KR20220164352A - 항산화제의 효능 평가 방법 - Google Patents
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Abstract
본 명세서는 피부 각질층에서의 시료의 항산화 효능을 평가하고 정량화할 수 있는 방법을 제공한다. 본 개시는 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약을 시용하므로 시료의 항산화 효능을 시각화하여 직관적으로 평가할 수 있다. 또한, 본 개시는 침습적 수단을 사용하지 않고 각질을 채집하여, 이를 별도의 추출 과정 없이 직접 시약과 반응시키기 때문에 신속하고 효율적인 평가가 가능하다.
Description
본 명세서에 기재된 내용은 항산화제의 효능을 평가하는 방법에 관한 것이다.
체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질 및 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적 및 환경적 요인 등에 의하여 생성되는 활성산소(Free Radical)는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴작용을 함으로써 세포노화 또는 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다. 이에 상기와 같은 활성산소를 제거하여 세포의 산화를 억제할 수 있는 다양한 항산화제가 개발되고 있다.
항산화제의 효능, 예를 들어 피부에 사용되는 항산화제의 효능을 평가하는 방법으로는 피부의 각질을 과산화수소와 같은 자유라디칼 물질과 카탈라아제와 같은 각질내 항산화 효소와의 반응성 분석 방법, 각질의 탄화 단백질(Carbonylated protein)을 형광 시료와 반응시킨 후 형광의 발현 정도를 공초점 현미경 또는 형광 현미경으로 분석하는 방법, 침습적(biopsy) 방법을 통해 피부 조직의 세포 변화를 스테이닝(staining)을 통해 관찰하거나 항산화 성분을 샘플에서 추출하여 분석하는 방법이 있다. 그러나 상기 피부의 각질을 채집한 후 각질 속 카탈라아제를 과산화수소와 반응시켜 자유 라디칼의 제거(Scavenging) 효과를 측정하는 방법의 경우, 채집한 각질을 카탈라제 활성분석 키트(catalase activity assay kit)의 지정된 버퍼와 반응시켜 카탈라제를 추출하는 일련의 과정을 거쳐야 한다는 번거로움이 있으며, 항산화제가 적용된 피부에 있어서 각질 깊이에 따른 항산화력을 시각화할 수 없다는 단점이 있다. 상기 각질의 탄화 단백질을 형광 시료와 반응시키는 방법의 경우 형광의 발현 정도를 분석하는 것으로 항산화력을 시각화할 수는 있지만 최외곽층의 각질을 채집하여 분석하는 것이므로 항산화제가 피부의 어느 깊이까지 효능을 나타내는지를 확인할 수 없다는 단점이 있다. 상기 침습적 방법의 경우 항산화제에 의한 피부 조직의 세포 변화를 검출할 수는 있지만 출혈, 감염 등의 위험이 있어 적용분야가 제한적이며, 특히 화장품 임상연구에는 거의 사용되지 않는다는 단점이 있다.
일 관점에서, 본 개시가 해결하고자 하는 과제는 시료의 항산화 효능을 평가할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 개시의 일 실시예는 시료의 항산화 효능 평가 방법으로,
피부에 시료를 국소 도포하는 단계;
상기 시료가 도포된 부위의 각질을 동일 부위에서 수직 방향으로 반복 채취하는 단계;
상기 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 채취하는 단계;
동량의 상기 시료가 도포된 부위의 각 채취 회차의 각질과 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약에 각각 투입하여 반응시키는 단계; 및
상기 시료가 도포된 부위의 채취 회차별 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질의 색상 변화 정도를 비교하여 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계;
를 포함하는, 방법을 제공한다.
일 관점에서, 본 개시는 피부 각질층에서 시료의 항산화 효능을 평가하고 정량화할 수 있다. 본 개시는 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약을 시용하므로 시료의 항산화 효능을 시각화하여 직관적으로 평가할 수 있다. 또한, 본 개시는 침습적 수단을 사용하지 않고 각질을 채집하여, 이를 별도의 추출 과정 없이 직접 시약과 반응시키기 때문에 신속하고 효율적인 평가가 가능하다. 따라서 본 개시는 피부 항산화제의 효능을 평가하는데 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 개시의 일 실시예에 따른 시료의 항산화 효능 평가 방법을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 2a는 본 개시의 일 실시예에 따라 피부 각질층을 대상으로 하여 두 제품의 항산화 효능을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 2b는 본 개시의 일 실시예에 따라 두 제품의 UV 노출에 대한 항산화 효능 유지율을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 3a는 본 개시의 일 실시예에 따라 UV 노출시킨 A 제품을 피부에 도포한 다음 채집한 각질을 채집회차(각질층)별로 시약에 투입하여 반응시킨 후 각 시약을 촬영한 이미지이다.
도 3b는 본 개시의 일 실시예에 따라 UV 노출시킨 B제품을 피부에 도포한 다음 채집한 각질을 채집회차(각질층)별로 시약에 투입하여 반응시킨 후 각 시약을 촬영한 이미지이다.
도 2a는 본 개시의 일 실시예에 따라 피부 각질층을 대상으로 하여 두 제품의 항산화 효능을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 2b는 본 개시의 일 실시예에 따라 두 제품의 UV 노출에 대한 항산화 효능 유지율을 비교한 결과를 나타낸 도이다.
도 3a는 본 개시의 일 실시예에 따라 UV 노출시킨 A 제품을 피부에 도포한 다음 채집한 각질을 채집회차(각질층)별로 시약에 투입하여 반응시킨 후 각 시약을 촬영한 이미지이다.
도 3b는 본 개시의 일 실시예에 따라 UV 노출시킨 B제품을 피부에 도포한 다음 채집한 각질을 채집회차(각질층)별로 시약에 투입하여 반응시킨 후 각 시약을 촬영한 이미지이다.
이하, 첨부한 도면들을 참조하여, 본 출원의 실시예들을 보다 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 본 출원에 개시된 기술은 여기서 설명되는 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 단지, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 출원의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. 또한, 당업자 본 출원의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 출원의 사상을 다양한 다른 형태로 구현할 수 있을 것이다.
본 개시의 일 실시예는 시료의 항산화 효능 평가 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은,
피부에 시료를 국소 도포하는 단계;
상기 시료가 도포된 부위의 각질을 동일 부위에서 수직 방향으로 반복 채취하는 단계;
상기 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 채취하는 단계;
동량의 상기 시료가 도포된 부위의 각 채취 회차의 각질과 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약에 각각 투입하여 반응시키는 단계; 및
상기 시료가 도포된 부위의 채취 회차별 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질의 색상 변화 정도를 비교하여 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계;
를 포함할 수 있다.
본 개시에서 "각질"이라 함은 섬유성 구조단백의 일종으로, 피부, 모발, 손톱 등의 상피세포를 구성하는 주요 구조 물질을 의미한다. 본 개시의 일 실시예로서 상기 각질은 피부 표피의 각질층(Stratum Corneum)의 세포들을 의미하는 것일 수 있으나, 이외에도 채취부위에 한정되지 않고 모두 포함될 수 있다. 본 개시에서 피부의 동일한 부위에서 각질을 반복 채취하는 경우, 피부 최외곽층의 표피에서 진피층 방향으로 각질 채취 회차에 따라 피부 깊이 층수를 정의할 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 방법에 따라 첫번째로 채취된 각질, 즉 피부 최외곽층의 각질을 피부 1층 깊이의 각질, 10번째로 채취된 각질을 피부 10층 깊이의 각질로 정의할 수 있다. 일 실시예로서, 상기 시료가 도포된 부위의 각질의 채취회차는 제한되지 않으나, 반복 채취 횟수가 증가하면 각질층 이상이 샘플링되고 피부 손상이 발생하는 점, 20회 이상의 반복채취에서는 항산화 효과가 급격하게 감소하는 점을 고려할 때, 예를 들어 동일 부위에서 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 11회, 12회, 13회, 14회, 15회, 16회, 17회, 18회, 19회 또는 20회 이상 반복 채취되는 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 시료가 도포된 부위의 각질은 동일 부위에서 5 회 내지 15회 반복 채취되는 것일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 피부에 시료를 도포하는 단계는 상기 단계 전에 피부를 세정하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일 실시예로서, 상기 피부에 시료를 도포하는 단계는 시료를 도포 후 5 내지 180 분간 흡수시키는 것을 포함할 수 있다.
본 개시에서 "채취"라 함은 측정이나 분석을 위해 대상이 되는 물질을 획득하는 것을 의미하며, 상기 채취의 대상이나 수단 또는 방법이 제한되지 않는 최광의의 의미이다. 본 개시의 일 실시예에서, 상기 채취의 대상은 피부의 각질일 수 있으며, 상기 채취는 비침습적 수단 또는 방법에 의한 것일 수 있다. 예를 들어 상기 채취는 테이프-스트리핑(tape-stripping)에 의한 것일 수 있다. 이때 상기 테이프는 점착성을 가짐으로써 피부 각질을 채취할 수 있는 것이라면 제한되지 않고 모두 사용할 수 있다. 보다 구체적으로, 본 개시의 일 실시예로서 상기 시료가 도포된 부위의 각질을 채취하는 단계 및 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 채취하는 단계에서 상기 각 단계의 각질은 테이프-스트리핑을 통해 채취되는 것일 수 있다. 일 실시예로서 각질을 동일 부위에서 테이프-스트레핑을 통해 반복 채취할 경우 피부 각질층의 각질이 수직방향으로 채취되므로, 시료의 항산화 효능이 나타나는 피부 깊이를 확인할 수 있다.
본 개시에서, "항산화제" 혹은 "항산화 효능을 갖는 물질(시료)"은 대상의 산화적 손상을 억제 또는 예방하거나 지연시키는 물질을 의미한다.
본 개시에서, "라디칼(radical)"은 자유(free) 라디칼을 의미한다. 상기 자유 라디칼은 원자, 분자 또는 이온이 홀전자와 함께 있어 매우 불안정하고 다른 분자와의 반응성이 크다. 따라서 시료가 항산화제로 작용하면 자유라디칼이 상기 시료와 반응하여 분해된다.
본 개시는 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약을 시용하므로 시료가 도포된 각질에서 항산화 효능이 나타난 정도에 따라 시약의 색상도 변화하므로, 시료의 항산화 효능을 시각화하여 직관적으로 평가할 수 있다. 또한, 상기 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약은 시약의 반응 정도에 따라 특정 파장에서의 흡광도가 변화하므로, 본 개시의 일 실시예는 흡광도를 비교하여 시료의 항산화 효능을 정량화할 수 있다. 일 실시예로서, 상기 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 시약, ABTS(2,2'-azinodi(3-ethlbenzthiazolne-6-sulfonic acid)) 시약, FRAP(Ferric ion reducing antioxidant power) 시약 및 요오드 용액(iodine solution)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 시약을 반응은 사용되는 시약의 종류에 따라 당업계의 통상적인 방법에 따라 수행될 수 있다.
일 실시예로서, 상기 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약은 색상의 변화, 즉 라디칼의 제거 정도에 따라 흡광도가 달라지므로, 상기 시료가 도포된 부위의 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질이 투입된 각 시약의 흡광도를 비교함으로써 시료의 항산화 효능을 정량화할 수 있다.
구체적으로, 일 실시예로서 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는 상기 항산화 효능을 정량화하는 단계를 포함할 수 있으며, 상기 항산화 효능을 정량화하는 단계는,
상기 시료가 도포된 부위의 각 채취 회차의 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질이 투입된 각 시약의 흡광도를 측정하는 단계; 및
상기 측정된 흡광도를 아래의 수학식에 대입하여 채취회차별 시료의 항산화 효능을 더하여, 시료의 항산화 효능을 정량화하는 단계를 더 포함할 수 있다.
[수학식 1]
시료의 항산화 효능(%)=[100 - {(시료 처리군 흡광도 - 블랭크 흡광도) / (대조군 흡광도 -블랭크 흡광도) * 100}] / 각질량
여기서, 시료 처리군은 시료가 도포된 부위의 각 채취회차별 각질이 투입된 시약, 대조군은 시료를 도포하지 않은 부위의 각질이 투입된 시약, 블랭크(blank)는 빈 시약 용기를 의미한다. 상기 각질량은 시료 처리군에 포함된 각질층의 단백질 질량이다.
일 실시예로서, 상기 각질량의 정량화 방법은 제한되지 않으나, 예를 들어 SquameScan®(제조사: Heiland electronic GmbH, Germany)을 이용하여 정량화할 수 있다.
일 실시예로서 상기와 같은 시료의 항산화 효능 정량화 단계를 더 포함할 경우, 예를 들어 시료의 항산화 효능을 피부 각질 00층 깊이까지의 항산화력이 00%인 것으로 표현할 수 있다.
이때, 상기 각 흡광도를 측정하는 파장은 사용하는 시약의 종류에 따른다. 예를 들어, 상기 DPPH 시약은 517nm, FRAP 시약은 593nm, 요오드 시약은 497 nm에서 흡광도 변화를 측정할 수 있으며, ABTS 시약은 734nm에서 흡광도 변화를 측정할 수 있다.
일 실시예로서 상기 흡광도의 측정 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법이라면 제한되지 않고 모두 사용될 수 있으며, 예를 들어 분광광도계를 사용하여 측정하는 것일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 각 각질을 채취하는 단계는 채취한 각질량, 즉 각질층내 단백질 질량을 측정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 개시는 피부의 표면이 아닌 상하 방향의 피부 깊이로 항산화 효능을 나타내는 시료, 즉 항산화제가 어느 깊이까지 흡수 되는지, 또는 얼마나 흡수되는지를 측정할 수 있다.
일 실시예로서, 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는,
상기 채취 회차별 각질들의 색상 변화 정도를 각각 측정하는 단계; 및
상기 채취 회차별 각질들의 색상 변화 정도를 시료를 도포하지 않은 각질과 비교하여, 색상 변화가 높은 채취 회차까지 나타날수록 시료의 항산화 효능이 높은 것으로 평가하는 단계를 더 포함할 수 있다.
또한, 일 실시예로서, 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는 시료가 도포된 부위의 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질의 색상 변화 정도를 비교하여 색상 변화가 클수록 시료의 항산화 효능이 높은 것으로 평가하는 것을 더 포함할 수 있다.
일 실시예로서, 상기 방법은 상기와 같은 채취 회차별 각질들의 색상 변화 정도와 색상 변화가 나타나는 채취 회차의 비교를 통하여, 복수의 시료의 항산화 효능을 비교 평가하는 방법일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 방법은 시료 사용 후의 즉각적인 항산화 효과를 평가할 수 있다. 또한, 상기 방법은 피부에 시료를 국소 도포하는 단계를 소정 기간 동안 반복하는 것을 더 포함하여 시료의 사용 기간에 따른 항산화 효능을 평가하는 것일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 방법은 UV에 대한 시료의 항산화 효능 유지율 평가 방법일 수 있다. 구체적으로, 상기 방법은,
피부에 시료를 국소 도포하는 단계 전에 상기 시료를 UV에 노출시키는 단계; 및
상기 UV에 노출된 시료의 항산화 효능과 UV에 노출되지 않은 시료의 항산화 효능을 비교하는 단계;
를 더 포함할 수 있다.
이하, 본 개시를 하기의 실시예를 통하여 설명한다. 이들은 오로지 본 개시를 보다 구체적으로 설명하기 위해 예시적으로 제시한 것일 뿐, 본 개시의 범위가 이 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가지는 자에 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1]
본 개시의 일 실시예로서, 시료의 피부 항산화 효능을 다음의 방법에 따라 평가하였다.
먼저, 항산화 효능 평가대상 시료로서 A제품(제품코드: SIP21001, 제조사: 아모레퍼시픽, 유효성분: Vit C 30%)과 B제품(타사 제품, 유효성분: Vit C 30%)을 냉장보관한 후 본 실험 당일날 개봉하여 항산화 효능의 감소, 즉 변성정도가 최소화되도록 준비하였다.
그 다음, 상기 정상 피부를 갖는 피험자의 전박부를 세정하고 15분간 대기한 후, 3*3 cm2 면적으로 상기 두 시료를 다른 부위에 각각 2㎕/㎠ 도포하였다. 상기 두 제품을 흡수시킨 후, 상기 각 도포 부위의 각질을 D-squame® tape(제조사: CuDerm, Dallas TX, USA)을 이용하여 수직 방향으로 10회 반복 채취하였다. 상기 각 채취회차별로 수집된 각질을 SquameScan®(제조사: Heiland electronic GmbH, Germany)을 이용하여 정량화하였다.
상기 정량화가 완료된 각질을 플레이트에 각 채취회차별로 넣고, 라디칼에 따라 색상이 변하는 시약인 DPPH 시약(100 μM, 3 ml)와 실온에서 약 5분 동안 반응시켰다. 이때, 상기 시료를 도포하지 않은 무도포 부위에서 동일한 방법으로 채취한 각질을 대조군으로 하여, 동일한 방법으로 반응시켰다.
상기 반응이 완료된 용액 중 각 제품별로 채취 1-10회차 각질을 시약과 반응시킨 용액을 96웰 플레이트에 100μl씩 이동시킨 후, 상기 DPPH 시약의 색상 변화를 평가할 수 있는 파장인 517nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 다음, 상기 시료의 항산화 효능을 다음의 수학식을 사용하여 정량화하였다. 각질 채취 1-10회차 각질을 각각 투입한 시료에 대한 항산화 효능을 더하여 최종 시료의 항산화 효능을 얻었다.
[수학식 1]
시료의 항산화 효능(%)=[100 - {(시료 처리군 흡광도 - 블랭크 흡광도) / (대조군 흡광도 -블랭크 흡광도) * 100}] / 각질량
상기 블랭크 흡광도는 빈 시약 용기(플레이트)에서 나오는 흡광도를 의미한다.
그 결과, 아래 표에 나타난 바와 같이, A제품과 B제품의 각 항산화 효능은 각각 9% 내외로 유사하게 나타났다.
| 항목 | A제품 | B제품 |
| 항산화 효능(%) | 9.05 ± 2.42 | 8.69 ± 2.48 |
[실시예 2]
본 개시의 일 실시예로서, 시료의 UV 노출에 대한 피부 항산화 효능 유지율을 다음의 방법에 따라 분석하였다.
먼저, 항산화 효능 평가대상 시료로서 상기 실시예 1에서 사용된 것과 동일한 A제품(제품코드: SIP21001, 제조사: 아모레퍼시픽, 유효성분: Vit C 30%)과 B제품(타사 제품, 유효성분: Vit C 30%)을 UV에 20분간 도출 시켰다. 상기 UV에 노출된 각 시험제품의 항산화 효능을 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 평가하여 다음의 표 및 도 2a 및 도 2b에 나타내었다.
| 항목 | A제품 | B제품 |
| 미변성 제품의 항산화 효능(%) | 9.05 ± 2.42 | 8.69 ± 2.48 |
| UV에 노출된 제품의 항산화 효능(%) | 8.85 ± 3.54 | 7.01 ± 1.68 |
| UV 노출 전 대비 항산화력 유지율(%) | 96.71 ± 20.59 | 81.39 ± 7.20 |
본 개시의 일 실시예에 따라 UV 노출 전후의 항산화력 유지율(%)을 평가한 결과, UV에 노출되지 않은 미변성 A제품과 B제품은 항산화 효능이 유사한 수준으로 나타난데 반해, UV에 노출시킨 각 제품의 항산화 효능은 A제품이 B제품보다 우수한 것으로 나타났다.
또한, 도 3a 및 도 3b는 상기 UV에 노출된 A제품과 B제품을 도포한 후 채취한 각 채취회차별(층별) 각질들을 시약에 투입하여 반응시킨 결과 시약의 색상이 변화한 것을 촬영한 도이다. 이로부터 본 개시의 일 실시예에 따른 방법에 따르면 시약의 색상 변화만으로 항산화 효능을 시각적으로 평가할 수 있음을 확인할 수 있다.
Claims (10)
- 시료의 항산화 효능 평가 방법으로,
피부에 시료를 국소 도포하는 단계;
상기 시료가 도포된 부위의 각질을 동일 부위에서 수직 방향으로 반복 채취하는 단계;
상기 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 채취하는 단계;
동량의 상기 시료가 도포된 부위의 각 채취 회차의 각질과 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약에 각각 투입하여 반응시키는 단계; 및
상기 시료가 도포된 부위의 채취 회차별 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질의 색상 변화 정도를 비교하여 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계;
를 포함하는, 방법. - 제1항에 있어서, 상기 시료가 도포된 부위의 각질은 동일 부위에서 5 내지 15회 반복 채취하는 것인, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 시료가 도포된 부위의 각질을 채취하는 단계 및 시료가 도포되지 않은 부위의 각질을 채취하는 단계에서 상기 각 단계의 각질은 테이프-스트리핑(tape-stripping)을 통해 채취되는 것인, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 라디칼에 따라 색상이 변화하는 시약은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 시약, ABTS(2,2'-azinodi(3-ethlbenzthiazolne-6-sulfonic acid)) 시약, FRAP(Ferric ion reducing antioxidant powe) 시약 및 요오드 용액(iodine solution)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 방법.
- 제4항에 있어서, 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는 상기 항산화 효능을 정량화하는 단계를 더 포함하고,
상기 항산화 효능을 정량화하는 단계는,
상기 시료가 도포된 부위의 각 채취 회차의 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질이 투입된 각 시약의 흡광도를 측정하는 단계; 및
상기 측정된 흡광도를 아래의 수학식에 대입하여 얻은 각 채취회차별 시료의 항산화 효능을 더하여, 시료의 항산화 효능을 정량화 하는 단계:
[수학식 1]
시료의 항산화 효능(%)=[100 - {(시료 처리군 흡광도 - 블랭크 흡광도) / (대조군 흡광도 -블랭크 흡광도) * 100}] / 각질량
여기서, 시료 처리군은 시료가 도포된 부위의 각 채취회차별 각질이 투입된 시약, 대조군은 시료를 도포하지 않은 부위의 각질이 투입된 시약, 블랭크는 빈 시약 용기를 의미하며, 상기 각질량은 시료 처리군에 포함된 각질층의 단백질 질량이다;
를 포함하는, 방법. - 제1항에 있어서, 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는 시료가 도포된 부위의 각질과 시료를 도포하지 않은 부위의 각질의 색상 변화 정도를 비교하여 색상 변화가 클수록 시료의 항산화 효능이 높은 것으로 평가하는 것을 더 포함하는, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 시료의 항산화 효능을 평가하는 단계는,
상기 채취 회차별 각질들의 색상 변화 정도를 각각 측정하는 단계; 및
상기 채취 회차별 각질들의 색상 변화 정도를 시료를 도포하지 않은 각질과 비교하여, 색상 변화가 높은 채취 회차까지 나타날수록 시료의 항산화 효능이 높은 것으로 평가하는 단계;
를 더 포함하는, 방법. - 제1항에 있어서, 상기 방법은 복수의 시료의 항산화 효능을 비교 평가하는 방법인, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 방법은 피부에 시료를 국소 도포하는 단계를 소정 기간 동안 반복하는 것을 더 포함하여, 시료의 사용 기간에 따른 항산화 효능을 평가하는 것인, 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 방법은 UV에 대한 시료의 항산화 효능 유지율 평가 방법이고, 상기 방법은,
피부에 시료를 국소 도포하는 단계 전에 상기 시료를 UV에 노출시키는 단계; 및
상기 UV에 노출된 시료의 항산화 효능과 UV에 노출되지 않은 시료의 항산화 효능을 비교하는 단계;
를 더 포함하는, 방법.
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|---|---|---|---|---|
| JPH1087505A (ja) | 1996-09-10 | 1998-04-07 | Taisho Pharmaceut Co Ltd | 生体内抗酸化力の評価方法 |
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