KR20230011916A

KR20230011916A - 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화

Info

Publication number: KR20230011916A
Application number: KR1020227034698A
Authority: KR
Inventors: 존 디. 캠벨; 로버트 엘. 커프맨; 랜달 엔. 히어; 로버트 에스. 얀센; 데이비드 노백; 마틴 골케; 모린 어반; 수닐 가이롤라; 우메쉬 샬리그램; 마니쉬 가우탐; 해리쉬 라오
Original assignee: 다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션; 세럼 인스티튜트 오브 인디아 프라이비트 리미티드
Priority date: 2020-03-09
Filing date: 2021-03-09
Publication date: 2023-01-25
Also published as: AU2021236055A1; CA3174987A1; MX2022011155A; JP2023517330A; EP4117719A1; WO2021183533A1; IL296286A; EP4117719A4; CN115697389A; US20230072809A1; BR112022017973A2; CL2022002456A1

Abstract

본 개시내용은 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 면역원성 조성물은 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 필요로 하는 개체에서 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화에 적합하다.

Description

파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 3월 9일자로 출원된 인도 가출원 번호 202011010025 및 2020년 12월 19일자로 출원된 인도 가출원 번호 202011055399의 우선권 및 이익을 주장하며, 이들 각각의 개시내용은 그 전체가 참조로 포함된다.

ASCII 텍스트 파일로서의 서열 목록의 제출

ASCII 텍스트 파일에 대한 하기 제출의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF) (파일 명칭: 377882006842SEQLIST.TXT, 기록된 날짜: 2021년 3월 8일, 크기: 2 KB).

분야

백일해는 고도로 감염성인 질환이고, 심지어 높은 백신접종률이 지속된 국가에서도 중요한 전세계적 공중 보건 문제로 남아있다. 확립된 유아 면역화 프로그램에도 불구하고, 백일해는 주로 소아기 이후의 면역 저하 및 청소년 및 성인에서 취약한 유아로의 질환 전파로 인해 계속 순환한다. 디프테리아, 파상풍 및 전세포 백일해 (DTwP) 혼합 백신의 전세포 백일해 성분에 대한 안전성 우려로 인해 1990년대에 디프테리아, 파상풍 및 무세포성 백일해 (DTaP) 혼합 백신으로의 전환이 촉진되었다. 그러나, 소아 DTaP 백신 요법을 완료한 개체에서 백일해에 대한 면역 저하로 인해 2000년대 중반 이후 백일해의 발생률이 증가하였다 (Liang et al., MMWR Recomm Rep, 67(2):1-43, 2018). 유사하게, 파상풍 및 디프테리아 항독소 수준은 소아 DTaP 백신 요법을 완료한 개체에서 시간이 지남에 따라 저하된다.

면역화 관행에 관한 권고 위원회 (ACIP)는 현재 10세 초과의 개체에게 파상풍 톡소이드, 감소된 디프테리아 톡소이드, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 백신의 단일 부스터 용량, 및 Tdap 백신 또는 파상풍 중 하나 및 디프테리아 (Td) 백신의 부스터 용량을 10년 간격으로 또는 상처 관리에 필요한 만큼 투여할 것을 권장한다 (Liang et al., 상기 문헌, 2018). 임상 시험은 Tdap의 2회의 용량이 안전하고 면역원성이지만, 항-백일해 항체 역가는 급속하게 감소하여, 일반적으로 2 내지 3년 내에 백일해 감염에 대한 보호의 상실을 유발함을 보여주었다.

따라서, 현행 백신 요법에서 전세포에서 무세포성 백일해 항원으로의 전환의 결과로서 관찰된 면역 저하를 해결하는 것을 돕기 위해 백일해 항원에 대한 보다 높은 역가 및 보다 긴 생존 항체 반응을 제공하기 위해 개선된 부스터 백신이 필요하다. 만족스러운 안전성 프로파일을 갖고 파상풍 및 디프테리아 톡소이드 면역원성과 관련하여 현재의 백신보다 열등하지 않은 개선된 Tdap 부스터 백신이 필요하다.

요약

도 1a-c는 Tdap 항원에 의한 재자극 후 시험관내에서 비장 세포에 의한 시토카인 분비의 수준을 도시한다. IFN-γ (도 1a), IL-5 (도 1b), 및 IL-17 (도 1c)의 수준이 제시된다.
도 2a-b는 Tdap 백신에 CpG 1018을 포함시키는 것이 백신접종된 마우스의 비내 챌린지 3일 후에 폐 및 기관에서 비. 페르투시스(B. pertussis) 부담의 실질적인 감소를 유발함을 제시한다.
도 3a-c는 Tdap 백신에 CpG 1018을 포함시키면 비내 챌린지 전에 혈청 항체 역가가 증가함을 제시한다. 도 3a는 비. 페르투시스-반응성 역가를 제시하고, 도 3b는 PT 반응성 역가를 제시하고, 도 3c는 FHA-반응성 역가를 나타낸다.

일반적인 기술 및 정의

본 개시내용의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내에 있는 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 이용할 것이다.

본원 및 첨부된 청구항들에서 사용되는 단수 형태들("a", "an", 및 "the")은 달리 표시되지 않는 한 복수의 언급을 포함한다. 예를 들어, "부형제"는 하나 이상의 부형제를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 "포함하는"이라는 문구는 개방형이며, 이는 그러한 실시양태가 추가 요소를 포함할 수 있음을 나타낸다. 대조적으로, 어구 "~로 이루어진"은 폐쇄형이며, 이는 이러한 실시양태가 (미량의 불순물을 제외하고는) 추가의 원소를 포함하지 않음을 나타낸다. 어구 "~로 본질적으로 이루어진"은 부분적으로 폐쇄형이며, 이는 이러한 실시양태가 이러한 실시양태의 기본 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 요소를 추가로 포함할 수 있음을 나타낸다.

값과 관련하여 본원에 사용된 용어 "약"은 그 값의 90% 내지 110%를 포괄한다 (예를 들어, 약 3000 μg의 CpG 1018은 2700 μg 내지 3300 μg의 CpG 1018을 지칭한다).

본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "올리고뉴클레오티드"는 단일-가닥 DNA (ssDNA), 이중-가닥 DNA (dsDNA), 단일-가닥 RNA (ssRNA) 및 이중-가닥 RNA (dsRNA), 변형된 올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오시드 또는 그의 조합을 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 선형 또는 원형으로 구성될 수 있거나, 또는 올리고뉴클레오티드는 선형 및 원형 세그먼트 둘 다를 함유할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 포스포디에스테르 연결을 통해 연결된 뉴클레오시드의 중합체이지만, 대안적 연결, 예컨대 포스포로티오에이트 에스테르가 또한 올리고뉴클레오티드에 사용될 수 있다. 뉴클레오시드는 당에 결합된 퓨린 (아데닌 (A) 또는 구아닌 (G) 또는 그의 유도체) 또는 피리미딘 (티민 (T), 시토신 (C) 또는 우라실 (U), 또는 그의 유도체) 염기로 이루어진다. DNA 내의 4개의 뉴클레오시드 단위 (또는 염기)는 데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 티미딘, 및 데옥시시티딘으로 불린다. 뉴클레오티드는 뉴클레오시드의 포스페이트 에스테르이다.

본원에 사용된 용어 "CpG", "CpG 모티프" 및 "시토신-포스페이트-구아노신"은 올리고뉴클레오티드에 존재할 때, 시험관내, 생체내 및/또는 생체외에서 측정가능한 면역 반응에 기여하는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 디뉴클레오티드를 지칭한다. 측정가능한 면역 반응의 예는 항원-특이적 항체 생산, 시토카인의 분비, 림프구 집단, 예컨대 NK 세포, CD4+ T 림프구, CD8+ T 림프구, B 림프구의 활성화 또는 확장 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, CpG 올리고뉴클레오티드는 우선적으로 Th1-유형 반응을 활성화시킨다.

물질의 "유효량" 또는 "충분한 양"은 임상 결과를 비롯한 유익하거나 목적하는 결과를 달성하기에 충분한 양이며, 따라서 "유효량"은 적용되는 문맥에 따라 달라진다. 면역원성 조성물의 투여와 관련하여, 유효량은 면역 반응을 자극하기에 충분한 항원 및 TLR9 효능제를 함유한다 (바람직하게는 항원에 대한 항체의 혈청보호 수준).

용어 "개체" 및 "대상체"는 포유동물을 지칭한다. "포유동물"은 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 원숭이), 농장 동물, 스포츠 동물, 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트) 및 애완동물 (예를 들어, 개 및 고양이)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

면역원성 조성물과 관련하여 본원에 사용된 용어 "용량"은 임의의 한 시점에 대상체에 의해 취해진 (그에 의해 투여되거나 또는 그에 의해 제공된) 면역원성 조성물의 측정된 부분을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "단리된" 및 "정제된"은 자연적으로 연관된 적어도 1종의 성분으로부터 제거된 (예를 들어, 그의 원래 환경으로부터 제거된) 물질을 지칭한다. 재조합 단백질과 관련하여 사용될 때, 용어 "단리된"은 단백질을 생산한 숙주 세포의 배양 배지로부터 제거된 단백질을 지칭한다.

반응 또는 파라미터의 "자극"은 관심 파라미터를 제외하고는 동일한 조건과 비교할 때, 또는 대안적으로 또 다른 조건과 비교할 때 (예를 들어, TLR 효능제의 부재와 비교하여 TLR 효능제의 존재 하에 TLR-신호전달의 증가) 상기 반응 또는 파라미터를 도출 및/또는 증진시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 면역 반응의 "자극"은 반응의 증가를 의미한다. 측정된 파라미터에 따라, 증가는 5배 내지 500배 이상, 또는 5, 10, 50, 또는 100배 내지 500, 1,000, 5,000, 또는 10,000배일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "면역화"는 항원에 대한 포유동물 대상체의 반응을 증가시키고, 따라서 감염에 저항하거나 또는 그를 극복하는 그의 능력을 개선시키는 과정을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "백신접종"은 포유동물 대상체의 신체 내로의 백신의 도입을 지칭한다.

"아주반트"는 항원을 포함하는 조성물에 첨가될 때, 노출 시 포유동물 수용자에서 항원에 대한 면역 반응을 비특이적으로 증진시키거나 강화시키는 물질을 지칭한다.

상세한 설명

I. 면역원성 조성물 및 키트

본 개시내용은 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는, 파상풍, 디프테리아, 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 위한 면역원성 조성물에 관한 것이며, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (또한 CpG 또는 시토신-포스페이트-구아노신으로 지칭됨) 모티프를 포함하는 8 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함하고, Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함한다.

A. 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제

톨-유사 수용체 (TLR)는 수지상 세포 및 다른 선천성 면역 세포 상에서 발현되고, 침입 병원체의 존재에 대한 반응을 자극하기 위한 가장 중요한 수용체 중 하나이다. 인간은 구조가 유사하지만 바이러스 또는 박테리아의 상이한 부분을 인식하는 다수의 유형의 TLR을 갖는다. 특정 TLR을 활성화시킴으로써, 적응 반응을 향상시키기 위해 이용될 수 있는 특정 유형의 선천 면역 반응을 자극하고 제어하는 것이 가능하다.

TLR9 (CD289)는 합성 CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG-ODN)를 사용하여 모방될 수 있는, 미생물 DNA에서 발견되는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 인식한다. CpG-ODN은 항체 생산을 증진시키고 T 헬퍼 1 (Th1) 세포 반응을 자극하는 것으로 공지되어 있다 (Coffman et al., Immunity, 33:492-503, 2010). 구조 및 생물학적 기능에 기초하여, CpG-ODN은 3가지 일반적 클래스: CpG-A, CpG-B, 및 CpG-C로 나누어졌다 (Campbell, Methods Mol Biol, 1494:15-27, 2017). B 세포 활성화의 정도는 클래스들 사이에서 달라지며, CpG-A ODN은 약하고, CpG-C ODN은 양호하고, CpG-B ODN은 강한 B 세포 활성화제이다. 본 개시내용의 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제는 바람직하게는 우수한 B 세포 활성화제 (CpG-C ODN) 또는 보다 바람직하게는 강한 (CpG-B ODN) B 세포 활성화제이다.

최적 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제는 종종 하기 화학식에 따른 회문식 서열을 함유한다: 5'-퓨린-퓨린-CG-피리미딘-피리미딘-3', 또는 5'-퓨린-퓨린-CG-피리미딘-피리미딘-CG-3' (미국 특허 번호 6,589,940). TLR9 효능작용은 또한 특정 비-회문식 CpG-풍부화된 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드에서 관찰되지만, 뉴클레오티드 서열에서의 변화에 의해 영향을 받을 수 있다. 추가로, TLR9 효능작용은 CpG 디뉴클레오티드 내의 시토신의 메틸화에 의해 폐지된다. 따라서, 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-AACGTTCG-3'을 포함하는 8 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 뉴클레오티드 초과의 길이이고, 올리고뉴클레오티드는 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25 또는 24개 뉴클레오티드 미만의 길이이다. 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호(SEQ ID NO):3)을 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 뉴클레오티드 초과의 길이이고, 올리고뉴클레오티드는 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 또는 24개 뉴클레오티드 미만의 길이이다.

다이나박스 테크놀로지스 코포레이션(Dynavax Technologies Corporation) (캘리포니아주 에머리빌)의 연구자들은 종에 걸쳐 공동-투여된 항원에 대한 면역 반응을 실질적으로 증진시킬 수 있는 특정 서열을 함유하는 22-mer 포스포로티오에이트 연결된 올리고데옥시뉴클레오티드, CpG 1018을 확인하였다 (Campbell, Methods Mol Biol, 1494:15-27, 2017). CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 제시됨)은 시험관내 및 생체내 면역자극성 활성에 대해 광범위한 패널의 올리고뉴클레오티드를 스크리닝한 후에 선택되었다. CpG 1018은 마우스, 토끼, 개, 개코원숭이, 시노몰구스 원숭이 및 인간에서 활성인 CpG-B ODN이다. 따라서, 일부 바람직한 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열식별번호: 1의 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드이다.

예시적인 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제, CpG 1018은 CpG-ODN이지만, 본 개시내용은 완전 DNA 분자로 제한되지 않는다. 즉, 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 CpG(들) 및 회문식 서열이 데옥시리보핵산이고 이들 영역 외부의 하나 이상의 핵산이 리보핵산인 DNA/RNA 키메라 분자이다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 선형이다. 다른 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 원형이거나 또는 헤어핀 루프(들)를 포함한다. CpG 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.

일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 변형을 함유할 수 있다. 변형은 3'OH 또는 5'OH 기의 변형, 뉴클레오티드 염기의 변형, 당 성분의 변형, 및 포스페이트 기의 변형을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 변형된 염기(들)가 왓슨-크릭 염기 쌍형성을 통해 그의 천연 상보체에 대해 동일한 특이성을 유지하는 한 (예를 들어, 회문식 부분이 여전히 자기-상보적임), 변형된 염기는 CpG 올리고뉴클레오티드의 회문식 서열에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 비-정규 염기를 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오시드는 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신, 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-TCG1AACG₁TTCG₁-3' (서열식별번호: 2)를 포함하는 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5'를 포함하고, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5')이다.

CpG 올리고뉴클레오티드는 포스페이트 기의 변형을 함유할 수 있다. 예를 들어, 포스포디에스테르 연결 이외에, 포스페이트 변형은 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트 (가교 또는 비-가교), 포스포트리에스테르 및 포스포로디티오에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않고, 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 다른 비-포스페이트 연결들도 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 백본만을 포함한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 백본만을 포함한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스페이트 백본 내의 포스페이트 연결의 조합, 예컨대 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 연결의 조합을 포함한다. 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 백본을 갖는 것보다 더 면역원성일 수 있고, 숙주 내로의 주사 후에 분해에 대해 더 저항성인 것으로 보인다 (Braun et al., J Immunol, 141:2084-2089, 1988; 및 Latimer et al., Mol Immunol, 32:1057-1064, 1995). 본 개시내용의 CpG 올리고뉴클레오티드는 적어도 1, 2 또는 3개의 뉴클레오티드간 포스포로티오에이트 에스테르 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 CpG 올리고뉴클레오티드 분자가 적어도 1종의 부형제를 포함하는 제약 조성물 중에 존재하는 경우, 포스포로티오에이트 에스테르 연결의 두 입체이성질체가 복수의 CpG 올리고뉴클레오티드 분자 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드의 모든 뉴클레오티드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이거나, 또는 상기 또 다른 방식으로, CpG 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 백본을 갖는다.

전형적으로 0.5 ml 용량인, 면역원성 조성물의 단위 용량은 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 250, 500, 750, 1000, 또는 1250 μg 초과의 CpG 올리고뉴클레오티드, 및 약 6000, 5000, 4000, 3000, 또는 2000 μg 미만의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 375, 750, 1500, 3000 또는 6000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 750 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 1500 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 3000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

본원에 기재된 CpG 올리고뉴클레오티드는 달리 나타내지 않는 한 그의 제약상 허용되는 염 형태이다. 예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬 및 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염, 아연 염, 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민), 예컨대 N-Me-D-글루카민, N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 콜린, 트로메타민, 디시클로헥실아민, t-부틸 아민과의 염, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등과의 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 암모늄, 나트륨, 리튬 또는 칼륨 염 형태이다. 한 바람직한 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 나트륨 염 형태이다.

B. 파상풍, 디프테리아 및 백일해 항원

파상풍은 박테리아 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani)에 의해 생산된 신경독소에 의해 야기되는 신경근육 기능장애를 특징으로 하는, 종종 치명적인 급성 질환이다. 파상풍은 토양, 먼지 및 퇴비에서 흔히 발견되는 박테리아의 포자에 대한 노출을 통해 감염된다. 파상풍 신경독소에 대한 면역은 자연적으로는 거의 획득되지 않지만, 파상풍 톡소이드 (TT)-함유 백신의 투여에 의해 질환으로부터의 보호가 부여될 수 있다 (Liang et al., MMWR Recomm Rep, 67(2):1-43, 2018). 중화 검정으로 측정 시 적어도 0.01 IU/ml의 혈청 파상풍 항독소 수준은 보호적인 것으로 간주되고, 효소 결합 면역흡착 검정 (ELISA)으로 측정 시 적어도 0.1 IU/ml의 혈청 파상풍 항독소 수준도 보호적인 것으로 간주된다. 본 개시내용의 면역원성 조성물은 씨. 테타니(C. tetani)에 의해 생산된 파상풍 독소의 화학적 해독에 의해 생산된 TT를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물의 단위 용량 (예를 들어, 약 0.5 ml)은 약 5-10 한계 응집 단위 (Lf) TT, 바람직하게는 약 5.0 Lf TT를 포함한다.

디프테리아는 박테리아 코리네박테리움 디프테리아에(Corynebacterium diphtheriae)의 독소생성 균주에 의해 유발되는 급성 질환이다. 디프테리아는 주로 씨. 디프테리아에-감염된 개체로부터의 에어로졸화된 박테리아와의 직접 접촉에 의해 또는 그의 흡입으로부터 감염된다. 이 질환은 인후통 및 열을 특징으로 하며, 심각한 경우에 기도 폐쇄를 유발할 수 있다. 또한, 디프테리아 독소의 전신 확산은 심장 및 신경학적 합병증을 유발할 수 있다. 디프테리아 감염은 보호 면역을 부여하지 않을 수 있다. 그러나, 디프테리아 톡소이드 (DT) 함유 백신으로 질환으로부터의 보호가 부여될 수 있다 (Liang et al., MMWR Recomm Rep, 67(2):1-43, 2018). 중화 검정으로 측정 시 적어도 0.01 IU/ml의 혈청 디프테리아 항독소 수준은 약간의 보호를 제공할 수 있는 반면, ELISA로 측정 시 적어도 0.1 IU/ml의 혈청 디프테리아 항독소 수준은 보호적인 것으로 간주되고, 적어도 1.0 IU/ml의 디프테리아 항독소 수준은 장기 보호와 연관된다. 본 개시내용의 면역원성 조성물은 씨. 디프테리아에에 의해 생산된 디프테리아 독소의 화학적 해독에 의해 생산된 DT를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단위 용량 (예를 들어, 약 0.5 ml)의 면역원성 조성물은 2.0-2.5 Lf DT, 바람직하게는 약 2.5 Lf DT의 감소된 양의 DT를 포함한다.

구미 기침으로도 알려진 백일해는 박테리아 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis)에 의해 유발되는 급성 호흡기 질환이다. 백일해는 비. 페르투시스(B. pertussis)-감염된 개체로부터 에어로졸화된 박테리아의 흡입을 통해 확산되는 고도로 전염성인 질환이다. 질병 심각도는 감염된 대상체의 연령과 반비례 관계이며, 유아 및 어린 유아 (예를 들어, 출생 - 2세)는 입원 및 사망으로 이어지는 심각한 증상 위험이 가장 크다. 소아과 백신 요법의 도입은 백일해의 발생률을 감소시켰고, 항백일해 항체의 존재와 질환으로부터의 보호 사이의 상관관계가 백신 효능 연구에서 관찰되었다 (Liang et al., MMWR Recomm Rep, 67(2):1-43, 2018). 그러나, 백일해에 대한 보호의 혈청학적 또는 실험실적 상관관계는 여전히 정의되지 않았다. 따라서, 새로운 백신의 효능은 그의 안전성 프로파일 및 유사하게 제조된 항원을 사용하는 기존의 연방 의약품국 (FDA)-승인된 백신에 대한 비-열등한 면역원성에 기초한다. 본 개시내용의 면역원성 조성물은 여러 비. 페르투시스 항원, 즉 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함한다. 면역원성 조성물은 1종 이상의 추가의 백일해 항원, 예컨대 백일해 핌브리아에 (FIM) 유형 2, 백일해 FIM 유형 3, 및 백일해 아데닐레이트 시클라제 (AC) 중 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 단위 용량 (예를 들어, 약 0.5 ml)의 면역원성 조성물은 감소된 양, 예컨대 약 2.5-8.0 μg PT, 약 5.0-8.0 μg FHA, 및 약 2.5-3.0 μg PRN, 바람직하게는 약 8 μg PT, 약 8 μg FHA, 및 약 2.5 μg PRN의 1종 이상의 백일해 항원을 포함한다.

C. 추가의 성분

본 개시내용의 면역원성 조성물은 1종 이상의 추가의 성분, 예컨대 1종 이상의 부형제, 또 다른 아주반트, 및/또는 추가의 항원을 포함할 수 있다.

1. 부형제

본 개시내용의 제약상 허용되는 부형제는, 예를 들어, 용매, 벌킹제, 완충제, 장성 조정제, 및 보존제를 포함한다 (Pramanick et al., Pharma Times, 45:65-77, 2013). 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 용매, 벌킹제, 완충제 및 장성 조정제 중 1종 이상으로서 기능하는 부형제를 포함할 수 있다 (예를 들어, 염수 중 염화나트륨은 수성 비히클 및 장성 조정제 둘 다로서 기능할 수 있다).

일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 용매로서 수성 비히클을 포함한다. 적합한 비히클은 예를 들어 멸균수, 염수 용액, 포스페이트 완충 염수, 및 링거액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 등장성이다.

면역원성 조성물은 완충제를 포함할 수 있다. 완충제는 처리, 저장 및 임의로 재구성 동안 활성제의 분해를 억제하기 위해 pH를 제어한다. 적합한 완충제는 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 포스페이트 또는 술페이트를 포함하는 염을 포함한다. 다른 적합한 완충제는 예를 들어 아미노산, 예컨대 아르기닌, 글리신, 히스티딘 및 리신을 포함한다. 완충제는 염산 또는 수산화나트륨을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 조성물의 pH를 6 내지 9의 범위 내로 유지한다. 일부 실시양태에서, pH는 (하한) 6, 7 또는 8 초과이다. 일부 실시양태에서, pH는 (상한) 9, 8, 또는 7 미만이다. 즉, pH는 하한이 상한 미만인 약 6 내지 9의 범위이다.

면역원성 조성물은 장성 조정제를 포함할 수 있다. 적합한 장성 조정제는 예를 들어 덱스트로스, 글리세롤, 염화나트륨, 글리세린 및 만니톨을 포함한다.

면역원성 조성물은 벌킹제를 포함할 수 있다. 벌킹제는 제약 조성물이 투여 전에 동결건조되어야 하는 경우에 특히 유용하다. 일부 실시양태에서, 벌킹제는 동결 또는 분무 건조 동안 및/또는 저장 동안 활성제의 안정화 및 분해 방지를 돕는 보호제이다. 적합한 벌킹제는 슈크로스, 락토스, 트레할로스, 만니톨, 소르비탈, 글루코스 및 라피노스와 같은 당 (단당류, 이당류 및 다당류)이다.

면역원성 조성물은 보존제를 포함할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어 항산화제 및 항균제를 포함한다. 그러나, 바람직한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 멸균 조건 하에 제조되고, 1회 사용 용기 내에 존재하므로, 보존제의 포함을 필요로 하지 않는다.

2. 추가의 아주반트

아주반트는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 명반 (알루미늄 염), 수중유 에멀젼, 유중수 에멀젼, 리포솜, 및 마이크로입자, 예컨대 폴리(락티드-코-글리콜리드) 마이크로입자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (Shah et al., Methods Mol Biol, 1494:1-14, 2017). 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 알루미늄 히드록시드 및 인산알루미늄 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 알루미늄 히드록시드으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 단위 용량 (예를 들어, 약 0.5 ml)의 면역원성 조성물은 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al³⁺, 바람직하게는 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al³⁺를 포함한다.

다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 추가의 아주반트를 추가로 포함한다. 추가의 적합한 아주반트는 수-중-스쿠알렌 에멀젼 (예를 들어, MF59 또는 AS03), TLR3 효능제 (예를 들어, 폴리-IC 또는 폴리-ICLC), TLR4 효능제 (예를 들어, AS01 또는 AS02에서와 같은 박테리아 리포폴리사카라이드 유도체, 예컨대 모노포스포릴 지질 A (MPL), 및/또는 사포닌, 예컨대 Quil A 또는 QS-21), TLR5 효능제 (박테리아 플라젤린), 및 TLR7 및/또는 TLR8 효능제 (이미다졸린 유도체, 예컨대 이미퀴모드, 및 레시퀴모드)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (Coffman et al., Immunity, 33:492-503, 2010). 일부 실시양태에서, 추가의 아주반트는 MPL 및 명반 (예를 들어, AS04)을 포함한다. 비-인간 동물에서의 수의학적 용도 및 항체 생산을 위해, 프로인트 아주반트의 분열촉진 성분 (완전 및 불완전 둘 다)이 사용될 수 있다.

3. 추가의 항원

본 개시내용의 면역원성 조성물은 적어도 1종의 추가의 항원, 예컨대 또 다른 인간 질환-유발 병원체로부터의 항원을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 병원체는 폴리오바이러스, B형 간염 바이러스 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae) 유형 B (HiB) 중 하나 이상으로부터 선택되지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 항원은 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하며, 이는 유형 1 바이러스, 유형 2 바이러스, 및 유형 3 바이러스 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 항원은 B형 간염 바이러스 표면 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 항원은 폐렴구균성 항원 및/또는 수막구균성 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 항원은 헤모필루스 b 피막 폴리사카라이드 (폴리리보실-리비톨-포스페이트)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 헤모필루스 b 피막 폴리사카라이드는 파상풍 톡소이드 또는 수막구균 단백질에 접합된다.

D. 키트

본 개시내용은 또한 i) 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물; 및 ii) 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물의 투여에 대한 지침서 세트를 포함하는 키트를 제공한다. 추가로, 본 개시내용은 i) 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원 및 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 포함하는 제1 조성물; ii) TLR9 효능제, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제2 조성물; iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 면역원성 조성물을 제조하는 것에 대한 지침서; 및 임의로 iv) 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물의 투여에 대한 추가의 지침서 세트를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-AACGTTCG-3'을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함한다. 일부 바람직한 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)의 서열을 포함한다.

키트는 적절하게 패키징된 면역원성 조성물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역원성 조성물이 동결-건조된 분말인 경우, 탄성 마개를 통해 유체 (예를 들어, 멸균수, 염수 등)를 주사함으로써 분말이 용이하게 재현탁될 수 있도록 탄성 마개를 갖는 바이알이 통상적으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 키트는 투여용 장치 (예를 들어, 주사기 및 바늘)를 포함한다. 면역원성 조성물의 사용에 관한 지침서는 일반적으로 의도된 사용 방법에 대한 투여량, 스케줄 및 투여 경로에 관한 정보를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 활성 부스터 면역화를 위한 것이다.

II. 사용 방법

본 개시내용은 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는 면역원성 조성물을 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (또한 CpG 또는 시토신-포스페이트-구아노신으로도 지칭됨) 모티프를 포함하는 8 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, 인간 대상체는 3세 이상이고, Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함하고, Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물에 존재하는 것인, 파상풍, 디프테리아, 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함한다.

본 개시내용은 또한 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는 면역원성 조성물을 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, 인간 대상체는 3세 이상이고, Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)를 포함하고, Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인, 파상풍, 디프테리아, 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 위한 방법에 관한 것이다. Tdap 항원은 단리된 또는 재조합 항원이고, 전체 파상풍, 디프테리아 또는 백일해 박테리아를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 방법은 백일해에 노출된 백신접종된 대상체의 비강 및/또는 폐 조직의 백일해 콜로니화를 감소시키는데 효과적이다.

A. 대상체

본 개시내용의 면역원성 조성물의 의도된 수용자는 적어도 3세인 인간 대상체이고, 디프테리아, 파상풍, 및 무세포성 백일해 (DTaP) 항원, 또는 디프테리아, 파상풍, 및 전세포 백일해 (DTwP) 항원을 포함하는 소아과 백신의 적어도 2 또는 3회 용량을 제공받은 적이 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 4-6세이고, 그의 2세 동안 소아 DTaP 백신의 용량을 제공받은 적이 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 적어도 7-10세 또는 그 이상이고, 불완전하거나 알려지지 않은 소아과 백신 이력을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 11-18세이다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 19세 이상, 19-64세, 또는 65세 이상이다. 일부 바람직한 실시양태에서, 인간 대상체는 적어도 10세이고, 이전 3, 4 또는 5년 내에 소아과 백신 또는 부스터 백신의 용량을 제공받지 않았으며, 여기서 소아과 백신은 디프테리아, 파상풍, 및 무세포성 백일해 (DTaP) 항원; 또는 디프테리아, 파상풍, 및 전세포 백일해 (DTwP) 항원을 포함하고; 부스터 백신은 파상풍 및 디프테리아 톡소이드 (Td) 항원; 또는 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원을 포함한다.

본 개시내용의 면역원성 조성물은 모체 면역화를 통해 신생아에서 백일해를 예방하는데 적합할 것으로 예상된다. 특히, 임신의 처음 삼분기에 임신한 여성에게 면역원성 조성물을 투여하면 모체 항체를 그녀의 유아에게 수동 전달할 것으로 예상된다. 이러한 방식으로, 어린 유아들은 소아과 백신 요법의 개시 전에 백일해로부터 어느 정도의 보호를 받을 수 있다. 또한, 면역원성 조성물을 건강관리 작업자에게 투여하는 것이, 그들 자신의 이익 및 그들의 관리 하에 있는 개체에 대한 백일해의 전파 위험을 감소시키기 위해 유리할 수 있다.

B. 용량 및 투여 방식

본 개시내용의 면역원성 조성물은 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 위해 의도된다. 면역원성 조성물은 약 0.5 mL의 부피로 단일 용량 (예를 들어, 단위 용량)으로서 근육내 주사에 의해 투여되어야 한다. 일부 실시양태에서, 근육내 주사는 상완의 삼각근 내로 이루어진다. 면역원성 조성물은 정맥내로, 피내로, 또는 피하로 투여되지 않아야 한다.

C. 면역 반응의 자극을 위한 방법

본 개시내용은 포유동물 대상체 (예를 들어, 인간 대상체)에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하도록 본원에 기재된 바와 같이 면역원성 조성물을 포유동물 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 파상풍, 디프테리아 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 근육내 주사에 의해, 임의로 약 0.5 mL의 부피 (예를 들어, 단위 용량)로 투여되어야 한다. 일부 실시양태에서, 근육내 주사는 이를 필요로 하는 인간 대상체의 상완의 삼각근 내로 이루어진다.

면역 반응을 "자극하는" 것은 (예를 들어, 초기 백신접종 요법의 결과로서) 신생 면역 반응을 도출하거나 또는 (예를 들어, 부스터 백신접종 요법의 결과로서) 기존 면역 반응을 증진시키는 것으로부터 발생할 수 있는 면역 반응을 증가시키는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 면역 반응을 자극하는 것은 시토카인 생산을 자극하는 것; B 림프구 증식을 자극하는 것; 항체 생산을 자극하는 것; 인터페론 경로-연관 유전자 발현을 자극하는 것; 화학유인물질-연관 유전자 발현을 자극하는 것; 및 형질세포양 수지상 세포 성숙을 자극하는 것으로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 바람직한 실시양태에서, 면역 반응을 자극하는 것은 대상체에서 항원-특이적 항체 반응을 증가시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 항원-특이적 항체 반응을 증가시키는 것은 항원-특이적 항체의 농도를 투여 후 1개월에 투여 전 수준보다 적어도 2, 3 또는 4배 더 높게 및/또는 투여 후 6개월에 투여 전 수준보다 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배 더 높게 증가시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 항원-특이적 항체 반응을 증가시키는 것은 항원-특이적 항체의 농도를 투여 후 1개월에 역치 수준 (예를 들어, IU/ml 단위의 ELISA에 의한 검출 수준)보다 적어도 2, 3 또는 4배 초과로, 및/또는 투여 후 6개월에 역치 수준보다 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배 초과로 증가시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 항원-특이적 항체 반응을 증가시키는 것은 항원-특이적 항체의 농도를 최소 혈청보호 수준 초과로 증가시키는 것을 포함한다 (예를 들어, 파상풍에 대해, 중화 검정에 의해 측정 시 적어도 0.01 IU/ml 또는 ELISA에 의해 측정 시 적어도 0.1 IU/ml).

열거된 실시양태

1. 파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 위한 방법이며, 인간 대상체에게 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서

TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고,

인간 대상체는 3세 이상이고,

Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함하고,

Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인,

방법.

2. 실시양태 1에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 방법.

3. 실시양태 1에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3'(서열식별번호: 1)을 포함하는 것인 방법.

4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드가 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신, 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.

5. 실시양태 4에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-3' (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, 임의로 여기서 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5'을 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 방법.

6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하고, 임의로 여기서 모든 뉴클레오티드 연결이 포스포로티오에이트 연결인 방법.

7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.

8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.

9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 한 실시양태에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.

10. 실시양태 1 내지 8 중 어느 한 실시양태에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 방법.

11. 실시양태 9 또는 실시양태 10에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al³⁺를 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al³⁺를 포함하는 것인 방법.

12. 실시양태 1 내지 11 중 어느 한 실시양태에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.0-2.5 Lf DT, 약 2.5-8.0 μg PT, 약 5.0-8.0 μg FHA, 및 약 2.5-3.0 μg PRN을 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.5 Lf DT, 약 8 μg PT, 약 8 μg FHA, 및 약 2.5 μg PRN을 포함하는 것인 방법.

13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 조성물이 적어도 1종의 추가의 항원을 추가로 포함하는 것인 방법.

14. 실시양태 13에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 백일해 핌브리아에 (FIM) 항원 및 백일해 아데닐레이트 시클라제 (AC) 항원 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 것인 방법.

15. 실시양태 13 또는 실시양태 14에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하며, 임의로 여기서 불활성화된 폴리오바이러스는 유형 1 바이러스, 유형 2 바이러스 및 유형 3 바이러스 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.

16. 실시양태 1 내지 15 중 어느 한 실시양태에 있어서, 인간 대상체가 적어도 10세 이상인 방법.

17. 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, 인간 대상체가 소아 백신 또는 부스터 백신을 이전 3년 내에 제공받지 않았으며, 여기서

소아 백신은 디프테리아, 파상풍, 및 무세포성 백일해 (DTaP) 항원; 또는 디프테리아, 파상풍, 및 전세포 백일해 (DTwP) 항원을 포함하고;

부스터 백신은 파상풍 및 디프테리아 (Td) 항원; 또는 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원을 포함하는 것인 방법.

18. 실시양태 17에 있어서, 인간 대상체가 10-18세인 방법.

19. 실시양태 17에 있어서, 인간 대상체가 19세 이상이고, 임의로 여기서 인간 대상체가 19-64세, 또는 65세 이상인 방법.

20. 실시양태 1 내지 19 중 어느 한 실시양태에 있어서, Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드가 투여 후 1개월까지 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하고, 여기서 면역 반응은

적어도 0.4 국제 단위/ml (IU/ml)의 항-TT 항체 및 항-DT 항체의 농도; 및

국제 단위/ml (IU/ml)로 투여 전 수준 또는 정량 한계 수준보다 적어도 2배 더 높은 항-PT 항체, 항-FHA 항체 및 항-PRN 항체의 농도

를 포함하는 것인 방법.

21. 실시양태 20에 있어서, 면역 반응이

(i) 투여 후 1개월까지 적어도 1.0 IU/ml의 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다; 및/또는

(ii) 투여 후 1개월까지 적어도 4배 더 높은 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도, 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상 (여기서 항체 농도는 국제 단위/ml (IU/ml)로 투여 전 수준 또는 정량 한계 수준에 대한 것임)

을 포함하는 것인 방법.

22. 실시양태 20 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 면역 반응이

투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배의 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다, 임의로 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다가 투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 2, 3 또는 4배인 것

을 포함하는 지속 파상풍 및/또는 디프테리아 면역 반응을 포함하는 것인 방법.

23. 실시양태 20 내지 22 중 어느 한 실시양태에 있어서, 면역 반응이

투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배의 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상, 임의로 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상이 투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 2, 3 또는 4배인 것

을 포함하는 지속 백일해 면역 반응을 포함하는 것인 방법.

24. 실시양태 1 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 조성물이 만족스러운 안전성 프로파일을 갖는 것인 방법.

25. 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하며, 여기서

Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인,

파상풍, 디프테리아, 및 백일해에 대한 활성 부스터 면역화를 위한 면역원성 조성물.

26. 실시양태 25에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 조성물.

27. 실시양태 25에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 것인 조성물.

28. 실시양태 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드는 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.

29. 실시양태 28에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-3' (서열식별번호: 2)를 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, 임의로 여기서 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5'를 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 조성물.

30. 실시양태 25 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하며, 임의로 여기서 모든 뉴클레오티드 연결은 포스포로티오에이트 연결인 조성물.

31. 실시양태 25 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 조성물.

32. 실시양태 25 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 조성물.

33. 실시양태 25 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하는 것인 조성물.

34. 실시양태 25 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 조성물.

35. 실시양태 25 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al³⁺를 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al³⁺를 포함하는 것인 조성물.

36. 실시양태 25 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.0-2.5 Lf DT, 약 2.5-8.0 μg PT, 약 5.0-8.0 μg FHA, 및 약 2.5-3.0 μg PRN을 포함하고, 임의로 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.5 Lf DT, 약 8 μg PT, 약 8 μg FHA, 및 약 2.5 μg PRN을 포함하는 것인 조성물.

37. 실시양태 25 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 조성물이 적어도 1종의 추가의 항원을 추가로 포함하는 것인 조성물.

38. 실시양태 37에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 백일해 핌브리아에 (FIM) 항원 및 백일해 아데닐레이트 시클라제 (AC) 항원 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 것인 조성물.

39. 실시양태 37 또는 실시양태 38에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하며, 임의로 불활성화된 폴리오바이러스는 유형 1 바이러스, 유형 2 바이러스, 및 유형 3 바이러스 중 1종 이상을 포함하는 것인 조성물.

40. 실시양태 25 내지 39 중 어느 한 실시양태의 조성물, 및 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 조성물의 투여에 대한 지침서를 포함하는 키트.

41. i) 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 포함하는 제1 조성물;

ii) TLR9 효능제를 포함하는 제2 조성물; 및

iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 면역원성 조성물을 제조하기 위한 지침서 (임의로 여기서 면역원성 조성물은 실시양태 25-39 중 어느 하나의 조성물임)

를 포함하는 키트.

42. 실시양태 41에 있어서,

iv) 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 면역원성 조성물을 투여하는 것에 대한 추가의 지침서 세트

를 포함하는 키트.

43. 실시양태 40 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 면역원성 조성물의 근육내 주사를 위한 주사기 및 바늘을 추가로 포함하는 키트.

44. 인간 대상체에게 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 실시양태 25 내지 39 중 어느 하나의 조성물의 용도.

45. 실시양태 25 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 인간 대상체에게 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 비. 페르투시스에 의한 감염으로부터 상기 대상체를 보호하기 위한 조성물의 용도.

46. 실시양태 25 내지 39 중 어느 한 실시양태의 조성물의, 인간 대상체에게 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체가 구미 기침에 걸리는 것을 예방하기 위한 용도.

47. 실시양태 44 내지 46 중 어느 한 실시양태에 있어서, 조성물이 근육내 주사에 의해 투여되는 것인 용도.

실시예

약어: CpG (비메틸화 시티딘-포스포-구아노신); DT (디프테리아 톡소이드); DTaP (디프테리아, 파상풍, 및 무세포성 백일해); DTwP (디프테리아, 파상풍, 및 전세포 백일해); FHA (필라멘트형 헤마글루티닌); GMC (기하 평균 농도); HD (인간 용량); Lf (응집 유닛); mcg (마이크로그램); MVC (모의-백신접종됨, 챌린지됨); NALT (비강-연관 림프성 조직); NVNC (비-백신접종, 비-챌린지); Tdap (파상풍, 감소된 디프테리아, 및 무세포성 백일해); IU/mL (국제 단위/밀리리터); OOR (범위 밖); PRN (페르탁틴); PT (불활성화된 백일해 독소); TLR9 (톨-유사 수용체 9); TT (파상풍 톡소이드); 및 wP (전세포 백일해).

항원: 파상풍, 감소된 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원은 4가지 상이한 박테리아 균주: 클로스트리디움 테타니 하버드(Clostridium tetani Harvard) 49025 (파상풍 독소), 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria) PW8 (디프테리아 독소), 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) 165 (백일해 독소), 및 보르데텔라 페르투시스 토하마(Bordetella pertussis Tohama) I (FHA 및 PRN)의 발효 동안 독립적으로 생산된다. 발효기 수확물을 수집하고, 후속적으로 항원을 단리하고, 불활성화시키고, 멸균-여과하여 개별 항원을 생산한다. 명반-함유 조사용 백신의 생산을 위해, 각각의 항원은 Tdap-명반 생성물로 블렌딩되기 전에 Al(OH)₃ 상에 추가로 개별적으로 흡착된다.

파상풍 톡소이드 (TT)는 씨. 테타니 균주 하버드 49205에 의해 생산된 파상풍 독소의 포르말린 해독에 의해 생산된다. 디프테리아 톡소이드 (DT)는 씨. 디프테리아에 PW8 (CN2000)에 의해 생산된 디프테리아 독소의 포르말린 해독에 의해 생산된다. 백일해 톡소이드 (PT)는 비. 페르투시스 165에 의해 생산된 백일해 독소의 포르말린 해독에 의해 생산된다. 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA)은 비. 페르투시스 토하마 I에 의해 생산된 FHA의 포르말린 처리에 의해 생산된다. 페르탁틴 (PRN)은 PRN-함유 비. 페르투시스 토하마 I 세포 덩어리의 열-불활성화에 의해 생산된다.

실시예 1

마우스에서의 CpG 아주반트 처리된 파상풍 감소 디프테리아 무세포성 백일해 (Tdap) 백신의 면역원성

본 실시예는 동종 프라임/부스트 요법에서 다양한 Tdap 백신의 2회 용량의 면역원성을 평가하기 위해 하를란(Harlan) 마우스에서 수행된 전임상 연구의 설명을 제공한다.

백신. Tdap 단독 (아주반트 없음), Tdap-명반, Tdap-CpG, 및 Tdap-명반-CpG를 포함하는 4개의 백신을 각각 2개의 상이한 항원 희석액 (희석되지 않음 및 1:4 희석액)으로 시험하였다. Tdap 단독 백신은 Tdap 항원을 함유하였지만, 명반 또는 CpG를 함유하지 않았다. Tdap-명반 백신은 39 mcg Al(OH)₃에 흡착된 Tdap 항원 (본원에서 "명반"으로 지칭되는 알루미늄 히드록시드)을 함유하였다. Tdap-CpG 백신은 10 mcg의 CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 제시됨)과 혼합된 Tdap 항원을 함유하였다. Tdap-명반-CpG 백신은 39 mcg Al(OH)₃에 흡착된 Tdap 항원을 함유하였고, 이어서 10 mcg CpG 1018과 혼합하였다. 각각의 50 μl 백신 용량은 하기 표 1-1에 제시된 바와 같이 5개의 상이한 항원을 함유하였다. 1:4 희석군에 대해, 단지 항원만을 희석하였고, CpG 1018 및 명반 (포함되는 경우)을 각각 10 mcg 및 39 mcg로 투여하였다.

표 1-1. 1회 용량의 전임상 Tdap 백신 중 Tdap 항원의 양

마우스에게 제0일에 50 μl의 Tdap 백신을 피하 주사하고, 제28일에 부스팅하였다. ELISA에 의한 항체 수준의 측정을 위해 제21일 및 제42일에 혈액을 채취하였다. 각각의 군에는 6-10마리의 마우스가 있었다. 각각의 군에 대해, 각각 2마리의 마우스로부터의 혈청을 사용하여 최대 5개의 혈청 서브-풀을 제조하였다. 반응을 측정하고, 4개까지의 서브-풀/군에 대해 평균내었고, 제5 서브-풀을 백업 샘플로서 유지하였다. 각각의 군으로부터의 서브-풀링된 혈청의 총 평균 항-PT, FHA, PRN, DT 및 TT IgG 수준을 하기 표 1-2에 나타내었다. 비-희석된 항원을 투여한 마우스 군에 대해 개별 마우스 혈청 반응을 또한 측정하였다. IgG 수준은 참조 혈청으로 구축된 검정 표준 곡선을 사용하여 IU/mL로 제시된다.

표 1-2. 풀링된 혈청에서의 백일해 항원, DT, 및 TT에 대한 총 IgG

OOR = 범위 밖 (정량 한계 미만)

희석되지 않은 Tdap 단독 군에서, 6마리의 마우스 중 어느 것도 임의의 Tdap 항원에 대해 제21일에 측정가능한 항체 반응을 갖지 않았다. 희석되지 않은 Tdap-명반 군에서, 10마리 마우스 중 5마리는 모든 3개의 백일해 항원 (PT, FHA 및 PRN)에 대해 제21일에 측정가능한 항체 반응을 가졌고, 10마리 마우스 중 3마리는 TT에 대해 제21일에 측정가능한 항체 반응을 가졌다. 대조적으로, 희석되지 않은 Tdap-명반-CpG 군에서, 10마리의 마우스 중 9마리는 모든 3종의 백일해 항원 (PT, FHA 및 PRN) 및 TT에 대해 제21일에 측정가능한 항체 반응을 가졌다. 또한, 제21일에 (즉, 프라이밍 주사 후에) 3개의 백일해 항원 각각에 대한 희석되지 않은 Tdap-명반-CpG 군의 항체 반응은 희석되지 않은 Tdap-명반 군 (즉, 1018 CpG가 결여된 Tdap 백신)보다 약 8-10배 더 높았고, TT 항체 반응에 대해 약 11배 더 높았다.

희석되지 않은 Tdap 단독 군에서, 6마리의 마우스 중 하나는 PT, FHA, PRN 및 TT에 대해 제42일에 측정가능한 항체 반응을 가졌고, 이 이상치 때문에, 이 군에 대해 제42일에 측정가능한 항체 반응이 관찰되었다 (표 1-2). 희석되지 않은 Tdap-명반 군에서, 8마리 마우스 중 6마리가 제42일에 PT, FHA, PRN 및 TT에 대해 측정가능한 항체 반응을 가졌다. 놀랍게도, 희석되지 않은 Tdap-명반-CpG 군에서, 8마리의 마우스 중 8마리는 제42일에 PT, FHA, PRN 및 TT에 대해 측정가능한 항체 반응을 가졌다. 또한, 3개의 백일해 항원 각각에 대한 희석되지 않은 Tdap-명반-CpG 군에서의 항체 반응은 희석되지 않은 Tdap-명반 군 (즉, 1018 CpG가 결여된 Tdap 백신)보다 제42일에 (즉, 부스터 주사 후에) 9배 초과로 더 높았다. Tdap-명반 및 Tdap-명반-CpG 군 둘 다에 대해, PT, FHA, PRN 및 TT에 대해 제2 주입의 명백한 부스터 효과가 관찰되었다 (표 1-2).

DT에 대한 항체 반응을 종점 역가 검정에서 희석되지 않은 항원 군 내의 개별 마우스의 혈청에서 측정하였는데, 이는 반응이 참조 혈청과 비교하여 ELISA 검정에서 검출되지 않았기 때문이다 (표 1-2). Tdap 단독 군 또는 Tdap-명반 군 내의 마우스는 제21일에 DT에 대해 측정가능한 항체 반응을 갖지 않았다. 제42일에, Tdap 단독 군 내의 10마리 마우스 중 1마리 및 Tdap-명반 군 내의 10마리 마우스 중 1마리는 DT에 대해 측정가능한 항체 반응을 가졌다. 대조적으로, 제21일에 (즉, 프라이밍 주사 후에) Tdap-명반-CpG 군 내의 10마리 마우스 중 5마리 및 제42일에 (즉, 부스터 주사 후에) Tdap-명반-CpG 군 내의 8마리 마우스 중 8마리는 DT에 대해 측정가능한 항체 반응을 가졌다.

요약하면, Tdap-명반-CpG 백신은 비교 백신보다 1회 및 2회 용량 후에 Tdap 항원에 대해 더 높은 항체 반응을 유도하였다.

실시예 2

동종 또는 이종 Tdap 프라임/부스트 요법을 받은 마우스에서의 백일해 항원 반응에서의 Th1/Th2/Th17 균형

본 실시예는 이종 프라임/부스트 요법에서 다양한 Tdap 백신의 3회 용량의 면역원성을 평가하기 위해 하를란 마우스에서 수행된 전임상 연구의 설명을 제공한다.

백신. 모든 명반 제제는 9.8 또는 39 mcg Al(OH)₃ (본원에서 "명반"으로 지칭되는 알루미늄 히드록시드)에 흡착된 Tdap 항원을 함유하였다. 각각 1개의 프라임 및 2개의 부스트를 포함하는 4개의 백신 요법을 시험하였다: Tdap-명반 (프라임 및 2개의 부스트); Tdap-명반 프라임 + Tdap-CpG (2개 부스트); Tdap 명반 프라임 + Tdap-명반-CpG (2개 부스트); 및 Tdap-명반-CpG (프라임 및 2개 부스트). Tdap-명반 백신은 39 mcg Al(OH)₃에 흡착된 Tdap 항원을 함유하였다. Tdap-CpG 백신은 10 mcg의 CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 제시됨)과 혼합된 Tdap 항원을 함유하였다. Tdap-명반-CpG 백신은 39 mcg Al(OH)₃에 흡착된 Tdap 항원을 함유하였고, 이어서 10 mcg의 CpG 1018과 혼합하였다. 각각의 50 μl 백신 용량은 하기 표 2-1에 제시된 바와 같이 5개의 상이한 항원을 함유하였다. 프라이밍 군에 대해, 항원 및 명반을 후속 부스터 용량의 1:4로 투여하였다. CpG (포함되는 경우)를 프라이밍 및 부스팅 용량 둘 다에서 10 mcg으로 투여하였다.

표 2-1. 1회 용량의 전임상 Tdap 백신 중 Tdap 항원의 양

마우스에게 제0일에 50 μl의 Tdap 백신을 피하 주사하고, 하기 표 2-2에 제시된 바와 같이 제28일 및 제56일에 부스팅하였다. ELISA에 의한 항체 수준의 측정을 위해 제21일, 제42일 및 제68일에 혈액을 채취하였다. 각각의 군에는 10마리의 마우스가 있었다. 혈청을 3개 (마우스 1-3, 4-6 및 7-8)의 풀에서 분석하였고, 마우스 9-10으로부터의 샘플을 백업으로서 유지하였다. 공지된 양의 IgG (IU/mL)를 사용하여 구축된 표준 곡선을 참조하여 ELISA에 의해 총 IgG, 뿐만 아니라 IgG1 및 IgG2a 항원-특이적 항체 반응을 측정하였다. 이 표준 곡선은 또한 IgG1 및 IgG2a 이소형을 정량하기 위한 대용물로서 역할을 하였는데, 이는 이들에 대한 특정 표준이 이용가능하지 않았기 때문이다. 제68일에 (즉, 프라이밍 및 2회 부스터 용량 후) 샘플링된 각각의 군으로부터의 총 평균 항-PT, FHA, 및 PRN IgG 결과, 뿐만 아니라 IgG1 및 IgG2a 수준을 하기 표 2-3에 제시한다. Tdap 항원 재자극에 대한 시험관내 회상 반응을 희생 시 (제68일) 배양된 비장 세포의 상청액 (96시간)에서 루미넥스(Luminex) 다중-분석물 플랫폼을 사용하여 IFN-γ, IL-5, 및 IL-17 (모두 pg/mL)에 대한 표준 곡선을 참조하여 측정하였다.

표 2-2. 이종 및 동종 프라임 부스트 요법

^aN=10/군.

^b프라이밍 군의 경우, Tdap-명반 백신을 후속 부스터 용량의 1:4의 용량으로 투여하였다. 희석은 보다 적은 항원 및 명반이 프라이밍 용량에 존재하도록 염수 중에 하였다. CpG는 항상 10 mcg으로 투여되었다.

^c혈청 항체 역가를 위한 말단 채혈, 동물 희생 및 항원 재자극을 위한 비장 수확.

표 2-3. 평균 총 IgG 수준 및 추정된 평균 IgG1 및 IgG2a 수준

^a항체 수준 (IU/mL), 마우스 혈청의 3개의 서브-풀에 대한 평균 ± 평균의 표준 오차로서 제시된 데이터

^bIgG1 및 IgG2a 수준은 총 IgG 표준 곡선에 대한 검정 판독치의 비교에 기초한 추정치이다.

프라임 및 부스트 또는 단지 부스트 백신접종에서 CpG의 포함은 Tdap-명반 프라임 및 부스트 군에 비해 더 높은 총 IgG 수준을 유발하였다. Tdap-명반 및 Tdap-명반-CpG를 사용한 동종 프라임/부스트 요법은 2회 부스팅 후에 측정된 바와 같이 백일해 항원 (PT, FHA, 또는 PRN)에 대한 Th2 대 Th1-편향된 항체 반응을 각각 유도하였다. Tdap-명반 프라임 및 부스트 군에 대한 IgG2a/IgG1 비 (Th1/Th2 비)는 0.3 (PT의 경우), 0.2 (FHA의 경우), 및 1.0 (PRN의 경우)이었다. 대조적으로, Tdap-명반-CpG 프라임/부스트는 반응을 Th1로 강하게 이동시켰고, IgG2a/IgG1 비는 29 (PT의 경우), 136 (FHA의 경우) 및 155 (PRN의 경우)였다. Tdap-명반/Tdap-CpG (부스트에서 명반이 없음) 이종 프라임/부스트 요법은 3.0 (PT의 경우), 1.2 (FHA의 경우), 및 55 (PRN의 경우)의 IgG2a/IgG1 비에 의해 입증되는 바와 같이 Th1 이동을 생성하였다. Tdap-명반/Tdap-명반-CpG를 사용한 이종 프라임/부스트는 9.2 (PT의 경우), 28 (FHA의 경우), 및 57 (PRN의 경우)의 IgG2a/IgG1 비로 보다 현저한 Th2 대 Th1 이동을 유도하였다.

도 1a-c에 제시된 바와 같이, Tdap 항원으로 재자극된 Tdap-명반 프라임/부스팅된 마우스로부터의 비장 세포는 IL-5 (Th2)를 생산하였지만, 시험관내 배양 96시간 후에는 거의 IFN-γ (Th1) 또는 IL-17 (Th17)을 생산하지 않았다. 대조적으로, Tdap-명반-CpG 프라임 부스팅된 마우스로부터의 비장 세포는 시험관내 재자극 시에 Th1 (IFN-γ) 및 Th17 (IL-17) 시토카인 생산으로의 이동을 입증하였다. Tdap-명반 프라이밍된 마우스를 Tdap-CpG 또는 Tdap-명반-CpG로 2회 부스팅한 것은 Tdap-명반 프라이밍 및 부스팅된 마우스에 비해 더 많은 Th1/Th17 표현형 (더 낮은 IL-5, 더 높은 IFN-γ 및 IL-17)으로의 이동을 입증하였다. Tdap-명반-CpG 부스팅된 마우스에서 Th 항체 반응으로의 더 강한 이동과 동시에, Tdap-명반-CpG 부스팅된 마우스에 비해 Tdap-명반-CpG에서 약간 더 많은 IFN-γ 및 IL-17에 대한 경향이 있었다.

요약하면, Tdap-명반-CpG로 부스팅된 Tdap 명반-프라이밍된 마우스는 Tdap-명반 프라임/부스팅된 대조군에 비해 더 높은 수준의 백일해 항원-특이적 총 IgG 항체 반응을 입증하였다. 또한, Tdap-명반-CpG 부스팅된 마우스는 시험관내에서 Tdap 항원으로 재자극된 비장 세포로부터 Th1 항체 반응으로의 현저한 이동 (더 높은 IgG2a/IgG1 비와 연관된 상승된 IgG2a) 및 IFN-γ 및 IL-17의 증가된 생산, 및 감소된 IL-5 생산을 보여주었다. Th2에서 Th1로의 이동은 또한 Tdap-CpG (명반 없음) 부스팅된 마우스에서 명백하였다.

실시예 3

마우스에서의 CpG 아주반트 처리된 파상풍 감소 디프테리아 무세포성 백일해 (Tdap) 백신의 효능

본 실시예는 동종 및 이종 프라임/부스트 요법에서 다양한 Tdap 백신의 2회 용량의 효능을 평가하기 위해 CD1 마우스에서 수행된 전임상 연구의 설명을 제공한다. 표 3-1에 열거된 바와 같이, 처리군당 4-6마리의 마우스로 연구에서는 14개의 군이 있었다.

표 3-1. 연구 군

연구 설계. 비근교계 암컷 CD1 마우스를 5주에 면역화시키고, 8주에 부스팅하고, 10주에 챌린지하였다. 마우스를 50 μl의 백신 또는 염수 대조군 (0.9% NaCl)의 근육내 주사에 의해 면역화하였다. 마우스는 비. 페르투시스의 약 2천6백만 박테리아인 균주 UT25 (PRN+)의 비강내 투여에 의해 챌린지되었다: 군 1-7은 마우스당 2.55 x 10⁷을 받았고 (용량 CFU/ml = 1.28 x 109); 군 8-13은 마우스당 2.65 x 10⁷을 받았고 (용량 CFU/ml = 1.33 x 10⁹); 군 14는 마우스당 1.47 x 10⁷을 받았다 (용량 CFU/ml = 7.33 x 10⁸). 박테리아를 마취된 마우스의 콧구멍에 직접 피펫팅하였다. 챌린지 2 또는 3일 전, 및/또는 챌린지 3일 후에 혈액을 채취하였다.

백신. 혈청 연구소 DTwP (SI DTwP), 국립 생물학적 표준 연구소 wP (NIBSC wP), Tdap-명반 (실시예 4에서 Tdap로서 지칭됨), 및 Tdap-명반-CpG (실시예 4에서 Tdap CpG 1018로서 지칭됨)를 포함한 4종의 백신을 시험하였다. 전세포 백일해 백신 (wP)은 인간 용량 (HD)의 1/20으로 투여한 반면, Tdap 및 Tdap-CpG 1018 백신은 1/10, 1/20, 1/40 또는 1/80 HD로 투여하였다.

효능. 백일해 감염 및 백일해-특이적 면역원성의 다양한 파라미터의 측정에 의해 백신의 효능을 평가하였다. 측정은 하기를 포함하였다:

1. 챌린지된 마우스의 비강-연관 림프성 조직 (NALT)에서의 박테리아 부담;

2. 챌린지된 마우스의 비강 세척액에서의 박테리아 부담;

3. 챌린지된 마우스의 폐 및 기관에서의 박테리아 부담;

4. CpG 1018의 포함으로 인한 박테리아 부담에서의 백분율 변화;

5. 폐 중량;

6. 혈액 호중구 계수;

7. 폐 균질물로부터의 IL-6 수준;

8. 폐 균질물로부터의 IFN-γ 수준;

9. PT, FHA, PRN, 및 전체 박테리아에 대한 챌린지 전 및 챌린지 후 혈청 IgG 수준; 및

10. 폐로의 식세포 동원.

표 3-2. B. 평균 CFU/ml로서의 비. 페르투시스 부담

비. 페르투시스 챌린지 3일 후에 NALT, 비강 세척액 (1 ml PBS 플러시), 및 폐 + 기관에서의 박테리아 부담을 측정하였다. 표 3-2 및 도 2a에 제시된 바와 같이, Tdap 백신 내의 CpG 1018의 포함은 시험된 모든 4개의 Tdap 항원 농도에서 비. 페르투시스-챌린지된 수용자의 비강 및 폐 조직에서 박테리아 부담을 감소시켰다. 현저하게, CpG 1018의 포함은 폐 + 기관에서의 CFU를 각각 99.6% (1/10), 98.8% (1/20), 93.8% (1/40) 및 84.3% (1/80)만큼 감소시켰다 (도 2b). 실제로, 1/10 또는 1/20 HD Tdap를 포함하는 CpG 1018-함유 백신은 2개의 wP-함유 백신의 수용자에 필적하는 박테리아 부담을 가졌다. 이종 Tdap 1/20 / Tdap 1/20 + 1018 면역화 요법은 동종 Tdap 1/20 및 Tdap 1/20 + 1018 요법 사이의 중간인 챌린지 후 박테리아 부하 데이터를 생성하였다.

폐 염증을 평가하는 방식으로서 균질화 전에 비. 페르투시스 챌린지 3일 후에 폐의 중량을 재었다. 모의 백신접종된 마우스, 및 2개의 wP 백신접종된 군의 폐는 CpG 1018의 포함에 관계없이 비-백신접종된, 비-챌린지된 (NCNV) 군, 및 9개의 Tdap-백신접종된 군의 마우스의 폐보다 실질적으로 더 중량이 컸다. 이들 결과는 CpG (1018)의 포함이 박테리아 부담을 감소시키기 위해 높은 수준의 염증을 유발하지 않음을 나타낸다.

비. 페르투시스 챌린지 3일 후에 전혈에서의 호중구 계수를 측정하였다. 모의 백신접종된 군, 및 2개의 wP 백신접종된 군의 마우스의 호중구 계수는 비-백신접종된, 비-챌린지된 (NCNV) 군의 마우스의 호중구 계수보다 상당히 더 높았다. 9개의 Tdap-백신접종 군의 마우스의 호중구 계수는 2개의 wP 백신접종 군의 호중구 계수보다 더 낮았고, CpG 1018-함유 Tdap 백신의 수용자에서 다소 더 높은 계수가 관찰되었다.

폐 균질물의 IL-6 및 IFN-γ 수준을 비. 페르투시스 챌린지 3일 후에 측정하였다. 9개의 Tdap-백신접종 군의 마우스의 IL-6 수준은 2개의 wP 백신접종 군의 IL-6 수준보다 낮았다. CpG 1018-함유 Tdap 백신의 수용자의 IL-6 수준을 SII DTwP 백신의 수용자와 비교할 때 IL-6 수준의 84-95% 감소가 관찰되었다. Tdap-백신접종 군의 마우스의 IFN-γ 수준은 2개의 wP 백신접종 군의 IFN-γ 수준보다 더 낮았다. 그러나, IFN-γ 수준은 CpG 1018의 부재 하에 등가의 항원 용량을 함유하는 Tdap 백신의 수용자에서보다 CpG 1018-함유 Tdap 백신의 수용자에서 더 높았으며, 이는 CpG 1018-아주반트 처리된 Tdap 백신에 반응하여 증가된 Th1 반응을 시사한다.

표 3-3. 챌린지전 IgG 항체 역가

표 3-4. 챌린지-후 IgG 항체 역가

백일해-특이적 혈청 IgG 항체 역가를 챌린지 2 또는 3일 전 (표 3-3), 및/또는 챌린지 3일 후 (표 3-4)에 채취한 혈액으로부터 ELISA에 의해 측정하였다. 일반적으로, CpG 1018-함유 Tdap 백신의 수용자는 챌린지 전 및 챌린지 후에, CpG 1018의 부재 하에 등가의 항원 용량을 함유하는 Tdap 백신의 수용자보다 PT, FHA, PRN 및 전체 박테리아에 대해 더 높은, 혈청 IgG 역가를 가졌다. 항체 역가에 대한 CpG 1018의 긍정적인 영향은 도 3a-c에 도시된 바와 같이 보다 높은 항원 용량 (Tdap 1/10 및 1/20 HD)을 받는 군에서 가장 두드러졌다.

비. 페르투시스 챌린지 3일 후에 폐 균질물에서의 감별 세포 계수를 측정하였다. 모의 백신접종된 군, 및 2개의 wP 백신접종된 군의 마우스의 폐 호중구, 수지상 세포, 대식 세포 및 단핵구 계수는 비-백신접종된, 비-챌린지된 (NCNV) 군의 마우스에서의 이들 세포 집단에 대한 계수보다 상당히 더 높았다. 9개의 Tdap-백신접종된 군의 마우스의 세포 계수는 2개의 wP 백신접종된 군의 세포 계수보다 더 낮은 경향을 보였고, CpG 1018-함유 Tdap 백신접종된 동물의 여러 군에서 다소 더 높은 계수가 관찰되었다.

실시예 4

인간에서 CpG 아주반트 처리된 파상풍 감소 디프테리아 무세포성 백일해 (Tdap) 백신의 면역원성

본 실시예는 FDA-승인된 Tdap 백신과 비교하여 임상시험용 Tdap 백신의 안전성, 내약성 및 면역원성을 평가하기 위해 건강한 대상체에서 수행될 임상 연구의 설명을 제공한다.

백신. Tdap-명반-1018은 다이나박스 테크놀로지스 코포레이션 (캘리포니아주 에머리빌)에 의해 개발된 임상시험용 백신이다. 각각의 0.5 mL 용량의 임상시험용 백신은 Tdap 항원 (5 Lf의 TT, 2.5 Lf의 DT, 8 mcg의 PT, 8 mcg의 FHA 및 2.5 mcg의 PRN), 0.39 mg 명반, 및 1500 mcg 또는 3000 mcg의 CpG 1018을 함유한다. Tdap-명반-1018 백신은 알루미늄 히드록시드 상에 흡착된 Tdap 항원 (0.39 mg Al³⁺ 이하)을 CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 기재됨)과 혼합함으로써 사용 직전에 제조한다. 부스트릭스(BOOSTRIX)® (파상풍 톡소이드, 감소된 디프테리아 톡소이드 및 무세포성 백일해)는 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline) (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크)에 의해 시판되는 FDA-승인된 백신이다. 각각의 0.5 mL 용량의 부스트릭스®는 알루미늄 히드록시드 (0.39 mg Al³⁺이하) 상에 개별적으로 흡착된 Tdap 항원 (5 Lf의 TT, 2.5 Lf의 DT, 8 mcg의 PT, 8 mcg의 FHA 및 2.5 mcg의 PRN), 4.5 mg 염화나트륨, ≤ 100 mcg 잔류 포름알데히드, 및 ≤ 100 mcg 폴리소르베이트 80을 함유한다. 위약은 보존제 무함유 0.9% 염화나트륨 주사액, USP (멸균 등장성 염수)이다.

목적: 1) Tdap-명반-1018의 안전성 및 내약성을 평가하는 것; 2) 단일 부스터 백신접종 후 1개월 (제4주)에 부스트릭스®와 비교하여 Tdap-명반-1018의 무세포성 백일해 항원에 대한 면역원성을 평가하는 것; 3) 단일 부스터 백신접종 후 1개월 (제4주)에 부스트릭스®와 비교하여 Tdap-명반-1018의 파상풍 및 디프테리아에 대한 면역원성을 평가하는 것. 추가의 목적은 4) 단일 부스터 백신접종 6 및 12개월 후에 부스트릭스®와 비교하여 Tdap-명반-1018의 백일해에 대한 항체 반응의 지속기간을 평가하는 것이다.

안전성 및 내약성은 국부 및 전신 주사후 반응, 임상 및 실험실 유해 사건, 및 심각한 유해 사건을 모니터링함으로써 평가된다. 백신 항원에 대한 면역원성은 기준선 (제1일) 및 제4주 (제29일±5일)에 연구 대상체로부터 수득된 샘플로부터 이루어진 측정에 의해 평가된다. 추가의 면역원성 평가는 제8주, 제12주, 제6개월 (제24주 내지 제26주), 및 제12개월 (제48주 내지 제52주) 중 하나 이상에서 이루어진다. 혈청 내의 파상풍, 디프테리아, 및 백일해 항원에 대한 항체의 수준은 ELISA에 의해 결정된다. PBMC의 백일해 항원에 대한 T 및 B 세포 반응이 또한 측정된다. 추가로, 혈청 또는 혈장 내의 백일해 독소-중화 항체, 옵소닌화 항체, 및 다른 기능적 항체 반응의 수준이 측정된다. 연구 대상체로부터 수득된 코 면봉채취물을 마이크로RNA 시험에 적용하여 비. 페르투시스 콜로니화를 평가한다.

백일해 항원에 대한 면역원성은 PT, FHA 및 PRN에 대한 항체 반응률을 개별적으로 측정함으로써 평가된다. PT, FHA 및 PRN 항체 반응은 각각 다음 중 하나로 정의된다: 1) 초기 혈청음성 대상체에서의 측정가능한 백신접종 후 항체 농도, 예컨대 역치 수준 (예를 들어, 검출 한계)의 2, 3 또는 4배 이상의 백신접종 후 항체 농도; 2) 초기 혈청양성 대상체에서의 백신접종-전 항체 농도의 적어도 2, 3 또는 4배의 증가.

백일해 항원에 대한 면역원성은 또한 항-PT, 항-FHA, 및 항-PRN 항체 각각에 대한 기하 평균 농도 (GMC)를 결정함으로써 평가된다. 파상풍 및 디프테리아 항원에 대한 면역원성은 TT 및 DT에 대한 항체 반응률을 개별적으로 측정함으로써 평가된다. TT 및 DT 항체 반응은 각각 다음 중 하나로 정의된다: 1) 백신접종 전 항체 수준이 <0.1 IU/mL인 대상체에서, 백신접종 후 항체 수준 ≥ 0.4 IU/mL; 2) 백신접종 전 항체 수준이 ≥ 0.1 IU/mL인 대상체에서, 백신접종 전 수준의 적어도 4배의 증가. 백일해에 대한 항체 반응의 지속기간은 PT, FHA 및 PRN에 대한 항체 역가를 측정함으로써 측정된다.

연구 설계. 연구는 10-22세의 건강한 대상체에서 Tdap 부스터 백신의 2 파트 무작위화 개방-표지 연구로서 수행된다. 파트 1은 18-22세의 건강한 성인 대상체에서 수행된다. 파트 2는 10-17세의 건강한 청소년 대상체에서 수행된다. 스크리닝 후, 대상체를 하기 치료군으로 무작위화한다: 치료 A: Tdap-명반-1018 (용량 1 또는 용량 2); 및 치료 B: 부스트릭스®. 대상체는 백신접종전 항체 수준을 결정하기 위해 제1일에 무작위 처리 백신을 받기 전에 기준선 혈액 채취를 받을 것이다. 백신을 단일 0.5-mL 근육내 주사로서 삼각근에 투여하였다. 백신접종 후 항체 수준의 측정을 위한 혈액 채취는 제4주 (~제29일), 및 임의로 제12주, 제24주 및 제52주, 또는 제4주, 제8주 및 제12주에 수행된다.

성인 참가자는 제1일에 그의 할당된 치료 (Tdap-1018 1500 mcg, Tdap-1018 3000 mcg, 또는 부스트릭스®)의 1회 용량을 받고, 제8주에 1회 용량 (Tdap-1018 1500 mcg, Tdap-1018 3000 mcg, 또는 위약)을 받는다. 청소년 참가자는 제1일에 그의 할당된 치료 (Tdap-1018 1500 mcg, Tdap-1018 3000 mcg, 또는 부스트릭스®)의 1회 용량을 받는다. 성인에서, 백신접종 후 항체 수준을 측정하기 위한 혈액 채취는 제4주, 제8주 및 제12주에 수행되고, 탐색적 평가는 제4주 및 제12주에 수행된다. 청소년에서, 백신접종 후 항체 수준을 측정하기 위한 혈액 채취는 제4주에 수행된다. 안전성 평가는 성인에서 제4주, 제12주 및 제20주에 및 청소년에서 제4주 및 제12주에 수행된다.

연구 집단. 연구 대상체에 대한 포함 및 배제 기준은 하기 제공된 목록을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 포함 기준은 하기를 모두 포함한다: 남성 또는 여성, 18-22세 (파트 1) 또는 10-17세 (파트 2); 모든 선행 백일해 면역화 (예를 들어, 2회 이상의 선행 무세포성 백일해 백신접종)의 기록을 가짐; 병력, 신체 검사, 및 실험실 평가에 기초한 양호한 건강 상태임; 인간 면역결핍 바이러스-혈청음성임. 배제 기준은 하기 중 어느 하나를 포함한다: 이전 3년 내에 무세포 Tdap 부스터를 받았음; 디프테리아, 파상풍 또는 백일해 질환의 병력; 자가면역 질환의 병력; 및/또는 연구 결과를 혼동시킬 수 있는 상태, 요법 또는 실험실 이상을 가짐. 잠재적으로 혼동시킬 수 있는 요법은 연구 백신 주사의 21일 내에 임의의 불활성화된 바이러스 백신; 연구 백신 주사의 28일 내에 임의의 생 바이러스 백신, 전신 코르티코스테로이드 또는 다른 면역 억제 약물, 과립구 또는 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자, 또는 다른 임상시험 의약 작용제; 연구 백신 주사의 3개월 내에 이뮤노글로불린 또는 임의의 혈액 제품; 또는 임의의 시간에 데옥시리보핵산 플라스미드 또는 올리고뉴클레오티드의 주사 중 임의의 것을 받는 것을 포함한다.

결과. Tdap-명반-1018의 수용자는 부스터 백신접종 4주 후에 PT, FHA 및 PRN 항원 중 하나 이상에 대해 부스트릭스®의 수용자보다 더 높은 농도의 항체를 갖는 것으로 고려된다. 마찬가지로, Tdap-명반-1018의 수용자는 부스터 백신접종 4주 후에 TT 및 DT 항원 중 하나 또는 둘 다에 대해 부스트릭스®의 수용자보다 더 높은 농도의 항체를 갖는 것으로 고려된다. 추가로, Tdap-명반-1018을 받은 대상체의 보다 높은 백분율은 항-TT 항체 ≥ 0.1 IU/mL 또는 ≥ 1.0 IU/mL, 및/또는 항-DT 항체 ≥ 0.1 IU/mL 또는 ≥ 1.0 IU/mL를 갖는 것으로 고려된다.

실시예 5

비. 페르투시스-챌린지된 인간에서 비강 콜로니화에서의 감소에 대한 CpG 아주반트 처리된 파상풍 감소 디프테리아 무세포성 백일해 (Tdap) 백신의 효능

본 실시예는 FDA-승인된 Tdap 백신과 비교하여 임상시험 Tdap 백신의 안전성, 내약성, 면역원성 및 보호 효과를 평가하기 위해 건강한 대상체에서 수행될 임상 연구의 설명을 제공한다. 특히, 인간 대상체는 Tdap 백신의 0, 1 또는 2회 용량을 받은 후에 야생형 비. 페르투시스를 사용한 대조군 비강내 챌린지를 받아야 한다. 챌린지된 대상체는 문헌 [de Graaf et al., Clinical Infectious Diseases, 71(2): 403-411, 2020]에 기재된 바와 같이 박테리아 콜로니화를 근절하기 위해 아지트로마이신 치료로 치료된다.

백신. Tdap-명반-1018은 다이나박스 테크놀로지스 코포레이션 (캘리포니아주 에머리빌)에 의해 개발된 임상시험 백신이다. 각각의 0.5 mL 용량의 임상시험 백신은 Tdap 항원 (5 Lf의 TT, 2.5 Lf의 DT, 8 mcg의 PT, 8 mcg의 FHA 및 2.5 mcg의 PRN), 0.39 mg 명반, 및 1500 mcg 또는 3000 mcg의 CpG 1018을 함유한다. Tdap-명반-1018 백신은 알루미늄 히드록시드 상에 흡착된 Tdap 항원 (0.39 mg Al³⁺ 이하)을 CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 기재됨)과 혼합함으로써 사용 직전에 제조하였다. 부스트릭스® (파상풍 톡소이드, 감소된 디프테리아 톡소이드 및 무세포성 백일해)는 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline) (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크)에 의해 시판되는 FDA-승인된 백신이다. 각각의 0.5 mL 용량의 부스트릭스®는 알루미늄 히드록시드 (0.39 mg Al³⁺ 이하) 상에 개별적으로 흡착된 Tdap 항원 (5 Lf의 TT, 2.5 Lf의 DT, 8 mcg의 PT, 8 mcg의 FHA 및 2.5 mcg의 PRN), 4.5 mg 염화나트륨, ≤ 100 mcg 잔류 포름알데히드, 및 ≤ 100 mcg 폴리소르베이트 80을 함유한다.

목적: 1) 무세포 백신과 비교하여 챌린지 후 비강 콜로니화의 감소에 대한 Tdap-명반-1018의 효능을 평가하는 것 (비강 세척액에서의 보다 낮은 박테리아 역가 및/또는 박테리아의 보다 빠른 클리어런스); 2) 챌린지된 대상체에서 조기 임상 증상에 대한 보호를 평가하는 것; 3) Tdap-명반-1018의 안전성 및 내약성을 평가하는 것; 및 4) 비. 페르투시스 비강내 챌린지 전 단일 백신접종 후 제4주에 또는 2회 백신접종 후 제8주에 부스트릭스®와 비교하여 Tdap-명반-1018의 무세포성 백일해 항원에 대한 면역원성을 평가하는 것.

안전성 및 내약성은 국부 및 전신 주사후 반응, 임상 및 실험실 유해 사건, 및 심각한 유해 사건을 모니터링함으로써 평가된다. 백신 항원에 대한 면역원성은 기준선 (제1일), 제4주 (제29일±5일)/챌린지 전, 또는 2회 용량을 투여받은 대상체에서는 제8주 (제60일±5일)/챌린지 전의 연구 대상체로부터 수득된 샘플로부터 수득한 측정에 의해 평가한다. 면역 반응은 또한 챌린지 2주 후에 평가된다. 혈청 내의 파상풍, 디프테리아, 및 백일해 항원에 대한 항체의 수준은 ELISA에 의해 결정된다. PBMC의 백일해 항원에 대한 T 세포 반응이 또한 측정된다. 추가로, 혈청 내의 백일해 독소-중화 항체, 옵소닌화 항체, 및 다른 기능적 항체 반응의 수준이 측정된다.

백일해 항원에 대한 면역원성은 PT, FHA 및 PRN에 대한 항체 반응률을 개별적으로 측정함으로써 평가된다. PT, FHA 및 PRN 항체 반응은 각각 다음 중 하나로 정의된다: 1) 초기 혈청음성 대상체에서의 측정가능한 백신접종 후 항체 농도, 예컨대 역치 수준 (예를 들어, 검출 한계)의 2, 3 또는 4배 이상의 백신접종 후 항체 농도; 2) 초기 혈청양성 대상체에서의 백신접종 전 항체 농도의 적어도 2, 3 또는 4배의 증가.

백일해 항원에 대한 면역원성은 또한 항-PT, 항-FHA, 및 항-PRN 항체 각각에 대한 기하 평균 농도 (GMC)를 결정함으로써 평가된다. 파상풍 및 디프테리아 항원에 대한 면역원성은 TT 및 DT에 대한 항체 반응률을 개별적으로 측정함으로써 평가된다. TT 및 DT 항체 반응은 각각 다음 중 하나로 정의된다: 1) 백신접종 전 항체 수준이 <0.1 IU/mL인 대상체에서, 백신접종 후 항체 수준 ≥ 0.4 IU/mL; 2) 백신접종 전 항체 수준이 ≥ 0.1 IU/mL인 대상체에서, 백신접종 전 수준의 적어도 4배의 증가.

백일해 항원에 대한 면역원성은 항체 특징화 검정 및 기능적 항체 반응의 평가에 의해 추가로 평가된다. 기능적 항체 반응은 백일해 독소의 항체 중화를 측정하고 옵소닌포식작용 검정에서 항체 옵소닌화 활성을 측정하기 위해 혈청-기반 검정에 의해 평가된다. 또한, 항체 이소형결정, Fc 수용체-결합, 및 추가의 항체 기능적 판독을 시스템스 세롤로지(Systems Serology) 분석에서 평가한다.

더욱이, 백일해 항원에 대한 면역원성은 또한 T 세포에서 항원-회상 반응을 측정함으로써 평가된다. 대상체로부터의 PBMC를 백일해 항원 (PT, FHA, 및 PRN)으로 시험관내에서 재자극하고, 세포내 시토카인 발현을 유동 세포측정법에 의해 측정한다.

연구 설계. 연구는 비. 페르투시스 비강내 챌린지에 대한 건강한 대상체의 반응에 대한 Tdap 부스터 백신의 효과에 대한 무작위화 개방-표지 연구로서 수행된다. 건강한 성인 대상체는 무세포-프라이밍되거나 (18-22세) 또는 전세포 백신 프라이밍되지만 (23-50세), 이전 3년 내에 부스팅되지 않고, 백일해 독소에 대한 혈청 항체 반응에 대해 음성이다. 스크리닝 후, 대상체를 하기 치료군으로 무작위화한다 (n= 50/군): 1) 백신 없음; 2) 부스트릭스®; 3) 이전에 무세포 또는 전세포 백신을 투여받은 대상에서, 1500 또는 3000 mcg의 1018을 갖는 Tdap-명반-1018의 1회 용량; 및 4) 이전에 무세포 백신을 투여받은 대상에서, 1500 또는 3000 mcg의 1018을 갖는 Tdap-명반-1018의 2회 용량. 대상체는 백신접종전 항체 수준 및 기준선 기능적 항체 반응 및 T 세포 반응 (PBMC)을 결정하기 위해 제1일에 치료 백신을 받기 전에 기준선 혈액 채취한다. 백신을 단일 0.5-mL 근육내 주사로서 삼각근에 투여한다. 백신접종-후 항체 수준, 기능적 항체 반응 및 T 세포 반응에 대한 PBMC의 측정을 위한 혈액 채취는 제4주 (단일 챌린지-전 백신 용량을 투여받은 대상체에서 ~제29일) 또는 제8주 (2개의 챌린지-전 백신 용량을 투여받은 대상체에서 ~제60일)에 수행된다. 혈액 채취 후, 대상체에 비. 페르투시스 균주 D420 (대략 105 콜로니 형성 단위)을 비내 접종하였다. 혈액 채취는 또한 상이한 연구군에서 면역 반응에 대한 백일해 콜로니화의 잠재적 차등 효과를 평가하기 위해 비. 페르투시스 챌린지 후 제2주에 수행한다. 안전성, 콜로니화, 및 박테리아 배출을 입원 시설에서 21일에 걸쳐 모니터링한다. 콜로니화는 배양 및 정량적 폴리머라제 연쇄 반응에 의해 평가된다. 아지트로마이신은 비. 페르투시스에 의해 비강 콜로니화를 제거하기 위해 제21일부터 투여된다.

연구 집단. 연구 대상체에 대한 포함 및 배제 기준은 하기 제공된 목록을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 포함 기준은 하기 모두를 포함한다: 남성 또는 여성, 18-50세; 모든 선행 백일해 면역화 (예를 들어, 2회 이상의 선행 무세포 또는 전세포 백일해 백신접종)의 기록을 가짐; 병력, 신체 검사, 및 실험실 평가에 기초한 양호한 건강 상태임; 및 인간 면역결핍 바이러스-혈청음성임. 배제 기준은 하기 중 어느 하나를 포함한다: 이전 3년 내에 무세포 Tdap 부스터를 받았음; 디프테리아, 파상풍 또는 백일해 질환의 병력; 자가면역 질환의 병력; 및/또는 연구 결과를 혼동시킬 수 있는 상태, 요법 또는 실험실 이상을 가짐. 잠재적으로 혼동시킬 수 있는 요법은 연구 백신 주사의 21일 내에 임의의 불활성화된 바이러스 백신; 연구 백신 주사의 28일 내에 임의의 생 바이러스 백신, 전신 코르티코스테로이드 또는 다른 면역 억제 약물, 과립구 또는 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자, 또는 다른 임상시험 의약 작용제; 연구 백신 주사의 3개월 내에 이뮤노글로불린 또는 임의의 혈액 제품; 또는 임의의 시간에 데옥시리보핵산 플라스미드 또는 올리고뉴클레오티드의 주사 중 임의의 것을 받음.

결과. Tdap-명반-1018의 수용자는 비내 접종 후 박테리아의 보다 낮은 박테리아 부담 및/또는 보다 빠른 클리어런스, 뿐만 아니라 보다 적은 및/또는 보다 경도의 질환-연관 증상을 갖는 것으로 고려된다. Tdap-명반-1018 백신접종된 대상체는 부스트릭스®의 수용자보다 부스터 백신접종 4주 또는 8주 후에 PT, FHA 및 PRN 항원 중 하나 이상에 대한 더 높은 농도의 항체를 입증하는 것으로 고려된다. 마찬가지로, Tdap-명반-1018의 수용자는 부스터 백신접종 4주 또는 8주 후에 부스트릭스®의 수용자보다 TT 및 DT 항원 중 하나 또는 둘 다에 대해 더 높은 농도의 항체를 갖는 것으로 고려된다. 추가로, Tdap-명반-1018을 받은 대상체의 보다 높은 백분율은 항-TT 항체 ≥ 0.1 IU/mL 또는 ≥ 1.0 IU/mL, 및/또는 항-DT 항체 ≥ 0.1 IU/mL 또는 ≥ 1.0 IU/mL를 갖는 것으로 고려된다. Tdap-명반-1018 대 부스트릭스® 백신접종의 예상된 효과는 또한 차별적인 항체 이소형결정 및 Fc 수용체-결합 프로파일, 뿐만 아니라 증가된 기능적 항체 반응을 포함한다. Tdap-명반-1018 대 부스트릭스® 백신접종은 T 세포 시토카인 발현 프로파일에 대해 차별적인 효과를 갖는 것으로 고려되고, Tdap-명반-1018 백신접종된 대상체는 보다 많은 Th1- 및 Th17 편향된 반응 (IFN-γ, IL-17 발현)을 나타낼 것으로 예상되고, 부스트릭스® 백신접종된 대상체는 보다 많은 Th2-편향된 반응 (IL-4, IL-5, 또는 IL-13)을 나타낼 것으로 예상될 것이다.

상기 개시내용이 명료성 및 이해의 목적을 위해 예시 및 실시예로서 일부 상세히 설명되었지만, 특정 변경 및 수정이 실시될 수 있다는 것이 본 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 따라서, 실시예는 첨부된 청구항들에 의해 서술되는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

SEQUENCE LISTING <110> DYNAVAX TECHNOLOGIES CORPORATION SERUM INSTITUTE OF INDIA PRIVATE LIMITED <120> ACTIVE BOOSTER IMMUNIZATION AGAINST TETANUS, DIPHTHERIA AND PERTUSSIS <130> 37788-20068.42 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> IN 202011055399 <151> 2020-12-19 <150> IN 202011010025 <151> 2020-03-09 <160> 3 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 tgactgtgaa cgttcgagat ga 22 <210> 2 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 3, 7, 11 <223> 2'-deoxy-7-deazaguanosine <400> 2 tcgaacgttc g 11 <210> 3 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 aacgttcgag 10

Claims

파상풍, 디프테리아 및 백일해에 대한 능동 부스터 면역화를 위한 방법이며,
인간 대상체에게 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는 면역원성 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서
TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고,
인간 대상체는 3세 이상이고,
Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함하고,
Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인,
방법.
제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3'(서열식별번호: 1)을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드가 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제4항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-3' (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, 임의로 여기서 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5'을 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, X는 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 방법.
제3항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하거나, 또는 모든 뉴클레오티드 연결이 포스포로티오에이트 연결인 방법.
제6항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 방법.
제6항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.
제8항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
제8항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 방법.
제9항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al³⁺를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al³⁺를 포함하는 것인 방법.
제11항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.5 Lf DT, 약 8 μg PT, 약 8 μg FHA, 및 약 2.5 μg PRN을 포함하는 것인 방법.
제12항에 있어서, 면역원성 조성물이 적어도 1종의 추가의 항원을 추가로 포함하는 것인 방법.
제13항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 백일해 핌브리아에 (FIM, pertussis fimbriae) 항원 및 백일해 아데닐레이트 시클라제 (AC) 항원 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 것인 방법.
제13항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하며, 임의로 여기서 불활성화된 폴리오바이러스는 유형 1 바이러스, 유형 2 바이러스 및 유형 3 바이러스 중 1종 이상을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 대상체가 적어도 10세 이상인 방법.
제16항에 있어서, 인간 대상체가 소아 백신 또는 부스터 백신을 이전 3년 내에 제공받지 않았으며, 여기서
소아 백신은 디프테리아, 파상풍, 및 무세포성 백일해 (DTaP) 항원; 또는 디프테리아, 파상풍, 및 전세포 백일해 (DTwP) 항원을 포함하고;
부스터 백신은 파상풍 및 디프테리아 (Td) 항원; 또는 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원을 포함하는 것인 방법.
제17항에 있어서, 인간 대상체가 10-18세인 방법.
제17항에 있어서, 인간 대상체가 19세 이상이거나, 또는 인간 대상체가 19-64세 또는 65세 이상인 방법.
제17항에 있어서, Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드가 투여 후 1개월까지 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하며, 여기서 면역 반응은
적어도 0.4 국제 단위/ml (IU/ml)의 항-TT 항체 및 항-DT 항체의 농도; 및
국제 단위/ml (IU/ml)로 투여 전 수준 또는 정량 한계 수준보다 적어도 2배 더 높은 항-PT 항체, 항-FHA 항체 및 항-PRN 항체의 농도
를 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 면역 반응이
(i) 투여 후 1개월까지 적어도 1.0 IU/ml의 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다; 및/또는
(ii) 투여 후 1개월까지 적어도 4배 더 높은 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도, 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상 (여기서, 항체 농도는 국제 단위/ml (IU/ml)로 투여 전 수준 또는 정량 한계 수준에 대한 것임)
을 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 면역 반응이
투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배의 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다, 또는 항-TT 항체 농도 및 항-DT 항체 농도 중 하나 또는 둘 다가 투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 2, 3 또는 4배인 것
을 포함하는 지속 파상풍 및/또는 디프테리아 면역 반응을 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 면역 반응이
투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 1.5, 2.0 또는 2.5배의 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상, 또는 항-PT 항체 농도, 항-FHA 항체 농도 및 항-PRN 항체 농도 중 하나 이상이 투여 후 약 6개월 또는 약 12개월에 투여 전 수준의 적어도 2, 3 또는 4배인 것
을 포함하는 지속 백일해 면역 반응을 포함하는 것인 방법.
제20항에 있어서, 면역원성 조성물이 만족스러운 안전성 프로파일을 갖는 것인 방법.
파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트, 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하며, 여기서
TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고,
Tdap 항원은 파상풍 톡소이드 (TT), 디프테리아 톡소이드 (DT), 백일해 톡소이드 (PT), 백일해 필라멘트형 헤마글루티닌 (FHA), 및 백일해 페르탁틴 (PRN)을 포함하고,
Tdap 항원 및 올리고뉴클레오티드는 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인,
파상풍, 디프테리아, 및 백일해에 대한 활성 부스터 면역화를 위한 면역원성 조성물.
제25항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 조성물.
제25항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)을 포함하는 것인 조성물.
제25항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드가 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제28항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-3' (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이거나, 또는 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG₁AACG₁TTCG₁-X-G₁CTTG₁CAAG₁CT-5'을 포함하며, G₁은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X가 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 조성물.
제27항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하거나, 또는 모든 뉴클레오티드 연결이 포스포로티오에이트 연결인 조성물.
제30항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 조성물.
제30항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 조성물.
제32항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하는 것인 조성물.
제32항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 조성물.
제32항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al³⁺를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al³⁺를 포함하는 것인 조성물.
제35항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 5 Lf TT, 약 2.5 Lf DT, 약 8 μg PT, 약 8 μg FHA, 및 약 2.5 μg PRN을 포함하는 것인 조성물.
제36항에 있어서, 면역원성 조성물이 적어도 1종의 추가의 항원을 추가로 포함하는 것인 조성물.
제37항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 백일해 핌브리아에 (FIM) 항원 및 백일해 아데닐레이트 시클라제 (AC) 항원 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 것인 조성물.
제37항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 항원이 불활성화된 폴리오바이러스를 포함하며, 임의로 불활성화된 폴리오바이러스는 유형 1 바이러스, 유형 2 바이러스 및 유형 3 바이러스 중 1종 이상을 포함하는 것인 조성물.
제25항 내지 제39항 중 어느 한 항의 조성물, 및 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 조성물의 투여에 대한 지침서를 포함하는 키트.
i) 파상풍, 디프테리아, 및 무세포성 백일해 (Tdap) 항원, 및 Tdap 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 포함하는 제1 조성물;
ii) TLR9 효능제를 포함하는 제2 조성물; 및
iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 제25항 내지 제39항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물을 제조하는 것에 대한 지침서
를 포함하는 키트.
제41항에 있어서, iv) 인간 대상체에서 Tdap 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 면역원성 조성물을 투여하는 것에 대한 추가의 지침서 세트
를 추가로 포함하는 키트.
제42항에 있어서, 면역원성 조성물의 근육내 주사를 위한 주사기 및 바늘을 추가로 포함하는 키트.