KR20230109459A - 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 폴리뉴클레오티드, 염화나트륨, 인산수소나트륨 수화물, 인산이수소나트륨 및 정제수로 이루어진다.
상기의 성분으로 이루어지는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선한다.
상기의 성분으로 이루어지는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선한다.
Description
본 발명은 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 척추동물의 관절을 이루는 연골 조직은 한번 손상되면 정상적으로 생체 내에서 재생되지 않는다. 이러한 관절의 연골조직이 손상될 경우 심한 통증과 함께 일상 활동에 제한을 받게 되며, 만성화될 경우 치명적인 퇴행성 관절염 등이 유발되어 정상적인 생활이나 직업적인 활동을 방해 받게 된다.
손상된 관절연골 치료방법으로는, 연골성형술(chondroplasty), 골연골 [0003] 이식술(osteochondral transplantation), 자가유래 연골세포 이식술(autologous chondrocyte transplantation) 등이 있다.
최근에는, 손상된 관절 연골의 치료를 위해 조직 공학에 기초를 둔 새로운 치료법이 각광받고 있다. 조직 공학에 기초를 둔 치료법은 자가유래 연골세포를 이용하여 효과를 증대시킬 수 있다. 자가유래 연골세포는 이식된 부위와 정상 부위가 비교적 잘 융합되며, 실제 관절에 필요한 유리 연골을 재생할 가능성이 많다. 그러나, 채취된 연골세포의 대부분은 이미 성장이 다 이루어진 성인으로부터 얻은 것이므로, 채취된 세포의 증식 및 생장이 왕성하지 않아 세포의 체외 배양시 이식에 필요한 만큼의 세포 수를 얻기까지 상당한 기간이 걸리며, 연골세포를 체외 배양할 시 세포의 발현형이 변화되곤 하는 문제점이 있다.
상기 방법을 응용하여 자가유래 골수, 근육, 피부 등의 간엽 조직으로부터 얻은 연골세포의 전구모세포인 간엽줄기세포(mesenchymal stem cell; MSC)는 보다 미분화된 세포로서, 자가유래 연골세포 이식술에 비해 세포증식력이 다소 높아지는 것으로 나타났다. 실제로 분화된 세포를 이용하여 설계된 조직 구조물과는 다르게, 다중분화능 및 비면역성 인간 간엽줄기세포(hMSCs)는 더 높은 세포증식력 및 우수한 재생력을 가지며, 다기능적 조직구조물(예를 들어, 골연골 조직)을 예측할 수 있고, 조직 거부반응(rejection) 및 부전(failure)을 감소시키거나 제거할 수 있다.
한편, 최근에는 반려동물을 주로 실내에서 기르고 있는데, 사람이 생활하는 실내의 경우 바닥면이 미끄러워 반려동물의 관절에 무리를 주며, 운동부족으로 인해 관절염을 앓는 반려동물의 수가 급격하게 증가하고 있다.
본 발명의 목적은 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적은 폴리뉴클레오티드, 염화나트륨, 인산수소나트륨 수화물, 인산이수소나트륨 및 정제수로 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물을 제공함에 의해 달성된다.
본 발명의 바람직한 특징에 따르면, 상기 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 폴리뉴클레오티드 0.0005 내지 0.0015 중량%, 염화나트륨 0.4 내지 0.45 중량%, 인산수소나트륨 수화물 0.015 내지 0.025 중량%, 인산이수소나트륨 0.001 내지 0.002 중량% 및 정제수 잔량으로 이루어지는 것으로 한다.
본 발명의 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 폴리뉴클레오티드는 연어과 어류의 정소에서 추출되는 폴리디옥시리보뉴클레오티드로 이루어지며, 상기 연어과 어류는 연어아과, 살기아과 및 백송어아과로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 바람직한 특징에 따르면, 상기 추출은 연어과 어류의 정소에서 정액과 미성숙된 정소 부분을 분리하는 정소분리단계, 상기 정소분리단계를 통해 분리된 미성숙된 정소를 인공정장액 하에서 마쇄 및 희석하는 마쇄희석단계, 상기 마쇄희석단계를 통해 제조된 희석액에 융모성 성선 자극호르몬을 처리하는 호르몬처리단계, 상기 호르몬처리단계를 통해 호르몬처리된 희석액을 원심분리하여 활성을 가질 수 있는 정자를 회수하는 정자회수단계 및 상기 정자회수단계를 통해 회수된 정자로부터 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 폴리뉴클레오티드추출단계로 이루어지는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 호르몬처리단계는 상기 마쇄희석단계를 통해 제조된 희석액에 함유된 정소 1g당 융모성 성선 자극호르몬을 20 내지 200IU로 처리하여 이루어지는 것으로 한다.
본 발명의 더욱 더 바람직한 특징에 따르면, 상기 정자회수단계는 10 내지 60분 동안 이루어지는 것으로 한다.
본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선하는 탁월한 효과를 나타낸다.
도 1은 본 발명에서 사용되는 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 추출과정을 나타낸 순서도이다.
이하에는, 본 발명의 바람직한 실시예와 각 성분의 물성을 상세하게 설명하되, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 발명을 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명하기 위한 것이지, 이로 인해 본 발명의 기술적인 사상 및 범주가 한정되는 것을 의미하지는 않는다.
본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 폴리뉴클레오티드, 염화나트륨, 인산수소나트륨 수화물, 인산이수소나트륨 및 정제수로 이루어지며, 폴리뉴클레오티드 0.0005 내지 0.0015 중량%, 염화나트륨 0.4 내지 0.45 중량%, 인산수소나트륨 수화물 0.015 내지 0.025 중량%, 인산이수소나트륨 0.001 내지 0.002 중량% 및 정제수 잔량으로 이루어지는 것이 바람직하다.
상기 폴리뉴클레오티드는 본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물에 함유되어 생물 체내의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내는데, 연어과 어류의 정소에서 추출되는 폴리디옥시리보뉴클레오티드(PDRN, Polydeoxyribonucleotide)로 이루어지는 것이 바람직하며, 상기 연어과 어류는 연어아과, 살기아과 및 백송어아과로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것이 더욱 바람직하다.
상기의 폴리디옥시리보뉴클레오티드는 생물 체내의 조직 재생(anagenesis) 활성 물질에 존재하고, 50 내지 2000개 사이의 염기쌍으로 구성된 체인 모양의 중합체로 결합하여(deoxyribonucleotides polymers)이루어지며, 세포성장 활성제로서 조직 재생물질로 인대, 힘줄, 피부 등 생물 체내 조직의 재생과 염증완화에 특별한 효과를 나타낸다.
폴리디옥시리보뉴클레오티드는 사람의 태반 속에 극소량 들어 있는 물질이나 윤리적 문제와 의약품 생산성 등의 어려움이 있어 어류 속 폴리디옥시리보뉴클레오티드가 대안으로 제시되도 있는데, 핵산 함유량에 있어서 송어, 연어 정액 및 정소는 양적으로 우월함도 있지만, 이보다 더 중요한 것은 질적인 우월함을 나타내는데, DNA는 5탄당과 인산 및 네가지 염기 아데닌. 구아닌. 티민. 사이토신이 포함된 뉴클레오타이드로 구성되는데, 송어 및 연어는 이 조합의 균형이 매우 우수하며, 버려지는 핵산없이 모두 사용될 수 있다는 것에 큰 의미가 있다.
본 발명에서와 같이 연어과 어류의 정소에서 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 과정은 연어과 어류의 정소에서 정액과 미성숙된 정소 부분을 분리하는 정소분리단계(S101), 상기 정소분리단계(S101)를 통해 분리된 미성숙된 정소를 인공정장액 하에서 마쇄 및 희석하는 마쇄희석단계(S103), 상기 마쇄희석단계(S103)를 통해 제조된 희석액에 융모성 성선 자극호르몬을 처리하는 호르몬처리단계(S105), 상기 호르몬처리단계(S105)를 통해 호르몬처리된 희석액을 원심분리하여 활성을 가질 수 있는 정자를 회수하는 정자회수단계(S107) 및 상기 정자회수단계(S107)를 통해 회수된 정자로부터 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 폴리뉴클레오티드추출단계(S109)로 이루어진다.
상기 정소분리단계(S101)는 연어과 어류의 정소에서 정액과 미성숙된 정소 부분을 분리하는 단계로, 연어과 어류의 정소에서 정액과 미성숙된 정소부분을 분리하는데, 흘러내리는 정액을 제거한 후에, 미성숙된 정소부분을 절단하는 과정으로 진행된다.
상기 마쇄희석단계(S103)는 상기 정소분리단계(S101)를 통해 분리된 미성숙된 정소를 인공정장액 하에서 마쇄 및 희석하는 단계로, 상기 정소분리단계(S101)를 통해 분리된 미성숙된 정소를 마쇄한 후에, 정장액(seminal plasma)을 사용하여 희석하는데, 상기 마쇄의 과정은 정소를 가위로 잘게 자르면 정소의 정세포 등을 감싸고 있는 막을 벗겨 낼 수 있는데, 이 막을 벗겨 낸 이후 부드럽게 장갑을 낀 손으로 부드럽게 으깨는 방법을 사용한다.
또한, 상기 정장액의 조성은 80 mM NaCl, 40 mM KCl, 1 mM CaCl2, 20 mM Tris-HCl로 이루어지며, 구체적으로 sodium(Na) 159.26±8.84 mM, potassium (K) 33.72±2.01 mM, chlorine (Cl) 133.04±5.96 mM, calcium (Ca) 1.68±0.2 mM 및 magnesium (Mg) 0.988±0.13 mM을 함유한다(Hatef A, et al, 2007 Aquaculture Research 38, 1175-1181 참조). 유기 성분은 총 단백질 075±014 mgㆍ100mL-1, 콜레스테롤 286±058 mgㆍL-1 및 포도당 381±104 mMㆍL-1이다.
상기 호르몬처리단계(S105)는 상기 마쇄희석단계(S103)를 통해 제조된 희석액에 융모성 성선 자극호르몬을 처리하는 단계로, 상기 마쇄희석단계(S103)를 통해 제조된 희석액에 함유된 정소 1g당 융모성성선 자극호르몬(chorionic gonadotropin)을 25 내지 200 IU로 10 내지 60분 동안 동안 처리하는 과정으로 이루어진다.
상기의 과정을 통해 미성숙된 정소의 세포를 인위적으로 정자로 성숙시킬 수 있으며, 더욱 상세하게는 상기 마쇄된 정소에 정장액을 혼합하고 희석한 후 임펠라가 장착된 저속 교반기를 이용해서 천천히 교반하면서 융모성성선 자극호르몬을 정량 처리한다. 단 임펠라의 속도가 빠르면 세포가 파괴되어 폴리디옥시리보뉴클레오티드에 불순물이 증가할 가능성이 높아지므로 주의해야 한다.
상기 정자회수단계(S107)는 상기 호르몬처리단계(S105)를 통해 호르몬처리된 희석액을 원심분리하여 활성을 가질 수 있는 정자를 회수하는 단계로, 상기 호르몬처리단계(S105)를 통해 융모성성선 자극호르몬으로 처리한 정소 희석액을 1,000 내지 10,000 RCF (Relative Centrifugal Force)의 속도로 20분 이상 원심분리하여 침전한 활성을 가질 수 있는 정자를 회수하는 과정으로 이루어진다.
상기 폴리뉴클레오티드추출단계(S109)는 상기 정자회수단계(S107)를 통해 회수된 정자로부터 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 단계로, 상기 정자회수단계(S107)를 통해 회수된 정자로부터 통상적인 방법으로 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 과정으로 이루어진다.
이때, 상기 폴리뉴클레오티드추출단계(S109)에서는 다양한 추출방법이 진행될 수 있는데, 일 예로, 회수된 정자를 Lysis Buffer를 처리한 후 냉동시켜 분말화하고 원심분리로 DNA로 분리한 후 단백질 등을 제거하여 DNA를 정화한 후, 원심분리하여 DNA를 침전하고 이것을 세척하여 DNA를 정제하는 과정으로 진행될 수 있으며, 최종적으로는 1. Restriction digest, 2. The transmission of high-frequency acoustic energy, 3. Neublization foces, 4. Sonication, 5. Needle shearing 등 중에서 하나의 방법으로 DNA를 분절화(fragmentation)하는 과정으로 진행될 수 있다.
상기 염화나트륨은 0.4 내지 0.45 중량%가 함유되며, 상기 인산수소나트륨 수화물은 0.015 내지 0.025 중량%가 함유되고, 상기 인산이수소나트륨은 0.001 내지 0.002 중량%가 함유되며, 상기 정제수는 잔량으로 함유되는데, 상기의 성분은 본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물을 주사제로 사용할 때, 의약학 분야에서 주사제에 통상적으로 사용되는 등장액의 역할을 한다.
상기의 성분으로 이루어지는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 주사제로 적용될 수 있으며, 1회에 약 2cc의 용량을 사용하는 것이 바람직한데, 1주일 간격으로 4 내지 6회에 걸쳐 손상된 근육조직이나 연골조직에 주입되면 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류인 애완동물의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선할 수 있다.
이하에서는, 본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물의 제조방법 및 그 제조방법으로 제조된 조성물의 물성을 실시예를 들어 설명하기로 한다.
<실시예 1> 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물의 제조
폴리뉴클레오티드(연어의 정소에서 추출된 폴리디옥시리보뉴클레오티드) 0.001 중량%, 염화나트륨 0.425 중량%, 인산수소나트륨 수화물 0.02 중량%, 인산이수소나트륨 0.0015 중량% 및 정제수 잔량을 혼합하여 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물을 제조하였다.
상기 실시예 1을 통해 제조된 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물의 근육조직 및 연골조직 수복 효과를 측정하여 아래 표 1에 나타내었다.
{단, 근육조직 및 연골조직 수복 효과는 파행도 4이상, 부중도 4이상 및 통증 3이상을 앓고 있는 강아지(3kg내외) 각 10마리씩을 대상으로 상기 실시예 1을 통해 제조된 조성물 2cc를 1주 간격으로 5주 동안 통증이 있는 무릎 연골조직에 주입한 후에 개선 정도를 5점 척도법으로 조사한 후에 평균값으로 나타내는 방법을 이용하였다.
상기 파행도는 1:파행없음, 2:약한파행, 3:중등도 파행, 4:심한파행, 5:건기를 주저함(5발 이상 걷지 않음)의 기준이며,
상기 부중도는 1:부중하지 않음, 2:간헐적 부중, 3:발끝으로 부중, 4:약한 부중, 5:압박시 주저앉음의 기준이고,
상기 통증은 1:통증 없음, 2:미약한 통증(고개를 돌림, 움찔함), 3:중등도 통증(발을 뺌), 4:심한 통증(소리지르거나 공격성을 보임), 5:심한 통증(만지는 것을 허용 안함)의 기준이다.
또한, 5점 척도법은 5:매우 만족, 4:만족, 3:보통, 2:불만족, 1:매우 불만족이다.}
<표 1>
상기 표 1에 나타낸 것처럼, 본 발명의 실시예 1을 통해 제조된 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 강아지의 파행도, 부중도 및 통증을 개선하는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 개나 고양이와 같은 사족보행 포유류의 손상된 근육조직이나 연골조직에 대해 우수한 수복효과를 나타내어 부중도, 파행도 및 통증을 개선할 수 있다.
S101 ; 정소분리단계
S103 ; 마쇄희석단계
S105 ; 호르몬처리단계
S107 ; 정자회수단계
S109 ; 폴리뉴클레오티드추출단계
S103 ; 마쇄희석단계
S105 ; 호르몬처리단계
S107 ; 정자회수단계
S109 ; 폴리뉴클레오티드추출단계
Claims (6)
- 폴리뉴클레오티드, 염화나트륨, 인산수소나트륨 수화물, 인산이수소나트륨 및 정제수로 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
- 청구항 1에 있어서,
상기 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물은 폴리뉴클레오티드 0.0005 내지 0.0015 중량%, 염화나트륨 0.4 내지 0.45 중량%, 인산수소나트륨 수화물 0.015 내지 0.025 중량%, 인산이수소나트륨 0.001 내지 0.002 중량% 및 정제수 잔량으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
- 청구항 1 또는 2에 있어서,
상기 폴리뉴클레오티드는 연어과 어류의 정소에서 추출되는 폴리디옥시리보뉴클레오티드로 이루어지며,
상기 연어과 어류는 연어아과, 살기아과 및 백송어아과로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
- 청구항 3에 있어서,
상기 추출은 연어과 어류의 정소에서 정액과 미성숙된 정소 부분을 분리하는 정소분리단계;
상기 정소분리단계를 통해 분리된 미성숙된 정소를 인공정장액 하에서 마쇄 및 희석하는 마쇄희석단계;
상기 마쇄희석단계를 통해 제조된 희석액에 융모성 성선 자극호르몬을 처리하는 호르몬처리단계;
상기 호르몬처리단계를 통해 호르몬처리된 희석액을 원심분리하여 활성을 가질 수 있는 정자를 회수하는 정자회수단계; 및
상기 정자회수단계를 통해 회수된 정자로부터 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하는 폴리뉴클레오티드추출단계;로 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
- 청구항 4에 있어서,
상기 호르몬처리단계는 상기 마쇄희석단계를 통해 제조된 희석액에 함유된 정소 1g당 융모성 성선 자극호르몬을 20 내지 200IU로 처리하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
- 청구항 4에 있어서,
상기 정자회수단계는 10 내지 60분 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는 애완동물의 근육조직 및 연골조직 수복용 조성물.
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| KR20020019893A (ko) | 1999-03-22 | 2002-03-13 | 추후제출 | 애완 동물의 관절 건강 유지 및 관절염 증상 완화용 애완동물 식품 |
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-
2022
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