KR20230130446A - Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain and its use for improving skin conditions - Google Patents
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Abstract
신규한 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주 및 이의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 신규 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주에 의하면, 피부 보습 및 피부 장벽 강화가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.It relates to a novel Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain and its use for improving skin condition. According to one aspect, the new Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain moisturizes the skin and strengthens the skin barrier, so it can be applied in various ways to improve, prevent, or treat skin conditions.
Description
신규한 미생물, 그의 파쇄액, 배양액, 추출액 및 이들의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다.It relates to novel microorganisms, their disrupted liquid, culture medium, extract liquid, and their use for improving skin condition.
피부의 생태계는 미생물에게 다양한 형태의 서식처를 제공하며, 광범위한 미생물들이 살고 있다. 이들은 숙주인 인간과 공생관계를 이루고 있으며, 숙주에 많은 긍정적인 영향을 미친다고 알려져 있다. 피부는 함입부, 특화 되어있는 틈새 등 다양한 형태의 서식처를 구성하고 있으며, 넓은 분포의 미생물이 자랄 수 있도록 돕는다. 기본적으로 피부는 물리적인 막을 형성하며, 외부로부터 잠재적인 위험요소 및 독성물질들로부터 방어를 하도록 도와준다. 피부는 외부환경과의 접속 지점이 되며, 다양한 미생물들(예: 진균, 세균, 바이러스 및 작은 유충)의 집합소이기도 하다. 물리적, 화학적 기능의 선택에 맞게 미생물들은 특화된 틈새에 적응하여 서식처를 마련한다. 일반적으로 피부는 차갑고, 산성 성질을 나타내며, 건조된 상태로 유지된다. 구조적으로 표피(epidermis)는 피부 장벽을 이루고 있으며, 미생물과 독소가 침투하는 것을 차단하고, 수분을 유지하는 중요한 역할을 한다. 표피의 최상위층은 각질층(stratum corneum)으로 구성되어 있다. 표피는 일명 '벽돌과 몰탈 구조'라고 불리는 형태를 띠고 있는데, 피부 조직은 계속적인 자가 회복 과정을 거치고, 분화 과정의 마지막을 거친 비늘(squames)은 끊임없이 피부 조직에서 탈락되는 과정을 반복하게 된다.The skin ecosystem provides various types of habitats for microorganisms, and a wide range of microorganisms live there. They form a symbiotic relationship with their human hosts, and are known to have many positive effects on the host. The skin constitutes various types of habitats, including indentations and specialized crevices, and helps a wide range of microorganisms to grow. Basically, the skin forms a physical membrane and helps defend against potential hazards and toxic substances from the outside. The skin serves as a point of contact with the external environment and is also a home for various microorganisms (e.g. fungi, bacteria, viruses, and small larvae). Depending on the selection of physical and chemical functions, microorganisms adapt to specialized niches and establish habitats. Typically, the skin remains cool, acidic, and dry. Structurally, the epidermis forms the skin barrier and plays an important role in blocking the penetration of microorganisms and toxins and maintaining moisture. The uppermost layer of the epidermis is composed of the stratum corneum. The epidermis has a form called a 'brick and mortar structure'. The skin tissue goes through a continuous self-recovery process, and the scales (squames) that have completed the differentiation process constantly repeat the process of being shed from the skin tissue.
프로바이오틱스(Probiotics)는 인체에 유익한 작용을 하는 미생물을 총칭하는 말로 우리 몸에 유익(benefit)을 주는 미생물을 말한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균으로 알려져 있다. 프로바이오틱스는 인체에 여러 가지 유익 작용을 통해 효과적인 효능이 발생되는 것으로 보고되었지만, 피부상재균과 피부의 상호관계에 대한 연구는 미비한 실정이다.Probiotics are a general term for microorganisms that have beneficial effects on the human body. They refer to microorganisms that benefit our bodies. Most probiotics known to date are known as lactic acid bacteria. Probiotics have been reported to produce effective effects through various beneficial effects on the human body, but research on the relationship between skin flora and skin is insufficient.
이에, 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 피부상재균의 개발이 필요한 실정이다.Accordingly, there is a need to develop skin flora that can be useful for skin-related conditions.
일 양상은 신규한 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주를 제공하는 것이다. One aspect is providing novel Enhydrobacter aerosaccus strains.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다. Another aspect is to provide a lysate, culture medium, or extract of the culture medium of the strain.
또 다른 양상은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.Another aspect is to provide a composition comprising the strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.Another aspect provides a method of preventing, ameliorating, or treating a condition in a subject comprising administering an effective amount of the composition described above to the subject in need thereof.
일 양상은 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주를 제공한다.One aspect provides a strain of Enhydrobacter aerosaccus .
상기 균주는 분리된 것일 수 있다. 본 명세서에서 용어 "분리된(isolated)"이란 자연계에 존재하는 것이 아닌 인위적으로 분리하여 이용가능한 것을 의미한다. 상기 균주는 인간 피부로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 균주는 인간 피부 세포를 TSB(Tryptic Soy Broth) 또는 R2A(Reasoner's 2A) 배지에 접종하여 배양된 콜로니를 순수 분리 배양하는 방법에 의해 분리된 균주일 수 있다.The strain may be isolated. In this specification, the term “isolated” means something that does not exist in the natural world but can be artificially separated and used. The strain may be isolated from human skin. The strain may be a strain isolated by inoculating human skin cells into TSB (Tryptic Soy Broth) or R2A (Reasoner's 2A) medium and pure isolation and culturing of the cultured colonies.
상기 균주는 엔히드로박테르 속(Enhydrobacter sp.)에 속하는 균주일 수 있다.The strain may be a strain belonging to the Enhydrobacter sp .
상기 균주는 서열번호 1과 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상, 약 99% 이상, 약 99.5% 이상, 또는 약 99.9% 이상의 서열 동일성을 갖는 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다. 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 포함하는 것일 수 있다.The strain contains 16S rRNA having a sequence identity of at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, at least about 99%, at least about 99.5%, or at least about 99.9% with SEQ ID NO: 1. It may be. The strain may contain 16S rRNA of SEQ ID NO: 1.
본 명세서에서 사용된 용어 "서열 동일성(sequence identity)"은 특정 비교 영역에서 양 서열을 최대한 일치되도록 얼라인시킨 후 서열간의 아미노산 잔기 또는 염기의 동일한 정도를 의미한다. 서열 동일성은 당업계에 공지된 방법에 따라 확인될 수 있다. 상기 서열 동일성의 퍼센트는 공지의 서열 비교 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며, 일례로 BLASTN(NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM(DNASTAR Inc) 등을 들 수 있다. As used herein, the term “sequence identity” refers to the degree of identity of amino acid residues or bases between sequences after aligning both sequences to be as consistent as possible in a specific comparison region. Sequence identity can be confirmed according to methods known in the art. The percent sequence identity can be determined using known sequence comparison programs, examples of which include BLASTN (NCBI), CLC Main Workbench (CLC bio), MegAlignTM (DNASTAR Inc), etc.
상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 균주는 기탁번호 KCCM13073P로 기탁된 균주일 수 있다. 상기 기탁번호로 기탁된 균주는 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주일 수 있다. The Enhydrobacter aerosaccus strain may be a strain deposited under the deposit number KCCM13073P. The strain deposited with the above deposit number may be Enhydrobacter Aerosaccus V-5 strain.
상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 상태 개선은 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다.The strain may have an effect of improving skin condition. For example, the improvement in skin condition may be one or more of skin moisturizing and skin barrier strengthening.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공한다.Another aspect provides a lysate, culture fluid, or extract of the culture fluid of the strain.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다. Specific details of the strain are as described above.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 "용해물"과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다. 상기 파쇄액은 파쇄액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다.As used herein, the term “lysate” may be used interchangeably with “lysate” and may refer to a product obtained by breaking the cell wall of a strain by chemical or physical force. The lysate may include the lysate itself, its concentrate, or its freeze-dried product.
본 명세서에서 용어 "배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 상호교환적으로 사용될 수 있고, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로, 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간 동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.As used herein, the term “culture medium” may be used interchangeably with “culture supernatant,” “conditioned culture medium,” or “conditioned medium,” and refers to a condition in which Enhydrobacter aerosaccus strains can grow and survive in vitro. It may refer to the entire medium containing the strain, its metabolites, extra nutrients, etc. obtained by culturing the strain in a medium capable of supplying nutrients for a certain period of time. Additionally, the culture medium may refer to a culture medium obtained by removing the bacterial cells from the bacterial culture medium obtained by culturing the strain. On the other hand, the liquid from which the bacteria have been removed from the culture medium is also called "supernatant", and the culture medium is left alone for a certain period of time and only the liquid in the upper layer excluding the part that has settled in the lower layer is taken, the bacteria are removed through filtration, or the culture medium is centrifuged to remove the lower layer. It can be obtained by removing the precipitation and taking only the upper liquid. The "bacteria" refers to the strain itself of the present invention, and includes the strain itself isolated and selected from a sample, etc., or a strain isolated from the culture medium by culturing the strain. The bacterial cells can be obtained by centrifuging the culture medium and taking the part that sinks to the lower layer. Alternatively, since they sink to the lower layer of the culture medium by gravity, they can be obtained by leaving them still for a certain period of time and then removing the upper liquid.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물 또는 동결건조물, 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다. The culture medium may include the culture medium itself, a concentrate or freeze-dried product obtained by cultivating the strain, or a culture supernatant obtained by removing the strain from the culture medium, a concentrate or a freeze-dried product thereof.
상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배양액은 배지(예를 들면, R2A 배지)에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 50시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다.Culture media and culture conditions for cultivating the Enhydrobacter aerosaccus strain can be appropriately selected or modified by those skilled in the art. For example, the culture medium may be obtained by culturing in a medium (e.g., R2A medium) at a temperature of more than 10°C or less than 40°C for a certain period of time, for example, 4 to 50 hours.
일 구체예에서, 상기 균주의 배양 상층액은 균주 배양액을 원심분리 또는 여과시켜 균체를 제거하는 단계에 의해 수득될 수 있다.In one embodiment, the culture supernatant of the strain can be obtained by removing the bacterial cells by centrifuging or filtering the strain culture fluid.
다른 구체예에서, 농축물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 원심분리 또는 여과한 후 수득된 상층액을 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.In another embodiment, the concentrate may be obtained by concentrating the strain culture itself or the supernatant obtained after centrifuging or filtering the culture.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액으로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다. As used herein, the term "culture extract" refers to an extract from the culture medium or its concentrate, and may include the extract, a diluted or concentrated liquid of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude or purified product thereof, or a fraction thereof. You can.
상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물은 생물학적으로 순수한 것일 수 있다. 상기 균주는 순수배양(pure culture)에 의해 얻은 것일 수 있다.The strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium may be biologically pure. The strain may be obtained by pure culture.
또 다른 양상은 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다. Another aspect provides the use of an Enhydrobacter aerosaccus strain, a lysate, a culture medium, or an extract of the culture medium of the strain. In detail, a composition comprising an Enhydrobacter aerosaccus strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium is provided.
상기 용도 또는 조성물에 있어서, 상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주는 상기 일 양상에 따른 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주일 수 있다. 따라서, 상기 균주는 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주일 수 있다.In the above use or composition, the Enhydrobacter aerosaccus strain may be the Enhydrobacter aerosaccus strain according to the above aspect. Therefore, the strain may be Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain.
상기 균주의 용도는 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료를 포함할 수 있다.Uses of the strain may include improving skin condition, improving skin beauty, and preventing, improving, or treating skin diseases.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 주름 개선, 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다. 상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 보습 및 피부 장벽 강화 중 1종 이상일 수 있다.The improvement of skin condition or skin beauty may be one or more of suppressing or improving skin aging, improving skin wrinkles, moisturizing skin, and strengthening the skin barrier. The improvement of skin condition or skin beauty may be one or more of skin moisturizing and skin barrier strengthening.
상기 균주 또는 조성물은 피부 보습 관련 유전자(예: 히알루론산 합성효소(Hyaluronan synthase 3, HAS3), 아쿠아포린(Aquaporin-3, AQP-3)) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: 인볼루크린(Involucrin, IVL) 및 로리크린(Loricrin, LOR))의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. 상기 균주 또는 조성물은 HAS3, AQP-3, IVL 및 LOR 중 1종 이상의 발현을 증가시키는 것일 수 있다. HAS3, AQP-3, IVL, LOR과 같은 마커들의 증가는 정상적인 각질층의 형성을 통해 각질세포 내에 천연보습인자(Natural Moisturizing Factor, NMF)의 전구체인 필라그린과 세포간 지질이 정상화 되었다는 것을 의미한다. 따라서, 상기 균주 또는 조성물은 피부 조직의 수분 유지를 촉진하면서, 피부 조직의 수분의 손실을 방지하는 피부 장벽을 강화하도록 각질층을 형성함으로써, 피부 노화를 방지하고, 대기 건조, 자외선 및 각종 공해 물질과 같은 외부 환경 변화로부터 피부 건강을 유지할 수 있도록 할 수 있다.The strain or composition contains genes related to skin moisturization (e.g., Hyaluronan synthase 3, HAS3, Aquaporin-3, AQP-3) and genes related to skin barrier strengthening (e.g., Involucrin). , IVL) and loricrin (LOR)) may be increased. The strain or composition may increase the expression of one or more of HAS3, AQP-3, IVL, and LOR. The increase in markers such as HAS3, AQP-3, IVL, and LOR means that filaggrin, a precursor of Natural Moisturizing Factor (NMF), and intercellular lipids in keratinocytes have been normalized through the formation of a normal stratum corneum. Therefore, the strain or composition prevents skin aging by forming a stratum corneum to strengthen the skin barrier to prevent loss of moisture in the skin tissue while promoting moisture retention in the skin tissue, and to protect against air drying, ultraviolet rays, and various pollutants. It can help maintain skin health from changes in the external environment.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다. As used herein, the term "skin aging" refers to both tangible and intangible changes that occur in the skin as one ages, such as thinning of the epidermis, number of cells or blood vessels in the dermis, DNA damage repair ability, cell replacement cycle, It refers to a decrease in wound recovery, skin barrier function, epidermal moisture retention, sweat secretion, sebum secretion, vitamin D production, physical damage defense, chemical removal ability, immune response, sensory function, and temperature regulation.
상기 균주 또는 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다. The strain or composition may be used to improve skin aging caused by extrinsic or endogenous factors. The exogenous factors refer to various external factors, such as ultraviolet rays (light), and the endogenous factors are also referred to as chronological factors and mainly refer to factors that occur due to the passage of time. In other words, the skin aging is not only a premature aging phenomenon induced by external stimuli such as ultraviolet rays, pollution, cigarette smoke, chemicals, etc., but also a natural aging phenomenon that occurs as the proliferation of skin cells decreases with age. It is a concept that includes wrinkles, loss of elasticity, skin sagging, and dryness. In addition, wrinkles include stimulation caused by changes in internal and external factors that change the components that make up skin tissue, causing wrinkles.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다. The aging may be photoaging. The term “photoaging” is a phenomenon caused by external environmental factors, the most representative factor being ultraviolet rays. Ultraviolet rays cause damage to biological components such as activation of proteolytic enzymes, chain cutting of matrix proteins, and abnormal cross-linking, and repetition of this mechanism causes skin aging that is evident in appearance.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하거나 피부 수분을 증가시키는 것에 의해 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.As used herein, the term “wrinkle” refers to a state in which the skin loses its elasticity and becomes loose, for example, the skin may be folded. The term “prevention or improvement of skin wrinkles” may refer to any action that prevents or improves wrinkles by suppressing the expression of factors related to wrinkles or increasing skin moisture, or increases the total amount of collagen.
상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.The term “skin moisturizing” may refer to any action that maintains skin moisture or prevents moisture loss.
상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.The “skin barrier strengthening” may refer to any action that improves the function of the skin barrier, which is located on the outermost layer of the skin and prevents moisture and nutrition loss.
상기 "피부 질환"은 피부 건조, 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환, 피부 노화, 또는 피부 염증일 수 있다.The “skin disease” may be dry skin, a disease caused by damage to the skin barrier function, skin aging, or skin inflammation.
상기 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다. The damage to the skin barrier function may mean any change that appears in the skin due to decreased or damaged skin barrier function. For example, it may include increased skin wrinkles, dryness, dermatitis, atopic dermatitis, allergic dermatitis, acne, etc.
용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다. 용어 "개선"은 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.The term “prevention” includes suppressing the occurrence of a disease. The term “treatment” includes inhibiting, alleviating, or eliminating the development of a disease. The term “improvement” may refer to any action that results in at least reducing the severity of a parameter associated with the alleviation or treatment of a condition, such as symptoms.
일 양상에 따른 조성물은 상기 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함함으로써, 피부 보습 관련 유전자(예: HAS3, AQP-3) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: IVL 및 LOR)의 발현을 증가시켜, 피부 보습 및/또는 피부 장벽 강화 효과를 가질 수 있다.The composition according to one aspect includes the Enhydrobacter aerosaccus strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium, thereby generating genes related to skin moisturization (e.g., HAS3, AQP-3) and genes related to skin barrier strengthening ( By increasing the expression of (e.g. IVL and LOR), it can have the effect of moisturizing the skin and/or strengthening the skin barrier.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 피부 상태 개선 효과를 갖는 다른 균주, 예를 들어, 엔히드로박테르 속에 속하는 균주 및/또는 레이나넬라 속(Reyranella sp.)에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타낼 수 있다. 상기 엔히드로박테르 속에 속하는 균주는 예를 들어, 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydrobacter aerosaccus) 등을 포함할 수 있다. 상기 레이나넬라 속에 속하는 균주는 예를 들어, 레이나넬라 마실리엔시스(Reyranella massiliensis), 레이나넬라 아쿠아틸리스(Reyranella aquatilis), 레이나넬라 그라미니폴리(Reyranella graminifolii) 등을 포함할 수 있다. In another embodiment, the strain is used with other strains that have a skin condition improvement effect, for example, a strain belonging to the Enhydrobacter genus and/or a strain belonging to the Reyranella genus ( Reyranella sp.) to achieve a synergistic effect. can represent. Strains belonging to the Enhydrobacter genus may include, for example, Enhydrobacter aerosaccus . Strains belonging to the genus Reyranella include, for example, Reyranella massiliensis , Reyranella aquatilis , and Reyranella graminifolii . It may include etc.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 상기 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물을 포함할 수 있다. 이때, 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 이의 배양액의 추출물의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 피부 상태 개선 효과, 예를 들면, 피부 보습 또는 피부 장벽 효과가 충분히 발휘되지 않을 수 있다.The composition is 0.001% to 80% by weight, for example, 0.01% to 60% by weight, 0.01% to 40% by weight, 0.01% to 30% by weight, 0.01% to 20% by weight, based on the total weight of the composition. %, 0.01% to 10% by weight, 0.01% to 5% by weight, 0.05% to 60% by weight, 0.05% to 40% by weight, 0.05% to 30% by weight, 0.05% to 20% by weight, 0.05% to 10% by weight, 0.05% to 5% by weight, 0.1% to 60% by weight, 0.1% to 40% by weight, 0.1% to 30% by weight, 0.1% to 20% by weight, 0.1% by weight It may contain % to 10% by weight, or 0.1% to 5% by weight of the strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium. At this time, if the content of the strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium is less than the above range, the skin condition improvement effect, for example, skin moisturizing or skin barrier effect, may not be sufficiently exerted.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 제형화(formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.In this specification, the term "included as an active ingredient" means that the strain of this specification, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium is added to the extent that it can exhibit the effects mentioned above, and for drug delivery and stabilization, etc. This means that it is formulated into various forms by adding various ingredients as sub-ingredients.
상기 조성물은 액체 상태 또는 건조 상태인 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 건조 분말 형태일 수 있다.The composition may be in a liquid state or a dry state. In one embodiment, the composition may be in dry powder form.
상기 조성물을 건조 상태로 제조하는 건조 방법은 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법을 사용할 수 있으며, 특별히 제한되지 않는다. 상기 건조 방법의 비제한적인 예는, 공기 건조 방법, 자연 건조 방법, 분무 건조 방법, 동결 건조 방법 등이 있다. 이들 방법은 단독으로 사용하거나 적어도 두 가지 방법을 함께 사용할 수 있다.The drying method for preparing the composition in a dry state may be a method generally used in the art and is not particularly limited. Non-limiting examples of the drying method include air drying method, natural drying method, spray drying method, freeze drying method, etc. These methods can be used alone or at least two methods can be used together.
상기 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물의 열화(deterioration)를 감소시키기에 충분한 유효량의 첨가제를 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 결합제일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The composition may contain an effective amount of additives sufficient to reduce deterioration of the strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium. The additive may be, for example, a binder, but is not limited thereto.
상기 조성물은 화장품학적으로, 약학적으로 또는 식품학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 조성물은 담체와 함께 제형화되어 화장품, 약품, 식품 첨가제 등으로 제공될 수 있다. The composition may further include a cosmetically, pharmaceutically, or foodologically acceptable carrier. The composition can be formulated with a carrier and provided as cosmetics, drugs, food additives, etc.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.The composition may be a cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 본 명세서에 개시된 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 기능성 첨가물 등을 추가로 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 분산제, 유화제, 방부제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다. In addition to the active ingredients disclosed in this specification, the cosmetic composition may further include ingredients commonly used in cosmetic compositions, functional additives, etc., such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, surfactants, dispersants, emulsifiers, and preservatives. , conventional auxiliaries such as vitamins, pigments, fragrances, etc., and carriers.
상기 화장료 조성물은 특정 제형에 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 제형을 적절히 선택할 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 가용화 제형, 유화 제형, 또는 분산 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들어, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.The cosmetic composition is not particularly limited to a specific formulation, and the formulation may be appropriately selected depending on the purpose. The cosmetic composition may have, for example, a solubilized formulation, an emulsified formulation, or a dispersed formulation. The cosmetic composition may have, for example, an softening lotion, a nourishing lotion, a massage cream, a nourishing cream, an essence, a pack, a gel, an ampoule, or a skin-adhesive cosmetic formulation.
상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다. The composition may be a composition for external skin application.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제; 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종 생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염 등의 약제; 비타민 C, 마그네슘아스코빌포스페이트, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산; 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.In this specification, the external skin agent may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermal delivery patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof. The skin external preparations include ingredients commonly used in external skin preparations such as cosmetics and medicines, such as aqueous ingredients, oil-based ingredients, powder ingredients, alcohols, moisturizers, thickeners, ultraviolet absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, and fragrances. , colorants, various skin nutrients, or a combination thereof may be appropriately mixed according to need. The skin external preparations include metal sequestrants such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid; Drugs such as caffeine, tannin, bellapamil, licorice extract, glablidin, hot water extract of calin fruit, various herbal medicines, tocopherol acetate, glythylitic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts; Vitamin C, magnesium ascorbyl phosphate, ascorbate glucoside, arbutin, kojic acid; Sugars such as glucose, fructose, and trehalose can also be appropriately mixed.
상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다. The composition may be a pharmaceutical composition.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 만니톨, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.The pharmaceutical composition may additionally include a pharmaceutically acceptable diluent or carrier. The diluent may be lactose, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose, mannitol, or a combination thereof. The carrier may be an excipient, disintegrant, binder, lubricant, or a combination thereof. The excipient may be microcrystalline cellulose, lactose, low-substituted hydroxycellulose, or a combination thereof. The disintegrant may be calcium carboxymethylcellulose, sodium starch glycolate, calcium monohydrogen phosphate anhydride, or a combination thereof. The binder may be polyvinylpyrrolidone, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropylcellulose, or a combination thereof. The lubricant may be magnesium stearate, silicon dioxide, talc, or a combination thereof.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제 등일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 연고제 등일 수 있다.The pharmaceutical composition may be formulated as an oral or parenteral dosage form. Oral dosage forms may be granules, powders, solutions, tablets, capsules, dry syrup, etc. Parenteral dosage forms may be injections, ointments, etc.
상기 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다. The composition may be a food composition. The composition may be a health functional food composition. In this case, it can be formulated in the form of a typical health functional food known in the art.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 배양액의 추출물 단독을 사용하거나, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.The health functional food composition may be used alone as the strain, its lysate, culture medium, or extract of the culture medium, or may be used together with other foods or food ingredients, and may be used appropriately according to conventional methods. The mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health, or therapeutic treatment). There are no particular restrictions on the types of health functional foods. Among the types of health functional foods, beverage compositions may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients like ordinary beverages. The natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose and sucrose; and polysaccharides such as dextrins and cyclodextrins; Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As a sweetener, natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used. The food composition is also used in nutritional supplements, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonated beverages. It may contain a carbonating agent, or a combination thereof. The food composition may also contain pulp for the production of natural fruit juice, fruit juice beverage, vegetable beverage, or a combination thereof.
또 다른 양상은 유효량의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다. Another aspect provides a method of preventing, ameliorating, or treating a condition in a subject comprising administering an effective amount of the composition described above to the subject in need thereof.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태, 예를 들어, 피부 건조, 피부 장벽 기능 손상, 피부 노화, 또는 피부 염증과 관련된 상태일 수 있다.The condition of the subject may be a condition related to the skin, for example, dry skin, impaired skin barrier function, skin aging, or skin inflammation.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고, 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. As used herein, the terms “administering,” “introducing,” and “implanting” are used interchangeably and refer to an individual by a method or route that results in at least partial localization of the composition according to one embodiment to the desired site. It may refer to the arrangement of the composition according to one embodiment into the inner space.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 피부에의 도포를 포함할 수 있다.Administration can be done by methods known in the art. Administration may be administered directly to the subject by any means, such as, for example, intravenous, intramuscular, oral, transdermal, mucosal, intranasal, intratracheal or subcutaneous administration. You can. The administration may be administered systemically or locally. The administration may include application to the skin.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 개선을 필요로 하는 개체, 예를 들어 피부 보습 또는 피부 장벽 강화 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.The subject may be a mammal, such as a human, cow, horse, pig, dog, sheep, goat, or cat. The subject may be an individual in need of skin improvement, for example, an individual in need of skin moisturizing or skin barrier strengthening effects.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.The administration of the composition according to one embodiment is 0.1 mg to 1,000 mg, for example, 0.1 mg to 500 mg, 0.1 mg to 100 mg, 0.1 mg to 50 mg, 0.1 mg to 25 mg, 1 mg to 1 mg per day. 1,000 mg, 1 mg to 500 mg, 1 mg to 100 mg, 1 mg to 50 mg, 1 mg to 25 mg, 5 mg to 1,000 mg, 5 mg to 500 mg, 5 mg to 100 mg , 5 mg to 50 mg , 5 mg to 25 mg, 10 mg to 1,000 mg, 10 mg to 500 mg, 10 mg to 100 mg, 10 mg to 50 mg, or 10 mg to 25 mg. However, the dosage may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, gender, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate, and reaction sensitivity, and those skilled in the art will Taking these factors into consideration, the dosage can be adjusted appropriately. The frequency of administration can be once a day or two or more times within the range of clinically acceptable side effects, and can be administered at one or two or more locations, daily or at intervals of 2 to 5 days. The number of days of administration can be from 1 to 30 days per treatment. If necessary, the same treatment can be repeated after an appropriate period. For animals other than humans, the dosage per kg is the same as for humans, or the above dosage is converted into, for example, the volume ratio (e.g., average value) of the organs (heart, etc.) between the target animal and human. One dose can be administered.
일 양상에 따른 신규 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주에 의하면, 피부 보습 또는 피부 장벽 강화 효과가 있으므로, 피부 상태의 개선, 예방, 또는 치료 용도로 다양하게 응용될 수 있다.According to one aspect, the new Enhydrobacter aerosaccus strain has a skin moisturizing or skin barrier strengthening effect, so it can be applied in various ways to improve, prevent, or treat skin conditions.
도 1은 V-5 균주가 보습에 관여하는 HAS3(Hyaluronan synthase 3)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, RA: 양성대조군으로서 레티노산(RA) 1 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 2는 V-5 균주가 보습에 관여하는 AQP-3(Aquaporin-3)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, RA: 양성대조군으로서 레티노산(RA) 1 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 3은 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 IVL(Involucrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.
도 4는 V-5 균주가 피부 장벽에 관여하는 LOR(Loricrin)의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. None: 미처리군, Adiporon: 양성대조군으로서 아디포론 10 μM 처리군, Media 1%: 배지 1%(w/w) 처리군, Media 10%: 배지 10%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 1%: V-5 균주 배양액 1%(w/w) 처리군, Enhydrobacter 10%: V-5 균주 배양액 10%(w/w) 처리군.Figure 1 is a graph showing the effect of strain V-5 on the expression of HAS3 (Hyaluronan synthase 3), which is involved in moisturizing. None: untreated group, RA: retinoic acid (RA) 1 μM treated group as a positive control, Media 1%: medium 1% (w/w) treated group, Media 10%: medium 10% (w/w) treated group, Enhydrobacter 1%: V-5 strain culture 1% (w/w) treated group, Enhydrobacter 10%: V-5 strain culture 10% (w/w) treated group.
Figure 2 is a graph showing the effect of strain V-5 on the expression of AQP-3 (Aquaporin-3), which is involved in moisturizing. None: untreated group, RA: retinoic acid (RA) 1 μM treated group as a positive control, Media 1%: medium 1% (w/w) treated group, Media 10%: medium 10% (w/w) treated group, Enhydrobacter 1%: V-5 strain culture 1% (w/w) treated group, Enhydrobacter 10%: V-5 strain culture 10% (w/w) treated group.
Figure 3 is a graph showing the effect of strain V-5 on the expression of IVL (Involucrin), which is involved in the skin barrier. None: Untreated group, Adiporon: As a positive control group, Adiporon 10 μM treated group, Media 1%: Medium 1% (w/w) treated group, Media 10%: Medium 10% (w/w) treated group, Enhydrobacter 1% : V-5 strain culture 1% (w/w) treated group, Enhydrobacter 10%: V-5 strain culture 10% (w/w) treated group.
Figure 4 is a graph showing the effect of strain V-5 on the expression of LOR (Loricrin) involved in the skin barrier. None: Untreated group, Adiporon: As a positive control group, Adiporon 10 μM treated group, Media 1%: Medium 1% (w/w) treated group, Media 10%: Medium 10% (w/w) treated group, Enhydrobacter 1% : V-5 strain culture 1% (w/w) treated group, Enhydrobacter 10%: V-5 strain culture 10% (w/w) treated group.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only and the scope of the present invention is not limited to these examples.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정Example 1. Isolation and identification of strains
사람의 피부에서 엔히드로박테르 아에로사쿠스 균주를 분리 및 동정하였다.Enhydrobacter aerosaccus strains were isolated and identified from human skin.
구체적으로, 사람의 피부로부터 채취한 시료를 R2A(Reasoner's 2A)를 함유하는 액체 배지 또는 고체 배지에 접종하였다. 접종 후 72시간 동안 37℃ 인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 집락 100개를 순수 분리 배양하여, 72 시간 동안 37℃ 인큐베이터에서 재배양 하였다. 배양이 완료된 집락은 16S rRNA 유전자 서열 동정을 실시하였다. 이때 사용된 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안되었다(27F, 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' (서열번호 2); 1492R, 5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3 (서열번호 3)). PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분30초씩 30 사이클로 실시 하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 처리한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다. Ezcloud 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램을 사용하여, 분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA 부위의 염기서열을 등록된 표준 균주(type strain)들과 비교 분석 하였을 때, 상동성 97% 이하의 신규성 있는 종들만 선별하였고, 그 중 상동성 97% 이하의 신규 미생물 엔히드로박테르 아에로사쿠스(Enhydorbacter aerosaccus) 균주(이하 "V-5"이라 함)을 선별하였다. Specifically, samples collected from human skin were inoculated into liquid medium or solid medium containing R2A (Reasoner's 2A). After inoculation, the colonies were cultured in an incubator at 37°C for 72 hours, and 100 colonies formed were pure, isolated and cultured, and re-cultured in an incubator at 37°C for 72 hours. The 16S rRNA gene sequence of the colonies after completion of culture was identified. The primers used at this time were designed to amplify in response to bacteria only (27F, 5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' (SEQ ID NO: 2); 1492R, 5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3 (SEQ ID NO: 3)). PCR amplification was performed in 30 cycles of 95°C for 1 minute, 55°C for 1 minute, and 75°C for 1 minute and 30 seconds, and was finally treated at 72°C for 8 minutes and stored at 4°C. After the PCR reaction was completed, the DNA sequences of the isolated and cultured species were determined using ABI-3730XL (ABI, USA). When comparing and analyzing the nucleotide sequence of the 16S rRNA region determined among the isolated and cultured microbial colonies with the registered standard strains (type strains) using the BLAST program provided on the Ezcloud website, only novel species with 97% or less homology were identified. Among them, a novel microorganism Enhydorbacter aerosaccus strain (hereinafter referred to as “V-5”) with 97% or less homology was selected.
선별된 V-5 균주를 2021년 11월 15일자로 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에 기탁하여 기탁번호 KCCM13073P를 부여 받았다. V-5 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16S rRNA 유전자 서열을 갖는다.The selected V-5 strain was deposited at the Korean Culture Center of Microorganisms (KCCM) on November 15, 2021, and was given deposit number KCCM13073P. Strain V-5 has the 16S rRNA gene sequence of SEQ ID NO: 1 (complementary DNA).
실험예 1. 피부 보습 효과 - HAS3 및 AQP-3 발현 증가능 확인Experimental Example 1. Skin moisturizing effect - Confirmation of ability to increase HAS3 and AQP-3 expression
V-5 균주 배양액이 피부 보습에 미치는 영향을 분석하기 위해, 보습과 관련된 유전자 히알루론산 합성효소(Hyaluronan synthase 3, HAS3) 및 아쿠아포린(Aquaporin-3, AQP-3)의 발현량을 분석하였다.To analyze the effect of V-5 strain culture on skin moisturization, the expression levels of moisturizing-related genes hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) and aquaporin (Aquaporin-3, AQP-3) were analyzed.
구체적으로, 인간 각질형성세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovine serum, FBS)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였다. 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 V-5 균주의 배양액을 1%(w/w) 또는 10%(w/w)로 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다.Specifically, HaCaT cells, a human keratinocyte cell line, were cultured in DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum (FBS). All cultures were performed in an incubator at 37°C and 5% CO 2 . The cultured cell line was treated with 1% (w/w) or 10% (w/w) of the culture medium of the V-5 strain and further cultured for 24 hours.
양성대조군으로 레티노산(Retionic acid, RA) 1 μM을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, TAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(nanodrop)으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 HAS3 및 AQP-3에 대한 프라이머를 사용하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.Retinoic acid (RA) 1 μM was used as a positive control. Afterwards, RNA was isolated from the cells of each sample using Trizol (RNA iso, TAKARA, Japan), RNA was quantified at 260 nm with a nanodrop, and 2 μg of RNA was used in an amplifier. cDNA was synthesized (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA). Real-time polymerase chain reaction was performed on a real-time PCR machine (Step One Plus, Applied Biosystems, USA) using the synthesized cDNA as a template and primers for HAS3 and AQP-3. The expression level of the gene was finally analyzed through correction for the β-actin gene, and the results are shown in Figures 1 and 2.
도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, V-5 균주 배양액은 HAS3 및 AQP-3의 발현을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.As shown in Figures 1 and 2, it was confirmed that the V-5 strain culture significantly increased the expression of HAS3 and AQP-3.
따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 효과가 있음을 알 수 있었다.Therefore, it was found that the Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain has a skin moisturizing effect.
실험예 2. 피부 장벽 강화 효과 - IVL 및 LOR 발현 증가능 확인Experimental Example 2. Skin barrier strengthening effect - confirmation of the ability to increase IVL and LOR expression
V-5 균주 배양액이 피부 장벽 강화에 미치는 영향을 분석하기 위해, 피부 장벽 강화와 관련된 유전자 인볼루크린(Involucrin, IVL) 및 로리크린(Loricrin, LOR)의 발현량을 분석하였다.To analyze the effect of V-5 strain culture on skin barrier strengthening, the expression levels of genes related to skin barrier strengthening, Involucrin (IVL) and Loricrin (LOR), were analyzed.
구체적으로, 인간 각질형성세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청(fetal bovine serum, FBS)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였다. 배양은 모두 37℃, 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 V-5 균주의 배양액을 1%(w/w) 또는 10%(w/w)로 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다.Specifically, HaCaT cells, a human keratinocyte cell line, were cultured in DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum (FBS). All cultures were performed in an incubator at 37°C and 5% CO 2 . The cultured cell line was treated with 1% (w/w) or 10% (w/w) of the culture medium of the V-5 strain and further cultured for 24 hours.
양성대조군으로 아디포론(Adiporon) 10 μM을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, TAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(nanodrop)으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 IVL 및 LOR에 대한 프라이머를 사용하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.Adiporon 10 μM was used as a positive control. Afterwards, RNA was isolated from the cells of each sample using Trizol (RNA iso, TAKARA, Japan), RNA was quantified at 260 nm with a nanodrop, and 2 μg of RNA was used in an amplifier. cDNA was synthesized (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA). Real-time polymerase chain reaction was performed in a real-time PCR machine (Step One Plus, Applied Biosystems, USA) using the synthesized cDNA as a template and primers for IVL and LOR. The expression level of the gene was finally analyzed through correction for the β-actin gene, and the results are shown in Figures 3 and 4.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, V-5 균주 배양액은 IVL 및 LOR의 발현을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.As shown in Figures 3 and 4, it was confirmed that the V-5 strain culture significantly increased the expression of IVL and LOR.
따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 장벽 강화 효과가 있음을 알 수 있었다.Therefore, it was found that the Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain had a skin barrier strengthening effect.
종합하면, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 관련 유전자(예: HAS3, AQP-3) 및 피부 장벽 강화 관련 유전자(예: IVL 및 LOR)의 발현을 증가시킴을 확인하였다. 따라서, 엔히드로박테르 아에로사쿠스 V-5 균주는 피부 보습 및 피부 장벽 강화 효과를 가짐을 알 수 있었다.In summary, it was confirmed that the Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain increased the expression of genes related to skin moisturization (e.g. HAS3, AQP-3) and genes related to skin barrier strengthening (e.g. IVL and LOR). . Therefore, it was found that the Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain had skin moisturizing and skin barrier strengthening effects.
이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능할 것이다. The above description is merely an illustrative explanation of the technical idea of the present invention, and various modifications and variations will be possible to those skilled in the art without departing from the essential characteristics of the present invention.
SEQUENCE LISTING <110> Cosmax, INC. <120> Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain and its use for improving skin conditions <130> PN142224KR <160> 3 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 1366 <212> DNA <213> Enhydrobacter aerosaccus V-5 <400> 1 ctaccatgca gtcgaacgcg tgtagcaata cacgagtggc gcacgggtga gtaacgcgtg 60 gatatctgcc ttttggttcg gaataacccc gggaaactgg ggctaatacc ggatggttcc 120 tacgggataa agatttatcg ccaaaagatg agtccgcgtc cgattagcta gttggtgggg 180 taacggccta ccaaggcgac gatcggtagc tggtctgaga ggacgatcag ccacactggg 240 actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatggggg 300 caaccctgat ccagccatgc cgcgtgagtg atgaaggcct tcgggttgta aagctctttt 360 ggcggggacg atgatgacgg tacccgcaga ataagccccg gctaacttcg tgccagcagc 420 cgcggtaaga cgaagggggc tagcgttgtt cggaattact gggcgtaaag cgagtgtagg 480 cggttgttat agtcaggtgt gaaagccttg agctcaactc aagaaatgca cttgatactg 540 aacagctaga gtaccggaga ggatagtgga attcccagtg tagtggtgaa atacgtagag 600 attgggaaga acaccagtgg cgaaggcggc tatctggacg gttactgacg ctaagactcg 660 aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgggtg 720 ctagacgttg gcgagcttgc tcgtcagtgt cgcagctaac gcgttaagca ccccgcctgg 780 ggagtacggc cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 840 gcatgtggtt caattcgacg caacgcgcag aaccttacca gcccttgaca tgtgactcgc 900 cggctccaga gacggagcct tcggttcggc cggagtcaac acaggtgctg catggctgtc 960 gtcagctcgt gtcgtgagaa tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac cctcgtctcc 1020 agttgccatc aggttatgct gggcactttg gagaaactgc cggtgacaag ccggaggaag 1080 gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct tacgggctgg gctacacacg tgctacaatg 1140 gcggtgacag tgggatgcga aggggcgacc cggagccgat cccaaaaagc cgtcccagtt 1200 cggattgcac tctgcaactc gagtgcatga aggtggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1260 atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgcc atgggagttg 1320 gttctacccg aagatggtgc gctaaccgca aggaggcagc cagcct 1366 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 27F primer <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 1492R primer <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19 SEQUENCE LISTING <110> Cosmax, INC. <120> Enhydrobacter aerosaccus V-5 strain and its use for improving skin conditions <130> PN142224KR <160> 3 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 1366 <212> DNA <213> Enhydrobacter aerosaccus V-5 <400> 1 ctaccatgca gtcgaacgcg tgtagcaata cacgagtggc gcacgggtga gtaacgcgtg 60 gatatctgcc ttttggttcg gaataacccc gggaaactgg ggctaatacc ggatggttcc 120 tacggggataa agatttatcg ccaaaagatg agtccgcgtc cgattagcta gttggtgggg 180 taacggccta ccaaggcgac gatcggtagc tggtctgaga ggacgatcag ccacactggg 240 actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatggggg 300 caaccctgat ccagccatgc cgcgtgagtg atgaaggcct tcgggttgta aagctctttt 360 ggcggggacg atgatgacgg tacccgcaga ataagccccg gctaacttcg tgccagcagc 420 cgcggtaaga cgaagggggc tagcgttgtt cggaattact gggcgtaaag cgagtgtagg 480 cggttgttat agtcaggtgt gaaagccttg agctcaactc aagaaatgca cttgatactg 540 aacagctaga gtaccggaga ggatagtgga attcccagtg tagtggtgaa atacgtagag 600 attgggaaga acaccagtgg cgaaggcggc tatctggacg gttactgacg ctaagactcg 660 aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgggtg 720 ctagacgttg gcgagcttgc tcgtcagtgt cgcagctaac gcgttaagca ccccgcctgg 780 ggagtacggc cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 840 gcatgtggtt caattcgacg caacgcgcag aaccttacca gcccttgaca tgtgactcgc 900 cggctccaga gacggagcct tcggttcggc cggagtcaac acaggtgctg catggctgtc 960 gtcagctcgt gtcgtgagaa tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac cctcgtctcc 1020 agttgccatc aggttatgct gggcactttg gagaaactgc cggtgacaag ccggaggaag 1080 gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct tacgggctgg gctacacacg tgctacaatg 1140 gcggtgacag tgggatgcga aggggcgacc cggagccgat cccaaaaagc cgtcccagtt 1200 cggattgcac tctgcaactc gagtgcatga aggtggaatc gctagtaatc gcggatcagc 1260 atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgcc atgggagttg 1320 gttctacccg aagatggtgc gctaaccgca aggaggcagc cagcct 1366 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 27F primer <400> 2 agagtttgat cctggctcag 20 <210> 3 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> 1492R primer <400> 3 ggttaccttg ttacgactt 19
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