KR20230035872A - 위령선 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스 균에 대한 항균용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물의 항균효과를 입증한 것으로, 더욱 구체적으로는 위령선(clematis florida thunb) 추출물은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 항균효과를 가지므로, 우수한 치주질환(neurological disease) 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 사용될 수 있다.

Description

위령선 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스 균에 대한 항균용 조성물{Antibacterial composition for Porphyromonas gingivalis containing extract of the clematis florida thunb as an active ingredient}
본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 항균용 조성물에 관한 것이다.
구강 내 질환은 세균에 의해 유발되며 성인의 치아 상실의 주된 원인으로 치주질환이다. 구강 내 균주의 변화는 구강 내 질환뿐만 아니라 전신질환에도 영향을 준다고 알려져 있다. 치주질환 관련된 세균의 독소와 대사산물이 치주낭을 통한 혈류 유입으로 당뇨병, 심혈관계질환, 류마티스 관절염, 폐렴 등의 전신질환과 밀접한 영향을 주고 있다.
구강 내 다양한 상주균 중 치주질환의 원인으로 알려진 대표적인 균은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis)그람 음성 막대균이다. 만성치주염과 급성치주염, 난치성 치주염과 재발성 치주염에서도 많이 검출되는 치주염 원인균으로 독성인자를 가지고 있고, 특히 콜라겐을 분해로 인해 구취를 유발하기도 하며, 내독소로 치조골 파괴를 일으켜 치아의 상실을 유발하기도 한다.
일반적으로 이러한 구강질환을 유발하는 원인균을 억제하기 위해 항생제를 사용하고 있다. 항생제는 인체에 위해 작용이 있어 균교대현상과 내성균 형성 등 부작용을 일으킬 수 있어 최근에는 부작용이 적다고 알려진 천연추출물의 활용이 적극적으로 이루어지고 있다.
또한, 현재 대부분의 소비자들은 기존에 판매되고 있는 구강세정제를 사용하여 구강을 관리하고 있으며 구강세정제는 강력한 항균효과를 가진 반면 다량의 화학물질이 포함되어 있고, 이는 치아 변색, 구강점막 손상 등의 문제를 비롯하여 구강암을 유발하는 요인과 연관성이 보고된 바 있다. 장기간 사용 시 화학물질은 인체에 생리학적 위험성이 있음으로 안정성에 대한 논란이 대두됨에 따라 화학물질의 부작용을 줄이고 안전하게 대체할 수 있는 천연추출물에 대한 많은 연구 및 개발이 보고되고 있다.
한편, 위령선(clematis florida thunb) 추출물은 미나리아재비과 으아리속에 속하는 다년생 덩굴성 뿌리로서 예전부터 한방에서는 부종, 신경통과 근육통, 편두통, 이하선염, 편도염, 간질환과 같은 질환에 폭넓게 이용되어왔다. 뿐만 아니라, 항염 및 항균 진통에도 효능이 보고 되었고 통증조절, 관절염, 소염 및 진통, 해열, 면역력 증진 등에 효과를 보이며 근육통, 편두통을 비롯한 신경통과 부종의 치료제로 활용되어 왔다.
본 발명에서는 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 제조하고 이를 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것으로, 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis)균에 뛰어난 항균효과를 확인하여 본 발명을 완성하였다.
KR 10-0599934
본 발명의 목적은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공하는 것으로, 본 발명의 위령선 추출물은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 우수한 항균 효과를 나타내므로, 이는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 항균용 조성물로 사용될 수 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, “위령선 추출물”은 증류수, 에탄올, 메탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출되는 것을 특징으로 할 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, “위령선 추출물”은 에탄올 60 내지 80%를 사용하여 추출한 것을 특징으로 할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, “항균용 조성물”은 세균의 생육을 억제 또는 사멸시키는 것을 특징으로 할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, “세균”은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균인 것을 특징으로 할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, “위령선 추출물”은 유효농도가 0.3 내지 40 mg/ml 범위로 함유되는 것을 특징으로 할 수 있으고, 바람직하게는 1.5 내지 35mg/ml 범위일 수 있고, 더 바람직하게는 10 내지 30mg/ml 범위일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물로, 본 발명의 추출물은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 우수한 항균 효과를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 위령선(clematis florida thunb) 추출물의 치은섬유모세포에 대한 세포독성실험 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 위령선(clematis florida thunb) 추출물의 농도와 시간에 따른 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 사멸효과를 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 6시간동안 처리한 경우, 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 농도별 사멸효과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명의 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 24시간동안 처리한 경우, 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 농도별 사멸효과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명의 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 6시간 및 24시간동안 처리한 경우, 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균에 대한 농도별 사멸효과를 비교한 도이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
일 측면에서, 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 위령선(clematis florida thunb)으로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 상기 위령선(clematis florida thunb)으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 식품학/약학/화장품학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.
본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.
일 측면에서, 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 약학적 조성물에는 유효성분 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학적 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/ 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.
또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.
일 측면에서, 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 의약외품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 “치주질환(periodontal disease)”은 치아를 받치고 있는 치은과 치주인대 및 골조직에 염증이 생기는 질환으로서, 흔히 풍치라고도 하는데, 병의 정도에 따라 치은염(gingivitis)과 치주염(periodontitis)으로 나뉜다. 비교적 가볍고 회복이 빠른 형태의 치주질환으로 잇몸 즉, 연조직에만 국한된 형태를 치은염이라고 하고, 이러한 염증이 잇몸과 잇몸뼈 주변까지 진행된 경우를 치주염이라고 한다. 치은(잇몸)과 치아 사이에는 V자 모양의 틈이 있는데, 이 홈(sulcus)의 잇몸 선 아래 부분을 구강병원균이 공격하면서 염증 자극원인 리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide, LPS)를 방출하고, 이로 인해 잇몸이 붓고 출혈이 일어나는 등 염증이 생성되며, 이로써 치주인대와 인접조직이 손상된다. 치주염이 진행되면 치주인대, 더 나아가 치조골까지 손상시키고 결국 치아가 손실된다. 단백질, 비타민 등의 영양부족, 임신한 경우나 당뇨병 등과 같은 호르몬 장애, 흡연, 후천성면역결핍증(AIDS) 등이 질환을 악화시킬 수 있다. 또한, 치주질환의 다른 원인으로 치태 및 치석을 들 수 있다. 본 발명의 치주질환은 치주질환을 일으키는 원인균이라면 그 종류에 관계없이 모두 포함되나, 구체적으로는 악티노바실루스 악티노마이세템코미탄스 (Actinobacillus actinomycetemcomitans), 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis), 타네렐라 포르시시아(Tannerella forsythia), 트레포네마 덴티콜라 (Treponema denticola) 및 푸소박테리움 누클리아툼(Fusobacterium nucleatum)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균일 수 있으며, 보다 구체적으로는 포르피로모나스 진지발리스(Porphyromonas gingivalis)일 수 있다.
상기 포르피로모나스 진지발리스는 박테로이드(Bacteroide) 유연균의 일종으로 그람음성균이고, 혐기성균이다. 상기 포르피로모나스 진지발리스는 치주질환이 발생한 구강 내에서 발견되며, 그 외에도 위장관 상부, 호흡기 및 결장에서도 발견된다. 만성 치주질환 환자는 상기 균의 콜라게네이즈 효소에 의해 콜라겐이 분해되며, 상기 균은 치은 섬유아세포에 침입할 수 있으며, 상당한 농도의 항생제 하에서도 생존할 수 있다. 또한, 상기 균은 치은 상피세포에 침입하여 장시간 생존할 수 있다.
본 발명의 “의약외품 조성물”은 구강용 의약외품을 포함할 수 있다. 본 발명의 의약외품 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 유효성분 이외에 구강용 의약외품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 연마제, 습윤제, 결합제, 기포제, 감미제, 방부제, 약효성분, 향미제, 색소, 용제, 증백제, 가용화제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다.
본 발명의 “구강용 의약외품 조성물”은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 치약, 구강세정제, 구강청정제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬, 구강양치액 및 잇몸 마사지 크림 등의 제형을 가질 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
하나의 예로서, 본 발명의 구강용 의약외품 조성물이 치약의 제형일 경우, 습윤제, 연마제, 결합제, 기포제, 향미제, 감미제, 착색제, 보존제, 약효성분, 용제, pH 조절제 등을 포함할 수 있다.
상기 습윤제는 치약제 성분 중 분말이 페이스트상이 되게 하고 치약제가 공기 중에 굳는 것을 방지하기 위한 것으로 글리세린, 솔비트액, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등을 단독 또는 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 1 ~ 60 중량%, 구체적으로는 10 ~ 50 중량%를 사용할 수 있다.
상기 기포제는 치약제를 구강 중에 확산시켜 청소효과를 높이고, 계면활성제로서 작용하여 구강 오염을 세정하는 것으로 라우릴황산나트륨, 라우릴 사르코신산 나트륨, 알킬 설포호박산 나트륨, 자당 지방산 에스테르 등의 계면활성제를 단독 혹은 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 0.5 ~ 10 중량%, 구체적으로는 0.5 ~ 5 중량%를 사용할 수 있다.
상기 결합제는 치약제중의 분말과 액체 성분 간의 분리를 방지하는 것으로 카복시메틸셀룰로오스나트륨, 메틸셀룰로오스, 하이드록시 프로필셀룰로오스 등의 셀룰로오스 유도체와 알긴산나트륨, 카라기난, 잔탄검 등을 단독 혹은 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 0.1 ~ 5 중량%, 구체적으로는 0.3 ~ 2 중량%를 사용할 수 있다.
상기 연마제는 치아표면을 상처내지 않고 치아표면의 부착물을 제거하고 치아 본래의 광택이 나도록 하는 것으로 탄산칼슘(CaCO3), 제2인산칼슘(CaHPO4, CaHPO42H2O), 무수규산(SiO22H2O), 수산화알루미늄(Al(OH)3), 피로인산카륨, 탄산마그네슘 등을 단독 혹은 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 1 ~ 60 중량%, 구체적으로는 10 ~ 50 중량%를 사용할 수 있다.
상기 향미제는 치약에 상쾌감과 냄새를 부여하여 사용감을 증진시키기 위한 것으로 페퍼민트오일, 스피아민트오일, 멘톨 등을 단독 혹은 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 0.01 ~ 60 중량%, 구체적으로는 0.01 ~ 5 중량%를 사용할 수 있다.
상기 감미제는 치약제 원료에 의한 불쾌한 맛이나 제거하고 청량감을 좋게 하기 위한 것으로 사카린산, 아스파탐, 자일리톨, 감초산 등을 단독 혹은 2종 이상 혼합하여 조성물 총 중량 중 0.01 ~ 60 중량%, 구체적으로는 0.01 ~ 5 중량%를 사용할 수 있다.
일 측면에서, 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 “화장료 조성물”은 상술한 본 발명의 위령선(clematis florida thunb)에서 추출한 추출물의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount) 및 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하여 제조할 수 있다.
본 명세서에서 용어 “화장품학적 유효량”은 상술한 본 발명의 조성물의 신경질환 개선 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
화장료 조성물의 외형은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일 및 바디에센스 등의 화장품으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 색조화장품, 선크림, 투웨이케이크, 페이스파우더, 콤팩트, 메이크업베이스, 스킨커버, 아이쉐도우, 립스틱, 립글로스, 립픽스, 아이브로우 펜슬, 화장수 등의 화장품 및 샴푸, 비누 등의 세정제에 적용될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물에는 상기 위령선(clematis florida thunb)에서 추출한 추출물 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 또한, 상기 기능성 첨가물과 더불어 필요에 따라 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분을 배합해도 된다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
일 측면에서, 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 유효성분인 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한, 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 기능성 식품 조성물은, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능성식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능성식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능성식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능성식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능성식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 자세히 설명한다. 다만, 상기 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.
실시예1. 위령선( clematis florida thunb ) 추출물 제조
분쇄한 위령선(clematis florida thunb)과 70% 에탄올을 혼합하고 60℃에서 24시간동안 진탕처리 하였다. 여과지를 사용하여 상층액만 여과한 뒤 회전식 진공증발 농축기(N-1300E.V.S. EYELA Co., Tokyo, Japan)를 사용하여 농축하였다. 농축된 추출물은 동결 건조기(FD, Ilshin Lab, Yangju, Korea)로 동결건조하여 사용하였다.
실시예2. 포르피로모나스 진지발리스( porphyromonas gingivalis ) 균주의 배양
기탁(KCTC 5352)된 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균주를 사용하였다. 실험균주를 yeast extract(5 ㎎/mL), L-cystein hydrochloride(5 ㎍/mL), hemin(1 ㎍/mL) 및 vitamin K1(0.2 ㎍/mL) 및 이 첨가된 tryptic soy broth(BD Difco, USA) 액체배지와 면역적혈구가 5% 첨가된 tryptic soy 혈액한천배지에서 24시간 37˚C에서 혐기적으로 배양하였다.
실시예3. 위령선( clematis florida thunb ) 추출물의 세포독성 확인
인간 치은섬유모세포인 HGF-1 cell은 ATCC (CRL-2014; Rockville, MD, USA)에서 구입하여 10 % fetal bovine serum(Hyclone, South Logan, UT, USA)과 1 % antibiotics(100 U/ml penicillin G, 100 mg/ml streptomycin, Hyclone)을 첨가한 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) 배지로 37 ℃, 5 % CO2에서 배양하였다.
위령선추출물을 적용에 따른 세포 성장률에 미치는 영향을 정량화는 WST-1 (water soluble tetrazoliumsalt-1) 분석을 적용하여 측정하였다. HGF세포를 96-well plate에 0.01mg/ml, 0.05mg/ml, 0.1mg/ml, 0.3mg/ml, 0.5mg/ml, 1mg/ml, 3mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml 의 농도로 처리된 세포를 6시간과 24시간 배양한 다음 WST-1 용액을 처리하였다. 2시간 동안 37°C, 5% CO2배양기에 반응시킨 후 ELISA reader (Multiskan FC, Thermo isher Scientific, Waltham, MA, USA)로 450 nm 파장에서 성장률을 측정 하였으며, 각각의 분석은 독립적으로 세 번씩 시행하였다.
세포에 미치는 영향을 적용 시간에 따라 확인한 결과, 6시간 적용한 경우는 3mg/ml까지 세포의 생존률에 영향을 미치지 않음으로 세포독성 없이 안전함을 알 수 있으나 5mg/ml부터는 낮은 세포생존률이 나타남을 확인하였다. 또한 24시간 적용한 경우 1mg/ml부터 세포 생존에 영향을 미치는 것을 확인하였다.
실시예4. 위령선( clematis florida thunb ) 추출물의 항균 활성 확인
집락형성단위(colony-forming units ;CFUs)를 평가하기 위해 0.01mg/ml 내지 40mg/ml의 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 1 mL tryptic soy broth에 희석하여 5X105 P. gingivalis 100 ul를 분주하였다. 24시간 혐기배양 후 tryptic soy 혈액한천배지에 도말하여 혐기배양 하여 시간에 따른 변화를 관찰하기 위하여 3, 6, 9, 12 및 24시간 후에 CFUs를 확인하였다.
결과는 도 1에서와 같이 3시간 경과시 P.G 대조군(위령선 추출물을 투여하지 않은 군)에 비하여 1.25mg/ml의 농도에서 항균효과가 나타남을 확인하였다. 또한 농도가 증가하면 더욱 뚜렷한 항균효과를 보임을 확인하였다.
위령선+PG/3h Con 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 20mg/ml
average 8.70E+07 7.00.E+03 4.40.E+03 2.12.E+03 1.31.E+03 1.20.E+03
log10 7.94 3.85 3.64 3.33 3.12 3.08
Con~Exp 4.09 4.30 4.61 4.82 4.86
inhibitor(%) 99.9919540 99.9949425 99.9975632 99.9984943 99.9986207
위령선+PG/6h Con 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 20mg/ml
average 8.70E+07 3.00.E+04 1.80.E+04 2.11.E+03 1.95.E+03 1.59.E+03
log10 7.94 4.48 4.26 3.32 3.29 3.20
Con~Exp 3.46 3.68 4.62 4.65 4.74
inhibitor(%) 99.9655172 99.9793103 99.9975747 99.9977586 99.9981724
위령선+PG/9h Con 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 20mg/ml
average 8.70E+07 5.76.E+08 1.15.E+07 6.98.E+04 3.40.E+02 7.00.E+01
log10 10.49 8.76 7.06 4.84 2.53 1.85
Con~Exp 1.73 3.43 5.65 7.96 8.64
inhibitor(%) 98.1333117 99.9626500 99.9997737 99.9999989 99.9999998
위령선+PG/12h Con 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 20mg/ml
average 3.74E+10 2.41.E+09 3.03.E+07 3.79.E+05 8.45.E+02 9.00.E+01
log10 10.57 9.38 7.48 5.58 2.93 1.95
Con~Exp 1.19 3.09 4.99 7.65 8.62
inhibitor(%) 93.5599572 99.9189240 99.9989855 99.9999977 99.9999998
위령선+PG/24h Con 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml 10mg/ml 20mg/ml
average 6.25E+10 1.10.E+09 1.00.E+09 8.45.E+08 1.10.E+07 6.10.E+03
log10 10.80 9.04 9.00 8.93 7.04 3.79
Con~Exp 1.75 1.80 1.87 3.75 7.01
inhibitor(%) 98.24 98.40 98.65 99.98 99.9999902
표 1은 위령선(clematis florida thunb) 추출물의 농도와 시간에 따른 CFUs수치에 따른 변화를 나타내었다. 이를 참조하면 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 3시간만 적용하여도 P.G 대조군에 비하여 1.25mg/ml의 농도에서 99.99% 사멸하는 것을 확인하였다. 또한 농도가 증가하면 로그 지수가 더욱 확실하게 감소되고 특히, 9시간 및 12시간 경과 시 로그지수의 확연한 차이가 보임으로 뚜렷한 항균효과를 보임을 확인하였다.
log10 6h 24h
p.gingivalis 9.56 12.79
0.01mg/ml 9.15 12.75
0.05mg/ml 8.30 12.73
0.1mg/ml 8.11 12.64
0.3mg/ml 3.64 11.98
0.5mg/ml 3.55 11.71
1mg/ml 3.29 11.33
3mg/ml 2.51 10.92
5mg/ml 1.52 10.72
10mg/ml 1.34 7.88
15mg/ml 1.18 6.66
20mg/ml 0.95 4.03
25mg/ml 0.90 2.62
30mg/ml 0.48 0.00
35mg/ml 0.48 0.00
40mg/ml 0.00 0.00
average 6h 24h
p.gingivalis 3.63.E+09 6.14.E+12
0.01mg/ml 1.42.E+09 5.65.E+12
0.05mg/ml 2.00.E+08 5.35.E+12
0.1mg/ml 1.30.E+08 4.36.E+12
0.3mg/ml 4.32.E+03 9.55.E+11
0.5mg/ml 3.53.E+03 5.13.E+11
1mg/ml 1.93.E+03 2.14.E+11
3mg/ml 3.25.E+02 8.33.E+10
5mg/ml 3.30.E+01 5.21.E+10
10mg/ml 2.20.E+01 7.54.E+07
15mg/ml 1.50.E+01 4.59.E+06
20mg/ml 9.00.E+00 1.07.E+04
25mg/ml 8.00.E+00 4.20.E+02
30mg/ml 4.00.E+00 0.00.E+00
35mg/ml 3.00.E+00 0.00.E+00
40mg/ml 0.00.E+00 0.00.E+00
inhibitor(%) 6h 24h
0.01mg/ml 60.88 8.01
0.05mg/ml 94.49 12.87
0.1mg/ml 96.42 29.03
0.3mg/ml 99.99988 84.44
0.5mg/ml 99.99990 91.64
1mg/ml 99.99995 96.52
3mg/ml 99.999991 98.64
5mg/ml 99.9999991 99.15
10mg/ml 99.9999994 99.9988
15mg/ml 99.9999996 99.99993
20mg/ml 99.9999998 99.9999998
25mg/ml 99.9999998 99.999999993
30mg/ml 99.999999917 100.00
35mg/ml 99.999999917 100.00
40mg/ml 100.00 100.00
표 2, 3 및 4는 위령선 추출물을 6시간 및 24시간동안 농도별 처리에 따른 항균효과를 비교한 것이다. 이를 참고하면 위령선 추출물을 6시간동안 처리한 경우에는 0.3mg/ml 내지 35mg/ml의 농도 구간에서 균 억제율이 99.99%, 40mg/ml에서 100% 완전 사멸하는 것을 확인하였고, 24시간동안 처리한 경우에는 10mg/ml 내지 25mg/ml의 농도 구간에서 균 억제율이 99.99%, 30mg/ml에서 100% 완전 사멸하는 것을 확인하였다(표 2, 3 및 4 참조).
결과적으로 위령선(clematis florida thunb) 추출물은 저농도에서 짧은시간에 항균효과가 나타나 치주질환 예방 및 개선을 위한 조성물로 사용될 수 있는 물질임을 확인하였다.

Claims (10)

  1. 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 위령선 추출물은 증류수, 에탄올, 메탄올 또는 이들의 혼합 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 위령선 추출물은 에탄올 60 내지 80%를 사용하여 추출한 것인 항균용 조성물.
  4. 제 1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 세균의 생육을 억제 또는 사멸 시키는 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
  5. 제 4항에 있어서,
    상기 세균은 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균인 것을 특징으로 하는 항균용 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 위령선 추출물의 유효농도가 0.3 내지 40 mg/ml 범위로 함유되는 것인, 항균용 조성물.
  7. 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 의약외품 조성물.
  9. 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  10. 위령선(clematis florida thunb) 추출물을 유효성분으로 포함하는 포르피로모나스 진지발리스(porphyromonas gingivalis) 균으로 인한 치주질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
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