KR20220054613A - 망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도 - Google Patents

망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20220054613A
KR20220054613A KR1020227008319A KR20227008319A KR20220054613A KR 20220054613 A KR20220054613 A KR 20220054613A KR 1020227008319 A KR1020227008319 A KR 1020227008319A KR 20227008319 A KR20227008319 A KR 20227008319A KR 20220054613 A KR20220054613 A KR 20220054613A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
retinal
cells
tissue unit
pigment epithelial
epithelial cells
Prior art date
Application number
KR1020227008319A
Other languages
English (en)
Inventor
막심 페이에
케빈 알레산드리
Original Assignee
트리프로그 테라퓨틱스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 트리프로그 테라퓨틱스 filed Critical 트리프로그 테라퓨틱스
Publication of KR20220054613A publication Critical patent/KR20220054613A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0618—Cells of the nervous system
    • C12N5/0621—Eye cells, e.g. cornea, iris pigmented cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/04—Alginic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/14—Eye parts, e.g. lenses, corneal implants; Implanting instruments specially adapted therefor; Artificial eyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/126—Immunoprotecting barriers, e.g. jackets, diffusion chambers
    • A61K2035/128—Immunoprotecting barriers, e.g. jackets, diffusion chambers capsules, e.g. microcapsules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/16—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of eye parts, e.g. intraocular lens, cornea
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/90—Substrates of biological origin, e.g. extracellular matrix, decellularised tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2535/00—Supports or coatings for cell culture characterised by topography

Abstract

본 발명은 내부 공동 주위에 조직화될 때 분화된 살아있는 인간 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하는 3차원 조직 단위에 관한 것으로, 각 세포의 기저측은 바깥쪽을 향하고 정단측은 내부 공동을 향한다. 본 발명은 또한 망막병증의 치료에 사용하기 위한 이들 조직 단위, 및 이들 조직 단위를 제조하는 방법 및 이식 키트에 관한 것이다.

Description

망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도
본 발명은 특히 적어도 하나의 망막 색소 상피를 포함하는 특정 조직 단위의 사용에 의한 망막 질환의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이들 조직 단위를 제조하는 방법 및 망막의 전부 또는 일부의 이식을 수행하기 위해 눈에 이들 조직 단위를 이식하기 위한 키트에 관한 것이다.
망막 질환 또는 망막병증은 전 세계적으로 시각 장애의 주요 원인 중 하나이다. 눈의 뒤 쪽에 있는 망막은 특히 빛을 받는 색소 상피 세포 및 신경 세포로 구성되어 있다. 이 신경 세포는 빛을 시신경을 통해 뇌로 이동하는 전기 신호로 변환한다. 망막, 특히 망막 색소 상피의 세포가 퇴화하거나 기능을 멈추면, 시야의 사각 지대가 나타난다.
망막병증은 다양한 기원을 가질 수 있다: 특히, 이는 나이-관련 황반변성(age-related the macular degeneration: AMD)과 같은 노화와 관련이 있을 수 있거나, 색소성 망막병증(retinopathy pigmentosa) 또는 망막 이영양증(retinal dystrophy)과 같은 유전성일 수 있거나, 일광 망막병증(solar retinopathy)과 같은 외상과 관련이 있을 수 있거나 또는 당뇨병성 망막병증(diabetic retinopathy) 또는 고혈압성 망막병증(hypertensive retinopathy)과 같은 또 다른 병리로부터 파생될 수 있다.
AMD는 노인의 시각 장애의 주요 원인이다. 이 병리는 대부분의 시각 정보를 뇌로 전달하는 망막의 중심 영역인 황반의 손상으로 인한 것이다. 그 결과 시야의 중앙에 사각 지대가 나타난다. AMD는 다음과 같은 두 가지 형태로 나타날 수 있다:
- 건성 또는 위축성 형태: 황반 세포의 점진적 소멸을 특징으로 한다. 따라서, 천천히 발병하며 가장 흔한 형태의 AMD를 나타낸다;
- 습성 또는 삼출성 형태: 망막 아래에 비정상적인 혈관이 형성되어 특히 망막이 박리되는 것을 특징으로 한다.
현재 AMD의 건성 형태에 대한 치료법은 없다. 유일한 방법은 식품 보조제(바이타민 C 및 E 및 항산화 미네랄)를 섭취하여 이를 지연시키는 것이다. 현재 몇 년 동안, 습성 AMD의 경우, 질환이 너무 진행된 단계가 아니라면, 혈관의 증식을 차단하는 약물을 눈에 주사하면 질환이 개선될 수 있지만, 이러한 치료는 매달 주사할 필요가 있으며 완전히 만족스러운 결과를 얻을 수는 없다.
색소성 망막병증은 유전될 수 있는 유전성 질환이다. 이는 하나 이상의 유전자의 돌연변이와 관련된 망막 세포의 변성을 특징으로 한다. 질환의 진행은 실명에 이를 때까지 느리며; 현재 치료법은 없다.
당뇨병성 망막병증은 당뇨병과 관련하여 발생하는 망막 손상이다. 이는 망막의 작은 혈관에 과도한 당이 집중되어 이의 붕괴를 초래하는 것과 관련이 있다. 산소 공급 부족은 새로운 더 약한 혈관의 형성을 유도한다. 파열과 이에 따른 미세출혈은 망막 박리로 이어질 수 있다. 습성 형태의 AMD의 경우, 항-혈관신생제를 주사하는 것이 가능하지만, 이러한 치료가 잘 되지는 않는다. 비정상적인 혈관을 태우기 위해 레이저 치료가 또한 수행될 수 있지만 그 효과는 제한적이다.
최근, 망막 질환의 치료를 목적으로 하는 새로운 치료적 접근법이 기술되고 있다.
최근의 치료적 시험에서는 망막 임플란트(인공 망막)를 식립할 가능성을 탐색하였지만, 이 임플란트의 해결은 여전히 낮다.
세포 요법 시험이 또한 변성된 망막 세포를 망막의 상피, 신경 또는 혈관 세포(hRPC 또는 인간 망막 전구 세포)로 분화할 수 있는 줄기 세포로 대체하는 것을 목표로 수행되었다. 그러나, 특히 이식 후 세포 분화가 조절되지 않고, 시험된 투여 경로인 유리체내 주사가 생리학적 메커니즘에 부합하지 않아 바람직하지 않은 부작용을 초래하여, 현재까지 결정적인 시험이 없었다(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/results/NCT02320182). 또한, 이들 전구 세포는 성인 망막의 재생을 허용하지 않으며 인간의 생체내에 존재한다(문헌[Tang et al. "Progress of stem/progenitor cell-based therapy for retinal degeneration" Journal of Translational Medicine, 10 May 2017]).
또한, 임플란트로 사용하기 위한 망막 세포의 막 또는 시트가 기술되어 있다. 이는 인간으로부터 채취되고 배양된 망막 세포로부터 얻어진 망막 세포의 막 또는 시트를 개시하고 있는 출원 US20160310637 또는 출원 EP2570139의 경우로, 상기 막 또는 시트는 눈에 이식되도록 의도된다. 그러나, 이 기술은 이식되는 세포의 수에 비해 매우 많은 수의 세포를 생산해야 하기 때문에 만족스럽지 못하며(품질 관리를 위해 8개의 배취를 생산해야 하며, 각 배취의 대부분의 세포가 임플란트에 위치하지 않음), 또한, 이식은 의사의 특정 이식 전문 지식을 필요로 하는 길고 복잡한 수술을 필요로 하며, 환자에게 매우 침습적이다
출원 EP3211071은 또한 다능성 줄기 세포로부터 얻어진 현탁액에서 응집체의 형태의 망막 조직을 기술하고 있다. 현탁액은 이어서 눈에 주사된다. 이 용액은 주사가 다음의 기능적 구조(특히, 기능적 분극화)를 유지하는 것을 가능하게 하지 않기 때문에 만족스럽지 않다: i) 색소 상피의 경우, 세포의 정단측(apical side)이 이식편의 광수용체의 외부 분절을 향하도록 제시되어야 하며, 이식의 생존 및 기능이 제한되고, ii) 광수용체의 경우, 외부 분절은 색소 상피의 세포 반대편에 있는 눈의 바깥쪽으로 위치하여야 하며, 시냅스 말단은 나머지 신경 망막을 연결하기 위해 눈의 중심을 향하여야 한다. 또한, 이 기법은 많은 양의 액체를 눈에 주사해야 하며, 선행 기술의 다른 모든 용액과 마찬가지로 치료할 영역보다 더 넓은 영역에 걸쳐 망막이 상당히 박리되어 절개 또는 주사 중에 국부 출혈을 유발할 위험이 있다. 현재의 해결책은 또한 Zarbin 등(문헌["Concise Review: Update on Retinal Pigment Epithelium Transplantation for Age-Related Macular Degeneration" Stem Cells Translational Medicine, 2019;8:466-477])에 기술되어 있는 바와 같이 3번 또는 4번의 절개를 필요로 한다.
본 발명의 목적은 선행 기술의 이러한 다양한 문제점을 극복하고, 오래 지속되며 확실한 방식으로 망막의 퇴행성 병리를 앓고 있는 환자에서 변성된 망막 세포를 대체하기 위하여 정확하게 분극화된 망막 세포의 쉽고 빠르며 최소 침습적인 이식 및 이의 숙주 기관으로의 통합을 위한 해결책을 제안하는 것이다.
본 발명에 따르면, 망막 조직 이식의 효과는 부르크 막(Bruch's membrane)에 색소 상피 세포의 기저측의 부착을 통한 이식편의 적절한 제자리 통합(in situ incorporation)(특히, 정확한 정단-기저 분극화)에 크게 좌우된다. 따라서, 본 발명의 목적을 충족시키기 위해, 본 발명자들은 공동(cavity) 주위에 조직화된 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하는 특정 중공형 3차원 세포 어레이를 개발하였으며, 상기 망막 색소 상피 세포는 기저측이 바깥을 향하고 있다. 이 조직 단위는 또한 바람직하게는 일단 눈에 주입되면, 세포의 통합 및 생존을 촉진하는 망막 색소 상피 세포의 기저측에 세포외 매트릭스의 외층을 포함한다. 본 발명에 따른 조직 단위는 또한 망막 색소 상피 세포층 내에서 하나 이상의 층의 형태로 조직화된 다른 망막 세포를 내부 공동(inner cavity), 즉, 망막 색소 상피 세포의 정단측에 포함할 수 있다. 이들 다른 세포는 바람직하게는 망막 신경 조직의 전부 또는 일부를 형성한다.
따라서, 본 발명은 내부 공동 주위에 조작화되어 있는, 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하는 중공형 3차원 조직 단위(hollow three-dimensional tissue unit)에 관한 것으로, 각각의 망막 색소 상피 세포의 기저측은 바깥쪽을 향하며 정단측은 내부 공동을 향하고 있다. 본 발명에 따른 조직 단위는 바람직하게는 중공형 타원, 중공형 원통, 중공형 회전 타원체 또는 중공형 구의 형태 또는 평면을 따른 이들 요소의 절단 형태이다.
본 발명은 또한 특히 부르크 막에서 눈으로의 이식에 의한 망막 질환의 치료에서 이러한 중공형 3차원 조직의 용도에 관한 것이다.
유리하게는, 이식은 조직화되고 밀리미터 이하의 크기의 본 발명에 따른 망막 조직 단위로 수행되기 때문에, 절차는 선행 기술에서와 같이 단일 이식편의 정확한 위치를 필요로 하지 않는다. 이는 (잠재적으로 외상을 입힐 수 있는) 망막 박리의 필요성을 제한하고, 결과적으로 눈으로부터 유리체액의 배수의 강도도 또한 제한한다. 또한, 본 발명은 오늘날 3번 또는 4번에 비해 눈의 단일 절개로 외과적 절차를 제한할 수 있다는 이점이 있다.
또한, 망막 색소 상피층의 분극화(기저측은 바깥쪽을 향하며 정단측은 내부 공동을 향함)는 망막 조직 단위가 눈에 이식될 때 올바른 위치에 놓이도록 하여 이식의 성공을 보장한다. 실제로, 기저측이 바깥쪽에 위치하는 덕분에, 본 발명에 따른 망막 조직 단위는 이동하여 단일층을 형성하는 기질에 부착된 세포를 방출함으로써 눈 뒤쪽의 세포외 매트릭스(부르크 막)에 부착된다.
본 발명은 또한 다음 단계를 포함하는 중공형 3차원 망막 조직 단위를 제조하는 방법에 관한 것이다:
- 하이드로겔 캡슐 내에 다음을 포함하는 세포 미소구획을 제조하는 단계:
* 망막 색소 상피 세포 및 선택적으로 다른 망막 세포, 또는
* 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포로 분화할 수 있는 세포,
- 미소구획이 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포로 분화할 수 있는 세포를 포함하는 경우: 세포 미소구획 내에서 세포 분화를 유도하여 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포를 수득하는 단계,
- 하이드로겔 캡슐을 제거하여 조직 단위의 형태의 망막 색소 상피 세포 및 임의의 다른 망막 세포를 회수하는 단계.
마지막으로, 본 발명은 또한 중공형 3차원 조직 단위를 눈에 이식하기 위한 키트에 관한 것으로, 상기 키트는 적어도 다음을 포함한다:
- 선택적으로 하이드로겔 캡슐에 캡슐화된 1개 내지 10,000개의 조직 단위, 및
- 상기 조직 단위(들)를 인간의 눈에 이식할 수 있는 외과적 이식 장치.
- 도 1: 도 1은 망막 색소 상피층(12) 및 내부 공동(14)을 갖는 본 발명에 따른 조직 단위(10)의 단면도의 도식 표현이며, A는 망막 색소 상피 세포의 정단측에 해당하고, B는 망막 색소 상피 세포의 기저측에 해당한다.
- 도 2: 도 2는 망막 색소 상피층(12), 공동(14) 및 세포외 매트릭스층(16)을 갖는 본 발명에 따른 조직 단위(10)의 단면도의 도식 표현이며, A는 망막 색소 상피 세포의 정단측에 해당하고, B는 망막 색소 상피 세포의 기저측에 해당한다.
- 도 3: 도 3은 본 발명에 따른 하이드로겔 캡슐(22) 및 조직 단위(10)를 포함하는 미소구획(20)의 단면도의 도식 표현이며, 조직 단위(10)는 색소 상피층(12), 공동(14) 및 세포외 매트릭스층(16)에 의해 형성되고, A는 망막 색소 상피 세포의 정단측에 해당하며, B는 망막 색소 상피 세포의 기저측에 해당한다.
- 도 4: 도 4는 본 발명에 따른 하이드로겔 캡슐(22) 및 조직 단위(10)를 포함하는 미소구획(20)의 단면도의 도식 표현이며, 조직 단위(10)는 세포외 매트릭스층(16), 망막 색소 상피층(12), 망막 상피 세포 이외의 망막 세포층(18) 및 공동(14)에 의해 형성되고, A는 망막 색소 상피 세포의 정단측에 해당하며, B는 망막 색소 상피 세포의 기저측에 해당한다.
- 도 5: 도 5는 본 발명에 따른 조직 단위를 캡슐화하는 하이드로겔(알기네이트) 미소구획의 현미경 이미지를 보여준다.
- 도 6: 도 6 본 발명에 따른 작은 조직 단위(A) 및 본 발명에 따른 큰 조직 단위(B)를 캡슐화하는 하이드로겔(알기네이트) 미소구획의 현미경 이미지를 보여준다.
- 도 7: 도 7은 상이한 세포 밀도를 갖는 하나 이상의 본 발명에 따른 조직 단위를 캡슐화하는 하이드로겔(알기네이트) 미소구획의 현미경 이미지를 보여준다.
- 도 8: 도 8은 망막 색소 상피의 단일층이 형성될 때까지 상이한 시간에 안저의 세포외 매트릭스를 시뮬레이션하는 기질(여기서는 부르크 막을 자극하는 마트리겔(matrigel))에 하이드로겔 캡슐이 없는 본 발명에 따른 망막 조직 단위를 보여준다.
- 도 9: 도 9는 알기네이트 캡슐의 내면에 매트릭스층을 증착하여 세포 분극화를 얻을 수 있음을 보여주는 현미경 이미지 및 그래프를 보여준다.
정의
본 발명의 의미 내에서 용어 "알기네이트"는 β-D-만누로네이트 및 α-L-굴루로네이트, 이의 염 및 유도체로부터 형성되는 선형 다당류를 의미한다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "하이드로겔 캡슐"은 액체 및 바람직하게는 물로 팽윤된 중합체 사슬의 매트릭스로부터 형성된 3차원 구조를 의미한다.
본 발명의 의미에서 용어 "인간 세포"는 인간 세포 또는 면역학적으로 인간화된 비-인간 포유동물 세포를 의미한다. 특정되지 않은 경우에도, 본 발명에 따른 세포, 줄기 세포, 전구 세포 및 조직은 인간 세포 또는 면역학적으로 인간화된 비-인간 포유동물 세포에 의해 형성되거나 또는 이로부터 수득된다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "전구 세포"는 망막 세포로의 세포 분화에 이미 관여하였지만 아직 분화되지 않은 줄기 세포를 의미한다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "배아 줄기 세포"는 배반포의 내부 세포 덩어리로부터 유래되는 다능성 줄기 세포를 의미한다. 배아 줄기 세포의 전분화능은 전사 인자 OCT4 및 NANOG와 같은 마커 및 SSEA3/4, Tra-1-60 및 Tra-1-81과 같은 표면 마커의 존재하에 평가될 수 있다. 본 발명에 따른 배아 줄기 세포는, 예를 들어, Chang 등(문헌[Cell Stem Cell, 2008, (2)) : 113-117])에 기술되어 있는 바와 같은 기법을 사용하여 이들이 유래되는 배아의 파괴 없이 수득된다. 인간으로부터의 배아 줄기 세포는 잠재적으로 제외될 수 있다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "다능성 줄기 세포" 또는 "다능성 세포"는 전체 유기체를 그 자체로 형성할 수는 없지만 기원의 전체 유기체에 존재하는 모든 조직을 형성할 수 있는 능력을 갖는 세포를 의미한다. 특히, 이들은 유도 다능성 줄기 세포, 배아 줄기 세포 또는 MUSE(다계통-분화 스트레스 내성(Multilineage-differentiating Stress Enduring)) 세포일 수 있다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "유도 다능성 줄기 세포"는 분화된 체세포의 유전자 재프로그래밍에 의한 전분화능으로 유도된 다능성 줄기 세포를 의미한다. 이들 세포는 특히 알칼리성 포스파테이스 염색 및 단백질 NANOG, SOX2, OCT4 및 SSEA3/4의 발현과 같은 전분화능 마커에 대해 양성이다. 유도 다능성 줄기 세포를 얻기 위한 과정의 예는 Yu 등(문헌[Science 2007, 318 (5858) : 1917-1920]), Takahashi 등(문헌[Cell, 207, 131(5) : 861-872]) 및 Nakagawa 등(문헌[Nat Biotechnol, 2008, 26(1) : 101-106])의 논문에 기술되어 있다.
본 발명의 의미 내에서 용어 "분화된" 세포는 분화되지 않은 다능성 줄기 세포와 대조적으로 특정 표현형을 나타내는 세포를 의미한다.
용어 조직 단위의 "페렛 직경(Feret diameter)"은 상기 조직 단위에 대한 두 접선 사이의 거리 "d"를 의미하며, 이들 두 접선은 평행하므로 조직 단위의 전체 투영은 이들 두 평행 접선 사이에 포함된다.
본 발명의 의미 내에서 용어 눈으로의 "이식(implantation)" 또는 "이식(transplantation)"은 본 발명에 따른 적어도 하나의 조직 단위를 특정 위치에서 눈에 위치시키는(depositing) 행위를 의미한다. 이식은 임의의 수단, 특히 주사에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 의미 내에서 용어 조직 단위의 "최대 치수"는 상기 조직 단위의 최대 페렛 직경의 값을 의미한다.
본 발명의 의미 내에서 용어 조직 단위의 "최소 치수"는 상기 조직 단위의 최소 페렛 직경의 값을 의미한다.
용어 본 발명에 따른 "조직 단위" 또는 "망막 조직 단위"는 망막의 적어도 하나의 조직을 포함하는 단위를 의미한다. 망막 조직 단위는 기능적 구조와 함께 조립되는 복수의 망막 조직을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 조직 단위는 적어도 하나의 망막 색소 상피 조직을 포함하고, 또한 또 다른 망막 조직, 특히 망막 신경 조직 또는 망막 혈관 조직 및/또는 적어도 하나의 다른 구성 요소, 예를 들어, 세포외 매트릭스를 더 포함할 수 있다.
조직 단위
본 발명은 이후 3차원 망막 조직 단위에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조직 단위는 중공형이다. 이는 항상 조직 단위의 중공 부분을 구성하는 내부 공동 또는 내강(lumen)을 포함한다. 이 공동은 증식하고 성장하는 망막 세포에 의해 조직 단위가 형성될 때 생성된다. 공동은 액체, 특히 배양 배지(예컨대, DMEM 또는 DMEM-F12 및/또는 신경기초(neurobasal) 기반 배지, 또는 B27 또는 N-2 또는 NS21이 보충된 배지) 및/또는 조직 단위의 세포에 의해 분비된 액체를 포함한다. 유리하게는, 망막 조직 단위에 이러한 중공형 부분의 존재는 눈에 이식될 때 망막으로의 더 나은 통합을 가능하게 한다.
본 발명에 따른 조직 단위는 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함한다. 이들 세포는 망막 색소 상피 세포로 분화된 인간의 살아있는 세포이다. 망막 상피 세포의 층은 내부 공동 주위에 조직화되어 있다. 이 층을 형성하는 세포는 함께 망막 색소 상피를 형성하고, 이의 기저측은 모두 세포 단위의 외부를 향하고, 이의 정단측은 모두 내부, 즉, 내부 공동을 향한다. 나란히 놓인 세포는 바람직하게는 긴밀한 접합에 의해 측면에서 함께 연결된다.
특히 적합한 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 조직 단위는 또한 세포외 매트릭스의 외층을 포함한다. 세포외 매트릭스의 이러한 외층은 망막 색소 상피 세포의 기저측에 위치한다. 세포 매트릭스층은 망막 색소 상피 세포에 의해 분비되는 세포 매트릭스 및/또는 세포 단위의 제조시에 첨가되는 세포외 매트릭스에 의해 형성될 수 있다.
세포외 매트릭스층은 겔을 형성할 수 있다. 이는 망막 색소 상피 세포의 배양에 필요한 단백질과 세포외 화합물의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 세포외 매트릭스는 콜라겐, 라미닌, 엔탁틴, 비트로넥틴과 같은 구조 단백질 및 TGF-베타 및/또는 EGF와 같은 성장 인자를 포함한다. 세포외 매트릭스층은 Matrigel® 및/또는 Geltrex® 및/또는 개질된 알기네이트와 같은 식물 기원 또는 합성 기원의 하이드로겔 유형 매트릭스 또는 폴리(N-아이소프로필아크릴아마이드) 및 폴리(에틸렌 글리콜)공중합체(PNIPAAm-PEG) 유형 Mebiol®로 구성되거나 또는 이를 포함할 수 있다.
망막 색소 상피층과 접촉하는 세포외 매트릭스층의 표면에서, 세포외 매트릭스는 선택적으로 하나 이상의 망막 색소 상피 세포를 포함할 수 있다.
세포외 매트릭스가 존재하는 경우, 내부 공동 주위에 3차원으로 조직화된 망막 세포는 유리하게는 이미 세포외 매트릭스와 상호작용하여 망막에서의 이식을 용이하게 한다.
본 발명에 따른 조직 단위는 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포의 하나 이상의 다른 층을 포함할 수 있다. 이들 세포는 살아있고 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포로 분화된 인간 세포이다. 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포의 층(들)은 망막 상피 세포층 내에, 즉, 내강 주위에 조직화된 망막 색소 상피 세포의 정단측에 배열된다.
일 실시형태에서, 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포는 간상체(rod), 원추체(cone), 신경절 세포(ganglion cell), 무축삭 세포(amacrine cell), 양극성 세포(bipolar cell) 및 수평 세포(horizontal cell)로부터 선택된다. 세포 단위가 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포의 적어도 2개의 층을 포함하는 경우, 상이한 층이 내부 공동 주위에 연속적으로 조직화된다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 조직 단위는 10개 내지 100,000개의 망막 세포를 포함한다.
본 발명의 특정 실시형태에 따르면, 도 1에 나타낸 바와 같이, 중공형 3차원 망막 조직 단위(10)는 다음으로만 구성된다:
- 내부 공동(14) 및
- 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피의 층(12), 망막 색소 상피 세포의 기저측 B는 조직 단위의 외부를 향하고, 망막 색소 상피 세포의 정단측 A는 내부 공동을 향함.
본 발명의 또 다른 특정 실시형태에 따르면, 도 2에 나타낸 바와 같이, 중공형 3차원 망막 조직(10)은 다음으로만 형성된다:
- 내부 공동(14),
- 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피의 층(12), 망막 색소 상피 세포의 기저측 B는 조직 단위의 외부를 향하고, 망막 색소 상피 세포의 정단측 A는 내부 공동을 향함, 그리고
- 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측 상의 망막 색소 상피 세포의 층 주위에 배치된 세포외 매트릭스의 층(16).
본 발명에 따른 조직 단위를 구성하는 다양한 분화된 세포는 실시형태에 관계없이 선택적으로 다능성 줄기 세포, 특히 인간 다능성 줄기 세포로부터 얻어질 수 있거나, 또는 선택적으로, 예를 들어, 섬유아세포 또는 말초혈액 단핵 세포와 같은 성인 세포로부터 직접 재프로그래밍될 수 있다.
본 발명에 따른 조직 단위는 임의의 3차원 형태일 수 있으며, 즉, 공간에서 임의의 물체의 형상을 가질 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 조직 단위는 중공형 난형, 중공형 원통, 중공형 회전 타원체 또는 중공형 구의 형태이다. 조직 단위의 외층, 즉, 망막 색소 상피층 또는 존재하는 경우 세포외 매트릭스층이며, 본 발명에 따른 조직 단위에 그 크기 및 형태를 부여한다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 조직 단위의 최대 치수는 1㎝ 미만, 훨씬 더 바람직하게는 0.5㎝ 미만이다. 적합한 및 바람직한 실시형태에 따르면, 본 발명에 따른 조직 단위의 최대 치수는 100㎛ 내지 1,000㎛이다. 또한, 200㎛ 내지 1,000㎛ 또는 300㎛ 내지 1,000㎛일 수 있다. 이 치수는 최대 치수가 가장 작은 크기의 이전 절개로 이식되기에 너무 크지 않아야 하기 때문에, 특히 주사에 의한 눈으로의 쉬운 이식을 보정한다. 치수가 클수록 눈에서 절개되는 부분도 커지며, 치료를 받는 환자에 대한 위험과 영향을 제한하기 위해 절개의 크기를 최대한 제한하는 것이 중요하다. 바람직하게는, 조직 단위의 최소 치수는 1,000㎛ 미만이다. 일 실시형태에 따르면, 이는 10㎛ 내지 1,000㎛, 바람직하게는 100㎛ 내지 400㎛, 훨씬 더 바람직하게는 200㎛ 내지 300㎛이다. 이 작은 치수는 시험관내 이식편의 생존, 특히 망막 조직 단위 내 망막 세포의 생존을 촉진하고 눈에 이식한 후 조직 단위의 재구성 및 혈관 형성을 최적화하는데 중요하다.
조직 단위에서 망막 색소 상피 세포층의 두께는 바람직하게는 5㎛ 내지 200㎛이다. 본 발명에 따른 조직 단위가 망막 색소 상피 세포가 아닌 망막 세포의 하나 이상의 다른 층을 포함하는 경우, 이 층 또는 이들 층은 함께, 하나 이상인 경우, 바람직하게는 20㎛ 내지 500㎛의 두께를 갖는다. 세포외 매트릭스의 외층이 본 발명에 따른 조직 단위에 존재할 때, 이러한 세포외 매트릭스의 외층의 두께는 바람직하게는 30㎜ 내지 500㎜이다.
공동은 바람직하게는 본 발명에 따른 조직 단위의 부피의 10% 내지 90%를 나타낸다.
본 발명에 따른 망막 조직 단위는 특히 망막 질환의 치료를 위해 인간의 눈에 이식 가능한 이식편으로서 특히 유용하다. 본 발명에 따른 망막 세포 단위의 형태, 크기 및 구성은 이식 전에 조직 단위 내에서 세포의 생존을 허용하고, 일단 눈에 이식되면 이식편의 성공적인 이식, 재구성 및 혈관 형성을 허용한다.
이식할 때까지, 조직 단위는 선택적으로 우선적으로 준비된 하이드로겔 캡슐에 캡슐화될 수 있다. 이러한 경우에, 하이드로겔 캡슐은 바람직하게는 눈에 이식하기 전에 제거된다.
본 발명에 따른 조직 단위는 이식할 때까지 보관을 위해 냉동될 수 있다.
이식 키트
본 발명은 또한 적어도 하나의 조직 단위를 이식하기 위한 키트에 관한 것이다.
본 발명에 따른 이식 키트는 적어도 다음을 포함한다:
- 1개 내지 10,000개의 본 발명에 따른 조직 단위, 상기 조직 단위는 선택적으로 하이드로겔 캡슐에 캡슐화됨,
- 캡슐 단위(들)가 하이드로겔 캡슐에 캡슐화되는 경우, 선택적으로 하이드로겔 캡슐 제거 수단,
- 인간의 눈에 상기 조직 단위(들)를 이식할 수 있는 외과적 이식 장치.
하이드로겔 캡슐 제거 수단은 임의의 생체 적합성 수단에 의한 가수분해, 용해, 관통 및/또는 파열에 의해 캡슐이 제거될 수 있도록, 즉, 세포에 무독성이 될 수 있도록 해야 한다. 제거 수단은 바람직하게는 완충 용액(예컨대, PBS로도 지칭되는 인산염 완충 식염수), 2가 이온의 킬레이터를 포함하는 완충액(예컨대, EDTA)으로부터 선택되며, 이들은 하이드로겔을 용해할 수 있는 효소(하이드로겔의 성질에 따라 선택됨)이다.
외과적 이식 장치는 이식될 본 발명에 따른 조직 단위의 통과를 허용하는 내부 직경(바람직하게는 100㎛ 내지 1㎜)이 있는 바늘 또는 캐뉼라일 수 있으며, 이의 외부 직경은 치료될 눈의 구조에 큰 외상을 주지 않는, 바람직하게는 2㎜ 미만이다.
장치에 존재하는 본 발명에 따른 조직 단위의 수는 1개 내지 10,000개, 바람직하게는 10개 내지 1,000개이다. 이러한 수는 치료될 망막 질환 및 더 이상 기능하지 않는 망막의 영역의 크기에 따라 다르다.
이식 키트에서, 조직 단위는 이식 장치 외부에 있을 수 있고/있거나 이미 전체 또는 부분적으로 외과적 이식 장치에 도입된다.
키트에 존재하는 본 발명에 따른 조직 단위는 장치 외부에서 냉동되고/되거나 외과적 이식 장치 내에서 냉동될 수 있다. 이 경우에, 본 발명에 따른 조직 단위는 조직 단위의 모든 특성이 보존되도록 하는 임의의 적합한 수단에 의해 사용 전에 해동되어야 한다. 이는 특히 DMSO를 부동액으로 사용하는 표준 세포 생물학 프로토콜 또는 수크로스와 같은 당 및 에틸렌 글리콜과 같은 알코올을 사용하여 시험관내 수정 배아를 냉동하는데 적용되는 프로토콜을 포함할 수 있다.
조직 단위가 하이드로겔 캡슐에 캡슐화되어 냉동된 경우, 캡슐화된 조직 단위가 먼저 해동된 다음 하이드로겔 캡슐이 제거되어야 한다.
제조 방법
본 발명은 또한 본 발명에 따른 조직 단위를 제조하는 방법에 관한 것이다. 특히, 방법은 다음을 둘러싸고 있는 하이드로겔 캡슐을 포함하는 세포 미소구획을 제조함으로써 본 발명에 따른 적어도 하나의 조직 단위를 제조하는 단계로 구성된다:
- 분화된 망막 색소 상피 세포 및 선택적으로 다른 분화된 망막 세포 또는
- 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 줄기 세포 또는 전구 세포, 또는
- 캡슐에서 다음을 겪도록 의도되는 분화된 세포:
* 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로의 교차-분화(trans-differentiation),
* 또는 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 유도 다능성 줄기 세포가 되도록 캡슐에서의 재프로그래밍.
그런 다음, 캡슐은 바람직하게는 조직 단위의 세포가 눈에 이식된 후 망막에 이식될 수 있도록 제거된다.
본 발명에 따른 조직 단위를 제조하는 방법은 적어도 다음 단계의 구현을 포함한다:
- 하이드로겔 캡슐 내부에 다음을 포함하는 세포 미소구획을 생성하는 단계:
* 바람직하게는 세포에 의해 분비되거나 또는 작업자에 의해 제공되는 적어도 세포외 매트릭스의 요소, 바람직하게는 세포에 의해 자연적으로 분비되는 세포외 매트릭스에 추가하여 제공되는 세포외 매트릭스의 적어도 일부,
* 적어도 망막 색소 상피 세포 또는 적어도 분화된 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포,
- 미소구획에 도입되는 세포가 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포인 경우: 세포 미소구획 내에서 세포 분화를 유도하여 적어도 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포를 수득하는 단계,
- 하이드로겔 캡슐을 제거하여 내부 공동 주위에 조작화되고 적어도 하나의 망막 색소 상피층을 포함하는 중공형 3차원 망막 조직의 형태로 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포를 회수하는 단계(각 망막 색소 상피 세포의 기저측은 바깥쪽을 향하고 정단측은 공동을 향함).
유리하게는, 하이드로겔의 전체 또는 부분적 캡슐화와 세포외 매트릭스의 공급의 결합은 망막 색소 상피 세포의 분극화를 가능하게 할 수 있는 수단이다. 실제로, 상기 세포의 분극화는 세포의 기저측을 배치하는 하이드로겔 캡슐의 내부 면에 매트릭스의 층을 증착시킴으로써 얻어질 수 있고, 조직은 이러한 극성의 지표에 따라 공동 주위에 조직화된다(도 9에 예시된 바와 같이, 이는 알기네이트 셸에 고정된 세포외 매트릭스층이 조직의 형태를 결정하는 겔의 높은 인장 강도로 인해 알기네이트에 대한 조직의 평탄화에 의해 입증되는 바와 같이 세포의 분극화를 유도함을 보여줌). 사용되는 하이드로겔은 바람직하게는 생체 적합성이며, 즉, 세포에 독성이 없다. 하이드로겔 캡슐은 산소 및 영양소의 확산을 허용하여 미소구획에 포함된 세포에 공급하고 생존할 수 있게 해야 한다. 일 실시형태에 따르면, 캡슐은 알기네이트를 포함한다. 이는 알기네이트만으로 형성될 수 있다. 특히, 알기네이트는 평균 분자량이 100kDa 내지 400kDa이고 총 농도가 0.5중량% 내지 5중량%인, 80%의 α-L-굴루로네이트 및 20%의 β-D-만누로네이트로 구성된 소듐 알기네이트일 수 있다.
하이드로겔 캡슐은 외부 환경으로부터 세포를 보호하고 세포의 통제되지 않는 증식을 제한할 수 있으며, 세포의 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로의 제어된 분화를 가능하게 할 수 있다. 캡슐은 매우 바람직하게는 단일 본 발명에 따른 조직 단위를 둘러싸며, 각각의 조직 단위는 단일 하이드로겔 캡슐에 의해 둘러싸여 있다.
일단 본 발명에 따른 망막 조직 단위가 얻어지면, 즉, 세포가 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하는 망막 세포로 분화되고 목적하는 형태 및 크기가 되면, 캡슐은 제거된다. 캡슐의 제거는 방법이 끝날 때 또는 눈에 이식하기 전에 수행될 수 있다. 캡슐의 제거는 특히 생체 적합성, 즉, 세포에 무독성인 임의의 수단에 의한 가수분해, 용해, 관통 및/또는 파열에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 제거는 인산염 완충 식염수, 2가 이온의 킬레이터, 하이드로겔이 알기네이트 및/또는 레이저 미세절개를 포함하는 경우 알긴산 분해효소(alginate lyase)와 같은 효소를 사용하여 달성될 수 있다.
하이드로겔의 제거가 완료되었기 때문에, 본 발명에 따른 조직 단위는 눈에 이식될 때 하이드로겔이 없다.
하이드로겔 캡슐 내에 적어도 망막 색소 상피 세포 또는 적어도 망막 색소 상피 세포를 생성할 수 있는 세포, 및 선택적으로 세포외 매트릭스 및/또는 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포 또는 적어도 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포를 생성할 수 있는 세포를 포함하는 세포 미소구획을 생산하는 임의의 방법이 사용될 수 있다. 적합한 방법은 특히 특허 WO2018/096277에 기술되어 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 제조 방법의 세포 미소구획을 제조하는 단계는 다음 단계를 포함한다:
- 배양 배지, 바람직하게는 DMEM 또는 DMEM-F12, FGF-2 또는 세포에서 이의 작용을 복제하는 분자, TGF-베타 또는 세포에서 이의 작용을 복제하는 분자를 기반으로 하는 배양 배지에서 다능성 줄기 세포를 인큐베이션하는 단계,
- 다능성 줄기 세포를 세포외 매트릭스와 혼합하는 단계,
- 하이드로겔층에 혼합물을 캡슐화하는 단계.
본 발명에 따른 조직 단위의 제조를 위한 캡슐화된 세포는 바람직하게는 다음으로부터 선택된다:
- 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포, 이들 세포는 다음과 같다:
* 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포, 바람직하게는 배아 줄기 세포 또는 유도 다능성 줄기 세포, 매우 바람직하게는 유도 다능성 줄기 세포로 분화할 수 있는 줄기 세포, 및/또는
* 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 전구 세포,
- 및/또는 분화된 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 분화된 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포,
- 및/또는 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로의 교차-분화를 겪을 수 있는 분화된 세포,
- 및/또는 망막 세포, 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 유도 다능성 줄기 세포가 되도록 재프로그래밍을 겪을 수 있는 분화된 세포.
캡슐화된 세포는 임의의 거부 위험을 피하기 위해 조직 단위를 받는 사람과 면역접합성이 될 수 있다. 일 실시형태에서, 캡슐화된 세포는 하나 이상의 조직 단위가 이식될 사람에게서 미리 수확되었다.
망막 색소 상피 세포로의 분화는 임의의 적합한 절차에 의해 달성될 수 있다. 이는 Leach 등(문헌["Concise Review: Making Stem Cells Retinal: Methods for Deriving Retinal Pigment Epithelium and Implications for Patients With Ocular Disease", Stem Cells 2015;33:2363-2373])에 기술되어 있는 방법 중 하나와 같은 공지된 방법을 포함할 수 있다. 기본 배지는 KSR-XF("넉아웃 DMEM 배지") 또는 N-2 및/또는 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액이 보충될 수 있는, DMEM("둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium)") 또는 DMEMF12일 수 있다. 유도는 또한 Choudhary 등(문헌["Directing Differentiation of Pluripotent Stem Cells Toward Retinal Pigment Epithelium Lineage" STEM CELLS TRANSLATIONAL MEDICINE 2016 ;5:1-12])에 공개된 바와 같은 순서로 달성될 수 있다.
망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포로의 분화는 임의의 적합한 방법에 의해 달성될 수 있다. 이는 Barnea-Cramer 등(문헌["Function of human pluripotent stem cell-derived photoreceptor progenitors in blind mice" Nature, Scientific Reports, published 13 July 2016])에 기술되어 있는 방법과 같은 방법을 포함할 수 있다. 따라서, 분화는 KSR-XF(넉아웃 DMEM 배지) 또는 N-2 및/또는 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액이 보충될 수 있는 DMEMF12로 수행될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 제조 방법의 세포 분화 유도 단계는 다음 단계를 포함한다:
- 적어도 10개의 세포, 바람직하게는 100개의 세포가 얻어질 때까지 다능성 세포 배양 배지에서 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 LDN193189 및 SB431542 및 20 ㎍/㎖의 인간 인슐린이 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 LDN193189 및 SB431542이 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 10 ng/㎖의 인간 BDNF, 10 ng/㎖의 인간 CNTF, 2μM의 레티노산 및 10μM의 DAPT가 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 미소구획을 성장시키는 단계.
미소구획은 바람직하게는 적어도 18일 동안, 바람직하게는 18일 내지 50일 동안 성장된다.
망막 색소 상피층 및 적어도 하나의 다른 망막 세포층을 포함하는 조직 단위의 실시형태에서, 방법은 망막 색소 상피 세포와 다른 세포를 공동 캡슐화하는 것으로 구성된다. 며칠의 각 분화로부터 얻어진 세포는 바람직하게는 망막 색소 상피 및 신경 망막을 포함하는 구조를 형성하기 위해 공동 캡슐화된다. 그런 다음, 세포는 본 발명에 따른 조직 단위를 얻기 전에 5일 내지 50일, 더욱 바람직하게는 10일 내지 25일 동안 캡슐에서 성숙된다.
공동은 3차원 조직 단위가 형성될 때 세포가 증식하고 성장하여 생성된다. 공동은 액체, 특히 방법을 수행하기 위해 사용되는 배양 배지를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 미소구획에서 망막 색소 상피 세포를 증식시키는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 중공형 3차원 조직 단위(10)를 포함하는 미소구획(20)의 실시형태는 도 3에 나타나 있다. 이 실시형태에서, 미소구획은 다음으로만 형성된다:
- 하이드로겔층(22), 및
- 다음으로 형성된 조직 단위(10):
* 내부 공동(14),
* 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피의 층(12), 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측 B는 조직 단위의 외부를 향하고, 망막 색소 상피 세포의 정단측 A는 내부 공동을 향함.
* 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측에 있는 망막 색소 상피 세포의 층 주위에 배열된 세포외 매트릭스층(16).
본 발명에 따른 중공형 3차원 망막 조직을 포함하는 미소구획(20)의 또 다른 실시형태는 도 4에 나타나 있다. 이 실시형태에서, 미소구획은 다음으로만 구성된다
- 하이드로겔층(22), 및
- 다음으로 형성된 조직 단위(10):
* 내부 공동(14),
* 망막 색소 상피 세포 이외의 망막 세포의 층(18), 바람직하게는 신경 망막의 층,
* 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피의 층(12), 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측 B는 조직 단위의 외부를 향하고, 망막 색소 상피 세포의 정단측 A는 내부 공동을 향함,
* 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측에 있는 망막 색소 상피 세포의 층 주위에 배열된 세포외 매트릭스층(16).
분화 단계 후, 조직 단위를 눈에 이식하기 전에 임의의 시점에서, 본 발명에 따른 방법은 캡슐에 포함된 세포의 표현형을 검증하는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 검증은 소정의 실시형태에서, 특히 공동에서 간상체에 대한 모든 광수용체 및 로돕신/PDE6베타에 의해 발현되는 조직 단위의 내부 위치에서 리커버린(recoverin)의 신경 망막 요소를 포함하는 조직 요소의 경우, 조직 단위의 외부 위치에서 색소 상피에 의한 RPE65의 발현을 확인함으로써 수행될 수 있고, 소정의 실시형태에서 내강은 비트로신(vitrosin) 및 옵티신(opticin)을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 하이드로겔층의 제거 전 본 발명에 따른 조직 단위를 포함하는 미소구획을 냉동시키는 단계 또는 하이드로겔 캡슐 제거 단계 후 조직 단위를 냉동시키는 단계를 포함할 수 있다. 냉동은 바람직하게는 -190℃ 내지 -80℃의 온도에서 수행된다.
하이드로겔층의 제거 전 본 발명에 따른 조직 단위 또는 하이드로겔 캡슐의 제거 단계 후 조직 단위를 포함하는 미소구획은 +4℃ 내지 실온의 다음의 조건에서 보관될 수 있다. 본 발명에 따른 조직 단위는 또한 보관 없이 본 발명에 따른 방법을 수행한 직후에 사용될 수 있다.
하이드로겔층의 제거 전 조직 단위 또는 조직 단위를 포함하는 미소구획의 가능한 해동 전 또는 후에, 본 발명에 따른 제조 방법은 또한 본 발명에 따른 적어도 하나의 조직 단위, 바람직하게는 10개 내지 1,000개의 조직 단위, 훨씬 더 바람직하게는 10개 내지 100개의 조직 단위를 외과적 이식 장치에 로딩하는 추가적인 단계를 포함할 수 있다.
눈에 조직 단위의 이식
본 발명은 또한 특히 망막 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 망막 질환의 치료에 사용하기 위한 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하는 중공형 3차원 조직 단위에 관한 것으로, 각 망막 색소 상피 세포의 기저측은 외부를 향하고, 정단측은 내부 공동을 향하고 있다. 용어 "치료"는 예방적, 치유적 또는 대증적 치료, 즉, 사람의 시력을 일시적으로 또는 영구적으로 개선하고, 바람직하게는 또한 질환을 근절하고/하거나, 질환의 진행을 중지 또는 지연시키고/시키거나 질환의 퇴행을 촉진하기 위한 임의의 행위를 의미한다.
실제로, 본 발명에 따른 조직 단위는 인간의 망막 질환, 특히 퇴행성 망막 질환, 바람직하게는 나이-관련 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 눈의 외상과 관련된 망막병증 및 유전성 망막병증으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용될 수 있다.
치료는 이식, 즉, 본 발명에 따른 조직 단위를 눈, 망막, 특히 부르크 막, 즉, 부르크 막과 신경 망막 사이에 이식하는 것으로 구성된다. 눈에 이식하기에 적합한 외과적 이식 장치가 사용되는 것이 매우 바람직하다. 이는 특히 바늘, 캐뉼라, 또는 동맥 또는 외과용 마이크로 임플란트에 스탠트를 이식하는데 사용되는 것과 같은 조직 단위를 부착하기 위한 기타 장치를 포함할 수 있다. 이식은 특히 다음으로 구성되는 단계를 수행함으로써 수행될 수 있다:
- 치료 부위에 외과적 이식 장치를 이용하여 망막을 관통하거나 또는 절개하는 단계,
- 망막 아래, 바람직하게는 부르크 막, 즉, 부르크 막과 신경 망막 사이에 조직 단위를 주사하는 단계,
- 외과적 임플란트 장치를 제거하여 세포가 유리체액으로 다시 밀려 들어가는 것을 방지하는 단계.
실시형태에서, 한 번의 이식 동안, 본 발명에 따른 1개 내지 10,000개의 조직 단위가 이식된다.
필요한 경우, 특히 여러 개별 영역이 질환에 의해 영향을 받는 경우 또는 이식이 수행되어야 하는 영역이 너무 광범위하여 한 곳에서만 이식을 수행할 수 없는 경우, 망막, 바람직하게는 부르크 막의 상이한 영역에서 여러 동시 또는 연속 이식을 수행하는 것이 가능하다.
유사하게는, 한 부위에 한 번의 이식이 충분하지 않은 경우, 더 짧거나 또는 더 긴 기간에 걸쳐 동일한 부위에 여러 번의 이식이 반복적으로 수행될 수 있다.
본 발명에 따른 조직 단위의 이식은 망막 질환, 특히 퇴행성 망막 질환을 앓고 있는 환자가 적어도 부분적인 시력을 회복하도록 한다.
본 발명은 도 5 내지 도 8에 나타낸 결과에 의해 예시될 것이다.
이러한 다양한 도면에 예시된 망막 상피 조직은 다음의 단계를 포함하는 방법을 시행함으로써 얻어졌다:
- 하이드로겔 캡슐 내에 다음을 포함하는 세포 미소구획을 생성하는 단계:
* 작업자에 의해 제공되는 세포외 매트릭스 요소,
* 망막 색소 상피 세포.
이들 망막 색소 상피 세포는 다음 방식으로 얻어질 수 있다:
- i) 수십 개의 세포를 포함하는 콜로니가 얻어질 때까지 페트리 디쉬 내에서 유도 다능성 줄기 세포를, ii) 적어도 10개의 세포, 바람직하게는 100개의 세포가 미소구획에서 얻어질 때까지 다능성 세포 배양 배지에서 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 LDN193189 및 SB431542 및 20 ㎍/㎖의 인간 인슐린이 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 i) 콜로니 - ii) 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 LDN193189 및 SB431542가 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 i) 콜로니 ii) 미소구획을 성장시키는 단계,
- N-2 및 B27, 1% GlutaMax 및 1% 비필수 아미노산 용액 및 10 ng/㎖의 인간 BDNF 10 ng/㎖의 인간 CNTF, 2μM의 레티노산 및 10μM의 DAPT가 보충된 DMEMF12 배양 배지에서 i) 콜로니 ii) 미소구획을 성장시키는 단계.
도 5에서, 미소구획 내에서 증식된 유도된 세포의 분화로부터 유래된 망막 색소 상피 세포의 캡슐화에 의해 얻어진 캡슐은 분극화된 조직 단위의 형태로 조직화된다. 도 5는 생체내 망막 색소 상피 세포의 조직 구조의 전형적인 성숙한 편평 색소 단층화 상피(검은색 화살표)(전형적으로 밀착 연접의 형성에 의해 활성화됨(흰색 화살표))의 형성을 명확하게 보여준다.
도 6에서, 유도 다능성 세포의 분화로부터 유래된 망막 색소 상피 세포의 캡슐화에 의해 얻어진 캡슐은 생체내 망막 색소 상피 세포의 조직 구조의 전형적인 조직 내 세포의 수에 관계없이 착색된 상피 시트의 구조(왼쪽에 대략 100개의 세포, 크기: 50㎛, 삽도 A 및 오른쪽에 대략 1,000개의 세포, 크기: 250㎛, 삽도 B)를 보여준다. 보다 구체적으로, 도 6에서 세포는 정단측이 조직 단위의 내부를 향하고 기저측이 알기네이트 층과 접촉하여 위치된 조직 단위의 외부를 향하는 것을 특징으로 하는 정단-기저 분극화에 따라 중공형 회전 타원체(삽도 B) 및 중공형 난형(삽도 E)으로 조직화되어 있음을 알 수 있다. 특히, 세포외 색소는 생체내에서 발생하는 토폴로지(topology)에 상응하는 핵(삽도 B, DAPI, 흰색 화살표)의 기저 조직과 함께 세포의 정단측(삽도 D, 투과광, 흰색 화살표)에 위치한다.
도 7에서, 유도 다능성 세포의 분화로부터 유래되는 망막 색소 상피 세포의 캡슐화에 의해 얻어진 캡슐은 4주에 10-배(도 7a 및 도 7b) 및 4주에 4-배(도 7c 및 도 7d)로 증식되었다. 이들 도면은 본 발명에 따른 망막 조직 단위가 가변적인 세포 밀도를 가질 수 있음을 예시한다.
마지막으로, 도 8의 연속 이미지에서, 본 발명에 따른 여러 망막 조직 단위(하이드로겔 캡슐 없음)는 안저의 세포외 매트릭스를 시뮬레이션하는 기질(여기서는 부르크 막을 시뮬레이션하는 마트리겔)에 배열되어 있다. 망막 조직 단위(검은색 화살표)는, 기저측이 외부에 위치하여, 기질을 덮고 단일층을 형성하도록(122시간의 배양에 해당하는 오른쪽 하단의 삽도) 이동하는(회색 화살표) 기질(흰색 화살표)에 부착된 세포를 방출함으로써 안저의 세포외 매트릭스를 시뮬레이션하는 기질에 부착할 수 있음을 알 수 있다.

Claims (21)

  1. 중공형 3차원 망막 조직 단위(hollow three-dimensional retinal tissue unit)로서,
    내부 공동 주위에 조직화된 분화된 살아있는 인간 망막 색소 상피 세포의 적어도 하나의 층을 포함하고, 상기 각 망막 색소 상피 세포의 기저측은 바깥쪽을 향하며 정단측은 내부 공동을 향하고 있는, 망막 조직 단위.
  2. 제1항에 있어서, 상기 망막 색소 상피 세포의 기저측에 위치한 세포외 매트릭스의 외층을 포함하는 것을 또한 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 중공형 난형, 중공형 원통, 중공형 회전 타원체 또는 중공형 구의 형태인 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  4. 제3항에 있어서, 최대 치수가 100㎛ 내지 1,000㎛인 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  5. 제4항에 있어서, 최소 치수가 10㎛ 내지 1,000㎛인 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 병치된 망막 색소 상피 세포는 밀착 접합에 의해 측면에서 서로 연결되어 있는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 내부 공동 주위에 조직화된 망막 색소 상피 세포의 정단측에, 망막 색소 상피 세포 이외의 분화된 살아있는 인간 망막 세포의 적어도 하나의 층을 또한 포함하는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  8. 제7항에 있어서, 상기 망막 색소 상피 세포 이외의 분화된 살아있는 인간 망막 세포는 간상체, 원추체, 신경절 세포, 무축삭 세포, 양극성 세포 및 수평 세포로부터 선택되는, 망막 조직 단위.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 10개 내지 100,000개의 망막 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 망막 색소 상피 세포 및/또는 임의의 다른 망막 세포는 유도 다능성 줄기 세포(induced pluripotent stem cell: IPS)로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 하이드로겔 캡슐에 캡슐화되는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위.
  12. 망막 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 망막 조직 단위.
  13. 제12항에 있어서, 퇴행성 망막 질환의 치료에서 사용하기 위한, 망막 조직 단위.
  14. 제13항에 있어서, 나이-관련 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 눈의 외상-관련 망막병증 및 유전성 망막병증으로부터 선택되는 망막 질환의 치료에서 사용하기 위한, 망막 조직 단위.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 망막 조직 단위를 제조하는 방법으로서,
    - 하이드로겔 캡슐 내에 다음을 포함하는 세포 미소구획을 생성하는 단계:
    * 선택적으로 세포에 의해 분비되거나 또는 첨가되는 적어도 세포외 매트릭스 요소,
    * 적어도 망막 색소 상피 세포 또는 적어도 분화된 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포,
    - 미소구획에 도입되는 세포가 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포인 경우: 적어도 망막 색소 상피 세포 및 가능하게는 다른 망막 세포를 얻기 위해 세포 미소구획 내에서 세포 분화를 유도하는 단계,
    - 중공형 3차원 망막 조직 단위의 형태로 망막 색소 상피 세포 및 임의의 다른 망막 세포를 회수하기 위해 하이드로겔 캡슐을 제거하는 단계
    를 포함하는, 망막 조직 단위를 제조하는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 망막 색소 상피 세포를 증식시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위를 제조하는 방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 상기 적어도 망막 색소 상피 세포로 분화할 수 있는 세포는 다능성 줄기 세포인 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위를 제조하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 다능성 줄기 세포는 유도 다능성 줄기 세포(IPS)인 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위를 제조하는 방법.
  19. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조직 단위를 눈에 주사하기에 적합한 외과적 이식 장치에 로딩하는 추가 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 망막 조직 단위를 제조하는 방법.
  20. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 조직 단위를 눈에 이식하기 위한 키트로서,
    - 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 1개 내지 10,000개의 조직 단위,
    - 상기 조직 단위(들)를 인간의 눈에 이식할 수 있는 외과적 이식 장치
    를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
  21. 제11항의 조직 단위를 눈에 이식하기 위한 키트로서,
    - 제11항의 1개 내지 10,000개의 조직 단위,
    - 하이드로겔 캡슐 제거 수단,
    - 상기 조직 단위(들)를 인간의 눈에 이식할 수 있는 외과적 이식 장치
    를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키트.
KR1020227008319A 2019-08-12 2020-08-12 망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도 KR20220054613A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FRFR1909155 2019-08-12
FR1909155A FR3099882A1 (fr) 2019-08-12 2019-08-12 Unité tridimensionnelle creuse de tissu rétinien et utilisation dans le traitement des rétinopathies
PCT/EP2020/072567 WO2021028456A1 (fr) 2019-08-12 2020-08-12 Unite tridimensionnelle creuse de tissu retinien et utilisation dans le traitement des retinopathies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220054613A true KR20220054613A (ko) 2022-05-03

Family

ID=70008570

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227008319A KR20220054613A (ko) 2019-08-12 2020-08-12 망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20220273727A1 (ko)
EP (1) EP4013433A1 (ko)
JP (1) JP2022544941A (ko)
KR (1) KR20220054613A (ko)
CN (1) CN114423857A (ko)
AU (1) AU2020327612A1 (ko)
BR (1) BR112022002624A2 (ko)
CA (1) CA3147254A1 (ko)
FR (1) FR3099882A1 (ko)
IL (1) IL290532A (ko)
WO (1) WO2021028456A1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3124193B3 (fr) * 2021-06-16 2023-09-22 Treefrog Therapeutics Microcompartiments cellulaires de grande taille comprenant plusieurs cystes
US20240060025A1 (en) * 2021-06-16 2024-02-22 Treefrog Therapeutics Large cellular microcompartments comprising a plurality of cysts

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003018040A1 (en) * 2001-08-24 2003-03-06 The Schepens Eye Research Institute, Inc. Composite graft for treatment of retinal diseases
EP2570139B1 (en) 2010-05-10 2019-08-07 Tsutomu Yasukawa Method for producing cell sheet
US9248013B2 (en) 2011-12-05 2016-02-02 California Institute Of Technology 3-Dimensional parylene scaffold cage
ES2880353T3 (es) 2014-10-24 2021-11-24 Sumitomo Dainippon Pharma Co Ltd Método de producción de tejido retiniano
CA3019357A1 (en) * 2016-04-04 2017-10-12 Biotime, Inc. Pluripotent stem cell-derived 3d retinal tissue and uses thereof
FR3058892B1 (fr) * 2016-11-23 2021-04-09 Univ Bordeaux Unite de tissu neural et utilisation d'une telle unite pour l'implantation dans le systeme nerveux d'un mammifere
FR3059009B1 (fr) * 2016-11-23 2018-12-07 Universite de Bordeaux Microcompartiment cellulaire et procedes de preparation
US11684698B2 (en) * 2017-09-08 2023-06-27 Riken Cell aggregate including retinal tissue and production method therefor

Also Published As

Publication number Publication date
IL290532A (en) 2022-04-01
BR112022002624A2 (pt) 2022-05-03
US20220273727A1 (en) 2022-09-01
JP2022544941A (ja) 2022-10-24
CA3147254A1 (fr) 2021-02-18
WO2021028456A1 (fr) 2021-02-18
FR3099882A1 (fr) 2021-02-19
EP4013433A1 (fr) 2022-06-22
AU2020327612A1 (en) 2022-03-03
CN114423857A (zh) 2022-04-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2717637T3 (es) Método para producir un primordio de órgano regenerativo dotado de una guía para trasplante
ES2727041T3 (es) Método de preparación de germen de folículo piloso regenerado para trasplante en el que se controla el color del pelo
CN109136184B (zh) 诱导人多能性干细胞分化为rpe细胞的方法
CN111164205A (zh) 包含视网膜组织的细胞聚集体及其制造方法
KR20220054613A (ko) 망막 조직으로 만든 중공형 3차원 단위 및 망막병증의 치료에서의 이의 용도
US20230257699A1 (en) Neural tissue unit and use of such a unit for implantation into the nervous system of a mammal
EP0700429B1 (en) Retinal pigment epithelium transplantation
Del Priore et al. Experimental and surgical aspects of retinal pigment epithelial cell transplantation
CN116121173B (zh) 一种眼组织类器官及其衍生细胞系、其制备方法和应用
RU2570041C1 (ru) Способ подготовки ожогового бельма роговицы к кератопротезированию
BRPI0708039A2 (pt) células alimentadoras derivadas de células-tronco de tecido
CN105274048A (zh) 一种可降解人iPSCs源性视网膜神经支架及其制作方法
CN112569227B (zh) 一种具有神经保护功能的3d立体移植材料体系及其应用
CA2395117A1 (en) Spore-like cells and uses thereof
CN114848833A (zh) 一种脱细胞基质胶辅助细胞递送扭转视功能的方法
RU2729937C1 (ru) Способ субретинальной трансплантации клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ), дифференцированных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, при атрофии ретинального пигментного эпителия в эксперименте
WO2024058679A1 (en) Fibrin patch containing corneal epithelial cells and the method of manufacturing there of
Khristov et al. Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Autologous Cell Therapy for Age-Related Macular Degeneration
CN114288293A (zh) 尼克酰胺在改善晶状体透明度中的应用
RU2494711C1 (ru) Способ хирургического лечения прогрессирующей и осложненной миопии
CN116829699A (zh) 视网膜色素上皮细胞在替代角膜内皮方面的应用
EP3847245A1 (en) Cryopreservation of cell-seeded substrates and related methods
NZ794776A (en) Neural tissue unit and use of such a unit for implantation in the nervous system of a mammal
François et al. Tissue culture studies of the adult pig retina