KR20220110278A - 타우병증을 치료하기 위한 펩타이드 조성물 및 방법 - Google Patents

타우병증을 치료하기 위한 펩타이드 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20220110278A
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마누엘 블랑
얀 고드프린
두스 줄리엣 르
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아쏠티스 파마
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Abstract

본 발명은 환자에게 전신 경로를 통해 투여하는 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 이용한 알츠하이머 질환과 같은 타우병증의 치료 방법에 관한 것이다. 이러한 펩타이드는 아미노산 서열 1-W-S-A1-W-S-A2-C-S-A3-A4-C-G-X2를 가지며, 서열에서 A1, A2, A3 및 A4는 아미노산 1-5개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되고, X1 및 X2는 아미노산 1-6개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되거나; 또는 X1 및 X2는 생략되며; N-말단 아미노산은 아세틸화되거나, C-말단 아미노산은 아미드화되거나, 또는 N-말단 아미노산은 아세틸화되고 C-말단 아미노산은 아미드화될 수 있다.

Description

타우병증을 치료하기 위한 펩타이드 조성물 및 방법
본 발명은 알츠하이머 질환 (AD)과 같은 타우병증을 치료하기 위한 펩타이드, 펩타이드 조성물 및 방법에 관한 것이다.
타우병증은 타우 단백질의 병리학적 응집과 관련있는 신경퇴행성 장애의 일종이다. 타우 (tau)는 중추 신경계에 풍부하고 축삭에서 주로 발현되는 미소관 관련 단백질이다. 타우 단백질은 뉴런에서 미소관 네트워크를 안정시키는 역할을 담당할 수 있다. 타우의 과도한 또는 비정상적인 인산화는 질환 진행의 주요 기여인자로 보이는 타우 응집을 유발할 수 있다.
타우 인산화는 타우가 미소관에 결합하는 것을 조절하는데 중요한 정상적인 대사 과정으로서, 뇌에서 항상 진행된다. 타우는 과인산화될 수 있으며, 노화 및 신경퇴행성 질환 둘다에서 조직내 검출가능한 원섬유 침착물로서 응집될 수 있다.
타우병증으로는 예를 들어 알츠하이머 질환 (AD), 진행성 핵상 마비 (PSP), 피크병과 같은 타우 양성의 전두측두엽 치매, 루이소체 치매, 피질기저 변성, C형 니만-피크병, 권투선수 치매를 비롯한 만성 외상성 뇌병증, 뇌염 후유증성 파킨슨 증후군이 있다. AD와 같은 일부 타우병증에서는 타우 응집뿐 아니라 아밀로이드-β 펩타이드의 응집도 관찰할 수 있다.
타우병증에 대한 치료 옵션은 매우 제한적이다. 아틸콜린에스테라제 저해제 (AChEI)(도네페질 (donepezil), 갈란타민 (galantamine) 및 리바스티그민 (rivastigmine))가 AD에 대한 대증 치료의 핵심으로서, 시냅스에서 이의 분해를 저해함으로써 아세틸콜린 이용성을 높인다. 그러나, 일부 환자들은 시간이 흐르면 치료에 반응하지 않거나 또는 치료 효과가 없어질 수 있다. 아울러, 이들 환자는 부작용을 겪을 수도 있다. 그래서, 아세틸콜린에스테라제 저해제가 금기되는 환자도 있다. 타우병증에 대한 혁신적인 치료 옵션에 대한 중대한 의학적인 요구가 존재한다.
SCO-스폰딘 유래 펩타이드는 신경재생 특성, 특히 세포 생존 및 신경돌기 생장을 시험관내에서 개선하는 능력에 대해 개시되어 있다. SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 척수 손상 치료 용도가 동물 모델에서 조사된 바 있다.
Maurice T, Lockhart BP, Privat A. Amnesia induced in mice by centrally administered β-amyloid peptides involves cholinergic dysfunction. Brain Res. 1996 Jan 15;706(2):181-93. Maurice T, Su TP, Privat A. Sigma1 (σ1) receptor agonists and neurosteroids attenuate β25-35-amyloid peptide-induced amnesia in mice through a common mechanism. Neuroscience. 1998 Mar;83(2):413-28. Maurice T, Mustafa MH, Desrumaux C, Keller E, Naert G, de la C Garcia-Barcelo M, Rodriguez Cruz Y, Garcia Rodriguez JC. Intranasal formulation of erythropoietin (EPO) showed potent protective activity against amyloid toxicity in the Aβ25-35 non-transgenic mouse model of Alzheimer's disease. J Psychopharmacol. 2013 Nov;27(11):1044-57. Jackson S, Ham RJ, Wilkinson D. The safety and tolerability of donepezil in patients with Alzheimer's Disease. Br J Clin Pharmacol. 2004 Nov;58 Suppl 1:1-8. Meunier J, Ieni J, Maurice T. The anti-amnesic and neuroprotective effects of donepezil against amyloid β25-35 peptide-induced toxicity in mice involve an interaction with the σ1 receptor. Br J Pharmacol. 2006 Dec;149(8):998-1012. Homma A, Imai Y, Tago H, Asada T, Shigeta M, Iwamoto T, Takita M, Arimoto I, Koma H, Takase T, Ohbayashi T. Long-Term Safety and Efficacy of Donepezil in Patients with Severe Alzheimer's Disease. Dement Geriatr Cogn Disord. 2009;27(3):232-9.
본 발명의 과제는 타우 단백질이 병인에 참여하는 타우병증 및/또는 장애를 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 아밀로이드-β 단백질과 타우 단백질이 병인에 참여하는 타우병증 및/또는 장애를 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
다른 과제는 알츠하이머 질환 (AD); 진행성 핵상 마비 (PSP); 피크병과 같은 타우 양성의 전두측두엽 치매; 루이소체 치매; 피질기저 변성; C형 니만-피크병; 권투선수 치매를 비롯한 만성 외상성 뇌병증; 뇌염 후유증성 파킨슨 증후군을 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 개체에서 타우 단백질의 응집을 저하 또는 파괴하거나, 타우 단백질을 낮추거나, 및/또는 타우 단백질의 과인산화 및/또는 비정상적인 인산화를 낮추기 위한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다. 또 다른 과제는 타우 단백질의 수준 증가 또는 병리학적 수준, 및/또는 타우 단백질 응집, 및/또는 타우 단백질 과인산화 및/또는 비정상적인 인산화 등의, 타우 단백질을 특징으로 하거나 또는 적어도 부분적으로 타우 단백질로부터 발생하는, 질환 또는 장애를 앓고 있는 개체에 유익할 수 있는, 상기한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는, 부가적으로 아밀로이드-β 플라크 형성을 간섭하거나, 아밀로이드-β 응집을 방지하거나 및/또는 이미 형성된 아밀로이드-β 침착 또는 아밀로이드-β 응집을 탈-중합할 수 있는, 상기한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 타우병증을 치료하기 위해 활성 성분을 전신 투여하는데 적합한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 아세틸콜린에스테라제 저해제가 금지된 환자에서 타우병증을 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 과제는 타우병증 치료용으로 처방되는 다른 약물과 조합하여 환자에서 타우병증을 치료하는데 유용한 조성물 및 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은, SCO-스폰딘 유래 펩타이드가 타우병증을 치료하는데 유용할 수 있다는 것을 놀랍게도 알게 되었다. 특히, 본 발명자들은, SCO-스폰딘 유래 펩타이드가 타우 (tau), 특히 이의 인산화를 조절하고, 타우 단백질의 축적 또는 타우 단백질의 응집을 감소시킨다는 것을, 예상치 못하게도 알게 되었다. 아울러, 본 발명자들은, 이러한 유익한 효과를 펩타이드의 전신 투여를 통해 달성할 수 있다는 것을 입증하였다. 나아가, 본 발명자들은, 본 발명에 따른 조성물 또는 방법이 아세틸콜린에스테라제 저해제를 이용한 치료가 금기되거나 또는 아세틸콜린에스테라제 저해제에 내성인 경우에서도 환자에게 유익할 수 있다는 것을 알게 되었다.
전신 투여는 예상치 못하게도 이러한 특정한 상황에서 본 발명의 펩타이드에 효과적이다. 전신 투여가 치료할 환자에게 더 안전하고 보다 편리하므로, 타우 탈조절 (tau deregulation) 부위에의 직접 투여 또는 CSF로의 직접 투여 (척수강내 또는 뇌내 주사)를 능가하는 상당한 이점을 제공한다. 이런 투여 방식의 중요한 또는 유리한 측면은, 건강 전문가가 주어진 환자에 대해 시간 경과에 따라 반복 투여 가능하다는 것이다. 펩타이드는 관류를 비롯한 주사 또는 주입을 통해 쉽게 투여할 수 있다. 또한, 본 발명자들은, 전신 투여 후 병변 수준에서 이들 펩타이드의 생체이용성 또는 생물학적 효과로 인해 펩타이드의 과도한 다량 투여가 필요 없다는 것을, 알게 되었다. 예상치 못하게도, (천연 또는 비-변형) 펩타이드는 전신 투여 후 생물학적 효과를 발휘한다. 또한, 예상치 못하게도, 펩타이드의 매우 짧은 반감기 (원숭이의 경우 약 12분, 인간의 경우 약 19분)에도 불구하고, CNS에서의 생물학적 효과가 관찰되었다. 예상치 못하게도, 이러한 매우 짧은 반감기에도 불구하고, 펩타이드의 효능은 펩타이드를 매일 또는 2일마다 투여한 경우에도 관찰되었다.
본 발명은 타우병증을 치료하기 위한 SCO-스폰딘 유래 펩타이드(들)를 포함하는 조성물을 개시한다. 이의 사용은 세포내 타우 단백질의 총 수준, 인산화된 타우 단백질의 수준, 타우 응집 또는 이들의 조합의 저하를 허용한다. 이의 사용은 유해한 타우 올리고머를 낮추고, 타우병증 및 이의 진행을 치료하거나, 느리게 하거나 또는 예방할 수 있다.
본 설명에서, 상충하지 않은 한, 임의의 기술된 특징은 여러가지 발명의 대상 "사용 조성물 (composition for use)", "이용 방법 (method of use)" 및 "의약제를 제조하기 위한 펩타이드의 용도"에 적용된다.
일 측면에서, 본 발명은 개체에서 타우병증을 치료하기 위한, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 포함하는 사용 조성물, 및 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 투여를 포함하는 방법에 관한 것이다. 이러한 용도 및 방법은 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 유효량 또는 충분량으로 개체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 전신 투여가 수행된다.
다른 측면에서, 본 발명은 개체에서 타우 응집을 감소 또는 파괴하거나 및/또는 개체에서 타우병증을 치료하기 위한, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 포함하는 사용 조성물, 및 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 투여를 포함하는 방법에 관한 것이다. 이러한 용도 및 방법은 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 유효량 또는 충분량으로 개체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 전신 투여가 수행된다.
다른 측면에서, 본 발명은 개체에서 타우 단백질 및/또는 타우 단백질 과인산화를 줄이거나 및/또는 개체에서 타우병증을 치료하기 위한, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 포함하는 사용 조성물, 및 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 투여를 포함하는 방법에 관한 것이다. 이러한 용도 및 방법은 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 유효량 또는 충분량으로 개체에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 전신 투여가 수행된다.
다른 측면에서, 본 발명은 개체에 전신 투여를 통해 타우병증을 치료하는데 사용하기 위한 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 다른 측면에서, 본 발명은 개체에 전신 경로를 통해 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 투여하는 것을 포함하는 타우병증의 치료 방법에 관한 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 아세틸콜린에스테라제 저해제가 금기되거나 또는 전혀 또는 더 이상 허용되지 않거나 또는 충분히 또는 더 이상 활성이 아닌 개체를 치료하기 위한, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 포함하는 사용 조성물, 및 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 투여를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 타우병증을 치료하기 위한 약학적 조성물의 제조에 있어 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 용도에 관한 것이다. 일 구현예에서, 조성물은 전신 투여를 위한 것이다. 일 구현예에서, 조성물은 전신 투여를 위한 약학적 부형제 또는 비히클을 포함한다.
이러한 여러가지 측면들에 대한 일부 구현예에서, 타우병증은 알츠하이머 질환 (AD); 진행성 핵상 마비 (PSP); 피크병과 같은 타우 양성의 전두측두엽 치매; 루이소체 치매; 피질기저 변성; C형 니만-피크병; 권투선수 치매를 비롯한 만성 외상성 뇌병증; 및 뇌염 후유증성 파킨슨 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
여러가지 측면들에 대한 일 구현예에서, 타우병증은 AD이다. AD는 아세틸콜린에스테라제 저해제 (예, 도네페질)를 이용한 치료가 금기되거나 또는 활성이 충분하지 않거나 또는 더 이상 활성을 발휘하지 않거나, 환자에서 내성이 발생하거나, 또는 환자가 이에 대해 불내성이 된 AD일 수 있다.
일 구현예에서, 상기한 사용은 부가적으로 아밀로이드-β 플라크 형성을 간섭할 수 있거나, 아밀로이드-β 응집을 방지할 수 있거나, 및/또는 이미 형성된 아밀로이드-β 침착 또는 아밀로이드-β 응집을 탈-중합화 할 수 있다.
일 구현예에서, 개체는 또한 충분한 양의 아세틸콜린에스테라제 저해제로 치료한다.
다른 측면에서, 본 발명은 펩타이드를 개체에게 전신 경로를 통해 투여하는, 타우병증의 치료 방법에 이용하기 위한, 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ의 조합에 관한 것이다. 이들 2종의 활성 성분의 투여는 특히 분리하여, 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ, 및 약제학적으로 허용가능한 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는, 조성물은 전신 경로를 통해 투여하기 적합하다. 일 구현예에서, 조성물은 개체에 전신 경로를 통해 투여되는, 타우병증을 치료하는데 사용하기 위한 것이다.
상세한 설명
타우병증
본원에 상세히 기술된 조성물 및 방법은 타우병증을 치료하기 위해 이용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 상세히 기술된 조성물 및 방법은 타우 단백질을 조절하여 타우병증을 치료한다. 타우는 미소관에 결합하여 이를 안정화하는 단백질이다. 타우는 또한 미소관 결합된 단백질 타우 (MAPT)로도 지칭할 수 있다. 타우 단백질은 또한 투불린과 상호작용하여 미소관을 안정화하고, 미소관으로의 투불린 조립을 촉진한다. 타우에는 이소형 5종이 존재한다. 타우 단백질은 중추 신경계의 뉴런에 풍부하고, 중추 신경계 (CNS) 성상 세포와 희소돌기신경교에서도 매우 낮은 수준으로 발현된다. 타우 단백질은 뉴런에서 미소관 네트워크를 안정화하는 역할을 담당할 수 있다.
타우의 과도한 인산화 (과인산화) 및 비정상적인 인산화를 비롯한 타우의 변형된 인산화는 미소관 구성의 파괴, 타우 단백질의 축적 및/또는 응집을 야기할 수 있다. 일부 구현예에서, 타우 응집체는 적절하게 기능하지 않는다. 예를 들어, 타우 응집체는 미소관을 적절하게 안정화하지 못할 수 있다. 타우 응집체로는 예를 들어, PHF-tau (쌍을 형성한 나선 필라멘트), NFT (신경원섬유 매듭) 및 신경교섬유질 매듭 (gliofibrillary tangle)을 포함한다. 타우 응집체는 단량체로서 또는 고 분자량 다량체 및 올리고머로 기술할 수 있다. 타우 응집체는 불용성일 수 있다. 타우 응집체는 뇌에 존재할 수 있다. 타우 단백질은 팽창된 뉴런내 봉입체 형태로 침착될 수 있다. 타우가 올리고머 종으로 응집하면, 타우병증으로 지칭되는 다양한 병증을 유발할 수 있으며, 이는 질환 진행의 주요 기여인자일 수 있다.
타우병증은 타우의 변형된 인산화 및/또는 타우의 병리학적 응집과 관련있는 신경퇴행성 질환의 일종이다.
본원에 상세히 기술된 조성물 및 방법은 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 세포내 전체 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 인산화된 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 타우 단백질의 응집을 저해, 감소 또는 파괴하거나, 또는 이들의 조합을 달성할 수 있다. 그 수준은 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, or 적어도 약 98%. 타우 응집 may be reduced by 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 98%까지 감소할 수 있다.
본원에 상세히 기술된 조성물 및 방법은 타우병증을 치료하기 위해, 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 세포내 전체 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 인산화된 타우 단백질의 수준을 낮추거나 저해하거나, 타우 단백질의 응집을 저해, 감소 또는 파괴하거나, 또는 이들의 조합을 달성할 수 있다.
"전신 투여"는 전신 투여 후 투여된 펩타이드(들) 또는 펩타이드 화합물(들)이 상당량 또는 충분량으로 혈액 순환계에 도달하게 되는 임의의 투여 방식 또는 경로를 의미한다. 척수강내 투여뿐 아니라 펩타이드를 혈액 순환계로 표적화 하지 않는 임의의 전신 투여 방식은 제외한다. 본 발명의 전신 투여 경로는 "혈액-표적화된 전신 투여 경로"로 한정할 수 있다.
"펩타이드", "펩타이드들" 또는 "펩타이드(들)"의 투여 또는 사용은 관용적인 표현이며, 본 발명은 하나의 단일 펩타이드 또는 하나 보다 많은 수의 단일 펩타이드의 투여 또는 사용, 즉 본 발명에 따른 2종 이상의 펩타이드의 투여 또는 사용을 망라한다. 이에, 본 발명에서, 단수 형태 또는 복수 형태는 달리 지시되지 않은 한 제한되지 않으며, 각각 하나의 단일 펩타이드 또는 적어도 2종의 펩타이드를 망라할 수 있다. 이는 "펩타이드"와 상호 호환적으로 사용될 수 있는, 동일한 표현 "펩타이드 화합물"에도 동일하게 적용된다.
"치료하는", "치료된" 또는 "치료한다"는 본 발명에 따른 펩타이드 화합물을 소정량 개체에 전달하는 것을 의미한다. 이들 용어는 본원에서 부적절한 생리학적 병태, 장애 또는 질환의 서행 (약화), 유익한 또는 요망하는 임상적 결과 달성을 목적으로 하는 치료를 의미한다. 본 발명의 목적에서, 유익한 또는 요망하는 임상 결과로는 비-제한적으로 증상 완화; 병태, 장애 또는 질환의 범위 축소; 병태, 장애 또는 질환의 상태 안정화 (즉, 비-악화); 병태, 장애 또는 질환의 개시 지연 또는 진행 서행; 병태, 장애 또는 질환 상태의 경감; 및 (부분 또는 완전) 관해를, 병태, 장애 또는 질환의 검출가능한 또는 검출할 수 없는, 또는 강화 또는 개선이든 간에, 포함한다. 치료는 또한 비-치료시 예상되는 생존성과 비교해 생존 연장을 포함한다. 용어 "치료하는", "치료된" 또는 "치료한다"는 질환의 예방, 억제, 저지, 경감 또는 완전한 소거를 포함할 수 있다. 질환 예방은 질환 개시 전에 본 발명의 조성물을 개체에 투여하는 것을 수반할 수 있다. 질환 억제는 질병이 유발된 후 임상적으로 발현되기 전에 본 발명의 조성물을 개체에 투여하는 것을 수반할 수 있다. 질환의 저지 또는 경감은 질환이 임상적으로 발생한 후 본 발명의 조성물을 개체에 투여하는 것을 수반할 수 있다. 일 구현예에서, 유익한 또는 요망하는 임상 결과는 기억 상실 및/또는 인지장애에 대한 유익한 효과, 예를 들어 약화, 지연 또는 부분 또는 완전한 회복을 포함한다.
용어 "저해한다" 또는 "저해하는"은 활성이 저해제의 존재시 저해제의 부재시와 반대로 감소 또는 방지되는 것을 의미한다. 용어 "저해"는 생체분자 또는 폴리펩타이드의 발현 또는 활성의 부재 또는 최소화로 이어지는, 프로세스의 감소 또는 하향 조절 또는 프로세스에 대한 자극 소거를 지칭한다. 저해는 직접 또는 간접적일 수 있다. 저해는 특이적일 수 있으며, 즉 저해제는 생체분자 또는 폴리펩타이드를 저해하고, 다른 것은 저해하지 않는다.
"유효량", "충분량", 및 "치료학적 유효량"과 같은 비슷한 용어는 본원에서 달리 정의되지 않은 한 상호 호환적으로 사용되며, 원하는 치료학적 결과를 달성하는데 필요한 기간 동안 효과적인 본 발명의 펩타이드 또는 펩타이드들의 투여량을 의미한다. 유효한 투여량은 당해 기술 분야의 당업자에 의해 결정될 수 있으며, 질환 상태, 개체의 나이, 상별 및 체중, 그리고 개체에서 원하는 반응을 유발하는 약물의 효과와 같은 인자들에 따라 달라질 수 있다. 이 용어는 본원에서 개체에서 원하는 생체내 효과를 일으키는데 효과적인 함량을 또한 의미할 수 있다. 치료학적 유효량은 1회 이상의 투여 (예를 들어, 조성물은 예방적 치료로 또는 질환 진행의 임의 단계에서 치료학적으로, 증상 발생 전 또는 발생 후에 제공될 수 있음, 등), 적용 또는 투약 (dosages)으로 투여할 수 있으며, 이는 구체적인 제형, 조합 또는 전신 투여 경로로 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명의 범위에서, 펩타이드(들)는 개체의 치료 과정 중에 다양한 시점에 투여할 수 있다. 투여 시기 및 투여량은 치료 목표 (예, 치료 대비 예방), 개체의 병태 등과 같은 여러가지 인자들에 의존할 것이며, 당해 기술 분야의 당업자라면 쉽게 결정할 수 있다. 또한, 치료학적 유효량은 물질의 임의 독성 또는 유해한 효과가 치료학적으로 유익한 효과를 능가하는 양이다. "예방학적 유효량"은 원하는 예방학적 결과를 달성하기 위해 필요한 시간 기간 동안 용량에서 효과적인 양을 의미한다. 전형적으로, 예방학적 투여량은 개체에 질환 개시 전 또는 이른 초기 단계에서 사용되므로, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량보다 적을 수 있다. "유효량", "충분량"은 또한, 펩타이드의 양을 별도로 고려할 경우 여러가지 펩타이드들의 조합을, 및/또는 예를 들어 조합에서 약물 하나 또는 2종의 용량을 조합 효과 또는 상승 효과로 인해 줄일 수 있어, 다른 활성 성분과의 조합을 고려할 수 있다.
용어 "(들은) 포함한다", "(들은) 함유한다", "가지는", "가진다", "할 수 있다", "(들은) 보유한다" 및 이의 변형어들은, 본원에서, 펩타이드, 화합물 또는 약물과 같은 추가적인 산물 또는 행위의 가능성을 배제하지 않는, 개방된 의미의 전환 구, 용어 또는 단어로 의도된다. 단수 형태 ("a," "an" 및 "the")는 문맥상 명확하게 달리 명시되지 않은 한 복수형도 포함한다. 본원은, 명확하게 명시되거나 또는 명시되지 않든 간에, 본원에 제시된 구현예 및 요소를 "포함하는", "이들로 구성되는" 및 "이들로 필수적으로 구성되는" 다른 구현예들을 고려한다.
"환자 또는 개체"는 인간을 비롯한, 동물, 특히 포유류를 의미한다. 일 구현예에서, 개체는 인간이다. 다른 구현예들에서, 개체는 큰 동물 또는 농장 동물, 반려 동물 (예, 고양이, 개) 또는 운동 경기 동물 (예, 말)이다.
본 발명의 펩타이드와 조합하여 이용할 수 있는 "아세틸콜린에스테라제 저해제"는 도네페질 (donepezil), 갈란타민 (galantamine) 및 리바스티그민 (rivastigmine), 또는 규제 기관에 의해 인가된 임의의 기타 아세틸콜린에스테라제 저해제를 포괄한다. 일 구현예에서, 이러한 저해제, 특히 도네페질은 NX210, NX218, 또는 NX210 및 NX218 (SCO-스폰딘 유래 펩타이드) 둘다와 조합하여 사용된다.
본원에서, "동시적으로" 또는 "동시"는 2가지 물질을 함께 투여하는 것을 의미하는 것인데 반해, 용어 "조합하여"는 2종이 동시에 사용되지 않을 경우 둘다 동일한 시간 프레임에서 치료학적으로 작용하도록 이용가능한 시간 프레임 안에 "순차적으로" 투여되는 것을 의미하기 위해 사용된다. 즉, "순차적으로" 또는 "순차적인" 투여는, 제1 투여 물질의 순환 반감기가 물질 2종이 치료학적 유효량으로 동시에 존재하게 하는 한, 물질 1종이 다른 물질을 투여한 후 5분 이내, 10분 이내 또는 수시간 이내에 투여되는 것을 허용할 수 있다. 구성성분들을 투여하는 시간 간격은 구성성분의 실제 특성, 이들 간의 상호작용 및 각각의 반감기에 따라 달라질 것이다. "별도로" 또는 "별개"는 본원에서 한가지 물질과 다른 물질 간의 투여 간격이 상당한, 즉 수시간, 수일, 수주 또는 수개월인 것을 의미하며, 이는 2차 물질을 투여하는 시점에 1차 투여한 물질이 혈액 순환계에 치료학적 유효량으로 더 이상 존재하지 않는 경우를 포함할 수 있다.
SCO - 스폰딘 유래 펩타이드
"SCO-스폰딘"은 중추 신경계 특이 당단백질로서, 전척 (prochordal)에서 인간에 이르는 모든 척추동물에 존재한다. 이것은 하부-연결 기관인 제3 뇌실의 루프에 위치한 특정 기관에 의해 분비되는 세포외 매트릭스 분자로 알려져 있다. 이것은 크기가 큰 분자이다. 이는 아미노산 4,500개 이상으로 구성되며, 특히 26종의 TR 또는 TSR 패턴을 비롯한 다양한 보존된 단백질 패턴을 포함하는 다중-모듈 방식으로 구성된다. TSR 패턴으로부터 시작하는 SCO-스폰딘 유래 일부 펩타이드는 신경 또는 신경 세포에서 생물학적 활성을 가지는 것으로 알려져 있다 (특히 WO-99/03890에 기술됨).
"TSR 또는 TR 패턴"은 보존된 아미노산 시스테인, 트립토판 및 아르기닌 정렬을 기본으로 하는, 대략 잔기 55-60개로 이루어진 단백질 도메인이다. 이들 패턴은 응고에 개입하는 분자인 TSP-1 (트롬보스폰딘 1)에서 처음으로 단리되었다. 이후 이는 SCO-스폰딘과 같은 여러가지 다른 분자들에서도 언급되었다. 실제, 이 트롬보스폰딘 타입 1 유닛 (TSR)은 지금까지 연구된 이전에 언급된 모든 단백질들에서 약 55-60개의 아미노산 (AA)을 포함하며, 이중 일부는 시스테인 (C), 트립토판 (W), 세린 (S), 글리신 (G), 아르기닌 (R) 및 프롤린 (P)과 같이 매우 보존되어 있다.
SCO-스폰딘 펩타이드 또는 펩타이드 화합물은 본 발명을 수행하는데 이용된다 (본 발명의 여러가지 과제, 즉 펩타이드 또는 사용 조성물, 사용 방법, 치료 방법, 의약제 제조에 있어 펩타이드의 용도 등).
구체적으로, 본 발명은 하기 서열의 펩타이드를 이용한다.
X1-W-S-A1-W-S-A2-C-S-A3-A4-C-G-X2 (서열번호 1)
서열번호 1에서:
A1, A2, A3 및 A4는 아미노산 1-5개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되고,
시스테인 2개가 이황화 결합을 형성하거나 또는 형성하지 않으며,
X1 및 X2는 아미노산 1-6개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되거나, 또는 X1 및 X2는 생략되며;
N-말단 아미노산은 아세틸화되거나 (예를 들어, H3CCOHN-을 가짐), C-말단 아미노산은 아미드화되거나 (예를 들어, -CONH2를 가짐), 또는 N-말단 아미노산은 아세틸화되고 C-말단 아미노산은 아미드화될 수 있다.
일 구현예에서, 서열번호 1의 식에서, X1 또는 X2 또는 X1과 X2 둘다 생략된다. 일 구현예에서, X1 및/또는 X2가 생략되는 경우, N-말단 W는 아세틸화되거나 및/또는 C-말단 G는 아미드화된다. 바람직하게는, X1과 X2 둘다 생략되고, N-말단 W는 아세틸화되고, C-말단 G는 아미드화된다.
특히, 본 발명은 하기 서열의 펩타이드를 이용한다.
W-S-A1-W-S-A2-C-S-A3-A4-C-G (서열번호 2)
서열번호 2에서:
A1, A2, A3 및 A4는 아미노산 1-5개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되고,
시스테인 2개가 이황화 결합을 형성하거나 또는 형성하지 않는다.
서열번호 1 및 2의 식에 대한 일 구현예에서, 펩타이드는 선형 펩타이드이거나, 또는 서열번호 1 및 2의 펩타이드 식에 존재하는 시스테인은 이황화 결합을 형성하지 않는다 (환원된 형태).
다른 구현예에서, 서열번호 1 및 2의 펩타이드 식에 존재하는 시스테인 2개는 이황화 결합을 형성한다 (산화된 형태).
바람직하게는, 서열번호 1 및 2의 식에서, A1, A2, A3 및/또는 A4, 바람직하게는 및 A4는 바람직하게는 아미노산 1 또는 2개, 더 바람직하게는 아미노산 1개로 구성된다.
바람직하게는, A1은 G, V, S, P 및 A로부터, 더 바람직하게는 G, S로부터 선택된다.
바람직하게는 A2는 G, V, S, P 및 A로부터, 더 바람직하게는 G, S로부터 선택된다.
바람직하게는, A3는 R, A 및 V로부터, 더 바람직하게는 R, V로부터 선택된다.
바람직하게는, A4는 S, T, P 및 A로부터, 더 바람직하게는 S, T로부터 선택된다.
바람직하게는, A1 및 A2는 독립적으로 G 및 S로부터 선택된다.
바람직하게는, A3-A4는 R-S 또는 V-S 또는 V-T 또는 R-T로부터 선택된다.
X1이 아미노산 1-6개로 된 아미노산 서열일 경우, 이들 아미노산은 임의의 아미노산이고, 바람직하게는 V, L, A, P 및 이들의 임의 조합으로부터 선택된다.
X2가 아미노산 1-6개로 된 아미노산 서열일 경우, 이들 아미노산은 임의의 아미노산이고, 바람직하게는 L, G, I, F 및 이들의 임의 조합으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 서열번호 1 또는 2의 펩타이드는, A1 및 A2가 독립적으로 G 및 S로부터 선택되고, A3-A4가 R-S 또는 V-S 또는 V-T 또는 R-T로부터 선택되는 것이다. 구체적인 형태로, 펩타이드는 추가로 아세틸화 및/또는 아미드화된다. 일 구현예에서, 펩타이드는 선형 펩타이드이거나, 또는 시스테인은 이황화 결합을 형성하지 않는다. 다른 구현예에서, 펩타이드는 이황화 결합을 형성하는 (C-말단 고리화) 시스테인 2개를 가진다. 다른 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 전신 경로를 통해 환자에게 투여되는 펩타이드는 이들 2가지 형태 모두, 즉 산화된 펩타이드 및 선형 펩타이드를 포함한다.
본 발명의 목적에서, 용어 "아미노산"은 천연 아미노산 및 비-천연 아미노산을 모두 의미하며, 천연에서 비-천연을 아우르는 아미노산의 변형은 본래의 펩타이드의 기능 또는 효능은 유지하면서 당업자가 통상적으로 행할 수 있다. "천연 아미노산"은 천연 단백질에서 발견할 수 있는 L 형태의 아미노산, 즉 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인; 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소루신, 루신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린을 의미한다. "비-천연 아미노산"은 상기한 아미노산의 D 형태뿐 아니라 아르기닌, 라이신, 페닐알라닌 및 세린과 같은 특정 아미노산의 호모 형태, 또는 루신 또는 발린의 nor 형태를 의미한다. 이러한 정의는 또한 α-아미노부티르산, 아그마틴, α-아미노이소부티르산, 사르코신, 스타틴, 오르니틴, 데아미노티로신과 같은 기타 아미노산도 망라한다. 펩타이드 서열을 나타내기 위해 이용하는 명명법은 한문자 코드를 이용한 국제 명명법이며, 아미노-말단은 좌측에, 카르복시-말단은 우측에 나타낸다. 대시 "-"는 서열의 아미노산을 연결하는 일반적인 펩타이드 결합을 표시한다.
일 구현예에서, 본 발명에 따른 펩타이드, 예를 들어 서열번호 1-63의 펩타이드들 중 어느 하나는 N-말단 아세틸화, C-말단 아미드화, 또는 N-말단 아세틸화와 N-말단 아세틸화를 둘다 포함한다.
여러가지 구현예들에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 (표 1)로 구성되거나 또는 이들로 필수적으로 구성되는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다:
표 1:
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 3
W-S-S-W-S-G-C-S-R-S-C-G 서열번호 4
W-S-S-W-G-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 5
W-S-S-W-G-G-C-S-R-S-C-G 서열번호 6
W-S-S-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 7
W-S-G-W-S-G-C-S-R-S-C-G 서열번호 8
W-S-G-W-G-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 9
W-S-G-W-G-G-C-S-R-S-C-G 서열번호 10
W-S-S-W-S-S-C-S-V-S-C-G 서열번호 11
W-S-S-W-S-G-C-S-V-S-C-G 서열번호 12
W-S-S-W-G-S-C-S-V-S-C-G 서열번호 13
W-S-S-W-G-G-C-S-V-S-C-G 서열번호 14
W-S-G-W-S-S-C-S-V-S-C-G 서열번호 15
W-S-G-W-S-G-C-S-V-S-C-G 서열번호 16
W-S-G-W-G-S-C-S-V-S-C-G 서열번호 17
W-S-G-W-G-G-C-S-V-S-C-G 서열번호 18
W-S-S-W-S-S-C-S-V-T-C-G 서열번호 19
W-S-S-W-S-G-C-S-V-T-C-G 서열번호 20
W-S-S-W-G-S-C-S-V-T-C-G 서열번호 21
W-S-S-W-G-G-C-S-V-T-C-G 서열번호 22
W-S-G-W-S-S-C-S-V-T-C-G 서열번호 23
W-S-G-W-S-G-C-S-V-T-C-G 서열번호 24
W-S-G-W-G-S-C-S-V-T-C-G 서열번호 25
W-S-G-W-G-G-C-S-V-T-C-G 서열번호 26
W-S-S-W-S-S-C-S-R-T-C-G 서열번호 27
W-S-S-W-S-G-C-S-R-T-C-G 서열번호 28
W-S-S-W-G-S-C-S-R-T-C-G 서열번호 29
W-S-S-W-G-G-C-S-R-T-C-G 서열번호 30
W-S-G-W-S-S-C-S-R-T-C-G 서열번호 31
W-S-G-W-S-G-C-S-R-T-C-G 서열번호 32
W-S-G-W-G-S-C-S-R-T-C-G 서열번호 33
W-S-G-W-G-G-C-S-R-T-C-G 서열번호 34
일 구현예에서, 표 1에 기술된 서열번호 3-34 서열의 펩타이드는 선형 펩타이드이거나, 또는 시스테인은 이황화 결합을 형성하지 않는다 (환원된 펩타이드). 다른 구현예에서, 상기 표에 기술된 서열번호 3-34 서열의 펩타이드는 이황화 결합을 형성하도록 산화된 시스테인 2개를 가진다 (산화된 펩타이드). 다른 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 2가지 형태 둘다, 즉 펩타이드 서열이 동일한, 산화된 펩타이드와 선형 펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 서열번호 3-34의 서열들로부터 선택되는 2종 이상의 서로 다른 펩타이드들의 혼합물을 포함하며, 혼합물은 2종 이상의 선형 펩타이드들로 된 혼합물 또는 2종 이상의 산화된 펩타이드들로 된 혼합물, 또는 예를 들어 동일한 아미노산 서열을 가진, 하나 이상의 선형 펩타이드와 하나 이상의 산화된 펩타이드의 혼합물일 수 있다.
바람직한 구현예에서, 펩타이드는 아미노산 서열 W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G (서열번호 3)로 구성된다. 일 구현예에서, 펩타이드는 선형 펩타이드이거나, 또는 시스테인은 이황화 결합을 형성하지 않는다 (NX210으로 지칭되는 환원된 형태). 다른 구현예에서, 펩타이드는 이황화 결합을 형성하도록 산화된 시스테인 2개를 가진다 (NX218로 지칭되는 산화된 형태). 다른 구현예에서, 본 발명에 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 이들 2가지 형태 둘다, 즉 산화된 형태와 환원된 형태를 모두 포함한다.
서열번호 1의 펩타이드에 대한 일 구현예에서,
- X1은 수소 원자 또는 P 또는 A-P 또는 L-A-P 또는 V-L-A-P이고, 및/또는
- X2는 수소 원자 또는 L 또는 L-G 또는 L-G-L 또는 L-G-L-I 또는 L-G-L-I-F이다.
다른 구현예에서, 본 발명은 하기 아미노산 서열 (표 2)로 구성되거나 또는 이로 필수적으로 구성되는 폴리펩타이드의 용도에 관한 것이다:
표 2:
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 35
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 36
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 37
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G 서열번호 38
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L 서열번호 39
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G 서열번호 40
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L 서열번호 41
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I 서열번호 42
W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I-F 서열번호 43
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L 서열번호 44
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G 서열번호 45
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L 서열번호 46
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I 서열번호 47
P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I-F 서열번호 48
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L 서열번호 49
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G 서열번호 50
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L 서열번호 51
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I 서열번호 52
A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I-F 서열번호 53
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L 서열번호 54
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G 서열번호 55
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L 서열번호 56
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I 서열번호 57
L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I-F 서열번호 58
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L 서열번호 59
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G 서열번호 60
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L 서열번호 61
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I 서열번호 62
V-L-A-P-W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G-L-G-L-I-F 서열번호 63
일 구현예에서, 표 2에 기술된 서열번호 35-63의 서열 또는 표 1 + 2에 기술된 서열번호 3-63 서열의 펩타이드는 선형 펩타이드이거나, 또는 시스테인은 이황화 결합을 형성하지 않는다 (환원된 펩타이드). 다른 구현예에서, 펩타이드는 이황화 결합을 형성하도록 산화된 시스테인 2개를 가진다 (산화된 펩타이드). 다른 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 2가지 형태 둘다, 즉 펩타이드 서열이 동일한, 산화된 펩타이드와 선형 펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 서열번호 35-63 또는 3-63의 서열들로부터 선택되는 2종 이상의 서로 다른 펩타이드들의 혼합물을 포함하며, 혼합물은 2종 이상의 선형 펩타이드들로 된 혼합물 또는 2종 이상의 산화된 펩타이드들로 된 혼합물, 또는 예를 들어 동일한 아미노산 서열을 가진, 하나 이상의 선형 펩타이드와 하나 이상의 산화된 펩타이드의 혼합물일 수 있다.
서열번호 3-63의 서열을 가진 펩타이드들은 각각 아세틸화되거나, 또는 아미드화되거나, 또는 아세틸화 및 아미드화될 수 있다.
본 발명에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 아미노산 서열로 정의된다. 사용되는 펩타이드는 본원에 기술된 펩타이드 하나일 수 있거나, 또는 본원에 기술된 펩타이드 2종 이상의 혼합물일 수 있다. 또한, 혼합물은 아미노산 서열이 동일하거나 또는 상이한, 선형 펩타이드와 산화된 펩타이드의 혼합물을 망라한다. 100% 순수한 펩타이드를 본 발명에 따라 이용할 수 있다면, 펩타이드는 >80%, 바람직하게는 >85%, 더 바람직하게는 >90%, 보다 더 바람직하게는 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 순도를 가지는 것이 가능하며, 본 발명에 포함된다. 통상적인 정제 방법, 예를 들어 크로마토그래피에 의한 정제 방법을 이용해, 원하는 펩타이드 화합물을 정제할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명에서 이용되는 펩타이드 또는 환자에게 전신 경로를 통해 투여되는 펩타이드는 2가지 형태, 즉 산화된 펩타이드 (Op) 및 선형 펩타이드 (Lp)를, 예를 들어 비슷한 함량으로 또는 그렇지 않게, 예를 들어 (개수 %로) Op가 10, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90%이고, 100%에서 나머지 함량이 Lp인 방식으로 포함한다. 조합될 수 있는 산화된 펩타이드와 선형 펩타이드는 동일한 서열을 가지거나 또는 서로 다른 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 서열번호 3의 서열의 펩타이드의 산화된 형태와 선형 형태 (NX210 및 NX218)를 조합한다. 서열번호 4-34 및 35-63 서열의 펩타이드들 중 어느 하나에도 동일하게 적용된다.
본 발명에서 이용되는 약학적 조성물은 활성 성분으로서 전술한 펩타이드 또는 펩타이드 혼합물, 예를 들어, 여러가지 아미노산 조성의 펩타이드 또는 동일한 아미노산 조성의 펩타이드를 산화된 형태 및 선형 형태로 포함하며, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 비히클, 담체 또는 부형제를 포함한다.
본 발명에 따른 펩타이드 화합물은 약학적 조성물에 또는 의약제의 제조에 이용할 수 있다. 이들 조성물 또는 의약제에서, 활성 성분은 다양한 형태로, 즉 용액 형태, 일반적으로 수성 용액으로, 또는 냉동-건조된 형태, 또는 에멀젼 형태 또는 전신 투여 경로에 적합한 임의의 다른 약제학적 및 생리학적으로 허용가능한 형태로 조성물에 병합될 수 있다.
본 발명의 중요한 특징에 따라, 펩타이드 화합물 또는 이를 함유한 조성물은 전신 경로를 통해 투여한다. 다음과 같은 주사 또는 투여 경로를 특히 언급할 수 있다: 정맥내, 복막내, 비강내, 피하, 근육내, 설하, 경구, 및 이들의 조합.
정맥내 경로의 경우, 주사, 즉 주사 기구 (예, 주사기, 펌프를 이용한) 또는 중력에 의한 관류를 이용한 투여를 선택할 수 있다.
피하 경로의 경우, 조성물은 피하 조직으로 볼루스로서 투여한다. 주사 부위는 상완 외표면 (outer area); 늑골 끝에서 장골릉까지의 복부; 대퇴부 앞쪽; 등 또는 엉덩이일 수 있다.
비강내 또는 코 경로의 경우, 코 주입 (nasal insufflation)(조성물을 코로, 특히 기체, 분말 또는 증기를 이용해 주입함), 코 흡입 (nasal inhalation) 또는 점비법 (nasal instillation)을 선택할 수 있다.
본원에 개시된 펩타이드 하나 이상을 함유한 조성물은 살균한 것이다. 이들 조성물은 펩타이드(들)를 혈액 순환계로 전달하게 하는 투여에 적합하다. 혈액 순환계로의 전달은 펩타이드(들)를 혈액 순환계로 충분한 양으로 전달하는 것이며, 충분한 양은 CNS에서의 유익한 효과와 연관되어 있다. 다시 말해, 혈액 순환계로의 전달은 펩타이드(들)를 혈액 순환계로 충분한 양으로 전달하는 것이며, 충분한 "약학적 효과"를 CNS에 및/또는 본원에 하기에서 정의되는 바와 같은 "인지 향상"을 전달하는 것이다. "약학적 효과"는 본원에 기술된 바와 같이 타우 단백질의 수준 저해 또는 감소, 세포내 총 타오 단백질의 수준 저해 또는 감소, 인산화된 타우 단백질의 수준 저해 또는 감소, 타우 단백질의 응집 저해 또는 감소 또는 파괴, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물에서 활성 성분은 (1) 본원에 기술된 선형 펩타이드, (2) 본원에 기술된 산화된 펩타이드, (3) NX210, (4) NX218, 또는 (5) 본원에 기술된, 동일한 함량이거나 또는 그렇지 않은 선형 펩타이드와 산화된 펩타이드의 혼합물, 특히 NX210 및 NX218로 구성된다.
활성 성분은 통상적인 약학적 지지체, 담체, 부형제 또는 비히클과의 혼합물로서 단위 투약 형태로 동물 및 인간에게 투여할 수 있다. 적합한 단위 투여 형태는 정제, 겔 캡슐제, 산제, 과립제 및 경구 현탁제 또는 용액제, 설하 및 볼 투여 형태, 에어로졸과 같은 경구-경로 형태; 임플란트; 피하 (subcutaneous), 경피, 국소, 복막내, 근육내, 정맥내, 진피하 (subdermal), 경피 및 비강내 투여 형태 및 직장 투여 형태를 포함한다.
바람직하게는, 약학적 조성물은 활성 성분을 혈류로 전달하기 위해 주사할 수 있는 액체 제형에 대한, 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 비히클을 포함한다. 이는 특히 등장성, 멸균, 식염수 용액과 같은 용액제와 같이 사용할 준비가 된 용액 형태 (모노소듐 포스페이트, 다이소듐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 칼슘 클로라이드, 마그네슘 등, 또는 이들 염의 혼합물)에, 또는 사례에 따라 멸균수 또는 생리학적 식염수의 첨가시 주사가능한 용액의 구성할 수 있는, 건조, 특히 냉동-건조된 조성물 형태에 존재할 수 있다.
주사 용도로 적합한 약학적 제형으로는 멸균 수성 용액 또는 분산액; 참깨 오일, 땅콩 오일 또는 수성 프로필렌 글리콜을 함유한 제형; 및 무균 주사용 용액 또는 분산액을 즉석 조제하기 위한 무균 산제를 포함한다. 모든 경우에, 형태는 무균성이어야 하며, 용이한 주사성이 존재할 정도로 유동성이어야 한다. 이는 제조 및 보관 환경에서 안정적이어야 하며, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존적이어야 한다.
주사가능한 무균 용액은 활성 폴리펩타이드를 적절한 용매에 필요한 양으로 투입한 다음 여과 멸균 처리함으로써 제조한다.
용액은, 제형화시, 용액은 투약 제형 (dosage formulation)에 적합한 방식으로, 치료학적으로 유효한 것과 같이 그러한 양으로 투여될 것이다. 제형은 전술한 주사가능한 용액 타입과 같은 다양한 투약 형태로 쉽게 투여하며, 약물 방출형 캡슐제 (drug release capsules) 등도 역시 채택할 수 있다.
수성 용액으로 적절하게 투여하는 경우, 예를 들어, 용액은 필요에 따라 적절하게 완충화 되어야 하며, 액체 희석제를 먼저 충분한 식염수 또는 글루코스로 등장성으로 만든다. 이러한 특정한 수성 용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하 및 복막내 투여에 적합하다. 이와 관련하여, 채택할 수 있는 무균 수성 매질은 본 발명에 비추어 당해 기술 분야의 당업자들에게 알려져 있을 것이다. 정맥내 또는 근육내 주사와 같이 주사 투여용으로 제형화되는 본 발명의 화합물 외에도, 기타 약제학적으로 허용가능한 형태는, 예를 들어, 경구 투여용 정제 또는 기타 고체; 리포좀 제형; 시간 방출형 캡슐제 (time release capsule); 및 현재 사용되는 임의의 기타 형태, 및 활성 성분의 혈류로의 전달을 포함한다.
환자 체중 (kg) 당 펩타이드의 무게로 표시되는 투여량은 약 1 ㎍/kg 내지 약 1 g/kg, 특히 약 10 ㎍/kg 내지 약 100 mg/kg, 예를 들어 약 50 ㎍/kg 내지 약 50 mg/kg 범위일 수 있다.
투약 용법은 1회 투여 또는 반복 투여를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 반복 투여는 치료 일 당 투여량 1회 투여, 예를 들어 치료 기간 동안 매일 또는 2일 또는 3일 간격으로 투여량 1회 투여를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 반복 투여는 치료 일 당 투여량 2회 투여, 예를 들어, 치료 기간 동안 1일 당 투여량 2회, 3회 또는 4회 투여를 포함할 수 있다. 이들 구현예에서, 치료 기간은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 15일, 20일, 25일, 30일, 35일, 40일, 45일 또는 그보다 긴 일수 (예, 최대 6개월) 있다. 치료는, 환자가 "시간 기간" 동안 이러한 치료로부터 "혜택"을 유지하도록 설계된다. "혜택"은 전술한 "약학적 효과" 또는 "인지 개선"을 포함할 수 있다. 이러한 "시간 기간"은 투약 용법 및 환자 자체, 예를 들어 질환의 중증도 및 용법 투여에 대한 환자의 반응성에 의존할 수 있다. "인지 개선"은 "부분 인지 회복" 및 "전체 인지 회복"을 포함한다. 인지 회복은, 개체에서 기억 변형의 일부 회복이 관찰되고; 치료 전 개체의 처음 상태와 비교해 기억이 상당히 개선되었지만 여전히 건강한 개체에 비해서는 유의하게 낮은 경우에는 "부분"이라 한다. "전체 회복"은 개체가 기억을 회복하거나 또는 기억 수준이 건강한 개체와 유의하게 다르지 않은 것을 의미한다.
인지 개선은 개체에서 MMSE (Mini-Mental State Examination; Carsten Henneges et al., Journal of Alzheimer's Disease 52 (2016) 1065-1080) 및/또는 ADAS-cog (Alzheimer's Disease Assessment Scale; Bart Sheehan, Therapeutic Advances in Neurological Disorders 2012, 5(6) 349-358)를 이용해 측정할 수 있다.
MMSE는 총 점수를 정상 (30)에서 중증 손상 (0) 범위까지 매기는, 항목 30개로 이루어진 간단한 검사이다. 질문은 7개의 범주로 그룹화되며, 각 하위 점수는 구체적인 인지 측면을 나타낸다: 시간 지남력 (점수 범위 0-5); 장소 지남력 (점수 범위 0-5); 기억 등록 (점수 범위 0-3); 주의 집중 (거꾸로 숫자를 세거나 또는 거꾸로 말하기, 점수 범위 0-5); 회상 (점수 범위 0-3); 언어 (점수 범위 0-8); 및 그리기 (점수 범위 0-1). 본원에서 이용할 수 있는 MMSE 척도 (AD 스펙트럼): 경미한 AD (MMSE 21-26점); 보통 AD (MMSE 15-20점); 다소 심각/심각 (MS/S) AD (MMSE<15점).
ADAS-cog는 임상 실험에서 인지 행동을 측정하고, 기억, 지남력, 시공간 인지능, 언어 및 행동을 비롯하여 복수의 인지 영역을 측정한다. 단어 회상 과제 (점수 범위 0-10); 물체와 손가락 명칭 말하기 (점수 범위 0-5); 다음과 같은 과제 (점수 범위 0-5); 구성적 수행 (점수 범위 0-5); 관념적 수행 (점수 범위 0-5); 지남력 (점수 범위 0-8); 단어 재인 과제 (점수 범위 0-12); 언어 표현력 (점수 범위 0-5); 언어 이해력 (점수 범위 0-5); 단어 선택 장애 (점수 범위 0-5); 및 검사 지시 기억 (점수 범위 0-5).
일 구현예에서, MMSE 척도 또는 ADAS-cog는 본원에 기술된 조성물로 치료를 개시하기 전에 개체에서 측정한 다음 동일한 개체에서 프로토콜 중에 또는 치료 중단 후, 또는 프로토콜 중에, 중단 후, 그리고 치료 없이 지연 시간 (lag tie) 이후에, 1회 또는 수회 (적어도 2회) 척도를 측정한다.
유리하게는, 치료 진행을 유지하거나 또는 척도에서 부분 또는 전체 개선일 수 있는 충분한 인지 개선이 관찰되면 치료를 중단하거나, 또는 개선이 치료 중단 후 지연 기간 이후에 없어진다면 치료를 갱신하는 것으로 결정하기 위해, 척도 측정을 수행한다.
일 구현예에서, 이러한 "약학적 효과" 또는 "인지 개선"은 (예, 경험 또는 관행에 기초하여) 모니터링하거나 또는 예상가능할 수 있는 특정 시간 기간 동안 지속된다. 일부 환자는 이러한 치료를 순차적으로, 예를 들어 1차 치료, 비-치료 기간 (지연 기간) 및 2차 또는 후속 치료로 이루어지는 것이 유용할 수 있으며, 이러한 연속적인 치료 및 지연 기간은 환자의 평생 동안 또는 환자가 필요한 경우에 여러번 수행할 수 있다. 투약 용법은 그래서 초기 또는 1차-적용 투약 용법, 비-치료 기간 (회복 기간), 2차 투약 용법, 2차 회복 기간; 가능하게는 후속적인 3차 투약 용법, 이후의 3차 회복 기간 등을 포함할 수 있다. 연속적인 투약 용법은 전술한 바와 같다.
환자가 본 발명의 투약 용법에 따라 치료로부터 혜택을 유지하는 동안의 "시간 기간" 또는 지연 시간 (회복 기간으로 칭할 수 있음)은 환자 자체에서 예를 들어 전술한 MMSE 및 ADAS-cog 방법을 이용해 모니터링하거나, 또는 비슷한 시례에 대한 경험을 기반으로 할 수 있다. 이러한 지연 기간 또는 회복 기간 (환자가 인지 개선 또는 기타 혜택, 예를 들어, 타우 단백질의 수준, 세포내 전체 타우 단백질의 수준, 인산화된 타우 단백질의 수준에 대한 저해 또는 감소, 또는 타우 단백질의 응집에 대한 저해 또는 감소 또는 파괴, 또는 이들의 조합을 겪는 동안)은 14일 이상, 또는 1달, 2달, 3달, 4달, 5달, 6달 또는 그보다 길게 지속될 수 있다.
일 구현예에서. 투여량은 주입에 의해 투여한다. 주입은 수분, 수십분, 수시간, 최대 24시간 1일간 지속될 수 있다.
본 발명에 따른 용도 및 본 발명의 치료 방법은 본 발명에 따른 펩타이드를 소정량으로 전달하여, 타우병증에 유익한 효과를 수득할 수 있거나, 및/또는 타우 단백질 응집에 대한 감소 또는 파괴, 타우 단백질 수준의 감소 및/또는 타우 단백질 과인산화의 감소, 및 비정상적인 인산화 감소 중 하나 이상을, 개체에서 달성할 수 있는 것을 특징으로 할 수 있다.
일 구현예에서, 용도 및 치료 방법은 기능적 회복을 보조 또는 유도하는 능력을 가지며, 이는 환자가 타우병증, 및/또는 타우 단백질 응집, 타우 단백질 수준 증가, 타우 단백질 과인산화 및 비정상적인 인산화 중 하나 이상의 결과로서, 모든 또는 일부 기능 상실을 회복하는 것을 의미한다.
일 구현예에서, 용도 또는 치료 방법은 타우병증, 및/또는 타우 단백질 응집, 타우 단백질 수준 증가, 타우 단백질 과인산화 및 비정상적인 인산화 중 하나 이상으로 인한 기능 상실을 중단 또는 저해하는 능력을 가진다.
일 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 타우병증의 치료 방법에 이용하기 위한, 개체에 전신 경로를 통해 투여되는, 본 발명의 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 도네페질 (DPZ)의 조합에 관한 것이다. 활성 성분 2종의 투여는 특히 분리하여, 동시에 또는 순차적으로 이루어질 수 있다. 활성 성분의 조합은 치료 효능 또는 혜택에 상승적인 효과를 가질 수 있다.
일 구현예에서, DPZ는 표준 치료, 특히 (www.rxlist.com/aricept-drug.htm#indications)에 따라 개체에 투여된다:
- 경도 내지 중등도의 알츠하이머 질환에 대한 투여: ARICEPT®의 시작 권고 투여량은 저녁 취침 직전에 매일 1회로 투여되는 5 mg이다. 경도 내지 중등도 알츠하이머 질환자에서 ARICEPT®의 최고 권고 투여량은 1일 당 10 mg이다. 환자에게 4-6주 동안 일일량 (daily dose) 5 mg을 투여할 때까지는 투여량 10 mg을 투여해서는 안된다.
- 중등도 내지 중증 알츠하이머 질환에 대한 투여: ARICEPT®의 시작 권고 투여량은 저녁 취침 직전에 매일 1회로 투여되는 5 mg이다. 중등도 내지 중증 알츠하이머 질환자에서 ARICEPT®의 최고 권고 투여량은 1일 당 23 mg이다. 환자가 4-6주 동안 일일량 5 mg을 투여받을 때까지는 투여량 10 mg을 투여해서는 안된다. 적어도 3개월간 일일량 10 mg을 환자에 투여할 때까지 1일 당 투여량 23 mg은 투여해서는 안된다.
상승적인 작용의 경우, 예를 들어 DPZ와 본 발명의 펩타이드, 예를 들어 NX210, NX218 또는 NX210 + NX218의 상승적인 작용에서, DPZ와 같은 아세틸콜린에스테라제 저해제의 투여량, 및/또는 펩타이드의 투여량은 단일 분자에 대한 투여량에 비해 줄일 수 있다. DPZ의 투여량은 따라서 DPZ와 본 발명의 펩타이드를 동일 개체에 (동시에 또는 순차적으로) 투여하는 경우, 표준 치료에 비해 낮출 수 있다. DPS의 투여량 (하위 용량 (subdose))은 예를 들어 3 mg/day 이하, 특히 2.5 mg/day 이하, 2 mg/day 이하, 1.5 mg/day 이하 또는 1 mg/day 이하일 수 있다. 투여량 또는 투약 용법은 0.5 mg/day 내지 3 mg/day, 0.5 mg/day 내지 2.5 mg/day, 0.5 mg/day 내지 2 mg/day, 0.5 mg/day 내지 1.5 mg/day, 또는 0.5 mg/day 내지 또는 1 mg/day 범위일 수 있다. 이러한 범위에서, 최저 값 0.5는 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 또는 1로 대체될 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 도네페질 (DPZ)은 동일 환자에게 별도로 사용된다. 구체적으로, 본 발명의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드는, 제1선 치료로서 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ로 먼저 치료한 환자에서, 타우병증에 대한 제2선 치료로서 이용한다. 이러한 제1선 치료는 전술한 바와 같이 표준 치료일 수 있다. 따라서, 본 발명은 본원에 기술된 바와 같이 타우병증의 치료 방법에 이용하기 위한, 본 발명의 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ의 조합에 관한 것으로, 펩타이드는 상기한 저해제로 이미 치료받은 환자 또는 개체에 전신 경로를 통해 투여된다.
대안적인 방법으로, 제2선 치료를 본 발명의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 도네페질 (DPZ)의 조합을 이용해 수행한다. "조합"은 물질들의 동시 또는 순차적인 투여를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및/또는 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 도네페질 (DPZ)을 하위 용량으로 사용한다.
본 방법은 다음과 같이 추가적으로 기술할 수 있다:
- 아세틸콜린에스테라제 저해제를 치료학적 치료로 투여받은 환자를 선택하는 단계; 바람직하게는, 환자는 저해제를 이용한 치료학적 프로토콜 (바람직하게는, 표준 또는 허가된 치료학적 프로토콜)에 따라 치료 받음;
- 선택적으로, 환자가 치료에 더 이상 반응하지 않거나 및/또는 치료에 대해 불내증 (intolerance)을 보이는 단계를 겪는지를 확인하는 단계;
- 환자에게, 본 발명의 치료학적 치료 또는 프로토콜을, 본 발명에 따른 조성물 또는 바로 앞에서 정의한 조합을 이용하여 제공하는 단계; 이러한 치료는 전술한 투약 용법 하나 이상을 포함할 수 있으며; 투약 용법 다음으로 전술한 바와 같이 회복 기간이 후속될 수 있으며; 가능하게는 2차 투약 용법, 2차 회복 기간 등이 후속될 수 있음.
일 구현예에서, 본 방법은 하기를 포함한다:
- 필요한 환자에게 아세틸콜린에스테라제 저해제를 이용한 치료학적 치료를 제공하는 단계; 바람직하게는, 환자는 저해제를 이용하여 치료학적 프로토콜에 따라 치료함;
- 선택적으로, 환자가 치료에 더 이상 반응하지 않거나 및/또는 치료에 대해 불내증을 보이는 단계를 겪는지를 확인하는 단계;
- 환자에게, 본 발명의 치료학적 치료 또는 프로토콜을, 본 발명에 따른 조성물 또는 바로 앞에서 정의한 조합을 이용하여 제공하는 단계; 이러한 치료는 전술한 투약 용법 하나 이상을 포함할 수 있으며; 투약 용법 다음으로 전술한 바와 같이 회복 기간이 후속될 수 있으며; 가능하게는 2차 투약 용법, 2차 회복 기간 등이 후속될 수 있음.
본 발명의 다양한 측면은, 완전성을 위해, 하기 번호를 매긴 항목으로 기술하며, 언급된 측면들은 본 발명의 다른 측면에, 즉 "사용하기 위한" 및 "의약제의 제조에서의 용도"에 적용된다:
항목 1. 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제를 전신 경로를 통해 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 타우병증을 치료하는 방법.
항목 2. 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제를 전신 경로를 통해 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 타우 응집을 감소 또는 파괴하는 방법.
항목 3. 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제를 전신 경로를 통해 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 타우 단백질을 감소시키는 방법.
항목 4. 상기 방법이 하나 이상의 치료 기간 및 하나 이상의 회복 기간을 포함하고, 치료 기간은 개체에 투약 용법 하나 이상의 투여를 포함하고, 회복 기간은비-치료 기간인, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 5. 인산화된 타우 단백질의 수준이 감소되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 6. 전체 타우 단백질의 수준이 감소되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 7. 상기 수준이 10% 이상 감소하는, 항목 5 또는 6에 따른 방법.
항목 8. 상기 수준이 50% 이상 감소하는, 항목 7에 따른 방법.
항목 9. 상기 주순이 80% 이상 감소하는, 항목 8에 따른 방법.
항목 10. 상기 타우 응집이 감소되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 11. 상기 타우 응집이 10% 이상 감소하는, 항목 10에 따른 방법.
항목 12. 상기 타우 응집이 50% 이상 감소하는, 항목 11에 따른 방법.
항목 13. 상기 타우 응집이 80% 이상 감소하는, 항목 12에 따른 방법.
항목 14. 인지 개선이 달성되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 15. SCO-스폰딘 유래 펩타이드가 서열번호 1 또는 2의 서열의 펩타이드들로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항목 1-14 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 16. SCO-스폰딘 유래 펩타이드가 서열번호 3-63의 서열의 펩타이들로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항목 1-14 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 17. 개체에 아세틸콜린에스테라제 저해제를 충분한 양으로 투여하는 것을 더 포함하는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 18. 아세틸콜린에스테라제 저해제가 DPZ인, 항목 17에 따른 방법.
항목 19. 하기 단계를 포함하는, (1) 개체에서 타우병증의 치료 방법, (2) 개체에서 타우 응집을 감소 또는 파괴하는 방법, 또는 (3) 개체에서 타우 단백질을 감소시키는 방법:
- 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ로 치료학적 치료를 받은 환자를 선택하는 단계; 그런 후
- 선택적으로, 상기 환자가 치료에 더 이상 반응하지 않거나 및/또는 치료에 대해 불내증을 보이는 단계를 겪는지를 확인하는 단계;
- 환자에게, 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제 또는 상기에서 정의되는 조합을 전신 경로로 개체에 투여하는 것을 포함하는, 치료학적 치료를 제공하는 단계.
항목 20. 하기 단계를 포함하는, (1) 개체에서 타우병증의 치료 방법, (2) 개체에서 타우 응집을 감소 또는 파괴하는 방법, 또는 (3) 개체에서 타우 단백질을 감소시키는 방법:
- 필요한 환자에게 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ를 이용한 치료학적 치료를 제공하는 단계; 그런 후
- 선택적으로, 상기 환자가 치료에 더 이상 반응하지 않거나 및/또는 치료에 대해 불내증을 보이는 단계를 겪는지를 확인하는 단계;
- 환자에게, 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제 또는 상기에서 정의되는 조합을 전신 경로로 개체에 투여하는 것을 포함하는, 치료학적 치료를 제공하는 단계.
항목 21. 하기 단계를 포함하는, 항목 1-18 중 임의 항목에 따른 방법:
- 환자의 초기 인지 상태를, 예를 들어 MMSE 및/또는 ADAS-cog 방법으로 결정하는 단계,
- 상기 환자에게, 치료학적 함량의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제 또는 상기에서 정의되는 조합을 전신 경로로 개체에 투여하는 것을 포함하는, 치료학적 치료를 제공하는 단계,
- 치료학적 치료 중에, 환자의 치료 코스 중의 인지 상태를 예를 들어 MMSE 및/또는 ADAS-cog 방법으로 결정하는 단계,
- 상기 치료 코스 중의 인지 상태를 환자의 초기 인지 상태와 비교하는 단계,
- 선택적으로, 부분 또는 완전 인지 개선의 경우 치료의 중단, 또는 인지 개선이 없거나 또는 불충분한 (부분 또는 완전한 개선이 달성되지 않는) 경우 치료의 지속을 결정하는 단계.
항목 22. 치료 지속 결정이 이루어지며, 하기를 더 포함하는, 항목 21에 따른 방법:
- 치료학적 치료 중에, 환자의 치료 코스 중의 인지 상태를 예를 들어 MMSE 및/또는 ADAS-cog 방법으로 결정하는 단계,
- 상기 치료 코스 중의 인지 상태를 환자의 초기 인지 상태와 비교하는 단계,
- 선택적으로, 부분 또는 완전 인지 개선의 경우 치료의 중단, 또는 인지 개선이 없거나 또는 불충분한 (부분 또는 완전한 개선이 달성되지 않는) 경우 치료의 지속을 결정하는 단계.
항목 23. 치료 중단 결정이 이루어지며, 하기를 더 포함하는, 항목 21 또는 22에 따른 방법:
- 비-치료 기간 후, 환자의 추가적인 인지 상태를 예를 들어 MMSE 및/또는 ADAS-cog 방법으로 결정하는 단계,
- 상기 추가적인 인지 치료 상태를 환자의 초기 인지 상태 및/또는 치료 코스 중의 인지 상태와 비교하는 단계,
- 선택적으로, 상태가 여전히 초기 상태보다 좋거나 또는 치료 중단 시점의 상태와 유의하게 다르지 않을 경우 아무것도 하지 않는 것으로 결정하거나, 또는 반대의 경우 본 발명에 따른 부가적인 치료 기간을 결정하는 단계.
항목 24. 상기 타우병증이 알츠하이머 질환 (AD); 진행성 핵상 마비 (PSP); 피크병과 같은 타우 양성의 전두측두엽 치매; 루이소체 치매; 피질기저 변성; C형 니만-피크병; 권투선수 치매를 비롯한 만성 외상성 뇌병증; 및 뇌염 후유증성 파킨슨 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 25. 상기 타우병증이 알츠하이머 질환 (AD)인, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 26. 상기 SCO-스폰딘 유래 펩타이드가 개체에 정맥내, 동맥내 또는 복막내로 투여되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 27. 상기 아밀로이드-β 플라크 형성이 저해 또는 감소되거나, 아밀로이드-β 응집이 방지 또는 감소되거나, 및/또는 이미 형성된 아밀로이드-β 침착 또는 아밀로이드-β 응집이 탈-중합되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 28. 아밀로이드 β1 -42의 저해 또는 감소, 타우 단백질의 과인산화가 저해 또는 감소되는, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
항목 29. 상기 펩타이드가 NX210, NX218 또는 NX210과 NX218의 조합인, 전술한 항목들 중 임의 항목에 따른 방법.
본 발명은 이제 도면을 참조하여 비-제한적인 실시예를 들어 보다 상세히 설명될 것이다.
도 1. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 공간 작업 기억 결함 (spatial working memory deficit)에 대한 NX210 또는 NX218 (2 mg/kg 매일 1회)의 IP 투여 효과: 플랫폼에 도달하는데 걸리는 시간을 5주 훈련 기간 동안 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 11-12/군이다. 데이터는 플랫폼을 찾는데 소요되는 시간 (초)으로 표시한다. ns (비-유의성), *** 또는 ### 또는 ¤¤¤ p < 0.001, Aβ25 -35 / Vhc 군 대비, 이원식 ANOVA 및 후속적인 터키의 다중 비교 검정.
도 2. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 공간 작업 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (2 mg/kg 매일 1회)의 IP 투여 효과: 각 사분면 당 소요 시간은 프로브 검사에서 결정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 11-12/군이다. 데이터는 표적 사분면에서의 소요 시간 %를 나머지 3가지 사분면에서의 소요 시간 %과 비교하여 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ25 -35 / Vhc 군 대비, 이원식 ANOVA 및 후속적인 터키의 다중 비교 검정.
도 3. 마우스 뇌에서 Aβ25 -35-유발성 생화학적 변화에 대한 NX210 또는 NX218 (2 mg/kg 매일 1회)의 IP 투여 효과 (Aβ1 -42 및 인산화된 타우 수준). 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 5-6/군이다. 데이터는 대조군 (Sc.Aβ / Vhc 군)에 대한 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
도 4. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 단기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (0.1-2 mg/kg 매일 1회, IP), 또는 DPZ (0.25-1 mg/kg 매일 1회, PO)의 활성 용량 또는 준활성 (subactive) 용량, 또는 NX210 또는 NX218의 준활성 용량과 DPZ의 준활성 용량의 조합 (NX210 및 NX218의 경우 0.1 mg/kg, IP, 및 DPZ의 경우 0.25 mg/kg, PO)의 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 변형에 대한 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
도 5. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 장기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (0.1-2 mg/kg 매일 1회, IP) 또는 DPZ (0.25-1 mg/kg 매일 1회, PO)의 활성 용량 또는 준활성 용량, 또는 NX210 또는 NX218의 준활성 용량과 DPZ의 준활성 용량의 조합 (NX210 및 NX218의 경우 0.1 mg/kg, IP, 및 DPZ의 경우 0.25 mg/kg, PO)의 투여 효과: 기억 세션 (retention session) 중의 스텝-스루 머무름 시간 (step-through latency, STL). 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 초로 나타낸다. ns (비-유의성), ** p<0.01 및 *** p < 0.001 대비 Aβ25 -35 / Vhc 군, 크루스칼-왈리스 및 후속적인 둔의 다중 비교 검정.
도 6. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 단기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (2 mg/kg 매일 1회, D11에 개시)의 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 6/군이다. 데이터는 시간에 따른 교대 (alternation) %로 나타낸다 (D08-15-22-29). ns (비-유의성), ***p < 0.001 Aβ25 -35 / D11 Vhc 군 대비 (*: Sc.Aβ / D11 vhc; $: Aβ25 -35 / D11 NX210 IP 2 및 ¤: Aβ25 -35 / D11 NX218 IP 2), 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
도 7. 마우스에서 Aβ25 -35-유발성 단기 기억 결함에 대한, NX218 (2 mg/kg IP 매일 1회, 120일간 (4군)) 또는 DPZ (1 mg/kg, os 매일 1회, 43일간)를 투여한 다음 용량 증가 방식으로 NX218 (44일부터 78일까지 2 mg/kg IP 매일 1회 -> 79일부터 99일까지 4 mg/kg 매일 1회 -> 100일부터 113일까지 8 mg/kg 매일 1회 (5군))의 투여, 또는 준활성 용량의 NX218 (0.1 mg/kg IP 매일 1회, 120일간)과 준활성 용량의 DPZ (0.25 mg/kg, os 매일 1회, 12일간)의 조합 투여 (6군), 또는 NX218을 이용한 일시적 치료 (2 mg/kg IP 매일 1회, 11일부터 38일까지 28일간 (3군))의 장기 효과. 데이터는 시간에 따른 변형의 %로 나타낸다. n은 5-6 /그룹. ns (비-유의성), **p < 0.01, ***p < 0.001, Aβ25 -35 Vhc 군 (2군) 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
도 8. 원숭이에서 NX210 IV 투여 후 PK 프로파일 (NX 210 10 mg/kg 볼루스 IV 주사). NX218 (NX210의 고리 형태)의 평균 원숭이 혈장 농도 (ng/mL)를 y 축에 로그 10 척도로 도시한다.
실시예 파트
서론 :
알츠하이머 질환 (AD) 및 관련 타우병증은 가장 만연한 노화-관련 신경퇴행성 장애로, 아직까지 완치법이 없는 실정이다. 처방 약물은 치매 증상을 일시적으로 늦출 뿐 질환의 진행을 바꾸진 못한다. 그래서, 새로운 치료법 개발이 시급하게 요구되고 있다.
본 실시예에서는 타우병증 모델을 이용한다. 이 모델의 경우, 마우스에 Aβ25 -35 펩타이드 (또는 모의 동물의 경우에는 scrambled-Aβ 펩타이드 (Sc.Aβ))를 01일에 뇌실내 (ICV) 주사하였다. 이러한 중증 동물 모델은 인간 타우병증의 생리병리학 및 진행에 관여하는 특이적인 마커 (뇌 아밀로이드 Beta1 -42 및 과인산화된 타우 단백질의 침작 등)의 조절뿐 아니라 환자가 직면하는 심각한 인지 결함 (기억 상실)을 재현한다 (Maurice et al., 1996, 1998, 2013; Meunier et al., 2006).
SCO-스폰딘 유래 펩타이드를 이용한 용량-반응 실험에서는, 치료는 Aβ25 -35 펩타이드를 NX210, NX218 또는 비히클 (Vhc, H2O)과 함께 주사한 후, 한(1) 시간 (질환의 초기 단계 모델로서) 또는 열흘(10) (질환의 후기 단계 모델로서) 경과한 시점에 개시하였다. NX210, NX218 및 비히클은 매일 1회 또는 2일 간격 (2일마다 1회)으로 복막내 (IP) 투여하였다. NX210 및 NX218 합성은 실시예 1 및 2에 기술된다.
아울러, NX210 또는 NX218과 표준 치료 (아세틸콜린 에스테라제의 저해제, 도네페질, DPZ)와 조합하여 수행하였다. 이를 위해, 준활성 용량의 NX210 또는 NX218 펩타이드를, 준활성 용량의 DPZ와 조합하여, 잠재적인 상승적인 치료 효과를 조사하였다.
마지막으로, NX218 및/또는 DPZ에 기반한 치료의 장기 효과를 조사하는 연구를 수행하였다.
실시예 1: NX 펩타이드 합성
서열번호 1, 2의 서열 또는 서열번호 3-63 중 임의 서열의 펩타이드, 특히 실시예에 사용된 서열의 펩타이드, 예를 들어 NX210 (서열번호 3)의 제조 공정은, 펩타이드 조립에서 빌딩 블록으로서 N-α-Fmoc (측쇄) 보호된 아미노산을 이용하는 고상 펩타이드 합성을 토대로 한다. 채택한 프로토콜은 MBHA 수지 상의 MPPA 링커에 결합된 C-말단 글리신 N-α-Fmoc-보호된 아미노산을 커플링한 후, Fmoc 커플링/탈보호 순서로 이루어진다. 수지 상에서 펩타이드를 조립한 후, 수지로부터 펩타이드의 절단과 아미노산 측쇄의 탈보호 단계를 동시에 수행한다.
펩타이드 조산물을 석출시킨 후 여과 및 건조한다. 펩타이드는 아세토니트릴 함유 수용액에 용해하여, 분취용 역상 크로마토그래피로 정제한다. 용액 중의 정제한 펩타이드는 농축한 다음 교환 단계를 거쳐 아세테이트 염 형태로 펩타이드를 수득하게 된다.
당업자는 합성 방법에 대한 상세한 내용은 US 6,995,140 및 WO2018146283을, 본원에 기술된 펩타이드의 산화된 형태에 대해서는 WO 2017/051135를 참조할 수 있으며, 이들 참조문헌은 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
당업자는 N-말단 및 C-말단 변형된 또는 보호된 펩타이드를 비롯한 본 발명의 개시된 임의의 펩타이드를 생산하기 위해 표준 방법을 추가로 입수한다. 펩타이드의 N-말단 및 C-말단 각각에서 아세틸화 및/또는 아미드화와 관련하여, 당업자라면 표준 기법, 예를 들어, Biophysical Journal Volume 95 November 2008 4879-4889에 언급된 기법을 참조할 수 있으며, 이 역시 원용에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시예 2: 사이클릭 NX 펩타이드 합성
서열 W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G의 폴리펩타이드를 인간 혈청 알부민 (HSA)에 1:1 비율로 첨가하여, 실온에서 공기 중에 교반하면서 1-3시간 동안 인큐베이션하였다. HPLC를 이용해, 시스테인 2개가 이황화 결합에 의해 연결된 폴리펩타이드 서열 W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G에 대응하는 피크 생성을 관찰하였다. 산물은 석출을 통해 알부민 제거한 후, HPLC에 의해 정제 및 분석하였다. 알부민과 서열 W-S-G-W-S-S-C-S-R-S-C-G에 해당하는 폴리펩타이드를 여러가지 비율로 사용해 고리화 비율 및 최종 고리화 수율에 영향을 미칠 수 있으며, 알부민 양이 적을수록 제거하기 더 쉬운 것으로 알려져 있다. 고리화된 화합물은 NX218이다.
당업자는 합성에 대한 추가적인 상세 내용에 대해 WO2017051135를 참조할 수 있다. 이 문헌은 원용에 의해 본 명세서에 병합된다.
실시예 3: NX210 및 NX218의 용량-반응 효과
인지 평가:
a. 자발적 교대 성능 (Spontaneous alternation performance)(Y-미로)
Aβ25 -35 펩타이드 (D08)를 ICV 주사한 후 7일 경과시, 전체 동물에서 공간 작업 기억 (spatial working memory)(단기 기억 검사)의 지표로 Y-미로에서 자발적인 교대 성능을 검사하였다. 각 마우스는 한쪽 팔 구역 끝에 배치하여, 8분 세션 동안 자유롭게 미로를 돌아다닐 수 있도록 하였다. 교대는 연속적인 세션들에서 미로 팔 구역 3곳 모두에 진입하는 것으로 정의한다. 따라서, 최대 교대 횟수는 총 팔 진입 횟수에서 2를 뺀 것이며, 교대 %는 (실제 교대/최대 교대) x 100으로 계산한다. 이 파라미터는 교대 % (기억 지표)를 포함한다 (Maurice et al., 1996, 1998; Meunier et al., 2006).
군 Y-미로
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 74.04 1.00 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 38.95 2.34 53 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 44.52 1.70 60 12 ns 0.3059
Aβ 25 -35 / NX210 IP 1 58.16 2.00 79 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 1/2d 2 74.35 1.82 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 72.67 1.48 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 1/2d 3.75 72.62 2.44 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 3.75 70.90 1.84 96 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 43.27 2.66 58 12 ns 0.6135
Aβ 25 -35 / NX218 IP 1 70.12 1.58 95 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 1/2d 2 72.03 1.92 97 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 72.53 2.51 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 3.75 71.56 1.73 97 12 *** <0.001
표 1. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 단기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 펩타이드 (0.1-1-2-3.75 mg/kg, 매일 1회 또는 2일 간격 (1/2d))의 IP 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 교대 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
NX210 (1, 2 및 3.75 mg/kg) 또는 NX218 (1, 2 및 3.75 mg/kg)을 매일 1회 또는 2일 간격으로 투여한 경우, 공간 단기 작업 기억 결함이 유의하게 회복되었다. 완전한 회복은, 비-손상 모의 동물와 비슷한 수준 (Sc.Aβ / Vhc)으로, NX210 2 및 3.75 mg/kg, NX218 1, 2 및 3.75 mg/kg에서 달성되었다. 이는, AD/타우병증 동물 모델에서 관찰되는 인지 결함 (단기 기억 상실)을 상쇄하는데 있어 NX210 및 NX218 펩타이드 둘다의 강력한 효과를 입증해준다 (표 1).
NX210 (0.1 mg/kg) 또는 NX218 (0.1 mg/kg)의 매일 1회 투여는 Aβ25 -35-유발성 단기 기억 결함을 방해하지 않으므로, 이들 화합물 2종의 준활성 용량은 0.1 mg/kg으로 설정할 수 있으며, 표준 치료와의 조합 실험을 준비하였다 (실시예 4)
b. 스텝-스루 수동 회피 검사 (Step-Through Passive Avoidance test, STPA)
Y-미로 검사 후, 동일한 동물에 대해 또한 스텝-스루 수동 회피 (STPA) 검사 (Aβ25-35 펩타이드 ICV 주사 후 8일 및 9일, 각각 D09 및 D10)를 맥락 장기 기억 (contextual long-term memory)의 지표로서 수행하였다. 장치는 길로틴 문 (guillotine door)에 의해 분리된 2-구획 박스 (밝은 구획과 어두운 구획)로 구성된다. 충격 발생기 스크램블러 (shock generator scrambler)를 이용해 어두운 구획에 발 충격을 전달할 수 있다. 첫째날 (훈련 세션), 각 마우스를 길로틴 문이 처음에는 닫힌 밝은 구획에 배치한다. 5초 후, 물을 올린다. 마우스가 어두운 구획에 진입해 그리드 바닥 위에 발을 모두 올리게 되면, 문이 닫히고 발 충격이 3초간 전달된다. 이러한 훈련 세션 후 스물네 (24)시간 경과시, 기명력 검사 (retention test)(발 충격은 수행되지 않음)를 수행한다. 구체적으로, 각 마우스를 문이 닫힌 상태로 밝은 구획에 다시 배치한다. 5초 후, 문을 올린다. 마우스가 어두운 구역으로 진입하는데 걸리는 시간, 즉 머무름 시간 (STL)을 최대 300초까지 기록한다. 마우스가 어두운 구획에서 나가는데 걸리는 시간, 즉 탈출 지연 시간 (escape latency)을 최대 300초까지 기록한다 (Maurice et al., 1996, 1998; Meunier et al., 2006).
군 STL
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 283.00 9.36 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 122.58 6.73 43 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 118.92 7.24 42 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP 1 177.92 9.66 63 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP1/2d 2 263.33 13.72 93 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 248.33 11.55 88 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP1/2d 3.75 264.75 9.89 94 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 3.75 255.50 12.79 90 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 129.75 9.26 46 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX218 IP 1 252.42 13.49 89 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP1/2d 2 274.25 14.11 97 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 267.75 12.41 95 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 3.75 250.25 13.17 88 12 *** <0.001
표 2. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 장기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218의 (0.1-1-2-3.75 mg/kg, 매일 1회 또는 2일 간격 ( 1/2d )) IP 투여 효과: 머무름 시간 (STL)을 기억 세션 중에 측정한다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 초로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 크루스칼-왈리스 및 후속적인 둔의 다중 비교 검정.
군 EL
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 19.92 2.27 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 89.50 5.51 449 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 89.42 6.16 449 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP 1 53.08 4.58 267 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP1/2d 2 22.00 2.76 110 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 31.17 3.07 156 12 ** 0.0037
Aβ 25 -35 / NX210 IP1/2d 3.75 23.75 3.96 119 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX210 IP 3.75 27.67 2.86 139 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 86.75 5.33 436 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX218 IP 1 25.58 3.37 128 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP1/2d 2 24.83 3.62 125 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 24.50 3.94 123 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 3.75 26.50 3.83 133 12 *** <0.001
표 3. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 장기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (0.1-1-2-3.75 mg/kg, 매일 1회 또는 2일 간격 ( 1/2d ))의 IP 투여 효과: 탈출 지연 시간 (EL)을 기억 세션 동안에 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 초로 나타낸다. ns (비-유의성), ** p<0.01 및 *** p < 0.001, Aβ 25-35 / Vhc 군 대비, 크루스칼-왈리스 및 후속적인 둔의 다중 비교 검정.
NX210 (2 및 3.75 mg/kg) 또는 NX218 (1, 2 및 3.75 mg/kg)의 매일 1회 또는 2일 간격 투여시 맥락 장기 기억 결함 (STL 및 EL)이 완전히 회복되어, 비-손상 모의 동물 (Sc.Aβ / Vhc)과 비슷한 수준에 도달하였다. 이러한 용량-효과는 타우병증 모델에서 관찰되는 인지 결함 (장기 기억 상실)을 상쇄하는데 NX210 및 NX218 펩타이드 둘다의 강력한 효과를 입증해준다 (표 2-3).
NX210 또는 NX218 (0.1 mg/kg)의 매일 1회 투여는 맥락 장기 기억 결함 (STL 및 EL)을 저해하지 않으모, 이들 화합물 2종의 준활성 용량은 0.1 mg/kg인 것으로 검증되었다 (표 2-3).
c. 모리스 수중 미로에서 학습 수행 - 참조 기억 검사 (Reference memory test)(MWM)
Y-미로 후 STPA 검사를 수행하는 대신, 일부 동물에는 공간 작업 기억 결함 (D09-D14까지 6일 검사)을 평가하기 위해 모리스 수중 미로 (MWM) 검사를 수행하였다. 이러한 골드-표준 검사는 외부 단서 (싱크대, 대조 포스터 (contrasted posters), 선반)가 존재하는 방에 배치된 불투명한 물로 채워진 원형 풀로 구성된다. 플렛폼은 습득 기간에는 수면 아래에 잠긴다. 훈련은 5일간 매일 3회의 수영으로 구성되며, D09-D13에 수행하고, 시도 시간 간격은 20분이다. 각 마우스는 플랫폼을 찾기 위해 90초간 수영하고, 그 위에서 20초간 머무를 수 있게 하였다.
프로브 검사 (PT)는 D14에 마지막 수영한 지 24시간 후 수행하였다. PT에서는 플랫폼을 제거하고, 각 동물이 60초간 수영할 수 있게 하였다. 각 마우스의 출발 지점은 플랫폼 위치로부터 역밸런스 순서 (counterbalanced order)로 멀리 떨어진 위치 2곳 중 한 곳에 해당한다. 플랫폼 사분면을 '표적'으로 지칭하고, 다른 사분면 (반대쪽, 인접 우측 및 인접 좌측)은 PT 동안에 '기타'로 지칭한다. 각 사분면에서의 소요 시간을 기록한다. 결과는 다른 사분면 3곳에서의 평균 소요 시간 % 대비 표적 사분면에서의 소요 시간 %로 나타내었다.
매일, 1차 (수영1), 2차 (수영2), 3차 (수영3), 4차 (수영4) 및 5차 (수영5) 시도에서 플랫폼을 찾는데 소요된 시간을 모니터링하고, 6일 실험에서 평균을 구하였다 (Maurice et al., 2013).
군 MWM - 학습 프로파일 - 1일
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 82.73 2.34 11 ns 0.9797
Aβ 25 -35 / Vhc 81.00 3.11 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 79.67 3.64 12 ns 0.9898
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 79.75 3.41 12 ns 0.9915
군 MWM - 학습 프로파일 - 2일
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 54.27 2.54 11 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 75.33 3.43 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 53.58 3.96 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 56.42 2.74 12 *** <0.001
군 MWM - 학습 프로파일 - 3일
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 33.64 3.14 11 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 59.75 3.02 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 35.83 2.99 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 31.42 2.61 12 *** <0.001
군 MWM - 학습 프로파일 - 4일
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 26.91 2.62 11 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 56.50 4.41 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 25.92 1.98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 25.58 2.39 12 *** <0.001
군 MWM - 학습 프로파일 - 5일
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vh 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 21.09 1.93 11 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 55.08 4.19 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 24.25 2.52 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 21.25 2.85 12 *** <0.001
표 4. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 공간 작업 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 ( 2 mg /kg 매일 1회)의 IP 투여 효과: 플랫폼에 도달하는데 걸리는 시간을 훈련 5일 동안 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 11-12마리/군이다. 데이터는 플랫폼을 찾는데 걸린 시간 (초)으로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25-35 / Vhc 군 대비, 이원식 ANOVA 및 후속적인 터키의 다중 비교 검정.
군 MWM - 프로브 검사
평균 SEM n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 표적 39.00 2.98 11 *** <0.001
기타 20.50 0.98 11 ns 0.3925
Aβ 25 -35 / Vhc 표적 21.56 3.46 12
기타 26.31 1.15 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 표적 39.59 3.47 12 *** <0.001
기타 20.30 1.15 12 ns 0.3415
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 표적 39.23 3.72 12 *** <0.001
기타 20.49 1.24 12 ns 0.3701
표 5. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 공간 작업 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 ( 2 mg /kg 매일 1회)의 IP 투여 효과: 프로브 검사에서 각 사분면에서의 소요 시간을 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 11-12마리/군이다. 데이터는 다른 3종의 사분면 (기타)에서 소요한 평균 시간 %와 비교하여 표적 사분면 (표적)에서의 소요 시간의 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 이원식 ANOVA 및 후속적인 터키의 다중 비교 검정.
NX210 또는 NX218의 투여는 모리스 수중 미로 결과 (표 4-5 및 도 1-2)에서 입증된 바와 같이 이 모델에서 공간 장기 기억 결함 및 학습 프로파일을 유의하게 회복시켰다. 빠르게는 훈련 2일차 (D10)에, NX210 또는 NX218 처리 마우스는 숨겨진 플랫폼의 위치를 기억하는데 비-손상 모의 마우스 (Sc.Aβ / Vhc)와 같이 효율적이었다. 유익한 효과는 5일 훈련 검사 내내 유지되었다 (표 4 및 도 1).
공간 기억에 대한 유익한 효과는, 플랫폼을 제거한 상황에서의 검사인 프로브 검사 (D14)에 의해 검증되었다. 이 검사에서, NX210 또는 NX218-처리 마우스는 표적 사분면 (즉, 제거된 플랫폼이 있던 위치)에서 총 수영 시간의 약 40%를 소비하였는데, 이는 플랫폼 위치를 기억하는 비-손상 모의 마우스 (Sc.Aβ / Vhc)와 일치하였다. 반면, Aβ25 -35 / Vhc 마우스는 플랫폼이 있던 위치를 기억하지 못하였으며, 그래서 각 사분면에서 수영 시간의 약 25%를 소비하였다 (표 5 및 도 2).
이는, 타우병증 모델에서 관찰되는 인지 결함 (공간 작업 기억 결함)에 대응하는데 있어 NX210 및 NX218 둘다의 강력한 효과를 다시 입증해준다.
생화학적 평가 및 조직학적 평가
a. 뇌 바이오마커 평가
NX210 또는 NX218 치료제가 병리학적 바이오마커에 미치는 잠재적인 생물학적 효과를 평가하기 위해, Sc.Aβ / Vhc (n=6), Aβ25 -35 / Vhc (n=6), Aβ25 -35 / NX210 IP 2 mg/kg (n=5) 및 Aβ25 -35 / NX218 IP 2 mg/kg (n=5) 군들의 마우스를 Aβ25 -35 펩타이드 (D11) ICV 주사 및 매일 화합물 투여 (매일 1회) 후 10일차에 마취 하에 희생시켰다.
각 마우스에서 뇌를 신속하게 취하여, 빙랭한 금속 플레이트 위에서 해마 1/2씩 2개, 전두피질 1/2씩 2개 및 나머지 뇌로 절단하였다. 각 수집 직후 뇌 샘플을 드라이아이스에서 냉동하여 -80℃에서 보관하였다. 이를 해동한 후, 뇌 구조체를 50 mM Tris-150 mM NaCl 완충제, pH 7.5 중에서 해리하고, 20초간 음파 처리하였다. 이를 원심분리한 후, 단백질을 함유한 상층액을 ELISA 분석에 제조사의 지침 (하기 참조)에 따라 이용하였다.
- Aβ 1 -42 (아밀로이드-β 1-42)의 경우, 좌측 해마 사용, ELISA 키트 (Cloud-Clone Corp., ref: CEA946Mu; batch: L190107385)
- pTau (인산화된 Tau 단백질)의 경우, 좌측 해마 사용, ELISA 키트 (Fisher Scientific, ref: 10591255; batch: 187860001)
모든 분석에서, 흡광도를 450 nm에서 판독하고, 특이적인 표준 곡선을 이용해 각 샘플의 농도를 계산하였다. 모든 샘플은 2세트로 사용하였고, 이들 2개의 평균을 계산에 이용하였다.
군 Aβ 1 -42
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 22.63 6.91 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 59.24 4.12 262 6
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 24.25 2.93 107 5 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 23.90 0.98 106 5 *** <0.001
군 pTau
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 59.82 1.95 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 112.73 1.76 188 6
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 90.21 1.69 151 5 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 60.41 1.19 101 5 *** <0.001
표 6. 마우스 뇌에서 Aβ 25 -35 -유발성 생화학적 변화 ( Aβ 1 -42 및 인산화된 Tau 수준)에 대한 NX210 또는 NX218 ( 2 mg /kg 매일 1회)의 IP 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 5-6/군이다. 데이터는 대조군 ( Sc . Aβ / Vhc 군)에 대한 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
이러한 타우병증 모델에서, Aβ25 -35 / Vhc 군과 비교할 경우, NX210 (2 mg/kg) 또는 NX218 (2 mg/kg)을 매일 1회로 10일간 투여하면, 아밀로이드 베타 1-42 (Aβ 1 -42 ) 및 과인산화된 Tau 단백질 (pTau)과 같은 AD 및 기타 타우병증의 진행에 전형적으로 관여하는 수종의 뇌 바이오마커가 놀랍게도 현저하게 감소하였다 (표 6 및 도 3). 실제, (NX210 및 NX218-처리 군 둘다, 그리고 NX218-처리 군 각각의 경우) Aβ1-42 및 pTau의 수준은 건강한 모의 동물과 비슷하였다.
b. 조직학적 실험
이 모델에서 (Maurice et al., 2013에 기술된 바와 같이) AD/타우병증 환자에서 발생하는 잘 알려진 병리학적 현상인 뉴런 감소 (neuronal loss)를 측정하기 위해, 모의, Aβ25 -35 / 비히클 및 Aβ25 -35 / NX210-처리 마우스의 뇌에서 해마 뉴런의 수를 측정하였다.
이를 위해, Aβ25 -35 또는 Scrambled 펩타이드 (D15)를 ICV 주사하고 NX210 (IP) 또는 비히클 (IP)을 매일 화합물 투여한 후 14일 경과시, 마우스를 케타민/크실라진으로 마취한 다음 런닝 유체가 맑아질 때까지 포스페이트 완충제 용액 (PBS, 15 ml, 5 ml/min, pH 7.4)으로 경심 관류한 다음, 4% 파라포름알데하이드 용액 (PFA, 25 ml, 5 ml/min)을 고정 진전증 (fixation tremor)이 사라질 때까지 관류하였다. 뇌를 조심스럽게 취하여, 4% PFA에 넣어 4℃에서 24-48h 동안 보관하였다. 그런 후, 뇌를 에탄올 단계별 연속 수조를 통과시켜 탈수시켜 물을 대체한 다음 왁스로 침윤 처리하였다. 마지막으로, 침윤 처리된 뇌를 왁스 블록에 임베딩하고, 5±1 ㎛로 절단하였다. 크레실 바이올렛 (CV) 염색을 동물 당 뇌 단편 9개에 수행하고, 각 단편은 CA1 피라미드 뉴런 수 측정을 위해 100 ㎛ 간격으로 떨어져 위치한다.
군 조직 (조직 mm 당 뉴런 개수)
평균 SEM % Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 335.49 8.20 100 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 276.64 9.84 82
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 311.84 9.18 93 * 0.0192
표 7. Aβ 25 -35 -주사 마우스에서 관찰되는 뉴런 감소에 대한 NX210 ( 2 mg /kg 매일 1회)의 IP 투여 효과. 데이터는 분석 면적의 길이 전체에서 핵 개수 % 및 대조군 ( Sc . Aβ / Vhc )에 대한 %로 나타낸다. * p < 0.05 및 *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
NX210 (2 mg/kg)은 Aβ25 -35 펩타이드를 주사한 마우스의 해마에서 관찰되는 뉴런 감소를 유의하게 방지하였다 (표 7). (모의 마우스 대비) Aβ25 -35 / Vhc 마우스에는 피라미드 뉴런이 팔십이% (82%)만 남아있는 반면, NX210 처리 후에는 구십삼% (93%)가 남아 있었다.
실시예 4: 표준 치료와 NX210 또는 NX218의 조합
도네페질 (DPZ)와 같은 아세틸콜린 에스테라제 저해제는 알츠하이머 질환 또는 타우병증을 앓고 있는 환자에 대한 현행 표준 치료제이다. 이들 화합물에 대한 효능 반응은 예측할 수 없으며, 시간 경과에 따라 효능이 떨어진다. 용량 증가는, 투여량 증가와 관련있는 부작용이 통상적으로 환자에게 잘 허용되지 않으므로, 임시적인 옵션에 불과하다 (Homma et al., 2009; Jackson et al., 2004). 궁극적으로, 환자는 치료를 중단하고, 단일 치료 해법이 없게 된다.
인지 평가:
a. 자발적인 교대 성능 (Y-미로)
Aβ25 -35 펩타이드를 ICV 주사한 후 7일차 (D08)에, 전체 동물에 대해 공간 작업 기억 지표 (단기 기억 검사, 방법의 상세 설명은 실시예 3 참조)로서 Y-미로에서 자발적인 교대 성능을 검사하였다.
군 Y-미로
평균 SEM % n A β25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 74.04 1.00 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 38.95 2.34 53 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 44.52 1.70 60 12 ns 0.3097
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 72.67 1.48 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 43.27 2.66 58 12 ns 0.5957
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 72.53 2.51 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ PO 0.25 41.82 3.16 56 12 ns 0.9172
Aβ 25 -35 / DPZ PO 1 68.90 2.19 93 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX210 0.1 67.88 1.30 92 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX218 0.1 71.94 1.32 97 12 *** <0.001
표 8. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 단기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (0.1-2 mg/kg 매일 1회, IP), 또는 DPZ (0.25-1 mg/kg 매일 1회, PO)의 활성 용량 또는 준활성 용량, 또는 NX210 또는 NX218의 준활성 용량과 DPZ의 준활성 용량의 조합 (NX210 및 NX218의 경우 0.1 mg/kg, IP, 및 DPZ의 경우 0.25 mg/kg, PO)의 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 교대 %로 나타낸다. ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
준활성 용량에서 NX210 (0.1 mg/kg), NX218 (0.1 mg/kg) 또는 DPZ (0.25 mg/kg)의 매일 1회 투여는 Aβ25 -35-유발성 공간 단기 작업 기억 결함을 저해하지 않았다 (표 8 및 도 4, 또한 실시예 3 참조).
놀랍게도, 준활성 용량의 NX210 또는 NX218 (0.1 mg/kg, IP)과 준활성 용량의 DPZ (0.25 mg/kg, PO)의 조합은 Aβ25 -35-유발성 공간 단기 작업 기억 결함을 유의하고 완전히 회복시켜 (표 8 및 도 4), 타우병증-관련 인지 장애에 대해 약물들 간에 상승적인 치료학적 효과가 있는 것으로 입증되었다.
b. 스텝-스루 수동 회피 검사 (STPA)
Aβ25 -35 펩타이드를 ICV 주사 후 8일 및 9일차 (각각 D09 및 D10)에, 스텝-스루 수동 회피 (STPA) 검사에서 맥락 장기 기억 성능을 검사하였다 (방법의 상세 내용은 실시예 3 참조).
군
STL
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 283.00 9.36 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 122.58 6.73 43 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 118.92 7.24 42 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 248.33 11.55 88 12 ** 0.0018
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 129.75 9.26 46 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 267.75 12.41 95 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ PO 0.25 109.33 10.50 39 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / DPZ PO 1 265.83 11.65 94 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX210 0.1 264.25 12.43 93 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX218 0.1 263.42 12.58 93 12 *** <0.001
표 9. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 장기 기억 결함에 대한 활성 또는 준활성 용량의 NX210 또는 NX218 (0.1-2 mg/kg 매일 1회, IP) 또는 DPZ (0.25-1 mg/kg 매일 1회, PO), 또는 준활성 용량의 NX210 또는 NX218과 준활성 용량의 DPZ의 조합 (NX210 및 NX218의 경우 0.1 mg/kg, IP, 및 DPZ의 경우 0.25 mg/kg, PO)의 투여 효과: 스텝- 스루 머무름 시간 ( STL )을 기억 세션 동안 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 초로 나타낸다. ns (비-유의성), ** p<0.01 및 *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 크루스칼 - 왈리스 및 후속적인 둔의 다중 비교 검정.
군 EL
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / Vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / Vhc 19.92 2.27 100 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / Vhc 89.50 5.51 449 12
Aβ 25 -35 / NX210 IP 0.1 89.42 6.16 449 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX210 IP 2 31.17 3.07 156 12 * 0.0106
Aβ 25 -35 / NX218 IP 0.1 86.75 5.33 436 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / NX218 IP 2 24.50 3.94 123 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ PO 0.25 88.67 6.67 445 12 ns >0.9999
Aβ 25 -35 / DPZ PO 1 24.25 2.84 122 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX210 0.1 19.50 3.08 98 12 *** <0.001
Aβ 25 -35 / DPZ 0.25 + NX218 0.1 19.17 3.04 96 12 *** <0.001
표 10. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 장기 기억 결함에 대한 활성 또는 준활성 용량의 NX210 또는 NX218 (0.1-2 mg/kg 매일 1회, IP) 또는 DPZ (0.25-1 mg/kg 매일 1회, PO), 또는 준활성 용량의 NX210 또는 NX218과 준활성 용량의 DPZ의 조합 (NX210 및 NX218의 경우 0.1 mg/kg, IP, 및 DPZ의 경우 0.25 mg/kg, PO)의 투여 효과: 탈출 지연 시간 (EL)을 기억 세션 동안 측정하였다. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 12/군이다. 데이터는 초로 나타낸다. ns (비-유의성), * p < 0.05 및 *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 크루스칼 - 왈리스 및 후속적인 둔의 다중 비교 검정.
준활성 용량에서 NX210 (0.1 mg/kg), NX218 (0.1 mg/kg) 또는 DPZ (0.25 mg/kg)의 매일 1회 투여는 Aβ25 -35-유발성 맥락 장기 기억 결함을 저해하지 않았다 (STL 및 EL, 표 9-10 및 도 5, 또한 실시예 3 참조).
놀랍게도, 본 검사에서, 준활성 용량의 NX210 또는 NX218 (0.1 mg/kg, IP)과 준활성 용량의 DPZ (0.25 mg/kg, PO)의 조합이 Aβ25 -35-유발성 장기 기억 결함을 유의하게 완전히 회복시키는 것으로 입증되었다 (STL 및 EL, 표 9-10 및 도 5). 이러한 결과는 NX210 또는 NX218와 아세틸콜린 에스테라제의 저해제 (도네페질)의 조합이 타우병증-관련 인지 장애에 미치는 상승적인 유익한 효과를 입증해준다.
실시예 5: NX210 또는 NX218의 후기 효능 (LATE STAGE EFFICACY)
인지 평가:
a. 자발적인 교대 성능 (Y-미로)
타우병증의 Aβ25 -35 마우스 모델에서, Aβ25 -35 펩타이드를 ICV 주사한 후 10일차 (D11)에 생리병리학적 상태는, Y-미로 및 STPA 검사에서 확인되는 높은 인지장애에 의해 (실시예 3 표 1-2-3, 비히클 군), 아울러 2종의 병리학적 뇌 바이오마커 아밀로이트 베타1-42 (Aβ 1 -42 ) 및 과인산화된 Tau 단백질 (pTau)에 의해 (실시예 3, 표 6 및 도 3, 비히클 군) 입증된 바와 같이, 이미 더욱 후기 단계인 상태였다.
따라서, NX210 및 NX218 SCO-스폰딘 유래 펩타이드의 효능은 이러한 후기 생리병리학적 상황에서 평가한 것이다. 구체적으로, NX210, NX218 또는 비히클의 투여는 D11에 시작하여, 실험 종료시까지 매일 1회로 반복하였다.
모든 동물은 D08 (즉, 치료 전 값)부터 단기 기억의 지표로서 Y-미로에서 자발적인 교대 성능 (방법의 상세한 내용은 실시예 3 참조)을 검사하였으며, 그런 후 3주 동안 매주 1회 (D15, D22, D29)로 검사하였다.
군 Y-미로 (D08)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / D11 vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / D11 vhc 70.68 2.70 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 vhc 40.57 1.83 57 6
Aβ 25 -35 / D11 NX210 IP 2 39.17 2.17 55 6 ns 0.9469
Aβ 25 -35 / D11 NX218 IP 2 40.70 2.27 58 6 ns >0.9999
군 Y-미로 (D15)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / D11 vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / D11 vhc 78.47 2.57 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 vhc 47.40 3.23 60 6
Aβ 25 -35 / D11 NX210 IP 2 55.55 1.51 71 6 ns 0.1887
Aβ 25 -35 / D11 NX218 IP 2 57.32 4.44 73 6 ns 0.0904
군 Y-미로 (D22)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / D11 vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / D11 vhc 73.42 2.23 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 vhc 40.70 2.17 55 6
Aβ 25 -35 / D11 NX210 IP 2 60.08 2.26 82 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 NX218 IP 2 60.37 2.47 82 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D29)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / D11 vhc 대비 유의성 p-값
Sc . Aβ / D11 Vhc 77.32 1.52 100 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 Vhc 47.82 3.59 62 6
Aβ 25 -35 / D11 NX210 IP 2 74.73 2.64 97 6 *** <0.001
Aβ 25 -35 / D11 NX218 IP 2 70.10 3.70 91 6 *** <0.001
표 11. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 단기 기억 결함에 대한 NX210 또는 NX218 (2 mg/kg 매일 1회, D11에 개시)의 투여 효과. 용량은 kg 당 mg으로 표시한다. n은 6/군이다. 데이터는 시간에 따른 교대 %로 나타낸다 (D08-15-22-29). ns (비-유의성), *** p < 0.001, Aβ 25 -35 / Vhc 군 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
D08 (치료 전 값)에, Sc.Aβ / D11 vhc (모의) 군과 비교해 Aβ25 - 35 군들 전체에서 상당한 기억 손상이 비슷하게 관찰되었다 (표 11 및 도 6).
D15에, NX210 또는 NX218 (2 mg/kg)의 매일 5회 투여가 Aβ25 -35-유발성 공간 단기 작업 기억 결함을 회복시키는 경향이 존재하는 것으로 이미 확인되었다 (NX210 및 NX218 각각에 대해 p-값 = 0.19 및 0.09, 표 11 및 도 6). 12일-치료 후 D22에, NX210 또는 NX218의 투여는 작업 기억 결함을 유의하게 회복시켰다 (표 11 및 도 6). 마지막으로, 19일-치료 후 D29에, NX210 또는 NX218의 투여는 타우병증 모델에서 관찰된 기억 결함을 완전해 회복시켰다 (모의 군 대비 각각 97% 및 91%, 표 11 및 도 6).
결론적으로, NX210 및 NX218은, 치료를 심지어 매우 진행된 생리병리학적 단계에서 개시 (후기 질환-개시)한 경우에도, 타우병증 모델의 인지 및 기억 결함을 완전히 회복시킬 수 있었다.
실시예 6: NX218 및/또는 DPZ에 기반한 치료의 장기 효과
NX218 치료가 더 긴 지속 기간 동안 인지 회복을 유지시키고 DPZ가 그 활성을 상실한 경우 제2선 치료로서 작용할 가능성을 조사하고자 함: 장기간 실험 (120일)을 타우병증의 Aβ25 -35 마우스 모델에서 수행하였다.
마우스는 아래 나타낸 바와 같이 동물 5-6마리/군으로 6개의 치료 군으로 할당하였다.
군 # 군 치료 n
군 1 Sc.Aβ + 비히클 IP o.d. D01에 개시하여 D120까지 5
군 2 Aβ25 -35 + 비히클 IP o.d. D01에 개시하여 D120까지 5
군 3 Aβ25 -35 + 시험 화합물 NX218 IP o.d. D11에 개시하여 D38까지 (2 mg/kg) 6
군 4 Aβ25 -35 + 시험 화합물 NX218 IP o.d. D01에 개시하여 D120까지 (2 mg/kg) 6
군 5 Aβ25 -35 + DPZ PO o.d. (1 mg/kg), D01에 개시하여 더이상 효과가 없을 때까지 (D43) -> NX218 IP (2 mg/kg), D44부터 D78까지 + NX218 IP (4 mg/kg), D97 부터 D99까지 + NX218 IP (8 mg/kg), D100부터 D113까지 -> D114부터 D120까지 워시아웃 6
군 6 Aβ25 -35 + NX218 IP (0.1 mg/kg) + DPZ PO (0.25 mg/kg) o.d, D01부터 D120까지 6
총 마우스 수 34
1일 (D01)에 (Aβ25 -35) 또는 (Sc.Aβ) 아밀로이드 독성을 제공하기 위해 Sc.Aβ 또는 Aβ25 -35 펩타이드를 ICV 주사하였다.
대조군:
- D01부터 D120까지, 군 1과 2의 마우스에 비히클 (주사용수)을 매일 1회 (o.d.) IP 투여하였다.
검사 화합물 NX218:
- D11부터 D38까지, 군 3의 마우스에 NX218 2 mg/kg을 IP o.d. 투여하였다 (마우스는 D01부터 D10까지 비히클 처리하지 않음).
- D01부터 D120까지, 군 4의 마우스에 NX218 2 mg/kg을 IP o.d. 투여하였다.
시험 화합물 NX218에 의해 구제된 DPZ :
- D01부터, 효과가 없을 때까지 군 5의 마우스에 DPZ를 활성 용량 (1 mg/kg)으로 위관 영양 o.d에 의해 PO 투여하였다. 이의 효과는 D36에 사라졌다. DPZ를 D43까지 투여한 다음 다시 D44부터 D78까지 NX218을 이의 활성 용량 (2 mg/kg)으로 매일 1회로 IP 투여하는 것으로 바꾸었다.
- D79부터 D99까지, NX218을 고 용량 (4 mg/kg)으로 IP o.d. 투여하였다.
- D100부터 D113까지, NX218을 더 고 용량 (8 mg/kg)으로 IP o.d. 투여하였다.
- NX218의 투여는 D114부터 동물이 희생되기 전까지 중단하였다.
DPZ와의 조합에서의 검사 화합물 NX218:
- D01부터 D120까지, 군 6의 마우스에 NX218 및 DPZ를 각각의 준활성 용량으로 공동 투여하였다:
o NX218: IP o.d., 0.1 mg/kg
o DPZ: PO o.d., 0.25 mg/kg
인지 평가:
모든 군에서 화합물의 효과를 모니터링하기 위해 D08 (Aβ25 -35 펩타이드 주사 후 7일차)에 시작하여 매주 한가지 행동 검사를 수행하였다:
D08, D15, D22, D29, D36, D43, D50, D57, D64, D71, D78, D85, D92, D99, D106, D113 및 D120에 Y-미로에서 자발적인 교대 절차 (YM, 실시예 3에 기술된 바와 같은 공간 단기/작업 기억 평가). 그 결과를 표 12 및 도 7에 제시한다.
군 Y-미로 (D08)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 73.88 1.11 100 5 *** <0.001
군 2 36.72 2.82 50 5
군 3 45.65 3.24 62 6 ns 0.2679
군 4 71.18 1.14 96 6 *** <0.001
군 5 72.08 2.72 98 6 *** <0.001
군 6 71.28 3.12 96 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D15)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 77.9 2.26 100 5 *** <0.001
군 2 46.00 2.23 59 5
군 3 56.48 1.55 73 6 ns 0.0947
군 4 78.42 1.73 101 6 *** <0.001
군 5 76.00 1.83 98 6 *** <0.001
군 6 72.83 3.00 93 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D22)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 74.42 1.14 100 5 *** <0.001
군 2 48.88 2.43 66 5
군 3 64.83 2.56 87 6 *** <0.001
군 4 73.88 1.98 99 6 *** <0.001
군 5 79.07 1.48 106 6 *** <0.001
군 6 72.48 2.27 97 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D29)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 77.44 1.49 100 5 *** <0.001
군 2 36.3 2.75 47 5
군 3 76.38 2.64 99 6 *** <0.001
군 4 72.17 1.83 93 6 *** <0.001
군 5 62.05 3.57 80 6 *** <0.001
군 6 75.77 1.98 98 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D36)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 74.42 4.26 100 5 *** <0.001
군 2 42.58 2.20 57 5
군 3 77.42 2.74 104 6 *** <0.001
군 4 75.48 1.96 101 6 *** <0.001
군 5 36.23 1.86 49 6 ns 0.7918
군 6 75.4 2.09 101 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D43)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 74.16 2.28 100 5 *** <0.001
군 2 35.92 2.55 48 5
군 3 69.88 2.67 94 6 *** <0.001
군 4 73.2 2.49 99 6 *** <0.001
군 5 38.73 4.15 52 6 ns >0.999
군 6 73.5 1.38 99 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D50)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 73.5 1.28 100 5 *** <0.001
군 2 40.08 1.88 55 5
군 3 76.6 1.70 104 6 *** <0.001
군 4 76.9 0.78 105 6 *** <0.001
군 5 55.08 3.69 75 6 ** 0.002
군 6 77.85 1.08 106 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D57)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 77.2 2.77 100 5 *** <0.001
군 2 42.94 2.31 56 5
군 3 76.38 2.48 99 6 *** <0.001
군 4 69.1 2.13 90 6 *** <0.001
군 5 67.87 1.62 88 6 *** <0.001
군 6 72.25 2.60 94 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D64)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 75.1 3.36 100 5 *** <0.001
군 2 45.58 3.53 61 5
군 3 77.97 1.61 104 6 *** <0.001
군 4 70.92 3.13 94 6 *** <0.001
군 5 77.07 6.00 103 6 *** <0.001
군 6 73.95 2.79 98 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D71)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 74.94 3.24 100 5 *** <0.001
군 2 35.06 3.75 47 5
군 3 74.52 3.46 99 6 *** <0.001
군 4 75.23 2.65 100 6 *** <0.001
군 5 61.6 4.06 82 6 *** <0.001
군 6 78.05 1.73 104 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D78)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 79.54 1.53 100 5 *** <0.001
군 2 35.4 3.10 45 5
군 3 75.77 1.62 95 6 *** <0.001
군 4 77.82 1.68 98 6 *** <0.001
군 5 53.25 3.55 67 6 *** <0.001
군 6 75.53 1.61 95 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D85)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 78.24 2.37 100 5 *** <0.001
군 2 45.92 4.94 59 5
군 3 76.07 2.21 97 6 *** <0.001
군 4 76.12 1.81 97 6 *** <0.001
군 5 56.77 2.63 73 6 ns 0.072
군 6 77.55 3.42 99 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D92)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 78.3 1.82 100 5 *** <0.001
군 2 41.28 3.95 53 5
군 3 74.08 2.79 95 6 *** <0.001
군 4 76.28 2.72 97 6 *** <0.001
군 5 63.35 2.80 81 6 *** <0.001
군 6 71.38 4.58 91 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D99)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 77.42 2.13 100 5 *** <0.001
군 2 41.28 2.89 53 5
군 3 78.35 1.43 101 6 *** <0.001
군 4 77.03 2.58 100 6 *** <0.001
군 5 60.47 4.66 78 6 *** <0.001
군 6 77.55 1.75 100 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D106)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 75.82 1.69 100 5 *** <0.001
군 2 36.38 3.15 48 5
군 3 73.98 3.09 98 6 *** <0.001
군 4 73.2 1.58 97 6 *** <0.001
군 5 68.93 2.15 91 6 *** <0.001
군 6 73.5 1.31 97 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D113)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 76.44 3.47 100 5 *** <0.001
군 2 48.48 4.48 63 5
군 3 74.33 2.21 97 6 *** <0.001
군 4 81.03 2.39 106 6 *** <0.001
군 5 77.43 1.94 101 6 *** <0.001
군 6 75.62 2.00 99 6 *** <0.001
군 Y-미로 (D120)
평균 SEM % n Aβ 25 -35 / vhc IP D01-D120 대비 유의성 p-값
군 1 77.24 1.72 100 5 *** <0.001
군 2 45.86 3.26 59 5
군 3 76.62 2.64 99 6 *** <0.001
군 4 76.28 2.80 99 6 *** <0.001
군 5 79.75 2.39 103 6 *** <0.001
군 6 79.47 1.06 103 6 *** <0.001
표 12. 마우스에서 Aβ 25 -35 -유발성 단기 기억 결함에 대한 NX218 ( 2 mg /kg IP 매일 1회, 120일간 (군 4)) 투여, 또는 DPZ ( 1 mg /kg, os 매일 1회, 43일간) 투여 후 NX218을 용량을 증가시키면서 투여 (44일부터 78일까지 2 mg /kg IP 매일 1회 투여 -> 79일부터 99일까지 4 mg /kg 매일 1회 투여 -> 100일부터 113일까지 8 mg /kg 매일 1회 투여 (군 5)), 또는 준활성 용량의 NX218 (0.1 mg/kg IP 매일 1회, 120일간)과 DPZ (0.25 mg/kg, os 매일 1회, 120일간)의 조합 투여 (군 6), 또는 NX218 일시적 투여 ( 2 mg /kg IP 매일 1회, 11일부터 38일까지 28일 동안 (군 3)) 의 장기 효과. 데이터는 시간에 따른 교대 %로 나타낸다. n은 5-6마리/군이다. ns (비-유의성), **p < 0.01, ***p < 0.001, Aβ 25 -35 Vhc 군 (군 2) 대비, 일원식 ANOVA 및 후속적인 더넷 검정.
120일간의 추적으로, NX218 2 mg/kg 치료 마우스 (군 3 및 4)는 오직 D35까지만 유효한 DPZ (군 5)와 상반되게, 어떠한 효능 감소 없이 완전하고 지속적인 회복을 나타내었다.
이미 병증이 확립되었으며 인지 결함을 가진 마우스에 D11-D38에 NX218 펩타이드 (군 3)를 일시적으로 처리한 결과, YM에서 관찰되는 기억 변형 (memory alteration)으로부터 완전히 회복되었다. 아울러, 이러한 혜택은 NX 펩타이드의 재-투여 없이도 D120까지 유지되어, 질환-변형 효과 (증상 효과가 (DPZ에서와 같은 시판 약물과 마찬가지로) 일시적이기보다는, 질병 (즉, 인지 결함)의 진행을 현저하게 수정 또는 반전시키도록 질환의 병리학적 경로 표적화)가 부각되었다.
4주간의 치료 후 DPZ 내성이 발현 (교대의 37%)한 다음, NX218 치료 (군 5)은 최대 17주간 기억 상실을 완전해 회복시켰다 (투여된 NX 펩타이드의 시간 및 용량에 따라 교차 군의 경우 53% 내지 80%).
NX218 + DPZ 처리 마우스 (군 6)는 효능 상실 없이 최대 17주 동안 공간 단기 작업 기억 손상에 대해 완전하고 지속적인 회복을 나타내었다 (실험에서 교차 군 71%-80% 대비 비히클-처리 군 35-49% 및 Scramble-Aβ 군 73-80%).
실시예 7: 동물 약동학
시험관내 예비 실험에서는, NX210이 랫 혈장에서의 산화에 의해 NX218로 빨리 변환되는 것으로, 입증되었다. 따라서, 동물에서 NX210 PK는 이의 고리 형태 NX218의 측정으로 추적하였다. 먼저, 혈장내 NX218 검출 방법을 검증하기 위해 랫에서 예비 PK 실험을 수행한 다음, 좀더 견고한 PK 실험을 반복 실험으로 수행함으로써 원숭이로 전환하였다. 모든 PK 실험은 비히클로서 NaCl 0.9%로 수행하였다.
랫 예비 PK 실험:
검사 랫 4마리에서, NX218은 농도가 빠르게 감소하였으며, NX210을 49 mg/kg으로 느린 볼루스 IV 주사 후 3시간부터는 정량화가 불가능해졌다 (데이터 도시 안함). 본 실험에서는 동물 혈장내 NX218 식별 가능함을 입증해준다.
원숭이 PK 실험:
검사 원숭이 3마리에서, NX210 10 mg/kg을 볼루스 IV 주사한 후 여러 날짜 (D22, D37 및 D51)에 반복 검사하였을 때 데이터는 재현가능하였다. NX218 농도는 주사 후 최대 30분 안에 빨리 감소하였다 (도 8). 반감기는 대략 12분 (표 13)으로 평가되었으며, 이는 랫 및 개에서 관찰되는 바와 동일한 범위로 (데이터 도시 안함), 반복 투여시 일관성이 우수하였다.
표 13: 원숭이에서 NX210 IV 주사 후 PK 데이터
실험 일 C max T max AUC 0 -t AUC 0 -inf CL t 1/2 V ss
(ng/mL) (분) (분*ng/mL) (분*ng/mL) (mL/분/kg) (분) (mL/kg)
22 (4300), 37 (4301 및 4302) 또는 51 (4300, 4301 및 4302) 19300 0 57600 63900 190 12.7 93.6
AUC : 곡선하 면적, CL: 총 청소, Cmax : 최고 농도, t1/2: 말단 소거 반감기, Tmax: Cmax에 도달하는데 걸린 시간, Vss : 정상 상태에서 분배 용적 (Volume of distribution at steady state)
NX218의 평균 원숭이 혈장 PK 파라미터에 대한 요약 통계 ( 적용가능한 경우, ± 표준 편차)
실시예 8: 건강한 인간 개체에서 약동학
동물에서와 마찬가지로; 건강한 인간 개체에서 NX210에 대한 PK 실험을 이의 고리 형태 NX218의 측정에 따라 수행하였다. 건강한 개체 6명에 12분간 지속되는 IV 주입을 통해 용량 10 mg/kg으로 투여하였다. 환자 3명에서 수득한 데이터를 기반으로 t1/2를 평가하였다 (아래 표 참조). 반감기는 약 19분으로 평가되었으며 (표 14), 이는 동물에서 관찰된 결과와 동일한 범위였다.
표 14: NX210 투여량 10 mg /kg의 IV 1회 투여 후 혈장 PK 파라미터
Cmax (ng/mL) Tmax
(min)		 AUClast (min*ng/mL) AUC∞ (min*ng/mL) t1/2
(min)		 Kel
(l/min)
N 6 6 6 3a 3a 3a
AM 582 9.00 4970 5930 20.0 0.0348
SD 297 2.45 2530 2740 2.15 0.00352
Min 185 6.00 1470 2800 18.6 0.0308
중간값 575 10.00 5400 7060 19.0 0.0365
Max 1040 12.00 7850 7920 22.5 0.0372
CV% 51 27 51 46 11 10
GM 510 8.69 4290 5390 20.0 0.0347
AM = 산술 평균; SD = 표준 편차; Min = 최소; Max = 최대; GM = 기하 평균;
CV: 변동 계수
Kel: 청소율 상수
AUC: 곡선하 면적
Cmax: 최대 농도
t1/2: 말단 소거 반감기
Tmax: Cmax에 도달하는데 걸린 시간
CV% = SD/AM*100에 해당하는 산술 CV;
a: 개체 3명은 AUClast/ AUC∞ 비율이 <0.80이거나 조정된 R2 값이 < 0.80이므로, Kel, t1/2 및 AUC∞를 기록할 수 없었으며, 그래서 요약 통계에 포함되지 않는다.
<110> AXOLTIS PHARMA <120> Peptide compositions and methods for treating tauopathies <130> BET 19L4982 <160> 63 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide compound <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is absent or 1 to 6 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(11) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> Xaa is absent or is 1 to 6 amino acids <400> 1 Xaa Trp Ser Xaa Trp Ser Xaa Cys Ser Xaa Xaa Cys Gly Xaa 1 5 10 <210> 2 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide compound <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(10) <223> Xaa is 1 to 5 amino acids <400> 2 Trp Ser Xaa Trp Ser Xaa Cys Ser Xaa Xaa Cys 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Cys Gly 1 5 10 <210> 37 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 37 Leu Ala Pro Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 <210> 38 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 38 Val Leu Ala Pro Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 <210> 39 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 39 Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly Leu 1 5 10 <210> 40 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 40 Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly Leu Gly 1 5 10 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 41 Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly Leu Gly Leu 1 5 10 15 <210> 42 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 42 Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly Leu Gly Leu Ile 1 5 10 15 <210> 43 <211> 17 <212> 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Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 Leu Gly <210> 61 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 61 Val Leu Ala Pro Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 Leu Gly Leu <210> 62 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 62 Val Leu Ala Pro Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 Leu Gly Leu Ile 20 <210> 63 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide compound <400> 63 Val Leu Ala Pro Trp Ser Gly Trp Ser Ser Cys Ser Arg Ser Cys Gly 1 5 10 15 Leu Gly Leu Ile Phe 20

Claims (16)

  1. 타우병증을 치료하는데 사용하기 위한, 개체에게 전신 경로를 통해 투여되는, 하기 아미노산 서열의 펩타이드:
    X1-W-S-A1-W-S-A2-C-S-A3-A4-C-G-X2 (서열번호 1)
    서열번호 1에서,
    - A1, A2, A3 및 A4는 아미노산 1-5개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되고;
    - X1 및 X2는 아미노산 1-6개로 이루어진 아미노산 서열로 구성되거나, 또는 X1 및 X2는 생략되고;
    - N-말단 아미노산은 아세틸화되거나, C-말단 아미노산은 아미드화되거나, 또는 N-말단 아미노산은 아세틸화되고 C-말단 아미노산은 아미드화될 수 있음.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 펩타이드가 하기 아미노산 서열인, 펩타이드:
    W-S-A1-W-S-A2-C-S-A3-A4-C-G (서열번호 2)
    상기 서열번호 2에서, A1, A2, A3 및 A4는 아미노산 1-5개로 이루어진 아미노산 서열로 구성됨.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 펩타이드가 선형 펩타이드, 또는 서열번호 1 및 2의 펩타이드 식에서 시스테인이 이황화 결합을 형성한 산화된 펩타이드, 또는 선형 펩타이드와 산화된 펩타이드의 혼합인, 펩타이드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    - A1은 G, V, S, P 및 A로부터 선택되고, 바람직하게는 G, S로부터 선택되고,
    - A2는 G, V, S, P 및 A로부터 선택되고, 바람직하게는 G, S로부터 선택되고,
    - A3는 R, A 및 V로부터 선택되고, 바람직하게는 R, V로부터 선택되고, 및/또는
    - A4는 S, T, P 및 A로부터 선택되고, 바람직하게는 S, T로부터 선택되는, 펩타이드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    A1 및 A2가 독립적으로 G 및 S로부터 선택되거나, 및/또는 A3-A4는 R-S 또는 V-S 또는 V-T 또는 R-T로부터 선택되는, 펩타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드가 서열번호 3-63의 서열들로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열인, 펩타이드.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 펩타이드가 서열번호 3의 서열의, 선형화된 형태, 고리화된 형태, 또는 이 둘의 혼합 형태의 펩타이드인, 펩타이드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 타우병증이 알츠하이머 질환 (AD); 진행성 핵상 마비 (Progressive Supranuclear Palsy, PSP); 피크병 (Pick's disease)과 같은 타우 양성의 전두측두엽 치매 (Tau positive Fronto-Temporal Dementia); 루이소체 치매 (dementia with Lewy bodies); 피질기저 변성 (corticobasal degeneration); C형 니만-피크병 (Niemann-Pick type C disease); 권투선수 치매 (dementia pugilistica)를 비롯한 만성 외상성 뇌병증; 및 뇌염 후유증성 파킨슨 증후군 (postencephalitic parkinsonism)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 펩타이드.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 타우병증이 알츠하이머 질환 (AD)인, 펩타이드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드가 개체에서 타우 응집 (tau aggregation)의 저하 또는 파괴, 개체에서 타우 단백질의 저하, 인산화된 타우 단백질의 수준 저하를 유도하는, 펩타이드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드가 정맥내, 복막내, 비강내, 피하, 근육내, 설하 또는 경구 경로를 통해 환자에게 투여되는, 펩타이드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 개체는 또한 충분한 양의 아세틸콜린에스테라제 저해제로 치료받는, 펩타이드.
  13. 타우병증의 치료 방법에 이용하기 위한, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제의 조합물로서.
    상기 펩타이드가 전신 경로를 통해 개체에게 투여되는 것인, 조합물.
  14. 하나 이상의 SCO-스폰딘 유래 펩타이드 및 아세틸콜린에스테라제 저해제, 바람직하게는 DPZ, 및 약제학적으로 허용가능한 비히클, 담체 또는 부형제를 포함하는, 약학적 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    타우병증 치료에 이용하기 위한 것이며, 상기 조성물은 개체에 전신 경로를 통해 투여되는, 약학적 조성물.
  16. 필요한 개체에서 타우병증을 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드와 약제학적으로 허용가능한 비히클 또는 부형제를 포함하는 조성물을 치료학적 양으로 전신 경로를 통해 개체에 투여하는 것을 포함하는, 방법.
KR1020227023057A 2019-12-05 2020-12-04 타우병증을 치료하기 위한 펩타이드 조성물 및 방법 KR20220110278A (ko)

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