KR20230083871A

KR20230083871A - 레몬 껍질 발효물을 포함하는 항비만 조성물

Info

Publication number: KR20230083871A
Application number: KR1020210172272A
Authority: KR
Inventors: 박건영; 반연예; 조흔
Original assignee: 주식회사 피토제닉스
Priority date: 2021-12-03
Filing date: 2021-12-03
Publication date: 2023-06-12

Abstract

본 발명은 항비만 조성물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로 레몬 껍질을 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)를 활용하여 발효시키는 경우, 비만 및 비만에 의해 유발된 염증 개선효과가 현저하게 증진된다. 따라서, 본 발명의 항비만 조성물은 항비만 의약품, 항비만 건강기능식품 관련 분야에서 폭넓게 활용될 수 있다.

Description

레몬 껍질 발효물을 포함하는 항비만 조성물{Anti-obesity composition comprising lemon peel fermented product}

본 발명은 비만의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

서구 선진국과 같이 우리나라에서도 최근 생활수준의 향상과 서구화된 식생활로 인해 비만 인구가 증가하고 있다. 비만은 단순한 외형적 문제가 아니라, 고혈압, 고지혈증, 동맥경화, 심장질환, 제2형 당뇨병 등과 같은 성인병으로 이어지므로 심각한 건강 문제로 대두되고 있다.

비만은 체내 지방이 과잉으로 증가된 상태로 단순한 과체중의 상태가 아닌, 체내에 지방이 과잉 축적된 상태를 말한다. 따라서 과도한 칼로리 섭취로 인해 소비되고 남은 칼로리가 중성지방 형태로 지방조직에 과잉으로 축적되는 질환이며, 유전적 요인과 호르몬, 효소 활성과 같은 생리적 요인을 비롯하여 나이, 성별, 활동량 등 환경적인 요인들의 상호작용에 의하여 발생되는 것으로 알려져 있다.

레몬은 귤속의 잡종 재배 식물로서, 과육, 껍질 등이 요리 등에 사용되며 청소 등에서 활용되고 있다. 레몬의 껍질 또한 항산화 및 항염증 효과가 있는 화합물을 포함하고 있어 그 이용가치가 높으나(Food and Chemical Toxicology Volume 94, August 2016, Pages 75-84), 대부분 버려지고 있는 실정이다.

한편, 현대인들의 생활 수준과 소득의 향상과 더불어 건강에 관한 관심이 높아짐에 따라서 천연물이나 생약 기능성 식품의 개발이 전 세계적으로 활발히 진행되고 있으며, 항균제나 항암제 등의 특정효능을 목표로 한 의약 품의 개발도 천연 생약제로부터 약효성분을 분리, 정제하여 제제화하려는 경향이 많아지고 있다.

따라서 레몬 껍질을 비롯한 천연물로부터 유래한 비만을 완화, 예방 또는 치료하기 위한 조성물이 요구된다.

일 양상은 유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다.

다른 양상은 유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

일 양상에 있어서, 유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

상기 용어 "비만"은 체내에 지방조직이 과다한 상태로, 신체비만지수(체중(kg)을 신장(m)의 제곱으로 나눈 값)가 25 이상이면 비만으로 정의된다. 비만은 오랜 기간에 걸쳐 에너지 소비량에 비해 영양소를 과다하게 섭취할 경우 에너지 불균형에 의해 유발되는 것이 통상적이다. 비만은 신체 전체에 영향을 미치는 대사질환으로 당뇨병 및 고지혈증에 걸릴 가능성이 상승하고, 성기능 장애, 관절염, 심혈관계 질환의 발병 위험이 커지며 일부의 경우 암의 발생과도 연관이 있다. 비만은 경도비만과 고도비만으로 분류될 수 있다.

상기 용어 "껍질"은 물체의 겉을 싸고 있는 막을 의미한다. 본 발명의 레몬 껍질은 과일 씨를 보호하는 과피로서, 식물의 과실 구성 요소 중, 가운데 꽃의 자방벽을 구성하는 심피에서 유래한 열매의 껍질 부분을 의미한다. 상기 레몬 껍질의 경우, 레몬 껍질 자체 또는 이의 분말 형태일 수 있다.

상기 용어, "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 비만을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 보다 구체적으로는 에너지 대사량을 증가시키거나 또는 체지방을 감소시키는 것에 의할 수 있다.

상기 용어, "개선"이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 이때 상기 식품 조성물은 비만의 예방 또는 개선을 위하여 해당 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.

상기 용어 "발효"는　미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해 시키는 과정을 의미한다. 상기　발효는 통상적인　발효　방법에 의해 이루어질 수 있고, 예를 들어, 자연발효, 균발효　및 염장발효로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 방법으로 이루어질 수 있다. 구체적으로, 일반적으로　발효에 이용되는　미생물에 의해 이루어질 수 있고, 비병원성　미생물,　효모　또는 건조 효모에 의해 이루어질 수 있다. 상기 발효는　예를 들어, 유산균에 의해 이루어지는 것일 수 있으며, 바람직하게는 “류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)”에 의해 이루어지는 것일 수 있다. 상기 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)”은 이에 제한되는 것은 아니지만 전주 김치에서 분리된 Leuconostoc mesenteroides PNU(기탁번호: KCCM 11353P)일 수 있다.

일 구체예에 있어서, 상기 발효물은 발효 여과물, 발효 상등액, 발효 침전물 또는 발효 추출물을 포함하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 발효 상등액일 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 발효는 12시간 내지 36시간 동안 수행될 수 있으며, 바람직하게는 18시간 내지 30시간, 더욱 바람직하게는 24시간 동안 수행되는 것일 수 있다.

상기 발효를 위해 접종되는 유산균의 접종량은 10⁶ 내지 10¹⁰ CFU/mL일 수 있으며, 바람직하게는 10⁷ 내지 10⁹ CFU/mL 일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 10⁸ CFU/mL일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 발효는 1차 발효 배지에서 미생물을 배양하는 1차 발효 단계, 상기 1차 발효 배양액을 첨가한 2차 발효 배지에서 미생물을 배양하는 2차 발효 단계, 및 상기 2차 발효 배양액으로부터 혼합 발효물을 정제하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 발효물은 항염증 효과를 나타낼 수 있다. 상기 항염증 효과는 염증을 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 예를 들어 비만에 의해 유발된 만성염증성 질환, 지방간 질환, 심혈관계 질환 또는 암 등일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 레몬 껍질 발효물은 발효되지 않은 레몬 껍질에 비하여 클로로겐산(chlorogenic acid), 에리오시트린(eriocitrin), 비텍신(vitexin), 루틴(rutin), 나란진(naringin), 헤스페리딘(hesperidin), 비아칸젤리신(byakangelicin), 옥시퓨세다닌 수화물(oxypeucedanin hydrate) 및 시니디신(cnidicin)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 함량이 증진된 것일 수 있다. 보다 구체적으로 상기 발효된 레몬 껍질에 함유된 성분들은 발효되지 않은 레몬 껍질에 비해 상기 클로로겐산은 40.00 내지 50.00%, 상기 에리오시트린은 8.00 내지 18.00%, 상기 비텍신은 60.00 내지 70.00%, 상기 루틴은 1.00 내지 7.00%, 상기 나란진은 0.10 내지 0.70%, 상기 헤스페리딘은 1.00% 내지 7.00%, 상기 비아칸젤리신은 30.00 내지 50.00%, 옥시퓨세다닌 수화물은 30.00 내지 50.00%, 상기 시니디신은 50.00 내지 70.00%만큼 증진된 것일 수 있다. 발효된 레몬 껍질의 항비만 효과는 상기와 같이 증진된 함량의 조합에 의해 발생하는 것일 수 있다.

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 핵인자 카파비 p65(NF-κB p65), Fas(Fas Cell Surface Death Receptor), 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α), 인터페론 감마(interferon-γ), 인터루킨-1 베타(interlukin-1β), 인터루킨-6(interlukin-6) CCAAT/증폭자 결합 단백질 알파(CCAAT/enhancer-binding protein alpha) 및 스테롤 조절 인자 결합 단백질 1c(sterol regulatory element-binding protein 1c) 및 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(peroxisome proliferator-activated receptor-γ)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현을 억제하는 것일 수 있다.

또 다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 아이카파비 알파(nuclear factor of κ-light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor-alpha), 인터루킨-10(interlukin-10), 인터루킨-4(interlukin-4) 및 렙틴(leptin)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현을 증진시키는 것일 수 있다.

상기 건강식품조성물에 더 포함될 수 있는 첨가제로는, 천연 탄수화물, 향미제, 영양제, 비타민, 광물(전해질), 풍미제(합성 풍미제, 천연 풍미제 등), 착색제, 충진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 산화 방지제, 글리세린, 알코올, 탄산화제 및 과육으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 성분을 사용할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 외에 본 발명에 따른 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 팩트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 담체, 부형제, 희석제 및 첨가제의 구체적인 예로는 이에 한정하는 것은 아니나, 락토오스, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 에리스리톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로즈, 폴리비닐키롤리돈, 셀룰로즈, 폴리비닐피로리돈, 메틸셀룰로즈, 물, 설탕시럽, 메틸 하이드록시 벤조에이트, 프로필하이드록시 벤조에이트, 활석, 스테아트산 마그네슘 및 미네랄 오일로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1종 이상이 사용되는 것이 바람직하다.

본 발명자들은 구체적인 실시예를 통해 레몬 껍질을 발효시킨 발효물을 비만 유도된 마우스 모델에 섭취시키는 경우, 고지방 식이에 의해 유도된 비만이 개선됨을 확인하였다.

일 실시예에서는, 발효시키지 않은 레몬 껍질에 비해 특정 성분들이 증진되어 있는 발효된 레몬 껍질을 고지방 식이에 의해 비만이 유도된 마우스 모델에 투여하는 경우, 고지방 식이에 의해 증가되었던 체중이 감소하는 것을 확인할 수 있었다(실시예 3-1 참조). 구체적인 비만 개선효과를 확인하기 위하여 간 및 부고환 지방 조직의 구조를 염색을 통해 확인한 결과, 지방 세포의 숫자가 감소하고 지질 방울이 더 작고 흩어진 형태로 바뀌는 것을 확인할 수 있었으며, 이러한 효과는 단순히 레몬 껍질을 섭취시키는 경우보다 발효시킨 레몬 껍질을 섭취시키는 경우가 보다 현저한 항비만 효과를 나타내는 것을 확인하였다(실시예 3-2 참조).

다른 실시예에서는, 발효 레몬 껍질의 비만 개선 효과의 원인을 확인하기 위해 비만 또는 비만에 의해 유발된 염증과 관련된 단백질 또는 이를 암호화하는 유전자의 발현 수준을 확인하였다. 마우스의 부고환 지방 조직 및 간조직에서 염증 및 비만관련 유전자의 발현 수준을 확인한 결과, 고지방 식이에 의해 비만이 유도된 마우스의 경우에도 발효 레몬 껍질을 섭취시키는 경우, 일반식이 마우스와 유사한 수준으로 비만이 개선됨을 확인하였다(실시예 4 참조).

본 발명자들은 상기와 같은 결과를 통해 레몬 껍질을 발효시키는 경우, 레몬 껍질에 포함되어 있는 특정 성분의 함량이 증가되고, 이를 통해 항비만 효과가 현저히 증진될 수 있음을 확인하였다. 이와 같은 발효 레몬 껍질의 항비만 효과는 기존에 이미 항비만 효과가 밝혀진 L-carnitine과 유사하거나 더 뛰어난 효과를 보임을 확인하였다

더욱이, 본 발명에 따른 천연물 조성물은 종래 매우 오랫동안 사용되면서 안전성이 입증된 식품을 포함하고 있어 독성 및 부작용은 없으므로, 비만의 예방 목적으로 장기간 복용하거나, 개선 또는 치료 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다

다른 양상으로서, 유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 용어, "치료"는 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 비만이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미할 수 있다. 보다 구체적으로는 BMI의 감소일 수 있고, 에너지 대사량을 증가 시키거나 또는 체지방을 감소시키는 것에 의할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 사이클로덱스트린, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 등을 포함하지만 이에 한정되지 않으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액 등 다른 통상의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 레밍턴의 문헌에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. 상기 약학적 조성물은 제형에 특별한 제한은 없으나 주사제, 흡입제, 피부 외용제 등으로 제제화할 수 있다.

상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로 상기 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01 내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감 될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

다른 양상으로서, 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 비만의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또 다른 양상으로서, 상기 약학적 조성물의 비만의 예방 또는 치료용도를 제공한다.

일 양상에 따른 유산균을 이용하여 발효된 레몬 껍질 발효물을 활용하는 경우, 비만, 그 중에서도 고지방 식이에 의해 유발된 비만 및 비만에 의해 유발된 염증을 현저하게 개선할 수 있다. 일 양상은 버려지는 천연물인 레몬 껍질을 발효 시키는 경우, 발효시키지 않은 레몬 껍질 보다 증진된 항비만 효과를 얻을 수 있으므로, 항비만 의약품, 항비만 건강기능식품 등의 분야에 폭넓게 활용될 수 있다.

단, 본 발명의 효과는 상기 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

도 1은 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델(제공하는 식이에 따라 L-carnitine, LPFS, LPS 그룹)의 시간의 흐름에 따른 체중변화를 확인한 결과이다.
도 2는 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델 조직을 염색하고 촬영한 것으로서, 도 2a는 마우스의 간 조직에 H&E 염색을 수행한 결과이고, 도 2b는 마우스의 간조직에 오일 레드 O 염색을 수행한 결과이며, 도 2c는 마우스의 부고환 지방 조직에 H&E 염색을 수행한 결과이다.
도 3은 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 혈청에서 혈액 지질 지수(HDL-C, LDL-C, TC, TG)를 확인한 결과이다.
도 4는 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 혈청에서 간 기능 지수(AKP, ALT, AST)를 확인한 결과이다.
도 5는 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 혈청에서 염증성 사이토카인(TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6, IL-10 및 IL-4)의 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 6은 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 지방 조직에서 염증 관련 유전자(IKB-α, NF-κB p65, IL-10, IL-4) 및 비만 관련 유전자(Fas(Fas receptor))의 mRNA 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 7은 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 간 조직에서 염증 관련 유전자(TNF-α, IKB-α, IL-4) 및 비만 관련 유전자(C/EBPα, REBP-1c)의 mRNA 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 8은 일반 대조군 마우스 및 고지방 식이에 의해 비만 유도된 마우스 모델의 간 조직에서 염증 관련 유전자(IKB-α, NF-κB p65, TNF-α, IL-1β) 및 비만 관련 유전자(Leptin, PPAR-γ)의 단백질 발현 수준을 확인한 결과로서, 도 8a는 웨스턴 블롯팅을 통해 확인한 결과이고, 도 8b는 도 8a에서 도출한 결과를 그래프화 한 결과이다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 다른 경우를 분명히 지적하는 것이 아니라면, 복수의 형태를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 경우 “포함한다(comprise, include)”및/또는 “포함하는(comprising, including)”은 언급한 형상들, 숫자, 단계, 동작, 부재, 요소 및/또는 이들 그룹의 존재를 특정하는 것이며, 하나 이상의 다른 형상, 숫자, 동작, 부재, 요소 및/또는 그룹들의 존재 또는 부가를 배제하는 것이 아니다.

[실시예]

실시예 1. 실험준비 및 방법

1-1. 균주 준비

레몬 껍질을 발효시키기 위해 전주 김치에서 분리한 Leuconostoc mesenteroides LM를 준비하였다. 글리세롤 동결보존관에 보관된 균주를 접종 부피가 2%(100 μL)인 MRS 액체 배지 5 mL에 접종하고 37℃에서 16-24시간 동안 배양하였다. 액체 배지에서 유산균이 성장한 후 두 번째 활성화를 수행한 다음, 새로운 5 mL MRS 액체 배지에 세균 용액 샘플 100 μL를 추가하고 37°C에서 16-24시간 동안 배양하였다.

1-2. 샘플 준비

레몬 껍질 발효 상등액(Lemon peel fermentation supernatant: LPFS)의 제조를 위하여 레몬 껍질 분말과 물을 1:20의 비율로 혼합하였다. 세균 접종량은 4%(10⁸ CFU/mL)로 하였고, 자일리톨(40%)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 37℃에서 24시간 동안 발효시켰다. 상등액을 취하여 0.22 μm 필터를 통해 여과하고 나중에 사용하기 위해 4°C의 온도 조건에서 저장하였다. 상기 발효 상등액과의 대비를 위한 레몬 껍질 상등액(Lemon peel supernatant: LPS)은 상기 레몬 껍질 발효 상등액 제조 단계에서 세균 공급과 관련된 단계를 제외한 형태로 제조하였다.

1-3. 비만 마우스 모델의 준비

5주령 수컷 C57BL/6J 마우스(체중: 20±2g)를 실온(25°C), 상대 습도 60%, 명암 주기(12/12시간)에서 키웠다. 실험을 시작하기 전 마우스를 일주일 동안 적응시켰다. 실험은 9주 동안 지속되었다. 1 내지 4주 동안 normal 그룹을 제외한 모든 마우스는 비만 유도를 위해 45% 고지방 식이를 진행했다. 5주차부터 비만 유도에 기초하여 양성대조군(L-carnitine 식이군)과 해당 농도의 시료(LPFS, LPS)를 채취하였다.

Normal 그룹은 4주간 일반식을 시킨 후 5주간 일반식을 기준으로 0.1mL/20g(체중) 0.9% 생리식염수를 경구투여하였다. Control 그룹은 45% 고지방 식이를 4주간 먹여 식이유발 비만 마우스를 얻은 후, 0.1mL/20g(체중) 0.9% 생리식염수와 45% 고지방 식이를 5주간 경구투여 하였다. L-carnitine 그룹은 4주 동안 45% 고지방 식이를 먹인 다음 200mg/kg(체중) L-carnitine을 5주 동안 45% 고지방 식이를 섭취 시켰다. LPFS 그룹은 45% 고지방 식이를 4주간 처리한 후, 45% 고지방 식이를 기준으로 레몬 껍질 발효 상등액 0.1mL/20g(체중)을 5주간 경구투여하였다. LPS 그룹의 마우스는 4주 동안 45% 고지방 식이를 제공한 후 45% 고지방 식이를 기준으로 0.1mL/20g(체중) 레몬 껍질 상등액을 5주간 경구 투여하였다.

1-4. 비만 마우스 모델의 간 및 지방조직의 관찰

상기 실시예 1-3에서 준비한 마우스 모델에서 약 0.5 cm² 크기의 간 및 부고환 지방 조직을 제거한 후 조직 고정액에 24시간 동안 담가두었다. 조직을 고정하고, 세척한 다음, 왁스에 담그고, 슬라이스하였다. H&E와 레드 오일 O로 염색하였다. 생물학적 현미경(BX43; Olympus, Tokyo, Japan)을 사용하여 형태적 구조를 관찰하였다.

1-5. 비만 마우스 모델의 혈청에서 간 기능 및 혈액 지질 관련 지표의 수준 확인

상기 실시예 1-3에서 준비한 마우스 모델의 혈액을 4℃에서 10분 동안 4,000 rpm에서 원심분리하였다. 혈청(serum)을 수집하고 향후 사용을 위해 -80℃에서 보관하였다. 마우스 혈청에서 간 기능 관련 지표로 알려진 알라닌 아미노트랜스퍼라제(alanine aminotransferase: ALT), 아스파테이트 트랜스아미나제(aspartate aminotransferase: AST) 및 알칼리 포스파타아제(alkaline phosphatase: AKP)의 활성 수준 및 혈액 지질 관련 지표로 알려진 총콜레스테롤(total cholesterol: TC), 중성지방(triglyceride: TG), 고밀도 지단백 콜레스테롤(High-density lipoprotein cholesterol: HDL-C) 및 저밀도 지단백 콜레스테롤(Low-density lipoprotein cholesterol: LDL-C)의 수준을 측정하였다. 상기 측정은 기존 생화학 키트(Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, China)의 지침에 따라 수행되었다.

1-6. 비만 마우스 혈청에서 염증 관련 사이토카인의 수준 확인

상기 실시예 1-3에서 준비한 마우스 모델 혈청의 염증관련 사이토카인인 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α: TNF-α), 인터페론 감마(interferon-γ: IFN-γ), 인터루킨-1 베타(interlukin-1β: IL-1β), 인터루킨-6(interlukin-6: IL-6), 인터루킨-10(interlukin-10: IL-10) 및 인터루킨-4(interlukin-4: IL-4)의 수준을 측정하였다. 상기 측정은 함량은 제조사(Shanghai Enzyme Linked Biotechnology Co., Ltd., Shanghai, China)의 지침에 따라 수행되었다.

1-7. 비만 마우스 모델의 조직 내 mRNA 발현 확인

간 및 부고환 지방에서 mRNA의 발현은 SYBR Green 기반 RT-qPCR(Quantitative real-time PCR) 분석을 사용하여 정량화되었다. 약 100mg의 간 또는 부고환 지방 조직을 조각으로 절단하여 Trizol(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, USA)로 total RNA를 추출하였다. RNA 농도는 마이크로-분광광도계(micro-spectrophotometer(Nano 300, Ao Sheng, Hangzhou, Zhejiang, China))를 사용하여 측정하였다. Reverse Aid First Strand cDNA 합성 키트(Thermo Fisher Scientific Baltics UAB, Lithuania, Vilnius)를 사용하여 cDNA 템플릿을 얻었다. 이때 활용한 프라이머의 서열은 하기 표 1에 나타내었다.

Gene Name	Sequence
IκB-α	Forward: 5'- TGAAGGACGAGGAGTACGAGC -3'
	Reverse: 5'- TGCAGGAACGAGTCTCCGT -3'
NF-κB p65	Forward: 5'- GGGGCCTGCAAAGGTTATC -3'
	Reverse: 5'- TGCTGTTACGGTGCATACCC -3'
IL-10	Forward: 5'- GCTGGACAACATACTGCTAACC -3'
	Reverse: 5'- ATTTCCGATAAGGCTTGGCAA -3'
IL-4	Forward: 5'- GGTCTCAACCCCCAGCTAGT -3'
	Reverse: 5'- GCCGATGATCTCTCTCAAGTGAT -3'
Fas	Forward: 5'- CTGTCCTGCCTCTGGTGCTTG -3'
	Reverse: 5'- AATGGGCCTCCTTGATATAATCC -3'
TNF-α	Forward: 5'- CAGGCGGTGCCTATGTCTC -3'
	Reverse: 5'- CGATCACCCCGAAGTTCAGTAG -3'
C/EBPα	Forward: 5'- TGGACAAGAACAGCAACGAGTAC -3'
	Reverse: 5'- GCAGTTGCCCATGGCCTTGAC -3'
SREBP-1c	Forward: 5'- CTTTGGCCTCGCTTTTCGG -3'
	Reverse: 5'- TGGGTCCAATTAGAGCCATCTC -3'
β-actin	Forward: 5'- GCCGACAGGATGCAGAAGG -3'
	Reverse: 5'- TGGAAGGTGGACAGCGAGG -3'

10μL의 SYBR Green PCR Master Mix(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 1μL upstream primer, 1μL downstream primer, 1μL cDNA 템플릿 및 7μL 디에틸피로카보네이트(diethyl pyrocarbonate)를 혼합하였다. 상기 혼합물을 StepOnePlus 실시간 PCR 시스템(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)으로 증폭하였다. 구체적으로 95℃에서 3분간 pre-denaturation; 95℃에서 15초 동안 변성, 60℃에서 30초 동안 어닐링, 72℃에서 15초 확장, 40사이클 연장; 최종 용해 곡선은 95℃에서 30초, 60℃에서 30초, 95℃에서 15초 동안 마감하는 방식으로 증폭을 수행하였다. 마지막으로 각 유전자의 상대적인 발현 수준은 ^2-ΔΔCT로 계산하였으며, β-Actin은 내부 참조 유전자로 사용되었다.

1-8. 비만 마우스 모델의 조직내 단백질 수준 확인

100 mg 간장 조직을 1 mL RIPA buffer 및 10 μL PMSF에서 균질화하고 4℃에서 5분 동안 12 000 rpm에서 원심분리 하였다. 중간층을 BCA단백질 분석 키트를 사용하여 정량화하였다. 단백질 샘플을 4 : 1의 비율로 LDS sample buffer와 혼합하였다. 100℃에서 5분 동안 처리한 다음, 100V에서 SDS-PAGE에서 전기영동하였다. SDS-PAGE 겔에서 생성된 밴드를 PVFD 막으로 옮겼다. PVDF 막을 5% skim milk를 함유하는 PBST 용액으로 1시간 동안 blocking 한 후, 아이카파비 알파(nuclear factor of κ-light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor-alpha: IκB-α), 핵인자 카파비 p65(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells IKB-α p65: NF-κB p65), 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α: TNF-α), 인터루킨 1-베타(Interleukin 1 beta: IL-1β), 렙틴(Leptin) 및 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(peroxisome proliferator-activated receptor-γ: PPAR-γ)에 대한 1차 항체를 4 ℃에서 밤새 배양하였다. 그 다음, 2차 항체를 첨가하고 1시간 동안 배양 하였다.

1-9. 통계 분석

3개 이상의 병렬 실험을 수행하여 각 마우스의 혈청 및 조직 지표를 측정한 다음 평균값을 취하였다. SPSS 22 소프트웨어(SPSS Inc. IL, USA)를 사용하여 데이터를 분석하였다. 실험 결과는 평균 ± 표준편차(SD)로 표시된다. 그룹간에 존재하는 유의적인 차이를 확인하기 위해, Duncun's multiple range test와 One-way analysis of variance(ANOVA) 방식을 사용하였다. 실험결과에 대하여 p<0.05수준일 때 통계학적으로 유의성이 있다고 판단하였다.

실시예 2. 레몬 껍질 발효액의 성분 확인

레몬 껍질 발효 상등액의 구체적인 성분을 확인하기 위하여 레몬 껍질 발효 상등액 및 비교를 위한 레몬 껍질 상등액에 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography: HPLC)를 수행하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

			Average of Area (mAUs)		Increased Compound after Fermentation
NO.	Rt(min)	Compound Name	LPS	LPFS	Increased Compound after Fermentation
1	7.9	chlorogenic acid	109.428	159.576	45.80%
2	12.6	scopoletin	32.632	22.849
3	14.2	umbelliferone	21.546	20.373
4	21.2	ferulic acid	332.495	103.545
5	24.6	eriocitrin	3093.191	3511.036	13.50%
6	24.9	vitexin	26.333	43.514	65.20%
7	25.4	rutin	92.991	96.642	3.90%
8	26.8	neoeriocitrin	196.644	195.640
9	29.6	naringin	181.297	182.023	0.40%
10	32.1	hesperidin	2600.261	2689.669	3.40%
11	38.3	byakangelicin	167.287	234.901	40.40%
12	38.9	oxypeucedanin hydrate	228.467	318.633	39.50%
13	43.2	citropten	356.443	332.798
14	45.6	bergaptol	73.081	62.394
15	50.3	cnidicin	3.699	5.863	58.50%

레몬 껍질 발효 상등액의 성분은 발효시키지 않은 레몬 껍질 상등액에 비하여 클로로겐산(chlorogenic acid) 45.80%, 에리오시트린(eriocitrin) 13.50%, 비텍신(vitexin) 65.20%, 루틴(rutin) 3.90%, 나란진(naringin) 0.40%, 헤스페리딘(hesperidin) 3.40%, 비아칸젤리신(byakangelicin) 40.40%, 옥시퓨세다닌 수화물(oxypeucedanin hydrate) 39.50% 및 시니디신(cnidicin) 58.50%의 만큼 증가되어 있음을 확인할 수 있었다.

실시예 3. 레몬 껍질의 발효에 따른 항비만 및 항염증 효과 확인

3-1. 비만 마우스의 비만도 변화 확인

상기 실시예 1-3에서 준비한 마우스 모델의 비만도 변화를 확인하기 위하여, 마우스 모델의 체중, 간지수 및 부고환 지방조직지수를 확인하였다. 체중은 항비만 실험을 위한 가장 직관적인 감지 지표이다. 장기지수는 지방의 축적과 비만도를 평가하는 데에도 많이 사용되며, 간지수 및 부고환 지방조직지수는 비만도의 지표로 많이 사용되기에 선정하였다. 체중을 확인했을 때, 도 1에 나타낸 바와 같이, 비만 모델링 기간(1-4주)은 normal 그룹 mice를 제외한 나머지 mice의 체중은 모두 유의하게 증가하였다. 4주가 끝날 때 45% 고지방 식이(high fat diet: HFD)를 섭취한 mice의 체중은 normal 그룹에 비해 20.00% 이상 증가하였다. Control, L-carnitine, LPFS, LPS그룹의 체중이 각각 21.98%, 21.77%, 22.67%, 21.39% 증가함을 확인하여 비만 마우스 모델이 성공적으로 제작되었음을 확인하였다. 실험 6주차부터는 L-carnitine, LPFS, LPS 그룹의 체중이 유의하게 억제되었다(p <0.05). 9주차에는 normal 그룹의 체중과 비교하여 control, L-carnitine, LPFS, LPS 그룹의 체중이 각각 28.84%, 7.44%, 9.27%, 17.01% 증가하였다. 체지방 지수, 간 지수, 부고환 지방 중량 및 간 중량을 측정하여 하기 표 3에 나타내었다.

	Epididymal fat weight(g)	Epididymal fat index (%)	Liver weight(g)	Liver index (%)
Normal	0.38±0.06	1.58±0.16	0.62±0.05	2.59±0.31
Control	1.18±0.19	3.88±0.42	1.30±0.08	4.29±0.24
L-carnitine	0.59±0.11	2.28±0.37	0.80±0.07	3.13±0.27
LPFS	0.64±0.10	2.45±0.24	0.75±0.08	2.90±0.39
LPS	0.75±0.17	2.71±0.49	1.05±0.08	3.84±0.15

L-carnitine과 LPFS 그룹이 control 그룹에 비해 유의하게 낮게 나타남을 확인하였다(p <0.05). 상기와 같은 결과를 통해 LPFS는 비만 마우스에서 유의한 수준의 지방 감소 효과를 보여주며, 이는 L-carnitine 그룹과 유사한 수준으로 확인된다(p >0.05).

3-2. 비만 마우스 모델의 간 및 부고환 지방 조직 구조 확인

마우스 모델의 비만도에 따라 변화하는 조직의 구조를 확인하고자 비만 마우스 모델에 염색을 수행하고 조직의 구조를 구체적으로 관찰하였다. 간 조직의 H&E 염색 병리를 확인하였을 때, 도 2a에 나타낸 바와 같이, normal 그룹에서는 간소엽의 구조가 명확하고 간세포가 가지런히 배열되어 있으며 문맥영역에 염증세포 침윤이 없다. Control 그룹에서는 간세포에서 지방과 지질 방울이 증가했으며 과립 축적이 관찰되었으며, 염증 세포가 소엽과 문맥 영역을 관통하는 것이 확인하였다. LPFS 및 L-carnitine 그룹에서는 마우스 간 세포의 지방 세포 수가 유의하게 감소하였다. 구체적으로, 지질 방울은 더 작고 흩어져 있는 형태로 관찰되었으며, 간 병변은 유의하게 감소된 것으로 확인되었다. 상기와 같은 결과는 발효 레몬 껍질의 상등액이 발효되지 않은 레몬 껍질보다 고지방 식이에 인한 마우스의 지방간에 대한 간 지질 축적을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 시사한다.

마우스 간 조직을 오일 레드 O(도 2b) 및 부고환 지방을 H&E(도 2c)으로 염색하고 관찰하였다. 그 결과, normal 그룹에서 마우스의 부고환 지방 조직이 가장 작고 지방 세포의 크기가 균일하고 깔끔하게 배열됨을 확인할 수 있었다. 반면, control그룹의 지방세포는 유의하게 증가하였고, 크기 또한 증가하였다. 고지방 식이에 의해 유도된 비만 마우스에 LPFS를 투여한 후 부고환 지방세포의 수와 크기는 L-carnitine 그룹과는 유사한 수준으로 나타났고, normal 그룹에 보다 가까웠다. 상기와 같은 결과를 토대로 발효 레몬 껍질의 상등액이 발효되지 않은 레몬 껍질보다 고지방 식이에 인한 마우스의 간에 대한 지질 축적을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 확인하였다. 이와 같은 결과는 상기 실시예 2에서 확인한 발효된 레몬 껍질에 증진되어 있는 성분들의 조합에 의한 것이다.

3-3. 비만 마우스의 혈액 지질 지수 변화 확인

마우스 모델의 비만도 변화를 확인하기 위하여 지질 지수의 수준을 확인하였다. 낮은 HDL-C 수치 또는 높은 TG, TC 및 LDL-C 수치를 가지는 모델은 일반적으로 지질 대사 장애를 나타내기에, 비만 마우스 모델에서 상기 지수를 확인하였다. 그 결과, 도 3에서 보는 바와 같이 normal 그룹의 에서 TG, TC 및 LDL-C 수치가 가장 낮았고 HDL-C 수치는 가장 높았으며 control 그룹에서는 이와 반대되는 경향을 발견하였다. LPFS 및 L-carnitine 식이를 수행한, 비만 마우스에서 높은 총 콜레스테롤, 중성지방 및 LDL-C 의 수치가 유의하게 감소하였고(p <0.05), HDL-C의 수치는 유의하게 증가하였다(p <0.05). 특히 LPFS 그룹과 L-carnitine 그룹의 TC, TG, HDL-C, LDL-C 수치는 normal 그룹과 유사하였다.

3-4. 비만 마우스의 간 기능 지수 변화 확인

마우스 모델의 비만도 변화를 확인하기 위하여 간 손상의 정도를 반영하는 간 기능 지수(ALT, AST, AKP)의 수준을 확인하였다. 그 결과, 도 4에서 보는 바와 같이 normal 그룹의 세럼에서 AST, ALT, AKP 함량은 가장 낮게 나타났다. Control 그룹은 반대의 경향을 보였다. LPFS 및 L-carnitine 처리 후 비만 마우스에서 AST, ALT 및 AKP이 유의한 수준으로 감소하였다(p <0.05). LPFS 및 L-carnitine 그룹의 ALT및 AST 함량은 normal 그룹과 유사한 수준을 나타내는 것을 확인하였다.

3-5. 비만 마우스의 염증 사이토카인 변화 확인

마우스 모델의 비만도 변화를 확인하기 위하여 인슐린 저항성과 관계가 있다고 알려진 염증 사이토카인 수준을 확인하였다. Control 그룹에서는 염증유발인자(TNF-α, IFN-γ, IL-1β, IL-6)의 수준이 가장 높았고, 항염증인자(IL-4, IL-10) 수준이 가장 낮았다. Normal 그룹에서는 반대 경향이 관찰되었다. 나머지 그룹에서 전염증 인자는 control 그룹보다 유의하게 낮았고(p<0.05), 항염증 인자는 control 그룹보다 유의하게 높았다(p<0.05). 비만에 대한 LPFS 및 L-carnitine 그룹의 염증 사이토카인 수준은 normal 그룹에 가깝게 나타났다(그림 5).

상기와 같은 결과를 종합했을 때, 고지방 식이를 통해 비만도가 증가된 마우스 모델에 LPFS를 처리하는 경우, 비만이 개선될 수 있으며, 이러한 개선 효과는 이미 비만 억제효과가 알려진 L-carnitine과 유사한 수준임을 확인하였다.

실시예 4. 레몬 껍질의 발효에 따른 비만 및 염증 관련 유전자 조절 효과 확인

4-1. 비만 마우스의 부고환 지방 조직에서 염증관련 유전자 및 비만 유전자 발현 변화 확인

염증 관련 유전자로서 인슐린 민감성에 영향을 주는 것으로 알려진 IKB-α/NF-κB 경로 관련 인자(IKB-α, NF-κB p65, IL-10, IL-4) 및 TNF 수용체 패밀리의 구성원으로서, 비만 및 당뇨병 환자의 지방세포에 발현이 증가되어 있는 Fas 유전자 mRNA의 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, LPFS 및 L-carnitine 그룹의 경우, 마우스의 부고환 지방 조직에서 상기 IKB-α/NF-κB 경로 관련 인자의 유전자 발현이 normal 그룹에 가까운 수준으로 나타나는 것을 확인하였다. LPFS 그룹과 L-carnitine 그룹의 마우스의 부고환 지방조직에서 IKB-α, IL-10, IL-4의 발현 수준은 LPS 그룹보다 높았으나 NF-κB p65와 Fas의 발현 수준은 더 낮았다. 상기와 같은 결과는 LPFS는 고지방 식이가 마우스 부고환 지방조직에서 염증 및 비만 관련 유전자의 발현에 미치는 영향을 유의하게 억제할 수 있음을 보여준다(p <0.05), 그 효과는 L-carnitine 그룹과 동등한 수준으로 확인된다.

4-2. 비만 마우스의 간 조직에서 염증관련 유전자 및 지방 방울 형성 유전자 발현 변화 확인

IKB-α/NF-κB 경로 관련 인자 및 지질방울 형성과 관련이 있는 CCAAT/증폭자 결합 단백질 알파(CCAAT/enhancer-binding protein alpha, C/EBPα) 및 지질대사 조절인자인 스테롤 조절 인자 결합 단백질 1c(sterol regulatory element-binding protein 1c: SREBP-1c)의 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, normal 그룹은 IKB-α와 IL-4의 mRNA 발현이 가장 높았고, TNF-α, C/EBPα, SREBP-1c의 발현은 가장 낮게 나타났다. 반면, control 그룹은 정반대의 발현 경향을 보였다. LPFS 및 L-carnitine 그룹의 마우스는 control 군에 비해 IKB-α및 IL-4 발현이 유의하게 증가되었고(p<0.05), TNF-α, C/EBPα 및 SREBP-1c 발현은 유의한 수준으로 감소한 것을 확인하였다. LPFS 및 L-carnitine 그룹의 IKB-α/NF-κB 경로 관련 유전자 발현은 LPS 그룹 보다 control 그룹과 유사한 수준의 발현을 보여주었다. 상기와 같은 결과를 통해 LPFS가 간 조직 샘플에서 고지방 식이에 의해 유도된 비만 관련 유전자 mRNA 발현을 조절할 수 있음을 확인하였다.

4-3. 비만 마우스의 간 조직에서 염증관련 유전자 및 식이 조절관련 유전자 발현 변화 확인

식이조절과 관련이 있는 유전자인 렙틴 및 에너지 대사와 관련이 있는 유전자인 PPAR의 패밀리 중, 지방세포 분화과정에서 작용하는 PPAR-γ의 발현 수준을 확인하였다. 그 결과, 도 8a 및 도 8b에 나타낸 바와 같이, control 그룹 마우스의 간 조직에서 IKB-α 및 렙틴 단백질의 발현 수준이 가장 낮았고, 염증 및 비만 관련된 유전자인 NF-κB p65, TNF-α, IL-1β 및 PPAR-γ의 단백질 발현 수준이 가장 높게 나타났다. Normal 그룹의 경우, 발현 수준이 이와 반대의 경향을 보여주었다. LPFS 및 L-carnitine 그룹 마우스의 간 조직 샘플에서 상기 염증 및 비만 관련 유전자의 단백질 발현 수준은 normal 그룹과 유사하게 나타났다. 상기와 같은 결과를 통해 고지방 식이를 통해 비만도가 증가된 마우스 모델에 LPFS를 처리하는 경우, 비만이 개선될 수 있으며, 이는 비만 및 염증과 관련된 유전자의 조절을 통해 이루어질 수 있음을 확인하였다.

Claims

유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 비만은 고지방 식이(High fat diet)에 의해 유발된 것인, 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유산균은 10⁶ 내지 10¹⁰ CFU/mL의 농도로 접종되는 것인, 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유산균은 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)인 것인, 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 발효물은 비발효물보다 클로로겐산(chlorogenic acid), 에리오시트린(eriocitrin), 비텍신(vitexin), 루틴(rutin), 나란진(naringin), 헤스페리딘(hesperidin), 비아칸젤리신(byakangelicin), 옥시퓨세다닌 수화물(oxypeucedanin hydrate) 및 시니디신(cnidicin)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 함량이 증진된 것인, 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 핵인자 카파비 p65(NF-κB p65), Fas(Fas Cell Surface Death Receptor), 종양괴사인자 알파(tumor necrosis factor-α), 인터페론 감마(interferon-γ), 인터루킨-1 베타(interlukin-1β), 인터루킨-6(interlukin-6) CCAAT/증폭자 결합 단백질 알파(CCAAT/enhancer-binding protein alpha) 및 스테롤 조절 인자 결합 단백질 1c(sterol regulatory element-binding protein 1c) 및 퍼옥시좀 증식제 활성화 수용체 감마(peroxisome proliferator-activated receptor-γ)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현을 억제하는 것인, 건강기능식품 조성물.
제1항에 있어서
상기 조성물은 아이카파비 알파(nuclear factor of κ-light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor-alpha), 인터루킨-10(interlukin-10), 인터루킨-4(interlukin-4) 및 렙틴(leptin)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 발현을 증진시키는 것인, 건강기능식품 조성물.
유산균 또는 이의 배양물로 발효시킨 레몬 껍질 발효물을 포함하는, 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물.