KR20230150077A - 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트 및 이를 이용한 성 매개 감염증 유발 병원체의 검출방법 - Google Patents
성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트 및 이를 이용한 성 매개 감염증 유발 병원체의 검출방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 성매개 감염증의 원인이 되는 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체 (12종의 STI: Sexual Transmitted Infections), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트 및 이를 이용한 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 검출방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 성매개 감염증의 원인이 되는 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체 (12종의 STI: Sexual Transmitted Infections), 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트 및 이를 이용한 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 검출방법에 관한 것이다.
성 매개 감염증 (Sexual Transmitted Infections: STI)은 주로 성적 접촉에 의해 전파된다. 일부 성 매개 감염증은 임신, 출산, 모유 수유 중에 자녀로 전염될 수도 있다. 성 매개 감염증의 일반적인 증상으로는 질 분비물, 남성의 요도 배출 또는 화상, 생식기 궤양, 복통 등이 있으며, 때때로 질병의 증상이 없는 경우도 있다. 이런 성 매개 감염증은 전 세계적으로 성적 또는 생식 보건에 큰 영향을 미친다.
성 매개 감염증은 매년 백만건이 넘게 발생하고 있다. 2020년 WHO에서 다음 네가지 성 매개 감염증의 원인균중 한가지 이상에 신규 감염된 환자를 3억7천4백만 건으로 추산하였다. 클라미디아 (chlamydia 129 million), 임질 (gonorrhoea 82 million), 매독 (syphilis 7.1 million) 및 트리코모나스증 (trichomoniasis 156 million). 또한 2016년에는 4억9천만명이 생식기 HSV(herpes)에 감염된 상태인 것으로 추산하였다.
한편, 헤르페스증, 임질 또는 매독 등과 같은 성 매개 감염증은 HIV 감염을 증가시킬 수 있다.
성 매개 감염증의 모친과 아이간의 전염은 사산, 신생아 사망, 저체중 및 미숙아, 패혈증, 폐렴, 신생아 결막염 및 선천성 기형을 초래할 수 있다. 2016년 대략 백만명의 임산부가 활동성 매독에 감염되었고, 이중 35만명이 출산에 부정적인 결과가 발생하였고, 20만명이 사산 또는 신생아 사망의 결과가 나타났다.
또한 임질과 클라미디아증과 같은 성 매개 감염증은 골반염과 여성불임의 주요 원인이다.
현재, 성 매개 감염증의 진단은 기존 PCR 후 전기영동을 하거나 실시간 PCR (real-time PCR) 법을 이용하는 분자진단법이 있다. 종래 PCR-전기영동을 이용한 분자진단키트는 제조하는 업체는 다이오진과 티씨엠생명과학등이 대표적이며, 실시간 PCR (real-time PCR) 키트를 제조하는 업체는 씨젠, 바이오니아, 파나진등으 대표적이다.
기존 PCR-전기영동을 이용하는 방법은 과정이 복잡하고 결과를 분석하기 위한 아가로스 젤 (agarose gel) 분석법은 사람의 시각을 이용하기에 결과의 오류가 발생할 수 있다. 또한, 실시간 PCR (real-time PCR)은 고가의 검출장비가 필요하며, 검출 물질로 형광 프로브 (probe)를 사용으로써 키트의 단가가 높은 단점이 있다.
이러한 기술적 배경하에서, 본 출원의 발명자들은 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체를 동시에 신속 정확하게 정성적으로 검출할 수 있고, 미량의 검체 유전자만으로 성 매개 감염증 유발 병원체 검출이 가능한 키트, 이의 검출방법 및 이를 이용한 성 매개 감염증 유발 병원체 감염 여부에 대한 진단방법을 제공할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 앞서 언급한 종래기술의 문제점을 인식하고, 종래에 비해 정확하면서도 간단하게 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체에 대한 감염 여부를 진단할 수 있는 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트, 이의 검출방법 및 이를 이용하여 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체에 대한 감염 여부를 진단하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 (a) 검체에서 추출된 핵산을 증폭시킬 수 있는, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 특이적 유전자와 비상보적 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머; 및 (b) 상기 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 상기 키트를 이용하여 생체 외에서 성 매개 감염증 유발 병원체를 검출하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 더욱이, (a) 검체에서 추출된 핵산을 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 코로나바이러스 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머와 반응시키는 단계; 및 (b) 상기 반응 산물 중 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브와 반응시키는 단계를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출에 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 키트는 미량의 검체 유전자만으로 12종의 성 매개 감염증 병원체 감염 여부의 진단이 가능하도록 하고, 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자를 증폭하여 진단함으로써, 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체에 대한 신속 정확한 정성적 분자진단이 가능하도록 한다. 또한, 유전자 증폭 후 측면 흐름 어세이를 통해 결과를 확인하기 때문에 리얼 타임 PCR에서와 같은 고가의 장비가 요구되지 않아 경제적이고, 종래 PCR에서와 같이 증폭된 유전자를 확인하기 위한 전기영동용 아가로스젤 제조 과정이 요구되지 않기 때문에 PCR-전기영동법 보다 빠른 시간 내에 결과 확인이 가능하다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 키트에 포함되는 프라이머 및 프로브 제작 과정을 도시한 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 키트에서 증폭 산물을 확인하기 위한 측면 흐름 어세이 (ULFA) 반응에 대한 모식도이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 키트에 고정된 프로브 위치와 이에 적용된 성 매개 감염증 병원체 타입을 예시한 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 키트를 통해 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체를 음성 또는 양성 판정 기준에 따른 테스트 결과를 도시한 것이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 키트를 이용하여 성 매개 감염증 유발 병원체를 증폭 및 검출한 결과를 도시한 것이다.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 키트에서 증폭 산물을 확인하기 위한 측면 흐름 어세이 (ULFA) 반응에 대한 모식도이다.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 키트에 고정된 프로브 위치와 이에 적용된 성 매개 감염증 병원체 타입을 예시한 것이다.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 키트를 통해 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체를 음성 또는 양성 판정 기준에 따른 테스트 결과를 도시한 것이다.
도 5는 본 발명의 일실시예에 따른 키트를 이용하여 성 매개 감염증 유발 병원체를 증폭 및 검출한 결과를 도시한 것이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 출원의 발명자들은 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 HSV1, HSV2, CT. NG, TP, TV, UU, UP, MG, MH, CA, GV 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머와 상기 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브가 고정된 멤브레인을 포함하는 STI PaxView STI12 MPCR-ULFA Kit를 제작하였다. 이러한 키트는 신속 정확하게 12종의 성 매개 감염증 유발 병원체의 유전형을 정성적으로 동정하는 분자진단 키트로써, 사람의 자궁경부 도말검체에서 추출한 유전자를 주형으로 하여 유전자를 증폭하고 ULFA에 전개하여 나타나는 나노골드 입자가 밴드의 형태로 나타나게 되면 HSV1, HSV2, CT. NG, TP, TV, UU, UP, MG, MH, CA, GV의 감염여부를 진단할 수 있음을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, (a) 검체에서 추출된 핵산을 증폭시킬 수 있는, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 특이적 유전자와 비상보적 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머; 및 (b) 상기 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트에 관한 것이다.
본 발명에 따른 키트는 타사의 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트의 단점을 보완하고 장점을 최대한 수용하는 방식으로, 시장을 점유하고 새로운 성 매개 감염증 관련 질환 진단의 플랫폼을 제공할 수 있다.
분자진단 제품 중 중합효소 연쇄 반응기법(Polymerase Chain Reaction, PCR) 이용하는 제품은 크게 두 가지로 분류할 수 있다. 하나는 종래 PCR로, 검체로부터 핵산을 추출하여 표적핵산을 증폭한 후 전기영동을 통해 그 결과를 확인한다. 이 방법을 사용하게 되면 저렴한 가격의 키트를 구입할 수 있지만 전기영동에 많은 노동력과 시간이 소요된다. 전기영동을 대신하여 사용하는 리얼-타임 PCR (Real-time PCR) 기법은 병원균의 핵산 증폭을 실시간으로 모니터링 할 수 있지만 키트의 가격이 고가이다.
이에, 사용자의 편리성을 유지하면서, 저가의 분자진단 제품 개발이 요구됨에 따라, 본 출원의 발명자들은 정성분석을 위한 체외 진단용 키트를 개발하였다.
본 발명에 따른 키트는 12 종의 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 핵산 올리고머를 포함하는 프라이머를 포함하고, 상기 프라이머는 HSV1, HSV2, CT, NG, TP, TV, UU, UP, MG, MH, CA, GV로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 성 매개 감염증 병원체에 따른 유전자와 이와 비상보적인 염기를 함유하는 핵산 올리고머를 포함한다.
상기 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자는 성 매개 감염증 병원체에 특이적으로 존재하는 1종 이상 또는 2종 이상의 유전자일 수 있으며, 예를 들어 Chlamydia trachomatis의 ompA 유전자 (ompA gene) 및 잠적 플라스미드 (cryptic plasmid)로 구성된 군에서 선택될 수 있으며, CT의 ompA 유전자 및/또는 잠적 플라스미드 유전자일 수 있다.
상기 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자는 예를 들어 Neisseria gonorrhoeae의 dcm/dcr 유전자일 수 있다. Treponema pallidum의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 bamA 유전자일 수 있다. Trichomonas vaginalis의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 actin gene일 수 있다. Ureaplasma urealyticum의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 ureG 유전자일 수 있다. Ureaplasma parvum의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 ureB 유전자일 수 있다. Mycoplasma genitalium의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 mgpA 유전자일 수 있다. Mycoplasma hominis의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 gap 유전자일 수 있다. Candida albicans의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 16SrRNA일 수 있다. Gardnerella vaginalis의 경우 특이적 유전자는 예를 들어
cpn60 유전자일 수 있다. Herpes simplex virus 1의 경우 특이적 유전자는 예를 들어 gB 유전자일 수 있다. Herpes simplex virus 2의
경우 특이적 유전자는 예를 들어 gB 유전자일 수 있다.
본 명세서에서 '성 매개 감염증'은 성적 행위와 밀접한 접촉으로 인간과 인간 사이에 전파되는 생물에 의해 유발되는 감염으로, '성 매개 감염증 유발 병원체'는 성적 행위와 밀접한 접촉으로 인간과 인간 사이에 전파되는 미생물, 효모균 또는 바이러스를 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 검출가능한 성 매개 감염증 유발 병원체는 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)이다.
이에 따라, 상기 프라이머는 성 매개 감염증 병원체의 각 종의 특이적 유전자와 특이적으로 결합하는 상보적 핵산 올리고머를 포함하며, 상기 성 매개 감염증 병원체의 각 유전형에 존재하는 유전자와 비상보적인 염기를 함유하는 핵산 올리고머를 포함할 수 있다. 본 발명에 따르면, 20가지 유전형의 성 매개 감염증 병원체의 감염 여부를 동시에 동정 및 진단할 수 있다.
본 명세서에서 '프라이머'는 적합한 온도 및 완충액 내에서 적합한 조건(즉, 4종의 다른 뉴클레오사이드 트리포스페이트 및 중합반응 효소) 하에서 주형-지시 DNA 합성의 개시점으로 작용할 수 있는 단일-가닥 올리고뉴클레오티드를 의미한다.
본 발명에 따른 프라이머는 프라이머는 12가지 종의 STI의 특이적 유전자의 단편을 포함할 수 있다. 상기 단편은 12가지 종의 STI 의 특이적 유전자의 임의의 부위를 의미할 수 있고, 상기 단편은 임의의 길이를 가질 수 있으며, 예를 들어 타겟 유전자 또는 이들 중 임의의 부위에 대한 5 bp 내지 50 bp, 구체적으로 10 bp 내지 30 bp의 길이를 가지는 부위를 의미할 수 있다.
본 명세서에서 '상보적 결합'은 중합반응을 수행하는 조건에서 프라이머가 대응하는 핵산 가닥과 하이브리다이제이션되는 것을 의미하고, 이합체(duplex) 구조를 형성할 수 있다. 상보적 결합은 쌍을 이루는 뉴클레오티드 서열 간의 상보성이 왓슨-크릭 결합(Watson-Crick pair)을 이루거나, 일부 비 왓슨-크릭 결합(Non-Watson-Crick base pair)이 존재하여도 형성될 수 있다.
상기 프라이머는 정방향 프라이머로, 예를 들어 12종의 성 매개 감염증 병원체의 특이적 유전자에 특이적으로 결합하는 상보적 핵산 올리고머를 포함할 수 있다. 상기 정방향 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자를 주형으로 하는 경우 이와 상보적 가닥에 결합하여 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자와 상보적 서열을 특이적으로 증폭할 수 있다.
상기 프라이머는 성 매개 감염증 병원체 특이적 유전자 또는 그 단편과 비상보적인 염기를 함유하는 핵산 올리고머를 포함한다. PCR을 이용하여 표적 유전자인 성 매개 감염증 병원체 특이적인 유전자를 증폭할 때에 성 매개 감염증 병원체 특이적인 유전자와 비상보적인 염기를 포함하는 핵산 올리고머 즉, STI 특이적인 유전자와 관련이 없는 유전자로 약 20-60 bp, 구체적으로 20-40 bp, 바람 직하게 약 20-30 bp를 포함할 수 있다. 이러한 핵산 올리고머를 멤브레인에 상보적으로 합성되어 있는 프로브와 반응시킴으로써 결과물 즉, 핵산 증폭 여부를 쉽게 확인할 수 있다.
상기 프라이머는 표지자를 포함하는 프라이머를 추가로 포함할 수 있다. 상기 표지자를 포함하는 프라이머는 역방향 프라이머로, 상기 역방향 프라이머는 성 매개 감염증 병원체 특이적인 유전자를 주형으로 하는 경우 주형 가닥에 상보적으로 결합하여 주형을 증폭할 수 있다.
예를 들어 상기 프라이머는 서열번호 1 내지 서열번호 26의 서열로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 상보적 핵산 올리고머를 포함할 수 있다.
구체적으로, 상기 프라이머는 다음을 포함할 수 있다:
서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는, HSV1 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 3 및 서열번호 4의 서열을 포함하는, HSV2 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 5 내지 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, CT 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 9 및 서열번호 10의 서열을 포함하는, NG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 11 및 서열번호 12의 서열을 포함하는, TP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 13 및 서열번호 14의 서열을 포함하는, TV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 15 및 서열번호 16의 서열을 포함하는, UU 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 17 및 서열번호 18의 서열을 포함하는, UP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 19 및 서열번호 20의 서열을 포함하는, MG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 21 및 서열번호 22의 서열을 포함하는, MH 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 23 및 서열번호 24의 서열을 포함하는, CA 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머; 또는
서열번호 25 및 서열번호 26의 서열을 포함하는, GV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머.
상기 키트 중 복수의 패널에 복수의 성 매개 감염증 유발 병원체 유전형에 상보적 핵산 올리고머를 포함하는 프라이머를 사용하는 경우, 상기 키트는 2개의 패널을 포함할 수 있으며, 1번 패널은 서열번호 1 내지 14의 프라이머를 포함할 수 있고, 2번 패널은 서열번호 15 내지 26의 프라이머를 포함할 수 있다.
이러한 핵산 올리고머는 멤브레인에 상보적으로 합성되어 있는 프로브와 반응시키기 위하여, 20가지 유전형의 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자 또는 그 단편과 비상보적인 핵산 올리고머 및 멤브레인에 상보적으로 합성되어 있는 프로브와 결합하기 위한 염기 사이에 비-뉴클레오티드 스페이서 (non-nucleotide spacer)를 추가로 포함할 수 있다.
상기 비상보적 핵산 올리고머는 예를 들어 서열번호 27 내지 39의 서열로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 구체적으로, 서열번호 27의 서열을 포함하는, HSV1 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 28의 서열을 포함하는, HSV2 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 29 또는 서열번호 30의 서열을 포함하는, CT 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 31의 서열을 포함하는, NG 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 32의 서열을 포함하는, TP 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 33의 서열을 포함하는, TV 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 34의 서열을 포함하는, UU 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 35의 서열을 포함하는, UP 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 36의 서열을 포함하는, MG 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 37의 서열을 포함하는, MH 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머;
서열번호 38의 서열을 포함하는, CA 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머; 또는
서열번호 39의 서열을 포함하는, GV 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머.
상기 비-뉴클레오티드 스페이서는 C3, C6, C9 또는 C12 지방족 스페이서일 수 있으며, C의 숫자는 비-뉴클레오티드 스페이서 구조 중 탄소 원자의 숫자를 의미한다. 이러한 비-뉴클레오티드 스페이서는 알킬, 아케닐, 아키닐기일 수 있다.
하나의 실시예에서, 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자 또는 그 단편과 비상보적인 염기부분과 멤브레인에 상보적으로 합성되어 있는 프로브와 결합하기 위한 염기 사이에 비-뉴클레오티드 스페이서, 예를 들어 C3 스페이서 (프로필 스페이서)를 위치시켜 택 폴리머라제 (Taq polymerase)를 이용하여 유전자를 증폭하였을 때 상보적인 증폭이 프로브와 결합하기 위한 염기부분을 침범하여 증폭되지 않도록 함으로써, 부분적인 단일가닥의 핵산 결과물을 확보할 수 있도록 하였고, 이 부분이 멤브레인에 프로브와 결합할 수 있도록 하였다.
하나의 실시예에서, 상기 프라이머에 포함된 표지자는 비오틴, Cy5, Cy3, FITC, EDANS(5-(2'-아미노에틸)아미노-1-나프탈렌 황산), 테트라메틸로다민(TMR), 테트라메틸로다민 이소시아네이트(TMRITC), x-로다민, DIG 또는 항체 또는 이와 결합된 나노입자일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
여기에, 표지자의 발색을 유도하는 결합제와 반응시켜 발색 또는 형광 발현 여부를 확인하고 표적 핵산의 증폭을 검출할 수 있다. 이 때, 상기 결합제는 스트렙타비딘일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
구체적 실시예에서, 역방향 프라이머에 비오틴 (Biotine)을 부착시켜 증폭함으로써 멤브레인에서 스트렙타비딘 (Streptavidine)과 결합하게 되고, 비오틴에 접합 (conjugation)된 입자 예를 들어 나노입자의 성향에 따라서 골드 파티클인 경우에는 발색으로 확인이 가능하고, 형광일 경우는 다양한 파장대의 형광으로 확인할 수 있어서, 멤브레인에 부착된 프로브의 종류에 따라서 수개에서 수십개까지 표적 핵산의 증폭 여부에 대한 구분이 가능하다.
본 발명에 따른 키트는 (b) 상기 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브가 고정된 멤브레인을 포함한다. 이를 통해, 상기 프라이머에 의해 증폭된 산물을 멤브레인 측면에 주입하면 증폭된 산물이 이동하면서 멤브레인에 고정된 프로브와 증폭된 산물에 포함된 핵산 올리고머가 상보적 혼성화 반응할 수 있다.
상기 "멤브레인"은 임의의 다양한 물질로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 천연, 합성, 또는 합성에 의해 변형된 천연 발생 물질, 예를 들어 폴리사카라이드(예: 셀룰로오스 물질, 종이, 셀룰로오스 아세테이트 및 니트로셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체); 폴리에테르 술폰; 폴리에틸렌; 나일론; 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF); 폴리에스테르; 폴리프로필렌; 실리카; 비닐 클로라이드, 비닐 클로라이드-프로필렌 공중합체 및 비닐 클로라이드-비닐 아세테이트 공중합체와 같은 중합체와 함께 다공성 중합체 매트릭스에 균일하게 분산된 무기 물질, 예를 들어 불활성화된 알루미나, 규조토, MgSO4, 또는 다른 무기 미분 물질; 자연 발생(예: 면) 및 합성(예: 나일론 또는 레이온) 천; 다공성 겔, 예를 들어 실리카겔, 아가로스, 덱스트란 및 젤라틴; 중합체 필름, 예를 들어 폴리아크릴아미드; 등의 물질로부터 형성될 수 있다. 바람직하게는 상기 멤브레인은 중합체 물질, 예를 들어 니트로셀룰로오스, 폴리에테르술폰, 폴리에틸렌, 나일론, 폴리비닐리덴 플루오라이드, 폴리에스테르 및 폴리프로필렌을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 프라이머는 다중 피씨알 (multiplex-PCR)에 이용될 수 있으며, 12가지 종의 성 매개 감염증 유발 병원체를 동시에 검출하여 감염 여부를 진단하는 것이 가능하도록 한다. 즉, 수 개에서 수 십 개의 추가된 각기 다른 올리고머 시퀀스를 지닌 프로브로 다중 피씨알을 수행한 후, 이와 상보적으로 반응이 가능한 프로브가 결합된 올리고머 프로브와 반응이 가능하도록 사용하게 되면, 하나의 측면 흐름 멤브레인으로 수개에서 수십개의 증폭된 결과물을 확인할 수가 있다.
따라서, 다양한 다중 피씨알에 공동으로 사용할 수가 있어 측면 흐름 멤브레인의 생산시에 대량 생산이 가능하다. 이는 하나의 측면흐름 멤프레인을 사용하여 다양한 아이템의 결과물을 확인하는 것으로, PCR의 증폭 산물의 종류에 상관없이 동일한 멤브레인을 사용하여 증폭산물을 확인할 수 있기 때문에, 제품생산의 원가절감과 품질관리를 용이하게 하여 제품의 생산성을 높일 수 있게 한다.
상기 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브는 예를 들어, 서열번호 27 내지 39로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 서열을 포함할 수 있다.
경우에 따라서, 상기 프로브는 멤브레인에 고정화하기 위해 핵산 올리고머를 추가로 포함할 수 있으며, 반복되는 염기 서열을 가지는 20-60bp, 구체적으로 20-40bp의 올리고머를 추가로 포함할 수 있다.
경우에 따라서, 본 발명에 따른 키트는 선택적으로 내부 대조 (internal control) 프라이머를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 내부 대조 프라이머는 위음성 문제, 즉 PCR 반응이 제대로 수행되었는지 여부를 확인하기 위한 것으로서, 시료 내 STI의 존부와 상관없이 정상적으로 발현되는 유전자를 임의로 선택할 수 있다.
본 발명에 따른 키트는 경우에 따라, 중합효소, 버퍼, 데옥시리보뉴클레오타이드-5-트리포스페이트와 같은 핵산 증폭 PCR 반응을 실시하는데 필요한 시약을 선택적으로 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 키트는 또한 다양한 폴리뉴클레오타이드 분자, 다양한 버퍼 및 시약을 추가로 포함할 수 있다.
상기 키트에서 특정 반응을 위해 사용되는 시약, 버퍼 또는 반응물의 최적량은 당업자에 의해 결정될 수 있으며, 앞서 언급된 STI 특이적 유전자와 특이적으로 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 이에 비상보적인 염기를 함유하는 핵산 올리고머를 포함하는 프라이머 (정방향) 및/또는 (ii) 표지자를 포함하는 표지된 프라이머 (역방향), 및 프로브가 고정화된 멤브레인들은 각각을 포함하는 별도의 포장 또는 컴파트먼트(compartment)로 제작될 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 키트를 이용하여 생체 외에서 STI를 검출하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 (a) 검체에서 추출된 핵산을 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 코로나바이러스 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머와 반응시키는 단계; 및 (b) 상기 반응 산물 중 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브와 반응시키는 단계를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출에 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 방법을 수행함에 있어 사용되는 키트와 관련된 구성에 대한 설명은 방법에도 동일하게 적용될 수 있다.
하나의 실시예에서, 상기 검체는 성 매개 감염증 병원체 보유 의심 환자 또는 진단 대상 개개인 또는 개개인 유래의 체액, 세포주, 조직 배양 등에서 얻어지는 폭넓은 범위의 모든 생물학적 체액을 포함할 수 있고, 예를 들어 자궁경부 및 질의 스왑, 자궁경부의 조직, 남성 성기의 조직, 소변, 항문, 직장, 인두, 구강 및 두경부일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 검체로부터 핵산을 추출하는 단계를 추가로 포함할 수 있으며, 핵산의 추출은 예를 들어 상업화 되어 공급되고 있는 다양한 키트 또는 추출 시약을 사용하여 수행될 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
1. 키트의 제작
본 발명에 따른 키트 (이하, PaxView STI12 MPCR-ULFA Kit로도 명명)는 두 개의 키트를 포함한다. 하나는 핵산을 증폭하는 키트 (이하, Component 1. STI12 MPCR Kit)이고, 다른 하나는 증폭산물을 확인하는 키트 (이하, Component 2. PaxView STI12 MPCR Kit)이다. PaxView STI12 MPCR-ULFA Kit의 구성품인 프라이머 혼합물에 포함된 프라이머는 12가지 타입의 STI에 대한 부위와 내부 대조에 대한 부위 외에, 정방향 프라이머 (Forward primer=SN)에는 비상보적 핵산 올리고머인 유니버셜 부위 (universal region)가, 역방향 프라이머 (Reverse primer=ASN)에는 비오틴 서열이 태깅 (tagging)되어 있다 (도 1).
PCR 후 증폭산물을 PaxView ULFA Kit의 ULFA 디바이스에 로딩하면 골드-스트렙타비딘 접합체 (Gold-streptavidin conjugate=Gold-SV, 글라스 파이버 (Glass fiber) 소재의 패드 (pad)에 존재)와 결합 후 NC (nitrocellulose) 멤브레인 위에 흡착되어 있는 프로브 (probe = 유니버셜 부위 (universal region)에 상보적인 올리고)와 결합하여 각 병원균의 표시 부위에서 발색한다. 발색 원리는 각 프라이머에 태깅된 비오틴과 스트렙타비딘의 반응법에 의한 것으로 많이 사용되고 있는 항원-항 체 반응 외에 DNA 반응 확인에도 활용할 수 있다. 아비딘과 유사한 스트렙타비딘은 비오틴과 복합체를 형성할 수 있어 비오틴에 접합된 골드 입자 (gold particle)에 의해 육안으로 판독 가능한 발색이 일어난다 (도 2).
발색 후 ULFA 디바이스를 육안으로 판독한다. 키트의 사용방법에 기재된 결과 판정에 따라 음·양성을 판정하며 STI의 타입에 따라 발색선의 위치가 달라지므로 예상 밴드 패턴과 실제 밴드 패턴이 일치함을 확인할 수 있다 (도 4 및 도 5).
본 발명에 따른 STI 진단 키트는 새로운 STI 진단의 플렛폼으로, 신속 정확한 정성적 분 자 진단 키트로써 검체로부터 추출한 유전자를 주형으로 하여 유전자를 증폭하고, ULFA에 전개하여 나타나는 나노 골드 입자가 밴드의 형태로 나타나게 되면 12가지 종의 STI의 감염 여부를 진단할 수 있다.
2. STI진단
(1) Mixture의 제조
1) PCR master mix의 제조: 아래와 같이 제조하였다.
2) 제조된 PCR master mix를 PCR tube에 분주하였다.
3) 검체로부터 추출된 DNA나 positive control 또는 negative control 5 ㎕를 같은 PCR tube에 넣어주었다.
[표 2] PCR증폭을 위한 Primer sequence
(2) Polymerase chain reaction(PCR)
1) 위 PCR tube를 thermal cycler에 넣는다.
2) 아래와 같은 조건으로 thermal cycler를 설정하고 장비를 작동하였다.
[표 4]
(3) ULFA에 전개
1) PCR 반응이 완료된 증폭산물 5 ㎕를 ULFA의 sample 투입구에 로딩하였다. 한 개의 프로브가 한종의 STI를 검출할 수 있다. 예를 들면 Universal probe (Uprobe) 01은 CT를 검출할 수 있다.
[표 5] 유니버셜 프로브
2) Running Buffer 5 ㎕를 같은 ULFA의 sample 투입구에 로딩하여 PCR 증폭산물을 10분 동안 전개시켰다.
3) Washing Buffer 15 ㎕를 같은 ULFA의 sample 투입구에 로딩하여 10분 동안 전개시켜 Nitrocellulose membrane을 clean up 하였다.
4) Device에 표시된 번호에 형성된 붉은색 라인의 유무로 증폭 결과를 확인하였다 (라인 유: 양성, 라인 무: 음성).
(4) 결과 판정
ULFA 디바이스에서 PCR 증폭 산물과 결합하여 반응이 나타나는 밴드의 결과를 육안으로 확인하여 음·양성을 판정하였다 (도 3 및 도 5 참조).
PaxView STI12 MPCR-ULFA Kit에 적용된 기술은 2개의 패널(panel)로 구성되어 동시에 10종의 multiplex PCR을 수행 후 나온 PCR product를 ULFA (universal lateral flow assay)에서 검출하는 것으로 ULFA의 nitrocellulose membrane에 12개의 프로브를 고정하고 각 프로브에 상보적인 핵산 올리고머 포함 유니버셜 영역 (universal region)을 가진 프라이머에 특이적인 STI 종을 검출할 수 있다. 12종의 Universal probe (Uprobe) 1 세트로 2개의 패널로 구성된 20타입의 STI와 내부 대조군 (internal control) 모두 검출이 가능하다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
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Claims (13)
- (a) 검체에서 추출된 핵산을 증폭시킬 수 있는, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 특이적 유전자와 비상보적 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머; 및
(b) 상기 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출용 키트.
- 제1항에 있어서,
상기 (a)의 프라이머 중 상보적 핵산 올리고머는 서열번호 1 내지 서열번호 26의 서열로 구성된 군에서 선택되는 키트.
- 제1항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머 중 상보적 핵산 올리고머는 다음을 포함하는 키트:
서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는, HSV1 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 3 및 서열번호 4의 서열을 포함하는, HSV2 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 5 내지 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, CT 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 9 및 서열번호 10의 서열을 포함하는, NG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 11 및 서열번호 12의 서열을 포함하는, TP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 13 및 서열번호 14의 서열을 포함하는, TV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 15 및 서열번호 16의 서열을 포함하는, UU 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 17 및 서열번호 18의 서열을 포함하는, UP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 19 및 서열번호 20의 서열을 포함하는, MG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 21 및 서열번호 22의 서열을 포함하는, MH 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 23 및 서열번호 24의 서열을 포함하는, CA 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머; 또는
서열번호 25 및 서열번호 26의 서열을 포함하는, GV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머.
- 제1항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머 중 비상보적 핵산 올리고머는 서열번호 27 내지 39의 서열로 구성된 군에서 선택되는 키트.
- 제1항에 있어서, 상기 (b)의 프로브는 서열번호 40 내지 52의 서열로 구성된 군에서 선택되는 키트.
- 제1항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머에 의해 증폭된 산물을 멤브레인 측면에 주입하면 증폭된 산물이 이동하면서 멤브레인에 고정된 프로브와 증폭된 산물에 포함된 핵산 올리고머가 상보적 혼성화 반응하는 것을 특징으로 하는 키트.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 키트를 이용하여, 생체 외에서 성 매개 감염증 유발 병원체를 검출하는 방법.
- (a) 검체에서 추출된 핵산을 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis: CT), 임질구균 (Neisseria gonorrhea: NG), 트레포네마 팔리둠 (Treponema pallidum: TP), 트리코모나스 바지날리스 (Trichomonas vaginalis: TV), 우레아플라즈마 우레아리티쿰(Ureaplasma urealyticum: UU), 우레아플라스마 파붐 (Ureaplasma parvum: UP), 마이코플라스마 제니탈리움 (Mycoplasma genitalium: MG), 마이코플라스마 호미니스(Mycoplasma hominis: MH), (GV), 칸디다 알비칸스 (Candida albicans: CA), 단순포진바이러스 1형 (Herpes simplex virus 1: HSV1) 및 단순포진바이러스 2형 (Herpes simplex virus 2: HSV2)로 구성된 군에서 선택되는 성 매개 감염증 유발 병원체 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머 및 상기 코로나바이러스 특이적 유전자와 비상보적인 핵산 올리고머를 함유하는 프라이머와 반응시키는 단계; 및
(b) 상기 반응 산물 중 비상보적인 핵산 올리고머와 상보적으로 결합하는 프로브와 반응시키는 단계를 포함하는, 성 매개 감염증 유발 병원체 검출에 정보를 제공하는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머 중 상보적 핵산 올리고머는 서열번호 1 내지 서열번호 26의 서열로 구성된 군에서 선택되는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머 중 상보적 핵산 올리고머는 다음을 포함하는 방법:
서열번호 1 및 서열번호 2의 서열을 포함하는, HSV1 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 3 및 서열번호 4의 서열을 포함하는, HSV2 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 5 내지 서열번호 8로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, CT 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 9 및 서열번호 10의 서열을 포함하는, NG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 11 및 서열번호 12의 서열을 포함하는, TP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 13 및 서열번호 14의 서열을 포함하는, TV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 15 및 서열번호 16의 서열을 포함하는, UU 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 17 및 서열번호 18의 서열을 포함하는, UP 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 19 및 서열번호 20의 서열을 포함하는, MG 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 21 및 서열번호 22의 서열을 포함하는, MH 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머;
서열번호 23 및 서열번호 24의 서열을 포함하는, CA 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머; 또는
서열번호 25 및 서열번호 26의 서열을 포함하는, GV 특이적 유전자와 결합하는 상보적 핵산 올리고머.
- 제8항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머 중 비상보적 핵산 올리고머는 서열번호 27 내지 39의 서열로 구성된 군에서 선택되는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 (b)의 프로브는 서열번호 40 내지 52의 서열로 구성된 군에서 선택되는 방법.
- 제8항에 있어서, 상기 (a)의 프라이머에 의해 증폭된 산물을 멤브레인 측면에 주입하면 증폭된 산물이 이동하면서 멤브레인에 고정된 프로브와 증폭된 산물에 포함된 핵산 올리고머가 상보적 혼성화 반응하는 것을 특징으로 하는 방법.
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| KR102239254B1 (ko) * | 2019-04-24 | 2021-04-13 | 주식회사 팍스젠바이오 | Hpv 검출용 키트 및 이를 이용한 hpv 검출방법 |
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