KR20230145050A - 세포외 소포체 제제 - Google Patents

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KR20230145050A
KR20230145050A KR1020237023903A KR20237023903A KR20230145050A KR 20230145050 A KR20230145050 A KR 20230145050A KR 1020237023903 A KR1020237023903 A KR 1020237023903A KR 20237023903 A KR20237023903 A KR 20237023903A KR 20230145050 A KR20230145050 A KR 20230145050A
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KR
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bacteria
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evs
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lyophilisate
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KR1020237023903A
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데릭 도르만
콜린 메케나
빌 왕
케빈 후인
로라 잭슨
마리아 시조바
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에벨로 바이오사이언시즈, 인크.
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Abstract

치료제로서 유용한 세포외 소포체(EV)의 용액 및 건조 형태, 및 이의 치료 조성물이 본원에 제공된다.

Description

세포외 소포체 제제
관련 출원에 대한 상호참조
본 출원은 미국 가출원 63/125,177호(2020년 12월 14일 출원) 및 63/196,992호(2021년 6월 4일 출원)의 이익을 주장하며, 각각의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
박테리아로부터 수득된 EV와 같은 세포외 소포체(EV)를 포함하는 치료 조성물은 치료 효과가 있으며, 질환 및/또는 건강 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 본원에 기재된 바와 같이, 박테리아로부터 유래된 EV는 용액 및 건조 형태로 제조된다. 일부 구현예에서, 용액 및 건조 형태는 EV를 포함하는 치료 조성물을 제조하는데 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 포함하는 건조 형태(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)는 건조 완료 시 약 6% 미만의 수분 함량을 갖는다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖는 건조 형태는 다운스트림 처리에 더 적합하다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖는 건조 형태는 개선된 안정성을 갖는다. 일부 구현예에서, EV를 포함하는 용액은 또한 증량제를 함유하는 부형제를 포함하고, 임의로 동결보호제와 같은 하나 이상의 추가 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, EV를 포함하는 용액은 또한 동결보호제를 함유하는 부형제를 포함하고, 임의로 증량제와 같은 하나 이상의 추가 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, EV를 포함하는 건조 형태는 또한 증량제를 함유하는 부형제를 포함하고, 임의로 동결보호제와 같은 하나 이상의 추가 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, EV를 포함하는 건조 형태는 또한 동결보호제를 함유하는 부형제를 포함하고, 임의로 증량제와 같은 하나 이상의 추가 성분을 포함한다.
동결건조 및 분무건조와 같은 건조용 세포외 소포체(EV)를 제조할 때 증량제 및/또는 동결보호제가 사용된다. 일부 구현예에서, 수크로스, 만니톨, 폴리에틸렌 글리콜(PEG, 예컨대 PEG 6000), 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 및 덱스트란(예컨대 덱스트란 40k)을 포함하나 이에 한정되지 않는 증량제는 건조 후 건조 형태(예컨대 분말 및/또는 동결건조물)를 취급하기 쉽게 만든다. 일부 구현예에서, 증량제는 건조 형태의 특성을 개선한다. 일부 구현예에서, 트레할로스, 수크로스, 및 락토스를 포함하나 이에 한정되지 않는 동결보호제는 건조, 예컨대 동결건조 또는 분무건조 시에 EV를 보호한다. 일부 구현예에서, 부형제는 건조 사이클 시간을 감소시키는 역할을 한다. 일부 구현예에서, 부형제는 EV의 치료 효능을 유지하는 역할을 한다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 수득된 EV와 같은 세포외 소포체(EV)는 치료 효과가 있으며, 질환 및/또는 건강 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 일부 구현예에서, EV를 함유하는 용액 및 건조 형태의 치료 조성물이 제조된다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 동결건조물의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법(본원에서 "Karl Fischer"라고도 지칭됨)에 의해 측정됨)은 약 6% 미만이다.
일부 구현예에서, 동결건조물의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 5% 미만이다.
일부 구현예에서, 동결건조물의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 4% 미만이다.
일부 구현예에서, 동결건조물의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 1% 내지 약 4%이다.
일부 구현예에서, 동결건조물의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 2% 내지 약 3%이다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 동결건조물은 동결건조물 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 동결건조물은 동결건조물 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 입자는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시, 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 입자는 총 입자 전하를 DLS로 측정시, 약 -0.929 내지 약 -24.80 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 101 nm 내지 약 752 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm 또는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 부형제는 동결건조물 총 질량의 약 95% 내지 약 99%를 차지한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공하며, EV는 동결건조물 총 질량의 약 2% 내지 약 6%를 차지한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말을 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 케이크를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 소장 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 혐기성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균이다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균이다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 내기성혐기성균이다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 단일막(monoderm) 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 이중막(diderm) 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 그람 음성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 그람 양성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 파라박테로이드 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 탄네렐라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 베일로넬라 파르불라 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물의 일부 구현예에서, 동결건조물은 포우르니에렐라 마실리엔시스 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공하며, 분말의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정됨)은 약 6% 미만이다.
일부 구현예에서, 분말의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 5% 미만이다.
일부 구현예에서, 분말의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 4% 미만이다.
일부 구현예에서, 분말의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 1% 내지 약 4%이다.
일부 구현예에서, 분말의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 2% 내지 약 3%이다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공하며, 분말은 분말 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공하며, 분말은 분말 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공하며, 입자는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시, 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공하며, 입자는 총 입자 전하를 DLS로 측정시, 약 -0.929 내지 약 -24.80 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 101 nm 내지 약 752 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm 또는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 분말을 제공하며, 부형제는 분말 총 질량의 약 95% 내지 약 99%를 차지한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 분말을 제공하며, EV는 분말 총 질량의 약 2% 내지 약 6%를 차지한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말을 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 분무건조 분말을 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 소장 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 혐기성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균이다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균이다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 내기성혐기성균이다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 단일막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 이중막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 그람 음성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 그람 양성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 파라박테로이드 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 탄네렐라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 베일로넬라 파르불라 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 분말의 일부 구현예에서, 분말은 포우르니에렐라 마실리엔시스 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 건조 형태의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정됨)은 약 6% 미만이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 건조 형태의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 5% 미만이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 건조 형태의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 4% 미만이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 건조 형태의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 1% 내지 약 4%이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 건조 형태의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법에 의해 측정된 바와 같음)은 약 2% 내지 약 3%이다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 건조 형태는 건조 형태 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 건조 형태는 건조 형태 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개 입자의 입자 계수를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 입자는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시, 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 입자는 총 입자 전하를 DLS로 측정시, 약 -0.929 내지 약 -24.80 mV의 전하를 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 101 nm 내지 약 752 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 입자가 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm 또는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖는, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 부형제는 건조 형태 총 질량의 약 95% 내지 약 99%를 차지한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV) 및 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공하며, EV는 건조 형태 총 질량의 약 2% 내지 약 6%를 차지한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말을 포함한다. 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말을 포함한다. 일부 구현예에서, 분말은 분무건조 분말을 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물을 포함한다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말을 포함한다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 케이크를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 소장 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 혐기성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균이다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균이다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 내기성혐기성균이다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 단일막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 이중막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 그람 음성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 그람 양성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 파라박테로이드 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 탄네렐라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 베일로넬라 파르불라 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태의 일부 구현예에서, 건조 형태는 포우르니에렐라 마실리엔시스 종의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 용액을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 건조 형태를 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 분무건조 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 동결건조물을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 상기 동결건조 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하는 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제로 이루어진 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함하는 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제로 이루어진 치료 조성물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 용액을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 용액을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 용액을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 건조 형태를 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 건조 형태를 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 건조 형태를 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 분무건조 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 분무건조 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 분무건조 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 동결건조물을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 동결건조물을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 동결건조물을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 동결건조 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 동결건조 분말을 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 동결건조 분말을 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제를 포함하는 동결건조 케이크를 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 본질적으로, 세포외 소포체(EV) 및 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡의 부형제로 이루어진 동결건조 케이크를 제공하며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된 EV이다.
일부 양태에서, 본 개시는 이러한 동결건조 케이크를 포함하는 치료 조성물을 제공하며, 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 약학적으로 허용가능한 부형제는 활택제, 윤활제 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체(예를 들어, 인간)(예를 들어, 치료를 필요로 하는 대상체)를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은
본원에 기재된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 대상체(예를 들어, 인간)(예를 들어, 치료를 필요로 하는 대상체)를 치료하는데 사용하기 위한 것이다.
일부 양태에서, 본 개시는 대상체(예를 들어, 인간)(예를 들어, 치료를 필요로 하는 대상체)를 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 용도를 제공한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 경구 투여된다(예를 들어, 경구 투여용임).
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 대상체는 암의 치료(및/또는 예방)을 필요로 한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 대상체는 자가면역 질환의 치료(및/또는 예방)을 필요로 한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 대상체는 염증성 질환의 치료(및/또는 예방)을 필요로 한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 대상체는 대사성 질환의 치료(및/또는 예방)을 필요로 한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 대상체는 세균불균형의 치료(및/또는 예방)을 필요로 한다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 추가 치료제와 조합하여 투여된다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 분무건조 분말이다.
본원에 제공된 방법, 용액, 건조 형태, 치료 조성물 또는 용도의 일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말이다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 케이크이다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 동결건조를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 건조 형태를 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 동결건조를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 분무건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 분무건조 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 분무건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 동결건조물을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 동결건조(냉동건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 동결건조 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 케이크를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 동결건조를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 건조 형태를 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 동결건조를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 분무건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 분무건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 분무건조 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 분무건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 동결건조물을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 동결건조물을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조물을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 동결건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 상기 방법은 추가 성분과 동결건조 분말을 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 분말을 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 결합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 동결건조 케이크를 제조하는 방법의 일부 구현예에서, 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 케이크를 제공한다.
동결건조 단계를 포함하는 방법의 일부 구현예에서, 동결건조는 1차 건조 및 2차 건조를 포함한다. 일부 구현예에서, 1차 건조는 약 -35℃ 내지 약 -20℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 1차 건조는 약 -20℃, 약 -25℃, 약 -30℃, 또는 약 -35℃의 온도에서 수행된다. 일부 구현예에서, 2차 건조는 약 +20℃ 내지 약 +30℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 2차 건조는 약 +25℃의 온도에서 수행된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 폴리에틸렌 글리콜(PEG, 예컨대 PEG 6000), 시클로덱스트린, 또는 PVP-K30을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 추가 성분을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 추가 성분은 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 만니톨 및 트레할로스를 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어진다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 만니톨, 트레할로스, 및 소르비톨을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 본질적으로 만니톨, 트레할로스, 및 소르비톨로 이루어진다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 트레할로스를 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 본질적으로 트레할로스로 이루어진다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제는 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡으로부터 유래되며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 분무건조 분말이다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말이다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 케이크이다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 만니톨 및 트레할로스를 포함하며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어진다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 함유한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨도 트레할로스도 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨은 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 트레할로스는 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨도 트레할로스도 9 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨은 9 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 트레할로스는 9 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 메티오닌을 포함하지 않는다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태 또는 치료 조성물은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨 및 트레할로스는 건조 형태 또는 치료 조성물 내에 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준).
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 적어도 약 10%(중량 기준)는 부형제 스톡이다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 약 10% 내지 약 80%(중량 기준)는 부형제 스톡이다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 약 20% 내지 약 70%(중량 기준)는 부형제 스톡이다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 약 30% 내지 약 60%(중량 기준)는 부형제 스톡이다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 적어도 약 1%를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 약 1% 내지 약 99%를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 약 5% 내지 약 90%를 포함한다. 본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 적어도 약 1% 내지 약 60%를 포함한다. 본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 분말 또는 케이크 중량 기준으로 총 고형물의 약 1% 내지 약 20%를 포함한다. 본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 약 2% 내지 약 10%를 포함한다. 본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형물의 적어도 약 2% 내지 약 6%를 포함한다. 본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 6% 미만의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 5% 미만의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 0.5% 내지 약 5%의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 1% 내지 약 5%의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 1% 내지 약 4%의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 2% 내지 약 5%의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 2% 내지 약 4%의 수분 함량을 포함한다(예를 들어, Karl Fischer 적정에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 적어도 1e10개의 입자를 포함한다(예를 들어, NTA와 같이 mg당 입자로 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 적어도 약 3e10 내지 약 8e10개의 입자를 포함한다(예를 들어, NTA와 같이 mg당 입자로 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 적어도 약 6e10 내지 약 8e10개의 입자를 포함한다(예를 들어, NTA와 같이 mg당 입자로 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개의 입자를 포함한다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개의 입자를 포함한다.
일부 구현예에서, 입자 계수는 NTA에 의해 건조 형태에 대해 측정된다. 일부 구현예에서, 입자 계수는 Zetaview 카메라를 사용하여 NTA에 의해 건조 형태에 대해 측정된다.
일부 구현예에서, 입자 계수는 NTA 및 Zetaview 카메라를 사용하여 물에 재현탁된 건조 형태에 대해 측정된다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 건조 형태로부터의 재현탁(예를 들어, 탈이온수에서의 재현탁) 후 약 200 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는다(예를 들어, 동적 광 산란에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 건조 형태로부터의 재현탁(예를 들어, 탈이온수에서의 재현탁) 후 약 200 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는다(예를 들어, 동적 광 산란에 의해 측정됨).
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 약 101 nm 내지 약 752 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는다. 일부 구현예에서, 동적 광 산란(DLS)은 동결건조물이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후에 존재하는 입자의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 얻기 위해 사용된다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm의, 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖는다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm의, 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖는다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하(제타 전위(mV)에 의해 측정된 바와 같음, 예를 들어 DLS에 의해 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하가 측정된 바와 같음)를 갖는다.
본원에 제공된 건조 형태 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, 입자는 (제타 전위(mV)에 의해 측정된 바와 같음, 예를 들어 DLS에 의해 총 입자가 측정된 바와 같음) 약 -0.929 내지 약 -24.80 mV의 전하를 갖는다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 그람 양성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 그람 음성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 호기성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 혐기성 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균을 포함한다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균을 포함한다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 내기성혐기성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 단일막 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 이중막 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 또는 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 파라박테로이드 속의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 탄네렐라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 프레보텔라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 베일로넬라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 호산성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 호알칼리성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 호중성 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 배양이 까다로운 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 배양이 까다롭지 않은 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 표 1, 표 2, 표 3, 또는 표 4에 열거된 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4에 열거된 박테리아 균주로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 표 J에 열거된 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 표 J에 열거된 박테리아 종으로부터 유래된다.
본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물의 일부 구현예에서, EV는 표 J에 열거된 박테리아 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 하나 이상의 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 함유한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 하나의 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 함유한다. 일부 구현예에서, EV의 공급원으로서 사용되는 박테리아 균주는 박테리아의 특성(예를 들어, 성장 특성, 수율, 분석 또는 대상체에서 면역 반응을 조절하는 능력)에 기초하여 선택된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 예를 들어 대상체(예를 들어, 인간)에서 질환 및/또는 건강 장애의 치료 또는 예방을 위해 사용된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 건조 형태(또는 이의 치료 조성물)는 고체 투여 형태, 예컨대 정제, 미니정제, 캡슐, 또는 분말; 또는 이들 형태의 조합(예를 들어, 캡슐에 포함된 미니정제)로 제조된다. 일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 코팅(예를 들어, 장용 코팅)을 포함한다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 건조 형태(또는 이의 치료 조성물)는 재구성된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액(또는 이의 치료 조성물)은 현탁액으로 사용되며, 예를 들어 현탁액으로 희석되거나 희석되지 않은 형태로 사용된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물이 본원에 제공된 바와 같이 제조된다. 일부 구현예에서, 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 정제, 미니정제, 캡슐, 또는 분말과 같은 고체 투여 형태로 제형화된다. 일부 구현예에서, 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 현탁액에서 재구성된다.
일부 구현예에서, 분말을 포함하는 치료 조성물은 정제, 미니정제, 캡슐, 또는 분말과 같은 고체 투여 형태로 제형화된다. 일부 구현예에서, 분말을 포함하는 치료 조성물은 현탁액에서 재구성된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 치료 조성물로 제형화된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 정제, 미니정제, 캡슐, 또는 분말과 같은 고체 투여 형태로 제형화된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 현탁액에서 재구성되어 제형화된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 경구 투여된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 비강내 투여된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 흡입에 의해 투여된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 정맥내 투여된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 예를 들어 종양이 있는 대상체에게 주사에 의해, 예를 들어 종양내로 또는 종양하로 투여된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 제공된 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 국소 투여된다.
특정 양태에서, 질환 또는 건강 장애(예를 들어, 유해 건강 장애)(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환)의 치료 및/또는 예방에 유용한 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물, 뿐만 아니라 이러한 용액 및/또는 건조 형태 및/또는 치료 조성물의 제조 및/또는 식별 방법, 및 이러한 용액 및/또는 건조 형태 및/또는 이의 치료 조성물의 사용 방법(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환의 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합)이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 박테리아 및 전체 박테리아, 예를 들어 살아있는 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화 박테리아와 같은 EV가 수득되는 박테리아로부터 유래된 EV를 모두 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은, EV가 수득되는 박테리아의 부재 시, 용액 및/또는 분말의 박테리아 공급 함량 중 약 85% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과(또는 약 99% 초과)가 EV를 포함하도록 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 제형화되고, EV는 단리된 EV, 예를 들어 본원에 기재된 방법으로 단리된다.
일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 본원에 제공된 (예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거된) 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 하나 이상의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 본원에 제공된 (예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거된) 하나 이상의 박테리아 균주 또는 종으로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 단리된 EV(예를 들어, 하나 이상의 박테리아 균주로부터 유래됨)를 포함한다. 예를 들어, 용액 및/또는 건조 형태의 함량(예를 들어, 부형제를 배제하지 않은 함량)의 적어도 50%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%는 박테리아(예를 들어, 관심 박테리아)로부터 유래된 단리된 EV이다.
일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 단리된 EV(예를 들어, 박테리아의 한 균주(예를 들어, 관심 박테리아)로부터 유래됨)를 포함한다. 예를 들어, 용액 및/또는 건조 형태의 함량(예를 들어, 부형제를 배제하지 않은 함량)의 적어도 50%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%는 박테리아(예를 들어, 관심 박테리아, 예를 들어, 본원에 개시된 박테리아)의 단리된 EV이다.
일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 박테리아의 한 균주로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 구현예에서, 용액, 건조 형태, 또는 치료 조성물은 하나 초과의 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 동결건조된 EV이다.
일부 구현예에서, EV는 감마선 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 UV 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 50℃에서 2시간 동안 또는 90℃에서 2시간 동안) 열 비활성화된다.
일부 구현예에서, EV는 산처리된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 2시간 동안 0.1 vvm으로) 산소 살포된다.
일부 구현예에서, EV는 그람 양성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 그람 음성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 실시예 10에서 평가된 박테리아 종으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 호기성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 혐기성 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균을 포함한다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균을 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 호산성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 호알칼리성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 호중성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 배양이 까다로운 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 배양이 까다롭지 않은 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 본원에 제공된 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 본원에 제공된 박테리아 균주(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 내기성혐기성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 점액은 장 내강과 연관되어 있다. 일부 구현예에서, 점액은 소장과 연관되어 있다. 일부 구현예에서, 점액은 기도와 연관되어 있다.
일부 구현예에서, EV는 구강, 폐, 코, 또는 질과 같은 상피 조직과 연관된 박테리아 균주로부터 선택된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 공생체인 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 소장으로부터 유래한 인간 공생 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 소장으로부터 유래되고 그곳에서 외부 점액층과 연관된 인간 공생 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 단일막 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 이중막 박테리아로부터 유래된다.
일부 경우에, EV는 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 또는 크리스텐세넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 파라박테로이데스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 탄네렐라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 그람 음성 박테리아는 네가티비쿠테스 강에 속한다.
일부 구현예에서, 그람 음성 박테리아는 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 또는 스포로무사세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 또는 아시다미노코커스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스틴, 또는 프로피오노스포라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토코커스, 프레보텔라, 비피도박테리움, 또는 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토코커스 락티스 크레모리스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라 히스티콜라 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 비피도박테리움 아니말리스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라 파르불라 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토코커스 락티스 크레모리스 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 락토코커스 락티스 크레모리스 박테리아는 락토코커스 락티스 크레모리스 균주 A(ATCC 지정번호 PTA-125368)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 락토코커스 박테리아는 락토코커스 락티스 크레모리스 균주 A(ATCC 지정번호 PTA-125368)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 락토코커스 박테리아는 락토코커스 락티스 크레모리스 균주 A(ATCC 지정번호 PTA-125368)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 프레보텔라 박테리아는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 프레보텔라 박테리아는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 프레보텔라 박테리아는 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁번호 B 50329)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 비피도박테리움 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 비피도박테리움 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125097로 기탁된 비피도박테리움 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 비피도박테리움 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125097로 기탁된 비피도박테리움 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 비피도박테리움 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125097로 기탁된 비피도박테리움 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 베일로넬라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 베일로넬라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 베일로넬라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 루미노코커스 그나부스 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 종 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라종 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라 종 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 해리플린티아 아세티스포라 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코카세애, 알칼리게나세애, 아케르만시아세애, 박테리오다세애, 비피도박테리아세애, 부르크홀데리아세애, 카타박테리아세애, 클로스트리디아세애, 코리오박테리아세애, 엔테로박테리아세애, 엔테로코카세애, 푸소박테리아세애, 라크노스피라세애, 리스테라세애, 마이코박테리아세애, 네이세리아세애, 오도리박테리아세애, 오실로스피라세애, 펩토코카세애, 펩토스트렙토코카세애, 포르피로모나다세애, 프레보텔라세애, 프로피오니박테리아세애, 리케넬라세애, 루미노코카세애, 셀레노모다세애, 스포로무사세애, 스트렙토코카세애, 스트렙토마이세타세애, 수테렐라세애, 시너지스타세애, 또는 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아케르만시아, 크리스텐세넬라, 블라우티아, 엔테로코커스, 유박테리움, 로세부리아, 박테로이데스, 파라박테로이데스, 또는 에리시펠라토클로스트리디움 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 블라우티아 하이드로게노트로피카, 블라우티아 스테르코리스, 블라우티아 웩슬러래, 유박테리움 패시움, 유박테리움 콘토르툼, 유박테리움 렉탈레, 엔테로코커스 패칼리스, 엔테로코커스 두란스, 엔테로코커스 빌로룸, 엔테로코커스 갈리나룸, 비피도박테리움 락티스, 비피도박테리움 비피디움, 비피도박테리움 롱검, 비피도박테리움 아니말리스, 또는 비피도박테리움 브레베 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 바실러스 칼메테-구에린(BCG), 파라박테로이데스, 블라우티아, 베일로넬라 락토바실러스 살리바리우스, 아가토바쿨룸, 루미노코커스 그나부스, 파라클로스트리디움 벤조엘리티쿰, 투리시박터 산귀너스, 부르크홀데리아, 클렙시엘라 쿼시뉴모니애 종 시밀뉴모니애, 클렙시엘라 옥시토카, 티제렐라 넥실리스, 또는 네이세리아 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 블라우티아 하이드로게노트로피카 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 블라우티아 스테르코리스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 블라우티아 웩슬러래 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 엔테로코커스 갈리나룸 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 엔테로코커스 패시움 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 비피도박테리움 비피디움 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 비피도박테리움 브레베 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 비피도박테리움 롱검 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 로세부리아 호미니스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 박테로이데스 테타이오타오미크론 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 박테로이데스 코프로콜라 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 에리시펠라토클로스트리디움 라모숨 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스페라 마실리엔시스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 유박테리움 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토바실러스 플란타룸 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모다세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코카세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 스포로무사세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모나스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프로피오노스포라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코커스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모나스 펠릭스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코커스 인테스티니 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프로피오노스포라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 패칼리박테리움 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 포우르니에렐라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 해리플린티아 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아가토바쿨룸 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 패칼리박테리움 프라우스니치(예를 들어, 패칼리박테리움 프라우스니치 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 포우르니에렐라 마실리엔시스(예를 들어, 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 해리플린티아 아세티스포라(예를 들어, 해리플린티아 아세티스포라 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아가토바쿨룸 종(예를 들어, 아가토바쿨룸 종 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아가토바쿨룸 종의 균주로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 아가토바쿨룸 종 균주는 아가토바쿨룸 종 균주 A(ATCC 기탁번호 PTA-125892)의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, CRISPR 서열)에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 아가토바쿨룸 종 균주는 아가토바쿨룸 종 균주 A(ATCC 기탁번호 PTA-125892)이다.
일부 구현예에서, EV는 박테로이디아 강[박테로이도타 문]의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테로이달레스 목의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 포르피로모노아다세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 박테로이디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 그람 음성으로 염색되는 박테로이디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 박테로이디아 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 클로스트리디아 강[피리미큐테스 문]의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 유박테리알레스 목의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 오실리스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 펩토스트렙토코카세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 클로스트리디알레스 패밀리 XIII/ 인서타에 세디스 41 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막인 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 그람 음성으로 염색되는 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 그람 양성으로 염색되는 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막이고 박테리아가 그람 양성으로 염색되는, 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 네가티비쿠테스 강[피리미큐테스 문]의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 베일로넬라레스 목의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 베일로넬로세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 셀레노모나달레스 목의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 셀레노모다세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 스포로무사세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 그람 음성으로 염색되는 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 시너지스티아 강[시너지스토타 문]의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 시너지스탈레스 목의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 시너지스타세애 과의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 시너지스티아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 그람 음성으로 염색되는 시너지스티아 강의 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 시너지스티아 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 대사산물을 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 예를 들어, 박테리아는 부티레이트, 아이오신, 프로피오네이트, 또는 트립토판 대사산물을 생성한다.
일부 구현예에서, EV는 부티레이트를 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 블라우티아; 크리스텐셀라; 코프라코커스; 유박테리움; 라크노스페라세아; 메가스파에라; 또는 로세부리아 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아이오신을 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 비피도박테리움; 락토바실러스; 또는 올세넬라 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프로피오네이트를 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 아케르만시아; 박테리오데스; 디알리스터; 유박테리움; 메가스파에라; 파라박테리오데스; 프레보텔라; 루미노코커스; 또는 베일로넬라 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 트립토판 대사산물을 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 락토바실러스 또는 펩토스트렙토코커스 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 히스톤 디아세틸라제 3(HDAC3)의 억제제를 생성하는 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 바리아트리커스 마실리엔시스, 패칼리박테리움 프라우스니치, 메가스파에라 마실리엔시스, 또는 로세부리아 인테스티날리스 종으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 알로이오코커스; 바실러스; 카테니박테리움; 코리네박테리움; 쿠프리아비두스; 엔하이드로박터; 엑시구오박테리움; 패칼리박테리움; 지오바실러스; 메틸로박테리움; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로테우스; 슈도모나스; 리조비움; 또는 스핑고모나스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 큐티박테리움 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 큐티박테리움 아비둠 종의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토바실러스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토바실러스 가세리 종의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 디소스모박터 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 디소스모박터 웰비오니스 종의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토바실러스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아케르만시아 무시니필라; 바실러스; 블라우티아; 쿠프리아비두스; 엔하이드로박터; 패칼리박테리움; 락토바실러스; 락토코커스; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로피오니박테리움; 프로테우스; 리조비움; 또는 스트렙토코커스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 홀잡펠리이 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아케르만시아 무시니필라; 쿠프리아비두스 메탈리두란스; 패칼리박테리움 프라우스니치; 락토바실러스 카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 파라카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 람노서스; 락토바실러스 사케이; 또는 스트렙토코커스 피오게네스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 락토바실러스 카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 파라카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 람노서스; 또는 락토바실러스 사케이 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 아시네토박터; 데이노코쿠스; 헬리코박터; 로도코쿠스; 와이셀라 시바리아; 알로이오코커스; 아토포비움; 카테니박테리움; 코리네박테리움; 엑시구오박테리움; 지오바실러스; 메틸로박테리움; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로테우스; 리조비움; 로티아; 스핑고모나스; 스핑고모나스; 및 류코노스톡으로 이루어진 군으로부터 선택되는 속으로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 아시네토박터 바우마니이; 데이노코쿠스 라디오두란스; 헬리코박터 파일로리; 로도코쿠스 에퀴; 와이셀라 시바리아; 알로이오코커스 오타이티스; 아토포비움 바지나에; 카테니박테리움 미투오카이; 코리네박테리움 글루타미쿰; 엑시구오박테리움 아우란티아쿰; 지오바실러스 스테아로모필러스; 메틸로박테리움 젓갈리; 마이크로코커스 루테우스; 모르가넬라 모르가니이; 프로테우스 미라빌리스; 리조비움 레구미노사룸; 로티아 아마래; 스핑고모나스 파우시모빌리스; 및 스핑고모나스 코린스로 이루어진 군으로부터 선택되는 종으로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 홀잡펠리이 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 홀잡펠리이 Ceb-kc-003(KCCM11830P) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386 또는 NCIMB 43387의 균주로부터의) 메가스파에라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 42787, NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주로부터의) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 수탁번호 DSM 26228의 균주로부터의) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 42382의 균주로부터의) 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주로부터의) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 또는 이의 유도체로부터 유래된다. 예를 들어, WO 2020/120714 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주로부터 유래된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주이다.
일부 구현예에서, EV는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 균주 또는 이의 유도체로부터 유래된다. 예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 균주의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 균주이다.
일부 구현예에서, EV는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, 또는 NCIMB 43387의 균주로부터의 메가스파에라 종 박테리아 또는 이의 유도체로부터 유래된다. 예를 들어, WO 2020/120714 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, 또는 NCIMB 43387의 균주로부터 유래된 메가스파에라 종의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386 또는 NCIMB 43387의 균주이다.
일부 구현예에서, EV는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아 또는 이의 유도체로부터 유래된다.　예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 균주이다.
일부 구현예에서, EV는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 또는 이의 유도체로부터 유래된다.　예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 균주이다.
특정 양태에서, 박테리아로부터 수득된 EV는 감소된 독성 및 부작용 감소(예를 들어, 지질다당류(LPS) 제거 또는 소거하여), 증진된 경구 전달(예를 들어, 내산성, 점액 부착성 및/또는 침투성 및/또는 담즙산에 대한 내성, 항박테리아 펩티드 및/또는 항체 중화에 대한 내성을 개선하여), 목적하는 세포 유형(예를 들어, M세포, 배상세포, 장세포, 수지상 세포, 대식세포) 표적화, 전신적으로 또는 적절한 미세환경(예를 들어, 장간막 림프절, 페이에르판, 고유판, 종양 배액 림프절, 및/또는 혈액) 내 개선된 생체이용률, 증진된 면역 조절 및/또는 치료 효과(예를 들어, 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여), 증진된 면역 활성화 및/또는 제조 속성(예를 들어, 성장 특성, 수율, 높아진 안정성, 향상된 동결-해동 내성, 짧아진 세대 시간)과 같은 특정 바람직한 특성에 근거하여 선택되었다.
특정 양태에서, EV는 특정 바람직한 특성을 향상시키도록 변형된 조작된 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 조작된 박테리아는 이로부터 생성된 EV가 감소된 독성 및 부작용 감소(예를 들어, 지질다당류(LPS) 제거 또는 소거하여), 증진된 경구 전달(예를 들어, 내산성, 점액 부착성 및/또는 침투성 및/또는 담즙산에 대한 내성, 항균 펩티드 및/또는 항체 중화에 대한 내성을 개선하여), 목적하는 세포 유형(예를 들어, M세포, 배상세포, 장세포, 수지상 세포, 대식세포) 표적화, 전신적으로 또는 적절한 미세환경(예를 들어, 장간막 림프절, 페이에르판, 고유판, 종양 배액 림프절, 및/또는 혈액) 내 개선된 생체이용률, 증진된 면역 조절 및/또는 치료 효과(예를 들어, 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여), 증진된 면역 활성화 및/또는 향상된 제조 속성(예를 들어, 성장 특성, 수율, 높아진 안정성, 향상된 동결-해동 내성, 짧아진 세대 시간)을 갖도록 변형된다. 일부 구현예에서, 이러한 EV를 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
특정 양태에서, 질환 또는 건강 장애(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환)의 치료 및/또는 예방에 유용한 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태(또는 이의 치료 조성물), 뿐만 아니라 이러한 용액 및/또는 건조 형태(또는 이의 치료 조성물)의 제조 및/또는 식별 방법, 및 (예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환의 치료를 위해) 이러한 용액 및/또는 건조 형태를 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 사용하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 용액 및/또는 건조 형태(예를 들어, 동결건조물)를 함유하는 치료 조성물로 제형화되고, EV가 수득되는 전체 박테리아를 함유하는 치료 조성물에 필적하거나 그보다 더 큰 효능을 제공한다. 예를 들어 동일한 용량의 EV(예를 들어, 입자 수 또는 단백질 함량 기준)에서, 용액 및/또는 분말을 함유하는 치료 조성물은 EV가 수득되는 동일한 박테리아 균주의 전체 박테리아를 함유하는 비교 치료 조성물에 필적하거나 그보다 더 큰 효능을 제공한다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 이러한 용액- 및/또는 건조 형태-(예를 들어, 동결건조물)-함유 치료 조성물이 더 높은 용량의 투여를 허용하고, EV가 수득되는 동일한 박테리아 균주의 전체 박테리아를 함유하는 유사한 치료 조성물에서 관찰된 것에 필적하거나 그보다 더 큰(예를 들어, 더 효과적인) 반응을 유도하도록 제형화된다.
추가 예로서, 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 감마선 조사된 EV는 동일한 용량(예를 들어, 입자 수 또는 단백질 함량 기준)으로, 용액 및/또는 건조 형태(예를 들어, 동결건조물)를 함유하는 치료 조성물이 이러한 치료 조성물을 받는 대상체에게 동일한 수준 이상의 치료적 이점을 제공하는 동시에, EV가 수득되는 동일한 박테리아 균주의 전체 박테리아를 함유하는 치료 조성물에 비해 미생물 유래 물질(입자 수 또는 단백질 함량 기준)을 더 적게 함유하도록 제형화된다.
추가 예로서, 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV는 예를 들어 NTA로 측정된 바와 같이 약 1x107 내지 약 1x1015개 입자의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, EV의 용량은 약 1 x 105 내지 약 7 x 1013개 입자이다(예를 들어, 입자 수는 나노입자 추적 분석(NTA)으로 측정됨). 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV의 용량은 약 1 x 1010 내지 약 7 x 1013개 입자이다(예를 들어, 입자 수는 나노입자 추적 분석(NTA)으로 측정됨).
다른 예로서, 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV는 예를 들어 Bradford 분석으로 측정된 바와 같이 총 단백질 약 5 mg 내지 약 900 mg의 용량으로 투여된다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV는 예를 들어 BCA 분석으로 측정된 바와 같이 총 단백질 약 5 mg 내지 약 900 mg의 용량으로 투여된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암이 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역 장애(예를 들어, 자가면역 질환, 염증성 질환, 알레르기)가 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대사성 질환이 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 세균불균형이 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 신경계 질환이 있는 대상체를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에게 항생제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에게 하나 이상의 다른 암 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다(예를 들어, 종양의 외과적 제거, 화학요법제의 투여, 방사선 요법의 투여, 및/또는 암 면역요법, 예컨대 면역관문 억제제, 암 특이적 항체, 암 백신, 프라이밍된 항원 제시 세포, 암 특이적 T 세포, 암 특이적 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포, 면역 활성화 단백질, 및/또는 보조제의 투여). 일부 구현예에서, 상기 방법은 다른 치료 박테리아 및/또는 하나 이상의 다른 박테리아 균주(예를 들어, 치료 박테리아)로부터 유래된 박테리아로부터 유래된 EV의 투여를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 면역 억제제 및/또는 항염증제의 투여를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액, 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 면역 효과 조절제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대사성 질환 치료제의 투여를 추가로 포함한다.
특정 양태에서, 질환(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환) 또는 건강 장애의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 단독 또는 하나 이상의 다른(예를 들어 추가) 치료제와 조합된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다.
특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 암을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 암 치료를 위해 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 면역 장애(예를 들어, 자가면역 질환, 염증성 질환, 알레르기)을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 면역 장애 치료를 위해 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 세균불균형을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 세균불균형 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 대사성 질환을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대사성 질환 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 세균불균형을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 세균불균형 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용된다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 신경계 질환을 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 신경계 질환 치료를 위해 단독으로 또는 하나 이상의 다른 치료제와 조합하여 사용된다.
일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 항생제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 암 요법과 조합하여 사용하기 위한 것이다(예를 들어, 종양의 외과적 제거, 화학요법제의 사용, 방사선 요법의 사용, 및/또는 암 면역요법, 예컨대 면역관문 억제제, 암 특이적 항체, 암 백신, 프라이밍된 항원 제시 세포, 암 특이적 T 세포, 암 특이적 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포, 면역 활성화 단백질, 및/또는 보조제의 사용). 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 다른 치료 박테리아 및/또는 하나 이상의 다른 박테리아 균주(예를 들어, 치료 박테리아)로부터 수득한 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 면역 억제제 및/또는 항염증제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액, 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 대사성 질환 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
특정 양태에서, 질환(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환)의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한, 단독 또는 다른 치료제와 조합된 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 다른 치료 박테리아 및/또는 하나 이상의 다른 박테리아 균주(예를 들어, 치료 박테리아)로부터 수득된 EV와 조합하여 사용한다.
특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 암을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 암에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 면역 장애(예를 들어, 자가면역 질환, 염증성 질환, 알레르기)을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 면역 장애에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 세균불균형을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 세균불균형에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 대사성 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대사성 질환에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 세균불균형을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 세균불균형에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 대상체(예를 들어, 인간)에서 신경계 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 의약의 제조를 위한 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 신경계 질환에 대해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 항생제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 암 요법과 조합하여 사용하기 위한 것이다(예를 들어, 종양의 외과적 제거, 화학요법제의 사용, 방사선 요법의 사용, 및/또는 암 면역요법, 예컨대 면역관문 억제제, 암 특이적 항체, 암 백신, 프라이밍된 항원 제시 세포, 암 특이적 T 세포, 암 특이적 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포, 면역 활성화 단백질, 및/또는 보조제의 사용). 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 다른 치료 박테리아 및/또는 하나 이상의 다른 박테리아 균주(예를 들어, 치료 박테리아)로부터 수득한 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액, 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 면역 억제제 및/또는 항염증제와 조합하여 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 치료 조성물 또는 용액, 및/또는 건조 형태는 하나 이상의 다른 대사성 질환 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대상체, 예를 들어 인간에게 치료 유효량의 EV를 제공한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대상체, 예를 들어 인간에게 비자연적 양의 치료 유효 성분(예를 들어, EV에 존재)을 제공한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대상체, 예를 들어 인간에게 비정상적인 양의 치료 유효 성분(예를 들어, EV에 존재)을 제공한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 대상체, 예를 들어 인간에게 예를 들어, 질환 또는 건강 장애를 치료 또는 예방하는 하나 이상의 변화를 가져온다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 본원에 기재된 바와 같은 치료 조성물 또는 용액 및/또는 건조 형태는 예를 들어 대상체, 예를 들어 인간에게 예를 들어, 질환 또는 건강 장애를 치료하거나 예방하는데 영향을 미칠 수 있는 상당한 유용성을 가질 가능성이 있다.
특정 양태에서, 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡이 본원에 제공되며, 스톡은 증량제를 포함하고, 스톡은 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)(예를 들어, 이의 액상 제제), 예를 들어 본원에 제공된 공급원으로부터 유래된 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
특정 양태에서, 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡이 본원에 제공되며, 스톡은 증량제 및 동결보호제를 포함하고, 스톡은 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)(예를 들어, 이의 액상 제제), 예를 들어 본원에 제공된 공급원으로부터 유래된 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
특정 양태에서, 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡이 본원에 제공되며, 스톡은 동결보호제를 포함하고, 스톡은 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)(예를 들어, 이의 액상 제제), 예를 들어 본원에 제공된 공급원으로부터 유래된 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 또는 PVP-K30을 포함한다.
일부 구현예에서, 증량제는 만니톨을 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 추가 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 성분은 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린을 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어진다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨, 트레할로스, 및 소르비톨을 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨, 트레할로스, 및 소르비톨로 이루어진다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 트레할로스를 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 트레할로스로 이루어진다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 만니톨 및 트레할로스를 포함하며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어진다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 만니톨 및 트레할로스는 동일한 양으로 존재하지 않는다(예를 들어, 만니톨 및 트레할로스는 동일하지 않은 양으로 존재함, 예를 들어, 중량 기준 또는 중량% 기준). 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 부형제 용액은 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 2배 더 많이 함유한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 본질적으로 만니톨 및 트레할로스로 이루어지며, 용액 또는 건조 형태의 부형제는 예를 들어 중량 기준 또는 중량% 기준으로 트레할로스보다 만니톨을 적어도 3배 더 많이 함유한다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨도 트레할로스도 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨은 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 트레할로스는 5 mg/ml 내지 15 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨도 트레할로스도 9 mg/ml 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 만니톨은 9 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루어지며, 트레할로스는 9 mg/ml의 양으로 존재하지 않는다.
일부 구현예에서, 부형제 용액은 만니톨 및 트레할로스를 포함하거나 본질적으로 이들로 이루이지고, 메티오닌을 포함하지 않는다.
특정 양태에서, 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡이 본원에 제공되며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함한다.
특정 양태에서, 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡이 본원에 제공되며, 스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함하고, 스톡은 세포외 소포체(EV)(예를 들어, 이의 액상 제제), 예컨대 박테리아 EV, 예컨대 본원에 제공된 공급원으로부터 유래된 EV와 조합하여 사용하기 위한 것이다.
본원에 기재된 용액 및 건조 형태 및 방법의 일부 구현예에서, 액상 제제는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 박테리아 세포 배양 상청액과 같은 세포 배양 상청액을 포함한다. 본원에 기재된 용액 및 건조 형태 및 방법의 일부 구현예에서, 액상 제제는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 농축된 잔류물과 같은 잔류물을 포함한다.
본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 부형제는 부형제 용액에 존재한다(예를 들어, 제공된다). 부형제 용액의 예는 표 A, B, C, D, K, 및 P에 제공된 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡을 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 건조 형태는 수분이 (예컨대, 건조에 의해) 제거되면 부형제 용액(예컨대, 스톡)의 부형제를 함유한다. 예를 들어, EV를 포함하는 액상 제제는 용액을 제조하기 위해 표 A의 화학식 7a의 스톡(부형제 만니톨 및 트레할로스를 포함함)과 조합된다. 용액을 건조하여 건조 형태를 제조한다. 건조 형태는 EV, 만니톨, 및 트레할로스를 포함한다.
도 1은 염증의 지연형 과민증(DTH) 모델에서 화학식 7a로 제조된 프레보텔라 EV 경구 투여 분말의 효과를 나타낸 그래프이다. 염증은 귀 두께(mm)의 변화로 평가된다.
도 2는 오실로스피라세애 과에 대한 분말 농도(입자/mg)를 나타낸 그래프이다.
도 3은 베일로넬라세애 과에 대한 분말 농도(입자/mg)를 나타낸 그래프이다.
도 4는 프레보텔라세애 과에 대한 분말 농도(입자/mg)를 나타낸 그래프이다.
도 5는 탄네렐라세애 과에 대한 분말 농도(입자/mg)를 나타낸 그래프이다.
도 6은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 분말 농도(입자/mg)를 나타낸 그래프이다.
도 7은 오실로스피라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 크기를 나타낸 그래프이다.
도 8은 탄네렐라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 크기를 나타낸 그래프이다.
도 9는 베일로넬라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 크기를 나타낸 그래프이다.
도 10은 프레보텔라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 크기를 나타낸 그래프이다.
도 11은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 크기를 나타낸 그래프이다.
도 12는 오실로스피라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 13은 탄네렐라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 14는 베일로넬라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 15는 프레보텔라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 16은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 17은 오실로스피라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 Zave 크기를 나타낸 그래프이다.
도 18은 프레보텔라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 Zave 크기를 나타낸 그래프이다.
도 19는 탄네렐라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 Zave 크기를 나타낸 그래프이다.
도 20은 베일로넬라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 Zave 크기를 나타낸 그래프이다.
도 21은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 Zave 크기를 나타낸 그래프이다.
도 22는 오실로스피라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 23은 베일로넬라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 24는 프레보텔라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 25는 탄네렐라세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 26은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 DLS 측정에 따른 전하(제타 전위)를 나타낸 그래프이다.
도 27은 프레보텔라세애 분말의 Karl Fischer 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 28은 탄네렐라세애 분말의 Karl Fischer 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 29는 오실로스피라세애 분말의 Karl Fischer 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 30은 베일로넬라세애 분말의 Karl Fischer 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 31은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 리케넬라세애; 스포로무사세애; 크리스텐세넬라세애; 셀레노모나다세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 분말에 대한 Karl Fischer 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 32는 프레보텔라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10의 수준을 나타낸 그래프이다. 도 32~61의 경우, y축은 10 ng/mL LPS 플레이트 대조군 대비 배수 변화를 나타낸다. 입자 농도는 x축에서 웰당 입자로 표기된다(106, 107, 108, 및 109). 막대는 단일 실험에서 삼중 웰의 평균 및 표준 편차를 나타낸다.
도 33은 탄네렐라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 34는 오실로스피라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 35: 베일로넬라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10
도 36은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 및 스포로무사세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 37은 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 크리스텐세넬라세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 38은 탄네렐라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 39는 프레보텔라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 40은 오실로스피라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 41은 베일로넬라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 42는 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 및 스포로무사세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 43은 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 크리스텐세넬라세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IP-10의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 44는 탄네렐라세애에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 45는 프레보텔라세애에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 46은 베일로넬라세애에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 47은 오실로스피라세애에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 48은 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 크리스텐세넬라세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 49는 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 및 스포로무사세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-1β의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 50은 탄네렐라세애에 대한 LPS로 정규화된 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 51은 프레보텔라세애에 대한 LPS로 정규화된 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 52: 오실로스피라세애에 대한 LPS로 정규화된 TNFα
도 53은 베일로넬라세애에 대한 LPS로 정규화된 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 54는 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 및 스포로무사세애 과에 대한 LPS로 정규화된 TNFα의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 55: 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 크리스텐세넬라세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 LPS로 정규화된 TNFα
도 56은 오실로스피라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 57은 베일로넬라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 58은 탄네렐라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 59는 프레보텔라세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 60은 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 크리스텐세넬라세애; 시너지스타세애; 및 아케르만시아세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 61은 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 및 스포로무사세애 과에 대한 LPS로 정규화된 IL-6의 수준을 나타낸 그래프이다.
도 62는 동결건조된 EV 분말의 수분 함량을 나타낸 그래프이다.
도 63은 동결건조된 EV 분말의 입자 수를 나타낸 그래프이다.
도 64는 동결건조된 EV 분말의 DLS 측정에 따른 평균 입자 크기를 나타낸 그래프이다.
도 65는 DLS 측정에 따른 동결건조된 EV 분말의 우세한 하위집단의 동전기 전위를 나타낸 그래프이다
도 66은 동결건조된 EV 분말의 우세한 하위집단의 입자 크기를 나타낸 그래프이다.
본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 함유하는 용액 및 건조 형태, 및 이의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 본 개시는 또한 용액 및/또는 건조 형태를 함유하는 치료 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, EV는 배양물 중 박테리아 세포에 의해 분비(예를 들어, 생성)된다. 이러한 분비된 세포외 소포체는 분비된 미생물 세포외 소포체(smEV)로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, EV는 박테리아 세포를 처리함으로써, 예를 들어 초음파처리와 같은 박테리아 막을 파괴하는 방법에 의해 제조(예를 들어, 인공적으로 제조)된다. 인공적으로 제조된 이러한 EV는 가공된 미생물 세포외 소포체(pmEV)로 지칭될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, (예를 들어, 박테리아로부터 유래된) 세포외 소포체(EV)를 함유하는 "건조 형태"는 EV를 함유하는 용액을 건조하여 생성된 생성물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 건조는 예를 들어 냉동건조(동결건조) 또는 분무건조에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 분말이란 건조 형태 유형을 말하며, 동결건조 분말, 및 분무건조와 같은 방법으로 수득되는 분무건조 분말을 포함한다.
냉동건조(동결건조)를 수행하여 생성된 건조 형태는 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말 또는 동결건조 케이크이다. 일부 구현예에서, 동결건조 케이크는 동결건조 분말을 생성하기 위해 밀링된다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 함유하는 용액 및 건조 형태는 또한 증량제 및/또는 동결보호제와 같은 하나 이상의 부형제를 포함한다.
일부 구현예에서, 동결건조를 위한 세포외 소포체(EV)를 제조할 때 증량제 및 동결보호제가 사용된다. 일부 구현예에서, 수크로스, 만니톨, 폴리에틸렌 글리콜(PEG, 예컨대 PEG 6000), 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 및 덱스트란(예컨대 덱스트란 40k)을 포함하나 이에 한정되지 않는 증량제를 EV의 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득함)에 (예를 들어, 이를 함유하는 스톡으로서) 첨가하여 동결건조물과 같은 건조 형태를 제조함으로써 건조 후 취급(및 임의로, 예를 들어 치료 조성물로 추가 제형화)이 용이해지도록 한다. 일부 구현예에서, 트레할로스, 수크로스, 및 락토스를 포함하나 이에 한정되지 않는 동결보호제를 EV의 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득됨)에 (예를 들어, 이를 함유하는 스톡으로서) 첨가하여 동결건조 또는 분무건조 중 EV를 보호한다. 일부 구현예에서, 증량제 및/또는 동결보호제는 용액을 생성하고/하거나 후속 건조시 예를 들어 용액의 건조 형태를 생성하기 위해 EV(예를 들어, 정제 및/또는 농축된 EV)에 첨가되는 부형제 스톡으로부터 포함된다. 일부 구현예에서, 동결건조물과 같은 건조 형태는 중량 기준으로 약 5% 내지 약 100% EV 고형분을 함유한다. 일부 구현예에서, (예컨대, 냉동건조에 의한) 건조 전에, EV 및 부형제를 포함하는 총 고형물은 중량 기준으로 약 2% 내지 약 20%이다.
본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, EV를 함유하는 동결건조물에서, 부형제는 분말 또는 케이크의 총 질량의 약 95% 내지 약 99%를 차지한다.
본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, EV를 함유하는 동결건조물에서, EV는 동결건조물의 총 질량의 약 2% 내지 약 6%(예를 들어, 약 2% 내지 약 5%, 약 2% 내지 약 3%, 또는 약 3% 내지 약 5%)를 차지한다.
일부 구현예에서, 부형제는 EV 효능을 유지하고/하거나 건조(예를 들어, 냉동건조) 사이클 시간을 감소시키는 역할을 한다. 일부 구현예에서, 동결보호제는 동결건조 처리 중 EV(예를 들어, 이의 단백질 성분)를 보호한다. 일부 구현예에서, 증량제는 예를 들어 추가 다운스트림 처리(예를 들어, 치료 조성물 밀링, 블렌딩, 및/또는 제조)를 위해 동결건조 특성을 개선한다.
냉동건조 사이클의 길이는 비용적 측면에서 중요하다. 증량제 및/또는 동결보호제와 같은 중요한 온도 조절제는 건조 시간을 크게 줄일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 부형제(예를 들어, 증량제 및/또는 동결보호제를 함유하는 것)를 함유하는 부형제 스톡을 총 고형분이 약 2% 내지 약 20%가 되도록 농축된 EV(예를 들어, 이의 액상 제제)에 첨가한다. 일부 구현예에서, EV는 5 내지 100배 또는 체적농축인자(VCF)로 농축된다. 본원에 제공된 예는 약 6% 내지 약 8% 범위의 실제 용해된 고형분을 갖는 약 10% 총 고형분을 목표로 하였다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 부형제를 함유하는 부형제 스톡(예를 들어, 증량제 및/또는 동결보호제를 함유하는 것)(예를 들어, 표 A, B, C, D, K, 및 P 중 하나에 제공된 제형의 부형제를 포함하는 스톡)은 탈이온수 중 스톡 용액으로 제조하고 사용 전에 0.2 mm 필터로 멸균 여과한다. 일부 구현예에서, 스톡 용액은 예를 들어 최대 80%의 중량을 기준으로 농축된 EV에 첨가된다. 일부 구현예에서, 첨가 백분율은 냉동건조 전에 목적하는 총 고형분 함량을 달성하기 위해 EV의 추정된 고형분 기여 + 부형제 스톡의 용해된 고형분에 기반한다.
일부 구현예에서, (예컨대, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 증량제를 포함하는 부형제를 사용하여) EV를 동결건조하여 생성된 동결건조물(예를 들어, 동결건조 케이크)은 균일한 외관을 갖고, 백색 내지 회백색이다. 일부 구현예에서, 동결건조 후 수득된 생성된 동결건조물(예를 들어, 동결건조 케이크)은 백색 내지 회백색의 미세하고 매끄러운 과립형 분말이다(예를 들어, 동결건조 케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)한 후). 일부 구현예에서, 동적 광 산란(DLS)은 동결건조물(예를 들어, 동결건조 분말)이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후에 존재하는 입자의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 얻기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, Zave는 안정화제의 유효성을 정량화하는 데 사용된다. 예를 들어, 이상적인 Zave 입자 크기가 200nm인 경우; 따라서 이 입자 크기에 가장 가까운 가장 낮은 Zave를 갖는 재현탁된 EV는 충분히 안정화된 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 입자 크기는 예를 들어 130 nm 내지 300 nm 범위이다. 일부 구현예에서, 동적 광 산란(DLS)은 동결건조물이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후에 존재하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 얻기 위해 사용된다. 특히, Z 평균으로 측정하든 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기로 측정하든 입자의 평균 크기는 냉동건조 전 EV의 평균 크기와 반드시 동일한 것은 아니다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 냉동건조 후(예를 들어, 동결건조물이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후) 입자의 평균 크기는 냉동건조 이전의 평균 EV 크기 또는 박테리아 배양물로부터 EV를 단리 또는 제조한 후의 평균 크기(예를 박테리아 배양물로부터 EV를 구배 정제한 후의 평균 크기)보다 크거나 작다. 동결건조물의 입자(EV를 함유한 용액이 냉동건조된 후)는 EV를 함유하고, 세포 파편, LPS, 및/또는 단백질과 같은 배양 배지의 다른 구성성분도 포함할 수 있다.
본원에 제공된 부형제 및/또는 조건으로 동결건조 후 수득한 동결건조물은 다공성 스폰지 형상을 갖지 않는다. 일부 구현예에서, 밀링 후, 본원에 제공된 부형제 및/또는 조건으로 동결건조 후 수득된 동결건조물은 백색 내지 회백색의 미세하고 매끄러운 과립형 동결건조물 분말이다.
또한 본원에 기재된 바와 같이, 본원에 제공된 부형제의 사용은 EV를 포함하는 용액이 더 높은 온도 및 더 짧은 건조 시간에서 동결건조되도록 한다. 예를 들어, 본원에 제공된 부형제 및 방법은 EV가 4000분 미만 내에 동결건조되도록 하며, 예를 들어 약 2800 내지 약 3200분 내에 동결건조되도록 한다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 동결 단계는 10 내지 15시간(600 내지 900분)이 아닌 225분 미만으로 수행된다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 1차 건조는 예를 들어 -50℃가 아닌, 약 -35℃ 내지 약 -20℃, 예를 들어 약 -20℃, 약 -25℃, 약 -30℃, 또는 약 -35℃의 온도에서 수행된다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 1차 건조는 예를 들어 50 내지 60시간(3000 내지 3600분)이 아닌 약 42시간 이하(예를 들어, 2500분 이하)로 수행된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 총 건조 시간은 예를 들어 약 72시간 이하, 예를 들어 약 48 내지 약 72시간, 예를 들어 약 48시간 미만이다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 1차 건조는 약 65시간 이하(예를 들어, 약 60시간 이하)로 수행된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 2차 건조는 약 12시간 이하(예를 들어, 약 10 내지 약 12시간, 약 5 내지 약 10시간, 약 10시간 이하, 또는 약 5시간 이하)로 수행된다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 본원에 제공된 부형제 및 방법을 사용하여, 2차 건조는 예를 들어 -20℃가 아닌, 약 +20℃ 내지 약 +30℃, 예를 들어 실온, 예를 들어 약 +25℃에서 수행된다. 일부 구현예에서, 더 짧은 건조 시간 및/또는 더 높은 건조 온도의 사용은 EV에 대한 냉동건조 처리를 보다 상업적으로 실현가능하게 한다.
본원의 예에서 입증된 바와 같이, 일부 구현예에서, EV의 동결건조물은 그람 음성 및 그람 양성 박테리아로부터 제조된다. 예를 들어, EV 동결건조물은 다음과 같은 그람 음성 박테리아 과로부터 제조되었다: 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 또는 아케르만시아세애. 예를 들어, EV 동결건조물은 다음과 같은 그람 양성 박테리아 과로부터 제조되었다: 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 또는 크리스텐세넬라세애.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 동결건조 완료 시 약 10% 미만(예를 들어, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 4% 미만, 예를 들어 약 1% 내지 약 4%, 약 1.5% 내지 약 4%, 약 2% 내지 약 3%)의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법으로 측정된 바에 따름)을 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 동결건조 완료 시 약 6% 미만(예를 들어, 약 5% 미만 또는 약 4% 미만, 예를 들어 약 1% 내지 약 4%, 약 1.5% 내지 약 4%, 약 2% 내지 약 3%)의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법으로 측정된 바에 따름)을 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖도록 동결건조물을 제조함으로써, 동결건조물은 예를 들어 치료 조성물에 사용하기 위한 다운스트림 처리에 더 적합하다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖도록 동결건조물을 제조함으로써, 동결건조물은 예를 들어 저장시 개선된 안정성을 갖는다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 다양한 박테리아 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 수분 함량(Karl Fis Fischer her로 측정됨)은 약 2.32% 내지 약 5.18%의 수분 함량이다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)은 약 4.22% 내지 약 4.98%의 수분 함량이다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)은 약 3.61% 내지 약 5.09%의 수분 함량이다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)은 약 3.72% 내지 약 5.23%의 수분 함량이다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)은 약 2.9% 내지 약 4.35%의 수분 함량이다. 약 2.32% 내지 약 5.18%의 수분 함량을 갖는 다른 박테리아 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 추가 예가 제공된다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 EV를 함유하는 동결건조물은 약 1.24% 내지 약 6.35%의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)을 가졌다. 본원에 예시된 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주의 EV를 함유하는 동결건조물은 약 1.51% 내지 약 7.01%의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)을 가졌다. 목적하는 수분 함량을 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 수분 함량을 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 동결건조물 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자의 입자 계수를 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 동결건조물 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개 입자의 입자 계수를 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 입자 계수는 예를 들어 NTA 및 Zetaview 카메라를 사용하여 물에 재현탁된 동결건조물에 대해 측정된다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 다양한 박테리아 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 입자 계수는 동결건조물 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 입자 계수는 약 7e8 내지 약 2.55e10개 입자였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 입자 계수는 약 6.7e8 내지 약 3.05e8개 입자였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 입자 계수는 약 1.65e9 내지 약 1.6e10개 입자였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 EV를 함유하는 동결건조물의 입자 계수는 약 7.15e8 내지 약 8.5e9개 입자였다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 EV를 함유하는 동결건조물은 약 5e9 내지 약 1.55e10개의 입자 계수를 가졌다. 예시된 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주의 EV를 함유하는 동결건조물은 약 6.24e9 내지 약 2.89e10개의 입자 계수를 가졌다. 목적하는 입자 계수를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 입자 계수를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, DLS는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 측정하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, DLS는 동결건조물에 존재하는 총 입자의 전하를 측정하는 데 사용된다. 특히, 총 입자에 대해 측정하든 가장 우세한 DLS 통합 피크에 대해 측정하든 입자의 전하는 냉동건조 전 EV의 전하와 반드시 동일한 것은 아니다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 냉동건조 후(예를 들어, 동결건조물(예를 들어, 동결건조 분말)이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후) 입자의 전하는 냉동건조 이전의 EV 전하 또는 박테리아 배양물로부터 EV를 단리 또는 제조한 후의 전하(예를 박테리아 배양물로부터 EV를 구배 정제한 후의 전하)보다 다소 음전하이다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 다양한 박테리아 과의 동결건조물 입자의 전하는 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하(예를 들어 동결건조물에 존재하는 총 입자의 전하를 측정하기 위해 동적 광 산란(DLS)를 사용하여 제타 전위(mV)로 측정됨)였다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)의 입자는 약 -29.2 내지 약 +2.67 mV의 전하(제타 전위(mV)에 의해 측정된 바와 같음, 예를 들어 DLS에 의해 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하가 측정된 바와 같음)를 갖는다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시 약 -15.5 내지 약 -24.2 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시 약 -4.5 내지 약 -20.7 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시 약 -17.4 내지 약 +2.67 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 전하를 DLS로 측정시 약 -7.45 내지 약 -29.2 mV였다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 동결건조물 입자의 전하는 약 -7.54 내지 약 -13.5 mV였다. 예시된 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주의 동결건조물 입자의 전하는 약 -25.3 내지 약 -32 mV였다. 목적하는 전하를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 전하를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)의 입자는 약 -0.929 내지 약 -24.80 mV의 전하(제타 전위(mV)에 의해 측정된 바와 같음, 예를 들어 DLS에 의해 총 입자가 측정된 바와 같음)를 갖는다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 총 입자의 전하를 DLS로 측정시 약 -13.3 내지 약 -24.80 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 총 입자의 전하를 DLS로 측정시 약 -0.929 내지 약 -20.60 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 총 입자의 전하를 DLS로 측정시 약 -1.49 내지 약 -11.70 mV였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 동결건조물 입자의 전하는 총 입자를 DLS로 측정시 약 -1.88 내지 약 19.30 mV였다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크에 대해 계산된 값과 유사하였다. 예시된 푸르니에렐라 마시리엔시스 균주의 동결건조물 입자의 전하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크에 대해 계산된 값과 유사하였다. 목적하는 전하를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 전하를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 동결건조물(예를 들어, 동결건조 분말)의 입자(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)는 약 101 nm 내지 약 752 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 동적 광 산란(DLS)은 동결건조물이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후에 존재하는 입자의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 얻기 위해 사용된다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 다양한 박테리아 과의 동결건조물 입자의 Zave는 (동결건조물을 0.1X PBS에 재현탁한 후 DLS로 측정시) 약 101 nm 내지 약 752 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 동결건조물 입자의 Zave는 약 101 nm 내지 약 752 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 동결건조물 입자의 Zave는 약 133 nm 내지 약 291 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 동결건조물 입자의 Zave는 약 192 nm 내지 약 530 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 동결건조물 입자의 Zave는 약 106 nm 내지 약 178 nm였다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 동결건조물 입자의 Zave는 약 130.4 nm 내지 약 323.5 nm였다. 예시된 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주의 동결건조물 입자의 Zave는 약 132 nm 내지 약 315.2 nm였다. 목적하는 Zave를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 Zave를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 동결건조물(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)의 입자는 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm 또는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 동적 광 산란(DLS)은 동결건조물이 탈이온수 또는 PBS(예를 들어, 0.1X PBS)와 같은 완충액에 재현탁된 후에 존재하는 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기를 얻기 위해 사용된다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 다양한 박테리아 과의 동결건조물 입자의 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균 크기는 (동결건조물을 0.1X PBS에 재현탁한 후 DLS로 측정시) 약 25.55 nm 내지 약 458.9 nm 또는 약 25.55 nm 내지 약 157.40 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 오실로스피라세애 과의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 25.55 nm 내지 약 134.8 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 탄네렐라세애 과의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 34.81 nm 내지 약 80.44 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 47.38 nm 내지 약 458.9 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라세애 과의 동결건조물 입자의 평균 크기는 예를 들어 응집체가 제외된 경우 약 47.58 nm 내지 약 157.40 nm였다. 본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 베일로넬라세애 과의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 39.86 내지 약 71.30 nm였다. 본원에 예시된 베일로넬라 파르불라 균주의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 40 nm 내지 약 78.8 nm였다. 예시된 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주의 동결건조물 입자의 평균 크기는 약 43.72 nm 내지 약 79.18 nm였다. 목적하는 평균 크기를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 평균 크기를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, EV를 함유하는 동결건조물은 예를 들어 U937 사이토카인 분비 분석에서 생물학적 활성을 갖는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같이 제조된 EV의 동결건조물은 예를 들어 대조군 수준과 비교하여 U937 세포로부터의 분비된 IL-10, IP-10, IL-1β, TNF-α, 및 IL-6 수준에 영향을 미친다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 분무건조 분말(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 분무건조 완료 시 약 10% 미만(예를 들어, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 또는 약 4% 미만, 예를 들어 약 1% 내지 약 4%, 약 1.5% 내지 약 4%, 약 2% 내지 약 3%)의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법으로 측정된 바에 따름)을 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 분무건조 분말(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)은 분무건조 완료 시 약 6% 미만(예를 들어, 약 5% 미만 또는 약 4% 미만, 예를 들어 약 1% 내지 약 4%, 약 1.5% 내지 약 4%, 약 2% 내지 약 3%)의 수분 함량(예를 들어, Karl Fischer 방법으로 측정된 바에 따름)을 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖도록 분무건조 분말을 제조함으로써, 분무건조 분말은 예를 들어 치료 조성물에 사용하기 위한 다운스트림 처리에 더 적합하다. 일부 구현예에서, 약 6% 미만의 수분 함량을 갖도록 분무건조 분말을 제조함으로써, 분무건조 분말은 예를 들어 저장시 개선된 안정성을 갖는다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라 히스티콜라 EV를 함유하는 분무건조 파우더의 수분 함량(Karl Fischer로 측정됨)은 약 2.54% 내지 약 8.38%의 수분 함량이다. 목적하는 수분 함량을 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 수분 함량을 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 분무건조 파우더(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)는 분무건조 파우더 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.55e10개 입자의 입자 계수를 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV를 함유하는 분무건조 파우더(예를 들어, 본원에 기재된 부형제 및/또는 방법을 사용하여 제조됨)는 분무건조 파우더 mg당 약 6.7e8 내지 약 2.89e10개 입자의 입자 계수를 갖도록 제조된다. 일부 구현예에서, 입자 계수는 예를 들어 Zetaview와 같은 NTA로 측정된다.
본원에 제공된 예에 기재된 바와 같이, 프레보텔라 히스티콜라 EV를 함유하는 분무건조 분말의 입자 계수는 분무건조 분말 mg당 약 8.05e9 내지 약 2.e10개 입자였다. 목적하는 입자 계수를 얻기 위해 부형제의 구성성분을 선택할 수 있다. 목적하는 입자 계수를 얻기 위해 건조 조건을 선택할 수 있다.
정의
구체적으로 언급되거나, 문맥상 명확하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "또는"은 포괄적인 것으로 이해된다. 구체적으로 언급되거나, 문맥상 명확하지 않는 한, 본원에 사용된 용어 단수형("a", "an", 및 "the")은 단수형 또는 복수형으로 이해된다.
"보조제" 또는 "보조제 요법"은 광범위하게, 환자 또는 대상체(예를 들어, 인간)에서 면역학적 또는 생리학적 반응에 영향을 미치는 제제를 지칭한다. 예를 들어, 보조제는 시간이 지남에 따라 또는 종양과 같은 관심 영역으로 항원의 존재를 증가시키고, 항원 제시 세포 항원의 흡수를 돕고, 대식세포와 림프구를 활성화하고, 사이토카인 생성을 보조할 수 있다. 면역 반응을 변화시킴으로써, 보조제는 면역 상호작용제의 특정 용량의 효과 또는 안전성을 증가시키기 위해 더 적은 용량의 면역 상호작용제를 허용할 수 있다. 예를 들어, 보조제는 T 세포 고갈을 방지하여, 특정 면역 상호작용제의 효과 또는 안전성을 증가시킬 수 있다.
"투여"는 광범위하게 대상체에 대한 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)의 투여 경로를 의미한다. 투여 경로의 예는 경구 투여, 직장 투여, 국소 투여, 흡입(비강), 또는 주사를 포함한다. 주사 투여는 정맥내(IV), 근육내(IM), 종양내(IT), 및 피하(SC) 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 종양내, 경구, 비경구, 장내, 정맥내, 복강내, 국소, 경피(예를 들어, 임의의 표준 패치 사용), 피내, 안과, 비강(내), 국소, 비구강, 예컨대 에어로졸, 흡입, 피하, 근육내, 협측, 설하, (경)직장, 질, 동맥내 및 척추강내, 경점막(예를 들어, 설하, 설측, (경)협측, (경)요도, 질(예를 들어, 경질 및 질주위)), 이식, 방광내, 폐내, 십이지장내, 위내, 및 기관지내를 포함하는(이에 한정되지 않음) 임의의 효과적인 경로에 의해 임의의 형태로 투여된다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 경구, 직장, 종양내, 국소, 방광내, 배수 림프절 내로 또는 이에 인접하여 주사에 의해, 정맥내, 흡입 또는 에어로졸에 의해, 또는 피하 투여된다. 다른 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 경구, 종양내, 또는 정맥내 투여된다. 다른 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 경구 투여된다.
"암"은 광범위하게, 주변 조직의 침입 및 잠재적으로 숙주의 비정상적인 세포 성장의 초기 부위 원위부 조직의 침입으로 이어지는 숙주 자신의 세포의 통제되지 않은 비정상적인 성장을 의미한다. 주요 부류는 상피 조직(예를 들어, 피부, 편평세포)의 암인 암종; 결합 조직(예를 들어, 뼈, 연골, 지방, 근육, 혈관 등)의 암인 육종; 혈액 형성 조직(예를 들어, 골수 조직)의 암인 백혈병; 면역세포의 암인 림프종 및 골수종; 및 뇌 및 척추 조직으로부터의 암을 포함하는 중추 신경계 암을 포함한다. "암" 및 "신생물"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "암"은 신규 또는 재발 여부에 관계없이 백혈병, 암종, 및 육종을 포함하는 모든 유형의 암 또는 신생물 또는 악성 종양을 지칭한다. 암의 구체적인 예는 암종, 육종, 골수종, 백혈병, 림프종, 및 혼합형 종양이다. 암의 비제한적 예는 뇌, 흑색종, 방광, 유방, 자궁경부, 결장, 두경부, 신장, 폐, 비소세포 폐, 중피종, 난소, 전립선, 육종, 위, 자궁, 및 수모세포종의 신규 또는 재발 암이다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 전이를 포함한다.
"탄수화물"은 당 또는 당의 중합체를 지칭한다. 용어 "당류", "다당류", "탄수화물", 및 "올리고당류"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 대부분의 탄수화물은 많은 하이드록실기(일반적으로 분자의 각 탄소 원자에 하나씩)를 가진 알데하이드 또는 케톤이다. 탄수화물은 일반적으로 CnH2nOn의 분자식을 갖는다. 탄수화물은 단당류, 이당류, 삼당류, 올리고당류, 또는 다당류일 수 있다. 가장 기본적인 탄수화물은 글루코스, 갈락토스, 만노스, 리보스, 아라비노스, 자일로스, 및 프룩토스와 같은 단당류이다. 이당류는 결합된 2개의 단당류이다. 예시적인 이당류는 수크로스, 말토스, 셀로비오스, 및 락토스를 포함한다. 일반적으로, 올리고당류는 3 내지 6개의 단당류 단위를 포함하고(예를 들어, 라피노스, 스타키오스), 다당류는 6개 이상의 단당류 단위를 포함한다. 예시적인 다당류는 전분, 글리코겐, 및 셀룰로스를 포함한다. 탄수화물은 하이드록실기가 제거된 2'-데옥시리보스, 하이드록실기가 불소로 대체된 2'-플루오로리보스, 또는 글루코스(예를 들어, 2'-플루오로리보스, 데옥시리보스, 및 헥소스)의 질소-함유 형태인 N-아세틸글루코사민과 같은 변형된 당류 단위를 함유할 수 있다. 탄수화물은 많은 다른 형태, 예를 들어 이형태체, 환형 형태, 비환형 형태, 입체이성질체, 호변이성질체, 아노머, 및 이성질체로 존재할 수 있다.
용어 "암종"은 주변 조직에 침투하고/하거나 생리학적 및 비생리학적 세포 사멸 신호에 저항하고 전이를 일으키는 경향이 있는 상피세포로 구성된 악성 성장을 의미한다.
"세포 강화"는 광범위하게, 조성물의 투여 전에 환경에 실질적으로 존재하지 않고 조성물 자체에는 존재하지 않는 환경에서의 세포의 유입 또는 세포의 확장을 지칭한다. 환경을 강화하는 세포에는 면역세포, 기질세포, 박테리아, 및 진균 세포가 포함된다. 특히 관심 있는 환경은 암세포가 상주하거나 위치하는 미세환경이다. 일부 예에서, 미세환경은 종양 미세환경 또는 종양 배수 림프절이다. 다른 예에서, 미세환경은 전암성 조직 부위 또는 조성물의 국소 투여 부위 또는 원격 투여 후 조성물이 축적될 부위이다.
"분기군(clade)"은 계통수(phylogenetic tree)에서 통계적으로 유효한 노드의 다운스트림에 있는 계통수의 OTU 또는 구성원을 지칭한다. 분기군은 계통수에 있는 일련의 말단 잎으로 구성되며, 이는 별개의 단일계통 진화 단위이며, 어느 정도 서열 유사성을 공유한다.
"조합"은 다른 제제, 예를 들어 다른 EV(예를 들어, 다른 균주), 박테리아(예를 들어, EV가 수득되는 동일하거나 다른 균주), 또는 다른 치료제와 함께, 하나의 공급원 균주로부터 유래된 EV를 나타낼 수 있다. 조합은 EV 및 다른 제제의 시간적 공동 투여 또는 공동 국재화, 뿐만 아니라 동일한 물질 또는 생성물 또는 물리적으로 연결된 생성물에서의 물리적 공존에 해당할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "~로 본질적으로 이루어지다"(또는 "본질적으로 이루어진")은 인용된 요소 및/또는 단계 및 청구된 발명의 기본적이고 신규한 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것에 한정됨을 의미한다.
"세균불균형"은 숙주 장내 미생물군 생태 네트워크("미생물군")의 정상적인 다양성 및/또는 기능이 파괴된, 점막 또는 피부 표면(또는 임의의 다른 미생물군 미세환경)을 포함한 장 또는 기타 신체 부위의 미생물군집 또는 미생물군의 상태를 의미한다. 세균불균형의 상태는 질병 상태를 초래할 수 있으며, 특정 조건에서만 또는 장기간 존재하는 경우에만 건강에 해로울 수 있다. 세균불균형은 환경 요인, 감염원, 숙주 유전자형, 숙주 식이, 및/또는 스트레스를 포함한 다양한 요인으로 인한 것일 수 있다. 세균불균형은 하나 이상의 박테리아 유형(예를 들어, 혐기성), 종 및/또는 균주의 유병률 변화(예를 들어, 증가 또는 감소), 숙주 미생물군 집단 구성의 다양성 변화(예를 들어, 증가 또는 감소); 하나 이상의 유익한 효과의 감소 또는 손실을 초래하는 하나 이상의 공생 유기체 집단의 변화(예를 들어, 증가 또는 감소); 하나 이상의 병원체 집단(예를 들어, 병원성 박테리아)의 과성장; 및/또는 특정 조건이 존재할 때만 질환을 일으키는 공생 유기체의 존재 및/또는 과성장을 초래할 수 있다.
"감소" 또는 "고갈"이라는 용어는 치료 전 상태와 비교할 때 치료 후 차이가 상황에 따라 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 1/100, 1/1000, 1/10,000, 1/100,000, 1/1,000,000이거나 검출할 수 없게 되는 변화를 의미한다. 감소될 수 있는 특성은 면역세포, 박테리아 세포, 기질세포, 골수 유래 억제자 세포, 섬유모세포, 대사산물의 수; 사이토카인의 수준; 또는 다른 물리적 파라미터(예컨대, 귀 두께(예를 들어, DTH 동물 모델에서의 귀 두께) 또는 종양 크기(예를 들어, 동물 종양 모델에서))를 포함한다.
용어 "유효 용량"은 대상체에 대한 독성이 가장 적으면서 특정 대상체, 조성물, 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 치료 조성물의 양이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "조작된 박테리아"는 인간 활동에 의해 자연 상태로부터 유전적으로 변경된 임의의 박테리아 및 이러한 박테리아의 자손이다. 조작된 박테리아에는 예를 들어 표적화된 유전자 변형의 산물, 무작위 돌연변이유발 스크리닝의 산물, 및 유도 진화의 산물이 포함된다.
용어 "에피토프"는 항체 또는 T 세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 의미한다. 에피토프는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹으로 구성된다. 특정 에피토프는 항체가 결합할 수 있는 특정 아미노산 서열에 의해 정의될 수 있다.
"세포외 소포체"(EV)는 smEV와 같은 박테리아에서 파생된 자연적으로 생성된 소포체일 수 있다. EV는 박테리아 지질 및/또는 박테리아 단백질 및/또는 박테리아 핵산 및/또는 박테리아 탄수화물 모이어티로 이루어지며 배양 상청액으로부터 단리된다. 이러한 소포체의 자연적 생성은 박테리아 세포가 배양되는 환경의 조작(예를 들어, 배지 또는 온도 변경)을 통해 인위적으로 향상(예를 들어, 증가) 또는 감소될 수 있다. 또한, EV 조성물은 효능, 면역 자극, 안정성, 면역 자극 능력, 안정성, 기관 표적화(예를 들어, 림프절), 흡수(예를 들어, 위장), 및/또는 수율(예를 들어, 이에 따른 효능 변경)을 변경하기 위해 박테리아 성분 또는 이물질을 감소, 증가, 추가, 또는 제거하도록 변형될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "정제된 EV 조성물" 또는 "EV 조성물"은 원재료에서 발견되는 적어도 하나의 관련 물질로부터 분리된(예를 들어, 적어도 하나의 다른 박테리아 성분으로부터 분리된) EV의 제제, 또는 제제 생산에 사용된 임의의 공정에서 EV와 관련된 임의의 재료를 지칭한다. 이는 또한 특정 성분에 대해 상당히 풍부한 조성물을 지칭할 수 있다. 세포외 소포체는 또한 포유동물 세포로부터 수득될 수 있고, 고세균, 진균, 미세조류, 원생동물, 및 기생충과 같은 미생물로부터 수득될 수 있다. 임의의 이러한 공급원으로부터 유래된 세포외 소포체는 본원에 기술된 바와 같이 용액 및/또는 건조 형태로 제조될 수 있다. 세포외 소포체는 예를 들어 박테리아 세포를 화학적으로 파괴(예를 들어, 리소자임 및/또는 리소스타핀에 의해)하고/하거나 물리적으로 파괴(예를 들어, 기계적인 힘에 의해)하여 수득된 pmEV와 같은 박테리아로부터 제조된 인위적으로 생성된 소포체일 수 있으며, 원심분리 및/또는 초원심분리, 또는 기타 방법을 통해 세포내 성분으로부터 박테리아 막 성분을 분리하여 또한 본원에 기재된 바와 같이 용액 및/또는 건조 형태로 제조될 수 있다.
용어 "유전자"는 생물학적 기능과 관련된 임의의 핵산을 지칭하기 위해 광범위하게 사용된다. 용어 "유전자"는 특정 게놈 서열뿐만 아니라 해당 게놈 서열에 의해 암호화된 cDNA 또는 mRNA에도 적용된다.
2개의 핵산 분자의 핵산 서열 간의 "동일성"은 예를 들어 문헌[Pearson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444]에서와 같은 기본 파라미터를 사용하여, "FASTA" 프로그램과 같은 알려진 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 동일성 백분율로서 결정될 수 있다(다른 프로그램은 GCG 프로그램 패키지(문헌[Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research 12(I):387 (1984)]), BLASTP, BLASTN, FASTA(문헌[Atschul, S. F., et al., J Molec Biol 215:403 (1990); Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ed., Academic Press, San Diego, 1994, 및 Carillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48:1073])를 포함한다). 예를 들어, 미국 국립 생물공학 정보센터 데이터베이스의 BLAST 기능을 사용하여 동일성을 결정할 수 있다. 기타 상업적으로 또는 공개적으로 이용가능한 프로그램은 DNAStar "MegAlign" 프로그램(Madison, Wis.) 및 위스콘신 대학교 Genetics Computer Group(UWG)의 "Gap" 프로그램(Madison Wis.)을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "면역 장애"는 자가면역 질환, 염증성 질환, 및 알레르기를 포함하여, 면역계의 활성에 의해 야기되는 임의의 질환, 장애, 또는 질환 증상을 지칭한다. 면역 장애는 자가면역 질환(예를 들어, 건선, 아토피성 피부염, 루푸스, 경피증, 용혈성 빈혈, 혈관염, 제1형 당뇨병, 그레이브병, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 굿파스처 증후군, 악성 빈혈, 및/또는 근병증), 염증성 질환(예를 들어, 심상성 여드름, 천식, 체강 질환, 만성 전립선염, 사구체신염, 염증성 장질환, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 이식 거부반응, 혈관염, 및/또는 간질성 방광염), 및/또는 알레르기(예를 들어, 음식 알레르기, 약물 알레르기, 및/또는 환경 알레르기)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
"면역요법"은 질환(예를 들어, 면역 질환, 염증성 질환, 대사성 질환, 암)을 치료하기 위해 대상체의 면역계를 사용하는 치료법이며, 예를 들어 관문 억제제, 암 백신, 사이토카인, 세포 요법, CAR-T 세포, 및 수지상 세포 요법을 포함한다.
용어 "증가"는 치료 전 상태와 비교할 때 치료 후 차이가 상황에 따라 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 2배, 4배, 10배, 100배, 10^3배, 10^4배, 10^5배, 10^6배, 및/또는 10^7배 더 크게 되는 변화를 의미한다. 증가될 수 있는 특성은 면역세포, 박테리아 세포, 기질세포, 골수 유래 억제자 세포, 섬유모세포, 대사산물의 수; 사이토카인의 수준; 또는 다른 물리적 파라미터(예컨대, 귀 두께(예를 들어, DTH 동물 모델에서의 귀 두께) 또는 종양 크기(예를 들어, 동물 종양 모델에서))를 포함한다.
"선천성 면역 작용제" 또는 "면역 보조제"는 톨유사 수용체(TLR), NOD 수용체, RLR, C형 렉틴 수용체, STING-cGAS 경로 성분, 인플라마좀 복합체를 비롯한 선천성 면역 수용체를 특이적으로 표적화하는 소분자, 단백질, 또는 기타 제제이다. 예를 들어, LPS는 박테리아 유래 또는 합성된 TLR-4 작용제이며, 알루미늄은 면역 자극 보조제로 사용될 수 있다. 면역 보조제는 보다 광범위한 보조제 또는 보조제 요법의 특정 부류이다. STING 작용제의 예는 2'3'-cGAMP, 3'3'-cGAMP, c-di-AMP, c-di-GMP, 2'2'-cGAMP, 및 2'3'-cGAM(PS)2 (Rp/Sp) (2'3'-cGAMP의 비스-포스포로티오에이트 유사체의 Rp, Sp-이성질체)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. TLR 작용제의 예는 TLRl, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8, TLR9, TLRl0, 및 TLR1l을 포함하나 이에 한정되지 않는다. NOD 작용제의 예는 N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(무라밀디펩티드(MDP)), 감마-D-글루타밀-메소-디아미노피멜산(iE-DAP), 및 데스무라밀펩티드(DMP)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
"내부 전사된 스페이서"또는 "ITS"는 진핵생물 종 특히 진균의 동정에 흔히 사용되는 공통 전구체 전사체의 구조적 리보솜 RNA(rRNA) 사이에 위치한 비기능적 RNA 조각이다. 리보솜의 코어를 형성하는 진균의 rRNA는 신호 유전자로서 전사되고, 8S, 5.8S, 및 28S 영역으로 구성되며, ITS4와 ITS5는 각각 8S와 5.8S 영역 사이, 그리고 5.8S와 28S 영역 사이에 위치한다. 18S와 5.8S 영역 사이 및 5.8S와 28S 영역 사이의 이러한 두 시스트론간 세그먼트는 스플라이싱에 의해 제거되며, 이전에 설명된 바와 같이 바코딩 목적을 위해 상당한 종간 변이를 포함한다(Schoch et al Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region as a universal DNA barcode marker for Fungi. PNAS 109:6241-6246. 2012). 18S rDNA가 통상적으로 계통발생학적 재구성에 사용되지만, ITS가 일반적으로 고도로 보존되면서도 대부분의 진균의 속과 종을 구별하기에 충분한 뉴클레오티드 다양성을 보유하는 초가변 영역을 포함한다는 점에서 이 기능을 수행할 수 있다.
"단리된" 또는 "풍부한"이라는 용어는 (1) (자연에서든 실험 환경에서든) 초기에 생산될 때 관련되었던 성분 중 적어도 일부로부터 분리되었고/되었거나, (2) 인간의 손에 의해 생산, 준비, 정제, 및/또는 제조된, 미생물, EV(예컨대, 박테리아 EV), 또는 기타 개체 또는 물질을 포괄한다. 단리된 박테리아 또는 EV는 초기에 관련되었던 다른 성분의 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 그 이상으로부터 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 박테리아 또는 EV는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과로, 예를 들어 다른 성분이 실질적으로 없는 수준으로, 순수하다.
용어 "백혈병"은 조혈 기관/시스템의 광범위하게 진행되는 악성 질환을 포함하며, 일반적으로 혈액 및 골수에서 백혈구 및 백혈구 전구체의 왜곡된 증식 및 발달을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "지질"은 지방, 오일, 트리글리세리드, 콜레스테롤, 인지질, 유리 지방산을 포함하는 임의의 형태의 지방산을 포함한다. 지방, 오일, 및 지방산은 포화, 불포화(시스 또는 트랜스), 또는 부분 불포화(시스 또는 트랜스)일 수 있다.
용어 "흑색종"은 피부 및 다른 기관의 멜라닌세포 시스템에서 발생하는 종양을 의미하는 것으로 간주된다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "대사산물"은 임의의 세포 또는 박테리아 대사 반응에서 기질로 사용되거나 임의의 세포 또는 박테리아 대사 반응으로부터 생성 화합물, 조성물, 분자, 이온, 보조인자, 촉매, 또는 영양소로서 생성되는 임의의 모든 분자 화합물, 조성물, 분자, 이온, 보조인자, 촉매, 또는 영양소를 지칭한다.
"미생물군"은 광범위하게, 대상체 또는 환자의 신체 부위에 또는 그 안에 존재하는 미생물을 지칭한다. 미생물군의 미생물에는 박테리아, 바이러스, 진핵 미생물, 및/또는 바이러스가 포함될 수 있다. 미생물군의 개별 미생물은 대사 활성, 휴면성, 잠복성이거나 포자로 존재할 수 있거나, 플랑크톤으로 또는 생물막에 존재할 수 있거나, 지속 가능하거나 일시적인 방식으로 미생물군에 존재할 수 있다. 미생물군은 공생 또는 건강한 상태의 미생물군 또는 질환 상태 또는 세균불균형 미생물군일 수 있다. 미생물군은 대상체 또는 환자에 고유할 수 있거나, 또는 건강 상태(예를 들어, 전암성 또는 암성 상태) 또는 치료 조건(예를 들어, 항생제 치료, 상이한 미생물에 대한 노출)의 변화로 인해 미생물군의 성분이 조절, 도입, 또는 고갈될 수 있다. 일부 양태에서, 미생물군은 점막 표면에서 발생한다. 일부 양태에서, 미생물군은 장내 미생물군이다. 일부 양태에서, 미생물군은 종양 미생물군이다.
조직 또는 샘플의 "미생물군 프로파일" 또는 "미생물군 시그니처"는 미생물군의 박테리아 구성의 적어도 부분적인 특성화를 지칭한다. 일부 구현예에서, 미생물군 프로파일은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100가지 이상의 박테리아 균주가 미생물군에 존재하는지 부재하는지를 나타낸다. 일부 구현예에서, 미생물군 프로파일은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100가지 이상의 암-관련 박테리아 균주가 샘플에 존재하는지 여부를 나타낸다. 일부 구현예에서, 미생물군 프로파일은 샘플에서 검출된 각 박테리아 균주의 상대적 또는 절대적 양을 나타낸다. 일부 구현예에서, 미생물군 프로파일은 암-관련 미생물군 프로파일이다. 암-관련 미생물군 프로파일은 일반 집단에서보다 암에 걸린 대상체에서 더 자주 발생하는 미생물군 프로파일이다. 일부 구현예에서, 암-관련 미생물군 프로파일은 암이 없는 개체로부터 채취한 다른 동등한 조직 또는 샘플의 미생물군에 정상적으로 존재하는 것보다 더 많은 수 또는 양의 암-관련 박테리아를 포함한다.
박테리아와 관련하여 "변형된"은 광범위하게, 야생형 형태에서 변화를 겪은 박테리아를 지칭한다. 박테리아 변형은 박테리아를 조작함으로써 발생할 수 있다. 박테리아 변형의 예는 유전적 변형, 유전자 발현 변형, 표현형 변형, 제형 변형, 화학적 변형, 및 용량 또는 농도를 포함한다. 개선된 특성의 예는 본 명세서 전반에 걸쳐 기재되어 있으며, 예를 들어 약독화, 영양요구성, 귀소성, 또는 항원성을 포함한다. 표현형 변형은 예를 들어 독성을 증가시키거나 감소시키도록 박테리아의 표현형을 변형시키는 배지에서의 박테리아 성장을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은 "종양생물군"은 종양원성 및/또는 암-관련 미생물군집을 포함하며, 여기서 미생물군집은 바이러스, 박테리아, 진균, 원생생물, 기생충, 또는 다른 미생물 중 하나 이상을 포함한다.
"종양영양성" 또는 "종양친화성" 미생물 및 박테리아는 암 미세환경에 존재하거나 매우 관련되어 있는 미생물이다. 이들은 환경 내에서 우선적으로 선택되거나, 암 미세환경에서 우선적으로 성장하거나, 상기 환경에 적응할 수 있다.
"조작 분류 단위" 및 "OTU"는 계통수에서 말단 잎을 지칭하며, 핵산 서열, 예를 들어 전체 게놈 또는 특정 유전자 서열, 및 종의 수준에서 이 핵산 서열에 대한 서열 동일성을 공유하는 모든 서열에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, 특정 유전자 서열은 16S 서열 또는 16S 서열의 일부일 수 있다. 일부 구현예에서, 두 개체의 전체 게놈이 시퀀싱되고 비교된다. 일부 구현예에서, 다중좌표 서열 태그(MLST), 특정 유전자, 또는 유전자 세트와 같은 선택 영역이 유전적으로 비교될 수 있다. 16S의 경우, 전체 16S 또는 16S의 일부 가변 영역에 걸쳐 97% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 OTU는 동일한 OTU로 간주된다. 예를 들어, 문헌[Claesson MJ, Wang Q, O'Sullivan O, Greene-Diniz R, Cole JR, Ross RP, and O'Toole PW. 2010. Comparison of two next-generation sequencing technologies for resolving highly complex microbiota composition using tandem variable 16S rRNA gene regions. Nucleic Acids Res 38: e200. Konstantinidis KT, Ramette A, and Tiedje JM. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참조. 완전한 게놈의 경우, 95% 이상의 평균 뉴클레오티드 동일성을 공유하는 MLST, 16S 이외의 특정 유전자, 또는 유전자 세트의 OTU는 동일한 OTU로 간주된다. 예를 들어, 문헌[Achtman M, and Wagner M. 2008. Microbial diversity and the genetic nature of microbial species. Nat. Rev. Microbiol. 6: 431-440. Konstantinidis KT, Ramette A, and Tiedje JM. 2006. The bacterial species definition in the genomic era. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 361: 1929-1940] 참조. OTU는 종종 유기체 간의 서열을 비교하여 정의된다. 일반적으로, 서열 동일성이 95% 미만인 서열은 동일한 OTU의 일부를 형성하는 것으로 간주되지 않는다. OTU는 또한 뉴클레오티드 마커 또는 유전자, 특히 고도로 보존된 유전자(예를 들어, "하우스-키핑" 유전자), 또는 이들의 조합의 임의의 조합을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어 속, 종 및 계통발생 분기군에 대한 분류학적 할당이 있는 조작 분류 단위(OTU)가 본원에 제공된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 유전자가 동일한 조건에서 같은 종의 야생형 박테리아에 의해 발현되는 것보다 적어도 일부 조건에서 조작된 박테리아에서 더 높은 수준으로 발현되는 경우, 유전자는 박테리아에서 "과발현"된다. 유사하게, 유전자가 동일한 조건에서 같은 종의 야생형 박테리아에 의해 발현되는 것보다 적어도 일부 조건에서 조작된 박테리아에서 더 낮은 수준으로 발현되는 경우, 유전자는 박테리아에서 "과소발현"된다.
용어 "폴리뉴클레오티드"와 "핵산"은 상호교환적으로 사용된다. 이들은 임의의 길이의 뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드의 중합체 형태, 또는 이들의 유사체를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 임의의 3차원 구조를 가질 수 있고, 임의의 기능을 수행할 수 있다. 다음은 폴리뉴클레오티드의 비제한적 예이다: 유전자 또는 유전자 단편의 암호화 또는 비암호화 영역, 연결 분석으로부터 정의된 유전자좌, 엑손, 인트론, 메신저 RNA(mRNA), 마이크로 RNA(miRNA), 사일런싱 RNA(siRNA), 전달 RNA, 리보솜 RNA, 리보자임, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지형 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브, 및 프라이머. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예컨대 표지화 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 본원에 제공된 모든 핵산 서열에서, U 뉴클레오티드는 T 뉴클레오티드와 상호교환가능하다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 물질은 다른 성분이 실질적으로 없는 경우 "순수"하다. 용어 "정제"는 (예를 들어, 자연에서든 실험 환경에서든) 초기에 생산 또는 생성될 때, 또는 초기 생산 후 임의의 시기 동안, 관련되었던 성분 중 적어도 일부로부터 분리된 EV(예컨대, 박테리아로부터 유래된 EV) 제제 또는 기타 물질을 나타낸다. EV 제제 또는 조성물은, 예를 들어 하나 이상의 다른 박테리아 성분으로부터, 생산 시점에 또는 이후에 단리된 경우 정제된 것으로 간주될 수 있고, 정제된 미생물 또는 박테리아 집단은 최대 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 또는 약 90% 초과의 다른 물질을 함유할 수 있으며, 여전히 "정제된" 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 정제된 EV는 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과로 순수하다. EV 조성물(또는 제제)은 예를 들어 잔류 서식지 생성물로부터 정제된다.
본원에서 사용되는 용어 "정제된 EV 조성물" 또는 "EV 조성물"은 원재료에서 발견되는 적어도 하나의 관련 물질로부터 분리된(예를 들어, 적어도 하나의 다른 박테리아 성분으로부터 분리된) 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 제제, 또는 제제 생산에 사용된 임의의 공정에서 EV와 관련된 임의의 재료를 지칭한다. 이는 또한 상당히 풍부하거나 농축된 조성물을 지칭한다. 일부 구현예에서, EV는 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 100배, 1000배, 10,000배, 또는 10,000배 초과로 농축된다.
"잔류 서식지 생성물"은 대상체 내부 또는 대상체 상의 미생물군집에 대한 서식지로부터 유래된 물질을 지칭한다. 예를 들어, 미생물의 발효 배양물은 오염물, 예를 들어 다른 미생물 균주 또는 형태(예를 들어, 박테리아, 바이러스, 마이코플라즘, 및/또는 진균)를 함유할 수 있다. 예를 들어, 미생물은 위장관내 배설물, 피부 자체, 타액, 호흡기의 점액, 또는 비뇨생식기의 분비물(즉, 미생물 군집과 관련된 생물학적 물질)에서 산다. 잔류 서식지 생성물이 실질적으로 없다는 것은 미생물 조성물이 배양물 또는 인간 또는 동물 대상체 상의 또는 그 안의 미생물 환경과 관련된 생물학적 물질을 더 이상 함유하지 않고 미생물 군집과 관련된 임의의 오염 생물학적 물질이 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 또는 95% 없다는 것을 의미한다. 잔류 서식지 생성물에는 비생물적 물질(소화되지 않은 음식 포함)이 포함되거나, 원치 않는 미생물이 포함될 수 있다. 잔류 서식지 생성물이 실질적으로 없다는 것은 또한 미생물 조성물이 배양 오염물 또는 인간 또는 동물로부터 검출가능한 세포를 함유하지 않고 미생물 세포만이 검출가능하다는 것을 의미할 수 있다. 일 구현예에서, 잔류 서식지 생성물이 실질적으로 없다는 것은 또한 미생물 조성물이 검출가능한 바이러스(박테리아, 바이러스(예를 들어, 파지) 포함), 진균, 마이코플라스마 오염물을 함유하지 않는다는 것을 의미할 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 미생물 세포와 비교하여 미생물 조성물에서 생존 세포의 1x10-2%, 1x10-3%, 1x10-4%, 1x10-5%, 1x10-6%, 1x10-7%, 1x10-8% 미만이 인간 또는 동물임을 의미한다. 이 정도의 순도를 달성하는 방법에는 여러 가지가 있으며 그중 어느 것도 제한적이지 않다. 따라서, 일련의 단일 콜로니로부터의 복제(예컨대, 2개, 이에 제한되지 않음) 줄무늬가 단일 콜로니 형태만을 나타낼 때까지 고체 배지에서 단일 콜로니로의 여러 단계의 스트리킹을 통해 원하는 성분을 단리함으로써 오염이 감소될 수 있다. 대안적으로, 오염의 감소는 다중 10배 연속 희석과 같은 단일의 원하는 세포에 대한 다중 라운드 희석(예를 들어, 10-8 또는 10-9의 희석)에 의해 달성될 수 있다. 이것은 여러 개의 단리된 콜로니가 유사한 세포 형태와 그람 염색 거동을 가짐을 보여줌으로써 추가로 확인될 수 있다. 적절한 순도를 확인하기 위한 다른 방법에는 유전자 분석(예를 들어, PCR, DNA 시퀀싱), 혈청학 및 항원 분석, 효소 및 대사 분석, 및 원하는 성분들을 오염물질과 구별하는 시약을 사용하는 유세포 분석과 같은 기기를 사용하는 방법이 포함된다.
용어 "육종"은 일반적으로 배아 결합 조직과 같은 물질로 구성되고, 일반적으로 원섬유, 이종 또는 동종 물질에 내장된 밀집된 세포로 구성된 종양을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적 결합"은 항체가 소정의 항원에 결합하는 능력 또는 폴리펩티드가 소정의 결합 파트너에 결합하는 능력을 나타낸다. 일반적으로, 항체 또는 폴리펩티드는 약 10-7 M 이하의 KD에 상응하는 친화도로 소정의 항원 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하고, 비특이적 및 관련되지 않은 항원/결합 파트너(예를 들어, BSA, 카제인)에 대한 결합에 대한 친화도보다 적어도 10배, 적어도 100배, 또는 적어도 1000배 작은 친화도(KD로 표현됨)로 소정의 항원/결합 파트너에 결합한다. 대안적으로, 특이적 결합은 한 성분이 단백질, 지질, 또는 탄수화물 또는 이들의 조합이고 특정 방식으로 단백질, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합인 두 번째 성분과 결합하는 2성분 시스템에 보다 광범위하게 적용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "스톡"은 하나 이상의 부형제를 포함하나 활성 성분(예컨대, 세포외 소포체)을 포함하지 않는 용액을 의미한다. 일부 구현예에서, 스톡은 EV를 포함하는 제제(액상 제제와 같은)에 하나 이상의 부형제를 도입하기 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 스톡은 알려진 양의 하나 이상의 부형제를 포함하는 농축 용액이다. 일부 구현예에서, 스톡은 본원에 제공된 용액 또는 건조 형태를 제조하기 위해 EV를 포함하는 제제(액상 제제와 같은)와 조합된다.
"균주"는 동일한 박테리아 종의 밀접하게 관련된 구성원과 구별될 수 있도록 유전적 특징을 갖는 박테리아 종의 구성원을 지칭한다. 유전적 특징은 적어도 하나의 유전자의 전부 또는 일부의 부재, 적어도 조절 영역(예를 들어, 프로모터, 종결자, 리보스위치, 리보솜 결합 부위)의 전부 또는 일부의 부재, 적어도 하나의 천연 플라스미드의 부재("경화"), 적어도 하나의 재조합 유전자의 존재, 적어도 하나의 돌연변이 유전자의 존재, 적어도 하나의 외래 유전자(다른 종으로부터 유래된 유전자)의 존재, 적어도 하나의 돌연변이 조절 영역(예를 들어, 프로모터, 종결자, 리보스위치, 리보솜 결합 부위)의 존재, 적어도 하나의 비천연 플라스미드의 존재, 적어도 하나의 항생제 내성 카세트의 존재, 또는 이들의 조합일 수 있다. 상이한 균주들 사이의 유전적 특징은 PCR 증폭에 의해 확인될 수 있고, 임의로 관심 게놈 영역(들) 또는 전체 게놈의 DNA 시퀀싱이 뒤따른다. (동일 종의 다른 균주와 비교하여) 한 균주가 항생제 내성을 얻거나 잃었거나 생합성 능력을 얻거나 잃은 경우(예컨대, 영양요구성 균주), 균주는 항생제 또는 영양소/대사산물을 각각 사용하는 선택 또는 역선택에 의해 구별될 수 있다.
용어 "대상체" 또는 "환자"는 임의의 포유류를 지칭한다. "필요로 하는"으로 기술된 대상체 또는 환자는 질환에 대한 치료(또는 예방)를 필요로 하는 대상체 또는 환자를 지칭한다. 포유류(즉, 포유류 동물)에는 인간, 실험 동물(예를 들어, 영장류, 래트, 마우스), 가축(예를 들어, 소, 양, 염소, 돼지), 및 가정용 애완동물(예를 들어, 개, 고양이, 설치류)이 포함된다. 대상체는 인간일 수 있다. 대상체는 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 당나귀, 염소, 낙타, 마우스, 래트, 기니피그, 양, 라마, 원숭이, 고릴라, 또는 침팬지를 포함하는(이에 한정되지 않음) 비인간 포유동물일 수 있다. 대상체는 건강할 수 있거나, 임의의 발달 단계의 암을 앓을 수 있거나(임의의 단계는 암 관련 또는 원인 병원체에 의해 유발되거나 우발적으로 확인됨), 암 발병 위험 또는 다른 대상체에게 암 관련 또는 암 원인 병원체가 전이될 위험이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에는 폐암, 방광암, 전립선암, 형질세포종, 대장암, 직장암, 메르켈세포 암종, 타액선 암종, 난소암, 및/또는 흑색종이 있다. 대상체에는 종양이 있을 수 있다. 대상체에는 강화된 거대음세포증을 나타내는 종양이 있을 수 있으며 이 과정의 기본 유전체학은 Ras 활성화를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에는 다른 암이 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 암 요법을 받았다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료제"는 치료용 제제를 의미한다. 일부 구현예에서, 치료제는 질환 및/또는 병태를 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있는 EV를 포함하는 조성물("EV 조성물")이다. 일부 구현예에서, 치료제는 약학적 제제이다. 일부 구현예에서, 의약품, 의료 식품, 식품, 또는 식이 보충제는 치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료제는 용액이고, 일부 구현예에서, 치료제는 건조 형태이다. 건조 형태 구현예는 예를 들어 냉동건조 또는 분무건조에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료제의 건조 형태는 동결건조 케이크 또는 분말이다. 일부 구현예에서, 치료제의 건조 형태는 분무건조 분말이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료 조성물" 또는 "약학적 조성물"은 치료 유효량의 치료제를 포함하는 조성물(예를 들어 본원에 기재된 EV 조성물)을 지칭한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 의약품, 의료식품, 식품, 또는 식이보조제일 수 있다(또는 그 안에 존재할 수 있다).
본원에서 사용되는 바와 같이, 대상체의 질환을 "치료하는" 또는 질환이 있거나 의심되는 대상체를 "치료하는"이라는 용어는 대상체에게 약학적 치료를 투여하는 것, 예를 들어 질환의 적어도 하나의 증상이 감소되도록 또는 악화되지 않도록 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 의미한다. 따라서, 일 구현예에서, "치료"는 특히 진행 지연, 관해 촉진, 관해 유도, 관해 증대, 회복 가속화, 대체 요법에 대한 효능 증가 또는 내성 감소, 또는 이들의 조합을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 대상체의 질환을 "예방하는"이라는 용어는 대상체에게 약학적 치료를 투여하는 것, 예를 들어 질환의 적어도 하나의 증상의 발병이 지연되거나 예방되도록 하나 이상의 제제를 투여하는 것을 의미한다.
박테리아 세포외 소포체
특정 양태에서, 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태, 및 치료 조성물이 본원에 제공된다. 특정 양태에서, 박테리아로부터 수득된 EV를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태, 및 치료 조성물이 본원에 제공된다.
EV의 공급원으로 전파된 박테리아는 관심 특성을 가진 박테리아를 식별하는 당업계의 분석에 기초하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 박테리아는 숙주 면역 반응을 조절하고/하거나 사이토카인 수준에 영향을 미치는 능력을 위해 선택된다. 예를 들어, U937 분석에서 사이토카인 수준(예컨대 TNFα, IL10, IL-6, IL-1β, 및/또는 IP-10 수준)에 영향을 미치기 위해 박테리아 균주가 선택된다.
일부 구현예에서, EV는 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 점액은 장 내강과 연관되어 있다. 일부 구현예에서, 점액은 소장과 연관되어 있다. 일부 구현예에서, 점액은 기도와 연관되어 있다.
일부 구현예에서, EV는 구강, 폐, 코, 또는 질과 같은 상피 조직과 연관된 박테리아 균주로부터 선택된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 공생체인 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 소장으로부터 유래한 인간 공생 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 인간 소장으로부터 유래되고 그곳에서 외부 점액층과 연관된 인간 공생 박테리아로부터 유래된다.
본원에 기재된 EV의 공급원으로 사용될 수 있는 박테리아의 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 및/또는 균주)의 예가 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 및 실시예 10)에 제공된다. 일부 구현예에서, 박테리아 균주는 본원에 제공된 균주(표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 및 실시예 10)에 열거됨)에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 또는 99.9%의 서열 동일성을 갖는 게놈을 가진 박테리아 균주이다. 일부 구현예에서, EV는 종양영양성 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 면역자극 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 면역억제 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 면역조절 박테리아로부터 유래된다. 특정 구현예에서, EV는 본원에 제공된 박테리아 균주의 조합으로부터 생성된다. 일부 구현예에서, 조합은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개 박테리아 균주의 조합이다. 일부 구현예에서, 조합은 본원에 제공된 박테리아 균주(표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨), 및/또는 본원에 제공된 균주(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 또는 99.9%의 서열 동일성을 갖는 게놈을 가진 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 그람 음성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 그람 음성 박테리아는 네가티비쿠테스 강에 속한다. 네가티비쿠테스는 피리미큐테스 문의 유일한 이중막 구성원이기 때문에 독특한 종류의 미생물을 나타낸다. 이러한 혐기성 유기체는 환경에서 발견될 수 있으며, 인간의 구강 및 위장관의 정상적인 공생체이다. 이 유기체는 외막을 가지고 있기 때문에 이 강으로부터 유래된 EV 수율을 조사했다. 세포당 기준으로 이 박테리아는 많은 수의 소포체(10~150개 EV/세포)를 생성하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 유기체로부터 유래된 EV는 시험관내 분석에서 광범위하게 자극적이고 매우 강력하다. 여러 종양학 및 생체내 염증 모델에서 이의 치료적 응용에 대한 조사는 치료 가능성을 보여주었다. 네가티비쿠테스 강은 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 및 스포로무사세애 과를 포함한다. 네가티비쿠테스 강은 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 및 아시다미노코커스 속을 포함한다. 네가티비쿠테스의 예는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스틴, 및 프로피오노스포라 종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, EV는 그람 양성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 내기성혐기성 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 단일막 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 이중막 박테리아로부터 유래된다.
일부 경우에, EV는 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 라크노스피라세애; 또는 크리스텐세넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 파라박테로이데스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애 과의 박테리아로 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 탄네렐라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프레보텔라세애 과의 박테리아 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라세애 과의 박테리아로 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 실시예 10에서 평가된 박테리아 과로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 실시예 10에서 평가된 박테리아 속으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 실시예 10에서 평가된 박테리아 종으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 호기성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 혐기성 박테리아로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균을 포함한다. 일부 구현예에서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균을 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 호산성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 호알칼리성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 호중성 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 배양이 까다로운 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 배양이 까다롭지 않은 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 동결건조된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 17.5 또는 25 kGy로) 감마선 조사된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 UV 조사된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 50℃에서 2시간 동안 또는 90℃에서 2시간 동안) 열 비활성화된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 산 처리된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 2시간 동안 0.1 vvm으로) 산소 살포된다.
일부 구현예에서, EV는 동결건조된 EV이다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 17.5 또는 25 kGy로) 감마선 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 UV 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 50℃에서 2시간 동안 또는 90℃에서 2시간 동안) 열 비활성화된다.
일부 구현예에서, EV는 산처리된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 2시간 동안 0.1 vvm으로) 산소 살포된다.
성장 단계는 박테리아 및/또는 박테리아에 의해 생성되는 EV의 양 또는 특성에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 EV 제조 방법에서, EV는 예를 들어 성장 대수기의 시작시에, 대수기의 중간에, 및/또는 정지기 성장에 도달했을 때 배양물로부터 단리될 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 절대 혐기성 박테리아로부터 수득된다. 절대혐기성 박테리아의 예는 그람 음성 간균(박테로이데스, 프레보텔라, 포르피로모나스, 푸소박테리움, 빌로필라, 및 수테렐라 종의 속 포함), 그람 양성 구균(주로 펩토스트렙토코커스 종), 그람 양성 포자형성균(클로스트리디움 종), 포자를 형성하지 않는 간균(악티노마이세스, 프로피오니박테리움, 유박테리움, 락토바실러스, 및 비피도박테리움 종), 및 그람 음성 구균(주로 베일로넬라 종)을 포함한다. 일부 구현예에서, 절대혐기성 박테리아는 아가토바쿨룸, 아토포비움, 블라우티아, 부르크홀데리아, 디엘마, 론기카테나, 파라클로스트리디움, 투리시박터, 및 티제렐라로 이루어진 군으로부터 선택되는 속에 속한다.
네가티비쿠테스 강은 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 및 스포로무사세애 과를 포함한다. 네가티비쿠테스 강은 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 및 아시다미노코커스 속을 포함한다. 네가티비쿠테스의 예는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스티니, 및 프로피오노스포라 종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, EV는 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모다세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코카세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 스포로무사세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모나스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프로피오노스포라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코커스 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 메가스파에라 종 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 셀레노모나스 펠릭스 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아시다미노코커스 인테스티니 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 프로피오노스포라 종 박테리아로부터 유래된다.
클로스트리디아 강에 속하는 오실로스피라세애 과의 미생물은 척추동물의 일반적인 공생 유기체이다.
일부 구현예에서, EV는 클로스트리디아 강의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 패칼리박테리움 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 포우르니에렐라 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 해리플린티아 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아가토바쿨룸 속의 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 패칼리박테리움 프라우스니치(예를 들어, 패칼리박테리움 프라우스니치 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 포우르니에렐라 마실리엔시스(예를 들어, 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 해리플린티아 아세티스포라(예를 들어, 해리플린티아 아세티스포라 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV는 아가토바쿨룸 종(예를 들어, 아가토바쿨룸 종 균주 A) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 에셰리키아, 클렙시엘라, 락토바실러스, 시겔라, 및 스타필로코커스로 이루어진 군으로부터 선택되는 속의 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 블라우티아 마실리엔시스, 파라클로스트리디움 벤조엘리티쿰, 디엘마 파스티디오사, 론기카테나 카에시무리스, 락토코커스 락티스 크레모리스, 티제렐라 넥실리스, 훈가텔라 에플루비아, 클렙시엘라 쿼시뉴모니애 아종. 시밀리뉴모니애, 클렙시엘라 옥시토카, 및 베일로넬라 토베츠엔시스로 이루어진 군으로부터 선택되는 종으로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 프레보텔라 알벤시스, 프레보텔라 암니, 프레보텔라 베르겐시스, 프레보텔라 비비아, 프레보텔라 브레비스, 프레보텔라 브리안티, 프레보텔라 부카에, 프레보텔라 부칼리스, 프레보텔라 코프리, 프레보텔라 덴탈리스, 프레보텔라 덴티콜라, 프레보텔라 디시엔스, 프레보텔라 히스티콜라, 프레보텔라 인터메디아, 프레보텔라 마쿨로사, 프레보텔라 마시, 프레보텔라 멜라니오제니카, 프레보텔라 마이칸스, 프레보텔라 멀티포르미스, 프레보텔라 니그레센스, 프레보텔라 오랄리스, 프레보텔라 오리스, 프레보텔라 오울로룸, 프레보텔라 팔렌스, 프레보텔라 살리바에, 프레보텔라 스터코레아, 프레보텔라 탄너라에, 프레보텔라 티모넨시스, 프레보텔라 제주니, 프레보텔라 아우란티아카, 프레보텔라 바로니애, 프레보텔라 콜로란스, 프레보텔라 코포리스, 프레보텔라 덴타시니, 프레보텔라 에노에카, 프레보텔라 팔세니, 프레보텔라 푸스카, 프레보텔라 헤파리놀리티카, 프레보텔라 로에셰이, 프레보텔라 멀티사카리보락스, 프레보텔라 난세이엔시스, 프레보텔라 오리자에, 프레보텔라 팔루디비벤스, 프레보텔라 플레우리티디스, 프레보텔라 루미니콜라, 프레보텔라 사카롤리티카, 프레보텔라 스코포스, 프레보텔라 샤히, 프레보텔라 주글레오포르만스, 및 프레보텔라 베로랄리스로 이루어진 군으로부터 선택되는 프레보텔라 박테리아로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 표 3에 제공된 바와 같은 ATCC 기탁번호로 기탁된 박테리아 균주의 게놈 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 갖는 게놈 서열을 포함하는 박테리아 균주로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 표 3에 제공된 바와 같은 ATCC 기탁번호로 기탁된 박테리아 균주의 16S 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 갖는 16S 서열을 포함하는 박테리아 균주로부터 수득된다.
네가티비쿠테스 강은 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 및 스포로무사세애 과를 포함한다. 네가티비쿠테스 강은 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 및 아시다미노코커스 속을 포함한다. 네가티비쿠테스의 예는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스티니, 및 프로피오노스포라 종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
네가티비쿠테스 강은 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 및 스포로무사세애 과를 포함한다. 네가티비쿠테스 강은 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 및 아시다미노코커스 속을 포함한다. 네가티비쿠테스의 예는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스티니, 및 프로피오노스포라 종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 네가티비쿠테스 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬라세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모다세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코카세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 스포로무사세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 메가스파에라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프로피오노스포라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코커스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 메가스파에라 종 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나스 펠릭스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코커스 인테스티니 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프로피오노스포라 종 박테리아이다.
클로스트리디아 강에 속하는 오실로스피라세애 과의 미생물은 척추동물의 일반적인 공생 유기체이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 클로스트리디아 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 오실로스피라세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 패칼리박테리움 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 포우르니에렐라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 해리플린티아 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아가토바쿨룸 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 패칼리박테리움 프라우스니치(예를 들어, 패칼리박테리움 프라우스니치 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 포우르니에렐라 마실리엔시스(예를 들어, 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 해리플린티아 아세티스포라(예를 들어, 해리플린티아 아세티스포라 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아가토바쿨룸 종(예를 들어, 아가토바쿨룸 종 균주 A) 박테리아로이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 에셰리키아, 클렙시엘라, 락토바실러스, 시겔라, 및 스타필로코커스로 이루어진 군으로부터 선택되는 속의 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 블라우티아 마실리엔시스, 파라클로스트리디움 벤조엘리티쿰, 디엘마 파스티디오사, 론기카테나 카에시무리스, 락토코커스 락티스 크레모리스, 티제렐라 넥실리스, 훈가텔라 에플루비아, 클렙시엘라 쿼시뉴모니애 아종. 시밀리뉴모니애, 클렙시엘라 옥시토카, 및 베일로넬라 토베츠엔시스로 이루어진 군으로부터 선택되는 종이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프레보텔라 알벤시스, 프레보텔라 암니, 프레보텔라 베르겐시스, 프레보텔라 비비아(, 프레보텔라 브레비스, 프레보텔라 브리안티, 프레보텔라 부카에, 프레보텔라 부칼리스, 프레보텔라 코프리, 프레보텔라 덴탈리스, 프레보텔라 덴티콜라, 프레보텔라 디시엔스, 프레보텔라 히스티콜라, 프레보텔라 인터메디아, 프레보텔라 마쿨로사, 프레보텔라 마시, 프레보텔라 멜라니오제니카, 프레보텔라 마이칸스, 프레보텔라 멀티포르미스, 프레보텔라 니그레센스, 프레보텔라 오랄리스, 프레보텔라 오리스, 프레보텔라 오울로룸, 프레보텔라 팔렌스, 프레보텔라 살리바에, 프레보텔라 스터코레아, 프레보텔라 탄너라에, 프레보텔라 티모넨시스, 프레보텔라 제주니, 프레보텔라 아우란티아카, 프레보텔라 바로니애, 프레보텔라 콜로란스, 프레보텔라 코포리스, 프레보텔라 덴타시니, 프레보텔라 에노에카, 프레보텔라 팔세니, 프레보텔라 푸스카, 프레보텔라 헤파리놀리티카, 프레보텔라 로에셰이, 프레보텔라 멀티사카리보락스, 프레보텔라 난세이엔시스, 프레보텔라 오리자에, 프레보텔라 팔루디비벤스, 프레보텔라 플레우리티디스, 프레보텔라 루미니콜라, 프레보텔라 사카롤리티카, 프레보텔라 스코포스, 프레보텔라 샤히, 프레보텔라 주글레오포르만스, 및 프레보텔라 베로랄리스로 이루어진 군으로부터 선택되는 프레보텔라 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 표 3에 제공된 바와 같은 ATCC 기탁번호로 기탁된 박테리아 균주의 게놈 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 갖는 게놈 서열을 포함하는 박테리아 균주이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 표 3에 제공된 바와 같은 ATCC 기탁번호로 기탁된 박테리아 균주의 16S 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 갖는 16S 서열을 포함하는 박테리아 균주이다.
네가티비쿠테스 강은 베일로넬라세애, 셀레노모다세애, 아시다미노코카세애, 및 스포로무사세애 과를 포함한다. 네가티비쿠테스 강은 메가스파에라, 셀레노모나스, 프로피오노스포라, 및 아시다미노코커스 속을 포함한다. 네가티비쿠테스의 예는 메가스파에라 종, 셀레노모나스 펠릭스, 아시다미노코커스 인테스티니, 및 프로피오노스포라 종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 네가티비쿠테스 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬라세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모다세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코카세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 스포로무사세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 메가스파에라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프로피오노스포라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코커스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 메가스파에라 종 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나스 펠릭스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아시다미노코커스 인테스티니 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프로피오노스포라 종 박테리아이다.
클로스트리디아 강에 속하는 오실로스피라세애 과의 미생물은 척추동물의 일반적인 공생 유기체이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 클로스트리디아 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 오실로스피라세애 과에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 패칼리박테리움 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 포우르니에렐라 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 해리플린티아 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아가토바쿨룸 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 패칼리박테리움 프라우스니치(예를 들어, 패칼리박테리움 프라우스니치 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 포우르니에렐라 마실리엔시스(예를 들어, 포우르니에렐라 마실리엔시스 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 해리플린티아 아세티스포라(예를 들어, 해리플린티아 아세티스포라 균주 A) 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아가토바쿨룸 종(예를 들어, 아가토바쿨룸 종 균주 A) 박테리아로이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아가토바쿨룸 종의 균주이다. 일부 구현예에서, 아가토바쿨룸 종 균주는 아가토바쿨룸 종 균주 A(ATCC 기탁번호 PTA-125892)의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, CRISPR 서열)에 대해 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 아가토바쿨룸 종 균주는 아가토바쿨룸 종 균주 A(ATCC 기탁번호 PTA-125892)이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테로이디아 강[박테로이도타 문]에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테로이달레스 목의 박테리아이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 포르피로모노아다세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프레보텔라세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 박테로이디아 강의 박테리아이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 그람 음성으로 염색되는 박테로이디아 강의 박테리아이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는 박테로이디아 강의 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 클로스트리디아 강[피리미큐테스 문]의 박테리아이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 유박테리알레스 목에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 오실리스피라세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 라크노스피라세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 펩토스트렙토코카세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 클로스트리디알레스 패밀리 XIII/ 인서타에 세디스 41 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막(monoderm)인 클로스트리디아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 그람 음성으로 염색되는 클로스트리디아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 그람 양성으로 염색되는 클로스트리디아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 클로스트리디아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 단일막이고 박테리아가 그람 양성으로 염색되는, 클로스트리디아 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 네가티비쿠테스 강[피리미큐테스 문]에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬라레스 목에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬로세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나달레스 목에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 셀레노모나다세애 과의 박테리아이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 스포로무사세애 과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 네가티비쿠테스 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 EV가 수득되는 박테리아가 EV이고 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는 네가티비쿠테스 강의 박테리아로부터 유래한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 시너지스티아 강[시너지스토타 문]에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 시너지스탈레스 목에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 시너지스타세애과에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막인 시너지스티아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 그람 음성으로 염색되는 시너지스티아 강에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 박테리아의 세포 외피 구조가 이중막이고 박테리아가 그람 음성으로 염색되는, 시너지스티아 강에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 하나의 박테리아 균주, 예를 들어 본원에 제공된 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 하나의 박테리아 균주(예를 들어 본원에 제공된 균주) 또는 본원에 제공된 둘 이상의 균주로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 락토코커스 락티스 크레모리스 박테리아, 예를 들어 락토코커스 락티스 크레모리스 균주 A(ATCC 지정번호 PTA-125368)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 락토코커스 박테리아, 예를 들어 락토코커스 락티스 크레모리스 균주 A(ATCC 지정번호 PTA-125368)이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프레보텔라 박테리아, 예를 들어 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁번호 B 50329)의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프레보텔라 박테리아, 예를 들어 프레보텔라 균주 B 50329(NRRL 수탁번호 B 50329)이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 비피도박테리움 박테리아, 예를 들어 ATCC 지정번호 PTA-125097로 기탁된 비피도박테리움 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 비피도박테리움 박테리아, 예를 들어 ATCC 지정번호 PTA-125097로 기탁된 비피도박테리움 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬라 박테리아, 예를 들어 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 베일로넬라 박테리아, 예를 들어 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 루미노코커스 그나부스 박테리아이다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 루미노코커스 그나부스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126695로 기탁된 루미노코커스 그나부스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 메가스파에라 종 박테리아이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라 종 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라 종 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126770으로 기탁된 메가스파에라 종 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 푸르니에렐라 마시리엔시스 박테리아이다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 포우르니에렐라 마실리엔시스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 해리플린티아 아세티스포라 박테리아이다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 90%(또는 적어도 97%)의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아의 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 99%의 게놈, 16S 및/또는 CRISPR 서열 동일성을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 해리플린티아 아세티스포라 박테리아는 ATCC 지정번호 PTA-126694로 기탁된 해리플린티아 아세티스포라 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 대사산물을 생성하는 박테리아이고. 예를 들어, 박테리아는 부티레이트, 아이오신, 프로피오네이트, 또는 트립토판 대사산물을 생성한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 부티레이트를 생성하는 박테리아이다. 일부 구현예에서, 박테리아는 블라우티아; 크리스텐셀라; 코프라코커스; 유박테리움; 라크노스페라세아; 메가스파에라; 또는 로세부리아 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아이오신을 생성하는 박테리아이다. 일부 구현예에서, 박테리아는 비피도박테리움; 락토바실러스; 또는 올세넬라 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 프로피오네이트를 생성하는 박테리아이다. 일부 구현예에서, 박테리아는 아케르만시아; 박테리오데스; 디알리스터; 유박테리움; 메가스파에라; 파라박테리오데스; 프레보텔라; 루미노코커스; 또는 베일로넬라 속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 트립토판 대사산물을 생성하는 박테리아이다. 일부 구현예에서, 박테리아는 락토바실러스 또는 펩토스트렙토코커스속으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 히스톤 디아세틸라제 3(HDAC3)의 억제제를 생성하는 박테리아이다. 일부 구현예에서, 박테리아는 바리아트리커스 마실리엔시스, 패칼리박테리움 프라우스니치, 메가스파에라 마실리엔시스, 또는 로세부리아 인테스티날리스 종으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 박테리아는 알로이오코커스; 바실러스; 카테니박테리움; 코리네박테리움; 쿠프리아비두스; 엔하이드로박터; 엑시구오박테리움; 패칼리박테리움; 지오바실러스; 메틸로박테리움; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로테우스; 슈도모나스; 리조비움; 또는 스핑고모나스 속으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 큐티박테리움 속으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 큐티박테리움 아비둠 종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 락토바실러스 속으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 락토바실러스 가세리 종으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 디소스모박터 속으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 디소스모박터 웰비오니스 종으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 알로이오코커스; 바실러스; 카테니박테리움; 코리네박테리움; 쿠프리아비두스; 엔하이드로박터; 엑시구오박테리움; 패칼리박테리움; 지오바실러스; 메틸로박테리움; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로테우스; 슈도모나스; 리조비움; 또는 스핑고모나스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 큐티박테리움 속에 속한다. 일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 큐티박테리움 아비둠 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 류코노스톡 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 락토바실러스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아케르만시아; 바실러스; 블라우티아; 쿠프리아비두스; 엔하이드로박터; 패칼리박테리움; 락토바실러스; 락토코커스; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로피오니박테리움; 프로테우스; 리조비움; 또는 스트렙토코커스 속에 속한다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 류코노스톡 홀잡펠리이 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 아케르만시아 무시니필라; 쿠프리아비두스 메탈리두란스; 패칼리박테리움 프라우스니치; 락토바실러스 카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 파라카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 람노서스; 락토바실러스 사케이; 또는 스트렙토코커스 피오게네스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 락토바실러스 카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 파라카세이; 락토바실러스 플란타룸; 락토바실러스 람노서스; 또는 락토바실러스 사케이 박테리아이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 아시네토박터; 데이노코쿠스; 헬리코박터; 로도코쿠스; 와이셀라 시바리아; 알로이오코커스; 아토포비움; 카테니박테리움; 코리네박테리움; 엑시구오박테리움; 지오바실러스; 메틸로박테리움; 마이크로코커스; 모르가넬라; 프로테우스; 리조비움; 로티아; 스핑고모나스; 스핑고모나스; 및 류코노스톡으로 이루어진 군으로부터 선택되는 속으로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 아시네토박터 바우마니이; 데이노코쿠스 라디오두란스; 헬리코박터 파일로리; 로도코쿠스 에퀴; 와이셀라 시바리아; 알로이오코커스 오타이티스; 아토포비움 바지나에; 카테니박테리움 미투오카이; 코리네박테리움 글루타미쿰; 엑시구오박테리움 아우란티아쿰; 지오바실러스 스테아로모필러스; 메틸로박테리움 젓갈리; 마이크로코커스 루테우스; 모르가넬라 모르가니이; 프로테우스 미라빌리스; 리조비움 레구미노사룸; 로티아 아마래; 스핑고모나스 파우시모빌리스; 및 스핑고모나스 코린스로 이루어진 군으로부터 선택되는 종으로부터 수득된다.
일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 홀잡펠리이 박테리아로부터 유래된다. 일부 구현예에서, EV는 류코노스톡 홀잡펠리이 Ceb-kc-003(KCCM11830P) 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, 또는 NCIMB 43387의 균주로부터 유래된) 메가스파에라 종 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 42787, NCIMB 43388, 또는 NCIMB 43389의 균주로부터 유래된) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 수탁번호 DSM 26228의 균주로부터의) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 42382의 균주로부터의) 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 (예를 들어, 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주로부터의) 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 또는 이의 유도체이다. 예를 들어, WO 2020/120714 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주로부터 유래된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43388 또는 NCIMB 43389의 균주이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 균주 또는 이의 유도체이다. 예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 균주의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42787로 기탁된 균주이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, 또는 NCIMB 43387의 균주로부터의 메가스파에라 종 박테리아 또는 이의 유도체이다. 예를 들어, WO 2020/120714 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386, 또는 NCIMB 43387의 균주로부터 유래된 메가스파에라 종의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 종 박테리아는 수탁번호 NCIMB 43385, NCIMB 43386 또는 NCIMB 43387의 균주이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아 또는 이의 유도체이다.　예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5% 서열 동일성, 적어도 99.6% 서열 동일성, 적어도 99.7% 서열 동일성, 적어도 99.8% 서열 동일성, 적어도 99.9% 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 파라박테로이데스 디스타소니스 박테리아는 수탁번호 NCIMB 42382로 기탁된 균주이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아 또는 이의 유도체이다.　예를 들어, WO 2018/229216 참조. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아의 뉴클레오티드 서열(예를 들어, 게놈 서열, 16S 서열, 및/또는 CRISPR 서열)에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 99.5%의 서열 동일성, 적어도 99.6%의 서열 동일성, 적어도 99.7%의 서열 동일성, 적어도 99.8%의 서열 동일성, 적어도 99.9%의 서열 동일성)을 포함하는 균주이다. 일부 구현예에서, 메가스파에라 마실리엔시스 박테리아는 수탁번호 DSM 26228로 기탁된 균주이다.
일부 구현예에서, EV가 수득되는 박테리아는 독성 또는 기타 부작용을 감소시키도록 변형(예를 들어 조작)되고/되거나, (예를 들어, 내산성, 점막부착성 및/또는 침투성 및/또는 담즙산, 소화효소에 대한 내성, 항균펩티드 및/또는 항체 중화에 대한 내성을 개선함으로써) 전달(예를 들어, 경구 전달)을 향상시키도록 변형되고/되거나, 목적하는 세포 유형(예를 들어, M세포, 배상세포, 장세포, 수지상 세포, 대식세포)을 표적화하도록 변형되고/되거나, (예를 들어, 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여) EV의 면역조절 및/또는 치료 효과를 향상시키도록 변형되고/되거나, (예를 들어, 다당류, 선모, 핌브리아, 부착소의 변형된 생성을 통해) EV에 의한 면역 활성화 또는 억제를 향상시키도록 변형된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 조작된 박테리아는 EV 제조의 개선(예를 들어, 더 높은 산소 내성, 안정성, 개선된 동결-해동 내성, 더 짧은 생성 시간)을 위해 변형된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 기재된 조작된 박테리아는 박테리아 염색체 또는 내인성 플라스미드 및/또는 하나 이상의 외래 플라스미드 상에 함유된 하나 이상의 뉴클레오티드의 삽입, 결실, 전위, 또는 치환, 또는 이들의 임의의 조합과 같은 하나 이상의 유전자 변화를 보유하는 박테리아를 포함하며, 여기서 유전자 변화는 하나 이상의 유전자의 과발현 및/또는 과소발현을 초래할 수 있다. 조작된 박테리아는 부위-지정 돌연변이유발, 트랜스포존 돌연변이유발, 녹아웃, 녹인, 중합효소 연쇄 반응 돌연변이유발, 화학적 돌연변이유발, 자외선 돌연변이유발, 형질전환(화학적 또는 전기천공법), 파지 형질도입, 유도 진화, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는(이에 한정되지 않음) 임의의 기술을 사용하여 생성될 수 있다.
[표 1]
[표 2]
[표 3]
[표 4]
변형된 EV
일부 양태에서, 본원에 기재된 EV는 치료 모이어티를 포함하고/하거나, 이에 연결되고/되거나, 이에 의해 결합되도록 변형된다.
일부 구현예에서, 치료 모이어티는 암-특이적 모이어티이다. 일부 구현예에서, 암-특이적 모이어티는 암세포에 대한 결합 특이성(예를 들어, 암-특이적 항원에 대한 결합 특이성)을 갖는다. 일부 구현예에서, 암-특이적 모이어티는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 암-특이적 모이어티는 T 세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 암-특이적 모이어티는 암세포의 표면에 발현된 수용체에 대한 리간드 또는 이의 수용체-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 암-특이적 모이어티는 2개의 부분, 즉 박테리아에 결합 및/또는 연결되는 제1 부분 및 (예를 들어, 암-특이적 항원에 대한 결합 특이성을 가짐으로써) 암세포에 결합할 수 있는 제2 부분을 갖는 이분(bipartite) 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 제1 부분은 PGRP와 같은 전장 펩티도글리칸 인식 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, 제1 부분은 (예를 들어, 박테리아 항원에 대한 결합 특이성을 가짐으로써) EV에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 부분은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 부분은 T 세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 부분은 암세포의 표면에 발현된 수용체에 대한 리간드 또는 이의 수용체-결합 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 암-특이적 모이어티와 EV의 공동 투여(조합 또는 개별 투여)는 암 세포에 대한 EV의 표적화를 증가시킨다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 자성 및/또는 상자성 모이어티(예를 들어, 자성 비드)를 포함하고/하거나, 이에 연결되고/되거나, 이에 의해 결합되도록 조작된다. 일부 구현예에서, 자성 및/또는 상자성 모이어티는 박테리아에 의해 구성되고/되거나 박테리아에 직접 연결된다. 일부 구현예에서, 자성 및/또는 상자성 모이어티는 EV에 결합하는 EV-결합 모이어티에 연결되고/되거나 이의 일부이다. 일부 구현예에서, EV-결합 모이어티는 PGRP와 같은 전장 펩티도글리칸 인식 단백질 또는 이의 단편이다. 일부 구현예에서, EV-결합 모이어티는 (예를 들어, 박테리아 항원에 대한 결합 특이성을 가짐으로써) EV에 대한 결합 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, EV-결합 모이어티는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, EV-결합 모이어티는 T 세포 수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다. 일부 구현예에서, EV-결합 모이어티는 암 세포의 표면에 발현된 수용체에 대한 리간드 또는 이의 수용체 결합 단편을 포함한다. 특정 구현예에서, 자성 및/또는 상자성 모이어티와 EV의 공동-투여(조합 또는 개별 투여)는 (예를 들어, 암세포 및/또는 암세포가 존재하는 대상체의 부분에 대한) EV의 표적화를 증가시키기 위해 사용될 수 있다.
박테리아 세포외 소포체(EV)의 생성
분비된 EV. 특정 양태에서, 본원에 기재된 박테리아로부터 유래된 EV(예를 들어, 분비된 EV(smEV))는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 제조된다.
일부 구현예에서, EV(예를 들어, 분비된 EV(smEV))는 EV 정제 단계 없이 제조된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 박테리아는 EV를 온전하게 남겨두는 방법을 사용하여 사멸되고, EV를 포함하여 생성된 박테리아 성분은 본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 항생제를 사용하여(예를 들어, 본원에 기재된 항생제를 사용하여) 사멸된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 UV 조사를 사용하여 사멸된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 열에 의해 사멸된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 EV는 하나 이상의 다른 박테리아 성분으로부터 정제된다. 박테리아로부터 EV를 정제하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 일부 구현예에서, EV는 문헌[S. Bin Park, et al. PLoS ONE. 6(3):e17629 (2011)] 또는 문헌[G. Norheim, et al. PLoS ONE. 10(9): e0134353 (2015)] 또는 문헌[Jeppesen, et al. Cell 177:428 (2019)]에 기재된 방법을 사용하여 박테리아 배양물로부터 제조되며, 각각의 문헌은 전체가 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 박테리아를 높은 광학 밀도로 배양한 다음, (예를 들어, 4℃에서 30분 동안 10,000 x g로, 4℃에서 15분 동안 15,500 x g로) 원심분리하여 박테리아를 펠릿화한다. 일부 구현예에서, 이어서 배양 상청액을 필터(예를 들어, 0.22 μm 필터)에 통과시켜 온전한 박테리아 세포를 배제한다. 일부 구현예에서, 이어서 상청액을 접선 유동 여과 처리하고, 그 동안 상청액이 농축되고, 100 kDa 미만의 종은 제거되고, 배지는 PBS로 부분적으로 교환된다. 일부 구현예에서, 여과된 상청액을 (예를 들어, 4℃에서 1~3시간 동안 100,000~150,000 x g로, 4℃에서 1~3시간 동안 200,000 x g로) 원심분리하여 박테리아 EV를 펠릿화한다. 일부 구현예에서, 생성된 EV 펠릿(예를 들어, PBS 중)을 재현탁하고 재현탁된 EV를 Optiprep(요오딕사놀) 구배 또는 구배(예를 들어, 30~60% 불연속 구배, 0~45% 불연속 구배)에 적용한 다음 원심분리(예를 들어, 4℃에서 4~20시간 동안 200,000 x g로)함으로써 EV를 추가 정제한다. EV 밴드를 수집하고, PBS로 희석하고, 원심분리하여 EV를 펠릿화할 수 있다(예를 들어, 4℃에서 3시간 동안 150,000 x g로, 4℃에서 1시간 동안 200,000 x g로). 정제된 EV는 사용할 때까지 예를 들어 -80℃ 또는 -20℃에서 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, EV는 DNase 및/또는 프로테이나제 K로 처리되어 추가로 정제된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 박테리아의 배양물을 4℃에서 20~40분 동안 11,000 x g로 원심분리하여 박테리아를 펠릿화할 수 있다. 배양 상청액을 0.22 μm 필터에 통과시켜 온전한 박테리아 세포를 배제할 수 있다. 여과된 상청액은 이어서, 황산암모늄 침전, 초원심분리, 또는 여과를 포함할 수 있는(이에 한정되지 않음) 방법을 사용하여 농축될 수 있다. 예를 들어, 황산암모늄 침전의 경우, 4℃에서 교반하면서 1.5~3 M 황산암모늄을 여과된 상청액에 천천히 첨가할 수 있다. 침전물을 4℃에서 8~48시간 동안 인큐베이션한 다음, 4℃에서 20~40분 동안 11,000 x g로 원심분리할 수 있다. 생성된 펠릿에는 박테리아 EV 및 기타 잔해가 함유되어 있다. 초원심분리를 사용하여, 여과된 상청액을 4℃에서 1~16시간 동안 100,000~200,000 x g로 원심분리할 수 있다. 이 원심분리의 펠릿에는 박테리아 EV 및 거대 단백질 복합체와 같은 기타 잔해가 함유되어 있다. 일부 구현예에서, Amicon Ultra 스핀 필터의 사용 또는 접선 유동 여과와 같은 여과 기술을 이용하여, 50 또는 100 kDa를 초과하는 분자량의 종을 보유하도록 상청액을 여과할 수 있다.
대안적으로, 예를 들어 생물반응기를 교번 접선 유동(ATF) 시스템(예를 들어, Repligen의 XCell ATF)에 연결하여, 성장 중에 연속적으로 또는 성장 중 선택된 시점에 박테리아 배양물로부터 EV를 수득할 수 있다. ATF 시스템은 온전한 세포(>0.22 μm)를 생물반응기 내에 보유하고, 더 작은 성분들(예를 들어, EV, 유리 단백질)은 수집을 위해 필터를 통과할 수 있게 한다. 예를 들어, 시스템은 0.22 μm 미만의 여과액이 이후 100 kDa의 제2 필터를 통과하여 0.22 μm 내지 100 kDa의 EV와 같은 종은 수집되고 100 kDa보다 작은 종은 다시 생물반응기 내로 펌핑되도록 구성될 수 있다. 대안적으로, 시스템은 배양물이 성장하는 동안 생물반응기의 배지가 보충 및/또는 변형되도록 구성될 수 있다. 이러한 방법으로 수집된 EV는 여과된 상청액에 대해 전술한 바와 같이 초원심분리 또는 여과에 의해 추가로 정제 및/또는 농축될 수 있다.
본원에 제공된 방법에 의해 수득된 EV는 수크로스 구배 또는 Optiprep 구배의 사용을 포함할 수 있는(이에 한정되지 않음) 방법을 사용하여, 크기 기반 컬럼 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 및 구배 초원심분리에 의해 추가로 정제될 수 있다. 간략히, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, 수크로스 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0에 재현탁한다. 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, Amicon Ultra 컬럼을 사용하여 농축액을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0으로 완충제 교환한다. 샘플을 35~60% 불연속 수크로스 구배에 적용하고 4℃에서 3~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다. 간략히 설명하면, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, Optiprep 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 PBS에 재현탁하고 3 부피의 60% Optiprep을 샘플에 첨가한다. 일부 구현예에서, 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, 60% Optiprep을 사용하여 농축액을 35% Optiprep의 최종 농도로 희석한다. 샘플을 0~45% 불연속 Optiprep 구배에 적용하고, 4℃에서 3~24시간 동안, 예를 들어 4℃에서 4~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다.
일부 구현예에서, EV 제제의 무균성 및 단리를 확인하기 위해, EV를 시험 중인 박테리아의 통상적인 배양에 사용되는 한천 배지에 연속적으로 희석하고, 통상적인 조건을 사용하여 인큐베이션한다. 비멸균 제제를 0.22 um 필터에 통과시켜 온전한 세포를 배제한다. 순도를 더 높이기 위해, 단리된 EV는 DNase 또는 프로테이나제 K로 처리될 수 있다.
일부 구현예에서, 생체내 주사에 사용되는 EV의 제조를 위해, 정제된 EV는 이전에 설명된 바와 같이 처리된다(G. Norheim, et al. PLoS ONE. 10(9): e0134353 (2015)). 간략히, 수크로스 구배 원심분리 후, EV를 함유하는 밴드를 3% 수크로스를 함유하는 용액 또는 당업자에게 알려진 생체내 주사에 적합한 다른 용액 중에 50 μg/mL의 최종 농도로 재현탁한다. 이 용액은 또한 보조제, 예를 들어 0~0.5%(w/v) 농도의 수산화알루미늄을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 생체내 주사에 사용되는 EV의 제조를 위해, PBS 중 EV는 0.22 μm 미만까지 멸균-여과된다.
특정 구현예에서, 샘플을 추가 시험에 적합하게 하기 위해(예를 들어, TEM 이미징 또는 시험관내 분석 전에 수크로스를 제거하기 위해), 여과(예를 들어, Amicon Ultra 컬럼), 투석, 또는 초원심분리(200,000 x g, 3시간 이상, 4℃), 및 재현탁을 사용하여 샘플을 PBS 또는 30 mM Tris, pH 8.0으로 완충액 교환한다.
일부 구현예에서, EV 제제의 무균성은 EV의 생성에 사용된 박테리아의 표준 배양을 위해 사용되는 한천 배지에 EV의 일부를 플레이팅하고 표준 조건을 사용하여 인큐베이션함으로써 확인될 수 있다.
일부 구현예에서, 선택된 EV는 크로마토그래피 및 EV 상의 결합 표면 모이어티에 의해 단리되고 농축된다. 일부 구현예에서, 선택된 EV는 친화성 시약, 화학 염료, 재조합 단백질을 사용하는 방법 또는 당업자에게 알려진 다른 방법으로 형광 세포 분류에 의해 단리 및/또는 농축된다.
일부 구현예에서, EV는 예를 들어 문헌[Jeppesen, et al. Cell 177:428 (2019)]에 기재된 바와 같이 분석된다.
일부 구현예에서, EV는 동결건조된 EV이다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 17.5 또는 25 kGy로) 감마선 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 UV 조사된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 50℃에서 2시간 동안 또는 90℃에서 2시간 동안) 열 비활성화된다.
일부 구현예에서, EV는 산처리된다.
일부 구현예에서, EV는 (예를 들어, 2시간 동안 0.1 vvm으로) 산소 살포된다.
성장 단계는 박테리아 및/또는 박테리아에 의해 생성되는 EV의 양 또는 특성에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 본원에 제공된 EV 제조 방법에서, EV는 예를 들어 성장 대수기의 시작시에, 대수기의 중간에, 및/또는 정지기 성장에 도달했을 때 배양물로부터 단리될 수 있다.
성장 환경(예를 들어, 배양 조건)은 박테리아에 의해 생성되는 EV의 양에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, EV의 수율은 표 5에 제공된 바와 같이 EV 유도제에 의해 증가될 수 있다.
[표 5]
본원에 제공된 EV 제조 방법에서, 방법은 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하기 전에 박테리아 배양물을 EV 유도제에 노출시키는 단계를 임의로 포함할 수 있다. 박테리아의 배양물은 성장 대수기의 시작시에, 대수기의 중간에, 및/또는 정지기 성장에 도달했을 때 EV 유도제에 노출될 수 있다. ‘
처리된 EV 특정 양태에서, 본원에 기재된 EV(예컨대, 처리된 EV(pmEV))는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 제조(예를 들어, 인공적으로 제조)된다.
일부 구현예에서, pmEV는 pmEV 정제 단계 없이 제조된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 pmEV가 방출되는 박테리아는 박테리아 pmEV를 온전하게 남겨두는 방법을 사용하여 사멸되고, pmEV를 포함하여 생성된 박테리아 성분은 본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 항생제를 사용하여(예를 들어, 본원에 기재된 항생제를 사용하여) 사멸된다. 일부 구현예에서, 박테리아는 UV 조사를 사용하여 사멸된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 pmEV는 하나 이상의 다른 박테리아 성분으로부터 정제된다. 박테리아(및 임의로, 다른 박테리아 성분)로부터 pmEV를 정제하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 일부 구현예에서, pmEV는 문헌[Thein, et al. (J. Proteome Res. 9(12):6135-6147 (2010))] 또는 문헌[Sandrini, et al. (Bio-protocol 4(21): e1287 (2014))]에 기재된 방법을 사용하여 박테리아 배양물로부터 제조되며, 각각의 문헌은 전체가 본원에 참조로 포함된다. 일부 구현예에서, 박테리아를 높은 광학 밀도로 배양한 다음, (예를 들어, 실온 또는 4℃에서 10~15분 동안 10,000~15,000 x g로) 원심분리하여 박테리아를 펠릿화한다. 일부 구현예에서, 상청액을 버리고 세포 펠릿을 -80℃에서 동결시킨다. 일부 구현예에서, 세포 펠릿을 얼음 위에서 해동하고, 1 mg/mL의 DLase I이 보충된 100 mM Tris-HCl, pH 7.5에 재현탁한다. 일부 구현예에서, 제조사가 권장하는 조건에서 Emulsiflex C-3(Avestin, Inc.)를 사용하여 세포를 용해한다. 일부 구현예에서, 잔해 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 15분 동안 10,000 x g로 원심분리하여 펠릿화한다. 일부 구현예에서, 이어서 상청액을 4℃에서 1시간 동안 120,000 x g로 원심분리한다. 일부 구현예에서, 펠릿을 빙냉 100 mM 탄산소듐, pH 11에 재현탁하고, 4℃에서 1시간 동안 교반하면서 인큐베이션한 다음, 4℃에서 1시간 동안 120,000 x g로 원심분리한다. 일부 구현예에서, 펠릿을 100 mM Tris-HCl, pH 7.5에 재현탁하고, 4℃에서 20분 동안 120,000 x g로 다시 원심분리한 다음, 0.1 M Tris-HCl, pH 7.5 또는 PBS에 재현탁한다. 일부 구현예에서, 샘플은 -20℃에서 보관된다.
특정 양태에서, pmEV는 문헌[Sandrini et al, 2014]에서 채택한 방법에 의해 수득된다. 일부 구현예에서, 박테리아 배양물을 실온 또는 4℃에서 10~15분 동안 10,000~15,500 x g로 원심분리한다. 일부 구현예에서, 세포 펠릿을 -80℃에서 동결시키고 상청액을 버린다. 일부 구현예에서, 세포 펠릿을 얼음 위에서 해동하고, 0.1 mg/mL의 리소자임이 보충된 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA에 재현탁한다. 일부 구현예에서, 샘플을 실온 또는 37℃에서 30분 동안 혼합하면서 인큐베이션한다. 일부 구현예에서, 샘플을 -80℃에서 재동결시키고 얼음 위에서 다시 해동한다. 일부 구현예에서, 1.6 mg/mL의 최종 농도로 DNase I을 첨가하고, 100 mM의 최종 농도로 MgCl2를 첨가한다. 일부 구현예에서, 30초 ON 및 30초 OFF의 7회 사이클로 QSonica Q500 초음파처리기를 사용하여 샘플을 초음파처리한다. 일부 구현예에서, 잔해 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 15분 동안 10,000 x g로 원심분리하여 펠릿화한다. 일부 구현예에서, 이어서 상청액을 4℃에서 15분 동안 110,000 x g로 원심분리한다. 일부 구현예에서, 펠릿을 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% Triton X-100에 재현탁하고 실온에서 혼합하면서 30~60분간 인큐베이션한다. 일부 구현예에서, 샘플을 4℃에서 15분 동안 110,000 x g로 원심분리한다. 일부 구현예에서, 펠릿은 PBS에 재현탁되고 -20℃에서 보관된다.
특정 양태에서, 본원에 기재된, 단리된 박테리아 pmEV를 형성하는(예를 들어, 제조하는) 방법은 (a) 박테리아 배양물을 원심분리하여 제1 펠릿 및 제1 상청액을 형성하는 단계(제1 펠릿은 세포를 포함함); (b) 제1 상청액을 버리는 단계; (c) 제1 펠릿을 용액에 재현탁하는 단계; (d) 세포를 용해하는 단계; (e) 용해된 세포를 원심분리하여 제2 펠릿 및 제2 상청액을 형성하는 단계; (f) 제2 펠릿을 버리고 제2 상청액을 원심분리하여 제3 펠릿 및 제3 상청액을 형성하는 단계; (g) 제3 상청액을 버리고 제3 펠릿을 제2 용액에 재현탁하여 단리된 박테리아 pmEV를 형성하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 이 방법은 (h) 단계 (g)의 용액을 원심분리하여 제4 펠릿 및 제4 상청액을 형성하는 단계; (i) 제4 상청액을 버리고 제4 펠릿을 제3 용액에 재현탁하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 (j) 단계 (i)의 용액을 원심분리하여 제5 펠릿 및 제5 상청액을 형성하는 단계; 및 (k) 제5 상청액을 버리고 제5 펠릿을 제4 용액에 재현탁하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 단계 (a)의 원심분리는 10,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (a)의 원심분리는 10~15분 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (a)의 원심분리는 4℃ 또는 실온에서 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (b)는 제1 펠릿을 -80℃에서 동결시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (c)의 용액은 1 mg/ml의 DNase I이 보충된 100 mM Tris-HCl, pH 7.5이다. 일부 구현예에서, 단계 (c)의 용액은 0.1 mg/ml의 리소자임이 보충된 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA이다. 일부 구현예에서, 단계 (c)는 37℃ 또는 실온에서 30분 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (c)는 제1 펠릿을 -80℃에서 동결시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (c)는 1.6 mg/ml의 최종 농도로 DNase I을 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (c)는 100 mM의 최종 농도로 MgCl2를 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 균질화를 통해 단계 (d)에서 용해된다. 일부 구현예에서, 세포는 emulsiflex C3를 통해 단계 (d)에서 용해된다. 일부 구현예에서, 세포는 초음파처리를 통해 단계 (d)에서 용해된다. 일부 구현예에서, 세포는 7회 사이클로 초음파처리되고, 각 사이클은 초음파처리가 실행되는 30초와 초음파처리가 실행되지 않는 30초로 구성된다. 일부 구현예에서, 단계 (e)의 원심분리는 10,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (e)의 원심분리는 15분 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (e)의 원심분리는 4℃ 또는 실온에서 수행된다.
일부 구현예에서, 단계 (f)의 원심분리는 120,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (f)의 원심분리는 110,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (f)의 원심분리는 1시간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (f)의 원심분리는 15분 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (f)의 원심분리는 4℃ 또는 실온에서 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (g)의 제2 용액은 100 mM 탄산소듐, pH 11이다. 일부 구현예에서, 단계 (g)의 제2 용액은 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 2% triton X-100이다. 일부 구현예에서, 단계 (g)는 용액을 4℃에서 1시간 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (g)는 용액을 실온에서 30~60분 동안 인큐베이션하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단계 (h)의 원심분리는 120,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (h)의 원심분리는 110,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (h)의 원심분리는 1시간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (h)의 원심분리는 15분 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (h)의 원심분리는 4℃ 또는 실온에서 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (i)의 제3 용액은 100 mM Tris-HCl, pH 7.5이다. 일부 구현예에서, 단계 (i)의 제3 용액은 PBS이다. 일부 구현예에서, 단계 (j)의 원심분리는 120,000 x g로 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (j)의 원심분리는 20분 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (j)의 원심분리는 4℃ 또는 실온에서 수행된다. 일부 구현예에서, 단계 (k)의 제4 용액은 100 mM Tris-HCl, pH 7.5 또는 PBS이다.
본원에 제공된 방법에 의해 수득된 pmEV는 수크로스 구배 또는 Optiprep 구배의 사용을 포함할 수 있는(이에 한정되지 않음) 방법을 사용하여, 크기 기반 컬럼 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 및 구배 초원심분리에 의해 추가로 정제될 수 있다. 간략히 설명하면, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, 수크로스 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0에 재현탁한다. 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, Amicon Ultra 컬럼을 사용하여 농축액을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0으로 완충제 교환한다. 샘플을 35~60% 불연속 수크로스 구배에 적용하고 4℃에서 3~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다. 간략히 설명하면, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, Optiprep 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 PBS 중 35% Optiprep에 재현탁한다. 일부 구현예에서, 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, 60% Optiprep을 사용하여 농축액을 35% Optiprep의 최종 농도로 희석한다. 샘플을 35~60% 불연속 수크로스 구배에 적용하고 4℃에서 3~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다.
일부 구현예에서, pmEV 제제의 무균성 및 단리를 확인하기 위해, pmEV를 시험 중인 박테리아의 통상적인 배양에 사용되는 한천 배지에 연속적으로 희석하고, 통상적인 조건을 사용하여 인큐베이션한다. 비멸균 제제를 0.22 μm 필터에 통과시켜 온전한 세포를 배제한다. 순도를 더 높이기 위해, 단리된 pmEV는 DNase 또는 프로테이나제 K로 처리될 수 있다.
일부 구현예에서, pmEV 제제의 무균성은 pmEV의 생성에 사용된 박테리아의 표준 배양을 위해 사용되는 한천 배지에 pmEV의 일부를 플레이팅하고 표준 조건을 사용하여 인큐베이션함으로써 확인될 수 있다.
일부 구현예에서, 선택된 pmEV는 크로마토그래피 및 pmEV 상의 결합 표면 모이어티에 의해 단리되고 농축된다. 일부 구현예에서, 선택된 pmEV는 친화성 시약, 화학 염료, 재조합 단백질을 사용하는 방법 또는 당업자에게 알려진 다른 방법으로 형광 세포 분류에 의해 단리 및/또는 농축된다.
일부 구현예에서, pmEV는 예를 들어 문헌[Jeppesen, et al. Cell 177:428 (2019)]에 기재된 바와 같이 분석된다.
일부 구현예에서, pmEV는 동결건조된다.
일부 구현예에서, pmEV는 (예를 들어, 17.5 또는 25 kGy로) 감마선 조사된다.
일부 구현예에서, pmEV는 UV 조사된다.
일부 구현예에서, pmEV는 (예를 들어, 50℃에서 2시간 동안 또는 90℃에서 2시간 동안) 열 비활성화된다.
일부 구현예에서, pmEV는 산처리된다.
일부 구현예에서, pmEV는 (예를 들어, 2시간 동안 0.1 vvm으로) 산소 살포된다.
성장 단계는 박테리아의 양 또는 특성에 영향을 미칠 수 있다. 본원에 제공된 pmEV 제조 방법에서, pmEV는 예를 들어 성장 대수기의 시작시에, 대수기의 중간에, 및/또는 정지기 성장에 도달했을 때 배양물로부터 단리될 수 있다.
용액 및 건조 형태
본 개시는 EV(예를 들어, 본원에 기재된 EV 및/또는 EV의 조합)를 포함하는 용액(예를 들어, 액체 혼합물)을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 용액은 EV, 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함한다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 용액은 EV, 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함한다. 다른 예로서, 일부 구현예에서, 용액은 EV, 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함한다.
본 개시는 용액을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 또는 PVP-K30을 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 임의로 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린과 같은 추가 성분을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 용액은 EV의 액상 제제, 및 증량제를 포함하는 부형제, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 스톡으로부터 유래된 부형제를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 용액은 EV를 함유하는 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물(예컨대, 상청액) 또는 잔류물로부터 EV를 단리하여 수득됨) 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함하고, 예를 들어, EV를 함유하는 액상 제제는 증량제를 포함하는 부형제 스톡, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 부형제 스톡과 조합된다.
(예를 들어, 박테리아로부터 유래된) 세포외 소포체(EV)를 함유하는 "건조 형태"는 EV를 함유하는 용액을 건조하여 생성된 생성물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 건조는 냉동건조(동결건조) 또는 분무건조에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 분말이란 건조 형태 유형을 말하며, 동결건조 분말을 포함하되 분무건조와 같은 방법으로 수득되는 분무건조 분말과 같은 분말을 포함한다.
냉동건조(동결건조)를 수행하여 생성된 생성물은 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 동결건조물은 건조 형태 유형을 말하며, 동결건조 분말 및 동결건조 케이크를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결건조 케이크는 동결건조 분말을 생성하기 위해 밀링(예를 들어, 분쇄)된다. 밀링은 고체의 기계적 크기 감소를 의미한다. 분쇄는 예를 들어 건조 형태에서 수행할 수 있는 밀링의 유형이다. 예를 들어 문헌[Seibert et al., “MILLING OPERATIONS IN THE PHARMACEUTICAL INDUSTRY” in Chemical Engineering in the Pharmaceutical Industry: R&D to Manufacturing, Edited by David J. am Ende (2011)] 참조.
본 개시는 또한 일부 구현예에서 EV(예를 들어, 본원에 기재된 EV 및/또는 EV의 조합) 및 부형제를 포함하는 동결건조물과 같은 건조 형태를 제공한다. 예를 들어, 건조 형태는 EV, 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함할 수 있다. 다른 예로서, 건조 형태는 EV, 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함할 수 있다. 다른 예로서, 건조 형태는 EV, 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, EV는 예를 들어 용액을 제조하기 위해 증량제 및/또는 동결건조 보호제를 포함하는 부형제와 조합된다. 일부 구현예에서, 용액은 건조된다. 생성된 건조 형태(예를 들어, 동결건조물)는 EV 및 부형제의 성분, 예를 들어 증량제 및/또는 동결보호제(예를 들어, 건조 형태)를 함유한다.
본 개시는 또한 EV의 건조 형태 및 부형제를 제공한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 예를 들어 동결건조 케이크 또는 동결건조 분말과 같은 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 예를 들어 분무건조 분말 또는 동결건조 분말과 같은 분말이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 또는 PVP-K30을 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린과 같은 추가 성분을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 건조 형태는 EV, 및 부형제, 예를 들어 증량제를 포함하는 부형제, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 스톡으로부터 유래된 부형제를 함유한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 6% 미만(또는 약 5% 미만)의 수분 함량을 갖는다(예를 들어, Karl Fischer 적정으로 측정됨). 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 10% 내지 약 80%(중량 기준)의 부형제, 예를 들어 증량제를 포함하는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 10% 내지 약 80%(중량 기준)의 부형제, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 스톡으로부터 유래된 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형분의 약 1% 내지 약 99%를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 적어도 약 1e10개의 입자를 갖는다(예를 들어, NTA와 같이 mg당 입자로 측정됨). 일부 구현예에서, 건조 형태의 입자는 건조 형태로부터의 재현탁(예를 들어, 탈이온수에서의 재현탁) 후 약 130 nm 내지 약 300 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는다(예를 들어, 동적 광 산란에 의해 측정됨).
일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 전체 박테리아(예를 들어, 생 박테리아, 사멸된 박테리아, 및/또는 약독화된 박테리아)가 실질적으로 또는 완전히 없는 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 EV 및 전체 박테리아(예를 들어, 살아있는 박테리아, 사멸된 박테리아, 및/또는 약독화된 박테리아)를 모두 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상)으로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 본원에 제공된 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상)으로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 본원에 제공된 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV를 포함한다 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 감마 조사된 EV를 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 EV가 단리(예를 들어, 제조)된 후에 감마 조사된다.
일부 구현예에서, 박테리아 샘플에 존재하는 박테리아로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아의 수를 정량화하기 위해, 전자 현미경(예를 들어, 초박형 동결 절편의 EM)을 사용하여 EV 및/또는 박테리아를 시각화하고, 이들의 상대적인 수를 계수한다. 대안적으로, 나노입자 추적 분석(NTA), Coulter 계수 또는, 동적 광 산란(DLS) 또는 이러한 기술의 조합이 사용된다. NTA 와 Coulter 계수기는 입자를 계수하고 입자 크기를 보여준다. DLS는 입자의 크기 분포를 제공하지만 농도를 제공하지는 않는다. 박테리아는 흔히 직경이 1~2 um(미크론)이다. 전체 범위는 0.2~20 um이다. Coulter 계수와 NTA의 조합된 결과로부터 소정 샘플 중의 박테리아 및/또는 박테리아로부터 유래된 EV의 수를 알 수 있다. Coulter 계수는 직경이 0.7~10 μm인 입자의 수를 나타낸다. 대부분의 박테리아 및/또는 EV 샘플의 경우, Coulter 계수만으로도 샘플의 박테리아 및/또는 EV의 수를 나타낼 수 있다. NTA의 경우, Malvern Pananlytical에서 Nanosight 기기를 입수할 수 있다. 예를 들어, NS300은 10~2000 nm 크기 범위의 부유 입자를 시각화하고 측정할 수 있다. NTA는 예를 들어 직경이 50~1000 nm인 입자의 수를 계수할 수 있다. DLS는 약 1 nm 내지 3 um 범위 내의 다른 직경 입자들의 분포를 나타낸다.
일부 구현예에서, EV는 당업계에 알려진 분석 방법에 의해 특성화된다(예를 들어, 문헌[Jeppesen, et al. Cell 177:428 (2019)]).
일부 구현예에서, EV는 입자 수에 기초하여 정량화될 수 있다. 예를 들어, EV 제제의 입자 수는 NTA를 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, EV 제제의 입자 수는 Zetaview를 사용하여 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, EV는 단백질, 지질, 또는 탄수화물의 양에 기초하여 정량화된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, EV 제제의 총 단백질 함량은 Bradford 분석 또는 BCA를 사용하여 측정된다.
일부 구현예에서, EV는 공급원 박테리아의 하나 이상의 다른 박테리아 성분으로부터 단리된다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 다른 박테리아 성분을 추가로 포함한다.
특정 구현예에서, 공급원 박테리아로부터 수득된 EV 액상 제제는 하위집단의 물리적 특성(예를 들어, 크기, 밀도, 단백질 함량, 및/또는 결합 친화도)에 기초하여 하위집단으로 분류될 수 있다. EV 하위집단(예를 들어, 액상 제제로서) 중 하나 이상은 이어서 본 발명의 용액, 분말, 및/또는 동결건조물에 혼입될 수 있다.
특정 양태에서, 질환(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환)의 치료 및/또는 예방에 유용한 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 용액 및/또는 건조 형태(및 이의 치료 조성물), 뿐만 아니라 이러한 EV의 제조 및/또는 식별 방법, 및 (예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환의 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여) 이러한 용액 및/또는 건조 형태(및 이의 치료 조성물)를 사용하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 EV 및 전체 박테리아(예를 들어, 살아있는 박테리아, 사멸된 박테리아, 및/또는 약독화된 박테리아)를 모두 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 박테리아가 없는(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99% 박테리아가 없는) EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상)으로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 본원에 제공된 하나 이상의 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)으로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 본원에 제공된 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다.
일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 건강 음식 또는 음료, 유아용 음식 또는 음료, 임산부, 운동선수, 노인 또는 기타 특정 집단을 위한 음식 또는 음료, 기능성 음식, 음료, 특정 건강 용도의 음식 또는 음료, 식이보조제, 프로바이오틱, 환자를 위한 음식 또는 음료, 또는 동물 사료와 같은 식품(예를 들어, 음식 또는 음료)에 첨가되거나 포함된다. 음식 및 음료의 구체적인 예는 주스, 청량음료, 차음료, 조제음료, 젤리음료, 및 기능성 음료 등의 각종 음료; 맥주 등의 알코올성 음료; 쌀 식품, 국수, 빵, 및 파스타 등의 탄수화물 함유 음식; 생선 햄, 소시지, 해산물 페이스트 제품 등의 페이스트 제품; 카레, 진한 전분 소스를 곁들인 음식, 및 수프 등의 레토르트 포장 제품; 수프; 우유, 유제품 음료, 아이스크림, 치즈, 및 요거트 등의 유제품; 된장, 요거트, 발효음료, 및 피클 등의 발효 제품; 콩 제품; 비스킷, 쿠키 등을 비롯한 각종 제과 제품, 캔디, 껌, 구미, 젤리를 비롯한 콜드디저트, 크림캐러멜, 및 냉동디저트; 즉석 수프, 즉석 된장국 등의 인스턴트 음식; 전자레인지용 등을 포함한다. 또한, 예에는 분말, 과립, 정제, 캡슐, 액체, 페이스트, 및 젤리 형태로 제조된 건강 음식 및 음료도 포함된다.
일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태는 인간을 포함하는 동물을 위한 식품 또는 식품 보조제에 첨가된다. 인간 이외의 동물은 특별히 제한되지 않으며, 조성물은 다양한 가축, 가금류, 애완동물, 실험동물 등에 사용될 수 있다. 동물의 구체적인 예는 돼지, 소, 말, 양, 염소, 닭, 오리, 타조, 칠면조, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 마우스, 래트, 원숭이 등을 포함하나, 동물은 이에 한정되지 않는다.
치료 조성물
일부 구현예에서, 본원에 제공된 용액 및/또는 건조 형태는 치료 조성물로 제형화된다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 용액 및/또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 본원에 제공된 용액 및/또는 건조 형태 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제와 같은 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
특정 양태에서, 질환(예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환)의 치료 및/또는 예방에 유용한 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물, 뿐만 아니라 이러한 EV의 제조 및/또는 식별 방법, 및 (예를 들어, 암, 자가면역 질환, 염증성 질환, 세균불균형, 또는 대사성 질환의 치료를 위해 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여) 이러한 치료 조성물을 사용하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 EV 및 전체 박테리아(예를 들어, 살아있는 박테리아, 사멸된 박테리아, 약독화된 박테리아)를 모두 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 박테리아가 없는(예를 들어, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 적어도 약 99% 박테리아가 없는) EV를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상)으로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 본원에 제공된 하나 이상의 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨)으로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 분류학상 그룹(예를 들어, 강, 목, 과, 속, 종, 또는 균주)의 박테리아(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 본원에 제공된 박테리아 균주 또는 종(예를 들어, 표 1, 표 2, 표 3, 및/또는 표 4 및/또는 본 명세서의 다른 부분(예를 들어, 표 J 또는 실시예 10)에 열거됨) 중 하나로부터 유래된 EV 및/또는 박테리아를 포함한다.
특정 양태에서, 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에게 투여하기 위한 치료 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 단일 투약 단위 또는 다중-용량 형식일 수 있는 최종 생성물을 생성하기 위해 추가의 활성 및/또는 비활성 물질과 조합된다. 일부 구현예에서, 치료 조성물은 면역보조제(예를 들어, STING 작용제, TLR 작용제, 또는 NOD 작용제)와 같은 보조제와 조합된다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 적어도 하나의 탄수화물을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 적어도 하나의 지질을 포함한다. 일부 구현예에서, 지질은 라우르산(12:0), 미리스트산(14:0), 팔미트산(16:0), 팔미톨레산(16:1), 마르가르산(17:0), 헵타데센산(17:1), 스테아르산(18:0), 올레산(18:1), 리놀레산(18:2), 리놀렌산(18:3), 옥타데카테트라엔산(18:4), 아라키드산(20:0), 에이코센산(20:1), 에이코사디엔산(20:2), 에이코사테트라엔산(20:4), 에이코사펜타엔산(20:5)(EPA), 도코산산(22:0), 도코센산(22:1), 도코사펜타엔산(22:5), 도코사헥사엔산(22:6)(DHA), 및 테트라코산산(24:0)으로부터 선택되는 적어도 하나의 지방산을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 적어도 하나의 보충 미네랄 또는 미네랄 공급원을 포함한다. 미네랄의 예는 염화물, 소듐, 칼슘, 철, 크롬, 구리, 아이오딘, 아연, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 인, 포타슘, 및 셀레늄을 제한 없이 포함한다. 상기 임의의 미네랄의 적합한 형태는 가용성 미네랄 염, 난용성 미네랄 염, 불용성 미네랄 염, 킬레이트화된 미네랄, 미네랄 복합체, 비반응성 미네랄, 예컨대 카보닐 미네랄, 및 환원된 미네랄, 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 적어도 하나의 보충 비타민을 포함한다. 적어도 하나의 비타민은 지용성 또는 수용성 비타민일 수 있다. 적합한 비타민은 비타민 C, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 B12, 비타민 K, 리보플라빈, 니아신, 비타민 D, 비타민 B6, 엽산, 피리독신, 티아민, 판토텐산, 및 비오틴을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 임의의 것의 적합한 형태는 비타민의 염, 비타민의 유도체, 비타민과 동일하거나 유사한 활성을 갖는 화합물, 및 비타민의 대사산물이다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제와 같은 부형제를 포함한다. 적합한 부형제의 비제한적 예는 완충제, 보존제, 안정화제, 결합제, 압축제, 윤활제, 분산 강화제, 붕해제, 착향제, 감미제, 및 착색제를 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제는 완충제이다. 적합한 완충제의 비제한적 예는 시트르산소듐, 탄산마그네슘, 중탄산마그네슘, 탄산칼슘, 및 중탄산칼슘을 포함한다.
일부 구현예에서, 부형제는 보존제를 포함한다. 적합한 보존제의 비제한적 예는 알파-토코페롤 및 아스코르베이트와 같은 항산화제, 및 파라벤, 클로로부탄올, 및 페놀과 같은 항균제를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 부형제로서 결합제를 포함한다. 적합한 결합제의 비제한적 예는 전분, 전호화 전분, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐옥소아졸리돈, 폴리비닐알코올, C12-C18 지방산 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리올, 당류, 올리고당류, 및 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 부형제로서 윤활제를 포함한다. 적합한 윤활제의 비제한적 예는 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 아연, 경화식물유, 스테로텍스, 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트, 탈크, 폴리에틸렌글리콜, 벤조산소듐, 라우릴황산소듐, 라우릴황산마그네슘, 및 경질광유를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 부형제로서 분산 강화제를 포함한다. 적합한 분산제의 비제한적 예는 전분, 알긴산, 폴리비닐피롤리돈, 구아 검, 카올린, 벤토나이트, 정제된 목재 셀룰로스, 전분글리콜산소듐, 이소아몰퍼스 실리케이트, 및 고 HLB 유화제 계면활성제로서의 미정질 셀룰로스를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 부형제로서 붕해제를 포함한다. 일부 구현예에서, 붕해제는 비발포성 붕해제이다. 적합한 비발포성 붕해제의 비제한적 예는 전분, 예컨대 옥수수 전분, 감자 전분, 이들의 전호화 및 변성 전분, 감미제, 점토, 예컨대 벤토나이트, 미정질 셀룰로스, 알기네이트, 전분글리콜산소듐, 검, 예컨대 한천, 구아, 로커스트 콩, 카라야, 펙틴, 및 트래거캔트를 포함한다. 일부 구현예에서, 붕해제는 발포성 붕해제이다. 적합한 발포성 붕해제의 비제한적 예는 시트르산과 조합된 중탄산소듐, 및 타타르산과 조합된 중탄산소듐을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 건강 음식 또는 음료, 유아용 음식 또는 음료, 임산부, 운동선수, 노인 또는 기타 특정 집단을 위한 음식 또는 음료, 기능성 음식, 음료, 특정 건강 용도의 음식 또는 음료, 식이보조제, 환자를 위한 음식 또는 음료, 또는 동물 사료와 같은 식품(예를 들어, 음식 또는 음료)이다. 음식 및 음료의 구체적인 예는 주스, 청량음료, 차음료, 조제음료, 젤리음료, 및 기능성 음료 등의 각종 음료; 맥주 등의 알코올성 음료; 쌀 식품, 국수, 빵, 및 파스타 등의 탄수화물 함유 음식; 생선 햄, 소시지, 해산물 페이스트 제품 등의 페이스트 제품; 카레, 진한 전분 소스를 곁들인 음식, 및 중국 수프 등의 레토르트 포장 제품; 수프; 우유, 유제품 음료, 아이스크림, 치즈, 및 요거트 등의 유제품; 된장, 요거트, 발효음료, 및 피클 등의 발효 제품; 콩 제품; 비스킷, 쿠키 등을 비롯한 각종 제과 제품, 캔디, 껌, 구미, 젤리를 비롯한 콜드디저트, 크림캐러멜, 및 냉동디저트; 즉석 수프, 즉석 된장국 등의 인스턴트 음식; 전자레인지용 등을 포함한다. 또한, 예에는 분말, 과립, 정제, 캡슐, 액체, 페이스트, 및 젤리 형태로 제조된 건강 음식 및 음료도 포함된다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 인간을 포함한 동물을 위한 식품이다. 인간 이외의 동물은 특별히 제한되지 않으며, 조성물은 다양한 가축, 가금류, 애완동물, 실험동물 등에 사용될 수 있다. 동물의 구체적인 예는 돼지, 소, 말, 양, 염소, 닭, 들오리, 타조, 집오리, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 마우스, 래트, 원숭이 등을 포함하나, 동물은 이에 한정되지 않는다.
투약 형태
일부 구현예에서, 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 예를 들어 경구 투여를 위한 고체 투여 형태("고체 용량 형태"라고도 함)로 제형화된다. 일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 건조 형태에 더하여 하나 이상의 부형제, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 고체 투여 형태의 건조 형태는 단리된 EV를 함유한다. 임의로, 고체 투여 형태의 EV는 감마선 조사된다. 일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 정제, 미니정제, 캡슐,또는 분말을 포함하고; 또는 이들 형태의 조합(예를 들어, 캡슐에 포함된 미니정제)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 고체 투여 형태는 캡슐이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 고체 투여 형태는 정제 또는 미니정제이다. 추가로, 일부 구현예에서, 복수의 미니정제는 캡슐에 존재한다(예를 들어, 캡슐에 로딩된다).
특정 구현예에서, 고체 투여 형태는 캡슐을 포함한다. 일부 구현예에서, 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4, 또는 크기 5 캡슐이다. 일부 구현예에서, 캡슐은 크기 0 캡슐이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 캡슐의 크기는 장용 코팅 적용 전의 정제의 크기를 나타낸다. 일부 구현예에서, 캡슐은 로딩 후(및 캡슐을 장용 코팅하기 전) 밴딩된다. 일부 구현예에서, 캡슐은 HPMC계 밴딩 용액으로 밴딩된다.
일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 정제(4 mm 초과)(예를 들어, 5 mm 내지 17 mm)를 포함한다. 예를 들어, 정제는 5 mm, 6 mm, 7 mm, 8 mm, 9 mm, 10 mm, 11 mm, 12 mm, 13 mm, 14 mm, 15 mm, 16 mm, 17 mm, 또는 18 mm 정제이다. 크기는 당업계에 알려진 바와 같이 정제의 직경을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 정제의 크기는 장용 코팅 적용 전의 정제의 크기를 나타낸다.
일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 미니정제를 포함한다. 일부 구현예에서, 미니정제는 1 mm ~ 4 mm 범위의 크기이다. 일부 구현예에서, 미니정제는 1 mm 미니정제, 1.5 mm 미니정제, 2 mm 미니정제, 3 mm 미니정제, 또는 4 mm 미니정제이다. 크기는 당업계에 알려진 바와 같이 미니정제의 직경을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 미니정제의 크기는 장용 코팅 적용 전의 미니정제의 크기를 나타낸다.
일부 구현예에서, 미니정제는 캡슐에 있다. 일부 구현예에서, 캡슐은 크기 00, 크기 0, 크기 1, 크기 2, 크기 3, 크기 4, 또는 크기 5 캡슐이다. 일부 구현예에서, 미니정제를 함유하는 캡슐은 HPMC(하이드록실 프로필 메틸 셀룰로스) 또는 젤라틴을 포함한다. 일부 구현예에서, 미니정제는 캡슐 안에 존재한다. 캡슐 안에 있는 미니정제의 수는 캡슐의 크기와 미니정제의 크기에 따라 다르다. 예를 들어, 크기 0 캡슐은 31~35개(평균 33개)의 3 mm 미니정제를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 캡슐은 로딩 후에 밴딩된다. 일부 구현예에서, 캡슐은 HPMC계 밴딩 용액으로 밴딩된다.
일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 현탁액으로 제형화되며, 예를 들어 경구 투여 또는 주사를 위해 예를 들어 건조 형태는 재구성되거나 용액은 희석된다. 주사 투여는 정맥내(IV), 근육내(IM), 종양내(IT), 및 피하(SC) 투여를 포함한다. 현탁액의 경우, 일부 구현예에서, EV는 완충액, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 완충액, 예를 들어 식염수 또는 PBS에 있다. 일부 구현예에서, 용액 및/또는 건조 형태(예를 들어, EV 및 증량제를 포함함)를 포함하는 치료 조성물은 현탁액으로 제형화되고, 예를 들어 국소 투여를 위해 예를 들어 건조 형태는 재구성되고; 용액은 희석된다. 일부 구현예에서, 현탁액은 하나 이상의 부형제, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 현탁액은 수크로스 또는 글루코스를 포함한다. 일부 구현예에서, 용액 또는 건조 형태의 EV는 단리된 EV이다. 임의로, 현탁액의 EV는 감마선 조사된다.
코팅
일부 구현예에서, 본원에 기재된 고체 투여 형태(예를 들어, 캡슐, 정제, 또는 미니정제)는 예를 들어 하나의 장용 코팅층 또는 두 층의 장용 코팅, 예를 들어 내측 장용 코팅 및 외측 장용 코팅으로 장용 코팅된다. 내측 장용 코팅과 외측 장용 코팅은 동일하지 않다(예를 들어, 내측 장용 코팅과 외측 장용 코팅은 동일한 양의 동일 성분을 함유하지 않는다). 장용 코팅은 예를 들어 소장에서 치료제(예컨대, 박테리아 EV, 건조 형태, 및/또는 이의 고체 투여 형태)의 방출을 가능하게 한다.
소장에서의 치료제의 방출은 치료제가 이러한 특정 위치에 위치한 세포(예를 들어, 상피세포 및/또는 면역세포)를 표적화하고 이에 영향을 미칠 수 있도록 하며, 예를 들어 이는 위장관에서의 국소 효과를 유발하고/하거나 전신 효과(예를 들어, 위장관 외부의 효과)를 유발할 수 있다.
EUDRAGIT는 광범위한 폴리메타크릴레이트계 공중합체의 브랜드명이다. 여기에는 메타크릴산 및 메타크릴/아크릴 에스테르 또는 이의 유도체를 기반으로 하는 음이온성, 양이온성, 및 중성 공중합체가 포함된다.
장용 코팅(예를 들어, 하나의 장용 코팅 또는 내측 장용 코팅 및/또는 외측 장용 코팅)에 사용될 수 있는 다른 물질의 예는 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트(CAP), 셀룰로스 아세테이트 트리멜리테이트(CAT), 폴리(비닐 아세테이트 프탈레이트)(PVAP), 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트(HPMCP), 지방산, 왁스, 셸락(알류리트산의 에스테르), 플라스틱, 식물섬유, 제인, Aqua-Zein®(알코올을 함유하지 않은 수성 제인 제형), 아밀로스 전분, 전분 유도체, 덱스트린, 메틸 아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 셀룰로스 아세테이트 숙시네이트, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 아세테이트 숙시네이트(하이프로멜로스 아세테이트 숙시네이트), 메틸 메타크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 및/또는 알긴산소듐을 포함한다.
일부 구현예에서, 장용 코팅(예를 들어, 하나의 장용 코팅 또는 내측 장용 코팅 및/또는 외측 장용 코팅)은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나의 장용 코팅은 메타크릴산 에틸 아크릴레이트(MAE) 공중합체(1:1)(예컨대, Kollicoat MAE 100P)를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나의 장용 코팅은 Eudragit 공중합체, 예를 들어 Eudragit L(예를 들어, Eudragit L 100-55; Eudragit L 30 D-55), Eudragit S, Eudragit RL, Eudragit RS, Eudragit E, 또는 Eudragit FS(예를 들어, Eudragit FS 30 D)를 포함한다.
장용 코팅(예를 들어, 하나의 장용 코팅 또는 내측 장용 코팅 및/또는 외측 장용 코팅)에 사용될 수 있는 물질의 다른 예는 예를 들어 U.S. 6312728; U.S. 6623759; U.S. 4775536; U.S. 5047258; U.S. 5292522; U.S. 6555124; U.S. 6638534; U.S. 2006/0210631; U.S. 2008/200482; U.S. 2005/0271778; U.S. 2004/0028737; WO 2005/044240에 기재된 것들을 포함한다.
또한, 예를 들어 메타크릴산 공중합체, 폴리비닐아세테이트 프탈레이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 아세테이트 숙시네이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트를 비롯하여, 본원에 제공된 고체 투여 형태와 함께 사용될 수 있는 pH 의존성 장용성 중합체를 제공하는 U.S. 9233074를 참조. 적합한 메타크릴산 공중합체는 예를 들어 Eudragit L100 상품명으로 판매되는 폴리(메타크릴산, 메틸 메타크릴레이트) 1:1; 예를 들어 Eudragit L100-55 상품명으로 판매되는 폴리(메타크릴산, 에틸 아크릴레이트) 1:1; 예를 들어 Kollicoat MAE-100P 상품명으로 판매되는, 부분적으로 중화된 폴리(메타크릴산, 에틸 아크릴레이트) 1:1; 및 예를 들어 Eudragit S100 상품명으로 판매되는 폴리(메타크릴산, 메틸 메타크릴레이트) 1:2를 포함한다.
일부 구현예에서, 고체 투약 형태(예를 들어, 캡슐)는 단일층 코팅, 예를 들어 HPMC(하이드록실 프로필 메틸 셀룰로스) 또는 젤라틴과 같은 비장용성 코팅을 포함한다.
용액 및 건조 형태의 제조 방법
본 개시는 또한 EV와 증량제를 포함하는 부형제의 용액을 제조하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 폴리에틸렌 글리콜(PEG, 예컨대 PEG 6000), 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 또는 PVP-K30을 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 동결보호제를 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 임의로 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린과 같은 추가 성분을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, EV의 액상 제제와 증량제를 포함하는 부형제를 조합하여 용액을 제조한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, EV의 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득함(예컨대, 상청액 또는 잔류물)와 증량제를 포함하는 부형제, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 부형제 스톡을 조합하여 용액을 제조한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, EV를 함유하는 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득함(예컨대, 상청액 또는 잔류물)와 증량제를 포함하는 부형제를 조합하고, 예를 들어 EV를 함유하는 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득함(예컨대, 상청액 또는 잔류물)를 증량제를 포함하는 부형제, 예컨대 만니톨, 또는 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 부형제 스톡의 부형제와 조합하여 용액을 제조한다.
본 개시는 또한 EV의 건조 형태를 제조하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 방법은 동결건조 분말 및/또는 동결건조 케이크와 같은 동결건조물을 제조하는 데 사용된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 방법은 분무건조 분말 및/또는 분무건조 분말과 같은 분말을 제조하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 부형제는 증량제를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 증량제는 만니톨, 수크로스, 폴리에틸렌 글리콜(PEG, 예컨대 PEG 6000), 시클로덱스트린, 말토덱스트린, 덱스트란, 피콜, 또는 PVP-K30을 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 동결보호제를 포함한다. 일부 구현예에서, 부형제는 임의로 트레할로스, 만니톨, 수크로스, 소르비톨, 덱스트란, 폴록사머 188, 말토덱스트린, PVP-K30, 피콜, 시트레이트, 아르기닌, 및/또는 하이드록시프로필-B-시클로덱스트린과 같은 추가 성분을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, EV를 포함하는 액상 제제(예를 들어, 박테리아 배양물로부터 EV를 단리하여 수득함(예컨대, 상청액 또는 잔류물)를 증량제를 포함하는 부형제, 예컨대 만니톨, 또는 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 부형제 스톡의 부형제와 조합하고 건조하여(예를 들어, 냉동건조 또는 분무건조하여)여 건조 형태를 제조한다. 일부 구현예에서, 건조 형태의 수분 함량은 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 0.5% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 4%, 약 1.5% 내지 약 4%, 또는 약 2% 내지 약 3%(예를 들어, Karl Fischer 적정으로 측정됨)이다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 10% 내지 약 80%(중량 기준)의 부형제, 예를 들어 증량제를 포함하는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 약 10% 내지 약 80%(중량 기준)의 부형제, 예를 들어 표 A, B, C, D, K, 또는 P 중 하나에 제공된 제형의 스톡으로부터 유래된 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, EV는 건조 형태 중량 기준으로 총 고형분의 약 1% 내지 약 99%를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 건조 형태의 mg당 적어도 약 1e10개의 입자를 갖는다(예를 들어, NTA와 같이 mg당 입자로 측정됨). 일부 구현예에서, 건조 형태의 입자는 건조 형태로부터의 재현탁(예를 들어, 탈이온수에서의 재현탁) 후 약 130 nm 내지 약 300 nm의 유체역학적 직경(Z 평균, Zave)을 갖는다(예를 들어, 동적 광 산란에 의해 측정됨).
일부 구현예에서, 건조 형태는 동결건조물이다. 일부 구현예에서, 동결건조물은 동결건조 분말 또는 동결건조 케이크이다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말 또는 분무건조 분말이다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법은 증량제를 포함하는 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법은
동결보호제를 포함하는 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 냉동건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 건조 형태를 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 냉동건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 분무건조 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 동결건조물을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 동결건조 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
증량제 및 동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
동결보호제를 포함하는(또는 이로 본질적으로 이루어진) 부형제와 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 액상 제제를 합하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 케이크를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 용액을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계;
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 용액을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 건조하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 건조 형태를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 건조는 냉동건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 건조 형태를 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 건조 형태를 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 건조하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 건조하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 건조는 냉동건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 건조는 분무건조를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 분무건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 분무건조하여 분무건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 방법은 분무건조 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 분무건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조물을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조물을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 동결건조물을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조물을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 분말을 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계;
용액을 냉동건조(동결건조)하여 케이크를 제조하는 단계; 및
케이크를 밀링(예를 들어, 분쇄)하여 동결건조 분말을 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, EV는 박테리아로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 동결건조 분말을 추가 성분과 합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 성분은 부형제, 예를 들어 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 분말을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시는 세포외 소포체(EV)를 포함하는 동결건조 케이크를 제조하는 방법을 제공하며, 이 방법은
EV를 포함하는 액상 제제를 하나 이상의 부형제를 포함하는 스톡(스톡은 표 A, B, C, D, K, 또는 P에 제공된 제형을 포함함)과 합하여 용액을 제조하는 단계; 및
용액을 냉동건조(동결건조)하여 동결건조 케이크를 제조하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시는 본원에 기술된 방법으로 제조된 동결건조 케이크를 제공한다.
치료 조성물 제조 방법
본 개시는 또한 치료 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 활택제, 윤활제, 및/또는 희석제와 같은 약학적으로 허용가능한 부형제와 조합하여 치료 조성물을 제조하는 단계를 포함한다.
본 개시는 또한 본원에 기재된 건조 형태를 함유하는, 고체 투여 형태와 같은 치료 조성물의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 캡슐, 정제, 또는 미니정제이다.
본 개시는 또한 건조 형태를 포함하는 (예를 들어, 약학적 사용을 위한)(예를 들어, 경구 투여용) 고체 투여 형태의 제조 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 세포외 소포체(EV), 및 증량제를 포함하는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 세포외 소포체(EV), 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 세포외 소포체(EV), 및 증량제 및 동결보호제를 포함하는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 또한 하나 이상의 추가 성분을 함유한다. 일부 구현예에서, 건조 형태는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 부형제와 조합된다. 일부 구현예에서, 고체 투여 형태는 예를 들어 본원에 기재된 코팅으로 장용 코팅된다.
일부 양태에서, 고체 투여 형태의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다:
건조 형태를 캡슐 내에 로딩하여 캡슐을 제조함으로써 고체 투여 형태를 제조하는 단계;
캡슐 내에 로딩하기 전에 임의로 건조 형태를 약학적으로 허용가능한 부형제와 합하는 단계; 및/또는
캡슐에 로딩 후 임의로 캡슐을 밴딩하는 단계(예를 들어, 캡슐에 로딩 후 캡슐을 밴딩하는 단계.
일부 양태에서, 고체 투여 형태의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다:
본원에 기재된 건조 형태를 미니정제로 압축하여 미니정제를 제조함으로써 고체 투여 형태를 제조하는 단계;
압축 전에 임의로 건조 형태를 약학적으로 허용가능한 부형제와 합하는 단계;
임의로 복수의 장용 코팅된 미니정제로 캡슐을 충전하는 단계.
일부 양태에서, 고체 투여 형태의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다:
본원에 기재된 분말을 정제로 압축하여 정제를 제조함으로써 고체 투여 형태를 제조하는 단계;
압축 전에 임의로 건조 형태를 약학적으로 허용가능한 부형제와 합하는 단계.
특정 구현예에서, 상기 방법은 분말과 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 또는 3개)의 부형제를 치료 조성물, 예컨대 고체 투여 형태로 합하기 전에 분말에 대해 습식 과립화를 수행하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 습식 과립화는 (i) 분말을 과립화 유체(예를 들어, 물, 에탄올 또는 이소프로판올을 단독으로 또는 조합하여)와 혼합하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 습식 과립화는 분말을 물과 혼합하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 습식 과립화는 (ii) 혼합 분말 및 과립화 유체를 건조시키는 단계(예를 들어, 유동층 건조기 상에서 건조시키는 단계)를 포함한다. 일부 구현예에서, 습식 과립화는 (iii) 건조된 분말 및 과립화 유체를 밀링(예를 들어, 분쇄)하는 단계를 포함한다. 밀링된(예를 들어, 분쇄된) 분말 및 과립화 유체는 이어서 하나 이상(예를 들어, 1, 2 또는 3개)의 부형제와 조합되어 치료 조성물(예컨대, 고체 투여 형태)을 제조한다. 일부 구현예에서, 분말은 동결건조 분말이다. 일부 구현예에서, 분말은 분무건조 분말이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 건조 형태를 액체(예를 들어, 완충액, 주스, 또는 물)에서 재구성하여 치료 조성물을 제조한다.
일부 구현예에서, 용액을 액체(예를 들어, 완충제, 주스, 또는 물)에 재현탁(예를 들어, 희석)하여 치료 조성물을 제조한다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 건조 형태를 포함하는 치료 조성물을 액체(예를 들어, 완충제, 주스, 또는 물)에서 재구성하여 현탁액을 제조한다.
일부 구현예에서, 용액을 포함하는 치료학적 조성물을 액체(예를 들어, 완충액, 주스, 또는 물)에 재현탁(예를 들어, 희석)하여 현탁액을 제조한다.
감마선 조사
분말 및 동결된 바이오매스(예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV)는 감마선 조사될 수 있다.
일부 구현예에서, 분말(예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV)을 주위 온도에서 17.5 kGy 방사선 단위로 감마선 조사한다.
일부 구현예에서, 동결된 바이오매스(예를 들어, 박테리아로부터 유래된 EV)를 드라이아이스의 존재하에 25 kGy 방사선 단위로 감마선 조사한다.
추가 치료제
특정 양태에서, 본원에 제공된 방법은 본원에 기재된 치료 조성물을 단독으로 또는 추가 치료제와 조합하여 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 면역억제제, 항염증제, 스테로이드, 및/또는 암 치료제이다.
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물은 추가 치료제가 투여되기 전(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30일 전)에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물은 추가 치료제가 투여된 후(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24시간 후 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30일 후)에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물은 대상체에게 동시에 또는 거의 동시에 투여된다(예를 들어, 투여는 서로 1시간 이내에 일어난다).
일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물이 대상체에게 투여되기 전(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30일 전)에 대상체에게 항생제가 투여된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물이 대상체에게 투여된 후(예를 들어, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24시간 전 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30일 후)에 대상체에게 항생제가 투여된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물 및 항생제는 대상체에게 동시에 또는 거의 동시에 투여된다(예를 들어, 투여는 서로 1시간 이내에 일어난다).
일부 구현예에서, 추가 치료제는 암 치료제이다. 일부 구현예에서, 암 치료제는 화학요법제이다. 이러한 화학요법제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예컨대 부설판, 임프로설판, 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드, 및 트리메틸롤로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신, 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스터드, 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스터드; 니트로소우레아, 예컨대 카무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항셍제, 예컨대 에네디인 항생제(예를 들어, 칼리케아마이신, 특히 칼리케아마이신 감마I 및 칼리케아마이신 오메가1; 다이네마이신(다이네마이신 A 포함); 비스포스포네이트, 예컨대 클로드로네이트; 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색소단백질 에네디인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라니신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투버시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사성물질, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제, 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충제, 예컨대 폴린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; PSK 다당류 복합체); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A, 및 안귀딘); 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 및 도세탁셀; 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 배위 착물, 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴, 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; 이리노테칸(예를 들어, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오미틴(DMFO); 레티노이드, 예컨대 레티노산; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 암 치료제는 암 면역요법제이다. 면역요법은 대상체의 면역계를 사용하여 암을 치료하는 치료를 의미한다(예를 들어, 관문 억제제, 암 백신, 사이토카인, 세포 요법, CAR-T 세포, 및 수지상 세포 요법). 면역요법의 비제한적 예는 관문 억제제로 니볼루맙(BMS, 항-PD-1), 펨브롤리주맙(Merck, 항-PD-1), 이필리무맙(BMS, 항-CTLA-4), MEDI4736(AstraZeneca, 항-PD-L1), 및 MPDL3280A(Roche, 항-PD-L1)를 포함한다. 기타 면역요법은 Gardail, Cervarix, BCG, sipulencel-T, Gp100:209-217, AGS-003, DCVax-L, Algenpantucel-L, Tergenpantucel-L, TG4010, ProstAtak, Prostvac-V/R-TRICOM, Rindopepimul, E75 펩티드 아세테이트, IMA901, POL-103A, Belagenpumatucel-L, GSK1572932A, MDX-1279, GV1001, 및 Tecemotide와 같은 종양 백신일 수 있다. 면역요법제는 주사를 통해(예를 들어, 정맥내, 종양내, 피하, 또는 림프절 내로) 투여될 수 있지만, 경구, 국소, 또는 에어로졸을 통해 투여될 수도 있다. 면역요법은 사이토카인과 같은 보조제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역요법제는 면역관문 억제제이다. 면역관문 억제는 광범위하게, 암세포가 면역 반응을 막거나 하향조절하기 위해 생성할 수 있는 관문을 억제하는 것을 지칭한다. 면역관문 단백질의 예는 CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, A2AR, B7-H3, B7-H4, BTLA, KIR, LAG3, TIM-3, 또는 VISTA를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 면역관문 억제제는 면역관문 단백질에 결합하여 이를 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. 면역관문 억제제의 예는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, AMP-224, AMP-514, STI-A1110, TSR-042, RG-7446, BMS-936559, MEDI-4736, MSB-0010718C(아벨루맙), AUR-012, 및 STI-A1010을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 본원에 기재된 치료 조성물을 하나 이상의 추가 치료제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 방법은 두 가지 면역요법제(예를 들어, 면역관문 억제제)의 투여를 포함한다. 예를 들어, 본원에 제공된 방법은 본원에 기재된 약학적 조성물을 PD-1 억제제(예컨대, 펨롤리주맙 또는 니볼루맙 또는 피딜리주맙) 또는 CLTA-4 억제제(예컨대, 이필리무맙) 또는 PD-L1 억제제(예를 들어, 아벨루맙)와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 면역요법제는 예를 들어 암-관련 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 암-관련 항원의 예는 아디포필린, AIM-2, ALDH1A1, 알파-액티닌-4, 알파-태아단백질("AFP"), ARTC1, B-RAF, BAGE-1, BCLX (L), BCR-ABL 융합 단백질 b3a2, 베타-카테닌, BING-4, CA-125, CALCA, 암배아 항원("CEA"), CASP-5, CASP-8, CD274, CD45, Cdc27, CDK12, CDK4, CDKN2A, CEA, CLPP, COA-1, CPSF, CSNK1A1, CTAG1, CTAG2, 사이클린 D1, 사이클린-A1, dek-can 융합 단백질, DKK1, EFTUD2, 신장 인자 2, ENAH (hMena), Ep-CAM, EpCAM, EphA3, 상피 종양 항원("ETA"), ETV6-AML1 융합 단백질, EZH2, FGF5, FLT3-ITD, FN1, G250/MN/CAIX, GAGE-1,2,8, GAGE-3,4,5,6,7, GAS7, 글리피칸-3, GnTV, gp100/Pmel17, GPNMB, HAUS3, 헵신, HER-2/neu, HERV-K-MEL, HLA-A11, HLA-A2, HLA-DOB, hsp70-2, IDO1, IGF2B3, IL13R알파2, 장 카복실 에스테라제, K-ras, 칼리크레인(Kallikrein) 4, KIF20A, KK-LC-1, KKLC1, KM-HN-1, CCDC110으로도 알려진 KMHN1, LAGE-1, LDLR-푸코실트랜스퍼라제 AS 융합 단백질, 렝신(Lengsin), M-CSF, MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-A12, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-A9, MAGE-C1, MAGE-C2, 말산 효소, 맘마글로빈-A, MART2, MATN, MC1R, MCSP, mdm-2, ME1, Melan-A/MART-1, 멜로에(Meloe), 미드카인(Midkine), MMP-2, MMP-7, MUC1, MUC5AC, 뮤신, MUM-1, MUM-2, MUM-3, 미오신, 미오신 클래스 I, N-raw, NA88-A, neo-PAP, NFYC, NY-BR-1, NY-ESO-1/LAGE-2, OA1, OGT, OS-9, P 폴리펩티드, p53, PAP, PAX5, PBF, pml-RAR알파 융합 단백질, 다형성 상피 뮤신("PEM"), PPP1R3B, PRAME, PRDX5, PSA, PSMA, PTPRK, RAB38/NY-MEL-1, RAGE-1, RBAF600, RGS5, RhoC, RNF43, RU2AS, SAGE, 세서린(secernin) 1, SIRT2, SNRPD1, SOX10, Sp17, SPA17, SSX-2, SSX-4, STEAP1, 서바이빈(survivin), SYT-SSX1 또는 -SSX2 융합 단백질, TAG-1, TAG-2, 텔로머라제, TGF-베타RII, TPBG, TRAG-3, 트리오세포스페이트 아이소머라제, TRP-1/gp75, TRP-2, TRP2-INT2, 티로시나제, 티로시나제("TYR"), VEGF, WT1, XAGE-1b/GAGED2a를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 항원은 신생항원이다.
일부 구현예에서, 면역요법제는 암 백신 및/또는 암 백신의 성분(예를 들어, 항원성 펩티드 및/또는 단백질)이다. 암 백신은 단백질 백신, 핵산 백신, 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 암 백신은 암-관련 항원의 에피토프를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 암 백신은 암-관련 항원의 에피토프를 암호화하는 핵산(예를 들어, DNA 또는 RNA, 예컨대 mRNA)을 포함한다. 암-관련 항원의 예는 아디포필린, AIM-2, ALDH1A1, 알파-액티닌-4, 알파-태아단백질("AFP"), ARTC1, B-RAF, BAGE-1, BCLX (L), BCR-ABL 융합 단백질 b3a2, 베타-카테닌, BING-4, CA-125, CALCA, 암배아 항원("CEA"), CASP-5, CASP-8, CD274, CD45, Cdc27, CDK12, CDK4, CDKN2A, CEA, CLPP, COA-1, CPSF, CSNK1A1, CTAG1, CTAG2, 사이클린 D1, 사이클린-A1, dek-can 융합 단백질, DKK1, EFTUD2, 신장 인자 2, ENAH (hMena), Ep-CAM, EpCAM, EphA3, 상피 종양 항원("ETA"), ETV6-AML1 융합 단백질, EZH2, FGF5, FLT3-ITD, FN1, G250/MN/CAIX, GAGE-1,2,8, GAGE-3,4,5,6,7, GAS7, 글리피칸-3, GnTV, gp100/Pmel17, GPNMB, HAUS3, 헵신, HER-2/neu, HERV-K-MEL, HLA-A11, HLA-A2, HLA-DOB, hsp70-2, IDO1, IGF2B3, IL13R알파2, 장 카복실 에스테라제, K-ras, 칼리크레인(Kallikrein) 4, KIF20A, KK-LC-1, KKLC1, KM-HN-1, CCDC110으로도 알려진 KMHN1, LAGE-1, LDLR-푸코실트랜스퍼라제 AS 융합 단백질, 렝신(Lengsin), M-CSF, MAGE-A1, MAGE-A10, MAGE-A12, MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6, MAGE-A9, MAGE-C1, MAGE-C2, 말산 효소, 맘마글로빈-A, MART2, MATN, MC1R, MCSP, mdm-2, ME1, Melan-A/MART-1, 멜로에(Meloe), 미드카인(Midkine), MMP-2, MMP-7, MUC1, MUC5AC, 뮤신, MUM-1, MUM-2, MUM-3, 미오신, 미오신 클래스 I, N-raw, NA88-A, neo-PAP, NFYC, NY-BR-1, NY-ESO-1/LAGE-2, OA1, OGT, OS-9, P 폴리펩티드, p53, PAP, PAX5, PBF, pml-RAR알파 융합 단백질, 다형성 상피 뮤신("PEM"), PPP1R3B, PRAME, PRDX5, PSA, PSMA, PTPRK, RAB38/NY-MEL-1, RAGE-1, RBAF600, RGS5, RhoC, RNF43, RU2AS, SAGE, 세서린(secernin) 1, SIRT2, SNRPD1, SOX10, Sp17, SPA17, SSX-2, SSX-4, STEAP1, 서바이빈(survivin), SYT-SSX1 또는 -SSX2 융합 단백질, TAG-1, TAG-2, 텔로머라제, TGF-베타RII, TPBG, TRAG-3, 트리오세포스페이트 아이소머라제, TRP-1/gp75, TRP-2, TRP2-INT2, 티로시나제, 티로시나제("TYR"), VEGF, WT1, XAGE-1b/GAGED2a를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 항원은 신생항원이다. 일부 구현예에서, 암 백신은 보조제와 함께 투여된다. 보조제의 예는 면역조절 단백질, 아주반트 65, α-GalCer, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 하이드록사이드, 칼슘 포스페이트, β-글루칸 펩티드, CpG ODN DNA, GPI-0100, 지질 A, 지질다당류, 리포반트, 몬타나이드, N-아세틸-무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민, Pam3CSK4, quil A, 콜레라 독소(CT) 및 이의 유도체(CTB, mmCT, CTA1-DD, LTB, LTK63, LTR72, dmLT)를 포함하는 장독소성 에셰리키아 콜라이(LT)로부터의 열분해성 독소, 및 트레할로스 디미콜레이트를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 면역요법제는 대상체에 대한 면역조절 단백질이다. 일부 구현예에서, 면역조절 단백질은 사이토카인 또는 케모카인이다. 면역조절 단백질의 예는 B 림프구 화학유인물질("BLC"), C-C 모티프 케모카인 11("에오탁신-1"), 호산구 화학주성 단백질 2("에오탁신-2"), 과립구 콜로니-자극 인자("G-CSF"), 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자("GM-CSF"), 1-309, 세포간 부착 분자 1("ICAM-1"), 인터페론 알파("IFN-알파"), 인터페론 베타("IFN-베타") 인터페론 감마("IFN-감마"), 인터루킨-1 알파("IL-1 알파"), 인터루킨-1 베타("IL-1 베타"), 인터루킨 1 수용체 길항제("IL-1 ra"), 인터루킨-2("IL-2"), 인터루킨-4("IL-4"), 인터루킨-5("IL-5"), 인터루킨-6("IL-6"), 인터루킨-6 가용성 수용체("IL-6 sR"), 인터루킨-7("IL-7"), 인터루킨-8("IL-8"), 인터루킨-10("IL-10"), 인터루킨-11("IL-11"), 인터루킨-12의 서브유닛 베타("IL-12 p40" 또는 "IL-12 p70"), 인터루킨-13("IL-13"), 인터루킨-15("IL-15"), 인터루킨-16("IL-16"), 인터루킨-17A-F("IL-17A-F"), 인터루킨-18("IL-18"), 인터루킨-21("IL-21"), 인터루킨-22("IL-22"), 인터루킨-23("IL-23"), 인터루킨-33("IL-33"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 2("MCP-1"), 대식세포 콜로니-자극 인자("M-CSF"), 감마 인터페론에 의해 유도된 모노카인("MIG"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 2("MIP-1 알파"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 4("MIP-1 베타"), 대식세포 염증성 단백질-1 델타("MIP-1 델타"), 혈소판-유래 성장 인자 서브유닛 B("PDGF-BB"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 5, "RANTES"(Regulated on Activation, Normal T cell Expressed and Secreted), TIMP 메탈로펩티다제 억제제 1("TIMP-1"), TIMP 메탈로펩티다제 억제제 2("TIMP-2"), 종양 괴사 인자, 림포톡신-알파("TNF 알파"), 종양 괴사 인자, 림포톡신-베타("TNF 베타"), 가용성 TNF 수용체 타입 1("sTNFRI"), sTNFRIIAR, 뇌-유래 신경영양 인자("BDNF"), 기본 섬유아세포 성장 인자("bFGF"), 골형성 단백질 4("BMP-4"), 골형성 단백질 5("BMP-5"), 골형성 단백질 7("BMP-7"), 신경 성장 인자("b-NGF"), 표피 성장 인자("EGF"), 표피 성장 인자 수용체("EGFR"), 내분비선-유래 혈관 내피 성장 인자("EG-VEGF"), 섬유아세포 성장 인자 4("FGF-4"), 각질세포 성장 인자("FGF-7"), 성장 분화 인자 15("GDF-15"), 신경교세포-유래 신경영양 인자("GDNF"), 성장 호르몬, 헤파린-결합 EGF-유사 성장 인자("HB-EGF"), 간세포 성장 인자("HGF"), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 1("IGFBP-1"), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 2("IGFBP-2"), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 3(" IGFBP-3"), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 4("IGFBP-4"), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 6("IGFBP-6"), 인슐린-유사 성장 인자 1("IGF-1"), 인슐린, 대식세포 콜로니-자극 인자("M-CSF R"), 신경 성장 인자 수용체("NGF R"), 뉴로트로핀-3("NT-3"), 뉴로트로핀-4("NT-4"), 파골세포생성 억제 인자("오스테오프로테게린"), 혈소판-유래 성장 인자 수용체("PDGF-AA"), 포스파티딜이노시톨-글리칸 생합성("PIGF"), "SCF"(Skp, Cullin, F-box 함유 복합체), 줄기세포 인자 수용체("SCF R"), 형질전환 성장 인자 알파("TGF알파"), 형질전환 성장 인자 베타-1("TGF 베타 1"), 형질전환 성장 인자 베타-3("TGF 베타 3"), 혈관 내피 성장 인자("VEGF"), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2("VEGFR2"), 혈관 내피 성장 인자 수용체 3("VEGFR3"), VEGF-D 6Ckine, 티로신-단백질 키나제 수용체 UFO("Axl"), 베타셀룰린("BTC"), 점막-관련 상피 케모카인("CCL28"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 27("CTACK"), 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 16("CXCL16"), C-X-C 모티프 케모카인 5("ENA-78"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 26("에오탁신-3"), 과립구 화학주성 단백질 2("GCP-2"), GRO, 케모카인(C-C 모티프) 리간드 14("HCC-l"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 16("HCC-4"), 인터루킨-9("IL-9"), 인터루킨-17 F("IL-17F"), 인터루킨-18-결합 단백질("IL-18 BPa"), 인터루킨-28 A("IL-28A"), 인터루킨 29("IL-29"), 인터루킨 31("IL-31"), C-X-C 모티프 케모카인 10("IP-10"), 케모카인 수용체 CXCR3("I-TAC"), 백혈병 억제 인자("LIF"), Light, 케모카인(C 모티프) 리간드("림포탁틴"), 단핵구 화학유인 단백질 2("MCP-2"), 단핵구 화학유인 단백질 3("MCP-3"), 단핵구 화학유인 단백질 4("MCP-4"), 대식세포-유래 케모카인("MDC"), 대식세포 이동 억제 인자("MIF"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 20("MIP-3 알파"), C-C 모티프 케모카인 19("MIP-3 베타"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 23("MPIF-1"), 대식세포 자극 단백질 알파 사슬("MSP알파"), 뉴클레오솜 어셈블리 단백질 1-유사 4("NAP-2"), 분비 포스포단백질 1("오스테오폰틴"), "PARC"(Pulmonary and activation-regulated cytokine), 혈소판 인자 4("PF4"), 기질세포-유래 인자-1 알파("SDF-1 알파"), 케모카인(C-C 모티프) 리간드 17("TARC"), 흉선-발현 케모카인("TECK"), 흉선 기질 림프포이에틴("TSLP 4- IBB"), CD 166 항원("ALCAM"), 분화 클러스터 80("B7-1"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 17("BCMA"), 분화 클러스터 14("CD14"), 분화 클러스터 30("CD30"), 분화 클러스터 40("CD40 리간드"), 암배아 항원-관련 세포 부착 분자 1(담즙 당단백질)("CEACAM-1"), 사멸 수용체 6("DR6"), 데옥시티미딘 키나제("Dtk"), 타입 1 막 당단백질("엔도글린"), 수용체 티로신-단백질 키나제 erbB-3("ErbB3"), 내피-백혈구 부착 분자 1("E-셀렉틴"), 아폽토시스 항원 1("Fas"), Fms-유사 티로신 키나제 3("Flt-3L"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 1("GITR"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 14("HVEM"), 세포간 부착 분자 3("ICAM-3"), IL-1 R4, IL-1 RI, IL-10 R베타, IL-17R, IL-2R감마, IL-21R, 리소좀 막 단백질 2("LIMPII"), 호중구 젤라티나제-관련 리포칼린("리포칼린-2"), CD62L("L-셀렉틴"), 림프 내피("LYVE-1"), MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 A("MICA"), MHC 클래스 I 폴리펩티드-관련 서열 B("MICB"), NRGl-베타1, 베타-타입 혈소판-유래 성장 인자 수용체("PDGF R베타"), 혈소판 내피세포 부착 분자("PECAM-1"), RAGE, A형 간염 바이러스 세포 수용체 1("TIM-1"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 IOC("TRAIL R3"), 트라핀 단백질 트랜스글루타미나제 결합 도메인("트라핀-2"), 우로키나제 수용체("uPAR"), 혈관세포 부착 단백질 1("VCAM-1"), XEDARActivin A, 아구티-관련 단백질("AgRP"), 리보뉴클레아제 5("안지오제닌"), 안지오포이에틴 1, 안지오스타틴, 카테프린 S, CD40, 크립틱 패밀리 단백질 IB("Cripto-1"), DAN, Dickkopf-관련 단백질 1("DKK-1"), E-카드헤린, 상피세포 부착 분자("EpCAM"), Fas 리간드(FasL 또는 CD95L), Fcg RIIB/C, 폴리스타틴, 갈렉틴-7, 세포간 부착 분자 2("ICAM-2"), IL-13 Rl, IL-13R2, IL-17B, IL-2 Ra, IL-2 Rb, IL-23, LAP, 신경세포 부착 분자("NrCAM"), 플라스미노겐 활성제 억제제-1("PAI-1"), 혈소판-유래 성장 인자 수용체("PDGF-AB"), 레지스틴, 기질세포-유래 인자 1("SDF-1 베타"), sgpl30, 분비된 프리즐-관련 단백질 2("ShhN"), 시알산 결합 면역글로불린형 렉틴("Siglec-5"), ST2, 형질전환 성장 인자-베타 2("TGF 베타 2"), Tie-2, 트롬보포이에틴("TPO"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10D("TRAIL R4"), "TREM-1"(Triggering receptor expressed on myeloid cells 1), 혈관 내피 성장 인자 C("VEGF-C"), VEGFRlAdiponectin, 아디프신("AND"), 알파-태아단백질("AFP"), 안지오포이에틴-유사 4("ANGPTL4"), 베타-2-마이크로글로불린("B2M"), 기저세포 부착 분자("BCAM"), 탄수화물 항원 125("CA125"), 암 항원 15-3("CA15-3"), 암배아 항원("CEA"), cAMP 수용체 단백질("CRP"), 인간 표피 성장 인자 수용체 2("ErbB2"), 폴리스타틴, 난포-자극 호르몬("FSH"), 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 1("GRO 알파"), 인간 융모막 성선자극호르몬("베타 HCG"), 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체("IGF-1 sR"), IL-1 sRII, IL-3, IL-18 Rb, IL-21, 렙틴, 매트릭스 메탈로프로테이나제-1("MMP-1"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-2("MMP-2"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-3("MMP-3"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-8("MMP-8"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-9("MMP-9"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-10("MMP-10"), 매트릭스 메탈로프로테이나제-13("MMP-13"), 신경세포 부착 분자("NCAM-1"), 엔탁틴("니도겐-1"), 뉴런 특이적 에놀라제("NSE"), 온코스타틴 M("OSM"), 프로칼시토닌, 프로락틴, 전립선 특이적 항원("PSA"), 시알산-결합 Ig-유사 렉틴 9("Siglec-9"), ADAM 17 엔도펩티다제("TACE"), 티로글로불린, 메탈로프로테이나제 억제제 4("TIMP-4"), TSH2B4, 디스인테그린 및 메탈로프로테이나제 도메인-함유 단백질 9("ADAM-9"), 안지오포이에틴 2, 종양 괴사 인자 리간드 수퍼패밀리 구성원 13/ 산성 류신이 풍부한 핵 포스포단백질 32 패밀리 구성원 B("APRIL"), 골형성 단백질 2("BMP-2"), 골형성 단백질 9("BMP-9"), 보체 성분 5a("C5a"), 카텝신 L, CD200, CD97, 케메린, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 6B("DcR3"), 지방산-결합 단백질 2("FABP2"), 섬유아세포 활성화 단백질 알파("FAP"), 섬유아세포 성장 인자 19("FGF-19"), 갈렉틴-3, 간세포 성장 인자 수용체("HGF R"), IFN-감마알파/베타 R2, 인슐린-유사 성장 인자 2("IGF-2"), 인슐린-유사 성장 인자 2 수용체("IGF-2 R"), 인터루킨-1 수용체 6("IL-1R6"), 인터루킨 24("IL-24"), 인터루킨 33("IL-33", 칼리크레인 14, 아스파라기닐 엔도펩티다제("Legumain"), 산화 저밀도 지질단백질 수용체 1("LOX-1"), 만노스-결합 렉틴("MBL"), 네프릴리신("NEP"), 노치 동족체 1, 전좌-관련(초파리)("Notch-1"), 신모세포종 과발현("NOV"), 오스테오액티빈, 세포예정사 단백질 1("PD-1"), N-아세틸무라모일-L-알라닌 아미다제("PGRP-5"), 세르핀 A4, 분비된 프리즐-관련 단백질 3("sFRP-3"), 트롬보모듈린, 톨유사 수용체 2("TLR2"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10A("TRAIL Rl"), 트랜스페린("TRF"), WIF-lACE-2, 알부민, AMICA, 안지오포이에틴 4, B 세포 활성화 인자("BAFF"), 탄수화물 항원 19-9("CA19-9"), CD 163, 클러스터린, CRT AM, 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 14("CXCL14"), 시스타틴 C, 데코린("DCN"), Dickkopf-관련 단백질 3("Dkk-3"), 델타-유사 단백질 1("DLL1"), 페투인 A, 헤파린-결합 성장 인자 1("aFGF"), 엽산 수용체 알파("FOLR1"), 푸린, GPCR-관련 분류 단백질 1("GASP-1"), GPCR-관련 분류 단백질 2("GASP-2"), 과립구 콜로니-자극 인자 수용체("GCSF R"), 세린 프로테아제 헵신("HAI-2"), 인터루킨-17B 수용체("IL-17B R"), 인터루킨 27("IL-27"), 림프구 활성화 유전자 3("LAG-3"), 아포지질단백질 A-V("LDL R"), 펩시노겐 I, 레티놀 결합 단백질 4("RBP4"), SOST, 헤파란 설페이트 프로테오글리칸("신데칸-1"), 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 13B("TACI"), 조직 인자 경로 억제제("TFPI"), TSP-1, 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 10b("TRAIL R2"), TRANCE, 트로포닌 I, 우로키나제 플라스미노겐 활성제("uPA"), 카드헤린 5, CD144("VE-카드헤린")로도 알려진 타입 2 또는 VE-카드헤린(혈관 내피), WNTl-유도성 신호 전달경로 단백질 1("WISP-1"), 및 핵 인자 κ B의 수용체 활성제("RANK")를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 암 치료제는 항암 화합물이다. 예시적인 항암 화합물은 알렘투주맙(Campath®), 알리트레티노인(Panretin®), 아나스트로졸(Arimidex®), 베바시주맙(Avastin®), 벡사로텐(Targretin®), 보르테조밉(Velcade®), 보수티닙(Bosulif®), 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris®), 카보잔티닙(Cometriq™), 카르필조밉(Kyprolis™), 세툭시맙(Erbitux®), 크리조티닙(Xalkori®), 다사티닙(Sprycel®), 데닐류킨 디프티톡스(Ontak®), 에를로티닙 하이드로클로라이드(Tarceva®), 에베롤리무스(Afinitor®), 엑세메스탄(Aromasin®), 풀베스트란트(Faslodex®), 게피티닙(Iressa®), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®), 이마티닙 메실레이트(Gleevec®), 이필리무맙(Yervoy™), 라파티닙 디토실레이트(Tykerb®), 레트로졸(Femara®), 닐로티닙(Tasigna®), 오파투무맙(Arzerra®), 파니투무맙(Vectibix®), 파조파닙 하이드로클로라이드(Votrient®), 퍼투주맙(Perjeta™), 프랄라트렉세이트(Folotyn®), 레고라페닙(Stivarga®), 리툭시맙(Rituxan®), 로미뎁신(Istodax®), 소라페닙 토실레이트(Nexavar®), 수니티닙 말레이트(Sutent®), 타목시펜, 템시롤리무스(Torisel®), 토레미펜(Fareston®), 토시투모맙 및 131I-토시투모맙(Bexxar®), 트라스투주맙(Herceptin®), 트레티노인(Vesanoid®), 반데타닙(Caprelsa®), 베무라페닙(Zelboraf®), 보리노스타트(Zolinza®), 및 지브-아플리버셉트(Zaltrap®)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
유전자 발현을 조절하는 단백질의 기능 및 기타 세포 기능을 변형시키는 예시적인 항암 화합물(예를 들어, HDAC 억제제, 레티노이드 수용체 리간드)은 보리노스타트(Zolinza®), 벡사로텐(Targretin®) 및 로미뎁신(Istodax®), 알리트레티노인(Panretin®), 및 트레티노인(Vesanoid®)이다.
세포자멸사를 유도하는 예시적인 항암 화합물(예를 들어, 프로테아좀 억제제, 항엽산제)은 보르테조밉(Velcade®), 카르필조밉(Kyprolis™), 및 프랄라트렉세이트(Folotyn®)이다.
항종양 면역 반응을 증가시키는 예시적인 항암 화합물(예를 들어, 항 CD20, 항 CD52; 항-세포독성 T-림프구-관련 항원-4)은 리툭시맙(Rituxan®), 알렘투주맙(Campath®), 오파투무맙(Arzerra®), 및 이필리무맙(Yervoy™)이다.
독성 물질을 암세포에 전달하는 예시적인 항암 화합물(예를 들어, 항-CD20-방사성 핵종 융합체; IL-2-디프테리아 독소 융합체; 항-CD30-모노메틸아우리스타틴 E(MMAE)-융합체)은 토시투모맙 및 131I-토시투모맙(Bexxar®) 및 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®), 데닐류킨 디프티톡스(Ontak®), 및 브렌툭시맙 베도틴(Adcetris®)이다.
기타 예시적인 항암 화합물은 예를 들어 야누스 키나제, ALK, Bcl-2, PARP, PI3K, VEGF 수용체, Braf, MEK, CDK, 및 HSP90의 소분자 억제제 및 이의 접합체이다.
예시적인 백금계 항암 화합물은 예를 들어 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴, 네다플라틴, 트리플라틴, 및 리포플라틴을 포함한다. 치료에 적합한 기타 금속계 약물은 루테늄계 화합물, 페로센 유도체, 티타늄계 화합물, 및 갈륨계 화합물을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 암 치료제는 방사성핵종을 포함하는 방사성 모이어티이다. 예시적인 방사성 핵종은 Cr-51, Cs-131, Ce-134, Se-75, Ru-97, I-125, Eu-149, Os-189m, Sb-119, I-123, Ho-161, Sb-117, Ce-139, In-111, Rh-103m, Ga-67, Tl-201, Pd-103, Au-195, Hg-197, Sr-87m, Pt-191, P-33, Er-169, Ru-103, Yb-169, Au-199, Sn-121, Tm-167, Yb-175, In-113m, Sn-113, Lu-177, Rh-105, Sn-117m, Cu-67, Sc-47, Pt-195m, Ce-141, I-131, Tb-161, As-77, Pt-197, Sm-153, Gd-159, Tm-173, Pr-143, Au-198, Tm-170, Re-186, Ag-111, Pd-109, Ga-73, Dy-165, Pm-149, Sn-123, Sr-89, Ho-166, P-32, Re-188, Pr-142, Ir-194, In-114m/In-114, 및 Y-90을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 암 치료제는 항생제이다. 예를 들어, 암-관련 박테리아 및/또는 암-관련 미생물군 프로파일의 존재가 본원에 제공된 방법에 따라 검출되는 경우, 대상체로부터 암-관련 박테리아를 제거하기 위해 항생제가 투여될 수 있다. "항생제"는 광범위하게, 박테리아 감염을 억제하거나 예방할 수 있는 화합물을 지칭한다. 항생제는 특정 감염에 대한 사용, 작용 기전, 생체이용률, 또는 표적 미생물의 스펙트럼을 포함하여 다양한 방식으로 분류될 수 있으며(예를 들어, 그람-음성 대 그람-양성 박테리아, 호기성 대 혐기성 박테리아 등), 숙주의 특정 영역("미세환경")에서 특정 박테리아를 사멸시키는 데 사용될 수 있다(Leekha, et al 2011. General Principles of Antimicrobial Therapy. Mayo Clin Proc. 86(2): 156-167). 특정 구현예에서, 항생제는 특정 미세환경의 박테리아를 선택적으로 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암 미세환경을 포함하는 특정 감염을 치료하는 것으로 알려진 항생제는 해당 미세환경 내의 암-관련 박테리아를 포함하여 암-관련 박테리아를 표적화하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물 후에 항생제가 투여된다. 일부 구현예에서, 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 치료 조성물 전에 항생제가 투여된다.
일부 양태에서, 항생제는 살균 또는 정균 특성에 기초하여 선택될 수 있다. 살균 항생제는 세포벽(예를 들어, β-락탐), 세포막(예를 들어, 답토마이신) 또는 박테리아 DNA(예를 들어, 플루오로퀴놀론)를 파괴하는 작용 기전을 포함한다. 정균제는 박테리아 복제를 억제하며, 설폰아미드, 테트라사이클린, 및 마크로라이드를 포함하며, 단백질 합성을 억제함으로써 작용한다. 또한, 일부 약물은 특정 유기체에서는 살균성이고 다른 유기체에서는 정균성일 수 있지만, 표적 유기체를 알면 당업자는 적절한 특성을 갖는 항생제를 선택할 수 있다. 특정 치료 조건에서, 정균 항생제는 살균 항생제의 활성을 억제한다. 따라서, 특정 구현예에서, 살균 항생제와 정균 항생제는 조합되지 않는다.
항생제는 아미노글리코시드, 안사마이신, 카바세펨, 카바페넴, 세팔로스포린, 글리코펩티드, 린코사미드, 리포펩티드, 마크로라이드, 모노박탐, 니트로푸란, 옥사졸리도논, 페니실린, 폴리펩티드 항생제, 퀴놀론, 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린, 및 항마이코박테리아 화합물, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
아미노글리코시드는 아미카신, 겐타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 토브라마이신, 파로모마이신, 및 스펙티노마이신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 아미노글리코시드는 예를 들어 에셰리키아 콜라이, 클렙시엘라, 슈도모나스 아에루기노사, 및 프란시셀라 툴라렌시스와 같은 그람-음성 박테리아와 특정 호기성 박테리아에 대해 효과적이지만, 절대/통성 혐기성균에 대해서는 덜 효과적이다. 아미노글리코시드는 박테리아 30S 또는 50S 리보솜 서브유닛에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
안사마이신은 겔다나마이신, 허비마이신, 리파마이신, 및 스트렙토바리신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 겔다나마이신과 허비마이신은 열충격 단백질 90의 기능을 억제하거나 변경하는 것으로 여겨진다.
카바세펨은 로라카르베프를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 카바세펨은 박테리아의 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
카바페넴은 에르타페넴, 도리페넴, 이미페넴/실라스타틴, 및 메로페넴을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 카바페넴은 광범위한 항생제로서 그람-양성 및 그람-음성 박테리아 모두에 대해 살균성이 있다. 카바페넴은 박테리아의 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
세팔로스포린은 세파드록실, 세파졸린, 세팔로틴, 세팔로씬, 세팔렉신, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손, 세페핌, 세프타롤린 포사밀, 및 세프토비프롤을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 선택된 세팔로스포린은 예를 들어 슈도모나스를 비롯한, 그람-음성 박테리아와 그람-양성 박테리아에 대해 효과적이며, 특정 세팔로스포린은 메티실린-내성 스타필로코커스 아우레우스(MRSA)에 대해 효과적이다. 세팔로스포린은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해하여 박테리아 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
글리코펩티드는 테이코플라닌, 반코마이신, 및 텔라반신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 글리코펩티드는 예를 들어 MRSA 및 클로스트리디움 디피실레를 비롯한, 호기성 및 혐기성 그람-양성 박테리아에 대해 효과적이다. 글리코펩티드는 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해하여 박테리아 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
린코사미드는 클린다마이신 및 린코마이신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 린코사미드는 예를 들어 혐기성 박테리아, 뿐만 아니라 스타필로코커스 및 스트렙토코커스에 대해 효과적이다. 린코사미드는 박테리아 50S 리보솜 서브유닛에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
리포펩티드는 답토마이신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 리포펩티드는 예를 들어 그람-양성 박테리아에 대해 효과적이다. 리포펩티드는 박테리아막에 결합하여 급속한 탈분극을 일으키는 것으로 여겨진다.
마크로라이드는 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 록시트로마이신, 트롤레안도마이신, 텔리트로마이신, 및 스피라마이신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 마크로라이드는 예를 들어 스트렙토코커스 및 마이코플라스마에 대해 효과적이다. 마크로라이드는 박테리아 또는 50S 리보솜 서브유닛에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
모노박탐은 아즈트레오남을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 모노박탐은 예를 들어 그람-음성 박테리아에 대해 효과적이다. 모노박탐은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해하여 박테리아 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
니트로푸란은 푸라졸리돈 및 니트로푸란토인을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
옥사졸리도논은 리네졸리드, 포시졸리드, 라데졸리드, 및 토레졸리드를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 옥사졸리도논은 단백질 합성 억제제인 것으로 여겨진다.
페니실린은 아목시실린, 암피실린, 아즐로실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 플루클록사실린, 메즐로실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 G, 페니실린 V, 피페라실린, 테모실린, 및 티카르실린을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 페니실린은 예를 들어 그람-양성 박테리아, 통성혐기성균, 예를 들어 스트렙토코커스, 보렐리아, 및 트레포네마에 대해 효과적이다. 페니실린은 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성을 방해하여 박테리아 세포벽 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
페니실린 조합은 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 피페라실린/타조박탐, 및 티카르실린/클라불라네이트를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
폴리펩티드 항생제는 바시트라신, 콜리스틴, 및 폴리믹신 B 및 E를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 폴리펩티드 항생제는 예를 들어 그람-음성 박테리아에 대해 효과적이다. 특정 폴리펩티드 항생제는 박테리아 세포벽의 펩티도글리칸 층의 합성에 관여하는 이소프레닐 피로포스페이트를 억제하는 반면, 다른 항생제는 박테리아 반대-이온을 대체하여 박테리아 외막을 불안정화시키는 것으로 여겨진다.
퀴놀론 및 플루오로퀴놀론은 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 제미플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 날리딕스산, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신, 그레파플록사신, 스파플록사신, 및 테마플록사신을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 퀴놀론/플루오로퀴놀론은 예를 들어 스트렙토코커스 및 나이세리아에 대해 효과적이다. 퀴놀론/플루오로퀴놀론은 박테리아 DNA 자이라제 또는 토포이소머라제 IV를 억제하여 DNA 복제 및 전사를 억제하는 것으로 여겨진다.
설폰아미드는 마페니드, 설파세타미드, 설파디아진, 은 설파디아진, 설파디메톡신, 설파메티졸, 설파메톡사졸, 설파닐이미드, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸(코-트리목사졸), 및 설폰아미도크리소이딘을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 설폰아미드는 디하이드로프테로에이트 합성효소의 경쟁적 억제에 의해 엽산 합성을 억제하여 핵산 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
테트라사이클린은 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 및 테트라사이클린을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 테트라사이클린은 예를 들어 그람-음성 박테리아에 대해 효과적이다. 테트라사이클린은 박테리아 30S 리보솜 서브유닛에 결합하여 박테리아 단백질 합성을 억제하는 것으로 여겨진다.
항마이코박테리아 화합물은 클로파지민, 답손, 카프레오마이신, 시클로세린, 에탐부톨, 에티오나미드, 이소니아지드, 피라진아미드, 리팜피신, 리파부틴, 리파펜틴, 및 스트렙토마이신을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
적합한 항생제는 또한 아르스페나민, 클로람페니콜, 포스포마이신, 푸시드산, 메트로니다졸, 무피로신, 플라텐시마이신, 퀴누프리스틴/달포프리스틴, 티게사이클린, 티니다졸, 트리메토프림 아목시실린/클라불라네이트, 암피실린/설박탐, 암포마이신 리스토세틴, 아지트로마이신, 바시트라신, 부포린 II, 카보마이신, 세크로핀 Pl, 클라리트로마이신, 에리트로마이신, 푸라졸리돈, 푸시드산, Na 푸시데이트, 그라미시딘, 이미페넴, 인돌리시딘, 조사마이신, 마가이난 II, 메트로니다졸, 니트로이미다졸, 미카마이신, 뮤타신 B-Ny266, 뮤타신 B-JHl 140, 뮤타신 J-T8, 니신, 니신 A, 노보비오신, 올레안도마이신, 오스트레오그리신, 피페라실린/타조박탐, 프리스티나마이신, 라모플라닌, 라날렉신, 류테린, 리팍시민, 로사마이신, 로사라마이신, 스펙티노마이신, 스피라마이신, 스타필로마이신, 스트렙토그라민, 스트렙토그라민 A, 시너기스틴, 타우롤리딘, 테이코플라닌, 텔리트로마이신, 티카르실린/클라불란산, 트리아세틸로레안도마이신, 틸로신, 티로시딘, 티로트리신, 반코마이신, 베마마이신, 및 버지니아마이신을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 면역억제제, DMARD, 통증조절제, 스테로이드, 비스테로이드성 항염증제(NSAID), 또는 사이토카인 길항제, 및 이들의 조합이다. 대표적인 제제는 시클로스포린, 레티노이드, 코르티코스테로이드, 프로피온산 유도체, 아세트산 유도체, 에놀산 유도체, 페남산 유도체, Cox-2 억제제, 루미라콕시브, 이부프로펜, 콜린 마그네슘 살리실레이트, 페노프로펜, 살살레이트, 디퓨니살, 톨메틴, 케토프로펜, 플루르비프로펜, 옥사프로진, 인도메타신, 술린닥, 에토돌락, 케토로락, 나부메톤, 나프록센, 발데콕십, 에토리콕십, MK0966; 로페콕십, 아세토미노펜, 셀레콕십, 디클로페낙, 트라마돌, 피록시캄, 멜록시캄, 테녹시캄, 드록시캄, 로녹시캄, 이속시캄, 메파남산, 메클로페남산, 플루페남산, 톨페남산, 발데콕시브, 파레콕시브, 에토돌락, 인도메타신, 아스피린, 이부프로펜, 피로콕십, 메토트렉세이트(MTX), 항말라리아제(예를 들어, 하이드록시클로로퀸 및 클로로퀸), 설파살라진, 레플루노마이드, 아자티오프린, 시클로스포린, 금염, 미노사이클린, 시클로포스파미드, D-페니실라민, 미노사이클린, 아우라노핀, 타크로리무스, 미오크리신, 클로람부실, TNF 알파 길항제(예를 들어, TNF 알파 길항제 또는 TNF 알파 수용체 길항제), 예를 들어 아달리무맙(Humira®), 에타너셉트(Enbrel®), 인플릭시맙(Remicade®; TA-650), 세르톨리주맙 페골(Cimzia®; CDP870), 골리무맙(Simpom®; CNTO 148), 아나킨라(Kineret®), 리툭시맙(Rituxan®; MabThera®), 아바타셉트(Orencia®), 토실리주맙(RoActemra /Actemra®), 인테그린 길항제(TYSABRI®(나탈리주맙)), IL-1 길항제(ACZ885(일라리스)), 아나킨라(Kineret®)), CD4 길항제, IL-23 길항제, IL-20 길항제, IL-6 길항제, BLyS 길항제(예를 들어, 아타시셉트, Benlysta®/LymphoStat-B®(벨리무맙)), p38 억제제, CD20 길항제(오크렐리주맙, 오파투무맙(Arzerra®)), 인터페론 감마 길항제(폰톨리주맙), 프레드니솔론, 프레드니손, 덱사메타손, 코르티솔, 코르티손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 베클로메타솜, 플루드로코르티손, 데옥시코르티코스테론, 알도스테론, 독시사이클린, 반코마이신, 피오글리타존, SBI-087, SCIO-469, Cura-100, 온콕신 + 뷰시드, TwHF, 메톡살렌, 비타민 D - 에르고칼시페롤, 밀나시프란, 파클리탁셀, 로시그 타존, 타크로리무스(Prograf®), RADOOl, 라파뮨, 라파마이신, 포스타마티닙, 펜타닐, XOMA 052, 포스타마티닙 디소듐, 로시그타존, 커큐민(Longvida™), 로수바스타틴, 마라비록, 라미프릴, 밀나시프란, 코비프로스톤, 소마트로핀, tgAAC94 유전자 치료 벡터, MK0359, GW856553, 에소메프라졸, 에베롤리무스, 트라스투주맙, JAK1 및 JAK2 억제제, 범-JAK 억제제, 예를 들어 테트라사이클릭 피리돈 6(P6), 325, PF-956980, 데노수맙, IL-6 길항제, CD20 길항제, CTLA4 길항제, IL-8 길항제, IL-21 길항제, IL-22 길항제, 인테그린 길항제(Tysarbri®(나탈리주맙)), VGEF 길항제, CXCL 길항제, MMP 길항제, 디펜신 길항제, IL-1 길항제(IL-1 베타 길항제 포함), 및 IL-23 길항제(예를 들어, 수용체 유인체, 길항 항체 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 면역억제제이다. 면역억제제의 예는 코르티코스테로이드, 메살라진, 메살라민, 설파살라진, 설파살라진 유도체, 면역억제 약물, 시클로스포린 A, 머캅토퓨린, 아자티오퓨린, 프레드니손, 메토트렉세이트, 항히스타민제, 글루코코르티코이드, 에피네프린, 테오필린, 크로몰린 소듐, 항류코트리엔, 비염에 대한 항콜린성 약물, TLR 길항제, 인플라마좀 억제제, 항콜린성 충혈제거제, 비만세포 안정화제, 단클론 항-IgE 항체, 백신(예를 들어, 알레르겐의 양이 점차 증가하는 백신접종에 사용되는 백신), 사이토카인 억제제, 예컨대 항-IL-6 항체, TNF 억제제, 예컨대 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙, 또는 에타너셉트, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
투여
특정 양태에서, 본원에 기재된 치료 조성물(예를 들어, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물)을 대상체에게 전달하는 방법이 본원에 제공된다. 본원에 제공된 방법들의 일부 구현예에서, 치료 조성물은 추가 치료제의 투여와 함께 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 추가 치료제와 함께 공동 제형화된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 추가 치료제와 함께 공동 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물의 투여 전(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 또는 55분 전, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23시간 전, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 전)에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물의 투여 전(예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 또는 55분 후, 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23시간 후, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 또는 14일 후)에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물과 추가 치료제를 둘 다 전달하기 위해 동일한 전달 방식이 사용된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물과 추가 치료제를 투여하기 위해 상이한 전달 방식이 사용된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물은 경구로 투여되는 반면, 추가 치료제는 주사(예를 들어, 정맥내, 근육내, 및/또는 종양내 주사)를 통해 투여된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 1일 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 일일 용량으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 1일 2회 용량으로 제형화되고, 각각의 용량은 일일 용량의 절반이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물은 예를 들어 방사선 요법 및 종양의 외과적 절제와 같은 임의의 다른 통상적인 항암 치료와 함께 투여된다. 이러한 치료는 필요에 따라 및/또는 지시된 바와 같이 적용될 수 있으며, 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 수행될 수 있다.
투약 요법은 다양한 방법 및 양 중 임의의 것일 수 있고, 공지된 임상 인자에 따라 당업자에 의해 결정될 수 있다. 의학 분야에서 알려진 바와 같이, 한 환자에 대한 투여량은 대상체의 종, 크기, 체표면적, 연령, 성별, 면역능력 및 일반적인 건강, 투여할 특정 미생물, 투여 기간 및 경로, 질환의 종류 및 병기, 예를 들어 종양 크기, 및 동시 또는 거의 동시에 투여되는 약물과 같은 다른 화합물을 비롯한 많은 인자에 따라 달라질 수 있다. 상기 인자뿐만 아니라, 이러한 수준은 당업자에 의해 결정될 수 있는 바와 같이 미생물의 감염성 및 미생물의 성질에 의해 영향을 받을 수 있다. 본 방법에서, 미생물의 적절한 최소 투여량 수준은 미생물이 생존, 성장 및 복제하기에 충분한 수준일 수 있다. 본원에 기재된 용액 또는 건조 형태를 포함하는 치료 조성물의 용량은 투여 형태, 투여 경로, 표적 질환의 정도 또는 병기 등에 따라 적절하게 설정 또는 조정될 수 있다. 예를 들어, 제제의 일반적인 유효 용량은 0.01 mg/kg 체중/일 내지 1000 mg/kg 체중/일, 0.1 mg/kg 체중/일 내지 1000 mg/kg 체중/일, 0.5 mg/kg 체중/일 내지 500 mg/kg 체중/일, 1 mg/kg 체중/일 내지 100 mg/kg 체중/일, 또는 5 mg/kg 체중/일 내지 50 mg/kg 체중/일의 범위일 수 있다. 유효 용량은 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 또는 1000 mg/kg 체중/일 이상일 수 있지만, 용량은 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체에게 투여되는 용량은 질환(예를 들어, 자가면역 질환, 염증성 질환, 대사성 질환, 또는 암)을 예방하거나, 질환 발병을 지연시키거나, 질환 진행을 늦추거나 중지시키거나, 하나 이상의 질환 증상을 경감시키기에 충분하다. 당업자는 투여량이 대상체의 연령, 종, 상태 및 체중뿐만 아니라 사용된 특정 제제(예를 들어, 치료제)의 강도를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라짐을 인식할 것이다. 용량의 크기는 또한 투여 경로, 시기 및 빈도뿐만 아니라 특정 약제의 투여에 수반될 수 있는 부작용의 존재, 성질 및 정도, 및 원하는 생리학적 효과에 의해 결정될 것이다.
적합한 용량 및 투약 요법은 당업자에게 알려진 통상적인 범위결정 기술에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 치료는 화합물의 최적 용량 미만인 더 적은 투여량으로 시작된다. 그 후에, 해당 상황에서 최적의 효과에 도달할 때까지 투여량을 조금씩 증량한다. 효과적인 투여량 및 치료 프로토콜은 예를 들어 실험 동물에서 낮은 투여량으로 시작한 다음, 효과를 모니터링하면서 투여량을 늘리고, 투약 요법을 체계적으로 변경하는 등 일상적이고 통상적인 수단에 의해 결정될 수 있다. 동물 연구는 일반적으로 킬로그램 중량당 생물활성제의 최대 허용 용량("MTD")을 결정하는 데 사용된다. 당업자는 인간을 포함한 다른 종에서 독성을 피하면서 효능에 대한 용량을 정기적으로 추정한다.
상기에 따르면, 치료적 적용에서, 본 발명에 따라 사용되는 치료제의 투여량은 선택된 투여량에 영향을 미치는 인자들 중 특히, 활성제, 수혜 환자의 연령, 체중 및 임상 상태, 및 치료하는 임상의 또는 의사의 경험과 판단에 따라 달라진다. 예를 들어, 암 치료의 경우, 용량은 종양 성장을 늦추기에 충분해야 하고, 바람직하게는 퇴행시키기에 충분해야 하며, 가장 바람직하게는 암의 완전 퇴행을 유발하거나 전이의 크기 또는 수를 감소시키기에 충분해야 한다. 다른 예로서, 용량은 치료 중인 대상체의 질환의 진행을 늦추기에 충분해야 하고, 바람직하게는 치료 중인 대상체의 질환의 하나 이상의 증상을 개선하기에 충분해야 한다.
개별 투여는 2, 3, 4, 5, 또는 6회의 투여를 포함하여 2회 이상 임의의 횟수의 투여를 포함할 수 있다. 치료 방법을 모니터링하기 위한 당업계에 알려진 방법 및 본원에 제공된 다른 모니터링 방법에 따라 당업자는 수행할 투여 횟수 또는 1회 이상의 추가 투여를 수행하는 것이 바람직한지 여부를 쉽게 결정할 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 방법은 대상체에게 약학적 조성물의 1회 이상의 투여를 제공하는 방법을 포함하며, 투여 횟수는 대상체를 모니터링하고 모니터링 결과에 기초하여 1회 이상의 추가 투여를 제공할지 여부를 결정함으로써 결정될 수 있다. 1회 이상의 추가 투여를 제공할지 여부는 다양한 모니터링 결과에 기초하여 결정될 수 있다.
투여 간격은 다양한 기간 중 임의의 것일 수 있다. 투여 간격은 투여 횟수와 관련하여 설명된 바와 같은 모니터링 단계, 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간을 비롯한 다양한 인자의 함수일 수 있다. 일례로, 간격은 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간의 함수일 수 있으며; 예를 들어, 간격은 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간보다 길 수 있고(예컨대, 약 1주 초과, 약 10일 초과, 약 2주 초과, 또는 약 1개월 초과); 또 다른 예에서, 간격은 대상체가 면역 반응을 일으키는 기간보다 짧을 수 있다(예컨대, 약 1주 미만, 약 10일 미만, 약 2주 미만, 또는 약 1개월 미만).
일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 조성물과 조합하여 추가 치료제를 전달하면 부작용이 감소되고/되거나 추가 치료제의 효능이 개선된다.
본원에 기재된 추가 치료제의 유효 용량은 대상체에 대한 독성이 가장 적으면서 특정 대상체, 조성물, 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하는 데 효과적인 추가 치료제의 양이다. 유효 투여량 수준은 본원에 기재된 방법을 사용하여 확인될 수 있으며, 투여된 특정 조성물 또는 제제의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용 중인 특정 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 조합하여 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료받는 대상체의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 이전 병력, 및 의학계에 잘 알려져 있는 유사 인자를 비롯한 다양한 약동학적 인자에 따라 달라질 것이다. 일반적으로, 추가 치료제의 유효 용량은 치료 효과를 생성하는 데 효과적인 가장 낮은 용량인 추가 치료제의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 인자들에 따라 달라질 것이다.
추가 치료제의 독성은 치료 중 및 치료 후에 대상체가 경험하는 부작용의 수준이다. 추가적인 치료 독성과 관련된 이상 반응은 복통, 위산성 소화불량, 위산 역류, 알레르기 반응, 탈모증, 아나필락시스, 빈혈, 불안, 식욕 부진, 관절통, 무력증, 운동 실조, 질소 혈증, 균형 소실, 뼈 통증, 출혈, 혈전, 저혈압, 혈압 상승, 호흡곤란, 기관지염, 멍, 낮은 백혈구 수, 낮은 적혈구 수, 낮은 혈소판 수, 심장 독성, 방광염, 출혈성 방광염, 부정맥, 심장판막질환, 심근병증, 관상동맥질환, 백내장, 중추신경독성, 인지장애, 혼돈, 결막염, 변비, 기침, 경련, 방광염, 심부정맥혈전증, 탈수, 우울증, 설사, 현기증, 구강건조, 피부건조, 소화불량, 호흡장애, 부종, 전해질 불균형, 식도염, 피로, 생식능력 상실, 발열, 고창, 홍조, 위역류, 위식도역류질환, 생식기 통증, 과립구감소증, 여성형유방증, 녹내장, 탈모, 수족증후군, 두통, 난청, 심부전, 심계항진, 속쓰림, 혈종, 출혈성 방광염, 간독성, 고아밀라아제혈증, 고칼슘혈증, 고염소혈증, 고혈당, 고칼륨혈증, 고리파제혈증, 고마그네슘혈증, 고나트륨혈증, 고인산혈증, 과색소침착, 고중성지방혈증, 고요산혈증, 저알부민혈증, 저칼슘혈증, 저염소혈증, 저혈당, 저칼륨혈증, 저마그네슘혈증, 저나트륨혈증, 저인산혈증, 발기부전, 감염, 주사부위 반응, 불면증, 철결핍, 가려움증, 관절통, 신부전, 백혈구감소증, 간기능 장애, 기억상실, 갱년기, 구강염, 점막염, 근육통, 근통, 골수억제, 심근염, 호중구감소성 발열, 메스꺼움, 신독성, 호중구감소증, 코피, 저림, 이독성, 통증, 손바닥-족저 홍반감각이상, 범혈구감소증, 심낭염, 말초신경병증, 인두염, 광공포증, 광과민증, 폐렴, 간질성 폐렴, 단백뇨, 폐색전증, 폐섬유증, 폐독성, 발진, 빠른 심장박동, 직장 출혈, 초조, 비염, 발작, 숨가쁨, 부비동염, 혈소판 감소증, 이명, 요로 감염, 질 출혈, 질 건조, 현기증, 체액저류, 쇠약, 체중 감소, 체중 증가, 및 구강건조증을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일반적으로, 독성은 치료를 통해 얻는 대상체에 대한 이점이 치료로 인해 대상체가 경험하는 이상 반응보다 더 큰 경우에 허용된다.
면역 장애
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 자가면역 질환, 알레르기 반응, 및/또는 염증성 질환과 같은 병리학적 면역 반응과 관련된 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 염증성 장질환(예를 들어, 크론병 또는 궤양성 대장염)이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 건선이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 아토피성 피부염이다.
본원에 기재된 방법은 이를 필요로 하는 임의의 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "이를 필요로 하는 대상체"는 병리학적 면역 반응(예를 들어, 염증성 장질환)과 관련된 질환 또는 장애가 있는 임의의 대상체뿐만 아니라 이러한 질환 또는 장애를 얻을 가능성이 증가된 임의의 대상체를 포함한다.
본원에 기재된 치료 조성물은 예를 들어 만성 염증성 장질환, 전신홍반루푸스, 건선, 머클웰 증후군, 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 또는 하시모토병과 같은 자가면역 질환; 음식 알레르기, 꽃가루증, 또는 천식과 같은 알레르기 질환; 클로스트리디움 디피실리 감염과 같은 감염성 질환; TNF-매개 염증성 질환과 같은 염증성 질환(예를 들어, 낭염과 같은 위장관의 염증성 질환, 죽상동맥경화증과 같은 심혈관 염증성 병태, 또는 만성 폐쇄성 폐 질환과 같은 염증성 폐 질환)의 예방 또는 치료(이러한 질환의 부작용의 부분적 또는 완전한 감소)을 위한 약학적 조성물; 장기 이식 또는 기타 조직 거부반응이 발생할 수 있는 상황에서 거부반응을 억제하기 위한 약학적 조성물; 면역 기능 개선을 위한 보충제, 식품, 또는 음료; 또는 면역세포의 증식 또는 기능을 억제하기 위한 시약으로 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 염증의 치료에 유용하다. 특정 구현예에서, 신체의 임의의 조직 및 기관의 염증은 하기에 논의된 바와 같은 근골격 염증, 혈관 염증, 신경 염증, 소화계 염증, 안구 염증, 생식계 염증, 및 기타 염증을 포함한다.
근골격계의 면역 장애는 손, 손목, 팔꿈치, 어깨, 턱, 척추, 목, 엉덩이, 안면, 발목, 및 발의 관절을 포함하는 골격 관절에 영향을 미치는 병태, 및 힘줄과 같은 뼈에 근육을 연결하는 조직에 영향을 미치는 병태를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본원에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 이러한 면역 장애의 예는 관절염(예를 들어, 골관절염, 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 강직성 척추염, 급성 및 만성 감염성 관절염, 통풍 및 가성통풍, 및 청소년 특발성 관절염과 관련된 관절염 포함), 건염, 활액막염, 건활막염, 활액낭염, 섬유염(섬유근육통), 상과염, 근염, 및 골염(예를 들어, 파제트병, 치골 골염, 및 낭포성 골염 포함)을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
안구 면역 장애는 눈꺼풀을 포함하여 눈의 임의의 구조에 영향을 미치는 면역 장애를 지칭한다. 본원에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 안구 면역 장애의 예는 안검염, 안검피부이완증, 결막염, 누선염, 각막염, 건성 각막결막염(안구건조증), 공막염, 속눈썹증, 및 포도막염을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 신경계 면역 장애의 예는 뇌염, 길랭-바레 증후군, 수막염, 신경근긴장증, 기면증, 다발성 경화증, 골수염, 및 조현병을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본원에 기재된 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 혈관계 또는 림프계 염증의 예는 관절경화증, 관절염, 정맥염, 혈관염, 및 림프관염을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 약학적 조성물로 치료될 수 있는 소화계 면역 장애의 예는 담관염, 담낭염, 장염, 소장대장염, 위염, 위창자염, 염증성 장질환, 회장염, 및 직장염을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 염증성 장질환은 예를 들어 관련 병태군의 특정 기술 분야에서 인식된 형태를 포함한다. 염증성 장질환의 몇 가지 주요 형태가 알려져 있으며, 크론병(국소 장질환, 예를 들어 비활성 및 활성 형태) 및 궤양성 대장염(예를 들어, 비활성 및 활성 형태)이 이러한 장애 중 가장 흔하다. 또한, 염증성 장질환은 과민성 대장 증후군, 현미경적 대장염, 림프구-형질구성 장염, 체강 질환, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 및 호산구성 장염을 포함한다. 기타 덜 흔한 형태의 IBD에는 불확실한 대장염, 위막성 대장염(괴사성 대장염), 허혈성 염증성 장질환, 베체트병, 사르코이드증, 경피증, IBD-관련 이형성, 이형성 관련 종괴 또는 병변, 및 원발성 경화성 담관염이 포함된다.
본원에 기재된 방법 및 약학적 조성물로 치료될 수 있는 생식계 면역 장애의 예는 자궁경부염, 융모양막염, 자궁내막염, 부고환염, 배꼽염, 난소염, 고환염, 난관염, 난관 난소 농양, 요도염, 질염, 외음염, 및 외음부통을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 약학적 조성물은 염증 성분이 있는 자가면역 병태를 치료하는 데 사용될 수 있다. 이러한 병태는 급성 파종성 보편성 탈모증, 베체트병, 샤가스병, 만성 피로 증후군, 자율신경이상증, 뇌척수염, 강직성 척추염, 재생불량성 빈혈, 화농한선염, 자가면역 간염, 자가면역 난소염, 체강 질환, 크론병, 제1형 진성당뇨병, 거대세포동맥염, 굿파스처 증후군, 그레이브병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 헤노흐-쇤라인 자반병, 가와사키병, 홍반루푸스, 현미경적 대장염, 현미경적 다발동맥염, 혼합결합조직병, 머클웰 증후군, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 간대 근경련 증후군, 시신경염, 요도 갑상선염, 천포창, 결절성 다발동맥염, 다발성 근육통, 류마티스 관절염, 라이터 증후군, 쇼그렌 증후군, 측두 동맥염, 베게너 육아종증, 온열 자가면역 용혈성 빈혈, 간질성 방광염, 라임병, 모르페아, 건선, 사르코이드증, 경피증, 궤양성 대장염, 및 백반증을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 염증 성분이 있는 T세포 매개 과민성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 이러한 병태는 접촉 과민증, 접촉 피부염(덩굴옻나무로 인한 피부염 포함), 두드러기, 피부 알레르기, 호흡기 알레르기(건초열, 알레르기성 비염, 집먼지 진드기 알레르기), 및 글루텐-민감성 장병증(체강병)을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
상기 방법 및 치료 조성물로 치료될 수 있는 다른 면역 장애는 예를 들어 충수염, 피부염, 피부근육염, 심내막염, 섬유염, 치은염, 설염, 간염, 화농한선염, 홍채염, 후두염, 유방염, 심근염, 신염, 중이염, 췌장염, 이하선염, 심낭염, 복막염, 인두염, 흉막염, 폐렴, 전립선염, 신우신염, 및 구내염, 이식 거부반응(신장, 간, 심장, 폐, 췌장(예를 들어, 섬세포), 골수, 각막, 소장과 같은 기관, 피부 동종이식편(skin allografts, skin homografts), 및 심장 판막 이종이식편, 혈청병, 및 이식편대숙주 질환 포함), 급성 췌장염, 만성 췌장염, 급성 호흡 곤란 증후군, 세자리 증후군, 선천성 부신과형성, 비화농성 갑상선염, 암과 연관된 고칼슘혈증, 수포창, 수포성 포진성 피부염, 중증 다형 홍반, 탈락피부염, 지루성 피부염, 계절성 또는 지속성 알레르기성 비염, 기관지 천식, 접촉 피부염, 아토피성 피부염, 약물 과민증 반응, 알레르기성 결막염, 각막염, 안부 대상 포진, 홍채염 및 홍채섬모채염, 맥락망막염, 시신경염, 사르코이드증 징후, 전격성 또는 전파성 폐결핵 화합요법, 성인의 특발성 혈소판감소증성 자반병, 성인의 2차 혈소판 감소증, 후천성 (자가면역) 용혈성 빈혈, 성인의 백혈병 및 림프종, 소아 급성 백혈병, 국소 장염, 자가면역성 혈관염, 다발성 경화증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 고형 장기 이식 거부반응, 패혈증을 포함한다. 바람직한 치료는 이식 거부반응, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 다발성 경화증, 제1형 당뇨병, 천식, 염증성 장질환, 전신홍반루푸스, 건선, 만성 폐쇄성 폐 질환, 및 감염성 병태를 수반하는 염증(예를 들어, 패혈증)의 치료를 포함한다.
대사 장애
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 II형 당뇨병, 내당능 장애, 인슐린 저항성, 비만, 고혈당증, 고인슐린혈증, 지방간, 비알코올성 지방간염, 고콜레스테롤혈증, 고혈압, 고지질단백혈증, 고지혈증, 고중성지방혈증, 케톤산증, 저혈당, 혈전성 장애, 이상지질혈증, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 또는 관련 질환의 치료 또는 예방에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 관련 질환은 심혈관 질환, 죽상동맥경화증, 신장 질환, 신병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 성기능 장애, 피부병증, 소화불량, 또는 부종이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 약학적 조성물은 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)의 치료에 관한 것이다.
본원에 기재된 방법은 이를 필요로 하는 임의의 대상체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "이를 필요로 하는 대상체"는 대사성 질환 또는 장애가 있는 임의의 대상체뿐만 아니라 이러한 질환 또는 장애를 얻을 가능성이 증가된 임의의 대상체를 포함한다.
본원에 기재된 치료 조성물은 예를 들어 대사성 질환, 예컨대 II형 당뇨병, 내당능 장애, 인슐린 저항성, 비만, 고혈당, 고인슐린혈증, 지방간, 비알코올성 지방간염, 고콜레스테롤혈증, 고혈압, 고지질단백혈증, 고지혈증, 고중성지방혈증, 케톤산증, 저혈당, 혈전성 장애, 이상지질혈증, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 또는 관련 질환의 예방 또는 치료(이러한 질환의 부작용의 부분적 또는 완전한 감소)를 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 관련 질환은 심혈관 질환, 죽상동맥경화증, 신장 질환, 신병증, 당뇨병성 신경병증, 당뇨병성 망막병증, 성기능 장애, 피부병증, 소화불량, 또는 부종이다.
암
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 암의 치료에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 임의의 암은 본원에 기재된 방법을 사용하여 치료될 수 있다. 본원에 기재된 방법 및 치료 조성물에 의해 치료될 수 있는 암의 예는 방광, 혈액, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 결장, 식도, 위장, 잇몸, 머리, 신장, 간, 폐, 비인두, 목, 난소, 전립선, 피부, 위, 고환, 혀, 또는 자궁으로부터의 암 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 암은 구체적으로 다음과 같은 조직학적 유형일 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다: 신생물, 악성; 암종; 암종, 미분화; 거대 및 방추 세포 암종; 소세포 암종; 유두 암종; 편평세포 암종; 림프상피 암종; 기저세포 암종; 필로매트릭스 암종; 이행세포 암종; 유두 이행세포 암종; 선암종; 가스트린종, 악성; 담관암종; 간세포 암종; 결합된 간세포 암종 및 담관암종; 섬유주 선암종; 선양 낭성 암종; 선종성 폴립의 선암종; 선암종, 가족성 용종증 대장균; 고형 암종; 카르시노이드 종양, 악성; 세기관지-폐포성 선암종; 유두 선암종; 혐색소성 암종; 호산구 암종; 호산성 선암종; 호염기구 암종; 투명세포 선암종; 과립세포 암종; 여포 선암종; 유두 및 여포 선암종; 비피막 경화성 암종; 부신피질 암종; 자궁내막 암종; 피부 부속기 암종; 아포크린 선암종; 피지 선암종; 귀질 선암종; 점막표피양 암종; 낭선암종; 유두 낭선암종; 유두 장액성 낭선암종; 점액성 낭선암종; 점액성 선암종; 인환세포 암종; 침윤성 관암종; 수질 암종; 소엽 암종; 염증성 암종; 파제트병, 유선; 포상세포 암종; 선편평 암종; 편평상피화생이 있는 선암종; 흉선종, 악성; 난소 기질 종양, 악성; 테코마, 악성; 과립막 세포 종양, 악성; 남성모세포종, 악성; 세르톨리세포 암종; 라이디히 세포 종양, 악성; 지질 세포 종양, 악성; 부신경절종, 악성; 유방외 부신경절종, 악성; 갈색 세포종; 사구체육종; 악성 흑색종; 무색소성 흑색종; 표재성 확산 흑색종; 거대 색소 모반의 악성 흑색종; 상피세포 흑색종; 푸른 모반, 악성; 육종; 섬유육종; 섬유성 조직구종, 악성; 점액육종; 지방육종; 평활근육종; 횡문근육종; 배아 횡문근육종; 폐포 횡문근육종; 기질 육종; 혼합 종양, 악성; 뮬러 혼합 종양; 신모세포종; 간모세포종; 암육종; 간엽종, 악성; 브레너 종양, 악성; 엽상 종양, 악성; 활액 육종; 악성 중피종; 이상 생식세포종; 배아 암종; 기형종, 악성; 난소 기질 종양, 악성; 융모막암종; 중신종, 악성; 혈관육종; 혈관내피종, 악성; 카포시 육종; 혈관주위세포종, 악성; 림프관육종; 골육종; 피질주위 골육종; 연골육종; 연골모세포종, 악성; 중간엽 연골육종; 뼈의 거대 세포 종양; 유윙 육종; 치성 종양, 악성; 변색성 상아육종; 흑색모세포종, 악성; 변색성 섬유육종; 송과종, 악성; 척색종; 신경교종, 악성; 뇌실막종; 성상세포종; 원형질 성상세포종; 원섬유성 성상세포종; 성상모세포종; 교모세포종; 희소돌기아교종; 희소돌기모세포종; 원시 신경외배엽; 소뇌 육종; 신경절신경모세포종; 신경 모세포종; 망막모세포종; 후각 신경성 종양; 수막종, 악성; 신경섬유육종; 신경연종, 악성; 과립세포 종양, 악성; 악성 림프종; 호지킨병; 호지킨 림프종; 부육아종; 악성 림프종, 소림프구성; 악성 림프종, 대세포, 확산성; 악성 림프종, 여포; 균상 식육종; 기타 특정 비호지킨 림프종; 악성 조직구증; 다발성 골수종; 비만세포 육종; 면역증식성 소장 질환; 백혈병; 림프성 백혈병; 형질세포 백혈병; 적혈구백혈병; 림프육종 세포 백혈병; 골수성 백혈병; 호염기성 백혈병; 호산구성 백혈병; 단핵구 백혈병; 비만세포 백혈병; 거핵모구성 백혈병; 골수 육종; 및 모세포 백혈병.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 약학적 조성물은 백혈병의 치료에 관한 것이다. 백혈병 질환의 비제한적 예는 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 과립구성 백혈병, 만성 과립구성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 성인 T세포 백혈병, 무백혈성 백혈병, 백혈구 백혈병, 호염기성 백혈병, 아세포 백혈병, 소 백혈병, 만성 골수구성 백혈병, 진피백혈병, 배아백혈병, 호산구성 백혈병, 그로스(Gross) 백혈병, 리더세포 백혈병, 실링 백혈병, 줄기세포 백혈병, 아백혈병 백혈병, 미분화 세포 백혈병, 모세포 백혈병, 혈구 백혈병, 혈구아세포성 백혈병, 조직구성 백혈병, 줄기세포 백혈병, 급성 단핵구 백혈병, 백혈구감소성 백혈병, 림프성 백혈병, 림프모구성 백혈병, 림프구성 백혈병, 림프원성 백혈병, 림프 백혈병, 림프육종 세포 백혈병, 비만세포 백혈병, 거핵구성 백혈병, 미세골수아구성 백혈병, 단핵구 백혈병, 골수아구성 백혈병, 골수구성 백혈병, 골수 과립구성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 네겔리 백혈병, 형질세포 백혈병, 형질구성 백혈병, 및 전골수구성 백혈병을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 치료 조성물은 암종의 치료에 관한 것이다. 암종의 비제한적인 예시적 유형은 선상 암종, 포상 암종, 선낭성 암종, 선양 낭성 암종, 선종 암종, 부신피질 암종, 폐포 암종, 폐포세포 암종, 기저세포 암종, 암 기저세포, 기저양 암종, 기저편평세포 암종, 세기관지폐포 암종, 세기관지 암종, 기관지 암종, 뇌형 암종, 담관세포 암종, 융모막 암종, 콜로이드 암종, 면포 암종, 코퍼스 암종, 면상 암종, 흉곽 암종, 피부 암종, 원통 암종, 원통세포 암종, 관암종, 경질 암종, 배아 암종, 뇌양 암종, 상피 암종, 암 상피 선종, 외피 암종, 궤양 외 암종, 섬유질 암종, 젤라틴 모양 암종, 젤라틴 암종, 거대세포 암종, 인환세포 암종, 단순 암종, 소세포 암종, 솔라노이드 암종, 구상세포 암종, 방추세포 암종, 암종 해면체, 편평 암종, 편평세포 암종, 스트링 암종, 모세관 확장 암종, 모세관 암종, 이행세포 암종, 결절 암종, 관상 암종, 사마귀 암종, 융모 암종, 암종 거대세포, 선 암종, 육아종 세포 암종, 모발-기질 암종, 혈양 암종, 간세포 암종, 허슬세포 암종, 유리질 암종, 고신성 암종, 유아 배아 암종, 제자리 암종, 표피내 암종, 상피내 암종, 크롬페처(Krompecher) 암종, 쿨치츠키-세포 암종, 대세포 암종, 수정체 암종, 암종 수정체, 지방종 암종, 림프상피 암종, 암종 수질, 수질 암종, 흑색종 암종, 몰리 암종, 점액성 암종, 점액분비 암종, 점막세포 암종, 점막표피양 암종, 점막 암종, 점액 암종, 암종 점액종, 비인두 암종, 귀리세포 암종, 화골 암종, 골양 암종, 유두 암종, 문맥주위 암종, 전침윤성 암종, 가시세포 암종, 활상 암종, 신장의 신세포 암종, 예비세포 암종, 육종 암종, 슈나이더 암종, 경성암종, 및 음낭암종을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 및 치료 조성물은 육종의 치료에 관한 것이다. 육종은 연골육종, 섬유육종, 림프육종, 흑색육종, 점액육종, 골육종, 자궁내막 육종, 기질 육종, 유잉 육종, 근막 육종, 섬유아 육종, 거대세포 육종, 아베메시 육종, 지방 육종, 지질육종, 폐포 연부 육종, 변색모세포 육종, 보트리로이드 육종, 엽록체 육종, 융모막 암종, 배아 육종, 윌름스(Wilms) 종양 육종, 과립구 육종, 호지킨 육종, 특발성 다발성 색소성 출혈 육종, B세포의 면역모세포 육종, 림프종, T세포의 면역모세포성 육종, 젠슨 육종, 카포시 육종, 쿠퍼 세포 육종, 혈관 육종, 백혈육종, 악성 중간엽 육종, 관절낭육종, 망상적혈구 육종, 라우스 육종, 장낭포성 육종, 활액 육종, 및 모세혈관확장성 육종을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 치료 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 추가의 예시적인 신생물은 호지킨병, 비호지킨 림프종, 다발성 골수종, 신경모세포종, 유방암, 난소암, 폐암, 횡문근육종, 원발성 혈소판증가증, 원발성 거대글로불린혈증, 소세포 폐종양, 원발성 뇌종양, 위암, 결장암, 악성 췌장선종, 악성 카르시노이드, 전암성 피부병변, 고환암, 림프종, 갑상선암, 신경모세포종, 식도암, 비뇨생식도암, 악성 고칼슘혈증, 자궁경부암, 자궁내막암, 형질세포종, 대장암, 직장암, 및 부신피질암을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료되는 암은 흑색종이다. 흑색종의 비제한적 예는 하딩-패시 흑색종, 연소성 흑색종, 악성 흑색점 흑색종, 악성 흑색종, 견봉-흑색종 흑색종, 무색소성 흑색종, 양성 연소성 흑색종, 클라우드만 흑색종, S91 흑색종, 결절성 흑색종, 설하 흑색종, 및 표재성 확산 흑색종이다.
일부 구현예에서, 암은 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암)을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 대장암(예를 들어, 현미부수체 안정(MSS) 대장암)을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 신세포 암종을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암)을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 방광암을 포함한다.
일부 구현예에서, 암은 위식도암을 포함한다.
본원에 기재된 방법 및 치료 조성물을 사용하여 치료될 수 있는 종양의 특정 범주는 림프증식성 장애, 유방암, 난소암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁내막암, 골암, 간암, 위암, 결장암, 췌장암, 갑상선암, 두경부암, 중추신경계암, 말초신경계암, 피부암, 신장암, 및 이러한 모든 것의 전이를 포함한다. 종양의 특정 유형은 간세포 암종, 간암, 간모세포종, 횡문근육종, 식도 암종, 갑상선 암종, 신경절모세포종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골형성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡상피육종, 침습성 관암종, 유두선암종, 흑색종, 폐편평세포 암종, 기저세포 암종, 선암종(잘 분화, 중간 분화, 저분화 또는 미분화), 세기관지폐포 암종, 신세포 암종, 부신종, 고신성 선암종, 담관 암종, 융모막암종, 정액종, 배아 암종, 윌름스 종양, 고환 종양, 소세포, 비소세포, 및 대세포 폐암종을 포함하는 폐암종, 방광 암종, 신경아교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 망막모세포종, 신경모세포종, 결장암, 직장 암종, 다음을 포함하는 모든 유형의 백혈병 및 림프종을 포함한 조혈 악성종양: 급성 골수성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 비만세포 백혈병, 다발성 골수종, 골수성 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 형질세포종, 대장암, 및 직장암을 포함한다.
특정 구현예에서 치료되는 암은 또한 전암성 병변, 예를 들어 광선각화증(일광각화증), 기태(이형성 모반), 광선 입술염(농부 입술), 피부 뿔, 바렛 식도, 위축성 위염, 선천성 각화이상증, 철구감소성 연하장애, 편평태선, 구강 점막하 섬유증, 광선(일광) 탄력증, 및 자궁경부 이형성증을 포함한다.
일부 구현예에서 치료되는 암은 예를 들어 담관종, 대장용종, 선종, 유두종, 낭선종, 간선종, 포상기태, 신장 세관선종, 편평세포유두종, 위 용종, 혈관종, 골종, 연골종, 지방종, 섬유종, 림프관종, 평활근종, 횡문근종, 성상세포종, 모반, 수막종, 및 신경절신경종을 포함하는(이에 한정되지 않음) 내배엽, 외배엽, 또는 중배엽 기원의 비암성 또는 양성 종양을 포함한다.
기타 질환 및 장애
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 간 질환의 치료에 관한 것이다. 이러한 질환은 알라길 증후군, 알코올-관련 간 질환, 알파-1 항트립신 결핍증, 자가면역 간염, 양성 간 종양, 담도 폐쇄증, 간경변증, 갈락토스혈증, 길버트 증후군, 혈색소증, A형 간염, B형 간염, C형 간염, 간성 뇌병증, 임신성 간내 담즙 정체(ICP), 리소좀산 리파제 결핍(LAL-D), 간 낭종, 간암, 신생아 황달, 원발성 담즙성 담관염(PBC), 원발성 경화성 담관염(PSC), 라이 증후군, 유형 I 글리코겐 축적 질환, 및 윌슨병을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본원에 기재된 방법 및 치료 조성물은 신경퇴행성 및 신경계 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 신경퇴행성 및/또는 신경계 질환은 파킨슨병, 알츠하이머병, 프리온병, 헌팅턴병, 운동 뉴런 질환(MND), 척수소뇌 운동실조, 척수 근위축, 근긴장이상, 특발성 두개내 고혈압, 간질, 신경계 질환, 중추신경계 질환, 운동 장애, 다발성 경화증, 뇌병증, 말초 신경병증, 또는 수술후 인지기능 장애이다.
세균불균형
장내 미생물군("장내 미생물군집"이라고도 함)이 미생물 활동을 통해 개인의 건강에 상당한 영향을 미치고 숙주의 면역 및 기타 세포에 (국소 및/또는 말단) 영향을 미칠 수 있다(문헌[Walker, W.A., Dysbiosis. The Microbiota in Gastrointestinal Pathophysiology. Chapter 25. 2017; Weiss and Thierry, Mechanisms and consequences of intestinal dysbiosis. Cellular and Molecular Life Sciences. (2017) 74(16):2959-2977. Zurich Open Repository and Archive, doi: doi.org/10.1007/s00018-017-2509-x]).
건강한 숙주-장내 미생물군 항상성은 때때로 "유바이오시스(eubiosis)" 또는 "노모바이오시스(normobiosis)"라고 불리는 반면, 숙주 미생물군 구성 및/또는 다양성의 해로운 변화는 미생물군의 건강에 해로운 불균형 또는 "세균불균형"으로 이어질 수 있다(문헌[Hooks and O'Malley. Dysbiosis and its discontents. American Society for Microbiology. Oct 2017. Vol. 8. Issue 5. mBio 8:e01492-17. https://doi.org/10.1128/mBio.01492-17]). 세균불균형 및 관련 국소 또는 원위 숙주 염증 또는 면역 효과는 미생물군 항상성이 상실되거나 감소되어 병원체에 대한 감수성 증가; 숙주 박테리아 대사 활성의 변경; 숙주 염증촉진 활성의 유도 및/또는 숙주 항염증 활성의 감소가 초래되는 경우 발생할 수 있다. 이러한 효과는 숙주 면역세포(예를 들어, T세포, 수지상 세포, 비만세포, NK세포, 장 상피 림프구(IEC), 대식세포 및 식세포)와 사이토카인, 및 이러한 세포 및 기타 숙주 세포에서 방출되는 다른 물질 간의 상호작용에 의해 부분적으로 매개된다.
세균불균형은 위장관 내에서 발생할 수 있거나("위장 세균불균형" 또는 "장내 세균불균형"), 위장관 내강 외부에서 발생할 수 있다("원위 세균불균형"). 위장 세균불균형은 대개 장 상피 장벽의 완전성 감소, 밀착 접합 완전성 감소, 및 장 투과성 증가와 관련이 있다. 문헌[Citi, S. Intestinal Barriers protect against disease, Science 359:1098-99 (2018); Srinivasan et al., TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems. J. Lab. Autom. 20:107-126 (2015)]. 위장 세균불균형은 위장관 내부와 외부에서 생리학적 및 면역 효과를 가질 수 있다.
세균불균형의 존재는 다음을 포함한 다양한 질환 및 병태와 관련이 있을 수 있다: 감염, 암, 자가면역 장애(예를 들어, 전신홍반루푸스(SLE)) 또는 염증성 장애(예를 들어, 염증성 장질환(IBD), 궤양성 대장염, 및 크론병과 같은 기능성 위장 장애), 신경염증 질환(예를 들어, 다발성 경화증), 이식 장애(예를 들어, 이식편대숙주 질환), 지방간 질환, I형 당뇨병, 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군, 체강 질환, 낭포성 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 장애(COPD), 및 면역기능 장애와 관련된 기타 질환 및 병태. 문헌[Lynch et al., The Human Microbiome in Health and Disease, N. Engl. J. Med .375:2369-79 (2016), Carding et al., Dysbiosis of the gut microbiota in disease. Microb. Ecol. Health Dis. (2015); 26: 10: 3402/mehd.v26.2619; Levy et al, Dysbiosis and the Immune System, Nature Reviews Immunology 17:219 (April 2017)].
특정 구현예에서, 본원에 개시된 예시적 치료 조성물은 세균불균형 부위에 존재하는 면역 활성을 변형시킴으로써 세균불균형 및 그 영향을 치료할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 이러한 조성물은 예를 들어 사이토카인 분비에 대한 영향을 초래하여 대상체 수혜자의 염증을 감소시키는 숙주 면역세포에 대한 효과를 통해 또는 대사산물 생성의 변화를 통해 세균불균형을 변형시킬 수 있다.
세균불균형과 연관된 장애의 치료에 유용한 본원에 개시된 예시적인 치료 조성물은 면역조절 박테리아로부터 유래된 하나 이상의 유형의 EV를 함유한다. 이러한 조성물은 위장관에서의 수혜자 숙주의 면역 기능 및/또는 대상체의 위장관 외부의 원위 부위에서의 전신 효과에 영향을 미칠 수 있다.
세균불균형과 연관된 장애의 치료에 유용한 본원에 개시된 예시적인 치료 조성물은 단일 박테리아 종(예를 들어, 단일 균주)의 면역조절 박테리아 집단 및/또는 단일 박테리아 종(예를 들어, 단일 균주)의 면역 조절 박테리아에서 파생된 EV의 집단을 함유한다. 이러한 조성물은 위장관에서의 수혜자 숙주의 면역 기능 및/또는 대상체의 위장관 외부의 원위 부위에서의 전신 효과에 영향을 미칠 수 있다.
일 구현예에서, 면역조절 박테리아로부터 파생된 EV의 단리된 집단을 함유하는 치료 조성물은 수혜자에서 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상을 치료하는 데 효과적인 양으로 포유동물 수혜자에게 (예를 들어, 경구로) 투여된다. 세균불균형은 위장관 세균불균형 또는 원위 세균불균형일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 치료 조성물은 위장 세균불균형 및 숙주 면역세포에 대한 그 영향 중 하나 이상을 치료하여, 사이토카인 분비에 대한 영향을 초래함으로써, 대상체 수혜자의 염증을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 세포 및 사이토카인 조절을 통해 수혜자 면역 반응을 조절하여 장 상피 장벽의 무결성을 증가시킴으로써 장 투과성을 감소시켜 위장 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상을 치료할 수 있다.
일부 구현예에서, 치료 조성물은 숙주 면역세포의 조절을 통해 세균불균형 부위에서의 수혜자 면역 반응을 조절함으로써 원위 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상을 치료할 수 있다.
다른 예시적인 치료 조성물은 세균불균형과 관련된 장애의 치료에 유용하며, 이 조성물은 수혜자에서 숙주 면역세포 하위집단, 예를 들어 T세포 하위집단, 면역 림프 세포, 수지상 세포, NK세포 및 기타 면역세포의 상대적 비율, 또는 이들의 기능을 변경할 수 있는 하나 이상의 유형의 박테리아 또는 EV를 함유한다.
다른 예시적 치료 조성물은 세균불균형과 관련된 장애의 치료에 유용하며, 이 조성물은 수혜자 대상체에서 면역세포 하위집단, 예를 들어 T세포 하위집단, 면역 림프 세포, NK세포, 및 기타 면역세포의 상대적 비율, 또는 이들의 기능을 변경할 수 있는 단일 면역조절 박테리아 종(예를 들어, 단일 균주)의 EV 집단을 함유한다.
일 구현예에서, 본 발명은 위장 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상의 치료를 필요로 하는 대상체에게 위장 세균불균형 부위에 존재하는 미생물군 집단을 변경하는 치료 조성물을 경구 투여함으로써 위장 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상을 치료하는 방법을 제공한다. 치료 조성물은 면역조절 박테리아로부터 유래된 하나 이상의 유형의 EV 또는 단일 면역조절 박테리아 종(예를 들어, 단일 균주)의 EV 집단을 함유할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명은 원위 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상의 치료를 필요로 하는 대상체에게 대상체의 위장관 외부의 면역 반응을 변경하는 치료 조성물을 경구 투여함으로써 원위 세균불균형 및 그 영향 중 하나 이상을 치료하는 방법을 제공한다. 치료 조성물은 면역조절 박테리아로부터 유래된 하나 이상의 유형의 EV 또는 단일 면역조절 박테리아 종(예를 들어, 단일 균주)의 EV 집단을 함유할 수 있다.
예시적 구현예에서, 세균불균형과 관련된 장애의 치료에 유용한 치료 조성물은 숙주 면역세포에 의한 하나 이상의 항염증성 사이토카인의 분비를 자극한다. 항염증성 사이토카인은 IL-10, IL-13, IL-9, IL-4, IL-5, TGFβ, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 다른 예시적 구현예에서, 세균불균형과 관련된 장애의 치료에 유용한 약학적 조성물은 숙주 면역세포에 의한 하나 이상의 염증촉진성 사이토카인의 분비를 감소시킨다(예를 들어, 억제한다). 염증촉진성 사이토카인은 IFNγ, IL-12p70, IL-1α, IL-6, IL-8, MCP1, MIP1α, MIP1β, TNFα, 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 다른 예시적 사이토카인은 당업계에 알려져 있으며 본원에 기재되어 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 세균불균형과 관련된 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 이를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 박테리아 또는 EV를 포함하는 프로바이오틱 또는 의료 식품 형태의 치료 조성물을 세균불균형과 관련된 장애가 치료되도록 세균불균형 부위의 미생물군을 변경하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여(예를 들어, 경구 투여)하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 프로바이오틱 또는 의료 식품 형태의 본 발명의 치료 조성물은 세균불균형이 발생할 위험이 있는 대상체에서 세균불균형의 발병을 예방하거나 지연시키기 위해 사용될 수 있다.
강화된 박테리아를 제조하는 방법
특정 양태에서, 본원에 기재된 EV의 생성을 위한 조작된 박테리아를 제조하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 조작된 박테리아는 특정 바람직한 특성을 향상시키도록 변형된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 조작된 박테리아는 (예를 들어, 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여) EV의 면역조절 및/또는 치료 효과의 향상, 독성의 감소, 박테리아 및/또는 EV 제조의 개선(예를 들어, 더 높은 산소 내성, 개선된 동결-해동 내성, 더 짧은 생성 시간)을 위해 변형된다. 조작된 박테리아는 부위-지정 돌연변이유발, 트랜스포존 돌연변이유발, 녹아웃, 녹인, 중합효소 연쇄 반응 돌연변이유발, 화학적 돌연변이유발, 자외선 돌연변이유발, 형질전환(화학적 또는 전기천공법), 파지 형질도입, 유도 진화, CRISPR/Cas9, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는(이에 한정되지 않음) 임의의 기술을 사용하여 생성될 수 있다.
본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 박테리아는 유도 진화에 의해 변형된다. 일부 구현예에서, 유도 진화는 환경 조건에 박테리아를 노출시키는 단계 및 환경 조건에서 생존 및/또는 성장이 개선된 박테리아를 선택하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 강화된 박테리아를 식별하는 분석을 사용하여 돌연변이 박테리아를 스크리닝하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 이 방법은 (예를 들어, 화학적 돌연변이원 및/또는 UV 방사선에 노출시켜) 박테리아를 돌연변이화하거나, 박테리아를 치료제(예를 들어, 항생제)에 노출시킨 후 바람직한 표현형을 갖는 박테리아를 검출하는 분석(예를 들어, 생체내 분석, 생체외 분석, 또는 시험관내 분석)을 수행하는 단계를 추가로 포함한다.
실시예
실시예 1: 동결건조물의 제조
표 A 내지 표 D에 제공된 제형을 갖는 부형제 스톡을 용액으로 제조하였다(표시된 양은 제형 내 각 성분의 백분율임). 부형제 스톡의 제형은 중합체의 유무에 기반하여 두 가지 주요 범주로 나뉜다. 부형제 스톡 용액을 세포외 소포체의 액상 제제와 혼합하였다. 생성된 용액을 동결건조하고 분석하였다.
본 실시예에서, 연구에 사용된 세포외 소포체(EV)는 프레보텔라 히스티콜라 균주로부터 단리하였다.
이들 혼합물의 냉동건조로부터 수집된 데이터는 표 E에 제공되어 있다. 측정된 모든 샘플은 5% 미만의 잔류 수분 함량을 가졌다. 지연형 과민증(DTH) 모델에서 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH) 특이적 염증을 사용하여 일부 샘플을 생체내에서 추가로 테스트하였다. KLH-DTH에서 테스트된 샘플은 효능을 보였다.
[표 A]
[표 B]
[표 C]
[표 D]
[표 E]
세포외 소포체(EV)의 냉동건조 사이클
냉동건조 사이클은 각 부형제 제형에 최적화되어 있다. 혼합물의 임계 온도 및 붕괴 온도의 차이는 냉동건조 중 선반 온도가 그에 따라 조정됨을 의미한다. 최적화 프로세스에는 초기 스크리닝, 1차 건조 최적화, 및 2차 건조 최적화로 구성된 3단계가 포함된다. 최종 사이클은 5% 잔류 수분 미만으로 물질을 건조하기에 충분한 것으로 확인되었다. 본 실시예에서 최적화를 위해 선택한 부형제 제형은 부형제 제형 7이었다.
[표 F]
[표 G]
[표 H]
[표 I]
실시예 2: EV 공급원으로서의 대표적인 균주
세포외 소포체(EV)는 표 J에 열거된 균주로부터 단리되었다. 각 균주에 대한 그람 염색, 세포벽 구조, 및 분류학상 분류에 대한 정보도 표 J에 제공되어 있다. EV를 이들 균주 중 임의의 것으로부터 제조하거나 단리하여 본원에 기재된 용액 및/또는 건조 형태를 제조할 수 있다.
[표 J]
실시예 3: 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)의 정제 및 제조
정제
세포외 소포체(예컨대, smEV)는 당업자에게 알려진 방법을 사용하여 박테리아 배양물로부터 정제되고 제조된다(S. Bin Park, et al. PLoS ONE. 6(3):e17629 (2011)).
예를 들어, 박테리아 배양물을 4℃ 또는 실온에서 10~40분 동안 10,000~15,500 x g로 원심분리하여 박테리아를 펠릿화한다. 이어서 0.22 μm 이하의 물질을 포함하고(예를 들어, 0.22 μm 또는 0.45 μm 필터를 통해 여과) 온전한 박테리아 세포를 제외하도록 배양 상청액을 여과한다. 여과된 상청액은 이어서, 황산암모늄 침전, 초원심분리, 또는 여과를 포함할 수 있는(이에 한정되지 않음) 방법을 사용하여 농축된다. 간략히, 황산암모늄 침전의 경우, 4℃에서 교반하면서 1.5~3 M 황산암모늄을 여과된 상청액에 천천히 첨가한다. 침전물을 4℃에서 8~48시간 동안 인큐베이션한 다음, 4℃에서 20~40분 동안 11,000 x g로 원심분리한다. 펠릿에는 EV 및 기타 잔해가 함유되어 있다. 간략히, 초원심분리를 사용하여, 여과된 상청액을 4℃에서 1~16시간 동안 100,000~200,000 x g로 원심분리한다. 이 원심분리의 펠릿에는 EV 및 기타 잔해가 함유되어 있다. 간략히, Amicon Ultra 스핀 필터의 사용 또는 접선 유동 여과에 의해, 여과 기술을 이용하여, 50, 100, 300, 또는 500 kDa를 초과하는 분자량의 종을 보유하도록 상청액을 여과한다.
대안적으로, 제조사의 지침에 따라 생물반응기를 교번 접선 유동(ATF) 시스템(예를 들어, Repligen의 XCell ATF)에 연결하여, 성장 중에 연속적으로 또는 성장 중 선택된 시점에 박테리아 배양물로부터 EV를 수득한다. ATF 시스템은 온전한 세포(>0.22 μm)를 생물반응기 내에 보유하고, 더 작은 성분들(예를 들어, EV, 유리 단백질)은 수집을 위해 필터를 통과할 수 있게 한다. 예를 들어, 시스템은 0.22 μm 미만의 여과액이 이후 100 kDa의 제2 필터를 통과하여 0.22 μm 내지 100 kDa의 EV와 같은 종은 수집되고 100 kDa보다 작은 종은 다시 생물반응기 내로 펌핑되도록 구성될 수 있다. 대안적으로, 시스템은 배양물이 성장하는 동안 생물반응기의 배지가 보충 및/또는 변형되도록 구성될 수 있다. 이러한 방법으로 수집된 EV는 여과된 상청액에 대해 전술한 바와 같이 초원심분리 또는 여과에 의해 추가로 정제 및/또는 농축될 수 있다.
상기 방법에 수득된 EV는 수크로스 구배 또는 Optiprep 구배의 사용을 포함할 수 있는(이에 한정되지 않음) 방법을 사용하여 구배 초원심분리에 의해 추가로 정제될 수 있다. 간략히 설명하면, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, 수크로스 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0에 재현탁한다. 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, Amicon Ultra 컬럼을 사용하여 농축액을 60% 수크로스, 30 mM Tris, pH 8.0으로 완충제 교환한다. 샘플을 35~60% 불연속 수크로스 구배에 적용하고 4℃에서 3~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다. 간략히 설명하면, 여과된 상청액을 황산암모늄 침전 또는 초원심분리를 사용하여 농축하는 경우, Optiprep 구배 방법을 사용하여, 펠릿을 PBS 중 45% Optiprep에 재현탁한다. 여과된 상청액을 여과를 사용하여 농축하는 경우, 60% Optiprep을 사용하여 농축액을 45% Optiprep의 최종 농도로 희석한다. 샘플을 0~45% 불연속 수크로스 구배에 적용하고 4℃에서 3~24시간 동안 200,000 x g로 원심분리한다. 대안적으로, 밀도에 따라 EV를 분리하기 위해 고해상도 밀도 구배 분별법을 사용할 수 있다.
제조
EV 제제의 무균성 및 단리를 확인하기 위해, EV를 시험 중인 박테리아의 통상적인 배양에 사용되는 한천 배지에 연속적으로 희석하고, 통상적인 조건을 사용하여 인큐베이션한다. 비멸균 제제를 0.22 μm 필터에 통과시켜 온전한 세포를 배제한다. 순도를 더 높이기 위해, 단리된 EV는 DNase 또는 프로테이나제 K로 처리될 수 있다.
대안적으로, 생체내 주사에 사용되는 EV의 제조를 위해, 정제된 EV는 이전에 설명된 바와 같이 처리된다(G. Norheim, et al. PLoS ONE. 10(9): e0134353 (2015)). 간략히, 수크로스 구배 원심분리 후, EV를 함유하는 밴드를 3% 수크로스를 함유하는 용액 또는 당업자에게 알려진 생체내 주사에 적합한 다른 용액 중에 50 μg/mL의 최종 농도로 재현탁한다. 이 용액은 또한 보조제, 예를 들어 0~0.5%(w/v) 농도의 수산화알루미늄을 함유할 수 있다.
샘플을 추가 시험에 적합하게 하기 위해(예를 들어, TEM 이미징 또는 시험관내 분석 전에 수크로스를 제거하기 위해), 여과(예를 들어, Amicon Ultra 컬럼), 투석, 또는 초원심분리(PBS에 15배 이상 희석 후, 200,000 x g, 1~3시간, 4℃), 및 PBS에의 재현탁을 사용하여 샘플을 PBS 또는 30 mM Tris, pH 8.0으로 완충제 교환한다.
이들 모든 연구에서, EV는 (본원에 기재한 바와 같이) 투여 전에 가열, 방사선 조사, 및/또는 동결건조될 수 있다.
실시예 4: 스트레스를 통한 박테리아 조작에 의한 다양한 양의 EV 생성 및/또는 EV의 함량 변경
스트레스, 특히 외피 스트레스는 일부 박테리아 균주에 의한 EV(예컨대, smEV)의 생성을 증가시키는 것으로 나타났다(I. MacDonald, M. Kuehn. J Bacteriol 195(13): doi: 10/1128/JB.02267-12). 박테리아에 의한 EV의 생성에 변화를 주기 위해, 다양한 방법을 사용하여 박테리아에 스트레스를 준다.
박테리아를 단일 스트레스 요인 또는 스트레스 요인의 조합에 노출시킬 수 있다. 서로 다른 박테리아에 대한 서로 다른 스트레스 요인의 영향은 스트레스 조건을 변화시키고 IC50 값(세포 성장을 50% 억제하는 데 필요한 조건)을 결정함으로써 실험적으로 결정된다. EV 정제, 정량화, 및 특성화가 수행된다. EV 생성은 (1) 복잡한 박테리아 샘플 및 EV에서 나노입자 추적 분석(NTA) 또는 투과 전자 현미경(TEM)에 의해; 또는 (2) NTA, 지질 정량화, 또는 단백질 정량화에 의해 EV 정제 후 정량화된다. EV 함량은 상기 방법에 의한 정제 후 평가된다.
항생제 스트레스
준치사 농도의 항생제를 첨가하여 표준 성장 조건에서 박테리아를 배양한다. 이는 0.1~1 μg/mL의 클로람페니콜, 또는 0.1~0.3 μg/mL의 겐타마이신, 또는 유사한 농도의 다른 항생제(예를 들어, 암피실린, 폴리믹신 B)를 포함할 수 있다. 리소자임, 데페신, 및 Reg 단백질과 같은 숙주 항균 산물을 항생제 대신 사용할 수 있다. 박테리오신 및 마이크로신을 포함하여, 박테리아에 의해 생성된 항균 펩티드도 사용될 수 있다.
온도 스트레스
표준 성장 조건에서, 그러나 일반적인 성장 온도보다 높거나 낮은 온도에서 박테리아를 배양한다. 대안적으로, 박테리아를 표준 조건에서 성장시킨 후, 저온 또는 고온에서 짧은 시간 동안 인큐베이션하여 각각 저온 충격 또는 열 충격에 노출시킨다. 예를 들어, 37℃에서 성장한 박테리아를 저온 충격을 위해 4℃ 내지 18℃에서 또는 열 충격을 위해 42℃ 내지 50℃에서 1시간 동안 인큐베이션한다.
기아 및 영양소 제한
영양 스트레스를 유도하기 위해, 하나 이상의 영양소가 제한된 조건에서 박테리아를 배양한다. 박테리아를 성장 내내 영양 스트레스에 노출시키거나, 풍부한 배지에서 빈약한 배지로 이동시킬 수 있다. 제한되는 배지 성분의 일부 예는 탄소, 질소, 철, 및 황이다. 예시적인 배지는 낮은 함량의 글루코스를 유일한 탄소원으로서 함유하는 M9 최소 배지(Sigma-Aldrich)이다. 특히 프레보텔라 종의 경우, 낮은 헤민 조건에서 성장한 세포가 더 많은 수의 EV를 생성하는 것으로 밝혀짐에 따라, 철 이용가능성 배지의 헤민 농도를 변경하거나 배지에 존재하는 포르피린 또는 기타 철 운반체의 유형을 변경하여 달라진다. 배지 성분은 EDTA 및 데페록사민과 같은 킬레이트제를 첨가하여 조작되기도 한다.
포화
박테리아를 포화 상태까지 성장시키고 포화 시점을 지나 다양한 기간 동안 인큐베이션한다. 대안적으로, 컨디셔닝된 배지를 사용하여 지수적 성장 동안 포화 환경을 모방한다. 포화된 배양물로부터 원심분리 및 여과에 의해 온전한 세포를 제거하여 컨디셔닝된 배지를 제조하고, 컨디셔닝된 배지는 특정 성분을 농축 또는 제거하기 위해 추가로 처리될 수 있다.
염 스트레스
박테리아를 NaCl, 담즙산염, 또는 기타 염류를 함유하는 배지에서 배양하거나 짧은 기간 동안 노출시킨다.
UV 스트레스
UV 스트레스는 UV 램프 아래에서 박테리아를 배양하거나 Stratalinker(Agilent)와 같은 기기를 사용하여 박테리아를 UV에 노출시켜 달성된다. UV는 전체 배양 기간에 걸쳐, 또는 짧은 순간에, 또는 성장 후 단일 정의 기간 동안 적용될 수 있다.
활성 산소 스트레스
활성 산소 종 형태의 스트레스를 유도하기 위해 준치사 농도의 과산화수소(250~1,000 μM)가 있는 상태에서 박테리아를 배양한다. 혐기성 박테리아는 이들에게 독성인 산소 농도에서 배양되거나 노출된다.
세제 스트레스
박테리아를 소듐 도데실 설페이트(SDS) 또는 데옥시콜레이트와 같은 세제에서 배양하거나 노출시킨다.
pH 스트레스
박테리아를 상이한 pH의 배지에서 배양하거나 제한된 시간 동안 노출시킨다.
실시예 5: EV 조성물 및 함량 프로파일링
EV는 NanoSight 특성화, SDS-PAGE 겔 전기영동, 웨스턴 블롯, ELISA, 액체 크로마토그래피-질량분석법 및 질량분석법, 동적 광 산란, 지질 수준, 총 단백질, 지질 대 단백질 비, 핵산 분석, 및/또는 제타 전위를 포함하는(이에 한정되지 않음) 다양한 방법 중 어느 하나에 의해 특성화될 수 있다.
EV의 NanoSight 특성화
정제된 EV의 크기 분포를 특성화하기 위해 나노입자 추적 분석(NTA)을 사용한다. 정제된 EV 제제를 NanoSight 장치(Malvern Instruments)에서 처리하여 EV 크기 및 농도를 평가한다.
SDS-PAGE 겔 전기영동
정제된 EV의 단백질 성분을 식별하기 위해, 표준 기술을 사용하여 샘플을 겔, 예를 들어 Bolt Bis-Tris Plus 4~12% 겔(Thermo-Fisher Scientific)에서 처리한다. 샘플을 1x SDS 샘플 완충제에서 10분 동안 비등시키고, 4℃까지 냉각한 후, 16,000 x g로 1분 동안 원심분리한다. 이어서 샘플을 SDS-PAGE 겔로 처리하고, 밴드 시각화를 위해 여러 표준 기술(예를 들어, 은 염색, 쿠마시 블루, 겔 코드 블루) 중 하나를 사용하여 염색한다.
웨스턴 블롯 분석
정제된 EV의 특정 단백질 성분을 식별하고 정량화하기 위해, EV 단백질을 전술한 바와 같은 SDS-PAGE에 의해 분리하고 웨스턴 블롯 분석(Cvjetkovic et al., Sci. Rep. 6, 36338 (2016))을 실시하고, ELISA를 통해 정량화한다.
EV 프로테오믹스 및 액체 크로마토그래피-질량분석법(LC-MS/MS) 및 질량분석법(MS)
EV에 존재하는 단백질은 질량분석법 기술에 의해 식별 및 정량화되며, 문헌[Erickson et al, 2017 (Molecular Cell, VOLUME 65, ISSUE 2, P361-370, JANUARY 19, 2017)]에 기재된 바와 같이, 디티오트레이톨(DTT) 용액을 이용한 단백질 환원 및 LysC 및 트립신과 같은 효소를 이용한 단백질 분해를 비롯한 표준 기술을 사용하여 LC-MS/MS용으로 EV 단백질을 제조할 수 있다. 대안적으로, 문헌[Liu et al. 2010(JOURNAL OF BACTERIOLOGY, June 2010, p. 2852-2860 Vol. 192, No. 11), Kieselbach and Oscarsson 2017(Data Brief. 2017 Feb; 10: 426-431.), Vildhede et al, 2018 (Drug Metabolism and Disposition February 8, 2018)]에 기재된 바와 같이 펩티드를 제조한다. 분해 후, 단일 샘플 내 단백질 식별을 위한 액체 크로마토그래피 및 질량분석 장치에서 직접 펩티드 제제를 처리한다. 샘플 간 단백질의 상대적 정량화를 위해, iTRAQ Reagent-8plex Multiplex Kit(Applied Biosystems, Foster City, CA) 또는 TMT 10plex 및 11plex Label Reagents(Thermo Fischer Scientific, San Jose, CA, USA)를 사용하여 서로 다른 샘플의 펩티드 분해물을 동중원소 태그로 표지한다. 각 펩티드 분해물을 상이한 동중원소 태그로 표지한 후, 표지된 분해물을 하나의 샘플 혼합물로 합한다. 합한 펩티드 혼합물을 식별 및 정량화를 위해 LC-MS/MS로 분석한다. LC-MS/MS 데이터를 사용하여 데이터베이스 검색을 수행하여, 표지된 펩티드 및 해당 단백질을 식별한다. 동중원소 표지의 경우, 부착된 태그의 단편화는 각 EV에 존재하는 펩티드 및 단백질의 상대적 정량화를 얻는 데 사용되는 저분자량 리포터 이온을 생성한다.
또한, 대사체 함량은 질량 분석법과 결합된 액체 크로마토그래피 기술을 사용하여 확인된다. 다양한 샘플의 대사체 함량을 결정하기 위한 다양한 기술이 존재하며, 질량 측정과 결합된 용매 추출, 크로마토그래피 분리, 및 다양한 이온화 기술을 포함하여 당업자에게 알려져 있다(Roberts et al 2012 Targeted Metabolomics. Curr Protoc Mol Biol. 30: 1-24; Dettmer et al 2007, Mass spectrometry-based metabolomics. Mass Spectrom Rev. 26(1):51-78). 비제한적 예로서, LC-MS 시스템은 1100 시리즈 펌프(Agilent) 및 HTS PAL 오토샘플러(Leap Technologies)와 결합된 4000 QTRAP 삼중 사중극자 질량분석기(AB SCIEX)를 포함한다. 9부피의 74.9:24.9:0.2(v/v/v) 아세토니트릴/메탄올/포름산 함유 안정적 동위원소-표지 내부 표준물질(발린-d8, Isotec; 및 페닐알라닌-d8, Cambridge Isotope Laboratories)을 사용하여 배지 샘플 또는 다른 복합 대사 혼합물(약 10 μL)을 추출한다. 관심 대사산물에 따라 표준물질을 조정 또는 수정할 수 있다. 샘플을 원심분리하고(10분, 9,000 g, 4℃), HILIC 컬럼(150 × 2.1 mm, 3 μm 입자 크기)에 용액을 주입하여 상청액(10 μL)을 LCMS에 적용한다. 5% 이동상[10 mM 포름산암모늄, 수중 0.1% 포름산]을 250 μL/분의 속도로 1분 동안 흘린 후 10분에 걸쳐 40% 이동상[0.1% 포름산 함유 아세토니트릴] 용액까지 선형 구배를 적용하여 컬럼을 용리한다. 이온 분무 전압은 4.5 kV로 설정하고 소스 온도는 450℃이다.
질량 스펙트럼 피크 적분을 위한 AB SCIEX의 Multiquant 1.2와 같은 상용 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석한다. 관심 피크를 수동 선별하고 표준물질과 비교하여 피크의 정체를 확인해야 한다. 적절한 표준물질로 정량화를 수행하여 박테리아 컨디셔닝 및 종양 세포 성장 후, 초기 배지에 존재하는 대사산물의 수를 결정한다. 피크 식별을 위해 NIST 데이터베이스와 같은(이에 한정되지 않음) 대사산물 데이터베이스를 사용하는 비표적화 대사체학 접근법을 사용할 수도 있다.
동적 광 산란(DLS)
다양한 EV 제제에서의 다양한 크기의 입자 분포를 포함한 DLS 측정은 DynaPro NanoStar(Wyatt Technology) 및 Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments)와 같은 기기를 사용하여 이루어진다.
지질 수준
지질 수준은 문헌[A.J. McBroom et al. J Bacteriol 188:5385-5392. 및 A. Frias, et al. Microb Ecol. 59:476-486 (2010)]에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 FM4-64(Life Technologies)를 사용하여 정량화된다. 샘플을 FM4-64와 함께 인큐베이션한다(37℃ 암실에서 10분 동안 PBS 중 3.3 μg/mL). 515 nm의 여기 후, Spectramax M5 플레이트 판독기(Molecular Devices)를 사용하여 635 nm의 방출을 측정한다. 절대 농도는 미지 샘플을 농도를 알고 있는 표준물질(예컨대, 팔미토일올레오일포스파티딜글리세롤(POPG) 소포체)과 비교하여 결정된다. EV에 존재하는 지질을 식별하기 위해 지질학을 사용할 수 있다.
총 단백질
단백질 수준은 Bradford 및 BCA 분석과 같은 표준 분석에 의해 정량화된다. Bradford 분석은 제조사의 프로토콜에 따라 Quick Start Bradford 1x 염료 시약(Bio-Rad)을 사용하여 실행된다. BCA 분석은 Pierce BCA 단백질 분석 키트(Thermo-Fisher Scientific)를 사용하여 실행된다. 절대 농도는 농도를 알고 있는 BSA로부터 생성된 표준 곡선과 비교하여 결정된다. 대안적으로, 단백질 농도는 Nanodrop 분광광도계(Thermo-Fisher Scientific)에서 측정되는 280 nm에서의 샘플 흡광도(A280)를 사용하여 Beer-Lambert 식을 통해 계산될 수 있다. 또한, 프로테오믹스를 사용하여 샘플에서 단백질을 식별할 수 있다.
지질:단백질 비
지질:단백질 비는 지질 농도를 단백질 농도로 나누어 생성된다. 이는 각 제제에서 유리 단백질 대비 소포체 순도의 척도를 제공한다.
핵산 분석
EV로부터 핵산을 추출하고 Qubit 형광계를 사용하여 정량화한다. BioAnalyzer를 사용하여 크기 분포를 평가하고 재료를 시퀀싱한다.
제타 전위
다양한 제제의 제타 전위는 Zetasizer ZS(Malvern Instruments)와 같은 기기를 사용하여 측정된다.
실시예 6: 제조 조건
농축 배지를 사용하여 시험관내 및 생체내 사용 및 궁극적으로 EV 제조를 위한 박테리아를 성장시키고 제조한다. 예를 들어, 배지는 당, 효모 추출물, 식물성 펩톤, 완충제, 염, 미량 원소, 계면활성제, 소포제, 및 비타민을 함유할 수 있다. 효모 추출물 및 펩톤과 같은 복합 성분의 조성물은 정의되지 않거나 부분적으로 정의될 수 있다(대략적 농도의 아미노산, 당 등 포함). 미생물 대사는 탄소 및 질소와 같은 자원의 이용가능성에 따라 달라질 수 있다. 다양한 당 또는 기타 탄소원이 시험될 수 있다. 대안적으로, 본원에 참조로 포함되는 문헌[Saarela et al., J. Applied Microbiology. 2005. 99: 1330-1339]에 나타낸 바와 같이 배지를 제조하고 선택된 박테리아를 성장시킬 수 있다. 우유 기반 성분 없이 생성된 선택된 박테리아의 동결-건조 생존, 저장 안정성, 및 산 및 담즙 노출에 대한 발효 시간, 동결방지제, 및 세포 농축액의 중화의 영향.
대규모로 배지를 멸균한다. 멸균은 초고온(HHT) 처리에 의해 달성될 수 있다. UHT 처리는 매우 높은 온도에서 짧은 시간 동안 수행된다. UHT 범위는 135~180℃일 수 있다. 예를 들어, 배지는 135℃에서 10 내지 30초 사이에서 멸균될 수 있다.
플라스크 또는 더 작은 생물반응기에서 접종원을 제조할 수 있으며, 성장을 모니터링한다. 예를 들어, 접종원 크기는 총 생물반응기 부피의 약 0.5 내지 3%일 수 있다. 물질의 용도 및 필요성에 따라, 생물반응기 부피는 최소 2 L, 10 L, 80 L, 100 L, 250 L, 1000 L, 2500 L, 5000 L, 10,000 L일 수 있다.
접종 전에 생물반응기는 원하는 pH, 온도, 및 산소 농도의 배지로 준비된다. 배양 배지의 초기 pH는 공정 설정값과 다를 수 있다. pH 스트레스는 낮은 세포 농도에서 해로울 수 있으며; 초기 pH는 pH 7.5와 공정 설정값 사이일 수 있다. 예를 들어, pH는 4.5와 8.0 사이에서 설정될 수 있다. 발효 중에, pH는 수산화소듐, 수산화포타슘, 또는 수산화암모늄을 사용하여 조절될 수 있다. 온도는 25℃ 내지 45℃, 예를 들어 37℃로 조절될 수 있다. 혐기성 조건은 배양액의 산소 수준을 약 8 mg/L에서 0 mg/L로 낮춤으로써 생성된다. 예를 들어, 혐기성 조건을 설정하기 위해 질소 또는 가스 혼합물(N2, CO2, 및 H2)을 사용할 수 있다. 대안적으로, 가스를 사용하지 않고, 세포가 배지에서 남은 산소를 소비함으로써 혐기성 조건이 설정된다. 균주 및 접종 크기에 따라 생물반응기 발효 시간이 달라질 수 있다. 예를 들어, 발효 시간은 약 5시간에서 48시간까지 다양할 수 있다.
박테리아를 동결 상태로부터 되살리려면 특별한 고려 사항이 필요할 수 있다. 생산 배지는 해동 후 세포에 스트레스를 줄 수 있으며; 해동된 물질로부터 시드 트레인을 일관되게 시작하려면 특정 해동 배지가 필요할 수 있다. 시드 부피를 증가시키거나 미생물 성장 상태를 유지하기 위한 목적으로 시드 물질을 새로운 배지로 옮기거나 통과시키는 동역학은 박테리아의 현재 상태(예를 들어, 지수적 성장, 정체 성장, 스트레스 유무)에 의해 영향을 받을 수 있다.
생산 발효기(들)의 접종은 성장 동역학 및 세포 활성에 영향을 미칠 수 있다. 성공적이고 일관된 생산을 용이하게 하기 위해 생물반응기 시스템의 초기 상태는 최적화되어야 한다. 전체 배지에 대한 시드 배양물의 분율(예를 들어, 백분율)은 성장 동역학에 큰 영향을 미친다. 범위는 발효기 작업 부피의 1~5%일 수 있다. 배양 배지의 초기 pH는 공정 설정값과 다를 수 있다. pH 스트레스는 낮은 세포 농도에서 해로울 수 있으며; 초기 pH는 pH 7.5와 공정 설정값 사이일 수 있다. 접종 중 교반 및 시스템으로의 가스 흐름은 공정 설정값과 다를 수 있다. 두 조건으로 인한 물리적 및 화학적 스트레스는 낮은 세포 농도에서 해로울 수 있다.
공정 조건 및 제어 설정은 미생물 성장 및 세포 활성의 동역학에 영향을 미칠 수 있다. 공정 조건의 변화는 막 조성, 대사산물 생성, 성장 속도, 세포 스트레스 등을 변화시킬 수 있다. 성장을 위한 최적의 온도 범위는 균주에 따라 다를 수 있다. 범위는 20~40℃일 수 있다. 세포 성장 및 다운스트림 활성의 성능을 위한 최적의 pH는 균주에 따라 다를 수 있다. 범위는 pH 5~8일 수 있다. 배지에 용해된 가스는 세포에서 대사를 위해 사용될 수 있다. 공정 전반에 걸쳐 , 및 N2 농도를 조정하는 것이 필요할 수 있다. 영양소의 이용가능성은 세포 성장을 변화시킬 수 있다. 박테리아는 과잉 영양소가 이용 가능할 때 대체 동역학을 가질 수 있다.
발효 종료시 및 채취 중의 박테리아 상태는 세포 생존 및 활성에 영향을 미칠 수 있다. 박테리아는 분리 및 다운스트림 처리와 관련된 물리적 및 화학적 스트레스에 더 잘 대비하도록 채취 직전에 사전 컨디셔닝될 수 있다. 온도 변화(종종 20~5℃로 감소)는 세포 대사를 감소시켜, 발효기로부터 제거될 때 성장(및/또는 사멸) 및 생리학적 변화를 늦출 수 있다. 원심 농축의 효과는 배양 pH에 의해 영향을 받을 수 있다. pH를 1~2포인트 올리면 농축의 효과를 높일 수 있지만 세포에 해로울 수도 있다. 배지 중의 염 및/또는 당의 농도를 증가시켜 채취 직전에 박테리아에 스트레스를 줄 수 있다. 이러한 방식으로 스트레스를 받은 세포는 다운스트림 동안 동결 및 동결건조에서 더 잘 생존할 수 있다.
분리 방법 및 기술은 박테리아가 배양 배지로부터 얼마나 효율적으로 분리되는지에 영향을 미칠 수 있다. 고체는 원심분리 기술을 사용하여 제거될 수 있다. 원심 농축의 효과는 배양 pH 또는 응집제의 사용에 의해 영향을 받을 수 있다. pH를 1~2포인트 올리면 농축의 효과를 높일 수 있지만 세포에 해로울 수도 있다. 배지 중의 염 및/또는 당의 농도를 증가시켜 채취 직전에 박테리아에 스트레스를 줄 수 있다. 이러한 방식으로 스트레스를 받은 세포는 다운스트림 동안 동결 및 동결건조에서 더 잘 생존할 수 있다. 또한 여과를 통해 박테리아를 분리할 수도 있다. 세포가 성공적 원심분리에 과도한 g-분을 필요로 하는 경우 여과가 정제를 위한 원심분리 기술보다 우수하다. 부형제는 분리 전후에 첨가될 수 있다. 부형제는 동결 방지를 위해 또는 동결건조 중 보호를 위해 첨가될 수 있다. 부형제는 수크로스, 트레할로스, 또는 락토스를 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 이들은 대안적으로 완충제 및 항산화제와 혼합될 수 있다. 동결건조 전에, 부형제와 혼합된 세포 펠릿 액적을 액체 질소에 담근다.
채취는 연속 원심분리에 의해 수행될 수 있다. 다양한 부형제와 함께 원하는 최종 농도로 재현탁될 수 있다. 부형제는 동결 방지를 위해 또는 동결건조 중 보호를 위해 첨가될 수 있다. 부형제는 수크로스, 트레할로스, 또는 락토스를 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 이들은 대안적으로 완충제 및 항산화제와 혼합될 수 있다. 동결건조 전에, 부형제와 혼합된 세포 펠릿 액적을 액체 질소에 담근다.
살아있는 박테리아, 소포체, 또는 기타 박테리아 유도체를 포함하는 물질의 동결건조는 동결, 1차 건조, 및 2차 건조 단계를 포함한다. 동결건조는 동결로 시작한다. 생성 물질은 동결 단계 이전에 동결보호제 또는 안정화제와 혼합되거나 혼합되지 않을 수 있다.　생성물은 동결건조기에 로딩하기 전에, 또는 동결건조기 선반에서 제어된 조건하에 동결될 수 있다.　다음 단계인 1차 건조 단계 중에, 얼음은 승화를 통해 제거된다. 여기서, 진공이 발생되고 적절한 양의 열이 물질에 공급된다. 얼음은 생성물 온도를 어는점 미만으로, 그리고 물질의 임계 온도(Tc) 미만으로 유지하면서 승화한다. 물질이 로딩되는 선반의 온도 및 챔버 진공은 원하는 생성물 온도를 달성하도록 조작될 수 있다. 2차 건조 단계 중에, 생성물에 결합된 물 분자가 제거된다. 여기서, 온도는 일반적으로, 물 분자와 생성 물질 사이에 형성된 임의의 물리 화학적 상호작용을 차단하기 위해 1차 건조 단계보다 더 높게 상승된다. 동결-건조 공정이 완료된 후, 챔버는 질소와 같은 불활성 기체로 채워질 수 있다. 생성물은 건조 조건하에 동결건조기 내에서 유리 바이알 또는 기타 유사한 용기에 밀봉되어, 대기 중 물 및 오염물질에 대한 노출을 방지할 수 있다.
실시예 7: EV 제조
프레보텔라 히스티콜라 및 베일로넬라 파르불라 EV를 다음과 같이 제조하였다.
EV: EV의 다운스트림 처리는 생물반응기 채취 직후에 시작되었다. 20,000 g의 원심분리를 사용하여 배양액으로부터 세포를 제거하였다. 생성된 상청액을 0.22 μm 필터를 사용하여 청징하였다. 100 kDa 분자량 컷오프(MWCO)를 갖는 플랫 시트 카세트 한외여과(UF) 막이 있는 접선 유동 여과(TFF)를 사용하여 EV를 농축 및 세척하였다. 정용여과(DF)는 5부피의 인산염 완충액(PBS)을 사용하여 저분자 및 저단백질을 세척하는 데 사용되었다. TFF의 잔류물을 초원심분리기에서 200,000 g로 1시간 동안 회전 침강시켜 고속 펠릿(HSP)이라고 하는 EV가 풍부한 펠릿을 형성하였다. 펠릿을 최소 PBS로 재현탁하고, optiprepTM 밀도 구배 배지로 구배를 마련하고, 200,000 g로 16시간 동안 초원심분리하였다. 생성 분획 중, 2개의 중간 밴드에 EV가 포함되었다. 분획을 15배 PBS로 세척하고, EV를 200,000 g로 1시간 동안 회전 침강시켜, 분획화된 HSP 또는 fHSP를 생성하였. 생성물을 이후 최소 PBS로 재현탁하고, 풀링하고, mL당 입자 및 단백질 함량에 대해 분석하였다. 투약은 원하는 농도를 달성하기 위해 ml당 입자 수로부터 준비되었다. EV는 532 nm 레이저를 사용하는 산란 모드에서 Malvern Panalytical의 NanoSight NS300을 사용하여 특성화되었다.
실시예 8: EV 단리 및 열거
EV 단리에 사용되는 장비는 SLA-3000 로터를 구비한 Sorvall RC-5C 원심분리기; Beckman-Coulter 45Ti 로터의 Optima XE-90 초원심분리기; Thermo Scientific의 Sorvall wX+ Ultra 시리즈 원심분리기; 및 Fiberlite F37L-8x100 로터를 포함한다.
박테리아 상청액 수집 및 여과:
박테리아가 아닌 EV를 회수하기 위해 박테리아를 펠릿화하고 상청액으로부터 여과 제거해야 한다.
펠릿화된 박테리아 배양물을 SLA-3000 로터를 구비한 Sorvall RC-5C 원심분리기를 사용하여 생성하고 최소 7,000 rpm으로 최소 15분 동안 배양물을 원심분리한다. 이어서 상청액을 새 멸균 용기에 따른다.
상청액을 0.2 μm 필터를 통해 여과한다. 여과성이 좋지 않은 상청액(필터 통과 상청액이 300 ml 미만)의 경우 0.2 μm 진공 필터 앞에 0.45 μm 캡슐 필터를 부착한다. 여과된 상청액을 4℃에서 보관한다. 이어서 여과된 상청액을 TFF를 사용하여 농축할 수 있다.
초원심분리를 이용한 EV의 단리
농축된 상청액을 초원심분리기에서 원심분리하여 EV를 펠릿화하고 더 작은 생체분자로부터 EV를 단리한다. 속도는 200,000 x g, 시간은 1시간, 온도는 4℃이다. 로터가 정지하면 초원심분리기로부터 튜브를 제거하고 상청액을 부드럽게 따라낸다. 더 많은 상청액을 첨가하고 튜브를 다시 원심분리한다. 농축된 상청액이 모두 원심분리된 후 생성된 펠릿을 '미정제' EV 펠릿이라고 한다. 멸균 1x PBS를 펠릿에 첨가하여 용기에 넣는다. 용기를 속도 70으로 설정된 진탕기에 놓고, 4℃ 냉장고에서 밤새 또는 그 이상 둔다. EV 펠릿을 추가 멸균 1x PBS로 재현탁한다. 재현탁된 미정제 EV 샘플을 4℃ 또는 -80℃에 보관한다.
밀도 구배를 이용한 EV 정제
EV 정제를 위해 밀도 구배를 이용한다. 초원심분리 중에, 샘플의 입자는 '부력' 밀도에 따라 차등 밀도 매질 내에서 이동하고 분리된다. 이러한 방식으로 EV는 샘플에서 당, 지질, 또는 다른 단백질과 같은 다른 입자로부터 분리된다.
EV 정제를 위해, 45% 층, 35% 층, 25% 층, 및 15% 층의 4가지 다른 백분율의 밀도 매질(60% Optiprep)을 사용한다. 이는 차등 층을 생성한다. 멸균 1x PBS로 이루어진 상단에 0% 층이 추가된다. 45% 구배층에는 미정제 EV 샘플이 포함되어야 한다. 15 ml의 Optiprep에 5 ml의 샘플을 첨가한다. 미정제 EV 샘플이 5 ml 미만인 경우, 멸균 1x PBS를 사용하여 부피를 늘린다.
일회용 피펫을 사용하여 45% 구배 혼합물을 위아래로 피펫팅하여 혼합한다. 이어서 샘플을 라벨이 붙은 깨끗한 멸균 초원심분리기 튜브에 피펫팅한다. 다음으로, 10 ml 일회용 피펫을 사용하여 35% 구배 혼합물 13 ml를 천천히 첨가한다. 이어서 25% 구배 혼합물 13 ml에 첨가한 후 15% 혼합물 13 ml, 그리고 마지막으로 멸균 1x 6 ml를 첨가한다. 초원심분리기 튜브는 멸균된 1x PBS와 균형을 이룬다. 구배를 로터에 조심스럽게 배치하고 초원심분리기를 200,000 x g 및 4℃로 설정한다. 구배를 최소 16시간 동안 원심분리한다.
깨끗한 피펫을 사용하여 관심 분획을 제거하고 15 ml 코니컬 튜브에 첨가한다. 이러한 '정제된' EV 샘플을 4℃에 보관한다.
EV로부터 잔류 optiprep을 세척하고 제거하기 위해, 10x 부피의 PBS를 정제된 EV에 첨가한다. 초원심분리기를 200,000 x g 및 4℃로 설정한다. 원심분리하고 1시간 동안 회전시킨다. 튜브를 초원심분리기에서 조심스럽게 제거하고 상청액을 따라낸다. 정제된 EV를 모든 샘플이 펠릿화될 때까지 세척한다. 1x PBS를 정제된 펠릿에 첨가하여 용기에 넣는다. 용기를 속도 70으로 설정된 진탕기에 놓고, 4℃ 냉장고에서 밤새 또는 그 이상 둔다. '정제된' EV 펠릿을 추가 멸균 1x PBS로 재현탁한다. 재현탁된 정제 EV 샘플을 4℃ 또는 -80℃에 보관한다.
실시예 9: 프레보텔라 EV 동결건조물: DTH 효능
5주령 암컷 C57BL/6 마우스를 Taconic Biosciences에서 구입하여 동물실에서 1주일 동안 적응시켰다. 0일차에 피하 면역화에 의해 KLH 및 CFA(1:1)의 에멀젼으로 마우스를 프라이밍하였다. 마우스에게 프레보텔라 히스티콜라 EV로 매일 경구 위관영양 공급하거나 6~8일차부터 덱사메타손(양성 대조군)을 1 mg/kg으로 복강내 투여하였다. 8일차에 투여한 후, 마우스를 이소플루란으로 마취시키고, Fowler 캘리퍼스를 사용하여 기준선 측정을 위해 왼쪽 귀를 측정하고, 마우스의 왼쪽 귀에 식염수(10 μl) 중 KLH를 피내 시험감염시키고, 24시간 후에 귀 두께를 측정하였다.
본 실시예에서, 연구에 사용된 프레보텔라 smEV를 프레보텔라 균주 B(NRRL 수탁번호 B 50329)로부터 단리하였다. EV를 부형제 제형 7a에서 동결건조하였다.
24시간 귀 측정 결과는 도 1에 도시되어 있다. 프레보텔라 히스티콜라로부터 제조되고 제형 7a의 부형제에서 동결건조된 EV를 3일의 투여 동안 4개의 용량(2E09, 2E07, 2E05, 2E03)으로 용량 범위 연구에서 테스트하였다. 프레보텔라 히스티콜라 EV의 모든 용량은 가장 낮은 용량(2E03)을 제외하고 비히클에 비해 효능이 있었고 용량 반응 경향을 보였다. 음성 대조군으로서, 제형 7a를 단독으로 사용하였다(마치 2e11 EV가 제형화된 것처럼 존재하는 양과 등가 용량의 부형제 성분 포함).
실시예 10: EV(smEV)의 단리 및 특성화
하기 나열된 과로부터 단리된 균주:
모든 EV는 제형 7a(20% 트레할로스, 80% 만니톨)에서 동결건조되었다.
분류체계는 lpsn.dsmz.de/에서 가져왔다.
프레보텔라세애:
도메인: 박테리아, 문: 박테로이데테스, 박테로이디아 강, 목: 박테로이달레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
프레보텔라 니그레센스
프레보텔라 코프리
프레보텔라 오랄리스
프레보텔라 부카에
오실로스피라세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 클로스트리디아, 목: 유박테리알레스
그람 음성 세포벽 구조(단일막)
아나에로트룬쿠스 콜리호미니스(배치 1, 글루코스에서 성장)
아나에로트룬쿠스 콜리호미니스(배치 2, NAG에서 성장)
수브돌리그라눌룸 바리아빌레
해리플린티아 아세티스포라(배치 1, 트윈에서 성장)
해리플린티아 아세티스포라(배치 2, 트윈 없이 성장)
아쿠탈리박터 종
베일로넬라세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 네가티비쿠테스, 목: 베일로넬라레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
베일로넬라 파르불라(배치 1, 균주 A)
베일로넬라 파르불라(배치 1, 균주 B)
메가스파에라 바지날리스
메가스파에라 종
베일로넬라 아티피카
탄네렐라세애
도메인: 박테리아, 문: 박테로이데테스, 강: 박테로이디아, 목: 박테로이달레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
파라박테로이데스 디스타소니스
파라박테로이데스 고르도니
파라박테로이데스 메르다에
파라박테로이데스 골드스테이니
클로스트리디아세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 클로스트리디아, 목: 유박테리알레스
그람 음성 세포벽 구조(단일막)
아나에로마실리바실루스 종
클로스트리디움 카다베리스
클로스트리디움 부티리쿰
라크노스피라세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 클로스트리디아, 목: 유박테리알레스
그람 음성 세포벽 구조(단일막)
도레아 론기카테나
메디테라네이박터/[루미노코커스] 그나부스
블라우티아 마실리엔시스
리케넬라세애
도메인: 박테리아, 문: 박테로이데테스, 박테로이디아 강, 목: 박테로이달레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
알리스티페스 인디스틴크투스
알리스티페스 티모넨시스
셀레노모다세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 네가티비쿠테스 목: 셀레노모나달레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
셀레노모나스 펠릭스
셀레노모나스 스푸티게나
스포로무사세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 네가티비쿠테스 목: 셀레노모나달레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
프로피오니스포라 종
크리스텐세넬라세애
도메인: 박테리아, 문: 피르미쿠테스, 강: 유박테리알레스, 목: 크리스텐세넬라레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
크리스텐세넬라 미누타
시너지스타세애
도메인: 박테리아, 문: 시너지스테스, 강: 시너지스티아, 목: 시너지스탈레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
클로아시바실러스 에브리엔시스
아케르만시아세애
도메인: 박테리아, 문: 베루코미크로비아, 강: 베루코미크로비애, 목: 베루코미크로비알레스
그람 음성 세포벽 구조(이중막)
아케르만시아 무시니필라
EV 단리 프로세스
동결건조를 위한 EV의 제조는 다음과 같다:
생물 반응기에서 미생물을 성장시킨 후, 배양물을 분당 최소 7,000회전에서 최소 15분 동안 SLA-3000 로터가 장착된 Sorvall RC-5C 원심분리기로 펠릿화하였다. 상청액을 수집하고 0.2 μm Pall Vacu-Cap 필터(VWR, 28139-706)를 통과시켰다. 여과성이 좋지 않은 상청액(필터 통과 상청액이 300 ml 미만)의 경우 0.2 μm 진공 필터 앞에 0.45 μm 캡슐 필터(VWR, 28145-870)를 부착하였다.
박테리아 상청액을 플랫 시트 TFF(접선 유동 여과)를 사용하여 농축하였다. 단일막 박테리아에서 파생된 상청액을 2개의 300 kDa 재사용 가능 카세트(Repligen)를 통해 농축하였다. 이중막 박테리아에서 파생된 상청액을 2개의 300 kDa(Millipore) 재사용 가능 카세트를 통해 농축하여 비-LPS 함유 박테리아로부터의 상청액으로의 LPS(내독소)의 가능한 이동을 제한하였다. 상청액 농축 전에 플랫 시트 TFF 시스템, 공급물, 잔류물, 및 투과물 라인을 0.5 M NaOH로 플러싱한 다음 유출 DI수가 중성 pH(약 4 L)를 나타낼 때까지 0.22 μm 멸균 여과된 탈이온수(DI)로 플러싱하였다. 이어서 폐기물 저장소에 투과물 라인을 넣고 상청액을 함유하는 보틀에 공급물 및 잔류물 라인을 넣어 상청액을 농축하였다. 부피가 100 ml에 도달할 때까지 상청액을 농축하였다. 압력 센서를 모니터링하고 10 psi 미만으로 유지하였다. 농축된 상청액이 100 ml에 도달한 후, 물질을 정용여과하여 작은 대사산물 및 배지 성분을 제거하였다. 멸균 여과된 탈이온수를 샘플에 따라 500 ml 또는 1 L의 부피로 천천히 첨가하였다. 튜브에 남아 있는 물질을 제거하고 수집하기 위해 투과물 라인을 고정하고 공급물 및 잔류물 라인을 50 ml의 0.22 μm 멸균 여과된 탈이온수를 함유하는 더 작은 2차 보틀에 넣었다. 라인을 멸균 탈이온수로 플러싱하였다. 생성된 물질을 수집하고 농축된 상청액에 첨가하였다. 농축된 잔류물을 제형 7a(20% 트레할로스, 80% 만니톨)에 동결건조하였다.
구배 정제 전용:
여과 및 농축된 상청액을 깨끗한 초원심분리기 튜브로 나누고, 물질을 회전 여과하고 이어서 농축된 상청액을 깨끗한 초원심분리기 튜브로 나누고, 물질을 초원심분리기에서 1시간 동안 4℃에서 200,000 x g로 회전 침강시키고 샘플을 멸균 PBS에 재현탁하였다. 이어서 미정제 펠릿을 15%, 35%, 및 45%의 농도에서 Optiprep(Sigma Aldrich, D1556-250ML) 구배에서 구배 정제하였다. 물질을 4℃에서 10~16시간 동안 200,000 x g로 초원심분리하였다(45Ti 로터가 구비된 Beckman-Coulter의 Optima XE-90 초원심분리기 또는 Fiberlite F37L-8x100 로터가 구비된 Thermo Scientific의 Sorvall wX+ Ultra 시리즈 원심분리기). Optiprep을 제거하기 위해 샘플을 10x 부피의 PBS로 세척하였다. 세척된 샘플을 4℃에서 1시간 동안 200,000 x g로 회전 침강시켰다(샘플 층으로부터 모든 물질을 수집하기 위해 2회 세척이 필요하였음). 샘플을 멸균 PBS에 재현탁하였다.
동결건조
동결건조 조건은 표 6에 제공되어 있다.
[표 6]
EV 특성 분석
1. 동결건조 분말의 입자 계수
목적: ZetaView에서 나노입자 추적 분석을 사용하여 분말에 존재하는 입자의 수를 측정.
프로토콜: 간략히, 화학천칭으로 칭량된 각 분말 50 mg을 MilliQ 물(Millipore) 5 mL에 재현탁하고 일련의 희석액(부피당 10-3, 10-4, 및 10-5 중량)을 준비하여 제조사의 프로토콜에 지정된 대로 시야당 50~400개 입자의 최적 판독 범위를 갖도록 Zetaview(Particle Metrix)에서 테스트하였다. Zetaview 카메라를 100 nm PS 정렬 비드(Particle Metrix, cat. 110-0020)를 사용하여 정렬하였고 100 nm 콜로이드 실리카 비드(Kanomax)의 밀리리터 농도당 1E8 입자를 기준 표준으로 사용하였다. 레이저는 산란 488, 카메라 감도는 80, 셔터는 300으로 설정하였다. 샘플을 이중으로 측정하고 평균값을 기록하였다. 결과는 도 2~6에 나와 있다. y축은 milliQ 물에서 mL당 5mg의 재현탁으로부터 외삽된 분말 mg당 입자를 제공한다.
2. 입자 크기 및 전하를 측정하는 동적 광 산란
목적: 입자의 크기와 전하는 시험관내 및 생체내 EV의 효능과 효력에 영향을 미칠 수 있는 물리적 특성이다. 입자의 크기와 전하는 식균 작용을 포함하여 면역 세포와의 상호 작용에 영향을 미친다는 증거가 있다(문헌[Paul et al. (2013) Biophys J. 105(5):1143-50]). 전하는 또한 EV를 함유하는 상청액의 여과성 및 용액 내 EV의 안정성에 영향을 미칠 수 있다(문헌[Getnet Midekessa et al. (2020) ACS Omega. 5(27): 16701- 10]). 동적 광 산란(DLS)은 직경(크기) 및 제타 전위(전하)를 포함한 입자의 특징을 확인하기 위해 산란광의 강도를 시간의 함수로 측정하는 대량 입자 검출 방법이다(문헌[Szatanek et al. (2017) Int J Mol Sci. 18(6):1153.]). 크기를 측정하는 방법으로 DLS를 사용하는 이점은 광범위한 입자 크기를 검출할 수 있다는 것이다. 소포체 제제와 같은 이종 또는 다분산 샘플에서 DLS는 최대 3개의 하위집단을 검출할 수 있다.
프로토콜: 모든 샘플은 DTS1070 큐벳을 사용하여 Malvern Zeta Sizer Nano ZS에서 실행되었다. 샘플을 0.1x PBS(Gibco)에서 100x 또는 1000x로 희석하였다. 설정의 경우 굴절률은 소포체의 굴절률에 대한 문헌 보고서(문헌[Welsh et al. (2020) J Extracell Vesicles, 9(1):1816641])를 기반으로 1.39로 설정하였고 물질 흡수는 0.01로 설정하였다. 샘플 희석에 사용된 분산제는 0.1x PBS(Gibco)였다. 입자 간의 장거리 상호 작용을 제한하기 위해 미량 염을 첨가하였다. 측정 각도는 173°로 설정하였다. 크기를 측정하기 위해 총 5번의 반복 측정을 수행하였고 제타 전위를 측정하기 위해 3번의 측정을 수행하였다. 모든 실행을 함께 평균화하여 평균 크기 및 전하 값을 측정하였다. 최종 보고서에서 "Z-평균" 또는 전체 집단의 강도 가중 평균과 크기 또는 전하의 분포를 제공하였다. Z-평균 값과 가장 우세한 피크의 평균을 모두 기록하였다.
A. 크기 측정
결과:
구배 정제 및 동결건조 EV 모두에 대한 크기 측정 결과는 도 7~11에 나와 있다. 플롯의 y축은 나노미터로 기록된 크기를 나타낸다. 막대는 가장 우세한 DLS 통합 피크의 평균을 나타내고 오차 막대는 평균으로부터의 표준 편차를 나타낸다.
B. 전하(제타 전위) 측정
결과:
구배 정제 및 동결건조 EV 모두에 대한 전하 결과는 도 12~16에 나와 있다. 플롯의 y축은 제타 전위(mV)를 제공한다. 전하는 가장 우세한 DLS 통합 피크에 대해 계산되었다. 막대는 평균을 나타내고 오차 막대는 평균으로부터의 표준 편차를 나타낸다.
결론:
EV의 크기는 25 nm 내지 500 nm의 범위내에 있다.
구배 정제 물질과 동결건조 물질은 종종 크기와 전하가 비슷하지만 모든 경우에 그런 것은 아니다.
수브돌리그라눌룸 바리아빌레, 아쿠탈리박터 종, 프레보텔라 니그레센스, 클로스트리디움 카다베리스, 클로스트리디움 부티리쿰, 및 클로아시바실러스 에브리엔시스는 구배 정제 후 더 커졌다. 이는 구배 정제 물질의 응집 또는 구배 정제에 의한 단백질 또는 기타 작은 입자 오염 물질의 제거 때문일 수 있다.
프레보텔라 오랄리스는, 아마도 응집으로 인해, 동결건조 후 크기가 훨씬 더 커졌다.
거의 모든 EV가 음전하를 띠었다. 유일한 예외는 프레보텔라 니그레센스였고 및 알리스티페스 티모넨시스, 클로아시바실러스 에브리엔시스, 및 메가스파에라 종의 구배 정제 물질이었다.
3. 입자 크기 및 전하의 Z 평균 측정
여기서 Z 평균 크기 및 전하 측정값이 보고된다. Z-평균 값은 가장 우세한 피크가 아닌 전체 샘플 집단으로부터 계산된 평균 크기 또는 전하를 나타낸다.
A. 크기 측정
결과:
구배 정제 및 동결건조 EV 모두에 대한 Zave 크기 측정 결과는 도 17~21에 나와 있다. 플롯의 y축은 크기(nm)를 나타낸다. 막대는 강도 가중 평균 또는 z-평균을 나타낸다.
B. 전하(제타 전위) 측정
결과:
구배 정제 및 동결건조 EV 모두에 대한 평균 전하 결과는 도 22~26에 나와 있다. 플롯의 y축은 제타 전위(mV)를 제공한다. 막대는 강도 가중 평균 또는 z-평균을 나타낸다.
결론:
전체 Z-평균 크기는 평균을 왜곡하는 EV 제제에 존재하는 매우 큰 입자의 수가 적기 때문에 가장 우세한 피크의 평균 크기보다 크다.
구배 정제 물질과 동결건조 물질은 종종 크기와 전하가 비슷하지만 모든 경우에 그런 것은 아니다.
메디테라네이박터 그나부스, 블라우티아 마실리엔시스, 파라박테로이데스 디스타소니스, 파라박테로이데스 고르도니, 아나에로트룬쿠스 콜리호미니스 배치 1, 해리플린티아 아세티스포라에서 파생된 구배 정제 물질은 동결건조 물질에 비해 더 컸다. 이는 구배 정제 물질의 응집 또는 환경적 오염, 구배 정제에 의한 단백질 또는 기타 작은 입자 오염 물질의 제거 때문일 수 있다.
모든 Z-평균 전하값은 음수였다. 이는 EV 제제에 있는 대부분의 물질이 음전하를 띠고 있음을 나타낸다.
파라박테로이데스 디스타소니스, 프레보텔라 코프리, 알리스티페스 티모넨시스, 셀레노모나스 펠릭스, 프로피오니스포라 종, 크리스텐세넬라 미누타, 메디테라네이박터 그나부스, 및 클로아시바실러스 에브리엔시스에서 파생된 구배 정제 및 동결건조 물질은 전하값이 서로 달랐다. 이는 부형제로부터의 전하 안정화 또는 평균을 왜곡하는 오염 물질의 존재 때문일 수 있다.
4. Karl Fischer 수분 함량
목적: 이 실험의 목적은 동결건조 세포외 소포체(EV)의 분말에 존재하는 수분 함량을 측정하는 것이다.
프로토콜: Hydranal Water Standard 1.0(Fluka, CAT#34828-40ML) 4 mL를 칭량하고 시린지와 바늘로 반응 용기에 주입하여 시스템 적합성을 평가하였다. 수분 백분율을 계산하기 위해, 보고된 수분 함량을 첨가된 표준 물질의 질량으로 나누었다. 샘플 분석을 진행하기 전에 표준에서 측정된 수분 비율이 제조사에서 제공한 값의 5% 이내임을 확인하였다. 샘플 물질을 분석하기 위해 약 30 mg의 샘플을 화학천칭으로 중량 보트에서 칭량하였다. 샘플의 정확한 최종 중량을 기록하고 샘플을 반응 용기로 옮겼다. 3중 샘플에 대해 상기 기재된 바와 같이 물 백분율을 계산하였다. 평균 수분 함량 및 상대 표준 편차가 보고된다. 결과는 도 27~31에 나와 있다.
결론:
모든 샘플의 수분 함량 값 범위는 2.3% 내지 5.2%이며 모든 샘플의 평균 값은 3.99%이다(표준 편차 = 0.76).
개별 측정의 반복성은 일부 예외를 제외하고 정확하였다. 아나에로마실리바실루스 종, 도레아 론기카테나, 및 메디테라네이박터/[루미노코커스] 그나부스의 RSD는 10% 이상이였으며 이는 각 분말의 물리적 상태 때문일 가능성이 높다. 이들 각각의 분말은 Karl Fischer 반응 용기에서 샘플을 용해시키는 데 어려움을 초래하는 분석된 많은 다른 배치에서 관찰되는 소과립과 달리 박편 모양을 나타냈다.
5. U937 시험관내 특성화
목적: 대식세포는 EV가 경구 투여 후 소장에서 상호작용하는 첫 번째 면역 세포 중 일부일 가능성이 높다. 막 단백질, 핵산, 지질, 및 글리칸과 같은 미생물 관련 분자 패턴(MAMP)은 TLR(Toll 유사 수용체), CLR(C형 렉틴 수용체), 및 NLR(Nod 유사 수용체)과 같은 면역 패턴 인식 수용체(PRR)에 의해 검출될 수 있고, 면역 반응을 개시한다(문헌[Kuipers et al. (2018) Front Microbiol., 9:2182, doi:10.3389/fmicb.2018.02182]). EV에 포함된 거대분자의 복잡한 조성에 기초하여, 숙주 대식세포와의 상호작용은 IL-6, TNFα, 및 IL-1β와 같은 사이토카인의 분비를 특징으로 하는 보다 전염증성인 M1 유사 반응 또는 IL-10의 분비를 특징으로 하는 보다 관용성인 M2 유사 사이토카인 반응을 개시할 수 있다. 이 분석에서, 다양한 미생물 공급원으로부터 단리되고 제형 7a의 분말로 제형화된 EV에 대한 U937 대식세포 반응을 관찰하기 위해 시험관내 방법을 개발하였다.
프로토콜: U-937 세포를 완전한 RPMI 1640 배지에서 웰당 100,000개 세포의 밀도로 96-웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포 분화를 위해 PMA를 5% CO2 인큐베이터에서 37℃로 72시간 동안 최종 농도 20 nM로 첨가하였다. 실험을 시작하기 24시간 전에 세포를 세척하고 신선한 배지에서 인큐베이션하였다. 세포외 소포체를 웰당 106, 107, 108, 및 109개 입자의 농도로 RPMI 배지에서 희석하였다. LPS 및 FSL 대조군을 RPMI 1640 배지에서 10 ng/ml의 최종 농도로 희석하였다. 희석된 EV와 LPS 및 FSL 대조군의 총 부피 200 μL을 3중 웰에 첨가하였다. 플레이트를 젖은 종이 타월이 있는 용기에 넣고 5% CO2의 호기성 조건에서 24시간 동안 37℃ 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 24시간 후, 젖산 탈수소효소 검출 키트(Promega CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay, cat. G1780)를 사용하여 세포 사멸을 분석하였다. 상청액을 수집하고 MSD U-Plex 분석을 수행하여 첨부된 제조사의 프로토콜에 따라 IL-10, IL-1β, IL-6, IP-10, 및 TNFα를 측정하였다.
결과는 도 32~37(IL-10), 도 38~43(IP-10), 도 44~49(IL-1β), 도 50~55(TNFα), 및 도 56~61(IL-6)에 나와 있다. 구체적으로, 도 32~37은 특정 용량에서 EV에 반응하는 U937 대식세포에 의한 IL-10 분비를 나타내고; 도 38~43은 특정 용량에서 EV에 반응하는 U937 대식세포에 의한 IP-10 분비를 나타내고; 도 44~49는 특정 용량에서 EV에 반응하는 U937 대식세포에 의한 IL-1B 분비를 나타내고; 도 50~55는 특정 용량에서 EV에 반응하는 U937 대식세포에 의한 TNFα 분비를 나타내고; 도 56~61은 특정 용량에서 EV에 반응하는 U937 대식세포에 의한 IL-6 분비를 나타낸다. 결과는 동결건조 분말로 제형화된 EV가 이 시험관내 분석에서 효과가 있음을 보여준다.
결론:
프레보텔라 코프리는 프레보텔라세애 과 중 가장 높은 IL-10 발현을 유도하였다.
IL-10 수준은 모든 탄네렐라세애 사이에서 유사하였지만 파라박테로이데스 고르도니 및 파라박테로이데스 메르다에에서 가장 높았다.
아나에로트룬쿠스 콜리호미니스 배치 1(글루코스)은 오실로스피라세애 중 가장 높은 IL-10 발현을 유도하였다.
메가스파에라 바지날리스는 베일로넬라세애 과 중 가장 높은 IL-10 발현을 유도하였다.
클로스트리디아세애 과의 아나에로마실리바실루스 종도 IL-10을 강력하게 유도하였다.
테스트한 많은 EV는 LPS에 비해 IP-10의 낮은 분비를 활성화하였다. 베일로넬라세애 과의 모든 구성원이 가장 높은 IP-10을 유도하였다.
파라박테로이데스 메르다에는 탄네렐라세애 과 중 가장 높은 IL-1β 발현을 유도하였다.
프레보텔라 코프리는 프레보텔라세애 과 중 가장 높은 IL-1 β 발현을 유도하였다.
메가스파에라 바지날리스 및 베일로넬라 아티피카는 베일로넬라세애 과 중 가장 높은 IL-1 β 발현을 유도하였다.
수브돌리그라눌룸 바리아빌레는 모든 박테리아 유래 EV 중 가장 높은 IL-1 β 발현을 유도했으며 오실로스피라세애 과에서 가장 높았다.
베일로넬라 파르불라 배치 1은 베일로넬라세애의 최대 전염증성 박테리아로 IL-6 및 TNFα 발현을 가장 많이 유발하였다.
프레보텔라 코프리는 가장 높은 IL-6 및 TNFα 발현을 보이는 프레보텔라세애의 최대 전염증성 박테리아였다.
수브돌리그라눌룸 바리아빌레는 모든 EV 중 IL-6 및 TNFα가 가장 높은 최대 전염증성 박테리아였다.
전반적인 결론:
박테리아 EV의 크기는 25 nm 내지 457 nm 범위였다. 더 큰 크기의 EV는 응집으로 인한 것일 수 있다.
프레보텔라세애 및 오실로스피라세애는 탄네렐라세애 및 베일로넬라세애보다 크기 분포가 더 컸다.
평균적으로 오실로스피라세애 과는 E9 입자당 단백질 농도가 가장 높았다.
거의 모든 EV는 음전하를 띤다. 유일한 양전하 EV는 프레보텔라 니그레센스였다.
베일로넬라세애는 사이토카인 반응을 가장 크게 이끌어 냈다.
실시예 11: 베일로넬라 파르불라 및 푸르니에렐라 마시리엔시스 smEV
이 연구의 목적은 EV의 물리적 특성에 대한 데이터를 수집하는 것이었다. EV는 베일로넬라 파르불라(V. 파르불라) 균주 배양물 및 푸르니에렐라 마시리엔시스(F. 마시리엔시스) 균주 배양물의 배지에서 단리하고, 부형제 제형과 블렌딩하고, 동결건조하고, 동결건조 분말로 분쇄하였다. 생성된 분말의 특성을 평가하였다.
EV의 공급원으로 사용된 베일로넬라 파르불라 균주는 ATCC 지정번호 PTA-125691로 기탁된 베일로넬라 박테리아였다. 또한 WO 2019/157003 참조. EV의 공급원으로 사용된 푸르니에렐라 마시리엔시스 균주는 ATCC 지정번호 PTA-126696으로 기탁된 푸르니에렐라 마시리엔시스 박테리아였다. 또한 PCT/US21/36927 참조.
이들 균주로부터 정제된 EV를 24개의 안정화제 혼합물(부형제 스톡)을 선택하여 동결건조하였다.
동결건조 EV 분말의 제조:
베일로넬라 파르불라 균주 및 푸르니에렐라 마시리엔시스 균주 각각의 50 L 배양물을 배치 발효 조건 하에 성장시켜 EV 물질을 생성하였다. 각 배양물을 먼저 원심분리 후 멸균 여과 또는 심층 여과와 멸균 여과의 조합으로 정화하였다.
이어서 정화된 상청액을 300 kd mPES 중공 섬유 필터를 사용하여 접선 유동 여과(TFF)로 약 25배 농축하였다. 잔류 배지 성분 및 폐기물을 제거하기 위해 5 부피 연속 정용여과를 통해 농축액을 추가로 정제하였다.
부형제를 포함하는 각각의 스톡(표 K 참조)은 정제된 EV 농축물과 혼합할 목적으로 15%(w/w) 스톡 용액으로서 제조하였다. 스톡은 0.2 μm 보틀 상단 필터로 필터 멸균하고 사용할 때까지 주변 조건에서 보관하였다. 각 안정화제 용액을 정제된 농축물과 질량 기준으로 0.5875:1의 비율로 혼합하여 EV 안정화제 "슬러리"를 생성하였다.
슬러리를 각 트레이가 대략 1 cm 깊이로 채워지도록 플라스틱 동결건조 트레이로 옮겼다. 트레이를 선반 동결건조기로 옮기고, 트레이를 냉동시키고, 테스트되는 다양한 안정화제를 수용하기 위해 보존적 동결건조 사이클을 사용하여 동결건조하였다(표 L 참조). 각각의 조건은 질량 기준으로 95~99% 안정화제인 분말을 산출하였다.
동결건조 후, 각 분말을 수분 함량(Karl Fischer(KF) 적정에 의해), 입자 크기 분포, 및 제타 전위(DLS(동적 광 산란)에 의해), 및 입자(Zetaview를 사용한 나노입자 추적 분석(NTA)에 의한 정량화)에 대해 분석하였다. 결과는 표 M, N, 및 O에 기록되어 있으며 도 62~66에 나와 있다. DLS 방법은 레이저 광원에서 나오는 단색광의 회절을 기반으로 나노 입자의 입자 크기 및 동전기 전위(전하)를 측정한다. DLS 측정(크기 또는 전하)은 전체 샘플 분포의 평균으로 분석하거나 샘플당 최대 3개의 개별 하위집단으로 분류할 수 있다. 결과는 전체 분포의 평균(예를 들어, z-평균) 또는 가장 우세한 하위집단의 평균(예를 들어, 피크 크기, 피크 제타 전위)으로 보고된다.
[표 K]
[표 L]
[표 M]
[표 N]
[표 O]
실시예 12: 처리된 미생물 세포외 소포체(pmEV) 수득을 위한 박테리아로부터의 막 정제 및 제조
정제
처리된 미생물 세포외 소포체(pmEV)를 당업자에게 알려진 방법을 사용하여 박테리아 배양물(예를 들어, 표 1, 표 2, 및/또는 표 3에 열거된 박테리아)로부터 정제 및 제조한다(문헌[Thein et al. (2010) J. Proteome Res., 9(12): 6135-47; Sandrini et al. (2014) Bio-Protocol. 4(21) doi: 10.21769/BioProtoc.1287]).
대안적으로, pmEV는 문헌[Thein et al.]에서 채택한 방법으로 정제한다. 예를 들어, 박테리아 배양물을 실온 또는 4℃에서 10~30분 동안 10,000~15,500 x g로 원심분리한다. 상청액을 버리고 세포 펠릿을 -80℃에서 동결한다. 세포 펠릿을 얼음 위에서 해동하고 100 mM Tris-HCl, pH 7.5에 재현탁하고 1 mg/mL DNase I 및/또는 100 mM NaCl로 보충할 수 있다. 해동된 세포를 500 μg/ml 리소자임, 40 μg/ml 리오스타핀, 및/또는 1 mg/ml DNaseI에서 40분 동안 인큐베이션하여 세포 용해를 촉진시킨다. 추가 효소를 사용하여 용해 과정을 촉진시킬 수 있다(예를 들어, EDTA(5 mM), PMSF(Sigma Aldrich), 및/또는 벤자미딘(Sigma Aldrich)). 이어서 제조사가 권장하는 조건에서 Emulsiflex C-3(Avestin, Inc.)을 사용하여 세포를 용해한다. 대안적으로, 펠릿을 -80℃에서 동결하고 용해 전에 다시 해동할 수 있다. 잔해 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 15분 동안 10,000~12,500 x g로 원심분리하여 펠릿화한다. 이어서 상청액을 4℃에서 1시간 동안 120,000 x g로 원심분리한다. 펠릿을 빙냉 100 mM 탄산나트륨(pH 11)에 재현탁하고 4℃에서 1시간 동안 교반하면서 인큐베이션한다. 대안적으로, 펠릿을 재현탁 직후 탄산나트륨에서 1시간 동안 4℃에서 120,000 x g로 원심분리한다. 펠릿을 100 mM NaCl이 보충된 100 mM Tris-HCl(pH 7.5)에 재현탁하고 4℃에서 20분 동안 120,000 x g로 재원심분리한 후 최대 또는 약 100 mM NaCl이 보충된 100 mM Tris-HCl(pH 7.5) 또는 PBS에 재현탁한다. 샘플을 -20℃에서 보관한다. 동결/해동 단계 중 pmEV 제조를 보호하기 위해 250 mM 수크로스 및 최대 500 mM NaCl을 최종 제조에 첨가하여 pmEV 제조에서 소포체를 안정화할 수 있다.
대안적으로, pmEV는 문헌[Sandrini et al, 2014]에서 채택한 방법으로 수득한다. 이후, 박테리아 배양물을 실온 또는 4℃에서 10~15분 동안 10,000-15,500 x g로 원심분리하고 세포 펠릿을 -80℃에서 동결하고 상청액을 버린다. 이어서, 세포 펠릿을 얼음 위에서 해동하고, 0.1 mg/mL의 리소자임이 보충된 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA에 재현탁한다. 이어서 샘플을 실온 또는 37℃에서 30분 동안 혼합하면서 인큐베이션한다. 선택적인 단계에서, 샘플을 -80℃에서 재동결하고 얼음 위에서 다시 해동한다. 1.6 mg/mL의 최종 농도로 DNase I을 첨가하고, 100 mM의 최종 농도로 MgCl2를 첨가한다. 30초 ON 및 30초 OFF의 7회 사이클로 QSonica Q500 초음파처리기를 사용하여 샘플을 초음파처리한다. 잔해 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 15분 동안 10,000 x g로 원심분리하여 펠릿화한다. 이어서 상청액을 4℃에서 15분 동안 110,000 x g로 원심분리한다. 펠릿을 10 mM Tris-HCl(pH 8.0)에 재현탁하고 실온에서 혼합하면서 30~60분간 인큐베이션한다. 샘플을 4℃에서 15분 동안 110,000 x g로 원심분리한다. 펠릿을 PBS에 재현탁하고 -20℃에서 보관한다.
임의로, pmEV는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 다른 박테리아 성분 및 잔해로부터 분리될 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피 또는 고속 단백질 액체 크로마토그래피(FPLC)를 pmEV 정제에 사용할 수 있다. 사용할 수 있는 추가 분리 방법은 장 흐름 분획법, 미세유체 여과, 비접촉 분류, 및/또는 면역친화성 농축 크로마토그래피를 포함한다. 대안적으로, 밀도를 기준으로 pmEV 입자를 분리하는 데 고해상도 밀도 구배 분획법을 사용할 수 있다.
제조
박테리아 배양물을 실온 또는 4℃에서 10~30분 동안 10,000~15,500 x g로 원심분리한다. 상청액을 버리고 세포 펠릿을 -80℃에서 동결한다. 세포 펠릿을 얼음 위에서 해동하고 100 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCl, 500 μg/ml 리소자임, 및/또는 40 μg/ml 리소스타핀에 재현탁하여 세포 용해를 촉진시키고; 최대 0.5 mg/ml DNaseI에 재현탁하여 게놈 DNA 크기를 감소시키고, EDTA(5 mM), PMSF(1 mM, Sigma Aldrich), 및 벤즈아미딘(1 mM, Sigma Aldrich)에 재현탁하여 프로테아제를 억제한다. 이어서 제조사가 권장하는 조건에서 Emulsiflex C-3(Avestin, Inc.)을 사용하여 세포를 용해한다. 대안적으로, 펠릿을 -80℃에서 동결하고 용해 전에 다시 해동할 수 있다. 잔해 및 용해되지 않은 세포를 4℃에서 15분 동안 10,000~12,500 x g로 원심분리를 통해 펠릿화한다. PBS 및 최대 0.3 M NaCl로 보충된 실행 완충액을 포함하는 FPLC 기기(AKTA Pure 150, GE Healthcare)를 사용하여 상청액을 크기 배제 크로마토그래피(Sepharose 4 FF, GE Healthcare)에 적용한다. 순수 pmEV를 컬럼 공극 부피에 수집하고 농축하여 -20℃에 보관한다. 농축은 다양한 방법으로 수행할 수 있다. 예를 들어, 초원심분리를 사용할 수 있다(140,000 x g, 1시간, 4℃, 이어서 소량의 PBS에 재현탁). 동결/해동 단계 중 pmEV 제조를 보호하기 위해 250 mM 수크로스 및 최대 500 mM NaCl을 최종 제제에 첨가하여 pmEV 제제의 소포체를 안정화할 수 있다. 사용할 수 있는 추가 분리 방법은 장 흐름 분획법, 미세유체 여과, 비접촉 분류, 및/또는 면역친화성 농축 크로마토그래피를 포함한다. 당업계에 알려진 방법을 사용하여 채용될 수 있는 다른 기술은 휘핑 필름 증발, 분자 증류, 단기 통과 증류, 및/또는 접선 유동 여과를 포함한다.
일부 예에서, pmEV를 칭량하고, 다양한 용량(μg/ml)으로 투여한다. 임의로, 당업계에 알려진 방법을 사용하여 나노입자 추적 분석(NTA)을 사용하여 입자 수 및 크기 분포에 대해 pmEV를 평가한다. 예를 들어 Malvern NS300 기기는 제조사의 지침에 따라 또는 문헌[Bachurski et al. 2019. Journal of Extracellular Vesicles. Vol. 8(1)]에 기재된 바에 따라 사용할 수 있다. 대안적으로, pmEV의 경우 제조사의 지침에 따라 수행된 Bio-rad 분석(Cat# 5000205)을 사용하여 총 단백질을 측정하고, 단백질 함량/용량에 따라 다양한 용량으로 투여할 수 있다.
본원에 기재된 연구의 경우, pmEV는 투여 전에 조사, 가열, 및/또는 동결건조할 수 있다.
pmEV는 동결건조물 또는 분말을 생성하기 위해 본원에 기재된 부형제 및 건조 조건을 사용하여 동결건조할 수 있다.
실시예 13: 프레보텔라 히스티콜라 smEV의 분무건조 분말
본 실시예에서, 연구에 사용된 세포외 소포체(smEV)는 프레보텔라 히스티콜라 균주 B로부터 단리하였다.
smEV를 다음과 같이 분무건조하였다:
EV 잔류물을 표 P에 제공된 부형제 중 하나와 혼합하였다.
[표 P]
분무건조는 100℃ 또는 130℃에서 수행하였다. 온도도 표 Q에 포함되어 있다.
분무건조 후, 각 분말을 수분 함량(MC)(Karl Fischer(KF) 적정)에 의해) 및 입자(분무건조 분말 mg당 입자(p/mg))(Zetaview를 사용한 나노입자 추적 분석(NTA)에 의한 정량화)에 대해 분석하였다. 결과는 표 Q에 나와 있다. EXP7A는 제형 7a의 스톡이다.
[표 Q]
PEG6000-만니톨-트레할로스(60:20:20)로 이루어진 스톡을 사용하여 분무건조를 또한 수행하였다. 그러나, 본원에 기재된 다른 방법에 비해 건조 생성물의 감소된 회수율을 보였다.
프레보텔라 히스티콜라 smEV를 2가지 농도(25X 및 500X)로 제형 7a(F7A) 스톡에서 분무건조 또는 동결건조하고, 입구 온도는 130℃로 하였다.
분무건조 분말 mg당 입자 및 크기의 비교를 표 R에 나타내었다. SD = 분무건조; L0.47 = 동결건조됨; 0.47은 사용된 스톡 비율을 나타냄: 잔류물 100 g당 부형제 47 g.
분무건조 및 동결건조 EV의 입자 패킹 및 크기는 두 가지 건조 방법에 대해 유사하였다.
[표 R]
참조에 의한 통합
본원에 언급된 모든 공보 특허 출원은 각각의 개별 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참조에 의해 통합된 것으로 표시된 것처럼 전문이 본원에 참조로 통합된다. 상충되는 경우, 본원에서의 임의의 정의를 포함하여 본 출원이 우선한다.
균등물
당업자는 본원에 기재된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 균등물을 인식하거나 단지 통상적인 실험을 사용하여 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 하기 청구범위에 포함되는 것으로 의도된다.

Claims (26)

  1. 박테리아로부터 유래된 세포외 소포체(EV)를 포함하는 건조 형태로서, 수분 함량이 약 6% 미만인 건조 형태.
  2. 제1항에 있어서, 수분 함량이 약 5% 미만인 건조 형태.
  3. 제1항에 있어서, 수분 함량이 약 4% 미만인 건조 형태.
  4. 제1항에 있어서, 수분 함량이 약 1% 내지 약 4%인 건조 형태.
  5. 제1항에 있어서, 수분 함량이 약 2% 내지 약 3%인 건조 형태.
  6. 제1항에 있어서, 분말을 포함하는 건조 형태.
  7. 제1항에 있어서, 동결건조물을 포함하는 건조 형태.
  8. 제1항에 있어서, 점액과 연관된 박테리아 균주로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  9. 제1항에 있어서, 혐기성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  10. 제1항에 있어서, 혐기성 박테리아는 절대혐기성균인, 건조 형태.
  11. 제1항에 있어서, 혐기성 박테리아는 통성혐기성균인. 건조 형태.
  12. 제1항에 있어서, 혐기성 박테리아는 내기성혐기성균인, 건조 형태.
  13. 제1항에 있어서, 단일막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  14. 제1항에 있어서, 이중막 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  15. 제1항에 있어서, 그람 음성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  16. 제1항에 있어서, 프레보텔라세애; 베일로넬라세애; 탄네렐라세애; 리케넬라세애; 셀레노모나다세애; 스포로무사세애; 시너지스타세애; 크리스텐세넬라세애; 또는 아케르만시아세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  17. 제1항에 있어서, 그람 양성 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  18. 제1항에 있어서, 오실로스피라세애; 클로스트리디아세애; 또는 라크노스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  19. 제1항에 있어서, 프레보텔라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  20. 제1항에 있어서, 베일로넬라 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  21. 제1항에 있어서, 파라박테로이드 속의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  22. 제1항에 있어서, 오실로스피라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  23. 제1항에 있어서, 탄네렐라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  24. 제1항에 있어서, 프레보텔라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  25. 제1항에 있어서, 베일로넬라세애 과의 박테리아로부터 유래된 EV를 포함하는 건조 형태.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 건조 형태를 포함하는 치료 조성물.
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