KR20220047258A

KR20220047258A - 면역 세포에 대한 개선된 제제

Info

Publication number: KR20220047258A
Application number: KR1020227002831A
Authority: KR
Inventors: 오마르 바에즈; 데빈 블라스
Original assignee: 벨리쿰 파마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2019-08-12
Filing date: 2020-08-12
Publication date: 2022-04-15
Also published as: CN114423498A; US20220273717A1; JP2022544358A; EP4013513A1; AU2020327994A1; BR112022001825A2; CA3147289A1; WO2021030482A1

Abstract

본 발명자들은, 보다 낮은 수준의 혈청 알부민 및 동결보호제, 예컨대 디메틸 술폭시드의 사용을 포함한, T 세포의 조성물에 대한 다양한 개선을 개시한다.

Description

면역 세포에 대한 개선된 제제

본원에서 인용된 모든 문헌 및 온라인 정보는 그 전체가 참조로 포함된다.

관련 출원의 참조

본 출원은 2019년 8월 12일 출원된 미국 가출원 62/885,747의 우선일의 이익을 청구하며, 상기 가출원은 그 전체가 본원에 포함된다.

기술 분야

본 발명은 면역 세포에 대한 제제 분야에 관한 것이다.

T 세포 활성화는 병원성 미생물 (예: 바이러스, 박테리아, 및 기생충), 외래 단백질, 및 환경의 유해 화학물질에 대한 보호 면역에서, 또한 암 및 기타 과증식성 질환에 대한 면역으로서 중요한 단계이다.

공여자 또는 환자로부터의 T 세포는 환자에 대한 이들의 투여 전에 유전적으로 변형될 수 있다. 예를 들어, 키메라 항원 수용체-발현 T 세포는 상이한 암 치료법을 비롯한 다양한 치료법에서 사용될 수 있다. 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포의 차용 전달은 특정 혈액학적 악성종양의 치료를 위한 효과적인 치료법이다. 변형된 T 세포는 또한, 재발을 치료 및 방지하고 이식 환자에게 면역을 제공하기 위해 조혈 세포 이식 (HCT) 및 줄기 세포 이식 (HSCT) 후에 사용될 수 있다.

유전적으로 변형된 공여자 T 세포는 통상적으로, 환자 또는 공여자로부터 T 세포를 취하고 이들이 유전적으로 조작되는 시설로 이들을 운송함으로써 얻어지고, 동결되고, 이후에 환자가 치료법을 수용할 수 있는 치료 시설로 복귀된다. 세포가 운송 및 동결되어야 하는 요건으로 인해, 이들은 통상적으로 세포를 보호하기 위한 동결보호제 등의 첨가제와 함께 제제화된다.

공지된 조성물은 때때로 조성물 중에 존재하는 첨가제의 일부로 인해 수용자에서의 부작용 또는 높은 제조 비용과 관련되었다. 유해 반응의 가능성을 감소시키고 비용 효율적인 방식으로 제조될 수 있는 개선된 제제를 제공할 필요성이 당업계에 존재한다.

요약

본 발명은, 높은 세포 농도에서도 세포 생존율 또는 치료적 효능의 임의의 유의미한 손실 없이, 선행 기술 조성물에 비해 더 적은 양의 동결보호제를 포함하는 조성물을 제공함으로써, 이러한 필요성을 충족시킨다. 이들 조성물은 요법에서 유용하다.

본 발명자들은, T 세포 및 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 <2.5% (v/v) 혈청 알부민 (바람직하게는 <2.2% (v/v), <2% (v/v), 또는 <1% (v/v), 또한 바람직하게는 <0.5% (v/v) 혈청 알부민)을 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 우수한 치료적 효능을 달성하지만, 제약학적으로-허용가능한 형태로 고가인 혈청 알부민을 일반적으로 보다 많은 양으로 포함하는 선행 기술 조성물에 비해 제조하기에 보다 저렴하다.

농축 조성물은 바람직하게는 또한 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 포함한다. DMSO는 통상적으로 혈청 알부민에 비해 과량 (v/v)으로 존재할 것이다. 농축 조성물이 x% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 경우, DMSO의 농도 (v/v)는 그에 따라 3x% 내지 30x%일 수 있고, 또한 바람직하게는 과량은 3배 내지 15배, 예를 들어 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배이다. 적어도 5배의 과량, 예를 들어 5배 내지 3배가 사용될 수 있다.

따라서, 본 발명자들은 또한, T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-2% (바람직하게는 <1% (v/v))이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 (바람직하게는 3배 내지 15배 더 높음, 예를 들어 6배 내지 12배 더 높음, 8배 내지 11배 더 높음, 또는 약 10배 더 높음; 적어도 5배 더 높은 농도가 사용될 수 있음) 농축 조성물을 제공한다.

이들 농축 조성물 중의 DMSO의 농도는 바람직하게는 <10% (v/v)이고, 보다 바람직하게는 2-8% (v/v), 4-7% (v/v), 5-6% (v/v), 또는 약 5%이다.

본 발명자들은 또한, T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 <5% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 상기에서 논의된 바와 같이, 동결보호제는 환자에서 유해 반응과 관련되는 것으로 보고되었지만, 그럼에도 불구하고 특히 세포의 우수한 해동-후 생존율을 보장하기 위해 중요한 것으로 간주되었다. 본 발명자들은, 보다 적은 양의 동결보호제 DMSO를 포함하는 조성물이, 세포가 우수한 해동-후 생존율을 나타내도록 이들을 해동으로부터 잘 보호한다는 것을 보여주었다.

본 발명자들은 또한, T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1% (예: 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%)이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)인 농축 조성물을 제공한다. DMSO 농도의 이 범위는, 높은 수준의 혈청 알부민을 필요로 하지 않으면서, 우수한 T 세포 회복률 및 생존율을 제공하는 것으로 나타났다.

이들 농축 조성물은 1x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL, 예를 들어 1x10⁶ 내지 35x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 33x10⁶,1.2x10⁶ 내지 30x10⁶,1.2x10⁶ 내지 20x10⁶,1.2x10⁶ 내지 15x10⁶,1.2x10⁶ 내지 10x10⁶,1.2x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또는 1.5x10⁶ 내지 2.5x10⁶ T 세포/mL를 포함할 수 있다. 적어도 1.5x10⁶ T 세포/mL의 농도가 전형적이고, 약 2x10⁶ T 세포/mL의 농도가 바람직하다. YESCARTA™에서의 T 세포의 농도는 3x10⁶/mL이고, KYMRIAH™에서는 2x10⁵/mL 내지 5x10⁶/mL의 범위이다.

모든 농축 조성물은 저온보존 형태 (예: -80℃ 이하, 또한 바람직하게는 -130℃ 이하의 온도에서) 뿐만 아니라 저온보존-전 및 저온보존-후 (예: 해동) 형태로 제공될 수 있다.

하나의 측면에서, 본 발명은 T 세포, 약 5-7% DMSO 및 약 0.1-1% (예: 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%) 인간 알부민 (v/v)의 현탁액을 포함하는 용기를 제공한다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 주입 백이다. 일부 구현예에서, 주입 백 부피는 약 15 mL, 30 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 100 mL, 250 mL, 500 mL, 750 mL, 1000 mL, 1500 mL, 2000 mL 또는 3000 mL이다.

본 발명의 농축 조성물은 환자에게 투여될 수 있지만, 높은 DMSO 농도가 때로는 세포 손상을 야기하고, 따라서 농축 조성물은 환자에 대한 투여 전에 희석될 수 있다. 이 희석액은 세포 손상을 피하도록 도울 수 있다. 희석 조성물은 심지어 희석된 DMSO가 세포 손상을 야기하는 것을 피하기 위해 이상적으로 희석 3시간 이내 (예: 60-120분 이내, 또한 이상적으로 90분 이내)에 환자에게 투여된다.

따라서 본 발명자들은 또한, T 세포 및 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 <1% (v/v) 혈청 알부민 (바람직하게는 <0.6% (v/v), 또한 보다 바람직하게는 0.15% (v/v))을 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 희석 조성물은 바람직하게는 또한, 상기에 기재된 바와 같이, DMSO를 3배 내지 30배의 혈청 알부민에 비해 과량 (v/v)으로 (예: 적어도 5배 과량 DMSO) 포함한다.

유사하게, 본 발명자들은, T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 희석 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.03-0.6% (바람직하게는 <0.3% (v/v))이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 (바람직하게는 3배 내지 15배 더 높음, 예를 들어 6배 내지 12배 더 높음, 8배 내지 11배 더 높음, 또는 약 10배 더 높음) 희석 조성물을 제공한다.

이들 희석 조성물 중의 DMSO의 농도는 바람직하게는 <3% (v/v)이고, 보다 바람직하게는 0.6-2.4% (v/v), 0.8-2.2% (v/v), 1.5-2% (v/v), 또는 1.6-1.9% (v/v), 또는 약 1.77% (v/v)이다.

본 발명자들은 또한, T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하며, 여기서 혈청 알부민의 농도는 0.03-0.3% (v/v)이고, DMSO 농도는 0.15-0.20% (v/v)인 희석 조성물을 제공한다.

이들 희석 조성물은 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 예를 들어 0.3x10⁶ 내지 10x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 9x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 7.5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 2x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또는 0.5x10⁶ 내지 0.8x10⁶ T 세포/mL를 포함할 수 있다. 적어도 0.45x10⁶ T 세포/mL의 농도가 전형적이고, 약 0.6x10⁶ T 세포/mL의 농도가 바람직하다.

희석 조성물은 환자에게 투여될 수 있고 (또한 투여되도록 의도되고), 따라서 이들은 일반적으로 동결되지 않는다. 바람직하게는, 이들은 4℃ 내지 40℃, 예를 들어 25-40℃, 또는 체온, 예를 들어 약 37+1℃의 온도를 가질 것이다. 해동 수조로부터의 제거 후 5℃ 내지 15℃의 온도를 갖는 조성물이 전형적일 수 있다.

추가로, 본원에 기재된 바와 같은 농축 조성물의 희석 단계를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 희석 조성물의 제조 프로세스가 제공된다. 희석은 다양한 액체로, 예를 들어 전해질 용액 (하기 참조)으로 수행될 수 있다. 이 프로세스는 또한, 동결된 농축 조성물의 해동, 그 후 희석 단계를 수반할 수 있다. 이어서 희석된 조성물을 (예를 들어, 희석과 투여 사이에 세포 배양 단계 없이) 환자에게 투여할 수 있다.

조성물의 나머지(즉, 세포, DMSO 및 혈청 알부민 성분 이외의 것)는 전해질 용액 (하기 참조)일 수 있다. 예를 들어, 세포를 제조하고, 이어서 세척하고, 전해질 용액 중에 현탁 (또한, 예를 들어 저온보존 및 해동 후에 임의로 희석)시킬 수 있다. 따라서, 바람직한 조성물은 본질적으로 세포, DMSO, 혈청 알부민, 및 전해질 용액으로 이루어질 수 있다.

농축 및 희석 조성물 중의 T 세포는 야생형 T 세포 (예: 폴리클로날 T 세포)일 수 있지만, 바람직하게는 이들은 유전적으로 변형된 T 세포 (예: CAR-T 세포)이다. 유전적으로 변형된 T 세포는 활성화제 스위치 및/또는 자살 스위치를 발현할 수 있다. T 세포는 가장 바람직하게는 인간 T 세포이다.

조성물 중의 혈청 알부민은 일반적으로 조성물 중의 T 세포와 동일한 종으로부터 유래될 것이다. 가장 바람직하게는, 조성물 중의 T 세포는 인간의 것이고, 따라서 가장 바람직한 구현예에서, 혈청 알부민은 인간 혈청 알부민 (HSA)이다. 이는 인간 혈청으로부터 제조될 수 있거나 재조합 인간 혈청 알부민일 수 있다.

본 발명의 조성물은, 예를 들어 정맥내 주입에 의해, 치료법 동안 환자에 대한 투여에 적합하고 이러한 투여를 위해 의도된다. 따라서, 조성물은 추가의 세포 배양 없이 투여될 수 있고, 예를 들어 그의 투여 전에 조성물에 세포 배양 배지가 첨가되지 않는다. 수용자는 혈액암 (예컨대 난치성 혈액암) 또는 유전적 혈액 장애를 가질 수 있다. 예를 들어, 수용자는 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 골수이형성 증후군 (MDS), 중증 복합 면역-결핍증 (SCID), 비스콧-알드리치(Wiskott-Aldrich) 증후군 (WA), 판코니 빈혈(Fanconi Anemia), 만성 골수성 백혈병 (CML), 비-호지킨(Hodgkin) 림프종 (NHL), 호지킨 림프종 (HL), 또는 다발성 골수종을 가질 수 있다. 조성물은 동종이식편의 수용 후 수용자가 이식-관련 감염을 제어하도록 도울 수 있다. 수용자는 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)을 수용하였을 수 있다. 환자에게 투여되는 T 세포는 통상적으로 자가조직 T 세포일 것이고, 통상적으로, 예를 들어 CAR, 자살 스위치 등을 발현하도록, 제거된 후 유전적으로 변형되었을 것이다.

따라서, 본 발명자들은 또한, 본원에 기재된 바와 같은 조성물 (바람직하게는 희석 조성물)을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 치료 방법을 제공한다. 유사하게, 본 발명자들은, 대상체의 치료에서의 사용을 위한, 농축 및 희석 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 방법은 그를 필요로 하는 환자에게 정맥내 주입에 의해 본원에 기재된 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 15 내지 120분이다. 일부 구현예에서, 정맥내 주입 시간은 30분 이하이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 50 내지 100 mL이다. 일부 구현예에서, 주입 부피는 약 50 mL이다.

도 1은 해동-후 세포 생존율에 대한 예측 프로파일러를 나타낸다.
도 2는 해동-후 세포 회복률에 대한 예측 프로파일러를 나타낸다.

상세한 설명

제제

면역 세포, 예컨대 T 세포 (특히 유전적으로 변형된 T 세포)는, 통상적으로 동결된 상태로 환자의 위치로 운송된다. 동결 및 해동 동안 생존율을 유지하기 위해, 세포는 이들을 손상으로부터 보호하기 위해 통상적으로 동결보호제와 함께 제제화된다. 예를 들어, 그렇지 않은 경우에는 세포를 손상시킬 수 있는, 동결 프로세스 동안 빙정의 형성을 방지하기 위해, 동결보호제 디메틸 술폭시드 (DMSO)가, 통상적으로 10% (v/v)의 농도로 첨가된다.

동결보호제, 예컨대 DMSO는 용량-의존적 부작용, 예컨대 메스꺼움, 구토, 복부 경련, 두통, 저혈압, 서맥, 용혈, 발진, 신부전, 고혈압, 심장 차단, 폐 부종, 심정지, 기관지경련, 및 신경학적 손상과 관련되었다. 따라서, DMSO의 농도를 5%로 감소시키기 위한 시도가 있었지만 (Morris et al. 2014 Transfusion 54:2514-22), 세포를 보존하면서 농도를 감소시키는 것이 어렵기 때문에 조성물은 여전히 빈번히 10% DMSO를 함유한다.

따라서, 수용자에 대한 가능한 부작용을 감소시키기 위해, 치료 센터는 주입 전에, 예를 들어 세포 세척을 통해, DMSO의 양을 감소시키기 위한 조치를 취할 수 있다. 그러나, 세포가 프로세스에서 손실될 수 있고, 각각의 추가의 취급 단계는 본질상 오염 가능성을 증가시키기 때문에 이 절차는 이상적이지 않다.

동결/해동 사이클 동안 T 세포를 생존가능하게 유지하는 것을 돕기 위해 조성물에 혈청 알부민이 또한 첨가된다. 특정 농도의 혈청 알부민의 첨가는 동결 동안 세포를 보존하기 위해 필수적인 것으로 간주된다. 예를 들어, KYMRIAH™에 대한 제제는 20% (v/v)의 25% 인간 혈청 알부민 (HSA)을 함유하고, YESCARTA™은 2.5% HSA를 갖는다. 혈청 알부민의 양 감소는 제제를 보다 비용 효과적으로 만드는 이점을 가질 것이지만, 그럼에도 불구하고 공지된 제제는 동결 동안 세포가 손상되지 않도록 보장하기 위해 고농도를 사용한다.

선행 기술에서는 T 세포의 생존율에 악영향을 주지 않으면서 이들 조성물에서 DMSO 및 혈청 알부민의 농도가 둘 다 감소될 수 있다는 지시가 없다.

본 발명자들은 놀랍게도, 공지된 제제에서보다 더 낮은 동결보호제 농도를 사용하여 T 세포를 안전하게 제제화할 수 있음을 발견하였다. 이들 제제는 특히 보다 비용 효과적이고 추가의 안전성 특징을 갖지만, T 세포가 환자에게 투여되는 최종 조성물 중에서 생존율을 유지한다. 이는 <2.5% (v/v) 혈청 알부민을 갖는 본원에 기재된 조성물을 제공함으로써 달성된다. 당업계의 조성물은 2.5% (v/v) 혈청 알부민을 함유하는 것으로 공지되어 있지만 (YESCARTA™), 다른 것들, 예를 들어 KYMRIAH™은 5% (v/v)까지의 훨씬 더 높은 양을 포함한다. 본 발명자들은 놀랍게도, T 세포의 해동-후 생존율 손실 없이 조성물 중의 혈청 알부민의 양이 감소될 수 있음을 발견하였다. 일부 구현예에서, 조성물은 <2% (v/v), <1.5% (v/v), <1% (v/v) 또는 심지어 ≤ 0.5% (v/v) 혈청 알부민 (또한 특히 인간 혈청 알부민)을 포함한다. 본 발명자들은, 이러한 낮은 농도가 세포의 우수한 해동-후 회복률을 달성함을 보여주었다. 조성물 중의 혈청 알부민의 수준은 통상적으로 적어도 0.05%일 것이다.

바람직한 조성물은 또한 DMSO를 포함한다. DMSO는 10% (v/v) 미만의 농도로 존재할 수 있다. 보다 낮은 농도가 사용될 수도 있고, 본 발명자들은 2 내지 8% (v/v) 범위의 농도의 DMSO (실시예 2)에서 특히 우수한 결과를 보았다. 따라서, 본 발명의 조성물은 2 내지 8% (v/v), 4 내지 7% (v/v), 4 내지 6% (v/v) 또는 5 내지 6% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 약 5.8% (v/v)의 동결보호제를 포함하는데, 본 발명자들이 이 농도가 특히 잘 작용함을 확인하였기 때문이다.

조성물이 혈청 알부민 및 DMSO 둘 다를 포함하는 경우, DMSO는 혈청 알부민보다 3배 내지 30배 더 높은 농도 (v/v)로 존재할 수 있다. DMSO 농도는 혈청 알부민 농도보다 3배 내지 15배 더 높거나, 6배 내지 12배 더 높거나, 8배 내지 11배 더 높거나, 약 10배 더 높을 수 있다. 공지된 조성물, 예컨대 KYMRIAH™ 및 YESCARTA™은 과량의 DMSO를 갖지만, 단지 1.5x 또는 2x이다.

조성물은 혈청 알부민 및 DMSO에 추가로 임의로 동결보호제를 포함할 수 있다. 예를 들어 조성물은 에틸렌 글리콜, 글리세롤, 및/또는 디에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 그러나, 통상적으로, 이들 추가의 동결보호제는 부재한다.

조성물은 멸균되어야 한다. 이상적으로, 이들은 또한 비발열성이다. 이들은 등장성일 수 있다. pH는 6-8의 범위, 예를 들어 6.5-8, 또는 6.8-7.7의 범위, 예를 들어 약 7.4일 수 있다.

조성물을 제조, 세척 또는 희석하기 위해 전해질 용액이 사용될 수 있고, 따라서 조성물은 전해질 용액을 포함할 수 있다. 조성물의 나머지 (즉, 세포, DMSO 및 혈청 알부민 성분 이외의 것)는 전해질 용액일 수 있다. 이러한 전해질 용액은 당업계에 공지되어 있고, 예컨대 Baxter Healthcare Corp.에 의해 판매되는 Plasma-Lyte™ 제품이다. Plasma-Lyte™ 제품은 그의 전해질 함량, 삼투질농도 및 pH에 있어 인간 혈장을 가깝게 모방하는 밸런싱된 결정상 용액의 패밀리이고, 이들은 비-발열성이고 등장성이다. 하나의 적합한 전해질 용액은 pH 6.5-8.0을 갖고, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 아세테이트, 클로라이드 및 글루코네이트를 포함하고, 이는 예를 들어 소듐 클로라이드, 소듐 글루코네이트, 소듐 아세테이트, 포타슘 클로라이드, 및 마그네슘 클로라이드를 포함한다. 이러한 유형의 바람직한 용액은 약 5.26 g/L NaCl, 약 5.02 g/L 소듐 글루코네이트, 약 3.68 g/L 소듐 아세테이트 삼수화물, 약 0.37 g/L KCl, 및 약 0.3 g/L MgCl₂.6H₂O를 갖는 6.5-8.0의 pH를 갖는 멸균, 비발열성, 등장성 용액 (예: Plasma-Lyte A™)이다. 또 다른 적합한 전해질 용액은 염 용액, 예컨대 소듐 클로라이드 용액 (예: 9 g/L NaCl을 함유하며, 통상적으로 308 mOsm/L의 삼투도를 갖는 생리 식염수)이다. 이들 다양한 용액은 이상적으로 비-발열성, 등장성이고, 멸균된 것이다.

농축 조성물은 바람직하게는 저온보존된다. 이는, 조성물이 -80℃ 이하, 또한 바람직하게는 -130℃ 이하의 온도에서 동결될 것임을 의미한다.

농축 조성물은 바람직하게는 용기 내에 있다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 주입 백이다. 일부 구현예에서, 주입 백 부피는 약 15 mL, 30 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 100 mL, 250 mL, 500 mL, 750 mL, 1000 mL, 1500 mL, 2000 mL 또는 3000 mL이다.

농축 조성물은 1x10⁶ 내지 40x10⁶ 세포/mL, 예를 들어 1x10⁶ 내지 35x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 33x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 30x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 20x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 15x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 10x10⁶, 1.2x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또는 1.5x10⁶ 내지 2.5x10⁶ T 세포/mL를 포함할 수 있다. 약 2x10⁶ 세포/mL의 농도가 바람직할 수 있다. 이들 수치는 조성물 중의 요망되는 T 세포의 농도를 지칭한다. 정확한 농도는 환자에게 투여될 용량에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 보다 많은 세포 수가 환자에게 투여되어야 하는 경우, 조성물 중의 세포 농도는 더 높을 수 있다. 적합한 세포 농도는 임상의에 의해 결정될 수 있다.

동결된 농축 조성물이 환자에게 투여되기 전에, 이들은 해동되어야 한다. 치료용 세포의 해동 방법은 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 동결된 조성물은 수조 (예: 37±1℃에서)를 사용하여 해동될 수 있다. 세포를 함유하는 밀봉 용기 (예: 임의로 제2 용기, 예컨대 지퍼-밀봉 플라스틱 용기 내에 밀봉된 저온보존 백)를 수조 중에 담그어 해동이 일어나게 할 수 있다. 조성물을 이것이 수조와 동일한 온도에 도달하기 전에 수조로부터 제거할 수 있다.

해동된 조성물은, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 희석 조성물을 제조하기 위해, 환자 내로의 주입 전에 희석될 수 있다. 이들 희석 조성물은 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ 세포/mL, 예를 들어 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 10x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 9x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 7.5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 2x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또는 0.5x10⁶ 내지 0.8x10⁶ T 세포/mL를 포함할 수 있다. 약 0.6x10⁶ 세포/mL의 농도가 바람직할 수 있다. 또한, 이들 수치는 조성물 중의 요망되는 T 세포의 농도를 지칭한다.

조성물은 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약학적으로 허용가능한"은 제약 조성물의 다른 성분과 상용성이고 대상체에게 안전하게 투여될 수 있는 담체를 지칭한다. 용어는 "생리학적으로 허용가능한" 및 "약리학적으로 허용가능한"과 동의어로 사용된다. 제약 조성물 및 이들의 제조 및 사용을 위한 기술은 본 개시내용에 비추어 당업자에게 공지되어 있다. 적합한 약리학적 조성물 및 이들의 투여를 위한 기술의 상세한 목록에 대하여, 하기와 같은 텍스트를 참조할 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. 1985; Brunton et al., "Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics," McGraw-Hill, 2005; University of the Sciences in Philadelphia (eds.), "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," Lippincott Williams & Wilkins, 2005; 및 University of the Sciences in Philadelphia (eds.), "Remington: The Principles of Pharmacy Practice," Lippincott Williams & Wilkins, 2008.

제약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로, 적어도 인간 사용을 위해, 멸균된 것일 것이다. 제약 조성물은 일반적으로 완충 및 저장시 보존을 위한 작용제를 포함할 것이고, 투여 경로에 따라, 적절한 전달을 위한 완충제 및 담체를 포함할 수 있다. 제약학적으로 허용가능한 담체의 예는, 제한 없이, 생리 (0.9%) 식염수, 인산염 완충 식염수 (PBS), 행크스 밸런싱 염 용액 (HBSS) 및 다중 전해질 용액, 예컨대 PlasmaLyte ATM (Baxter)을 포함한다. 제약학적으로 허용가능한 담체는 의도된 투여 방식에 적합화될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 주사를 위한 조성물은 멸균되고 혈액과 상용성인 성분을 포함할 수 있다.

제제는 면역 세포, 특히, T 세포, 및 다른 면역 세포 뿐만 아니라 조혈 계통의 다른 세포, 예컨대 림프 또는 골수 세포에 대한 것일 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 조성물 중의 세포는 명명된 세포 유형 또는 세포 유형들로 이루어지거나 본질적으로 이들로 이루어진다. 예를 들어, 조성물은, T 세포로 이루어지거나 본질적으로 이들로 이루어진 세포를 포함할 수 있다. 용어 "본질적으로 ~로 이루어진"은 언급된 요소 및 청구된 조합의 기본적 및 신규한 특징에 실질적으로 영향을 주지 않는 다른 요소의 포함을 지칭한다.

T 세포 조성물의 희석 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 조성물은 본원에서 논의된 바와 같은 전해질 용액을 사용하여, 예를 들어 Plasma-Lyte™ 용액, 예컨대 Plasma-Lyte A™ 용액을 사용하여, 또는 식염수를 사용하여 희석될 수 있다. 희석 후 조성물은 이상적으로 90분 이내에 대상체에게 투여된다.

임상의에 의해 적합한 것으로 간주되는 임의의 비율로 희석될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 1:2 내지 1:10의 비율로 희석될 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 3:7 (즉, 1:2⅓)의 비율로 희석된다. KYMRIAH™ 및 YESCARTA™ 제품은 주입 전에 희석되지 않는다.

일부 구현예에서, 조성물은, 이것이 희석 후에 요망되는 세포 농도를 함유하도록 희석될 것이다. 이를 위해, 최종 희석 조성물이 요망되는 수의 세포/mL를 함유하도록 조성물 중의 세포 수가 결정되고 희석 인자가 계산될 수 있다.

농축 조성물은 다양한 부피를 가질 수 있다. 전형적인 부피는 5-100 mL, 예를 들어 10-20 mL (예: 약 15 mL) 또는 50-70 mL (예: 약 60 mL)일 것이다. 일부 구현예에서 조성물은 적어도 14 mL의 부피를 갖고; 일부 구현예에서 저온보존 조성물은 적어도 2 mL, 예를 들어 적어도 5 mL의 부피를 갖는다. 500x10⁶ 미만의 세포를 포함하는 조성물에 대해서는 약 15 mL의 부피가 유용할 수 있지만, 500x10⁶ 초과의 세포를 포함하는 조성물에 대해서는 약 60 mL의 부피가 유용할 수 있다.

조성물은 저온보존 백 내에 위치할 수 있고, 이는 또한 저온보존 카세트 내에 또는 지퍼-밀봉 플라스틱 용기 내에 위치할 수 있다. 저온보존 백 내의 농축 조성물은, 예를 들어 시린지를 통한 전해질 용액의 도입에 의해, 백 내에서 희석되어 희석 조성물을 제공할 수 있다. 예를 들어, 7:3 희석 비율을 제공하기 위해, 35 mL의 전해질 용액이 15 mL의 농축 조성물에 첨가될 수 있거나, 또는 140 mL의 전해질 용액이 60 mL의 농축 조성물에 첨가될 수 있다.

저온보존 백 (또는 다른 용기)은 바람직하게는 ISBT 128 표준 (1994년에 승인됨)에 따르는 식별 라벨을 포함한다. 전형적인 저온보존 백은 출구 포트를 포함하고, 이는 격벽을 갖는 스파이크 포트일 수 있고, 또한 이는 변조 방지(tamper-evident) 덮개에 의해 외부 오염으로부터 보호될 수 있다.

저온보존은, 예를 들어 튜브를 통해, 백으로부터 물질을 인출하기 위한 백 스파이크를 수용하도록 구성된 스파이크 포트를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 조성물은 페놀 레드 (페놀술폰프탈레인)을 실질적으로 갖지 않고, 예를 들어 페놀 레드의 농도가 50 μg/L 미만이고, 이상적으로는 5 μg/L 미만이다. 예를 들어, RPMI-1640 배지의 사용 후에, 잔류 페놀 레드가 존재할 수 있다. 조성물은 페놀 레드를 함유하지 않을 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 2-10% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 35x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 2-10% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 30x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 2-10% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 20x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 2-10% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 10x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 2-10% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 2-8% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.4-1% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 2-8% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 35x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.4-1% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 2-8% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 30x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.4-1% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 2-8% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 20x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.4-1% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 2-8% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 10x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <2% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.4-1% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 35x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 30x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 20x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 10x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.5% (v/v) 내지 2% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <1% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 2x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <10% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 5% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <1% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 2x10⁶ T 세포/mL, 및 (iii) <10% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <8% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 5% (v/v) DMSO, 및 (ii) 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 2x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 농축 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <1% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 유전적으로 변형된 1.5x10⁶ 내지 40x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 농축 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명자들은 유전적으로 변형된 약 30x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 유전적으로 변형된 1.5x10⁶ 내지 30x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 농축 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명자들은 유전적으로 변형된 약 20x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 유전적으로 변형된 1.5x10⁶ 내지 20x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 농축 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명자들은 유전적으로 변형된 약 12x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 유전적으로 변형된 1.5x10⁶ 내지 10x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 농축 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명자들은 유전적으로 변형된 약 2x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 농축 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 1.5x10⁶ T 세포/mL 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 2x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 <1% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, 인간 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 농축 조성물로, 여기서 인간 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)이고, 인간 T 세포의 농도는 1.5x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 30 x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 20 x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 15 x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 10 x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 5 x10⁶ T 세포/mL, 바람직하게는 약 2x10⁶ T 세포/mL인 농축 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.15% (v/v) 내지 0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 예를 들어 0.3x10⁶ 내지 10x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 9x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 7.5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 2x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또는 0.5x10⁶ 내지 0.8x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 0.6-3% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.15% (v/v) 내지 0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 3x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 0.6-3% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.6-2.5% (v/v) DMSO, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 예를 들어 0.3x10⁶ 내지 10x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 9x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 7.5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 2x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또는 0.5x10⁶ 내지 0.8x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 0.6-3% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다. 이 조성물은 또한 <0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.1-0.3% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) 0.6-2.5% (v/v) DMSO, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 3x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 0.6-3% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다. 이 조성물은 또한 <0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 0.1-0.3% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 12x10⁶ T 세포/mL, 예를 들어 0.3x10⁶ 내지 10x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 9x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 7.5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 5x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 2x10⁶ T 세포/mL, 0.3x10⁶ 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또는 0.5x10⁶ 내지 0.8x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.15% (v/v) 내지 0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 희석 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 (i) 조성물은 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 3x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 0.15% (v/v) 내지 0.6% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 희석 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <0.3% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.15% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 0.6x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <3% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 1.5% (v/v) DMSO를 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <0.3% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.15% (v/v) 인간 혈청 알부민, (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 0.6x10⁶ T 세포/mL, 및 (iii) <3% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 1.5% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포 및 DMSO를 포함하는 희석 조성물로, 여기서 조성물은 (i) <2.5% (v/v) DMSO, 또한 바람직하게는 약 1.5% (v/v) DMSO, 및 (ii) 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 0.6x10⁶ T 세포/mL를 포함하는 것인 희석 조성물을 제공한다. 이 조성물은 또한 <0.3% (v/v) 인간 혈청 알부민, 또한 바람직하게는 약 0.15% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함할 수 있다.

본 발명자들은, 유전적으로 변형된 0.5x10⁶ 내지 3x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.5% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 5% (v/v) DMSO를 포함하는 농축 조성물을 제공한다. 예를 들어, 본 발명자들은 유전적으로 변형된 약 0.6x10⁶ 인간 T 세포 / 밀리리터, 약 0.15% (v/v) 인간 혈청 알부민, 및 약 1.5% (v/v) DMSO를 포함하는 조성물을 제공한다.

본 발명자들은, 인간 T 세포, DMSO, 및 인간 혈청 알부민을 포함하며, 여기서 (i) 조성물은 0.5x10⁶ T 세포/mL 내지 1.5x10⁶ T 세포/mL, 또한 바람직하게는 약 0.6x10⁶ T 세포/mL를 포함하고, (ii) 조성물은 <0.3% (v/v), 또한 바람직하게는 약 0.15% (v/v) 인간 혈청 알부민을 포함하고, (iii) DMSO의 농도는 인간 혈청 알부민의 농도보다 5-15배 더 높고, 바람직하게는 약 10배 더 높은 것인 희석 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 인간 T 세포, 인간 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 희석 조성물로, 여기서 인간 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)이고, 인간 T 세포의 농도는 1.5x10⁶ 내지 5x10⁶ 세포/mL, 바람직하게는 약 2x10⁶ 세포/mL인 희석 조성물을 제공한다.

일부 구현예에서, T 세포를 포함하는 본원에 기재된 조성물은 5-7% DMSO 및 0.1-1% 인간 혈청 알부민 중의 T 세포의 대략 15 내지 60 mL의 동결된 현탁액을 함유하는 주입 백 내에서 공급된다. 일부 구현예에서, T 세포는 5-7% DMSO 및 0.1-1% 인간 혈청 알부민 중의 T 세포의 대략 15-100 mL, 15-90 mL, 15-80 mL, 15-70 mL, 15-60 mL, 60-70 mL, 60-75 mL, 또는 65-75 mL의 현탁액을 함유하는 주입 백 내에서 공급된다.

혈청 알부민의 농도는, 실제로 혈청 알부민이 농축 혈청 알부민 용액의 부피 희석에 의해 혼입되기 때문에 (예를 들어, 1% HSA는, 예를 들어 40 mL를 1 L의 최종 부피 중으로 희석시키는 25% 용액의 25배 부피 희석에 의해 달성될 수 있음), 본원에서 v/v로 표현되지만, 농축 혈청 알부민 용액은 중량 기준으로 제조될 것이다 (예를 들어, 농축된 25% 용액은 100 mL의 수성 부피 중의 25 g의 혈청 알부민을 함유함). 따라서, 궁극적으로, 혈청 알부민의 v/v 백분율은 실제로 1:1 기준의 w/v 백분율을 반영하며, 즉, 이들 단위는 상호교환가능하게 사용된다.

T 세포

본원에 개시된 조성물은 T 세포를 포함한다. 본 발명에서의 사용을 위한 적합한 T 세포의 예는 CAR-T 세포 및 야생형 폴리클로날 T 세포를 포함한다. 조성물은 유전적으로 변형된 T 세포, 예컨대 CAR-T 세포에 대해 특히 유용하다.

유전적으로 변형된 T 세포는 공여자 림프구 투여로부터 이익을 얻을 수 있는 대상체에 대한 투여를 위해 유용하다. 이들 대상체는 전형적으로 인간일 것이다. 따라서, 가장 바람직하게는, T 세포는 인간 T 세포이다.

본 발명의 조성물 중의 T 세포는 일반적으로 단일 공여자로부터 유래될 것이고, 이들은, 예를 들어, 확장 및/또는 유전적 변형 후, 그 공여자에게 또는 또 다른 수용자에게 재도입되도록 의도될 수 있다.

T 세포는 임의의 공여자로부터 유래될 수 있다. 공여자는 일반적으로 성인 (적어도 18세)일 것이지만, 아동 또한 T 세포 공여자로서 적합하다 (예를 들어, 하기 문헌 참조: Styczynski 2018, Transfus Apher Sci 57(3):323-330). T 세포는 또한 유전적으로 변형된 세포를 필요로 하는 동일한 환자로부터 유래될 수 있다.

공여자로부터 T 세포를 얻기 위한 적합한 프로세스가 공개 프로토콜에 기재되어 있고, 이는 하기 문헌을 동반한다: Di Stasi et al. (2011) N Engl J Med 365:1673-83. 일반적으로, T 세포는 공여자로부터 얻어지고, 유전적 변형 및 선택에 적용되고, 이어서 수용자 대상체에게 투여될 수 있다. T 세포의 유용한 공급원은 공여자의 말초 혈액이다. 말초 혈액 샘플은 일반적으로 백혈구에 대해 풍부화된 샘플을 제공하기 위해 백혈구성분채집술(leukapheresis)에 적용될 것이다. 이 풍부화된 샘플 (또한 류코팩(leukopak)으로서 공지됨)은 단핵구, 림프구, 혈소판, 혈장, 및 적혈구를 포함한 다양한 혈액 세포로 구성될 수 있다. 류코팩은 전형적으로 정맥천자 또는 백혈구연층(buffy coat) 생성물에 비해 더 높은 농도의 세포를 함유한다.

샘플이 동종고갈(allodepletion)에 적용될 수도 있지만, 샘플이 동종고갈에 적용되지 않는 것이 바람직하다. 따라서 바람직한 샘플은 하기 문헌에서 논의된 바와 같은 알로리플레트(alloreplete)이다: Zhou et al. (2015) Blood 125:4103-13. 이들 집단은 공여자 세포의 치료적 이점을 제공하기 위해 보다 강건한 T 세포 레퍼토리를 제공한다. 따라서 바람직한 본 발명의 조성물은 T 세포 동종고갈된 것이 아니고, 동종고갈 단계에 적용되지 않았던 것이다.

공여자 T 세포는 일반적으로 유전적으로 변형되기 전에 (통상적으로 활성화 조건 하에, 예를 들어 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 사용하여, 임의로 시토카인, 예컨대 IL-2, IL-15, 및/또는 IL-7의 존재 하에) 배양된다. 이 단계는 변형 프로세스 종료시 보다 높은 T 세포의 수율을 제공한다.

T 세포는, 관심 안전성 스위치, 공동자극 스위치 및/또는 키메라 항원 수용체 (하기 참조) 등의 바람직한 핵산을 인코딩하는 바이러스 벡터를 사용하여 형질도입될 수 있다. 적합한 형질도입 기술은 당업계에서 개시되어 있을 뿐만 아니라 널리 공지되어 있고, 피브로넥틴 단편 CH-296을 수반할 수 있다. 바이러스 벡터를 사용하는 형질도입에 대한 대안으로서, 세포는, 예를 들어 칼슘 포스페이트, 양이온성 중합체 (예컨대 PEI), 자기 비드, 전기천공 및 상업적 지질 기재의 시약, 예컨대 Lipofectamine™ 및 Fugene™을 사용하여, 관심 핵산 및 관심 세포 표면 트랜스진 마커를 인코딩하는 DNA로 형질감염될 수 있다. 형질도입/형질감염 단계의 하나의 결과는, 다양한 공여자 T 세포가 이제, 관심 자살 스위치를 발현할 수 있는 유전적으로 변형된 T 세포일 것이라는 것이다.

형질도입을 위한 바람직한 바이러스 벡터는 하기 문헌에 의해 개시된 레트로바이러스 벡터이다: Tey et al. (2007), Biol Blood Marrow Transpl 13:913-24 및 Di Stasi et al. (2011) supra. 이 벡터는 iCasp9 자살 스위치 및 ΔCD19 세포 표면 트랜스진 마커를 인코딩하는 긴팔원숭이 유인원(Gibbon ape) 백혈병 바이러스 (Gal-V) 위형화 레트로바이러스를 기반으로 한다 (추가로 하기 참조). 이는 하기 문헌에 의해 논의되는 바와 같이 PG13 패키징 세포 라인에서 생성될 수 있다: Tey et al. (2007) supra. 요망되는 단백질을 인코딩하는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수도 있다. 레트로바이러스 벡터, 특히 세포 당 많은 카피 수의 프로바이러스 통합자를 제공할 수 있는 것들이 바람직하다.

형질도입/형질감염 후, 세포를 형질도입/형질감염 물질로부터 분리하고 다시 배양하여, 유전적으로 변형된 T 세포가 확장될 수 있게 할 수 있다. T 세포는 유전적으로 변형된 T 세포의 요망되는 최소 수가 달성되도록 확장될 수 있다.

특정 차용 세포 전달 방법은 CAR-변형된 T 세포를 사용하고, 다양한 악성종양의 치료에 대한 큰 가능성을 보유한다. 이 치료법에서는, T 세포를 환자의 또는 공여자의 혈액으로부터 추출하고 유전적으로 조작하여 세포 표면 상에 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시킨다.

키메라 항원 수용체

일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물 및 방법은 CAR-T 세포 집단을 사용한다. "키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"이란, 예를 들어, T 세포를 활성화시키고 특이적 면역을 제공하기 위해 선택된 막횡단 폴리펩티드 및 세포내 도메인 폴리펩티드에 연결된 표적 항원을 인식하는 폴리펩티드 서열 (항원-인식 도메인, 항원 인식 영역, 항원 인식 모이어티, 또는 항원 결합 영역)을 포함하는 키메라 폴리펩티드를 의미한다.

항원 인식 모이어티

"항원 인식 모이어티"는, 항원에 결합하는, 예를 들어, 자연 유래된, 또는 합성의 항체 단편 가변 도메인 등의 임의의 폴리펩티드 또는 그의 단편일 수 있다. 항원 인식 모이어티의 예는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 예를 들어, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편 등의, 항체로부터 유래된 폴리펩티드; 예를 들어, TCR 가변 도메인 등의, T 세포 수용체로부터 유래된 폴리펩티드; 세포외 동족 단백질에 결합되는 임의의 리간드 또는 수용체 단편 (예: CD27, NKG2D), 및 신호화 도메인 (예: "자이토카인")에 인공 융합될 수 있는 분비 인자 (예: 시토카인, 성장 인자). 종양-관련 표적에 높은 친화도로 결합하는 펩티드를 식별하기 위해 조합 라이브러리가 또한 사용될 수 있다. 또한, 비오티닐화 종양-표적화 항체 (Urbanska (12) Ca Res)와 조합하여 신호화 도메인에 아비덴을 융합시킴으로써 또는 IgG-표적화 종양 (Kudo K (13) Ca Res)에 결합하도록 Fc 감마 수용체/CD16를 사용함으로써 "보편적" CAR이 제조될 수 있다.

막횡단 영역

본원에서 키메라 단백질은 단일-통과 또는 다중 통과 막횡단 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 키메라 단백질의 N-말단 또는 C-말단에). 단일 통과 막횡단 영역은 특정 CD 분자, 티로신 키나제 수용체, 세린/트레오닌 키나제 수용체, TGFβ, BMP, 악티빈 및 포스파타제에서 나타난다. 단일 통과 막횡단 영역은 종종 단일 펩티드 영역 및 약 20 내지 약 25개의 아미노산의 막횡단 영역을 포함하고, 이들 중 많은 것은 소수성 아미노산이고 알파 나선을 형성할 수 있다. 양으로 대전된 아미노산의 짧은 트랙은 종종 막에 단백질을 고정하기 위해 막횡단 범위를 따른다. 다중 통과 단백질은 이온 펌프, 이온 채널, 및 수송체를 포함하고, 막에 다수회 걸쳐지는 2개 이상의 나선을 포함한다. 모든 또는 실질적으로 모든 다중 통과 단백질은 때로는 키메라 단백질 내에 혼입된다. 단일 통과 및 다중 통과 막횡단 영역에 대한 서열은 공지되어 있고, 키메라 단백질 분자 내로의 혼입을 위해 선택될 수 있다.

일부 구현예에서, 막횡단 도메인은 CAR의 세포외 도메인으로 융합된다. 하나의 구현예에서는, CAR 내의 도메인 중 하나와 자연적으로 연합되는 막횡단 도메인이 사용된다. 다른 구현예에서는, CAR 내의 도메인 중 하나와 자연적으로 연합되지 않는 막횡단 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막횡단 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에 대한 이러한 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환 (예를 들어, 전형적으로 소수성 잔기로 대전됨)에 의해 선택되거나 변형될 수 있다.

막횡단 도메인은, 예를 들어, T 세포 수용체, CD3-ε, CD3 ζ, CD4, CD5, CD8, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD38, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, 또는 CD154의 알파, 베타, 또는 제타 사슬로부터 유래될 수 있다. 또는, 일부 예에서, 막횡단 도메인은 드노보(de novo) 합성될 수 있고, 이는 예를 들어, 류신 및 발린 등의 소수성 잔기를 대부분 포함한다. 특정 구현예에서, 짧은 폴리펩티드 링커가 키메라 항원 수용체의 막횡단 도메인과 세포내 도메인 사이에 연결을 형성할 수 있다. 키메라 항원 수용체는 추가로, 세포외 도메인과 막횡단 도메인 사이의 아미노산의 세포외 영역인 스타크(stalk)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 스타크는 선택된 막횡단 도메인과 자연적으로 연합된 아미노산의 서열일 수 있다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 CD8 막횡단 도메인을 포함하고, 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 CD8 막횡단 도메인, 및 막횡단 도메인의 세포외 부분 상의 추가의 아미노산을 포함하고, 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 CD8 막횡단 도메인 및 CD8 스타크를 포함한다. 키메라 항원 수용체는 추가로, 막횡단 도메인이 유래된 폴리펩티드와 자연적으로 연합된, 막횡단 도메인과 세포질 도메인 사이의 아미노산의 영역을 포함할 수 있다.

표적 항원

키메라 항원 수용체는 표적 항원에 결합한다. 시험관내 또는 생체외 T 세포 활성화 검정시, 표적 항원이 다양한 공급원으로부터 얻어지거나 단리될 수 있다. 표적 항원은, 본원에서 사용되는 바와 같이, 포유류에서 면역 인식 및 질환-유발 작용제 또는 질환 상태의 궁극적인 제거 또는 제어에 있어 중대한 항원 또는 항원 상의 면역 에피토프이다. 면역 인식은 세포 및/또는 체액성일 수 있다. 세포내 병원체 및 암의 경우, 면역 인식은, 예를 들어, T 림프구 반응일 수 있다.

표적 항원은, 예를 들어, HIV (Korber et al, eds HIV Molecular Immunology Database, Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, N. Mex), 인플루엔자, 단순 헤르페스, 인간 유두종 바이러스 (미국 특허 번호 5,719,054), 간염 B (미국 특허 번호 5,780,036), 간염 C (미국 특허 번호 5,709,995), EBV, 시토메갈로바이러스 (CMV) 등을 포함한 바이러스와 같은 병원성 미생물로부터 유래되거나 단리될 수 있다. 표적 항원은, 예를 들어, 하기로부터의 병원성 박테리아로부터 유래되거나 단리될 수 있다: 클라미디아(Chlamydia) (미국 특허 번호 5,869,608), 마이코박테리아(Mycobacteria), 레지오넬라(Legionella), 메닝고콕쿠스(Meningococcus), 그룹 A 스트렙토콕쿠스(Streptococcus), 살모넬라(Salmonella), 리스테리아(Listeria), 헤모필루스 인플루엔자에(Hemophilus influenzae) (미국 특허 번호 5,955,596) 등). 표적 항원은, 예를 들어, 하기를 포함한 병원성 이스트로부터 유래되거나 단리될 수 있다: 아스페르길루스(Aspergillus), 침습성 칸디다(Candida) (미국 특허 번호 5,645,992), 노카르디아(Nocardia), 히스토플라스모시스(Histoplasmosis), 크립토스포리디아(Cryptosporidia) 등. 표적 항원은, 예를 들어, 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는 병원성 원충 및 병원성 기생충으로부터 유래되거나 단리될 수 있다: 뉴모시스티스 카리니이(Pneumocystis carinii), 트리파노소마(Trypanosoma), 레이쉬마니아(Leishmania) (미국 특허 번호 5,965,242), 플라스모디움(Plasmodium) (미국 특허 번호 5,589,343) 및 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii).

용어 "항원"은 본원에서 사용되는 바와 같이 면역 반응을 유발하는 분자로서 정의된다. 이 면역 반응은 항체 생성, 또는 특정 면역학적으로 유능한 세포의 활성화, 또는 이들 둘 다를 수반할 수 있다. 항원은 유기체, 단백질/항원의 서브유닛, 사멸 또는 불활성화된 전체 세포 또는 용해물로부터 유래될 수 있다. 따라서, 실질적으로 모든 단백질 또는 펩티드를 포함한 임의의 거대분자가 항원으로서 작용할 수 있다. 또한, 항원은, 예를 들어, 항원의 합성에서 면역 반응 결과를 끌어내는 단백질에 대한 병원성 게놈 또는 유전자 또는 유전자의 단편의 뉴클레오티드 서열 또는 부분적 뉴클레오티드 서열을 함유하는 임의의 DNA를 포함한, 재조합 또는 게놈 DNA로부터 유래될 수 있다.

표적 항원은 종양전 또는 과형성 상태와 관련된 항원을 포함한다. 표적 항원은 또한 암과 관련되거나 암의 원인일 수 있다. 이러한 표적 항원은, 예를 들어, 종양 특이적 항원, 종양 관련 항원 (TAA) 또는 조직 특이적 항원, 이들의 에피토프, 및 이들의 에피토프 작동제(agonist)일 수 있다. 이러한 표적 항원은 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 암배아 항원 (CEA) 및 그의 에피토프, 예컨대 CAP-1, CAP-1-6D 등 (진뱅크(GenBank) 수탁 번호 M29540), MART-1 (Kawakarni et al, J. Exp. Med. 180:347-352, 1994), MAGE-1 (미국 특허 번호 5,750,395), MAGE-3, GAGE (미국 특허 번호 5,648,226), GP-100 (Kawakami et al Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91:6458-6462, 1992), MUC-1, MUC-2, 점 돌연변이된 ras 종양유전자, 정상 및 점 돌연변이된 p53 종양유전자 (Hollstein et al Nucleic Acids Res. 22:3551-3555, 1994), PSMA (Israeli et al Cancer Res. 53:227-230, 1993), 티로시나제 (Kwon et al PNAS 84:7473-7477, 1987) TRP-1 (gp75) (Cohen et al Nucleic Acid Res. 18:2807-2808, 1990; 미국 특허 번호 5,840,839), NY-ESO-1 (Chen et al PNAS 94: 1914-1918, 1997), TRP-2 (Jackson et al EMBOJ, 11:527-535, 1992), TAG72, KSA, CA-125, CD-123, PSA, HER-2/neu/c-erb/B2, (미국 특허 번호 5,550,214), BRC-I, BRC-II, bcr-abl, pax3-fkhr, ews-fli-1, TAA의 변형 및 조직 특이적 항원, TAA의 스플라이스 변형체, 에피토프 작동제 등. 미국 특허 번호 4,514,506에 개시된 것들과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 다른 TAA가 식별, 단리 및 클로닝될 수 있다. 표적 항원은 또한 하나 이상의 성장 인자 및 각각의 스플라이스 변형체를 포함할 수 있다. 종양 항원은, 종양에 대하여 숙주에서 면역 반응을 촉발하는, 예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드 등의 임의의 항원일 수 있다. 종양 항원은 신생 종양 세포와 관련된 종양-관련 항원일 수 있다.

이들 항원을 표적화하는 scFv가 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 하기 문헌을 참조한다: Berahovich et al., 2018 Cancers 10, 323; Wang et al., 2015, Molecular Therapy 23(1): 184-191; Han et al. 2018, Am J Cancer Res 8(1):106-119; Qin et al., 2017; Hematol & Oncol. 10:68; Jachimowicz et al. 2011, Molecular Cancer Therapeutics 10(6): 1036-1045; Schau et al. 2019, Scientific reports 9:3299; Han et al. 2017, Clin Cancer Res 23(13):3385-3395; Nejatollahi et al., 2013, Journal of Oncology Vol. 2013, Article ID 839831; Kugler et al, 2010 BJH Vol 150, 574-586.

공동자극

일부 구현예에서, 본 발명은 공동자극 폴리펩티드를 포함하는 CAR-T 세포 집단을 포함하는 조성물 및 방법을 제공한다.

CAR는 먼저 단일 신호화 도메인, 예를 들어, 또한 "제1 세대 CAR"로서 공지된 CD3ζ으로 디자인되었지만 (예를 들어, 하기 참조: Becker et al. (1989) Cell 58:911-921; Goverman et al. (1990) Cell 60:929-939; Gross et al. (1989) Proc Natl Acad Sci U.S.A. 86:10024-10028; Kuwana et al. (1987) Biochem Biophys Res Commun 149:960-968), CAR 면역요법의 실행가능성을 평가하는 임상 시험은 제한된 임상적 이득을 나타내었다 (예를 들어, 하기 참조: Till et al. (2012) Blood 119:3040-3050; Pule et al. (2008) Nat Med 14:1264-1270; Jensen et al. (2010) Biol Blood Marrow Transplant 16:1245-1256; Park et al. (2007) Mol Ther 15:825-833). 제한된 임상적 이득은 주로 종양 인식에 따른 T 세포의 불완전한 활성화에 기인하였고, 이는 생체내 세포의 지속 및 확장의 제한으로 이어진다 (예를 들어, 하기 참조: Ramos et al. (2011) Expert Opin Biol Ther 11:855-873).

이러한 결핍을 해결하기 위해, CAR는, 종종, CAR-T 세포가 표적 항원의 맞물림에 따라 적절한 공동자극을 수용할 수 있게 하는, CD28, 4-1BB, OX40, ICOS 및 DAP10을 포함한 T 세포 공동자극 분자의 세포질 부분으로부터 유래된 또 다른 자극 도메인을 포함하도록 조작되었다 (예를 들어, 하기 참조: Carpenito et al. (2009) Proc Natl Acad Sci U.S.A. 106:3360-3365; Finney et al. (1998) J Immunol 161:2791-2797; Hombach et al. J Immunol 167:6123-6131; Maher et al. (2002) Nat Biotechnol 20:70-75; Imai et al. (2004) Leukemia 18:676-684; Wang et al. (2007) Hum Gene Ther 18:712-725; Zhao et al. (2009) J Immunol 183:5563-5574; Milone et al. (2009) Mol Ther 17:1453-1464; Yvon et al. (2009) Clin Cancer Res 15:5852-5860). 가장 통상적으로 사용되는 공동자극 분자는 CD28 및 4-1BB를 포함하고, 이는, 종양 인식에 따라, 신호화 캐스캐이드를 개시하여 NF-κB 활성화를 일으키고, 이는 T 세포 증식 및 세포 생존을 촉진한다. 난치성 급성 림프구성 백혈병 (ALL)의 치료를 위한 CD28 또는 4-1BB 신호화 도메인을 갖는 항-CD19 CAR로 수행된 임상 시험은 차용 전달 후 현저한 T 세포 지속, 확장 및 일련의 종양 사멸을 입증하였다 (Kalos et al. (2011) Sci Transl Med 3:95ra73; Porter et al. (2011) N Engl J Med 365:725-733; Brentjens et al. (2013) Sci Transl Med 5:177ra38). 제3 세대 CAR-T 세포는 OX40 및 4-1BB와 같은 종양 괴사 인자 (TNF)-패밀리 단백질의 추가 신호화 분자와 함께 CD28-변형된 CAR을 덧붙인다 (Finney HM, et al. J Immunol 172:104-13, 2004; Guedan S, et al., Blood, 2014).

일부 구현예에서, DMSO 및 HSA를 함유하는 본원에 기재된 조성물은 CAR-T 세포를 포함한다.

일부 구현예에서, DMSO 및 HSA를 함유하는 본원에 기재된 조성물은 키메라 항원 수용체-발현 T 세포의 증강 및 유지를 위한 공동자극 폴리펩티드를 포함하는 CAR-T 세포를 포함한다.

공동자극 폴리펩티드는 유도성이거나 구성적으로 활성화될 수 있다. 공동자극 폴리펩티드는 하나 이상의 공동자극 신호화 영역, 예컨대 CD27, ICOS, RANK, TRANCE, CD28, 4-1BB, OX40, DAP10, MyD88, 또는 CD40 또는, 예를 들어, 이들의 세포질 영역을 포함할 수 있다. 공동자극 폴리펩티드는 CD27, ICOS, RANK, TRANCE, CD28, 4-1BB, OX40, DAP10, MyD88, 또는 CD40에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 하나 이상의 적합한 공동자극 신호화 영역을 포함할 수 있다. 공동자극 폴리펩티드는 종양 괴사 인자 수용체 (TNFR) 패밀리 (즉, CD40, RANK/TRANCE-R, OX40, 4-1BB) 및 CD28 패밀리 구성원 (CD28, ICOS)의 NF-κB 경로, Akt 경로, 및/또는 p38 경로를 활성화시키는 임의의 분자 또는 폴리펩티드를 포함한다. 하나 초과의 공동자극 폴리펩티드 또는 공동자극 폴리펩티드 세포질 영역이 본원에서 논의된 변형된 T 세포에서 발현될 수 있다.

MyD88 및 CD40에 의해 제공된 공동자극

일부 구현예에서, 본원에 기재된 DMSO 및 HSA 조성물 중에 제제화된 CAR T 세포 집단은 CD27, ICOS, RANK, TRANCE, CD28, 4-1BB, OX40, DAP10, MyD88, 또는 CD40에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 하나 이상의 공동자극 신호화 영역을 포함하는 공동자극 폴리펩티드를 포함한다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 DMSO 및 HSA 조성물 중에 제제화된 CAR T 세포 집단은 MyD88, CD40 및/또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 하나 이상의 공동자극 신호화 영역을 포함하는 공동자극 폴리펩티드를 포함한다.

MyD88은 TLR에 대한 보편적 어댑터 분자 및 선천성 면역 시스템의 중요한 신호화 성분으로, 외래 침입자에 대한 경보를 촉발하고, 면역 세포 모집 및 활성화를 프라이밍한다. MyD88은 선천성 및 적응성 면역 반응에서 중심 역할을 하는 세포질 어댑터 단백질이다. 이 단백질은 인터류킨-1 및 톨(Toll)-유사 수용체 신호화 경로에서 필수적인 신호 변환기로서 기능한다. 이들 경로는 수많은 전염증성 유전자의 그 활성화를 조절한다. 인코딩된 단백질은 N-말단 사망 도메인 및 C-말단 톨-인터류킨1 수용체 도메인으로 이루어진다. MyD88 TIR 도메인은 TLR과 이종이량체화되고 다른 MyD88 단백질과 동종이량체화될 수 있다. 이는 또한 MyD88 및 IRAK 키나제의 아미노 말단에서 사망 도메인 (DD)의 상호작용을 통해 IRAK 패밀리 키나제의 모집 및 활성화를 초래하고, 이로써 JNK, p38 MAPK (미토겐-활성화 단백질 키나제) 및 NF-κB, 시토카인- 및 케모카인-인코딩 유전자 (뿐만 아니라 다른 유전자)의 발현을 유도하는 전사 인자의 활성화로 이어지는 신호화 경로를 개시한다. MyD88은 IRAK1, IRAK2, IRF7 및 TRAF6을 통해 작용하여, NF-카파-B 활성화, 시토카인 분비 및 염증 반응으로 이어진다. 이는 또한 IRF1을 활성화시켜 핵 내로의 그의 빠른 이동을 제공하여 IFN-베타, NOS2/INOS, 및 IL12A 유전자의 효율적인 유도를 매개한다. 장 상피 세포에서 MyD88-매개된 신호화는 장 항상성 유지를 위해 중대하고 소장에서 항미생물 렉틴 REG3G의 발현을 제어한다. TLR 신호화는 또한 종양 괴사 인자 수용체 (TNFR) 패밀리의 구성원, CD40의 발현을 상향조절하고, 이는 항원-프라이밍된 CD4+ T 세포 상의 CD40 리간드 (CD154 또는 CD40L)와 상호작용한다.

CD40은 적응성 면역 반응의 중요한 부분으로, 그의 동족 CD40L과의 맞물림을 통해 APC를 활성화시키는 것을 돕고, 또한 보다 강한 CTL 반응을 분극화한다. CD40/CD154 신호화 시스템은 T 세포 기능 및 B 세포-T 세포 상호작용에 있어 중요한 성분이다. CD40 신호화는 CD40 동종이량체의 형성 및 CD40의 세포질 도메인에 대한 TRAF의 모집에 의해 수행되는 TNFR-관련 인자 (TRAF)와의 상호작용을 통해 진행되며, 이는 NF-κB, JNK 및 AKT 경로와 같은 여러 2차 신호를 수반하는 T 세포 활성화로 이어진다.

생존 및 성장 이점 이외에도, MyD88 또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드-기반 공동자극은 또한 CAR-변형된 T 세포에 대한 추가의 기능을 제공할 수 있다. MyD88 신호화는 Th1 및 Th17 반응 둘 다에 있어 중대하고 IL-1을 통해 작용하여 CD4+ T 세포가 조절성 T 세포 (Treg)-유도 억제에 대해 불응성이 되게 한다 (예를 들어, 하기 참조: Schenten et al. (2014) Immunity 40:78-90). 추가로, Ras, PI3K 및 단백질 키나제 C를 통한 CD8+ T 세포에서의 CD40 신호화는, CD4+CD25+ Treg 세포를 용해시키는 세포독성 매개체 그랜자임 및 퍼포린의 NF-κB-의존적 유도를 초래한다 (Martin et al. (2010) J Immunol 184:5510-5518). 따라서, MyD88 및 CD40 공동-활성화는 Treg 세포의 면역억제 효과에 대해 CAR-T 세포를 내성으로 만들 수 있고, 이는 충실성 종양 및 다른 유형의 암의 치료에 있어 매우 중요할 수 있는 기능이다.

T 세포를 포함한 면역 세포에서 MyD88 및 CD40은 함께, 전염증성 시토카인, 타입 I IFN을 상향조절하고 증식 및 생존을 촉진하도록 전사 인자에 대해 하류로 작용할 수 있다. CAR로부터의 CD3z로부터의 신호화 입력과 함께, MyD88/CD40은 강력하고 다면성인 공동자극 분자를 만든다. 일부 구현예에서, 본 발명은 MyD88, CD40 및/또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 하나 이상의 공동자극 신호화 영역을 포함하는 공동자극 폴리펩티드를 포함하는 CAR T 세포를 제공한다. 적합한 공동자극 신호화 영역의 예는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: IRAK-4, IRAK-1, TRAF6, TRAF2, TRAF3, TRAF5, Act, JAK3, 또는 임의의 이들의 기능적 단편.

세포 활성화를 유도하기 위해 유용한 키메라 폴리펩티드, 및 예를 들어, 발현 구성체를 포함한 CAR-T 세포 활성화의 유도를 위한 관련 방법, 벡터 구성 방법, 및 활성 또는 기능에 대한 검정의 비-제한적 예는 또한 하기 특허 및 특허 출원에서 찾아볼 수 있고, 이들 각각은 모든 목적상 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. US2016-0046700-A1; WO2015/123527; 미국 특허 번호 7,404,950; WO2004/073641; 미국 특허 번호 8,691,210; WO2008/049113; 미국 특허 번호 9,315,559; WO2010/033949; US2011-0287038-A1; WO2011/130566; US2016-0175359-A1; WO2016/036746; WO2016/100241; US2017-0166877-A1; WO2017/106185; WO2018/208849, Bayle et al., 모든 목적상, 모든 텍스트, 표 및 도면을 포함하여, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함됨.

안전성 스위치

본원에 기재된 DMSO 및 HSA 조성물 중에 배합된 유전적으로 변형된 T 세포는, 또한 유도성 자살 유전자 또는 자살 스위치로서 공지된, 안전성 스위치를 발현할 수 있다. 이는 요망되는 경우, 예를 들어 GVHD가 발달하는 경우, T 세포를 근절하기 위해 사용될 수 있다. 일부 예에서는, 표적외 독성과 같은 불리한 이벤트를 촉발하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포가 환자에게 제공된다. 일부 치료법 예에서, 환자는 키메라 항원 수용체-변형된 세포를 사용한 치료법 동안 부정적 증상을 경험할 수 있다. 일부 경우에, 이들 치료법은, 부분적으로, 건강한 조직에 대한 비-특이적 공격으로 인해 부작용을 초래하였다. 일부 예에서, 치료용 T 세포는 더 이상 필요하지 않을 수 있거나, 치료법이 특정량의 시간 동안 의도되고, 예를 들어, 치료용 T 세포가 종양 세포, 또는 종양 크기를 감소시키도록 작용할 수 있고, 더 이상 필요하지 않을 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서는, 본원에 기재된 DMSO 및 HSA 조성물 중에 배합된 변형된 T 세포가 또한 유도성 카스파제(Caspase)-9 폴리펩티드를 발현하는 핵산, 세포, 및 방법이 제공된다. 예를 들어, 키메라 항원 수용체 변형된 T 세포의 수를 감소시킬 필요가 있는 경우, 유도성 리간드가 환자에게 투여됨으로써, 변형된 T 세포의 아팝토시스(apoptosis)를 유도할 수 있다.

이들 스위치는, T 세포를 근절하기 위해 요망되는 경우에 공급되고, 세포 사망을 초래하는 (예를 들어, 괴사 또는 아팝토시스를 촉발함으로써), 약리학적 작용제와 같은 트리거에 반응한다. 이들 작용제는 독성 유전자 생성물의 발현을 초래할 수 있지만, 유전적으로 변형된 T 세포가 이미 작용제에 반응하여 독성 형태로 스위칭되는 단백질을 발현하는 경우에는 보다 빠른 반응이 얻어질 수 있다.

일부 구현예에서, 안전성 스위치는 대상체에게 이량체화의 화학적 유도제를 투여함으로써 촉발될 수 있는 전-아팝토시스 단백질을 기반으로 한다. 전-아팝토시스 단백질이 이량체화의 화학적 유도제에 결합하는 폴리펩티드 서열에 융합되는 경우, 이 화학적 유도제의 전달이 2개의 전-아팝토시스 단백질을 이들이 아팝토시스를 촉발하도록 근접시킬 수 있다. 예를 들어, 카스파제-9는 약리학적 작용제 리미두시드 (AP1903)에 반응하여 이량체화를 유도할 수 있는 변형된 인간 FK-결합 단백질에 융합될 수 있다. 예를 들어, 카스파제-9와 같은 인간 전-아팝토시스 단백질 기반의 안전성 스위치의 사용은, 스위치를 발현하는 T 세포가 인간 대상체의 면역 시스템에 의해 외래물로서 인식될 위험을 최소화한다. 따라서, 대상체로의 리미두시드의 전달은 카스파제-9 스위치를 발현하는 T 세포의 아팝토시스를 촉발할 수 있다.

카스파제-9 스위치는 하기 문헌에 기재되어 있다: Di Stasi et al. (2011) supra; 또한 하기 문헌 참조: Yagyu et al. (2015) Mol Ther 23(9):1475-85; Rossigloni et al. (2018) Cancer Gene Ther doi.org/10.1038/s41417-018-0034-1; Jones et al. (2014) Front Pharmacol doi.org/10.3389/fphar.2014.00254; 미국 특허 9,434,935; 미국 특허 9,913,882; 미국 특허 9,393,292; 및 특허 출원 US2015/0328292. 자살 스위치는 또한 Fas 또는 HSV 티미딘 키나제를 기반으로 할 수 있다.

스위치에 대한 리간드 유도제의 예는, 예를 들어, 하기 문헌에서 논의된 것들을 포함한다: Kopytek, S.J., et al., Chemistry & Biology 7:313-321 (2000) 및 Gestwicki, J.E., et al., Combinatorial Chem. & High Throughput Screening 10:667-675 (2007); Clackson T (2006) Chem Biol Drug Des 67:440-2; Clackson, T., Chemical Biology: From Small Molecules to Systems Biology and Drug Design (Schreiber, s., et al., eds., Wiley, 2007).

안전성 스위치 내에 혼입된 리간드 결합 영역은 FKBP12v36 변형된 FKBP12 폴리펩티드, 또는 AP1903에 결합하는 변형체 폴리펩티드를 포함한 다른 적합한 FKBP12 변형체 폴리펩티드, 또는 예를 들어, AP20187 또는 AP2015 등의 다른 합성 동종이량체화제를 포함할 수 있다. 변형체는, 예를 들어, 발린, 류신, 이소류신 및 알라닌으로 이루어진 군으로부터 선택된 위치 36에서의 아미노산 치환을 갖는 FKBP 영역을 포함할 수 있다 (Clackson T, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1998, 95:10437-10442). 또한 리미두시드로서 공지된 AP1903, (CAS 인덱스 명칭: 2-피페리딘카르복실산, 1-[(2S)-1-옥소-2-(3,4,5-트리메톡시페닐)부틸]-, 1,2-에탄디일비스[이미노(2-옥소-2,1-에탄디일)옥시-3,1-페닐렌[(1R)-3-(3,4-디메톡시페닐)프로필리덴]] 에스테르, [2S-[1(R*),2R*[S*[S*[1(R*),2R*]]]]]-(9CI) CAS 등록 번호: 195514-63-7; 분자식: C78H98N4O20 분자량: 1411.65)은, 건강한 지원자에서 안전한 것으로 입증된 합성 분자이다 (Iuliucci JD, et al., J Clin Pharmacol. 2001, 41:870-879).

일부 구현예에서는, 예를 들어, 그의 내인성 카스파제 활성화 및 모집 도메인이 결핍된 변형된 인간 카스파제 9 (CASP9)에 SGGGS 링커를 통해 연결된, F36V 돌연변이를 갖는 인간 FK506-결합 단백질 (FKBP12) (진뱅크 AH002 818)의 서열로 이루어진, 상기 Di Stasi et al. (2011) 문헌에서 논의된 안전성 스위치와 같은 안전성 스위치가 제공된다. F36V 돌연변이는 합성 동종이량체화제 AP20187 및 AP1903 (리미두시드)에 대한 FKBP12의 결합 친화도를 증가시킨다.

안전성 스위치는, 예를 들어, 동종이량체화제 리간드의 부재 하에 감소된 기초 활성과 같은 변형된 활성을 갖는 변형된 카스파제-9 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 변형된 카스파제-9 폴리펩티드는, 예를 들어, 상기 미국 특허 9,913,882 및 US-2015-0328292에서 논의되었고, 예를 들어, 위치 330에서의 아미노산 치환 (예: D330E 또는 D330A) 또는, 예를 들어, 위치 450에서의 아미노산 치환 (예: N405Q), 또는 예를 들어, D330E-N405Q 및 D330A-N405Q를 포함한 이들의 조합을 포함할 수 있다.

본원에서 제시된 이량체화 또는 다량체화 리간드와 같은 제약 조성물의 유효량은, 치료용 세포의 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 97% 초과, 또는 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 또는 10% 미만이 사멸되도록, 카스파제-9-발현 세포 T 세포에서 아팝토시스 유도의 이러한 선택된 결과를 달성하는 양일 것이다. 용어는 또한 "충분량"과 동의어이다. 임의의 적절한 검정을 사용하여 사멸되는 치료용 세포의 퍼센트를 결정할 수 있다. 검정은 이량체화 또는 다량체화 리간드의 투여 전에 대상체로부터 제1 샘플을 얻는 단계, 및 이량체화 또는 다량체화 리간드의 투여 후에 대상체로부터 제2 샘플을 얻는 단계, 및 제1 및 제2 샘플에서의 치료용 세포의 수 또는 농도를 비교하여 사멸되는 치료용 세포의 퍼센트를 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 과도한 실험을 필요로 하지 않으면서 본원에서 제시된 특정 조성물의 유효량을 경험적으로 결정할 수 있다.

세포 사망 또는 아팝토시스를 유도하기에 유용한 키메라 폴리펩티드, 및 발현 구성체를 포함한 세포 사망 또는 아팝토시스를 유도하기 위한 관련 방법, 벡터 구성 방법, 활성 또는 기능에 대한 검정, 및 생체외 및 생체내 둘 다에서 키메라 폴리펩티드의 다량체화 영역에 결합하는 다량체 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염과의 유도성 키메라 폴리펩티드를 발현하는 세포의 접촉에 의한 키메라 폴리펩티드의 다량체화, 대상체에 대한 본원에 기재된 발현 벡터, 세포, 또는 다량체 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염의 투여, 및 유도성 키메라 폴리펩티드를 발현하는 세포를 투여받은 대상체에 대한 본원에 기재된 다량체 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염의 투여에 대한 비-제한적 예는 또한 하기 특허 및 특허 출원에서 찾아볼 수 있고, 이들 각각은 모든 목적상 그 전체가 본원에 참조로 포함된다. 미국 특허 9,089,520; 미국 특허 번호 9,434,935; WO2014/16438; US2016-0151465-A1; WO2014/197638; US2015-0328292-A1; WO2015/134877; US2016-0166613-A1; WO2016/100236; US2016-0175359-A1 WO2016/100241; US2017-0166877-A1; WO2017/106185, 모든 목적상, 모든 텍스트, 표 및 도면을 포함하여, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 포함됨. 본원에 기재된 다량체 화합물, 또는 제약학적으로 허용가능한 그의 염은 본질적으로, 이들 공개에서 제공된 예, 및 본원에서 제공되는 다른 예에서 논의되는 바와 같이 사용될 수 있다.

치료 방법

용어 "환자" 또는 "대상체"는 상호교환가능하며, 본원에서 사용되는 바와 같이 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 유기체 또는 동물; 예를 들어, 인간, 비-인간 영장류 (예: 원숭이), 마우스, 돼지, 소, 염소, 토끼, 래트, 기니아 피그, 햄스터, 말, 원숭이, 양, 또는 다른 비-인간 포유류를 포함한 포유류; 비-포유류 척추동물, 예컨대 조류 (예: 닭 또는 오리) 또는 어류, 및 비-포유류 무척추동물을 포함한 비-포유류. 대상체는, 예를 들어, 인간, 예를 들어, 감염성 질환을 앓고 있는 환자, 및/또는 면역손상된, 또는 과증식성 질환을 앓고 있는 대상체일 수 있다.

본원에 기재된 변형된 세포 집단은 그를 필요로 하는 인간 대상체의 치료 방법에서 사용될 수 있고, 이러한 대상체의 치료를 위한 의약 제조를 위해 사용될 수 있다. 세포는 통상적으로 주입 (전형적으로 정맥내 주입)에 의해 수용자 대상체에게 전달될 것이다. 대상체에 대한 T 세포의 전형적인 용량은, 10⁴ - 10⁹ 세포/kg, 예를 들어 대상체 체중 1 kg 당 1 x 10⁴, 5 x 10⁴, 1 x 10⁵, 2 x 10⁵, 3 x 10⁵, 4 x 10⁵, 5 x 10⁵, 6 x 10⁵, 7 x 10⁵, 8 x 10⁵, 9 x 10⁵, 1 x 10⁶, 2 x 10⁶, 3 x 10⁶, 4 x 10⁶, 5 x 10⁶, 6 x 10⁶, 7 x 10⁶, 8 x 10⁶, 9 x 10⁶, 1 x 10⁷, 2 x 10⁷, 3 x 10⁷, 4 x 10⁷, 5 x 10⁷, 6 x 10⁷, 7 x 10⁷, 8 x 10⁷, 9 x 10⁷, 1 x 10⁸, 2 x 10⁸, 3 x 10⁸, 4 x 10⁸, 5 x 10⁸, 6 x 10⁸, 7 x 10⁸, 8 x 10⁸, 9 x 10⁸, 또는 1 x 10⁹ 변형된 세포, 또는 변형된 세포 집단으로부터의 세포로 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 투여량은 총 세포의 요망되는 고정 용량 및 요망되는 비율을 기준으로 하고/거나, 개개의 하위-유형 또는 하위-집단 중 하나 이상, 예를 들어 이들 각각의 요망되는 고정 용량을 기준으로 한다.

일반적으로, 2천만-2억개의 T 세포, 예를 들어 3천만-1억2천만개의 T 세포가 대상체에게 주입될 수 있다.

전달된 세포의 수는 특정 카테고리의 모든 환자 (예: 모든 소아과 환자, 또는 모든 성인 환자)에 대해 동일할 수 있거나, 또는 이는 체중에 따라, 예를 들어, 아동의 경우 약 1x10⁶ 세포/kg 또는 성인의 경우 약 3x10⁶ 세포/kg로 달라질 수 있다. 따라서, 환자에게 투여되는 부피는, 요망되는 수의 세포가 수용되도록 보장하기 위해, 조성물 중의 세포의 농도에 따라, 또한 임의로 환자의 체중에 따라 달라질 수 있다.

수용자는 유전적으로 변형된 T 세포를 포함하는 변형된 세포 집단의 수용 전에 골수절제 컨디셔닝을 겪을 수 있다. 따라서, 수용자 자신의 α/β T 세포 (및 B 세포)는 유전적으로 변형된 T 세포의 수용 전에 고갈될 수 있다. 유사하게, 수용자에게 투여되는 조혈 (줄기) 세포는 α/β 세포에 대해 고갈될 수 있다. 반면, 수용자에게 투여된 유전적으로 변형된 공여자 T 세포는 일반적으로 α/β 세포에 대해 고갈되지 않는다.

수용자는 아동, 예를 들어, 0-16세, 또는 0-10세의 아동일 수 있다. 일부 구현예에서, 수용자는 성인이다.

T 세포를 수용하는 대상체는 또한 동종이계 공여자로부터 다른 조직을 수용할 수 있고, 예를 들어 이들은 조혈 세포 및/또는 조혈 줄기 세포 (예: CD34+ 세포)를 수용할 수 있다. 이 동종이식편 조직 및 유전적으로 변형된 T 세포는 이상적으로는, 이들이 유전적으로 매칭되도록, 동일한 공여자로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 공여자 및 수용자는 매칭된 비관련 공여자, 또는 적합한 패밀리 구성원이다. 예를 들어, 공여자는 수용자의 부모 또는 아동일 수 있다. 따라서, 대상체가 유전적으로 변형된 T 세포를 필요로 하는 것으로 식별되는 경우, 적합한 공여자는 T 세포 공여자로서 식별될 수 있다.

본원에서 제공되는 변형된 세포 집단 (예를 들어, 변형된 T 세포를 포함하는 변형된 세포 집단)이 조혈 세포 및/또는 조혈 줄기 세포와 함께 사용되는 경우, 변형된 세포 집단은, 일부 예에서, 이후 시점, 예를 들어 이후 7-100일에 투여될 수 있다.

T 세포 집단이 공동자극 폴리펩티드를 포함하는 일부 구현예에서, 공동자극 폴리펩티드는, 예를 들어 수용자에게 유효량의 유도성 리간드 (예: 리미두시드 또는 라파로그(rapalog))를 투여함으로써 촉발될 수 있다. 일부 구현예에서, 공동자극 폴리펩티드는 MyD88, CD40 및/또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 하나 이상의 공동자극 신호화 영역을 포함한다.

수용자가 유전적으로 변형된 T 세포 수용 후 합병증을 나타내는 경우 (예를 들어, 이들이 GVHD를 나타내는 경우), 예를 들어, 수용자에게 유도성 리간드 (예: 리미두시드 또는 라파로그)를 투여함으로써, 자살 스위치를 촉발할 수 있다. 변형된 세포가 유도성 키메라 전-아팝토시스 폴리펩티드를 포함하는 경우, 변형된 세포를 제거하기 위해 필요한 유도성 리간드 (예: 리미두시드 또는 라파로그)의 최소 용량은 수용자 중에 존재하는 유전적으로 변형된 T 세포의 수에 따라 달라질 것이다. 이 최소 초과의 용량이 투여될 수도 있지만, 통상의 제약 원리에 따라, 과도한 용량은 피해야 한다. 일부 구현예에서, 자살 스위치는 리미두시드로 촉발될 수 있고, 예를 들어, 0.4 mg/kg의 용량이 1.5x107 세포/kg의 용량으로 주입된 세포를 제거할 수 있다. 일반적으로, 리미두시드 용량 0.1-5 mg/kg이 투여되고, 통상적으로 0.1-2 mg/kg 또는 0.1 1 mg/kg이면 충분할 것이며, 일부 구현예에서, 용량은 0.4 mg/kg이다. 리미두시드의 일련의 다중 용량이 투여될 수 있고, 예를 들어, 최초 용량이 모든 유전적으로 변형된 T 세포를 제거하지 않는 것으로 나타난 경우에는, 제2 용량이 투여될 수 있고, 기타 등등이다.

일부 구현예에서, 유도 리간드 (예: 리미두시드)의 제1 용량을 투여하고, 이것이 대부분의 민감성 세포를 사멸시키고, 이어서 제2 용량 (이는 제1 용량보다 더 높음)을 투여하고, 이는 덜 민감성인 세포를 사멸시킨다. 추가의 용량 (필요한 경우 상승됨)이 필요에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 방법은 또한 병원성 미생물에 의해 야기되는 질환 및/또는 과증식성 질환의 치료 또는 방지 방법을 포괄한다.

치료 또는 방지될 수 있는 질환은 바이러스, 박테리아, 이스트, 기생충, 원충, 암 세포 등에 의해 야기되는 질환을 포함한다. 제약 조성물은 일반화된 면역 증강제 (T 세포 활성화 조성물 또는 시스템)로서 사용될 수 있으며, 그 자체로 질환 치료에서 유용성을 갖는다. 치료 및/또는 방지될 수 있는 예시적 질환은 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: HIV, 인플루엔자, 헤르페스, 바이러스 간염, 엡스타인 바(Epstein Bar), 소아마비, 바이러스성 뇌염, 홍역, 수두, 유두종 바이러스 등과 같은 바이러스 병인의 감염; 또는 폐렴, 결핵, 매독 등과 같은 박테리아 병인의 감염; 또는 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 트리코모나스증, 아메바증 등과 같은 기생충 병인의 감염.

제약 조성물 (형질도입된 T 세포, 발현 벡터, 발현 구성체 등)을 사용하여 치료 또는 방지될 수 있는 종양전 또는 과형성 상태는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 결장 폴립, 크론병, 궤양성 대장염, 유방 병변 등과 같은 종양전 또는 과형성 상태.

조성물을 사용하여 치료될 수 있는 충실성 종양을 포함한 암은 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 원발성 또는 전이성 흑색종, 선암종, 편평 세포 암종, 선편평 세포 암종, 흉선종, 림프종, 육종, 폐암, 간암, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 자궁암, 유방암, 전립선암, 난소암, 췌장암, 결장암, 다발성 골수종, 신경모세포종, NPC, 방광암, 자궁경부암 등.

예를 들어, 예를 들어, 폐, 뼈, 간, 전립선, 또는 뇌에, 및 또한, 예를 들어, 유방, 난소, 장, 고환, 결장, 췌장, 신장, 방광, 신경내분비계, 연조직, 골종 및 림프계에 존재하는, 예를 들어 충실성 종양을 포함한, 임의의 조직 또는 기관으로부터의 충실성 종양이 본 방법을 사용하여 치료될 수 있다. 치료될 수 있는 다른 충실성 종양은, 예를 들어, 교모세포종, 및 악성 골수종을 포함한다.

수용자는 혈액암 (예컨대 난치성 혈액암) 또는 유전적 혈액 장애를 가질 수 있다. 예를 들어, 수용자는 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 중증 복합 면역-결핍증 (SCID), 비스콧-알드리치 증후군 (WA), 판코니 빈혈, 만성 골수성 백혈병 (CML), 비-호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종 (HL), 또는 다발성 골수종을 가질 수 있다.

용어 "암"은 본원에서 사용되는 바와 같이 고유한 특질 (정상 제어의 상실)이 조절되지 않은 성장, 분화 결여, 국소 조직 침습 및 전이를 초래하는 세포의 과증식으로서 정의된다. 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 흑색종, 비-소세포 폐, 소세포 폐, 폐, 간암종, 백혈병, 망막모세포종, 성상세포종, 교모세포종, 잇몸, 혀, 신경모세포종, 머리, 목, 유방, 췌장, 전립선, 신장, 뼈, 고환, 난소, 중피종, 자궁경부, 위장, 림프종, 뇌, 결장, 육종 또는 방광.

용어 "과증식성 질환"은 세포의 과증식으로부터 초래되는 질환으로서 정의된다. 본원에서 제시된 T 세포 및 다른 치료용 세포 활성화 시스템을 사용하여 치료될 수 있는 충실성 종양을 포함한 다른 과증식성 질환은 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 류마티스 관절염, 염증성 장 질환, 골관절염, 평활근종, 선종, 지방종, 혈관종, 섬유종, 혈관 폐색, 재협착, 죽상동맥경화증, 종양전 병변 (예: 선종 증식증 및 전립선 상피내 종양), 제자리암종, 구강 모 백반증 또는 건선.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료", "치료하다", "치료된", 또는 "치료하는"은 예방 및/또는 치료를 지칭한다. 충실성 종양, 예컨대 암성 충실성 종양과 관련하여 사용되는 경우, 예를 들어, 용어는, 충실성 종양 또는 암에 대한 대상체의 저항성을 증가시키는, 예방적 치료에 의한 방지를 지칭한다. 일부 예에서, 대상체는, 암이 가족성이거나 유전적으로 관련되는 경우, 암을 방지하기 위해 치료될 수 있다. 감염성 질환과 관련하여 사용되는 경우, 예를 들어, 용어는 병원체로의 감염에 대한 대상체의 저항성을 증가시키는, 또는 다시 말해서, 대상체가 병원체로 감염되게 될 또는 감염에 기인하는 질병의 징후를 나타낼 가능성을 감소시키는 예방적 치료, 뿐만 아니라 감염과 싸우기 위한, 예를 들어, 감염을 감소시키거나 제거하기 위한 또는 그것이 악화되는 것을 방지하기 위한 대상체의 감염 후 치료를 지칭한다.

본원에서 제공되는 방법은, 예를 들어 종양 항원의 상승된 발현이 존재하는 질환, 장애, 또는 병태의 치료에 사용될 수 있다.

제약 조성물의 투여는 "예방적" 또는 "치료적" 목적을 위한 것일 수 있다. 예방적으로 제공되는 경우, 제약 조성물은 임의의 증상에 앞서 제공된다. 변형된 세포 집단의 예방적 투여는 임의의 후속 감염 또는 질환의 방지 또는 개량을 위해 작용한다. 치료적으로 제공되는 경우, 변형된 세포 집단은 감염 또는 질환의 증상 발병시 또는 그 후에 제공된다. 따라서, 본원에서 제시된 조성물은 질환-유발 작용제 또는 질환 상태에 대한 예상된 노출 전에 또는 감염 또는 질환의 개시 후에 제공될 수 있다. 따라서, 본원에서 논의된 변형된 세포 집단을 사용한, 암, 또는 예를 들어 이에 제한되지는 않지만 전립선암에서 나타나는 것들과 같은 충실성 종양의 예방적 치료 방법이 본원에서 제공된다. 예를 들어, 본원에서 논의된 변형된 세포 집단을, 변형된 세포 집단이 대상체에서의 종양의 방지 또는 크기 감소를 위해 효과적인 양으로 투여되도록 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 종양의 예방적 방지 또는 크기 감소 방법이 제공된다.

본원에 기재된 제약 조성물의 유효량은 면역 반응을 증강시키는 이러한 선택된 결과를 달성하는 양이며, 이러한 양은 결정될 수 있다. 예를 들어, 면역계 결핍의 치료를 위한 유효량은, 면역계의 활성화를 야기하여, 항원으로의 노출시 항원 특이적 면역 반응의 발달을 제공하기 위해 필수적인 양일 수 있다. 용어는 또한 "충분량"과 동의어이다. 다른 예에서, 유효량은, 종양 크기 또는 종양의 수 감소, 또는 종양의 성장 속도 또는 종양의 증식 속도 감소를 위해 필수적인 양일 수 있다. 다른 예에서, 유효량은, 본원에서 제공되는 변형된 세포 집단의 투여 전, 동안, 및/또는 후에 얻어진 샘플 중의 표적 항원의 양 또는 농도 비교에 의해 측정된, 대상체에서 표적 항원의 양 또는 농도를 감소시키기 위해 필수적인 양일 수 있다.

임의의 특정 응용을 위한 유효량은 치료되는 질환 또는 병태, 투여되는 특정 조성물, 대상체의 크기, 및/또는 질환 또는 병태의 중증도 등의 인자에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 예를 들어, 하나의 구현예에서, 형질도입된 T 세포 또는 다른 세포는, 예를 들어, 면역 반응을 유도하거나, 또는 예를 들어, 종양의 크기를 감소시키거나 또는 종양 혈관계의 양을 감소시키기 위해 효과적인 양으로 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서는, 다중 용량 사이에서 투여량 수준을 상승시키며, 다중 용량의 변형된 세포가 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 투여량 수준의 상승은 CAR-T 세포 활성의 수준을 증가시키고, 따라서, 예를 들어, 표적 세포, 예를 들어 종양 세포 등의 양 또는 농도 감소와 같은 치료적 효과를 증가시킨다.

일부 구현예에서, 질환 또는 병태의 스테이지 또는 수준이, 변형된 세포의 투여 전에, 변형된 세포의 추가 용량의 투여 전에, 또는 변형된 세포의 투여에 수반되는 투여량 및 방법의 결정에서 결정되는 맞춤화된 치료가 제공된다. 이들 방법은 본 출원의 방법 중 임의의 것에서 사용될 수 있다. 변형된 세포의 투여 전에 환자를 평가하는 이들 방법이, 예를 들어, 충실성 종양을 갖는 대상체의 치료와 관련되어 논의되는 경우, 이들 방법은 다른 병태 및 질환의 치료에 유사하게 적용될 수 있음을 이해한다. 따라서, 예를 들어, 본 출원의 일부 구현예에서, 방법은 본 출원의 변형된 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 종양 크기의 감소의 효과적인 수준을 달성하기 위한 변형된 세포의 적절한 용량을 결정하는 것을 추가로 포함한다. 세포의 양은, 예를 들어, 대상체의 임상적 상태, 체중, 및/또는 성별 또는 다른 관련 신체적 특징에 기초하여 결정될 수 있다. 대상체에게 투여되는 변형된 세포의 양을 제어함으로써, 예를 들어, 시토카인 폭풍과 같은 불리한 이벤트의 가능성이 감소될 수 있다.

용어 "투여량"은, 예를 들어, 다음 용량의 타이밍과 같은, 투여의 빈도수 및 용량의 양 둘 다를 포함하도록 의도된다. 용어 "투여량 수준"은 대상체의 체중과 관련하여 투여되는 세포 집단의 양을 지칭한다.

일부 예에서, 용어 투여량은 리간드 유도제의 투여량을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 키메라 카스파제-9 폴리펩티드 또는 키메라 공동자극 폴리펩티드를 유도하기 위해, 용어 "투여량 수준"은 대상체의 체중과 관련하여 투여되는 다량체 리간드의 양을 지칭한다. 따라서, 투여량 수준 증가는 대상체의 체중과 관련하여 투여되는 리간드의 양 증가를 의미할 것이다. 추가로, 예를 들어, 다량체 리간드가 연속 주입 펌프를 사용하여 투여되는 경우와 같이, 투여되는 용량의 농도 증가는, 분, 또는 초 당 투여되는 농도 (또한 그에 따라 투여되는 양)가 증가함을 의미할 것이다.

본원에서 제시된 바와 같은 방법은 제한 없이 본원에 기재된 세포 집단을 포함하는 DMSO 및 HSA 조성물의 유효량의 전달을 포함한다. 세포 집단의 "유효량"은, 일반적으로, 언급된 요망되는 결과를 검출가능하게 그리고 반복적으로 달성하기 위해, 예를 들어, 질환 또는 그의 증상의 정도를 개량하거나, 감소시키거나, 최소화하거나 또는 제한하기 위해 충분한 양으로서 정의된다. 다른 보다 엄격한 정의는, 질환의 제한, 근절 또는 치유를 포함하여 적용될 수 있다. 일부 구현예에서는, 치료 효과를 평가하고 독성을 제어하기 위해, 바이오마커, 또는 다른 질환 증상, 예컨대 종양 크기 또는 종양 항원 발현을 모니터링하는 단계가 존재할 수 있다.

필요한 경우, 방법은 치료에서 사용될 보다 많은 세포를 얻기 위해 추가의 백혈구성분채집술을 추가로 포함할 수 있다.

병용 요법

본원에서 제시된 조성물의 효과를 증가시키기 위해, 이들 조성물 및 방법을 질환의 치료에서 효과적인 작용제와 병용하는 것이 바람직할 수 있다.

특정 구현예에서, 항암제가 본 발명의 방법과 병용되어 사용될 수 있다. "항암"제는, 예를 들어, 하나 이상의 암 세포를 사멸시킴으로써, 하나 이상의 암 세포에서 아팝토시스를 유도함으로써, 하나 이상의 암 세포의 성장 속도를 감소시킴으로써, 발병률 또는 전이 수를 감소시킴으로써, 종양의 크기를 감소시킴으로써, 종양의 성장을 억제함으로써, 종양 또는 하나 이상의 암 세포에 대한 혈액 공급을 감소시킴으로써, 하나 이상의 암 세포 또는 종양에 저항하는 면역 반응을 촉진시킴으로써, 암의 진행을 방지 또는 억제함으로써, 또는 암을 갖는 대상체의 수명을 증가시킴으로써 대상체에서 암에 부정적으로 영향을 줄 수 있다. 항암제는, 예를 들어, 화학요법제 (화학요법), 방사선요법제 (방사선요법), 수술 절차 (수술), 면역요법제 (면역요법), 유전자요법제 (유전자요법), 호르몬요법, 다른 생물학적 작용제 (생물요법) 및/또는 대안적 요법을 포함한다.

일부 구현예에서는, 감염성 질환의 치료 및/또는 방지를 위해 항생제가 제약 조성물과 조합되어 사용될 수 있다. 이러한 항생제는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 아미카신, 아미노글리코시드 (예: 젠타마이신), 아목시실린, 암포테리신 B, 암피실린, 안티모니알, 아토바쿠온 소듐 스티보글루코네이트, 아지트로마이신, 카프레오마이신, 세포탁심, 세폭시틴, 세프트리악손, 클로람페니콜, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 클로파지민, 시클로세린, 다프손, 독시사이클린, 에탐부톨, 에티오나미드, 플루코나졸, 플루오로퀴놀론, 이소니아지드, 이트라코나졸, 카나마이신, 케토코나졸, 미노사이클린, 오플록사신), 파라-아미노살리실산, 펜타미딘, 폴리믹신 데핀신, 프로티오나미드, 피라지나미드, 피리메타민 술파디아진, 퀴놀론 (예: 시프로플록사신), 리파부틴, 리팜핀, 스파르플록사신, 스트렙토마이신, 술폰아미드, 테트라사이클린, 티아세타존, 트리메타프림-술파메톡사졸, 비오마이신 또는 이들의 조합.

보다 일반적으로, 이러한 작용제는 암 세포 및/또는 미생물의 사멸 또는 증식 억제를 위해 효과적인 제약 조성물과의 조합된 양으로 제공될 것이다. 이 프로세스는 세포(들)를 작용제(들) 및 제약 조성물과 동시에 또는 세포, 조직 또는 유기체에 대한 제약 조성물 및 작용제의 별도 투여가 요망되는 치료적 이익을 생성하는 기간 내에 접촉하는 것을 수반할 수 있다. 이는, 세포, 조직 또는 유기체를 제약 조성물 및 하나 이상의 작용제 둘 다를 포함하는 단일 조성물 또는 약리학적 제제와 접촉시킴으로써, 또는 세포를 하나의 조성물은 제약 조성물을 포함하고 다른 하나는 하나 이상의 작용제를 포함하는 둘 이상의 별개의 조성물 또는 제제와 접촉시킴으로써 달성될 수 있다.

용어 "접촉된" 및 "노출된"은, 세포, 조직 또는 유기체에 적용시, 제약 조성물 및/또는 예를 들어 화학요법제 또는 방사선요법제 등의 또 다른 작용제가 표적 세포, 조직 또는 유기체에 전달되거나 표적 세포, 조직 또는 유기체와 직접적 병치로 배치되는 프로세스를 기재하기 위해 사용된다. 세포 사멸 또는 정체를 달성하기 위해, 제약 조성물 및/또는 추가의 작용제(들)가 세포(들)를 사멸시키거나 이들이 분열되는 것을 방지하기 위해 효과적인 조합된 양으로 하나 이상의 세포로 전달된다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 카르보플라틴, 에스트라무스틴 포스페이트 (Emcyt), 및 탈리도미드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 탁산이다. 탁산은, 예를 들어, 도세탁셀 (탁소테레(Taxotere)), 파클리탁셀, 및 카바지탁셀로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 탁산은 도세탁셀이다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 동시에 또는 변형된 세포 또는 핵산 투여 후 1주 이내에 투여된다. 다른 구현예에서, 화학요법제는 변형된 세포 또는 핵산 투여 1 내지 4주 또는 1주 내지 1개월, 1주 내지 2개월, 1주 내지 3개월, 1주 내지 6개월, 1주 내지 9개월, 또는 1주 내지 12개월 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 화학요법제는 세포 또는 핵산 투여 적어도 1개월 전에 투여된다.

제약 조성물의 투여는, 수분 내지 수주 범위의 간격만큼 다른 작용제(들)에 선행하고/거나 동시 투여되고/거나 후속될 수 있다. 제약 조성물 및 다른 작용제(들)가 세포, 조직 또는 유기체에 별도로 적용되는 구현예에서는, 제약 조성물 및 작용제(들)가 세포, 조직 또는 유기체에 대하여 유리하게 조합된 효과를 여전히 발휘할 수 있도록, 일반적으로 각각의 전달 시간 사이에 상당한 기간이 만료되지 않았음을 보장한다. 예를 들어, 이러한 경우, 세포, 조직 또는 유기체를 제약 조성물과 실질적으로 동시에 (즉, 약 1분 미만 이내에) 2, 3, 4 또는 그 초과의 양상과 접촉시킬 수 있음을 고려한다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 작용제는, 발현 백터의 투여 전 및/또는 후에, 실질적으로 동시에, 약 1분 내지 약 24시간 내지 약 7일 내지 약 1 내지 약 8주 또는 그 초과 이내에 투여될 수 있다. 또한 추가로, 본원에서 제시된 제약 조성물 및 하나 이상의 작용제의 다양한 병용 레지멘(regimen)이 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 화학요법제는 림프고갈 화학요법제일 수 있다. 다른 예에서, 화학요법제는 탁소테레 (도세탁셀), 또는 예를 들어, 카바지탁셀 등의 또 다른 탁산일 수 있다. 화학요법제는 세포 및 유도제로의 치료 전, 동안, 또는 후에 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학요법제는 활성화된 핵산의 제1 용량 투여 약 1년, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 또는 4개월, 또는 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12,11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2주 또는 1주 전에 투여될 수 있다. 또는, 예를 들어, 화학요법제는 세포 및 유도제의 제1 용량 투여 약 1주 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 또는 18주 또는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 11개월 또는 1년 후에 투여될 수 있다.

화학요법제의 투여는 하나 초과의 화학요법제의 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 시스플라틴이, 탁소테레 또는 예를 들어, 카바지탁셀 등의 다른 탁산에 추가로 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 수용자는 본원에 기재된 세포 집단을 포함하는 조성물의 수용 전에 골수절제 컨디셔닝을 겪을 수 있다. 따라서, 수용자 자신의 α/β T 세포 (및 B 세포)는 본원에 기재된 세포 집단을 포함하는 조성물의 수용 전에 고갈될 수 있다. 일부 구현예에서는, 림프고갈 화학요법 체제가 본원에 기재된 세포 집단을 포함하는 조성물의 주입 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 림프고갈 화학요법 체제는 정맥내 시클로포스파미드 500 mg/m²를 포함하고, 정맥내 플루다라빈 30 mg/m²는, 조합이 용인되지 않는 것이 아니라면, 주입 전 제5, 제4, 및 제3일에 투여되었다. 조합-기반 림프고갈이 대상체에게 불리한 안전성 위험을 제시한 것으로 결정되면, 림프고갈은 시클로포스파미드 단독으로 수행될 수 있다.

일반적

본 발명의 실행은, 달리 지시하지 않는다면, 당업계의 기술 내에 있는, 화학, 생화학, 분자 생물학, 면역학 및 약리학의 종래의 방법을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 하기 참조: Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.), Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds, Blackwell Scientific Publications), Advanced Methods in Cellular Immunology (Fernandez-Botan &

, 1st ed. 2000), Short Protocols in Immunology (Coligan, 2005), Green & Sambrook (2012) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th edition (Cold Spring Harbor Press), Ausubel et al. (eds) Short protocols in molecular biology, 5th edition (Current Protocols), Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream et al., eds., 1998, Academic Press) 등.

용어 "포함하는"은 "포함한" 뿐만 아니라 "이루어진"을 포괄하고, 예를 들어, X를 "포함하는" 조성물은 X로만 이루어질 수 있거나 예를 들어 X + Y와 같이 추가의 것을 포함할 수 있다.

수치 x와 관련하여 용어 "약"은 임의적이고, 예를 들어, x +10%를 의미한다.

용어 "실질적으로"는 "완전히"를 배제하지 않으며, 예를 들어, Y를 "실질적으로 갖지 않는" 조성물은 Y를 완전히 갖지 않을 수 있다. 필수적인 경우, 용어 "실질적으로"는 본 발명의 정의로부터 생략될 수 있다.

2개의 값과 관련하여 용어 "내지"는 이들 2개의 값을 포함하며, 예를 들어 범위 10 mg "내지" 20 mg은 특히 10, 15, 및 20 mg을 포괄한다.

구체적으로 언급되지 않는다면, 2개 이상의 성분의 혼합 단계를 포함하는 방법은 임의의 특정 혼합 순서를 요구하지 않는다. 따라서, 성분은 임의의 순서로 혼합될 수 있다. 3개의 성분이 존재하는 경우, 2개의 성분이 서로 조합될 수 있고, 이어서 조합이 제3 성분 등과 조합될 수 있다.

방법의 다양한 단계는 동시에 또는 상이한 시간에, 동일한 또는 상이한 지리적 위치 (예: 국가)에서, 또한 동일한 사람 또는 실체에 의해 수행될 수 있다.

번호화된 구현예

1. T 세포 및 혈청 알부민을 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <2.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 것인 조성물.

2. <2.2% (v/v), <2% (v/v), <1% (v/v), 또는 약 0.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는, 구현예 1의 조성물.

3. 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 또한 포함하는, 구현예 1 또는 구현예 2의 조성물.

4. DMSO가 혈청 알부민에 비해 3배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인, 구현예 3의 조성물.

5. 과량이 3배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인, 구현예 4의 조성물.

6. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하며, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-2%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 조성물.

7. 혈청 알부민 농도가 <1% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인, 구현예 6의 조성물.

8. DMSO의 농도가 <10% (v/v)인, 구현예 6 또는 구현예 7의 조성물.

9. DMSO의 농도가 2-8% (v/v), 4-7% (v/v), 5-6% (v/v), 또는 약 5% (v/v)인, 구현예 8의 조성물.

10. T 세포 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <5% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 조성물.

11. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)인 조성물.

12. 혈청 알부민의 농도 (v/v)가 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%인, 구현예 11의 조성물.

13. 1x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 갖는, 구현예 1 내지 12 중 어느 하나의 조성물.

14. 저온보존 형태인, 구현예 1 내지 13 중 어느 하나의 조성물.

15. T 세포 및 혈청 알부민을 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <1% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 것인 조성물.

16. <0.6% (v/v) 혈청 알부민 또는 약 0.15% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는, 구현예 15의 조성물.

17. DMSO를 또한 포함하는, 구현예 15 또는 구현예 16의 조성물.

18. DMSO가 혈청 알부민에 비해 3배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인, 구현예 17의 조성물.

19. 과량이 3배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인, 구현예 18의 조성물.

20. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.03-0.6%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 조성물.

21. 혈청 알부민 농도가 <0.3% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인, 구현예 20의 조성물.

22. DMSO의 농도가 <3% (v/v)인, 구현예 20 또는 구현예 21의 조성물.

23. DMSO의 농도가 0.6-2.4% (v/v), 0.8-2.2% (v/v), 1.5-2% (v/v), 또는 약 1.8% (v/v)인, 구현예 8의 조성물.

24. T 세포 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <0.15% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 조성물.

25. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도는 0.03-0.3% (v/v)이고, DMSO 농도는 0.15-0.20% (v/v)인 조성물.

26. 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ T 세포/mL를 갖는, 구현예 15 내지 25 중 어느 하나의 조성물.

27. T 세포가 유전적으로 변형된 T 세포, 예컨대 CAR-T 세포인, 임의의 상기 구현예의 조성물.

28. T 세포가 인간 T 세포이고, 혈청 알부민이 인간 혈청 알부민인, 임의의 상기 구현예의 조성물.

29. 구현예 1 내지 14 중 어느 하나의 조성물을 희석하는 단계를 포함하는, 구현예 15 내지 28 중 어느 하나의 조성물의 제조 프로세스.

30. 희석을 전해질 용액으로 수행하는 것인, 구현예 29의 프로세스.

31. 전해질 용액이 생리 식염수인, 구현예 30의 프로세스.

32. 전해질 용액이 약 5.26 g/L NaCl, 약 5.02 g/L 소듐 글루코네이트, 약 3.68 g/L 소듐 아세테이트 삼수화물, 약 0.37 g/L KCl, 및 약 0.3 g/L MgCl₂.6H₂O를 갖는 6.5-8.0의 pH를 갖는 멸균, 비발열성, 등장성 용액인, 구현예 30의 프로세스.

33. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 조성물을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 치료 방법.

34. T 세포, 혈청 알부민 및 디메틸 술폭시드 (DMSO)의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 조성물은 <2.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하고, DMSO는 혈청 알부민에 비해 >5배 과량 (v/v)으로 존재하고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.

35. 현탁액이 <2.2% (v/v), <2% (v/v), <1% (v/v), 또는 약 0.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 것인, 구현예 34의 용기.

36. DMSO가 혈청 알부민에 비해 5배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인, 구현예 34 또는 구현예 35의 용기.

37. 과량이 5배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인, 구현예 36의 용기.

38. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.

39. 혈청 알부민 농도가 <1% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인, 구현예 38의 용기.

40. DMSO의 농도가 <10% (v/v)인, 구현예 38 또는 구현예 39의 용기.

41. DMSO의 농도가 2-8% (v/v), 4-7% (v/v), 5-6% (v/v), 또는 약 5% (v/v)인, 구현예 40의 용기.

42. T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)이고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.

43. 혈청 알부민의 농도 (v/v)가 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%인, 구현예 42의 용기.

44. 1x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 갖는, 구현예 34 내지 43 중 어느 하나의 용기.

45. 저온보존 형태인, 구현예 34 내지 44 중 어느 하나의 조성물.

46. 구현예 15 내지 28 중 어느 하나의 조성물을 그를 필요로 하는 환자에게 정맥내 주입에 의해 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 치료 방법.

47. 정맥내 주입 시간이 15 내지 120분인, 구현예 46의 방법.

48. 정맥내 주입 시간이 30분 이하인, 구현예 46의 방법.

49. 주입 부피가 50 내지 100 mL인, 구현예 44-46 중 어느 하나의 방법.

50. 주입 부피가 약 50 mL인, 구현예 46-49 중 어느 하나의 방법.

51. T 세포가 키메라 신호화 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 키메라 신호화 폴리펩티드는

(i) 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역;

(ii) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역;

(iii) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역 및 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역; 또는

(iv) (iv) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역 및 CD40 세포외 도메인이 없는 CD40 세포질 폴리펩티드 영역

을 포함하는 것인, 임의의 상기 구현예의 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.

52. 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역이 MyD88, CD40 및/또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 신호화 영역인, 구현예 48의 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.

53. T 세포가 유도성 키메라 전-아팝토시스 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인, 임의의 상기 구현예의 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.

54. (a) 내부 공간을 포함하는 용기; 및

(b) 내부 공간 내에 함유된 조성물로,

(i) 약 1 x 10⁶ 내지 약 40 x 10⁶ (예: 약 5 x 10⁶) 세포/ml의 양의 T 세포;

(ii) 약 0.1%-0.6% v:v의 농도의 혈청 알부민;

(iii) 약 5%-7% v:v의 농도의 DMSO; 및

(iv) 인간 주사를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체

를 포함하는 조성물

을 포함하는 키트.

55. 용기가 백, 예를 들어, 저온보존 백을 포함하는 것인, 구현예 54의 키트.

56. 용기가 내부 공간과 유체 연통(fluidic communication)되는 백 스파이크를 추가로 포함하는 것인, 구현예 55의 키트.

57. T 세포가 유전적으로 조작된 것인, 구현예 54의 키트.

58. 혈청 알부민이 인간 혈청 알부민인, 구현예 54의 키트.

59. 혈청 알부민이 약 0.5% v:v의 농도로 존재하는 것인, 구현예 54의 키트.

60. DMSO가 약 5% v:v의 농도로 존재하는 것인, 구현예 54의 키트.

61. 제약학적으로 허용가능한 담체가 소듐 클로라이드, 소듐 글루코네이트 소듐, 아세테이트 삼수화물, 포타슘 클로라이드, 및 마그네슘 클로라이드를 포함하는 것인, 구현예 54의 키트.

62. 제약학적으로 허용가능한 담체가 Pharma Lyte 또는 Plasma Lyte를 포함하는 것인, 구현예 54의 키트.

63. 조성물이 약 15 ml의 부피를 갖는 것인, 구현예 54의 키트.

64. (a) 내부 공간을 포함하는 용기; 및

(b) 내부 공간 내에 함유된 조성물로,

(i) 약 15 x 10⁶ 내지 약 600 x 10⁶ (예: 약 75 x 10⁶) 세포의 양의 T 세포;

(ii) 약 0.03% 내지 약 1.8% 혈청 알부민, 예를 들어, 약 1.5% v:v의 양의 혈청 알부민;

(iii) 약 1.5%-2.1 v:v (예: 약 1.5% v:v)의 농도의 DMSO; 및

(iv) 인간 주사를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체

를 포함하는 조성물

을 포함하는 키트.

65. 용기가, 임의로 백 스파이크를 포함하는 튜브를 포함한, 백을 포함하고, 여기서 튜브는 내부 공간과 유체 연통되는 것인, 구현예 63의 키트.

66. 조성물이 약 50 ml의 부피를 갖는 것인, 구현예 63의 키트.

67. 질환, 예를 들어, 암의 치료에서의 사용을 위한 본원에 기재된 바와 같은 조성물.

68. 질환, 예를 들어, 암의 치료를 위한 본원에 기재된 바와 같은 조성물의 용도.

69. 질환, 예를 들어, 암의 치료를 위한 의약 제조에서의 본원에 기재된 바와 같은 조성물의 용도.

실시예

실시예 1: 유전적으로 변형된 T 세포의 제조

세포를 본질적으로 하기와 같이 얻었다:

· 백혈구에 대한 풍부화를 위해, 백혈구성분채집술에 의해 공여자의 말초 혈액의 샘플로부터 세포를 얻는다. CliniMACS Prodigy™ 장치 (Miltenyi Biotec)를 사용하여 밀도 구배 분리에 의해 단핵 세포를 풍부화하고, -130℃에서 저장을 위해 저온보존한다.

· 요구되는 경우, 이들을 건조 배쓰에서 해동시키고, 이어서 (제1일) 37℃ 및 5% CO₂에서 배양 백 내에서 Prodigy™ 장치 상에서 배양한다. 세포를 1-3x10⁶ 세포/mL로 배양 배지 내로 시딩한다. 배지는, 100 U/mL IL-2, 0.2 μg/mL 항-CD3 mAb (Miltenyi Biotec으로부터의 OKT3), 및 0.5 μg/mL 항-CD28 mAb로 보충된, (트랜스페린, 알부민, 및 인슐린을 함유하는) T 세포를 지지하는 무혈청 배지이다. 이들 조건은 T 세포를 활성화시킨다.

· 제3일에, 배양물에 신선한 100 U/mL IL-2 및 33% 추가의 신선한 배지를 공급한다.

· 제5일에, 세포를 RetroNectin™-코팅된 AC 백으로 전달하고, 하기 문헌에 의해 개시된 iCasp9 자살 스위치를 인코딩하는 Gal-V 레트로바이러스 벡터로 형질도입한다: Tey et al. (2007) Biol Blood Marrow Transpl 13:913-24 및 Di Stasi et al. (2011) N Engl J Med 365:1673-83. IL-2를 200 U/mL로 첨가한다.

· 제6일에, 세포를 프로세싱하여 남아있는 레트로바이러스 입자 (상청액)를 제거하고, 200 U/mL IL-2와 10⁶ 세포/mL로 배지 중에 재-현탁시킨다. 배양을 37℃, 5% CO₂에서 계속한다.

· 제8일에, 형질도입된 세포를, 다시 Prodigy™ 시스템을 사용하여, CD19 발현에 기초하여 MACS에 의해 선택한다. CD19+ 세포를, 10⁶ 세포/mL로 추가의 IL-2 (200 IU/mL)와, 이전과 같이, 백 내에서 배양한다.

· 제9일에, 세포를 수확하고, 원심분리기에서 Plasma-Lyte A (Rizoli (2011) J Trauma 70(5 Suppl) S17-8)로 세척하고, 이들이 동종이계 수용자에 의해 필요할 때까지 -130℃에서 저장을 위해 저온보존 배지 중에 재현탁시킨다.

· 그러나, 제9일에 세포 수가 적절하지 않은 경우 (예를 들어, 의도된 치료를 위해 세포가 지나치게 적은 경우), 배양을, 이전 포인트에 기재된 바와 같이, 수확 이전에 제15일까지 계속할 수 있다.

생성된 세포는 공여자에 대한 재-도입을 위해 적합하고, 줄기 세포 이식 후에 바이러스 및 종양-특이적 면역을 제공할 수 있다. 유전적으로 변형된 T 세포는 숙주에서 재-확장될 수 있다. GVHD의 경우, 리미두시드에 의한 iC9의 활성화는 동종반응성 T 세포의 빠른 사멸 및 GVHD의 분해로 이어진다.

유전자 변형은 전형적으로, 공여자 환자로부터 멀리 떨어진 전문 사이트에서 수행될 것이다. 따라서, 세포는 공여자에게 수송되어야 하고, 이는 전형적으로 저온보존을 수반한다. 다음 실시예는 저온보존 전, 동안 및 후에 T 세포의 회복률 및 생존율에 영향을 줄 수 있는 파라미터를 고려한다.

실시예 2: 저온보존 프로세스 파라미터의 특성화

세포 농도 및 DMSO 농도는 잠재적으로 해동 세포 생존율 및 회복률에 대한 중요한 영향력을 갖는 것으로 확인되었고, 따라서 이들 파라미터를 DoE 연구에서 조사하였다. 서로 유사한 실험 유닛 배열의 통계적 이론에 기초한 블록 인자가, 연구의 변동성을 감소시키기 위해 나중에 추가되었다. 이 이론 사용시, 블록간에 상이한 회귀는 실험적 변동을 지시한다. 1차 인자 이외에, 모델은 또한 3개의 1차 인자 사이의 상호작용을 검사한다 (Alias Terms).

배양에서 세포에 대한 세포 농도 범위는 1-3 x 10⁶ 세포/mL였고, 최종 제제 중의 DMSO 함량은 2 내지 8% (v/v)였다.

세포 생성 및 저온보존을 위한 제조

건강한 공여자로부터 얻은 백혈구성분채집물을 이 프로세스의 출발 물질로서 사용하였다. 세포를 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다. 수확에 따라 (제9일), 세포를 하기 3개의 상이한 농도로 배합하였고: 1.3 x 10⁶/mL, 2.6 x 10⁶/mL 및 3.6 x 10⁶/mL, CryoStor™ 세포 저온보존 배지 CS10 (CS10)으로 희석하여, 최종 DMSO 농도가 2%, 5%, 또는 8% (v/v)가 되도록 하였다. 희석 후, 세포를 제어 속도 동결 (CRF)을 사용하여 저온-보존하였다.

해동-후 및 배양-후 측정

바이알 내의 저온보존된 세포를 DryBath를 사용하여 배치에서 해동시켰다. 해동-후 세포를 PrimeXV +10% FBS 완전 배지 중에 10x 희석하였다. NC-3000 Nucleocounter를 사용하여 세포 카운트 및 생존율 측정을 위해 300 μl 분취액을 제거하였다. 해동-후 샘플을 37℃에서 60 min 동안 유지한 후, 2의 감속 설정으로 10 min 동안 350x g로 원심분리하였다. 원심분리 후, 상청액을 경사분리에 의해 제거하고, 세포를 5 mL의 PrimeXV+10% FBS 완전 배지 중에 재현탁시켰다. NC-3000을 사용하여 스핀-후 세포 카운트 및 생존율 측정을 수행하였다. 세포를 37℃/5% CO₂에서 인큐베이터 내 배양에 배치하였다. 인큐베이션-후 20±4시간 후, 배양물을 200 IU/mL의 IL-2로 보충하고, 배양을 추가의 20±4시간 동안 계속하였다. 총 40±8시간 인큐베이션 후, 배양물을 수확하고, NC-3000을 사용하여 세포 카운트 및 생존율 측정을 수행하였다.

결과

세포 생존율은 75.2-85.1%의 범위였다. 세포 회복률은 적어도 97%였다.

다변수 효과를 입증하기 위해 사용된 제1 예측 프로파일러 (도 1)는, DMSO 농도가, 5% 내지 7%의 바람직한 범위, 및 5.88%에서의 최대 생존율을 가지며, 2차 방식으로 생존율에 영향을 주었음을 보여주었다. 제2 예측 프로파일러 (도 2)는, 회복률이 시험 농도에서 DMSO와 선형 관계에 있음을 지시하였고, 이는 보다 높은 DMSO 농도가 보다 우수한 회복률을 제공함을 나타낸다.

생존율 및 회복률에 대한 DMSO의 영향에 대한 이러한 정보는 그의 안전성 프로파일에 대한 지식과 조합될 수 있고, 이는 저온보존을 위해 최적 DMSO 농도가 5-7%임을 가리킨다. 약 5%의 농도는, 특히 소아과 환자에 대한 안전성과 관련하여, 모든 3개의 파라미터의 유리한 밸런스를 제공한다. 5% 미만의 농도는 저온보존 절차에 적용될 세포에 대하여 선호되지 않는다.

실시예 3: 세포 주입

세포 제조

실시예 1에 따라 제조된 세포를 Plasma-Lyte A™ 내에서 세척한다. 상청액을 제거하고, 1% (v/v)의 HSA 농도를 제공하도록 HSA (Nova Biologics)로 보충된 Plasma-Lyte A™을 사용하여 최종 부피를 7.5 mL로 만든다. 이어서, 7.5 mL의 CryoStor CS10™ (10% v/v DMSO 함유)을 첨가하여, 15 mL의 최종 부피를 제공한다. 따라서 최종 조성물은 0.5% HSA (v/v) 및 5% DMSO (v/v)를 함유한다. 이어서, 세포를 운송을 위해 저온보존한다.

세포 해동

저온보존된 세포를 37°±1℃로 가열된 멸균 수조를 사용하여 주입을 위해 제조하였다. 생성물 백을 해동시키고, 최종 생성물의 포트를 가능한 누출에 대하여 백을 가시적으로 검사하면서 37°±1℃ 수조에 담근다. 포트 상의 누출이 관찰 또는 검출되지 않으면, 최종 생성물 백을 37°±1℃ 수조에 완전히 담그어 물이 지퍼-밀봉 백으로 도입되지 않음을 보장한다. 이어서, 최종 생성물 백을 해동 동안 온화하게 마사지하여 해동된 세포 현탁액이 백을 통해 순환하여 백 내의 해동된 액체의 보다 균일한 온도 분포를 생성하도록 한다. 마지막 얼음 조각이 해동되기 직전에, 최종 생성물 백을 수조로부터 제거하고, 지퍼-밀봉 용기로부터 제거하고, 멸균 드레이프 상에 배치한다.

주입 준비

무침 밸브 (또는 다른 샘플링 장치)를 갖는 백 스파이크를 해동된 최종 생성물 백 및 Plasma-Lyte A™ 백 내로 무균 삽입한다. 대안으로서, Plasma-Lyte A™ 대신에 0.9% NaCl 용액을 사용할 수 있다. 35 mL의 Plasma-Lyte A™ (또는 0.9% NaCl)을 시린지 내로 무균 흡인한다. 생성물 백을 온화하게 혼합하며, 시린지의 내용물을 생성물 백 내로 서서히 전달함에 따라 세포를 백 내에서 희석한다 (15 mL로부터 50 mL까지). 이어서, 빈 시린지를 최종 생성물 백으로부터 탈착시키고, 희석된 최종 생성물을 주입 위치로 수송한다. 이어서, 최종 생성물 백을 환자 주입 라인에 연결하고 20-30분의 기간에 걸쳐 주입한다.

백 내의 모든 세포가 사용됨을 보장하기 위해, 최종 생성물 백을 추가의 최소 부피의 >15 mL의 Plasma-Lyte A™ (또는 0.9% NaCl)으로 헹군 후 최종 생성물 부피를 백으로부터 배출시킨다. 이 헹굼은 Plasma-Lyte A (또는 0.9% NaCl) 백을 주입 세트에 연결하고 희석제를 중력 유동에 의해 최종 생성물 백 내로 배출함으로써 수행된다. 대안으로서, Plasma-Lyte A™ (또는 0.9% NaCl) 볼루스를 백 스파이크 상의 무침 밸브 (또는 다른 샘플링 장치)에 연결하고 백 내로 주입할 수 있다.

본 발명자들의 작업이 단지 예로서 상기에 기재되었고, 본 발명의 범위 및 취지 내에서 유지하면서 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.

Claims

T 세포 및 혈청 알부민 및 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <2.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하고, DMSO는 혈청 알부민에 비해 >5배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, <2.2% (v/v), <2% (v/v), <1% (v/v), 또는 약 0.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, DMSO가 혈청 알부민에 비해 5배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인 조성물.
제3항에 있어서, 과량이 5배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인 조성물.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 조성물.
제5항에 있어서, 혈청 알부민 농도가 <1% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인 조성물.
제5항 또는 제6항에 있어서, DMSO의 농도가 <10% (v/v)인 조성물.
제7항에 있어서, DMSO의 농도가 2-8% (v/v), 4-7% (v/v), 5-6% (v/v), 또는 약 5% (v/v)인 조성물.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하며, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)인 조성물.
제9항에 있어서, 혈청 알부민의 농도 (v/v)가 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%인 조성물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 1x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 갖는 조성물.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 저온보존 형태인 조성물.
T 세포 및 혈청 알부민을 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 약 0.15% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 것인 조성물.
제13항에 있어서, 디메틸 술폭시드 (DMSO)를 또한 포함하는 조성물.
제14항에 있어서, DMSO가 혈청 알부민에 비해 3배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인 조성물.
제15항에 있어서, 과량이 3배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인 조성물.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.03-0.6%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높은 것인 조성물.
제17항에 있어서, 혈청 알부민 농도가 <0.3% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인 조성물.
제17항 또는 제18항에 있어서, DMSO의 농도가 <3% (v/v)인 조성물.
제7항에 있어서, DMSO의 농도가 0.6-2.4% (v/v), 0.8-2.2% (v/v), 1.5-2% (v/v), 또는 약 1.8% (v/v)인 조성물.
T 세포 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 조성물은 <0.15% (v/v) DMSO를 포함하는 것인 조성물.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO를 포함하는 조성물로, 여기서 혈청 알부민의 농도는 0.03-0.3% (v/v)이고, DMSO 농도는 0.15-0.20% (v/v)인 조성물.
제13항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 0.3x10⁶ 내지 12x10⁶ T 세포/mL를 갖는 조성물.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 유전적으로 변형된 T 세포, 예컨대 CAR-T 세포인 조성물.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 인간 T 세포이고, 혈청 알부민이 인간 혈청 알부민인 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 조성물을 희석하는 단계를 포함하는, 제13항 내지 제25항 중 어느 한 항의 조성물의 제조 프로세스.
제26항에 있어서, 희석을 전해질 용액으로 수행하는 것인 프로세스.
제27항에 있어서, 전해질 용액이 생리 식염수인 프로세스.
제27항에 있어서, 전해질 용액이 약 5.26 g/L NaCl, 약 5.02 g/L 소듐 글루코네이트, 약 3.68 g/L 소듐 아세테이트 삼수화물, 약 0.37 g/L KCl, 및 약 0.3 g/L MgCl₂.6H₂O를 갖는 pH 6.5-8.0의 멸균, 비발열성, 등장성 용액인 프로세스.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 조성물을 그를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 치료 방법.
T 세포, 혈청 알부민 및 디메틸 술폭시드 (DMSO)의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 조성물은 <2.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하고, DMSO는 혈청 알부민에 비해 >5배 과량 (v/v)으로 존재하고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.
제31항에 있어서, 현탁액이 <2.2% (v/v), <2% (v/v), <1% (v/v), 또는 약 0.5% (v/v) 혈청 알부민을 포함하는 것인 용기.
제31항 또는 제32항에 있어서, DMSO가 혈청 알부민에 비해 5배 내지 30배 과량 (v/v)으로 존재하는 것인 용기.
제33항에 있어서, 과량이 5배 내지 15배, 6배 내지 12배, 8배 내지 11배, 또는 약 10배인 용기.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도 (v/v)는 혈청 알부민의 농도보다 3배 내지 30배 더 높고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.
제35항에 있어서, 혈청 알부민 농도가 <1% (v/v)이고, DMSO 농도가 혈청 알부민 농도보다 8배 내지 11배 더 높은 것인 용기.
제35항 또는 제36항에 있어서, DMSO의 농도가 <10% (v/v)인 용기.
제37항에 있어서, DMSO의 농도가 2-8% (v/v), 4-7% (v/v), 5-6% (v/v), 또는 약 5% (v/v)인 용기.
T 세포, 혈청 알부민, 및 DMSO의 현탁액을 포함하는 용기로, 여기서 혈청 알부민의 농도 (v/v)는 0.1-1%이고, DMSO의 농도는 5-7% (v/v)이고, 현탁액은 환자에게 투여되는 것인 용기.
제39항에 있어서, 혈청 알부민의 농도 (v/v)가 0.2-0.8%, 0.3-0.7%, 0.4-0.6%, 또는 약 0.5%인 용기.
제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 1x10⁶ 내지 40x10⁶ T 세포/mL를 갖는 용기.
제31항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 저온보존 형태인 조성물.
제13항 내지 제25항 중 어느 한 항의 조성물을 그를 필요로 하는 환자에게 정맥내 주입에 의해 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 치료 방법.
제43항에 있어서, 정맥내 주입 시간이 15 내지 120분인 방법.
제43항에 있어서, 정맥내 주입 시간이 30분 이하인 방법.
제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 주입 부피가 50 내지 100 mL인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 주입 부피가 약 50 mL인 방법.
제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 키메라 신호화 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 여기서 키메라 신호화 폴리펩티드는
(i) 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역;
(ii) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역;
(iii) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역 및 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역; 또는
(iv) TIR 도메인이 없는 절두형 MyD88 폴리펩티드 영역 및 CD40 세포외 도메인이 없는 CD40 세포질 폴리펩티드 영역
을 포함하는 것인 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.
제48항에 있어서, 공동자극 폴리펩티드 세포질 신호화 영역이 MyD88, CD40 및/또는 MyD88-CD40 융합 키메라 폴리펩티드에 의해 활성화된 신호화 경로를 활성화시키는 신호화 영역인 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.
제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포가 유도성 키메라 전-아팝토시스 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 조성물, 방법, 프로세스, 또는 용기.
(a) 내부 공간을 포함하는 용기; 및
(b) 내부 공간 내에 함유된 조성물로,
(i) 약 1 x 10⁶ 내지 약 40 x 10⁶ (예: 약 5 x 10⁶) 세포/ml의 양의 T 세포;
(ii) 약 0.1%-0.6% v:v의 농도의 혈청 알부민;
(iii) 약 5%-7% v:v의 농도의 DMSO; 및
(iv) 인간 주사를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 포함하는 키트.
제51항에 있어서, 용기가 백, 예를 들어, 저온보존 백을 포함하는 것인 키트.
제52항에 있어서, 용기가 내부 공간과 유체 연통(fluidic communication)되는 백 스파이크를 추가로 포함하는 것인 키트.
제51항에 있어서, T 세포가 유전적으로 조작된 것인 키트.
제51항에 있어서, 혈청 알부민이 인간 혈청 알부민인 키트.
제51항에 있어서, 혈청 알부민이 약 0.5% v:v의 농도로 존재하는 것인 키트.
제51항에 있어서, DMSO가 약 5% v:v의 농도로 존재하는 것인 키트.
제51항에 있어서, 제약학적으로 허용가능한 담체가 소듐 클로라이드, 소듐 글루코네이트 소듐, 아세테이트 삼수화물, 포타슘 클로라이드, 및 마그네슘 클로라이드를 포함하는 것인 키트.
제51항에 있어서, 제약학적으로 허용가능한 담체가 Pharma Lyte 또는 Plasma Lyte를 포함하는 것인 키트.
제51항에 있어서, 조성물이 약 15 ml의 부피를 갖는 것인 키트.
(a) 내부 공간을 포함하는 용기; 및
(b) 내부 공간 내에 함유된 조성물로,
(i) 약 15 x 10⁶ 세포 내지 약 600 x 10⁶ (예: 약 75 x 10⁶) 세포의 양의 T 세포;
(ii) 약 0.03% 내지 약 1.8% 혈청 알부민, 예를 들어, 약 1.5% v:v의 양의 혈청 알부민;
(iii) 약 1.5%-2.1 v:v (예: 약 1.5% v:v)의 농도의 DMSO; 및
(iv) 인간 주사를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 포함하는 키트.
제61항에 있어서, 용기가, 임의로 백 스파이크를 포함하는 튜브를 포함한, 백을 포함하고, 여기서 튜브는 내부 공간과 유체 연통되는 것인 키트.
제61항에 있어서, 조성물이 약 50 ml의 부피를 갖는 것인 키트.
질환, 예를 들어, 암의 치료에서의 사용을 위한 본원에 기재된 바와 같은 조성물.
질환, 예를 들어, 암의 치료용인, 본원에 기재된 바와 같은 조성물의 용도.
질환, 예를 들어, 암의 치료용 의약의 제조에서 본원에 기재된 바와 같은 조성물의 용도.