KR20220107257A - 이중특이성 융합 단백질 및 그의 응용 - Google Patents

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Abstract

신규한 구조를 갖는 이중특이성 융합 단백질을 제공한다. 제2결합 구조 도메인은 임의의 펩타이드 조인트에 의해 전체 길이(full length)로 IgG 힌지 영역에 삽입된다. 상기 융합 단백질은 IgG와 동일한 발현 및 생산 이점을 가지며, 융합 단백질의 Fab 영역의 결합 활성에 영향을 미치지 않아 안정성을 더욱 향상시키고 더 높은 반감기를 얻을 수 있다. 또한, 제2 결합 구조 도메인의 표적 결합 부위에 대한 결합 활성은, 가용성 천연 결합 단편에 상응하는 표적에 대한 단량체의 결합 활성에 비해 현저히 개선되었다.

Description

이중특이성 융합 단백질 및 그의 응용
본 발명은 신규한 구조를 갖는 이중특이성 융합 단백질 및 이의 응용에 관한 것이다. 본 발명은 또한 폴리뉴클레오티드, 핵산 구조체 및 상기 융합 단백질을 코딩하거나 제조하는 숙주 세포에 관한 것이다.
생명공학의 발달로 항체는 성숙한 치료제로서 종양 및 면역질환의 치료에 중요한 역할을 하고 있다. 현재 시중에 나와 있는 대부분의 항체 약물은 단일 항원을 표적으로 하며 하나의 표적 분자에만 작용할 수 있다. 그러나, 자연에서의 복잡한 질병들은 종종 다양한 인자에 의하며, 질병 매개체의 과발현이나 시너지 효과, 또는 신호 전달 네트워크의 분자 상호 작용을 포함한 다양한 수용체의 상향 조절이 수반된다. 따라서 다중 신호 경로를 조절하면 치료 항체의 효능이 향상될 수 있다. 이중 표적화 전략을 사용한 이중특이성 항체(BsAb) 요법은 종양 및 면역 질환에 대한 효과적인 치료법 중 하나가 되었다 (Kontermann R. Dual targeting strategies with bispecific antibodies [C]//MAbs. Taylor & Francis, 2012, 4(2): 182-197.).
이중특이성 항체는 2개의 상이한 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다 (Carter P. Bispecific human IgG by design [J]. Journal of immunological methods, 2001, 248(1-2): 7-15). 1980년대에 Morrison 등은 융합 발현을 위한 유연한 펩타이드를 사용하여 다른 특이성을 가진 단일 사슬 항체를 연결하여 dextran 및 dansyl 그룹에 대한 최초의 진정한 4가 이중특이성 항체를 제조했다 (Coloma M J, Morrison S L. Design and production of novel tetravalent bispecific antibodies [J]. Nature biotechnology, 1997, 15(2): 159.). 그러나 항체 제조 기술의 병목 현상과 신호 경로에 대한 기초 연구 부족으로 이중특이성 항체의 개발에 차질을 빚고 있다. 질병의 발병기전에 대한 깊은 이해와 치료적 단일클론항체(McAbs) 관련 기술의 급속한 발전으로, 항체의 구성, 발현 및 정제 기술이 크게 향상되어, 이중특이성 항체의 개발에서 제한 요소들을 극복할 수 있는 기술과 동기를 갖도록 하고 있다. 현재 이중특이성 또는 다중특이성 항체의 기작은 주로 다음과 같다: (1) 가교 세포(in trans); (2) 수용체 억제(in-cis) 또는 수용체 활성화(in-cis); (3) 보조 인자 모방체; (4) PIgGyback 접근법 (Aran F. Labrijn, et al. Bispecific antibodies: a mechanistic review of the pipeline, Nature Reviews Drug Discovery volume 18, pages 585-608(2019)).
이중특이성 항체의 개발에 있어서 분자구조의 선택은 매우 중요하다. 이중특이성 항체 설계는 각기 장단점이 있지만 임상 치료 목적을 위한 이중특이성 항체 설계는 다음과 같은 문제를 해결해야 한다. 첫째, 서로 다른 경쇄와 중쇄의 두 쌍(또는 그 이상)의 올바른 커플링 또는 짝지음이 보장되어야 한다. 둘째, 각 단일클론항체의 각 결합도메인의 독립성을 유지하며, 서로 다른 에피토프를 동시에 결합할 경우 입체간섭이 일어나지 않아야 한다. 셋째, 항체 분자는 복잡한 단백질 변형 과정 없이 포유동물 세포에서 발현하기 쉬워야 한다. 넷째, 높은 열 안정성, 높은 화학적 안정성, 높은 용해도, 중합의 비 용이성, 낮은 점도, 높은 발현성, 적절한 반감기 등과 같은 우수한 약물성 등이 요구된다 (Spiess C, Zhai Q, Carter P J. Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies [J]. Molecular immunology, 2015, 67(2): 95-106.).
상이한 분자 구조 형태(즉, 성분 및 구성 방법)에 따라, 이중특이성 항체는 많은 유형으로 나눌 수 있다. 예를 들어, 구조의 좌우 대칭에 따라 대칭 구조와 비대칭 구조로 나뉘고, Fc영역(Fc region)의 유무에 따라 Fc영역을 포함하는 이중특이성 항체와 Fc영역이 없는 이중특이성 항체로 나눌 수 있고, 항원 결합 영역의 수에 따라 2가, 3가, 4가 또는 다가 배열로 나뉘는 등과 같이 분류된다. 현재, 이중특이성 항체는 수십 개의 구조가 개발되었으며 (Spiess C, Zhai Q, Carter P J. Alternative molecule functions and therapy for bispecific antibody [J]. Molecular immunology, 2015, 67(2): 95-106.), 이러한 이중특이성 항체는 다양한 구조를 가지며 대략 5가지 범주로 나뉜다: IgG-유사 이중특이성 항체, 추가 기능 영역을 갖는 IgG-유사 이중특이성 항체, 직렬로 연결된 상이한 항원-결합 단편을 갖는 이중특이성 항체, 융합 단백질-유형 이중특이성 항체 및 화학적으로 결합된 이중특이성 항체. 그 중 IgG-유사 이중특이성 항체의 구성은 주로 구조적 변형을 위한 재조합 DNA 기술을 사용한다. 제조된 IgG 유사 이중특이성 항체는 완전 결정화 가능한 단편(즉, Fc 단편)을 가지므로 Fc 단편 매개 ADCC(항체 의존성 세포 매개 세포독성) 및 CDC(보체 매개 세포독성, 보체 의존성 세포독성) 등을 유지하면서 다른 항원에 결합할 수 있다. 동시에, 이러한 유형의 항체는 또한 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 결합하여 항체의 생체내 반감기를 연장하는 특징을 유지한다 (Ridgway J B B, Presta L G, Carter P. 'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization [J]. Protein Engineering, Design and Selection, 1996, 9(7): 617-621.); 추가 기능 영역이 있는 IgG 유사 이중특이성 항체는 일반적으로 기존의 IgG 항체를 기반으로 하며 융합 단백질을 통해 중쇄 및/또는 경쇄에 다른 특정 항원 결합 단편(즉, 단일 도메인 항체, 단일 사슬 항체 등과 같은 추가 기능 영역)을 추가하여 생성된다(LaFleur D, Abramyan D, Kanakaraj P, et al. Monoclonal antibody therapeutics with up to five specificities: functional enhancement through fusion of target-specific peptides [C]//MAbs. Taylor & Francis, 2013, 5(2): 208-218.); 서로 다른 항원 결합 단편이 직렬로 연결된 이중특이성 항체는 특정 서열의 서로 다른 Fab, 단일 사슬 항체, 단일 도메인 항체 또는 항원 결합 단편을 연결 펩타이드를 통해 연결하여 얻는다 (Stork R, Muller D, Kontermann R E. A novel tri-functional antibody fusion protein with improved pharmacokinetic properties generated by fusing a bispecific single-chain diabody with an albumin-binding domain from streptococcal protein G [J]. Protein Engineering, Design & Selection, 2007, 20(11): 569-576.); 융합 단백질형 이중특이성 항체는 2개 이상의 항원에 동시에 결합할 수 있는 단백질 분자로, 폴리펩타이드 단편과 같은 링커를 통해 특이성이 다른 항체/항체 단편(IgG, Fab, scFv, 등)을 연결함으로써 형성되고; 그리고 화학적으로 결합된 이중특이성 항체는 융합 단백질형 이중특이성 항체와 유사하지만, 화학적으로 결합된 이중특이성 항체의 경우 먼저 두 개의 항체/항체 단편을 별도로 준비해야 하며, 그 다음 이 두 항체는 화학 결합을 통해 결합되거나 두 항체 모두 운반체 단백질에 결합된다.
또한, 신호경로에 대한 기초연구의 발달과 이중항체 기전의 확장으로 이중특이성 항체 선택을 위한 표적 및 조합이 점점 더 많아지고 있으며, PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG-3, FGL1, TIM-3, 갈렉틴-9, TIGIT, CD155 및 TGF-β 수용체(TGF-βR), CD80, CD86, VEGFR, VEGF-트랩, FGL1, CD70, 4-1BBL, OX40L 및 SIRPα; 및 Claudin 18.2, HER-2, 메소테린(Mesothelin), BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, VEGF-A, Nectin-4, FGFR, C-met, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL4, Ang-1 및 Ang-2 등을 포함한 종양 항원 등이 있다. 면역 관문 표적 또는 종양 표적을 암세포의 발달 저항 또는 T-세포 활성화와 관련된 다른 표적과 조합하거나, 또는 다중 면역 관문 표적의 조합은, 종양과 같은 악성 질환의 치료 가능성을 크게 향상시킨다. 초기 단계에서는 두 개의 개별 체크포인트 항체의 조합을 임상적으로 사용하여 효능을 개선했다. 예를 들어, 이필리무맙 단독 치료와 비교하여 이필리무맙(항-CTLA4)과 니볼루맙(항-PD1)의 병용 치료는 흑색종 환자의 생존율을 향상시킬 수 있다. 현재 4개의 PD-1xCTLA4 bsAbs의 안전성과 초기 효능은 초기 임상 시험에서 평가되고 있다. 두 개의 면역 관문을 차단하는 억제제의 개념은 PD-1 x LAG 3, PD-1 x TIM3 및 PD-L1 x CTLA 4와 같은 다른 표적 조합에도 임상적으로 사용된다 (Wolchok, J. D. et al. Overall Survival with Combined Nivolumab and Ipilimumab in Advanced Melanoma, N.Engl. J. Med. 377(14): 1345-1356, (2017); Dovedi, S. J. et al. MEDI5752: A novel bispecific antibody that preferentially targets CTLA-4 on PD-1 expressing T-cells. Cancer Res.78(13), Supplement.Abstract 2776: (2018). Hedvat, M. et al. Simultaneous checkpoint ―checkpoint or checkpoint ― costimulatory receptortargeting with bispecific antibodies promotes enhanced human T cell activation [abstract P664]. Presented at the 2018 Society for Immunotherapyof Cancer (SITC) (2018); Aran F. Labrijn, et al. Bispecific antibodies: a mechanistic review of the pipeline, Nature Reviews Drug Discovery volume 18, pages 585-608(2019).
현재 이중특이성 항체의 대부분은 아직 임상 또는 전임상 연구 단계에 있으며, 현재 시판 허가를 받은 이중특이성 항체는 3개에 불과하다. 이들은 Trion Pharma의 카투막소맙 (Catumaxomab)(2017년 상업적 요인으로 인해 판매중지), Amgen의 블리나투모맙(Blinatumomab) 및 Roche의 에미시주맙(Emicizumab)이다. 카투막소맙은 Triomab 형태의 IgG 유사 이중특이성 항체이다. 이는 상피 세포 부착 분자(EpCAM)가 과발현되는 T 세포 및 종양 세포를 표적으로 하고, T 세포 활성화, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 및 보체 의존성 세포독성(CDC)을 통해 종양 세포를 억제한다. 이는 2009년 EMA로부터 표준 치료에 효과가 없거나 실행 불가능한 EpCAM 양성 종양으로 인한 악성 복수(ascites)의 치료제로 승인되었으며, 시판 승인을 받은 최초의 이중특이성 항체이기도 하다. 블리나투모맙은 Fc 영역이 없는 이중특이성 항체로 BiTE(이중특이성 T 세포 인게이저)의 구조 형태를 채택한다. 블리나투모맙은 항-CD3 부분을 통해 T 세포에 결합하고, 항-CD19 부분을 통해 악성 및 정상 B 세포에 결합하여 T 세포 매개 종양 세포 사멸 효과를 유도한다. 2014년에는 블리나투모맙이 필라델피아 염색체 음성 전구체 B 세포 급성 림프모구성 백혈병 치료제로 FDA 승인을 받았다. 에미시주맙은 인자 IXa 및 인자 X에 결합할 수 있는 변형된 인간화 이중특이성 IgG4 단일클론 항체다. 이 항체는 Fc 디자인을 위한 "Knobs-into-Holes(KiH)", LC 디자인을 위한 "Common Light Chain-IgG(CLC-IgG)", 가변 영역 최적화를 위한 "Multidimensional Optimization"을 채택하여, 인자 VIII 억제제의 존재하 혈우병 A의 일상 예방을 위해 2017년 FDA 승인을 받았다.
시판 승인을 받은 이중특이성 항체(판매 중지 포함)
이중특이성 항체 상표명 연구 기관 최초 승인 연도
카투막소맙 Removab Trion Pharma 2009 (EMA)
(2017년 판매중지(delisted))
블리나투모맙 Blincyto Amgen 2014 (FDA)
에미시주맙 Hemlibra Roche 2017 (FDA)
현재 수십 개의 이중특이성 항체/플랫폼과 3개의 시판 의약품에 대한 연구개발 경험이 있지만, 이중특이성 항체의 개발은 복잡한 구조와 다양한 기능적 특성으로 인해 일반 항체에 비해 더 많은 문제점과 과제가 있다. 예를 들어, IgG 유사 이중특이성 항체는 제조 과정에서 중쇄-중쇄 또는 중쇄-경쇄의 불일치 문제에 직면하며, 그 중 가장 대표적인 것이 카투막소맙이다. 카투막소맙은 시판 허가를 받은 최초의 이중특이성 항체이지만, 트리오맙 항체의 복잡한 생산 과정과 이종 항체가 상대적으로 출현하기 쉽다는 면역원성 문제에 주로 반영되는 몇 가지 매우 명백한 한계가 있으며, 2017년에 출시되었으나 상업적 요인으로 인해 판매 중지되었다; 다른 예를 들어, 직렬로 연결된 상이한 항원 결합 단편을 갖는 이중특이성 항체는 불변 영역의 결여, 특히 Fc 단편의 결여로 인해 짧은 반감기를 가지며, 발현 수준 및 발현 후 세포 내 안정성은 일반적으로 종래의 IgG보다 낮다 (Stork R, M
Figure pct00001
ller D, Kontermann R E. A novel tri-functional antibody fusion protein with improved pharmacokinetic properties generated by fusing a bispecific single-chain diabody with an albumin-binding domain from streptococcal protein G [J]. Protein Engineering, Design & Selection, 2007, 20(11): 569-576.). 또한, 이러한 유형의 항체는 대부분 정제 과정에서 친화성 정제 수단(affinity purification means)을 채택하기 어렵기 때문에 정제 과정 및 완제품 내 불순물 분석도 기존의 IgG에 비해 복잡하며(Tan P H, Sandmaier B M, Stayton P S. Contributions of a highly conserved VH/VL hydrogen bonding interaction to scFv folding stability and refolding efficiency [J]. Biophysical journal, 1998, 75(3): 1473-1482.), 그 중 가장 대표적인 것이 블리나투모맙이다. 블리나투모맙은 Fc 단편이 없기 때문에 분자량이 작고, 혈액 내 반감기가 1.25±0.63h에 불과하여 온전한 항체의 반감기보다 훨씬 짧으므로, 유효량에 도달하기 위해서는 4주간의 지속적인 정맥 주사가 필요하며, 시약 사용 시에는 추가로 지속적인 주입 장치를 갖추어야 한다. 또한, 안정성이 좋지 않고 생산 중 응집체를 쉽게 형성하여 제품의 품질에 영향을 미치고 생산 비용을 증가시킨다. 현재 이중특이성 항체는 단일클론항체에 비해 낮은 발현, 낮은 안정성, 복잡한 생산공정, 현저히 높은 연구개발비 등 많은 문제점을 가지고 있어 이중특이성 항체의 개발을 제한하고 있다. 따라서 더 많은 임상 옵션을 제공할 수 있는 새로운 구조의 이중특이성 항체 개발이 시급하다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 부가적인 기능 영역을 갖는 IgG 유사 이중특이성 융합 단백질에 속하는 신규한 구조의 이중특이성 융합 단백질을 제공한다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 부가적인 기능 영역을 갖는 IgG 유사 이중특이성 융합 단백질에 속하는 신규한 구조의 이중특이성 융합 단백질을 제공한다. 구체적으로, 상기 융합 단백질은 전체 길이(전장)(full-length) 면역글로불린 G(IgG)의 힌지 영역에 임의의 펩타이드 링커를 통해 제2 결합 도메인(second binding domain)이 삽입된 구조를 갖고, IgG의 Fab 영역은 융합 단백질의 제1 결합 도메인(first binding domain)이며; 제2 결합 도메인을 삽입한 후, IgG의 중쇄는 융합 단백질의 중쇄이고, IgG의 경쇄는 융합 단백질의 경쇄이고; 제2 결합 도메인은 인간 수용체 또는 리간드(receptor or ligand), 수용체 또는 리간드의 세포외 영역 단편, 결합 도메인 단편, 및 수용체 또는 리간드의 단편 조합으로부터 선택되고; 여기서 수용체 또는 리간드는 자연 신호전달 경로에서 이량체화 또는 다량체화 구조를 형성하여 신호전달 경로를 활성화 또는 억제하고, 제2 결합 도메인 및 제1 결합 도메인은 상이한 표적을 표적화한다. 위와 같은 구조의 이중특이성 융합단백질을 하이바디(Hibody)(Hinge-insertion bispecific antibody) 구조의 융합단백질로 명명하였다 (이하 하이바디 구조 융합 단백질 또는 하이바디라 함).
또한, 제1 결합 도메인은 면역 관문 분자 또는 종양 항원을 표적으로 하여 결합한다.
또한, 면역 관문 분자는 PD-1(프로그램된 세포 사멸 단백질 1), PD-L1(프로그램된 세포 사멸 1 리간드 1), CTLA-4(세포독성 T 림프구 관련 항원-4), LAG-3 (림프구 활성화 유전자-3), FGL1(피브리노겐 유사 단백질 1), TIM-3(T 세포 면역글로불린-3), 갈렉틴-9, TIGIT(Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체), CD155, CD47; Claudin 18.2, Her-2(인간 표피 성장 인자 수용체-2), Mesothelin, BCMA(B 세포 성숙 항원), SSTR2(소마토스타틴 수용체 2), GPRC5D(G-단백질 결합 수용체 패밀리 C 그룹 5 구성원 D), PSMA(전립선 특이적 막 항원), FcRH5(Fc 수용체 유사 단백질 5), CD33, CD123, CD20, A33, CEA(암배아 항원), CD28, DLL3(델타 유사 단백질 3), EGFR(표피 성장 인자 수용체), VEGFR(혈관 내피 성장 인자 수용체), VEGFR2(혈관 내피 성장 인자 수용체 2), VEGF-A(혈관 내피 성장 인자-A), Nectin-4, FGFR(섬유아세포 성장 인자 수용체), C-met , RANKL(핵인자 카파-B 리간드의 수용체 활성제), PDGF(혈소판 유래 성장 인자), PDGFR(혈소판 유래 성장 인자 수용체), PDGFRα(혈소판 유래 성장 인자 수용체 α), DLL4(델타 유사 리간드 4), Ang-1(안지오포이에틴-1) 및 Ang-2(안지오포이에틴-2)을 포함하는 종양 항원을 포함한다.
또한, 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β(변형 성장 인자-β), CTLA-4, VEGF, LAG3, CD27, 4-1BB(CD137), OX40(CD134), CD47, FGL1(피브리노겐 유사 단백질 1), TLT-2(Trem-유사 전사체 2), CD28, HGF(간세포 성장 인자), CSF1(집락 자극 인자 1), CXCL1(CXC 케모카인 리간드 1), CXCL2(CXC 케모카인 리간드 2), CXCL3(CXC 케모카인 리간드 3), CXCL5(CXC 케모카인 리간드 5), CXCL6(CXC 케모카인 리간드 6), CXCL7(CXC 케모카인 리간드 7), CXCL8(CXC 케모카인 리간드 8), CXCL9(CXC 케모카인 리간드 9), CXCL10(CXC 케모카인 리간드 10), CXCCL12 (CXC 케모카인 리간드 12), GITR(글루코코르티코이드 유발 종양 괴사 인자 수용체), EGF(표피 성장 인자) 및 ICOSL(유도성 공동 자극제 리간드)를 표적으로 하여 결합한다.
또한, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-β 수용체(TGF-βR), CD80, CD86, VEGFR, VEGF-트랩, FGL1, CD70, 4-1BBL, OX40L, SIRPα(신호 조절 단백질 α), B7-H3(CD276), C-met, CSF1R(집락 자극 인자 1 수용체), CXCR2(CXC 케모카인 수용체 2), CXCR3(CXC 케모카인 수용체 3), CXCR4(CXC 케모카인 수용체 4), GITRL(글루코코르티코이드 유도 TNF 수용체 리간드), EGFR 및 ICOS(유도성 공동 자극제)이다.
이 중 CD80 및 CD86은 면역글로불린 슈퍼패밀리(IgSF)의 구성원인 막관통 당단백질이다. 성숙한 CD80 분자는 세포외 도메인(ECD)의 208개 아미노산, 막횡단 도메인의 25개 아미노산, 세포내 도메인의 21개 아미노산을 포함하여 254개 아미노산으로 구성된다. 유사하게, 성숙한 CD86 분자는 세포외 도메인의 222개 아미노산, 막횡단 도메인의 20개 아미노산, 세포내 도메인의 61개 아미노산을 포함하여 303개의 아미노산으로 구성된다. CD80 및 CD86의 세포외 도메인은 면역글로불린 V(IgV) 및 면역글로불린 C(IgC) 영역을 포함한다. CD80 및 CD86은 면역글로불린 V(IgV) 영역을 통해 리간드 CD28 및 CTLA-4에 결합한다.. CD28에 결합하는 CD80 및 CD86의 경우, CD80 및 CD86은 항원 유도 T 세포 활성화, 증식 및 조절자 기능 생성에 중요한 조절 효과를 가지며 양성 조절자로서 작용하고, 반면 CD80 및 CD86이 CTLA-4에 결합하는 경우 CD80 및 CD86은 면역 반응을 하향 조절하여 음성 조절자 역할을 한다. 따라서 CD80과 CD86은 T림프구가 활성화될 때 공동자극인자로서 자가면역 모니터링, 체액성 면역반응 및 이식반응에 중요한 역할을 한다. 작용성(agonistic) 항-CD28 항체를 사용하여 T 세포를 활성화하는 것과 달리 CD28의 리간드 CD80을 활성화 인자로 사용하여 T 세포를 활성화하면 심각한 사이토카인 폭풍을 일으키지 않아 환자의 생명을 위험에 빠뜨릴 가능성이 크게 줄어든다.
일부 실시양태에서, CD80 ECD는 인간 CD80(예: 서열번호 134의 인간 CD80) 또는 CD80 이소형 2 또는 이소형 3(서열번호 135 및 136)으로부터 유래된 인간 CD80 ECD로부터 선택된다. CD80 ECD는 CD80 면역글로불린 V(IgV) 영역(CD80-IgV, 서열번호 133)을 포함한다. 한 실시양태에서, CD80 ECD는 인간 CD80 면역글로불린 V 영역 및 C 영역(CD80-IgVIgC, 서열번호 32)을 포함한다. 한 실시양태에서, CD80 ECD는 인간 CD80 ECD이다. 한 실시양태에서, CD80 ECD는 인간 CD80 IgV를 포함한다.
CD80-IgV (서열번호 133):
VIHVTKEVKE VATLSCGHNV SVEELAQTRI YWQKEKKMVL TMMSGDMNIW PEYKNRTIFD 60
ITNNLSIVIL ALRPSDEGTY ECVVLKYEKD AFKREHLAEV TLSVKADFPT PS 112
CD80-IgVIgC (서열번호 32):
VIHVTKEVKE VATLSCGHNV SVEELAQTRI YWQKEKKMVL TMMSGDMNIW PEYKNRTIFD 60
ITNNLSIVIL ALRPSDEGTY ECVVLKYEKD AFKREHLAEV TLSVKADFPT PSISDFEIPT 120
SNIRRIICST SGGFPEPHLS WLENGEELNA INTTVSQDPE TELYAVSSKL DFNMTTNHSF 180
MCLIKYGHLR VNQTFNWN 198
CD80 isotype 1 (서열번호 134):
MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA 60
QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK 120
YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE 180
ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTTKQEHFP 240
DNLLPSWAIT LISVNGIFVI CCLTYCFAPR CRERRRNERL RRESVRPV 288
CD80 isotype 2 (서열번호 135):
MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA 60
QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK 120
YEKDAFKREH LAEVTLSVKA DFPTPSISDF EIPTSNIRRI ICSTSGGFPE PHLSWLENGE 180
ELNAINTTVS QDPETELYAV SSKLDFNMTT NHSFMCLIKY GHLRVNQTFN WNTSFAPRCR 240
ERRRNERLRR ESVRPV 256
CD80 isotype 3 (서열번호 136):
MGHTRRQGTS PSKCPYLNFF QLLVLAGLSH FCSGVIHVTK EVKEVATLSC GHNVSVEELA 60
QTRIYWQKEK KMVLTMMSGD MNIWPEYKNR TIFDITNNLS IVILALRPSD EGTYECVVLK 120
YEKDAFKREH LAEVTLSVKG FAPRCRERRR NERLRRESVR PV 162
또한, 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인은 하기 조합으로부터 선택된다:
(1) 제1 결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, FGL1, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL을 표적으로 하여 이에 결합하거나; 또는
(2) 제1결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 제2결합 도메인은 인간 CTLA-4, VEGF, HGF, EGF, CD28, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(3) 제1 결합 도메인은 CTLA-4를 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 CD28, VEGF, HGF, EGF, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(4) 제1 결합 도메인은 LAG-3을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 CD28, VEGF, HGF, EGF, CTLA-4, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(5) 제1 결합 도메인은 FGL1을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(6) 제1 결합 도메인은 TIM-3을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 VEGF, HGF, EGF, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(7) 제1 결합 도메인은 갈렉틴-9를 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(8) 제1 결합 도메인은 TIGIT를 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, HGF, EGF 또는 VEGF를 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(9) 제1결합 도메인은 CD155를 표적으로 하여 결합하고, 제2결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, HGF, EGF, CD47 또는 CD155를 표적으로 하여 결합하거나; 또는
(10) 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2, 메조텔린, BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, VEGF-A, Nectin-4, FGFR, C-met, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL-4, Ang-1 또는 Ang-2를 표적으로 하고 결합하며, 제2 결합 도메인은 인간 CTLA-4, TGF-β, VEGF, FGL1, LAG3, 4-1BB, OX40, CD27, CD28, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10 또는 ICOSL 를 표적으로 하여 결합한다.
또한, 제1 결합 도메인 및 수용체 또는 리간드는 하기 조합으로부터 선택된다:
(1) 제1 결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 TGF-βRII, VEGFR, LAG-3, SIRPα, TIGIT, C-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS에서 선택되거나; 또는
(2) 제1 결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 CD80, CD86, VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
(3) 제1 결합 도메인은 CTLA-4를 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 CD80, CD86, VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
(4) 제1 결합 도메인은 LAG-3을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 VEGFR, c-MET, EGFR, CD80, CD86, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
(5) 제1 결합 도메인은 FGL1을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, SIRPα, TIGIT, c-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS로부터 선택되거나 ; 또는
(6) 제1 결합 도메인은 TIM-3을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
(7) 제1 결합 도메인은 갈렉틴-9를 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, SIRPα, TIGIT, c-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS로부터 선택되거나; 또는
(8) 제1 결합 도메인은 TIGIT를 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, c-MET, EGFR 또는 VEGFR로부터 선택되거나; 또는
(9) 제1 결합 도메인은 CD155를 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, c-MET, EGFR, SIRPα 또는 TIGIT로부터 선택되거나; 또는
(10) 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2, 메조텔린, BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, Nectin-4, FGFR, c-MET, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL4, Ang-1 또는 Ang-2 을 표적으로 하여 결합하고, 수용체 또는 리간드는 인간 CTLA-4, CD80, CD86, TGF-βRII, VEGFR, FGL1, LAG3, 4-1BB, OX40, CD27, CD28, CD70, c-MET, SIRPα, TIGIT, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS에서 선택된다.
또한, 상기 수용체 또는 리간드의 단편은 세포외 영역의 단편 및 수용체 또는 리간드의 결합 도메인의 단편을 포함한다.
또한, 제1 결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고; 제2결합 도메인은 인간 TGF-βRII의 단편이거나; 또는 제1 결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 CD80 ECD, CD80 IgV 영역, 인간 CD80 IgVIgC, VEGFR1 ECD, VEGFR2 ECD 또는 VEGFR1의 제2 세포외 영역과 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합을 포함하거나; 또는 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2 또는 EGFR을 표적으로 하여 결합하고, 제2 결합 도메인은 인간 CD80 ECD, CD80 IgV 영역, 인간 CD80 IgVIgC, VEGFR1 ECD, VEGFR2 ECD 또는 VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3세포외 영역의 조합으로부터 선택된다.
또한, 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택된다:
(1) 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열, 또는 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열 상의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실된 아미노산 서열을 포함하는, 인간 TGF-βRII; 또는
(2) 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열, 또는 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD80 ECD; 또는
(3) VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합으로서, 서열번호 33에 나타낸 서열, 또는 서열번호 33에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 33에 나타낸 서열 상의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다.
또한, 제2 결합 도메인의 C-말단 또는/및 N-말단에는 펩타이드 링커가 있고, 펩타이드 링커는 2-30개의 아미노산으로 이루어진다.
추가로, 펩타이드 링커는 다음과 같을 수 있다:
(1) (GGGGS)n; 또는
(2) AKTTPKLEEEGEFSEAR(서열번호 80); 또는
(3) AKTTPKLEEEGEFSEARV(서열번호 81); 또는
(4) AKTTPKLGG(서열번호 82); 또는
(5) SAKTTPKLGG(서열번호 83); 또는
(6) SAKTTP(서열번호 84); 또는
(7) RADAAP(서열번호 85); 또는
(8) RADAAPTVS(서열번호 86); 또는
(9) RADAAAAGGPGS(서열번호 87); 또는
(10) RADAAAA(서열번호 88); 또는
(11) SAKTTPKLEEEGEFSEARV(서열번호 89); 또는
(12) ADAAP(서열번호 90); 또는
(13) DAAPTVSIFPP(서열번호 91); 또는
(14) TVAAP(서열번호 92); 또는
(15) TVAAPSVFIFFP(서열번호 93); 또는
(16) QPKAAP(서열번호 94); 또는
(17) QPKAAPSVTLFPP(서열번호 95); 또는
(18) AKTTPP(서열번호 96); 또는
(19) AKTTPPSVTPLAP(서열번호 97); 또는
(20) AKTTAP(서열번호 98); 또는
(21) AKTTAPSVYPLAP(서열번호 99); 또는
(22) ASTKGP(서열번호 100); 또는
(23) ASTKGPSVFPLAP(서열번호 101); 또는
(24) GENKVEYAPALMALS(서열번호 102); 또는
(25) GPAKELTPLKEAKVS(서열번호 103); 또는
(26) GHEAAAVMQVQYPAS(서열번호 104); 또는
(27) GGGGSGGGGSGGGGSA(서열번호 105),
여기서 n은 1, 2, 3 또는 4이고;
n=1일 때, (GGGGS)n은 GGGGS(서열번호 120)이고;
n=2일 때, (GGGGS)n은 GGGGSGGGGS(서열번호 121) 또는 (GGGGS)2이고;
n=3일 때, (GGGGS)n은 GGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 122) 또는 (GGGGS)3이고;
n=4일 때, (GGGGS)n은 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열번호 123) 또는 (GGGGS)4이다.
또한, 삽입된 제2 결합 도메인의 크기는 235, 240, 250, 260, 270, 280, 290 또는 300개의 아미노산을 초과하지 않는다.
또한, 상기 제2 결합 도메인의 삽입 부위는 상기 힌지 영역의 전면 중앙부에 위치하며, 상기 삽입 부위는 면역글로불린의 이황화 결합 형성에 영향을 미치지 않고, 상기 힌지 영역의 전면 중앙부는 일반적으로 231A 이전 부분을 나타낸다. 또한, 삽입 부위 전후의 힌지 영역의 아미노산의 일부가 치환 또는 결실되어 있다. 예를 들어, 힌지 영역은 D221G 및/또는 C220V 돌연변이를 포함한다.
또한, IgG는 포유동물 IgG, 인간화 IgG 및 인간 IgG로부터 선택되고, 포유동물에는 마우스, 래트 및 토끼가 포함되고; 바람직하게는, IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다.
또한, 융합 단백질의 Fc 영역은 비글리코실화 또는 탈글리코실화되거나, 푸코실화가 감소되거나 또는 비푸코실화된다.
또한, IgG는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 이필리무맙이다. 바람직하게는, IgG는 아테졸리주맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 106에 표시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 107에 표시되거나; 또는 IgG가 아벨루맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열이 서열번호 108에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열이 서열번호 109에 제시되거나; 또는 IgG가 더발루맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열이 서열번호 110에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열이 서열번호 111에 제시되거나; 또는 IgG가 니볼루맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열이 서열번호 112에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열이 서열번호 113에 제시되거나; 또는 IgG가 펨브롤리주맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열이 서열번호 114에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열이 서열번호 115에 제시되거나; 또는 IgG가 이필리무맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열이 서열번호 116에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열이 서열번호 117에 제시되거나; 또는 IgG는 세미플리맙이고, IgG의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 118에 제시되고, IgG의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 119에 제시된다.
구체적으로, 본 발명은 인간 PD-L1을 표적화하는 제1 결합 도메인을 갖는 하이바디 구조 융합 단백질을 제공하며, IgG의 Fab 내의 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 하기 서열로 정의된 항체와 동일한 CDR 서열을 가지거나, 하기 서열로 정의된 항체의 CDR에 1-2개의 아미노산 치환을 가지며, 상기 항체는 하기와 같이 정의된다:
(1) 서열번호 66의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열; 및/또는
(2) 서열번호 67의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열.
또한, IgG의 Fab에서 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 다음과 같다:
(1) 중쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1-5 및 서열번호 1-5에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 6-10 및 서열번호 6-10에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 11-15 및 서열번호 11-15에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; 및/또는
(2) 경쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 16-20 및 서열번호 16-20에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 21-25 및 서열번호 21-25에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 26-30 및 서열번호 26-30에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 사용된 상이한 측정 방법 또는 시스템 식별에 따라, 상응하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 CDR 1-3을 표 2에 제시한다.
항-PD-L1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR 1-3의 아미노산 서열
카테고리 시스템 CDR1 CDR2 CDR3
중쇄 Chothia 서열번호1
GFSLSRY		 서열번호 6
WGVGT		 서열번호 11
NWGTADYFDY
AbM 서열번호 2
GFSLSRYSVH		 서열번호 7
MIWGVGTTD		 서열번호 12
NWGTADYFDY
Kabat 서열번호 3RYSVH 서열번호 8
MIWGVGTTDYNSALKS		 서열번호 13
NWGTADYFDY
Contact 서열번호 4SRYSVH 서열번호 9
WLGMIWGVGTTD		 서열번호 14
ARNWGTADYFD
IMGT 서열번호 5GFSLSRYS 서열번호 10
IWGVGTT		 서열번호 15
ARNWGTADYFDY
경쇄 Chothia 서열번호 16
RASKSVHTSGYSYMH		 서열번호 21
LASNLES		 서열번호 26
QHSGELPYT
AbM 서열번호 17
RASKSVHTSGYSYMH		 서열번호 22
LASNLES		 서열번호 27
QHSGELPYT
Kabat 서열번호 18RASKSVHTSGYSYMH 서열번호 23
LASNLES		 서열번호 28
QHSGELPYT
Contact 서열번호 19HTSGYSYMHWY 서열번호 24
LLIYLASNLE		 서열번호 29
QHSGELPY
IMGT 서열번호 20KSVHTSGYSY 서열번호 25
LAS		 서열번호 30
QHSGELPYT
또한, 상기 융합 단백질은 하기 CDR 서열을 포함한다,
(1) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 1, 6, 11, 또는 서열번호 1, 6, 11에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 16, 21, 26, 또는 서열번호 16, 21, 26에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(2) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 2, 7, 12, 또는 서열번호 2, 7, 12에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 17, 22, 27, 또는 서열번호: 17, 22, 27에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(3) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 3, 8, 13 또는 서열번호 3, 8, 13에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 18, 23, 28, 또는 서열번호 18, 23, 28에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(4) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 4, 9, 14, 또는 서열번호 4, 9, 14에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 19, 24, 29, 또는 서열번호: 19, 24, 29에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(5) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 5, 10, 15 또는 서열번호 5, 10, 15에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 20, 25, 30, 또는 서열번호 20, 25, 30에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이다.
또한, 융합 단백질의 중쇄에서 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 3, 8, 13이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열 18, 23, 28이다.
또한, 융합 단백질의 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 서열은 다음과 같다.
(1) 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 66 에 나타낸 서열, 또는 서열번호 66과 동일한 CDR 1-3을 갖고, 서열번호 66과 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖고; 및/또는
(2) 경쇄 가변영역은 서열번호 67에 나타낸 서열, 또는 서열번호 67과 동일한 CDR 1-3을 갖고, 서열번호 67과 비교하여 상동성이80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖는다.
보다 구체적으로, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같다:
(1) 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 72 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 72와 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
(2) 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 73 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 73과 비교하여 상동성이80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖는다.
또한, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같다.
(1) 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 72와 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 가지거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
(2) 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 73과 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는다.
구체적으로, 본 발명은 인간 PD-1을 표적화하는 제1 결합 도메인을 갖는 하이바디 구조 융합 단백질을 제공하며, 여기서 Fab 내의 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 하기 서열로 정의된 항체와 동일한 CDR 서열, 또는 하기 서열로 정의된 항체의 CDR에 1-2개의 아미노산 치환을 가지며, 상기 항체는 하기와 같이 정의된다:
(1) 중쇄 가변영역의 아미노산 서열은 서열번호 64로 표시되며; 및/또는
(2) 경쇄 가변영역의 아미노산 서열은 서열번호 65로 표시된다.
또한, 융합 단백질에서 Fab의 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 다음과 같다:
(1) 중쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 34-38 및 서열번호 34-38에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 39-43 및 서열번호 39-43에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 44-48 및 서열번호 44-48에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; 및/또는
(2) 경쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 49-53 및 서열번호 49-53에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 54-58 및 서열번호 54-58에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 59-63 및 서열번호 59-63에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 사용된 상이한 측정 방법 또는 시스템 식별에 따라, 상응하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역 CDR 1-3을 표 3에 제시한다.
항-PD-1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 CDR 1-3의 아미노산 서열
카테고리 시스템 CDR1 CDR2 CDR3
중쇄 Chothia 서열번호 34
GITFSNS		 서열번호 39
WYDGSK		 서열번호 44
NDDY
AbM 서열번호 35
GITFSNSGMH		 서열번호 40
VIWYDGSKRY		 서열번호 45
NDDY
Kabat 서열번호 36NSGMH 서열번호 41
VIWYDGSKRYYADSVKG		 서열번호 46
NDDY
Contact 서열번호 37SNSGMH 서열번호 42
WVAVIWYDGSKRY		 서열번호 47
ATNDD
IMGT 서열번호 38GITFSNSG 서열번호 43
IWYDGSKR		 서열번호 48
ATNDDY
경쇄 Chothia 서열번호 49
RASQSVSSYLA		 서열번호 54
DASNRAT		 서열번호 59
QQSSNWPRT
AbM 서열번호 50
RASQSVSSYLA		 서열번호 55
DASNRAT		 서열번호 60
QQSSNWPRT
Kabat 서열번호 51RASQSVSSYLA 서열번호 56
DASNRAT		 서열번호 61
QQSSNWPRT
Contact 서열번호 52SSYLAWY 서열번호 57
LLIYDASNRA		 서열번호 62
QQSSNWPR
IMGT 서열번호 53QSVSSY 서열번호 58
DAS		 서열번호 63
QQSSNWPRT
또한, 융합 단백질의 가변 영역의 CDR 1-3은 다음과 같이 정의된다:
(1) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 34, 39, 44 또는 서열번호 34, 39, 44에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 49, 54, 59, 또는 서열번호 49, 54, 59에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(2) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 35, 40, 45, 또는 서열번호 35, 40, 45에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 50, 55, 60, 또는 서열번호 50, 55, 60에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(3) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 36, 41, 46 또는 서열번호 36, 41, 46에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 51, 56, 61, 또는 서열번호 51, 56, 61에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(4) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 37, 42, 47, 또는 서열번호 37, 42, 47에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 52, 57, 62, 또는 서열번호 52, 57, 62에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
(5) 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 38, 43, 48 또는 서열번호 38, 43, 48에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 53, 58, 63, 또는 서열번호 53, 58, 63에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이다.
또한, 융합 단백질의 가변 영역의 CDR 1-3은 다음과 같이 정의된다: 중쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 36, 41, 46이고; 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 51, 56, 61이다.
또한, 융합 단백질의 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열은 다음과 같다.
(1) 중쇄 가변영역은 서열번호 64 에 나타낸 서열, 또는 서열번호 64와 동일한 CDR 1-3을 갖고, 서열번호 64와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열이고; 및/또는
(2) 경쇄 가변영역은 서열번호 65 에 나타낸 서열, 또는 서열번호 65와 동일한 CDR 1-3을 갖고 서열번호 65와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열이다.
보다 구체적으로, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같이 정의된다:
(1) 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 68 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 68와 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
(2) 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 69 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 69와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖는다.
또한, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같이 정의된다:
(1) 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 68과 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
(2) 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 69와 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는다.
보다 구체적으로, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같이 정의된다:
(1) 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 70에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 70과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
(2) 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 71에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 71과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 갖는다.
또한, 융합 단백질의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 다음과 같이 정의된다:
(1) 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 70과 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 가지거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
(2) 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 71과 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는다.
본 발명은 또한 상기 융합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구조체를 제공하며, 바람직하게는 핵산 구조체는 벡터이다.
본 발명은 또한 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 핵산 구조체 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공하며, 바람직하게 상기 세포는 원핵 세포, 진핵 세포, 효모 세포, 포유동물 세포, 대장균 세포 또는 CHO 세포, NS0 세포, Sp2/0 세포 또는 BHK 세포이다.
본 발명은 또한 상기 융합 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 치료 또는 완화를 필요로 하는 대상체에게 상기 융합 단백질 또는 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 종양 또는 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 종양 또는 암의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 상기 융합 단백질, 폴리뉴클레오티드, 핵산 구조체 또는 벡터, 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 종양 또는 암은 고형 종양 또는 비-고형 종양을 포함한다.
본 발명은 또한 상기 융합 단백질을 포함하는 진단 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 핵산 구조체의 발현이 가능한 조건 하에 숙주 세포를 배양하고, 배양물로부터 생산된 융합 단백질을 회수하는 것을 포함하는, 융합 단백질의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에서 제공되는 하이바디 구조 융합 단백질은 힌지 영역에 제2 결합 도메인이 삽입되어 있기 때문에 IgG와 동일한 발현 및 생산 이점을 가지며, 기존의 IgG 발현 플랫폼 및 정제 플랫폼에 원활하게 적용할 수 있고 이는 후속 개발 비용을 크게 줄인다. 구체적으로, 기존의 이중특이성 항체 플랫폼으로 구축한 이중특이성 항체에 비해 하이바디 플랫폼으로 구축한 이중특이성 항체는 발현량이 높고 경쇄와 중쇄의 미스매치 문제가 없어 항체 생산비용을 크게 절감할 수 있다. 또한, 두 개의 힌지 영역에 일정 크기의 제2 결합 도메인을 삽입하여, 융합 단백질의 Fab 영역의 결합 활성 및 단백질의 안정성에 영향을 미치지 않을 뿐만 아니라, 안정성과 더 긴 반감기를 얻는다. 특히, 표적 결합 부위에 대한 제2 결합 도메인의 결합 활성은 대응하는 표적에 대한 상응하는 가용성 천연 결합 단편 단량체의 결합 활성과 비교하여 상당히 개선되며, 이는 선택된 제2 결합 도메인의 수용체 또는 리간드가 신호 전달 경로를 활성화하거나 억제하기 위해 자연 신호경로에서 이량체화 또는 다량체화 구조를 형성한다. 또한 제2 결합 도메인이 힌지 영역에 삽입될 때, 힌지 영역에서 공간적 위치 관계는 상응하는 수용체 또는 리간드 또는 그의 단편의 이량체화 형성을 촉진하고, 이를 통해 천연 신호 경로를 모방함으로써 보다 현저하게 개선된 결합 활성이 생성되어 융합 단백질이 가용성 수용체 또는 리간드 또는 그의 단편에 비해 크게 증가된 활성화 또는 억제 능력을 갖도록 한다. 또한, 2개의 결합 도메인의 합리적인 조합을 통해 수용체 억제 또는 수용체 활성화의 표적을 유연하게 선택하여 효과적인 시너지 효과를 달성할 수 있다. 본 발명에서 제공되는 이중특이성 융합 단백질은 두 개의 표적 약물 또는 종래 기술의 이중특이성 항체를 별도로 투여하는 경우에 비해, 특히 다양한 종양 및 암에서 질병의 진행을 효과적으로 치료하거나 조절하는데 보다 유의한 질병 치료 효과를 갖는다.
본 발명의 융합 단백질은 IgG와 동일한 발현 및 생산 이점을 가지며, 융합 단백질의 Fab 영역의 결합 활성에 영향을 미치지 않아 안정성을 더욱 향상시키고 더 높은 반감기를 얻을 수 있다. 또한, 제2 결합 구조 도메인의 표적 결합 부위에 대한 결합 활성은, 가용성 천연 결합 단편에 상응하는 표적에 대한 단량체의 결합 활성에 비해 현저히 개선되었다.
도 1 은 하이바디 구조 융합 단백질의 개략도이다.
도 2는 마우스 결장암 모델 종양에 대한 Hib-PDV 및 그 대조군의 억제 곡선을 나타낸다.
도 3은 마우스 결장암 종양에 대한 Hib-PDC 및 그 대조군의 억제 곡선을 나타낸다.
도 4는 10-100 nM 수준에서 IFN-γ 인자의 세포 분비 촉진에 대한 Hib-PLT와 그 대조군의 비교 차트이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 여기에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명과 관련된 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 당업자는 Dictionary of Cell and Molecular Biology, third edition, 1999, Academic Press; the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, second edition, 2002, CRC Press; and the Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, revised edition, 2000 , Oxford University Press을 참고할 수 있다.
본 발명과 관련된 아미노산은 IUPAC-IUB 생화학적 명명 위원회에서 권장하는 일반적으로 알려진 3문자 기호 또는 단일 문자 기호로 나타낼 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오티드는 일반적으로 인식되는 한 글자 코드로 나타낼 수 있다.
본 발명에서, 항체 가변 도메인의 상보성 결정 영역(CDR)의 결정 또는 넘버링 방법은 IMGT, Kabat(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th edition, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda MD. (1991)에 기재된 것과 같이), Chothia, AbM 및 콘택트법을 포함한다.
본 발명의 목적과 관련하여, 2개의 핵산 또는 아미노산 서열 사이의 "상동성", "동일성" 또는 "유사성"은 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 최적의 정렬 후 얻은 두 시퀀스 간의 비교 백분율을 지칭한다.
백분율은 오로지 통계적이며 두 시퀀스 간의 차이는 무작위로 분포되고, 전체 길이를 포함한다. 두 개의 핵산 또는 아미노산 서열 간의 비교는 일반적으로 최적의 방식으로 정렬한 후 이들 서열을 비교함으로써 수행되며, 세그먼트 또는 "비교 창"을 통해 수행될 수 있다. 수동 구현 외에도 Smith와 Waterman(1981)의 로컬 상동성 알고리즘을 이용하거나 [Ad. App. Math. 2: 482], Neddleman 및 Wunsch(1970)의 로컬 상동성 알고리즘을 이용하거나 [J. MoI. Biol. 48: 443], Pearson과 Lipman(1988)의 유사성 탐색 방법을 이용하거나 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 2444), 및 이러한 알고리즘을 사용하는 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여(GAP, BESTFIT, FASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, 또는BLAST N or BLAST P comparison software을 통해) 서열 비교를 위한 최적의 정렬을 수행할 수 있다.
폭넓게 정의된 바와 같이, 본 발명에 관련된 면역글로불린은 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어진 항체 활성을 갖는 동물성 단백질을 지칭한다. 이는 면역 효과 분자의 중요한 부류이며 고등 동물 면역계의 림프구에 의해 생성되는 단백질이고, 항원의 유도에 의해 항체로 변형될 수 있다. 구조가 다르기 때문에 IgG, IgA, IgM, IgD 및 IgE의 5가지 유형으로 나눌 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 관련된 면역글로불린은 IgG이다.
폭넓게 정의된 바와 같이, 본 발명에 관련된 수용체는 세포막 또는 세포 내에 존재하고 세포 외부의 특정 신호 분자에 결합하여 세포 내에서 일련의 생화학적 반응을 활성화할 수 있는 일종의 특이 단백질이며, 세포가 외부 자극 하에서 상응하는 효과를 일으키도록 한다. 수용체에 결합하는 생물학적 활성 물질을 종합적으로 리간드라고 한다. 수용체와 리간드의 결합은 분자 형태 변화를 초래하고, 이는 세포간 신호 전달, 세포간 접착, 내포 작용(endocytosis) 등을 매개하는 것과 같은 세포 반응을 유발한다.
본 발명에 관련된 이중특이성 융합 단백질은 힌지 영역에 삽입된 제2 결합 도메인을 갖는 면역글로불린의 구조에 기초한다. 따라서, 본 발명에 관련된 이중특이성 융합 단백질은 2개의 결합 도메인을 갖는다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시될 것이다. 하기 실시예는 본 발명의 추가적인 정교화 및 설명을 위한 것이며, 본 발명을 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다는 점에 유의해야 한다.
실시예 1. 단백질의 구축
이 실시예에서, 하기 단백질 분자는 당업계의 통상적인 방법을 사용하여 제조되었고, 당업계의 통상적인 방법에 따라 일시적으로 또는 안정적으로 발현되었다:
(1) 3개의 하이바디 이중특이성 융합 단백질: Hib-PLT, Hib-PDC 및 Hib-PDV;
(2) 대조군 단백질 1-3: WO2015/118175의 이관능성(bifunctional) 분자 구조에 따라 구축됨;
(3) 기타 대조군 단백질: TGF-β-R-His, VEGF-R-His, CD80-His, PD-L1 대조군 항체.
융합 단백질의 표적 조합
융합단백질 코드 제1결합 도메인의 표적 제2결합 도메인의 표적 제2결합 도메인 단편 삽입 펩타이드 링커
Hib-PLT PD-L1 TGF-β TGF-βRII 세포외 영역 단편 (GGGGS)3
Hib-PDC PD-1 CD28 CD80 (GGGGS)3
Hib-PDV PD-1 VEGF VEGFR1의 제2 세포외 영역과 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합 (GGGGS)3
대조군 단백질 1 PD-L1 TGF-β TGF-βRII 세포외 영역 단편 (GGGGS)3
대조군 단백질 2 PD-1 CD28 CD80 (GGGGS)3
대조군 단백질 3 PD-1 VEGF VEGFR1의 제2 세포외 영역과 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합 (GGGGS)3
융합 단백질 Hib-PLT의 중쇄 및 경쇄의 핵산 서열 및 아미노산 서열은 다음과 같다:
융합 단백질 Hib-PLT 중쇄의 핵산 서열(서열번호 78):
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCCGGACCAGGACTGGTGAAGCCATCCGAGACCCTGAGCCTGACCTGTACAGTGTCCGGCTTCAGCCTGTCTAGGTACAGCGTGCACTGGATCAGACAGCCACCTGGCAAGGGACTGGAGTGGCTGGGCATGATCTGGGGCGTGGGCACCACAGACTACAACTCTGCTCTGAAGTCCAGACTGACCATCAGCAAGGATACATCTAAGAATCAGTTCAGCCTGAAGCTGTCCAGCGTGACCGCCGCTGACACAGCCGTGTACTATTGCGCTCGCAACTGGGGCACCGCCGACTACTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACAGTGTCTTCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAGGCGGGGGAGGCAGCGGCGGCGGAGGAAGCGGGGGCGGAGGTAGC ACCATCCCTCCACACGTGCAGAAGAGCGTGAACAATGACATGATCGTCACCGACAACAACGGCGCCGTCAAGTTCCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGACGTGAGGTTCTCCACGTGCGACAACCAGAAGAGCTGTATGAGCAACTGCAGCATCACATCCATCTGCGAAAAACCCCAGGAAGTGTGCGTCGCCGTCTGGCGGAAGAACGACGAGAACATCACACTGGAGACCGTGTGCCACGACCCCAAACTGCCCTACCACGACTTCATCCTGGAGGACGCCGCCAGCCCAAAGTGCATCATGAAAGAGAAGAAGAAGCCGGGCGAGACTTTCTTCATGTGCTCCTGCAGCTCCGACGAGTGCAACGATAATATCATCTTCAGCGAAGAATACAACACATCTAACCCAGAC GGAGGGGGCGGATCCGGGGGCGGCGGAAGCGGCGGGGGGGGCAGCACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
참고: 밑줄 친 굵은 서열은 TGF-βRII 핵산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PLT 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 72):
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGFSLS RYSVHWIRQP PGKGLEWLGM IWGVGTTDYN 60
SALKSRLTIS KDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCARNWG TADYFDYWGQ GTTVTVSSAS 120
TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL 180
YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKV EPKS CDK GGGGSGG GGSGGGGS TI 240
PPHVQKSVNN DMIVTDNNGA VKFPQLCKFC DVRFSTCDNQ KSCMSNCSIT SICEKPQEVC 300
VAVWRKNDEN ITLETVCHDP KLPYHDFILE DAASPKCIMK EKKKPGETFF MCSCSSDECN 360
DNIIFSEEYN TSNPD GGGGS GGGGSGGGGS THTCPPCPAP ELLGGP SVFL FPPKPKDTLM 420
ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD 480
WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF 540
YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL 600
HNHYTQKSLS LSPGK 615
참고: 볼드체 및 밑줄친 단편은 힌지 영역 서열이고, 펩타이드 링커는 이탤릭체이며, 밑줄과 볼드체 서열은 TGF-βRII 아미노산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PLT 경쇄의 핵산 서열(서열번호 79):
GATATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGCTTCCCTGGCCGTGTCCCCAGGACAGAGGGCCACCATCACATGTCGGGCTTCCAAGAGCGTGCACACAAGCGGCTACTCTTATATGCATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCCCCTAAGCTGCTGATCTATCTGGCTTCCAACCTGGAGAGCGGAGTGCCAGCTAGGTTCTCTGGCTCCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACAATCAATCCTGTGGAGGCCAACGATACAGCTAATTACTATTGCCAGCACTCCGGAGAGCTGCCATACACCTTCGGCGGAGGCACAAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
융합 단백질 Hib-PLT 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 73):
DIVLTQSPAS LAVSPGQRAT ITCRASKSVH TSGYSYMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES 60
GVPARFSGSG SGTDFTLTIN PVEANDTANY YCQHSGELPY TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF 120
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS 180
STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC 218
융합 단백질 Hib-PDC의 중쇄 및 경쇄의 핵산 서열 및 아미노산 서열은 다음과 같다:
융합 단백질 Hib-PDC 중쇄의 핵산 서열(서열번호 74):
CAGGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGCGTCGTCCAGCCTGGCCGTAGCCTGCGGCTGGACTGTAAGGCTAGCGGAATCACGTTCAGCAACAGCGGAATGCACTGGGTCAGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTCGAATGGGTCGCCGTGATCTGGTACGACGGGAGCAAGAGATACTACGCAGATTCAGTGAAGGGCCGTTTCACAATCAGCCGTGACAACTCGAAGAACACACTGTTCCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCAGAAGACACAGCAGTCTACTACTGCGCTACAAATGACGACTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTGAGCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCGGTGGCGGCGGAAGCGGCGGCGGAGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGC GTGATCCATGTCACGAAGGAGGTCAAAGAAGTGGCCACCCTCAGCTGCGGTCACAACGTCAGCGTGGAAGAGTTGGCCCAGACCAGAATCTACTGGCAGAAGGAGAAGAAGATGGTCTTGACCATGATGAGCGGCGACATGAACATCTGGCCAGAGTACAAGAATAGAACTATCTTCGACATCACCAATAACCTGAGCATCGTGATCCTCGCTTTGCGTCCGAGCGACGAAGGCACCTACGAGTGCGTAGTGCTAAAGTACGAGAAAGACGCCTTCAAGCGGGAGCACCTGGCAGAAGTAACCCTGAGCGTGAAGGCAGACTTCCCAACGCCTAGCATCTCCGACTTCGAGATCCCCACAAGCAACATCCGGCGGATCATCTGTAGCACCTCCGGGGGTTTCCCCGAGCCTCACCTGTCCTGGCTCGAGAACGGCGAGGAGCTGAACGCCATCAACACCACCGTGAGCCAGGACCCCGAGACAGAACTGTACGCCGTGAGCTCCAAGCTCGACTTCAACATGACCACAAATCACAGCTTCATGTGCCTCATCAAGTACGGACACCTGCGGGTGAATCAGACGTTCAACTGGAAC GGCGGGGGGGGTAGCGGCGGCGGGGGCTCAGGTGGGGGGGGCTCAAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATAG
참고: 밑줄과 볼드체 서열은 CD80 핵산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PDC 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 68):
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSKRYY 60
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND DYWGQGTLVT VSSASTKGPS 120
VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS 180
VVTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESGGGGSGG GGSGGGGS VI HVTKEVKEVA 240
TLSCGHNVSV EELAQTRIYW QKEKKMVLTM MSGDMNIWPE YKNRTIFDIT NNLSIVILAL 300
RPSDEGTYEC VVLKYEKDAF KREHLAEVTL SVKADFPTPS ISDFEIPTSN IRRIICSTSG 360
GFPEPHLSWL ENGEELNAIN TTVSQDPETE LYAVSSKLDF NMTTNHSFMC LIKYGHLRVN 420
QTFNWN GGGG SGGGGSGGGG SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV 480
TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY 540
KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV 600
EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK 660
SLSLSLGK 668
참고: 펩타이드 링커는 이탤릭체이며 밑줄과 굵은 글씨체는 CD80 아미노산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PDC 경쇄의 핵산 서열(서열번호 75):
GAGATCGTGCTGACACAGAGCCCAGCCACTCTGTCACTGTCCCCAGGAGAAAGGGCTACTCTGTCTTGCCGGGCAAGCCAGTCTGTCTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGGCTCCTAGACTGCTGATCTACGACGCAAGTAACAGAGCCACCGGCATCCCCGCACGCTTCAGTGGCTCAGGCTCCGGAACAGACTTTACTCTGACCATCTCTAGTCTGGAGCCTGAAGATTTCGCCGTGTACTATTGTCAGCAGAGCTCTAATTGGCCTAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
융합 단백질 Hib-PDC 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 69):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA 60
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP 120
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT 180
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 214
융합 단백질 Hib-PDV의 중쇄 및 경쇄의 핵산 서열 및 아미노산 서열은 다음과 같다:
융합 단백질 Hib-PDV 중쇄의 핵산 서열(서열번호 76):
CAGGTGCAGCTCGTGGAGAGCGGGGGAGGCGTCGTCCAGCCTGGCCGTAGCCTGCGGCTGGACTGTAAGGCTAGCGGAATCACGTTCAGCAACAGCGGAATGCACTGGGTCAGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTCGAATGGGTCGCCGTGATCTGGTACGACGGGAGCAAGAGATACTACGCAGATTCAGTGAAGGGCCGTTTCACAATCAGCCGTGACAACTCGAAGAACACACTGTTCCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCAGAAGACACAGCAGTCTACTACTGCGCTACAAATGACGACTACTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACCGTGAGCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCGGTGGCGGCGGAAGCGGCGGCGGAGGCAGCGGCGGAGGCGGCAGC GGTAGACCATTCGTAGAGATGTACAGCGAAATCCCCGAAATCATCCACATGACTGAAGGAAGGGAGCTCGTCATCCCCTGCCGGGTTACGTCACCTAACATCACTGTTACTCTGAAGAAGTTCCCACTCGACACTTTGATCCCTGATGGAAAACGCATCATCTGGGACAGCAGAAAGGGCTTCATCATCTCAAATGCAACGTACAAAGAAATCGGACTCCTGACCTGTGAAGCAACAGTCAATGGACATTTGTATAAGACAAACTATCTCACACATCGACAGACCAATACAATCATCGATGTGGTTCTGAGCCCGTCTCATGGAATCGAACTATCTGTTGGAGAAAAGCTCGTCCTGAATTGTACAGCAAGAACTGAACTGAATGTGGGAATCGACTTCAACTGGGAATACCCTTCTTCGAAGCATCAGCATAAGAAACTCGTAAACCGAGACCTAAAGACCCAGTCTGGGAGCGAGATGAAGAAATTCTTGAGCACCCTGACTATCGATGGTGTAACCCGGAGCGACCAGGGATTGTACACCTGTGCAGCATCCAGCGGGCTGATGACCAAGAAGAACAGCACATTCGTCAGGGTCCATGAACCC GGCGGGGGGGGTAGCGGCGGCGGGGGCTCAGGTGGGGGGGGCTCAAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAATAG
참고: 밑줄과 굵은 글씨체는 VEGFR 핵산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PDV 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 70):
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSKRYY 60
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND DYWGQGTLVT VSSASTKGPS 120
VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS 180
VVTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESGGGGSGG GGSGGGGS GR PFVEMYSEIP 240
EIIHMTEGRE LVIPCRVTSP NITVTLKKFP LDTLIPDGKR IIWDSRKGFI ISNATYKEIG 300
LLTCEATVNG HLYKTNYLTH RQTNTIIDVV LSPSHGIELS VGEKLVLNCT ARTELNVGID 360
FNWEYPSSKH QHKKLVNRDL KTQSGSEMKK FLSTLTIDGV TRSDQGLYTC AASSGLMTKK 420
NSTFVRVHEP GGGGSGGGGS GGGGSKYGPP CPPCPAPEFL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR 480
TPEVTCVVVD VSQEDPEVQF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ FNSTYRVVSV LTVLHQDWLN 540
GKEYKCKVSN KGLPSSIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSQ EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS 600
DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSRLTVDKS RWQEGNVFSC SVMHEALHNH 660
YTQKSLSLSL GK 672
참고: 펩타이드 링커는 이탤릭체이며 밑줄과 굵은 글씨체는 VEGF 아미노산 서열이다.
융합 단백질 Hib-PDV 경쇄의 핵산 서열(서열번호 77):
GAGATCGTGCTGACACAGAGCCCAGCCACTCTGTCACTGTCCCCAGGAGAAAGGGCTACTCTGTCTTGCCGGGCAAGCCAGTCTGTCTCCAGCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGACAGGCTCCTAGACTGCTGATCTACGACGCAAGTAACAGAGCCACCGGCATCCCCGCACGCTTCAGTGGCTCAGGCTCCGGAACAGACTTTACTCTGACCATCTCTAGTCTGGAGCCTGAAGATTTCGCCGTGTACTATTGTCAGCAGAGCTCTAATTGGCCTAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAAGTCGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
융합 단백질 Hib-PDV 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 71):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA 60
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP 120
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT 180
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 214
대조군 단백질 1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열
대조군 단백질 1 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 124):
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGFSLS RYSVHWIRQP PGKGLEWLGM IWGVGTTDYN 60
SALKSRLTIS KDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCARNWG TADYFDYWGQ GTTVTVSSAS 120
TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL 180
YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPELLGGPS 240
VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST 300
YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT 360
KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ 420
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGKGG GGSGGGGSGG GGS TIPPHVQ KSVNNDMIVT 480
DNNGAVKFPQ LCKFCDVRFS TCDNQKSCMS NCSITSICEK PQEVCVAVWR KNDENITLET 540
VCHDPKLPYH DFILEDAASP KCIMKEKKKP GETFFMCSCS SDECNDNIIF SEEYNTSNPD 600
참고: 펩타이드 링커는 이탤릭체이며 밑줄과 굵은 글씨체는 TGF-βRII 아미노산 서열이다.
대조군 단백질 1 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 125):
DIVLTQSPAS LAVSPGQRAT ITCRASKSVH TSGYSYMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES 60
GVPARFSGSG SGTDFTLTIN PVEANDTANY YCQHSGELPY TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF 120
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS 180
STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC 218
대조군 단백질 2의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열
대조군 단백질 2 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 126):
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSKRYY 60
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND DYWGQGTLVT VSSASTKGPS 120
VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS 180
VVTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESKYGPPCP PCPAPEFLGG PSVFLFPPKP 240
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STYRVVSVLT 300
VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC 360
LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV 420
MHEALHNHYT QKSLSLSLGK GGGGSGGGGS GGGGS VIHVT KEVKEVATLS CGHNVSVEEL 480
AQTRIYWQKE KKMVLTMMSG DMNIWPEYKN RTIFDITNNL SIVILALRPS DEGTYECVVL 540
KYEKDAFKRE HLAEVTLSVK ADFPTPSISD FEIPTSNIRR IICSTSGGFP EPHLSWLENG 600
EELNAINTTV SQDPETELYA VSSKLDFNMT TNHSFMCLIK YGHLRVNQTF NWN 653
참고: 펩타이드 링커는 이탤릭체이며 밑줄과 굵은 글씨체는 CD80 아미노산 서열이다.
대조군 단백질 2 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 127):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA 60
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP 120
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT 180
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 214
대조군 단백질 3의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열
대조군 단백질 3 중쇄의 아미노산 서열(서열번호 128):
QVQLVESGGG VVQPGRSLRL DCKASGITFS NSGMHWVRQA PGKGLEWVAV IWYDGSKRYY 60
ADSVKGRFTI SRDNSKNTLF LQMNSLRAED TAVYYCATND DYWGQGTLVT VSSASTKGPS 120
VFPLAPCSRS TSESTAALGC LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS 180
VVTVPSSSLG TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESKYGPPCP PCPAPEFLGG PSVFLFPPKP 240
KDTLMISRTP EVTCVVVDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN STYRVVSVLT 300
VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC 360
LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV 420
MHEALHNHYT QKSLSLSLGK GGGGSGGGGS GGGGS GRPFV EMYSEIPEII HMTEGRELVI 480
PCRVTSPNIT VTLKKFPLDT LIPDGKRIIW DSRKGFIISN ATYKEIGLLT CEATVNGHLY 540
KTNYLTHRQT NTIIDVVLSP SHGIELSVGE KLVLNCTART ELNVGIDFNW EYPSSKHQHK 600
KLVNRDLKTQ SGSEMKKFLS TLTIDGVTRS DQGLYTCAAS SGLMTKKNST FVRVHEP 657
참고: 펩타이드 링커는 이탤릭체이며 밑줄과 굵은 글씨체는 VEGFR 아미노산 서열이다.
대조군 단백질 3 경쇄의 아미노산 서열(서열번호 129):
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA 60
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SSNWPRTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP 120
SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT 180
LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 214
TGF-β-R-His
TGF-β-R-His는 His-태깅된 TGF-βRII 세포외 영역 단편이고, 여기서 TGF-βRII 세포외 영역 단편(서열번호 137)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
TIPPHVQKSV NNDMIVTDNN GAVKFPQLCK FCDVRFSTCD NQKSCMSNCS ITSICEKPQE 60
VCVAVWRKND ENITLETVCH DPKLPYHDFI LEDAASPKCI MKEKKKPGET FFMCSCSSDE 120
CNDNIIFSEE YNTSNPD 137
VEGF-R-His 아미노산 서열
VEGF-R-His는 VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 His-태그된 조합 단편이고, 여기서 VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합 단편의 아미노산 서열(서열번호 130)은 다음과 같다:
GRPFVEMYSE IPEIIHMTEG RELVIPCRVT SPNITVTLKK FPLDTLIPDG KRIIWDSRKG 60
FIISNATYKE IGLLTCEATV NGHLYKTNYL THRQTNTIID VVLSPSHGIE LSVGEKLVLN 120
CTARTELNVG IDFNWEYPSS KHQHKKLVNR DLKTQSGSEM KKFLSTLTID GVTRSDQGLY 180
TCAASSGLMT KKNSTFVRVH EP 202
CD80-His 아미노산 서열
CD80-His는 His-태깅된 CD80 단편이며, 여기서 CD80 단편(서열번호 32)의 아미노산 서열은 다음과 같다:
VIHVTKEVKE VATLSCGHNV SVEELAQTRI YWQKEKKMVL TMMSGDMNIW PEYKNRTIFD 60
ITNNLSIVIL ALRPSDEGTY ECVVLKYEKD AFKREHLAEV TLSVKADFPT PSISDFEIPT 120
SNIRRIICST SGGFPEPHLS WLENGEELNA INTTVSQDPE TELYAVSSKL DFNMTTNHSF 180
MCLIKYGHLR VNQTFNWN 198
실시예 2. CHO 발현
A. 세포 해동 및 확장:
CHO 숙주 세포를 10mL의 배양 부피 및 37.0℃, 200rpm, 8% CO2및 80% 습도의 배양 조건으로 해동시켰다. 해동 후 세포 밀도는 2.82 x 105 cells/mL이었고 생존율은 95.41%였다.
72시간의 세포 확장 및 배양 후, 생존 세포의 밀도는 2.22 x 106개 세포/mL이었고, 생존율은 98.32%였다.
세포 재주입 작업을 위해 세포를 5 x 105개 세포/mL로 재주입했다. 48시간 연속 배양 후 생존 세포의 밀도는 2Х106 cells/mL이었고 생존율은 98.68%였다.
세포를 5 x 105개 세포/웰로 6웰 플레이트에 2mL/웰의 배양 부피로 시딩하고, 이산화탄소 인큐베이터(배양 조건: 37℃, 8% CO2)에 넣어, 다음 날의 착생 및 형질감염을 위해 밤새도록 유지하였다.
B. 형질감염
형질감염 시약은 LTX 및 Plus 시약을 포함하는 Lipofectamine® LTX 시약(Invitrogen, 카탈로그 번호 15338-100)을 사용했다.
형질감염 절차: 6-웰 플레이트에서 배지 교체 및 형질감염 복합체 제조: LTX: 9㎕/웰 + 플라스미드: 2.5㎍/웰 + 플러스: 2.5㎕/웰. 형질감염 복합체를 6웰 플레이트에 250㎕/웰로 첨가하였다. 6-웰 플레이트의 각 웰의 배지는 세포 형질감염 5시간 후에 교체하였다. 형질감염 48시간 후, 상청액을 취하여 이중 항원 ELISA 방법으로 상청액의 항체 함량을 검출하였다.
C. 회분식 배양 및 유가식 배양
형질감염 48시간 후, 6-웰 플레이트의 세포를 소화시켜 세포 배양 튜브에 수집하고, 3 x 105개 세포/mL의 세포 밀도에서 현탁액에서 성장하도록 적응시켰다. 세포 생존율이 약 90%로 회복되면 Hib-PLT 발현 세포 풀과 대조군 단백질 1 발현 세포 풀을 회분식 배양으로 배양하고, Hib-PDC, 대조군 단백질 2, Hib-PDV 및 대조군 단백질 3을 유가 배양하였다.
배치 배양: 세포는 3 x 105개 세포/mL의 세포 밀도, 30mL의 부피 및 37.0°C, 200rpm, 8% CO2 및 80% 습도 배양 조건에서 TPP 세포 배양 튜브에서 배양되었고, 세포 생존력과 대사를 매일 모니터링했다. 생존율이 <60%가 될 때 배양을 종료하고, 배양 완료 후 세포 상층액을 채취하여 농도를 검출하였다.
유가식(Fed-batch) 배양: 세포는 3 x 105개 세포/mL의 세포 밀도, 30mL의 부피 및 37.0°C, 200rpm, 8% CO2 및 80% 습도의 배양 조건에서 TPP 세포 배양 튜브에서 배양되었다. 세포 농축 배지는 Glc가 2-6g/L로 조절되는 동안 특정 유가식 계획(표 5 참조)에 따라 제공되었다. 생존율이 <60%가 될 때까지 배양을 종료하고, 배양 완료 후 세포 상층액을 채취하여 농도를 검출하였다.
유가(Fed-Batch) 계획
0일 3Х105/ml, 배양 부피30 ml
4、6、8、10、12일 900 μL CellBoost7A、90 μL CellBoost7B
16일 VCD 및 생존력 검출, 샘플 비축 및 실험 종료
표 6은 하이바디 이중특이성 융합 단백질 Hib-PLT, Hib-PDC 및 Hib-PDV 및 이들의 상응하는 대조군 단백질의 발현 수준 결과를 나타낸다. 이러한 결과는 Hib-PLT 발현 수준 증가의 상대 값이 상응하는 대조군 단백질과 비교하여 52.85% 증가했음을 보여주며; Hib-PDC 발현 수준 증가의 상대값은 상응하는 대조군 단백질과 비교하여 33.43% 증가하였고; Hib-PDV 발현 수준 증가의 상대값은 상응하는 대조군 단백질과 비교하여 25.6% 증가하여, 본 발명에서 제공되는 하이바디 이중특이성 융합 단백질의 발현 수준이 상응하는 대조군 단백질의 발현 수준보다 현저히 우수함을 나타내고, 본 발명에서 제공되는 이중특이성 항체는 예상치 못한 기술적 효과를 가짐을 알 수 있다.
이중특이성 항체의 발현 수준
카테고리 배양 방법 발현 레벨 증가 상대값
Hib-PLT 배치 배양 188 mg/L 52.85%
대조군 단백질1 배치 배양 123 mg/L
Hib-PDC 유가식 배양 349.59 mg/L 33.43%
대조군 단백질 2 유가식 배양 262 mg/L
Hib-PDV 유가식 배양 243.95 mg/L 25.6%
대조군 단백질 3 유가식 배양 194.22 mg/L
참고: 증가의 상대값 = (본 발명에서 제공되는 이중특이성 융합 단백질의 발현 수준 - 해당 대조군 단백질의 발현 수준) / 해당 대조군 단백질의 발현 수준.
실시예 3. 결합 활성의 측정
1. Hib-PLT 결합 활성의 측정:
(1) 코팅 항원: TGF-β1을 코팅 완충액으로 2㎍/ml로 희석하고, 96-웰 플레이트에 100㎕/웰로 첨가하고, 2-8℃에서 밤새 방치하였다;
(2) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(3) 플레이트 차단: 플레이트를 차단 용액으로 사용하는 3% BSA-PBST로 300μl/웰로 차단하고 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
(4) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(5) 시료의 첨가 : 시료의 각 농도점은 다음과 같다. 각 농도 지점의 샘플을 100μl/well로 96-웰 플레이트에 순차적으로 첨가하고, 각 농도 지점은 2개의 복제 웰과 평행하게 하고 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
실험군 S01 S02 S03 S04 S05 S06 S07 S08 S09 S10 S11
Hib-PLT 555.556 55.556 5.556 1.852 0.617 0.206 0.069 0.023 0.008 0.001 0.000
TGF-β-R-His 64516.000 6451.600 645.160 215.053 71.684 23.895 7.965 2.655 0.885 0.088 0.009
(단위: nM)
(6) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(7) 2차 항체의 첨가:
Hib-PLT 샘플 웰: 염소-항-인간-Fc-HRP를 1:5000으로 희석하고 100 μl/웰로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
TGF-β-R-His 웰: Anti-His-HRP를 1:5000으로 희석하고 100㎕/웰로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
(8) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 5회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(9) 발색: 플레이트는 발색 용액으로 사용된 TMB를 사용하여 100μl/웰에서 2분 동안 발색되었다.
(10) 발색 종료: 플레이트는 정지 용액으로 사용된 2M H2SO4를 사용하여 50 μl/웰에서 발색을 위해 종료되었다.
(11) 판독: 흡광도 값은 MD 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 각각 450/655 nm에서 판독되었다. 시험 샘플의 농도를 가로축으로, 흡광도 값을 세로축으로 하여 4-PL 곡선을 그리는 플롯을 만들고 소프트웨어에서 자동으로 EC50 값을 제공했다.
2. Hib-PDV 결합 활성의 측정:
(1) 코팅 항원: VEGF를 코팅 완충액으로 1㎍/ml로 희석하고, 96-웰 플레이트에 100㎕/웰로 첨가하고, 2-8℃에서 밤새 방치하였다;
(2) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(3) 플레이트 차단: 플레이트를 차단 용액으로 사용하는 3% BSA-PBST로 300μl/웰로 차단하고 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
(4) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(5) 시료의 첨가 : 시료의 각 농도점은 다음과 같다. 각 농도 지점의 샘플을 100μl/well로 96-웰 플레이트에 순차적으로 첨가하고, 각 농도 지점은 2개의 복제 웰과 평행하게 하고 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
실험군 S01 S02 S03 S04 S05 S06 S07 S08 S09 S10 S11
Hib-PDV 555.556 55.556 5.556 1.852 0.617 0.206 0.069 0.023 0.005 0.001 0.000
VEGFR-His 43478.300 4347.830 434.783 144.928 48.309 16.103 5.368 1.789 0.358 0.036 0.004
(단위: nM)
(6) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(7) 2차 항체의 첨가:
Hib-PDV 샘플 웰: 염소-항-인간-Fc-HRP를 1:5000으로 희석하고 100 μl/웰로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
VEGFR-His 웰: Anti-His-HRP를 1:5000으로 희석하여 100㎕/well로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C에서 2시간 동안 인큐베이션했다.
(8) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 5회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(9) 발색: 플레이트는 발색 용액으로 사용된 TMB를 사용하여 100μl/웰에서 2분 동안 발색되었다.
(10) 발색 종료: 플레이트는 정지 용액으로 사용된 2M H2SO4를 사용하여 50 μl/웰에서 발색을 위해 종료되었다.
(11) 판독: 흡광도 값은 MD 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 각각 450/655 nm에서 판독되었다. 시험 샘플의 농도를 가로축으로, 흡광도 값을 세로축으로 하여 4-PL 곡선을 그리는 플롯을 만들고 소프트웨어에서 자동으로 EC50 값을 제공했다.
3. Hib-PDC 결합 활성의 측정:
(1) 코팅 항원: CTLA-4 단백질을 200μg/mL 농도의 멸균수 1mL로 재용해하고, 코팅 완충액으로 20μg/ml로 희석하고, 96-웰 플레이트에 100μl/웰로 첨가한 후 2-8℃에서 밤새 방치하였다;
(2) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(3) 플레이트 차단: 플레이트를 차단 용액으로 사용하는 3% BSA-PBST로 300μl/웰로 차단하고 37°C에서 2시간 ± 20분 동안 인큐베이션했다.
(4) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(5) 샘플 첨가: 비오틴화된 샘플을 PBST로 희석하였다. 시료의 각 농도점은 다음과 같다. 각 농도 지점의 샘플을 100μl/well로 96-웰 플레이트에 순차적으로 첨가하고, 각 농도 지점은 2개의 복제 웰과 평행했으며, 블랭크 웰은 PBST였고, 플레이트를 37°C에서 2시간 ± 20분 동안 인큐베이션했다.
실험군 S01 S02 S03 S04 S05 S06 S07 S08 S09 S10
Hib-PDC 1000000 100000 10000 3333.333 1111.111 370.370 123.457 41.152 13.717 1.372
CD80-His 1000000 100000 10000 3333.333 1111.111 370.370 123.457 41.152 13.717 1.372
(단위: nM)
(6) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350㎕/웰로 3회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(7) 2차 항체의 첨가:
Hib-PDC 샘플 웰 및 CD80-His 웰: Streptavidin-HRP를 1:2000으로 희석하여 100μl/well로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C에서 1시간 ± 10분 동안 인큐베이션했다.
(8) 플레이트 세척: 플레이트를 용리액으로 사용된 PBST로 350 ㎕/웰로 5회 자동 세척하고 세척 후 가볍게 두드려 건조시켰다.
(9) 발색: TMB Double Slow 기판을 100㎕/웰로 첨가하고 플레이트를 차광된 실온에서 6분 동안 발색시켰다.
(10) 발색 종료: 플레이트는 정지 용액으로 사용된 2M H2SO4를 사용하여 50 μl/웰에서 발색을 위해 종료되었다.
(11) 판독: 흡광도 값은 MD 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 각각 450/655 nm에서 판독되었다. 시험 샘플의 농도를 가로축으로, 흡광도 값을 세로축으로 하여 4-PL 곡선을 그리는 플롯을 만들고 소프트웨어에서 자동으로 EC50 값을 제공했다. (표 10 참조).
각 테스트 그룹의 EC50 값
실험군 EC50 값
Hib-PLT 0.164 nM
TGF-β-R-His 11.60 nM
Hib-PDV 0.061 nM
VEGFR-His 2154 nM
Hib-PDC 24.36 nM
CD80-His 50.69 nM
결합 활성의 측정 결과는, Hib-PLT와 TGF-β 수용체 단량체의 비교 결과, Hib-PLT의 EC50 값은 0.164 nM이고, TGF-β 수용체 단량체의 EC50 값은 11.60 nM이며, Hib-PLT의 결합 활성은 TGF-β 수용체 단량체의 결합 활성보다 약 70배 더 우수하였다. Hib-PDV와 VEGF 수용체 단량체 간의 비교 결과, Hib-PDV는 0.061nM의 EC50 값을 갖고, VEGF 수용체 단량체는 2154nM의 EC50 값을 가지며, Hib-PDV 결합 활성은 VEGF 수용체 단량체의 결합 활성보다 약 35,311배 더 우수하였다. Hib-PDC와 CD80 단량체 간의 비교 결과, Hib-PDC의 EC50 값은 24.36nM이고, CD80 단량체의 EC50 값은 50.69 nM이며 Hib-PDC의 결합 활성은 CD80 단량체보다 약 2배 더 우수하였다. 즉, 본 발명에서 제공하는 이중항체 모델로 구축된 Hib-PLT, Hib-PDV, Hib-PDC의 결합 활성은 상응하는 단량체보다 훨씬 우수하였다.
실시예 4. C57BL/6J-hPD-1 마우스에서 결장암 MC38 세포의 피하 이식된 종양에 대한 Hib-PDV의 효능
32마리의 7주령, C57BL/6J 인간화 PD-1 형질전환 마우스(Shanghai Model Organisms Center, Inc.)를 수집하였다. 0.1 mL의 결장암 MC38 세포 현탁액(1 x 106 세포/마우스)을 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 접종하였다. 종양이 약 100 mm3로 성장했을 때, 마우스를 종양 크기에 따라 무작위로 비히클(PBS) 그룹, Hib-PDV(1.25 mg/kg) 그룹, Hib-PDV(2.5 mg/kg) 그룹 및 Hib-PDV(5 mg/kg) 그룹으로 각각 총 4개 그룹으로 나누었으며, 각 그룹은 8마리의 종양 보유 마우스를 갖는다. 주 1회 복강 내 투여하여 총 3회 투여하였으며, 투여 기간 동안 종양의 장경 및 단경 및 체중을 주 2회 측정하였다. 투여 후 21일째에 약효 평가를 위해 종양 성장 억제율(TGIRTV)을 표 11과 같이 계산하였다.
마우스 결장암의 종양 억제 활성에 대한 Hib-PDV 투여 요법
그룹 투여군 용량
(mg/kg) 		투여 경로 투여 주기 투여량
1 비히클 -- i.p. QWХ3 10 mL/kg
2 Hib-PDV 5 i.p. QWХ3 10 mL/kg
3 Hib-PDV 2.5 i.p. QWХ3 10 mL/kg
4 Hib-PDV 1.25 i.p. QWХ3 10 mL/kg
계산 공식:
종양 부피: TV = D1ХD2 2/2, 여기서 D1 및 D2는 각각 종양의 장직경 및 단직경을 나타냄;
상대적 종양 부피: RTV = TVT/TV1, 여기서 TV1은 투여 전 종양 부피이고, TVT는 각 측정에서의 종양 부피임;
상대적 종양 억제율: TGIRTV(%) = (1-TRTV/CRTV) x 100%, 여기서 TRTV는 투여군 또는 양성 대조군의 RTV를 나타내고, CRTV는 음성 대조군의 RTV를 나타낸다.
결과 및 결론: 마우스 결장암 모델에 대한 Hib-PDV의 종양 억제 효과를 표 12 및 도 2에 나타내었고, 표 12는 마우스 결장암 모델에 대한 Hib-PDV의 종양 부피 및 종양 성장 억제율을 나타내고, 도 2는 투여 후 종양 성장의 그래프이다. 실험 결과는 Hib-PDV가 마우스 결장암 모델 종양에 상당한 억제 효과가 있음을 보여준다.
마우스 결장암 모델의 종양 부피 및 종양 억제율에 대한 Hib-PDV의 효과(평균+SEM)
투여군 종양 부피(TV, mm 3 ) TGIRTV (%)
D0 D21
비히클 86+10 1299+174 --
Hib-PDV (5 mg/kg) 86+10 675+218 46
Hib-PDV (2.5 mg/kg) 86+8 755+305 47
Hib-PDV (1.25 mg/kg) 85+8 1088+259 14
실시예 5. C57BL/6J-hPD-1 마우스에서 형질전환 hPD-L1 MC38 세포의 피하 이식된 종양에 대한 Hib-PDC의 효능
32마리의 7-9주령 인간화 C57BL/6J 인간화 PD-1 트랜스제닉 암컷 마우스(Shanghai Model Organisms Center, Inc.)를 수집하였다. 0.1 mL의 형질전환 hPD-L1 MC38 세포 현탁액(1 x 106 세포/마우스)을 마우스의 오른쪽 앞다리 뒤쪽에 피하 이식하였다. 종양이 약 100 mm3로 성장했을 때, 마우스를 종양 크기에 따라 무작위로 비히클(PBS) 그룹, Hib-PDC(1.25 mg/kg) 그룹, Hib-PDC(2.5 mg/kg) 그룹 및 Hib-PDC(5 mg/kg) 그룹으로 각각 총 4개 그룹으로 나누었으며, 각 그룹은 8마리의 종양 보유 마우스를 갖는다. 주 1회 복강 내 투여하여 총 3회 투여하였으며, 투여 기간 동안 종양의 장경 및 단경 및 체중을 주 2회 측정하였다. 투여 후 21일째에 약효 평가를 위해 종양 성장 억제율(TGIRTV)을 표 13과 같이 계산하였다.
마우스 결장암의 종양 억제 활성에 대한 Hib-PDC의 투여 요법
그룹 투여군 Dosage (mg/kg) 투여 경로 투여량 투여 주기
1 비히클(PBS) -- i.p. 10 ml/kg QWХ3
2 Hib-PDC 1.25 i.p. 10 ml/kg QWХ3
3 Hib-PDC 2.5 i.p. 10 ml/kg QWХ3
4 Hib-PDC 5 i.p. 10 ml/kg QWХ3
계산 공식:
종양 부피: TV = D1ХD2 2/2, 여기서 D1 및 D2는 각각 종양의 장직경 및 단직경을 나타냄;
상대적 종양 부피: RTV = TVT/TV1, 여기서 TV1은 투여 전 종양 부피이고, TVT는 각 측정에서의 종양 부피임;
상대적 종양 억제율: TGIRTV(%) = (1-TRTV/CRTV) x 100%, 여기서 TRTV는 투여군 또는 양성 대조군의 RTV를 나타내고, CRTV는 음성 대조군의 RTV를 나타낸다.
결과 및 결론: 마우스 결장암 모델에 대한 Hib- PDC 의 종양 억제 효과를 표 14 및 도 3에 나타내었고, 표 14는 마우스 결장암 모델에 대한 Hib- PDC 의 종양 부피 및 종양 성장 억제율을 나타내고, 도 3은 투여 후 종양 성장의 그래프이다. 실험 결과는 Hib-PDC가 쥐의 피하 이식된 대장암 종양에 상당한 억제 효과가 있음을 보여준다.
마우스 결장암 모델의 종양 부피 및 종양 억제율에 대한 Hib-PDC의 효과(평균+SEM)
군 용량
(mg/kg) 		종양 부피 (TV, mm 3 ) TGIRTV (%)
D0 D21
PBS -- 101±10 2319±517 --
Hib-PDC 1.25 101±8 1577±211 31
Hib-PDC 2.5 101±9 813±74 63
Hib-PDC 5 101±9 541±179 77
실시예 6. 동종 림프구의 혼합 반응에서 사이토카인 분비에 대한 Hib-PLT의 효과
CD4+ T 세포를 활성화하는데 Hib-PLT의 역할을 평가하기 위해, 세포 상청액에서 사이토카인 IFN-γ의 농도를 검출하고자 ELISA 방법을 사용하였다. 공여자 1의 단핵 림프구를 시험관 내 DC 세포 급속 성숙 시험관 키트(cat: CT-004, StemEry)로 성숙한 수지상 세포로 유도하고, 세포를 48시간 후에 수집하고 2 x 105 cells/mL로 희석하였다. 공여자2의 CD4+ T 세포를 마그네틱 비드(EasySep?? Human CD4+ T Cell Enrichment Kit, StemCell, cat: 19052)로 강화하고 1 x 106 cells/mL로 희석했다. 성숙한 수지상 세포와 CD4+ T 세포를 1:1의 부피비로 혼합하고, 혼합된 세포 현탁액을 100 μL/well의 부피로 96-웰 플레이트에 첨가하였다. Hib-PLT, PD-L1 대조군 항체 + TGF-β Trap(병용 약물), PD-L1 대조군 항체, TGF-β Trap 및 인간 IgG1(Biolegend)을 혼합 세포 현탁액이 포함된 96-웰 플레이트에 0.01-100nM의 최종 농도로 첨가하였다. 그 다음 플레이트를 37°C, 5% CO2 인큐베이터에 120시간 동안 놓고 2000rpm에서 5분 동안 원심분리하고 150-200μL의 세포 상청액을 수집했다. ELISA 키트(Human IL-2 Quantikine ELISA Kit, R&D, cat: S2050; Human IFN-gamma Quantikine ELISA Kit, R&D, cat: SIF50C)를 사용하여 동종 림프구의 혼합 반응 상청액에서 IFN-γ 인자를 검출했다. 그룹 간의 차이를 분석하는 데에 One-way ANOVA를 사용하였다.
결과 및 결론: 도 4에 도시된 바와 같이, IFN-γ 인자의 세포 분비를 촉진하는 10-100 nM 농도에서 Hib-PLT의 수준은 PD-L1 대조군 항체와 TGF-β 트랩의 병용 투여 군보다 유의하게 높았다(p<0.05). 이러한 결과는 10-100nM의 농도 수준에서 Hib-PLT가 혼합 림프구 반응에서 CD4+ T 세포의 활성화를 촉진하는 데 있어 복합 약물 그룹보다 더 우수함을 보여준다.
본 발명은 다양한 특정 실시예에 의해 예시되었다. 다만, 본 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명이 각각의 특정한 실시예에 한정되는 것은 아니며, 통상의 기술자는 본 발명의 범위 내에서 다양한 변경 또는 수정을 할 수 있고, 본 명세서의 여러 곳에서 언급된 각각의 기술적 특징은 본 발명의 본질 및 범위를 벗어나지 않고 서로 결합될 수 있다. 이러한 변경 및 수정은 본 발명의 범위 내에 있다.
<110> RemeGen Co., Ltd. <120> BISPECIFIC FUSION PROTEIN AND APPLICATION THEREOF <130> PI220009 <150> CN 202010199036.2 <151> 2020-03-20 <160> 137 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR1 <400> 1 Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR1 <400> 2 Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser Val His 1 5 10 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR1 <400> 3 Arg Tyr Ser Val His 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR1 <400> 4 Ser Arg Tyr Ser Val His 1 5 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR1 <400> 5 Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ser 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain variable region CDR2 <400> 6 Trp Gly Val Gly Thr 1 5 <210> 7 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catttgtata agacaaacta tctcacacat 960 cgacagacca atacaatcat cgatgtggtt ctgagcccgt ctcatggaat cgaactatct 1020 gttggagaaa agctcgtcct gaattgtaca gcaagaactg aactgaatgt gggaatcgac 1080 ttcaactggg aatacccttc ttcgaagcat cagcataaga aactcgtaaa ccgagaccta 1140 aagacccagt ctgggagcga gatgaagaaa ttcttgagca ccctgactat cgatggtgta 1200 acccggagcg accagggatt gtacacctgt gcagcatcca gcgggctgat gaccaagaag 1260 aacagcacat tcgtcagggt ccatgaaccc ggcggggggg gtagcggcgg cgggggctca 1320 ggtggggggg gctcaaaata tggtccccca tgcccaccat gcccagcacc tgagttcctg 1380 gggggaccat cagtcttcct gttcccccca aaacccaagg acactctcat gatctcccgg 1440 acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc 1500 aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 1560 ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac 1620 ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc 1680 atctccaaag ccaaagggca gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag 1740 gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc 1800 gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1860 cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc 1920 aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1980 tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggtaaatag 2019 <210> 77 <211> 645 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hib-PDV light chain nucleic acid sequence <400> 77 gagatcgtgc tgacacagag cccagccact ctgtcactgt ccccaggaga aagggctact 60 ctgtcttgcc gggcaagcca gtctgtctcc agctacctgg cctggtatca gcagaagccc 120 ggacaggctc ctagactgct gatctacgac gcaagtaaca gagccaccgg catccccgca 180 cgcttcagtg gctcaggctc cggaacagac tttactctga ccatctctag tctggagcct 240 gaagatttcg ccgtgtacta ttgtcagcag agctctaatt ggcctagaac cttcggccag 300 ggcaccaaag tcgagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga 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caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1500 gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1560 ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1620 tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1680 accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1740 gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1800 cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaatga 1848 <210> 79 <211> 657 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Hib-PLT light chain nucleic acid sequence <400> 79 gatatcgtgc tgacccagtc tccagcttcc ctggccgtgt ccccaggaca gagggccacc 60 atcacatgtc gggcttccaa gagcgtgcac acaagcggct actcttatat gcattggtac 120 cagcagaagc ccggccagcc ccctaagctg ctgatctatc tggcttccaa cctggagagc 180 ggagtgccag ctaggttctc tggctccggc agcggcaccg actttaccct gacaatcaat 240 cctgtggagg ccaacgatac agctaattac tattgccagc actccggaga gctgccatac 300 accttcggcg gaggcacaaa ggtggagatc aagcgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657 <210> 80 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker <400> 80 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala Arg 1 5 10 15 <210> 81 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker <400> 81 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Glu Glu Gly Glu Phe Ser Glu Ala Arg 1 5 10 15 Val <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker <400> 82 Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 <210> 83 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide linker <400> 83 Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Gly Gly 1 5 10 <210> 84 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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Ipilimumab heavy chain amino acid sequence <400> 116 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 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Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 130 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGF-R fragment <400> 130 Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His 1 5 10 15 Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro 20 25 30 Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro 35 40 45 Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser 50 55 60 Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val 65 70 75 80 Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn 85 90 95 Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser 100 105 110 Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn 115 120 125 Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His 130 135 140 Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met 145 150 155 160 Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp 165 170 175 Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys 180 185 190 Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Pro 195 200 <210> 131 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human TGF-betaRII <400> 131 Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe 1 5 10 15 Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr 20 25 30 Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys 35 40 45 Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu 50 55 60 Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile 65 70 75 80 Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys 85 90 95 Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn 100 105 110 Thr Ser Asn Pro Asp 115 <210> 132 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human TGF-betaRII <400> 132 Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr 1 5 10 15 Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile 20 25 30 Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp 35 40 45 Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr 50 55 60 His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys 65 70 75 80 Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser 85 90 95 Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser 100 105 110 Asn Pro Asp 115 <210> 133 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD80 ECD <400> 133 Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys 1 5 10 15 Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp 20 25 30 Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn 35 40 45 Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn 50 55 60 Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr 65 70 75 80 Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His 85 90 95 Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser 100 105 110 <210> 134 <211> 288 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD80 <400> 134 Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr 1 5 10 15 Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys 20 25 30 Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu 35 40 45 Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile 50 55 60 Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp 65 70 75 80 Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr 85 90 95 Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly 100 105 110 Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg 115 120 125 Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr 130 135 140 Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile 145 150 155 160 Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu 165 170 175 Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp 180 185 190 Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met 195 200 205 Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg 210 215 220 Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro 225 230 235 240 Asp Asn Leu Leu Pro Ser Trp Ala Ile Thr Leu Ile Ser Val Asn Gly 245 250 255 Ile Phe Val Ile Cys Cys Leu Thr Tyr Cys Phe Ala Pro Arg Cys Arg 260 265 270 Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg Pro Val 275 280 285 <210> 135 <211> 256 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD80 <400> 135 Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr 1 5 10 15 Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys 20 25 30 Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu 35 40 45 Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile 50 55 60 Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp 65 70 75 80 Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr 85 90 95 Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly 100 105 110 Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg 115 120 125 Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr 130 135 140 Pro Ser Ile Ser Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile 145 150 155 160 Ile Cys Ser Thr Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu 165 170 175 Glu Asn Gly Glu Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp 180 185 190 Pro Glu Thr Glu Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met 195 200 205 Thr Thr Asn His Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg 210 215 220 Val Asn Gln Thr Phe Asn Trp Asn Thr Ser Phe Ala Pro Arg Cys Arg 225 230 235 240 Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg Pro Val 245 250 255 <210> 136 <211> 162 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD80 <400> 136 Met Gly His Thr Arg Arg Gln Gly Thr Ser Pro Ser Lys Cys Pro Tyr 1 5 10 15 Leu Asn Phe Phe Gln Leu Leu Val Leu Ala Gly Leu Ser His Phe Cys 20 25 30 Ser Gly Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu 35 40 45 Ser Cys Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile 50 55 60 Tyr Trp Gln Lys Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp 65 70 75 80 Met Asn Ile Trp Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr 85 90 95 Asn Asn Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly 100 105 110 Thr Tyr Glu Cys Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg 115 120 125 Glu His Leu Ala Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Gly Phe Ala Pro Arg 130 135 140 Cys Arg Glu Arg Arg Arg Asn Glu Arg Leu Arg Arg Glu Ser Val Arg 145 150 155 160 Pro Val <210> 137 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TGF-betaRII extracellular region fragment <400> 137 Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val 1 5 10 15 Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys 20 25 30 Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn 35 40 45 Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala 50 55 60 Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His 65 70 75 80 Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser 85 90 95 Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe 100 105 110 Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser 115 120 125 Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp 130 135

Claims (45)

  1. 이중특이성 융합 단백질로서,
    상기 융합 단백질은 제2 결합 도메인이 전체 길이의 면역글로불린 G(IgG)의 힌지 영역에 임의의 펩타이드 링커를 통해 삽입된 구조를 갖고, 상기 IgG의 Fab 영역이 제1 결합 도메인이며;
    상기 제2 결합 도메인이 삽입된 후, 상기 IgG의 중쇄는 상기 융합 단백질의 중쇄이고, 상기 IgG의 경쇄는 상기 융합 단백질의 경쇄이고;
    상기 제2 결합 도메인은 인간 수용체 또는 리간드, 상기 수용체 또는 리간드의 단편, 및 상기 수용체 또는 리간드의 단편 조합으로부터 선택되고;
    상기 수용체 또는 리간드는 자연 신호전달 경로에서 이량체화 또는 다량체화 구조를 형성하여 신호전달 경로를 활성화 또는 억제하고, 상기 제2 결합 도메인 및 제1 결합 도메인은 상이한 표적을 표적화하는 것인, 이중특이성 융합 단백질.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 면역 관문 분자 또는 종양 항원을 표적으로 하여 결합하는 것인, 융합 단백질.
  3. 제2항에 있어서, 상기 면역 관문 분자는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, LAG-3, FGL1, TIM-3, 갈렉틴-9, TIGIT, CD155 및 CD47; 그리고 클라우딘 18.2, HER-2, 메조텔린, BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, VEGF-A, Nectin-4, FGFR, C-met, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL4, Ang-1 및 Ang-2을 포함하는 종양 항원을 포함하는 것인, 융합 단백질.
  4. 제3항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, CTLA-4, VEGF, LAG3, CD27, 4-1BB, OX40, CD47, FGL1, TLT-2, CD28, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, GITR, EGF 및 ICOSL을 표적으로 하여 결합하는 것인, 융합 단백질.
  5. 제4항에 있어서, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-β 수용체(TGF-βR), CD80, CD86, VEGFR, VEGF-트랩, FGL1, CD70, 4-1BBL, OX40L, SIRPα, B7-H3 , C-met, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, GITRL, EGFR 및 ICOS인 것인, 융합 단백질.
  6. 제4항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인 및 제2 결합 도메인은 하기 조합으로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
    (1) 상기 제1결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, FGL1, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (2) 상기 제1결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2결합 도메인은 인간 CTLA-4, VEGF, HGF, EGF, CD28, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (3) 상기 제1 결합 도메인은 CTLA-4를 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 CD28, VEGF, HGF, EGF, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (4) 상기 제1 결합 도메인은 LAG-3을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 CD28, VEGF, HGF, EGF, CTLA-4, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (5) 상기 제1 결합 도메인은 FGL1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL 을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (6) 상기 제1 결합 도메인은 TIM-3을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 VEGF, HGF, EGF, LAG3, CD27, 4-1BB 또는 OX40을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (7) 상기 제1 결합 도메인은 갈렉틴-9를 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL 을 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (8) 상기 제1 결합 도메인은 TIGIT를 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, HGF, EGF 또는 VEGF를 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (9) 상기 제1 결합 도메인은 CD155를 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-β, VEGF, HGF, EGF, CD47 또는 CD155를 표적으로 하여 결합하거나; 또는
    (10) 상기 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2, 메조텔린, BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, VEGF-A, 넥틴-4, FGFR, C-met, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL-4, Ang-1 또는 Ang-2를 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 CTLA-4, TGF-β, VEGF, FGL1, LAG3, 4-1BB, OX40, CD27, CD28, CD47, CD155, HGF, CSF1, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL12, EGF 또는 ICOSL 를 표적으로 하여 결합한다.
  7. 제6항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인 및 상기 수용체 또는 리간드가 하기 조합으로부터 선택되는 융합 단백질:
    (1) 상기 제1 결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 TGF-βRII, VEGFR, LAG-3, SIRPα, TIGIT, C-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS 로부터 선택되거나; 또는
    (2) 상기 제1 결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 CD80, CD86, VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
    (3) 상기 제1 결합 도메인은 CTLA-4를 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 CD80, CD86, VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
    (4) 상기 제1 결합 도메인은 LAG-3을 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 VEGFR, c-MET, EGFR, CD80, CD86, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
    (5) 상기 제1 결합 도메인은 FGL1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, SIRPα, TIGIT, c-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS로부터 선택되거나; 또는
    (6) 상기 제1 결합 도메인은 TIM-3을 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 VEGFR, c-MET, EGFR, FGL1, CD70, 4-1BBL 또는 OX40L로부터 선택되거나; 또는
    (7) 상기 제1 결합 도메인은 갈렉틴-9를 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, SIRPα, TIGIT, c-MET, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS로부터 선택되거나; 또는
    (8) 상기 제1 결합 도메인은 TIGIT를 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, c-MET, EGFR 또는 VEGFR로부터 선택되거나; 또는
    (9) 상기 제1 결합 도메인은 CD155를 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 TGF-βRII, VEGFR, c-MET, EGFR, SIRPα 또는 TIGIT로부터 선택되거나; 또는
    (10) 상기 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2, 메조텔린, BCMA, SSTR2, GPRC5D, PSMA, FCRH5, CD33, CD123, CD20, A33, CEA, CD28, DLL3, EGFR, VEGFR, VEGFR2, Nectin-4, FGFR, c-MET, RANKL, PDGF, PDGFR, PDGFRα, DLL4, Ang-1 또는 Ang-2를 표적으로 하여 결합하고, 상기 수용체 또는 리간드는 인간 CTLA-4, CD80, CD86, TGF-βRII, VEGFR, FGL1, LAG3, 4-1BB, OX40, CD27, CD28, CD70, c-MET, SIRPα, TIGIT, CSF1R, CXCR2, CXCR3, CXCR4, EGFR 또는 ICOS에서 선택된다.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 수용체 또는 리간드의 단편이 세포외 영역의 단편 및 상기 수용체 또는 리간드의 결합 도메인의 단편을 포함하는 것인, 융합 단백질.
  9. 제7항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인은 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고; 상기 제2 결합 도메인은 인간 TGF-βRII의 단편이거나; 또는 상기 제1 결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 CD80 ECD, CD80 IgV 영역, 인간 CD80 IgVIgC, VEGFR1 ECD, VEGFR2 ECD 또는 VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합으로부터 선택되거나; 또는 상기 제1 결합 도메인은 클라우딘 18.2, HER-2 또는 EGFR을 표적으로 하여 결합하고, 상기 제2 결합 도메인은 인간 CD80 ECD, CD80 IgV 영역, 인간 CD80 IgVIgC, VEGFR1 ECD, VEGFR2 ECD 또는 VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3세포외 영역의 조합으로부터 선택되는 것인, 융합 단백질.
  10. 제9항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인은 하기로부터 선택되는 것인 융합 단백질:
    (1) 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열, 또는 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 31, 131 또는 132에 나타낸 서열 상의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실된 아미노산 서열을 포함하는, 인간 TGF-βRII; 또는
    (2) 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열, 또는 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 32 또는 133에 나타낸 서열에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 CD80 ECD; 또는
    (3) VEGFR1의 제2 세포외 영역 및 VEGFR2의 제3 세포외 영역의 조합으로서, 서열번호 33에 나타낸 서열, 또는 서열번호 33에 나타낸 서열과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열, 또는 서열번호 33에 나타낸 서열 상의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 조합.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 제1 결합 도메인이 PD-L1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 IgG의 Fab에서 상기 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR이 하기 서열로 정의된 항체와 동일한 CDR 서열을 가지거나, 또는 하기 서열로 정의된 항체의 CDR 에 1-2개의 아미노산 치환을 갖고, 상기 항체는 다음과 같이 정의되는 것인, 융합 단백질:
    (1) 서열번호 66의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열; 및/또는
    (2) 서열번호 67의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열.
  12. 제11항에 있어서, 상기 IgG의 Fab에서 상기 중쇄 가변영역의 CDR 및/또는 상기 경쇄 가변영역의 CDR은 다음을 특징으로 하는 융합단백질:
    (1) 중쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 1-5 및 서열번호 1-5에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 6-10 및 서열번호 6-10에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 11-15 및 서열번호 11-15에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; 및/또는
    (2) 경쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 16-20 및 서열번호 16-20에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 21-25 및 서열번호 21-25에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 26-30 및 서열번호 26-30에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다.
  13. 제12항에 있어서,
    (1) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 1, 6, 11, 또는 서열번호 1, 6, 11에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 16, 21, 26, 또는 서열번호 16, 21, 26에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (2) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 2, 7, 12, 또는 서열번호 2, 7, 12에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 17, 22, 27, 또는 서열번호: 17, 22, 27에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (3) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 3, 8, 13 또는 서열번호 3, 8, 13에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 18, 23, 28, 또는 서열번호 18, 23, 28에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (4) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 4, 9, 14, 또는 서열번호 4, 9, 14에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 19, 24, 29, 또는 서열번호: 19, 24, 29에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (5) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 5, 10, 15 또는 서열번호 5, 10, 15에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 20, 25, 30, 또는 서열번호 20, 25, 30에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열인 것인, 융합 단백질.
  14. 제13항에 있어서, 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 3, 8, 13이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 18, 23, 28인 것인, 융합 단백질.
  15. 제14항에 있어서,
    (1) 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 66에 나타낸 서열, 또는 서열번호 66과 동일한 CDR 1-3을 갖고, 서열번호 66과 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖고; 및/또는
    (2) 경쇄 가변영역은 서열번호 67에 나타낸 서열, 또는 서열번호 67과 동일한 CDR 1-3을 갖고, 서열번호 67과 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖는 것인, 융합 단백질.
  16. 제15항에 있어서,
    (1) 상기 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 72 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 72와 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
    (2) 상기 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 73 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 73과 비교하여 상동성이80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 이상인 서열을 갖는 것인, 융합 단백질.
  17. 제16항에 있어서,
    (1) 상기 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 72와 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 가지거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
    (2) 상기 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 73과 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는 것인, 융합 단백질.
  18. 제9항에 있어서,
    상기 제1 결합 도메인은 PD-1을 표적으로 하여 결합하고, 상기 IgG의 Fab에서 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 하기 서열에 의해 정의된 항체와 동일한 CDR 서열, 또는 하기 서열에 의해 정의된 항체의 CDR 상에 1-2개의 아미노산 치환을 갖고, 상기 항체는 다음과 같이 정의 되는 것인, 융합 단백질:
    (1) 서열번호 64의 중쇄 가변영역의 아미노산 서열; 및/또는
    (2) 서열번호 65의 경쇄 가변영역의 아미노산 서열.
  19. 제18항에 있어서, 상기 IgG의 Fab에서 중쇄 가변 영역의 CDR 및/또는 경쇄 가변 영역의 CDR은 하기와 같은 융합 단백질:
    (1) 상기 중쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 34-38 및 서열번호 34-38에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 39-43 및 서열번호 39-43에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 44-48 및 서열번호 44-48에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; 및/또는
    (2) 상기 경쇄 가변 영역의 경우, CDR1의 아미노산 서열은 서열번호 49-53 및 서열번호 49-53에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR2의 아미노산 서열은 서열번호 54-58 및 서열번호 54-58에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택되고; CDR3의 아미노산 서열은 서열번호 59-63 및 서열번호 59-63에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열로부터 선택된다.
  20. 제19항에 있어서,
    (1) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 34, 39, 44 또는 서열번호 34, 39, 44에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 49, 54, 59, 또는 서열번호 49, 54, 59에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (2) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 35, 40, 45, 또는 서열번호 35, 40, 45에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 50, 55, 60, 또는 서열번호 50, 55, 60에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (3) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 36, 41, 46 또는 서열번호 36, 41, 46에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 51, 56, 61, 또는 서열번호 51, 56, 61에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (4) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 37, 42, 47, 또는 서열번호 37, 42, 47에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 52, 57, 62, 또는 서열번호 52, 57, 62에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이거나; 또는
    (5) 상기 중쇄 가변영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 38, 43, 48 또는 서열번호 38, 43, 48에 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 53, 58, 63, 또는 서열번호 53, 58, 63에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열인 것인, 융합 단백질.
  21. 제20항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 36, 41, 46이고; 및/또는 상기 경쇄 가변 영역의 CDR 1-3의 아미노산 서열은 서열번호 51, 56, 61인 것인, 융합 단백질.
  22. 제21항에 있어서,
    (1) 상기 중쇄 가변영역은 서열번호 64에 나타낸 서열, 또는 서열번호 64와 동일한 CDR 1-3을 갖고 서열번호 64와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열이고; 및/또는
    (2) 상기 경쇄 가변영역은 서열번호 65 에 나타낸 서열, 또는 서열번호 65와 동일한 CDR 1-3을 갖고 서열번호 65와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 것인, 융합 단백질.
  23. 제22항에 있어서,
    (1) 상기 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 68 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 68와 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
    (2) 상기 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 69 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 69와 비교하여 상동성이 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상인 서열을 갖는 것인, 융합 단백질.
  24. 제23항에 있어서,
    (1) 상기 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 68과 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
    (2) 상기 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 69와 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는 것인, 융합 단백질.
  25. 제22항에 있어서,
    (1) 융합 단백질의 중쇄는 서열번호 70 에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 70과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 가지고;
    (2) 융합 단백질의 경쇄는 서열번호 71에 나타낸 아미노산 서열, 또는 서열번호 71과 비교하여 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 상동성을 갖는 서열을 갖는 것인, 융합 단백질.
  26. 제25항에 있어서,
    (1) 융합 단백질의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 70과 비교하여 1-15개의 아미노산 부위 돌연변이를 가지거나 대체 펩타이드 링커를 갖고;
    (2) 융합 단백질의 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 71과 비교하여 1-10개의 아미노산 부위 돌연변이를 갖는 것인, 융합 단백질.
  27. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 이필리무맙인 것인, 융합 단백질.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인의 C-말단 또는/및 N-말단은 펩타이드 링커를 갖고, 상기 펩타이드 링커는 2-30개의 아미노산으로 이루어진 것인 융합 단백질.
  29. 제28항에 있어서, 상기 펩타이드 링커는
    (1) (GGGGS)n; 또는
    (2) AKTTPKLEEEGEFSEAR(서열번호 80); 또는
    (3) AKTTPKLEEEGEFSEARV(서열번호 81); 또는
    (4) AKTTPKLGG(서열번호 82); 또는
    (5) SAKTTPKLGG(서열번호 83); 또는
    (6) SAKTTP(서열번호 84); 또는
    (7) RADAAP(서열번호 85); 또는
    (8) RADAAPTVS(서열번호 86); 또는
    (9) RADAAAAGGPGS(서열번호 87); 또는
    (10) RADAAAA(서열번호 88); 또는
    (11) SAKTTPKLEEEGEFSEARV(서열번호 89); 또는
    (12) ADAAP(서열번호 90); 또는
    (13) DAAPTVSIFPP(서열번호 91); 또는
    (14) TVAAP(서열번호 92); 또는
    (15) TVAAPSVFIFFP(서열번호 93); 또는
    (16) QPKAAP(서열번호 94); 또는
    (17) QPKAAPSVTLFPP(서열번호 95); 또는
    (18) AKTTPP(서열번호 96); 또는
    (19) AKTTPPSVTPLAP(서열번호 97); 또는
    (20) AKTTAP(서열번호 98); 또는
    (21) AKTTAPSVYPLAP(서열번호 99); 또는
    (22) ASTKGP(서열번호 100); 또는
    (23) ASTKGPSVFPLAP(서열번호 101); 또는
    (24) GENKVEYAPALMALS(서열번호 102); 또는
    (25) GPAKELTPLKEAKVS(서열번호 103); 또는
    (26) GHEAAAVMQVQYPAS(서열번호 104); 또는
    (27) GGGGSGGGGSGGGGSA(서열번호 105) 이고,
    상기 n은 1, 2, 3 또는 4인 것인, 융합 단백질.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 삽입된 제2 결합 도메인의 크기가 300개의 아미노산을 초과하지 않는 것인, 융합 단백질.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 결합 도메인의 삽입 부위가 힌지 영역의 전면 중앙부에 위치하고, 상기 삽입 부위가 면역글로불린의 이황화 결합 형성에 영향을 미치지 않는 것인, 융합 단백질.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 힌지영역의 전면 중앙부는 231A의 이전 부분을 의미하는 것인, 융합단백질.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 삽입 부위 전후의 힌지 영역의 아미노산의 일부가 치환 또는 결실되어 있는, 융합 단백질.
  34. 제33항에 있어서, 상기 힌지 영역이 D221G 및/또는 C220V 돌연변이를 포함하는 것인, 융합 단백질.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IgG는 포유동물 IgG, 인간화 IgG 및 인간 IgG로부터 선택되고, 상기 포유동물에는 마우스, 래트 및 토끼가 포함되고; 바람직하게는 상기 IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4인 것인, 융합 단백질.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 융합 단백질의 Fc 영역이 비글리코실화 또는 탈글리코실화되거나, 푸코실화가 감소되거나 또는 비푸코실화되는 것인, 융합 단백질.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질을 코딩하는 분리된 폴리뉴클레오티드.
  38. 제37항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 구조체로서, 바람직하게 상기 핵산 구조체는 벡터인 것인, 핵산 구조체.
  39. 제37항에 따른 폴리뉴클레오티드 또는 제38항에 따른 핵산 구축물 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포로서, 바람직하게 상기 세포는 원핵 세포, 진핵 세포, 효모 세포, 포유동물 세포, 대장균 세포 또는 CHO 세포, NS0 세포 , Sp2/0 세포 또는 BHK 세포인 것인, 세포.
  40. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약학 조성물.
  41. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질 또는 제40항에 따른 약학 조성물을, 치료 또는 완화가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 종양 또는 암의 치료 방법.
  42. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질, 제37항에 따른 폴리뉴클레오타이드, 제38항에 따른 핵산 구조체 또는 벡터, 또는 제40항에 따른 약학 조성물의, 종양 또는 암의 치료 또는 예방을 위한 의약 제조에서의 용도.
  43. 제42항에 있어서, 상기 종양 또는 암은 고형 종양 또는 비-고형 종양을 포함하는 것인, 용도.
  44. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질을 포함하는 진단 키트.
  45. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 따른 융합 단백질의 제조 방법으로서,
    제38항에 따른 핵산 구조체의 발현이 가능한 조건 하에 제39항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 생산된 융합 단백질을 상기 배양물로부터 회수하는 단계를 포함하는, 융합 단백질의 제조 방법.
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EP3813864A4 (en) * 2018-06-29 2022-07-20 Gensun Biopharma Inc. ANTITUMOR ANTAGONISTS
CN112672753A (zh) * 2018-07-09 2021-04-16 普瑞赛格恩公司 融合构建体及其使用方法

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