KR20220138241A - Functional cosmetic composition containing Bombus terrestris extract - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a functional cosmetic composition containing a Bombus terrestris extract, and more particularly, to a functional cosmetic composition comprising an alcohol extract of Bombus terrestris as an active ingredient.

Description

서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물{Functional cosmetic composition containing Bombus terrestris extract}Functional cosmetic composition containing Bombus terrestris extract

본 발명은 서양뒤영벌 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처 회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a functional cosmetic composition containing an extract of sagebrush, and more particularly, to a multi-purpose functional cosmetic composition effective for collagen production, skin regeneration, wound recovery and skin moisturizing.

인간을 포함하는 동물의 피부의 가장 중요한 역할은 외부의 손상 및 세균의 침입으로부터 신체를 보호하는 방어 장벽(defense barrier)의 역할을 함과 동시에 내부로부터의 열과 수분의 손실을 방지하는 것이다. 이러한 기능을 하는 피부는 여러 개의 층으로 구성되어 있으며, 이 가운데 가장 바깥에 위치하는 것을 표피(epidermis)라고 하는데, 이들 표피에서 재생능력을 보이는 것으로 알려진 것은 기저층에 존재하는 피부의 각질 줄기세포(Keratinocyte stem cells, KSC)이다.The most important role of the skin of animals including humans is to act as a defense barrier to protect the body from external damage and invasion of bacteria, and to prevent loss of heat and moisture from the inside. The skin with this function is composed of several layers, and the outermost one of them is called the epidermis, and it is known that the epidermis has regenerative ability in the basal layer of the skin keratinocytes (Keratinocytes). stem cells, KSC).

이러한 피부는 세포의 변이, 활성산소 라디칼, 독성 물질의 축적 및 피부 간극 구성 단백질 변형 등에 의해 노화가 발생하는 것으로 알려져 있고, 보통 어릴 때는 피부 손상이 일어나더라도 흉터가 남지 않는 반면, 나이가 들어 피부 손상이 일어나게 되면 흉터가 남는 이유는 피부 재생에 필요한 세포의 증식의 수준 정도가 나이에 따라 현저하게 낮아지기 때문인 것으로 보인다. 즉, 노화가 진행하게 되면, 상기한 세포들의 증식 정도가 낮아지게 되며, 이는 피부 재생 능력이 감퇴하는 것으로, 상처 등의 회복이 지연되거나, 피부 보습 및 탄력 감소가 심화되어 주름이 발생할 수 있다.It is known that aging of the skin occurs due to cell mutation, active oxygen radicals, accumulation of toxic substances, and modification of skin interstitial proteins. The reason why scars remain when this occurs seems to be that the level of cell proliferation required for skin regeneration decreases significantly with age. That is, as aging progresses, the degree of proliferation of the cells is lowered, which is a decrease in skin regeneration ability, which may delay recovery of wounds or the like, or may cause wrinkles due to deepening of skin moisture and elasticity reduction.

이러한 피부 노화, 주름 개선 등의 문제를 해결하기 위하여 콜라겐의 변화에 대한 다양한 연구가 진행되고 있다. 콜라겐의 생산을 촉진하는 저분자 화합물은 현재 피부주름 및 기미, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 레티노이드류, 그 중에서도 레티놀(비타민 A)에 대한 피부 주름제거 임상 결과들이 다양하게 보고되고 있다. 그러나 레티놀은 건성피부에 사용할 경우 피부의 각질을 벗겨내 피부자극이 심해 지거나 더욱 건성이 될 가능성이 있다. 또한, 재조합 단백질 원료의 경우 고가의 비용이 소요되며, 천연 추출물의 경우 재현성이 떨어지는 단점이 있다.In order to solve problems such as skin aging and wrinkle improvement, various studies on changes in collagen are being conducted. Low molecular weight compounds that promote collagen production are currently widely used retinoids to improve skin wrinkles, blemishes, and pigmentation, and among them, clinical results of skin wrinkle removal for retinol (vitamin A) have been reported variously. However, if retinol is used for dry skin, it may exfoliate the skin and cause severe skin irritation or dryness. In addition, in the case of recombinant protein raw materials, expensive costs are required, and in the case of natural extracts, there is a disadvantage in that the reproducibility is poor.

서양뒤영벌은 주로 일벌이나 여왕벌의 분획물인 글라이코자미노글라이칸으로써 주로 의약품 용도로 연구되어 왔다. 예를 들어, 서양뒤영벌 일벌을 포함한 뒤영벌류의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물(특허등록 제10-1403520)이 개시되었으나, 화장품으로서의 효능에 대하여는 알려져 있지 않은 실정이다.The hornbill bee has been mainly studied for medicinal use as glycozaminoglycan, a fraction of worker or queen bees. For example, a composition for enhancing immunity (Patent Registration No. 10-1403520) comprising, as an active ingredient, an alcohol extract of hornet bee, including western hornbee worker bee, has been disclosed, but its efficacy as a cosmetic is not known.

따라서 피부 건조를 막고 면역기능을 강화하기 위해 개발된 여러 화장료 조성물들의 부작용을 해결하기 위하여, 본 발명자들은 천연 재료인 서양뒤영벌의 추출물에서 피부 보습, 콜라겐 생성 및 피부 재생 및 상처회복 성분을 갖는 화장료 조성물을 찾으려고 연구 노력한 결과 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, in order to solve the side effects of various cosmetic compositions developed to prevent skin dryness and strengthen immune function, the present inventors have developed a cosmetic composition having skin moisturizing, collagen production and skin regeneration and wound healing components from the extract of sagebrush, which is a natural material. As a result of research and efforts to find the result, the present invention was completed.

본 발명의 한 측면은 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.One aspect of the present invention is to provide a functional cosmetic composition for multiple uses effective for collagen production, skin regeneration, wound recovery and skin moisturizing.

본 발명의 일 견지에 의하면 서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기능성 화장료 조성물이 제공된다.According to one aspect of the present invention, there is provided a functional cosmetic composition comprising an alcohol extract of sagebrush as an active ingredient.

서양뒤영벌 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물은 피부에 안전한 천연 유래 성분을 이용하여 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 기능성 화장료 조성물을 제공할 수 있으며, 특히 최근 급속도로 시장이 증가하고 있는 미세먼지 등과 같은 유해 환경으로부터 피부를 보호해주는 안티폴루션 화장품으로 활용이 가능하다.Functional cosmetic composition containing locust serrata extract as an active ingredient can provide a functional cosmetic composition that is effective for skin regeneration, wound recovery and skin moisturizing by using natural ingredients that are safe for the skin. It can be used as an anti-pollution cosmetic that protects the skin from harmful environments such as fine dust.

도 1은 인간진피섬유아세포에 대한 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물의 세포독성 평가 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 PIP(Type-1 Procollagen) 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 과산화수소(H2O2)에 의한 인간진피섬유아세포 손상 조건 확인을 위한 (a)세포독성 실험, (b)히알루론산 및 (c)세라마이드 인산화효소 생성 실험 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 과산화수소(500μM H2O2) 처리에 의한 산화적 손상 조건에서 서양 뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 (a)히알루론산 및 (b)세라마이드 인산화효소 생성에 미치는 영향을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물이 인간진피섬유아세포의 세포이동(피부재생)에 미치는 영향을 나타낸 것으로, (a)피부 세포 스크래치 직후 및 추출물 처리 8시간 후 현미경 사진 비교 및 (b)길이 측정을 통한 상처회복(wound healing) 효과 비교 결과를 나타낸 것이다.
1 shows the results of evaluation of cytotoxicity of extracts of honey bee and queen bee for human dermal fibroblasts.
FIG. 2 shows the results of confirming the effect of extracts of western hornet bee and queen bee on PIP (Type-1 Procollagen) production of human dermal fibroblasts.
Figure 3 shows the results of (a) cytotoxicity test, (b) hyaluronic acid and (c) ceramide kinase production experiment for confirming the condition of human dermal fibroblast damage caused by hydrogen peroxide (H 2 O 2 ).
Figure 4 is the result of confirming the effect of the extracts of western honey bee and queen bee on the production of (a) hyaluronic acid and (b) ceramide kinase in human dermal fibroblasts under oxidative damage conditions by hydrogen peroxide (500 μM H 2 O 2 ) treatment. is shown.
Figure 5 shows the effect of the extract of the queen bee of the Western Swamp bee on the cell migration (skin regeneration) of human dermal fibroblasts. The results of comparison of wound healing effects are shown.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 형태를 설명한다. 그러나, 본 발명의 실시 형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described with reference to the accompanying drawings. However, the embodiments of the present invention may be modified in various other forms, and the scope of the present invention is not limited to the embodiments described below.

본 발명에 의하면 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 복합 용도의 기능성 화장료 조성물이 제공되며, 보다 상세하게 본 발명의 기능성 화장료 조성물은 서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는 것이다. According to the present invention, there is provided a functional cosmetic composition for multiple uses effective for collagen production, skin regeneration, wound recovery, and skin moisturizing, and more specifically, the functional cosmetic composition of the present invention includes an alcohol extract of sagebrush as an active ingredient.

상기 본 발명의 기능성 화장료 조성물은 콜라겐 생성 촉진에 의해 피부 탄력을 증진시키고, 세포이동(cell migration) 촉진에 의해 피부 재생을 증진시키며, 및/또는 히알루론산(Hyaluronic acid, HA) 및 세라마이드 인산화효소(Ceramide kinase, CERK)의 분비 촉진에 의해 피부 보습을 증진시킬 수 있는 복합적인 기능성을 발현하는 것이다. The functional cosmetic composition of the present invention enhances skin elasticity by promoting collagen production, promotes skin regeneration by promoting cell migration, and/or hyaluronic acid (HA) and ceramide kinase ( Ceramide kinase, CERK) is stimulated to express complex functions that can enhance skin moisture.

본 발명에 사용될 수 있는 상기 서양뒤영벌(Bombus terrestris)은 벌목 꿀벌과의 곤충으로 유럽이 원산지이며 한국에는 자원곤충으로 도입되었다. 본 발명에 있어서 상기 서양뒤영벌은 서양뒤영벌의 수벌, 일벌 및 여왕벌로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인 것일 수 있으며, 바람직하게는 여왕벌인 것이다. 여왕벌의 몸길이는 20~22㎜이고, 수벌의 몸길이는 14~16㎜이며 일벌의 몸길이는 11~17㎜이다.The bombus terrestris, which can be used in the present invention, is an insect of the Hymenoptera family, originating in Europe, and introduced as a resource insect in Korea. In the present invention, the bristle bee may be at least one selected from the group consisting of a male bee, a worker bee, and a queen bee, and preferably a queen bee. The length of the queen bee is 20~22mm, that of the male bee is 14~16mm, and that of the worker bee is 11~17mm.

서양뒤영벌의 알코올 추출물을 획득하기 위한 상기 알코올은 탄소수 1 내지 3의 알코올, 헥산 및 클로로포름으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나인 것일 수 있으며, 예를 들어 메탄올, 에탄올 및 프로판올로부터 선택될 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다. 농도는 70 내지 100%(v/v), 예를 들어 70 내지 95%(v/v)의 농도가 바람직하다. The alcohol for obtaining the alcohol extract of the locust may be at least one selected from the group consisting of alcohols having 1 to 3 carbon atoms, hexane and chloroform, for example, may be selected from methanol, ethanol and propanol, preferably For example, ethanol may be used. The concentration is preferably from 70 to 100% (v/v), for example from 70 to 95% (v/v).

상기 유효성분은 기능성 화장료 조성물 부피를 기준으로 15 내지 500 μg/ml의 농도로 포함되는 것일 수 있으며, 예를 들어 30 내지 250 μg/ml, 또는 60 내지 250 μg/ml일 수 있다. 상기 유효성분이 15μg/ml 미만인 경우에는 본 발명의 콜라겐 생성, 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습 효과가 불충분할 수 있으며, 500 μg/ml를 초과하는 경우에는 함량 증가 대비 효과의 증가가 크지 않은 경향이 있다. 다만, 이에 제한되는 것은 아니며, 상기 유효한 양은 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 피부 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 추출물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.The active ingredient may be included at a concentration of 15 to 500 μg/ml based on the volume of the functional cosmetic composition, for example, 30 to 250 μg/ml, or 60 to 250 μg/ml. When the active ingredient is less than 15 μg/ml, the collagen production, skin regeneration, wound recovery and skin moisturizing effects of the present invention may be insufficient, and when it exceeds 500 μg/ml, the increase in the effect compared to the increase in the content tends not to be large. have. However, the present invention is not limited thereto, and the effective amount may be appropriately selected depending on the individual. the severity of the skin condition, the subject's age, weight, health, sex, the subject's sensitivity to the extract, the time of administration, the route of administration and the rate of excretion, the duration of administration, factors including other compositions used in combination with or concurrently with the composition, and other physiology to factors well known in the medical field.

본 발명의 상기 기능성 화장료 조성물은 화장품학적 또는 피부학적으로 허용될 수 있는 담체와 함께 용액, 현탁액, 에멀션, 페이스트, 젤, 크림, 파우더 또는 스프레이 제형으로 제제화될 수 있다. The functional cosmetic composition of the present invention may be formulated as a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, powder or spray formulation together with a cosmetically or dermatologically acceptable carrier.

한편, 상기 화장료 조성물은 보존제, 유화제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 및 제한제 중 적어도 하나 이상의 성분을 더 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.On the other hand, the cosmetic composition is at least one of preservatives, emulsifiers, stabilizers, surfactants, solubilizers, moisturizers, emollients, ultraviolet absorbers, preservatives, bactericides, antioxidants, pH adjusters, organic and inorganic pigments, fragrances, cooling agents and limiting agents. It may further include one or more components, but is not limited thereto. The blending amount of the additional ingredients such as the moisturizing agent can be easily selected by those skilled in the art within the range that does not impair the purpose and effect of the present invention, and the blending amount is 0.001 to 5% by weight, specifically 0.01 to 3% by weight, based on the total weight of the composition % by weight.

본 발명에 있어서 피부는 얼굴, 손, 팔, 다리, 발, 가슴, 배, 등, 엉덩이, 및 두피를 포함하는 신체의 모든 피부 부위를 포함한다.In the present invention, the skin includes all skin parts of the body including the face, hands, arms, legs, feet, chest, stomach, back, buttocks, and scalp.

구체적으로 본 발명의 상기 기능성 화장료 조성물은 화장수, 영양 크림, 로션, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 비누 또는 파운데이션으로 제조될 수 있다. Specifically, the functional cosmetic composition of the present invention may be prepared as a lotion, nourishing cream, lotion, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, soap or foundation.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component. can

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane /may contain propellants such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액(에멀션)인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion (emulsion), a solvent, solubilizer or emulsifier is used as a carrier component, specifically water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, Propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol, fatty acid ester of sorbitan, and the like may be used.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester, polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Sex cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, and the like can be used.

본 발명의 상기 서양뒤영벌의 알코올 추출물은 서양뒤영벌을 2배 내지 30배의 중량비의 알코올을 이용하여 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 여과 및 농축하여 획득된 것일 수 있다. The alcohol extract of the locust larvae of the present invention may be obtained by filtering and concentrating the undiluted extract extracted at 5 to 35° C. using alcohol in a weight ratio of 2 to 30 times.

보다 상세하게, 서양뒤영벌을 2배 내지 30배, 예를 들어 5배 내지 25배, 또는 10배내지 20배의 중량비의 알코올을 이용하여 실온, 예를 들어 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 마련한다. 이와 같은 추출 과정은 예를 들어 12시간 내지 3일, 바람직하게는 24시간 내지 48시간 동안 수행될 수 있다.In more detail, prepare an extract stock solution extracted at room temperature, for example, 5 to 35° C., using alcohol in a weight ratio of 2 to 30 times, for example, 5 to 25 times, or 10 to 20 times. do. This extraction process may be performed for, for example, 12 hours to 3 days, preferably 24 hours to 48 hours.

그 후 상기 추출원액을 여과하여 고형물을 제외하고 추출 용액을 획득한다. 이때 여과의 방식은 특히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 여과지에 의한 여과 등 당업계에 알려진 어떠한 고액 분리 방법도 사용할 수 있다. Thereafter, the extract stock solution is filtered to obtain an extract solution excluding solids. At this time, the method of filtration is not particularly limited, for example, any solid-liquid separation method known in the art, such as filtration by filter paper, may be used.

나아가, 상기 추출 용액을 회수하고 농축하여 서양뒤영벌 추출물을 제조한다. 이때 농축 방법은 특히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 감압농축에 의해 수행될 수 있다. Furthermore, the extract solution is recovered and concentrated to prepare an extract of the locust beetle. In this case, the concentration method is not particularly limited, and for example, concentration under reduced pressure may be performed.

본 발명의 서양뒤영벌 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 피부에 안전한 천연 유래 성분을 이용하여 피부 재생, 상처회복 및 피부 보습에 효과적인 기능성 화장료 조성물 및/또는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 약학 조성물로 활용이 가능하다.The composition containing the extract of the present invention as an active ingredient is a functional cosmetic composition that is effective for skin regeneration, wound recovery and skin moisturizing using natural ingredients that are safe for skin and/or a pharmaceutical composition together with a pharmaceutically acceptable carrier. It is possible to use

이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 예시에 불과하며, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through specific examples. The following examples are only examples to help the understanding of the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

실시예Example

1. 서양뒤영벌 추출물의 제조1. Preparation of extract

실시예 1: 서양뒤영벌 여왕벌 추출물의 제조Example 1: Preparation of extract of queen bee queen bee

서양뒤영벌 여왕벌 1㎏을 물로 2회 세척 후 체를 이용하여 탈수하고, 60℃에서 12 시간 건조 후 분쇄하였다. 그 결과 분쇄물을 20 배 중량비의 95% 에탄올을 이용하여 48시간 동안 실온(20℃)에서 추출하였다. 이 추출원액을 여과지(Wattman No 4)를 이용하여 여과한 후에 감압농축하여 서양뒤영벌 여왕벌 추출물을 얻었다.After washing 1 kg of queen bee with water twice, it was dehydrated using a sieve, dried at 60° C. for 12 hours, and then pulverized. As a result, the pulverized product was extracted at room temperature (20° C.) for 48 hours using 95% ethanol in a weight ratio of 20 times. This extract stock solution was filtered using filter paper (Wattman No 4), and then concentrated under reduced pressure to obtain an extract of the queen bee of the honey bee.

실시예 2: 서양뒤영벌 수벌 추출물의 제조EXAMPLE 2: Preparation of extracts from hornbeam bee bee

서양뒤영벌 수벌을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 과정에 의해 추출하여 서양뒤영벌 수벌 추출물을 얻었다.Extraction was carried out in the same manner as in Example 1, except that the hornet wasp was used to obtain an extract of the hornbeam bee.

2. 세포 독성 실험 2. Cytotoxicity experiment

인간진피섬유아세포(HDF)를 37℃, 5% CO2 조건에서 10% FBS(fetal bovine serum), 페니실린(100 U/㎖), 스트렙토마이신(100 ㎍/㎖)이 첨가된 DMEM 배지로 배양하였다. 세포들은 75 cm2 플라스크에 배양하였으며, 배양은 3일 간격으로 배양 표면을 PBS(phosphate buffered saline) 용액으로 씻어준 후 세포를 탈착하여 일정 비율로 10% FBS가 첨가된 DMEM 배양액에 부유시킨 다음 75 cm2 플라스크에 옮겨 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다. Human dermal fibroblasts (HDF) were cultured in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), penicillin (100 U/ml), and streptomycin (100 μg/ml) at 37°C and 5% CO 2 conditions. . The cells were cultured in a 75 cm 2 flask, and the culture surface was washed with a phosphate buffered saline (PBS) solution every 3 days, and then the cells were detached and suspended in a DMEM medium supplemented with 10% FBS at a certain ratio. cm 2 Transfer to a flask, 37 ℃, 5% CO 2 Incubated in an incubator condition.

실시예 1의 서양뒤영벌 여왕벌 추출물 및 실시예 2의 서양뒤영벌 수벌 추출물의 대식세포 세포독성을 측정하기 위하여 MTT 어세이(assay)를 수행하였다. 보다 상세하게 인간진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 추출물을 농도 별로 24시간 동안 처리하였다. 이후, MTT 용액을 웰(well) 당 20 ㎕씩 첨가한 후 2시간 동안 배양하였고, 배양 상등액(supernatant)을 모두 제거한 후 DMSO를 웰(well) 당 200 ㎕씩 첨가하여 세포 내 생성된 포마잔(formazan)을 완전히 용해시킨 후 마이크로플레이트 리더(microplate reader)를 이용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율(cell viability)은 무처리구 대조군(CON) 대비 추출물 처리구의 흡광도 %로 산출하였으며 그 결과를 도 1에 나타내었다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타낸다. An MTT assay was performed to measure macrophage cytotoxicity of the queen bee extract of Example 1 and the queen bee extract of Example 2 and of Example 2. In more detail, human dermal fibroblasts were cultured in DMEM cell culture medium containing 10% FBS at 37° C. and 5% CO 2 conditions, and then dispensed into 96 well plates to become 2×10 4 cells, and for 12 hours. Cells were completely adhered while culturing, and the extracts were treated for 24 hours at different concentrations. Thereafter, 20 μl of MTT solution was added per well, followed by incubation for 2 hours, and after removing all of the culture supernatant, 200 μl of DMSO was added per well to form intracellular formazan ( formazan) was completely dissolved, and the absorbance was measured at 570 nm using a microplate reader. Cell viability was calculated as the absorbance % of the extract treated group compared to the untreated control group (CON), and the results are shown in FIG. 1 . In this case, the control group (CON) represents the untreated group without the addition of the dwarf beetle extract.

도 1을 참고하면 바람직하게는 본 발명의 추출물 500 ㎍/㎖ 이하의 농도까지는 모두 세포독성이 없음을 확인하였다.Referring to FIG. 1 , it was confirmed that all of the extracts of the present invention had no cytotoxicity up to a concentration of 500 μg/ml or less.

3. 콜라겐 생성 실험3. Collagen production experiment

본 발명의 서양뒤영벌 수벌 및 여왕벌 추출물이 콜라겐 생합성에 미치는 영향을 평가하기 위해 인간 진피섬유아세포의 PIP(Type-1 Procollagen) 생성에 미치는 영향을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 상세하게 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 각 웰의 세포들을 무혈청 DMEM 배양액으로 세척한 다음 각 웰에 추출물을 농도별로 처리하여 48시간 동안 배양하였다. 이후 배양액을 수집하여 Procollagen type I C-peptide assay kit(Takara Bio Inc.)를 사용하여 콜라겐 함량을 측정하였으며, 이때 콜라겐의 농도는 kit에 포함되어 있는 표준용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산하였다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타내며, '기존 피부재생에 효과가 있는 고시형 기능성 화장품원료로서 추출물의 효능을 비교하기 위한 양성대조군으로 '아데노신(Adenosine)' 500 ㎍/㎖을 이용하였다.In order to evaluate the effect of the honey bee extracts of the present invention on collagen biosynthesis, an experiment was performed to confirm the effect on PIP (Type-1 Procollagen) production of human dermal fibroblasts. In more detail, human dermal fibroblasts were cultured in DMEM cell culture medium containing 10% FBS at 37° C. and 5% CO 2 conditions and then dispensed into 96 well plates to become 2×10 4 cells, and for 12 hours. Cells were completely adhered while culturing, and cells in each well were washed with serum-free DMEM culture medium, and the extracts were treated in each well by concentration and cultured for 48 hours. Then, the culture medium was collected and the collagen content was measured using a Procollagen type I C-peptide assay kit (Takara Bio Inc.), and the concentration of collagen was calculated from the standard curve calculated from the standard solution included in the kit. At this time, the control group (CON) represents the untreated group without the addition of the extract, 'Adenosine' 500 ㎍ as a positive control group to compare the efficacy of the extract as a functional cosmetic ingredient that is effective for existing skin regeneration. /ml was used.

그 결과 도 2를 참고하면 본 발명의 추출물은 PIP(콜라겐) 생성에 의한 피부재생 효과를 증가시키는 것을 확인할 수 있으며, 특히 여왕벌 추출물의 경우 수벌 추출물에 비하여 보다 향상된 추출물은 PIP(콜라겐) 생성에 의한 피부재생 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. As a result, referring to FIG. 2 , it can be confirmed that the extract of the present invention increases the skin regeneration effect by PIP (collagen) production. It was confirmed that the skin regeneration effect was shown.

4. 과산화수소(H4. Hydrogen peroxide (H 22 OO 22 )에 의한 인간진피섬유아세포 손상 조건 확인 ) Confirmation of human dermal fibroblast damage conditions

피부 손상 모델로 활용하기 위한 피부세포의 손상을 유도하기 위해 인간 진피섬유아세포에 과산화수소(H2O2)를 처리하여 산화적 손상을 유도한 후 (a)세포독성, (b)히알루론산 생성량 및 (c)세라마이드 인산화효소(Ceramide Kinase) 생성량을 분석하였다. After inducing oxidative damage by treating human dermal fibroblasts with hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) to induce skin cell damage for use as a skin damage model, (a) cytotoxicity, (b) hyaluronic acid production and (c) The amount of ceramide kinase (Ceramide Kinase) production was analyzed.

보다 상세하게, 세포독성은 상기 도 1과 동일한 방법으로 분석하였다. 한편, 히알루론산 생성량은 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 2×104 cell이 되도록 96 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시키고, 농도별로 과산화수소(H2O2)를 2시간 동안 처리하였다. 이후 상등액을 수집하여 HA(Human Hyaluronic acid) ELISA Kit(CUSABIO)으로 히알루론산 생성량을 측정하였다. 세라마이드 인산화효소 생성량의 경우 상기 히알루론산 분석법과 동일한 방법으로 인간 진피섬유아세포에 농도 별로 과산화수소(H2O2)를 처리한 후 세포외 및 세포내 함량을 비교하기 위해 각각 상등액과 세포를 분리하였다. 이로부터 획득된 세포를 RIPA Lysis Buffer(BIOMAX)로 처리하여 1,800rpm에서 5분간 원심분리를 통해 상등액을 수집하여 세포 용해물(Cell lysate) 시료를 획득하였다. 이후 획득한 상등액 및 세포 용해물 시료를 CERK(Human Ceramide Kinase) ELISA Kit(CUSABIO)를 사용하여 상등액과 세포내 세라마이드 인산화효소 생성량을 비교분석하였다. In more detail, cytotoxicity was analyzed in the same manner as in FIG. 1 . On the other hand, the amount of hyaluronic acid produced by culturing human dermal fibroblasts in a DMEM cell culture medium containing 10% FBS at 37 ° C., 5% CO 2 conditions, 2 × 10 4 cells were dispensed in a 96-well plate (well plate), Cells were completely attached while culturing for 12 hours, and hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) was treated for 2 hours by concentration. Thereafter, the supernatant was collected and the amount of hyaluronic acid produced was measured with HA (Human Hyaluronic acid) ELISA Kit (CUSABIO). In the case of the amount of ceramide kinase produced, hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) was treated to human dermal fibroblasts by concentration in the same manner as the hyaluronic acid analysis method, and then the supernatant and the cells were separated to compare the extracellular and intracellular contents. The obtained cells were treated with RIPA Lysis Buffer (BIOMAX), and the supernatant was collected by centrifugation at 1,800 rpm for 5 minutes to obtain a cell lysate sample. Afterwards, the supernatant and cell lysate samples obtained were compared and analyzed for the amount of ceramide kinase produced in the supernatant and cells using CERK (Human Ceramide Kinase) ELISA Kit (CUSABIO).

그 결과, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이 인간 진피섬유아세포에 과산화수소(H2O2)를 처리한 결과 500 μM 농도부터 산화적 손상으로 인해 세포생존율이 급격히 감소됨과 동시에 인간 진피섬유아세포가 생성하는 피부 구성성분인 히알루론산 및 세라마이드 인산화효소 생성량이 함께 감소하는 것으로 나타났다. 결과적으로 500 μM 농도의 과산화수소(H2O2) 처리는 인간 진피섬유아세포가 손상되는 최적 조건임을 확인하였으며, 이하 도 4의 실험에서 동일한 방법을 적용하여 수벌 및 여왕벌 추출물의 효능을 비교분석 하였다. 이때 대조군(CON)은 과산화수소(H2O2)를 처리하지 않은 무처리군을 나타낸다.As a result, as can be seen in FIG. 3 , as a result of treating human dermal fibroblasts with hydrogen peroxide (H 2 O 2 ), the cell viability was rapidly reduced due to oxidative damage from a concentration of 500 μM, and at the same time, human dermal fibroblasts produced It was found that the production of hyaluronic acid and ceramide kinase, which are components of the skin, decreased together. As a result, it was confirmed that the 500 μM concentration of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) treatment was the optimal condition to damage human dermal fibroblasts. In this case, the control group (CON) represents an untreated group that is not treated with hydrogen peroxide (H 2 O 2 ).

5. 산화적 손상 조건에서 본 발명의 추출물의 영향 확인5. Identification of the effect of the extract of the present invention under oxidative damage conditions

수벌 및 여왕벌 추출물이 과산화수소에 의한 산화적 피부 손상에 효과가 있는지 확인하기 위해 상기 4.(도 3)에서 제시한 방법과 동일하게 인간 진피섬유아세포를 배양한 후 수벌 및 여왕벌 추출물을 농도 별로 1시간 동안 전처리 하였다. 이후 상기 4.에서 확인한 바에 기초하여 500μM의 과산화수소를 인간 진피섬유아세포에 2시간 동안 처리하여 히알루론산 생성량 및 세포 내 세라마이드 인산화효소 생성량을 비교 분석하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 이때 대조군(CON)은 추출물 및 과산화수소(H2O2)를 처리하지 않은 무처리군을 나타낸다.In order to check whether the extracts of the honey bee and queen bee are effective in oxidative skin damage caused by hydrogen peroxide, after culturing human dermal fibroblasts in the same manner as in 4. during pretreatment. Thereafter, based on the confirmation in 4. above, human dermal fibroblasts were treated with 500 μM hydrogen peroxide for 2 hours to compare and analyze hyaluronic acid production and intracellular ceramide kinase production, and the results are shown in FIG. 4 . In this case, the control group (CON) represents an untreated group that was not treated with the extract and hydrogen peroxide (H 2 O 2 ).

그 결과 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이 본 발명의 추출물에 의한 히알루론산(도 4(a)) 및 세라마이드 인산화효소(도 4(b)) 생성의 증가를 확인할 수 있었으며, 특히 여왕벌 추출물을 이용한 경우 이들의 현저한 생성의 증가가 획득될 수 있음을 알 수 있었다. 한편, 과산화수소만 처리한 경우 산화적 손상으로 인해 대조군(CON)에 비해 히알루론산 및 세라마이드 인산화효소 생성량이 급격히 감소하는 것으로 나타났으나, 본 발명에 의한 수벌 및 여왕벌 추출물 처리구의 경우 추출물 농도가 증가할수록 히알루론산 및 세라마이드 인산화 효소 생성량이 증가하여 과산화수소에 의한 산화적 손상을 감소시키는 것으로 나타났다. As a result, as can be seen in FIG. 4, it was possible to confirm an increase in the production of hyaluronic acid (FIG. 4(a)) and ceramide kinase (FIG. 4(b)) by the extract of the present invention, especially when the queen bee extract was used. It has been found that a significant increase in their production can be obtained. On the other hand, when only hydrogen peroxide was treated, the production of hyaluronic acid and ceramide kinase was rapidly decreased compared to the control group (CON) due to oxidative damage. It was found that the production of hyaluronic acid and ceramide phosphorylation enzymes increased, thereby reducing the oxidative damage caused by hydrogen peroxide.

특히, 여왕벌 추출물의 경우 수벌에 비해 피부구성 성분으로 피부보습에 효과적인 히알루론산 및 세라마이드 생성량이 더욱 증가하여 과산화수소에 의한 인간진피섬유아세포의 산화적 손상을 방지하는 효과가 더욱 큰 것으로 확인되었다.In particular, in the case of the queen bee extract, it was confirmed that the amount of hyaluronic acid and ceramide, which is effective for skin moisturizing, as a component of the skin, was further increased compared to that of the male bee, and the effect of preventing oxidative damage to human dermal fibroblasts caused by hydrogen peroxide was confirmed to be greater.

6. 본 발명의 추출물의 피부 재생 효과 확인6. Confirmation of skin regeneration effect of the extract of the present invention

본 발명에 의한 서양뒤영벌 여왕벌 추출물이 인간 진피섬유아세포의 세포이동을 통한 상처회복(wound healing) 능력, 즉 피부재생에 미치는 영향을 확인하기 위하여 보다 상세하게 인간 진피섬유아세포를 10% FBS가 들어간 DMEM 세포배양액에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양한 후 5×105 cell이 되도록 6 웰 플레이트(well plate)에 분주하였고, 12시간 동안 배양하면서 세포를 완전히 부착시켰다. 이후 스크래처(Scratcher, SPL Inc.)를 이용하여 웰 플레이트 중앙을 긁어서 상처를 낸 후 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 농도 별로 처리하여 8시간 후 현미경 관찰을 통해 상처 사이의 길이(Wound closure length)를 측정하여 상처 회복 정도를 분석하였다. 이때 대조군(CON)은 뒤영벌 추출물을 첨가하지 않은 무처리군을 나타내며, 기존 피부재생에 효과가 있는 고시형 기능성 화장품원료로서 추출물의 효능을 비교하기 위한 양성대조군으로 '아데노신(Adenosine)' 500 ㎍/㎖을 이용하였다. In order to confirm the effect of the queen bee extract according to the present invention on the wound healing ability through cell migration of human dermal fibroblasts, that is, skin regeneration, in more detail, DMEM containing 10% FBS of human dermal fibroblasts. After culturing in a cell culture medium at 37° C. and 5% CO 2 conditions, the cells were aliquoted into 6 well plates to become 5×10 5 cells, and the cells were completely adhered while culturing for 12 hours. After that, the center of the well plate was scraped using a scratcher (SPL Inc.) to make a wound, and then, after 8 hours of treatment with the extract of the queen bee extract at each concentration, the length between the wounds was measured through microscopic observation (Wound closure length). The degree of wound healing was analyzed. At this time, the control group (CON) represents the untreated group without the addition of the extract, 'Adenosine' 500 μg/ ml was used.

그 결과, 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이 피부 세포에 상처를 내고 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 처리하여 8시간 동안 배양할 경우 대조구(CON)에 비하여 서양 뒤영벌 여왕벌 추출물을 처리하였을 때 피부재생을 통한 상처회복이 빠른 것을 현미경 사진으로 확인할 수 있었으며(도 5(a)), 상처의 길이 측정을 통한 상처회복(wound healing) 효과를 확인할 수 있었다(도 5(b)).As a result, as can be seen in FIG. 5 , when the skin cells were wounded, treated with the western hummingbird extract and cultured for 8 hours, compared to the control (CON), the western hummingbird extract was treated, wound recovery through skin regeneration. This rapid thing could be confirmed with a micrograph (FIG. 5(a)), and the wound healing effect could be confirmed by measuring the length of the wound (FIG. 5(b)).

이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.Although the embodiments of the present invention have been described in detail above, the scope of the present invention is not limited thereto, and various modifications and variations are possible within the scope without departing from the technical spirit of the present invention described in the claims. It will be apparent to those of ordinary skill in the art.

Claims (10)

서양뒤영벌의 알코올 추출물을 유효성분으로 포함하는, 기능성 화장료 조성물.
A functional cosmetic composition comprising, as an active ingredient, an alcohol extract of sagebrush.
제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 콜라겐 생성 촉진에 의해 피부 탄력을 증진시키는, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition according to claim 1, wherein the functional cosmetic composition enhances skin elasticity by promoting collagen production.
제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 세포이동(cell migration) 촉진에 의해 피부 재생 및 상처회복을 증진시키는, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition of claim 1, wherein the functional cosmetic composition promotes skin regeneration and wound recovery by promoting cell migration.
제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 히알루론산(Hyaluronic acid, HA) 및 세라마이드 인산화효소(Ceramide kinase, CERK)의 분비 촉진에 의해 피부 보습을 증진시키는, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition of claim 1, wherein the functional cosmetic composition enhances skin moisture by promoting secretion of hyaluronic acid (HA) and ceramide kinase (CERK).
제1항에 있어서, 상기 서양뒤영벌은 서양뒤영벌의 수벌, 일벌 및 여왕벌로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나인, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition according to claim 1, wherein the locust bee is at least one selected from the group consisting of a male bee, a worker bee, and a queen bee.
제1항에 있어서, 상기 알코올은 탄소수 1 내지 3의 알코올, 헥산 및 클로로포름으로 이루어지는 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나인, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition according to claim 1, wherein the alcohol is at least one selected from the group consisting of alcohols having 1 to 3 carbon atoms, hexane and chloroform.
제1항에 있어서, 상기 유효성분은 기능성 화장료 조성물 부피를 기준으로 15 내지 500 μg/ml의 농도로 포함되는, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition according to claim 1, wherein the active ingredient is included in a concentration of 15 to 500 μg/ml based on the volume of the functional cosmetic composition.
제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 페이스트, 젤, 크림, 파우더 또는 스프레이 제형인, 기능성 화장료 조성물.
According to claim 1, wherein the functional cosmetic composition is a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, powder or spray formulation, the functional cosmetic composition.
제1항에 있어서, 상기 기능성 화장료 조성물은 로션, 화장수, 영양 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 비누 또는 파운데이션인, 기능성 화장료 조성물.
The functional cosmetic composition of claim 1, wherein the functional cosmetic composition is a lotion, lotion, nourishing cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, soap or foundation.
제1항에 있어서, 상기 서양뒤영벌의 알코올 추출물은 서양뒤영벌을 2배 내지 30배의 중량비의 알코올을 이용하여 5 내지 35℃에서 추출한 추출원액을 여과 및 농축하여 획득된 것인, 기능성 화장료 조성물.


The functional cosmetic composition according to claim 1, wherein the alcohol extract of locust beetle is obtained by filtering and concentrating the extract extracted at 5 to 35°C using alcohol in a weight ratio of 2 to 30 times.


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