KR20230105080A - 자궁내막증 진단을 위한 정보 제공 방법 - Google Patents

자궁내막증 진단을 위한 정보 제공 방법 Download PDF

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이재훈
조시현
최영식
이병석
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연세대학교 산학협력단
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Abstract

본 발명은 하나 이상의 분류 조작 단위 (OTUs)에 상응하는 여성 생식기 내 위치별 다양한 마이크로바이옴의 상대 존재비(relative abundance)를 측정함으로써, 조기에 자궁내막증을 진단할 수 있다.

Description

자궁내막증 진단을 위한 정보 제공 방법{Method for providing information for diagnosis of endometriosis}
본 발명은 자궁 내 미생물 군집 분석을 이용한 자궁내막증 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
자궁내막증(Endometriosis)은 사춘기 및 가임기 여성에게 발병하는 통상적인 부인과 질환으로, 자궁 안쪽을 덮고 있어야 하는 자궁 내막 조직이 자궁강(uterine cavity)이 아닌 부위에 위치하는 질환으로 자궁강 외부에서 자궁내막 세포의 침적 및 증식이 나타나는 것을 특징으로 한다. 자궁내막증은 대부분 증상이 없는 경우가 많지만, 일부에서 월경통, 성교통, 부정 출혈 등의 증상이 있을 수 있으며, 불임으로 인해 수술 받은 환자의 9 내지 50%에서 자궁내막증이 진단되었다는 보고가 있어 불임의 원인으로 지목되기도 한다. 자궁내막증 자체가 반드시 불임을 유발하는 것은 아니라 할 지라도, 중증도 이상의 자궁내막증은 여러 가지 측면에서 임신을 방해하게 되는 질환이라고 할 수 있다.
현재 자궁내막증 진단에 활용 가능한 표준 검사는 복강경 검사 및 이를 통한 병변의 조직학적 검사가 있고, 신체 검진, 혈중 표지자 검사, 초음파 검사, CT 또는 MRI 등 여러 검사들이 있으나, 초음파와 같은 영상화 기법들은 자궁내막증의 진단 및 병기 결정(staging)에 있어 신뢰할 수 없는 문제가 있고, 복강경 검사(laparascopy)에 의한 자궁내막증의 확정적 진단은 병변을 직접 시각화할 정도로 질환이 악화된 상태에서만 확인이 되는 문제가 있다.
자궁내막증의 성공적인 치료를 위해서는 초기 단계에서의 정확한 진단이 필수적으로 요구된다. 기존의 진단 방법 중의 하나인 혈청 CA-125 검사는 자궁내막증에 걸린 일부 여성에게서 혈청 CA-125가 상승하지만, 특이적인 것은 아니며 낮은 민감도 및 특이도를 가지는 한계가 존재한다. 이렇듯 초기 단계의 자궁내막증을 정확하게 진단할 수 있는 기술이 미흡한 실정이다.
최근 차세대 염기서열 분석법(Next-Generation Sequencing; NGS)이 개발되면서 다양한 질환의 진단을 위해 미생물의 정보가 가장 잘 보존되고 있는 16S rRNA 유전자를 대상으로 미생물 군집의 염기서열을 결정하여 분석하는 연구가 활발히 이루어지고 있다.
이에, 본 발명자는 여성 생식기 자궁 내막 또는 질에서의 세균 환경을 분석하였으며, 여성 생식기 내 마이크로바이옴의 상대 존재비(relative abundance)로부터 자궁내막증을 진단할 수 있음을 규명함으로써 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 일 목적은 자궁내막증을 진단하기 위한 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 목적은 자궁내막증을 진단하는 키트를 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 자궁내막증의 진단에 관한 정보를 제공하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 자궁내막증을 진단하는 기기를 제공하고자 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이하, 본원에 기재된 다양한 구체예가 도면을 참조로 기재된다. 하기 설명에서, 본 발명의 완전한 이해를 위해서, 다양한 특이적 상세 사항, 예컨대, 특이적 형태, 조성물 및 공정 등이 기재되어 있다. 그러나, 특정의 구체예는 이들 특이적 상세 사항 중 하나 이상 없이, 또는 다른 공지된 방법 및 형태와 함께 실행될 수 있다. 다른 예에서, 공지된 공정 및 제조 기술은 본 발명을 불필요하게 모호하게 하지 않게 하기 위해서, 특정의 상세사항으로 기재되지 않는다. "한 가지 구체예" 또는 "구체예"에 대한 본 명세서 전체를 통한 참조는 구체예와 결부되어 기재된 특별한 특징, 형태, 조성 또는 특성이 본 발명의 하나 이상의 구체예에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전체에 걸친 다양한 위치에서 표현된 "한 가지 구체예에서" 또는 "구체예"의 상황은 반드시 본 발명의 동일한 구체예를 나타내지는 않는다. 추가로, 특별한 특징, 형태, 조성, 또는 특성은 하나 이상의 구체예에서 어떠한 적합한 방법으로 조합될 수 있다.
명세서 내에 특별한 정의가 없으면 본 명세서에 사용된 모든 과학적 및 기술적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야에서 당업자에 의하여 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 자궁내막증을 진단하기 위한 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 조성물은 디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners) 및 포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 제제를 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 조성물은 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) 균주의 상대 존재비를 측정하는 제제를 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 "디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus) 균주"는 네가티비콕쿠스강(Negativicutes) 클래스로 분류되는 후벽균(Firmicutes) 박테리아의 속인 디알리스터에 속하는 균주이다.
본 발명에서 상기 "락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners) 균주"는 락토바실러스 속의 종이며, CCUG 28746T 형 균주를 갖는 그람 양성, 카탈라아제 음성, 통성 혐기성 막대 모양의 세균이다. 특히, 락토바실러스 이너스는 건강한 여성의 하부 생식기에 존재하는 균주로 알려져 있다.
본 발명에서 상기 "포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis) 균주"는 인간 임상 표본에서 분리된 포르피로모나스 속의 그람 음성, 혐기성 및 포자 형성이 없는 박테리아에 해당한다.
본 발명에서 상기 "락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) 균주"는 최근 락토바실러스 류테리로부터 리모시락토바실러스 류테리로 명칭이 바뀌었으며, 상기 균주는 초기에 락토바실러스 퍼멘툼(L. fermentum)으로 잘못 분류되었다가 1960 년대에 미생물 학자 Gerhard Reuter의 추가 연구를 통하여 락토바실러스 류테리 (L. reuteri)와 락토바실러스 퍼멘툼(L. fermentum)을 구별하기 시작했으며, Reuter는 이 종을 종국적으로 유산균 발효 생물형 II로 재분류하였다. 락토바실러스는 자연계에 널리 분포하는 당류를 발효하여 에너지를 획득하여 다량의 유산을 생성하는 세균으로 형태적으로는 그람 양성 무포자 간균으로 다형성을 나타낸다. 락토바실러스 속에 포함된 루테리 균주는 인체의 위, 소장, 대장, 모유 등 인체의 여러 곳에서 발견되는 유산균 종으로 유산균을 섭취하지 않아도 원래부터 인간의 몸에서 발견되는 내생균종에 해당한다. 주로 락토바실러스 루테리 균주는 아동 설사를 감소시키거나 영유아들에게 흔히 발생하는 영아 산통에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 항진균 효능이 있어 조산아에게 쉽게 발생하는 칸디다증을 예방하고 치유하는 역할을 하는 것으로도 알려져 있으며, 염증성 장질환, 과민성 대장증후군, 기능성 위장장애, 변비 등 각종 장질환의 증상을 줄이는 데 효과가 있는 것으로도 보고된 바 있다.
본 발명은 여성 생식기 내 상기 균주의 메타게놈 분석에 의해 자궁내막증 발병의 위험도를 사전에 예측할 수 있다.
본 발명에서 상기 메타게놈(metagenome)은 Handelsman 등에 의해서 정의된 것으로 특정 자연 환경에 존재하는 모든 미생물의 유전체 집합으로, 특정 고립된 범위 내 바이러스, 세균, 곰팡이 등을 포함하는 유전체의 총합을 의미한다. 특히 메타게놈은 일 종의 게놈 또는 유전체를 말하는 것이 아니라, 일 환경계 단위의 모든 종의 유전체로서 일종의 혼합 유전체를 말한다. 일 환경 내에서 모든 종을 동정하여 상호 작용, 대사 작용을 규명하는 기법의 대상이다. 본 발명에서는 여성 생식기로부터 분리한 생물학적 시료를 이용하여 메타게놈 분석을 실시하였다.
본 발명에서 상기 상대 존재비(relative abundance)는 목적하는 개체의 특정 기관 내 미생물 군집 조성으로부터 획득되는 것으로, 목적하는 개체의 특정 기관에서 확인된 진단 대상이 되는 균주의 각 OTU 수(count)를 상기 특정 기관 내 총 균주 모집단에 포함되어 있는 균주 전체의 수로 나눈 값을 말한다.
본 발명에서 상기 "목적하는 개체"란 자궁내막증이 발병하였거나 발병 가능성이 높은 개체로, 인간을 포함하는 포유 동물일 수 있고, 예를 들면, 인간, 래트, 마우스, 모르모트, 햄스터, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 양 및 염소로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 바람직하게는 인간일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 기관은 다세포 생물의 몸을 구성하는 단위로, 여러 가지 조직이 모여 통합된 구조를 형성하고, 특정 기능을 하는 구조를 말한다. 예를 들면, 생식 기관, 순환 기관, 소화 기관, 내분비 기관, 면역 기관, 외피 기관, 림프 기관, 운동 기관, 신경 기관, 호흡 기관, 골격 기관 또는 비뇨 기관 등이 포함된다. 본 발명에서의 특정 기관은 생식 기관일 수 있으며, 바람직하게는 여성 생식기일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 여성 생식기는 자궁내막, 자궁경부, 난소, 난관, 질 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스, 포르피로모나스 베노니스 및 락토바실러스 류테리 균주로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주는 목적하는 개체의 특정 기관 내 존재하는 균주일 수 있고, 바람직하게는 여성 생식기관 내 존재하는 균주일 수 있으며, 가장 바람직하게는 질 내 또는 자궁내막 내 존재하는 균주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 예시에서 상기 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스 및 포르피로모나스 베노니스 균주로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주는 여성 생식기 내 존재하는 균주일 수 있으며, 바람직하게는 질 내 존재하는 균주일 수 있다.
본 발명의 다른 일 예시에서 본 발명에서 상기 락토바실러스 류테리 균주는 여성 생식기 내 존재하는 균주일 수 있으며, 바람직하게는 자궁 내막 또는 질 내 존재하는 균주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 분류 조작 단위(operational taxonomic units; OTU)는 진단 대상이 되는 해당 균주의 16s rRNA 유전자에 94 내지 97% 이상의 유사성이 확인된 클러스터 분석을 수행하여 가장 대표성을 가지는 시퀀스를 시드 시퀀스로 삼고, 그 중 자궁내막증과 관련성이 있는 목적하는 개체의 생물학적 시료로부터 시드 시퀀스를 분석하여 얻어지는 것일 수 있으며, 바람직하게는 해당 균주의 16s rRNA 유전자의 V3-V4 영역에 94 내지 97% 이상의 유사성이 확인된 클러스터 분석을 수행하여 분류 조작 단위(operational taxonomic units; OTU)로부터 얻어지는 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 OTU 분석은 분류 대상이 되는 생물체의 개체 또는 군에서 얻은 시료에서 얻은 염기 서열 간의 유사도에 근거하여 염기 서열들을 분류하고, 이를 한 단위로 하여 시료 내의 미생물 다양성을 평가하는 방법들 중의 하나에 해당한다. 최근 16s 리보솜 RNA(16s rRNA) 염기 서열을 기반으로 한 방법으로 인간의 미생물총의 세균 구성을 계열화하는 것이 가능해지고, 차세대 염기서열 분석(NGS) 플랫폼을 통해 균주의 염기 서열 분석이 가능하여, 시료 내의 미생물 다양성을 평가하고 서로 다른 시료의 미생물 군집 조성을 비교할 수 있다.
본 발명에서 상기 상대 존재비는 OTU에 대한 분석으로 획득될 수 있고, 각 한 개의 OTU가 한 개의 균주 종으로 간주된다. 본 발명에서 샘플 중의 미생물 다양성과 특정 미생물의 상대 존재비는 OTU에 대한 분석으로 획득될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 제제는 해당 균주의 16S rRNA 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 해당 균주의 16S rRNA 유전자의 V3-V4 영역에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 16S rRNA 유전자는 원핵 생물 리보솜의 30S 소단위체를 구성하고 있는 rRNA로, V1 내지 V9의 초가변 영역을 포함하고 있으며, 약 1,500 뉴클레오티드의 길이를 갖는다. 16S rRNA의 서열을 비교하여 원핵 생물을 동정할 수 있으며, 상기 RNA의 서열은 대부분 상당히 보존되어 있는 한편 일부 구간에서는 높은 염기 서열의 다양성이 나타난다. 특히 동종 간에는 다양성이 거의 없는 반면에 타종 간에는 다양성이 나타나므로 생물 동정에 사용된다. 특히 배양이 불가능하거나 어려운 생물, 또는 보고된 적이 없는 생물의 동정 및 분류에 유용하게 사용된다. 본 발명의 일 실시예에서는 16S rRNA 유전자 V3 및 V4 영역이 OTU를 특성화하기 위해 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 "프라이머"는 표적 유전자 서열을 인지하는 단편으로서, 정방향 및 역방향의 프라이머 쌍을 포함하나, 바람직하게는, 특이성 및 민감성을 가지는 분석 결과를 제공하는 프라이머 쌍이다. 프라이머의 핵산 서열이 시료 내 존재하는 비-표적 서열과 불일치하는 서열이어서, 상보적인 프라이머 결합 부위를 함유하는 표적 유전자 서열만 증폭하고 비특이적 증폭을 유발하지 않는 프라이머일 때, 높은 특이성이 부여될 수 있다.
본 발명에서 상기 "프로브"란 시료 내의 검출하고자 하는 표적 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 물질을 의미하며, 상기 결합을 통하여 특이적으로 시료 내의 표적 물질의 존재를 확인할 수 있는 물질을 의미한다. 프로브의 종류는 당 업계에서 통상적으로 사용되는 물질로서 제한은 없으나, 바람직하게는 PNA(peptide nucleic acid), LNA(locked nucleic acid), 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, RNA 또는 DNA일 수 있으며, 가장 바람직하게는 PNA이다. 보다 구체적으로, 상기 프로브는 바이오 물질로서 생물에서 유래되거나 이와 유사한 것 또는 생체 외에서 제조된 것을 포함하는 것으로, 예를 들어, 효소, 단백질, 항체, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포, DNA, 및 RNA일 수 있으며, DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, RNA는 게놈 RNA, mRNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, 단백질의 예로는 항체, 항원, 효소, 펩타이드 등을 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 "LNA(Locked nucleic acids)"란, 2'-O, 4'-C 메틸렌 브릿지를 포함하는 핵산 아날로그를 의미한다 [J Weiler, J Hunziker and J Hall Gene Therapy (2006) 13, 496.502]. LNA 뉴클레오사이드는 DNA와 RNA의 일반적 핵산 염기를 포함하며, Watson-Crick 염기 쌍 규칙에 따라 염기 쌍을 형성할 수 있다. 하지만, 메틸렌 브릿지로 인한 분자의 'locking'으로 인해, LNA는 Watson-Crick 결합에서 이상적 형상을 형성하지 못하게 된다. LNA가 DNA 또는 RNA 올리고뉴클레오티드에 포함되면, LNA는 보다 빠르게 상보적 뉴클레오티드 사슬과 쌍을 이루어 이중 나선의 안정성을 높일 수 있다.
본 발명에서 상기 "안티센스"는 안티센스 올리고머가 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해 RNA 내의 표적 서열과 혼성화되어, 표적서열 내에서 전형적으로 mRNA와 RNA: 올리고머 헤테로이중체의 형성을 허용하는, 뉴클레오티드 염기의 서열 및 서브유닛간 백본을 갖는 올리고머를 의미한다. 올리고머는 표적 서열에 대한 정확한 서열 상보성 또는 근사 상보성을 가질 수 있다.
본 발명에 따른 균주의 16s rRNA 유전자 정보는 알려져 있으므로, 당 업자라면 이를 바탕으로 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 용이하게 디자인할 수 있을 것이다.
본 발명에서 상기 "자궁내막증"은 자궁내막에서 관찰되는 선과 간질 구조의 조직이 자궁 바깥의 장기 또는 기타 신체 부위에 나타나는 질환으로 생리통, 만성 골반통과 생식 능력 저하를 유발하는 만성적인 질환에 해당한다. 현재까지 병태 생리나 원인에 대하여 명확히 밝혀지지 않았고, 완전한 치료법도 없어, 자궁내막증의 진단과 치료가 지연될 경우 만성적인 골반 통증이나 난임과 같은 합병증들이 유발되는 문제가 있다. 비교적 흔한 부인과 질환임에도 불구하고 충분한 민감도와 특이도를 갖춘 진단적 도구가 없어 많은 연구들이 진행되고 있는 실정이다. 현재까지 자궁내막증 진단의 가장 표준적인 방법으로 여겨지는 것은 복강경을 통해 복강 내의 병변을 육안적으로 확인하고 필요 시에는 조직학적 검사를 통해서 진단하는 방법이나, 조기 진단이 어려운 한계가 있다.
본 발명은 여성 생식기 내 존재하는 특정 균주의 메타게놈 분석에 의해 자궁내막증 발병의 위험도를 사전에 예측함으로써 자궁내막증 위험군을 조기에 진단 및 예측하여 적절한 관리를 통해 발병 시기를 늦추거나 발병을 예방할 수 있고 더 나아가 발병 이후에도 조기 진단을 통해 치료 효과를 향상시킬 수 있다.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 본 발명의 상기 진단용 조성물을 포함하는 자궁내막증 진단용 키트에 관한 것이다.
본 발명에서 상기 "키트"는 바이오 마커 성분에 특이적으로 결합하는 프로브 또는 항체를 검출 가능한 표지로 표지하여 바이오 마커의 발현 수준을 평가할 수 있는 도구를 말한다. 프로브 또는 항체 관련하여 검출 가능한 물질을 기질과의 반응에 의해서 직접적으로 표지하는 것뿐만 아니라, 직접적으로 표지된 다른 시약과의 반응성에 의한 발색하는 표지체가 접합된 간접적 표지도 포함한다. 상기 표지체와 발색 반응할 발색 기질 용액, 세척액 및 기타 다른 용액 등을 포함할 수 있으며, 사용되는 시약 성분을 포함하여 제작될 수 있다. 본 발명에서 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있으며, 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 테스트 튜브, 반응 완충액, 데옥시뉴클레오티드(dNTPs), Taq-중합효소, 역전사효소, DNase, RNase 억제제, 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한, 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 자궁내막증 진단을 위한 다양한 균주의 유전자를 검출하기 위한 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA가 프로브로 부착되어 있는 기판을 포함하고 기판은 정량 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA를 포함할 수 있다. 본 발명의 키트는 당 업계에 공지되어 있는 것이라면, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, ELISA 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트일 수 있다.
본 발명의 상기 키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치를 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명에서 상기 키트는 역전사 중합효소반응을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 더 포함할 수 있다. 역전사 중합효소반응 키트는 마커 단백질을 코딩하는 유전자에 대해 특이적인 프라이머 쌍을 포함한다. 프라이머는 상기 유전자의 핵산 서열에 특이적인 서열을 가지는 뉴클레오티드로써, 약 7 bp 내지 50 bp의 길이, 보다 바람직하게는 약 10 bp 내지 30 bp의 길이를 가질 수 있다. 또한 대조군 유전자의 핵산 서열에 특이적인 프라이머를 포함할 수 있다. 그 외 역전사 중합효소반응 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 용기, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제 DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 진단용 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표지 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 진단용 키트는 ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. ELISA 키트는 상기 단백질에 대해 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2 차 항체, 발색단(chromophores), 효소(예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 진단용 키트에서 항원-항체 결합반응을 위한 고정체로는 니트로셀룰로오즈 막, PVDF 막, 폴리비닐(polyvinyl) 수지 또는 폴리스티렌(polystyrene) 수지로 합성된 웰 플레이트(Well plate), 유리로 된 슬라이드 글래스 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 진단용 키트에서 2차 항체의 표지체는 발색 반응을 하는 통상의 발색제가 바람직하며, HRP(horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소(alkaline phosphatase), 콜로이드 골드(coloid gold), FITC(폴리 L-라이신-플루오르세인 아이소티오시아네이트), RITC(로다민-B-아이소티오시아네이트) 등의 형광물질(fluorescein) 및 색소(dye) 등의 표지체가 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 진단용 키트에서 발색을 유도하기 위한 발색 기질은 발색 반응을 하는 표지체에 따라 사용하는 것이 바람직하며, TMB(3,3',5,5'-테트라메틸 베지딘), ABTS[2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)], OPD(o-페닐렌다이아민) 등을 사용할 수 있다. 이때, 발색 기질은 완충 용액(0.1 M NaAc, pH 5.5)에 용해된 상태로 제공되는 것이 더욱 바람직하다. TMB와 같은 발색기질은 이차 항체 접합체의 표지체로 사용된 HRP에 의해 분해되어 발색 침적체를 생성하고, 이 발색 침적체의 침적 정도를 육안으로 확인함으로써 상기 마커 단백질들의 존재 유무를 검출한다.
본 발명의 진단용 키트에서 세척액은 인산염 완충 용액, NaCl 및 트윈 20(Tween 20)을 포함하는 것이 바람직하며, 0.02 M 인산염 완충용액, 0.13 M NaCl, 및 0.05 % 트윈 20으로 구성된 완충 용액(PBST)이 더욱 바람직하다. 세척액은 항원-항체 결합 반응 후 항원-항체 결합체에 2 차 항체를 반응시킨 다음 적당량을 고정체에 첨가하여 3 내지 6 회 세척한다. 반응 정지 용액은 황산 용액(H2SO4)이 바람직하게 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 자궁내막증의 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 상기 방법은 상기 목적하는 개체의 특정 기관으로부터 분리된 생물학적 시료에서 특정 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 상기 방법은 목적하는 개체의 생식 기관으로부터 분리된 생물학적 시료에서, 자궁내막증 질환의 유무를 선별하기 위한 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 "목적하는 개체"란 자궁내막증이 발병하였거나 발병 가능성이 높은 개체로, 인간을 포함하는 포유 동물일 수 있고, 예를 들면, 인간, 래트, 마우스, 모르모트, 햄스터, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 양 및 염소로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 바람직하게는 인간일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 생식 기관은 자궁내막, 자궁경부, 난소, 난관, 질 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 생물학적 시료는 개체로부터 얻어지거나 개체로부터 유래된 임의의 물질, 생물학적 체액, 조직 또는 세포를 의미하는 것으로, 전혈(whole blood), 백혈구(leukocytes), 말초혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층(buffy coat), 혈장(plasma), 혈청(serum), 객담(sputum), 눈물(tears), 점액(mucus), 세비액(nasal washes), 비강 흡인물(nasal aspirate), 호흡(breath), 소변(urine), 정액(semen), 침(saliva), 복강 세척액(peritoneal washings), 복수(ascites), 낭종액(cystic fluid), 뇌척수막 액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 췌장액(pancreatic fluid), 림프액(lymph fluid), 흉수(pleural fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 기관 분비물(organ secretions), 세포(cell), 세포 추출물(cell extract) 및 뇌척수액(cerebrospinal fluid) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 생식기관 내 조직 또는 세포로부터 얻어진 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 특정 균주는 디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners), 포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis) 및 락토바실러스 류테리(lactobacillus reuteri)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주일 수 있다.
본 발명의 일 예시에서 상기 특정 균주는 여성 생식기 내, 바람직하게는 질 내 존재하는 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스 및 포르피로모나스 베노니스 중 적어도 하나의 균주를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 일 예시에서 상기 특정 균주는 여성 생식기 내, 바람직하게는 질 내 또는 자궁 내막에 존재하는 락토바실러스 류테리 균주를 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 단계 시 사용하는 제제는 해당 균주의 16S rRNA 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 균주의 16S rRNA 유전자의 발현 수준의 측정은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩에 의할 수 있다.
본 발명에서 상기 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 특정 균주의 상대 존재비가 대조군에 비하여 높거나 낮을 경우, 상기 목적하는 개체에 자궁내막증이 발병하였거나 발병할 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명의 일 예시에서, 상기 목적하는 개체의 질 내 생물학적 시료에 대하여 측정된 디알리스터 미크라에로필러스 균주의 상대 존재비가 대조군에 비하여 높을 경우, 상기 목적하는 개체에 자궁내막증이 발병하였거나 발병할 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명의 다른 일 예시에서, 상기 목적하는 개체의 질 내 생물학적 시료에 대하여 측정된 락토바실러스 이너스 균주의 상대 존재비가 대조군에 비하여 낮을 경우, 상기 목적하는 개체에 자궁내막증이 발병하였거나 발병할 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 예시에서, 상기 목적하는 개체의 질 내 생물학적 시료에 대하여 측정된 포르피로모나스 베노니스 균주의 상대 존재비가 대조군에 비하여 높을 경우, 상기 목적하는 개체에 자궁내막증이 발병하였거나 발병할 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 예시에서, 상기 목적하는 개체의 질 내 또는 자궁 내막의 생물학적 시료에 대하여 측정된 락토바실러스 류테리 균주의 상대 존재비가 대조군에 비하여 낮을 경우, 상기 목적하는 개체에 자궁내막증이 발병하였거나 발병할 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다.
본 발명에서 "대조군"이란 자궁내막증이 발생하지 아니한 정상 대조군이거나, 호르몬에 반응하지 않는 난소 종양인 기형종이 있으나 자궁내막증이 발생하지 아니한 개체의 시료에서 나타나는 상기 균주의 상대 존재비의 평균 내지 중간 값일 수 있다. 대조군에서의 특정 균주의 상대 존재비와 분석 대상이 되는 자궁내막증 환자 유래의 생물학적 시료에서의 특정 균주의 상대 존재비를 비교할 수 있으며, 상기 상대 존재비의 유의한 변화 여부를 판단하여 자궁내막증 여부를 진단할 수 있다.
본 발명의 정보 제공 방법에서 자궁내막증, 균주, 상대 존재비, 프라이머, 프로브, 안티센스 뉴클레오티드 등에 관한 기재는 앞서 기재된 바와 중복되어 명세서의 과도한 복잡을 피하기 위하여 이하 그 자세한 기재를 생략한다.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 자궁내막증을 진단하는 기기에 관한 것이다.
본 발명의 상기 진단 기기의 측정부는 목적하는 개체로부터 얻어진 생물학적 시료에 대하여 하나 이상의 분류 조작 단위(operational taxonomic units; OTUs)에 상응하는 특정 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정할 수 있다.
본 발명에서 상기 균주는 락토바실러스 류테리 균주, 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스 및 포르피로모나스 베노니스로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주로 여성 생식기 내 존재하는 균주일 수 있으며, 바람직하게는 자궁내막 또는 질 내 존재하는 균주일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 목적하는 개체는, 인간, 래트, 마우스, 모르모트, 햄스터, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 양 및 염소로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 바람직하게는 인간일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 상기 생물학적 시료는 전혈 (whole blood), 백혈구 (leukocytes), 말초혈액 단핵 세포 (peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층 (buffy coat), 혈장 (plasma), 혈청 (serum), 객담 (sputum), 눈물 (tears), 점액 (mucus), 세비액 (nasal washes), 비강 흡인물 (nasal aspirate), 호흡 (breath), 소변 (urine), 정액 (semen), 침 (saliva), 복강 세척액 (peritoneal washings), 복수 (ascites), 낭종액 (cystic fluid), 뇌척수막 액 (meningeal fluid), 양수 (amniotic fluid), 선액 (glandular fluid), 췌장액 (pancreatic fluid), 림프액 (lymph fluid), 흉수 (pleural fluid), 유두 흡인물 (nipple aspirate), 기관지 흡인물 (bronchial aspirate), 활액 (synovial fluid), 관절 흡인물 (joint aspirate), 기관 분비물 (organ secretions), 세포 (cell), 세포 추출물 (cell extract) 및 뇌척수액 (cerebrospinal fluid) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 진단 기기의 측정부에서 이용하는 제제는 해당 균주의 16S rRNA 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 측정부에서 상기 제제를 이용하여 해당 균주의 상대 존재비를 확인함으로써 자궁내막증 유무 또는 자궁내막증 발병 가능성을 예측할 수 있다.
본 발명의 상기 진단 기기는, 상기 측정부에서 얻어진 상기 해당 균주의 상대 존재비로부터 상기 목적하는 개체의 자궁내막증 유무 또는 자궁내막증 발병 가능성을 예측하여 출력하는 검출부를 추가로 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 검출부는, 상기 측정부에서 얻어진 해당 균주의 상대 존재비의 범주에 따라 자궁내막증 유무 또는 자궁내막증 발병 가능성에 관한 정보를 생성하여 분류함으로써 자궁내막증을 조기에 정밀하게 진단할 수 있다.
본 발명의 상기 검출부는, 상기 측정부에서 측정된 특정 균주의 상대 존재비 수준이 대조군에 비하여 높거나 낮을 경우 상기 목적하는 개체에게 자궁내막증 발병 가능성이 높은 것으로 예측하여 출력할 수 있다.
본 발명의 일 예시에서, 상기 검출부는 상기 측정부에서 측정된 디알리스터 미크라에로필러스 균주의 상대 존재비 수준이 대조군에 비하여 높을 경우 상기 목적하는 개체에게 자궁내막증 발병 가능성이 높은 것으로 예측하여 출력할 수 있다.
본 발명의 다른 일 예시에서, 상기 검출부는 상기 측정부에서 측정된 락토바실러스 이너스 균주의 상대 존재비 수준이 대조군에 비하여 낮을 경우 상기 목적하는 개체에게 자궁내막증 발병 가능성이 높은 것으로 예측하여 출력할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 예시에서, 상기 검출부는 상기 측정부에서 측정된 포르피로모나스 베노니스 균주의 상대 존재비 수준이 대조군에 비하여 높을 경우 상기 목적하는 개체에게 자궁내막증 발병 가능성이 높은 것으로 예측하여 출력할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 예시에서, 상기 검출부는 상기 측정부에서 측정된 락토바실러스 류테리 균주의 상대 존재비 수준이 대조군에 비하여 낮을 경우 상기 목적하는 개체에게 자궁내막증 발병 가능성이 높은 것으로 예측하여 출력할 수 있다.
본 발명의 상기 진단 기기에서, 자궁내막증, 상대 존재비, 균주, 대조군 등에 관한 기재는 상기에서 기재한 바와 동일하여, 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 생략한다.
본 발명은 여성 생식기, 특히는 자궁내막 또는 질 내 마이크로바이옴의 메타게놈 분석에 의해 자궁내막증 발병의 위험도를 사전에 예측함으로써 자궁내막증 위험군을 조기에 진단 및 예측하여 적절한 관리를 통해 발병 시기를 늦추거나 발병을 예방할 수 있고 더 나아가 발병 이후에도 조기 진단을 통해 치료 효과를 향상시킬 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 OTU 분석을 통하여 EMS 군과 DER 군의 여성 생식기 중 자궁 내막 내 락토바실러스 류테리 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 비교 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2a 내지 도 2d는 본 발명의 일 실시예에 따른 OTU 분석을 통하여 EMS 군과 DER 군의 여성 생식기 중 질 내 락토바실러스 류테리, 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스 또는 포르피로모나스 베노니스 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 비교 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
준비예: 시료의 준비
본 연구는 연세대학교 의과대학 평가위원회 (Institutional Review Board; IRB)의 승인을 얻어 모든 실험을 수행하였으며, 모든 샘플은 자궁내막증 환자로부터 서면 동의를 얻은 후 수집되었다. 질내 세균 채집용 키트인 OMNIGENE-vaginal swab kit(#OMR-130)를 사용하여 질 또는 자궁내막 시료를 수득하였고, 복강액은 직접 채취하여 멸균 튜브에 저장하여 준비하였다.
실시예 1: OTU(operational taxonomic unit) 분석
MiSeq raw data는 시퀀싱이 완료된 후, 인덱스 서열을 이용하여 시료 별로 분류하고, 시료 별 FASTQ 파일을 생성하였다. Fastp 프로그램을 이용하여 어댑터 서열을 제거하고, 두 리드가 겹치는 영역에 대해서 오류 교정(error-correction)을 진행하였다. 각 시료 별로 구분된 paired-end data는 FLASH(1.2.11)를 사용하여 하나의 서열로 조립하였다. 하나로 조립된 서열의 길이가 400bp 미만, 500bp 초과인 서열들은 제거하였다. 얻어진 서열은 CD-HIT-EST기반의 OTU 분석 프로그램인 CD-HIT-OTU를 이용하여 시퀀싱 에러로 간주되는 낮은 품질의 서열, 모호한 서열, 키메라 서열 등을 제거한 후, 97% 이상의 서열 유사성을 갖는 서열끼리 클러스터링하여 종 수준의 OTU를 형성하였다.
각 OTU의 대표서열은 레퍼런스 DB(NCBI 16S Microbial)에 BLASTN(v2.9.0+)을 수행하여, 유사성이 가장 높은 목적하는(subject) 개체(organism) 정보로 분류 정렬 과정(taxonomic assignment)을 수행하였다. 이 때, DB에 매치되는 best hit의 쿼리 범위(query coverage)가 85% 미만이거나, 매치된 영역의 상동성(Identity)이 85% 미만이면, taxonomy를 정의하지 않았다. 16S rRNA 유전자의 V3-V4 서열을 타겟으로 하여, 도 1 내지 도 2의 균주를 확인할 수 있었다.
실시예 2: 여성 생식기 내 위치(site)에 따른 균주의 비교 분석
상기한 실시예 1에서의 OTUs 풍부도(abundance)와 분류(taxonomy) 정보로 QIIME(v1.9)을 이용하여, 다양한 미생물 군집 비교 분석을 수행하였다. 여성 생식기 내 미생물 군집의 종 다양성 및 균등도를 확인하기 위해, Shannon Index와 Inversed Simpson Index를 구하고, Rarefaction curve와 Chao1 값을 통해 alpha diversity 정보를 확인하였다. Weighted/Unweighted UniFrac distance를 기반으로 샘플 사이의 Beta diversity(비교 그룹 내 샘플 사이의 다양성 정보)를 구하고, PCoA와 UPGMA tree를 통해 샘플 사이의 유연 관계를 시각화 하였다. 그룹 간 존재하는 미생물 유/무 비교를 위해 벤 다이어그램을 작성하였고, EMS, DER 각 그룹 내 위치인 질/자궁내막/복강(Vagina/Endometrium/Peritoneum) 간의 종 다양성(Diversity Index)과 미생물 군집 조성(Relative Abundance) 비교를 위한 통계 분석은 세 그룹 비교 시 Kruskal-Wallis Rank Sum Test, 두 그룹 비교 시 Wilcoxon Rank-Sum Test를 수행하였으며, 각 Site 내 EMS, DER 그룹 간 종 다양성(Diversity Index)과 미생물 군집 조성(Relative Abundance) 비교를 위해서 Wilcoxon Rank-Sum Test를 수행하였다. 여기서, EMS 그룹은 자궁내막증이 있는 그룹에 해당하며, DER 그룹은 호르몬에 반응하지 않는 난소 종양인 양성 기형종이 있는 그룹에 해당한다. 그룹 간 미생물 군집 조성(Relative Abundance)에 대해서 LEfSe(Linear discriminant Effect Size) 분석도 수행하여 비교 그룹 사이의 유의한 차이를 보이는 미생물을 선정하고 차이의 정도를 LDA Score로 표현하였다. DER 그룹에 대해서는 미생물 군집 조성에 대하여 Site와 Phase의 요인 별 효과 및 상호 효과를 살펴보기 위해 이원분산분석(Two-way ANOVA)을 수행하였다.
그 결과, 도 1을 참조하면, 여성 생식기 자궁내막 내 락토바실러스 류테리 균주의 상대 존재비가 대조군인 DER 군 대비하여 자궁내막증이 있는 군인 EMS 군에서 낮게 나타나는 것을 확인하였다. 또한, 도 2a 내지 도 2d를 참조하면, 여성 생식기 질 내 락토바실러스 류테리, 락토바실러스 이너스 균주의 상대 존재비가 DER 군 대비하여 EMS 군에서 낮게 나타났으며, 여성 생식기 질 내 디알리스터 미크라에로필러스, 포르피로모나스 베노니스 균주의 상대 존재비가 DER 군 대비하여 EMS 군에서 높게 나타나는 것을 확인하였다.
이를 통하여, 여성 생식기 자궁내막 내 락토바실러스 류테리 균주의 상대 존재비, 질 내 락토바실러스 류테리, 디알리스터 미크라에로필러스, 락토바실러스 이너스 또는 포르피로모나스 베노니스 균주의 상대 존재비를 각각 대조군의 수준과 비교하는 것을 통하여 상기 균주를 자궁내막증 진단에 용이하게 활용 가능하며, 자궁내막증을 조기에 발견하여 조기 치료 효과를 얻을 수 있다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (14)

  1. 디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners) 및 포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주의 상대 존재비를 측정하는 제제를 포함하는, 자궁내막증의 진단용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 균주는 여성 생식기 질 내에 존재하는 균주인, 조성물.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 조성물은 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 제제를 추가로 포함하는, 조성물.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 락토바실러스 류테리 균주는 여성 생식기 질 내 또는 자궁 내막에 존재하는 균주인, 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 균주의 존재 수준을 측정하는 제제는 균주의 16S rRNA 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함하는, 조성물.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 자궁내막증의 진단용 키트.
  7. 목적하는 개체의 생식 기관으로부터 분리된 생물학적 시료에서 디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners) 및 포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 단계를 포함하는, 자궁내막증 진단을 위한 정보 제공 방법.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 생식 기관은 자궁내막, 자궁경부, 난소, 난관, 질 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인, 방법.
  9. 제 7항에 있어서,
    상기 균주는 여성 생식기 질 내에 존재하는 균주인, 방법.
  10. 제 7항에 있어서,
    상기 방법은 락토바실러스 류테리(lactobacillus reuteri) 균주의 상대 존재비를 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  11. 제 10항에 있어서,
    상기 락토바실러스 류테리 균주는 여성 생식기 질 내 또는 자궁 내막에 존재하는 균주인, 방법.
  12. (a) 목적하는 개체의 생식 기관으로부터 얻어진 생물학적 시료에 대하여 하나 이상의 분류 조작 단위(operational taxonomic units; OTUs)에 상응하는 균주의 상대 존재비(relative abundance)를 측정하는 측정부; 및
    (b) 상기 측정부에서 측정된 균주의 상대 존재비로부터 상기 목적하는 개체의 자궁내막증에 관한 정보를 출력하는 검출부;를 포함하는 자궁내막증 진단 기기.
  13. 제 12항에 있어서,
    상기 생식 기관은 자궁내막, 자궁경부, 난소, 난관, 질 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인, 진단 기기.
  14. 제 12항에 있어서,
    상기 균주는 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri), 디알리스터 미크라에로필러스(Dialister micraerophilus), 락토바실러스 이너스(Lactobacillus iners) 및 포르피로모나스 베노니스(Porphyromonas bennonis)로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 균주인, 진단 기기.
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