KR20230174770A - 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 건 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 건 재건 및 항염증 효과를 나타내므로, 건 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 건 재건 및 항염증 효과를 나타내므로, 건 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 건 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
건은 보통 근육을 골에 연결시켜 주는 섬유성 결합 조직인 질긴 띠이다. 건의 탄력적인 특성이 운동시 힘을 조절하며, 어떤 활동적인 일없이 추가로 안정화시켜 준다. 이는 또한 에너지를 보관하고 고효율로 회복시킨다. 정상의 건강한 건은 주로 함께 조밀하게 패킹된 평행 배열 방식의 I형 콜라겐 섬유로 구성되어 있지만, 이는 또한 소량의 엘라스틴과 소량의 프로테오글리칸을 포함한다. 건은 고도로 분화된 초미세구조를 가지며, 그의 혈관화 수준은 낮고, 콜라겐 전환이 느리기 때문에, 손상될 경우, 그의 치유 속도는 매우 느리고, 그의 원래의 강도로 회복되기는 좀처럼 힘들다. 부분적인 인열은 해체된 III형 콜라겐의 신속한 생산을 통해 치유되지만, 이는 정상의 건보다는 약하다. 건의 손상 부위에서 다시 손상이 재발하는 것은 흔한 일이다.
건 질환은 과용 또는 노화로 인해 점차적으로 건에 마모가 일어나고, 인열이 일어남으로써 그로 인한 이화 대사 반응과 동화 대사 반응 사이의 불균형이 원인인 것으로 보여지는 건의 만성 장애 또는 손상이다. 이와 같은 불균형의 결과는 건 변성, 쇠약, 인열, 및 동통이다. 대조적으로, 급성 건 손상, 예를 들어, 건 파열 또는 골로부터의 분리는 매우 갑작스럽게 일어나는 것으로, 보통 파열을 수복시키거나, 건을 골에 재부착시키기 위해서는 수술이 이루어져야 한다. 어느 누구에서나 건 질환이 발병될 수 있지만, 직업상, 운동시, 또는 규칙적인 일상 활동에서 같은 동작을 반복해서 하는 경향이 있는 사람인 경우에 상기 질환이 발병될 가능성은 더 크다. 건 질환은 보통 환부에 동통, 경직, 및 강도 상실을 유발한다.
건 질환의 치유를 생물학적으로 증가시키는 것에 관한 여러 생체내 및 시험관내 연구가 진행되어 왔다. 예를 들어, 문헌 ([Seeherman HJ, Archambault JM, Rodeo SA, et al. rhBMP-12 accelerates healing of rotator cuff repairs in a sheep model. J BoneJointSurgAm. 2008;90(10):2206-2219]; [Chan BP, Fu SC, Qin L, et al. Supplementation-time dependence of growth factors in promoting tendon healing. Clin Orthop Relat Res. 2006;448:240-247]; [Uggen JC, Dines J, Uggen CW, et al. Tendon gene therapy modulates the local repair enviroment in the shoulder. J Am Osteopath Assoc. 2005;105(1):20-21]; [Gelberman R, Thomopoulos S, Sakiyama-Elbert S, et al. The early effects of sustained platelet-derived growth factor administration on the functional and structural properties of repaired intrasynovial flexor tendons: an in vivo biomechanic study at 3 weeks in canines. J Hand Surg Am. 2007;32(3):373-379]; [Thomopoulos S, Das R, Silva MJ, et al. Enhanced flexor tendon healing through controlled delivery of PDGF-BB. J Orthop Res. 2009;27(9): 1209-1215]; [Thomopoulos S, Zaegel M, Das R, et al. PDGF-BB released in tendon repair using a novel delivery system promotes cell proliferation and collagen remodeling. J Orthop Res. 2007;25(10): 1358-1368]; [Dines J, Grande D, Dines D. Tissue Engineering and Rotator Cuff Tendon Healing. J Shoulder Elbow Surg, Sept/Oct 2007: 204S-206S])를 참조한다.
그러나 이러한 노력에도 안전하면서도 효과가 뛰어난 물질을 개발하는 것이 요구되고 있는 실정이다.
본 발명의 목적은 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 조성물은 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자들은 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기의 혼합 추출물이 건 질환을 치료하는 효과를 인비트로(in vitro) 및 인비보(in vivo)에서 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 발명자들은 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다. 상기 조성물은 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 건 질환은 건염, 건초염 및/또는 상과염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 상기 상과염은 내측상과염(골프엘보) 및/또는 외측상과염(테니스엘보)를 포함할 수 있다.
하기 실시예에서, 본 발명의 추출물의 추출을 위해 사용된 추출 용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나를 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하며, 에탄올인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 추출 용매의 양은 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기 전체 건조 중량의 5배 내지 15배를 첨가하는 것이 바람직하고, 전체 건조 중량의 10배를 첨가하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
추출 온도는 10℃ 내지 120℃ 인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 40℃ 내지 100℃인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 1시간 내지 7시간인 것이 바람직하고, 3시간 내지 5시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 3시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 추출물을 제조하는 방법은 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출, 초임계추출, 아임계추출, 고온추출, 고 압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 탕약, 트로키제(troche), 캡슐, 구강정, 과립, 환, 분말, 현탁액 및 용제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제 에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 적어도 하나 이 상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으나, 바람직하게는 경구 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 상기 혼합 추출물 100 중량부에 대하여 감초 3 내지 10 중량부, 금은화 3 내지 15 중량부, 당귀 3 내지 24 중량부, 백지 3 내지 9 중량부, 백출 3 내지 15 중량부, 복령 3 내지 18 중량부, 연교 3 내지 15 중량부, 인삼 3 내지 15 중량부, 작약 3 내지 15 중량부, 진피 3 내지 15 중량부 및 황기 3 내지 15 중량부를 포함할 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 조성물이 식품 조성물일 때 상기 식품은 건강기능식품일 수 있다.
본 발명에 따른 식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 및 음료로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 형태로 제조될 수 있고, 바람직하게는 과립의 형태로 제조될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물은 “탁리소독음”이라는 용어와 혼용되어 사용될 수 있다.
일 실시예에 있어서, 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물의 건 질환 예방 또는 치료 효과를 측정하기 위하여 인비트로(in vitro) 및 인비보(in vivo) 실험을 진행하였다.
구체적으로, 본 발명자들은 인비트로 실험을 통하여, 본 발명의 탁리소독음의 세포독성을 측정한 결과 독성이 없는 것을 확인하였다(도 1).
또한, 염증반응을 유도한 마우스 유래 건세포에 탁리소독음 물 추출물 처리 시 COX-2 및 MMP-9의 발현이 감소함을 확인하였고, 에탄올 추출물 처리 시 MMP-9의 발현이 감소함을 확인하였다(도 2).
한편, 콜라게나아제(collagenase)로 건 손상이 유발된 마우스 모델에서 콜라겐 재건 및 항염증 효과를 확인한 결과, 탁리소독음 물 추출물 및 에탄올 추출물 각각 SCX, Col3a1의 높은 발현량을 나타내어 콜라겐 재건 효과를 확인하였고(도 4), 탁리소독음 에탄올 추출물 처리 시 COX-2 및 MMP-9를 억제함으로써 항염증 효과가 있음을 확인하였다(도 5).
따라서, 본 발명에 따른 탁리소독음 즉, 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 건 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실험예 및 제조예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실험예 및 제조예에 한정되는 것이 아니라, 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이다.
본 발명에 따른 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 건 재건 및 항염증 효과를 나타내므로, 건 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 탁리소독음의 세포독성 측정 결과를 보여준다.
도 2는 본 발명에 따른 탁리소독음의 사이토카인 (TNF-α, IL-1β)에 의해 유도된 건세포의 염증반응 저해 활성 측정 결과를 보여준다.
도 3은 본 발명의 인비보(in vivo) 실험방법을 도식화하여 보여준다.
도 4는 본 발명에 따른 탁리소독음의 콜라겐 재생능을 측정한 결과를 보여준다.
도 5는 본 발명에 따른 탁리소독음의 항염증 효능 측정 결과를 보여준다.
도 2는 본 발명에 따른 탁리소독음의 사이토카인 (TNF-α, IL-1β)에 의해 유도된 건세포의 염증반응 저해 활성 측정 결과를 보여준다.
도 3은 본 발명의 인비보(in vivo) 실험방법을 도식화하여 보여준다.
도 4는 본 발명에 따른 탁리소독음의 콜라겐 재생능을 측정한 결과를 보여준다.
도 5는 본 발명에 따른 탁리소독음의 항염증 효능 측정 결과를 보여준다.
다음 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로, 이에 본 발명의 범위가 한정되는 것으로 이해되지 않는다.
[실시예]
실시예 1: 마우스에서 직접 얻은 건세포를 활용한 항염 효능 평가(In vitro 실험)
1. 탁리소독음의 세포독성 측정
1-1. 실험방법
12주령의 C57BL/6 계의 암컷 마우스로부터 얻은 아킬레스건 조직을 collagenase를 1시간 동안 처리하여 건세포를 분리하였다. 세포독성의 지표가 되는 세포생존률은 MTT assay로 측정하였다.
1-2. 실험결과
탁리소독음 시료는 두 종류로 물 추출물과 에탄올 추출물을 사용하였으며, 시료는 각각 62.5, 125, 250, 500 ng/ml 씩 농도별로 처리하였다.
그 결과 모든 시료의 세포생존율이 80% 이상으로 독성이 없는 것으로 확인 되었다(도 1).
2. 탁리소득음의 사이토카인 (TNF-α, IL-1β)에 의해 유도된 건세포의 염증반응 저해 활성 측정
2-1. 실험방법
12주령의 C57BL/6 계의 암컷 마우스로부터 분리한 건세포에 TNF-α (10 ng/ml), IL-1β (10 ng/ml)를 처리하여 염증반응을 유도하였다.
탁리소독음 물 추출물 과 에탄올 추출물을 각각 고농도 500 ng/ml와 저농도 250 ng/ml로 처리하여 건세포에 유도된 염증반응에 대한 저해활성을 Real time PCR로 평가하였다. 평가지표는 collagen type1 (Col1a1), collagen type 3 (Col3a1), cyclooxygenase-2 (COX-2), Matrix Metalloproteinase9 (MMP-9), microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1)의 발현량을 확인하였다.
2-2. 실험결과
건세포에 사이토카인을 처리하여 유도된 염증반응이 저해될 때 Col1a1, COX2, MMP9, mPGES-1의 발현량은 감소하여야 하는 반면 Col3a1은 증가하여야 한다.
사이토카인만을 처리하여 염증반응을 유도시킨 control군과 비교하였을 때 탁리소독음 물 추출물에서 COX-2와 MMP-9의 발현이 감소하였고, 탁리소독음 에탄올 추출물에서는 MMP-9의 발현이 감소하였다(도 2).
실시예 2: 콜라게나아제(collagenase)로 건 손상이 유발 된 동물모델을 활용한 콜라겐재건 및 항염 효능 평가(
in vivo
실험)
1. 탁리소득음 건염 마우스 모델의 염증인자와 콜라겐 조성의 변화 확인
1-1. 실험준비
12주령의 C57BL/6 계의 암컷 마우스의 양쪽 다리에 실험 첫 날 collagenase를 7.5 ng/ml 농도로 40 μl를 주사하고, 3일후 동일농도 동일량으로 양쪽다리에 주사하여 건염시 진행되는 세포외기질의 파괴를 유도하여 건염 마우스 모델을 준비하였다.
1-2. 실험방법
첫번째 Collagenase를 주사한 6일 후부터 매일 탁리소독음 물 추출물 과 에탄올 추출물을 각각 고농도 50 mg/ml와 저농도 25 mg/ml로 20 μL씩 경구투여하였다. Positive control로는 NSAIDs의 일종인 ibuprofen을 0.75 mg/ml로 20 μL씩 경구투여하였다. 건염 실험모델에서 주어진 샘플들의 Real time PCR을 진행하여 콜라겐 재생능과 항염증 효능을 확인하였고 western blot을 진행하여 콜라겐 재생능을 확인하였다(도 3).
1-3. 실험결과
(가) Real time PCR을 이용한 탁리소독음의 콜라겐 재생능의 측정
Collagen type1(col1a1)은 마우스 힘줄을 일반적으로 구성하는 콜라겐 조성이며 collagen type3(col3a1)는 세포가 세포외기질의 콜라겐을 회복하기 위해 합성을 증가시킨다. Scleraxis (SCX)는 성인힘줄치유에 필수적인 역할을 하는 전사인자이다. 따라서, SCX, Col3a1의 높은 발현량은 콜라겐의 재생효과를 보여준다. 건손상 유발 동물모델에서 탁리소득음 물 추출물과 에탄올 추출물 모두 콜라겐 재건 효능을 보임을 확인하였다(도 4).
(나) Real time PCR을 이용한 탁리소독음의 항염증 효능의 측정
COX2와 mPGES-1에 의하여 생성된 PGE2는 MMP-9의 발현량을 높인다. 초기염증단계에서 높아진 MMP-9은 세포외기질을 분해하여 초기염증단계에서 높아지고 이후 회복단계에서는 낮은 발현량을 보여준다. 탁리소득음 에탄올 추출물 고농도 샘플은 COX-2와 MMP-9 억제에 크게 억제하여 뛰어난 항염증 효능을 보였고 물 추출물 저농도에서 COX-2와 MMP-9을 억제하는 효과가 있음이 확인되었다(도 5).
Claims (5)
- 감초, 금은화, 당귀, 백지, 백출, 복령, 연교, 인삼, 작약, 진피 및 황기로 이루어진 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 건 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 건 질환은 건염, 건초염 및 상과염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 건 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물의 추출 용매는 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합인 것을 특징으로 하는 건 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 약학 조성물은 탕약, 트로키제(troche), 캡슐, 구강정, 과립, 환, 분말, 현탁액 및 용제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 혼합 추출물 100 중량부에 대하여 감초 3 내지 10 중량부, 금은화 3 내지 15 중량부, 당귀 3 내지 24 중량부, 백지 3 내지 9 중량부, 백출 3 내지 15 중량부, 복령 3 내지 18 중량부, 연교 3 내지 15 중량부, 인삼 3 내지 15 중량부, 작약 3 내지 15 중량부, 진피 3 내지 15 중량부 및 황기 3 내지 15 중량부를 포함하는 것인, 약학 조성물.
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|---|---|---|---|---|
| KR101959571B1 (ko) | 2010-02-22 | 2019-03-18 | 바이오미메틱 세라퓨틱스, 인크. | 건 질환의 치료를 위한 혈소판-유래 성장 인자 조성물 및 방법 |
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2022
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