KR20230044268A - Car-t 세포 치료와 관련된 부작용의 방지 또는 최소화 - Google Patents

Car-t 세포 치료와 관련된 부작용의 방지 또는 최소화 Download PDF

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에두아르도 쉬프랭
마이클 솔단
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에이비2 바이오 에스에이
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Abstract

본 발명은 키메라 항원 수용체 T 세포(Chimeric Antigen Receptor T-cell, CAR-T) 치료의 일부로서 암 치료에 사용하기 위한 화합물 및 조성물을 제공한다. 특히, 본 발명에는 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 조절제로서 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료에서 사용하기 위한, 예를 들어 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)과 같은 IL-18 결합 분자가 개시되어 있다.

Description

CAR-T 세포 치료와 관련된 부작용의 방지 또는 최소화
본 발명은 키메라 항원 수용체 T 세포(Chimeric Antigen Receptor T-cell, CAR-T) 치료의 일부로서 암 치료에 사용하기 위한 화합물 및 조성물을 제공한다. 특히, 본 발명은 원치 않는 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 조절제로서 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료에서 사용하기 위한, 예를 들어 인간 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)과 같은 IL-18 결합 분자를 제공한다.
입양 T 세포 전달(Adoptive T-cell transfer, ACT)은 항종양, 항바이러스 또는 항염증 효과를 달성하기 위한 림프구의 주입을 포함하는 신규한 수혈 의학 분야이다. 이 분야는 전임상 모델의 유망한 형태의 면역 종양학(immuno-oncology)으로부터 백혈병 및 림프종을 치료하기 위한 CAR-T 세포의 최근의 상업적 승인으로 빠르게 발전했다.
CAR은 항원 결합 도메인, 가장 일반적으로는 항체의 가변 도메인에서 파생된 단일 사슬 가변 단편(scFv)을, "TCR" 사슬의 신호전달 도메인 및 CD28, OX40 및 CD137과 같은 수용체로부터의 추가의 공자극(costimulatory) 도메인과 결합시킨다.
다양한 암 환자를 대상으로 1세대 CAR 설계를 사용한 초기 임상 시험 결과는 실망스러웠다. 그러나, 2011년에 CD19를 표적으로 하여 공자극 도메인을 암호화하는 2세대 CAR-T 세포가 암의 조작 T 세포 치료의 주요 패러다임으로 등장했다. 다른 표적을 평가하는 CAR-T 세포 시험의 초기 결과는 CD19 종양 외(off-tumor) 교차 반응이 단일한 예가 아니라, 일반적으로 다른 계통 의존적 표적에서 관찰될 수 있는 것을 나타낸다.
CAR-T 기술은 이제 CD19를 넘어 더 광범위한 응용을 갖는 것으로 나타났으며, BCMA 및 CD22를 표적으로 하는 CAR-T 세포의 초기 단계 임상 시험은 다발성 골수종 및 급성 림프모구 백혈병 각각에서 유사하게 강한 항종양 활성을 보고했다. 그러나, CD19와 마찬가지로 BCMA 및 CD22는 관리 가능한 독성과 함께 표적이 될 수 있는 조직에 존재하는 B 세포 계통으로 매우 제한된다. 고형 종양에서 종양 관련 항원을 표적으로 하려는 시도는 지금까지 제한적인 성공을 거두었다.
고형 종양의 어려움은 일반적으로 적대적이며(hostile) 면역 억제적인(immuno-suppressive) 미세 환경에 둘러싸여 있다는 것이다. 이러한 환경은 CAR-T 세포가 도달하는 것을 막는 많은 억제 요인을 나타낸다. 일반적인 CAR-T 접근법은 이러한 조건에서는 성공하지 못한다. 이러한 이유로, 인터류킨 12(IL-12)와 같은 CAR 기능을 촉진하기 위해 추가 사이토카인을 발현하도록 조작된 신규한 설계를 갖는 CAR-T 세포가 개발되고 있다(Chmielewski, M. 및 H. Abken(2017) Cell Rep 21(11): 3205-3219; Pegram, H. J. 등(2012) Blood 119(18): 4133-4141; Zhang, T. 등(2015) ONCOTARGET 6(32): 33961-33971), IL-15(Hurton, L. V. 등(2016) Proc Natl Acad Sci USA 113(48): E7788-e7797), 및 interferon-β(IFN-β)(Zhao, Z. 등(2015) Cancer Cell 28(4): 415-428).
Carl H. June의 그룹(Hu, B. 등(2017) Cell Reports 20(13): 3025-3033)은 합성 IL-18 발현이 CAR-T 세포 기능을 촉진할 수 있다는 가설을 세웠다. IL-18은 처음에 T 세포에서 인터페론γ(IFN-γ) 발현의 유도물질로 특성지어졌으며, 임상 시험에서 심각한 용량 제한 독성을 유발하지 않고 림프구와 단핵구를 활성화하는 것으로 나타났다. Hu 등은 인간 및 마우스 T 세포 증식에 대한 강한 IL-18 매개 효과에 대해 보고했다. 또한, CAR-T 세포에 의한 합성 IL-18 분비는 CAR-T 세포 증식 및 항종양 활성을 상당히 향상시키는 것으로 나타났다.
현재, 이들 세포는 전임상 및 초기 임상 개발 단계에 있으며, 고형 종양에서 강력한 성능을 보인다.
Das 등(2016), Blood, Vol. 127, no. 13, pp. 1666-75에는 TNFa의 중화 또는 IL-18BP에 의한 치료가 혈구탐식성 림프조직구증(hemophagocytic lympho-histiocytosis, HLH)의 중증도를 감소시킬 수 있다는 것이 개시되어 있다. Griffinet 등(2020), Best Practice and research clinical Reumatology, vol. 34, no. 4에는 CAR-T 치료가 HLH로 발전할 수 있는 CRS로 이어질 수 있는 것이 개시되어 있다. 또한, WO 2019/076489는 면역 세포 치료에서의 CRS의 치료에 관한 것이다. US 2018/265846은 외인성 항염증 또는 면역 억제 단백질을 발현하는 CAR 세포에 관한 것이다. WO 2019/213686은 IL-18 억제제에 의한 골수종 치료에 관한 것이다.
ACT 후의 T 세포 활성화에 의해 어느 정도의 면역 자극 및 염증이 예상되었지만, CD19 특이적, BCMA 특이적 및 CD22 특이적 CAR-T 세포에서 심각한 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)이 관찰되었다. CAR-T 세포 관련 CRS의 중증도는 부분적으로 종양 부담과 연관성이 있다. 가장 심각한 형태에서, CRS는 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범(lung involvement)), 간 및 신장을 포함한 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증(cytopenias), 응고병증(coagulopathy), 혈구탐식(hemophagocytosis) 및 신경학적 독성(neurologic toxicities)을 포함한 혈구탐식성 림프조직구증 및 대식 세포 활성화 증후군과 많은 특징을 공유한다(Brudno, J. N. 및 J. N. Kochenderfer(2019). "Recent advances in CAR-T-cell toxicity: Mechanisms, manifestations and management." Blood Rev 34: 45-55).
CRS는 T 세포 면역 치료로 예상되는 독성이 있지만, 경미한 정도에서 생명을 위협하는 정도에 이르는 예기치 않은 신경학적 합병증 또한 CD19 및 BCMA 특이적 CAR-T 세포를 사용한 여러 임상 연구에서 보고되었다. CD19 특이적 CAR-T 세포로 기술된 신경학적 독성은 대체로 가역적이었다. CAR-T 세포 치료로 인한 뇌부종이 CRS의 극심한 징후인지, 또는 별도의 작용 기전이 있는지는 알려져 있지 않다. 후자를 뒷받침하기 위해, 아마도 신경독성의 발병에 기여하는 염증성 사이토카인과 관련된 내피 손상에 대한 증거가 있다. T 세포 면역 치료 매개 CRS 및 뇌부종의 기본 메커니즘은, 부분적으로 해당 분야에서 이러한 중요한 독성을 연구하기 위한 유용한 동물 모델이 부족하기 때문에, 잘 이해하기 어렵다.
이러한 CAR-T 부작용 관리를 위해 몇 가지 접근법이 제안되었다. 예를 들어, IL-6R 차단을 제공하기 위해 토실리주맙을 사용하는 것으로 CRS 증상의 관리가 개선되었다. 그럼에도 불구하고, IL-6R 차단이 CD19 특이적 CAR-T 세포에 따르는 신경학적 후유증에 미치는 영향은 알려져 있지 않다.
전신 코르티코스테로이드에 의한 면역 억제 또한 CRS의 증상을 개선할 수 있으며, 덱사메타손은 중추신경계 침투력이 우수하기 때문에 적절한 1차 선택 시약이다. 당연히, 장기간의 전신 코르티코스테로이드의 사용은 지속성, 및 잠재적으로는 CAR-T 세포의 효능을 약화시키는 것으로 나타났다.
따라서, CAR-T 세포 치료의 이러한 부작용을 방지하거나 최소화하는 데 도움이 되는 대안적이고 보다 효과적인 관리 대책이 필요하다.
이제 놀랍게도, 예를 들어 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)과 같은 IL-18 결합 분자가, 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 세포 종양 치료에서 공동 약제(co-medication)로서, 특히 환자의 유리(free) IL-18 레벨 조절제로서 사용될 수 있다는 것이 본 발명의 범위 내에서 발견되었다. IL-18 결합 분자, 특히 본원에 제공된 바와 같은 IL-18 결합 단백질의 공동 약제는, 특히 CAR-T 세포 전달 이후 및/또는 부작용의 임상 증상(예를 들어, IL-18 유도 과염증(hyperinflammatory) 상태와 같은 염증 반응, 예를 들어 대식 세포 활성화 증후군 유사 발현을 특징으로 하는 바와 같이, 예를 들어 발열, 빈맥, 간 손상, 혈구탐식, 고중성지방혈증, 다계통 혈구감소증(multilineage cytopenias), 응고병증 중추신경계 기능 장애 및/또는 장염) 시에 고려된다.
본 발명의 IL-18 결합 분자는 CAR 기능을 촉진하기 위해 IL-18과 같은 추가 사이토카인을 발현하도록 조작된 세포를 사용하는 CAR-T 세포 치료에서 IL-18 레벨의 조절제로서 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 암 치료에서 신규한 기회를 제공한다.
본 발명의 치료적 접근법은 WO 2015/032932 및/또는 WO 2016/139297에 각각 기술된 바와 같은 정량 분석을 사용함으로써 환자의 체액에서 유리 IL-18의 정확한 정량화와 조합될 수 있으며, 이들의 개시 내용은 본 명세서에 참조로 포함된다.
따라서, 본 발명의 목적은 CAR-T 세포 치료의 부작용, 특히 면역 체계의 오버슈팅(overshooting) 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 독성 부작용을 제어하는 데 유용한 수단 및 방법을 제공하는 것이다.
기술적 문제는 본 명세서에 제공된 실시형태, 특히 특허청구범위에서 특징지어진 실시형태에 의해 해결된다.
따라서, 본 발명은 특히 이하의 실시형태에 관한 것이다:
1. 키메라 항원 수용체 T 세포(Chimeric Antigen Receptor T-cell, CAR-T) 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 종양 항원의 발현과 관련된 질병으로 진단을 받은 환자의 CAR-T 치료에서 사용하기 위한 IL-18 결합 분자.
2. CAR-T 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 환자의 IL-18 레벨의 조절제로서의 실시형태 1의 IL-18 결합 분자.
3. 여기서 IL-18 레벨은 유리 IL-18의 레벨인, 실시형태 2의 IL-18 결합 분자.
4. 여기서 IL-18 결합 분자는 IFN 감마 분비를 억제하는, 실시형태 1 내지 3 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
5. 여기서 IL-18 결합 분자는 IL-12에 의해 추가로 상승되는, IFN 감마 분비의 IL-18 매개 자극을 억제하는, 실시형태 1 내지 4 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
6. 여기서 종양 항원의 발현과 관련된 질병은 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및/또는 종양 항원의 발현과 관련된 비암(non-cancer) 관련 징후인, 실시형태 1 내지 5 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
7. 여기서 환자는 암, 특히 혈액암(hematological cancer) 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, 실시형태 1 내지 6 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
8. 여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 백혈병(acute leukemia), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoid leukemia, ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-cell acute lymphoid leukemia, B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-cell acute lymphoid leukemia, T-ALL), 만성 골수성 백혈병(chronic myelogenous leukemia, CML), B 세포 전림프구성 백혈병(B-cell prolymphocytic leukemia), 모구 형질세포양 수지상 세포 종양(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 광범위 B형 대세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma), 소포성 림프종(follicular lymphoma), 털 세포 백혈병(hairy cell leukemia), 소세포 또는 대세포 소포성 림프종(small cell- or a large cell-follicular lymphoma), 악성 림프증식성 질환(malignant lymphoproliferative condition), 말트 림프종(MALT lymphoma), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 다발성 골수종(multiple myeloma), 골수형성이상증(myelodysplasia) 및 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 형질모세포성 림프종(plasmablastic lymphoma), 형질세포양 수지상 세포 종양(plasmacytoid dendritic cell neoplasm), 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia) 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, 실시형태 7의 IL-18 결합 분자.
9. 여기서 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단이 CAR-T 치료에서 사용되며, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는, 실시형태 1 내지 8 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
10. 여기서 세포는 IL-18을 발현하도록 추가로 조작되는, 실시형태 9의 IL-18 결합 분자.
11. 여기서 부작용은 면역 체계의 오버슈팅(overshooting) 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 것인, 실시형태 1 내지 10 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
12. 여기서 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범(lung involvement)), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증(cytopenias), 응고병증(coagulopathy), 혈구탐식(hemophagocytosis) 및 신경학적 독성(neurologic toxicities)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 실시형태 11의 IL-18 결합 분자.
13. 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서의, 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
14. 환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 감소시키기 위한, 실시형태 1 내지 13 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
15. 여기서 환자는 동물, 특히 인간인, 실시형태 1 내지 14 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
16. IL-18 결합 단백질(IL-18BP)이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, 실시형태 1 내지 15 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자.
17. 유리 IL-18에 특이적으로 결합하지만 복합체에 결합된 IL-18에는 특이적으로 결합하지 않는 IL-18 결합 항체이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, IL-18 결합 분자.
18. 인간 IL-18BP(hIL-18 BP), 바람직하게는 재조합 인간 IL-18BP(rhIL-18 BP)이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, 실시형태 16의 IL-18 결합 분자.
19. 여기서 상기 인간 IL-18BP는 인간 IL-18BP의 아이소형(isoform) a, b, c 및 d, 특히 SEQ ID NO: 2에서와 같은 아이소형 a, SEQ ID NO: 3에서와 같은 아이소형 b, SEQ ID NO: 4에서와 같은 아이소형 c 또는 SEQ ID NO: 5에서와 같은 아이소형 d로부터 선택되며, 조절제 활성을 유지하는 아이소형 a, b, c 및/또는 d의 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, 실시형태 18의 IL-18 결합 분자.
20. SEQ ID NO: 2에 나타내어진 바와 같은 IL-18BP이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하고, 바람직하게는 여기서 기능적 등가물이 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열에 대해 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 서열 동일성을 가지며 조절제 활성을 유지하는, 실시형태 19의 IL-18 결합 분자.
21. 여기서 기능적 등가물 또는 기능적 일부는 조절제 활성을 유지하는 IL-18BP의 돌연변이 단백질, 단편(fragment), 펩티드, 기능적 유도체, 기능적 단편, 파편(fraction), 순환 치환 유도체(circularly permuted derivative), IL-18BP를 포함하는 융합 단백질, 아이소형 또는 염을 포함하는, 실시형태 20의 IL-18 결합 분자.
22. 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 종양 항원의 발현과 관련된 질병으로 진단을 받은 환자의 CAR-T 치료에서 사용하기 위한, IL-18 결합 분자, 특히 청구항 16 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물로서, 선택적으로는 여기서 조성물이 약제학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 용매 및/또는 부형제를 포함하는, 조성물.
23. CAR-T 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 환자의 IL-18 레벨의 조절제로서의, 실시형태 22의 조성물.
24. 여기서 부작용은 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 것인, 실시형태 22 또는 23의 조성물.
25. 여기서 질병은 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후인, 실시형태 22 내지 24 중 어느 하나의 조성물.
26. 여기서 환자는 암, 특히 혈액암 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, 실시형태 22 내지 25 중 어느 하나의 조성물.
27. 여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 종양, 버킷 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 또는 대세포 소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, 말트 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상증 및 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, 실시형태 26의 조성물.
28. 여기서 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증, 응고병증, 혈구탐식 및 신경학적 독성으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 실시형태 22 내지 27 중 어느 하나의 조성물.
29. (i) 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단으로서, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는, 세포 집단, 및
(ii) IL-18 결합 분자, 특히 실시형태 15 내지 20 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자
를 포함하는, 실시형태 22 내지 28 중 어느 하나의 조성물.
30. 여기서 (i)의 세포 집단은 IL-18을 발현하도록 추가로 조작되는, 실시형태 29의 조성물.
31. 여기서 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)은 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 추가로 포함하는, 실시형태 22 내지 30 중 어느 하나의 조성물.
32. 여기서 환자는 동물, 특히 인간인, 실시형태 22 내지 31 중 어느 하나의 조성물.
33. IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 최대 40%, 특히 최대 30%, 특히 최대 20%, 특히 최대 15%, 특히 최대 10%, 특히 최대 7.5%, 특히 최대 5%, 특히 최대 2.5%, 특히 최대 1%, 특히 최대 0.5%, 특히 최대 0.25%, 특히 최대 0.1%, 특히 최대 0.05%, 특히 최대 0.01%의 양으로 포함하는, 실시형태 22 내지 32 중 어느 하나의 조성물.
34. 여기서 상기 결실 변이체는 IL-18BP의 C 말단에서 1개 내지 5개의 아미노산 잔기 및/또는 IL-18BP의 N 말단에서 1개 내지 30개의 아미노산 잔기의 결실을 포함하는, 실시형태 31 또는 33의 조성물.
35. 여기서 상기 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체는 최대 40%의 양으로, 특히 2% 내지 35%의 양으로 존재하는, 실시형태 31 내지 34 중 어느 하나의 조성물.
36. 환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 제어 및/또는 조절, 특히 감소시키기 위한 실시형태 1 내지 21 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자 또는 실시형태 22 내지 35 중 어느 하나의 조성물.
37. 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료 중인 환자의 IL-18 레벨을 조절하는 방법으로서, 필요로 하는 환자에게 치료적 유효량의 IL-18 결합 분자, 특히 실시형태 16 내지 21 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자, 또는 치료적 유효량의 실시형태 22 내지 35 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
38. 환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 조절, 특히 감소시키기 위한, 실시형태 37의 방법.
39. 여기서 환자는 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 예를 들어 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후를 갖는, 실시형태 37 또는 38의 방법.
40. 여기서 환자는 암, 특히 혈액암 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, 실시형태 39의 방법.
41. 여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 종양, 버킷 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 또는 대세포 소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, 말트 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상증 및 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, 실시형태 40의 방법.
42. 여기서 환자는 동물, 특히 인간인, 실시형태 37 내지 41 중 어느 하나의 방법.
43. 여기서 CAR-T 세포 및 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 환자에게 동시에 투여되는, 실시형태 37 내지 42 중 어느 하나의 방법.
44. 여기서 CAR-T 세포 및 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 환자에게 순차적으로 투여되는, 실시형태 37 내지 42 중 어느 하나의 방법.
45. 여기서 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 CAR-T 치료 시에 급성 인터벤션으로서 환자에게 투여되는, 실시형태 37 내지 44 중 어느 하나의 방법.
46. 여기서 암은 고형 종양, 특히 결장암, 직장암, 신장 세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 소장암, 식도암, 흑색종, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기 고형 종양, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추신경계(CNS) 종양, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관형성, 척추축 종양(spinal axis tumor), 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피암, 편평세포암, T 세포 림프종, 환경적으로 유발된 암, 상기 암들의 조합, 및 상기 암들의 전이성 병변으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 실시형태 7의 IL-18 결합 분자 또는 실시형태 26의 조성물 또는 실시형태 40의 방법.
47. 여기서, 체액의 유리 IL-18을 검출할 수 있는 분석을 사용하여, 환자의 체액에서 유리 IL-18의 비정상적인 레벨을 알아냈고, 특히 여기서 유리 IL-18의 레벨은 건강한 대조군 대상체의 체액에서의 유리 IL-18의 레벨을, 특히 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 100% 이상 초과하며, 상기 분석은 실시형태 16 내지 21 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자를 포함하는, 실시형태 1 내지 21, 36 또는 46 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자 또는 실시형태 22 내지 35 또는 46 중 어느 하나의 조성물, 또는 실시형태 37 내지 46 중 어느 하나의 방법.
48. 여기서 체액(들) 내의 유리 IL-18의 레벨을 정량화하기 위한 분석은 이하의 단계들:
a) 유리 IL-18을 함유하는 것으로 추측되는 체액의 샘플을 유리 IL-18에 대한 포획 분자로서의 실시형태 16 내지 21 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자와 접촉시키는 단계;
b) IL-18 결합 분자가 유리 IL-18에 결합하도록 허용하는 단계; 및
c) IL-18 결합 분자의 결합을 검출하고 샘플에서 유리 IL-18의 양을 결정하는 단계를 포함하는, 실시형태 47의 IL-18 결합 분자, 조성물 또는 방법.
49. 여기서 체액은 기관지 폐포 세척 유체(broncho-alveolar lavage fluid, BALF) 순환 유체, 분비 유체, 생체 검사 및 균질 조직, 특히 혈청, 소변, 눈물, 타액, 담즙, 땀, 날숨 또는 호기, 가래, 기관지 폐포 유체, 피지, 세포, 선(gland), 점막 및 조직 분비로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 실시형태 47 또는 48의 IL-18 결합 분자, 조성물 또는 방법.
50. 여기서 환자의 치료는 하나 이상의 면역관문 억제제(들)의 사용을 추가로 포함하는, 실시형태 1 내지 21, 36 또는 46 내지 49 중 어느 하나의 IL-18 결합 분자, 또는 실시형태 22 내지 35 또는 46 내지 49 중 어느 하나의 조성물, 또는 실시형태 37 내지 49 중 어느 하나의 방법.
51. 여기서 면역관문 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제인, 실시형태 50의 IL-18 결합 분자 또는 실시형태 50의 조성물, 또는 실시형태 50의 방법.
따라서, 본 발명은 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 예를 들어 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및/또는 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후를 갖는 환자의 CAR-T 치료에서 공동 약제로서; 특히 조절제, 특히 IL-18의 조절제, 특히 CAR-T 치료에 관한 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해, IL-18을 분비하도록 조작된 암 및/또는 CAR-T 세포에 의해 IL-18 레벨이 증가될 수 있는, CAR-T 치료 하의 환자의 신체 샘플 및/또는 체액 내의 유리 IL-18의 조절제로서 사용하기 위한, IL-18 결합 분자, 특히 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)에 관한 것이다.
본원에서 사용된 IL-18 결합 분자는 IFN 감마 분비를 억제할 수 있다. 본원에서 사용된 IL-18 결합 분자는 IL-12에 의해 추가로 상승되는, IFN 감마 분비의 IL-18 매개 자극을 억제할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 본 발명의 IL-18BP를 사용함으로써, CAR-T 치료와 관련된 부작용, 특히 오버슈팅 면역 반응 및/또는 독성 부작용의 위험을 방지하거나 최소화하기 위해, CAR-T 치료 하의 환자의 체액 내의 IL-18 레벨이 조절, 특히 감소된다. IL-18 레벨은 유리 IL-18 레벨일 수 있다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증, 응고병증, 혈구탐식 및 신경학적 독성으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명 내에서, CAR-T 치료 하의 환자의 신체 샘플 및/또는 체액 내의 유리 IL-18 레벨의 정확한 정량화는 WO 2015/032932 및/또는 WO 2016/139297에 각각 설명된 정량 분석을 사용하여 이루어질 수 있다. 본원에 기술된 분석에서 결정된 유리 IL-18 레벨에 따라, 부작용, 특히 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군에 의한 부작용을 방지하거나 최소화함으로써 CAR-T 치료의 효능 증가를 보장하는 IL-18 결합 분자의 양이 결정될 수 있다.
본 발명 내에서, 이러한 치료를 필요로 하는 환자, 예를 들어 체액 내의 IL-18의 레벨이 증가되고, 특히 유리 IL의 레벨이 증가되고, 따라서 본원에 정의된 IL-18 결합 분자, 특히 본원에 정의된 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)과의 공동 약제에 반응할 가능성이 있는 환자만이 CAR-T 치료를 위해 선택되도록 보장하기 위해 분석이 사용될 수 있다.
분석은 추가로 또는 대안적으로 본원에 정의된 IL-18 결합 분자, 특히 본원에 정의된 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)과의 CAR-T 공동 약제의 효능을 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 이와 같이, 치료 받은 환자의 체액 내의 증가된 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨의 감소는 공동 약제가 효율적이라는 것을 나타낸다.
특히, CAR-T 치료 하의 환자의 신체 샘플 및/또는 체액 내의 유리 IL-18의 레벨을 정량화하기 위해 사용될 수 있는 분석은 이하의 단계들:
a) 유리 IL-18을 함유하는 것으로 추측되는 신체 샘플 또는 체액의 샘플을 유리 IL-18에 대한 포획 분자로서 IL-18 결합 분자와, 특히 본원에 정의된 IL-18 결합 분자와 접촉시키는 단계;
b) IL-18 결합 분자가 유리 IL-18에 결합하도록 허용하는 단계; 및
c) IL-18 결합 분자의 결합을 검출하고 샘플에서 유리 IL-18의 양을 결정하는 단계
를 포함할 수 있다.
본 발명 내에서, 신체 샘플 및/또는 체액은 기관지 폐포 세척 유체(BALF) 순환 유체, 분비 유체, 생체 검사 및 균질 조직, 특히 혈청, 소변, 눈물, 타액, 담즙, 땀, 날숨 또는 호기, 가래, 기관지 폐포 유체, 피지, 세포, 선, 점막 및 조직 분비로 이루어지는 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자는 유리 IL-18에 특이적으로 결합하지만, 복합체에 결합된 IL-18에는 특이적으로 결합하지 않는 항체이다.
또 다른 특정 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자는, 참조 분자의 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18 결합 단백질(IL-18BP), 특히 인간 IL-18BP(hIL-18BP), 특히 재조합 인간 IL-18BP(rhIL-18BP)이다.
또 다른 특정 실시형태에서, IL-18BP는 IL-18BP의 아이소형 a, b, c 및 d, 특히 아이소형 a, 특히 아이소형 c로부터 선택된다.
또 다른 특정 실시형태에서, IL-18BP는 SEQ ID NO 2 및 SEQ ID NO: 3, 4 및 5에 각각 나타낸 IL-18BP의 아이소형 a, b, c 및 d로부터 선택되지만, 특히 SEQ ID NO: 2에 나타낸 IL-18BP의 아이소형 a, 또는 SEQ ID NO: 4에 나타낸 아이소형 c로 부터 선택되고, 이는 참조 분자의 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함한다.
본 발명 내에서, 상이한 조합의 상기 아이소형의 혼합물은 본 발명의 조성물에 사용될 수 있지만, 특히 아이소형 a와 아이소형 c의 혼합물이 사용될 수 있고, 이는 참조 분자의 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함한다.
본 발명 내에서, "기능적 등가물" 또는 "기능적 일부"라는 용어는 유리 IL-18에 선택적으로 결합하는 능력을 여전히 보유하고 있고 따라서 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 치료에서 조절제로서 기능하는 IL-18 결합 참조 분자의 등가물 또는 일부를 의미한다.
또한, IL-18BP의 기능적 돌연변이 단백질, 기능적 단편, 기능적 펩티드, 기능적 유도체, 기능적 단편, 기능적 파편, 기능적 순환 치환 유도체, IL-18BP를 포함하는 기능적 융합 단백질, 기능적 아이소형 또는 기능적 염이 본 발명의 범위 내에서 포함되며, 이는 유리 IL-18에 선택적으로 결합하는 능력을 보유하고 따라서 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 치료에서 기능하며, 특히 CAR-T 치료 하의 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서 기능한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 면역글로불린의 전부 또는 일부, 바람직하게는 면역글로불린의 불변 부위에 융합된, IL-18BP의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 단백질인 IL-18BP에 관한 것이며, 여기서 융합 단백질은 여전히 유리 IL-18에 선택적으로 결합할 수 있으며, 융합 단백질은 유리 IL-18에 선택적으로 결합하는 능력을 보유하고 따라서 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 치료에서 기능하며, 특히 CAR-T 치료 하의 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서 기능한다. 보다 구체적으로, 면역글로불린은 본원에 기술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 조성물에 사용하기 위한 IgG1 또는 IgG2 아이소형일 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 IL-18BP에 관한 것이며, 이는 소분자의 전부 또는 일부, 특히 소분자 약물의 전부 또는 일부에 융합된, IL-18BP의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 단백질이고, 선택적으로는 여기서 융합은 결합 분자(linker molecule)를 통해 이루어지며, 여기서 융합 단백질은 유리 IL-18에 선택적으로 결합하는 능력을 보유하고 따라서 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 치료에서 기능하고, 특히 CAR-T 치료 하의 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서 기능한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 본원에 기재된 실시형태 중 어느 하나의 사용을 위한 IL-18 결합 분자에 관한 것이며, 여기서 억제제는 SEQ ID NO: 2 및 SEQ ID NO: 3, 4 및 5에 기재된 서열, 하지만 특히 SEQ ID NO: 2 및 SEQ ID NO: 4에 기재된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖고 유리 IL-18에 선택적으로 결합하는 능력을 보유하며 따라서 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 CAR-T 치료에서 기능하고, 특히 CAR-T 치료 하의 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서 기능하는 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)이다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, IL-18BP는 최대 40%, 특히 최대 30%, 특히 최대 20%, 특히 최대 15%, 특히 최대 10%, 특히 최대 7.5%, 특히 최대 5%, 특히 최대 2.5%, 특히 최대 1%, 특히 최대 0.5%, 특히 최대 0.25%, 특히 최대 0.1%, 특히 최대 0.05%, 특히 최대 0.01%의 양으로 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 수반할 수 있다.
특정 실시형태에서, 상기 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체는 최대 40%의 양으로, 특히 2% 내지 35%의 양으로 존재한다.
특히, 상기 결실 변이체는 IL-18BP의 C 말단에서 1개 내지 5개의 아미노산 잔기의 결실을 포함하고 그리고/또는 IL-18BP의 N 말단에서 1개 내지 30개의 아미노산 잔기의 결실을 포함할 수 있다.
따라서, 일 실시형태에서, 본 발명은 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 예를 들어 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및/또는 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후를 갖는 환자의 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료에서 사용하기 위한, 특히 치료의 효능을 증가시키기 위해 그리고/또는 부작용, 특히 CAR-T 치료와 관련된 부작용, 특히 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군에 의한 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 치료 받는 환자의 IL-18 레벨의 조절제로서의 IL-18 결합 분자, 특히 본원에 제공된 IL-18 결합 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증, 응고병증, 혈구탐식 및 신경학적 독성으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은, 필요로 하는 환자의 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료에서 사용하여 치료의 효능을 증가시키고, 그리고/또는 환자, 특히 CAR-T 치료 중인 환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 제어, 조절, 특히 감소시키기 위한, IL-18 결합 분자, 특히 본원에서 제공된 IL-18 결합 단백질, 및 본원에서 제공된 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
특히, 본 발명에 따른 IL-18 결합 분자 및 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은, 부작용, 특히 CAR-T 치료와 관련된 부작용, 특히 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해, 조절제, 특히 치료 받는 환자의 IL-18 레벨의 조절제, 특히 치료 받는 환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서 사용될 수 있다.
특히, 본 발명의 조성물은
(i) 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단으로서, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는, 세포 집단, 및
(ii) IL-18 결합 분자, 특히 본원에서 제공된 IL-18 결합 단백질
을 포함한다.
특정 실시형태에서, (i)의 세포 집단은 IL-18을 발현하도록 추가로 조작된다.
또 다른 특정 실시형태에서, 조성물은 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체, 특히 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체, 특히 본원에 정의된 결실 변이체를 추가로 포함한다.
또 다른 특정 실시형태에서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 추가로 포함한다.
본 발명의 다양한 실시형태에서, 본원에 기재된 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명의 상기 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP를 포함하며, 선택적으로는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP의 N 및 C 말단 결실 변이체를 추가로 포함하는 본원에 기재된 본 발명의 조성물은, 부작용, 특히 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해, CAR-T 치료의 공동 약제로서, 특히 조절제로서 사용된다.
특히, CAR-T 치료는 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 예를 들어 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및/또는 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후를 갖는 환자에게 사용된다.
특히, IL-18 결합 분자, 및 본 발명의 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 포유 동물, 특히 인간의 CAR-T 치료에서 사용된다.
특정 실시형태에서, IL-18 결합 분자, 및 본 발명의 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 CAR-T 치료에서, 특히 혈액 종양 및/또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 치료하기 위해 사용된다.
특히, 암은 혈액암, 특히 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 종양, 버킷 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 또는 대세포 소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, 말트 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상증 및 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양, 발덴스트롬 매크로글로불린혈증 및 전백혈병(preleukemia) 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암일 수 있다.
특정 실시형태에서, 암은 고형 종양, 특히 결장암, 직장암, 신장 세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 소장암, 식도암, 흑색종, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기 고형 종양, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추신경계(CNS) 종양, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관형성, 척추축 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피암, 편평세포암, T 세포 림프종, 환경적으로 유발된 암, 상기 암들의 조합, 및 상기 암들의 전이성 병변으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 암일 수 있다.
일 실시형태에서, IL-18 결합 분자, 및 본 발명의 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물, 특히 (i) 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단으로서, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하며, IL-18을 발현하도록 추가로 조작된 세포 집단, 및 (ii) IL-18 결합 분자, 특히 본원에서 제공된 IL-18 결합 단백질을 포함하는 본 발명의 조성물은, 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양, 특히 비소세포 폐암, 악성 흉막 중피종(malignant pleuran mesothelioma) 또는 다형성 교모세포종(multiform glioblastoma)을 치료하기 위한 CAR-T 치료에서 사용된다.
본원에서 사용된 치료(therapy or treatment)는 치료될 질병 또는 장애와 관련된 증상의 예방, 정지(halting), 완화 및/또는 전환(reversion)을 포함한다.
본 발명 내에서, 치료(therapy or treatment)는 적어도 치료 받는 환자가 치료 반응을 보일 때까지 계속될 수 있다.
다양한 추가 실시형태에서, 본 발명은, 상술한 실시형태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, IL-18 결합 분자, 특히 본원에 정의된 본 발명의 IL-18BP, 또는 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 본원에 정의된 본 발명의 IL-18BP를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서
· IFNγ, IL-13 및/또는 IL-17A의 증가된 발현은 상기 질병 또는 장애를 앓고 있는 치료되지 않은 대상체와 비교하여 조정, 특히 억제되고; 그리고/또는
· IL-18BP에 의한 유리 IL-18의 결합은 조직 및 순환에서 초과된 유리 IL-18을 포획하여 중화시킴으로써 IL-18/IL-18BP 불균형을 보완하며; 그리고/또는
· IL-18 결합, 특히 IL-18 수용체(IL-18R)에 대한 유리 IL-18의 결합, 특히 IL-18Rα에 대한 유리 IL-18 결합이 제한되거나 억제되고; 그리고/또는
· IL-18BP는 IL-18 수용체에 대한 IL-18의 결합, 특히 IL-18Rα에 대한 결합을 적어도 5%, 특히 적어도 10%, 특히 적어도 15%, 특히 적어도 20%, 특히 적어도 25%, 특히 적어도 30%, 특히 적어도 40%, 특히 적어도 45%, 특히 적어도 50%, 특히 적어도 55%, 특히 적어도 60%, 특히 적어도 65%, 특히 적어도 70, 특히 적어도 75, 특히 적어도 80, 특히 적어도 85%, 특히 적어도 90%, 특히 적어도 95%, 특히 100% 감소시키며; 그리고/또는
· IL-18BP는 IL-18 수용체(IL-18R)에 대한 IL-18 결합, 특히 IL-18Rα에 대한 유리 IL-18 결합을 제한하거나 방지함으로써 유리 IL-18을 중화시킨다.
일 실시형태에서, 본 발명은, 상술한 실시형태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP를 포함하는 조성물에 관한 것이며, 여기서 체액(들) 내의 유리 IL-18의 레벨은 건강한 대조군의 ≤4pg/mL에 비해 ≥5pg/mL, 특히 최대 10000pg/mL인 것으로 결정되었다.
특정 실시형태에서, 체액(들) 내의 유리 IL-18의 레벨은 정상의 2배 내지 3배이다.
체액(들) 내의 유리 IL-18의 결정은 체액 내, 신체 샘플 내 또는 원위치(in situ)의 유리 IL-18의 레벨을 정량화하기 위한 분석을 사용함으로써 수행될 수 있으며, 이는 이하의 단계들:
a) 유리 IL-18을 함유하는 것으로 추측되는 체액의 샘플 또는 신체 샘플 또는 신체 부위를 IL-18 결합 분자, 특히 유리 IL-18에 특이적으로 결합하지만 복합체에 결합된 IL-18에는 특이적으로 결합하지 않고 유리 IL-18에 대한 포획 분자로서 기능하는 IL-18BP와 접촉시키는 단계;
b) IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP가 유리 IL-18에 결합하도록 허용하는 단계;
c) IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP에 대한 IL-18의 결합을 검출하고 샘플 또는 원위치에서 유리 IL-18의 양을 결정하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 실시형태에서, 샘플은 기관지 폐포 세척 유체(BALF) 순환 유체, 분비 유체, 생체 검사 및 균질 조직, 특히 혈청, 소변, 눈물, 타액, 담즙, 땀, 날숨 또는 호기, 가래, 기관지 폐포 유체, 피지, 세포, 선, 점막 및 조직 분비로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본 발명에 따른 샘플 내의 유리 IL-18의 존재 또는 부재를 결정하기 위해, 예를 들어 검출을 위한 2차 시약을 사용하는 간접 검출 방법을 이용하는 분석 형식과 같은 당업자에게 공지된 임의의 면역분석 형식이 사용될 수 있고, 특히 ELISA 및 면역침강 및 응집반응 분석이 사용될 수 있다. 이러한 분석의 자세한 설명은, 예를 들어 "Harlow와 Lane, Antibodies: A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1988, 555-612, WO96/13590, Maertens와 Stuyver, Zrein 등(1998), 및 WO96/29605에 나와 있다.
샘플은 비희석 또는 희석된 생물학적 유체, 예를 들어 혈청, 소변, 눈물, 타액, 담즙, 땀, 날숨 또는 호기, 가래, 기관지 폐포 유체, 피지, 세포, 선, 점막 또는 조직 분비, 생체 검사, 균질 조직일 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
원위치 진단을 위해, IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP 또는 이의 임의의 활성 및 기능적 일부는, 예를 들어 정맥 내, 비강 내, 복강 내, 대뇌 내, 동맥 내 주사와 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 진단될 대상체에게 투여될 수 있고, IL-18BP와 유리 IL-18 사이의 특이적 결합이 발생할 수 있다. IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP 또는 이의 임의의 활성 및 기능적 일부는 하기에 추가로 설명되는 바와 같이, 검출 가능한 표지를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 본원에 기재된 유리 IL-18의 검출은 면역분석 절차에 의해 수행될 수 있다. 면역분석은 일반적으로 테스트 샘플을 IL-18 결합 분자, 특히 유리 IL-18에 특이적으로 결합하는 다양한 실시형태에서 본원에 기재된 IL-18BP와 접촉시키는 단계 및 샘플 내의 IL-18BP/유리 IL-18 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 면역분석 절차는, 예를 들어 경쟁적 또는 비경쟁적 효소 기반 면역분석, 효소 결합 면역흡착 분석(enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA), 방사성 면역분석(radioimmunoassay, RIA) 및 웨스턴 블롯(Western blots) 등과 같이 당업자에게 공지된 다양한 면역분석 절차로부터 선택될 수 있다. 또한, IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP가 지지체, 예를 들어 유리 비드 또는 플레이트에 배치되고 테스트 샘플과 반응하거나 접촉하는 어레이를 포함하는 다중 분석이 사용될 수 있다.
IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP의 다양한 화학적 또는 생화학적 유도체는 공지된 방법을 사용하여 생성할 수 있다. IL-18 분자, 특히 IL-18BP를 포함하는 면역결합체로서 진단적으로 유용한 한 유형의 유도체는 검출 가능한 표지에 결합된다(conjugated). 그러나, 많은 실시형태에서, IL-18 분자, 특히 IL-18BP는 표지되지 않지만 분석 과정에서, 표지된 다른 분자에 결합하거나 이에 의해 결합됨으로써 간접적으로 표지된다. 본 발명은 IL-18 분자, 특히 IL-18BP 및 표지를 포함하는 분자 복합체를 포함한다.
검출 가능한 물질의 예로는 각종 효소, 보결 분자단, 형광 물질, 발광 물질, 생물 발광 물질 및 방사성 물질을 들 수 있다. 적합한 효소의 예로는 겨자무 과산화효소(horseradish peroxidase), 알칼리 인산분해효소, β 갈락토시다아제 또는 아세틸콜린에스테라아제를 들 수 있고; 적합한 보결 분자단 복합체의 예로는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 들 수 있으며; 적합한 형광 물질의 예로는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 댄실 클로라이드, 피코에리트린, Alexa Fluor 647, Alexa Fluor 680, DilC19(3), Rhodamine Red-X, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 546, TTexas Red, YOYO-1 + DNA, 테트라메틸로다민, Alexa Fluor 594, BODIPY FL, Alexa Fluor 488, Fluorescein, BODIPY TR, BODIPY TMR, 카복시 SNARF-1, FM 1-43, Fura-2, Indo-1, 케스케이드 블루, NBD, DAPI, Alexa Fluor 350, 아미노메틸쿠마린, 루시퍼 옐로, 프로피듐 아이오다이드 또는 댄실아미드를 들 수 있고; 발광 물질의 예로는 루미놀을 들 수 있으며; 생물 발광 물질의 예로는 녹색 형광 단백질, 변형된 녹색 형광 단백질, 루시페라아제, 루시페린 및 에쿼린을 들 수 있고; 적합한 방사성 물질의 예로는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 들 수 있다.
면역분석은 전형적으로 검출 가능하게 표지된 IL-18 분자, 특히 IL-18BP의 존재 하에 생물학적 유체, 조직 추출물, 갓 채취된 세포 또는 세포의 용해물과 같은 샘플을 배양하는 단계(incubating), 및 결합된 IL-18 분자, 특히 IL-18BP를 당업계에 공지된 임의의 다양한 기술로 검출하는 단계를 포함할 것이다. IL-18BP로 유리 IL-18의 레벨을 측정하는 한 가지 방법은 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)와 같은 효소 면역분석(EIA)에 의한 것이다(Voller, A. 등, J. Clin. Pathol. 31:507-520(1978); Butler, J.E., Meth. Enzymol. 73:482-523(1981); Maggio, E.(ed.), Enzyme Immunoassay, CRC Press, Boca Raton, FL, 1980). IL-18 분자, 특히 IL-18BP 또는 IL-18 분자, 특히 IL-18BP에 대한 결합 파트너에 결합된 효소는, 추후에 적절한 기질에 노출될 때에, 예를 들어 분광광도법 또는 형광법에 의해 검출될 수 있는 화학적 부분을 생성하는 방식으로 기질과 반응할 것이다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 임의의 상기 형식, 특히 ELISA 형식에서 사용되는 IL-18 분자, 특히 IL-18BP는 IL-18BP 아이소형 a, b, c 또는 d, 또는 이의 기능적 등가물 또는 기능적 유도체, 또는 기능적 단편, 특히 SEQ ID NO 2, 및 3, 4 및 5에 나타낸 아이소형 a, 특히 아이소형 c, 또는 이의 유도체, 특히 아이소형 a, b, c 또는 d이지만, 특히 SEQ ID NO: 2에 나타낸 IL-18BP의 아이소형 a 또는 SEQ ID NO 4에 나타낸 아이소형 c이다.
또한, 상기 아이소형의 혼합물이 본 발명의 조성물에 사용될 수 있지만, 특히 아이소형 a와 아이소형 c의 혼합물이 사용될 수 있다.
생물학적 샘플은 고체상 지지체 또는 니트로셀룰로오스와 같은 담체, 또는 세포, 세포 입자 또는 가용성 단백질을 고정할 수 있는 기타 고체 지지체와 접촉하여 고정화될 수 있다. 그런 다음 지지체를 적합한 완충액으로 세정한 후에 검출 가능하게 표지된 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP로 처리할 수 있다. 그런 다음 고체상 지지체를 완충액으로 두 번째로 세정하여 결합되지 않은 IL-18 결합 분자, 특히 결합되지 않은 IL-18BP를 제거할 수 있다. 고체 지지체 상의 결합된 라벨의 양은 통상적인 수단에 의해 검출될 수 있다. 이러한 기술의 잘 알려진 예는 웨스턴 블롯이다.
다양한 실시형태에서, 본 발명은 표지된 IL-18 분자, 특히 본원에 기술된 본 발명에 따른 IL-18BP를 포함하는 조성물을 제공한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 암 치료에서 부작용을 조절하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 이하의 단계들:
a. 제1 선택적 단계에서, 다양한 실시형태의 본원에 기술된 방법을 사용하여 상기 대상체의 체액 내의 유리 IL-18의 양을 정량화하는 단계;
b. 필요로 하는 환자에게 치료적 유효량의 IL-18 결합 분자, 특히 본원에 제공된 IL-18 결합 단백질, 또는 본원에 제공된 조성물의 유효량을 투여하는 단계
를 포함한다.
특히, 이러한 치료를 필요로 하는 환자는 신체 샘플 또는 체액 내의 유리 IL-18의 레벨이, 건강한 대조군 대상체의 신체 샘플 또는 체액 내의 유리 IL-18의 레벨을 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 100% 이상 초과하는 것으로 밝혀진 환자이다.
치료적 또는 예방적 유효량의 상술한 실시형태 중 어느 하나에 정의된 IL-18 결합 분자 또는 상기 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 전신, 비강 내, 구강, 경구, 점막 경유, 기관 내, 정맥 내, 피하, 요로 내(intraurinary tract), 질 내, 설하, 기관지 내(intrabronchial), 폐 내, 경피 또는 근육 내 투여, 특히 기관지 폐(broncho-pulmonary) 투여에 의해 환자에게 투여될 수 있다.
다양한 실시형태의 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 필요로 하는 환자에게 적합한 투여 형태 및/또는 단위 및/또는 투여 간격으로 투여된다.
특정 실시형태에서, 본원에 정의된 바와 같은, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP는 약제학적 조성물로, 특히 0.01M 내지 0.2M, 특히 0.01M 내지 0.15M의 농도로, 주사용 멸균 용액, 바람직하게는 추가의 염화나트륨 및/또는 수산화나트륨 및/또는 인산나트륨 완충액을 포함하는 약제학적 조성물로 제제화된다. 본 발명의 조성물에 염화나트륨 및 인산나트륨 완충액을 포함하는 것이 바람직하다. 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 조성물, 특히 약제학적 조성물은 약 0.12M 염화나트륨 및 약 0.02M 인산나트륨 완충액을 포함한다.
본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP를 포함하는 조성물은 필요로 하는 환자에게 단회 투여량 또는 투여량 단위/일, 다회 투여량 또는 투여량 단위/일, 다회 투여량 또는 투여량 단위/주, 또는 다회 투여량 또는 투여량 단위/월로 투여될 수 있다. 단회 투여량 또는 투여량 단위는 여러 투여량 또는 투여량 단위로 분할되어 수 시간 또는 하루 종일 치료될 환자에게 투여될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP를 포함하는 조성물은 48시간마다 투여된다.
한 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명에 따른 조성물은 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 특히, 피하 주사 부위는 교체되며, 특히 주사 부위는 허벅지 바깥쪽과 전복벽의 다양한 사분역이다. 본 발명의 조성물의 단회 투여량을 구성하는 별도의 주사는 특히 동일한 신체 부위 내에 투여되지만 정확히 동일한 주사 부위에는 투여되지 않는다.
한 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명에 따른 조성물은 정맥 내로 투여될 수 있다. 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명에 따른 조성물의 제제는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 정맥 내 투여에 적합할 수 있다.
한 실시양형에서, 조성물은 투여 전에 실온, 특히 18℃ 내지 25℃가 되도록 한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 조성물, 특히 상술한 실시형태 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 조성물의 단회 투여량은 10mg 내지 600mg의 IL-18BP를 포함한다.
특히, 단회 투여량은 10mg 내지 20mg, 20mg 내지 40mg, 40mg 내지 80mg, 80mg 내지 160mg, 160mg 내지 320mg, 또는 320mg 내지 600mg의 IL-18BP를 포함할 수 있다.
본 발명의 다양한 실시형태에서, 단회 투여량은 0.5mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중 내지 10mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중, 특히 1mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중 내지 8mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중, 특히 1.5mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중 내지 6mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중, 특히 2mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중 내지 4mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중을 포함할 수 있다.
본 발명의 특정 실시형태에서, 단회 투여량은 2mg의 IL-18BP/kg 체중 내지 3mg의 IL-18BP/kg 체중, 특히 2mg의 IL-18BP/kg 체중을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP, 또는 본 발명의 IL-18 결합 분자, 특히 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 IL-18BP를 포함하는 조성물은 0.5mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중 내지 5mg IL-18 결합 분자/kg 체중의 투여량으로 매 24시간 또는 48시간마다 투여되며, 특히 2mg의 IL-18 결합 분자/kg 체중의 단회 투여량이 48시간마다 투여된다.
또 다른 특정 실시형태에서, 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 인간 IL-18BP(rhIL-18 BP), 또는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는 재조합 인간 IL-18BP(rhIL-18 BP)를 포함하는 조성물은, 예를 들어 3주에 걸쳐 2mg/kg 체중의 단회 투여량으로 격일로 투여된다. 그러나, 본원에 제공된 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18 결합 단백질은 환자에서 추정되거나 결정된 유리 IL-18 레벨에 따라 투여되는 것이 바람직하며, 특히 IL-18 분자, IL-18 결합 단백질은 유리 IL-18 레벨이, 예를 들어 건강한 대상체에서 관찰되는 레벨과 같이 허용 가능한 것으로 생각되는 레벨 미만인 것으로 추정되거나 결정될 때까지 투여된다.
본 발명의 조성물은 추가의 의약적 작용제, 약제학적 작용제, 담체, 부형제, 완충제, 분산제, 희석제, 및/또는 공동 치료제, 예를 들어 항염증제, 기관지 확장제(bronchodilatory), 항히스타민제, 충혈 완화제, 진해 약물 물질, 항바이러스제 및/또는 면역억제제, 및/또는 항암제, 예를 들어 면역관문 억제제 등을 포함할 수 있으며, 이들은 의도된 용도 및 응용에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 일 실시형태에서, 다양한 실시형태의 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 예방적으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, 다양한 실시형태의 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 치료적으로 투여된다.
본 발명의 일 실시형태에서, 다양한 실시형태의 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 필요로 하는 환자에게 전신, 비강 내, 안구 내, 유리체 내(intravitral), 점안액, 구경, 경구, 점막 경유, 기관 내, 정맥 내, 피하, 요로 내, 직장 내, 질 내, 설하, 기관지 내, 폐 내, 경피 또는 근육 내 투여에 의해 투여된다. 특히, 투여는 피하 주사에 의해 달성된다.
다양한 실시형태의 본원에 개시된 바와 같은 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 점막 경유 투여, 예를 들어 비강 내, 구강, 경구 점막 경유, 기관 내, 요로 내, 질 내, 설하, 기관지 내, 폐 내 및/또는 경피 투여를 위한 액체, 액체 스프레이, 마이크로스페어, 반고체, 젤 또는 분말로 제공될 수 있다. 또한, 조성물은 구강, 경구 점막 경유 및/또는 설하 투여를 위한 고체 제형일 수 있다. 비강 내, 구강, 경구 기관 내, 요로 내, 질 내, 점막 경유 및 설하 투여는 본원에 기술된 조성물을 체온에서 경구로 붕해시키고 선택적으로 구강의 신체 조직에 부착될 수 있다. 또한, 본원에 개시된 조성물은 하나 이상의 부형제, 희석제, 결합제, 윤활제, 유동화제(glidants), 붕해제, 탈감작제(desensitizing agent), 유화제, 점막 접착제(mucosal adhesive), 가용화제, 현탁제, 점도 조절제, 이온 등장제, 완충제, 담체, 계면활성제, 향미제, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 특정 측면에서, IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 비경구, 또는 정맥 내 용액, 현탁액, 에멀션, 정제, 환제, 생체접착 패치, 드롭스, 스펀지, 필름, 로젠지, 하드 캔디, 웨이퍼, 구, 롤리팝, 디스크 형상 구조체, 좌약 또는 스프레이로서 제제화된다.
점막 경유 투여는 점막으로의 풍부한 맥관 공급 및 표피 내의 각질층의 부족으로 인해 일반적으로 신속하다. 이러한 약물 수송은 일반적으로 혈중 농도의 신속한 상승을 제공하며, 유사하게 위산에 의한 장간 순환 및 즉각적인 파괴, 또는 내장 벽 및 간 대사의 부분적 초회 통과 효과를 방지한다. 약물은 일반적으로 상당한 약물 흡수가 발생하기 위해 점막 표면에 장기간 노출되어야 한다.
점막 경유 경로는 또한 이들 경로가 비교적 더 신속하게 흡수 및 치료 작용이 개시되도록 제공할 수 있다는 점에서 경구 경로보다 더 효과적일 수 있다. 또한, 점막 경유 경로는 정제, 캡슐, 또는 기타 경구 고체를 삼키는 데 어려움이 있는 환자, 또는 장내 흡수를 제대로 하지 못하는 질병이 있는 환자의 치료에서 사용하기에 바람직할 수 있다. 따라서, IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP, 또는 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 포함하는 조성물의 점막 경유 투여에는 많은 장점이 있다.
비강 내 또는 구강 경로 모두에서, 약물 흡수가 지연 또는 연장될 수 있거나, 흡수가 거의 정맥 내 볼루스가 투여된 것처럼 신속할 수 있다. 풍부한 혈액 공급의 높은 투과성 때문에, 설하 경로는 신속한 작용 개시를 제공할 수 있다.
비강 내 조성물은 이들의 형태에 따라 임의의 적절한 방법에 의해 투여될 수 있다. 마이크로스페어 또는 분말을 포함하는 조성물은 비강 취입 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 이러한 장치의 예는 당업자에게 공지되어 있으며, 피선스 로무달 시스템(Fisons Lomudal System)과 같은 상업용 분말 시스템을 들 수 있다. 취입기는 건조 분말 또는 마이크로스페어의 미분된 클라우드를 생성한다. 취입기는 바람직하게는 실질적으로 고정된 양의 조성물의 투여를 보장하기 위한 메커니즘으로 제공된다. 분말 또는 마이크로스페어는 취입기와 함께 직접 사용될 수 있으며, 이는 분말 또는 마이크로스페어를 위한 병 또는 용기와 함께 제공된다. 대안적으로, 분말 또는 마이크로스페어는 젤라틴 캡슐과 같은 캡슐, 또는 비강 투여에 적합한 기타 단회 투여 장치에 충전될 수 있다. 취입기는 바람직하게는 캡슐 또는 기타 장치를 부수어 여는 메커니즘을 갖는다. 또한, 조성물은, 예를 들어 하나 초과의 유형의 마이크로스페어 또는 분말을 제공함으로써, 활성 성분의 초기 신속 방출에 이어 활성 성분의 지속 방출을 제공할 수 있다. 또한, 조성물을 비강에 투여하기에 적합한 대안적인 방법은 당업자에게 공지되어 있을 것이다. 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 적합한 방법의 보다 상세한 설명은 EP2112923, EP1635783, EP1648406, EP2112923(이의 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다)을 참조한다.
본 발명의 한 실시형태에서, 다양한 실시형태의 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 또한 비강 내 투여, 즉 흡입에 의해 투여될 수 있고, 따라서 비강 내 투여에 적합한 형태, 즉 에어로졸, 건조 분말 제제 또는 액체 제제로 제제화될 수 있다. 적합한 약제학적 담체, 부형제 및/또는 희석제의 예는 당업계에 공지되어 있으며, 검, 전분(예를 들어, 옥수수 전분, 전호화 전분), 당(예를 들어, 락토오스, 만니톨, 수크로오스, 덱스트로스), 셀룰로오스 물질(예를 들어, 미세결정성 셀룰로오스), 아크릴레이트(예를 들어, 폴리메틸아크릴레이트), 탄산칼슘, 산화마그네슘, 탈크, 또는 이들의 혼합물을 들 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
액체 제제를 위한 약제학적으로 허용 가능한 담체는 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 건조 분말 제제, 에멀션 또는 오일이다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 에틸 올레이트와 같은 주사 가능한 유기 에스테르이다. 오일의 예는 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일, 예를 들어 땅콩유, 대두유, 올리브유, 해바라기유, 어간유, 기타 해양 오일, 또는 우유 또는 계란의 지질이다.
본 발명은 또한, 기도를 통해 전신 순환계로의 건조 분말, 기체 또는 휘발성 제제로서의, 다양한 실시형태의 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물의 흡입에 의한 경폐 투여에 관한 것이다. 폐포 및 맥관 상피 막이 매우 투과성이 있으며, 혈류가 풍부하고 흡착을 위한 매우 넓은 표면이 있기 때문에, 제제가 폐의 폐포로 전달될 수 있는 만큼 흡수가 사실상 신속하다. 예를 들어, 에어로졸은 압축 포장된 정량 흡입기(metered-dose inhalers, MDIs)로부터 전달될 수 있다.
다양한 실시형태의 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 일반적으로 흡입 및 표준 약제학적 실행의 선정 수단으로 선택된 적합한 약제학적 부형제, 희석제 또는 담체와의 혼합물로 투여될 것이다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP 또는 본원에 제공된 조성물은 바람직하게는 건조 분말 흡입 조성물 내의 담체로서 공지된 물질, 예를 들어 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드를 포함하는 사카라이드 및 아라비노오스, 글루코오스, 푸룩토오스, 리보오스, 만노오스, 수크로오스, 트레할로오스, 락토오스, 말토오스, 전분, 덱스트란, 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당 알코올로부터 선택된, 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 공지된 하나 이상의 물질일 수 있는, 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체 미립자와 선택적으로 함께 있는 건조 분말로 제제화된다. 특히 바람직한 담체는 락토오스, 예를 들어 락토오스 일수화물 또는 무수 락토오스이다. 건조 분말은 바람직하게는 5mg 내지 50mg의 캡슐 당 총 종량이 되도록 하는 양으로 담체와 함께 투여량 단위로, 단회 투여량 또는 다회 투여량 장치일 수 있는 건조 분말 흡입 장치에서의 사용을 위한, 예를 들어 젤라틴 또는 플라스틱의 캡슐, 또는 블리스터(예를 들어, 알루미늄 또는 플라스틱)의 단위 투여량으로 함유될 수 있다. 대안적으로, 건조 분말은 전달되도록 개조된 다회 투여량 건조 분말 흡입(multi-dose dry powder inhalation, MDDPI) 장치 내의 저장 용기에 포함될 수 있다.
치료적으로 효능이 있는 기타 다른 투여 경로가 사용될 수 있으며, 예를 들어 상피 또는 내피 조직을 통한 흡수 또는 활성제가 생체 내에서 발현 및 분비를 야기하도록, 활성제를 코딩하는 DNA 분자를 환자에게 투여하는(예를 들어, 발현 벡터를 통해) 유전자 치료가 있다.
다양한 실시형태의 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 조류, 비인간 영장류, 개, 고양이, 돼지, 염소, 양, 소, 말, 마우스, 쥐 및 토끼를 포함하는 인간 및 동물의 치료를 위한 인간 및 수의학에서 다양한 실시형태로 본원에 기술된 암의 치료에 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 다양한 실시형태로 본원에 기술된 암의 치료에 사용하기 위한, 다양한 실시형태로 본원에 기술된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 대상체는 포유 동물이고, 특히 여기서 대상체는 인간이다.
수성 담체로는 염수 및 완충 매질, 예를 들어 인산염 완충 염수 용액, 물, 에멀션, 예를 들어 오일/물 에멀션과 같은 에멀션, 다양한 유형의 습윤제, 멸균 용액 등을 비롯한 물, 알코올 용액/수용액, 에멀션 또는 현탁액을 들 수 있다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 공지된 종래 방법으로 제제화될 수 있다. 적합한 담체는 본 발명의 생리 활성 화합물과 결합되었을 때, 생물학적 활성을 유지하는 물질을 포함할 수 있다.
특정 작용제의 침투 허용, 전달되는 작용제의 효능 강화, 전달 시간 강화, 전달된 투여량 감소, 다양한 전달 방법으로부터의 부작용 감소, 환자 반응 감소 등을 위한 피부의 배리어 특성을 화학적으로 조절하도록 하는 노력이 당업계에서 이루어졌다.
이와 관련하여, 침투 증진제는 약물의 피부 표면의 투과성을 증가시키기 위하여 사용되어 왔으며, 종종 프로톤 수용 용매, 예를 들어 디메틸 술폭시드(DMSO) 및 디메틸아세트아미드이다. 효과적인 것으로 연구 및 보고된 다른 침투 증진제로는 2-피롤리딘, N,N-디에틸-m-톨루아미드(Deet), 1-도데칼-아자시클로헵탄-2-온, N,N-디메틸포름아미드, N-메틸-2-피롤리딘, 칼슘 티오글리콜레이트, 헥산올, 지방산 및 에스테르, 피롤리돈 유도체, 1,3-디옥산 및 1,3-디옥솔란의 유도체, 1-N-도데실-2-피롤리돈-5-카르복실산, 2-펜틸-2-옥소-피롤리딘아세트산, 2-도데실-2-옥소-1-피롤리딘아세트산, 1-아자시클로헵탄-2-온-2-도데실아세트산, 및 그 중에서도 1,3-디옥산의 유도체를 포함하는 아미노알코올 유도체를 들 수 있다.
점막 경유 투여를 위한 제제로는 멸균의 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 건조 분말 제제 및 에멀션을 들 수 있다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 오일, 및 주사 가능한 에틸 올레이트와 같은 유기 에스테르이다. 수성 담체로는 염수 및 완충 매질을 비롯한 물, 알코올 용액/수용액, 에멀션 또는 현탁액을 들 수 있다. 점막 경유 비히클로는 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트 링거, 또는 불휘발성유(fixed oils)를 들 수 있다. 예를 들어, 항균제, 항산화제, 킬레이트화제, 및 불활성 가스 등을 포함하는 방부제 및 다른 첨가제 또한 존재할 수 있다. 또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 단백질성 담체류, 예를 들어 혈청 알부민 또는 면역글로불린, 바람직하게는 인간 기원의 것을 포함할 수 있다.
다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 신체 표면에 국소적으로 투여될 수 있으며, 따라서, 적합한 국소 투여 형태로 제제화될 수 있다. 적합한 국소 제제로는 젤, 연고, 크림, 로션, 드롭스 등을 들 수 있다. 국소 투여를 위해, 다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 조성물이 제조되고 약제학적 담체와 함께 또는 없이 생리적으로 허용 가능한 희석제 내에서 용액, 현탁액, 또는 에멀션으로서 적용된다.
다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 또한 지효성(controlled-release) 조성물, 즉 활성 성분이 투여 후 일정 기간 동안 방출되는 조성물로서 투여될 수 있다. 지효성 또는 서방성(sustained-release) 조성물은 친유성 저장소(예를 들어, 지방산, 왁스, 오일) 내의 제제를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 조성물은 속방성(immediate-release) 조성물, 즉, 모든 활성 성분이 투여 후 즉시 방출되는 조성물이다.
적합한 제제에 대한 추가의 예는 WO 2006/085983에서 제공되며, 이의 전체 내용은 본원에서 참조로 포함된다. 예를 들어, 다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 리포솜 제제로 제공될 수 있다. 리포솜 현탁액을 형성하기 위한 기술은 공지되어 있다. 사용된 지질층은 임의의 종래의 조성물일 수 있으며 콜레스테롤을 함유하거나 또는 콜레스테롤을 함유하지 않을 수 있다. 리포솜은 표준 초음파 및 균질화 기술의 사용을 통해 크기가 감소될 수 있다. 다양한 실시양태로 본원에 개시된 본 발명의 약제학적 조성물을 함유하는 리포솜 제제는 동결 건조되어 물과 같은 약제학적으로 허용 가능한 담체로 환원되어 리포솜 현탁액을 재생할 수 있는 동결 건조물을 생성할 수 있다. 다양한 실시양태로 본원에 개시된 본 발명의 약제학적 조성물은 적합한 투여량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 투여량 처방은 주치의 및 임상 인자에 의해 결정될 것이다. 의약 분야에서 공지된 바와 같이, 임의의 한 대상체에 대한 투여량은 대상체의 크기, 신체 표면적, 나이, 투여될 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적인 건강, 및 동시에 투여되는 기타 약물을 포함하는 많은 인자에 의존한다.
다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물의 투여량은 치료되는 상태, 사용된 특정 조성물, 및 대상체의 체중, 크기 및 상태와 같은 기타 임상 인자, 신체 표면적, 투여될 특정 화합물 또는 조성물, 동시에 투여되는 기타 약물 및 투여 경로에 의존할 것이다.
다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 다른 생물학적 활성 물질 및 암 치료와 관련된 증상의 치료 절차와 함께 투여될 수 있다. 다른 생물학적 활성 물질은 혼합물 형태로 이미 본 발명에 따른 조성물을 포함하는 동일한 조성물의 일부일 수 있으며, 여기서 본 발명의 조성물 및 다른 생물학적 활성 물질은 동일한 약학적으로 허용 가능한 용매 및/또는 담체와 혼합되거나, 개별 조성물의 일부로서 별도로 제공될 수 있으며, 이는 개별적으로 또는 부품 키트의 형태로 함께 제공될 수 있다. 본 발명 내에서, 다른 생물학적 활성 물질은, 예를 들어 CTLA-4, PD-1 또는 PD-L1 억제제와 같은 면역관문 억제제일 수 있다.
다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물은 다른 생물학적 활성 물질 또는 물질들과 동시에 간헐적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 조성물은 제1 추가 생물학적 활성 물질과 동시에 또는 상기 조성물의 투여 후 또는 전에 순차적으로 투여될 수 있다. 하나 초과의 추가 생물학적 활성 물질 및 본 발명에 따른 적어도 하나의 조성물이 투여되는 적용 스킴이 선택되는 경우, 화합물 또는 물질은 부분적으로 동시에, 부분적으로 순차적으로 다양한 조합으로 투여될 수 있다.
따라서, 본 발명은 다양한 실시형태로 본원에 개시된 본 발명의 IL-18 결합 분자 또는 IL-18 결합 분자를 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 추가의 생물학적 활성 물질을 치료적 또는 예방적 유효량으로 포함하는 조성물의 혼합물, 및 예방 및/또는 치료적 처치를 위한 이러한 혼합물의 사용 방법을 제공한다.
기타 생물학적 활성 물질 또는 화합물은 본 발명에 따른 조성물과 동일 또는 유사한 메커니즘에 의해, 또는 관련되지 않은 작용의 메커니즘에 의해, 또는 다수의 관련된 및/또는 관련되지 않은 작용의 메커니즘에 의해 생물학적 효과를 발휘할 수 있다.
다양한 실시형태로 본원에서 개시된 본 발명의 조성물의 적합한 투여량은 대상체의 상태, 나이 및 종에 따라 다를 것이며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 수의학 및 인간 의학 양자에서 사용된 총 일일 투여량은 킬로그램 당 0.1mg 내지 10mg의 범위가 적합할 것이다.
또한, IL-18BP 결합 분자, 특히 IL-18BP의 기능적 유도체는 안정성, 반감기, 생체이용률, 인체에 의한 내성, 또는 면역원성과 같은 단백질의 성질을 개선하기 위해 중합체에 결합될 수 있다. 이러한 목표를 달성하기 위해, IL1-8BP는, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜(PEG)에 연결될 수 있다. PEG화(PEGylation)는, 예를 들어 WO 92/13095에 기술된 공지의 방법에 의해 수행될 수 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 실시형태에서, IL-18BP는 PEG화된다.
본 발명의 또 다른 실시형태에서, IL-18BP는 면역글로불린의 전부 또는 일부에 융합된 IL-18BP의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 단백질이고, 바람직하게는 면역글로불린의 불변 영역(Fc)에 융합되고, 여기서 융합 단백질은 여전히 IL-18에 결합할 수 있다. 보다 구체적으로, 면역글로불린은 IgG1 또는 IgG2 동종형일 수 있다.
본 발명의 추가 실시형태에서, IL-18BP는 PEG화, 면역글로불린의 전부 또는 일부에, 바람직하게는 면역글로불린의 불변 영역(Fc)에 융합되고, 여기서 융합 단백질은 여전히 IL-18에 결합할 수 있다. 보다 구체적으로, 면역글로불린은 IgG1 또는 IgG2 동종형일 수 있다.
당업자는 결과물인 융합 단백질이 IL-18BP의 생물학적 활성, 특히 IL-18에 대한 결합을 유지한다는 것을 이해할 것이다. 융합은 직접, 또는 1개 내지 3개의 아미노산 잔기의 길이 만큼 짧거나 또는 더 긴, 예를 들어 13개의 아미노산 잔기의 길이일 수 있는 짧은 링커 펩티드를 통하여 될 수 있다. 상기 링커는 IL-18BP 서열 및 면역글로불린 서열 사이에 도입되는, 예를 들어 서열 E-F-M (Glu-Phe-Met)의 트리펩티드, 또는 Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met(SEQ ID NO: 1)을 포함하는 13-아미노산 링커 서열일 수 있다. 결과물인 융합 단백질은 개선된 성질, 예를 들어 체액 내에서 연장된 잔류 시간(반감기), 증가된 특이적 활성, 증가된 발현 레벨을 가지며, 또는 융합 단백질의 정제가 용이하게 된다.
바람직하게는, 예를 들어 인간 IgG1의 CH2 및 CH3 도메인과 같은, 중쇄 영역에 융합된다. IL-18BP 및 면역글로불린의 일부를 포함하는 특정 융합 단백질의 생성은, 예를 들어 WO99/09063의 실시예 11에 기술되어 있다. 기타 Ig 분자의 아이소형 또한 본 발명에 따른 융합 단백질, 예를 들어 아이소형 IgG2 또는 IgG4, 또는 IgM 또는 IgA와 같은 기타 Ig 클래스의 생성에 적합하다. 융합 단백질은 단량체 또는 다량체, 헤테로 또는 호모다량체일 수 있다.
정의
본 출원의 범주 내에서 사용된 기술적인 용어 및 표현은 일반적으로 이하에서 달리 지시되지 않는 경우 해당 기술 분야에 적용되는 일반적인 의미를 부여한다.
본 명세서 및 첨부된 실시형태에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 그러므로, 예를 들어 참고로 "화합물"은 하나 이상의 화합물들을 포함하는 것이다.
용어 "치료", "치료하는" 등은 일반적으로 본원에서 원하는 약리학적 및/또는 생리적 효과를 얻는 것을 의미하는 것으로 사용된다. 효과는 완전히 또는 부분적으로 그의 질병 또는 증상을 예방하는 관점에서 예방적 일 수 있으며 그리고/또는 질병 및/또는 질병으로 인한 역효과를 부분적으로 또는 완전히 치료하는 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "치료"는 대상체의 질병의 임의의 치료를 커버하는 것으로 사용되며 이하: (a) 질병 예방, 즉 질병에 소인이 될 수 있는 대상체에서 발생하는 원하지 않는 면역 반응에 관련된 질병을 예방하는 단계; (b) 질병 억제, 즉 그의 전개를 정지시키는 단계; 또는 (c) 질병 완화, 즉 질병의 퇴행을 야기하는 단계; (d) 질병 증상의 역전, 즉 손상된 조직의 복구를 유도하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용된 표현 "IL-18 결합 단백질(IL-18BP)"은 전장 단백질, 돌연변이 단백질, 단편, 펩티드, 기능적 유도체, 기능적 단편, 파편, 순환 치환 유도체, IL-18BP를 포함하는 융합 단백질, 아이소형 또는 염을 포함하며, 이는 전장 참조 단백질의 특이적 활성, 특히 본원에 기술된 CAR-T 조절 활성을 유지하고 있다.
본원에서 사용된 용어 "유리 IL-18"은 단량체, 가용성 및 비복합체화된(non-complexed) 인터류킨 18 단백질을 의미한다.
용어 "기능적" 및 "활성"은 본원에서 동의어로 사용되며, 비개질된 또는 전장 IL-18 결합 분자, 특히 비개질된 IL-18BP로서 여전히 동일하거나 또는 본질적으로 동일한 생물학적, 약리학 적 및 치료학적 특성을 갖는 개질된 IL-18 BP 또는 IL-18BP의 일부를 의미하며, 따라서 비개질된 IL-18BP와 같은 방법으로 본원에서 개시된 바의 질병 및 장애의 치료를 위해 본 발명 내에서 사용될 수 있다. 특히, "기능적"은 개질된 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP가 CAR-T 치료에서 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP의 IL-18 조절 활성을 여전히 유지하고 있음을 의미하고, 따라서 특히 치료 중인 환자의 유리 IL-18의 레벨을 제어하거나 감소시킴으로써 CAR-T 치료의 부작용을 최소화하거나 방지할 수 있다.
본 발명의 다양한 실시형태에서, 용어 "IL-18BP"는 인간 IL-18BP, 특히 재조합 인간 IL-18BP, 특히 SEQ ID NO 2, 및 SEQ ID NO: 3, 4 및 5에 나타낸 IL-18BP의 아이소형 a, b, c 또는 d, 특히 아이소형 a, 특히 아이소형 c, 특히 아이소형 a, b, c 또는 d이지만, 특히 SEQ ID NO: 2에 나타낸 IL-18BP의 아이소형 a, 또는 SEQ ID NO 4에 나타낸 아이소형 c를 나타낸다.
본 발명의 목적을 위한 "환자" 또는 "대상체"는 상호 교환적으로 사용되며 인간 및 기타 동물 양자, 특히 포유 동물, 및 기타 유기체를 포함하는 의미이다. 그러므로, 방법은 인간 치료 및 수의학 적용 양자에 적용 가능하다. 바람직한 실시형태에서 환자 또는 대상체는 포유 동물이고, 가장 바람직한 실시형태에서 환자 또는 대상체는 인간이다.
표현 "조성물" 및 "약제학적 조성물"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 본 발명의 목적을 위해, 치료적으로 유효한 조성물, 특히 치료적 유효량의 활성 성분, 즉 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP, 및 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 지칭하는 것을 의미한다.
인간 또는 비인간 동물에서 상태의 치유적인 치료, 제어, 경감, 개선 또는 질병 또는 장애의 예방을 위한 적합한 조성물을 포함한다. 그러므로, 인간 또는 수의학의 영역에서 사용하기 위한 약제학적 조성물을 포함한다. 이러한 "조성물"은 적어도 하나의 IL-18 결합 분자, 특히 IL-18BP, 또는 염 및 담체 및 부형제가 이와 함께 처리되는 표적 유기체에 의해 허용되는, 생리적으로 허용 가능한 이의 염, 및 선택적으로 담체 또는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 한다.
"치료적 유효량"은 주어진 조건 및 투여 요법에 대해 치료 효과를 제공하는 양을 의미한다. 특히, "치료적 유효량"은 질병 증상의 효과적인 예방, 전환, 경감 또는 완화 또는 인간 또는 비인간 동물일 수 있는 치료될 대상체의 생존의 연장에 효과적인 양을 의미한다. 치료적 유효량의 결정은 당업자의 기술 범위 내에 있다. 특히, 본 발명의 경우 "치료적 또는 예방적 유효량"은 단백질 또는 펩티드, 돌연변이 단백질, 기능적 유도체, 파편, 순환 치환 유도체, 융합 단백질, 아이소형 또는 염, 및 인간 또는 동물에게 투여 되었을 때, 상기 인간 또는 동물에서 치료적 또는 예방적 효과를 유도하는 화합물 또는 약제학적 조성물의 양을 의미한다. 유효량은 루틴한 절차에 따라 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량 또는 투여량은 광범위한 제한 내에서 다를 수 있으며 관련 기술 분야에서 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 투여량은 광범위한 제한 내에서 다를 수 있으며, 물론, 각각의 특정 경우에 개별적인 요건에 따라 조정되어야 한다.
용어 "점막 경유" 투여는 화합물이 신체의 모든 부분의 점막에 의해 흡수되는 다양한 투여 경로를 의미한다. 점막 경유 투여로는, 즉 비강 내, 구강, 경구 점막경유, 기관 내, 요로 내, 직장 내, 질 내, 설하, 기관지 내, 폐 내 및 경피 투여를 들 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
정의 "약제학적으로 허용 가능한"은 활성 성분의 생물학적 활성의 효능을 간섭하지 않으며 투여되는 숙주에 독성이 없는 담체, 부형제, 희석제 또는 비히클을 포함하는 것을 의미한다.
용어 "융합 단백질"은, 예를 들어 체액 내에서 연장된 잔류 시간을 갖는 또 다른 단백질과 융합된 IL-18BP, 또는 바이러스성 IL-18BP, 또는 돌연변이 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. 따라서, IL-18BP 또는 바이러스성 IL-18BP는 또 다른 단백질, 폴리펩티드 등, 예를 들어 면역글로불린 또는 이의 단편에 융합될 수 있다.
이들 아이소형, 돌연변이 단백질, 융합 단백질 또는 기능적 유도체는 특히 IL-18에 결합하는, IL-18BP의 생물학적 활성을 유지하며, 바람직하게는 필수적으로 IL-18BP와 유사한 적어도 하나의 활성을 갖는다. 이상적으로, 이러한 단백질은 비개질된 IL-18BP와 비교하여 심지어 증가된 생물학적 활성을 갖는다. 바람직한 활성 파편은 IL-18BP의 활성보다 더 우수한 활성을 가지거나, 또는 더 우수한 안정성 또는 더 낮은 독성 또는 면역원성과 같은 추가의 장점을 갖거나, 또는 이들은 대량 생산이 더 용이하거나 또는 정제가 더 용이하다.
용어 "인터류킨 18 결합 단백질(IL-18BP)"은 돌연변이 단백질, 기능적 유도체, 파편, 생리 활성 펩티드, 순환 치환 유도체, 융합 단백질, 아이소형 및 염을 포함하는, IL-18BP의 기능적 등가물 또한 포함한다.
특히, IL-18BP의 기능적 등가물은 SEQ ID NO: 2에 나타낸 서열에 대해 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 서열 동일성을 가질 수 있고, 이는 참조 분자의 조절제 활성을 유지하며, 바람직하게는 IL-18 결합 특이성 및 본원에 기술된 부작용을 방지하거나 최소화하는 능력을 유지한다.
본원에서 사용된 용어 "돌연변이 단백질"은 야생형 IL-18BP 또는 바이러스성 IL-18BP와 비교하여 결과물인 생성물의 활성에 상당한 변화 없이 천연 IL-18BP 또는 바이러스성 IL-18BP의 아미노산 잔기의 하나 이상이 상이한 아미노산 잔기로 대체되거나, 또는 결실되며, 또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 IL-18BP, 또는 바이러스성 IL-18BP의 자연 서열에 첨가된 IL-18BP의 유사체, 또는 바이러스성 IL-18BP의 유사체를 의미한다. 이들 돌연변이 단백질은 공지의 합성 및/또는 부위 지정 돌연변이 유발 기술, 높은 처리량 돌연변이 유발, DNA 셔플링, 단백질 진화 기술, 또는 기타 그에 대한 다른 공지 기술에 의해 제조된다.
이러한 돌연변이 단백질은 바람직하게는 IL-18BP와 실질적으로 유사한 활성을 갖도록 충분히 복제된 IL-18BP 또는 충분히 복제된 바이러스성 IL-18BP의 아미노산의 서열을 갖는다. IL-18BP의 한 활성은 IL-18을 결합하는 그의 능력이다. 돌연변이 단백질이 IL-18에 실질적인 결합 활성을 갖는 한, 그것은 친화 크로마토그래피의 수단과 같은 IL-18의 정제에 사용될 수 있으며, 따라서 IL-18BP와 실질적으로 유사한 활성을 갖는 것으로 고려될 수 있다. 그러므로, 그것은 예를 들어 방사면역분석법 또는 ELISA 분석법과 같은 적절하게 표지된 IL-18에 결합하는 지의 여부를 결정하기 위한 간단한 샌드위치 경쟁 분석법으로 이러한 돌연변이 단백질을 실행하는 것을 포함하는 루틴한 실험 수단에 의해 주어진 돌연변이 단백질이 IL-18BP와 실질적으로 동일한 활성을 갖는지를 결정할 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 IL-18BP 폴리펩티드의 돌연변이 단백질 또는 바이러스성 IL-18BPs의 돌연변이 단백질, 또는 핵산 코딩은 그러므로 본원에서 나타낸 교시 및 지침에 기초하여, 과도한 실험 없이 당업자에 의해 루틴하게 수득 될 수 있는 치환 펩티드 또는 폴리뉴클레오티드로서 실질적으로 상응하는 서열의 유한 집합을 포함한다.
본 발명에 따른 돌연변이 단백질에 대한 바람직한 변화는 "보전적" 치환으로서 공지되어 있는 것이다. IL-18BP 폴리펩티드 또는 단백질 또는 바이러스성 IL-18BPs의 보전적 아미노산 치환은 기의 구성원 간의 치환이 분자의 생물학적 기능을 유지하는 충분히 유사한 물리화학적 성질을 갖는 기 내에서 동의 아미노산을 포함할 수 있다(Grantham, 1974). 특히 삽입 또는 결실이 오로지 수개의 아미노산, 즉, 30 이하, 및 바람직하게는 10 이하를 포함하며 기능성 형태에 중요한 아미노산, 즉 시스테인 잔기를 제거 또는 대체하지 않는다면 아미노산의 삽입 및 결실은 또한 그들의 기능을 변경함이 없이 상술한 서열로 또한 만들어질 수 있음은 명백하다. 단백질 및 돌연변이 단백질은 본 발명의 범위 내에 속하는 이러한 결실 및/또는 삽입에 의해 제조된다.
본원에서 사용된 "기능적 유도체"는 당업계의 공지된 방법에 의해 잔기의 측쇄에서 발생하는 작용기 또는 N 또는 C 말단기로부터 제조될 수 있는 IL-18BPs 또는 바이러스성 IL-18BP의 유도체, 및 그들의 돌연변이 단백질 및 융합 단백질을 커버하며, 이들이 약제학적으로 허용 가능하도록 유지되는 한, 즉 이들이 IL-18BP, 또는 바이러스성 IL-18BPs의 활성과 실질적으로 유사한 단백질의 활성을 파괴하지 않고, 그것을 함유하는 조성물에 대하여 독성을 부여하지 않는다면, 본 발명에 포함된다.
이들 유도체는, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 측쇄를 포함하며, 이것은 항원 부위를 마스크할 수 있으며 체액에서 IL-18BP 또는 바이러스성 IL-18BP의 잔류를 연장한다. 기타 유도체는 카르복실기의 지방족 에스테르, 암모니아 또는 일차 또는 이차 아민과의 반응에 의한 카르복실기의 아미드, 아실 잔기(예를 들어 알칸올 또는 카르비시클릭 아로일기)로 형성된 아미노산 잔기의 유리 아미노기의 N-아실 유도체 또는 아실 잔기와 형성된 유리 히드록실기의 O-아실 유도체(예를 들어 세릴 또는 트레오닐 잔기의 유도체)를 포함한다.
IL-18BP, 또는 바이러스성 IL-18BP, 돌연변이 단백질 및 융합 단백질의 "기능적 단편"으로서, 본 발명은 IL-18BP 단백질 분자 단독 또는 거기에 연결된 관련 분자 또는 잔기와 함께의 폴리펩티드 사슬의 단편 또는 전구체, 예를 들어 당 또는 포스페이트 잔기, 또는 그들 자신에 의한 단백질 분자 또는 당 잔기의 집합체를 커버하며, 단, 상기 파편은 실질적으로 IL-18BP와 유사한 활성을 갖는다.
본원에서 용어 "염"은 IL-18BP 분자 또는 이의 유사체의 카르복실기의 염 및 아미노기의 산부가염 양자를 의미한다. 카르복실기의 염은 당업계에 공지된 수단에 의해 형성될 수 있으며 무기염, 예를 들어 나트륨, 칼슘, 암모늄, 제2철 또는 아연 염 등, 및 형성된 것으로서 유기 염기와의 염, 예를 들어 아민과의 염, 예를 들어 트리에탄올아민, 아르기닌 또는 라이신, 피페리딘, 프로카인 등을 포함한다. 산부가염은, 예를 들어 염산 또는 황산과 같은 광산과의 염, 및 예를 들어 아세트산 또는 옥살산과 같은 유기산과의 염을 포함한다. 물론, 이러한 염들은 IL-18BP의 생물학적 활성, 예를 들어 IL-18에 결합하는 능력을 유지해야 한다.
IL-18BP의 "아이소형"은 IL-18 또는 대안적인 스플라이싱에 의해 생성될 수 있는 이의 단편을 결합할 수 있는 단백질이다.
본원에서 사용된 용어 "억제(inhibit)", "중화(neutralize)" 또는 "차단(block)"은 측정 가능한 양으로 분자, 반응, 상호작용, 유전자 발현, mRNA, 및/또는 단백질의 발현, 안정성, 기능 또는 활성을 감소시키거나 또는 전체적으로 방지하는 것을 의미하는 동의어로 이해해야 한다. 억제제, 예를 들어 길항제는 단백질, 유전자, 및 mRNA 안정성, 발현, 기능 및 활성을, 예를 들어 부분적으로 또는 전체적으로 차단 자극, 감소, 예방, 활성화 지연, 비활성화, 탈감작, 또는 조절 저하하도록 만드는 화합물이다.
용어 "키메라 항원 수용체" 또는 대안적으로 "CAR"은 면역 이펙터 세포에 있을 때 표적 T 세포, 일반적으로는 암 세포에 대한 특이성, 및 세포 내 신호 생성을 세포에 제공하는, 가장 간단한 실시형태에서 일반적으로 2개인 폴리펩티드 세트를 의미한다. 일부 실시형태에서, CAR은 적어도 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 하기에 정의되는 자극 분자 및/또는 동시 자극 분자로부터 유도된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포질 신호전달 도메인(본원에서 "세포 내 신호전달 도메인"이라고도 한다)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩티드 세트는 서로 인접한다.
일부 실시형태에서, 폴리펩티드 세트는 이량체화 분자의 존재 시에 폴리펩티드를 서로 커플링할 수 있는, 예를 들어 항원 결합 도메인을 세포 내 신호전달 도메인에 커플링할 수 있는 이량체화 스위치를 포함한다. 한 측면에서, 자극 분자는 T 세포 수용체 복합체와 관련된 제타 사슬이다. 한 실시형태에서, 세포질 신호전달 도메인은 하기 정의되는 적어도 하나의 공동 자극 분자로부터 유래된 하나 이상의 기능적 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 한 측면에서, 공동 자극 분자는 본원에 기재된 공동 자극 분자, 예를 들어 4-1BB(즉, CD137), CD27 및/또는 CD28로부터 선택된다. 한 실시형태에서, CAR은 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 한 실시형태에서, CAR은 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 공동 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 한 실시형태에서, CAR은 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 하나 이상의 공동 자극 분자(들)로부터 유래된 2개의 기능적 신호전달 도메인 및 자극 분자로부터 유래된 기능적 신호전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 한 실시형태에서, CAR은 세포외 항원 결합 도메인, 막횡단 도메인, 및 하나 이상의 공동자극 분자(들)로부터 유래된 적어도 2개의 기능적 신호전달 도메인 및 자극 분자. 한 실시양태에서, CAR은 CAR 융합 단백질의 아미노 말단(N-ter)에 선택적 리더 서열을 포함한다. 한 실시형태에서, CAR은 세포 외 항원 결합 도메인의 N 말단에 리더 서열을 추가로 포함하고, 여기서 리더 서열은 CAR-To 세포막의 세포 프로세싱 및 국소화 시에 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)으로부터 선택적으로 절단된다.
CAR-That은 본원에 기재된 것과 같은 특정 종양 형성자 X를 표적으로 하는 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv 또는 TCR)을 포함하며, XCAR로도 지칭된다. 예를 들어, CAR-That은 CD19를 표적으로 하는 항원 결합 도메인을 포함하며 이는 CD19CAR로 지칭된다.
용어 "신호전달 도메인"은 세포 내에서 정보를 전송함으로써 작용하여, 제2 전달자를 생성함으로써 또는 이러한 전달자에 대한 반응에 의해 이펙터로서 기능함으로써, 정의된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절하는 단백질의 기능적 일부를 의미한다.
항체 또는 항체 단편을 포함하는 CAR의 부분은 항원 결합 도메인이, 예를 들어 단일 도메인 항체 단편(sdAb), 단일 사슬 항체(scFv), 인간화 항체 또는 이중 특이성 항체를 포함하는 연속적인 폴리펩티드 사슬의 일부로서 발현되는 다양한 형태로 존재할 수 있다(Harlow 등, 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow 등, 1989, In: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird 등, 1988, Science 242:423-426). 한 측면에서, 본 발명의 CAR 조성물의 항원 결합 도메인은 항체 단편을 포함한다. 추가 측면에서, CAR은 scFv를 포함하는 항체 단편을 포함한다. 제공된 CDR의 정확한 아미노산 서열 경계는 Kabat 등(1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD("Kabat" numbering scheme), Al-Lazikani 등(1997) JMB 273,927-948("Chothia" numbering scheme)에 의해 기술된 것을 포함하는 임의의 다수의 공지된 스킴 또는 이들의 조합을 사용하여 결정될 수 있다.
용어 "항체 단편"은 항원의 에피토프와 특이적으로 상호작용(예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/불안정화, 공간 분포에 의해)하는 능력을 유지하는 항체의 적어도 한 부분을 의미한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, scFv 항체 단편, 이황화 연결 Fv(sdFv), VH 및 CHI 도메인으로 이루어지는 Fd 단편, 선형 항체, sdAb(VL 또는 VH)와 같은 단일 도메인 항체, 낙타류 VHH 도메인, 힌지 영역에서 디설파이드 브러지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편과 같은 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체, 및 분리된 CDR 또는 항체의 다른 에피토프 결합 단편을 들 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 항원 결합 단편은 또한 단일 도메인 항체, 맥시바디, 미니바디, 나노바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 bis-scFv에 포함될 수 있다(예를 들어, Hollinger와 Hudson, Nature Biotechnology 23: 1126-1136, 2005 참조). 항원 결합 단편은 또한 피브로넥틴 III형(Fn3)과 같은 폴리펩티드에 기반한 스캐폴드에 접목될 수 있다(피브로넥틴 폴리펩티드 미니바디를 설명하는 미국 특허 제6,703,199 참조).
용어 "scFv"는 경쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 적어도 하나의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 의미하며, 여기서 경쇄 및 중쇄 가변 영역은, 예를 들어 합성 링커, 예를 들어 짧은 유연한 폴리펩티드 링커를 통해 연속적으로 연결되고 단일 사슬 폴리펩티드로 발현될 수 있으며, 여기서 scFv는 그것이 유래된 온전한 항체의 특이성을 유지한다. 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 scFv는, 예를 들어 폴리펩티드의 N 말단 및 C 말단과 관련하여 순서대로 VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있고, scFv는 VL-링커-VH를 포함할 수 있거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 CAR의 부분은 항원 결합 도메인이, 예를 들어 단일 도메인 항체 단편(single domain antibody fragment, sdAb), 단일 사슬 항체(single chain antibody, scFv), 인간화 항체 또는 이중특이성 항체를 포함하는, 인접한 폴리펩티드 사슬의 일부로서 발현되는 다양한 형태로 존재할 수 있다(Harlow 등, 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow 등, 1989, In: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston 등, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird 등, 1988, Science 242:423-426). 한 측면에서, 본 발명의 CAR 조성물의 항원 결합 도메인은 항체 단편을 포함한다. 추가 측면에서, CAR은 scFv를 포함하는 항체 단편을 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "결합 도메인" 또는 "항체 분자"는 적어도 하나의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 단백질, 예를 들어 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편을 의미한다. 용어 "결합 도메인" 또는 "항체 분자"는 항체 및 항체 단편을 포함한다. 한 실시형태에서, 항체 분자는 다중특이적 항체 분자이고, 예를 들어 이는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하며, 여기서 복수의 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖고, 복수의 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 한 실시형태에서, 다중특이적 항체 분자는 이중특이적 항체 분자이다. 이중특이적 항체는 2개 이하의 항원에 대해 특이성을 갖는다. 이중특이적 항체 분자는 제1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다.
용어 "항체 중쇄"는 항체 분자에 천연 발생 형태로 존재하는 두 가지 유형의 폴리펩티드 사슬 중 더 큰 것을 의미하며, 이는 일반적으로 항체가 속하는 부류를 결정한다.
용어 "항체 경쇄"는 항체 분자에 천연 발생 형태로 존재하는 두 가지 유형의 폴리펩티드 사슬 중 더 작은 것을 의미한다. 카파(κ) 및 람다(λ) 경쇄는 두 가지 주요 항체 경쇄 아이소형을 의미한다.
용어 "재조합 항체"는 재조합 DNA 기술을 사용하여 생성된 항체, 예를 들어 박테리오파지 또는 효모 발현 시스템에 의해 발현된 항체를 의미한다. 이 용어는 또한 항체를 코딩하는 DNA 분자의 합성에 의해 생성되고 DNA 분자가 항체 단백질을 발현하는 항체, 또는 항체를 특정하는 아미노산 서열을 의미하는 것으로 해석되어야 하며, 여기서 DNA 또는 아미노산 서열은 이용 가능하며 당업계에 공지된 재조합 DNA 또는 아미노산 서열 기술을 사용하여 수득했다.
용어 "항원" 또는 "Ag"는 면역 반응을 유발하는 분자를 의미한다. 이 면역 반응은 항체 생성 또는 특정 면역학적으로 적격의 T 세포의 활성화, 또는 양자 모두를 포함할 수 있다. 당업자는 사실상 모든 단백질 또는 펩티드를 포함하는 임의의 거대 분자가 항원으로 작용할 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 항원은 재조합 또는 게놈 DNA로부터 파생될 수 있다. 당업자는 면역 반응을 유도하는 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열 또는 부분적인 뉴클레오티드 서열을 포함하는 임의의 DNA가 본원에서 사용된 용어 "항원"을 코딩한다는 것을 이해할 것이다. 또한, 당업자는 항원이 유전자의 전장 뉴클레오티드 서열에 의해서만 코딩될 필요가 없음을 이해할 것이다. 본 발명이 하나 초과의 유전자의 부분적 뉴클레오티드 서열의 사용을 포함하지만 이에 제한되지 않는다는 것과, 이들 뉴클레오티드 서열이 다양한 조합으로 배열되어 원하는 면역 반응을 유도하는 폴리펩티드를 코딩한다는 것은 명백하다. 더욱이, 당업자는 항원이 "유전자"에 의해 코딩될 필요가 전혀 없음을 이해할 것이다. 항원이 합성되어 생성될 수 있거나 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있거나 폴리펩티드 이외의 거대 분자일 수 있다는 것은 명백하다. 이러한 생물학적 샘플은 조직 샘플, 종양 샘플, 세포 또는 기타 생물학적 성분을 갖는 유체를 포함할 수 있지만, 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 "항암 효과"는, 예를 들어 종양 크기의 감소, 암 세포 수의 감소, 전이 수의 감소, 기대 수명의 증가, 암 세포 증식의 감소, 암 세포 생존의 감소, 또는 암 상태와 관련된 다양한 생리학적 증상의 완화를 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 다양한 수단에 의해 나타날 수 있는 생물학적 효과를 의미한다. "항암 효과"는 또한 처음부터 암 발생을 예방하는 펩티드, 폴리뉴클레오티드, 세포 및 항체의 능력에 의해 나타날 수 있다. 용어 "항종양 효과"는, 예를 들어 종양 크기의 감소, 종양 세포 수 감소, 종양 세포 증식의 감소, 또는 종양 세포 생존의 감소를 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 다양한 수단에 의해 나타날 수 있는 생물학적 효과를 의미한다.
어구 "본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 질병"은 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 또는 본원에 기술된 종양 항원을 발현하는 세포와 관련된 상태를 포함하지만, 이에 제한되지 않으며, 예를 들어 암 또는 악성 종양과 같은 증식성 질병, 또는 골수형성이상증, 골수이형성 증후군 또는 전백혈병과 같은 전암 상태; 또는 본원에 기술된 종양 항원을 발현하는 세포와 관련된 비암 관련 징후를 포함한다. 한 측면에서, 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 암은 혈액암이다. 한 측면에서, 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 암은 고형암이다. 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 추가 질병은, 예를 들어 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 비정형(atypical) 및/또는 비전형적(non-classical) 암, 악성 종양, 전암 상태 또는 증식성 질병을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 기술된 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후는, 예를 들어 자가면역 질병(예를 들어, 루푸스), 염증성 장애(알레르기 및 천식) 및 이식을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 종양 항원 발현 세포는 종양 항원을 코딩하는 mRNA를 발현하거나 임의의 시간에 발현된다. 한 실시형태에서, 종양 항원 발현 세포는 종양 항원 단백질(예를 들어, 야생형 또는 돌연변이체)을 생성하고, 종양 항원 단백질은 정상 수준 또는 감소된 수준으로 존재할 수 있다. 한 실시형태에서, 종양 항원 발현 세포는 한 지점에서 검출 가능한 수준의 종양 항원 단백질을 생성했고, 이어서 실질적으로 검출 가능한 종양 항원 단백질을 생성하지 않았다.
용어 "암 관련 항원" 또는 "종양 항원"은 상호 교환적으로, 암 세포의 표면에서 전체적으로 또는 단편(예를 들어, MHC/펩티드)으로 발현되고, 암 세포에 대한 약리학적 작용제의 우선적 표적화에 유용한 분자(일반적으로 단백질, 탄수화물 또는 지질)를 의미한다. 일부 실시형태에서, 종양 항원은 정상 세포 및 암 세포 모두에 의해 발현되는 마커, 예를 들어 계통 마커, 예를 들어 B 세포 상의 CD19이다. 일부 실시형태에서, 종양 항원은 정상 세포와 비교하여 암 세포에서 과발현되는, 예를 들어 정상 세포와 비교하여 1배 과발현, 2배 과발현, 3배 과발현 또는 그 이상으로 과발현되는 세포 표면 분자이다. 일부 실시형태에서, 종양 항원은 암 세포에서 부적절하게 합성된 세포 표면 분자, 예를 들어 정상 세포에서 발현된 분자와 비교하여 결실, 삽입 또는 돌연변이를 포함하는 분자이다. 일부 실시형태에서, 종양 항원은 전체적으로 또는 단편(예를 들어, MHC/펩티드)으로서 암 세포의 세포 표면에서만 독점적으로 발현될 것이고, 정상 세포의 표면에서는 합성되거나 발현되지 않을 것이다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 CAR은 MHC 제시 펩티드에 결합하는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 항체 단편)을 포함하는 CAR을 포함한다. 일반적으로, 내인성 단백질에서 파생된 펩티드는 주요 조직 적합성 복합체(MHC) 클래스 I 분자의 포켓을 채우고, CD8+T 림프구의 T 세포 수용체(TCR)에 의해 인식된다. MHC 클래스 I 복합체는 모든 유핵 세포에 의해 구성적으로 발현된다. 암에서, 바이러스 특이적 및/또는 종양 특이적 펩티드/MHC 복합체는 면역 요법을 위한 세포 표면 표적의 독특한 클래스를 나타낸다. 인간 백혈구 항원(HLA)-A1 또는 HLA-A2와 관련하여 바이러스 또는 종양 항원에서 파생된 펩티드를 표적으로 하는 TCR 유사 항체가 기술되어 있다(예를 들어, Sastry 등, J Virol. 2011 85(5): 1935-1942; Sergeeva 등, Blood, 2011 117(16):4262-4272; Verma 등, J Immunol 2010 184(4):2156-2165; Willemsen 등, Gene Ther 2001 8(21) : 1601-1608 ; Dao 등, Sci Transl Med 2013 5(176) : 176ra33 ; Tassev 등, Cancer Gene Ther 2012 19(2):84-100 참조). 예를 들어, TCR 유사 항체는 인간 scFv 파지 디스플레이 라이브러리와 같은 라이브러리를 스크리닝함으로써 식별될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, "종양 항원" 또는 "과증식성 장애 항원" 또는 "과증식성 장애와 관련된 항원"은 암과 같은 특정 과증식성 장애에 공통적인 항원을 의미한다.
서열의 간단한 설명
SEQ ID NO 1: hIL-18BP의 13-아미노산 링커 서열:
Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met
SEQ ID NO 2: IL-18 결합 단백질(hIL-18BP)의 아미노산 서열, 아이소형 a
TPVSQTTTAA TASVRSTKDP CPSQPPVFPA AKQCPALEVT WPEVEVPLNG TLSLSCVACS RFPNFSILYW LGNGSFIEHL PGRLWEGSTS RERGSTGTQL CKALVLEQLT PALHSTNFSC VLVDPEQVVQ RHVVLAQLWA GLRATLPPTQ EALPSSHSSP QQQG
SEQ ID NO 3: IL-18 결합 단백질(hIL-18BP)의 아미노산 서열, 아이소형 b
TPVSQTTTAA TASVRSTKDP CPSQPPVFPA AKQCPALEVT WPEVEVPL SWAEGNLAPH PRSPALQPQQ STAAGLRLST GPAAAQP
SEQ ID NO: 4: IL-18 결합 단백질(hIL-18BP)의 아미노산 서열, 아이소형 c
TPVSQTTTAA TASVRSTKDP CPSQPPVFPA AKQCPALEVT WPEVEVPLNG TLSLSCVACS RFPNFSILYW LGNGSFIEHL PGRLWEGSTS RERGSTGTQL CKALVLEQLT PALHSTNFSC VLVDPEQVVQ RHVVLAQLWV RSPRRGLQEQ EELCFHMWGK GGLCQSSL
SEQ ID NO: 5: IL-18 결합 단백질(hIL-18BP)의 아미노산 서열, 아이소형 d
TPVSQTTTAA TASVRSTKDP CPSQPPVFPA AKQCPALEVT WPEVEVPLNG TLSLSCVACS RFPNFSILYW LGNGSFIEHL PGRLWEGSTS RERGSTGWAE GNLAPHPRSP ALQPQQSTAA GRLSTGPAAA QP
본 발명은 또한 이하의 도면, 도면 범례 및 이하의 비제한적 실시예를 특징으로 한다.
도 1: CAR-T 세포 유도 CRS의 IL-18 의존적 및 독립적 경로.
도 2: IL-18은 CAR-T 세포에서 IFN-γ 분비를 증가시킨다. 3일에 걸친 CAR-T 세포로부터의 IFN-γ 분비의 동역학. IFN-γ 레벨 대 CAR-T 세포 단독으로 관찰된 레벨의 변화의 통계적 유의성이 보고된다(*: p<0.05; **: p<0.005).
도 3: IL-18 매개 IFN-γ 분비는 rhIL-18BP에 의해 철폐된다. 종양+CAR-T 세포로 1일째 레벨로 정상화된 매일 이후 배양 배지에서의 IFN-γ 레벨의 누적 증가. IFN-γ 증가 대 종양+CAR-T 세포에서 관찰된 증가의 변동의 통계적 유의성이 보고된다(ns: 유의하지 않음; *: p<0.05; ***: p<0.0005).
도 4: IL-12 증폭 IFN-γ 분비는 rhIL-18BP에 의해 크게 감소한다. 종양+CAR-T 세포로 1일째 레벨로 정상화된 매일 이후 배양 배지에서의 IFN-γ 레벨의 누적 증가. IFN-γ 증가 대 종양+CAR-T 세포에서 관찰된 증가의 변동의 통계적 유의성이 보고된다(*: p<0.05; ***: p<0.0005).
실시예
실시예 1: 뮤린(murine) B16F10 흑색종의 치료의 CAR-T 세포에서 형질전환적으로 코딩된 마우스 IL-18의 생성. CAR-T 세포 치료에 의해 유발된 IL-18 구동 사이토카인 방출 증후군을 완화하는 rhIL-18BP의 효능.
IL-18 신호전달은 TCR 신호전달을 향상시키고 따라서 CAR-T가 T 세포 활성화 및 증식을 위한 TCR 신호전달 도메인을 포함하기 때문에 CAR-T 활성화/증식도 강화할 수 있다고 결론지었다. 그러나 주의할 점은 증가된 CAR-T 활성화가 지나친 항원 특이적 T 세포 활성화 및 또한 사이토카인 방출 증후군과 유사한 과염증 상태를 모방하는 Ag 비특이적 활성화로 이어질 수 있다는 것이다.
방법
뮤린 T 세포는 뮤린 IL-18 및 특정 종양 관련 항원(뮤린 CD19-IL-18)인 뮤린 CD19에 대한 항체 단편을 발현하도록 조작된다. 뮤린 CD19-IL-18 CAR-T 세포는 표면 항원 CD19를 발현하는 B16F10 흑색종 종양이 있는 C57BL/6 마우스에 입양 전달된다. CAR-T 세포에서의 IL-18의 동시 발현은 T-bethigh 표현형의 발달을 초래하고, CAR-T 세포를 Th1 이펙터 쪽으로 분극화하며 전신 급성 염증 반응을 자극한다.
CAR-T 세포가 이식된 지 일주일 후 마우스가 CAR-T 세포 증식과 일치하는 혈액에서 매우 높은 레벨의 IL-18을 나타내고 그 후에 감소한다는 것이 이전에 관찰되었다. 높은 레벨의 IL-18과 동시에 전신 염증의 경미한 징후와 함께 사이토카인 방출 증후군의 주요 징후로서 마우스의 체중이 감소했다.
유해한 부작용을 최소화하기 위한 전략은 인간에게 유해한 합병증 없이 고형 종양에서 이 치료를 사용하는 매력적인 접근법을 나타낸다.
CAR-T 세포 전달 후 수 일 내에 rhIL-18BP를 투여하는 것은 놀랍게도 유해한 독성 효과를 방지하는 안전한 방법을 나타낸다. 이와 관련하여, rhIL-18BP는 부작용의 발생 시 또는 예를 들어 환자의 상승된 순환 IL-18 레벨의 결정 시에 식염수에서 1mg/kg 내지 3mg/kg의 투여량으로 정맥 내 투여, 또는 피하 투여, 또는 부하 용량에 대해 정맥 내 투여하고 그 후에 피하 투여될 수 있다.
실시예 2: CAR-T 세포 유도 CRS의 IL-18 의존적 자극 및 IL-18BP에 의한 완화
CAR-T 세포 치료는 혁신적인 암 치료법으로 간주되고; CAR-T 세포 치료의 치유 가능성은 암 치료의 패러다임 전환을 나타낸다. 지난 수 년 동안, 이 분야에서 급속한 발전이 있었고, CD19 표적 CAR-T 세포는 이제 B 세포 백혈병 및 림프종의 치료를 위해 FDA의 승인을 받았다; 예를 들어, Maude SL, Laetsch TW, Buechner J 등(2018) "Tisagenlecleucel in children and young adult with B-cell lymphoblastic leukemia." N Engl J Med. 378:439-448 또는 Neelapu SS, Locke FL, Bartlett NL, 등(2017) "Axicabtagene ciloleucel CAR-T-cell therapy in refractory large B-cell lymphoma." N Engl J Med. 377:2531-2544 참조.
완화율의 유망한 결과에도 불구하고, CAR-T 세포 주입을 받는 환자는 종종 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 형태로 제어되지 않는 면역 활성화를 경험한다. 이 과염증 반응은 CAR-T 세포 치료의 완전한 치료 가능성을 제한하는 생명 위협 치료 관련 독성이다. 초기 CAR-T 세포 시험에 등록된 환자의 대략 45%-50%는 집중 치료 관리가 필요했다. CRS 관리에 대한 더 많은 경험과 초기 개입으로 인해, 이 비율이 감소될 수 있다.
CAR-T 세포 주입 후 CRS 관리는 현재 IL-6R 차단을 제공하기 위해 토실리주맙을 사용하는 것이 지배적이다. 이 치료는 CRS 증상의 관리를 개선했다. 그럼에도 불구하고, IL-6R 차단이 CAR-T 세포에 따른 신경학적 후유증에 미치는 영향은 오늘날에도 아직 알려지지 않았다.
CRS의 분자 기반을 해독하기 위한 작용 가설 중 하나는 CRS가 IL-1β/IL-6 경로와 IL-18/IFN-γ 경로의 두 가지 별개의 사이토카인 신호전달 경로의 유도로 인해 발생한다는 것이다. 지금까지 첫 번째 경로에 초점을 맞춘 치료적 접근법은 완전히 만족스러운 효능/안전성 프로파일을 제공하지 못했다.
IL-18은 IL-1 계열에 속하는 전염증성 사이토카인으로, IFN-γ 유도 특성이 처음으로 확인되었다. IL-18에 결합함으로써, IL-18 결합 단백질(IL-18BP)은 IL-18을 중화시키고 관련 면역 반응의 주요 조절자 역할을 한다.
건강한 상태에서, 모든 IL-18은 IL-18BP에 의해 결합되며, 유리 활성 IL-18은 없거나 거의 없다. 전신성 염증 장애를 앓고 있는 환자의 경우, IL-18 및 IL-18BP 레벨이 모두 급격하게 증가하지만, IL-18의 보다 높은 상승으로 인해, IL-18BP는 활성 유리 형태의 IL-18을 효율적으로 중화할 수 없으며, 이는 유리 IL-18의 병리학적 존재를 유도한다. IL-18 BP에 의해 불활성화되지 않는 유리 IL-18은 면역 체계를 지속적으로 유도하여 심각한 자가염증 상황 및 치명적인 결과를 초래할 수 있는 CRS를 유발할 수 있다.
중증 희귀 자가염증성 질병(혈구탐식성 림프조직구증(HLH))의 치료에 사용하기 위한 재조합 인간 IL-18BP(rhIL-18BP, Tadekinig alfa)가 현재 개발 중이다. HLH는 다량의 염증성 사이토카인 분비를 유발하는 활성화된 림프구 및 대식 세포의 통제되지 않은 증식을 특징으로 하는 고페리티틴혈증성(hyperferritinemic) 전신 염증성 장애이다. HLH 환자의 상태가 대식 세포 활성화 증후군(macrophage activation syndrome, MAS)으로 발전할 때에 높은 레벨의 IL-18, 특히 유리 IL-18이 HLH 환자의 혈청에서 발견되었다; Weiss ES, Girard-Guyonvarc'h C, Holzinger D, 등(2018) "Interleukin-18 diagnostically distinguishes and pathogenically promotes human and murine macrophage activation syndrome." Blood. 131(13): 1442-1455 참조. Tadekinig alfa를 사용한 치료는 순환하는 유리 IL-18을 중화하여 IL-18 매개 염증을 감소 및 제어한다.
CRS를 경험하고 있는 CD19 특이적 CAR-T 세포로 치료 받은 환자는 기준치에서 가장 큰 상대적 변화가 있는 IFN-γ와 함께 순환 사이토카인의 증가된 레벨을 나타낸다; Kalos M, Levine BL, Porter DL, 등(2011) "T-cells with chimeric antigen receptors have potent antitumor effects and can establish memory in patients with advanced leukemia." Sci Transl Med. 3(95):95ra73 참조.
특정 CAR-T 세포에 의한 종양 세포의 인식은 이러한 Th1 세포의 활성화와 IFN-γ 및 기타 가용성 매개체 분자의 분비로 이어진다. 이 첫 번째 신호전달은 세포 간 접촉을 포함하며, IL-18에 독립적인 한편(Rooney C와 Sauer T.(2018) "Modelling cytokine release syndrome." Nat Med. 24(6):705-706 참조), 다음 대식 세포의 활성화는 분비 매개체에 의해, 또는 활성화된 Th1 세포와의 세포 간 접촉에 의해 IL-18을 방출하고, 이는 차례로 Th1 세포에서 IFN-γ의 분비를 유발한다(도 1).
이러한 신호전달은 IL-18 의존적이며 IL-18BP에 의해 억제될 수 있다. 또한, Th1 세포의 IL-18 매개 자극은 Th1 세포 표면에서 IL-18Rβ의 발현을 유도하는 부속 분자 IL-12에 의해 최적화된다: IL-18은 단량체 IL-18Rα 수용체보다 이형이량체 IL-18Rαβ에 대해 더 높은 친화성을 나타내고, Th1 세포에 대한 결합이 안정화되어 IFN-γ의 생성이 촉진된다; Tominaga K, Yoshimoto T, Torigoe K, 등(2000) "IL-12 synergizes with IL-18 or IL-1beta for IFN-gamma production from human T-cells." Int Immunol. 12(2):151-160 참조.
두 경로 모두 IL-18을 포함한 높은 레벨의 전염증성 사이토카인의 분비에 기여하며, 이들의 활성화는 CRS로 이어질 수 있다. Tadekinig alfa를 IL-18BP의 외인성 공급원으로 사용하여 CAR-T 세포 유도 CRS를 관리하면 IL-18/IL-18BP 균형을 회복하고 높은 레벨의 IL-18을 나타내는 환자에게 대안적인 접근 방식을 제공할 수 있다.
이 연구는 CAR-T 세포의 IL-18 의존성 자극을 개괄하고, 활성화된 CAR-T 세포로부터의 IFN-γ 분비의 모니터링을 통해 CRS에 대한 rhIL-18BP의 완화제 효과를 평가하는 것을 목표로 한다. 목표는 Tadekinig alfa가 CAR-T 세포 유도 CRS와 관련된 독성을 제한하는 치료적 옵션임을 나타내는 증거를 수집하는 것이다.
이 연구는 활성화된 CAR-T 세포에서 분비되는 IFN-γ를 모니터링함으로써 CAR-T 세포 자극을 따르도록 설계되었다. IFN-γ는 CAR-T 세포 유도 CRS의 주요 구성요소 중 하나이기 때문에, 이러한 실험 조건은 CAR-T 세포 치료 후에 CRS에 대한 rhIL-18BP의 효과를 평가하는 도구를 제공한다.
CAR-T 세포는 세포 간 접촉과 전 염증성 사이토카인 IL-18에 의해 활성화된다. 따라서, IL-18BP의 결합을 통한 유리 IL-18의 감소는 IL-18 의존성 CAR-T 세포 자극을 감소시키고, 따라서 이들 CAR-T 세포로부터 분비되는 IFN-γ를 감소시킬 것으로 예상된다. 이는 유리 IL-18의 효율적인 중화가 CAR-T 세포 매개 CRS를 완화하고, Tadekinig alfa가 높은 레벨의 IL-18을 나타내는 CAR-T 세포 환자가 경험하는 독성을 제한하는 치료적 접근 방식을 구성한다는 증거를 제시할 것이다.
CD19 특이적 CAR-T 세포(CD19SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ CAR-T 세포, #PM-CAR1003-10M, ProMAB)는, rhIL-18에 비해 20배몰 과량으로, rhIL-18(IL-18, 100ng/mL, #9124-IL-010, R&D Systems), rhIL-12(IL-12, 10ng/mL, #219-IL-005, R&D Systems) 또는 rhIL-18BP(IL-18BP, Tadekinig alfa, AB2 Bio)가 있거나 없는, Raji 림프종 표적 T 세포(#CCL-86, ATCC)와 E:T 비율 5:1에서 이러한 인자의 조합으로 공동 배양되었다. 각 조건은 3중으로 평가되었다.
세포 배양 상청액의 앨리쿼트(60μL)를 각 웰로부터 24시간, 48시간 및 72시간 시점에서 수집하여 ELISA(#EHIFNG, Invitrogen)에 의해 IFN-γ 분비를 분석하고, 동일한 시약 조합을 함유하는 새로운 배지로 교체했다. 검량선에서 IFN-γ의 농도를 외삽하고 누적 농도를 계산했다.
도출된 계산과 함께 IFN-γ에서 측정된 농도가 표 1에 보고되어 있다.
CAR-T 세포 단독으로는 배양 3일 후에 각각 27.49±0.73pg/mL 대 15.84±2.42pg/mL의 백그라운드 레벨(종양 세포만)과 비교할 때 상당한 양의 IFN-γ를 생성하지 않는다.
종양 세포가 존재하면, CAR-T 세포는 다량의 IFN-γ(1일째에 6910.5±478.0pg/mL 및 3일째에 32675.1±1449.3pg/mL)를 생성한다. 배양액에 rhIL-18이 존재하면 IFN-γ 생성이 더 많아져, 3일 후에 더 높은 속도로 70ng/mL 초과에 도달한다(도 2).
[표 1] 3일(D1; D2 및 D3)에 걸친 배양 배지 내의 IFN-γ의 농도 및 도출된 계산.
Figure pct00001
Figure pct00002
각 테스트 시점에서, rhIL-18은 CAR-T와 종양 세포의 공동 배양에 의해 생성된 IFN-γ의 약 2배 자극을 유발했다(도 3). 3일에 걸쳐, IFN-γ 레벨은 기본 레벨(즉, rhIL-18이 없는 경우)에 비해 평균 10배 증가했다. CAR-T/종양 세포의 rhIL-18BP에 의한 공동 치료는 IL-18 매개 IFN-γ 생성의 92% 및 79% 감소(각각 2일째 및 3일째)로 완전한 억제(1일째)로 이어졌다.
CAR-T와 종양 세포의 rhIL-18 및 rhIL-12에 의한 공동 치료는 IFN-γ의 분비가 급격히 촉진시켜, 3일에 걸쳐 기본 레벨의 250배 초과에 도달했다(도 4). rhIL-18BP의 첨가는 1일째, 2일째 및 3일째에 이들 레벨의 각각 82%, 79% 및 75% 감소를 유발한다.
T 세포 매개체인 IFN-γ는 CAR-T 세포가 개별적으로 배양될 때 분비되지 않는다. 종양 세포가 존재하는 경우, CD19 특이적 CAR-T 세포는 IFN-γ의 활성화를 반영하여 상당한 레벨의 IFN-γ를 생성한다. 이 T 세포 자극은 B 세포의 CD19 표면 항원 인식을 통해 세포 간 접촉에 의해 개시되며, IL-18에 독립적이다.
rhIL-18을 첨가하자, IFN-γ의 생성이 더욱 증가하여, 이 전염증성 사이토카인에 대한 T 세포의 반응성을 반영한다. 생성 속도는 rhIL-18이 없을 때보다 더 컸으며, 동역학에서 더 가파른 경사로 볼 수 있었고, 3일 배양 후 정체기에 도달하지 않았다. 종양/CAR-T 세포 공동 배양에서 IFN-γ 생성이 3일에 걸쳐 점진적으로 증가했지만, rhIL-18은 일정한 2배 자극을 유지했다. 이는 rhIL-18이 세포 대 세포 접촉에 의해 개시되는 신호전달에 상보적인 병렬 신호를 유발한다는 것을 강력하게 뒷받침한다.
rhIL-18BP에 의한 공동 치료는 1일째에 IFN-γ 생성의 IL-18 매개 자극의 완전한 억제로 이어졌고, 3일째에는 여전히 79% 감소로 이어졌다.
IL-12는 문헌에 IL-18의 보조 분자로 기술되어 있으며, IL-18 결합을 안정화시켜 T 세포의 활성화를 더욱 증가시킴으로써 생체 내에서 상승 작용으로 작용한다. 실험 결과, 종양/CAR-T 세포 공동 배양에서 rhIL-12를 rhIL-18에 첨가하면 IFN-γ 생성이 크게 촉진되고, 이 자극은 rhIL-18BP의 첨가 시에 크게 감소했다(평균 80%). 따라서 생리학적 조건에 더 가까운 조건에서, rhIL-18BP로 치료하면 rhIL-12가 없을 때보다 T 세포 자극이 비슷하게 감소한다.
이 연구의 실험 조건은 CAR-T 세포의 IL-18 의존적 자극을 개괄하고 CAR-T 세포 활성화에 의해 유도된 CRS에 대한 rhIL-18BP의 완화 효과를 평가할 수 있게 한다. 이는 활성화된 대식 세포에 의해 분비되는, CAR-T 세포 매개 CRS의 주요 핵심 플레이어, 즉 CD19 특이적 CAR-T 세포, Raji B 림프종, T 세포 매개체 IFN-γ, 전염증성 사이토카인 IL- 18 및 부속 분자 IL-12를 포함하도록 설계되었다.
생성된 결과는 종양 세포에 의한 CAR-T 세포의 IL-18 독립적 낮은 자극 외에도 rhIL-18에 의해 유발되고 rhIL-12에 의해 추가로 상승되는 T 세포의 엄청난 활성화가 있음을 보여주었다. 따라서, 활성화된 대식 세포에서 분비되는 높은 레벨의 유리 IL-18의 존재는 CAR-T 세포를 추가로 자극하고 CRS의 정도를 악화시킨다. 이러한 발견은 CAR-T 세포 치료 후 암 환자의 혈청에 존재할 때 유리 IL-18의 오버슈팅 레벨을 중화하기 위한 이론적 근거를 제공한다. 이 연구는, 순환하는 IL-18의 불균형 레벨을 중화시키는 목적으로, rhIL-18BP에 의한 공동 치료가 CAR-T 세포의 IL-18 매개 활성화를 제거하여, CAR-T 세포 치료 후 CRS를 경험하는 환자의 Tadekinig alfa의 치료적 사용을 위한 증거를 제공한다는 것을 입증한다.
SEQUENCE LISTING <110> AB2 BIO SA <120> CAR-T CELL THERAPY <130> AD1615 PCT BS <150> EP 20 18 7684.4 <151> 2020-07-24 <160> 5 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13-amino acid Linker Sequence of hIL-18BP <400> 1 Glu Phe Gly Ala Gly Leu Val Leu Gly Gly Gln Phe Met 1 5 10 <210> 2 <211> 164 <212> PRT <213> Mammalia <220> <223> Amino Acid Sequence of IL-18 Binding Protein (hIL-18BP) <400> 2 Thr Pro Val Ser Gln Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser Val Arg Ser 1 5 10 15 Thr Lys Asp Pro Cys Pro Ser Gln Pro Pro Val Phe Pro Ala Ala Lys 20 25 30 Gln Cys Pro Ala Leu Glu Val Thr Trp Pro Glu Val Glu Val Pro Leu 35 40 45 Asn Gly Thr Leu Ser Leu Ser Cys Val Ala Cys Ser Arg Phe Pro Asn 50 55 60 Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Leu Gly Asn Gly Ser Phe Ile Glu His Leu 65 70 75 80 Pro Gly Arg Leu Trp Glu Gly Ser Thr Ser Arg Glu Arg Gly Ser Thr 85 90 95 Gly Thr Gln Leu Cys Lys Ala Leu Val Leu Glu Gln Leu Thr Pro Ala 100 105 110 Leu His Ser Thr Asn Phe Ser Cys Val Leu Val Asp Pro Glu Gln Val 115 120 125 Val Gln Arg His Val Val Leu Ala Gln Leu Trp Ala Gly Leu Arg Ala 130 135 140 Thr Leu Pro Pro Thr Gln Glu Ala Leu Pro Ser Ser His Ser Ser Pro 145 150 155 160 Gln Gln Gln Gly <210> 3 <211> 85 <212> PRT <213> Mammalia <220> <223> Amino Acid Sequence of IL-18 Binding Protein (hIL-18BP) <400> 3 Thr Pro Val Ser Gln Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser Val Arg Ser 1 5 10 15 Thr Lys Asp Pro Cys Pro Ser Gln Pro Pro Val Phe Pro Ala Ala Lys 20 25 30 Gln Cys Pro Ala Leu Glu Val Thr Trp Pro Glu Val Glu Val Pro Leu 35 40 45 Ser Trp Ala Glu Gly Asn Leu Ala Pro His Pro Arg Ser Pro Ala Leu 50 55 60 Gln Pro Gln Gln Ser Thr Ala Ala Gly Leu Arg Leu Ser Thr Gly Pro 65 70 75 80 Ala Ala Ala Gln Pro 85 <210> 4 <211> 168 <212> PRT <213> Mammalia <220> <223> Amino Acid Sequence of IL-18 Binding Protein (hIL-18BP) <400> 4 Thr Pro Val Ser Gln Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser Val Arg Ser 1 5 10 15 Thr Lys Asp Pro Cys Pro Ser Gln Pro Pro Val Phe Pro Ala Ala Lys 20 25 30 Gln Cys Pro Ala Leu Glu Val Thr Trp Pro Glu Val Glu Val Pro Leu 35 40 45 Asn Gly Thr Leu Ser Leu Ser Cys Val Ala Cys Ser Arg Phe Pro Asn 50 55 60 Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Leu Gly Asn Gly Ser Phe Ile Glu His Leu 65 70 75 80 Pro Gly Arg Leu Trp Glu Gly Ser Thr Ser Arg Glu Arg Gly Ser Thr 85 90 95 Gly Thr Gln Leu Cys Lys Ala Leu Val Leu Glu Gln Leu Thr Pro Ala 100 105 110 Leu His Ser Thr Asn Phe Ser Cys Val Leu Val Asp Pro Glu Gln Val 115 120 125 Val Gln Arg His Val Val Leu Ala Gln Leu Trp Val Arg Ser Pro Arg 130 135 140 Arg Gly Leu Gln Glu Gln Glu Glu Leu Cys Phe His Met Trp Gly Lys 145 150 155 160 Gly Gly Leu Cys Gln Ser Ser Leu 165 <210> 5 <211> 132 <212> PRT <213> Mammalia <220> <223> Amino Acid Sequence of IL-18 Binding Protein (hIL-18BP) <400> 5 Thr Pro Val Ser Gln Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ser Val Arg Ser 1 5 10 15 Thr Lys Asp Pro Cys Pro Ser Gln Pro Pro Val Phe Pro Ala Ala Lys 20 25 30 Gln Cys Pro Ala Leu Glu Val Thr Trp Pro Glu Val Glu Val Pro Leu 35 40 45 Asn Gly Thr Leu Ser Leu Ser Cys Val Ala Cys Ser Arg Phe Pro Asn 50 55 60 Phe Ser Ile Leu Tyr Trp Leu Gly Asn Gly Ser Phe Ile Glu His Leu 65 70 75 80 Pro Gly Arg Leu Trp Glu Gly Ser Thr Ser Arg Glu Arg Gly Ser Thr 85 90 95 Gly Trp Ala Glu Gly Asn Leu Ala Pro His Pro Arg Ser Pro Ala Leu 100 105 110 Gln Pro Gln Gln Ser Thr Ala Ala Gly Arg Leu Ser Thr Gly Pro Ala 115 120 125 Ala Ala Gln Pro 130

Claims (51)

  1. 키메라 항원 수용체 T 세포(Chimeric Antigen Receptor T-cell, CAR-T) 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 종양 항원의 발현과 관련된 질병으로 진단을 받은 환자의 CAR-T 치료에서 사용하기 위한 IL-18 결합 분자.
  2. 청구항 1에 있어서,
    CAR-T 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 환자의 IL-18 레벨의 조절제로서의, IL-18 결합 분자.
  3. 청구항 2에 있어서,
    여기서 IL-18 레벨은 유리(free) IL-18의 레벨인, IL-18 결합 분자.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 IL-18 결합 분자는 IFN 감마 분비를 억제하는, IL-18 결합 분자.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 IL-18 결합 분자는 IL-12에 의해 추가로 상승되는, IFN 감마 분비의 IL-18 매개 자극을 억제하는, IL-18 결합 분자.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 종양 항원의 발현과 관련된 질병은 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및/또는 종양 항원의 발현과 관련된 비암(non-cancer) 관련 징후인, IL-18 결합 분자.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 환자는 암, 특히 혈액암(hematological cancer) 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, IL-18 결합 분자.
  8. 청구항 7에 있어서,
    여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 백혈병(acute leukemia), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphoid leukemia, ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-cell acute lymphoid leukemia, B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-cell acute lymphoid leukemia, T-ALL), 만성 골수성 백혈병(chronic myelogenous leukemia, CML), B 세포 전림프구성 백혈병(B-cell prolymphocytic leukemia), 모구 형질세포양 수지상 세포 종양(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm), 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 광범위 B형 대세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma), 소포성 림프종(follicular lymphoma), 털 세포 백혈병(hairy cell leukemia), 소세포 또는 대세포 소포성 림프종(small cell- or a large cell-follicular lymphoma), 악성 림프증식성 질환(malignant lymphoproliferative condition), 말트 림프종(MALT lymphoma), 외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 다발성 골수종(multiple myeloma), 골수형성이상증(myelodysplasia) 및 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 형질모세포성 림프종(plasmablastic lymphoma), 형질세포양 수지상 세포 종양(plasmacytoid dendritic cell neoplasm), 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia) 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, IL-18 결합 분자.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단이 CAR-T 치료에서 사용되며, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는, IL-18 결합 분자.
  10. 청구항 9에 있어서,
    여기서 세포는 IL-18을 발현하도록 추가로 조작되는, IL-18 결합 분자.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 부작용은 면역 체계의 오버슈팅(overshooting) 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 것인, IL-18 결합 분자.
  12. 청구항 11에 있어서,
    여기서 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범(lung involvement)), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증(cytopenias), 응고병증(coagulopathy), 혈구탐식(hemophagocytosis) 및 신경학적 독성(neurologic toxicities)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, IL-18 결합 분자.
  13. 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서,
    환자의 유리 IL-18 레벨의 조절제로서의, IL-18 결합 분자.
  14. 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서,
    환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 감소시키기 위한, IL-18 결합 분자.
  15. 청구항 1 내지 청구항 14 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 환자는 동물, 특히 인간인, IL-18 결합 분자.
  16. 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
    IL-18 결합 단백질(IL-18BP)이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, IL-18 결합 분자.
  17. 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
    유리 IL-18에 특이적으로 결합하지만 복합체에 결합된 IL-18에는 특이적으로 결합하지 않는 IL-18 결합 항체이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, IL-18 결합 분자.
  18. 청구항 16에 있어서,
    인간 IL-18BP(hIL-18 BP), 바람직하게는 재조합 인간 IL-18BP(rhIL-18 BP)이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, IL-18 결합 분자.
  19. 청구항 18에 있어서,
    여기서 상기 인간 IL-18BP는 인간 IL-18BP의 아이소형(isoform) a, b, c 및 d, 특히 SEQ ID NO: 2에서와 같은 아이소형 a, SEQ ID NO: 3에서와 같은 아이소형 b, SEQ ID NO: 4에서와 같은 아이소형 c 또는 SEQ ID NO: 5에서와 같은 아이소형 d로부터 선택되며, 조절제 활성을 유지하는 아이소형 a, b, c 및/또는 d의 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하는, IL-18 결합 분자.
  20. 청구항 19에 있어서,
    SEQ ID NO: 2에 나타내어진 바와 같은 IL-18BP이며, 조절제 활성을 유지하는 임의의 기능적 등가물 또는 기능적 일부를 포함하고, 바람직하게는 여기서 기능적 등가물이 SEQ ID NO: 2에 기재된 서열에 대해 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 서열 동일성을 가지며 조절제 활성을 유지하는, IL-18 결합 분자.
  21. 청구항 20에 있어서,
    여기서 기능적 등가물 또는 기능적 일부는 조절제 활성을 유지하는 IL-18BP의 돌연변이 단백질, 단편(fragment), 펩티드, 기능적 유도체, 기능적 단편, 파편(fraction), 순환 치환 유도체(circularly permuted derivative), IL-18BP를 포함하는 융합 단백질, 아이소형 또는 염을 포함하는, IL-18 결합 분자.
  22. 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 종양 항원의 발현과 관련된 질병으로 진단을 받은 환자의 CAR-T 치료에서 사용하기 위한, IL-18 결합 분자, 특히 청구항 16 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자를 포함하는 조성물로서,
    선택적으로는 여기서 조성물이 약제학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 용매 및/또는 부형제를 포함하는, 조성물.
  23. 청구항 22에 있어서,
    CAR-T 치료와 관련된 부작용을 방지하거나 최소화하기 위한 환자의 IL-18 레벨의 조절제로서의, 조성물.
  24. 청구항 22 또는 청구항 23에 있어서,
    여기서 부작용은 면역 체계의 오버슈팅 및/또는 사이토카인 방출 증후군으로 인한 것인, 조성물.
  25. 청구항 22 내지 청구항 24 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 질병은 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후인, 조성물.
  26. 청구항 22 내지 청구항 25 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 환자는 암, 특히 혈액암 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, 조성물.
  27. 청구항 26에 있어서,
    여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 종양, 버킷 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 또는 대세포 소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, 말트 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상증 및 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, 조성물.
  28. 청구항 22 내지 청구항 27 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 부작용은 끊임없는 발열, 저혈압, 저산소증(폐 침범), 간 및 신장을 포함하지만 이들로 제한되는 것은 아닌 기타 종말 기관의 손상 및 기능 장애, 혈구감소증, 응고병증, 혈구탐식 및 신경학적 독성으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 조성물.
  29. 청구항 22 내지 청구항 28 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 조작된 세포 집단으로서, 여기서 CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는, 세포 집단, 및
    (ii) IL-18 결합 분자, 특히 청구항 15 내지 청구항 20 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자
    를 포함하는, 조성물.
  30. 청구항 29에 있어서,
    여기서 (i)의 세포 집단은 IL-18을 발현하도록 추가로 조작되는, 조성물.
  31. 청구항 22 내지 청구항 30 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 IL-18 결합 단백질(IL-18BP)은 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 추가로 포함하는, 조성물.
  32. 청구항 22 내지 청구항 31 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 환자는 동물, 특히 인간인, 조성물.
  33. 청구항 22 내지 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서,
    IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체를 최대 40%, 특히 최대 30%, 특히 최대 20%, 특히 최대 15%, 특히 최대 10%, 특히 최대 7.5%, 특히 최대 5%, 특히 최대 2.5%, 특히 최대 1%, 특히 최대 0.5%, 특히 최대 0.25%, 특히 최대 0.1%, 특히 최대 0.05%, 특히 최대 0.01%의 양으로 포함하는, 조성물.
  34. 청구항 31 또는 청구항 33에 있어서,
    여기서 상기 결실 변이체는 IL-18BP의 C 말단에서 1개 내지 5개의 아미노산 잔기 및/또는 IL-18BP의 N 말단에서 1개 내지 30개의 아미노산 잔기의 결실을 포함하는, 조성물.
  35. 청구항 31 내지 청구항 34 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 상기 IL-18BP의 N 말단 및/또는 C 말단 결실 변이체는 최대 40%의 양으로, 특히 2% 내지 35%의 양으로 존재하는, 조성물.
  36. 환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 제어 및/또는 조절, 특히 감소시키기 위한 청구항 1 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자 또는 청구항 22 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 기재된 조성물.
  37. 부작용을 방지하거나 최소화하기 위해 키메라 항원 수용체 T 세포(CAR-T) 치료 중인 환자의 IL-18 레벨을 조절하는 방법으로서,
    필요로 하는 환자에게 치료적 유효량의 IL-18 결합 분자, 특히 청구항 16 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자, 또는 치료적 유효량의 청구항 22 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 기재된 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  38. 청구항 37에 있어서,
    환자의 IL-18 레벨, 특히 유리 IL-18 레벨을 조절, 특히 감소시키기 위한, 방법.
  39. 청구항 37 또는 청구항 38에 있어서,
    여기서 환자는 종양 항원의 발현과 관련된 질병, 예를 들어 증식성 질병, 전암 상태, 암, 및 종양 항원의 발현과 관련된 비암 관련 징후를 갖는, 방법.
  40. 청구항 39에 있어서,
    여기서 환자는 암, 특히 혈액암 또는 고형 종양, 특히 종양 관련 항원을 발현하는 종양을 갖는, 방법.
  41. 청구항 40에 있어서,
    여기서 암은 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병(ALL), B 세포 급성 림프구성 백혈병(B-ALL), T 세포 급성 림프구성 백혈병(T-ALL), 만성 골수성 백혈병(CML), B 세포 전림프구성 백혈병, 모구 형질세포양 수지상 세포 종양, 버킷 림프종, 광범위 B형 대세포 림프종, 소포성 림프종, 털 세포 백혈병, 소세포 또는 대세포 소포성 림프종, 악성 림프증식성 질환, 말트 림프종, 외투 세포 림프종, 변연부 림프종, 다발성 골수종, 골수형성이상증 및 골수이형성 증후군, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 형질모세포성 림프종, 형질세포양 수지상 세포 종양 및 발덴스트롬 매크로글로불린혈증 중 하나 이상으로부터 선택되는 혈액암인, 방법.
  42. 청구항 37 내지 청구항 41 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 환자는 동물, 특히 인간인, 방법.
  43. 청구항 37 내지 청구항 42 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 CAR-T 세포 및 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 환자에게 동시에 투여되는, 방법.
  44. 청구항 37 내지 청구항 42 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 CAR-T 세포 및 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 환자에게 순차적으로 투여되는, 방법.
  45. 청구항 37 내지 청구항 44 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 IL-18 결합 분자 또는 조성물은 각각 CAR-T 치료 시에 급성 인터벤션으로서 환자에게 투여되는, 방법.
  46. 여기서 암은 고형 종양, 특히 결장암, 직장암, 신장 세포 암종, 간암, 폐의 비소세포 암종, 소장암, 식도암, 흑색종, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안구내 악성 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문 부위의 암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 소아기 고형 종양, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신우 암종, 중추신경계(CNS) 종양, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관형성, 척추축 종양(spinal axis tumor), 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피암, 편평세포암, T 세포 림프종, 환경적으로 유발된 암, 상기 암들의 조합, 및 상기 암들의 전이성 병변으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 청구항 7의 용도의 IL-18 결합 분자 또는 청구항 26의 용도의 조성물 또는 청구항 40의 방법.
  47. 여기서, 체액 내의 유리 IL-18을 검출할 수 있는 분석을 사용하여, 환자의 체액 내의 유리 IL-18의 비정상적인 레벨을 결정했고, 특히 여기서 유리 IL-18의 레벨은 건강한 대조군 대상체의 체액 내의 유리 IL-18의 레벨을, 특히 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% 또는 100% 이상 초과하며, 상기 분석은 청구항 16 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자를 포함하는, 청구항 1 내지 청구항 21, 청구항 36 또는 청구항 46 중 어느 한 항의 용도의 IL-18 결합 분자 또는 청구항 22 내지 청구항 35 또는 청구항 46 중 어느 한 항의 용도의 조성물, 또는 청구항 37 내지 청구항 46 중 어느 한 항의 방법.
  48. 여기서 체액(들) 내의 유리 IL-18의 레벨을 정량화하기 위한 분석은 이하의 단계들:
    a) 유리 IL-18을 함유하는 것으로 추측되는 체액의 샘플을 유리 IL-18에 대한 포획 분자로서의 청구항 16 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 기재된 IL-18 결합 분자와 접촉시키는 단계;
    b) IL-18 결합 분자가 유리 IL-18에 결합하도록 허용하는 단계; 및
    c) IL-18 결합 분자의 결합을 검출하고 샘플에서 유리 IL-18의 양을 결정하는 단계
    를 포함하는, 청구항 47의 용도의 IL-18 결합 분자, 용도의 조성물 또는 방법.
  49. 여기서 체액은 기관지 폐포 세척 유체(broncho-alveolar lavage fluid, BALF) 순환 유체, 분비 유체, 생체 검사 및 균질 조직, 특히 혈청, 소변, 눈물, 타액, 담즙, 땀, 날숨 또는 호기, 가래, 기관지 폐포 유체, 피지, 세포, 선(gland), 점막 및 조직 분비로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 청구항 47 또는 청구항 48의 용도의 IL-18 결합 분자, 용도의 조성물 또는 방법.
  50. 여기서 환자의 치료는 하나 이상의 면역관문 억제제(들)의 사용을 추가로 포함하는, 청구항 1 내지 청구항 21, 청구항 36 또는 청구항 46 내지 청구항 49 중 어느 한 항의 용도의 IL-18 결합 분자 또는 청구항 22 내지 청구항 35 또는 청구항 46 내지 청구항 49 중 어느 한 항의 용도의 조성물, 또는 청구항 37 내지 청구항 49 중 어느 한 항의 방법.
  51. 여기서 면역관문 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제인, 청구항 50의 용도의 IL-18 결합 분자 또는 청구항 50의 용도의 조성물, 또는 청구항 50의 방법.
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