KR102334450B1 - Corynebacterium jeikeium strain and skin condition improving uses of thereof - Google Patents
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Abstract
Description
신규한 미생물, 그의 파쇄물, 배양액, 배양액의 추출물, 및 이들의 피부상태 개선 용도에 관한 것이다. It relates to a novel microorganism, its lysate, a culture solution, an extract of the culture solution, and their use for improving skin condition.
피부의 생태계는 미생물에게 다양한 형태의 서식처를 제공하며, 광범위한 미생물들이 살고 있다. 숙주인 인간은 이들과 공생관계를 이루고 있으며, 숙주에 많은 긍정적인 영향을 미친다고 알려져 있다. 피부는 함입부, 특화되어있는 틈새 등 다양한 형태의 서식처를 구성하고 있으며, 넓은 분포의 미생물이 자랄 수 있도록 돕는다. 기본적으로 피부는 물리적인 막을 형성하며, 외부로부터 잠재적인 위험요소 및 독성물질들로부터 방어를 하도록 도와준다. 피부는 외부환경과의 접속지점이 되며, 다양한 미생물들(진균, 세균, 바이러스 및 작은 유충)의 집합소이기도 하다. 물리적, 화학적 기능의 선택에 맞게 미생물들은 특화된 틈새에 적응하여 서식처를 마련한다. 일반적으로 피부는 차갑고, 산성 성질을 나타내며, 건조된 상태로 유지된다. 구조적으로 표피(epidermis)는 피부장벽을 이루고 있으며, 미생물과 독소가 침투하는 것을 차단하고, 수분을 유지하는 중요한 역할을 한다. 표피의 최상위층은 각질층(stratum corneum)으로 구성되어있다. 표피는 일명 '벽돌과 몰탈 구조'라고 불리는 형태를 띠고 있는데, 피부 조직은 계속적인 자가 회복 과정을 거치고, 분화과정의 마지막을 거친 비늘(squames)은 끊임없이 피부조직에서 탈락되는 과정을 반복하게 된다.The skin ecosystem provides various types of habitat for microorganisms, and a wide range of microorganisms live there. Human beings, the host, form a symbiotic relationship with them and are known to have many positive effects on the host. The skin constitutes various types of habitats, such as depressions and specialized crevices, and helps a wide range of microorganisms to grow. Basically, the skin forms a physical barrier and helps to defend against potential hazards and toxic substances from the outside. The skin becomes a connection point with the external environment and is also a gathering place for various microorganisms (fungi, bacteria, viruses and small larvae). In accordance with the selection of physical and chemical functions, microorganisms adapt to specialized niches to prepare habitats. In general, the skin is cold, acidic, and remains dry. Structurally, the epidermis forms the skin barrier, blocks the penetration of microorganisms and toxins, and plays an important role in maintaining moisture. The uppermost layer of the epidermis is composed of the stratum corneum. The epidermis has a so-called 'brick and mortar structure', and the skin tissue undergoes a continuous self-healing process, and the squames that have undergone the final differentiation process repeat the process of constantly being removed from the skin tissue.
프로바이오틱스(Probiotics)는 인체에 유익한 작용을 하는 미생물을 총칭하는 말로 우리 몸에 유익(benefit)을 주는 미생물을 말한다. 현재까지 알려진 대부분의 프로바이오틱스는 유산균으로 알려져 있다. 프로바이오틱스는 인체에 여러 가지 유익작용을 통해 효과적인 효능이 발생되는 것으로 보고되었지만, 피부상재균과 피부의 상호관계에 대한 연구는 미비한 실정이다.Probiotics are microorganisms that have beneficial effects on the human body. Most probiotics known to date are known as lactic acid bacteria. Probiotics have been reported to produce effective effects through various beneficial effects on the human body, but studies on the interaction between skin flora and skin are scarce.
이에, 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 피부상재균의 개발이 필요한 실정이다.Accordingly, there is a need for the development of skin flora that can be usefully used in skin-related conditions.
일 양상은 코리네박테리룸 속(Corynebacterium sp.)에 속하는 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium) 균주를 제공하는 것이다. One aspect is to provide a Corynebacterium jeikeium ( Corynebacterium jeikeium ) belonging to the Corynebacterium sp.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄물, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공하는 것이다. Another aspect is to provide a lysate of the strain, a culture solution, or an extract of the culture solution.
또 다른 양상은 상기 균주, 그의 파쇄물, 배양액, 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이다. Another aspect is to provide a composition comprising the strain, a lysate thereof, a culture solution, and an extract of the culture solution.
일 양상은 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium) 균주를 제공한다. One aspect provides a Corynebacterium jeikeium strain.
상기 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium) 균주는 기탁번호 KCCM12691P로 기탁된 균주일 수 있다. The Corynebacterium jeikeium strain may be a strain deposited with accession number KCCM12691P.
상기 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium) 균주는 서열번호 1의 16s rRNA를 포함하는 균주일 수 있다. The Corynebacterium jeikeium strain may be a strain comprising 16s rRNA of SEQ ID NO: 1.
상기 균주는 피부 미용 개선 효과, 예를 들면, 피부 노화 억제, 피부 미백, 피부 장벽 강화, 피부 주름 억제, 또는 피부 보습 효과를 갖는 것일 수 있다. The strain may have a skin beauty improvement effect, for example, skin aging suppression, skin whitening, skin barrier strengthening, skin wrinkle suppression, or skin moisturizing effect.
상기 균주는 항노화 및 항주름 인자(예를 들어, COL1A1 또는 엘라스틴(ELN))의 발현을 증가 시키거나, 피부 보습 및 피부 장벽 관련 히알루론산 합성 효소 3(HAS3: Hyaluronan synthase 3)의 발현을 증가시키거나, 또는 염증성 사이토카인(예를 들어, IL-1β)의 발현을 억제하거나, 또는 피부미백에 관련된 멜라닌의 합성을 감소시키는 것일 수 있다.The strain increases the expression of anti-aging and anti-wrinkle factors (eg, COL1A1 or elastin (ELN)), or increases the expression of skin moisturizing and skin barrier-related hyaluronic acid synthase 3 (HAS3: Hyaluronan synthase 3) or inhibiting the expression of inflammatory cytokines (eg, IL-1β), or reducing the synthesis of melanin involved in skin whitening.
다른 양상은 상기 균주의 파쇄물, 배양액, 또는 배양액의 추출물을 제공한다. Another aspect provides a lysate of the strain, a culture solution, or an extract of the culture solution.
상기 균주의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다. The specific details of the strain are as described above.
본 명세서에서 용어"배양액"은 "배양 상층액", "조건 배양액" 또는 "조정 배지"와 호환적으로 사용될 수 있고, 코리네박테리움 제이케이움 균주가 시험관 내에서 성장 및 생존할 수 있도록 영양분을 공급할 수 있는 배지에 상기 균주를 일정기간 배양하여 얻는 상기 균주, 이의 대사물, 여분의 영양분 등을 포함하는 전체 배지를 의미할 수 있다. 또한, 상기 배양액은 균주를 배양하여 얻은 균체 배양액에서 균체를 제거한 배양액을 의미할 수 있다. 한편, 상기 배양액 중 균체를 제거한 액체를 "상등액"이라고도 하며, 배양액을 일정시간 가만히 두어 하층에 가라앉은 부분을 제외한 상층의 액체만을 취하거나, 여과를 통해 균체를 제거하거나, 배양액을 원심분리하여 하부의 침전을 제거하고 상부의 액체만을 취하여 획득할 수 있다. 상기 "균체"는 본 발명의 균주 자체를 의미하는 것으로 피부 샘플 등으로부터 분리하여 선별한 균주 자체 또는 상기 균주를 배양하여 배양액으로부터 분리한 균주를 포함한다. 상기 균체는 배양액을 원심분리하여 하층에 가라앉은 부분을 취하여 획득할 수 있고, 또는 중력에 의해 배양액의 하층으로 가라앉으므로 일정 시간동안 가만히 두었다가 상부의 액체를 제거함으로써 획득할 수 있다.As used herein, the term "culture medium" may be used interchangeably with "culture supernatant", "conditioned culture medium" or "conditioned medium", and provides nutrients so that the Corynebacterium jakeium strain can grow and survive in vitro. It may mean the entire medium including the strain obtained by culturing the strain for a certain period of time in a medium capable of supplying it, its metabolites, and extra nutrients. In addition, the culture solution may refer to a culture solution obtained by culturing the strain in which the cells are removed from the culture solution. On the other hand, the liquid from which the cells have been removed from the culture medium is also called a “supernatant”, and the culture solution is left for a certain period of time to take only the liquid from the upper layer except for the part that has sunk to the lower layer, remove the cells through filtration, or centrifuge the culture solution to the lower part It can be obtained by removing the precipitation of and taking only the liquid at the top. The "cell" of the present invention refers to the strain itself of the present invention, and includes the strain isolated and selected from a skin sample, or the strain isolated from the culture solution by culturing the strain. The cells can be obtained by centrifuging the culture medium and taking the part that has sunk to the lower layer, or by removing the liquid from the upper layer after leaving it still for a certain period of time because it sinks to the lower layer of the culture solution by gravity.
상기 배양액은 균주를 배양하여 수득된 배양액 자체, 그의 농축물, 또는 동결건조물 또는 배양액로부터 균주를 제거하여 수득된 배양 상층액, 그의 농축물 또는 동결건조물을 포함할 수 있다. The culture medium may include the culture medium itself obtained by culturing the strain, its concentrate, or a lyophilisate or a culture supernatant obtained by removing the strain from the culture medium, its concentrate or lyophilisate.
상기 배양액은 코리네박테리움 제이케이움 균주를 배지(예를 들면, R2A 배지 또는 TSA 배지) 에서 10℃ 초과 또는 40℃ 미만 중 어느 온도에서 일정 시간, 예를 들면, 4 내지 50시간 동안 배양하여 수득된 것일 수 있다. The culture medium is a Corynebacterium jakeium strain in a medium (eg, R2A medium or TSA medium) at any temperature of more than 10°C or less than 40°C for a certain time, for example, 4 to 50 hours. may be obtained.
일 구체예에서, 균주의 배양 상층액은 균주 배양액을 원심분리나 여과시켜 균주를 제거하는 단계에 의해 수득될 수 있다.In one embodiment, the culture supernatant of the strain may be obtained by centrifuging or filtering the strain culture to remove the strain.
다른 구체예에서, 농축물은 상기 균주 배양액 자체, 또는 상기 배양액을 원심분리나 필터를 이용하여 여과한 후 수득된 상층액을 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다. In another embodiment, the concentrate may be obtained by concentrating the supernatant obtained after filtering the strain culture solution itself, or the culture solution using centrifugation or a filter.
상기 코리네박테리움 제이케이움 균주를 배양하기 위한 배양용 배지 및 배양 조건은 통상의 지식을 가진 자가 적절하게 선택하거나 변형하여 이용할 수 있다.The culture medium and culture conditions for culturing the Corynebacterium jakeium strain may be appropriately selected or modified by those of ordinary skill in the art.
본 명세서에서 용어 "파쇄액"은 균주 자체를 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 균주의 세포벽을 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다.As used herein, the term "lysate" may refer to a product obtained by crushing the cell wall of the strain itself by chemical or physical force.
본 명세서에서 용어 "배양액 추출물"은 상기 배양액 또는 그의 농축액로부터 추출한 것을 의미하며, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물을 포함할 수 있다. As used herein, the term "culture solution extract" means extraction from the culture solution or its concentrate, and may include an extract, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or these prepared or purified products, and a fraction obtained by fractionation thereof. can
또 다른 양상은 상기 균주, 상기 균주의 파쇄액, 배양액, 또는 배양액의 추출물의 용도를 제공한다. 상세하게는, 코리네박테리움 제이케이움 균주, 그의 파쇄액, 배양액 또는 그의 배양액의 추출물을 포함하는 조성물을 제공한다. Another aspect provides the use of the strain, a lysate of the strain, a culture solution, or an extract of the culture solution. Specifically, it provides a composition comprising a Corynebacterium jakeium strain, a lysate thereof, a culture solution or an extract of the culture solution.
상기 균주의 용도는 피부 상태 개선, 피부 미용 개선, 피부 질환의 예방, 개선 또는 치료, 피부 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료 등을 포함할 수 있다. Uses of the strain may include improving skin condition, improving skin beauty, preventing, improving or treating skin diseases, preventing, improving, or treating skin inflammatory diseases.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 노화 억제 또는 개선, 항 주름, 피부 미백, 피부 장벽 강화, 또는 피부 보습일 수 있다. The skin condition improvement or skin beauty improvement may be skin aging inhibition or improvement, anti-wrinkle, skin whitening, skin barrier strengthening, or skin moisturizing.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다. As used herein, the term "skin aging" refers to the tangible and intangible changes that appear on the skin with age, for example, a phenomenon in which the thickness of the epidermis becomes thin, the number of cells or blood vessels in the dermis, DNA damage repair ability, cell replacement cycle, It refers to a decrease in wound healing, skin barrier function, epidermal moisture retention, sweat secretion, sebum secretion, vitamin D production, physical damage defense, chemical removal ability, immune response, sensory function, and temperature regulation.
상기 균주 또는 이의 배양액은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다. The strain or its culture medium may be for improving skin aging caused by extrinsic factors or intrinsic factors. The extrinsic factor refers to various external factors, such as ultraviolet light (light), and the intrinsic factor is also referred to as a chronological factor and refers to a factor mainly caused by the passage of time. That is, the skin aging is specifically a natural aging phenomenon that occurs as the proliferation of skin cells decreases due to aging, as well as premature aging symptoms induced by external stimuli such as ultraviolet rays, pollution, cigarette smoke, chemical substances, etc. It is a concept that includes all of wrinkles, elasticity reduction, skin sagging and dryness. In addition, wrinkles include those that cause wrinkles by changing the components constituting the skin tissue by stimulation by changes in internal and external factors.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다. The aging may be photoaging. The term “photoaging” is a phenomenon induced by external environmental factors, and the most representative factor is ultraviolet rays. Ultraviolet rays cause damage to biological components such as activation of proteolytic enzymes, chain cleavage of matrix proteins, and abnormal cross-linking, and repetition of these mechanisms leads to apparent skin aging.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.As used herein, the term "wrinkle" refers to a state in which elasticity of the skin is lost and loosened, and for example, the skin may be folded. The "skin wrinkle prevention or improvement" may refer to any action of preventing or improving wrinkles by inhibiting the expression of factors related to wrinkles, or increasing the total amount of collagen.
상기 "피부 미백"은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 의미할 수 있다. 상기 "색소 침착"은 체내에 있는 색소의 양이 비정상적인 경우 또는 색소가 나타나는 장소에 이상이 있는 상태를 의미하며, 예를 들면 기미 및 주근깨 등인 것일 수 있다.The "skin whitening" may mean not only to brighten skin tone by inhibiting the synthesis of melanin pigment, but also to improve skin hyperpigmentation such as spots or freckles caused by ultraviolet rays, hormones, or heredity. The "pigmentation" refers to a condition in which the amount of pigment in the body is abnormal or there is an abnormality in the place where the pigment appears, and may be, for example, spots and freckles.
상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.The "skin barrier strengthening" may refer to any action that enhances the function of the skin barrier that is located at the outermost part of the skin and prevents loss of moisture and nutrients.
상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.The "skin moisturizing" may refer to any action of maintaining skin moisture or preventing moisture loss.
본 명세서에서 용어, "항염증"이란 "염증 억제 또는 개선"과 혼용될 수 있으며, 면역 반응이 완화되어 NO 생성이 억제되는 모든 작용을 의미할 수 있다.As used herein, the term "anti-inflammatory" may be used interchangeably with "inhibiting or improving inflammation", and may refer to any action in which an immune response is alleviated to suppress NO production.
상기 "피부 질환"은 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환, 피부 노화, 피부 상처, 피부 흉터, 또는 피부 염증일 수 있다. 용어, "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어, "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다.The "skin disease" may be a disease caused by damage to the skin barrier function, skin aging, skin wounds, skin scars, or skin inflammation. The term “prevention” includes inhibiting the development of a disease. The term “treatment” includes inhibiting, alleviating, or eliminating the development of a disease.
상기 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다. The damage to the skin barrier function may refer to any change that appears in the skin as the function of the skin barrier is reduced or damaged. For example, it may include increased skin wrinkles, dryness, dermatitis, atopic dermatitis, allergic dermatitis, acne, and the like.
상기 피부 염증성 질환은 피부 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것일 수 있다. The skin inflammatory disease may be any one selected from the group consisting of skin wounds, dermatitis, atopic dermatitis, pruritus, eczematous skin disease, dry eczema, erythema, urticaria, psoriasis, weak rash, and acne.
또 다른 구체예에 있어서, 상기 균주는 피부 개선 효과를 갖는 다른 균주 코리네박테리움 속에 속하는 균주와 함께 사용되어 시너지 효과를 나타낸 것일 수 있다. 상기 코리네박테리움 속에 속하는 균주는 예를 들어, C. ammoniagenes, C. glutamicum, C. acetoglutamicum, C. acetoacidophilum, C. thermoaminogenes, C. alkanolyticum, C. callunae, C. lilium, C. melassecola, C. efficiens, C. herculis, C. diphtheria, C. hemolyticum, C. pseudotuberculosis, C. pyogenes, C. ulcerans, 또는 C. pseudodiphthericum 등을 포함할 수 있다. 더욱 상세하게는 상기 코리네박테리움 속에 속하는 균주의 예는 코리네박테리움 아미콜라툼 SB-1 (Corynebacterium amycolatum SB-1), 코리네박테리움 아코렌스 SB-2(Corynebacterium accolens SB-2), 코리네박테리움 제이케이움 SB-3(Corynebacterium jeikeium SB-3), 코리네박테리움 아페르멘탄스 SB-4(Corynebacterium afermentans SB-4), 코리네박테리움 우레아리티쿰 SB-5(Corynebacterium urealyticum SB-5), 코리네박테리움 크롭펜스테드티 SB-6(Corynebacterium kroppenstedtii SB-6), 코리네박테리움 투베르쿨로사리쿰 SB-7(Corynebacterium tuberculostearicum SB-7) 또는 코리네박테리움 맥진레이 SB-8(Corynebacterium macginleyi SB-8)를 포함할 수 있다. In another embodiment, the strain may be used with a strain belonging to the genus Corynebacterium, which is another strain having a skin improvement effect, to show a synergistic effect. The strain belonging to the genus Corynebacterium is, for example, C. ammoniagenes , C. glutamicum , C. acetoglutamicum, C. acetoacidophilum, C. thermoaminogenes , C. alkanolyticum, C. callunae, C. lilium, C. melassecola, C efficiens, C. herculis, C. diphtheria, C. hemolyticum, C. pseudotuberculosis, C. pyogenes, C. ulcerans, or C. pseudodiphthericum . More specifically, examples of strains belonging to the genus Corynebacterium include Corynebacterium amycolatum SB-1, Corynebacterium accolens SB-2, Corynebacterium jeikeium SB-3, Corynebacterium afermentans SB-4, Corynebacterium urealyticum SB-5 -5), Corynebacterium kroppenstedtii SB-6, Corynebacterium tuberculostearicum SB-7, or Corynebacterium mcjinray SB-8 ( Corynebacterium macginleyi SB-8).
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 이의 배양액의 추출물을 포함할 수 있다.The composition comprises 0.001 wt% to 80 wt%, for example, 0.01 wt% to 60 wt%, 0.01 wt% to 40 wt%, 0.01 wt% to 30 wt%, 0.01 wt% to 20 wt%, based on the total weight of the composition %, 0.01% to 10%, 0.01% to 5%, 0.05% to 60%, 0.05% to 40%, 0.05% to 30%, 0.05% to 20% by weight, 0.05% to 10% by weight, 0.05% to 5% by weight, 0.1% to 60% by weight, 0.1% to 40% by weight, 0.1% to 30% by weight, 0.1% to 20% by weight, 0.1% by weight % to 10% by weight, or 0.1% to 5% by weight of the strain, a lysate thereof, a culture medium, or an extract of the culture medium thereof.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 균주, 이의 파쇄액, 배양액, 또는 이의 배양액의 추출물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션 (formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.As used herein, the term "included as an active ingredient" means that the extract of the strain of the present specification, its lysate, culture, or its culture is added to the extent that it can exhibit the above-mentioned effects, drug delivery and stabilization, etc. For this purpose, it is meant to include being formulated in various forms by adding various components as sub-components.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. The composition may be a cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.The cosmetic composition may have a cosmetic formulation of, for example, a softening lotion, a nourishing lotion, a massage cream, a nourishing cream, an essence, a pack, a gel, an ampoule, or a skin adhesion type.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.Components included in the cosmetic composition may include components commonly used in cosmetic compositions in addition to the composition as an active ingredient, for example, conventional adjuvants and carriers such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and fragrances. may include
또한, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다. In addition, the composition may be a composition for external application to the skin.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.In the present specification, the external preparation for skin may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermally delivered patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof. The external preparation for skin is a component usually used in external preparations for skin such as cosmetics or pharmaceuticals, for example, an aqueous component, an oily component, a powder component, alcohol, a moisturizer, a thickener, an ultraviolet absorber, a whitening agent, a preservative, an antioxidant, a surfactant, a fragrance , colorant, various skin nutrients, or a combination thereof may be appropriately formulated as needed. The external preparation for skin includes metal-blocking agents such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid, caffeine, tannin, belapamil, licorice extract, glablidine, and kaline. Fruit hot water extract, various herbal medicines, drugs such as tocopherol acetate, glitylic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, glucoside ascorbate, arbutin, kojic acid, glucose, fructose, Sugars, such as trehalose, etc. can be mix|blended suitably.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다. In another embodiment, the composition may be a pharmaceutical composition.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.The pharmaceutical composition may further include a pharmaceutically acceptable diluent or carrier. The diluent may be lactose, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose, or mannitol, and the lubricant may be magnesium stearate, talc, or a combination thereof. The carrier may be an excipient, a disintegrant, a binder, a lubricant, or a combination thereof. The excipient may be microcrystalline cellulose, lactose, low-substituted hydroxycellulose, or a combination thereof. The disintegrant may be carboxymethyl cellulose calcium, sodium starch glycolate, anhydrous calcium monohydrogen phosphate, or a combination thereof. The binder may be polyvinylpyrrolidone, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropylcellulose, or a combination thereof. The lubricant may be magnesium stearate, silicon dioxide, talc, or a combination thereof.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.The pharmaceutical composition may be formulated as an oral or parenteral dosage form. Oral dosage forms may be granules, powders, solutions, tablets, capsules, dry syrups, or a combination thereof. The parenteral dosage form may be an injection.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다. The composition may be a health functional food composition.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주 또는 이의 배양액 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.The health functional food composition may be used alone or in combination with other foods or food ingredients of the strain or its culture, and may be appropriately used according to a conventional method. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prophylactic, health or therapeutic treatment). In general, in the production of food or beverage, the composition of the present specification may be added in an amount of 15 parts by weight or less based on the raw material. There is no particular limitation on the type of the health functional food. Among the types of health functional food, the beverage composition may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as an additional component like a conventional beverage. The natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the sweetener, natural sweeteners such as taumartin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like can be used. The health food composition can also be added to nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonated beverages carbonation agent used, or a combination thereof. The health functional food composition may also contain natural fruit juice, fruit juice beverage, fruit flesh for the production of vegetable beverage, or a combination thereof.
또한, 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다. Another aspect also provides a method of preventing, ameliorating, or treating a condition in a subject comprising treating or administering to the subject in need thereof an effective amount of the composition described above.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태, 또는 염증과 관련된 상태일 수 있다. The subject's condition may be a condition related to skin or a condition related to inflammation.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. As used herein, the terms "administering", "introducing", and "implanting" are used interchangeably and into a subject by a method or route that results in at least partial localization of a composition according to one embodiment to a desired site. It may mean the arrangement of the composition according to one embodiment of the.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.Administration may be administered by methods known in the art. Administration may be administered directly to a subject by any means, for example, intravenous, intramuscular, oral, transdermal, mucosal, intranasal, intratracheal or subcutaneous administration. can The administration may be systemically or locally.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부미용 개선, 예를 들어 피부 보습, 피부 장벽 강화, 피부 염증 억제, 피부 주름 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.The subject may be a mammal, such as a human, cow, horse, pig, dog, sheep, goat, or cat. The subject may be an individual in need of skin beauty improvement, for example, skin moisturizing, skin barrier strengthening, skin inflammation suppression, and skin wrinkle improvement effect.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.The administration is 0.1 mg to 1,000 mg, for example, 0.1 mg to 500 mg, 0.1 mg to 100 mg, 0.1 mg to 50 mg, 0.1 mg to 25 mg, 1 mg to 1,000 mg, 1 mg to 500 mg, 1 mg to 100 mg, 1 mg to 50 mg, 1 mg to 25 mg, 5 mg to 1,000 mg, 5 mg to 500 mg, 5 mg to 100 mg, 5 mg to 50 mg , 5 mg to 25 mg, 10 mg to 1,000 mg, 10 mg to 500 mg, 10 mg to 100 mg, 10 mg to 50 mg, or 10 mg to 25 mg may be administered. However, the dosage may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate and reaction sensitivity, and those skilled in the art The dosage may be appropriately adjusted in consideration of these factors. The number of administration may be once a day or twice or more within the range of clinically acceptable side effects, and may be administered to one or two or more sites for the administration site, and total daily or at intervals of 2 to 5 days The number of days of administration may range from 1 to 30 days per treatment. If necessary, the same treatment can be repeated after a titration period. For animals other than humans, the dose is the same as that of a human per kg, or the above dose is converted, for example, by the volume ratio (for example, average value) of the target animal and the organ (heart, etc.) of the human One dose can be administered.
일 양상에 따른 신규 코리네박테리움 제이케이움 균주에 의하면, 피부 관련 상태 또는 염증 관련 상태의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.According to the novel Corynebacterium jakeium strain according to an aspect, it can be usefully used for the prevention, improvement, or treatment of skin-related conditions or inflammation-related conditions.
도 1은 일 구체예에 따른 균주가 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 2는 일 구체예에 따른 균주가 엘라스틴의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 3은 일 구체예에 따른 균주가 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 4는 일 구체예에 따른 균주가 염증성 사이토카인의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 5는 일 구체예에 따른 균주가 멜라닌 생성 억제에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. 1 is a graph showing the effect of a strain according to an embodiment on the expression of COL1A1.
2 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the expression of elastin.
3 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the expression of HAS3.
4 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the expression of inflammatory cytokines.
5 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the inhibition of melanin production.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, it will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes of one or more embodiments, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
[실시예][Example]
실시예 1. 균주의 분리 및 동정Example 1. Isolation and identification of strains
건강한 여성의 피부를 멸균 증류수로 세척하여 확보된 샘플(human epidermal keratinocyte)을 TSB(Tryptic soy broth) 및 0.1% tween 80을 함유하는 액체 배지 또는 고체 배지(Becton Dickinson, Cockeysville, MD)에 접종하였다. 접종 후 48시간 동안 28℃인큐베이터에서 배양한 뒤 형성된 집락 100개를 순수 분리 배양하여, 48시간 동안 28℃인큐베이터에서 재배양 하였다. 배양이 완료된 집락은 16s rRNA 유전자 서열 동정을 실시하였다. 이때 사용된 프라이머는 박테리아에만 반응하여 증폭하도록 고안되었다. PCR 증폭은 95℃ 1분, 55℃ 1분, 75℃ 1분 30초씩 30 사이클로 실시 하였으며, 마지막으로 72℃에서 8분간 처리한 후 4℃에서 보관하였다. PCR 반응이 끝난 뒤 분리 배양된 종들의 DNA 서열은 ABI-3730XL(ABI, USA)를 이용하여 결정하였다. 분리 배양된 미생물 집락 중 결정된 16S rRNA부위의 염기서열을 미국 국립생물정보센터(NCBI, National Center for Biotechnology Information) 홈페이지에서 제공되는 BLAST 프로그램으로 등록된 다른 균주들과 비교 분석 하였을 때 상동성 97% 이하의 신규성 있는 종들만 선별하여 사용하였고, 그 중 상동성 98% 이하의 신규 미생물 코리네박테리움 제이케이움(Corynebacterium jeikeium) 균주(이하 "SB-3"이라 함)을 선별하였다. 선별된 SB-3 균주를 2020년 4월 9일자로 한국 미생물 보존센터에 기탁하여 기탁번호 KCCM12691P를 부여 받았고, SB-3 균주는 서열번호 1(complementary DNA)의 16s rRNA 서열을 갖는다. A sample (human epidermal keratinocyte) obtained by washing the skin of a healthy woman with sterile distilled water was inoculated into a liquid medium or solid medium (Becton Dickinson, Cockeysville, MD) containing TSB (Tryptic soy broth) and 0.1% tween 80 (Becton Dickinson, Cockeysville, MD). After inoculation, 100 colonies formed after culturing in a 28 ℃ incubator for 48 hours after inoculation were purely separated and cultured, and cultured in a 28 ℃ incubator for 48 hours. The cultured colonies were subjected to 16s rRNA gene sequence identification. The primers used at this time were designed to amplify in response only to bacteria. PCR amplification was carried out in 30 cycles of 95°C for 1 minute, 55°C for 1 minute, 75°C for 1 minute and 30 seconds each, and finally, after treatment at 72°C for 8 minutes, it was stored at 4°C. After the PCR reaction, the DNA sequences of the isolated and cultured species were determined using ABI-3730XL (ABI, USA). When the nucleotide sequence of the 16S rRNA region determined among the isolated and cultured microbial colonies is compared with other strains registered with the BLAST program provided on the website of the National Center for Biotechnology Information (NCBI), homology is less than 97% Only novel species of were selected and used, and among them, a novel microorganism Corynebacterium jeikeium with less than 98% homology was selected (hereinafter referred to as "SB-3"). The selected SB-3 strain was deposited with the Korea Microbial Conservation Center on April 9, 2020 and was given accession number KCCM12691P, and the SB-3 strain has a 16s rRNA sequence of SEQ ID NO: 1 (complementary DNA).
[실험예] [Experimental example]
항노화 및 항주름 활성 분석Anti-aging and anti-wrinkle activity assay
상기 실시예 1에서 분리된 SB-3 균주 배양액이 자외선(UV) 조사에 의한 노화피부 노화 및 주름 생성과 관련된 인자에 미치는 영향을 분석하였다. The effect of the SB-3 strain culture medium isolated in Example 1 on factors related to aging skin aging and wrinkle generation by ultraviolet (UV) irradiation was analyzed.
구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68) 를 6 웰 플레이트에 3.5x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣은 후 12 mJ/㎠ 의 UVB를 조사하거나 조사하지 않았다. UVB 조사 직후 DPBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아 준 후, 상기 SB-3 균주의 배양액(1%(w/w))을 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 음성 대조군으로 자외선 처리 및 균주 배양액 비처리군을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 COL1A1 및 ELN(elastin)에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다. Specifically, a human dermal fibroblast (Hs68) cell line was aliquoted at 3.5x10 5 in a 6-well plate, and then cultured at 37° C., 5% CO 2 condition in an incubator for 24 hours. After removing the medium and adding DPBS, 12 mJ/cm2 of UVB was irradiated or not. Immediately after UVB irradiation, DPBS was removed and replaced with a medium without FBS, the SB-3 strain culture solution (1% (w/w)) was treated and further cultured for 24 hours. As a negative control group, UV-treated and strain culture untreated groups were used. Then, RNA was isolated from the cells of each sample using trizol (RNA iso, DAKARA, Japan), and RNA was quantified at 260 nm using nanodrops, and cDNA was synthesized in an amplifier using 2 μg of RNA each. (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA). Using the synthesized cDNA as a template, cybergreen (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA) was added together with primers and cDNA for the target genes COL1A1 and ELN (elastin) in a real-time PCR machine (Step One Plus, Step One Plus, Real-time polymerase chain reaction was performed in Applied Biosystems, USA). The expression level of the gene was finally analyzed through correction for the β-actin gene, and the results are shown in FIGS. 1 and 2 .
도 1은 일 구체예에 따른 균주가 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. 1 is a graph showing the effect of a strain according to an embodiment on the expression of COL1A1.
도 2는 일 구체예에 따른 균주가 엘라스틴의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.2 is a graph showing the effect of a strain according to an embodiment on the expression of elastin.
도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 균주는 자외선에 의해 감소된 COL1A1 및/또는 엘라스틴의 발현을 유의적으로 증가키는 것을 확인할 수 있었다.1 and 2, the strain according to one embodiment was confirmed to significantly increase the expression of COL1A1 and / or elastin reduced by ultraviolet rays.
따라서, 일 구체예에 따른 SB-3 균주는 노화(예를 들면, 광노화) 개선에 효과가 있음을 알 수 있다. Therefore, it can be seen that the SB-3 strain according to one embodiment is effective in improving aging (eg, photoaging).
피부장벽 강화 및 피부 보습 활성 분석 Skin barrier strengthening and skin moisturizing activity analysis
상기 실시예 1에서 분리된 SB-3 균주 배양액이 피부장벽강화 및 피부 보습 활성에 미치는 영향을 분석하였다. The effect of the SB-3 strain culture medium isolated in Example 1 on skin barrier strengthening and skin moisturizing activity was analyzed.
구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovine serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃ 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 상기 SB-3 균주의 배양액(1%(w/w))을 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 피부 장벽 강화 및 보습과 관련된 인자인 HAS3(히알루론산 합성 효소)에 대한 프라이머를 사용한 것만을 제외하고는 상기 실험예와 동일한 방법으로 HAS3의 발현량을 측정하였다. 상기 결과는 도 3에 나타내었다. Specifically, HaCaT cells, a human keratinocyte cell line, were cultured in DMEM medium (Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum, all of which were cultured at 37°C 5°C. % CO 2 in an incubator. The cultured cell line was treated with the culture solution (1% (w/w)) of the SB-3 strain and further cultured for 24 hours. The expression level of HAS3 was measured in the same manner as in Experimental Example, except that a primer for HAS3 (hyaluronic acid synthase), a factor related to skin barrier strengthening and moisturizing, was used. The results are shown in FIG. 3 .
도 3은 일 구체예에 따른 균주가 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.3 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the expression of HAS3.
도 3에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 균주는 HAS3의 발현량을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.As shown in FIG. 3 , it was confirmed that the strain according to one embodiment significantly increased the expression level of HAS3.
따라서, 일 구체예에 따른 SB-3 균주는 피부장벽 강화 및 피부 보습에 유용하게 사용될 수 있다. Therefore, the SB-3 strain according to one embodiment can be usefully used for strengthening the skin barrier and moisturizing the skin.
항염증 활성 분석Anti-inflammatory activity assay
상기 실시예 1에서 분리된 SB-3 균주 배양액이 항염증 활성이 있는지 여부를 분석하였다. Whether the SB-3 strain culture medium isolated in Example 1 had anti-inflammatory activity was analyzed.
구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovine serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃ 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 배지는 3~4일마다 교환해 주며 세포가 과다하게 증식되었을 때는 계대배양 하였다. 이후에 상기 세포를 5x105/웰로 분주하고 배양 24시간 후, 인산 완충 식염수 용액(PBS)으로 세척하였다. FBS를 포함하지 않은 DMEM 배지가 들어있는 각 웰에 세포를 분주하고, Poly I:C 10 ㎍/㎖, 및 IL-4를 10 ng/㎖로 첨가하여 각질형성 세포주에 염증을 유도하였다 다음으로 상기 균주의 배양액을 1% 농도로 처리한 후, 4시간 동안 추가 배양하였다. IL-1β에 대한 프라이머를 사용한 것만을 제외하고는 상기 실험예와 동일한 방법으로 IL-1β의 발현량을 분석하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었다. Specifically, HaCaT cells, a human keratinocyte cell line, were cultured in DMEM medium (Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum, all of which were cultured at 37°C 5°C. % CO 2 in an incubator. The medium was changed every 3 to 4 days, and when the cells were excessively proliferated, subculture was performed. Thereafter, the cells were aliquoted at 5x10 5 /well, and after 24 hours of incubation, they were washed with a phosphate buffered saline solution (PBS). Cells were aliquoted into each well containing DMEM medium without FBS, and poly I:
도 4는 일 구체예에 따른 균주가 염증성 사이토카인의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. 4 is a graph showing the effect of the strain according to one embodiment on the expression of inflammatory cytokines.
도 4에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 균주는 무처리 대조군 대비 현저하게 염증성 사이토카인인 IL-1β의 발현을 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. As shown in FIG. 4 , it was confirmed that the strain according to one embodiment significantly reduced the expression of IL-1β, an inflammatory cytokine, compared to the untreated control group.
따라서, 일 구체예에 따른 SB-3 균주는 피부 염증성 질환의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. Therefore, the SB-3 strain according to one embodiment can be usefully used for preventing, improving, or treating skin inflammatory diseases.
피부 미백 활성 분석Skin whitening activity analysis
상기 실시예 1에서 분리된 SB-3 균주 배양액의 멜라닌 분비 억제 효과를 확인하였다. The melanin secretion inhibitory effect of the culture medium of the SB-3 strain isolated in Example 1 was confirmed.
구체적으로, 쥐의 색소 세포인 B16-F10(Murine Melanoma) 세포(ATCC)를 10% FBS를 포함하는 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) 2㎖에 현탁시켜 1x105/웰로 6-웰 플레이트에 접종한 후, 상기 세포가 웰 바닥에 40~50% 부착될 때까지 37℃ 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, α-MSH를 100 nM 농도로 처리하여 멜라닌 생성을 유도하였다. 다음으로 상기 균주의 배양액을 1% 농도로 처리한 후, 3일 동안 추가 배양하였다. 이후, 배양액을 회수하여 1,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 얻었다. 상등액을 마이크로플레이트 리더(Microlpate reader, Victor 3)로 490 ㎚에서 흡광도를 3회 측정하여 멜라닌 분비 억제능을 평가하였다. 하기 계산식에 의해 평가하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다. 양성대조군으로는 알부틴(100ppm, Sigma aldrich)를 사용하였다.Specifically, murine pigment cells, B16-F10 (Murine Melanoma) cells (ATCC), were suspended in 2 ml of DMEM medium (Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% FBS to 1x10 5 /well 6 - After inoculation in the well plate, the cells were cultured for 24 hours at 37°C 5% CO 2 in an incubator until 40-50% adhered to the bottom of the well. Then, α-MSH was treated at a concentration of 100 nM to induce melanin production. Next, the culture solution of the strain was treated at a concentration of 1%, and further cultured for 3 days. Thereafter, the culture medium was recovered and centrifuged at 1,000 rpm for 10 minutes to obtain a supernatant. The absorbance of the supernatant was measured three times at 490 nm with a microplate reader (Victor 3) to evaluate the ability to inhibit melanin secretion. It was evaluated by the following formula, and the results are shown in FIG. 5 . As a positive control, arbutin (100 ppm, Sigma aldrich) was used.
[계산식][formula]
Melanin contents(%)=(각 시료 처리군의 평균 흡광도)/(α-MSH 처리군의 평균 흡광도) x 100(%)Melanin contents (%) = (average absorbance of each sample treatment group) / (average absorbance of α-MSH treatment group) x 100 (%)
도 5는 일 구체예에 따른 균주 배양액이 멜라닌 생성 억제에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. 5 is a graph showing the effect of the strain culture medium according to one embodiment on the inhibition of melanin production.
도 5에 나타낸 바와 같이, 일 구체예에 따른 균주는 무처리 대조군 대비 멜라닌의 생성을 유의적으로 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. As shown in Figure 5, the strain according to one embodiment was confirmed to significantly reduce the production of melanin compared to the untreated control.
따라서, 일 구체예에 따른 SB-3 균주는 피부 미백에 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the SB-3 strain according to one embodiment can be usefully used for skin whitening.
<110> Cosmax, INC. <120> Corynebacterium jeikeium strain and skin condition improving uses of thereof <130> PN132219 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1277 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Corynebacterium jeikeium <400> 1 agtggcgaac gggtgagtaa cacgtgggtg atctgccttg cacttcggga taagcctggg 60 aaactgggtc taataccgga taggaccatg ctttagtgtg tgtggtggaa agttttttcg 120 gtgcaagatg agcccgcggc ctatcagctt gttggtgggg taatggccta ccaaggcgac 180 gacgggtagc cggcctgaga gggtgtacgg ccacattggg actgagacac ggcccagact 240 cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatgggcg caagcctgat gcagcgacgc 300 cgcgtggggg atgacggcct tcgggttgta aactcctttc gctagggaag aagccactgt 360 gtggtgacgg tacctggata agaagcaccg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata 420 cgtagggtgc gagcgttgtc cggaattact gggcgtaaag agctcgtagg tggtttgtcg 480 cgtcgtctgt gaaatcccgg ggcttaactt cgggcgtgca ggcgatacgg gcataactag 540 agtgctgtag gggagactgg aattcctggt gtagcggtga aatgcgcaga tatcaggagg 600 aacaccgatg gcgaaggcag gtctctgggc agttactgac gctgaggagc gaaagcatgg 660 gtagcgaaca gatgattaga taccctggta gtccatgccg taaacggtgg gcgctaggtg 720 tgggggtttt atttacgatt cccgtgccgt agctaacgca ttaagcgccc cgcctgggga 780 gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggcggagca 840 tgtggattaa ttcgatgcaa cgcgaagaac ctttaacctg ggcttgacat acaccggatc 900 gctgcagaga tgtagtttcc cttgtggctg gtgtacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 960 tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgtc ttgtgttgcc 1020 agcacgttat ggtggggact cgcgagagac tgccggggtt aactcggagg aaggtacggg 1080 gatgacgtca aatcatcatg ccccttatgt ccagggcttc acacatgcta caatggtcgg 1140 tacagtgggt tgcgataccg tgaggtggag ctaatccctt aaagccggtc tcagttcgga 1200 ttggagtctg caactcgact ccatgaagtc ggagtcgcta gtaatcgcag atcagcaacg 1260 ctgcggtgaa tacgttc 1277 <110> Cosmax, INC. <120> Corynebacterium jeikeium strain and skin condition improving uses of it <130> PN132219 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1277 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Corynebacterium jeikeium <400> 1 agtggcgaac gggtgagtaa cacgtgggtg atctgccttg cacttcggga taagcctggg 60 aaactgggtc taataccgga taggaccatg ctttagtgtg tgtggtggaa agttttttcg 120 gtgcaagatg agcccgcggc ctatcagctt gttggtgggg taatggccta ccaaggcgac 180 gacgggtagc cggcctgaga gggtgtacgg ccacattggg actgagacac ggcccagact 240 cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatgggcg caagcctgat gcagcgacgc 300 cgcgtggggg atgacggcct tcgggttgta aactcctttc gctagggaag aagccactgt 360 gtggtgacgg tacctggata agaagcaccg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata 420 cgtagggtgc gagcgttgtc cggaattact gggcgtaaag agctcgtagg tggtttgtcg 480 cgtcgtctgt gaaatcccgg ggcttaactt cgggcgtgca ggcgatacgg gcataactag 540 agtgctgtag gggagactgg aattcctggt gtagcggtga aatgcgcaga tatcaggagg 600 aacaccgatg gcgaaggcag gtctctgggc agttactgac gctgaggagc gaaagcatgg 660 gtagcgaaca gatgattaga taccctggta gtccatgccg taaacggtgg gcgctaggtg 720 tgggggtttt atttacgatt cccgtgccgt agctaacgca ttaagcgccc cgcctgggga 780 gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggcggagca 840 tgtggattaa ttcgatgcaa cgcgaagaac ctttaacctg ggcttgacat acaccggatc 900 gctgcagaga tgtagtttcc cttgtggctg gtgtacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 960 tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgtc ttgtgttgcc 1020 agcacgttat ggtggggact cgcgagagac tgccggggtt aactcggagg aaggtacggg 1080 gatgacgtca aatcatcatg ccccttatgt ccagggcttc acacatgcta caatggtcgg 1140 tacagtgggt tgcgataccg tgaggtggag ctaatccctt aaagccggtc tcagttcgga 1200 ttggagtctg caactcgact ccatgaagtc ggagtcgcta gtaatcgcag atcagcaacg 1260 ctgcggtgaa tacgttc 1277
Claims (7)
The composition of claim 6, wherein the skin inflammatory disease is any one selected from the group consisting of skin wounds, dermatitis, atopic dermatitis, pruritus, eczematous skin disease, dry eczema, erythema, urticaria, psoriasis, weak rash, and acne. .
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