KR20230148905A - 비알콜성 지방간 질환에 dpp-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오 마커 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명의 비알콜성 지방간 질환에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오 마커를 이용하면, 비알콜성 지방간 질환 개개의 환자의 DPP-4 저해제의 타겟 대상군으로 적합한지 치료 개시 전에 확실하게 판정할 수 있어, 불필요한 약물 투여를 최소화하고 치료 효율을 높일 수 있다.
Description
본 발명은 비알콜성 지방간 질환에 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오 마커 및 이의 용도 에 관한 것이다.
지방간 질환(fatty liver disease)이란, 지방간이라고도 불리며 간세포에 지방(트리글리세리드 등)이 이상 축적되는 것에 기인하여 간장애를 초래하는 질환이다. 지방간 질환의 초기 병태는 간세포에 지방 침착만을 인정하는 단순성 지방간이며, 그 후에 지방간염(간섬유증을 포함), 또한 간경변이나 간세포암으로 병태가 진행되는 것이 알려져 있다. 일반적으로, 간장에 지방이 침착되는 원인으로서는, 알콜성 섭취, 비만, 당뇨병, 지질대사 이상, 약제(스테로이드, 테트라사이클린 등), Cushing 증후군, 중독(황린 등), 고도의 영양 장애 등을 들 수 있다.
지방간 질환의 원인은 크게 알콜성과 비알콜성으로 나누어지며, 전자를 원인으로 하는 간 질환을 알콜성 지방간 질환(알콜성 간장해라고도 불린다), 후자를 원인으로 하는 간 질환을 비알콜성 지방간 질환(nonalcoholic fatty liver disease: NAFLD)이라고 부른다.
비알콜성 지방간 질환이란, 간에 유해할 정도로 인정되는 알콜성 섭취 병력이 없음에도 불구하고 간 조직 검사에서 알콜성 간염의 특징적인 소견인 지방성 변화(fatty change, steatosis)와 소엽성간염(lobular hepatitis,steatohepatitis) 등을 나타내는 경우를 말한다. 간의 병리소견은 단순 지방간(Non-Alcoholic Fatty Liver,NAFL)으로부터 지방간염(Non-Alcoholic Steatohepatits, NASH), 지방간염과 동반된 섬유화증, 간경변증 등의 다양한 스펙트럼을 나타내는데, 비알콜성 지방간 질환은 이 모두를 포함하는 의미로 사용된다.
이러한 비알콜성 지방간 질환에서는 대부분 인슐린 저항성, 비만, 당뇨병 및 고지혈증을 동반하고 있다. 이러한 합병증이 존재하는 경우에는, 우선 그 치료를 실시하는 것이 필요하다. 비알콜성 지방간 질환에 대한 치료의 원칙은, 식사 요법이나 운동요법 등의 생활 습관의 개선이지만, 확실하게 실행하는 것은 어려운 것이 현실이다. 비알콜성 지방간염에 있어서는, 간경변간세포암으로 진전될 가능성이 높은 점에서, 보다 적극적인 약물 치료가 필요하다. 비알콜성 지방간염의 병태 발증진행에 중요하다고 생각되고 있는 산화 스트레스나 인슐린 저항성 등의 개선을 목표로 한 치료도 시도되고 있지만, 충분한 과학적 근거가 확립된 치료법이 없는 것이 현실이다.
특허문헌 1에 비알콜성 지방간 질환의 치료 및 예방에 적합한 치료제로서 당뇨병 치료제로 사용되고 있는 DPP-Ⅳ 억제제가 적합하다는 발명이 출원되었으나, 약물의 타깃 선별과 반응률을 높이기 위한 바이오마커 선별의 제시가 부족한 문제가 있다.
비알콜성 지방간 질환 환자에서 기존의 DPP-4 저해제를 이용한 사람을 대상으로 하였을 때 비알콜성 간질환에서 반응률이 약 40%로 매우 낮았다. 이러한 효능을 최적화 하기 위하여 적절한 타깃 대상군을 찾는 것이 매우 중요하고, 이러한 타깃 대상군을 찾기 위한 임상적 표지자의 개발이 필요한 실정이다.
당뇨병 치료제로 사용되고 있는 DPP-4 저해의 경우 비알콜성 지방간 질환에서 약 40%의 반응률을 나타냈으나 효능에 대한 외부 검증(external validation)이 필요하고, 실제 임상에서 비알콜성 지방간 질환에 적응 확대 및 실제 사용을 위해서는 단순 간 내 지방의 양의 감소보다는 간 내 염증 감소 및 간내 섬유화 감소에 대한 기전적 증명이 필요하여, DPP-4 저해제의 향후 임상 적용 시 최적 환자군을 찾기 위한 비침습적 표지자를 연구한 결과, 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1, IGFBP-1)가 비알콜성 지방간 질환에서 DPP-Ⅳ 억제제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커로의 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (IGFBP-1)’은 대사증후군으로 다양한 표현형을 가지는 비알콜성 지방간 질환에서 치료제로 사용되고 있는 DPP-4 저해제의 타겟 바이오마커로 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
특히, 간과 혈청에서의 IGFBP-1의 연관성 분석을 통해서 비침습적인 방법으로 비알콜성 지방간 질환에서 혈청에서의 IGFBP-1의 발현 정도에 따른 DPP-4 저해제의 반응율을 높일 수 있었다
또한, 본 발명의 IGFBP-1이 경우 간과 혈청에서 연관성을 보이는 것을 확인하였으며 추후에 DPP-4 저해제를 사용 시 비알콜성 지방간 질환 환자에서 적절한 타깃 대상군을 찾는 데 유용하게 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 목적은 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커를 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준을 확인하는 제제를 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자 중 DPP-Ⅳ 저해제의 타겟 대상군 예측용 조성물을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측용 키트를 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적은 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 정보 제공 방법을 제공하는 데 있다.
이하, 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1, IGFBP-1)의 mRNA 또는 단백질을 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4(dipeptidyl peptidase-4) 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커 조성물을 제공한다.
본 발명의 가장 큰 특징은 IGFBP-1의 mRNA 또는 단백질을 바이오마커로 이용하여 비알콜성 지방간 질환 환자 중 DPP-4 저해제의 타겟 대상군을 예측하는 것이다.
본 발명의 바이 마커는 비알콜성 지방간 질환의 치료제가 없어, 당뇨병 치료에 사용되는 DPP-4 저해제의 반응율을 높일 수 있는(비알콜성 지방간 질환 치료제로서 DPP-4 저해제가 적합한 타겟 대상군인지를 판정하는) 적합도 지표가 될 수 있으며, DPP-4 저해제의 반응율을 높일 수 있으므로, 불필요한 약물 투여를 최소화하고 치료 효율을 높일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "비알콜성 지방간"은 비만, 인슐린 저항성, 제 2형 당뇨병 등이 동반되는 대사증후군을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "DPP-4 저해제"는 주로 소화 호르몬 '인크레틴'을 분해할 때 작용하는 효소인 DPP-4를 저해하는 기능을 하는 물질로서, 구체적으로, 리나글립틴, 시타글립틴, 빌다글립틴, 알로글립틴, 테넬리글립틴 등이 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1)"은 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질 (IGFBP) 계열의 구성원이며 IGFBP 도메인과 I형 티로글로불린 도메인이 있는 단백질을 암호화하며, IGFBP-1라고도 칭한다. 이 단백질은 인슐린 유사 성장 인자 (IGF) I 및 II 모두에 결합하고 혈장에서 순환한다. 예를 들어, 이의 인간 유래 유전자 서열은 진뱅크 번호 Gene 3484이며, 인간 단백질은 진뱅크 번호: NP_000587.1의 아미노산 서열로 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "반응율"은 개개의 환자의 비알콜성 지방간 치료를 위한 특정약물이 효과를 나타내는 비율을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "감수성"은 개개의 환자의 비알콜성 지방간 치료를 위한 특정 약물이 효과를 나타내는지 여부를 의미하며, 해당 약물에 대하여 민감하게 반응하여 약물의 효능이 작용하는 것을 의미하는 "민감도"와 혼용될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "저항성"은 해당 약물에 대하여 민감하게 반응하지 아니하여 약물의 효능이 작용하지 않는 것을 의미한다.
예컨대, 상기 DPP-4 저해제는 비알콜성 지방간 환자에 따라 효과를 나타내는 경우와 효과를 나타내지 않는 경우가 있다. 이와 같은 개개의 환자의 비알콜성 지방간에 대해 DPP-4 저해제가 효과를 나타내는 지 여부를 감수성이라고 한다. 따라서, 본 발명에 따라 치료 개시 전에 효과를 기대할 수 있는 환자(반응자)와, 효과를 기대할 수 없는 환자(무반응자)를 예측할 수 있으면, 유효성과 안전성이 높은 화학 요법이 실현될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "적합도"는 개개의 환자의 비알콜성 지방간 치료를 위한 특정 약물이 그 환자에게 알맞은 정도를 나타낸다.즉, 적절 또는 적합한 치료제인지 여부를 판단하는 척도이다.
본 명세서에서 용어 "적합"은 해당 약물에 대하여 민감하게 반응하지 아니하여 개개의 환자의 비알콜성 지방간 치료에 알맞는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "부적합"은 해당 약물에 대하여 민감하게 반응하지 아니하여 개개의 환자의 비알콜성 지방간 치료에 알맞지 않는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용도 "기준(reference)"은 건강하거나 정상인 개체 또는 비교 대상인 개체로부터 획득된 생물학적 시료에서 검출되는 바이오 마커의 값 혹은 수준 범위를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예측"은 본원에서 대상 환자가 약물 또는 약물 세트에 대해 유리하게 또는 불리하게 반응할 가능성을 지칭하는데 사용된다. 일 실시 양태에서, 예측은 이러한 반응의 정도에 관한 것이다.
본 발명에서는, 본 바이오 마커인 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 저발현 또는 저활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 부적합한 타겟 대상군인 것을 판정하고; 상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 고발현 또는 고활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 적합한 타겟 대상군인 것을 판정할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준을 확인하는 제제를 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자 중 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용되는 표현 " mRNA 발현 수준; 또는 단백질의 발현 또는 활성 수준 측정"은 해당 시료 내에서 검출하고자 하는 대상을 검출하는 것을 의미한다.
본 발명에서, 검출하고자 하는 대상은 시료 내 해당 유전자의 mRNA 및/또는 단백질이다. 즉, 유전자의 전사 산물인 RNA 또는 유전자 산물인 단백질(바람직하게는, 활성형)을 검출함으로써 상기 유전자의 발현 여부를 확인할 수 있다.
mRNA 또는 단백질의 검출은 통상적으로는 시료부터 mRNA 또는 단백질을 추출하여, 추출물 중의 mRNA RNA 또는 단백질을 검출함으로써 실시할 수 있다. 이러한 mRNA 또는 단백질의 검출은 면역분석학적 방법, 하이브리드화 반응 및 증폭반응에 의해 측정될 수 있으나, 이에 제한되지 않고 당업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여 용이하게 실시될 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 유전자 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 유전자의 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함한다.
상기 mRNA의 발현 여부를 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적인 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍, 프로브 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된다. 즉, 핵산의 검출은 유전자를 암호화하는 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자의 상보물에 하이브리드화되는 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용하는 증폭반응에 의해 수행될 수 있다.
예컨대, 프라이머를 이용한 mRNA의 검출은 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 유전자 서열을 증폭한 다음 당 분야에 공지된 방법으로 유전자의 증폭 여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 단백질의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드 또는 뉴클레오티드를 포함한다.
상기 단백질의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제는 상기 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 의미하고, 다클론 항체, 단클론 항체, 재조합 항체 및 이들의 조합을 모두 포함한다.
상기 항체는 다클론 항체, 단클론 항체, 재조합 항체 및 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 및 항체 분자의 기능적인 단편, 예를 들어, Fab, F(ab'), F(ab')2및 Fv를 모두 포함한다. 항체 생산은 본 발명이 속하는 분야에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있고, 제조되어 상업적으로 판매되는 항체를 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 mRNA의 발현 여부를 측정하는 제제뿐만 아니라, 항원-항체 복합체의 형성을 정량 또는 정성적으로 측정 가능하게 하는 라벨, 면역학적 분석에 사용되는 통상적인 도구, 시약 등을 더 포함할 수 있다.
항원-항체 복합체의 형성을 정성 또는 정량적으로 측정 가능하게 하는 라벨에는 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 산화환원 분자 및 방사선 동위원소 등이 있으며, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다. 검출 라벨로 이용 가능한 효소에는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, β-D-갈락토시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제, 알칼라인포스파타아제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코즈옥시다제, 헥소키나제와 GDPase, RNase, 글루코즈옥시다제와루시페라제, 포스포프럭토키나제, 포스포에놀피루베이트카복실라제, 아스파르테이트아미노트랜스페라제, 포스페놀피루베이트데카복실라제, β-라타마제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 형광물에는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데히드, 플루오레스카민 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 리간드에는바이오틴 유도체 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 발광물에는 아크리디늄에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 미소입자에는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 산화환원 분자에는 페로센, 루테늄착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논, K4W(CN)8, [Os(bpy)3]2+, [RU(bpy)3]2+, [MO(CN)8]4-등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 방사선동위원소에는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I, 186Re 등이 있으며 이로 제한되지 않는다.
상기 도구 또는 시약의 일 예로, 적합한 담체, 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 표지물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 담체는 가용성 담체, 불용성 담체가 있고, 가용성 담체의 일 예로 당 분야에서 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS가 있고, 불용성 담체의 일 예로 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
본 발명의 조성물은 상술한 바이오 마커를 이용하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4(dipeptidyl peptidase-4) 저해제의 타겟 대상군 예측용 키트를 제공한다.
상기 키트에는 상기 mRNA의 발현; 또는 상기 단백질의 발현 또는 활성 수준을 측정하는 제제뿐만 아니라, 면역학적 분석에 사용되는 당 분야에서 일반적으로 사용되는 도구, 시약 등이 포함될 수 있다.
상기 도구 또는 시약의 일 예로, 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 발색단(chromophores), 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 표지물질이 효소인 경우에는 효소 활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다. 담체는 가용성 담체, 불용성 담체가 있고, 가용성 담체의 일 예로 당 분야에서 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS가 있고, 불용성 담체의 일 예로 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교 덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.
본 발명의 키트는 상술한 바이오 마커 및 조성물을 구성으로 포함하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은
(a) 대상으로부터 생물학적 시료를 준비하는 단계;
(b) 상기 생물학적 시료 내에 IGFBP-1의 mRNA의 발현 수준; 또는 단백질의 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계; 및
(c) 상기 (b) 단계의 결과를 기반으로 하여, 대상의 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 타깃 대상군 적합 여부를 판정하는 단계;
를 포함하는 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 정보 제공 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 방법은, 대상 환자로부터 생물학적 시료를 획득하고, 상기 시료 내에서 상술한 유전자로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 1개 또는 복수개 유전자의 발현 여부를 측정한 후, 기준과 비교하여, 기재된 유전자 또는 단백질의 발현 또는 활성이 억제되었거나 감소한 경우에, 당해 시료가 DPP-Ⅳ 저해제의 타겟 대상군으로 부적합하다고 판정; 및 기재된 유전자 또는 단백질의 발현 또는 활성이 증가되었거나 향상된 경우에, 당해 시료가 DPP-4 저해제의 타겟 대상군으로 적합하다고 판정하는 공정을 포함하여 이루어진다.
본 발명의 상기 방법은 시료 내에서의 특정 유전자 또는 단백질의 발현(바람직하게는, 활성형) 여부를 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 적합 지표로 하는 점을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 (c) 단계에서 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 수준이 정상에 비하여 고발현 또는 고활성화된 경우, 대상의 DPP-4 저해제의 타겟 대상군으로 적합한 것으로 판정한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 (c) 단계에서 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 수준이 정상에 비하여 저발현 또는 저활성화된 경우, 대상의 DPP-4 저해제의 타겟 대상군으로 부적합한 것으로 판정한다.
본 명세서에서 상기 유전자들의 발현 수준을 언급하면서 사용되는 용어 "저발현" 또는 "저활성"은 바이오 마커가 비정상 프로세스, 질환 혹은 개체 내 기타 병태를 나타내거나 이의 징후인 경우, 건강하거나 정상인 개체 또는 비교 대상인 개체로부터 획득된 생물학적 시료에서 검출되는 바이오 마커의 값 혹은 수준 범위 보다 낮은 생물학적 시료 내의 바이오 마커의 값 혹은 수준을 지칭한다. 또한, 바이오 마커의 "기준(정상)" 발현 수준 혹은 값과 비교해서 "차등(differential) 수준" 혹은 "차등 값"을 지니거나 "상이하게 발현된" 것으로서 지칭될 수 있으며, 발현에 있어서 정량적 차이뿐만 아니라 정성적 차이의 둘 모두를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "생물학적 시료"란 본 발명의 바이오 마커의 발현이 검출될 수 있는 개체로부터 얻어지는 모든 시료를 의미한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생물학적 시료는 타액(saliva), 생검(biopsy), 혈액, 피부 조직, 액체 배양물, 분변 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이며, 특별히 이에 제한되지 않고, 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용되는 방법으로 처리하여 준비될 수 있다.
본 발명의 방법은 상술한 바이오 마커를 이용하여 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 적합도를 판정하므로, 중복된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 발명의 비알콜성 지방간 질환에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오 마커를 이용하면, 치료제가 아직 없는 비알콜성 지방간 질환 환자들 중에서 DPP-4 저해제 사용에 적합한 타겟 대상군을 판정할 수 있어, 불필요한 약물 투여를 최소화하고 치료 효율을 높일 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 ‘비알콜성 지방간 질환에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커로의 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (IGFBP-1)’ 개념도이다.
도 2는 표적 집단뿐만 아니라 치료 반응을 예측하기 위한 새로운 바이오마커 결정하는 방법에 대한 데이터로,
도 2a는 3가지 NAFLD 모델(HFD, MCD, WD)에서 바이오마커로 제시한 IGFBP-1과 관련된 INSULIN LIKE GROWTH FACTOR BINDING 경로의 발현 정도를 나타낸 것이고,
도 2b는 제시한 바이오마커 IGFBP-1와 그에 관련된 유전자 패밀리의 발현량을 3가지 NAFLD 마우스 모델과 DPP-4 저해제를 처리한 세포의 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 3은 DPP-4 저해제의 바이오마커로 정한 IGFBP1 발현을 다른 간질환(예, 고지방식이와 추가로 0.1% 메티오닌과 콜린이 첨가되지 않은 60kcal% 지방의 L-아미노산 식이(L-Amino Acid Diet With 60 kcal% Fat With 0.1% Methionine and No Added Choline; CDHF)) 모델에 적용하여 검증한 것으로,
도 3a는 검증 연구로 CDHF NAFLD 모델을 사용하여 약물 투여 전 혈청을 수집한 연구 디자인 모식도이며,
도 3b는 간 질환 마우스 모델 CDHF 군에서 DPP-4 저해제 linagliptin의 투여 전/후 제시한 바이오마커인 IGFBP-1의 혈청 내 발현량과 그 외 IGFBP-3, IGF-I의 발현량을 나타낸 것이며,
도 3c는 혈청 내 제시한 바이오마커 IGFBP-1와 그 외 IGFBP-3, IGF-I에 대하여 DPP-4 저해제 linagliptin 처리 전/후 발현 정도를 나타낸 분석 표이다.
도 3d는 제시한 바이오마커 IGFBP-1의 혈청 발현 정도에 따른 DPP-4 저해제 투여 시 간 질환에서의 효과를 나타낸 표현형 분석 자료이며,
도 3e는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 검증 연구에서 DPP-4 저해제 linagliptin 처리 후 표현형을 나타낸 분석 표이다.
도 3f는 CDHF(간질환 대조군)과 비교하여 제시한 바이오마커의 혈청 내 발현 정도에 따라 나눈 그룹군에서 DPP-4 저해제 처리 후 간 조직에서의 IGFBP-1 발현과 섬유화 마커(a-SMA,COL1A1), 염증 마커 (CCL-2, TNFa), 지방산생합성(SREBP1c)를 나타낸 것이다.
도 4는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 검증 연구에서 혈청과 간 사이의 IGFBP-1 상관관계를 나타낸 것이며,
도 4a는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 정상인과 비알콜성 지방간 환자의 혈청 내 IGFBP-1 상관관계를 나타낸 것이며,
도 4b는 CDHF 간질환 마우스 모델에서 DPP-4 저해제 linagliptin 투여에 따른 혈청과 간 조직 내에서의 IGFBP-1의 발현량를 나타낸 것이다.
도 4c는 DPP-4 저해제 linagliptin 투여 전/후에 따른 IGFBP-1과 ALT, AST, TG의 상관관계를 나타낸 것이고,
도 4d는 DPP-4 저해제에 따른 간과 혈청에서의 IGFBP-1의 상관관계를 나타낸 것이다.
도 2는 표적 집단뿐만 아니라 치료 반응을 예측하기 위한 새로운 바이오마커 결정하는 방법에 대한 데이터로,
도 2a는 3가지 NAFLD 모델(HFD, MCD, WD)에서 바이오마커로 제시한 IGFBP-1과 관련된 INSULIN LIKE GROWTH FACTOR BINDING 경로의 발현 정도를 나타낸 것이고,
도 2b는 제시한 바이오마커 IGFBP-1와 그에 관련된 유전자 패밀리의 발현량을 3가지 NAFLD 마우스 모델과 DPP-4 저해제를 처리한 세포의 발현 변화를 나타낸 것이다.
도 3은 DPP-4 저해제의 바이오마커로 정한 IGFBP1 발현을 다른 간질환(예, 고지방식이와 추가로 0.1% 메티오닌과 콜린이 첨가되지 않은 60kcal% 지방의 L-아미노산 식이(L-Amino Acid Diet With 60 kcal% Fat With 0.1% Methionine and No Added Choline; CDHF)) 모델에 적용하여 검증한 것으로,
도 3a는 검증 연구로 CDHF NAFLD 모델을 사용하여 약물 투여 전 혈청을 수집한 연구 디자인 모식도이며,
도 3b는 간 질환 마우스 모델 CDHF 군에서 DPP-4 저해제 linagliptin의 투여 전/후 제시한 바이오마커인 IGFBP-1의 혈청 내 발현량과 그 외 IGFBP-3, IGF-I의 발현량을 나타낸 것이며,
도 3c는 혈청 내 제시한 바이오마커 IGFBP-1와 그 외 IGFBP-3, IGF-I에 대하여 DPP-4 저해제 linagliptin 처리 전/후 발현 정도를 나타낸 분석 표이다.
도 3d는 제시한 바이오마커 IGFBP-1의 혈청 발현 정도에 따른 DPP-4 저해제 투여 시 간 질환에서의 효과를 나타낸 표현형 분석 자료이며,
도 3e는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 검증 연구에서 DPP-4 저해제 linagliptin 처리 후 표현형을 나타낸 분석 표이다.
도 3f는 CDHF(간질환 대조군)과 비교하여 제시한 바이오마커의 혈청 내 발현 정도에 따라 나눈 그룹군에서 DPP-4 저해제 처리 후 간 조직에서의 IGFBP-1 발현과 섬유화 마커(a-SMA,COL1A1), 염증 마커 (CCL-2, TNFa), 지방산생합성(SREBP1c)를 나타낸 것이다.
도 4는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 검증 연구에서 혈청과 간 사이의 IGFBP-1 상관관계를 나타낸 것이며,
도 4a는 IGFBP-1의 바이오마커로서의 가능성 확인을 위해, 정상인과 비알콜성 지방간 환자의 혈청 내 IGFBP-1 상관관계를 나타낸 것이며,
도 4b는 CDHF 간질환 마우스 모델에서 DPP-4 저해제 linagliptin 투여에 따른 혈청과 간 조직 내에서의 IGFBP-1의 발현량를 나타낸 것이다.
도 4c는 DPP-4 저해제 linagliptin 투여 전/후에 따른 IGFBP-1과 ALT, AST, TG의 상관관계를 나타낸 것이고,
도 4d는 DPP-4 저해제에 따른 간과 혈청에서의 IGFBP-1의 상관관계를 나타낸 것이다.
이하, 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
[실험과정]
1. 다양한 NAFLD 마우스 모델의 구축
1-1) 바스킷 연구 설계(Basket study design): 동물실험 1 마우스 사육
6주령의 C57/BL6N 야생형 수컷 마우스(18~20g)를 오리엔트 바이오에서 구입하였다.
본 실험을 실시하기 전에 1주일간 사육하여 적응시켰다. 실험 동물의 사육환경은 22±2℃ 온도와, 50±15% 습도, 낮과 밤 주기는 각각 12시간으로 조절하였다.
1-2) 검증 연구 설계(validation study design); 동물실험 2 마우스 사육
6주령의 C57/BL6J 야생형 수컷 마우스(18~20g)를 Jackson lab에서 구입하였다.
본 실험을 실시하기 전에 1주일간 사육하여 적응시켰다. 실험 동물의 사육환경은 22±2℃ 온도와, 50±15% 습도, 낮과 밤 주기는 각각 12시간으로 조절하였다.
1-3) 바스킷 연구 설계: 동물실험 1 비알콜성 지방간 모델 유도
(1) 고지방 식이 (High-fat diet) (Research diet # D12492, 60Kcal% Fat; HFD)
(2) 서양식 식이 (Western diet) (Research diets #D12079B; WD)
(3) 메티오닌과 콜린 결핍 식이(Methionine and choline deficient diet) (Research diet # A02082002BR; MCD)
총 30마리를 선정하여 HFD, WD, MCD 각 군당 10마리로 배정하였다. 지방간 유발 사료를 16주 동안 급여 후 (MCD의 경우 6주) 간 생검을 진행하였다.
1-4) 검증 연구 설계: 동물실험 2 비알콜성 지방간 모델 유도
0.1% 메티오닌과 콜린이 첨가되지 않은 60kcal% 지방의 L-아미노산 식이(L-Amino Acid Diet With 60 kcal% Fat With 0.1% Methionine and No Added Choline) (Research diet #A06071302, CDHF)
총 마리 수는 40마리로 일반 식이군 10마리, CDHF 식이군 10마리, CDHFD + DPP-4 저해제 투여군 20마리로 진행되었다. 약물을 투여하기 전 지방간 유발 사료 섭취 14주 후에 채혈을 진행하였고, 이후 DPP-4 저해제를 10주간 사료에 섞어 투여하였다.
2. 약물 투여
2-1) 개발 연구 동물실험 3 약물 투여
3. 조직 생검 및 채혈
3-1) 바스킷 연구 설계: 동물실험 1 & 검증 연구 설계: 동물실험 2 조직 생검
(J Korean Med Sci. 2019 Jan 14; 34(2): e14. Feasibility and Stability of Liver Biopsy before Treatment for Preclinical Nonalcoholic Fatty Liver Studies.참조)
지방간 유발 사료 20주 후에 조직 생검을 실시하였다. 졸레틸(zoletil)과 롬푼(rompun)을 복강 내 주사 (i.p)를 사용하여 마취시켰다. 면도 후, 복부 부위를 10 % 요오드 용액으로 소독하였다. 복부 정중선 절개를 1 cm 이하로 하여 간을 면봉으로 노출시킨 후 간을 절제하였다. 생검 직후 가열된 spatula을 생검 부위에 적용하여 지혈하였다. 절개 부위는 5-0 합성 흡수성 봉합사로 봉합되었다.
수술 후, 동물들은 가열 램프 아래에 보관하여 따뜻하게 유지시켰고, 항생제로서 테트라 사이클린을 항생제로 3 일 동안 처리하였다.
3-2) 검증 연구 동물실험 2 채혈
DPP-4 저해제를 투여하기 전 지방간 유발 사료 섭취 14주 후에 채혈을 실시하였다. 졸레틸 (Zoletil 50 Virbac Laboratories, Carros, France)과 롬푼 (Rompun, Bayer Korea, Korea)을 복강 내 주사 (i.p)를 사용하여 마취시켰다. 마취 후 꼬리에서 채혈을 실시 하루 최대 200ul을 넘지 않도록 하였다.
채혈 후 혈청을 얻기 위하여 원심분리 후 -80℃에 보관하였다.
4. 분자 작업(Molecular work)
4-1) 실시간 정량 역전사 PCR (qRT-PCR)
에보글립틴 (Evogliptin) 투여에 따른 간 섬유화 마커(Liver fibrosis markers)의 발현을 확인하기 위해 qRT-PCR (LightCycler 480 Instrument II; ROCHE) 기기를 이용하여 간 섬유화 마커와 지방 생성 (lipogenesis) 마커 VLDL 분비 마커, 염증 마커를 분석하였다.
4-2) 간 조직의 병리학적 분석
간 조직을 적출하여 10%의 포르말린에 고정하였다.
고정된 조직은 파라핀 block 제조 후 4-5μm 두께로 박절한 후 젤라틴으로 표면 처리된 슬라이드에 부착시켜 슬라이드를 제작하고 H&E (hematoxylin and eosin)로 염색한 후 광학현미경으로 관찰하였다.
지방증, 염증, H&E 을 포함하여 NAFLD에 일반적으로 기술되는 주요 간 조직 병리학적 특징을 NAS (NAFLD activity score) 시스템에 따라 스코어링 하였다. NAS scoring system은 지방 변화(0-3점), 염증(0-3점), 간세포의 풍선 변성(0-2점)을 기준으로 하여 5점 이상인 경우 NASH로, 2점 이하인 경우 non-NASH로, 그 사이 값은 경계치로 진단하였다
4-3) RNA 분리
간으로부터 Total RNA는 Trizol 방법을 통하여 분리하였다. RNA 양은 UV 분광광도계를 사용하여 260 nm과 280nm에서 흡광도로 측정하였다. 1 ug의 총 RNA를 PrimeScript RT Reagent Kit(TaKaRa; #RR037A)를 이용하여 cDNA로 역전사하였다.
4-4) 루미넥스 (Luminex) 멀티플렉스 스크리닝 분석
DPP-4 저해제를 투여하기 전과 실험 종료 후, 200ul의 마우스 혈청을 채취하여 루미넥스 다중 분석을 위해 80 ℃에 보관했다. 멀티플렉스 분석은 웅비메디텍에서 수행하였고, 혈청 내 사이토카인(IGF-I, IGFBP-1, IGFBP-3)을 측정하였다. 각 키트를 사용하는 각 사이토카인에 대한 표준 곡선은 제조업체에서 제공한 참조 사이토카인 농도를 사용하여 생성되었다.
4-5) 간 질환 환자 연구
본 연구를 시작하기 전에 한양대학교 의료원의 IRB(Institutional Review Board)로부터 연구에 대한 윤리적 승인을 받았으며(IRB: 2020-06-048-004, 2019-12-028-006) 각 환자의 동의를 얻었습니다.
본 실험에 사용된 DPP-4 저해제는 유한양행 linagliptin으로, DPP-4의 촉매영역과 비공유 결합(non-covalent bonds)을 형성한다.
[결과]
<비알콜성 지방간 질환에서 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커로의 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (IGFBP-1) 개념도>
다양한 환자의 특성을 묘사하기 위해서 3가지의 모델(HFD, MCD, WD)을 사용하였고(screening cohort), 이에 따라 DPP-4 저해제의 약물 투여 전과 후의 매칭을 통해 간 질환의 개선이 가장 많이 진행된 마우스 식이 군(responder)과 그렇지 않은 비반응성 (non-responder)로 그룹화 후 그에 따른 유전자의 변화분석을 진행하였다. 이를 통해 DPP-4 저해제 의해서 조절되는 바이오마커를 찾고 이 후 바이오마커 발현 정도에 따른 validation cohort 실험을 진행하여 DPP-4 저해제의 반응률을 높이고자 하였다.
<다양한 간질환 마우스 모델의 특성화>
바스킷 연구 설계 동물실험 1에서 사전 연구 생검 샘플을 사용하여 바이오마커 발견을 위해 전사체 분석을 수행하였다. IGFBP-1의 발현은 3개의 NAFLD 모델의 유전자 발현 값(Fragments Per Kilobase of transcript per Million; FPKM)에서 WD 및 MCD 모델에 비해 HFD에서 가장 높았다.
<IGFBP-1 발현량에 따라서 DPP-IV 저해제의 효과 검증>
바스킷 연구에서 선별된 IGFBP-1 바이오마커를 선별한 후 검증 연구(Development study) 동물실험에서는 CDHFD 모델과 투여 전 혈청 내에서의 IGFBP-1 발현량에 따라서 DPP-4 저해제의 효과를 검증하기 위해 진행하였다 (도 3a). DPP-4 저해제의 CDHFD 모델은 DDP-4 저해제 치료 전 혈청 IGFBP-1 발현 수준에 따라 두 그룹(투여 전 간 내 IGFBP-1 높은 그룹: 혈청 370~915pg/mL) vs. 낮은 IGFBP-1 그룹: 혈청 66~161pg/mL)으로 분류되었다. IGFBP-1, IGFBP-3 및 IGF-I의 혈청 농도는 중증 모델인 CDHF에서 DPP-4 저해제 치료 전후에 측정되었다. DPP-4 저해제 연구에서 생검 전 혈청의 IGFBP-1은 일반식이군(NC)에 비해 CDHF에서 증가하였다. 생검 후 IGFBP-1을 비교한 결과 CDHF는 NC에 비해 증가를 보였고 DPP-4 저해제 투여에 의해 감소하였다(1532 pg/mL ± 360.6에서 990.1 pg/mL ± 402.6, p<0.05) (도 3b-3c). 분석 결과 치료 전 혈청 내 IGFBP-1의 발현이 높았던 군에서 CDHF군과 비교하여 NAS score (from 8.0±0 to 7.33±0.87,p=0.0173), 간 중량 (from 2.73±0.65 to 1.78±0.16, p=0.0028), ALT (from 300±116 to 207.4±74.61, p=0.0387)로 유의미하게 낮아졌음을 확인하였다. 그에 반해, 치료 전 혈청 내 IGFBP-1의 발현이 낮았던 군에서는 CDHF군과 비교하여 유의미한 결과를 얻지 못하였음을 나타냈다 (도 3d-e). 섬유화 마커 COL1A1의 경우 CDHF 식이 군과 비교하여 투여 전 혈청 내 IGFBP-1이 낮았던 군과(P=0.006) IGFBP-1이 높았던 군(P<0.0001) 모두에서 유의미하게 감소하였으며, IGFBP-1이 낮았던 군과 비교하여 IGFBP-1이 높았던 군이 COL1A1의 감소율이 더 높았다 (P=0.0022). 염증 마커 CCL2의 경우 CDHF 식이 군과 비교하여 투여 전 혈청 내 IGFBP-1이 높았던 군에서만 유의미하게 감소됨을 확인하였다 (P=0.0107). 지방 생성 마커 SREBP-1c의 경우 CDHF 식이 군과 비교하여 투여 전 혈청 내 IGFBP-1이 낮았던 군과 (P<0.0001) 높았던 군 (P<0.0001) 모두에서 유의미하게 감소함을 확인하였다(도 3f).
<DPP-4 저해제에 대한 바이오마커로서 IGFBP-1의 가능성 확인>
검증 연구는 중증 간질환을 나타내는 마우스 모델과 DPP-4 저해제에 대한 바이오마커로서 IGFBP-1의 가능성을 확인하였다. 정상인과 비교하여 비알콜성 지방간 (NAFLD)환자에서 혈청 내 IGFBP-1이 유의미하게 증가됨을 확인하였다 (P=0.0017) (도 4a). DPP-4 저해제에 따른 간 및 혈청 IGFBP-1 발현량의 상관관계를 확인한 결과, IGFBP-1이 높은 그룹에서 간과 혈청 모두에서 IGFBP-1 발현이 유의하게 감소하였다 (도 4b). DPP-4 저해제 투여 전 혈청 내 IGFBP-1은 ALT (r=0.1995, P =0.0133), AST(r=0.1990, P =0.0135)와 양의 상관관계를 보였다. 투여 후 연구에서는 ALT만이 혈청 IGFBP-1과 상관관계가 있었다(r = 0.5142, P =0.0085). 간 mRNA IGFBP-1 발현 또한 혈청 IGFBP-1과 양의 상관관계를 보였다(r = 0.7477, P<0.0001)(도 4d).
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (13)
- 인슐린-유사 성장인자-결합단백질 1 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 1, IGFBP-1)의 mRNA 또는 단백질을 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4(dipeptidyl peptidase-4) 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 바이오마커 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 저발현 또는 저활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 부적합한 타겟 대상군인 것을 판정하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 고발현 또는 고활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 적합한 타겟 대상군인 것을 판정하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질 발현 또는 활성 수준을 확인하는 제제를 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자 중 DPP-4 저해제의 타겟 대상군 예측용 조성물.
- 제 4 항에 있어서, 상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준을 확인하는 제제는 상기 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 프라이머 쌍 또는 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제 4 항에 있어서, 상기 IGFBP-1 단백질의 발현 또는 활성 수준을 확인하는 제제는 상기 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 펩타이드 또는 뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제 4 항에 있어서, 상기 조성물은 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 단백질의 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 저발현 또는 저활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 부적합한 타겟 대상군인 것으로 판정하는 조성물.
- 제 4 항에 있어서, 상기 조성물은 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 고발현 또는 고활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 적합한 타겟 대상군인 것으로 판정하는 조성물.
- 제 4 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4(dipeptidyl peptidase-4) 저해제의 타겟 대상군 예측용 키트.
- 다음 단계를 포함하는 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4dipeptidyl peptidase-4) 저해제의 타겟 대상군 예측을 위한 정보 제공 방법:
(a) 대상으로부터 생물학적 시료를 준비하는 단계;
(b) 상기 생물학적 시료 내에 IGFBP-1의 mRNA의 발현 수준; 또는 단백질의 발현 또는 활성 수준을 확인하는 단계; 및
(c) 상기 (b) 단계의 결과를 기반으로 하여, 대상의 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 타깃 대상군 적합 여부를 판정하는 단계.
- 제 10 항에 있어서, 상기 (b) 단계에서,
상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 저발현 또는 저활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 부적합한 타겟 대상군인 것으로 판정하는 것을 특징으로 하는, 방법.
- 제 10 항에 있어서, 상기 (b) 단계에서,
상기 IGFBP-1의 mRNA 발현 수준; 또는 이의 단백질의 발현 또는 활성 수준이 기준에 비하여 고발현 또는 고활성화된 경우, 비알콜성 지방간 질환 환자에서 DPP-4 저해제에 대한 적합한 타겟 대상군인 것으로 판정하는 것을 특징으로 하는, 방법.
- 제 10 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 생물학적 시료는 타액(saliva), 생검(biopsy), 혈액, 피부 조직, 액체 배양물, 분변 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
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