KR20230011866A - 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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이윤미
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Abstract

본 발명은 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 유효성분은 염증성 케모카인의 분비량을 감소시키며, 피부세포의 생존율에 영향을 미치지 않을 뿐만 아니라, 피부보습인자인 필라그린의 발현량 및 히알루론산의 함량을 증가시키는 효과가 있으며, 히스타민 분비량을 감소시키는 효과가 있으므로, 피부 보습 및 염증관련 피부질환에 매우 유용하게 사용할 수 있다.

Description

돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물{Composition for skin moisturizing and preventing, ameliorating or treating skin disease comprising extract of Glycine soja or fermented Glycine soja as effective component}
본 발명은 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
피부염은 다양한 원인이 복잡하게 뒤엉켜 발병하고 완화와 재발을 반복한다. 피부염은 상당히 많은 사람이 앓고 있는데, 현재 국내 피부염 환자는 어린이에게서 10~30%의 유병률을 보이고 있으며 성인에게서는 1~3%의 유병률을 보이고 있다. 피부염은 환경적인 요소와 유전적인 소인이 모두 관여하는 복합적인 질환으로 알려져 있는데, 최근 피부염의 발생률의 증가에 미치는 요인으로는 대기오염, 모유 수유의 감소, 항생제 사용의 증가로 인한 항원에 대한 노출의 증가, 주거환경 변화 또는 공업 발달로 인한 새로운 항원 물질의 등장 등 여러 요인이 복합적으로 관여하는 것으로 여겨진다. 피부염은 21세기에 접어들어 더욱 꾸준히 증가하고 있는 추세이고, 국내뿐 아니라 서구 사회나, 심지어 개발이 진행되고 있는 여러 후진국에서조차도 심각하게 발생하고 있으므로, 피부염 치료제는 범세계적인 시장수요를 창출할 것으로 예상된다. 피부염의 주요증상은 심한 가려움증, 피부 건조, 발진, 진물, 부스럼딱지, 비늘 같은 껍질이 있는 피부 등이다.
한편, 돌콩(Glycine soja)은 콩과(Zingiberaceae)에 속하는 덩굴성 1년 초로 길이는 2m이며 전체에 갈색의 거친 털이 난다. 잎은 호생이고 잎자루는 길며 3출엽이다. 열매는 2~3cm로 털이 많고 콩꼬투리와 비슷하며, 종자는 타원형이거나 신장형 비슷하며 약간 편평하다. 돌콩은 콩(Glycine max)의 기원종으로 여겨지고 있으며, 현재 식용 가능한 것으로 인정되고 있으나 실제 식용으로 이용되는 경우는 거의 없다. 대부분 자연계에서 자생하고 있으며, 강한 유전자를 지니고 있어 콩의 유전적 개량 연구 등을 위해 일부 재배되기도 한다.
돌콩 관련 기술로, 한국등록특허 제2207561호에 돌콩 추출물을 포함하는 천연 화장료 조성물이 개시되어 있고, 한국등록특허 제1621506호에 돌콩 추출물 및 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈행개선 조성물이 개시되어 있으나, 아직까지는 본 발명의 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명은 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 유효성분이 염증성 케모카인의 분비량을 감소시키며, 피부세포의 생존율에 영향을 미치지 않을 뿐만 아니라, 피부보습인자인 필라그린의 발현량 및 히알루론산의 함량을 증가시키는 효과가 있으며, 히스타민 분비량을 감소시키는 효과가 있다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 의약외품을 제공한다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제를 제공한다.
본 발명은 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 상기 유효성분은 염증성 케모카인의 분비량을 감소시키며, 피부세포의 생존율에 영향을 미치지 않을 뿐만 아니라, 피부보습인자인 필라그린의 발현량 및 히알루론산의 함량을 증가시키는 효과가 있으며, 히스타민 분비량을 감소시키는 효과가 있다는 것이다. 특히, 돌콩 잎 추출물 및 돌콩 줄기 추출물이 다른 부위에 비해 효과가 현저한 특징이 있다.
도 1은 본 발명의 돌콩 추출물 처리에 따른 RANTES(A) 및 TARC(B)의 생성량 변화를 확인한 것이다. *, **, ***은 TNF-α+IFN-γ 처리군 대비 본 발명의 돌콩 추출물 처리군에서 RANTES(A) 또는 TARC(B)의 생성량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, *는 p<0.05이며, **는 p<0.01이고, ***은 p<0.001이다.
도 2는 피부 각질세포에서 본 발명의 돌콩 추출물 처리에 따른 세포 생존율을 확인한 결과이다.
도 3은 피부 각질세포에서 본 발명의 돌콩 추출물 처리에 따른 필라그린의 발현량을 확인한 결과이다. **은 아무것도 처리하지 않은 대조군(CON) 대비 본 발명의 돌콩 추출물 처리군에서 필라그린의 발현량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.01이다.
도 4는 피부 각질세포에서 본 발명의 돌콩 추출물 처리에 따른 히알루론산의 생성량을 확인한 결과이다. **, ***은 TNF-α+IFN-γ 처리군 대비 본 발명의 돌콩 추출물 처리군에서 히알루론산의 생성량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, **는 p<0.01이고, ***은 p<0.001이다.
도 5는 MC/9 면역비만세포에서의 세포생존율(A) 및 히스타민 분비량(B) 변화를 확인한 결과이다. ###은 대조군(CON) 대비 Compound48/80 처리군의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다는 것으로, p<0.001이고, *, **은 Compound48/80 처리군 대비 돌콩 종자 추출물(GS), 돌콩 줄기 추출물(GS-S) 및 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다는 것으로, *은 p<0.05이고, **은 p<0.01이다. $은 돌콩 종자 추출물(GS) 대비 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 더 감소하였다는 것으로, p<0.05이다.
본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 피부질환은 피부염, 소양증 또는 피부 건선인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않고, 상기 피부염의 바람직한 일례로는 아토피 피부염이 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물은 하기의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다:
(1) 돌콩 또는 발효한 돌콩 분말에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
(2) 단계 (1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
(3) 단계 (2)의 여과한 추출물을 농축하고 건조하여 추출물을 제조하는 단계.
상기 단계 (1)에서 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물 중에서 선택하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 에탄올이지만 이에 한정하지 않는다. 상기 제조방법에 있어서, 추출방법은 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류 냉각 추출 및 초음파 추출 등의 당 업계에 공지된 모든 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 상기 추출용매는 돌콩 중량의 1~20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 10~18배 첨가하는 것이고, 더욱더 바람직하게는 15배 첨가하는 것이다. 추출온도는 20~120℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1~48시간인 것이 바람직하며, 1~24시간이 더욱 바람직하고, 2시간이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 방법에 있어서, 단계 (3)의 농축은 진공 회전 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 동결건조이나 이에 한정하지 않는다.
본 발명에서 돌콩의 발효는 하기 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
1) 돌콩 분말에 물을 가하여 멸균하는 단계;
2) 상기 단계 1) 이후에, 상온(15~25℃)으로 식혀 발효균을 첨가하고 30~50℃에서 2~4일 동안 발효하는 단계;
3) 상기 단계 2) 이후에, 건조하는 단계.
상기 단계 2)에서 첨가한 발효균은 유산균, 효모 또는 누룩이 바람직하지만, 이에 한정하는 것은 아니며, 상기 유산균은 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophillus), 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei) 중에서 선택된 하나 이상의 유산균인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)로 이루어진 복합 유산균이지만 이에 한정하는 것은 아니다.
상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만, 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 제조될 수 있다. 상기 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 카라멜, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 중에서 선택된 어느 하나의 형태일 수 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 즉, 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 상기의 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토스, 슈크로스와 같은 이당류, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 크게 중요하지 않지만, 본 발명의 조성물 100g에 대하여, 0.01~0.04g인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.02~0.03g을 포함하는 것이지만 이에 한정하지 않는다. 감미제로는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 성분들 이외에 항산화제, 완충액, 정균제, 희석제, 계면활성제, 결합제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 주사 또는 피부에 도포하는 방법으로 투여할 수 있는 것이다. 상기 피부에 도포하는 경우는 연고제, 첩부제 또는 분무제의 제형으로 제조된 것을 이용하는 것이 람직하다. 본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 의약외품에 관한 것이다.
본 발명에서 용어, '의약외품'은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적을 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 중 하나에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미한다. 또한 상기 의약외품은 피부외용제 및 개인 위생용품을 포함한다.
본 발명의 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 피부외용제는 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태로 제조되어 사용될 수 있다. 상기 개인위생용품에는 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 비누, 물티슈, 휴지, 피부 크림, 얼굴 크림, 에어프레쉬너 겔 또는 세정겔일 수 있다. 또한, 본 발명의 의약외품의 또 다른 예로 소독청결제, 샤워폼, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제가 있다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습용 화장료 조성물에 관한 것이다.
상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것이 바람직하지만 이에 한정하는 것은 아니다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
또한 본 발명은 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제에 관한 것이다.
본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당한다. 본 발명에서 용어 '사료'는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다. 상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
실시예 1. 돌콩 추출물의 제조
돌콩(Glycine soja) 종자, 잎, 줄기 및 콩깍지 각 1kg을 15ℓ의 70%(v/v) 에탄올로 2시간 환류 추출한 후 추출액을 여과하고 여액을 감압농축, 건조하여 돌콩종자 추출물(GS), 돌콩 줄기 추출물(GS-S), 돌콩 잎 추출물(GS-L), 돌콩깍지 추출물(GS-P)을 각각 수득하였다.
실시예 2. 유산균 고체 발효에 의한 유산균 발효 돌콩 추출물(GS-F)의 제조
돌콩 분말 1kg에 3ℓ의 물을 첨가하여 24시간 동안 침지시키고, 100℃에서 15분 동안 끓이고 식힌 후, 1×107cfu/㎖의 락토바실러스 플랜타룸(Lactobacillus plantarum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 메센테로이드스(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei)로 이루어진 복합 유산균(제조원: 한남바이오 주식회사)을 0.1% 비율로 접종하여 42℃에서 72시간 동안 발효한 후, 동결건조하였다. 상기 발효하여 동결건조한 돌콩 유산균 발효물 1kg을 취하여 70% 에탄올 15ℓ를 가하고 85℃에서 3시간 동안 환류 추출한 후, 여과하고 여액을 농축 및 건조하여 유산균 발효돌콩 추출물(GS-F) 17.8g을 얻었다.
실시예 3. 인체 피부 각질세포에서의 항염 효과 확인
인체 피부 각질세포주인 HaCaT(human keratinocyte cell, ATCC, USA) 세포를 소태아혈청(FBS; fetal bovine serum), 페니실린-스트렙토마이신(PS; penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium)에서 배양하였으며, 96웰 플레이트에서 웰당 5×104 세포를 분주하여 DMEM 배지조건으로 18시간 배양한 후, 배지를 제거하고 혈청-프리 DMEM으로 교체하고, 시료(50, 100 및 200㎍/㎖의 돌콩 부위별 추출물) 및 10ng/㎖의 TNF-α+IFN-γ를 동시 처리하여 24시간 동안 배양하였다. TARC 및 RANTES 분비량은 ELISA 키트(R&D systems, USA)를 이용하여 제조사의 방법에 따라 세포 상층액에 존재하는 TARC(thymus-and activation-regulated chemokine), RANTES(regulated on activation, normal T cell expressed and secreted)의 분비량을 측정하였다. 스튜던트 t-테스트를 이용하여 통계적 유의성을 평가하였다.
그 결과 도 1에 개시한 바와 같이, TNF-α+IFN-γ에 의해 RANTES 및 TARC 분비량이 증가하였으며, 이에 대비하여 본 발명의 돌콩 추출물을 처리한 경우, RANTES 및 TARC 분비량이 감소하였다. 특히, 돌콩 줄기 추출물(GS-S) 및 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 효과가 다른 부위에 비해 현저하였다.
실시예 4. HaCaT 세포에서 피부장벽 개선 및 보습 효과
(1) 세포 생존율 평가
HaCaT 세포를 소태아혈청(FBS; fetal bovine serum), 페니실린-스트렙토마이신(PS; penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium)에서 배양하였으며, 96웰 플레이트에서 웰당 5×104 세포를 분주하여 DMEM 배지조건으로 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 시료(25, 50, 100 및 200㎍/㎖의 돌콩 부위별 추출물)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 세포생존율은 CCK-8 키트를 이용하여 측정하였다. 스튜던트 t-테스트를 이용하여 통계적 유의성을 평가하였다.
그 결과 도 2에 개시한 바와 같이, 본 발명의 돌콩 추출물은 세포 생존율에 아무런 영향을 미치지 않는다는 것을 확인하였다.
(2) 피부장벽 개선 및 보습 효과
HaCaT 세포를 소태아혈청(FBS; fetal bovine serum), 페니실린-스트렙토마이신(PS; penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium)에서 배양하였으며, 24웰 플레이트에서 웰당 1×105 세포를 분주하여 DMEM 배지조건으로 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 시료(50, 100 및 200㎍/㎖)의 돌콩 부위별 추출물)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 세포로부터 분해 버퍼(lysis buffer)를 이용하여 단백질을 추출한 다음, 필라그린(Filaggrin) ELISA 키트를 이용하여 발현된 필라그린의 양을 측정하였으며, 총 단백질로 정량하여 필라그린의 발현량을 정확히 산출하였다. 스튜던트 t-테스트를 이용하여 통계적 유의성을 평가하였다.
그 결과 도 3에 개시한 바와 같이, 피부장벽 보호 및 보습인자인 필라그린 발현량이 대조군(CON)에 비해 증가하였으며, 특히 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 효과가 다른 부위 추출물에 비해 현저하였다.
실시예 5. 히알루론산 분비량 확인
HaCaT 세포를 소태아혈청(FBS; fetal bovine serum), 페니실린-스트렙토마이신(PS; penicillin-streptomycin)를 첨가한 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium)에서 배양하였으며, 24웰 플레이트에서 웰당 5×104 세포를 분주하여 DMEM 배지조건으로 18시간 배양한 후, 배지를 제거하여 혈청-프리 DMEM으로 배지를 교체하고, 시료(25, 50㎍/㎖의 돌콩 추출물), 10ng/㎖의 TNF-α+IFN-γ를 동시 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 세포 상층액으로부터 인간 히알루론산(human Hyaluronic acid; HA) ELISA 키트를 이용하여 분비된 HA 양을 측정하였으며, 스튜던트 t-테스트를 이용하여 통계적 유의성을 평가하였다.
그 결과, 도 4에 개시한 바와 같이, 아무것도 처리하지 않은 대조군(CON)과 TNF-α+IFN-γ 처리군에서는 히알루론산 분비량의 차이가 없었으나, 본 발명의 돌콩 줄기 추출물(GS-S) 및 돌콩 잎 추출물(GS-L)을 처리한 군에서, 히알루론산 분비량이 통계적으로 유의미하게 증가하였다.
실시예 6. MC/9 면역비만세포에서 히스타민 분비 억제 효과
(1) 세포 독성 실험
돌콩 또는 발효 돌콩 추출물의 세포 독성을 확인하고자 CCK-8(Cell Counting Kit-8) 어세이를 실시하였다. 96웰 플레이트에서 MC/9 비만세포에 시료를 농도별로 처리하고 배양하였다. 24시간 후에 배지에 CCK-8을 10% 농도로 첨가한 다음 2시간 동안 37℃에서 반응시킨 후, 마이크로플레이트 스펙트로미터(microplate spectrophotometer)(Biorad, Hercules, CA, USA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하고, 대조군과의 비교를 통해 상대적인 세포생존율(%)을 계산하였다.
(2) 히스타민 분비량 측정
배양된 MC/9 마우스 비만 세포를 96웰 플레이트에 접종하여 25㎍/㎖의 컴파운드48/80(Sigma, USA)과 다양한 농도의 시료를 30분 동안 처리하였다. 그 후, 배지에 분비된 알러지성 히스타민(Histamine)의 분비량을 ELISA kit(Oxford Biomedical Research Inc., USA)로 측정하였다. 100% 생성량은 컴파운드48/80이 처리되지 않은 군에서 처리된 군 사이의 히스타민 분비량의 차이로 계산하였다.
그 결과 도 5에 개시한 바와 같이, 대조군(CON) 대비 컴파운드48/80 처리군의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 증가하였고, 컴파운드48/80 처리군 대비 돌콩 종자 추출물(GS), 돌콩 줄기 추출물(GS-S) 및 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 감소하였다. 특히, 돌콩 종자 추출물(GS) 대비 돌콩 잎 추출물(GS-L)의 히스타민 분비량이 통계적으로 유의미하게 더 감소한 것을 확인하였다.

Claims (11)

  1. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 피부질환은 피부염, 소양증 또는 피부 건선인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 돌콩 추출물의 추출용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  5. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 조성물은 피부에 도포하는 연고제, 첩부제 또는 분무제의 제형인 것을 특징으로 하는 피부질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 의약외품.
  9. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  10. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습용 화장료 조성물.
  11. 돌콩 추출물 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 개선용 사료 첨가제.
KR1020220077026A 2021-07-14 2022-06-23 돌콩 또는 발효 돌콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부보습 및 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 KR20230011866A (ko)

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