KR20230152071A - 육모제 - Google Patents
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Abstract
[과제] 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹에서 모간 성장을 촉진하고 모유두 세포에서 육모에 기여하는 유전자 발현을 항진시키고, 모발, 모간 신장 속도의 향상, 모간 최대 길이의 향상, 및 모간 지름을 증대하는 효과를 나타내는 외용제인 육모제를 제공하는 것이다.
[해결방법] 외용제인 육모제에 있어서, 유효 성분으로서 팔미토일 디펩티드 -5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜을 함유하는 것으로 한다.
[해결방법] 외용제인 육모제에 있어서, 유효 성분으로서 팔미토일 디펩티드 -5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜을 함유하는 것으로 한다.
Description
본 발명은 육모제에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜을 포함하는 육모제에 관한 것이다.
인간을 비롯한 포유동물에 있어서, 육모 효과 및 모종·모질을 개선하는 육모제 등의 외용제의 수요가 증가하고 있다. 육모 효과 및 모종·모질을 개선하기 위해 모발의 라이프사이클인 모주기를 조절하는데 기여하는 유효 성분이 제안되어 육모제로서 출시되고 있다.
예를 들면, 육모제의 유효 성분으로서 미녹시딜의 이용이 제안되어(특허문헌 1 ~ 3 등을 참조.), 인간 임상 시험을 거쳐 미녹시딜을 유효 성분으로 하는 육모제가 출시되어 있다. 그러나, 그의 의약 용도는 일본에서는 남성의 장년성 탈모증에 한정되는 등, 육모 효과 및 모종·모질 개선 효과를 원하는 폭넓은 소비자의 요망을 충분히 이루어주지는 못하고 있다.
팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산은 화장품 원료의 성분으로서 알려져 있다(특허문헌 4 참조.). 그러나, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시 부티르산의 육모 효과에 관한 보고는 없다.
본 발명의 목적은 우수한 육모 작용을 갖는 육모제를 제공하는 것이다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 연구를 거듭한 결과, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효성분으로 함으로써 육모 활성을 발휘시킬 수 있고, 나아가 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효성분으로 함으로써 강한 육모 활성을 발휘시킬 수 있다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제1 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제2 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제3 수단은 미녹시딜을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제4 수단은 모간 성장 촉진 또는 발모에 사용하기 위한, 본 발명의 제1 내지 제3 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제5 수단은 모간 신장 속도를 향상시키기 위해 사용하는, 본 발명의 제1 내지 제4 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제6 수단은 모간 최대 길이를 향상시키기 위해 사용하는, 본 발명의 제1 내지 제4 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제7 수단은 모간 지름을 증대시키기 위해 사용하는, 본 발명의 제1 내지 제4 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제로 있다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제8 수단은 모수를 증가시키기 위해 사용하는, 본 발명의 제1 내지 제4 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제9 수단은 용액인, 본 발명의 제 1 내지 제8 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제10 수단은 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹용인, 본 발명의 제1 내지 제9 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제11 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 육모제의 제조 방법이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제12 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제의 제조방법이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제13 수단은 미녹시딜을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제의 제조방법이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제14 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 함유하는 제제와, 미녹시딜을 함유하는 제제를 포함하는 육모제의 키트이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제15 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 함유하는 제제를 포함하는 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제의 키트이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제16 수단은 미녹시딜을 함유하는 제제를 포함하는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제의 키트이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제17 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 투여하는 것을 특징으로 하는 육모 방법이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 제18 수단은 본 발명의 제1 내지 제10 수단 중 어느 하나의 수단에 기재된 육모제를 대상에게 투여하는 것을 포함하는 육모 방법이다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 포함하는 두피케어제이다.
나아가, 상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 수단은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효성분으로서 포함하는 두피 케어제를 대상에 투여하는 것을 포함하는 두피 증상 개선 방법이다.
본 발명의 수단에 의해 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 외용제인 육모제의 유효 성분으로 함으로써 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹에서의 모간 성장 촉진, 모간 신장 속도의 향상, 모간 최대 길이의 향상, 모간 지름의 증대의 효과 및 두피 케어 효과가 발휘되는 우수한 육모제 및 두피 케어제가 제공되도록 한다.
도 1은 인간 모유두 세포에서의 미녹시딜, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물, 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜 24시간 자극에 의한 유전자 발현량의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 1 (a)는 FGF-7 유전자 발현량의 변화,도 1 (b)는 VEGF 유전자 발현량의 변화를 나타낸다.
도 2는 인간 모유두 세포에서의 미녹시딜, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물, 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜 72시간 자극에 의한 유전자 발현량의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 2 (a)는 FGF-7 유전자 발현량의 변화, 도 2 (b)는 VEGF 유전자 발현량의 변화를 나타낸다.
도 2는 인간 모유두 세포에서의 미녹시딜, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물, 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜 72시간 자극에 의한 유전자 발현량의 변화를 나타내는 그래프이다. 도 2 (a)는 FGF-7 유전자 발현량의 변화, 도 2 (b)는 VEGF 유전자 발현량의 변화를 나타낸다.
본 발명을 실시하기 위한 형태에 관하여 이하에 설명한다. 또한, 본 발명은 이들 예시만으로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 요지를 일탈하지 않는 범위 내에서 여러 가지 변경을 가할 수 있음은 물론이다.
본 발명에 따른 육모제 및 두피 케어제의 유효 성분은 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌(Palmitoyl Dipeptide-5 Diaminobutyloyl Hydroxythreonine (Palm-Lys-Val-Dab-Thr-OH)) 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산(Palmitoyl Dipeptide-5 Diaminohydroxybutyrate (Palm-Lys-Val-Dab-OH))과, 미녹시딜로 이루어진다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제에 있어서의 유효 성분인 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜의 농도는 육모제 및 두피 케어제의 전체에 대하여 0.001 ~ 20중량%이다. 보다 구체적으로는 0.005 ~ 10중량%이다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제는 의약품, 의약부외품, 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹용 화장품 및 두피용 화장품을 포함하는 화장품 등으로 하고, 연고, 팝, 리니먼트, 로션, 외용액제 , 살포제, 크림, 젤, 유액, 헤어 토닉, 헤어 스프레이, 마이크로니들 등과 같은 외용제로서의 다양한 양태의 제형을 갖는 제제로서 사용할 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 함유시키는 공정을 거쳐 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의, 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제 및 두피 케어제는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효성분으로서 함유시키는 공정을 거침으로써, 또한 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제 및 두피 케어제는 미녹시딜을 유효성분으로서 함유시키는 공정을 거침으로써 제조할 수 있다. 또한, 상기 각 공정에 더하여, 원하는 바에 따라 제제화를 위한 첨가물을 함유시키는 공정을 부가한 것으로 해도 된다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제에 있어서, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산, 미녹시딜이 별개의 제제에 함유되어 제공되는 경우에는 이들 제제의 제형은 동일한 제형이어도, 상이한 제형을 조합한 것이어도 되고, 이들 제형의 제제를 제공하기 위한 키트로서 제공할 수도 있다.
또한, 나아가서는 본 발명의 육모 효과 및 두피 케어 효과를 방해하지 않는 정도에 있어서, 의약품, 의약부외품, 두발, 눈썹 및/또는 속눈썹용 화장품 및 두피용 화장품을 포함하는 화장품 등에 있어서 통상 함유하는 것이 허용되는 첨가물 등의 성분을 배합한 것이어도 된다. 이 첨가물 등의 성분으로서는 예를 들어 부형제, 안정제, 교취제, 기제, 분산제, 희석제, 음이온성 계면활성제, 양성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 음이온성 중합체, 비이온성 중합체, 에틸렌옥사이드·프로필렌옥사이드 블록 공중합체, 알코올류, 유화제, 경피 흡수 촉진제, pH 조정제, 보존제, 착색제, 유지, 광물유 등의 유분, 보습제, 증점제, 폴리머, 피막 형성제, 자외선 흡수제, 세포 부활제, 보습제, 무기염, 기능성 비드·캡슐류, 실리콘류, 금속 킬레이트제, 산화 방지제, 방부제, 청량제, 탈취제, 안료, 염료, 향료, 당류, 아미노산류, 비타민류, 유기산, 유기 아민, 식물 추출물, 점토 광물이나 각종 폴리머 등의 점도 조정제 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제는 발모, 육모, 양모 등의 효과를 갖는 공지의 성분을 더 함유하는 것으로 해도 된다.
본 발명의 수단에 있어서의 육모제 및 두피 케어제의 1 투여당 유효 성분의 투여량은 본 발명의 육모제 및 두피 케어제의 효과가 발휘되도록 조절할 수 있다. 그리고, 그 투여량은 예를 들면 0.005 ~ 200mg, 구체적으로는 0.05 ~ 100mg, 보다 구체적으로는 0.5 ~ 10mg로 할 수 있다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제의 투여 횟수는 본 발명의 육모제 및 두피 케어제의 효과가 발휘되도록 1회 또는 복수회로 할 수 있다. 그리고, 본 발명의 육모제 및 두피 케어제의 투여 횟수는 예를 들면 1일당 1 ~ 6회로 할 수 있다. 그리고, 구체적으로는 1일당 1 ~ 3회, 보다 구체적으로는 1일당 1 ~ 2회로 할 수 있다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제는 모간 성장 촉진, 발모 및 탈모 방지에 관한 것이고, 바람직하게는 모간 성장 촉진 및 발모에 관한 것이다.
본 명세서에 있어서, 「모간 성장 촉진」이란 용어는 모간 신장 속도를 향상시키는 것, 모간 최대 길이를 향상시키는 것, 및/또는 모간 지름을 증대시키는 것을 의미한다.
본 명세서에 있어서, 「발모」라는 용어는 모발이 나지 않은(표피로부터 밖에 모간이 나오지 않은) 또는 모수가 적은 부위에서 발모가 정지했거나, 발모 능력이 저하된 모공으로부터 새로운 모발이 자라는 것을 촉진하여 모수를 증가시키는 것을 의미하며, 구체적으로는 모주기에서의 휴지기를 단축하는 것, 및/또는 정지 된 모주기를 재개하는 것을 의미한다.
본 명세서에 있어서, 「모간 성장 촉진 효과를 갖는다」란 모간 성장 촉진에 유리하게 작용하는 것을 의미하고, 모간 성장 촉진 효과를 나타내는 특질을 「모간 성장 촉진 활성」이라고 칭한다. 또한, 「발모 효과를 갖는다」란 발모에 유리하게 작용하는 것을 의미하고, 발모 효과를 나타내는 특질을 「발모 촉진 활성」이라고 칭한다.
본 명세서에 있어서, 「탈모」라는 용어는 모공으로부터 모간이 탈락하는 현상을 의미하고, 상세하게는 세포 증식을 저해하는 억제성 사이토카인 등의 증가 및, 이들의 세포사를 의미한다. 탈모 방지 효과를 나타내는 특질을 「탈모 방지 활성」이라고 부른다. 또한, 「탈모 방지 효과를 갖는다」란 억제 사이토카인의 저해 혹은 감소, 및 세포사의 억제를 통하여 모공으로부터의 모간의 탈락수가 감소하는 것을 의미하고, 모간 성장 촉진, 발모 효과를 나타내는 특성과는 상이한 생리 현상이다.
본 명세서에 있어서, 「두피 증상」이란 비듬, 두피의 피부 거칠기, 두피의 까칠함, 홍반, 가려움, 뾰루지 등의 증상을 의미한다. 또한, 본 명세서에 있어서 「두피 증상 개선」이란 비듬, 두피의 피부 거칠기, 두피의 까칠함, 홍반, 가려움, 뾰루지 등의 억제 또는 개선을 의미한다.
본 발명의 육모제는 모간 신장 속도 또는 모간 최대 길이를 향상시키기 위해 사용할 수 있다. 그리고, 모간 신장 속도에 대해서는 모주기의 표준 데이터에 있어서의 모간 신장 속도와 비교하여, 예를 들면 최대 110% 정도 향상시킬 수 있고, 구체적으로는 25 ~ 110% 정도 향상시킬 수 있고, 보다 구체적으로는 33 ~ 110% 정도 향상시킬 수 있다. 또한, 모간 최대 길이에 관해서는 모주기의 표준 데이터에 있어서의 모간 최대 길이와 비교하여, 예를 들면 최대 49% 정도 향상시킬 수 있고, 구체적으로는 1 ~ 49% 정도 향상시킬 수 있고, 보다 구체적으로는 2 ~ 49% 정도 향상시킬 수 있다.
본 발명의 육모제는 모간 지름을 증대시키기 위해 사용할 수 있다.
본 발명의 육모제는 모발이 나지 않은(표피로부터 밖으로 모간이 나오지 않은) 또는 모수가 적은 부위에서 발모가 정지했거나, 모발 능력이 저하된 모공으로부터 새로운 모발이 자라는 것을 촉진하여 모수를 증가시키기 위해 사용할 수 있으며, 특히 모주기에서의 휴지기를 단축하고/하거나 정지된 모주기를 재개시키기 위해 사용할 수 있다.
본 발명의 육모제 및 두피 케어제는 인간 이외에 가축이나 애완 동물 등의 동물용으로도 사용할 수 있다. 본 발명의 한 측면에서, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 포함하는 외용제를 인간 및 가축이나 애완 동물과 같은 동물을 포함하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는 육모 방법 및 두피 증상 개선 방법이 제공된다.
[실 시 예]
<시험예 1: 인간 모유두 세포에서의 FGF-7 유전자 및 VEGF 유전자 발현의 평가>
FGF-7 유전자와 VEGF 유전자는 모유두 세포에서 발현되며, 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹에서 모간 성장 촉진, 모간 신장 속도의 향상, 모간 최대 길이의 향상, 모간 지름의 증대 등의 효과 발현에 기여하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 인간 모유두 세포를 사용하여 각 성분에서의 FGF-7 유전자 및 VEGF 유전자의 발현 항진에 대하여 평가를 행했다.
1. 재료 및 방법
(1) 인간 모유두 세포 및 배지에 대해서
인간 모유두 세포(카탈로그 번호: CA60205a, 백색 인종, 29세 남성 유래, 도요보주식회사(일본))를 구입하고, 프로토콜에 기재된 대로 세포를 유지·배양하여 시험 평가를 행했다.
(2) 약제
시험용 약제로서, 이하의 각 농도(종 농도)의 약제 용액을 조제하여 사용하였다.
비교예 1: 미녹시딜 30μM
실시예 1: 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물 0.025% 용액
실시예 2: 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물 0.1% 용액
실시예 3: 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물 3% 용액
실시예 4: 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물 0.1% 용액과 미녹시딜 30μM의 혼합 용액
실시예 5: 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물 3% 용액, 미녹시딜 30μM의 혼합 용액
(3) 시험 방법
인간 모유두 세포를 5 x 104개/웰이 되도록 96-웰 플레이트에 파종하였다. CO2 인큐베이터(5% CO2, 37℃)내에서 1일간 배양한 후, 각 시험용 약제를 함유하는 배지로 치환하였다. 그 후, 세포 플레이트를 CO2 인큐베이터로 되돌리고, 추가 24시간 또는 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 각 웰로부터 전체 RNA를 추출, 회수하고 그것을 cDNA로 역전사했다. 조제한 cDNA를 이용하여 실시간 PCR법으로 FGF-7 유전자 및 VEGF 유전자의 발현을 각각 측정하였다. 내부 표준으로서 GAPDH 유전자를 사용하여 음성 대조군과의 상대값으로서 FGF-7 유전자 및 VEGF 유전자의 발현량을 산출하였다.
세포로부터의 전체 RNA의 회수에는 FastGene RNA Basic Kit(카탈로그 번호: FG-80250, 니폰제네틱스주식회사(일본))를 사용하였다.
웰 당 100 μL의 용해 완충액 RL을 첨가하고 피펫팅으로 세포를 용해시켰다. 세포 용해액에 70% 에탄올을 100μL 첨가하고, 피펫팅으로 혼합하였다. 샘플 용액을 FastGene RNA 바인딩 컬럼에 첨가하고 10000g로 1분 동안 실온에서 원심분리하였다. 컬럼을 통과한 여액을 수집 튜브로부터 폐기하고, FastGene RNA 바인딩 컬럼을 원래의 콜렉션 튜브로 되돌린 후, 600 ㎕의 세척 완충액 RW1을 FastGene RNA 바인딩 컬럼에 가하고, 10000g로 1분 동안 실온에서 원심분리하였다. FastGene RNA 바인딩 컬럼을 새로운 수집 튜브에 옮겨 세팅하고 700 μl의 세척 완충액 RW2를 FastGene RNA 바인딩 컬럼에 가하고 10000g로 1 분간 실온에서 원심분리했다. FastGene RNA 바인딩 컬럼을 새로운 수집 튜브에 옮겨 세팅하고 15000rpm으로 1분간 실온에서 원심분리했다. FastGene RNA 바인딩 컬럼을 새로운 수집 튜브에 옮겨 세팅하고, 50 μL의 용출 완충액 RE를 FastGene RNA 바인딩 컬럼의 멤브레인의 중앙에 첨가하고, 10000g로 1분 동안 실온에서 원심분리하고, 정제한 RNA를 회수하였다. 회수한 RNA의 농도를 NanoDrop Lite(카탈로그 번호: ND-LITE, 서모피셔사이언티픽주식회사)로 측정하고, -80℃에서 다음의 cDNA화 작업까지 보존하였다.
cDNA의 합성에는 FastGene scriptase II cDNAsynthesis 5×Ready Mix(카탈로그 번호: NE-LS64, 니폰제네틱스주식회사(일본))를 사용하였다. 새로운 튜브에 생성된 전체 RNA의 농도가 20ng/mL가 되도록 RNase Free Water로 희석하고 이 샘플 용액 16μL에 FastGene scriptase II cDNA synthesis 5 x Ready Mix를 4μL 첨가하고, 볼텍싱으로 교반하였다. MiniAmp Thermal Cycler(서모피셔사이언티픽주식회사)를 사용하여 25℃에서 10분간, 42℃에서 60분간, 85℃에서 5분간 인큐베이트하여 cDNA를 합성하였다.
상기 방법으로 합성한 cDNA를 실시간 PCR에 사용하였다. 96 웰 플레이트의 소정의 웰에 각 cDNA template 희석액을 첨가하고, THUNDERBIRD SYBR qPCR Mix(카탈로그 번호: QPS-201, 도요보주식회사(일본))와 프라이머를 첨가하여 혼합하고, QuantStudio 7 Flex Real-Time PCR System (카탈로그 번호 : 4485693, 서모피셔사이언티픽주식회사)로 유전자 발현을 분석하였다. PCR 반응으로서 95℃ 5초간, 60℃ 30초간 및 72℃ 30초간을 40사이클 행하였다.
시험에 사용한 FGF-7 유전자에 특이적인 프라이머, VEGF 유전자에 특이적인 프라이머 및 내부 표준으로 한 GAPDH 유전자에 특이적인 프라이머를 이하에 나타낸다.
FGF-7 유전자 발현 검출용 프라이머
순방향: tctgtcgaacacagtggtacctgag (서열번호 1)
역방향: gccactgtcctgatttccatga (서열번호 2)
VEGF 유전자 발현 검출용 프라이머
순방향: atcttcaagccatcctgtgtgc (서열번호 3)
역방향: caaggcccacagggattttc (서열번호 4)
GAPDH 유전자 발현 검출용 프라이머
순방향: catccctgcctctactggcgctgcc (서열번호 5)
역방향:ccaggatgcccttgagggggccctc (서열번호 6)
이하와 같이 각 유전자의 상대 발현량을 산출하였다.
각 유전자의 증폭 곡선과 역치선의 교점으로부터 Ct값(PCR 사이클수)을 산출했다. 목적 유전자의 Ct값으로부터 내부 표준 GAPDH 유전자의 Ct값으로 나눈 값이 상대 발현량이 된다.
2. 결과
인간 모유두세포에 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물을 24시간 및 72시간 작용시킨 후의 FGF-7 유전자 및 VEGF 유전자의 발현량의 변화를 측정하고, 그 결과를 각각 도 1(24 시간) 및 도 2(72 시간)에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 인간 모유두세포에 대해 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물(실시예 1 ~ 3)을 24시간 작용시키면, 무첨가 대조군에 비해 FGF-7 유전자 발현량 및 VEGF 유전자 발현량이 상승하는 것이 확인되었다. 그리고, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물의 첨가량이 증가하면 FGF-7 유전자 발현량 및 VEGF 유전자 발현량은 미녹시딜(비교예 1)을 작용시킨 경우보다 커지는 것이 확인되었다.
나아가, 인간 모유두 세포에 대해 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물과 미녹시딜의 혼합 용액(실시예 4 ~ 5)을 24시간 작용시키면 미녹시딜 단독 또는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물만의 경우보다 FGF-7 유전자 발현량 및 VEGF 유전자 발현량이 보다 현저하게 증가하는 것이 확인되었다.
이와 같이, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물은 모유두 세포에서 FGF-7 유전자의 발현 및 VEGF 유전자의 발현을 항진시키고, 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹에 있어서의 모간 성장 촉진, 모간 신장 속도의 향상, 모간 최대 길이의 향상, 모간 지름을 증대하는 효과를 나타내는 육모제의 유효 성분으로서 유용하다는 것이 확인되었다.
나아가, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물과 미녹시딜을 병용하는 것은 모유두 세포에서의 FGF-7 유전자의 발현 및 VEGF 유전자의 발현을 팔미토일 디펩티드- 5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산의 혼합물, 또는 미녹시딜을 유효성분으로 하는 경우에 비해 모유두 세포에서의 FGF-7 유전자의 발현 및 VEGF 유전자의 발현을 보다 유의하게 항진하여 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹에 있어서의 모간 성장 촉진, 모간 신장 속도의 향상, 모간 최대 길이의 향상, 모간 지름을 보다 증대하는 효과를 나타내는 육모제의 유효 성분으로서 유용하다는 것이 확인되었다.
본 발명의 수단에 의해 육모제의 유효 성분으로서 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌, 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산 및 미녹시딜을 사용하는 것으로 함으로써 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹 등의 모발에 있어서의 모간의 성장 촉진 효과, 모간 신장 속도의 향상 효과 및 모간 최대길이의 향상 효과 및 두피 케어 효과를 발휘하는 새로운 육모제 및 두피 케어제를 제공하는 것이 가능해진다.
Claims (18)
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 육모제.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제.
- 미녹시딜을 유효 성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, 모간 성장 촉진 또는 발모에 사용하기 위한 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 모간 신장 속도를 향상시키기 위해 사용하는 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 모간 최대 길이를 향상시키기 위해 사용하는 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 모간 지름을 증가시키기 위해 사용하는 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 모수를 증가시키기 위해 사용하는 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서, 용액인 육모제.
- 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 두발, 턱수염, 눈썹 및/또는 속눈썹용 육모제.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 육모제의 제조 방법.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제의 제조 방법.
- 미녹시딜을 유효 성분으로서 제제에 함유시키는 공정을 갖는 것을 특징으로 하는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제의 제조 방법.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 함유하는 제제와, 미녹시딜을 함유하는 제제를 포함하는 육모제의 키트.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산을 함유하는 제제를 포함하는, 미녹시딜과 병용하기 위한 육모제의 키트.
- 미녹시딜을 함유하는 제제를 포함하는 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과 병용하기 위한 육모제의 키트.
- 팔미토일 디펩티드-5 디아미노부틸로일 히드록시트레오닌 및 팔미토일 디펩티드-5 디아미노히드록시부티르산과, 미녹시딜을 유효 성분으로서 투여하는 것을 특징으로 하는 육모 방법.
- 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 기재된 육모제를 대상에게 투여하는 것을 포함하는 육모 방법.
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