KR20230043061A - COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF MUSCLE WEAKNESS DISEASE OR SARCOPENIA COMPRISING Rosa davurica Pall. EXTRACT AS AN EFFECTIVE INGREDIENT - Google Patents

COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF MUSCLE WEAKNESS DISEASE OR SARCOPENIA COMPRISING Rosa davurica Pall. EXTRACT AS AN EFFECTIVE INGREDIENT Download PDF

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KR20230043061A
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sarcopenia
muscle weakness
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연성흠
김현준
박현진
필감방
문효원
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(주)휴온스
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Abstract

The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing a Rosa davurica extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active component. Since the Rosa davurica extract can inhibit myostatin activity without cytotoxicity, it can be effectively used for strengthening muscle strength or preventing or treating sarcopenia.

Description

생열귀나무 추출물을 유효성분으로 하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 조성물{COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF MUSCLE WEAKNESS DISEASE OR SARCOPENIA COMPRISING Rosa davurica Pall. EXTRACT AS AN EFFECTIVE INGREDIENT}Composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing a raw heathen tree extract as an active ingredient {COMPOSITION FOR PREVENTION OR TREATMENT OF MUSCLE WEAKNESS DISEASE OR SARCOPENIA COMPRISING Rosa davurica Pall. EXTRACT AS AN EFFECTIVE INGREDIENT}

본 발명은 생열귀나무 추출물을 유효성분으로 하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, comprising an extract of wild genus japonica as an active ingredient.

노화에 따른 대표적인 생리적 변화는 근육량 및 근력 감소이다. 근육량 감소는 40대 이후부터 발생하여 70대까지 10년에 약 8%의 감소가 일어나는 것으로 알려져 있으며, 이후에는 급격한 감소가 발생하여 10년에 최대 15%까지 발생하는 것으로 알려져 있다. A representative physiological change according to aging is a decrease in muscle mass and strength. It is known that muscle mass loss occurs after the age of 40 and decreases by about 8% per 10 years until the age of 70.

근력 약화 관련 질환(muscle weakness disease) 또는 근감소증(sarcopenia)은 직접적인 근력 감소를 유발하여 각종 신체 기능의 감소 및 장애로 인해 사망의 위험성을 증가시킬 뿐 아니라 신진대사의 감소 및 면역력 저하 등 고혈압, 당뇨, 관절염, 비만, 암 등과 같은 대사성 질환의 유병률을 높이는 원인이 되기도 한다.Muscle weakness disease or sarcopenia causes direct muscle strength reduction, which not only increases the risk of death due to a decrease in various physical functions and disabilities, but also reduces metabolism and lowers immunity, such as high blood pressure and diabetes. It is also a factor that increases the prevalence of metabolic diseases such as arthritis, obesity, and cancer.

마이오스타틴(Myostatin, MSTN)은 골격근의 성장을 조절하는 단백질로서 TGF-β(transforming growth factor-β) 계열에 속하고 GDF-8(growth and differentiation factor-8)로도 알려져 있다. 유전자 knock-out 기술을 통해 마우스의 마이오스타틴 유전자의 기능을 제어하면 정상 마우스에 비해 골격근이 2~3배 많은 표현형을 보이는 것으로 알려져 있다.Myostatin (MSTN) is a protein that regulates the growth of skeletal muscle and belongs to the transforming growth factor-β (TGF-β) family and is also known as growth and differentiation factor-8 (GDF-8). It is known that controlling the function of the myostatin gene in mice through gene knock-out technology shows 2 to 3 times more skeletal muscle phenotypes than normal mice.

마이오스타틴의 기능을 억제하기 위한 다양한 길항제(antagonists) 연구는 다양한 분야에서 진행 중에 있다. 분자적 수준에서 마이오스타틴의 기능을 억제하기 위한 방법으로는 MSTN 프로도메인, 액티빈 타입 II 리셉터, 폴리스타틴, 폴리스타틴 연관 단백질 등이 있다.Research on various antagonists for inhibiting the function of myostatin is in progress in various fields. Methods for inhibiting the function of myostatin at the molecular level include MSTN prodomain, activin type II receptor, follistatin, and follistatin-related proteins.

이러한 근육량의 감소와 관련하여 골격근의 성장을 억제하는 마이오스타틴의 연구가 되고 있으며, 마이오스타틴의 기능만을 억제하기 위한 항체를 제조하였으나, 부작용이 나타났으며, 천연물을 이용한 항마이오스타틴 소재에 대한 연구는 진행되고 있으나 아직까지 세포 수준에서의 연구가 대부분이며 임상실험에 도달한 연구는 전무한 상황이다.Myostatin, which inhibits the growth of skeletal muscle, has been studied in relation to this decrease in muscle mass. Antibodies were prepared to inhibit only the function of myostatin, but side effects appeared, and anti-myostatin materials using natural products Research on this is in progress, but most of the studies are still at the cellular level, and there are no studies that have reached clinical trials.

본 발명은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물 등을 제공하고자 한다.The present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, which contains an extract of wild chives, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the above-mentioned problem, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

본 발명은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing an extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무의 잎, 줄기, 꽃, 열매 및 전초로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위를 대상으로 추출할 수 있다. The raw fever tree extract can be extracted from any one or more parts selected from the group consisting of leaves, stems, flowers, fruits, and outposts of the tree.

상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무를 대상으로 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출할 수 있다. The raw heat tree extract can be extracted using water, an organic solvent, or a mixture thereof as a solvent for the raw heat tree tree.

상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물은 마이오스타틴 활성을 억제할 수 있다. [0025] The raw wild cypress extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof may inhibit myostatin activity.

상기 조성물 내 상기 상기 생열귀나무 추출물의 농도는 0.1 ㎍/mL 내지 100 ㎍/mL일 수 있다. Concentration of the extract of the wild chives tree in the composition may be 0.1 μg/mL to 100 μg/mL.

상기 근력 약화 관련 질환은 근위축증, 근무력증, 근이영양증, 근경직증, 근긴장저하, 근력약화, 근육퇴화, 근육퇴행위축, 근위축성 측삭경화증, 중증 근무력증, 긴장감퇴증 및 악액질로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. The disease related to muscle weakness may be one or more selected from the group consisting of muscular dystrophy, myasthenia gravis, muscular dystrophy, myasthenia, hypotonia, muscle weakness, muscle degeneration, muscular dystrophy, amyotrophic lateral sclerosis, myasthenia gravis, hypotonia and cachexia. .

본 발명의 일 구현예로, 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다. In one embodiment of the present invention, there is provided a health functional food composition for strengthening muscle strength or preventing or improving sarcopenia, which contains an extract of genus japonica, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 구현예로, 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. In another embodiment of the present invention, there is provided a food composition for strengthening muscle strength or preventing or improving sarcopenia, which contains an extract of wild chives, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

본 발명은 천연 성분으로서 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 생열귀나무 추출물은 세포 독성 없이, 마이오스타틴 활성을 억제시킬 수 있으므로, 근력 강화 또는 근감소증 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있다. The present invention relates to a composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing as an active ingredient a natural ingredient extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof. Since it can inhibit ausstatin activity, it can be effectively used for strengthening muscle strength or preventing or treating sarcopenia.

도 1는 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에서 다양한 농도의 생열귀나무(전초) 추출물(12.5, 25, 50, 100 ㎍/mL)의 처리에 따른 세포 독성을 분석한 그래프이다.
도 2(a)는 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에 재조합 마이오스타틴 및 다양한 농도의 생열귀나무(전초) 추출물(0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 ㎍/mL)의 처리에 따른 세포 독성과, 항마이오스타틴 활성을 분석한 그래프이다.
도 2(b)는 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에 재조합 마이오스타틴 및 다양한 농도의 생열귀나무(꽃, 잎, 열매 또는 전초) 추출물(5, 20, 100 ㎍/mL)의 처리에 따른 세포 독성과, 항마이오스타틴 활성을 분석한 그래프이다.
도 3은 HepG2 세포주에 재조합 마이오스타틴 및 다양한 농도의 생열귀나무 추출물(3.13, 6.25, 12.5, 25 ㎍/mL)의 처리에 따른 SMAD2 인산화 단백질의 발현량을 분석한 사진이다.
Figure 1 is a graph analyzing the cytotoxicity of CAGA 12 -Luc-expressing 293T cell line according to the treatment of various concentrations of wild chives (whole plant) extract (12.5, 25, 50, 100 μg/mL).
Figure 2 (a) shows that CAGA 12 -Luc-expressing 293T cell line was treated with recombinant myostatin and various concentrations of wild chives extract (0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 μg/mL). ) is a graph analyzing the cytotoxicity and antimyostatin activity according to the treatment.
Figure 2 (b) shows the treatment of CAGA 12 -Luc-expressing 293T cell line with recombinant myostatin and various concentrations of fresh wild chives (flower, leaf, fruit or herb) extract (5, 20, 100 μg/mL). It is a graph analyzing the cytotoxicity and antimyostatin activity according to FIG.
Figure 3 is a photograph of analyzing the expression level of SMAD2 phosphorylated protein according to the treatment of HepG2 cell line with recombinant myostatin and various concentrations of extract (3.13, 6.25, 12.5, 25 μg/mL).

본 발명자들은 항마이오스타틴 소재로서, 근력 강화에 효과적인 천연 성분을 탐색하던 중, 장미속(Rosa) 식물 중에서도 생열귀나무 추출물이 세포 독성 없이, 마이오스타틴 활성을 억제시킴으로써, 근력 강화 또는 근감소증 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다. While searching for a natural ingredient effective for muscle strength enhancement as an antimyostatin material, the present inventors found that, among Rosa plants, the extract of rosa genus sarcopenia inhibits myostatin activity without cytotoxicity, thereby strengthening muscle strength or preventing sarcopenia. Or it was confirmed that it can be effectively used for treatment, and the present invention was completed.

본 명세서 내 "근력 약화 관련 질환 또는 근감소증"이라 함은 마이오스타틴 관련 질환을 의미하는 것으로, 호르몬 불균형, 심한 부상, 패혈증, 암 및 노화로 인한 여러 가지 이화 상태(catabolic condition)에서 발생하는 근육세포 및 근조직의 크기 및 질량적 손실을 말한다. 구체적으로, 상기 근력 약화 관련 질환은 근위축증(muscular atrophy), 근무력증, 근이영양증(muscular dystrophy), 근경직증, 근긴장저하, 근력약화, 근육퇴화, 근육퇴행위축, 근위축성 측삭경화증, 중증 근무력증, 긴장감퇴증(atony) 및 악액질(cachexia)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다. The term "muscle weakness-related disease or sarcopenia" as used herein refers to myostatin-related disease, which occurs in various catabolic conditions caused by hormonal imbalance, severe injury, sepsis, cancer, and aging. Loss of size and mass of cells and muscle tissue. Specifically, the diseases associated with muscle weakness include muscular atrophy, myasthenia gravis, muscular dystrophy, myasthenia gravis, hypotonia, muscle weakness, muscle degeneration, muscular dystrophy, amyotrophic lateral sclerosis, myasthenia gravis, and hypotonia. It may be one or more selected from the group consisting of (atony) and cachexia.

본 명세서 내 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증의 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증의 증세가 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다. "Prevention" in the present specification refers to all actions that delay the onset of muscle weakness-related diseases or sarcopenia by administration of the composition of the present invention, and "treatment" and "improvement" are related to muscle weakness by administration of the composition of the present invention. Any action that improves or beneficially alters the symptoms of a disease or sarcopenia.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물Pharmaceutical composition for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia

본 발명은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing an extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유한다.The pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia according to the present invention contains, as an active ingredient, an extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof.

상기 생열귀나무(Rosa davurica Pall.)는 장미과(Rosaceae) 장미속(Rosa)에 속하는 여러해살이 식물에 속하며, 한반도, 중국, 극동러시아 등에 분포하며, 관상용, 밀원, 향료, 열매는 식용하기도 한다. 다만, 상기 생열귀나무가 근력 강화에 효과적임을 실험적으로 입증한 문헌은 전무하다. The live hot tree ( Rosa davurica Pall. ) belongs to a perennial plant belonging to the Rosaceae (Rosaceae) genus (Rosa), and is distributed in the Korean Peninsula, China, and Far East Russia, etc., and ornamental, wheat, spices, and fruits are edible. However, there is no literature that experimentally proves that the above-mentioned green fever tree is effective in strengthening muscle strength.

상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무의 잎, 줄기, 꽃, 열매 및 전초로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위를 대상으로 추출할 수 있고, 생열귀나무의 꽃, 잎 및 전초로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위를 대상으로 추출한 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, 해당 부위는 건조된 상태일 수 있다. The raw heat fir tree extract can be extracted from any one or more parts selected from the group consisting of leaves, stems, flowers, fruits and outposts of the fresh heat fir tree, and in the group consisting of flowers, leaves and It is preferable to extract any one or more selected sites, but is not limited thereto. At this time, the corresponding site may be in a dry state.

또한, 상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무를 대상으로 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출할 수 있고, 물, C1 내지 C4의 저급알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 상기 생열귀나무 추출물은 건조된 생열귀나무를 세절한 후 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 생열귀나무 중량의 5배 내지 50배를 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 10배 내지 30배를 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 추출온도는 50℃ 내지 150℃인 것이 바람직하며, 70℃ 내지 120℃인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 추출시간은 1시간 내지 20시간인 것이 바람직하며, 3시간 내지 10시간인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 추출방법은 냉침, 초음파 추출 또는 환류 냉각 추출방법이 모두 이용가능하나, 이에 한정되지 않는다. 추출 회수는 1회 내지 5회인 것이 바람직하며, 2회 내지 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 추가적으로, 상기 생열귀나무 추출물을 희석시키거나, 농축시키거나, 희석 또는 농축시킨 후 정제 및 건조하여 사용할 수 있다.In addition, the extract of the raw heat fir tree can be extracted using water, an organic solvent, or a mixture thereof as a solvent, and extracting using water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixture thereof as a solvent Preferred, but not limited thereto. Specifically, the extract of the fresh wild cypress tree is preferably extracted by adding water, an organic solvent or a mixture thereof 5 to 50 times the weight of the fresh cypress tree, and 10 to 30 times the weight of the dried cypress tree. It is more preferable to extract by adding pears, but is not limited thereto. The extraction temperature is preferably 50 ° C to 150 ° C, more preferably 70 ° C to 120 ° C, but is not limited thereto. The extraction time is preferably 1 hour to 20 hours, more preferably 3 hours to 10 hours, but is not limited thereto. As the extraction method, cold extraction, ultrasonic extraction, or reflux cooling extraction method may all be used, but is not limited thereto. The number of extractions is preferably 1 to 5 times, and more preferably repeated extraction 2 to 3 times, but is not limited thereto. In addition, the extract of the wild genus japonica may be diluted, concentrated, or purified and dried after being diluted or concentrated.

선택적으로, 상기 생열귀나무 추출물 대신, 상기 생열귀나무 추출물의 분획물을 선택할 수 있는데, 상기 생열귀나무 추출물의 분획물은 생열귀나무 추출물을 현탁한 후, 물, 메탄올, 에탄올 등의 극성 용매 또는 헥산, 에틸아세테이트 등의 비극성 용매를 사용하여 분획함으로써 극성 용매 분획물과 비극성 용매 분획물을 각각 수득할 수 있다. 추가적으로, 상기 생열귀나무 추출물의 분획물을 다양한 크로마토그래피에 의해 분리시킬 수 있다.Optionally, instead of the raw cypress tree extract, a fraction of the natural cypress tree extract can be selected. , A polar solvent fraction and a non-polar solvent fraction may be respectively obtained by fractionation using a non-polar solvent such as ethyl acetate. In addition, the fractions of the extract of the wild red ginseng plant may be separated by various chromatographies.

또한, 상기 생열귀나무 추출물 대신, 상기 생열귀나무 추출물의 발효물을 선택할 수 있는데, 상기 생열귀나무 추출물의 발효물은 생열귀나무 추출물에 다양한 유산균을 접종한 후 발효시킴으로써 수득할 수 있다.In addition, a fermented product of the natural wild plant extract may be selected instead of the natural plant extract, and the fermented product of the natural plant extract may be obtained by inoculating the plant extract with various lactic acid bacteria and then fermenting it.

상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물은 세포 독성 없이, 마이오스타틴 활성을 억제시킬 수 있고, 또한, 마이오스타틴 신호 전달을 방 해함으로써 세포 안쪽으로 진행되는 신호(SMAD2 인산화 단백질의 발현)를 저해함으로써, 근력 강화 효과를 가질 수 있다. 더욱이, 상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물의 근력 강화 효과는 장미속(Rosa)에 속하는 유사식물에 비해 월등히 우수한 것을 특징으로 한다. 예로써, 생열귀나무의 유사식물로서, 흰생열귀(Rosa davurica for.alba), 긴생열귀(Rosa davurica var.ellipsoidea) 또는 민생열귀(Rosa silenidifloraa)의 경우에는 마이오스타틴 활성 억제 정도가 미미하여, 근력 강화에 효과적이지 않은 한계가 있다. The extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof can inhibit myostatin activity without cytotoxicity, and also, by interfering with myostatin signal transduction, a signal that proceeds into cells (expression of SMAD2 phosphorylated protein) ) By inhibiting, it can have a muscle strengthening effect. Moreover, the muscle strength strengthening effect of the extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof is far superior to that of a similar plant belonging to the genus Rosa. For example, as a similar plant of the live fever tree, white live fever ( Rosa davurica for.alba ), long live fever ( Rosa davurica var. There are limitations in which reinforcement is not effective.

상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물의 농도는 0.1 ㎍/mL 내지 100 ㎍/mL일 수 있고, 0.1 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL인 것이 바람직하고, 0.4 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, 해당 농도가 상기 범위 미만인 경우, 마이오스타틴 활성 억제 효과가 미미하여 근력 강화 또는 근감소증에 효과적이지 않은 문제점이 있고, 해당 농도가 상기 범위를 초과하는 경우에는, 세포 독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다. The concentration of the wild chives extract, its fraction or its fermented product may be 0.1 μg/mL to 100 μg/mL, preferably 0.1 μg/mL to 25 μg/mL, and 0.4 μg/mL to 25 μg/mL It is more preferable, but is not limited thereto. At this time, if the concentration is less than the above range, there is a problem that the effect of inhibiting myostatin activity is insignificant and is not effective for muscle strength or sarcopenia, and if the concentration exceeds the above range, toxicity concerns including cytotoxicity This can be.

상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구제 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화되어 사용할 수 있고, 제형화를 위하여 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.The pharmaceutical compositions may be formulated and used in the form of oral preparations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. Suitable carriers, excipients or diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions may be included.

상기 담체 또는, 부형제 또는 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리게이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 포함한 다양한 화합물 혹은 혼합물을 들 수 있다.Examples of the carrier or excipient or diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, undecided and various compounds or mixtures including vaginal cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.When formulated, it can be prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, weighting agents, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.

경구 투여를 위한 고형 제제는 상기 생열귀나무 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 제조할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다.A solid preparation for oral administration may be prepared by mixing at least one or more excipients, such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc., with the extract of the wild chive plant. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용하는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다.Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions for oral use, emulsions, syrups, etc., and various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, preservatives, etc. may be included in addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents. .

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등을 사용할 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등을 사용할 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, water-insoluble agents, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspensions. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerol gelatin, and the like can be used.

상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서는 1일 0.0001 내지 2,000 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 2,000 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수회 나누어서 투여할 수도 있다. 다만, 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition varies depending on the patient's condition, body weight, disease severity, drug type, administration route and period, but can be appropriately selected by those skilled in the art. However, for desirable effects, it may be administered at 0.0001 to 2,000 mg/kg per day, preferably 0.001 to 2,000 mg/kg. Administration may be administered once a day or divided into several times. However, the scope of the present invention is not limited by the dosage.

상기 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유 동물에 다양한 경로로 투여할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해서 투여할 수 있다.The pharmaceutical composition may be administered to mammals such as rats, mice, livestock, and humans through various routes. All modes of administration can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.

근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물Pharmaceutical composition for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia

본 발명은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물을 제공한다. The present invention provides a health functional food composition or food composition for strengthening muscle strength or preventing or improving sarcopenia, which contains an extract of genus japonica, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물은 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는데, "생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물"에 대해서는 전술한바 있으므로, 중복 설명을 생략하기로 한다.The health functional food composition or food composition for strengthening muscle strength or for preventing or improving sarcopenia according to the present invention contains as an active ingredient an extract of wild chives, a fraction thereof, or a fermented product thereof. Since the fermented product has been described above, redundant description will be omitted.

상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물의 농도는 0.1 ㎍/mL 내지 100 ㎍/mL일 수 있고, 0.1 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL인 것이 바람직하고, 0.4 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이때, 해당 농도가 상기 범위 미만인 경우, 마이오스타틴 활성 억제 효과가 미미하여 근력 강화 또는 근감소증에 효과적이지 않은 문제점이 있고, 해당 농도가 상기 범위를 초과하는 경우에는, 세포 독성을 포함한 독성의 우려사항이 있을 수 있다. The concentration of the wild chives extract, its fraction or its fermented product may be 0.1 μg/mL to 100 μg/mL, preferably 0.1 μg/mL to 25 μg/mL, and 0.4 μg/mL to 25 μg/mL It is more preferable, but is not limited thereto. At this time, if the concentration is less than the above range, there is a problem that the effect of inhibiting myostatin activity is insignificant and is not effective for muscle strength or sarcopenia, and if the concentration exceeds the above range, toxicity concerns including cytotoxicity This can be.

상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물에 있어서, 상기 생열귀나무 추출물을 건강기능식품 또는 식품의 첨가물로 사용하는 경우 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 예방, 건강 또는 치료 등의 각 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있다.In the health functional food composition or food composition, when using the extract of the health functional food or food additives, it may be added as it is or used together with other foods or food ingredients, and appropriately according to a conventional method can be used The mixing amount of the active ingredient can be appropriately determined according to each purpose of use, such as prevention, health, or treatment.

상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물의 제형은 산제, 과립제, 환, 정제, 캡슐제의 형태뿐만 아니라 일반 식품 또는 음료의 형태 어느 것이나 가능하다.The formulation of the health functional food composition or food composition may be in the form of powder, granules, pills, tablets, capsules, as well as general food or beverage forms.

상기 식품의 종류에는 특별히 제한은 없고, 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸콜렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있다.The type of food is not particularly limited, and examples of food to which the substance can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, and dairy products including ice cream. , various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, etc., and may include all foods in a conventional sense.

일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 상기 생열귀나무 추출물은 원료 100 중량부에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 또한 본 발명은 천연물질을 이용하는 점에서 안전성 면에서 문제가 없으므로 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.In general, when preparing a food or beverage, the extract of the genus japonica may be added in an amount of 15 parts by weight or less, preferably 10 parts by weight or less, based on 100 parts by weight of the raw material. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be less than the above range, and since the present invention uses natural substances, there is no problem in terms of safety, so the amount above the above range can also be used as

상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물 중 음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올일 수 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 상기 음료 100 mL당 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g일 수 있다.Beverages of the health functional food composition or food composition may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional components, like conventional beverages. The aforementioned natural carbohydrates may be monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the sweetener, natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract, or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame may be used. The ratio of the natural carbohydrate may be about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the beverage.

상기 외에 상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제를 함유할 수 있다. 그 밖에 상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 제한되지 않으나 상기 건강기능식품 조성물 또는 식품 조성물 100 중량부 대비 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the health functional food composition or food composition is various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, It may contain glycerin, alcohol, and carbonation agents used in carbonated beverages. In addition, the health functional food composition or food composition may contain fruit flesh for the production of natural fruit juice, fruit juice beverages and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination. The ratio of these additives is not limited, but is generally selected from the range of 0.01 to 0.1 parts by weight based on 100 parts by weight of the health functional food composition or food composition.

따라서, 본 발명은 천연 성분으로서 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 생열귀나무 추출물은 세포 독성 없이, 마이오스타틴 활성을 억제시킬 수 있으므로, 근력 강화 또는 근감소증 예방 또는 치료에 효과적으로 이용될 수 있다. Accordingly, the present invention relates to a composition for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia, which contains as an active ingredient an extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof as a natural ingredient. , Since it can inhibit myostatin activity, it can be effectively used for strengthening muscle strength or preventing or treating sarcopenia.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, a preferred embodiment is presented to aid understanding of the present invention. However, the following examples are provided to more easily understand the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples.

[실시예][Example]

실시예 1: 생열귀나무(Example 1: Live fever tree ( Rosa davuricaRosa davurica Pall.) 추출물의 제조 Pall.) Preparation of extracts

먼저, 국립백두대간수목원으로부터 99.9%(v/v) 메탄올로 추출된 생열귀나무(전초) 추출물을 분양받았다.First, we received a pre-sale extract from the National Baekdudaegan Arboretum with 99.9% (v/v) methanol.

추가로, 강원도 정선에서 구입한 건조된 생열귀나무(Rosa davurica Pall.) 꽃, 잎 또는 열매 30 g에 20배수의 물, 30%에탄올 또는 70%에탄올을 넣고, 환류추출장치를 이용하여 80~100℃에서 4시간 동안 2회 반복 추출하였다. 추출물을 와트만 No.2(150 mm Φ) 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 장착된 회전증발농축기로 60℃에서 감압 농축하였다. 감압 농축된 추출물의 용매를 완전히 제거하기 위해 정제수를 넣어 현탁시킨 후 동결건조기를 이용하여 동결건조된 파우더 형태의 생열귀나무(꽃, 잎 또는 열매) 추출물을 최종 수득하였다. 생열귀나무(꽃, 잎 또는 열매) 추출물의 수득량을 추출부위별 또는 추출용매별로 구분하면, 표 1과 같다. In addition, a dried fresh sage tree ( Rosa davurica Pall.) purchased from Jeongseon, Gangwon-do. 20-fold water, 30% ethanol or 70% ethanol was added to 30 g of flowers, leaves or fruits, and extraction was repeated twice for 4 hours at 80-100 ° C using a reflux extraction device. The extract was filtered with a Whatman No. 2 (150 mm Φ) filter paper to remove insoluble substances, and then concentrated under reduced pressure at 60° C. using a rotary evaporator equipped with a cooling condenser. In order to completely remove the solvent of the extract concentrated under reduced pressure, purified water was added and suspended, and then a lyophilized powder form of raw yeolgi tree (flower, leaf or fruit) extract was finally obtained using a lyophilizer. Table 1 shows the yield of extracts of wild genus japonica (flowers, leaves or fruits) by classification by extraction part or extraction solvent.

water 30%에탄올30% ethanol 70%에탄올70% ethanol 생열귀꽃live fever flower 9.92 g9.92g 12.83 g12.83g 12.64 g12.64g 생열귀잎Fresh fever leaves 11.14 g11.14g 12.07 g12.07g 12.65 g12.65g 생열귀열매fresh fruit 17.05 g17.05g 12.64 g12.64g 16.65 g16.65g

실험예 1: 생열귀나무 추출물의 세포 독성 분석Experimental Example 1: Analysis of cytotoxicity of extracts of live fever

생열귀나무 추출물의 세포 독성을 분석하기 위하여, 페놀레드가 미포함된 10% 우태아 혈청 DMEM 배지를 사용하여 96 well plate에 well 당 5Х104 cell/100 uL의 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주를 분주하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후 페놀레드가 미포함된 무혈청 DMEM 배지에 생열귀나무(전초) 추출물을 혼합하여 농도별(12.5, 25, 50, 100 ㎍/mL)로 처리하되, 대조군(Vehicle)은 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에 용매만 처리하여, 5% CO2, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후 CCK-8(Cell Counting Kit-8)을 well 당 10 uL 분주 후 5% CO2, 37℃, 배양기에서 1시간 동안 반응시킨 후 450 nmEX/495-505 nmEm에서 형광을 측정하여 세포 독성을 판단하였다.In order to analyze the cytotoxicity of the extract of the wild chives, 293T cell line expressing CAGA 12 -Luc at 5Х10 4 cells/100 uL per well was prepared in a 96-well plate using 10% fetal bovine serum DMEM medium without phenol red. Divided and cultured at 5% CO 2 , 37°C. After 24 hours, the serum-free DMEM medium without phenol red was mixed with the extract of the wild genus japonica (herbica) and treated by concentration (12.5, 25, 50, 100 μg/mL), but the control group (Vehicle) was CAGA 12 -Luc The 293T cell line expressing the was treated with only the solvent and cultured at 5% CO 2 and 37°C. After 24 hours, after dispensing 10 uL of CCK-8 (Cell Counting Kit-8) per well, incubate in 5% CO 2 , 37 ℃ for 1 hour, and measure fluorescence at 450 nm EX / 495-505 nm Em Cytotoxicity was determined.

그 결과, 도 1에서 확인되는 바와 같이, CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에서 생열귀나무(전초) 추출물의 농도는 100 ㎍/mL 미만, 바람직하게, 25 ㎍/mL 이하에서 세포 독성이 나타나지 않는 것으로 확인된다. As a result, as shown in FIG. 1, the concentration of the extract of wild genus japonica (whole plant) in the 293T cell line in which CAGA 12 -Luc is expressed is less than 100 μg / mL, preferably less than 25 μg / mL, cytotoxicity is shown. It is confirmed that no

실험예 2: 생열귀나무 추출물의 항마이오스타틴 활성 분석Experimental Example 2: Analysis of antimyostatin activity of extracts of wild genus japonica

생열귀나무 추출물의 항마이오스타틴 활성을 분석하기 위하여, 발광 효소 분석(luciferase assay) 시스템을 이용하였다. In order to analyze the anti-myostatin activity of the extracts of wild chives, a luciferase assay system was used.

먼저,, 페놀레드가 미포함된 10% 우태아 혈청 DMEM 배지를 사용하여 96 well plate에 well 당 5Х104 cell/100 uL의 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주를 분주하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후 페놀레드가 미포함된 무혈청 DMEM 배지에 재조합 마이오스타틴(10 nM)과 생열귀나무(전초) 추출물을 혼합하여 농도별(0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 ㎍/mL)로 처리하되, 대조군(Vehicle)은 CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에 용매만 처리하여, 5% CO2, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후 CCK-8(Cell Counting Kit-8)을 well당 20 uL 분주 후 5% CO2, 37℃, 배양기에서 30분 동안 반응시킨 후 450 nmEX/495-505 nmEm에서 형광을 측정하여 세포 독성을 분석하였으며, Bright-Glo reagent로 항마이오스타틴 활성을 분석하였다. First, the 293T cell line expressing CAGA 12 -Luc at 5Х10 4 cells/100 uL per well was dispensed into a 96 well plate using 10% fetal calf serum DMEM medium without phenol red, 5% CO 2 , 37 ℃ cultured in. After 24 hours, the recombinant myostatin (10 nM) and the extract of wild genus japonica (herbica) were mixed in a serum-free DMEM medium without phenol red, and the concentrations (0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 ug/mL), but as a control group (Vehicle), CAGA 12 -Luc-expressing 293T cell line was treated with only the solvent and cultured at 5% CO 2 and 37°C. After 24 hours, after dispensing 20 uL of CCK-8 (Cell Counting Kit-8) per well, incubate in 5% CO 2 , 37℃, incubator for 30 minutes, and measure fluorescence at 450 nm EX /495-505 nm Em Cytotoxicity was analyzed, and antimyostatin activity was analyzed with Bright-Glo reagent.

그 결과, 도 2(a)에서 확인되는 바와 같이, CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에서 생열귀나무 추출물의 농도는 25 ㎍/mL 이하, 구체적으로, 0.2 ㎍/mL 내지 25 ㎍/mL 에서 모두 세포 생존율 80% 이상으로 세포 독성이 나타나지 않는 것으로 확인된다. 또한, 생열귀나무 추출물은 농도 의존적으로 마이오스타틴 활성이 억제되는 경향을 가지는 것으로 확인된다.As a result, as confirmed in FIG. 2 (a), the concentration of the wild genus japonica extract in the 293T cell line expressing CAGA 12 -Luc was 25 μg/mL or less, specifically, at 0.2 μg/mL to 25 μg/mL. All of them were confirmed to show no cytotoxicity with a cell viability of 80% or more. In addition, it is confirmed that the extract of wild lentils has a tendency to suppress myostatin activity in a concentration-dependent manner.

한편, 생열귀나무(전초) 추출물을 농도별(0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 ㎍/mL)로 처리한 대신, 생열귀나무(꽃, 잎, 열매 또는 전초) 추출물을 농도별(5, 20, 100 ㎍/mL)로 처리하여 반복 실험을 수행하였다. On the other hand, instead of treating the extract of the wild plant (flower, leaf, fruit or plant) by concentration (0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.1, 6.3, 12.5, 25 μg/mL), the extract of the plant were treated at different concentrations (5, 20, 100 μg/mL) and repeated experiments were performed.

그 결과, 도 2(b) 및 표 2에서 확인되는 바와 같이, CAGA12-Luc가 발현되는 293T 세포주에서 생열귀나무(꽃, 잎, 열매) 추출물은 모든 농도에서 모두 세포 생존율 80% 이상으로 세포 독성이 나타나지 않은 것으로 확인된다. As a result, as shown in FIG. 2 (b) and Table 2, in the 293T cell line expressing CAGA 12 -Luc, the extracts of fresh lentils (flowers, leaves, fruits) showed a cell viability of 80% or more at all concentrations. No toxicity was found.

또한, 생열귀나무(꽃, 잎, 열매 또는 전초) 추출물은 농도 의존적으로 마이오스타틴 활성이 억제되는 경향을 가지는 것으로 확인된다. 특히, 추출부위별로 살펴보면, 생열귀나무(꽃, 잎 및 전초) 추출물의 경우, 생열귀나무(열매) 추출물에 비해, 동일 농도에서 마이오스타틴 활성이 강하게 억제되는 것으로 확인된다. 추출용매별로 살펴보면, 추출용매로 30~70% 에탄올을 사용한 경우, 추출용매로 물을 사용한 경우에 비해, 동일 농도에서 마이오스타틴 활성이 강하게 억제되는 것으로 확인된다. In addition, it is confirmed that the extract of wild genus japonica (flower, leaf, fruit or whole plant) tends to suppress myostatin activity in a concentration-dependent manner. In particular, when looking at each extraction part, it was confirmed that the myostatin activity was strongly inhibited at the same concentration in the case of the extract of the wild cypress (flower, leaf and herb) extract, compared to the extract of the genus cypress (fruit). Looking at each extraction solvent, it was confirmed that myostatin activity was strongly inhibited at the same concentration when 30-70% ethanol was used as the extraction solvent, compared to the case where water was used as the extraction solvent.

구분division 시험군test group 농도(μg/mL)Concentration (μg/mL) 세포생존율(%)Cell viability (%) 항마이오스틴활성(RLU)Antimyostin activity (RLU) 항마이오스틴활성antimyostin activity
(억제%)(control%)
MSTN미처리MSTN unprocessed VehicleVehicle   100.00 ± 8.57100.00 ± 8.57 240240 0.000.00 MSTN 처리MSTN treatment VehicleVehicle   108.15±6.30108.15±6.30 1023.331023.33 0.000.00 생열귀꽃live fever flower 열수추출물hot water extract 55 107.69 ± 2.72107.69 ± 2.72 380380 62.8762.87 2020 106.04 ± 6.22106.04 ± 6.22 340340 66.7866.78 100100 78.16 ± 2.5378.16 ± 2.53 170170 83.3983.39 30%EtOH추출물30% EtOH extract 55 107.01 ± 2.53107.01 ± 2.53 445445 56.5156.51 2020 102.88 ± 2.53102.88 ± 2.53 210210 79.4879.48 100100 88.60 ± 6.8088.60 ± 6.80 150150 85.3485.34 70%EtOH추출물70% EtOH extract 55 111.13 ± 11.07111.13 ± 11.07 375375 63.3563.35 2020 113.87 ± 1.75113.87 ± 1.75 165165 83.8883.88 100100 83.65 ± 1.3683.65 ± 1.36 120120 88.2788.27 생열귀잎Fresh fever leaves 열수추출물hot water extract 55 111.26 ± 2.72111.26 ± 2.72 565565 44.7944.79 2020 106.73 ± 0.97106.73 ± 0.97 405405 60.4260.42 100100 83.79 ± 0.3983.79 ± 0.39 275275 73.1373.13 30%EtOH추출물30% EtOH extract 55 107.42 ± 5.83107.42 ± 5.83 405405 60.4260.42 2020 107.97 ± 0.78107.97 ± 0.78 240240 76.5576.55 100100 92.17 ± 1.3692.17 ± 1.36 190190 81.4381.43 70%EtOH추출물70% EtOH extract 55 107.01 ± 2.91107.01 ± 2.91 435435 57.4957.49 2020 123.21 ± 16.51123.21 ± 16.51 180180 82.4182.41 100100 80.08 ± 2.5380.08 ± 2.53 9595 90.7290.72 생열귀열매fresh fruit 열수추출물hot water extract 55 112.91±3.50112.91±3.50 755755 26.2226.22 2020 111.13±10.30111.13±10.30 605605 40.8840.88 100100 102.06±0.58102.06±0.58 415415 59.4559.45 30%EtOH추출물30% EtOH extract 55 101.92±3.11101.92±3.11 640640 37.4637.46 2020 102.06±3.69102.06±3.69 335335 67.2667.26 100100 99.59±2.1499.59±2.14 200200 80.4680.46 70%EtOH추출물70% EtOH extract 55 115.25±11.07115.25±11.07 510510 50.1650.16 2020 103.43±2.14103.43±2.14 455455 55.5455.54 100100 84.89±3.8984.89±3.89 230230 77.5277.52 생열귀전초 fresh fever grass 메탄올methanol 55 123.76±9.91123.76±9.91 335335 67.2667.26 2020 108.93±1.36108.93±1.36 150150 85.3485.34 100100 52.34±0.5852.34±0.58 4040 96.0996.09

실험예 3: 생열귀나무 추출물의 마이오스타틴 신호 전달 분석Experimental Example 3: Analysis of Myostatin Signal Transduction in Fresh Ficus Extract

생열귀나무 추출물이 마이오스타틴 신호 전달 경로에 미치는 영향을 확인하기 위하여, SMAD2 인산화 단백질의 발현량을 Western blot으로 확인하였다. In order to confirm the effect of the extract of wild chives on the myostatin signal transduction pathway, the expression level of SMAD2 phosphorylated protein was confirmed by Western blot.

구체적으로, 10% 우태아 혈청 DMEM 배지를 사용하여 12 well plate에 well 당 5.0Х105cell 의 HepG2 세포주를 분주하여 5% CO2, 37℃에서 배양하였다. 24시간 후 무혈청 DMEM 배지로 교체하여 5% CO2, 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 무혈정 DMEM 배지에 재조합 마이오스타틴(10 nM)과 생열귀나무 추출물을 혼합하여 농도별(3.13, 6.25, 12.5, 25 ㎍/mL)로 처리하여, 5% CO2, 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 배양이 완료된 세포는 배지를 제거하고 PBS 버퍼로 세척하여 RIPA 버퍼에 EDTA와 포스포타아제 저해제를 혼합하여 세포에 처리하였다. 스크래퍼를 이용하여 세포를 긁은 후, 세포를 회수하였다. 펠렛을 균질화하여 얼음에서 30분간 반응시킨 후, 4℃, 13,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 획득한 상층액을 BCA로 단백질 정량하였다. 전기영동 후 상온에서 1시간 동안 블로킹 후 1차 항체(pSMAD2, SMAD2, β-actin)를 4℃에서 반응시켰다. 24시간 후 2차 항체를 상온에서 1시간 동안 반응시키고, Odyssey CLX을 이용하여 단백질 발현량을 측정하였다.Specifically, 5.0Х10 5 cells of the HepG2 cell line were dispensed per well in a 12-well plate using 10% fetal bovine serum DMEM medium and cultured at 5% CO 2 and 37°C. After 24 hours, the medium was replaced with serum-free DMEM medium and cultured for 4 hours at 5% CO 2 and 37°C. A bloodless DMEM medium was mixed with recombinant myostatin (10 nM) and the extract of wild genus chinensis, and treated by concentration (3.13, 6.25, 12.5, 25 μg/mL), 5% CO 2 , at 37°C for 30 minutes. cultured. The cultured cells were treated with a mixture of EDTA and a phosphatase inhibitor in RIPA buffer after washing with PBS buffer to remove the culture medium. After scraping the cells with a scraper, the cells were recovered. After the pellet was homogenized and reacted on ice for 30 minutes, the supernatant obtained by centrifugation at 4° C. and 13,000 rpm for 10 minutes was quantified by BCA. After electrophoresis, the cells were blocked for 1 hour at room temperature and reacted with primary antibodies (pSMAD2, SMAD2, β-actin) at 4°C. After 24 hours, the secondary antibody was reacted at room temperature for 1 hour, and the protein expression level was measured using Odyssey CLX.

그 결과, 도 3에서 확인되는 바와 같이, 생열귀나무 추출물의 농도 의존적으로 재조합 마이오스타틴 처리 후 발현되는 SMAD2 인산화 단백질의 발현이 감소하는 것으로 확인된다. As a result, as confirmed in FIG. 3 , it was confirmed that the expression of the SMAD2 phosphorylated protein expressed after treatment with recombinant myostatin was reduced in a concentration-dependent manner in the extract of Raisinus sinensis.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. The above description of the present invention is for illustrative purposes, and those skilled in the art can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting.

Claims (8)

생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, containing an extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.
제1항에 있어서,
상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무의 잎, 줄기, 꽃, 열매 및 전초로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위를 대상으로 추출한 것을 특징으로 하는, 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
According to claim 1,
The raw fever tree extract is characterized in that it is extracted from any one or more parts selected from the group consisting of leaves, stems, flowers, fruits and outposts of the live fever tree, a pharmaceutical for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia. composition.
제1항에 있어서,
상기 생열귀나무 추출물은 생열귀나무를 대상으로 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하는, 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
According to claim 1,
The raw fever tree extract is a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia, characterized in that extracted using water, an organic solvent, or a mixture thereof as a solvent for the living tree tree.
제1항에 있어서,
상기 생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물은 마이오스타틴 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
According to claim 1,
A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, characterized in that the extract, a fraction thereof, or a fermented product thereof inhibits myostatin activity.
제1항에 있어서,
상기 조성물 내 상기 상기 생열귀나무 추출물의 농도는 0.1 ㎍/mL 내지 100 ㎍/mL인 것을 특징으로 하는, 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
According to claim 1,
A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of muscle weakness-related diseases or sarcopenia, characterized in that the concentration of the raw fever lichen extract in the composition is 0.1 μg / mL to 100 μg / mL.
제1항에 있어서,
상기 근력 약화 관련 질환은 근위축증, 근무력증, 근이영양증, 근경직증, 근긴장저하, 근력약화, 근육퇴화, 근육퇴행위축, 근위축성 측삭경화증, 중증 근무력증, 긴장감퇴증 및 악액질로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 근력 약화 관련 질환 또는 근감소증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
According to claim 1,
The disease associated with muscle weakness is at least one selected from the group consisting of muscular dystrophy, myasthenia gravis, muscular dystrophy, myasthenia, hypotonia, muscle weakness, muscle degeneration, muscular dystrophy, amyotrophic lateral sclerosis, myasthenia gravis, hypotonia and cachexia. To, a pharmaceutical composition for preventing or treating muscle weakness-related diseases or sarcopenia.
생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
A health functional food composition for strengthening muscle strength or preventing or improving sarcopenia, containing an extract of wild genus japonica, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.
생열귀나무 추출물, 이의 분획물 또는 이의 발효물을 유효성분으로 함유하는 근력 강화용 또는 근감소증 예방 또는 개선용 식품 조성물.A food composition for strengthening muscle strength or for preventing or improving sarcopenia, containing an extract of wild genus japonica, a fraction thereof, or a fermented product thereof as an active ingredient.
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