KR20230024421A - C5a를 특이적으로 인식하는 항체 및 그의 응용 - Google Patents

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KR20230024421A
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핑샤 쭈
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스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드
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Abstract

본 출원은 보체 성분 5a(C5a)를 특이적으로 인식하는, 항원 결합 단편을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 이러한 항체의 제조방법과 용도를 제공한다.

Description

C5A를 특이적으로 인식하는 항체 및 그의 응용
ASCII TEXT 텍스트 파일로 서열 목록을 제출
아래 제출된 ASCII TEXT 텍스트 파일의 내용은 전체적으로 인용하는 방식을 통해 본문에 통합된다: 컴퓨터 판독 가능 형태(CRF)의 서열 목록(텍스트 명칭: 202006095269_SEQLIST.txt, 기록일: 2020.06.10, 크기: 96.5KB).
본 출원은 보체 성분 5a(C5a)을 특이적으로 인식하는 항체 및 그의 제조, 사용 방법에 관한 것이며, 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병, 암, 통증 및 이식 관련 질병을 치료하기 위한 용도를 포함한다.
C5a는 보체 캐스케이드에서 C5-전환효소에 의해 보체 성분 C5를 절단하여 형성되는 아나필락시스 반응 및 염증 과정에서의 활성 펩티드이다. C5a는 비만 세포 탈과립화, 종양 괴사 인자-α(TNF-α) 및 히스타민의 방출을 자극하고, 또한 내피세포 표면 접착 분자의 발현을 증가시키는 것을 통해 식세포를 감염 및 염증 부위로 모집시킨다(Mollnes, T.E. et al. Blood 2002, 100, 1869-1877; Riedemann, N.C. et al. Immunity 2003, 19,193-202). 이식 후 동종이식 거부 및 천식과 같은 일부 병리학적 자극의 상황하에, C5a는 혈관 투과성을 증가시키기도 한다(Gueler, F. et al. J. Am. Soc . Nephrol. 2008, 19, 2302-2312; Krug, N. et al. Am. J. Respir. Crit . Care Med . 2001, 164, 1841-1843; Khan, M.A. et al. Proc . Natl . Acad. Sci . USA 2013, 110, 6061-6066). 혈청 중의 C5a 수준은 이미 여러 연구에서 논의되었다. Lechner 등의 연구에서, 대조군의 C5a 수준은 8.34 +2.05(ng/mL) (Lechner, J. et al. Immun . Aging 2016, 13, 4)이다. 다른 연구에서는, 정상적인 상황하에서, 아나필라톡신의 신속한 제거로 인해, 혈장 중의 C5a 수준이 매우 낮다는 것을 시사하였다(Oppermann, M. et al. Immunology 1994, 82, 516-521). C5a(25nM)를 사용하여 처리한 후, 마우스 피질 신장 세뇨관 세포에서 형질전환 성장 인자-β(TGF-β)의 수준이 증가되었으며, 이는 C5a는 신장 섬유증 및 신장 흉터 형성을 초래할 수 있음을 나타낸다(Boor, P. et al. J.Am. Soc . Nephrol. 2007, 18, 1508-1515).
C5a는 전형적인 G 단백질 결합 수용체(GPCR) C5aRI(CD88)에 결합하고 전염증성 신호 경로의 활성화를 유발하는 효과적인 전염증성 분자이다(Li, R. et al. FASEB J. 2013, 27, 855-864). C5aR은 제대 혈관 내피세포(HUVEC), 쥐의 진피, 간, 폐 및 신장 근위 세뇨관과 같은 비골수성 세포에서 광범위하게 발현한다(Monsinjon, T. et al. FASEB J. 2003, 17, 1003-1014; Gerard, C. et al. Annu . Rev. Immunol . 1994, 12, 775-808; Haviland, D.L. et al. J. Immunol . 1995, 154, 1861-1869). 또한, 연구에 따르면, C5aR은 족세포가 아닌 사구체 내피세포에서 발현되는데, 이는 C5a가 주로 신장 내피세포에서 단백뇨를 유발할 수 있음을 시사한다(Tsai, I.J. et al. Cell. Mol . Life Sci. 2015, 72, 3157-3171).
따라서, C5a를 중화함으로써 C5aR와의 결합을 차단하는 것이, C5a-매개 질병 및 병증을 치료하는 방법으로 된다. 특허 출원 WO2011063980에서는 인간 C5a에 대한 항체 INab308(InflaRx)을 개시하였고, WO2012088247에서는 C5a 항체 MEDI-7814(MedImmune)를 개시하였으며, US10450370에서는 C5a 항체 BNJ383(Alexion)를 개시하였다.
본문에서 언급한 모든 출판물, 특허, 특허 출원 및 이미 공개된 특허 출원에서 개시한 내용은, 인용하는 방식으로 전부 본문에 통합된다.
일 측면에서, 본 출원은 인간 C5a 상의 에피토프와 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항-C5a 항체를 제공하며, 여기서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기 중 적어도 하나의 아미노산 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31-40번 위치 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체는 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 해당 에피토프는 (i) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR, (ii) NDETCEQRAARISLGPR 또는 (iii) DETCEQRAAR 서열 내에 있거나, 이러한 서열로 구성되거나, 이러한 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체는 (i) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR, (ii) NDETCEQRAARISLGPR, 또는 (iii) DETCEQRAAR의 서열로 구성되거나 이를 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체는 0.1pM 내지 1nM의 Kd 값으로 인간 C5a에 결합한다. 일부 실시형태에서 상기 단리된 항-C5a 항체는 2배 또는 그 이상의 몰의 미절단 천연 인간 C5의 존재하에 자유 인간 C5a 폴리펩티드에 결합한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-C5a 항체에 있어서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인(VH)은 서열 X1YYX2Q(서열번호 67)를 포함하는 하나의 중쇄 상보성 결정 영역(HC-CDR)1-여기서, X1은 D 또는 N이고, X2는 M 또는 I임; 서열 LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(서열번호 68)를 포함하는 하나의 HC-CDR2-여기서, X1은 K 또는 N이고, X2는 A 또는 V이며, X3은 V, N 또는 I이고, X4는 G, E, F, H, I, Q 또는 R이며, X5는 T, V 또는 A이고, X6은 Q, E, T 또는 S이며, X7은 Y 또는 F이고, X8은 V 또는 L임; 및 서열 RX1GPPGLX2(서열번호 69)를 포함하는 하나의 HC-CDR3-여기서, X1은 A, L 또는 V이고, X2는 T, S 또는 A임; 을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인(VL)은 서열 RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(서열번호 70)를 포함하는 하나의 LC-CDR1-여기서, X1은 S, R 또는 N이고, X2는 A, H 또는 D이며, X3은 S 또는 T이고, X4는 D 또는 N이며, X5는 G, A 또는 R이고, X6은 N, I, T, E 또는 A이며, X7은 I, M, L 또는 V임; 서열 GX1SX2RAS(서열번호 71)를 포함하는 하나의 LC-CDR2-여기서, X1은 G 또는 A이고, X2는 N 또는 K임; 및 서열 X1QHX2X3LPX4T(서열번호 72)를 포함하는 하나의 LC-CDR3-여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 R 또는 K이며, X3은 A 또는 V이고, X4는 P 또는 L임; 을 포함한다.
일부 실시예에서, VH 및 VL을 포함하는 단리된 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, VH 및 VL을 포함하는 단리된 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체를 제공하고, 이는, (i)서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 39에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (ii)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 40에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (iii)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (iv)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 41에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (v)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 43에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (vi)상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 44에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (vii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (viii)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (ix)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (x)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (xi)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 56에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (xii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (xiii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; (xiv)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH;서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; 또는 (xv)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; 를 포함한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-C5a 항체에 있어서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-C5a 항체는 (i) 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ii) 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iii) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (iv) 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (v) 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (vi) 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (vii) 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (viii) 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (ix) 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (x) 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xii) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xiii) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL; (xiv) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 또는 (xv) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 어느 하나의 단리된 항-C5a 항체와 경쟁적으로 C5a에 결합하는 단리된 항-C5a 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 어느 하나의 단리된 항-C5a 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항-C5a 항체를 제공한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-C5a 항체에 있어서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 Fc 단편을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 전장 IgG 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 전장 IgG1 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 키메라 항체, 완전 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일 사슬 항체 (scFv), Fv 단편, dAb, Fd, 나노바디(Nanobody), 디아 항체(diabody)와 선형 항체로 구성된 군에서 선택되는 항원 결합 단편이다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 항-C5a 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 항-C5a 항체, 상술한 어느 하나의 핵산 분자 또는 상술한 어느 하나의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시예에서, a) 항-C5a 항체를 효과적으로 발현시키는 조건 하에 상기 어느 하나의 숙주 세포를 배양하는 단계; 또한 b) 상기 숙주 세포로부터 발현된 항-C5a 항체를 얻는 단계를 포함하는 항-C5a 항체를 제조하는 방법을 제공한다.
일부 실시예에서, 치료가 필요한 개체에게 유효량의 상술한 어느 하나의 항-C5a 항체를 투여하는 것을 포함하는, 치료가 필요한 개체의 질병 또는 병증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 C5a 항체 또는 C5a 항체를 포함하는 약학적 조성물을 사용하여 질병 또는 병증을 치료하는 약물을 제조하는 것을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 질병 또는 병증은 염증성, 호흡기 또는 자가면역 질병 또는 병증이다. 일부 실시예에서, 상기 질병 또는 병증은 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병(lupus-type diseases), 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암으로 구성된 군에서 선택된다.
아울러, 상술한 어느 하나의 항-C5a 항체를 포함하는 약학적 조성물, 키트 및 제품을 더 제공한다.
도 1a-도 1b에 나타낸 결과는 ELISA를 사용하여 분석한 인간 재조합 C5a 또는 내인성 C5a에 대한 예시적 항-C5a 항체의 결합 친화력이다. 도 1a는 인간 재조합 C5a에 대한 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13 또는 Cab15의 결합 곡선을 나타낸다. 도 1b는 내인성 C5a에 대한 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13 또는 Cab15의 결합 곡선을 나타낸다.
도 2a에 나타낸 결과는 ELISA를 사용하여 분석한 인간 재조합 C5a에 대한 최적화된 전장 C5a 항체 Cab05-IgG4, Cab35, Cab38 또는 Cab42(인간 IgG1 형태로 재구축)의 결합 친화력이다. 도 2b에 나타낸 결과는 ELISA를 사용하여 분석한 인간 재조합 C5a에 대한 최적화된 전장 C5a 항체 Cab42, Cab44 또는 Cab45(인간 IgG1 형태로 재구축)의 결합 친화력이다. 도 2c에 나타낸 결과는 ELISA를 사용하여 분석한 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey) C5a에 대한 전장 C5a 항체 Cab01, Cab03, Cab05, Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축) 또는 최적화된 항-C5a 항체 Cab42-IgG1의 결합 친화력이다.
도 3a-도 3c에 나타낸 결과는 ELISA를 사용하여 분석한 인간 천연 C5에 대한 예시적 전장 C5a 항체의 결합 친화력이다. 도 3a는 인간 천연 C5에 대한 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축) 또는 대조군 항체 INab308의 결합 곡선을 나타낸다. 도 3b에 나타낸 결과는 인간 천연 C5에 대한 Cab05-IgG4, Cab35, Cab38, Cab42(인간 IgG1 형태로 재구축) 또는 대조군 항체 INab308의 결합 곡선이다. 도 3c에 나타낸 결과는 인간 천연 C5에 대한 Cab42, Cab44, Cab45(인간 IgG1 형태로 재구축) 또는 대조군 항체 INab308의 결합 곡선이다.
도 4a에 나타낸 결과는 BV 입자에 대한 전장 항체 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05 및 Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축) 또는 최적화된 항체 Cab35, Cab42(인간 IgG1 형태로 재구축)의 비-특이적 결합이다. 도 4b에 나타낸 결과는 Cab35-IgG1 또는 Cab42-IgG1 항체가 C5a 음성의 293 세포와 비교적 낮은 교차 반응성을 나타냄을 보여준다.
도 5a는 인간 호중구에서, C5a 항체 Cab01, Cab03 또는 Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축)는 인간 재조합 C5a 및 내인성 C5a에 의해 유도된 CD11b의 상향 조절을 차단할 수 있음을 보여주는 CD11b 차단 실험의 결과를 나타낸다. 도 5b는 인간 호중구에서, 최적화된 C5a 항체 Cab42, Cab43, Cab44, Cab45 또는 Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축)은 인간 내인성 C5a에 의해 유도된 CD11b의 상향 조절을 차단할 수 있음을 보여주는 CD11b 차단 실험의 결과를 나타낸다. 도 5c는 대조군 항체 INab308과 비교하여, 반응 시스템에 50배 몰 이상의 C5가 존재하더라도, 최적화된 항-C5a 항체 Cab42-IgG1은 여전히 인간 호중구에서, 내인성 인간 C5a에 의해 유도된 CD11b 발현의 상향 조절을 차단할 수 있음을 보여주는 CD11b 차단 실험의 결과를 나타낸다.
도 6a-도 6d에 나타낸 결과는 C5a 항체의 혈장 용혈 활성이다. 전형적인 활성화 경로에서, 대조군 항체 Eculizumab과 비교하여, 항-C5a 항체 Cab01, Cab03, Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축)(도 6a) 또는 최적화된 항-C5a 항체 Cab35, Cab42, Cab43, Cab44, Cab45, Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축)(도 6b)은 혈장 용혈 활성을 억제하지 않는다. 대체 활성화 경로에서, 대조군 항체 Eculizumab과 비교하여, 항-C5a 항체 Cab01, Cab03, Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축)(도 6c) 또는 최적화된 항-C5a 항체 Cab35, Cab42, Cab43, Cab44, Cab45, Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축)(도 6d)는 혈장 용혈 활성을 억제하지 않는다.
도 7에 나타낸 결과는 C5a-유도 호중구 주화성 실험에서 상이한 조제량(doses)의 항-C5a 항체 Cab05-IgG4의 억제 효과이다.
도 8에 나타낸 결과는 사이노몰구스 원숭이 체내에서 ELISA를 사용하여 검출한 Cab35-IgG1 또는 대조군 항체 INab308의 약동학 분석이다.
도 9a-도 9d에 나타낸 결과는 INab308, Cab42-IgG1, BNJ383 또는 MEDI-7814 항체의 경쟁 ELISA 결합 곡선이다. 도 9a에 나타낸 결과는 INab308과의 경쟁 결합 ELISA이고, 도 9b에 나타낸 결과는 Cab42-IgG1과의 경쟁 결합 ELISA이며, 도 9c에 나타낸 결과는 BNJ383과의 경쟁 결합 ELISA이며, 도 9d에 나타낸 결과는 MEDI-7814와의 경쟁 결합 ELISA이다. 도 9e-도 9f에 나타낸 결과는 INab308, Cab42-IgG1 또는 Cab35-IgG1 항체의 경쟁 ELISA 결합 곡선이다. 도 9e에 나타낸 결과는 INab308과의 경쟁 결합 ELISA이고, 도 9f에 나타낸 결과는 Cab35-IgG1과의 경쟁 결합 ELISA이다.
도 10a-도 10d에 나타낸 결과는 Cab42-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선이다. 도 10e-도 10h에 나타낸 결과는 Cab44-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선이다. 도 10i-도 10l에 나타낸 결과는 Cab45-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선이다.
도 11a-도 11c는 MEDI-7814, Cab42-IgG1, His 항체가 Avih-C5a 또는 Avih-C5a-D31A 돌연변이체와 결합하는 웨스턴 블롯팅 결과를 나타낸다. 도 11d-도 11e는 Cab44-IgG1, Cab45-IgG1이 인간 Avih-C5a 또는 인간 Avih-C5a-D31A 돌연변이체와 결합하는 웨스턴 블롯팅 결과를 나타낸다. 도 11f는 인간 Avih-C5a 및 인간 C5a 돌연변이체 Avih-C5a-D31A의 SDS-PAGE 결과를 나타낸다.
도 12a는 ELISA 결합 결과를 나타내며, 이는 Cab42 항체가 서열번호141에 나타낸 바와 같이 인간 C5a에서 24-46번 위치, 30-46번 위치 또는 31-40번 위치 아미노산을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합함을 보여주는 ELISA 결합 결과를 나타낸다. 도 12b는 Inab308 항체가 3가지의 폴리펩티드-Fc 융합체: C5a-p1-Fc, C5a-p2-Fc 또는 C5a-p4-Fc 중 어느 하나와 결합하지 않음을 보여주는 ELISA 결합 결과를 나타낸다.
일 측면에서, 본 출원은 항-C5a 항체 분자 또는 항원-결합 단편을 제공한다. scFv 파지 라이브러리 선택, 친화력 성숙 및 적절한 생화학적 디자인 및 생물학적 실험의 결합을 통해, 우리는 인간 C5a에 결합하고 C5a의 작용을 억제할 수 있는 고효율 항체 분자를 검정해냈다. 본문에서 제시한 결과에 따르면, 이미 알려진 항-C5a 항체와 비교하여, 우리의 항체 또는 항원 결합 단편은 C5a의 상이한 영역 또는 에피토프에 결합하며, 이미 알려진 C5a 항체와 경쟁적으로 결합하지 않는다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 C5 및 C5a에 결합한다. 일부 실시예에서, 2배 또는 2배 이상의 몰의 과량의 미절단 천연 인간 C5가 존재하는 경우, 상기 단리된 항-C5a 항체 또는 항원-결합 단편은 여전히 자유 C5a 폴리펩티드와 결합할 수 있고, C5a-매개 염증 반응을 억제할 수 있다. C5a는 보체 관련 질환의 병인에 필수적인 일부분으로 알려져 있으며, 여기서 보체 관련 질환에는 패혈증, 류마티스 관절염 및 천식이 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 인간 혈청에서 C5의 농도는 C5a보다 훨씬 높기 때문에, 항체가 동일한 결합력으로 C5와 C5a에 결합하는 경우, 고농도 및/또는 빈번하게 항-C5a 항체를 투여하여야 한다. 본문에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 이점은, 이들은 C5a의 새로운 에피토프에 결합하고, ELISA 결합 측정 및 Biacore 측정에서 인간 C5에 대해 매우 낮은 결합 친화력을 나타내므로, 기타 C5a 항체와 비교하여, 본문에 기재된 항체는 비교적 낮은 조제량 및/또는 투여 빈도로 사람에게 투여할 수 있고, C5a를 억제함에 있어 동일하거나 더 좋은 작용을 갖는 것이다. 놀랍게도, 다양한 생물학적 실험에서 우리의 항체는 심지어 대조군 항체보다 더 효과적인 것을 증명하였다.
본원에서 제공하는 항-C5a 항체는 예를 들어, 전장 항-C5a 항체, 항-C5a 단일 사슬 항체(scFvs), 항-C5a Fc 융합 단백질, 다중특이성(예를 들어, 이중특이성) 항-C5a 항체, 항-C5a 면역접합체 및 이와 같은 유형을 포함한다.
일 측면에서, 본 출원은 인간 C5a 상의 에피토프와 특이적으로 결합할 수 있는 단리된 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기 중 적어도 하나의 아미노산 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31-40번 위치 잔기에 특이적으로 결합한다.
다른 일 측면에서, 본 출원은 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항-C5a 항체를 제공하고, 상기 VH는 서열 X1YYX2Q(서열번호 67)를 포함하는 하나의 중쇄 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1-여기서, X1은 D 또는 N이고, X2는 M 또는 I임; 서열 LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(서열번호 68)를 포함하는 하나의 HC-CDR2-여기서, X1은 K 또는 N이고, X2는 A 또는 V이며, X3은 V, N 또는 I이고, X4는 G, E, F, H, I, Q 또는 R이며, X5는 T, V 또는 A이고, X6은 Q, E, T 또는 S이며, X7은 Y 또는 F이고, X8은 V 또는 L임; 및 서열 RX1GPPGLX2(서열번호 69)를 포함하는 하나의 HC-CDR3-여기서, X1은 A, L 또는 V이고, X2는 T, S 또는 A임; 을 포함하며, 상기 VL은 서열 RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(서열번호 70)를 포함하는 하나의 LC-CDR1-여기서, X1은 S, R 또는 N이고, X2는 A, H 또는 D이며, X3은 S 또는 T이고, X4는 D 또는 N이며, X5는 G, A 또는 R이고, X6은 N, I, T, E 또는 A이며, X7은 I, M, L 또는 V임; 서열 GX1SX2RAS(서열번호 71)를 포함하는 하나의 LC-CDR2-여기서, X1은 G 또는 A이고, X2는 N 또는 K임; 및 서열 X1QHX2X3LPX4T(서열번호 72)를 포함하는 하나의 LC-CDR3-여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 R 또는 K이며, X3은 A 또는 V이고, X4는 P 또는 L임; 을 포함한다.
아울러, 항-C5a 항체를 코딩하는 핵산, 항-C5a 항체를 포함하는 조성물, 및 항-C5a 항체의 제조방법 및 용도를 더 제공한다.
정의
본문에 기재된 바와 같이, "치료(treatment)" 또는 "치료하는(treating)"은 임상 결과를 포함하는, 유익하거나 원하는 결과를 얻는 방법이다. 본 출원의 목적에 비추어, 상기 유익하거나 원하는 임상 결과는, 질병으로 인한 하나 이상의 증상의 완화, 질병 중증도의 감소, 질병 안정화(예를 들어, 질병 악화의 예방 또는 지연), 질병의 확산(예를 들어, 전이)을 예방 또는 지연, 질병 재발을 예방 또는 지연, 질병 진행을 지연 또는 느리게 함, 질병 상태를 개선, 질병 완화(부분 또는 전체), 질병을 치료하는 데 필요한 하나 이상의 기타 약물의 투여량을 감소, 질병 진행을 지연, 삶의 질을 개선 또는 향상, 체중 증가, 및/또는 생존 기간을 연장 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아울러, "치료"는 질병의 병리학적 결과의 감소(예를 들어, 암의 경우, 종양 부피)를 더 포함한다. 본 출원의 방법은 이들 치료의 어느 하나 또는 여러 측면을 고려한다.
용어 "항체"는 전장 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 전장 항체는 2가닥의 중쇄와 2가닥의 경쇄를 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원의 결합을 담당한다. 두 사슬의 가변 영역은 통상적으로 3개의 초가변 루프(highly variable loops)를 포함하고, 상보성 결정 영역(CDRs)(경쇄(LC) CDRs에는 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고, 중쇄(HC) CDRs에는 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함)이라고 칭한다. 본문에서 개시한 항체 또는 항원-결합 단편의 CDR 경계는 Kabat, Chothia 또는 Al-Lazikani 규약을 통해 정의하거나 인식할 수 있다(Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991). 중쇄 또는 경쇄의 3개의 CDR 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 칭하는 플랭킹 스트레치(flanking stretches) 사이에 삽입되며, 상기 프레임워크 영역은 CDR 영역보다 더 높은 보존성을 가지고, 초가변 루프를 지지하는 스캐폴드(scaffold)를 형성한다. 중쇄 및 경쇄의 불변 영역은 항원 결합에 참여하지 않지만 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 항체는 그들의 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로 분류된다. 항체의 5가지 주요 클래스 또는 이소타입은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이며, 각각 α, δ, ε, γ 및 μ 유형의 중쇄를 갖는 것을 특징으로 한다. 여러 주요한 항체 유형은 IgG1(γ1 중쇄), IgG2(γ2 중쇄), IgG3(γ3 중쇄), IgG4(γ4 중쇄), IgA1(α1 중쇄) 또는 IgA2(α2 중쇄)와 같은 하위 유형으로 나뉜다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "항원-결합 단편"은 항원 단편을 의미하며, 예를 들어, 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디설파이드 결합 안정화 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv'), 디설파이드 결합 안정화 디아바디(ds 디아바디), 단일 사슬 항체(scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 하나 이상의 CDRs를 포함하는 항체 단편으로 구성된 다중특이성 항체, 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원과 결합할 수 있지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 기타 항체 단편을 포함한다. 항원-결합 단편은 모 항체(parent antibody) 또는 모 항체 단편(예를 들어, 모 scFv)과 동일한 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시예에서, 항원-결합 단편은 특정 인간 항체로부터 유래한 하나 이상의 CDRs를 포함할 수 있으며, 해당 CDRs는 하나 이상의 상이한 인간 항체로부터 유래한 프레임워크 영역에 이식된다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "에피토프"는 항체 또는 일부 항체가 결합하는 항원 상의 특정 원자 또는 아미노산 그룹을 의미한다. 만약 2가지 항체 또는 일부 항체가 어느 항원과 경쟁적으로 결합하는 것으로 나타나면, 그들은 항원 상의 동일한 에피토프에 결합할 가능성이 있다.
본문에 기재된 바와 같이, 1차 항체가 등몰 농도에서 C5a 표적에 대한 2차 항체의 결합을 적어도 50%(예를 들어, 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 억제할 경우, 1차 항체는 2차 항체와 C5a 표적에 결합할 것을 "경쟁"하며, 그 반대도 마찬가지이다. PCT 출판물 WO 03/48731은 교차 경쟁을 기반으로 하는 높은 처리량 항체 "에피토프 비닝(binning)" 방법을 설명하였다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "특이적으로 결합", "특이적으로 인식" 또는 "에 대해서는 특이적이다"는 측정 가능하고 재현 가능한 상호작용, 예를 들어, 항체와 표적의 결합을 의미하며, 이는 생체분자를 포함하는 이종 분자 집단에서 해당 표적이 존재하는 것을 확정할 수 있다. 예를 들어, 항체는 특정 표적(에피토프일 수 있음)을 특이적으로 인식할 수 있다는 것은, 기타 표적과 결합하는 것과 비교하여, 해당 항체와 해당 표적의 결합이 더 높은 친화력, 결합력을 가지며, 더 쉽고 및/또는 더 지속적인 것을 의미한다. 일부 실시예에서, 항원을 특이적으로 인식하는 항체는 항원의 하나 이상의 항원 결정 부위와 반응하며, 이의 결합 친화력은 이와 기타 표적의 결합 친화력의 적어도 10배이다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "단리된" 항-C5a 항체는 (1) 자연으로 존재하는 단백질과 관련이 없으며, (2) 동일한 기원의 기타 단백질을 함유하지 않고, (3) 상이한 종속의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연계에 존재하지 않는 항-C5a 항체를 의미한다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "단리된 핵산"은, 게놈, cDNA 또는 합성 기원의 핵산 또는 그들의 조합을 의미한다. 그 기원에 따르면, 상기 "단리된 핵산"은 (1) 자연계에서 발견한 "단리된 핵산" 중의 전부 또는 부분 폴리뉴클레오티드와 관련이 없고, (2) 자연 상태에서 그와 연결되지 않은 폴리뉴클레오티드와 작동 가능하게 연결되거나, (3) 자연계에서 비교적 긴 시퀀스의 일부로 존재하지 않는 것을 의미한다.
본문에 기재된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 가변 도메인 내에서 발견한 비연속 항원 결합 부위를 의미한다. 문헌 Kabat et al., J. Biol . Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S . Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991); Chothia et al., J. Mol . Biol. 196:901-917 (1987); Al-Lazikani B. et al., J. Mol . Biol., 273: 927-948 (1997); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996); Abhinandan and Martin, Mol . Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Lefranc M.P. et al., Dev . Comp. Immunol., 27: 55-77 (2003); 및 Honegger and Pl
Figure pct00001
ckthun, J. Mol . Biol., 309:657-670 (2001)에서는 이러한 특수 영역에 대해 이미 설명하였으며, 여기서 서로 비교할 경우, 이러한 정의에는 아미노산 잔기의 중복(overlapping) 또는 하위 집합(subsets)을 포함한다. 하지만, 어느 하나의 정의 방식을 사용하여 항체 또는 이식된 항체 또는 그의 변이체의 CDR을 지시하여도, 모두 본원에서 정의하고 사용된 용어의 범위 내에 포함된다. 표 1에는 비교를 위해, 상기 인용된 각 참고문헌에 의해 정의된 CDR에 포함된 아미노산 잔기의 위치를 나열하였다. CDR 예측을 위한 알고리즘 및 결합 인터페이스는 예를 들어, Abhinandan and Martin, Mol . Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307 (2010); 및 Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438 (2015)에 기재된 것을 포함하여 당업계에 알려져 있다. 본 출원 및 본문에 포함될 수 있는 하나 이상의 청구범위에 사용되도록, 본 단락에 인용한 참고문헌의 전부 내용은 참조로서 본문에 통합된다.
CDR의 정의
Kabat 1 Chothia 2 MacCallum 3 IMGT 4 AHo 5
VH CDR1 31-35 26-32 30-35 27-38 25-40
VH CDR2 50-65 53-55 47-58 56-65 58-77
VH CDR3 95-102 96-101 93-101 105-117 109-137
VL CDR1 24-34 26-32 30-36 27-38 25-40
VL CDR2 50-56 50-52 46-55 56-65 58-77
VL CDR3 89-97 91-96 89-96 105-117 109-137
1아미노산 잔기의 번호는 상기 Kabat et al.에서의 명명 방법을 참조한다.
2아미노산 잔기의 번호는 상기 Chothia et al.에서의 명명 방법을 참조한다.
3아미노산 잔기의 번호는 상기 MacCallum et al.에서의 명명 방법을 참조한다.
4아미노산 잔기의 번호는 상기 Lefranc et al.에서의 명명 방법을 참조한다.
5아미노산 잔기의 번호는 상기 Honegger and Pl
Figure pct00002
ckthun.에서의 명명 방법을 참조한다.
용어 "키메라 항체"는, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종속에서부터 유래하거나 특정 항체 종류 또는 하위 종류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 일치하거나 상동성을 갖는 것을 의미하며, 본 출원의 생물학적 활성을 갖는 한, 이(들) 사슬의 나머지 부분은 다른 종속에서부터 유래하거나 기타 항체 종류 또는 하위 종류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 일치하거나 상동적인 항체, 및 이러한 유형의 항체의 단편을 갖는다(U.S. Patent No. 4,816,567; and Morrison et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA, 81:6851-6855 (1984)참조).
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 포함하는 가장 작은 항체 단편이다. 해당 단편은 하나의 중쇄 가변 도메인과 하나의 경쇄 가변 도메인의 밀접한 비-공유 결합에 의해 형성된 이량체이다. 이 두 도메인의 폴딩(folding)에 의해 6개의 초가변 루프(경쇄 및 중쇄에서 각각 3개의 루프)가 파생되며, 상기 초가변 루프는 항원에 결합하기 위한 아미노산 잔기를 항체에 제공하고, 항체에 항원과 결합하는 특이성을 부여한다. 하지만, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이성을 갖는 3개의 CDRs만 포함하는 Fv 단편의 절반)조차도 완전한 결합 부위보다 친화력이 낮지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖고 있다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭될 수 있는 "단일 사슬 Fv"는 단일 폴리펩티드 사슬로 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시예에서, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 이상적인 구조를 형성하도록 하는 VH와 VL 도메인 사이의 연결 폴리펩티드를 추가로 포함한다. scFv의 개요에 대해서는, Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer- Verlag , New York, pp. 269-315 ( 1994)를 참조하면 된다.
용어 "디아바디(diabodies)"는 VH와 VL 도메인 사이에 짧은 링커(예를 들어, 5-10개의 잔기)를 사용하여, scFv 단편(이전 단락 참조)을 구축함으로써 제조된 작은 항체 단편이며, 이렇게 하면 가변 도메인이 사슬내 페어링이 아닌 사슬간 페어링을 수행하여, 하나의 2가 단편, 즉 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 생성한다. 이중특이성 디아바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩티드 사슬 상에 위치하는 2개의 "교차" scFv 단편의 이종이량체이다. EP 404,097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)에서 디아바디에 대해 전면적으로 설명하였다.
비-인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용체 항체의 초가변 영역(HVR) 잔기가 마우스, 랫트, 토끼와 같은 비-인간 종속 또는 비-인간 포유동물에서 유래되고 이상적인 항체 특이성, 친화력 및 성능을 가진 초가변 영역 잔기(공여체 항체)에 의해 치환된 인간 면역글로불린(수용체 항체)이다. 특정 경우에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역에 있는 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 또한, 인간화 항체는 수용체 항체나 공여체 항체에서 모두 존재하지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 수식은 항체의 성능을 추가로 향상시킬 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 기본적으로 모든, 적어도 하나의, 통상적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 기본적으로 모든 초가변 루프는 모두 비-인간 면역글로불린의 초가변 루프와 대응하고, 모든 또는 기본적으로 모든 프레임워크 영역은 모두 인간 면역글로불린 서열이다. 인간 항체는 임의로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 더 포함하며, 일반적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역이다. 구체적인 내용은 Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct . Biol . 2:593-596(1992)를 참조할 수 있다.
본원에서 검정된 폴리펩티드 및 항체 서열의 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)" 또는 "상동성"은 보존적 치환이 서열 동일성의 일부에 속한다고 간주되는 상황에서 서열 정렬을 수행하며, 후보 서열과 비교될 폴리펩티드 서열에서 동일한 아미노산 잔기가 차지하는 백분율; 로 정의된다. 당업계의 기술 범위 내에 있는 다양한 정렬 방식에 의해 아미노산 서열의 동일성 백분율을 결정할 수 있으며, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR) 또는 MUSCLE 소프트웨어와 같은 공개적으로 획득 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용한다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에서 최대화 정렬을 구현하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는 정렬을 측정하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 하지만, 본문의 목적상, 아미노산 서열 동일성 백분율 수치는 서열 정렬 컴퓨터 프로그램 MUSCLE(Edgar, R.C., Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics 5(1):113, 2004)을 사용하여 생성된 것이다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하는 데 사용된다. 일부 실시예에서, 본원에 기재된 FcR은 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위 종류의 수용체를 포함하고, 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 대체 스플라이싱 형태(alternatively spliced forms)를 포함하는, IgG 항체(γ 수용체)에 결합하는 FcR이다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함하며, 이들은 유사한 아미노산 서열을 갖고, 주로 세포질 도메인에서 상이하다. 활성화 수용체 FcγRIIA의 세포질 도메인에는 면역 수용체 티로신 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB의 세포질 도메인에는 면역 수용체 티로신 억제 모티프(ITIM)를 함유한다(M. in Da
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ron, Annu . Rev. Immunol. 15:203-234(1997) 참조). 상기 용어는 알로타입, 예를 들어, FcγRIIIA 알로타입: FcγRIIIA-Phe158, FcγRIIIA-Val158, FcγRIIA-R131 및/또는 FcγRIIA-H131을 더 포함한다. Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol 9:457-92 (1991)와 Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin . Med. 126:330-41 (1995)에서 FcRs에 대해 설명하였다. 본 출원에서 용어 FcR은 미래에 검정할 FcR을 포함하여 기타 유형의 FcRs를 포함한다. 용어 FcR은 동시에 신생아 수용체 FcRn을 더 포함하며, 이는 모체 IgGs를 신생아에게 전달하는 역할을 한다(Guyer et al., J. Immunol . 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol . 24: 249(1994)).
용어 "FcRn"은 신생아 Fc 수용체(FcRn)를 의미한다. FcRn은 주요 조직 적합성 복합체(major histocompatibility complex, MHC)와 구조적으로 유사하며, α 사슬이 β2 마이크로글로불린에 비-공유적으로 결합하여 구성된다. 신생아 Fc 수용체 FcRn의 다양한 기능은 Ghetie and Ward (2000) Annu . Rev. Immunol . 18, 739-766.에서 종합적으로 설명하였다. FcRn은 모체에서 신생아로의 면역글로불린 IgG의 피동적 전달 및 혈청 IgG 수준의 조절에서 중요한 역할을 한다. FcRn은 구조 수용체로서, 세포내 및 세포 사이에서 완전한 형태로 엔도사이토시스된 IgG를 결합 및 수송하고, 그들이 기본 분해 경로를 겪지 않도록 한다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH1 도메인"은 일반적으로 118번 위치 아미노산에서부터 215번 위치 아미노산(EU 넘버링 시스템)까지 연장된다.
"힌지 영역"은 통상적으로 인간 IgG1의 216번 Glu에서부터 230번 Pro까지 연장되는 것으로 정의된다(Burton, Molec . Immunol . 22:161-206 (1985)). 중쇄간 디설파이드 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 IgG1과 동일한 위치에 배치함으로써, 기타 IgG 이소타입의 힌지 영역이 IgG1 서열과 정렬할 수 있도록 한다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH2 도메인"은 일반적으로 231번의 아미노산에서부터 340번의 아미노산까지 연장된다. CH2 도메인은 다른 영역과 밀접하게 쌍을 이루지 않고, 대신, 완전한 천연 IgG 분자의 두 CH2 도메인 사이에 N-말단이 연결된 2 가닥의 분지형 당 사슬을 삽입하였다는 것이 독특하다. 추측에 따른면, 당류는 도메인간 페어링을 위한 대체 역할을 할 수 있어, CH2 도메인이 안정을 유지하는 데 도움이 된다. Burton, Molec . Immunol. 22:161-206 (1985).
"CH3" 도메인은 Fc 영역 내에서 C-말단 잔기로부터 CH2 도메인(341번의 아미노산부터 항체 서열의 C-말단까지, 일반적으로 IgG의 446번 위치 또는 447번 위치 아미노산 잔기임)까지 연장된 것을 포함한다.
"기능성 Fc 단편"은 천연 Fc 영역 서열이 갖는 "이펙터 기능"을 갖는다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등; 을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 영역)에 결합하여야 되고, 당업계에서 잘 알려진 다양한 실험방법을 사용하여 평가할 수 있다.
"변경된" FcR 결합 친화력 또는 ADCC 활성을 갖는 IgG Fc 변이체의 항체는 모 폴리펩티드(parent polypeptide) 또는 천연 Fc 서열을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여, FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성이 증강하거나 감소한다. FcR에 대한 "결합이 증강"을 나타내는 Fc 변이체는 모 폴리펩티드 또는 천연 IgG Fc 서열을 포함하는 폴리펩티드와 비교하여, 적어도 1종의 FcR에 대해 더 높은 결합 친화력(예를 들어, 더 낮은 겉보기 Kd 또는 IC50 값)을 갖는다. 일부 실시예에서, 모 폴리펩티드와 비교하여, 결합 능력은 3배, 예를 들어, 5, 10, 25, 50, 60, 100, 150, 200, 심지어 최대 500배까지 증가하거나, 결합 능력은 25% 내지 1,000% 증가한다. FcR에 대한 "결합이 감소"를 나타내는 Fc 변이체는 모 폴리펩티드와 비교하여, 적어도 1종의 FcR에 대해 더 낮은 친화력(예를 들어, 더 높은 겉보기 Kd 또는 IC50 값)을 갖는다. 모 폴리펩티드와 비교하여, 그 결합 능력은 40% 이상 감소한다.
"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 분비형의 Ig가 특정 세포독성 세포(예를 들어, 자연 살해 세포(NK), 호중구 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcRs)에 결합하여 이러한 세포독성 이펙터 세포가 항원을 휴대하는 표적 세포에 특이적으로 결합할 수 있도록 한 후, 세포독소를 사용하여 표적 세포를 사멸하는 것을 의미하는 세포독성의 형태이다. 항체는 세포독성 세포를 "무장"하고 이러한 살상에 필요한 것이다. ADCC를 매개하는 주요 세포 유형에서, NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포에서 FcR의 발현은 Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol 9:457-92(1991)의 464페이지의 Table 3에 요약되어 있다. 미국 특허 No. 5,500,362 또는 5,821,337에 기재된 바와 같이, 목표 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내(in vitro) ADCC 실험을 수행할 수 있다. 이러한 유형의 실험에 적합한 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵구(PBMC) 및 자연 살해 세포(NK)를 포함한다. 선택적으로, 또는 추가로, 목표 분자의 ADCC 활성은 또한 예를 들어, Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656(1998)에 공개된 동물 모델에 설명한 바와 같이 생체내에서 평가할 수 있다.
야생형 IgG Fc를 포함하는 폴리펩티드 또는 모 폴리펩티드와 비교하여, Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩티드는 인간 이펙터 세포의 존재 하에 "증강된 ADCC 활성"을 나타내거나 보다 효과적으로 ADCC 효과를 매개할 수 있으며, 상기 Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩티드는 실험 시 야생형 IgG Fc를 포함하는 폴리펩티드(또는 모 폴리펩티드)와 수량에서 기본적으로 동일한 경우, 시험관내 또는 생체내에 상관없이 모두 보다 효과적으로 ADCC를 매개할 수 있다. 일반적으로, 이러한 유형의 변이체는 예를 들어, ADCC 활성을 검정하기 위한 실험 또는 방법, 예를 들어, 동물 모델에서와 같이, 당업계에 공지된 임의의 시험관내 ADCC 실험방법을 사용하여 검정한다. 일부 실시예에서, 이러한 유형의 변이체는 야생형 Fc(또는 모 폴리펩티드)와 비교하여, ADCC를 매개하는 효율이 5배 내지 100배, 예를 들어, 25배 내지 50배 향상된다.
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체가 존재하는 상황 하에 표적 세포를 용해(lysis)하는 것을 의미한다. 전형적인 보체 경로의 활성화는 보체 시스템의 제1 성분(C1q)이 동족 항원에 결합하는 항체(적절한 구조를 갖는 하위 종류)와 결합함으로써 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163(1996)에 설명된 바와 같이, CDC 실험을 수행할 수 있다. 미국 특허 No. 6,194,551B1 및 WO99/51642에서는 변경된 Fc 영역 아미노산 서열 및 증강된 또는 감소된 C1q 결합 능력을 갖는 폴리펩티드 변이체에 대해 설명하였다. 이러한 특허 출판물의 내용은 참조로서 명확하게 본문에 통합된다. 또한 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)를 참조하면 된다.
달리 언급하지 않는 한, "아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열"은 서로 축퇴형(degenerate version)이면서 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 또한 인트론을 포함할 수 있는데, 예를 들어, 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 특정 형태에서 인트론을 포함한다.
용어 "작동 가능하게 연결"은 이종 뉴클레오티드 서열이 발현되도록 하는, 조절 서열과 이종 뉴클레오티드 서열 사이의 기능적 연결을 의미한다. 예를 들어, 첫 번째 뉴클레오티드 서열이 두 번째 뉴클레오티드 서열과 기능적 관계에 처하여 있을 경우, 첫 번째 뉴클레오티드 서열은 두 번째 뉴클레오티드 서열에 작동 가능하게 연결된 것이다. 예를 들어, 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미친다면, 해당 프로모터는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 것이다. 일반적으로, 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 연속적인 것이며, 또한 필요할 경우, 동일한 리딩 프레임에서 2개의 단백질 코딩 영역을 연결할 수 있다.
"상동성"은 2개의 폴리펩티드 사이 또는 2개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성을 의미한다. 두 비교 서열의 동일한 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브 유닛인 경우, 예를 들어, 2개의 DNA 분자의 동일한 위치가 모두 아데닌이면, 이 2개의 DNA 분자는 이 위치에서 상동적이다. 2개의 서열 사이의 상동성 백분율은 2개의 서열에서 공유하는 매칭 또는 상동성 위치의 수량과 위치 총수의 비에 100을 곱하여 얻은 함수를 의미한다. 예를 들어, 2개의 서열에서 10개 위치 중 6개의 위치가 매칭되거나 상동적인 경우, 즉 이 2개의 서열의 상동성은 60%이다. 예를 들어, DNA 서열 ATTGCC 및 TATGGC는 50%의 상동성을 갖는다. 일반적으로, 2개의 서열을 정렬할 경우, 최대 상동성을 얻기 위한 목적으로 비교를 수행한다.
본문에 개시된 항-C5a 항체 또는 조성물의 "유효량"은 특정 목적을 달성하기에 충분한 양을 의미한다. "유효량"은 경험적으로 그리고 목적과 관련하여 알려진 방법에 의해 결정될 수 있다.
용어 "치료 유효량"은 본문에서 개시한 항-C5a 항체 또는 그의 조성물이 개체의 질병 또는 증상을 효과적으로 치료할 수 있는 량을 의미한다. 예를 들어, 암의 경우, 항-C5a 항체 또는 그의 조성물의 치료 유효량은 암 세포의 수량을 감소시킬 수 있는 량; 종양의 크기 또는 무게를 감소시킬수 있는 량; 종양 세포가 주변 기관으로 침윤하는 것을 억제(즉, 어느 정도에서 늦추거나 바람직하게는 중단)하는 량; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도에서 늦추거나 바람직하게는 중단)하는 량; 종양 성장을 어느 정도에서 억제하고, 및/또는 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도에서 완화시키는 량을 의미한다. 본문에 개시된 항-C5a 항체 또는 그의 조성물은 어느 정도에서 기존 종양 세포를 저해 및/또는 사멸할 수 있는데, 세포증식억제 또는 세포독성일 수 있다. 일부 실시예에서, 치료 유효량은 환자의 생존 기간 연장할 수 있는 사용량을 의미한다. 일부 실시예에서, 치료 유효량은 환자의 무진행 생존 기간을 개선할 수 있는 사용량을 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용가능한" 또는 "약리학적으로 적합한"은 생물학적 활성이 없거나 기타 바람직한 특성을 갖지 않는 재료를 의미하며, 예를 들어, 해당 재료는 환자에게 투여되는 약학 조성물에 첨가될 수 있으며, 현저한 생물학적 부작용을 일으키지 않고, 또는, 조성물에 포함된 임의의 기타 성분과 유해하는 방식으로 상호작용하지 않는다. 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제는 바람직하게는 독성학 또는 제조 검출에 필요한 기준을 충족하고, 및/또는 미국 식품의약청(FDA)에서 제정한 비-활성 성분 가이드라인에 포함되어 있다.
본문에 기재된 본 출원의 실시예는 "…로 구성된" 및/또는 "기본적으로 …로 구성된" 실시예를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본문에 언급된 "약"은 하나의 수치 또는 매개변수이며, 해당 수치 또는 매개변수 자체에 대한 변이체를 포함(및 설명)한다. 예를 들어, "약 X"에 관한 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 수치 또는 매개변수가 "아님(not)"에 대한 언급은, 통상적으로 특정 수치 또는 매개변수를 "제외(other than)"한다는 것을 의미하고 설명한다. 예를 들어, 해당 방법은 X형 암을 치료하는 데 사용될 수 없다는 것은, 즉, 해당 방법은 통상적으로 X형 암 이외의 기타 유형의 암을 치료하는 데 사용된다는 것을 의미한다.
문맥상 달리 명시되지 않는 한, 본문 및 상기 청구범위에서 사용된 단수 형태 "일", "하나" 및 "해당"은 복수 대상을 포함한다.
항- C5a 항체
일 측면에서, 본 출원은 C5a에 특이적으로 결합하는 항-C5a 항체를 제공한다. 상기 항-C5a 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 마우스 항체, 인간 항체, 및 본문에 기재된 중쇄 및/또는 경쇄 CDRs를 포함하는 항체 분자를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일 측면에서, 본 출원은 C5a에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 예상되는 항-C5a 항체는 예를 들어, 전장 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 IgG1 또는 IgG4), 항-C5a 단일 사슬 항체, 항-C5a Fc 융합 단백질, 다중특이성(예를 들어, 이중특이성) 항 -C5a 항체, 항-C5a 면역접합체, 및 이와 같은 유형을 포함한다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체는 C5a에 특이적으로 결합하는 전장 항체(예를 들어, 전장 IgG1 또는 IgG4) 또는 그의 항원-결합 단편이다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일 사슬 항체(scFv), Fv 단편, dAb, Fd, 나노바디, 디아바디(diabody) 또는 선형 항체이다. 일부 실시예에서, C5a에 특이적으로 결합하는 항체는, 항체가 C5a에 결합하는 친화력이 비-표적에 결합하는 친화력보다 적어도 10배 이상(예를 들어 10, 102, 103, 104, 105, 106, 또는 107배를 포함)인 것을 의미한다. 일부 실시예에서, 비-표적은 C5a 이외의 항원을 의미한다. 결합 친화력은 ELISA, 형광 활성화 세포 분류(fluorescence activated cell sorting, FACS) 분석 또는 방사면역침전 분석(radioimmunoprecipitation assay, RIA)과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. Kd 값은 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance, SPR) 기술 또는 생물층 간섭기술(biolayer interferometry, BLI)과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다.
비록 본문에서는 인간 서열을 포함하는 항-C5a 항체(예를 들어, 인간 CDR 서열을 포함하는 인간 중쇄 및 경쇄 가변 도메인)를 광범위하게 논의하였지만, 아울러 비-인간 항-C5a 항체도 고려하였다. 일부 실시예에서, 비-인간 항-C5a 항체는 본문에 기재된 항-C5a 항체의 인간 CDR 서열 및 비-인간 프레임워크 영역 서열을 포함하고, 일부 실시예에서, 비-인간 프레임워크 영역 서열은 본문에 사용된 바와 같은 하나 이상의 인간 CDR 서열을 사용하여 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 생성하는데 사용되는 임의의 서열을 포함하고, 예를 들어 마우스, 랫트, 토끼, 돼지, 소(예를 들어, 소, 황소, 물소), 사슴, 양, 염소, 닭, 고양이, 개, 페럿, 영장류(예를 들어, 마모셋 원숭이, 레서스 원숭이(rhesus monkey))와 같은 포유동물을 포함한다. 일부 실시예에서, 비-인간 항-C5a 항체는 본문에 기재된 하나 이상의 인간 CDR 서열을 비-인간 프레임워크 영역(예를 들어, 마우스 또는 닭의 프레임워크 영역 서열)에 이식함으로써 생성된 항-C5a 항체를 포함한다.
예시적인 인간 C5a의 완전한 아미노산 서열은 서열번호141의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 인간 C5a의 에피토프를 특이적으로 인식한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 인간 이외의 기타 종의 C5a와 교차 반응한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 인간 C5a에 완전히 특이적이며, 기타 비-인간 종 또는 유형과 교차 반응하지 않는다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 인간 C5a의 선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 C5a의 비-선형 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 인간 C5a 상의 에피토프에 특이적으로 결합하며, 여기서 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a의 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기 중 적어도 하나의 아미노산 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a의 31-40번 위치 잔기에 특이적으로 결합한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 C5a 단백질(또는 이의 단편)의 적어도 1종의 대립형질 변이체와 교차 반응한다. 일부 실시예에서, 대립형질 변이체는 자연적으로 존재하는 C5a 단백질(또는 이의 단편)과 비교하여, 최대 30개(예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30개)의 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 치환)을 갖는다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 C5a 단백질(또는 이의 단편)의 임의의 대립형질 변이체와 교차 반응하지 않는다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 C5a 단백질의 적어도 1종의 종간 변이체와 교차 반응한다. 일부 실시예에서, 예를 들어, C5a 단백질(또는 이의 단편)은 인간 C5a이고, C5a 단백질(또는 이의 단편)의 종간 변이체는 사이노몰구스 원숭이의 변이체이다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 C5a 단백질의 임의의 종간 변이체와 교차 반응하지 않는다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체에 있어서, 상기 항-C5a 항체는 항체 중쇄 불변 영역 및 항체 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 IgG1형 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 IgG2형 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 IgG3형 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 IgG4형 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함(…로 구성되거나 기본적으로 …로 구성됨을 포함)한다. 일부 실시예에서, 상기 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함(…로 구성되거나 기본적으로 …로 구성됨을 포함)한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 λ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 항-C5a 항체는 κ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함(…로 구성되거나 기본적으로 …로 구성됨을 포함)한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 항체 중쇄 가변 도메인 및 항체 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열 X1YYX2Q(서열번호 67)를 포함하는 하나의 중쇄 상보성 결정 영역(HC-CDR) 1-여기서, X1은 D 또는 N이고, X2는 M 또는 I임; 서열 LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(서열번호 68)를 포함하는 하나의 HC-CDR2-여기서, X1은 K 또는 N이고, X2는 A 또는 V이며, X3은 V, N 또는 I이고, X4는 G, E, F, H, I, Q 또는 R이며, X5는 T, V 또는 A이고, X6은 Q, E, T 또는 S이며, X7은 Y 또는 F이고, X8은 V 또는 L임; 및 서열 RX1GPPGLX2(서열번호 69)를 포함하는 하나의 HC-CDR3-여기서, X1은 A, L 또는 V이고, X2는 T, S 또는 A임; 을 포함하며, 상기 VL은 서열 RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(서열번호 70)를 포함하는 하나의 LC-CDR1-여기서, X1은 S, R 또는 N이고, X2는 A, H 또는 D이며, X3은 S 또는 T이고, X4는 D 또는 N이며, X5는 G, A 또는 R이고, X6은 N, I, T, E 또는 A이며, X7은 I, M, L 또는 V임; 서열 GX1SX2RAS(서열번호 71)를 포함하는 하나의 LC-CDR2-여기서, X1은 G 또는 A이고, X2는 및 N 또는 K임; 및 서열 X1QHX2X3LPX4T(서열번호 72)를 포함하는 하나의 LC-CDR3-여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 R 또는 K이며, X3은 A 또는 V이고, X4는 P 또는 L임; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH를 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하며;
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH를 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VL을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VL을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 40에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 41에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 43에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 44에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 56에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을; 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을; 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1, 서열번호 7 및 서열번호 30과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39, 서열번호 57 및 서열번호 60과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1, 서열번호 7 및 서열번호 30에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39, 서열번호 57 및 서열번호 60에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 8 및 서열번호 31과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 40, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 8 및 서열번호 31에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 40, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 10 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 10 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 11 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 41, 서열번호 57 및 서열번호 64와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 11 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 41, 서열번호 57 및 서열번호 64에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 9 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 43, 서열번호 57 및 서열번호 63과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 9 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 43, 서열번호 57 및 서열번호 63에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 11 및 서열번호 35와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 44, 서열번호 57 및 서열번호 60과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 11 및 서열번호 35에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 44, 서열번호 57 및 서열번호 60에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 10 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 10 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 23 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 23 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 23 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 56, 서열번호 57 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2, 서열번호 23 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 56, 서열번호 57 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52, 서열번호 58 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52, 서열번호 58 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6, 서열번호 18 및 서열번호 36에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52, 서열번호 58 및 서열번호 61과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52, 서열번호 58 및 서열번호 61에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65와 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5, 서열번호 21 및 서열번호 32에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53, 서열번호 59 및 서열번호 65에 나타낸 바와 같은 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열의 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열의 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 73의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 75의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 100의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 79의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 85의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 88의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 93의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 97의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 77의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 102의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 109의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 110의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 111 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 112 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 114 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 135 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 118 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 117 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 126 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 116 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 132 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 138 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 139 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는, 서열번호 140 중의 아미노산 서열 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 73을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 112를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 75를 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 114를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 100을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 135를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 79를 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 118을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 85를 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 117을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 88을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 126을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 93을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 116을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 97을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 116을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 77을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 132를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 102를 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 135를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 109를 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 138을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 110을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 139를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 110을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 140를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 111을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 139를 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 111을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2와 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 140을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2와 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 75의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 114의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 100의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 135의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 118의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 85의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 117의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 88의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 126의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 93의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 116의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 97의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 116의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 77의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 132의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 102의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 135의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 109의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 138의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 110의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 139의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 110의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 140의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 111의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 139의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 111의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 VL는 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 140의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 기능적 에피토프는 조합 알라닌 스캐닝 방법(combinatorial alanine scanning)에 의해 해석될 수 있다. 이 과정에서, 조합 알라닌 스캐닝 방법은 C5a 단백질에서 항-C5a 항체와의 상호작용에 필수적인 아미노산을 검정하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시예에서, 해당 에피토프는 형태적(conformational)이며, 아울러 C5a 단백질과 결합하는 항-C5a 항체의 결정 구조(crystal structure)를 사용하여 에피토프를 검정할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 출원은 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체와 C5a에 경쟁적으로 결합하는 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체와 C5a 상의 에피토프에 경쟁적으로 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, VH 및 VL을 포함하는 항-C5a 항체 분자와 동일한 에피토프에 결합하는 항-C5a 항체를 제공하며, 여기서 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, VH 및 VL을 포함하는 항-C5a 항체와 C5a에 경쟁적으로 결합하는 항-C5a 항체를 제공하며, 여기서 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 경쟁 실험을 사용하여 본문에 기재된 항-C5a 항체와 C5a에 경쟁적으로 결합하는 모노클로날 항체를 검정할 수 있다. 경쟁 실험은 동일하거나 공간적으로 중첩(overlapping)되는 에피토프를 인식하거나 하나의 항체가 다른 항체가 항원에 결합하는 것을 경쟁적으로 억제함으로써 2개의 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 검정할 수 있다. 특정 실시예에서, 이러한 경쟁적 항체는 본문에 기재된 항체와 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 예시적인 경쟁 실험은 Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.)에 기재된 일반적인 실험을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 항체가 결합하는 에피토프를 해석하는 데 사용되는 상세한 예시적 방법은 Morris(1996) "Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66(Humana Press, Totowa, N.J.)에 기재된 바와 같다. 일부 실시예에서, 각 항체가 다른 항체의 결합을 50% 이상 차단하는 경우, 동일한 에피토프에 결합한다고 한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체와 경쟁하는 항체는 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체이다.
예시적인 항-C5a 항체 서열은 표 2 및 표 3에 나타낸 바와 같고, 여기서 Kabat 정의 방식에 따라 CDR 넘버링을 수행한다. 당업자는 CDR의 위치를 예측하고 항체 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 정의하기 위한 다양한 알려진 알고리즘이 있음을 인지할 것이다. 본 출원의 범위 내에는 본문에 기술된 항체의 CDR, VH 및/또는 VL 서열을 포함하나, 하기 표에 예시된 것 이외의 예측 알고리즘을 기반으로 하는 항체도 본 출원의 범위 내에 있다.
예시적인 항-C5a 항체의 CDR 서열
항체 HC- CDR1 HC- CDR2 HC- CDR3
Cab01 KYYMQ
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항체 LC- CDR1 LC- CDR2 LC- CDR3
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Cab31 RSSQSLLHSDGYTYMD(서열번호 54) GGSNRAS
(서열번호 57)		 MQHKVLPPT
(서열번호 63)
Cab32 RSSQSLLASDGYIYID(서열번호 55) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab33 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHKALPPT
(서열번호 65)
Cab34 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab35 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab36 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab37 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab38 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab39 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab40 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab41 RSSQSLLASDGYNYID(서열번호 42) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab42 RSSQSLLASDAYNYID(서열번호 56) GGSNRAS
(서열번호 57)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab43 RSSQNLLATDGYTYLD(서열번호 52) GGSKRAS
(서열번호 58)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab44 RSSQSLLATDGYEYLD(서열번호 53) GASNRAS
(서열번호 59)		 LQHKALPPT
(서열번호 65)
Cab45 RSSQNLLATDGYTYLD(서열번호 52) GGSKRAS
(서열번호 58)		 LQHRALPPT
(서열번호 61)
Cab46 RSSQSLLATDGYEYLD(서열번호 53) GASNRAS
(서열번호 59)		 LQHKALPPT
(서열번호 65)
예시적인 서열
소개 서열
Cab01 VH EVQLVESGGGMVQPGGSLRVSCAASGFTFTKYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKANGGTA
EYVASVKDRFTISRDDSKSIAYLQMSSLKTEDTAVYYCVMRDNGYHWGQGVLVTVSS
(서열번호 73)
Cab02 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 74)
Cab03 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTVSS
(서열번호 75)
Cab04 VH EVQLVQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGGTTQYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVVVTVSS
(서열번호 76)
Cab28 VHCab29 VH
Cab30 VH
Cab31 VH 		DMQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGGTT
QYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLEMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 77)
Cab06 VH EVHLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 78)
Cab07 VH DVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTISS
(서열번호 79)
Cab08 VH EVQLVESGGGLIQPGGSLRVSCAASGFTFSDYYLQWVRQAPGKGPEWVGLIRTKRYGGTSEYAASVKGRYTISRDDSKAIAYLQMSSLKTEDTAVYYCVVRIFTGLHWGKGTPVTVSS
(서열번호 80)
Cab09 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIAYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 81)
Cab10 VH QVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLTWGQGVLITVSS
(서열번호 82)
Cab11 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRVSCAASGFRFSDFYMQWVRQAPGKRPEWVGLIRNKPYGGTAEYAASVKGRFTISRDDSKSVTDLQMSSLKTEDTAIYYCVMRNNGYHWGQGVLVTISS
(서열번호 83)
Cab12 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTQYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTISS
(서열번호 84)
Cab13 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGGTTQYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTISS
(서열번호 85)
Cab14 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCATSGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWLGLIRNKAIGGTTQYAASVKGRFTISRDDSKGIAYLQMSSLKTEDTAVYYCVCRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 86)
Cab15 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKPEDTAVYYCAGRLGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 87)
Cab16 VH EVHLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKPEDTAVYYCAGRLGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 88)
Cab17 VH VVQLVESGGGLVLPGGSLKVSCAASGFIFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGETVQYAASLKGRFTISRDDSKSIAYLQMTSLKTEDTAMYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTVSS
(서열번호 89)
Cab18 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTQYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 90)
Cab19 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCVASGFTFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGGTTSYAASVKGRFTISRDDSKSVAYLQMTSLKTEDTAVYFCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 91)
Cab20 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFRDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETAEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCTSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 92)
Cab21 VH EVQLVQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSNYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGETTEFAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMTRLKTEDTAVYYCAGRLGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 93)
Cab22 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCTASGFIFNDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKANGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYFCTGRLGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 94)
Cab23 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGGTVEYAASVKGRFTISRDDSKRIAYLQMRSLKTEDTAVYFCTGRVGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 95)
Cab24 VH VVQLVESGGGLVQPGGSLKVSCAASGFIFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRKKVNGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKIEDTAVYYCVSRAGPPGLAWGQGVLVTISS
(서열번호 96)
Cab25 VH EVQLVESGGGFVQPGGSLKVSCVASGFTFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGGTTTYAASVKGRFTISRDDSKSVAYLQMTSLKTEDTAVYFCVSRAGPPGLSWGQGVLVTISS
(서열번호 97)
Cab26 VH EVQLVESGGGLVLPGGSLKVSCAASGFIFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGETVQYAASLKGRFTISRDDSKSIAYLQMTSLKTEDTAMYYCVSRAGPPGLTWGQGVLVTISS
(서열번호 98)
Cab27 VH EVQLVQSGGGLVQPGGSLKVSCAASGFTFRDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGGTTQYAASVKGRFTISRDDSKSIVYLQMSSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 99)
Cab05 VHCab32 VH
Cab33 VH 		EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGGTT
QYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 100)
Cab34 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGGTTEYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 101)
Cab35 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGETTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 102)
Cab36 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGETTEYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 103)
Cab37 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGFTTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 104)
Cab38 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGHTTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 105)
Cab39 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGITTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 106)
Cab40 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGQTTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 107)
Cab41 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGRTTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 108)
Cab42 VH EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGETTQYAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 109)
Cab43 VHCab44 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAIGE
TTEFAASVKGRFTISRDDSKNSVYLQMNSLKTEDTAVYYCAGRLGPPGLTWGQGVLVTVSS
(서열번호 110)
Cab45 VHCab46 VH EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYIQWVRQAPGKGPEWVGLIRNKAVGG
TTTYAASVKGRFTISRDDSKNSAYLQMNSLKTEDTAVYFCVSRAGPPGLSWGQGVLVTVSS
(서열번호 111)
Cab01 VL DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLLHSDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTKVEIK
(서열번호 112)
Cab02 VL DIVMIQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLLHSDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTKLEIK
(서열번호 113)
Cab03 VL DIVLTQTPLSLAVSPGEPASISCRSSQSLLASDGYTYLDWYLQKPGQSPQILIYGGSNRASGVPDRFSGRGSGTDFTLKITKVEAEDVGVYYCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 114)
Cab04 VL DIVMIQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLLHTDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGSDFTLKISKVEAEDVGVYYCLQHKALPLTFGGGTKLEIK
(서열번호 115)
Cab21 VLCab22 VL
Cab23 VL
Cab24 VL
Cab25 VL
Cab26 VL
Cab27 VL 		DAVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDGYNYIDWYLQRPGQSPKVLIYGGSNRASGVP
DRFSGSGSGTYFTLKISKVEAEDVGFYFCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 116)
Cab06 VLCab13 VL
DIVMIQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDGYNYMDWYLQKPGQSPKVLIYGGSNRASGVP
DRFSGSGSGTDFTLKITKVEAEDVGIYYCMQHKVLPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 117)
Cab07 VL DTVMTQIPLSLSVTPGEPASISCRSSQRLLHTDGYTYLDWYHQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSVTDFTLKISKMEAEDVGVYYCMQHKALPPTFGGGTKLEIK
(서열번호 118)
Cab08 VL DIVMTQTPLSRPVTPGEPASISCRSSQSLLHTDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTKLEIK
(서열번호 119)
Cab09 VL DIVMIQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYTYVDWYLQKPGQSPQILIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKITNVEAEDVGVYYCLQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 120)
Cab10 VL DTVMSQIPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHTDGYIYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTKLEIK
(서열번호 121)
Cab11 VL DAVMTQIPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHTDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPPTFGGGTKLEIK
(서열번호 122)
Cab12 VL DIVLTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLLHSDGYTYMDWYLQKPGQSPQILIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 123)
Cab14 VL DIELTQTPLSRPVTPGEPASISCRSSQSLLHTDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTKLEIK
(서열번호 124)
Cab15 VL DIVMTQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLATDGYTYLDWYLQKPGQSPQVLIYGGSKRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKITKVEAEDVGIYYCMQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 125)
Cab16 VL DAVMTQIPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHTDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPLTFGGGTRLEIK
(서열번호 126)
Cab17 VL DIVMIQNPLSLSVTPGEPASISCRSSQRLLASDGYTYVDWYLQKPGQSPQILIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 127)
Cab18 VL DIVMTQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLDSNRYAYVDWYLQKPGQSPQILVYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGIYYCMQHKVLPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 128)
Cab19 VL DIVMIQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYTYLDWYQQKPGQAPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSATDFTLKISKMEAEDVGVYYCMQHKALPPTFGGGTKVEIK
(서열번호 129)
Cab20 VL DIVMIQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKVLPLTFAGGTKLEIK
(서열번호 130)
Cab28 VL DIVMIQNPLSLPVTPGEPASISCRSSQNLLATDGYTYLDWYLQKPGQSPQVLIYGGSKRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGIYYCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 131)
Cab29 VL DIVMIQNPLSLSVSLGEPASISCRSSQSLLATDGYEYLDWYLQKPGQSPQILIYGASNRASGVPDRFSGRGSGTDFTLKITKVEAEDVGVYYCLQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 132)
Cab30 VL DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYTYLDWYLQRPGQSPHLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKVLPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 133)
Cab31 VL DTVMSQIPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSDGYTYMDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISKVEAEDVGVYYCMQHKVLPPTFGQGTRLEIK
(서열번호 134)
Cab05 VLCab34 VL
Cab35 VL
Cab36 VL
Cab37 VL
Cab38 VL
Cab39 VL
Cab40 VL
Cab41 VL 		DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDGYNYIDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVP
DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 135)
Cab32 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDGYIYIDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 136)
Cab33 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDGYNYIDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCLQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 137)
Cab42 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLASDAYNYIDWYLQKPGQSPQLLIYGGSNRASGVP
DRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYFCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 138)
Cab43 VLCab45 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQNLLATDGYTYLDWYLQKPGQSPQLLIYGGS
KRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQHRALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 139)
Cab44 VLCab46 VL DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLATDGYEYLDWYLQKPGQSPQLLIYGAS
NRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQHKALPPTFGQGTKLEIK
(서열번호 140)
인간 C5a TLQKKIEEIAAKYKHSVVKKCCYDGACVNNDETCEQRAARISLGPRCIKAFTECCVVASQLRANISHKDMQLGR(서열번호 141)
IgG1 중쇄 불변 영역 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열번호 142)
IgG4 중쇄 불변 영역 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열번호 143)
경쇄 불변 영역 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열번호 144)
C5a
보체 시스템은 조직 손상, 병원체(pathogens) 또는 기타 외부 침입에 응답하여 활성화되며, 30종 이상의 단백질로 구성된다. 보체 성분 5a(C5a)는 주화성(chemotactic) 및 아나필라톡신 특성(anaphylatoxic properties)을 갖는 보체 인자 5(C5)의 분해 산물로서 최초 기술되었다(Shin et al., 1968). C5a의 전구체 C5 단백질은 1,676개의 아미노산을 포함하고, 분자량은 188kDa이며, 그 유전자는 9q33-9q34에 위치한다(Wetsel et al., 1988). 인간의 C5a는 C5-전환효소가 C5의 α 사슬을 절단하여 생성되는 약 11kDa이고, 74개의 아미노산을 함유하는 하나의 당단백질이지만, N-연결된 글리코실화는 그 기능에 필수적인 것이 아니다. C5a의 특성은 이것이 선천 면역 반응의 중요한 구성 성분임을 시사하지만, 기존 증거는 C5a가 적응 면역에서도 역할을 할 수 있음을 시사한다(Kohl, 2006). C5a가 반드시 염증성 질병의 유발 요인은 아니지만, 많은 염증성 질병에서 과도하거나 조절되지 않는 C5a가 생성되는데, 이는 C5a는 염증 반응을 촉진하고 유지할 수 있음을 시사한다(Guo and Ward, 2005년). C5a는 펩티드 루프로 연결된 4개의 역평행 α-나선을 가지며, 3개의 주요 디설파이드 결합을 통해 더욱 안정화된다(Monk et al., 2007). 돌연변이 유발 및 항체 연구는 수용체와의 상호작용을 제공하는 몇 가지 기본적인 잔기를 이미 확정하였다(Monk et al., 2007 검토).
보체 캐스케이드는 전형적인 경로, 대체 경로, 만난-결합 렉틴 경로(MBL) 또는 외인성 프로테아제 경로인 4가지 경로를 통해 활성화될 수 있다(Ricklin and Lambris, 2007). 전형적인 경로와 렉틴 경로는 각각 병원체 표면에 형성된 항체 복합체 및 박테리아 표면의 만노스(mannose)를 인식하는 것을 통해 활성화된다. 2가지 경로는 모두 세린 프로테아제가 C4를 절단하는 것을 초래하여 C4a와 C4b를 형성한다. C4b가 C2에 결합한 후, 프로테아제의 작용 하에 C2a의 생성을 초래하고, C4b와 C2a는 전형적인 경로 중의 C3-전환효소(C4b2a)를 형성한다. 대체 경로는 외부 물질 표면 또는 "느린 전달(tickover)"에 의해 활성화될 수 있고, C3의 자발적인 가수분해를 초래하며, 그 후 인자 B에 결합하여 대체 경로 중의 C3 전환 효소(C3bBb)를 형성하고, 대체 경로는 낮은 수준의 보체 캐스케이드 활성화를 지속적으로 유지함으로써, 침입하는 병원체에 대해 신속한 응답을 할 수 있도록 보장한다(Ricklin and Lambris, 2007). 위의 3가지 경로는 모두 C3-전환효소를 형성할 수 있으며, C3-전환효소는 C3 단백질을 추가로 절단하여 C3a 및 C3b를 형성한다. C3b는 병원체 표면에 대한 세포의 인식 및 병원체의 제거를 촉진할 수 있고, 또한 C3-전환효소(C4b2a 또는 C3bBb)와 C5-전환효소(C4b2aC3b 또는 C3bBbC3b)를 형성할 수 있으며, 그 후 C5-전환효소는 C5를 추가로 절단하여 C5a 및 C5b를 생성한다. C5b는 계속해서 막 공격 복합체(MAC; C5b-9)의 조립을 시작한다. 보체 캐스케이드는 보체 활성화 생성물이 숙주 조직을 표적화하는 것을 방지하는 일련의 가용적인 막 결합 조절 단백질에 의해 밀접하게 조절된다(Ricklin and Lambris, 2007). 하지만 이런 제어는 트롬빈이 C3와 C5를 직접 절단하여 보체 시스템을 활성화시키는 것과 같은 일부 외인성 경로를 통해 우회할 수 있다(Amara et al., 2008). 또한, 활성화된 호중구와 폐포 대식세포는 분비된 세린 프로테아제를 통해 C5를 절단하여 C5a를 생성할 수 있다(Amara et al., 2008). 혈장 및 세포 표면의 카르복시펩티다아제는 단백질 C-말단의 아르기닌을 제거할 수 있으므로, C5 절단에 의해 생성된 C5a는 이에 의해 신속하게 대사되어 C5adesArg를 형성할 수 있다(Bokisch and Muller-Eberhard, 1970). C5a와 비교하여, C5adesArg의 효능 감소는, 전형적인 C5a 수용체-CD88에 대한 결합 친화력을 감소시킨다(Higginbottom et al., 2005). C5a 및 C5adesArg는 생체 내에서 신속하게 제거될 수 있으며, 여기서 약 50%의 C5a 및 C5adesArg는 2-3분 이내에 순환에서 제거되고, 이외 부분 C5a는 백혈구 및 기타 세포 상의 CD88과 결합한 후 매개되어 제거된다(Oppermann and Gotze, 1994). 하지만, 두 번째 수용체인 C5a-유사 수용체 2(C5L2)는 C5a/C5adesArg, 특히 C5adesArg를 신속하게 내재화함으로써, C5adesArg를 세포 내에 보류하게 하고, 특정 세포 유형에서 분해하여, 보체 단편을 보다 효과적으로 제거한다(Scola et al. (2009)). 반면, CD88을 발현하는 세포는 C5a를 내재화하지만, 분해하지 않고, 여전히 활성 형태로 더 높은 비율로 방출할 수 있다. 혈장 C5a는 또한 간에서 제거될 수 있다(Chenoweth and Goodman, 1983).
CD88
C5a는 유사한 고친화력으로 CD88 및 C5L2에 결합한다. 반면, C5adesArg의 C5L2에 대한 친화력은 C5a와 유사(~12nM)하지만, CD88에 대한 친화력은 훨씬 낮다(~660nM
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)(Monk et al., 2007). CD88과 C5L2는 35%의 서열 상동성을 가지며, 19번 염색체의 동일한 영역(19q13.3-19q13.4)에 위치한다. 그들은 기타 주화 인자 수용체(chemoattractant receptors)(예를 들어, 포르밀 펩티드 수용체 패밀리 및 브래디키닌 수용체) 유전자와 클러스터(cluster)로 응집된다. 양자는 모두 글리코실화된 7차 막관통 단백질이며, 분자량은 약 45kDa이다. CD88은 G 단백질 결합 수용체이며, 동시에 로돕신 유전자 패밀리의 구성원 중 하나이기도 하다(Monk et al., 2007). 사람들은 CD88에 대한 C5a의 결합은 2개의 상이하고, 물리적으로 단리된 부위에서 발생하는 것으로 간주한다. 첫 번째 "인식" 부위는 수용체의 세포외 아미노 말단(N-말단)에 위치하며, C5a N-말단과 디설파이드 결합 연결의 코어에 결합한다. 두 번째 "활성화" 부위는 수용체의 막관통 도메인에 의해 형성되고, C5a의 C-말단과 결합하며, 수용체 결합 G 단백질에 의해 매개되는 특정 신호 전달 경로를 생성시킨다(Monk et al., 2007).
C5L2
C5L2를 발현하는 세포 유형은 예를 들어 호중구, 단핵구, 림프구, 대식세포, 비-골수성 세포(예를 들어, 혈관 평활근 세포) 및 조직 기원의 세포(예를 들어, 부신(adrenal gland), 심장, 간, 폐, 비장 및 뇌)와 같이 CD88을 발현하는 세포 유형과 대략 동일하지만, 비-염증 조건 하에서, C5L2의 발현 함량은 CD88보다 현저하게 낮다(Gao et al.,2005). C5L2의 기능은 알려져 있지 않다. 일부 실험 데이터는 C5L2가 신호 전달 기능 없는 미끼 수용체로 작용할 수 있음을 시사한다. 연구에 따르면, C5L2를 녹아웃(knockout)하거나 차단하면, 마우스의 염증 반응을 가속화시킬 수 있다(Gao et al., 2005; Gerard et al., 2005). 이는 C5L2는 항염증 기능을 가지고 있음을 시사하며, CD88에 결합하는 C5a의 양을 감소시킴으로써 작용을 하는 것일 수 있다. 또한, C5L2는 양의 조절자(positive regulator)로 작용할 수 있으며, 적어도 마우스에서, C5a 및 C3a 신호 전달에 대해 아주 중요하다(Chen et al., 2007). 연구에 따르면, 시험관 내에서, C5L2는 호중구, 대식세포 및 섬유아세포에서의 C5a 신호 전달을 촉진하는 데 매우 중요한 하지만, 생체 내에서 C5L2의 결핍은 오발부민-유도 기도 과민성 및 염증을 초래한다(Chen et al., 2007). 또한, 마우스 "말기" 패혈증(치사율 100%) 모델에서, C5L2 및 CD88을 동시에 지체시켜야만 보호 작용을 할 수 있다(Rittirsch et al., 2008).
전장 항- C5a 항체
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 그의 변이체의 불변 영역과 같은 IgG 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 λ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 κ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 전장 인간 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 마우스 면역글로불린 Fc 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-C5a 항체는 증강된 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)의 이펙터 기능을 갖도록, 이미 변경되거나 기타 방식으로 변경된 Fc 서열을 포함한다.
따라서, 예를 들어, 일부 실시예에서, C5a에 특이적으로 결합하는 IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a에 특이적으로 결합하는 IgG2 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a에 특이적으로 결합하는 IgG3 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a에 특이적으로 결합하는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 b) VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG2 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG3 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 a) 중쇄 가변 도메인 및 b) 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 a) 중쇄 가변 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3; 을 포함하고; 상기 b) 경쇄 가변 도메인은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하며; 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112 내지 서열번호 140중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG2 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73 내지 서열번호 111중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112 내지 서열번호 140중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG3 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73 내지 서열번호 111중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112 내지 서열번호 140중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73 내지 서열번호 111중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하며, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112 내지 서열번호 140중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체를 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되고, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
결합 친화력
결합 친화력은 Kd, Koff, Kon 또는 Ka를 사용하여 표시한다. 본문에서 사용하는 바와 같이, 용어 Koff는 동역학적 선택 장치에 의해 측정되는, 항원/항체 복합체로부터 항체가 해리되는 오프-속도 상수(off-rate constant)를 의미한다. 용어 Kon는 항체가 항원에 결합하여 항원/항체 복합체를 형성하는 결합 속도 상수(on-rate constant)를 의미한다. 본문에서 사용하는 평형 해리 상수 Kd는 특정 항체-항원이 상호작용할 때의 해리 상수를 의미하며, 항체 분자 용액에서, 항원이 모든 항체 결합 부위의 절반을 차지하고 평형에 도달할 때 필요한 항원 농도를 의미하며, 이는 Koff/Kon과 동일하다. Kd의 측정은 모든 결합 분자가 모두 용액에 있다고 가정한다. 효모 발현 시스템에서와 같이, 항체가 세포벽과 연결되는 경우, 상응하는 평형 해리 속도 상수는 Kd의 양호한 근사치인 EC50으로 표현한다. 친화 결합 상수 Ka는 해리 상수 Kd의 역수이다.
해리 상수(Kd)는 항원에 대한 항체 모이어티의 친화력을 나타내는 지표로 사용될 수 있다. 예를 들어, Scatchard법에 의해 다양한 마커가 표지된 항체와 Biacore 기기(Amersham Biosciences사 제조)를 사용하여 간단한 분석을 수행하고, 사용자 매뉴얼 또는 첨부된 키트에 따라, 표면 플라즈몬 공명에 의해 생체분자간의 상호작용을 분석할 수 있다. 이러한 방법을 사용하여 Kd 값을 획득하고, 단위 M으로 표시한다. 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 예를 들어 ≤10-7M, ≤10-8M, ≤10-9M, ≤10-10M, ≤10-11M, ≤10-12M, 또는 ≤10-13M의 Kd 값을 가질 수 있다.
항체의 결합 특이성은 당업계에 공지된 방법에 의해 실험을 수행하여 측정할 수 있다. 이러한 방법은 Western blots, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIAcore 테스트 및 펩티드 주사 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 C5a 표적에 특이적으로 결합하며, 이의 Kd 값은 10-7M 내지 10-13M(예를 들어, 10-7M 내지 10-13M, 10-8M 내지 10-13M, 10-9M 내지 10-13M, 또는 10-10M 내지 10-12M)이다. 따라서, 일부 실시예에서, 항-C5a 항체와 C5a 사이의 결합하는 Kd 값은 10-7M 내지 10-13M, 1Х10-7M 내지 5Х10-13M, 10-7M 내지 10-12M, 10-7M 내지 10-11M, 10-7M 내지 10-10M, 10-7M 내지 10-9M, 10-8M 내지 10-13M, 1Х10-8M 내지 5Х10-13M, 10-8M 내지 10-12M, 10-8M 내지 10-11M, 10-8M 내지 10-10M, 10-8M 내지 10-9M, 5Х10-9M 내지 1Х10-13M, 5Х10-9M 내지 1Х10-12M, 5Х10-9M 내지 1Х10-11M, 5Х10-9M 내지 1Х10-10M, 10-9M 내지 10-13M, 10-9M 내지 10-12M, 10-9M 내지 10-11M, 10-9M 내지 10-10M, 5Х10-10M 내지 1Х10-13M, 5Х10-10M 내지 1Х10-12M, 5Х10-10M 내지 1Х10-11M, 10-10M 내지 10-13M, 1Х10-10M 내지 5Х10-13M, 1Х10-10M 내지 1Х10-12M, 1Х10-10M 내지 5Х10-12M, 1Х10-10M 내지 1Х10-11M, 10-11M 내지 10-13M, 1Х10-11M 내지 5Х10-13M, 10-11M 내지 10-12M, 또는 10-12M 내지 10-13M이다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체와 C5a 사이의 결합하는 Kd 값은 10-7M 내지 10-13M이다.
일부 실시예에서, 항-C5a 항체와 비-표적 사이의 결합하는 Kd 값은 항-C5a 항체와 표적의 Kd 값보다 높고, 본문에 인용된 일부 실시예에서, 표적(예를 들어, C5a)에 대한 항-C5a 항체의 결합 친화력은 비-표적에 대한 항-C5a 항체의 결합 친화력보다 높다. 일부 실시예에서, 비-표적은 비-C5a의 항원을 의미한다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체(C5a에 대해)와 비-C5a 표적이 결합하는 Kd 값은 적어도 10배, 예를 들어 10-100배, 100-1,000배, 103-104배, 104-105배, 105-106배, 106-107배, 107-108배, 108-109배, 109-1010배, 1010- 1011배, 또는 1011-1012배이다.
일부 실시예에서, 비-표적에 결합하는 상기 항-C5a 항체의 Kd 값은 10-1M 내지 10-6M(예를 들어, 10-1M 내지 10-6M, 10-1M 내지 10-5M, 또는 10-2M 내지 10-4M)이다. 일부 실시예에서, 상기 비-표적은 비-C5a의 항원을 의미한다. 따라서, 일부 실시예에서, 항-C5a 항체와 비-C5a 표적 사이의 결합하는 Kd 값은 10-1M 내지 10-6M, 1Х10-1M 내지 5Х10-6M, 10-1M 내지 10-5M, 1Х10-1M 내지 5Х10-5M, 10-1M 내지 10-4M, 1Х10-1M 내지 5Х10-4M, 10-1M 내지 10-3M, 1Х10-1M 내지 5Х10-3M, 10-1M 내지 10-2M, 10-2M 내지 10-6M, 1Х10-2M 내지 5Х10-6M, 10-2M 내지 10-5M, 1Х10-2M 내지 5Х10-5M, 10-2M 내지 10-4M, 1Х10-2M 내지 5Х10-4M, 10-2M 내지 10-3M, 10-3M 내지 10-6M, 1Х10-3M 내지 5Х10-6M, 10-3M 내지 10-5M, 1Х10-3M 내지 5Х10-5M, 10-3M 내지 10-4M, 10-4M 내지 10-6M, 1Х10-4M 내지 5Х10-6M, 10-4M 내지 10-5M, 또는 10-5M 내지 10-6M이다.
일부 실시예에서, 항-C5a 항체가 높은 결합 친화력으로 C5a 표적을 특이적으로 인식하고, 낮은 결합 친화력으로 비-표적에 결합한다고 언급하는 경우, 상기 항-C5a 항체와 C5a 표적이 결합하는 Kd 값은 10-7M 내지 10-13M(예를 들어, 10-7M 내지 10-13M, 10-8M 내지 10-13M, 10-9M 내지 10-13M, 또는 10-10M 내지 10-12M)이고, 비-표적과 결합하는 Kd 값은 10-1M 내지 10-6M(예를 들어, 10-1M 내지 10-6M, 10-1M 내지 10-5M, 또는 10-2M 내지 10-4M)이다.
일부 실시예에서, 항-C5a 항체가 C5a를 특이적으로 인식한다고 언급하는 경우, 상기 항-C5a 항체의 결합 친화력을 대조군 항-C5a 항체(예를 들어, INab308)의 결합 친화력과 비교한다. 일부 실시예에서, 대조군 항-C5a 항체와 C5a 사이의 결합하는 Kd 값은 본원에 기재된 항-C5a 항체와 C5a 사이의 결합하는 Kd 값의 적어도 2배일 수 있으며, 예를 들어 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 10-100배, 100-1,000배, 103-104배이다.
핵산
항-C5a 항체를 코딩하는 핵산 분자도 고려된다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 전장 항-C5a 항체를 포함하는 전장 항-C5a 항체를 코딩하는 핵산(또는 한 세트)을 제공한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체의 핵산(또는 한 세트의 핵산)은 폴리펩티드 태그(예를 들어, 단백질 정제 태그, His 태그, HA 태그)를 코딩하는 핵산 서열을 더 포함할 수 있다.
또한, 본문은 항-C5a 항체를 포함하는 단리된 숙주 세포, 항-C5a 항체 폴리펩티드 성분을 코딩하는 단리된 핵산, 또는 본문에 기재된 항-C5a 항체 폴리펩티드 성분을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터도 고려한다.
본 출원은 이들 핵산 서열의 변이체를 더 포함한다. 예를 들어, 변이체는 적어도 적당히 엄격한 혼성화 조건 하에서 본 출원의 항-C5a 항체를 코딩하는 핵산 서열과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 출원은 또한 본 출원의 핵산 서열이 삽입될 수 있는 벡터를 더 제공한다.
간단히 말하면, 항-C5a 항체를 코딩하는 천연 또는 합성 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하여, 핵산이 예를 들어 프로모터(예를 들어, 림프구 특이적 프로모터) 및 3' 비-번역 영역(UTR)을 포함하는 5' 및 3' 말단 조절 요소에 작동 가능하게 연결하도록 함으로써, 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 발현할 수 있다. 상기 벡터는 진핵 숙주 세포에서 복제 및 통합에 적용될 수 있다. 전형적인 클로닝과 발현 벡터는 목표 핵산 서열의 발현을 조절하는 전사 및 번역 종결자, 개시 서열 및 프로모터를 포함한다.
본 출원에 기재된 핵산은 또한 표준 유전자 전달 프로토콜을 사용함으로써 핵산 면역 및 유전자 치료에 사용될 수 있다. 핵산 전달 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, U.S.Pat.Nos.5,399,346, 5,580,859, 5,589,466을 참조하여, 전체 내용은 참조로서 본문에 통합한다. 일부 실시예에서, 본 출원은 유전자 치료 벡터를 더 제공한다.
핵산을 여러 가지 유형의 벡터에 클로닝할 수 있다. 예를 들어, 핵산을 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하나 이에 한정되지 않는 벡터에 클로닝할 수 있다. 특히 관심 있는 벡터는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터 및 시퀀싱 벡터를 포함한다.
또한, 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 Green and Sambrook(2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), 및 기타 바이러스학 또는 분자 생물학 핸드북에 설명되어 있다. 벡터로 사용될 수 있는 바이러스에는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스 및 렌티바이러스가 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 1종의 유기체에서 기능하는 하나의 복제 기점, 프로모터 서열, 편리한 제한 효소 부위(restriction endonuclease sites) 및 하나 이상의 선택 마커(selectable markers)를 포함한다(예를 들어, WO 01/96584, WO 01/29058 및 미국 특허 6,326,193호를 참조).
유전자를 포유동물의 세포로 전달하기 위해, 이미 여러 가지 바이러스 기반 시스템이 개발되었다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위해 편리한 플랫폼을 제공하였다. 당업계에 공지된 기술을 사용하여, 선택된 유전자를 벡터에 삽입하고 레트로바이러스 입자에 패키징할 수 있다. 그 후, 재조합 바이러스를 분리하여, 생체내 또는 시험관 내에서 피험자의 세포로 전달한다. 많은 레트로바이러스 시스템은 당업계에 이미 알려져 있다. 일부 실시예에서, 아데노바이러스 벡터를 사용한다. 많은 아데노바이러스 벡터는 당업계에 알려져 있다. 일부 실시예에서, 렌티바이러스 벡터를 사용한다. 렌티바이러스와 같은, 레트로바이러스에서 파생된 벡터는 전이유전자의 장기적이고 안정적인 통합과 자손 세포에서의 번식을 초래하기에, 장기적인 유전자 전달을 구현하는 데 적합한 도구이다. 뮤린 백혈병 바이러스(murine leukemia viruses)와 같은 종양 유래 레트로바이러스와 비교하여, 렌티바이러스 벡터는 간세포와 같은 비-분열 세포를 형질도입할 수 있기에, 별도의 이점을 구비한다. 아울러, 이는 면역원성이 낮은 별도의 이점도 구비한다.
인핸서와 같은 다른 프로모터 요소는 전사 개시 빈도를 조절한다. 일반적으로, 이들은 개시 부위의 30-110 bp 업스트림에 위치하지만, 최근에는 많은 프로모터가 개시 부위의 다운스트림의 기능적 요소도 포함하는 것을 발견하였다. 프로모터 요소 사이의 간격은 일반적으로 유연하므로, 요소 서로간 위치를 교환하거나 이동할 경우, 여전히 프로모터의 기능을 유지한다. 티미딘 키나제(tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 사이의 간격이 50bp까지 증가해야 활성이 감소하기 시작한다.
적합한 프로모터의 하나의 예는 즉시 초기 사이토메갈로바이러스(immediate early cytomegalovirus, CMV) 프로모터 서열이다. 해당 프로모터 서열은 이와 작동 가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오티드 서열의 높은 수준의 발현을 유도할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 적합한 프로모터의 또 다른 하나의 예는 신장 인자 1α(EF-1α) 프로모터이다. 하지만, 유인원 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV), 인간 면역결핍 바이러스 긴 말단 반복(HIV-LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, Epstein-Barr 바이러스 즉시 초기 프로모터, Rous 육종 바이러스 프로모터(Rous sarcoma virus promoter)를 포함하나 이에 한정되지 않는 기타 구성적 프로모터, 및 예를 들어 액틴 프로모터(actin promoter), 미오신 프로모터(myosin promoter), 헤모글로빈 프로모터(hemoglobin promoter) 및 크레아틴 키나제 프로모터(creatine kinase promoter)를 포함하나, 이에 한정되지 않는 인간 유전자 프로모터를 사용할 수도 있다. 또한, 본 출원을 단지 구성적 프로모터의 사용으로 국한해서는 안 되며, 유도형 프로모터도 본 출원이 고려하는 부분이다. 유도형 프로모터의 사용은 이러한 발현이 필요될 경우, 그것과 그것에 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 턴-온(turn on)시키고, 필요되지 않을 경우, 발현을 턴-오프(turn off)시키는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터는 메탈로티오네인 프로모터(metallothionine promoter), 글루코코르티코이드 프로모터(glucocorticoid promoter), 프로게스테론 프로모터(progesterone promoter) 및 테트라사이클린 프로모터(tetracycline promoter)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 항-C5a 항체의 발현은 유도 가능적하다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체를 코딩하는 핵산 서열은 본문에 기재된 어느 하나의 유도성 프로모터를 포함하는 유도성 프로모터에 작동 가능하게 연결된다.
유도성 프로모터
유도성 프로모터의 사용은 발현이 필요될 경우, 그것에 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 턴-온시키고, 필요되지 않을 경우, 발현을 턴-오프시키는 분자 스위치를 제공한다. 진핵 세포에 적용되는 예시적인 유도성 프로모터는 호르몬 조절 요소(hormone-regulated elements)(예를 들어, Mader, S. and White, J. H.(1993) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:5603-5607 참조), 합성 리간드 조절 요소(synthetic ligand-regulated elements)(Spencer, D. M. et al (1993) Science 262: 1019-1024 참조) 및 이온화 방사선 조절 요소(ionizing radiation-regulated elements)(Manome, Y. et al.(1993) Biochemistry 32: 10607-10613; Datta, R. et al. (1992) Proc . Natl . Acad . Sci . USA 89: 1014-10153 참조)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 생체내 또는 시험관내 포유동물 시스템에 적용되는 기타 예시적인 유도성 프로모터는 Gingrich et al.(1998) Annual Rev. Neurosci 21:377-405를 참조한다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체를 발현하기 위해 사용되는 유도성 프로모터 시스템은 Tet 시스템이다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체를 발현하기 위해 사용되는 유도성 프로모터 시스템은 E. coli lac 억제 시스템이다.
본 출원에서 사용하는 하나의 예시적인 유도성 프로모터 시스템은 Tet 시스템이다. 해당 시스템은 Gossen 등(1993)이 설명한 Tet 시스템을 기반으로 한다. 하나의 예시적인 실시예에서, 목표 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 Tet 오퍼레이터(TetO) 부위를 포함하는 프로모터에 의해 제어된다. 비-활성 상태에서, Tet 리프레서(TetR)는 TetO 부위에 결합하여 프로모터의 전사를 억제한다. 활성 상태에서, 예를 들어, 테트라사이클린(Tc), 안하이드로테트라사이클린, 독시사이클린(Dox) 또는 이들의 활성 유사체와 같은 유도제가 존재하는 경우, 유도제는 TetR가 TetO에서 방출되도록 하여 전사의 발생을 초래한다. 독시사이클린은 항생물질의 테트라사이클린 패밀리의 구성원이며, 이의 화학적 명칭은 1-디메틸아미노-2,4a,5,7-펜타히드록시-11-메틸-4,6-디옥시-1,4a,11,11a,12,12a-헥사히드로테트라엔-3-카르복스아미드이다.
하나의 실시예에서, TetR은 코돈에 의해 최적화되어, 예를 들어 마우스 또는 인간 세포와 같은 포유동물 세포에서 발현하는 데 적용된다. 유전자 코드의 축퇴성으로 인해, 대부분의 아미노산은 하나 이상의 코돈에 의해 코딩됨으로써, 주어진 핵산의 서열에 대량의 변이체를 구비하지만, 이에 의해 코딩되는 아미노산 서열은 어떠한 변화도 없다. 하지만, 많은 유기체는 코돈 사용 측면에서 차이가 존재하고, "코돈 선호도"(즉, 주어진 아미노산이 특정 코돈을 사용하는 선호도)라고도 부른다. 코돈 선호도는 일반적으로 특정 코돈에 대한 우세 tRNA 종의 존재와 관련이 있으며, 이는 반대로 mRNA 번역의 효율을 증가시켰다. 따라서, 상이한 종(예를 들어, 진핵 생물)에서의 그의 발현을 향상시키기 위해, 코돈 최적화에 의해 특정 종으로부터 유래된 코딩 서열(예를 들어, 원핵 생물)을 맞춤화할 수 있다.
Tet 시스템의 기타 구체적인 변이체는 아래의 "Tet-Off" 및 "Tet-On" 시스템을 포함한다. Tet-off 시스템에서, 전사는 Tc 또는 Dox의 존재 하에서 비-활성화적이다. 해당 시스템에서, TetR과 단순 헤르페스 바이러스 VP16의 강력한 전사 활성화 도메인이 융합하여 구성된 테트라사이클린-조절 전사 활성화 단백질(tTA)은 테트라사이클린 반응 프로모터 요소(TRE)의 전사 제어 하에서 표적 핵산의 발현을 조절한다. TRE 요소는 TetO 서열이 연결(concatamers)되어 프로모터(일반적으로 인간 사이토메갈로바이러스의 즉시 초기 프로모터에서 유래한 최소 프로모터 서열임)와 융합함으로써 구성된다. Tc 또는 Dox가 존재하지 않는 경우, tTA는 TRE에 결합하여 표적 유전자의 전사를 활성화한다. Tc 또는 Dox가 존재하는 경우, tTA는 TRE에 결합할 수 없어 표적 유전자가 발현될 수 없다.
반면, Tet-On 시스템에서, Tc 또는 Dox의 존재하에, 전사는 활성화적이다. Tet-On 시스템은 역테트라사이클린-조절 전사 활성화 인자 rtTA를 기반으로 한다. tTA와 마찬가지로, rtTA는 TetR 리프레서와 VP16 전사 활성화 도메인으로 구성된 융합 단백질이다. 하지만, TetR의 DNA 결합 영역에서 4개의 아미노산의 변화가 rtTA의 결합 특성을 변경시켰음으로, Dox가 존재하는 경우, 표적 트랜스제닉 TRE 위의 tetO 서열만 인식할 수 있다. 따라서, Tet-On 시스템에서, 오직 Dox가 존재하는 경우에만, rtTA가 TRE-조절 표적 유전자의 전사를 활성화할 수 있다.
또 다른 1종의 유도성 프로모터 시스템은 대장균의 lac 리프레서(repressor) 시스템이다(Brown et al., Cell 49:603-612 (1987) 참조). Lac 리프레서 시스템은 lac 오퍼레이터(lacO)를 포함하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 목표 폴리뉴클레오티드의 전사를 조절함으로써 기능을 발휘한다. lac 리프레서(lacR)는 LacO에 결합함으로써, 나아가 목표 폴리뉴클레오티드의 전사를 저해한다. 적절한 유도제, 예를 들어 이소프로필-β-D-티오갈락토피라노시드(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)에 의해 목표 폴리뉴클레오티드의 발현을 유도한다.
폴리펩티드 또는 그의 부분의 발현을 평가하기 위해, 세포 내로 도입될 발현 벡터는 바이러스 벡터에 의해 형질감염되거나 감염된 세포 집단에서 발현 세포의 식별 및 선택을 용이하게 하기 위하여, 선별 마커 유전자(selectable marker gene) 또는 리포터 유전자(reporter gene) 또는 양자 모두를 더 포함할 수 있다. 기타 측면에서, 선별 마커는 단독의 DNA 단편에 휴대될 수 있으며 공동 형질감염 실험에 사용될 수 있다. 선별 마커 유전자 또는 리포터 유전자는 숙주 세포에서 발현될 수 있도록 모두 적절한 조절 서열의 옆(flanked)에 연결될 수 있다. 유용한 선별 마커는 예를 들어 neo 및 유사 유전자와 같은 항생제 내성 유전자를 포함한다.
리포터 유전자는 잠재적으로 형질감염 세포를 검정하고 조절 서열의 기능을 평가하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수용 유기체 또는 조직에 존재하지 않거나 수용 유기체 또는 조직에 의해 발현되지 않는 유전자이며, 이는 효소 활성과 같이 쉽게 검출될 수 있는 특성을 나타내는 폴리펩티드를 코딩한다. DNA가 수용 세포에 도입된 후, 적합한 시점에서 리포터 유전자의 발현을 검출한다. 적합한 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase), β-갈락토시다제(β-galactosidase), 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(chloramphenicol acetyl transferase), 분비성 알칼리 포스파타제(secreted alkaline phosphatase) 또는 녹색 형광 단백질(green fluorescent protein gene)을 코딩하는 유전자를 포함할 수 있다(Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82 참조). 적합한 발현 시스템은 공지되어 있고, 공지된 기술에 의해 제조하거나 상업적인 경로에 의해 획득할 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자의 가장 높은 발현 수준을 나타낼 수 있는 최소 5' 플랭킹 영역의 구축체를 프로모터로 간주한다. 이런 유형의 프로모터 영역은 리포터 유전자와 연결할 수 있고, 프로모터에 의해 구동되는 전사를 조절하는 특정 물질의 능력을 평가하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 전장 항-C5a 항체를 코딩하는 핵산을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 핵산은 전장 항-C5a 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 하나 이상의 핵산 서열 중의 각각은 단독의 벡터에 포함된다. 일부 실시예에서, 적어도 일부의 핵산 서열은 동일한 벡터 내에 포함된다. 일부 실시예에서, 모든 핵산 서열은 동일한 벡터 내에 포함된다. 벡터는 예를 들어, 포유동물 발현 벡터 및 바이러스 벡터(예를 들어, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스 및 렌티바이러스로부터 유래된 벡터)로부터 선택될 수 있다.
유전자를 세포에 도입하고 발현시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 발현 벡터의 상하문장에서, 벡터는 당업계의 임의의 방법에 의해 포유동물 세포, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포와 같은 숙주 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 방법에 의해 숙주 세포에 도입될 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 물리적 방법은 인산칼슘 침전(phosphate precipitation), 리포펙션(lipofection), 입자 충격법(particle bombardment), 미세주입법(microinjection), 전기천공법(electroporation) 및 이와 유사한 방법을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)을 참조한다. 일부 실시예에서, 인산칼슘 형질감염법에 의해 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입한다.
목표 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 생물학적 방법에는 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터, 특히 레트로바이러스 벡터는 인간 세포와 같은 포유동물 세포에 유전자를 삽입하는 데 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 기타 바이러스 벡터는 렌티바이러스(lentivirus), 폭스바이러스(poxviruses), 헤르페스 심플렉스 바이러스 1형(herpes simplex virus 1), 아데노바이러스(adenoviruses) 및 아데노 관련 바이러스(adeno-associated viruses) 등으로부터 파생될 수 있다. 예를 들어, U.S. Pat. Nos. 5,350,674 및 5,585,362를 참조할 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 화학적 방법은 폴리머 복합체(macromolecule complexes), 나노캡슐(nanocapsules), 마이크로스피어(microspheres), 자기 비드와 같은 콜로이드 분산 시스템(colloidal dispersion systems) 및 수중유 에멀젼(oil-in-water emulsions), 미셀(micelles), 혼합 미셀(mixed micelles) 및 리포좀(liposomes)을 포함하는 지질 기반 시스템(lipid-based systems)을 포함한다. 생체내 및 시험관 내에서 전달 비히클로 사용되는 예시적인 콜로이드 시스템은 리포좀(예를 들어, 인공 막 소포)이다.
비-바이러스 전달 시스템을 사용하는 경우, 예시적인 전달 비히클은 리포좀이다. 지질 제제를 사용하여 핵산을 숙주 세포에 도입하는 것을 고려한다(시험관 내, 생체외 또는 생체내). 다른 일 측면에서, 상기 핵산은 지질에 결합할 수 있다. 지질에 결합하는 핵산은 리포좀의 수성 내부로 캡슐화될 수 있고, 리포좀의 지질 이중층 내에 분산되며, 리포좀과 올리고뉴클레오티드에 결합하는 링커 분자를 통해 리포좀에 연결되고, 리포좀에 포매(entrapped)되어 리포좀과 복합체를 형성하고, 지질을 함유하는 용액에 분산되어 지질과 혼합되며, 지질과 결합하고, 지질에 현탁되어 미셀에 포함되거나 미셀과 혼합되고, 또는 기타 방식으로 지질에 결합한다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 관련 조성물은 용액에서 임의의 특정 구조에 제한되지 않는다. 예를 들어, 이들은 이중층 구조, 미셀 또는 "붕괴된(collapsed)" 구조로 존재할 수 있다. 그들은 또한 단순히 용액에 분산되어 크기나 모양이 균일하지 않은 응집체를 형성할 수 있다. 지질은 지방 물질이며, 자연적으로 존재하거나 합성된 지질일 수 있다. 예를 들어, 지질은 세포질에 자연적으로 존재하는 지방 방울, 및 장쇄 지방족 탄화수소 및 지방산, 알코올, 아민, 아미노알코올 및 알데히드와 같은 그의 유도체를 포함하는 화합물 종류를 포함한다.
외인성 핵산을 숙주 세포에 도입하는 데 사용되는 방법 또는 기타 방식으로 세포를 본 출원의 억제제에 노출시키는 데 사용되는 방법에 관계없이, 숙주 세포에서 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위해, 다양한 실험을 수행할 수 있다. 이런 유형의 실험은 예를 들어 당업자에게 잘 알려진 "분자 생물학" 실험을 포함한다. 예를 들어, 서던(Southern) 및 노던 블롯팅(Northern blotting), RT-PCR 및 PCR; 예를 들어 특정 펩티드의 존재 또는 부재를 검출하는 것과 같은 "생화학적" 실험, 예를 들어 면역학적 방법(ELISA 및 Western blots) 또는 본문에 기재된 실험에 의해 검정하는 것은 모두 본 출원의 범위 내에 속한다.
항- C5a 항체의 제조
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 모노클로날 항체이거나 모노클로날 항체로부터 유래된 것이다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 모노클로날 항체로부터 유래된 VH 및 VL, 또는 그의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 모노클로날 항체로부터 유래된 CH1 및 CL 영역, 또는 그의 변이체를 추가로 포함한다. 모노클로날 항체는 예를 들어 하이브리도마 세포 방법(hybridoma methods), 파지 디스플레이 방법(phage display methods) 또는 재조합 DNA 방법을 적용하는 것을 포함하는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 추가로, 예시적인 파지 디스플레이 방법은 본문 및 하기 실시예에 설명되어 있다.
하이브리도마 세포 방법에서, 일반적으로 면역제에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 생성할 수 있는 림프구를 유도하기 위해, 일반적으로 면역제를 사용하여 햄스터, 마우스 또는 기타 적합한 숙주 동물을 면역시킨다. 또는, 시험관 내에서 림프구를 면역시킬 수 있다. 면역제는 목표 단백질의 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 필요될 경우, 말초 혈액 림프구(PBL)를 사용하고, 반면 비-인간 포유동물 기원의 세포가 필요될 경우, 비장 세포 또는 림프절 세포를 사용한다. 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여 림프구를 불멸화 세포주(immortalized cell line)와 융합하여 하이브리도마 세포를 형성한다. 불멸화 세포주는 일반적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 일반적으로 랫트 또는 마우스 골수종 세포주를 사용한다. 하이브리도마 세포는 바람직하게는 미융합 불멸 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 1종 또는 여러 종의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 모 세포에 하이포크산틴-구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 부족한 경우, 하이브리도마 세포의 배양 배지는 일반적으로 하이포크산틴(hypoxanthine), 아미노프테린(aminopterin) 및 티미딘(thymidine)(HAT 배지)을 포함하여, 해당 배양 배지는 HGPRT 결핍 세포의 성장을 저해할 수 있다.
일부 실시예에서, 불멸화 세포주는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생성 세포에 의해 항체의 높은 수준의 안정적인 발현을 보장하고, HAT 배양 배지와 같은 특정 배양 배지에 민감하다. 일부 실시예에서, 불멸화 세포주는 예를 들어 캘리포니아주 샌디에고 소재의 솔크 세포 보존센터(Salk Institute Cell Distribution Center) 및 버지니아주 마나사스 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 획득할 수 있는 마우스 골수종 세포주이다. 아울러, 인간 모노클로날 항체의 제조를 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 하이브리드 골수종 세포주의 사용을 더 설명하였다.
그 후, 하이브리도마 세포를 배양하는 배양 배지에 폴리펩티드에 대한 모노클로날 항체의 존재 여부를 측정할 수 있다. 하이브리도마 세포에 의해 생성된 단일 클론 항체의 결합 특이성은 방사면역분석법(radioimmunoassay, RIA) 또는 효소 결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunoabsorbent assay, ELISA)과 같은 면역침전법 또는 시험관내 결합 실험에 의해 확정될 수 있다. 이러한 기술 또는 분석 방법은 당업계에 공지되어 있다. 모노클로날 항체의 결합 친화력은 예를 들어 Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220(1980)에 기재된 스캐차드(Scatchard) 분석에 의해 확정될 수 있다.
필요한 하이브리도마 세포를 확인한 후, 제한 희석법에 의해 목표 클론에 대하여 서브-클로닝을 수행하고, 표준 방법으로 배양할 수 있다. 이 목적에 적합한 배양 배지는 예를 들어, 개선된 Eagle 배양 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, DMEM) 및 RPMI-1640 배양 배지를 포함한다. 또는, 하이브리도마 세포는 복수(ascites)의 형태로 포유동물의 체내에서 성장할 수 있다.
서브-클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 단백질 A-세파로스(protein A-Sepharose), 수산화인회석 크로마토그래피(hydroxylapatite chromatography), 겔 전기영동(gel electrophoresis), 투석(dialysis) 또는 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 방법에 의해 배양 배지 또는 복수로부터 분리 또는 정제될 수 있다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체에 따르면, 상기 항-C5a 항체는 항체 라이브러리(예를 들어, scFv 또는 Fab 단편을 디스플레이하는 파지 라이브러리)로부터 선택된 클론의 서열을 포함한다. 상기 클론은 필요하는 활성을 갖는 항체 단편의 조합 라이브러리를 선별하는 방법에 의해 검정될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 이러한 라이브러리를 선별함으로써 필요하는 결합 특성을 갖는 항체를 획득하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 예를 들어 Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa , N.J ., 2001)에서 종합하여 설명하였고, 예를 들어, McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol . Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa , N.J ., 2003); Sidhu et al., J. Mol . Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol . Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)에서 추가로 설명하였다.
일부 파지 디스플레이 방법에서, 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 VH 및 VL 유전자의 모든 구성 성분을 각각 클로닝하고, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합한 후, Winter et al., Ann. Rev Immunol ., 12: 433-455(1994)에 기재된 바와 같이, 항원에 결합할 수 있는 파지를 선별한다. 파지는 통상적으로 scFv 단편 또는 Fab 단편의 형태로 항체 단편을 디스플레이한다. 면역원의 라이브러리 파지는 하이브리도마 세포를 구축할 필요 없이 면역원에 대한 고친화력 항체를 제공한다. 또는, Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)에 기재된 바와 같이, 임의의 면역화 없이, 자연 레퍼토리(예를 들어, 인간에서부터 유래된)를 클로닝함으로써, 다양한 비-자가 항원 및 자가 항원에 대한 단일 항체의 공급원을 제공할 수 있다. 마지막으로, Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol ., 227: 381-388(1992)에 기재된 바와 같이, 천연 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 유래된 비-배열 V-유전자 단편을 클로닝하고, 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용하여 CDR3 초가변 영역을 코딩하고, 시험관 내에서 재배열을 완료하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 설명하는 특허 출판물은 예를 들어, 미국 특허 5,750,373호 및 미국 특허 공개 2005/0079574호, 2005/0119455호, 2005/0266000호, 2007/0117126호, 2007/0160598호, 2007/0237764호, 2007/0292936호 및 2009/0002360호를 포함한다.
파지 디스플레이를 통해 라이브러리에서 표적 C5a에 특이적으로 결합할 수 있는 항-C5a 항체 모이어티를 선별하는 방법에 의해 상기 항-C5a 항체를 제조한다. 해당 라이브러리는 적어도 1Х109(예를 들어, 적어도 1Х109, 2.5Х109, 5Х109, 7.5Х109, 1Х1010, 2.5Х1010, 5Х1010, 7.5Х1010 또는 1Х1011)종의 다양성을 갖는 독특한 인간 항체 단편인, 인간 scFv 파지 디스플레이 라이브러리일 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 모든 인간 중쇄 및 경쇄 서브-패밀리를 포함하는 건강한 피험자의 PMBCs 및 비장에서부터 추출한 DNA에 의해 구축된 인간 천연 라이브러리이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 자가면역 질병의 환자, 암 환자 및 감염성 질병의 환자와 같은 다양한 질병 환자의 체내에서부터 분리한 PMBCs에서 추출한 DNA에 의해 구축된 인간 천연 라이브러리이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 반-합성 인간 라이브러리(semi-synthetic human library)이며, 여기서 중쇄 CDR3은 완전히 무작위적이고, 모든 아미노산(시스테인 제외)은 동일한 확률로 임의의 주어진 위치에 존재한다(예를 들어, Hoet, R.M. et al., Nat. Biotechnol. 23(3):344-348, 2005 참조). 일부 실시예에서, 반-합성 인간 라이브러리의 중쇄 CDR3의 길이는 약 5개 내지 24개(예를 들어 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개)의 아미노산이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 완전-합성 파지 디스플레이 라이브러리(fully-synthetic phage display library)이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 비-인간 파지 디스플레이 라이브러리이다.
표적 C5a에 대해 높은 친화력을 갖는 파지 클론은 고체 지지체에 결합(예를 들어, 용액 패닝에 사용되는 비드 또는 세포 패닝에 사용되는 포유동물 세포)하는 표적 C5a에 대한 파지의 반복적 결합에 의해 선별될 수 있고, 이어서 미결합된 파지를 제거하고, 특이적으로 결합된 파지를 용출한다. 그 후, 결합된 파지 클론을 용출하고 적합한 숙주 세포를 감염시키는 데 사용하며, 예를 들어 E. coli XL1-Blue와 같이, 발현 및 정제를 수행한다. 용액 패닝, 세포 패닝 또는 양자 결합과 같은 여러 라운드의 패닝(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상의 라운드)에 의해 C5a에 특이적으로 결합하는 파지 클론을 풍부하게 수집할 수 있다. 표적 C5a에 대한 풍부한 파지 클론의 특이적 결합은 예를 들어 ELISA 및 FACS를 포함하는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 검출될 수 있다.
항체 라이브러리를 선별하는 또 다른 방법은 효모 세포의 표면에서 단백질을 디스플레이하는 것이다. Wittrup 등(미국 특허 6,699,658 및 6,696,251)은 효모 세포 디스플레이 라이브러리의 방법을 개발하였다. 이 효모 디스플레이 시스템에서, 하나의 조성분은 효모 세포벽에 고정된 효모 응집소 단백질(yeast agglutinin protein, Aga1)을 포함하고, 다른 하나의 조성분은 디설파이드 결합을 통해 Aga1 단백질에 결합하여 효모 세포의 표면에 디스플레이될 수 있는 응집소 단백질 Aga2의 두 번째 서브-클래스를 포함한다. Agal 유전자를 효모 염색체에 통합함으로써 Agal 단백질을 발현한다. 단일 사슬 가변 단편(scFv) 라이브러리를 효모 디스플레이 플라스미드 중의 Aga2 유전자와 융합하며, 이를 전환시킨 후, 해당 라이브러리는 추가적인 영양 마커의 존재로 인해 효모에 보류될 수 있다. Aga1 및 Aga2 단백질은 모두 갈락토오스-유도성 프로모터(galactose-inducible promoter)의 제어 하에 발현한다.
인간 항체 V 유전자 레퍼토리(VH 및 VK 단편)는 한 세트의 축퇴 프라이머 세트를 사용하여 PCR 방법에 의해 획득된다(Sblatero, D. 및 Bradbury, A. Immunotechnology 3, 271-278, 1998). PCR 템플릿은 PBMC, 비장, 림프절, 골수 및 편도선을 포함하는 상업적으로 구입 가능한 RNA 또는 cDNA에서 얻어진다. 독립적인 VH 및 VK PCR 라이브러리를 합병한 후, 중첩 신장 PCR에 의해 이들을 scFv 형태(Sheets，M.D. et al, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 95, 6157-6162 1998)로 조립한다. 효모 scFv 디스플레이 라이브러리를 구축하기 위해, 생성된 scFv PCR 생성물을 상동 재조합에 의해 효모 내의 효모 디스플레이 플라스미드로 클로닝한다(Chao, G, et al, Nat Protoc. 2006;1(2):755-68. Miller KD, et al. Current Protocols in Cytometry 4.7.1-4.7.30, 2008).
포유동물 세포 디스플레이 시스템을 사용하여 항-C5a 항체를 선별할 수 있으며, 여기서 항체 모이어티는 세포 표면에 디스플레이되고, 항원-유도 선별 방법(antigen-guided screening method)에 의해 C5a를 특이적으로 표적하는 항체를 분리한다(미국 특허 7,732,195B2호에 기재된 바와 같음). 대량의 인간 IgG 항체 유전자를 디스플레이하는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 라이브러리를 구축하고, 이를 고친화력 항체 유전자를 발현하는 클론을 발견하는 데 사용할 수 있다. 얼터너티브 스플라이싱(alternate splicing)을 통해 동일한 단백질이 동시에 세포 표면에서 디스플레이 및 분비하도록 하는 또 다른 시스템을 개발하였으며, 여기서 디스플레이된 단백질 표현형은 유전자형과 관련을 유지함으로써, 생물물리학적 및 세포 기능 기반의 분석에서 해당 분비된 가용성 항체를 동시에 특징화하도록 할 수 있다. 해당 방법은 이전 포유동물 세포 디스플레이의 많은 한계를 극복하고, 전장의, 글리코실화된 IgGs 형태의 항체를 직접 선별 및 성숙화시킬수 있다(Peter M. Bowers, et al, Methods 2014,65:44-56). 일시적인 발현 시스템(Transient expression systems)은 항체 유전자 복원 이전에 수행되는 단일 라운드의 항원 선택에 적용되므로, 비교적 작은 라이브러리에서 항체를 선택하는 데 가장 유용하다. 안정적인 엑소좀 벡터는 흡인력 있는 선택을 제공한다. 엑소좀 벡터는 효율적으로 형질감염되고 낮은 복제 수에 안정적으로 유지될 수 있으므로, 여러 라운드의 패닝 및 보다 복잡한 항체 레퍼토리의 해석을 허용한다.
IgG 라이브러리는 재배열된 (D)J 영역에 결합된 인간 공여체의 패널로부터 분리된 생식계열 서열(germline sequence) V-유전자 단편을 기반으로 하여 구축된 것이다. 2,000개의 인간 혈액 샘플로부터 수집된 RNA를 cDNA로 역전사시키고, VH 및 VK 특이적 프라이머를 사용하여 VH 및 VK 단편을 증폭시키고, 겔 추출에 의해 정제한다. VH 및 VK 단편을 각각 IgG1 또는 K 불변 영역을 포함하는 디스플레이 벡터에 서브-클로닝한 후, 293T 세포로 전기천공 또는 형질도입하여 IgG 라이브러리를 제조한다. scFv 항체 디스플레이 라이브러리를 제조하기 위해, VH 및 VK를 연결하여 scFv를 생성한 후, 디스플레이 벡터에 서브-클로닝한 다음 293T 세포로 전기천공 또는 형질도입한다. 모두가 알다시피, IgG 라이브러리는 재배열된 (D)J 영역에 결합된 공여체의 패널로부터 분리된 생식계열 서열 V-유전자 단편을 기반으로 하여 구축된 것이며, 공여체는 마우스, 랫트, 토끼 또는 원숭이일 수 있다.
모노클로날 항체는 또한 미국 특허 4,816,567호에 기재된 바와 같이, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 출원에 기술된 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 방법(예를 들어, 뮤린 항체의 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브에 의해)에 의해 용이하게 분리되고 시퀀싱될 수 있다. 상기 기재된 바와 같은 하이브리도마 세포 또는 본 출원의 C5a-특이적 파지 클론은 이러한 DNA의 기원으로 사용될 수 있다. 분리 후, DNA를 발현 벡터에 넣은 다음 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소암(CHO) 세포 또는 면역글로불린을 생성하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 해당 벡터를 형질감염시켜, 재조합 숙주 세포에서 합성된 모노클로날 항체를 획득한다. 상기 DNA는 또한 예를 들어 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 코딩 서열로 치환하고/하거나 상동 비-인간 서열(U.S. Patent No. 4,816,567; Morrison et al., supra)을 프레임워크 영역으로 치환하고/하거나, 공유 결합에 의해 면역글로불린의 코딩 서열의 전부 또는 부분 비-면역글로불린 폴리펩티드의 코딩 서열에 연결함으로써 변형될 수 있다. 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 본 출원의 항체의 불변 영역을 치환할 수 있고, 또는 본 출원의 항체의 가변 도메인 중의 하나의 항원 결합 부위를 치환하여 키메라 2가 항체를 형성할 수 있다.
상기 항체는 1가 항체(monovalent antibodies)일 수 있다. 1가 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 면역글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현 방법이 있다. 중쇄가 서로 가교 결합(crosslinking)하는 것을 저해하기 위해, 일반적으로 Fc 영역의 임의의 위치에서 중쇄를 절단한다. 또는, 관련 시스테인 잔기가 기타 아미노산 잔기로 치환되거나 결실되어 가교결합을 방지한다.
시험관내 방법도 1가 항체를 제조하는데 적합하다. 항체 단편, 특히 Fab 단편을 생성하기 위한 항체의 소화는 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다.
필요하는 결합 특이성(항체-항원 결합 부위)을 가진 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 영역과 융합될 수 있다. 바람직하게는 적어도 일부 힌지, CH2 및 CH3 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 영역과 융합한다. 일부 실시예에서, 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)은 적어도 1종의 융합체에서 나타난다. 면역글로불린 중쇄의 융합체를 코딩하는 DNA, 필요할 경우, 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 더 포함할 수 있으며, 상기 DNA는 독립적인 발현 벡터에 삽입되고, 적합한 숙주 유기체에 공동 형질감염된다.
완전 인간 및 인간화 항체
상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)는 완전 인간 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체 모이어티의 인간화 형태는 일반적으로 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(예를 들어, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, scFv, 또는 항체의 기타 항원 결합 서브서열(subsequences))이다. 인간화 항체는 인간 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(공여체 항체)을 포함하며, 여기서 수용체 CDR의 잔기는 마우스, 랫트 또는 토끼의 CDR와 같은 필요하는 특이성, 친화력 및 특성을 갖는 비-인간(공여체 항체) CDR 잔기로 치환된다. 일부 실시예에서, 인간 면역글로불린 Fv 프레임워크 영역 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 치환된다. 인간화 항체는 수용체 항체에도 속하지 않고, 도입한 CDR 또는 프레임워크 영역의 서열에도 존재하지 않는 아미노산 잔기를 더 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 포함하고, 여기서 전부 또는 실질적으로 전부 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 CDR 영역에 대응되고, 전부 또는 실질적으로 전부 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열(consensus sequence)이다.
일반적으로, 인간화 항체는 비-인간 소스에서 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 이러한 비-인간 아미노산 잔기는 일반적으로 "수입(import)" 가변 도메인으로부터 유래되며, 종종 "수입(import)" 잔기로 지칭된다. 일부 실시예에 따르면, 인간화는 인간 항체의 상응하는 서열을 설치동물의 CDRs 또는 CDR 서열로 치환함으로써, 실질적으로 Winter 및 그의 동료의 방법에 의해 수행할 수 있다(Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)). 따라서, 완전한 인간 항체보다 실질적으로 적은 이러한 "인간화" 항체 모이어티(미국 특허 4,816,567호)의 가변 도메인은 이미 비-인간 소스로부터 유래된 상응하는 서열로 치환되었다. 실제로, 인간화 항체 모이어티는 전형적인 인간 항체 모이어티이며, 여기서 일부 CDR 잔기 및 가능적인 일부 프레임워크 영역 잔기는 설치류 항체의 유사 부위로부터 유래한 잔기에 의해 치환된다.
완전 인간 항체는 인간화의 대체 방식이다. 예를 들어, 현재, 내인성 면역글로불린 생성 없이, 면역화 후 완전한 인간 항체 라이브러리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물(예: 마이스(mice))을 제조할 수 있다. 예를 들어, 키메라 및 생식계열 돌연변이 마이스에서 항체 중쇄 결합 영역(JH) 유전자의 동형접합 결실(homozygous deletion)이 내인성 항체의 생성을 완전히 억제한다고 보고된 바 있다. 인간 생식계열 면역글로불린 유전자 어레이를 이러한 생식계열 돌연변이 마이스로 옮기면, 항원의 자극하에 인간 항체가 생성될 수 있으며, 예를 들어 akobovits et al., PNAS USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258(1993); Bruggemann et al., Year in Immunol., 7:33(1993); 미국 특허 5,545,806호, 5,569,825호, 5,591,669호, 5,545,807호; 및 WO 97/17852를 참조할 수 있다. 또는, 인간 면역글로불린 유전자좌를 트랜스제닉 동물(예를 들어, 내인성 면역글로불린 유전자가 부분적으로 또는 전체적으로 침묵된 마이스)에 도입함으로써 완전 인간 항체를 제조할 수 있다. 항원 자극 후, 완전 인간 항체의 생성은 유전자 재배열, 조립 및 항체 라이브러리를 포함한 모든 측면에서, 모두 인간에서 생성된 것과 매우 유사하다는 것을 알 수 있다. 해당 방법은 예를 들어, 미국 특허 5,545,807호; 5,545,806호; 5,569,825호; 5,625,126호; 5,633,425호; 및 5,661,016호, 및 Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783(1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859(1994); Morrison, Nature, 368: 812-813(1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851(1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826(1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93(1995)에 기재되어 있다.
완전 인간 항체는 또한 B 세포(U.S. Patents 5,567,610 and 5,229,275 참조)를 시험관 내에서 활성화시키거나 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기술을 사용함으로써 생성될 수 있다. Hoogenboom and Winter, J. Mol . Biol., 227:381(1991); Marks et al., J. Mol . Biol., 222:581(1991). Cole et al. 및 Boerner et al.의 기술도 완전 인간 모노클로날 항체를 제조하는 데 사용될 수 있다. Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p.77 (1985) and Boerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95 (1991)를 참조할 수 있다.
항- C5a 항체 변이체
일부 실시예에서, 본문에서 제공한 항-C5a 항체 변이체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 아미노산 서열도 또한 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화력 및/또는 기타 생물학적 활성을 개선할 필요가 있다. 항체 변이체의 아미노산 서열은 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입하거나 펩티드 합성을 통해 제조할 수 있다. 이러한 유형의 변형은 예를 들어 항체 아미노산 서열 내의 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 예를 들어, 항원 결합성과 같은, 필요하는 특성을 갖도록 하기 위해, 아미노산 잔기의 결실, 삽입 및 치환의 어느 하나의 조합에 의해 최종의 구축을 달성할 수 있다.
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항-C5a 항체 변이체를 제공한다. 치환 돌연변이의 목표 부위는 초가변 영역(HVRs) 및 프레임워크 영역(FRs)을 포함한다. 목표 항체에 아미노산 치환을 도입하여 예를 들어, 개선된 생물학적 활성, 유지/개선 항원 결합 능력, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC와 같은, 필요한 활성을 갖는 생성물을 선별할 수 있다.
보존적 치환
원시 잔기 예시적인 치환 바람직한 치환
Ala (A) Val; Leu; Ile Val
Arg (R) Lys; Gln; Asn Lys
Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Gln
Asp (D) Glu; Asn Glu
Cys (C) Ser; Ala Ser
Gln (Q) Asn; Glu Asn
Glu (E) Asp; Gln Asp
Gly (G) Ala Ala
His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Arg
Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucine Leu
Leu (L) Norleucine; Ile; Val; Met; Ala; Phe Ile
Lys (K) Arg; Gln; Asn Arg
Met (M) Leu; Phe; Ile Leu
Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Tyr
Pro (P) Ala Ala
Ser (S) Thr Thr
Thr (T) Val; Ser Ser
Trp (W) Tyr; Phe Tyr
Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Phe
Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala; Norleucine Leu
측쇄 특성에 따라, 아미노산을 상이한 부류로 나눈다.
a. 소수성(hydrophobic) 아미노산: 노르류신(Norleucine), 메티오닌(Met), 알라닌(Ala), 발린(Val), 류신(Leu), 이소류신(Ile);
b. 중성 친수성(neutral hydrophilic) 아미노산: 시스테인(Cys), 세린(Ser), 트레오닌(Thr), 아스파라긴(Asn), 글루타민(Gln);
c. 산성(acidic) 아미노산: 아스파르트산(Asp), 글루탐산(Glu);
d. 염기성(basic) 아미노산: 히스티딘(His), 라이신(Lys), 아르기닌(Arg);
e. 사슬 방향에 영향을 미치는 잔기를 함유(residues that influence chain orientation): 글리신(Gly), 프롤린(Pro);
f. 방향족(aromatic) 아미노산: 트립토판(Trp), 티로신(Tyr), 페닐알라닌(Phe).
비-보존적 아미노산의 치환은 상기 클래스 중 1종을 기타 1종의 클래스로 치환하는 것을 포함한다.
하나의 예시적인 치환 변이체는 예를 들어, 파지 디스플레이-기반 친화력 성숙 기술을 사용함으로써 편리하게 생성될 수 있는 친화력 성숙 항체이다. 간략하면, 하나 이상의 CDR 잔기를 돌연변이시키고, 변이체 항체 모이어티는 파지에 디스플레이되며, 특정 생물학적 활성(예를 들어, 활성산소종(ROS) 방출 시험에 기반한 생물학적 활성 또는 결합 친화력)을 갖는 변이체를 선별한다. 활성산소종(ROS) 방출 시험에 기반한 개선된 생물학적 활성 또는 항체의 친화력을 획득하기 위해, HVRs 영역에서 변경(예를 들어, 치환)을 수행할 수 있다. HVR의 "핫스팟(hotspots)", 즉 체세포 성숙과정에서 과돌연변이가 발생되는 코돈에 의해 코딩된 잔기(예를 들어, Chowdhury, Methods Mol . Biol. 207:179-196(2008) 참조), 및/또는 특이적인 결정성 잔기(SDRs)에서 변경이 생성될 수 있으며, 획득된 변이체 VH 및 VL의 결합 친화력을 검출한다. 2차 라이브러리로부터 친화력 성숙을 구축하고 재선택하는 방법은 Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa , NJ, (2001))과 같은 여러 문헌에 기재되어 있다.
일부 친화력 성숙의 실시예에서, 여러 가지 방법 중 하나(예를 들어, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 사슬 셔플링(shuffling) 또는 올리고뉴클레오티드 지정 돌연변이유발)에 의해, 다양성을 친화력 성숙을 위해 선택된 가변 유전자에 도입한다. 그 후 2차 라이브러리를 생성시킨다. 해당 라이브러리를 선별하여, 필요하는 친화력을 가진 항체 변이체를 검정해낸다. 또 다른 다양성을 도입하는 방법은 HVR-매개 방식을 포함하며, 여기서 여러 HVR 잔기(예를 들어, 1회에 4-6개 잔기)는 무작위화된다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는 예를 들어, 알라닌 주사 돌연변이 유발 또는 모델링을 사용하여 특이적으로 식별된다. 일반적으로 특히 CDR-H3 및 CDR-L3 영역은 핵심 표적이다.
일부 실시예에서, 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실은 하나 이상의 HVR 내에서 발생될 수 있다. 예를 들어, HVRs에서 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들어, 본문에서 제공하는 보존적 치환)을 생성할 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDRs 영역 밖에서 발생될 수 있다. 일부 실시예의 상기 내용에서 제공하는 변이체 VH 및 VL 서열에 있어서, 각 HVR은 변경되지 않거나, 1개, 2개 또는 3개를 초과하지 않는 아미노산 치환을 포함한다.
돌연변이에 대해 표적화될 수 있는 항체의 아미노산 잔기 또는 영역을 검정하기 위한 유용한 방법은 Cunningham and Wells(1989) Science, 244:1081-1085에 기재된 바와 같이 "알라닌 주사 돌연변이 유발(alanine scanning mutagenesis)"이라고 지칭한다. 해당 방법에서, 하나 또는 한 세트의 목표 잔기(예를 들어, 아르기닌, 아스파르트산, 히스티딘, 라이신, 글루탐산과 같은 하전된 잔기)는 중성 또는 음전하를 띤 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 글루탐산)으로 치환되며, 이로부터 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정한다. 해당 위치가 초기 치환에 대해 기능적 민감성을 갖는다는 것을 입증하기 위해, 아미노산의 위치에 추가 치환을 도입할 수 있다. 또는/추가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉 부위는 항원-항체 복합체의 결정 구조에 의해 검정된다. 이러한 접촉 부위 잔기 및 인접 잔기는 치환 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 필요하는 특성을 구비하고 있는지 확인하기 위해 변이체를 선별한다.
아미노산 서열의 삽입은 1개의 잔기에서 100개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노-말단 및/또는 카르복시-말단의 융합을 포함하며, 서열 내에 1개 이상의 아미노산 잔기를 삽입하는 것을 더 포함한다. 말단 삽입의 예에는 N-말단에 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 기타 삽입 변이체는 하나의 효소(예를 들어, ADEPT) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드를 항체 분자의 N-말단 또는 C-말단에 융합시키는 것을 포함한다.
Fc 영역 변이체
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 변형을 본문에 기재된 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체 또는 항-C5a 항체 융합 단백질)의 Fc 영역에 도입함으로써, Fc 영역 변이체를 생성한다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 일반적으로 Fc과 결합하는 수용체(FcRs)와 관련되며, 증강된 ADCC 이펙터 기능을 갖는다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 감소된 ADCC 이펙터 기능을 갖는다. Fc 서열의 변경 또는 돌연변이가 그의 이펙터 기능에 영향을 미치다는 많은 예가 있으며, 예를 들어 WO 00/42072 및 Shields et al. J Biol . Chem. 9(2):6591-6604(2001)에서는 FcR에 대한 결합이 강화되거나 감소된 항체 변이체에 대해 기재되어 있다. 이들 출판물의 내용은 참조로서 본문에 통합된다.
항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC)은 종양 세포에 대한 치료성 항체의 작용 메커니즘이다. ADCC는 세포-매개 면역 방어로, 표적 세포막 표면의 항원이 특이성 항체(예를 들어, 항-C5a 항체)와 결합하면, 면역 시스템의 이펙터 세포는 표적 세포(예를 들어, 암세포)를 능동적으로 용해시킨다. 일반적으로, ADCC 이펙터는 항체에 의해 활성화된 NK 세포와 관련된다. NK 세포는 Fc 수용체 CD16을 발현한다. 해당 수용체는 표적 세포의 표면에 결합된 항체 분자의 Fc 부분을 인식하고 결합한다. NK 세포 표면의 가장 일반적인 Fc 수용체는 CD16 또는 FcγRIII이다. 항체의 Fc 영역에 대한 Fc 수용체의 결합은 NK 세포를 활성화시켜, 세포 용해 입자를 방출하고, 이어서 표적 세포의 세포사멸을 초래한다. 종양 세포에 대한 ADCC의 사멸 효과는 고친화력 FcR로 형질감염된 NK-92 세포의 특이성 실험에 의해 측정될 수 있다. FcR을 발현하지 않는 야생형 NK-92와 그 결과를 비교한다.
일부 실시예에서, 본 출원은 항-C5a 항체 변이체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체 변이체)를 더 제공하는데, 이는 부분적이지만 전부는 아닌 이펙터 기능을 갖는 Fc 영역을 포함하여, 생체내에서 연장된 반감기를 갖도록 하지만, 특정 이펙터 기능(예를 들어, CDC 또는 ADCC)은 불필요되거나 유해한 것으로, 이러한 항-C5a 항체는 본 출원의 이상적인 후보이다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석에 의해 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/제거를 확인한다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 시험에 의해 항체는 FcγR 결합 능력(따라서, ADCC 활성이 결핍할 수 있음)이 결핍하지만 여전히 FcRn의 결합 능력을 보류한다는 것을 확인한다. ADCC를 매개하는 주요 세포 중, NK세포는 FcγRIII만을 발현하지만, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현한다. Ravetch and Kinet Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)의 제464페이지의 표 3에 조혈 세포에서의 FcR의 발현을 요약하였다. 시험관 내에서 목표 분자의 ADCC 활성을 평가하는 비-제한적 예는 미국 특허 5,500,362호(예를 들어, Hellstrom, I. et al. Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 83:7059-7063(1986) and Hellstrom, I et al., Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 82:1499-1502(1985); U.S. Pat. No. 5,821,337(see Bruggemann, M. et al., J. Exp . Med. 166:1351-1361(1987) 참조)에 기재되어 있다. 또는, 비-방사성 분석 방법(non-radioactive cytotoxicity assay)을 사용할 수 있다(예를 들어, ACTI?? 유세포 분석 비-방사성 세포독성 분석(non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry)(CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.) 및 CYTOTOX 96?? 비-방사성 세포독성 분석(CYTOTOX 96?? non-radioactive cytotoxicity assay)(Promega, Madison, Wis.) 참조). 이러한 유형의 분석 실험에 사용되는 이펙터 세포에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해 세포(NK)를 포함한다. 또는, 추가로, Clynes et al. Proc . Nat'l Acad . Sci. USA 95:652-656(1998)에 기재된 바와 같이, 목표 분자의 ADCC 활성은 예를 들어 동물 모델에서와 같은 생체내에서 테스트한다. 아울러, 또한 C1q 결합 분석을 수행하여 항체가 C1q에 결합할 수 없어, CDC 활성이 결핍함을 확인할 수도 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참조할 수 있다. 보체 활성화 상황을 평가하기 위해, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163(1996); Cragg, M. S. et al., Blood 101:1045-1052(2003); 및 Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103:2738-2743(2004) 참조). 당업계에 공지된 방법을 사용하여 FcRn 결합 및 생체내 클리어런스(clearance)/반감기(half-life)를 측정한다(예를 들어, Petkova, S. B. et al., Int'l . Immunol. 18(12):1759-1769 (2006) 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 Fc 영역의 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329번 위치에서 하나 이상의 잔기의 치환을 수행한 항체를 포함한다(미국 특허 6,737,056호). 이들 Fc 변이체는 265, 269, 270, 297 및 327번 위치에서 2개 이상의 잔기의 치환을 수행한 Fc 변이체를 포함하며, 265번 위치 및 297번 위치 잔기에서 알라닌(미국 특허 7,332,581호)으로 치환된, "DANA"로 지칭되는 Fc 변이체를 포함한다.
FcR에 대한 결합이 향상되거나 감소된 이러한 항체 변이체는 이미 기재되었다(예를 들어, 미국 특허 6,737,056호; WO 2004/056312, 및 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001) 참조).
일부 실시예에서, ADCC 이펙터를 증강시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역 변이체를 포함하는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 변이체를 제공한다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 ADCC 이펙터를 증강시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하고, 이러한 치환의 위치는 Fc 영역의 298, 333 및/또는 334(EU 잔기 넘버링)번 위치에 있다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체) 변이체는 변이체 Fc 영역의 S298A, E333A 및 K334A번 위치에서의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시예에서, Fc 영역의 변경은 C1q 결합 및/또는 보체-의존성 세포독성(CDC)의 변경(즉, 증강 또는 약화)을 초래하며, 미국 특허 6,194,551호, WO 99/51642 및 Idusogie et al., J. Immunol . 164:4178-4184(2000)에 기재된 바를 참조할 수 있다.
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역 변이체를 포함하고, 반감기를 연장하거나 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합을 증강시킬 수 있는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 변이체를 제공한다. 반감기를 연장하고 FcRn 결합을 개선하는 항체는 US 2005/0014934A1(Hinton et al.)에 기재되어 있다. 이들 항체 Fc 영역은 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하므로, FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 증강시켰다. 이들 Fc 변이체는 Fc 영역에서 434번 위치 잔기의 치환과 같은, Fc 영역에서 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434번 위치 잔기 중의 하나 이상의 치환을 포함한다(미국 특허 7,371,826호).
아울러, Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 미국 특허 5,648,260호; 미국 특허 5,624,821호 및 WO 94/29351에서 제공하는 Fc 영역 변이체의 기타 예를 참조할 수 있다.
본 출원은 본문에 기재된 어느 하나의 Fc 변이체 또는 이들의 조합을 포함하는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 고려한다.
글리코실화 변이체 ( Glycosylation Variants)
일부 실시예에서, 항-NGF 항체의 글리코실화 정도를 증가시키거나 감소시키기 위해, 본문에서 제공하는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)에 대해 변경을 수행한다. 항-NGF 항체 또는 그의 폴리펩티드 부분의 아미노산 서열을 변경하여 하나 이상의 글리코실화 부위를 증가 또는 제거함으로써, 항-C5a 항체 상의 글리코실화 부위의 추가 또는 삭제를 편리하게 구현할 수 있다.
여기서, 항-C5a 항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 연결되는 당을 변경할 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생성된 천연 항체는 일반적으로 N-연결에 의해 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 연결되는 분지형 바이안테나리 올리고당(biantennary oligosaccharide)을 포함하며, 예를 들어 Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)를 참조할 수 있다. 상기 올리고당은 만노스(mannose), N-아세틸글루코사민(N-acetyl glucosamine, GlcNAc), 갈락토스(galactose)와 시알산(sialic acid), 및 바이안테나리 올리고당 구조(biantennary oligosaccharide structure)의 "줄기"부의 GlcNAc에 연결된 푸코스(fucose)와 같은 다양한 탄수화물 구조(carbohydrate structure)를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 특정 개선된 특성을 갖는 항-C5a 항체 변이체를 생성하기 위해, 본 출원의 항-C5a 항체에 대해 올리고사카라이드 변형을 수행할 수 있다.
Fc 영역의 CH2 도메인에 연결된 N-글리칸은 이질적이다. CHO 세포에서 생성된 항체 또는 Fc 융합 단백질은 푸코실트랜스퍼라제 활성에 의해 푸코실화되며, Shoji-Hosaka et al., J. Biochem. 2006, 140:777-83을 참조할 수 있다. 일반적으로, 인간 혈청에서 자연적으로 존재하는 비-푸코실화 IgGs를 소량 검출해낼 수 있다. Fc 영역의 N-글리코실화는 FcγR과의 결합에 아주 중요하지만; 비-푸코실화된 N-글리칸은 Fc와 FcγRIIIa의 결합 능력을 증강시킨다. FcRIIIa에 대한 결합의 증강은 ADCC 이펙터가 증가되도록 하며, 이는 세포독성이 필요되는 특정 항체 치료의 적용에서 유리한 것이다.
일부 실시예에서, Fc-매개 세포독성이 필요되지 않을 경우, 증강된 이펙터 기능은 해로운 것일 수 있다. 일부 실시예에서, Fc 단편 또는 CH2 도메인은 비-글리코실화된 것이다. 일부 실시예에서, CH2 도메인 중의 N-글리코실화 부위를 돌연변이시킴으로써 글리코실화를 저해한다.
일부 실시예에서, Fc 영역을 포함하는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체) 변이체를 제공하며, 여기서 Fc 영역에 연결된 탄수화물 구조는 감소된 푸코스를 갖거나 푸코스가 결핍하여, ADCC 기능을 증강시킬 수 있다. 구체적으로, 야생형 CHO 세포에 의해 생성된 동일한 항-C5a 항체에 비해, 감소된 푸코스를 갖는 항-C5a 항체가 본원에서 제공된다. 즉, 이들은 천연 CHO 세포(예를 들어, 천연 글리코실화 형태를 생성하는 CHO 세포, 천연 FUT8 유전자를 함유하는 CHO 세포)에 의해 생성된 항체보다, 더 적은 양의 푸코스를 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체의 N-연결 글리칸은 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 5%보다 적은 푸코스를 갖는다. 예를 들어, 해당 항-C5a 항체의 푸코스 함량은 1%-80%, 1%-65%, 5%-65%, 또는 20%-40%일 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체의 N-연결 글리칸은 푸코스를 포함하지 않으며, 즉, 여기서 항-C5a 항체는 완전히 푸코스를 함유하지 않거나, 푸코스가 없거나, 어푸코실화(afucosylated)된다. WO 2008/077546에 기재된 바와 같이, 푸코스의 함량은 MALDI-TOF 질량 분석법(MALDI-TOF mass spectrometry)에 의해 측정한 Asn297 상에 연결된 모든 당 구조(복합, 하이브리드 또는 만노스 구조와 같은)의 총량에 대한 Asn297 상에 연결된 당 사슬 내의 푸코스의 평균 함량을 계산함으로써 결정된 것이다. Asn297은 Fc 영역의 297번 위치에 위치한 아스파라긴 잔기(EU Fc 영역 잔기 넘버링 시스템)를 지칭한다. 하지만, 항체의 사소한 서열 변이로 인해, Asn297은 또한 297번 위치의 ±3개 아미노산 업스트림 또는 다운스트림, 즉 294번 위치와 300번 위치 사이에 위치할 수 있다. 이러한 푸코실화된 변이체는 증강된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 US 2003/0157108(Presta, L.)호, US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)호를 참조할 수 있다. "어푸코실화" 또는 "푸코스-결핍"의 항체 변이체와 관련된 출판물의 예로는 US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol . Biol. 336:1239-1249(2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614(2004)를 포함한다. 어푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주는 단백질 푸코실화 기능이 결핍하는 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys . 249:533-545(1986), US Pat Appl No US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 및 α-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8 유전자 녹아웃 CHO 세포와 같은 유전자 녹아웃 세포주를 포함한다(Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614(2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol . Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107 참조).
항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체) 변이체는 예를 들어 항-C5a 항체의 Fc 영역에 연결된 바이안테나리 올리고당이 GlcNAc에 의해 등분된 이등분된 올리고당을 추가로 제공한다. 이러한 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체) 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 증강된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 유형의 항체 변이체의 예는 WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 6,602,684 (Umana et al.)호; US 2005/0123546(Umana et al.), 및 Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5):851-861 (2006)에 기재되어 있다. Fc 영역에 연결된 올리고당에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체) 변이체를 더 제공한다. 이러한 유형의 항-C5a 항체 변이체는 증강된 CDC 기능을 가질 수 있다. 이러한 유형의 변이체는 예를 들어 WO 1997/30087(Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체) 변이체는 FcγRIII에 결합할 수 있는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc 영역을 포함하는 상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체) 변이체는 인간 이펙터 세포(예를 들어, T 세포)의 존재 하에 ADCC 활성을 갖거나, 또는 인간 야생형 IgG1 Fc 영역을 가진 기타 동일한 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)와 비교하여, 인간 이펙터 세포의 존재 하에, 증강된 ADCC 활성을 갖는다.
시스테인 조작 변이체 ( Cysteine Engineered Variants)
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 제조해야 한다. 일부 실시예에서, 치환된 잔기는 항-C5a 항체의 접근 가능한 부위에서 발생한다. 이러한 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 항-C5a 항체의 접근 가능한 부위에 위치한 반응성 티올 그룹(reactive thiol groups)은 해당 항-C5a 항체를 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 같은 기타 모이어티에 접합시켜, 본문에 추가로 기재된 바와 같은 항-C5a 면역 접합체(anti-C5a immunoconjugate)를 제조하는 데 사용될 수 있다. 시스테인 조작된 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)는 예를 들어 미국 특허 7,521,541호에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
유도체(Derivatives)
일부 실시예에서, 본문에서 제공하는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)는 당업계에 공지되고 쉽게 획득 가능한 기타 비-단백질 모이어티를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 항-C5a 항체를 유도체화(derivatization)하기에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 수용성 중합체의 비-제한적 예는, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤 공중합체), 덱스트란 또는 폴리(n-비닐피롤리돈) 폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 사이클릭 프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어, 글리세린), 폴리비닐 알코올 및 이들의 혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물속에서의 안정성으로 인해, 제조에서 이점을 구비한다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비-분지형일 수 있다. 항-C5a 항체에 연결된 폴리머의 수량은 변화할 수 있으며, 하나 보다 많은 폴리머가 연결된 경우, 이들은 동일한 분자이거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수량 및/또는 유형은, 항 C5a 항체의 특성이나 기능의 개선이 필요한지, 특정 조건 하의 치료 등에 항-C5a 항체 유도체를 사용할지 여부 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는 요소를 고려하여 결정될 수 있다.
약학적 조성물
본 출원은 어느 하나의 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체), 항체를 코딩하는 핵산, 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 또는 본문에 기재된 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학적 조성물, 여기에서는 제제라고도 함)을 더 제공한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체 및 약학적으로 허용가능한 담체(carrier)를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
필요하는 순도의 항-C5a 항체를 임의의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980))와 혼합함으로써 적합한 항-C5a 항체 제제를 획득하고, 동결건조 제제 또는 액체 제제의 형태로 제조할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 사용량 및 농도에서 수용자에 대해 독성이 없고, 인산염(phosphate), 구연산염(citrate) 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산(ascorbic acid) 및 메티오닌(methionine)을 포함하는 항산화제; 방부제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드(octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride); 헥사메틸암모늄 클로라이드(hexamethonium chloride), 벤잘코늄 클로라이드(benzalkonium chloride); 벤제토늄 클로라이드(benzethonium chloride); 페놀(phenol); 부틸(butyl) 또는 벤질 알코올(benzyl alcohol); 메틸(methyl) 또는 프로필 파라벤(propylparaben)과 같은 알킬파라벤(alkyl parabens); 카테콜(catechol), 레조르시놀(resorcinol), 사이클로헥산올(cyclohexanol), 3-펜탄올(3-pentanol) 및 m-크레졸(m-cresol)); 저분자량(잔기 10개 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민(serum albumin), 젤라틴(gelatin) 또는 면역글로불린(immunoglobulins)과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신(glycine), 글루타민(glutamine), 아스파라긴(asparagine), 히스티딘(histidine), 아르기닌(arginine) 또는 라이신(lysine)과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 포도당, 만노스(mannose) 또는 덱스트린(dextrins)을 포함하는 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로즈(sucrose), 만니톨(mannitol), 트레할로오스(trehalose) 또는 소르비톨(sorbitol)과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온(salt-forming counter-ions); 금속 복합체(아연-단백질 복합체); 및/또는 TWEEN??, PLURONICS?? 또는 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol, PEG))과 같은 비-이온성 계면활성제(non-ionic surfactants)를 포함하며, 예시적인 제제는 WO98/56418에 기재된 바와 같고, 참조로서 본문에 명시적으로 통합된다. 피하 투여에 적합한 동결건조 제제는 WO97/04801에 기재되어 있다. 이러한 유형의 동결건조 제형은 적합한 희석제에 의해 고단백질 농도의 제제로 재구성될 수 있고, 재구성된 제제는 피하 투여의 방식에 의해 본문에서의 치료될 개체에게 투여될 수 있다. 양이온성 리포좀 또는 리포좀은 본 출원의 항-C5a 항체를 세포에 전달하기 위해 사용될 수 있다.
본문에 기재된 제제는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 포함하는 외에, 특정 병증을 치료하는데에 필요하는 하나 이상의 기타 활성 물질, 바람직하게는 보완적 활성을 갖고 서로 부작용이 없는 물질을 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-C5a 항체 외에, 항종양제, 성장 억제제, 세포독성제 또는 화학요법제를 추가로 포함하여야 할 수 있다. 이들 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 존재한다. 기타 물질의 유효량은 제제 내 항-C5a 항체의 함량, 질병 또는 병증 또는 치료의 유형, 및 상술한 기타 요인에 의해 결정된다. 이들 약물은 일반적으로 본문에 기재된 것과 동일한 사용량 및 투여 경로로, 또는 현재 적용되는 용량의 1% 내지 99%로 사용된다.
상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)는 또한 예를 들어 코아세르베이션(coacervation) 기술 및 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 콜로이드 약물 전달 시스템(colloidal drug delivery systems)(예를 들어, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼에서의 하이드록시메틸셀룰로오스(hydroxymethylcellulose) 또는 젤라틴-마이크로캡슐(gelatin-microcapsules) 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 각각 포매(entrapped)될 수 있다. 서방성 제제(Sustained-release preparation)를 제조할 수 있다.
항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)의 서방성 제제를 제조할 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체(또는 이의 단편)를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 기질을 포함하며, 이러한 기질은 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐과 같은 성형제품의 형태이다. 서방성 기질의 예는 폴리에스테르(polyesters), 하이드로겔(hydrogels)(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸 메타크릴레이트(poly(2-hydroxyethyl-methacrylate)) 또는 폴리(비닐 알코올)(poly(vinylalcohol)), 폴리락티드(polylactides)(미국 특허 3,773,919호), L-글루탐산(L-glutamic) 및 에틸 L-글루타메이트(ethyl-L-glutamate) 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트(non-degradable ethylene-vinyl acetate), LUPRON DEPOTTM(락트산-글리콜산 공중합체(lactic acid-glycolic acid copolymer) 및 류프롤리드 아세테이트(leuprolide acetate)로 구성된 주사가능한 마이크로스피어)과 같은 분해성 젖산-글리콜산 공중합체, 및 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산(poly-D(-)-3-hydroxybutyric acid)을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 젖산-글리콜산과 같은 폴리머는 100일 이상 동안 분자를 방출할 수 있지만, 특정 하이드로겔은 더 짧은 시간 내에 단백질을 방출할 수 있다. 봉입된 항체가 체내에 장기간 체류할 경우, 이들은 37°C의 습한 환경에 노출되어 변성 또는 응집이 발생됨으로써, 생물학적 활성의 상실 또는 면역원성의 변화가 초래될 수 있다. 상응하는 메커니즘에 따라, 항-C5a 항체를 안정화하기 위한 합리적인 전략을 설계할 수 있다. 예를 들어, 응집 메커니즘이 티오-디설파이드(thio-disulfide) 교환을 통한 분자간 S-S 결합의 형성인 것으로 밝혀지면, 설프하이드릴 잔기의 변형, 산성 용액에서의 동결건조, 수분 함량 제어, 적절한 첨가제를 사용, 및 특정 폴리머 기질 조성물의 개발을 통해 안정화를 구현할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)는 구연산염, 염화나트륨, 아세테이트, 숙시네이트, 글리신, 폴리소르베이트 80(트윈 80) 또는 상기 임의의 조합을 함유하는 완충액에서 조제된다.
생체내 투여에 사용되는 제제는 멸균 상태여야 한다. 이는 예를 들어 멸균 여과막을 사용한 여과에 의해 쉽게 구현될 수 있다.
항- C5a 항체를 사용한 치료 방법
항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체) 및/또는 본원에 기재된 조성물은 C5a의 고발현과 관련된 질병 및/또는 병증, 및 C5a 기능 실조로 인한 질병 및/또는 병증을 치료하기 위해, 개체(예를 들어, 인간과 같은 포유동물)에게 투여될 수 있으며, 예를 들어, C5a의 고발현 및/또는 C5a의 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역을 치료하기 위해 투여될 수 있다.
따라서, 본 출원의 일부 실시예에서는 개체에서 C5a의 고발현 및/또는 C5a의 기능 이상(예를 들어, 염증 장애, 자가면역 장애, 암, 통증 및 이식 면역)을 특징으로 하는 질병 또는 병증을 예방, 치료, 유지, 감소 및/또는 억제하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학적 조성물), 예를 들어 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 질병 또는 병증은, 예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병(lupus-type diseases), 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
예를 들어, 일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 인간 C5a 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a의 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기의 어느 하나의 아미노산 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-C5a 항체는 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a 중의 31-40번 위치 잔기에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 항-C5a 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항체는 IgG1 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질병 또는 병증은 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병(lupus-type diseases), 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는 서열 X1YYX2Q(서열번호 67)를 포함하는 하나의 HC-CDR1-여기서, X1은 D 또는 N이고, X2는 M 또는 I임; 서열 LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(서열번호 68)를 포함하는 하나의 HC-CDR2-여기서, X1은 K 또는 N이고, X2는 A 또는 V이며, X3은 V, N 또는 I이고, X4는 G, E, F, H, I, Q 또는 R이며, X5는 T, V 또는 A이고, X6은 Q, E, T 또는 S이며, X7은 Y 또는 F이고, X8은 V 또는 L임; 및 서열 RX1GPPGLX2(서열번호 69)를 포함하는 하나의 HC-CDR3-여기서, X1은 A, L 또는 V이고, X2는 T, S 또는 A임; 을 포함하며, 상기 VL은 서열 RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(서열번호 70)를 포함하는 하나의 LC-CDR1-여기서, X1은 S, R 또는 N이고, X2는 A, H 또는 D이며, X3은 S 또는 T이고, X4는 D 또는 N이며, X5는 G, A 또는 R이고, X6은 N, I, T, E 또는 A이며, X7은 I, M, L 또는 V임; 서열 GX1SX2RAS(서열번호 71)를 포함하는 하나의 LC-CDR2-여기서, X1은 G 또는 A이고, X2는 N 또는 K임; 및 서열 X1QHX2X3LPX4T(서열번호 72)를 포함하는 하나의 LC-CDR3-여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 R 또는 K이며, X3은 A 또는 V이고, X4는 P 또는 L임; 을 포함한다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함한다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 39에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 40에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 41에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 43에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 44에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 56에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)을 앓고 있는 개체를 치료하기 위한, 상기 개체에게 유효량의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공하며, 상기 항-C5a 항체는 VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체는 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 실시예에서, 본문에 기재된 항-C5a 항체는 IgG1 또는 IgG4의 불변 영역을 포함하는 전장 항-C5a 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중쇄 불변 영역은 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경쇄 불변 영역은 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, 상기 개체는 포유동물(예를 들어, 인간, 비-인간 영장류, 랫트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등)이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 임상 환자, 임상 시험 지원자, 실험 동물 등이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 60세 미만(예를 들어, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 또는 10세 미만을 포함)이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 60세 초과(예를 들어, 70, 80, 90 또는 100세 초과를 포함)이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 본문에 기재된 질병 또는 병증(예를 들어, 류마티스성 관절염, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환, 아나필락시스, 다발성 경화증, 골수성 백혈병 또는 죽상동맥경화증) 중 1종 이상으로 진단되거나 유전적으로 발생하기 쉽다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 본문에 기재된 1 종 이상의 질병 또는 병증과 관련된 1종 이상의 위험 인자를 갖는다.
일부 실시예에서, 본 출원은 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체의 세포 표면에서 C5a를 발현하는 세포에 항-C5a 항체(예를 들어, 단리된 항-C5a 항체와 같은 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체)를 전달하는 방법을 제공한다.
보체 시스템은 면역 복합체의 제거 및 감염 인자, 외부 항원, 바이러스 감염 세포 및 종양 세포에 대한 면역 반응에서 핵심적인 역할을 발휘한다. 보체 캐스케이드의 부적절하거나 과도한 활성화는 C5a의 조절 실조로 이어져, 심각한 염증 및 조직 손상을 유발할 수 있다. 체액 및 조직 샘플에서 C5a 수준의 증가는 C5a-매개 질병 및 그 엄중성의 진단을 위한 바이오마커로 사용될 수 있다. 염증 또는 임의의 C5a의 비정상적 발현을 나타내는 기타 질병에 대한 수많은 진단 방법 및 이들 질병의 임상적 설명은 당업계에서 공지되어 있다. 이러한 방법에는 예를 들어 면역조직화학(immunohistochemistry), PCR 및 형광 인 시튜 혼성화(fluorescent in situ hybridization, FISH)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 실시예에서, 본원에 기재된 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체) 및/또는 조성물은 제2, 제3 또는 제4 에이전트(agent)(예를 들어, 항종양제, 성장 억제제, 세포독성제 또는 화학요법제를 포함)와 연합하여 C5a의 비정상적 발현과 관련된 질병 또는 병증을 치료하는데 사용된다.
예를 들어, 종양 퇴행, 종양 무게 또는 크기의 감소, 진행 시간, 생존 기간, 무진행 생존 기간, 전체 반응률, 반응 지속 시간, 삶의 질, 단백질 발현 수준 및/또는 활성을 사용하여 암 요법을 평가한다. 예를 들어, 방사선 촬영에 의해 응답 여부를 측정하는 것을 포함하는, 치료 효과를 확정하는 방법을 사용할 수 있다.
일부 실시예에서, 치료의 효과는 방정식 100-(T/CХ100)을 사용하여 계산하는 종양 성장 억제 백분율(% TGI)로 평가하며, 여기서 T는 치료된 종양의 상대 평균 종양 부피이고, C는 치료되지 않은 종양의 상대 평균 종양 부피이다. 일부 실시예에서, % TGI는 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 또는 95%를 초과한다. 일부 실시예에서, 치료 효과는 과립구(granulocytes) 형태의 변화 및/또는 과립구의 생존 수량의 증가에 의해 평가된다. 일부 실시예에서, 치료 효과는 단핵구에 의한 사이토카인 분비의 증가에 의해 평가된다.
항-C5a 항체의 투여 용량 및 투여 방법
개체(예를 들어, 인간)에게 투여되는 항-C5a 항체(예를 들어, 단리된 항-C5a 항체) 조성물의 사용량은 특정 조성물, 투여 방식 및 치료되는 질병의 유형이 다름에 따라 상이할 수 있다. 일부 실시예에서, 조성물(예를 들어, 항-C5a 항체를 포함하는 조성물)의 양은 암 치료에서 객관적인 응답(예를 들어, 부분적 응답 또는 완전 응답)을 효과적으로 생성할 수 있다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체 조성물의 양은 개체에서 완전 응답을 생성하기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체 조성물의 양은 개체에서 부분적 응답을 생성하기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체 조성물의 투여량(예를 들어, 단독으로 투여하는 경우)은 항-C5a 항체 조성물을 사용하여 치료하는 개체 집단에서 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 64%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90%를 초과하는 총 응답률을 생성하기에 충분하다. 본문에 기재된 치료 방법에 대한 개인의 응답은 예를 들어 RECIST 수준에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물(예를 들어, 단리된 항-C5a 항체를 포함하는 조성물)의 양은 개체의 무진행 생존 기간을 연장시키기에 충분하다. 일부 실시예에서, 조성물의 양은 개체의 전체 생존 기간을 연장하기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-C5a 항체 조성물을 사용하여 치료하는 개체 집단에서, 조성물의 양(예를 들어, 단독으로 투여하는 경우)은 50%, 60%, 70% 또는 77%를 초과하는 임상적 이점을 생성하기에 충분하다.
일부 실시예에서, 조성물(예를 들어, 단리된 항-C5a 항체를 포함하는 조성물)의 양에 있어서, 단독으로 사용하거나 제2, 제3 및/또는 제4 에이전트와 연합하여 사용하는 경우, 동일한 피험자의 치료 전의 상응하는 종양 크기, 암 세포 수 또는 종양 성장 속도와 비교하거나 치료를 받지 않은 기타 피험자의 상응하는 활성과 비교하여, 종양 크기, 암 세포의 수량을 감소시키거나 종양 성장 속도를 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 감소시키는 데 충분하다. 정제된 효소의 시험관내 분석, 세포 기반 분석, 동물모델 또는 인체 시험과 같은 표준 방법을 사용하여 해당 치료 효과의 크기를 측정할 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물 중 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 양은 독성 이펙터를 유발하는 수준보다 낮거나(즉, 임상적으로 허용가능한 독성 수준을 초과하는 이펙터)이거나, 조성물이 개체에게 투여될 경우, 잠재적인 부작용이 제어되거나 용인될 수 있는 수준이다.
일부 실시예에서, 동일한 투여 방안을 따르면, 조성물의 양은 조성물의 최대 용인 용량(MTD)에 근접한다. 일부 실시예에서, 조성물의 양은 MTD의 80%, 90%, 95% 또는 98%를 초과한다.
일부 실시예에서, 조성물 중 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 함량은 0.001㎍ 내지 1,000㎍ 범위 내이다.
상술한 어느 하나의 실시예에서, 조성물 중 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)의 유효량은 체중을 기준으로 계산할 경우, 0.1㎍/kg 내지 100mg/kg 범위 내이다.
항-C5a 항체 조성물은 예를 들어, 정맥 주사, 동맥내 투여, 복강내 주사, 폐내 투여, 경구 투여, 흡입 투여, 혈관내 투여, 근육내 주사, 기관내 투여, 피하 주사, 안구내 투여, 경막내 투여, 점막 투여 또는 경피 투여를 포함하는 다양한 경로에 의해 개체(예를 들어, 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 실시예에서, 조성물의 서방성 제제를 사용한다. 일부 실시예에서, 조성물은 정맥에 의해 투여된다. 일부 실예에서, 조성물은 동맥에 의해 투여된다. 일부 실시예에서, 조성물은 복강내로 투여된다. 일부 실시예에서, 조성물은 간내로 투여된다. 일부 실시예에서, 조성물은 간동맥 주입에 의해 투여된다. 일부 실시예에서, 조성물은 제1 병변으로부터 멀리 떨어진 부위에 투여된다.
제품 및 키트
본 출원의 일부 실시예에서, C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)의 치료에 사용될 수 있거나, 표면에서 C5a를 발현하는 세포에 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 전달하기 위해 사용될 수 있는 물질을 포함하는 제품을 제공한다. 상기 제품은 용기 및 용기 상에 또는 해당 용기에 첨부된 라벨 또는 패키지 설명서를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기 등을 포함한다. 용기는 유리나 플라스틱과 같은 다양한 재질로 제조될 수 있다. 일반적으로, 해당 용기는 본문에 기재된 질병 또는 병증을 치료하는데 효과적인 조성물을 함유하고, 하나의 멸균 포트를 갖는다(예를 들어, 해당 용기는 하나의 정맥 수액 백(intravenous solution bag) 또는 피하 주사 바늘이 뚫을 수 있는 캡을 가진 하나의 바이알일 수 있음). 조성물 중 적어도 하나의 활성 물질이 즉 본 출원에 기재된 항-C5a 항체이다. 라벨 또는 패키지 설명서는 해당 조성물이 치료할 수 있는 특정 병증을 나타낸다. 라벨 또는 패키지 설명서는 항-C5a 항체 조성물을 환자에게 투여하기 위한 설명서를 추가로 포함한다. 조합 치료를 포함하는 제품 및 키트는 모두 본문의 고려범위 내에 있다.
패키지 설명서는 이러한 치료 제품의 사용과 관련된 적응증, 용법, 사용량, 투여, 금기증 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서를 의미한다. 일부 실시예에서, 패키지 설명서는 해당 조성물이 자가면역 질병 및/또는 염증성 질환 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)의 치료에 사용될 수 있음을 명시한다. 일부 실시예에서, 패키지 설명서는 해당 조성물이 염증성 질환(예를 들어, 염증 반응 증후군)의 치료에 사용될 수 있음을 명시한다.
또한, 상기 제품은 주사용 정균수(BWFI), 인산염 완충액, 링거 용액(Ringer's solution) 또는 포도당 용액과 같은 약학적으로 허용가능한 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 기타 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하는, 상업적으로나 사용자가 필요하는 기타 재료를 더 포함할 수 있다.
아울러, 예를 들어 C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)의 치료에 사용되거나, 표면에서 C5a를 발현하는 세포에 항-C5a 항체(예를 들어, 전장 항-C5a 항체)를 전달하기 위해 사용되며, 임의로 제품과 조합하는, 다양한 목적에 사용되는 키트를 더 제공한다. 본 출원의 키트는 항-C5a 항체 조성물(또는 단일 사용량 형태 및/또는 제품)을 포함하는 하나 이상의 용기를 포함하고, 또한, 일부 실시예에서, 다른 에이전트(예를 들어, 본문에 기재된 에이전트) 및/또는 본문에 기재된 어느 하나의 방법과 일치하는 사용 설명서를 추가로 포함한다. 해당 키트는 치료에 적합한 개체를 선택하는 설명을 더 포함할 수 있다. 본 출원에서 키트에 첨부된 사용 명세서는 일반적으로 라벨 또는 패키지 설명서의 서면 설명(예를 들어, 키트 내에 포함된 종이 시트)이며, 기계 판독가능한 설명(예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크의 명세서)도 허용된다.
예를 들어, 일부 실시예에서, 키트는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물, 및 b) 항-C5a 항체의 효과(예를 들어, 치료 효과, 검출 효과)를 증강시킬 수 있는 적어도 1종의 유효량의 기타 에이전트를 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물, 및 b) C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)를 치료하기 위해, 개체에게 항-C5a 항체 조성물을 투여하는 사용 설명서(instructions)를 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 본문에 기재된 어느 하나의 항-C5a 항체를 포함하는 조성물, 및 b) 항-C5a 항체의 효과(예를 들어, 치료 효과, 검출 효과)를 증강시킬 수 있는 적어도 1종의 유효량의 기타 에이전트 및 c) C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)를 치료하기 위해, 개체에게 항-C5a 항체 조성물을 투여하는 사용 설명서를 포함한다. 상기 항-C5a 항체 및 기타 물질은 독립적인 용기 또는 동일한 용기에 존재할 수 있다. 예를 들어, 해당 키트는 1종의 특정 조성물 또는 2종 이상의 조성물을 포함할 수 있으며, 여기서 1종의 조성물은 항-C5a 항체를 포함하고, 다른 1종의 조성물은 다른 에이전트를 포함한다.
일부 실시예에서, 키트는 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 코딩하는 1종(또는 한 세트)의 핵산을 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 코딩하는 1종(또는 한 세트)의 핵산, 및 b) 핵산(또는 한 세트의 핵산)을 발현하는 1종의 숙주 세포를 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 코딩하는 1종(또는 한 세트)의 핵산, 및 b) i) 숙주 세포에서 항-C5a 항체를 발현하고, ii) 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 제조하고, iii) C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)를 치료하기 위해, 개체에게 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여; 하는데 적용되는 사용 설명서를 포함한다. 일부 실시예에서, 키트는 a) 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 코딩하는 1종(또는 한 세트)의 핵산, 및 b) 핵산(또는 한 세트의 핵산)을 발현하는 1종의 숙주 세포, 및 c) i) 숙주 세포에서 항-C5a 항체를 발현하고, ii) 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 제조하고, iii) C5a의 고발현 및/또는 C5a 기능 이상을 특징으로 하는 자가면역 질병 및/또는 염증성 질병 및/또는 암 및/또는 통증 및/또는 이식 면역 실조(예를 들어, 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암)를 치료하기 위해, 개체에게 항-C5a 항체를 포함하는 조성물을 투여; 하는데 적용되는 사용 설명서를 포함한다.
본 출원에 기재된 키트는 적합한 형태로 포장된다. 적합한 포장에는 바이알, 병, 광구병, 가요성 패키징(flexible packaging)(예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 비닐 백) 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 키트는 임의로 완충액 및 설명 정보와 같은 기타 조성분을 제공할 수 있다. 따라서, 본 출원은 바이알, 병, 광구병, 가요성 패키징(예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 비닐 백) 등을 포함하는 제품을 더 제공한다.
항-C5a 항체 조성물에 관련되는 사용 설명서에 있어서, 일반적으로 예를 들어 사용량, 투여 주기 및 투여 경로와 같은 일부 정보를 포함한다. 용기는 벌크 패키지(예를 들어, 다중 용량 패키지) 또는 서브-단위 사용량의 단위 사용량일 수 있다. 예를 들어, 개체에 대해 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월, 4개월, 5개월, 7개월 8개월, 9개월 또는 보다 더 긴 시간과 같은 장기적으로 효과적인 치료를 수행하기 위해, 충분한 사용량의 본문에 기재된 항-C5a 항체(예를 들어, 전장의 항-C5a 항체)를 포함하는 키트를 제공한다. 키트는 또한 다중 단위 사용량의 항-C5a 항체, 약학적 조성물 및 사용 설명서를 포함할 수 있고, 병원 약국 및 조제 약국과 같은 약국에서 저장 및 사용하기에 충분한 양으로 포장된다.
당업자는 본 출원의 범위 및 사상 내에서 가능한 여러 실시예를 인식할 것이다. 현재 하기 비-제한적 실시예를 참조하여 본 출원을 보다 상세히 설명할 것이다. 이하 실시예는 본 출원을 추가로 설명하지만, 어떤 방식으로든 그 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예
이하 개시된 실시예에서, 하기 약어가 적용된다: C5a(보체 성분 5a); Avih-C5a(Avi-10His-C5a), Bavih-C5a(비오틴-Avi-10His-C5a), 재조합 C5a(rC5a); 내인성 C5a(eC5a)
실시예 1: 재조합 인간 C5a를 제조하고, 항- C5a의 단일 사슬 항체( scFv )를 선별
재조합 C5a 항원의 제조
전장 인간 C5a(Shanghai Generay Biotech Co, Ltd.에서 합성)를 서브-클로닝에 의해 원핵 발현 벡터 pTWIN1 및 진핵 발현 벡터 pTT5에 클로닝하고, C5a에 His 태그 또는 당업자가 통상적으로 사용하는 기타 태그를 첨가한다. 발현 벡터 pTWIN1-C5a 및 pTT5-Avi-10 His-C5a를 구축하여 생성한다. 여기서 "His"는 His-태그를 나타내고, "Avi"는 아비딘(avidin)-태그를 나타낸다.
또한, 재조합 시노몰구스 원숭이 C5a를 합성한다. 상술한 바와 같이, pTWIN1-cynoC5a 및 pTT5-6 His-cynoC5a 발현 벡터를 구축하여 생성한다. 여기서 "His"는 His-태그를 나타낸다.
기기 제조업체 및 키트의 조작 명세서에 따라, 재조합 인간 Avi-10 His-C5a에 대해 발현 및 정제를 수행한다. 간략하면, 발현 벡터를 293F 세포에 형질감염시키고, 상기 세포를 37℃ 5% CO2, 120rpm 조건하에서 5일 동안 배양한다. 세포 배양액을 수집하고, 조작 명세서에 따라, (Ni) 니켈 컬럼을 사용하여 His-태그를 가진 단백질을 정제한다. 구체적인 조작은 다음과 같다: QIAGEN 회사의 Ni-NTA를 사용하여 고정화 금속 친화성 크로마토그래피(immobilized metal affinity chromatography, IMAC)를 수행한다. 먼저, 버퍼 A1(50mM Na3PO4, 0.15M NaCl, pH 7.2)을 사용하여 150cm/h의 유속으로 니켈 컬럼을 평형화한다. 배양 상등액(pH 7.2로 조정)을 150cm/h의 유속으로 컬럼에 통과시킨다. 이어서, 컬럼 부피 6배의 A1 완충액을 사용하여 150cm/h의 유속으로 해당 컬럼을 재평형화시킨다. 마지막으로, 컬럼 부피 10배의 50mM의 PB 용액(0.15M NaCl 및 0.2M 이미다졸 함유, pH 7.2)을 사용하여 용출하고, 용출액을 수집한다.
비오티닐화된 C5a 항원의 제조
작동 명세서에 따라, 비오틴 리가아제(biotin ligase) B0101A(GeneCopoeia)를 사용하여 Avi-10His-C5A에 대해 비오티닐화시킨다. 간략하면, Avi-10His-C5a에 BufferA/B 및 BirA 리가아제를 첨가하고 30°C에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 비오티닐화된 Avi-10His-C5a는 Bavih-C5a로 명명한다. ELISA 방법에 의해 비오티닐화 효율을 검출한다. 즉, Bavih-C5a의 초기 농도를 500ng/ml로 설정하고, 1:2의 비율로 연속 희석(serially diluted)한 후, ELISA plate에 코팅한다. SA-HRP를 사용하여 신호를 검출하고, 비오티닐화 표준품을 대조군으로 사용한다. Bavih-C5a의 비오티닐화된 효율은 70%인 것으로 확인된다.
항- C5a 단일 사슬 항체( scFv ) 선별
여러 라운드의 패닝을 거친 후, 당사의 효모 디스플레이 라이브러리에서 C5a를 인식하는 scFvs를 분리한다. 간략하면, 마그네틱 비드 분류(magnetic-activated cell sorting, MACS)를 사용하여, C5a scFv를 발현하는 효모 세포를 농축한다. 1,000OD의 효모 세포를 2,500g에서 5분 동안 원심분리한다. 얻어진 세포 펠렛을 초기 농도 OD600=1로 1L의 SGCAA 배양 배지에 재현탁하고, 20℃ 250rpm의 배양 조건하에서 40-48시간 동안 발현을 유도한다. 세포 배양 배지를 원심분리하고, 펠렛을 PBSM 용액으로 세척하며, 부피의 5-10배의 1μM Bavih-C5a를 함유하는 PBSM 용액으로 세포 펠렛을 재현탁하고, 4°C에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 원심분리 및 PBSM 세척을 거친 후, 미결합 항원은 PBSM 용액에 의해 세척된다. 마그네틱 비드를 추가한 후, 충분히 혼합하고, 이어서 4°C 로테이터(rotator)에 방치하여 30분 동안 인큐베이션한다. 2,500g에서 5분 동안 원심분리하고, 상등액을 버리고, 부피의 5-10배의 PBSM 용액으로 펠렛을 재현탁한다. 모든 세포 현탁액이 컬럼을 통과할 때까지, 한 번에 7ml의 세포 현탁액을 컬럼에 추가한다. 플라스미드를 추출하기 위해, 컬럼에 결합된 세포를 수집하여 추가로 배양 및 원심분리한다.
파지 디스플레이 라이브러리의 제조 및 scFv 항체 선별: scFv-F 및 scFv-R 프라이머를 사용하여, 선별된 효모 세포에서 얻은 scFv 항체 단편에 대해 PCR 증폭을 수행하고, 얻어진 scFvs 항체 단편을 SfiI를 통해 파지 디스플레이 벡터 pDAN5로 클로닝하고, 연결한 다음 scFv 항체 파지 디스플레이 라이브러리를 얻기 위해, TG1 파지 디스플레이 전기천공 컴피턴트 세포를 변환한다. 일련의 반복된 선별 단계를 거친 후, 파지 디스플레이 라이브러리로부터 C5a에 특이적으로 결합하는 scFv 항체를 분리하여 얻는다. 간략하면, 2Х1011 PFU의 파지 scFv 라이브러리를 비오티닐화된 C5a에 첨가하고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션한다. C5a에 결합된 파지는 스트렙타비딘-코팅된 마그네틱 비드에 의해 포획되고, 반면 미결합 파지는 세척된다. TBST 용액을 사용하여 8-15회 세척(선별 라운드가 증가함에 따라, 세척 횟수도 증가)한 후, Glycine-HCl 용액(pH 2.2)을 사용하여 C5a에 특이적으로 결합하는 파지를 용출시킨다. 암피실린(Ampicillin)을 첨가하고, 이들 파지를 사용하여 지수 성장기의 TG1 세포를 감염시키고, 1시간 동안 배양한 후, 헬퍼 파지(helper phage)를 첨가하고 28℃ 200rpm의 흔들 침대(rocking bed)에서 밤새 배양한다. 다음날, 배양액을 수집하고, 원심분리 후 상등액을 획득하여 다음 라운드의 선별에 진입한다. 선별완료 후 양성 scFv 항체 한 세트를 얻는다.
C5a ELISA 결합 실험
C5a 결합 실험을 수행하고 scFv 모노클로날 항체를 선별한다. 인간 재조합 C5a 또는 내인성 C5a에 결합하는 scFv 항체를 확인하기 위해, 해당 실험을 설계한다. 간략하면, 인간 재조합 C5a 또는 eC5a 항원을 PBS 용액에 용해시키고, 0.1μg/웰로 96웰을 코팅하고 4℃에서 밤샌다. scFv 항체를 첨가하기 전에, TBST 용액으로 96-웰 플레이트를 세척하고, 5% 우유로 37℃에서 1-2시간 동안 블락킹한 다음, 다시 TBST 용액으로 세척한다. 먼저, 각 scFv 샘플을 10μg/mL로 희석하고, 150μL를 취하여 첫 번째 행의 웰에 추가한 다음, 10μg/mL scFv 샘플을 1:3의 비율로 연속 희석하고, 희석 후 나머지 웰에 추가한다. 37°C에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 TBST 용액으로 6회 세척한다. 1차 항체와 2차 항체 혼합물(마우스 항-flag(1:2,500)와 항-마우스 FC-AP(1:2000)) 100μL를 각 웰에 추가하고, 37°C에서 1시간 동안 인큐베이션하고, TBST 용액으로 3회 세척한다. 각 웰에 50μL pNPP를 추가하고, 10-20분 동안 37°C에서 인큐베이션한다. 3M NaOH 50μL를 추가하여 반응을 종료시킨다. ELISA 결과(OD410)를 분석하고, PRISM에 의해 결합 곡선을 생성한다. INab308(항-C5a 항체, InflaRx)을 대조군으로 하여, 선별된 scFv 항체는 인간 재조합 C5a 또는 내인성 C5a와 모두 우수한 결합 친화력을 보였다. 인간 rC5a 또는 eC5a에 대한 부분 scFv 항체 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13 및 Cab15의 결합 친화력은 도 1A-1B에 나타낸 바와 같다.
활성산소종(ROS) 방출 시험: C5a는 호중구를 자극하여 활성산소종(ROS)을 방출함으로써, 호중구가 광범위한 염증 반응에 참여하도록 촉진할 수 있다. 이러한 메커니즘을 기반으로, 유도성 호중구를 이용하여 항-C5a 항체의 차단 효과를 검출한다. HL-60 세포주는 인간 전골수성 백혈병 세포주로서, 간략하면, 1mM 디부티릴 cAMP 나트륨염(sigma, D0260)을 사용하여 HL60 세포를 48시간 동안 처리하여 분화를 유도한 결과, 세포가 축소되어 방추형을 나타내고, 호중구로 분화된다. C5a는 분화된 HL-60 세포를 자극하여 사용량-의존적으로 ROS를 생성할 수 있다. 일련의 농도의 C5a 항체와 C5a(5nM)를 사전 혼합하고, 혼합액을 사용하여 분화된 세포를 처리한다. 30분 후, DCFH-DA 형광 프로브(sigma, D6883)를 첨가한다. 인큐베이션 후, 여기 파장 480nm 및 방출 파장 525nm에서의 형광 강도를 검출한다. 단순 C5a 자극 및 C5a 자극이 없을 경우의 억제율을 각각 0% 및 100%로 계산하고, 실험 데이터를 정규화하여 항체의 억제 활성을 계산한다. 선택된 항체는 호중구에서의 ROS 방출을 모두 효과적으로 감소시킬 수 있다. ROS 생성을 억제하는 항체의 활성은 표 5에 나타낸 바와 같다.
항체 ROS IC50(nM） 항체 ROS IC50(nM）
Cab01 1.51 Cab16 0.87
Cab02 1.67 Cab17 1.87
Cab03 1.41 Cab18 1.36
Cab04 1.87 Cab19 1.32
Cab05 1.56 Cab20 0.81
Cab06 1.03 Cab21 0.84
Cab07 1.07 Cab22 0.91
Cab08 1.29 Cab24 1.44
Cab09 1.54 Cab23 0.92
Cab10 2.02 Cab25 0.54
Cab11 1.57 Cab26 1.13
Cab12 1.22 Cab27 1.21
Cab13 1.08 Cab28 0.98
Cab14 1.20 Cab29 0.96
Cab15 0.64 Cab30 1.18
Cab31 1.26
실시예 2: 전장 C5a 항체의 제조 및 특징화
전장 항- C5a 항체의 제조
가장 잠재력이 있는 scFv 항체를 인간 IgG1 또는 IgG4 중쇄 불변 도메인 및 인간 kappa 또는 lambda 경쇄 불변 도메인을 갖는 인간 IgG1 또는 IgG4 항체 분자로 재구성한다. 원핵 발현 벡터로부터 VL 및 VH를 증폭하고, 진핵 발현 벡터 pTT5-K(kappa 불변 도메인 포함) 또는 pTT5-L(lambda 불변 도메인 포함) 및 pTT5-H1(IgG1 중쇄 불변 도메인 포함) 또는 pTT5-H4(IgG4 중쇄 불변 도메인 포함)에 각각 구축한다. 경쇄 또는 중쇄를 발현하는 플라스미드를 추출하고, 293F 세포를 공동 형질감염시킨다. 37℃ 8% CO2, 120rpm에서 5일 동안 배양하고, Protein A 친화성 크로마토그래피 컬럼으로 배양액을 정제한다. 간략하면, 먼저 컬럼 부피의 6배의 0.15M NaCl을 포함하는 50mM PBS 완충액(pH 7.2)을 사용하여 150cm/h의 유속으로 단백질 A 컬럼을 평형화시킨다. 배양 상등액(pH 7.2로 조정)을 150cm/h의 유속으로 컬럼에 통과시킨다. 추가적으로 평형화시킨 후, 50mM 구연산나트륨 완충액(pH 3.5)을 사용하여 용출하고, 용출액을 수집한다.
항체의 친화력 및 생물학적 활성 개선: C5a 항체의 친화력 및 활성을 개선하기 위해, 구축된 전장 항체에서 Cab05를 주요 모 항체로 선정한다. Cab05 scFv를 사용하여 CDR 영역 돌연변이를 포함하는 scFv 파지 디스플레이 라이브러리를 제조한다. ROS 방출 실험을 사용하여 인간 C5a를 효율적으로 차단할 수 있는 변이체의 생물학적 활성을 평가한다. 생물학적 활성이 높은 scFv 항체를 선택하여 전장 항체를 구축한다. ROS 방출 실험을 사용하여 전장 항체의 새로운 라운드의 선별을 수행한다. 선별하여 얻은 선도 최적화 항체에 대해 추가적으로 생화학적 및 생물학적 분석을 수행한다.
활성산소종 ( ROS ) 방출 시험
ROS 방출 시험(실시예 1에 기재된 방법)을 사용하여 ROS 방출을 억제하는 최적화된 항체(인간 IgG1 형태로 재구축됨)의 능력을 검출한다. 표 6에 나타난 바와 같이, 최적화된 항체는 비교적 높은 ROS 방출을 억제하는 능력을 갖는다.
항체 ROS IC50 (nM) 항체 ROS IC50 (nM)
Cab05 1.56 Cab39 0.91
Cab32 1.76 Cab40 0.70
Cab33 1.70 Cab41 0.70
Cab34 1.61 Cab42 0.78
Cab35 1.28 Cab43 0.62
Cab36 1.41 Cab44 0.51
Cab37 0.92 Cab45 0.64
Cab38 0.53 Cab46 0.66
항- C5a 항체의 친화력
C5a ELISA 결합 실험: INab308을 대조군으로 하고, ELISA 실험을 사용하여 인간 C5a에 대한 전장 C5a 항체의 친화력을 평가한다. 도 2a에 나타낸 바와 같이, 대조군 항체 INab308과 비교하여, 최적화된 항체 Cab35, Cab38 또는 Cab42(인간 IgG1 형태로 재구축됨)는 더 높거나 비슷한 친화력으로 인간 C5a에 결합할 수 있고, Cab05와 비교하여, 최적화된 항체는 또한 더 높거나 비슷한 친화력을 나타낸다. 도 2b에 나타낸 바와 같이, 대조군 항체 INab308와 비교하여, 최적화된 항체 Cab42, Cab44 또는 Cab45(인간 IgG1 형태로 재구축됨)는 더 높거나 비슷한 친화력으로 인간 C5a에 결합한다.
이어서, 우리는 시노몰구스 원숭이 C5a에 대한 전장 항체 Cab01, Cab03, Cab05, Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축됨) 및 최적화된 C5a 항체 Cab42-IgG1의 친화력도 측정하였다. 도 2c에 나타낸 바와 같이, 이들 항체는 모두 시노몰구스 C5a와 교차 반응한다.
C5 ELISA 결합 실험:
이와 동시에, 결합 ELISA 실험을 사용하여 천연 인간 전장 보체 성분 C5에 대한 모노클로날 항체 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축됨) 및 최적화된 항체 Cab35, Cab38, Cab42, Cab44, Cab45(인간 IgG1 형태로 재구축됨)의 친화력을 확정한다. INab308을 대조군으로 하여, 상기 방법에 따라 ELISA 결합 시험을 수행한다. 도 3a-3c에 나타낸 바와 같이, 대조군 항체 INab308과 비교하여, 모든 C5a 항체는 인간 천연 C5에 대해 모두 비교적 약한 결합 친화력을 나타낸다.
항- C5a 항체의 비-특이적 결합
BV와의 교차 반응성 ELISA: ELISA 실험을 사용하여 BV 입자에 대한 전장 항체 Cab01, Cab03, Cab04, Cab05, Cab13(인간 IgG4 형태로 재구축됨) 및 최적화된 항체 Cab35, Cab42(인간 IgG1 형태로 재구축됨)의 교차 반응성을 측정한다.
본 실험은 전술한 방법(Hφtzel I, et al, 2012, mAbs 4:6, 753-760 참조)에 따라 BV 입자에 대한 전장 항-C5a 항체의 교차 반응성을 측정한다. 간략하면, 정제된 배큘로바이러스(baculovirus)를 ELISA 플레이트에 코팅하고, 4℃에서 밤샌다. 시험 항체를 바큘로바이러스와 실온에서 공동 인큐베이션하고, PBS로 세척한 후 항-인간 IgG-HRP 항체를 첨가한다. 실온에서 인큐베이션하고 PBS로 세척한 후, 웰에 TMB를 첨가하여 발색시킨 후, 450 nm에서의 흡광도 값을 판독한다.
도 4a에 나타낸 바와 같이, 양성 대조군 lenzilumab과 비교하여, 모든 항체는 BV 입자와 모두 현저한 다중특이성 반응이 생성되지 않았다.
293 세포와의 교차 반응: 유세포 측정기를 사용하여 최적화된 항체 Cab35-IgG1, Cab42-IgG1 및 양성 대조군 항-NPHS2 항체와 C5a-음성 293 세포의 교차 반응을 측정한다. 도 4b에 나타낸 바와 같이, C5a-음성 293 세포에 대한 Cab35-IgG1 및 Cab42-IgG1의 결합력은 음성 대조군(항체 없음)에 필적할 정도로 낮은 반면, 293 세포의 NPHS2에 대한 양성 대조군 항체는 C5a-음성 293 세포에 강력한 결합을 보인다. 종합하면, 이들 결과는, 선택된 항-C5a 항체가 BV ELISA 및 C5a-음성 293 세포 교차 반응 시험에서 모두 낮은 수준의 비-특이적 결합을 나타냄을 시사한다.
결합 친화력 및 해리 상수( Kd )의 특징화
Biacore T200(GE)을 사용하여 eC5a 또는 인간 C5 각각에 대한 항-C5a 항체 Cab05-IgG4의 결합 친화력을 측정한다. 센서 칩 CM5에 Cab05-IgG4 항체를 고정시킨다. eC5a 또는 인간 C5에 대한 상이한 농도에서의 항체의 친화력을 측정하고, 농도 범위는 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125, 0.15625, 0.078, 0.039, 0.0195 및 0nM을 포함하며, 여기서 0.625 및 0Nm은 각각 1회 반복한다. SPR 기술로 항체의 결합 및 해리율을 측정하고, 결합 친화력을 확정하며, 표 7에서는 eC5a 또는 인간 C5 항원에 대한 Cab05-IgG4의 Kon, Koff 및 Kd 값을 나열하였으며, 그 결과 C5a 항체 Cab05는 높은 친화력으로 C5a에 결합하고, 매우 약한 친화력으로 C5에 결합한다는 것을 보여준다.
항체 항원 Kon (1/Ms) Koff (1/s) Kd (M)
INab308 C5 2.931E+05 2.178E-04 7.430E-10
Cab05 C5 No signal No signal >1E-7
항체 항원 Kon (1/Ms) Koff (1/s) Kd (M)
INab308 eC5a 7.01E+06 3.25E-04 4.64E-11
Cab05 eC5a 4.02E+05 4.22E-05 1.05E-10
실시예 3: 전혈에서의 CD11b 차단 실험
CD11b 발현의 상향조절은 호중구 활성화의 특징과 센스티브 마커(sensitive marker)이며, 호중구의 CD11b 수준을 사용하여 호중구의 활성화를 평가한다. 본 연구에서는 인간 전혈 모델을 사용하고, INab308을 대조군으로 하여, 재조합 인간 C5a 및 내인성 C5a에 대한 항-C5a 항체 Cab01, Cab03 및 Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축됨)의 차단 활성을 평가한다. 아울러, INab308을 대조군으로 하여, 내인성 인간 C5a에 대한 최적화된 항체 Cab42, Cab43, Cab44, Cab45 및 Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축됨)의 차단 활성을 평가하였다. 인간 전혈을 인간 C5a와 각각 단독으로 인큐베이션하거나 인간 C5a 및 상이한 농도의 각 항체와 조합하여 인큐베이션한다. 인큐베이션한 후, 검출 항체 CD11b:FITC로 염색하고, 적혈구를 용해한 후, 유세포 측정기로 CD11b MFI를 분석하여, 혈액 내 호중구의 활성화 수준을 반영한다.
도 5a에 나타낸 바와 같이, 인간 재조합 C5a 및 내인성 C5a는 모두 인간 호중구에서의 CD11b 발현의 상향조절을 강렬하게 자극할 수 있다. C5a 항체 Cab01, Cab03 및 Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축됨)는 사용량-의존적 방식으로 C5a 활성을 전면적으로 차단한다. 항-C5a 항체의 존재는 재조합 C5a 또는 내인성 C5에 의해 유도된 인간 호중구에서의 CD11b의 발현을 현저하게 감소시켰고, 이는 Ab:Ag 몰비가 0.25:1인 경우에도 마찬가지이다.
도 5b에 나타난 바와 같이, 최적화된 항체는 내인성 C5a에 의해 유도된 인간 호중구에서의 CD11b의 발현을 모두 현저하게 감소시킬 수 있으며, 이는 Ab:Ag의 몰비가 0.5:1인 경우에도, 대조군 항체 INab308에 필적하는 CD11b 상향조절을 억제하는 능력을 달성할 수 있다.
도 5c 및 표 8에 나타낸 바와 같이, 인간 C5에 대한 최적화된 C5a 항체 Cab42-IgG1의 결합이 매우 약하기에, 대조군 항체 INab308과 최적화된 C5a 항체 Cab42-IgG1은 반응 시스템에 50배 이상의 C5가 존재함에도 불구하고, 모두 내인성 C5a에 의해 유도된 인간 호중구에서의 CD11b의 발현을 억제할 수 있다. 대조군 항체 INab308과 비교하여, 최적화된 C5a 항체 Cab42-IgG1은 더 높은 효능으로 내인성 C5a에 의해 유도된 인간 호중구에서의 CD11b 발현의 상향조절을 감소시킨다.
항체 eC5a IC50(nM) eC5a +50*C5 IC50(nM)
Cab42-IgG1 2.05 31.04
INab308 1.95 42.53
실시예 4: 항- c5a 항체의 혈장 용혈 활성
보체 시스템은 3개의 활성화 경로에 의해 독립적으로 활성화될 수 있고, 최종적으로 막 공격 복합체를 형성한다. 특정 실험 조건하에서, 이는 적혈구의 세포막을 직접 공격하여 적혈구의 용해를 초래할 수 있다. 이 메커니즘을 기반으로 하여, C5a 항체가, C5를 C5b로 절단하는 C5 전환효소의 생물학적 활성에 영향을 미치는지 여부를 평가하기 위한 실험을 수행한다.
보체-매개 전형적인 활성화 경로에서의 C5a 항체의 역할 검출: 50% 보체 용혈 실험은 혈청에서 전체 전형적인 보체 활성을 측정하는 방법이다. 해당 실험은 항체를 전형적인 보체 경로의 활성화제로 사용하여 적혈구를 감작시키기고, 테스트 혈청을 상이한 농도로 희석하여, 50% 용해(CHSO)를 달성하는 데 필요한 양을 확정하는 용해 실험이다. 용혈률은 분광 광도계로 측정할 수 있다. 50% 보체 용혈 실험은, TCC 자체가 측정되는 용혈에 직접적인 영향을 미치기 때문에, 말단 보체 복합체(TCC) 형성을 간접적으로 측정하는 방법을 제공한다. 해당 실험은 잘 알려져 있고, 예를 들어 Limei Zhao et al. Front Immunol. 2017 May 31;8:636; Zhao et al. Parasites &Vectors. 2014 Feb 24;7:80에 기재된 바와 같이, 당업자에게 일상적인 조작이다.
간략하면, 신선한 기니 피그(Guinea Pig) 전혈로부터 원심분리하여 기니 피그 적혈구를 제조한 다음, 양(sheep) 항-적혈구 항체로 감작시킨다. 위의 조작은 보체의 전형적인 용혈 경로를 활성화하여 적혈구 용해할 수 있다. 412nm에서의 흡광도를 판독한다. C5 항체 에쿨리주맙(Eculizumab)을 대조군으로 한다.
보체-매개 대체 활성화 경로에서의 C5a 항체의 역할 검출: 간략하면, 항체 감작이 없는 경우, 토끼 적혈구는 대체 경로를 활성화하여 막 공격 복합체를 형성하여 토끼 적혈구의 용해를 유도할 수 있다. 에틸렌 글리콜 테트라아세틱산(Ethylene Glycol tetraacetic acid, EGTA)을 반응 시스템에 첨가한 후, 해당 물질은 혈장 중의 Ca2 +와 킬레이트화할 수 있지만, Mg2 +와의 결합 능력이 약하기에, 전형적인 경로는 차단된다. 상기 50% 보체 용혈 실험을 사용하여 대체 경로의 활성화를 측정한다. C5 항체 에쿨리주맙을 대조군으로 한다.
도 6a-6b에 나타낸 바와 같이, C5 항체 에쿨리주맙을 첨가한 후, C5 항체 에쿨리주맙은 사용량-의존적 방식으로 용혈 반응을 억제할 수 있는 반면, C5a 항체 Cab01, Cab03, Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축됨)(도 6a) 및 최적화된 항체 Cab35, Cab42, Cab43, Cab44, Cab45, Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축됨)(도 6b)은 전체 전형적인 보체 활성을 억제하지 않는다. 도 6c-6d에 나타낸 바와 같이, C5 항체 에쿨리주맙을 첨가하면 용혈 반응을 억제할 수 있는 반면, C5a 항체 Cab01, Cab03, Cab05(인간 IgG4 형태로 재구축됨)(도 6c) 및 최적화된 항체 Cab35, Cab42, Cab43, Cab44, Cab45, Cab46(인간 IgG1 형태로 재구축됨)(도 6d)은 대체 경로 활성을 억제하지 않는다. 요약하면, 상기 항-C5a 항체는 보체-매개 전형적 활성화 경로에서의 C5b의 기능이나 대체 활성화 경로에서의 C5b의 기능에 영향을 미치지 않는다.
실시예 5: 항- C5a 항체의 생체내 생물학적 활성 검출
C5a는 호중구에 대해 강렬한 주화 작용이 있다. 마우스에 C5a를 정맥 주사하면 짧은 시간(3-5분) 내에 호중구가 말초 조직으로 신속하게 이동하고, 전혈 중의 호중구가 현저하게 감소된다.
간략하면, 실험 24시간 전에 테스트 항체 또는 대조군 항체를 복강 주사하고, 실험 당일 200μg/kg의 사용량으로 인간 C5a를 정맥 주사한다. 5분 후, 혈액을 수집하여 항응고제 처리를 수행하고, 전혈 중의 호중구의 수량을 검출한다. 항-C5a 항체의 작용은 C5a-유도 호중구 주화성의 감소에 의해 평가된다.
도 7에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 Cab05-IgG4는 C5a-유도 호중구 주화성 실험에서 극대화된 억제 작용(P<0.0001)을 나타냈고, 해당 억제 작용은 사용량-의존성을 나타낸다.
실시예 6: 항- C5a 항체의 약물동력학
시노몰구스 원숭이 체내의 PK 연구: 4마리의 시노몰구스 원숭이(체중이 약 3kg/마리)에게 Cab35-IgG1 또는 대조군 항체 INab308을 10mg/kg의 사용량으로 주사한다. 특별히, 동물 #1 및 #2에는 INab308을 주사하고, 동물 #3 및 #4에는 Cab35-IgG1을 주사한다. 각각 주사 전날(D-1), 주사 후 1일째(D1), 그 후 차례로 2일째(D2), 4일째(D4), 8일째(D8), 15일째(D15), 22일째(D22), 29일째(D29), 36일째(D36), 44일째(D44), 56일째(D56)에, 각 동물로부터 6mL 혈액 샘플을 채취한다. 각 시점에서 1mL의 혈액 샘플을 수집하여 5,000g에서 15분 동안 원심분리하여 혈장을 획득하고, 그 후 혈장을 똑같이 50μL로 나누어 -80℃에 보관하여, 사이노몰구스 원숭이의 약물동력학적 평가에 사용한다. ELISA에 의해 Cab35-IgG1 및 INab308의 농도를 분석한다. 간략하게, 합성된 인간 C5a를 사용하여 96웰 플레이트를 코팅한다. 다음날, PBST로 세척한 후, PBS에 녹인 우유 200μL로 1시간 동안 블락킹하고, PBST로 세척한 후 혈장을 첨가하고, 37°C에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 0.1% TBST로 6회 세척한 후, 각 웰에 100μL의 염소 항-인간 Fc 항체-AP(PBS를 사용하여 1:3,000으로 희석)를 첨가하고, 1시간 동안 인큐베이션한다. 0.1% TBST로 6회 세척한 후, 각 웰에 pNPP 50μL를 넣고, 37℃에서 10-20분 동안 발색한다. 마이크로플레이트 판독기(microplate reader)를 사용하여 410nm에서의 흡광도를 판독한다. 도 8에 나타낸 바와 같이, 대조군 항체 INAb308와 비교하여, Cab35-IgG1의 반감기가 더 길다.
실시예 7: 경쟁적 ELISA 결합 측정
해당 실험은 C5a 항체 Cab35-IgG1 또는 Cab42-IgG1이 알려진 항체 INab308(항-C5a 항체, InflaRx), MEDI-7814(항-C5a 항체, MedImmune) 또는 BNJ383(항-C5a 항체, Alexion)과 경쟁적으로 인간 재조합 C5a에 결합하는지 여부를 측정한다. 간략하면, 1차 항체를 ELISA 플레이트에 코팅하고, 4°C에서 밤새 블락킹한다. TBST로 세척한 후, 상이한 농도의 1차 항체 또는 기타 항-C5a 항체를 코팅된 웰에 첨가한 다음, 즉시 50μL의 비오티닐화된 C5a(1μg/mL)를 웰에 첨가하고, 37°C에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, PBST 완충액으로 세척하고, SA-HRP(겨자무과산화효소-표지된 스트렙타비딘)와 37℃에서 1시간 동안 반응시키는 것을 통해 결합된 비오티닐화 C5a를 검출하고, PBST로 세척한 다음, 각 웰에 TMB를 첨가하여 발색시키고, 각 웰에 2M H2SO4 50μL를 첨가하여 반응을 종료시키고, 410nm에서의 흡광도를 판독한다. 만약 기타 항체가 코팅된 1차 항체와 경쟁할 경우, C5a의 결합 신호는 감소된다.
도 9a에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 INAb308은 Cab42-IgG1과 경쟁하지 않지만, MEDI-7814 또는 BNJ383과 경쟁한다. 도 9b에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 Cab42-IgG1은 INAb308, MEDI-7814 또는 BNJ383과 경쟁하지 않는다. 도 9c에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 BNJ383은 Cab42-IgG1과 경쟁하지 않지만, INAb308 또는 MEDI-7814와 부분적으로 경쟁한다. 도 9d에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 MEDI-7814는 Cab42-IgG1과 경쟁하지 않지만, INAb308 또는 BNJ383과 경쟁한다. 도 9e에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 INAb308은 Cab35-IgG1 또는 Cab42-IgG1과 경쟁하지 않는다. 도 9f에 나타낸 바와 같이, 항-C5a 항체 Cab35-IgG1 또는 Cab42-IgG1은 INab308과 경쟁하지 않지만, 서로 경쟁한다.
실시예 8: 항- C5a 항체의 에피토프 해석
알라닌 주사(Alanine scanning): C5 결정 구조(PDB ID: 5I5K), C5a 단량체 NMR 구조(PDB ID: 1KJS) 및 C5a 및 MEDI-7814(항-C5a 항체, MedImmune) 복합체(PDB ID: 4uu9)의 결정 구조를 기반으로, C5a의 C5aR 결합 부위 근처의 아미노산 잔기를 검정해낸다. Discovery11 Studio 소프트웨어를 사용하여, 예상한 Cab42-IgG1의 결합 부위를 확정하고, 결합 부위 및 그 근처의 아미노산 잔기를 선택하여 알라닌 주사를 수행한다. 이들 부위 중 일부는 또한 크기가 아미노산 A와 상이한 아미노산 R 또는 F로 돌연변이되어, 해당 부위가 항체 결합에 영향을 미치는지 여부를 더 잘 확정할 수 있다. 상기 선택된 돌이변이를 가진 C5a 단백질을 발현한다.
ELISA에 의해 Cab42-IgG1과 각 C5a 돌연변이 단백질의 결합 친화력을 분석한다. 도 10a-도 10d는 항체 Cab42-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선을 나타탠다. 상기 알라닌 주사 기술을 사용하여 야생형 C5a 아미노산 서열의 각각의 위치에서 돌연변이된 변이체를 획득한다. 도 10a-도 10d에 나타낸 바와 같이, D31번 위치의 돌연변이는 Cab42-IgG1의 결합 친화력에 현저하게 영향을 미치기에, C5a 결합에 영향을 미치는 가장 중요한 돌연변이로 확정되었다. 또한, E32번 위치 및 R40번 위치의 돌연변이도 Cab42-IgG1의 결합 친화력에 영향을 미쳤다.
ELISA에 의해 Cab44-IgG1과 각 C5a 돌연변이 단백질의 결합 친화력을 분석한다. 도 10e-도 10h는 항체 Cab44-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선을 나타탠다. 상기 알라닌 주사 기술을 사용하여 야생형 C5a 아미노산 서열의 각각의 위치에서 돌연변이된 변이체를 획득한다. 도 10e-도 10h에 나타낸 바와 같이, D31번 위치의 돌연변이는 Cab44-IgG1의 결합 친화력에 현저하게 영향을 미친다.
ELISA에 의해 Cab45-IgG1과 각 C5a 돌연변이 단백질의 결합 친화력을 분석한다. 도 10i-도 10l은 항체 Cab45-IgG1과 C5a 돌연변이체의 ELISA 결합 곡선을 나타탠다. 상기 알라닌 주사 기술을 사용하여 야생형 C5a 아미노산 서열의 각각의 위치에서 돌연변이된 변이체를 획득한다. 도 10i-도 10l에 나타낸 바와 같이, D31번 위치의 돌연변이는 Cab45-IgG1의 결합 친화력에 현저하게 영향을 미치기에, C5a 결합에 영향을 미치는 가장 중요한 돌연변이로 확정되었다. 또한 E32번 위치의 돌연변이도 Cab45-IgG1의 결합 친화력에 영향을 미쳤다.
선형 에피토프의 확정: 이러한 결과를 기반으로 하여, 우리는 Cab42-IgG1 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅에 의해 에피토프가 선형 에피토프인지 구조적인 에피토프인지 확정한다. 웨스턴 블롯팅은 단백질에 대해 특이성 검정 및 특징화를 수행할 수 있는 중요한 실험 기술이다. 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)으로 분리한 단백질을 전기영동에 의해 폴리비닐리덴 플루오라이드(polyvinylidene fluoride, PVDF) 막으로 옮기고, 막을 특이적 항체와 인큐베이션한 다음, 목표 단백질을 나타내기 위해 디벨로먼트(Development)한다. 웨스턴 블롯팅의 방법은 Taylor SC et al. Biomed Res Int. 2014;2014:361590에 기재된 바와 같이, 당업자의 능력 범위 내에 있다. 우리는 가열에 의해 재조합 C5a의 구조가 파괴된 후, 이러한 항-C5a 항체가 결합한 것이 인간 C5a의 선형 에피토프일 경우, 웨스턴 블롯팅에 의해 그의 결합을 직접 검출할 수 있을 것이라고 예상한다. MEDI-7814 및 마우스 항-His 항체를 대조군으로 한다. Colley CS, et al. MAbs. 2018 Jan;10(1):104-117에서는 인간 C5a 잔기 Y13-C21(인터 a-헬리컬 루프 1(inter a-helical loop 1)/헬릭스 2(helix 2)), D24 및 G25(헬릭스 2(helix 2)), C27(인터 a-헬리컬 루프 2(inter a-helical loop 2)), R37(헬릭스 3(helix 3)), R40-C47(인터 a-헬리컬 루프 3(inter a-helical loop 3)) 및 F51(헬릭스 4(helix 4))을 포함하는 MEDI-7814의 에피토프를 기재하였다. 도 11a-11c에 나타낸 바와 같이, MEDI-7814는 Avih-C5a에 약하게 결합하고, Avih-C5a와 Avih-C5a-D31A 변이체 사이의 결합 강도와 차이가 없는 것으로 보아, 이는 MEDI-7814의 결합 에피토프가 구조적 에피토프임을 시사하고, 해당 에피토프는 D31과 관련이 없으며, 문헌 보고와 일치하다. 반면, 항체 Cab42-IgG1은 Avih-C5a에 강하게 결합하여, Cab42-IgG1의 결합 에피토프가 선형 에피토프임을 시사하지만, 해당 항체는 돌연변이 Avih-C5a-D31A와의 결합이 매우 약하기에, D31 부위가 핵심 결합 부위임을 시사한다.
또한, 우리는 D31 부위가 핵심 결합 부위인지 확정하기 위해, 웨스턴 블롯팅을 사용하여 항체 Cab44-IgG1 및 Cab45-IgG1을 검출하였다. Avih-C5a 및 Avih-C5a-D31A 돌연변이체의 SDS-PAGE를 대조군으로 한다. 도 11d-도 11f에 나타낸 바와 같이, Cab44-IgG1 및 Cab45-IgG1의 에피토프는 선형 에피토프이고, D31 부위는 또한 항체 Cab44-IgG1 및 Cab45-IgG1의 C5a에 대한 결합에 현저하게 영향을 미친다.
항-C5a 항체의 선형 펩티드 맵 분석:
폴리펩티드 위치 서열
C5a-p1 인간 C5a의 24-46번 위치의 아미노산(서열번호 141) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR
C5a-p2 인간 C5a의 30-46번 위치의 아미노산(서열번호 141) NDETCEQRAARISLGPR
C5a-p4 인간 C5a의 31-40번 위치의 아미노산(서열번호 141) DETCEQRAAR
C5a-p1, C5a-p2 및 C5a-p4의 아미노산 서열은 표 9에 나타낸 바와 같고, 폴리펩티드-Fc 융합 단백질: C5a-p1-Fc, C5a-p2-Fc 또는 C5a-p4-Fc, 및 C5a 또는 Fc 폴리펩티드의 서열을 합성하고, 진핵 발현 벡터 pTT5에 서브-클로닝한다. 제조업체의 조작 설명서에 따라, 293 세포에서 C5a-p1-Fc, C5a-p2-Fc 또는 C5a-p4-Fc 단백질을 발현시키고 그것을 정제한다.
ELISA 실험에 의해 각 폴리펩티드-Fc 융합 단백질에 대한 항-C5a 항체 Cab42 또는 INab308의 결합을 검출한다. 간략하면, 인간 C5a의 상이한 영역에 대응하는 선형 펩티드 C5a-p1-Fc, C5a-p2-Fc 또는 C5a-p4-Fc를 코팅 완충액에 희석하고, 마이크로타이터 플레이트에 첨가한다. 비오티닐화된 항-C5a 항체 Cab42 또는 INab308을 각 웰에 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 다음, PBST 완충액으로 세척하고, SA-HRP(겨자무과산화효소-표지된 스트렙타비딘)와 37℃에서 1시간 동안 반응시키는 것을 통해 비오티닐화 C5a에 결합한 항체를 검출하고, PBST로 세척한 다음, 각 웰에 TMB를 첨가하여 발색시키고, 각 웰에 3M NaOH 50μL를 첨가하여 반응을 종료시키고, 410nm에서의 흡광도를 판독한다.
이들 ELISA 실험을 기반으로 한 결과는 도 12a-12b에 나타내었고, 도 12a에 나타낸 바와 같이, Cab42 항체는 서열번호 141 중 24-46번 위치, 30-46번 위치 또는 31-40번 위치 아미노산을 포함하는 폴리펩티드와 특이적으로 결합한다. 도 12b에 나타낸 바와 같이, INab308 항체는 3가지 폴리펩티드-Fc 융합체: C5a-pl-Fc, C5a-p2-Fc 또는 C5a-p4-Fc 중 어느 하나와도 결합하지 않는다.
웨스턴 블롯팅과 알라닌 주사 및 항-C5a 항체의 선형 펩티드 맵 분석의 결과에 따르면, 항체 Cab42-IgG1, Cab44-IgG1 및 Cab45-IgG1의 예시적인 에피토프는 선형 에피토프로 검정되었다. D31 부위는 핵심 결합 부위이며, E32 및 R40 부위도 인간 C5a에 대한 상기 항체의 결합에 영향을 미칠 수 있다. 본문에 기재된 단리된 항-C5a 항체는 인간 C5a(서열번호 141) 중의 31번 위치 D 잔기에 특이적으로 결합하거나, 31번 위치 D 잔기 및 32번 위치 E 잔기에 결합하거나, 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기에 결합한다. 본문에 기재된 단리된 항-C5a 항체는 인간 C5a 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 상기 에피토프는 (i)DGACVNNDETCEQRAARISLGPR; (ii) NDETCEQRAARISLGPR; 또는 (iii) DETCEQRAAR 서열 내에 있고, 이러한 서열로 구성되거나, 이러한 서열을 포함한다. 본문에 기재된 단리된 항-C5a 항체는 (i) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR, (ii) NDETCEQRAARISLGPR, 또는 (iii) DETCEQRAAR의 서열로 구성되거나 이를 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. C5a에서 아미노산 잔기의 넘버링은 서열번호 141에 따라 결정된다.
실시예 9: 코로나바이러스에 의해 유발된 ARDS를 치료하는 항- C5a 항체의 생체내 효과
ARDS 동물질병 모델을 구축하여, 생체 내에서의 Cab42 항체의 치료 효과를 평가한다.
ARDS 동물질병 모델 및 정상 대조군: C5a 인간화 마이스(Shanghai Model Organisms Center, Inc.에서 구입) 총 46마리를 사용하여, 실온 20℃-26℃, 상대습도 40-70%, 12시간 명암교체 조건에서 사육한다. 실험 4일, 3일, 2일 전에, 그 중 40마리의 마이스에 7.5Х108 PFU/100μL/마리/횟수/일로 SARS-CoV-2 N 단백질을 휴대 및 발현하는 아데노바이러스를 주사하였으며(Ting Gao 등, Highly pathogenic coronavirus N protein aggravates lung injury by MASP-2-mediated complement over-activation medRxiv 2020.03.29.20041962를 참조할 수 있음; https://doi.org/10.1101/2020.03.29.20041962), 나머지 6마리의 마이스는 염화나트륨 용액을 주사한다(정상 대조군으로 함). 0일(실험 당일)에, 마이스에게 다음과 같이 그룹별로 상응하는 사용량의 항체 또는 염화나트륨 용액을 주사한다.
투여 용량 및 동물 그룹화. 마이스를 다음과 같이 몇개의 그룹으로 나누고 상응하는 시약으로 처리한다: (1) 정상 대조군(n=6), 0.9% 염화나트륨 용액을 100μL 주사한다. (2) 질병 모델 대조군(n=10), 9% 염화나트륨 용액을 100μL 주사한다. (3) 저용량 실험군(n=10), 1mg/kg 투여 용량으로 항체를 주사한다. (4) 중간 용량 실험군(n=10), 3mg/kg 투여 용량으로 항체를 주사한다. (5) 고용량 실험군(n=10), 10mg/kg 투여 용량으로 항체를 주사한다. 상기와 같이 투여 30분 후, 질병 모델 대조군과 각 실험군에 있어서, LPS-K235(Sigma-Aldrich)를 농도 1mg/mL, 100μL/마리로 마이스에 주사한다. 정상 대조군은 염화나트륨 용액을 주사한다. 본 연구 중의 모든 시약은 꼬리 정맥 주사의 방식으로 투여된다. 본 연구는 Beijing Institute of Biotechnology 윤리위원회의 승인하에 수행되었으며, 관련 규제 기준에 부합된다.
생존율 검출: 투여 후 12h, 24h, 36h, 48h, 60h 및 72h에 각 그룹의 마이스의 생존 상황을 각각 관찰 및 분석한다.
전혈 백혈구 카운팅: 항체 투여 72시간 후, 마이스를 마취시키고 안와 혈액 채취를 수행한다. ADVIA®2120 시리즈 혈액 분석기를 사용하여 백혈구(WBC), 호중구(Neut), 림프구(Lymph) 및 단핵구(Mono)를 포함하는 전혈 백혈구의 카운팅 및 분류를 수행한다.
생존율 결과: 투여 후의 72시간 내에, 정상 대조군과 상이한 항-C5a 항체(Cab35, Cab42, Cab44 또는 Cab45)를 투여한 고용량 실험군의 동물은 모두 생존하였다. 모델 대조군에서 전체 사망률은 30%(3/10)이다. 상이한 항-C5a 항체(Cab35, Cab42, Cab44 또는 Cab45)를 투여한 저용량 실험군에서, 전체 사망률은 10-20%(1-2/10)이고; 상이한 항-C5a 항체(Cab35, Cab42, Cab44 또는 Cab45)를 투여한 중간 용량 실험군에서, 전체 사망률은 10%(1/10)이다. 이러한 결과는, 본 출원의 항-C5a 항체는 코로나바이러스로 인한 마이스의 사망을 효과적으로 감소시키거나 예방하고, 마이스의 생존율을 향상시킬 수 있음을 시사한다.
전혈 백혈구 카운팅 결과: 정상 대조군과 비교하여, 모델 대조군에서 마이스의 WBC, Lymph, Mono의 수준은 감소하였으며, 양자 사이의 차이는 통계적으로 유의미하다(P<0.05). 모델 대조군과 비교하여, 상이한 항-C5a 항체(Cab35, Cab42, Cab44 또는 Cab45)를 투여한 3개의 사용량 실험군은 모두 WBC 및 Lymph의 수량의 증가를 나타내고, 모델 대조군과 중간 용량 및 고용량 실험군 사이의 차이는 모두 통계적으로 유의미하다(P<0.05). 상기 결과는, 본 출원의 항-C5a 항체는 ARDS 질병 모델 마이스의 체내 면역 세포의 균형 상태를 회복하는데 도움이 된다는 것을 시사한다.
염증성 사이토카인 분석 결과: 정상 대조군과 비교하여, 모델 대조군 동물에서 GM-CSF, IL-1β, IL-6, TNF-α, MCP-1의 수준은 모두 현저하게 상승하였고, 양자 사이의 차이는 통계적으로 유의미하다(P<0.05). 모델 대조군과 비교하여, 상이한 항-C5a 항체(Cab35, Cab42, Cab44 또는 Cab45)를 투여한 3개의 사용량 실험군에서의 GM-CSF, IL-1β, IL-6, TNF-α, MCP-1, C5a의 수준은 모두 사용량-의존적으로 감소하였다. 또한, 대부분의 이러한 사이토카인의 수준은 사용량 실험군과 모델군에서의 차이가 통계적으로 유의미하다(P<0.05). 상기 결과는, 본 출원의 항-C5a 항체는 생체 내에서 신종 코로나바이러스에 의해 유발되는 사이토카인 폭풍 및 염증 반응을 현저하게 감소시킬 수 있음을 시사한다.
<110> STAIDSON (BEIJING) BIOPHARMACEUTICALS CO. , LTD. <120> ANTIBODIES SPECIFICALLY RECOGNIZING C5A AND USES THEREOF <130> IP-2022-0022 <150> PCT/CN 2021/098081 <151> 2020-06-24 <160> 144 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 1 Lys Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 2 Asp Tyr Tyr Met Gln 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 3 Asp Tyr Tyr Leu Gln 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 4 Asp Phe Tyr Met Gln 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 5 Asp Tyr Tyr Ile Gln 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 6 Asn Tyr Tyr Ile Gln 1 5 <210> 7 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 7 Leu Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Gly Thr Ala Glu Tyr Val Ala Ser 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Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 143 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 143 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 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Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 144 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial <400> 144 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105

Claims (25)

  1. 서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31번 위치 D 잔기, 32번 위치 E 잔기 및 40번 위치 R 잔기 중 적어도 하나의 아미노산 잔기에 특이적으로 결합하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  2. 제 1 항에 있어서,
    서열번호 141에 나타낸 바와 같은 인간 C5a에서의 31-40번 위치 잔기에 특이적으로 결합하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 인간 C5a 상의 에피토프에 특이적으로 결합하고, 상기 에피토프는,
    (i) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR;
    (ii) NDETCEQRAARISLGPR; 또는
    (iii) DETCEQRAAR;와 같은 서열 내에 있고, 이러한 서열로 구성되거나, 이러한 서열을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  4. (i) DGACVNNDETCEQRAARISLGPR;
    (ii) NDETCEQRAARISLGPR; 또는
    (iii) DETCEQRAAR;와 같은 서열로 구성되거나 이런 서열들을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편이 인간 C5a와 결합하는 Kd 값이 0.1pM 내지 1nM인 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 2배 또는 2배 이상의 몰의 과량의 미절단 천연 인간 C5 단백질이 존재하는 경우, 자유 인간 C5 단백질에 결합하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  7. 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고,
    상기 VH는, 서열 X1YYX2Q(서열번호 67)를 포함하는 하나의 중쇄 상보성 결정 영역(HC-CDR)1-여기서, X1은 D 또는 N이고, X2는 M 또는 I임;
    서열 LIRX1KX2X3GX4TX5X6X7AASX8KG(서열번호 68)를 포함하는 하나의 HC-CDR2-여기서, X1은 K 또는 N이고, X2는 A 또는 V이며, X3은 V, N 또는 I이고, X4는 G, E, F, H, I, Q 또는 R이며, X5는 T, V 또는 A이고, X6은 Q, E, T 또는 S이며, X7은 Y 또는 F이고, X8은 V 또는 L임; 및
    서열 RX1GPPGLX2(서열번호 69)를 포함하는 하나의 HC-CDR3-여기서, X1은 A, L 또는 V이고, X2는 T, S 또는 A임; 을 포함하며,
    상기 VL은, 서열 RSSQX1LLX2X3X4X5YX6YX7D(서열번호 70)를 포함하는 하나의 LC-CDR1-여기서, X1은 S, R 또는 N이고, X2는 A, H 또는 D이며, X3은 S 또는 T이고, X4는 D 또는 N이며, X5는 G, A 또는 R이고, X6은 N, I, T, E 또는 A이며, X7은 I, M, L 또는 V임;
    서열 GX1SX2RAS(서열번호 71)를 포함하는 하나의 LC-CDR2-여기서, X1은 G 또는 A이고, X2는 N 또는 K임; 및
    서열 X1QHX2X3LPX4T(서열번호 72)를 포함하는 하나의 LC-CDR3-여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 R 또는 K이며, X3은 A 또는 V이고, X4는 P 또는 L임; 을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  8. VH 및 VL을 포함하고,
    상기 VH는 서열번호 1 내지 서열번호 6 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1; 서열번호 7 내지 서열번호 29 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2; 및 서열번호 30 내지 서열번호 38 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하고;
    상기 VL은 서열번호 39 내지 서열번호 56 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1; 서열번호 57 내지 서열번호 59 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2; 및 서열번호 60 내지 서열번호 66 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3; 을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  9. VH 및 VL을 포함하고, 상기 VH는 서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VH 중의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL 중의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 서열번호 1에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 7에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 30에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 39에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (ii)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 8에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 31에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 40에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (iii)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (iv)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 41에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 64에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (v)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 9에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 43에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 63에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (vi)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 11에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 35에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 44에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 60에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (vii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (viii)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (ix)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 10에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (x)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 42에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (xi)서열번호 2에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 23에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 56에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 57에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (xii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (xiii)서열번호 6에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 18에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 36에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL;
    (xiv)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 52에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 58에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 61에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; 또는
    (xv)서열번호 5에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR1, 서열번호 21에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR2, 및 서열번호 32에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 HC-CDR3을 포함하는 VH; 서열번호 53에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR1, 서열번호 59에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR2, 및 서열번호 65에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 하나의 LC-CDR3을 포함하는 VL; 를 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 73 내지 서열번호 111 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VH, 및 서열번호 112 내지 서열번호 140 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함하는 VL을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  12. 제 11 항에 있어서,
    (i) 서열번호 73의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 73의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 112의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (ii) 서열번호 75의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 75의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 114의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (iii) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 100의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 135의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (iv) 서열번호 79의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 79의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 118의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (v) 서열번호 85의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 85의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 117의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (vi) 서열번호 88의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 88의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 126의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (vii) 서열번호 93의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 93의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 116의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (viii) 서열번호 97의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 97의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 116의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (ix) 서열번호 77의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 77의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 132의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 132의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (x) 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 102의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 135의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (xi) 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 109의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 138의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (xii) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 110의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 139의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (xiii) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 110의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호140의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL;
    (xiv) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 111의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 139의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL; 또는
    (xv) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하거나 서열번호 140의 아미노산 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 갖는 변이체 서열을 포함하는 VL; 을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편과 경쟁적으로 C5a에 결합하거나, 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 Fc 단편을 포함하는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  15. 제 14 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 전장의 IgG 항체인 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 전장의 IgG1 또는 IgG4 항체인 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 키메라 항체 또는 항원 결합 단편, 완전 인간 항체 또는 항원 결합 단편, 혹은 인간화 항체 또는 항원 결합 단편인 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  18. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일 사슬 항체(scFv), Fv 단편, dAb, Fd, 나노바디, 디아바디와 선형 항체로 구성된 군에서 선택되는 단리된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자.
  20. 제 19 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  21. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편, 제 19 항에 따른 핵산 분자 또는 제 20 항에 따른 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  22. a) 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편을 효과적으로 발현시킬 수 있는 조건 하에서 제 21 항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계; 또한
    b) 숙주 세포로부터 발현된 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편을 얻는 단계; 를 포함하는 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편을 제조하는 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 항-C5a 항체 또는 항원 결합 단편, 제 19 항에 따른 핵산 분자, 제 20 항에 따른 벡터 또는 제 21 항에 따른 단리된 숙주 세포, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  24. 치료가 필요한 개체에게 유효량의 제 23 항에 따른 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료가 필요한 개체의 질병 또는 병증을 치료하는 방법.
  25. 제 24 항에 있어서,
    상기 질병 또는 병증은 염증 반응 증후군(SIRS), 패혈증, 중증 패혈증, 패혈성 쇼크, 허혈/재관류 관련 손상, 급성 폐 손상, 폐렴, 이식 환자의 급성 및 만성 이식 거부 반응, 이식편 대 숙주 반응, 사구체 질병, 사구체 신염, 고형 신부전, 류마티스 관절염, 자가면역 질병, 벡테류병(Bechterew's disease), 루푸스형 질병, 염증성 장 질환, 크론병, 종양 성장 및 고형 장기 암으로 구성된 군에서 선택되는 치료가 필요한 개체의 질병 또는 병증을 치료하는 방법.
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