RU2787992C1

RU2787992C1 - Пиримидиновое соединение или его соль

Info

Publication number: RU2787992C1
Application number: RU2021121401A
Authority: RU
Inventors: Масаюки НАКАМУРА; Такахиро АСАИ; Сатору Игути; Кей ОГУТИ
Original assignee: Тайхо Фармасьютикал Ко., Лтд.
Priority date: 2019-01-11
Filing date: 2020-01-10
Publication date: 2023-01-16

Abstract

Группа изобретений относится к фармацевтической химии и включает пиримидиновое производное формулы (I), его стереоизомер или фармацевтически приемлемую соль, фармацевтическую композицию, противоопухолевое средство, применение и способ лечения. Где в формуле (I) R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу; R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, или C1-C6 алкоксигруппу; R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 атомов фтора; R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу; и R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-3 заместителя, выбранных из атомов фтора и атомов хлора. Технический результат – соединение формулы (I), которое ингибирует активность HER2 и применяется для лечения опухоли, связанной с HER2. 8 н. и 13 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 49 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

[0001]

Настоящее изобретение относится к новому пиримидиновому соединению, обладающему HER2-ингибирующей активностью, или к его соли, и к фармацевтической композиции, содержащей указанное соединение в качестве активного ингредиента.

Уровень техники

[0002]

HER2 (который также называется «ErbB2») представляет собой рецепторную тирозинкиназу, принадлежащую к семейству ErbB.

HER2 считается протоонкогеном. Сообщалось, что амплификация гена HER2, сверхэкспрессия, мутация и тому подобное имеют место при различных типах рака. На основе данных неклинических и клинических исследований считается, что активация HER2 и нисходящих сигнальных путей играет важную роль в жизнеспособности и/или пролиферации и т.п. раковых клеток, связанных с генетическим нарушением, сверхэкспрессией и тому подобным HER2 (непатентный документ 1).

Соответственно, предполагается, что ингибитор, способный регулировать киназную активность HER2, ингибирует HER2 и нисходящие сигнальные пути в раковых клетках с амплификацией гена HER2, сверхэкспрессией или мутацией, с проявлением противоопухолевого действия на раковые клетки. Поэтому считается, что такой ингибитор полезен для лечения, увеличения продолжительности жизни или улучшения качества жизни больных раком.

[0003]

Сообщалось, что метастазы в головном мозге встречаются приблизительно в 25-40% случаев рака легких, приблизительно в 15-30% случаев рака молочной железы и в определенных процентах разных других случаев рака (непатентные документы 2 и 3). Фактически сообщалось, что метастаз в гловном мозге встречается приблизительно в 20-30% случаев HER2-положительного рака молочной железы (непатентный документ 4).

[0004]

Соединения, имеющие HER2-ингибирующую активность, такие как лапатиниб и нератиниб, одобрены в качестве терапевтических агентов против HER2-положительного рака молочной железы. Однако сообщается, что поскольку все эти терапевтические агенты являются субстратами p-gp или Bcrp, свойства проникновения в головной мозг этих агентов ограничены в неклинических испытаниях (непатентный документ 5). Фактически, в клинических испытаниях с использованием лапатиниба или нератиниба, не удавалось получить достаточного действия этих агентов в отношении метастатического рака головного мозга (непатентные документы 6, 7, 8 и 9).

С точки зрения контроля патологических состояний, включая очаг метастазирования в мозг, было бы желательно разработать ингибитор HER2, обладающий ингибирующей активностью в отношении HER2, а также обладающий свойствами проникновения в мозг.

[0005]

Сообщалось, что одна из HER2 мутаций, HER2ex20ins мутация является активирующей мутацией при раке легких и т.п. (непатентный документ 10), и в отношении такой HER2ex20ins мутации было проведено множество клинических испытаний. Однако на сегодняшний день способ ее терапевтического лечения еще не создан. Соответственно, было бы желательно разработать ингибитор HER2, обладающий ингибирующей активностью в отношении HER2ex20ins мутации.

Перечень ссылок

Патентные документы

[0006]

Патентный документ 1: Международная публикация WO 2017/146116

Патентный документ 2: Международная публикация WO 2017/038838

Непатентные документы

[0007]

Непатентный документ 1: Cancer Treatment Reviews, 40, pp. 770-780 (2014)

Непатентный документ 2: Current Oncology, 25, pp. S103-S114 (2018)

Непатентный документ 3: Breast Cancer Research, 18(1), 8, pp. 1-9 (2016)

Непатентный документ 4: Journal of Clinical Oncology, 28, pp. 3271-3277 (2010)

Непатентный документ 5: Journal of Medicinal Chemistry, 59, pp. 10030-10066 (2016)

Непатентный документ 6: Journal of Medicinal Chemistry, 26, pp. 2999-3005 (2008)

Непатентный документ 7: Journal of Clinical Oncology, 26, pp. 1993-1999 (2008)

Непатентный документ 8: Journal of Clinical Oncology, 28, pp. 1301-1307 (2010)

Непатентный документ 9: Journal of Clinical Oncology, 34, pp. 945-952 (2016)

Непатентный документ 10: Proc Natl Acad Sci USA., 106, pp. 474-479 (2009)

Сущность изобретения

[0008]

Задачей настоящего изобретения является предоставление нового пиримидинового соединения, которое ингибирует активность HER2 и проявляет свойства проникновения в головной мозг, или его соль, и содержащую их фармацевтическую композицию.

[0009]

В результате интенсивных исследований авторы настоящего изобретения обнаружили новое соединение, представленное следующей формулой (I), содержащее пиримидин в качестве основного каркаса. Это новое соединение отличается тем, что имеет структуру, в которой пирроло[2,3-d]пиримидин представляет собой основной каркас, замещенный в положении 5 карбоксамидом, замещенный в положении 6 алкином, и, кроме того, в положении 7 присутствует пирролидиновая группа, замещенная акриламидом.

[0010]

В частности, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает перечисленное ниже в п.п. [1] - [25]:

[1] Соединение, представленное приведенной ниже формулой (I) или его соль:

где R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу;

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп, каждая в качестве заместителя (заместителей) или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей), или C1-C6 алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода, или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей);

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу; и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-3 заместителя, выбранных из атомов фтора и атомов хлора.

[2] Соединение по указанному выше п.[1], представленное приведенной ниже формулой (II), или его соль:

[3] Соединение по указанному выше п.[1] или п.[2], или его соль, где R₂ представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителя (заместителей).

[4] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[3], или его соль, где R₃ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).

[5] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[4], или его соль, где R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[6] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[5], или его соль, где R₁ представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.

[7] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[6], или его соль, где R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, метоксиметильную группу или этоксиметильную группу.

[8] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[7], или его соль, где R₃ представляет собой метильную группу.

[9] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[8], или его соль, где R₄ представляет собой атом водорода.

[10] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[9], или его соль, где R₅ представляет собой фенильную группу.

[11] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[10], или его соль, где соединение выбирают из следующих (1)-(3):

(1) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид, и

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[12] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.

[13] Противоопухолевое средство, содержащее, в качестве активного ингредиента, соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.

[14] Противоопухолевое средство для перорального введения, содержащее, в качестве активного ингредиента, соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль.

[15] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения фармацевтической композиции.

[16] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения противоопухолевого средства.

[17] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения.

[18] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в качестве лекарственного средства.

[19] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении опухоли.

[20] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении опухоли путем перорального введения.

[21] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения по любому из указанных выше п.п.[1]-[12] или его соли нуждающемуся в этом субъекту.

[22] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в профилактике и/или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).

[23] Применение соединения по любому из указанных выше п.п. [1]-[11] или его соли для получения фармацевтической композиции, используемой в профилактике и/или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).

[24] Соединение по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соль для применения в качестве лекарственного средства, используемого в профилактике или лечении первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.).

[25] Способ профилактики и/или лечения первичной опухоли головного мозга или метастатической опухоли головного мозга (например, метастаза в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, рака пищевода, рака головы и шеи и т.п.), где способ включает введение эффективного количества соединения по любому из указанных выше п.п.[1]-[11] или его соли нуждающемуся в этом субъекту.

[0011]

Настоящее изобретение имеет следующие один или более полезных эффектов.

(1) В соответствии с настоящим изобретением предлагается новое соединение, представленное указанной выше формулой (I), которое подходит в качестве ингибитора HER2, имеющее свойства проникновения в головной мозг, его соль, фармацевтическая композиция, противоопухолевое средство или противоопухолевое средство для перорального введения.

(2) Соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной HER2 селективной ингибирующей активностью и проявляет ингибирующее действие на рост раковых клеточных линий.

(3) Можно ожидать, что соединение настоящего изобретения или его соль будут обладать свойствами проникновения в головной мозг.

(4) Можно ожидать, что соединение настоящего изобретения или его соль не будут иметь серьезных побочных эффектов, но будут обладать лечебными эффектами.

(5) Соединение настоящего изобретения или его соль проявляют превосходную ингибирующую активность в отношении мутанта HER2 (например, HER2, имеющего инсерционную мутацию YVMA в экзоне 20).

(6) Соединение настоящего изобретения или его соль используется в качестве профилактического и/или терапевтического агента при опухолях.

(7) Соединение настоящего изобретения или его соль осуществляет новое соединение, представленное указанной выше формулой (I), которое подходит для лечения больных раком, его соль, фармацевтическая композиция, противоопухолевое средство или противоопухолевое средство для перорального введения.

Краткое описание чертежей

[0012]

[Фиг.1] На фиг.1 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 2 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).

[Фиг.2] На фиг.2 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 11 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).

[Фиг.3] На фиг.3 показаны противоопухолевые эффекты соединения примера 12 в отношении моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc).

[Фиг.4] На фиг.4 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 2.

[Фиг.5] На фиг.5 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 11.

[Фиг.6] На фиг.6 показан процент снижения массы тела для моделей, включающих прямую трансплантацию в мозг экспрессирующей HER2 клеточной линии с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc), вызванный соединением примера 12.

Описание вариантов осуществления

[0013]

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, представленному приведенной ниже формулой (I), или его соли:

Один из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, представленному приведенной ниже формулой (II), или его соли:

[0014]

Соединение, представленное указанной выше формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, представляет собой соединение, содержащее пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве базовой структуры, и является новым соединением, не описанным ни в одной из вышеупомянутых публикаций известного уровня техники и т.п.

[0015]

В настоящем описании конкретные примеры «атома галогена» могут включать атом хлора, атом брома, атом фтора и атом йода. Среди них атом хлора и атом фтора являются предпочтительными, и атом фтора является более предпочтительным.

[0016]

В настоящем описании «алкильная группа» означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу. Конкретные примеры алкильной группы могут включать метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, пентильную группу и гексильную группу. Среди них линейная или разветвленная алкильная группа, содержащая 1-4 атомов углерода, является предпочтительной, и метильная группа и трет-бутильная группа являются более предпочтительными.

[0017]

В настоящем описании «галогеналкильная группа» означает линейную или разветвленную насыщенную углеводородную группу, в которой от одного до всех атомов водорода замещено описанными выше атомами галогена. Конкретные примеры галогеналкильной группы могут включать монофторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, 1-фторэтильную группу, 2-фторэтильную группу, 1,1-дифторэтильную группу, 1,2-дифторэтильную группу, 2,2-дифторэтильную группу, 2,2,2-трифторэтильную группу, монохлорметильную группу, дихлорметильную группу, трихлорметильную группу, 1-хлорэтильную группу, 2-хлорэтильную группу и 1,1-дихлорэтильную группу. Среди них линейная или разветвленная насыщенная углеводородная группа, содержащая 1-6 атомов углерода, в которой 1-3 атома водорода замещено описанными выше атомами галогена, является предпочтительной, и монофторметильная группа является более предпочтительной.

[0018]

В настоящем описании «циклоалкильная группа» означает моноциклическую или полициклическую насыщенную углеводородную группу, содержащую 3-7 атомов углерода. Конкретные примеры циклоалкильной группы могут включать циклопропильную группу, циклобутильную группу, циклопентильную группу, циклогексильную группу и циклогептильную группу. Среди них циклопропильная группа и циклобутильная группа являются предпочтительными.

[0019]

В настоящем описании «ароматическая углеводородная группа» означает циклический заместитель, состоящий из углерода и водорода, имеющий ненасыщенную связь, в которой 4e+2 (где e представляет собой целое число, равное 1 или более) электронов содержится в циклической π-электронной системе.

[0020]

В настоящем описании «C6-C14 ароматическая углеводородная группа» означает моноциклическую или полициклическую ароматическую углеводородную группу, содержащую 6-14 атомов углерода. Конкретные примеры C6-C14 ароматической углеводородной группы могут включать фенильную группу, нафтильную группу, тетрагидронафтильную группу и антраценильную группу. Среди них фенильная группа является предпочтительной.

[0021]

В настоящем описании «аралкильная группа» означает описанную выше алкильную группу, замещенную описанной выше ароматической углеводородной группой. Конкретные примеры аралкильной группы могут включать C7-C16 аралкильные группы, такие как бензильная группа, фенилэтильная группа, фенилпропильная группа, нафтилметильная группа и нафтилэтильная группа. Среди них бензильная группа является предпочтительной.

[0022]

В настоящем описании «ненасыщенная углеводородная группа» означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую 2-6 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную или тройную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры ненасыщенной углеводородной группы могут включать винильную группу, аллильную группу, метилвинильную группу, пропенильную группу, бутенильную группу, пентенильную группу, гексенильную группу, этинильную группу и 2-пропинильную группу. Среди них винильная группа, аллильная группа и 1-пропенильная группа являются предпочтительными.

[0023]

В настоящем описании «алкенильная группа» означает линейную или разветвленную углеводородную группу, содержащую 2-6 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры алкенильной группы могут включать C2-C6 алкенильные группы, такие как винильная группа, аллильная группа, 2-метил-2-пропенильная группа, изопропенильная группа, 1-, 2- или 3-бутенильная группа, 2-, 3- или 4-пентенильная группа, 2-метил-2-бутенильная группа, 3-метил-2-бутенильная группа и 5-гексенильная группа. Среди них винильная группа, аллильная группа, 1-пропенильная группа и 2-метил-2-пропенильная группа являются предпочтительными.

[0024]

В настоящем описании термин «алкинильная группа» означает линейную или разветвленную ненасыщенную углеводородную группу, содержащую по меньшей мере одну тройную связь (например, 1 или 2 и предпочтительно 1 тройную связь). Конкретные примеры алкинильной группы могут включать C2-C6 алкинильные группы, такие как этинильная группа, 1- или 2-пропинильная группа, 1-, 2- или 3-бутинильная группа и 1-метил-2-пропинильная группа. Среди них этинильная группа и 2-пропинильная группа являются предпочтительными.

[0025]

В настоящем описании «C3-C10 циклическая ненасыщенная углеводородная группа» означает моноциклическую или полициклическую углеводородную группу, содержащую 3-10 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Конкретные примеры С3-С10 циклической ненасыщенной углеводородной группы могут включать циклопропенильную группу, циклобутенильную группу, циклопентенильную группу, циклогексенильную группу, циклогептенильную группу, циклооктенильную группу и циклононильную группу. Среди них моноциклическая или полициклическая углеводородная группа, содержащая 3-7 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь, является предпочтительной, и циклопропенильная группа является более предпочтительной.

[0026]

В настоящем описании «алкоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкоксигруппы могут включать C1-C6 алкоксигруппы, такие как метоксигруппа, этоксигруппа, н-пропоксигруппа, изопропоксигруппа, н-бутоксигруппа, изобутоксигруппа, втор-бутоксигруппа, трет-бутоксигруппа, пентилоксигруппа, изопентилоксигруппа и гексилоксигруппа. Среди них метоксигруппа и этоксигруппа являются предпочтительными, и метоксигруппа является более предпочтительной.

[0027]

В настоящем описании «галогеналкоксигруппа» может включать в себя описанную выше алкоксигруппу, содержащую по меньшей мере один атом галогена (предпочтительно 1-13 и более предпочтительно 1-3 атома галогена). Конкретные примеры галогеналкоксигруппы могут включать C1-C6 галогеналкоксигруппы, такие как фторметоксигруппа, дифторметоксигруппа, трифторметоксигруппа, трихлорметоксигруппа, фторэтоксигруппа, 1,1,1-трифторэтоксигруппа, монофтор-н-пропоксигруппа, перфтор-н-пропоксигруппа и перфторизопропоксигруппа.

[0028]

В настоящем описании «циклоалкоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше циклоалкильную группу. Конкретные примеры циклоалкоксигруппы могут включать C3-C7 циклоалкоксигруппы, такие как циклопропоксигруппа, циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа, циклогексилоксигруппа и циклогептилоксигруппа. Среди них циклобутоксигруппа, циклопентилоксигруппа и циклогексилоксигруппа являются предпочтительными.

[0029]

В настоящем описании «аралкилоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше аралкильную группу. Конкретные примеры аралкилоксигруппы могут включать C7-C20 аралкилоксигруппы, такие как бензилоксигруппа, фенэтилоксигруппа, нафтилметилоксигруппа и флуоренилметилоксигруппа. Среди них бензилоксигруппа является предпочтительной.

[0030]

В настоящем описании «алкилтиогруппа» означает тиоксигруппу, содержащую описанную выше алкильную группу. Конкретные примеры алкилтиогруппы могут включать C1-C6 алкилтиогруппы, такие как метилтиогруппа, этилтиогруппа, н-пропилтиогруппа, изопропилтиогруппа, н-бутилтиогруппа, изобутилтиогруппа, трет-бутилтиогруппа, н-пентилтиогруппа, изопентилтиогруппа и гексилтиогруппа. Среди них метилтиогруппа, этилтиогруппа и н-пропилтиогруппа являются предпочтительными.

[0031]

В настоящем описании «алкоксиалкильная группа» означает описанную выше алкильную группу, содержащую по меньшей мере одну из описанных выше алкоксигрупп. Конкретные примеры алкоксиалкильной группы могут включать C1-C6 алкокси-C1-C6 алкильные группы, такие как метоксиметильная группа, этоксиэтильная группа, метоксиэтильная группа и метоксипропильная группа.

[0032]

В настоящем описании «алкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой 1 или 2 атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородной группой (группами), содержащей 1-6 атомов углерода. Конкретные примеры алкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них предпочтительной является аминогруппа, в которой 1 или 2 атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода.

[0033]

В настоящем описании «моноалкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой один атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры моноалкиламиногруппы могут включать метиламиногруппу, этиламиногруппу, н-пропиламиногруппу, изопропиламиногруппу, н-бутиламиногруппу, изобутиламиногруппу, втор-бутиламиногруппу, трет-бутиламиногруппу, пентиламиногруппу и гексиламиногруппу. Среди них предпочтительной является аминогруппа, в которой один атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода.

[0034]

В настоящем описании «диалкиламиногруппа» означает аминогруппу, в которой два атома водорода замещены линейной или разветвленной углеводородными группами, содержащими 1-6 атомов углерода. Конкретные примеры диалкиламиногруппы могут включать диметиламиногруппу, диэтиламиногруппу и этилметиламиногруппу. Среди них аминогруппа, в которой два атома водорода замещены линейными или разветвленными углеводородными группами, содержащими 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и диметиламиногруппа является более предпочтительной.

[0035]

В настоящем описании «ацильная группа» означает формильную группу, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой. Конкретные примеры ацильной группы могут включать ацетильную группу, н-пропаноильную группу, изопропаноильную группу, н-бутилоильную группу и трет-бутилоильную группу. Среди них формильная группа, в которой атом водорода замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и ацетильная группа является более предпочтительной.

[0036]

В настоящем описании «ацилоксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше ацильную группу. Конкретные примеры ацилоксигруппы могут включать алкилкарбонилоксигруппу и арилкарбонилоксигруппу. Среди них оксигруппа, в которой атом водорода формильной группы замещен линейной или разветвленной углеводородной группой, содержащей 1-3 атома углерода, является предпочтительной, и алкилкарбонилоксигруппа является более предпочтительной.

[0037]

В настоящем описании «алкоксикарбонильная группа» означает карбонильную группу, содержащую описанную выше алкоксигруппу. Конкретные примеры алкоксикарбонильной группы могут включать (C1-C6 алкокси)карбонильные группы, такие как метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропоксикарбонильная группа, изопропоксикарбонильная группа, бутоксикарбонильная группа, изобутоксикарбонильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, пентилоксикарбонильная группа, изопентилоксикарбонильная группа и гексилоксикарбонильная группа. Среди них трет-бутоксикарбонильная группа является предпочтительной.

[0038]

В настоящем описании «аралкилоксикарбонильная группа» означает карбонильную группу, содержащую описанную выше аралкилоксигруппу. Конкретные примеры аралкилоксикарбонильной группы могут включать (С6-С20 аралкил)оксикарбонильные группы, такие как бензилоксикарбонильная группа, фенэтилоксикарбонильная группа, нафтилметилоксикарбонильная группа и флуоренилметилоксикарбонильная группа. Среди них бензилоксикарбонильная группа является предпочтительной.

[0039]

В настоящем описании «насыщенная гетероциклическая группа» означает моноциклическую или полициклическую насыщенную гетероциклическую группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно 1-5, и более предпочтительно 1-3 гетероатома), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической группы могут включать азиридинильную группу, азетидинильную группу, имидазолидинильную группу, морфолиногруппу, пирролидинильную группу, пиперидинильную группу, пиперазинильную группу, тетрагидрофуранильную группу, тетрагидропиранильную группу, тетрагидротиофенильную группу, тиазолидинильную группу и оксазолидинильную группу. Среди них азетидинильная группа, пирролидинильная группа и пиперидинильная группа являются предпочтительными, и азетидинильная группа и пирролидинильная группа являются более предпочтительными.

[0040]

В настоящем описании «ненасыщенная гетероциклическая группа» означает моноциклическую или полициклическую полностью ненасыщенную или частично ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно 1-5 и более предпочтительно 1-3 гетероатома), выбранный из атомов азота, атомов кислорода и атомов серы. Конкретные примеры ненасыщенной гетероциклической группы могут включать имидазолильную группу, тиенильную группу, пирролильную группу, оксазолильную группу, изоксазолильную группу, тиазолильную группу, изотиазолильную группу, тиадиазолильную группу, оксадиазолильную группу, пиразолильную группу, триазолильную группу, тетразолильную группу, пиридильную группу, пиразильную группу, пиримидинильную группу, пиридазинильную группу, индолильную группу, изоиндолильную группу, индазолильную группу, триазолопиридильную группу, бензимидазолильную группу, бензоксазолильную группу, бензотиазолильную группу, бензотиенильную группу, фуранильную группу, бензофуранильную группу, пуринильную группу, хинолильную группу, изохинолильную группу, хиназолинильную группу, хиноксалильную группу, метилендиоксифенильную группу, этилендиоксифенильную группу и дигидробензофуранильную группу. Среди них имидазолильная группа, пиразолильная группа, тиазолильная группа, изоксазолильная группа и фуранильная группа являются предпочтительными; имидазолильная группа, пиразолильная группа и тиазолильная группа являются более предпочтительными; и имидазолильная группа является наиболее предпочтительной.

[0041]

В настоящем описании «насыщенная гетероциклическая оксигруппа» означает оксигруппу, содержащую описанную выше насыщенную гетероциклическую группу. Конкретные примеры насыщенной гетероциклической оксигруппы могут включать морфолинилоксигруппу, 1-пирролидинилоксигруппу, пиперидинооксигруппу, пиперазинилоксигруппу, 4-метил-1-пиперазинилоксигруппу, тетрагидрофуранилоксигруппу, тетрагидропиранилоксигруппу, тетрагидротиофенилоксигруппу, тиазолидинилоксигруппу и оксазолидинилоксигруппу. Среди них предпочтительными являются 1-пирролидиноксигруппа, пиперидинооксигруппа и пиперазинилоксигруппа.

[0042]

В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащая C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу.

[0043]

«C1-C4 алкоксигруппа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно содержащей C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R₁, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу. Здесь количество заместителей предпочтительно составляет 1-3, и наиболее предпочтительно - 1. Когда C1-C4 алкильная группа имеет два или более заместителей, заместители могут быть одинаковыми или могут отличаться друг от друга.

[0044]

«C1-C4 алкильная группа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно содержащей C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R₁, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно метильную группу или трет-бутильную группу.

[0045]

«C1-C4 алкильная группа, необязательно содержащая C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя», представленная R₁, предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, содержащую 1-3 метоксигрупп в качестве заместителей, более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу или 1-метил-1-метоксиэтильную группу, и наиболее предпочтительно метильную группу или трет-бутильную группу.

[0046]

«C3-C4 циклоалкильная группа», представленная R₁, предпочтительно представляет собой циклопропильную группу или циклобутильную группу, и наиболее предпочтительно - циклопропильную группу.

[0047]

R₁ предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую 1-3 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4 циклоалкильную группу.

[0048]

R₁ более предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую 1-3 метоксигрупп в качестве заместителей, или C3-C4 циклоалкильную группу.

[0049]

R₁ представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу или циклопропильную группу.

[0050]

R₁ представляет собой наиболее предпочтительно метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.

[0051]

В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей), или C1-C6 алкоксигруппу.

[0052]

«Атом галогена», представленный R₂, предпочтительно представляет собой атом фтора или атом хлора.

[0053]

«C1-C4 алкоксигруппа» в «C1-C6 алкильной группе, необязательно содержащая 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R₂, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.

[0054]

«C1-C6 алкильная группа, необязательно содержащая 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R₂, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0055]

«C1-C6 алкильная группа» в «C1-C6 алкильной группе, необязательно содержащей 1-5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей)», представленная R₂, предпочтительно представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей), (в частности, метильную группу, метоксиметильную группу, этоксиметильную группу, метоксиэтильную группу, этоксиэтильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу и т.д.), более предпочтительно C1-C6 алкильную группу, еще более предпочтительно - метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0056]

«C1-C6 алкоксигруппа», представленная R₂, предпочтительно представляет собой метоксигруппу или этоксигруппу, и наиболее предпочтительно - метоксигруппу.

[0057]

R₂ представляет собой предпочтительно C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, каждый в качестве заместителя (заместителей). В одном варианте осуществления R₂ представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей). В другом варианте осуществления R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу (предпочтительно метильную группу или этильную группу, и более предпочтительно - метильную группу), каждая из них необязательно содержит 1-5 метоксигрупп, этоксигрупп или атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).

[0058]

R₂ представляет собой более предпочтительно C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В одном варианте осуществления R₂ представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую 1-5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В другом варианте осуществления R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу (предпочтительно метильную группу или этильную группу, и более предпочтительно - метильную группу), каждая из которых необязательно имеет 1-5 метоксигрупп или этоксигрупп в качестве заместителя (заместителей). В еще одном варианте осуществления R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, метоксиметильную группу или этоксиметильную группу.

[0059]

R₂ даже более предпочтительно является C1-C6 алкильной группой.

[0060]

R₂ еще более предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

R₂ особенно предпочтительно представляет собой метильную группу или этильную группу.

R₂ наиболее предпочтительно представляет собой метильную группу.

[0061]

В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R₃ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).

[0062]

«C1-C4 алкильная группа» в «C1-C4 алкильной группе, необязательно, содержащей 1-5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей)», представленная R₃, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0063]

«C1-C4 алкильная группа», необязательно содержащая 1-5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей)», представленная R₃, предпочтительно представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, более предпочтительно метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0064]

R₃ предпочтительно представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей).

[0065]

R₃ представляет собой более предпочтительно метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, этильную группу, фторэтильную группу, дифторэтильную группу, трифторэтильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

[0066]

R₃ представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.

[0067]

R₃ представляет собой еще более предпочтительно метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу.

R₃ представляет собой особенно предпочтительно метильную группу или этильную группу.

R₃ наиболее предпочтительно представляет собой метильную группу.

[0068]

В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу.

[0069]

«C1-C4 алкильная группа», представленная R₄, предпочтительно представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, более предпочтительно - метильную группу или этильную группу, и наиболее предпочтительно - метильную группу.

[0070]

R₄ представляет собой предпочтительно атом водорода, метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу.

[0071]

R₄ представляет собой более предпочтительно атом водорода, метильную группу или этильную группу.

[0072]

R₄ представляет собой еще более предпочтительно атом водорода или метильную группу.

R₄ представляет собой наиболее предпочтительно атом водорода.

[0073]

В соединении, представленном формулой (I) или формулой (II) настоящего изобретения, R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую

1-3 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0074]

R₅ представляет собой предпочтительно фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0075]

R₅ представляет собой более предпочтительно фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу или 3,5-дифторфенильную группу.

[0076]

R₅ представляет собой наиболее предпочтительно фенильную группу.

[0077]

Соединение по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II),

R₁ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую C1-C4 алкоксигруппу в качестве заместителя, или C3-C4 циклоалкильную группу,

R₂ представляет собой C1-C6 алкильную группу,

R₃ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую от 1 до 5 атомов фтора в качестве заместителя (заместителей),

R₄ представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, и

R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

[0078]

Соединение по настоящему изобретению более предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (I) или формулой (II), или его соль, где в формуле (I) или формуле (II),

R₁ представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу, циклопропильную группу или циклобутильную группу,

R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу или трет-бутильную группу,

R₃ представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу, этильную группу, фторэтильную группу, дифторэтильную группу, трифторэтильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу,

R₄ представляет собой атом водорода, метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу или трет-бутильную группу, и

R₅ представляет собой фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-фторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 3,5-дифторфенильную группу, 2-хлорфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,4-дихлорфенильную группу или 3,5-дихлорфенильную группу.

[0079]

Соединение по настоящему изобретению еще более предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II),

R₁ представляет собой метильную группу, этильную группу, изопропильную группу, трет-бутильную группу, 1-метил-1-метоксиэтильную группу или циклопропильную группу,

R₂ представляет собой метильную группу,

R₃ представляет собой метильную группу, фторметильную группу, дифторметильную группу, трифторметильную группу или этильную группу,

R₄ представляет собой атом водорода, метильную группу или этильную группу, и

R₅ представляет собой фенильную группу, 2-фторфенильную группу, 3-хлорфенильную группу, 2,3-дифторфенильную группу, 2,4-дифторфенильную группу или 3,5-дифторфенильную группу.

[0080]

R₁ представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу,

R₂ представляет собой метильную группу,

R₃ представляет собой метильную группу, трифторметильную группу или этильную группу,

R₄ представляет собой атом водорода или метильную группу, и

R₅ представляет собой фенильную группу.

[0081]

Соединение по настоящему изобретению особенно предпочтительно представляет собой соединение, представленное формулой (II), или его соль, где в формуле (II),

R₂ представляет собой метильную группу,

R₃ представляет собой метильную группу,

R₄ представляет собой атом водорода, и

R₅ представляет собой фенильную группу.

[0082]

Конкретные примеры соединения настоящего изобретения могут включать соединения в следующих ниже примерах, но ими не ограничиваются.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих ниже (1)-(18), или к его соли. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к соединению, выбранному из следующих ниже (1)-(15), или к его соли.

(2) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(3) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(4) 7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(5) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(6) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(7) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(8) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(9) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(10) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(11) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропан-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(12) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(13) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(14) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(15) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(16) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(17) 7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид,

(18) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид, и

(19) 7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид.

[0083]

Предпочтительным примером соединения настоящего изобретения может быть соединение, выбранное из следующих (1)-(3), или его соль.

[0084]

< Способ получения соединения, представленного формулой (I) >

Соединение по настоящему изобретению может быть получено, например, следующим способом получения или способами, описанными в примерах. Однако способ получения соединения по настоящему изобретению не ограничивается этим примерами.

Соединение (I) настоящего изобретения может быть получено с помощью применения, например, следующего способа получения.

< Способ получения >

В указанном выше способе каждый из L₁, L₂ и L₃, которые являются одинаковыми или различными, представляют уходящую группу; каждый из P₁, и P₂, которые являются одинаковыми или различными, представляют защитную группу; и другие символы являются такими, как определено выше.

[0085]

< Стадия 1 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 3, путем проведения реакции Мицунобу между соединением, представленным формулой 1, и соединением, представленным формулой 2, которое является коммерчески доступным соединением, или может быть получено известным способом. Реакция Мицунобу обычно проводится в присутствии реагента Мицунобу и фосфинового реагента.

Соединение, представленное формулой 2 (в формуле 2, P₁ представляет защитную группу для аминогруппы), может быть использовано в количестве 1-10 эквивалентов, предпочтительно 1-3 эквивалента, в расчете на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

«Защитная группа для аминогруппы» не имеет особых ограничений при условии, что она выполняет защитную функцию. Примеры защитной группы для аминогруппы могут включать: аралкильные группы, такие как бензильная группа, п-метоксибензильная группа, 3,4-диметоксибензильная группа, о-нитробензильная группа, п-нитробензильная группа, бензгидрильная группа, тритильная группа и кумильная группа; низшие алканоильные группы, такие как, например, формильная группа, ацетильная группа, пропионильная группа, бутирильная группа, пивалоильная группа, трифторацетильная группа и трихлорацетильная группа; например, бензоильные группы; арилалканоильные группы, такие как, например, фенилацетильная группа и феноксиацетильная группа; низшие алкоксикарбонильные группы, такие как, например, метоксикарбонильная группа, этоксикарбонильная группа, пропилоксикарбонильная группа и трет-бутоксикарбонильная группа; аралкилоксикарбонильные группы, такие как, например, п-нитробензилоксикарбонильная группа и фенэтилоксикарбонильная группа; низшие алкилсилильные группы, такие как, например, триметилсилильная группа и трет-бутилдиметилсилильная группа; например, тетрагидропиранильные группы; например, триметилсилилэтоксиметильные группы; низшие алкилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, метилсульфонильная группа, этилсульфонильная группа и трет-бутилсульфонильная группа; низшие алкилсульфинильные группы и т.д., такие как, например, трет-бутилсульфинильная группа; арилсульфонильные группы и т.д., такие как, например, бензолсульфонильная группа и толуолсульфонильная группа; и имидные группы, такие как, например, фталимидная группа. Среди них трифторацетильная группа, ацетильная группа, трет-бутоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа, триметилсилилэтоксиметильная группа или кумильная группа являются особенно предпочтительными.

[0086]

В качестве реагента Мицунобу используется диэтилазодикарбоксилат, диизопропилазодикарбоксилат или тому подобное. Такой реагент Мицунобу используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на соединение, представленное формулой 1 (1 моль).

В качестве фосфинового реагента используется трифенилфосфин, трибутилфосфин, трифурилфосфин или тому подобное. Такой фосфиновый реагент используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на соединение, представленное формулой 1 (1 моль).

Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 3, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0087]

< Стадия 2 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 4, путем реакции соединения, представленного формулой 3, с аммиаком или его солью.

Аммиак или его соль могут быть использованы в количестве 1-1000 эквивалентов и предпочтительно 1-100 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 3 (1 моль).

Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 150°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 4, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0088]

< Стадия 3 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 5, путем реакции соединения, представленного формулой 4, в атмосфере монооксида углерода, например, в присутствии катализатора на основе переходного металла, основания и спирта.

На этой стадии давление монооксида углерода обычно составляет 1-20 атмосфер (0,1-2 МПа), предпочтительно 1-10 атмосфер (0,1-1 МПа).

Примеры спирта могут включать метанол, этанол, пропанол, изопропанол, диэтиламиноэтанол, изобутанол, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, 3-морфолинопропанол и диэтиламинопропанол.

Спирт используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-50 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0089]

Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем изобретении, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракистрифенилфосфинпалладий, палладий на угле и т.д.). Лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.) может быть добавлен при необходимости. Количество используемого катализатора на основе переходного металла различается в зависимости от типа катализатора. Катализатор на основе переходного металла используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-1 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-0,5 моль, в расчете на количество соединения 4 (1 моль). Лиганд используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0090]

Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Среди прочего, соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия, алкоксиды щелочных металлов, такие как трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия, органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин, и тому подобное, являются предпочтительными. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,1-50 моль, и предпочтительно приблизительно 1-20 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0091]

Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид, N-метилпирролидон и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 150°С.

[0092]

После завершения данной реакции сложноэфирную форму, соответствующую используемому спирту, или смесь сложноэфирной формы и соединения, представленного формулой 5, подвергают реакции гидролиза, чтобы она могла быть преобразована в соединение, представленное формулой 5.

В качестве такого основания предпочтительно используется гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития или тому подобное. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,5-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Например, вода, метанол, этанол, изопропанол, тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, N, N-диметилформамид и тому подобное могут использоваться по отдельности или в сочетании. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 5, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0093]

< Стадия 4 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 6 (где P₂ представляет собой защитную группу для карбоксильной группы), путем введения защитной группы в соединение, представленное формулой 5. Защита может быть осуществлена с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентного ему способа.

«Защитная группа для карбоксильной группы» не имеет особых ограничений при условии, что она выполняет защитную функцию. Примеры защитной группы для карбоксильной группы могут включать: низшие алкильные группы, такие как, например, метильная группа, этильная группа, пропильная группа, изопропильная группа и трет-бутильная группа; галогеновые низшие алкильные группы, такие как, например, 2,2,2-трихлорэтильная группа; низшие алкенильные группы, такие как, например, аллильная группа; например, триметилсилилэтоксиметильная группа; аралкильные группы, такие как, например, бензильная группа, п-метоксибензильная группа, п-нитробензильная группа, бензгидрильная группа и тритильная группа. В частности, метильная группа, этильная группа, трет-бутильная группа, аллильная группа, бензильная группа, п-метоксибензильная группа или триметилсилилэтоксиметильная группа является предпочтительной.

В данной реакции предпочтительно вводится защитная группа, такая как, например, группа сложного трет-бутилового эфира, группа сложного метилового эфира или группа сложного этилового эфира.

Агентом защитной группы, используемым в настоящей реакции, может быть, например, 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевина. Такой агент защитной группы используется в количестве, как правило, приблизительно 1-50 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 5 (1 моль).

Растворитель не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры растворителя могут включать углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран, трет-бутилметиловый эфир и т.д.), спирты (например, метанол, этанол и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), воду, и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 6, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0094]

< Стадия 5 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 7 (где L₃ представляет атом галогена), галогенированием соединения, представленного формулой 6. Галогенирование может быть проведено способом с использованием фтора, хлора, брома, йода и т.д., или способом с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида или N-йодсукцинимида, и т.д. В рассматриваемой реакции способ с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида и т.д. является предпочтительным.

N-хлорсукцинимид, N-бромсукцинимид, N-йодсукцинимид и т.д. могут быть использованы в количестве от 1 до 10 эквивалентов и предпочтительно от 1 до 3 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 6 (1 моль).

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 7, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0095]

< Стадия 6 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 8, путем удаления защитной группы для аминогруппы (Р₁ в формуле 7) из соединения, представленного формулой 7 (снятие защиты). Такое снятие защиты может быть осуществлено с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1999), или эквивалентного ему способа.

Защитная группа может представлять собой, например, трет-бутилоксикарбонил. Когда такая трет-бутилоксикарбонильная группа используется, например, в качестве защитной группы, снятие защиты предпочтительно проводится в кислых условиях. Примеры используемой в данном документе кислоты могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.

Кислоту предпочтительно используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 7 (1 моль).

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до 100°С, и предпочтительно от 0°С до 50°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 8, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0096]

< Стадия 7 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 9, путем проведения реакции амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галогенидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты.

В случае использования галогенида акриловой кислоты или ангидрида акриловой кислоты, такой галогенид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты используется в количестве, составляющем, как правило, приблизительно 0,5-10 моль, и предпочтительно приблизительно 1-5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль). Следует отметить, что рассматриваемый галогенид акриловой кислоты или ангидрид акриловой кислоты могут быть получены в виде коммерчески доступного продукта или могут быть получены в соответствии с известным способом.

Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание. Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, изопропилэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль).

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особых ограничений, при условии, что он не влияет на реакцию. Примеры используемого здесь растворителя могут включать спирты (например, метанол и т.д.), углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и т.д.), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ, 1,2-дихлорэтан и т.д.), нитрилы (например, ацетонитрил и т.д.), простые эфиры (например, диметоксиэтан, тетрагидрофуран и т.д.), апротонные полярные растворители (например, N, N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид и т.д.), и их смеси. Время реакции составляет 0,1-100 ч и предпочтительно 0,5-24 ч. Вслед за этим, температура реакции составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, и предпочтительно от 0°С до 100°С.

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 9, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0097]

< Стадия 8 >

Эта стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 10, путем проведения реакции Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетилена, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть получено известным способом.

Производное ацетилена может быть использовано в количестве 1-50 эквивалентов и предпочтительно 1-10 эквивалентов, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в настоящем изобретении, могут включать палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия, тетракистрифенилфосфинпалладий, дихлорбис(трифенилфосфин)палладий, дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий и т.д.) и никелевые катализаторы (например, хлорид никеля и т.д.). При необходимости может быть добавлен лиганд (например, трифенилфосфин, три-трет-бутилфосфин и т.д.), и медный катализатор (например, йодид меди, бромид меди или хлорид меди) или тому подобное может использоваться в качестве сокатализатора. Количество используемого катализатора на основе переходного металла различается в зависимости от типа катализатора. Катализатор на основе переходного металла используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-1 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-0,5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Лиганд используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,01-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль). Медный катализатор используется в количестве, как правило, приблизительно 0,0001-4 моль, и предпочтительно приблизительно 0,010-2 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

[0098]

Примеры основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия, дисилазид калия и т.д.). Среди них предпочтительные примеры основания могут включать: соли щелочных металлов, такие как карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия и фосфат калия; алкоксиды щелочных металлов, такие как натрий-трет-бутоксид и калий-трет-бутоксид; и органические амины, такие как триэтиламин и диизопропилэтиламин. Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 0,1-10 моль, и предпочтительно приблизительно 1-5 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 10, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0099]

< Стадия 9 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой 11, путем снятия защитной группы для карбоксильной группы (Р₂ в формуле 10) соединения, представленного формулой 10. Снятие защиты может быть осуществлено с помощью широко известного способа, например, с помощью способа, описанного в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», third edition, T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентного ему способа.

Защитная группа может представлять собой, например, группу сложного трет-бутилового эфира. Когда такая группа сложного трет-бутилового эфира используется, например, в качестве защитной группы, снятие защиты предпочтительно проводится в кислых условиях. Примеры используемой в данном документе кислоты могут включать соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и тозиловую кислоту.

Кислоту предпочтительно используют в количестве приблизительно от 1 до 100 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль).

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 11, может быть выделено и очищено известными способами выделения и очистки, или может быть направлено на следующую стадию без выделения и очистки.

[0100]

< Стадия 10 >

Данная стадия представляет собой способ получения соединения, представленного формулой (I), путем проведения реакции амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом.

Амидирование может быть осуществлено в соответствии с общеизвестным способом. Примеры способа амидирования могут включать способ проведения реакции в присутствии конденсирующего агента, и способ, включающий активацию части карбоновой кислоты в соответствии с традиционно известным способом для получения реакционноспособного производного, и затем проведение амидирования между производным и амином (для обоих способов см. «Peptide Gosei no Kiso to Jikken (Principle of Peptide Synthesis and Experiments)» (Nobuo IZUMIYA et al., Maruzen Co., Ltd., 1983)).

Примеры конденсирующего агента могут включать N, N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N, N'-диизопропилкарбодиимид (DIC), 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимидгидрохлорид (WSC), дифенилфосфорилазид (DPPA), бензoтриазол-1-ил-окситрисдиметиламинофосфонийгексафторфосфат (BOP), бензoтриазол-1-ил-окситрипирролидинoфосфонийгексафторфосфат (PyBOP), 7-азабензотриазол-1-илoкситриспирролидинoфосфонийфосфат (PyAOP), бромтриспирролидинoфосфонийгексафторфосфат (BroP), хлортрис(пирролидин-1-ил)фосфонийгексафторфосфат (PyCroP), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензoтриазин-4(3H)-он (DEPBT), O-(азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилуронийгексафторфосфат (HATU), и 4-(5,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолингидрохлорид (DMTMM). Примеры добавки, используемой при этом, могут включать 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt), и N-гидроксисукцинимид (HOSu). Такие агенты используются в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 11 (1 моль).

[0101]

Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание. Примеры такого основания могут включать органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин, N, N-диметиланилин и т.д.), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и т.д.), гидриды металлов (например, гидрид калия, гидрид натрия и т.д.), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия и т.д.). Основание используется в количестве, как правило, приблизительно 1-100 моль, и предпочтительно приблизительно 1-10 моль, в расчете на количество соединения, представленного формулой 11 (1 моль).

Полученное таким образом соединение (I) может быть выделено и очищено в соответствии с известными способами выделения и очистки, такими как, например, концентрирование, концентрирование под вакуумом, кристаллизация, сольвентная экстракция, переосаждение или хроматография.

В описанном выше способе получения, стадии, начиная от «введения защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5» (стадия 4) до «реакции амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом» (стадия 10), последовательно выполняются в данном порядке. Однако порядок выполнения этих стадий может быть изменен. Кроме того, «введение защитной группы в карбоксильную группу соединения, представленного формулой 5» (стадия 4) и «удаление защитной группы для карбоксигруппы из соединения, представленного формулой 10» (стадия 9), может быть исключено.

[0102]

В частности, отдельные стадии выполняются в порядке: «реакция амидирования между карбоксильной группой соединения, представленного формулой 11, и амином, который является коммерчески доступным продуктом или может быть получен известным способом» (стадия 10), «галогенирование соединения, представленного формулой 6» (стадия 5), «удаление защитной группы для аминогруппы из соединения, представленного формулой 7» (стадия 6), «реакция амидирования между аминогруппой соединения, представленного формулой 8, и галогенидом акриловой кислоты или ангидридом акриловой кислоты» (стадия 7), и «реакция Соногаширы между соединением, представленным формулой 9, и производным ацетилена, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть получено известным способом, когда L3 соединения, представленного формулой 9, имеет уходящую группу, такую как галоген» (стадия 8), так что соответствующее соединение может быть приведено к соединению, представленному формулой (I). Условия, применяемые на индивидуальных стадиях, являются такими же, как описанные выше условия.

[0103]

Когда соединение настоящего изобретения имеет изомер, такой как оптический изомер, стереоизомер, ротационный изомер или таутомер, все такие изомеры или их смеси включены в соединение настоящего изобретения, если не утверждается иное. Например, когда соединение настоящего изобретения имеет оптический изомер, в соединение настоящего изобретения включен как рацемат, так и оптический изомер, полученный в результате рацемического разделения, если не утверждается иное.

[0104]

Соль соединения настоящего изобретения означает фармацевтически приемлемую соль, и она может быть, например, аддитивной солью основания или аддитивной солью кислоты.

[0105]

Соединение настоящего изобретения или его соль также включает пролекарство. «Пролекарство» означает соединение, которое превращается в соединение настоящего изобретения или его соль в результате реакции с ферментом, желудочным соком или т.п. в физиологических условиях в живом организме; то есть, соединение, которое инициирует ферментативное окисление, восстановление, гидролиз и т.п., так что оно превращается в соединение настоящего изобретения или его соль, или соединение, которое подвергается гидролизу и т.п. за счет действия желудочного сока или тому подобного, так что оно превращается в соединение настоящего изобретения или его соль. В остальных случаях это также может быть соединение, которое превращается в соединение настоящего изобретения или его соль в физиологических условиях, как описано в «Iyakuhin no Kaihatsu (Development of Pharmaceutical Products),» Hirokawa Shoten, 1990, Vol. 7, Bunshi Sekkei (Molecular Designing), pp. 163-198.

[0106]

Соединение настоящего изобретения или его соль может быть аморфным веществом или кристаллом. Хотя кристаллическая форма указанного может являться монокристаллом или полиморфной смесью, они включены в соединение по настоящему изобретению или его соль. Кристалл может быть получен кристаллизацией соединения настоящего изобретения или его соли с использованием известного способа кристаллизации. Соединение настоящего изобретения или его соль могут представлять собой или сольват (например, гидрат и т.д.) или не-сольват, при этом и то и другое включено в соединение настоящего изобретения или его соль. Соединения, меченные радиоизотопами (например, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ¹²⁵I и т.д.) и тому подобное, также включены в соединение настоящего изобретения или его соль.

[0107]

Соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении HER2. Кроме того, соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной селективностью в отношении HER2. Соответственно, соединение настоящего изобретения или его соль пригодны в качестве противоопухолевого средства против злокачественной опухоли, имеющей сверхэкспрессию HER2, амплификацию гена HER2, мутацию HER2 и т.п. Кроме того, поскольку у мышей не было обнаружено значительного снижения веса, настоящее соединение или его соль являются предпочтительными в том смысле, что они имеют мало побочных эффектов.

В настоящем описании термин «HER2» включает HER2 человека или отличного от человека млекопитающего, и предпочтительно является HER2 человека. Кроме того, термин «HER2» включает изоформы.

[0108]

Поскольку соединение настоящего изобретения или его соль обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении HER2, оно годится в качестве лекарственного средства для профилактики или лечения заболеваний, связанных с HER2.

«Заболевание, связанное с HER2», означает заболевание, при котором снижение частоты случаев или ремиссия, облегчение и/или полная реверсия его симптомов достигается путем удаления, подавления и/или ингибирования функции HER2. Примеры таких заболеваний могут включать злокачественные опухоли, но не ограничиваются ими. Предпочтительные примеры заболевания могут включать злокачественные опухоли, имеющие сверхэкспрессию HER2, амплификацию гена HER2 или мутацию HER2.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает ингибитор HER2, содержащий соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ ингибирования HER2, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения по настоящему изобретению или его соли для получения ингибитора HER2. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве ингибитора HER2. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для ингибирования HER2. В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для профилактики или лечения заболевания, связанного с HER2.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает противоопухолевое средство, содержащее соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения противоопухолевого средства.

Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает соединение настоящего изобретения или его соль для применения при профилактике и/или лечении опухоли.

[0109]

Соединение согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения или его соль селективно ингибирует HER2 дикого типа, а также мутант HER2, имеющий одну или более инсерционных мутаций, точечных мутаций, делеционных мутаций и т.п. в домене HER2, такие как инсерционная мутация экзона 20. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предусматривает: соединение, обладающее ингибирующей активностью в отношении HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, которая является одной из инсерционных мутаций экзона 20, или его соль; или лекарственное средство или фармацевтическую композицию, содержащие указанное. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает ингибитор HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п., где ингибитор содержит соединение настоящего изобретения или его соль. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ ингибирования HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п., где способ включает введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения ингибитора HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве ингибитора HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения настоящего изобретения или его соли для ингибирования HER2 дикого типа и мутанта HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п. В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для профилактики или лечения заболевания, связанного с HER2 дикого типа и мутантом HER2, включая HER2 с инсерционной мутацией YVMA, и т.п.

[0110]

Ген человеческого HER2 показан, например, в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 5. Белок HER2 дикого типа состоит из аминокислотной последовательности, указанной, например, в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, или SEQ ID NO: 6. Информация о нуклеотидной последовательности гена человеческого HER2 и информация о аминокислотной последовательности белка HER2 дикого типа могут быть получены, например, из номеров доступа NM_004448, NM_001289936, NM_001005862, или подобных.

[0111]

В нескольких вариантах осуществления, соединение одного из вариантов осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G309A, S310F, R678Q, L755S, L755_T759del, D769H, A775_G776insYVMA, V777L, V842I и R896C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A775_G776insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2 в качестве эталона.

В нескольких вариантах осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G294A, S295F, R663Q, L740S, L740_T744del, D754H, A760_G761insYVMA, V762L, V827I и R881C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A760_G761insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4 в качестве эталона.

В нескольких вариантах осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего одну или более мутаций из G279A, S280F, R648Q, L725S, L725_T729del, D739H, A745_G746insYVMA, V747L, V812I и R866C, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6 в качестве эталона. В другом варианте осуществления соединение одного варианта осуществления настоящего изобретения или его соль проявляет ингибирующую активность в отношении мутанта HER2, содержащего A745_G746insYVMA, с использованием аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6 в качестве эталона.

[0112]

Далее, в нескольких вариантах осуществления, в отношении мутации в определенной изоформе HER2, даже когда положение мутации отличается от положения аминокислоты, показанного в SEQ ID NO: 2, вследствие делеции или инсерции аминокислоты (аминокислот), имеется ввиду, что мутация является такой же, как и мутация в положении, соответствующем положению аминокислоты, показанному в SEQ ID NO: 2. Так, например, глицин в положении 309 в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2, соответствует глицину в положении 294 в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4. Например, термин «G309A» означает, что глицин в положении 309 в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2, мутирует в аланин. Так как такой «G309» находится в положении, соответствующем аминокислоте в положении 294 в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, «G294A» в HER2, состоящем из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, соответствует «G309A» в HER2, показанном в SEQ ID NO: 2. Кроме того, положение аминокислоты в SEQ ID NO: 2, которое соответствует определенной аминокислоте в определенной изоформе HER2, может быть подтверждено множественным выравниванием BLAST.

[0113]

Список последовательностей

[Таблица А]

SEQ ID NO: 1
Номер доступа: NM_004448
CDS: 262..4029
1 gcttgctccc aatcacagga gaaggaggag gtggaggagg agggctgctt gaggaagtat
61 aagaatgaag ttgtgaagct gagattcccc tccattggga ccggagaaac caggggagcc
121 ccccgggcag ccgcgcgccc cttcccacgg ggccctttac tgcgccgcgc gcccggcccc
181 cacccctcgc agcaccccgc gccccgcgcc ctcccagccg ggtccagccg gagccatggg
241 gccggagccg cagtgagcac catggagctg gcggccttgt gccgctgggg gctcctcctc
301 gccctcttgc cccccggagc cgcgagcacc caagtgtgca ccggcacaga catgaagctg
361 cggctccctg ccagtcccga gacccacctg gacatgctcc gccacctcta ccagggctgc
421 caggtggtgc agggaaacct ggaactcacc tacctgccca ccaatgccag cctgtccttc
481 ctgcaggata tccaggaggt gcagggctac gtgctcatcg ctcacaacca agtgaggcag
541 gtcccactgc agaggctgcg gattgtgcga ggcacccagc tctttgagga caactatgcc
601 ctggccgtgc tagacaatgg agacccgctg aacaatacca cccctgtcac aggggcctcc
661 ccaggaggcc tgcgggagct gcagcttcga agcctcacag agatcttgaa aggaggggtc
721 ttgatccagc ggaaccccca gctctgctac caggacacga ttttgtggaa ggacatcttc
781 cacaagaaca accagctggc tctcacactg atagacacca accgctctcg ggcctgccac
841 ccctgttctc cgatgtgtaa gggctcccgc tgctggggag agagttctga ggattgtcag
901 agcctgacgc gcactgtctg tgccggtggc tgtgcccgct gcaaggggcc actgcccact
961 gactgctgcc atgagcagtg tgctgccggc tgcacgggcc ccaagcactc tgactgcctg
1021 gcctgcctcc acttcaacca cagtggcatc tgtgagctgc actgcccagc cctggtcacc
1081 tacaacacag acacgtttga gtccatgccc aatcccgagg gccggtatac attcggcgcc
1141 agctgtgtga ctgcctgtcc ctacaactac ctttctacgg acgtgggatc ctgcaccctc
1201 gtctgccccc tgcacaacca agaggtgaca gcagaggatg gaacacagcg gtgtgagaag
1261 tgcagcaagc cctgtgcccg agtgtgctat ggtctgggca tggagcactt gcgagaggtg
1321 agggcagtta ccagtgccaa tatccaggag tttgctggct gcaagaagat ctttgggagc
1381 ctggcatttc tgccggagag ctttgatggg gacccagcct ccaacactgc cccgctccag
1441 ccagagcagc tccaagtgtt tgagactctg gaagagatca caggttacct atacatctca
1501 gcatggccgg acagcctgcc tgacctcagc gtcttccaga acctgcaagt aatccgggga
1561 cgaattctgc acaatggcgc ctactcgctg accctgcaag ggctgggcat cagctggctg
1621 gggctgcgct cactgaggga actgggcagt ggactggccc tcatccacca taacacccac
1681 ctctgcttcg tgcacacggt gccctgggac cagctctttc ggaacccgca ccaagctctg
1741 ctccacactg ccaaccggcc agaggacgag tgtgtgggcg agggcctggc ctgccaccag
1801 ctgtgcgccc gagggcactg ctggggtcca gggcccaccc agtgtgtcaa ctgcagccag
1861 ttccttcggg gccaggagtg cgtggaggaa tgccgagtac tgcaggggct ccccagggag
1921 tatgtgaatg ccaggcactg tttgccgtgc caccctgagt gtcagcccca gaatggctca
1981 gtgacctgtt ttggaccgga ggctgaccag tgtgtggcct gtgcccacta taaggaccct
2041 cccttctgcg tggcccgctg ccccagcggt gtgaaacctg acctctccta catgcccatc
2101 tggaagtttc cagatgagga gggcgcatgc cagccttgcc ccatcaactg cacccactcc
2161 tgtgtggacc tggatgacaa gggctgcccc gccgagcaga gagccagccc tctgacgtcc
2221 atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc
2281 ctcatcaagc gacggcagca gaagatccgg aagtacacga tgcggagact gctgcaggaa
2341 acggagctgg tggagccgct gacacctagc ggagcgatgc ccaaccaggc gcagatgcgg
2401 atcctgaaag agacggagct gaggaaggtg aaggtgcttg gatctggcgc ttttggcaca
2461 gtctacaagg gcatctggat ccctgatggg gagaatgtga aaattccagt ggccatcaaa
2521 gtgttgaggg aaaacacatc ccccaaagcc aacaaagaaa tcttagacga agcatacgtg
2581 atggctggtg tgggctcccc atatgtctcc cgccttctgg gcatctgcct gacatccacg
2641 gtgcagctgg tgacacagct tatgccctat ggctgcctct tagaccatgt ccgggaaaac
2701 cgcggacgcc tgggctccca ggacctgctg aactggtgta tgcagattgc caaggggatg
2761 agctacctgg aggatgtgcg gctcgtacac agggacttgg ccgctcggaa cgtgctggtc
2821 aagagtccca accatgtcaa aattacagac ttcgggctgg ctcggctgct ggacattgac
2881 gagacagagt accatgcaga tgggggcaag gtgcccatca agtggatggc gctggagtcc
2941 attctccgcc ggcggttcac ccaccagagt gatgtgtgga gttatggtgt gactgtgtgg
3001 gagctgatga cttttggggc caaaccttac gatgggatcc cagcccggga gatccctgac
3061 ctgctggaaa agggggagcg gctgccccag ccccccatct gcaccattga tgtctacatg
3121 atcatggtca aatgttggat gattgactct gaatgtcggc caagattccg ggagttggtg
3181 tctgaattct cccgcatggc cagggacccc cagcgctttg tggtcatcca gaatgaggac
3241 ttgggcccag ccagtccctt ggacagcacc ttctaccgct cactgctgga ggacgatgac
3301 atgggggacc tggtggatgc tgaggagtat ctggtacccc agcagggctt cttctgtcca
3361 gaccctgccc cgggcgctgg gggcatggtc caccacaggc accgcagctc atctaccagg
3421 agtggcggtg gggacctgac actagggctg gagccctctg aagaggaggc ccccaggtct
3481 ccactggcac cctccgaagg ggctggctcc gatgtatttg atggtgacct gggaatgggg
3541 gcagccaagg ggctgcaaag cctccccaca catgacccca gccctctaca gcggtacagt
3601 gaggacccca cagtacccct gccctctgag actgatggct acgttgcccc cctgacctgc
3661 agcccccagc ctgaatatgt gaaccagcca gatgttcggc cccagccccc ttcgccccga
3721 gagggccctc tgcctgctgc ccgacctgct ggtgccactc tggaaaggcc caagactctc
3781 tccccaggga agaatggggt cgtcaaagac gtttttgcct ttgggggtgc cgtggagaac
3841 cccgagtact tgacacccca gggaggagct gcccctcagc cccaccctcc tcctgccttc
3901 agcccagcct tcgacaacct ctattactgg gaccaggacc caccagagcg gggggctcca
3961 cccagcacct tcaaagggac acctacggca gagaacccag agtacctggg tctggacgtg
4021 ccagtgtgaa ccagaaggcc aagtccgcag aagccctgat gtgtcctcag ggagcaggga
4081 aggcctgact tctgctggca tcaagaggtg ggagggccct ccgaccactt ccaggggaac
4141 ctgccatgcc aggaacctgt cctaaggaac cttccttcct gcttgagttc ccagatggct
4201 ggaaggggtc cagcctcgtt ggaagaggaa cagcactggg gagtctttgt ggattctgag
4261 gccctgccca atgagactct agggtccagt ggatgccaca gcccagcttg gccctttcct
4321 tccagatcct gggtactgaa agccttaggg aagctggcct gagaggggaa gcggccctaa
4381 gggagtgtct aagaacaaaa gcgacccatt cagagactgt ccctgaaacc tagtactgcc
4441 ccccatgagg aaggaacagc aatggtgtca gtatccaggc tttgtacaga gtgcttttct
4501 gtttagtttt tacttttttt gttttgtttt tttaaagatg aaataaagac ccagggggag
4561 aatgggtgtt gtatggggag gcaagtgtgg ggggtccttc tccacaccca ctttgtccat
4621 ttgcaaatat attttggaaa acagctaaaa aaaaaaaaaa aaaa

SEQ ID NO: 2
Номер доступа: NM_004448
MELAALCRWG LLLALLPPGA ASTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL 60
ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG 120
DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA 180
LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC 240
AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP 300
YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN 360
IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP 420
DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV 480
PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC 540
VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC 600
PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG 660
ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL 720
RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAGVGSP 780
YVSRLLGICL TSTVQLVTQL MPYGCLLDHV RENRGRLGSQ DLLNWCMQIA KGMSYLEDVR 840
LVHRDLAARN VLVKSPNHVK ITDFGLARLL DIDETEYHAD GGKVPIKWMA LESILRRRFT 900
HQSDVWSYGV TVWELMTFGA KPYDGIPARE IPDLLEKGER LPQPPICTID VYMIMVKCWM 960
IDSECRPRFR ELVSEFSRMA RDPQRFVVIQ NEDLGPASPL DSTFYRSLLE DDDMGDLVDA 1020
EEYLVPQQGF FCPDPAPGAG GMVHHRHRSS STRSGGGDLT LGLEPSEEEA PRSPLAPSEG 1080
AGSDVFDGDL GMGAAKGLQS LPTHDPSPLQ RYSEDPTVPL PSETDGYVAP LTCSPQPEYV 1140
NQPDVRPQPP SPREGPLPAA RPAGATLERP KTLSPGKNGV VKDVFAFGGA VENPEYLTPQ 1200
GGAAPQPHPP PAFSPAFDNL YYWDQDPPER GAPPSTFKGT PTAENPEYLG LDVPV 1255

SEQ ID NO: 3
Номер доступа: NM_001289936
CDS: 583..4305
1 aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc
61 ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg
121 cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc
181 atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc
241 ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg
301 cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat
361 gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag
421 agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga
481 gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt
541 ggacatgcac aaaagtgaga tacttcaaag attccagaag atatgccccg ggggtcctgg
601 aagccacaag tgtgcaccgg cacagacatg aagctgcggc tccctgccag tcccgagacc
661 cacctggaca tgctccgcca cctctaccag ggctgccagg tggtgcaggg aaacctggaa
721 ctcacctacc tgcccaccaa tgccagcctg tccttcctgc aggatatcca ggaggtgcag
781 ggctacgtgc tcatcgctca caaccaagtg aggcaggtcc cactgcagag gctgcggatt
841 gtgcgaggca cccagctctt tgaggacaac tatgccctgg ccgtgctaga caatggagac
901 ccgctgaaca ataccacccc tgtcacaggg gcctccccag gaggcctgcg ggagctgcag
961 cttcgaagcc tcacagagat cttgaaagga ggggtcttga tccagcggaa cccccagctc
1021 tgctaccagg acacgatttt gtggaaggac atcttccaca agaacaacca gctggctctc
1081 acactgatag acaccaaccg ctctcgggcc tgccacccct gttctccgat gtgtaagggc
1141 tcccgctgct ggggagagag ttctgaggat tgtcagagcc tgacgcgcac tgtctgtgcc
1201 ggtggctgtg cccgctgcaa ggggccactg cccactgact gctgccatga gcagtgtgct
1261 gccggctgca cgggccccaa gcactctgac tgcctggcct gcctccactt caaccacagt
1321 ggcatctgtg agctgcactg cccagccctg gtcacctaca acacagacac gtttgagtcc
1381 atgcccaatc ccgagggccg gtatacattc ggcgccagct gtgtgactgc ctgtccctac
1441 aactaccttt ctacggacgt gggatcctgc accctcgtct gccccctgca caaccaagag
1501 gtgacagcag aggatggaac acagcggtgt gagaagtgca gcaagccctg tgcccgagtg
1561 tgctatggtc tgggcatgga gcacttgcga gaggtgaggg cagttaccag tgccaatatc
1621 caggagtttg ctggctgcaa gaagatcttt gggagcctgg catttctgcc ggagagcttt
1681 gatggggacc cagcctccaa cactgccccg ctccagccag agcagctcca agtgtttgag
1741 actctggaag agatcacagg ttacctatac atctcagcat ggccggacag cctgcctgac
1801 ctcagcgtct tccagaacct gcaagtaatc cggggacgaa ttctgcacaa tggcgcctac
1861 tcgctgaccc tgcaagggct gggcatcagc tggctggggc tgcgctcact gagggaactg
1921 ggcagtggac tggccctcat ccaccataac acccacctct gcttcgtgca cacggtgccc
1981 tgggaccagc tctttcggaa cccgcaccaa gctctgctcc acactgccaa ccggccagag
2041 gacgagtgtg tgggcgaggg cctggcctgc caccagctgt gcgcccgagg gcactgctgg
2101 ggtccagggc ccacccagtg tgtcaactgc agccagttcc ttcggggcca ggagtgcgtg
2161 gaggaatgcc gagtactgca ggggctcccc agggagtatg tgaatgccag gcactgtttg
2221 ccgtgccacc ctgagtgtca gccccagaat ggctcagtga cctgttttgg accggaggct
2281 gaccagtgtg tggcctgtgc ccactataag gaccctccct tctgcgtggc ccgctgcccc
2341 agcggtgtga aacctgacct ctcctacatg cccatctgga agtttccaga tgaggagggc
2401 gcatgccagc cttgccccat caactgcacc cactcctgtg tggacctgga tgacaagggc
2461 tgccccgccg agcagagagc cagccctctg acgtccatca tctctgcggt ggttggcatt
2521 ctgctggtcg tggtcttggg ggtggtcttt gggatcctca tcaagcgacg gcagcagaag
2581 atccggaagt acacgatgcg gagactgctg caggaaacgg agctggtgga gccgctgaca
2641 cctagcggag cgatgcccaa ccaggcgcag atgcggatcc tgaaagagac ggagctgagg
2701 aaggtgaagg tgcttggatc tggcgctttt ggcacagtct acaagggcat ctggatccct
2761 gatggggaga atgtgaaaat tccagtggcc atcaaagtgt tgagggaaaa cacatccccc
2821 aaagccaaca aagaaatctt agacgaagca tacgtgatgg ctggtgtggg ctccccatat
2881 gtctcccgcc ttctgggcat ctgcctgaca tccacggtgc agctggtgac acagcttatg
2941 ccctatggct gcctcttaga ccatgtccgg gaaaaccgcg gacgcctggg ctcccaggac
3001 ctgctgaact ggtgtatgca gattgccaag gggatgagct acctggagga tgtgcggctc
3061 gtacacaggg acttggccgc tcggaacgtg ctggtcaaga gtcccaacca tgtcaaaatt
3121 acagacttcg ggctggctcg gctgctggac attgacgaga cagagtacca tgcagatggg
3181 ggcaaggtgc ccatcaagtg gatggcgctg gagtccattc tccgccggcg gttcacccac
3241 cagagtgatg tgtggagtta tggtgtgact gtgtgggagc tgatgacttt tggggccaaa
3301 ccttacgatg ggatcccagc ccgggagatc cctgacctgc tggaaaaggg ggagcggctg
3361 ccccagcccc ccatctgcac cattgatgtc tacatgatca tggtcaaatg ttggatgatt
3421 gactctgaat gtcggccaag attccgggag ttggtgtctg aattctcccg catggccagg
3481 gacccccagc gctttgtggt catccagaat gaggacttgg gcccagccag tcccttggac
3541 agcaccttct accgctcact gctggaggac gatgacatgg gggacctggt ggatgctgag
3601 gagtatctgg taccccagca gggcttcttc tgtccagacc ctgccccggg cgctgggggc
3661 atggtccacc acaggcaccg cagctcatct accaggagtg gcggtgggga cctgacacta
3721 gggctggagc cctctgaaga ggaggccccc aggtctccac tggcaccctc cgaaggggct
3781 ggctccgatg tatttgatgg tgacctggga atgggggcag ccaaggggct gcaaagcctc
3841 cccacacatg accccagccc tctacagcgg tacagtgagg accccacagt acccctgccc
3901 tctgagactg atggctacgt tgcccccctg acctgcagcc cccagcctga atatgtgaac
3961 cagccagatg ttcggcccca gcccccttcg ccccgagagg gccctctgcc tgctgcccga
4021 cctgctggtg ccactctgga aaggcccaag actctctccc cagggaagaa tggggtcgtc
4081 aaagacgttt ttgcctttgg gggtgccgtg gagaaccccg agtacttgac accccaggga
4141 ggagctgccc ctcagcccca ccctcctcct gccttcagcc cagccttcga caacctctat
4201 tactgggacc aggacccacc agagcggggg gctccaccca gcaccttcaa agggacacct
4261 acggcagaga acccagagta cctgggtctg gacgtgccag tgtgaaccag aaggccaagt
4321 ccgcagaagc cctgatgtgt cctcagggag cagggaaggc ctgacttctg ctggcatcaa
4381 gaggtgggag ggccctccga ccacttccag gggaacctgc catgccagga acctgtccta
4441 aggaaccttc cttcctgctt gagttcccag atggctggaa ggggtccagc ctcgttggaa
4501 gaggaacagc actggggagt ctttgtggat tctgaggccc tgcccaatga gactctaggg
4561 tccagtggat gccacagccc agcttggccc tttccttcca gatcctgggt actgaaagcc
4621 ttagggaagc tggcctgaga ggggaagcgg ccctaaggga gtgtctaaga acaaaagcga
4681 cccattcaga gactgtccct gaaacctagt actgcccccc atgaggaagg aacagcaatg
4741 gtgtcagtat ccaggctttg tacagagtgc ttttctgttt agtttttact ttttttgttt
4801 tgttttttta aagatgaaat aaagacccag ggggagaatg ggtgttgtat ggggaggcaa
4861 gtgtgggggg tccttctcca cacccacttt gtccatttgc aaatatattt tggaaaacag
4921 ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa

SEQ ID NO: 4
Номер доступа: NM_001289936
MPRGSWKPQV CTGTDMKLRL PASPETHLDM LRHLYQGCQV VQGNLELTYL PTNASLSFLQ 60
DIQEVQGYVL IAHNQVRQVP LQRLRIVRGT QLFEDNYALA VLDNGDPLNN TTPVTGASPG 120
GLRELQLRSL TEILKGGVLI QRNPQLCYQD TILWKDIFHK NNQLALTLID TNRSRACHPC 180
SPMCKGSRCW GESSEDCQSL TRTVCAGGCA RCKGPLPTDC CHEQCAAGCT GPKHSDCLAC 240
LHFNHSGICE LHCPALVTYN TDTFESMPNP EGRYTFGASC VTACPYNYLS TDVGSCTLVC 300
PLHNQEVTAE DGTQRCEKCS KPCARVCYGL GMEHLREVRA VTSANIQEFA GCKKIFGSLA 360
FLPESFDGDP ASNTAPLQPE QLQVFETLEE ITGYLYISAW PDSLPDLSVF QNLQVIRGRI 420
LHNGAYSLTL QGLGISWLGL RSLRELGSGL ALIHHNTHLC FVHTVPWDQL FRNPHQALLH 480
TANRPEDECV GEGLACHQLC ARGHCWGPGP TQCVNCSQFL RGQECVEECR VLQGLPREYV 540
NARHCLPCHP ECQPQNGSVT CFGPEADQCV ACAHYKDPPF CVARCPSGVK PDLSYMPIWK 600
FPDEEGACQP CPINCTHSCV DLDDKGCPAE QRASPLTSII SAVVGILLVV VLGVVFGILI 660
KRRQQKIRKY TMRRLLQETE LVEPLTPSGA MPNQAQMRIL KETELRKVKV LGSGAFGTVY 720
KGIWIPDGEN VKIPVAIKVL RENTSPKANK EILDEAYVMA GVGSPYVSRL LGICLTSTVQ 780
LVTQLMPYGC LLDHVRENRG RLGSQDLLNW CMQIAKGMSY LEDVRLVHRD LAARNVLVKS 840
PNHVKITDFG LARLLDIDET EYHADGGKVP IKWMALESIL RRRFTHQSDV WSYGVTVWEL 900
MTFGAKPYDG IPAREIPDLL EKGERLPQPP ICTIDVYMIM VKCWMIDSEC RPRFRELVSE 960
FSRMARDPQR FVVIQNEDLG PASPLDSTFY RSLLEDDDMG DLVDAEEYLV PQQGFFCPDP 1020
APGAGGMVHH RHRSSSTRSG GGDLTLGLEP SEEEAPRSPL APSEGAGSDV FDGDLGMGAA 1080
KGLQSLPTHD PSPLQRYSED PTVPLPSETD GYVAPLTCSP QPEYVNQPDV RPQPPSPREG 1140
PLPAARPAGA TLERPKTLSP GKNGVVKDVF AFGGAVENPE YLTPQGGAAP QPHPPPAFSP 1200
AFDNLYYWDQ DPPERGAPPS TFKGTPTAEN PEYLGLDVPV 1240

SEQ ID NO: 5
Номер доступа: NM_001005862
CDS: 577..4254
1 aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc
61 ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg
121 cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc
181 atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc
241 ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg
301 cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat
361 gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag
421 agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga
481 gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt
541 ggacatgcac aaaagtgagt gtgcaccggc acagacatga agctgcggct ccctgccagt
601 cccgagaccc acctggacat gctccgccac ctctaccagg gctgccaggt ggtgcaggga
661 aacctggaac tcacctacct gcccaccaat gccagcctgt ccttcctgca ggatatccag
721 gaggtgcagg gctacgtgct catcgctcac aaccaagtga ggcaggtccc actgcagagg
781 ctgcggattg tgcgaggcac ccagctcttt gaggacaact atgccctggc cgtgctagac
841 aatggagacc cgctgaacaa taccacccct gtcacagggg cctccccagg aggcctgcgg
901 gagctgcagc ttcgaagcct cacagagatc ttgaaaggag gggtcttgat ccagcggaac
961 ccccagctct gctaccagga cacgattttg tggaaggaca tcttccacaa gaacaaccag
1021 ctggctctca cactgataga caccaaccgc tctcgggcct gccacccctg ttctccgatg
1081 tgtaagggct cccgctgctg gggagagagt tctgaggatt gtcagagcct gacgcgcact
1141 gtctgtgccg gtggctgtgc ccgctgcaag gggccactgc ccactgactg ctgccatgag
1201 cagtgtgctg ccggctgcac gggccccaag cactctgact gcctggcctg cctccacttc
1261 aaccacagtg gcatctgtga gctgcactgc ccagccctgg tcacctacaa cacagacacg
1321 tttgagtcca tgcccaatcc cgagggccgg tatacattcg gcgccagctg tgtgactgcc
1381 tgtccctaca actacctttc tacggacgtg ggatcctgca ccctcgtctg ccccctgcac
1441 aaccaagagg tgacagcaga ggatggaaca cagcggtgtg agaagtgcag caagccctgt
1501 gcccgagtgt gctatggtct gggcatggag cacttgcgag aggtgagggc agttaccagt
1561 gccaatatcc aggagtttgc tggctgcaag aagatctttg ggagcctggc atttctgccg
1621 gagagctttg atggggaccc agcctccaac actgccccgc tccagccaga gcagctccaa
1681 gtgtttgaga ctctggaaga gatcacaggt tacctataca tctcagcatg gccggacagc
1741 ctgcctgacc tcagcgtctt ccagaacctg caagtaatcc ggggacgaat tctgcacaat
1801 ggcgcctact cgctgaccct gcaagggctg ggcatcagct ggctggggct gcgctcactg
1861 agggaactgg gcagtggact ggccctcatc caccataaca cccacctctg cttcgtgcac
1921 acggtgccct gggaccagct ctttcggaac ccgcaccaag ctctgctcca cactgccaac
1981 cggccagagg acgagtgtgt gggcgagggc ctggcctgcc accagctgtg cgcccgaggg
2041 cactgctggg gtccagggcc cacccagtgt gtcaactgca gccagttcct tcggggccag
2101 gagtgcgtgg aggaatgccg agtactgcag gggctcccca gggagtatgt gaatgccagg
2161 cactgtttgc cgtgccaccc tgagtgtcag ccccagaatg gctcagtgac ctgttttgga
2221 ccggaggctg accagtgtgt ggcctgtgcc cactataagg accctccctt ctgcgtggcc
2281 cgctgcccca gcggtgtgaa acctgacctc tcctacatgc ccatctggaa gtttccagat
2341 gaggagggcg catgccagcc ttgccccatc aactgcaccc actcctgtgt ggacctggat
2401 gacaagggct gccccgccga gcagagagcc agccctctga cgtccatcat ctctgcggtg
2461 gttggcattc tgctggtcgt ggtcttgggg gtggtctttg ggatcctcat caagcgacgg
2521 cagcagaaga tccggaagta cacgatgcgg agactgctgc aggaaacgga gctggtggag
2581 ccgctgacac ctagcggagc gatgcccaac caggcgcaga tgcggatcct gaaagagacg
2641 gagctgagga aggtgaaggt gcttggatct ggcgcttttg gcacagtcta caagggcatc
2701 tggatccctg atggggagaa tgtgaaaatt ccagtggcca tcaaagtgtt gagggaaaac
2761 acatccccca aagccaacaa agaaatctta gacgaagcat acgtgatggc tggtgtgggc
2821 tccccatatg tctcccgcct tctgggcatc tgcctgacat ccacggtgca gctggtgaca
2881 cagcttatgc cctatggctg cctcttagac catgtccggg aaaaccgcgg acgcctgggc
2941 tcccaggacc tgctgaactg gtgtatgcag attgccaagg ggatgagcta cctggaggat
3001 gtgcggctcg tacacaggga cttggccgct cggaacgtgc tggtcaagag tcccaaccat
3061 gtcaaaatta cagacttcgg gctggctcgg ctgctggaca ttgacgagac agagtaccat
3121 gcagatgggg gcaaggtgcc catcaagtgg atggcgctgg agtccattct ccgccggcgg
3181 ttcacccacc agagtgatgt gtggagttat ggtgtgactg tgtgggagct gatgactttt
3241 ggggccaaac cttacgatgg gatcccagcc cgggagatcc ctgacctgct ggaaaagggg
3301 gagcggctgc cccagccccc catctgcacc attgatgtct acatgatcat ggtcaaatgt
3361 tggatgattg actctgaatg tcggccaaga ttccgggagt tggtgtctga attctcccgc
3421 atggccaggg acccccagcg ctttgtggtc atccagaatg aggacttggg cccagccagt
3481 cccttggaca gcaccttcta ccgctcactg ctggaggacg atgacatggg ggacctggtg
3541 gatgctgagg agtatctggt accccagcag ggcttcttct gtccagaccc tgccccgggc
3601 gctgggggca tggtccacca caggcaccgc agctcatcta ccaggagtgg cggtggggac
3661 ctgacactag ggctggagcc ctctgaagag gaggccccca ggtctccact ggcaccctcc
3721 gaaggggctg gctccgatgt atttgatggt gacctgggaa tgggggcagc caaggggctg
3781 caaagcctcc ccacacatga ccccagccct ctacagcggt acagtgagga ccccacagta
3841 cccctgccct ctgagactga tggctacgtt gcccccctga cctgcagccc ccagcctgaa
3901 tatgtgaacc agccagatgt tcggccccag cccccttcgc cccgagaggg ccctctgcct
3961 gctgcccgac ctgctggtgc cactctggaa aggcccaaga ctctctcccc agggaagaat
4021 ggggtcgtca aagacgtttt tgcctttggg ggtgccgtgg agaaccccga gtacttgaca
4081 ccccagggag gagctgcccc tcagccccac cctcctcctg ccttcagccc agccttcgac
4141 aacctctatt actgggacca ggacccacca gagcgggggg ctccacccag caccttcaaa
4201 gggacaccta cggcagagaa cccagagtac ctgggtctgg acgtgccagt gtgaaccaga
4261 aggccaagtc cgcagaagcc ctgatgtgtc ctcagggagc agggaaggcc tgacttctgc
4321 tggcatcaag aggtgggagg gccctccgac cacttccagg ggaacctgcc atgccaggaa
4381 cctgtcctaa ggaaccttcc ttcctgcttg agttcccaga tggctggaag gggtccagcc
4441 tcgttggaag aggaacagca ctggggagtc tttgtggatt ctgaggccct gcccaatgag
4501 actctagggt ccagtggatg ccacagccca gcttggccct ttccttccag atcctgggta
4561 ctgaaagcct tagggaagct ggcctgagag gggaagcggc cctaagggag tgtctaagaa
4621 caaaagcgac ccattcagag actgtccctg aaacctagta ctgcccccca tgaggaagga
4681 acagcaatgg tgtcagtatc caggctttgt acagagtgct tttctgttta gtttttactt
4741 tttttgtttt gtttttttaa agatgaaata aagacccagg gggagaatgg gtgttgtatg
4801 gggaggcaag tgtggggggt ccttctccac acccactttg tccatttgca aatatatttt
4861 ggaaaacagc taaaaaaaaa aaaaaaaaa

SEQ ID NO: 6
Номер доступа: NM_001005862
MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ 60
VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK 120
GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE 180
DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA 240
LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR 300
CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA 360
PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI 420
SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA 480
CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ 540
NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC 600
THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL 660
LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV 720
AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAGVGSP YVSRLLGICL TSTVQLVTQL MPYGCLLDHV 780
RENRGRLGSQ DLLNWCMQIA KGMSYLEDVR LVHRDLAARN VLVKSPNHVK ITDFGLARLL 840
DIDETEYHAD GGKVPIKWMA LESILRRRFT HQSDVWSYGV TVWELMTFGA KPYDGIPARE 900
IPDLLEKGER LPQPPICTID VYMIMVKCWM IDSECRPRFR ELVSEFSRMA RDPQRFVVIQ 960
NEDLGPASPL DSTFYRSLLE DDDMGDLVDA EEYLVPQQGF FCPDPAPGAG GMVHHRHRSS 1020
STRSGGGDLT LGLEPSEEEA PRSPLAPSEG AGSDVFDGDL GMGAAKGLQS LPTHDPSPLQ 1080
RYSEDPTVPL PSETDGYVAP LTCSPQPEYV NQPDVRPQPP SPREGPLPAA RPAGATLERP 1140
KTLSPGKNGV VKDVFAFGGA VENPEYLTPQ GGAAPQPHPP PAFSPAFDNL YYWDQDPPER 1200
GAPPSTFKGT PTAENPEYLG LDVPV 1225

SEQ ID NO: 7
Мутант HER2 (имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2 в качестве основы, и содержащий мутацию A775_G776insYVMA (HER2ex20insYVMA))
MELAALCRWG LLLALLPPGA ASTQVCTGTD MKLRLPASPE THLDMLRHLY QGCQVVQGNL 60
ELTYLPTNAS LSFLQDIQEV QGYVLIAHNQ VRQVPLQRLR IVRGTQLFED NYALAVLDNG 120
DPLNNTTPVT GASPGGLREL QLRSLTEILK GGVLIQRNPQ LCYQDTILWK DIFHKNNQLA 180
LTLIDTNRSR ACHPCSPMCK GSRCWGESSE DCQSLTRTVC AGGCARCKGP LPTDCCHEQC 240
AAGCTGPKHS DCLACLHFNH SGICELHCPA LVTYNTDTFE SMPNPEGRYT FGASCVTACP 300
YNYLSTDVGS CTLVCPLHNQ EVTAEDGTQR CEKCSKPCAR VCYGLGMEHL REVRAVTSAN 360
IQEFAGCKKI FGSLAFLPES FDGDPASNTA PLQPEQLQVF ETLEEITGYL YISAWPDSLP 420
DLSVFQNLQV IRGRILHNGA YSLTLQGLGI SWLGLRSLRE LGSGLALIHH NTHLCFVHTV 480
PWDQLFRNPH QALLHTANRP EDECVGEGLA CHQLCARGHC WGPGPTQCVN CSQFLRGQEC 540
VEECRVLQGL PREYVNARHC LPCHPECQPQ NGSVTCFGPE ADQCVACAHY KDPPFCVARC 600
PSGVKPDLSY MPIWKFPDEE GACQPCPINC THSCVDLDDK GCPAEQRASP LTSIISAVVG 660
ILLVVVLGVV FGILIKRRQQ KIRKYTMRRL LQETELVEPL TPSGAMPNQA QMRILKETEL 720
RKVKVLGSGA FGTVYKGIWI PDGENVKIPV AIKVLRENTS PKANKEILDE AYVMAYVMAG 780
VGSPYVSRLL GICLTSTVQL VTQLMPYGCL LDHVRENRGR LGSQDLLNWC MQIAKGMSYL 840
EDVRLVHRDL AARNVLVKSP NHVKITDFGL ARLLDIDETE YHADGGKVPI KWMALESILR 900
RRFTHQSDVW SYGVTVWELM TFGAKPYDGI PAREIPDLLE KGERLPQPPI CTIDVYMIMV 960
KCWMIDSECR PRFRELVSEF SRMARDPQRF VVIQNEDLGP ASPLDSTFYR SLLEDDDMGD 1020
LVDAEEYLVP QQGFFCPDPA PGAGGMVHHR HRSSSTRSGG GDLTLGLEPS EEEAPRSPLA 1080
PSEGAGSDVF DGDLGMGAAK GLQSLPTHDP SPLQRYSEDP TVPLPSETDG YVAPLTCSPQ 1140
PEYVNQPDVR PQPPSPREGP LPAARPAGAT LERPKTLSPG KNGVVKDVFA FGGAVENPEY 1200
LTPQGGAAPQ PHPPPAFSPA FDNLYYWDQD PPERGAPPST FKGTPTAENP EYLGLDVPV 1259

[0114]

В настоящем описании термин «эффективное количество», используемый в отношении соединения настоящего изобретения, означает количество соединения настоящего изобретения, которое вызывает у субъекта биологический или медицинский ответ, такой как, например, снижение или ингибирование активности фермента или белка; или смягчает симптомы, облегчает состояния и замедляет или задерживает прогрессирование заболевания; или предотвращает заболевание и т.п. (терапевтически эффективное количество).

В настоящем описании термин «субъект» включает млекопитающих и немлекопитающих. Примеры млекопитающих могут включать, в числе прочего, человека, шимпанзе, человекообразную обезьяну, обезьяну, быка, лошадь, овцу, козу, свинью, кролика, собаку, кошку, крысу, мышь, морскую свинку, ежа, кенгуру, крота, дикую свинью, медведя, тигра и льва. Примеры немлекопитающих могут включать, в числе прочего, птиц, рыб и рептилий. В одном варианте осуществления субъект является человеком и может быть человеком, которому был поставлен диагноз, требующий лечения симптомов, состояний или заболевания, раскрытых в настоящем описании.

[0115]

При использовании соединения настоящего изобретения или его соли в качестве лекарственного средства, с ним, при необходимости, смешивают фармацевтически приемлемый носитель, и различные типы лекарственных форм могут быть выбраны в зависимости от профилактической или терапевтической цели. Примеры лекарственной формы могут включать любое из перорального средства, инъекции, суппозитория, мази и пластыря. Предпочтительно, выбирают пероральное средство. Такие лекарственные формы могут быть получены общепринятыми способами получения, которые известны специалистам.

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает противоопухолевое средство для перорального введения, содержащее соединение настоящего изобретения или его соль в качестве активного ингредиента. В дополнение к этому, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли нуждающемуся в этом субъекту путем перорального введения. Кроме того, один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает применение соединения настоящего изобретения или его соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает соединение настоящего изобретения или его соль для применения при профилактике и/или лечении опухоли путем их перорального введения.

[0116]

Один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает фармацевтическую композицию, содержащую соединение настоящего изобретения или его соль. Фармацевтическая композиция согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения содержит соединение настоящего изобретения или его соль, и фармацевтически приемлемый носитель. Кроме того, один из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагает применение соединения по настоящему изобретению или его соли для получения фармацевтической композиции. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает соединение настоящего изобретения или его соль для применения в качестве лекарственного средства.

[0117]

В качестве фармацевтически приемлемых носителей используют различные типы органических или неорганических веществ, которые обычно используют в качестве материалов для получения. Когда соединение настоящего изобретения перерабатывают в твердый препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешанного с соединением настоящего изобретения, могут включать эксципиент, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, покрывающий агент и красящий агент. Когда соединение настоящего изобретения перерабатывают в жидкий препарат, примеры фармацевтически приемлемого носителя, смешанного с соединением настоящего изобретения, могут включать растворитель, солюбилизатор, суспендирующий агент, регулятор тоничности, буфер и успокаивающее средство. Кроме того, добавки для приготовления, такие как антисептик, антиоксидант, подсластитель или стабилизатор, также могут использоваться при необходимости.

[0118]

В случае приготовления твердого препарата для перорального введения к соединению настоящего изобретения добавляют эксципиент и, при необходимости, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, красящий агент, корригирующее вещество и т.п., и после этого могут быть получены таблетка, таблетка с покрытием, гранула, порошковое средство, капсула и т.п. с помощью обычных способов.

В случае приготовления инъекции к соединению настоящего изобретения добавляют регулятор pH, буфер, стабилизатор, регулятор тоничности, местный анестетик и т.п., и после этого могут быть произведены подкожные, внутримышечные и внутривенные инъекции с помощью обычных способов.

[0119]

Количество соединения настоящего изобретения, которое смешивают в каждой из вышеупомянутых стандартных дозированных лекарственных форм, зависит от симптомов субъекта, к которому должно быть применено настоящее соединение, лекарственной формы и тому подобного, и таким образом, количество соединения настоящего изобретения не является постоянным. В целом, предпочтительно, чтобы применяемая доза составляла 0,05-1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае перорального средства, составляла 0,01-500 мг на стандартную лекарственную форму в случае инъекции, и составляла 1-1000 мг на стандартную лекарственную форму в случае суппозитория.

Суточная доза лекарства, имеющего описанную выше лекарственную форму, различается в зависимости от симптомов, массы тела, возраста, пола и тому подобного субъекта и, таким образом, она не может быть определена в целом. Однако соединение настоящего изобретения может быть введено взрослому (масса тела: 50 кг) в суточной дозе, как правило, 0,05-5000 мг и предпочтительно 0,1-1000 мг.

[0120]

Опухоль, которая является объектом применения настоящего изобретения, не имеет особых ограничений. Примеры опухоли могут включать опухоль головного мозга, рак головы и шеи, рак желудочно-кишечного тракта (рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (рак желчного пузыря и/или желчевыводящих путей и т.д.), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (рак толстой кишки, рак прямой кишки и т.д.), и т.д.), рак легких (немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, мезотелиома, и т.д.), рак молочной железы, генитальный рак (рак яичников, рак матки (рак шейки матки, рак эндометрия, и т.д.) и т.д.), рак мочеполовой системы (рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, тестикулярная опухоль, и т.д.), опухоли кроветворной ткани (лейкоз, злокачественная лимфома, множественная миелома, и т.д.), опухоли кости и/или мягких тканей, и рак кожи. Среди них предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, рак желчных протоков или рак матки, и более предпочтительным является рак легких, рак молочной железы, рак желудка, рак мочевого пузыря или рак желчных протоков.

[0121]

В одном варианте осуществления опухоль представляет собой опухоль головного мозга. Соединение настоящего изобретения может применяться для лечения симптомов головного мозга, для которых требуется прохождение через гематоэнцефалический барьер. Соединение одного из вариантов осуществления обладает благоприятной проницаемостью через гематоэнцефалический барьер для своей доставки в головной мозг, то есть превосходные свойства проникновения в головной мозг. В качестве показателя проникающих свойств соединения в мозг применяется концентрация соединения в мозге или значение Kp (отношение концентрации препарата в мозге к концентрации препарата в плазме).

Опухоль мозга, подвергаемая лечению соединением настоящего изобретения, включает метастатическую опухоль головного мозга и первичную опухоль головного мозга.

Примеры опухоли головного мозга могут включать, без ограничения перечисленным, метастатическую опухоль головного мозга (например, метастаз в головной мозг в результате рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных протоков, рака матки, и т.п. (предпочтительно рака легких, рака молочной железы или рака желудка)), пилоцитарную астроцитому, диффузную астроцитому, олигодендрому и/или олигодендроастроцитому, анапластическую астроцитому и/или анапластическую олигодендроглиому, анапластическую олигодендроастроцитому, глиобластому, эпендимому, анапластическую эпендимому, ганглиоглиому, центральную нейроцитому, медуллобластому, герминому, злокачественную лимфому центральной нервной системы, менингиому, неврилеммому, GH-секретирующую аденому гипофиза, PRL-секретирующую аденому гипофиза, ACTH-секретирующую аденому гипофиза, нефункциональную аденому гипофиза, краниофарингиому, хордому, гемангиобластому и эпидермоидную опухоль.

ПРИМЕРЫ

[0122]

Далее настоящее изобретение будет описано подробно в приведенных ниже примерах. Однако, эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

В настоящем описании «комнатная температура» обычно означает температуру, которая составляет от приблизительно 10°C до приблизительно 35°C. В дополнение к этому, в следующих примерах применительно к соединениям выражение «%» означает % масс., если не указано иное.

Различные типы реагентов, использованные в примерах, были коммерчески доступными продуктами, если не утверждается иное. Хроматографию на силикагеле проводили с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Ultra, выпускаемого Biotage Japan Ltd. Хроматографию на основном силикагеле проводили с использованием картриджа Biotage SNAP Cartridge Isolute Flash-NH2, выпускаемого Biotage Japan Ltd.

Препаративную тонкослойную хроматографию осуществляли, используя Kieselgel TM60F254, Art. 5744, производимый компанией Merck, или NH2 Silica Gel 60F254 Plate Wako, производимый компанией Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Для определения ¹H-ЯМР использовали тетраметилсилан в качестве стандарта и применяли приборы AL400 (400 МГц) производства JEOL, Mercury (400 МГц) производства Varian или Inova (400 МГц) производства Varian. Кроме того, масс-спектр измеряли с использованием Micromass ZQ или SQD, производимых Waters, в соответствии с процедурой электрораспылительной ионизации (ESI) или химической ионизации при атмосферном давлении (APCI). Реакцию при микроволновом облучении проводили с использованием устройства Initiator производства Biotage Japan Ltd.

Сокращения имеют следующие значения.

с: синглет

д: дублет

т: триплет

кв: квартет

дд: двойной дублет

дт: двойной триплет

тд: тройной дублет

тт: тройной триплет

ддд: двойной двойной дублет

ддт: двойной двойной триплет

дтд: двойной тройной дублет

тдд: тройной двойной дублет

м: мультиплет

ушир.: уширенный

ATP: аденозинтрифосфат

ДМСО-d6: дейтерированный диметилсульфоксид

CDCl₃: дейтерированный хлороформ

ЭДТА: этилендиаминтетрауксусная кислота

THF: тетрагидрофуран

DMF: N, N-диметилформамид

ДМСО: диметилсульфоксид

NMP: N-метилпирролидон

HATU: O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N, N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат

HPMC: гипромеллоза

PdCl₂(PPh₃)₂: дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II)

[0123]

Ссылочный пример 1

Ссылочный пример 1(1)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2 -метилпирролидин-1-карбоксилат

Трет-бутил-(2S,4S)-4-гидрокси-2-метилпирролидин-1-карбоксилат (19,0 г) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (13,1 г) растворяли в THF (190 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого к реакционному раствору добавляли трифенилфосфин (37,2 г) и диизопропилазодикарбоксилат (28,1 мл), и затем температуру смеси повышали до комнатной температуры с последующим перемешиванием в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток затем очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением соответствующего связующего соединения. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

Полученное связующее соединение, THF (114 мл) и аммиачную воду (114 мл) добавляли в баростойкую трубку, и полученную смесь затем перемешивали при 100°С в течение 14 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее выливали в воду (285 мл). Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. После этого осажденное твердое вещество собирали фильтрацией, затем промывали водой и затем сушили с получением представляющего интерес продукта (34,5 г).

¹HNMR (CDCl₃)δ: 8,27 (c,1H) 7,15 (c,1H) 5,55-5,73 (м,2H) 5,12-5,25 (м,1H) 3,86-4,18 (м,2H) 3,43-3,57 (м,1H) 2,59-2,69 (м,1H) 1,92-2,03 (м,1H) 1,48 (c,9H) 1,30-1,40 (м,3H)

ESI-MS m/z 444 (MH+)

[0124]

Ссылочный пример 1(2)

4-Амино-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоновая кислота

Соединение ссылочного примера 1(1) (28,0 г), катализатор 10% палладий на угле (720 мг), NMP (84 мл), метанол (26 мл) и триэтиламин (17,6 мл) добавляли в бароустойчивую трубку, с последующим замещением монооксидом углерода, и полученную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем добавляли к ней 2 М водный раствор гидроксида натрия (79 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 80°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем фильтровали через целит и далее промывали метанолом. Затем метанол в фильтрате концентрировали при пониженном давлении. Затем добавляли воду и водный слой далее промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. К водному слою добавляли 1 М водный раствор гидросульфата калия для доведения рН до приблизительно 3. Осажденное твердое вещество собирали фильтрацией, затем промывали водой и затем сушили с получением представляющего интерес продукта (23,4 г).

¹H-ЯМР (400MHz, ДМСО-d6)δ: 8,14 (с, 1H) 8,08 (с, 1H) 5,16-4,93 (м,1H) 4,07-3,79 (м,2H) 3,61-3,45 (м,1H) 2,53 (м,1H) 2,33-2,02 (м,1H) 1,42 (c,9H) 1,29 (д, J=6,1 Гц, 3H) ESI-MS m/z 362 (MH+)

[0125]

Примеры

Пример 1(1)

Трет-бутил-4-амино-6-бром-7-((3R,5S)-1-(трет-бутоксикарбонил)-5-метилпирролидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

В атмосфере азота соединение ссылочного примера 1(2) (15,0 г) растворяли в хлороформе (150 мл), и затем к полученному выше раствору добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл). Температуру полученной смеси повышали до 60°C и смесь затем перемешивали в течение 2 ч. После этого к реакционной смеси дополнительно добавляли 2-трет-бутил-1,3-диизопропилизомочевину (25 мл) и полученную таким образом смесь затем перемешивали в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли простой трет-бутилметиловый эфир, и осажденное твердое вещество собирали фильтрацией и затем промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и затем к полученному остатку добавляли простой трет-бутилметиловый эфир. Осажденное твердое вещество собирали фильтрацией и затем промывали простым трет-бутилметиловым эфиром. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением формы сложного трет-бутилового эфира. Полученное соединение использовали в последующей реакции галогенирования без дополнительной очистки.

Полученную форму сложного трет-бутилового эфира растворяли в хлороформе (140 мл) и затем к полученному выше раствору добавляли N-бромсукцинимид (11,8 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. После этого к реакционной смеси последовательно добавляли хлороформ и 10% водный раствор бисульфита натрия, и полученную смесь затем экстрагировали хлороформом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (13,8 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,02 (с, 1H) 5,74-5,13 (м,2H) 4,07-3,64 (м,2H) 2,43-2,29 (м,1H) 2,07-1,97 (м,1H) 1,63 (c,9H) 1,48 (м,12H)

ESI-MS m/z 496,498 (MH+)

[0126]

Пример 1(2)

Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

Соединение примера 1(1) (11,4 г) растворяли в THF (57 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого к смеси добавляли 4 М раствор хлористого водорода в 1,4-диоксане (114 мл) и полученную таким образом смесь затем перемешивали при 0°С в течение 10 ч. Затем к реакционной смеси добавляли 5 М водный раствор гидроксида натрия (92 мл), ацетонитрил (57 мл), диизопропилэтиламин (20 мл) и акрилоилхлорид (2,0 мл), и полученную смесь затем перемешивали в течение 30 мин. После этого реакционную смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (7,72 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,26-8,16 (м,1H) 6,62-6,30 (м,2H) 5,81-5,64 (м,1H) 5,33-5,14 (м,1H) 4,81-3,75 (м,3H) 3,07-2,86 (м,1H) 2,67-2,33 (м,1H) 1,69-1,61 (м,9H) 1,60-1,51 (м,3H)

ESI-MS m/z 450,452 (MH+)

[0127]

Пример 1(3)

Трет-бутил-7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксилат

1,0 М раствор пропина в DMF (85,7 мл) добавляли к соединению примера 1(2) (7,72 г), ацетонитрилу (154 мл), триэтиламину (7,2 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (1,2 г) и йодиду меди (I) (330 мг) с последующим замещением азотом. Затем смесь перемешивали при 70°С в течение 4 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. После этого полученную смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (4,06 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,29-8,17 (м,1H) 6,63-6,30 (м,2H) 5,81-5,63 (м,1H) 5,42-5,15 (м,1H) 4,66-3,81 (м,3H) 3,01-2,82 (м,1H) 2,65-2,32 (м,1H) 2,92-2,13 (м,3H) 1,65-1,59 (м,9H) 1,57-1,49 (м,3H)

ESI-MS m/z 410 (MH+)

[0128]

Пример 1(4)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидинкарбоновая кислота

Соединение примера 1(3) (1,52 г) растворяли в хлороформе (5 мл), и затем к полученному выше раствору добавляли трифторуксусную кислоту (5 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, и затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении К остатку добавляли хлороформ, и полученную смесь снова концентрировали при пониженном давлении. Остаток сушили при пониженном давлении с получением представляющего интерес продукта (1,25 г).

ESI-MS m/z 354 (MH+)

[0129]

Пример 1(5)

7-(R)-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3,5-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению примера 1(4) (100 мг) в растворе DMF(1,0 мл) добавляли (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амин (89,0 мг), диизопропилэтиламин (0,25 мл) и HATU (215 мг), и полученную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением указанного в заголовке соединения (60 мг).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,51 (д, J=7,3 Гц, 1H) 8,16 (с, 1H) 7,25-7,07 (м,3H) 6,74-6,47 (м,1H) 6,25-6,08 (м,1H) 5,78-5,58 (м,1H) 5,41-5,21 (м,1H) 5,21-5,06 (м,1H) 4,45-4,29 (м,1H) 4,24-3,91 (м,2H) 2,78-2,58 (м,1H) 2,52-2,41 (м,1H) 2,23 (c,3H) 1,48 (д, J=7,1 Гц, 3H) 1,39 (д, J=6,1 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 493 (MH+)

[0130]

Пример 2

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,35 (д, J=7,8 Гц,1 H) 8,17-8,13 (м,1H) 7,48-7,23 (м,5H) 6,76-6,46 (м,1H) 6,28-6,06 (м,1H) 5,81-5,58 (м,1H) 5,43-5,02 (м,2H) 4,42-4,28 (м,1H) 4,21-3,96 (м,2H) 2,74-2,59 (м,1H) 2,54-2,41 (м,1H) 2,17 (c,3H) 1,50 (д, J=6,8 Гц, 3H) 1,42-1,33 (м,3H)

ESI-MS m/z 457 (MH+)

[0131]

Пример 3

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-фенилпропaн-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что 2-фенилпропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,26 (c,1H) 8,16-8,08 (м,1H) 7,44 (дд, J=8,8, 1,2 Гц, 2H) 7,38-7,28 (м,2H) 7,21 (тт, J=7,3, 1,27 Гц, 1H) 6,76-6,50 (м,1H) 6,25-6,10 (м,1H) 5,79-5,62 (м,1H) 5,45-5,19 (м,1H) 4,45-4,30 (м,1H) 4,26-4,01 (м,2H) 2,79-2,42 (м,2H) 2,29-2,22 (м,3H) 1,71 (c,6H) 1,43-1,36 (м,3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0132]

Пример 4

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилпропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-1-фенилпропaн-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ: 8,35 (ушир.д, J=8,0 Гц,1H) 8,17-8,11 (м,1H) 7,46-7,22 (м,5H) 6,74-6,50 (м,1H) 6,26-6,08 (м,1H) 5,79-5,60 (м,1H) 5,40-5,21 (м,1H) 4,99-4,87 (м,1H) 4,43-4,30 (м,1H) 4,23-3,94 (м,2H) 2,76-2,42 (м,2H) 2,21 (c,3H) 1,95-1,74 (м,2H) 1,44-1,34 (м,3H) 0,91 (т, J=7,3 Гц,3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0133]

Пример 5

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропaн-2-ил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что 2-(2-фторфенил)пропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,28 (c,1H) 8,11 (д, J=4,4 Гц,1H) 8,02 (c,1H) 7,47-7,42 (м,1H) 7,29-7,23 (м,1H) 7,15 (т, J=7,7 Гц,1H) 7,02 (ддд, J=12,5, 8,1, 1,1 Гц,1H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,79-5,70 (м,1H) 5,30-5,19 (м,1H) 4,53 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,38-4,25 (м,1,6H) 3,92 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,91-2,78 (м,1H) 2,70-2,60 (м,0,3H) 2,54-2,43 (м,0,7H) 2,28 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,88 (дт, J=10,0, 5,0 Гц, 6H) 1,53 (т, J=6,2 Гц,3H)

ESI-MS m/z 489 (MH+)

[0134]

Пример 6

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(3-хлорфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-(+)-1-(3-хлорфенил)этиламина гидрохлорид использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,22 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,75 (д, J=7,0 Гц,1H) 7,38 (c,1H) 7,35-7,27 (м,3H) 6,58-6,33 (м,2H) 5,78-5,66 (м,1H) 5,29-5,19 (м,2H) 4,56 (т, J=10,3 Гц,0,7H) 4,39-4,20 (м,1,6H) 3,89 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,94-2,82 (м,1H) 2,66-2,58 (м, 0,3H) 2,46 (дт, J=14,5, 6,1 Гц, 0,7H) 2,18 (д, J=11,0 Гц,3H) 1,60 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55-1,51 (м,3H)

ESI-MS m/z 491,493 (MH+)

[0135]

Пример 7

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-(2,4-дифторфенил)этил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-(+)-1-(2,4-дифторфенил)этиламина гидрохлорид использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,20 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,98 (д, J=7,7 Гц, 1H) 7,37-7,31 (м,1H) 6,90-6,81 (м,2H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,78-5,65 (м,1H) 5,44-5,37 (м,1H) 5,30-5,19 (м,1H) 4,56 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,38-4,23 (м,1,6H) 3,88 (т,J=8,8 Гц, 0,7H) 2,94-2,83 (м,1H) 2,66-2,57 (м, 0,3H) 2,51-2,42 (м, 0,7H) 2,27 (д, J=9,2 Гц,3H) 1,61 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,56-1,51 (м,3H)

ESI-MS m/z 493 (MH+)

[0136]

Пример 8

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(проп-1-ин-1-ил)-N-((S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (S)-2,2,2-трифтор-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,40 (д, J=8,8 Гц,1H) 8,16 (c,1H) 7,44 (c,5H) 6,58-6,38 (м,2H) 5,92-5,84 (м,1H) 5,81-5,69 (м,1H) 5,29-5,19 (м,1H) 4,55 (т, J=10,3 Гц, 0,7H) 4,41-4,24 (м, 1,6H) 3,91 (т, J=8,6 Гц, 0,7H) 2,92-2,80 (м,1H) 2,70-2,61 (м, 0,3H) 2,54-2,46 (м, 0,7H) 2,35 (д, J=8,4 Гц,3H) 1,54 (т, J=7,3 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 511 (MH+)

[0137]

Пример 9

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-(2-фенилпропaн-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 1(3), и того, что 2-фенилпропaн-2-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,15 (c,1H) 8,00 (c,1H) 7,44 (д, J=7,7 Гц,2H) 7,37 (т, J=7,7 Гц,2H) 7,32-7,27 (м, 1H) 6,66-6,30 (м,2H) 5,81-5,69 (м,1H) 5,38-5,24 (м,1H) 4,48 (т, J=9,9 Гц, 0,7H) 4,42-4,29 (м,1,6H) 4,22 (т, J=10,4 Гц, 0,7H) 2,77-2,68 (м,1H) 2,67-2,60 (м, 0,3H) 2,59-2,52 (м, 0,7H) 1,83 (c,6H) 1,60-1,52 (м,4H) 1,08-1,01 (м,2H) 0,92-0,88 (м,2H)

ESI-MS m/z 497 (MH+)

[0138]

Пример 10

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-(2,3-дифторфенил)этил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 1(3), и того, что (R)-(+)-1-(2,3-дифторфенил)этиламин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,17 (д, J=4,0 Гц,1H) 8,04 (д, J=8,1 Гц, 1H) 7,15-7,05 (м,3H) 6,58-6,36 (м,2H) 5,80-5,68 (м,1H) 5,49-5,42 (м,1H) 5,34-5,24 (м,1H) 4,52 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,37-4,23 (м, 1,6H) 3,92 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,86-2,76 (м,1H) 2,69-2,63 (м, 0,3H) 2,52-2,46 (м, 0,7H) 1,73-1,63 (м,4H) 1,55 (т, J=5,3 Гц, 3H) 1,14-1,07 (м,2H) 1,01-0,92 (м,2H)

ESI-MS m/z 519 (MH+)

[0139]

Пример 11

Пример 11(1)

Трет-бутил(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат

Добавляли соединение эталонного примера 1(2) (1,00 г), (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,503 г), диизопропилэтиламин (1,79 г) и N, N-диметилформамид (10 мл), и затем добавляли HATU (1,58 г). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После этого к реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением амидной формы (1,53 г). Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

К амидной форме (1,53 г) добавляли хлороформ (15 мл), и затем полученную смесь охлаждали до 0°C. После этого в реакционную смесь добавляли N-бромсукцинимид (0,88 г), и затем полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (1,39 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,21 (с, 1H) 7,42-7,28 (м,5H) 6,97 (д, J=7,3 Гц,1H) 5,36-5,29 (м,1H) 5,20-5,07 (м,1H) 4,30 (т, J=10,3 Гц,1H) 4,04-3,72 (м,2H) 3,00-2,86 (м,1H) 2,38 (дт, J=14,3, 6,0 Гц, 1H) 1,63 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,53-1,43 (м,12H)

ESI-MS m/z 543,545 (MH+)

[0140]

Пример 11(2)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению примера 11(1) (600 мг) добавляли хлороформ (3 мл) и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого в реакционную смесь добавляли трифторуксусную кислоту (4,44 г) и полученную таким образом смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем к остатку добавляли ацетонитрил (5 мл). Полученную смесь снова концентрировали при пониженном давлении с получением аминной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки.

К полученной аминной форме добавляли ацетонитрил (3 мл), и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли акрилоилхлорид (99,9 мг) и диизопропилэтиламин (713 мг) и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (этилацетат:метанол) с получением представляющего интерес продукта (281 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,20 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,42-7,36 (м,4H) 7,32-7,28 (м,1H) 7,00-6,94 (м,1H) 6,57-6,33 (м,2H) 5,76-5,66 (м,1H) 5,36-5,29 (м, 1H) 5,14-5,08 (м,1H) 4,71 (т, J=9,9 Гц, 0,7H) 4,42-4,23 (м,1,6H) 3,83 (т, J=8,6 Гц, 0,7H) 3,03-2,92 (м,1H) 2,60-2,57 (м, 0,3H) 2,44-2,40 (м, 0,7H) 1,64 (д, J=6,6 Гц, 3H) 1,56 (дд, J=11,7, 6,2 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 497,499 (MH+)

[0141]

Пример 11(3)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Добавляли соединение примера 11(2) (65 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий (9,2 мг), йодид меди(I) (5,0 мг), циклопропилацетилен (13,0 мг), триэтиламин (39,7 мг) и N, N-диметилформамид (1,3 мл), и затем внутренний объем реакционной системы замещали азотом. После этого смесь перемешивали при 70°С в течение 2,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол) с получением представляющего интерес продукта (50 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,22 (д, J=5,1 Гц,1H) 7,82 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,43-7,35 (м,4H) 7,30 (т, J=6,8 Гц,1H) 6,58-6,34 (м,2H) 5,77-5,66 (м,1H) 5,35-5,20 (м,2H) 4,54 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,35-4,25 (м, 1,6H) 3,88 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,90-2,78 (м,1H) 2,65-2,56 (м, 0,3H) 2,49-2,40 (м, 0,7H) 1,63 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,56-1,45 (м,4H) 1,03-0,91 (м,2H) 0,84-0,69 (м,2H)

ESI-MS m/z 483 (MH+)

[0142]

Пример 12

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3,3-диметилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 3,3-диметил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,22 (д,J=5,9 Гц, 1H) 7,75 (д, J=7,7 Гц, 1H) 7,38 (дт, J=15,5, 7,1 Гц, 4H) 7,31-7,25 (м,1H) 6,57-6,34 (м,2H) 5,77-5,65 (м,1H) 5,44-5,35 (м,1H) 5,33-5,15 (м,1H) 4,63 (т, J=10,1 Гц, 0,7H) 4,40-4,20 (м, 1,6H) 3,89 (т, J=8,8 Гц, 0,7H) 2,90-2,76 (м,1H) 2,65-2,55 (м, 0,3H) 2,49-2,40 (м, 0,7H) 1,85 (c,1H) 1,64 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55 (д, J=5,9 Гц,3H) 1,26 (c,9H)

ESI-MS m/z 499 (MH+)

[0143]

Пример 13

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(3-метокси-3-метилбут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 3-метокси-3-метил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,17 (с, 1H) 7,61 (д, J=7,7 Гц,1H) 7,43-7,35 (м,4H) 7,30 (д, J=7,0 Гц,1H) 6,57-6,33 (м,2H) 5,81-5,68 (м,1H) 5,43-5,33 (м,1H) 5,29-5,12 (м,1H) 4,59 (т, J=10,1 Гц,0,7H) 4,38-4,22 (м,1,6H) 3,92 (т, J=8,6 Гц,0,7H) 3,30 (c,3H) 2,86-2,72 (м,1H) 2,70-2,60 (м, 1,3H) 2,52-2,44 (м, 0,7H) 1,64 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,55 (т, J=5,5 Гц,3H) 1,46 (д, J=2,2 Гц,6H)

ESI-MS m/z 515 (MH+)

[0144]

Пример 14

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(бут-1-ин-1-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 1-триметилсилил-1-бутин и фторид тетра-н-бутиламмония использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,26-8,25 (м,1H) 7,79 (д, J=7,3 Гц,1H) 7,42-7,36 (м,4H) 7,32-7,30 (м,1H) 6,57-6,37 (м,2H) 5,76-5,66 (м,1H) 5,33-5,20 (м,2H) 4,57 (т, J=10,3 Гц,0,7H) 4,36-4,22 (м,1,6H) 3,88 (т, J=8,8 Гц,0,7H) 2,92-2,81 (м,1H) 2,65-2,57 (м,0,3H) 2,48-2,38 (м, 2,7H) 1,63 (д, J=7,0 Гц,3H) 1,54-1,51 (м,3H) 1,17-1,12 (м,3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0145]

Пример 15

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-(2-фторфенил)пропан-2-ил)-6-(3-метилбут-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 11, за исключением того, что 2-(2-фторфенил)пропaн-2-амин использовали вместо (R)-(+)-1-фенилэтиламина в примере 11(1), и того, что 3-метил-1-бутин использовали вместо циклопропилацетилена в примере 11(3).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 7,92 (с, 1H) 7,44 (т, J=7,9 Гц,1H) 7,30-7,23 (м,1H) 7,14 (т, J=7,5 Гц,1H) 7,02 (дд, J=12,6, 8,2 Гц,1H) 6,58-6,35 (м,2H) 5,80-5,69 (м,1H) 5,33-5,16 (м,1H) 4,58 (т, J=9,9 Гц,0,7H) 4,38-4,23 (м,1,6H) 3,91 (т, J=8,4 Гц,0,7H) 3,03-2,93 (м,1H) 2,89-2,75 (м,1H) 2,69-2,60 (м,0,3H) 2,53-2,43 (м, 0,7H) 1,88 (c,6H) 1,55 (д, J=5,1 Гц, 3H) 1,36 (д, J=6,6 Гц,6H)

ESI-MS m/z 517 (MH+)

[0146]

Пример 16

Пример 16(1)

Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-((тозилокси)метил)пирролидин-1-карбоксилат

Трет-бутил-(2R,4S)-4-(бензилокси)-2-(гидроксиметил)пирролидин-1-карбоксилат (2,0 г) растворяли в метиленхлориде (20 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого в реакционный раствор добавляли 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (2,2 г) и тозилатхлорид (1,9 г), и затем температуру смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 4 ч. После этого к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (4,32 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 7,78 (д, J=8,1 Гц,2H), 7,42-7,29 (м,7H), 4,57-4,41 (м,2H), 4,39-3,96 (м,4H), 3,61-3,20 (м,2H),2,46 (c,3H), 2,27-2,02 (м,2H), 1,48-1,31 (м,9H)

ESI-MS m/z 462 (MH⁺)

[0147]

Пример 16(2)

Трет-бутил-(2S,4S)-4-(бензилокси)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

В атмосфере азота йодид меди (2,04 г) суспендировали в простом диэтиловом эфире (12 мл) и полученную суспензию затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли 1,04 М раствор метиллития в простом диэтиловом эфире (0,36 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 30 мин. После этого в реакционную смесь добавляли раствор соединения примера 16(1) (1,98 г) в метиленхлориде (4,0 мл), и затем температуру полученной смеси повышали до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до 0°С, и затем к реакционной смеси добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (707 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 7,42-7,25 (м,5H), 4,66-4,40 (м,2H), 4,17-4,03 (м,1H), 4,00-3,26 (м,3H), 2,24-2,09 (м,1H), 1,96-1,71 (м,2H), 1,48 (c,9H),1,45- 1,31 (м,1H), 0,86 (т, J=7,4 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 306 (MH⁺)

[0148]

Пример 16(3)

Трет-бутил-(2S,4S)-2-этил-4-гидроксипирролидин-1-карбоксилат

Соединение примера 16(2) (1,06 г) и катализатор 10% палладий на угле (160 мг) суспендировали в этаноле (11 мл) и THF (11 мл) с последующим замещением водородом, и продукт реакции затем перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. После этого реакционную смесь фильтровали через целит и затем промывали этанолом, и фильтрат затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (709 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 4,46-4,36 (м,1H), 4,02-3,81 (м,1H), 3,71-3,35 (м,2H), 2,15-1,99 (м,1H), 1,95-1,72 (м,2H), 1,49 (c,9H), 1,46-1,35 (м,1H), 0,86 (т, J=7,5 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 216 (MH⁺)

[0149]

Пример 16(4)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

Соединение примера 16(3) (709 мг) и 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (1,11 г) растворяли в THF (7,1 мл), и полученный раствор затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли трифенилфосфин (1,3 г) и диизопропилазодикарбоксилат (1,00 мл), и температуру полученной смеси затем повышали до комнатной температуры, с последующим перемешиванием смеси в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток затем очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением соответствующего связующего соединения. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. В баростойкую трубку добавляли полученное связующее соединение, THF (5,4 мл) и аммиачную воду (5,4 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 100°С в течение 14 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и далее выливали в воду (12,8 мл), и затем смешанный раствор экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (797 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,29 (c,1H), 7,14 (c,1H), 5,67 (ушир.c,2H), 5,32-5,09 (м,1H), 4,24-4,08 (м,1H), 3,95-3,79 (м,1H), 3,46 (дд, J=9,3, 11,0 Гц, 1H), 2,70-2,55 (м,1H), 2,06-1,95 (м,1H), 1,59-1,51 (м,2H), 1,49 (c,9H), 0,91 (т, J=7,5 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 458 (MH⁺)

[0150]

Пример 16(5)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-6-бром-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-этилпирролидин-1-карбоксилат

Соединение примера 16(4) (797 мг), дихлорбис(трифенилфосфин)дипалладий (25 мг) и (R)-(+)-1-фенилэтиламин (0,55 мл) суспендировали в DMF (8,0 мл) с последующим замещением монооксидом углерода, и продукт реакции затем перемешивали при 80°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем к ней добавляли воду, и далее полученную смесь экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением соответствующей амидной формы. Полученное соединение использовали в последующей реакции без дополнительной очистки. Полученную амидную форму растворяли в ацетонитриле (8,2 мл), и полученный раствор затем охлаждали до -10°С. После этого к раствору медленно по каплям добавляли раствор N-бромсукцинимида (457 мг) в ацетонитриле (8,2 мл), и реакционную смесь затем перемешивали в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляли водный раствор сульфита натрия и водный раствор гидрокарбоната натрия, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (650 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,23 (c,1H), 7,49-7,29 (м,5H), 6,98 (д, J=7,4 Гц, 1H), 5,41-5,28 (м,1H), 5,24-5,04 (м,1H), 4,38-4,22 (м,1H), 4,07-3,68 (м,1H), 3,19-2,83 (м,1H), 2,43-2,29 (м,1H), 2,25-1,67 (м,3H), 1,66 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,51 (c,9H), 0,98 (т, J=7,4 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 557,559 (MH⁺)

[0151]

Пример 16(6)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-бром-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению примера 16(5) (650 мг) добавляли ацетонитрил (9,7 мл) и полученную смесь затем охлаждали до 0°С. После этого добавляли йодид натрия (1,05 г) и триметилсилилхлорид (0,89 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого к реакционной смеси последовательно добавляли этанол (9,7 мл), изопропилэтиламин (2,0 мл) и ангидрид акриловой кислоты (0,16 мл), и полученную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляли аммиачную воду и воду, и полученную смесь затем экстрагировали этилацетатом. Собранный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, затем сушили над безводным сульфатом натрия и далее концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон) с получением представляющего интерес продукта (256 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,27-8,16 (м,1H), 7,47-7,29 (м,5H), 6,98 (д, J=7,3 Гц,1H), 6,61-6,29 (м,2H), 5,84-5,63 (м,1H), 5,43-5,26 (м,1H), 5,22-5,01 (м,1H), 4,80-3,82 (м,3H), 3,23-2,92 (м,1H), 2,58-2,30 (м,1H), 2,22-1,79 (м,2H), 1,66 (д, J=7,0 Гц, 3H),1,07-0,96 (м,3H)

ESI-MS m/z 511,513 (MH⁺)

[0152]

Пример 16(7)

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

1,0 М раствор пропина в DMF (0,70 мл) добавляли к соединению примера 16(6) (120 мг), ацетонитрилу (1,2 мл), триэтиламину (0,10 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (8,2 мг) и йодиду меди(I) (0,4 мг), с последующим замещением азотом, и смесь затем перемешивали при 60°С в течение 2 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор хлорида аммония. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (этилацетат:метанол) с получением представляющего интерес продукта (102 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,26 (c,1H), 7,79 (ушир.д, J=7,0 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м,5H), 6,58-6,31 (м,2H), 5,80-5,65 (м,1H), 5,33-5,15 (м,2H), 4,59-3,85 (м,3H), 3,03-2,33 (м,2H), 2,25-1,70 (м,5H), 1,65 (д, J=6,8 Гц, 6H), 1,09-0,91 (м,3H)

ESI-MS m/z 471 (MH⁺)

[0153]

Пример 17

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-этилпирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 M раствора пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,31-8,16 (м,1H), 7,84 (д, J=7,4 Гц, 1H), 7,46-7,30 (м,5H), 6,64-6,32 (м,2H), 5,82-5,67 (м,1H), 5,39-5,17 (м,2H), 4,67-3,81 (м,3H), 3,02-2,80 (м,1H), 2,62-1,71 (м,3H), 1,65 (д, J=6,9 Гц, 3H), 1,58-1,47 (м,1H), 1,06-0,92 (м,5H), 0,85-0,70 (м,2H)

ESI-MS m/z 497 (MH⁺)

[0154]

Пример 18

7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(метоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что трет-бутил-(2R,4S)-4-гидрокси-2-(метоксиметил)пирролидин-1-карбоксилат использовали вместо соединения примера 16(3) в примере 16(4), и что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 М раствора пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,29-8,22 (м,1H), 7,86-7,80 (м,1H), 7,36-7,44 (м,4H), 7,34-7,28 (м,1H), 6,48-6,37 (м,2H), 5,78-5,69 (м,1H), 5,29-5,15 (м,2H), 4,55-4,30 (м,2H), 3,96-3,65 (м,3H), 3,42 (c,3H), 3,18-3,06 (м, 0,3H), 2,90-2,80 (м, 0,3H), 2,64-2,58 (м, 0,3H), 2,47-2,35 (м, 0,7H),1,64 (д, 3H, J=6,9 Гц), 1,58-1,47 (м,1H), 1,04-0,94 (м,2H), 0,87-0,69 (м,2H)

ESI-MS m/z 513 (MH⁺)

[0155]

Пример 19

7-((3R,5R)-1-акрилоил-5-(этоксиметил)пирролидин-3-ил)-4-амино-6-(циклопропилэтинил)-N-((R)-1-фенилэтил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 16, за исключением того, что трет-бутил-(2R,4S)-2-(этоксиметил)-4-гидроксипирролидин-1-карбоксамид использовали вместо соединения примера 16(3) в примере 16(4), и что циклопропилацетилен использовали вместо 1,0 М раствора пропина в DMF в примере 16(7).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,28-8,18 (м,1H), 7,84 (ушир.д, J=7,0 Гц,1H), 7,47-7,29 (м,5H), 6,82-6,35 (м,2H), 5,79-5,68 (м,1H), 5,40-5,14 (м,2H), 4,63-3,53 (м,7H), 3,20-2,79 (м,1H), 2,69-2,40 (м,1H), 1,67-1,63 (м,3H), 1,59-1,47 (м,1H),1,22 (т, J=7,0 Гц, 3H), 1,05-0,92 (м,2H), 0,87-0,72 (м,2H)

ESI-MS m/z 527 (MH⁺)

[0156]

Сравнительный пример 1

4-Амино-N-(4-(метоксиметил)фенил)-7-(1-метилциклопропил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали способом, описанным в примере 95 Международной публикации WO 2017/146116.

ESI-MS m/z 390 (MH+)

[0157]

Сравнительный пример 2

1-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(4-(2-(диметиламино)-2-оксоэтил)-2,3-диметилфенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали способом, описанным в примере 79 Международной публикации WO 2017/038838.

ESI-MS m/z 505 (MH+)

[0158]

Сравнительный пример 3

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(циклогексилметил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что циклогексилметанамин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ:8,68-8,31 (м,1H) 8,20-8,10 (м,1H) 8,09-7,97 (м,1H) 7,59-7,20 (м,1H) 6,74-6,49 (м,1H) 6,25-6,09 (м,1H) 5,78-5,60 (м,1H) 5,40-5,20 (м,1H) 4,44-4,29 (м,1H) 4,23-3,92 (м,2H) 3,25-3,12 (м,2H) 2,76-2,40 (м,2H) 2,25 (c,3H) 1,81-1,45 (м,5H) 1,43-1,34 (м,3H) 1,30-0,90 (м,6H)

ESI-MS m/z 449 (MH+)

[0159]

Сравнительный пример 4

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-(2-метилбензил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что o-толилметанамин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (DMSO-d6)δ:8,37-8,27 (м,1H) 8,19-8,09 (м,1H) 7,39-7,30 (м,1H) 7,26-7,11 (м,4H) 6,68-6,48 (м,1H) 6,24-6,07 (м,1H) 5,80-5,60 (м,1H) 5,36-5,17 (м,1H) 4,52 (д, J=5,7 Гц, 2H) 4,42-4,28 (м,1H) 4,22-3,92 (м,2H) 2,73-2,42 (м,2H) 2,33 (c,3H) 2,02 (c,3H) 1,43-1,32 (м,3H)

ESI-MS m/z 457 (MH+)

[0160]

Сравнительный пример 5

7-((3R,5S)-1-акрилоил-5-метилпирролидин-3-ил)-4-амино-N-метил-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

Указанное в заголовке соединение получали таким же образом, как и в примере 1, за исключением того, что (R)-N-метил-1-фенилэтан-1-амин использовали вместо (R)-1-(3,5-дифторфенил)этан-1-амина в примере 1(5).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,23 (д, J=5,9 Гц,1H) 7,50-7,28 (м,4H) 7,09-6,88 (м,1H) 6,57-6,34 (м,2H) 5,79-5,64 (м,1H) 5,22 (т, J=9,3 Гц, 1H) 4,48 (т, J=9,7 Гц, 0,6H) 4,39-4,20 (м,1,9H) 3,90 (т, J=8,6 Гц, 0,5H) 2,85 (c,4H) 2,66-2,63 (м, 0,4H) 2,51-2,44 (м, 0,6H) 2,07 (c,2H) 1,66 (д, J=4,8 Гц, 3H) 1,52 (д, J=5,9 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0161]

Сравнительный пример 6(1)

Трет-бутил-(2S,4R)-4-(4-амино-5-(((R)-1-фенилэтил)карбамоил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-2-метилпирролидин-1-карбоксилат

1,0 М раствор пропина в DMF (2,1 мл) добавляли к соединению примера 11(1) (230 мг), ацетонитрилу (4,6 мл), триэтиламину (0,29 мл), PdCl₂(PPh₃)₂ (5,9 мг) и йодиду меди(I) (1,6 мг), с последующим замещением азотом, и полученную смесь затем перемешивали при 70°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем к смеси добавляли этилацетат и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия. Полученную таким образом смесь экстрагировали этилацетатом, и собранный органический слой промывали водой и затем насыщенным солевым раствором. Полученный продукт сушили над безводным сульфатом натрия и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат) с получением представляющего интерес продукта (193 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,23 (с, 1H) 7,79 (д, J=6,8 Гц, 1H) 7,46-7,27 (м,5H) 5,40-5,17 (м,2H) 4,28-3,64 (м,3H) 2,85-2,68 (м,1H) 2,46-2,36 (м,1H) 2,15-1,97 (м,3H) 1,62 (д, J=6,8 Гц, 3H) 1,56-1,32 (м,12H)

ESI-MS m/z 503 (MH+)

[0162]

Сравнительный пример 6(2)

4-Амино-7-((3R,5S)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамида гидрохлорид

К соединению сравнительного примера 6(1) (530 мг) добавляли 4 М раствор соляной кислоты в 1,4-диоксане (5 мл), и полученную смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, с получением представляющего интерес продукта (420 мг).

ESI-MS m/z 403 (MH+)

[0163]

Сравнительный пример 6(3)

4-Амино-7-((3R,5S)-1-((E)-бут-2-енoил)-5-метилпирролидин-3-ил)-N-((R)-1-фенилэтил)-6-(проп-1-ин-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбоксамид

К соединению сравнительного примера 6(2) (18 мг) добавляли ацетонитрил (0,5 мл), и затем полученную смесь охлаждали до 0°C. После этого в реакционную смесь добавляли акрилоилхлорид (0,004 мл) и диизопропилэтиламин (0,036 мл), и полученную таким образом смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. После этого реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и затем подвергали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (вода: ацетонитрил (0,1% муравьиная кислота)) с получением представляющего интерес продукта (8,7 мг).

¹H-ЯМР (CDCl₃)δ: 8,31 (с, 1H) 8,14 (д, J=6,2 Гц, 1H) 7,77 (д, J=7,0 Гц, 1H) 7,39-7,36 (м,4H) 7,33-7,31 (м,1H) 7,03-6,90 (м,1H) 6,06 (дд, J=14,3 Гц, 1H) 5,28-5,17 (м,2H) 4,48 (т, J=10,1 Гц,1H) 4,35-4,20 (м,2H) 3,88 (т, 8,8 Гц, 1H) 2,84-2,76 (м,1H) 2,64-2,40 (м,1H) 2,05 (д, J=10,6 Гц,3H) 1,92 (д, J=6,6 Гц,1H) 1,85 (д, J=7,0 Гц, 2H) 1,62 (д, J=7,0 Гц, 3H) 1,55 (дд, J=9,0, 5,7 Гц, 3H)

ESI-MS m/z 471 (MH+)

[0164]

Соединения, синтезированные в описанных выше примерах и сравнительных примерах, показаны ниже.

[Таблица B]

Пример №	Структурная формула	Пример №	Структурная формула
1		2
3		4
5		6
7		8
9		10
11		12
13		14
15		16
17		18
19

[0165]

[Таблица C]

Сравн. прим. №	Структурная формула	Сравн. прим. №	Структурная формула
1		2
3		4
5		6

[0166]

Экспериментальный пример 1. Измерение ингибирующего эффекта (in vitro) на активность фосфорилирования HER2

Для определения условий для способа измерения ингибирующей активности in vitro соединения в отношении активности фосфорилирования HER2, основанного на отчете о HER2 киназной реакции с использованием в качестве субстрата пептида, имеющего такую же последовательность (5-FAM-EEPLYWSFPAKKK-CONH₂), что и пептид ProfilerPro Peptide 22 от PerkinElmer (Xie H et al., PLoS One.2011; 6(7): e21487), в качестве субстрата использовали пептид ProfilerPro Peptide 22. Очищенный рекомбинантный человеческий белок HER2, используемый в настоящем испытании, приобретали у Carna Biosciences, Inc. Что касается измерения ингибирующей активности соединений, сначала соединение настоящего изобретения разбавляли поэтапно диметилсульфоксидом (ДМСО). Впоследствии, белок HER2, субстратный пептид (конечная концентрация: 1 мкM), хлорид марганца (конечная концентрация: 10 мМ), АТФ (конечная концентрация: 5 мкM), а также соединение настоящего изобретения в растворе ДМСО (конечная концентрация ДМСО: 5%) добавляли в буфер для киназной реакции (13,5 мМ Трис (рН 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,009% Tween 20), и затем полученную смесь инкубировали при 25°C в течение 30 мин, чтобы провести киназную реакцию. К реакционному раствору добавляли ЭДТА до конечной концентрации 30 мМ, чтобы остановить реакцию. И, наконец, используя ридер LabChip (зарегистрированный товарный знак) EZ Reader II (Perkin Elmer), нефосфорилированный субстратный пептид (S) и фосфорилированный пептид (P) разделяли и детектировали в соответствии с микроканальным капиллярным электрофорезом. На основании высот пиков S и P получали количество реакционной среды фосфорилирования, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% реакции фосфорилирования, определяли как значение IC50 (нМ). Результаты показаны в таблице 1.

[0167]

Экспериментальный пример 2. Измерение ингибирующего действия (in vitro) в отношении активности фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20 (HER2ex20insYVMA)

Для определения условий для способа измерения ингибирующей активности in vitro соединения в отношении активности фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20, как и в случае с HER2, в качестве субстрата использовали пептид ProfilerPro Peptide 22. Очищенный рекомбинантный человеческий инсерционный мутантный белок HER2 экзона 20 (A775_G776insYVMA) показан в SEQ ID NO: 7 и был приобретен у SignalChem. Что касается измерения ингибирующей активности соединений, сначала соединение настоящего изобретения разбавляли поэтапно диметилсульфоксидом (ДМСО). Впоследствии, инсерционный мутантный белок HER2 экзона 20 и соединение настоящего изобретения в растворе ДМСО (конечная концентрация ДМСО: 5%) добавляли в буфер для киназной реакции (13,5 мМ Трис (рН 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,009% Tween 20), и полученную смесь затем предварительно инкубировали при 25°C в течение 30 мин. После этого в реакционную смесь добавляли субстратный пептид (конечная концентрация: 1 мкM), хлорид марганца (конечная концентрация: 25 мM), хлорид магния (конечная концентрация: 20 мМ) и АТФ (конечная концентрация: 200 мкM), и полученную таким образом смесь затем инкубировали при 25°C в течение 220 мин, чтобы провести киназную реакцию. К реакционному раствору добавляли ЭДТА до конечной концентрации 30 мМ, чтобы остановить реакцию. И, наконец, используя ридер LabChip (зарегистрированный товарный знак) EZ Reader II (Perkin Elmer), нефосфорилированный субстратный пептид (S) и фосфорилированный пептид (P) разделяли и детектировали в соответствии с микроканальным капиллярным электрофорезом. На основании высот пиков S и P получали количество реакционной среды фосфорилирования, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% реакции фосфорилирования, определяли как значение IC50 (нМ). Результаты показаны в таблице 1.

[0168]

Таблица 1
Пример №	HER2 ингибирующая активность значение IC50 (нM)	HER2ex20insYVMA ингибирующая активность значение IC50 (нM)
1	2,7	0,34
2	2,5	< 0,30
3	5,8	< 0,30
4	3,9	0,37
5	7,7	0,38
6	2,8	< 0,30
7	4,9	0,39
8	10	< 0,30
9	5,6	0,32
10	2,2	< 0,30
11	3,2	< 0,30
12	3,4	0,39
13	5,2	0,44
14	2,2	< 0,30
15	4,6	0,42
16	3,3	0,44
17	2,9	0,54
18	2,3	< 0,30
19	4,4	1,1
Сравн. прим. 1	> 10000	> 10000
Сравн. прим. 2	19	4,4
Сравн. прим. 3	630	380
Сравн. прим. 4	54	11
Сравн. прим. 5	130	14
Сравн. прим. 6	390	> 10000

[0169]

Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей активностью в отношении фосфорилирования HER2 и в отношении фосфорилирования инсерционного мутанта HER2 экзона 20.

[0170]

Экспериментальный пример 3. Измерение ингибирующей рост активности в отношении HER2-экспрессирующей клеточной линии

Клетки SK-BR-3 в качестве клеточной линии рака молочной железы человека, сверхэкспрессирующей HER2, суспендировали в среде McCoy's 5a (производства Life Technologies) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. Клеточную суспензию высевали в каждую лунку 384-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. После этого соединение по настоящему изобретению растворяли в ДМСО и соединение разбавляли до 500-кратной конечной концентрации в ДМСО. Соединение в растворе ДМСО разбавляли раствором ДМСО или средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,2%. Полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) и затем рассчитывали процент ингибирования роста в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).

Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100

T: Интенсивность испускания из лунки, в которую добавляли тестируемое соединение

C: Интенсивность испускания из лунки, в которую не добавляли тестируемое соединение

Результаты приведены в следующей ниже таблице 2.

[0171]

Экспериментальный пример 4. Измерение ингибирующей рост активности в отношении клеточной линии, экспрессирующей инсерционный мутант HER2 экзона 20

Ингибирующую рост активность в отношении инсерционного мутанта HER2 экзона 20 измеряли с использованием клеток Ba/F3, которые представляли собой клеточную линию предшественников В-лимфоцитов мыши, в которую был введен ген человеческого инсерционного мутанта HER2 экзона 20. Клетки Ba/F3 поддерживали в среде RPMI-1640 (Thermo Fisher Scientific) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 Ед/мл пенициллина, 100 μг/мл стрептомицина (Thermo Fisher Scientific) и 1 нг/мЛ мышиного интерлейкина-3 (mIL-3) (CST). После этого вектор pcDNA3.1-hyg(+), в который были включены ген человеческого инсерционного мутанта HER2 экзона 20 (A775_G776insYVMA (HER2ex20insYVMA)), связывающая внутреннюю рибосому последовательность (IRES) и ген Kusabira-Orange, был введен в клетки Ba/F3 в соответствии с методом электропорации с использованием набора Amaxa (зарегистрированный товарный знак) Cell Line Nucleofector (зарегистрированный товарный знак) Kit V. Клетки Ba/F3, экспрессирующие инсерционный мутант HER2 экзона 20 (Ba/F3-HER2insYVMA), которые отбирали с помощью гидромицина В (Nacalai Tesque), демонстрировали mIL-3-независимый рост.

После оценки ингибирующей клеточный рост активности, клетки Ba/F3-HER2insYVMA суспендировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клеточную суспензию высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. Соединение настоящего изобретения растворяли в ДМСО и затем разбавляли ДМСО или средой, используемой в суспензии клеток. Полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,2%. Полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) и затем рассчитывали процент ингибирования роста в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).

Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100

[0172]

Таблица 2
Пример №	Активность ингибирования роста клеток SK-BR-3 значение IC50 (нM)	Активность ингибирования роста клеток HER2ex20insYVMA значение IC50 (нM)
1	9,3	17
2	2,8	12
3	4,5	25
4	5,6	20
5	4,0	14
6	10	28
7	12	40
8	14	26
9	4,2	24
10	13	29
11	6,6	29
12	17	43
13	14	23
14	8,1	27
15	7,0	40
16	1,4	9,7
17	4,0	20
18	3,4	14
19	17	50
Сравн. прим. 1	> 10000	> 10000
Сравн. прим. 2	25	1900
Сравн. прим. 3	4300	3400
Сравн. прим. 4	340	900
Сравн. прим. 5	400	1300
Сравн. прим. 6	3000	4100

[0173]

Из приведенных выше результатов было установлено, что группа соединений настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей рост клеток активностью даже в отношении экспрессирующей HER2 клеточной линии (SK-BR-3), а также в отношении клеточной линии, экспрессирующей инсерционный мутант HER2 экзона 20 (Ba/F3-HER2insYVMA).

[0174]

Экспериментальный пример 5. Измерение ингибирующей рост активности в отношении HER2-экспрессирующей клеточной линии (NCI-N87)

Клетки NCI-N87 в качестве клеточной линии рака желудка человека, сверхэкспрессирующей HER2 (American Type Culture Collection, кат. № ATCC (зарегистрированный товарный знак) CRL-5822), суспендировали в среде RPMI1640 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. После этого, клеточную суспензию высевали в каждую лунку 96-луночного плоскодонного микропланшета и затем культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 1 суток. После этого соединение по настоящему изобретению растворяли в ДМСО и соединение разбавляли до 1000-кратной конечной концентрации в ДМСО. Соединение в растворе ДМСО разбавляли средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,1%. Что касается контрольной лунки, то ДМСО разбавляли средой, используемой в суспензии клеток, и полученный раствор затем добавляли в каждую лунку культурального планшета так, чтобы конечная концентрация ДМСО составляла 0,1%. После добавления раствора лекарственного средства полученную смесь дополнительно культивировали в сосуде для культивирования, содержащем 5% углекислый газ, при 37°С в течение 3 суток. После завершения культивирования в течение 3 суток в присутствии соединения клетки подсчитывали с помощью CellTiter-Glo 2.0 (производства Promega) в соответствии с протоколами, рекомендованными Promega. Процент ингибирования роста рассчитывали в соответствии со следующим уравнением. Концентрацию соединения, при которой рост клеток может быть ингибирован на 50%, определяли как IC50 (нМ).

Процент ингибирования роста (%) = (C-T)/(C) × 100

Результаты приведены в следующей ниже таблице 3.

[0175]

Таблица 3
Пример №	Активность ингибирования роста клеток NCI-N87 значение IC50 (нM)
1	10,7
2	3,0
3	4,7
4	5,6
5	7,0
6	8,5
7	11,1
8	9,7
9	6,2
10	10,5
11	9,9
12	15,0
13	11,7
14	9,1
15	11,6
16	0,9
17	2,2
18	2,6
19	7,9

[0176]

Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения обладает превосходной ингибирующей рост клеток активностью даже в отношении сверхэкспрессирующей HER2 клеточной линии (NCI-N87).

[0177]

Экспериментальный пример 6. Оценка пероральной абсорбируемости

Соединение настоящего изобретения суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 н. соляной кислоте, и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сут. Через 0,5, 1, 2, 4 и 6 ч после окончания перорального введения из лицевой вены через определенные интервалы времени отбирали кровь для получения плазмы. Концентрацию соединения в полученной плазме измеряли с помощью ЖХМС/МС и оценивали пероральную абсорбируемость соединения по настоящему изобретению.

Результаты приведены в следующей ниже таблице 4.

[0178]

Таблица 4
Пример №	AUC 0-6 ч (мкM⋅ч)	Пример №	AUC 0-6 ч (мкM⋅ч)
1	50	2	15
3	24	4	12
5	20	6	17
7	15	8	15
9	51	10	50
11	31	12	36
13	18	14	27
15	34	16	15
17	21	18	15
19	6,1	Сравн. прим. 2	1,5

[0179]

Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения содержалось в достаточной концентрации в плазме, так что данное соединение проявляло благоприятную пероральную абсорбируемость. В отличие от этого, соединение сравнительного примера 2 обладало пероральной абсорбируемостью, которая была более чем в 4 раза слабее, чем у соединения настоящего изобретения.

[0180]

Экспериментальный пример 7. Оценка свойств проникновения в головной мозг

Соединение настоящего изобретения суспендировали или растворяли в 0,5% водном растворе HPMC и 0,1 н. соляной кислоте, и полученную суспензию или раствор вводили перорально мышам BALB/cA (CLEA Japan, Inc.) в дозе 50 мг/кг/сут. Через 0,5 ч после окончания перорального введения из лицевой вены отбирали кровь и весь головной мозг вырезали для получения образцов плазмы и головного мозга. К полученному образцу головного мозга добавляли воду в объеме, в 3 раза превышающем объем образца мозга, и полученный продукт затем гомогенизировали с помощью ультразвукового гомогенизатора для получения гомогената головного мозга. Концентрацию соединения в полученной плазме и гомогенате головного мозга измеряли с помощью ЖХМС/МС, и свойства проникновения в головной мозг данного соединения оценивали по концентрации соединения в головном мозге/плазме.

Результаты приведены в следующей ниже таблице 5.

[0181]

Таблица 5
Пример №	Концентрация соединения в плазме (мкМ)	Концентрация соединения в головном мозге (мкM)	Значение Kp (концентрация соединения в головном мозге/плазме)
1	9,1	1,4	0,15
2	6,6	1,8	0,27
3	11	1,4	0,13
4	8,3	2,8	0,34
5	15	2,2	0,15
6	7,5	1,3	0,17
7	7,9	1,1	0,14
8	9,9	3,3	0,33
9	13	2,4	0,18
10	13	2,4	0,18
11	12	2,7	0,23
12	11	3,2	0,29
13	13	2,8	0,22
14	9,9	2,1	0,21
15	8,1	1,2	0,15
16	12	4,4	0,35
17	17	6,5	0,39
18	7,7	1,6	0,22
19	4,9	0,7	0,14
Сравн. прим. 2	1,6	0,008	0,005

[0182]

Из приведенных выше результатов было установлено, что соединение настоящего изобретения присутствовало в головном мозге/плазме в высокой концентрации (значение Kp) и, таким образом, проявляло благоприятные свойства проникновения в головной мозг. В то же время, концентрация в головном мозге соединения сравнительного примера 2 была более чем в 80 раз ниже, чем у соединения настоящего изобретения.

[0183]

Экспериментальный пример 8. Испытание на подтверждение противоопухолевого эффекта (in vivo) на моделях прямой трансплантации в головной мозг, в которых непосредственно трансплантировалась экспрессирующая HER2 клеточная линия с введенным геном люциферазы (NCI-N87-luc)

Для подтверждения противоопухолевых эффектов тестируемого соединения на моделях прямой трансплантации в головной мозг использовали NCI-N87-Luc, которую получали путем введения гена люциферазы в NCI-N87, представляющей собой клеточную линию рака желудка человека, приобретенную от American Type Culture Collection. NCI-N87-Luc добавляли в среду RPMI-1640, содержащую 10% фетальную бычью сыворотку (FBS) (с добавлением 4,5 г/л глюкозы, 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия) (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), и затем эту клеточную линию культивировали в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C.

Клетки NCI-N87-Luc повторно суспендировали в PBS в концентрации 6,25×10⁷ клеток/мл.

Используя ушную складку мыши, бесшерстную мышь в возрасте 6-7 недель (BALB/cAJcl-nu/nu, CLEA Japan, Inc.) фиксировали в устройстве для стереотаксического исследования мозга, и кожу на верхней части мозга дезинфицировали ватой со спиртом, и затем иссекали хирургическим ножом.

Микродрель использовали для сверления отверстия в черепе, и затем, используя иглу, манипулятор и шприцевой насос, 4 мкл клеточной суспензии трансплантировали в головной мозг со скоростью 0,8 мкл/мин.

В качестве контроля количества опухоли головного мозга, приблизительно через 3 недели после трансплантации измеряли общий поток (фотон/с) во всех случаях выживания с использованием IVIS (PerkinElmer, Inc., модель: Lumina II). На основании полученных результатов 6 животных распределяли на группы с использованием программы разделения на группы MiSTAT (версия 2.00).

Тестируемое соединение перорально вводили мышам один раз в сутки, каждый день, в течение 21 дня со следующего дня после разделения на группы (дни 1-21).

Для определения наличия или отсутствия эффектов использовали значение (Log10), полученное логарифмическим преобразованием общего потока на дату определения. Тестируемое соединение вводили мышам в дозе 25 мг/кг/сут в примере 2 и в примере 11, в то время как его вводили в дозе 50 мг/кг/сут в примере 12.

Составляли график со значением, полученным путем логарифмического преобразования (Log10) среднего общего потока для каждой группы, отложенным по вертикальной оси, и с числом дней (дни) после трансплантации - по горизонтальной оси. Наблюдали изменение общего потока с течением времени в период введения лекарственного средства.

В качестве тестируемых соединений использовали соединения примера 2, примера 11 и примера 12, и в качестве контроля использовали 0,1 н. HCl и 0,5% водный раствор HPMC.

[0184]

Результаты показаны на следующих фиг.1 - фиг.3. Значение, полученное логарифмическим преобразованием (Log10) общего потока на 22-й день в каждой группе, анализировали с помощью критерия Даннетта или t-критерия Стьюдента. В результате было продемонстрировано, что указанное выше значение для группы тестируемых соединений было статистически достоверно ниже, чем значение контрольной группы (уровень значимости (двусторонний): 5%) (фиг.1: использовали соединение примера 2, P=0,0077; фиг.2: использовали соединение примера 11, P=0,0007; и (фиг.3: использовали соединение примера 12, P=0,0012). Для измерения массы тела использовали электронные весы для животных. Процент изменения массы тела (BWCn) от массы тела на n-й день (BWn) рассчитывали в соответствии со следующим уравнением:

BWCn (%) = [(масса тела на n-ый день) - (масса тела на день группирования]/[(масса тела на день группирования)] × 100.

По результатам данного испытания было установлено, что соединение настоящего изобретения обладают превосходными противоопухолевыми эффектами в отношении сверхэкспрессирующей HER2 клеточной линии (NCI-N87-luc), трансплантированной бесшерстным мышам. Кроме того, снижения массы тела на 20% или более наблюдалось не у всех мышей, которым вводили соединение примера 2 или примера 11. Соответственно, было установлено, что серьезных побочных эффектов не было.

[0185]

Следует отметить, что все документы и публикации, цитируемые в настоящем описании, включены в настоящее описание посредством ссылки во всей своей полноте, независимо от их назначения. Кроме того, настоящее описание включает в себя содержание, раскрытое в формуле изобретения, описании и чертежах японской патентной заявки № 2019-003403 (поданной 11 января 2019), по которой настоящая заявка испрашивает приоритет.

Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения описаны выше. Однако эти варианты осуществления приведены только в иллюстративных целях и, таким образом, не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Эти новые варианты осуществления могут быть выполнены в разных других формах, и могут быть осуществлены различные сокращения, замены и изменения при условии, что они не выходят за пределы сущности изобретения. Эти варианты осуществления и их модификации включены в объем или сущность изобретения и также включены в изобретение в соответствии с формулой изобретения и эквивалентным ей объемом.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.

<120> Пиримидиновое соединение или его соль

<130> G2225

<150> JP 2019-003403

<151> 2019-01-11

<160> 7

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 4664

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

gcttgctccc aatcacagga gaaggaggag gtggaggagg agggctgctt gaggaagtat 60

aagaatgaag ttgtgaagct gagattcccc tccattggga ccggagaaac caggggagcc 120

ccccgggcag ccgcgcgccc cttcccacgg ggccctttac tgcgccgcgc gcccggcccc 180

cacccctcgc agcaccccgc gccccgcgcc ctcccagccg ggtccagccg gagccatggg 240

gccggagccg cagtgagcac catggagctg gcggccttgt gccgctgggg gctcctcctc 300

gccctcttgc cccccggagc cgcgagcacc caagtgtgca ccggcacaga catgaagctg 360

cggctccctg ccagtcccga gacccacctg gacatgctcc gccacctcta ccagggctgc 420

caggtggtgc agggaaacct ggaactcacc tacctgccca ccaatgccag cctgtccttc 480

ctgcaggata tccaggaggt gcagggctac gtgctcatcg ctcacaacca agtgaggcag 540

gtcccactgc agaggctgcg gattgtgcga ggcacccagc tctttgagga caactatgcc 600

ctggccgtgc tagacaatgg agacccgctg aacaatacca cccctgtcac aggggcctcc 660

ccaggaggcc tgcgggagct gcagcttcga agcctcacag agatcttgaa aggaggggtc 720

ttgatccagc ggaaccccca gctctgctac caggacacga ttttgtggaa ggacatcttc 780

cacaagaaca accagctggc tctcacactg atagacacca accgctctcg ggcctgccac 840

ccctgttctc cgatgtgtaa gggctcccgc tgctggggag agagttctga ggattgtcag 900

agcctgacgc gcactgtctg tgccggtggc tgtgcccgct gcaaggggcc actgcccact 960

gactgctgcc atgagcagtg tgctgccggc tgcacgggcc ccaagcactc tgactgcctg 1020

gcctgcctcc acttcaacca cagtggcatc tgtgagctgc actgcccagc cctggtcacc 1080

tacaacacag acacgtttga gtccatgccc aatcccgagg gccggtatac attcggcgcc 1140

agctgtgtga ctgcctgtcc ctacaactac ctttctacgg acgtgggatc ctgcaccctc 1200

gtctgccccc tgcacaacca agaggtgaca gcagaggatg gaacacagcg gtgtgagaag 1260

tgcagcaagc cctgtgcccg agtgtgctat ggtctgggca tggagcactt gcgagaggtg 1320

agggcagtta ccagtgccaa tatccaggag tttgctggct gcaagaagat ctttgggagc 1380

ctggcatttc tgccggagag ctttgatggg gacccagcct ccaacactgc cccgctccag 1440

ccagagcagc tccaagtgtt tgagactctg gaagagatca caggttacct atacatctca 1500

gcatggccgg acagcctgcc tgacctcagc gtcttccaga acctgcaagt aatccgggga 1560

cgaattctgc acaatggcgc ctactcgctg accctgcaag ggctgggcat cagctggctg 1620

gggctgcgct cactgaggga actgggcagt ggactggccc tcatccacca taacacccac 1680

ctctgcttcg tgcacacggt gccctgggac cagctctttc ggaacccgca ccaagctctg 1740

ctccacactg ccaaccggcc agaggacgag tgtgtgggcg agggcctggc ctgccaccag 1800

ctgtgcgccc gagggcactg ctggggtcca gggcccaccc agtgtgtcaa ctgcagccag 1860

ttccttcggg gccaggagtg cgtggaggaa tgccgagtac tgcaggggct ccccagggag 1920

tatgtgaatg ccaggcactg tttgccgtgc caccctgagt gtcagcccca gaatggctca 1980

gtgacctgtt ttggaccgga ggctgaccag tgtgtggcct gtgcccacta taaggaccct 2040

cccttctgcg tggcccgctg ccccagcggt gtgaaacctg acctctccta catgcccatc 2100

tggaagtttc cagatgagga gggcgcatgc cagccttgcc ccatcaactg cacccactcc 2160

tgtgtggacc tggatgacaa gggctgcccc gccgagcaga gagccagccc tctgacgtcc 2220

atcatctctg cggtggttgg cattctgctg gtcgtggtct tgggggtggt ctttgggatc 2280

ctcatcaagc gacggcagca gaagatccgg aagtacacga tgcggagact gctgcaggaa 2340

acggagctgg tggagccgct gacacctagc ggagcgatgc ccaaccaggc gcagatgcgg 2400

atcctgaaag agacggagct gaggaaggtg aaggtgcttg gatctggcgc ttttggcaca 2460

gtctacaagg gcatctggat ccctgatggg gagaatgtga aaattccagt ggccatcaaa 2520

gtgttgaggg aaaacacatc ccccaaagcc aacaaagaaa tcttagacga agcatacgtg 2580

atggctggtg tgggctcccc atatgtctcc cgccttctgg gcatctgcct gacatccacg 2640

gtgcagctgg tgacacagct tatgccctat ggctgcctct tagaccatgt ccgggaaaac 2700

cgcggacgcc tgggctccca ggacctgctg aactggtgta tgcagattgc caaggggatg 2760

agctacctgg aggatgtgcg gctcgtacac agggacttgg ccgctcggaa cgtgctggtc 2820

aagagtccca accatgtcaa aattacagac ttcgggctgg ctcggctgct ggacattgac 2880

gagacagagt accatgcaga tgggggcaag gtgcccatca agtggatggc gctggagtcc 2940

attctccgcc ggcggttcac ccaccagagt gatgtgtgga gttatggtgt gactgtgtgg 3000

gagctgatga cttttggggc caaaccttac gatgggatcc cagcccggga gatccctgac 3060

ctgctggaaa agggggagcg gctgccccag ccccccatct gcaccattga tgtctacatg 3120

atcatggtca aatgttggat gattgactct gaatgtcggc caagattccg ggagttggtg 3180

tctgaattct cccgcatggc cagggacccc cagcgctttg tggtcatcca gaatgaggac 3240

ttgggcccag ccagtccctt ggacagcacc ttctaccgct cactgctgga ggacgatgac 3300

atgggggacc tggtggatgc tgaggagtat ctggtacccc agcagggctt cttctgtcca 3360

gaccctgccc cgggcgctgg gggcatggtc caccacaggc accgcagctc atctaccagg 3420

agtggcggtg gggacctgac actagggctg gagccctctg aagaggaggc ccccaggtct 3480

ccactggcac cctccgaagg ggctggctcc gatgtatttg atggtgacct gggaatgggg 3540

gcagccaagg ggctgcaaag cctccccaca catgacccca gccctctaca gcggtacagt 3600

gaggacccca cagtacccct gccctctgag actgatggct acgttgcccc cctgacctgc 3660

agcccccagc ctgaatatgt gaaccagcca gatgttcggc cccagccccc ttcgccccga 3720

gagggccctc tgcctgctgc ccgacctgct ggtgccactc tggaaaggcc caagactctc 3780

tccccaggga agaatggggt cgtcaaagac gtttttgcct ttgggggtgc cgtggagaac 3840

cccgagtact tgacacccca gggaggagct gcccctcagc cccaccctcc tcctgccttc 3900

agcccagcct tcgacaacct ctattactgg gaccaggacc caccagagcg gggggctcca 3960

cccagcacct tcaaagggac acctacggca gagaacccag agtacctggg tctggacgtg 4020

ccagtgtgaa ccagaaggcc aagtccgcag aagccctgat gtgtcctcag ggagcaggga 4080

aggcctgact tctgctggca tcaagaggtg ggagggccct ccgaccactt ccaggggaac 4140

ctgccatgcc aggaacctgt cctaaggaac cttccttcct gcttgagttc ccagatggct 4200

ggaaggggtc cagcctcgtt ggaagaggaa cagcactggg gagtctttgt ggattctgag 4260

gccctgccca atgagactct agggtccagt ggatgccaca gcccagcttg gccctttcct 4320

tccagatcct gggtactgaa agccttaggg aagctggcct gagaggggaa gcggccctaa 4380

gggagtgtct aagaacaaaa gcgacccatt cagagactgt ccctgaaacc tagtactgcc 4440

ccccatgagg aaggaacagc aatggtgtca gtatccaggc tttgtacaga gtgcttttct 4500

gtttagtttt tacttttttt gttttgtttt tttaaagatg aaataaagac ccagggggag 4560

aatgggtgtt gtatggggag gcaagtgtgg ggggtccttc tccacaccca ctttgtccat 4620

ttgcaaatat attttggaaa acagctaaaa aaaaaaaaaa aaaa 4664

<210> 2

<211> 1255

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu

1 5 10 15

Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys

20 25 30

Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His

35 40 45

Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr

50 55 60

Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val

65 70 75 80

Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu

85 90 95

Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr

100 105 110

Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro

115 120 125

Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser

130 135 140

Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln

145 150 155 160

Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn

165 170 175

Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys

180 185 190

His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser

195 200 205

Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys

210 215 220

Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys

225 230 235 240

Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu

245 250 255

His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val

260 265 270

Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg

275 280 285

Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu

290 295 300

Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln

305 310 315 320

Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys

325 330 335

Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu

340 345 350

Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys

355 360 365

Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp

370 375 380

Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe

385 390 395 400

Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro

405 410 415

Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg

420 425 430

Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu

435 440 445

Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly

450 455 460

Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val

465 470 475 480

Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr

485 490 495

Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His

500 505 510

Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys

515 520 525

Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys

530 535 540

Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys

545 550 555 560

Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys

565 570 575

Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp

580 585 590

Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu

595 600 605

Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln

610 615 620

Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys

625 630 635 640

Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser

645 650 655

Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly

660 665 670

Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg

675 680 685

Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly

690 695 700

Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu

705 710 715 720

Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys

725 730 735

Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile

740 745 750

Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu

755 760 765

Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser Arg

770 775 780

Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln Leu

785 790 795 800

Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly Arg

805 810 815

Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys Gly

820 825 830

Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala

835 840 845

Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp Phe

850 855 860

Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala Asp

865 870 875 880

Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu Arg

885 890 895

Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val

900 905 910

Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala

915 920 925

Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro

930 935 940

Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met

945 950 955 960

Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu Phe

965 970 975

Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn Glu

980 985 990

Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser Leu

995 1000 1005

Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr

1010 1015 1020

Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly

1025 1030 1035

Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg

1040 1045 1050

Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu

1055 1060 1065

Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser

1070 1075 1080

Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu

1085 1090 1095

Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser

1100 1105 1110

Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val

1115 1120 1125

Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro

1130 1135 1140

Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro

1145 1150 1155

Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu

1160 1165 1170

Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly

1175 1180 1185

Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala

1190 1195 1200

Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp

1205 1210 1215

Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro

1220 1225 1230

Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr

1235 1240 1245

Leu Gly Leu Asp Val Pro Val

1250 1255

<210> 3

<211> 4940

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 3

aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc 60

ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg 120

cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc 180

atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc 240

ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg 300

cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat 360

gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag 420

agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga 480

gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt 540

ggacatgcac aaaagtgaga tacttcaaag attccagaag atatgccccg ggggtcctgg 600

aagccacaag tgtgcaccgg cacagacatg aagctgcggc tccctgccag tcccgagacc 660

cacctggaca tgctccgcca cctctaccag ggctgccagg tggtgcaggg aaacctggaa 720

ctcacctacc tgcccaccaa tgccagcctg tccttcctgc aggatatcca ggaggtgcag 780

ggctacgtgc tcatcgctca caaccaagtg aggcaggtcc cactgcagag gctgcggatt 840

gtgcgaggca cccagctctt tgaggacaac tatgccctgg ccgtgctaga caatggagac 900

ccgctgaaca ataccacccc tgtcacaggg gcctccccag gaggcctgcg ggagctgcag 960

cttcgaagcc tcacagagat cttgaaagga ggggtcttga tccagcggaa cccccagctc 1020

tgctaccagg acacgatttt gtggaaggac atcttccaca agaacaacca gctggctctc 1080

acactgatag acaccaaccg ctctcgggcc tgccacccct gttctccgat gtgtaagggc 1140

tcccgctgct ggggagagag ttctgaggat tgtcagagcc tgacgcgcac tgtctgtgcc 1200

ggtggctgtg cccgctgcaa ggggccactg cccactgact gctgccatga gcagtgtgct 1260

gccggctgca cgggccccaa gcactctgac tgcctggcct gcctccactt caaccacagt 1320

ggcatctgtg agctgcactg cccagccctg gtcacctaca acacagacac gtttgagtcc 1380

atgcccaatc ccgagggccg gtatacattc ggcgccagct gtgtgactgc ctgtccctac 1440

aactaccttt ctacggacgt gggatcctgc accctcgtct gccccctgca caaccaagag 1500

gtgacagcag aggatggaac acagcggtgt gagaagtgca gcaagccctg tgcccgagtg 1560

tgctatggtc tgggcatgga gcacttgcga gaggtgaggg cagttaccag tgccaatatc 1620

caggagtttg ctggctgcaa gaagatcttt gggagcctgg catttctgcc ggagagcttt 1680

gatggggacc cagcctccaa cactgccccg ctccagccag agcagctcca agtgtttgag 1740

actctggaag agatcacagg ttacctatac atctcagcat ggccggacag cctgcctgac 1800

ctcagcgtct tccagaacct gcaagtaatc cggggacgaa ttctgcacaa tggcgcctac 1860

tcgctgaccc tgcaagggct gggcatcagc tggctggggc tgcgctcact gagggaactg 1920

ggcagtggac tggccctcat ccaccataac acccacctct gcttcgtgca cacggtgccc 1980

tgggaccagc tctttcggaa cccgcaccaa gctctgctcc acactgccaa ccggccagag 2040

gacgagtgtg tgggcgaggg cctggcctgc caccagctgt gcgcccgagg gcactgctgg 2100

ggtccagggc ccacccagtg tgtcaactgc agccagttcc ttcggggcca ggagtgcgtg 2160

gaggaatgcc gagtactgca ggggctcccc agggagtatg tgaatgccag gcactgtttg 2220

ccgtgccacc ctgagtgtca gccccagaat ggctcagtga cctgttttgg accggaggct 2280

gaccagtgtg tggcctgtgc ccactataag gaccctccct tctgcgtggc ccgctgcccc 2340

agcggtgtga aacctgacct ctcctacatg cccatctgga agtttccaga tgaggagggc 2400

gcatgccagc cttgccccat caactgcacc cactcctgtg tggacctgga tgacaagggc 2460

tgccccgccg agcagagagc cagccctctg acgtccatca tctctgcggt ggttggcatt 2520

ctgctggtcg tggtcttggg ggtggtcttt gggatcctca tcaagcgacg gcagcagaag 2580

atccggaagt acacgatgcg gagactgctg caggaaacgg agctggtgga gccgctgaca 2640

cctagcggag cgatgcccaa ccaggcgcag atgcggatcc tgaaagagac ggagctgagg 2700

aaggtgaagg tgcttggatc tggcgctttt ggcacagtct acaagggcat ctggatccct 2760

gatggggaga atgtgaaaat tccagtggcc atcaaagtgt tgagggaaaa cacatccccc 2820

aaagccaaca aagaaatctt agacgaagca tacgtgatgg ctggtgtggg ctccccatat 2880

gtctcccgcc ttctgggcat ctgcctgaca tccacggtgc agctggtgac acagcttatg 2940

ccctatggct gcctcttaga ccatgtccgg gaaaaccgcg gacgcctggg ctcccaggac 3000

ctgctgaact ggtgtatgca gattgccaag gggatgagct acctggagga tgtgcggctc 3060

gtacacaggg acttggccgc tcggaacgtg ctggtcaaga gtcccaacca tgtcaaaatt 3120

acagacttcg ggctggctcg gctgctggac attgacgaga cagagtacca tgcagatggg 3180

ggcaaggtgc ccatcaagtg gatggcgctg gagtccattc tccgccggcg gttcacccac 3240

cagagtgatg tgtggagtta tggtgtgact gtgtgggagc tgatgacttt tggggccaaa 3300

ccttacgatg ggatcccagc ccgggagatc cctgacctgc tggaaaaggg ggagcggctg 3360

ccccagcccc ccatctgcac cattgatgtc tacatgatca tggtcaaatg ttggatgatt 3420

gactctgaat gtcggccaag attccgggag ttggtgtctg aattctcccg catggccagg 3480

gacccccagc gctttgtggt catccagaat gaggacttgg gcccagccag tcccttggac 3540

agcaccttct accgctcact gctggaggac gatgacatgg gggacctggt ggatgctgag 3600

gagtatctgg taccccagca gggcttcttc tgtccagacc ctgccccggg cgctgggggc 3660

atggtccacc acaggcaccg cagctcatct accaggagtg gcggtgggga cctgacacta 3720

gggctggagc cctctgaaga ggaggccccc aggtctccac tggcaccctc cgaaggggct 3780

ggctccgatg tatttgatgg tgacctggga atgggggcag ccaaggggct gcaaagcctc 3840

cccacacatg accccagccc tctacagcgg tacagtgagg accccacagt acccctgccc 3900

tctgagactg atggctacgt tgcccccctg acctgcagcc cccagcctga atatgtgaac 3960

cagccagatg ttcggcccca gcccccttcg ccccgagagg gccctctgcc tgctgcccga 4020

cctgctggtg ccactctgga aaggcccaag actctctccc cagggaagaa tggggtcgtc 4080

aaagacgttt ttgcctttgg gggtgccgtg gagaaccccg agtacttgac accccaggga 4140

ggagctgccc ctcagcccca ccctcctcct gccttcagcc cagccttcga caacctctat 4200

tactgggacc aggacccacc agagcggggg gctccaccca gcaccttcaa agggacacct 4260

acggcagaga acccagagta cctgggtctg gacgtgccag tgtgaaccag aaggccaagt 4320

ccgcagaagc cctgatgtgt cctcagggag cagggaaggc ctgacttctg ctggcatcaa 4380

gaggtgggag ggccctccga ccacttccag gggaacctgc catgccagga acctgtccta 4440

aggaaccttc cttcctgctt gagttcccag atggctggaa ggggtccagc ctcgttggaa 4500

gaggaacagc actggggagt ctttgtggat tctgaggccc tgcccaatga gactctaggg 4560

tccagtggat gccacagccc agcttggccc tttccttcca gatcctgggt actgaaagcc 4620

ttagggaagc tggcctgaga ggggaagcgg ccctaaggga gtgtctaaga acaaaagcga 4680

cccattcaga gactgtccct gaaacctagt actgcccccc atgaggaagg aacagcaatg 4740

gtgtcagtat ccaggctttg tacagagtgc ttttctgttt agtttttact ttttttgttt 4800

tgttttttta aagatgaaat aaagacccag ggggagaatg ggtgttgtat ggggaggcaa 4860

gtgtgggggg tccttctcca cacccacttt gtccatttgc aaatatattt tggaaaacag 4920

ctaaaaaaaa aaaaaaaaaa 4940

<210> 4

<211> 1240

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Pro Arg Gly Ser Trp Lys Pro Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met

1 5 10 15

Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg

20 25 30

His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr

35 40 45

Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu

50 55 60

Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro

65 70 75 80

Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn

85 90 95

Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr

100 105 110

Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg

115 120 125

Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro

130 135 140

Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys

145 150 155 160

Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala

165 170 175

Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu

180 185 190

Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly

195 200 205

Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln

210 215 220

Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys

225 230 235 240

Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu

245 250 255

Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly

260 265 270

Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr

275 280 285

Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn

290 295 300

Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser

305 310 315 320

Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg

325 330 335

Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys

340 345 350

Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly

355 360 365

Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val

370 375 380

Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp

385 390 395 400

Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile

405 410 415

Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly

420 425 430

Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser

435 440 445

Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr

450 455 460

Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His

465 470 475 480

Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys

485 490 495

His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln

500 505 510

Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu

515 520 525

Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His

530 535 540

Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr

545 550 555 560

Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys

565 570 575

Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp

580 585 590

Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys

595 600 605

Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp

610 615 620

Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile

625 630 635 640

Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe

645 650 655

Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met

660 665 670

Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser

675 680 685

Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu

690 695 700

Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr

705 710 715 720

Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala

725 730 735

Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile

740 745 750

Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val Ser

755 760 765

Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr Gln

770 775 780

Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg Gly

785 790 795 800

Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala Lys

805 810 815

Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu Ala

820 825 830

Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr Asp

835 840 845

Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His Ala

850 855 860

Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu

865 870 875 880

Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr

885 890 895

Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro

900 905 910

Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln

915 920 925

Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys Trp

930 935 940

Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser Glu

945 950 955 960

Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln Asn

965 970 975

Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg Ser

980 985 990

Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu Tyr

995 1000 1005

Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly

1010 1015 1020

Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg

1025 1030 1035

Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu

1040 1045 1050

Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser

1055 1060 1065

Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu

1070 1075 1080

Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser

1085 1090 1095

Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val

1100 1105 1110

Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro

1115 1120 1125

Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro

1130 1135 1140

Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu

1145 1150 1155

Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly

1160 1165 1170

Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala

1175 1180 1185

Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp

1190 1195 1200

Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro

1205 1210 1215

Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr

1220 1225 1230

Leu Gly Leu Asp Val Pro Val

1235 1240

<210> 5

<211> 4889

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 5

aagttcctgt gttctttatt ctactctccg ctgaagtcca cacagtttaa attaaagttc 60

ccggattttt gtgggcgcct gccccgcccc tcgtccccct gctgtgtcca tatatcgagg 120

cgatagggtt aagggaaggc ggacgcctga tgggttaatg agcaaactga agtgttttcc 180

atgatctttt ttgagtcgca attgaagtac cacctcccga gggtgattgc ttccccatgc 240

ggggtagaac ctttgctgtc ctgttcacca ctctacctcc agcacagaat ttggcttatg 300

cctactcaat gtgaagatga tgaggatgaa aacctttgtg atgatccact tccacttaat 360

gaatggtggc aaagcaaagc tatattcaag accacatgca aagctactcc ctgagcaaag 420

agtcacagat aaaacggggg caccagtaga atggccagga caaacgcagt gcagcacaga 480

gactcagacc ctggcagcca tgcctgcgca ggcagtgatg agagtgacat gtactgttgt 540

ggacatgcac aaaagtgagt gtgcaccggc acagacatga agctgcggct ccctgccagt 600

cccgagaccc acctggacat gctccgccac ctctaccagg gctgccaggt ggtgcaggga 660

aacctggaac tcacctacct gcccaccaat gccagcctgt ccttcctgca ggatatccag 720

gaggtgcagg gctacgtgct catcgctcac aaccaagtga ggcaggtccc actgcagagg 780

ctgcggattg tgcgaggcac ccagctcttt gaggacaact atgccctggc cgtgctagac 840

aatggagacc cgctgaacaa taccacccct gtcacagggg cctccccagg aggcctgcgg 900

gagctgcagc ttcgaagcct cacagagatc ttgaaaggag gggtcttgat ccagcggaac 960

ccccagctct gctaccagga cacgattttg tggaaggaca tcttccacaa gaacaaccag 1020

ctggctctca cactgataga caccaaccgc tctcgggcct gccacccctg ttctccgatg 1080

tgtaagggct cccgctgctg gggagagagt tctgaggatt gtcagagcct gacgcgcact 1140

gtctgtgccg gtggctgtgc ccgctgcaag gggccactgc ccactgactg ctgccatgag 1200

cagtgtgctg ccggctgcac gggccccaag cactctgact gcctggcctg cctccacttc 1260

aaccacagtg gcatctgtga gctgcactgc ccagccctgg tcacctacaa cacagacacg 1320

tttgagtcca tgcccaatcc cgagggccgg tatacattcg gcgccagctg tgtgactgcc 1380

tgtccctaca actacctttc tacggacgtg ggatcctgca ccctcgtctg ccccctgcac 1440

aaccaagagg tgacagcaga ggatggaaca cagcggtgtg agaagtgcag caagccctgt 1500

gcccgagtgt gctatggtct gggcatggag cacttgcgag aggtgagggc agttaccagt 1560

gccaatatcc aggagtttgc tggctgcaag aagatctttg ggagcctggc atttctgccg 1620

gagagctttg atggggaccc agcctccaac actgccccgc tccagccaga gcagctccaa 1680

gtgtttgaga ctctggaaga gatcacaggt tacctataca tctcagcatg gccggacagc 1740

ctgcctgacc tcagcgtctt ccagaacctg caagtaatcc ggggacgaat tctgcacaat 1800

ggcgcctact cgctgaccct gcaagggctg ggcatcagct ggctggggct gcgctcactg 1860

agggaactgg gcagtggact ggccctcatc caccataaca cccacctctg cttcgtgcac 1920

acggtgccct gggaccagct ctttcggaac ccgcaccaag ctctgctcca cactgccaac 1980

cggccagagg acgagtgtgt gggcgagggc ctggcctgcc accagctgtg cgcccgaggg 2040

cactgctggg gtccagggcc cacccagtgt gtcaactgca gccagttcct tcggggccag 2100

gagtgcgtgg aggaatgccg agtactgcag gggctcccca gggagtatgt gaatgccagg 2160

cactgtttgc cgtgccaccc tgagtgtcag ccccagaatg gctcagtgac ctgttttgga 2220

ccggaggctg accagtgtgt ggcctgtgcc cactataagg accctccctt ctgcgtggcc 2280

cgctgcccca gcggtgtgaa acctgacctc tcctacatgc ccatctggaa gtttccagat 2340

gaggagggcg catgccagcc ttgccccatc aactgcaccc actcctgtgt ggacctggat 2400

gacaagggct gccccgccga gcagagagcc agccctctga cgtccatcat ctctgcggtg 2460

gttggcattc tgctggtcgt ggtcttgggg gtggtctttg ggatcctcat caagcgacgg 2520

cagcagaaga tccggaagta cacgatgcgg agactgctgc aggaaacgga gctggtggag 2580

ccgctgacac ctagcggagc gatgcccaac caggcgcaga tgcggatcct gaaagagacg 2640

gagctgagga aggtgaaggt gcttggatct ggcgcttttg gcacagtcta caagggcatc 2700

tggatccctg atggggagaa tgtgaaaatt ccagtggcca tcaaagtgtt gagggaaaac 2760

acatccccca aagccaacaa agaaatctta gacgaagcat acgtgatggc tggtgtgggc 2820

tccccatatg tctcccgcct tctgggcatc tgcctgacat ccacggtgca gctggtgaca 2880

cagcttatgc cctatggctg cctcttagac catgtccggg aaaaccgcgg acgcctgggc 2940

tcccaggacc tgctgaactg gtgtatgcag attgccaagg ggatgagcta cctggaggat 3000

gtgcggctcg tacacaggga cttggccgct cggaacgtgc tggtcaagag tcccaaccat 3060

gtcaaaatta cagacttcgg gctggctcgg ctgctggaca ttgacgagac agagtaccat 3120

gcagatgggg gcaaggtgcc catcaagtgg atggcgctgg agtccattct ccgccggcgg 3180

ttcacccacc agagtgatgt gtggagttat ggtgtgactg tgtgggagct gatgactttt 3240

ggggccaaac cttacgatgg gatcccagcc cgggagatcc ctgacctgct ggaaaagggg 3300

gagcggctgc cccagccccc catctgcacc attgatgtct acatgatcat ggtcaaatgt 3360

tggatgattg actctgaatg tcggccaaga ttccgggagt tggtgtctga attctcccgc 3420

atggccaggg acccccagcg ctttgtggtc atccagaatg aggacttggg cccagccagt 3480

cccttggaca gcaccttcta ccgctcactg ctggaggacg atgacatggg ggacctggtg 3540

gatgctgagg agtatctggt accccagcag ggcttcttct gtccagaccc tgccccgggc 3600

gctgggggca tggtccacca caggcaccgc agctcatcta ccaggagtgg cggtggggac 3660

ctgacactag ggctggagcc ctctgaagag gaggccccca ggtctccact ggcaccctcc 3720

gaaggggctg gctccgatgt atttgatggt gacctgggaa tgggggcagc caaggggctg 3780

caaagcctcc ccacacatga ccccagccct ctacagcggt acagtgagga ccccacagta 3840

cccctgccct ctgagactga tggctacgtt gcccccctga cctgcagccc ccagcctgaa 3900

tatgtgaacc agccagatgt tcggccccag cccccttcgc cccgagaggg ccctctgcct 3960

gctgcccgac ctgctggtgc cactctggaa aggcccaaga ctctctcccc agggaagaat 4020

ggggtcgtca aagacgtttt tgcctttggg ggtgccgtgg agaaccccga gtacttgaca 4080

ccccagggag gagctgcccc tcagccccac cctcctcctg ccttcagccc agccttcgac 4140

aacctctatt actgggacca ggacccacca gagcgggggg ctccacccag caccttcaaa 4200

gggacaccta cggcagagaa cccagagtac ctgggtctgg acgtgccagt gtgaaccaga 4260

aggccaagtc cgcagaagcc ctgatgtgtc ctcagggagc agggaaggcc tgacttctgc 4320

tggcatcaag aggtgggagg gccctccgac cacttccagg ggaacctgcc atgccaggaa 4380

cctgtcctaa ggaaccttcc ttcctgcttg agttcccaga tggctggaag gggtccagcc 4440

tcgttggaag aggaacagca ctggggagtc tttgtggatt ctgaggccct gcccaatgag 4500

actctagggt ccagtggatg ccacagccca gcttggccct ttccttccag atcctgggta 4560

ctgaaagcct tagggaagct ggcctgagag gggaagcggc cctaagggag tgtctaagaa 4620

caaaagcgac ccattcagag actgtccctg aaacctagta ctgcccccca tgaggaagga 4680

acagcaatgg tgtcagtatc caggctttgt acagagtgct tttctgttta gtttttactt 4740

tttttgtttt gtttttttaa agatgaaata aagacccagg gggagaatgg gtgttgtatg 4800

gggaggcaag tgtggggggt ccttctccac acccactttg tccatttgca aatatatttt 4860

ggaaaacagc taaaaaaaaa aaaaaaaaa 4889

<210> 6

<211> 1225

<212> ПРТ

<213> Homo sapiens

<400> 6

Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu

1 5 10 15

Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu

20 25 30

Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln

35 40 45

Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val

50 55 60

Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp

65 70 75 80

Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr

85 90 95

Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu

100 105 110

Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn

115 120 125

Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His

130 135 140

Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg

145 150 155 160

Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly

165 170 175

Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly

180 185 190

Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu

195 200 205

Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala

210 215 220

Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala

225 230 235 240

Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu

245 250 255

Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn

260 265 270

Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His

275 280 285

Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys

290 295 300

Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu

305 310 315 320

Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly

325 330 335

Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp

340 345 350

Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln

355 360 365

Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala

370 375 380

Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val

385 390 395 400

Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln

405 410 415

Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly

420 425 430

Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His

435 440 445

Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu

450 455 460

His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala

465 470 475 480

Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr

485 490 495

Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu

500 505 510

Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg

515 520 525

His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val

530 535 540

Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr

545 550 555 560

Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro

565 570 575

Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala

580 585 590

Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp

595 600 605

Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile

610 615 620

Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val

625 630 635 640

Phe Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr

645 650 655

Met Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro

660 665 670

Ser Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr

675 680 685

Glu Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val

690 695 700

Tyr Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val

705 710 715 720

Ala Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu

725 730 735

Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro Tyr Val

740 745 750

Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu Val Thr

755 760 765

Gln Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu Asn Arg

770 775 780

Gly Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln Ile Ala

785 790 795 800

Lys Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg Asp Leu

805 810 815

Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys Ile Thr

820 825 830

Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu Tyr His

835 840 845

Ala Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser Ile

850 855 860

Leu Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Val

865 870 875 880

Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp Gly Ile

885 890 895

Pro Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg Leu Pro

900 905 910

Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val Lys Cys

915 920 925

Trp Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu Val Ser

930 935 940

Glu Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val Ile Gln

945 950 955 960

Asn Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe Tyr Arg

965 970 975

Ser Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp Ala Glu Glu

980 985 990

Tyr Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp Pro Ala Pro Gly

995 1000 1005

Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser Ser Ser Thr Arg

1010 1015 1020

Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu Pro Ser Glu Glu

1025 1030 1035

Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu Gly Ala Gly Ser

1040 1045 1050

Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala Ala Lys Gly Leu

1055 1060 1065

Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu Gln Arg Tyr Ser

1070 1075 1080

Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr Asp Gly Tyr Val

1085 1090 1095

Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr Val Asn Gln Pro

1100 1105 1110

Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu Gly Pro Leu Pro

1115 1120 1125

Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg Pro Lys Thr Leu

1130 1135 1140

Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val Phe Ala Phe Gly

1145 1150 1155

Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro Gln Gly Gly Ala

1160 1165 1170

Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser Pro Ala Phe Asp

1175 1180 1185

Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu Arg Gly Ala Pro

1190 1195 1200

Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu Asn Pro Glu Tyr

1205 1210 1215

Leu Gly Leu Asp Val Pro Val

1220 1225

<210> 7

<211> 1259

<212> ПРТ

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция

<400> 7

Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu

1 5 10 15

Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys

20 25 30

Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His

35 40 45

Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr

50 55 60

Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val

65 70 75 80

Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu

85 90 95

Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr

100 105 110

Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro

115 120 125

Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser

130 135 140

Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln

145 150 155 160

Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn

165 170 175

Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys

180 185 190

His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser

195 200 205

Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys

210 215 220

Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys

225 230 235 240

Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu

245 250 255

His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val

260 265 270

Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg

275 280 285

Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu

290 295 300

Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln

305 310 315 320

Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys

325 330 335

Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu

340 345 350

Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys

355 360 365

Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp

370 375 380

Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe

385 390 395 400

Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro

405 410 415

Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg

420 425 430

Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu

435 440 445

Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly

450 455 460

Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val

465 470 475 480

Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr

485 490 495

Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His

500 505 510

Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys

515 520 525

Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys

530 535 540

Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys

545 550 555 560

Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys

565 570 575

Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp

580 585 590

Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu

595 600 605

Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln

610 615 620

Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys

625 630 635 640

Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro Leu Thr Ser Ile Ile Ser

645 650 655

Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val Leu Gly Val Val Phe Gly

660 665 670

Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile Arg Lys Tyr Thr Met Arg

675 680 685

Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly

690 695 700

Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Leu

705 710 715 720

Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys

725 730 735

Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val Lys Ile Pro Val Ala Ile

740 745 750

Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu

755 760 765

Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly Ser Pro

770 775 780

Tyr Val Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val Gln Leu

785 790 795 800

Val Thr Gln Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val Arg Glu

805 810 815

Asn Arg Gly Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys Met Gln

820 825 830

Ile Ala Lys Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val His Arg

835 840 845

Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His Val Lys

850 855 860

Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu Thr Glu

865 870 875 880

Tyr His Ala Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala Leu Glu

885 890 895

Ser Ile Leu Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr

900 905 910

Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro Tyr Asp

915 920 925

Gly Ile Pro Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly Glu Arg

930 935 940

Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile Met Val

945 950 955 960

Lys Cys Trp Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg Glu Leu

965 970 975

Val Ser Glu Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe Val Val

980 985 990

Ile Gln Asn Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser Thr Phe

995 1000 1005

Tyr Arg Ser Leu Leu Glu Asp Asp Asp Met Gly Asp Leu Val Asp

1010 1015 1020

Ala Glu Glu Tyr Leu Val Pro Gln Gln Gly Phe Phe Cys Pro Asp

1025 1030 1035

Pro Ala Pro Gly Ala Gly Gly Met Val His His Arg His Arg Ser

1040 1045 1050

Ser Ser Thr Arg Ser Gly Gly Gly Asp Leu Thr Leu Gly Leu Glu

1055 1060 1065

Pro Ser Glu Glu Glu Ala Pro Arg Ser Pro Leu Ala Pro Ser Glu

1070 1075 1080

Gly Ala Gly Ser Asp Val Phe Asp Gly Asp Leu Gly Met Gly Ala

1085 1090 1095

Ala Lys Gly Leu Gln Ser Leu Pro Thr His Asp Pro Ser Pro Leu

1100 1105 1110

Gln Arg Tyr Ser Glu Asp Pro Thr Val Pro Leu Pro Ser Glu Thr

1115 1120 1125

Asp Gly Tyr Val Ala Pro Leu Thr Cys Ser Pro Gln Pro Glu Tyr

1130 1135 1140

Val Asn Gln Pro Asp Val Arg Pro Gln Pro Pro Ser Pro Arg Glu

1145 1150 1155

Gly Pro Leu Pro Ala Ala Arg Pro Ala Gly Ala Thr Leu Glu Arg

1160 1165 1170

Pro Lys Thr Leu Ser Pro Gly Lys Asn Gly Val Val Lys Asp Val

1175 1180 1185

Phe Ala Phe Gly Gly Ala Val Glu Asn Pro Glu Tyr Leu Thr Pro

1190 1195 1200

Gln Gly Gly Ala Ala Pro Gln Pro His Pro Pro Pro Ala Phe Ser

1205 1210 1215

Pro Ala Phe Asp Asn Leu Tyr Tyr Trp Asp Gln Asp Pro Pro Glu

1220 1225 1230

Arg Gly Ala Pro Pro Ser Thr Phe Lys Gly Thr Pro Thr Ala Glu

1235 1240 1245

Asn Pro Glu Tyr Leu Gly Leu Asp Val Pro Val

1250 1255

Claims

1. Соединение, представленное приведенной ниже формулой (I), или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль:

,

R₂ представляет собой атом водорода, атом галогена, C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп или атомов фтора, или C1-C6 алкоксигруппу;

R₃ представляет собой атом водорода, или C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 атомов фтора;

2. Соединение по п.1, представленное приведенной ниже формулой (II), или его фармацевтически приемлемая соль:

,

3. Соединение по п.1 или 2, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₂ представляет собой C1-C6 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 C1-C4 алкоксигрупп.

4. Соединение по любому из пп.1-3, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₃ представляет собой C1-C4 алкильную группу, необязательно содержащую в качестве заместителя от 1 до 5 атомов фтора.

5. Соединение по любому из пп.1-4, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₅ представляет собой фенильную группу, необязательно содержащую 1-2 заместителя, выбранных из группы, состоящей из атомов фтора и атомов хлора.

6. Соединение по любому из пп.1-5, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₁ представляет собой метильную группу, трет-бутильную группу или циклопропильную группу.

7. Соединение по любому из пп.1-6, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₂ представляет собой метильную группу, этильную группу, метоксиметильную группу или этоксиметильную группу.

8. Соединение по любому из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₃ представляет собой метильную группу.

9. Соединение по любому из пп.1-8, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₄ представляет собой атом водорода.

10. Соединение по любому из пп.1-9, или его фармацевтически приемлемая соль, где R₅ представляет собой фенильную группу.

11. Соединение по любому из пп.1-10, или его соль, где соединение выбрано из следующих (1)-(3):

12. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, связанной с HER2, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемой соли и носитель.

13. Противоопухолевое средство для лечения опухоли, связанной с HER2, содержащее в качестве активного ингредиента соединение по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемую соль.

14. Противоопухолевое средство для перорального введения для лечения опухоли, связанной с HER2, содержащее в качестве активного ингредиента соединение по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемую соль.

15. Применение соединения по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтической композиции по п.12.

16. Применение соединения по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемой соли для получения противоопухолевого средства по п.13 для лечения опухоли, связанной с HER2.

17. Применение соединения по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемой соли для получения противоопухолевого средства для перорального введения по п.14 для лечения опухоли, связанной с HER2.

18. Соединение по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемая соль в качестве лекарственного средства, обладающая HER2 селективной ингибирующей активностью.

19. Соединение по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемая соль для лечения опухоли, связанной с HER2.

20. Соединение по п.19 или его фармацевтически приемлемая соль в форме для перорального введения.

21. Способ лечения опухоли, связанной с HER2, включающий введение эффективного количества соединения по любому из пп.1-11 или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом субъекту.