KR20230112200A - 새싹인삼에서 분리한 락토바실러스 람노서스 b3421 및 이를 포함하는 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 새싹인삼에서 분리한 신규한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)에 관한 것으로, 본 발명 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)의 단백질 추출물은 피부암세포 저해능이 우수하다.
Description
본 발명은 새싹인삼에서 분리한 신규한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)에 관한 것이다.
피부암의 원인은 매우 다양한데 자외선, 사마귀를 일으키는 바이러스 감염, 발암성 화학물질, 방사선, 만성 자극, 만성 궤양, 오래된 화상이나 흉터, 항암제나 면역 억제제 복용에 의한 면역 억제 상태, 유전적 요인 등이 알려져 있다. 이 중 특히 자외선은 위에서 언급한 3대 피부암의 주요 원인이 되고 있다.
국내 피부암 환자수는 전체 암의 2%정도로 그 수는 많지 않으나, 발생률이 지난 10년간 매우 가파른 증가 추세를 보이고 있다.
피부암 중에서도 약 4%의 비중을 차지하는 흑색종(melanoma)은 다른 피부암보다 예후가 나쁘기 때문에 조기 발견이 되더라도 재발이 흔하며 생명을 단축할 수 있다. 흑색종의 치료법으로는 종양절제술, 항암화학요법, 방사선치료 등이 수행되어 왔고, 최근에는 면역항암제가 사용되고 있으나 환자생존율에는 큰 효과가 없는 실정이다.
또한, 현재까지의 피부암 치료 약물들은 단지 피부암의 증상만을 완화하는 것이고, 근본적인 치료약의 개발이 이루어지지 않았을 뿐만 아니라 많은 부작용이 발생하는 것으로 보고되고 있다.
따라서, 피부암의 치료 및 전이를 억제할 수 있는 약물의 개발이 필요하다.
본 발명에서는 새싹인삼에서 분리한 신규한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP) 및 이를 포함하는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 새싹인삼에서 분리한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)를 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. 이때, 상기 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물은 바람직하게 스프레이 또는 연고제 제형인 것이 좋다.
본 발명의 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 건조분말을 포함하는 조성물은 피부암세포 저해를 통해 피부암 개선, 예방 또는 치료 효과를 발휘할 수 있다.
도 1은 본 발명 균주 (#3) 및 후보 균주의 단백질 추출물을 피부암세포와 배양하고, MTT assay를 하여 얻은 결과를 보여준다.
도 2는 본 발명 균주 (#3) 및 후보 균주의 단백질 추출물을 피부암세포와 배양하고, WST assay를 하여 얻은 결과를 보여준다.
도 2는 본 발명 균주 (#3) 및 후보 균주의 단백질 추출물을 피부암세포와 배양하고, WST assay를 하여 얻은 결과를 보여준다.
본 발명은 새싹인삼에서 분리한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)를 제공한다.
하기 실시예에 따르면, 새싹인삼으로 부터 분리한 본 발명 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP)의 단백질 추출물은 피부암세포 저해능이 우수하다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명 화장료 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태로 제조할 수 있는데, 보다 상세하게는 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤 또는 스프레이 등의 제형으로 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 식품 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명 식품 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태로 제조할 수 있는데, 보다 상세하게는 음료, 빵, 과자 등과 같이 기존 음식에 포함시키거나, 드링크제, 캡슐제, 분말 등의 형태로 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
한편, 본 발명 약학 조성물의 제형은 사용 방법에 따라 바람직한 형태로 제조될 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화하는 것이 좋다. 구체적인 제형의 예로는 경고제(PLASTERS), 과립제(GRANULES), 로션제(LOTIONS), 리니멘트제(LINIMENTS), 리모나데제(LEMONADES), 방향수제(AROMATIC WATERS), 산제(POWDERS), 시럽제(SYRUPS), 안연고제(OPHTALMIC OINTMENTS), 액제(LIQUIDS AND SOLUTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제(ELIXIRS), 연고제(OINTMENTS), 유동엑스제(FLUIDEXTRACTS), 유제(EMULSIONS), 현탁제(SUSPESIONS), 전제(DECOCTIONS), 침제(INFUSIONS), 점안제(OPHTHALMIC SOLUTIONS), 정제(TABLETS), 좌제(SUPPOSITIORIES), 주사제(INJECTIONS), 주정제(SPIRITS), 카타플라스마제(CATAPLSMA), 캅셀제(CAPSULES), 크림제(CREAMS), 트로키제(TROCHES), 틴크제(TINCTURES), 파스타제(PASTES), 환제(PILLS), 스프레이(SPRAYS) 중 선택되는 어느 하나일 수 있다.
한편, 본 발명의 약학조성물에 있어서, 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중 및 질환의 중증도 등을 고려하여 결정하는 것이 좋다. 일례로, 유효성분을 기준으로 하였을 때 1일 0.001 내지 1,000mg/kg (체중)으로 1회 이상 경구 투여 가능하다. 다만, 상기의 투여량은 예시에 불과하며, 복용자의 상태와 의사의 처방에 의해 변화될 수 있다.
본 발명의 내용을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 다만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고 그와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
[실시예 1: 후보 균주 단백질 추출물의 항암 효능 확인]
(1) 개요
새싹인삼으로부터 얻은 5가지 후보 균주의 단백질 추출물 (PE; Protein extracts)을 피부암세포와 배양하여 피부암세포 저해능이 특히 우수한 단백질 추출물을 분비하는 균주를 발견하고자 했다.
균주 배양액으로부터 단백질 추출물을 분리하기 위해 후보균주를 37℃, 24 시간동안 10 ml MRS broth에 배양하였다. 배양된 균주들을 4℃, 8000 rpm 조건에서 5분 동안 원심분리 후 상층액을 제거하고 펠렛만 남겨두었다. 남겨진 펠렛에 beads와 PBS를 넣고 균주들의 세포벽을 파쇄시켰다. 이후 4℃, 8000 rpm 조건에서 3분 동안 원심분리하여 단백질 추출물을 얻었다.
한편, 액체 질소에 동결되어 있는 피부암세포(A431 세포)를 꺼내어 37℃ 수조에서 3분간 담가 녹였다. 클린 벤치에서 세포 배양접시에 배지 10mL에 해동한 세포를 풀어 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다.
클린 벤치 내에서 배양접시에 붙어있는 세포를 트립신-EDTA 2mL로 떼어내어 배지를 15mL 코티칼 튜브에 회수한 후, 완전 배지로 10mL까지 채워주었다. 1,300rpm, 4℃ 조건에서 5분 동안 원심분리 후, 세포 펠렛만 남겨두고 새로운 완전배지 1mL를 넣어 현탁하였다.
현탁된 세포 중 10㎕를 취하여 트리판 블루 (trypan blue) 90㎕용액으로 10배 희석하여 염색하였다. 염색된 세포를 혈구계수기(hemacytometer)에 10㎕의 부피로 넣고 현미경 배율을 100배로 하여 세포 수를 측정하였다.
세포 수를 5x104cells/well로 만든 후 96웰의 세포 배양접시에 200㎕/well로 접종하고, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다.
(2) 항암효능 확인 1
상기 실시예 1의 (1)에서 제조한 96웰 배양 접시 중 48웰 배양 접시에서 배지를 제거한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 각각의 샘플(대조군(Lactobacillus rhamnosus GG) 및 5가지 후보 균주의 단백질 추출물)을 3, 6, 15μg/ml 에 맞게 희석하여, 각 웰당 100㎕씩 분주하였다. 분주한 후, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 16시간 동안 인큐베이팅 하였다.
배양된 세포의 각각의 well에 MTT 시약을 10㎕씩 첨가하였다. 이후 37℃에서 4시간 배양한 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO를 100㎕씩 첨가하여 암소에서 10분간 반응하였다.
육안으로 확인 결과 (도 1), 살아있는 세포가 많이 없어 염색약(MTT)이 그대로 많이 남아있는 B3421 균주 처리군 (#3)이 특히 우수한 피부암세포 저해능을 보였다.
(3) 항암효능 확인 2
상기 실시예 1의 (1)에서 제조한 96웰 배양 접시 중 48웰 배양 접시에서 배지를 제거한 후, FBS가 첨가되지 않은 배지로 각각의 샘플(대조군, 5가지 후보 균주의 PE-peptide)을 15ug/ml 에 맞게 희석하여, 각 웰당 100㎕씩 분주하였다. 각 샘플군을 처리한 후, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 16시간 동안 인큐베이팅 하였다.
상등액을 제거하고 PBS로 2회 워싱된 세포에 WST시약이 10% 함유된 배지를 110㎕ 첨가하였다. 이후 37℃에서 1시간 배양한 후 배지 색상변화를 확인하였고, 450nm에서 흡광도를 측정하여 그 평균 값을 도 2에 나타내었다.
도 2를 보면, 모든 처리군에서 피부암세포를 저해하여 O.D 값이 낮은 것을 볼 수 있다.
[실시예 2: 본 발명 균주의 유전자 동정]
실시예 1에서 우수한 효능을 보인 B3421 균주 (#3)에 대하여 동정(identification)을 위해 DNA sequencing을 진행하였다.
동정 결과 서열번호 1의 16S rRNA 서열을 얻을 수 있었고, 이를 통해 본 발명 균주가 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus)임을 확인할 수 있었다.
그 후, 본 발명 균주 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421을 한국생물자원센터(KCTC)에 2021년 6월 22일자로 기탁하여 수탁번호 KCTC14622BP를 부여받았다.
기탁기관명 : 한국생명공학연구원
수탁번호 : KCTC14622BP
수탁일자 : 20210622
<110> Rokya Co. Ltd.
KIST
Dong-A University
<120> Lactobacillus rhamnosus B3421 isolated from ginseng sprout and
composition comprising the same
<130> YP-21-246
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1515
<212> DNA
<213> Lactobacillus rhamnosus
<400> 1
actctgctca ggatgaacgc tggcggcgtg cctaatacat gcaagtcgaa cgagttctga 60
ttattgaaag gtgcttgcat cttgatttaa ttttgaacga gtggcggacg ggtgagtaac 120
acgtgggtaa cctgccctta agtgggggat aacatctgga aacagatgct aataccgcat 180
aaatccaaga accgcatggt tcttggctga aagatggcgt aagctatcgc ttttggatgg 240
acccgcggcg tattagctag ttggtgaggt aacggctcac caaggcaatg atacgtagcc 300
gaactgagag gttgatcggc cacattggga ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg 360
cagcagtagg gaatcttcca caatggacgc aagtctgatg gagcaacgcc gcgtgagtga 420
agaaggcttt cgggtcgtaa aactctgttg ttggagaaga atggtcggca gagtaactgt 480
tgtcggcgtg acggtatcca accagaaagc cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt 540
aatacgtagg tggcaagcgt tatccggatt tattgggcgt aaagcgagcg caggcggttt 600
tttaagtctg atgtgaaagc cctcggctta accgaggaag tgcatcggaa actgggaaac 660
ttgagtgcag aagaggacag tggaactcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg 720
aagaacacca gtggcgaagg cggctgtctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagca 780
tgggtagcga acaggattag ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg aatgctaggt 840
gttggagggt ttccgccctt cagtgccgca gctaacgcat taagcattcc gcctggggag 900
tacgaccgca aggttgaaac tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat 960
gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatctt ttgatcacct 1020
gagagatcag gtttcccctt cgggggcaaa atgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct 1080
cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca acccttatga ctagttgcca 1140
gcatttagtt gggcactcta gtaagactgc cggtgacaaa ccggaggaag gtggggatga 1200
cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gatggtacaa 1260
cgagttgcga gaccgcgagg tcaagctaat ctcttaaagc cattctcagt tcggactgta 1320
ggctgcaact cgcctacacg aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag cacgccgcgg 1380
tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc 1440
gaagccggtg gcgtaaccct tttagggagc gagccgtcta aggtgggaca aatgattagg 1500
gtgaagtcgt acagg 1515
Claims (5)
- 새싹인삼에서 분리한 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP).
- 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 화장료 조성물.
- 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 개선용 식품 조성물.
- 락토바실러스 람노서스 (Lactobacillus rhamnosus) B3421 (KCTC14622BP), 이의 배양액 또는 이 배양액의 건조분말을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제4항에 있어서,
상기 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물은,
스프레이 또는 연고제 제형인 것을 특징으로 하는 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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