KR20220160177A - 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물 - Google Patents

알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20220160177A
KR20220160177A KR1020210067992A KR20210067992A KR20220160177A KR 20220160177 A KR20220160177 A KR 20220160177A KR 1020210067992 A KR1020210067992 A KR 1020210067992A KR 20210067992 A KR20210067992 A KR 20210067992A KR 20220160177 A KR20220160177 A KR 20220160177A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
skin
moisturizing
composition
aloe vera
flower extract
Prior art date
Application number
KR1020210067992A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102543123B1 (ko
Inventor
신은주
심규석
조은애
김선여
술타나 라지아
강민철
Original Assignee
주식회사 유니베라
가천대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 유니베라, 가천대학교 산학협력단 filed Critical 주식회사 유니베라
Priority to KR1020210067992A priority Critical patent/KR102543123B1/ko
Priority to PCT/KR2022/006170 priority patent/WO2022250313A1/ko
Publication of KR20220160177A publication Critical patent/KR20220160177A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102543123B1 publication Critical patent/KR102543123B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

본 발명은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 피부 보습 인자의 발현을 조절하여 피부 보습을 향상시키고, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상시키는 효과를 나타내는바, 피부 보습을 위한 화장료 조성물, 의약외품, 피부외용제 또는 식품 조성물로 사용될 수 있다.

Description

알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물{Composition for skin moisturizing comprising Aloe flower extract thereof as an active ingredient}
본 발명은 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 알로에베라(Aloe vera) 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에 관한 것이다.
피부는 우리 몸에서 가장 큰 기관으로 표피, 진피, 피하조직이라고 불리는 세 개의 층을 가지고 있다. 표피의 각질층은 물리적, 화학적, 환경적 자극에 대한 일차적인 방어벽 역할을 한다. 특히 표피층의 세포 내 지질과 천연 보습 인자는 표피 수분 손실을 방지하여 피부 보습을 유지하는데 도움이 된다. 수분 부족 및 열악한 환경 조건으로 인한 각질층의 손상은 건조한 피부를 만들고, 이는 피부염, 가려움증, 건선 및 노화와 같은 여러 피부 질환이 발생하기 쉬운 상태로 만든다.
피부 보습과 관련된 분자 신호 경로를 기반으로, 여러 유형의 표피 단백질이 피부장벽 기능을 조절하는데 관여하는 것으로 보고되었다. 히알루로난 합성효소(Hyaluronan synthase, HASes)와 분해효소(hyaluronidase, HYALs)에 의해서 조절되는 히알루로난(HA, Hyaluronan)은 피부 보습 조절제이다. 프로필라그린(profilaggrin), 아쿠아포린(aquaporins, AQP), 인볼루크린(involucrin)은 피부의 강력한 물리적 장벽 및 투과장벽 기능에 기여한다. 이들 모두는 피부 보습과 피부 무결성을 유지하는데 중요한 역할을 한다.
천연 원료 보습제는 전통적으로 여러 피부 질환을 치료하는데 사용해왔다. 알로에베라, 병풀, 해초, 동백은 보습 효과로 잘 알려진 식물이다. 아스포델루스과(Asphodelaceae)에 속하는 알로에베라(Aloe vera, Aloe barbadensis Mill.과 동의어)는 다년생 관목으로 장미와 같은 패턴으로 줄기를 둘러싼 잎이 있고, 중앙에는 꽃이 자란다. 알로에베라는 보습, 항염, 항균, 상처 치유 기능으로 보고되어 다양한 화장품에 사용되어 왔다.
인체 적용시험을 포함해 대부분의 연구는 알로에베라 잎 추출물, 겔, 특정 성분 등에 대해서 수행되어 왔다. 반면에 알로에베라 꽃에 대한 문헌은 거의 없는 상황이며, 연구 내용은 항산화, 항균 특성을 가진 화학적 성분을 식별하는데 주로 초점을 맞추고 있다.
이에, 본 발명자들은 천연 원료 보습제를 개발하기 위해 노력한 결과, 알로에베라 꽃 추출물 및 이로부터 유래한 화합물의 피부 보습 기능을 확인하였다. 이에, 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 유래한 화합물을 피부 보습용 조성물의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다는 점을 밝힘으로써, 본 출원에 이르렀다.
대한민국 등록특허 제10-216559 B1호
본 발명의 목적은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 유래한 화합물의 피부 보습 효과에 대한 분자신호전달경로 연구를 통해 피부 보습을 위한 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 알로에베라(Aloe vera) 꽃 추출물 및 이로부터 유래한 화합물이 피부 보습 인자들의 발현을 조절하고, UVB로 인한 손상으로 저하된 피부 보습을 향상시키는 효과가 있다는 것을 발견하였다.
이에, 본 발명은 알로에베라(Aloe vera) 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물, 의약외품, 피부 외용제 및 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 알로에베라 꽃 추출물 및 이로부터 분리한 화합물은 PKC와 MAPK 신호전달경로를 활성화 시켜 피부장벽 기능에 기여하는 인볼루크린(involucrin)의 발현을 증가시키고, 핵심적 피부 보습 인자인 AQP3, 필라그린, HA의 발현을 증가시키며, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상시키는 효과를 나타내므로, 상기 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물은 피부 보습를 목적으로 하는 화장품, 의약외품, 피부 외용제, 식품 조성물 등의 유효성분으로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 추출물의 유효성분을 확인한 도로서, 도 1A는 건조한 알로에베라 꽃을 나타내고, 도 1B는 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 수(AFWE), 100% 에탄올(AE), 50% 에탄올(EE) 추출물 및 이의 기능성분의 TLC 패턴을 나타내며, 도 1C는 AFWE의 HPLC 크로마토그램을 나타내고, 도 1D는 표준 유효성분의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 수 추출물(AFWE)의 HaCaT 세포에서 피부 수화(hydration) 관련 단백질 발현 조절 효과를 확인한 도로서, 도 2A는 MTT 분석을 통한 AFWE의 세포 독성 확인 결과를 나타내고, 도 2B는 ELISA 분석을 통한 히알루로난 함량 확인 결과를 나타내며, 도 2C는 Western blot 분석을 통한 HAS1, HYAL1 및 AQP3 발현 확인 결과를 나타내고, 도 2D 내지 도 2F는 농도계 분석을 통한 HAS1(도 2D), HYAL1(도 2E), AQP3(도 2F) 발현 확인 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 수 추출물(AFWE)의 HaCaT 세포에서 피부장벽 기능 관련 단백질 발현 향상 효과를 확인한 도로서, 도 3A는 Western blot 분석을 통한 인볼루크린(involucrin) 및 필라그린(filaggrin) 발현 확인 결과를 나타내고, 도 3B 내지 도 3C는 농도계 분석을 통한 인볼루크린(도 3B) 및 필라그린(도 3C) 발현 확인 결과를 나타내며, 도 3D는 qRT-PCR 분석을 통해 인볼루크린의 상대적 mRNA 발현 확인 결과를 나타내고, 도 3E는 Western blot 분석을 통한 인볼루크린 조절에 관여하는 신호전달경로 단백질 PCK 및 MAPK(pP38/p38, ERK1/2) 발현 확인 결과를 나타내며, 도 3F 내지 도 3H는 농도계 분석을 통한 PCK 및 MAPK(pP38/p38, ERK1/2) 확인 결과를 나타낸다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 HaCaT 세포에 UVB 조사 후 알로에베라 꽃 수 추출물(AFWE) 처리시 피부 보습 인자들, 구체적으로 피부 수화 관련 단백질, 피부장벽 기능 관련 단백질 발현 조절 효과를 확인한 도로서, 도 4A는 MTT 분석을 통한 UVB 조건에서 AFWE의 세포 독성 확인 결과를 나타내고, 도 4B는 Western blot 분석을 통한 UVB 조건에서 AFWE 처리시 인볼루크린, HAS1, HYAL1, 프로필라그린, 필라그린 및 AQP3 발현 확인 결과를 나타내며, 도 4C 내지 도 4G는 농도계 분석을 통한 UVB 조건에서 알로에베라 꽃 수 추출물(AFWE) 처리시 인볼루크린(도 4C), HAS1(도 4D), HYAL1(도 4E), 필라그린(도 4F) 및 AQP3(도 4G) 발현 확인 결과를 나타낸다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 HaCaT 세포에 UVB 조사 후 알로에베라 꽃 수 추출물(AFWE) 처리시 형태학적 변화를 확인한 도이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 수(AFWE), 100% 에탄올(AE), 50% 에탄올(EE) 추출물을 처리한 HaCaT 세포에서 피부 보습 인자들, 구체적으로 피부 수화 관련 단백질, 피부장벽 기능 관련 단백질 발현 조절 효과를 확인한 도로서, 도 6A는 MTT 분석을 통한 AFWE, AE, EE의 세포 독성 확인 결과를 나타내고, 도 6B는 ELISA 분석을 통한 히알루로난 함량 확인 결과를 나타내며, 도 6C는 Western blot 분석을 통한 인볼루크린, HAS1, HYAL1, 프로필라그린, 필라그린, AQP3 발현 확인 결과를 나타내고, 도 6D 내지 도 6H는 농도계 분석을 통한 인볼루크린, HAS1, HYAL1, 필라그린, AQP3 발현확인 결과를 나타낸다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 추출물에 함유된 활성성분들, 구체적으로 이소오리엔틴(isoorientin, IO), 비텍신(vitexin, V), 이소비텍신(isovitexin, IV)의 HaCaT 세포에서 피부 보습 인자들 발현 효과를 확인한 도로서, 도 7A는 MTT 분석을 통한 IO, V, IV의 세포 독성 확인 결과를 나타내고, 도 7B는 ELISA 분석을 통한 히알루로난 함량 확인 결과를 나타내며, 도 7C는 Western blot 분석을 통한 인볼루크린, HAS1, HYAL1, 프로플라그린, 필라그린, AQP3 발현 확인 결과를 나타내고, 도 7D 내지 도 7H는 농도계 분석을 통한 인볼루크린(도 7D), HAS1(도 7E), HYAL1(도 7F), 필라그린(도 7G), AQP3(도 7H) 발현 확인 결과를 나타낸다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 IO와 피부 보습 인자들의 분자결합 분석을 나타낸 도로서, 도 8A는 IO와 인볼루크린의 결합구조를 나타내고, 도 8B는 IO와 PKC의 결합구조를 나타내며, 도 8C는 IO와 P38의 결합구조를 나타낸다. 도 8D는 IO와 ERK1의 결합구조를 나타내고, 도 8E는 IO와 필라그린의 결합구조를 나타내며, 도 8F는 IO와 AQP3의 결합구조를 나타내며, 도 8G는 도 8A 내지 도 8F에 나타낸 결합체 형성의 결합 점수를 나타낸다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 IO와 인볼루크린의 분자결합 분석을 확인한 도로서, IO와 인볼루크린의 결합포켓(도 9, 왼쪽) 및 IO와 인볼루크린 사이에 형성된 결합의 종류(도 9, 오른쪽)를 나타낸다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 IO와 PKC 및 IO와 P38의 분자결합 분석을 확인한 도로서, 도 10A는 IO와 PKC의 결합포켓(도 10A, 왼쪽) 및 IO와 PKC 사이에 형성된 결합의 종류(도 10A, 오른쪽)를 나타내고, 도 10B는 IO와 P38의 결합포켓(도 10B, 왼쪽) 및 IO와 P38 사이에 형성된 결합의 종류(도 10B, 오른쪽)를 나타낸다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 IO와 ERK 및 IO와 필라그린의 분자결합 분석을 확인한 도로서, 도 11A는 IO와 ERK의 결합포켓(도 11A, 왼쪽) 및 IO와 ERK 사이에 형성된 결합의 종류(도 11A, 오른쪽)를 나타내고, 도 11B는 IO와 필라그린의 결합포켓(도 11B, 왼쪽) 및 IO와 필라그린 사이에 형성된 결합의 종류(도 11B, 오른쪽)를 나타낸다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 IO와 AQP3 및 IO와 HYAL1의 분자결합 분석을 확인한 도로서, 도 12A는 IO와 AQP3의 결합포켓(도 12A, 왼쪽) 및 IO와 AQP3 사이에 형성된 결합의 종류(도 12A, 오른쪽)를 나타내고, 도 12B는 IO와 HYAL1의 결합포켓(도 12B, 왼쪽) 및 IO와 HYAL1 사이에 형성된 결합의 종류(도 12B, 오른쪽)를 나타낸다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 알로에베라 꽃 추출물 및 이에 함유된 활성성분이 신호전달경로를 통해 피부보습을 향상시키는 기전을 도식적으로 나타낸 도이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시형태를 들어 상세히 설명한다. 본 발명의 실시형태는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서, 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명은 알로에베라(Aloe vera) 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "추출물(extract)"은 상기 알로에 꽃의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. 상기 추출물은 알로에 꽃의 천연, 잡종, 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능하다.
본 발명에서, 상기 알로에베라 꽃은 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한없이 사용할 수 있다.
본 발명에서, 상기 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있고, 상기 유기용매는 C1 내지 C5의 저급 알코올, 에틸아세테이트 및 아세톤 등의 극성용매, 헥산 및 디클로로메탄 등의 비극성 용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 물, C1 내지 C4 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출된 추출물일 수 있다. 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 및 이소프로판올일 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있다. 보다 바람직하게는 물을 사용하여 추출된 추출물일 수 있다. 추출방법으로는 초음파추출, 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출방법을 이용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출용매를 세척하고 잘 건조된 알로에베라 꽃 분량의 1 내지 20배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 5 내지 20배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 추출시간은 1 내지 72시간이 바람직하며, 1 내지 48시간이 더욱 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에서, 상기 화합물은 C-글리코사이드 플라보노이드(glycoside flavonoids) 배당체일 수 있고, 상기 C-글리코사이드 플라보노이드 배당체는 이소오리엔틴(issoorientin), 비텍신(vitexin) 또는 이소비텍신(isovitexin)일 수 있고, 구체적으로 이소오리엔틴일 수 있다.
본 발명에서, 상기 조성물은 피부 보습 인자를 조절함으로써, 피부 보습 효과를 나타내고, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상할 수 있다.
구체적으로 상기 조성물은 피부 보습 인자로 피부 수화(hydration) 관련 단백질 또는 피부장벽 기능 관련 단백질을 조절함으로써, 피부 보습 효과를 나타내고, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상할 수 있다.
보다 구체적으로 피부 수화 관련 단백질은 HAS1, HYAL1, 히알루로난 또는 AQP3이고, 상기 조성물은 HAS1, 히알루로난 또는 AQP3 발현을 증가시키고, HYAL1 발현을 감소시킴으로써, 피부 보습 효과를 나타내고, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상할 수 있다.
또한, 상기 피부장벽 기능 관련 단백질은 인볼루크린(involuclin) 또는 필라그린(filaggrin)이고, 상기 조성물은 인볼루크린 또는 필라그린 발현을 증가시킴으로써, 피부 보습 효과를 나타내고, UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상할 수 있다.
또한, 본 발명은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 상기 추출물, 추출방법, 화합물에 대한 내용은 상기 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에서 설명한 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 화장료 조성물의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "화장료 조성물"은 신체의 구조 또는 기능에 영향을 주지 않으면서 인간 피부에 국소적으로 도포되어 피부의 외관 및 건강을 개선시키는 조성물이다.
본 발명에서, 상기 화장료 조성물은 피부 점착 타입의 화장료 제형, 예를 들어, 기초제품 화장료(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 비누), 바디제품 화장료(바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 비누), 색조제품 화장료(파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발제품 화장료(샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤) 등을 가질 수 있다. 또한, 경피 투여형 제형, 예를 들어, 연고제, 액제, 드레싱제, 패취제 또는 스프레이제 등으로 제조될 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있고, 상기 담체는 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 화장료 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량%로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부외용제를 제공한다.
본 발명에서, 상기 추출물, 추출방법, 화합물에 대한 내용은 상기 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에서 설명한 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 피부 외용제의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "외용제"는 외용으로 제공되는 제제이다.
본 발명에서, 피부외용제는 외용산제, 외용정제, 외용액제, 연고제, 크림제, 겔제, 경고제, 드레싱제, 패취제, 스프레이제 및 좌제로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제형화할 수 있다.
또한, 상기 피부외용제는 상용되는 무기 또는 유기의 담체, 부형제 및 희석제를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 제제화된 비경구 투여제일 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 패취, 스프레이, 현탁제 및 유제로 이루어진 군에서 선택되는 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 외용제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 의약외품을 제공한다.
본 발명에서, 상기 추출물, 추출방법, 화합물에 대한 내용은 상기 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에서 설명한 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 의약외품의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로 사람이나 동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품일 수 있다.
상기 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 소독 청결제, 세정제, 주방용 세정제, 청소용 세정제, 치약, 가글제, 물티슈, 세제, 비누, 핸드 워시, 헤어세정제, 헤어 유연제, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 및 필터 충진제로 구성된 군에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서, 상기 추출물, 추출방법, 화합물에 대한 내용은 상기 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물에서 설명한 내용과 동일하므로, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 식품 조성물의 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "식품 조성물"은 각각의 조성물을 먹거나 마시는 데에 독성증상을 유발함이 없이 먹고/먹거나 마실 수 있는 임의 종류의 조성물을 지칭한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "건강기능식품(functional food)"은 특정보건용 식품(food for special health use, FOSHU)와 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료 효과가 높은 식품이다.
본 발명에서, 상기 식품 조성물은 음료, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품, 통상적인 의미에서의 가공 식품 및 건강기능식품일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 음료조성물은 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제(천연 향미제, 예를 들어 타우마틴, 스테비아추출물, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등; 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등) 또는 천연 탄수화물(모노사카라이드, 예를들어, 포도당, 과당등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜) 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 g 내지 10 g이다.
또한, 상기 외에 본 발명의 식품은 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제, 천연 풍미제, 착색제, 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산, 팩트산 염, 알긴산, 알긴산염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산화제 및 과육 등을 함유할 수 있다, 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물 100 g 당 일반적으로 약 0.1 g 내지 20 g, 바람직하게는 약 1 g 내지 20 g일 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 유효성분을 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 건강기능식품은 원료에 대하여 바람직하게 15 중량 % 이하, 바람직하게는 10 중량 % 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 보다 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것이지 본 발명의 권리범위를 이로 한정하는 것을 의도하지 않는다.
화학물 및 시약
건조된 알로에베라(Aloe vera) 꽃(도 1A)은 Univera Co., Ltd.(서울, 한국)로부터 제공 받았다. DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium) 배지, 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 페니실린과 스트렙토마이신은 Gibco-BRL(Grand Island, NY, USA)로부터 구입하였다. 히알루로난 탐지를 위한 ELISA 키트는 R&D System Inc.(Minneapolis, MN, USA)로부터 구입하였다. PRO-PREPTM 단백질 추출 용액, ECL(Enhanced chemiluminescence) 탐지 키트는 인트론(성남, 한국)으로부터 구입하였다. GAPDH, 인볼루크린(involucrin), HAS1, HYAL1, AQP3, 필라그린(filaggrin), PKC, P38, ERK 1/2의 항체, HRP(horseradish peroxidase)와 접합된 이차 항체는 Santa Cruz(Dallas, TX, USA), Cell Science(Canton, MA, USA), Cell Signaling Technology(Beverly, MA, USA)로부터 구입하였다. 모든 그 밖의 화학물질들은 Sigma-Aldrich( Steinheim, Germany)로부터 구입하였다.
세포 배양
인간 각질형성세포(keratinocyte)인 HaCaT 세포는 한국 세포주 은행(서울, 한국)에서 구입하였다. 세포를 10% 열-비활성 소태아혈청(heat-inactivated FBS)와 1 % 페니실린-스트렙토마이신을 포함하는 high-glucose DMEM 배지로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
통계적 분석
실험군들을 비교하기 위해서 GraphPad Prism5(La Jolla, CA, USA)를 사용하여 1차원 분산 분석(ANOVA)을 하였고, p-value <0.05는 통계적으로 의미가 있는 것으로 하였다. 세 개의 독립적인 실험에 대해 평균±표준오차를 표시하였다.
<실시예 1> 알로에베라 꽃 추출물 제조
추출용매를 달리하여 3종의 알로에베라 꽃 추출물을 제조하였다.
구체적으로, 건조하여 분말화한 알로에베라 꽃 1 g 각각을 물(AFWE), 100% 에탄올(AE), 50% 에탄올(EE) 10 mL에 넣고, 40℃에서 60분 동안 초음파로 추출한 후 원심분리 및 여과하였다. 이후 각 추출물은 회전감압농축기를 사용하여 감압농축한 후 동결건조하였다. 제조한 추출물은 사용 시까지 -4℃에서 보관하였다.
<실시예 2> 알로에베라 꽃 추출물에 포함된 활성성분 분석
알로에베라 꽃 추출물에 포함된 성분을 분석하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제조한 3종의 알로에베라 꽃 추출물을 이용하여 TLC와 HPLC를 수행하였다. TLC는 종전의 방법에 따라 수행하였다(The Scientific World Journal Volume 2014, Article ID 724267, 6 page). HPLC 분석은 분리 모듈(e2695), 포토다이오드 어레이 검출기를 갖춘 Water system(Water Corp., Milford, MA, USA)을 사용하여 종전의 방법에 따라 수행하였다(Phytochemical Analysis Volume 16, Issue 5, pages 295-301). 내용물의 분석을 위해서 상기 실시예 1의 각 추출물들을 10 mg/ml씩 분리하였다. 활성성분으로 C-글리코사이드 플라보노이드(glycoside flavonoids) 배당체인 오리엔틴(orientin, O), 이소오리엔틴(isoorientin, IO), 비텍신(vitexin, V) 및 이소비텍신(isovitexin, IV)을 표준 성분으로 사용하였고, 1 mg/mL의 농도로 사용하였다.
그 결과, 도 1B 내지 도 1D에 나타낸 바와 같이, 물(AFWE), 100% 에탄올(AE), 50% 에탄올 수용액(EE)으로 추출한 알로에베라 꽃 추출물 모두에 이소오리엔틴(isoorientin, IO), 비텍신(vitexin, V), 이소비텍신(isovitexin, IV)가 함유되어 있고, 특히 AFWE에서 다른 추출물보다 이들 유효성분의 함량이 더 높다는 것을 확인하였다. 뿐만 아니라 이들 유효성분들 중에서 IO의 농도가 더 높았다. AFWE에서 IO의 함량은 22.24 %였고, IO>V>IV 순으로 함유하는 것을 확인하였다.
<실시예 3> 샘플 제조 및 세포 처리
상기 실시예 1의 각 추출물들을 PBS에 용해하고, 여과하여 10 mg/mL의 농도의 스톡을 만들었다. 그 후, 세포에 투여하기 위하여 상기 스톡을 이용하여 25 ㎍/mL의 추출물 샘플을 제조하고, 무혈청 배지에 희석시킨 5 ㎛의 IO, V, IV 샘플을 제조하였다. 상기 실시예 1의 추출물들 중에서 AFWE의 농도 의존적 효과를 평가하기 위하여 AFWE 스톡을 이용해 1, 2.5, 5 ㎍/mL 농도의 AFWE 샘플을 추가로 제조하였다. 또한, 양성 대조군으로 사용하기 위하여 피부 보습을 향상시킨다고 알려진 병풀(Centella asiatica) 에탄올 추출물Postepy Dermatologii Alergologii 2013: XXX, 1: 46-49) 5 ㎍/mL 샘플을 제조하였다. 또한, 추출물을 처리하지 않은 세포군을 음성 대조군으로 하였다.
<실시예 4> AFWE의 세포 독성 분석
AFWE의 세포 독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다.
구체적으로, HaCaT 세포(4×104 cells/well)를 10% FBS를 포함하는 배양 배지가 든 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 배양 후, 세포에 상기 실시예 3의 AFWE 샘플들을 각각 투여하였다. 24시간 배양한 후 배양액을 제거하고, 0.5 mg/mL의 MTT 용액을 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건에서 1시간 동안 배양하였다. 그 후, 각 웰에서 MTT 용액을 제거하고 100 ㎕ DMSO를 첨가한 후 microplate reader(Morecular Device, CA, USA)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 2A에 나타낸 바와 같이, 정상 상태에서 AFWE 처리군은 음성 대조군(NCtr) 또는 양성 대조군(PCtr)과 비교해서 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
<실시예 5> AFWE의 피부 보습 인자 조절 효과
AFWE가 피부 보습에 미치는 영향을 알아보기 위하여, HaCaT 세포에 AFWE 처리 후 피부 보습 인자로 피부 수화(hydration) 관련 단백질인 히알루로난(HA), HSA1, HYAL1 및 AQP3, 피부장벽 기능 관련 단백질인 필라그린(filaggrin)의 분비를 확인하였다.
<실시예 5-1> AFWE의 히알루로난 분비 조절 효과
AFWE의 히알루로난(HA) 분비 조절 효과를 알아보기 위해 ELISA(Enzyme Linked-Immuo sorbent assay)를 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 4에 기재된 방법과 동일한 방법으로 HaCaT 세포에 AFWE를 처리 및 배양한 후, 상층액을 모아 제조사의 설명에 따라 ELISA를 수행하였다.
그 결과, 도 2B에 나타낸 바과 같이, AFWE의 농도(1, 2.5, 5 ㎍/ml)에 따라 히알루로난 분비가 농도 의존적으로 증가하였다.
<실시예 5-2> AFWE의 HAS1, HYAL1 조절 효과
히알루로난 분비를 조절하는 HAS1 및 HYAL1에 대한 AFWE의 조절 효과를 알아보기 위해 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 4에 기재된 방법과 동일한 방법으로 HaCaT 세포에 AFWE를 처리 및 배양한 후 HaCaT 세포를 회수하였다. 회수한 HaCaT 세포를 차가운 PBS 용액으로 세척한 후 단백질분해효소(protease)와 인산가수분해효소 억제제(phosphatase inhibitor)가 포함된 PRO-PREPTM에 용해하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질을 종전에 확립된 방식(Phytomedicine 28, 19-26)으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행하였다(Enhanced chemiluminescence from ECL, detection kit from Intron., Sungnam, Korea).
그 결과, 도 2C 내지 도 2E에서 나타낸 바와 같이, 음성 대조군(NCtr)과 양성 대조군(PCtr)과 비교해서 HAS1 발현은 AFWE의 농도에 따라 농도 의존적으로 증가한 반면, HYAL1은 양성 대조군에 비해 감소하였다.
<실시예 5-3> AFWE의 AQP3 및 필라그린(filaggrin) 조절 효과
AQP3 및 피부장벽 기능 조절에 관여하는 필라그린(filaggrin)에 대한 AFWE의 조절 효과를 알아보기 위해 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 5-2에서 추출한 단백질을 종전에 확립된 방식(Phytomedicine 28, 19-26)으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행 하였다(Enhanced chemiluminescence from ECL, detection kit from Intron., Sungnam, Korea).
그 결과, 도 2C 및 도 2F에 나타낸 바와 같이, AFWE의 농도에 따라 AQP3의 발현이 농도 의존적으로 증가하였다.
또한, 도 3A 및 도 3C에 나타낸 바와 같이, AFWE의 농도에 따라 필라그린의 발현도 양성 대조군에 비해 농도 의존적으로 증가하였다.
<실시예 6> AFWE의 PKC와 MAPK 신호전달경로를 통한 인볼루크린(involucrin) 발현 조절
AFWE의 피부장벽 기능 관련 단백질인 인볼루크린(involucrin) 조절 기전을 알아보기 위해 아래의 분석을 실시하였다.
<실시예 6-1> AFWE의 인볼루크린 발현 조절
AFWE에 의한 인볼루크린 조절 효과를 알아보기 위해 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 5-2에서 추출한 단백질을 종전에 확립된 방식(Phytomedicine 28, 19-26)으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행 하였다(Enhanced chemiluminescence from ECL, detection kit from Intron., Sungnam, Korea).
그 결과, 도 3A 및 도 3B에 나타낸 바와 같이, AFWE에 의해 인볼루크린의 발현이 농도 의존적으로 증가한다는 것을 확인하였다.
<실시예 6-2> AFWE의 mRNA 수준에서의 인볼루크린 조절
AFWE에 의한 mRNA 수준에서 인볼루크린 조절 효과를 알아보기 위해 qRT-PCR(Quantitative real time-reverse transcription-polymerase chain reaction)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 5-2에서 회수한 HaCaT 세포에서 RNA 추출 키트(KeyGEN BioTECH, Nanjing, China)를 이용하여 mRNA를 추출하였다. 상기 추출한 mRNA로부터 cDNA를 합성하고, PrimeScript RT regent 키트(Takara, Beijing, China)를 사용하여 제조사의 설명에 따라 qRT-PCR을 수행하였다. qRT-PCR에 사용된 프라이머 서열은 다음과 같다: IVL, forward: 5'-GTGGGGGAGAGAGGGAATTA-3'; reverse, 5'-CTCACCTGAGGTTGGGATTG-3'; GAPDH, foward: 5'-TCCACTGGCGTCTTCACC-3', reverse: 5'-GGCAGAGATGATGACCCTTTT-3'.
그 결과, 도 3D에 나타낸 바와 같이, AFWE 처리군과 양성 대조군의 인볼루크린 mRNA 발현 수준이 유사한 것을 확인하였다.
<실시예 6-3> PKC와 MAPK 신호전달경로를 통한 인볼루크린 발현 조절
인볼루크린의 발현 조절에서 PKC의 활성화와 P38, MAPK의 ERK1/2 신호전달경로가 중요한 역할을 한다. 이에, AFWE가 PKC와 MAPK 신호전달경로에 미치는 영향을 알아보기 위해 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 5-2에서 추출한 단백질을 종전에 확립된 방식(Phytomedicine 28, 19-26)으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행하였다(Enhanced chemiluminescence from ECL, detection kit from Intron., Sungnam, Korea).
그 결과, 도 3E 및 도 3F에 나타낸 바와 같이, 양성 대조군과 비교하여 AFWE 처리군에서 PKC 발현이 증가하였다.
또한, 도 3E, 도 3G 및 도 3H에 나타낸 바와 같이, AFWE 처리군에서 음성 대조군에 비해 P38 인산화 및 ERK1/2 탈인산화가 증가하는 것을 확인하였다.
<실시예 7> UVB 조건에서 AFWE의 피부 보습 향상 효과
UVB 노출은 피부 손상을 유발하고, 이로 인해 피부 보습이 저하된다. 이에, UVB 조건에서 AFWE가 피부 보습 인자 발현을 유도하여 UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상시킬 수 있는지 확인하기 위해 아래의 분석을 실시하였다.
<실시예 7-1> UVB 조사
HaCaT 세포(4×104 cells/well)를 10% FBS를 포함하는 배양 배지가 든 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 배양 후, UVB 조사기계(Bio-Link BLX-312; Vilber Lourmat GmbH, Marne-la-Vallee, France)를 사용해 종전의 방식(Pharmaceutical Biology, 55:1, 1032-1040)으로 UVB(200 mj/cm2)를 조사하였다. 그 후, 즉시 상기 실시예 1의 AFWE 추출물을 처리하고, 24시간 배양하였다. UVB 조사하지 않은 세포는 음성 대조군으로 사용하였다.
<실시예 7-2> UVB 조건에서 AFWE의 세포독성 분석
UVB 조건에서 AFWE의 세포 독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 7-2에서 AFWE 추출물 처리 및 배양 완료 후, 상기 실시예 4에 개시된 방법과 동일한 방법으로 MTT assay를 수행하였다.
그 결과, 도 4A에 나타낸 바와 같이, UVB 조건에서 AFWE의 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
또한, 도 5에 나타낸 바와 같이, UVB 조건에서 AFWE 처리군은 세포 형태학적 변화를 보이지 않았다.
<실시예 7-3> UVB 조건에서 AFWE의 피부 보습 인자 조절 효과 확인
UVB 조건에서 AFWE에 의한 피부 보습 인자 조절 효과를 알아보기 위해 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 7-2에서 AFWE 추출물 처리 및 배양 완료 후, 상기 실시예 5에 기재된 방법과 동일한 방법으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 4B 내지 도 4G에 나타난 바와 같이, AFWE 처리군에서는 정상 조건에서 관찰된 것과 유사하게 인볼루크린 발현이 농도 의존적으로 증가하였다. 뿐만 아니라 HAS1 발현은 농도 의존적으로 증가하고, HYAL1 발현은 농도 의존적으로 감소하였다. 또한, 필라그린 및 AQP3 발현이 증가하였다.
<실시예 8> 추출용매에 따른 알로에베라 꽃 추출물의 피부 보습 효과 비교
추출용매에 따른 알로에베라 꽃 추출물의 피부 보습 효과를 비교하기 위하여, MTT assay, Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, HaCaT 세포(4×104 cells/well)를 10% FBS를 포함하는 배양 배지가 든 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 배양 후, 세포에 상기 실시예 3의 샘플들을 각각 투여하였다. 그 후, 실시예 4에 기재된 방법과 동일한 방법으로 MTT assay를 수행하고, 실시예 5에 기재된 방법과 동일한 방법으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 6A에 나타낸 바와 같이, 알로에베라 꽃 100% 에탄올 추출물(AE)를 제외하고, 50% 에탄올 추출물(EE) 및 수 추출물(AFWE)에서 세포 독성의 없음을 확인하였다.
또한, 도 6B 내지 도 6H에 나타낸 바와 같이, 3종의 추출물 모두 피부 보습 인자 조절에 있어서 유사한 양상을 보였고, 이 중 AFWE가 피부 보습 인자 조절 효과가 가장 우수한 것으로 나타났다.
<실시예 9> 알로에베라 꽃 추출물에 함유된 유효성분들의 피부 보습 효과 비교
알로에베라 꽃 추출물에서 함유된 유효성분들의 기능과 피부 보습 효과를 비교하기 위해 아래의 분석을 실시하였다.
<실시예 9-1> 알로에베라 꽃 추출물에 함유된 유효성분들의 세포 독성 분석
실시예 2에서 확인한 유효성분 IO, V, IV의 세포 독성을 확인하기 위해 MTT assay를 수행하였다.
구체적으로, HaCaT 세포(4×104 cells/well)를 10% FBS를 포함하는 배양 배지가 든 96 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 배양 후, 세포에 상기 실시예 3의 IO, V, IV 샘플들을 각각 투여하였다. 그 다음, 24시간 배양한 후 실시예 4에 기재된 방법과 동일한 방법으로 MTT assay를 수행하였다.
그 결과, 도 7A에 나타낸 바와 같이, IO, V, IV 처리군은 음성 대조군과 비교해 세포 생존력이 유사함을 확인하였다.
<실시예 9-2> 알로에베라 꽃 추출물에 함유된 유효성분들의 피부 보습 인자 조절 효과 비교
실시예 2에서 확인한 유효성분 IO, V, IV에 의한 피부 보습 인자 조절 효과를 비교하기 위하여 Western blot 및 농도계 분석(densitometric analysis)을 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 9-1에서 각각의 샘플 처리 및 배양 완료한 세포를 회수하였다. 그 다음, 회수한 세포를 이용하여 상기 실시예 5에 기재된 방법과 동일한 방법으로 Western blot 및 농도계 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 7B 내지 도 7H에 나타낸 바와 같이, 음성 대조군에 비해 IO 처리군 및 IV 처리군에서 인볼루크린의 발현이 증가하는 것을 확인하였다. 또한, IO 처리군, V 처리군 및 IV 처리군에서 HYAL1의 발현이 감소하여 히알루로난 분비가 증가한 것을 확인하였다. 또한, IO 처리군, V 처리군 및 IV 처리군에서 필라그린의 발현이 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다. 특히, IO 처리군에서 상기 피부 보습 인자들의 조절 효과가 가장 우수한 것을 확인하였다.
<실시예 10> 알로에베라 꽃 추출물에 함유된 유효성분 IO의 피부 보습 인자 결합친화도 분석
상기 실시예 9-2에서 피부 보습 인자 조절 효과가 가장 우수한 IO와 피부 보습 인자 간 결합 친화도를 알아보기 위해, IO와 피부 보습 인자에 대해 Molecular docking study를 실행하였다.
구체적으로, IO와 피부 보습 인자 간 분자결합은 종전의 방법(Phytomedicine 31, 1-9)에 따라 AutoDock Vina를 사용하여 확인하였다.
그 결과, 도 8 내지 도 12에 나타낸 바와 같이, IO와 피부 보습 인자 간 강한 결합 친화도를 나타내는 것을 확인하였다.
상기의 결과를 통해 도 13의 모식도와 같이 본 발명의 알로에베라 꽃 추출물 및 이로부터 유래된 화합물이 피부 보습 인자, 구체적으로 피부장벽 기능 관련 단백질 및 피부 수화(hydration) 관련 단백질을 조절하여 피부 보습 효과를 나타냄을 알 수 있다. 또한, UVB에 의한 피부 손상으로 저하된 피부 보습 향상에서 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있다.

Claims (13)

  1. 알로에베라(Aloe vera) 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는, 피부 보습용 화장료 조성물.
  2. 청구항 1항에 있어서,
    상기 알로에베라 꽃 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  3. 청구항 1항에 있어서,
    상기 알로에베라 꽃 추출물은 물로 추출한 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  4. 청구항 1항에 있어서,
    상기 화합물은 C-글리코사이드 플라보노이드(C-glycoside flavonoid) 배당체인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  5. 청구항 4항에 있어서,
    상기 C-글리코사이드 플라보노이드 배당체는 이소오리엔틴(Isoorientin), 비텍신(Vitexin) 및 이소비텍신(Isovitexin)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  6. 청구항 1항에 있어서,
    상기 조성물은 피부 보습 인자를 조절하는 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  7. 청구항 6항에 있어서,
    상기 피부 보습 인자는 피부 수화(hydration) 관련 단백질 또는 피부장벽 기능 관련 단백질인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  8. 청구항 7항에 있어서,
    상기 피부 수화 관련 단백질은 HAS1, HYAL1, 히알루로난 또는 AQP3이고, 상기 조성물은 HAS1, 히알루로난 또는 AQP3 발현을 증가시키고, HYAL1 발현을 감소시키는 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  9. 청구항 7항에 있어서,
    상기 피부장벽 기능 관련 단백질은 인볼루크린(involucrin) 또는 필라그린(filaggrin)이고, 상기 조성물은 인볼루크린 또는 필라그린 발현을 증가시키는 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  10. 청구항 1항에 있어서,
    상기 조성물은 UVB로 인한 피부 손상으로 저하된 피부 보습을 향상하는 것인, 피부 보습용 화장료 조성물.
  11. 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는, 피부 보습용 의약외품.
  12. 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는, 피부 보습용 피부 외용제.
  13. 알로에베라 꽃 추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는, 피부 보습용 식품 조성물.
KR1020210067992A 2021-05-27 2021-05-27 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물 KR102543123B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210067992A KR102543123B1 (ko) 2021-05-27 2021-05-27 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물
PCT/KR2022/006170 WO2022250313A1 (ko) 2021-05-27 2022-04-29 알로에 베라 꽃 추출물, 또는 알로에 베라 꽃 추출물 및 알로에 베라 다당체를 유효성분으로 함유하는 피부 보습, 재생 촉진 및 상처 치료용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210067992A KR102543123B1 (ko) 2021-05-27 2021-05-27 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20220160177A true KR20220160177A (ko) 2022-12-06
KR102543123B1 KR102543123B1 (ko) 2023-06-13

Family

ID=84407524

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210067992A KR102543123B1 (ko) 2021-05-27 2021-05-27 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102543123B1 (ko)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100216559B1 (ko) 1997-02-21 1999-10-01 송재관 생물학적 탈질산화용 탄소원 조성물 및 이를 이용한 폐수 처리방법
KR100720973B1 (ko) * 2005-03-18 2007-05-22 주식회사 유니젠 천연물 유래 아이소오리엔틴을 포함하는 히스타민 억제용약학 조성물
CN108635301A (zh) * 2018-07-25 2018-10-12 云南万绿生物股份有限公司 一种芦荟花提取物及其制备方法
KR20200082812A (ko) * 2018-12-31 2020-07-08 대봉엘에스 주식회사 알로에 추출물, 밭벼 추출물 및 세라마이드를 포함하는 화장료 및 약학적 조성물

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100216559B1 (ko) 1997-02-21 1999-10-01 송재관 생물학적 탈질산화용 탄소원 조성물 및 이를 이용한 폐수 처리방법
KR100720973B1 (ko) * 2005-03-18 2007-05-22 주식회사 유니젠 천연물 유래 아이소오리엔틴을 포함하는 히스타민 억제용약학 조성물
CN108635301A (zh) * 2018-07-25 2018-10-12 云南万绿生物股份有限公司 一种芦荟花提取物及其制备方法
KR20200082812A (ko) * 2018-12-31 2020-07-08 대봉엘에스 주식회사 알로에 추출물, 밭벼 추출물 및 세라마이드를 포함하는 화장료 및 약학적 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
KR102543123B1 (ko) 2023-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102126470B1 (ko) 용안육 추출물을 포함하는 화장료 조성물
KR20160058832A (ko) 패시플로라 종자들로부터 얻은 지질 추출물
KR101071414B1 (ko) 과나바나 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 조성물
KR101591499B1 (ko) 아마란스 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 피부 미백용 조성물
US20200078290A1 (en) Cosmetic Composition Comprising Extract Of Medicinal Herbs As Active Ingredient
KR102283527B1 (ko) 곡류 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
US10143648B2 (en) Peptide and oside extract of schisandra fruit and improvement in the response of the cutaneous neurosensory system
KR102543123B1 (ko) 알로에 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 조성물
JP4247091B2 (ja) 皮膚老化防止剤
KR20150105903A (ko) 고사리삼 알코올 추출물을 포함하는 피부 염증 예방 또는 치료용 조성물
KR20150057331A (ko) 구상나무 추출물을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물
KR102212343B1 (ko) 마리안 플럼 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 항노화 및 보습용 조성물
KR102244585B1 (ko) 피부 노화 개선 복합 화장료 조성물
KR20170136957A (ko) 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물
TW201628598A (zh) 包含醋栗或穀胱甘肽之組合物
KR102476671B1 (ko) 황금 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부외용제 조성물
KR20100042090A (ko) 자스민 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 조성물
KR20170025363A (ko) 피부 개선용 조성물
KR102563733B1 (ko) 알로에 베라 꽃 추출물을 유효성분으로 함유하는 상처 치료 또는 피부 재생용 조성물
KR101526435B1 (ko) 머루근 추출물을 포함하는 미백용 조성물
KR102563734B1 (ko) 알로에 베라 꽃 추출물 및 알로에 베라 다당체를 유효성분으로 함유하는 상처 치료 또는 피부 재생용 조성물
KR102264006B1 (ko) 멜라닌 생성 억제 및 분해 촉진용 조성물
KR102283289B1 (ko) 물푸레나무 유래 신규 쿠마린계 화합물의 제조방법 및 주름 개선용 화장료 조성물
KR101933835B1 (ko) 플럼바긴 및 생강 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물
KR101068808B1 (ko) 봉황목 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right