KR20230119520A - 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 상기 사프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 주름, 탄력, 보습 시너지 효과를 가지므로 피부 미용 개선에 탁월한 효과가 있다.

Description

샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising extractions of Crocus sativus flower and Salvia miltiorrhiza}
화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부에서부터 순서대로 표피(Epidermis), 진피(Dermis), 피하지방(Hypodermis) 조직의 3개 층으로 크게 구분되며, 물리적, 화학적인 외부 환경의 자극으로부터 인체를 보호하는 기능을 한다. 이 중 표피는 다시 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 나뉘는데, 각질층은 약 10~20%의 수분을 함유하며 인체의 최외곽에 존재함으로써 체외로의 수분 증발을 억제하는 한편, 외부로부터 물질의 과잉 침투를 차단하는 역할을 한다. 또한, 각질층 표면은 피지선에서 나온 피지와 땀샘에서 나온 땀으로 만들어진 얇은 천연 보호막으로 감싸져 있어 수분의 증발을 예방한다.
노화된 피부에서 나타나는 주름살과 피부의 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등은 대부분 진피에 존재하는 기질단백질의 변화로 인해 발생한다. 진피는 피부 내에서 피부의 강도와 형태를 지지하는 역할을 하고 있는데, 노화가 진행될 때 진피에 형태적인 변화가 일어남으로써 주름 생성 및 피부 처짐에 결정적인 역할을 하는 것이다. 진피 층을 지지하는 역할을 하는 것이 콜라겐(Collagen)과 엘라스틴(Elastin)이며 이러한 기질단백질을 분해하는 효소로서 대표적인 것이 매트릭스 메탈로프로테아제(Matrix metalloproteinase, MMP)가 있다. 자외선 조사 시 피부 내의 MMPs 활성이 증가되고, 피부 내의 콜라겐 및 기타 기질단백질을 현저하게 분해시켜 피부 노화를 촉진하는데 주요한 요인으로 작용한다.
따라서, 콜라겐과 엘라스틴의 합성을 촉진하고 MMP-1를 억제하여 피부 노화 방지에 탁월한 천연 추출물 소재의 화장품 개발이 필요하다.
일 양상은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 피부외용제용 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 양상은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.
상기 샤프란(Crocus Sativus)은 꽃의 암술을 추출하여 제조한 건조 향신료로서, 크로신(crocin), 피크로크로신(picrocrocin), 사프라날(safranal), 크로세틴(crocetin) 등과 같은 화합물을 포함하고 있다. 상기 화합물 중 크로신은 글리코시드 혼합물로서 샤프란에 황적색의 색을 부여하며, 크로신의 주요 성분은 α-크로신이다. 일반적으로 샤프란 꽃은 암술 머리를 제거한 후 버려진다. 특히, 사프란 꽃 또한 암술과 같이 크로신 성분으로 인해 진한 붉은 색을 띠어 변색에 대한 위험성이 있어 화장품 효능 원료로 고농도 사용되기 어렵다는 문제가 있다. 일 실시예에서는 샤프란 꽃, 구체적으로 샤프란 꽃잎 추출물이 피부섬유아세포에서 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 감소시키고, 콜라겐의 발현을 증가시키며, 노화된 섬유아세포에서 세포 이동을 촉진함으로써 피부 상처를 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 피부 재생 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 샤프란 꽃은 피부 미용 개선에 효과적인 각종 유효성분을 함유하고 있을 뿐만 아니라, 암술에 비하여 원가가 낮은 바, 대체 원료로 사용될 수 있다.
상기 단삼(Salvia Miltiorrhiza)은 꿀풀과에 속하는 다년생 초본식물로서, 인삼의 형태와 유사하고 붉은 빛을 나타내며 인체 내 혈액순환을 촉진시키고 콜레스테롤을 낮추는 효과가 우수하다고 알려져 있다.
상기 샤프란 꽃 추출물은 샤프란 꽃을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 추출한 것으로, 상기 샤프란 꽃 추출물은 크로신 화합물을 포함할 수 있다. 샤프란 꽃을 세절한 후, 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 샤프란 꽃 무게의 2배 내지 20배를 첨가하여 추출하는 것일 수 있다. 또한, 상기 추출은 30℃ 내지 100℃에서 수행될 수 있으며, 1 내지 10시간 동안 추출되는 것일 수 있다. 추출 방법은 냉침, 초음파 추출 또는 환류 냉각 추출 방법 등을 이용할 수 있으며, 추출 횟수는 1회 내지 5회 동안 수행될 수 있다. 일 구체예에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물은 상기 샤프란 꽃을 물 및 탄수화물분해효소(carbonhydrase)의 혼합물을 용매로 추출하는 것일 수 있다. 일반적으로 탄수화물은 분자량이 크고 불용성인 바, 체내에 흡수가 어렵다는 문제점이 있다. 상기 탄수화물분해효소는 샤프란 꽃에 존재하는 탄수화물을 글루코스, 말토오스와 같은 단당류로 전환하는 반응을 촉매한다. 따라서, 일 구체예에 따른 샤프란 꽃 추출물은 분자량이 작은 단당류를 포함함으로써 샤프란 꽃의 유효성분의 피부 흡수를 촉진시키는 바, 피부 상태 개선 효과를 극대화시킬 수 있다. 다른 구체예에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물은 샤프란 꽃을 물 및 탄수화물분해효소(carbonhydrase)의 혼합물을 용매로 추출한 후, 화학적, 물리적, 전기적 또는 생물학적 방법에 의해 탈색한 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 탈색은 여과제를 이용한 여과법에 의해 수행될 수 있다. 상기 탈색에 의하여 크로신 화합물이 제거되는 바, 변색에 대한 위험성이 없어 화장품에 고농도로 사용할 수 있다. 일 실시예에서는 크로신 화합물의 유무에 관계 없이 피부섬유아세포에서 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 감소시키고, 콜라겐의 발현을 증가시키며, 노화된 섬유아세포에서 세포 이동을 촉진함으로써 피부 상처를 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 피부 재생 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 따라서, 일 구체예에 따른 조성물은 샤프란 꽃 추출물의 함량에 따라 크로신 화합물을 탈색하는 단계를 선택적으로 적용할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 피부 장벽 강화, 피부 주름, 피부 탄력 또는 보습 효과를 가질 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다.
상기 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다. 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다.
상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 단삼 추출물은 단삼을 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 추출한 것일 수 있다. 단삼 뿌리를 세절한 후, 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 단삼 뿌리 무게의 2배 내지 20배를 첨가하여 추출하는 것일 수 있다. 또한, 상기 추출은 30℃ 내지 100℃에서 수행될 수 있으며, 1 내지 10시간 동안 추출되는 것일 수 있다. 추출 방법은 냉침, 초음파 추출 또는 환류 냉각 추출 방법 등을 이용할 수 있으며, 추출 횟수는 1회 내지 5회 동안 수행될 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물은 1:0.01 내지 1:10의 중량비로 혼합된 것일 수 있다. 상기 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물은 예를 들어, 1:0.01 내지 1:10, 1:0.1 내지 1:10, 1:1 내지 1:10, 1:5 내지 1:10, 1:5 내지 1:8 또는 1:7 내지 1:9로 혼합될 수 있다. 이때, 상기 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물의 혼합 비율이 상기 범위 미만인 경우, 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물에 의한 피부 상태 개선의 시너지 효과가 충분히 발휘되지 못하는 문제점이 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물의 혼합물을 포함할 수 있다.
일 실시예에서는 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 각각의 단독 추출물에 비해 외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 감소시키고, COL1A1, 엘라스틴 및 피브릴린 발현을 증가시키는 것을 확인하였다. 또한, 상처가 유발된 섬유아세포의 회복에 현저한 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 따라서, 일 양상에 따른 조성물은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물의 혼합물에 의해 피부 미용 개선, 상처 치유 효과의 시너지 활성을 가질 수 있다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 조성물 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또한, 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 상태 개선, 예를 들어 피부 보습, 피부 장벽 강화, 피부 상처 치료, 피부 주름 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인 가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
일 양상에 따른 화장료 조성물은 사프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물을 모두 포함하고 있어 각각의 단독 추출물에 비해 주름, 탄력, 보습 시너지 효과를 가지는 바, 피부 상태 개선에 탁월한 효과가 있다.
도 1은 탈색 과정 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물의 색을 나타낸 사진이다.
도 2는 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 3은 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 콜라겐 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 4는 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 상처 치유 및 피부 재생에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 5는 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 6은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 7은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 엘라스틴의 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 8은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 피브릴린의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 9a 및 도 9b는 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 피부 재생 촉진 효과를 나타낸 결과이다.
도 10은 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 피부 보습 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11a 및 도 11b는 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 제형에 따른 피부 주름 개선 효과를 나타낸 결과이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[제조예]
제조예 1. 샤프란 꽃 물 추출물의 제조(1)
건조 샤프란 꽃 16.7 g에 물 1L 및 탄수화물분해효소(carbonhydrase)를 가하여 25℃에서 24시간 동안 환류 냉각 추출하였다. 이를 여과지(Advantec no. 2 filter paper)를 이용하여 여과한 다음, 여액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 샤프란 꽃 물 추출물을 제조하였다.
제조예 2. 샤프란 꽃 물 추출물의 제조(2)
상기 제조예 1에서 제조한 샤프란 꽃 건조 엑스 추출물을 10 내지 24시간 동안 용매 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량%의 활성탄을 첨가한 여과제를 이용하여 착색 물질을 탈색하는 단계를 추가로 포함하였다는 점을 제외하고는 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 샤프란 꽃 물 추출물을 제조하였다.
제조예 3~5. 샤프란 꽃 물 추출물의 제조(3)
건조 샤프란 꽃 12.0 g에 다양한 온도(25℃, 50℃ 및 80℃)의 물 1 L를 가하여 24시간 동안 환류 냉각 추출하였다. 이를 여과지(Advantec no. 2 filter paper)를 이용하여 여과한 다음, 여액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 샤프란 꽃 물 추출물을 제조하였다.
제조예 6~7. 샤프란 꽃 물 추출물의 제조(4)
상기 제조예 3 및 5에서 제조한 샤프란 꽃 물 추출물을 사용하였다는 점을 제외하고는 상기 제조예 2와 동일한 방법으로 샤프란 꽃 건조 엑스 물 추출물을 제조하였다.
제조예 8~10. 샤프란 꽃 알코올 추출물의 제조(5)
건조 샤프란 꽃 10 g에 다양한 농도(25%, 50% 및 75%)의 부틸렌글리콜 1 L를 가하여 50℃에서 24시간 동안 환류 냉각 추출하였다. 이를 여과지(Advantec no. 2 filter paper)를 이용하여 여과한 다음, 여액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 건조된 상태의 샤프란 꽃 부틸렌글리콜 추출물을 제조하였다.
제조예 11~13. 샤프란 꽃 알코올 추출물의 제조(6)
25℃ 에탄올(10%, 25% 및 50%)를 사용하였다는 점을 제외하고는 상기 제조예 8과 동일한 방법으로 샤프란 꽃 에탄올 추출물을 제조하였다.
제조예 14. 단삼 뿌리 추출물의 제조
단삼 뿌리 분말가루 100 g에 25% 부틸렌글리콜 1 L를 가하여 25℃에서 24시간 동안 환류 냉각 추출하였다. 이를 여과지(Advantec no. 2 filter paper)를 이용하여 여과한 다음, 여액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)를 이용하여 감압농축하여 단삼 뿌리 추출물을 제조하였다.
[실시예]
실시예 1~3. 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 제조
상기 제조예 2에서 제조한 샤프란 꽃 물 추출물 및 제조예 14에서 제조한 단삼 뿌리 추출물을 1:0.1, 1:0.5 및 1:1의 중량비로 혼합하여 화장료 조성물을 제조하였다.
실시예 4. 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함하는 크림 제형 화장료 조성물의 제조
하기 표 1의 성분 및 함량을 포함하는 크림 제형의 화장료 조성물을 제조하였다. 본 명세서에서 다른 언급이 없는 한 함량은 중량%이다.
성분 함량
정제수 52.3625
소듐파이테이트 0.02
하이드록시아세토페논 0.2
글리세린 5
판테놀 1
펜틸렌글라이콜 2
1,2-헥산다이올 1
글리세린 2
잔탄검 0.07
트로메타민 0.15
소듐카보머 0.35
하이드록시에틸아크릴레이트/소듐아크릴로일다이메틸타우레이트코폴리머 0.0475
폴리글리세릴-3메틸글루코오스다이스테아레이트 2
폴리글리세릴-3다이스테아레이트 1.89
글리세릴스테아레이트시트레이트 0.11
카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트라이글리세라이드 0.5
코코넛야자오일 2
스쿠알란 2
카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 4
정제수 20
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.2
정제수 2.94
제조예 2 0.03
1,2-헥산다이올 0.015
카프릴릴글라이콜 0.015
부틸렌글라이콜 0.085
정제수 0.012
제조예 14 0.003
[비교예]
비교예 1. 크림 제형의 화장료 조성물의 제조
하기 표 2의 성분 및 함량을 포함하였다는 점을 제외하고는 상기 실시예 4와 동일한 방법으로 크림 제형의 화장료 조성물을 제조하였다.
성분 함량
정제수 55.4625
소듐파이테이트 0.02
하이드록시아세토페논 0.2
글리세린 5
판테놀 1
펜틸렌글라이콜 2
1,2-헥산다이올 1
글리세린 2
잔탄검 0.07
트로메타민 0.15
소듐카보머 0.35
하이드록시에틸아크릴레이트/소듐아크릴로일다이메틸타우레이트코폴리머 0.0475
폴리글리세릴-3메틸글루코오스다이스테아레이트 2
폴리글리세릴-3다이스테아레이트 1.89
글리세릴스테아레이트시트레이트 0.11
카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트라이글리세라이드 0.5
코코넛야자오일 2
스쿠알란 2
카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 4
정제수 20
아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머 0.2
[실험예]
탈색 과정에 따른 샤프란 꽃 추출물의 색조 및 크로신 화합물 확인
상기 제조예 1~13에서 제조한 샤프란 꽃 추출물의 탈색 과정에 따른 표면 색조를 육안으로 관찰하였다. 또한, 샤프란 꽃 추출물의 주요 성분에 해당하는 크로신 화합물의 함량을 HPTLC(High-Performance Thin Layer Chromatography)로 확인하여 표 3에 나타내었다.
제조예 1 제조예 2 제조예 3 제조예 4 제조예 5 제조예 6 제조예 7 제조예 8 제조예 9 제조예 10 제조예 11 제조예 12 제조예 13
크로신 농도 +/- - +/- +/- +/- - - ++++ ++ +/- +/- ++ ++++
++++: 다량 검출됨
++: 검출됨
+/-: 소량 검출됨
-: 검출되지 않음
도 1은 탈색 과정 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물의 색을 나타낸 사진이다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 탈색 과정을 포함하지 않는 제조예 1은 붉은 색을 띠었으나, 탈색 과정을 추가로 포함하는 제조예 2는 노란 색조를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 표 1에 나타낸 바와 같이, 탈색 과정이 포함되지 않은 경우, 크로신 화합물이 일정 농도 이상으로 검출되었으나 탈색 과정을 추가로 포함한 제조예 2, 6~7은 크로신 화합물이 검출되지 않았다.
즉, 탈색에 의하여 샤프란의 색을 담당하는 화학 물질인 크로신 화합물이 제거된 것을 알 수 있다.
크로신 화합물의 유무에 따른 항노화 및 항주름 활성 확인
샤프란은 크로신(crocin), 피크로크로신(picrocrocin) 및 사프라날(safranal) 등과 같은 화합물을 주요 성분으로 포함하고 있다. 따라서, 주요 성분 중 하나인 크로신 화합물의 유무에 따라 항노화 및 항주름 활성의 차이가 발생하는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 37℃ 5% CO2 조건의 배양기에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, Biosun UV 램프를 통해 UVA 10 J/cm2를 조사하거나 조사하지 않았다. UVA 조사 직후, 상기 제조예 2 및 제조예 8을 농도별(1.0% 및 2.0%)로 처리하고, 48시간 동안 추가 배양하였다. 이후, MMP-1 발현량을 ELISA로 측정하였다. 양성대조군으로는 크로신 화합물 10 ㎍/mL 또는 100 ㎍/mL을 사용하였다.
도 2는 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 섬유아세포는 자외선의 조사에 의해 MMP-1의 발현이 증가하였고, 제조예 2 및 제조예 8을 처리함으로써 증가된 MMP-1의 발현이 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
크로신 화합물의 유무에 따른 피부 탄력 개선 효과 확인
크로신 화합물의 유무에 따른 피부 탄력 개선 효과를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 37℃ 5% CO2 조건의 배양기에서 48시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 제조예 2 및 제조예 9를 농도별(1.0% 및 2.0%)로 처리하고, 24시간 동안 추가 배양하였다. 이후, 배양 상청액을 -80℃에서 보관한 뒤, 콜라겐 발현량을 ELISA로 측정하였다. 양성대조군으로는 크로신 화합물 10 ㎍/mL을 사용하였다.
도 3은 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 콜라겐 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 제조예 2 및 제조예 8은 농도 의존적으로 콜라겐의 발현을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 탈색에 의하여 크로신 화합물이 제거된 제조예 2의 경우, 크로신 화합물을 포함하는 제조예 8에 비해 유의하게 콜라겐 발현을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 일 구체예에 따른 샤프란 꽃 추출물은 크로신 화합물의 유무에 관계 없이 피부 탄력 개선 효과를 나타낼 수 있다.
크로신 화합물의 유무에 따른 피부 상처 치유 및 재생 효과 확인
크로신 화합물의 유무에 따른 피부 상처 치유 및 재생 효과를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 37℃ 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하여 100% 컨플루언시(cohfluency)한 상태로 만들었다. 이후, 파이펫 팁(pipette tip)을 사용하여 웰의 가운데를 가로지르도록 임의로 긁어 상처를 낸 후, 상기 제조예 2 및 제조예 9를 1.0%로 포함하는 배지로 각각 교체하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 이후, 전자현미경을 이용하여 섬유아세포의 세포 이동 모습을 관찰하였다. 양성대조군으로는 크로신 화합물 10 ㎍/mL을 사용하였다.
도 4는 크로신 화합물의 유무에 따른 샤프란 꽃 추출물이 상처 치유 및 피부 재생에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 상처 유발에 의해 노화된 섬유화세포는 젊은 세포에 의해 세포 이동이 유의적으로 감소하였으며, 노화된 세포에 크로신 화합물, 제조예 2 및 제조예 8을 처리함으로써 세포 이동이 유의적으로 증가한 것을 확인할 수 있었다. 특히, 제조예 2의 경우, 노화된 세포에 비해 세포 이동이 38% 이상 증가하여 세포 이동이 8% 증가한 크로신 화합물 및 제조예 8에 비하여 현저한 세포 이동 효과를 나타내었다.
따라서, 일 구체예에 따른 샤프란 꽃 추출물은 크로신 화합물은 포함하지 않음에도 노화된 섬유아세포에서 세포 이동을 촉진함으로써 피부 상처를 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 피부 재생 효과를 나타낼 수 있다.
항노화 및 항주름 시너지 활성 확인
상기 실험예의 결과를 종합하여 볼 때, 샤프란 꽃 추출물은 크로신 화합물의 유무에 관계 없이 피부 상태 개선 효과를 가지는 것을 확인할 수 있다. 따라서, 이하에서는 샤프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 각각의 단독 추출물과 비교하여 항노화 및 항주름의 시너지 활성을 가지는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 6 웰 플레이트에 3x105로 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣어준 후 20 mJ/cm2의 UVB를 조사하거나 조사하지 않고, 상기 실시예 1~3을 각각 1%의 농도로 첨가하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 이후, 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 MMP-1(Matrix metalloproteinase-1) 및 COL1A1에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다. 양성대조군으로 EGCG 1 μM을 사용하였다.
도 5는 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 6은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 섬유아세포는 자외선의 조사에 의해 MMP-1의 발현이 증가하였고, 실시예 1~3을 처리함으로써 증가된 MMP-1의 발현이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 구체적으로, 실시예 1~3은 샤프란 꽃 추출물 단독 처리한 경우와 비교하여 MMP-1의 발현을 현저하게 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 1~3은 제조예 2 및 제조예 14에 비하여 COL1A1 발현을 현저하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 화장료 조성물은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함함으로써 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 감소시키고, COL1A1의 발현을 증가시키는 바, 우수한 항노화 및 항주름 활성을 가질 수 있다.
피부 탄력 개선의 시너지 효과 확인
샤프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 각각의 단독 추출물과 비교하여 피부 탄력 개선의 시너지 활성을 가지는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 6 웰 플레이트에 4X105의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 이후, PBS로 세척한 뒤, FBS를 포함하지 않는 DMEM 배지에 상기 실시예 1~3을 각각 1% 농도로 처리하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 이후, COL1A1, 엘라스틴(ELN) 및 피브릴린(FBN)에 대한 프라이머를 사용하였다는 점을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 COL1A1, 엘라스틴(ELN) 및 피브릴린(FBN)의 유전자 발현량을 분석하였다.
도 7은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 엘라스틴의 생성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 8은 일 구체예에 따른 화장료 조성물이 피브릴린의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
그 결과, 도 7 및 도 8에 나타낸 바와 같이, 실시예 1~3은 제조예 2 및 제조예 14에 비하여 엘라스틴 및 피브릴린의 발현을 현저하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 화장료 조성물은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함함으로써 각각의 단독 추출물에 비해 엘라스틴 및 피브릴린 발현이 현저하게 증가하는 바, 피부 탄력 개선의 시너지 효과를 나타낼 수 있다.
피부 상처 치유 및 재생 시너지 효과 확인
샤프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 각각의 단독 추출물과 비교하여 피부 상처 치유 및 재생의 시너지 활성을 가지는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 5x105 세포/웰의 농도로 6 웰 플레이트에 분주한 후, 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 24 시간 동안 배양하여 100% 컨플루언시(confluency)한 상태로 만들었다. 이후, 파이펫 팁(pipette tip)을 사용하여 웰의 가운데를 가로지르도록 임의로 긁어 상처를 낸 후, 상기 실시예 1~3을 1.0%로 포함하는 배지로 각각 교체하여 24시간 동안 추가로 배양하였다. 이후, 전자현미경을 이용하여 섬유아세포의 세포 이동 모습을 관찰하였다. 양성대조군으로는 bEGF 10 ng/㎖를 사용하였다.
도 9a 및 도 9b는 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 피부 재생 촉진 효과를 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 9a 및 도 9b에 나타낸 바와 같이, 실시예 1~3은 제조예 14와 비교하여 상처가 유발된 섬유아세포의 회복에 현저한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 화장료 조성물은 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 포함함으로써 상처 치유 및 피부 재생에 탁월한 효과를 가질 수 있다.
피부 보습 및 주름개선 효과 확인
샤프란 꽃 추출물과 단삼 뿌리 추출물의 혼합물이 피부 보습 및 주름 개선의 효과를 가지는지 여부를 확인하였다. 구체적으로, 피험자 5명(평균 나이 45세)에게 얼굴 안면부 좌/우에 실시예 4 및 비교예 1을 하루 2회씩 4주 동안 사용하게 하였다. 이후, 시험 부위를 비누로 세안하고 10분 간 항온항습실(22±2℃, 40~60% RH)에서 대기한 뒤, 피부 수분도(0주)를 측정하고 피부 주름(0주)을 촬영하였다. 제품 사용 2주 및 4주 후, 동일한 방법으로 피부 수분도 및 피부 주름을 측정하였으며 각 주차 3회 측정값의 평균을 산출하여 0주차 측정값과 비교하였다.
도 10은 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 피부 보습 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11a 및 도 11b는 일 구체예에 따른 화장료 조성물의 피부 주름 개선 효과를 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 10에 나타낸 바와 같이, 사용 4주후의 피부 수분도는 실시예 4 및 비교예 1이 각각 24.3% 및 5.0%를 나타내어 사용 전과 비교하여 증가한 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 4는 비교예 1과 비교하여 피부 수분도가 현저하게 증가한 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 11a 및 도 11b에 나타낸 바와 같이, 실시예 4 및 비교예 1는 사용 시간이 증가함에 따라 피부 침하도(indentation)이 감소한 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 4는 비교예 1과 비교하여 사용 4주차의 피부 침하도 증감율이 유의적으로 감소한 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 화장료 조성물은 피부 보습 및 주름 개선에 탁월한 효과가 있다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (8)

  1. 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 추출한 것인 화장료 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물은 물 및 탄수화물 분해효소(carbonhydrase)의 혼합물을 용매로 추출하는 단계; 및
    상기 샤프란 꽃 추출물을 탈색하는 단계를 포함하여 추출한 것인 화장료 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 단삼 뿌리 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 추출한 것인 화장료 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 피부 상태 개선은 피부 노화, 피부 장벽 강화, 상처 치료, 피부 주름, 피부 탄력 또는 보습인 것인 화장료 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물은 1:0.01 내지 1:10의 중량비로 혼합된 것인 화장료 조성물.
  7. 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 피부외용제용 조성물.
  8. 샤프란 꽃 추출물 및 단삼 뿌리 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물.
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