KR20230057447A - 글리코실화된 il-2 단백질 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 화학식 (Tag1)y - (Ala)x - SEQ A - SEQ B - SEQ C - (Tag2)z (I)의 IL-2 단백질 서열, 이의 접합체 및 세포 증식 장애의 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것으로, 여기에서 SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고; SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 갖고 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함하고; SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 가지며; Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고; Ala는 알라닌 잔기이고; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이고; z는 0 또는 1이다.
Description
본 발명은 화학식 (Tag1)y - (Ala)x - SEQ A - SEQ B - SEQ C - (Tag2)z (I)의 IL-2 단백질 서열, 이의 접합체 및 세포 증식 장애의 치료에 있어서 이들의 용도에 관한 것으로, 여기에서 SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고; SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 가지며 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함하고; SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 갖고; Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고; Ala는 알라닌 잔기이고; x는 0 또는 1이고; y는 0 또는 1이고; z는 0 또는 1이다.
건강한 인간에서, 면역 시스템은 종종 건강한 세포와 암 세포를 구별할 수 있다. 주어진 세포를 암 세포로서 식별할 때, 면역 시스템은 전형적으로 이를 제거한다. 그러나, 면역 시스템이 예를 들어, 급성 또는 만성 결함으로 인해 손상되거나 과부하가 걸리면, 손상된 면역 시스템이 암 세포를 구별한 후 제거하지 못하기 때문에 암이 발생할 수 있다. 암을 앓고 있는 환자에서, 이 환자에게의 면역조절 단백질의 투여는 암 세포를 제거하는 면역 시스템의 능력이 향상되도록 그 환자의 면역 시스템을 활성화시키는 데 도움이 될 수 있다. 바이러스 감염으로 고통 받는 환자에서, 이 환자에게의 면역조절 단백질의 투여는 바이러스 감염을 제거하는 면역 시스템의 능력이 향상되도록 환자의 면역 시스템을 활성화시키는 데 도움이 될 수 있다. 유사하게, 건강한 환자에서도 백신에 대한 면역 반응은 이러한 면역조절 단백질의 첨가에 의해 향상될 수 있다.
특정 암을 앓고 있는 환자의 치료에 사용되는 이러한 면역조절 단백질 중 하나는 인터류킨-2(IL-2)이다. 인간 IL-2는 153개 아미노산 전구체 폴리펩티드(전장)로서 합성된 후 성숙 IL-2로 프로세싱된다. 성숙 인간 IL-2는 133개의 아미노산으로 구성된 15.5 kDa 4-알파-나선 다발 당단백질이다. IL-2는 면역 이펙터 세포의 생성, 분화, 생존 및 항상성에 있어서 중추적인 역할을 한다. IL-2는 활성화된 CD4+ 헬퍼 T 세포에 의해 합성되며, IL-2는 차등적 수용체 상호작용을 통해 면역 반응을 면역 또는 내성 쪽으로 조절할 수 있다.
IL-2는 IL-2 수용체(IL-2R)에 결합함으로써 작용한다. α-(CD25), β-(CD122) 및 공통 γ-(γc, CD132) 서브유닛의 회합은 삼량체 고친화성 IL-2Rαβγ를 생성한다. 이량체 중간 친화성 IL-2Rβγ는 β-서브유닛 및 γ-서브유닛으로 구성되며 50배 더 낮은 친화성으로 IL-2에 결합한다. IL-2Rα는 IL-2 신호전달에 요구되지 않지만 삼량체 수용체의 고친화성 결합을 부여하는 반면, β-서브유닛 및 γ-서브유닛은 신호 전달도입을 매개한다. IL-2Rβγ는 NK 세포, 단핵구, 대식세포, γδ T 세포, 특히 Vγ9Vδ2 T 세포, 및 휴지기 CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 발현되는 반면, IL-2Rαβγ는 활성화된 T 및 NK 세포에서 일시적으로 유도되고 T 조절 세포 및 제2형 선천성 림프구 세포(ILC2), 호산구 및 내피 세포에서 항시적으로 발현된다. IL-2가 선천성 이펙터 세포 및 적응 이펙터 세포를 증폭하고 활성화시키는 능력은 그의 항-종양 활성의 기반이다.
환자에서, IL-2는 고용량(즉, 인간에서 주기당 14회 용량까지 1일 3회 600000 내지 720000 IU/kg 체중)으로 제공될 때 이펙터 T 및 NK 세포를 비롯한 세포독성 림프구의 증가를 특징으로 하는 항-종양 효능을 자극할 수 있다. 아마도 이 요법 동안 모든 T 세포는 고용량이 투여된 후 IL-2에 의해 자극된다. 그러나, 요법 주기가 끝날 때뿐만 아니라 임의의 개별 용량 후 이후 시점에서도 IL-2 수준은 떨어질 것이다. 결과적으로, IL-2는 제한적이게 될 것이고 IL-2Rαβγ를 발현하는 T 조절(Treg) 세포는 남은 야생형 IL-2에 대해 IL-2Rβγ를 발현하는 이펙터 T 세포를 능가할 것이다.
그러나, IL-2의 항-종양 면역은 심각한 심혈관 부작용, 폐 부작용, 간 부작용, 위장 부작용, 신경학적 부작용 및 혈액학적 부작용에 의해 용량이 제한되므로, 전문화된 센터에서만 환자에게 제공된다. 이 부작용들 중 대다수는 모세관 누출 증후군으로서도 알려져 있는 혈관 누출 증후군(VLS)을 특징으로 한다. VLS를 야기하는 몇 가지 제안된 기작이 있고, 이들 중 대다수는 야생형 IL-2와 IL-2Rαβγ 발현 세포, 예컨대, ILC2, 호산구 및 내피 세포 사이의 상호작용을 수반한다.
항-종양 면역 반응을 상당히 향상시키는 이펙터 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδ T 세포, 특히 Vγ9Vδ2 T 세포 및 NK 세포는 IL-2R의 IL-2Rβγ 형태를 우선적으로 발현한다. 따라서, IL-2Rβγ에 결합하고 IL-2Rβγ에 대한 아고니스트인 화합물의 투여는 (예를 들어, CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδ T 세포, 특히 Vγ9Vδ2 T 세포 및 NK 세포의 증식 및 효과의 활성을 증가시킴으로써) 종양에 대한 면역 반응을 향상시킬 것으로 예상될 수 있다.
따라서, IL-2Rβγ 선택적 아고니스트(IL-2Rα와의 결합이 감소되었거나 전혀 없거나, IL-2Rβγ와의 결합이 향상됨)의 투여는 전신 혈관 누출 부작용, 예컨대, 폐부종, 저혈압 및 호산구증가증을 감소시킴으로써 개선된 치료 윈도우를 제공할 것으로 예상되기 때문에 특정 암을 앓고 있는 환자에게 유익할 것이다.
이러한 편향된 IL-2, 즉 IL-2Rβγ에 우선적으로 결합하는 IL-2 단백질을 합성하는 한 가지 방법은 IL-2와 IL-2Rα 서브유닛의 결합이 차단되도록 입체 장애를 도입하는 것이다. 이것은 예컨대, 국제 특허 출원 공개 제WO2019/185705A1호에 제시된 바와 같이 특정 모이어티를 IL-2 서열의 내생성 또는 돌연변이된 아미노산에 접합시켜 비-IL-2Rα 결합 편향을 매개함으로써 달성될 수 있다. 그러나, 이러한 돌연변이된 또는 편향된 IL-2 단백질을 충분한 수율 및 품질로 제조하는 것은 어려울 수 있으며, 상기 모이어티를 IL-2에 접합시키는 것은 추가 합성 단계를 필요로 하고, 이는 비용을 증가시키고 품질 및 전체 수율에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
따라서, 본 발명의 목적은 상기 언급된 단점을 적어도 부분적으로 극복하는 것이다.
이 목적은 화학식 (I)의 IL-2 단백질 서열로 달성된다:
(Tag1)y - (Ala)x - SEQ A - SEQ B - SEQ C - (Tag2)z (I),
상기 식에서,
SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 갖고 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함하고;
SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 갖고;
Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고;
Ala는 알라닌 잔기이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
z는 0 또는 1이다.
놀랍게도, 이론에 의해 구속되지 않지만, IL-2Rα 결합을 매개하는 IL-2 변이체의 아미노산 서열의 특정 위치에서 글리코실화 모티프를 도입하는 것은 감소된 Treg 활성화 및 지속된 CD8+ T 세포 활성에 의해 입증된 바와 같이 임의의 추가 접합 단계를 필요로 하지 않으면서 효율적인 부위 특이적 글리코실화를 야기하고 효율적인 IL-2Rβγ 결합 편향을 제공한다는 것을 발견하였다.
놀랍게도, 특정 실시양태에서, 글리코실화 모티프를 IL-2Rα 결합 영역에 삽입하는 것은 의도된 부위에서 특히 높은 글리코실화율을 야기하였고, 글리코실화된 IL-2 변이체의 발현은 놀랍게도 글리코실화되지 않은 IL-2 변이체의 발현보다 더 효율적이었다. 더욱이, 이론에 의해 구속되지 않지만, 이 글리코실화는 임의의 추가 모이어티의 접합을 필요로 하지 않으면서 IL-2Rα+ 세포의 활성화를 효과적으로 차단함으로써, 편향된 IL-2의 제조를 더 효율적으로 만든다.
본 발명 내에서 다음과 같은 의미를 가진 용어들이 사용된다.
일반적으로, 용어 "인터류킨-2" 또는 "IL-2"는 림프구 생성, 생존 및 항상성에 있어서 중추적인 역할을 하는 것을 특징으로 하는, 바람직하게는 포유동물 종, 보다 바람직하게는 영장류 종, 가장 바람직하게는 인간으로부터의 모든 IL-2 단백질뿐만 아니라, 이들의 변이체, 유사체, 오르톨로그, 상동체, 및 이들의 유도체와 단편 및 융합 단백질도 지칭하고, IL-2의 천연 생성 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체도 포함한다. 본 발명과 관련하여 용어 "인터류킨-2" 및 "IL-2"는 특히 화학식 (I)의 서열을 가진 단백질을 지칭한다.
인간 전장 IL-2는 하기 서열을 가진다:
성숙 형태의 인간 IL-2는 하기 서열을 가진다:
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "편향된 IL-2"는 IL-2Rα에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 상기 편향된 IL-2의 KD의 비가 IL-2Rα에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD 대 IL-2Rβ에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD의 비보다 더 큰 변형된 IL-2를 지칭한다. 이것은 하기 식으로 기재된다:
상기 식에서,
여기에서 "IL-2Rα에 대한 편향된 IL-2의 KD"는 IL-2Rα에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD이고,
"IL-2Rα에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD"는 IL-2Rα에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD이다.
서열번호 213의 IL-2는 하기 서열을 가진다:
IL-2Rα에 대한 편향된 IL-2의 KD, IL-2Rβ에 대한 편향된 IL-2의 KD, IL-2Rα에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD 및 IL-2Rβ에 대한 서열번호 213의 IL-2의 KD를 측정하는 데 필요한 결합 친화성/동역학은 다음과 같이 비아코어(Biacore) 기기(GE Healthcare)에서 측정된 표면 플라스몬 공명(SPR)을 이용함으로써 평가될 수 있다: 항-인간 Fc 항체로 공유코팅하여 CM5(또는 대안적으로 C1 또는 CM4) 칩 상의 인간 Fc 포획 표면을 제조하거나 대안적으로 단백질 A 칩을 사용한다. 다음으로, IL-2Rβ-Fc 또는 IL-2Rα-Fc를 상기 칩에 고정한다. 친화성/동역학 상수를 측정하기 위해, 예를 들어, IL-2 화합물의 경우 1 nM 내지 2 μM 또는 30 nM 내지 500 nM에서 시작하여 피분석물의 연속 희석물을 만든다. 예를 들어, 2분일 수 있거나 3분일 수 있는 적합한 시간, 예컨대, 1분 내지 30분 동안 피분석물을 수용체 변형 칩에 각각 노출시킨 후, 예를 들어, 10분일 수 있는 적절한 시간, 예컨대, 2분 내지 60분 동안 세척한다. 연속 희석물들로부터 얻은 결합 곡선을 1:1 동역학 모델에 피팅하여, 관찰된 반응 유닛(R)을 결합 및 해리 속도 상수인 ka 및 kd와 상호연관시킨다:
상기 식에서,
t는 시간이고;
C는 피분석물의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 용량이다.
동역학 1:1 모델을 통해 측정된 경우, 해리 속도와 결합 속도의 비는 평형 해리 상수 KD를 제공한다.
대안적으로, 연속 희석물로부터 얻은 결합 곡선을, 피분석물 농도(C)에 대한 정상 상태 결합 수준(Req)의 플롯으로부터 1:1 상호작용에 대한 KD를 계산하는 1:1 정상 상태 상호작용 모델에 피팅한다.
상기 식에서,
Req는 정상 상태 결합 수준이고;
C는 피분석물의 농도이고;
Rmax는 표면의 최대 결합 용량이다.
모든 편향된 IL-2 분자에 대해 모든 계산 방법이 가능한 것은 아님을 이해해야 한다. 예를 들어, 반응이 너무 빠른 경우, 1:1 동역학 모델을 사용할 수 없고 1:1 정상 상태 상호작용 모델을 사용할 수 있다. 예를 들어, 평형이 얻어지지 않는 경우, 1:1 상호작용 모델을 사용할 수 없고 1:1 동역학 모델을 사용할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단백질생성 아미노산"은 알라닌(Ala, A), 아르기닌(Arg, R), 아스파라긴(Asn, N), 아스파르트산(Asp, D), 시스테인(Cys, C), 글루탐산(Glu, E), 글루타민(Gln, Q), 글리신(Gly, G), 히스티딘(His, H), 이소류신(Ile, I), 류신(Leu, L), 라이신(Lys, K), 메티오닌(Met, M), 페닐알라닌(Phe, F), 프롤린(Pro, P), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 트립토판(Trp, W), 티로신(Tyr, Y) 및 발린(Val, V)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 의미한다. 각각의 3 문자 코드 및 1 문자 코드는 괄호 안에 제공된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "비-단백질생성 아미노산"은 각각의 단백질생성 아미노산의 D-입체이성질체, 피롤라이신(Pyl, O), 셀레노시스테인(Sec, U), 2-아미노아디프산(ad), 3-아미노아디프산(bAad), 베타-알라닌(bAla), 2-아미노부티르산(Abu), 4-아미노부티르산(4Abu), 6-아미노카프로산(Acp), 2-아미노헵탄산(Ahe), 2-아미노이소부티르산(Aib), 3-아미노이소부티르산(bAib), 2-아미노피멜산(Apm), 2,4-디아미노부티르산(Dbu), 데스모신(Des), 2,2'-디아미노피멜산(Dpm), 2,3-디아미노프로피온산(Dpr), N-에틸글리신(EtGly), N-에틸아스파라긴(EtAsn), 하이드록시라이신(Hyl), 알로-하이드록시라이신(aHyl), 3-하이드록시프롤린(3Hyp), 4-하이드록시프롤린(4Hyp), 이소데스모신(Ide), 알로-이소류신(alle), N-메틸글리신(MeGly), N-메틸이소류신(Melle), 6-N-메틸라이신(MeLys), N-메틸발린(MeVal), 노르발린(Nva), 노르류신(Nle) 및 오르니틴(Orn)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 의미한다. 각각의 약어는 괄호 안에 제공된다.
아미노산 서열과 관련하여 단일 문자는 화학 원자가 아니라 아미노산의 1 문자 코드를 의미하는 것으로 이해된다.
SEQ A, SEQ B, SEQ C 또는 SEQ D와 같은 서열에서 하나 이상의 아미노산의 결실 또는 삽입은 이러한 서열 내의 특정 아미노산의 수, 즉 위치를 변경할 수 있고, 이러한 경우 상응하는, 즉 상동 아미노산 위치가 포함되는 것으로 이해된다. 이것은 "또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서"라는 문구로 표시될 수 있지만, 이러한 상응하는 위치는 이 문구가 없는 경우에도 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩티드/단백질 서열과 관련하여 용어 "동일한" 및 퍼센트 "동일성"은 서열 비교 알고리즘을 이용하여 측정된 경우 최대 상응에 대해 비교되고 정렬될 때, 동일하거나 특정된 퍼센트의 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기를 가진 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 의미한다. 퍼센트 서열 동일성을 측정하는 데 적합한 이러한 알고리즘의 일례는 BLAST 알고리즘이다(Altschul et al., J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990); Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 10915 (1989); Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873 5787 (1993)). BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 생물공학 정보 센터를 통해 공개적으로 입수될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "글리코실화"는 탄수화물, 특히 글리칸이 아미노산의 작용기에 부착되는 번역 후 단백질 변형을 지칭한다. 글리코실화는 탄수화물이 아스파라긴 또는 아르기닌 측쇄의 질소(N-글리코실화); 세린, 트레오닌, 티로신, 하이드록시라이신 또는 하이드록시프롤린 측쇄의 하이드록실 산소(O-글리코실화); 포스포세린의 포스페이트(포스포글리코실화); 또는 트립토판 측쇄의 탄소(C-글리코실화)에 부착하는 것을 포함한다. O-연결 글리칸은 예를 들어, N1(NeuAc(a2-3)Gal(b1-3)GalNAc-ol) 또는 N2(NeuAc(a2-3)Gal(b1-3)(NeuAc(a2-6)GalNAc-ol)일 수 있고, 여기에서 NeuAc는 N-아세틸뉴라민산(시알산)이고, Gal은 갈락토스이고 GalNAc-ol은 아세틸갈락토사미니톨이다. N-연결 글리칸은 트리만노실 코어(Man3)에 의해 더 연장되는 파우시만노스(paucimannose) 글리칸(Man3GlcNAc2)일 수 있고, 여기에서 2개의 가장 안쪽 당 잔기는 N-아세틸글루코사민(GlcNAc)이다. 이것은 예를 들어, 바이안테나형(biantennary) G0 글리칸(GlcNAc2Man3GlcNAc2)일 수 있으며, 여기에서 파우시만노스는 트리만노실 코어의 2개의 외부 만노스 각각에서 하나씩 2개의 GlcNAc 잔기에 결합되어, 바이안테나형 구조를 생성한다. 이러한 바이안테나형 당형태(glycoform)는 가장 안쪽 GlcNAc 잔기에 부착된 푸코스(Fuc) 잔기를 포함하는 다양한 추가 당, 및 GlcNAc, Gal 및 NeuAc 잔기를 포함하는 분지에 의해 더 장식될 수 있다. 예를 들어, N-연결 글리칸은 G0 구조에 비해 1개의 추가 갈락토스 및 1개의 추가 시알산 잔기를 가진 G1 글리칸(NeuAcGalGlcNAc2Man3GlcNAc2)일 수 있거나, G0 구조에 비해 2개의 추가 갈락토스 및 2개의 추가 시알산 잔기를 포함하는 G2 글리칸(NeuAc2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2)일 수 있다. 더욱이, G0, G1 및 G2 글리칸은 가장 안쪽 GlcNAc 잔기에서 푸코실화되어 G0F(GlcNAc2Man3GlcNAc2Fuc), G1F(NeuAcGalGlcNAc2Man3GlcNAc2Fuc) 및 G2F(NeuAc2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2Fuc) 글리칸을 생성할 수 있다. 앞서 설명된 글리칸은 트리만노실 코어에 부착된 추가 GlcNAc 잔기에 의해 장식되어, G0B(GlcNAc3Man3GlcNAc2), G1B(NeuAcGalGlcNAc3Man3GlcNAc2) 및 G2B(NeuAc2Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2) 글리칸을 생성할 수도 있다. 푸코실화와 트리만노실 코어에서의 추가 GlcNAc 부착은 조합되어, G0BF(GlcNAc3Man3GlcNAc2Fuc), G1BF(NeuAcGalGlcNAc3Man3GlcNAc2Fuc) 및 G2BF(NeuAc2Gal2GlcNAc3Man3GlcNAc2Fuc) 글리칸을 생성할 수도 있다. N-연결 글리칸은 또한 GlcNAc 글리코실트랜스퍼라제인 GNTIV 및 GNTV의 작용을 통해 추가 GlcNAc 잔기를 바이안테나형 G0 글리칸에 전달함으로써 형성된 테트라안테나형 글리칸일 수 있다. N-연결 글리칸은 GlcNAc-Gal 연장(LacNAc)에 의해 변형된 바이안테나형 또는 테트라안테나형 파우시만노스 글리칸일 수도 있다. N-연결 글리칸은 또한 GlcNAc-Gal 연장(LacNAc)에 의해 변형되고 Gal 잔기 및 하나 또는 여러 개의 NeuAc 잔기에 추가로 커플링된 바이안테나형 또는 테트라안테나형 파우시만노스 글리칸일 수 있다. N-연결 글리칸의 추가 예는 본원에 참고로 포함되는 문헌["Antibody glycoengineering strategies in mammalian cells", Wang et al., Biotechnology and Bioengineering, 2018 Jun;115(6):1378-1393] 및 문헌["SnapShot: N-Glycosylation Processing Pathways across Kingdoms", Chung et al., Cell, 2017 Sep 21;171(1):258-258.e1]에서 발견될 수 있다. N-글리코실화된 단백질은 종종 하나의 특정 N-글리칸으로 균질하게 글리코실화되기보다는 N-글리칸의 혼합물을 포함한다. 이것은 종종 특정 부위에서 글리칸 구조적 변화와 관련될 때 미세불균질성으로서 지칭되고, 글리코실화 부위 및 부위 점유의 가변성과 관련될 때 거대불균질성으로서 지칭된다. N-글리코실화의 불균질성 정도는 단백질 및 발현 숙주에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, IgG1 항체의 Fc 도메인 내의 N-글리코실화 부위는 인간 및 포유동물 발현 시스템에서 주로 G0F, G1F 및 G2F 글리칸에 의해 점유되지만, CHO 세포에서 생성된 재조합 치료 항체는 전형적으로 비 G0F>G1F>>G2F로 G0F, G1F 및 G2F 글리칸을 포함할 수 있고, 마우스 골수종 SP2/0 세포에서 생성된 재조합 항체는 비 G1F≥G0F>>G2F로 글리칸을 포함할 수 있다. N-연결 또는 O-연결 글리칸의 제거는 효소 또는 화학적 처리에 의해 달성될 수 있다. 펩티드-N-글리코시다제 F(PNgaseF) 처리에 의한 N-연결 글리칸의 제거는 아르기닌(N)이 아스파르트산(D)으로 바뀌는 아미노산 변화를 야기하고, 이로써, 예를 들어, 서열 FGNST(서열번호 307)의 글리코실화 모티프는 FGDST(서열번호 368)로 변환된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "부위 점유"는 특정 글리코실화 모티프에서 발견되는 글리코실화의 퍼센트를 의미한다. "적어도 X% 부위 점유"라는 어구는 다수의 IL-2 분자 또는 모이어티가 예컨대, 제제 또는 약학 조성물에 존재하고 이들 중 모든 IL-2 분자 또는 모이어티의 X%가 특정 부위에서 글리코실화되어 있음을 의미하고 개별 분자 또는 모이어티를 지칭하지 않는 것으로 이해된다. 당단백질의 N-글리칸 구조 및 부위 점유는 중요한 성질, 예컨대, 수용체 결합 친화성, 안정성, 용해도, 항원성, 제거율 및 반감기에 영향을 미칠 수 있다. 따라서, 일반적으로 재조합 당단백질 제조 공정의 경우 재현 가능하고 균질하게 글리코실화된 생성물을 수득하는 것이 중요하다. 따라서, 생성물이 생산 숙주 세포에 의해 완전히 N-글리코실화된 형태(전체 부위 점유)로 생성되는 경우가 유리하다. "완전히 글리코실화"되기 위해서는 모든 단백질의 적어도 90%, 예컨대, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%가 특정 부위에서 글리코실화된다. 다운스트림 정제 공정 동안 N-글리코실화를 결여하는 형태로부터 N-글리코실화된 형태를 분리할 수 있으나, 출발 물질이 불균질한 경우 전체 공정 비용에 큰 영향을 미치는 더 복잡해진 공정 및 정제된 화합물의 더 낮은 회수율이 예상될 수 있다. 또한, 출발 물질이 N-글리코실화를 결여하는 변이체를 큰 비율로 함유하는 경우 고순도의 N-글리코실화된 형태를 수득하는 것은 어려울 수 있거나 심지어 불가능할 수 있다. 이것은 글리코실화되지 않은 형태가 원하지 않는 성질을 가진 경우 특히 유의미하다. 예를 들어, 편향된 N-글리코실화된 IL-2 단백질의 경우, N-글리칸을 갖지 않는 형태의 존재는 이 IL-2 형태가 IL-2Rα를 활성화시키는 데 있어서 N-글리코실화된 형태보다 더 높은 잔류 효능을 가질 것이기 때문에 매우 바람직하지 않다.
본원에서 사용된 바와 같이, 표현 "-X 위치에 있는 아미노산" 또는 "+X 위치에 있는 아미노산"(여기에서 X는 정수임)은 단백질 또는 펩티드 서열에서 특정된 아미노산에 대한 아미노산의 상대적 위치를 의미하므로, -X 위치에 있는 아미노산은 특정된 아미노산에 대해 X의 거리에서 N-말단에 위치한 아미노산이고 +X 위치에 있는 아미노산은 특정된 아미노산에 대해 X의 거리에서 C-말단에 위치한 아미노산이다. 예를 들어, 펩티드 서열 "ALMGR"(서열번호 253)에서, A는 M의 -2 위치에 있는 아미노산이고, L은 M의 -1 위치에 있는 아미노산이고, G는 M의 +1 위치에 있는 아미노산이고, R은 M의 +2 위치에 있는 아미노산이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "글리코실화 모티프"는 단백질의 부위 특이적 글리코실화를 유도하는 아미노산 서열을 지칭한다. 글리코실화 모티프는 N-글리코실화 모티프, O-글리코실화 모티프, 포스포글리코실화 모티프, 또는 C-글리코실화 모티프일 수 있다. N-글리코실화 모티프는 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산을 포함할 수 있다. O-글리코실화 모티프는 1개 또는 2개의 아미노산을 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "N-글리코실화 부위"는 N-글리코실화 모티프의 아스파라긴(N)이 위치하는 아미노산 서열의 위치를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화성"은 분자(예컨대, 수용체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너(예컨대, 리간드) 사이의 비공유 상호작용의 총 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에서 사용된 바와 같이, "친화성"은 결합 쌍의 구성원들 사이(예를 들어, 수용체와 리간드 사이)의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 평형 상태에서 측정된 해리 속도 상수 및 결합 속도 상수(각각 kd 및 ka)의 비인 평형 해리 상수(KD)로 표시될 수 있다. 따라서, 동등한 친화성은, 속도 상수의 비가 동일하게 유지되는 한, 상이한 속도 상수를 포함할 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 방법을 포함하는, 당분야에서 알려져 있는 잘 확립된 방법에 의해 측정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 α-서브유닛" 및 "IL-2Rα"는 인간 CD25를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 β-서브유닛" 및 "IL-2Rβ"는 인간 CD122를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-2 수용체의 γ-서브유닛" 및 "IL-2Rγ"는 인간 CD132를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "패턴 인식 수용체 아고니스트"("PRRA")는 병원체 관련 분자 패턴(PAMP) 또는 손상 관련 분자 패턴(DAMP)을 인식하는 하나 이상의 면역 세포 관련 수용체에 결합하고 이를 활성화시켜, 면역 세포 활성화 및/또는 병원체 또는 손상 유도 염증성 반응을 유발하는 분자를 지칭한다. 패턴 인식 수용체는 전형적으로 선천성 면역 시스템의 세포, 예컨대, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포(DC), 호중구 및 상피 세포에 의해 발현될 뿐만 아니라, 적응 면역 시스템의 세포에 의해서도 발현된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성제" 및 "화학요법제"는 동의어로 사용되며 세포에 대한 독성을 나타내고 세포 복제 또는 생장을 방해하여, 세포 파괴/사멸을 유발하는 화합물을 지칭한다. 세포독성제의 예는 화학요법제 및 독소, 예컨대, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소뿐만 아니라 이의 합성 유사체 및 유도체도 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역 체크포인트 억제제" 및 "면역 체크포인트 길항제"는 동의어로 사용되며, 수용체 활성화 시 염증성 면역 세포 기능을 억제하는, 세포막에서 발현된 수용체를 통해 신호전달을 유도하는 리간드의 기능을 방해하거나 이 리간드의 결합을 억제하는 화합물을 지칭한다. 이러한 화합물은 예를 들어, 생물제제, 예컨대, 항체, 항체 단편, 아피바디(affibody), 아필린(affilin), 아피머(affimer), 아피틴(affitin), 알파맙(alphamab), 알파바디(alphabody), 안티칼린(anticalin), 아비머(avimer), DARPin, 파이노머(Fynomer)®, 쿠니츠(Kunitz) 도메인 펩티드, 모노바디(monobody), nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체 또는 나노바디(Nanobody)®, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 이 수용체들 또는 소분자 억제제들에 대한 천연 또는 변형된 리간드 또는 결합 파트너일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역 활성화 아고니스트"는 세포막에서 발현된 체크포인트 수용체를 직접적으로 또는 간접적으로 활성화시키는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역 활성화 수용체 아고니스트"는 활성화 또는 보조자극 수용체 활성화 시 면역 세포 기능을 자극하는 화합물을 지칭한다. 이러한 자극 수용체의 예는 CD3 서브유닛 CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ(CD247), T 세포 수용체(TCR) 서브유닛 TCRα, TCRβ, TCRγ 및 TCRδ, B 세포 수용체(BCR) 쇄 또는 신호전달 유닛 CD79a 또는 CD79b, CD2, CD4, CD8, CD16, CD32a, CD64, CD27, CD28, CD134(OX40), CD137(41BB), CD244(2B4), CD278(ICOS), CD357(GITR), CRACC(CS1), LFA-1, NKG2D, NKG2C, NKp30, NKp46, NKp44, NKp80, NTB-A, 활성화 짧은 형태 KIR(KIR2DS1, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1), CD40, SIRP-β, 덱틴(Dectin)-1, 덱틴-2, TREM1, TREM2, ILT1, ILT6, ILT7, ILT8, LIR-6, MDL1, 및 면역티로신 수용체 기반 활성화 모티프(ITAM)를 이용하거나 PI3K, JAK/STAT, MyD88, IRF, NFKB 또는 JNK/AP1 경로를 통해 신호전달을 유도하는 다른 면역 수용체를 포함한다. 많은 다중특이적 약물들은 면역 활성화 수용체 아고니스트의 유형이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "다중특이적" 및 "다중특이적 약물"은 2개 이상의 상이한 항원에 동시에 결합하고 표적 의존적 방식으로 길항 활성, 아고니스트 활성 또는 특이적 항원 결합 활성을 매개할 수 있는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체-약물 접합체"(ADC)는 전형적으로 생물학적 활성 세포독성 페이로드, 방사선요법, 또는 세포독성제를 종양 환경으로 전달하도록 설계된 다른 약물에 연결된 항체로 구성된 화합물을 지칭한다. ADC는 유의미한 전신 독성 없이 종양 존재량을 감소시키는 데 특히 효과적이며 체크포인트 억제제 항체에 의해 유도된 면역 반응의 효과를 개선하도록 작용할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체-보강제(adjuvant) 접합체"(AAC)는 직접적으로 또는 링커를 통해 생물학적 활성 보조제에 연결된 항체로 구성된 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "보강제"는 항원에 대한 신체의 면역 반응을 향상시키는 물질을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "볼트바디(boltbody)"는 (a) (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 모이어티, (b) 보강제 모이어티, 및 (c) 에틸렌 글리콜 기 또는 글리신 잔기를 포함하는 링커를 포함하는 항체-보강제 접합체를 지칭하고, 여기에서 각각의 보강제 모이어티는 절단될 수 있거나 절단될 수 없는 링커를 통해 항체 모이어티에 공유결합된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "방사성핵종"은 세포 파괴/사멸로 이어지는 이온화 방사선을 방출하는 방사성 동위원소를 지칭한다. 종양 표적화 담체에 접합된 방사성핵종은 "표적화 방사성핵종 치료제"로서 지칭된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "DNA 손상 복구 억제제"는 DNA 손상 복구 요소, 예컨대, CHK1, CHK2, ATM, ATR 및 PARP를 표적화하는 약물을 지칭한다. 특정 암은 기존 돌연변이 또는 경로 변경으로 인해 이러한 경로의 표적화에 더 민감하고, 예컨대, BRCA1 돌연변이된 환자 또는 상동 재조합 경로 결핍 환자는 합성 치사의 개념으로 인해 PARP 억제제에 더 민감하다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "종양 대사 억제제"는 면역 세포 기능을 억제할 수 있는 대사 중간체를 생성하는, 종양 환경에서 발현된 하나 이상의 효소의 기능을 방해하는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단백질 키나제 억제제"는 하나 이상의 단백질 키나제의 활성을 억제하는 화합물을 지칭한다. 단백질 키나제는 단백질을 인산화하여 단백질 기능을 조절할 수 있는 효소이다. 단백질 키나제 억제제는 하나 초과의 키나제를 표적화할 수 있고 본원에서 사용된 단백질 키나제 억제제에 대한 임의의 분류는 주요 표적 또는 가장 특징규명된 표적을 지칭하는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "케모카인 수용체 및 화학유인제 수용체 아고니스트"는 매우 다양한 세포에서 발현되고 주로 세포 이동성(화학주성 또는 화학운동성)의 제어에 관여하는 케모카인 또는 화학유인제 수용체, G-단백질 커플링 수용체의 서브세트 또는 G-단백질 커플링 유사 수용체를 활성화시키는 화합물을 지칭한다. 이 수용체들은 비-세포 이동 과정, 예컨대, 혈관신생, 세포 성숙 또는 염증에도 참여할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "사이토카인 수용체 아고니스트"는 면역 세포 활성화 및 증식을 제어하는 가용성 단백질을 지칭한다. 사이토카인은 예를 들어, 인터페론, 인터류킨, 림포카인 및 종양 괴사 인자를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "사멸 수용체 아고니스트"는 하나 이상의 사멸 수용체, 예컨대, DR4(TRAIL-R1) 또는 DR5(TRAIL-R2)를 통해 전구아폽토시스 신호전달을 유도할 수 있는 분자를 지칭한다. 사멸 수용체 아고니스트는 항체, 사멸 리간드, 사이토카인, 사멸 수용체 아고니스트 발현 벡터, 펩티드, 소분자 아고니스트, 사멸 수용체 아고니스트를 발현하는 세포(예를 들어, 줄기 세포), 및 사멸 리간드의 발현을 유도하는 약물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 MHC 클래스 II 분자를 통해 프로세싱된 항원성 펩티드를 CD4 T 세포의 T 세포 수용체에 제시하는 세포, 예컨대, 대식세포, B 세포 또는 수지상 세포를 지칭한다. APC는 유세포분석과 같은 표현형 기법을 이용함으로써 당분야에서 숙련된 자에 의해 식별될 수 있다. APC를 식별하는 데 사용되는 표현형 마커는 종 및 조직에 따라 다르지만, 골수 또는 수지상 세포 표면 마커(예를 들어, CD11b, CD11c, CD14, CD16, CD33, CD34, CD68, CD206, MHC-II, CD163, Ly6C, Ly6G, GR-1, F4/80, TREM1, TREM2) 또는 B 세포 표면 마커(예를 들어, CD19, CD20, B220)를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "MHCII"는 일반적으로 항원 제시 세포, 예컨대, 골수 세포, 수지상 세포 및 B 세포에서만 발견되는 주조직적합성 복합체(MHC) 분자의 한 부류를 지칭한다. MHCII는 프로세싱된 항원성 펩티드를 CD4 T 세포의 T 세포 수용체에 제시한다. MHCII 발현은 유세포분석과 같은 단백질 발현 프로파일링 기법을 이용함으로써 당분야에서 숙련된 자에 의해 측정될 수 있다. MHCII 발현의 변화는 관심 있는 특정 세포 서브세트에서 MHCII의 중간 형광 강도 신호, 또는 MHCII에 대해 양성을 나타내는 세포의 퍼센트의 변화를 분석함으로써 확인될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "T 세포"는 적응 면역 반응에서 중추적인 역할을 하는 면역 세포의 한 유형을 지칭한다. T 세포는 αβ 또는 γδ T 세포 수용체(TCR)가 그의 세포 표면에 존재한다는 점에 의해 다른 면역 세포와 구별된다. T 세포는 TCR 신호전달에 중요한 단백질 복합체인 CD3도 발현한다. αβ T 세포는 CD4, CD8 또는 CD4/CD8 이중 음성 서브세트로 나누어질 수 있다. CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 CD4 및 CD8의 높은 표면 밀도로 인해, 종종 CD4 및 CD8만을 사용하여 각각 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 식별할 수 있다. γδ T 세포는 γ 쇄 및 δ 쇄로 구성된 TCR을 갖추고 있으며, 이 TCR은 αβ TCR처럼 항원 인식 및 세포 활성화에 있어서 중추적인 역할을 한다. 이 TCR은 또한 γδ T 세포의 상이한 서브세트인 Vδ1과 Vδ2를 구별하는 데 사용된다. Vδ1 T 세포는 소수(<5%)이며, 소염 기능 및 전구염증 기능 둘 다를 가진 γδ T 세포의 불균질한 집단이다. Vδ2 T 세포는 순환계에서 γδ T 세포의 약 95%를 차지하는 Vγ9Vδ2(Vδ2) T 세포의 상대적으로 균질한 단일 T 세포 집단이다. Vδ2 T 세포는 그의 TCR 및 추가 선천성 면역 수용체의 고유한 성질로 인해 면역요법에 활용될 수 있는 강력한 항-종양 성질을 부여받는다. MHC 분자에 의해 제시된 동족 항원의 TCR 인식을 통한 활성화 후, T 세포는 성숙하고 분열하여 이펙터 또는 기억 T 세포를 생성할 수 있다. 기억 T 세포는 그의 동족 항원과 이전에 만나고 이 동족 항원에 반응한 T 세포의 서브세트이다. 이러한 T 세포는 암 관련 항원뿐만 아니라 박테리아 또는 바이러스로부터 유래한 항원과 같은 병원성 항원도 인식할 수 있다. T 세포는 유세포분석과 같은 표현형 기법을 이용함으로써 당분야에서 숙련된 자에 의해 식별될 수 있다. T 세포를 식별하는 데 사용되는 표현형 마커는 일반적으로 포유동물에서 보존되어 있고 CD3, TCRα, TCRβ, TCRδ, CD4 및 CD8을 포함한다. 기억 T 세포를 식별하는 데 사용되는 표현형 마커는 종 및 조직에 따라 다를 수 있지만, CD45RO, LY6C, CD44 및 CD95와 같은 세포 표면 마커를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 표현 "세포 요법"은 질환의 치료를 위해 변형된 인간 세포를 환자에 주입하거나 이식하는 것을 의미한다. 세포의 기원은 환자(자가) 또는 건강한 기증자(동종이계)일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 제1 모이어티와 제2 모이어티의 부착과 관련하여 용어 "가역적", "가역적으로", "분해 가능한" 또는 "분해 가능하게"는 상기 제1 모이어티와 제2 모이어티를 연결하는 결합이 1시간 내지 3개월, 예컨대, 1시간 내지 2개월, 3시간 내지 1개월, 6시간 내지 28일, 12시간 내지 21일, 24시간 내지 14일, 또는 48시간 내지 7일의 반감기를 가지면서 pH 7.4 및 37℃의 수성 완충제인 생리학적 조건 하에서 절단될 수 있음을 의미한다. 절단은 효소적 또는 비-효소적 절단일 수 있으며 특정 실시양태에서 비-효소적 절단이다. 따라서, 제1 모이어티와 제2 모이어티의 부착과 관련하여 용어 "안정한" 또는 "영구적인"은 상기 제1 모이어티와 제2 모이어티를 연결하는 결합이 생리학적 조건 하에서 3개월 초과의 반감기를 가지면서 절단될 수 있음을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "시약"은 또 다른 화학적 화합물 또는 약물의 작용기와 반응하기 위한 적어도 하나의 작용기를 포함하는 화학적 화합물을 의미한다. 작용기(예컨대, 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실 작용기)를 포함하는 약물도 시약인 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "모이어티"는 상응하는 시약에 비해 하나 이상의 원자(들)를 결여하는, 분자의 일부를 의미한다. 예를 들어, 화학식 "H-X-H"의 시약이 또 다른 시약과 반응하여 반응 생성물의 일부가 되는 경우, 반응 생성물의 상응하는 모이어티는 구조 "H-X-" 또는 "-X-"를 가진 반면, 각각의 "-"는 또 다른 모이어티에의 부착을 표시한다. 따라서, 약물 모이어티는 약물로서 가역적 결합으로부터 방출된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "태그 모이어티"는 IL-2 단백질에 번역적으로 융합되는 펩티드 또는 단백질 서열을 지칭한다. 이것은 예를 들어, IL-2 단백질의 안정화 또는 반감기 연장과 같은 다양한 기능을 수행할 수 있거나("안정화 태그"), IL-2 단백질의 정제를 보조할 수 있거나("정제 태그"), IL-2 단백질을 특정 세포 유형 또는 조직 쪽으로 표적화할 수 있다("표적화 태그").
달리 명확히 언급되지 않는 한, 2개의 모이어티에 부착되거나 모이어티를 중단시키는 원자 군의 순서 또는 화학 구조가 제공되는 경우, 상기 순서 또는 화학 구조는 어느 배향으로든 2개의 모이어티에 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 모이어티 "-C(O)N(R1)-"는 "-C(O)N(R1)-" 또는 "-N(R1)C(O)-"로서 2개의 모이어티에 부착될 수 있거나 모이어티를 중단시킬 수 있다. 유사하게, 모이어티 
는 
또는 
로서 2개의 모이어티에 부착될 수 있거나 모이어티를 중단시킬 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "치환된"은 분자 또는 모이어티의 하나 이상의 -H 원자(들)가 "치환기"로서 지칭되는 상이한 원자 또는 원자 군으로 대체됨을 의미한다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 6개 이하의 -H 원자가 치환된다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 5개 이하의 -H 원자가 치환된다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 4개 이하의 -H 원자가 치환된다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 3개 이하의 -H 원자가 치환된다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 2개 이하의 -H 원자가 치환된다. 특정 실시양태에서, 모이어티 또는 분자의 1개의 -H 원자가 치환된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치환기"는 특정 실시양태에서 할로겐, -CN, -COORx1, -ORx1, -C(O)Rx1, -C(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2N(Rx1Rx1a), -S(O)N(Rx1Rx1a), -S(O)2Rx1, -S(O)Rx1, -N(Rx1)S(O)2N(Rx1aRx1b), -SRx1, -N(Rx1Rx1a), -NO2, -OC(O)Rx1, -N(Rx1)C(O)Rx1a, -N(Rx1)S(O)2Rx1a, -N(Rx1)S(O)Rx1a, -N(Rx1)C(O)ORx1a, -N(Rx1)C(O)N(Rx1aRx1b), -OC(O)N(Rx1Rx1a), -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 지칭하고; 여기에서 -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)- 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
-Rx1, -Rx1a 및 -Rx1b는 -H, -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 -T0, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T0-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Rx3)-, -S(O)2N(Rx3)-, -S(O)N(Rx3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Rx3)S(O)2N(Rx3a)-, -S-, -N(Rx3)-, -OC(ORx3)(Rx3a)-, -N(Rx3)C(O)N(Rx3a)- 및 -OC(O)N(Rx3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T0는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 및 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 각각의 T0는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Rx2로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORx4, -ORx4, -C(O)Rx4, -C(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2N(Rx4Rx4a), -S(O)N(Rx4Rx4a), -S(O)2Rx4, -S(O)Rx4, -N(Rx4)S(O)2N(Rx4aRx4b), -SRx4, -N(Rx4Rx4a), -NO2, -OC(O)Rx4, -N(Rx4)C(O)Rx4a, -N(Rx4)S(O)2Rx4a, -N(Rx4)S(O)Rx4a, -N(Rx4)C(O)ORx4a, -N(Rx4)C(O)N(Rx4aRx4b), -OC(O)N(Rx4Rx4a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Rx3, -Rx3a, -Rx4, -Rx4a 및 -Rx4b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 임의로 치환된 분자의 최대 6개의 -H 원자가 치환기로 독립적으로 대체되거나, 예를 들어, 5개의 -H 원자가 치환기로 독립적으로 대체되거나, 4개의 -H 원자가 치환기로 독립적으로 대체되거나, 3개의 -H 원자가 치환기로 독립적으로 대체되거나, 2개의 -H 원자가 치환기로 독립적으로 대체되거나, 1개의 -H 원자가 치환기로 대체된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "지방산"은 4개 내지 28개의 탄소 원자를 포함할 수 있는, 지방족 꼬리를 가진 포화 또는 불포화 모노카복실산을 지칭한다. 지방산은 포화 또는 불포화, 선형 또는 분지형 지방산일 수 있다. 용어 "지방산 변이체"는 특정 탄소 원자가 다른 원자 또는 원자 군으로 대체될 수 있고 치환될 수 있는 변형된 지방산을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "펩티드"는 펩티드(아미드) 결합에 의해 연결된 적어도 2개 내지 최대 50개의 아미노산 단량체 모이어티의 쇄를 지칭한다. 용어 "펩티드"는 펩티드모방체, 예컨대, D-펩티드, 펩토이드 또는 베타-펩티드도 포함하고, 최대 50개의 단량체 모이어티를 가진 이러한 펩티드모방체 쇄를 커버한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단백질"은 펩티드 결합에 의해 연결된, "아미노산 잔기"로서도 지칭될 수 있는 50개 초과의 아미노산 단량체 모이어티의 쇄를 지칭하며, 여기에서 특정 실시양태에서 12000개 이하의 아미노산 단량체, 예컨대, 10000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티, 8000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티, 5000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티 또는 2000개 이하의 아미노산 단량체 모이어티가 펩티드 결합에 의해 연결된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 숫자 값과 조합된 용어 "약"은 숫자 값 플러스 및 마이너스 상기 숫자 값의 25% 이하, 특정 실시양태에서 플러스 및 마이너스 상기 숫자 값의 20% 이하, 및 특정 실시양태에서 플러스 및 마이너스 상기 숫자 값의 10% 이하를 포함하는 범위를 표시하는 데 사용된다. 예를 들어, 어구 "약 200"은 200 +/- 25%를 포함하는, 즉 150 내지 250; 특정 실시양태에서 200 +/- 20%, 즉 160 내지 240을 포함하는; 특정 실시양태에서 200 +/- 10%을 포함하는, 즉 180 내지 220을 포함하는 범위를 의미하는 데 사용된다. "약 50%"로서 주어진 퍼센트는 "50% +/- 25%", 즉 25% 내지 75%를 포함하는 범위를 의미하지 않고, "약 50%"는 37.5% 내지 62.5%, 즉 50인 숫자 값의 플러스 및 마이너스 25%를 포함하는 범위를 의미하는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "중합체"는 선형, 원형, 분지형, 가교결합 또는 덴드리머 방식 또는 이들의 조합으로 화학 결합에 의해 연결된 반복 구조 유닛, 즉 단량체를 포함하는 분자를 의미하고, 이것은 합성 또는 생물학적 기원의 분자, 또는 이들 둘의 조합일 수 있다. 중합체는 하나 이상의 다른 화학적 기(들) 및/또는 모이어티/모이어티들, 예를 들어, 하나 이상의 작용기(들)도 포함할 수 있는 것으로 이해된다. 마찬가지로, 개별 아미노산 잔기의 측쇄가 상이할 수 있음에도 불구하고, 펩티드 또는 단백질도 중합체인 것으로 이해된다. 특정 실시양태에서, 가용성 중합체는 적어도 0.5 kDa의 분자량, 예를 들어, 적어도 1 kDa의 분자량, 적어도 2 kDa의 분자량, 적어도 3 kDa의 분자량 또는 적어도 5 kDa의 분자량을 가진다. 중합체가 가용성 중합체인 경우, 특정 실시양태에서 중합체는 최대 1000 kDa, 예컨대, 최대 750 kDa, 예컨대, 최대 500 kDa, 예컨대, 최대 300 kDa, 예컨대, 최대 200 kDa, 예컨대, 최대 100 kDa의 분자량을 가진다. 하이드로겔과 같은 불용성 중합체의 경우 유의미한 분자량 범위를 제공할 수 없는 것으로 이해된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "중합체성"은 하나 이상의 중합체(들) 또는 중합체 모이어티/모이어티들을 포함하는 시약 또는 모이어티를 의미한다. 중합체성 시약 또는 모이어티는 특정 실시양태에서 하기 모이어티들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 다른 모이어티/모이어티들도 임의로 포함할 수 있다:
상기 식에서,
파선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
당분야에서 숙련된 자는 중합 반응으로부터 수득된 중합 생성물이 모두 동일한 분자량을 갖는 것이 아니라 분자량 분포를 나타낸다는 것을 이해한다. 결과적으로, 본원에서 사용된 바와 같이 분자량 범위, 분자량, 중합체의 단량체 수의 범위 및 중합체의 단량체 수는 단량체의 수평균 분자량 및 수평균, 즉 중합체 또는 중합체 모이어티의 분자량의 산술 평균 및 중합체 또는 중합체 모이어티의 단량체 수의 산술 평균을 지칭한다.
따라서, "x"개의 단량체 유닛을 포함하는 중합체 모이어티에서 "x"에 대해 주어진 임의의 정수는 단량체의 산술 평균 수에 상응한다. "x"에 대해 주어진 임의의 정수 범위는 단량체의 산술 평균 수가 있는 정수 범위를 제공한다. "약 x"로서 주어진 "x"에 대한 정수는 단량체의 산술 평균 수가 x +/- 25%, 바람직하게는 x +/- 20%, 보다 바람직하게는 x +/- 10%의 정수 범위 내에 있음을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "수평균 분자량"은 개별 중합체의 분자량의 통상의 산술 평균을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "PEG 기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 PEG를 포함함을 의미한다. 특정 실시양태에서, PEG 기반 모이어티 또는 시약은 적어도 10%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 20%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 30%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 40%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 50%(w/w), 예컨대, 적어도 60%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 70%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 80%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 90%(w/w) PEG, 예컨대, 적어도 95%를 포함한다. PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 퍼센트는 특정 실시양태에서 하기 모이어티 및 결합으로부터 선택된 다른 모이어티이다:
상기 식에서,
파선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
용어 "히알루론산 기반"은 이에 상응하게 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 모이어티 또는 시약과 관련하여 용어 "적어도 X% PEG를 포함하는 PEG 기반"은 상기 모이어티 또는 시약이 적어도 X%(w/w) 에틸렌 글리콜 유닛(-CH2CH2O-)을 포함함을 의미하고, 여기에서 에틸렌 글리콜 유닛은 블록 방식으로 배열될 수 있거나, 교대로 배열될 수 있거나, 모이어티 또는 시약 내에서 무작위로 분포될 수 있고, 특정 실시양태에서 상기 모이어티 또는 시약의 모든 에틸렌 글리콜 유닛은 하나의 블록에 존재하고; PEG 기반 모이어티 또는 시약의 나머지 중량 퍼센트는 특정 실시양태에서 하기 모이어티 및 결합으로부터 선택된 다른 모이어티이다:
상기 식에서,
파선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
용어 "적어도 X% 히알루론산을 포함하는 히알루론산 기반"은 이에 상응하게 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "하이드로겔"은 소수성 상호작용, 수소 결합, 이온 상호작용 및/또는 공유 화학적 가교결합의 존재로 인해 불용성을 가진 단독중합체 또는 공중합체로 구성된 친수성 또는 양친매성 중합체 네트워크를 의미한다. 특정 실시양태에서, 하이드로겔은 공유 화학적 가교결합의 존재로 인해 불용성을 가진다. 일반적으로, 가교결합은 네트워크 구조 및 물리적 무결성을 제공한다.
용어 "중단된"은 모이어티가 2개의 탄소 원자 사이에 삽입되거나 - 삽입이 모이어티의 말단 중 하나에 있는 경우 - 탄소 또는 헤테로원자와 수소 원자 사이에 삽입됨을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C1-4 알킬"은 단독으로 또는 조합으로 1개 내지 4개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 직쇄 또는 분지형 C1-4 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-4 알킬에 의해 연결될 때, 이러한 C1-4 알킬 기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)-, -C(CH3)2-이다. C1-4 알킬 탄소의 각각의 수소는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, C1-4 알킬은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C1-6 알킬"은 단독으로 또는 조합으로 1개 내지 6개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 알킬 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 직쇄 및 분지형 C1-6 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필이다. 분자의 2개의 모이어티가 C1-6 알킬 기에 의해 연결될 때, 이러한 C1-6 알킬 기의 예는 -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)- 및 -C(CH3)2-이다. C1-6 탄소의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, C1-6 알킬은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, "C1-10 알킬", "C1-20 알킬" 또는 "C1-50 알킬"은 각각 1개 내지 10개, 1개 내지 20 또는 1개 내지 50개의 탄소 원자를 가진 알킬 쇄를 의미하며, 여기에서 C1-10, C1-20 또는 C1-50 탄소의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, C1-10 또는 C1-50 알킬은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C2-6 알케닐"은 단독으로 또는 조합으로 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고 2개 내지 6개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 예는 -CH=CH2, -CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH2, -CH=CHCH2-CH3 및 -CH=CH-CH=CH2이다. 분자의 2개의 모이어티가 C2-6 알케닐 기에 의해 연결될 때, 이러한 C2-6 알케닐의 예는 -CH=CH-이다. C2-6 알케닐 모이어티의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, C2-6 알케닐은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, 용어 "C2-10 알케닐", "C2-20 알케닐" 또는 "C2-50 알케닐"은 단독으로 또는 조합으로 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고 2개 내지 10개, 2개 내지 20개 또는 2개 내지 50개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐 기의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알케닐은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C2-6 알키닐"은 단독으로 또는 조합으로 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하고 2개 내지 6개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. 분자의 말단에 존재하는 경우, 예는 -C≡CH, -CH2-C≡CH, -CH2-CH2-C≡CH 및 CH2-C≡C-CH3이다. 분자의 2개의 모이어티가 알키닐 기에 의해 연결될 때, 예는 -C≡C-이다. C2-6 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 존재할 수 있다. 임의로, C2-6 알키닐은 아래에 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
따라서, 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C2-10 알키닐", "C2-20 알키닐" 및 "C2-50 알키닐"은 단독으로 또는 조합으로, 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하고 각각 2개 내지 10개, 2개 내지 20개 또는 2개 내지 50개의 탄소 원자를 가진 직쇄 또는 분지형 탄화수소 모이어티를 의미한다. C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐 기의 각각의 수소 원자는 임의로 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 임의로, 하나 이상의 이중 결합(들)이 존재할 수 있다. 임의로, C2-10 알키닐, C2-20 알키닐 또는 C2-50 알키닐은 아래 정의된 하나 이상의 모이어티에 의해 중단될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, C1-4 알킬, C1-6 알킬, C1-10 알킬, C1-20 알킬, C1-50 알킬, C2-6 알케닐, C2-10 알케닐, C2-20 알케닐, C2-50 알케닐, C2-6 알키닐, C2-10 알키닐, C2-20 알케닐 또는 C2-50 알키닐은 바람직하게는 하기 모이어티들로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 모이어티에 의해 임의로 중단될 수 있다:
상기 식에서,
파선은 모이어티 또는 시약의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 -H, 및 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 포화될 수 있거나 불포화될 수 있는, 3개 내지 10개의 탄소 원자를 가진 환형 알킬 쇄, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 사이클로노닐 또는 사이클로데실을 의미한다. C3-10 사이클로알킬 탄소의 각각의 수소 원자는 상기 정의된 치환기로 대체될 수 있다. 용어 "C3-10 사이클로알킬"은 노르보르난 또는 노르보르넨과 같은 가교된 이환도 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "8원 내지 30원 카보폴리사이클릴" 또는 "8원 내지 30원 카보폴리사이클"은 8개 내지 30개의 고리 원자를 갖고 최대 수의 이중 결합을 함유할 수 있는, 2개 이상의 고리의 환형 모이어티(완전히 포화되거나, 부분적으로 포화되거나 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하며, 여기에서 2개의 인접 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유한다. 바람직하게는, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴은 2개, 3개, 4개 또는 5개의 고리, 보다 바람직하게는 2개, 3개 또는 4개의 고리의 환형 모이어티를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "3원 내지 10원 헤테로사이클릴" 또는 "3원 내지 10원 헤테로환"은 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 고리 원자를 갖고 최대 수의 이중 결합을 함유할 수 있는 고리(완전히 포화되거나, 부분적으로 포화되거나 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하고, 여기에서 적어도 하나의 고리 원자 내지 최대 4개의 고리 원자는 황(-S(O)- 및 -S(O)2-를 포함함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함함)로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 3원 내지 10원 헤테로환의 예는 아지리딘, 옥시란, 티이란, 아지린, 옥시렌, 티이렌, 아제티딘, 옥세탄, 티에탄, 퓨란, 티오펜, 피롤, 피롤린, 이미다졸, 이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 옥사졸, 옥사졸린, 이속사졸, 이속사졸린, 티아졸, 티아졸린, 이소티아졸, 이소티아졸린, 티아디아졸, 티아디아졸린, 테트라하이드로퓨란, 테트라하이드로티오펜, 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 티아디아졸리딘, 설포란, 피란, 디하이드로피란, 테트라하이드로피란, 이미다졸린, 피리딘, 피리다진, 피라진, 피리미딘, 피페라진, 피페리딘, 모르폴린, 테트라졸, 트리아졸, 트리아졸리딘, 테트라졸리딘, 디아제판, 아제핀 및 호모피페라진을 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 3원 내지 10원 헤테로사이클릴 또는 3원 내지 10원 헤테로환형 기의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 치환기로 대체될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "8원 내지 11원 헤테로비사이클릴" 또는 "8원 내지 11원 헤테로이환"은 8개 내지 11개의 고리 원자를 갖고 최대 수의 이중 결합을 함유할 수 있는, 2개의 고리의 헤테로환형 모이어티(완전히 포화되거나, 부분적으로 포화되거나 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하고, 여기에서 적어도 하나의 고리 원자는 두 고리에 의해 공유되고, 여기에서 적어도 하나의 고리 원자 내지 최대 6개의 고리 원자는 황(-S(O)- 및 -S(O)2-를 포함함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함함)로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 8원 내지 11원 헤테로이환의 예는 인돌, 인돌린, 벤조퓨란, 벤조티오펜, 벤족사졸, 벤즈이속사졸, 벤조티아졸, 벤즈이소티아졸, 벤즈이미다졸, 벤즈이미다졸린, 퀴놀린, 퀴나졸린, 디하이드로퀴나졸린, 퀴놀린, 디하이드로퀴놀린, 테트라하이드로퀴놀린, 데카하이드로퀴놀린, 이소퀴놀린, 데카하이드로이소퀴놀린, 테트라하이드로이소퀴놀린, 디하이드로이소퀴놀린, 벤즈아제핀, 퓨린 및 프테리딘이다. 용어 8원 내지 11원 헤테로이환은 2개의 고리의 스피로 구조, 예컨대, 1,4-디옥사-8-아자스피로[4.5]데칸, 또는 가교된 헤테로환, 예컨대, 8-아자-비사이클로[3.2.1]옥탄도 포함한다. 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴 또는 8원 내지 11원 헤테로이환 탄소의 각각의 수소 원자는 하기 정의된 치환기로 대체될 수 있다.
유사하게, 용어 "8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴" 또는 "8원 내지 30원 헤테로폴리사이클"은 8개 내지 30개의 고리 원자를 갖고 최대 수의 이중 결합을 함유할 수 있는, 2개 초과의 고리, 바람직하게는 3개, 4개 또는 5개의 고리의 헤테로환형 모이어티(완전히 포화되거나, 부분적으로 포화되거나 불포화된 방향족 또는 비방향족 고리)를 의미하고, 여기에서 2개의 인접 고리는 적어도 하나의 고리 원자를 공유하고, 적어도 하나의 고리 원자 내지 최대 10개의 고리 원자는 황(-S(O)- 및 -S(O)2-를 포함함), 산소 및 질소(=N(O)-를 포함함)로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자로 대체되고, 고리는 탄소 또는 질소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다.
구조 
의 모이어티와 관련하여 어구 "쌍 Rx/Ry는 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성한다"는 것은 Rx와 Ry가 하기 구조를 형성함을 의미하는 것으로 이해된다:
상기 식에서, R은 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴이다.
구조 
의 모이어티와 관련하여 어구 "쌍 Rx/Ry는 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성한다는 것"은 Rx와 Ry가 하기 구조를 형성함을 의미한다는 것도 이해된다:
본원에서 사용된 바와 같이, "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다. 일반적으로 할로겐은 플루오로 또는 클로로인 것이 바람직하다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "작용기"는 다른 원자 군과 반응할 수 있는 원자 군을 의미한다. 예시적인 작용기는 예를 들어, 카복실산(-(C=O)OH), 1차 또는 2차 아민(-NH2, -NH-), 말레이미드, 티올(-SH), 설폰산(-(O=S=O)OH), 카보네이트, 카바메이트(-O(C=O)N<), 하이드록실(-OH), 알데하이드(-(C=O)H), 케톤(-(C=O)-), 하이드라진(>N-N<), 이소시아네이트, 이소티오시아네이트, 인산(-O(P=O)OHOH), 포스폰산(-O(P=O)OHH), 할로아세틸, 알킬 할라이드, 아크릴오일, 아릴 플루오라이드, 하이드록실아민, 디설파이드, 설폰아미드, 황산, 비닐 설폰, 비닐 케톤, 디아조알칸, 옥시란 및 아지리딘이다.
본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체가 하나 이상의 산성 또는 염기성 기를 포함하는 경우, 본 발명은 그의 상응하는 약학적으로 또는 독성학적으로 허용되는 염, 특히 그의 약학적으로 사용 가능한 염도 포함한다. 따라서, 산성 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체는 예를 들어, 알칼리 금속 염, 알칼리성 토금속 염 또는 암모늄 염으로서 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 이러한 염의 보다 정확한 예는 나트륨 염, 칼륨 염, 칼슘 염, 마그네슘 염, 또는 암모니아 또는 유기 아민, 예컨대, 에틸아민, 에탄올아민, 트리에탄올아민 또는 아미노산을 사용한 염을 포함한다. 하나 이상의 염기성 기, 즉 양성자화될 수 있는 기를 포함하는 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체는 무기산 또는 유기산을 사용한 그의 부가 염의 형태로 존재할 수 있고 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 적합한 산의 예는 염화수소, 브롬화수소, 인산, 황산, 질산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌디설폰산, 옥살산, 아세트산, 주석산, 젖산, 살리실산, 벤조산, 포름산, 프로피온산, 피발산, 디에틸아세트산, 말론산, 석신산, 피멜산, 푸마르산, 말레산, 말산, 설파민산, 페닐프로피온산, 글루콘산, 아스코르브산, 이소니코틴산, 구연산, 아디프산, 및 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있는 다른 산을 포함한다. 염의 양성 전하 암모늄 기 및 적절한 반대이온을 생성하는 아민 기의 알킬화처럼 염기성 기를 양이온으로 전환시키는 추가 방법은 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있다. 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체가 산성 기 및 염기성 기를 동시에 포함하는 경우, 본 발명은 언급된 염 형태 이외에 내부 염 또는 베타인(betaine)(양쪽성이온(zwitterion))도 포함한다. 각각의 염은 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있는 통상의 방법, 예를 들어, 이 프로드러그를 용매 또는 분산제에서 유기 또는 무기 산 또는 염기와 접촉시키거나, 다른 염과 음이온 교환시키거나 양이온 교환시킴으로써 수득될 수 있다. 본 발명은 낮은 생리학적 적합성 때문에 의약에서 사용하기에 직접적으로 적합하지 않으나, 예를 들어, 화학 반응 또는 약학적으로 허용되는 염의 제조를 위한 중간체로서 사용될 수 있는, 본 발명의 IL-2 단백질 또는 접합체의 모든 염들도 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용되는"은 환자에게 투여되었을 때 해로움을 야기하지 않는 물질을 의미하고, 바람직하게는 동물에서의 사용, 예컨대, 인간에서의 사용에 대해 EMA(유럽) 및/또는 FDA(미국)와 같은 규제 관청 및/또는 임의의 다른 국립 규제 관청에 의해 승인되었음을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "부형제"는 치료제, 예컨대, 약물 또는 프로드러그와 함께 투여되는 희석제, 보강제 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 약학 부형제는 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등을 포함하나 이들로 제한되지 않는, 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 멸균 액체를 포함하는 멸균 액체, 예컨대, 물 및 오일일 수 있다. 약학 조성물이 경구 투여될 때 물이 바람직한 부형제이다. 약학 조성물이 정맥내로 투여될 때 식염수 및 수성 덱스트로스가 바람직한 부형제이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액은 바람직하게는 주입 가능한 용액을 위한 액체 부형제로서 사용된다. 적합한 약학 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 모노스테아르산글리세롤, 탈크, 염화나트륨, 건조된 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 원하는 경우, 약학 조성물은 소량의 습윤화제 또는 유화제, pH 완충제, 예를 들어, 아세트산염, 석신산염, 트리스(tris), 탄산염, 인산염, HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산), MES(2-(N-모르폴리노)에탄설폰산)도 함유할 수 있거나, 세제, 예컨대, Tween, 폴록사머, 폴록사민, CHAPS, Igepal 또는 아미노산, 예를 들어, 글리신, 라이신 또는 히스티딘을 함유할 수 있다. 이 약학 조성물은 용액, 현탁액, 유화액, 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 지속 방출 제제 등의 형태를 취할 수 있다. 약학 조성물은 전통적인 결합제 및 부형제, 예컨대, 트리글리세라이드를 사용함으로써 좌약제로서 제제화될 수 있다. 경구 제제는 표준 부형제, 예컨대, 약학 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절하게 투여될 형태를 제공하도록 적합한 양의 부형제와 함께 치료 유효량의 약물 또는 생물학적 활성 모이어티를 함유할 것이다. 제제는 투여 방식에 적합해야 한다.
일반적으로, 용어 "포함한다" 또는 "포함하는"은 "~로 구성된다" 또는 "~로 구성된"도 포함한다.
화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 가진다. 서열번호 1은 하기 서열을 가진다:
PTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN
화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 가진다. 서열번호 2는 하기 서열을 가진다:
YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSK
화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 가진다. 서열번호 4는 하기 서열을 가진다:
NFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
달리 언급되지 않는 한, 본원에서 제공된 모든 아미노산 위치는 각각 서열번호 1, 서열번호 2 또는 서열번호 4를 기준으로 한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 93%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 96%의 서열 동일성을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ A는 서열번호 1에 비해 3개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ A는 서열번호 1에 비해 2개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ A는 서열번호 1에 비해 1개의 아미노산 변화를 포함한다. 이러한 아미노산 변화는 아미노산 결실, 아미노산 추가, 또는 하나의 아미노산을 또 다른 아미노산으로 교환하는 것, 즉 돌연변이일 수 있다. 이러한 돌연변이는 단백질생성 아미노산을 비-단백질생성 아미노산으로 교환하는 것일 수도 있다. 특정 실시양태에서, SEQ A는 서열번호 1에 비해 아미노산 변화를 포함하지 않는다. 즉, SEQ A는 서열번호 1의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ A는 서열번호 36: PASSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN의 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ A는 내생성 O-글리코실화 모티프를 제거하는 아미노산 돌연변이를 포함한다. 바람직하게는, 이러한 아미노산 돌연변이는 서열번호 1의 위치 2에 있고, 훨씬 더 바람직하게는 이러한 아미노산 돌연변이는 T2A, T2G, T2Q, T2E, T2N, T2D, T2R, T2K 및 T2P로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 아미노산 돌연변이는 서열번호 1, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 T2A이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 78%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 82%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 84%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 87%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 93%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 95%의 서열 동일성을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 11개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 10개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 9개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 8개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 7개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 6개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 4개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 3개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2에 비해 2개의 아미노산 변화를 포함한다.
SEQ B는 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 1개의 글리코실화 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 동일하거나 상이한 2개의 글리코실화 모티프를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 동일하거나 상이한 3개의 글리코실화 모티프를 포함한다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 글리코실화 모티프는 N-글리코실화 모티프, O-글리코실화 모티프, 포스포글리코실화 모티프 및 C-글리코실화 모티프로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 글리코실화 모티프는 N-글리코실화 모티프이다.
이러한 N-글리코실화는 아스파라긴 아미노산의 아민 작용기에서 일어난다. 아민 작용기를 가진 아스파라긴은 서열번호 2의 서열에 천연적으로 존재할 수 있거나 아미노산을 아스파라긴 잔기로 치환함으로써 도입될 수 있다.
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 아미노산 서열 X1X2NX3X4(서열번호 254)를 포함하고, 여기에서
X1은 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이거나 존재하지 않고;
X2는 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이거나 존재하지 않고;
N은 아스파라긴이고;
X3은 프롤린을 제외한 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이고;
X4는 트레오닌, 세린 및 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, X1은 단백질생성 아미노산 또는 비-단백질생성 아미노산이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, X1은 단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 비-단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X1은 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, X1은 페닐알라닌, 글루탐산 또는 아스파르트산이다. 특정 실시양태에서, X1은 페닐알라닌이다. 특정 실시양태에서, X1은 글루탐산이다. 특정 실시양태에서, X1은 아스파르트산이다.
특정 실시양태에서, X2는 단백질생성 아미노산 또는 비-단백질생성 아미노산이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, X2는 단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X2는 비-단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X2는 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, X2는 글리신 또는 알라닌이다. 특정 실시양태에서, X2는 글리신이다. 특정 실시양태에서, X2는 알라닌이다.
특정 실시양태에서, X3은 프롤린을 제외한 단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X3은 비-단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, X3은 세린이다.
특정 실시양태에서, X4는 트레오닌, 세린 또는 시스테인이다. 특정 실시양태에서, X4는 트레오닌이다. 특정 실시양태에서, X4는 세린이다. 특정 실시양태에서, X4는 시스테인이다.
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 아미노산 서열 NX3X4를 가지며, 여기에서 X3 및 X4는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NX3T, NX3S 및 NX3C로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NX3T이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NX3S이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NX3C이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NSX4이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NST, NSS 및 NSC로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NST이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NSS이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 NSC이다.
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NX3X4(서열번호 255)이고, 여기에서 X2, X3 및 X4는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NX3T(서열번호 256), X2NX3S(서열번호 257) 및 X2NX3C(서열번호 258)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NX3T(서열번호 256)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NX3S(서열번호 257)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NX3C(서열번호 258)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NSX4(서열번호 259)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NST(서열번호 260), X2NSS(서열번호 261) 및 X2NSC(서열번호 262)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NST(서열번호 260)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NSS(서열번호 261)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X2NSC(서열번호 262)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNX3X4(서열번호 263)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNX3T(서열번호 264), GNX3S(서열번호 265) 및 GNX3C(서열번호 266)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNX3T(서열번호 264)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNX3S(서열번호 265)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNX3C(서열번호 266)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNSX4(서열번호 267)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNST(서열번호 268), GNSS(서열번호 269) 및 GNSC(서열번호 270)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNST(서열번호 268)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNSS(서열번호 269)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 GNSC(서열번호 270)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANX3X4(서열번호 271)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANX3T(서열번호 272), ANX3S(서열번호 273) 및 ANX3C(서열번호 274)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANX3T(서열번호 272)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANX3S(서열번호 273)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANX3C(서열번호 274)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANSX4(서열번호 275)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANST(서열번호 276), ANSS(서열번호 277) 및 ANSC(서열번호 278)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANST(서열번호 276)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANSS(서열번호 277)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 ANSC(서열번호 278)이다.
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NX3X4(서열번호 254)이고, 여기에서 X1, X2, X3 및 X4는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NX3T(서열번호 279), X1X2NX3S(서열번호 280) 및 X1X2NX3C(서열번호 281)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NX3T(서열번호 279)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NX3S(서열번호 280)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NX3C(서열번호 281)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NSX4(서열번호 282)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NST(서열번호 283), X1X2NSS(서열번호 284) 및 X1X2NSC(서열번호 285)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NST(서열번호 283)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NSS(서열번호 284)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1X2NSC(서열번호 285)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNX3X4(서열번호 286)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNX3T(서열번호 287), X1GNX3S(서열번호 288) 및 X1GNX3C(서열번호 289)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNX3T(서열번호 287)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNX3S(서열번호 288)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNX3C(서열번호 289)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNSX4(서열번호 290)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNST(서열번호 291), X1GNSS(서열번호 292) 및 X1GNSC(서열번호 293)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNST(서열번호 291)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNSS(서열번호 292)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1GNSC(서열번호 293)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3X4(서열번호 294)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3T(서열번호 295), FX2NX3S(서열번호 296) 및 FX2NX3C(서열번호 297)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3T(서열번호 295)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3S(서열번호 296)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3C(서열번호 297)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSX4(서열번호 298)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NST(서열번호 299), FX2NSS(서열번호 300) 및 FX2NSC(서열번호 301)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NST(서열번호 299)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSS(서열번호 300)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSC(서열번호 301)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNX3X4(서열번호 302)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNX3T(서열번호 303), FGNX3S(서열번호 304) 및 FGNX3C(서열번호 305)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNX3T(서열번호 303)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNX3S(서열번호 304)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNX3C(서열번호 305)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNSX4(서열번호 306)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNST(서열 번호 307), FGNSS(서열 번호 308) 및 FGNSC(서열 번호 309)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNST(서열번호 307)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNSS(서열번호 308)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNSC(서열번호 309)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANX3X4(서열번호 310)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANX3T(서열번호 311), X1ANX3S(서열번호 312) 및 X1ANX3C(서열번호 313)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANX3T(서열번호 311)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANX3S(서열번호 312)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANX3C(서열번호 313)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANSX4(서열번호 314)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANST(서열번호 315), X1ANSS(서열번호 316) 및 X1ANSC(서열번호 317)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANST(서열번호 315)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANSS(서열번호 316)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 X1ANSC(서열번호 317)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3X4(서열번호 318)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3T(서열번호 319), FX2NX3S(서열번호 320) 및 FX2NX3C(서열번호 321)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3T(서열번호 319)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3S(서열번호 320)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NX3C(서열번호 321)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSX4(서열번호 322)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NST(서열번호 323), FX2NSS(서열번호 324) 및 FX2NSC(서열번호 325)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NST(서열번호 323)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSS(서열번호 324)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FX2NSC(서열번호 325)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANX3X4(서열번호 326)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANX3T(서열번호 327), FANX3S(서열번호 328) 및 FANX3C(서열번호 329)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANX3T(서열번호 327)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANX3S(서열번호 328)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANX3C(서열번호 329)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANSX4(서열번호 330)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANST(서열번호 331), FANSS(서열번호 332) 및 FANSC(서열번호 333)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANST(서열번호 331)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANSS(서열번호 332)이다. 특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FANSC(서열번호 333)이다.
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 FGNST(서열번호 307) 또는 FANST(서열번호 331)이다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 글리코실화 모티프는 O-글리코실화 모티프이다.
이러한 O-글리코실화는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에서 일어난다. 하이드록실 작용기를 가진 아미노산은 서열번호 2의 서열에 천연적으로 존재할 수 있거나 내생성 아미노산을 하이드록실 작용기를 포함하는 아미노산으로 대체함으로써 도입될 수 있다. O-글리코실화에 사용되는 아미노산은 하이드록실 작용기를 가진 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산일 수 있다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 아미노산은 단백질생성 아미노산이다. 특정 실시양태에서, 하이드록실 작용기를 가진 단백질생성 아미노산은 세린, 트레오닌, 티로신, 하이드록시라이신 및 하이드록시프롤린으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -6 내지 -1 또는 +1 내지 +4 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -6 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -5 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -4 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -3 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -2 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 -1 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 +1 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 +2 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 +3 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다. 특정 실시양태에서, O-글리코실화에 사용되는 하이드록실 작용기를 가진 아미노산에 대해 +4 위치에 있는 아미노산은 프롤린으로 치환된다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 글리코실화 모티프는 서열번호 2의 특정 연속 아미노산을 돌연변이시킴으로써 수득된다. 특정 실시양태에서, 하나의 이러한 글리코실화 모티프는 서열번호 2의 특정 아미노산을 돌연변이시킴으로써 서열번호 2에 도입된다. 특정 실시양태에서, 2개의 이러한 글리코실화 모티프는 서열번호 2의 특정 아미노산을 돌연변이시킴으로써 서열번호 2에 도입되고, 여기에서 2개의 글리코실화 모티프는 동일할 수 있거나 상이할 수 있다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 40, 41, 42, 43 및 44로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 3, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 4, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 5, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 6, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 7, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 8, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 9, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 10, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 11, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 12, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 13, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 14, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 15, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 16, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 17, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 29, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 30, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 31, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 32, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 33, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 34, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 40, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 41, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 42, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 43, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 위치 44, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 N-글리코실화 부위를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
상기 서열에서, X3 및 X4는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 87; 서열번호 88; 서열번호 89; 서열번호 90; 서열번호 91; 서열번호 92; 서열번호 93; 서열번호 94; 서열번호 95; 서열번호 96; 서열번호 97; 서열번호 98; 서열번호 99; 서열번호 100; 서열번호 114; 서열번호 115; 서열번호 116; 서열번호 117; 서열번호 125; 서열번호 126; 및 서열번호 127로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 130; 서열번호 131; 서열번호 132; 서열번호 133; 서열번호 134; 서열번호 135; 서열번호 136; 서열번호 137; 서열번호 138; 서열번호 139; 서열번호 140; 서열번호 141; 서열번호 142; 서열번호 143; 서열번호 144; 서열번호 156; 서열번호 157; 서열번호 158; 서열번호 159; 서열번호 160; 서열번호 161; 서열번호 167; 서열번호 168; 서열번호 169; 서열번호 170; 및 서열번호 171로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 89; 서열번호 92; 서열번호 93; 서열번호 95; 서열번호 96; 서열번호 97; 서열번호 98; 서열번호 99; 서열번호 116; 서열번호 117; 및 서열번호 127로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 134; 서열번호 137; 서열번호 138; 서열번호 140; 서열번호 141; 서열번호 142; 서열번호 143; 서열번호 144; 서열번호 160; 서열번호 161; 및 서열번호 171로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, SEQ B는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, SEQ B는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, N-글리코실화 모티프는 서열번호 2의 서열의 위치 3 또는 41에 있는 내생성 아스파라긴이 N-글리코실화 모티프의 일부가 되어, SEQ B가 서열번호 87; 서열번호 130; 서열번호 127; 서열번호 168; 및 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열들 중 하나를 갖도록 하는 방식으로 도입되고, 이 경우 아스파라긴은 치환될 필요가 없다:
특정 실시양태에서, O-글리코실화 모티프는 서열 SEQ B의 임의의 아미노산을 세린, 트레오닌, 티로신, 하이드록시라이신 및 하이드록시프롤린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환함으로써 도입된다.
특정 실시양태에서, O-글리코실화 모티프, 즉 서열번호 2의 아미노산이 세린, 트레오닌, 티로신, 하이드록시라이신 및 하이드록시프롤린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산으로 돌연변이되는 것은 서열 SEQ B의 위치 K5, R8, M9, T11, F12, K13, F14, Y15, E32 또는 L42에서 일어난다.
특정 실시양태에서, O-글리코실화 모티프는 K5S, K5T, K5Y, K5Hyl, K5Hyp, R8S, R8T, R8Y, R8Hyl, R8Hy, M9S, M9T, M9Y, M9Hyl, M9Hyp, T11S, T11Y, T11Hyl, T11Hyp, F12S, F12T, F12Y, F12Hyl, F12Hyp, K13S, K13T, K13Y, K13Hyl, K13Hyp, Y15S, Y15T, Y15Hyl, Y15Hyp, E32S, E32T, E32Y, E32Hyl, E32Hyl, L42S, L42T, L42Y, L42Hyl 및 L42Hyp로 이루어진 군으로부터 선택된, 서열 SEQ B의 아미노산 치환에 의해 도입된다.
특정 실시양태에서, SEQ는 서열번호 11, 서열번호 14, 서열번호 17, 서열번호 20, 서열번호 23, 서열번호 26, 서열번호 32, 서열번호 35, 서열번호 214 및 서열번호 215로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 11의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 14의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 17의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 20의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 23의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 26의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 32의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 35의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 214의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 215의 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 50%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 55%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 60%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 65%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 70%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 75%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 80%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 85%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 90%의 부위 점유를 야기한다. 특정 실시양태에서, SEQ B 내로의 글리코실화 모티프의 삽입은 적어도 95%의 부위 점유를 야기한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2를 기준으로 K5, R8, M9, T11, F12, K13, F14, Y15, E31, E32 및 L42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생하는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 추가로 포함한다. 훨씬 더 바람직하게는, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 F12, Y15, E31, E32 및 L42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 K5, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 R8, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 M9, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 T11, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 F12, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 K13, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 F14, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 Y15, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 E31, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 E32, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 L42, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 단백질생성 천연 생성 아미노산을 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 트립토판 및 티로신으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 알라닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 아르기닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 아스파라긴으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 아스파르트산으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 시스테인으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 글루타민으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 글루탐산으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 글리신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 히스티딘으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 라이신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 세린으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 트레오닌으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 트립토판으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 티로신으로 대체된다. 특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 천연 생성 아미노산을 아르기닌, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 히스티딘, 라이신, 세린, 트레오닌, 트립토판 및 티로신으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 이러한 돌연변이는 천연 생성 아미노산을 시스테인, 글루탐산, 라이신, 세린, 트레오닌 및 티로신으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 천연 생성 아미노산은 비-단백질생성 아미노산으로 대체된다. 이러한 비-단백질생성 아미노산에 대한 실시양태는 앞서 설명된 바와 같다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 K5A, K5C, K5G, K5S, K5T, K5Q, K5E, K5N, K5D, K5H, K5W, K5Y 및 K5R로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 K5R 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 YKNPDLTFGNSTKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSK(서열번호 214), YKNPELTFGNSTKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSK(서열번호 215), YKNPDLTFANSTKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSK(서열번호 235) 및 YKNPELTFANSTKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSK(서열번호 236)로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 214의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 215의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 235의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 236의 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 R8A, R8C, R8G, R8S, R8T, R8Q, R8E, R8N, R8D, R8H, R8W, R8Y 및 R8K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8N 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8K 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 R8K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 F12A, F12C, F12G, F12S, F12T, F12Q, F12E, F12N, F12D, F12R, F12H, F12W, F12Y 및 F12K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 F12A, F12C, F12G, F12S, F12T, F12Q, F12E, F12N, F12D, F12R 및 F12K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12N 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12R 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 Y15A, Y15C, Y15G, Y15S, Y15T, Y15Q, Y15E, Y15N, Y15D, Y15R, Y15H, Y15W 및 Y15K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 Y15A, Y15C, Y15G, Y15S, Y15T, Y15Q, Y15E, Y15N, Y15D, Y15R 및 Y15K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15N 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15R 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 L42G, L42C, L42A, L42S, L42T, L42Q, L42E, L42N, L42D, L42R, L42H, L42W, L42Y 및 L42K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 L42G, L42C, L42A, L42S, L42T, L42Q, L42E, L42N, L42D, L42R 및 L42K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42C 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42N 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42R 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 L42K 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 F12A, F12C, F12G, F12S, F12T, F12Q, F12E, F12N, F12D, F12R 및 F12K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이 및 Y15A, Y15C, Y15G, Y15S, Y15T, Y15Q, Y15E, Y15N, Y15D, Y15R 및 Y15K로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A 및 Y15A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12C 돌연변이 및 Y15A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A 및 Y15C 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 F12A, F12C, F12G, F12S, F12T, F12Q, F12E, F12N, F12D, F12R 및 F12K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이 및 L42G L42C, L42A, L42S, L42T, L42Q, L42E, L42N, L42D, L42R 및 L42K로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F42C 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F42A 및 L42C 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 Y15A, Y15C, Y15G, Y15S, Y15T, Y15Q, Y15E, Y15N, Y15D, Y15R 및 Y15K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이 및 L42G, L42C, L42A, L42S, L42T, L42Q, L42E, L42N, L42D, L42R 및 L42K로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15A 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15C 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 Y15A 및 L42C 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ B는 서열번호 2, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 F12A, F12C, F12G, F12S, F12T, F12Q, F12E, F12N, F12D, F12R 및 F12K로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이; Y15A, Y15C, Y15G, Y15S, Y15T, Y15Q, Y15E, Y15N, Y15D, Y15R 및 Y15K로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 아미노산 돌연변이; 및 L42G, L42C, L42A, L42S, L42T, L42Q, L42E, L42N, L42D, L42R 및 L42K로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A, Y15A 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12C, Y15A 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A, Y15C 및 L42G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ B는 F12A, Y15C 및 L42C 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 93%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 94%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 96%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 98%의 서열 동일성을 가진다.
특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 4개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 3개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 2개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 1개의 아미노산 변화를 포함한다. 이러한 아미노산 변화는 아미노산 결실, 아미노산 추가, 또는 하나의 아미노산을 또 다른 아미노산으로 교환하는 것, 즉 돌연변이일 수 있다. 이러한 돌연변이는 단백질생성 아미노산을 비-단백질생성 아미노산, 또는 단백질생성 아미노산의 D-입체이성질체로 교환하는 것일 수도 있다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4에 비해 아미노산 변화를 포함하지 않으며, 이는 SEQ C가 서열번호 4의 서열을 가진다는 것을 의미한다.
특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치를 기준으로 C49A, C49G, C49S, C49T, C49Q, C49E, C49N, C49D, C49H, C49W, C49Y, C49R, C49I, C49L, C49K, C49M, C49F, C49P 및 C49V로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49A 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49G 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49T 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49Q 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49E 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49D 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49H 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49W 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49Y 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49R 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49I 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49L 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49K 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49M 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49F 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49P 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 C49V 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 212로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 3의 서열: NFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLT(서열번호 3)을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 4의 서열: NFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(서열번호 4)을 가진다. 특정 실시양태에서, SEQ C는 서열번호 212의 서열: NFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFAQSIISTLT(서열번호 212)을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A의 N-말단에 알라닌이 존재하지 않는다. 즉, x는 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A의 N-말단에 알라닌이 존재한다. 즉, x는 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 특정 실시양태에서 알부민 결합 단백질, 알칼리 포스파타제, AU1 에피토프, AU5 에피토프, 박테리오파지 T7 에피토프(T7-태그), 박테리오파지 V5 에피토프(V5-태그), 바이오틴-카복시 담체 단백질, 청설 바이러스 태그(B-태그), 칼모듈린 결합 펩티드, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 셀룰로스 결합 도메인, 키틴 결합 도메인, 콜린 결합 도메인, 디하이드로폴레이트 환원효소, E2 에피토프, FLAG 에피토프, 갈락토스 결합 단백질, 녹색 형광 단백질, Glu-Glu(EE-태그), 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 인간 인플루엔자 헤마글루티닌, HaloTag®, 히스티딘 친화성 태그, 호스라디쉬 퍼록시다제, HSV 에피토프, 케토스테로이드 이소머라제, KT3 에피토프, lacz, 루시퍼라제, 말토스 결합 단백질, myc 에피토프, NusA, PDZ 도메인, PDZ 리간드, 폴리아르기닌(Arg-태그), 폴리아스파르테이트(Asp-태그), 폴리시스테인(Cys-태그), 폴리히스티딘(His-태그), 폴리페닐알라닌(Phe-태그), 프로피니티(profinity) eXact, 단백질 C, S1-태그, S-태그, 스트렙타바딘 결합 펩티드, 스타필로코커스 단백질 A, 스타필로코커스 단백질 G, 스트렙-태그, 스트렙타바딘, 작은 유비퀴틴 유사 변형제, 탠덤 친화성 정제, T7 에피토프, 티오레독신, TrpE, 유비퀴틴, 유니버살(universal) 및 VSV-G로 이루어진 군으로부터 선택된 정제 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 특정 실시양태에서 알부민 결합 단백질, 알칼리 포스파타제, AU1 에피토프, AU5 에피토프, 박테리오파지 T7 에피토프(T7-태그), 박테리오파지 V5 에피토프(V5-태그), 바이오틴-카복시 담체 단백질, 청설 바이러스 태그(B-태그), 칼모듈린 결합 펩티드, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 셀룰로스 결합 도메인, 키틴 결합 도메인, 콜린 결합 도메인, 디하이드로폴레이트 환원효소, E2 에피토프, FLAG 에피토프, 갈락토스 결합 단백질, 녹색 형광 단백질, Glu-Glu(EE-태그), 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 인간 인플루엔자 헤마글루티닌, 히스티딘 친화성 태그, 호스라디쉬 퍼록시다제, HSV 에피토프, 케토스테로이드 이소머라제, KT3 에피토프, lacz, 루시퍼라제, 말토스 결합 단백질, myc 에피토프, NusA, PDZ 도메인, PDZ 리간드, 폴리아르기닌(Arg-태그), 폴리아스파르테이트(Asp-태그), 폴리시스테인(Cys-태그), 폴리히스티딘(His-태그), 폴리페닐알라닌(Phe-태그), 프로피니티 eXact, 단백질 C, S1-태그, S-태그, 스트렙타바딘 결합 펩티드, 스타필로코커스 단백질 A, 스타필로코커스 단백질 G, 스트렙-태그, 스트렙타바딘, 작은 유비퀴틴 유사 변형제, 탠덤 친화성 정제, T7 에피토프, 티오레독신, TrpE, 유비퀴틴, 유니버살 및 VSV-G로 이루어진 군으로부터 선택된 정제 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 폴리히스티딘(His-태그), 예컨대, 5개의 히스티딘, 6개의 히스티딘, 7개의 히스티딘, 8개의 히스티딘, 9개의 히스티딘, 10개의 히스티딘, 11개의 히스티딘, 12개의 히스티딘, 13개의 히스티딘, 14개 히스티딘 또는 15개 히스티딘을 포함하는 His-태그이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 서열: AHHHHHHGSDDDDK(서열번호 234)의 His-태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 특정 실시양태에서 알부민 결합 단백질, 알칼리 포스파타제, AU1 에피토프, AU5 에피토프, 박테리오파지 T7 에피토프(T7-태그), 박테리오파지 V5 에피토프(V5-태그), 바이오틴-카복시 담체 단백질, 청설 바이러스 태그(B-태그), 칼모듈린 결합 펩티드, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 셀룰로스 결합 도메인, 키틴 결합 도메인, 콜린 결합 도메인, 디하이드로폴레이트 환원효소, E2 에피토프, FLAG 에피토프, 갈락토스 결합 단백질, 녹색 형광 단백질, Glu-Glu(EE-태그), 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 인간 인플루엔자 헤마글루티닌, HaloTag®, 히스티딘 친화성 태그, 호스라디쉬 퍼록시다제, HSV 에피토프, 케토스테로이드 이소머라제, KT3 에피토프, lacz, 루시퍼라제, 말토스 결합 단백질, myc 에피토프, NusA, PDZ 도메인, PDZ 리간드, 폴리아르기닌(Arg-태그), 폴리아스파르테이트(Asp-태그), 폴리시스테인(Cys-태그), 폴리히스티딘(His-태그), 폴리페닐알라닌(Phe-태그), 프로피니티 eXact, 단백질 C, S1-태그, S-태그, 스트렙타바딘 결합 펩티드, 스타필로코커스 단백질 A, 스타필로코커스 단백질 G, 스트렙-태그, 스트렙타바딘, 작은 유비퀴틴 유사 변형제, 탠덤 친화성 정제, T7 에피토프, 티오레독신, TrpE, 유비퀴틴, 유니버살 및 VSV-G로 이루어진 군으로부터 선택된 정제 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 특정 실시양태에서 알부민 결합 단백질, 알칼리 포스파타제, AU1 에피토프, AU5 에피토프, 박테리오파지 T7 에피토프(T7-태그), 박테리오파지 V5 에피토프(V5-태그), 바이오틴-카복시 담체 단백질, 청설 바이러스 태그(B-태그), 칼모듈린 결합 펩티드, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제, 셀룰로스 결합 도메인, 키틴 결합 도메인, 콜린 결합 도메인, 디하이드로폴레이트 환원효소, E2 에피토프, FLAG 에피토프, 갈락토스 결합 단백질, 녹색 형광 단백질, Glu-Glu(EE-태그), 글루타티온 S-트랜스퍼라제, 인간 인플루엔자 헤마글루티닌, 히스티딘 친화성 태그, 호스라디쉬 퍼록시다제, HSV 에피토프, 케토스테로이드 이소머라제, KT3 에피토프, lacz, 루시퍼라제, 말토스 결합 단백질, myc 에피토프, NusA, PDZ 도메인, PDZ 리간드, 폴리아르기닌(Arg-태그), 폴리아스파르테이트(Asp-태그), 폴리시스테인(Cys-태그), 폴리히스티딘(His-태그), 폴리페닐알라닌(Phe-태그), 프로피니티 eXact, 단백질 C, S1-태그, S-태그, 스트렙타바딘 결합 펩티드, 스타필로코커스 단백질 A, 스타필로코커스 단백질 G, 스트렙-태그, 스트렙타바딘, 작은 유비퀴틴 유사 변형제, 탠덤 친화성 정제, T7 에피토프, 티오레독신, TrpE, 유비퀴틴, 유니버살 및 VSV-G로 이루어진 군으로부터 선택된 정제 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 폴리히스티딘(His-태그), 예컨대, 5개의 히스티딘, 6개의 히스티딘, 7개의 히스티딘, 8개의 히스티딘, 9개의 히스티딘, 10개의 히스티딘, 11개의 히스티딘, 12개의 히스티딘, 13개의 히스티딘, 14개 히스티딘 또는 15개 히스티딘을 포함하는 His-태그이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 서열: AHHHHHHGSDDDDK(서열번호 234)의 His-태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 중 하나는 정제 태그이고, 예컨대, 화학식 (I)의 Tag1은 정제 태그이고 화학식 (I)의 Tag2는 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 정제 태그이고 Tag1은 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 둘 다는 동일하거나 상이할 수 있는 정제 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 특정 실시양태에서 Fc, Fc 단편, IgG, IgG 단편, 항체, 항체 단편, 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 단편, 트랜스페린, 연장된 재조합 폴리펩티드(XTEN), 프롤린-알라닌-세린 중합체(PAS), 프롤린-알라닌 중합체(PA), 엘라스틴 유사 펩티드(ELP), 동종-아미노산 중합체(HAP), 젤라틴 유사 단백질(GLK), 또는 항체 단편에 대한 CG β-서브유닛으로 이루어진 군으로부터 선택된 안정화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 특정 실시양태에서 Fc, Fc 단편, IgG, IgG 단편, 항체, 항체 단편, 인간 혈청 알부민, 알부민 결합 단편, 트랜스페린, 연장된 재조합 폴리펩티드(XTEN), 프롤린-알라닌-세린 중합체(PAS), 프롤린-알라닌 중합체(PA), 엘라스틴 유사 펩티드(ELP), 동종-아미노산 중합체(HAP), 젤라틴 유사 단백질(GLK), 또는 항체 단편에 대한 CG β-서브유닛으로 이루어진 군으로부터 선택된 안정화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 중 하나는 안정화 태그이고, 예컨대, 화학식 (I)의 Tag1은 안정화 태그이고 화학식 (I)의 Tag2는 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 안정화 태그이고 Tag1은 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 둘 다는 동일하거나 상이할 수 있는 안정화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 특정 실시양태에서 항체, 항체 단편, Fab, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, 파이노머®, 쿠니츠 도메인 펩티드, 모노바디, nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체 또는 나노바디®, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 및 천연 또는 변형 펩티드 또는 단백질 수용체 리간드로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1은 특정 실시양태에서 항체, 항체 단편, Fab, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, 쿠니츠 도메인 펩티드, 모노바디, nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 및 천연 또는 변형 펩티드 또는 단백질 수용체 리간드로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 특정 실시양태에서 항체, 항체 단편, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, 파이노머®, 쿠니츠 도메인 펩티드, 모노바디, nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체 또는 나노바디®, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 및 천연 또는 변형 펩티드 또는 단백질 수용체 리간드로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 특정 실시양태에서 항체, 항체 단편, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, 쿠니츠 도메인 펩티드, 모노바디, nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 및 천연 또는 변형 펩티드 또는 단백질 수용체 리간드로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 중 하나는 표적화 태그이고, 예컨대, 화학식 (I)의 Tag1은 표적화 태그이고 화학식 (I)의 Tag2는 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag2는 표적화 태그이고 Tag1은 상이한 유형의 태그이거나 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 Tag1 및 Tag2 둘 다는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 표적화 태그이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 "Tag1"은 존재하지 않는다. 즉, y는 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 "Tag1"은 존재한다. 즉, y는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 "Tag2"는 존재하지 않는다. 즉, z는 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 "Tag2"는 존재한다. 즉, z는 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 9의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 10의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 37의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 38의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 39의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 40의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 41의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 42의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 216의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 217의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 218의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 219의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 220의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 221의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 222의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 214의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 223의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 224의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 225의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 226의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 227의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 228의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 27의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 28의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 215의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 29의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 12의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 13의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 43의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 44의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 45의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 46의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 47의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 14의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 48의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 15의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 16의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 49의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 50의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 51의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 52의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 53의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 54의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 18의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 19의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 55의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 56의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 57의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 58의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 59의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 20의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 60의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 21의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 22의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 61의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 62의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 63의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 64의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 65의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 66의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 24의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 25의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 67의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 68의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 69의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 70의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 71의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 26의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 72의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 30의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 31의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 73의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 74의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 75의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서. 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 76의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 77의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 32의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 78의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 33의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 34의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 79의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 80의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 81의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 82의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 83의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 35의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고 화학식 (I)의 z는 0이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 84의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 204의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 205의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 206의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 207의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 폴리히스티딘(His-태그)이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 208의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 209의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 0이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 210의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 36의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 4의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 211의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 17의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 229의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 23의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 0이고; 화학식 (I)의 z는 1이고 화학식 (I)의 "Tag2"는 6개의 히스티딘을 포함하는 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 230의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 x는 1이고; 화학식 (I)의 SEQ A는 서열번호 1의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ B는 서열번호 11의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 SEQ C는 서열번호 3의 서열을 갖고; 화학식 (I)의 y는 1이고; 화학식 (I)의 z는 0이고 화학식 (I)의 "Tag1"은 서열번호 234의 서열을 가진 His 태그이다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 231의 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 9; 서열번호 10; 서열번호 12; 서열번호 13; 서열번호 15; 서열번호 16; 서열번호 18; 서열번호 19; 서열번호 21; 서열번호 22; 서열번호 24; 서열번호 25; 서열번호 30; 서열번호 31; 서열번호 33; 서열번호 34, 서열번호 216; 서열번호 217; 서열번호 224; 및 서열번호 225로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 9; 서열번호 12; 서열번호 15; 서열번호 18; 서열번호 21; 서열번호 24; 서열번호 30; 서열번호 33; 서열번호 216; 및 서열번호 224로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 10; 서열번호 13; 서열번호 16; 서열번호 19; 서열번호 22; 서열번호 25; 서열번호 31; 서열번호 34; 서열번호 217; 및 서열번호 225로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 9의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 10의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 12의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 13의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 15의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 16의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 18의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 19의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 21의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 22의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 24의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 25의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 30의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 31의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 33의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 34의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 216의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 217의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 224의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 225의 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 적어도 하나의 O-연결 N1 글리칸, 적어도 하나의 O-연결 N2 글리칸, 또는 적어도 하나의 O-연결 N1과 적어도 하나의 O-연결 N2 글리칸의 조합을 포함할 수 있거나 글리코실화되지 않을 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 적어도 하나, 예컨대, 하나의 O-연결 N1 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 적어도 하나, 예컨대, 하나의 O-연결 N2 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 적어도 하나, 예컨대, 하나의 O-연결 N1 글리칸과 적어도 하나, 예컨대, 하나의 O-연결 N2 글리칸의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 SEQ A는 O-글리코실화되지 않는다. 특정 실시양태에서, O-연결 N1 글리칸 대 O-연결 N2 글리칸의 비는 1:1, 1:2, 1:3 또는 1:4이다. 특정 실시양태에서, O-연결 N1 글리칸 대 O-연결 N2 글리칸의 비는 1:1이다. 특정 실시양태에서, O-연결 N1 글리칸 대 O-연결 N2 글리칸의 비는 1:2이다. 특정 실시양태에서, N1 글리칸 대 N2 글리칸의 비는 1:3이다. 특정 실시양태에서, N1 글리칸 대 N2 글리칸의 비는 1:4이다.
화학식 (I)의 IL-2 단백질은 특정 실시양태에서 적어도 하나의 N-연결 바이안테나형 파우시만노스 글리칸을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G0 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G1 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G2 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G0B 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G1B 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G2B 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G0F 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G1F 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G2F 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대 하나의 N-연결 G0BF 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G1BF 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 적어도 하나, 예컨대, 하나의 N-연결 G2BF 글리칸을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 단백질은 바이안테나형 파우시만노스 글리칸의 혼합물을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 단백질은 2개 초과의 Gal 잔기, 예컨대, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 Gal 잔기, 및/또는 2개 초과의 NeuAc 잔기, 예컨대, 3개 또는 4개의 NeuAc 잔기를 가진 N-연결 테트라안테나형 파우시만노스 글리칸을 포함한다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 N-연결 또는 O-연결 글리칸은 화학식 (I)의 단백질의 반감기를 연장시킨다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 N-연결 또는 O-연결 글리칸은 글리코실화 모티프와 함께 도입된 돌연변이를 면역 인식으로부터 차폐한다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 N-연결 또는 O-연결 글리칸은 글리코실화 모티프와 함께 도입된 돌연변이가 항체 또는 T 세포 수용체(TCR)에 의해 인식되는 것을 차단한다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 N-연결 또는 O-연결 글리칸은 친화성 정제에 사용될 수 있다. 예를 들어, N-연결 글리칸은 렉틴을 통한 친화성 정제에 사용될 수 있다.
적어도 하나의 글리칸이 SEQ B 모이어티에 존재하지만, 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 다른 곳, 예컨대, SEQ A 또는 SEQ C에도 글리칸이 존재할 수 있음이 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 편향된 IL-2이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 이러한 올리고뉴클레오타이드 서열은 DNA, RNA 및 cDNA 서열로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 DNA 서열이다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 RNA 서열이다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 cDNA 서열이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 진핵 시스템, 원핵 시스템 또는 무세포 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 진핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 원핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드 서열은 무세포 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 7의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 8의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 202의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 203의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 233의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 244의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 245의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA 서열은 서열번호 246의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA 서열은 mRNA 서열이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 원핵 시스템, 예컨대, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli); 바실러스(Bacillus) 종, 예컨대, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis); 코리네박테리움(Corynebacterium) 종, 예컨대, 코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum); 및 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens)로 이루어진 군으로부터 선택된 박테리아 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 플라스미드 형태의 DNA 서열이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 진핵 시스템, 예컨대, 포유동물 시스템, 예컨대, 포유동물 세포, 예컨대, 중국 햄스터 난소 세포(CHO), 마우스 골수종 림프모세포양(예컨대, NS0 세포), Sp2/0 세포, 마우스 섬유모세포(예컨대, NIH3T3 세포), 및 완전 인간 세포, 예컨대, 인간 배아 신장 세포 HEK 293, HeLa 세포, 인간 배아 망막 세포(예컨대, 크루셀(Crucell)의 Per.C6) 또는 인간 양수세포(예컨대, 글리코토프(Glycotope) 및 CEVEC) 등); 효모, 예컨대, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 야로위아 리폴라이티카(Yarrowia lipolytica) 또는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris); 사상균, 예컨대, 아스퍼길루스(Aspergillus), 트리코데르마(Trichoderma) 또는 마이셀리오프토라 써모필라(Myceliophthora thermophila); 바큘로바이러스 감염 세포, 예컨대, 바큘로바이러스 감염 곤충 세포, 예컨대, Sf9, Sf21, Hi-5 균주; 비용해성 곤충 세포 발현 시스템, 예컨대, Sf9, Sf21, Hi-5, 슈나이더(Schneider) 2 세포 또는 슈나이더 3 세포; 및 식물 또는 식물 세포, 예컨대, 아라비돕시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana), 니코티아나 벤타미아나(Nicotiana benthamiana), 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum), 메디카고 사티바(Medicago sativa), 렘나 마이너(Lemna minor) 또는 파이스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens) 및 이의 세포로 이루어진 군으로부터 선택된 진핵 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 CHO 세포에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열은 포유동물 시스템에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 플라스미드 형태의 DNA 서열이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 IL-2, 특히 편향된 IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 것이다. 특정 실시양태에서, IL-2, 특히 편향된 IL-2로 치료할 수 있는 상기 질환은 암이다. 특정 실시양태에서, 이러한 용도를 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 DNA, RNA 또는 cDNA, 특히 변형된 DNA, 변형된 RNA 또는 변형된 cDNA이다. 특정 실시양태에서, 질환 치료에 사용하기 위한 이러한 올리고뉴클레오타이드는 특정 실시양태에서 고양이, 개, 말, 소, 양, 비인간 영장류 또는 인간과 같은 포유동물인 환자에게 투여된다.
특정 실시양태에서, IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 DNA 분자, 특히 변형된 DNA 분자이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA는 변형된 DNA이다. 특정 실시양태에서, DNA의 변형은 골격 변형, 입체구조적 제약 변형 및 화학적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA의 입체구조적 제약 변형은 잠금 핵산(LNA), 제약된 2'-O-에틸-(cEt) 및 트리사이클로-DNA(tcDNA)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 DNA의 골격 변형은 2'-O-메틸(2'-OMe), 2'-O-메톡시-에틸(2'-MOE) 및 2'-플루오로(2'-F) 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, DNA의 변형은 골격 변형, 입체구조적 제약 변형 및 화학적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 변형의 조합을 포함한다.
특정 실시양태에서, IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 cDNA 분자, 특히 변형된 cDNA 분자이다.
특정 실시양태에서, IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 RNA 분자, 특히 변형된 RNA 분자이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA는 변형된 RNA이다. 특정 실시양태에서, RNA의 변형은 골격 변형, 리보스 변형, 입체구조적 제약 변형 및 화학적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA의 리보스 변형은 RNA 골격에서 포스포디에스테르(PO)를 포스포로티오에이트(PS)로 대체하는 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA의 골격 변형은 2'-O-메틸(2'-OMe), 2'-O-메톡시-에틸(2'-MOE) 및 2'-플루오로(2'-F) 치환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA의 화학적 변형은 핵염기의 변화이다. 특정 실시양태에서, 핵염기의 변화는 포스포로디아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO) 또는 펩티드 핵산(PNA)이다. 특정 실시양태에서, RNA의 변형은 골격 변형, 리보스 변형, 입체구조적 제약 변형 및 화학적 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 변형의 조합을 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA는 개선된 전달을 위해 변형된다. 특정 실시양태에서, 개선된 전달을 위한 변형은 특정 모이어티에의 화학적 접합 및 나노미립자 담체에의 혼입 또는 부착으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학적 접합체는 중합체, 세포 투과 펩티드(CPP), 지질, 항체, 수용체 리간드 및 앱타머로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 중합체는 덴드리머이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 PEG, 폴리(락타이드-코-글리콜산)(PLGA) 및 폴리포스파젠으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 중합체는 PEG이다. 특정 실시양태에서, 나노미립자 담체는 지질, 중합체 및/또는 펩티드를 포함하는 나노미립자 담체이다. 특정 실시양태에서, 지질을 포함하는 나노미립자 담체는 지질 나노입자(LNP) 및 엑소좀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 나노미립자 담체는 중합체 덴드리머를 포함한다. 특정 실시양태에서, 나노미립자 담체는 PEG, 폴리(락타이드-코-글리콜산)(PLGA) 및 폴리포스파젠으로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 RNA의 전달에 사용되는 지질 나노입자(LNP)는 3차 또는 4차 아민을 가진 이온화 가능한 또는 양이온성 지질 또는 중합체성 물질; 양쪽성이온성 지질(예를 들어, 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민[DOPE]); 콜레스테롤; 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-지질 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 양이온성 지질, 생분해성 이온화 가능한 지질, 지질 나노입자(LNP) 내로의 공-제제화, 나노리포좀, 유화액, 중합체성 담체, 전기천공, 지질감염, 인산칼슘 침전, 나노입자 기반 형질감염, 바이러스 기반 형질감염, 또는 양이온성 중합체, 예컨대, DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민 기반 형질감염으로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 생체외에서 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 생체내에서 세포 내로 전달된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 인간 대상체의 숙주 세포에서의 발현을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 생체내 또는 생체외에서 숙주 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 생체내에서 숙주 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 생체외에서 숙주 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 인간 대상체의 숙주 세포 내로 전달되고, 그 후 이 세포는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 발현한다. 특정 실시양태에서, 상기 숙주 세포는 면역 세포이다. 특정 실시양태에서, 상기 면역 세포는 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 골수 세포, 수지상 세포, 적혈구, 대식세포, B 세포 또는 임의의 다른 유전적으로 변형된 면역 세포 유형으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 바이러스 벡터를 사용하는 바이러스 기반 형질감염을 통해 세포 내로 전달된다. 특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 DNA 기반 바이러스 벡터 및 RNA 기반 바이러스 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 DNA 기반 바이러스 벡터는 폭스바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스 및 헤르페스 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 헤르페스 바이러스는 헤르페스 심플렉스 바이러스 1 및 헤르페스 심플렉스 바이러스 2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 헤르페스 심플렉스 바이러스 1은 적어도 하나의 바이러스 유전자, 예컨대, ICP34.5, ICP6/UL39 및 ICP47로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자의 결실을 가진다. 특정 실시양태에서, 헤르페스 심플렉스 바이러스 1은 G207, HSV1716, NV1020 및 탈리모진 라헤르파렙벡(Talimogene laherparepvec)(Oncovex-GMCSF)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, DNA 기반 바이러스 벡터는 종양용해성 바이러스이다. 특정 실시양태에서, DNA 기반 종양용해성 바이러스는 헤르페스 심플렉스 바이러스 1, 아데노바이러스 및 폭스바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 종양용해성 아데노바이러스는 H101, ColoAd1(Ad11p/Ad3) 및 Onyx-015(Ad2/5 dl1520)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 RNA 기반 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 레트로바이러스, 알파바이러스, 플라비바이러스, 랍도바이러스, 홍역 바이러스, 폴리오바이러스, 인간 거품 바이러스 및 뉴캐슬병 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 예컨대, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스, 몰로니 뮤린 육종 바이러스 및 뮤린 줄기 세포 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 레트로바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 예컨대, 인간 면역결핍 바이러스 1, 인간 면역결핍 바이러스 2 및 말 감염성 빈혈 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 렌티바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 알파바이러스, 예컨대, 셈리키 포레스트 바이러스, 신드비스 바이러스, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스 및 M1 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 알파바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 플라비바이러스, 예컨대, 쿤진 바이러스, 웨스트 나일 바이러스, 황열 바이러스 및 뎅기 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 플라비바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 랍도바이러스, 예컨대, 광견병 및 수포성 구내염 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 랍도바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 홍역 바이러스, 예컨대, MV-Edm이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 피코르나바이러스, 예컨대, 콕사키바이러스 및 세네카 밸리 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된 피코르나바이러스이다.
특정 실시양태에서, RNA 기반 바이러스 벡터는 종양용해성 바이러스이다. 특정 실시양태에서, RNA 기반 종양용해성 바이러스는 MV-Edm, 뉴캐슬병 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, 세네카 밸리 바이러스 및 콕사키바이러스로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 바이러스 유사 소포체(VLV)이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 유사 소포체는 2개의 바이러스로부터의 구성요소의 하이브리드이다. 특정 실시양태에서, 바이러스 유사 소포체는 알파바이러스 셈리키 포레스트 바이러스(SFV) 및 랍도바이러스 소포성 구내염 바이러스(VSV)로부터의 구성요소의 하이브리드이다.
화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 바이러스 벡터를 숙주 세포 내로 성공적으로 전달한 후, 상기 숙주 세포는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 발현하고 분비할 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드는 백신 제제로서 전달된다. 특정 실시양태에서, 상기 백신 제제는 DNA 기반, RNA 기반, 세포 기반 또는 바이러스 기반 백신으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 세포는 조작된 면역 세포이다. 특정 실시양태에서, 조작된 면역 세포는 T 세포, 자연 살해(NK) 세포, 골수 세포, 수지상 세포, 적혈구, 대식세포, B 세포 또는 임의의 다른 유전적으로 변형된 면역 세포 유형으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 T 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 T 세포는 TCR 조작된 T(TCR-T) 세포, 키메라 항원 수용체 변형된 T(CAR-T) 세포 및 보편적 사이토카인 사멸을 위해 재지정된 T 세포(TRUCK)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 조작된 T 세포는 TCR-T 세포이다. 특정 실시양태에서, 조작된 T 세포는 CAR-T 세포이다. 특정 실시양태에서, 조작된 T 세포는 TRUCK이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 α/β T 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 γ/δ T 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 자연 살해 T 세포에서 발현된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 NK 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 NK 세포는 키메라 항원 수용체 변형 NK(CAR-NK) 세포이다. 특정 실시양태에서, 조작된 NK 세포는 림포카인 활성화 킬러(LAK) 세포이다. 특정 실시양태에서, 조작된 NK 세포는 NK-92 세포이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 골수 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 대식세포는 CAR 골수 세포이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 수지상 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 수지상 세포는 CAR 수지상 세포이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 대식세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 대식세포는 CAR 대식세포이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 적혈구에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 적혈구에서 발현되고 세포 표면에 제시된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 B 세포에서 발현된다. 특정 실시양태에서, 조작된 대식세포는 CAR B 세포이다.
조작된 면역 세포에서 발현된 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 상기 세포로부터 분비될 수 있는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 발현하는 조작된 면역 세포는 세포 요법에 사용된다. 특정 실시양태에서, 세포 요법은 입양 면역 세포 요법이다. 특정 실시양태에서, 입양 면역 세포 요법은 동종 또는 이종 입양 면역 세포 요법이다. 특정 실시양태에서, 입양 면역 세포 요법은 동종 입양 면역 세포 요법이다. 특정 실시양태에서, 입양 면역 세포 요법은 이종 입양 면역 세포 요법이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 면역 세포와 같은 세포의 시험관내 또는 생체외 자극에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 조작된 면역 세포의 자극을 위한 것이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 T 세포, NK 세포, 대식세포 및 수지상 세포의 군으로부터 선택된 세포의 자극을 위한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 재조합 IL-2 단백질을 발현시키는 방법으로서, a) 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 하나 이상의 유전자를 발현하는 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 b) 숙주 세포 배양물로부터 관심 있는 상기 재조합 IL-2 단백질을 분리하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포와 같은 원핵 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 에스케리키아 콜라이; 바실러스 종, 예컨대, 바실러스 서브틸리스; 코리네박테리움 종, 예컨대, 코리네박테리움 글루타미쿰; 및 슈도모나스 플루오레센스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 에스케리키아 콜라이이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바실러스 종이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 코리네박테리움 종이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 슈도모나스 플루오레센스이다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 효모, 예컨대, 사카로마이세스 세레비지애 또는 피키아 파스토리스; 사상균, 예컨대, 아스퍼길루스, 트리코데르마 또는 마이셀리오프토라 써모필라; 바큘로바이러스 감염 세포, 예컨대, 바큘로바이러스 감염 곤충 세포, 예컨대, Sf9, Sf21, Hi-5 균주, 또는 바큘로바이러스 감염 포유동물 세포, 예컨대, HeLa, 인간 배아 신장 세포 HEK 293 또는 중국 햄스터 난소 세포(CHO); 포유동물 시스템, 예컨대, 마우스 골수종 림프모세포양(예컨대, NS0 세포), 마우스 섬유모세포(예컨대, NIH3T3 세포), CHO 세포 및 완전 인간 세포, 예컨대, HEK 293 세포, 인간 배아 망막 세포(예컨대, 크루셀의 Per.C6) 및 인간 양수세포(예컨대, 글리코토프 및 CEVEC); 및 비용해성 곤충 세포 발현 시스템, 예컨대, Sf9, Sf21, Hi-5, 슈나이더 2 세포 또는 슈나이더 3 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 효모 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 사카로마이세스 세레비지애 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 피키아 파스토리스 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 사상균의 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 아스퍼길루스 종의 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 트리코데르마 종의 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 마이셀리오프토라 써모필라 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 세포, 예컨대, 바큘로바이러스 감염 곤충 세포 또는 바큘로바이러스 감염 포유동물 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 Sf9 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 Sf21 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 Hi-5 균주의 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 HeLa 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 인간 신장 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 Sf9 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 바큘로바이러스 감염 CHO 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 마우스 골수종 림프모세포양 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 마우스 섬유모세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 HEK 293 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 인간 배아 망막 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 인간 양수세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 마우스 섬유모세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 비용해성 곤충 세포 발현 시스템이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 Sf9 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 Sf21 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 Hi-5 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 슈나이더 2 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 슈나이더 3 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 아라비돕시스 탈리아나 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 니코티아나 벤타미아나 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 니코티아나 타바쿰 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 메디카고 사티바 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 렘나 마이너 세포이다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 파이스코미트렐라 파텐스 세포이다.
특정 실시양태에서, 상기 언급된 숙주 세포 및 유기체는 천연 유기체의 글리코실화를 변화시켜, 예를 들어, 인간과 같은 포유동물에 존재하는 글리코실화와 더 유사하거나 동일한 글리코실화를 수득하도록 (유전적으로 또는 다른 방식으로) 변형될 수 있다.
특정 실시양태에서, 발현 숙주 세포는 예를 들어, 특정 글리코실트랜스퍼라제를 결실시키거나 과발현함으로써, 다른 유기체로부터의 글리코실트랜스퍼라제를 도입함으로써, 또는 변경된 기질 및/또는 수용체 특이성을 가진 변형된 글리코실트랜스퍼라제를 도입함으로써, 특정 글리코실화 패턴 또는 보다 균질한 글리코실화 패턴을 생성하도록 변형된다. 발현 숙주 세포는 특정 실시양태에서 숙주 세포에 천연적으로 존재하지 않는 특정 탄수화물 잔기를 합성하도록 변형될 수 있다.
관심 있는 분비 단백질의 수율을 증가시키는 한 가지 방법은 단백질이 분비되도록 유도하는 신호 또는 리더 서열을 절단하는 기작을 개선하는 것이다. 신호 또는 리더 서열의 정확한 프로세싱은 성숙 분비 단백질의 N-말단을 유리하고 일반적으로 효율적인 분비를 달성하는 데 필요하기 때문에 분비 경로에서 중요한 단계이다. 신호 또는 리더 서열의 불완전한 절단은 전형적으로 단백질의 세포내 축적을 유발하지만, 일부 경우 불완전하게 프로세싱된 생성물도 분비될 수 있다.
대부분의 발현 시스템에서, 분비는 분비될 단백질의 N-말단에 융합되고 분비 전 또는 분비와 함께 숙주 세포의 특정 프로세싱 효소에 의해 절단되는 분비 신호 펩티드에 의해 유도된다. 따라서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 특정 실시양태에서 분비 전 또는 분비와 함께 숙주 세포의 특정 프로세싱 효소에 의해 절단되는 분비 신호 펩티드와 함께 발현된다.
포유동물 발현 시스템에서, 신호 펩티드는 특정 실시양태에서 임의의 천연 분비 단백질의 신호 펩티드이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 포유동물 발현 시스템을 위한 신호 펩티드는 특정 실시양태에서 천연 분비 단백질의 신호 펩티드이다. 특정 실시양태에서, 포유동물 발현 시스템을 위한 신호 펩티드는 인 실리코(in silico) 설계되었거나 분비를 효율적으로 유도하는 것으로 실험적으로 발견된 비천연 합성 신호 서열이다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 238, 서열번호 239 및 서열번호 240으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 238의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 239의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열번호 240의 서열을 가진다.
특정 실시양태에서, 신호 펩티드를 가진 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 248, 서열번호 250 및 서열번호 252로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드를 가진 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 248의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드를 가진 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 250의 서열을 가진다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드를 가진 화학식 (I)의 IL-2 단백질은 서열번호 252의 서열을 가진다.
이. 콜라이에서 단백질을 주변세포질 분비로 유도하는 신호 서열은 천연적으로 주변세포질로 분비되는 임의의 박테리아의 신호 펩티드일 수 있다. 특정 실시양태에서, 이. 콜라이에서 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 발현하기 위한 신호 펩티드는 phoA, dsbA, gllI, mal, OmpA, OmpC, OmpT, pelB, torA, torT, EOX, STII, SfmC, lamB, MglB, MmAp 및 tolB로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 신호 펩티드는 인 실리코 설계되었거나 분비를 효율적으로 유도하는 것으로 실험적으로 발견된 비천연 서열이다.
효모 발현 시스템, 예컨대, 사카로마이세스 세레비지애 및 피키아 파스토리스에서, 발현을 유도하는 리더 서열은 신호 서열 및 전구펩티드를 포함할 수 있으며, 이들 중 신호 서열은 단백질이 ER로 분비되도록 유도하고 ER 내로의 수송과 함께 절단되고, 전구펩티드는 생장 배지 내로 분비되기 전에 Kex2 효소에 의해 골지체에서 절단된다. 리더 서열은 천연 분비 효소 또는 페로몬의 리더 서열일 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 효모 발현 시스템에서 발현하기 위한 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 리더 서열은 사카로마이세스 세레비지애 교배 인자 알파 리더 서열, SUC2 리더 서열 및 VOA1 리더 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 리더 서열은 또 다른 효모 또는 사상균으로부터의 분비 단백질로부터 유래하거나, 인 실리코 설계된 비천연 리더 서열일 수 있거나, 접힘 및 분비를 효율적으로 유도하는 것으로 실험적으로 발견된 리더 서열일 수 있다. 리더 서열은 예를 들어, 무작위 아미노산 치환의 많은 조합을 포함하는 큰 리더 서열 라이브러리로부터 실험적으로 확인되었을 수도 있다.
숙주 세포의 내생성 프로세싱 효소에 의한 신호 또는 리더 서열의 정확한 절단은 프로세싱되고 분비된 성숙 재조합 단백질의 N-말단을 구성하는, 절단 부위 바로 다음에 있는 아미노산 서열에 의해 좌우된다. 관심 있는 단백질의 특정 N-말단 아미노산 서열 이외에, 관심 있는 접힌 단백질에서 N-말단의 접근성은 신호 서열 또는 리더가 얼마나 효율적으로 프로세싱되는지에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 파묻힌 N-말단은 프로세싱 프로테아제에 접근될 수 없으므로 분비 전략에 있어서 문제가 될 것이다.
입수 가능한 실험 데이터에 기반한 예측 모델을 이용하여, 특정 아미노산 서열이 신호 펩티다제 복합체에 의해 절단될 확률을 계산할 수 있다. 이러한 도구는 온라인에서 입수 가능하여, 당분야에서 숙련된 자가 진핵 세포 및 박테리아에서 신호 펩티드의 정확한 프로세싱의 확률을 예측할 수 있게 한다. 효모 발현 시스템에서, 리더 서열은 전형적으로 ER에서 신호 펩티다제 복합체에 의해 절단되는 신호 서열, 및 골지체에서 Kex2 푸린 프로테아제에 의해 절단되는 전구펩티드 둘 다를 포함한다. Kex2에 대한 인식 부위인 KR는 효모 종 전체에 걸쳐 Kex2 기질 사이에 잘 보존되어 있다. Kex2 기질의 P1', P2' 및 P4' 위치에서 음으로 하전된 아미노산이 과도하게 나타나는 것으로 알려져 있다. 그러나. Kex2에 의한 잠재적 절단은 전형적으로 사례별로 실험에 의해 조사될 필요가 있다.
신호 또는 리더 서열의 정확한 프로세싱이 정확하게 접힌 가용성 단백질의 효율적인 분비에 필요한 여러 특징 중 하나라는 것은 당분야에서 통상의 기술을 가진 자에게 잘 알려져 있다. 중요한 특징의 예는 적절한 전사 및 번역 속도, 번역과 동시 또는 번역 후 ER 내로의 전위, ER에서의 정확한 이황화 가교의 접힘 및 형성, 및 세포 외부로의 소포 수송이다. 따라서, 분비 효율의 임의의 컴퓨터 보조 예측의 실험적 검증은 필수적이다.
부정확하게 접히거나 응집된 단백질의 세포내 축적은 숙주 세포의 생리에 부정적으로 영향을 미쳐, 잠재적으로 스트레스 반응을 유도하고 감소된 생장 속도 및 세포 적합도를 야기할 수 있는 것으로 알려져 있다. 따라서, 신호 또는 리더 서열의 프로세싱을 개선하여 세포내 축적을 피하는 것은 생장 속도, 세포 밀도 및 세포 대량 생산성을 증가시켜, 관심 있는 단백질의 전체 생산성에 긍정적으로 기여할 수 있다. 또한, 더 적합한 세포주는 규모 및 배양 조건 전체에 걸쳐 강력한 성능을 갖고 공정 교란에 더 잘 대처할 가능성이 더 높다. 더욱이, 정상 생장 속도 및 세포 적합도를 가진 세포주가 감소된 생장 속도 및 세포 적합도를 가진 세포주보다 형질전이유전자 발현의 효과, 예컨대, 생성물의 세포내 축적으로부터 비롯된 불안정성의 더 낮은 위험을 가진다는 것은 당분야에서 숙련된 자에 의해 일반적으로 인식된다. 형질전이유전자 발현에 의해 부여된 감소된 생장 속도를 가진 세포주의 경우, 형질전이유전자 발현을 감소시키는 사건(예를 들어, 유전자 침묵 사건, 돌연변이, 또는 직접 반복부 재조합을 통한 형질전이유전자의 루핑 아웃)의 발생은 경쟁적 생장 이점을 야기한다. 감소된 발현을 가진 세포는 여전히 고수준으로 형질전이유전자를 발현하는, 집단 내의 다른 세포를 빠르게 능가하여, 불안정한 발현 표현형을 초래할 것이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 하나 이상의 유전자를 발현하는 숙주 세포는 그의 게놈 내에 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 하나 이상의 유전자를 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 상기 접합체는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는, 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 접합된 적어도 하나, 예컨대, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 모이어티 Mmod를 포함한다. 이러한 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2 단백질의 N-말단, C-말단, 아미노산 측쇄 또는 내부 부위에 있을 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 N-말단에 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 모이어티 Mmod의 부착은 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 C-말단에 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 모이어티 Mmod의 부착은 IL-2 모이어티의 내부 부위, 예컨대, 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 아미노산 측쇄에 있다. 하나 초과의 모이어티 Mmod가 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 부착되는 경우, 부착은 N-말단, C-말단 및 내부 부위로 이루어진 군으로부터 선택된 부착 부위의 임의의 조합에서 일어날 수 있다.
특정 실시양태에서, Mmod는 치환기이다. 바람직하게는, 이러한 치환기는 15 Da 내지 1 kDa의 분자량을 가진다.
특정 실시양태에서, Mmod는 중합체 모이어티이다. 이러한 중합체 모이어티는 선형, 분지형 또는 멀티아암 중합체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 중합체는 선형 중합체이다. 또 다른 실시양태에서, 중합체는 분지형 중합체이다. 특정 실시양태에서, 이러한 분지형 중합체는 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 분지점을 가진다. 각각의 분지점으로부터 2개, 3개 또는 4개의 중압체 아암이 연장될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 중합체는 멀티아암 중합체이다. 이러한 멀티아암 중합체는 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 중합체 아암을 가질 수 있다.
Mmod가 중합체 모이어티인 경우, 특정 실시양태에서 이러한 중합체 모이어티는 0.5 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대, 1 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대, 2 kDa 내지 500 kDa, 3 kDa 내지 200 kDa, 5 kDa 내지 120 kDa 또는 7 kDa 내지 40 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 0.5 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 1 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 2 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 3 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 4 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 5 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 약 7.5 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 10 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 15 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 20 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 30 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 40 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 50 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 70 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 80 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 90 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 약 100 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 0.5 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 1 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 2 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 3 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 4 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 5 kDa의 분자량을 가진다. 한 실시양태에서, 이러한 중합체는 7.5 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 10 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 15 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 20 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 30 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 40 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 50 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 70 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 80 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 90 kDa의 분자량을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 중합체 모이어티는 100 kDa의 분자량을 가진다.
Mmod가 중합체 모이어티인 경우, 이러한 중합체 모이어티는 바람직하게는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(젖산), 폴리(젖산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오르가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, Mmod는 PEG 기반 중합체이다.
특정 실시양태에서, Mmod는 히알루론산 기반 중합체이다.
특정 실시양태에서, Mmod는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 화학적으로 접합될 수 있는 펩티드 또는 단백질 모이어티를 포함한다. 바람직하게는, 이 펩티드 또는 단백질 모이어티 Mmod는 IL-2 또는 IL-2 모이어티의 단편이 아니다.
펩티드 또는 단백질 모이어티 형태의 Mmod는 합성 또는 천연 단백질 모이어티, 또는 이의 일부 또는 변이체일 수 있다. 예시적인 펩티드 및 단백질은 천연 생성 형태, 또는 이의 변이체 또는 단편으로서 알부민; 항체 도메인, 예컨대, 면역글로불린의 Fc 도메인 또는 항원 결합 도메인; CTP; 및 CD25를 포함한다.
Mmod와 화학식 (I)의 IL-2 단백질의 부착은 안정한 결합을 통해 달성될 수 있다.
특정 실시양태에서, Mmod는 항체, 항체 단편, 아피바디, 아필린, 아피머, 아피틴, 알파맙, 알파바디, 안티칼린, 아비머, DARPin, 파이노머®, 쿠니츠 도메인 펩티드, 모노바디, nanoCLAMP, 환형 펩티드, 펩티드, 중쇄 단독 항체, VHH 항체 또는 나노바디®, 단일 쇄 가변 단편(scFv), 천연 또는 변형된 펩티드 또는 단백질 수용체 리간드 및 소분자 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 표적화 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, 이 접합체는 화학식 (Ia) 또는 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이다:
상기 식에서,
-D는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하고;
-L1-은 -D에 가역적으로 공유결합된 링커 모이어티이고;
-L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
-Z는 중합체 모이어티 또는 치환된 지방산 모이어티이고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 및 16으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
y는 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (Ia) 및 (Ib)의 접합체는 화학식 (I)의 편향된 IL-2 모이어티 또는 편향된 IL-2 단백질을 방출하며, 여기에서 비서열번호 213의 IL-2에 대한 비편향된 IL-2의 비는 1보다 더 크고, 바람직하게는 2보다 더 크고, 바람직하게는 3보다 더 크고, 바람직하게는 4보다 더 크고, 훨씬 더 바람직하게는 5보다 더 크다. 특정 실시양태에서, 비서열번호 213의 IL-2에 대한 비편향된 IL-2의 비는 10보다 더 크거나, 20보다 더 크거나, 50보다 더 크거나, 70보다 더 크거나, 100보다 더 크거나, 150보다 더 크거나, 200보다 더 크다.
화학식 (Ia) 및 (Ib)의 -D는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 적어도 하나의 모이어티 Mmod를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
화학식 (Ia) 또는 (Ib)의 IL-2 접합체는 적어도 하나의 가역적으로 공유결합된 중합체 모이어티 및/또는 치환된 지방산 모이어티 -Z를 포함한다.
이러한 적어도 하나의 가역적으로 공유결합된 중합체 모이어티 및/또는 치환된 지방산 모이어티의 추가는 화학식 (I)의 IL-2 모이어티의 순환 반감기를 연장시킬 수 있는 반면, 그의 가역적 부착은 충분한 약학 활성을 보장한다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ia)의 접합체이고 치환된 지방산 또는 중합체 모이어티인 하나의 모이어티 -Z를 포함한다. 특정 실시양태에서, -Z는 치환된 지방산이다. 특정 실시양태에서, -Z는 중합체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)의 접합체이고 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 2개의 모이어티 -Z를 포함한다. 특정 실시양태에서, 2개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 특정 실시양태에서, 2개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, 하나의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고 다른 모이어티 -Z는 중합체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)의 접합체이고 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 3개의 모이어티 -Z를 포함한다. 특정 실시양태에서, 모든 3개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 특정 실시양태에서, 모든 3개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, 1개 또는 2개의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고 나머지 모이어티/모이어티들 -Z는 중합체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)의 접합체이고 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 4개의 모이어티 -Z를 포함한다. 특정 실시양태에서, 모든 4개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 치환된 지방산이다. 특정 실시양태에서, 모든 4개의 모이어티 -Z는 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, 1개, 2개 또는 3개의 모이어티 -Z는 치환된 지방산이고 나머지 모이어티/모이어티들 -Z는 중합체 모이어티이다.
-Z가 치환된 지방산 모이어티인 경우, 이것은 바람직하게는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2005/027978A2호 및 제WO2014/060512A1호에 개시된 치환된 지방산 모이어티이다.
-Z가 중합체 모이어티인 경우, 이러한 중합체 모이어티는 특정 실시양태에서 1 kDa 내지 1000 kDa, 예컨대, 2 kDa 내지 500 kDa, 3 kDa 내지 200 kDa, 5 kDa 내지 120 kDa, 10 kDa 내지 100 kDa 또는 15 kDa 내지 80 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 2 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 5 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 10 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 15 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 20 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 30 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 40 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 50 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 60 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 70 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 80 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 90 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 약 100 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 2 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 5 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 10 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 15 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 20 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 30 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 40 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 50 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 60 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 70 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 80 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 90 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 100 kDa의 분자량을 가진 중합체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -Z는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(젖산), 폴리(젖산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오르가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 알기네이트, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함하는 중합체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -Z는 펩티드 또는 단백질 모이어티이다. 바람직하게는, 이러한 펩티드 또는 단백질 모이어티는 IL-2 모이어티 또는 이의 단편이 아니다. 이러한 펩티드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합될 수 있거나 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역적으로 융합될 수 있으며, 이 경우 -L1-은 펩티드 또는 단백질 모이어티이고 -L2-는 바람직하게는 화학 결합이다. 특정 실시양태에서, 이러한 펩티드 또는 단백질 모이어티 -Z는 -L1-L2-를 통해 -D에 화학적으로 접합된다. 특정 실시양태에서, 이러한 펩티드 또는 단백질 모이어티 -Z는 가역적 링커 모이어티 -L1-을 통해 -D에 번역적으로 융합되고, 이 경우 -L1-은 펩티드 또는 단백질 모이어티이고 -L2-는 바람직하게는 화학 결합이다. 이러한 펩티드 또는 단백질 가역적 링커 모이어티 -L1-은 효소적으로 또는 비효소적으로 분해될 수 있는 것으로 이해된다. 효소적 분해를 용이하게 하기 위해 -L1-은 프로테아제 인식 부위를 포함할 수 있다.
-Z가 펩티드 또는 단백질 모이어티인 경우, 특정 실시양태에서 이것은 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 출원 공개 제2012/0035101 A1호에 기재된 융모성 성선자극호르몬의 카복실 말단 펩티드를 포함하는 모이어티; 알부민 모이어티; 랜덤 코일 단백질 모이어티; 및 Fc 융합 단백질 모이어티로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 펩티드 또는 단백질 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 펩티드 또는 단백질 모이어티는 적어도 25개의 아미노산 잔기 및 최대 2000개의 아미노산, 예컨대, 30개의 아미노산 내지 1500개의 아미노산 잔기 또는 50개 내지 500개의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 예컨대, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌 및 프롤린으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 10%, 그러나 75% 미만, 예컨대, 65% 미만은 프롤린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 전체적으로 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2011/144756A1호에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, -Z는 국제 특허 출원 공개 제WO2011/144756호에 개시된 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 51 및 서열번호 61로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질을 포함하는 모이어티는 본원에서 "PA" 또는 "PA 모이어티"로서 지칭된다.
따라서, 특정 실시양태에서, -Z는 PA 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 예컨대, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌, 세린 및 프롤린으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티의 아미노산 잔기의 총수의 적어도 4%, 그러나 40% 미만은 프롤린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2008/155134A1호에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, -Z는 국제 특허 출원 공개 제WO2008/155134A1호에 개시된 서열번호 2, 서열번호 4, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 14, 서열번호 16, 서열번호 18, 서열번호 20, 서열번호 22, 서열번호 24, 서열번호 26, 서열번호 28, 서열번호 30, 서열번호 32, 서열번호 34, 서열번호 36, 서열번호 40, 서열번호 42, 서열번호 44, 서열번호 46, 서열번호 50, 서열번호 52, 서열번호 54 및 서열번호 56으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 세린 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 본원에서 "PAS" 또는 "PAS 모이어티"로서 지칭된다.
따라서, 특정 실시양태에서, -Z는 PAS 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Z는 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하고, 상기 랜덤 코일 단백질 모이어티를 형성하는 아미노산의 총수의 적어도 80%, 예컨대, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%는 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2010/091122A1호에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, -Z는 국제 특허 출원 공개 제WO2010/091122A1호에 개시된 서열번호 182, 서열번호 183, 서열번호 184, 서열번호 185, 서열번호 186, 서열번호 187, 서열번호 188, 서열번호 189, 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 193, 서열번호 194, 서열번호 195, 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 199, 서열번호 200, 서열번호 201, 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 204, 서열번호 205, 서열번호 206, 서열번호 207, 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 211, 서열번호 212, 서열번호 213, 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 217, 서열번호 218, 서열번호 219, 서열번호 220, 서열번호 221, 서열번호 759, 서열번호 760, 서열번호 761, 서열번호 762, 서열번호 763, 서열번호 764, 서열번호 765, 서열번호 766, 서열번호 767, 서열번호 768, 서열번호 769, 서열번호 770, 서열번호 771, 서열번호 772, 서열번호 773, 서열번호 774, 서열번호 775, 서열번호 776, 서열번호 777, 서열번호 778, 서열번호 779, 서열번호 1715, 서열번호 1716, 서열번호 1718, 서열번호 1719, 서열번호 1720, 서열번호 1721 및 서열번호 1722로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 모이어티를 포함한다. 알라닌, 글리신, 세린, 트레오닌, 글루타메이트 및 프롤린을 포함하는 이러한 랜덤 코일 단백질 모이어티를 포함하는 모이어티는 본원에서 "XTEN" 또는 "XTEN 모이어티"로서 지칭된다.
따라서, 특정 실시양태에서, -Z는 XTEN 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Z는 히알루론산 기반 중합체이다.
특정 실시양태에서, -Z는 PEG 기반 모이어티, 예컨대, 선형, 분지형 또는 멀티아암 PEG 기반 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 분지형 PEG 기반 모이어티, 예컨대, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 분지점을 가진 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 1개, 2개 또는 3개의 분지점을 가진 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 1개의 분지점을 가진 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 2개의 분지점을 가진 분지형 PEG 기반 모이어티이다. 특정 실시양태에서, -Z는 3개의 분지점을 가진 분지형 PEG 기반 모이어티이다.
각각의 분기점은 -N<, -CH< 및 >C<로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, -Z는 화학식 (A)의 모이어티를 포함한다:
상기 식에서,
-BP1<, -BP2< 및 -BP3<은 -N< 및 -C(R8)<로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
R8은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 40%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 가진 PEG 기반 쇄이고;
-C1- 및 -C2-는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 임의로 치환되고 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 임의로 치환되고;
각각의 R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11aR11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 R10, R10a, R11, R11a 및 R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 50%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 가진 PEG 기반 쇄이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 60%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 가진 PEG 기반 쇄이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 70%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 가진 PEG 기반 쇄이다. 특정 실시양태에서, -P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 80%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa의 분자량을 가진 PEG 기반 쇄이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 모이어티 -P1, -P2, -P3 및 -P4의 분자량은 서로 독립적으로 5 내지 30 kDa, 예를 들어, 5 내지 25 kDa 또는 8 내지 20 kDa이다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 5 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 7 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 10 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 12 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 15 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 20 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 25 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 약 30 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 7 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 10 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 12 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 15 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 20 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 25 kDa일 수 있다. 특정 실시양태에서, 모이어티 -P1, -P2, -P3 또는 -P4의 분자량은 30 kDa일 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -P1, -P2, -P3 및 -P4는 동일한 구조를 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -BP1<은 -N<이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -BP2< 및 -BP3<은 동일한 구조를 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -BP2< 및 -BP3<은 둘 다 -CH<이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 동일한 구조를 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 -O-, -C(O)N(R10)- 및 3원 내지 10원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 중단된 C1-50 알킬이고; 여기에서 3원 내지 10원 헤테로사이클릴은 적어도 하나의 옥소(=O)로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -C1- 및 -C2-는 화학식 (A-a)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -BP1<에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 각각 -BP2< 또는 -BP3<에의 부착을 나타내고;
q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q4는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5, 6 및 7로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q1은 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q2는 5이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q3은 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-a)의 q4는 3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A)의 -P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 화학식 (A-b)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -Z의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
p는 70 내지 900의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 m은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 m은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 p는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-b)의 q는 6이다.
특정 실시양태에서, -Z는 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함한다:
상기 식에서,
p1, p2, p3 및 p4는 서로 독립적으로 70 내지 900의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p2는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p3은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p4는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (A-c)의 p1, p2, p3 및 p4는 동일하다. 특정 실시양태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다.
특정 실시양태에서, -Z는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2012/02047A1호에 개시된 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -Z는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2013/024048A1호에 개시된 모이어티이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 중 하나 이상을 포함하는 접합체는 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 적어도 하나의 모이어티 Z'에 접합된 상기 화학식 (I)의 단백질인 모이어티 -D를 여러 개 포함하고, 여기에서 모이어티 -L1-은 가역적 결합을 통해 -D에 접합되고 모이어티 -L2-는 Z'에 접합되고, 여기에서 -L1- 및 -L2-는 화학식 (Ia) 및 (Ib)에 대해 정의된 바와 같이 사용되고 Z'는 수불용성 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, 이러한 하이드로겔 Z'는 2-메타크릴로일-옥시에틸 포스포일 콜린, 폴리(아크릴산), 폴리(아크릴레이트), 폴리(아크릴아미드), 폴리(알킬옥시) 중합체, 폴리(아미드), 폴리(아미도아민), 폴리(아미노산), 폴리(무수물), 폴리(아스파르타미드), 폴리(부티르산), 폴리(글리콜산), 폴리부틸렌 테레프탈레이트, 폴리(카프로락톤), 폴리(카보네이트), 폴리(시아노아크릴레이트), 폴리(디메틸아크릴아미드), 폴리(에스테르), 폴리(에틸렌), 폴리(알킬렌 글리콜), 예컨대, 폴리(에틸렌 글리콜) 및 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸 포스페이트), 폴리(에틸옥사졸린), 폴리(글리콜산), 폴리(하이드록시에틸 아크릴레이트), 폴리(하이드록시에틸-옥사졸린), 폴리(하이드록시메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필메타크릴아미드), 폴리(하이드록시프로필 메타크릴레이트), 폴리(하이드록시프로필옥사졸린), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(젖산), 폴리(젖산-코-글리콜산), 폴리(메타크릴아미드), 폴리(메타크릴레이트), 폴리(메틸옥사졸린), 폴리(오르가노포스파젠), 폴리(오르토 에스테르), 폴리(옥사졸린), 폴리(프로필렌 글리콜), 폴리(실록산), 폴리(우레탄), 폴리(비닐 알코올), 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐메틸에테르), 폴리(비닐피롤리돈), 실리콘, 셀룰로스, 카보메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 키틴, 키토산, 덱스트란, 덱스트린, 젤라틴, 히알루론산 및 유도체, 작용화된 히알루론산, 만난, 펙틴, 람노갈락투로난, 전분, 하이드록시알킬 전분, 하이드록시에틸 전분 및 다른 탄수화물 기반 중합체, 크실란 및 이들의 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, Z'는 폴리(알킬렌 글리콜) 기반 또는 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 폴리(프로필렌 글리콜) 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 PEG 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2011/012715A1호 또는 제WO2014/056926A1호에 개시된 PEG 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2018/175788A1호에 개시된 히알루론산 기반 하이드로겔이다.
특정 실시양태에서, Z'는 국제 특허 출원 공개 제WO2013/036847A1호에 개시된 하이드로겔이다. 구체적으로, 특정 실시양태에서, Z'는 적어도 제1 반응성 중합체를 절단 가능한 가교결합제 화합물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성된 하이드로겔이고, 여기에서 상기 절단 가능한 가교결합제 화합물은 제1 반응성 중합체와 반응하는 제1 작용기 -Y1을 포함하고 생리학적 조건 하에서 제거에 의해 절단되는 모이어티를 추가로 포함하며, 여기에서 상기 모이어티는 제2 반응성 중합체와 반응하는 제2 작용기 -Y2를 포함한다. 특정 실시양태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 화학식 (PL-1)을 갖는다:
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
-X는 생리학적 조건 하에서 제거될 수 있는 반응성 중합체에 연결될 수 있는 작용기 및 상기 제2 작용기 -Y2를 포함하고;
-R1, -R2 및 -R5 중 적어도 하나는 중합체에 연결될 수 있는 상기 제1 작용기 -Y1을 포함하고;
-R1 및 -R2 중 하나 및 오직 하나는 -H, 알킬, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
임의로, -R1과 -R2는 연결되어 3원 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
-R1 및 -R2 중 적어도 하나 또는 둘 다는 -CN, -NO2, 아릴, 헤테로아릴, 알케닐, 알키닐, -COR3, -SOR3, -SO2R3 및 -SR4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R3은 -H, 알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -NR9 2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 -H, 알킬, 알케닐알킬, 알키닐알킬, (OCH2CH2)pO-알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로아릴 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 p는 1 내지 1000의 정수이고;
각각의 -R9는 -H 및 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되거나, -R9 둘 다는 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성하고;
화학식 (PL-1)의 모이어티는 임의로 더 치환된다.
다음 단락은 이러한 하이드로겔을 보다 자세히 설명한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 석신이미딜 카보네이트, 설포석신이미딜 카보네이트 할라이드, 티오에테르, 에스테르, 니트로페닐 카보네이트, 클로로포르메이트, 플루오로포르메이트, 임의로 치환된 페놀 및 화학식 (PL-2)로 이루어진 군으로부터 선택된다:
상기 식에서,
파선은 화학식 (PL-1)의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
-T*-는 -O-, -S- 및 -NR6-으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
z는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
-X'-는 존재하지 않거나 -OR7- 및 -SR7-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2는 반응성 중합체와 연결될 수 있는 작용기이며;
-R6은 -H, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R7은 알킬렌, 페닐렌 및 (OCH2CH2)p로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 p는 1 내지 1000의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 활성화된 카보네이트, 예컨대, 석신이미딜 카보네이트, 설포석신이미딜 카보네이트 또는 니트로페닐 카보네이트를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 카보닐 할라이드, 예컨대, O(C=O)Cl 또는 O(C=O)F를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 화학식 (PL-2)를 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -X는 OR7 또는 SR7이고, 여기에서 R7은 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 페닐렌 또는 (OCH2CH2)p이고, 여기에서 p는 1 내지 1000이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-2)의 p는 1 내지 100의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-2)의 p는 1 내지 10의 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1)의 -Y1 및 화학식 (PL-2)의 -Y2는 독립적으로 N3, NH2, NH-CO2 tBu, SH, StBu, 말레이미드, CO2H, CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 퓨란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하고, 여기에서 tBu는 tert-부틸이고, -Y1 또는 -Y2 중 하나가 N3을 포함할 때 다른 하나는 알킨 또는 사이클로옥틴을 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 SH를 포함할 때 다른 하나는 말레이미드, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 NH2를 포함할 때 다른 하나는 CO2H를 포함하지 않고; -Y1 또는 -Y2 중 하나가 1,3-디엔 또는 사이클로펜타디엔을 포함할 때 다른 하나는 퓨란을 포함하지 않는다.
특정 실시양태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 화학식 (PL-3)을 갖는다:
상기 식에서,
m은 0 또는 1이고;
n은 1 내지 1000의 정수이고;
s는 0, 1 또는 2이고;
t는 2, 4, 8, 16 및 32로 이루어진 군으로부터 선택되며;
-W-는 -O(C=O)O-, -O(C=O)NH-, -O(C=O)S-, -O(C=O)NR6CH2O- 및 -O(C=O)NR6S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Q는 절단 가능한 가교결합 화합물의 다수의 아암을 연결하는, 원자가=t를 가진 코어 기이고, 여기에서 t는 2, 4, 8, 16 및 32로부터 선택된 정수이고;
-R1, -R2 및 -R5는 화학식 (PL-1)에서와 같이 정의된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 8이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 16이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 t는 32이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 하기 구조들로 이루어진 군으로부터 선택된 구조를 가진다:
상기 식에서,
파선은 절단 가능한 가교결합제 화합물의 나머지 부분에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-i)의 구조를 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-ii)의 구조를 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 -Q는 (PL-3-iii)의 구조를 가진다.
특정 실시양태에서, 절단 가능한 가교결합제 화합물은 m이 0이고, n이 대략 100이고, s가 0이고, t가 4이고, -W-가 -O(C=O)NH-이고, -Q가 (PL-3i)의 구조를 갖고, -R2가 H이고, 하나의 -R5가 -H이고 다른 -R5가 (CH2)5N3이고, -R1이 (4-클로로페닐)SO2, -SO2로 치환된 페닐, 모르폴리노-SO2 또는 -CN인 화학식 (PL-3)의 화합물이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-3)의 -Y1은 N3, NH2, NH-CO2 tBu, SH, StBu, 말레이미드, CO2H, CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 퓨란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함하고, 여기에서 tBu는 tert-부틸이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-1) 또는 (PL-3)의 각각의 -Y1 및 화학식 (PL-2)의 -Y2는 독립적으로 N3, NH2, NH-CO2 tBu, SH, StBu, 말레이미드, CO2H, CO2 tBu, 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔, 퓨란, 알킨, 사이클로옥틴, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드를 포함한다.
특정 실시양태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 아자이드이고 다른 하나는 아세틸렌, 사이클로옥틴 및 말레이미드로 이루어진 군으로부터 선택된 반응성 작용기이다. 특정 실시양태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 티올이고 다른 하나는 말레이미드, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 비닐설폰, 비닐설폰아미드 및 할로카보닐로 이루어진 군으로부터 선택된 반응성 작용기이다. 특정 실시양태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 아민이고 다른 하나는 카복실산 및 활성화된 카복실산으로부터 선택된 선택적 반응성 작용기이다. 특정 실시양태에서, -Y1 및 -Y2 중 하나는 말레이미드이고 다른 하나는 1,3-디엔, 사이클로펜타디엔 및 퓨란으로 이루어진 군으로부터 선택된 선택적 반응성 작용기이다.
특정 실시양태에서, 제1 중합체 및 임의의 제2 중합체는 적합한 반응성 작용기를 포함하거나 화학식 [Y3-(CH2)s(CH2CH2O)n]tQ를 갖는 단독중합체 또는 공중합체 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리(N-비닐피롤리돈), 폴리메타크릴레이트, 폴리포스파젠, 폴리락타이드, 폴리아크릴아미드, 폴리글리콜레이트, 폴리에틸렌 이민, 아가로스, 덱스트란, 젤라틴, 콜라겐, 폴리라이신, 키토산, 알기네이트, 히알루로난, 펙틴 및 카라기난으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 -Y3은 반응성 작용기이고, s는 0, 1 또는 2이고, n은 10 내지 1000으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고, -Q는 원자가 t를 가진 코어 기이고, t는 2, 4, 8, 16 및 32로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 제1 중합체는 멀티아암 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 3개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 4개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 5개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 6개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 7개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 적어도 8개의 아암을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 중합체는 멀티아암 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 3개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 4개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 5개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 6개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 7개의 아암을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 적어도 8개의 아암을 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 중합체는 2-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 4-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 8-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 16-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 중합체는 32-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제2 중합체는 2-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 4-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 8-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 16-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 중합체는 32-아암 폴리에틸렌 글리콜 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 제1 및 제2 반응성 중합체는 순차적으로 또는 동시에 상기 절단 가능한 가교결합제 화합물과 반응한다.
특정 실시양태에서, 제1 작용기와 제2 작용기는 동일하다.
오로지 화학식 (PL-1), (PL-2) 및 (PL-3)과 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "생리학적 조건 하에서 제거에 의해 절단될 수 있는 모이어티"는 기 H-C-(CH=CH)m-C-X'를 포함하는 구조를 지칭하고, 여기에서 m은 0 또는 1이고 X'는 이탈기이고, HX'의 원소를 제거하기 위한 전술된 제거 반응은 반응의 반감기가 pH 및 온도의 생리학적 조건 하에서 1시간 내지 10,000시간이 되게 하는 속도로 일어날 수 있다. 바람직하게는, 반응의 반감기는 pH 및 온도의 생리학적 조건 하에서 1시간 내지 5,000시간, 보다 바람직하게는 1시간 내지 1,000시간이다. pH 및 온도의 생리학적 조건은 7 내지 8의 pH 및 섭씨 30도 내지 40도의 온도를 의미한다.
용어 "반응성 중합체 및 반응성 올리고머"는 가장 바람직하게는 펩티드, 단백질 및 다른 생체분자의 안정성 요건과 양립할 수 있는 온화한 조건 하에서 다른 작용기에 대한 반응성을 나타내는 작용기를 포함하는 중합체 또는 올리고머를 지칭한다. 반응성 중합체에서 발견되는 적합한 작용기는 말레이미드, 티올 또는 보호된 티올, 알코올, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 아민 또는 보호된 아민, 카복실산 또는 보호된 카복실산, 아지드, 사이클로알킨을 비롯한 알킨, 사이클로펜타디엔 및 퓨란을 비롯한 1,3-디엔, 알파-할로카보닐, 및 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 또는 니트로페닐 에스테르 또는 카보네이트를 포함한다.
용어 "반응성 중합체에 연결될 수 있는 작용기"는 반응성 중합체의 상응하는 작용기와 반응하여 중합체와 공유결합을 형성하는 작용기를 지칭한다. 반응성 중합체에 연결될 수 있는 적합한 작용기는 말레이미드, 티올 또는 보호된 티올, 아크릴레이트, 아크릴아미드, 아민 또는 보호된 아민, 카복실산 또는 보호된 카복실산, 아지드, 사이클로알킨을 비롯한 알킨, 사이클로펜타디엔 및 퓨란을 비롯한 1,3-디엔, 알파-할로카보닐, 및 N-하이드록시석신이미딜, N-하이드록시설포석신이미딜, 또는 니트로페닐 에스테르 또는 카보네이트를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환기를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 지칭한다. 치환기는 일반적으로 F, CI, Br 및 I를 포함하는 할로겐; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬 및 요오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; OH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알콕시; SH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노; 알킬실릴, 알콕시실릴 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카보닐; 카복실산, 카복실산 에스테르, 카복실산 아미드; 아미노카보닐; 아미노아실; 카바메이트; 우레아; 티오카바메이트; 티오우레아; 케톤; 설폰; 설폰아미드; 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 피롤, 이미다졸, 퓨란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘 및 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴, 및 벤조퓨란, 벤조티오펜, 벤즈옥사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴을 포함하는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
R1 및 R2의 특성은 전자 공여 또는 전자 끄는 치환기의 임의적 추가에 의해 조절될 수 있다. 용어 "전자 공여 기"는 R1R2CH의 산도를 감소시키는 치환기를 의미하고; 전자 공여 기는 전형적으로 음의 Hammett σ 또는 Taft σ* 상수와 관련되어 있고 물리유기화학 분야에 잘 알려져 있다. (Hammett 상수는 아릴/헤테로아릴 치환기를 지칭하고, Taft 상수는 비방향족 모이어티의 치환기를 지칭한다.) 적합한 전자 공여 치환기의 예는 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬티오, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노 및 실릴을 포함한다.
용어 "전자 끄는 기"는 R1R2CH 기의 산도를 증가시키는 치환기를 지칭하며; 전자 끄는 기는 전형적으로 양의 Hammett σ 또는 Taft σ* 상수와 관련되어 있고 물리유기화학 분야에 잘 알려져 있다. 적합한 전자 끄는 치환기의 예는 할로겐, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 니트로, 시아노, C(=O)-Rx, 또는 S(O)mRY를 포함하고, 여기에서 -Rx는 H, 저급 알킬, 저급 알콕시 또는 아미노이고, m은 1 또는 2이고, -RY는 저급 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이다. 당분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, 치환기의 전자적 영향은 치환기의 위치에 의해 좌우될 수 있다. 예를 들어, 아릴 고리의 오르토 또는 파라 위치에 있는 알콕시 치환기는 전자 공여 치환기이고 음의 Hammett σ 상수를 특징으로 하는 반면, 아릴 고리의 메타 위치에 있는 알콕시 치환기는 전자 끄는 치환기이고 양의 Hammett σ 상수를 특징으로 한다.
용어 "알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 1개 내지 8개의 탄소 또는 1개 내지 6개의 탄소 또는 1개 내지 4개의 탄소의 선형, 분지형 또는 환형 탄화수소 기를 포함하고, 여기에서 알킬은 포화 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 특정되지 않는 한, 이들은 1개 내지 6개의 탄소를 함유한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는, 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등과 같은 기를 포함하는, 3개 내지 15개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는, 바람직하게는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 방향족 고리를 포함한다.
용어 "할로겐"은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 포함한다.
용어 "말레이미도"는 화학식 
의 기이다.
특정 실시양태에서, Z'는 국제 특허 출원 공개 제WO2020/206358 A1호에 개시된 하이드로겔이다. 구체적으로, 특정 실시양태에서, Z'는
(a) 멀티아암 중합체 -P2를 포함하는 하기 화학식 (PL-4)의 제1 예비중합체를 제공하는 단계;
(b) 멀티아암 중합체 -P1을 포함하는 제2 예비중합체를 제공하는 단계로서, 각각의 아암이 단계 (a)의 -Y와 반응하는 반응성 작용기 -Y"에 의해 종결되는 것인 단계;
(c) -Y와 -Y"가 반응하여 결합 -Y*-를 형성하는 조건 하에서 단계 (a) 및 (b)의 두 예비중합체를 혼합하는 단계; 및 임의로
(d) 생성된 하이드로겔을 단리하는 단계
를 포함하는 방법에 의해 생성된 하이드로겔이다:
상기 식에서,
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이고;
r은 2보다 더 큰 정수이고;
-Y는 상기 제1 예비중합체를 제2 예비중합체에 연결하는 반응성 작용기이고;
-R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끄는 기, 알킬 또는 -H이고, 여기에서 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 전자 끄는 기이고;
각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나 2개의 -R4는 이들에 부착된 탄소 원자와 함께 3원 내지 6원 고리를 형성하고;
-W-는 존재하지 않거나 
이고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -NH-에의 부착을 나타내고 표시되지 않은 파선은 -P2에의 부착을 나타내고;
각각의 x, y 및 z는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이고;
-B'는 -NH2, -ONH2, 케톤, 알데하이드, -SH, -OH, -CO2H, 카복스아미드 기, 또는 사이클로옥틴 또는 비사이클로노닌을 포함하는 기이고;
-C*는 카복스아미드, 티오에테르, 티오석신이미딜, 트리아졸 또는 옥심이다.
따라서, -Z'는 전술된 방법으로부터 수득될 수 있는 하이드로겔이다. 특정 실시양태에서, 상기 방법에 의해 생성된 하이드로겔은 분해 가능하다.
특정 실시양태에서, -Y와 -Y"는 단계 (c) 하에서 반응하여 화학식 (PL-4')의 가교결합을 포함하는 불용성 하이드로겔 매트릭스를 형성한다:
상기 식에서,
n, r, -P1, -Y*-, -R4, -R1, -R2, -W- 및 -P2는 상기 정의된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 0, 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4)의 n은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 n은 3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 멀티아암 -P2는 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 r은 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 적어도 1 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 100 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 80 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 60 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 40 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 20 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 10 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 1 내지 5 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 약 20 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 약 40 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 약 60 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 약 80 kDa의 분자량을 가진다.
특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 2이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 4이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 6이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 -P1은 r-아암 중합체이고, 여기에서 r은 8이다.
특정 실시양태에서, 단계 (b)의 -P1은 적어도 1 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 100 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 80 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 60 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 40 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 20 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 10 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 1 내지 5 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 약 20 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 약 40 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 약 60 kDa의 분자량을 가진다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 멀티아암 중합체 -P1은 약 80 kDa의 분자량을 가진다.
특정 실시양태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 폴리(에틸렌 글리콜)(PEG), 폴리(에틸렌 옥사이드)(PEO), 폴리(에틸렌 이민)(PEI), 덱스트란, 히알루론산 또는 이들의 공중합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 PEG 기반 중합체이다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)의 -P1 및 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -P2는 히알루론산 기반 중합체이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끄는 기, 알킬 또는 -H이고, 여기에서 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 전자 끄는 기이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -CN, -NO2, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, -COR3, -SOR3, 또는 -SO2R3; 또는 -SR9이고, 여기에서 -R3은 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 여기에서 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 두 -R8 기는 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성하고, -R9는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴알킬이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -CN이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -NO2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 6개 내지 10개의 탄소를 함유하는 임의로 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 임의로 치환된 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 임의로 치환된 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 또는 인데닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -COR3, -SOR3, 또는 -SO2R3이고, 여기에서 R3은 -H, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 여기에서 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알킬이거나, 두 -R8 기는 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -SR9이고, 여기에서 -R9는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 또는 임의로 치환된 헤테로아릴알킬이다. 특정 실시양태에서, -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SOR3 또는 -SO2R3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이고, 여기에서 -R3은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 -NR8 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SO2N(CH3)2, -SO2CH3, -SO2로 치환된 페닐, -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐, -SO2N(CH2CH2)2O, -SO2CH(CH3)2, -SO2N(CH3)(CH2CH3), 또는 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나 함께 3원 내지 6원 고리를 형성할 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (PL-4) 또는 (PL-4')의 두 -R4는 메틸이다.
특정 실시양태에서, -Y 및 -Y"는 아민, 아미노옥시, 케톤, 알데하이드, 말레이미딜, 티올, 알코올, 아지드, 1,2,4,6-테트라지닐, 트랜스-사이클로옥테닐, 비사이클로노니닐, 사이클로옥티닐, 및 이들의 보호된 변이체로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, Y 및 Y"는 예컨대, 선택적 방식으로 서로 반응할 수 있다. 예를 들어, -Y가 아민일 때, -Y"는 아미드 또는 카바메이트인 잔류 연결 작용기 -Y*-를 생성하도록 카복실산, 활성 에스테르 또는 활성 카보네이트이다. 또 다른 예로서, -Y가 아지드일 때, -Y"는 1,2,3-트리아졸인 잔류 연결 작용기 -Y*-를 생성하도록 알키닐, 비사이클로노니닐 또는 사이클로옥티닐이다. 또 다른 예로서, -Y가 NH2O일 때, -Y"는 옥심인 잔류 연결 작용기 -Y*-를 생성하도록 케톤 또는 알데하이드이다. 또 다른 예로서, -Y가 SH일 때, -Y"는 티오석신이미딜 또는 티오에테르인 잔류 연결 작용기 -Y*-를 생성하도록 말레이미드 또는 할로카보닐이다. 유사하게, -Y 및 -Y"의 이러한 역할은 반대 배향의 -Y*-를 생성하도록 역전될 수 있다.
특정 실시양태에서, -Y*-는 아미드, 옥심, 1,2,3-트리아졸, 티오에테르, 티오석신이미드 또는 에테르를 포함한다. 특정 실시양태에서, -Y*-는 -L2-이다.
이들 접합 반응은 당분야에 알려져 있는 조건 하에서 수행될 수 있고, 예를 들어, -Y가 아지드이고 -Y"가 사이클로옥틴일 때, 접합은 두 구성요소들이 적절한 용해도를 보이는 임의의 용매에서 일어나지만, 수용액이 보다 유리한 반응 속도를 보이는 것으로 알려져 있다. -Y와 -Y"가 아지드/사이클로옥틴인 경우 pH 2 내지 7, 또는 -Y와 -Y"가 활성화된 에스테르 및 아민인 경우 pH 6 내지 9에서 적절한 용매, 전형적으로 수성 완충제에서 혼합될 때, -Y와 -Y" 기는 반응하여 화학식 (PL-4')의 가교결합을 포함하는 불용성 하이드로겔 매트릭스를 형성한다. 이 공정은 주입에 적합한 마이크로스피어와 같은 마이크로입자 현탁액을 형성하도록 벌크상에서, 또는 혼합된 유기/수성 시스템의 유화 조건 하에서 수행될 수 있다.
특정 실시양태에서, 하이드로겔 Z'를 포함하는 접합체는
(a) 화학식 (PL-4)의 제1 예비중합체를 제공하는 단계;
(b) 하기 화학식 (PL-5)의 -Y가 화학식 (PL-4)의 -B'와 반응하도록 화학식 (PL-4)의 예비중합체를 하기 화학식 (PL-5)의 링커-약물과 반응시키는 단계;
(c) 멀티아암 중합체 -P1을 포함하는 제2 예비중합체를 제공하는 단계로서, 각각의 아암이 단계 (a)의 -Y와 반응하는 반응성 작용기 -Y"에 의해 종결되고 -P1에 대한 실시양태가 앞서 기재된 바와 같은 것인 단계;
(d) -Y와 -Y"가 반응하여 잔류 연결 작용기 -Y*-를 형성하는 조건 하에서 단계 (a) 및 (b)의 두 예비중합체를 혼합하는 단계; 및 임의로,
(e) 생성된 하이드로겔을 단리하는 단계
포함하는 방법에 의해 생성된다:
상기 식에서,
n, -R1, -R2, -R4 및 -Y는 화학식 (PL-4)에서 정의된 바와 같고;
-D는 약물 모이어티이고;
-X-는 -D가 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 존재하지 않거나, -X-는 -D가 페놀, 알코올, 티올, 티오페놀, 이미다졸 또는 비염기성 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 -N(R6)CH2-이고; 여기에서 -R6은 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
특정 실시양태에서, 접합체는 하이드로겔 Z'를 화학식 (PL-5)의 링커-약물과 반응시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 수득되며, 여기에서 하이드로겔 Z'의 -B'는 화학식 (PL-5)의 -Y와 반응한다.
오로지 화학식 (PL-4), (PL-4') 및 (PL-5)와 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "알킬"은 1개 내지 20개, 1개 내지 12개, 1개 내지 8개, 1개 내지 6개, 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 알킬은 선형 또는 분지형 알킬이다. 선형 또는 분지형 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐 및 n-데실을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알킬은 환형 알킬이다. 환형 알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜타디에닐 및 사이클로헥실을 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시 및 사이클로부톡시를 포함하는, 산소에 결합된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개, 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개, 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는, 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 용어 "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 및 인데닐과 같은 기를 포함하는, 3개 내지 15개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는, 바람직하게는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 방향족 고리를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 커플링될 수 있다. 이러한 상황 하에서, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬로서 지칭될 것이며, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에 커플링된 분자 사이에 있음을 시사한다.
용어 "할로겐" 또는 "할로"는 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 지칭한다.
용어 "헤테로환형 고리" 또는 "헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3원 내지 15원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로퓨라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기도 포함한다. 특정 실시양태에서, 헤테로환형 고리 또는 헤테로사이클릴은 비방향족이다. 특정 실시양태에서, 헤테로환형 고리 또는 헤테로사이클릴은 방향족이다.
용어 "임의로 치환된"은 기가 비치환될 수 있거나, 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 치환기로 치환될 수 있음을 의미한다. 치환기의 예는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, -CN, -ORaa, -SRaa, -NRaaRbb, -NO2, -C=NH(ORaa), -C(O)Raa, -OC(O)Raa, -C(O)ORaa, -C(O)NRaaRbb, -OC(O)NRaaRbb, -NRaaC(O)Rbb, -NRaaC(O)ORbb, -S(O)Raa, -S(O)2Raa, -NRaaS(O)Rbb, -C(O)NRaaS(O)Rbb, -NRaaS(O)2Rbb, -C(O)NRaaS(O)2Rbb, -S(O)NRaaRbb, -S(O)2NRaaRbb, -P(O)(ORaa)(ORbb), 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴을 포함하고, 여기에서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 및 아릴은 각각 독립적으로 -Rcc로 임의로 치환되고, 여기에서 -Raa 및 -Rbb는 각각 독립적으로 -H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴이거나, -Raa 및 -Rbb는 이들에 부착된 질소 원자와 함께, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 -CN으로 임의로 치환되는 헤테로사이클릴을 형성하고, 각각의 -Rcc는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 아릴, -CN 또는 -NO2이다.
모이어티 -L1-은 화학식 (I)의 IL-2 모이어티를 통해, 특히 -D에 존재하는 상기 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기를 통해 -D에 부착될 수 있다. 특정 실시양태에서, -L1-은 IL-2 모이어티를 통해, 특히 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기를 통해 -D에 부착된다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체에 존재하는 모든 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착된다.
-L1-이 IL-2 모이어티의 아미노산 잔기에 부착되는 경우, 이러한 아미노산 잔기는 -D의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산 잔기일 수 있다. 특정 실시양태에서, -L1-은 비-단백질생성 아미노산 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-의 부착은 단백질생성 아미노산 잔기에의 부착이다. 부착이 단백질생성 아미노산 잔기에서 일어나는 경우, 상기 단백질생성 아미노산 잔기는 특정 실시양태에서 시스테인, 메티오닌, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산, 글루타민 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 이러한 단백질생성 아미노산 잔기는 시스테인, 히스티딘, 라이신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 티로신, 아스파르트산, 글루탐산 및 아르기닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 시스테인 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 히스티딘 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 라이신 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 트립토판 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 세린 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 트레오닌 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 티로신 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아스파르트산 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 글루탐산 잔기에 부착된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아르기닌 잔기에 부착된다.
특정 실시양태에서, 적어도 하나의 모이어티 -L1-은 -D의 아미노산 잔기에 부착되고 하나 이상의 추가 모이어티 -L1-은 -D에 존재하는 변형 모이어티에 부착된다.
결합이 가역적인 한, 모이어티 -L1-은 임의의 유형의 결합을 통해 -D에 연결될 수 있다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아미드, 에스테르, 카바메이트, 아세탈, 아미날, 이민, 옥심, 하이드라존, 디설파이드 및 아실구아니딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 결합을 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아미드, 에스테르, 카바메이트 및 아실구아니딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 결합을 통해 -D에 연결된다. 이러한 결합은 그 자체로 가역적이지 않을 수 있으나, 가역성은 -L1-에 존재하는 원자 또는 모이어티의 특정 기의 효과일 수 있는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 에스테르 결합을 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 카바메이트 결합을 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아실구아니딘을 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 아미드 결합을 통해 -D에 연결된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 라이신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결된다. 특정 실시양태에서, -L1-은 -D의 라이신 잔기의 측쇄의 아민 작용기의 질소를 통해 -D에 연결되고, -D와 -L1- 사이에 형성된 결합은 카바메이트이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 국제 특허 출원 공개 제WO2009/095479A2호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (II)의 모이어티이다:
상기 식에서,
파선은 아미드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 부착하는 것을 표시하고;
-X-는 -C(R4R4a)-; -N(R4)-; -O-; -C(R4R4a)-C(R5R5a)-; -C(R5R5a)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-O-; -O-C(R4R4a)-; 또는 -C(R7R7a)-이고;
X1은 C 또는 S(O)이고;
-X2-는 -C(R8R8a)- 또는 -C(R8R8a)-C(R9R9a)-이고;
=X3은 =O, =S 또는 =N-CN이고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R4, -R4a, -R5, -R5a, -R6, -R8, -R8a -R9 및 -R9a는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R3 및 -R3a는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 단 -R3 및 -R3a 중 하나 또는 둘 다가 -H가 아닌 경우 이들은 sp3-하이브리드화 탄소 원자를 통해 이들에 부착된 N에 연결되고;
-R7은 -N(R10R10a) 또는 -NR10-(C=O)-R11이고;
-R7a, -R10, -R10a 및 -R11은 서로 독립적으로 -H 또는 C1-6 알킬이고;
임의로, 쌍 -R1a/-R4a, -R1a/-R5a, -R1a/-R7a, -R4a/-R5a 및 -R8a/-R9a 중 하나 이상은 화학 결합을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R4/-R4a, -R5/-R5a, -R8/-R8a 및 -R9/-R9a 중 하나 이상은 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7a, -R4/-R5, -R4/-R6, -R8/-R9 및 -R2/-R3 중 하나 이상은 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성하고;
임의로, -R3/-R3a는 이들에 부착된 질소 원자와 함께 연결되어 3원 내지 10원 헤테로환을 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄리닐; C3-10 사이클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소가 -L2-Z, -L2-Z' 또는 치환기로 대체되지 않는 한, -L1-은 적어도 하나의 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 -L1-은 임의로 더 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (II)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (II)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
바람직하게는, 화학식 (II)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -L1-은 더 치환되지 않는다.
화학식 (II)의 -R3/-R3a가 이들에 부착된 질소 원자와 함께 연결되어 3원 내지 10원 헤테로환을 형성하는 경우, 이러한 3원 내지 10원 헤테로환만이 형성될 수 있고, 여기에서 질소에 직접 부착된 원자는 sp3-하이브리드화 탄소 원자인 것으로 이해된다. 즉, -R3/-R3a가 이들에 부착된 질소 원자와 함께 형성하는 이러한 3원 내지 10원 헤테로환은 하기 구조를 가진다:
상기 식에서,
파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
고리는 적어도 하나의 질소를 포함하는 3개 내지 10개의 원자를 포함하고;
R# 및 R##은 sp3-하이브리드화 탄소 원자를 나타낸다.
또한, 3원 내지 10원 헤테로환은 더 치환될 수 있는 것으로 이해된다.
화학식 (II)의 -R3/-R3a가 이들에 부착된 질소 원자와 함께 형성하는 적합한 3원 내지 10원 헤테로환의 예시적인 실시양태는 다음과 같다:
상기 식에서,
파선은 분자의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
-R은 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (II)의 -L1-은 임의로 더 치환될 수 있다. 일반적으로, 절단 원리가 영향을 받지 않는 한, 즉 화학식 (II)에서 별표로 표시된 수소가 대체되지 않고 화학식 (II)의 모이어티 
의 질소가 1차, 2차 또는 3차 아민의 일부로 남아 있고, 즉 -R3 및 -R3a가 서로 독립적으로 -H이거나 sp3-하이브리드화 탄소 원자를 통해 -N<에 연결되는 한, 임의의 치환기가 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R1 또는 -R1a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R2 또는 -R2a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R3 또는 -R3a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R4는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R5 또는 -R5a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R6은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R7 또는 -R7a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R8 또는 -R8a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (II)의 -R9 또는 -R9a는 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 국제 특허 출원 공개 제WO2016/020373A1호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (III)을 갖는다:
상기 식에서,
파선은 각각 아미드 또는 에스테르 결합을 형성함으로써 -D의 1차 또는 2차 아민 또는 하이드록실에 부착하는 것을 표시하고;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R3 및 -R3a는 -H, -C(R8R8aR8b), -C(=O)R8, -C≡N, -C(=NR8)R8a, -CR8(=CR8aR8b), -C≡CR8 및 -T로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-R4, -R5 및 -R5a는 -H, -C(R9R9aR9b) 및 -T로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
a1 및 a2는 서로 독립적으로 0 또는 1이고;
각각의 -R6, -R6a, -R7, -R7a, -R8, -R8a, -R8b, -R9, -R9a 및 -R9b는 -H, 할로겐, -CN, -COOR10, -OR10, -C(O)R10, -C(O)N(R10R10a), -S(O)2N(R10R10a), -S(O)N(R10R10a), -S(O)2R10, -S(O)R10, -N(R10)S(O)2N(R10aR10b), -SR10, -N(R10R10a), -NO2, -OC(O)R10, -N(R10)C(O)R10a, -N(R10)S(O)2R10a, -N(R10)S(O)R10a, -N(R10)C(O)OR10a, -N(R10)C(O)N(R10aR10b), -OC(O)N(R10R10a), -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 임의로 치환되고, 여기에서 C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)- 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 -R10, -R10a 및 -R10b는 -H, -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 -T, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 임의로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R12)-, -S(O)2N(R12)-, -S(O)N(R12)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R12)S(O)2N(R12a)-, -S-, -N(R12)-, -OC(OR12)(R12a)-, -N(R12)C(O)N(R12a)- 및 -OC(O)N(R12)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴 및 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -R11로 임의로 치환되고;
각각의 -R11은 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR13, -OR13, -C(O)R13, -C(O)N(R13R13a), -S(O)2N(R13R13a), -S(O)N(R13R13a), -S(O)2R13, -S(O)R13, -N(R13)S(O)2N(R13aR13b), -SR13, -N(R13R13a), -NO2, -OC(O)R13, -N(R13)C(O)R13a, -N(R13)S(O)2R13a, -N(R13)S(O)R13a, -N(R13)C(O)OR13a, -N(R13)C(O)N(R13aR13b), -OC(O)N(R13R13a) 및 C1-6 알킬로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -R12, -R12a, -R13, -R13a 및 -R13b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
임의로, 쌍 -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R3/-R3a, -R6/-R6a 및 -R7/-R7a 중 하나 이상은 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 C3-10 사이클로알킬 또는 3원 내지 10원 헤테로사이클릴을 형성하고;
임의로, 쌍 -R1/-R2, -R1/-R3, -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7, -R2/-R3, -R2/-R4, -R2/-R5, -R2/-R6, -R2/-R7, -R3/-R4, -R3/-R5, -R3/-R6, -R3/-R7, -R4/-R5, -R4/-R6, -R4/-R7, -R5/-R6, -R5/-R7 및 -R6/-R7은 중 하나 이상은 이들에 부착된 원자와 함께 연결되어 고리 A를 형성하고;
A는 페닐; 나프틸; 인데닐; 인다닐; 테트랄리닐; C3-10 사이클로알킬; 3원 내지 10원 헤테로사이클릴; 및 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-L1-은 적어도 하나의 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 -L1-은 임의로 더 치환된다.
화학식 (III)의 -L1-의 임의의 추가 치환기는 바람직하게는 전술된 바와 같다.
바람직하게는, 화학식 (III)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (III)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, -L1-은 본원에 참고로 포함되는 유럽 특허 제1536334B1호, 국제 특허 출원 공개 제WO2009/009712A1호, 국제 특허 출원 공개 제WO2008/034122A1호, 국제 특허 출원 공개 제WO2009/143412A2호, 국제 특허 출원 공개 제WO2011/082368A2호 및 미국 특허 제8618124B2호에 개시된 구조를 가진다.
특정 실시양태에서, -L1-은 미국 특허 제8946405B2호 및 미국 특허 제8754190B2호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IV)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -OH, -SH 및 -NH2로 이루어진 군으로부터 선택된 -D의 작용기를 통한 -D에의 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
-R1 및 -R2 중 적어도 하나 또는 둘 다는 -CN, -NO2, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 알케닐, 임의로 치환된 알키닐, -C(O)R3, -S(O)R3, -S(O)2R3 및 -SR4로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고,
-R1 및 -R2 중 하나 및 오직 하나는 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴알킬 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR9 및 -N(R9)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐알킬, 임의로 치환된 알키닐알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-R9는 -H 및 임의로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
-Y-는 존재하지 않고 -X-는 -O- 또는 -S-이거나;
-Y-는 -N(Q)CH2-이고 -X-는 -O-이고;
Q는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 및 임의로 치환된 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
임의로, -R1과 -R2는 연결되어 3 내지 8원 고리를 형성할 수 있고;
임의로, -R9는 둘 다 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성하고;
-L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 -L1-은 임의로 더 치환된다.
오로지 화학식 (IV)와 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
본원에서 사용된 용어 "알킬"은 1개 내지 8개의 탄소, 또는 일부 실시양태에서 1개 내지 6개 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시, 사이클로부톡시 등을 포함하는, 산소에 결합된 알킬 기를 포함한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합을 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합을 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 포함한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는, 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등과 같은 기를 포함하는, 3개 내지 15개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는, 바람직하게는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 방향족 고리를 포함한다.
일부 경우, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬렌 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 커플링될 수 있다. 이러한 상황 하에서, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬로서 지칭될 것이며, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에 커플링된 분자 사이에 있음을 시사한다.
용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
용어 "헤테로환형 고리"는 3개 내지 7개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 4원 내지 8원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로퓨라닐, 및 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기이다.
고리 시스템이 임의로 치환될 때, 적합한 치환기는 각각 임의로 더 치환되는 알킬, 알케닐, 알키닐 및 추가 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다. 전술된 치환기들을 포함하는, 임의의 기 상의 임의적 치환기는 할로, 니트로, 시아노, -OR, -SR, -NR2, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR2, -SOR, -SO2R, -SONR2 및 -SO2NR2를 포함하고, 여기에서 R은 각각 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴이거나, 2개의 R 기들은 이들에 부착된 원자와 함께 고리를 형성한다.
바람직하게는, 화학식 (IV)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 국제 특허 출원 공개 제WO2013/036857A1호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (V)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에의 부착을 나타내고;
-R1은 임의로 치환된 C1-C6 선형, 분지형 또는 환형 알킬; 임의로 치환된 아릴; 임의로 치환된 헤테로아릴; 알콕시; 및 -NR5 2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R2는 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3은 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R4는 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -R5는 -H; 임의로 치환된 C1-C6 알킬; 임의로 치환된 아릴; 및 임의로 치환된 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 치환되거나; 2개의 -R5는 함께 사이클로알킬 또는 사이클로헤테로알킬일 수 있고;
-L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고, -L1-은 임의로 더 치환된다.
오로지 화학식 (V)와 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
"알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 1개 내지 8개 탄소, 1개 내지 6개 탄소 또는 1개 내지 4개 탄소의 선형, 분지형 또는 환형 탄화수소 기를 포함하고, 여기에서 알킬은 포화된 탄화수소이고, 알케닐은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 포함하고, 알키닐은 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함한다. 달리 특정되어 있지 않은 한, 이들은 1개 내지 6개의 C를 함유한다.
"아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라센과 같은 기를 포함하는, 6개 내지 18개 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개 탄소의 방향족 탄화수소 기를 포함한다. "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴, 인데닐 등과 같은 기를 포함하는, 3개 내지 15개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는, 바람직하게는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 함유하는 방향족 고리를 포함한다.
용어 "치환된"은 하나 이상의 수소 원자 대신에 하나 이상의 치환기를 포함하는 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 기를 의미한다. 치환기는 일반적으로 F, Cl, Br 및 I를 포함하는 할로겐; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬; 플루오로알킬, 클로로알킬, 브로모알킬 및 요오도알킬을 포함하는 저급 할로알킬; OH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알콕시; SH; 선형, 분지형 및 환형을 포함하는 저급 알킬티오; 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노; 알킬실릴, 알콕시실릴 및 아릴실릴을 포함하는 실릴; 니트로; 시아노; 카보닐; 카복실산, 카복실산 에스테르, 카복실산 아미드, 아미노카보닐; 아미노아실; 카바메이트; 우레아; 티오카바메이트; 티오우레아; 케톤; 설폰; 설폰아미드; 페닐, 나프틸 및 안트라세닐을 포함하는 아릴; 피롤, 이미다졸, 퓨란, 티오펜, 옥사졸, 티아졸, 이속사졸, 이소티아졸, 티아디아졸, 트리아졸, 옥사디아졸 및 테트라졸을 포함하는 5원 헤테로아릴, 피리딘, 피리미딘 및 피라진을 포함하는 6원 헤테로아릴, 및 벤조퓨란, 벤조티오펜, 벤즈옥사졸, 벤즈이미다졸, 인돌, 벤조티아졸, 벤즈이속사졸 및 벤즈이소티아졸을 포함하는 융합된 헤테로아릴을 포함하는 헤테로아릴로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (V)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 미국 특허 제7585837B2호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (VI)을 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에의 부착을 나타내고;
R1 및 R2는 수소, 알킬, 알콕시, 알콕시알킬, 아릴, 알크아릴, 아르알킬, 할로겐, 니트로, -SO3H, -SO2NHR5, 아미노, 암모늄, 카복실, PO3H2 및 OPO3H2로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R3, R4 및 R5는 수소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고 -L1-은 임의로 더 치환된다.
화학식 (VI)에 적합한 치환기는 알킬(예컨대, C1-6 알킬), 알케닐(예컨대, C2-6 알케닐), 알키닐(예컨대, C2-6 알키닐), 아릴(예컨대, 페닐), 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 헤테로아릴(예컨대, 방향족 4원 내지 7원 헤테로환) 또는 할로겐 모이어티이다.
오로지 화학식 (VI)과 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "알킬", "알콕시", "알콕시알킬", "아릴", "알크아릴" 및 "아르알킬"은 1개 내지 8개, 바람직하게는 1개 내지 4개 탄소 원자의 알킬 라디칼, 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 및 부틸, 및 6개 내지 10개 탄소 원자의 아릴 라디칼, 예를 들어, 페닐 및 나프틸을 의미한다. 용어 "할로겐"은 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (VI)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 국제 특허 출원 공개 제WO2002/089789A1호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (VII)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -D의 아민 작용기를 통한 -D에의 부착을 나타내고;
Y1 및 Y2는 독립적으로 O, S 또는 NR7이고;
R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 수소, C1-6 알킬, C3-12 분지형 알킬, C3-8 사이클로알킬, C1-6 치환된 알킬, C3-8 치환된 사이클로알킬, 아릴, 치환된 아릴, 아르알킬, C1-6 헤테로알킬, 치환된 C1-6 헤테로알킬, C1-6 알콕시, 페녹시 및 C1-6 헤테로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
Ar은 화학식 (VII)에 포함될 때 다치환된 방향족 탄화수소 또는 다치환된 헤테로환형 기를 형성하는 모이어티이고;
X는 표적 세포, 소수성 모이어티 또는 이들의 조합물 내로 능동적으로 수송되는 화학 결합 또는 모이어티이고;
y는 0 또는 1이고;
-L1-은 -L2-Z 또는 L2-Z'로 치환되고, -L1-은 임의로 더 치환된다.
오로지 화학식 (VII)과 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "알킬"은 예를 들어, 알콕시, C3-8 사이클로알킬 또는 치환된 사이클로알킬 등을 포함하는, 선형, 분지형 또는 치환된 C1-12 알킬을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
용어 "치환된"은 작용기 또는 화합물 내에 함유된 하나 이상의 원자를 추가하거나 하나 이상의 상이한 원자로 대체하는 것을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
치환된 알킬은 카복시알킬, 아미노알킬, 디알킬아미노, 하이드록시알킬 및 머캡토알킬을 포함하고; 치환된 사이클로알킬은 4-클로로사이클로헥실과 같은 모이어티를 포함하고; 아릴은 나프틸과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 아릴은 3-브로모-페닐과 같은 모이어티를 포함하고; 아르알킬은 톨루일과 같은 모이어티를 포함하고; 헤테로알킬은 에틸티오펜과 같은 모이어티를 포함하고; 치환된 헤테로알킬은 3-메톡시티오폰과 같은 모이어티를 포함하고; 알콕시는 메톡시와 같은 모이어티를 포함하고; 페녹시는 3-니트로페녹시와 같은 모이어티를 포함한다. 할로-는 플루오로, 클로로, 요오도 및 브로모를 포함하는 것으로 이해될 것이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (VII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 하기 화학식 (VIII)의 하위구조를 포함한다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 아미드 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 부착되는 것을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
-L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고, -L1-은 임의로 더 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (VIII)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (VIII)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (VIII)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (VIII)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX)의 하위구조를 포함한다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 카바메이트 결합을 형성함으로써 -D의 질소에 부착되는 것을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
-L1-은 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환되고, -L1-은 임의로 더 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX)의 -L1-은 하나의 모이어티 -L2-Z 또는 -L2-Z'로 치환된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고 표시되지 않은 파선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에의 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3, -R5, -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH, 및 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택된 친핵체이고:
-Ar-은 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
상기 식에서,
파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a 및 -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-L1-은 임의로 더 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-a)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고 표시되지 않은 파선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에의 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R2, -R3, -R5, -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH, 및 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택된 친핵체이고:
-Ar-은 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
상기 식에서,
파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a 및 -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-L1-은 임의로 더 치환된다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-b)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -L1-은 추가로 치환되지 않는다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y1은 =O이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y2-는 -O-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y3-은 -O-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Y4-는 -NR5-이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 =Y5는 =O이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0 또는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 0이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 n은 1이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H, 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-b)의 -R2는 -H이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H, 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R3은 -H이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 각각의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R4는 메틸 및 에틸로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸 및 에틸로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R5는 메틸이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 -H, 메틸 및 에틸로부터 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R6 및 -R6a는 둘 다 -H이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은 페닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 Ar은 
이고, 여기에서 파선은 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 모이어티의 나머지 부분에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 임의로 중단된 C1-20 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 임의로 중단된 C1-10 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 C3-10 사이클로알킬, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-에 의해 임의로 중단된 C1-6 알킬이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 W는 
이고, 여기에서 파선은 각각 화학식 (IX-a) 또는 (IX-b)의 모이어티의 나머지 부분에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -Nu는 -N(R7R7a)이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필로부터 서로 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 메틸 또는 에틸로부터 서로 독립적으로 선택된다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-a) 및 (IX-b)의 -R7, -R7a 및 -R7b는 둘 다 메틸이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에의 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-c)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-c)의 s1은 5이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-d)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 국제 특허 출원 공개 제WO2020/206358A1호에 개시된 구조를 가진다. 따라서, 특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-은 화학식 (X)를 갖는다:
상기 식에서,
표시되지 않은 파선은 -D에의 부착을 나타내고;
별표로 표시된 파선은 -L2-Z 또는 -L2-Z'에의 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
-R1 및 -R2는 독립적으로 전자 끄는 기, 알킬 또는 -H이고, 여기에서 -R1 또는 -R2 중 적어도 하나는 전자 끄는 기이고;
각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이거나, 2개의 -R4는 이들에 부착된 탄소 원자와 함께 3원 내지 6원 고리를 형성하고;
-D가 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 -Y-는 존재하지 않거나, -D가 페놀, 알코올, 티올, 티오페놀, 이미다졸 또는 비염기성 아민을 통해 연결된 약물 모이어티일 때 -Y-는 -N(R6)CH2-이고; 여기에서 -R6은 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 0, 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 n은 3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -CN; -NO2; 임의로 치환된 아릴; 임의로 치환된 헤테로아릴; 임의로 치환된 알케닐; 임의로 치환된 알키닐; -COR3, -SOR3, 또는 -SO2R3; 또는 -SR9로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 -R3은 -H, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 여기에서 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 임의로 치환된 알킬이거나, 두 -R8 기는 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성하고, -R9는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴알킬이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -CN이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -NO2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 6개 내지 10개의 탄소를 포함하는 임의로 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 임의로 치환된 페닐, 나프틸 또는 안트라세닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 임의로 치환된 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 또는 인데닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 함유하는 임의로 치환된 알케닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 2개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 알키닐이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -COR3, -SOR3 또는 -SO2R3이고, 여기에서 -R3은 -H, 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴, 임의로 치환된 헤테로아릴알킬, -OR8 또는 -NR8 2이고, 여기에서 각각의 -R8은 독립적으로 -H 또는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 알킬이거나, 또는 두 -R8 기는 이들에 부착된 질소와 함께 헤테로환형 고리를 형성한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2의 전자 끄는 기는 -SR9이고, 여기에서 -R9는 1개 내지 20개의 탄소 원자를 포함하는 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 아릴알킬, 임의로 치환된 헤테로아릴 또는 임의로 치환된 헤테로아릴알킬이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SOR3 또는 -SO2R3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN 또는 -SO2R3이고, 여기에서 -R3은 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴 또는 -NR8 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -R1 및 -R2 중 적어도 하나는 -CN, -SO2N(CH3)2, -SO2CH3, -SO2로 치환된 페닐, -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐, -SO2N(CH2CH2)2O, -SO2CH(CH3)2, -SO2N(CH3)(CH2CH3), 또는 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 각각의 -R4는 독립적으로 C1-C3 알킬이다. 특정 실시양태에서, -R4는 둘 다 메틸이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -Y-는 존재하지 않는다. 특정 실시양태에서, 화학식 (X)의 -Y-는 -N(R6)CH2-이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 1이고, -R1은 -SO2 및 -CH3로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 2이고, -R1은 -SO2 및 -CH3로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -CN이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 SO2CH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2CHCH3이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2 및 -Cl로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2)2O이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2CH(CH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH3)(CH2CH3)이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2N(CH2CH2OCH3)2이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다. 특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (X)를 갖고, 여기에서 n은 3이고, -R1은 -SO2 및 -CH3로 치환된 페닐이고, -R2는 -H이고, -R4는 -CH3이다.
오로지 화학식 (X)와 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "알킬"은 1개 내지 20개, 1개 내지 12개, 1개 내지 8개, 1개 내지 6개 또는 1개 내지 4개의 탄소 원자의 선형, 분지형 또는 환형 포화 탄화수소 기를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 알킬은 선형 또는 분지형 알킬이다. 선형 또는 분지형 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐 및 n-데실을 포함한다. 특정 실시양태에서, 알킬은 환형 알킬이다. 환형 알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로펜타디에닐 및 사이클로헥실을 포함한다.
용어 "알콕시"는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 사이클로프로폭시 및 사이클로부톡시를 포함하는, 산소에 결합된 알킬 기를 지칭한다.
용어 "알케닐"은 탄소-탄소 이중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "알키닐"은 탄소-탄소 삼중 결합 및 2개 내지 20개, 2개 내지 12개, 2개 내지 8개, 2개 내지 6개 또는 2개 내지 4개의 탄소 원자를 가진 비방향족 불포화 탄화수소를 지칭한다.
용어 "아릴"은 페닐, 나프틸 및 안트라세닐과 같은 기를 포함하는, 6개 내지 18개의 탄소, 바람직하게는 6개 내지 10개의 탄소의 방향족 탄화수소 기를 지칭한다. 용어 "헤테로아릴"은 피롤릴, 피리딜, 피리미디닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 인돌릴 및 인데닐과 같은 기를 포함하는, 3개 내지 15개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는, 바람직하게는 3개 내지 7개의 탄소를 포함하고 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 방향족 고리를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티는 알킬 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 커플링될 수 있다. 이러한 상황 하에서, 치환기는 알케닐알킬, 알키닐알킬, 아릴알킬 또는 헤테로아릴알킬로서 지칭될 것이며, 이는 알킬렌 모이어티가 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴 모이어티와, 알케닐, 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴에 커플링된 분자 사이에 있음을 시사한다.
용어 "할로겐" 또는 "할로"는 브로모, 플루오로, 클로로 및 요오도를 지칭한다.
용어 "헤테로환형 고리" 또는 "헤테로사이클릴"은 적어도 하나의 N, O 또는 S 원자를 포함하는 3원 내지 15원 방향족 또는 비방향족 고리를 지칭한다. 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 테트라하이드로피라닐, 피롤리딘 및 테트라하이드로퓨라닐뿐만 아니라, 상기 용어 "헤테로아릴"에 대해 제공된 예시적인 기도 포함한다. 특정 실시양태에서, 헤테로환형 고리 또는 헤테로사이클릴은 비방향족이다. 특정 실시양태에서, 헤테로환형 고리 또는 헤테로사이클릴은 방향족이다.
용어 "임의로 치환된"은 기가 비치환될 수 있거나, 동일할 수 있거나 상이할 수 있는 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개)의 치환기로 치환될 수 있음을 의미한다. 치환기의 예는 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, -CN, -ORaa, -SRaa, -NRaaRbb, -NO2, -C=NH(ORaa), -C(O)Raa, -OC(O)Raa, -C(O)ORaa, -C(O)NRaaRbb, -OC(O)NRaaRbb, -NRaaC(O)Rbb, -NRaaC(O)ORbb, -S(O)Raa, -S(O)2Raa, -NRaaS(O)Rbb, -C(O)NRaaS(O)Rbb, -NRaaS(O)2Rbb, -C(O)NRaaS(O)2Rbb, -S(O)NRaaRbb, -S(O)2NRaaRbb, -P(O)(ORaa)(ORbb), 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴을 포함하고, 여기에서 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 및 아릴은 각각 독립적으로 -Rcc로 임의로 치환되고, 여기에서 -Raa 및 -Rbb는 각각 독립적으로 -H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴 또는 아릴이거나, -Raa 및 -Rbb는 이들에 부착된 질소 원자와 함께, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 하이드록실, 알콕시 또는 -CN으로 임의로 치환되는 헤테로사이클릴을 형성하고, 각각의 -Rcc는 독립적으로 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로겐, 헤테로사이클릴, 헤테로아릴, 아릴, -CN 또는 -NO2이다.
일부 실시양태에서, -L2-는 화학 결합이다. 일부 실시양태에서, -L2-는 스페이서 모이어티이다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기에서 -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고, 여기에서 -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 -T-, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-20 알킬, C2-20 알케닐 및 C2-20 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고, 여기에서 -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고;
-Ry2는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기에서 -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a는 -H, -T, C1-10 알킬, C2-10 알케닐 및 C2-10 알키닐로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -Ry2는 할로겐 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, -L2-는 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되는 C1-20 알킬 쇄이고; C1-20 알킬 쇄는 -OH, -T 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 기로 임의로 치환되고, 여기에서 -Ry1, -Ry6 및 -Ry6a는 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 14 g/mol 내지 750 g/mol의 분자량을 가진다.
특정 실시양태에서, -L2-는 하기 모이어티들로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함한다:
상기 식에서,
파선은 각각 -L1-, -L2-의 나머지 부분 또는 Z에의 부착을 나타내고;
-R 및 -Ra는 -H, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 및 헥실로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택된다.
특정 실시양태에서, -L2-는 화학식 (IX-e)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -L1-에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -Z에의 부착을 나타내고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 8이다.
특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-는 화학식 (IX-f)를 갖는다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -Z에의 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-f)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-은 화학식 (IX-f)를 갖고, 여기에서 별표로 표시된 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (IX-f)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1과 -D 사이의 결합은 카바메이트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 5이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-e)의 s2는 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s2는 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (IX-f)의 s1은 3이고 화학식 (IX-f)의 s2는 3이다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ia)의 접합체이다. 특정 실시양태에서, x는 1이다. 특정 실시양태에서, x는 2이다. 특정 실시양태에서, x는 3이다. 특정 실시양태에서, x는 4이다.
특정 실시양태에서, IL-2 접합체는 화학식 (Ib)의 접합체이다. 특정 실시양태에서, y는 2이다. 특정 실시양태에서, y는 3이다. 특정 실시양태에서, y는 4이다.
특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이고;
p1, p2, p3 및 p4는 서로 독립적으로 70 내지 900의 정수이다.
특정 실시양태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (XI)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1-과 -D 사이의 결합은 카바메이트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 5이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 4이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 5이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 6이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 7이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s2는 8이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 s1은 3이고 화학식 (XI)의 s2는 3이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p2는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p3은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p4는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI)의 p1, p2, p3 및 p4는 동일하다. 특정 실시양태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다.
특정 실시양태에서, 모이어티 -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖는다:
상기 식에서,
파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
p1, p2, p3 및 p4는 서로 독립적으로 70 내지 900의 정수이다.
특정 실시양태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 라이신 측쇄의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, -L1-L2-Z는 화학식 (XI-a)를 갖고, 여기에서 파선은 -D의 N-말단의 아민의 질소에의 부착을 나타낸다.
따라서, 화학식 (XI-a)의 화합물에서 형성된 모이어티 -L1-과 -D 사이의 결합은 카바메이트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p2는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p3은 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 115 내지 680의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 115 내지 560의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 185 내지 450의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 220 내지 240의 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 115이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 160이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 225이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 270이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 340이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 450이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p4는 약 560이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 p1, p2, p3 및 p4는 동일하다. 특정 실시양태에서, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 10의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 13의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 16의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 19의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 22의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 25의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 31의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 34의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 217의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체는 서열번호 225의 IL-2 모이어티를 포함하고, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 N-말단 또는 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합되고, p1, p2, p3 및 p4는 220 내지 240이다. 특정 실시양태에서, b3은 약 112이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (XI-a)의 모이어티는 IL-2 모이어티의 라이신 측쇄 잔기의 1차 아민의 질소에 접합된다.
본 발명의 또 다른 측면은 본원에 기재된 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 적어도 하나의 IL-2 접합체 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물이다. 특정 실시양태에서, 이러한 약학 조성물은 pH 3 내지 pH 8을 포함하는 범위의 pH를 가진다.
특정 실시양태에서, 이러한 약학 조성물은 액체 제제이다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 현탁액 제제이다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 건조 제제이다.
이러한 액체, 현탁액 또는 건조 약학 조성물은 적어도 하나의 부형제를 포함한다. 비경구 제제에 사용되는 부형제는 예를 들어, 완충제, 등장성 조절제, 방부제, 안정화제, 항흡착제, 산화 보호제, 증점제/점도 향상제 또는 다른 보조제로서 분류될 수 있다. 그러나, 일부 경우, 하나의 부형제가 이중 또는 삼중 기능을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 약학 조성물에 포함된 적어도 하나의 부형제는 하기 부형제들로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(i) 완충제: pH를 원하는 범위 내로 유지하기 위한 생리학적으로 용인되는 완충제, 예컨대, 인산나트륨, 중탄산염, 석신산염, 히스티딘, 구연산염 및 아세트산염, 황산염, 질산염, 염화물, 피루브산염; 제산제, 예컨대, Mg(OH)2 또는 ZnCO3도 사용될 수 있음;
(ii) 등장성 조절제: 주입 데포에서 삼투압 차이로 인한 세포 손상으로 인해 발생할 수 있는 통증을 최소화하기 위함; 글리세린 및 염화나트륨이 예이고; 유효 농도는 혈청에 대해 285 내지 315 mOsmol/kg의 가정된 오스몰농도를 사용함으로써 삼투측정법에 의해 측정될 수 있음;
(iii) 방부제 및/또는 항균제: 다회용량 비경구 제제는 주입 시 환자가 감염될 위험을 최소화하기에 충분한 농도의 방부제 첨가를 요구하며 상응하는 규제 요건이 확립되어 있고; 전형적인 방부제는 m-크레졸, 페놀, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 클로로부탄올, 벤질 알코올, 질산페닐수은, 티메로솔, 소르브산, 소르브산칼륨, 벤조산, 클로로크레졸 및 염화벤즈알코늄을 포함함;
(iv) 안정화제: 안정화는 단백질 안정화 힘의 강화, 변성 상태의 불안정화, 또는 부형제와 단백질의 직접 결합에 의해 달성되고; 안정화제는 아미노산, 예컨대, 알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 글리신, 히스티딘, 라이신, 프롤린, 당, 예컨대, 글루코스, 수크로즈, 트레할로스, 폴리올, 예컨대, 글리세롤, 만니톨, 소르비톨, 염, 예컨대, 인산칼륨, 황산나트륨, 킬레이팅제, 예컨대, EDTA, 헥사포스페이트, 리간드, 예컨대, 2가 금속 이온(아연, 칼슘 등), 다른 염 또는 유기 분자, 예컨대, 페놀성 유도체일 수 있고; 또한, 올리고머 또는 중합체, 예컨대, 사이클로덱스트린, 덱스트란, 덴드리머, PEG 또는 PVP 또는 프로타민 또는 HSA가 사용될 수 있음;
(v) 항흡착제: 주로 이온성 또는 비이온성 계면활성제 또는 다른 단백질 또는 가용성 중합체, 예를 들어, 폴록사머(Pluronic F-68), PEG 도데실 에테르(Brij 35), 폴리소르베이트 20 및 80, 덱스트란, 폴리에틸렌 글리콜, PEG-폴리히스티딘, BSA 및 HSA 및 젤라틴이 제제 용기의 내부 표면을 코팅하거나 이러한 내부 표면에 경쟁적으로 흡착하는 데 사용되고; 부형제의 선택된 농도 및 유형은 피해야 할 효과에 의해 좌우되지만 전형적으로 계면활성제의 단층이 CMC 값 바로 위의 계면에서 형성됨;
(vi) 산화 보호제: 항산화제, 예컨대, 아스코르브산, 엑토인, 메티오닌, 글루타티온, 모노티오글리세롤, 모린, 폴리에틸렌이민(PEI), 프로필 갈레이트 및 비타민 E; 킬레이팅제, 예컨대, 구연산, EDTA, 헥사포스페이트 및 티오글리콜산도 사용될 수 있음;
(vii) 증점제 또는 점도 향상제: 바이알 및 주사기에서 입자의 침전을 지연시키고, 입자의 혼합 및 재현탁을 용이하게 하고 현탁액이 더 쉽게 주입되도록 만들기 위해 사용되고(즉, 주사기 플런저에 대한 낮은 힘); 적합한 증점제 또는 점도 향상제는 예를 들어, 카보머 증점제, 예컨대, 카보폴(Carbopol) 940, 카보폴 울트레즈(Carbopol Ultrez) 10, 셀룰로스 유도체, 예컨대, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(하이프로멜로스, HPMC) 또는 디에틸아미노에틸 셀룰로스(DEAE 또는 DEAE-C), 콜로이드성 규산마그네슘(Veegum) 또는 규산나트륨, 하이드록시아파타이트 겔, 인산삼칼슘 겔, 크산탄, 카라기난, 예컨대, 사티아 검(Satia gum) UTC 30, 지방족 폴리(하이드록시산), 예컨대, 폴리(D,L-젖산 또는 L-젖산)(PLA) 및 폴리(글리콜산)(PGA) 및 이들의 공중합체(PLGA), D,L-락타이드, 글리콜라이드 및 카프로락톤의 삼원중합체, 폴록사머, 폴리(옥시에틸렌)-폴리(옥시프로필렌)-폴리(옥시에틸렌)의 트리블록(예를 들어, 플루로닉(Pluronic)®)을 구성하기 위한 친수성 폴리(옥시에틸렌) 블록 및 소수성 폴리(옥시프로필렌) 블록, 폴리에테르에스테르 공중합체, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 테레프탈레이트/폴리부틸렌 테레프탈레이트 공중합체, 수크로스 아세테이트 이소부티레이트(SAIB), 덱스트란 또는 이의 유도체, 덱스트란과 PEG의 조합, 폴리디메틸실록산, 콜라겐, 키토산, 폴리비닐 알코올(PVA) 및 유도체, 폴리알킬이미드, 폴리(아크릴아미드-코-디알릴디메틸 암모늄(DADMA)), 폴리비닐피롤리돈(PVP), 글리코사미노글리칸(GAG), 예컨대, 더마탄 설페이트, 콘드로이틴 설페이트, 케라탄 설페이트, 헤파린, 헤파란 설페이트, 히알루로난, 소수성 A-블록, 예컨대, 폴리락타이드(PLA) 또는 폴리(락타이드-코-글리콜라이드)(PLGA)와, 친수성 B-블록, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 폴리비닐 피롤리돈으로 구성된 ABA 트리블록 또는 AB 블록 공중합체이고; 이러한 블록 공중합체뿐만 아니라 상기 언급된 폴록사머도 역열 겔화 거동(투여를 용이하게 하기 위해 실온에서 유체 상태, 및 주입 후 체온에서 졸-겔 전이 온도 초과의 겔 상태)을 나타낼 수 있음;
(viii) 분산제 또는 확산제: 결합 조직의 세포간 공간에서 발견되는 다당류인 히알루론산과 같은, 그러나 이로 제한되지 않는, 간질 공간 내의 세포외 매트릭스 성분의 가수분해를 통해 결합 조직의 투과성을 변형시키고; 히알루로니다제와 같은, 그러나 이로 제한되지 않는, 분산제는 세포외 매트릭스의 점도를 일시적으로 감소시키고 주입된 약물의 확산을 촉진함;
(ix) 다른 보조제: 예컨대, 습윤제, 점도 조절제, 항생제, 히알루로니다제; 산 및 염기, 예컨대, 염산 및 수산화나트륨은 제조 동안 pH 조절을 위해 필요한 보조제임.
또 다른 측면은 의약으로서 사용하기 위한 본원에 기재된 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환을 치료하는 의약의 제조를 위한 본원에 기재된 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 이러한 질환을 치료하거나, 제어하거나, 지연시키거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 본원에 기재된 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물을, 이러한 치료, 제어, 지연 또는 예방을 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, IL-2로 치료할 수 있는 질환은 암이다. 이러한 암은 액형 종양, 고형 종양 및 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
액형 림프종은 백혈병 또는 골수성 신생물, 예컨대, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 털세포 백혈병, 림프모구성 백혈병, 골수성 백혈병, 형질 세포 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 골수이형성 증후군(MDS), 골수증식성 신생물(MPN), MPN 후 AML, MDS 후 AML, del(5q) 관련 고위험 MDS 또는 AML, 급성기 만성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 만성 골수증식성 장애, 형질 세포 신생물 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증일 수 있다.
고형 종양 또는 림프종은 입술 및 구강암, 구강암, 간암/간세포암, 원발성 간암, 폐암, 림프종, 악성 중피종, 악성 흉선종, 피부암, 안내 흑색종, 잠재적 원발성을 가진 전이성 편평 경부암, 소아 다발성 내분비 신생물 증후군, 균상 식육종, 비강 및 부비동암, 비인두암, 신경모세포종, 구강인두암, 난소암, 췌장암, 부갑상선암, 갈색세포종, 뇌하수체 종양, 부신피질 암종, AIDS 관련 악성종양, 항문암, 담관암, 방광암, 뇌 및 신경계 암, 유방암, 기관지 선종/카르시노이드, 위장 카르시노이드 종양, 암종, 결장직장암, 자궁내막암, 식도암, 두개외 생식세포 종양, 생식선외 생식세포 종양, 간외 담도암, 담낭암, 위(복부)암, 임신성 영양막 종양, 두경부암, 하인두암, 섬세포 암종(내분비 췌장), 신장암/신세포암, 후두암, 흉막폐모세포종, 전립선암, 신우 및 요도의 이행세포암, 망막모세포종, 타액선암, 육종, 세자리 증후군, 소장암, 비뇨생식기암, 악성 흉선종, 갑상선암, 윌름스 종양, 담관암종, 및 또한 이들의 관련 비정상적 세포 생장 초기 단계, 예컨대, 이형성증, 선종 및 제자리 암종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 암은 간암/간세포암이다. 특정 실시양태에서, 암은 폐암이다. 특정 실시양태에서, 암은 림프종이다. 특정 실시양태에서, 암은 악성 흉선종이다. 특정 실시양태에서, 암은 피부암이다. 특정 실시양태에서, 암은 잠재적 원발성을 가진 전이성 편평 경부암이다. 특정 실시양태에서, 암은 신경모세포종이다. 특정 실시양태에서, 암은 난소암이다. 특정 실시양태에서, 암은 췌장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 담관암이다. 특정 실시양태에서, 암은 방광암이다. 특정 실시양태에서, 암은 뇌 및 신경계 암이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 위장 카르시노이드 종양이다. 특정 실시양태에서, 암은 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 결장직장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 간외 담관암이다. 특정 실시양태에서, 암은 담낭암이다. 특정 실시양태에서, 암은 위(복부)암이다. 특정 실시양태에서, 암은 두경부암이다. 특정 실시양태에서, 암은 신장암/신세포암이다. 특정 실시양태에서, 암은 전립선암이다. 특정 실시양태에서, 암은 육종이다. 특정 실시양태에서, 암은 소장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 비뇨생식기암이다.
폐암의 예는 비소세포 폐암 및 소세포 폐암이다. 특정 실시양태에서, 암은 비소세포 폐암이다. 특정 실시양태에서, 암은 소세포 폐암이다.
림프종의 예는 AIDS 관련 림프종, 원발성 중추신경계 림프종, T 세포 림프종, 피부 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 임신 동안 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 임신 동안 비호지킨 림프종 및 혈관면역모세포성 림프종이다.
피부암의 예는 흑색종 및 메르켈 세포 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 피부암이다. 특정 실시양태에서, 암은 메르켈 세포 암종이다.
난소암은 예를 들어, 상피암, 생식 세포 종양, 또는 악성 잠재력이 낮은 종양일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 상피암이다. 특정 실시양태에서, 암은 생식 세포 종양이다. 특정 실시양태에서, 암은 악성 잠재력이 낮은 종양이다.
췌장암은 예를 들어, 외분비 종양/선암종, 췌장 내분비 종양(PET) 또는 신경내분비 종양(NET)일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 외분비 종양/선암종이다. 특정 실시양태에서, 종양은 췌장 내분비 종양이다. 특정 실시양태에서, 암은 신경내분비 종양이다.
뇌 및 신경계 암의 예는 수모세포종, 예컨대, 소아 수모세포종, 성상세포종, 상의세포종, 신경외배엽 종양, 신경초종, 수막종, 뇌하수체 선종 및 신경아교종이다. 특정 실시양태에서, 암은 수모세포종이다. 특정 실시양태에서, 암은 소아 수모세포종이다. 특정 실시양태에서, 암은 성상세포종이다. 특정 실시양태에서, 암은 상의세포종이다. 특정 실시양태에서, 암은 신경외배엽 종양이다. 특정 실시양태에서, 종양은 신경초종이다. 특정 실시양태에서, 암은 수막종이다. 특정 실시양태에서, 암은 뇌하수체 선종이다. 특정 실시양태에서, 암은 신경아교종이다.
성상세포종은 거대 세포 교모세포종, 교모세포종, 속발성 교모세포종, 원발성 성인 교모세포종, 원발성 소아 교모세포종, 희소돌기아교세포 종양, 희소돌기아교세포종, 역형성 희소돌기아교세포종, 희소성상세포 종양, 희소성상세포종, 역형성 희소성상세포종, 희소성상세포 종양, 희소성상세포종, 역형성 희소성상세포종, 역형성 성상세포종, 모양세포성 성상세포종, 뇌실막하 거대 세포 성상세포종, 미만성 성상세포종, 다형성 황색성상세포종 및 소뇌 성상세포종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
신경외배엽 종양의 예는 송과체 원시 신경외배엽 종양 및 천막상 원시 신경외배엽 종양이다.
상의세포종은 상의하종, 상의세포종, 점액유두상 상의세포종 및 역형성 상의세포종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
수막종은 비정형 수막종 또는 역형성 수막종일 수 있다.
신경아교종은 다형성 교모세포종, 부신경절종, 천막상 원시 신경외배엽 종양(sPNET), 뇌간 신경아교종, 소아 뇌간 신경아교종, 시상하부 및 시각 경로 신경아교종, 소아 시상하부 및 시각 경로 신경아교종 및 악성 신경아교종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
유방암의 예는 임신 동안 유방암, 삼중 음성 유방암, 유관 상피내 암종(DCIS), 침습성 유관 암종(IDC), 유방의 관상 암종, 유방의 수질 암종, 유방의 점액성 암종, 유방의 유두상 암종, 유방의 체모양 암종, 침습성 소엽 암종(ILC), 염증성 유방암, 소엽 상피내 암종(LCIS), 남성 유방암, 유두의 파제트병, 유방의 엽상 종양 및 전이성 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 임신 동안 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 삼중 음성 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 유관 상피내 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 침습성 유관 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 관상 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 수질 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 점액성 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 유두상 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 체모양 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 침습성 소엽 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 염증성 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 소엽 상피내 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 남성 유방암이다. 특정 실시양태에서, 암은 유두의 파제트병이다. 특정 실시양태에서, 암은 유방의 엽상 종양이다. 특정 실시양태에서, 암은 전이성 유방암이다.
암종의 예는 신경내분비 암종, 부신피질 암종 및 섬세포 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 신경내분비 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 부신피질 암종이다. 특정 실시양태에서, 암은 섬세포 암종이다.
결장직장암의 예는 결장암 및 직장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 결장암이다. 특정 실시양태에서, 암은 직장암이다.
육종은 카포시 육종, 뼈의 골육종/악성 섬유성 조직구종, 연조직 육종, 유잉 계열의 종양/육종, 횡문근육종, 건초의 투명 세포 육종, 중심 연골육종, 중심 및 골막 연골종, 섬유육종 및 자궁 육종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 카포시 육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 뼈의 골육종/악성 섬유성 조직구종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 연조직 육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 유잉 계열의 종양/육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 횡문근육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 건초의 투명 세포 육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 중심 연골육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 중심 및 골막 연골종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 섬유육종일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 자궁 육종일 수 있다.
비뇨생식기암의 예는 고환암, 요도암, 질암, 자궁경부암, 음경암 및 외음부암이다. 특정 실시양태에서, 암은 고환암일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 요도암일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 질암일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 자궁경부암일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 음경암일 수 있다. 특정 실시양태에서, 암은 질암일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물을 사용한 치료는 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전에, 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법과 동시에, 또는 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법 후에 시작될 수 있다. 또한, 이러한 치료는 적어도 하나의 다른 암 치료, 예컨대, 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과 임의로 조합될 수 있다. 전신 면역요법과 같은 적어도 하나의 암 치료의 예는 특정 실시양태에서 본 발명의 약학 조성물에 존재할 수 있는 하나 이상의 추가 약물에 대해 본원의 다른 곳에서 제공된 바와 같다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 방사선 요법 또는 주입된 종양의 외과적 제거 전에 적어도 하나의 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과의 조합 전에, 조합과 동시에, 또는 조합 후에 전신 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 방사선 요법 또는 주입된 종양의 외과적 제거 전에 적어도 하나의 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과의 조합 전에, 조합과 동시에, 또는 조합 후에 종양내 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 약학 조성물은 방사선 요법 또는 종양의 외과적 제거 후에 적어도 하나의 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과의 조합 전에, 조합과 동시에, 또는 조합 후에 종양내 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전에, 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법과 동시에, 또는 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법 후에 종양 배액 림프절 내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 적어도 하나의 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과의 조합 전에, 조합과 동시에, 또는 조합 후에, 및 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전에, 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법과 동시에, 또는 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법 후에 종양 배액 림프절 내로 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 원발성 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전 또는 후에 발생할 수 있는 전이성 종양 내로 종양내 투여된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 적어도 하나의 전신 면역요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과의 조합 전에, 조합과 동시에, 또는 조합 후에, 및 원발성 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전에, 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법과 동시에, 또는 이러한 외과적 제거 또는 방사선 요법 후에 전이성 종양 내로 종양내 투여된다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 전신 요법은 종양의 외과적 제거 또는 방사선 요법 전에 투여되고, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 전신 투여 또는 종양내 투여 또는 림프절내 투여가 뒤따른다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 종양내 투여가 먼저 투여되고, 적어도 하나의 전신 요법 또는 국소 종양내 면역요법 또는 림프절내 면역요법과 조합된 후속 치료가 뒤따른다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 전신 요법은 종양의 외과적 제거 전에 투여되고, 이어서 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물이 수술 후, 또는 수술에 의해 제거되지 않은 종양의 종양내 투여에 의해 전신 투여되거나 배액 림프절 또는 종양 층에 투여된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 환자에게 투여되고, 여기에서 상기 하나 이상의 추가 약물은 특정 실시양태에서 패턴 인식 수용체 아고니스트(PRRA), 세포독성/화학요법제, 면역 체크포인트 억제제 또는 길항제, 면역 체크포인트 아고니스트, 면역 활성화 수용체 아고니스트, 다중특이적 약물, 항체-약물 접합체(ADC), 항체-보강제 접합체(AAC), 방사성핵종 또는 표적화 방사성핵종 치료제, DNA 손상 복구 억제제, 종양 대사 억제제, 단백질 키나제 억제제, 케모카인 및 화학유인제 수용체 아고니스트, 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제, 사이토카인 수용체 아고니스트, 사멸 수용체 아고니스트, CD47 또는 SIRPα 길항제, 종양용해성 약물, 신호 전환제 단백질, 후성유전학 변형제, 종양 펩티드 또는 종양 백신, 열충격 단백질(HSP) 억제제, 단백질용해성 효소, 유비퀴틴 및 프로테아좀 억제제, 부착 분자 길항제, 호르몬 펩티드 및 합성 호르몬을 포함하는 호르몬, 및 적응 세포 요법, 예컨대, 종양 침윤 림프구(TIL) 요법, 키메라 항원 수용체(CAR) 요법, T 세포 요법, 자연 살해(NK) 세포 요법, CAR-T 요법, CAR-NK 요법, CAR-γδ 요법, CAR-대식세포 요법, 또는 유전적으로 변형되었거나 유전적으로 변형되지 않은 면역 세포 유형을 사용한 임의의 다른 세포 요법으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
PRRA는 Toll 유사 수용체(TLR) 아고니스트, NOD 유사 수용체 아고니스트(NLR), RIG-I 유사 수용체 아고니스트, 세포질 DNA 센서 아고니스트, STING 아고니스트 및 아릴 탄화수소 수용체 아고니스트(AhR)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, PRRA는 Toll 유사 수용체 아고니스트, 예컨대, TLR1/2의 아고니스트, 예컨대, 펩티도글리칸, 지단백질, Pam3CSK4, 암플리반트(Amplivant), SLP-AMPLIVANT, HESPECTA, ISA101 및 ISA201; TLR2의 아고니스트, 예컨대, LAM-MS, LPS-PG, LTA-BS, LTA-SA, PGN-BS, PGN-EB, PGN-EK, PGN-SA, CL429, FSL-1, Pam2CSK4, Pam3CSK4, 자이모산(zymosan), CBLB612, SV-283, ISA204, SMP105, 열 사멸된 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes); RLR3의 아고니스트, 예컨대, 폴리(A:U), 폴리(I:C)(폴리-ICLC), 린타톨리모드(rintatolimod), 아폭심(apoxxim), IPH3102, 폴리-ICR, PRV300, RGCL2, RGIC.1, 리복심(Riboxxim)(RGC100, RGIC100), 리복솔(Riboxxol)(RGIC50)), 합성 천연 또는 변형된 이중 가닥 RNA, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머 및 리복손(Riboxxon); TLR4의 아고니스트, 예컨대, 지질다당류(LPS), 네오셉틴(neoceptin)-3, 글루코피라노실 지질 보강제(GLA), GLA-SE, G100, GLA-AF, 임상 센터 기준 내독소(CCRE), 모노포스포릴 지질 A, 그래스(grass) MATA MPL, PEPA10, ONT-10(PET-지질 A, 온코티레온(oncothyreon)), G-305, ALD046, CRX527, CRX675(RC527, RC590), GSK1795091, OM197MPAC, OM294DP, 종양 표적화 TLR4 아고니스트 및 SAR439794; TLR2/4의 아고니스트, 예컨대, 지질 A, OM174 및 PGN007; TLR5의 아고니스트, 예컨대, 플라겔린(flagellin), 엔톨리모드(entolimod), 모빌란(mobilan), 프로텍탄(protectan) CBLB501; TLR6/2의 아고니스트, 예컨대, 디아실화된 지단백질, 디아실화된 리포펩티드, FSL-1, MALP-2 및 CBLB613; TLR7의 아고니스트, 예컨대, CL264, CL307, 이미퀴모드(imiquimod)(R837), TMX-101, TMX-201, TMX-202, TMX302, 가르디퀴모드(gardiquimod), S-27609, 851, UC-IV150, 852A(3M-001, PF-04878691), 록소리빈(loxoribine), 폴리우리딜산, GSK2245035, GS-9620, RO6864018(ANA773, RG7795), RO7020531, 이사토리빈(isatoribine), AN0331, ANA245, ANA971, ANA975, DSP0509, DSP3025(AZD8848), GS986, MBS2, MBS5, RG7863(RO6870868) 소티리모드(sotirimod), SZU101, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머, 종양 표적화 TLR7 아고니스트 및 TQA3334; TLR8의 아고니스트, 예컨대, ss폴리유리딘(PolyUridine), ssRNA40, TL8-506, XG-1-236, VTX-2337(모톨리모드), VTX-1463, VTX378, VTX763, DN1508052, SBT6050, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머, 종양 표적화 TLR8 아고니스트 및 GS9688; TLR7/8의 아고니스트, 예컨대, TransCon™ TLR7/8 아고니스트, CL075, CL097, 폴리(dT), 레시퀴모드(resiquimod)(R-848, VML600, S28463), MEDI9197(3M-052), NKTR262, DV1001, IMO4200, IPH3201, 합성 천연 또는 변형된 단일 가닥 RNA, 합성 핵산, 합성 핵산 올리고머, BDC-1001, 다른 종양 표적화 TLR7/8 아고니스트 및 VTX1463; TLR9의 아고니스트, 예컨대, CpG DNA, CpG ODN, 레피톨리모드(lefitolimod)(MGN1703), SD-101, QbG10, CYT003, CYT003-QbG10, DUK-CpG-001, CpG-7909(PF-3512676), GNKG168, EMD 1201081, IMO-2125, IMO-2055, CPG10104, AZD1419, AST008, IMO2134, MGN1706, IRS 954, 1018 ISS, 액틸론(actilon)(CPG10101), ATP00001, AVE0675, AVE7279, CMP001, DIMS0001, DIMS9022, DIMS9054, DIMS9059, DV230, DV281, EnanDIM, 헤플리사브(heplisav)(V270), 카파프록트(kappaproct)(DIMS0150), NJP834, NPI503, SAR21609, 합성 천연 또는 변형된 핵산 올리고머 및 톨람바(tolamba); 및 TLR7/9의 아고니스트, 예컨대, DV1179로 이루어진 군으로부터 선택된 Toll 유사 수용체 아고니스트이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR1/2의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR2의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR3의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR4의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR2/4의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR5의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR6/2의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR7의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR8의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR7/8의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 TLR9의 아고니스트이다.
CpG ODN의 예는 ODN 1585, ODN 2216, ODN 2336, ODN 1668, ODN 1826, ODN 2006, ODN 2007, ODN BW006, ODN D-SL01, ODN 2395, ODN M362 및 ODN D-SL03이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 레시퀴모드이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 이미퀴모드이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 유리 형태의 레시퀴모드이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 하나 이상의 화학식 (A-i)의 모이어티에 접합된 중합체를 포함하는 접합체이다:
상기 식에서,
파선은 중합체에의 부착을 나타내고;
n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 화학식 (A-i)의 모이어티에 접합된 중합체는 수용성 중합체이다. 특정 실시양태에서, 이러한 수용성 중합체는 PEG 기반 또는 히알루론산 기반 중합체이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 PEG 기반 중합체이다. 특정 실시양태에서, 중합체는 하이드로겔, 예컨대, PEG 기반 또는 히알루론산 기반 하이드로겔이다. 특정 실시양태에서, 하이드로겔은 PEG 기반 하이드로겔이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-i)의 n은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-i)의 n은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-i)의 n은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (A-i)의 n은 4이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 다수의 화학식 (A-i)의 모이어티에 접합된 PEG 기반 하이드로겔을 포함하는 접합체이고, 여기에서 화학식 (A-i)에서 n은 2이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 본원에 참고로 포함되는 국제 특허 출원 공개 제WO2020/141221A1호의 각각 제217면 및 제219면에 표시된 화합물 12 또는 14이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 국제 특허 출원 공개 제WO2020/141221A1호의 제217면에 표시된 화합물 12이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 국제 특허 출원 공개 제WO2020/141221A1호의 제219면에 표시된 화합물 14이다. 화합물 12 및 14는 국제 특허 출원 공개 제WO2020/141221A1호에 개시된 바와 같이 합성될 수 있다.
특정 실시양태에서, PRRA는 NOD 유사 수용체 아고니스트이다. 하나 이상의 추가 약물이 NOD 유사 수용체 아고니스트인 경우, 이러한 NOD 유사 수용체 아고니스트는 NOD1의 아고니스트, 예컨대, C12-iE-DAP, C14-Tri-LAN-Gly, iE-DAP, iE-Lys 및 Tri-DAP; 및 NOD2의 아고니스트, 예컨대, L18-MDP, MDP, M-TriLYS, 무라부타이드(murabutide) 및 N-글리콜릴-MDP로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 NOD1의 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 NOD2의 아고니스트이다.
특정 실시양태에서, PRRA는 RIG-I 유사 수용체 아고니스트이다. 하나 이상의 추가 약물이 RIG-I 유사 수용체 아고니스트인 경우, 이러한 RIG-I 유사 수용체 아고니스트는 3p-hpRNA, 5'ppp-dsRNA, 5'ppp RNA(M8), 꼬임(kink)을 가진 5'OH RNA(CBS-13-BPS), 5'PPP SLR, KIN100, KIN101, KIN1000, KIN1400, KIN1408, KIN1409, KIN1148, KIN131A, 폴리(dA:dT), SB9200, RGT100 및 힐토놀(hiltonol)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, PRRA는 세포질 DNA 센서 아고니스트이다. 하나 이상의 추가 약물이 세포질 DNA 센서 아고니스트인 경우, 이러한 세포질 DNA 센서 아고니스트는 cGAS 아고니스트, dsDNA-EC, G3-YSD, HSV-60, ISD, ODN TTAGGG(A151), 폴리(dG:dC) 및 VACV-70으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, PRRA는 STING 아고니스트이다. 하나 이상의 추가 약물이 STING 아고니스트인 경우, 이러한 STING 아고니스트는 MK-1454, ADU-S100(MIW815), 2'3'-cGAMP, 3'3'-cGAMP, c-di-AMP, c-di-GMP, cAIMP(CL592), cAIMP 디플루오르(CL614), cAIM(PS)2 디플루오르(Rp/Sp)(CL656), 2'2'-cGAMP, 2'3'-cGAM(PS)2(Rp/Sp), 플루오르화된 3'3'-cGAM, 플루오르화된 c-di-AMP, 2'3'-c-di-AMP, 2'3'-c-di-AM(PS)2(Rp,Rp), 플루오르화된 c-di-GMP, 2'3'-c-di-GMP, c-di-IMP, c-di-UMP 및 DMXAA(바디메잔(vadimezan), ASA404)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 MK-1454이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 ADU-S100(MIW815)이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 2'3'-cGAMP이다.
특정 실시양태에서, PRRA는 아릴 탄화수소 수용체 아고니스트이다. 하나 이상의 추가 약물이 아릴 탄화수소 수용체(AhR) 아고니스트인 경우, 이러한 AhR 아고니스트는 FICZ, ITE 및 L-키누레닌(kynurenine)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 세포독성/화학요법제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 면역 체크포인트 억제제 또는 길항제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 면역 활성화 수용체 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 다중특이적 약물이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 항체-약물 접합체(ADC)이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 항체-보강제 접합체(AAC)이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 방사성핵종 또는 표적화 방사성핵종 치료제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 DNA 손상 복구 억제제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양 대사 억제제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 패턴 인식 수용체 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 단백질 키나제 억제제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 케모카인 및 화학유인제 수용체 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 사이토카인 수용체 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 사멸 수용체 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 CD47 길항제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 SIRPα 길항제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양용해성 약물이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 신호 전환제 단백질이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 후성유전학 변형제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 종양 펩티드 또는 종양 백신이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 열충격 단백질(HSP) 억제제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 단백질용해성 효소이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 유비퀴틴 및 프로테아좀 억제제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 부착 분자 길항제이다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 호르몬 펩티드 및 합성 호르몬을 비롯한 호르몬이다.
세포독성제 또는 화학요법제는 알킬화제, 안트라사이클린(anthracycline), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 질소 머스타드, 백금 작용제, 항-대사물질, 항-마이크로튜불 작용제, 토포이소머라제 억제제, 세포독성 항생제, 아우리스타틴(auristatin), 엔다인(enediyne), 렉시트롭신(lexitropsin), 듀오카마이신(duocarmycin), 사이클로프로필피롤로인돌(cyclopropylpyrroloindole), 푸로마이신(puromycin), 돌라스타틴(dolastatin), 메이탄신(maytansine) 유도체, 알킬설포네이트, 트리아젠 및 피페라진으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
알킬화제는 질소 머스타드, 예컨대, 메클로레타민(mechlorethamine), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 멜팔란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 이포스파미드(ifosfamide) 및 부설판(busulfan); 니트로소우레아, 예컨대, N-니트로소-N-메틸우레아, 카무스틴(carmustine), 로무스틴(lomustine), 세무스틴(semustine), 포테무스틴(fotemustine) 및 스트렙토조토신(streptozotocin); 테트라진, 예컨대, 다카바진(dacarbazine), 미토졸로마이드(mitozolomide) 및 테모졸로마이드(temozolomide); 에틸렌이민, 예컨대, 알트레타민(altretamine); 아지리딘(aziridine), 예컨대, 티오테파(thiotepa), 미토마이신(mitomycin) 및 디아지쿠온(diaziquone); 시스플라틴(cisplatin) 및 유도체, 예컨대, 시스플라틴, 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin); 및 비고전적 알킬화제, 예컨대, 프로카바진(procarbazine) 및 헥사메틸멜라민(hexamethylmelamine)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항-대사물질은 항-엽산제, 예컨대, 메토트렉세이트(methotrexate) 및 페메트렉세드(pemetrexed); 플루오로피리미딘, 예컨대, 플루오로우라실 및 카페시타빈(capecitabine); 데옥시뉴클레오사이드 유사체, 예컨대, 사이타라빈(cytarabine), 젬시타빈(gemcitabine), 데시타빈(decitabine), 아자사이티딘(azacytidine), 플루다라빈(fludarabine), 넬라라빈(nelarabine), 클라드리빈(cladribine), 클로파라빈(clofarabine) 및 펜토스타틴(pentostatin); 및 티오푸린, 예컨대, 티오구아닌 및 머캡토푸린으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항-마이크로튜불 작용제는 빈카 알칼로이드(Vinca alkaloid), 예컨대, 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 비노렐빈(vinorelbine), 빈데신(vindesine) 및 빈플루닌(vinflunine); 탁산(taxane), 예컨대, 파클리탁셀(paclitaxel) 및 도세탁셀(docetaxel); 포도필로톡신(podophyllotoxin) 및 유도체, 예컨대, 포도필로톡신, 에토포사이드(etoposide) 및 테니포사이드(teniposide); 스틸베노이드(stilbenoid) 페놀 및 유도체, 예컨대, 자이브레스타트(zybrestat)(CA4P); 및 BNC105로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
토포이소머라제 억제제는 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대, 이리노테칸(irinotecan), 토포테칸(topotecan) 및 캄프토테신(camptothecin); 및 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 에토포사이드, 독소루비신(doxorubicin), 미톡산트론(mitoxantrone), 테니포사이드, 노보바이오신(novobiocin), 메바론(merbarone) 및 아클라루비신(aclarubicin)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
세포독성 항생제는 안트라사이클린, 예컨대, 독소루비신, 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(epirubicin) 및 이다루비신(idarubicin); 피라루비신(pirarubicin), 아클라루비신, 블레오마이신(bleomycin), 미토마이신(mitomycin) C, 미톡산트론(mitoxantrone), 악티노마이신(actinomycin), 닥티노마이신(dactinomycin), 아드리아마이신(adriamycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 티라파자민(tirapazamine)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
아우리스타틴은 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE) 및 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
엔다인은 네오카지노스타틴(neocarzinostatin), 리다마이신(lidamycin)(C-1027), 칼리케아미신(calicheamicin), 에스퍼라미신(esperamicin), 디네미신(dynemicin) 및 골포마이신(golfomycin) A로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
메이탄신 유도체는 안사미토신(ansamitocin), 메르탄신(mertansine)(엠탄신(emtansine), DM1) 및 라브탄신(ravtansine)(소라브탄신(soravtansine), DM4)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
면역 체크포인트 억제제 또는 길항제는 CTLA-4(세포독성 T 림프구 관련 단백질 4)의 억제제, 예컨대, 이필리무맙(ipilimumab), 트레멜리무맙(tremelimumab), MK-1308, FPT155, PRS010, BMS-986249, BPI-002, CBT509, JS007, ONC392, TE1254, IBI310, BR02001, CG0161, KN044, PBI5D3H5, BCD145, ADU1604, AGEN1884, AGEN1181, CS1002 및 CP675206; PD-1(프로그래밍된 사멸 1)의 억제제, 예컨대, 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 니볼루맙(nivolumab), 피딜리주맙(pidilizumab), AMP-224, BMS-936559, 세미플리맙(cemiplimab) 및 PDR001; PD-L1(프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1)의 억제제, 예컨대, MDX-1105, MEDI4736, 아테졸리주맙(atezolizumab), 아벨루맙(avelumab), BMS-936559 및 더발루맙(durvalumab); PD-L2(프로그래밍된 사멸 리간드 2)의 억제제; KIR(킬러 세포 면역글로불린 유사 수용체)의 억제제, 예컨대, 리루맙(lirlumab)(IPH2102) 및 IPH2101; B7-H3의 억제제, 예컨대, MGA271; B7-H4의 억제제, 예컨대, FPA150; BTLA(B 및 T 림프구 약화제)의 억제제; LAG3(림프구 활성화 유전자 3)의 억제제, 예컨대, IMP321(에프틸라지모드(eftilagimod) 알파), 렐라틀리맙(relatlimab), MK-4280, AVA017, BI754111, ENUM006, GSK2831781, INCAGN2385, LAG3Ig, LAG525, REGN3767, Sym016, Sym022, TSR033, TSR075 및 X1mAb22841; TIM-3(T 세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유 3)의 억제제, 예컨대, LY3321367, MBG453 및 TSR-022; VISTA(T 세포 활성화의 V-도메인 Ig 억제제)의 억제제, 예컨대, JNJ-61610588; ILT2/LILRB1(Ig 유사 전사체 2/백혈구 Ig 유사 수용체 1)의 억제제; ILT3/LILRB4(Ig 유사 전사체 3/백혈구 Ig 유사 수용체 4)의 억제제; ILT4/LILRB2(Ig 유사 전사체 4/백혈구 Ig 유사 수용체 2)의 억제제, 예컨대, MK-4830; TIGIT(Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T 세포 면역수용체)의 억제제, 예컨대, MK-7684, PTZ-201, RG6058 및 COM902; NKG2A의 억제제, 예컨대, IPH-2201; PVRIG의 억제제, 예컨대, COM701; TREM1의 억제제, 예컨대, PY314; 및 TREM2의 억제제, 예컨대, PY159로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CTLA-4 억제제의 일례는 항-CTLA4 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이고, 여기에서 상기 접합체는 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 중합체 모이어티 Z에 공유접합된 복수의 항-CTLA4 모이어티 -DCTLA4를 포함하고, 여기에서 -L1-은 -DCTLA4에 가역적으로 공유접합되고 -L2-는 Z에 공유접합되고, -L1-은 링커 모이어티이고 -L2-는 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이고, 여기에서 모이어티 -L1-, -L2- 및 Z는 본 발명의 접합체에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, -DCTLA4는 야생형 Fc 항-CTLA4 항체, 이펙터 기능에 대해 향상된 Fc/FcγR 결합 항-CTLA4 항체, 종양 미세환경에서 조건부 활성을 띠는 항-CTLA4 항체, 항-CTLA4 소분자, CTLA4 길항제 융합 단백질, 항-CTLA4 안티칼린, 항-CTLA4 나노바디, 및 항체, scFV 또는 다른 포맷에 기반한 항-CTLA4 다중특이적 생물제제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, -DCTLA4는 이필리무맙이다. 특정 실시양태에서, -DCTLA4는 트레멜리무맙이다. 특정 실시양태에서, 항-CTLA4 접합체는 하기 구조를 가진다:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -DCTLA4의 아민 작용기의 질소, 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 하이드로겔, 특히 가교결합된 히알루론산 하이드로겔과 같은 Z에의 부착을 나타낸다.
Z가 가교결합된 히알루론산 하이드로겔과 같은 하이드로겔인 경우, 다수의 모이어티 -DCTLA4-L1-L2-가 Z에 연결되는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, -DCTLA4, 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소는 라이신 잔기의 아민이다. 특정 실시양태에서, -DCTLA4, 특히 이필리무맙의 아민 작용기의 질소는 N-말단 아민이다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 앞서 기재된 바와 같은 CTLA4의 억제제이다.
면역 활성화 수용체 아고니스트는 CD27의 아고니스트, 예컨대, 재조합 CD70, 예컨대, HERA-CD27L, 및 바릴루맙(varlilumab)(CDX-1127); CD28의 아고니스트, 예컨대, 재조합 CD80, 재조합 CD86, TGN1412 및 FPT155; CD40의 아고니스트, 예컨대, 재조합 CD40L, CP-870,893, 다세투주맙(dacetuzumab)(SGN-40), Chi Lob 7/4, ADC-1013 및 CDX1140; 4-1BB(CD137)의 아고니스트, 예컨대, 재조합 4-1BBL, 우렐루맙(urelumab), 우토밀루맙(utomilumab) 및 ATOR-1017; OX40의 아고니스트, 예컨대, 재조합 OX40L, MEDI0562, GSK3174998, MOXR0916 및 PF-04548600; GITR의 아고니스트, 예컨대, 재조합 GITRL, TRX518, MEDI1873, INCAGN01876, MK-1248, MK-4166, GWN323 및 BMS-986156; 및 ICOS의 아고니스트, 예컨대, 재조합 ICOSL, JTX-2011 및 GSK3359609로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
다중특이적 약물은 생물제제 및 소분자 면역 체크포인트 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 생물제제의 예는 다중특이적 면역 체크포인트 억제제, 예컨대, 다중특이적 CD137/HER2, PD-(L)1/LAG3 길항제(예를 들어, FS118, MGD013), CTLA4/LAG3 길항제(예를 들어, XmAb22841) 및 CTLA4/PD-(L)1 길항제(예를 들어, XmAb20717, MGD019); 다중특이적 면역 활성화 수용체 아고니스트, 면역사이토카인 및 다중특이적 면역 체크포인트 아고니스트이다. 이러한 다중특이적 면역 체크포인트 아고니스트는 Ig 수퍼패밀리 아고니스트, 예컨대, ALPN-202, FPT155, TGN1412, GSK3359609, JTX-2011; TNF 수퍼패밀리 아고니스트, 예컨대, FAP-4-1BBL(RG7826), OX40-41BB(FS120) ATOR-1015, ATOR-1144, ALG.APV-527, 리포칼린/PRS-343, PRS344/ONC0055, FAP-CD40 DARPin, MP0310 DARPin, FAP-0X40 DARPin, EGFR-CD40 DARPin, EGFR41BB/CD137 DARPin, EGFR-0X40/DARFPin, HER2-CD40 DARPin, HER2-41BB/CD137 DARPin, HER2-0X40 DARPin, 피브로넥틴(FIBRONECTIN) ED-B-CD40 DARPin, 피브로넥틴 ED-B-41BB/CD137 및 피브로넥틴 ED-B-0X40 DARPin; CD3 다중특이적 아고니스트, 예컨대, 블리나투모맙(blinatumomab), 솔리토맙(solitomab), MEDI-565, 에르투막소맙(ertumaxomab), 항-HER2/CD3, 1Fab-면역글로불린 G TDB, GBR 1302, MGD009, MGD007, EGFRBi, EGFR-CD 프로바디, RG7802, PF-06863135, PF-06671008, AMG212/BAY2010112, CD3-5T4, XMAB14045, XMAB13676, XMAB18087, S80880, REGN1979, REGN5458, REGN4018, RG6026, 모수네투주맙(Mosunetuzumab), EM801, ERY974, RG6194, AMG420, AMG330, AMG 212, AMG 596, AMG 160, AMG 427, AMG 562, AMG 673, AMG 701, AMG 757, AFM13, AMF24, AFM26, AFM11, TNB-486, TNB-383B, GEN3013, JNJ-63709178, JNJ-63898081, JNJ-64007957, JNJ-64407564, JNJ-67571244, AMV564, APVO414(MOR209, ES414), APVO436, HPN424, HPN536, HPN217, HPN328, 및 종양 세포 항원 또는 바이러스 항원 발현 세포에 대한 T 세포 활성을 표적화하는 γδ TCR 아고니스트를 포함하는 다른 다중특이적 CD3 아고니스트 또는 T 세포 수용체(TCR) 아고니스트; 활성화 NK 수용체 및 표적 종양 세포 항원을 표적화하는 자연 살해(NK) 세포 수용체 다중특이적 아고니스트, 예컨대, NKG2D 다중특이적 아고니스트, NKp30 다중특이적 아고니스트, NKp44 다중특이적 아고니스트, NKp46 다중특이적 아고니스트, NKp80 다중특이적 아고니스트, NKG2C 다중특이적 아고니스트, 2B4(CD244) 다중특이적 아고니스트, CD32a 다중특이적 아고니스트, CD64 다중특이적 아고니스트, 종양 항원 및 활성화 수용체, 예컨대, NKG2D 또는 NKp30 또는 상기 나열된 다른 NK 수용체에 결합할 뿐만 아니라 Fc 수용체, 예컨대, TriNKeTs에도 결합하는 다중특이적 아고니스트, 및 CD16 다중특이적 아고니스트, 예컨대, 1633 BiKE, 161533 TriKE, OXS-3550, OXS-C3550, AFM13 및 AFM24; 및 표적 항원뿐만 아니라 CD16, CD32a, CD64와 같은 Fc 수용체에도 결합할 수 있는 다른 치료 항체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
면역 활성화 수용체 아고니스트의 다른 예는 덱틴(Dectin) 아고니스트(Imprime PGG), 재조합 NKG2D 리간드, γδ TCR 신호전달의 리간드 또는 변형제, 예컨대, 항-BTN3A1 mAb 또는 항-BTN2A1 mAb 또는 Vγ9/Vδ2 TCR 활성화 리간드, 예컨대, 포스포 항원 및 피로포스페이트 항원, 또는 내생성 Vγ9/Vδ2 리간드를 증가시키는 작용제, 예컨대, 파미드로네이트 및 졸레드로네이트와 같은 비스포스포네이트를 포함한다.
소분자 면역 체크포인트 억제제의 일례는 CA-327(TIM3/PD-L1 길항제)이다.
항체-약물 접합체는 조혈암을 표적화하는 ADC, 예컨대, 젬투주맙(gemtuzumab) 오조가미신(ozogamicin), 브렌툭시맙(brentuximab) 베도틴(vedotin), 이노투주맙(inotuzumab) 오조가미신, SAR3419, BT062, SGN-CD19A, IMGN529, MDX-1203, 폴라투주맙(polatuzumab) 베도틴(RG7596), 피나투주맙(pinatuzumab) 베도틴(RG7593), RG7598, 밀라투주맙(milatuzumab)-독소루비신 및 OXS-1550; 및 고형 종양 항원을 표적화하는 ADC, 예컨대, 트라스투주맙(trastuzumab) 엠탄신(emtansine), 글렘바투모맙(glembatumomab) 베도틴, SAR56658, AMG-172, AMG-595, BAY-94-9343, BIIB015, 보르세투주맙(vorsetuzumab) 마포도틴(mafodotin)(SGN-75), ABT-414, ASG-5ME, 엔포르투맙(enfortumab) 베도틴(ASG-22ME), ASG-16M8F, IMGN853, 인두사투맙(indusatumab) 베도틴(MLN-0264), 바도르투주맙(vadortuzumab) 베도틴(RG7450), 소피투주맙(sofituzumab) 베도틴(RG7458), 리파스투주맙(lifastuzumab) 베도틴(RG7599), RG7600, DEDN6526A(RG7636), PSMA5 TTC, 프로게닉스 파마슈티칼스(Progenics Pharmaceuticals)의 1095, 로르보투주맙(lorvotuzumab) 머탄신(mertansine), 로르보투주맙 엠탄신, IMMU-130, 삭시투주맙(sacituzumab) 고비테칸(govitecan)(IMMU-132), PF-06263507 및 MEDI0641로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
항체-보강제 접합체는 국제 특허 출원 공개 제WO2018112108A1호 및 제WO2018009916A1호에 기재된 볼트바디와 같은 볼트바디일 수 있다. 특정 실시양태에서, 볼트바디는 BDC-1001 및 BDC-2034로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 볼트바디는 BDC-1001이다. 특정 실시양태에서, 볼트바디는 BDC-2034이다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-I)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
Ab는 항체 모이어티이고;
A는 항체 모이어티의 변형되지 않은 아미노산 측쇄, 또는 항체 모이어티의 변형된 아미노산 측쇄이고;
Z는 연결 모이어티이고;
Adj는 보강제 모이어티이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이다.
화학식 (BT-I)의 모이어티 Ab의 r개 아미노산 측쇄는 모이어티 Adj-Z에 연결되는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I)의 A는 아민 작용기를 포함하는 항체 모이어티에서 아미노산 측쇄를 포함한다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-II)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
Ab는 항체 모이어티이고;
Adj는 보강제 모이어티이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
Z는 에틸렌 글리콜 기 또는 글리신 잔기를 가진 2가 연결 모이어티이다.
화학식 (BT-II)의 모이어티 
는 화학식 (BT-I)의 A에 상응하는 것으로 이해된다. 마찬가지로, 화학식 (BT-II)의 모이어티 Ab의 r개 라이신 측쇄 모이어티는 모이어티 Adj-Z에 연결되는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 아미드 결합, C-N 단일 결합, C-O 단일 결합 또는 C-C 단일 결합을 통해 Adj에 결합되고, 아미드 결합 또는 C-N 단일 결합을 통해 Ab에 결합된다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 Adj의 질소 기 및 Ab의 질소 기에 결합된다. 이러한 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 아미드 결합, C-N 단일 결합 또는 이들의 조합을 통해 인접 질소 기에 결합된다.
일부 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 PEG 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 적어도 2개의 에틸렌 글리콜 기, 예컨대, 적어도 3개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 4개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 5개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 6개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 7개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 8개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 9개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 10개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 11개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 12개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 13개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 14개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 15개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 16개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 17개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 18개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 19개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 20개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 21개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 22개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 23개의 에틸렌 글리콜 기, 적어도 24개의 에틸렌 글리콜 기, 또는 적어도 25개의 에틸렌 글리콜 기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 2개의 에틸렌 글리콜 기, 3개의 에틸렌 글리콜 기, 4개의 에틸렌 글리콜 기, 5개의 에틸렌 글리콜 기, 6개의 에틸렌 글리콜 기, 8개의 에틸렌 글리콜 기, 12개의 에틸렌 글리콜 기, 24개의 에틸렌 글리콜 기 또는 25개의 에틸렌 글리콜 기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 글리신 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 적어도 2개의 글리신 잔기, 예컨대, 적어도 3개의 글리신 잔기, 적어도 4개의 글리신 잔기, 적어도 5개의 글리신 잔기, 적어도 6개의 글리신 잔기, 적어도 7개의 글리신 잔기, 적어도 8개의 글리신 잔기, 적어도 9개의 글리신 잔기, 적어도 10개의 글리신 잔기, 적어도 11개의 글리신 잔기, 적어도 12개의 글리신 잔기, 적어도 13개의 글리신 잔기, 적어도 14개의 글리신 잔기, 적어도 15개의 글리신 잔기, 적어도 16개의 글리신 잔기, 적어도 17개의 글리신 잔기, 적어도 18개의 글리신 잔기, 적어도 19개의 글리신 잔기, 적어도 20개의 글리신 잔기, 적어도 21개의 글리신 잔기, 적어도 22개의 글리신 잔기, 적어도 23개의 글리신 잔기, 적어도 24개의 글리신 잔기, 또는 적어도 25개의 글리신 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 2개의 글리신 잔기, 3개의 글리신 잔기, 4개의 글리신 잔기, 5개의 글리신 잔기, 6개의 글리신 잔기, 8개의 글리신 잔기, 12개의 글리신 잔기, 24개의 글리신 잔기 또는 25개의 글리신 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Z는 2가 사이클로헥실렌 기를 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 CDH1, CD19, CD20, CD29, CD30, CD38, CD40, CD47, CEA, EpCAM, MUC1, MUC16, EGFR, VEGF, HER2, SLAMF7, PDGFRa, gp75, CTLA4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, B7-H4, KIR, TNFRSF4, OX40L, IDO-1, IDO-2, CEACAM1, BTLA, TIM3, A2Ar, VISTA, CLEC4C(BDCA-2, DLEC, CD303, CLECSF7), CLEC4D(MCL, CLECSF8), CLEC4E(민클(Mincle)), CLEC6A(덱틴-2), CLEC5A(MDL-1, CLECSF5), CLEC1B(CLEC-2), CLEC9A(DNGR-1) 및 CLEC7A(덱틴-1)로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 HER2에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 EGFR에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 CCR8에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 PD-L1에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 CEA에 결합하는 항체 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 이필리무맙, 오비누투주맙(obinutuzumab), 트라스투주맙, 세툭시맙(cetuximab), 리툭시맙(rituximab), 퍼투주맙(pertuzumab), 베바시주맙(bevacizumab), 다라투무맙(daratumumab), 에타너셉트(etanercept), 올라라투맙(olaratumab), 엘로투주맙(elotuzumab), 마르게툭시맙(margetuximab) 및 이들의 바이오시밀러(biosimilar)로 이루어진 군으로부터 선택된 항체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 트라스투주맙을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 펨브롤리주맙을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Ab는 니볼루맙을 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 PRRA를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 toll 유사 수용체(TLR) 아고니스트, c형 렉틴 수용체(CLR) 아고니스트, NOD 유사 수용체(NLR) 아고니스트, Rig-I 유사 수용체(RLR) 아고니스트, 인터페론 유전자의 자극제(STING) 아고니스트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 PRRA이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 TLR 아고니스트, 예컨대, TLR1 아고니스트, TLR2 아고니스트, TLR3 아고니스트, TLR4 아고니스트, TLR5 아고니스트, TLR6 아고니스트, TLR7 아고니스트, TLR7/8 아고니스트, TLR8 아고니스트, TLR9 아고니스트, TLR10 아고니스트, TLR11 아고니스트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 TLR 아고니스트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 CL264, CL401, CL413, CL419, CL553, CL572, Pam3CSK4 및 Pam2CSK4로 이루어진 군으로부터 선택된 TLR 아고니스트이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택된다:
상기 식에서,
각각의 -J는 -H, -OR4 및 -R4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -R4는 -H, 및 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 유닛을 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬 기로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
-Q-는 존재하지 않거나, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 유닛을 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
파선은 Z에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 하기 화학식을 갖는다:
상기 식에서,
각각의 -J는 -H, OR4 또는 -R4로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -R4는 -H, 및 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 유닛을 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 -U-는 독립적으로 -CH- 또는 -N-이고, 여기에서 적어도 하나의 -U-는 -N-이고;
각각의 t는 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택된 정수이고;
-Q-는 존재하지 않거나, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 탄소 유닛을 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
파선은 Z에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 하기 화학식으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
상기 식에서, 파선은 Z에의 부착을 나타낸다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)의 Adj는 국제 특허 출원 공개 제WO2018112108A1호의 단락 [118] 내지 [136]에 개시된 보강제 모이어티로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 하나 초과의 상이한 보강제 모이어티를 포함한다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VI)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
Ab는 항체 모이어티이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
Z는 적어도 하나의 에틸렌 글리콜 기 또는 적어도 하나의 글리신 잔기를 포함하는 2가 연결 모이어티이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VI)의 Z는 화학식 (BT-I) 및 (BT-II)에 대해 정의된 바와 같이 사용된다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VII)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
Ab는 (i) 항원 결합 도메인 및 (ii) Fc 도메인을 포함하는 항체 모이어티이고;
Adj는 화학식 (BT-IVb)의 보강제 모이어티이고:
상기 식에서,
-R4는 1개 내지 8개의 탄소를 포함하는 알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬 및 헤테로아릴알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 -J는 -H이고;
각각의 -U-는 -N-이고;
각각의 t는 2이고;
-Q-는 존재하지 않고;
파선은 G1에의 부착을 나타내고;
-G1-은 결합이고;
a는 1 내지 40으로부터 선택된 정수이고;
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VII)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
Ab는 트라스투주맙이고;
Adj는 화학식 (BT-IVb)의 보강제 모이어티이고:
상기 식에서,
-R4는 부틸이고;
각각의 -J는 H이고;
각각의 -U-는 N이고;
각각의 t는 2이고;
-Q-는 존재하지 않고;
파선은 -G1-에의 부착을 나타내고;
-G1-은 결합이고;
a는 1 내지 40으로부터 선택된 정수이고;
r은 1 내지 4로부터 선택된 정수이다.
특정 실시양태에서, 볼트바디는 화학식 (BT-VIII)의 구조를 가진다:
상기 식에서,
r은 1 내지 10으로부터 선택된 정수이고;
n은 약 2 내지 약 25로부터 선택된 정수이고;
Ab는 항체 모이어티이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 1이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 2이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 3이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 r은 4이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된 정수이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 n은 10이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 HER2, EGFR, PD-L1 또는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 항체 모이어티는 HER2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 EGFR에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 PD-L1에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (BT-VIII)의 Ab는 CEA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
오로지 화학식 (BT-IIIa), (BT-IIIb), (BT-IIIc), (BT-IIId), (BT-IVa) 및 (BT-IVb)와 관련하여 사용된 용어는 하기 의미를 가진다:
용어 "알킬"은 표시된 탄소 원자의 수를 가진 선형 또는 분지형 포화 지방족 라디칼을 지칭한다. 알킬은 임의의 수의 탄소, 예컨대, C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C1-6, C1-7, C1-8, C1-9, C1-10, C2-3, C2-4, C2-5, C2-6, C3-4, C3-5, C3-6, C4-5, C4-6 및 C5-6을 포함할 수 있다. 예를 들어, C1-6 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 헥실을 포함한다. 알킬은 또한 30개 이하의 탄소 원자를 가진 알킬 기, 예컨대, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실을 포함할 수 있다. 알킬 기는 치환될 수 있거나 비치환될 수 있다. "치환된 알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다.
용어 "아릴"은 임의의 적합한 수의 고리 원자 및 임의의 적합한 수의 고리를 가진 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 아릴 기는 임의의 적합한 수의 고리 원자, 예컨대, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 또는 16개의 고리 원자뿐만 아니라 6개 내지 10개, 6개 내지 12개, 또는 6개 내지 14개의 고리 구성원도 포함할 수 있다. 아릴 기는 단환형일 수 있거나, 융합되어 이환형 또는 삼환형 기를 형성할 수 있거나, 결합에 의해 연결되어 비아릴 기를 형성할 수 있다. 대표적인 아릴 기는 페닐, 나프틸 및 비페닐을 포함한다. 다른 아릴 기는 메틸렌 연결 기를 가진 벤질을 포함한다. 페닐, 나프틸 또는 비페닐과 같은 일부 아릴 기는 6개 내지 12개의 고리 구성원을 가진다. 페닐 또는 나프틸과 같은 다른 아릴 기는 6개 내지 10개의 고리 구성원을 가진다.
용어 "탄소환"은 3개 내지 12개의 고리 원자 또는 표시된 수의 원자를 함유하는 포화 또는 부분 불포화 단환형, 융합된 이환형 또는 가교된 다환형 고리 어셈블리를 지칭한다. 탄소환은 임의의 수의 탄소, 예컨대, C3-6, C4-6, C5-6, C3-8, C4-8, C5-8, C6-8, C3-9, C3-10, C3-11 및 C3-12를 포함할 수 있다. 포화 단환형 탄소환 고리는 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로옥틸을 포함한다. 포화 이환형 및 다환형 탄소환 고리는 예를 들어, 노르보르난, [2.2.2] 비사이클로옥탄, 데카하이드로나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 탄소환 기는 또한 부분적으로 불포화되어, 고리에서 하나 이상의 이중 또는 삼중 결합을 가질 수 있다. 부분적으로 불포화된 대표적인 탄소환 기는 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 사이클로헥사디엔(1,3-이성질체 및 1,4-이성질체), 사이클로헵텐, 사이클로헵타디엔, 사이클로옥텐, 사이클로옥타디엔(1,3-이성질체, 1,4-이성질체 및 1,5-이성질체), 노르보르넨 및 노르보르나디엔을 포함하나, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "헤테로알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 임의로 그리고 독립적으로 N, O 및 S로부터 선택된 헤테로원자로 대체되어 있는 알킬 기를 지칭한다.
용어 "헤테로환"은 헤테로사이클로알킬 기 및 헤테로아릴 기를 지칭한다. 그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 "헤테로아릴"은 5개 내지 16개의 고리 원자를 함유하는 단환형 또는 융합된 이환형 또는 삼환형 방향족 고리 어셈블리를 지칭하고, 여기에서 고리 원자 중 1개 내지 5개의 고리 원자는 헤테로원자, 예컨대, N, O 또는 S이다. 추가 헤테로원자, 예컨대, B, Al, Si 및 P도 유용할 수 있다. 헤테로원자는 산화되어 -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성할 수 있다. 헤테로아릴 기는 임의의 수의 고리 원자, 예컨대, 3개 내지 6개, 4개 내지 6개, 5개 또는 6개, 3개 내지 8개, 4개 내지 8개, 5개 내지 8개, 6개 내지 8개, 3개 내지 9개, 3개 내지 10개, 3개 내지 11개, 또는 3개 내지 12개의 고리 구성원을 포함할 수 있다. 임의의 적합한 수, 예컨대, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개, 또는 1개 또는 2개, 1개 내지 3개, 1개 내지 4개, 1개 내지 5개, 2개 또는 3개, 2개 내지 4개, 2개 내지 5개, 3개 또는 4개, 또는 3개 내지 5개의 헤테로원자가 헤테로아릴 기에 포함될 수 있다. 상기 헤테로아릴 기는 피롤, 피리딘, 이미다졸, 피라졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라진, 피리미딘, 피리다진, 트리아진(1,2,3-이성질체, 1,2,4-이성질체 및 1,3,5-이성질체), 티오펜, 퓨란, 티아졸, 이소티아졸, 옥사졸 및 이속사졸과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로아릴 기는 또한 방향족 고리 시스템, 예컨대, 페닐 고리에 융합되어 구성원, 예컨대, 벤조피롤, 예컨대, 인돌 및 이소인돌, 벤조피리딘, 예컨대, 퀴놀린 및 이소퀴놀린, 벤조피라진(퀴녹살린), 벤조피리미딘(퀴나졸린), 벤조피리다진, 예컨대, 프탈라진 및 신놀린, 벤조티오펜 및 벤조퓨란을 형성할 수 있다. 다른 헤테로아릴 기는 결합에 의해 연결된 헤테로아릴 고리, 예컨대, 비피리딘을 포함한다. 헤테로아릴 기는 치환될 수 있거나 비치환될 수 있다. "치환된 헤테로아릴" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 헤테로아릴 기는 고리의 임의의 위치를 통해 연결될 수 있다. 예를 들어, 피롤은 1-피롤, 2-피롤 및 3-피롤을 포함하고, 피리딘은 2-피리딘, 3-피리딘 및 4-피리딘을 포함하고, 이미다졸은 1-이미다졸, 2-이미다졸, 4-이미다졸 및 5-이미다졸을 포함하고, 피라졸은 1-피라졸, 3-피라졸, 4-피라졸 및 5-피라졸을 포함하고, 트리아졸은 1-트리아졸, 4-트리아졸 및 5-트리아졸을 포함하고, 테트라졸은 1-테트라졸 및 5-테트라졸을 포함하고, 피리미딘은 2-피리미딘, 4-피리미딘, 5-피리미딘 및 6-피리미딘을 포함하고, 피리다진은 3-피리다진 및 4-피리다진을 포함하고, 1,2,3-트리아진은 4-트리아진 및 5-트리아진을 포함하고, 1,2,4-트리아진은 3-트리아진, 5-트리아진 및 6-트리아진을 포함하고, 1,3,5-트리아진은 2-트리아진을 포함하고, 티오펜은 2-티오펜 및 3-티오펜을 포함하고, 퓨란은 2-퓨란 및 3-퓨란을 포함하고, 티아졸은 2-티아졸, 4-티아졸 및 5-티아졸을 포함하고, 이소티아졸은 3-이소티아졸, 4-이소티아졸 및 5-이소티아졸을 포함하고, 옥사졸은 2-옥사졸, 4-옥사졸 및 5-옥사졸을 포함하고, 이속사졸은 3-이속사졸, 4-이속사졸 및 5-이속사졸, 인돌, 예컨대, 1-인돌, 2-인돌 및 3-인돌, 이소인돌, 예컨대, 1-이소인돌 및 2-이소인돌, 퀴놀린, 예컨대, 2-퀴놀린, 3-퀴놀린 및 4-퀴놀린, 이소퀴놀린, 예컨대, 1-이소퀴놀린, 3-이소퀴놀린 및 4-이소퀴놀린, 퀴나졸린, 예컨대, 2-퀴나졸린 및 4-퀴나졸린, 신놀린, 예컨대, 3-신놀린 및 4-신놀린, 벤조티오펜, 예컨대, 2-벤조티오펜 및 3-벤조티오펜, 및 벤조퓨란, 예컨대, 2-벤조퓨란 및 3-벤조퓨란을 포함한다.
그 자체로 또는 또 다른 치환기의 일부로서 용어 "헤테로사이클로알킬"은 3개 내지 12개의 고리 구성원 및 1개 내지 4개의 N, O 및 S 헤테로원자를 가진 포화 고리 시스템을 지칭한다. B, Al, Si 및 P와 같은 추가 헤테로원자도 유용할 수 있다. 헤테로원자는 산화되어, -S(O)- 및 -S(O)2-와 같은 모이어티를 형성할 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 임의의 수의 고리 원자, 예컨대, 3개 내지 6개, 4개 내지 6개, 5개 또는 6개, 3개 내지 8개, 4개 내지 8개, 5개 내지 8개, 6개 내지 8개, 3개 내지 9개, 3개 내지 10개, 3개 내지 11개, 또는 3개 내지 12개의 고리 구성원을 포함할 수 있다. 임의의 적합한 수, 예컨대, 1개, 2개, 3개 또는 4개, 또는 1개 또는 2개, 1개 내지 3개, 1개 내지 4개, 2개 또는 3개, 2개 내지 4개, 3개 또는 4개의 헤테로원자가 헤테로사이클로알킬 기에 포함될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 아지리딘, 아제티딘, 피롤리딘, 피페리딘, 아제판, 아조칸, 퀴누클리딘, 피라졸리딘, 이미다졸리딘, 피페라진(1,2-이성질체, 1,3-이성질체 및 1,4-이성질체), 옥시란, 옥세탄, 테트라하이드로퓨란, 옥산(테트라하이드로피란), 옥세판, 티이란, 티에탄, 티올란(테트라하이드로티오펜), 티안(테트라하이드로티오피란), 옥사졸리딘, 이속사졸리딘, 티아졸리딘, 이소티아졸리딘, 디옥솔란, 디티올란, 모르폴린, 티오모르폴린, 디옥산 또는 디티안과 같은 기를 포함할 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 또한 방향족 또는 비방향족 고리 시스템에 융합되어, 인돌린과 같은 구성원을 형성할 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 비치환될 수 있거나 치환될 수 있다. "치환된 헤테로사이클로알킬" 기는 할로, 하이드록시, 아미노, 옥소(=O), 알킬아미노, 아미도, 아실, 니트로, 시아노 및 알콕시로부터 선택된 하나 이상의 기로 치환될 수 있다. 헤테로사이클로알킬 기는 고리의 임의의 위치를 통해 연결될 수 있다. 예를 들어, 아지리딘은 1-아지리딘 또는 2-아지리딘일 수 있고, 아제티딘은 1-아제티딘 또는 2-아제티딘일 수 있고, 피롤리딘은 1-피롤리딘, 2-피롤리딘 또는 3-피롤리딘일 수 있고, 피페리딘은 1-피페리딘, 2-피페리딘, 3-피페리딘 또는 4-피페리딘일 수 있고, 피라졸리딘은 1-피라졸리딘, 2-피라졸리딘, 3-피라졸리딘 또는 4-피라졸리딘일 수 있고, 이미다졸리딘은 1-이미다졸리딘, 2-이미다졸리딘, 3-이미다졸리딘 또는 4-이미다졸리딘일 수 있고, 피페라진은 1-피페라진, 2-피페라진, 3-피페라진 또는 4-피페라진일 수 있고, 테트라하이드로퓨란은 1-테트라하이드로퓨란 또는 2-테트라하이드로퓨란일 수 있고, 옥사졸리딘은 2-옥사졸리딘, 3-옥사졸리딘, 4-옥사졸리딘 또는 5-옥사졸리딘일 수 있고, 이속사졸리딘은 2-이속사졸리딘, 3-이속사졸리딘, 4-이속사졸리딘 또는 5-이속사졸리딘일 수 있고, 티아졸리딘은 2-티아졸리딘, 3-티아졸리딘, 4-티아졸리딘 또는 5-티아졸리딘일 수 있고, 이소티아졸리딘은 2-이소티아졸리딘, 3-이소티아졸리딘, 4-이소티아졸리딘 또는 5-이소티아졸리딘일 수 있고, 모르폴린은 2-모르폴린, 3-모르폴린 또는 4-모르폴린일 수 있다.
용어 "아릴알킬"은 알킬 기의 임의의 아릴 유도체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 아릴 모이어티는 알킬 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 커플링될 수 있다. 이러한 상황 하에서, 치환기는 아릴알킬로서 지칭될 것이며, 이는 알킬렌 모이어티가 아릴 모이어티와, 아릴에 커플링된 분자 사이에 있음을 시사한다. 대표적인 아릴알킬 기는 페닐메틸, 페닐에틸, 페닐프로필, 페닐이소프로필, 페닐부틸, 페닐-이소부틸, 페닐-sec-부틸, 페닐-tert-부틸, 페닐펜틸, 페닐-이소펜틸, 페닐헥실, 나프틸메틸, 나프틸에틸, 나프틸프로필, 나프틸이소프로필, 나프틸부틸, 나프틸-이소부틸, 나프틸-sec-부틸, 나프틸-tert-부틸, 나프틸펜틸, 나프틸-이소펜틸, 나프틸헥실, 비페닐메틸, 비페닐에틸, 비페닐프로필, 비페닐이소프로필, 비페닐부틸, 비페닐-이소부틸, 비페닐-sec-부틸, 비페닐-tert-부틸, 비페닐펜틸, 비페닐-이소펜틸, 및 비페닐헥실을 포함한다.
용어 "헤테로아릴알킬"은 하나 이상의 탄소 원자가 임의로 그리고 독립적으로 N, O 및 S로부터 선택된 헤테로원자로 대체되어 있는 아릴알킬 기를 지칭한다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 추가 약물은 β-방사제(emitter), 예컨대, 177루테튬, 166홀뮴, 186레늄, 188레늄, 67구리, 149프로메튬, 199금, 77브롬, 153사마륨, 105로듐, 89스트론튬, 90이트륨, 131요오드; α-방사제, 예컨대, 213비스무트, 223라듐, 225악티늄, 211아스타틴; 및 오거(Auger) 전자 방사제, 예컨대, 77브롬, 111인듐, 123요오드 및 125요오드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있는 방사성핵종이다.
표적화 방사성핵종 치료제는 제발린(zevalin)(90Y-이브리투모맙 티욱세탄(ibritumomab tiuxetan)), 벡사르(bexxar)(131I-토시투모맙(tositumomab)), 온콜림(oncolym)(131I-Lym 1), 림포사이드(lymphocide)(90Y-에프라투주맙(epratuzumab)), 코타라(cotara)(131I-chTNT-1/B), 라베투주맙(labetuzumab)(90Y 또는 131I-CEA), 테라진(theragyn)(90Y-펨투모맙(pemtumomab)), 리카르틴(licartin)(131I-메툭시맙(metuximab)), 라드레투맙(radretumab)(131I-L19) PAM4(90Y-클리바투주맙 테트락세탄(clivatuzumab tetraxetan)), 소피고(xofigo)(223Ra 이염화물), 루타테라(lutathera)(177Lu-DOTA-Tyr3-옥트레오테이트(Octreotate)) 및 131I-MIBG로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
DNA 손상 복구 억제제는 폴리(ADP-리보스) 중합효소(PARP) 억제제, 예컨대, 올라파립(olaparib), 루카파립(rucaparib), 니라파립(niraparib), 벨리파립(veliparib), CEP 9722 및 E7016; CHK1/CHK2 이중 억제제, 예컨대, AZD7762, V158411, CBP501 및 XL844; CHK1 선택적 억제제, 예컨대, PF477736, MK8776/SCH900776, CCT244747, CCT245737, LY2603618, LY2606368/프렉사서팁(prexasertib), AB-IsoG, ARRY575, AZD7762, CBP93872, ESP01, GDC0425, SAR020106, SRA737, V158411 및 VER250840; CHK2 억제제, 예컨대, CCT241533 및 PV1019; ATM 억제제, 예컨대, AZD0156, AZD1390, KU55933, M3541 및 SX-RDS1; ATR 억제제, 예컨대, AZD6738, BAY1895344, M4344 및 M6620(VX-970); 및 DNA-PK 억제제, 예컨대, M3814로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
종양 대사 억제제는 아데노신 경로의 억제제, 트립토판 경로의 억제제 및 아르기닌 경로의 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
아데노신 경로 억제제의 예는 A2AR(아데노신 A2A 수용체)의 억제제, 예컨대, ATL-444, 이스트라데필린(istradefylline)(KW-6002), MSX-3, 프렐라데난트(preladenant)(SCH-420,814), SCH-58261, SCH412,348, SCH-442,416, ST-1535, 카페인, VER-6623, VER-6947, VER-7835, 비파데난트(vipadenant)(BIIB-014), ZM-241,385, PBF-509 및 V81444; CD73 억제제, 예컨대, IPH53 및 SRF373; CD39 억제제, 예컨대, IPH52이다.
트립토판 대사 억제제의 예는 IDO의 억제제, 예컨대, 인독시모드(indoximod)(NLG8189), 에파카도스타트(epacadostat), 나복시모드(navoximod), BMS-986205 및 MK-7162; TDO의 억제제, 예컨대, 680C91; 및 IDO/TDO 이중 억제제 등이다.
아르기닌 경로 억제제의 예는 INCB001158과 같은 아르기나제 억제제이다.
단백질 키나제 억제제는 수용체 티로신 키나제 억제제, 세포내 키나제 억제제, 사이클린 의존성 키나제 억제제, 포스포이노시타이드-3-키나제 억제제, 미토겐 활성화 단백질 키나제 억제제, 핵 인자 카파-β 키나제(IKK)의 억제제 및 Wee-1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
수용체 티로신 키나제 억제제의 예는 EGF 수용체 억제제, 예컨대, 아파티닙(afatinib), 세툭시맙(cetuximab), 에를로티닙(erlotinib), 제피티닙(gefitinib), 퍼투주맙 및 마르게툭시맙; VEGF 수용체 억제제, 예컨대, 악시티닙(axitinib), 렌바티닙(lenvatinib), 페갑타닙(pegaptanib) 및 리니파닙(linifanib)(ABT-869); C-KIT 수용체 억제제, 예컨대, CDX0158(KTN0158); ERBB2(HER2) 억제제, 예컨대, 허셉틴(herceptin)(트라스투주맙); ERBB3 수용체 억제제, 예컨대, CDX3379(MEDI3379, KTN3379) 및 AZD8931(사피티닙(sapitinib)); FGF 수용체 억제제, 예컨대, 에르다피티닙(erdafitinib); AXL 수용체 억제제, 예컨대, BGB324(BGB 324, R 428, R428, 벰센티닙(bemcentinib)) 및 SLC391; 및 MET 수용체 억제제, 예컨대, CGEN241이다.
세포내 키나제 억제제의 예는 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제, 예컨대, 이브루티닙(ibrutinib), 아칼라브루티닙(acalabrutinib), GS-4059, 스페브루티닙(spebrutinib), BGB-3111, HM71224, 자누브루티닙, ARQ531, BI-BTK1 및 베카브루티닙(vecabrutinib); 비장 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 포스타마티닙(fostamatinib); Bcr-Abl 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 이마티닙(imatinib) 및 닐로티닙(nilotinib); 야누스(Janus) 키나제 억제제, 예컨대, 룩솔리티닙(ruxolitinib), 토파시티닙(tofacitinib) 및 페드라티닙(fedratinib); 및 다중특이적 티로신 키나제 억제제, 예컨대, 보수티닙(bosutinib), 크리조티닙(crizotinib), 카보잔티닙(cabozantinib), 다사티닙(dasatinib), 엔트렉티닙(entrectinib), 라파티닙(lapatinib), 무브리티닙(mubritinib), 파조파닙(pazopanib), 소라페닙(sorafenib), 수니티닙(sunitinib), SU6656 및 반데타닙(vandetanib)이다.
티로신 키나제 억제제의 일례는 티로신 키나제 억제제("TKI") 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이고, 여기에서 상기 접합체는 적어도 하나의 모이어티 -L1-L2-를 통해 중합체 모이어티 Z에 공유접합된 복수의 TKI 모이어티 -DTKI를 포함하고, 여기에서 -L1-은 -DTKI에 가역적으로 공유접합되고 -L2-는 Z에 공유접합되고, -L1-은 링커 모이어티이고 -L2-는 화학 결합 또는 스페이서 모이어티이고, 여기에서 모이어티 -L1-, -L2- 및 Z는 본 발명의 접합체에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다. 특정 실시양태에서, -DTKI는 수용체 티로신 키나제 억제제, 세포내 키나제 억제제, 사이클린 의존성 키나제 억제제, 포스포이노시타이드-3-키나제(PI3K) 억제제, 미토겐 활성화 단백질 키나제 억제제, 핵 인자 카파-β 키나제(IKK)의 억제제 및 Wee-1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, -DTKI는 악시티닙이다. 특정 실시양태에서, -DTKI는 렌바티닙이다. 특정 실시양태에서 -DTKI는 페갑타닙이다. 특정 실시양태에서, -DTKI는 리니파닙이다.
사이클린 의존성 키나제 억제제의 예는 리보시클립(ribociclib), 팔보시클립(palbociclib), 아베마시클립(abemaciclib), 트릴라시클립(trilaciclib), 푸르발라놀(purvalanol) A, 올로뮤신(olomucine) II 및 MK-7965이다.
포스포이노시타이드-3-키나제 억제제의 예는 IPI549, GDc-0326, 픽틸리십(pictilisib), 세라벨리십(serabelisib), IC-87114, AMG319, 셀레탈리십(seletalisib), 아이디얼리십(idealisib) 및 CUDC907이다.
미토겐 활성화 단백질 키나제 억제제의 예는 Ras/파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 예컨대, 티피라피닙(tipirafinib) 및 LB42708; Raf 억제제, 예컨대, 레고라페닙(regorafenib), 엔코라페닙(encorafenib), 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib), 소라페닙(sorafenib), PLX-4720, GDC-0879, AZ628, 리피라페닙(lifirafenib), PLX7904 및 RO5126766; MEK 억제제, 예컨대, 코비메티닙(cobimetinib), 트라메티닙(trametinib), 비니메티닙(binimetinib), 셀루메티닙(selumetinib), 피마서팁(pimasertib), 레파메티닙(refametinib) 및 PD0325901; ERK 억제제, 예컨대, MK-8353, GDC-0994, 울릭서티닙(ulixertinib) 및 SCH772984이다.
핵 인자 카파-β 키나제(IKK)의 억제제의 예는 BPI-003 및 AS602868이다.
Wee-1 억제제의 예는 아다보서팁(adavosertib)이다.
케모카인 수용체 및 화학유인제 수용체 아고니스트는 CXC 케모카인 수용체, CC 케모카인 수용체, C 케모카인 수용체, CX3C 케모카인 수용체 및 화학유인제 수용체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CXC 케모카인 수용체는 CXCR1 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL8 및 재조합 CXCL6; CXCR2 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL8, 재조합 CXCL1, 재조합 CXCL2, 재조합 CXCL3, 재조합 CXCL5, 재조합 CXCL6, MGTA 145 및 SB251353; CXCR3 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL9, 재조합 CXCL10, 재조합 CXCL11 및 재조합 CXCL4; CXCR4 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL12, ATI2341, CTCE0214, CTCE0324 및 NNZ4921; CXCR5 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL13; CXCR6 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL16; 및 CXCL7 아고니스트, 예컨대, 재조합 CXCL11로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CC 케모카인 수용체는 CCR1 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL4, 재조합 CCL5, 재조합 CCL6, 재조합 CCL8, 재조합 CCL9/10, 재조합 CCL14, 재조합 CCL15, 재조합 CCL16, 재조합 CCL23, PB103, PB105 및 MPIF1; CCR2 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL2, 재조합 CCL8, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR3 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL11, 재조합 CCL26, 재조합 CCL7, 재조합 CCL13, 재조합 CCL15, 재조합 CCL24, 재조합 CCL5, 재조합 CCL28 및 재조합 CCL18; CCR4 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL5, 재조합 CCL17 및 재조합 CCL22; CCR5 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL3, ECI301, 재조합 CCL5, 재조합 CCL8, 재조합 CCL11, 재조합 CCL13, 재조합 CCL14, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR6 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL2; CCR7 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL19 및 재조합 CCL21; CCR8 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL1, 재조합 CCL16, PB103 및 PB105; CCR9 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL25; CCR10 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL27 및 재조합 CCL28; 및 CCR11 아고니스트, 예컨대, 재조합 CCL19, 재조합 CCL21 및 재조합 CCL25로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
C 케모카인 수용체는 XCR1 아고니스트, 예컨대, 재조합 XCL1 또는 재조합 XCL2일 수 있다.
CX3C 케모카인 수용체는 CX3CR1 아고니스트, 예컨대, 재조합 CX3CL1일 수 있다.
화학유인제 수용체는 포르밀 펩티드 수용체 아고니스트, 예컨대, N-포르밀 펩티드, N-포르밀메티오닌-류실-페닐알라닌, 엔푸비르타이드(enfuvirtide), T21/DP107, 아넥신 A1, Ac2-26 및 Ac9-25; C5a 수용체 아고니스트; 및 케모카인 유사 수용체 1 아고니스트, 예컨대, 케메린(chemerin)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
케모카인 길항제는 CXCL 케모카인의 억제제, 예컨대, UNBS5162; CXCL8의 억제제, 예컨대, BMS986253 및 PA620; CXCL10의 억제제, 예컨대, TM110, 엘델루맙(eldelumab) 및 NI0801; CXCL12의 억제제, 예컨대, NOX-A12 및 JVS100; CXCL13의 억제제, 예컨대, VX5; CCL2의 억제제, 예컨대, PA508, ABN912, AF2838, BN83250, BN83470, C243, CGEN54, CNTO888, NOXE36, VT224 및 SSR150106; CCL5의 억제제, 예컨대, HGS1025 및 NI0701; CCL2/CCL5의 억제제, 예컨대, BKTP46; CCL5/FMLP 수용체의 억제제, 예컨대, RAP160; CCL11의 억제제, 예컨대, 버틸리무맙(bertilimumab) 및 RAP701; CCL5/CXCL4의 억제제, 예컨대, CT2008 및 CT2009; CCL20의 억제제, 예컨대, GSK3050002; 및 CX3CL1의 억제제, 예컨대, 퀘트몰리맙(quetmolimab)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
케모카인 수용체 길항제는 CXCR1의 억제제, 예컨대, 레퍼탁신(repertaxin), CCX832, FX68 및 KB03; CXCR2의 억제제, 예컨대, AZD5069, AZD5122, AZD8309, GSK1325756, GSK1325756H, PS291822, SB332235 및 SB656933; CXCR1/CXCR2의 억제제, 예컨대, DF1970, DF2156A, DF2162, DF2755A, 레파릭신(reparixin), SX576, SX682, PACG31P, AZD4721 및 PA401; CXCR3의 억제제; CXCR4의 억제제, 예컨대, BL8040; CXCR4/E-셀렉틴의 억제제, 예컨대, GMI1359; CXCR6의 억제제, 예컨대, CCX5224; CCR1의 억제제, 예컨대, AZD4818, BAY865047, BMS817399, CCX354, CCX634, CCX9588, CP481715, MLN3701, MLN3897, PS031291, PS375179 및 PS386113; CCR2의 억제제, 예컨대, AZD2423, BL2030, BMS741672, CCX140, CCX598, CCX872, CCX915, CNTX6970, INCB3284, INCB3344, INCB8696, JNJ17166864, JNJ27141491, MK0812, OPLCCL2LPM, PF4136309, 세로시온(serocion), STIB0201, STIB0211, STIB0221, STIB0232, STIB0234, TAK202, TPI526; CCR2/CCR5의 억제제, 예컨대, PF04634817, RAP103 및 TBR652; CCR2/CCR5/CCR8의 억제제, 예컨대, RAP310; CCR3의 억제제, 예컨대, ASM8, AXP1275, BMS639623, CM101, DPC168, GW766994, GW824575, MT0814, OPLCCL11LPM 및 QAP642; CCR4의 억제제, 예컨대, AT008, AZD2098, CCX6239, FLX193, FLX475, GBV3019, GSK2239633, IC487892 및 포텔리게오(poteligeo); CCR5의 억제제, 예컨대, 5P12-RANTES, AZD5672, AZD8566, CMPD167, ESN196, GSK706769, GW873140, HGS004, INCB15050, INCB9471, L872, 살균제, PF232798, PRO140, RAP101, SAR113244, SCH350634, SCH351125, SCH417690, 셀젠트리(selzentry), TAK779, TBR220, TD0232 및 VX286; CCR5/CXCR4의 억제제, 예컨대, AMD887, ND401 및 SP01; CCR6의 억제제, 예컨대, CCX507, CCX9664 및 STIB100X; CCR6의 억제제, 예컨대, CCX025, CCX507, CCX807, eut22, MLN3126, POL7085, 트라피세트(traficet)-EN; CXCR3의 억제제, 예컨대, AMG487, AT010, STIA120X; CXCR4의 억제제, 예컨대, AD114, AD214, ALX0651, ALX40-4C, AMD070, AT007, AT009, BKT170, BMS936564, 셀릭사포르(celixafor), CTCE9908, GBV4086, GSK812397, KRH2731, KRH3140, LY2510924, LY2624587, 모조빌(mozobil), OPLCXCL12LPM, PF06747143, POL6326, Q122, 레빅실(revixil), TG0054, USL311, X4P001 및 X4P002; 및 CXCR7의 억제제, 예컨대, CCX650 및 CCX662로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
사이토카인 수용체 아고니스트는 IL-2, IL-15, IL-7, IL-10, IL-12, IL-21, IFNα IL-17, IFNβ, IFNγ, IL-18, IL-27, TNFα, GM-CSF, FLT3L, LTα, LTβ 및 TRAIL 및 재조합 단백질, 예컨대, IL-2/IL-15 β/γ 수용체의 아고니스트, IL-10 수용체의 아고니스트, IL-12 수용체의 아고니스트, IL-18 수용체의 아고니스트, IL-21 수용체의 아고니스트, IL-7 수용체의 아고니스트, IFNα/β 수용체의 아고니스트, IFNγ 수용체의 아고니스트, FLT3 수용체의 아고니스트, GM-CSF 수용체의 아고니스트, LTα 수용체의 아고니스트, LTβ 수용체의 아고니스트 및 TNFα 수용체의 아고니스트에 대한 유전자를 코딩하는 mRNA, DNA 또는 플라스미드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
IL-10 수용체의 아고니스트의 예는 AG011, 데카빌(dekavil), EG10, IL10Nanocap, 일로데카킨(Ilodecakin), AM0010, 테노빌(tenovil) 및 VT310 VIRON이다.
IL-12 수용체의 아고니스트의 예는 재조합 IL-12 p70, 재조합 IL-12 p35, AM0012, AS1409, 도데킨(dodekin), 헤마맥스(HemaMax), LipoVIL12, MSB0010360N, Ad-RTS-hIL-12, 타보키노겐 텔세플라스미드(tavokinogene telseplasmid), exoIL-12 및 NHS-IL12이다.
IL-18 수용체의 아고니스트의 예는 SB485232이다.
IL-21 수용체의 아고니스트의 예는 BMS982470(데네니코킨(denenicokin))이다.
IL-7 수용체의 아고니스트의 예는 CYT107, CYT99007 및 GX-I7이다.
FLT3R의 아고니스트의 예는 CDX-301이다.
TNFα 수용체의 아고니스트의 예는 L19-TNFα, 아우리뮨(aurimune), 베로뮨(beromun), BreMel/TNFα, 피브로뮨(fibromun), 레프노트(refnot) 및 TNFPEG20이다.
사멸 수용체 아고니스트는 TRAILR1/DR4 아고니스트, 예컨대, AMG951(둘라네르민(dulanermin)), APG350, APG880, HGSETR1(마파투무맙(mapatumumab)) 및 SL231; 및 TRAILR2/DR5 아고니스트, 예컨대, AMG655, DS8273, HGSETR2(렉사투무맙(lexatumumab)), HGSTR2J, IDD004/GEN1029, INBRX109, LBY135, MEDI3039, PRO95780, RG7386 및 TAS266으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
CD47 길항제는 ALX148, CC-90002, Hu5F9G4, SRF231, TI061, TTI-621, TTI-622, AO176, IBI188, IMC002, 재조합 SIRPα 및 LYN00301로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
SIRPα 길항제의 예는 FSI89 또는 재조합 CD47이다.
종양용해성 약물의 예는 CAVATAK, BCG, 모빌란, TG4010, Pexa-Vec(JX-594), JX-900, JX-929 및 JX-970이다.
신호 전환제 단백질의 예는 Fn14-TRAIL(KAHR101), CD80-Fc(FTP155), CTLA4-FasL(KAHR102), PD1-41BBL(DSP 105), PD-L1-41BB(PRS-344, NM21-1480, FS222), PD1-CD70(DSP 106) 및 SIRPα-41BBL(DSP 107)이다.
후성유전학 변형제는 DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제, 라이신 특이적 데메틸라제 1 억제제, Zeste 상동체 2 억제제, 브로모도메인 및 외부 말단 모티프(BET) 단백질 억제제, 예컨대 GSK525762, 및 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 억제제, 예컨대, 벨레오다크(beleodaq), SNDX275 및 CKD-M808로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
종양 펩티드/백신의 예는 NY-ESO, WT1, MART-1, IO102 및 PF-06753512, 및 환자 유래 종양 서열 또는 신생항원을 사용하는 맞춤형 암 백신이다.
열충격 단백질(HSP) 억제제의 예는 HSP90의 억제제, 예컨대, PF-04929113(SNX-5422)이다.
단백질용해성 효소의 예는 재조합 히알루로니다제, 예컨대, rHuPH20 및 PEGPH20이다.
유비퀴틴 및 프로테아좀 억제제는 유비퀴틴 특이적 프로테아제(USP) 억제제, 예컨대, P005091; 20S 프로테아좀 억제제, 예컨대, 보르테지밉(bortezimib), 카필조밉(carfilzomib), 익사조밉(ixazomib), 오프로조밉(oprozomib), 델란조밉(delanzomib) 및 셀라스트롤(celastrol); 및 면역프로테아좀 억제제, 예컨대, ONX-0914로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
부착 분자 길항제는 β2-인테그린 길항제 및 셀렉틴 길항제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
호르몬은 호르몬 수용체 아고니스트 및 호르몬 수용체 길항제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
호르몬 수용체 아고니스트의 예는 소마토스타틴 수용체 아고니스트, 예컨대, 소마토스타틴(somatostatin), 란레오타이드(lanreotide), 옥트레오타이드(octreotide), FX125L, FX141L 및 FX87L이다.
호르몬 수용체 길항제의 예는 항-안드로겐, 항-에스트로겐 및 항-프로게스토겐이다. 항-안드로겐의 예는 스테로이드성 항-안드로겐, 예컨대, 사이프로테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 클로르마디논 아세테이트, 스피로놀락톤, 옥센돌론 및 오사테론 아세테이트; 비스테로이드성 항-안드로겐, 예컨대, 플루타마이드, 비칼루타마이드, 닐루타마이드, 토필루타마이드, 엔잘루타마이드 및 아팔루타마이드; 안드로겐 합성 억제제, 예컨대, 케토코나졸, 아비라테론 아세테이트, 세비테로넬, 아미노글루테티마이드, 피나스테라이드, 두타스테라이드, 에프리스테라이드 및 알파트라디올이다. 항-에스트로겐의 예는 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 예컨대, 타목시펜, 클로미펜, 파레스톤 및 랄록시펜; ER 침묵 길항제 및 선택적 에스트로겐 수용체 분해제(SERD), 예컨대, 풀베스트란트; 아로마타제 억제제, 예컨대, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑세메스탄, 보로졸, 포르메스탄 및 파드로졸; 및 항-성선자극호르몬, 예컨대, 테스토스테론, 프로게스토겐 및 GnRH 유사체이다. 항-프로게스토겐의 예는 미페프리스톤, 릴로프리스톤 및 오나프리스톤이다.
세포 요법의 예는 CAR 요법, 예컨대, CAR-T 요법, 예컨대, 티사겐레클레우셀(tisagenlecleucel), 액시카브타겐 실로류셀(axicabtagene ciloleucel), bb21217, LCAR-B38M, JCARH125, MCARH171, JNJ-4528, 이데카브타겐 비클레우셀(idecabtagene vicleucel)(bb2121), SCRI-CAR19x22; 종양 항원을 표적화하는 CAR 요법, 예컨대, CD19 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, CD22 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, BCMA 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, HER2 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, CD138 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, CD133 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, BCMA 발현 세포를 표적화하는 요법, CEA 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, 클라우딘(Claudin) 18.2 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, EGFR 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, EGFRvIII 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, Eph2A 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, EpCAM 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, GD2 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, GPC3 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, MSLN 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, 5T4 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, LMP1 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, PD-L1 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, PSMA 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, FRα 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법, 및 MUC1 발현 세포를 표적화하는 CAR 요법을 포함한다. 세포 요법의 예는 TIL 요법, NK 요법, 사이토카인 유도 기억 NK 세포 요법, 생체외 증폭된 세포를 사용한 NK 세포 요법을 포함한다. 세포 요법의 예는 종양 항원 또는 종양 신생항원 특이적 T 세포 수용체를 발현하도록 조작될 수 있거나 종양 항원 또는 종양 신생항원의 환경 하에서 증폭되었을 수 있는 αβ 또는 γδ T 세포를 사용하는 요법을 포함한다.
특정 실시양태에서, 환자는 인간 환자와 같은 포유동물 환자이다.
본원에 기재된 화학식 (I)의 IL-2 단백질, IL-2 접합체 또는 약학 조성물의 투여는 관절내, 관절주위, 피내, 피하, 근육내, 정맥내, 골내, 복막내, 경막내, 피막내, 안와내, 종양내, 유리체내, 고막내, 방광내, 심장내, 경기관, 피하, 피막하, 지주막하, 척수내, 심실내, 흉골내 주사 및 주입, 본 발명 등이 뇌 조직 또는 뇌액으로 전달될 수 있게 하는 이식된 장치(예를 들어, Ommaya Reservoir)를 통한 뇌로의 직접 전달, 직접적인 뇌실내 주사 또는 주입, 뇌 또는 뇌 관련 영역으로의 주사 또는 주입, 맥락막하 공간 내로의 주사, 후안와 주사 및 안구 점적을 포함하는 외용, 주사 또는 주입, 바람직하게는 피하 주사를 통해 수행될 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여는 피하 주사를 통해 수행된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질 서열에 관한 것이다.
(Tag1)y - (X1)x - SEQ A - SEQ B - SEQ C - (Tag2)z (I-i),
상기 식에서,
SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 갖고 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함하고;
SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 갖고;
Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고;
X1은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
z는 0 또는 1이다.
SEQ A, SEQ B, SEQ C, Tag1, Tag2, x, y 및 z에 대한 특정 실시양태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질에 대해 개시된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 아르기닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 아스파라긴 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 아스파르트산 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 시스테인 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 글루타민 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 글루탐산 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 글리신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 히스티딘 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 이소류신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 류신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 라이신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 메티오닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 페닐알라닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 세린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 트레오닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 트립토판 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 티로신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 X1은 발린 잔기이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대한 특정 실시양태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 하나 이상의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 이 접합체에 대한 구체적인 실시양태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 또는 하나 이상의 이러한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체, 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 이러한 약학 조성물에 대한 특정 실시양태는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질, 또는 하나 이상의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 의약으로서 사용하기 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환을 치료하는 의약의 제조를 위한 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 바람직하게는 인간 환자에서 이러한 질환을 치료하거나, 제어하거나, 지연시키거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을, 이러한 치료, 제어, 지연 또는 예방을 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-i)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 환자에게 투여된다. 이러한 하나 이상의 추가 약물에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 서열에 관한 것이다:
(Tag1)y - (X1)x - SEQ A - SEQ D - SEQ C - (Tag2)z (I-ii),
상기 식에서,
SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 갖고;
Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고;
X1은 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
z는 0 또는 1이다.
SEQ A, SEQ C, Tag1, Tag2, x, y 및 z에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 개시된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 78%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 80%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 82%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 84%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 87%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 93%의 서열 동일성을 가진다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 대해 적어도 95%의 서열 동일성을 가진다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 11개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 10개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 9개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 8개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 7개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 6개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 5개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 4개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 3개의 아미노산 변화를 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2에 비해 2개의 아미노산 변화를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 하기 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 SEQ D는 서열번호 2를 기준으로 K5, R8, M9, T11, F12, K13, F14, Y15, E31, E32 및 L42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서 발생하는 적어도 하나의 아미노산 돌연변이를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 F12, Y15, E31, E32 및 L42로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 위치, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 K5, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 R8, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 M9, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 T11, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 F12, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 K13, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 F14, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 Y15, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 E31, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 E32, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 적어도 하나의 아미노산 돌연변이는 서열번호 2를 기준으로 아미노산 위치 L42, 또는 이의 상동체 또는 변이체의 상응하는 위치에서의 돌연변이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 아르기닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 아스파라긴 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 아스파르트산 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 시스테인 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 글루타민 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 글루탐산 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 글리신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 히스티딘 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 이소류신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 류신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 라이신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 메티오닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 페닐알라닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 세린 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 트레오닌 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 트립토판 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 티로신 잔기이다. 특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 X1은 발린 잔기이다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 하기 서열을 가진다:
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 화학식 (I) 또는 (I-i)의 IL-2 단백질로부터의 N-연결 또는 O-연결 글리칸의 효소적 또는 화학적 제거에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질은 펩티드-N-글리코시다제 F(PNgaseF)에 의해 매개되는, 화학식 (I) 또는 (I-i)의 IL-2 단백질로부터의 하나 이상의 N-연결 글리칸의 효소적 제거에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 334의 IL-2 단백질은 서열번호 9의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 340의 IL-2 단백질은 서열번호 10의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 335의 IL-2 단백질은 서열번호 12의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 341의 IL-2 단백질은 서열번호 13의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 336의 IL-2 단백질은 서열번호 15의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 342의 IL-2 단백질은 서열번호 16의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 337의 IL-2 단백질은 서열번호 18의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 343의 IL-2 단백질은 서열번호 19의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 338의 IL-2 단백질은 서열번호 21의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 344의 IL-2 단백질은 서열번호 22의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 339의 IL-2 단백질은 서열번호 24의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 서열번호 345의 IL-2 단백질은 서열번호 25의 IL-2 단백질의 PNgaseF 처리에 의해 수득될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드 서열에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 이러한 올리고뉴클레오타이드에 대한 특정 실시양태는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 접합체에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 하나 이상의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 이 접합체에 대한 특정 실시양태는 하나 이상의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 접합체에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질 또는 하나 이상의 이러한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체, 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 화학식 (I)의 IL-2 단백질이 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질로 대체된다는 점을 제외하고, 이러한 약학 조성물에 대한 특정 실시양태는 적어도 하나의 화학식 (I)의 IL-2 단백질 또는 하나 이상의 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하는 적어도 하나의 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 대해 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 의약으로서 사용하기 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 질환을 치료하는 의약의 제조를 위한 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
또 다른 측면은 IL-2로 치료할 수 있는 하나 이상의 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물 환자, 예컨대, 인간 환자에서 이러한 질환을 치료하거나, 제어하거나, 지연시키거나 예방하는 방법으로서, 치료 유효량의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물을, 이러한 치료, 제어, 지연 또는 예방을 필요로 하는 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. IL-2로 치료할 수 있는 질환에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
특정 실시양태에서, 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질, 적어도 하나의 화학식 (I-ii)의 IL-2 단백질을 포함하는 IL-2 접합체, 또는 이러한 IL-2 단백질 또는 IL-2 접합체를 포함하는 약학 조성물은 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 환자에게 투여된다. 이러한 하나 이상의 추가 약물에 대한 특정 실시양태는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
재료 및 방법
재료
달리 명시된 경우를 제외하고 모든 재료는 상업적으로 입수 가능하였다.
방법
단백질 농도의 측정
제조업체에 의해 미리 정의된 설정을 이용하여 에펜도르프 바이오스펙트로미터(Eppendorf BioSpectrometer)® 베이직에서 계산된 분자 흡광 계수 및 분자량을 이용하여 단백질 농도를 측정하였다.
PNGase F 어세이
정제된 IL-2 변이체를 PNGase F(Promega, #V4831, LOT# 0000386354)와 함께 또는 없이 혼합하고 제조업체의 설명서에 따라 처리하였다. 그 후, 샘플을 환원시키고 열처리한 후 SDS-PAGE 겔에 로딩하였다. 제조업체의 설명서에 따라 바이오-세이프 쿠마시(Bio-Safe Coomassie) G-250 염료(Bio-Rad, #161078)로 단백질 밴드를 염색하였다. HEK293-6E 및 CHO 세포에서 발현된 글리코실화된 IL-2 변이체는 대략 18 내지 20 kDa에서 이중 밴드로서 SDS-PAGE에서 이동한다. PNGase F로 처리한 후, 대략 15 내지 17 kDa으로의 현저한 하향 변위가 관찰되는데, 이는 CHO 세포에서 발현된 IL-2 변이체의 효율적인 N-글리코실화를 시사한다.
펩티드 맵 분석
10 ㎍ IL-2 변이체를 100 mM Hepes 완충제(pH 8.0)에서 1 ㎍ Pierce™ 트립신/Lys-C 프로테아제(Thermo Fisher)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 37±1℃에서 18±1시간 동안 인큐베이션하였다. 어떠한 프로테아제도 갖지 않는 동일한 완충제에서 분해되지 않은 샘플 대조군을 제조하였다. 인큐베이션 후, 샘플/대조군을 간단히 원심분리하고 20 ㎕ UPLC-MS 물을 첨가하였다. QTof 질량 분광측정기에 연결된 아질런트(Agilent) 1290 UHPLC 시스템을 사용하여 희석된 샘플을 분석하였다. 물 중의 0.075%(V/V) 트리플루오로아세트산(이동상 A), 및 MeCN 중의 0.06%(V/V) 트리플루오로아세트산(이동상 B)을 사용하여 분석을 수행하였다. Halo C18, 100x2.1, 2.7 ㎛, 90 Å 컬럼을 사용하여 아래 표 1에 표시된 구배를 실행하였다.
유속은 0.5 ㎖/분으로 설정된다. 컬럼 오븐은 21℃로 설정되었다.
실시예 1: HEK293-6E에서의 글리코실화된 IL-2의 발현
벡터 구축
IL-2 글리코실화 변이체는 맞춤 제작되었고, 293-6E 세포로부터 단백질의 발현을 수행한 후 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있는 표준 정제 전략을 수행한 외부 공급업체로부터 조달되었다. 다음 단백질들이 제조되었다:
DNA 서열 서열번호 7에 상응하는 단백질 1a(서열번호 205); DNA 서열 서열번호 8에 상응하는 단백질 1b(서열번호 229); DNA 서열 서열번호 202에 상응하는 단백질 1c(서열번호 230); 및 DNA 서열 서열번호 203에 상응하는 단백질 1d(서열번호 232).
N-말단 인간 카파 경쇄 리더 서열 및 C 말단 헥사히스티딘 태그를 포함하는 서열번호 205, 서열번호 229, 서열번호 230 및 서열번호 232를 코딩하는 코딩 DNA 서열을 인간 발현에 대해 코돈 최적화하고 pTT5 포유동물 발현 벡터의 EcoRI 및 BamHI 부위에 삽입하였다. 구축된 플라스미드를 각각 적절한 규모로 증식시키기 위해 이. 콜라이 균주(DH5a/TOP10) 내로 형질전환시켰다. 뉴클레오본드 엑스트라 맥시 플러스(NucleoBond Xtra Maxi Plus) EF 키트(MN 740426)를 대규모 플라스미드 생성에 사용하였다. 정제된 플라스미드를 아가로스 겔로 점검하고 시퀀싱으로 확인하였다.
단백질 발현:
포유동물 세포 발현을 위해, PEI(Polyscience, 카탈로그 번호 23966)를 사용하여 각각의 단백질에 대한 플라스미드를 CNRC-NRC("Conseil National de Recherches Canada")로부터 입수된 HEK293-6E 세포 내로 형질감염시켰다. 상기 세포를 표준 세포 배양 조건에서 인큐베이터 진탕기 내에서 배양하였다. 컨디셔닝된 배지를 형질감염시킨 지 6일 내지 7일 후에 수거하였다.
단백질 정제 및 품질 관리:
컨디셔닝된 배지(CM)를 원심분리로 회수하여 세포 잔해를 버린 후 여과하였다. 정화된 CM을 Ni-엑셀(GE) 컬럼에 로딩하고 제조업체의 설명서에 따라 단백질 정제를 수행하였다. 그 다음, 농축된 물질을 수퍼덱스(superdex) 75 컬럼(GE)으로 더 정제하였다.
정제된 단백질을, SDS-PAGE(PNGase F(NEB) 전처리가 있거나 없음), SEC-HPLC, 및 엔도세이프(Endosafe)-PTS 키트(Charles River)를 사용한 내독소 측정으로 분석하였다.
결과:
설명된 구축물들 중 단백질 1a는 N-글리코실화되지 않은 IL-2 대조군(단백질 1d, 1.0 mg)에 대해 관찰된 수율과 유사한 수율(0.97 mg)로 잘 발현되었다. 놀랍게도, 단백질 1a의 적어도 90%는 대조군인 N-글리코실화되지 않은 IL-2 단백질 1d(15 kDa)에 비해 더 높은 분자량(약 18 kDa)에서 이동하였는데, 이는 SDS-PAGE에서 이동성을 감소시키는 N-글리칸이 1a에 존재함을 암시한다. 단백질 1a를 단백질 N-글리코시다제 F(PNGase F)로 처리하여 N-글리칸을 제거하였을 때, 처리된 단백질은 야생형 IL-2(단백질 1d)와 유사하게 약 16 kDa에서 균일하게 이동하였는데, 이는 거의 모든 단백질 1a가 N-글리코실화되었음을 시사한다. 예상된 바와 같이, PNGase F로 처리된 웰에서 PGNase F 자체의 분자량에 상응하는 추가 약 36 kDa 밴드도 존재하였다.
실시예 2: CHO 세포에서 절단 가능한 HIS 태그를 가진 글리코실화된 IL-2의 발현
벡터 구축:
IL-2 글리코실화 변이체는 맞춤 제작되었고, CHO 세포로부터 단백질의 발현을 수행한 후 당분야에서 숙련된 자에게 알려져 있는 표준 정제 전략을 수행한 외부 공급업체로부터 조달되었다. 다음 단백질들이 제조되었다:
DNA 서열번호 233에 상응하는 단백질 1e(서열번호 231).
그 후, 단백질 1e를 엔테로키나제(EnteroKinase)로 처리하여 최종 생성물 단백질 1f(서열번호 10)를 생성하였다.
N-말단 인간 카파 경쇄 리더 서열, N-말단 헥사히스티딘 태그 및 N-말단 엔테로키나제 절단 부위를 포함하는 코딩 DNA 서열 서열번호 233을 CHO 발현에 대해 코돈 최적화하여 His 태그를 제거하고 pTT5 포유동물 발현 벡터에 삽입하였다. 구축된 플라스미드를 각각 적절한 규모로 증식시키기 위해 이. 콜라이 균주(DH5a/TOP10) 내로 형질전환시켰다. 뉴클레오본드 엑스트라 맥시 플러스 EF 키트(MN 740426)를 대규모 플라스미드 생성에 사용하였다. 정제된 플라스미드를 아가로스 겔로 점검하고 시퀀싱으로 확인하였다.
단백질 발현:
PEI Max(Polyscience, 카탈로그 번호 24765)를 사용하여 각각의 단백질에 대한 플라스미드를 써모 피셔(Thermo Fisher)로부터 입수된 EXPI-CHO 세포 내로 형질감염시켰다. 세포를 표준 세포 배양 조건에서 인큐베이터 진탕기 내에서 배양하였다. 컨디셔닝된 배지를 형질감염시킨 지 9일 후에 수거하였다.
단백질 정제 및 품질 관리:
컨디셔닝된 배지(CM)를 원심분리로 회수하여 세포 잔해를 버린 후 사르토포어(Sartopore) 2 필터(Sartorius)를 이용하여 여과하였다. 정화된 CM을 Ni-엑셀(GE) 컬럼에 로딩하고 제조업체의 설명서에 따라 단백질 정제를 수행하였다. 용출된 단백질을 EK 프로테아제(GenScript, Z03004-100)와 함께 인큐베이션하여 His 태그를 절단하였다. 물질을 또 다른 니켈 컬럼에 이어 수퍼덱스 75 컬럼(GE)으로 추가 정제하였다. 정제된 단백질을, SDS-PAGE, SEC-HPLC, 및 엔도세이프-PTS 키트(Charles River)를 사용한 내독소 측정으로 분석하였다.
결과:
293 세포에서 관찰된 N-글리코실화된 IL-2(단백질 1a)의 발현과 유사하게, CHO 세포에서 발현된 N-글리코실화된 IL-2(단백질 1e로부터 유래한 단백질 1f)의 적어도 90%는 대조군 IL-2(약 15 kDa)를 사용한 별도의 실험에 비해 약 17 kDa의 감소된 이동을 가진 더 높은 밴드를 균일하게 나타내었는데, 이는 단백질 1f의 놀랍도록 효율적인 N-글리코실화를 시사한다. CHO 유래의 His 태그 제거된 N-글리코실화된 IL-2(단백질 1f)의 이동 패턴은 예상된 바와 같이 His 태그를 함유하는 293 발현 구축물(단백질 1a)(약 18 kDa)보다 약간 더 작았는데(약 17 kDa), 이는 840 Da의 6xHis 태그의 MW와 일치한다.
실시예 3: 인간 1차 세포 pSTAT5 어세이에서 293에 의해 생성된 글리코실화된 IL-2의 생물활성
실시예 1의 293 발현으로부터의 대조군 야생형 IL-2 단백질 1d 및 당조작된 IL-2 단백질 1a의 생물활성은 인간 혈액을 사용함으로써 외부 판매회사에 의해 시험되었다. 샘플을 단백질 1d 또는 단백질 1a로 처리한 후 근위 IL-2 수용체 신호전달 바이오마커인 STAT5의 인산화(pSTAT5)를 조사하였다. 헤파린처리된 인간 전혈을 채취하고 실온으로 평형화하고 플레이트에 분취하고 37℃로 가온한 후, 단백질 1d 또는 단백질 1a를 첨가하였다. 단백질 1d 또는 단백질 1a의 용량 적정을 준비하고 37℃로 미리 가온한 후 세포에 첨가하였다. 단백질 1d 또는 단백질 1a를 첨가한 후, 세포를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 시간의 종료 시, 적혈구를 용해시키고 세포를 고정시켰다. 세척 후, 세포를 표면 항원에 대해 염색하고, 세척하고, 메탄올로 투과 가능하게 만든 다음, 세척 및 pSTAT5와 추가 계통 마커에 대한 세포내 염색을 수행하였다. 관심 있는 세포 집단을 정의하기 위해 다음 마커를 사용하였다: CD8+ T 세포는 CD3+ CD4- CD8+로서 정의되었고; CD4+ T 세포는 CD3+ CD4+ CD8-로서 정의되었고; 조절 T 세포(Treg)는 CD3+ CD4+ CD8- CD25+ FOXP3+로서 정의되었고; 자연 살해(NK) 세포는 CD3- CD56 또는 CD16+로서 정의되었다.
결과:
야생형 IL-2 대조군(1d) 또는 N-글리코실화된 IL-2(1a)로 처리한 후 CD8+ T 세포, NK 세포 및 Treg에 대한 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 측정하였다. 중요한 것은 CD8+ T 세포 및 NK 세포가 IL-2 수용체의 고친화성 알파 서브유닛(IL-2Rα/CD25)을 낮은 휴지기 수준으로 발현하는 반면, Treg가 높은 수준의 IL-2Rα(CD25)를 발현한다는 것이다. 이러한 이유로, CD8+ T 세포 또는 NK 세포 대 Treg 사이의 상대적 IL-2 변이체 효능의 변화 분석은 IL-2Rβγ에 대한 활성(CD8+ 및 NK 세포 효능에 의해 반영됨) 대 Treg 효능에 의해 반영된 IL-2Rαβγ에 대한 활성의 우수한 척도이다. 본 발명자들은 pSTAT5의 중간 형광 강도(MFI) 및 pSTAT5 양성 세포의 퍼센트 둘 다를 정량함으로써 이 3개의 세포 서브세트에 걸쳐 효능을 조사하였다. pSTAT5 MFI EC50 값의 요약은 표 2에 제시되어 있다.
pSTAT5 MFI 메트릭(metric)을 사용하였을 때, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1a는 야생형 IL-2 대조군과 비교될 때 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대해 유사한 효능을 나타내었다(야생형 IL-2에 비해 각각 1.44배 및 1.34배의 효능 감소, 표 2). 그러나, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1a는 야생형 IL-2 대조군과 비교될 때 Treg에 대해 현저히 감소된 효능을 나타내었다(436.56배의 효능 감소, 표 2).
퍼센트 pSTAT5 양성 EC50 값의 요약이 표 3에 제시되어 있다:
유사하게, 퍼센트 pSTAT5 양성 메트릭을 사용하였을 때, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1a는 야생형 IL-2 대조군과 비교될 때 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대해 유사한 효능을 나타내었다(야생형 IL-2에 비해 각각 1.58배 및 2.01배의 효능 감소). 그러나, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1a는 야생형 IL-2(1d) 대조군과 비교될 때 Treg에 대해 현저히 감소된 효능을 나타내었다(598.46배의 효능 감소, 표 3).
이 데이터는 N-글리코실화된 IL-2 변이체 단백질 1a가 야생형 IL-2(1d)와 비교될 때 유사한 IL-2Rβγ 활성(CD8+ 및 NK 세포 효능에 의해 반영됨)을 나타내되, 감소된 IL-2Rαβγ 활성(Treg 효능에 의해 반영됨)을 나타냄을 표시한다. 이 데이터는 단백질 1a의 "비-IL-2Rα" 편향을 입증한다.
실시예 4: 인간 1차 세포 pSTAT5 어세이에서 CHO에 의해 생성된 글리코실화된 IL-2(His 태그가 제거됨)의 생물활성:
실시예 2의 CHO 세포 발현으로부터의 대조군 야생형 IL-2 단백질 1d 및 당조작된 IL-2 단백질 1f의 생물활성은 인간 혈액을 사용함으로써 외부 판매회사에 의해 시험되었다. 샘플을 단백질 1d 또는 단백질 1f로 처리한 후 근위 IL-2 수용체 신호전달 바이오마커인 STAT5의 인산화(pSTAT5)를 조사하였다. 헤파린처리된 인간 전혈을 채취하고 실온으로 평형화하고 플레이트에 분취하고 37℃로 가온한 후 단백질 1d 또는 단백질 1f를 첨가하였다. 단백질 1d 또는 단백질 1f의 용량 적정을 준비하고 37℃로 미리 가온한 후 세포에 첨가하였다. 단백질 1d 또는 단백질 1f를 첨가한 후, 세포를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 시간의 종료 시, 적혈구를 용해하고 세포를 고정하였다. 이어서, 세척 후 세포를 표면 항원에 대해 염색하고, 세척하고 메탄올로 투과 가능하게 만든 후, 세척 및 pSTAT5와 추가 계통 마커에 대한 세포내 염색을 수행하였다. 관심 있는 세포 집단을 정의하기 위해 다음 마커를 사용하였다: CD8+ T 세포는 CD3+ CD4- CD8+로서 정의되었고; CD4+ T 세포는 CD3+ CD4+ CD8-로서 정의되었고; 조절 T 세포(Treg)는 CD3+ CD4+ CD8- CD25+ FOXP3+로서 정의되었고; 자연 살해(NK) 세포는 CD3- CD56 또는 CD16+로서 정의되었다.
결과:
야생형 IL-2 대조군(1d) 또는 N-글리코실화된 IL-2(1f)로 처리한 후 CD8+ T 세포, NK 세포 및 Treg에 대한 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 측정하였다. 중요한 것은 CD8+ T 세포 및 NK 세포가 IL-2 수용체의 고친화성 알파 서브유닛(IL-2Rα/CD25)을 낮은 휴지기 수준으로 발현하는 반면, Treg가 높은 수준의 IL-2Rα(CD25)를 발현한다는 것이다. 이러한 이유로, CD8+ T 세포 또는 NK 세포 대 Treg 사이의 상대적 IL-2 변이체 효능의 변화 분석은 IL-2Rβγ에 대한 활성(CD8+ 및 NK 세포 효능에 의해 반영됨) 대 Treg 효능에 의해 반영된 IL-2Rαβγ에 대한 활성의 우수한 척도이다. 본 발명자들은 pSTAT5의 중간 형광 강도(MFI) 및 pSTAT5 양성 세포의 퍼센트 둘 다를 정량함으로써 이 3개의 세포 서브세트에 걸쳐 효능을 조사하였다. pSTAT5 MFI EC50 값의 요약은 표 4에 제시되어 있다.
pSTAT5 MFI 메트릭의 사용 시, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1f는 야생형 IL-2 대조군과 비교될 때 CD8+ T 세포 및 NK 세포에 대해 유사한 효능을 나타내었다(야생형 IL-2에 비해 각각 2.13배 및 1.22배의 효능 감소, 표 4). 그러나, N-글리코실화된 IL-2 단백질 1f는 야생형 IL-2 대조군과 비교될 때 Treg에 대해 현저히 감소된 효능을 나타내었다(371.83배의 효능 감소, 표 4).
이 데이터는 N-글리코실화된 IL-2 변이체 단백질 1f가 야생형 IL-2(1d)와 비교될 때 유사한 IL-2Rβγ 활성(CD8+ 및 NK 세포 효능에 의해 반영됨)을 나타내되, 감소된 IL-2Rαβγ 활성(Treg 효능에 의해 반영됨)을 나타냄을 표시한다. 이 데이터는 CHO 세포에서 발현된 단백질 1f의 "비-IL-2Rα" 편향을 입증한다.
실시예 5: CHO 세포에서의 글리코실화된 IL-2의 발현
벡터 구축:
3개의 상이한 N-말단 분비 신호 펩티드(신호 펩티드 3a(서열번호 238), 신호 펩티드 3b(서열번호 239) 및 신호 펩티드 3c(서열번호 240))와 각각 조합된 단백질 2a의 아미노산 서열(서열번호 237) 및 단백질 1f의 아미노산 서열(서열번호 10)을 역번역하고 CHO에서의 발현에 대해 코돈 최적화함으로써, 단백질 2b(서열번호 247; 신호 펩티드 3a + 단백질 2a), 단백질 2c(서열번호 251; 신호 펩티드 3c + 단백질 2a), 단백질 2d(서열번호 249; 신호 펩티드 3b + 단백질 2a), 단백질 2e(서열번호 248; 신호 펩티드 3a + 단백질 1f), 단백질 2f(서열번호 252; 신호 펩티드 3c + 단백질 1f) 및 단백질 2g(서열번호 250; 신호 펩티드 3b + 단백질 1f)를 생성하였다.
그 결과, 단백질 2b(서열번호 241), 단백질 2c(서열번호 243), 단백질 2d(서열번호 242), 단백질 2e(서열번호 244), 단백질 2f(서열번호 246) 및 단백질 2g(서열번호 245)를 코딩하는 DNA 서열을 합성하고 발현 벡터 pPur에 클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 퓨어링크 하이퓨어 플라스미드 맥시프렙(PureLink HiPure Plasmid Maxiprep) 키트(Invitrogen)를 사용하여 이. 콜라이 DH5 알파 배양물(Invitrogen)로부터 최대로 제조하였다.
단백질 발현:
전술된 플라스미드로 CHO 세포를 형질감염시키고 안정한 세포 풀(풀 4a: 단백질 2b 발현; 풀 4b: 단백질 2c 발현; 풀 4c: 단백질 2d 발현; 풀 4d: 단백질 2e 발현; 풀 4e: 단백질 2f 코딩; 및 풀 4f: 단백질 2g 발현)을 개발하였다. 단백질 발현을 위해, 안정한 풀을 진탕 플라스크에서 유가식으로 배양하였다. 배양이 7일째 날에 종료된 풀 4f를 제외하고 유가 배양을 10일째 날에 종료하였다. 구아바(Guava)® 이지사이트(Easycyte) HT(Merck Millipore)를 사용하여 세포 수 및 생존율을 평가하였다. 또한, 시판되는 생장 및 공급 배지를 사용하여 안정한 세포 풀(풀 4a, 4b, 4c, 4d, 4e 및 4f)을 유가식으로 Ambr15 생물반응기(Sartorius)에서 총 14일 동안 배양하였다. 세포 수 및 생존율을 바이오프로파일(BioProfile)® FLEX2(Nova)로 분석하였다.
분석 방법:
상청액의 IL-2 단백질을 ELISA(IL-2 인간 키트, Abcam #ab100566, Lot #GR3344842)로 정량하고, 토끼 항-인간 IL-2(Abcam, 카탈로그 번호 Ab9618)를 1차 항체로서 사용하고 당나귀 항-토끼 IgG-HRP(Jackson, 카탈로그 번호 711-036-152)를 2차 항체로서 사용하여 웨스턴 블롯으로 정성적으로 분석하였다. TMB(3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘) 기질을 사용하여 흡광도로 웨스턴 블롯 검출을 수행하였다. 분자량 래더(Novex® Sharp 미리 염색된 단백질 표준물, Invitrogen, 카탈로그 번호 LC5801) 및 재조합 이. 콜라이 유래의 hIL-2(Abcam, 카탈로그 번호 ab9619)를 웨스턴 블롯 분석에서 크기 기준으로서 사용하였다.
단백질 정제:
공정 1: 정화된 CM을 수퍼덱스(Superdex) 200 16/600 크기 배제 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하여 IL-2 변이체를 정제하였다. 분획을 모으고 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색으로 분석하였다. 단량체 IL-2에 상응하는 밴드를 조합하고 하이스크린 캡토(HiScreen Capto) Q 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하기 위해 완충제 교환하였다. 선형 NaCl 구배를 적용한 후 두 번째 선형 NaCl 구배를 적용함으로써 단백질을 용출하였다. 분획을 모으고 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색으로 분석하여 단량체 IL-2에 상응하는 밴드를 확인하였다. 정제된 IL-2를 농축하고 후속 실험을 위해 완충제를 저장 및/또는 어세이 완충제로 교환하였다.
공정 2: 4개의 컬럼 단계로 구성된 공정을 이용하여 IL-2 변이체를 대안적으로 정제하였다. 이때, 정화된 CM을 pH 6.0으로 pH 조절하고 농축하였다. 그 다음, 세포 상청액을 하이스크린 캡토 MMC 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하였다. 컬럼을 세척한 후, IL-2 단백질을 용출하고 후속 선형 NaCl 구배를 수행하였다. 분획을 모으고 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색으로 분석하였다. 단량체 IL-2에 상응하는 밴드를 조합하고 하이스크린 캡토 블루(Blue) 크로마토그래피 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하기 위해 pH 7.4로 pH 조절하였다. NaCl 구배 단계를 적용한 후 선형 NaCl을 적용함으로써 단백질을 용출하였다. 분획을 모으고 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색으로 분석하여 단량체 IL-2를 함유하는 분획을 확인하였다. 캡토 블루 실행으로부터의 조합된 IL-2 분획을 하이스크린 캡토 어드히어(Adhere) 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하고 유동 통과 크로마토그래피 단계에서 정제하였다. 단량체 IL-2 분획을 SDS-PAGE 및 쿠마시 염색으로 확인하고, 완충제를 교환하고 농축하였다. 그 다음, IL-2 단백질 샘플을 하이스크린 캡토 MMC 컬럼(GE Healthcare)에 로딩하고 전술된 바와 같이 정제하였다. 정제된 IL-2를 약 0.5 mg/㎖로 농축하고 후속 실험을 위해 완충제를 저장 및/또는 어세이 완충제로 교환하였다.
결과:
진탕 플라스크에서 발현시키기 위해, 단백질 2a(4a, 4b 및 4c) 및 단백질 1f(4d, 4e 및 4f)를 발현하는 세포주의 배양 상청액에서 재조합 IL-2 단백질의 농도를 유가 배양 8일째 날 및 10일째 날에 ELISA로 측정하였다(표 5). 8일째 날 및 10일째 날, 단백질 1f의 농도는 단백질 2a의 농도보다 몇 배 더 높았다. 신호 펩티드 3a를 가진 구축물의 경우, 단백질 1f의 발현 수준은 단백질 2a보다 8일째 날 11.0배 및 10일째 날 10.0배 더 높았고; 신호 펩티드 3c를 가진 구축물의 경우, 배수 변화는 8일째 날 3.7배 및 10일째 날 6.0배이었으며, 신호 펩티드 3b를 가진 구축물의 경우 7일째 날 단백질 1f의 발현 수준은 8일째 날 단백질 2a의 발현 수준보다 12.9배 더 높았다.
유가 배양 10일째 날부터 4a, 4b 및 4c 배양 상청액으로부터의 비환원 샘플의 웨스턴 블롯은 14 내지 15 kDa의 크기에서 이중 밴드를 보여주었는데, 이는 글리코실화되지 않은 형태 및 O-글리코실화된 형태의 IL-2가 CHO 세포에 의해 생성될 것이라는 예상과 잘 일치한다. 글리코실화되지 않은 단백질 2a 생성물에 상응하는 하부 생성물 밴드는 동일한 겔에 로딩된, 글리코실화되지 않은 이. 콜라이 유래의 야생형 hIL-2 기준 표준물과 동일한 크기를 가졌다. 대조적으로, 4d(10일째 날), 4e(10일째 날) 및 4f(7일째 날)로부터의 비환원 샘플의 웨스턴 블롯은 4a, 4b 및 4c 샘플 및 hIL-2 기준 표준물에 비해 생성물 크기의 명확한 상향 변위를 보여주었는데, 이는 단백질 1f의 효율적인 N-글리코실화를 시사한다. 거의 보이지 않는 약한 밴드만이 글리코실화되지 않은 hIL-2에 상응하는 크기에 존재하기 때문에, 상기 변위는 거의 완전하였다. 4d, 4e 및 4f의 생성물 밴드도 웨스턴 블롯에서 이중 밴드의 형태를 가졌는데, 이는 N-글리코실화된 생성물이 일부 O-글리코실화된 생성물을 함유하였음을 시사한다. 기재된 밴드 이외에, 단백질 2a(4a, 4b 및 4c) 및 단백질 1f(4d, 4e 및 4f) 둘 다에 대해 주 생성물 밴드 크기의 대략 2배의 더 약한 생성물 밴드도 웨스턴 블롯에서 검출되었는데, 이는 일부 이량체 형성을 시사한다.
Ambr15 생물반응기에서의 발현을 위해, 단백질 2a(4a, 4b 및 4c) 및 단백질 1f(4d, 4e 및 4f)를 발현하는 세포주의 배양 상청액에서 재조합 IL-2 뮤테인의 농도를 유가 배양 10일째 날 및 14일째 날에 ELISA로 측정하였다(표 6). 10일째 날 및 14일째 날, 단백질 1f의 농도는 단백질 2a의 농도보다 몇 배 더 높았다. 신호 펩티드 3a를 가진 구축물의 경우, 단백질 1f의 발현 수준은 단백질 2a보다 10일째 날 10.1배 및 14일째 날 10.9배 더 높았고, 신호 펩티드 3c를 가진 구축물의 경우, 배수 변화는 10일째 날 4.5배 및 14일째 날 2.8배이었다. 신호 펩티드 3b를 가진 구축물의 경우, 단백질 2a 역가는 10일째 날에 매우 낮았고(0.03 g/L) 14일째 날에 검출될 수 없었지만, 10일째 날 및 14일째 날 단백질 1f에 대한 역가는 상당하였다(각각 0.56 g/L 및 1.1 g/L).
실시예 6: CHO 세포에서 발현된 글리코실화된 IL-2의 정체 분석
펩티드 맵을 수행하여 단백질 1f(서열번호 10)의 정체를 확인하였다. 야생형 생성 O-글리코실화 부위를 확인하였고 이종 글리코실화 패턴을 특징규명하였다. 도입된 N-글리코실화 부위를 확인하였고 이종 글리코실화 패턴을 특징규명하였다. "유리" LTFGNSTK는 (검출 한계 이내에서) 검출될 수 없었는데, 이는 모든 IL-2 변이체가 지정된 도입된 N-글리코실화 부위에서 N-글리코실화를 가짐을 시사한다.
실시예 7: IL-2 화합물의 SPR 분석
IL-2 수용체 서브유닛의 세포외 도메인이 고정된 비아코어 기기(T200, GE Healthcare)로 표면 플라스몬 공명(SPR) 분광법을 이용하여 단백질 5a(서열번호 213의 IL-2; Peprotech, 카탈로그 번호 AF-200-02) 및 단백질 1f(서열번호 10)의 결합 동역학을 평가하였다. 요약하건대, 공급업체의 설명서에 따라 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, GE Healthcare)을 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화하였다. 공급업체의 설명서(GE Healthcare, 주문 번호 BR-1008-39)에 따라 단일클론 마우스 항-인간 IgG(Fc) 항체의 고정도 수행하였다.
IL-2Rα에 대한 결합 동역학의 측정을 위해, 하기 칩 제제를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 알파, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드)를 HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)로 대략 0.67 ㎍/㎖까지 희석하고 60초 동안 50 ㎕/분의 유속으로 고정하여 80 내지 100 반응 유닛(RU)을 달성하였다.
IL-2Rβ에 대한 결합 동역학의 측정을 위해, 하기 칩 제제를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 베타, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드)를 HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)로 대략 0.80 ㎍/㎖까지 희석하고 60초 동안 50 ㎕/분의 유속으로 고정하여 140 내지 180 반응 유닛(RU)을 달성하였다.
두 수용체 서브유닛 설정에 대한 동역학 측정을 위해, 단백질 5a 또는 단백질 1f를 다중주기 동역학으로 분석하였므로, 25℃에서 HBS-EP 실행 완충제 중의 적어도 5개의 상이한 농도로 주입하였다(50 ㎕/분 유속, 60초 접촉 시간, 300초 해리 시간). 동역학 피트(1:1 결합 모델)를 통해 이중 기준 데이터(기준 유동 셀 및 완충제 단독 샘플로부터의 데이터를 뺌)를 분석하여 KD, ka 및 kd를 측정하였다. 3 M MgCl2을 사용하여 각각의 주기 후 재생을 수행하였다.
수득된 데이터는 표 7에 요약되어 있다.
이 결과는 단백질 1f가 단백질 5a에 비해 IL-2Rα에 대한 크게 감소된 친화성을 가진 반면, IL-2Rβ에 대한 친화성은 유사한 범위 내에 있음을 보여준다.
실시예 8: 편향 비의 계산
단백질 1f가 편향된 IL-2인지를 시험하기 위해, 다음 요건이 충족되는지를 계산하였다:
상기 식에서,
여기에서, "IL-2Rα에 대한 단백질 1f의 KD"는 IL-2Rα에 대한 단백질 1f의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 단백질 1f의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 단백질 1f의 KD이고,
"IL-2Rα에 대한 단백질 5a의 KD"는 IL-2Rα에 대한 단백질 5a의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 단백질 5a의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 단백질 5a의 KD이다.
위에서 언급된 식을 이용할 때, 비단백질 5a에 대한 비단백질 1f의 계산된 비가 200보다 더 크기 때문에, 단백질 1f는 분명히 편향된 IL-2이다.
실시예 9: 클론 안정한 CHO 세포주에서의 글리코실화된 IL-2 단백질 6의 발현
단백질 6(서열번호 10)을 발현하는 클론 안정한 CHO 세포주를 확립하기 위해, 안정한 세포 풀 4d(실시예 5)로부터의 세포를, 세포 풀 4d(서열번호 244, 실시예 5 참조)를 구축하는 데 사용된 발현 벡터와 동일한 IL-2 코딩 DNA 서열을 함유하되 상이한 선택 마커를 보유하는 제2 발현 벡터로 수퍼형질감염시켰다. 수퍼형질감염 후, ClonePix-2 기기(Molecular Devices)를 이용하여 단일 클론 후보를 단리하고 단일 클론을 생장(Celigo S, Nexcelom) 및 상청액의 단백질 6 역가(실시예 5에 기재된 ELISA)에 대해 스크리닝하였다. 시판되는 생장 및 공급 배지를 사용하여 선택된 단일 클론을 Ambr15 생물반응기(Sartorius)에서 총 14일 동안 유가 배양으로 평가하였다. 실시예 5에 기재된 바와 같이 유가 배양의 시간 경과에 따라 단백질 6의 세포 수, 생존율 및 역가를 측정하였다. 세포 배양 성능 및 단백질 6의 역가를 기반으로, 추가 물질 생성에 사용될 최상위 클론으로서 안정한 클론 세포주 9를 선택하였다. 클론 세포주 9의 안정성을 검증하기 위해, 총 60세대 동안 5 ㎖ 스핀 튜브에서 세포를 계대배양하고, 연구의 시작, 중간 및 종료 시점에서 보관된 세포의 성능을 유가 배양에서 비교하였다. 결과는 60세대에 걸쳐 최종 단백질 6 역가의 감소 없이 세포주가 안정하였음을 보여주었다.
시판되는 생장 및 공급 배지를 사용하여 단백질 6을 발현하는 안정한 클론 세포주 9를 진탕 플라스크에서 유가식으로 배양하고 10일째 날에 수거하였다. 세포 수 및 생존율을 ViCell BLU 세포 계수기(Beckman Coulter)로 분석하였다.
실시예 10: 클론 안정한 CHO 세포주로부터 단백질 6의 정제
실시예 5의 공정 2에 기재된 바와 같이 단백질 6을 정제하였다. 정제된 단백질을 저장 및/또는 어세이 완충제로 완충제 교환하고 후속 실험을 위해 1 mg/㎖로 농축하였다.
실시예 11: 접합체 7의 제조
파선은 단백질 6의 N-말단 또는 라이신 측쇄의 1차 아민의 질소에의 부착을 나타내고, 각각의 n은 200 내지 250의 정수이다.
AKTA 시스템에 연결된 HiPrep 26/10 탈염 컬럼을 사용하여, 20 mM 인산나트륨과 140 mM NaCl(pH 7.4)에 3.47 mg/㎖로 제제화된 2.5 ㎖의 단백질 6을 100 mM 붕산염(pH 9.0)으로 완충제 교환하였다. 모은 단백질 용액을 원심분리 필터(MWCO 3 kDa)를 사용하여 농축함으로써, 0.662 ㎖·mg-1·cm-1의 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서 광도측정 농도 측정을 통해 측정된 4.80 mg/㎖의 농도를 가진 최종 부피 1.55 ㎖ 용액을 제공하였다. 0.0932 g의 40 kDa mPEG-링커 시약(국제 특허 출원 공개 제WO2009/133137호의 화합물 16c 및 1A를 사용하여 이 특허의 실시예 7에서 화합물 17ca에 대해 기재된 바와 같이 합성을 수행할 수 있음)을 1.07 ㎖ 냉수에 용해하여 2.1*10-3 mol/L의 스톡 용액을 제공하였다. 용액을 얼음 위에서 저장하였다. 100 mM 붕산염(pH 9.0)을 첨가하여 1.55 ㎖의 단백질 용액을 4 mg/㎖로 희석하였다. 이어서, 933 ㎕의 냉각된 40 kDa mPEG-링커 시약 스톡 용액을 첨가하였다(단백질에 대해 4 몰 당량에 상응함). 접합 혼합물을 14℃ 수조에 2시간 동안 넣어두었다. 933 ㎕의 물 및 3.732 ㎖의 200 mM 아세트산나트륨(pH 3.6)을 첨가하여 pH를 pH 4로 변화시켰다. 25℃에서 밤새 인큐베이션한 후, AKTA 시스템에 연결된 하이스크린 캡토 MMC ImpRes 컬럼을 사용하여 반응 혼합물로부터 하나의 단일 40 kDa mPEG-링커가 부착된 접합체(모노접합체)를 단리하였다. 10 mM 석신산(pH 5.0)부터 10 mM 석신산 및 800 mM NaCl(pH 5.0)까지 선형 염 구배를 12 컬럼 부피에서 1.2 ㎖/분으로 적용하였다. 구배 동안 용출되는 주로 모노접합체를 함유하는 피크를 모았다. 10 mM 석신산(pH 5.0)을 첨가하여 이 분획의 NaCl 함량을 150 mM로 조절하였다. 원심분리 필터(MWCO 10 kDa)를 사용하여 1.49 mg/㎖로 2.18 ㎖까지 농축할 때, 샘플을 115 ㎕의 10 mM 석신산, 150 mM NaCl 및 1% Tween20(pH 5.0), 및 963 ㎕의 10 mM 석신산, 150 mM NaCl 및 0.05% Tween20(pH 5.0)으로 최종 농도 1 mg/㎖ 단백질 6 당량(글리코실화를 고려하지 않은 단백질의 분자량을 기준으로 함)까지 희석하여 접합체 7을 생성하였다.
실시예 12: 접합체 방출 혼합물 8의 제조
150 ㎕의 접합체 7을 62 ㎕의 50 mM 붕산(pH 10.0)으로 희석하여 pH를 pH 9.0으로 변화시켰다. 샘플을 37℃ 인큐베이터에서 24시간 동안 인큐베이션하여 접합체 방출 혼합물 8을 생성하였다. 인큐베이션 후, HPLC 시스템에서 액퀴티(Acquity) UPLC 펩티드 BEH C18 컬럼(Waters, 300 Å, 2.1 x 50 mm, 1.7 ㎛)을 사용하는 RP-HPLC로 방출된 단백질 6의 퍼센트를 측정하였다. 컬럼 온도를 30℃로 유지하였고 유속을 0.25 ㎖/분으로 설정하였다. UV 검출을 215 및 280 nm에서 수행하였다. 물 중의 0.05%(V/V) 트리플루오로아세트산(용출제 A) 및 아세토니트릴 중의 0.04%(V/V) 트리플루오로아세트산(용출제 B)을 사용하여 분석을 수행하였다. HPLC 구배는 표 8에 기재되어 있다.
동일한 RP-HPLC 조건을 적용하여 6개의 상이한 농도에서 정제된 기준 물질의 보정 곡선을 이용하여 방출된 단백질 6의 함량을 측정하였다. UV 검출을 280 nm에서 수행하였다. 접합체 방출 혼합물 8은 정제 없이 사용되었으므로, 주로 단백질 6 및 절단된 40 kDa mPEG-링커를 함유할 뿐만 아니라 >10% 잔류 접합체 7도 함유한다.
실시예 13: 접합체 7로부터의 단백질 6의 시험관내 방출 동역학
생리학적 pH 및 온도 조건을 모방하기 위해 pH 7.4 및 37℃에서 접합체 7로부터의 단백질 6의 시험관내 방출 동역학을 측정하였다. 이를 위해, 2 ㎖/분의 유속 및 215 및 280 nm에서의 UV 검출을 이용하는 Akta 시스템 및 2개의 연결된 HiTrap 탈염 컬럼(Cytiva)을 사용하여 접합체 7을 25 mM HEPES, 135 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM L-메티오닌 및 2 mg/㎖ 플루로닉(Pluronic) F-68(pH 7.4)로 완충제 교환하였다. 완충제 교환된 샘플을 최대 1주(168시간) 동안 수조에서 온도 제어 조건 하에 37℃에서 인큐베이션하였다. 샘플의 산성화 후, 액퀴티 UPLC 펩티드 BEH C18 컬럼(300 Å, 1.7 ㎛, 2.1 mm x 50 mm)을 갖춘 1260 인피니티(Infinity) II 시스템(Agilent Technologies)에서 역상 고압 액체 크로마토그래피로 링커 절단 및 단백질 6 방출의 측정을 수행하였다. 물 중의 0.05%(V/V) 트리플루오로아세트산(용출제 A) 및 MeCN 중의 0.04%(V/V) 트리플루오로아세트산(용출제 B)을 사용하여 분석을 수행하였다. HPLC 구배는 실시예 12의 표 8에 기재되어 있다.
215 nm에서 각각의 RP-HPLC 크로마토그램에서 접합체 7 및 방출 관련 종(단백질 6 및 절단된 40 kDa mPEG-링커 종)의 피크를 통합하여 5개의 상이한 시점에서 방출을 정량하였다. 유리된 종의 퍼센트를 인큐베이션 시간에 대해 플롯팅하고 곡선 피팅 소프트웨어를 이용하여 비선형 1상 연관 피트(안정기가 95%로 설정됨)를 적용함으로써 링커 절단 동역학의 반감기를 측정하였다. 시험관내 링커 반감기는 pH 7.4 및 37℃에서 65시간(95% 신뢰 구간 = 52시간 내지 83시간)으로 측정되었다.
실시예 14: 인간 말초 혈액 단핵 세포 림프구 서브세트에서 대조군 IL-2, 또는 클론 안정한 CHO에 의해 생성된 단백질 6의 생물활성
1차 인간 세포에서 대조군 IL-2(1d), 또는 클론 안정한 CHO에 의해 생성된 단백질 6의 세포 유형 특이적 면역자극 효과를 평가하기 위해, 2명의 기증자로부터의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 다양한 농도의 1d 또는 6과 함께 30분 동안 인큐베이션하고, 독특한 세포 서브세트, 예컨대, IL-2Rα/β/γ를 주로 발현하는 Treg, 및 IL-2Rβ/γ를 주로 발현하는 CD8+ T 세포(CD8) 및 NK 세포에서 인산화된 STAT5(pSTAT5)의 세포내 수준에 대해 유세포분석기로 분석하였다. 모든 서브세트를 pSTAT5의 중간 형광 강도에 대해 분석하였고, 모든 세포 유형에 걸쳐 각각의 화합물에 대해 EC50 값을 계산하였다.
1d에 비해, 6은 CD8+ T 세포 및 NK 세포와 거의 동일한 효능을 유지하면서 Treg에서 실질적으로 감소된 효능을 나타내었다. 예를 들어, 인간 혈액에서 1d는 Treg에서 pSTAT5에 대해 0.02 ng/㎖의 EC50 값을 나타낸 반면, 6은 38.01 ng/㎖의 상당히 더 높은 EC50 값을 보여주었다. 대조적으로, 1d는 인간 NK 세포에서 pSTAT5에 대해 15.91 ng/㎖의 EC50 값을 나타낸 반면, 6은 11.66 ng/㎖의 거의 동일한 EC50 값을 보여주었다. NK 세포에 대해 관찰된 결과와 유사하게, 1d는 인간 CD8+ T 세포에서 pSTAT5에 대해 82.98 ng/㎖의 EC50 값을 나타낸 반면, 6은 78.82 ng/㎖의 거의 동일한 EC50 값을 보여주었다(표 9). 이러한 결과는 6이 Treg와 같은 IL-2Rα/β/γ+ 세포에 대해 실질적으로 감소된(약 1900배 더 낮은) 효능을 나타내지만, NK 세포 및 CD8+ T 세포와 같은 IL-2Rβ/γ+ 세포에 대한 효능을 유지함을 암시한다.
실시예 15: IL-2Rα 및 IL-2Rβ 결합 실험에서 단백질 6의 수용체 결합 및 편향의 계산
IL-2 수용체 서브유닛의 세포외 도메인이 고정된 비아코어 기기(T200, GE Healthcare)로 표면 플라스몬 공명(SPR) 분광법을 이용하여 단백질 5a(서열번호 213의 IL-2; Peprotech, 카탈로그 번호 AF-200-02) 및 단백질 6(서열번호 10)의 결합 동역학을 평가하였다. 요약하건대, 공급업체의 설명서에 따라 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, GE Healthcare)을 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카보디이미드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화하였다. 공급업체의 설명서(GE Healthcare, 주문 번호 BR-1008-39)에 따라 단일클론 마우스 항-인간 IgG(Fc) 항체의 고정도 수행하였다.
IL-2Rα에 대한 결합 동역학의 측정을 위해, 하기 칩 제제를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 알파, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드)를 HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)로 대략 0.25 ㎍/㎖까지 희석하고 60초 동안 50 ㎕/분의 유속으로 고정하여 90 내지 110 반응 유닛(RU)을 달성하였다.
IL-2Rβ에 대한 결합 동역학의 측정을 위해, 하기 칩 제제를 사용하였다: 인간 IL-2 수용체 베타, Fc-태그(Symansis, 뉴질랜드)를 HBS-EP 실행 완충제(GE Healthcare, 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, pH 7.4)로 대략 0.25 ㎍/㎖까지 희석하고 60초 동안 50 ㎕/분의 유속으로 고정하여 300 내지 330 반응 유닛(RU)을 달성하였다.
두 수용체 서브유닛 설정에 대한 동역학 측정을 위해, 단백질 5a 또는 단백질 1f를 다중주기 동역학에서 분석하였으므로, 25℃에서 HBS-EP 실행 완충제 중의 적어도 5개의 상이한 농도로 주입하였다(50 ㎕/분 유속, 60초 접촉 시간, 300초 해리 시간). 동역학 피트(1:1 결합 모델)를 통해 이중 기준 데이터(기준 유동 셀 및 완충제 단독 샘플로부터의 데이터를 뺌)를 분석하여 KD, ka 및 kd를 측정하였다. 3 M MgCl2을 사용하여 각각의 주기 후 재생을 수행하였다.
이 결과는 단백질 6이 단백질 5a에 비해 IL-2Rα에 대한 크게 감소된 친화성을 가진 반면, IL-2Rβ에 대한 친화성은 유사한 범위 내에 있음을 보여준다(표 10).
단백질 6이 편향된 IL-2인지를 시험하기 위해, 하기 요건이 충족되는지를 계산하였다:
상기 식에서,
여기에서, "IL-2Rα에 대한 단백질 6의 KD"는 IL-2Rα에 대한 단백질 6의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 단백질 6의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 단백질 6의 KD이고,
"IL-2Rα에 대한 단백질 5a의 KD"는 IL-2Rα에 대한 단백질 5a의 KD이고,
"IL-2Rβ에 대한 단백질 5a의 KD"는 IL-2Rβ에 대한 단백질 5a의 KD이다.
위에서 언급된 식을 이용할 때, 비단백질 5a에 대한 비단백질 6의 계산된 비가 100보다 더 크기 때문에, 단백질 6은 분명히 편향된 IL-2이다.
실시예 16: HH pSTAT5 및 CTLL-2 pSTAT5 어세이에서 클론 안정한 CHO에 의해 생성된 단백질 6의 생물활성
대조군 야생형 IL-2 단백질 5a의 생물활성뿐만 아니라 당조작된 IL-2 단백질 6의 생물활성도 HH 및 CTLL-2 세포주와 함께 STAT5 인산화(pSTAT5) 어세이를 이용함으로써 외부 판매회사에 의해 시험되었다. HH 세포주는 피부 T 세포 림프종을 가진 환자의 혈액으로부터 유래한 IL-2-Rβ/γ 발현 인간 T 림프구 세포주이다. CTLL-2 세포주는 IL-2-Rα/β/γ 발현 뮤린 T 림프구 세포주이다. HH 및 CTLL-2 세포에 대한 STAT5 인산화에 대한 최대 유효 농도의 절반(EC50)을 중복 측정하고 4-파라미터 로지스틱 피트로 분석하였다.
결과는 단백질 6이 단백질 5a에 비해 IL-2Rα/β/γ+(CTLL-2 세포)에 대한 크게 감소된 효능을 가진 반면, IL-2Rβ/γ+(HH 세포)에 대한 효능이 유사한 범위 내에 있음을 보여준다(표 11). 단백질 5a에 비해 IL-2Rα/β/γ+(CTLL-2 세포)에 대한 크게 감소된 효능을 보이는 반면, IL-2Rβ/γ+(HH 세포)에 대한 효능이 유사한 범위 내에 있는 접합체 방출 혼합물 8의 경우에도 유사한 결과가 수득된다(표 11). 따라서, 접합체 방출 혼합물 8은 단백질 6에 비해 효능 및 IL-2R 선호도의 유의미한 손실이 없음을 보여준다.
단백질 6이 편향된 IL-2인지를 시험하기 위해, 하기 요건이 충족되는지를 계산하였다:
상기 식에서,
여기에서, "CTLL-2 세포에 대한 단백질 6의 EC50"은 CTLL-2 세포에 대한 단백질 6의 EC50이고,
"HH 세포에 대한 단백질 6의 EC50"은 HH 세포에 대한 단백질 6의 EC50이고,
"CTLL-2 세포에 대한 단백질 5a의 EC50"은 CTLL-2 세포에 대한 단백질 5a의 EC50이고,
"HH 세포에 대한 단백질 5a의 EC50"은 HH 세포에 대한 단백질 5a의 EC50이다.
위에서 언급된 식을 이용할 때, 비단백질 5a에 대한 비단백질 6의 계산된 비가 250보다 더 크기 때문에, 단백질 6은 분명히 편향된 IL-2이다. 접합체 방출 혼합물 8도 IL-2Rβ/γ에 대한 편향을 보여준다.
SEQUENCE LISTING
<110> Ascendis Pharma Oncology Division A/S
<120> Glycosylated IL-2 proteins and uses thereof
<130> CPX73073PC
<160> 368
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29
<212> PRT
<213> Human
<400> 1
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn
20 25
<210> 2
<211> 46
<212> PRT
<213> Human
<400> 2
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 3
<211> 57
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ C with C49S
<400> 3
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
1 5 10 15
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
20 25 30
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
35 40 45
Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
50 55
<210> 4
<211> 57
<212> PRT
<213> Human
<400> 4
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
1 5 10 15
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
20 25 30
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
35 40 45
Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
50 55
<210> 5
<211> 153
<212> PRT
<213> Human
<400> 5
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe
50 55 60
Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
85 90 95
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
100 105 110
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
115 120 125
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
130 135 140
Cys Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 6
<211> 133
<212> PRT
<213> Human
<400> 6
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 7
<211> 486
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence for protein 1a
<400> 7
atggatatgc gggtccctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggtt tcctgggtca 60
aggtgcgccc ccacatctag ttctacaaag aagacacaat tacaattaga gcacttatta 120
ttagacttac aaatgatatt aaatggcata aataattata agaatcccaa gttaactttc 180
ggcaacagca ccaagtttta tatgcctaag aaggctacag agttaaagca cttacaatgt 240
ttagaggagg agttaaagcc attagaggag gtattaaatt tagcccaatc aaagaatttt 300
cacttacggc cccgggactt aatttccaat attaatgtta ttgtgttaga gttaaagggc 360
tctgagacaa cttttatgtg tgagtatgcc gacgagacag ccacaattgt tgagttctta 420
aatcggtgga ttactttttc acaatccatt atctccactt taactcatca tcaccatcac 480
cactaa 486
<210> 8
<211> 486
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence for protein 1b
<400> 8
atggatatgc gggtccctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggtt tcctgggtca 60
aggtgcgccc ccacatctag ttctacaaag aagacacaat tacaattaga gcacttatta 120
ttagacttac aaatgatatt aaatggcata aataattata agaatcccaa gttaactaga 180
atgttattcg gcaacagcac catgcctaag aaggctacag agttaaagca cttacaatgt 240
ttagaggagg agttaaagcc attagaggag gtattaaatt tagcccaatc aaagaatttt 300
cacttacggc cccgggactt aatttccaat attaatgtta ttgtgttaga gttaaagggc 360
tctgagacaa cttttatgtg tgagtatgcc gacgagacag ccacaattgt tgagttctta 420
aatcggtgga ttactttttc acaatccatt atctccactt taactcatca tcaccatcac 480
cactaa 486
<210> 9
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 9
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 10
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 10
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 11
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 11
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 12
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 12
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 13
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 13
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 14
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 14
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 15
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 15
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Gly Asn Ser Thr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 16
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 16
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Gly Asn Ser Thr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 17
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 17
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Gly Asn Ser Thr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 18
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 18
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Ala Asn Ser Thr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 19
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 19
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Ala Asn Ser Thr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 20
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 20
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Ala Asn Ser Thr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 21
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 21
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly Asn Ser Thr
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 22
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 22
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly Asn Ser
50 55 60
Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 23
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 23
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly
20 25 30
Asn Ser Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 24
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 24
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Ala Asn Ser Thr
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 25
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 25
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Ala Asn Ser
50 55 60
Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 26
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 26
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Ala
20 25 30
Asn Ser Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 27
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 27
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 28
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 28
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
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Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
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Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 81
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 81
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Phe Gly Asn Ser Thr Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 82
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
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100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
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130
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<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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1 5 10 15
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20 25 30
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65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
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100 105 110
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
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1 5 10 15
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100 105 110
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<212> PRT
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<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (15)..(15)
<223> T, S or C
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> T, S or C
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (17)..(17)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Asn
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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<212> PRT
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<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
<400> 107
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
<400> 108
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> T, S or C
<400> 109
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys Asn Xaa Xaa Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> T, S or C
<400> 110
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 111
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> T, S or C
<400> 111
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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20 25 30
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35 40 45
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<222> (5)..(5)
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35 40 45
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (8)..(8)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> T, S or C
<400> 137
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 138
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (9)..(9)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> T, S or C
<400> 138
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 139
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (13)..(13)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> T, S or C
<400> 139
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (11)..(11)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
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<222> (12)..(12)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> T, S or C
<222> (15)..(15)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 140
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 141
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
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<220>
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Xaa Xaa Asn Xaa Xaa
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 142
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<220>
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Xaa Xaa Asn Xaa
1 5 10 15
Xaa Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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1 5 10 15
Xaa Xaa Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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1 5 10 15
Asn Xaa Xaa Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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1 5 10 15
Xaa Asn Xaa Xaa Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 146
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
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<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<213> Artificial Sequence
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<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Xaa Xaa Asn Xaa Xaa His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
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<222> (21)..(21)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 151
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (22)..(22)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<213> Artificial Sequence
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (23)..(23)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(24)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> T, S or C
<400> 153
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (25)..(25)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (26)..(26)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Glu Glu Glu
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27)..(27)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28)..(28)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> T, S or C
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Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Xaa Xaa Asn Xaa Xaa
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Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> T, S or C
<400> 158
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Xaa Xaa Asn Xaa
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (30)..(30)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> T, S or C
<400> 159
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Xaa Xaa Asn
20 25 30
Xaa Xaa Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(31)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> T, S or C
<400> 160
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Xaa Xaa
20 25 30
Asn Xaa Xaa Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 161
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (32)..(32)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36)..(36)
<223> T, S or C
<400> 161
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Xaa
20 25 30
Xaa Asn Xaa Xaa Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 162
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (33)..(33)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36)..(36)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (37)..(37)
<223> T, S or C
<400> 162
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 163
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (34)..(34)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (35)..(35)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (37)..(37)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (38)..(38)
<223> T, S or C
<400> 163
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20 25 30
Leu Xaa Xaa Asn Xaa Xaa Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
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<222> (43)..(43)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> T, S or C
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (42)..(42)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (44)..(44)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (45)..(45)
<223> T, S or C
<400> 170
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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35 40 45
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (42)..(42)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (43)..(43)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (45)..(45)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (46)..(46)
<223> T, S or C
<400> 171
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 172
Tyr Lys Asn Pro Asn Ser Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 173
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 173
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Asn Ser Thr Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 174
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 175
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<400> 180
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Asn
20 25 30
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35 40 45
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<212> PRT
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Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<212> PRT
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 184
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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1 5 10 15
Thr Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
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35 40 45
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<212> PRT
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<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 186
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1 5 10 15
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20 25 30
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<212> PRT
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<223> SEQ B with glycosylation motif
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 188
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1 5 10 15
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20 25 30
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 189
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35 40 45
<210> 190
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 190
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 191
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 191
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 192
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 193
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1 5 10 15
Thr Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<210> 194
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 194
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Gly Asn
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
<210> 195
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 195
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Phe Gly
1 5 10 15
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35 40 45
<210> 196
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 196
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe
20 25 30
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<210> 197
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 197
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<210> 198
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 198
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1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 199
Phe Ala Asn Ser Thr Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 200
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 200
Phe Gly Asn Ser Thr Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 201
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 201
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Ser Thr Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 202
<211> 486
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequences for protein 1c
<400> 202
atggatatgc gggtccctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggtt tcctgggtca 60
aggtgcgccc ccacatctag ttctacaaag aagacacaat tacaattaga gcacttatta 120
ttagacttac aaatgatatt aaatggcata aataattata agaatcccaa gttaactaga 180
atgttaacat tcaagtttta tatgcctaag aaggctacag agttaaagca cttacaatgt 240
ttagagttcg gcaacagcac cttagaggag gtattaaatt tagcccaatc aaagaatttt 300
cacttacggc cccgggactt aatttccaat attaatgtta ttgtgttaga gttaaagggc 360
tctgagacaa cttttatgtg tgagtatgcc gacgagacag ccacaattgt tgagttctta 420
aatcggtgga ttactttttc acaatccatt atctccactt taactcatca tcaccatcac 480
cactaa 486
<210> 203
<211> 486
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence for protein 1d
<400> 203
atggatatgc gggtccctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggtt tcctgggtca 60
aggtgcgccc ccacatctag ttctacaaag aagacacaat tacaattaga gcacttatta 120
ttagacttac aaatgatatt aaatggcata aataattata agaatcccaa gttaactaga 180
atgttaacat tcaagtttta tatgcctaag aaggctacag agttaaagca cttacaatgt 240
ttagaggagg agttaaagcc attagaggag gtattaaatt tagcccaatc aaagaatttt 300
cacttacggc cccgggactt aatttccaat attaatgtta ttgtgttaga gttaaagggc 360
tctgagacaa cttttatgtg tgagtatgcc gacgagacag ccacaattgt tgagttctta 420
aatcggtgga ttactttttc acaatccatt atctccactt taactcatca tcaccatcac 480
cactaa 486
<210> 204
<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 204
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 205
<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 205
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 206
<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 206
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
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50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
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<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 207
Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
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Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
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115 120 125
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<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 208
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Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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<211> 139
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135
<210> 210
<211> 138
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 210
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 211
<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 211
Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
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Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
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<211> 57
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ C with C49A
<400> 212
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1 5 10 15
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
20 25 30
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
35 40 45
Ala Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
50 55
<210> 213
<211> 134
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant
<400> 213
Met Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu
1 5 10 15
His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro
35 40 45
Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu
50 55 60
Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His
65 70 75 80
Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu
85 90 95
Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr
100 105 110
Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ala Gln Ser
115 120 125
Ile Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 214
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 214
Tyr Lys Asn Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 215
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif
<400> 215
Tyr Lys Asn Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 216
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 216
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
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50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
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Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 217
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 217
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 218
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 218
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
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Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 219
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 219
Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 220
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 220
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
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50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 221
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 221
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 222
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 222
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 223
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 223
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
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Asn Pro Asp Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
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100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
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Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 224
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 224
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
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Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
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Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
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<210> 225
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 225
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
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100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 226
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 226
Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
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Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 227
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 227
Ala Pro Ala Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
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Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 228
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif
<400> 228
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Glu Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
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Ser Thr Leu Thr
130
<210> 229
<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 229
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 230
<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and His-tag
<400> 230
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly Asn Ser
50 55 60
Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 231
<211> 147
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with glycosylation motif and cleavable His-tag
<400> 231
Ala His His His His His His Gly Ser Asp Asp Asp Asp Lys Ala Pro
1 5 10 15
Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu
20 25 30
Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro
35 40 45
Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala
50 55 60
Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu
65 70 75 80
Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro
85 90 95
Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly
100 105 110
Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile
115 120 125
Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser
130 135 140
Thr Leu Thr
145
<210> 232
<211> 139
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 variant with His-tag
<400> 232
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr His His His His His His
130 135
<210> 233
<211> 510
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 1e
<400> 233
atggatatgc gggtccctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggtt tcctgggtca 60
aggtgcgccc atcatcacca tcaccacggc agcgacgacg acgacaaggc ccccacatct 120
agttctacaa agaagacaca attacaatta gagcacttat tattagactt acaaatgata 180
ttaaatggca taaataatta taagaatccc aagttaactt tcggcaacag caccaagttt 240
tatatgccta agaaggctac agagttaaag cacttacaat gtttagagga ggagttaaag 300
ccattagagg aggtattaaa tttagcccaa tcaaagaatt ttcacttacg gccccgggac 360
ttaatttcca atattaatgt tattgtgtta gagttaaagg gctctgagac aacttttatg 420
tgtgagtatg ccgacgagac agccacaatt gttgagttct taaatcggtg gattactttt 480
tcacaatcca ttatctccac tttaacttaa 510
<210> 234
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> His tag
<400> 234
Ala His His His His His His Gly Ser Asp Asp Asp Asp Lys
1 5 10
<210> 235
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif FANST
<400> 235
Tyr Lys Asn Pro Asp Leu Thr Phe Ala Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 236
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ B with glycosylation motif FANST
<400> 236
Tyr Lys Asn Pro Glu Leu Thr Phe Ala Asn Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 237
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protein 2a
<400> 237
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 238
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Signal peptide 3a
<400> 238
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1 5 10 15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser
20
<210> 239
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Signal peptide 3b
<400> 239
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Ile Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 240
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Signal peptide 3c
<400> 240
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser
20
<210> 241
<211> 471
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2b
<400> 241
atggcctgga agactctccc catctacctc ctgctgctcc tgtcggtctt cgtcatccag 60
caggtgtcct ccgcccccac gtcgtcctcc accaagaaga cccagctgca gctcgagcac 120
ctcctgctgg acctgcagat gatcctgaac gggatcaaca actacaagaa cccgaagctg 180
acttgcatgc tgaccttcaa gttctacatg ccgaagaagg cgaccgagct gaagcacctg 240
cagtgcctgg aggaggagct caagccgctc gaggaggtgc tgaatctggc ccagtccaag 300
aacttccacc tgcgcccgcg ggacctcatc agcaacatca acgtcatcgt gctggagctg 360
aagggcagcg agacgacgtt tatgtgcgag tacgcagacg agacggccac catcgtcgag 420
ttcttgaacc ggtggatcac cttcagccag tccatcatct ccaccctgac c 471
<210> 242
<211> 456
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2d
<400> 242
atggagttcg gtctgtcctg ggtgttcctg gtcgccatca tcaagggcgt gcagtgcgcc 60
cccacgtcgt cctccaccaa gaagacccag ctgcagctcg agcacctcct gctggacctg 120
cagatgatcc tgaacgggat caacaactac aagaacccga agctgacttg catgctgacc 180
ttcaagttct acatgccgaa gaaggcgacc gagctgaagc acctgcagtg cctggaggag 240
gagctcaagc cgctcgagga ggtgctgaat ctggcccagt ccaagaactt ccacctgcgc 300
ccgcgggacc tcatcagcaa catcaacgtc atcgtgctgg agctgaaggg cagcgagacg 360
acgtttatgt gcgagtacgc agacgagacg gccaccatcg tcgagttctt gaaccggtgg 420
atcaccttca gccagtccat catctccacc ctgacc 456
<210> 243
<211> 459
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2c
<400> 243
atgtaccgta tgcagctgct ctcgtgcatc gcactgagcc tcgccctggt gaccaactca 60
gcccccacgt cgtcctccac caagaagacc cagctgcagc tcgagcacct cctgctggac 120
ctgcagatga tcctgaacgg gatcaacaac tacaagaacc cgaagctgac ttgcatgctg 180
accttcaagt tctacatgcc gaagaaggcg accgagctga agcacctgca gtgcctggag 240
gaggagctca agccgctcga ggaggtgctg aatctggccc agtccaagaa cttccacctg 300
cgcccgcggg acctcatcag caacatcaac gtcatcgtgc tggagctgaa gggcagcgag 360
acgacgttta tgtgcgagta cgcagacgag acggccacca tcgtcgagtt cttgaaccgg 420
tggatcacct tcagccagtc catcatctcc accctgacc 459
<210> 244
<211> 471
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2e
<400> 244
atggcctgga agactctccc catctacctc ctgctgctcc tgtcggtctt cgtcatccag 60
caggtgtcct ccgcgcccac ttcctcgtcc accaagaaga cccagctgca gctcgaacac 120
ctgctcctcg acctccagat gatcctcaac ggaatcaaca actacaagaa ccccaagctg 180
acgttcggca actccaccaa gttctacatg cccaagaagg ccaccgagct gaagcatctg 240
cagtgcctgg aagaggagct caagccgctc gaggaagtgc tgaacctggc ccagagcaag 300
aacttccacc tccgcccgag ggacctgatc tcgaacatca acgtcatcgt gctggagctg 360
aagggatcgg agaccacgtt catgtgcgaa tacgccgacg agacggccac catcgtggag 420
ttcctcaacc gctggatcac cttctcccag agcataatct ccaccctgac c 471
<210> 245
<211> 456
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2g
<400> 245
atggagttcg gtctgtcctg ggtgttcctg gtcgccatca tcaagggcgt gcagtgcgcg 60
cccacttcct cgtccaccaa gaagacccag ctgcagctcg aacacctgct cctcgacctc 120
cagatgatcc tcaacggaat caacaactac aagaacccca agctgacgtt cggcaactcc 180
accaagttct acatgcccaa gaaggccacc gagctgaagc atctgcagtg cctggaagag 240
gagctcaagc cgctcgagga agtgctgaac ctggcccaga gcaagaactt ccacctccgc 300
ccgagggacc tgatctcgaa catcaacgtc atcgtgctgg agctgaaggg atcggagacc 360
acgttcatgt gcgaatacgc cgacgagacg gccaccatcg tggagttcct caaccgctgg 420
atcaccttct cccagagcat aatctccacc ctgacc 456
<210> 246
<211> 459
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> DNA sequence encoding protein 2f
<400> 246
atgtaccgca tgcagctgct gtcgtgcatc gcgctcagcc tggcgctggt cacgaactcg 60
gcgcccactt cctcgtccac caagaagacc cagctgcagc tcgaacacct gctcctcgac 120
ctccagatga tcctcaacgg aatcaacaac tacaagaacc ccaagctgac gttcggcaac 180
tccaccaagt tctacatgcc caagaaggcc accgagctga agcatctgca gtgcctggaa 240
gaggagctca agccgctcga ggaagtgctg aacctggccc agagcaagaa cttccacctc 300
cgcccgaggg acctgatctc gaacatcaac gtcatcgtgc tggagctgaa gggatcggag 360
accacgttca tgtgcgaata cgccgacgag acggccacca tcgtggagtt cctcaaccgc 420
tggatcacct tctcccagag cataatctcc accctgacc 459
<210> 247
<211> 157
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2b
<400> 247
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1 5 10 15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys
20 25 30
Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile
35 40 45
Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Cys Met Leu
50 55 60
Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu
65 70 75 80
Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu
85 90 95
Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn
100 105 110
Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met
115 120 125
Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg
130 135 140
Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150 155
<210> 248
<211> 157
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2e
<400> 248
Met Ala Trp Lys Thr Leu Pro Ile Tyr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Val
1 5 10 15
Phe Val Ile Gln Gln Val Ser Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys
20 25 30
Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile
35 40 45
Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn
50 55 60
Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu
65 70 75 80
Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu
85 90 95
Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn
100 105 110
Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met
115 120 125
Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg
130 135 140
Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150 155
<210> 249
<211> 152
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2d
<400> 249
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Ile Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln
20 25 30
Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn
35 40 45
Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr
50 55 60
Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu
65 70 75 80
Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn
85 90 95
Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val
100 105 110
Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp
115 120 125
Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser
130 135 140
Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 250
<211> 152
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2g
<400> 250
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Ile Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln
20 25 30
Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn
35 40 45
Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe Tyr
50 55 60
Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu
65 70 75 80
Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn
85 90 95
Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val
100 105 110
Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp
115 120 125
Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser
130 135 140
Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 251
<211> 153
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2c
<400> 251
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Cys Met Leu Thr Phe Lys Phe
50 55 60
Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
85 90 95
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
100 105 110
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
115 120 125
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
130 135 140
Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 252
<211> 153
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Protein 2f
<400> 252
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu
20 25 30
Gln Leu Glu His Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asn Ser Thr Lys Phe
50 55 60
Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
85 90 95
Asn Phe His Leu Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile
100 105 110
Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala
115 120 125
Asp Glu Thr Ala Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe
130 135 140
Ser Gln Ser Ile Ile Ser Thr Leu Thr
145 150
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> example peptide sequence
<400> 253
Ala Leu Met Gly Arg
1 5
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1X2NX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 254
Xaa Xaa Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 255
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 255
Xaa Asn Xaa Xaa
1
<210> 256
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> X2NX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 256
Xaa Asn Xaa Thr
1
<210> 257
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 257
Xaa Asn Xaa Ser
1
<210> 258
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 258
Xaa Asn Xaa Cys
1
<210> 259
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 259
Xaa Asn Ser Xaa
1
<210> 260
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 260
Xaa Asn Ser Thr
1
<210> 261
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 261
Xaa Asn Ser Ser
1
<210> 262
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X2NSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 262
Xaa Asn Ser Cys
1
<210> 263
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine and cysteine
<400> 263
Gly Asn Xaa Xaa
1
<210> 264
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 264
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1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
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1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 266
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 267
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNST
<400> 268
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNSS
<400> 269
Gly Asn Ser Ser
1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif GNSC
<400> 270
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1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> glycosylation motif ANX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 271
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1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<400> 272
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 273
Ala Asn Xaa Ser
1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 274
Ala Asn Xaa Cys
1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
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<400> 275
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 276
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1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANST
<400> 277
Ala Asn Ser Thr
1
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<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif ANSS
<400> 278
Ala Asn Ser Ser
1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<220>
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<222> (1)..(1)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 279
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> glycosylation motif X1X2NX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 280
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1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 281
Xaa Xaa Asn Xaa Cys
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 282
Xaa Xaa Asn Ser Xaa
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1X2NST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 283
Xaa Xaa Asn Ser Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1X2NSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 284
Xaa Xaa Asn Ser Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1X2NSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 285
Xaa Xaa Asn Ser Cys
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<220>
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<222> (1)..(1)
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<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 286
Xaa Gly Asn Xaa Xaa
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> glycosylation motif X1GNX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 287
Xaa Gly Asn Xaa Thr
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 288
Xaa Gly Asn Xaa Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 289
Xaa Gly Asn Xaa Cys
1 5
<210> 290
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 290
Xaa Gly Asn Ser Xaa
1 5
<210> 291
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 291
Xaa Gly Asn Ser Thr
1 5
<210> 292
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 292
Xaa Gly Asn Ser Ser
1 5
<210> 293
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1GNSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 293
Xaa Gly Asn Ser Cys
1 5
<210> 294
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 294
Phe Xaa Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 295
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 295
Phe Xaa Asn Xaa Thr
1 5
<210> 296
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 296
Phe Xaa Asn Xaa Ser
1 5
<210> 297
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 297
Phe Xaa Asn Xaa Cys
1 5
<210> 298
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 298
Phe Xaa Asn Ser Xaa
1 5
<210> 299
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 299
Phe Xaa Asn Ser Thr
1 5
<210> 300
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 300
Phe Xaa Asn Ser Ser
1 5
<210> 301
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 301
Phe Xaa Asn Ser Cys
1 5
<210> 302
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 302
Phe Gly Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 303
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 303
Phe Gly Asn Xaa Thr
1 5
<210> 304
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 304
Phe Gly Asn Xaa Ser
1 5
<210> 305
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 305
Phe Gly Asn Xaa Cys
1 5
<210> 306
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 306
Phe Gly Asn Ser Xaa
1 5
<210> 307
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNST
<400> 307
Phe Gly Asn Ser Thr
1 5
<210> 308
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNSS
<400> 308
Phe Gly Asn Ser Ser
1 5
<210> 309
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FGNSC
<400> 309
Phe Gly Asn Ser Cys
1 5
<210> 310
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 310
Xaa Ala Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 311
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 311
Xaa Ala Asn Xaa Thr
1 5
<210> 312
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 312
Xaa Ala Asn Xaa Ser
1 5
<210> 313
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or is absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 313
Xaa Ala Asn Xaa Cys
1 5
<210> 314
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> threonine, serine or cysteine
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 314
Xaa Ala Asn Ser Xaa
1 5
<210> 315
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 315
Xaa Ala Asn Ser Thr
1 5
<210> 316
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or is absent
<400> 316
Xaa Ala Asn Ser Ser
1 5
<210> 317
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif X1ANSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 317
Xaa Ala Asn Ser Cys
1 5
<210> 318
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 318
Phe Xaa Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 319
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 319
Phe Xaa Asn Xaa Thr
1 5
<210> 320
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 320
Phe Xaa Asn Xaa Ser
1 5
<210> 321
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 321
Phe Xaa Asn Xaa Cys
1 5
<210> 322
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 322
Phe Xaa Asn Ser Xaa
1 5
<210> 323
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NST
<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid
<400> 323
Phe Xaa Asn Ser Thr
1 5
<210> 324
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSS
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or absent
<400> 324
Phe Xaa Asn Ser Ser
1 5
<210> 325
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FX2NSC
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid or is absent
<400> 325
Phe Xaa Asn Ser Cys
1 5
<210> 326
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANX3X4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 326
Phe Ala Asn Xaa Xaa
1 5
<210> 327
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANX3T
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 327
Phe Ala Asn Xaa Thr
1 5
<210> 328
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANX3S
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 328
Phe Ala Asn Xaa Ser
1 5
<210> 329
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANX3C
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> any proteinogenic or non-proteinogenic amino acid except proline
<400> 329
Phe Ala Asn Xaa Cys
1 5
<210> 330
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANSX4
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> threonine, serine or cysteine
<400> 330
Phe Ala Asn Ser Xaa
1 5
<210> 331
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANST
<400> 331
Phe Ala Asn Ser Thr
1 5
<210> 332
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANSS
<400> 332
Phe Ala Asn Ser Ser
1 5
<210> 333
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> glycosylation motif FANSC
<400> 333
Phe Ala Asn Ser Cys
1 5
<210> 334
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 334
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 335
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 335
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 336
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 336
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Gly Asp Ser Thr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 337
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 337
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Ala Asp Ser Thr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 338
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 338
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly Asp Ser Thr
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 339
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 339
Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His Leu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys Asn
20 25 30
Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys
35 40 45
Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Ala Asp Ser Thr
50 55 60
Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Arg
65 70 75 80
Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys
85 90 95
Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr
100 105 110
Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile Ile
115 120 125
Ser Thr Leu Thr
130
<210> 340
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 340
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 341
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 341
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Ser Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 342
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 342
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 343
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 343
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130
<210> 344
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 344
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1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130
<210> 345
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-2 protein of formula (I-ii)
<400> 345
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130
<210> 346
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 346
Tyr Lys Asn Pro Phe Ala Asp Ser Thr Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 347
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 347
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Ala Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 348
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 348
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Phe Ala Asp Ser Thr Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 349
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 349
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Ala Asp Ser Thr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 350
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 350
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Ala Asp Ser Thr
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 351
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 351
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Phe Ala Asp Ser
1 5 10 15
Thr Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 352
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 352
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Ala Asp
1 5 10 15
Ser Thr Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 353
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 353
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Phe Ala
1 5 10 15
Asp Ser Thr Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 354
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 354
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Ala
20 25 30
Asp Ser Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 355
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 355
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe
20 25 30
Ala Asp Ser Thr Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 356
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 356
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Phe Ala Asp Ser Thr
35 40 45
<210> 357
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 357
Tyr Lys Asn Pro Phe Gly Asp Ser Thr Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 358
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 358
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Phe Gly Asp Ser Thr Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 359
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Phe Gly Asp Ser Thr Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 360
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Phe Gly Asp Ser Thr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 361
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Gly Asp Ser Thr
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 362
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 362
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Phe Gly Asp Ser
1 5 10 15
Thr Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
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<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 363
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Gly Asp
1 5 10 15
Ser Thr Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 364
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 364
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Phe Gly
1 5 10 15
Asp Ser Thr Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 365
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 365
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Phe Gly
20 25 30
Asp Ser Thr Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 366
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 366
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Phe
20 25 30
Gly Asp Ser Thr Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys
35 40 45
<210> 367
<211> 46
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SEQ D
<400> 367
Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met
1 5 10 15
Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu
20 25 30
Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Phe Gly Asp Ser Thr
35 40 45
<210> 368
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> example sequence
<400> 368
Phe Gly Asp Ser Thr
1 5
Claims (43)
- 하기 화학식 (I)의 IL-2 단백질 서열:
(Tag1)y - (Ala)x - SEQ A - SEQ B - SEQ C - (Tag2)z (I),
상기 식에서,
SEQ A는 서열번호 1에 대해 적어도 89%의 서열 동일성을 갖고;
SEQ B는 서열번호 2에 대해 적어도 76%의 서열 동일성을 갖고 적어도 하나의 글리코실화 모티프를 포함하고;
SEQ C는 서열번호 4에 대해 적어도 91%의 서열 동일성을 갖고;
Tag1 및 Tag2는 독립적으로 태그 모이어티이고;
Ala는 알라닌 잔기이고;
x는 0 또는 1이고;
y는 0 또는 1이고;
z는 0 또는 1이다. - 제1항에 있어서, SEQ A가 서열번호 1 및 서열번호 36으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, SEQ B의 적어도 하나의 글리코실화 모티프가 N-글리코실화 모티프 또는 O-글리코실화 모티프인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B의 적어도 하나의 N-글리코실화 모티프가 아미노산 서열 X1X2NX3X4(서열번호 254)를 갖고, 여기에서
X1은 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이거나, 존재하지 않고;
X2는 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이거나, 존재하지 않고;
N은 아스파라긴이고;
X3은 프롤린을 제외한 임의의 단백질생성 또는 비-단백질생성 아미노산이고;
X4는 트레오닌, 세린 및 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B의 적어도 하나의 N-글리코실화 모티프가 FGNST(서열번호 307) 또는 FANST(서열번호 331)인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B가 서열번호 11, 서열번호 14, 서열번호 17, 서열번호 20, 서열번호 23, 서열번호 26, 서열번호 32, 서열번호 35, 서열번호 214 및 서열번호 215로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ B가 서열번호 11의 서열을 갖는 것인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ C가 서열번호 3, 서열번호 4 및 서열번호 212로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 x가 1인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (I)의 y 및 z가 0인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 10; 서열번호 13; 서열번호 16; 서열번호 19; 서열번호 22; 서열번호 25; 서열번호 31; 서열번호 34; 서열번호 217; 및 서열번호 225로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 10의 서열을 갖는 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 편향된 IL-2인 IL-2 단백질.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 IL-2 단백질 중 하나 이상을 포함하는 접합체.
- 제14항에 있어서, 하기 화학식 (Ia) 또는 화학식 (Ib)의 IL-2 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염인 접합체:
(Ia),
(Ib),
상기 식에서,
-D는 화학식 (I)의 IL-2 단백질을 포함하고;
-L1-은 -D에 가역적으로 공유결합된 링커 모이어티이고;
-L2-는 화학 결합이거나 스페이서 모이어티이고;
-Z는 중합체 모이어티 또는 치환된 지방산 모이어티이고;
x는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 및 16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 정수이고;
y는 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되는 정수이다. - 제14항 또는 제15항에 있어서, -Z가 중합체 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 1 kDa 내지 1000 kDa 범위의 분자량을 갖는 중합체 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 PEG 기반 중합체 모이어티인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 하기 화학식 (A)의 모이어티를 포함하는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
-BP1<, -BP2< 및 -BP3<은 -N< 및 -C(R8)<로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
R8은 H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-P1, -P2, -P3 및 -P4는 서로 독립적으로 적어도 40%의 PEG를 포함하고 3 내지 40 kDa 범위의 분자량을 갖는 PEG 기반 쇄이고;
-C1- 및 -C2-는 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 임의로 치환되고 C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐은 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R10)-, -S(O)2N(R10)-, -S(O)N(R10)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(R10)S(O)2N(R10a)-, -S-, -N(R10)-, -OC(OR10)(R10a)-, -N(R10)C(O)N(R10a)- 및 -OC(O)N(R10)-으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T는 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 각각의 T는 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 R9로 임의로 치환되고;
각각의 R9는 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COOR11, -OR11, -C(O)R11, -C(O)N(R11R11a), -S(O)2N(R11R11a), -S(O)N(R11R11a), -S(O)2R11, -S(O)R11, -N(R11)S(O)2N(R11aR11b), -SR11, -N(R11R11a), -NO2, -OC(O)R11, -N(R11)C(O)R11a, -N(R11)S(O)2R11a, -N(R11)S(O)R11a, -N(R11)C(O)OR11a, -N(R11)C(O)N(R11aR11b), -OC(O)N(R11R11a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 R10, R10a, R11, R11a 및 R11b는 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬은 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환된다. - 제19항에 있어서, C1 및 C2가 하기 화학식 (A-a)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 BP1에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 각각 BP2 또는 BP3에의 부착을 나타내고;
q1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q2는 1, 2, 3, 4 및 5로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q3은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로 이루어진 군으로부터 선택되고;
q4는 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제19항 또는 제20항에 있어서, P1, P2, P3 및 P4가 서로 독립적으로 하기 화학식 (A-b)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
파선은 -Z의 나머지 부분에의 부착을 나타내고;
m은 0 또는 1이고;
p는 70 내지 900 범위의 정수이고;
q는 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로 이루어진 군으로부터 선택된다. - 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, BP1이 -N<인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, BP2 및 BP2가 둘 다 -CH<인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, -Z가 하기 화학식 (A-c)의 모이어티를 포함하는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
p1, p2, p3 및 p4는 서로 독립적으로 70 내지 900 범위의 정수이다. - 제14항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 하기 화학식 (IX-a)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고, 표시되지 않은 파선은 -L2-Z에의 부착을 나타내고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
=Y1은 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y2-는 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y3-은 -O- 및 -S-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Y4-는 -O-, -NR5- 및 -C(R6R6a)-로 이루어진 군으로부터 선택되고;
=Y5는 =O 및 =S로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-R3, -R5, -R6 및 -R6a는 -H, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-R4는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸 및 3,3-디메틸프로필로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-W-는 C3-10 사이클로알킬, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, -C(O)-, -C(O)N(R7)-, -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
-Nu는 -N(R7R7a), -N(R7OH), -N(R7)-N(R7aR7b), -S(R7), -COOH, 및 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되는 친핵체이고:
-Ar-은 하기 기들로 이루어진 군으로부터 선택되고:
상기 식에서,
파선은 -L1-의 나머지 부분에의 부착을 나타내고,
-Z1-은 -O-, -S- 및 -N(R7)-로 이루어진 군으로부터 선택되고,
-Z2-는 -N(R7)-이고;
-R7, -R7a 및 -R7b는 -H, C1-6 알킬, C2-6 알케닐 및 C2-6 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고;
-L1-은 임의로 더 치환된다. - 제14항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, -L1-이 하기 화학식 (IX-c)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -D의 질소에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -L2-Z에의 부착을 나타내고;
s1은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 이루어진 군으로부터 선택되는 정수이다. - 제26항에 있어서, s1은 3인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 스페이서인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, -S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, -S-, -N(Ry1)-, -OC(ORy1)(Ry1a)-, -N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1)-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기에서 -T-, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐이 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐이 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, -S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, -N(Ry3)-, -OC(ORy3)(Ry3a)-, -N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- 및 -OC(O)N(Ry3)-으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
-Ry1 및 -Ry1a가 -H, -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐로 이루어진 군으로부터 서로 독립적으로 선택되고; 여기에서 -T, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐이 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고, C1-50 알킬, C2-50 알케닐 및 C2-50 알키닐이 -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, -S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, -OC(ORy4)(Ry4a)-, -N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- 및 -OC(O)N(Ry4)-로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되고;
각각의 T가 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 각각의 T가 독립적으로 동일하거나 상이한 하나 이상의 -Ry2로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry2가 할로겐, -CN, 옥소(=O), -COORy5, -ORy5, -C(O)Ry5, -C(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2N(Ry5Ry5a), -S(O)N(Ry5Ry5a), -S(O)2Ry5, -S(O)Ry5, -N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), -SRy5, -N(Ry5Ry5a), -NO2, -OC(O)Ry5, -N(Ry5)C(O)Ry5a, -N(Ry5)S(O)2Ry5a, -N(Ry5)S(O)Ry5a, -N(Ry5)C(O)ORy5a, -N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), -OC(O)N(Ry5Ry5a) 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고; 여기에서 C1-6 알킬이 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되고;
각각의 -Ry3, -Ry3a, -Ry4, -Ry4a, -Ry5, -Ry5a 및 -Ry5b가 -H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기에서 C1-6 알킬이 동일하거나 상이한 하나 이상의 할로겐으로 임의로 치환되는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염. - 제14항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 -O-, -T- 및 -C(O)N(Ry1)-로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기에 의해 임의로 중단되는 C1-20 알킬 쇄이고; C1-20 알킬 쇄가 -OH, -T 및 -C(O)N(Ry6Ry6a)로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 기로 임의로 치환되고; 여기에서 -Ry1, -Ry6 및 -Ry6a가 H 및 C1-4 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, T가 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 테트랄리닐, C3-10 사이클로알킬, 3원 내지 10원 헤테로사이클릴, 8원 내지 11원 헤테로비사이클릴, 8원 내지 30원 카보폴리사이클릴 및 8원 내지 30원 헤테로폴리사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제14항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, -L2-가 하기 화학식 (IX-e)를 갖는 것인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
상기 식에서,
별표로 표시된 파선은 -L1-에의 부착을 나타내고;
표시되지 않은 파선은 -Z에의 부착을 나타내고;
s2는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택되는 정수이다. - 제31항에 있어서, s2가 3인 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 IL-2 단백질 또는 제14항 내지 제32항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 IL-2 단백질, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 IL-2 단백질, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 약학 조성물.
- 제35항에 있어서, 암이 육종, 척색종, 결장암, 직장암, 결장직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암, 기저세포암, 선암종, 땀샘암, 피지샘암, 유두암, 유두선암종, 낭선암종, 수질암, 기관지암, 신세포암, 간암, 담관암, 융모막암종, 정상피종, 배아암, 윌름스 종양, 자궁경부암, 고환암, 위암, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 방광암, 신세포암종, 요로상피암, 상피암, 신경아교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 비호지킨 림프종, 피부 T 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병 및 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 약학 조성물.
- 제34항 또는 제35항에 있어서, 하나 이상의 추가 약물의 투여 전에, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 환자에게 투여되는 IL-2 단백질, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 약학 조성물.
- 제37항에 있어서, 하나 이상의 추가 약물이 패턴 인식 수용체 아고니스트(PRRA), 세포독성/화학요법제, 면역 체크포인트 억제제 또는 길항제, 면역 체크포인트 아고니스트, 면역 활성화 수용체 아고니스트, 다중특이적 약물, 항체-약물 접합체(ADC), 항체-보강제 접합체(AAC), 방사성핵종 또는 표적화 방사성핵종 치료제, DNA 손상 복구 억제제, 종양 대사 억제제, 패턴 인식 수용체 아고니스트, 단백질 키나제 억제제, 케모카인 및 화학유인제 수용체 아고니스트, 케모카인 또는 케모카인 수용체 길항제, 사이토카인 수용체 아고니스트, 사멸 수용체 아고니스트, CD47 또는 SIRPα 길항제, 종양용해성 약물, 신호 전환제 단백질, 후성유전학 변형제, 종양 펩티드 또는 종양 백신, 열충격 단백질(HSP) 억제제, 단백질용해성 효소, 유비퀴틴 및 프로테아좀 억제제, 부착 분자 길항제, 호르몬 펩티드 및 합성 호르몬을 포함하는 호르몬, 및 적응 세포 요법, 예컨대, 종양 침윤 림프구(TIL) 요법, 키메라 항원 수용체(CAR) 요법, T 세포 요법, 자연 살해(NK) 세포 요법, CAR-T 요법, CAR-NK 요법, CAR-γδ 요법, CAR-대식세포 요법, 또는 유전적으로 변형되었거나 유전적으로 변형되지 않은 면역 세포 유형을 사용하는 임의의 다른 세포 요법으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-2 단백질, 접합체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 약학 조성물.
- 제1항의 IL-2 단백질을 코딩하는 올리고뉴클레오타이드.
- 제39항에 있어서, DNA, RNA 및 cDNA로 이루어진 군으로부터 선택되는 올리고뉴클레오타이드.
- 제39항 또는 제40항에 있어서, IL-2, 특히 편향된 IL-2로 치료할 수 있는 질환의 치료에 사용하기 위한 올리고뉴클레오타이드.
- 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 생체내 또는 생체외에서 숙주 세포 내로 전달되는 올리고뉴클레오타이드.
- 제42항에 있어서, 숙주 세포가 면역 세포인 올리고뉴클레오타이드.
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