KR20230044416A - Parp 억제제로서의 인돌로 헵타밀 옥심 유사체 결정 및 그의 제조방법 - Google Patents

Parp 억제제로서의 인돌로 헵타밀 옥심 유사체 결정 및 그의 제조방법 Download PDF

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Abstract

PARP 억제제로서의 인돌로 헵타밀 옥심 유사체 결정형의 일종 및 이의 제조 방법으로, 구체적으로 화학식 (I)의 화합물의 결정형 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
Figure pct00018

Description

PARP 억제제로서의 인돌로 헵타밀 옥심 유사체 결정 및 그의 제조방법
본 출원은 2020년 7월 31일 PRC에 제출된 중국 특허 출원 번호 202010762484.9 및 2020년 8월 4일 PRC에 제출된 중국 특허 출원 번호 202010772764.8의 이익 및 우선권을 주장한다. 이들은 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.
본 출원은 PARP 억제제로 사용하기 위한 인돌로 헵타밀 옥심 유사체(indolo heptamyl oxime analog)의 결정형 및 이의 제조 방법에 관한 것으로, 특히 화학식 (I)의 화합물의 결정형 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.
Ploy(ADP-리보스) 중합효소(PARP)는 효소 계열이며 다양한 표적 단백질에 ADP-리보스 잔기를 추가하는 것을 촉매하는 데 사용할 수 있다. 현재까지 총 18개의 하위 유형이 식별되고 특성화되었다. PARP 패밀리에 다양한 효소가 있음에도 불구하고, PARP-1은 세포에서 ADP-리보실화의 90% 이상을 담당하므로 PARP-1 억제제는 PARP 억제제 연구의 초점이 된다.
인간의 생활환경에서 인간 DNA는 자연환경의 영향(산화스트레스, 방사선요법, 화학요법 등)으로 인해 항상 손상된다. PARP-1은 DNA 복구 및 게놈 기능 유지와 밀접한 관련이 있다. 일반적으로 단일가닥 절단(single strand break, SSB)과 같은 DNA 손상 시, PARP-1은 먼저 DNA 절단부위에 결합한 다음 활성화되며, PARP1 효소의 구조가 변경됨에 따라 이 효소는 poly(ADP)리보스의 합성을 위해 NAD+(coenzyme II)를 모으기 시작하고, 동시에 DNA 리가제 및 DNA 폴리머라제 β와 같은 다른 복구 효소가 기능하도록 신호 역할을 한다. 이러한 PARP-1 결합 및 활성화 과정을 염기 절제 복구(BER)라고 하며 DNA 증폭 복구 과정에 기여한다. PARP-1이 PARP 억제제에 의해 억제되면, 손상된 DNA는 SSB를 통해 복구할 수 없다; 대신 이중가닥 절단(double strand break, DSB)가 활성화된다. 신체는 주로 DNA의 상동 재조합(HR) 및 비상동 말단 연결(NHEJ)의 두 가지 방법을 통해 DSB를 복구한다, 여기서 상동 재조합은 DSB 복구의 주요 방법이며 높은 복구 신뢰성을 가진다. BRCA1 및 BRCA2는 상동 재조합에서 중요한 역할을 한다(Nature, 2005, 913-917). 연구들에 따르면 BRCA1/2 돌연변이는 난소암, 유방암 및 전립선암에서 발견되며 PARP 억제제는 BRCA1/2 결핍 종양을 위한 좋은 선택이다. PARP 억제제는 단독으로 사용하거나 화학요법제 및 방사선요법제와 함께 사용함으로써 용량을 줄이고 효능을 향상시킬 수 있다. 이를 바탕으로 일련의 이종 화합물(J. Med. Chem. 2010, 4561)이 개발되었으며, 이들 화합물 중 olaparib, rucaparib, niraparib(MK-4827) 및 talazoparib(BMN-673)이 개발되었고 마케팅 승인을 받았다. 그럼에도 불구하고 PARP 억제제의 적응증이 지속적으로 확대됨에 따라 PARP 억제제의 적용도 종양 치료에서 뇌졸중, 심근 허혈, 염증 및 당뇨병 치료로 확대되고 있다. 현재 매우 많은 수의 임상 시험이 진행 중에 있다.
Figure pct00001
암 및 기타 질환의 치료를 위한 PARP 억제제를 개발하려는 노력이 여전히 진행 중이지만 만족스러운 치료법이 발견되지 않아 여전히 새로운 PARP 억제제 개발이 시급한 상황이다.
일 양태에서, 본 출원은 하기 화학식 (I)의 화합물을 제공한다:
Figure pct00002
.
또 다른 양태에서, 본 출원은 화학식 (I)의 화합물의 결정형을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물을 제공하며, 여기서 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형은 결정질 조성물 중량의 50 % 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 치료 유효량의 상기 화학식 (I)의 화합물 또는 상기 기재된 그의 결정형, 또는 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다; 상기 약학적 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 다른 부형제를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하기 위한 의약을 제조하는데 있어서 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기술된 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하는데 있어서 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기술된 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 치료적 유효량의 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 억제제로서의 사용을 위한 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 결정형의 제조 방법을 제공한다, 여기서 상기 방법은 유기 용매 중에서 비결정질 형태의 화학식 (I)의 화합물을 가열 및 교반하는 단계, 결정화를 위해 냉각시키고 결정형을 제공하기 위해 여과하는 단계를 포함한다; 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태는 도 1에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다; 상기 결정형의 제조방법에서 상기 유기 용매는 아세톤, 테트라하이드로퓨란 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되며, 바람직하게는 아세톤이다.
한 양태에서, 본 출원은 하기 화학식 (I)의 화합물을 제공한다:
Figure pct00003
.
또 다른 양태에서, 본 출원은 추가로 화학식 (I)의 화합물의 결정형을 제공한다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 2개, 3개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°및 25.96 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°및 25.96 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20° 및 31.68 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 9개, 10개, 11개, 12개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 13.32 ± 0.20°, 13.88 ± 0.20°, 15.38 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20°± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 22.24 ± 0.20°, 22.56 ± 0.20°, 24.02 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20°, 28.20 ± 0.20°, 29.32 ± 0.20°, 31.68 ± 0.20°, 31.98 ± 0.20° 및 32.28 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 12개, 13개, 14개, 15개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 13.32 ± 0.20°, 13.88 ± 0.20°, 14.70 ± 0.20°, 15.38 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 18.80 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 19.72 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 21.30 ± 0.20°, 21.73 ± 0.20°, 22.24 ± 0.20°, 22.56 ± 0.20°, 23.50 ± 0.20°, 24.02 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 26.84 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20°, 28.20 ± 0.20°, 29.32 ± 0.20°, 30.36 ± 0.20°, 31.68 ± 0.20°, 31.98 ± 0.20°, 32.28 ± 0.20°, 32.90 ± 0.20°, 33.59 ± 0.20°, 34.72 ± 0.20°, 35.22 ± 0.20°, 35.98 ± 0.20°, 36.58 ± 0.20° 및 38.48 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20° 및 31.68 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 13.32 ± 0.20°, 13.88 ± 0.20°, 15.38 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 22.24 ± 0.20°, 22.56 ± 0.20°, 24.02 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20°, 28.20 ± 0.20°, 29.32 ± 0.20°, 31.68 ± 0.20°, 31.98 ± 0.20° 및 32.28 ± 0.20°.
본원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서 회절 피크를 포함한다: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 13.32 ± 0.20°, 13.88 ± 0.20°, 14.70 ± 0.20°, 15.38 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 18.80 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 19.72 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 21.30 ± 0.20°, 21.73 ± 0.20°, 22.24 ± 0.20°, 22.56 ± 0.20°, 23.50 ± 0.20°, 24.02 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 26.84 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20°, 28.20 ± 0.20°, 29.32 ± 0.20°, 30.36 ± 0.20°, 31.68 ± 0.20°, 31.98 ± 0.20°, 32.28 ± 0.20°, 32.90 ± 0.20°, 33.59 ± 0.20°, 34.72 ± 0.20°, 35.22 ± 0.20°, 35.98 ± 0.20°, 36.58 ± 0.20° 및 38.48 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 도 2에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 표 1에 나타낸 피크 위치 및 상대 강도를 갖는 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 특징적인 피크를 포함한다.
화학식 (I)의 화합물의 결정형 A에 대한 XRPD 패턴 분석 데이터
No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%) No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%)
1 8.593 40.8 20 24.021 7.6
2 11.736 24.5 21 25.140 33.1
3 12.339 28.9 22 25.962 46.9
4 12.559 38.8 23 26.836 4.2
5 13.315 6.3 24 27.478 10.7
6 13.875 5.4 25 28.197 9.7
7 14.701 2.4 26 29.323 5.7
8 15.376 7.5 27 30.362 3.0
9 15.999 41.4 28 31.679 10.6
10 17.202 16.5 29 31.981 6.0
11 18.795 3.0 30 32.281 5.8
12 19.397 18.1 31 32.900 2.9
13 19.720 4.1 32 33.586 2.2
14 20.759 100.0 33 34.723 4.4
15 21.299 4.5 34 35.220 2.9
16 21.726 4.8 35 35.977 3.5
17 22.241 9.8 36 36.578 1.3
18 22.562 7.7 37 38.479 2.7
19 23.498 4.8
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 시차주사열량계 곡선(differential scanning calorimetry curve)에서 발열 피크의 285.6 ± 5℃에서 시작점을 갖는다.본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크의 288.6 ± 5℃에서 피크 값을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 도 3에 도시된 시차주사열량계(DSC) 곡선을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 열중량 분석 곡선(thermogravimetric analysis curve)에서 200.0±5℃에서 0.56%의 중량 손실을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 도 4에 도시된 열중량 분석 곡선을 갖는다.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 특성 피크를 포함하는, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 15.86 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20° 및 23.54 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20° 및 26.28 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 4개, 5개, 6개, 7개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 13.66 ± 0.20°, 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 18.30 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20°, 25.80 ± 0.20°, 26.28°± 0.20° 및 27.96 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 11.52 ± 0.20°, 13.66 ± 0.20°, 14.28 ± 0.20°, 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 16.84 ± 0.20°, 18.30 ± 0.20°, 18.72 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20°, 24.48 ± 0.20°, 24.84 ± 0.20°, 25.80 ± 0.20°, 26.28 ± 0.20°, 27.96 ± 0.20°, 28.40 ± 0.20°, 28.84 ± 0.20 ° , 29.82 ± 0.20°, 30.22 ± 0.20°, 31.74 ± 0.20°, 32.04 ± 0.20°, 32.69 ± 0.20°, 33.90 ± 0.20°, 34.50 ± 0.20°, 35.02 ± 0.20°, 36.08 ± 0.20°, 36.94 ± 0.20°, 37.46 ± 0.20° 및 37.92 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 15.86 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20° 및 23.54 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20° 및 26.28 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 13.66 ± 0.20°, 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 18.30 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20°, 25.80 ± 0.20°, 26.28 ± 0.20° 및 27.96 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공한다: 11.52 ± 0.20°, 13.66 ± 0.20°, 14.28 ± 0.20°, 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 16.84 ± 0.20°, 18.30 ± 0.20°, 18.72 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20°, 24.48 ± 0.20°, 24.84 ± 0.20°, 25.80 ± 0.20°, 26.28 ± 0.20°, 27.96 ± 0.20°, 28.40 ± 0.20°, 28.84 ± 0.20°, 29.82 ± 0.20°, 30.22 ± 0.20°, 31.74 ± 0.20°, 32.04°± 0.20°, 32.69 ± 0.20°, 33.90 ± 0.20°, 34.50 ± 0.20°, 35.02 ± 0.20°, 36.08 ± 0.20°, 36.94 ± 0.20°, 37.46 ± 0.20° 및 37.92 ± 0.20°.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 도 5에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 표 2에 나타낸 피크 위치 및 상대 강도를 갖는 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 특징적인 피크를 포함한다.
화학식 (I)의 화합물의 결정형 B에 대한 XRPD 패턴 분석 데이터
No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%) No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%)
1 11.519 5.5 16 27.962 18.8
2 13.659 10.9 17 28.402 5.4
3 14.276 7.4 18 28.844 3.3
4 14.721 22.4 19 29.819 3.8
5 15.860 63.9 20 30.220 5.7
6 16.840 5.2 21 31.738 7.4
7 18.299 11.6 22 32.040 2.8
8 18.715 6.7 23 32.686 2.3
9 21.621 100.0 24 33.899 4.0
10 23.141 33.0 25 34.500 6.4
11 23.541 64.0 26 35.021 6.1
12 24.483 5.7 27 36.082 5.3
13 24.838 3.8 28 36.941 6.0
14 25.801 17.7 29 37.459 3.7
15 26.281 22.7 30 37.918 2.0
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크의 287.4 ± 5℃에서 시작점을 갖는다.본 출원의 한 실시상태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크의 290.6 ± 5℃에서 피크 값을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 도 6에 도시된 시차주사열량계(DSC) 곡선을 갖는다.
본 출원의 하나의 실시상태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 열중량 분석 곡선에서 200.0±5℃에서 0.70%의 중량 손실을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 도 7에 도시된 열중량 분석 곡선을 갖는다.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20° 및 24.92 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20° 및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20° 및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20° 및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 9개, 10개, 11개, 12개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 9.94 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 16.32 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°, 26.14 ± 0.20°, 26.86 ± 0.20°, 27.82 ± 0.20°, 28.52 ± 0.20° 및 29.34 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 12개, 13개, 14개, 15개 또는 그 이상의 특성 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 9.59 ± 0.20°, 9.94 ± 0.20°, 10.58 ± 0.20°, 11.42 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 13.40 ± 0.20°, 14.86 ± 0.20°, 15.66 ± 0.20°, 16.32 ± 0.20°, 17.00 ± 0.20°, 17.54 ± 0.20°, 17.84 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°, 26.14 ± 0.20°, 26.86 ± 0.20°, 27.34 ± 0.20°, 27.82 ± 0.20°, 28.52 ± 0.20°, 29.34 ± 0.20°, 30.18 ± 0.20°, 31.36 ± 0.20° 및 32.36 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°및 24.92 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20° 및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20° 및 27.82 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 9.94 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 16.32 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ±0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°, 26.14 ± 0.20°, 26.86 ± 0.20°, 27.82 ± 0.20°, 28.52 ± 0.20° 및 29.34 ± 0.20°.
본 출원은 추가로 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크를 포함하는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공한다: 6.46 ± 0.20°, 9.59 ± 0.20°, 9.94 ± 0.20°, 10.58 ± 0.20°, 11.42 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 13.40 ± 0.20°, 14.86 ± 0.20°, 15.66 ± 0.20°, 16.32 ± 0.20°, 17.00 ± 0.20°, 17.54 ± 0.20°, 17.84 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°, 26.14 ± 0.20°, 26.86 ± 0.20°, 27.34 ± 0.20°, 27.82 ± 0.20°, 28.52 ± 0.20°, 29.34 ± 0.20°, 30.18 ± 0.20°, 31.36 ± 0.20° 및 32.36 ± 0.20°.
본 출원의 하나의 구현예에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 도 8에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 표 3에 나타낸 피크 위치 및 상대 강도를 갖는 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴에서 특징적인 피크를 포함한다.
화학식 (I)의 화합물의 결정형 C에 대한 XRPD 패턴 분석 데이터
No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%) No. 2θ 각도(±0.2°) 상대 강도(%)
1 6.460 100.0 18 20.979 52.1
2 9.593 13.4 19 21.702 50.5
3 9.941 20.9 20 22.321 40.0
4 10.582 17.7 21 22.683 45.0
5 11.422 17.3 22 23.300 51.0
6 12.438 34.1 23 24.080 37.4
7 13.402 6.3 24 24.921 71.2
8 14.859 18.3 25 26.139 21.0
9 15.664 15.9 26 26.855 27.8
10 16.317 24.0 27 27.337 15.3
11 17.000 6.0 28 27.821 36.9
12 17.540 17.0 29 28.519 23.8
13 17.838 16.9 30 29.340 27.0
14 18.780 51.3 31 30.179 17.2
15 19.819 50.4 32 31.356 12.9
16 20.220 38.8 33 32.360 13.0
17 20.680 30.8
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크의 261.6 ± 5℃에서 시작점을 갖는다.본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크의 267.5 ± 5℃에서 피크 값을 갖는다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 도 9에 도시된 시차주사열량계(DSC) 곡선을 갖는다.
본 출원은 도 1에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 비결정질 형태인, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 추가로 제공한다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D는 유기 용매 및 염산의 존재 하에서 화합물 1을 교반하고, 결정화하고, 여과하여 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D의 제조에 있어서, 상기 유기 용매는 에틸아세테이트로부터 선택된다.
본 출원에서 화합물 1은 하기와 같은 구조를 갖는다:
Figure pct00004
.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 D 결정형을 가열 및 교반함으로써 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 가열 및 교반하고, 결정화를 위해 냉각하고 여과함으로써 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 상기 유기 용매는 아세톤, 테트라히드로푸란 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되며, 바람직하게는 아세톤이다.
본원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 유기 용매 대 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D의 부피-대-몰비는 (2-10) mL:1 mmol, 바람직하게는 (4-6) mL:1 mmol 이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 상기 가열 온도는 40~80℃, 바람직하게는 40~60℃이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 상기 가열 온도는 상기 유기 용매의 환류 온도이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 교반시간은 10~48 시간, 바람직하게는 16~48 시간이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 제조에 있어서, 상기 결정화는 25~35℃로 냉각, 바람직하게는 25~30℃로 냉각하여 수행한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A를 제공하며, 여기서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 전술한 결정형 A의 결정 특성을 가진다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 아세톤 테트라히드로푸란 및 에틸아세테이트 중 하나 또는 둘 이상의 혼합 용매 중에서 선택된 용매에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 아세톤에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본 출원의 일부 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 가열 및 교반함으로써 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 가열 및 교반하고, 결정화를 위해 냉각하고 여과함으로써 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 상기 유기 용매는 아세토니트릴로부터 선택된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 유기 용매 대 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D의 부피-대-몰비는 (2-10) mL:1 mmol, 바람직하게는 (4-6) mL:1 mmol 이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 상기 가열 온도는 30~80℃, 바람직하게는 40~60℃이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 상기 가열 온도는 유기 용매의 환류온도이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 상기 교반시간은 10~48 시간, 바람직하게는 16~48 시간이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 제조에 있어서, 상기 결정화는 25~35℃, 바람직하게는 25~30℃로 냉각하여 수행된다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 제공하며, 여기서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B는 전술한 결정형 B의 결정 특성을 가진다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식(I)의 화합물의 결정형 B는 아세토니트릴에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 유기 용매 및 염기의 존재 하에 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 해리시킨 다음, 염산의 존재 하에 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 유기 용매 및 염기의 존재 하에 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 해리시키고, 상을 분리하고, 염산 존재 하에서 교반하고, 결정화 및 여과함으로써 제조된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 상기 해리를 위한 유기 용매는 에틸아세테이트에서 선택된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 상기 해리를 위한 염기는 중탄산나트륨, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 중탄산칼륨 및 탄산나트륨 중에서 선택되고, 바람직하게는 중탄산나트륨에서 선택된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 상기 해리를 위한 염기는 염기의 포화 수용액 형태이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D 대 유기 용매 대 해리를 위한 염기의 포화 수용액의 몰:부피:부피 비율은 1mmol:(12-20)mL:(4-10)mL, 바람직하게는 1mmol:(12-16)mL:(4-6)mL이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 상기 해리는 8-12분 동안, 바람직하게는 10분 동안 교반 하에 수행된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 상기 염산은 에틸아세테이트, 클로로포름, 사염화탄소 및 디옥산으로 이루어진 군에서 선택되는 유기 용매 중에, 바람직하게는 에틸아세테이트 중에 존재한다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 제조에 있어서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D와 염산의 당량비는 1:0.85이다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 유기 용매 중에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 제공하며, 여기서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 전술한 결정형 C의 결정 특성을 가진다.
본 출원의 한 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C는 에틸 아세테이트에서 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D로부터 제조된다.
본원에 기재된 상기 염산은 에틸아세테이트, 클로로포름, 사염화탄소 및 디옥산 중에서 선택된 유기 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트로 선택된 유기 용매에 HCl 기체를 도입함으로써 용액으로 제조된 즉시 사용 가능한 형태일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 상기 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물을 제공하며, 여기서 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형은 결정질 조성물에서 중량 기준으로 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지한다. 상기 결정질 조성물은 화학식 (I)의 화합물의 다른 결정질 또는 비결정질 형태를 소량으로 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 치료 유효량의 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 또는 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다; 상기 약학적 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 다른 부형제를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하기 위한 의약을 제조하는데 있어서, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하는데 있어서, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 치료적 유효량의 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, PARP 수용체-관련 장애를 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 억제제로서의 사용을 위한, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 PARP 수용체-관련 장애의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형, 상기 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물, 또는 상기 기재된 약학적 조성물을 제공한다.
본 출원의 한 실시양태에 있어서, 상기 포유동물은 인간이다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 PARP 수용체-관련 장애는 종양 또는 암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 출원의 한 실시양태에서, 상기 PARP 수용체-관련 장애는 유방암으로부터 선택된다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 하기를 포함하는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형의 제조 방법을 제공한다: 여기서 상기 방법은, 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태를 유기 용매에 가열 및 교반하는 단계, 결정화를 위해 냉각하고 여과하는 단계를 포함한다; 상기 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태는 도 1에 도시된 바와 같은 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴을 갖는다; 상기 결정형의 제조 방법에서, 상기 유기 용매는 아세톤, 테트라하이드로퓨란 및 에틸 아세테이트로 이루어진 군에서 선택되며, 바람직하게는 아세톤이다. 바람직하게 상기 결정형은 결정형 A이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어, 상기 결정형의 제조방법에 있어서 유기 용매 대 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태의 부피 대 몰비는 (2-10)mL:1 mmol 이고, 바람직하게는 (4-6) mL:1 mmol 이다.
본 출원의 한 실시양태에 있어, 상기 결정형의 제조방법에 있어서, 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태는 유기용매 및 염산 존재하에서 화합물 1을 교반하고 결정화한 후 여과하여 제조된다; 상기 유기 용매는 에틸 아세테이트로부터 선택되며; 화합물 1의 구조는 하기와 같다.
Figure pct00005
.
본 출원에서 상기 약학적 조성물은 일정한 제형으로 제형화될 수 있으며, 투여 경로는 경구 투여, 비경구 투여(피하, 근육내 및 정맥내 투여 포함), 직장 투여 등이 바람직하다. 예를 들어, 경구 투여에 적합한 투여 형태는 정제, 캡슐, 과립, 가루약, 알약, 분말, 향정, 시럽 또는 현탁액이고; 비경구 투여에 적합한 투여 형태는 수성 또는 비수성 용액 또는 주사용 에멀젼을 포함하며; 직장 투여에 적합한 제형은 친수성 또는 소수성 담체가 있는 좌약을 포함한다. 상기 기재된 투여 형태는 또한 활성 성분의 신속, 지연 또는 변형 방출을 위해 원하는 대로 제형화될 수 있다.
본원에 개시된 약학적 조성물은 종래의 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 분말화, 유화 및 동결건조와 같은 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
본 출원에 기재된 상기 결정형은 비용매화물 또는 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태로 존재할 수 있다.
본 출원에서, 샘플의 상기 X-선 분말 회절 패턴은 하기 조건 하에서 결정된다: 기기: DX-2700BH X-선 회절계(Dandong Haoyuan Instrument Co., Ltd., China); 표적: Cu:Kα; 파장 λ = 1.54184 ; 2θ 각도 범위: 3-40°; 산란 슬릿: 1 mm; 검출기 슬릿: 0.3 mm; 산란 방지 슬릿: 1 mm; Cu-타겟 튜브 전압 및 전류: 40kV, 30mA.
본 출원에서, 상기 DSC 스펙트럼은 하기 조건 하에서 측정된다: 기기: METTLER TOLEDO DSC1 시차주사열량계; 온도 범위: 40-350 ℃; 가열 속도: 10℃/분.
본 출원에서, 상기 열중량 분석(TGA)은 하기 조건 하에서 수행된다: 기기: TA TGA550 열중량 분석기; 유속: 40 mL/분; 온도 범위: 40-500 ℃; 가열 속도: 10℃/분.
상기 X-선 분말 회절 패턴에서 피크의 위치 및 상대 강도는 측정 장비, 측정 방법/조건 및 기타 요인으로 인해 달라질 수 있음을 유의해야 한다. 특정 결정 형태에 대해서는 피크의 위치에 오차가 있을 수 있으며 2θ의 측정 오차는 ±0.2°이다. 따라서 이러한 오차는 각각의 결정형을 결정할 때 고려되어야 하며, 이 오차 범위 내의 결정형은 본 출원의 범위 내에 있다.
단, 동일한 결정형이라도 DSC 패턴에서 흡열 피크의 위치는 측정 장비, 측정 방법/조건 및 기타 요인에 따라 다를 수 있다. 특정 결정형의 경우 흡열 피크의 위치에 ±5 ℃의 오차가 있을 수 있다. 따라서 이러한 오차는 각각의 결정형을 결정할 때 고려되어야 하며, 이 오차 범위 내의 결정형은 본 출원의 범위 내에 있는 것이다.
또한, 동일한 결정형이라도 TGA 패턴에서 중량 손실 온도의 위치는 측정 장비, 측정 방법/조건 및 기타 요인에 따라 다를 수 있다. 특정 결정형의 경우 중량 손실 온도의 위치는 ±5 ℃의 오차가 있을 수 있다. 따라서 이러한 오차는 각각의 결정 형태를 결정할 때 고려되어야 하며, 이 오차 범위 내의 결정 형태는 본 출원의 범위 내에 있는 것이다.
본원에 개시된 화합물 1은 PARP1-키나제에 대해 강한 억제 활성을 가지며 BRCA1 돌연변이를 갖는 MDA-MB-436 세포에 대해 아주 우수한 항증식 활성을 갖는다. 반면에, 상기 화합물 1은 야생형 BRCA를 갖는 MDA-MB-231 세포에 대해 억제 활성을 갖지 않으며, 이는 본원에 개시된 화합물이 선택성 및 안전성이 우수함을 나타내는 것이다. 본원에 개시된 화합물 1은 또한 폴리 ADP-리보실화에 대해 특정한 억제 효과를 갖는다. 또한, 본원에 개시된 화합물 1은 생체내(in vivo) 대사에서 안정하고 생체이용률이 높아 약동학적 특성이 우수하다. 일반적으로 본원에 개시된 화합물은 활성이 우수하고 합성이 용이할 뿐만 아니라 약동학적 특성도 우수하다.
본원에 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형은 안정한 특성을 갖고, 고습도, 고온 등의 조건 하에서 양호한 안정성을 나타내며, 또한 장기간 시험 조건 하에서도 양호한 안정성을 나타낸다. 본원에 기재된 화학식 (I)의 화합물의 결정형은 제약 활성, 약동학, 생체이용률, 안정성, 순도, 제조 용이성 등의 양태에서 이점을 가지며, 생산, 저장, 운송, 제형 등의 측면에서 의약품의 요구 사항을 충족할 수 있다.
도 1은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D의 XRPD 패턴이다.
도 2는 실시예 2의 방법 I에 의해 제조된 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 XRPD 패턴이다.
도 3은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 DSC 패턴이다.
도 4는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 TGA 패턴이다.
도 5는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 XRPD 패턴이다.
도 6은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 DSC 패턴이다.
도 7은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B의 TGA 패턴이다.
도 8은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 XRPD 패턴이다.
도 9는 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C의 DSC 패턴이다.
도 10은 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 3차원 구조의 타원체 플롯이다.
정의 및 설명
달리 명시되지 않는 한, 여기에서 사용된 다음 용어 및 구문은 다음과 같은 의미를 갖는 것으로 의도된다. 달리 구체적으로 정의되지 않는 한 특정 구 또는 용어는 불확실하거나 불분명한 것으로 간주되어서는 안되며 일반적인 의미에 따라 해석되어야 한다. 상표명을 언급할 때, 이는 해당 상업 제품 또는 활성 성분을 언급하기 위한 것이다.
"포유류"는 인간, 실험실 포유동물 및 가축 애완동물(예를 들어, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼)과 같은 가축 및 야생 포유동물과 같은 비-가축 포유동물을 포함한다.
용어 "약학적 조성물"은 인간과 같은 포유동물에게 생물학적으로 활성인 화합물을 전달하기 위해 당업계에서 일반적으로 인식되는 비히클과 함께 본원에 개시된 화합물의 제형을 지칭한다. 상기 비히클은 사용을 위한 모든 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 상기 약학적 조성물은 유기체에 대한 상기 화합물의 투여를 쉽게 한다.
용어 "치료적 유효량"은 원하는 효과를 제공하기에 충분하고 독성이 없는 약물 또는 제제의 양을 말한다. 유효량의 결정은 사람마다 다르다. 이는 사용된 특정 활성 물질뿐만 아니라 피험자의 연령 및 일반적인 상태에 따라 다르다. 각 케이스에서 적절한 유효량은 통상의 시험에 비추어 당업자에 의해 결정될 수 있다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 하기를 포함하는 질병 또는 질병과 관련된 하나 이상의 증상을 개선 또는 제거하기 위해 본원에 기술된 화합물 또는 제형을 투여하는 것을 의미한다:
(i) 질병 또는 질병 상태를 억제하는 것, 즉 그 발달을 저지하는 것; 그리고
(ii) 질병 또는 질병 상태의 완화, 즉 퇴행 유발.
용어 "예방하다" 또는 "예방"은 질병 또는 질병과 관련된 하나 이상의 증상을 예방하기 위해 본원에 기술된 화합물 또는 제형을 투여하는 것을 의미하며, 포유동물에서 질병 또는 질병 상태의 발생을 예방하는 것을 포함하며, 특히 그러한 경우 포유동물은 질병 상태에 걸리기 쉽지만 아직 진단되지 않은 상태이다.
본 출원에서 "약학적으로 허용되는 담체"라 함은 활성 성분과 함께 투여되는 담체로서, 생물체에 현저한 자극을 주지 않거나 활성 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 손상시키지 않는 담체를 의미한다. 담체에 대한 추가 정보는 본원에 참조로 포함된 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins(2005)를 참조할 수 있다.
본 출원에서 용어 "상온"은 20℃ 내지 30℃를 의미한다.
본 출원에서 용어 "EtOAc"는 에틸아세테이트를 의미한다.
"포함하다(comprise)"라는 단어 및 "구성하다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)" 또는 등가물과 같은 이의 변형은 개방적이고 비배타적인 의미로 해석되어야 한다. 나열된 요소, 구성 요소 및 절차, 기타 지정되지 않은 요소, 구성 요소 및 절차도 포함될 수 있다.
본 명세서에서 명확하게 달리 명시되지 않는 한, 단수 용어는 복수 용어를 포함하며 그 역도 마찬가지이다.
본 명세서에서 달리 명시하지 않는 한, 파라미터 값(2θ 값, 반응 조건 포함)은 그 값에 존재하는 측정 오차 등을 반영하기 위해 "약"이라는 용어로 수식된 것으로 해석되어야 하며, 예를 들어 주어진 값에 비해 ±5%의 오차가 있다.
모든 특허, 특허 출원 및 기타 확인된 간행물은 설명 및 개시 목적을 위해 참조로 여기에 명시적으로 포함된다. 이러한 간행물은 본 출원의 출원일 이전에 공개되었기 때문에 제공된다. 이 문서의 날짜에 관한 모든 진술 또는 이 문서의 내용에 대한 설명은 신청자가 사용할 수 있는 정보를 기반으로 하며 날짜 또는 이 문서의 내용의 정확성에 대한 승인을 구성하지 않는다. 더욱이, 모든 국가 또는 지역에서, 여기에서 이들 간행물에 대한 언급은 간행물이 당업계에서 일반적으로 인정되는 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
상세 설명
본 출원은 아래에서 실시예를 통해 상세히 설명된다. 그러나 이는 본 출원의 범위를 불리하게 제한하는 것은 결코 아니다. 본원에 개시된 화합물은 하기 열거된 특정 실시양태, 이들과 다른 화학적 합성 방법의 조합에 의해 형성된 실시양태 및 당업자에게 공지된 그의 등가물을 포함하는, 당업자에게 널리 공지된 다양한 합성 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 바람직한 실시예는 본 출원의 예를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 본 출원의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 특정 실시예에 대해 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 자명할 것이다.
실시예 1. 화합물 1의 제조
Figure pct00006
Figure pct00007
단계 A: 1-1(25g, 129.42mmol)을 디클로로메탄(250mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(26.19g, 258.83mmol), 4-디메틸아미노피리딘(3.16g, 25.88mmol), 디-tert- 부틸 디카보네이트(31.07g, 142.36mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 시스템을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템을 포화 염화암모늄 수용액(80mL×3) 및 포화 식염수(50mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-2를 얻었다.
단계 B: 디이소프로필아민(13.80g, 136.38mmol)을 테트라히드로푸란(60mL)에 용해시키고, n- 부틸리튬(2.5M, 47.73mL)을 질소 대기 하 -78℃에서 반응 시스템에 적가하였다. 적가는 30분 이내에 완료되었다. 반응 용액을 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 1-2(25g, 285.14mmol) 및 트리이소프로필 보레이트(24.05g, 127.86mmol)의 테트라하이드로퓨란 용액(200 mL)이 들어 있는 또 다른 3구 플라스크에 질소 대기 하 0℃에서 적가하였다. 적가는 0 ℃에서 빠르게 완료되었다. 반응 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 아세트산 용액(50mL)을 반응 시스템에 첨가하여 반응을 종결시켰다. 생성된 용액을 물(60mL)로 희석하고 에틸아세테이트(60mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염화암모늄 수용액(50mL × 3) 및 포화 염수(40mL × 2)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 조 생성물을 얻었다. 상기 조 생성물을 아세토니트릴(100mL) 및 수용액(300mL)으로 슬러리화하고, 필터 케이크를 오일 펌프로 건조시켜 1-3을 얻었다.
단계 C: 1-3(45g, 133.49mmol)을 트리플루오로아세트산(200mL) 용액에 0℃에서 세 부분으로 나누어 첨가하고, 반응 시스템을 질소 대기 하 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 얼음물(300 mL)에 부어 고체를 침전시키고 필터 케이크를 얻은 후 오일 펌프로 감압 농축하여 1-4를 얻었다.
단계 D: 1-5(25g, 105.98mmol)를 테트라하이드로퓨란(100.00mL)에 녹이고 생성된 혼합물을 질소 대기 하 70℃에서 마그네슘 칩(2.58g, 105.98mmol) 및 요오드(489.05mg, 1.93μmol)를 함유하는 3 구 플라스크에 적가하였다. 적가는 30분 이내에 완료되었다. 반응 용액을 70℃에서 1시간 동안 교반한 후, 20℃로 냉각시켰다. 반응 용액을 질소 대기 하 -70℃에서 테트라히드로푸란(150mL) 중 tert-부틸 2-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트(17.84g, 96.34mmol)의 용액을 함유하는 또 다른 3구 플라스크에 적가하였다. 적가는 30분 이내에 완료되었다. 반응 용액을 -70℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 10℃로 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 수용액(60mL)을 반응 시스템에 첨가하여 반응을 종결시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 1-6을 얻었다.
단계 E: 1-6(50g, 146.10mmol)을 0℃에서 트리플루오로아세트산(250mL)에 첨가하였다. 이 반응 시스템을 15℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 용액을 40% 수산화나트륨 수용액으로 pH 14로 조절하자 노란색 고체가 침전되었다. 생성된 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 소량의 물로 세척하고 회전 증발시켜 1-7을 얻었다.
단계 F: 1-7(15g, 66.94mmol)을 테트라히드로푸란(150mL)에 용해시켰다. 이 반응 시스템을 질소 대기 하에서 -78℃로 냉각하고, 상기 반응 시스템에 삼불화 붕소 디에틸 에테레이트(19g, 133.87mmol)를 적가하였다. 적가는 30분 이내에 완료되었다. 상기 반응 시스템을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템에 메틸리튬 용액(1.6M, 83.67mL)을 적가하였다. 반응 시스템을 천천히 78℃로 가온하고 19.5 시간 동안 교반하였다. 반응 시스템을 실온으로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(100 mL)을 첨가하여 반응을 종결하였다. 이어서 물(30mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 에틸아세테이트(80mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염수(30 mL × 2)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-8을 얻었다.
단계 G: 1-8(16g, 66.63mmol)을 디클로로메탄(150mL)에 용해시키고 트리에틸아민(20.23g, 199.88mmol)을 0℃에서 첨가한 후 디-tert-부틸 디카보네이트(29.08g, 133.26mmol)를 첨가하였다. 이 반응 시스템을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템을 감압 하에서 회전 증발에 의해 농축 건조시켰다. 포화 염화암모늄 수용액(60 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 에틸아세테이트(80 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염수(30 mL × 3)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-9를 얻었다.
단계 H: 1-9(9g, 26.45mmol) 및 1-4(7.52g, 31.74mmol)를 에틸렌 글리콜 디메틸 에테르(100mL) 및 물(20mL)에 용해시키고, 중탄산나트륨(6.67g, 79.35mmol) 및 [1,1-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센]팔라듐 디클로라이드(1.72g, 2.65mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 시스템을 질소로 3회 퍼징하고 질소 대기 하, 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 이 반응 시스템을 감압에서 회전 증발에 의해 농축 건조시켰다. 포화 염수(60mL)를 첨가하고 생성된 혼합물을 에틸아세테이트(60mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염수(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 1-10을 얻었다.
단계 I: 옥살릴 클로라이드(5.61g, 44.20mmol)를 디클로로메탄(150mL)에 첨가하고, N,N-디메틸포름아미드(4.85g, 66.30mmol)를 질소 대기 하, 0℃에서 천천히 적가하였다. 이 반응 시스템을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 1-10(10g, 22.10mmol)을 디클로로메탄(50mL)에 용해시키고 0℃에서 반응 시스템에 첨가하였다. 반응 시스템을 15℃에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템에 10% 아세트산 암모늄 수용액(100mL)과 테트라히드로푸란(100mL)을 첨가하여 반응을 정지시키고, 생성된 혼합물을 에틸아세테이트(45mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염화암모늄 수용액(50mL × 3) 및 포화 염수(50mL × 3)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-11을 얻었다.
단계 J: 1-11(10.62g, 22.10mmol)을 디클로로메탄(80mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(6.71g, 66.30mmol), 디-tert-부틸 디카보네이트(9.65g, 44.20mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘(810.01mg, 6.63mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 이 반응 시스템을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템을 감압 하에서 회전 증발에 의해 농축 건조시켰다. 포화 염화암모늄 수용액(60 mL)을 첨가하고 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(60 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염수(30 mL × 3)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-12를 얻었다.
단계 K: 1-12(12.75g, 21.96mmol)를 테트라히드로푸란(100mL) 및 메탄올(25mL)에 용해시켰다. 이 반응 시스템을 0℃로 냉각하고 수소화붕소나트륨(1.25g, 32.94mmol)을 첨가했다. 반응 시스템을 0℃에서 40분 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 수용액(80mL)을 상기 반응 시스템에 첨가하여 반응을 종결하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(80 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 물(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-13을 얻었다.
단계 L: 1-13(12.79g, 21.95mmol)을 디클로로메탄(150mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(4.44g, 43.90mmol)을 첨가한 후, 질소 대기 하, 0℃에서 메탄설포닐 클로라이드(3.02g, 26.34mmol)를 첨가하였다. 이 반응 시스템을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템을 감압 하에서 회전 증발에 의해 농축 건조시키고 에틸 아세테이트(80mL)를 첨가하였다. 유기상을 포화 염화암모늄 수용액(30mL × 2) 및 포화 염수(20mL × 2)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 1-14를 얻었다.
단계 M: 1-14(14.45g, 21.87mmol)를 N,N- 디메틸포름아미드(150mL)에 용해시키고, 탄산나트륨(4.64g, 43.74mmol) 및 N-히드록시프탈이미드(5.35g, 32.80mmol)를 첨가하였다. 이 반응 시스템을 65℃에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 반응 시스템에 수용액(60mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 에틸아세테이트(80mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 포화 염화암모늄 수용액(50 mL × 3) 및 포화 염수(50 mL × 3)로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조하고 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 1-15를 얻었다.
단계 N: 1-15(15g, 20.61mmol)를 메탄올(200mL)에 용해시키고, 98% 히드라진 수화물(3.10g, 61.83mmol)을 첨가하였다. 이 반응 시스템을 질소 대기 하에서 2시간 동안 65℃에서 교반하였다. 상기 반응 시스템을 여과하고, 여액을 감압 농축하여 잔류물을 얻었다. 상기 잔류물을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여 1-16을 얻었다.
단계 O: 화합물 1-16을 키랄 HPLC 컬럼(분리 컬럼 AD-H(250mm × 30mm, 5μm); 이동상: 이소프로판올 중 0.1% 암모니아; 용출 구배 25%-25%, 2.7분; 400분)으로 분리하여 1_AA(체류 시간 = 2.161분, ee(거울상 초과량, enantiomeric excess) 값: 100%) 및 1_BB(체류 시간 = 2.353분, ee(거울상 초과량) 값: 97%)을 얻었다.
ee(거울상 초과량) 값 측정 방법: 분석 컬럼: Amycoat 50mm × 4.6mm I.D., 3μm; 이동상: CO2 중 10%-20% 이소프로판올(0.05% 디에틸아민); 유속: 3mL/분; 파장: 220nm.
단계 P: 1_AA를 트리플루오로아세트산으로 탈보호하여 화합물 1을 얻었다(시간 = 3.461분, ee(거울상체 초과) 값: 98%).
ee(거울상체 과잉) 값의 측정 방법: 분리 컬럼: Chiralcel Cellucoat 50mm × 4.6mm I.D., 3μm; 이동상: CO2 중 10%-40% 이소프로판올(0.05% 디에틸아민); 유속: 3mL/분; 파장: 220nm.
화합물 1: 1 H NMR(400 MHz, 중수소화 디메틸 설폭사이드) δ = 12.00(br s, 1H), 11.30(br s, 1H), 8.23(br s, 1H), 7.62(br d, J = 7.75 Hz, 4H), 7.45(br d, J = 9.13Hz, 2H), 5.44(br d, J = 14.51Hz, 1H), 5.14-5.31(m, 1H), 2.99-3.42(m, 2H), 1.89-2.23(m, 4H), 1.53(br s, 3H).
실시예 2. 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A, B, C 및 D의 제조
Figure pct00008
결정형 D의 제조:
단계 1: HCl 기체를 -40 내지 -20℃에서 EtOAc(100mL)에 도입하여 HCl/EtOAc(에틸 아세테이트 중 염화수소, 7mol, 100mL) 용액을 제조하였다.
단계 2: 화합물 1_AA(10g, 17.68mmol)를 -20 내지 -10℃에서 상기 용액에 조금씩 첨가하였다. 첨가 후 차가운 수조를 제거하였다. 반응 용액을 자연적으로 약 20℃로 가온하고 3시간 동안 교반하였다. 다량의 고체가 침전되었다.
단계 3: 혼합물을 여과하고 에틸아세테이트(30mL × 3)로 3회 세척하였다. 고체를 수집하고 오븐에서 16시간 동안 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 D를 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 12.15(br s, 1H), 11.30(s, 1H), 10.45(br s, 1H), 9.29(br s, 1H), 7.61-7.75(m, 4H), 7.39-7.51(m, 2H), 5.45(br d, J = 14.79Hz, 1H), 5.23(br dd, J = 7.40, 14.73Hz, 1H), 3.29-3.36(m, 2H), 2.34-2.45(m, 1H), 2.14-2.30(m, 2H), 2.05(br d, J = 4.16Hz, 1H), 1.60(s, 3H).
결정형 A의 제조:
방법 I:
화학식 (I)의 화합물의 결정형 D(1g, 2.49mmol)를 아세톤 10mL에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류에서 16시간 동안 교반하고, 약 30℃로 냉각하고 여과하였다. 고체를 수집하고 35-40℃에서 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A를 얻었다.
1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ=12.24-12.06(m, 1H), 11.41-11.22(m, 1H), 10.39(br s, 1H), 9.50-8.97(m, 1H), 7.79-7.59(m, 4H), 7.55-7.33(m, 2H), 5.56-5.37(m, 1H), 5.31-5.15(m, 1H), 3.50-3.42(m, 1H), 3.36-3.29(m, 1H), 2.45-2.34(m, 1H), 2.15(br s, 2H), 2.14-2.01(m, 1H), 1.61(s, 3H).
방법 II:
화학식 (I)의 화합물 D 결정형(200mg, 0.50mmol)을 에틸 아세테이트 2mL에 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 48시간 동안 교반한 후 여과하였다. 고체를 수집하고 35-40℃에서 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A를 얻었다.
방법 III:
화학식 (I)의 화합물 D 결정형(200mg, 0.50mmol)을 테트라하이드로퓨란 2mL에 첨가하고 40℃에서 48시간 동안 교반한 후 여과하였다. 고체를 수집하고 35-40℃에서 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A를 얻었다.
결정형 B의 제조:
화학식 (I)의 화합물의 결정형 D(1g, 2.49mmol)를 아세토니트릴 10mL에 첨가하고, 생성된 혼합물을 16시간 동안 환류에서 교반하고, 약 30℃로 냉각하고 여과하였다. 고체를 수집하고 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 B를 얻었다.
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ= 12.14(d, J = 3.1Hz, 1H), 11.30(s, 1H), 10.47(br s, 1H), 9.27(br d, J = 9.5Hz, 1H), 7.76-7.60(m, 4H), 7.45(dt, J = 2.3, 9.5Hz, 2H), 5.56-5.38(m, 1H), 5.22(dd, J = 7.9, 14.8Hz, 1H), 3.49-3.40(m, 1H), 3.34(br d, J = 7.0Hz, 1H), 2.38(br d, J = 8.0Hz, 1H), 2.29-2.13(m, 2H), 2.08(s, 1H), 2.07(s, 1H), 2.07-1.99(m, 1H), 1.59(s, 3H).
결정형 C의 제조:
화학식 (I)의 화합물 D 결정형(10g, 2.49mmol)을 에틸 아세테이트 40mL에 첨가한 후, 포화 NaHCO3 용액(15mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고, 상을 분리하였다. 고체를 건조시킨 다음 적합한 반응 플라스크에 첨가하고 -20℃로 냉각시켰다. 이어서, 에틸 아세테이트 중 염화수소(0.5 M, 4.23 mL, 0.85 당량)를 천천히 적가하였다. 적가 후, 반응 혼합물은 상온으로 자연 냉각하고 2.5시간 동안 반응시킨 후 여과하였다. 고체를 수집하고 건조하여 화학식 (I)의 화합물의 결정형 C를 얻었다.
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 12.11-12.19(m, 1H), 11.30(s, 1H), 10.41(brs, 1H), 9.20-9.35(m, 1H), 7.63-7.72(m, 4H), 7.42-7.50(m, 2H), 5.45(br d, J=15.28Hz, 1H), 5.23(dd, J=7.15, 14.86Hz, 1H), 3.44-3.66(m, 1H), 3.31-3.36(m, 1H), 2.33-2.45(m, 1H), 2.14-2.29(m, 2H), 2.00-2.11(m, 1H), 1.60(s, 3H).
실험예 1. 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A 및 결정형 B의 안정성 시험
1. 예비 안정성 시험
시험 조건: 결정형 A와 결정형 B의 안정성을 60℃, 습도 75%에서 동시에 조사하였다. 결과는 다음과 같다.
Figure pct00009
2. 가속 테스트
시험 조건: 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 샘플을 이중층 약학적 저밀도 폴리에틸렌 백으로 포장하였다. 약학적 저밀도 폴리에틸렌 백의 각 층을 밀봉한 다음, 상기 백을 알루미늄 호일 백에 넣고 알루미늄 호일 백을 열 밀봉하였다. 가속 테스트는 40℃± 2℃ 및 75 ± 5% 상대습도(RH)에서 수행되었다. 결과는 다음과 같다.
Figure pct00010
결론: 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A 및 결정형 B는 우수한 안정성을 갖는다.
실험예 2. PARP-1 효소 분석
재료: 테스트 화합물; HT Universal Chemiluminescent PARP 분석 키트(TREVIGEN에서 구입); PBS(인산염 완충 식염수, Wisent에서 구입); Triton X-100(Macklin에서 구입); 인비전 다중 모드 플레이트 판독기(Envision Multimode Plate Reader, PerkinElmer).
HT Universal Chemiluminescent PARP 분석 키트의 구성
Figure pct00011
절차:
(I) 시약 준비:
1. 세척액: Triton X-100을 Triton X-100의 최종 농도가 0.1%가 되도록 1X PBS에 첨가하였다.
2. 1X PARP 완충액: 키트의 20X PARP 완충액을 물로 20배 희석하여 화합물, 효소 용액 및 기질 용액을 준비하는 데 사용되는 1X PARP 완충액을 준비하였다.
3. 1X Strep-희석 용액: 키트의 10X Strep-희석 용액을 물로 10배 희석하여 1X Strep-희석 용액을 준비하였다.
(II) 테스트 화합물의 제조:
테스트 화합물을 200μM 내지 2.56nM로 희석하였다. DMSO 농도는 100%였다. 다양한 농도 구배의 각 억제제 2μL를 화합물 중간체 플레이트에 첨가한 다음 38μL의 1X PARP 완충액을 첨가하였다. 두 가지를 잘 혼합하여 사용하였으며, 이때의 DMSO 농도는 5%였다.
(III) 절차:
a) 1X PARP 완충액을 웰당 50 μL로 테스트 플레이트에 첨가하고, 테스트 플레이트를 25℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
b) 인큐베이션이 완료된 후 테스트 플레이트의 액체를 버리고, 다양한 농도 구배의 각 화합물을 화합물 중간체 플레이트에서 피펫팅하여 웰당 10μL로 테스트 플레이트에 첨가하였다. 샘플은 반복되었다.
c) 효소 용액(0.5 IU)을 웰당 15 μL로 테스트 플레이트에 첨가하였다. 상기 화합물과 효소를 25℃에서 10분 동안 함께 배양하였다.
d) 인큐베이션이 완료된 후, 25 μL의 1X PARP 칵테일(2.5 μL의 10X PARP 칵테일, 2.5 μL의 10X 활성화된 DNA 및 20 μL의 1X PARP 완충액으로 구성됨)을 테스트 플레이트의 각 웰에 첨가하였다. 상기 테스트 플레이트를 25℃에서 1시간 동안 배양하였다. 화합물의 최종 농도는 2 μM 내지 0.0256 nM이었고, DMSO 농도는 1%였다.
e) 인큐베이션이 완료된 후, 테스트 플레이트를 웰당 200μL의 세척액으로 2회 세척한 후 웰당 200μL의 PBS로 2회 세척하였다.
f) 키트의 Strep-HRP는 1X Strep-희석 용액으로 500배 희석되었다. 생성된 용액을 웰당 50 μL로 테스트 플레이트에 첨가하고, 테스트 플레이트를 25℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다.
g) 인큐베이션이 완료된 후, 테스트 플레이트를 웰당 200μL의 세척액으로 2회 세척한 후 웰당 200μL의 PBS로 2회 세척하였다.
퍼옥시글로우 A와 B를 1:1의 비율로 혼합한 후 혼합액을 웰당 100μL씩 테스트 플레이트에 첨가하였다. 화학발광은 0.5초의 통합 시간으로 PerkinElmer 인비전 다중 모드 플레이트 판독기를 사용하여 즉시 판독되었다.
데이터 분석: (시료 - 최소)/(최대 - 최소) × 100% 방정식을 사용하여 원래 데이터를 억제율로 변환한 다음, IC50 값을 4-파라미터 방법(그래프패드 프리즘의“log(억제제) vs. 반응-변수 기울기" 모델에서 얻음)을 사용하여 곡선에 피팅하였다. 표 4는 PARP1에 대한 본원에 개시된 화합물 1의 효소 억제 활성을 나타낸다.
결과:
본원에 개시된 화합물 1의 PARP-1 키나제 억제 활성을 상기 방법으로 측정하였고, 얻어진 화합물 1의 in vitro 효소 억제 활성(IC 50 )을 표 4에 나타내었다.
화합물 1의 PARP-1 효소 활성
테스트 화합물 PARP1(IC 50 , nM)
화합물 1 2.3
결론: 화합물 1은 PARP1에 대해 우수한 억제 활성을 나타낸다.
실험예 3. MDA-MB-436 CTG 세포에 대한 항증식 연구
재료: 테스트 화합물; RPMI-1640 배지; 태아 소 혈청; 페니실린/스트렙토마이신 항생제; MDA-MB-436 세포; 인비전 다중 모드 플레이트 판독기(PerkinElmer)
방법론:
1. 절차:
MDA-MB-436 세포를 흰색 96-웰 플레이트의 각 웰에 80 μL의 세포 현탁액(3000 MDA-MB-436 세포 함유)을 첨가하여 시딩하였다. 이 세포 플레이트를 CO2 인큐베이터에서 밤새 배양하였다.
상기 테스트 화합물은 두 반복하여, 8번째 농도 즉 2mM에서 26nM까지 연속으로 5배 희석하였다. 78 μL의 배지를 중간체 플레이트에 첨가하고, 연속 희석된 화합물을 웰당 2 μL씩 중간체 플레이트로 옮겼다. 잘 혼합한 후, 혼합물을 웰당 20 μL씩 세포 플레이트로 옮겼다. 이 세포 플레이트를 CO2 인큐베이터에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 화합물 첨가 당일 시그널 값을 판독하기 위해 별도의 셀 플레이트를 제공하였고, 이러한 시그널 값을 데이터 분석에서 Max 값으로 사용하였다. Promega CellTiter-Glo를 웰당 25μL로 세포 플레이트에 첨가하고 발광 신호를 실온에서 10분 동안 배양하여 안정화하였다. 판독은 PerkinElmer 인비전 다중 모드 플레이트 판독기를 사용하여 수행하였다.
Promega CellTiter-Glo를 웰당 25μL로 세포 플레이트에 첨가하고 발광 신호를 실온에서 10분 동안 배양하여 안정화하였다. 판독은 PerkinElmer 인비전 다중 모드 플레이트 판독기를 사용하여 수행하였다.
2. 데이터 분석: (시료 - 최소)/(최대 - 최소) × 100% 방정식을 사용하여 원래 데이터를 억제율로 변환한 다음 IC50 값을 4-파라미터 방법(그래프패드 프리즘의“log(억제제) vs. 반응- 변수 기울기" 모델에서 얻음)을 사용하여 곡선에 피팅하였다. 표 5는 MDA-MB-436 세포 증식에 대한 본원에 개시된 화합물의 억제 활성을 예시한다.
결과: 시험관내 증식에 대한 화합물 1 및 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 표 5에 나타내었다.
MDA-MB-436 세포 증식에 대한 화합물 1 및 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A의 억제 활성
화합물 MDA-MB-436
(IC 50 , nM) 		화합물 MDA-MB-436
(IC 50 , nM)
화합물 1 12.3 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A 8.4
결론: 화합물 1과 화학식 (I)의 화합물 A의 결정형은 BRCA1 돌연변이가 있는 MDA-MB-436 세포에 대해 우수한 항증식 활성을 가지며, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A는 BRCA1 돌연변이가 있는 MDA-MB-436 세포에 대한 현저한 항증식 활성을 나타낸다.
실험예 4. MDA-MB-231 CTG 세포의 항증식 연구
재료: 테스트 화합물; R DMEM 배지; 태아 소 혈청; 페니실린/스트렙토마이신 항생제; MDA-MB-231 세포; 인비전 다중 모드 플레이트 판독기.
절차 :
MDA-MB-231 세포를 각 웰에 80 μL의 세포 현탁액(5000 MDA-MB-231 세포 함유)을 첨가하여 흰색 96-웰 플레이트에 시딩하였다. 세포 플레이트를 CO2 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다.
각 화합물에 대해 8개의 농도가 설정되었다. 상기 테스트 화합물을 멀티채널 피펫을 사용하여 8 번째 농도, 즉 2mM에서 920Nm 까지 두 반복하여 연속 3배 희석하였다. 78 μL의 배지를 중간체 플레이트에 첨가하고, 연속 희석된 화합물을 웰당 2 μL로 중간체 플레이트로 옮겼다. 잘 혼합한 후, 혼합물을 웰당 20 μL씩 세포 플레이트로 옮겼다. 세포 플레이트를 CO2 인큐베이터에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 화합물 첨가 당일 시그널 값을 판독하기 위해 별도의 세포 플레이트를 제공하였고, 이러한 시그널 값을 데이터 분석에서 Max 값으로 사용하였다. Promega CellTiter-Glo를 웰당 25μL로 세포 플레이트에 첨가하고 발광 신호를 실온에서 10분 동안 배양하여 안정화하였다. PerkinElmer Envision Multimode Plate Reader를 사용하여 판독하였다.
Promega CellTiter-Glo를 웰당 25μL로 세포 플레이트에 첨가하고 발광 신호를 실온에서 10분 동안 배양하여 안정화하였다. PerkinElmer 인비전 다중 모드 플레이트 판독기를 사용하여 판독하였다.
데이터 분석: (시료 - 최소)/(최대 - 최소) × 100% 방정식을 사용하여 원래 데이터를 억제율로 변환한 다음 IC50 값을 4-파라미터 방법(그래프패드 프리즘에서 " log(억제제) vs. 반응- 변수 기울기" 모델에서 얻음)을 사용하여 곡선에 피팅하였다. 표 6은 MDA-MB-231 세포 증식에 대한 본원에 개시된 화합물의 억제 활성을 예시한다.
결과: 야생형 BRCA를 갖는 MDA-MB-231 세포에 대한 화합물 1의 항증식 활성을 상기 방법으로 결정하였고, 시험관내 증식에 대한 화합물 1의 최대 억제 농도의 절반(IC 50 )을 표 6에 나타내었다.
야생형 BRCA에 대한 화합물 1의 항증식 활성
화합물 MDA-MB-231(IC 50 , μM)
화합물 1 > 10
결론: 화합물 1은 야생형 BRCA가 있는 MDA-MB-231 세포에 대한 억제 활성이 거의 없어 화합물 1의 선택성이 우수함을 시사한다.
실험예 5. PARylation에 대한 항증식 연구
실험 재료: 테스트 화합물, F12K 배지, Lovo 세포, Anti-Poly(ADP-ribose) 마우스 단일클론 항체; FITC-표지 염소 항마우스 IgG; 과산화수소; DAPI; PBS; 메탄올; 아세톤; Tween-20; 탈지분유; 인비전 다중 모드 플레이트 판독기.
시약 준비:
1 일차: Lovo 세포를 플레이트에 60,000개 세포/웰로 시딩한 다음 37℃/5% CO2에서 밤새 배양하였다.
2 일차: 시약을 준비하였다:
1. 세척액: Tween-20을 1X PBS에 첨가하였고, Tween-20의 최종 농도는 0.05%였다.
2. 차단액(Blocking solution): 세척액에 탈지분유를 첨가하여 탈지분유의 최종농도를 5%로 하였다.
3. 세포 고정화 용액: 메탄올과 아세톤을 7:3의 비율로 혼합하였다.
테스트 화합물의 제조: 화합물 중간체 플레이트 1: 화합물을 DMSO 및 PBS로 10 μM 내지 0.13 nM의 최종 농도로 희석하였고, DMSO의 농도는 1%였다; 화합물 중간체 플레이트 2: 화합물을 DMSO 및 50mM 과산화수소를 포함하는 PBS로 최종 농도가 10μM 내지 0.13nM이 되도록 희석하였고, DMSO의 농도는 1%였다.
절차:
1. 세포 상등액을 제거하고, 화합물을 화합물 중간체 플레이트 1에서 웰당 40 μL씩 세포 플레이트로 옮기고 세포 플레이트를 37℃에서 30분 동안 배양하였다.
화합물 웰: 화합물, DMSO 1%;
음성 및 양성 대조군: 1% DMSO 첨가;
블랭크 컨트롤: 무세포 웰, PBS 추가.
2. 배양이 완료된 후 화합물을 화합물 중간체 플레이트 2에서 웰당 40 μL씩 세포 플레이트로 옮겼으며, H2O2의 최종 농도는 25 mM이었다.
화합물 웰: 화합물 + 25mM H2O2
양성 및 음성 대조군: 1% DMSO + 25mM H2O2
블랭크 컨트롤: 무세포 웰, PBS 추가
4. 배양이 완료된 후, 세포 플레이트를 얼음 위에서 미리 냉각시킨 PBS로 1회 세척하고 미리 냉각시킨 세포 고정화 용액을 웰당 100 μL씩 첨가하였다. 세포 플레이트를 -20℃에서 10분 동안 방치한 후 세포 고정화 용액을 버렸다.
5. 송풍 건조 후 세포 플레이트를 웰당 200 μL의 PBS로 세척한 후 PBS를 버렸다.
6. 차단액을 웰당 100 μL로 세포 플레이트에 첨가하고 세포 플레이트를 25℃에서 30분 동안 인큐베이션한 후 차단 용액을 버렸다.
7. 차단액에 1:50의 비율로 희석된 항-PAR 항체를 세포 플레이트에 웰당 25 μL씩 첨가한 후 세포 플레이트를 25℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다.
음성 대조군 웰: 25 μL/웰로 첨가된 차단액
블랭크 대조군 웰: 25 μL/웰로 첨가된 차단액
8. 인큐베이션이 끝난 후 세포 플레이트를 세척액으로 웰당 200 μL씩 3분씩 4회 세척하였다. 그런 다음 세척액을 버렸다.
9. 1:50으로 희석된 FITC-접합된 염소 항-마우스 IgG 및 0.5 μg/mL DAPI를 함유하는 차단액을 웰당 25 μL로 세포 플레이트에 첨가한 다음, 세포 플레이트를 25℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다.
10. 인큐베이션이 끝난 후 세포 플레이트를 세척액으로 웰당 200 μL씩 3분씩 4회 세척하였다.
11. 상기 액체를 제거한 후 Envision으로 해당 형광 값을 읽었다: FITC: 480nm 및 530nm; DAPI: 360nm 및 460nm.
데이터 분석: 원래 데이터는 방정식 (FITC - 음성 대조군)/(DAPI - 블랭크 대조군)을 사용하여 정규화되었고, 정규화된 데이터는 방정식 (샘플 - 양성 대조군)/(음성 대조군 - 양성 대조군) × 100%을 사용하여 억제율로 변환되었다. IC50 값은 4-파라미터 방법(GraphPad Prism에서 "log(억제제) vs. 반응- 변수 기울기" 모델로부터 얻음)을 사용하여 곡선에 피팅되었다. 표 7은 본원에 개시된 화합물의 억제 활성을 예시한다.
결과: PARrylation에 대한 화합물 1의 최대 억제 농도의 절반(IC50)을 표 7에 나타내었다.
PARrylation에 대한 화합물 1의 억제 활성
테스트 화합물 PARrylation (IC 50 , nM)
화합물 1 19
결론: 화합물 1은 파릴화(PARrylation)에 대해 상당한 억제 활성을 갖는다.
실험예 6. 혈장 내 단백질 결합률 연구
인간, CD-1 마우스 및 SD 래트의 혈장에서 본원에 개시된 화합물의 단백질 결합률을 측정하였다. 796 μL의 블랭크 혈장을 인간, CD-1 마우스 또는 SD 랫트로부터 채취하고, 4 μL의 테스트 화합물 워킹 용액(400 μM) 또는 와파린 워킹 용액(400 μM)을 첨가하여 혈장 샘플에서 테스트 화합물 및 와파린 둘 모두의 최종 농도가 2 μM이 되도록 하였다. 샘플을 잘 혼합하였다. 유기상 DMSO의 최종 농도는 0.5%였고; 50 μL의 테스트 화합물 및 와파린 혈장 샘플을 샘플 수용 플레이트(3 반복)로 피펫팅하고, 각 샘플 웰의 최종 부피가 100 μL가 되도록 해당 부피의 블랭크 혈장 또는 완충액을 즉시 첨가하였다. 혈장 대 투석 완충액의 부피비는 1:1 이었다. 400 μL의 정지 용액을 이 샘플에 첨가하여 회수율 및 안정성을 측정하기 위한 T0 샘플로 사용하였다. T0 샘플은 다른 투석 샘플과의 후속 처리를 위해 2-8℃에 보관하였다; 150 μL의 테스트 화합물 및 와파린 혈장 샘플을 각각의 투석 웰의 투여 말단에 첨가하고, 150 μL의 블랭크 투석 완충액을 투석 웰의 상응하는 수용 말단에 첨가하였다. 그런 다음 투석 플레이트를 기체 투과성 막으로 밀봉하고 습한 5% CO2 인큐베이터에 넣고 약 100 rpm으로 진탕하면서 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 투석이 완료된 후, 50μL의 투석된 완충액 시료와 투석된 혈장 시료를 새로운 시료 수용 플레이트에 피펫팅하였다. 각 샘플 웰의 최종 부피가 100μL이고 혈장 대 투석 완충액의 부피 비율이 1:1이 되도록 상응하는 부피의 블랭크 혈장 또는 완충액을 샘플에 첨가하였다. 모든 시료는 단백질 침전 후 LC/MS 분석을 실시하였으며, 단백질 결합율 및 회수율은 다음 공식으로 계산하였다: 단백질 결합 해제율(%) = 100 × 투석막을 통과한 약물 농도/투석액을 통과하지 않은 약물 농도; 단백질 결합률(%) = 100 - 단백질 결합 해제율(%); 회수율(%) = 100 × (투석막을 통과한 약물 농도 + 투석액을 통과하지 않은 약물 농도)/투석 전 총 약물 농도.
결과: 결과를 표 8에 나타내었다.
상이한 종의 혈장에서 화합물 1의 단백질 결합률
테스트 화합물 혈장 내 단백질 결합률
인간 CD-1 마우스 SD 래트
화합물 1 85.1% 89.6% 92.3%
결론: 화합물 1은 적절한 혈장 단백질 결합률을 갖는다.
실험예 7. 사이토크롬 P450 동종효소 억제에 관한 연구
인간 시토크롬 P450 동종효소의 상이한 아형에 대한 테스트 화합물의 억제를 결정하였다. 테스트 화합물, 표준 억제제(최종 농도 100x) 및 혼합 기질 워킹 용액을 제조하였다; -80℃ 냉장고에 얼린 마이크로솜을 꺼내어 해동하였다. 2 μL의 테스트 화합물 및 표준 억제제 용액을 해당 웰에 첨가하고, 2 μL의 상응하는 용매를 비억제제 대조군(NIC) 웰 및 블랭크 대조군(Blank) 웰에 첨가하였다; 그런 다음 블랭크 웰을 제외한 해당 웰에 혼합 기질 용액 20μL를 첨가하였다(블랭크 웰에 PB 20μL 첨가); 인간 간 마이크로솜 용액(사용 후 날짜가 표기되고 즉시 냉장고에 보관됨)을 준비한 다음 모든 웰에 웰당 158μL로 첨가하였다; 샘플 플레이트를 사전 배양을 위해 37℃ 수조에 넣은 다음 조효소인자(NADPH) 용액을 준비하였다; 10분 후, NADPH 용액을 웰당 20 μL로 모든 웰에 첨가하고, 샘플 플레이트를 흔들어 잘 섞은 다음 37℃ 수조에서 10분 동안 인큐베이션하였다; 상응하는 시점에서, 400 μL의 차가운 아세토니트릴 용액(내부 표준: 200 ng/mL 톨부타마이드 및 라베탈롤)을 첨가하여 반응을 중단시켰고; 잘 혼합한 후 샘플 플레이트의 혼합물을 4,000rpm에서 20분 동안 원심분리하여 단백질을 침전시켰다. 상층액 200 μL를 취하여 물 100 μL에 넣고 잘 섞은 후 LC/MS/MS로 분석하였다.
결과: 결과를 표 9에 나타내었다.
결론: 화합물 1은 5가지 CYP 효소에 대한 억제 효과가 없거나 약하다.
시토크롬 P450 동종효소에 대한 화합물 1의 억제 결과
테스트 화합물 IC 50 (μM)
CYP1A2 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP3A4-M
화합물 1 >50 >50 8.33 11.6 32.9
실험예 8. 마이크로솜에서의 대사 안정성
목적: 3 종의 간 마이크로솜에서 테스트 화합물의 대사 안정성을 시험하기 위함.
절차: 1 μM 테스트 화합물 및 마이크로솜(0.5 mg/mL)을 NADPH 재생 시스템의 존재 하에 37℃에서 배양하였다. 양성 대조군은 테스토스테론(3A4 기질), 프로필아민 프로피오페논(2D6 기질) 및 디클로페낙(2C9 기질)이었다. 37℃에서 양성 대조군은 NADPH 재생 시스템이 존재하는 상태에서 마이크로솜(0.5 mg/mL)과 함께 배양하였다. 다양한 시점(0, 5, 10, 20, 30 및 60분)에서 샘플을 내부 표준을 포함하는 차가운 아세토니트릴과 직접 혼합하여 반응을 중단하였다. 상기 화합물 및 마이크로솜을 NADPH 재생 시스템 없이 60분 동안 배양하였다. 각 시점에서 하나의 복제(n = 1)가 설정되었다. 샘플을 LC/MS/MS로 분석하였다; 화합물의 농도는 내부 표준 피크 면적에 대한 분석 물질 피크 면적의 비율로 특성화되었다.
결과: 그 결과를 표 10에 나타내었다.
상이한 종의 간 마이크로좀에서 화합물 1의 안정성
화합물 60분 배양 후 잔류물 농도
인간 래트 마우스
화합물 1 35.9% 31.8% 40.7%
결론: 화합물 1은 래트, 인간 및 마우스의 3종 모두에서 중간 정도의 안정성을 갖는다.
실험예 9. 마우스 단회 투여 약동학 연구
목적: 수컷 C57BL/6 마우스의 약동학 거동을 평가하고 단일 투여 후 혈장, 간 및 뇌척수액에서 상기 화합물의 약물 농도를 결정하고자 함.
절차: 위내 투여를 위해 건강한 성인 수컷 C57BL/6 마우스를 선택하였다. 후보 화합물을 적절한 양의 10% DMSO/90%(20% 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린)와 혼합하고, 볼텍싱하고 초음파 처리하여 나중에 사용할 수 있도록 0.5mg/mL 투명한 용액을 준비하였다. 마우스에 1 mg/kg을 정맥 주사하고 5 mg/kg을 경구 투여한 후, 특정 시점에서 전혈을 채취하였다. 혈장을 분리하고 간과 뇌척수액을 채취하였다. 샘플을 전처리한 후 약물 농도를 LC-MS/MS로 측정하고 약동학 파라미터를 Phoenix WinNonlin 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
결과: 그 결과를 표 11에 나타내었다.
결론: 화합물 1은 마우스에서 양호한 AUC0-last 및 생체이용률을 갖는다.
마우스 및 래트에서 화합물 1의 약동학 연구 결과
약동학 결과
(IV: 1mg/kg PO: 5mg/kg) 		루카파립 화합물 1
클리어런스율(mL/min/kg) 99.9 41.0
분포의 겉보기 부피(L/kg) 13.1 9.44
AUC0-last (정맥 주사, nM.h) 255 958
AUC0-last (경구, nM.h) 145 1186
반감기(h) 1.78 3.02
최대 농도(nM) 24.8 240
생체이용률(%) 14.6 24.8
실험예 10. 피하 인간 유방암 MDA-MB-436 세포 이종이식 종양을 가진 BALB/c 누드 마우스 모델에서 테스트 화합물의 생체내 약력학적 연구
목적: 피하 인간 유방암 MDA-MB-436 세포 이종이식 종양을 갖는 BALB/c 누드 마우스 모델에서 시험 화합물의 생체내 효능을 연구하기 위함.
설계:
화합물 1의 생체내 약력학적 연구의 동물 그룹화 및 투여 요법
그룹 N 1 화합물 투여량
(mg/kg) 		투여 부피 매개변수(μL/g) 2 투여 경로 투여 빈도
1 6 블랭크 -- 10 PO QD × 28일
5 6 화합물 1 12.5 10 PO QD × 28일
6 6 화합물 1 25 10 PO QD × 28일
7 6 화합물 1 50 10 PO QD × 28일
참고: 1. N: 각 그룹의 마우스 수; 2. 투여 부피: 마우스의 체중을 기준으로 10 mL/g. 만약 체중이 15% 이상 감소한 경우라면, 그에 따라 투여 요법을 조정해야 한다. 3. QD: 1일 1회; PO: 경구 투여.재료: 연령 및 체중: 암컷 BALB/c 누드 마우스, 6-8주령, 18-22g. 이 연구는 3~7일 간의 적응 수유 후에 시작되었다. 각 케이지의 동물 정보 카드에는 동물에 대한 다음과 같은 정보가 표시되었다: 숫자, 성별, 계통, 접수 날짜, 요법, 연구 번호, 그룹 및 치료 시작. 모든 케이지, 패딩 및 식수는 사용 전에 멸균되었다. 우리, 사료 및 식수는 일주일에 두 번 새로 교체되었다. 동물은 귀 태그로 식별되었다. 테스트 샘플: 니라파리밴드 및 화합물 1. 모든 테스트 샘플은 비히클로 10% DMSO + 90%(20% HP-β-CD)로 준비되었고, 블랭크 대조군은 비히클 단독으로 투여하였다.
절차:
1. 세포 배양: 인간 유방암 MDA-MB-436 세포(ATCC, Manassas, VA, 카탈로그 No.: HTB-130)는 37℃/5% CO2 인큐베이터에서 10% 태아 소 혈청 및 1% Anti-anti를 포함하는 RPMI-1640 배양 배지에서 시험관내 단층 배양하였다. 세포는 통상적인 관행에 따라 계대 배양을 위해 일주일에 2회 트립신-EDTA로 소화시켰다. 80%-90%의 세포 포화도와 필요한 수에서 세포를 수집, 계수 및 이식하였다.
2. 종양 세포 이식(종양 이식): 0.2mL(1×10 7 세포)의 MDA-MB-436 세포(1:1의 부피비로 마트리겔과 함께)는 각 마우스의 우측 등에 피하 이식하고, 평균 종양 부피가 약 318㎣가 된 후 마우스를 임의로 투여 그룹으로 나누었다.
3. 동물의 일일 관찰: 동물의 건강 및 사망에 대해 매일 모니터링하고 일상적인 검사에는 종양 성장에 대한 영향 관찰 및 행동 활동, 음식 및 물 섭취, 신체 변화, 체중, 외모 또는 기타 비정상적인 상태와 같은 동물의 일상적인 수행에 대한 치료가 포함된다.
4. 종양 측정 및 실험 지표: 실험 지표는 종양 성장이 억제 또는 지연되었는지 또는 종양이 치유되었는지를 조사하기 위한 것이었다. 버니어 캘리퍼스(vernier caliper)를 사용하여 종양 직경을 매주 2회 측정하였다. 종양 부피는 다음 공식을 사용하여 계산되었다: V = 0.5 a × b2, 여기서 a와 b는 각각 종양의 긴 직경과 짧은 직경을 나타낸다. 화합물의 항종양 효능은 TGI(%) 또는 상대 종양 증식률 T/C(%)로 평가하였다. TGI(%)는 종양 성장 억제를 나타낸다. TGI(%)의 계산: TGI(%) = [(1 - (처리군의 투여 종료 시 평균 종양 부피 - 처리군의 투여 시작 시 평균 종양 부피))/(용매 대조군의 치료 종료 시 평균 종양 부피 - 용매 대조군의 치료 시작 시 평균 종양 부피)] × 100%. 상대 종양 증식률 T/C(%)의 계산식은 다음과 같다: T/C(%) = TRTV/CRTV × 100% (TRTV : 처리군의 RTV; CRTV : 음성 대조군의 RTV ). 상대 종양 부피(RTV)는 종양 측정 결과를 기반으로 계산되었다. 계산 공식은 다음과 같다: RTV = Vt/V0, 여기서 V0는 그룹화 및 투여 시 측정된 평균 종양 부피(즉, d0)이고, Vt는 특정 측정에서의 평균 종양 부피이며, TRTV 및 CRTV은 같은 날 얻었다.
5. 통계 분석: 각 그룹의 각 시점에서 종양 부피의 평균 및 평균의 표준 오차(SEM)를 포함한다. 처리군은 연구 종료 시 투여 후 27일째에 가장 우수한 종합 효능을 보였고, 이들 데이터를 바탕으로 통계분석을 실시하여 군간 차이를 평가하였다. 실험 데이터는 one-way ANOVA와 Games-Howell 방법을 사용하여 분석되었다. 모든 데이터는 SPSS 17.0을 사용하여 분석하였다. p<0.05를 유의성으로 정의하였다.
결과:
1. 동물의 체중은 약물의 독성을 간접적으로 측정하기 위한 참고 지표로 사용하였다. 이 모델에서는 연구 중에 다른 이환율이나 사망률이 발생하지 않았다.
2. 테스트 화합물의 효능 평가 지표:
피하 인간 유방암 MDA-MB-436 세포 이종이식 종양 모델에서 테스트 화합물의 항종양 효능 평가 (처리 후 27일째 종양 부피를 기준으로 계산)
그룹 종양 부피 (mm 3 ) a
(27일) 		T/C b
(%) 		TGI b
(%) 		p 값 c
블랭크 1586 ± 267 -- -- --
화합물 1(12.5mg/kg) 377±149 23.79 95.34 0.051
화합물 1(25mg/kg) 132±32 8.31 114.69 0.025
화합물 1(50mg/kg) 91±14 5.76 117.86 0.023
참고: a. 평균 ± SEM. b. 종양 성장 억제는 T/C 및 TGI를 기준으로 계산되었다. c. p 값은 27일째 각 치리군의 종양 부피와 비히클군의 종양 부피 차이의 유의성이다.
결론: 화합물 1의 효능은 각각의 주어진 투여 구배 및 우수한 종양 성장 억제에서 투여량 의존성을 나타낸다. 체중의 변화에서 알 수 있듯이 화합물 1의 세 가지 투여량군의 마우스는 체중의 변화가 거의 없어 내성이 양호함을 나타낸다.
실험예 11. 화학식 (I)의 화합물 결정형 A로부터 제조된 단결정의 단위 셀 파라미터
화학식 (I)의 화합물의 결정형 A로부터 제조된 단결정:
화학식 (I) 화합물의 결정형 A 시료 15mg을 실온에서 에탄올/아세톤/물(2:2:1) 용액 1mL에 녹이고, 시료 용액을 실온에서 느린 증발을 위해 4mL의 반밀봉된 샘플 플라스크 용기에 넣었다. 3일째에 노란색 벌크 결정을 얻었다.
결과:
화학식 (I)의 화합물의 결정형 A로부터 제조된 단결정의 3차원 구조의 타원체 플롯이 도 10에 도시되어 있고, 이는 R 배열에 있다.
실시예 12. 전위차 적정에 의한 화학식 (1)의 화합물의 결정형 A에서 염화이온 함량의 결정
재료: 자동 전위차 적정기, 전자 천칭, 초순수 미터, 질산은 적정제(0.1 mol/L)
절차:
1) 정제수 50mL를 적절한 비이커에 넣고 블랭크로 표시한다.
2) 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A 약 100mg을 정밀하게 칭량하고 적당한 비이커에 첨가하고 정제수 50mL에 용해시켰다. 생성된 용액은 테스트 샘플 용액으로 표시한다.
3) 상기 테스트 샘플 용액과 블랭크 용액을 전위차 적정법(일반 챕터 0701, 중국 약전, 제4권)에 따라 질산은 적정제(0.1 mol/L)로 적정하였다. 1mL의 질산은 적정제(0.1mol/L)은 3.545mg의 염소(Cl)와 같다.
계산:
염화이온 함량(%)
Figure pct00012
상기 계산 공식에서:
F: 역가, 1mL의 질산은 적정제(0.1mol/L)는 3.545mg의 염소(Cl)와 같다.
WSPL : 테스트 샘플의 중량(g);
VSPL : 테스트 샘플 용액에 의해 소비된 질산은 적정제(0.1mol/L)의 부피(mL);
V0 : 블랭크 용액에 의해 소비된 질산은 적정제(0.1 mol/L)의 부피(mL).
결과: 상기 식을 이용하여 계산한 결과 염화이온 함량은 8.7%로 나타났다.
결론: 염화이온 함량에 따라, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 A가 하나의 염산염을 함유한다는 결론을 내릴 수 있다.

Claims (20)

  1. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형:
    Figure pct00013
    .
  2. 제1항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 2개, 3개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 8.59 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20° 및 25.96 ± 0.20.
  3. 제2항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 12개, 13개, 14개, 15개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 8.59 ± 0.20°, 11.74 ± 0.20°, 12.34 ± 0.20°, 12.56 ± 0.20°, 13.32 ± 0.20°, 13.88 ± 0.20°, 14.70 ± 0.20°, 15.38 ± 0.20°, 16.00 ± 0.20°, 17.20 ± 0.20°, 18.80 ± 0.20°, 19.40 ± 0.20°, 19.72 ± 0.20°, 20.76 ± 0.20°, 21.30 ± 0.20°, 21.73 ± 0.20°, 22.24 ± 0.20°, 22.56 ± 0.20°, 23.50 ± 0.20°, 24.02 ± 0.20°, 25.14 ± 0.20°, 25.96 ± 0.20°, 26.84 ± 0.20°, 27.48 ± 0.20°, 28.20 ± 0.20°, 29.32 ± 0.20°, 30.36 ± 0.20°, 31.68 ± 0.20°, 31.98 ± 0.20°, 32.28 ± 0.20°, 32.90 ± 0.20°, 33.59 ± 0.20°, 34.72 ± 0.20°, 35.22 ± 0.20°, 35.98 ± 0.20°, 36.58 ± 0.20° 및 38.48 ± 0.20°.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 결정형은 하기 X-선 분말 회절 패턴 데이터를 갖는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형:
    Figure pct00014

    전형적으로, 상기 결정형은 도 2에 도시된 X-선 분말 회절 패턴을 갖음.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정형은 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크가 285.6 ± 5℃에서 시적점 및/또는 288.6 ± 5℃에서 피크 값을 갖는; 바람직하게, 상기 결정형은 도 3에 도시된 시차주사열량계 곡선을 갖는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형.
  6. 제1항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 15.86 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20° 및 23.54 ± 0.20°.
  7. 제6항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 7개, 8개, 9개, 10개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 11.52 ± 0.20°, 13.66 ± 0.20°, 14.28 ± 0.20°, 14.72 ± 0.20°, 15.86 ± 0.20°, 16.84 ± 0.20°, 18.30 ± 0.20°, 18.72 ± 0.20°, 21.62 ± 0.20°, 23.14 ± 0.20°, 23.54 ± 0.20°, 24.48 ± 0.20°, 24.84 ± 0.20°, 25.80 ± 0.20°, 26.28 ± 0.20°, 27.96 ± 0.20°, 28.40 ± 0.20°, 28.84 ± 0.20°, 29.82 ± 0.20°, 30.22 ± 0.20°, 31.74 ± 0.20°, 32.04 ± 0.20°, 32.69 ± 0.20°, 33.90 ± 0.20°, 34.50 ± 0.20°, 35.02 ± 0.20°, 36.08 ± 0.20°, 36.94 ± 0.20°, 37.46 ± 0.20° 및 37.92 ± 0.20°.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, 상기 결정형은 하기 X-선 분말 회절 패턴 데이터를 갖는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형:
    Figure pct00015

    전형적으로, 상기 결정형은 도 5에 도시된 X-선 분말 회절 패턴을 갖음.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정형은 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크가 287.4 ± 5℃에서 시작점 및/또는 290.6 ± 5℃에서 피크 값을 갖는; 바람직하게, 상기 결정형은 도 6에 도시된 시차 주사 열량측정 곡선을 갖는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형.
  10. 제1항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 3개, 4개, 5개, 6개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 6.46 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20° 및 24.92 ± 0.20°.
  11. 제10항에 있어서, 상기 결정형은 Cu Kα 방사선을 사용한 X-선 분말 회절 패턴에서 하기 2θ 각도에서의 회절 피크로 이루어진 군으로부터 선택된 12개, 13개, 14개, 15개 또는 그 이상의 특징적인 피크를 포함하는 것인, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형: 6.46 ± 0.20°, 9.59 ± 0.20°, 9.94 ± 0.20°, 10.58 ± 0.20°, 11.42 ± 0.20°, 12.44 ± 0.20°, 13.40 ± 0.20°, 14.86 ± 0.20 °, 15.66 ± 0.20°, 16.32 ± 0.20°, 17.00 ± 0.20°, 17.54 ± 0.20°, 17.84 ± 0.20°, 18.78 ± 0.20°, 19.82 ± 0.20°, 20.22 ± 0.20°, 20.68 ± 0.20°, 20.98 ± 0.20°, 21.70 ± 0.20°, 22.32 ± 0.20°, 22.68 ± 0.20°, 23.30 ± 0.20°, 24.08 ± 0.20°, 24.92 ± 0.20°, 26.14 ± 0.20°, 26.86 ± 0.20°, 27.34 ± 0.20°, 27.82 ± 0.20°, 28.52 ± 0.20°, 29.34 ± 0.20°, 30.18 ± 0.20°, 31.36 ± 0.20° 및 32.36 ± 0.20°.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 결정형은 하기 X-선 분말 회절 패턴 데이터를 갖는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형:
    Figure pct00016

    전형적으로, 상기 결정형은 도 8에 도시된 X-선 분말 회절 패턴을 갖음.
  13. 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 결정형은 시차주사열량계 곡선에서 발열 피크가 261.6 ± 5℃에서 시작점 및/또는 267.5 ± 5℃에서 피크 값을 갖는; 바람직하게, 상기 결정형은 도 9에 도시된 시차주사열량계 곡선을 갖는, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형.
  14. 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물로서, 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물의 결정형을 상기 결정질 조성물 중량의 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상 포함하는, 화학식 (I)의 화합물의 결정질 조성물.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 치료 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형 및/또는 제14항에 따른 결정질 조성물을 포함하는 약학적 조성물로서, 적어도 하나의 약학적으로 허용되는 담체 또는 다른 부형제를 포함하는, 약학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형, 제14항에 따른 결정질 조성물 및 제15항에 따른 약학적 조성물의 PARP 억제제 제조에 있어서의 용도.
  17. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형, 제14항에 따른 결정질 조성물 및 제15항에 따른 약학적 조성물의 PARP 수용체-관련 장애 예방 또는 치료를 위한 의약 제조에 있어서의 용도, 여기서 바람직하게는 PARP 수용체-관련 장애는 종양 또는 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것; 보다 바람직하게 PARP 수용체-관련 장애는 유방암인 것임.
  18. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 결정형을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은 하기를 포함하는 것인 방법:
    화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태를 유기 용매 중에서 가열 및 교반하는 단계, 결정화를 위해 냉각시키고 결정형을 제공하기 위해 여과하는 단계를 포함하고; 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태는 도 1에 도시된 Cu Kα 방사선을 사용하는 X-선 분말 회절 패턴을 가지며; 상기 결정형을 제조하는 방법에서 상기 유기 용매는 아세톤, 테트라하이드로퓨란 및 에틸아세테이트로 이루어진 군에서 선택되며, 바람직하게는 아세톤임.
  19. 제18항에 있어서, 상기 유기 용매 대 상기 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태의 부피 대 몰비가 (2-10) mL: 1 mmol이고, 바람직하게는 (4-6) mL:1 mmol인 것인, 방법.
  20. 제18항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물의 비결정질 형태는 화합물 1을 유기 용매 및 염산의 존재 하에서 교반하고 결정화 및 여과하는 단계에 의해 제조되고; 상기 유기 용매는 에틸아세테이트로 선택되며; 화합물 1은 하기의 구조를 가지는 것인, 방법:
    Figure pct00017
    .
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