KR20230155875A - Animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorder containing Zizyphus jujuba Miller, Glycyrrhiza uralensis Fisch and Artemisiae capillaris Thunb extract, and method for preparing the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 상기 수면장애 개선용 동물 사료 조성물은 산조인, 감초 및 인진호의 복합 추출물을 유효성분으로 포함한다. The present invention relates to an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders and a method for producing the same. The animal feed composition for improving sleep disorders includes complex extracts of Sanjoin, Licorice root, and Injinho as active ingredients.
Description
본 발명은 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 상기 수면장애 개선용 동물 사료 조성물은 산조인, 감초 및 인진호의 복합 추출물을 유효성분으로 포함한다. The present invention relates to an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders and a method for producing the same. The animal feed composition for improving sleep disorders includes complex extracts of Sanjoin, Licorice root, and Injinho as active ingredients.
고령화와 1인가구 급증에 따른 인구구조 변화, 소득증가 등에 따라 반려동물을 보유하는 가구가 크게 증가하고 있는 추세이며, 과거 애완동물을 소비하는 형태에서 반려동물을 삶의 동반자로 인식하는 형태로 변화하고 있다. 이를 반영하여 국내 반려동물 관련 시장규모는 앞으로도 꾸준히 성장할 것으로 기대된다. 하지만, 시장의 증가세와 달리 현재 펫푸드시장의 70% 이상이 외국산 브랜드이다. 국산품에 대한 신뢰도를 향상시키고, 소비자들의 니즈를 파악하여 수입의존도를 낮추고 국산품의 점유율을 높인 수 있는 방안이 필요한 실정이다.The number of households owning companion animals is increasing significantly due to demographic changes and income increases due to the aging population and rapid increase in single-person households. There is a change from consuming pets in the past to recognizing companion animals as life partners. I'm doing it. Reflecting this, the size of the domestic pet-related market is expected to continue to grow steadily in the future. However, unlike the market growth, more than 70% of the current pet food market is foreign brands. There is a need for measures to improve the reliability of domestic products, identify consumer needs, reduce dependence on imports, and increase the market share of domestic products.
한편, 인간뿐만 아니라 반려동물에게도 수면은 건강에 매우 중요한 영향을 끼친다. 반려동물의 만성적인 수면장애 문제는 스트레스 호르몬의 증가를 일으키며, 면역체계를 약화시켜 감염의 위험 또한 높인다. 이를 해결하기 위해 수면 장애 개선 효과가 있는 천연 식물 복합추출물 및 유효성분을 활용하여 이를 첨가한 기능성 반려동물 사료를 개발하고자 한다. Meanwhile, sleep has a very important impact on the health of not only humans but also pets. Chronic sleep disorders in pets cause an increase in stress hormones, weaken the immune system, and increase the risk of infection. To solve this problem, we are trying to develop functional pet food using natural plant complex extracts and active ingredients that are effective in improving sleep disorders.
본 발명의 일 목적은 산조인, 감초 및 인진호 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물을 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders containing Sanjoin, licorice and Injinho extracts as active ingredients.
본 발명의 다른 목적은 독성이 있는 인진호 및 산조인 추출물의 함유량을 최소화하면서도 효능은 저하되지 않는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders that minimizes the content of toxic Injinho and Sanjoin extracts but does not reduce efficacy.
본 발명의 일 실시형태에 따른 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물 은 산조인(Zizyphus jujuba Miller), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fisch) 및 인진호(Artemisiae capillaris Thunb)의 추출물을 유효성분으로 포함한다.The animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders according to an embodiment of the present invention includes extracts of Zizyphus jujuba Miller, Glycyrrhiza uralensis Fisch, and Artemisiae capillaris Thunb as active ingredients.
일 실시형태에 따르면, 수면장애의 개선은 수면 지속 시간의 증가를 위한 것일 수 있다.According to one embodiment, improvement in sleep disorders may be for increasing sleep duration.
일 실시형태에 따르면, 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합할 수 있다.According to one embodiment, Sanjoin, licorice, and Injinho may be mixed at a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5.
일 실시형태에 따르면, 조성물은 분말 형태일 수 있다.According to one embodiment, the composition may be in powder form.
일 실시형태에 따르면, 추출물은 1일(day) 단위 5mg/kg 내지 100mg/kg의 용량으로 경구 복용할 수 있다.According to one embodiment, the extract can be taken orally at a dose of 5 mg/kg to 100 mg/kg per day.
본 발명의 일 실시형태에 따른 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료는 산조인(Zizyphus jujuba Miller), 감초(Glycyrrhiza uralensis) 및 인진호(Artemisiae capillaris Thunb)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물을 포함한다.Animal feed for improving nervous stability and sleep disorders according to an embodiment of the present invention contains extracts of Zizyphus jujuba Miller, Glycyrrhiza uralensis , and Artemisiae capillaris Thunb as active ingredients. and animal feed compositions for improvement.
본 발명의 일 실시형태에 따른 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법은 산조인, 감초 및 인진호를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계, 혼합물의 추출물을 수득하는 단계 및 추출물을 건조하는 단계를 포함한다.The method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleeping disorders according to an embodiment of the present invention includes preparing a mixture by mixing Sanjoin, licorice, and Injinho, obtaining an extract of the mixture, and drying the extract. Includes.
일 실시형태에 따르면, 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합할 수 있다.According to one embodiment, Sanjoin, licorice, and Injinho may be mixed at a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5.
일 실시형태에 따르면, 추출물은 증류수, 메탄올 및 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 용매로 추출될 수 있다.According to one embodiment, the extract may be extracted with any one solvent selected from the group consisting of distilled water, methanol, and ethanol.
일 실시형태에 따르면, 추출물은 동결건조할 수 있다.According to one embodiment, the extract may be lyophilized.
본 발명의 일 실시형태에 따르면, 산조인, 감초 및 인진호 추출물을 유효성분으로 포함하여 반려동물의 수면장애를 개선할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, sleep disorders in companion animals can be improved by including extracts of Sanjoin, Licorice root, and Injinho as active ingredients.
본 발명의 다른 실시형태에 따르면, 산조인, 감초 및 인진호를 포함하는 복합 추출물을 사용함으로써 독성이 있는 인진호 및 산조인 추출물의 함유량을 감소시키더라도, 인진호 및 산조인 추출물의 함유량을 유지하였을 때 각각의 단독 추출물이 갖는 신경안정 및 수면장애의 효과보다 개선되는 동물 사료를 제조할 수 있다.According to another embodiment of the present invention, even if the content of the toxic Injinho and Sanjoin extracts is reduced by using a complex extract containing Sanjoin, licorice, and Injinho, when the content of Injinho and Sanjoin extracts is maintained, each individual extract It is possible to manufacture animal feed that improves the effects on nervous stability and sleep disorders.
도 1은 유기 형질 해마조직 절편을 배양하는 과정을 촬영한 이미지이다.
도 2는 해마조직 절편과 MEA 시스템을 이용한 실험셋팅 과정을 촬영한 이미지이다.
도 3은 MEA를 이용하여 지속적인 신경활동을 측정하는 과정을 나타낸 이미지이다.
도 4a는 천연 추출물 농도별 treatment(시약 처리) 시 신경활동 정도를 나타내는 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4b는 천연 추출물의 농도별 aCSF 세척(washing) 시에 신경활동 정도를 나타내는 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5a는 복합 추출물의 농도별 treatment(시약 처리) 시에 신경활동 정도를 나타내는 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5b는 복합 추출물의 농도별 처리 후 washing(aCSF 세척) 시에 신경활동 정도를 나타내는 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6은 각 경구 투여 물질에 따른 쥐의 수면시간을 나타낸 그래프이다.Figure 1 is an image taken of the process of culturing organic hippocampal tissue slices.
Figure 2 is an image taken of the experimental setting process using a hippocampal tissue slice and an MEA system.
Figure 3 is an image showing the process of measuring continuous neural activity using MEA.
Figure 4a is a graph showing the change in the total number of spikes indicating the degree of neural activity during treatment (reagent treatment) by natural extract concentration.
Figure 4b is a graph showing the change in total spike number indicating the degree of neural activity during aCSF washing according to concentration of natural extract.
Figure 5a is a graph showing the change in the total number of spikes indicating the degree of neural activity during treatment (reagent treatment) by concentration of the complex extract.
Figure 5b is a graph showing the change in the total number of spikes indicating the degree of neural activity during washing (aCSF washing) after treatment with different concentrations of the complex extract.
Figure 6 is a graph showing the sleep time of rats according to each orally administered substance.
이하 첨부 도면들 및 첨부 도면들에 기재된 내용들을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세하게 설명하지만, 본 발명이 실시예에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings and the contents described in the accompanying drawings, but the present invention is not limited or limited by the embodiments.
본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 "포함한다(comprises)" 및/또는 "포함하는(comprising)"은 언급된 구성요소, 단계, 동작 및/또는 소자는 하나 이상의 다른 구성요소, 단계, 동작 및/또는 소자의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다.The terminology used herein is for describing embodiments and is not intended to limit the invention. As used herein, singular forms also include plural forms, unless specifically stated otherwise in the context. As used herein, “comprises” and/or “comprising” refers to the presence of one or more other components, steps, operations and/or elements. or does not rule out addition.
본 명세서에서 사용되는 "실시예", "예", "측면", "예시" 등은 기술된 임의의 양상(aspect) 또는 설계가 다른 양상 또는 설계들보다 양호하다거나, 이점이 있는 것으로 해석되어야 하는 것은 아니다.As used herein, “embodiment,” “example,” “aspect,” “example,” etc. should be construed to mean that any aspect or design described is better or advantageous than other aspects or designs. It's not like that.
또한, '또는' 이라는 용어는 배타적 논리합 'exclusive or'이기보다는 포함적인 논리합 'inclusive or'를 의미한다. 즉, 달리 언급되지 않는 한 또는 문맥으로부터 명확하지 않는 한, 'x가 a 또는 b를 이용한다'라는 표현은 포함적인 자연 순열들(natural inclusive permutations) 중 어느 하나를 의미한다.Additionally, the term 'or' means an inclusive OR 'inclusive or' rather than an exclusive OR 'exclusive or'. That is, unless otherwise stated or clear from the context, the expression 'x uses a or b' means any of the natural inclusive permutations.
또한, 본 명세서 및 청구항들에서 사용되는 단수 표현("a" 또는 "an")은, 달리 언급하지 않는 한 또는 단수 형태에 관한 것이라고 문맥으로부터 명확하지 않는 한, 일반적으로 "하나 이상"을 의미하는 것으로 해석되어야 한다.Additionally, as used in this specification and claims, the singular expressions “a” or “an” generally mean “one or more,” unless otherwise indicated or it is clear from the context that the singular refers to singular forms. It should be interpreted as
이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세하게 설명하기로 한다. Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the attached drawings.
본 발명은 산조인(Zizyphus jujuba Miller), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fisch) 및 인진호(Artemisiae capillaris Thunb)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders containing extracts of Zizyphus jujuba Miller, Glycyrrhiza uralensis Fisch, and Artemisiae capillaris Thunb as active ingredients.
'추출물'은 추출하는 대상이 되는 원재료와 용매를 특정 조건 하에서 접촉시킴으로써 원재료에 함유된 유효성분을 분리한 것이다.‘Extract’ is the separation of the active ingredients contained in the raw material by bringing the raw material to be extracted into contact with a solvent under specific conditions.
'신경안정'은 뇌중추 신경세포가 활동전위를 덜 만들어 내어 신경활동이 저하된 상태를 말한다.‘Nervous stability’ refers to a state in which neuronal activity is reduced as brain central neurons produce fewer action potentials.
'수면장애'는 한밤중에 기상하는 것, 다시 잠드는 데 어려움을 겪는 것, 너무 일찍 기상하는 것으로 특징 지어지는 병태를 포함할 수 있다.'Sleep disorders' can include conditions characterized by waking up in the middle of the night, difficulty falling back to sleep, or waking up too early.
실시예에 따라서는, 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 신경안정 기능은 신경세포의 스파이크(spike) 수 제어, 바람직하게는 스파이크(spike) 수 감소일 수 있고, 수면장애 개선 기능은 수면 지속 시간의 증가를 위한 것일 수 있다.Depending on the embodiment, the nervous stability function of the animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders may be controlling the number of spikes in nerve cells, preferably reducing the number of spikes, and the function of improving sleep disorders may be controlling the number of spikes in nerve cells. This may be for increasing duration.
'카페인'은 적정량 섭취 시에는 중추신경계와 말초신경계를 자극하여 집중력 향상, 졸음 방지의 효과가 있지만, 과다하게 섭취하면 신경과민, 흥분, 불면을 유발할 수 있다. 카페인은 수면을 극하게 장애하는 요소로, 본 발명에서는 의도적으로 수면장애 상황을 만들기 위해 사용하였다. When consumed in appropriate amounts, 'caffeine' stimulates the central and peripheral nervous systems to improve concentration and prevent drowsiness, but if consumed in excess, it can cause nervousness, excitement, and insomnia. Caffeine is a factor that severely hinders sleep, and was used in the present invention to intentionally create a sleep disorder situation.
본 발명에서는 산조인, 감초, 인진호를 혼합하여 복합 추출물을 수득하였고, 수득된 복합 추출물은 카페인으로 인해 높아진 신경 활성을 유의미하게 완화시키고, 카페인으로 인한 수면시간의 감소 또한 유의미하게 개선시켰다.In the present invention, a complex extract was obtained by mixing Sanjoin, Licorice root, and Injinho, and the obtained complex extract significantly alleviated the increased nerve activity caused by caffeine and also significantly improved the reduction in sleep time caused by caffeine.
본 발명의 동물 사료 조성물은 화학적으로 합성한 물질과 달리 자연에서 유효성분을 추출하여 이용하기 때문에 상기 조성물로 제조하는 동물 사료는 반려동물 등이 섭취 시 부작용을 최소화할 수 있다. Unlike chemically synthesized materials, the animal feed composition of the present invention extracts and uses active ingredients from nature, so the animal feed produced from the composition can minimize side effects when consumed by companion animals.
본 발명의 '동물 사료 조성물'은 반려동물, 가축동물, 야생동물의 신경안정 및 수면장애 개선 내지 완화하기 위해 사료에 첨가하거나 사료를 구성하는 물질일 수 있고, '반려동물'은 개, 고양이, 토끼 등 사람이 가까이 두는 동물을 모두 포함할 수 있다.The 'animal feed composition' of the present invention may be a substance added to or constituting feed to improve or alleviate nervous stability and sleep disorders in companion animals, domestic animals, and wild animals, and 'companion animal' refers to dogs, cats, This can include any animal that humans keep nearby, such as rabbits.
인진호는 일반적으로 독성이 있는 것으로 알려져 있고, 산조인은 독성이 과다하지는 않으나 다량 복용 시 독성을 나타낼 수 있다. 본 발명은 동물 사료를 구성하는 조성물에 관한 것으로, 사료는 장기간 연속적으로 섭취해야 하기 때문에 인진호와 산조인에 있어서, 소량이라도 오랜 기간 섭취로 인해 나타날 수 있는 독성을 최소화할 필요가 있다. Injinho is generally known to be toxic, and Sanjoin is not excessively toxic, but can be toxic when taken in large doses. The present invention relates to a composition that constitutes animal feed. Since the feed must be consumed continuously for a long period of time, it is necessary to minimize toxicity that may occur due to ingestion of even small amounts over a long period of time in Injinho and Sanjoin.
이에 본 발명에서는 동물 사료 조성물로써 산조인과 인진호를 함유량을 적게하여 복용 시 위험성은 낮추지만, 이로인해 효능이 저하되는 것을 보상하기 위하여 산조인, 감초, 인진호를 혼합하여 복합 추출물의 병용 투여에 의한 시너지 효과를 이용하였다. 즉, 본 발명에서는 산조인과 인진호의 함량을 낮추더라도 신경활동 작용에 대한 효능과 수면 지속 시간을 증가시키는 효능은 산조인과 인진호의 함량을 감소시키지 않은 단독 조성물과 비교하여 그 효능을 개선할 수 있게 하였다.Accordingly, in the present invention, the risk of taking Sanjoin and Injinho is lowered by reducing the content of Sanjoin and Injinho as an animal feed composition, but in order to compensate for the decrease in efficacy, Sanjoin, licorice, and Injinho are mixed to achieve a synergistic effect by combined administration of the complex extract. was used. In other words, in the present invention, even if the content of Sanjoin and Injinho is lowered, the effect on neural activity and the effect of increasing sleep duration can be improved compared to a single composition in which the content of Sanjoin and Injinho is not reduced. .
실시예에 따라서는, 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합하여, 복합 추출물로써 상승 효과를 나타낼 수 있다. Depending on the embodiment, Sanjoin, Licorice root, and Injinho may be mixed at a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5 to exhibit a synergistic effect as a complex extract.
바람직하게는 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 3 : 2 내지 4 : 0.5 내지 2의 중량비로 혼합하여, 신경안정 및 수면장애 개선 효과를 증가시키고, 인진호 및 산조인의 독성을 줄일 수 있다. Preferably, Sanjoin, licorice, and Injinho are mixed at a weight ratio of 1 to 3:2 to 4:0.5 to 2 to increase the effect of improving nervous stability and sleep disorders and reduce the toxicity of Injinho and Sanjoin.
더욱 바람직하게는 산조인, 감초 및 인진호를 2 : 3 : 1의 중량비로 혼합하여, 독성은 나타내지 않으면서 신경안정 및 수면장애 개선 효과는 극대화시킬 수 있다. 산조인, 감초 및 인진호의 중량비가 상기 범위를 벗어나면, 산조인과 인진호의 독성으로 인해 신경계 대사에 영향을 미쳐 수면장애 개선 효과를 저하시킬 수 있다.More preferably, Sanjoin, licorice, and Injinho are mixed at a weight ratio of 2:3:1 to maximize the effect of improving nervous stability and sleep disorders without showing toxicity. If the weight ratio of Sanjoin, licorice, and Injinho is outside the above range, the toxicity of Sanjoin and Injinho may affect nervous system metabolism, reducing the effect of improving sleep disorders.
실시예에 따라서는, 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물은 분말 형태일 수 있다. 상기 동물 사료 조성물은 동물 사료 제조 시 첨가될 수도 있고, 동물 사료 완성품에 첨가하는 용도로도 사용할 수 있다. 또한, 동물 사료 조성물의 형태는 분말에 한정되지 않으며, 동물 사료의 첨가물로 사용하기 용이한 제형일 수 있다. Depending on the embodiment, the animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders may be in powder form. The animal feed composition may be added when manufacturing animal feed, and may also be used to add to finished animal feed. Additionally, the form of the animal feed composition is not limited to powder, and may be a formulation that is easy to use as an additive to animal feed.
실시예에 따라서는, 산조인, 감초 및 인진호 추출물은 1일(day) 단위 5mg/kg 내지 100mg/kg의 용량으로 경구 복용할 수 있다. 바람직하게는 1일(day) 단위 20mg/kg 내지 30mg/kg의 용량으로 경구 복용할 수 있다. 복합 조성물을 상기 범위 미만으로 복용 시에는 신경안정 및 수면장애 개선의 효과가 나타나지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과하여 복용 시에는 조성물이 함유하는 독성의 발현이 강해질 수 있다.Depending on the embodiment, Sanjoin, licorice and Injinho extracts can be taken orally at a dose of 5 mg/kg to 100 mg/kg per day. Preferably, it can be taken orally at a dose of 20 mg/kg to 30 mg/kg per day. When the complex composition is taken below the above range, the effects of improving nervous stability and sleep disorders may not appear, and when taken above the above range, the toxicity contained in the composition may become stronger.
산조인, 감초 및 인진호 추출물을 동물, 특히 반려동물의 사료 조성물로 사용하는 이유는 의사소통이 불가하므로 인위적인 강제 투여보다는 자연적인 취식으로 섭취하게 하는 방법이 용이하기 때문이다.The reason why Sanjoin, Licorice and Injinho extracts are used as feed compositions for animals, especially companion animals, is because they cannot communicate, so it is easier to make them ingested through natural intake rather than artificially forced administration.
본 발명에 따른 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법은 산조인, 감초 및 인진호를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계, 혼합물의 추출물을 수득하는 단계 및 추출물을 건조하는 단계를 포함한다.The method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleeping disorders according to the present invention includes preparing a mixture by mixing Sanjoin, licorice, and Injinho, obtaining an extract of the mixture, and drying the extract.
신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법을 구체적으로 살펴보면 다음과 같다. 산조인, 감초 및 인진호를 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계 이전에, 각 천연물을 분쇄하여 준비한다. 분쇄된 각 천연물들을 혼합하여 혼합물 상태로 제조한 후 혼합물의 추출물을 수득하는 단계에서는 증류수를 가하여 열수 추출한다. 혼합물의 추출물은 추출액 상태로 얻어지며, 추출액을 여과한다. 여과된 추출액은 농축 과정과 건조 과정을 거친다. A detailed look at the manufacturing method of the animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders is as follows. Before preparing a mixture by mixing Sanjoin, licorice, and Injinho, each natural product is ground and prepared. Each pulverized natural product is mixed to prepare a mixture, and then in the step of obtaining an extract of the mixture, distilled water is added and hot water extraction is performed. The extract of the mixture is obtained in the form of an extract, and the extract is filtered. The filtered extract goes through concentration and drying processes.
건조된 복합 추출물을 분말화시킨 후, 열량과 풍미를 더하기 위해 지방과 향을 첨가하고, 압축시켜 사료의 모양으로 만든다.After the dried complex extract is powdered, fat and flavor are added to add calories and flavor, and it is compressed into the shape of feed.
실시예에 따라서는, 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합하여, 복합 추출물로써 상승 효과를 나타낼 수 있다. Depending on the embodiment, Sanjoin, Licorice root, and Injinho may be mixed at a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5 to exhibit a synergistic effect as a complex extract.
바람직하게는 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 3 : 2 내지 4 : 0.5 내지 2의 중량비로 혼합하여, 신경안정 및 수면장애 개선 효과를 증가시키고, 인진호 및 산조인의 독성을 줄일 수 있다. Preferably, Sanjoin, licorice, and Injinho are mixed at a weight ratio of 1 to 3:2 to 4:0.5 to 2 to increase the effect of improving nervous stability and sleep disorders and reduce the toxicity of Injinho and Sanjoin.
더욱 바람직하게는 산조인, 감초 및 인진호를 2 : 3 : 1의 중량비로 혼합하여, 독성은 나타내지 않으면서 신경안정 및 수면장애 개선 효과는 극대화시킬 수 있다. 산조인, 감초 및 인진호의 중량비가 상기 범위를 벗어나면, 산조인과 인진호의 독성으로 인해 신경계 대사에 영향을 미쳐 수면장애 개선 효과를 저하시킬 수 있다.More preferably, Sanjoin, licorice, and Injinho are mixed at a weight ratio of 2:3:1 to maximize the effect of improving nervous stability and sleep disorders without showing toxicity. If the weight ratio of Sanjoin, licorice, and Injinho is outside the above range, the toxicity of Sanjoin and Injinho may affect nervous system metabolism, reducing the effect of improving sleep disorders.
실시예에 따라서는, 추출물은 증류수, 메탄올 및 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 용매로 추출된다.Depending on the embodiment, the extract is extracted with any one solvent selected from the group consisting of distilled water, methanol, and ethanol.
천연물 원재료와 용매는 10 % w/v 내지 20 % w/v로 추출할 수 있다. 분쇄된 천연물과 용매의 비율이 10 % w/v 미만이면 추출물에 천연물의 유효성분이 적게 추출될 수 있고, 20 % w/v를 초과하면 추출액의 점도가 증가하여 여과 과정에서 유효성분이 추출되는 것을 저해할 수 있다.Natural raw materials and solvents can be extracted at 10% w/v to 20% w/v. If the ratio of the pulverized natural product to the solvent is less than 10% w/v, less active ingredients of the natural product may be extracted in the extract, and if it exceeds 20% w/v, the viscosity of the extract increases, preventing the extraction of active ingredients during the filtration process. can do.
실시예에 따라서는, 추출물을 동결건조할 수 있다. 동결 건조 공정은 승화에 의해서 건조되는 것이기 때문에 추출물의 물리적, 화학적 변화가 적고, 거의 탈수된 상태이므로 효소적 갈변화, 단백질의 변성, 각종 분해반응이 최소화된다. 또한 동결건조된 추출물은 무게가 가볍고, 상온유통이 가능하고, 저장기간이 길다.Depending on the example, the extract may be freeze-dried. Because the freeze-drying process involves drying by sublimation, there are few physical and chemical changes in the extract, and since it is almost dehydrated, enzymatic browning, protein denaturation, and various decomposition reactions are minimized. Additionally, freeze-dried extracts are light in weight, can be distributed at room temperature, and have a long storage period.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples.
본 발명에서는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물로 산조인, 감초 및 인진호 복합 추출물을 사용하였고, 하기 실시예를 이용한 신경신호 분석을 통해 수면장애를 완화할 수 있는 복합 추출물 소재를 발굴하고, 동물실험을 통해 수면 시간을 분석하여 산조인, 감초 및 인진호의 단독 추출물보다 복합 추출물의 효능이 더 우수함을 입증하고자 한다.In the present invention, complex extracts of Sanjoin, licorice, and Injinho were used as animal feed compositions for improving nervous stability and sleep disorders, and through nerve signal analysis using the following examples, complex extract materials that can alleviate sleep disorders were discovered, and animal feed compositions for improving nervous stability and sleep disorders were used. By analyzing sleep time through experiments, we aim to prove that the combined extract is more effective than the single extracts of Sanjoin, Licorice root, and Injinho.
[비교 준비예 1-1] 산조인 추출물[Comparative Preparation Example 1-1] Sanjoin Extract
분쇄한 산조인 100g에 증류수 1000mL(10 % w/v)를 가하여 고압멸균기를 이용하여 121℃ 15psi 조건에서 2시간동안 가열하여 추출(열수 추출)하였다. 수득된 추출액은 Whatman No. 1 필터 페이퍼 (Whatman International Ltd., Maidstone, UK)를 이용하여 여과하였다. 여과된 추출액은 농축기(Eyela Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 40℃에서 5시간 동안 감압 농축하였다. 이후 농축된 추출액은 -70℃ 5 mTorr에서 5일간 동결건조 시킨 후 그라인더로 분쇄하였다. 1000 mL (10 % w/v) of distilled water was added to 100 g of pulverized acid solution and extracted (hot water extraction) by heating for 2 hours at 121°C and 15 psi using a high-pressure sterilizer. The obtained extract was treated with Whatman No. 1 Filtered using filter paper (Whatman International Ltd., Maidstone, UK). The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 40°C for 5 hours using a concentrator (Eyela Co., Tokyo, Japan). Afterwards, the concentrated extract was freeze-dried at -70°C and 5 mTorr for 5 days and then ground with a grinder.
[비교 준비예 1-2] 감초 추출물[Comparative Preparation Example 1-2] Licorice extract
분쇄한 감초 100g에 증류수 1000mL(10 % w/v)를 가하여 고압멸균기를 이용하여 121℃ 15psi 조건에서 2시간동안 가열하여 추출(열수 추출)하였다. 수득된 추출액은 Whatman No. 1 필터 페이퍼 (Whatman International Ltd., Maidstone, UK)를 이용하여 여과하였다. 여과된 추출액은 농축기(Eyela Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 40℃에서 5시간 동안 감압 농축하였다. 이후 농축된 추출액은 -70℃ 5 mTorr에서 5일간 동결건조 시킨 후 그라인더로 분쇄하였다. 1000 mL (10 % w/v) of distilled water was added to 100 g of crushed licorice and extracted (hot water extraction) by heating for 2 hours at 121°C and 15 psi using a high-pressure sterilizer. The obtained extract was treated with Whatman No. 1 Filtered using filter paper (Whatman International Ltd., Maidstone, UK). The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 40°C for 5 hours using a concentrator (Eyela Co., Tokyo, Japan). Afterwards, the concentrated extract was freeze-dried at -70°C and 5 mTorr for 5 days and then ground with a grinder.
[비교 준비예 1-3] 인진호 추출물[Comparative Preparation Example 1-3] Injinho Extract
분쇄한 인진호 100g에 증류수 1000mL(10 % w/v)를 가하여 고압멸균기를 이용하여 121℃ 15psi 조건에서 2시간동안 가열하여 추출(열수 추출)하였다. 수득된 추출액은 Whatman No. 1 필터 페이퍼 (Whatman International Ltd., Maidstone, UK)를 이용하여 여과하였다. 여과된 추출액은 농축기(Eyela Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 40℃에서 5시간 동안 감압 농축하였다. 이후 농축된 추출액은 -70℃ 5 mTorr에서 5일간 동결건조 시킨 후 그라인더로 분쇄하였다. 1000 mL (10 % w/v) of distilled water was added to 100 g of pulverized Injinho and extracted (hot water extraction) by heating for 2 hours at 121°C and 15 psi using a high-pressure sterilizer. The obtained extract was treated with Whatman No. 1 Filtered using filter paper (Whatman International Ltd., Maidstone, UK). The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 40°C for 5 hours using a concentrator (Eyela Co., Tokyo, Japan). Afterwards, the concentrated extract was freeze-dried at -70°C and 5 mTorr for 5 days and then ground with a grinder.
[준비예 1] 복합(산조인, 감초, 인진호) 추출물[Preparation Example 1] Complex (Sanjoin, Licorice, Injinho) Extract
분쇄한 산조인 30g, 감초 45g, 인진호 15g에 증류수 900mL(10 % w/v)를 가하여 고압멸균기를 이용하여 121℃ 15psi 조건에서 2시간동안 가열하여 추출(열수 추출)하였다. 수득된 추출액은 Whatman No. 1 필터 페이퍼 (Whatman International Ltd., Maidstone, UK)를 이용하여 여과하였다. 여과된 추출액은 농축기(Eyela Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 40℃에서 5시간 동안 감압 농축하였다. 이후 농축된 추출액은 -70℃ 5 mTorr에서 5일간 동결건조 시킨 후 그라인더로 분쇄하였다. 900 mL (10 % w/v) of distilled water was added to 30 g of pulverized Sanzoin, 45 g of licorice, and 15 g of Injinho, and extracted (hot water extraction) by heating for 2 hours at 121°C and 15 psi using a high-pressure sterilizer. The obtained extract was treated with Whatman No. 1 Filtered using filter paper (Whatman International Ltd., Maidstone, UK). The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 40°C for 5 hours using a concentrator (Eyela Co., Tokyo, Japan). Afterwards, the concentrated extract was freeze-dried at -70°C and 5 mTorr for 5 days and then ground with a grinder.
각 천연물들의 추출에 이용된 양과 수율은 아래 표와 같았다.The amounts and yields used for extraction of each natural product were as shown in the table below.
추출물/원물)extract/raw material)
[준비예 2] 유기 형질 해마조직 절편 배양(Organotypic hippocampal slice culture)[Preparation Example 2] Organotypic hippocampal slice culture
도 1은 유기 형질 해마조직 절편을 배양하는 과정을 촬영한 이미지이다. 도 1의 a를 참고하면, Sprague-Dawley 쥐(SD rat) 7일령을 얼음마취시킨 후, 빠르게 뇌를 적출하여 HBSS 액체 배지(HBSS media; LB 003-01, Sigma, St. Louis, Mo, USA)에 넣었다. 도 1의 b를 참고하면, 뇌를 반구로 가른 뒤, 좌/우 뇌 각각에서 해마를 분리하였다. 도 1의 c를 참고하면, 세단기(chopper; Mickle Laboratory Engineering Co., Surrey, UK)를 이용하여 해마를 400μM로 슬라이스(slice)하였다. 슬라이스된 해마조직 절편은 0.4μM 배양 인서트(culture insert; Millicell-CM; Millipore, Bedford, MA, USA)에 4~5개씩 넣은 후 6-웰 플레이트(6-well plate)에 넣었다. 그 후 배양 배지 (MEM; 25% (v/v) Hank's balanced salt solution, supplemented with 20mM HEPES, 6 g/L D-glucose, 1mM Lglutamine, 25% (v/v) heat-inactivated horse serum and 1% penicillin-streptomycin, pH = 7.1)를 2일에 한 번씩 교체해주며 36℃ 5% CO2가 유지되는 배양기(incubator)에 14일간 배양하였다.Figure 1 is an image taken of the process of culturing organic hippocampal tissue slices. Referring to Figure 1 a, after anesthetizing 7-day-old Sprague-Dawley rats (SD rats) with ice, the brains were quickly removed and placed in HBSS liquid medium (HBSS media; LB 003-01, Sigma, St. Louis, Mo, USA). ) was placed in. Referring to Figure 1b, the brain was divided into hemispheres, and the hippocampus was separated from each of the left and right brains. Referring to Figure 1c, the hippocampus was sliced at 400 μM using a chopper (Mickle Laboratory Engineering Co., Surrey, UK). The sliced hippocampal tissue fragments were placed 4 to 5 times into a 0.4 μM culture insert (Millicell-CM; Millipore, Bedford, MA, USA) and then placed in a 6-well plate. Then, culture medium (MEM; 25% (v/v) Hank's balanced salt solution, supplemented with 20mM HEPES, 6 g/L D-glucose, 1mM Lglutamine, 25% (v/v) heat-inactivated horse serum and 1% penicillin-streptomycin, pH = 7.1) was replaced every two days and cultured in an incubator maintained at 36°C and 5% CO 2 for 14 days.
[준비예 3] 유기 형질 해마조직 절편을 다중 전극 어레이 시스템에 셋팅하여 준비(Preparation of organotypic hippocampal slice tissue in the MEA)[Preparation Example 3] Preparation of organotypic hippocampal slice tissue in the MEA by setting it in a multi-electrode array system
도 2는 해마조직 절편과 MEA 시스템을 이용한 실험셋팅 과정을 촬영한 이미지이다. 준비예 2에서 14일 동안 배양한 해마조직 절편을 멤브레인 인서트(membrane insert)로부터 떼어낸 후 0.01%의 폴리에틸렌이민(polyethylenimine)으로 코팅된 8x8 다중 전극 어레이(multielectrode array, MEA)에 붙였다. 해마조직 절편(brain slice on MEA)이 붙어있는 MEA를 MEA1060 증폭기(Amplifier of MEA)의 인터페이스로 이동시킨 후 인공 뇌척수액(aCSF) (10mM glucose, 114 mM NaCl, 3 mM KCl, 26 mM NaHCO3, 2mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 20 mM HEPES, pH 7.4)을 3mL/min로 관류(perfusion)시켜주며 30분간 안정화시켰다. MEA와 관류시키는 aCSF의 온도는 33℃로 유지시켜주었다.Figure 2 is an image taken of the experimental setting process using a hippocampal tissue slice and an MEA system. In Preparation Example 2, the hippocampal tissue slice cultured for 14 days was removed from the membrane insert and attached to an 8x8 multielectrode array (MEA) coated with 0.01% polyethylenimine. After moving the MEA with the hippocampal tissue slice (brain slice on MEA) attached to the interface of the MEA1060 Amplifier of MEA, artificial cerebrospinal fluid (aCSF) (10mM glucose, 114mM NaCl, 3mM KCl, 26mM NaHCO3 , 2mM) CaCl 2 , 1mM MgCl 2 , 20mM HEPES, pH 7.4) was perfused at 3mL/min and stabilized for 30 minutes. The temperature of aCSF perfused with MEA was maintained at 33°C.
[실시예 및 비교예][Examples and Comparative Examples]
유기 형질 해마 절편 배양(Organotypic hippocampal slice culture)을 통해 배양된 해마조직 절편(준비예 2)으로 MEA 시스템을 이용하여 신경활동(neural activity)을 측정하였다(준비예 3). Neural activity was measured using a MEA system using hippocampal tissue slices (preparation example 2) cultured through organotypic hippocampal slice culture (preparation example 3).
도 3은 MEA를 이용하여 지속적인 신경활동을 측정하는 과정을 나타낸 이미지이다. 기록은 총 9분간 진행하며, 첫 3분간은 aCSF만 관류, 중간 3분은 시약 처리(treatment), 마지막 3분은 다시 aCSF로 관류(washing)하였다. 안정화가 완료되면 MEA의 모든 채널에서 해마조직 절편의 신경 활성을 측정(data collection)하며, 측정되는 샘플 주파수(sampling frequency)는 25 kHz로 하였다. MEA 전체에서 처리하는 시약에 따른 활성 전위의 빈도를 알아내기 위하여 4차 밴드 패스 필터(4th band pass filter) 방식을 이용하여 임계값을 정의하였다.Figure 3 is an image showing the process of measuring continuous neural activity using MEA. The recording lasted for a total of 9 minutes, with only aCSF perfused for the first 3 minutes, reagent treatment for the middle 3 minutes, and washing with aCSF again for the last 3 minutes. Once stabilization was completed, the neural activity of the hippocampal tissue slice was measured (data collection) in all channels of the MEA, and the sampling frequency measured was 25 kHz. In order to determine the frequency of action potentials according to the reagents processed throughout the MEA, a threshold value was defined using the 4 th band pass filter method.
시약으로는 카페인(caffeine), 산조인 추출물(비교 준비예 1-1), 감초 추출물(비교 준비예 1-2), 인진호 추출물(비교 준비예 1-3), 복합 추출물(준비예 1)을 사용하였으며, 복합 추출물은 산조인, 감초 및 인진호를 혼합하여 추출한 물질을 의미한다. 실험에 사용한 비교예 및 실시예는 아래 표에 정리하여 나타내었다. 각 추출물의 농도는 aCSF에 녹인 것을 의미한다.Caffeine, Sanjoin extract (Comparative Preparation Example 1-1), licorice extract (Comparative Preparation Example 1-2), Injinho extract (Comparative Preparation Example 1-3), and complex extract (Preparation Example 1) were used as reagents. Complex extract refers to a substance extracted by mixing Sanjoin, Licorice root, and Injinho. Comparative examples and examples used in the experiment are summarized in the table below. The concentration of each extract refers to that dissolved in aCSF.
데이터는 초반 3분간 기록된 스파이크(spike)의 총 수를 100(%)으로 표준화(normalize)하여, 시약을 처리한 중반 3분과 마지막 aCSF 관류(washing)한 후반 3분 동안의 변화값을 나타내었다. The data was normalized to 100 (%) for the total number of spikes recorded in the first 3 minutes, and showed the change values between the middle 3 minutes of reagent treatment and the last 3 minutes of aCSF perfusion (washing). .
(시약 처리, treatment)(reagent treatment, treatment)
(washing)(washing)
[실험예 1] 천연 추출물 처리에 따른 지속적 신경 활성 변화[Experimental Example 1] Continuous neural activity changes following natural extract treatment
단독 추출물 및 복합 추출물이 카페인 처리로 인한 신경 활성 증가를 감소시키는 정도를 확인하기 위하여 카페인과 추출물을 함께 처리하여 해마조직의 신경활성에 미치는 영향을 평가하였다. 실험 결과는 t-test를 이용하여 분석하였고, 통계적으로 유효한 차이의 여부는 p-value를 이용하여 판별하였으며, p<0.01일 때 통계적으로 유효한 차이가 있는 것으로 판별하였다.In order to determine the extent to which single extracts and combined extracts reduce the increase in neural activity caused by caffeine treatment, caffeine and extracts were treated together to evaluate the effect on the neural activity of hippocampal tissue. The experimental results were analyzed using t-test, and statistically valid differences were determined using p-value. When p<0.01, it was determined that there was a statistically valid difference.
도 4a는 천연 추출물 treatment(시약 처리) 시 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다. Figure 4a is a graph showing the change in total number of spikes upon natural extract treatment (reagent treatment).
스파이크(spike) 수의 비교를 통해 지속적 신경 활성(Continuous neural activity)의 변화를 알 수 있다. 뇌 신경세포의 스파이크 숫자는 뇌 신경세포의 활동을 나타내는 직접적인 지표이다. 뇌 신경세포의 스파이크 수가 줄어들면 신경활동이 안정되었다는 뜻이므로 스파이크 수의 비교를 통해 추출물로 인한 신경안정 효과를 분석할 수 있다. 또한, 신경활동이 안정됨으로써 수면이라는 행동으로 귀결될 수 있다.By comparing the number of spikes, changes in continuous neural activity can be seen. The number of spikes in brain neurons is a direct indicator of the activity of brain neurons. If the number of spikes in brain neurons decreases, it means that neural activity has stabilized, so the nerve stabilizing effect caused by the extract can be analyzed by comparing the number of spikes. Additionally, the stabilization of neural activity can result in the behavior of sleep.
도 4b는 천연 추출물의 농도별 aCSF 세척(washing) 시에 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다. 각 군별 스파이크 수의 비교를 통해 지속적 신경 활성의 변화를 알 수 있다. 또한, 도 4a 및 도 4b의 표준화된 총 스파이크(%)(Normarlized total spike)는 control의 스파이크 수를 100%로 보았을 때 나머지 실험군들의 스파이크 수를 환산한 값이다. 'Control'은 아무 것도 주입하지 않은 군(비교예 1-1), 'Caffeine'은 카페인만 주입한 군(비교예 1-2), '산조인'(비교예 1-3), '감초' (비교예 1-4), '인진호' (비교예 1-5)는 카페인과 함께 각 천연물의 추출물을 주입한 군을 의미하고, '복합물' (실시예 1-2)은 카페인과 함께 산조인, 감초 및 인진호 혼합물의 추출물을 의미한다. 또한, 도 4a의 'Treatment'는 초반 aCSF 관류 후 시약 처리까지 수행한 단계이고, 도 4b의 'Washing'은 초반 aCSF 관류 및 시약 처리(treatment) 후 후반 aCSF 관류로 세척까지 수행한 단계를 의미한다.Figure 4b is a graph showing the change in total number of spikes during aCSF washing according to concentration of natural extract. Changes in continuous neural activity can be seen through comparison of the number of spikes in each group. In addition, the normalized total spike (%) in FIGS. 4A and 4B is a value calculated by converting the number of spikes of the remaining experimental groups when considering the number of spikes in the control as 100%. 'Control' was a group in which nothing was injected (Comparative Example 1-1), 'Caffeine' was a group in which only caffeine was injected (Comparative Example 1-2), 'Sanjoin' (Comparative Example 1-3), and 'Licorice' ( Comparative Example 1-4), 'Injinho' (Comparative Example 1-5) refers to a group injected with extracts of each natural product along with caffeine, and 'composite' (Example 1-2) refers to a group in which Sanjoin and licorice are added together with caffeine. and extracts of Injinho mixture. In addition, 'Treatment' in Figure 4a refers to a step performed from initial aCSF perfusion to reagent treatment, and 'Washing' in Figure 4b refers to a step performed from early aCSF perfusion and reagent treatment to washing with late aCSF perfusion. .
도 4a를 참고하면, 카페인을 처리한 경우(비교예 1-2) 아무것도 처리하지 않은 경우(비교에 1-1)와 비교하여 스파이크 수(신경 활성)가 급격히 증가하였다. 또한, 카페인만 처리한 군(비교예 1-2)과 카페인 및 복합물을 함께 처리한 군 간의 비교를 했을 때, 시약 처리(treatment) 단계에서는 모두 활성이 감소하였으나 유의미한 결과가 나타내지는 않았다. Referring to Figure 4a, when treated with caffeine (Comparative Example 1-2), the number of spikes (neural activity) increased sharply compared to when treated with nothing (Comparative Example 1-1). In addition, when comparing the group treated only with caffeine (Comparative Example 1-2) and the group treated with both caffeine and the complex, activity decreased in both reagent treatment stages, but no significant results were shown.
도 4b를 참고하면, 천연 추출물의 주입을 멈추고 aCSF로 세척한 후에는 카페인 및 추출물을 처리한 군들은 카페인만 처리한 군(비교예 1-2)보다 모두 신경 활성이 감소하였다. 이중 산조인 군(비교예 1-3), 감초 군(비교예 1-4), 복합물 군(실시예 1-2)은 신경 활성이 유의미하게 감소한 반면, 인진호 군(비교예 1-5)은 유의성을 나타내지 못하였다 (** p<0.01, *** p<0.001; vs. caffeine). Referring to Figure 4b, after stopping the injection of the natural extract and washing with aCSF, the neural activity of the groups treated with caffeine and the extract was decreased compared to the group treated only with caffeine (Comparative Example 1-2). Among them, the Sanjoin group (Comparative Example 1-3), the licorice group (Comparative Example 1-4), and the composite group (Example 1-2) showed a significant decrease in nerve activity, while the Injinho group (Comparative Example 1-5) showed a significant decrease. (** p <0.01, *** p <0.001; vs. caffeine).
신경활성의 대사(metabolism)가 작용하기까지는 어느정도 시간이 소요되기 때문에 처리(Treatment) 단계에서는 추출물이 투입되고 있는 상황이라 반응이 나타나지 않았고, 세척(washing) 한 후에는 반응이 일어날 시간이 충분히 주어졌기 때문에 신경활성의 변화가 나타난다.Since it takes some time for the metabolism of neural activity to take effect, no reaction occurred during the treatment stage because the extract was being added, and after washing, sufficient time was given for the reaction to occur. Because of this, changes in neural activity occur.
추출물별로 살펴보면, 산조인 군(비교예 1-3)은 129.3±3.0%, 감초 군(비교예 1-4)은 138.4±6.2%, 인진호 군(비교예 1-5)은 171.9±15.6%, 복합물 군(실시예 1-2)은 102.8±8.3%로 복합추출물을 처리하였을 때 신경 활성이 가장 많이 감소하였다. 이러한 실험 결과는 산조인, 감초 인진호의 복합 추출물이 각각의 단일 추출물에 비해 카페인으로 인해 증가한 신경 활성 억제 효과가 더 뛰어남을 나타낸다.Looking at each extract, the Sanjoin group (Comparative Example 1-3) was 129.3±3.0%, the Licorice group (Comparative Example 1-4) was 138.4±6.2%, the Injinho group (Comparative Example 1-5) was 171.9±15.6%, and the complex In the group (Example 1-2), nerve activity decreased the most when treated with the complex extract, at 102.8 ± 8.3%. These experimental results indicate that the combined extract of Sanjoin and Licorice Injinho has a better effect of suppressing the increased nerve activity caused by caffeine compared to each single extract.
[실험예 2] 복합 추출물 농도별 처리에 따른 지속적 신경 활성 변화[Experimental Example 2] Continuous neural activity changes according to treatment at different concentrations of complex extracts
복합 추출물이 카페인 처리로 인한 신경 활성 증가를 감소시키는 정도를 확인하기 위하여 카페인과 복합 추출물을 농도별로 함께 처리하여 해마조직의 신경활성에 미치는 영향을 평가하였다.In order to determine the extent to which the complex extract reduces the increase in neural activity caused by caffeine treatment, caffeine and the complex extract were treated together at different concentrations to evaluate their effect on the neural activity of hippocampal tissue.
도 5a는 복합 추출물의 농도별 treatment(시약 처리) 시에 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다. 스파이크 수의 비교를 통해 지속적 신경 활성(Continuous neural activity)의 변화를 알 수 있다. 도 5b는 복합 추출물의 농도별 처리 후 washing(aCSF 세척) 시에 총 스파이크 수의 변화를 나타낸 그래프이다. 각 군별 스파이크 수의 비교를 통해 지속적 신경 활성의 변화를 알 수 있다. 또한, 도 5a 및 도 5b의 표준화된 총 스파이크(%)(Normarlized total spike)는 control의 스파이크 수를 100%로 보았을 때 나머지 실험군들의 스파이크 수를 환산한 값이다. 'Control' (비교예 1-1)은 아무 것도 투여하지 않은 군, 'Caffeine'은 카페인만 투여한 군 (비교예 1-2), '복합물 100 μg/mL' (실시예 1-1), '복합물 200 μg/mL' (실시예 1-2), '복합물 400 μg/mL' (실시예 1-3)는 카페인 및 복합 추출물을 농도별로 주입한 군을 의미한다. 또한, 도 5a의 'Treatment'는 초반 aCSF 관류 후 시약 처리까지 수행한 단계이고, 도 5b의 'Washing'은 초반 aCSF 관류 및 treatment 후 후반 aCSF 관류로 세척까지 수행한 단계를 의미한다.Figure 5a is a graph showing the change in the total number of spikes upon treatment (reagent treatment) by concentration of the complex extract. By comparing the number of spikes, changes in continuous neural activity can be seen. Figure 5b is a graph showing the change in the total number of spikes during washing (aCSF washing) after treatment with each concentration of the complex extract. Changes in continuous neural activity can be seen through comparison of the number of spikes in each group. In addition, the normalized total spike (%) in FIGS. 5A and 5B is a value calculated by converting the number of spikes of the remaining experimental groups when considering the number of spikes in the control as 100%. 'Control' (Comparative Example 1-1) was a group in which nothing was administered, 'Caffeine' was a group in which only caffeine was administered (Comparative Example 1-2), 'Complex 100 μg/mL' (Example 1-1), ‘Complex 200 μg/mL’ (Example 1-2) and ‘Complex 400 μg/mL’ (Example 1-3) refer to the group injected with caffeine and complex extract at different concentrations. In addition, 'Treatment' in Figure 5a refers to a step performed from initial aCSF perfusion to reagent treatment, and 'Washing' in Figure 5b refers to a step performed from early aCSF perfusion and treatment to washing with late aCSF perfusion.
도 5a를 참고하면, 카페인만 처리한 군과 카페인 및 복합물을 함께 처리한 군 간의 비교를 했을 때, 시약 처리(treatment) 단계에서 모두 활성이 감소하였으나 유의미한 수치를 나타내지는 않았다. Referring to Figure 5a, when comparing the group treated with only caffeine and the group treated with caffeine and the complex, activity decreased in both reagent treatment steps, but did not show a significant value.
반면, 도 5b를 참고하면, 시약의 주입을 멈추고 aCSF로 세척(washing)한 후에는 카페인 및 복합물 처리한 군들(실시예 1-1 ~ 1-3)은 카페인만 처리한 군(비교예 1-2)보다 모두 신경 활성이 유의미하게 감소하였다. 복합물의 농도별로 살펴보면, 복합물 100μg/mL군(실시예 1-1)은 132.8±5.2%, 복합물 200μg/mL군(실시예 1-2)은 102.7±8.3%, 복합물 400μg/mL 군(실시예 1-3)은 101.9±15.4%로 복합물 200μg/mL 군과 400μg/mL 군의 스파이크 변화가 control 군(비교예 1-1)과 비슷하게 나타났다(** p<0.01, *** p<0.001; vs. caffeine). On the other hand, referring to Figure 5b, after stopping the injection of the reagent and washing with aCSF, the groups treated with caffeine and the complex (Examples 1-1 to 1-3) were compared to the group treated only with caffeine (Comparative Example 1- In all cases, neural activity was significantly reduced compared to 2). Looking at the concentration of the complex, the complex 100 μg/mL group (Example 1-1) was 132.8 ± 5.2%, the complex 200 μg/mL group (Example 1-2) was 102.7 ± 8.3%, and the complex 400 μg/mL group (Example 1-3) was 101.9±15.4%, showing that the spike change in the complex 200μg/mL group and 400μg/mL group was similar to the control group (Comparative Example 1-1) (** p<0.01, *** p<0.001; vs. caffeine).
신경활성의 대사(metabolism)가 작용하기까지는 어느정도 시간이 소요되기 때문에 처리(Treatment) 단계에서는 추출물이 투입되고 있는 상황이라 반응이 나타나지 않았고, 세척(washing) 한 후에는 반응이 일어날 시간이 충분히 주어졌기 때문에 신경활성의 변화가 나타난다.Since it takes some time for the metabolism of neural activity to take effect, no reaction occurred during the treatment stage because the extract was being added, and after washing, sufficient time was given for the reaction to occur. Because of this, changes in neural activity occur.
실험예 2를 통해 복합추출물이 투여되면 카페인으로 인해 증가한 신경 활성이 감소될 수 있고, 더 나아가 수면 방해를 억제시켜 줄 수 있음을 시사한다.Experimental Example 2 suggests that administration of the complex extract can reduce the increased neural activity caused by caffeine and further suppress sleep disturbance.
[실험예 3] 추출물 복용에 따른 수면시간 분석 (동물 실험)[Experimental Example 3] Analysis of sleep time according to extract intake (animal experiment)
실험동물로 Sprague-Dawley(SD) 쥐 6주령을 선정하였으며, 실험 환경을 최대한 일정하게 유지하기 위해, 한 케이지 당 쥐를 1마리씩 넣어 사육하였다. 쥐는 25℃, 습도 50%, 조명(12시간 명/암)이 자동적으로 유지되고 음수와 식이가 자유롭게 공급되는 환경에서 하루동안 적응기간을 거치게 하였다. 설치류가 야행성이라는 점에 착안하여, 쥐가 본래 수면을 취해야 할 주간동안 녹화를 진행하기 위해 카페인(caffeine) 또는 천연 추출물은 오전 10시에 경구 투여를 실시하였다. Six-week-old Sprague-Dawley (SD) rats were selected as experimental animals, and in order to keep the experimental environment as constant as possible, one rat was placed per cage. Rats were allowed to undergo an adaptation period for one day in an environment of 25°C, 50% humidity, automatically maintained lighting (12 hours light/dark), and free supply of drinking water and food. Considering that rodents are nocturnal, caffeine or natural extracts were administered orally at 10 a.m. to conduct recordings during the day when the mice were supposed to sleep.
쥐에게 아래 표와 같은 물질을 경구 투여한 후, 캠코더(DCR-SR300, HMX-F90)를 이용하여 5시간 동안 쥐의 수면패턴을 녹화하였고, 분석은 멀티 채널 스톱워치를 이용하여 수면을 시작하는 시점부터 수면을 끝마칠 때까지의 시간을 합산하였다. 복합 추출물은 산조인, 감초 및 인진호를 혼합하여 추출한 물질을 의미한다.After orally administering the substances shown in the table below to rats, their sleep patterns were recorded for 5 hours using a camcorder (DCR-SR300, HMX-F90), and the time of sleep onset was analyzed using a multi-channel stopwatch. The time from start to end of sleep was added up. Complex extract refers to a substance extracted by mixing Sanjoin, Licorice root, and Injinho.
도 6은 각 경구 투여 물질에 따른 쥐의 수면시간을 나타낸 그래프이다. 앞서 실험예 1 및 실험예 2의 ex vivo(체외) 실험을 통해 각 추출물들이 수면방해를 억제시켜 줄 수 있는 가능성을 가지고 있음을 확인하였다. 이에 따라 실험예 3에서는 in vivo(체내) 실험을 통해 각 추출물들이 실제로 수면장애 영향을 막아줄 수 있는지 시험하였다. Figure 6 is a graph showing the sleep time of rats according to each orally administered substance. Previously, through ex vivo experiments in Experimental Examples 1 and 2, it was confirmed that each extract had the potential to suppress sleep disturbance. Accordingly, in Experimental Example 3, it was tested whether each extract could actually prevent the effects of sleep disorders through in vivo experiments.
도 6을 참고하면, 수면 지속시간(Sleep duration)을 분 단위로 나타내었다. 그래프에서'Control'은 아무 것도 투여하지 않은 군(비교예 2-1), 'Caffeine'은 카페인만 투여한 군(비교예 2-2), '산조인' (비교예 2-3), '감초' (비교예 2-4), '인진호' (비교예 2-5)는 카페인과 함께 각 천연물의 추출물을 투여한 군을 의미하고, '복합물'(실시예 2)은 카페인과 함께 산조인, 감초 및 인진호 혼합물의 추출물을 의미한다.Referring to Figure 6, sleep duration is shown in minutes. In the graph, 'Control' is the group where nothing was administered (Comparative Example 2-1), 'Caffeine' is the group where only caffeine was administered (Comparative Example 2-2), 'Sanjoin' (Comparative Example 2-3), and 'Licorice'. ' (Comparative Example 2-4), 'Injinho' (Comparative Example 2-5) refers to the group administered extracts of each natural product together with caffeine, and 'complex' (Example 2) refers to the group administered Sanjoin and licorice along with caffeine. and extracts of Injinho mixture.
실험결과 control 군(비교예 2-1)에 비해 카페인을 투여한 군(비교예 2-2)의 수면시간이 현저히 낮아졌다. 추출물 별로는 산조인 군(비교예 2-3)은 132.8±24.6 분, 감초 군(비교예 2-4)은 95.0±12.6 분, 인진호 군(비교예 2-5)은 74.5±13.8 분, 복합물 군(실시예 2)은 134.3±8.4 분으로 모든 추출물 처리 군에서 수면시간이 증가하였지만, 인진호 군은 통계적으로 유의성을 입증하기 어려운 결과를 나타내었다. 다른 군에 비해 복합물 군의 수면시간이 control 군과 거의 비슷하게 가장 높게 증가하였다(* p<0.05, *** p<0.001; vs. caffeine). 이와 같은 결과는 산조인 추출물, 감초 추출물, 인진호 추출물, 이들의 복합 추출물 중에서 복합 추출물을 복용 시 각각의 단일 추출물보다 수면이 방해되는 요인이 있을 때, 이를 극복하는 효과가 크다고 볼 수 있다. 이로 인해 상기 복합 추출물은 다양한 극한 환경 변화로 인한 수면장애를 극복할 수 있는 강력한 물질이 될 수 있음을 시사한다.As a result of the experiment, the sleep time of the caffeine-administered group (Comparative Example 2-2) was significantly lower than the control group (Comparative Example 2-1). By extract, the Sanjoin group (Comparative Example 2-3) was 132.8 ± 24.6 minutes, the Licorice group (Comparative Example 2-4) was 95.0 ± 12.6 minutes, the Injinho group (Comparative Example 2-5) was 74.5 ± 13.8 minutes, and the composite group ( In Example 2), sleep time increased in all extract treatment groups to 134.3 ± 8.4 minutes, but the In Jin-ho group showed results that were difficult to prove statistical significance. Compared to other groups, the sleep time of the composite group increased the most, almost similar to the control group (* p < 0.05, *** p < 0.001; vs. caffeine). These results show that among Sanjoin extract, Licorice extract, Injinho extract, and their complex extracts, taking the complex extract is more effective in overcoming factors that interfere with sleep than each single extract. This suggests that the complex extract can be a powerful substance that can overcome sleep disorders caused by various extreme environmental changes.
본 발명에서는 단일 투여보다 혼합하여 투여하였을 때 신경을 안정시키고, 수면장애를 극복하는 효과가 더 우수한 천연물 소재를 개발하는 것을 목적으로 천연물 후보물질로 3종의 물질 (산조인, 감초, 인진호)을 선정하였다. 상기 실시예를 이용하여 후보물질들로 다양한 특성 평가를 진행하였고, 실험 결과를 통해 단일 추출물과 복합 추출물의 효능 차이를 비교 분석하였다. In the present invention, three types of substances (Sanjoin, Licorice root, and Injinho) were selected as natural product candidates for the purpose of developing natural materials that are more effective in stabilizing nerves and overcoming sleep disorders when administered in combination rather than single administration. did. Using the above examples, various characteristic evaluations were conducted with candidate substances, and the difference in efficacy between single extracts and complex extracts was compared and analyzed through experimental results.
그 결과, 지속적 신경 활성의 변화 측정 실험에서 카페인으로 인해 증가하였던 신경 활성도가 천연 추출물을 처리함으로써 감소하였고, 감소 정도는 단일 추출물보다 3종의 복합 추출물을 처리하였을 때 더욱 뛰어났다. 수면시간 측정 실험에서도 복합 추출물을 복용했을 때 수면시간이 단일 추출물을 복용했을 때보다 긴 것을 확인할 수 있었다. 이로 인해, 산조인, 감초, 인진호 각 추출물보다 혼합하여 복합 추출물의 형태로 사용할 때 수면 방해를 억제하는 효과가 더욱 뛰어남을 알 수 있다.As a result, in an experiment measuring changes in continuous nerve activity, the nerve activity that had increased due to caffeine was reduced by treatment with the natural extract, and the degree of decrease was greater when three types of complex extracts were treated than single extracts. In the sleep time measurement experiment, it was confirmed that when taking the complex extract, the sleep time was longer than when taking a single extract. For this reason, it can be seen that the effect of suppressing sleep disturbance is more excellent when mixed and used in the form of a complex extract than the individual extracts of Sanjoin, Licorice, and Injinho.
이에 상기 복합 추출물을 포함하는 조성물을 동물에 복용시킴으로써 신경안정 및 수면장애 개선 용도로 사용할 수 있다. 이때 약물과 같이 인위적으로 강제 투여하는 것이 아니라, 동물이 자율적으로 섭취할 수 있는 방법으로 사료의 조성물로 제작한다. 더불어 인진호 및 산조인은 독성이 있는 천연물임을 감안하여 경구 복용하는 동물의 안전성이 보장되도록 인진호와 산조인의 함량은 최대한 낮추었지만, 이들의 함량 감소로 인해 신경안정 및 수면장애 개선 효능은 저하되지 않도록 단독 물질보다 효능이 우수한 복합물의 형태로 구성하였다. Accordingly, a composition containing the above complex extract can be used to improve nervous stability and sleep disorders by administering it to animals. At this time, it is not artificially forcibly administered like a drug, but is manufactured into a feed composition in a way that the animal can consume autonomously. In addition, considering that Injinho and Sanjoin are toxic natural products, the contents of Injinho and Sanjoin were reduced as much as possible to ensure the safety of animals taking them orally. It was composed in the form of a more effective complex.
이상과 같이 본 발명은 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 그러므로, 본 발명의 범위는 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 한다.As described above, although the present invention has been described with reference to limited embodiments and drawings, the present invention is not limited to the above embodiments, and various modifications and variations can be made from these descriptions by those skilled in the art. This is possible. Therefore, the scope of the present invention should not be limited to the described embodiments, but should be determined by the claims and equivalents thereof as well as the claims described later.
Claims (9)
An animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders comprising extracts of Zizyphus jujuba Miller, Glycyrrhiza uralensis Fisch, and Artemisiae capillaris Thunb as active ingredients.
상기 수면장애의 개선은 수면 지속 시간의 증가를 위한 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물.
According to paragraph 1,
An animal feed composition for improving nervous stability and sleeping disorders, characterized in that the improvement of the sleeping disorder is to increase the sleep duration.
상기 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합한 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물.
According to paragraph 1,
An animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, characterized in that the Sanjoin, licorice and Injinho are mixed in a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5.
상기 조성물은 분말 형태인 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물.
According to paragraph 1,
An animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, characterized in that the composition is in powder form.
상기 추출물은 1일(day) 단위 5mg/kg 내지 100mg/kg의 용량으로 경구 복용하는 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물.
According to paragraph 1,
An animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, wherein the extract is taken orally in a dose of 5 mg/kg to 100 mg/kg per day.
상기 혼합물의 추출물을 수득하는 단계;및
상기 추출물을 건조하는 단계;를 포함하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법.
Preparing a mixture by mixing Sanjoin, licorice, and Injinho;
obtaining an extract of the mixture; and
A method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleeping disorders, comprising the step of drying the extract.
상기 산조인, 감초 및 인진호를 1 내지 4 : 2 내지 5 : 0.5 내지 2.5의 중량비로 혼합한 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법.
According to clause 6,
A method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, characterized in that the Sanjoin, licorice and Injinho are mixed at a weight ratio of 1 to 4:2 to 5:0.5 to 2.5.
상기 추출물은 증류수, 메탄올 및 에탄올로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법.
According to clause 6,
A method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, characterized in that the extract is extracted with any one solvent selected from the group consisting of distilled water, methanol and ethanol.
상기 추출물은 동결건조하는 것을 특징으로 하는 신경안정 및 수면장애 개선용 동물 사료 조성물의 제조방법.
According to clause 6,
A method for producing an animal feed composition for improving nervous stability and sleep disorders, characterized in that the extract is freeze-dried.
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