KR20220111677A - 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하여 인체에 대해 안전하면서 피부의 상태 개선 및 미용 효능을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체에서 가장 큰 면적을 차지하는 기관으로 외부로부터 인체를 보호하는 역할을 하며, 피부 장벽(skin barrier)은 그 기능에 따라 물리적 장벽, 화학적 장벽, 면역 장벽으로 구분할 수 있다. 물리적 장벽은 피부 세포간의 틈을 부착하는 밀착 연접으로 세포의 틈을 메워 유해 물질이 침입하지 못하도록 막는 역할을 한다. 화학적 장벽은 세포가 분비하는 물질에 의해 pH 조건이 변경되거나, 항균 펩타이드, 천연 보습인자, 자유지방산과 같은 성분이 분비됨에 따라 생성되어 유해 물질이 침입하지 못하도록 막는 역할을 한다. 예를 들어, 피부 세포와 상재균에서 생성되는 항균 펩타이드(Defensin, LL-37, Psoriacin 등)는 외부에서 유입되는 균, 바이러스 등을 제거하여 1차면역에 관여할 수 있다. 면역 장벽은 피부에 존재하는 랑게르한스 세포, 대식세포, T 세포 등의 면역세포들에 의한 장벽으로 물리적, 화학적 장벽을 통과한 유해 물질에 대한 방어 기전을 제공한다.
최근에는 생활 수준이 향상됨에 따라 아름다운 피부를 가꾸기 위한 노력에서 더 나아가, 피부 장벽 개선 등 피부의 건강 관리를 위한 화장료 조성물도 다양하게 제공되고 있다. 화장료 조성물은 노화 방지, 피부 보호와 같은 상태 개선 효과 및 보습, 미백과 같은 미용 효과를 부여하는 유효 성분을 함유할 수 있다. 종래에는 미생물, 식물 등 천연 재료로부터 유래된 대사물이나 추출물을 유효 성분으로 동정하여 적용함으로써 화장료 조성물의 부작용을 줄이기 위한 연구가 활발하게 이루어져 왔다. 최근에는 천연 유래 물질 뿐만 아니라 의약이나 건강기능식품과 같은 분야에서 소정의 효과를 나타내는 것으로 알려진 물질들의 화장료 조성물에 대한 유효 성분으로서의 활용 가능성이 연구되고 있다.
따라서, 종래 피부에 도포하는 것 이외의 다양한 방법으로 인체 내에 투여하여 소정의 효과를 얻던 물질들로서, 인체에 대해 안전하면서도 피부의 상태 개선이나 피부 미용에 효과적으로 작용할 수 있는 조성물에 대한 연구가 주목받고 있는 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자 창출된 것으로서, 본 발명의 목적은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리실레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신과 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다.
본 발명에서 "화장료 조성물"은 피부에 도포하여 조성물 중에 포함하는 유효 성분을 피부 및 피부를 구성하는 피부 세포에 전달하기 위한 것을 의미한다.
본 발명에서 화장료 조성물은 피부의 상태 개선용, 피부 보습용 또는 피부 장벽 개선용으로 제공되는 것을 의미할 수 있다.
구체적으로, 피부의 상태 개선은 진피 세포 등 피부 세포의 활성 및 증식을 증대시키는 것, 피부 세포에서의 콜라겐 합성량을 증대시키는 것, 피부 세포에서의 멜라닌 합성량을 감소시키는 것을 포함하여 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부의 상태 개선은 피부 세포의 활성 및 증식을 통해 피부의 재생 작용을 향상시키는 것, 피부 세포의 콜라겐 합성능을 증가시켜 피부의 주름 또는 탄력을 개선하는 것 및 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하여 피부에 미백 또는 브라이트닝 효과를 부여하는 것을 포함하여 의미할 수 있다. 피부의 미백은 멜라닌 합성의 억제를 통해 피부를 하얗게 만드는 것(whitening)을 의미할 수 있고, 피부의 브라이트닝(brightening)은 피부의 각질 관리 또는 유수분 밸런스의 정상화를 통해 어두운 피부를 밝게 만드는 것을 의미할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 피부 개선을 통해 피부 잡티의 발생과 탄력 저하를 방지하여 미용 효과를 제공할 수 있다.
구체적으로, 피부의 보습은 피부 세포에서 히알루론산 합성 효소의 발현율을 증대시키는 것, 피부 세포에서의 히알루론산 합성량을 증대시키는 것, 피부 세포에서의 함수율을 증대시키는 것을 포함하여 의미할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 피부 보습을 통해 노화 방지 효과를 제공할 수 있다.
구체적으로, 피부 장벽 개선은 피부 세포에서 항균 펩타이드의 합성량을 증대시키는 것, 피부 세포에서 콜라겐 타입7의 합성량을 증대시키는 것, 피부 세포에서 항산화 단백질의 발현량을 증대시키는 것을 포함하여 의미할 수 있다. 피부는 매일 산화 스트레스에 노출되며 상처가 발생하기 쉬운데, 본 발명의 화장료 조성물은 항산화 단백질 발현량을 증가시켜 항산화 작용을 향상시키거나, 항균 펩타이드 및 상처 재생에 관여하는 콜라겐 타입7을 포함하는 인자들의 합성량을 증가시켜 재생 작용을 향상시켜 피부 장벽 개선 효과를 제공할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물은, 피부의 재생 작용 향상, 피부의 세포 증식능 증가, 피부의 주름 또는 탄력 개선, 피부 세포의 콜라겐 합성능 증가, 피부 보습, 피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소의 발현율 증가, 피부의 미백 또는 브라이트닝, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성 억제, 피부 장벽 개선, 피부 세포에서의 항균 펩타이드 생산량 증가, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량 증가, 또는 피부 세포에서의 항산화 단백질의 발현량 증가의 용도를 제공할 수 있다.
본 발명에서 "유효성분"은 피부의 상태, 건강 및 미용 중 어느 하나 이상에 대해 이로운 효과를 부여하는 물질 또는 물질들의 군을 의미한다.
본 발명에서 유효성분의 "적용"은 화장료 조성물의 피부에의 도포를 통해 상기 유효성분을 피부 세포로 능동수송, 확산, 수송 매개체를 통한 전달 중 하나 이상의 방법으로 전달하는 것을 의미한다.
구체적으로, 본 발명에서 유효성분은 티아민, 피리독신, 엽산 및 시아노코발라민으로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 비타민 B일 수 있다. 비타민 B는 세포 내에서 대사를 위한 보조 인자로서 효소의 역할과 효소를 만들기 위한 전구체로 사용되는 수용성 비타민이다. 비타민 B는 주로 경구 투여를 통해 흡수하여 세포 대사 및 면역 반응에 이용된다.
티아민(thiamine)은 비타민 B1이라고도 불리며, 아미노피리미딘 및 티아졸륨이 연결된 구조를 가진다. 티아민은 일반적으로 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 탄수화물 대사 및 핵산의 합성에 관여한다.
티아민 및 티아민의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 티아민은 곡물, 콩류, 육류, 과일 또는 효모로부터 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
피리독신(pyridoxine)은 비타민 B6 또는 히드록시메틸피리딘이라고도 불리며, 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 글리코겐 대사, 아미노산의 합성 및 빈혈의 예방 및 치료에 이용된다.
피리독신 및 피리독신의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 피리독신은 곡물, 채소, 과일로부터 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
엽산(folic acid)은 비타민 B9, 폴산 또는 폴라신이라고도 불리며, 2-아미노-4-히드록시프테리딘, p-아미노벤조산, 폴리글루타메이트가 연결된 구조를 가진다. 엽산은 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 핵산의 합성 및 비타민B12의 활성화에 이용된다.
엽산 및 엽산의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 엽산은 곡물, 채소, 과일로부터 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
시아노코발라민(cyanocobalamin)은 비타민 B12 또는 시아노코발라민이라고도 불리며, 코발트를 함유하는 배위화합물이다. 시아노코발라민은 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 빈혈의 예방 및 치료에 이용된다.
시아노코발라민 및 시아노코발라민의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 시아노코발라민은 미생물의 발효에 의해 생산되는 것을 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다. 구체적으로, 본 발명의 또 다른 유효성분은 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신으로 이루어지는 군으로부터 1종 이상 선택되는 것일 수 있다.
글리시레티닉애씨드(glycyrrhetinic acid)는 에녹솔론이라고도 불리며, 글리시리진의 펜타시클릭 트리테르페노이드 아글리콘 대사산물이다. 글리시레티닉애씨드는 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 소화 개선 및 프로스타글란딘 대사에 이용된다.
글리시레티닉애씨드 및 글리시레티닉애씨드의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포에서의 콜라겐7의 합성량 및 피부 세포에서의 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키는 효과가 있다. 본 발명에서 글리시레티닉애씨드는 감초와 같은 식물로부터 생산되는 것을 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
알루미늄 수크로스 옥타설페이트(aluminum sucrose octasulfate)는 히드록시알루미늄의 수크로스 복합체로서, 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 궤양의 예방에 이용된다.
알루미늄 수크로스 옥타설페이트 및 알루미늄 수크로스 옥타설페이트의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키는 효과가 있다. 알루미늄 수크로스 옥타설페이트는 수크로스 옥타설페이트의 암모늄염과 염화알루미늄을 반응시켜 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
루페올(lupeol)은 트리테르펜의 일종으로, 경구 투여를 통해 흡수하여 인체 내에서 항종양 및 암 예방에 이용된다.
루페올 및 루페올의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 콜라겐 합성능, 피부 세포의 함수율 및 항균 펩타이드의 생산량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 루페올은 식물로부터 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
카르노신(carnosine)은 베타-알라닐-L-히스티딘이라고도 불리며, 베타알라닌과 L-히스티딘이 연결된 구조를 가진다. 카르노신은 근육에 대한 버퍼로 작용하는 것으로 알려져 있다.
카르노신 및 카르노신의 약학적으로 허용가능한 염을 피부에 적용하는 경우, 피부의 세포 증식능, 피부 세포의 함수율, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량, 항균 펩타이드의 생산량 및 피부 세포에서의 항산화 단백질의 발현량을 증가시키며, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있다. 본 발명에서 카르노신은 육류로부터 수득할 수 있으나, 국내외에서 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물은 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 함유할 수 있으며, 상기 군으로부터 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 경우 각각의 성분을 동일한 비율로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 화장료 조성물은 전체 100 중량%에 대해 상기 유효성분을 각각 0.000001 내지 10 중량%로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 화장료 조성물 전체 100 중량%에 대해 상기 유효성분을 0.00001 내지 1 중량%로 포함할 수 있다.
또는, 상기 화장료 조성물은 전체 중량에 대해 상기 유효성분을 각각 0.01 ppm 내지 100,000 ppm으로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 화장료 조성물 전체 중량에 대해 상기 유효성분을 0.01 내지 10,000 ppm으로 포함할 수 있다. 이하, 유효성분의 농도는 각 성분의 약학적으로 허용가능한 염에 대해서도 적용된다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 티아민은 100,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 티아민을 10,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 1,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량, 항균 펩타이드 합성량 및 피부 세포에서 콜라겐 타입 7 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 티아민을 1,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 히알루론산 합성 효소 발현도에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 티아민을 100,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 티아민을 1 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 5 ppm 이상, 가장 바람직하게는 10 ppm 이상으로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 피리독신은 10,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진, 피부 세포의 콜라겐 합성량 및 항균 펩타이드의 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 피리독신을 1,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 히알루론산 합성 효소 발현도에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 피리독신을 10,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 1,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 피리독신을 1 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 10 ppm 이상, 가장 바람직하게는 100 ppm 이상으로 포함할 수 있다. 피부 세포에서 콜라겐 타입 7 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 피리독신을 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 엽산은 1,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 엽산을 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 10 ppm 이하, 가장 바람직하게는 1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 엽산을 10 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이상으로 포함할 수 있다. 피부 세포의 히알루론산 합성 효소 발현도에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 엽산을 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 엽산을 10 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이상으로 포함할 수 있다. 항균 펩타이드 합성량 및 피부 세포에서 콜라겐 타입 7 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 엽산을 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 시아노코발라민은 1,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 시아노코발라민을 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 10 ppm 이하, 가장 바람직하게는 1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량, 피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소 발현도 및 항균 펩타이드 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 시아노코발라민을 1,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 시아노코발라민을 1 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이상으로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 글리시레티닉애씨드는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 글리시레티닉애씨드를 10 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 1 ppm 이하, 가장 바람직하게는 0.1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 항균 펩타이드 합성량 및 피부 세포에서 콜라겐 타입 7 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 글리시레티닉애씨드를 10 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 5 ppm 이하, 가장 바람직하게는 1 ppm 이하로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량 및 피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소 발현도 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 알루미늄 수크로스 옥타설페이트를 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 알루미늄 수크로스 옥타설페이트를 100 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다. 항균 펩타이드 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 알루미늄 수크로스 옥타설페이트를 100 ppm 이하로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 루페올은 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 루페올을 50 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 5 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 콜라겐 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 루페올을 10 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 1 ppm 이하, 가장 바람직하게는 0.1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 히알루론산 합성 효소 발현도에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 루페올을 10 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 5 ppm 이하, 가장 바람직하게는 1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 루페올을 10 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 5 ppm 이하, 가장 바람직하게는 1 ppm 이하로 포함할 수 있다. 항균 펩타이드 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 루페올을 100 ppm 이하로 포함할 수 있다.
예를 들어, 화장료 조성물 전체 중량에 대해, 카르노신은 100,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포 활성 증진에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 카르노신을 100,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 10,000 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 히알루론산 합성 효소 발현도와 항균 펩타이드 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 카르노신을 1,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 100 ppm 이하로 포함할 수 있다. 멜라닌 세포의 멜라닌 생성량 감소에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 카르노신을 100 ppm 이상으로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 1,000 ppm 이상으로 포함할 수 있다. 피부 세포에서 콜라겐 타입 7 합성량 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 카르노신을 1,000 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 100 ppm 이하, 가장 바람직하게는 10 ppm 이하로 포함할 수 있다. 피부 세포의 항산화 단백질 발현도 증대에 대한 유의미한 효능을 얻기 위해서는 카르노신을 200 ppm 이하로 포함하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 20 ppm 이하로 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "화장료 조성물"은 피부에 직접 도포 하거나 살포하는 등으로 조성물 중에 포함되는 유효성분을 피부 세포에 적용하기 위한 조성물을 의미한다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일, 클렌징 폼, 비누 또는 바디 워시 제형일 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 중에서 두피에 사용하기 위한 것일 수 있으며, 이러한 경우 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형일 수 있다.
본 발명의 조성물을 액상으로 제형화하는 경우, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분에 대한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 피마자유, 글리세린, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄과 같은 지방산 에스테르일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화하는 경우, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분에 대한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 예를 들어, 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 히드록시에틸 등의 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연, 세토스테아릴알코올 또는 염화스테아릴트리에틸암모늄일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 파우더 또는 스프레이로 제형화하는 경우, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분에 대한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 예를 들어, 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물을 스프레이로 제형화하는 경우에는 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물을 비누로 제형화하는 경우, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분에 대한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 예를 들어, 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 화장료 조성물에 대해 통상적으로 사용되는 첨가제를 더 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어, 정제수, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 킬레이트제, 살균제, 산화방지제, 방부제, 색소, 향료일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
이상, 본 발명에 포함되는 모든 성분들은 각 국가에서 정하는 규제를 초과하여 포함하지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 언급된 개별 성분들을 중국 정부에서 정하는 「화장품 안전·기술 규범」에 규정된 최대 사용량을 초과하지 않는 범위 내에서 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 피부 개선 방법은, 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 피부에 처리하는 단계를 포함한다.
상기 피부 개선 방법은, 피부의 재생 작용을 향상시키거나, 피부의 세포 증식능을 증가시키거나, 피부의 주름 또는 탄력을 개선시키거나, 피부 세포의 콜라겐 합성능을 증가시키거나, 피부 보습용이거나, 피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소의 발현율을 증가시키거나, 피부의 미백 또는 브라이트닝용이거나, 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하거나, 피부 장벽 개선용이거나, 피부 세포에서의 항균 펩타이드 생산량을 증가시키거나, 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량을 증가시키거나, 또는 피부 세포에서의 항산화 단백질의 발현량을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 피부 개선 방법은, 상기 화장료 조성물을 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일, 클렌징 폼, 비누 또는 바디 워시 제형으로 피부에 처리하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 피부 개선 방법은, 상기 화장료 조성물을 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형으로 두피에 처리하는 단계를 포함한다.
상기 피부 개선 방법은, 피부의 상태 개선 방법, 피부 보습 방법 및 피부 장벽 개선 방법을 포함한다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 인체에 무해하며, 피부의 상태를 개선하고, 피부 보습 효과를 제공하며, 피부 장벽 개선 효과를 부여할 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포의 증식능을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 피부 세포의 활성이 증가하여 피부에 활력이 부여되며 생기 있어 보이는 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포의 콜라겐 합성능을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 피부 세포의 탄력이 증가하여 노화를 방지하는 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포 내에서 히알루론산 합성 효소의 발현율을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 피부 세포 중의 함수율이 증가하며 피부에 대한 보습 및 탄력 부여의 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 중의 멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제할 수 있다. 이에 따라, 피부에 대한 미백 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포에서의 항균 펩타이드 생산량을 증가시킨다. 이에 따라, 피부의 면역력을 향상시켜 피부의 보호 및 염증의 예방 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포에서의 콜라겐7 합성량을 증가시킨다. 이에 따라, 표피와 진피의 구조 유지력 및 상처 재생력을 개선하여 피부의 장벽 구성 및 유지를 통한 보호 효과를 제공한다.
구체적으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 피부 세포에서의 항산화 단백질의 발현량을 증가시킨다. 이에 따라, 인체에서 외부 환경에 가장 먼저 노출되는 피부에서 활성 산소를 제거하여 산화로부터 피부를 보호하고 피부의 장벽 구성 및 유지를 통한 보호 효과를 제공한다.
도 1은 본 발명에 따른 유효성분으로서 카르노신의 SPRR1a 발현을 확인하기 위해 웨스턴블롯을 수행한 결과를 나타낸 이미지이다.
본 발명의 목적, 특정한 장점들 및 신규한 특징들은 이하의 상세한 설명과 바람직한 실시예로부터 더욱 명백해질 것이다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명은 생략한다.
실험예 1. 유효성분별 피부 세포 활성에 대한 효능 평가
이하의 실험예에서 사용한 티아민(Sigma Aldrich, T4625-100g), 피리독신(Sigma Aldrich, PHR1036-500MG), 엽산(Sigma Aldrich, F8758-5G) 시아노코발라민(Sigma aldrich, V2876-5g), 글리시레티닉애씨드(Sigma Aldrich, E0180500), 알루미늄 수크로스 옥타설페이트(Sigma Aldrich, Y0001324), 루페올(Sigma Aldrich, L5632-100mg), 카르노신(Sigma Aldrich, C9625-5G) 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 시판되는 제품을 사용하였다.
피부 세포의 활성 및 증식에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하기 위하여 Cell Counting Kit-8(CCK8, Dojindo, Japan)을 사용하여, 테트라졸륨염의 분해에 따라 생성되는 포르마잔의 발색을 확인하였다. 활성 및 증식이 활발한 세포는 미토콘드리아에서 에너지 생산이 활발하게 일어나므로, 에너지 생산에 사용되는 탈수소효소가 테트라졸륨염을 분해하여 포르마잔을 생성한다. 발색은 ELISA Reader(Epoch, Bio-tech Instrument INC., USA)로 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
사람의 foreskin 유래의 인체섬유아세포를(진피 세포, HS68) 배양접시의 바닥에 접종한 후 penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100 μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 섬유아세포가 배양접시의 표면을 약 60 내지 70% 정도를 덮을 정도가 되면 0.25% trypsin (Gibco BRL, U.S.A.)처리하여 세포들을 회수한 후 배양을 실시하였으며 96 well 배양판 (Falcon Co)의 각 well 당 1 x 104 개의 세포를 분주하여 1일간 배양하였다. 1일 배양 후 각 유효 성분들을 아래 표 1의 실험 농도에 맞게 DMEM에 혼합하여 각각의 well에 넣고 다시 24 시간 동안 배양한 후, 각 well당 CCK-8 용액을 10 μl씩 첨가하고 37℃, 5% CO2가 공여되는 세포배양기에서 1시간 동안 반응시켰다. 그리고 ELISA reade로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 각 농도마다 동일한 3개의 well에서 실험을 시행하고 그 결과를 평균하여 표 1에 표시하였다. 이때, 세포활성은 FBS를 3% 농도로 처리한 양성 대조군에 대한 상대적 수치로 비교하여 증감정도를 백분율로 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | 세포활성 증감도(%) |
| 티아민 | 100 ppm | 3.5 |
| 1,000 ppm | 23.7 | |
| 피리독신 | 100 ppm | 75.4 |
| 엽산 | 1 ppm | 21.2 |
| 시아노코발라민 | 1 ppm | 24 |
| 루페올 | 0.01 ppm | 30.9 |
| 0.1 ppm | 55.8 | |
| 1 ppm | 73.2 | |
| 5 ppm | 87.3 | |
| 카르노신 | 1,000 ppm | 34.7 |
| 10,000 ppm | 126 |
티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 루페올 및 카르노신을 각각을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 진피 세포의 증식이 유의미한 수준으로 나타났다.
실험예 2. 유효성분별 피부 세포의 콜라겐 합성에 대한 효능 평가
피부 세포에서의 콜라겐 합성에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하였다. 진피 세포로서 콜라겐 합성이 가능한 HS68을 사용하였으며, PICP (Procollagen Type I C-peptide) EIA assay를 이용하였다. 섬유아세포에서 대표적으로 가장 많이 합성이 이루어지는 제 I 형 전구 콜라겐 C말단 펩타이드(PICP)를 정량적으로 측정하였다. 24 well 배양판에 well 당 1.5 x 105 의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 각각의 유효성분을 첨가하여, 48 시간 동안 처리하였다. 배양 상층액 20 μl를 취하여 콜라겐 합성 측정에 사용하였다.
제 I 형 전구콜라겐 C말단 펩타이드의 양을 PICP EIA kit(Takara shuzo, Japan, Cat.# MK101)를 이용하여 측정하였다. 효소면역측정과정은 one step sandwich method이고 PIP(procollagen I peptide)에 대한 마우스 단클론항체로 96 well 배양판을 코팅하고 37℃에서 3시간 동안 20 μl의 세포배양액과 peroxidase로 표지한 항마우스 PIP 단클론항체를 반응시켜, H2O2 와 테트라메틸벤지딘(tetramethylbenzidine)으로 발색시킨 후 100μl의 1N 황산을 첨가하여 반응을 종결시킨 후 ELISA 판독기(Pro collagen type 1 c-peptide ELASA Kit(Takara mk101))로 450nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. PICP 표준농도로 그래프를 작성하여 정량적인 계측을 하였다.
각 유효성분별 처리 농도는 아래 표 2에 나타낸 것과 같으며, 아무것도 처리하지 않은 대조군과의 상대적 수치로 비교하여 증감정도를 백분율로 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | 콜라겐 합성량(%) |
| 티아민 | 100 ppm | 14.3 |
| 피리독신 | 100 ppm | 4.7 |
| 엽산 | 100 ppm | 14.4 |
| 시아노코발라민 | 100 ppm | 8.8 |
| 글리시레티닉애씨드 | 0.1 ppm | 14 |
| 알루미늄수크로스 옥타설페이트 |
10 ppm | 8.8 |
| 루페올 | 0.1 ppm | 8.3 |
티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트 및 루페올을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 콜라겐 합성 증가량이 유의미한 수준으로 나타났으며, 티아민의 경우 일정 농도 이상, 엽산의 경우 일정 농도 이하인 경우에서는 콜라겐 합성이 저감되는 것으로 나타났다.
실험예 3. 유효성분별 피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소 발현에 대한 효능 평가
피부 세포 내에서의 히알루론산 합성 효소의 발현에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하였다. 히알루론산은 피부 내에서 세포가 수분을 흡수한 상태로 유지하도록 하여 세포의 함수율에 중요한 영향을 미치는 물질이며, 히알루론산의 합성에 필요한 효소인 HAS3(hyaluronan synthase 3)의 발현 정도를 확인하였다.
피부 세포로서 HaCaT 세포를 사용하였으며, penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 24 well 배양판에 well 당 1 x 106 의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 각각의 유효성분을 첨가한 뒤 72시간 처리하였다. 세포에서 RNA를 추출하여 qPCR(Qiagen Rnase mini kit)를 통해 HAS3의 발현 정도를 확인하였다.
각 유효성분별 처리 농도는 아래 표 3에 나타낸 것과 같으며, 아무것도 처리하지 않은 대조군의 상대적 발현 정도를 1.00으로 두어 상대적 수치로 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | 상대적 mRNA 발현도 |
| 티아민 | 100 ppm | 1.37 |
| 10,000 ppm | 2.74 | |
| 피리독신 | 100 ppm | 1.49 |
| 1,000 ppm | 1.80 | |
| 엽산 | 1 ppm | 1.07 |
| 10 ppm | 1.22 | |
| 시아노코발라민 | 1 ppm | 1.18 |
| 100 ppm | 1.37 | |
| 알루미늄 수크로스 옥타설페이트 |
10 ppm | 23.7 |
| 루페올 | 1 ppm | 1.10 |
| 5 ppm | 1.50 | |
| 10 ppm | 2.40 | |
| 카르노신 | 100 ppm | 1.20 |
티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 히알루론산 합성 효소의 mRNA 발현량이 유의미한 수준으로 나타났으며, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트는 현저히 우수한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
실험예 4. 유효성분별 멜라닌 세포의 멜라닌 생성에 대한 효능 평가
피부의 멜라닌 세포에서의 멜라닌 생성량에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하였다. 멜라닌 세포로서 melanocyte B16을 사용하였으며, penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 6 well 배양판에 well당 1 x 105 개의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 각각의 유효성분을 첨가한 뒤 72시간 처리하였다.
각 유효성분별 처리 농도는 아래 표 4에 나타낸 것과 같으며, 아무것도 처리하지 않은 대조군의 멜라닌 생성량을 100으로 두고 상대적 수치로 비교하여 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | 상대적 멜라닌 생성량 |
| 티아민 | 10 ppm | 88.2 |
| 피리독신 | 100 ppm | 85.9 |
| 엽산 | 100 ppm | 88.5 |
| 시아노코발라민 | 10 ppm | 84.3 |
| 글리시레티닉애씨드 | 100 ppm | 87.1 |
| 알루미늄수크로스 옥타설페이트 |
1 ppm |
80.5 |
| 루페올 | 1 ppm | 93.1 |
| 카르노신 | 100 ppm | 65.9 |
| 1,000 ppm | 77.6 |
티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉 애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 멜라닌 생성량 감소율이 유의미한 수준으로 나타났다.
실험예 5. 유효성분별 항균 펩타이드 합성 대한 효능 평가
피부 세포 내에서의 항균 펩타이드 합성에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하였다. 피부 세포로서 HaCaT 세포를 사용하였으며, penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 24 well 배양판에 well 당 1 x 106 의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 각각의 유효성분을 첨가한 뒤 24시간 처리하였다. 그 후 항균 펩타이드 생성을 저해하는 조건인 42℃에서 15분 동안 노출시킨 후 세포 배양액 100μl를 걷어 항균펩타이드인 HBD2(human beta defensin2) 생성량을 ELISA(Alpha Diagnostic. Intl., 100-240-BD2)를 사용하여 정량하였다. HBD2 antibody가 코팅된 well에 배양액 100μl를 넣은 후 HRP(고추냉이과산화효소, horseradish peroxidase)와 결합가능한 HBD2 antibody를 처리하였다. 그 후 HRP와 반응하는 기질(TMB, Tetramethyl benzidine)을 첨가해 기질이 분해되면서 색이 변하는 것을 450nm에서 ELISA Reader기로 흡광도를 측정하여 정량하였다. 실험시 HBD2 standard 물질을(Alpha Diagnostic. Intl., 100-240-BD2) series dilution 하여 동일하게 450nm에서 흡광도를 측정하여 x축을 HBD2의 농도로, y축을 450nm흡광도의 값을 갖는 그래프를 도시하고, 그래프에 대응하는 식을 산출한 뒤 샘플의 흡광도 값을 y에 대입하여 x값에 해당하는 HBD2의 농도를 구하였다. 아무것도 처리하지 않은 대조군의 HBD2 농도값을 100%로 보고 각 샘플군의 HBD2농도를 백분율 환산하여 표 5에 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | HBD2 생성 증감도(%) |
| 티아민 | 1ppm | 203.3 |
| 10ppm | 209.9 | |
| 100ppm | 190.1 | |
| 피리독신 | 1ppm | 149.2 |
| 10ppm | 138.9 | |
| 100ppm | 177.1 | |
| 엽산 | 0.1ppm | 170.4 |
| 1ppm | 132.5 | |
| 10ppm | 114.6 | |
| 시아노코발라민 | 100ppm | 122.5 |
| 글리시레티닉 애씨드 |
0.1ppm | 137.6 |
| 1ppm | 193.4 | |
| 알루미늄 수크로스 옥타설페이트 |
100ppm | 132.7 |
| 루페올 | 100ppm | 122.8 |
| 카르노신 | 100ppm | 141.1 |
티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올 및 카르노신을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 HBD2 생성 증가율이 유의미한 수준으로 나타났으며, 글리시레티닉애씨드가 현저히 우수한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
실험예 6. 유효성분별 피부 세포 내의 콜라겐 타입7 합성에 대한 효능 평가
피부 세포에서의 콜라겐 타입 7 합성에 대한 각 유효성분의 효과를 평가하였다. 피부 세포로서 HaCaT 세포를 사용하였으며, penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 24 well 배양판에 well 당 1 x 106 의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 각각의 유효성분을 첨가한 뒤 24시간 처리하였다. 콜라겐7 합성량은 ELISA(LSOBIO, Human COL7A1/Collagen Ⅶ ELISA kit, LS-F11164)를 이용하여 정량하였다.
각 유효성분별 처리 농도는 아래 표 6에 나타낸 것과 같으며, 아무것도 처리하지 않은 대조군과의 상대적 수치로 비교하여 증감정도를 백분율로 나타내었다.
| 유효성분 | 처리농도 | 콜라겐 7 합성량(%) |
| 티아민 | 100 ppm | 12.6 |
| 피리독신 | 10 ppm | 8.1 |
| 엽산 | 10 ppm | 7.0 |
| 글리시레티닉애씨드 | 1 ppm | 12.0 |
| 카르노신 | 10 ppm | 55.0 |
티아민, 피리독신, 엽산, 글리시레티닉애씨드, 카르노신을 유효성분으로 하는 경우, 유효성분별 처리농도에 차이는 있었지만 콜라겐 7의 mRNA 발현량이 유의미한 수준으로 나타났다.
실험예 7. 카르노신의 피부 세포 내의 항산화 단백질 발현에 대한 효능 평가
피부 세포 내에서의 항산화 단백질의 발현량을 정량하여 카르노신의 효과를 평가하였다. 피부 세포로서 HaCaT 세포를 penicillin (100 IU/ml), streptomycin(100μg/ml) (GibcoBRL, U.S.A.) 및 10% 우태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, GibcoBRL, U.S.A.)이 포함된 Dulbecco's modified eagles medium (DMEM, GibcoBRL, U.S.A.)을 넣고 37℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Forma Scientific, France)내에서 배양을 시행하였다. 24 well 배양판에 well 당 1 x 106 의 세포를 분주하여 24시간 배양하였다. (기본 배양액 및 유효성분 조건 정보 요청)에 분주한 후, UVB 50mJ/cm2을 처리(30W, 312nm, BIO-SUN, Vilber Lourmat Deutschland GmbH)하여 SPRR1a(small proline rich protein 1a)를 감소시킨 뒤, 여기에 혈청을 포함하지 않은 DMEM에 카르노신 20ppm을 세포에 24시간 처리하였다. 그 후 SPRR1a 발현량의 회복 정도를 측정하였다. 배양된 세포에서 lysis buffer를 이용하여 단백질을 추출하고, SDS-PAGE를 통해 단백질을 크기별로 분리하여 멤브레인에 트랜스퍼한 뒤, SPRR1a 항체를 이용하여 단백질을 정량하였다.
도 6은 UV 처리전, UV 처리 후 대조군 및 UV 처리 후 카르노신 20 ppm 처리시 SPRR1a 단백질의 웨스턴블롯 결과이다. 카르노신 처리 결과 SPRR1a의 발현이 아무것도 처리하지 않은 UV처리 대조군 대비 338% 증가한 것으로 확인되었다.
본 발명은 상기에서 설명한 실시예로 한정되지 않으며, 상기 실시예들의 조합 또는 상기 실시예 중 적어도 어느 하나와 공지 기술의 조합을 또 다른 실시예로서 포함할 수 있음은 물론이다.
이상 본 발명을 구체적인 실시예를 통하여 상세히 설명하였으나, 이는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명은 이에 한정되지 않으며, 본 발명의 기술적 사상 내에서 당해 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 그 변형이나 개량이 가능함은 명백하다고 할 것이다.
본 발명의 단순한 변형 내지 변경은 모두 본 발명의 영역에 속하는 것으로 본 발명의 구체적인 보호 범위는 첨부된 특허청구범위에 의하여 명확해질 것이다.
Claims (15)
- 티아민, 피리독신, 엽산, 시아노코발라민, 글리시레티닉애씨드, 알루미늄 수크로스 옥타설페이트, 루페올, 카르노신 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부의 재생 작용을 향상시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 2 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부의 세포 증식능을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부의 주름 또는 탄력을 개선시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 4 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 세포의 콜라겐 합성능을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 6 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 세포 내의 히알루론산 합성 효소의 발현율을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부의 미백 또는 브라이트닝용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 8 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
멜라닌 세포의 멜라닌 합성을 억제하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 장벽 개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 10 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 세포에서의 항균 펩타이드 생산량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 10 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 세포에서의 콜라겐7 합성량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제 10 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 세포에서의 항산화 단백질의 발현량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일, 클렌징 폼, 비누 또는 바디 워시 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 피부는 두피이며,
상기 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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