KR20220162233A - 고들빼기 추출물을 포함하는 항암용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 암 개선 또는 예방용 식품 조성물에 관한 것으로, 고들빼기 뿌리 추출물이 대장암에 효과적이며, 고들빼기 잎 추출물이 자궁암에 효과적임을 확인하였다. 본 발명의 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물은 항암에 대한 효과로, 구체적으로는 대장암 또는 자궁암 개선, 예방 또는 치료 용도로 식품, 의약품 개발에 유용하게 활용할 수 있다.

Description

고들빼기 추출물을 포함하는 항암용 조성물{Anticancer composition comprising Youngia sonchifolia extract thereof}
본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물 또는 암 개선 또는 예방용 식품 조성물에 관한 것이다.
고들빼기(Youngia sonchifolia)는 국화과에 속하는 2년생 산채류로 우리나라 산야에 자생하는 다년생 초본이며, 민간에서는 야생종을 채취하여 식용이나 약용으로 이용하고 있다. 상기 고들빼기의 줄기는 보랏빛 또는 붉은 빛을 띠고 있으며 80 cm 정도로 곧게 자라는 데 많은 가지를 치고 잎은 길쭉한 타원형 내지 주걱모양으로 가장자리에는 고르지 않은 톱니가 있거나 또는 밋밋한 형태를 갖기도 한다. 상기 고들빼기의 잎의 맨 아래 부분은 줄기를 감싸는 모양이 귀처럼 보이는 매우 독특한 생김새를 갖고 있으며, 꽃은 5 내지 6월경에 피는데 가지 끝에 여러 개의 꽃이 뭉쳐있어 가을 국화모양을 하고 있으며 색깔은 노란색이다. 상기 고들빼기의 종자가 익으면 흰 솜털이 있어 날아다니며 종자는 흑색의 부리 모양을 하고 있고, 뿌리는 굵기가 1.4 내지 1.7 cm, 길이는 2.5 내지 5 cm 정도로 자라는데 이 부분을 잎과 함께 나물로 이용하며, 식용으로는 4월 경에 어린잎을 채취하여 사용하고 있다.
상기 고들빼기의 주성분은 이눌린(inulin)으로 쓴맛을 가지고 있어서, 주로 다른 양념과 혼합하여 쓴맛을 마스킹할 수 있도록 김치로 담가서 식용으로 이용되고 있으며 해열, 경혈, 소화불량, 폐렴, 간염, 진정 및 이뇨작용이 있어 약용으로도 쓰여 왔다.
암은 전세계 인간의 가장 무서운 질병의 한 종류이다. 암 세포는 보통 우리 몸의 정상 세포를 침범하고, 파괴함으로써 인간의 죽음을 초래할 수 있다. 천연물은 비교적 독성이 없으며 고대부터 자연 요법으로 사용되어 왔기 때문에 천연물 유래 화합물의 항암 특성에 대해 많은 연구가 진행 중이다.
이에, 본 발명에서는 고들빼기를 이용하여 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 개발하고자 한다.
대한민국 등록특허 제 10-1738541 호
본 발명의 해결하고자 하는 과제는 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 과제를 해결하기 위해 본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.
상기 암은 대장암 또는 자궁암일 수 있다.
상기 암이 대장암인 경우 상기 추출물은 고들빼기 잎을 추출한 것일 수 있다.
상기 암이 자궁암인 경우 상기 추출물은 고들빼기 뿌리를 추출한 것일 수 있다.
또한 본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 개선 또는 예방용 건강기능성 식품 조성물을 제공한다.
상기 건강기능성 식품 조성물은 동시에 간 보호효과를 가지는 것일 수 있다.
상기 건강기능성 식품 조성물은 동시에 항염증 효과를 가지는 것일 수 있다.
상기 암은 대장암 또는 자궁암일 수 있다.
본 발명에 따르면, 고들빼기 뿌리 추출물이 대장암에 효과적이며, 고들빼기 잎 추출물이 자궁암에 효과적임을 확인하였는바, 대장암 또는 자궁암 예방 또는 치료용도로 식품, 의약품 개발에 유용하게 활용할 수 있다.
또한, 동시에 고들빼기 추출물이 항염, 간 보호 효과가 우수함을 확인하였는바, 건강기능성 식품개발에 유용하게 활용할 수 있다.
도 1은 고들빼기 추출부위에 따른 세포 생존율을 분석한 결과이다.
도 2는 고들빼기 뿌리 추출물의 아질산염(Nitrite) 생성 억제 효과를 분석한 결과이다.
도 3은 고들빼기 잎 추출물의 아질산염(Nitrite) 생성 억제 효과를 분석한 결과이다.
도 4는 고들빼기 뿌리 추출물의 에탄올에 의한 간 독성 저해 효과를 분석한 결과이다.
도 5는 고들빼기 잎 추출물의 에탄올에 의한 간 독성 저해 효과를 분석한 결과이다.
도 6은 고들빼기 뿌리 추출물의 아세트알데히드의 독성 저해 효과를 분석한 결과이다.
도 7은 고들빼기 잎 추출물의 아세트알데히드의 독성 저해 효과를 분석한 결과이다.
도 8은 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물의 대장암 세포주인 HCT116 세포에서 항암 활성을 분석한 결과이다.
도 9는 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물의 HeLa 세포에서 자궁암에 대한 효과를 분석한 결과이다.
본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 고들빼기 추출물을 포함한다.
본 발명에서 “고들빼기(Youngia sonchifolia)”는 국화과에 속하는 2년생 산채류로 우리나라 산야에 자생하는 다년생 초본이다.
본 발명에서 “추출물”은 고들빼기를 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 상기 고들빼기 추출물은 건조된 고들빼기를 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있다. 구체적으로 고들빼기 추출물은 건조된 큰고들빼기 분말에 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올 등과 같은 탄소수 1(C1)내지 4(C4)의 알코올 또는 이들의 혼합용매를 용출 용매로써 사용하고, 추출 온도는 10 내지 100℃에서, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 추출할 수 있으나, 암의 예방 또는 치료 활성이 있는 물질을 추출하는 방법이라면 제한 없이 이용될 수 있다.
구체적으로는 동결 건조한 고들빼기 분말을 추출용매로 100% 메탄올을 이용하고, 추출온도 60 내지 80℃로, 1회 에서 5회 연속 추출하여 여과하고, 그 여과추출물을 진공회전농축기로 20 내지 100℃에서 감압 농축하여 고들빼기 추출물을 수득한 결과물이 될 수 있으나, 본 발명의 암의 예방 또는 치료 활성을 나타낼 수 있는 한, 이에 제한되지는 않고, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물을 모두 포함할 수 있다.
본 발명에서 “예방”은 본 발명의 상기 약학 조성물을 개체에 투여하여 암의 발병을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"는 본 발명의 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하여 암의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 일실시예에서 고들빼기 잎 또는 뿌리의 동결 건조 시료 1kg을 초음파 추출기를 사용하여 100% 메탄올 용매를 이용 70℃에서 1시간 동안 3회 추출하여 여과한 후 감압회전농축기를 이용하여 40℃에서 농축하여 최종적으로 뿌리 추출물 또는 잎 추출물을 이용하여 대장암 또는 자궁암 세포에 대한 억제 효과를 평가하였으며, 그 외의 항염, 간 보호 효과를 평가하였다.
따라서 본 발명의 고들빼기 추출물은 구체적으로 고들빼기 잎 또는 뿌리를 100% 메탄올 용매로 추출한 것일 수 있다.
따라서 본 발명의 고들빼기는 구체적으로 순천 재래종일수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서 “암”은 일반적으로 비조절된 세포 성장의 특징을 갖는 포유동물의 생리학적 상태를 나타내거나 설명한다. "암"이란 세포의 정상적인 분열, 분화 및 사멸의 조절 기능에 문제가 발생하여 비정상적으로 과다 증식하여 주위 조직 및 장기에 침윤하여 덩어리를 형성하고 기존의 구조를 파괴하거나 변형시키는 상태를 의미한다.
본 발명의 일실시예에서 고들빼기 뿌리 추출물은 대장암에 대한 세포 억제 효과가 나타나지 않았으나, 잎 추출물의 경우 200㎍/㎖ 농도 처리시 19.3%의 생존율 감소가 나타나 대장암 세포에 대한 억제 활성이 있음을 확인하였다.
또한, 자궁암 세포에서 고들빼기 뿌리 추출물은 고농도(500㎍/㎖) 처리시에 11.9%의 생존율 감소를 나타내 자궁암에 대한 항암 효과가 높지 않은 것을 확인하였다. 반면, 고들빼기 잎 추출물은 농도 의존적으로 자궁암 세포의 생존율을 감소시켰으며 200 ㎍/㎖ 농도 처리시 76.9%의 생존율 감소를 나타내 자궁암 세포에 대한 강한 억제 활성이 있음을 확인하였다.
고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 대장암 세포 또는 자궁암 세포의 생존율을 감소시킴을 확인하였는바, 본 발명에서 암은 대장암 또는 자궁암일 수 있다.
또한, 고들빼기 잎 추출물이 대장암에 대해 특이적으로 항암 활성이 우수함을 확인하였는바, 상기 암이 대장암인 경우 상기 추출물은 고들빼기 잎을 추출한 것일 수 있다.
또한, 고들빼기 뿌리 추출물이 자궁암에 대해 특이적으로 항암 활성이 우수함을 확인하였는바, 상기 암이 자궁암인 경우 상기 추출물은 고들빼기 뿌리를 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 고들빼기 추출물을 포함하는, 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 조성물에 포함되는 고들빼기 추출물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 99 중량%로, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%를 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 암 치료 또는 예방을 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용 가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것이나 사용할 수 있으며, 상기 약학적 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
또한 본 발명은 고들빼기 추출물을 포함하는 암 개선 또는 예방용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 고들빼기, 추출물, 암, 예방에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 “개선”은 고들빼기 추출물을 포함하는 식품 조성물을 개체에 투여하여 암의 증세가 호전되거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 고들빼기 추출물을 암의 예방 또는 개선을 목적으로 식품 조성물에 첨가할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 고들빼기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.
상기 식품 조성물에는 고들빼기의 추출물 외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용되는 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능성 식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능성 식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 고들빼기의 추출물은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능성 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 일실시예에서 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 간 세포에서 알코올에 대한 독성 및 아세트알데히드에 의한 세포 독성을 감소시킴을 확인하였다.
따라서 본 발명의 식품 조성물은 항암 효과와 동시에 알코올 및 아세트알데히드에 의한 간 독성에 대해 간 보호 효과가 있음을 확인하였는바, 상기 식품 조성물은 동시에 간 보호효과를 가지는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 농도 의존적으로 LPS에 의해 유도되는 NO 생성을 억제함을 확인하였다.
따라서 본 발명의 식품 조성물은 NO 형성을 억제하여 항염증 효과를 나타냄을 확인하였는바, 상기 식품 조성물은 동시에 항염증 효과를 가지는 것일 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
1. 고들빼기 추출물의 제조
순청 재래종 고들빼기의 동결 건조 시료 1kg을 초음파 추출기를 사용하여 100% 메탄올 용매를 이용 70℃에서 1시간 동안 3회 추출하여 여과한 후 감압회전농축기를 이용하여 40℃에서 농축하여 최종적으로 뿌리 추출물 4.2g, 잎 1.73g를 확보하여 생리활성 검정에 활용 하였다.
2. 추출 부위에 따른 세포독성 평가
먼저 생쥐의 비장세포에서 고들빼기 부위에 따른 추출물의 세포독성을 평가하였다. 수컷 생쥐(Balb/C mouse)의 비장을 분리하여 조직을 으깬 후 원심분리하고, ACK lysis buffer (0.15 M NH4Cl, 1 M KHCO3, 0.01 M Na2EDTA, pH 7.2-7.4)를 처리 후 pellet에 5% FBS가 함유된 compelete RPMI media를 이용하여 비장세포를 일차배양하여 사용하였다. 고들빼기 뿌리 추출물 또는 잎 추출물을 100 내지 500 ㎍/㎖의 농도로 세포에 처리한 후 XTT 분석으로 세포생존율을 분석하였다.
도 1을 참조하면, 뿌리 추출물은 100 내지 500 ㎍/㎖에서 세포 생존율을 영향을 주지 않았으나, 잎 추출물은 200 ㎍/㎖ 이상의 농도에서 세포 생존율 80%로 약간 감소하였으며 500 ㎍/㎖ 이상에서는 40% 미만의 생존율을 나타내, 500 ㎍/㎖ 이상의 고농도의 세포 독성을 가짐을 확인하였다.
따라서 이후 평가에서 뿌리 추출물은 500 ㎍/㎖ 이하, 잎 추출물에 대해 200 ㎍/㎖ 이하에 농도에서 생리활성 평가를 수행하였다.
3. 추출 부위에 따른 항염증 효과평가
다음으로 고들빼기 추출 부위에 따른 추출물의 항염증 효과를 평가하고자 아질산염(Nitrite, NO) 생성 억제 효과를 분석하였다.
NO의 농도는 배양액 내의 아질산염 농도를 보고된 방법에 따라 Griess Reagent System을 이용하여 측정하였다(Huang et al., 2011). RAW 264.7 세포를 1.5×105 cells/㎖로 96 well plate에 분주하여 12 시간 부착시킨 후, 고들빼기 뿌리(0, 50, 100, 200 또는 500 ㎍/㎖) 또는 잎 추출물(0, 50, 100 또는 200 ㎍/㎖) 처리한 후, 1시간 뒤 LPS를 1 ㎍/㎖로 첨가하여 NO 형성을 유도하였다. 그후 다음 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 동안 배양하고, 배양액과 동량의 Griess Reagent를 가하고 10 분간 상온에서 반응시킨 후 540 nm 에서 흡광도를 측정하였다. sodium nitrite의 농도별 표준곡선을 이용하여 배양액의 NO 농도를 결정하였다.
도 2를 참조하면, 고들빼기 뿌리 추출물(200 또는 500 ㎍/㎖)만 처리한 경우 아질산염의 생성되지 않음을 확인하였으며, LPS 처리에 의해 증가된 RAW 264.7 세포의 아질산염 생성량은 고들빼기 뿌리 추출물에 의해 농도 의존적으로 감소하였다. 실험에 사용된 최고농도인 고들빼기 뿌리 추출물 500 ㎍/㎖에서는 아질산염 생성량이 80%까지 감소하여 비처리 대조군과 유사한 수준까지 아질산염 생성이 억제됨을 확인하였다.
도 3을 참조하면, 고들빼기 잎 추출물만 처리한 경우 아질산염의 생성되지 않음을 확인하였으며, LPS 처리에 의해 유도된 아질산염 생성이 고들빼기 잎 추출물 처리 농도가 증가함에 따라 감소함을 확인하였다. 독성이 없는 최고농도인 고들빼기 200 ㎍/㎖에서 LPS에 의해 증가된 아질산염 생성량이 약 70%까지 감소하였다.
이러한 결과는 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 농도 의존적으로 염증을 억제하여 강력한 항염활성이 있음을 시사한다.
4. 추출 부위에 따른 간 보호 효과 평가
4.1. 에탄올에 의한 간 독성 저해 효과 평가
고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물의 간 독성 저해 효과를 확인하기 위해 간 세포주인 Chang 세포에 에탄올 및 고들빼기 추출물을 처리하고 MTT assay를 수행하여 세포 생존율을 분석하였다. 구체적으로 고들빼기 뿌리 추출물(0 내지 500 ㎍/㎖) 또는 잎 추출물(0 내지 100 ㎍/㎖)을 전 처리하고, 1시간 뒤 에탄올 500mM을 처리한 후 세포의 생존율을 분석하였다.
분석결과, 에탄올 처리에 의해 세포 생존율이 약 50%로 감소하는 것을 확인하였으며, 뿌리 추출물 및 잎 추출물 처리시 생존율이 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 에탄올에 의한 간 독성 저해 효과가 우수함을 확인하였다(도 4, 도 5).
4.2. 아세트알데히드 독성 저해 효과 평가
고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물의 아세트알데히드 독성 저해 효과를 간 세포주인 Chang 세포에 아세트알데히드 및 고들빼기 추출물을 처리하고 MTT assay를 수행하여 세포 생존율을 분석하였다. 구체적으로 고들빼기 뿌리 추출물(0 내지 500 ㎍/㎖) 또는 잎 추출물(0 내지 100 ㎍/㎖)을 전처리하고 1시간 뒤 아세트알데히드 5μM을 처리한 후 세포의 생존율을 분석하였다.
분석결과, 아세트알데히드 처리에 의해 세포 생존율이 20%로 감소하는 것을 확인하였으며, 뿌리 추출물 및 잎 추출물 모두 추출물의 처리 농도가 증가함에 따라 생존율이 증가하는 것을 확인하였다(도 6, 도 7).
즉, 고들빼기 뿌리 또는 잎 추출물이 아세트알데히드 독성을 저해시켜 간을 보호할 수 있음 확인하였다.
5. 추출 부위에 따른 항암 활성 평가
5.1. 대장암 세포주 억제 활성 평가
대장암 세포주인 HCT116 세포에 고들빼기 뿌리(100, 200, 500 ㎍/㎖) 또는 잎 추출물(100, 200 ㎍/㎖)을 농도별로 처리하고 24 시간 후 XTT kit를 이용하여 세포 생존율을 평가하였다.
무처리 대조군과 비교하여, 뿌리 추출물에서는 대장암에 대한 세포 억제 효과가 나타나지 않았으나, 잎 추출물의 경우 200 ㎍/㎖ 농도 처리시 19.3%의 생존율 감소가 나타나 대장암 세포에 대한 억제 활성이 있음을 확인하였다. 이는 HCT116 세포의 특성상 높은 항암 활성이다(도 8).
5. 2. 자궁암 세포주 억제 활성 평가
자궁 경부암(자궁암) 세포주인 HeLa 세포에 고들빼기 뿌리(100, 200, 500 ㎍/㎖) 또는 잎 추출물(100, 200 ㎍/㎖)을 농도별로 처리하고 24 시간 후 XTT kit를 이용하여 세포 생존율을 평가하였다.
무처리 대조군과 비교하여, 뿌리 추출물은 100에서 500 ㎍/㎖로 처리 농도가 증가함에 따라 HeLa 세포의 생존율이 감소하는 경향을 나타냈으나, 500 ㎍/㎖ 처리시 11.9%의 생존율 감소를 나타내 효과가 높지 않은 것을 확인하였다.
반면, 고들빼기 잎 추출물의 경우 100 ㎍/㎖ 농도 처리시 67.1%의 생존율 감소가 나타났으며 200 ㎍/㎖ 농도 처리시 76.9%의 생존율 감소를 나타내, 자궁암 세포에 대한 강한 억제 활성이 있음을 확인하였다(도 9).
즉, 고들빼기 뿌리 추출물은 대장암에 대한 항암 효과를 가지며, 잎 추출물은 자궁암에 대한 항암 효과를 가짐을 확인하였다.

Claims (8)

  1. 고들빼기 추출물을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 암은 대장암 또는 자궁암인 것인, 약학 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 암이 대장암인 경우, 상기 추출물은 고들빼기 잎을 추출한 것인, 약학 조성물.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 암이 자궁암인 경우, 상기 추출물은 고들빼기 뿌리를 추출한 것인, 약학 조성물.
  5. 고들빼기 추출물을 포함하는 암 개선 또는 예방용 건강기능성 식품 조성물.
  6. 제 5항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 동시에 간 보호효과를 가지는, 건강기능성 식품 조성물.
  7. 제 5항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 동시에 항염증 효과를 가지는, 건강기능성 식품 조성물.
  8. 제 5항에 있어서,
    상기 암은 대장암 또는 자궁암인 것인, 건강기능성식품 조성물.
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