KR20220012328A - c-kit 및 CD47에 대한 면역요법제의 병용 투여를 위한 요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 내인성 HSPC를 절제하기 위한, c-kit에 특이적으로 결합하거나 CD47-SIRPa를 저해하는 면역요법제의 병용 투여 요법을 제공한다. 비교적 낮은 수준의 항-c-kit는 HSPC의 수준을 상당히 감소시키지 않으면서 HSPC 상의 c-kit로의 결합이 포화되게 한다. CD47-SIRPa를 저해하는 면역요법제에 의해서 항-c-kit의 작용이 촉진될 때 HSPC의 수준의 상당한 감소가 달성될 수 있다. c-kit를 발현하는 HSPC는 대상체가 부적절한 HSPC를 갖고 있게 되는 기간인 유해한 지연 없이 대체 HSPC를 도입할 수 있도록 하는 허용 가능한 수준까지 감소될 수 있다.

Description

c-kit 및 CD47에 대한 면역요법제의 병용 투여를 위한 요법

관련 출원의 교차 참조

본 출원은 2019년 5월 24일자로 출원된 미국 특허 출원 제62/852,901호의 우선권을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 모든 목적을 위해 원용되어 포함된다.

서열 목록

본 출원은 2002년 5월 18일에 작성된 37k 바이트의 파일명 2020-05-28 547773 WO SL의 텍스트 파일에 개시된 서열을 포함하며, 이는 본원에 원용되어 포함된다.

줄기 세포는 분화된 세포를 생성하기 위한 증식을 통해, 유기체가 특정 조직을 유지 및 복구하는 수단을 제공한다. 조혈 모세포 이식은 일반적으로 환자가 화학요법 또는 기타 컨디셔닝 요법에 의해 내인성 조혈 모세포를 절제(ablating)한 경우 환자에게 혈액 세포를 생성할 수 있는 능력을 제공하는 데 사용되어 왔다.

조혈 세포 이식은 일반적으로 조혈 모세포를 포함하는 자가 또는 동종 혈액 형성 세포의 정맥내 주입을 포함한다. 조혈 모세포는 골수, 말초 혈액, 또는 제대혈에서 수집되고, 골수 또는 면역 체계가 손상되거나 결함이 있는 환자에서 조혈 기능을 회복하기 위해 이식된다. 이 절차는 종종 백혈병과 같은 골수 침윤 과정을 제거하거나 선천성 면역결핍 장애를 교정하기 위한 요법의 일부로 수행된다. 조혈 세포 이식은 또한 암 환자가 골수가 일반적으로 견딜 수 있는 것보다 더 많은 용량의 화학 요법을 제공받을 수 있도록 하는 데 사용되고; 그러면 골수 기능은 이전에 수거한 줄기세포로 골수를 대체함으로써 회복된다(일반적으로 국제 출원 공개 WO 2004/002425호 및 국제 출원 공개 WO2018/140940호 참조).

본 발명은 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC: hematopoietic stem and progenitor cell)의 절제(ablating)를 필요로 하는 환자에서 HSPC를 절제하는 방법을 제공하는 바, 이 방법은 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제를 0.15 내지 2 mg/㎏ 투여하고 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제를 유효 처방(effective regime)으로 투여하는 것을 포함하고, HSPC를 환자에서 절제한다.

선택적으로, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 1 mg/㎏이 단일 용량으로 투여된다. 선택적으로, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제가, 0.15 내지 1 mg/㎏의 단일 용량과 실질적으로 동일한 곡선 하 면적을 전달하는 최대 7일의 기간에 걸친 다회 용량으로 투여된다. 선택적으로, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 1 mg/㎏이 2회 용량으로 3일 내지 7일 간격으로 투여된다. 선택적으로, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 유효 처방은 제1 용량과, 제1 용량보다 많은 제2 용량을 포함한다. 선택적으로, 제1 용량은 1 mg/㎏이고, 제2 용량은 10 내지 30 mg/㎏, 바람직하게는 15 내지 20 mg/㎏이다. 선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량과 동시에 단일 용량으로 투여된다. 선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량과, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량이 동시 주입(co-infusion)에 의해서 투여된다. 선택적으로, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량과, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량이, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제1 용량 후 3일 내지 15일 후에, 선택적으로는 7일 후에 투여된다. 선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 10일 내지 30일의 기간에 걸친 적어도 3회 용량으로 투여된다. 선택적으로, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 각각의 용량이 투여되는 날과 동일한 날에, 선택적으로는 이전의 다른 투여량보다는 적은 용량이 추가되게 하여, 투여된다.

선택적으로, 본 방법은 환자에게 HSPC를 도입하는 것을 더 포함한다. 선택적으로, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량 및 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량이 투여된 후 5일 내지 15일 후에, HSPC가 도입된다.

선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량 및 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제1 용량 및 제2 용량만이 HSPC 도입 전에 투여된다. 선택적으로, 본 방법은 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제3 용량을 제2 용량 후에 투여하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 제2 용량과 제3 용량은 면역요법제의 양과 동일한 양이다. 선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 다회 용량이 투여되고, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 다회 용량이 투여되며, HSPC는 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제나, 또는 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제 중 어느 것이든지 간에 나중의 것의 마지막 용량 후 5일 내지 15일 후에 환자에게 도입된다. 선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 마지막 용량과 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 마지막 용량이 같은 날에 투여된다.

선택적으로, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 CD47에 특이적으로 결합하는 항체이다. 선택적으로, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 인간화 5F9, 선택적으로 마그롤리맙(magrolimab)이다.

선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제가 유효 처방으로 투여된다. 선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 항체이다. 선택적으로, 이 항체는 서열 번호 29를 포함하는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 30을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체는 FSI-189, ES-004, BI765063, ADU1805 및 CC-95251 중 어느 하나이다. 선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 10 내지 30 mg/㎏의 용량으로 투여된다. 선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 단일 용량으로 투여된다. 선택적으로, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 다회 용량으로 투여된다.

선택적으로, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 항체이다. 선택적으로, 이 항체는 인간 IgG1 동종형의 SR1의 인간화 형태이다. 선택적으로, 이 항체는 서열 번호 7 내지 9 중 어느 하나를 포함하는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 10을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 선택적으로, 중쇄 가변 영역은 서열 번호 7을 포함하는 서열을 갖는다.

선택적으로, 면역요법제의 투여는 c-kit 양성 HSPC를 투여 전 수준의 25% 내지 95%만큼 절제한다. 선택적으로, 면역요법제의 투여는 c-kit 양성 HSPC를 투여 전 수준의 25% 내지 75%만큼 절제한다.

선택적으로, 환자는 HSPC 절제에 의해서 치료되는 혈액암을 갖는다. 선택적으로, 환자에게 혈액암의 치료에 효력이 있는 작용제도 또한 투여된다. 선택적으로, 환자에게 HSPC 절제 전에 또는 동안에 작용제가 투여된다. 선택적으로, 작용제는 암 항원에 대한 화학요법제, 항혈관신생제, 항섬유화제, 또는 단일클론 항체이다. 선택적으로, 혈액암은 림프종, 백혈병, 또는 골수종이다. 선택적으로, 환자는 고형 종양을 갖고 있고, 이 환자에게 고형 종양을 치료하는 데 효력이 있는 작용제가 투여되며, 이 작용제는 환자에서 HSPC를 절제하기 전에 환자의 HSPC를 손상시킨다. 선택적으로, 작용제는 화학요법제이다. 선택적으로, HSPC 절제 후에 환자에게 CAR-T 세포가 투여된다. 선택적으로, HSPC 또는 세포 요법의 성장을 촉진하기 위해, HSPC 절제 후에 flt3 효능제 또는 CISH 저해제가 투여된다. 선택적으로, NK 세포를 절제하기 위해, MCL1 저해제가, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 및 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제와 병용 투여된다.

상기 방법들 중 어느 하나에서, 환자는 인간일 수 있다.

본 발명은 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC)를 절제하기 위한 약제를 제조하는 데 있어서의 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 용도로서, 이 면역요법제는, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 유효 처방과 조합하여, 0.15 내지 2 mg/㎏의 용량으로 투여하기 위한 것인, 용도를 추가로 제공한다. 본 발명은 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC)를 절제하기 위한 약제를 제조하는 데 있어서의 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 용도로서, 이 면역요법제를 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 2 mg/㎏의 용량과 조합하여 사용하는 용도를 추가로 제공한다. 이들 용도 중 어느 하나는 상기 또는 본원에 기재된 임의의 방법에 따를 수 있다.

도 1a 및 도 1b는 영장류에서 (A) 항-c-kit 및 (B) 항-c-kit와 항-CD47을 투여하기 위한 치료 시간 라인을 보여주고 있다.
도 2는 시간에 따른 항-c-kit의 혈청 농도를 보여주고 있다.
도 3은 여러 투여량의 항-c-kit에 대한 c-kit 수용체 점유율을 보여주고 있다.
도 4는 시간에 따른 항-c-kit 및 항-CD47 수용체 점유율을 보여주고 있다.
도 5a 및 도 5b는 (A) 항-c-kit 및 (B) 항-c-kit와 항-CD47로 치료된 기준선에 대한 c-kit 양성 HSC에서의 변화 %를 보여주고 있다.
도 6a 및 도 6b는 항-c-kit와 항-CD47의 조합 치료에 따른 (A) 말초 백혈구 또는 (B) 호중구의 시간 경과에 따른 변화를 보여주고 있다.
도 7a 및 도 7b는 항-c-kit와 항-CD47가 조합된 치료의 경우의 시간 경과에 따른 (A) 헤모글로빈 및 (B) 적혈구 수준을 음성 대조군과 대비하여 보여주고 있다.
도 8은 항-c-kit 및 항-CD47 둘 다의 다회 투여 요법을 사용한 HSC의 절제를 보여주고 있다.
도 9는 항-c-kit 및 항-SIRPα에 의한 HSPC의 절제를 보여주고 있다.
정의
대상체 또는 환자는 개시된 방법에 의해 치료될 인간 및 기타 동물, 특히 애완동물 및 실험실 동물, 예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 및 비인간 영장류를 포함한 포유동물을 포함한다. 따라서 이 방법은 인간 요법 및 수의학 적용 모두에 적용할 수 있다.
면역요법제는 지정된 표적에 대한 항체 또는 Fc-융합 단백질을 지칭한다. 예를 들어 CD47에 대한 항체 및 SIRPα-Fc 융합은 CD47에 대한 면역요법제이다.
면역요법제는 전형적으로 단리된 형태로 제공된다. 이는 이러한 작용제가 전형적으로 이의 생산 또는 정제로부터 발생하는 간섭 단백질 및 기타 오염물질에 대해 50% w/w 이상 순수하다는 것을 의미하지만, 작용제가 그의 사용을 용이하게 하도록 의도된 과량의 약제학적으로 허용되는 담체(들) 또는 기타 비히클(vehicle)과 조합될 가능성을 배제하지는 않는다. 때때로 작용제는 생산 또는 정제로부터의 간섭 단백질 및 오염 물질이 적어도 60, 70, 80, 90, 95 또는 99% w/w 이상 순수하다. 종종 작용제는 그의 정제 후에 남아 있는 우세한 거대분자 종이다.
표적 항원에 대한 면역요법제의 특이적 결합은 적어도 10⁶, 10⁷, 10⁸, 10⁹ 또는 10¹⁰ M^-1의 친화도를 의미한다. 특이적 결합은 검출 가능하게 더 큰 규모이며 적어도 하나의 관련되지 않은 표적에 대해 발생하는 비특이적 결합과 구별될 수 있다. 특이적 결합은 특정 작용기들 사이의 결합의 형성 또는 특정 공간 맞춤(spatial fit)(예를 들어, 자물쇠와 열쇠 유형)의 결과일 수 있지만 비특이적 결합은 보통 반 데르 발스 힘의 결과이다.
기본 항체 구조 단위는 소단위의 사량체이다. 각각의 사량체는 2개의 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬을 포함하며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄"(약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄"(약 50 내지 70 kDa)를 갖는다. 각각의 사슬의 아미노-말단 부분은 항원 인식을 주로 담당하는 약 100 내지 110개, 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 이러한 가변 영역은 초기에 발현되고, 절단가능한 신호 펩티드에 연결된다. 신호 펩티드가 없는 가변 영역은 때때로 성숙 가변 영역으로 지칭된다. 따라서, 예를 들어, 경쇄 성숙 가변 영역은 경쇄 신호 펩티드가 없는 경쇄 가변 영역을 의미한다. 그러나, 가변 영역에 대한 언급은 신호 서열이 반드시 존재함을 의미하지는 않으며; 실제로 일단 본 발명의 항체 또는 다른 면역요법제 발현되고 분비되면 신호 서열이 절단된다. 한 쌍의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 항체의 결합 영역을 한정한다. 경쇄 및 중쇄의 카복시-말단 부분은 각각 경쇄 불변 영역 및 중쇄 불변 영역을 한정한다. 중쇄 불변 영역은 주로 이펙터 기능을 담당한다. IgG 항체에서, 중쇄 불변 영역은 CH1, 힌지, CH2, 및 CH3 영역으로 나뉜다. IgA에서, 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3으로 나뉜다. CH1 영역은 이황화 및 비공유 결합에 의해 경쇄 불변 영역에 결합한다. 힌지 영역은 항체의 결합 영역과 이펙터 영역 사이에 유연성을 제공하고 또한 사량체 소단위에서 2개의 중쇄 불변 영역 사이의 분자간 이황화 결합을 위한 부위를 제공한다. CH2 영역 및 CH3 영역은 이펙터 기능 및 FcRn 결합의 주요 부위이다.
경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 중쇄는 감마, 뮤, α, 델타, 또는 엡실론으로 분류되며, 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE로서 항체의 동종형을 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 세그먼트에 의해 연결되며, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 세그먼트를 포함한다. (일반적으로, 문헌[Fundamental Immunology (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y., 1989), Ch. 7] 참조)(모든 목적을 위해 전체적으로 참고로 포함됨).
각각의 경쇄/중쇄 쌍의 성숙 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 온전한 항체는 2개의 결합 부위를 가지며, 즉, 2가이다. 천연 항체에서, 결합 부위들은 동일하다. 그러나, 이중특이성에서, 결합 부위가 상이하다(예를 들어, 문헌[Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol., 79:315-321 (1990)]; 문헌[Kostelny et al., J. Immunol., 148:1547-53 (1992)] 참조). 가변 영역은 모두 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개의 사슬로부터의 CDR은 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 하는, 프레임워크 영역에 의해서 정렬된다. N-말단부터 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘 모두는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 대한 아미노산의 할당은 문헌[Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)], 또는 문헌[Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]; 문헌[Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]의 정의에 따른다. Kabat는 또한, 상이한 중쇄 가변 영역들 사이 또는 상이한 경쇄 가변 영역들 사이의 상응하는 잔기들이 동일한 번호를 할당받는 널리 사용되는 넘버링 규약(Kabat 넘버링)을 제공한다. Kabat 넘버링이 항체 불변 영역에 사용될 수 있지만, 본 출원에서의 경우와 같이, EU 인덱스가 더 일반적으로 사용된다.
용어 "에피토프"는 이중특이성 항체의 아암이 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 인접 아미노산, 또는 하나 이상의 단백질의 3차 접힘에 의해 병치된 비인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프(선형 에피토프로도 알려짐)는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시에 유지되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프(입체구조적 에피토프로도 알려짐)는 전형적으로 변성 용매로 처리 시 손실된다. 일부 항체는 말단 특이적 에피토프에 결합하는데, 이는 다른 폴리펩티드에 융합된 동일한 폴리펩티드에 비해 자유 말단을 갖는 폴리펩티드에 항체가 우선적으로 결합하여 자유 말단의 손실을 초래함을 의미한다. 에피토프는 전형적으로 특유의 공간 입체구조로 적어도 3개, 더욱 일반적으로는 적어도 5개, 또는 8개 내지 10개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간 입체구조를 결정하는 방법은, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols, in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다.
동일하거나 중첩하는 에피토프를 인식하는 항체는 하나의 항체가 표적 항원에 대한 다른 항체의 결합과 경쟁하는 능력을 보여주는 단순 면역검정에서 확인될 수 있다. 항체의 에피토프는 또한 접촉 잔기를 확인하기 위해 그의 항원에 결합된 항체의 X-선 결정학으로 규정될 수 있다. 대안적으로, 하나의 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 항원 내의 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 경우에 두 항체는 동일한 에피토프를 갖는다. 하나의 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 경우에 두 항체는 중첩하는 에피토프를 갖는다.
항체 간의 경쟁은 시험 하의 항체가 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 억제하는 검정에 의해 결정된다(예를 들어, 문헌[Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990] 참조). 경쟁적 결합 검정에서 측정할 때 과량의 시험 항체(예를 들어, 적어도 2배 5배 10배 20배 또는 100배)가 참조 항체의 결합을 적어도 50%, 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 99%만큼 억제하는 경우에 시험 항체는 참조 항체와 경쟁한다. 경쟁 검정에 의해 확인된 항체(경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및 입체 장애가 발생하도록 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접한 인접 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다.
아미노산 치환을 보존적 치환 또는 비보존적 치환으로 분류하기 위해, 아미노산은 하기와 같이 그룹화된다: 그룹 I (소수성 측쇄): met, ala, val, leu, ile; 그룹 II (중성 친수성 측쇄): cys, ser, thr; 그룹 III (산성 측쇄): asp, glu; 그룹 IV (염기성 측쇄): asn, gln, his, lys, arg; 그룹 V (사슬 배향에 영향을 주는 잔기): gly, pro; 및 그룹 VI (방향족 측쇄): trp, tyr, phe. 보존적 치환은 동일한 부류의 아미노산들 사이의 치환을 포함한다. 비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류의 구성원으로 교환하는 것으로 이루어진다.
서열 동일성 백분율은 가변 영역에 대한 Kabat 넘버링 규약 또는 불변 영역에 대한 EU 넘버링에 의해 최대로 정렬된 항체 서열을 사용하여 결정된다. 정렬 후, 대상 항체 영역(예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 전체 성숙 가변 영역)이 참조 항체의 동일한 영역과 비교되는 경우, 대상 항체 영역과 참조 항체 영역 사이의 서열 동일성 백분율은 대상 항체 영역 및 참조 항체 영역 둘 모두에서 동일한 아미노산에 의해 점유된 위치의 수를 두 영역의 정렬된 위치의 총 수로 나눈 것이며, 이때 갭은 계수되지 않고, 100을 곱하여 백분율로 전환된다.
c-kit는, 대상체에게 투여되는 항-c-kit의 용량이 c-kit에 결합된 항-c-kit의 양을 10%를 초과하게 증가시키지 않은 때에 항-c-kit로 실질적으로 포화된다.
하나 이상의 언급된 요소를 "포함하는" 조성물 또는 방법은 구체적으로 언급되지 않은 다른 요소를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체를 포함하는 조성물은 항체를 단독으로 또는 다른 성분들과 조합하여 함유할 수 있다.
용어 "항체-의존성 세포 세포독성", 또는 ADCC는 항체-코팅된 표적 세포(즉, 결합된 항체를 갖는 세포)와 용해 활성을 갖는 면역 세포(이펙터 세포로도 지칭됨)의 상호작용에 의존하는 세포 사멸을 유도하는 메커니즘이다. 이러한 이펙터 세포는 자연 살해 세포, 단핵구/대식세포 및 호중구를 포함한다. ADCC는 호중구, 대식세포 및 자연 살해 세포와 같은 면역 이펙터 세포 상에서 세포에 결합된 항체의 Fc 영역과 Fcγ 수용체, 특히 FcγRI 및 FcγRIII 사이의 상호작용에 의해 촉발된다. 표적 세포는 매개 이펙터 세포의 종류에 따라 식세포작용 또는 용해에 의해 제거된다. 항체-코팅된 표적 세포의 사멸은 이펙터 세포 활성의 결과로서 일어난다.
"항체-의존성 세포 식세포 작용" 또는 ADCP라는 용어는 항체-코팅된 세포가 면역글로불린 Fc 영역에 결합하는 식세포 면역 세포(예를 들어, 대식세포, 호중구 및 수지상 세포)에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 내재화되는 과정을 지칭한다.
용어 "보체-의존성 세포독성" 또는 CDC는 표적-결합 항체의 Fc 이펙터 도메인(들)이 표적 세포막에서의 구멍 형성에 이르게 하는 일련의 효소 반응을 활성화하는 세포 사멸을 유도하는 메커니즘을 지칭한다. 전형적으로, 항체-코팅된 표적 세포 상의 것과 같은 항원-항체 복합체는 보체 성분 C1q에 결합하고 활성화하고, 이는 다시 보체 캐스케이드를 활성화하여 표적 세포 사멸을 유도한다. 보체의 활성화는 또한 백혈구 상의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합함으로써 ADCC를 촉진하는 표적 세포 표면 상의 보체 성분의 침착을 초래할 수 있다.
문맥으로부터 달리 명확하지 않는 한, 범위에 대한 언급은 그 범위 내의 정수에 의해서 정의된 모든 하위 범위를 또한 개시하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 제공된 mg/㎏ 단위의 임의의 투여량 또는 투여량 범위는 70 ㎏의 예시적인 인간 체중을 사용하여 mg 단위의 절대 투여량, 선택적으로 투여량의 반올림, 또는 투여량의 상한 및 하한을 가장 가까운 정수로, 또는 계산된 절대 용량을 포함하는 가장 가까운 10, 50, 100, 500 또는 1000 정수로 변환될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 0.15 내지 2 mg/㎏의 투여량 범위는 10.5 내지 140 mg 또는 예시적인 반올림으로, 10 내지 150 mg으로 변환될 수 있다. 마찬가지로 10 내지 30 mg/㎏의 투여량 범위는 700 내지 2100 mg 또는 예시적인 반올림으로 500 내지 2500 mg으로 변환될 수 있다.
상세한 설명
I. 일반
본 발명은 내인성 HSPC의 절제를 위한 c-kit에 특이적으로 결합하거나 CD47-SIRPa를 저해하는 면역요법제의 병용 투여 요법을 제공한다. 이들 요법은, 비교적 낮은 수준의 항-c-kit의 전달이 HSPC의 수준을 상당히 감소시키지 않으면서 HSPC 상의 c-kit에 대한 결합의 포화를 초래한다는 통찰에 부분적으로 기초한다. 그러나, 항-c-kit의 작용이 CD47-SIRPa를 저해하는 면역요법제에 의해서 촉진될 때 HSPC의 수준의 상당한 감소가 얻어질 수 있다. 수용체의 실질적인 포화를 달성하기에 충분하지만 지나치게 과도하지 않은 항-c-kit를 투여하는 것은 c-kit을 발현하는 HSPC의 수준을 허용 가능한 수준으로 감소시켜 대상체가 적절하지 않은 HSPC를 갖는 동안 유해한 지연 없이 대체 HSPC를 도입할 수 있도록 하는 데 유리하다.
II. HSPC
응용에 따라, 대상체에 도입될 HSPC는 자가(즉, 그 대상체로부터), 동종이계(동일한 종의 다른 개체로부터) 또는 이종(다른 종으로부터)일 수 있다. 동종이형인 경우, HSPC는 MHC 대립유전자에 대해 완전히 또는 부분적으로 일치하거나 일치하지 않을 수 있다. 일치하는 HSPC는 친척 또는 낯선 사람으로부터 얻어질 수 있다.
모든 HSPC가 골수 또는 림프 계통 또는 둘 모두의 세포로 증식 및 분화할 수 있지만, HSPC는 상이한 분화 단계에 있는 세포를 포함한다. 원시 줄기 세포는 무한대로 증식할 수 있고, 골수 및 림프 계통의 모든 세포 유형을 형성할 수 있다. 원시 줄기 세포는 골수 계통과 림프 계통의 모든 세포를 생성할 수 있지만 무한대로 증식할 수 없는 다능성(multi-potent) 전구 세포로 분화한다. 다능성 전구 세포는 성숙 B 림프구, T 림프구 및 자연 살해(NK) 세포를 생성하는 공통 림프구 전구 세포인 CLP를 비롯한 올리고능성(oligo-potent) 전구 세포를 생성한다. 다능성 전구 세포는 또한 단핵구/대식세포 및 과립구로 분화하는 과립구-대식세포 전구 세포 및 거핵구/혈소판 및 적혈구로 분화하는 거핵구/적혈구 전구 세포로 추가로 분화하는 공통 골수 전구 세포(CMP: Common Myeloid Progenitor)를 생성한다(문헌[Bryder et al., Am. J. Pathol. 169, 338-346 (2006)]의 도 1 참조).
원시 조혈 모세포(HC) 및 다능성 전구 세포(HPC)는 예를 들어, Cobblestone-Forming Area Cell Assay(문헌[Ploemacher et al. Blood. 78:2527-33 (1991)])를 수행함으로써 실험적으로 서로 구별될 수 있다. 전구 세포는 배양물 중에서 1 내지 3주에 걸쳐 더 일찍 나타나는 반면, 원시 조혈 모세포는 배양물 중에서 4 내지 5주에 나타난다. 원시 줄기 세포 및 다능성 전구 세포는 모두 대체 요법에 유용하다. CMP 또는 CLP와 같은 추가로 분화된 세포가 또한 사용할 수 있지만, 증식 능력이 제한되어 있고 형성할 수 있는 세포 계통이 제한되어 있기 때문에 덜 다용성(versatile)일 수 있다.
HSPC는 골수, 말초혈액 또는 제대혈로부터 수거함으로써 얻어질 수 있다. 골수는 일반적으로 기증자를 국소 마취 또는 전신 마취하는 동안 후방 장골 능선에서 흡인된다. 추가 골수는 전방 장골 능선에서 얻을 수 있다. 골수는 줄기 세포 수치를 증가시키기 위해 과립구 집락 자극 인자(G-CSF; filgrastim[Neupogen])로 프라이밍될 수 있다. "전체 골수"에 대한 언급은 일반적으로 특정 면역 세포 하위집합에 대해 선택되지 않은 골수로부터 유래된 단핵 세포의 조성물을 지칭한다. "분별된 골수"는 예를 들어 T 세포, 예를 들어 CD8+ 세포, CD52+ 세포, CD3+ 세포 등이 고갈될 수 있고; CD34+ 세포 등이 풍부하다.
HSPC는 또한 시토카인, 예컨대, G-CSF, GM-CSF 또는 Plerixafor(AMD3100 또는 Mozobil로도 알려짐)에 의해 골수로부터의 줄기 세포를 말초 혈액으로 동원하여 얻을 수 있다. 동원에 사용되는 G-CSF의 예시적인 용량은 10 ㎍/㎏/일이지만 더 높은 용량이 제공될 수 있으며, 예를 들어 40 ㎍/㎏/일이 제공될 수 있다. Mozobil은 수집을 위해 말초 혈액에 HSPC를 동원하기 위해 G-CSF와 함께 사용할 수 있다. HSPC는 성분채집 장치를 사용하여 말초 혈액에서 수거될 수 있다.
HSPC는 또한 전형적으로 동종이계 이식을 위해 제대혈(UBC)로부터 얻을 수 있다. UCB는 생체 내에서 장기 증식 줄기 세포를 생산할 수 있는 원시 줄기/전구 세포가 풍부하다.
이들 절차로부터 단리된 혈액 세포는 특징적인 세포 표면 마커에 대한 친화도 농축에 의해 HSPC 또는 이의 하위세트, 예를 들어 원시 줄기 세포 및/또는 공통 전구체에 대한 농축을 거칠 수 있다. 이러한 마커는 CD34; CD90(thy-1); CD59; CD1 10(c-mpl); c-kit(CD-117)를 포함한다. 세포는 공여자 조혈 세포 샘플로부터 자기 비드 선택, 유세포 분석 등을 포함하는 친화성 방법에 의해 선택될 수 있다. Ceparte, Isolex 300i 및 CliniMACS를 포함한 여러 면역 선택 장치가 CD34+ 세포 선택을 위해 상업적으로 이용 가능하다.
HSPC 조성물은 집단에서 CD34+인 세포의 백분율로 정의되는 바와 같이 적어도 약 50% 순수할 수 있고, 적어도 약 75% 순수하고, 적어도 약 85% 순수하고, 적어도 약 95% 또는 그 초과만큼 순수할 수 있다.
HSPC를 특징규명하는 예시적인 마커 세트는 CD34 양성이고, CD11b, CD2, CD14, CD4, CD56, CD7, CD3, CD8a, CD16, CD19, CD20 각각에서 음성인 계통이다.
III. 절제 요법
절제 요법은 내인성 HSPC를 감소 또는 제거하는 역할을 한다. 내인성 HSPC는 대체 HSPC를 도입하기 전에 예를 들어, 적어도 10%, 25%, 50%, 75% 또는 90%의 인자만큼 감소될 수 있다. 일부 요법은 대체 HSPC를 도입하기 전에 내인성 HSPC를 예를 들어 90%, 75%, 50%, 25% 또는 10% 초과로 감소시키지 않는다. 일부 요법은 내인성 HSPC를 25 내지 75% 또는 25 내지 95%만큼 감소시킨다. 절제 요법은 또한 HSPC의 구성 세포인 HSC 또는 HPC의 상응하는 백분율 감소로 정의될 수 있다. 둘 다 항-c-kit을 발현하기 때문에 둘 다 비슷한 정도로 절제를 겪을 수 있다.
이러한 절제 요법은 c-kit(CD117)에 특이적으로 결합하는 항체(국제 출원 공개 WO 2008067115호를 전반적으로 참조) 또는 하기에 추가로 예시되는 바와 같이 저해제 c-kit에 결합하는 다른 작용제의 투여를 포함한다. C-kit은 PBT, SCFR, MASTC 중 어느 하나로도 알려져 있다. 인간의 치료에서 면역요법제에 의해서 표적화되는 것인 인간 c-kit는 예시적인 수탁 번호 NCBI Gene ID:3815 및 Uniprot - P10721로 지정되어 있다. C-kit은 골수에서 특정 유형의 HSPC를 식별하는 데 사용되는 세포 표면 마커이다. 조혈 모세포(HSC), 다능성 전구 세포(MPP) 및 일반 골수 전구 세포(CMP)는 높은 수준의 c-kit을 발현한다. 이러한 항체는 c-kit와 이의 리간드 간의 상호작용을 저해하고, ADCC, ADCP 및 CDC와 같은 이펙터 매개 메커니즘에 의해 내인성 HSPC를 감소시킬 수 있다. c-kit는 "스틸 인자(steel factor)" 또는 "c-kit 리간드"라고도 알려진 줄기 세포 인자(특정 유형의 세포를 성장시키는 물질)에 결합하는 수용체 티로신 키나제 유형 III이다. 이 수용체가 줄기 세포 인자에 결합하는 경우, 그것은 고유한 티로신 키나제 활성을 활성화하는 이량체를 형성하고, 이것은 차례로 세포에서 신호를 전파하는 신호 전달 분자를 인산화 및 활성화한다. SR1, 2B8, ACK2, YB5-B8, 57A5, 104D2(US20180214525)를 포함하여 인간 c-kit에 특이적으로 결합하는 다수의 항체가 상업적으로 입수 가능하다. AMG 191은 SR1의 인간화 형태이다(미국 특허 제8,436,150호 및 제7,915,391호). 키메라, 베니어, 또는 인간화 형태를 포함하는 이들 항체, 또는 동일한 에피토프에 결합하거나 c-kit로의 결합을 위해 이와 경쟁하는 항체 중 임의의 항체가 개시된 방법에서 사용될 수 있다. c-kit에 대한 다른 항체는 하기에서 추가로 설명되는 바와 같이 표준 면역학적 기술에 의해 새로 생성될 수 있다.
SR1의 일부 다른 인간화 형태는 예를 들어, 2018년 11월 26일자로 출원된 미국 특허 출원 제62/771,526호 및 2019년 11월 25일자로 출원된 PCT/US2019/063091호에 기재되어 있다. 일부 항체는 각각 중쇄 CDR H1, H2 및 H3 서열 번호 2 내지 4를 포함하고, 경쇄 CDR L1, L2 및 L3은 US62/771,526 및 PCT/US2019/063091의 서열 번호 6 내지 8(즉, Kabat에 의해 정의됨)을 포함하고, 이것은 선택적으로 하기 CDR 치환 중 1개, 2개, 또는 3개를 갖는다. 이들 CDR은 본 명세서에서 서열 번호 1 내지 6이다. CDR 치환은 바람직하게는 중쇄 위치 60에서 N에서 A, 중쇄 위치 64에서 K에서 Q 및 경쇄 위치 30에서 N에서 Q로부터 선택되며, 위치는 Kabat에 따라 넘버링된다. 본 발명의 일부 바람직한 항체는 AH2, AH3 및 AH4에 상응하는 US62/771,526 및 PCT/US2019/063091의 서열 번호 13, 17 또는 21 및 본 명세서에서 서열번호 7 내지 9에 지정된 쇄 중 임의의 것의 서열을 갖는 성숙 중쇄 가변 영역 및 NL2에 상응하는 US62/771,526 및 PCT/US2019/063091의 서열 번호 53(본 명세서에서 서열 번호 10)의 서열을 갖는 성숙 경쇄 가변 영역을 갖는다. 일반적으로 ADCP와 같은 이펙터 기능은 항-c-kit 항체에 필수적인 것은 아니지만 유용하다. 따라서, 일부 이러한 항체는 인간 IgG1 동종형을 갖는다. 일부 항체는 하나 이상의 이펙터 기능을 향상시키는 돌연변이가 있는 인간 IgG1 동종형을 갖는다(아래 참조). 하기 실시예에서 사용된 예시적인 항체는 본 명세서의 서열 번호 7의 중쇄 가변 영역, 및 본 명세서의 서열 번호 10의 경쇄 가변 영역 및 인간 IgG1 동종형을 포함하는 SR1의 인간화 형태이다.
항-c-kit 면역요법제의 추가 예는 FSI-174(Forty Seven, Inc.), 및 CDX-0158 또는 CDX-0159(Celldex Therapeutics, Inc.)를 포함한다. c-kit의 다른 저해제는 다음 공보: WO199203459호, WO199221766호, WO2007127317호, WO2008115300호, WO2012154480호, WO2019155067호 및 WO2020076105호에 기재되어 있다.
절제 요법은 또한 c-kit에 대한 항체와 조합하여 사용하기 위한 CD47-SIRPα 상호작용을 저해하는 면역요법제를 포함할 수 있다(국제 출원 공개 WO2016033201호를 전반적으로 참조). 이러한 작용제는 항-c-kit에 의해 매개되는 내인성 HSPC의 이펙터 매개 제거를 촉진한다. 이러한 작용제는 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 이러한 작용제는 또한 SIRPα에 대한 항체와 유사하게 기능하는 Fc에 융합된 CD47 ECD 또는 CD47에 대한 항체와 유사하게 기능하는 Fc에 융합된 SIRPα를 포함한다. (문헌[Zhang et al., Antibody Therapeutics, 1: 27-32 (2018)] 참고). 바람직한 항체는 수용체를 통해 활성화 신호를 부여하지 않고 CD47-SIRPα 상호작용을 길항작용한다.
CD47은 IAP, MER6 및 OA3 중 어느 하나로도 알려져 있다. 인간의 치료에서 면역요법제에 의해 표적화되는 인간 CD47은 예시적인 수탁 번호 NCBI Gene ID: 961 및 UniProt Q08722로 지정되어 있다.
적합한 항-CD47 항체의 예는 클론 B6H12, 5F9, 8B6, C3(예를 들어, WO2011/143624호에 기재된 바와 같음), CC9002(문헌[Vonderheide, Nat Med 2015; 21: 1122-3, 2015]), 및 SRF231(Surface Oncology)를 포함한다. 적합한 항-CD47 항체는 이러한 항체의 인간, 인간화 또는 키메라 버전, 동일한 에피토프에 결합하거나 CD47에 대한 결합에 대해 이와 경쟁하는 항체를 포함한다. 인간화 항체(예를 들어, hu5F9-IgG4-WO2011/143624호)는 낮은 항원성으로 인해 인간의 생체내 적용에 특히 유용하다. 인간 CD47에서 hu5F9-IgG4에 대한 직접 접촉 잔기는 K39, K41, E97, T99 및 E104(LC) 및 E29, R103 및 E104(HC)인 것으로 보고되어 있다(문헌[Weiskopf et al., J. Clin. Invest 126, 2610-262- (2016)]). 유사하게, 개화(caninized), 고양이화(felinized) 항체 등은 각각 개, 고양이, 및 다른 종에서의 응용에 특히 유용하다.
일부 인간화 항체는 각각 WO2011/143624호의 서열 번호 20, 21 및 22에 제시된 VH 상보성 영역, CDR1, CDR2 및 CDR3을 함유하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 각각 서열 번호 23, 24 및 25에 제시된 VL 상보성 영역인 CDR1, CDR2 및 CDR3을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 인간 CD47(본 명세서에서 서열 번호 11 내지 16)에 특이적으로 결합한다. 일부 인간화 항체는 WO2011/143624호의 서열번호 36, 서열번호 37 및 서열번호 38로부터 선택되는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 41 및 서열번호 42 및 서열번호 43으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다(본 명세서에서 서열번호 17 내지 22). 5F9의 인간화 형태인 마그롤리맙이 바람직한 항체이다.
SIRPα와의 상호작용을 저해하는 CD47에 대한 면역요법제의 다른 예는 항-CD47 mAb(Vx-1004), 항-인간 CD47 mAb(CNTO-7108), CC-90002, CC-90002-ST-001, NI-1701, NI-1801, RCT-1938, ALX-148, RRx-001, DSP-107, VT-1021, TTI-621, TTI-622, IMM-02 SGN-CD47M을 포함한다.
적합한 항-SIRPα 항체는 (식세포작용을 억제하기 위한 신호전달 반응을 충분히 활성화/자극하지 않고서) SIRPα에 특이적으로 결합하고, SIRPα와 CD47 사이의 상호작용을 억제한다. 인간의 치료에서 면역요법제에 의해 표적화되는 인간 SIRPα는 예시적인 수탁 번호 NCBI Gene ID: 140885 및 UniProt P78324로 지정되어 있다. 적합한 항-SIRPα 항체는 이러한 항체의 완전 인간, 인간화 또는 키메라 버전을 포함한다. 이의 Kabat CDR 및 가변 영역에 의해 정의된 일부 예시적인 항-SIRPα 항체가 하기 표 1에 제공되어 있다.
[표 1]

하기 실시예에서 사용된 상기 표의 예시적인 항체는 서열 번호 29의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 30의 경쇄 가변 영역 및 감소된 이펙터 기능에 대해 돌연변이된 인간 IgG1 불변 영역(N297A, EU 넘버링)을 포함하는 인간화 1H9이다. 추가 예시적인 항체는 KWAR23(문헌[Ring et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2017 Dec 5; 114(49): E10578-E10585], WO2015/138600호), My-1 및 Effi-DEM(BI765063으로도 알려져 있음)(Boehringer Ingelheim)(문헌[Zhang et al., Antibody Therapeutics, Volume 1, Issue 2, 21 September 2018, Pages 27-32])이다. 인간화 항체는 그의 낮은 항원성으로 인해 인간에서의 생체내 응용에 특히 유용하다. 유사하게, 개화, 고양이화 항체 등은 각각 개, 고양이, 및 다른 종에서의 응용에 특히 유용하다. 항-SIRPα-항체의 다른 예는 FSI-189(Forty Seven, Inc.), ES-004, ADU1805(문헌[Aduro Biotech and, Voets et al, J Immunother. Cancer. 2019; 7: 340]) 및 CC-95251(문헌[Celgene, Uger & Johnson, Expert Opinion on Biological Therapy, 20:1, 5-8, DOI: 10.1080/14712598.2020.1685976])을 포함한다.
면역요법제는 또한 SIRPα에 특이적으로 결합하고 HSPC 상의 CD47과 식세포 상의 SIRPα 사이의 상호작용을 감소시키는 가용성 CD47 폴리펩티드를 포함한다(예를 들어, WO2016179399호 참조). 이러한 폴리펩티드는 전체 ECD 또는 상기 기능을 갖는 그의 부분을 포함할 수 있다. 적합한 가용성 CD47 폴리펩티드는 SIRPα의 활성화가 식세포작용을 억제할 것이기 때문에 SIRPα를 통한 신호전달을 활성화하거나 자극하지 않고 SIRPα에 특이적으로 결합한다. 대신에, 적합한 가용성 CD47 폴리펩티드는 내인성 HCSP의 식세포작용을 촉진한다. 가용성 CD47 폴리펩티드는 Fc에 융합될 수 있다(예를 들어, US20100239579호에 기재된 바와 같음).
SIRPα에 결합하고 CD47와의 상호작용을 저해하는 작용제의 다른 예는 WO200140307호, WO2002092784호, WO2007133811호, WO2009046541호, WO2010083253호, WO2011076781호, WO2013056352호, WO2015138600호, WO2016179399호, WO2016205042호, WO2017178653호, WO2018026600호, WO2018057669호, WO2018107058호, WO2018190719호, WO2018210793호, WO2019023347호, WO2019042470호, WO2019175218호, WO2019183266호, WO2020013170호 및 WO2020068752호에 기재되어 있다.
면역요법제는 또한 CD47에 특이적으로 결합하고 SIRPα와의 상호작용을 저해하는 가용성 SIRPα 폴리펩티드를 포함한다. 예시적인 작용제는 ALX148(문헌[Kauder et al., Blood 2017 130:112]) 및 TTI-622 및 TTI-661 트릴리움(Trillium)을 포함한다. 이러한 작용제는 전체 SIRPα ECD 또는 상기 기능을 갖는 그의 임의의 부분을 포함할 수 있다. SIRPα 시약은 보통 SIRPα의 적어도 d1 도메인을 포함할 것이다. 가용성 SIRPα 폴리펩티드는 Fc 영역에 융합될 수 있다. SIRPα-유도된 폴리펩티드 및 그의 유사체(예를 들어, CV1-hlgG4, 및 CV1 단량체)를 포함하는 "고친화성 SIRPα 시약"으로 명명된 예시적인 SIRPα 폴리펩티드가 WO2013/109752호에 기재되어 있다. 고친화성 SIRPα 시약은 천연 SIRPα 단백질의 변이체이다. 증가된 친화도를 제공하는 아미노산 변화는 d1 도메인에 국한되며, 따라서 고친화성 SIRPα 시약은 d1 도메인 내의 야생형 서열에 비해 적어도 하나의 아미노산 변화를 갖는 인간 SIRPα의 d1 도메인을 포함한다. 이러한 고친화성 SIRPα 시약은 선택적으로 추가의 아미노산 서열, 예를 들어 항체 Fc 서열; 천연 단백질의 잔기 150 내지 374 또는 이의 단편, 보통 d1 도메인과 인접한 단편을 제한 없이 포함하는, d1 도메인 이외의 야생형 인간 SIRPα 단백질의 부분 등을 포함한다. 고 친화성 SIRPα 시약은 단량체 또는 다량체, 즉, 이량체, 삼량체, 사량체 등일 수 있다. 일부 실시형태에서, 고 친화성 SIRPα 시약은 가용성이고, 여기서 폴리펩티드는 SIRPα 막관통 도메인이 결여되어 있고, 야생형 SIRPα 서열에 비해서 적어도 하나의 아미노산 변화를 포함하며, 아미노산 변화는 예를 들어, 오프-레이트를 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 500배 또는 그 초과만큼 감소시킴으로써 CD47에 대한 SIRPα 폴리펩티드 결합의 친화성을 증가시킨다.
Fc 영역을 갖는 CD47 또는 SIRPα에 지향되는 면역요법제는 임의의 인간 동종형, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4를 가질 수 있다. CD47-SIRPα 상호작용을 저해하기 위해 이펙터 기능이 필요하지 않기 때문에 이펙터 기능을 감소시키기 위해 돌연변이된 인간 IgG4 또는 IgG2 동종형 또는 IgG1이 사용될 수 있다.
항체 및 Fc 융합 단백질을 포함하는 면역요법제는 내인성 HSPC를 감소 또는 제거하려는 원하는 목적을 달성하는 데 효력이 있는 유효 처방으로 투여된다. 유효 처방(effective regime)이라 함은 용량과, 투여 빈도과, 투여 경로의 조합을 말한다.
c-kit에 특이적으로 결합하는 항체의 요법은 바람직하게는 c-kit를 발현하는 HSPC의 표적 집단에 대한 c-kit 수용체의 실질적인 포화에 충분하지만 투여 후 항-c-kit의 불필요한 장기간 유지(이것은 대체 HSPC의 투여 또는 HSPC의 대체물의 의도하지 않은 사멸에 지연을 초래할 수 있음)를 초래하는 그러한 양을 지나치게 초과하지는 않는 항체를 전달한다. 약 0.15 내지 2 mg/㎏의 항-c-kit의 총량이 이러한 목적에 적합하다는 것을 발견하였다. 이 양은 단일 용량, 2회 용량, 또는 3회 이상의 투여량으로 투여될 수 있다. 한 요법은, 예를 들어 0.15 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 0.5 mg/㎏, 또는 0.3 mg/㎏인, 항-c-kit를 단일 용량으로 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 요법은, 예를 들어 0.15 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 0.5 mg/㎏, 또는 0.3 mg/㎏인, 항-c-kit를 3일 내지 7일 간격으로 2회 용량으로 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 요법은 0.15 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 1 mg/㎏, 0.25 내지 0.5 mg/㎏, 또는 0.3 mg/㎏인 항-c-kit를, 선택적으로는 10일 내지 30일 간격으로, 3회 이상의 용량으로 투여하는 것을 포함한다. 동일한 날짜에 여러 번(즉, 처음부터 끝까지 24시간 이내) 투여는 동일한 용량의 일부로 간주된다. 다른 요법은 단일, 이중 또는 삼중 투여 요법의 곡선의 실질적으로 동일한 면적(예를 들어, 90% 이내)을 전달할 수 있지만, 각각의 투여에 대해 감소된 양의 더 많은 투여를 갖는다. 다른 요법은 기재된 단일 및 이중 투여 요법과 실질적으로 동일한 수준의 c-kit를 발현하는 HSPC 감소(예를 들어 90% 이내)를 초래할 수 있다. 제공된 투여량은 c-kit에 대한 항체, 특히 상기에 기재된 바와 같은 인간화 SR1 항체들 중 임의의 항체에 대한 것이다. 이러한 투여량은 또한 다른 면역요법제에 대한 지침을 제공하지만; 이러한 작용제의 투여량은 분자량 및/또는 결합 친화도의 차이에 따라 조정되어 인간화 SR1에 대해 얻은 것과 실질적으로 동일한 수준의 c-kit을 발현하는 HSPC의 감소를 달성할 수 있다.
CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제는 c-kit(항-c-kit)에 특이적으로 결합하는 면역요법제에 의해 c-kit를 발현하는 HSPC의 감소를 촉진하는 데 효력이 있는 유효 처방으로 투여된다. 항-c-kit는 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제에 의한 촉진 없이 c-ki를 발현하는 HSPC의 감소에 영향을 미칠 수 있거나 미치지 않을 수 있다. CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 예시적인 용량은 적어도 0.05 mg/㎏, 0.1 mg/㎏, 0.5 mg/㎏, 1 mg/㎏ 중 어느 하나 내지 5 mg/㎏, 10 mg/㎏, 20 mg/㎏, 30 mg/㎏ 40 mg/㎏ 또는 50 mg/㎏ 중 어느 하나까지이다. 일부 예시적인 범위는 0.05 mg/㎏ 내지 50 mg/㎏, 0.1 mg/㎏ 내지 20 mg/㎏, 1 mg/㎏ 내지 10 mg/㎏ 또는 10 mg/㎏ 내지 30 mg/㎏이다. 선택적으로, 이러한 면역요법제, 특히 CD47에 특이적으로 결합하는 것은 예를 들어, WO2017181033호에 기재된 바와 같이, 1회 이상의 프라이밍 용량이 먼저 투여되고, 그 다음 적혈구의 바람직하지 않은 가교를 감소시키기 위해서 1회 이상의 치료 용량이 투여될 수 있다. 바람직한 요법은 0.5 내지 5 mg/㎏, 예를 들어 1 mg/㎏의 프라이밍 용량, 그 다음 10 내지 30 또는 15 내지 20 mg/㎏의 치료 용량이다. 치료 용량은 예를 들어, 프라이밍 용량 후 3일 내지 15일, 또는 5일 내지 10일, 또는 7일에 투여된다.
항-c-kit 및 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제와의 조합 또는 병용 투여 치료는 전자에 의한 c-kit를 발현하는 HSPC의 감소를 촉진하기 위해 후자에 대한 시간에 충분히 근접하게 각각의 작용제를 투여하는 것을 포함한다. 전형적으로 조합 요법에서 두 작용제는 동시에 대상체 혈청에서 검출 가능한 수준으로 존재한다. 일부 조합 요법에서, CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 프라이밍 용량이 투여된 후 항-C-kit의 용량과 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 치료 용량이 동시에 투여된다. 일부 이러한 요법에서, 두 작용제는 공동 주입에 의해 동시에 투여된다. 일부 요법에서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 다회 용량 및 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 다회 용량이 선택적으로 동일한 날에 각각의 1회 용량이 투여되는 쌍별 방식으로 투여된다. 이러한 요법은 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 프라이밍 용량이 선행될 수 있다.
c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 및 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제를 사용한 조합 치료는 면역 체계의 다른 세포를 고갈시키는 데 효력이 있는 1종 이상의 작용제와 추가로 조합하여 수행될 수 있다. 예를 들어, MCL1 세포자멸 조절인자인 BCL2 패밀리 구성원(MCL1) 저해제를 사용하여 NK 세포를 절제할 수 있다. 다양한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 절제 요법은 MCL1 아폽토시스 조절인자, BCL2 패밀리 구성원(MCL1, TM; EAT; MCL1L; MCL1S; Mcl-1; BCL2L3; MCL1-ES; bcl2-L-3; mcl1/EAT; NCBI Gene ID: 4170)의 저해제와 조합된다. MCL1 저해제의 예는 AMG-176, AMG-397, S-64315, AZD-5991, 483-LM, A-1210477, UMI-77, JKY-5-037, APG-3526 및 WO2018183418호, WO2016033486호 및 WO2017147410호에 기재된 것을 포함한다.
대체 HSPC는 c-kit에 특이적으로 결합하고 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 조합 요법의 투여 후에 투여될 수 있다. 선택적으로, 대체 HSPC는 항-c-kit 투여 또는 1회 초과가 투여된 경우 항-c-kit의 마지막 용량 후 5일 내지 15일 후에 투여된다. 항-c-kit의 마지막 용량보다 늦게 투여되는 경우 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 마지막 용량의 5일 내지 15일에 투여가 또한 일어날 수 있다. 선택적으로 c-kit를 발현하는 HSPC 또는 HSPC의 수준 및/또는 항-c-kit의 수준 및/또는 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 수준을 측정하고, c-kit를 발현하는 HSPC 또는 HSPC의 수준이 치료전 수준의 역치%보다 낮고(예를 들어, 90, 75, 50. 25 또는 5% 미만 또는 25 내지 75% 또는 25 내지 95%), 항-c-kit의 수준 및/또는 CD47-SIRPα를 저해하는 면역요법제의 수준이 최대 수준의 25, 10, 5, 1% 미만에 포함되거나 검출 가능하지 않은 수준에 도달하는 경우 대체 HSPC가 투여된다.
재도입을 위한 HSPC의 예시적인 투여량은 적어도 1 x 10⁵, 1 x 10⁶, 2, x 10⁶, 5x 10⁶, 10⁷, 2 x 10⁷ CD34⁺개 세포/㎏ 체중이다. 예시적인 범위는 1x10⁵ 내지 5x 10⁷, 1x 10⁶ 내지 2x10⁷ 또는 5x10⁵ 내지 6 x 10⁶ CD34⁺개 세포/㎏ 체중이다. 용량은 사용 가능한 세포 수에 의해 제한될 수 있다. 전형적으로 공급원에 관계없이, 용량은 존재하는 CD34⁺ 세포의 수에 의해 계산된다. CD34⁺ 세포의 백분율 수는 미분획 골수 또는 동원된 말초 혈액의 경우 낮을 수 있고, 이 경우 투여된 세포의 총 수는 훨씬 더 많다. HSC 또는 HPC와 같은 HSPC의 성분 세포는 투여된 HSPC의 대안으로 투여될 수 있다.
대체 HSPC 또는 다른 세포 요법은 HSPC의 성장을 촉진하는 1종 이상의 작용제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 대체 HSPC 또는 기타 세포 요법은 fms-관련 수용체 티로신 키나제 3(FLT3); FLK2; STK1; CD135; FLK-2; NCBI Gene ID: 2322의 효능제 투여와 조합될 수 있다. FLT3 효능제의 예는 CDX-301 및 GS-3583을 포함한다. 대체 HSPC 또는 기타 세포 요법은 또한 사이토카인 유도성 SH2 함유 단백질(CISH; CIS; G18; SOCS; CIS-1; BACTS2; NCBI Gene ID: 1154)의 저해제와 조합될 수도 있다. CISH 저해제의 예는 WO2017100861호, WO2018075664호 및 WO2019213610호에 기재된 것을 포함한다.
면역요법제는 전형적으로 작용제가 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 담체와 조합되는 약제학적 조성물로서 투여된다. 다양한 수성 담체, 예를 들어, 완충 식염수 등이 사용될 수 있다. 이러한 용액은 멸균성이며, 일반적으로 바람직하지 않은 물질이 존재하지 않는다. 이들 조성물은 통상적인 기술에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약제학적으로 허용되는 보조 물질, 예를 들어 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 락트산나트륨 등을 함유할 수 있다. 이러한 제형에서 활성제의 농도는 광범위하게 달라질 수 있으며, 선택된 특정 투여 모드 및 환자의 요구에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택된다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., 1980) and Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)] 참조).
IV. 세포 요법
일부 실시형태에서, 세포 요법은 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR) TCR을 발현하도록 조작된 면역 세포의 병용 투여를 수반한다. 특정 실시형태에서, 면역 세포의 집단은 CAR을 발현하도록 조작되며, 여기서 CAR은 암 항원-결합 도메인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 면역 세포의 집단은 종양 세포의 표면 상에 제시된 종양 유래 펩티드를 표적화하도록 조작된 T 세포 수용체(TCR)를 발현하도록 조작된다. 일 실시형태에서, 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR) TCR을 발현하도록 조작된 면역 세포는 T 세포이다. 또 다른 실시형태에서, 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR) TCR을 발현하도록 조작된 면역 세포는 NK 세포이다.
CAR의 구조와 관련하여, 일부 실시형태에서, CAR은 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 도메인은 1차 신호전달 도메인, 공동자극 도메인 또는 1차 신호전달 도메인 및 공동자극 도메인 둘 다를 포함한다. 일부 실시형태에서, 1차 신호전달 도메인은 CD3 제타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, 공통 FcR 감마(FCERIG), FcR 베타(Fc 엡실론 Rlb), CD79a, CD79b, Fc감마 RIIa, DAP10 및 DAP12 4-1BB/CD137, 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, B7-H3, BAFFR, BLAME(SLAMF8), BTLA, CD100(SEMA4D), CD103, CD160(BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD247, CD27, CD276(B7-H3), CD28, CD29, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD30, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD69, CD7, CD84, CD8알파, CD8베타, CD96(Tactile), CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CDS, CEACAM1, CRT AM, 사이토카인 수용체, DAP-10, DNAM1(CD226), Fc 감마 수용체, GADS, GITR, HVEM(LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, 유도성 T 세포 공자극인자(ICOS), 인터그린, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGB1, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, CD83과 결합하는 리간드, LIGHT, LIGHT, LTBR, Ly9(CD229), Ly108, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-1; CD1-1a/CD18), MHC 클래스 1 분자, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80(KLRF1), OX-40, PAG/Cbp, 예정사-1(PD-1), PSGL1, SELPLG(CD162), 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM 단백질), SLAM(SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4(CD244; 2B4), SLAMF6(NTB-A, SLAMF7, SLP-76, TNF 수용체 단백질, TNFR2, TNFSF14, Toll 리간드 수용체, TRANCE/RANKL, VLA1 또는 VLA-6 또는 이들의 단편, 절단부 또는 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 기능성 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 공동자극 도메인은 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, 림프구 기능-관련 항원-1(LFA-1), MYD88, B7-H3, CD83과 특이적으로 결합하는 리간드, CDS, ICAM-1, GITR, BAFFR, HVEM(LIGHTR), SLAMF7, NKp80(KLRFI), CD19, CD4, CD8알파, CD8베타, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, ITGAE, CD103, ITGAL, CD1A(NCBI Gene ID: 909), CD1B(NCBI Gene ID: 910), CD1C(NCBI Gene ID: 911), CD1D(NCBI Gene ID: 912), CD1E(NCBI Gene ID: 913), ITGAM, ITGAX, ITGB1, CD29, ITGB2(CD18, LFA-1), ITGB7, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(Tactile), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46 및 NKG2D로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 단백질의 기능성 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 막관통 도메인은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD28, CD3 엡실론, CD3 델타, CD3 감마, CD45, CD4, CD5, CD7, CD8 알파, CD8 베타, CD9, CD11a, CD11b, CD11c, CD11d, CD16, CD18, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154, KIRDS2, OX40, CD2, CD27, ICOS(CD278), 4-1BB(CD137), GITR, CD40, BAFFR, HVEM(LIGHTR), SLAMF7, NKp80(KLRF1), CD19, CD19a, IL2R 베타, IL2R 감마, IL7R 알파, ITGA1, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD1A, CD1B, CD1C, CD1D, CD1E, ITGAE, CD103, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB1, ITGB2, ITGB7, CD29, ITGB2(LFA-1, CD18), ITGB7, TNFR2, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96(TACTILE), CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), SLAMF6 (NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, PAG/Cbp, NKp44, NKp30, NKp46, NKG2D 및 NKG2C 활성화 NK 세포 수용체, 면역글로불린 단백질, BTLA, CD247, CD276(B7-H3), CD30, CD84, CDS, 사이토카인 수용체, Fc 감마 수용체, GADS, ICAM-1, Ig 알파(CD79a), 인터그린, LAT, CD83과 결합하는 리간드, LIGHT, MHC 클래스 1 분자, PAG/Cbp, TNFSF14, Toll 리간드 수용체, TRANCE/RANKL 또는 이들의 단편, 절단부 또는 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질로부터 유래된 막관통 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 힌지 도메인을 포함한다. 힌지 도메인은 CD2, CD3 델타, CD3 엡실론, CD3 감마, CD4, CD7, CD8.알파., CD8.베타., CD11a(ITGAL), CD11b(ITGAM), CD11c(ITGAX), CD11d(ITGAD), CD18(ITGB2), CD19 (B4), CD27(TNFRSF7), CD28, CD28T, CD29(ITGB1), CD30(TNFRSF8), CD40(TNFRSF5), CD48(SLAMF2), CD49a(ITGA1), CD49d(ITGA4), CD49f(ITGA6), CD66a(CEACAM1), CD66b(CEACAM8), CD66c(CEACAM6), CD66d(CEACAM3), CD66e(CEACAM5), CD69(CLEC2), CD79A(B-세포 항원 수용체 복합체-관련 알파 사슬), CD79B(B-세포 항원 수용체 복합체-관련 베타 사슬), CD84(SLAMF5), CD96(Tactile), CD100(SEMA4D), CD103(ITGAE), CD134 (OX40), CD137(4-1BB), CD150(SLAMF1), CD158A(KIR2DL1), CD158B1(KIR2DL2), CD158B2(KIR2DL3), CD158C(KIR3DP1), CD158D(KIRDL4), CD158F1(KIR2DL5A), CD158F2(KIR2DL5B), CD158K(KIR3DL2), CD160(BY55), CD162(SELPLG), CD226(DNAM1), CD229(SLAMF3), CD244(SLAMF4), CD247(CD3-제타), CD258(LIGHT), CD268 (BAFFR), CD270(TNFSF14), CD272(BTLA), CD276(B7-H3), CD279(PD-1), CD314(NKG2D), CD319(SLAMF7), CD335(NK-p46), CD336(NK-p44), CD337(NK-p30), CD352(SLAMF6), CD353(SLAMF8), CD355(CRTAM), CD357(TNFRSF18), 유도성 T 세포 공동자극인자(ICOS), LFA-1(CD11a/CD18), NKG2C, DAP-10, ICAM-1, NKp80(KLRF1), IL-2R 베타, IL-2R 감마, IL-7R 알파, LFA-1, SLAMF9, LAT, GADS(GrpL), SLP-76(LCP2), PAG1/CBP, CD83 리간드, Fc 감마 수용체, MHC 클래스 1 분자, MHC 클래스 2 분자, a TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 단백질, 사이토카인 수용체, 인터그린, 활성화 NK 세포 수용체 또는 Toll 리간드 수용체, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgD, IgE, IgM 또는 이들의 단편 또는 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질로부터 유래될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 TCR 또는 CAR 항원 결합 도메인 또는 면역요법제(예를 들어, 단일특이적 또는 다중특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항체 모방체)는 종양-관련 항원(TAA: tumor-associated antige)에 결합한다. 일부 실시형태에서, 종양-관련 항원은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: CD19; CD123; CD22; CD30; CD171; CS-1(CD2 하위세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319, 및 19A24라고도 지칭); C형 렉틴-유사 분자-1(CLL-1 또는 CLECLI); CD33; 표피 성장 인자 수용체 변이체 III(epidermal growth factor receptor variant: EGFRvlll); 강글리오시드 G2(GD2); 강글리오시드 GD3(αNeuSAc(2-8)αNeuSAc(2-3)βDGaip(1-4)bDGIcp(1-1)Cer); 강글리오시드 GM3(αNeuSAc(2-3)βDGalp(1-4)βDGlcp(1-1)Cer); GM-CSF 수용체; TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17(TNFRSF17, BCMA); B-림프구 세포 접착 분자; Tn 항원((Tn Ag) 또는 (GaINAcu-Ser/Thr)); 전립선-특이적 막 항원(PSMA); 수용체 티로신 키나제-유사 오판 수용체 1(RORI); 종양-관련 당단백질 72(TAG72); CD38; CD44v6; 종양태아성 항원(CEA); 상피 세포 접착 분자(EPCAM); B7H3(CD276); KIT(CD117); 인터류킨-13 수용체 소단위 알파-2(IL-13Ra2 또는 CD213A2); 메소텔린; 인터류킨 11 수용체 알파(IL-11Ra); 전립선 줄기 세포 항원(PSCA); 프로테아제 세린 21(Testisin 또는 PRSS21); 혈관 내피 성장 인자 수용체 2(VEGFR2); HLA 클래스 I 항원 A-2 알파; HLA 항원; 루이스(Y)항원; CD24; 혈소판-유래 성장 인자 수용체 베타(PDGFR-베타); 단계-특이적 배아 항원-4(SSEA-4: Stage-specific embryonic antigen-4); CD20; 델타 유사 3(DLL3); 폴레이트 수용체 알파; 폴레이트 수용체 베타, GDNF 알파 4 수용체, 수용체 티로신-단백질 키나제, ERBB2(Her2/neu); Mucin 1, 세포 표면 연관(MUC1); APRIL 수용체; ADP 리보실 사이클라제-1; Ephb4 티로신 키나제 수용체, DCAMKL1 세린 트레오닌 키나제, 아스파테이트 베타-히드록실라제, 표피 성장 인자 수용체(EGFR); 신경 세포 접착 분자(NCAM); 프로스타제; 전립선산 포스파타제(PAP); 돌연변이된 연장 인자 2(ELF2M); Ephrin B2; 섬유아세포 활성화 단백질 알파(FAP); 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체(IGF-I 수용체), 탄산무수화효소 IX(CAIX); 프로테아솜(프로솜, 마크로페인) 소단위, 베타형, 9(LMP2); 당단백질 100(gp100); 절단점 클러스터 영역(BCR: breakpoint cluster region) 및 아벨슨(Abelson) 뮤린 백혈병 바이러스 종양유전자 동족체 1(Abl)로 이루어진 종양유전자 융합 단백질(bcr-abl); 티로시나제; 에프린 A형 수용체 2(EphA2); 에프린 A형 수용체 3(EphA3), 푸코실 GM1; 시알릴 루이스 접착 분자(sLe); 트랜스글루타미나제 5(TGS5); 고분자량-흑색종 관련 항원(HMWMAA); o-아세틸-GD2 강글리오시드(OAcGD2); 폴레이트 수용체 베타; 종양 내피 마커 1(TEM1/CD248); 종양 내피 마커7-관련(TEM7R); 전립선 I의 6 막관통 상피 항원(STEAP1); 클라우딘 6(CLDN6); 갑상선 자극 호르몬 수용체(TSHR); G 단백질-커플링 수용체 클래스 C 군 5, 구성원 D(GPRCSD); IL-15 수용체(IL-15); 염색체 X 오픈 리딩 프레임 61(CXORF61); CD97; CD179a; 역형성 림프종 키나제(ALK); 폴리시알산; 태반-특이적 1(PLAC1); globoH 글리코세라미드의 6당류 부분(GloboH); 유선 분화 항원(NY-BR-1); 유로플라킨 2(UPK2); A형 간염 바이러스 세포 수용체 1(HAVCR1); 아드레날린 수용체 베타 3(ADRB3); 판넥신 3(PANX3); G 단백질-커플링 수용체 20(GPR20); 림프구 항원 6 복합체, 유전자좌 K 9(LY6K); 후각 수용체 51E2(ORS IE2); TCR 감마 대체 리딩 프레임 단백질(TAP); 윌름스 종양 단백질(WT1); 암/고환 항원 1(NY-ESO-1); 암/고환 항원 2(LAGE-la); 흑색종 관련 항원 1(MAGE-A1); 흑색종 관련 항원 3(MAGE-A3); 흑색종 관련 항원 4(MAGE-A4); T 세포 수용체 베타 2 사슬 C; 염색체 12p에 위치한 ETS 전좌 변이 유전자 6(ETV6-AML); 정자 단백질 17(SPA17); X 항원 패밀리, 구성원 1A(XAGE1); 안지오포이에틴 결합 세포 표면 수용체 2(Tie 2); 흑색종 암 고환 항원-1(MADCT-1); 흑색종 암 고환 항원-2(MAD-CT-2); Fos 관련 항원 1; 종양 단백질 p53, (p53); p53 돌연변이; 프로스테인; 서바이빈; 텔로머라제; 전립선암종 종양 항원-1(PCTA-1 또는 갈렉틴 8); T 세포 1에 의해 인식되는 흑색종 항원(MelanA 또는 MARTI); 래트 육종(Ras) 돌연변이체; 인간 텔로머라제 역전사효소(hTERT); 육종 전위 중단점; 아폽토시스의 흑색종 저해제(ML-IAP); ERG(막관통 프로테아제, 세린 2(TMPRSS2) ETS 융합 유전자); N-아세틸 글루코사미닐-트랜스퍼라제 V(NA17); 쌍을 이루는 상자 단백질 Pax-3(PAX3); 안드로겐 수용체; 사이클린-A1; 사이클린 B1, v-myc 조류 골수세포종증 바이러스 종양유전자 신경모세포종 유래 동족체(MYCN); Ras 동족체 패밀리 구성원 C(RhoC); 티로시나제 관련 단백질 2(TRP-2); 시토크롬 P450 1B1(CYP IBI); CCCTC 결합 인자(징크 핑거 단백질)-유사(BORIS 또는 각인된 부위 조절기의 형제), T 세포 3에 의해 인식되는 편평 세포 암종 항원(SART3); 쌍을 이루는 상자 단백질 Pax-5(PAX5); 프로아크로신 결합 단백질 sp32(OY-TES I); 림프구 특이적 단백질 티로신 키나제(LCK); 키나제 앵커 단백질 4(AKAP-4); 펩티도글리칸 인식 단백질, 활액 육종, X 중단점 2(SSX2); 고급 당화 최종 생성물에 대한 수용체(RAGE-I); 신장 유비쿼터스 1(RUI); 신장 유비쿼터스 2(RU2); 레구마인(legumain); 인간 유두종 바이러스 E6(HPV E6); 인간 유두종 바이러스 E7(HPV E7); 장 카복실 에스테라제; 돌연변이된 열 충격 단백질 70-2(mut hsp70-2); CD79a; CD79b; CD72; 백혈구 관련 면역글로불린 유사 수용체 1(LAIRI); IgA 수용체의 Fc 단편(FCAR 또는 CD89); 백혈구 면역글로불린 유사 수용체 서브패밀리 A 구성원 2(LILRA2); CD300 분자 유사 패밀리 구성원 f(CD300LF); C형 렉틴 도메인 패밀리 12 구성원 A(CLEC12A); 골수 기질 세포 항원 2(BST2); 뮤신 유사 호르몬 수용체 유사 2(EMR2)를 함유하는 EGF 유사 모듈; 림프구 항원 75(LY75); 글리피칸-2(GPC2); 글리피칸-3(GPC3); Fc 수용체-유사 5(FCRL5); 및 면역글로불린 람다-유사 폴리펩티드 1(IGLL1). 일부 실시형태에서, 표적은 MHC에 제시된 종양 관련 항원의 에피토프이다.
일부 실시형태에서, 암 항원은 CD150, 5T4, ActRIIA, B7, TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17(TNFRSF17, BCMA), CA-125, CCNA1, CD123, CD126, CD138, CD14, CD148, CD15, CD19, CD20, CD200, CD21, CD22, CD23, CD24, CD25, CD26, CD261, CD262, CD30, CD33, CD362, CD37, CD38, CD4, CD40, CD40L, CD44, CD46, CD5, CD52, CD53, CD54, CD56, CD66a-d, CD74, CD8, CD80, CD92, CE7, CS-1, CSPG4, ED-B 피브로넥틴, EGFR, EGFRvIII, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, FBP, 조합된 HER1-HER2, 조합된 HER2-HER3, HERV-K, HIV-1 엔벨로프 당단백질 gp120, HIV-1 엔벨로프 당단백질 gp41, HLA-DR, HLA 클래스 I 항원 알파 G, HM1.24, K-Ras GTPase, HMW-MAA, Her2, Her2/neu, IGF-1R, IL-11R알파, IL-13R-알파2, IL-2, IL-22R-알파, IL-6, IL-6R, Ia, Ii, L1-CAM, L1-세포 접착 분자, 루이스 Y, Ll-CAM, MAGE A3, MAGE-A1, MART-1, MUC1, NKG2C 리간드, NKG2D 리간드s, NYESO-1, OEPHa2, PIGF, PSCA, PSMA, ROR1, T101, TAC, TAG72, TIM-3, TRAIL-R1, TRAIL-R1(DR4), TRAIL-R2 (DR5), VEGF, VEGFR2, WT-I, G-단백질 커플링 수용체, 알파태아단백질(AFP), 혈관신생 인자, 외인성 동족 결합 분자(ExoCBM), 종양유전자 산물, 항-폴레이트 수용체, c-Met, 종양태아성 항원(CEA), 사이클린(D 1), 에프린B2, 상피 종양 항원, 에스트로겐 수용체, 태아 아세틸콜린 e 수용체, 폴레이트 결합 단백질, gp100, B형 간염 표면 항원, 엡스테인-바 핵 항원 1, 잠복성 막 단백질 1, 분비 단백질 BARF1, P2X7 퓨리노셉터, 신데칸-1, 카파 사슬, 카파 경쇄, kdr, 람다 사슬, 리빈, 흑색종 관련 항원, 메소텔린, 마우스 쌍 염색체 2 동족체(MDM2), 뮤신 16(MUC16), 돌연변이된 p53, 돌연변이된 ras, 괴사 항원, 종양태아성 항원, ROR2, 프로게스테론 수용체, 전립선 특이적 항원, tEGFR, 테나신, P2-마이크로지오부인, Fc 수용체-유사 5(FcRL5)로부터 선택된다.
세포 요법의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: AMG-119, 알겐판투셀-L, ALOFISEL®, 시풀류셀-T, (BPX-501) 리보겐레클레우셀 US9089520, WO2016100236, AU-105, ACTR-087, 활성화된 동종 자연 살해 세포 CNDO-109-AANK, MG-4101, AU-101, BPX-601, FATE-NK100, LFU-835 조혈 모세포, 이밀레클레우셀(Imilecleucel)-T, 발탈류셀-T, PNK-007, UCARTCS1, ET-1504, ET-1501, ET-1502, ET-190, CD19-ARTEMIS, ProHema, FT-1050-처리 골수 줄기 세포 요법, CD4CARNK-92 세포, SNK-01, NEXI-001, CryoStim, AlloStim, 렌티바이러스 형질도입된 huCART-메조 세포, CART-22 세포, EGFRt/19-28z/4-1BBL CAR T 세포, 자가 4H11-28z/fIL-12/EFGRt T 세포, CCR5-SBC-728-HSPC, CAR4-1BBZ, CH-296, dnTGFbRII-NY-ESOc259T, Ad-RTS-IL-12, IMA-101, IMA-201, CARMA-0508, TT-18, CMD-501, CMD-503, CMD-504, CMD-502,CMD-601,CMD-602, CSG-005, LAAP T-세포 요법, PD-1 넉아웃 T 세포 요법(식도암/NSCLC), 항-MUC1 CAR T-세포 요법(식도암/NSCLC), 항-MUC1 CAR T-세포 요법 + PD-1 넉아웃 T 세포 요법(식도암/NSCLC), 항-KRAS G12D mTCR PBL, 항-CD123 CAR T-세포 요법, 항-돌연변이된 신생항원 TCR T-세포 요법, 종양 용해물/MUC1/서바이빈 PepTivator-로딩된 수지상 세포 백신, 자가 수지상 세포 백신(전이성 악성 흑색종, 피내/정맥내), 항-LeY-scFv-CD28-제타 CAR T-세포, PRGN-3005, iC9-GD2-CAR-IL-15 T-세포, HSC-100, ATL-DC-101, MIDRIX4-LUNG, MIDRIXNEO, FCR-001, PLX 줄기 세포 요법, MDR-101, GeniusVac-Mel4, 일릭사덴셀, 동종이계 중간엽 줄기 세포 요법, 로미엘로셀 L, CYNK-001, ProTrans, ECT-100, MSCTRAIL, 딜라누비셀, FT-516, ASTVAC-2, E-CEL UVEC, CK-0801, 동종이계 알파/베타 CD3+ T 세포 및 CD19+ B 세포 고갈 줄기 세포(혈액 질환, TBX-1400, HLCN-061, 제대 유래 Hu-PHEC 세포(혈액암/재생불량성 빈혈), AP-011, 압세트(apceth)-201, 압세트-301, SENTI-101, 줄기 세포 요법(췌장암), ICOVIR15-cBiTE, CD33HSC/CD33 CAR-T, PLX-Immune, SUBCUVAX, CRISPR 동종이계 감마-델타 T-세포 기반 유전자 요법(암), 생체외 CRISPR 동종이계 건강한 공여자 NK-세포 기반 유전자 요법(암), 생체외 동종이계 유도 다능성 줄기 세포-유래 NK-세포 기반 유전자 요법(고형 종양) 및 항-CD20 CAR T-세포 요법(비호지킨 림프종).
V. 암 치료를 위한 공동요법
이미 기재된 바와 같이, HSPC의 절제는 조혈암을 치료하기 위해 또는 비조혈 세포 암, 예를 들어, 고형 종양의 치료의 부작용으로서 손상된 HSPC를 대체하기 위해 사용될 수 있다. HSPC 절제와 조합하여 사용할 수 있는 암 치료에 효력이 있는 작용제의 다양한 예가 하기에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "화학요법제" 또는 "화학요법"(또는 화학요법제로 치료하는 경우 "화학요법")는 암의 치료에 유용한 임의의 비-단백질성(예를 들어, 비-펩티드) 화학 화합물을 포함하는 것을 의미한다. 화학요법제의 예는 하기를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다: 알킬화제, 예컨대, 티오테파 및 사이클로포스파미드(CYTOXAN®); 알킬 설포네이트, 예컨대, 부설판, 임프로설판, 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대, 벤조데파, 카보쿠온, 메투레데파, 및 우레데파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예컨대, 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메밀로멜라민; 아세토게닌, 예를 들어 불라타신 및 불라타시논; 합성 유사체 토포테칸을 포함하는 캄프토테신; 브리오스타틴, 칼리스타틴; 아도젤레신, 카젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함하는 CC-1065; 크립토피신, 특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8; 돌라스타틴; 합성 유사체 KW-2189 및 CBI-TMI를 포함하는 듀오카마이신; 엘류테로빈; 5-아자시티딘; 판크라티스타틴; 사르코딕틴; 스폰지스타틴; 질소 머스타드; 예컨대, 클로람부실, 클로르나파진, 사이클로포스파미드, 글루포스파미드, 에보포스파미드, 벤다무스틴, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 염산염, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드 및 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예컨대, 카무스틴, 클로로조토신, 포에무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라니무스틴; 항생제, 예컨대, 엔디인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마II 및 칼리케아미신 phiI1), 디네마이신 A를 포함하는 디네마이신, 비스포스포네이트, 예컨대, 클로드로네이트, 에스페라미신, 네오카지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 엔디인 항생제 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 카티노마이신, 카라비신, 카니노마이신, 카지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예컨대, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리마이신, 페플로마이신, 포르피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴 및 조루비신; 항대사물질, 예컨대, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 엽산 유사체, 예컨대, 데모프테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린 및 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대, 클라드리빈, 펜토스타틴, 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린 및 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예컨대, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈 및 플록수리딘; 안드로겐, 예컨대, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스탄올, 메피티오스탄 및 테스토락톤; 항부신, 예컨대, 아미노글루테티미드, 미토탄 및 트리로스탄; 엽산 보충제, 예컨대, 프롤린산; 방사선 치료제, 예컨대, 라듐-223, 177-Lu-PSMA-617; 트리코테센, 특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A, 및 안귀딘; 탁소이드, 예컨대, 파클리탁셀(TAXOL®), 아브락산, 도세탁셀(TAXOTERE®), 카바지탁셀, BIND-014, 테세탁셀; 백금 유사체, 예컨대, 시스플라틴 및 카보플라틴, NC-6004 나노플라틴; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 헤스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포름틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 류코보린; 로니다민; 메이탄시노이드, 예컨대, 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 플루오로피리미딘; 폴린산; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; 다당류-K(PSK); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트라벡테딘, 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에밀아민; 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오페타; 클로람부실; 젬시타빈(GEMZAR®); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미트록산트론; 반크리스틴; 비노렐빈(NAVELBINE®); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 제올로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DFMO); 레티노이드, 예컨대, 레티노산; 카페시타빈; NUC-1031; FOLFOX(폴린산, 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴); FOLFIRI(폴린산, 5-플루오로우라실, 이리노테칸); FOLFOXIRI(폴린산, 5-플루오로우라실, 옥살리플라틴, 이리노테칸), FOLFIRINOX(폴린산, 5-플루오로우라실, 이리노테칸, 옥살리플라틴) 및 이들 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체. 이러한 작용제는 본 명세서에 기재된 항체 또는 임의의 표적화제 상에 접합되어 항체-약물 접합체(ADC) 또는 표적화 약물 접합체를 생성할 수 있다.
"화학요법제"의 정의에는 또한 항호르몬제, 예컨대, 항-에스트로겐 및 선택적인 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 효소 아로마타제의 저해제, 항안드로겐 및 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 저해하는 작용을 하는 상기한 것 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다.
항에스트로겐 및 SERM의 예는 예를 들어 타목시펜(NOLVADEX^TM 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜(FARESTON®)을 포함한다.
효소 아로마타제의 저해제는 부신에서 에스트로겐 생산을 조절한다. 예는 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트(MEGACE®), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸(RIVISOR®), 레트로졸(FEMARA®) 및 아나스트로졸(ARIMIDEX®)을 포함한다.
항안드로겐의 예는 아팔루타미드, 아비라테론, 엔잘루타미드, 플루타미드, 갈레테론, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 고세렐린, ODM-201, APC-100, ODM-204를 포함한다.
암을 표적화하기 위한 작용제의 추가 예는 하기를 포함한다: 알파-태아단백질 조절제, 예컨대, ET-1402, 및 AFP-TCR; 탄저병 독소 수용체 1 조절제, 예컨대, 항-TEM8 CAR T-세포 요법; TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17(TNFRSF17, BCMA), 예컨대, bb-2121(ide-cel), bb-21217, JCARH125, UCART-BCMA, ET-140, MCM-998, LCAR-B38M, CART-BCMA, SEA-BCMA, BB212, ET-140, P-BCMA-101, AUTO-2(APRIL-CAR), JNJ-68284528; 항-CLL-1 항체(예를 들어, WO/2017/173384호 참조); 항-PD-L1-CAR 탱크(tank) 세포 요법, 예컨대, KD-045; 항-PD-L1 t-haNK, 예컨대, PD-L1 t-haNK; 항-CD45 항체, 예컨대, 131I-BC8(lomab-B); 항-HER3 항체 예컨대, LJM716, GSK2849330; 항-CD52 항체, 예컨대, 알렘투주맙; APRIL 수용체 조절제, 예컨대, 항-BCMA CAR T-세포 요법, 데스카테스(Descartes)-011;ADP 리보실 사이클라제-1/APRIL 수용체 조절제, 예컨대, 이중 항-BCMA/항-CD38 CAR T-세포 요법; CART-ddBCMA;B7 동족체 6, 예컨대, CAR-NKp30 및 CAR-B7H6;B-림프구 항원 CD19, 예컨대, TBI-1501, CTL-119 huCART-19 T 세포, liso-cel, JCAR-015 US7446190, JCAR-014, JCAR-017(WO2016196388호, WO2016033570호, WO2015157386호), 액시캅타진 실로류셀(KTE-C19, Yescarta®), KTE-X19, US7741465, US6319494, UCART-19, EBV-CTL, T 티사젠렉류셀-T(CTL019), WO2012079000호, WO2017049166호, CD19CAR-CD28-CD3제타-EGFRt-발현 T 세포, CD19/4-1BBL 아모레드 CAR T 세포 요법, C-CAR-011, CIK-CAR.CD19, CD19CAR-28-제타 T 세포, PCAR-019, MatchCART, DSCAR-01, IM19 CAR-T, TC-110; 항-CD19 CAR T-세포 요법(B-세포 급성 림프모구성 백혈병, Universiti Kebangsaan Malaysia); 항-CD19 CAR T-세포 요법(급성 림프모구성 백혈병/비호지킨 림프종, University Hospital Heidelberg), 항-CD19 CAR T-세포 요법(침묵 IL-6 발현, 암, Shanghai Unicar-Therapy Bio-medicine Technology), MB-CART2019.1(CD19/CD20), GC-197(CD19/CD7), CLIC-1901, ET-019003, 항-CD19-STAR-T 세포, AVA-001, BCMA-CD19 cCAR(CD19/APRIL), ICG-134, ICG-132(CD19/CD20), CTA-101, WZTL-002, 이중 항-CD19/항-CD20 CAR T-세포(만성 림프구성 백혈병/B-세포 림프종), HY-001, ET-019002, YTB-323, GC-012(CD19/APRIL), GC-022(CD19/CD22), CD19CAR-CD28-CD3제타-EGFRt-발현 Tn/mem; UCAR-011, ICTCAR-014, GC-007F, PTG-01, CC-97540; 동종이계 항-CD19 CART 세포, 예컨대, GC-007G; APRIL 수용체 조절제; SLAM 패밀리 구성원 7 조절인자, BCMA-CS1 cCAR; 자가 수지상 세포 종양 항원(ADCTA), 예컨대, ADCTA-SSI-G; B-림프구 항원 CD20, 예컨대, ACTR707 ATTCK-20, PBCAR-20A; CD20 CAR 발현 동종이계 T 세포, 예컨대, LB-1905; B-림프구 항원 CD19/B-림프구 항원 22, 예컨대, TC-310; B-림프구 항원 22 세포 접착, 예컨대, UCART-22, JCAR-018 WO2016090190호; NY-ESO-1 조절인자, 예컨대, GSK-3377794, TBI-1301, GSK3537142; 탄산탈수효소, 예컨대, DC-Ad-GMCAIX; 카파제 9 자살 유전자, 예컨대, CaspaCIDe DLI, BPX-501; CCR5, 예컨대, SB-728; CCR5 유전자 저해제/TAT 유전자/TRIM5 유전자 자극인자, 예컨대, 렌티바이러스 벡터 CCR5 shRNA/TRIM5알파/TAR 디코이-형질도입된 자가 CD34-양성 조혈 전구 세포; CDw123, 예컨대, MB-102, IM-23, JEZ-567, UCART-123; CD4, 예컨대, ICG-122; CD5 조절인자, 예컨대, CD5.28z CART 세포;항-CD22, 예컨대, 항-CD22 CART; 항-CD30, 예컨대, TT-11; CD33, 예컨대, CIK-CAR.CD33, CD33CART; 이중 항-CD33/항-CLL1, 예컨대, LB-1910; CD38, 예컨대, T-007, UCART-38; CD40 리간드, 예컨대, BPX-201, MEDI5083; CD56, 예컨대, 동종이계 CD56-양성 CD3-음성 자연 살해 세포(골수성 악성종양); CD19/CD7 조절인자, 예컨대, GC-197; T-세포 항원 CD7 조절인자, 예컨대, 항-CD7 CAR T-세포 요법(CD7-양성혈액 악성종양); CD123 조절인자, 예컨대, UniCAR02-T-CD123; 항-CD276, 예컨대, 항-CD276 CART; CEACAM 단백질 5 조절인자, 예컨대, MG7-CART; 클라우딘 6, 예컨대, CSG-002; 클라우딘 18.2, 예컨대, LB-1904; 클로로톡신, 예컨대, CLTX-CART; 표적화된 EBV, 예컨대, CMD-003; MUC16EGFR, 예컨대, 자가 4H11-28z/fIL-12/EFGRt T 세포; 엔도뉴클레아제, 예컨대, PGN-514, PGN-201; 엡스테인-바 바이러스 특이적 T-림프구, 예컨대, TT-10; 엡스테인-바 핵 항원 1/잠복(Latent) 막 단백질 1/분비 단백질 BARF1 조절인자, 예컨대, TT-10X; Erbb2, 예컨대, CST-102, CIDeCAR; 강글리오시드(GD2), 예컨대, 4SCAR-GD2; 감마 델타 T 세포, 예컨대, ICS-200; 엽산염 히드롤라제 1(FOLH1, 글루타메이트 카복시펩티다제 II, PSMA; NCBI Gene ID: 2346), 예컨대, CIK-CAR.PSMA, CART-PSMA-TGFβRDN, P-PSMA-101; 글리피칸-3(GPC3), 예컨대, TT-16, GLYCAR; 헤모글로빈, 예컨대, PGN-236; 간세포 성장 인자 수용체, 예컨대, 항-cMet RNA CAR T; HLA 클래스 I 항원 A-2 알파 조절인자, 예컨대, FH-MCVA2TCR; HLA 클래스 I 항원 A-2 알파/흑색종 관련 항원 4 조절인자, 예컨대, ADP-A2M4CD8; HLA 항원 조절인자, 예컨대, FIT-001, NeoTCR-P1; 인간 유두종바이러스 E7 단백질, 예컨대, KITE-439(예를 들어, WO/2015/184228호 참고); ICAM-1 조절인자, 예컨대, AIC-100; 면역글로불린 감마 Fc 수용체 III, 예컨대, ACTR087; IL-12, 예컨대, DC-RTS-IL-12; IL-12 효능제/뮤신 16, 예컨대, JCAR-020; IL-13 알파 2, 예컨대, MB-101; IL-15 수용체 효능제, 예컨대, PRGN-3006, ALT-803; 인터류킨-15/Fc 융합 단백질(예를 들어, XmAb24306); 재조합 인터류킨-15(예를 들어, AM0015, NIZ-985); 페길화된 IL-15(예를 들어, NKTR-255); IL-2, 예컨대, CST-101; 인터페론 알파 리간드, 예컨대, 자가 종양 세포 백신 + 시스템 CpG-B + IFN-알파 (암); K-Ras GTPase, 예컨대, 항-KRAS G12V mTCR 세포 요법; 신경 세포 접착 분자 L1 L1CAM(CD171), 예컨대, JCAR-023; 잠복 막 단백질 1/잠복 막 단백질 2, 예컨대, Ad5f35-LMPd1-2-형질도입된 자가 수지상 세포; MART-1 흑색종 항원 조절인자, 예컨대, MART-1 F5 TCR 조작된 PBMC; 흑색종 관련 항원 10, 예컨대, MAGE-A10C796T MAGE-A10 TCR; 흑색종 관련 항원 3/흑색종 관련 항원 6(MAGE A3/A6) 예컨대, KITE-718 (예를 들어, WO/2014/043441호 참조); 메소텔린, 예컨대, CSG-MESO, TC-210; 뮤신 1 조절인자, 예컨대, ICTCAR-052, Tn MUC-1 CAR-T, ICTCAR-053; 항-MICA/MICB, 예컨대, CYAD-02; NKG2D, 예컨대, NKR-2; Ntrkr1 티로신 키나제 수용체, 예컨대, JCAR-024; PRAMET 세포 수용체, 예컨대, BPX-701; 전립선 줄기 세포 항원 조절인자, 예컨대, MB-105; 라운드어바웃(Roundabout) 동족체 1 조절인자, 예컨대, ATCG-427; 펩티도글리칸 인식 단백질 조절인자, 예컨대, Tag-7 유전자 변형된 자가 종양 세포 백신; PSMA, 예컨대, PSMA-CAR T-세포 요법(렌티바이러스 벡터, 거세-내성 전립선암);SLAM 패밀리 구성원 7 조절인자, 예컨대, IC9-Luc90-CD828Z; TGF 베타 수용체 조절인자, 예컨대, DNR.NPC T-세포; T-림프구, 예컨대, TT-12; T-림프구 자극인자, 예컨대, ATL-001; TSH 수용체 조절인자, 예컨대, ICTCAR-051; 종양 침윤 림프구, 예컨대, LN-144, LN-145; 및 윌름스 종양 단백질, 예컨대, JTCR-016, WT1-CTL 또는 ASP-7517. 예시적인 프로게스테론 수용체 길항제는 오나프리스톤이다.
다양한 실시형태에서, 상기에 기재된 바와 같은 암 치료를 위한 작용제는 항혈관신생제와 조합될 수 있다. 병용 투여될 수 있는 항혈관신생제는 레티노이드산 및 이의 유도체, 2-메톡시에스트라디올, ANGIOSTATIN®, ENDOSTATIN®, 레고라페닙, 네쿠파라닙, 수라민, 스쿠알라민, 메탈로프로테이나제-1의 조직 저해제, 메탈로프로테이나제-2의 조직 저해제, 플라스미노겐 활성화제 저해제-1, 플라스미노겐 활성화제 저해제-2, 연골-유래 저해제, 파클리탁셀(nab-파클리탁셀), 혈소판 인자 4, 프로타민 설페이트(클루페인), 황산화 키틴 유도체(왕게 껍질에서 제조), 황산화 다당류 펩티도글리칸 복합체(sp-pg), 스타우로스포린, 프롤린 유사체를 포함한 기질 대사 조절제, 예컨대, 1-아제티딘-2-카복실산(LACA), 시스히드록시프롤린, d,I-3,4-디히드로프롤린, 티아프롤린, α,α'-디피리딜, 베타-아미노프로피오니트릴 푸마레이트, 4-프로필-5-(4-피리디닐)-2(3h)-옥사졸론, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 헤파린, 인터페론, 2 마크로글로불린-혈청, 메탈로프로테이나제-3(ChIMP-3)의 닭 저해제, 키모스타틴, 베타-사이클로덱스트린 테트라데카설페이트, 에포네마이신, 푸마길린, 금 티오말산나트륨, d-페니실라민, 베타-1-안티콜라게나제-혈청, 알파-2-안티플라스민, 비산트렌, 로벤자릿 디소듐, n-2-카복시페닐-4-클로로안트로닐산 디소듐 또는 "CCA", 탈리도미드, 혈관신생억제 스테로이드, 카복시 아미노이미다졸, 메탈로프로테이나제 저해제, 예컨대, BB-94, S100A9의 저해제, 예컨대, 타스퀴니모드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 다른 항-혈관신생제는 이러한 혈관신생 성장 인자: 베타-FGF, 알파-FGF, FGF-5, VEGF 아이소형, VEGF-C, HGF/SF 및 Ang-1/Ang-2에 대한 항체, 바람직하게는 단일클론 항체를 포함한다.
다양한 실시형태에서, 상기에 기재된 바와 같은 암의 치료를 위한 작용제는 항섬유화제와 조합된다. 공동 투여될 수 있는 항섬유화제는 베타-아미노프로피오니트릴(BAPN)과 같은 화합물, 뿐만 아니라 리실 옥시다제의 저해제 및 콜라겐의 비정상적인 침착과 관련된 질병 및 질환의 치료에서의 이들의 용도에 관해서 US 4965288에 개시된 화합물 및 다양한 병리학적 섬유증 상태의 치료를 위한 LOX를 저해하는 화합물에 관한 US 4997854에 개시된 화합물을 포함하지만 이들로 제한되지 않으며, 상기 문헌은 참조로 본 명세서에 원용된다. 추가의 예시적인 저해제는 2-이소부틸-3-플루오로-, 클로로-, 또는 브로모-알릴아민과 같은 화합물에 관한 US 4943593, US 5021456, US 5059714, US 5120764, US 5182297, 2(1-나프틸옥시메틸)-3-플루오로알릴아민에 관한 US 5252608 및 US 2004-0248871에 기재되어 있고, 상기 문헌은 참조로 본 명세서에 원용된다.
예시적인 항섬유화제는 또한, 리실 옥시다제의 활성 부위의 카보닐 기와 반응하는 1차 아민을 포함하고, 더 구체적으로는, 카보닐과 결합한 후 공명에 의해 안정화된 생성물을 생성하는 것, 예컨대, 하기 1차 아민: 에밀렌마민, 히드라진, 페닐히드라진 및 이들의 유도체; 세미카바지드 및 우레아 유도체; BAPN 또는 2-니트로에틸아민과 같은 아미노니트릴; 2-브로모에틸아민, 2-클로로에틸아민, 2-트리플루오로에틸아민, 3-브로모프로필아민, 및 p-할로벤질아민과 같은 불포화 또는 포화 할로아민; 및 셀레노호모시스테인 락톤을 포함한다.
다른 항섬유화제는 세포를 침투하거나 침투하지 않는 구리 킬레이팅제이다. 예시적인 화합물은 리실 옥시다제에 의한 리실 및 히드록실리실 잔기의 산화적 탈아미노화로부터 유래하는 알데히드 유도체를 차단하는 간접 저해제를 포함한다. 예는 티올아민, 특히 D-페니실라민 및 이의 유사체, 예컨대, 2-아미노-5-메르캅토-5-메틸헥산산, D-2-아미노-3-메틸-3-((2-아세트아미도에틸)디티오)부탄산 p-2-아미노-3-메틸-3-((2-아미노에틸)디티오)부탄산, 소듐-4-((p-1-디메틸-2-아미노-2-카복시에틸)디티오)부탄 설퍼레이트, 2 -아세트아미도에틸-2-아세트아미도에탄티올 설파네이트 및 소듐-4-메르캅토부탄설피네이트 삼수화물을 포함한다.
일부 화학요법제가 림프종 또는 백혈병의 치료에 적합하다. 이들 작용제는 알데스류킨, 알보시딥, 아미포스틴 삼수화물, 아미노캄프토테신, 안티네오플라스톤 A10, 안티네오플라스톤 AS2-1, 항흉선세포 글로불린, 삼산화비소, Bcl-2 패밀리 단백질 저해제 ABT-263, 베타 알레틴, BMS-345541 보테조밉(VELCADE®, PS-341), 브리오스타틴 1, 불설판, 캄파트(campath)-1H, 카보플라틴, 카필조밉(Kyprolis®), 카무스틴, 카스포펀진 아세테이트, CC-5103, 클로람부실, CHOP(사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손), 시스플라틴, 클라드리빈, 클로파라빈, 커큐민, CVP(사이클로포스파미드, 빈크리스틴 및 프레드니손), 사이클로포스파미드, 사이클로스포린, 시타라빈, 데닐류킨 디프티톡스, 덱사메타손, 도세탁셀, 돌라스타틴 10, 독소루비신, 독소루비신 염산염, DT-PACE(덱사메타손, 탈리도미드, 시스플라틴, 독소루비신, 사이클로포스파미드 및 에토포시드), 엔자스타우린, 에포에틴 알파, 에토포시드, 에베롤리무스(RAD001), FCM(플루다라빈, 사이클로포스파미드 및 미톡산트론), FCR(플루다라빈, 사이클로포스파미드 및 리툭시맙), 펜레티니드, 필그라스팀, 플라보피리돌, 플루다라빈, FR(플루다라빈 및 리툭시맙), 젤다나마이신(17 AAG), hyperCVAD(과분할된 사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 독소루비신, 덱사메타손, 메토트렉세이트 및 시타라빈), ICE(이포스파미드, 카보플라틴 및 에토포시드), 이포스파미드, 이리노테칸 염산염, 인터페론 알파-2b, 익사베필론, 레날리도미드(REVLIMID®, CC-5013), 포말리도미드(POMALYST®/IMNOVID®)림포카인 활성화 킬러 세포, MCP(미톡산트론, 클로람부실 및 프레드니솔론), 멜팔란, 메스나, 메토트렉세이트, 미톡산트론 염산염, 모텍사핀 가돌리늄, 미코페놀레이트 모페틸, 넬라라빈, 오바토클락스(GX15-070), 오블리머센, 옥트레오티드 아세테이트, 오메가-3 지방산, Omr-IgG-am(WNIG, Omrix), 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 팔보시클립(PD0332991), 페그필그라스팀, 페길화 리포솜 독소루비신 염산염, 페리포신, 프레드니솔론, 프레드니손, 재조합 flt3 리간드, 재조합 인간 트롬보포이에틴, 재조합 인터페론 알파, 재조합 인터류킨-11, 재조합 인터류킨-12, 리툭시맙, R-CHOP(리툭시맙 및 CHOP), R-CVP(리툭시맙 및 CVP), R-FCM(리툭시맙 및 FCM), R-ICE(리툭시맙 및 ICE) 및 R MCP(리툭시맙 및 MCP), R-로스코비틴(셀리시클립, CYC202), 사그라모스팀, 실데나필 시트레이트, 심바스타틴, 시롤리무스, 스티릴 설폰, 타크롤리리무스, 타네스피마이신, 템시롤리무스(CCl-779), 탈리도미드, 치료용 동종이계 림프구, 티오테파, 티피파르닙, 빈크리스틴, 빈크리스틴 설페이트, 비노렐빈 디타르트레이트, SAHA(수베라닐로히드록삼산 또는 수베로일, 아닐리드 및 히드록삼산), 베무라페닙(Zelboraf ®), 베네토클락스(ABT-199)를 포함한다.
하나의 변형된 접근법은 단일클론 항체가 방사성 동위원소 입자, 예컨대, 인듐-111, 이트륨-90 및 아이오딘-131과 조합되는 방사성면역요법이다. 조합 요법의 예는 아이오딘-131 토시투모맙(BEXXAR®), 이트륨-90 이브리투모맙 티욱세탄(ZEVALIN®) 및 BEXXAR®와 CHOP를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
비호지킨 림프종(NHL), 특히 B 세포 기원의 것의 치료는 단일클론 항체, 표준 화학요법 접근법(예를 들어, CHOP(사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손), CVP(사이클로포스파미드, 빈크리스틴, 및 프레드니손), FCM(플루다라빈, 사이클로포스파미드 및 미톡산트론), MCP(미톡산트론, 클로람부실, 프레드니솔론), 모두 선택적으로 리툭시맙(R) 등을 포함함), 방사선면역요법 및 이들의 조합, 특히 항체 요법과 화학요법의 통합을 사용하는 것을 포함한다.
NHL/B-세포 암의 치료를 위한 비접합 단일클론 항체의 예는 리툭시맙, 알렘투주맙, 인간 또는 인간화 항-CD20 항체, 루밀릭시맙, 항-TNF-관련 아폽토시스-유도 리간드(항-TRAIL), 베바시주맙, 갈릭시맙, 에프라투주맙, SGN-40 및 항-CD74를 포함한다.
NHL/B-세포 암의 치료에 사용되는 실험적 항체 작용제의 예는 오파투무맙, ha20, PRO131921, 알렘투주맙, 갈릭시맙, SGN-40, CHIR-12.12, 에프라투주맙, 루밀릭시맙, 아폴리주맙, 밀라투주맙 및 베바시주맙을 포함한다.
NHL/B-세포 암에 대한 화학요법의 표준 요법의 예는 CHOP, FCM, CVP, MCP, R-CHOP(리툭시맙, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니손), R-FCM, R-CVP, 및 RMCP을 포함한다.
NHL/B-세포 암에 대한 방사선면역요법의 예는 이트륨-90 이브리투모맙 티욱세탄(ZEVALIN®) 및 아이오딘-131 토시투모맙(BEXXAR®)을 포함한다.
외투 세포 림프종(mantle cell lymphoma: MCL)에 대한 치료적 치료는 조합 화학요법, 예컨대, CHOP, hyperCVAD 및 FCM을 포함한다. 이러한 요법은 또한 단일클론 항체 리툭시맙이 보충되어 조합 요법 R-CHOP, hyperCVAD-R 및 R-FCM을 형성할 수 있다. 상기에 언급된 요법 중 임의의 것이 MCL을 치료하기 위해 줄기 세포 이식 또는 ICE와 조합될 수 있다.
MCL을 치료하기 위한 대안적인 접근법은 면역요법이다. 하나의 면역요법은 리툭시맙과 같은 단일클론 항체를 사용한다. 또 다른 것은 개별 환자 종양의 유전자 구성을 기반으로 하는 암 백신, 예컨대 GTOP-99를 사용한다.
MCL을 치료하기 위한 변형된 접근법은 방사성 면역요법이며, 여기서 단일클론 항체는 아이오딘-131 토시투모맙(BEXXAR®) 및 이트륨-90 이브리투모맙 티욱세탄(ZEVALIN®)과 같이 방사성 동위원소 입자와 조합된다. 또 다른 예에서, BEXXAR®은 CHOP와의 순차적 치료에 사용된다.
MCL을 치료하기 위한 다른 접근법은 고용량 화학요법과 결합된 자가 줄기 세포 이식, 프로테아솜 저해제, 예컨대, 보테조밉(VELCADE® 또는 PS-341)의 투여 또는 특히 리툭시맙과 조합된 항-혈관신생제, 예컨대 탈리도미드의 투여를 포함한다.
또 다른 치료 접근법은 Bcl-2 단백질의 분해를 초래하고, 다른 화학요법제와 조합하여 오블리머센과 같은 화학요법에 대한 암 세포 감수성을 증가시키는 약물을 투여하는 것이다.
추가 치료 접근법은 mTOR 저해제를 투여하는 것을 포함하며, 이는 세포 성장 및 심지어 세포 사멸을 저해할 수 있다. 비제한적인 예는 RITUXAN®, VELCADE® 또는 다른 화학요법제와 조합된 시롤리무스, 템시롤리무스(TORISEL®, CCI-779), CC-115, CC-223, SF-1126, PQR-309(비미랄리십), 복스탈리십, GSK-2126458 및 템시롤리무스이다.
MCL에 대한 다른 최근 치료법이 개시되어 있다. 이러한 예는 플라보피리돌, 팔보시클립(PD0332991), R-로스코비틴(셀리시실립, CYC202), 스티릴 설폰, 오바토클락스(GX15-070), TRAIL, 항-TRAIL 사멸 수용체 DR4 및 DR5 항체, 템시롤리무스(TORISEL®, CCl-779), 에베롤리무스(RAD001), BMS-345541, 커큐민, SAHA, 탈리도미드, 레날리도미드(REVLIMID®, CC-5013) 및 젤다나마이신(17 AAG)을 포함한다.
발덴스트롬 거대글로불린혈증(WM: Waldenstrom's Macroglobulinemia)의 치료에 사용되는 치료제는 알데스류킨, 알렘투주맙, 알보시딥, 아미포스틴 삼수화물, 아미노캄프토테신, 안티네오플라스톤 A10, 안티네오플라스톤 AS2-1, 항흉선세포 글로불린, 삼산화비소, 자가 인간 종양-유래 HSPPC-96, Bcl-2 패밀리 단백질 저해제 ABT-263, 베타 알레틴, 보테조밉(VELCADE®), 브리오스타틴 1, 부설판, 캄파트-1H, 카보플라틴, 카무스틴, 카스포펀진 아세테이트, CC-5103, 시스플라틴, 클로파라빈, 사이클로포스파미드, 사이클로스포린, 시타라빈, 데닐류킨 디프티톡스, 덱사메타손, 도세탁셀, 돌라스타틴 10, 독소루비신 염산염, DT-PACE, 엔자스타우린, 에포에틴 알파, 에프라투주맙(hLL2-항-CD22 인간화 항체), 에토포시드, 에베롤리무스, 펜레티니드, 필그라스팀, 플루다라빈, 이브루티닙, 이포스파미드, 인듐-111 단일클론 항체 MN-14, 아이오딘-131 토시투모맙, 이리노테칸 염산염, 익사베필론, 림포카인-활성화 살해 세포, 멜팔란, 메스나, 메토트렉세이트, 미톡산트론 염산염, 단일클론 항체 CD19(예컨대, 티사젠렉류셀-T, CART-19, CTL-019), 단일클론 항체 CD20, 모텍사핀 가돌리늄, 마이코페놀레이트 모페틸, 넬라라빈, 오블리머슨, 옥트레오티드 아세테이트, 오메가-3 지방산, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페그필그라스팀, 페길화 리포솜 독소루비신 염산염, 펜토스타틴, 페리포신, 프레드니손, 재조합 flt3 리간드, 재조합 인간 트롬보포이에틴, 재조합 인터페론 알파, 재조합 인터류킨-11, 재조합 인터류킨-12, 리툭시맙, 사그라모스팀, 실데나필 시트레이트(VIAGRA®), 심바스타틴, 시롤리무스, 타크롤리무스, 타네스피마이신, 탈리도미드, 치료용 동종이계 림프구, 티오테파, 티피파르닙, 토시투모맙, 울로쿠플루맙, 벨투주맙, 빈크리스틴 설페이트, 비노렐빈 디타르트레이트, 보리노스타트, WT1 126-134 펩티드 백신, WT-1 유사체 펩티드 백신, 이트륨-90 이브리투모맙 티욱세탄, 이트륨-90 인간화 에프라투주맙 및 이들의 조합물을 포함한다.
WM의 치료에 사용되는 치료 절차의 예는 말초 혈액 줄기 세포 이식, 자가 조혈 모세포 이식, 자가 골수 이식, 항체 요법, 생물학적 요법, 효소 저해제 요법, 전신 방사선 조사, 줄기 세포 주입, 줄기 세포 지원을 사용한 골수 절제, 시험관 내 처리된 말초 혈액 줄기 세포 이식, 제대혈 이식, 면역효소 기술, 저-ET 코발트-60 감마선 요법, 블레오마이신, 기존 수술, 방사선 요법 및 비골수파괴성 동종이계 조혈 모세포 이식을 포함한다.
미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL)의 치료에 사용되는 치료제에는 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 프레드니손, 항-CD20 단일클론 항체, 에토포시드, 블레오마이신, WM에 대해 열거된 다수의 작용제, 및 이들의 임의의 조합물, 예컨대 ICE 및 R ICE를 포함한다.
만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료에 사용되는 치료제의 예는 클로람부실, 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 펜토스타틴, 클라드리빈, 독소루비신, 빈크리스틴, 프레드니손, 프레드니솔론, 알렘투주맙, WM에 대해 열거된 다수의 작용제 및 조합 화학요법 및 화학면역요법, 예컨대, 하기 일반적인 조합 요법: CVP, R-CVP, ICE, R-ICE, FCR 및 FR을 포함한다.
골수섬유증 저해제는 헤지호그 저해제, 히스톤 데아세틸라제(HDAC) 저해제 및 티로신 키나제 저해제를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 헤지호그 저해제의 비제한적 예는 사리데깁 및 비스모데깁이다. HDAC 저해제의 예는 프라시노스타트 및 파노비노스타트를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 티로신 키나제 저해제의 비제한적인 예는 레스타우르티닙, 보수티닙, 이마티닙, 라도티닙 및 카보잔티닙이다.
젬시타빈, nab-파클리탁셀 및 젬시타빈/nab-파클리탁셀은 과증식성 장애를 치료하기 위해 JAK 저해제 및/또는 PI3Kδ 저해제와 함께 사용될 수 있다.
방광암의 치료에 사용되는 치료제는 아테졸리주맙, 카보플라틴, 시스플라틴, 도세탁셀, 독소루비신, 플루오로우라실(5-FU), 젬시타빈, 이도스파미드, 인터페론 알파-2b, 메토트렉세이트, 미토마이신, nab-파클리탁셀, 파클리탁셀, 페메트렉세드, 티오테파, 빈블라스틴 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
유방암의 치료에 사용되는 치료제는 알부민-결합 파클리탁셀, 아나스트로졸, 카페시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에베롤리무스, 엑세메스탄, 플루오로우라실, 풀베스트란트, 젬시타빈, 익사베필론, 라파티닙, 레트로졸, 메토트렉세이트, 미톡산트론, 파클리탁셀, 페길화 리포솜 독소루비신, 퍼투주맙, 타목시펜, 토레미펜, 트라스투주맙, 비노렐빈 및 이들의 조합물을 포함한다.
삼중 음성 유방암의 치료에 사용되는 치료제는 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 플루오로우라실, 파클리탁셀 및 이들의 조합물을 포함한다.
결장직장암의 치료에 사용되는 치료제는 베바시주맙, 카페시타빈, 세툭시맙, 플루오로우라실, 이리노테칸, 류코보린, 옥살리플라틴, 파니투무맙, ziv-애플리버셉트 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
거세-내성 전립선암의 치료에 사용되는 치료제는 아비라테론, 카바지탁셀, 도세탁셀, 엔잘루타미드, 프레드니손, 시풀류셀-T 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
식도 및 위식도 연결부암의 치료에 사용되는 치료제는 카페시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 도세탁셀, 에피루비신, 플루오로피리미딘, 플루오로우라실, 이리노테칸, 류코보린, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 라무시루맙, 트라스투주맙 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
위암의 치료에 사용되는 치료제는 카페시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 도세탁셀, 에피루비신, 플루오로피리미딘, 플루오로우라실, 이리노테칸, 류코보린, 미토마이신, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 라무시루맙, 트라스투주맙 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
두경부암의 치료에 사용되는 치료제는 아파티닙, 블레오마이신, 카페시타빈, 카보플라틴, 세툭시맙, 시스플라틴, 도세탁셀, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 니볼루맙, 파클리탁셀, 펨프롤리주맙 비노렐빈 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
간담도암의 치료에 사용되는 치료제는 카페시타빈, 시스플라틴, 플루오로피리미딘, 5-플루오로우라실, 젬시타빈, 옥살리플라틴, 소라페닙 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
간세포 암종의 치료에 사용되는 치료제는 카페시타빈, 독소루비신, 젬시타빈, 소라페닙 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
비소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 사용되는 치료제는 아파티닙, 알부민-결합 파클리탁셀, 알렉티닙, 베바시주맙, 베바시주맙 바이오시밀러, 카보잔티닙, 카보플라틴, 시스플라틴, 크리조티닙, 다브라페닙, 도세탁셀, 에를로티닙, 에토포시드, 젬시타빈, 니볼루맙, 파클리탁셀, 펨브롤리주맙, 페메트렉세드, 라무시루맙, 트라메티닙, 트라스투주맙, 반데타닙, 베무라페닙, 빈블라스틴, 비노렐빈 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
소세포폐암(SCLC)의 치료에 사용되는 치료제는 벤다무스팀, 카보플라틴, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에토포시드, 젬시타빈, 이필리무맙, 이리노테칸, 니볼루맙, 파클리탁셀, 테모졸로미드, 토포테칸, 빈크리스틴, 비노렐빈 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
흑색종암의 치료에 사용되는 치료제는 알부민 결합 파클리탁셀, 카보플라틴, 시스플라틴, 코비엠티닙, 다브라페닙, 다크라바진, IL-2, 이마티닙, 인터페론 알파-2b, 이필리무맙, 니트로소우레아, 니볼루맙, 파클리탁셀, 펨브롤리주맙, 필리무맙, 테모졸로미드, 트라메티닙, 베무라페닙, 빈블라스틴 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
난소암의 치료에 사용되는 치료제는 5-플루오로우라실, 알부민 결합 파클리탁셀, 알트레타민, 아나스트로졸, 베바시주맙, 카페시타빈, 카보플라틴, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 도세탁셀, 독소루비신, 에토포시드, 엑세메스탄, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 레트로졸, 류프로라이드 아세테이트, 리포솜 독소루비신, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 올라파립, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파조파닙, 페메트렉세드, 타목시펜, 토포테칸, 비노렐빈 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
췌장암의 치료에 사용되는 치료제는 5-플루오로우라실, 알부민-결합 파클리탁셀, 카페시타빈, 시스플라틴, 도세탁셀, 엘로티닙, 플루오로피리미딘, 젬시타빈, 이리노테칸, 류코보린, 옥살리플라틴, 파클리탁셀 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
신장 세포 암종의 치료에 사용되는 치료제는 악시티닙, 베바시주맙, 카보잔티닙, 에를로티닙, 에베롤리무스, 레반티닙, 니볼루맙, 파조파닙, 소라페닙, 수니티닙, 템시롤리무스 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다.
VI. 항체의 일반적인 특징
항원에 대한 다른 비인간, 예를 들어, 뮤린, 기니피그, 영장류, 토끼 또는 래트 단일클론 항체의 생산은, 예를 들어, 동물을 항원 또는 이의 단편, 또는 항원을 보유하는 세포로 면역화함으로써 달성될 수 있다. 문헌[Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (CSHP NY, 1988)](모든 목적을 위해 참고로 원용됨)을 참조. 이러한 항원은 천연 공급원으로부터, 펩티드 합성에 의해, 또는 재조합 발현에 의해 얻어질 수 있다. 선택적으로, 항원은 담체 단백질과 융합되거나 그렇지 않으면 복합체를 형성하여 투여될 수 있다. 선택적으로, 항원은 애쥬번트(adjuvant)와 함께 투여될 수 있다. 몇몇 유형의 애쥬번트가 하기에 기재된 바와 같이 사용될 수 있다. 완전 프로인트 애쥬번트 후의 불완전 어쥬번트가 실험실 동물의 면역화에 바람직하다.
인간화 항체는 비인간 "공여자"(donor) 항체로부터의 CDR이 인간 "수용자"(acceptor) 항체 서열로 이식되는 유전자 조작된 항체이다(예를 들어, Queen의 미국 특허 제5,530,101호 및 제5,585,089호; Winter의 미국 특허 제5,225,539호, Carter의 미국 특허 제6,407,213호, Adair의 미국 특허 제5,859,205호, 제6,881,557호, Foote의 미국 특허 제6,881,557호 참조). 수용자 항체 서열은, 예를 들어, 성숙 인간 항체 서열, 이러한 서열의 복합체, 인간 항체 서열의 공통 서열, 또는 생식세포계열 영역 서열일 수 있다. 따라서, 인간화 항체는 전체적으로 또는 실질적으로 공여자 항체로부터의 일부 또는 모든 CDR 및 존재하는 경우, 전체적으로 또는 실질적으로 인간 항체 서열로부터의 가변 영역 프레임워크 서열 및 불변 영역을 갖는 항체이다. 유사하게, 인간화 중쇄는 전체적으로 또는 실질적으로 공여자 항체 중쇄로부터의 적어도 1개, 2개 및 보통 3개 모두의 CDR, 및 존재하는 경우, 실질적으로 인간 중쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터의 중쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 중쇄 불변 영역을 갖는다. 유사하게, 인간화 경쇄는 전체적으로 또는 실질적으로 공여자 항체 경쇄로부터의 적어도 1개, 2개 및 보통 3개 모두의 CDR, 및 존재하는 경우, 실질적으로 인간 경쇄 가변 영역 프레임워크 및 불변 영역 서열로부터의 경쇄 가변 영역 프레임워크 서열 및 경쇄 불변 영역을 갖는다. 나노바디 및 dAb 이외에, 인간화 항체는 인간화 중쇄 및 인간화 경쇄를 포함한다. 인간화 항체 내의 CDR은 상응하는 잔기(Kabat에 의해 정의된 바와 같음)의 적어도 85%, 90%, 95% 또는 100%가 각각의 CDR 사이에서 동일한 경우에 비인간 항체 내의 상응하는 CDR로부터 실질적으로 유래된다. 항체 사슬의 가변 영역 프레임워크 서열 또는 항체 사슬의 불변 영역은 Kabat에 의해 정의된 상응하는 잔기의 적어도 85, 90, 95 또는 100%가 동일한 경우에 각각 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 인간 불변 영역으로부터 실질적으로 유래된다.
인간화 항체는 종종 마우스 항체로부터의 6개의 CDR 모두(바람직하게는 Kabat에 의해 정의된 바와 같음)를 포함하지만, 전체 CDR보다 적은 수(예를 들어, 마우스 항체로부터의 적어도 3, 4 또는 5개의 CDR)로 만들어질 수도 있다(예를 들어, 문헌[Pascalis et al., J. Immunol. 169:3076, 2002]; 문헌[Vajdos et al., Journal of Molecular Biology, 320: 415-428, 2002]; 문헌[Iwahashi et al., Mol. Immunol. 36:1079-1091, 1999]; 문헌[Tamura et al, Journal of Immunology, 164:1432-1441, 2000]).
키메라 항체는 비인간 항체(예를 들어, 마우스)의 경쇄 및 중쇄의 성숙 가변 영역이 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 조합된 항체이다. 이러한 항체는 마우스 항체의 결합 특이성을 실질적으로 또는 전체적으로 보유하며, 인간 서열의 약 2/3이다.
베니어화 항체는, 비인간 항체의 일부 및 보통 모든 CDR 및 비인간 가변 영역 프레임워크 잔기의 일부를 보유하지만 B- 또는 T-세포 에피토프에 기여할 수 있는 다른 가변 영역 프레임워크 잔기, 예를 들어 노출된 잔기(문헌[Padlan, Mol. Immunol. 28:489, 1991])를 인간 항체 서열의 상응하는 위치의 잔기로 대체하는 인간화 항체의 유형이다. 결과는 CDR이 전체적으로 또는 실질적으로 비인간 항체로부터 유래되고 비인간 항체의 가변 영역 프레임워크가 치환에 의해 더 인간과 유사하게 만들어지는 항체이다.
인간 항체는 인간으로부터 단리될 수 있거나, 그렇지 않으면 인간 면역글로불린 유전자의 발현(예를 들어, 트랜스제닉 마우스에서, 시험관 내에서, 또는 파지 디스플레이에 의해)의 결과일 수 있다. 인간 항체를 생산하는 방법은 문헌[Oestberg et al., Hybridoma 2:361-367(1983)]; Oestberg의 미국 특허 제4,634,664호; 및 Engleman 등의 미국 특허 제4,634,666호의 트리오마(trioma) 방법, 인간 면역글로불린 유전자를 포함하는 트랜스제닉 마우스의 사용(예를 들어, Lonberg 등의 WO93/12227호(1993)); 미국 특허 제5,877,397호, 제5,874,299호, 제5,814,318호, 제5,789,650호, 제5,770,429호, 제5,661,016호, 제5,633,425호, 제5,625,126호, 제5,569,825호, 제5,545,806호, 문헌[Nature 148, 1547-1553 (1994)], 문헌[Nature Biotechnology 14, 826 (1996)], Kucherlapati의 국제 출원 공개 91/10741호(1991) 참조) 및 파지 디스플레이 방법(예를 들어, Dower 등의 국제 출원 공개 91/17271호 및 McCafferty 등의 국제 출원 공개 92/01047호, 미국 특허 제5,877,218호, 제5,871,907호, 제5,858,657호, 제5,837,242호, 제5,733,743호 및 제5,565,332호 참조)을 포함한다.
항체는 의도된 표적에 대한 특이적 결합에 대해서 스크리닝된다. 항체는 (예를 들어, 목적하는 에피토프를 함유하는) 표적의 특이적 영역에 대한 결합, 참조 항체와의 경쟁, 항원 보유 세포의 효능작용 또는 길항작용에 대해서 추가로 스크리닝될 수 있다. 비-인간 항체는 상기에 기재된 바와 같이 키메라, 베니어화 또는 인간화 형태로 전환될 수 있다.
불변 영역의 선택은 항체-의존성 세포-매개 세포독성, 항체 의존성 세포 식세포작용 및/또는 보체 의존성 세포독성이 요구되는지 여부에 따라 부분적으로 좌우된다. 예를 들어, 인간 동종형 IgG1 및 IgG3은 보체-의존성 세포독성을 갖지만 인간 동종형 IgG2 및 IgG4는 갖지 않는다. 경쇄 불변 영역은 람다 또는 카파일 수 있다. 인간 IgG1 및 IgG3은 또한 인간 IgG2 및 IgG4보다 더 강한 세포 매개 이펙터 기능을 유도한다.
인간 불변 영역은 상이한 개체 간의 동종이형(allotypic) 변이 및 아이소동종이형(isoallotypic) 변이를 보여주며, 즉, 불변 영역은 하나 이상의 다형성(polymorphic) 위치에서 상이한 개체에서 상이할 수 있다. 아이소동종이형은, 아이소동종이형을 인식하는 혈청이 하나 이상의 다른 동종형의 비-다형성 영역에 결합한다는 점에서 동종이형과는 상이하다. 인간 불변 영역에 대한 참조는 임의의 천연 동종이형을 갖는 불변 영역 또는 천연 동종이형에서 다형성 위치를 점유하는 잔기의 임의의 순열(permutation)을 포함한다.
중쇄의 C-말단 라이신과 같은 경쇄 및/또는 중쇄의 아미노 또는 카복시 말단에 있는 하나 이상의 아미노산은 분자의 일부 또는 전부에서 누락되거나 유도체화될 수 있다. 이펙터 기능, 예컨대, 보체-매개된 세포독성 또는 ADCC를 감소시키거나 증가시키기 위해서(예를 들어, Winter 등의 미국 특허 제5,624,821호; Tso 등의 미국 특허 제5,834,597호; 및 문헌[Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006] 참조), 또는 인간에서 반감기를 연장시키기 위해서(예를 들어, 문헌[Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004] 참조) 치환은 불변 영역에 만들어질 수 있다. 예시적인 치환은 위치 250에서의 Gln 및/또는 위치 428에서의 Leu, 위치 434에서의 S 또는 N, 위치 252에서의 Y, 위치 254에서의 T 및 위치 256에서의 E 및 N434A를 포함한다(EU 넘버링). 증가된 FcRn 결합은 본 발명의 하이브리드 단백질이 FcRn에 대한 결합에 대해 내인성 IgG와 더 강하게 경쟁하도록 하는 데 유리하다. ADCC, ADP 또는 CMC 중 임의의 것을 감소시키기 위해서 다수의 돌연변이가 또한 공지되어 있다(예를 들어, Winter 등의 미국 특허 제5,624,821호; Tso 등의 미국 특허 제5,834,597호; 및 문헌[Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006] 참고). 예를 들어, 위치 234, 235, 236 및/또는 237 중 임의의 것의 치환은 Fcγ 수용체, 특히 FcγRI 수용체에 대한 친화도를 감소시킨다(예를 들어, US 6,624,821호 참조). 선택적으로, 인간 IgG2 내의 위치 234, 236 및/또는 237이 알라닌으로 치환되고 위치 235가 글루타민 또는 글루탐산으로 치환된다. (예를 들어, US 5,624,821호 참조) 이펙터 기능을 감소시키는 다른 치환은 위치 268에서의 A, 위치 297에서의 G 또는 A, 위치 309에서의 L, 위치 322에서의 A, 위치 327에서의 G, 위치 330에서의 S, 위치 331에서의 S, 위치 238에서의 S, 위치 268에서의 A, 위치 309에서의 L을 포함한다. 이펙터 기능을 향상시키는 돌연변이의 일부 예는 S239D, I332E, A330L 및 이들의 조합물을 포함한다.
주목되는 바와 같이, 일부 실시형태에서, 항체의 Fc 영역은 항-결합 분자의 혈청 반감기 증가를 촉진하는 하나 이상의 아미노 변형을 포함한다. 항체의 반감기를 증가시키는 돌연변이가 기재되어 있다. 일 실시형태에서, CD3-표적화 중쇄 및 HIV 항원-표적화 중쇄 중 하나 또는 둘 다의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 위치 252(EU 넘버링)에서의 메티오닌 대 티로신 치환, 위치254(EU 넘버링)에서의 세린 대 트레오닌 치환 및 위치 256(EU 넘버링)에서의 트레오닌 대 글루탐산 치환을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제7,658,921호 참조. "YTE 돌연변이"로 지정된 이러한 유형의 돌연변이는 동일한 항체의 야생형 버전에 비해서 4배 증가되 반감기를 나타낸다(문헌[Dall' Acqua, et al., J Biol Chem, 281: 23514-24 (2006)]; 문헌[Robbie, et al., Antimicrob. Agents Chemotherap., 57(12):6147-6153 (2013)]). 특정 실시형태에서, CD3-표적화 중쇄 및 HIV 항원-표적화 중쇄 중 하나 또는 둘 모두의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 위치 251 내지 257, 285 내지 290, 308 내지 314, 385 내지 389 및 428 내지 436(EU 넘버링)의 아미노산 잔기의 1, 2, 3개, 또는 그 초과의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다. 대안적으로, M428L 및 N434S("LS") 치환은 다중-특이적 항원 결합 분자의 약동학적 반감기를 증가시킬 수 있다. 다른 실시형태에서, Fc 영역은 M428L 및 N434S 치환(EU 넘버링)을 포함한다. 다른 실시형태에서, CD3-표적화 중쇄 및 HIV 항원-표적화 중쇄 중 하나 또는 둘 모두의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 T250Q 및 M428L(EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다. 다른 실시형태에서, Fc 영역은 H433K 및 N434F(EU 넘버링) 돌연변이를 포함한다.
언급된 바와 같이, 항체의 Fc 영역은 이펙터 활성을 증가시키는, 예를 들어 개선된 FcγIIIa 결합 및 증가된 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 갖는 번역 후 및/또는 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 Fc 영역에 DE 변형(즉, EU 넘버링에 의해서 S239D 및 I332E)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 Fc 영역에 DEL 변형(즉, EU 넘버링에 의해서 S239D, I332E 및 A330L)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 Fc 영역에 DEA 변형(즉, EU 넘버링에 의해서 S239D, I332E 및 G236A)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체의 Fc 영역 또는 Fc 도메인은 Fc 영역에 DEAL 변형(즉, EU 넘버링에 의해서 S239D, I332E, G236A 및 A330L)을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제7,317,091호; 제7,662,925호; 제8,039,592호; 제8,093,357호; 제8,093,359호; 제8,383,109호; 제8,388,955호; 제8,735,545호; 제8,858,937호; 제8,937,158호; 제9,040,041호; 제9,353,187호; 제10,184,000호; 및 제10,584,176호 참조. 이펙터 활성을 증가시키는, 예를 들어 개선된 FcγIIIa 결합 및 증가된 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 갖는 추가 아미노산 변형은 비제한적으로 (EU 넘버링) F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L; S298A/E333A/K334A; 또는 제1 Fc 도메인 상의 L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A 및 제2 Fc 도메인 상의 D270E/K326D/A330M/K334E를 포함한다. C1q 결합 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 증가시키는 아미노산 돌연변이는 비제한적으로(EU 넘버링) S267E/H268F/S324T 또는 K326W/E333S를 포함한다. 이펙터 활성을 향상시키는 Fc 영역 돌연변이는 예를 들어, 문헌[Wang, et al., Protein Cell (2018) 9(1): 63-73]; 및 문헌[Saunders, Front Immunol. (2019) 10:1296]에 검토되어 있다.
다른 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 변형된 글리코실화를 가지며, 이는 예를 들어, 번역 후 또는 유전 공학을 통해 도입될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 존재하는 글리코실화 부위에서 어푸코실화(afucosylating)된다. 대부분의 승인된 단일클론 항체는 IgG1 동종형이며, 여기서 2개의 N-연결된 이안테나형(biantennary) 복합형 올리고당이 Fc 영역에 결합된다. Fc 영역은 FcγR 패밀리의 백혈구 수용체와의 상호작용을 통해 ADCC의 이펙터 기능을 실행한다. 어푸코실화된 단일클론 항체는 항체의 Fc 영역에 있는 올리고당이 어떠한 푸코스 당 단위도 갖지 않도록 조작된 단일클론 항체이다.
절제에 대한 관심 대상인 항체는 ADCC를 유도하는 능력에 대해 시험될 수 있다. 항체-관련 ADCC 활성은 용해된 세포로부터 표지 또는 락테이트 데히드로게나제의 방출을 검출하거나 감소된 표적 세포 생존력을 검출(예를 들어, 아넥신 검정)함으로써 모니터링 및 정량화될 수 있다. 아폽토시스에 대한 검정은 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제-매개 디곡시게닌-11-dUTP 닉 단부 표지(TUNEL) 검정에 의해 수행될 수 있다(문헌[Lazebnik et al., Nature: 371, 346 (1994]). 세포독성은 또한 검출 키트, 예컨대, Roche Applied Science(미국 인디애나주 인디아나폴리스 소재)로부터의 Cytotoxicity Detection Kit의해 직접 검출될 수 있다. 항체는 마찬가지로 WO/2009/091601에 기재된 바와 같이 예를 들어, AML LSC에 대한 항체 의존성 식세포 작용(ADP)을 유도하는 능력에 대해 시험될 수 있다.
일부 실시형태에서, 면역요법제는 이펙터 모이어티에 접합된다. 이펙터 모이어티는 표지 모이어티, 예컨대, 방사성 표지 또는 형광 표지를 포함하는 임의의 수의 분자일 수 있거나, 세포독성 모이어티일 수 있다. 세포독성제는 세포독성 약물 또는 독소 또는 이러한 독소의 활성 단편을 포함한다. 적합한 독소 및 이들의 상응하는 단편은 디프테리아 A 쇄, 외독소 A 쇄, 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 커신, 크로틴, 페노마이신, 에노마이신, 사포린, 아우리스타틴-E 등을 포함한다. 세포독성제는 또한 방사성 동위원소를 항체에 접합시켜 만든 방사성 화학물질을 포함한다. 막관통 단백질에 대한 세포독성 모이어티의 표적화는 표적화된 영역에서 세포독성 모이어티의 국소 농도를 증가시키는 역할을 한다.
VII. 혈액 세포의 유전적 장애
본 발명의 방법은 혈액 세포의 유전적 장애, 특히 단일 단백질의 돌연변이로부터 발생하는 단일유전자 장애를 교정하는 데 사용될 수 있다. 이러한 장애는 우성 또는 비우성일 수 있고, 부분적 또는 완전한 침투를 초래할 수 있다. 일반적으로 이러한 장애는 내인성 HPLC를 절제하고, 장애의 기저에 있는 단백질의 기능(예를 들어, 야생형) 형태를 포함하는 대체 HPLC를 투여함으로써 치료될 수 있다. 이러한 세포는 유전자 변형이 수행되는 방법에 따라 단백질의 돌연변이 형태뿐만 아니라 또는 그 대신에 야생형 단백질을 발현할 수 있다.
혈액 세포의 유전적 장애는 이상헤모글로빈증(Hemoglobinopathy), 예컨대, 지중해빈혈 및 겸상 적혈구병, X-연관 중증 복합 면역결핍증(X-SCID: X-linked severe combined immunodeficiency) 아데노신 디아미나제 결핍증(ADA-SCID), SCID의 기타 유전적 형태(아르테미스, Rag1/2), 위스코트 알드리치 증후군(WAS: Wiskott Aldrich syndrome), 만성 육아종증, 식혈세포성 림프조직구증, X-연관 고 IgM 증후군, X-연관 림프증식성 질환, X-연관 무감마글로불린혈증, X-연관 부신백질영양증, 이염성 백질 이영양증, 혈우병, 폰빌레브란트병(von Willebrand disease), 낫적혈구빈혈(drepanocytic anemia), 유전성 재생 불량성 빈혈, 순수 적혈구 무형성증, 발작성 야간 혈색소뇨증, 판코니 빈혈, 식혈세포성 림프조직구증(HLH: hemophagocytic lymphohistiocytosis), 선천성 대사 이상, 예를 들어, 점액 다당류증, 고셔병 및 기타 지질증, 수포성 표피박리증, 중증 선천성 호중구 감소증, 슈바크만-다이아몬드 증후군(Shwachman-Diamond syndrome), 다이아몬드-블랙판 빈혈(Diamond-Blackfan anemia), 코스트만 증후군(Kostmann's syndrome) 및 백혈구 부착 결핍을 포함한다.
겸상 적혈구 빈혈증에서, 헤모글로빈 베타 사슬의 6번째 아미노산에서 발린이 글루탐산 대신 치환된다. 헤모글로빈의 발린 돌연변이 형태는 글루탐산 형태보다 용해도가 훨씬 낮고; 그것은 막대 모양의 팩토이드의 반고체 겔을 형성하여 낮은 P02 부위에서 RBC를 겸상으로 만든다. 변형되고, 유연하지 않은 RBC는 혈관 내피에 부착하여 작은 세동맥 및 모세혈관을 막아 폐색 및 경색을 유발한다. 겸상 적혈구는 순환의 기계적 외상을 견디기에는 너무 약하기 때문에 순환에 들어간 후에 용혈이 발생한다. 동형접합체에서, 임상 증상은 빈혈 및 혈관 폐쇄 현상으로 인해 조직 허혈 및 경색을 유발한다. 성장 및 발달이 손상되고, 감염에 대한 감수성이 증가한다. 빈혈은 일반적으로 심각하지만 환자마다 매우 다양하다. 병적 세포 빈혈은 유전적 결함을 수정하거나 추가적인 기능적 헤모글로빈 전사 단위를 발현하거나 BCL11A 적혈구 증강의 파괴를 통해 치료될 수 있는데, 이것은 태아 글로빈 발현을 억제하여 겸상 적혈구 빈혈(또는 베타 지중해빈혈)의 치료를 위한 증가된 수준의 태아 헤모글로빈을 초래한다.
지중해빈혈은 특히 지중해, 아프리카 및 동남아시아 혈통의 사람들에게서 흔히 볼 수 있는 결함 있는 헤모글로빈 합성 및 비효율적인 적혈구 생성을 특징으로 하는 만성 유전성 소구성 빈혈의 군이다. 지중해빈혈은 가장 흔한 유전성 용혈성 장애 중 하나이다. 이것은 적어도 하나의 글로빈 폴리펩티드 사슬(β, α, γ, δ)의 생산 감소로 인한 불균형적인 Hb 합성의 결과이다. 이것은 유전자의 조절 영역의 돌연변이 또는 감소된 발현을 초래하는 글로빈 암호 서열의 돌연변이를 통해 발생할 수 있다.
복합 면역결핍증은 B- 및 T-세포 시스템 둘 다의 선천성 및 일반적으로 유전성 결핍, 림프성 무형성증 및 흉선 형성이상을 특징으로 하는 장애 군이다. 복합 면역결핍증은 중증 복합 면역결핍증, 스위스 무감마글로불린혈증, 아데노신 디아미나제 또는 뉴클레오시드 포스포릴라제 결핍이 있는 복합 면역결핍 및 면역글로불린 관련 복합 면역결핍(combined immunodeficiency with immunoglobulin)(네젤로프 증후군(Nezelof syndrome))을 포함한다. 대부분의 환자는 아구창, 폐렴 및 설사로 감염 초기에 발병한다. 치료하지 않고 방치하면 대부분은 2세 이전에 사망한다. 대부분의 환자는 B 세포 및 면역글로불린이 심하게 결핍되어 있다. 다음과 같은 특징이 있다: 림프구감소증, T 세포 수치 낮거나 없음, 유사분열원에 대한 증식 반응 불량, 피부 무감각, 흉선 그림자 부재, 림프 조직 감소. 폐포자충 폐렴 및 기타 기회 감염이 일반적이다.
본 방법은 또한 HIV의 경우 CCR5와 같은 바이러스를 감염시키는 데 사용되는 면역 세포 수용체를 변형함으로써 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있다.
이들 본 발명의 방법은 또한 병리가 혈액 세포에 적어도 부분적으로 존재하는 혈액 악성종양 및 자가면역 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 혈액암에는 백혈병, 림프종 및 골수종이 있다. 이러한 악성종양의 보다 구체적인 예는 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, 호지킨병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병; 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 장애 및 다발성 골수종을 포함한다. 자가면역 장애는 B 세포 및 T 세포 매개 장애를 포함한다. 일반적인 예로는 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 염증성 장 질환, 다발성 경화증, 제1형 당뇨병, 길랭 바레 증후군, 만성 염증성 탈수초 다발성 신경병증, 건선, 그레이브병, 하시모토 갑상선염, 중증 근무력증, 혈관염, 및 전신 경화증이 있다.
본 방법은 또한 내인성 HSPC에 손상을 야기하는 화학요법을 제공받은 적이 있는 고형 종양과 같은 다른 유형의 암을 갖는 환자에서 내인성 HSPC를 대체하는 데 사용될 수 있다. 고형 종양은 다른 것 중에서 유방, 전립선, 뇌, 폐, 신장, 간, 위, 장, 결장, 갑상선, 흉선, 난소, 흑색종 및 췌장의 종양을 포함한다. 대체 줄기 세포는 내인성 HSPC의 기능(예를 들어, 감염 퇴치)을 제공하며 동종이계인 경우 잔류 암 세포에 대한 추가 활성을 가질 수 있다.
본 방법은 또한 장기 이식, 특히 동종이식편에서 HSPC를 대체하는 데 사용될 수 있다. 내인성 HSPC는 MHC와 일치하지 않는 동종이식편에 대해 숙주대이식편 반응을 발달시킬 가능성이 있다. 숙주대이식편 반응은 장기 이식 전에 내인성 HSPC를 절제하고, 바람직하게는 동일한 공급원(즉, 대상체)으로부터 이식된 장기와 동시에 증식 이점을 부여하도록 유전자 변형된 대체 HSPC를 도입함으로써 감소될 수 있다.
대체 HSPC를 위한 자가 및 동종이계 공급원 간의 선택은 몇몇 인자에 좌우된다. 자가 이식은 쉽게 이용 가능하며, HLA 일치 공여자를 식별할 필요가 없다. 자가 이식은 생명을 위협하는 합병증의 위험이 낮은데; GVHD의 위험이 없으며, GVHD 및 이식 거부를 예방하기 위한 면역억제 요법이 필요하지 않다. 면역 재구성은 동종이계 이식 이후보다 더 신속하고, 기회 감염의 위험이 낮다. 이식 실패는 드물게 발생한다. 그러나 암 환자로부터의 자가 이식은 암세포에 오염될 위험이 있다.
동종이계 이식은 이식편에 오염된 종양 세포가 없다는 이점이 있다. 이식편은 또한 면역 이식편대악성종양 효과를 일으킬 수 있는 공여자-유래 면역적격 세포를 포함한다. 일반적으로 자가 이식에 비해 동종이계 이식 후 질병 재발 위험이 더 낮다. 그러나 동종이계 이식은 요법 관련 장기 독성, 이식 실패 및 이식편대숙주병과 같은 다수의 잠재적으로 치명적인 합병증과 관련될 수 있다.
일반적으로, 동종이계 이식은 백혈병 및 골수이형성 증후군의 치료에 주로 사용되어 왔다. 자가 이식은 고형 종양, 림프종 및 골수종에서 더 자주 사용되어 왔다. 유전적 장애의 교정을 위해, 자가 이식을 유전자 변형과 함께 사용하여 장애의 유전자 기반을 교정하거나 교정이 필요 없는 동종이계 이식을 사용할 수 있다.
VIII. 대체 줄기 세포 투여를 위한 요법
대체 줄기 세포는 전형적으로 정맥내 주입에 의해 비경구로 투여된다. 투여되는 줄기 세포의 용량은 주입된 세포 조성물의 목적하는 순도 및 세포의 공급원에 따라 달라질 수 있다. 용량은 또한 HSPC의 유전자 변형 유형에 좌우될 수 있다. HSPC의 보호 때문에 그리고 대체 HSPC를 도입하기 전에 내인성 HSPC를 실질적으로 완전히 제거할 필요가 없기 때문에, 투여량은 1-2x10⁶개 CD34+ 세포/㎏ 체중이 최소로 간주되었던 이전 방법보다 때때로 더 적을 수 있다. 재도입을 위한 세포의 예시적인 투여량은 적어도 1 x 10⁵, 1 x 10⁶, 2, x 10⁶, 5x 10⁶, 10⁷, 2 x 10⁷개 CD34+ 세포/㎏ 체중이다. 예시적인 범위는 1 x 10⁵ 내지 5 x 10⁷, 1 x 10⁶ 내지 2 x 10⁷ 또는 5 x 10⁵-6 x 10⁶개 CD34+세포/㎏ 체중이다. 용량은 사용 가능한 세포 수에 의해 제한될 수 있다. 전형적으로 공급원에 관계없이 용량은 존재하는 CD34⁺ 세포의 수에 의해 계산된다. CD34⁺ 세포의 백분율 수는 미분획 골수 또는 동원된 말초 혈액의 경우 낮을 수 있고, 이 경우 투여된 세포의 총 수는 훨씬 더 많다.
IX. 모니터링
유전자 변형된 대체 HSPC를 대상체에 도입한 후, 대체 HSPC 대 전체 HSPC의 비율을 모니터링할 수 있다. HSPC의 샘플은 상기에 기재된 바와 같이 골수 또는 말초 혈액에서 얻어질 수 있다. 대체 HSPC는 예를 들어, 핵산 혼성화 검정 또는 면역검정에 의해 내인성과 구별될 수 있다. 대체 HSPC가 동종이계 또는 이종인 경우, 차등 프로브 결합 검정의 기초를 형성할 수 있는 대체 세포와 내인성 세포 사이에 많은 유전자 차이가 존재하고, 때로는 면역검정을 허용하는 수용체의 차이가 존재한다. 대체 HSPC가 자가인 경우, 대체 HSPC의 유전자 변형은 핵산 혼성화 검정 또는 면역검정에 의해서 이들을 내인성 HSPC와 구별할 수 있다. 전체 HSPC에 대한 교체 비율은 도입 후 시간에 따라 증가할 수 있다. 바람직하게는 6개월 후 비율이 30, 50, 75, 90 또는 95%를 초과한다.
상기 또는 하기에 인용된 모든 특허 출원, 웹사이트, 기타 간행물, 수탁 번호 등은, 각각의 개별 항목이 참조로 그렇게 포함되는 것으로 구체적으로 그리고 개별적으로 표시되는 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 전체적으로 참고로 포함된다. 한 서열의 상이한 버전이 상이한 시간에 한 수탁 번호와 관련되어 있는 경우, 본 출원의 유효 출원일에서의 수탁 번호와 관련된 버전을 의미한다. 유효 출원일은 실제 출원일 또는 적용가능한 경우 수탁 번호를 언급하는 우선권 출원의 출원일 중 빠른 날짜를 의미한다. 마찬가지로, 한 간행물, 웹사이트 등의 상이한 버전이 상이한 시간에 공개된 경우, 달리 표시되지 않은 한, 본 출원의 유효 출원일에 가장 최근에 공개된 버전을 의미한다. 구체적으로 달리 표시되지 않은 한, 본 개시내용의 임의의 특징, 단계, 요소, 실시형태, 또는 양태는 임의의 다른 것과 조합하여 사용될 수 있다. 본 개시내용이 명료함 및 이해를 목적으로 예시 및 예를 통해 다소 상세히 기재되어 있지만, 특정 변경 및 수정이 첨부된 청구범위의 범주 내에서 실시될 수 있음이 명백할 것이다.
실시예
실시예 1
물질 및 방법
동물
레서스 마카크(마카카 물라타(macaca mulatta))를 본 연구에 사용하였고, (2 내지 4세 암컷, 2 내지 4 ㎏)을 사육하고, 취급하고, 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 요약된 지침에 따라 절차를 수행하였다. 골수 흡인물을 -7일차, 2일차, 9일차, 16일차, 29일차, 및 57일차에 대전자(grater trochanter) 또는 상완골(humerus)로부터 교대로 수집하였다.
시약
FACS 완충액(PBS, 2% FBS(Life Technologies), 2 mM EDTA(Life Technologies). 울트라 레인보우 비드(Spherotech). 사용된 항체: CD34 PE(클론 563), CD45RA APCH7(클론 5H9), CD45 FITC(클론 D058-1283), CD90 V605(클론 5E10), CD3 PerCPCy5.5(클론 SP34), CD20 PerCPCy5.5(클론 2H7), CD16 PerCPCy5.5(클론 3G8), CD11b PerCPCy5.5(클론 ICRF44), CD4 PerCPCy5.5(클론 L200), CD8a (PerCPCy5.5 클론 RPA-T8), 정제된 항-CD32(클론 FLI8.26). 정제수로 1X로 제조된 Pharm Lyse 10X. Sytox Blue 및 정제수(Life Technologies). 비접합된 인간화 SR1(Forty Seven, Inc.), 비접합된 마그로리맙(Forty Seven Inc.), 항-IgG-AF647(클론 4E3, Southern Biotech), 항-IgG4-AF647(클론 G17-4, Forty Seven Inc.)
골수 흡인물의 면역표현형분석(immunophenotyping)
골수를 FACS 완충액으로 세척하고, 펠렛화하였다. 적혈구를 실온에서 10 내지 15분 동안 1x Pharm 용해물로 용해시키고, FACS 완충액으로 세척하였다. 그런 다음 세포를 얼음 위에서 10 내지 15분 동안 항-CD32로 차단한 다음 FACS 완충액으로 세척한다. 얼음 위에서 30분 동안 CD34, CD45, CD45RA, CD90 및 계통(lin) 마커: CD3, CD4, CD8a, CD11b, CD20, CD16으로 세포를 염색하여 세포를 면역표현형분석하였다. 그런 다음 세포를 FAC 완충액으로 다시 세척하고, 유세포 분석기에서 획득하기 전에 생존성 염색제(Sytox Blue)를 첨가하였다. 관심 대상인 표적 세포 집단은 sytox(-)Lin(-)CD34(+)CD45(mid)CD90(+)CD45RA(-)cKIT(+), sytox(-)Lin(-)CD34(+)CD45(mid)CD90(+)CD45RA(-)CD47(+), sytox(-)Lin(-)CD34(+)CD45(mid)CD90(+)CD45RA(-), sytox(-)Lin(-)CD34(+)CD90(+), sytox(-)Lin(-)CD34(+)cKIT(+)로 정의된다.
표적 세포 집단 변화의 계산
표적 참조 세포 집단을 -7일차에 각각의 동물에 대해 평가하였고, 이것이 표적 세포 참조 값(Target_reference)이다. Target_reference는 표적 집단 세포 수를 sytox(-), sytox(-)Lin(-)CD34(+), sytox(-)Lin(-), sytox(-)Lin(-)CD34(+), sytox(-)Lin(-)CD34(+)CD90(+) 또는 sytox(-)Lin(-)CD34(+)cKIT(+)의 세포 수로 나눔으로써 계산된다. Target_{time point}는 표적 참조로서 수행된 것과 동일한 방식으로 각각의 시점(t = 2, 9, 16, 29 및 57)에 대해서 계산된다. 각각의 동물은 출발로부터 표적 세포 집단의 변화 %=(Target_{time point}/Target_reference)*100를 계산함으로써 정규화된다.
cKIT에 대한 수용체 점유
골수 흡인물 적혈구를 실온에서 10 내지 15분 동안 1x Pharm 용해물로 용해시키고, FACs 완충액으로 세척하였다. 그런 다음 세포를 얼음 위에서 10 내지 15분 동안 항-CD32로 차단한 다음 FACs 완충액으로 세척한다. 총 cKIT 수용체를 측정하기 위해서, 세포를 얼음 위에서 비접합된 항-c-kit(인간화 SR1)(5 ug/ml)와 함께 35분 동안 인큐베이션시키고, FACs 완충액으로 2회 세척하고, 얼음 위에서 항-IgG1-AF647(50 ug/ml)로 20분 동안 염색하고, 2회 세척하고, 그 다음 세포를 유세포 분석기에서 획득하기 전에 면역표현형분석 칵테일 프로토콜로 염색하였다. 점유 수용체를 측정하기 위해서, 준비된 세포(용해 및 차단)를 추가 인간화 SR1 포화 없이 인큐베이션시키고, 항-IgG1-AF647(50 ug/ml)로 염색하고, 얼음 위에서 20분 동안 인큐베이션시키고, 2회 세척한 다음 면역표현형분석 칵테일 프로토콜로 염색한다.
수용체 점유율의 계산
수용체 점유율은 다음과 같이 계산할 것이다:
RO 계산: MFI_test/ MFI_total x 100%. MFI_total은 MFI_test와 동일한 평가일로부터의 5 ug/ml FSI-174 염색된 튜브로부터 유래된다.
결과
도 1a 및 도 1b는 기본적인 치료 프로토콜을 보여주고 있다. 도 1a는 PBS 대조군 및 항-c-kit(인간화 SR1) 또는 항-CD47(마그로리맙)을 사용한 개별 치료를 보여주고 있다. 도 1b는 PBS 대조군 및 항-c-kit 및 항-CD47을 사용한 조합 치료를 보여주고 있다. 0.3 mg/㎏에서 3 mg/㎏ 범위의 다양한 항-C-kit 투여량을 표시된 대로 시험하였다. 항-CD47의 프라이밍 용량은 5 mg/㎏이었고, 후속 용량은 20 mg/㎏이었다.
도 2는 시간에 따른 항-c-kit의 혈청 농도를 보여주고 있다. 모든 용량은 0.1 ㎍/ml의 목적하는 역치를 초과하는 측정 가능한 혈청 수준을 달성한다. 0.3 mg/㎏의 용량은 6일 후 측정 가능한 최소 혈청 수준 아래로 떨어졌고, 1 mg/㎏의 용량은 13일 후에, 3 mg/㎏의 용량은 19일 후에 측정 가능한 최소 혈청 수준 아래로 떨어졌다.
도 3은 여러 투여량의 항-c-kit에 대한 c-kit 수용체 점유율을 보여주고 있다. 모든 투여량은 HSC의 100% c-kit 수용체 점유율을 달성하였다.
도 4는 시간에 따른 항-c-kit 및 항-CD47 수용체 점유율을 보여주고 있다. 항-c-kit의 모든 투여량은 항-CD47의 5 mg/㎏ 내지 20 mg/㎏ 투여량과 마찬가지로 HSC에서 100% 수용체 점유율을 달성하였다.
도 5a 및 도 5b는 기준선에 대한 c-kit 양성 HSC의 변화 %를 보여주고 있다. 항-c-kit 단독 치료는 음성 대조군에 비해 유의한 감소를 나타내지 않은 반면, 항-c-kit와 항-CD47의 조합 치료는 유의한 감소를 초래하였다. 감소는 0.3 및 3 mg/㎏의 항-c-kit에서 유의한 차이가 없었다.
도 6a 및 도 6b는 항-c-kit와 항-CD47의 조합 치료에 따른 말초 백혈구 또는 호중구의 시간 경과에 따른 변화를 보여주고 있다. 치료는 음성 대조군에 비해 백혈구 또는 호중구의 유의한 감소를 초래하지 않았다. 호중구감소증 또는 범혈구감소증은 관찰되지 않았다.
도 7a 및 도 7b는 항-c-kit와 항-CD47가 조합된 치료의 경우의 시간 경과에 따른 헤모글로빈 및 적혈구 수준을 음성 대조군 대비하여 보여주고 있다. 치료는 노화된 적혈구의 항-CD47 제거로 인해 경미하고 일시적인 빈혈을 초래한다.
추가 실험에서, 레서스 원숭이에게 1일차, 8일차, 및 15일차에 항-c-kit 및 항-CD47 항체를 투여하였다. 골수 흡인물을 -6일차, 2일차, 9일차, 23일차, 37일차에 수거하였고, 조혈 모세포 및 전구 세포 빈도에 대한 유세포 분석에 의해 분석하였다. 모든 원숭이에게 치료적 투여 1주 전에 CD47 ab 프라이밍 용량을 제공하였다. 도 8은 2일 내지 25일 동안 HSC의 약 85 내지 90% 감소 및 그 후 회복을 보여주고 있다.
실시예 2
본 실시예는 c-kit 및 SIRPα에 대한 항체의 조합을 사용한 HSPC 세포 고갈을 나타낸다.
방법 :
인간 SIRPα를 발현하는 트랜스제닉 마우스에게 -6일차, -4일차, 및 -2일차에 400 ug의 항-SIRPα(1H9)를 복강내 주사하거나, 마우스에게 -6일차에 500 ug의 항-c-kit(ACK2)를 정맥내 주사하였다. 골수를 0일차에 수거하고, 조혈 모세포 및 전구 세포에 대해 염색하고, 유세포 분석에 의해 평가하였다.
HSC 고갈을 다음과 같이 염색 패널로 골수에서 평가하였다:
[표 2]

[표 3]

플레이팅 및 염색
다채널 피펫을 사용하여 100 uL의 최종 부피로 웰당 적어도 2백만 개의 세포를 분배했습니다. 불충분한 양의 세포를 갖는 샘플의 경우, 모든 세포를 플레이팅하였다. FC를 4℃에서 5 내지 10분 동안 4 uL/웰로 차단하였다. 래트 항-마우스 CD16/CD32(Mouse BD Fc Block™)(BD Biosciences 카탈로그 번호: 553141)를 정제하였다. 전체 마우스 HSC 염색 패널과 마우스 BM 면역염색 패널의 마스터 믹스를 준비하였다. 혼합물을 4℃, 1600 RPM에서, 5분 동안 펠렛으로 회전시켰다. 추가로 세척하지 않고 Fc를 제거하고, 100 uL의 염색 용액 마스터 믹스를 각각의 샘플에 첨가하고, 4℃의 암실에서 90분 동안 인큐베이션시켰다. 100 uL의 FACS 완충액을 첨가한 다음, 플로어 탑 원심분리기에서 4℃, 1600 RPM에서, 5분 동안 회전을 감소시켰다. 200 uL의 FACS 완충액으로 2회 더 세척을 수행하였다. 웰당 250 uL의 FACS 완충액 + 5 uL의 7AAD에서 재현탁을 수행하였다.
결과
인간 SIRPα를 발현하는 마우스에게 -6일차, -4일차, 및 -2일차에 400 ug의 항-SIRPα 항체(인간화 1H9)를 주사하거나, 마우스에게 500 ug 항-c-kit(인간화 SR1)을 -6일차에 주사하였다. 이 개념 증명 실험은 수용체의 포화를 허용하는 용량에서 HSPC를 고갈시키기 위해 항-c-kit와 조합하여 항-SIRPα를 시험하도록 설계되었다. 제0일에 골수를 수거하고, 계통 음성, Sca-1 양성, c-kit 양성 세포인 HSPC 세포에 대해 유세포 분석에 의해 분석하였다(또한 LKS 세포로도 지칭될 수 있음). 도 9는 항-c-kit와 항-SIRPα의 조합이 골수로부터 HSPC의 고갈에 매우 효과가 있음을 나타낸다.

SEQUENCE LISTING <110> FORTY SEVEN, INC. GIBBS, CRAIG VOLKMER, JENS-PETER WEISSMAN, IRVING L. MARJON, KRISTOPHER <120> REGIMES FOR CO-ADMINISTRATION OF IMMUNOTHERAPEUTIC AGENTS AGAINST C-KIT AND CD47 <130> 063673-547773 <150> US 62/852,901 <151> 2019-05-24 <160> 58 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 1 Ser Tyr Asn Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 2 Val Ile Tyr Ser Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 3 Glu Arg Asp Thr Arg Phe Gly Asn 1 5 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 4 Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ile Tyr Gly Asn Ser Phe Met His 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 5 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthesized <400> 6 Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 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Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr His Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-H1 <400> 23 Ser Tyr Trp Ile Thr 1 5 <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-H2 <400> 24 Asp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn His Ile Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-H3 <400> 25 Gly Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-L1 <400> 26 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-L2 <400> 27 Thr Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 1H9 CDR-L3 <400> 28 Gln His Gln Tyr Gly Pro Pro Phe Thr 1 5 <210> 29 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> 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Claims (47)

1. 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC: hematopoietic stem and progenitor cell)의 절제(ablating)를 필요로 하는 환자에서 HSPC를 절제하는 방법으로서, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제를 0.15 내지 2 mg/㎏ 투여하고 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제를 유효 처방(effective regime)으로 투여하는 것을 포함하고, HSPC를 환자에서 절제하는, 방법.
2. 제1항에 있어서, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 1 mg/㎏이 단일 용량으로 투여되는, 방법.
3. 제1항에 있어서, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제가, 0.15 내지 1 mg/㎏의 단일 용량과 실질적으로 동일한 곡선 하 면적을 전달하는 최대 7일의 기간에 걸친 다회 용량으로 투여되는, 방법.
4. 제1항에 있어서, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 1 mg/㎏이 2회 용량으로 3일 내지 7일 간격으로 투여되는, 방법.
5. 제1항에 있어서, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제가 투여되며, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 상기 유효 처방은 제1 용량과, 제1 용량보다 많은 제2 용량을 포함하는, 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 제1 용량은 1 mg/㎏이고, 상기 제2 용량은 10 내지 30 mg/㎏, 바람직하게는 15 내지 20 mg/㎏인, 방법.
7. 제5항 또는 제6항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량과 동시에 단일 용량으로 투여되는, 방법.
8. 제7항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량과, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량이 동시 주입에 의해서 투여되는, 방법.
9. 제7항 또는 제8항에 있어서, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량과, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량이, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제1 용량 후 3일 내지 15일 후에, 선택적으로는 7일 후에 투여되는, 방법.
10. 제1항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 10일 내지 30일의 기간에 걸친 적어도 3회 용량으로 투여되는, 방법.
11. 제10항에 있어서, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 각각의 용량이 투여되는 날과 동일한 날에, 선택적으로는 이전의 다른 투여량보다는 적은 추가 용량으로 투여되는, 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 HSPC를 도입하는 것을 더 포함하는, 방법.
13. 제7항 또는 제8항에 있어서, 환자에게, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량 및 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제2 용량이 투여된 후 5일 내지 15일 후에, HSPC가 도입되는, 방법.
14. 제13항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 단일 용량 및 CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제1 용량 및 제2 용량만이 HSPC 도입 전에 투여되는, 방법.
15. 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 제3 용량을 상기 제2 용량 후에 투여하는 것을 더 포함하고, 선택적으로는 상기 제2 용량과 상기 제3 용량은 면역요법제의 양과 동일한 양인, 방법.
16. 제1항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 다회 용량이 투여되고, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 다회 용량이 투여되며, HSPC는 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제나, 또는 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제 중 어느 것이든지 간에 나중의 것의 마지막 용량 후 5일 내지 15일 후에 환자에게 도입되는, 방법.
17. 제16항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 마지막 용량과, SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 마지막 용량이 같은 날에 투여되는, 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 CD47에 특이적으로 결합하는 항체인, 방법.
19. 제18항에 있어서, CD47에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 인간화 5F9인, 방법.
20. 제19항에 있어서, 상기 항체는 마그롤리맙(magrolimab)인, 방법.
21. 제1항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제가 유효 처방으로 투여되는, 방법.
22. 제21항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 항체인, 방법.
23. 제22항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 29를 포함하는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 30을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
24. 제22항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체는 FSI-189, ES-004, BI765063, ADU1805 및 CC-95251 중 어느 하나인, 방법.
25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 10 내지 30 mg/㎏의 용량으로 투여되는, 방법.
26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 단일 용량으로 투여되는, 방법.
27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 항체가 다회 용량으로 투여되는, 방법.
28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제는 항체인, 방법.
29. 제28항에 있어서, 상기 항체는 인간 IgG1 동종형의 SR1의 인간화 형태인, 방법.
30. 제29항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호 7 내지 9 중 어느 하나를 포함하는 서열을 갖는 중쇄 가변 영역과, 서열 번호 10을 포함하는 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
31. 제30항에 있어서, 중쇄 가변 영역은 서열 번호 7을 포함하는 서열을 갖는, 방법.
32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 면역요법제의 투여는 c-kit 양성 HSPC를 투여 전 수준의 25% 내지 95%만큼 절제하는, 방법.
33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 면역요법제의 투여는 c-kit 양성 HSPC를 투여 전 수준의 25% 내지 75%만큼 절제하는, 방법.
34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 HSPC의 절제에 의해 치료되는 혈액암을 갖는, 방법.
35. 제34항에 있어서, 환자에게 혈액암을 치료하는 데 효력이 있는 작용제도 또한 투여하는, 방법.
36. 제34항에 있어서, 환자에게 HSPC 절제 전에 또는 동안에 상기 작용제를 투여하는, 방법.
37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작용제는 암 항원에 대한 화학요법제, 항혈관신생제, 항섬유화제, 또는 단일클론 항체인, 방법.
38. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈액암은 림프종, 백혈병 또는 골수종인, 방법.
39. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 고형 종양을 갖고 있고, 이 환자에게 고형 종양을 치료하는 데 효력이 있는 작용제가 투여되며, 이 작용제는 환자에서 HSPC를 절제하기 전에 환자의 HSPC를 손상시키는, 방법.
40. 제39항에 있어서, 상기 작용제는 화학요법제인, 방법.
41. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, HSPC 절제 후 환자에게 CAR-T 세포를 투여하는, 방법.
42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, HSPC 성장 또는 세포 요법을 촉진하기 위해, HSPC 절제 후 flt3 효능제 또는 CISH 저해제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, NK 세포를 절제하기 위해, MCL1 저해제를 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 및 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제와 병용 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 인간인, 방법.
45. 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC)를 절제하기 위한 약제를 제조하는 데 있어서의 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 용도로서, 상기 면역요법제는, CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 유효 처방과 조합하여, 0.15 내지 2 mg/㎏의 용량으로 투여하기 위한 것인, 용도.
46. 조혈 모세포 및 전구 세포(HSPC)를 절제하기 위한 약제를 제조하는 데 있어서의 CD47 또는 SIRPα에 특이적으로 결합하는 면역요법제의 용도로서, 이 면역요법제를 c-kit에 특이적으로 결합하는 면역요법제 0.15 내지 2 mg/㎏의 용량과 조합하여 사용하는, 용도.
47. 제2항 내지 제44항 중 어느 한 항의 방법에 따른 제45항 또는 제46항의 용도.

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