KR20230034341A - 피리미딘 화합물의 결정 - Google Patents
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Abstract
7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필 에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 결정, 그 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 을 제공한다. 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°에서 선택되는 3 개 이상에 특징적인 피크를 갖는, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정. 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°에서 선택되는 3 개 이상에 특징적인 피크를 갖는, 화합물 (I) 의 (프리체) II 형 결정. 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°에서 선택되는 3 개 이상에 특징적인 피크를 갖는, 화합물 (I) 의 (프리체) I 형 결정. 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°에서 선택되는 4 개 이상에 특징적인 피크를 갖는, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정. 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°에서 선택되는 4 개 이상에 특징적인 피크를 갖는, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정.
Description
본 발명은, 항종양제로서 유용한 피리미딘 화합물의 결정 및 당해 결정을 포함하는 의약 조성물에 관한 것이다.
HER2 (ErbB2 라고도 불린다) 는, ErbB 패밀리에 속하는 수용체형 티로신 키나아제이다.
HER2 는, 암 원인 유전자로서 생각되며, HER2 의 유전자 증폭이나 과잉 발현, 변이 등이 다양한 암에서 보고되어 있다. 비임상·임상 연구 데이터로부터, 이들 HER2 의 유전자 이상·과잉 발현 등을 수반하는 암세포에 있어서, HER2 및 하류 시그널의 활성화가, 암세포의 생존·증식 등에 있어서 중요한 역할을 담당하고 있는 것으로 생각되고 있다 (비특허문헌 1).
따라서, HER2 의 키나아제 활성을 제어할 수 있는 저해제는, HER2 의 유전자 증폭이나 과잉 발현, 변이를 갖는 암세포에 있어서, HER2 및 하류 시그널 전달을 저해함으로써 항종양 효과를 발휘하는 것이 상정되기 때문에, 암 환자의 치료, 연명이나 QOL 향상에 유용한 것으로 생각된다.
폐암에서는 약 25 - 40 %, 유방암에서는 약 15 - 30 %, 그 밖의 복수의 암에 있어서도 일정한 비율로 뇌 전이를 발생시킨다는 보고가 있다 (비특허문헌 2,3). 실제로, HER2 양성의 유방암에서는, 약 20 - 30 % 가 뇌 전이를 발생시킨다는 보고가 있다 (비특허문헌 4).
HER2 저해 활성을 갖는 화합물로는, 라파티닙 (Lapatinib), 네라티닙 (Neratinib) 등이 HER2 양성 유방암에 대한 치료제로서 승인되어 있다. 그러나, 모두 p-gp, Bcrp 의 기질인 점에서, 비임상 시험에서는 뇌 이행성은 한정적이라는 보고가 있다 (비특허문헌 5). 실제로, 라파티닙나 네라티닙의 임상 시험에 있어서, 뇌 전이암에 대한 충분한 효과는 얻어지고 있지 않다 (비특허문헌 6, 7, 8, 9).
뇌 전이소 (巢) 도 포함한 병태의 컨트롤이라는 관점에서, HER2 에 대하여 저해 활성을 갖고, 또한 뇌 이행성도 갖는 HER2 저해제가 요망되고 있다.
또, 일반적으로, 의약품의 유효 활성 성분으로서 화합물이 사용될 때, 품질을 안정적으로 유지하기 위해 및/또는 보관 관리를 용이하게 하기 위해, 화합물의 화학적 및 물리학적인 안정성이 필요하다. 이 때문에, 화학적 및 물리학적인 안정성을 갖고, HER2 에 대하여 저해 활성을 갖고, 또한 뇌 이행성도 갖는 HER2 저해제가 요망되고 있다.
Cancer Treatment Reviews, 40, p.770-780 (2014)
Current Oncology, 25, p.S103-S114 (2018)
Breast Cancer Reseach, 18 (1), 8, p.1-9 (2016)
Journal of Clinical Oncology, 28, p3271-3277 (2010)
Journal of Medicinal Chemistry, 59, p10030-10066 (2016)
Journal of Medicinal Chemistry, 26, p2999-3005 (2008)
Journal of Clinical Oncology, 26, p1993-1999 (2008)
Journal of Clinical Oncology, 28, p1301-1307 (2010)
Journal of Clinical Oncology, 34, p945-952 (2016)
본 발명은, 화학적 및 물리학적인 안정성을 갖고, HER2 에 대하여 저해 활성을 갖고, 또한 뇌 이행성도 갖는 HER2 저해제를 제공하는 것을 목적으로 한다. 특히 본 발명은, 안정성이 우수하고, 경구 흡수성이 양호하고, 또한 양호한 재현성으로 취득 가능한 HER2 저해제의 결정을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해 예의 연구를 실시한 결과, 하기 식 (I) 로 나타내는 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (이하,「화합물 (I)」이라고도 한다) 가, HER2 저해 활성 및 뇌 이행성을 갖고, HER2 를 저해함으로써 HER2 가 관여하는 질환 (특히, 악성 종양) 의 치료제로서 유용한 것을 알아냈다.
[화학식 1]
그리고, 본 발명자들은, 화합물 (I) 에는 프리체로서 2 개의 결정형 (I 형 결정, II 형 결정), 및 산과의 결정 (염체의 결정 또는 공결정) 으로서, 염산과의 결정 (염산과의 I 형 결정, 염산과의 II 형 결정, 염산과의 III 형 결정), 브롬화수소산과의 결정, 1 당량의 타르타르산과의 결정, 푸마르산과의 결정 (0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정), 숙신산과의 결정을 알아냈다.
그 결정형 중 프리체 I 형 결정, 프리체 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정 각각에 있어서, 비흡습성이며 우수한 고체 안정성이 있다는 의약품 제조에 있어서 유리한 성질을 알아내고, 또 경구 흡수성이 우수한 것 등을 알아내어, 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은, 하기의 실시형태를 포함한다.
〔1〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°에서 선택되는 3 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 II 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
〔2〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°에 피크를 갖는,〔1〕에 기재된 결정.
〔3〕도 1 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔1〕또는〔2〕에 기재된 결정.
〔4〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 178 ℃ 부근인,〔1〕∼〔3〕중 어느 한 항에 기재된 결정.
〔5〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔1〕∼〔4〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔6〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°에서 선택되는 3 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 II 형 결정.
〔7〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°에 피크를 갖는,〔6〕에 기재된 결정.
〔8〕도 3 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔6〕또는〔7〕에 기재된 결정.
〔9〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 182 ℃ 부근인,〔6〕∼〔8〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔10〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔6〕∼〔9〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔11〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 I 형 결정.
〔12〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°에 피크를 갖는,〔11〕에 기재된 결정.
〔13〕도 5 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔11〕또는〔12〕에 기재된 결정.
〔14〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 183 ℃ 부근인,〔11〕∼〔13〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔15〕결정의 순도가 90 질량% 이상인〔11〕∼〔14〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔16〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 V 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
〔17〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°에 피크를 갖는,〔16〕에 기재된 결정.
〔18〕도 7 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔16〕또는〔17〕에 기재된 결정.
〔19〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 151 ℃ 부근인,〔16〕∼〔18〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔20〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔16〕∼〔19〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔21〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 I 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
〔22〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°에 피크를 갖는,〔21〕에 기재된 결정.
〔23〕도 9 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔21〕또는〔22〕에 기재된 결정.
〔24〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 153 ℃ 부근인,〔21〕∼〔23〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔25〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔21〕∼〔24〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔26〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 7.5°, 9.7°, 11.7°, 15.1°, 19.6°및 23.9°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 I 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 0.5 인, 결정.
〔27〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 7.5°, 9.7°, 11.7°, 15.1°, 19.6°및 23.9°에 피크를 갖는,〔26〕에 기재된 결정.
〔28〕도 11 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔26〕또는〔27〕에 기재된 결정.
〔29〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 161 ℃ 부근인,〔26〕∼〔28〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔30〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔26〕∼〔29〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔31〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.4°, 6.4°, 7.3°, 12.8°, 13.4°, 14.7°및 15.4°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 II 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 0.5 인, 결정.
〔32〕분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.4°, 6.4°, 7.3°, 12.8°, 13.4°, 14.7°및 15.4°에 피크를 갖는,〔31〕에 기재된 결정.
〔33〕도 13 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인,〔31〕또는〔32〕에 기재된 결정.
〔34〕시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 162 ℃ 부근인,〔31〕∼〔33〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔35〕결정의 순도가 90 질량% 이상인,〔31〕∼〔34〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔36〕〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정을 함유하는 의약 조성물.
〔37〕〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정을 함유하는 경구 투여용의 의약 조성물.
〔38〕〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정을 함유하는 항종양제.
〔39〕의약으로서 사용하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔40〕경구 투여용의 항종양제를 제조하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정의 사용.
〔41〕종양의 치료에 사용하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔42〕경구 투여하여 종양의 치료에 사용하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정.
〔43〕종양의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에,〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
〔44〕의약 조성물을 제조하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정의 사용.
〔45〕항종양제를 제조하기 위한〔1〕∼〔35〕중 어느 하나에 기재된 결정의 사용.
본 발명의 화합물 (I) 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 프리체 I 형 결정, 프리체 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 높은 안정성, 취급성 (보다 낮은 흡습성), 품질 관리성 등의 관점에서, 다른 결정형과 비교하여 우수하다. 또한 프리체 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 경구 흡수성이 우수하여, 그 화합물을 의약품용의 원약으로서 사용할 때의 유용한 형태이다. 또, 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은 아세톤 (용매) 으로부터 고체로서 단리시킬 수 있는 형태 (단리 후, 건조시켜 V 형 결정으로 한다) 이기 때문에, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 제조의 중간체로서도 유용하다.
본 발명에 의하면, 화합물 (I) 의 신규한 결정 혹은 화합물 (I) 과 산의 신규한 결정, 이것을 포함하는 의약 조성물, 항종양제, 또는 경구 투여용의 항종양제가 제공된다.
바람직한 양태에 있어서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 비흡습성, 취득 재현성, 고체 안정성, 경구 흡수성 등의 의약품 제조에 있어서 유리한 성질 중 적어도 1 개를 구비한다.
도 1 은, 실시예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 2 는, 실시예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 3 은, 실시예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 4 는, 실시예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 5 는, 실시예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 6 은, 실시예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 7 은, 실시예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 8 은, 실시예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 9 는, 실시예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 10 은, 실시예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 11 은, 실시예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 12 는, 실시예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 13 은, 실시예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 14 는, 실시예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 15 는, 참고예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 16 은, 참고예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 17 은, 참고예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 18 은, 참고예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 19 는, 참고예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 20 은, 참고예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 21 은, 참고예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 22 는, 참고예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 23 은, 참고예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 III 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 24 는, 참고예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 III 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 25 는, 참고예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 브롬화수소산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 26 은, 참고예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 브롬화수소산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 27 은, 참고예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 28 은, 참고예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 29 는, 참고예 8 에서 얻어진 화합물 (I) 의 숙신산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 30 은, 참고예 8 에서 얻어진 화합물 (I) 의 숙신산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 31 은, 화합물 (I) 의 Luciferase 유전자 도입 HER2 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 의 뇌 직접 이식 모델에 대한 항종양 효과를 나타낸다.
도 32 는, 화합물 (I) 의 Luciferase 유전자 도입 HER2 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 의 뇌 직접 이식 모델에 대한 체중 증감률을 나타낸다.
도 2 는, 실시예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 3 은, 실시예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 4 는, 실시예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 5 는, 실시예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 6 은, 실시예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 7 은, 실시예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 8 은, 실시예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 9 는, 실시예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 10 은, 실시예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 11 은, 실시예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 12 는, 실시예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 13 은, 실시예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 14 는, 실시예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 15 는, 참고예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 16 은, 참고예 1 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 17 은, 참고예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 18 은, 참고예 2 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 19 는, 참고예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 20 은, 참고예 3 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 21 은, 참고예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 22 는, 참고예 4 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 23 은, 참고예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 III 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 24 는, 참고예 5 에서 얻어진 화합물 (I) 의 염산과의 III 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 25 는, 참고예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 브롬화수소산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 26 은, 참고예 6 에서 얻어진 화합물 (I) 의 브롬화수소산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 27 은, 참고예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 28 은, 참고예 7 에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 29 는, 참고예 8 에서 얻어진 화합물 (I) 의 숙신산과의 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼을 나타낸다 (종축은 강도 (counts), 횡축은 회절각 (2θ) 을 나타낸다).
도 30 은, 참고예 8 에서 얻어진 화합물 (I) 의 숙신산과의 결정의 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 결과를 나타낸다 (좌측 종축은 TG 곡선에 있어서의 중량 (mg), 우측 종축은 DTA 곡선에 있어서의 열 유속 (μV), 횡축은 온도 (℃) 를 나타낸다).
도 31 은, 화합물 (I) 의 Luciferase 유전자 도입 HER2 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 의 뇌 직접 이식 모델에 대한 항종양 효과를 나타낸다.
도 32 는, 화합물 (I) 의 Luciferase 유전자 도입 HER2 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 의 뇌 직접 이식 모델에 대한 체중 증감률을 나타낸다.
본 발명은, 하기 식 (I) 로 나타내는 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 결정, 및 그 산과의 결정 (그 염의 결정 또는 공결정) 에 관한 것이다.
[화학식 2]
구체적으로는, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체의 II 형 결정, 프리체의 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정에 관한 것이다.
또한, 본 명세서 중, I 형, II 형, III 형, IV 형 및 V 형이라는 기재는, 결정형을 구별하기 위한 편의적인 명칭이며, 본 발명에 관련된 결정은 이 명칭에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에 있어서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 산과의 결정이란, 염의 결정 또는 산과의 공결정을 나타낸다.
염의 결정은, 화합물 (I) 과 산의 분자가 이온 결합으로 결합한 결정이고, 공결정은, 화합물 (I) 과 산의 분자가 비이온성의 상호 작용에 의해 결합한 결정이다. 본 발명에 있어서, 화합물 (I) 의 산과의 결정은, 염의 결정이어도 되고 공결정이어도 되며, 그 양방의 의미를 포함한다. 예를 들어, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 II 형 결정이면, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산염의 결정 또는 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 공결정의 뜻을 나타낸다.
결정은, 원자나 분자가 규칙적인 반복 구조를 배치하고 있는 고체를 나타내며, 반복 구조를 갖지 않는 아모르퍼스 (비정질) 의 고체와는 상이하다. 분말 X 선 회절 측정 (XRD 측정), 시차 주사 열량 측정 (DSC 측정), 열중량-시차열 동시 측정 (TG-DTA 측정), 단결정 해석 등의 방법에 의해, 결정 또는 아모르퍼스의 고체를 조사할 수 있다. 결정 다형은, 동일 분자로서 결정 중의 원자나 분자의 서열이 상이한 것을 나타내고, XRD 측정으로 얻어지는 피크가 결정 다형에 의해 상이한 것이 알려져 있다. 또, 각각의 결정 다형 간에서 용해성, 경구 흡수성, 안정성 등이 상이한 것이 알려져 있다.
본 명세서 중,「결정」,「비정질체」라는 말은, 통상적인 의미로 사용된다.
본 명세서 중에서 간단히「화합물 (I)」이라고 기재한 경우에는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드를 의미하고, 「비정질체」,「결정」모두를 포함하는 의미로 사용된다.
본 명세서에서「화합물 (I) 의 결정」이라고 기재한 경우에는, 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 및 화합물 (I) 과 산의 결정 (화합물 (I) 의 염의 결정 및 화합물 (I) 의 공결정) 모두를 포함하는 의미로 사용된다.
본 명세서 중에서 결정을 구성하는 화합물 (I) 이외의 분자 (염 또는 공결정을 구성하는 다른 분자) 가 특정되어 있지 않은 결정은, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 프리체의 결정을 의미한다. 본 명세서 중에서 당량이라고 기재되어 있는 경우에는, 몰 당량을 의미한다.
화합물 (I) 과 산의 결정 (염체의 결정 또는 공결정) 에 있어서, 화합물 (I) 에 대한 산의 당량은, 예를 들어 NMR 이나 이온 크로마토그래피로 분석할 수 있다.
본 명세서 중에서 결정은, 수화물이어도 된다.
또, 화합물 (I), 또는 그 염의 라벨체, 즉, 화합물 (I) 이나 화합물 (I) 의 염의, 1 개 이상의 원자를 방사성 동위 원소 혹은 비방사성 동위 원소로 치환시킨 화합물도, 본 발명에 포함된다.
결정은, 화합물 (I) 의 결정을 포함하는 것이면 되며, 단일 결정이어도 되고 그 이외의 화합물 (I) 의 결정을 포함하는 다형 혼합물이어도 된다. 구체적으로는 결정의 순도가 50 중량% 이상인 것, 즉 50 중량% 이상이 단일의 결정인 것이 바람직하고, 결정의 순도가 75 중량% 이상인 것, 즉 75 중량% 이상이 단일의 결정인 것이 바람직하고, 결정의 순도가 90 중량% 이상인 것, 즉 90 중량% 이상이 단일의 결정인 것이 보다 바람직하고, 결정의 순도가 95 중량% 이상인 것, 즉 95 중량% 이상이 단일의 결정인 것이 더욱 바람직하고, 결정의 순도가 99 중량% 이상인 것, 즉 99 중량% 이상이 단일의 결정인 것이 특히 바람직하다.
본 명세서에 있어서, 화학 순도란 고속 액체 크로마토그래피 (HPLC) 로 측정하였을 때의 순도이며, 화합물 (I) 의 화학 순도라고 기재하였을 때에는, 화합물 (I) 을 고속 액체 크로마토그래피로 측정하였을 때의 순도를 말한다. 그 때, 순도 측정에 사용하는 검출기의 파장은 적절히 설정할 수 있다. 구체적으로는, 화합물 (I) 의 결정의 화학 순도는 95 % 이상이 바람직하고, 98 % 이상이 보다 바람직하고, 99 % 이상이 특히 바람직하다.
또한, 분말 X 선 회절 패턴은, 데이터의 성질상, 결정의 동일성을 인정할 때에는, 회절각 및 전체적인 패턴이 중요하다. 분말 X 선 회절 패턴의 상대 강도는 결정 성장의 방향, 입자의 크기, 측정 조건에 따라 다소 변동할 수 있는 것이므로, 엄밀하게 해석되어서는 안된다.
각종 패턴으로부터 얻어지는 수치는, 그 결정 성장의 방향, 입자의 크기, 측정 조건 등에 따라 다소의 오차가 발생하는 경우가 있다. 따라서, 본 명세서 중, 분말 X 선 회절 패턴에 있어서의 회절각 (2θ) 의 수치는, ± 0.2°정도의 범위에서 측정 오차를 가질 수 있다.
본 명세서에 있어서,「실온」은 통상적으로 약 10 ℃ 내지 약 35 ℃ 를 나타낸다.
또, 시차열 열중량 동시 측정 (TG-DTA) 곡선에 있어서의 흡열 피크는, 1 분 당의 승온의 폭, 시료의 화학 순도 등에 따라 측정 온도가 변화하는 경우가 있으며, 통상적으로 ± 5.0 ℃ 를 의미한다. 따라서, 본 발명에 관련된 결정을 (TG-DTA 측정하였을 때에는, 피크 (피크톱값) 의 오차는 ± 5.0 ℃ 를 고려한다. 그 때에 사용하는「부근」이라는 용어는 ± 5.0 ℃ 를 의미한다.
본 발명의 일 형태는, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 (I 형 결정, II 형 결정), 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 결정 (I 형 결정, II 형 결정, III 형 결정, IV 형 결정, V 형 결정), 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 결정 (I 형 결정, II 형 결정) 에 관한 것이다.
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정)
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 도 1 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 2 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
또, 본 발명의 일 실시형태에 있어서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 분말 X 선 회절에 있어서 표 2 에 나타내는 회절각 (2θ) 및 강도 (cts) 를 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 7 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 한층 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 8 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 한층 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 9 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 173 ∼ 183 ℃, 바꿔 말하면 178 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정)
화합물 (I) 의 II 형 결정은, 도 3 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 4 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
또, 본 발명의 일 실시형태에 있어서, 화합물 (I) 의 프리체의 II 형 결정은, 분말 X 선 회절에 있어서 표 3 에 나타내는 회절각 (2θ) 및 강도 (cts) 를 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 II 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 7 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 한층 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 8 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 한층 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 9 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 177 ∼ 187 ℃, 바꿔 말하면 182 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 프리체 I 형 결정)
화합물 (I) 의 I 형 결정은, 도 5 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 6 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
또, 본 발명의 일 실시형태에 있어서, 화합물 (I) 의 프리체의 I 형 결정은, 분말 X 선 회절에 있어서 표 4 에 나타내는 회절각 (2θ) 및 강도 (cts) 를 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 I 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
여기서, 화합물 (I) 의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 18.8°및 20.8°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 I 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 178 ∼ 188 ℃, 바꿔 말하면 183 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정)
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 도 7 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 8 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
또, 본 발명의 일 실시형태에 있어서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 분말 X 선 회절에 있어서 표 5 에 나타내는 회절각 (2θ) 및 강도 (cts) 를 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.9°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 146 ∼ 156 ℃, 바꿔 말하면 151 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정)
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 도 9 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 10 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
또, 본 발명의 일 실시형태에 있어서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 분말 X 선 회절에 있어서 표 6 에 나타내는 회절각 (2θ) 및 강도 (cts) 를 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 더욱 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 148 ∼ 158 ℃, 바꿔 말하면 153 ℃ 부근을 들 수 있다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 20.7°, 23.4°및 26.6°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 148 ∼ 158 ℃, 바꿔 말하면 153 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정)
화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 도 11 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 12 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.4°, 7.5°, 9.7°, 11.7°, 15.1°, 19.6°및 23.9°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 156 ∼ 166 ℃, 바꿔 말하면 161 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정)
화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 도 13 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 14 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 5.4°, 6.4°, 7.3°, 12.8°, 13.4°, 14.7°및 15.4°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 6 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크 (피크톱값) 는 157 ∼ 167 ℃, 바꿔 말하면 162 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정)
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정은, 도 15 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 16 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 8.1°, 13.2°, 20.4°, 23.1°, 24.7°및 26.1°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정은, 상기 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 4 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 보다 바람직하게는 상기 특징적인 피크에서 선택되는 5 개 이상의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 발열 피크 (피크톱값) 는 148 ∼ 158 ℃, 바꿔 말하면 153 ℃ 부근을 들 수 있다.
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정)
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정은, 도 17 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖고, 또, 도 18 에 나타내는 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선을 갖는다.
여기서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 회절각 (2θ ± 0.2°) 으로서, 6.0°, 15.7°및 18.8°를 들 수 있다.
본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정은, 상기 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 발열 피크 (피크톱값) 는 125 ∼ 135 ℃, 바꿔 말하면 130 ℃ 부근을 들 수 있다.
(1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 의 I 형 결정에 푸마르산 및 하기의 용매를 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻은 현탁액을 교반하여, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 결정을 얻는 공정.
그 후 여과 채취하고, 고체를 회수한다. 회수된 고체를 물로 세정하고, 건조시키는 것이 바람직하다.
공정 1 의 푸마르산은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 1.5 ∼ 10 당량 (보다 바람직하게는 2 ∼ 5 당량, 가장 바람직하게는 3 당량) 첨가한다.
공정 1 의 용매는 바람직하게는 5 ∼ 35 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 5 ∼ 30 배량 (v/w), 가장 바람직하게는 10 배량 (v/w)) 첨가한다.
공정 1 에서 사용하는 용매는, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, tert-부탄올 등의 알코올류, 1,4-디옥산, 테트라하이드로푸란 등의 에테르류, 아세톤, 메틸에틸케톤 등의 케톤류, 아세토니트릴 등의 비프로톤성 극성 용매 등의 단일 용매 혹은 혼합 용매를 예시할 수 있다.
화합물 (I) 의 I 형 결정은,「(프리체 I 형의 결정의 제조 방법)」의 항이나 실시예 3 에서 후술하는 방법으로 취득하는 것이 가능하다.
공정 2 의 반응 중의 온도는, 상기와 같이 실온 이상 각 용매의 비점 이하가 바람직하지만, 특별히 제한되지 않고 적절히 설정할 수 있으며, 바람직하게는 25 ∼ 70 ℃ (보다 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃, 가장 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 중의 교반 시간은, 현탁액을 바람직하게는 24 ∼ 124 시간 (보다 바람직하게는 48 ∼ 72 시간, 가장 바람직하게는 60 ∼ 65 시간) 교반이다.
(프리체 II 형 결정의 제조 방법)
(방법 A-1)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법 (방법 A-1) 에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 숙신산, 인산, 및 아디프산 중 어느 산 및 부용매/빈용매의 혼합 용매를 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 교반하여, 고체상의 화합물 (I) 의 결정을 얻는 공정.
상기 현탁 교반 중에는, 용매의 증발량에 따라, 추가의 용매 (예를 들어 부용매로서의 1-프로판올) 를 필요에 따라 복수 회로 분할하여 첨가해도 된다.
그 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킨다.
공정 1 의 산은, 화합물 (I) 1 당량에 대하여 바람직하게는 0.5 ∼ 2 당량 (보다 바람직하게는 0.75 ∼ 1.5 당량, 특히 1 당량) 첨가한다.
공정 1 의 부용매/빈용매의 혼합 용매 (예를 들어 1-프로판올/물) 를 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 5 ∼ 50 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 10 ∼ 30 배량 (v/w), 특히 20 배량 (v/w)) 첨가한다.
공정 2 의 반응 중의 온도는, 바람직하게는 25 ∼ 70 ℃ (보다 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃, 특히 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 중의 교반 시간은, 바람직하게는 2 ∼ 7 일간 (보다 바람직하게는 3 ∼ 5 일간, 특히 4 일간) 현탁 교반한다.
(방법 A-2)
또 본 명세서 중에 있어서의 다른 실시형태로서, 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법 (방법 A-2) 에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 부용매/빈용매의 혼합 용매 및 종결정을 첨가하고, 임의 선택으로 숙신산, 인산, 및 아디프산 중 어느 산을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 교반하여, 고체상의 화합물 (I) 의 결정을 얻는 공정.
상기 현탁 교반 중에는, 용매의 증발량에 따라, 추가의 용매 (예를 들어 부용매로서의 1-프로판올) 를 필요에 따라 복수 회로 분할하여 첨가해도 된다.
그 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킨다.
공정 1 의 숙신산의 양은, 화합물 (I) 1 당량에 대하여 바람직하게는 0.5 ∼ 2 당량 (보다 바람직하게는 0.75 ∼ 1.5 당량, 특히 1 당량) 첨가한다.
공정 1 의 부용매/빈용매의 혼합 용매 (예를 들어 1-프로판올/물의 혼합 용매) 를 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 1 ∼ 10 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 2 ∼ 5 배량 (v/w), 특히 3 배량 (v/w)) 및 종결정 (예를 들어 (i) 또는 (ii) 중 어느 것으로 얻어진 종결정) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 25 ∼ 70 ℃ (보다 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃, 특히 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 시간은 바람직하게는 6 ∼ 48 시간 (보다 바람직하게는 12 ∼ 24 시간, 특히 바람직하게는 17.5 ∼ 24 시간) 이다.
(방법 B)
또 본 명세서 중에 있어서의 다른 실시형태로서, 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법 (방법 B) 에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 빈용매를 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 용액에, 부용매를 첨가하고, 얻어진 현탁액을 교반하여, 고체상의 화합물 (I) 의 결정을 얻는 공정.
공정 1 의 빈용매의 양은, 화합물 (I) 에, 빈용매 (예를 들어 디이소프로필에테르) 를 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 2 ∼ 10 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 3 ∼ 7 배량 (v/w), 특히 5 배량 (v/w)) 을 첨가한다.
공정 1 의 반응 시간은, 바람직하게는 24 ∼ 96 시간 (보다 바람직하게는 36 ∼ 72 시간, 특히 44.5 시간) 현탁 교반한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 25 ∼ 70 ℃ (보다 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃, 특히 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 부용매의 양은, 부용매 (예를 들어 에탄올) 를 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 0.5 ∼ 3 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 0.8 ∼ 2 배량 (v/w), 특히 1 배량 (v/w)) 을 첨가한다.
공정 2 의 교반 시간은 바람직하게는 6 ∼ 72 시간 (보다 바람직하게는 12 ∼ 48 시간, 특히 21 시간) 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킨다.
상기 현탁 교반 중에는, 용매의 증발량에 따라, 추가의 용매 (예를 들어 빈용매로서의 디이소프로필에테르 및/또는 부용매로서의 에탄올) 를 필요에 따라 복수 회로 분할하여 첨가해도 된다.
화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정의 제조에 사용되는 부용매와 빈용매의 조합으로는, 메탄올 (부용매) 과 물 (빈용매), 메탄올 (부용매) 과 디이소프로필에테르 (IPE) (빈용매), 메탄올 (부용매) 과 헵탄 (빈용매), 에탄올 (부용매) 과 IPE (빈용매), 에탄올 (부용매) 과 헵탄 (빈용매), 1-프로판올 (부용매) 과 물 (빈용매), 1-프로판올 (부용매) 과 IPE (빈용매), 1-프로판올 (부용매) 과 헵탄 (빈용매), 2-프로판올 (부용매) 과 헵탄 (빈용매), 아세톤 (부용매) 과 IPE (빈용매), 아세톤 (부용매) 과 헵탄 (빈용매), 디메틸술폭사이드 (DMSO) (부용매) 와 물 (빈용매), 디메틸아세트아미드 (DMA) (부용매) 와 물 (빈용매), 테트라하이드로푸란 (THF) (부용매) 과 IPE (빈용매), 또는 THF (부용매) 와 헵탄 (빈용매) 등을 사용할 수 있다.
그 중에서도, 부용매와 빈용매의 바람직한 조합으로는 아세트산에틸 (부용매) 과 n-헵탄 (빈용매), 에탄올 (부용매) 과 물 (빈용매), 1-프로판올 (부용매) 과 물 (빈용매), 에탄올 (부용매) 과 디이소프로필에테르 (빈용매) 의 조합이다. 빈용매의 양은, 부용매의 1 ∼ 20 배량 (v/v) 이 바람직하고, 1 ∼ 10 배량 (v/v) 이 보다 바람직하다.
상기 방법에 있어서, 종결정의 첨가량은, 화합물 (I) 투입량의 바람직하게는 0.5 ∼ 30 (w/w) %, 보다 바람직하게는 1 ∼ 5 (w/w) % 로 할 수 있다.
(프리체 I 형의 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 프리체 I 형 결정은, 예를 들어 화합물 (I) 의 조체 (粗體) 를 용매에 현탁시키고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하여, 고체상의 화합물 (I) 의 결정을 얻는 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
종결정은, 프리체 I 형 결정의 정석을 촉진시키기 위해, 임의 선택으로 첨가되며, 종결정으로는, 적당량의 화합물 (I) 의 I 형 결정 또는 I 형 결정을 포함하는 혼합 결정을 첨가할 수 있다. 종결정을 첨가하지 않아도 상기 방법에 의해 화합물 (I) 의 I 형 결정을 얻을 수 있지만, 종결정을 첨가함으로써, 상기 화합물을 취득하는 시간을 단축시킬 수 있다. 또, 정석 시간의 단축과 입자경의 컨트롤을 위해 교반하면서 정석시켜도 된다.
첨가하는 종결정은, 화합물 (I) 의 투입량의 0.5 ∼ 30 (w/w) % 이고, 바람직하게는 1 ∼ 10 (w/w) % 이다.
온도는, 적절히 설정할 수 있지만, 50 ∼ 65 ℃ 가 바람직하다.
상기 용해 온도에서 화합물 (I) 을 석출시킬 수 있지만, 용해 온도에서 석출되지 않는 경우에는, 25 ℃ 까지 냉각시킴으로써 프리체 I 형 결정을 얻을 수 있다.
용매로는, 아세트산에틸, 에탄올, 아세토니트릴, 아세톤, tert-부틸메틸에테르 등을 사용할 수 있다.
(1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 예를 들어, 이하의 2 공정으로 이루어지는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여 1 ∼ 2 당량의 푸마르산 및 용매로서의 아세톤을 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 40 ∼ 60 배량 (v/w) 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 교반하고, 여과 채취하고, 고체를 회수하는 공정.
공정 3 상기 공정에서 얻은 고체를, 바람직하게는 20 ∼ 60 ℃ 의 감압 조건하 (바람직하게는 2 ㎪ 이하의 압력) 에서 건조시켜, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 결정을 얻는 공정.
공정 1 의 푸마르산은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 보다 바람직하게는 2 당량 첨가한다.
공정 1 의 아세톤은 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 40 ∼ 60 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 50 배량 (v/w)) 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 10 ∼ 30 ℃ (바람직하게는 25 ℃) 의 온도이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 12 ∼ 96 시간 (보다 바람직하게는 71 시간) 이다.
공정 3 의 반응 온도는, 바람직하게는 20 ∼ 60 ℃ (예를 들어, 실온) 이다.
공정 3 의 감압 시간은, (예를 들어, 2 ㎪ 이하의 압력에서) 바람직하게는 6 ∼ 24 시간 (보다 바람직하게는 7.5 시간) 건조시킨다.
본 명세서 중에 있어서의 다른 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 이하의 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정을 감압 조건하 (바람직하게는 2 ㎪ 이하의 압력) 에서 건조시킨다.
공정 1 의 반응 온도는, 20 ∼ 60 ℃ 이다.
(1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정으로 이루어지는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여 1 ∼ 2 당량의 푸마르산 및 용매로서의 아세톤을 40 ∼ 60 배량 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 30 ℃ 이하에서 교반하여, 화합물 (I) 의 푸마르산과의 결정을 얻는 공정.
그 후 여과 채취하고, 고체를 회수한다.
공정 1 의 푸마르산의 양은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 2 당량 첨가한다.
공정 1 의 아세톤은 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 40 ∼ 60 배량 (보다 바람직하게는 50 배량) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 10 ∼ 30 ℃ (보다 바람직하게는 25 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 12 ∼ 24 시간 (보다 바람직하게는 19.5 시간) 이다.
(1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 푸마르산 및 용매로서 아세토니트릴을 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 1.5 시간 이하의 단시간 교반하여, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 결정을 얻는 공정.
그 후, 여과 채취하고, 고체를 회수한다.
공정 1 의 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 1 ∼ 5 당량 (보다 바람직하게는 3 당량) 첨가한다.
공정 1 의 용매 (예를 들어 아세토니트릴) 를 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 25 ∼ 35 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 30 배량 (v/w)) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 45 ∼ 55 ℃ (특히 바람직하게는 50 ℃) 의 온도이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 0.5 ∼ 1.5 시간 (보다 바람직하게는 1 시간) 이다.
(1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 푸마르산 및 용매로서 물을 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을 2 시간 이하의 단시간 교반하여, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 결정을 얻는 공정.
그 후, 여과 채취하고, 고체를 회수한다.
공정 1 의 푸마르산은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 1 ∼ 5 당량 (보다 바람직하게는 3 당량) 첨가한다.
공정 1 의 용매로서 물을 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 15 ∼ 25 배량 (보다 바람직하게는 20 배량) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 45 ∼ 55 ℃ (특히 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 1 ∼ 2 시간 (보다 바람직하게는 1.5 시간) 이다.
(0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 푸마르산 및 용매로서의 물을 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을, 바람직하게는 실온 이상 용매의 비점 이하의 온도에서 교반하여, 결정을 얻는 공정.
그 후 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킨다.
공정 1 의 푸마르산은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 0.5 ∼ 1 당량 (보다 바람직하게는 0.5 ∼ 0.75 당량, 가장 바람직하게는 0.5 당량) 첨가한다.
공정 1 의 용매로서의 물은 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 10 ∼ 40 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 15 ∼ 25 배량 (v/w), 가장 바람직하게는 20 배량 (v/w)) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃ (보다 바람직하게는 45 ∼ 55 ℃, 가장 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 48 ∼ 120 시간 (보다 바람직하게는 72 ∼ 96 시간, 가장 바람직하게는 93.5 시간) 이다.
(0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 제조 방법)
본 명세서 중에 있어서의 일 실시형태로서, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 예를 들어 이하의 2 공정을 포함하는 방법에 의해 얻어진다.
공정 1 화합물 (I) 에 푸마르산 및 에탄올을 첨가하고, 임의 선택으로 종결정을 첨가하는 공정.
공정 2 상기 공정에서 얻어진 현탁액을, 바람직하게는 실온 이상 용매의 비점 이하의 온도에서 교반하여, 결정을 얻는 공정.
그 후 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킨다.
공정 1 의 푸마르산의 양은, 화합물 (I) 의 프리체 1 당량에 대하여, 푸마르산을 바람직하게는 0.5 ∼ 1 당량 (바람직하게는 1 당량) 첨가한다.
공정 1 의 용매로서의 에탄올은, 화합물 (I) 의 프리체에 대하여 바람직하게는 10 ∼ 40 배량 (v/w) (보다 바람직하게는 15 ∼ 25 배량 (v/w), 가장 바람직하게는 20 배량 (v/w)) 을 첨가한다.
공정 2 의 반응 온도는, 바람직하게는 40 ∼ 60 ℃ (보다 바람직하게는 45 ∼ 55 ℃, 가장 바람직하게는 50 ℃) 이다.
공정 2 의 반응 시간은, 바람직하게는 6 ∼ 48 시간 (보다 바람직하게는 12 ∼ 24 시간, 가장 바람직하게는 19.5 시간) 이다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 비흡습성, 취득 재현성, 고체 안정성, 경구 흡수성 등의 의약품 제조에 있어서 유리한 성질 중 적어도 1 개를 구비한다.
그 중에서도, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 화합물 (I) 의 다른 결정 형태와 비교하여 비흡습성, 취득 재현성, 고체 안정성, 경구 흡수성 등의 의약품 제조에 있어서 유리한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 흡습성이 낮고, 취득 안정성이 있다. 의약품의 개발 후보 화합물에 있어서, 흡습성이 낮고, 안정적으로 취득할 수 있는 것은 의약품의 공업적 생산 상에서 중요하다. 또, 고체 안정성과 용해성이나, 경구 흡수성이 우수하거나 한 의약품으로서 취급하기 쉬운 성질을 갖는다. 따라서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정은 흡습성이 낮다. 이것은 의약품의 개발 후보 화합물에 있어서, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서 중요하다. 또, 고체 안정성과 용해성이나, 경구 흡수성이 우수하거나 한 의약품으로서 취급하기 쉬운 성질을 갖는다. 따라서 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 프리체 I 형 결정은, 흡습성이 낮고, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 낮은 흡습성과 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 화합물 (I) 의 I 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 흡습성이 낮고, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 낮은 흡습성과 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은 고체로서 회수 가능하기 때문에, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 제조를 위한 중간체로서도 유용하다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정은, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정은, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은, 취득 안정성이 우수하다. 의약품의 개발 후보 화합물이 취득 안정성을 구비하는 것은, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산 상에서도 중요하다. 따라서, 본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형의 결정은, 의약품 또는 의약품 원약으로서 필요하다고 여겨지는 우수한 성질을 갖는다.
(그 밖의 산과의 결정)
본 발명의 다른 형태는, 화합물 (I) 의 염산과의 결정 (I 형 결정, II 형 결정, III 형 결정), 화합물 (I) 의 브롬화수소산과의 결정, 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정, 또는 화합물 (I) 의 숙신산과의 결정에 관한 것이다.
이들 결정에 대한 분말 X 선 회절 스펙트럼 및 시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA) 의 곡선은, 도 19 ∼ 30 에 도시되어 있다.
이들 결정에 대한 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서의 특징적인 피크는, 참고예 3 ∼ 7 에 기재되어 있다. 이들 결정은, 참고예에 기재된 특징적인 피크에서 선택되는 3 개 이상 (바람직하게는 4 개 이상, 존재하는 경우에는 보다 바람직하게는 5 개 이상) 의 피크를 갖는 결정이고, 특히 바람직하게는 특징적인 피크 모두를 갖는 결정이다.
또, 이들 결정에 대한 시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크의 온도에 대해서도 참고예에 기재되어 있다.
상기 서술한 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 에 관하여, 석출된 결정은, 예를 들어, 여과, 물에 의한 세정, 감압 건조 등의 공지된 분리 정제 수단에 의해, 상기 결정의 용해 용액, 혼합 용액 등으로부터 단리 정제할 수 있다.
본 발명의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 우수한 HER2 저해 활성을 갖는다. 또, HER2 에 대한 우수한 선택성을 갖고 있다. 따라서, 본 발명의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, HER2 과잉 발현, HER2 유전자 증폭, 또는 HER2 변이 등을 갖는 질환이나 악성 종양에 대하여, 항종양제로서 유용하고, 부작용이 적다는 이점을 갖는다.
본 명세서에 있어서「HER2」란, 인간 또는 비인간 포유 동물의 HER2 를 포함하고, 바람직하게는 인간 HER2 이다. 또,「HER2」의 말에는 아이소폼이 포함된다.
본 발명의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 그 우수한 HER2 저해 활성에 의해, HER2 가 관여하는 질환의 치료를 위한 의약으로서 유용하다.
「HER2 가 관여하는 질환」이란, HER2 의 기능을 결실, 억제 및/또는 저해함으로써, 발증률의 저하, 증상의 관해, 완화 및/또는 완치하는 질환을 들 수 있다. 이와 같은 질환으로서, 예를 들어, 악성 종양 등을 들 수 있지만 이것에 한정은 되지 않는다. 바람직하게는 HER2 과잉 발현, HER2 유전자 증폭, 또는 HER2 변이를 갖는 악성 종양이다.
본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 야생형 HER2, 및 엑손 20 삽입 변이 등의 HER2 도메인 내에 1 개 이상의 삽입 변이, 점 변이, 또는 결실 변이 등을 갖는 변이형 HER2 를 선택적으로 저해한다.
본 발명의 일 실시형태는, 야생형 HER2, 및 엑손 20 삽입 변이 중 하나인 YVMA 삽입 변이를 갖는 HER2 등을 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 갖는 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 또는 이것을 포함하는 의약 혹은 의약 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시형태는, 본 발명의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (그 염의 결정 또는 공결정) 을 포함하는, 야생형 HER2, 및 YVMA 삽입 변이를 갖는 HER2 등을 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해제를 제공한다.
인간 HER2 유전자는, 예를 들어 서열 번호 1, 서열 번호 3, 또는 서열 번호 5 에 나타내는 것이고, 야생형 HER2 단백질은, 예를 들어 서열 번호 2, 서열 번호 4, 또는 서열 번호 6 에 나타내는 아미노산 서열로 이루어진다. 인간 HER2 유전자의 염기 서열 정보 및 야생형 HER2 단백질의 아미노산 서열 정보는, 예를 들어 액세션 번호 NM_004448, 또는 NM_001289936, 또는 NM_001005862 등에 의해 얻을 수 있다.
몇 가지의 실시형태에 있어서, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 2 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, G309A, S310F, R678Q, L755S, L755_T759del, D769H, A775_G776insYVMA, V777L, V842I, R896C 중 1 개 이상의 변이를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다. 다른 실시형태에서는, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 2 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, A775_G776insYVMA 를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다.
몇 가지의 실시형태에 있어서, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 4 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, G294A, S295F, R663Q, L740S, L740_T744del, D754H, A760_G761insYVMA, V762L, V827I, R881C 중 1 개 이상의 변이를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다. 다른 실시형태에서는, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 4 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, A760_G761insYVMA 를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다.
몇 가지의 실시형태에 있어서, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I), 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 6 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, G279A, S280F, R648Q, L725S, L725_T729del, D739H, A745_G746insYVMA, V747L, V812I, R866C 중 1 개 이상의 변이를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다. 다른 실시형태에서는, 본 발명의 일 형태의 화합물 (I) 의 프리체의 결정, 또는, 산과의 결정 (염의 결정 또는 공결정) 은, 서열 번호 6 에 나타내는 아미노산 서열을 기준으로 하여, A745_G746insYVMA 를 포함하는 변이형 HER2 에 대한 저해 활성을 나타낸다.
또, 몇 가지의 실시형태에 있어서, 어느 HER2 아이소폼에 있어서의 변이에 있어서, 아미노산의 결실이나 삽입에 의해, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산의 위치와는 상이한 경우라도 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산의 위치에 상당하는 위치의 변이와 동일한 것으로 해석된다. 그 때문에, 예를 들어, 서열 번호 2 로 나타내는 HER2 에 있어서의 309 번째의 글리신은, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 HER2 에 있어서는, 294 번째의 글리신에 상당한다. 그 때문에, 예를 들어,「G309A」는, 서열 번호 2 로 나타내는 HER2 의 309 번째의 글리신이 알라닌으로 변이되어 있는 것을 의미하지만, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 HER2 에 있어서는, 294 번째의 아미노산에 상당하는 위치이기 때문에, 서열 번호 4 로 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 HER2 에 있어서의「G294A」는 서열 번호 2 로 나타내는 HER2 에 있어서의「G309A」에 상당한다. 또한, 어느 HER2 아이소폼의 어느 아미노산이, 서열 번호 2 로 나타내는 아미노산의 어느 위치에 상당하는 아미노산인지의 여부는, 예를 들어, BLAST 의 Multiple Alignment 에 의해 확인할 수 있다.
서열 리스트
[표 A]
본 발명의 일 실시형태는, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 을 포함하는 항종양제를 제공한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 종양의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 본 발명의 일 실시형태는, 항종양제를 제조하기 위한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 사용이 제공된다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 종양의 치료에 사용하기 위한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 이 제공된다.
본 발명의 결정은, 종양을 외과적으로 적출한 후에 재발 방지를 위해 실시되는 수술후 보조 화학 요법에 사용하는 것이어도 되고, 종양을 외과적으로 적출하기 위해 사전 실시되는 수술전 보조 화학 요법에 사용하는 것이어도 된다.
본 발명의 대상이 되는 종양은 특별히 제한은 되지 않지만, 예를 들어, 뇌종양, 두경부암, 소화기암 (식도암, 위암, 십이지장암, 간장암, 담도암 (담낭·담관암 등), 췌장암, 결장 직장암 (결장암, 직장암 등) 등), 폐암 (비소세포 폐암, 소세포 폐암, 중피종 등), 유방암, 생식기암 (난소암, 자궁암 (자궁 경부암, 자궁체암 등) 등), 비뇨기암 (신암 (腎癌), 방광암, 전립선암, 정소 종양 등), 조혈기 종양 (백혈병, 악성 림프종, 다발성 골수종 등), 골·연부 종양, 피부암 등을 들 수 있고, 바람직하게는 폐암, 유방암, 위암, 결장 직장암, 방광암, 담도암, 또는 자궁암이고, 보다 바람직하게는 폐암, 유방암, 위암, 방광암, 또는 담도암이다.
일 실시양태에 있어서, 종양은 뇌종양이다. 본 발명의 화합물은, 혈액 뇌 관문의 통과를 필요로 하는 뇌의 증상의 치료에 유용할 수 있다. 일 실시양태의 화합물은, 뇌로의 송달을 위한 혈액 뇌 관문의 바람직한 통과성, 즉 우수한 뇌 이행성을 갖는다. 화합물의 뇌로의 이행성의 지표로는, 뇌 내의 화합물 농도, Kp 값 (뇌 대 (對) 혈장 중 약물 농도비) 이 있다.
본 발명의 화합물로 치료되는 뇌종양은, 전이성 뇌종양 및 원발성 뇌종양을 포함한다.
뇌종양은 특별히 제한은 없지만, 예를 들어, 전이성 뇌종양 (예를 들어, 폐암, 유방암, 위암, 결장 직장암, 방광암, 담도암, 자궁암 등 (바람직하게는 폐암, 유방암 또는 위암) 의 뇌 전이), 모양 세포성 성상 세포종, 미만성 성 (星) 세포종, 핍돌기 교종·핍돌기 성세포종, 퇴형성성 성세포종·퇴형성성 핍돌기 교종, 퇴형성성 핍돌기 성세포종, 교아종, 상의종, 퇴형성성 상의종, 신경절 교종, 중추성 신경 세포종, 수아종, 배아종 (germinoma), 중추 신경계 악성 림프종, 수막종, 신경초종, GH 산생 하수체 선종, PRL 산생 하수체 선종, ACTH 산생 하수체 선종, 비기능성 하수체 선종, 두개인두종, 척삭종, 혈관아종, 유상피종 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서, 화합물의「유효량」이라는 용어는, 대상의 생물학적 또는 의학적 응답, 예를 들어, 효소나 단백질 활성의 감소 혹은 저해를 일으키거나, 또는 증상을 개선하고, 상태를 완화시키고, 질환의 진행을 늦추거나 또는 지연시키는 등의, 본 발명의 화합물의 양 (치료 유효량) 을 가리킨다.
본 명세서에 있어서,「대상」이라는 용어는, 포유 동물 및 비포유 동물을 포함한다. 포유 동물의 예로는, 한정되지 않지만, 인간, 침팬지, 유인원, 원숭이, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 래트, 마우스, 모르모트, 고슴도치, 캥거루, 두더지, 멧돼지, 곰, 호랑이, 라이온 등을 들 수 있다. 비포유 동물의 예로는, 한정되지 않지만, 조류, 어류, 파충류 등을 들 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 대상은 인간이고, 본 명세서에서 개시되는 증상, 상태, 또는 질환을 위한 처치를 필요로 하는 것으로 진단된 인간이어도 된다.
화합물 (I), 그 염의 결정 또는 공결정을 의약으로서 사용하는 데에 있어서는, 당해 결정을 분쇄하거나 또는 분쇄하지 않고, 치료 목적에 따라 각종 투여 형태를 채용 가능하며, 그 형태로는, 예를 들어, 정제, 캡슐제, 과립제, 세립제, 산제, 드라이 시럽제 등의 경구제 ; 좌제, 흡입제, 점비제, 연고제, 첩부제, 주사제 등의 비경구제 중 어느 것이어도 된다. 이들 투여 형태에 적합한 의약 조성물은, 약학적으로 허용되는 담체를 사용하여, 당업자에게 공지 관용의 제제 방법에 의해 제조할 수 있다.
본 발명의 일 실시형태는, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 을 포함하는 항종양제를 제공한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 종양의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 항종양제를 제조하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 사용이 제공된다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 종양의 치료에 사용하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 이 제공된다.
본 발명의 일 실시형태는, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 을 포함하는 경구 투여용의 항종양제를 제공한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 종양의 치료 방법으로서, 그것을 필요로 하는 대상에, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 유효량을 경구 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 경구 투여용의 항종양제를 제조하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 사용이 제공된다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 경구 투여하여 종양의 치료에 사용하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 이 제공된다.
본 발명의 일 형태는, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 을 포함하는 의약 조성물이 제공된다. 본 발명의 일 실시형태의 의약 조성물은, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)), 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 또, 본 발명의 일 실시형태는, 의약 조성물을 제조하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 사용이 제공된다. 본 발명의 다른 일 실시형태는, 의약으로서 사용하기 위한, 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 이 제공된다. 본 발명의 일 실시형태에서는, (i) 상기 서술한 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 을 포함하는 의약 조성물과 (ii) 그 조성물의 사용 설명서를 포함하는 키트가 제공된다.
약학적으로 허용되는 담체로는, 제제 소재로서 관용의 각종 유기 혹은 무기 담체 물질이 사용되고, 고형 제제에 있어서의 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 코팅제, 액상 제제에 있어서의 용제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 무통화제 등으로서 배합된다. 또, 필요에 따라 방부제, 항산화제, 착색제, 감미제, 안정화제 등의 제제 첨가물을 사용할 수도 있다.
부형제로는, 젖당, 백당, D-만니톨, 전분, 결정 셀룰로오스, 규산칼슘 등을 들 수 있다.
결합제로는, 하이드록시프로필셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 엿가루, 히프로멜로오스 등을 들 수 있다.
붕괴제로는, 전분 글리콜산나트륨, 카르멜로오스칼슘, 크로스카르멜로오스나트륨, 크로스포비돈, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 부분 알파화 전분 등을 들 수 있다.
활택제로는, 탤크, 스테아르산마그네슘, 자당 지방산 에스테르, 스테아르산, 푸마르산스테아릴나트륨 등을 들 수 있다.
코팅제로는, 에틸셀룰로오스, 아미노알킬메타크릴레이트 코폴리머 RS, 히프로멜로오스, 백당 등을 들 수 있다.
용제로는, 물, 프로필렌글리콜, 생리 식염액을 들 수 있다.
용해 보조제로는, 폴리에틸렌글리콜, 에탄올, α-시클로덱스트린, 마크로골 400, 폴리소르베이트 80 등을 들 수 있다.
현탁화제로는, 카라기난, 결정 셀룰로오스·카르멜로오스나트륨, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유를 들 수 있다.
등장화제로는, 염화나트륨, 글리세린, 염화칼륨 등을 들 수 있다.
pH 조절제·완충제로는, 시트르산나트륨, 염산, 락트산, 인산, 인산이수소나트륨 등을 들 수 있다.
무통화제로는, 프로카인염산염, 리도카인 등을 들 수 있다.
방부제로는, 파라옥시벤조산에틸, 크레졸, 벤잘코늄염화물 등을 들 수 있다.
항산화제로는, 아황산나트륨, 아스코르브산, 천연 비타민 E 등을 들 수 있다.
착색제로는, 산화티탄, 삼이산화철, 식용 청색 1 호, 구리클로로필 등을 들 수 있다.
교미·교취제로는 아스파탐, 사카린, 수크랄로오스, l-멘톨, 민트 플레이버 등을 들 수 있다.
안정화제로는, 피로아황산나트륨, 에데트산나트륨, 에리소르빈산, 산화마그네슘, 디부틸하이드록시톨루엔 등을 들 수 있다.
경구용 고형 제제를 조제하는 경우에는, 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 에 부형제, 필요에 따라 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미·교취제 등을 첨가한 후, 통상적인 방법에 의해 정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다.
주사제를 조제하는 경우에는, 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 에 pH 조정제·완충제, 안정화제, 등장화제, 국소 마취제 등을 첨가하고, 통상적인 방법에 의해 피하, 근육 내 및 정맥 내용 주사제를 제조할 수 있다.
각 투여 단위 형태 중에 배합되어야 할 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 양은, 이것을 적용해야 할 환자의 증상에 따라, 혹은 그 제형 등에 따라 일정하지는 않지만, 일반적으로 투여 단위 형태당, 화합물 (I) 의 프리체 환산으로, 경구제에서는 약 0.05 ∼ 1000 mg, 주사제에서는 약 0.1 ∼ 500 mg, 좌제 또는 외용제에서는 약 1 ∼ 1000 mg 으로 하는 것이 바람직하다.
또, 각 투여 형태를 갖는 약제의 화합물 (I) 의 결정 (즉, 화합물 (I) 의 프리체의 결정 또는 화합물 (I) 의 산과의 결정 (염의 결정 혹은 공결정)) 의 1 일당의 투여량은, 환자의 증상, 체중, 연령, 성별 등에 따라 상이하며 일률적으로는 결정할 수 없지만, 통상적으로 성인 (체중 50 kg) 1 일당 화합물 (I) 의 프리체 환산으로, 약 0.05 ∼ 5000 mg, 바람직하게는 0.1 ∼ 1000 mg 으로 하면 되고, 이것을 1 일 1 회 또는 2 ∼ 3 회 정도로 나눠 투여하는 것이 바람직하다.
실시예
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이것들에 의해 전혀 한정되는 것은 아니다. 본 발명은 실시예에 의해 충분히 설명되고 있지만, 당업자에 의해 다양한 변경 및/또는 수식이 가능할 것은 이해된다. 따라서, 그러한 변경 및/또는 수식이 본 발명의 범위를 일탈하는 것이 아닌 한, 그것들은 본 발명에 포함된다.
이하의 화합물의 실시예에 있어서, % 는 특기하지 않는 한 중량퍼센트를 나타낸다.
실시예에서 사용한 각종 시약은, 특히 기재가 없는 한 시판품을 사용하였다. 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에는, 모리텍스사 제조의 퓨리프팩 (등록 상표) SI, 바이오타지사 제조의 KP-Sil (등록 상표) Silica 프리팩드 칼럼, 또는 바이오타지사 제조의 HP-Sil (등록 상표) Silica 프리팩드 칼럼을 사용하였다. 염기성 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에는 모리텍스사 제조의 퓨리프팩 (등록 상표) NH 또는 바이오타지사 제조의 KP-NH (등록 상표) 프리팩드 칼럼을 사용하였다. 분리 채취용 박층 크로마토그래피에는 머크사 제조의 KieselgelTM60F254, Art. 5744 또는 와코사 NH2 실리카 겔 60F254 플레이트를 사용하였다. NMR 스펙트럼은, AL400 (400 ㎒ ; 니혼 전자 (JEOL)), Mercury400 (400 ㎒ ; 애질런트·테크놀로지) 형 스펙트로미터, 또는 400 MNMR 프로브 (Protasis) 를 장비한 Inova400 (400 ㎒ ; 애질런트·테크놀로지) 형 스펙트로미터를 사용하고, 중용매 중에 테트라메틸실란을 포함하는 경우에는 내부 기준으로서 테트라메틸실란을 사용하고, 그 이외의 경우에는 내부 기준으로서 NMR 용매를 사용해서 측정하여, 전체 δ 값을 ppm 으로 나타냈다.
LCMS 스펙트럼은 Waters 사 제조의 ACQUITY SQD (사중극형) 를 사용하여 하기 조건에서 측정하였다.
칼럼 : Waters 제조의 ACQUITY UPLC (등록 상표) BEH C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 ㎛
MS 검출 : ESI positive
UV 검출 : 254 및 210 nm
칼럼 유속 : 0.5 mL/분
이동상 A : 0.1 % 포름산 수용액
이동상 B : 0.1 % 포름산아세토니트릴 용액
인젝션량 : 1 μL
그래디언트 (표 1)
역상 분리 채취 HPLC 정제는 WATERS 사 제조의 분리 채취 시스템을 사용하여 하기 조건에서 실시하였다.
칼럼 : YMC 사 제조의 YMC-Actus Triart C18, 20 × 50 mm, 5 ㎛ 와 YMC 사 제조의 YMC-Actus Triart C18, 20 × 10 mm, 5 ㎛ 를 연결한 것을 사용하였다.
UV 검출 : 254 nm
MS 검출 : ESI positive
칼럼 유속 : 25 mL/분
이동상 : 물/아세토니트릴 (0.1 % 포름산)
인젝션량 : 0.1 - 0.5 mL
약호의 의미를 이하에 나타낸다.
s : 싱글렛
d : 더블렛
t : 트리플렛
dt : 더블 트리플렛
m : 멀티플렛
DMSO-d6 : 중디메틸술폭사이드
CDCl3 : 중클로로포름
THF : 테트라하이드로푸란
DMA : N,N-디메틸아세트아미드
NMP : 1-메틸-2-피롤리디논
DMSO : 디메틸술폭사이드
분말 X 선 회절 측정
분말 X 선 회절은, 시험 물질 적당량을 필요에 따라 마노제 막자사발로 가볍게 분쇄한 후, 다음의 어느 시험 조건에 따라서 측정하였다.
장치 : PANalytical 제조의 EMPYREAN (A 법)
반사법 (집중법)
타깃 : Cu
X 선관 전류 : 40 mA
X 선관 전압 : 45 kV
주사 범위 : 2θ = 5.0 ∼ 40.0°
스텝 : 2θ = 0.0131°
평균 시간/스텝 : 8.670 s
스캔 스피드 : 0.0015°/s
발산 슬릿 : 1°
산란 슬릿 : 2.0 mm
수광 슬릿 : 8.0 mm
장치 : PANalytical 제조의 EMPYREAN (B 법)
투과법
타깃 : Cu
X 선관 전류 : 40 mA
X 선관 전압 : 45 kV
주사 범위 : 2θ = 2.0 ∼ 40.0°
스텝 : 2θ = 0.0066°
평균 시간/스텝 : 8.670 s
스캔 스피드 : 0.0008°/s
발산 슬릿 : 1/2°
산란 슬릿 : 2.0 mm
수광 슬릿 : 없음
데이터 처리를 포함하는 장치의 취급은, 각 장치에서 지시된 방법 및 순서에 따랐다. 또한, 각종 스펙트럼으로부터 얻어지는 수치는, 그 결정 성장의 방향, 입자의 크기, 측정 조건 등에 따라 다소 변동하는 경우가 있다. 따라서, 그들 수치는 엄밀하게 해석되어서는 안된다.
시차열-열중량 동시 측정 (TG-DTA 측정) 은, 시험 물질 2 ∼ 3 mg 에 대해, 다음의 시험 조건에 따라서 시험을 실시하였다.
장치 : TG/DTA7200
히타치 하이테크 사이언스 주식회사 제조
시료 용기 : 알루미늄제
승온 속도 : 25 ∼ 290 ℃ 까지 10 ℃/분으로 승온
분위기 가스 : 공기 (200 mL/분)
대조 물질 : 블랭크 팬
데이터 처리를 포함하는 장치의 취급은, 각 장치에서 지시된 방법 및 순서에 따랐다.
합성예 1 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 합성
합성예 1(1) tert-부틸(2S,4R)-4-(4-아미노-5-요오드-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성
tert-부틸(2S,4S)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트 (19.0 g) 와 4-클로로-5-요오드-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (13.1 g) 을 THF (190 mL) 에 용해시켜, 0 ℃ 로 냉각 후, 트리페닐포스핀 (37.2 g) 과 디이소프로필아조디카르복실레이트 (28.1 mL) 를 첨가하고, 실온으로 승온시켜 1 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축시킨 후, 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 : 아세트산에틸) 로 정제하여, 대응하는 커플링체를 얻었다. 얻어진 화합물은 추가로 정제하지 않고 다음의 반응에 사용하였다.
내압관 중에, 얻어진 커플링체와 THF (114 mL) 와 암모니아수 (114 mL) 를 첨가하고, 100 ℃ 에서 14 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 물 (285 mL) 에 주입하고, 실온에서 5 시간 교반하였다. 석출된 고체를 여과 채취하여, 물로 세정하고, 건조시킴으로써 목적물 (34.5 g) 을 얻었다.
합성예 1(2) 4-아미노-7-((3R,5S)-1-(tert-부톡시카르보닐)-5-메틸피롤리딘-3-일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복실산의 합성
내압관에, 합성예 1(1) 의 화합물 (28.0 g), 10 % 팔라듐탄소 촉매 (720 mg), NMP (84 mL), 메탄올 (26 mL), 트리에틸아민 (17.6 mL) 을 첨가한 후, 일산화탄소 치환시켜, 100 ℃ 에서 2 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 2 M 수산화나트륨 수용액 (79 mL) 을 첨가하고, 80 ℃ 에서 2 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 여과하고, 메탄올로 세정하고, 여과액의 메탄올을 감압 농축시켰다. 추가로 물을 첨가한 후, 수층을 tert-부틸메틸에테르로 세정하였다. 수층에 1 M 황산수소칼륨 수용액을 첨가하여 pH 를 약 3 으로 조정하고, 석출된 고체를 여과 채취하여, 물로 세정하고, 건조시킴으로써 목적물 (23.4 g) 을 얻었다.
합성예 1(3) tert-부틸(2S,4R)-4-(4-아미노-6-브로모-5-(((R)-1-페닐에틸)카르바모일)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-2-메틸피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성
합성예 1(2) 의 화합물 (1.00 g), (R)-(+)-1-페닐에틸아민 (0.503 g), 디이소프로필에틸아민 (1.79 g), N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 를 첨가하고, 계속해서 HATU (1.58 g) 를 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 아세트산에틸, 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하고, 합친 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 : 아세톤) 로 정제하여, 아미드체 (1.53 g) 를 얻었다. 얻어진 화합물은 추가로 정제하지 않고 다음의 반응에 사용하였다.
아미드체 (1.53 g) 에 클로로포름 (15 mL) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, N-브로모숙신이미드 (0.88 g) 를 첨가하고, 0 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (헥산 : 아세트산에틸) 로 정제하여, 목적물 (1.39 g) 을 얻었다.
합성예 1(4) 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-브로모-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드
합성예 1(3) 의 화합물 (600 mg) 에 클로로포름 (3 mL) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 트리플루오로아세트산 (4.44 g) 을 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축시키고, 잔류물에 아세토니트릴 (5 mL) 을 첨가하고 다시 감압 농축시켜, 아민체를 얻었다. 얻어진 화합물은 추가로 정제하지 않고 다음의 반응에 사용하였다.
얻어진 아민체에 아세토니트릴 (3 mL) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각시킨 후, 염화아크릴 (99.9 mg), 디이소프로필에틸아민 (713 mg) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축시키고, 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸 : 메탄올) 로 정제하여, 목적물 (281 mg) 을 얻었다.
합성예 1(5) 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 합성
합성예 1(4) 의 화합물 (65 mg), 디클로로비스(트리페닐포스핀)디팔라듐 (9.2 mg), 요오드화구리 (I) (5.0 mg), 시클로프로필아세틸렌 (13.0 mg), 트리에틸아민 (39.7 mg), N,N-디메틸포름아미드 (1.3 mL) 를 첨가하고, 계 내를 질소 치환시킨 후, 70 ℃ 에서 2.5 시간 교반하였다. 반응 혼합물에 아세트산에틸, 포화 염화암모늄 수용액을 첨가하고, 아세트산에틸로 추출하고, 합친 유기층을 물, 이어서 포화 식염수로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조 후, 감압 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (클로로포름 : 메탄올) 로 정제하여, 목적물 (50 mg) 을 얻었다.
실시예 1 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 제조
이하 제조 방법 1, 제조 방법 2 에 기재된 2 개의 방법으로 푸마르산과의 II 형 결정을 제조하였다. 또한, 화합물 (I) 의 프리체의 I 형 결정은 후술하는 실시예 3 과 동일한 방법으로 합성하였다.
(i) 제조 방법 1
화합물 (I) 의 프리체의 I 형 결정 30 mg 에 푸마르산 3 당량 첨가하고, tert-부탄올 0.3 mL 를 첨가하고, 25 ℃ 에서 현탁액을 약 124 시간 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
(ii) 제조 방법 2
화합물 (I) 의 프리체의 I 형 결정 2.20 g 에 푸마르산 1.06 g 및 아세톤 22 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 현탁액을 약 62 시간 교반한 후, 30 분 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 2-프로판올로 세정하고, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 2.27 g 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 1 에 나타냈다. 분말 X 선 회절 스펙트럼 데이터를 표 2 에 나타낸다.
또, 특징적인 회절각은 이하와 같다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) :
5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 2 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 178 ℃ 부근
실시예 2 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 프리체 II 형 결정의 제조
이하 제조 방법 1 ∼ 제조 방법 4 에 기재된 4 개의 방법 중 어느 것으로 프리체 II 형 결정을 제조하였다.
(i) 제조 방법 1
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 숙신산 1 당량 및 1-프로판올/물 (1 : 3 v/v) 0.3 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 4 일간 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
(ii) 제조 방법 2
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 300 mg 에 숙신산 1 당량 및 1-프로판올/물 (1 : 3 v/v) 1.5 mL 를 첨가하고, (i) 에서 얻어진 결정 중 소량을 종결정으로서 첨가하고, 50 ℃ 에서 5 시간 현탁 교반한 후, 1-프로판올 0.3 mL 를 첨가하고, 추가로 50 ℃ 에서 2 시간 현탁 교반한 후, 1-프로판올 0.3 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 17 시간 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 84.5 mg 얻었다.
(iii) 제조 방법 3
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 1000 mg 에 숙신산 1 당량 및 1-프로판올/물 (1 : 1 v/v) 3 mL 를 첨가하고, (ii) 에서 얻어진 결정 중 소량을 종결정으로서 첨가하고, 50 ℃ 에서 17.5 시간 현탁 교반한 후, 여과 채취 (여과시에 물로 세정) 하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 487.6 mg 얻었다.
(iv) 제조 방법 4
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 1000 mg 에 디이소프로필에테르 5 mL 를 첨가하고, (iii) 에서 얻어진 결정 중 소량을 종결정으로서 첨가하고, 50 ℃ 에서 현탁 교반하였다. 42.5 시간 후, 용매가 증발되었기 때문에, 디이소프로필에테르 5 mL 를 첨가하였다. 50 ℃ 에서 2 시간 현탁 교반한 후, 에탄올 0.5 mL 를 첨가하였다. 추가로 50 ℃ 에서 2 시간 현탁 교반한 후, 에탄올 0.5 mL 를 첨가하였다. 추가로, 50 ℃ 에서 19 시간 현탁 교반한 후, 30 분에 걸쳐서 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 798.8 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 3 에 나타냈다. 분말 X 선 회절 스펙트럼 데이터를 표 3 에 나타낸다.
또, 특징적인 회절각은 이하와 같다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) :
8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 4 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 182 ℃ 부근
실시예 3 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 프리체 I 형 결정의 제조
화합물 (I) 의 조체 (100 mg) 를 에탄올 (500 μL) 에 현탁시키고, 50 ℃ 에서 밤새 교반하였다. 용액을 25 ℃ 까지 냉각시키고, 얻어진 현탁액을 여과 채취함으로써, 화합물 (I) 의 프리체 I 형 결정 (31 mg) 을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 5 에 나타냈다. 분말 X 선 회절 스펙트럼 데이터를 표 4 에 나타낸다.
또, 특징적인 회절각은 이하와 같다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) :
9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 6 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 183 ℃ 부근
실시예 4 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 1000 mg 에 푸마르산 481 mg 및 아세톤 50 mL 를 첨가하고, 25 ℃ 에서 71 시간 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 실온 감압 조건에서, 7.5 시간 건조시킴으로써 표기 결정을 695.0 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 7 에 나타냈다. 분말 X 선 회절 스펙트럼 데이터를 표 5 에 나타낸다.
또, 특징적인 회절각은 이하와 같다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) :
6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 8 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 151 ℃ 부근
실시예 5 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 1000 mg 에 푸마르산 481 mg 및 아세톤 50 mL 를 첨가하고, 25 ℃ 에서 19.5 시간 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수함으로써 표기 결정을 868.8 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 9 에 나타냈다. 분말 X 선 회절 스펙트럼 데이터를 표 6 에 나타낸다.
또, 특징적인 회절각은 이하와 같다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) :
6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 10 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 153 ℃ 부근
실시예 6 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 I 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 푸마르산 0.5 당량 및 물 0.3 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 93.5 시간 현탁 교반한 후, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 11 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 6.4°, 7.5°, 9.7°, 11.7°, 15.1°, 19.6°및 23.9°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 12 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 161 ℃ 부근
실시예 7 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 0.5 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 300 mg 에 푸마르산 1 당량 및 에탄올 6 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 19.5 시간 현탁 교반한 후, 3 시간 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 물로 세정하고, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 224.6 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 : 도 13 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 5.4°, 6.4°, 7.3°, 12.8°, 13.4°, 14.7°및 15.4°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 14 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 162 ℃ 부근
실시예 8 화합물 (I) 과 푸마르산의 몰비의 분석
화합물 (I) 과 푸마르산 및 화합물 (I) 과 L-타르타르산의 몰비에 대해서는, 1H-NMR 로 확인하였다. 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 및 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정의 NMR 스펙트럼의 측정 결과를 이하에 나타낸다. 또, 화합물 (I) 의 프리체 I 형의 결정, 및 프리체 II 형의 결정의 NMR 스펙트럼의 측정 결과도 이하에 나타낸다.
(화합물 (I) 의 프리체 I 형의 결정)
(화합물 (I) 의 프리체 II 형의 결정)
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 I 형 결정)
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정)
(화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정)
참고예 1 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 푸마르산과의 III 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 300 mg 에 푸마르산 3 당량 및 아세토니트릴 9 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 1 시간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 303.7 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 15 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 8.1°, 13.2°, 20.4°, 23.1°, 24.7°및 26.1°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 16 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 발열 피크 (피크톱값) : 153 ℃ 부근
참고예 2 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 푸마르산과의 IV 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 300 mg 에 푸마르산 3 당량 및 물 6 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 1.5 시간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 물로 세정하고, 여과 채취하고, 고체를 회수하여, 건조시킴으로써 표기 결정을 311.2 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 17 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 6.0°, 15.7°및 18.8°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 18 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 발열 피크 (피크톱값) : 130 ℃ 부근
참고예 3 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 염산과의 I 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 2 M 염산/에탄올 용액 15 μL 및 2-프로판올/헵탄 혼액 (1 : 3 v/v) 0.3 mL 를 첨가하고, 4 일간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 19 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 7.0°, 7.4°, 12.6°, 19.0°및 25.4°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 20 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 51 ℃ 및 179 ℃ 부근
참고예 4 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 염산과의 II 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 2 M 염산/에탄올 용액 15 μL 및 아세톤/헵탄 혼액 (1 : 3 v/v) 0.3 mL 를 첨가하고, 4 일간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 21 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 6.3°, 7.4°, 8.0°, 17.6°, 22.0°및 23.6°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 22 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 147 ℃ 부근
참고예 5 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 염산과의 III 형 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 2 M 염산/에탄올 용액 15 μL 및 아세트산에틸 0.3 mL 를 첨가하고, 4 일간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 23 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 5.3°, 6.5°, 8.1°, 15.3°및 24.2°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 24 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 156 ℃ 부근
참고예 6 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 브롬화수소산과의 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 브롬화수소산 1 당량 및 2-프로판올/헵탄 혼액 (1 : 3 v/v) 0.3 mL 를 첨가하고, 5 일간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 25 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 7.0°, 7.4°, 13.4°, 15.6°, 19.2°및 25.6°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 26 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 204 ℃ 부근
참고예 7 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 500 mg 에 L-타르타르산 466 mg 및 아세톤 10 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 40 분 교반하여 용해시켰다. 이 후, 실온에서 17 시간 교반하고, 얻어진 현탁액을 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 506.3 mg 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (A 법) : 도 27 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 7.2°, 12.6°, 17.3°및 23.4°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 28 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 121 ℃ 부근
참고예 8 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드 (화합물 (I)) 의 숙신산과의 결정의 제조
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 15 mg 에 숙신산 3 당량 및 아세토니트릴 0.3 mL 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 3 일간 현탁 교반한 후, 자연 냉각시키고, 여과 채취하고, 고체를 회수하였다. 이것을 건조시킴으로써 표기 결정을 얻었다.
분말 X 선 회절 스펙트럼 (B 법) : 도 29 에 나타냈다.
특징적인 회절각 (2θ ± 0.2°) : 6.5°, 10.7°, 13.2°, 14.6°, 18.7°및 23.9°
시차열-열중량 동시 측정 곡선 : 도 30 에 나타냈다.
시차열-열중량 동시 측정 곡선에 있어서의 흡열 피크 (피크톱값) : 148 ℃ 및 159 ℃ 부근
시험예 1 HER2 인산화 활성 저해 작용 (in vitro) 의 측정
HER2 인산화 활성에 대한 화합물의 인비트로에서의 저해 활성 측정법의 조건 설정에 있어서, 퍼킨엘머사의 ProfilerPro Peptide 22 와 동일 서열 (5-FAM-EEPLYWSFPAKKK-CONH2) 의 펩티드를 기질로서 사용한 HER2 키나아제 반응의 보고 (Xie H et al., PLoS One. 2011 ; 6 (7) : e21487) 에 기초하여, ProfilerPro Peptide 22 를 기질에 사용하였다. 시험에 사용한 정제 리콤비넌트 인간 HER2 단백질은 카르나 바이오사이언스사로부터 구입하였다. 화합물의 저해 활성 측정에 있어서는, 먼저, 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 디메틸술폭사이드 (DMSO) 로 단계 희석시켰다. 다음으로, 키나아제 반응용 완충액 (13.5 mM Tris (pH 7.5), 2 mM 디티오트레이톨, 0.009 % Tween20) 중에 HER2 단백질, 기질 펩티드 (종 (終) 농도는 1 μM), 염화망간 (종농도는 10 mM), ATP (종농도는 5 μM) 와 화합물 (I) 의 DMSO 용액 (DMSO 의 종농도는 5 %) 을 첨가하고 25 ℃ 에서 30 분간 인큐베이션하여 키나아제 반응을 실시하였다. 거기에 종농도 30 mM 이 되도록 EDTA 를 첨가함으로써 반응을 정지시켰다. 마지막으로, LabChip (등록 상표) EZ Reader II (퍼킨엘머사) 로, 인산화되지 않았던 기질 펩티드 (S) 와 인산화된 펩티드 (P) 를 마이크로 유로 캐필러리 전기 영동에 의해 분리·검출하였다. S 와 P 각각의 피크의 높이로부터 인산화 반응량을 구하고, 인산화 반응을 50 % 억제할 수 있는 화합물 농도를 IC50 값 (nM) 으로 정의하여 이하의 표 7 에 나타냈다.
시험예 2 엑손 20 삽입 변이형 HER2 (HER2ex20insYVMA) 인산화 활성 저해 작용 (in vitro) 의 측정
엑손 20 삽입 변이형 HER2 인산화 활성에 대한 화합물의 인비트로에서의 저해 활성 측정법의 조건 설정에 있어서, HER2 와 동일하게 ProfilerPro Peptide 22 를 기질에 사용하였다. 시험에 사용한 정제 리콤비넌트 인간 엑손 20 삽입 변이형 HER2 (A775_G776insYVMA) 단백질은, SignalChem 사로부터 구입하였다. 화합물의 저해 활성 측정에 있어서는, 먼저, 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 디메틸술폭사이드 (DMSO) 로 단계 희석시켰다. 다음으로, 키나아제 반응용 완충액 (13.5 mM Tris (pH 7.5), 2 mM 디티오트레이톨, 0.009 % Tween20) 중에 엑손 20 삽입 변이형 HER2 단백질과 화합물 (I) DMSO 용액 (DMSO 의 종농도는 5 %) 을 첨가하고 25 ℃ 에서 30 분간 프리인큐베이션하였다. 그 후, 기질 펩티드 (종농도는 1 μM), 염화망간 (종농도는 25 mM), 염화마그네슘 (종농도는 20 mM), ATP (종농도는 200 μM) 를 첨가하고 25 ℃ 에서 220 분간 인큐베이션하여 키나아제 반응을 실시하였다. 거기에 종농도 30 mM 이 되도록 EDTA 를 첨가함으로써 반응을 정지시켰다. 마지막으로, LabChip (등록 상표) EZ Reader II (퍼킨엘머사) 로, 인산화되지 않았던 기질 펩티드 (S) 와 인산화된 펩티드 (P) 를 마이크로 유로 캐필러리 전기 영동에 의해 분리·검출하였다. S 와 P 각각의 피크의 높이로부터 인산화 반응량을 구하고, 인산화 반응을 50 % 억제할 수 있는 화합물 농도를 IC50 값 (nM) 으로 정의하여 이하의 표 7 에 나타냈다.
이상의 결과로부터, 화합물 (I) 은, HER2 인산화의 우수한 저해 활성 및 엑손 20 삽입 변이형 HER2 인산화에 대하여, 우수한 저해 활성을 갖는 것이 분명해졌다.
시험예 3 HER2 발현 세포주에 대한 증식 저해 활성의 측정
HER2 과잉 발현 인간 유방암 세포주인 SK-BR-3 세포를, 10 % 소 태아 혈청을 포함하는 McCoy's 5a 배지 (라이프 테크놀로지즈사 제조) 중에 현탁시켰다. 세포 현탁액을, 384 웰 평저 (平底) 마이크로플레이트의 각 웰에 파종하고, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 1 일 배양하였다. 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 DMSO 에 용해시키고, DMSO 를 사용하여 화합물을 종농도의 500 배의 농도가 되도록 희석시켰다. 화합물의 DMSO 용액을 세포의 현탁에 사용한 배지로 희석시키고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 DMSO 의 최종 농도가 0.2 % 가 되도록 첨가하고, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 추가로 3 일 배양하였다. 화합물 존재하에서 3 일간 배양 후의 세포수 계측을 CellTiter-Glo2.0 (프로메가사 제조) 을 사용하여 실시하고, 이하의 식으로부터 증식 저해율을 산출하였다. 증식을 50 % 저해할 수 있는 화합물 농도를 IC50 (nM) 으로 정의하였다.
증식 저해율 (%) = (C - T)/(C) × 100
T : 피검 화합물을 첨가한 웰의 발광 강도
C : 피검 화합물을 첨가하지 않았던 웰의 발광 강도
결과를 이하의 표 8 에 나타냈다.
시험예 4 엑손 20 삽입 변이형 HER2 발현 세포주에 대한 증식 저해 활성의 측정
엑손 20 삽입 변이형 HER2 에 대한 증식 저해 활성은, 인간 엑손 20 삽입 변이형 HER2 유전자를 도입한 마우스 B 림프구 전구 세포주인 Ba/F3 세포를 사용하여 실시하였다. Ba/F3 세포는 10 % 소 태아 혈청 (FBS), 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신 (써모피셔 사이언티픽) 및 1 ng/mL 마우스 인터류킨-3 (mIL-3) (CST) 을 포함하는 RPMI-1640 배지 (써모피셔 사이언티픽) 에서 유지하고, 인간 엑손 20 삽입 변이형 HER2 유전자 (A775_G776insYVMA (HER2ex20insYVMA)), Internal Ribosome Binding Sequence (IRES) 및 쿠사비라 오렌지 유전자를 삽입한 pCDNA3.1-hyg (+) 벡터를 Amaxa (등록 상표) Cell Line Nucleofector (등록 상표) Kit V 에 의한 전기 천공법에 의해 도입하였다. 하이그로마이신 B (나칼라이 테스크) 로 선택한 엑손 20 삽입 변이형 HER2 를 발현한 Ba/F3 세포 (Ba/F3-HER2insYVMA) 는 mIL-3 비의존적인 증식을 나타냈다.
세포 증식 저해 활성의 평가시에, Ba/F3-HER2insYVMA 세포를 10 % FBS, 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신을 포함하는 RPMI-1640 배지에서 현탁시키고, 세포 현탁액을 96 웰 평저 마이크로플레이트의 각 웰에 파종하고, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 1 일 배양하였다. 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 DMSO 에 용해시키고, DMSO 혹은 세포의 현탁에 사용한 배지를 사용하여 희석시키고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 DMSO 의 최종 농도가 0.2 % 가 되도록 첨가하고, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 추가로 3 일 배양하였다. 화합물 존재하에서 3 일간 배양 후의 세포수 계측은 CellTiter-Glo (프로메가사 제조) 를 사용하여, 이하의 식으로부터 증식 저해율을 산출하였다. 증식을 50 % 저해할 수 있는 화합물 농도를 IC50 (nM) 으로 정의하였다.
증식 저해율 (%) = (C - T)/(C) × 100
T : 피검 화합물을 첨가한 웰의 발광 강도
C : 피검 화합물을 첨가하지 않았던 웰의 발광 강도
결과를 이하의 표 8 에 나타냈다.
이상의 결과로부터, 화합물 (I) 은, HER2 발현 세포주 (SK-BR-3) 및 엑손 20 삽입 변이형 HER2 발현 세포주 (Ba/F3-HER2insYVMA) 에 있어서도 우수한 세포 증식 억제 활성을 갖는 것이 분명해졌다.
시험예 5 HER2 발현 세포주 (NCI-N87) 에 대한 증식 저해 활성의 측정
HER2 과잉 발현 인간 위암 세포주인 NCI-N87 세포 (American Type Culture Collection, Cat No. ATCC (등록 상표) CRL-5822) 를, 10 % 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지 (와코 순약 공업 주식회사) 중에 현탁시켰다. 이어서, 세포 현탁액을, 96 웰 평저 마이크로플레이트의 각 웰에 파종하고, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 1 일 배양하였다. 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 DMSO 에 용해시키고, DMSO 를 사용하여 피검 화합물을 종농도의 1000 배의 농도가 되도록 희석시켰다. 화합물 (I) 의 DMSO 용액을 세포의 현탁에 사용한 배지로 희석시키고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 DMSO 의 최종 농도가 0.1 % 가 되도록 첨가하였다. Control 용 웰에는, DMSO 를 세포의 현탁에 사용한 배지로 희석시키고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 DMSO 의 최종 농도가 0.1 % 가 되도록 첨가하였다. 약액을 첨가 후, 5 % 탄산 가스 함유의 배양기 중 37 ℃ 에서 추가로 3 일 배양하였다. 화합물 존재하에서 3 일간 배양 후의 세포수 계측은 CellTiter-Glo2.0 (프로메가사 제조) 을 사용하여, 프로메가사가 추장하는 프로토콜에 준하여 실시하였다. 이하의 식으로부터 증식 저해율을 산출하고, 증식을 50 % 저해할 수 있는 피검 화합물의 농도를 IC50 값 (nM) 으로 정의하였다.
증식 저해율 (%) = (C - T)/(C) × 100
T : 피검 화합물을 첨가한 웰의 발광 강도
C : 피검 화합물을 첨가하지 않았던 웰의 발광 강도
결과를 이하의 표 9 에 나타냈다.
이상의 결과로부터, 화합물 (I) 은, HER2 과잉 발현 세포주 (NCI-N87) 에 있어서도 우수한 세포 증식 억제 활성을 갖는 것이 분명해졌다.
시험예 6 경구 흡수성의 평가
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 0.5 % HPMC 수용액, 0.1 N 염산에 현탁 또는 용해시키고, BALB/cA 마우스 (니혼 클레아 주식회사) 에 50 mg/kg/day 의 용량으로 경구 투여하였다. 경구 투여 후, 0.5, 1, 2, 4 및 6 시간 후에 안면 정맥으로부터 시간 경과적으로 채혈하여 혈장을 얻었다. 얻어진 혈장 중의 화합물 농도를 LC-MS/MS 에 의해 측정하고, 경구 흡수성의 평가를 실시하였다.
결과를 이하의 표 10 에 나타냈다.
이상의 결과로부터, 화합물 (I) 은 충분한 혈장 중 농도가 관측되어, 양호한 경구 흡수성을 나타냈다.
시험예 7 뇌 이행성의 평가
합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 0.5 % HPMC 수용액, 0.1 N 염산에 현탁 또는 용해시키고, BALB/cA 마우스 (니혼 클레아 주식회사) 에 50 mg/kg/day 의 용량으로 경구 투여하였다. 경구 투여 후, 0.5 시간 후에 안면 정맥으로부터 채혈 후, 전체 뇌를 적출하여 혈장 및 뇌 샘플을 얻었다. 얻어진 뇌 샘플에 3 배량의 물을 첨가 후, 초음파 호모게나이저를 사용해서 호모게나이즈하여, 뇌 호모게네이트를 얻었다. 얻어진 혈장 중 및 뇌 호모게네이트 중의 화합물 농도를 LC-MS/MS 에 의해 측정하고, 뇌/혈장 중 화합물 농도로부터 뇌 이행성을 평가하였다.
결과를 이하의 표 11 에 나타냈다.
이상의 결과로부터, 화합물 (I) 은 양호한 뇌 이행성을 나타냈다.
시험예 8 Luciferase 유전자 도입 HER2 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 의 뇌 직접 이식 모델에 대한 항종양 효과 확인 시험 (in vivo)
뇌 직접 이식 모델에 의한 피검 화합물의 항종양 효과는, American Type Culture Collection 으로부터 구입한 인간 위암 종양 세포인 NCI-N87 에 Luciferase 유전자를 도입한 NCI-N87-Luc 를 사용하였다. NCI-N87-Luc 는, 10 % 소 태아 혈청 (FBS) 을 포함하는 RPMI-1640 (4.5 g/L 글루코오스, 10 mM HEPES 및 1 mM 피루브산나트륨 함유) (와코 순약 주식회사) 배지에 있어서, 5 % CO2 인큐베이터 중에 있어서 37 ℃ 에서 세포주를 배양하였다.
NCI-N87-Luc 세포를 PBS 중에 6.25 × 107 cells/mL 의 농도로 재현탁시켰다.
마우스용 이어 바를 사용하여 약 6 ∼ 7 주령의 누드 마우스 (BALB/cAJcl-nu/nu, 니혼 클레아 주식회사) 를 뇌 정위 고정 장치에 고정시키고, 뇌 상부의 피부를 알코올면으로 소독 후, 메스로 절개하였다.
마이크로드릴을 사용하여, 두개골에 구멍을 뚫고, 침, 매니퓰레이터, 시린지 펌프를 사용하여, 세포 현탁액 4 μL 를 0.8 μL/분의 조건에서 뇌 내에 이식하였다.
뇌 내 종양량의 기준으로서, 이식 약 3 주일 후에 생존예 전체예에 대해, IVIS (PerkinElmer, Inc., 형식 : Lumina II) 를 사용하여 Total Flux (Photon/sec) 를 측정하였다. 그 결과로부터, MiSTAT (Ver.2.00) 의 군 분류 프로그램을 사용하여, 각 군 6 마리씩의 동물을 할당하였다.
피검 화합물은 1 일 1 회, 군 분류 다음날부터 21 일간 (Day1-21) 연일 경구 투여하였다.
효과 유무의 판단에는, 판정일 (Day22) 의 Total Flux 를 대수 변환 (Log10) 한 값을 사용하였다. 피검 화합물로는 합성예 1 의 방법에 따라서 얻어진 화합물 (I) 을 사용하고, 25 mg/kg/day 의 용량으로 투여하였다.
종축에 평균 Total Flux 를 대수 변환 (Log10) 한 값, 횡축에 이식 후의 일수 (Day) 를 설정한 그래프를 작성하고, 약제 투여 기간 중의 Total Flux 의 시간 경과적 추이를 관찰하였다.
컨트롤 (Control) 로는 0.1 N HCl, 0.5 % HPMC 수용액을 사용하였다.
결과를 이하의 도 31 및 도 32 에 나타냈다. 각 군 Day22 의 Total Flux 를 대수 변환 (Log10) 한 값을 유의차 검정한 결과, 컨트롤군에 비하여, 통계학적으로 유의 (유의 수준 양측 5 %) 하게 낮은 것이 나타났다. 또, 체중의 측정에는 동물용 전자 천칭을 사용하였다. n 일째의 체중 (BWn) 으로부터 n 일째 체중 변화율 (Body weight change ; BWCn) 을 하기의 식에 의해 산출하였다.
BWCn (%) = [(n 일째의 체중) - (군 분류일의 체중)]/(군 분류일의 체중) × 100
이 시험 결과로부터, 화합물 (I) 은, 누드 마우스 뇌 내에 이식한 HER2 과잉 발현 세포주 (NCI-N87-luc) 에 대하여, 우수한 항종양 효과를 갖는 것이 분명해졌다. 또, 모든 개체에서 -20 % 이상의 체중 감소는 보이지 않았기 때문에, 위중한 부작용은 없는 것이 분명해졌다.
시험예 9 고체 안정성 시험
실시예 및 비교예에서 얻어진 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정을 4 주일 보존하였을 때의 고체 안정성을 평가하였다.
보존 조건 : 60 ℃ (폐쇄계)
보존 기간 : 4 주일
보존량 : 약 30 mg
보존 용기 : 유리병
결과를 이하의 표 12 에 나타낸다.
유연 (類緣) 물질량 (화합물 (I) 이외에 검출된 물질의 양) 의 변화는, 시료 약 1 mg 을 칭량하여, 물·아세토니트릴 혼액 (1 : 1) 약 1 mL 에 용해시키고, 이 액 5 μL 를 정확하게 칭량해 넣고, 이하의 방법으로 HPLC 로 분석을 실시하였다.
HPLC 측정법 (안정성 시험)
시료 용액 중의 유연 물질량을 HPLC 분석으로 측정하였다. 또한, 데이터 처리를 포함하는 장치의 취급은, 각 장치에서 지시된 방법 및 순서에 따랐다.
칼럼 : Waters 제조의 XSelect CSH C18 (4.6 × 150 mm, 3.5 ㎛)
UV 검출 : 246 nm
칼럼 온도 : 40 ℃
유량 : 1.0 mL/분
샘플 온도 : 5 ℃
샘플 농도 : 1 mg/mL
이동상 A : 5 mmol/L 포름산암모늄 완충액 (pH 6.5)/아세토니트릴 (9 : 1) 혼액
이동상 B : 아세토니트릴
그래디언트를 표 13 에 나타낸다.
그 결과, 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정 모두 분말 X 선 회절 패턴의 변화는 확인되지 않고, 또, 유연 물질의 증가도 거의 확인되지 않아, 매우 안정적인 결정인 것이 판명되었다.
시험예 10 동적 수분 흡탈착 (DVS) 시험
실시예 및 참고예에서 얻어진 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정, 및 1 당량의 L-타르타르산과의 결정을 사용하여 수분 흡탈착 시험을 실시하였다.
수분 흡탈착 시험은, 다음의 조건에 따라서 측정하였다.
시료 대략 10 mg 을 전용의 석영제 홀더에 충전하고, 이하의 조건하에 시료의 각 습도에 있어서의 중량을 연속적으로 측정하여 기록하였다. 또한, 데이터 처리를 포함하는 장치의 취급은, 각 장치에서 지시된 방법 및 순서에 따랐다.
장치 : VTI SA+ (티·에이·인스트루먼트사 제조)
건조 온도 : 60 ℃
승온 속도 : 1 ℃/분
건조의 평형 : 300 분을 초과하지 않는 범위에서, 5 분간에서 0.01 wt% 감소하지 않는 것을 확인
측정 온도 : 25 ℃
가습의 평형 : 120 분을 초과하지 않는 범위에서, 5 분간에서 0.01 wt% 증가하지 않는 것을 확인
상대 습도 프로그램 : 5 ∼ 95 %RH 까지 5 %RH 씩 높이고, 95 %RH ∼ 5 %RH 까지 5 %RH 씩 낮춘다
이들 시험에서 얻어진 측정 조건 범위에 있어서의 중량 변화를 표 14 ∼ 표 18 에 나타낸다.
표 14 에 나타내는 바와 같이 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은 수분 흡탈착 시험에 있어서 95 % 의 상대 습도하에서 0.38 % 의 중량 증가로서, 1 % 에 미치지 않는 점에서, 거의 흡습성이 없는 것으로 판단되었다. 동일하게 화합물 (I) 의 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정에 대해서도 수분 흡탈착 시험에 있어서 95 % 의 상대 습도하에서 질량 증가가 1 % 에 미치지 않는 점에서, 거의 흡습성이 없는 것으로 판단되었다 (표 15 ∼ 17). 한편, 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정은 표 18 에 나타내는 바와 같이, 수분 흡탈착 시험에 있어서 95 % 의 상대 습도하에서 6.41 % 나 되는 질량 증가가 확인되어, 높은 흡습성을 갖는 것이 분명해졌다.
따라서, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은, 화합물 (I) 의 1 당량의 L-타르타르산과의 결정과 비교하여 흡습성이 낮아, 의약품의 개발 후보 화합물에 있어서, 안정적인 품질의 의약품의 공업적 생산의 관점에서 우수하다고 할 수 있다. 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정, 프리체 II 형 결정, 프리체 I 형 결정, 1 당량의 푸마르산과의 V 형 결정은 의약품 또는 의약품 원약으로서, 우수한 성질을 갖는 것이 확인되었다.
시험예 11 혈중 농도 측정 시험
실시예에서 얻어진 화합물 (I) 의 I 형 결정, 화합물 (I) 의 II 형 결정, 및 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산염 II 형 결정에 대해, 혈중 농도 측정 시험을 실시하였다. 구체적으로는, 화합물 (I) 의 I 형 결정은 0.1 N 염산을 포함한 0.5 % HPMC 를 사용하고, 화합물 (I) 의 II 형 결정, 및 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은 0.5 % HPMC 를 사용하여, 각각 화합물 (I) (프리체) 로 분자량 환산하여 100 mg/10 mL 및 300 mg/10 mL 의 현탁액을 제조하였다. 이들 투여액을 섭식 조건하에서 사육하고 있던 자성 래트 (Crl : CD (SD), 니혼 찰스·리버 주식회사) 에 체중 1 kg 당 10 mL 의 용량으로 경구 투여용 존데를 사용하여 경구 투여하였다. 투여 후, 래트용 케이지로 되돌려 상태를 확인하였다. 케이지 내에서는 급수 및 급이는 자유롭게 취할 수 있는 상태로 하였다. 투여 0.5, 1, 2, 4, 6 시간 후에 래트를 이소플루란으로 마취시키고, 헤파린 처리 시린지와 주사침 (25 G) 을 사용하여 약 80 μL 경정맥으로부터 채혈하였다.
채혈한 혈액은, 빙랭시키고, 원심 조작에 의해 혈장을 분리하였다. 채혈 종료 후의 래트는, 래트용 케이지로 되돌려 마취 각성 후의 상태를 확인하였다. 최종 채혈 종료 후에는, 이소플루란 마취의 심도 확인을 실시한 후, 소동물 실험 고정기로 위를 향하게 사지를 고정시켜 개복하고, 복부 대동정맥의 절개에 의한 방혈에 의해 안락사시켰다.
LC/MS/MS 를 사용하여, MRM 법으로 측정하고 검량선으로부터 정량한 각 혈장 중의 화합물 (I) 의 농도로부터, Phoenix WinNonlin (v6.4.0, Certara USA, Inc.) 을 사용하여, AUC0-6hr (사다리꼴법으로 산출한 투여 후 0 ∼ 6 시간의 혈중 농도-시간 곡선 하면적), Cmax (최고 혈중 농도), Tmax (최고 혈중 농도 도달 시간) 를 산출하였다.
결과를 표 19 에 나타낸다. 투여량을 100 mg/kg 에서 300 mg/kg 으로 높인 경우, 염산을 첨가한 화합물 (I) 의 I 형 결정 및 화합물 (I) 의 II 형 결정의 Cmax 가 각각 0.8 배 및 1.2 배 상승하고, AUC0-6hr 이 각각 1.0 배 및 1.5 배 상승한 반면, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은 Cmax 및 AUC0-6hr 이 각각 1.9 배 상승하였다. 또, 투여량 300 mg/kg 에 있어서의, 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정의 Cmax 는, 동일 용량으로의 산을 첨가한 화합물 (I) 의 I 형 결정 및 화합물 (I) 의 II 형 결정의 값과 비교하여, 각각 1.7 배 및 1.4 배, AUC0-6hr 은 각각 2.4 배 높은 값을 나타내는 것을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명에 관련된 화합물 (I) 의 1 당량의 푸마르산과의 II 형 결정은 보다 우수한 경구 흡수성을 나타내는 것이 확인되었다.
또한, 본 명세서에 기재한 모든 문헌 및 간행물은, 그 목적에 상관없이 참조에 의해 그 전체를 본 명세서에 편입하는 것으로 한다. 또, 본 명세서는, 본원의 우선권 주장의 기초가 되는 일본 특허출원인 일본 특허출원 2020-121520호 (2020년 7월 15일 출원) 의 특허 청구의 범위, 명세서, 및 도면의 개시 내용을 포함한다.
본 발명의 몇 가지의 실시형태를 설명하였지만, 이들 실시형태는, 예로서 제시한 것이며, 발명의 범위를 한정하는 것은 의도하고 있지 않다. 이들 신규한 실시형태는, 그 밖의 다양한 형태로 실시되는 것이 가능하며, 발명의 요지를 일탈하지 않는 범위에서, 다양한 생략, 치환, 변경을 실시할 수 있다. 이들 실시형태나 그 변형은, 발명의 범위나 요지에 포함됨과 함께, 특허 청구의 범위에 기재된 발명과 그 균등한 범위에 포함된다.
SEQUENCE LISTING
<110> TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.
<120> Crystal of pyrimidine compound
<130> G2640
<150> JP 2020-121520
<151> 2020-07-15
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 4664
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
gcttgctccc aatcacagga gaaggaggag gtggaggagg agggctgctt gaggaagtat 60
aagaatgaag ttgtgaagct gagattcccc tccattggga ccggagaaac caggggagcc 120
ccccgggcag ccgcgcgccc cttcccacgg ggccctttac tgcgccgcgc gcccggcccc 180
cacccctcgc agcaccccgc gccccgcgcc ctcccagccg ggtccagccg gagccatggg 240
gccggagccg cagtgagcac catggagctg gcggccttgt gccgctgggg gctcctcctc 300
gccctcttgc cccccggagc cgcgagcacc caagtgtgca ccggcacaga catgaagctg 360
cggctccctg ccagtcccga gacccacctg gacatgctcc gccacctcta ccagggctgc 420
caggtggtgc agggaaacct ggaactcacc tacctgccca ccaatgccag cctgtccttc 480
ctgcaggata tccaggaggt gcagggctac gtgctcatcg ctcacaacca agtgaggcag 540
gtcccactgc agaggctgcg gattgtgcga ggcacccagc tctttgagga caactatgcc 600
ctggccgtgc tagacaatgg agacccgctg aacaatacca cccctgtcac aggggcctcc 660
ccaggaggcc tgcgggagct gcagcttcga agcctcacag agatcttgaa aggaggggtc 720
ttgatccagc ggaaccccca gctctgctac caggacacga ttttgtggaa ggacatcttc 780
cacaagaaca accagctggc tctcacactg atagacacca accgctctcg ggcctgccac 840
ccctgttctc cgatgtgtaa gggctcccgc tgctggggag agagttctga ggattgtcag 900
agcctgacgc gcactgtctg tgccggtggc tgtgcccgct gcaaggggcc actgcccact 960
gactgctgcc atgagcagtg tgctgccggc tgcacgggcc ccaagcactc tgactgcctg 1020
gcctgcctcc acttcaacca cagtggcatc tgtgagctgc actgcccagc cctggtcacc 1080
tacaacacag acacgtttga gtccatgccc aatcccgagg gccggtatac attcggcgcc 1140
agctgtgtga ctgcctgtcc ctacaactac ctttctacgg acgtgggatc ctgcaccctc 1200
gtctgccccc tgcacaacca agaggtgaca gcagaggatg gaacacagcg gtgtgagaag 1260
tgcagcaagc cctgtgcccg agtgtgctat ggtctgggca tggagcactt gcgagaggtg 1320
agggcagtta ccagtgccaa tatccaggag tttgctggct gcaagaagat ctttgggagc 1380
ctggcatttc tgccggagag ctttgatggg gacccagcct ccaacactgc cccgctccag 1440
ccagagcagc tccaagtgtt tgagactctg gaagagatca caggttacct atacatctca 1500
gcatggccgg acagcctgcc tgacctcagc gtcttccaga acctgcaagt aatccgggga 1560
cgaattctgc acaatggcgc ctactcgctg accctgcaag ggctgggcat cagctggctg 1620
gggctgcgct cactgaggga actgggcagt ggactggccc tcatccacca taacacccac 1680
ctctgcttcg tgcacacggt gccctgggac cagctctttc ggaacccgca ccaagctctg 1740
ctccacactg ccaaccggcc agaggacgag tgtgtgggcg agggcctggc ctgccaccag 1800
ctgtgcgccc gagggcactg ctggggtcca gggcccaccc agtgtgtcaa ctgcagccag 1860
ttccttcggg gccaggagtg cgtggaggaa tgccgagtac tgcaggggct ccccagggag 1920
tatgtgaatg ccaggcactg tttgccgtgc caccctgagt gtcagcccca gaatggctca 1980
gtgacctgtt ttggaccgga ggctgaccag tgtgtggcct gtgcccacta taaggaccct 2040
cccttctgcg tggcccgctg ccccagcggt gtgaaacctg acctctccta catgcccatc 2100
tggaagtttc cagatgagga gggcgcatgc cagccttgcc ccatcaactg cacccactcc 2160
tgtgtggacc tggatgacaa gggctgcccc gccgagcaga gagccagccc tctgacgtcc 2220
atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc 2280
ctcatcaagc gacggcagca gaagatccgg aagtacacga tgcggagact gctgcaggaa 2340
acggagctgg tggagccgct gacacctagc ggagcgatgc ccaaccaggc gcagatgcgg 2400
atcctgaaag agacggagct gaggaaggtg aaggtgcttg gatctggcgc ttttggcaca 2460
gtctacaagg gcatctggat ccctgatggg gagaatgtga aaattccagt ggccatcaaa 2520
gtgttgaggg aaaacacatc ccccaaagcc aacaaagaaa tcttagacga agcatacgtg 2580
atggctggtg tgggctcccc atatgtctcc cgccttctgg gcatctgcct gacatccacg 2640
gtgcagctgg tgacacagct tatgccctat ggctgcctct tagaccatgt ccgggaaaac 2700
cgcggacgcc tgggctccca ggacctgctg aactggtgta tgcagattgc caaggggatg 2760
agctacctgg aggatgtgcg gctcgtacac agggacttgg ccgctcggaa cgtgctggtc 2820
aagagtccca accatgtcaa aattacagac ttcgggctgg ctcggctgct ggacattgac 2880
gagacagagt accatgcaga tgggggcaag gtgcccatca agtggatggc gctggagtcc 2940
attctccgcc ggcggttcac ccaccagagt gatgtgtgga gttatggtgt gactgtgtgg 3000
gagctgatga cttttggggc caaaccttac gatgggatcc cagcccggga gatccctgac 3060
ctgctggaaa agggggagcg gctgccccag ccccccatct gcaccattga tgtctacatg 3120
atcatggtca aatgttggat gattgactct gaatgtcggc caagattccg ggagttggtg 3180
tctgaattct cccgcatggc cagggacccc cagcgctttg tggtcatcca gaatgaggac 3240
ttgggcccag ccagtccctt ggacagcacc ttctaccgct cactgctgga ggacgatgac 3300
atgggggacc tggtggatgc tgaggagtat ctggtacccc agcagggctt cttctgtcca 3360
gaccctgccc cgggcgctgg gggcatggtc caccacaggc accgcagctc atctaccagg 3420
agtggcggtg gggacctgac actagggctg gagccctctg aagaggaggc ccccaggtct 3480
ccactggcac cctccgaagg ggctggctcc gatgtatttg atggtgacct gggaatgggg 3540
gcagccaagg ggctgcaaag cctccccaca catgacccca gccctctaca gcggtacagt 3600
gaggacccca cagtacccct gccctctgag actgatggct acgttgcccc cctgacctgc 3660
agcccccagc ctgaatatgt gaaccagcca gatgttcggc cccagccccc ttcgccccga 3720
gagggccctc tgcctgctgc ccgacctgct ggtgccactc tggaaaggcc caagactctc 3780
tccccaggga agaatggggt cgtcaaagac gtttttgcct ttgggggtgc cgtggagaac 3840
cccgagtact tgacacccca gggaggagct gcccctcagc cccaccctcc tcctgccttc 3900
agcccagcct tcgacaacct ctattactgg gaccaggacc caccagagcg gggggctcca 3960
cccagcacct tcaaagggac acctacggca gagaacccag agtacctggg tctggacgtg 4020
ccagtgtgaa ccagaaggcc aagtccgcag aagccctgat gtgtcctcag ggagcaggga 4080
aggcctgact tctgctggca tcaagaggtg ggagggccct ccgaccactt ccaggggaac 4140
ctgccatgcc aggaacctgt cctaaggaac cttccttcct gcttgagttc ccagatggct 4200
ggaaggggtc cagcctcgtt ggaagaggaa cagcactggg gagtctttgt ggattctgag 4260
gccctgccca atgagactct agggtccagt ggatgccaca gcccagcttg gccctttcct 4320
tccagatcct gggtactgaa agccttaggg aagctggcct gagaggggaa gcggccctaa 4380
gggagtgtct aagaacaaaa gcgacccatt cagagactgt ccctgaaacc tagtactgcc 4440
ccccatgagg aaggaacagc aatggtgtca gtatccaggc tttgtacaga gtgcttttct 4500
gtttagtttt tacttttttt gttttgtttt tttaaagatg aaataaagac ccagggggag 4560
aatgggtgtt gtatggggag gcaagtgtgg ggggtccttc tccacaccca ctttgtccat 4620
ttgcaaatat attttggaaa acagctaaaa aaaaaaaaaa aaaa 4664
<210> 2
<211> 1255
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu
1 5 10 15
Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys
20 25 30
Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His
35 40 45
Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr
50 55 60
Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val
65 70 75 80
Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu
85 90 95
Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr
100 105 110
Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro
115 120 125
Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser
130 135 140
Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln
145 150 155 160
Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn
165 170 175
Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys
180 185 190
His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser
195 200 205
Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys
210 215 220
Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys
225 230 235 240
Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu
245 250 255
His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val
260 265 270
Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg
275 280 285
Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu
290 295 300
Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln
305 310 315 320
Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys
325 330 335
Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu
340 345 350
Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys
355 360 365
Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp
370 375 380
Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe
385 390 395 400
Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro
405 410 415
Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg
420 425 430
Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu
435 440 445
Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly
450 455 460
Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val
465 470 475 480
Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr
485 490 495
Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His
500 505 510
Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys
515 520 525
Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys
530 535 540
Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys
545 550 555 560
Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys
565 570 575
Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp
580 585 590
Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu
595 600 605
Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln
610 615 620
Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys
625 630 635 640
Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser
645 650 655
Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly
660 665 670
Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg
675 680 685
Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly
690 695 700
Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu
705 710 715 720
Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys
725 730 735
Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile
740 745 750
Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu
755 760 765
Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg
770 775 780
Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu
785 790 795 800
Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg
805 810 815
Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly
820 825 830
Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala
835 840 845
Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe
850 855 860
Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp
865 870 875 880
Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg
885 890 895
Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val
900 905 910
Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala
915 920 925
Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro
930 935 940
Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met
945 950 955 960
Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe
965 970 975
Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu
980 985 990
Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu
995 1000 1005
Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr
1010 1015 1020
Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly
1025 1030 1035
Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg
1040 1045 1050
Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu
1055 1060 1065
Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser
1070 1075 1080
Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu
1085 1090 1095
Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser
1100 1105 1110
Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val
1115 1120 1125
Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro
1130 1135 1140
Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro
1145 1150 1155
Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu
1160 1165 1170
Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly
1175 1180 1185
Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala
1190 1195 1200
Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp
1205 1210 1215
Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro
1220 1225 1230
Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr
1235 1240 1245
Leu Gly Leu Asp Val Pro Val
1250 1255
<210> 3
<211> 4940
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc 60
ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg 120
cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc 180
atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc 240
ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg 300
cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat 360
gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag 420
agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga 480
gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt 540
ggacatgcac aaaagtgaga tacttcaaag attccagaag atatgccccg ggggtcctgg 600
aagccacaag tgtgcaccgg cacagacatg aagctgcggc tccctgccag tcccgagacc 660
cacctggaca tgctccgcca cctctaccag ggctgccagg tggtgcaggg aaacctggaa 720
ctcacctacc tgcccaccaa tgccagcctg tccttcctgc aggatatcca ggaggtgcag 780
ggctacgtgc tcatcgctca caaccaagtg aggcaggtcc cactgcagag gctgcggatt 840
gtgcgaggca cccagctctt tgaggacaac tatgccctgg ccgtgctaga caatggagac 900
ccgctgaaca ataccacccc tgtcacaggg gcctccccag gaggcctgcg ggagctgcag 960
cttcgaagcc tcacagagat cttgaaagga ggggtcttga tccagcggaa cccccagctc 1020
tgctaccagg acacgatttt gtggaaggac atcttccaca agaacaacca gctggctctc 1080
acactgatag acaccaaccg ctctcgggcc tgccacccct gttctccgat gtgtaagggc 1140
tcccgctgct ggggagagag ttctgaggat tgtcagagcc tgacgcgcac tgtctgtgcc 1200
ggtggctgtg cccgctgcaa ggggccactg cccactgact gctgccatga gcagtgtgct 1260
gccggctgca cgggccccaa gcactctgac tgcctggcct gcctccactt caaccacagt 1320
ggcatctgtg agctgcactg cccagccctg gtcacctaca acacagacac gtttgagtcc 1380
atgcccaatc ccgagggccg gtatacattc ggcgccagct gtgtgactgc ctgtccctac 1440
aactaccttt ctacggacgt gggatcctgc accctcgtct gccccctgca caaccaagag 1500
gtgacagcag aggatggaac acagcggtgt gagaagtgca gcaagccctg tgcccgagtg 1560
tgctatggtc tgggcatgga gcacttgcga gaggtgaggg cagttaccag tgccaatatc 1620
caggagtttg ctggctgcaa gaagatcttt gggagcctgg catttctgcc ggagagcttt 1680
gatggggacc cagcctccaa cactgccccg ctccagccag agcagctcca agtgtttgag 1740
actctggaag agatcacagg ttacctatac atctcagcat ggccggacag cctgcctgac 1800
ctcagcgtct tccagaacct gcaagtaatc cggggacgaa ttctgcacaa tggcgcctac 1860
tcgctgaccc tgcaagggct gggcatcagc tggctggggc tgcgctcact gagggaactg 1920
ggcagtggac tggccctcat ccaccataac acccacctct gcttcgtgca cacggtgccc 1980
tgggaccagc tctttcggaa cccgcaccaa gctctgctcc acactgccaa ccggccagag 2040
gacgagtgtg tgggcgaggg cctggcctgc caccagctgt gcgcccgagg gcactgctgg 2100
ggtccagggc ccacccagtg tgtcaactgc agccagttcc ttcggggcca ggagtgcgtg 2160
gaggaatgcc gagtactgca ggggctcccc agggagtatg tgaatgccag gcactgtttg 2220
ccgtgccacc ctgagtgtca gccccagaat ggctcagtga cctgttttgg accggaggct 2280
gaccagtgtg tggcctgtgc ccactataag gaccctccct tctgcgtggc ccgctgcccc 2340
agcggtgtga aacctgacct ctcctacatg cccatctgga agtttccaga tgaggagggc 2400
gcatgccagc cttgccccat caactgcacc cactcctgtg tggacctgga tgacaagggc 2460
tgccccgccg agcagagagc cagccctctg acgtccatca tctctgcggt ggttggcatt 2520
ctgctggtcg tggtcttggg ggtggtcttt gggatcctca tcaagcgacg gcagcagaag 2580
atccggaagt acacgatgcg gagactgctg caggaaacgg agctggtgga gccgctgaca 2640
cctagcggag cgatgcccaa ccaggcgcag atgcggatcc tgaaagagac ggagctgagg 2700
aaggtgaagg tgcttggatc tggcgctttt ggcacagtct acaagggcat ctggatccct 2760
gatggggaga atgtgaaaat tccagtggcc atcaaagtgt tgagggaaaa cacatccccc 2820
aaagccaaca aagaaatctt agacgaagca tacgtgatgg ctggtgtggg ctccccatat 2880
gtctcccgcc ttctgggcat ctgcctgaca tccacggtgc agctggtgac acagcttatg 2940
ccctatggct gcctcttaga ccatgtccgg gaaaaccgcg gacgcctggg ctcccaggac 3000
ctgctgaact ggtgtatgca gattgccaag gggatgagct acctggagga tgtgcggctc 3060
gtacacaggg acttggccgc tcggaacgtg ctggtcaaga gtcccaacca tgtcaaaatt 3120
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ccttacgatg ggatcccagc ccgggagatc cctgacctgc tggaaaaggg ggagcggctg 3360
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ttagggaagc tggcctgaga ggggaagcgg ccctaaggga gtgtctaaga acaaaagcga 4680
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ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4940
<210> 4
<211> 1240
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Met Pro Arg Gly Ser Trp Lys Pro Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met
1 5 10 15
Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg
20 25 30
His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr
35 40 45
Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu
50 55 60
Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro
65 70 75 80
Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn
85 90 95
Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr
100 105 110
Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg
115 120 125
Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro
130 135 140
Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys
145 150 155 160
Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala
165 170 175
Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu
180 185 190
Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly
195 200 205
Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln
210 215 220
Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys
225 230 235 240
Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu
245 250 255
Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly
260 265 270
Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr
275 280 285
Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn
290 295 300
Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser
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Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg
325 330 335
Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys
340 345 350
Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly
355 360 365
Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val
370 375 380
Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp
385 390 395 400
Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile
405 410 415
Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly
420 425 430
Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser
435 440 445
Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr
450 455 460
Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His
465 470 475 480
Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys
485 490 495
His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln
500 505 510
Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu
515 520 525
Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His
530 535 540
Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr
545 550 555 560
Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys
565 570 575
Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp
580 585 590
Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys
595 600 605
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610 615 620
Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile
625 630 635 640
Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe
645 650 655
Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met
660 665 670
Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser
675 680 685
Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu
690 695 700
Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr
705 710 715 720
Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala
725 730 735
Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile
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Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser
755 760 765
Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln
770 775 780
Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly
785 790 795 800
Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys
805 810 815
Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala
820 825 830
Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp
835 840 845
Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala
850 855 860
Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu
865 870 875 880
Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr
885 890 895
Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro
900 905 910
Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln
915 920 925
Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp
930 935 940
Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu
945 950 955 960
Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn
965 970 975
Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser
980 985 990
Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr
995 1000 1005
Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly
1010 1015 1020
Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg
1025 1030 1035
Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu
1040 1045 1050
Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser
1055 1060 1065
Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu
1070 1075 1080
Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser
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Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val
1100 1105 1110
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Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu
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Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly
1160 1165 1170
Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala
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Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp
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Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro
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Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr
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Leu Gly Leu Asp Val Pro Val
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<210> 5
<211> 4889
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc 60
ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg 120
cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc 180
atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc 240
ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg 300
cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat 360
gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag 420
agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga 480
gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt 540
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cccgagaccc acctggacat gctccgccac ctctaccagg gctgccaggt ggtgcaggga 660
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ctggctctca cactgataga caccaaccgc tctcgggcct gccacccctg ttctccgatg 1080
tgtaagggct cccgctgctg gggagagagt tctgaggatt gtcagagcct gacgcgcact 1140
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ggcgcctact cgctgaccct gcaagggctg ggcatcagct ggctggggct gcgctcactg 1860
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165 170 175
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Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn
260 265 270
Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His
275 280 285
Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys
290 295 300
Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu
305 310 315 320
Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly
325 330 335
Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp
340 345 350
Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln
355 360 365
Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala
370 375 380
Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val
385 390 395 400
Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln
405 410 415
Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly
420 425 430
Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His
435 440 445
Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu
450 455 460
His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala
465 470 475 480
Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr
485 490 495
Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu
500 505 510
Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg
515 520 525
His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val
530 535 540
Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr
545 550 555 560
Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro
565 570 575
Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala
580 585 590
Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp
595 600 605
Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile
610 615 620
Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val
625 630 635 640
Phe Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr
645 650 655
Met Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro
660 665 670
Ser Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr
675 680 685
Glu Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val
690 695 700
Tyr Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val
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Ala Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu
725 730 735
Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val
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Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr
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Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035
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Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu
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1100 1105 1110
Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro
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Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu
1130 1135 1140
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Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala
1160 1165 1170
Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp
1175 1180 1185
Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro
1190 1195 1200
Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr
1205 1210 1215
Leu Gly Leu Asp Val Pro Val
1220 1225
Claims (23)
- 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°에서 선택되는 3 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 II 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
- 제 1 항에 있어서,
분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 5.5°, 6.8°, 9.3°, 13.4°, 15.3°, 16.3°, 18.5°, 19.8°, 22.0°및 24.5°에 피크를 갖는, 결정. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
도 1 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인, 결정. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 178 ℃ 부근인, 결정. - 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°에서 선택되는 3 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 II 형 결정.
- 제 5 항에 있어서,
분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 8.3°, 14.8°, 17.3°, 18.0°, 19.1°, 20.3°, 21.0°, 22.5°, 23.0°및 26.2°에 피크를 갖는, 결정. - 제 5 항 또는 제 6 항에 있어서,
도 3 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인, 결정. - 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 182 ℃ 부근인, 결정. - 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°에서 선택되는 3 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 I 형 결정.
- 제 9 항에 있어서,
분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 9.9°, 11.7°, 13.2°, 17.7°, 18.1°, 18.8°및 20.8°에 피크를 갖는, 결정. - 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
도 5 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인, 결정. - 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 183 ℃ 부근인, 결정. - 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 V 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
- 제 13 항에 있어서,
분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.9°, 9.4°, 10.2°, 13.7°, 21.1°, 23.6°및 26.5°에 피크를 갖는, 결정. - 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서,
도 7 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인, 결정. - 제 13 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 151 ℃ 부근인, 결정. - 분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°에서 선택되는 4 개 이상에 피크를 갖는, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드의 푸마르산과의 I 형 결정으로서, 7-((3R,5S)-1-아크릴로일-5-메틸피롤리딘-3-일)-4-아미노-6-(시클로프로필에티닐)-N-((R)-1-페닐에틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르복사미드와 푸마르산의 몰비가 1 : 1 인, 결정.
- 제 17 항에 있어서,
분말 X 선 회절 스펙트럼에 있어서, 회절각 (2θ ± 0.2°) 이, 6.4°, 10.3°, 12.8°, 15.0°, 20.7°, 23.4°및 26.6°에 피크를 갖는, 결정. - 제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
도 9 에 나타내는 분말 X 선 회절 스펙트럼을 갖는 결정인, 결정. - 제 17 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
시차열-열중량 동시 측정에 의해 결정한 흡열 피크가 153 ℃ 부근인, 결정. - 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 기재된 결정을 함유하는, 의약 조성물.
- 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 기재된 결정을 함유하는, 경구 투여용의 의약 조성물.
- 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 기재된 결정을 함유하는, 항종양제.
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Breast Cancer Reseach, 18 (1), 8, p.1-9 (2016) |
Cancer Treatment Reviews, 40, p.770-780 (2014) |
Current Oncology, 25, p.S103-S114 (2018) |
Journal of Clinical Oncology, 26, p1993-1999 (2008) |
Journal of Clinical Oncology, 28, p1301-1307 (2010) |
Journal of Clinical Oncology, 28, p3271-3277 (2010) |
Journal of Clinical Oncology, 34, p945-952 (2016) |
Journal of Medicinal Chemistry, 26, p2999-3005 (2008) |
Journal of Medicinal Chemistry, 59, p10030-10066 (2016) |
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