.45 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.24 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.46 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.77 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.65-1.59 (m, 2H), 1.52 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.40-1.32 (m, 2H), 1.18 (q, J = 3.9 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.7, 167.4, 165.0, 155.5, 148.9, 144.8, 144.1, 143.6, 141.0, 140.2, 134.9, 134.8, 131.8, 128.4, 127.5, 127.0, 126.6, 126.6, 126.3, 112.9, 112.4, 110.2, 107.4, 100.9, 39.7, 39.1, 31.2, 29.0, 24.2, 23.7, 19.2, 17.2.

화합물 203의 합성

tert -부틸(6-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)헥실)카르바메이트(4d): 루마카프토르(100 ㎎, 0.22 mmol) 및 tert-부틸(6-아미노헥실)카르바메이트를 일반 절차 A에 따라 반응시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 중간체 4d(114 ㎎, 0.18 mmol, 80%)를 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 651.3, 실측치: 651.2. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (dt, J = 7.6, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.58 (s, 1H), 3.48 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 3.17 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.69-1.64 (m, 1H), 1.58-1.49 (m, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.45-1.38 (m, 6H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(6-아미노헥실)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드)(5d): 일반 절차 B에 따라 4d(114 ㎎, 0.18 mmol)를 탈보호하여 오일로서 아민(5d)(99 ㎎, 0.18 mmol, 정량)을 제공하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 551.2, 실측치: 551.2. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.74 (dt, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.17 (s, 1H), 3.44 (td, J = 7.2, 5.8 Hz, 2H), 2.68 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.99 (s, 1H), 1.81 (s, 1H), 1.74 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.67-1.55 (m, 3H), 1.51-1.33 (m, 5H), 1.16 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(6-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)헥실)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 203): 일반 절차 C에 따라 3(30 ㎎, 0.086 mmol)을 탈보호하고, 5d(16 ㎎, 0.029 mmol)에 결합시켜 투명한 무색 오일로서 화합물 203(17.4 ㎎, 0.021 mmol, 73%)을 제공하였다. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 825.3345, 실측치: 825.3425. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89-7.79 (m, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 31.0 Hz, 2H), 6.41 (dd, J = 16.8, 1.9 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 39.7 Hz, 1H), 5.83 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 21.6 Hz, 2H), 4.05-3.81 (m, 4H), 3.74 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 3.45 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 3.22 (dq, J = 13.2, 6.9 Hz, 3H), 2.94 (q, J = 6.4, 5.5 Hz, 2H), 2.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.78 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.61 (p, J = 6.9 Hz, 2H), 1.42-1.30 (m, 3H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.8, 167.3, 155.5, 149.7, 148.9, 144.7, 144.1, 143.6, 141.0, 140.2, 134.9, 134.9, 133.4, 131.7, 131.7, 130.0, 128.5, 127.5, 127.0, 126.6, 126.6, 126.4, 112.9, 112.4, 110.2, 107.3, 100.8, 55.6, 43.6, 39.6, 39.1, 34.8, 31.2, 29.4, 29.3, 26.0, 25.9, 24.2, 19.1, 18.6, 17.2, 12.5.

화합물 204의 합성

tert -부틸(2-(2-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)에톡시)에틸)카르바메이트(4e): 루마카프토르(100 ㎎, 0.22 mmol) 및 tert-부틸(2-(2-아미노에톡시)에틸)카르바메이트(57 ㎎, 0.28 mmol)를 일반 절차 A에 따라 반응시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 무색 오일로서 4e(122 ㎎, 0.19 mmol, 87%)를 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 639.3, 실측치: 639.2. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.81 (dt, J = 7.5, 1.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.59 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.87 (s, 1H), 3.74-3.62 (m, 4H), 3.58 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.41-3.31 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(2-(2-아미노에톡시)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5e): 일반 절차 B에 따라 4e(122 ㎎, 0.19 mmol)를 탈보호하여 오일로서 아민(5e)(102 ㎎, 0.19 mmol, 정량)을 제공하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 539.2 실측치: 639.2. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.91 (s, 0H), 3.70 (tdd, J = 7.9, 4.0, 1.2 Hz, 4H), 3.55 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.91 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(2-(2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)에톡시)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 204). 일반 절차 C에 따라 3(30 ㎎, 0.086 mmol)을 탈보호하고, 중간체 5e(23 ㎎, 0.043 mmol)에 결합시켜 발포체로서 화합물 204(10.9 ㎎, 0.0134 mmol, 31%의 수율)를 제공하였다. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 813.31, 실측치: 813.3055. ¹ H NMR (600 MHz, 클로로포름-d) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (dt, J = 7.6, 1.4 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.39 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.4, 1.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.73 (hept, J = 6.6 Hz, 2H), 3.63 (d, J = 4.1 Hz, 4H), 3.53 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.41 (q, J = 5.3 Hz, 2H), 3.19 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.89 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.47 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 1.18 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 0.12-0.06 (m, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.77, 167.53, 165.03, 155.44, 149.75, 148.91, 144.71, 144.11, 143.59, 140.95, 140.22, 134.94, 134.55, 131.91, 131.68, 128.46, 127.72, 126.98, 126.64, 126.36, 112.96, 112.39, 110.21, 107.27, 100.91, 69.63, 69.50, 55.72, 53.43, 43.65, 39.83, 39.18, 34.69, 31.20, 24.08, 19.14, 17.18, 12.52.

화합물 205의 합성

tert -부틸(2-(2-(2-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트(4f): 루마카프토르(100 ㎎, 0.22 mmol) 및 tert-부틸(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트(70 ㎎, 0.28 mmol)를 일반 절차 A에 따라 반응시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 80% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 4f(127 ㎎, 0.19 mmol, 85%)를 수득하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 683.3, 실측치: 683.3. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.80 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.77-7.72 (m, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 5.02 (s, 1H), 3.75-3.61 (m, 8H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.31 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5f): 일반 절차 B에 따라 4f(127 ㎎, 0.19 mmol)를 탈보호하여 오일로서 아민(5f)(111 ㎎, 0.19 mmol, 정량)을 제공하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 583.2, 실측치: 583.3. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.83 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.73-3.62 (m, 9H), 3.51 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.82 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(2-(2-(2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)에톡시)에톡시)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 205). 일반 절차 C에 따라 중간체 3(30 ㎎, 0.086 mmol)을 탈보호하고, 중간체 5f(25 ㎎, 0.043 mmol)에 결합시켜 오일로서 화합물 205(11.6 ㎎, 0.0134 mmol, 31%의 수율)을 제공하였다. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 857.33, 실측치: 857.3319. ¹ H NMR (600 MHz, 클로로포름-d) δ 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 (tt, J = 1.8, 1.2 Hz, 1H), 7.79 (ddd, J = 7.7, 1.8, 1.2 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62-7.58 (m, 1H), 7.55 (ddd, J = 7.6, 1.7, 1.2 Hz, 1H), 7.48 (td, J = 7.7, 0.6 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.18 (s, 1H), 6.05 (dd, J = 3.3, 1.0 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.5, 1.8 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.40 (d, J = 39.8 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 47.9 Hz, 1H), 3.85 (s, 2H), 3.70-3.58 (m, 7H), 3.50 (dd, J = 5.6, 4.8 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.47 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 1H), 1.76 (q, J = 3.8 Hz, 2H), 1.47 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 1.18 (p, J = 3.8 Hz, 2H). ¹³ C NMR 151 MHz, CDCl₃) δ 171.78, 171.54, 167.31, 164.98, 155.46, 148.91, 144.68, 144.12, 143.60, 140.94, 140.25, 134.93, 134.64, 131.88, 131.68, 128.46, 127.72, 126.98, 126.63, 126.51, 126.34, 113.00, 112.39, 110.19, 107.18, 100.77, 70.23, 70.18, 69.80, 55.62, 53.43, 43.58, 39.81, 39.16, 34.67, 31.20, 30.92, 23.97, 19.13, 17.19, 12.47, 1.02.

화합물 206의 합성

tert -부틸(1-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)페닐)-1-옥소-5,8,11-트리옥사-2-아자트리데칸-13-일)카르바메이트(4g): 루마카프토르(100 ㎎, 0.22 mmol) 및 tert-부틸(2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)-에틸)카르바메이트(82 ㎎, 0.28 mmol)를 일반 절차 A에 따라 반응시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 4g(139 ㎎, 0.19 mmol, 87%)를 수득하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 727.3, 실측치: 727.2. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.82 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 3.73-3.66 (m, 9H), 3.64 (dd, J = 6.1, 3.2 Hz, 2H), 3.59 (dd, J = 6.1, 3.2 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.30 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(5g): 일반 절차 B에 따라 4g(139 ㎎, 0.19 mmol)를 탈보호하여 오일로서 아민(5g)(119 ㎎, 0.19 mmol, 정량)을 제공하였다. LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 627.3, 실측치: 627.3. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.93 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.87 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.62 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.55 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.73-3.63 (m, 9H), 3.61 (dt, J = 6.0, 1.8 Hz, 4H), 3.48-3.43 (m, 2H), 2.82-2.75 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.79 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

N-(15-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-13-옥소-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데실)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 206). 일반 절차 C에 따라 3(30 ㎎, 0.086 mmol)을 탈보호하고, 중간체 5g(27 ㎎, 0.043 mmol)에 결합시켜 오일로서 화합물 206(13.7 ㎎, 0.0152 mmol, 35%의 수율)을 제공하였다. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 901.36, 실측치: 901.3584. ¹ H NMR ¹ H NMR (600 MHz, 클로로포름-d) δ 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.87 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.80 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.4, 1.8 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 35.7 Hz, 2H), 3.95 (d, J = 50.4 Hz, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.70-3.62 (m, 8H), 3.62-3.57 (m, 2H), 3.57-3.52 (m, 2H), 3.47 (dd, J = 5.6, 4.6 Hz, 2H), 3.39 (q, J = 5.3 Hz, 2H), 2.93 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.47 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 1H), 1.76 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.18 (q, J = 3.9 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.78, 171.50, 167.25, 164.97, 155.52, 148.90, 144.64, 144.13, 143.60, 140.92, 140.21, 134.93, 134.65, 133.37, 131.81, 131.68, 129.98, 128.40, 127.78, 126.98, 126.62, 126.59, 126.35, 112.96, 112.38, 110.20, 107.12, 100.70, 70.43, 70.38, 70.18, 70.07, 69.85, 69.82, 53.43, 39.81, 39.19, 34.59, 31.20, 30.92, 23.93, 19.13, 17.18.

알킨-링커-화합물 100의 합성

N-(5-아미노펜틸)-4-에티닐벤즈아미드(11): 4-에티닐벤조산(27 ㎎, 0.19 mmol), N-Boc-1,5-디아미노펜탄(47 ㎎, 0.23 mmol), HOBt(26 ㎎, 0.19 mmol) 및 DIEA(165 ㎖, 0.95 mmol)를 DCM(1.5 ㎖) 중에 용해하고, EDCI-HCl(73 ㎎, 0.38 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반한 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 분배하였으며, 수성상을 DCM으로 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 Boc-보호된 아민(11)(27 ㎎, 0.082 mmol, 43%)을 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 331.19, 실측치: 331.1. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.32 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 3.50 (td, J = 7.0, 5.7 Hz, 2H), 3.23(s, 1H), 3.18 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 1.70 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 1.62-1.52 (m, 2H), 1.46 (s, 11H).

N-(5-아미노펜틸)-4-에티닐벤즈아미드(12): tert-부틸(5-(4-에티닐벤즈아미도)펜틸)-카르바메이트(11)(27 ㎎, 0.082 mmol)를 DCM(1 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.5 ㎖)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 DCM 중에서 희석하고, 반복적으로 증발시켜 휘발성 물질을 제거하고, TFA 염이면서 오일로서 아민(32 ㎎, 0.096 mmol, 117%)을 제공하였으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 231.14, 실측치: 231.1. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.55 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.63 (s, 2H), 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.39 (s, 1H), 3.26 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.83-2.74 (m, 2H), 1.62-1.48 (m, 4H), 1.40-1.32 (m, 2H).

N-(5-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)펜틸)-4-에티닐벤즈아미드(화합물 100): 중간체 1인 tert-부틸 3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트(20 ㎎, 0.057 mmol)를 DCM(0.5 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.25 ㎖)로 처리하였다. 출발 물질이 소모될 때까지 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반한 후, DCM으로 희석하고, 증발시켜 휘발성 물질을 제거하였다. 이어서, 카르복실산을 DMF 중에 용해하고, 12(N-(5-아미노펜틸)-4-에티닐벤즈아미드 TFA; 22 ㎎, 0.062 mmol), DIEA(50 ㎖, 0.29 mmol) 및 HATU(43 ㎎, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 물을 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 DCM으로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, Na₂SO₄ 상에서 건조하고, 농축하고, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 4% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 오일로서 화합물 100(7.6 ㎎, 0.016 mmol, 27%)을 수득하였다. HRMS [M+H]⁺ m/z 계산치: 380.1586, 실측치: 380.1581. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.82 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.58 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.77-6.50 (m, 2H), 6.43 (dd, J = 16.7, 2.1 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.93 (s, 1H), 5.86 (dd, J = 10.1, 2.1 Hz, 1H), 4.44 (d, J = 17.4 Hz, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.91-3.84 (m, 2H), 3.46 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.32-3.19 (m, 3H), 2.93 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.72-1.61 (m, 2H), 1.60-1.46 (m, 2H), 1.44-1.35 (m, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.0, 165.7, 164.6, 150.1, 135.2, 132.1, 128.8, 127.9, 124.7, 106.9, 100.5, 83.4, 83.1, 38.9, 33.8, 29.3, 29.2, 24.3, 24.0.

화합물 226의 합성

tert -부틸 3-(5-(2-옥소-4-프로피오닐피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트(10): 중간체 2(벤질 (E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트)(85 ㎎, 0.20 mmol)를 EtOH(5 ㎖) 중에 용해하고, Pd/C(10 ㎎, 10 중량%)를 첨가하였다. 분위기를 수소(벌룬)로 교체하고, 혼합물을 하룻밤 동안 격렬하게 교반하였다. 16시간 후, 현탁액을 DCM으로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하여 Pd/C를 제거한 후, 농축하였다. 미정제 잔류물을 DCM(2 ㎖) 중에 다시 용해하고, TEA(83 ㎕, 0.60 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 용액을 0℃까지 냉각시키고, 프로피오닐 클로라이드(25 ㎕, 0.31 mmol)를 첨가하였으며, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 고체로서 중간체 10(48 ㎎, 0.14 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 69%의 수율)을 제공하였다. ¹ H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 6.28 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.91 (dt, J = 30.8, 5.3 Hz, 2H), 3.85-3.78 (m, 2H), 2.88 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.43-2.34 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.19 (q, J = 6.9 Hz, 3H).LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 351.2, 실측치: 351.2.

3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)-N-(5-(3-(5-(2-옥소-4-프로피오닐피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)펜틸)벤즈아미드(화합물 226): 중간체 10(15 ㎎, 0.043 mmol) 및 중간체 5c(15 ㎎, 0.029 mmol)를 일반 절차 C에 따라 반응시켜 오일로서 화합물 226(18 ㎎, 0.022 mmol, 76%)을 제공하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.79 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.51-6.39 (m, 1H), 6.22-6.15 (m, 1H), 6.02-5.97 (m, 1H), 5.88-5.76 (m, 1H), 4.31 (d, J = 50.6 Hz, 2H), 3.96-3.71 (m, 4H), 3.42 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.92-2.82 (m, 2H), 2.44 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.41-2.29 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.74 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.64-1.56 (m, 2H), 1.53-1.43 (m, 2H), 1.38-1.26 (m, 2H), 1.21-1.09 (m, 5H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 206.9, 172.2, 171.8, 167.3, 155.4, 149.8, 148.9, 144.9, 144.1, 143.6, 141.0, 140.1, 134.9, 134.8, 131.7, 131.7, 128.4, 127.5, 127.0, 126.6, 113.0, 112.4, 110.2, 107.3, 100.9, 53.4, 49.3, 47.2, 42.4, 39.7, 39.1, 38.7, 34.9, 31.2, 29.0, 26.5, 24.2, 23.8, 19.1, 17.2, 9.0. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 813.3345, 실측치: 813.3422.

화합물 101의 합성

1-(5-메틸푸란-2-일)-4-프로피오닐피페라진-2-온: 1-(5-메틸푸란-2-일)피페라진-2-온(30 ㎎, 0.17 mmol)을 DCM(2 ㎖) 중에 용해하였다. 용액을 0℃까지 냉각시키고, TEA(69 ㎕, 0.50 mmol) 및 프로피오닐 클로라이드(21 ㎕, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 물을 첨가하고, 반응물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 1-(5-메틸푸란-2-일)-4-프로피오닐피페라진-2-온(17.3 ㎎, 0.073 mmol, 43%)을 제공하였다. ¹ H NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 6.25 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.29 (s, 1H), 3.97-3.86 (m, 2H), 3.82 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.45-2.34 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.23-1.16 (m, 3H). ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 172.2, 163.4, 147.5, 144.4, 107.2, 101.0, 49.3, 46.9, 38.8, 26.5, 13.4, 9.0. ¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 172.2, 163.4, 147.5, 144.4, 107.2, 101.0, 49.3, 46.9, 38.8, 26.5, 13.4, 9.0. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 259.1160, 실측치: 259.1053.

화합물 220의 합성

tert -부틸 4-(4-((2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디하이드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-카르복실레이트(중간체 7). 상업적으로 구매 가능한 중간체 6인 2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(250 ㎎, 0.7 mmol)을 7 ㎖의 톨루엔 중에 용해하고, 0℃까지 냉각시켰다. 얼음 상의 반응 혼합물에 메타-클로로퍼옥시벤조산(190 ㎎, 0.77 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, N,N-디이소프로필에틸아민(365 ㎖, 2.1 mmol) 및 1-피페라진-카르복실산, 4-(4-아미노페닐)-1,1-디메틸에틸 에스테르(232 ㎎, 0.84 mmol)를 천천히 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 염수로 3회 세척하고, 실리카 상에서 건조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(DCM/헥산 5:95)에 의한 정제에 의해 중간체 7(0.445 mmol, 64%의 수율)이 수득되었다.

¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.99 (s, 1H), 7.95 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.1, 0.8 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 7.7, 0.8 Hz, 1H), 5.83-5.65 (m, 1H), 5.13-5.04 (m, 1H), 4.97 (dq, J = 17.1, 1.4 Hz, 1H), 4.85 (dt, J = 6.2, 1.4 Hz, 2H), 3.80 (s, 1H), 2.63 (s, 3H), 1.63 (s, 6H).

LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치:

2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((4-(피페라진-1-일)페닐)아미노)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(중간체 8). 중간체 7(261 ㎎, 0.445 mmol)을 4 ㎖의 DCM 중에 용해하고, 0℃까지 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 얼음 상에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, DCM 중에서 추출하고, 염수로 3회 세척하고, 실리카 상에서 건조하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(DCM/헥산 5:95)에 의한 정제에 의해 중간체 8(0.398 mmol, 89%의 수율)이 수득되었다. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.84 (s, 1H), 7.86 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.78-5.59 (m, 1H), 5.04 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.94 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 4.74 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.94 (s, 1H), 3.60 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 3.11 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 2.05 (s, 1H), 1.59 (s, 6H), 1.49 (s, 9H).LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치:

6-((4-(4-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피페라진-1-일)페닐)아미노)-2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(화합물 220). LEB-03-139(0.0449 mmol)를 3 ㎖의 DCM 중에 용해하고, 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 적가하고, 용액을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 탈보호된 아민 염을 DCM으로 2회 세척하고, 진공 하에 건조하였다. 탈 보호 직후, 미정제 생성물을 0.5 ㎖ DMF 중에 보호하고, 탈보호된 중간체 3(0.898 mmol)을 혼합물에 첨가한 후, DIPEA(0.449 mmol) 및 HATU(0.0898 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 30분 동안 교반한 후, 물을 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하고, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(MeOH:DCM 8:92)에 의한 정제에 의해 고체로서 화합물 220(12.9 ㎎, 0.0169 mmol, 38%의 수율)이 수득되었다. ¹ H NMR (600 MHz, 클로로포름-d) δ 8.76 (s, 1H), 7.80 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.87-6.82 (m, 2H), 6.45 (s, 1H), 6.34 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.01 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.74 (t, J = 11.1, 10.6 Hz, 1H), 5.67-5.59 (m, 1H), 5.23(s, 1H), 4.97 (dd, J = 9.8, 0.8 Hz, 1H), 4.87 (dd, J = 17.4, 0.8 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.38 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.73 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.55 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.06 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.92 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.62 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 1.59 (s, 4H), 1.52 (s, 6H). ¹³ C NMR (151 MHz, 클로로포름-d) δ 169.96, 165.90, 165.00, 162.18, 161.36, 161.26, 156.36, 150.16, 147.68, 147.51, 144.67, 138.85, 131.56, 131.29, 126.30, 119.07, 117.20, 116.21, 116.12, 107.23, 101.12, 72.46, 50.15, 49.85, 49.49, 47.67, 45.40, 41.64, 31.55, 30.56, 23.71. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 761.35, 실측치: 761.3522.

화합물 221의 합성

2-알릴-6-((4-(4-(3-아미노프로필)피페라진-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(중간체 12). 중간체 8(40 ㎎, 0.0823 mmol)을 0.5 ㎖의 DMF 중에 용해하였다. tert-부틸(3-브로모프로필)카르바메이트(24 ㎎, 1.2 당량, 0.0987 mmol) 및 탄산칼륨(34 ㎎, 3.0 당량, 0.247 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응물을 50℃까지 가온하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였으며, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산 50:50)에 의한 정제에 의해 boc-보호된 중간체가 수득되었다. 이를 3 ㎖의 DCM 중에 즉시 용해하고, 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 적가하고, 용액을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 탈보호된 아민 TFA 염을 DCM으로 2회 세척하고, 진공 하에 건조하여 오일로서 중간체 12(33 ㎎, 0.0497 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 60%의 수율)를 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 8.80 (s, 1H), 7.92 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.4 Hz, 3H), 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 5.75-5.54 (m, 1H), 5.05 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.66 (s, 1H), 3.43 (s, 9H), 3.28 (q, J = 9.4, 8.5 Hz, 2H), 3.19 (s, 1H), 3.06 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.23(d, J = 8.2 Hz, 3H), 1.59 (s, 6H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 544.3, 실측치: 544.3.

3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-(3-(4-(4-((2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디하이드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)프로필)프로펜아미드(화합물 221). 중간체 3(19 ㎎, 0.0558 mmol) 및 중간체 12(0.0497 mmol)를 일반 절차 C에 따라 반응시켰다. 가수분해 후, 탈호보된 3 및 중간체 12를 DMF(0.5 ㎖) 중에 용해한 후, DIPEA(43 ㎖, 0.249 mmol) 및 HATU(23 ㎎, 0.0596 mmol) 중에 용해하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 4:1 CHCl₃:IPA로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 분취용 TLC(DCM 중의 10% MeOH)에 의한 정제에 의해 고체로서 화합물 221(8.1 ㎎, 0.0099 mmol, 20%의 수율)이 수득되었다. ¹ H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 10.07 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.83 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.51 (s, 2H), 6.85 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.80-6.72 (m, 1H), 6.16-6.08 (m, 2H), 6.04 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.71-5.66 (m, 1H), 5.64-5.55 (m, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.92 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 17.0 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.27 (d, J = 93.6 Hz, 2H), 3.95-3.63 (m, 4H), 3.02 (q, J = 6.4 Hz, 6H), 2.73 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.55-1.47 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.17 (s, 6H), 0.80-0.74 (m, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.0, 168.0, 164.6, 161.6, 156.5, 150.1, 139.3, 132.7, 131.3, 128.8, 118.7, 116.8, 115.9, 106.9, 100.5, 72.8, 55.9, 53.2, 49.2, 47.6, 47.1, 46.9, 42.5, 37.4, 34.7, 33.8, 31.4, 30.9, 29.5, 26.9, 25.3, 24.0, 22.6, 22.5, 14.4. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 818.41, 실측치: 818.4101.

화합물 222의 합성

2-알릴-6-((4-(4-(5-아미노펜틸)피페라진-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(중간체 13). 중간체 8(40 ㎎, 0.0823 mmol)을 0.5 ㎖의 DMF 중에 용해하였다. tert-부틸(5-브로모펜틸)카르바메이트(26 ㎎, 1.2 당량, 0.0987 mmol) 및 탄산칼륨(34 ㎎, 3.0 당량, 0.247 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응물을 50℃까지 가온하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였으며, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산 50:50)에 의한 정제에 의해 boc-보호된 중간체가 수득되었다. 이를 3 ㎖의 DCM 중에 즉시 용해하고, 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 적가하고, 용액을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 탈보호된 아민 TFA 염을 DCM으로 2회 세척하고, 진공 하에 건조하여 오일로서 중간체 13(21 ㎎, 0.0307 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 37%의 수율)을 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 8.80 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.94 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.2 Hz, 3H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.67 (dd, J = 16.8, 10.4 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 3.69 (s, 1H), 3.55-3.47 (m, 8H), 3.22 (s, 1H), 3.19-2.89 (m, 4H), 1.91-1.66 (m, 4H), 1.61 (s, 6H), 1.51 (s, 2H), 1.27 (s, 1H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 572.3, 실측치: 572.3.

3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-(5-(4-(4-((2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디하이드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)펜틸)프로판아미드(화합물 222). 중간체 3(19 ㎎, 0.0558 mmol) 및 중간체 13(21 ㎎, 0.0307 mmol)을 일반 절차 C에 따라 결합시켰다. 가수분해 이후, 탈보호된 3 및 중간체 13을 DMF(0.5 ㎖) 중에 용해한 후, DIPEA(27 ㎖, 0.153 mmol) 및 HATU(14 ㎎, 0.0368 mmol) 중에 용해하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 4:1 CHCl₃:IPA로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 분취용 TLC(DCM 중의 8% MeOH)에 의한 정제에 의해 고체로서 화합물 222(10.1 ㎎, 0.0119 mmol, 39%의 수율)가 수득되었다. ¹ H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 10.15 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.78-7.72 (m, 1H), 7.61 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.88-6.76 (m, 1H), 6.24-6.19 (m, 1H), 6.10 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.76 (q, J = 9.8, 8.3 Hz, 1H), 5.72-5.61 (m, 1H), 5.36-5.26 (m, 1H), 5.00 (dq, J = 10.3, 1.3 Hz, 1H), 4.84 (dq, J = 17.2, 1.5 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.43 (s, 1H), 4.27 (s, 1H), 3.95 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 3.86 (s, 1H), 3.82-3.73 (m, 2H), 3.13-3.08 (m, 4H), 3.08-3.01 (m, 2H), 2.80 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.30 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.47 (s, 6H), 1.45-1.37 (m, 2H), 1.26-1.21 (m, 6H), 0.89-0.81 (m, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 170.97, 168.04, 161.64, 156.46, 150.07, 139.28, 132.67, 128.77, 118.72, 115.93, 106.92, 100.44, 72.78, 58.33, 53.28, 49.17, 47.57, 47.06, 46.88, 42.46, 38.88, 33.80, 30.92, 29.54, 29.48, 29.16, 26.48, 24.81, 24.00, 22.56, 14.42. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 846.44, 실측치: 846.4395.

화합물 223의 합성

2-알릴-6-((4-(4-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(중간체 14). 중간체 8(40 ㎎, 0.0823 mmol)을 0.5 ㎖의 DMF 중에 용해하였다. tert-부틸(2-(2-(브로모메톡시)에톡시)에틸)카르바메이트(31 ㎎, 1.2 당량, 0.0987 mmol) 및 탄산칼륨(34 ㎎, 3.0 당량, 0.247 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응물을 50℃까지 가온하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였으며, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산 50:50)에 의한 정제에 의해 boc-보호된 중간체가 수득되었다. 이를 3 ㎖의 DCM 중에 즉시 용해하고, 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 적가하고, 용액을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 탈보호된 아민 TFA 염을 DCM으로 2회 세척하고, 진공 하에 건조하여 중간체 14(28 ㎎, 0.0389 mmol, 47%의 수율)를 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 10.99 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.97 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.66 (ddd, J = 16.5, 10.3, 5.6 Hz, 1H), 5.07 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.75 (d, J = 6.3 Hz, 4H), 3.87 (d, J = 4.6 Hz, 4H), 3.76-3.69 (m, 4H), 3.65 (s, 4H), 3.39-3.10 (m, 8H), 1.61 (s, 6H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 618.3, 실측치: 618.3.

3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-(2-(2-(2-(4-(4-((2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디하이드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에틸)프로판아미드(화합물 223). 중간체 3(19 ㎎, 0.0558 mmol) 및 중간체 14(28 ㎎, 0.0389 mmol)을 일반 절차 C에 따라 결합시켰다. 가수분해 이후, 탈보호된 3 및 중간체 14를 DMF(0.5 ㎖) 중에 용해한 후, DIPEA(34 ㎖, 0.195 mmol) 및 HATU(18 ㎎, 0.0466 mmol) 중에 용해하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 4:1 CHCl₃:IPA로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 분취용 TLC(DCM 중의 8% MeOH)에 의한 정제에 의해 고체로서 화합물 223(8.3 ㎎, 0.0093 mmol, 17%의 수율)이 수득되었다. ¹ H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 8.83 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.97 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.61 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 3H), 6.92 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.81 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 6.23-6.15 (m, 2H), 6.10 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 5.67 (ddt, J = 16.5, 10.8, 6.0 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 5.04-4.97 (m, 1H), 4.87-4.80 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.42 (s, 1H), 4.26 (s, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.85 (s, 1H), 3.77 (d, J = 24.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.54-3.49 (m, 6H), 3.42 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.22 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 3.09 (d, J = 5.8 Hz, 4H), 2.79 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.58 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.44-2.36 (m, 4H), 1.47 (s, 6H), 0.86 (d, J = 7.4 Hz, 1H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.31, 168.04, 161.64, 156.46, 150.02, 139.28, 132.68, 128.76, 118.72, 115.93, 106.93, 100.44, 72.78, 70.12, 70.04, 69.58, 68.89, 57.72, 53.63, 49.14, 47.07, 46.88, 42.46, 39.07, 33.65, 30.92, 29.49, 23.89, 14.42. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 892.45, 실측치: 892.4454.

화합물 224의 합성

2-알릴-6-((4-(4-(2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에틸)피페라진-1-일)페닐)아미노)-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디하이드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온(중간체 15). 중간체 8(40 ㎎, 0.0823 mmol)을 0.5 ㎖의 DMF 중에 용해하였다. tert-부틸(2-(2-(2-(브로모메톡시)에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트(35 ㎎, 1.2 당량, 0.0987 mmol) 및 탄산칼륨(34 ㎎, 3.0 당량, 0.247 mmol)을 혼합물에 첨가하고, 반응물을 50℃까지 가온하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였으며, 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 플래시 칼럼 크로마토그래피(EtOAc:헥산 50:50)에 의한 정제에 의해 boc-보호된 중간체가 수득되었다. 이를 3 ㎖의 DCM 중에 즉시 용해하고, 반응 혼합물을 얼음 상에서 냉각시켰다. 1 ㎖의 트리플루오로아세트산을 적가하고, 용액을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 탈보호된 아민 TFA 염을 DCM으로 2회 세척하고, 진공 하에 건조하여 오일로서 중간체 15(22 ㎎, 0.0279 mmol, 34%의 수율)를 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, 클로로포름-d) δ 11.44 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.10 (s, 4H), 8.00 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 6.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.69 (ddt, J = 16.5, 10.1, 6.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 17.1 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.98-3.77 (m, 5H), 3.77-3.63 (m, 9H), 3.33 (d, J = 59.7 Hz, 8H), 1.64 (s, 6H), 1.29 (s, 1H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 662.3, 실측치: 662.4.

3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-(2-(2-(2-(2-(4-(4-((2-알릴-1-(6-(2-하이드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디하이드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)페닐)피페라진-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)프로판아미드(화합물 224). 중간체 3(19 ㎎, 0.0558 mmol) 및 중간체 15(22 ㎎, 0.0279 mmol)를 일반 절차 C에 따라 결합시켰다. 가수분해 이후, 탈보호된 3 및 중간체 14를 DMF(0.5 ㎖) 중에 용해한 후, DIPEA(49 ㎖, 0.279 mmol) 및 HATU(21 ㎎, 0.0558 mmol) 중에 용해하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 4:1 CHCl₃:IPA로 3회 추출하였다. 모은 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 분취용 TLC(DCM 중의 8% MeOH)에 의한 정제에 의해 고체로서 화합물 224(10.0 ㎎, 0.0107 mmol, 19%의 수율)가 수득되었다. ¹ H NMR (600 MHz, DMSO-d₆) δ 10.14 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.97 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.87-6.75 (m, 1H), 6.21 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.11-6.06 (m, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.67 (ddt, J = 16.3, 10.2, 6.0 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 5.00 (dq, J = 10.2, 1.4 Hz, 1H), 4.84 (dq, J = 17.1, 1.5 Hz, 1H), 4.69 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.26 (s, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.77 (d, J = 24.9 Hz, 2H), 3.59-3.48 (m, 9H), 3.41 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.21 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 3.09 (d, J = 5.3 Hz, 4H), 2.83-2.76 (m, 2H), 2.57 (t, J = 5.0 Hz, 4H), 2.51 (p, J = 1.9 Hz, 9H), 1.47 (s, 6H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO-d₆) δ 171.30, 164.62, 156.47, 150.02, 147.70, 139.28, 132.68, 128.76, 118.72, 116.75, 115.93, 106.92, 100.44, 72.78, 70.26, 70.23, 70.17, 70.08, 69.59, 68.87, 57.72, 55.38, 53.62, 49.15, 47.54, 47.07, 46.87, 42.45, 39.05, 33.64, 30.92, 23.88. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 936.47, 실측치: 936.4723

추가적인 이작용성 화합물을 본원에 기재된 절차에 따라 제조하였다. 이들 화합물의 특성분석은 하기에 제공된다.

N-(6-(3-(2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)-2,8-디아자스피로[4.5]-데칸-8-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 207)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.11 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 3H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.25-7.20 (m, 1H), 7.19 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 8.2, 3.9 Hz,1H), 6.52 (s, 1H), 6.44-6.36 (m, 1H), 6.25 (dd, J = 3.2, 2.2 Hz, 1H), 6.05 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.49-4.36 (m, 2H), 4.06-3.76 (m, 5H), 3.62-3.17 (m, 7H), 2.96 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.57 (dd, J = 8.7, 6.4 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.11 (d, J = 15.1 Hz, 2H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.75 (q, J = 3.8 Hz, 2H), 1.54-1.39 (m, 2H), 1.17 (q, J = 4.1 Hz, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.83, 170.42, 170.19, 169.97, 169.92, 164.98, 154.97, 150.26, 148.76, 144.60, 144.12, 143.62, 141.43, 139.60, 135.93, 135.85, 134.85, 131.69, 130.31, 130.23, 128.45, 127.68, 127.12, 126.82, 126.68, 126.29, 113.10, 112.42, 110.20, 107.11, 101.12, 56.64, 54.66, 44.71, 44.04, 41.63, 39.62, 36.60, 33.97, 33.08, 32.74, 31.23, 29.72, 23.40,19.18, 17.27. ¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.52

HRMS (TOF, ES+): C₄₆H₄₇F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 849.3423; 실측치: 849.3419

N-(6-(3-(4-(2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-메틸프로판아미도)-에틸)-피페리딘-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 208)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.14 (s, 1H), 7.82-7.52 (m, 2H), 7.50-7.43 (m, 3H), 7.40 (s, 1H), 7.23(dt, J = 8.3, 2.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 8.2, 5.6 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 6.45-6.33 (m, 1H), 6.26 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.84-5.76 (m, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.50-4.33 (m, 2H), 4.05-3.69 (m, 5H), 3.54-3.18 (m, 2H), 3.05-2.86 (m, 6H), 2.76 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 2.64-2.55 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.89-1.73 (m, 3H), 1.54-1.44 (m, 3H), 1.35-1.28 (m, 1H), 1.23-1.04 (m, 4H).

¹³ C: (101 MHz, CDCl₃) δ 171.10, 170.9, 164.97, 150.26, 144.52, 144.15, 143.67, 134.21, 131.70, 130.05, 128.40, 127.69, 126.69, 126.31, 112.46, 110.20, 107.09, 100.97, 47.46, 45.37, 35.07, 34.92, 33.91, 33.67, 33.54, 31.86, 31.32, 29.72, 23.78, 23.55, 19.15, 17.27.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.50, -49.52

HRMS (TOF, ES+): C₄₆H₄₉F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 851.3580; 실측치: 851.3572

N-((1-(1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(화합물 209)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.18 (br s, 1H), 8.01-7.59 (m, 5H), 7.58-7.44 (m, 3H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.39 (dd, J = 16.7, 1.9 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 10.3, 1.9 Hz, 1H), 4.78-4.67 (m, 3H), 4.63 (tt, J = 11.3, 4.1 Hz, 1H), 4.47-4.33 (m, 2H), 4.07-3.79 (m, 5H), 3.22 (ddd, J = 14.2, 11.9, 2.8 Hz, 1H), 2.97 (td, J = 7.6, 2.8 Hz, 2H), 2.90-2.78 (m, 1H), 2.68 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.41-2.13 (m, 5H), 2.01-1.84 (m, 2H), 1.77 (q, J = 4.0 Hz, 2H), 1.21 (s, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 169.91, 167.08, 164.98, 150.02, 144.71, 144.20, 143.75, 134.23, 131.97, 131.69, 129.94, 129.15, 128.68, 126.71, 126.33, 120.54, 112.46, 110.24, 107.36, 101.06, 57.82, 49.45, 46.82, 44.13, 40.51, 35.57, 32.74, 32.09, 31.98, 31.45, 23.78, 19.02, 17.43.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.46

HRMS (TOF, ES+): C₄₆H₄₆F₂N₉O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 890.3437; 실측치: 890.3433.

N-(1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)-N-메틸벤즈아미드(화합물 210)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (s, 1H), 7.76-7.55 (m, 1H), 7.51-7.43 (m, 3H), 7.39 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.77 (s, 2H), 4.50-4.32 (m, 2H), 4.09-3.71 (m, 6H), 3.17 (s, 1H), 2.96 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.93-2.75 (m, 3H), 2.66 (s, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.81-1.72 (m,3H), 1.59 (s, 2H), 1.37-1.28 (m, 1H), 1.18 (s, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 169.70, 164.97, 150.17, 144.62, 144.16, 143.65, 131.69, 130.14, 128.39, 126.68, 126.30, 112.46, 110.21, 107.16, 100.94, 69.02, 49.37, 44.78, 39.08, 31.50, 29.72, 23.72, 19.21, 17.26.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.56

HRMS (TOF, ES+): C₄₄H₄₅F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 823.3267; 실측치: 823.3247

N-(6-(3-(4-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피페라진-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 213)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54-7.45 (m, 3H), 7.40 (dt, J = 7.4, 1.6 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.48-4.36 (m, 2H), 4.05-3.83 (m, 4H), 3.80-3.37 (m, 8H), 2.97 (dd, J = 8.8, 6.4 Hz, 2H), 2.65 (d, J = 9.4 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.74 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.16 (q, J = 3.9 Hz, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.75, 170.24, 170.14, 164.97, 155.06, 149.93, 148.92, 144.72, 144.13, 143.62, 141.11, 140.28, 135.04, 134.94, 134.23, 131.68, 130.70, 129.99, 129.14, 128.49, 128.00, 126.94, 126.84, 126.62, 126.29, 112.94, 112.44, 110.26, 107.31, 101.08, 49.46, 46.83, 39.06, 31.56, 31.19, 23.60, 19.28, 17.23.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.54

HRMS (TOF, ES+): C₄₂H₄₁F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 795.2954, 실측치: 795.2943

N-(6-(3-(7-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)-2,7-디아자스피로[3.5]-노난-2-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 214)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.80-7.67 (m, 2H), 7.64-7.58 (m, 2H), 7.52 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 4.51-4.31 (m, 2H), 4.06-3.80 (m, 8H), 3.66-3.45 (m, 2H), 3.36 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.94 (dd, J = 8.9, 6.4 Hz, 2H), 2.68-2.57 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.88-1.62 (m, 6H), 1.17 (q, J = 3.8 Hz, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 170.11, 169.84, 164.98, 150.17, 148.82, 144.61, 144.13, 143.63,134.78, 134.23, 133.15, 131.68, 131.57, 129.98, 129.14, 128.63, 128.32, 127.64, 127.05, 126.71, 126.29, 113.07, 112.43, 110.23, 107.17, 101.05, 62.93, 58.32, 49.46, 46.77, 42.44, 39.07, 38.84, 35.67, 34.91, 34.55, 31.54, 31.21, 29.71, 23.71, 19.17, 17.38.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.49

HRMS (TOF, ES+): C₄₅H₄₅F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 835.3267; 실측치: 835.3298

N-(6-(3-(4-(2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)에틸)피페리딘-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 225)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (s, 1H), 7.82-7.54 (m, 2H), 7.49-7.42 (m, 3H), 7.39 (dd, J = 5.4, 3.2 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 5.61 (s, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.51-4.32 (m, 2H), 4.05-3.72 (m, 5H), 3.25 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 2.99-2.87 (m, 3H), 2.73 (s, 1H), 2.48 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.83-1.72 (m, 3H), 1.57-1.47 (m, 2H), 1.42 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.23-1.00 (m, 4H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.45, 169.80, 164.99, 149.89, 148.76, 144.92, 144.14, 143.64, 136.32, 134.87, 134.24, 131.69, 130.07, 129.17, 128.37, 127.68, 127.09, 126.69, 126.26, 112.93, 112.46, 110.21, 107.37, 101.10, 47.99, 42.42, 39.06, 36.98, 36.12, 35.02, 33.69, 32.67, 31.74, 31.26, 24.26, 19.18, 17.25.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.50

HRMS (TOF, ES+): C₄₅H₄₇F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 837.3423, 실측치: 837.3448

N-(6-(3-(4-((3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)-N-메틸프로판아미도)메틸)피페리딘-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 215)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.48-7.43 (m, 3H), 7.38 (dt, J = 6.8, 1.9 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 8.2, 1.7 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.48-4.32 (m, 2H), 4.06-3.69 (m, 5H), 3.40 (s, 1H), 3.27-3.11 (m, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.96-2.91 (m, 3H), 2.81-2.72 (m, 1H), 2.63 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.00-1.87 (m, 1H), 1.79-1.72 (m, 3H), 1.57-1.40 (m, 2H), 1.20-1.12 (m, 3H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.85, 171.66, 169.94, 164.98, 150.27, 148.80, 144.57, 144.11, 143.60, 141.22, 136.21, 134.90, 134.23, 131.68, 130.07, 129.14, 128.44, 128.35, 127.67, 127.07, 126.71, 126.30, 112.88, 112.45, 110.22, 107.11, 100.95, 53.44, 49.46, 39.09, 36.61, 34.92, 31.88, 31.20, 30.53, 29.58, 23.79, 23.57, 19.24,17.27.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.51

HRMS (TOF, ES+): C₄₅H₄₇F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 837.3423; 실측치: 837.3439

N-(6-(3-((3aR,8aS)-2-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)데카하이드로피롤로[3,4-d]아제핀-6-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 216)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.48-7.42 (m, 3H), 7.38 (dt, J = 6.3, 2.0 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.52-4.28 (m, 2H), 4.06-3.79 (m, 5H), 3.74-3.45 (m, 4H), 3.37-3.25 (m, 2H), 3.22-3.11 (m, 1H), 2.95 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.56 (t, J = 8.3 Hz, 3H), 2.53-2.38 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.11-1.97 (m, 1H), 1.85-1.72 (m, 5H), 1.16 (q, J = 3.9 Hz, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.77, 170.94, 170.04, 164.97, 163.22, 155.29, 150.26, 148.85, 144.58, 144.11, 143.60, 141.07, 140.07, 136.55, 134.94, 134.23, 131.68, 130.08, 129.14, 128.43, 127.48, 126.99, 126.70, 126.53, 126.31, 112.89, 112.46, 110.20, 107.11, 100.98, 52.48, 51.83, 51.57, 51.14, 49.46, 47.76, 43.17, 42.94, 40.49, 39.10, 32.86, 31.20, 30.18, 23.39, 19.24, 17.26. ¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.55 HRMS (TOF, ES+): C₄₆H₄₇F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 849.3423; 실측치: 849.3475

N-(6-(3-(4-((1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)아제티딘-3-일)옥시)피페리딘-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 217)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.39 (dt, J = 7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 4.50-4.34 (m, 3H), 4.27-4.16 (m, 2H), 4.12-3.81 (m, 7H), 3.71-3.54 (m, 2H), 3.45 (d, J = 21.9 Hz, 1H), 3.22 (s, 1H), 2.96-2.86 (m, 2H), 2.39 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.26 (s, 3H), 1.88 (s, 1H), 1.80-1.72 (m, 3H), 1.51 (s, 2H), 1.17 (q, J = 3.9 Hz, 2H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.78, 171.58, 169.98, 164.97, 163.22, 155.21, 149.95, 148.84, 144.63, 144.12, 143.61, 141.12, 135.90, 134.94, 134.24, 131.69, 130.25, 129.98, 129.15, 128.43, 127.63, 127.01, 126.69, 126.29, 112.89, 112.46, 110.20, 107.21, 101.04, 73.90, 65.51, 58.03, 55.96, 49.46, 46.72, 44.80, 39.10, 31.96, 31.21, 30.09, 23.25, 19.22, 17.25.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.52

HRMS (TOF, ES+): C₄₆H₄₇F₂N₆O₉ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 865.3373; 실측치: 865.3416

N-(6-(3-(1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)-[3,4'-바이피페리딘]-1'-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 211)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49-7.43 (m, 3H), 7.40 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 7.25-7.22 (m, 1H), 7.20 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.26 (t, J = 3.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.53 (t, J = 13.4 Hz, 1H), 4.48-4.31 (m, 2H), 4.07-3.70 (m, 6H), 3.02-2.87 (m, 4H), 2.77-2.68 (m, 1H), 2.63 (td, J = 7.2, 2.1 Hz, 2H), 2.53-2.35 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.94-1.80 (m, 2H), 1.80-1.70 (m, 4H), 1.47-1.34 (m, 3H), 1.31-1.23(m, 1H), 1.22-1.10 (m, 4H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 169.67, 164.98, 148.74, 144.52, 144.14, 143.64, 134.81, 134.21,131.69, 130.06, 128.41, 127.65, 126.71, 126.30, 113.01, 112.45, 110.22, 107.05, 100.95, 100.86, 49.41, 46.25, 42.69, 41.71, 40.51, 39.08, 31.56, 31.25, 27.87, 25.79, 24.97, 23.72, 19.20, 17.29.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.53

HRMS (TOF, ES+): C₄₈H₅₁F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 877.3736; 실측치: 877.3794

N-(2-(1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피페리딘-4-일)에틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드(218)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.75 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.39 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.19 (s, 1H), 6.05 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 4.67-4.56 (m, 1H), 4.48-4.33 (m, 2H), 4.04-3.77 (m, 5H), 3.49 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 3.03-2.91 (m, 3H), 2.67-2.58 (m, 2H), 2.54 (td, J = 12.9, 2.8 Hz, 1H), 2.25 (s, 3H), 1.85-1.72 (m, 4H), 1.61-1.52 (m, 3H), 1.21-1.08 (m, 4H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.81, 169.64, 169.34, 167.25, 164.98, 155.36, 148.90, 144.49, 144.15, 143.64, 141.04, 140.19, 134.87, 134.23, 131.83, 131.68, 128.55, 127.46, 127.00, 126.66, 126.52, 126.32, 113.00, 112.44, 110.19, 107.10, 100.88, 49.45, 45.68, 42.16, 42.04, 39.07, 37.54, 36.29, 33.83, 32.54, 32.44, 31.84, 31.76, 31.53, 31.20, 23.79, 19.15, 17.28.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.52

HRMS (TOF, ES+): C₄₅H₄₇F₂N₆O₈ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 837.3423; 실측치: 837.3455

N-(6-(3-(4-(((1-(3-(5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노일)피롤리딘-3-일)옥시)메틸)피페리딘-1-카르보닐)페닐)-5-메틸피리딘-2-일)-1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미드(화합물 212)

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.09 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.42 (m, 3H), 7.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.23(dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.40 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 6.26 (dd, J = 3.2, 1.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.2, 2.0 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.48-4.34 (m, 2H), 4.10-3.75 (m, 6H), 3.66-3.58 (m, 1H), 3.54-3.39 (m, 3H), 3.34-3.22 (m, 2H), 3.05-2.87 (m, 3H), 2.81-2.70 (m, 1H), 2.60-2.50 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.12-1.95 (m, 2H), 1.94-1.71 (m, 5H), 1.21-1.04 (m, 4H)

¹³ C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.78, 170.23, 170.02, 169.92, 164.97, 150.29, 148.82, 144.50, 144.13, 143.61, 141.08, 136.23, 134.92, 134.24, 131.69, 130.09, 128.33, 127.73, 127.69, 127.02, 126.67, 126.31, 112.85, 112.44, 110.20, 107.03, 100.93, 78.63, 73.53, 73.39, 52.05, 50.93, 44.59, 43.69, 42.18, 39.06, 36.74, 36.70, 33.03, 32.80, 31.66, 31.21, 29.66, 23.29, 19.25, 17.23.

¹⁹ F: (376 MHz, CDCl₃) δ -49.51, -49.52

HRMS (TOF, ES+): C₄₈H₅₁F₂N₆O₉ (M+H)+에 대한 m/z 계산치: 893.3686; 실측치: 893.3688.

화합물 231의 합성

메틸 2-(4-((벤질옥시)카르보닐)-2-옥소피페라진-1-일)이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복실레이트: 메틸 2-브로모이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복실레이트(100 ㎎, 0.39 mmol), 벤질 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(101 ㎎, 0.43 mmol), 탄산칼륨(161 ㎎, 1.17 mmol), 요오드화제일구리(7.5 ㎎, 0.039 mmol) 및 N,N'-디메틸디아미노에탄(11 ㎖, 0.10 mmol)을 모으고, 질소 하에 1,4-디옥산(2 ㎖) 중에 용해하였다. 혼합물을 진공 하의 초음파 처리 및 질소를 이용한 2회의 백필링(backfilling)에 의해 탈기하였다. 이어서, 반응물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 포화 염화암모늄(1 ㎖) 및 물(5 ㎖)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 추가의 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 80% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(62 ㎎, 0.15 mmol, 39%)을 제공하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 409.14, 실측치: 409.1. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.94-8.89 (m, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 9.4, 1.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.45-7.34 (m, 5H), 5.23(s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.35-4.30 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.92 (t, J = 5.5 Hz, 2H).

벤질 4-(6-((6-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)헥실)카르바모일)이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 메틸 2-(4-((벤질옥시)카르보닐)-2-옥소피페라진-1-일)이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복실레이트(60 ㎎, 0.15 mmol)를 THF(1.5 ㎖) 및 2방울의 MeOH 중에 용해하였다. LiOH 수용액(1.5 ㎖, 0.75 mmol, 0.5 M)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 용액을 물로 희석하고, HCl(1 ㎖, 1 M)로 산성화하고, DCM으로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하여 카르복실산을 제공하였으며, 이를 DMF(1.5 ㎖) 중에 직접 용해하였다. tert-부틸(6-아미노헥실)카르바메이트(39 ㎎, 0.18 mmol), DIEA(131 ㎖, 0.75 mmol) 및 HATU(114 ㎎, 0.30 mmol)를 첨가하고, 반응액을 하룻밤 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(28 ㎎, 0.047 mmol, 31%)을 제공하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 593.30, 실측치: 593.3. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.82 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.59 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.42-7.29 (m, 5H), 6.80 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.38 (s, 2H), 4.28 (s, 2H), 3.87 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.46 (q, J = 6.4 Hz, 2H), 3.17 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.00 (s, 2H), 1.51-1.44 (m, 4H), 1.42 (s, 9H), 1.39-1.31 (m, 4H).

tert -부틸(6-(2-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복스아미도)헥실)카르바메이트: 벤질 4-(6-((6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥실)카르바모일)이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(25 ㎎, 0.047 mmol) 및 Pd/C(6 ㎎, 10 중량%)를 EtOH(4 ㎖) 중에 현탁하고, 분위기를 수소로 교체하였으며, 혼합물을 하룻밤 동안 격렬하게 교반하였다. Pd/C를 여과(PTFE, 0.45 ㎜)를 통해 제거하고, EtOH를 진공 하에 제거하였다. 이어서, 미정제 아민을 DCM(1.5 ㎖) 중에 용해하고, 용액을 0℃까지 냉각시켰다. DIEA(40 m25L, 0.23 mmol)을 첨가한 후, 아크릴로일 클로라이드(10 ㎖, 0.099 mmol)를 첨가하고, 반응물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 8% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(20 ㎎, 0.039 mmol, 83%)을 제공하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 513.27, 실측치: 513.3. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.86 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.69-6.51 (m, 1H), 6.44 (dd, J = 16.8, 1.9 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 10.3, 1.9 Hz, 1H), 4.67 (s, 1H), 4.52 (d, J = 16.6 Hz, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.03 (d, J = 29.2 Hz, 2H), 3.49 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 3.25-3.15 (m, 2H), 1.67 (p, J = 6.8 Hz, 2H), 1.58-1.35 (m, 15H).

2-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)-N-(6-(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로프-1-엔-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미도)헥실)이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복스아미드(NJH-2-153): tert-부틸(6-(2-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)이미다조[1,2-a]피리딘-6-카르복스아미도)헥실)카르바메이트(15 ㎎, 0.029 mmol)를 DCM(1 ㎖) 중에 용해하고, TFA(0.5 ㎖)로 처리하고, 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 증발시키고, 미정제물을 DCM으로 세척하고, 2회 증발시켰다. 미정제 아민 및 루마카프토르(3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤조산, 15 ㎎, 0.032 mmol)를 DMF(0.5 ㎖) 중에 용해하고, DIEA(25 ㎖, 0.15 mmol)를 첨가한 후, HATU(22 ㎎, 0.058 mmol)를 첨가하였다. 용액을 20분 동안 교반한 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 7% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(12.7 ㎎, 0.015 mmol, 52%)을 제공하였다. HRMS (ESI) [M+H]⁺ m/z 계산치: 847.3301, 실측치: 847.3370. H1 NMR (600 MHz, CDCl₃) δ 8.84 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.75 (dt, J = 7.8, 1.5 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.60 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.53 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.20 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.41 (dd, J = 16.8, 1.7 Hz, 1H), 6.34 (s, 1H), 5.81 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 27.0 Hz, 2H), 4.31 (s, 2H), 3.98 (d, J = 49.3 Hz, 3H), 3.47 (dq, J = 23.0, 6.5 Hz, 4H), 2.21 (s, 3H), 1.73 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.66-1.60 (m, 2H), 1.53-1.38 (m, 5H), 1.15 (q, J = 3.9 Hz, 2H).

¹³ C NMR (151 MHz, CDCl₃) δ 171.7, 167.6, 164.8, 155.3, 148.9, 144.1, 143.6, 141.3, 141.0, 140.3, 134.9, 134.8, 131.9, 131.7, 128.6, 127.4, 127.0, 126.6, 126.5, 120.8, 115.7, 113.0, 112.4, 110.2, 104.0, 55.8, 43.7, 39.2, 39.1, 31.2, 29.6, 29.1, 25.4, 25.2, 19.1, 18.6, 17.2, 12.5.

화합물 230의 합성

벤질 (R)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 453 ㎎(3.28 mmol)의 탄산칼륨을 3 ㎖의 THF 중에 용해하고, 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물에 1 ㎖의 물을 첨가한 후, 310 ㎕(2.17 mmol)의 벤질 클로로포르메이트를 적가하였다. 125 ㎎(1.10 mmol)의 (R)-3-메틸피페라진-2-온을 첨가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 반응물에 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기층을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% to 80% EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 고체로서 160 ㎎(0.64 mmol, 59%의 수율)의 표제 화합물을 수득하였다. LC/MS [M+H]⁺ m/z 계산치: 249.12, 실측치: 249.1. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.47-7.34 (m, 5H), 6.16 (s, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.83-4.63 (m, 1H), 4.38-4.12 (m, 1H), 3.61-3.42 (m, 1H), 3.31 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 1.63 (s, 2H).

(R)-N-(5-(3-(5-(4-아크릴로일-3-메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판아미도)펜틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드: 160 ㎎(0.64 mmol)의 벤질 (R)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트, 176 ㎎(0.64 mmol)의 tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트, 268 ㎎(1.94 mmol)의 탄산칼륨, 18 ㎕(0.16 mmol)의 N,N'-디메틸에틸렌디아민 및 13 ㎎(0.068 mmol)의 요오드화구리를 3 ㎖의 디옥산 중에 용해하고, 3회 탈기하고, 100℃까지 가열하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 다음 날, 반응물에 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기층을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고, 농축하여 미정제 중간체인 벤질 (R)-4-(5-(4,4-디메틸-3-옥소펜트-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트를 얻었다. 이러한 중간체를 30 ㎎의 Pd/C(10 중량%)와 함께 5 ㎖의 EtOH에 첨가하였으며, 분위기를 수소 가스로 교체하였다. 반응물을 하룻밤 동안 격렬하게 교반하였다. 다음 날, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하여 Pd/C을 제거하고, 농축하여 EtOH를 제거하여 미정제 중간체인 (R)-1-(5-(4,4-디메틸-3-옥소펜틸)푸란-2-일)-3-메틸피페라진-2-온을 수득하였다. 이어서, 이러한 미정제 중간체를 500 ㎕의 DCM 중에 즉시 용해하고, 500 ㎕의 TFA를 첨가하였으며, 용액을 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 하에 증발시키고, DCM(1 ㎖)을 첨가하고, 증발시켜 카르복실산 중간체인 (R)-3-(5-(3-메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로판산을 얻었다. 이러한 중간체를 500 ㎕ DMF 중에 용해하고, 그 이후에 100 ㎕의 DIEA 및 70 ㎎(0.13 mmol)의 N-(4-아미노부틸)-3-(6-(1-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)사이클로프로판-1-카르복스아미도)-3-메틸피리딘-2-일)벤즈아미드를 첨가한 후, 100 ㎎의 HATU를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기 추출물을 모으고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조하고 농축하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(DCM 중의 0% 내지 4% MeOH)에 의해 정제하여 고체로서 11.1 ㎎(0.013 mmol, 3개의 단계에 걸쳐 2%의 수율)의 LEB-03-162를 수득하였다. HRMS (ESI) [M+H]⁺ m/z 계산치: 824.3345, 실측치: 825.3417. ¹ H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.90-7.79 (m, 2H), 7.76 (s, 1H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.23(d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.14-7.08 (m, 1H), 6.54 (s, 2H), 6.46 (s, 1H), 6.14 (dd, J = 78.1, 3.3 Hz, 2H), 5.91 (s, 1H), 5.83 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 3.91-3.77 (m, 2H), 3.46 (p, J = 6.2 Hz, 2H), 3.25 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.94-2.90 (m, 4H), 2.48 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.78 (q, J = 3.9 Hz, 2H), 1.56-1.49 (m, 2H), 1.49-1.44 (m, 2H), 1.37 (q, J = 8.0 Hz, 1H), 1.20 (q, J = 3.9 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.69, 171.00, 166.14, 162.78, 155.91, 150.13, 149.51, 143.31, 142.59, 141.14, 140.02, 136.74, 134.87, 131.74, 128.44, 128.15, 127.98, 127.21, 127.02, 126.79, 113.56, 112.69, 110.59, 106.88, 100.60, 54.08, 42.32, 38.88, 36.25, 33.78, 31.81, 31.24, 31.16, 29.29, 29.23, 24.32, 23.97, 19.18, 18.56, 17.21, 16.16, 12.95.

실시예 4: 예시적인 DUB 리크루터의 합성

1-(1-아크릴로일피페리딘-4-일)-1,3-디하이드로-2H-벤조[d]이미다졸-2-온: 일반 절차 H를 통해 1-(피페리딘-4-일)-1,3-디하이드로-2H-벤조[d]이미다졸-2-온(50 ㎎, 0.23 mmol)을 아실화하고, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 20% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(11.8 ㎎, 0.043 mmol, 19%)을 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.87 (s, 1H), 7.29-7.17 (m, 1H), 7.05-6.95 (m, 3H), 6.88 (ddd, J = 16.1, 10.5, 3.3 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.70 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 4.61 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.44 (tt, J = 12.0, 3.9 Hz, 1H), 4.21 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 3.21 (t, J = 13.3 Hz, 1H), 2.76 (t, J = 12.9 Hz, 1H), 2.34-2.07 (m, 2H), 1.75 (d, J = 12.4 Hz, 2H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 164.8, 154.2, 129.7, 129.0, 129.0, 127.7, 121.1, 120.9, 109.3, 109.0, 50.3, 45.1, 41.6, 29.9, 29.0. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 272.14, 실측치: 272.1394.

tert -부틸 4-(벤조[b]티오펜-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 2-브로모벤조[b]티오펜(100 ㎎, 0.47 mmol)을 tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(93.5 ㎎, 0.47 mmol)에 결합시키고, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(22.3 ㎎, 0.116 mmol, 14%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 2H), 6.92 (s, 1H), 4.40 (s, 2H), 4.01 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.92 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.54 (s, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 333.1, 실측치: 333.1

4-아크릴로일-1-(벤조[b]티오펜-2-일)피페라진-2-온: 일반 절차 F 및 H를 통해 tert-부틸 4-(벤조[b]티오펜-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(EZ-1-035)(18 ㎎, 0.05 mmol)를 각각 탈보호 및 아실화하였다. 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(6.6 ㎎, 0.023 mmol, 46%)을 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.86 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45-7.32 (m, 1H), 7.28 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.98-6.77 (m, 1H), 6.21 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.83-5.74 (m, 1H), 4.50 (d, J = 68.5 Hz, 2H), 4.18-3.91 (m, 4H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 164.7, 142.0, 136.7, 136.2, 128.9, 128.0, 124.9, 123.9, 122.8, 122.1, 108.0, 49.2, 48.4, 47.6, 46.8. HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 309.0674, 실측치: 309.0667.

tert -부틸 4-(벤조푸란-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 2-브로모벤조푸란(200 ㎎, 1.02 mmol)을 tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(204.24 ㎎, 1.02 mmol)에 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(44.3 ㎎, 0.14 mmol, 14%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.65-7.52 (m, 1H), 7.48-7.39 (m, 1H), 7.26 (dd, J = 6.0, 3.3 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.19-4.05 (m, 2H), 3.86 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.53 (d, J = 1.6 Hz, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 316.1, 실측치: 316.2

4-아크릴로일-1-(벤조푸란-2-일)피페라진-2-온: 일반 절차 F 및 H를 통해 tert-부틸 4-(벤조푸란-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(EZ-1-044)(44.3 ㎎, 0.14 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(9.3 ㎎, 0.034 mmol, 25%)을 얻었다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.63-7.51 (m, 1H), 7.43 (dt, J = 7.1, 3.8 Hz, 1H), 7.29 (td, J = 6.3, 2.8 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 16.7, 2.2 Hz, 1H), 5.88 (dd, J = 10.1, 2.2 Hz, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.24-3.92 (m, 4H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 165.0, 150.1, 149.5, 129.0, 128.8, 128.1, 123.9, 123.9, 121.2, 111.1, 94.6, 49.5, 47.1, 46.6, 42.4. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 271.1004, 실측치: 271.1078.

벤질 2,2-디메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 E를 통해 3,3-디메틸피페라진-2-온(400 ㎎, 3.12 mmol)을 벤질 클로로포르메이트를 이용하여 보호하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 분말(492.1 ㎎, 1.88 mmol, 60%)을 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.41 (s, 5H), 6.02 (s, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.87-3.74 (m, 2H), 3.49-3.35 (m, 2H), 1.75 (s, 6H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 263.1, 실측치: 263.1.

벤질 (E)-4-(5-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2,2-디메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(중간체 2)(104 ㎎, 0.38 mmol) 및 벤질 2,2-디메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(EZ-1-050)(100 ㎎, 0.38 mmol)를 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 방치 시에 고형화되는 오일(133.7 ㎎, 0.29 mmol, 77%)을 수득하였다.. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.43 (d, J = 5.1 Hz, 6H), 6.66 (q, J = 3.6 Hz, 2H), 6.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.04-3.98 (m, 2H), 3.91 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 1.80 (s, 6H), 1.56 (d, J = 4.0 Hz, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 455.2, 실측치: 455.2

tert -부틸 3-(5-(4-아크릴로일-3,3-디메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트: 일반 절차 G 및 H를 통해 벤질 (E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2,2-디메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(30 ㎎, 0.066 mmol)를 각각 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 70% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(7.2 ㎎, 0.019 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 29%)을 얻었다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.51 (ddd, J = 16.8, 10.6, 2.3 Hz, 1H), 6.29 (t, J = 2.9 Hz, 1H), 6.23(dt, J = 16.8, 2.1 Hz, 1H), 6.03 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.70 (dt, J = 10.5, 2.1 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 6.4, 3.4 Hz, 2H), 3.78 (dd, J = 6.1, 3.6 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.54 (td, J = 7.9, 2.3 Hz, 2H), 1.83 (d, J = 2.3 Hz, 6H), 1.44 (d, J = 2.3 Hz, 9H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.6, 171.1, 166.3, 149.1, 146.2, 131.5, 127.2, 107.2, 99.7, 80.4, 63.6, 47.5, 42.7, 28.2, 23.8, 23.5. HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 399.1896, 실측치: 399.1883.

벤질 2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 E를 통해 3-메틸피페라진-2-온(400 ㎎, 3.5 mmol)을 벤질 클로로포르메이트를 이용하여 보호하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 고체(123.9 ㎎, 0.5 mmol, 14%)를 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.36 (s, 5H), 5.96 (s, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.69 (s, 1H), 4.18 (s, 1H), 3.47 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.27 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 1.46 (d, J = 7.1 Hz, 3H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 249.1, 실측치: 249.1.

벤질 (E)-4-(5-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 벤질 2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(EZ-1-049)(60 ㎎, 0.24 mmol) 및 tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(66 ㎎, 0.24 mmol)를 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(69.3 ㎎, 0.16 mmol, 66%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42 (s, 5H), 7.32-7.24 (m, 1H), 6.70-6.62 (m, 2H), 6.12 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 5.23(d, J = 2.5 Hz, 2H), 4.89 (s, 1H), 4.35 (s, 1H), 4.00 (d, J = 13.9 Hz, 2H), 3.50 (s, 1H), 1.72-1.49 (m, 12H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 441.2, 실측치: 441.2.

tert -부틸 3-(5-(4-아크릴로일-3-메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트: 일반 절차 G 및 H를 통해 벤질 (E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(52.3 ㎎, 0.12 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일로서 표제 화합물(17.9 ㎎, 0.05 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 42%)을 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.66-6.51 (m, 1H), 6.46 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.07 (dd, J = 3.2, 1.0 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.23-3.23(m, 4H), 2.91 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.57 (dd, J = 8.2, 6.9 Hz, 3H), 1.63 (s, 3H), 1.47 (s, 9H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.6, 167.6, 164.2, 149.5, 145.9, 128.7, 128.2, 107.2, 100.7, 80.4, 60.2, 54.5, 52.0, 48.2, 33.4, 28.2, 23.5, 17.0. HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 385.1739, 실측치: 385.1728.

tert -부틸 3-옥소-4-(2-페닐옥사졸-5-일)피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 5-브로모-2-페닐옥사졸(50 ㎎, 0.22 mmol)을 tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(44.7 ㎎, 0.22 mmol)와 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 60% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(40.4 ㎎, 0.117 mmol, 54%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.05-7.98 (m, 2H), 7.49 (dd, J = 5.7, 1.8 Hz, 3H), 7.38 (s, 1H), 4.36 (s, 2H), 4.04 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.89 (t, J = 5.3 Hz, 2H), 1.55 (s, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 344.2, 실측치: 344.1.

4-아크릴로일-1-(2-페닐옥사졸-5-일)피페라진-2-온: 일반 절차 F 및 H를 통해 tert-부틸 3-옥소-4-(2-페닐옥사졸-5-일)피페라진-1-카르복실레이트(40.4 ㎎, 0.117 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 80% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(34.6 ㎎, 0.116 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 45%)을 얻었다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 8.01 (dd, J = 6.8, 3.0 Hz, 2H), 7.54-7.46 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.54-6.42 (m, 1H), 5.90 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.10 (s, 4H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 164.6, 155.1, 146.6, 130.8, 129.6, 128.9, 128.3, 128.1, 127.1, 125.9, 116.2, 49.4, 47.2, 46.9. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 298.1113, 실측치: 298.1187.

페닐 ( R )-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 E를 통해 (R)-3-메틸피페라진-2-온(100 ㎎, 0.88 mmol)을 벤질 클로로포르메이트(186 ㎖, 0.876 mmol)을 사용하여 보호하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(47.2 ㎎, 0.25 mmol, 22%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.15 (s, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.73 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.51 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.31 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 1.50 (d, J = 7.0 Hz, 3H).LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 248.1, 실측치: 248.1.

벤질 (R,E)-4-(5-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 페닐 (R)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(44.6 ㎎, 0.18 mmol)를 tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(49.1 ㎎, 0.18 mmol)에 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 35% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일(56.7 ㎎, 0.13 mmol, 72%)을 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.42 (d, J = 5.3 Hz, 5H), 7.30 (s, 1H), 6.74-6.62 (m, 2H), 6.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.23(d, J = 2.3 Hz, 2H), 4.89 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.02 (s, 2H), 3.49 (s, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.56 (d, J = 5.5 Hz, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 441.2, 실측치: 441.2.

tert -부틸(R)-3-(5-(4-아크릴로일-3-메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트: 일반 절차 F 및 H를 통해 벤질 (R,E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(31.2 ㎎, 0.07 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(18.9 ㎎, 0.052 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 68%)을 얻었다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 6.65-6.40 (m, 2H), 6.33 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.08 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 5.90-5.81 (m, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.93-3.34 (m, 4H), 2.92 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.58 (dd, J = 8.3, 6.8 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.48 (s, 9H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.6, 167.6, 164.2, 149.4, 145.9, 128.7, 128.2, 107.2, 100.6, 80.4, 52.0, 48.2, 47.2, 33.4, 28.2, 23.5. HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 385.1739, 실측치: 385.1730.

벤질 (S)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 E를 통해 (S)-3-메틸피페라진-2-온(100 ㎎, 0.88mmol)을 벤질 클로로포르메이트(149.4 ㎎, 0.88 mmol)를 이용하여 보호하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 백색 고체(89.4 ㎎, 0.36 mmol, 41%)를 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.40 (d, J = 4.6 Hz, 5H), 6.13 (s, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.72 (s, 1H), 4.24 (s, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.31 (d, J = 12.5 Hz, 2H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 248.1, 실측치: 248.1.

벤질 (S,E)-4-(5-(3-( tert -부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 벤질 (S)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(EZ-1-063)(41.6 ㎎, 0.17 mmol)를 tert-부틸(E)-3-(5-브로모푸란-2-일)아크릴레이트(EZ-1-048)(46.8 ㎎, 0.17 mmol)에 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 50% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 황색 오일(41.3 ㎎, 0.09 mmol, 56%)을 수득하였다.

¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.45-7.37 (m, 5H), 7.31 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.72-6.61 (m, 2H), 6.12 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.23(d, J = 1.3 Hz, 2H), 4.90 (s, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.05-3.92 (m, 2H), 3.49 (s, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.56 (d, J = 3.1 Hz, 9H).

LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 441.2, 실측치: 441.2.

tert -부틸(S)-3-(5-(4-아크릴로일-3-메틸-2-옥소피페라진-1-일)푸란-2-일)프로파노에이트: 일반 절차 F 및 H를 통해 벤질 (S,E)-4-(5-(3-(tert-부톡시)-3-옥소프로프-1-엔-1-일)푸란-2-일)-2-메틸-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(35.4 ㎎, 0.08 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 무색 오일로서 표제 화합물(16.9 ㎎, 0.047 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 58%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.63-6.41 (m, 2H), 6.32 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.77 (s, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.34 (s, 1H), 2.91 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.58 (dt, J = 8.8, 5.2 Hz, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.48 (d, J = 4.0 Hz, 9H).

¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.6, 164.2, 149.5, 145.9, 128.7, 128.1, 107.2, 100.7, 80.4, 54.4, 52.0, 48.2, 33.4, 28.2, 23.5.

HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 385.1739, 실측치: 385.1726.

tert -부틸 4-(이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 2-브로모이미다조[1,2-a]피리딘(50 ㎎, 0.25 mmol)을 tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(50.8 ㎎, 0.25 mmol)에 결합시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 80% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 무색 오일(35.7 ㎎, 0.11 mmol, 45%)을 수득하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.33 (s, 1H), 8.15 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.22 (ddd, J = 8.7, 6.9, 1.4 Hz, 1H), 6.85 (td, J = 6.8, 1.3 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.31 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.53 (s, 9H). LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 317.2, 실측치: 317.2.

4-아크릴로일-1-(이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)피페라진-2-온: 일반 절차 F 및 H를 통해 tert-부틸 4-(이미다조[1,2-a]피리딘-2-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(23.4 ㎎, 0.074 mmol)를 탈보호 및 아실화하고, 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 회백색 고체로서 표제 화합물(3.8 ㎎, 0.014 mmol, 2개의 단계에 걸쳐 19%)을 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.32 (s, 1H), 8.15 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.87 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.46 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 23.7 Hz, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.04 (d, J = 33.0 Hz, 2H).

HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 271.1117, 실측치: 271.1190.

tert -부틸 4-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트: 일반 절차 D를 통해 4-브로모-1-메틸-1H-이미다졸(155 ㎖, 1.55 mmol)을 tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(311 ㎎, 1.55 mmol)에 결합시키고, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 고체(412 ㎎, 1.47 mmol, 95%)를 수득하였다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.58-7.50 (m, 1H), 7.39-7.26 (m, 1H), 4.27 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 4.18-4.06 (m, 3H), 3.80-3.61 (m, 4H), 1.51 (d, J = 4.1 Hz, 9H).

LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 281.2, 실측치: 281.2.

4-아크릴로일-1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)피페라진-2-온: 일반 절차 F 및 H를 통해 tert-부틸 4-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(100 ㎎, 0.36 mmol)를 탈보호 및 아실화하였으며, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 고체로서 표제 화합물(27.7 ㎎, 0.12 mmol, 33%)을 수득하였다. ¹ H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ 7.54 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.44 (dd, J = 16.7, 2.0 Hz, 1H), 5.88-5.81 (m, 1H), 4.46 (d, J = 16.0 Hz, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.99 (d, J = 23.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 163.4, 162.9, 138.9, 133.9, 128.6, 128.5, 128.2, 46.9, 44.9, 42.6, 33.7. HRMS (ESI): [M+H]⁺ m/z 계산치: 235.1117, 실측치: 235.1190.

에틸 5-(트리부틸스타닐)이소옥사졸-3-카르복실레이트: 무수 DCM(15 ㎖) 중에 용해된 에틸-2-클로로-2(하이드록시이미노아세테이트)(481 ㎎, 3.17 mmol)의 용액에 탄산칼륨(482.5 ㎎, 3.5mmol) 및 트리부틸(에티닐)스탄난(872 ㎖, 3.17 mmol)을 첨가하고, 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조하였다. 유기층을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(0% 내지 10% EtOAc/헥산)를 통해 정제하여 오일로서 생성물(753 ㎎, 1.75 mmol, 55%)을 얻었다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.84 (s, 1H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.70-1.10 (m, 27H), 0.94 (s, 3H).

에틸 5-브로모이소옥사졸-3-카르복실레이트: DCM(10 ㎖) 중에 용해된 에틸 5-(트리부틸스타닐)이소옥사졸-3-카르복실레이트(753 ㎎, 1.74 mmol) 및 탄산나트륨(203 ㎎, 1.91 mmol)의 용액에 Br₂(134 ㎖, 2.62 mmol)를 첨가하고, 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 포화 티오황산나트륨(8 ㎖)으로 켄칭한 후, DCM으로 추출하고, 염수로 세척하였다. 유기층을 무수 황산나트륨 상에서 건조하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(0% 내지 15% EtOAc/헥산)를 통해 정제하여 방치 시에 결정화되는 투명한 무색 오일(241.8 ㎎, 1.1 mmol, 63%)을 생성하였다. ¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.76 (s, 1H), 4.49 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.47 (dt, J = 9.6, 6.9 Hz, 3H).

에틸 5-(4-( tert -부톡시카르보닐)-2-옥소피페라진-1-일)이소옥사졸-3-카르복실레이트: 무수 디옥산(3 ㎖)을 N₂로 플러싱된 바이알(에틸 5-브로모이소옥사졸-3-카르복실레이트(EZ-1-091)(94.6 ㎎, 0.43 mmol), tert-부틸 3-옥소피페라진-1-카르복실레이트(0.43mmol, 86.1 ㎎), 탄산세슘(280.2 ㎎, 0.86 mmol), Xantphos(19 ㎎, 0.032 mmol), Pd(dba)₃(10 ㎎, 0.011 mmol)을 함유함)에 첨가하고, 현탁액을 탈기하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 추출하고, 염수로 세척하고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(0% 내지 75% EtOAc/헥산)를 통해 정제하여 투명한 황색 오일(14 ㎎, 0.04 mmol, 9.6%)을 얻었다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.38 (s, 2H), 4.13 (q, J = 5.5 Hz, 2H), 3.91-3.84 (m, 2H), 1.54 (d, J = 2.8 Hz, 9H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 3H).

LC/MS: [M+H]⁺ m/z 계산치: 340.1, 실측치: 340.

에틸 5-(4-아크릴로일-2-옥소피페라진-1-일)이소옥사졸-3-카르복실레이트: 일반 절차 F 및 H를 통해 에틸 5-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-옥소피페라진-1-일)이소옥사졸-3-카르복실레이트(EZ-1-097)(14 ㎎, 0.04 mmol)를 각각 탈보호 및 아실화하였으며, 미정제 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(0% 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 투명한 무색 오일로서 표제 화합물(5.0 ㎎, 0.017 mmol, 42%)을 얻었다.

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.01 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.47 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.90 (dd, J = 10.1, 2.0 Hz, 1H), 4.56 (s, 2H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.18 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 4.07 (s, 2H), 1.46 (t, J = 7.1 Hz, 3H). ¹³ C NMR (151 MHz, DMSO) δ 173.4, 144.1, 143.7, 135.1, 121.6, 119.5, 118.2, 117.4, 64.5, 44.7, 27.3, 16.5, 9.9. HRMS (ESI): [M+Na]⁺ m/z 계산치: 316.0909, 실측치: 316.0907.

실시예 5: DUB 리크루터-탈유비퀴티나아제 상호작용의 바이오-NMR 분석

z-구배를 갖는 5 ㎜ QCI-F 극저온 탐침이 구비된 Bruker 600 MHz 분광계 상에 모든 NMR 스펙트럼을 기록하고, 모든 실험 동안에 온도를 298K로 일정하게 유지하였다. OTUB1에 대한 화합물 및 E2 리가아제 결합을 탐침하기 위해, 160 ㎕의 50 μM {U}-²H,¹H/¹³C-메틸-Ile/Leu/Val/Ala(ILVA), {U}-¹⁵N 표지 OTUB1, 25 mM d-트리스(pH 7.5), 150 mM NaCl, 5% D₂O(to lock), 100 μM DSS(내부 표준), 75 μM DUB 리크루터(화합물 100)(100% d₆-DMSO에 용해됨; 화합물 결합 연구용) 및/또는 100 μM E2 D2/Ub-E2 D2(리가아제 결합 연구용)가 채워진 3 ㎜ NMR 튜브를 사용하여 ¹H-1D 및 ¹³C-SOFAST-HMQC 실험을 수행하였다. OTUB1에 대한 화합물의 완전 결합을 가능케 하기 위해, 대략 40시간의 인큐베이션 기간을 선택하였다. 적절한 부피의 순수한 d₆-DMSO 및/또는 E2 완충액을 이용한 참조 스펙트럼을 기록하여 용매-유도 효과를 보상하고, 임의의 스펙트럼 변화가 단백질 산화와 관련이 없는지 확인하기 위해 40시간 후에 실험을 반복하였다.

실시예 6: 삼원 복합체 형성에 대한 고유 질량 분광 분석

나노-전기분무 이온화 공급원(Advion TriVersa NanoMate)이 장착된 Thermo QE UHMR 상에서 고유 질량 분석 실험을 수행하였다. 재조합 OTUB1은 먼저 pH 6.7에서 150 mM 아세트산암모늄, 100 μM MgCl₂ 및 100 μM ATP로 완충액을 교환하였다. 이어서, 4 μM OTUB1을 DMSO, DUB 리크루터 화합물 100(100 μM) 또는 DUBTAc 화합물 200(100 μM)과 함께 실온에서 24시간 동안 사전 인큐베이션하였다. 24시간 후, 동일한 완충액 중의 4 μM CFTR을 OTUB1 용액에 첨가하여 DMSO 또는 50 μM 화합물과 함께 각각의 단백질의 최종 농도가 2 μM이 되도록 하였다. 이어서, 질량 분광계 상에서의 분석 이전에 용액을 30분 동안 인큐베이션하였다. 질량 스펙트럼을 1,000 내지 8,000 m/z의 질량 범위를 갖는 양이온 모드로 기록하였다. 이어서, 각각의 스펙트럼을 디콘볼루션(deconvolution)하고, 관련 피크를 통합하여 형성된 삼원 복합체(%)를 결정하였다. 모든 실험은 3회 실시하였다.

실시예 7: 인간 기관지 상피세포의 경상피 전도도 분석

DF508-CFTR 돌연변이를 갖는 낭포성 섬유증(CF) 환자의 인간 기관지 상피세포(HBEC)를 SingleQuots 보충제 및 성장 인자(Lonza, #CC-3170)가 포함된 기관지 상피세포 성장 기본 배지(BEGM)에서 37℃ 및 5% CO₂에서 배양하였다. 세포를 세포 배양 플라스크(Corning, #430641U)에서 1주일 동안 유지하고, 배지를 2일 내지 3일마다 교체하였다. 세포를 Dulbecco의 인산염 완충 식염수(Thermo Fisher Scientific, #14040141)로 세척하고, 0.05% 트립신-EDTA(Thermo Fisher Scientific, #25300120)로 5분 내지 10분 동안 트립신 처리하였으며, 그 이후 트립신 중화 용액(TNS; Thermo Fisher Scientific, #R002100)을 첨가하였다. 세포를 300 x g에서 5분 동안 펠릿화하고, Dulbecco-변형 이글 배지(DMEM, Thermo Fisher Scientific, #11965092)가 포함된 BEG에 재현탁하고, 24-웰 트랜스웰 플레이트(Corning, #3526)에 플레이트 당 100만 개의 세포를 도말하였다. 세포를 2일 내지 3일마다 배지를 교체하면서 DMEM이 포함된 BEGM에서 1주 동안 침지하여 성장시켰으며, 이때 공기 액체 경계면(ALI)으로 옮겨서 사용할 준비가 되기 2주 전에 추가로 성장시켰다.

세포를 실험 24시간 전에 DMSO 비히클, 10 μM 루마카프토르 또는 10 μM DUBTAC로 처리하였다. 그 이후, 세포를 pH 7.4의 20 mM HEPES(Thermo Fisher Scientific, #15630080)가 포함된 Ham의 F12 완충액(Thermo Fisher Scientific, #21700075)에 침지시키고, 검정 시스템에 장착하였다. 경상피 저항(transepithelial resistance)을 24-채널 경상피 전류 클램프 증폭기(TECC-24, EP Design, 벨기에 베르템 소재)를 사용하여 기록하였다. 저항 측정은 대략 6분 간격으로 이루어졌다. 4개의 값을 취하여 기준선 저항을 결정하고, 하기 각각의 첨가 이후에 4개의 다른 측정값을 취하였다: 10 μM 아밀로라이드(amiloride; Millipore Sigma, #A7410)를 정점에서 첨가하고, 20 μM 포스콜린(forskolin; Millipore Sigma, #F6886)을 정점에서 첨가하고, 0.5 μM 이바카프토르를 정점 및 기저점에서 첨가하였다. 이어서, CFTR 저해제 172(Millipore Sigma, #219672)를 첨가하고, 최종 6개의 측정치를 얻었다. 경상피 전도도(G)를 저항 측정치(G = 1/R)로부터 계산하였다. 상피 단층을 통한 염화물 이온 수송은 CFTR에 의해 매개되며, 따라서 작용성 CFTR의 활성화 또는 저해는 경상피 전도도의 변화를 야기한다. 이러한 방식으로, ΔG는 작용성 CFTR 발현 및 화합물 첨가를 통한 CFTR의 기능성 구조를 측정하는 데 사용될 수 있다.

Claims

화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제(deubiquitinase)에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
제1항에 있어서, 상기 표적 단백질은 효소, 수용체, 막 채널 및 호르몬, 또는 이의 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 표적 단백질은 가용성 단백질 또는 막 단백질인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 돌연변이 또는 미스폴딩(misfolding)되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 글리코실화(glycosylation)되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 유비퀴틴화(예를 들어, 폴리유비퀴틴화)되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 종양 억제제인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 종양 억제제, 막 채널, 키나아제, 전사 인자, 이온 채널, 세포사멸 인자, 종양 형성 단백질 및 후생유전학적 조절자로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 TP53, CDKN1A, CDN1C, BAX, 글루코키나아제, 낭포성 섬유증 막횡단 전도도 조절제(CFTR), WEE1 또는 이의 돌연변이체 또는 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 낭포성 섬유증 막횡단 전도도 조절제(CFTR) 또는 이의 돌연변이체 또는 단편을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 ΔF508-CFTR을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 단백질은 종양 억제제 키나아제 WEE1 또는 이의 돌연변이체 또는 단편을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 리신-연결 폴리유비퀴틴 사슬을 개열할 수 있는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제12항에 있어서, 상기 리신-연결 폴리유비퀴틴 사슬은 K43-연결 폴리유비퀴틴 사슬을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 시스테인 프로테아제 또는 메탈로프로테아제인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 시스테인 프로테아제인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 탈유비퀴티나아제 내부의 촉매 부위 이외의 다른 부위에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 탈유비퀴티나아제 내부의 다른 자리 입체성 부위에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 탈유비퀴티나아제 내부의 시스테인 아미노산 잔기에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제19항에 있어서, 상기 시스테인 아미노산 잔기는 다른 자리 입체성 시스테인 아미노산 잔기인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 촉매 아미노산 잔기(예를 들어, 촉매 시스테인 아미노산 잔기)보다 다른 자리 입체성 아미노산 잔기(예를 들어, 다른 자리 입체성 아미노산 잔기)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 탈유비퀴티나아제의 촉매 부위(예를 들어, 촉매 시스테인) 내의 시스테인 아미노산 잔기에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 표 1로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 WDR48, YOD1, OYUD3, OTUB1, OTUD5, USP8, USP5, USP15, USP16, UCHL3, UCHL1 및 USP14로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 OTUB1을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제24항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUB1 서열 내부의 시스테인 23(C23)에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUB1 서열 내부의 시스테인 91(C91)보다 시스테인 23(C23)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUB1 서열 내부의 시스테인 91(C91)에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 OTUD5를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제29항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUD5 서열 내부의 시스테인 434(C434)에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUD5 서열 내의 시스테인 244(C244)보다 시스테인 434(C434)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 OTUD5 서열 내부의 시스테인 244(C244)에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제는 USP15를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제33항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 USP15 서열 내부의 시스테인 264(C264)에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 USP15 서열 내부의 시스테인 298(C298)보다 시스테인 264(C264)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이작용성 화합물은 상기 USP15 서열 내부의 시스테인 298(C298)에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 리간드는 상기 표적 단백질에 결합(예를 들어, 공유 결합)하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 리간드는 표적 단백질을 조정할 수 있는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제38항에 있어서, 상기 조정은,
(i) 표적 단백질의 폴딩 조정;
(ii) 표적 단백질의 반감기 조정;
(iii) 프로테아솜으로의 표적 단백질의 수송(trafficking) 조정;
(iv) 표적 단백질의 유비퀴틴화 수준 조정;
(v) 표적 단백질의 분해(예를 들어, 프로테아솜 분해) 조정;
(vi) 표적 단백질 신호전달 조정;
(vii) 표적 단백질 국부화 조정;
(viii) 리소좀으로의 표적 단백질의 수송 조정;
(ix) 다른 단백질과 표적 단백질의 상호작용 조정 중 하나 이상을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (i)를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (ii)를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (iii)을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (iv)를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (v)를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제39항에 있어서, (i) 내지 (v) 각각을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 리간드는 화학적 샤페론(chemical chaperone)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 리간드는 화학식 I-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 I-a]

(상기 식에서,
X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고;
Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고;
R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고;
각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고;
R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
q는 0, 1, 2 또는 3이고;
는 상기 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타냄).
제47항에 있어서, X 및 Z 각각은 독립적으로 O인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제47항 또는 제48항에 있어서, Y는 C(R^7a)(R^7b)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, R^7a 및 R^7b 각각은 독립적으로 할로(예를 들어, 플루오로)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, R^3a, R^3b, R^4a, R^4b 각각은 독립적으로 H인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제47항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, R¹은 H인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제47항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, p 및 q 각각은 0인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 리간드는 화학식 I-f의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 I-f]

(상기 식에서,
는 상기 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타냄).
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 화학식 I-h의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 I-h]

(상기 식에서, 각각의 R²⁰, R²⁴ 및 R²⁵는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R²¹ 및 R²³은 각각 독립적으로 H 또는 C_1-6 알킬이고; R²²는 C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고; R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고; m 및 n은 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; p는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고; 는 상기 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타냄).
제1항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-a 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-a]

(상기 식에서,
X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고;
Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고;
R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고;
각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고;
R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
q는 0, 1, 2 또는 3이고;
L1 및 DUB 리크루터는 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-d 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-d]

(상기 식에서, L1 및 DUB 리크루터는 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-k 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-k]

(상기 식에서, L1 및 DUB 리크루터는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 탈유비퀴티나아제에 결합(예를 들어, 공유 결합)하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 탈유비퀴티나아제에 대한 상기 DUB 리크루터의 결합은 상기 탈유비퀴티나아제의 활성을 실질적으로 억제하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 탈유비퀴티나아제 내부의 촉매 부위 이외의 다른 부위에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 탈유비퀴티나아제 내부의 다른 자리 입체성 부위에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 탈유비퀴티나아제 내부의 시스테인 아미노산 잔기에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 촉매 아미노산 잔기(예를 들어, 촉매 시스테인 아미노산 잔기)보다 다른 자리 입체성 아미노산 잔기(예를 들어, 다른 자리 입체성 아미노산 잔기)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 탈유비퀴티나아제의 촉매 부위(예를 들어, 촉매 시스테인) 내의 시스테인 아미노산 잔기에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 아크릴아미드 모이어티를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 푸란 모이어티를 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 화학식 V-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 V-b]

(상기 식에서,
고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고;
R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고;
각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고;
각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6임).
제68항에 있어서, 고리(A)는 헤테로아릴(예를 들어, 단환식 헤테로아릴)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제68항 또는 제69항에 있어서, 고리(A)는 5원 헤테로아릴(예를 들어, 푸라닐)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제68항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, R⁸은 친전자성 모이어티인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제68항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, R⁸은 C_2-6 알케닐(예를 들어, CH=CH₂)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 화합물 100의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화합물 100]

(상기 식에서, 는 상기 화학식 I의 L1에 대한 부착점을 나타냄).
제1항 내지 제28항 및 제29항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 OTUB1 서열 내의 시스테인 23(C23)에 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제28항 및 제29항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 OTUB1 서열 내부의 시스테인 91(C91)보다 시스테인 23(C23)에 우선적으로 결합하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제28항 및 제29항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DUB 리크루터는 상기 OTUB1 서열 내부의 시스테인 91(C91)에 실질적으로 결합하지 않는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-k 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-k]

(상기 식에서,
고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고;
R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고;
각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고;
각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
표적 리간드 및 L1은 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-l 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-l]

(상기 식에서, 표적 리간드 및 L1은 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 개열 불가능한 링커인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 알킬렌 또는 헤테로알킬렌을 포함하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 화학식 III-a의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 III-a]

(상기 식에서, R^12a, R^12b, R^13a, R^13b, R^14a 및 R^14b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^12a와 R^12b, R^13a와 R^13b, 및 R^14a와 R^14b 각각은 독립적으로 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고,
W는 C(R^15a)(R^15b), O, N(R¹⁶) 또는 S이고;
R^15a 및 R^15b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^15a 및 R^15b는 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고;
R¹⁶은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
o 및 x는 각각 독립적으로 0과 10 사이의 정수이고;
는 상기 화학식 I의 표적 리간드에 대한 부착점을 나타내고;
는 상기 화학식 I의 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타냄).
제81항에 있어서, R^12a, R^12b, R^13a 및 R^13b 각각은 독립적으로 H인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제81항 또는 제82항에 있어서, R^14a 및 R^14b 각각은 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성하는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, W는 N(R¹⁶)(예를 들어, NH)인 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제81항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, o는 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제81항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, p는 1, 2 및 3으로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 화학식 III-b의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 III-b]

(상기 식에서
o는 0과 10 사이의 정수이고;
는 상기 화학식 I의 표적 리간드에 대한 부착점을 나타내고;
는 상기 화학식 I의 DUB 리크루터에 대한 부착점을 나타냄).
제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 화학식 III-c의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 III-c]

(상기 식에서,
R^12a, R^12b, R^13a, R^13b, R^14a 및 R^14b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^12a와 R^12b, R^13a와 R^13b, 및 R^14a와 R^14b 각각은 독립적으로 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고,
W는 C(R^15a)(R^15b), O, N(R¹⁶) 또는 S이고;
R^15a 및 R^15b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^15a 및 R^15b는 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고;
R¹⁶은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^A는 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
o 및 x는 각각 독립적으로 0과 10 사이의 정수이고;
표적 리간드 및 DUB 리크루터는 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 화학식 III-d의 구조 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[화학식 III-d]

(상기 식에서, o는 0과 10 사이의 정수이고;
표적 리간드 및 DUB 리크루터는 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-n 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-n]

(상기 식에서,
X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고;
Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고;
고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이때 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고;
R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고;
각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고;
R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고;
각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고;
각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
q는 0, 1, 2 또는 3이고;
L1은 제1항에서 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-o 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-o]

(상기 식에서,
X 및 Z는 각각 독립적으로 O, S 또는 C(R^7a)(R^7b)이고;
Y는 C(R^7a)(R^7b) 또는 NR^7c이고;
고리(A)는 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이며, 이대 이들 각각은 0개 내지 12개의 R¹⁰으로 치환되고;
R¹은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R²는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^3a, R^3b, R^4a, R^4b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이고;
각각의 R⁵, R^5' 및 R⁶은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노, -OR^A, -C(O)N(R^B)(R^C) 또는 -N(R^B)CO(R^D)이고;
R^7a 및 R^7b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^7c는 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R⁸은 H, C_1-6 알킬 또는 친전자성 모이어티이고;
각각의 R⁹는 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로 또는 -OR^A이고;
각각의 R¹⁰은 독립적으로 C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬 또는 할로이고;
R^12a, R^12b, R^13a, R^13b, R^14a 및 R^14b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^12a와 R^12b, R^13a와 R^13b, 및 R^14a와 R^14b 각각은 독립적으로 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고,
W는 C(R^15a)(R^15b), O, N(R¹⁶) 또는 S이고;
R^15a 및 R^15b는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 할로, 시아노 또는 -OR^A이거나;
R^15a 및 R^15b는 이들이 부착된 탄소 원자와 결합하여 옥소기를 형성할 수 있고;
R¹⁶은 H 또는 C_1-6 알킬이고;
R^A, R^B, R^C 및 R^D는 각각 독립적으로 H, C_1-6 알킬, C_2-6 알케닐, C_2-6 알키닐, C_1-6 할로알킬, C_1-6 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴 또는 헤테로아릴이고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
o 및 x는 각각 독립적으로 0과 10 사이의 정수이고;
p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
p'는 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
q는 0, 1, 2 또는 3임).
제1항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 구조 II-q 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 갖는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체:
[구조 II-q]

(상기 식에서, o는 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택됨).
제1항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 이작용성 화합물은 표 2에서 제공된 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 전구약물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체로부터 선택되는 것인 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체.
제1항 내지 제93항 중 어느 한 항에 따른 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체, 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
개체에게 화합물을 제공하는 데 사용하기 위한 조성물로서, 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는, 개체에서 질병, 질환 또는 병태를 치료하는 데 사용하기 위한 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
제96항에 있어서, 상기 조성물의 투여는 상기 질병, 질환 또는 병태의 증상 또는 요소를 개선시키는 것인 조성물.
제96항 또는 제97항에 있어서, 상기 질병, 질환 또는 병태는 낭포성 섬유증인 것인 조성물.
화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는, 개체에서 낭포성 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는, 세포 또는 개체에서 단백질을 조정하는 데 사용하기 위한 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
세포 또는 개체에서 탈유비퀴티나아제를 표적 단백질로 리크루팅하는 데 사용하기 위한 조성물로서, 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는, 단백질을 탈유비퀴틴화하는 데 사용하기 위한 조성물:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
개체에게 화합물을 제공하는 방법으로서,
상기 화합물은 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 포함하는 것인, 개체에게 화합물을 제공하는 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
개체에서 질병, 질환 또는 병태를 치료하는 방법으로서,
상기 개체에게 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 투여하는 단계를 포함하는 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
제104항에 있어서, 상기 방법은 상기 질병, 질환 또는 병태의 증상 또는 요소를 개선시키는 단계를 포함하는 것인 방법.
제104항 또는 제105항에 있어서, 상기 질병, 질환 또는 병태는 낭포성 섬유증인 것인 방법.
개체에서 낭포성 섬유증을 치료하는 방법으로서,
상기 개체에게 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 투여하는 단계를 포함하고, 이를 통해 낭포성 섬유증을 치료하는, 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
세포 또는 개체에서 단백질을 조정하는 방법으로서,
상기 세포를 접촉시키거나 상기 개체에게 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체를 투여하는 단계를 포함하고, 이를 통해 세포 또는 개체에서 단백질을 조정하는, 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
탈유비퀴티나아제를 표적 단백질로 리크루팅하는 방법으로서,
(예를 들어, 세포 또는 샘플 내의) 혼합물을 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체와 접촉시키는 단계를 포함하고, 이를 통해 혼합물, 예를 들어 세포 또는 개체에서 탈유비퀴티나아제를 표적 단백질로 리크루팅하는, 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).
단백질을 탈유비퀴틴화하는 방법으로서,
세포 또는 샘플을 화학식 I의 이작용성 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물, 입체 이성질체 또는 호변이성질체와 접촉시키는 단계를 포함하고, 이를 통해 세포 또는 개체에서 단백질을 탈유비퀴틴화하는, 방법:
[화학식 I]

(상기 식에서,
(i) 표적 리간드는 표적 단백질에 결합할 수 있는 모이어티를 포함하고;
(ii) L1은 링커를 포함하고;
(iii) DUB 리크루터는 탈유비퀴티나아제에 결합할 수 있는 모이어티를 포함함).