JP2023547380A - 新規の抗ｌｉｌｒｂ２抗体および誘導体生成物 - Google Patents

Abstract

本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片、抗ＬＩＬＲＢ２キメラ抗原受容体タンパク質、これをコードする単離ポリヌクレオチド、これを含む医薬組成物、およびこれらの使用を提供する。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
[0001]本出願は、それらの開示が、参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年１０月２１日に出願された、米国仮特許出願第６３／０９４，３５４号、および２０２１年１１月５日に出願された、米国仮特許出願第６３／１１０，３１７号に対する優先権を主張する。
配列表
[0002]「０６６５６４－８０１４ＷＯ０１＿ＳＴ２５」と名付けられ、１５４ＫＢ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｗｉｎｄｏｗｓにより測定された）であり、２０２１年１０月２０日に作成されたファイルに含有された配列表は、電子提出により、本明細書と共に出願され、参照により本明細書に組み込まれる。
背景
[0003]Ｉ．分野
[0004]本開示は、一般に、医学、腫瘍学、および免疫学の分野に関する。より詳細には、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体に関する。

[0005]ＩＩ．関連技術についての記載
[0006]骨髄由来抑制細胞および腫瘍関連マクロファージは、抗がん免疫応答を、全身および腫瘍微小環境のそれぞれにおいて阻害し、これにより、免疫チェックポイント遮断剤の有効性を限定する。他方、骨髄細胞の可塑性は、治療介入を可能としうる。免疫グロブリン様転写物４（ＩＬＴ４またはＩＬＴ－４）、白血球免疫グロブリン様受容体２（ＬＩＲ２またはＬＩＲ－２）、およびＣＤ８５ｄまたはＣＤ８５Ｄとしてもまた公知である、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）は、主に、骨髄細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、および好中球）により発現され、がんと関連する骨髄細胞の寛容原性活性を媒介する、鍵となる免疫チェックポイントとして出現した、Ｉ型膜タンパク質である。ＬＩＬＲＢ２は、細胞質免疫受容体阻害チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含有し、免疫細胞活性化の負の調節に関与する。ＬＩＬＲＢ２は、がんにおいて役割を果たしうる、いくつかのリガンド（古典的ＭＨＣ－Ｉおよび非古典的ＭＨＣ－Ｉ、ＡＮＧＰＴＬ２／５、ＳＥＭＡ４Ａ、補体分解産物［ＣＳＰ］、ならびにＣＤ１ｃ／ｄ）を有し、これらの大半は、固形腫瘍微小環境において、免疫抑制に寄与することが公知である。ＬＩＬＲＢ２の、そのリガンドへの結合は、免疫応答の刺激に対抗する、阻害性シグナルを結果としてもたらす。生理学的に、その活性は、免疫応答をフォーカシングし、自己反応性を制限する一助となるように、炎症性応答および免疫細胞傷害作用を制御すると考えられる。したがって、ＬＩＬＲＢ２は、がん、慢性ウイルス感染、および自己免疫疾患を含む、多様な疾患および状態の処置において、免疫応答をモジュレートするのに、有望な標的である。新規の抗ＬＩＬＲＢ２抗体が、著しく必要とされている。

[0007]本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片、これらのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列、抗ＬＩＬＲＢ２キメラ抗原受容体、ならびにこれらの使用を提供する。

[0008]一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２に結合されると、ＬＩＬＲＢ２の活性化をモジュレートする。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２に結合されると、ＬＩＬＲＢ２の活性化を抑制する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２に結合されると、ＭＨＣおよび他のリガンド（例えば、ＡＮＧＰＴＬ、ＳＥＭＡ４Ａなど）の、ＬＩＬＲＢ２への結合を特異的に遮断する。

[0009]一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片は、図１に示される、クローン対合された重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含むか；または（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。

[00010]ある特定の実施形態では、本明細書で記載される抗体は、組換え完全ヒト抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される抗体は、ヒトＩｇＧ１型、ヒトＩｇＧ２型、ヒトＩｇＧ３型、またはヒトＩｇＧ４型の抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書で記載される抗原結合性断片は、組換えｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｖａｒｉａｂｌｅ）抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、またはＦｖ断片である。

[00011]ある特定の実施形態では、本明細書で記載される、単離組換え完全ヒト抗体は、１つまたは複数のコンジュゲート部分へと連結される。一部の実施形態では、コンジュゲート部分は、抗腫瘍薬、ＳＴＩＮＧ（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｇｅｎｅｓ）アゴニスト、サイトカイン、クリアランス修飾剤、毒素（例えば、化学療法剤）、免疫細胞刺激因子（例えば、ＴＬＲアゴニスト）、検出可能な標識（例えば、放射性アイソトープ、ランタニド、発光標識、蛍光標識、または酵素－基質標識）、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または精製部分を含む。

[00012]別の態様では、本明細書で提供される、単離組換え完全ヒト抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離核酸が提供される。
[00013]別の態様では、本明細書で提供される単離核酸を含むベクターが提供される。

[00014]別の態様では、本明細書で提供されるベクターを含む宿主細胞が提供される。宿主細胞は、哺乳動物細胞でありうる。宿主細胞は、ＣＨＯ細胞でありうる。
[00015]別の態様では、抗体を作製する工程が提供される。方法は、本明細書で提供される宿主細胞を、抗体の発現に適する条件下で培養するステップと、抗体を回収するステップとを含みうる。

[00016]別の態様では、本明細書で提供される抗原結合性断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）タンパク質が提供される。
[00017]別の態様では、本明細書で提供されるＣＡＲタンパク質をコードする単離核酸が提供される。

[00018]別の態様では、本明細書で提供される単離核酸を含む操作細胞が提供される。ある特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または骨髄細胞である。
[00019]別の態様では、対象におけるがんまたは慢性ウイルス感染の影響を処置または改善する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書で規定された抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む方法が提供される。方法は、対象における腫瘍量を低減または根絶する場合もあり、腫瘍細胞の数を低減する場合もあり、腫瘍サイズを低減する場合もあり、腫瘍の浸潤を低減する場合もあり、腫瘍の転移を低減する場合もあり、腫瘍を根絶する場合もある。がんは、固形腫瘍の場合もあり、血液悪性腫瘍の場合もある。

[00020]ある特定の実施形態では、がんは、副腎がん、胆管癌、骨がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、絨毛癌、結腸がん、結腸直腸がん、食道がん、胃食道接合部腺癌（ＧＥＡ）、眼がん、胃がん、神経膠芽腫、頭頸部がん、腎がん、肝がん、肺がん、中皮腫、黒色腫、メルケル細胞がん、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、松果体腫、前立腺がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、肉腫、皮膚がん、精巣がん、胸腺癌、甲状腺がん、子宮がん、および膣がんを含む固形腫瘍である。

[00021]一部の実施形態では、がんは、転移性がん、再発性がん、または薬物耐性がんである。
[00022]一部の実施形態では、前記がんは、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞性白血病、芽球形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、前駆Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｐｒｅ－Ｂ ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、重鎖病、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物、および真性多血症を含む血液悪性腫瘍である。

[00023]本明細書の処置法に該当するがんの例は、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病を含むがこれらに限定されない。より詳細には、このようながんの非限定例は、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺がん（扁平上皮非小細胞肺がんを含む）、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎がん、腎細胞癌、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、脳がん、子宮内膜がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、黒色腫、および多様な種類の頭頸部がん（頭頸部扁平上皮癌を含む）を含む。

[00024]抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内投与、動脈内投与、腫瘍内投与、筋内投与、または皮下投与されうる。
[00025]ある特定の実施形態では、方法は、対象に、化学療法剤、腫瘍増殖阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法において使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス薬剤、抗チューブリン薬剤、微小管阻害剤、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤、血小板由来増殖因子阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体であるイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、またはトレメリムマブ）、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）またはニボルマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）またはペムブロリズマブ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）またはアテゾリズマブ、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）またはアベルマブ、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）またはデュルバルマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）またはセミプリマブｒｗｌｃ、ＴＹＶＹＴ（登録商標）またはシンチリマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ペンプリマブ（ＡＫ１０５）、カムレリズマブ、トリパリマブ、ジムベレリマブ（ＧＬＳ－０１０）、レチファンリマブ、スゲマリマブ、またはＣＳ１００３）、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する二重標的化抗体（例えば、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体またはＡＫ１０４）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、ＬＡＧ－３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、サイトカイン、以下の標的であるＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＦＧＦＲ２ｂ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＩＤＨ１阻害剤、イボシデニブ、Ｔｉｂｓｏｖｏ（登録商標）、ＩＤＨ２阻害剤、エナシデニブ、Ｉｄｈｉｆａ（登録商標）、ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（ＳＭＯ）阻害剤、グラスデギブ、アルギナーゼ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、エパカドスタット、ＢＣＬ－２阻害剤、ベネトクラックス、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標）、白金錯体誘導体、オキサリプラチン、キナーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、イブルチニブ、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、アカラブルチニブ、ＣＡＬＱＵＥＮＣＥ（登録商標）、ザヌブルチニブ、ＩＣＯＳ抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＯＸ４０抗体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＮＦＲ２抗体、ＣＤ４０抗体、４－１ＢＢ抗体、ＣＤ４７抗体、ＳＩＲＰ１α抗体またはＳＩＲＰ１ａ融合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ抗体、別のＬＩＬＲファミリーメンバーに対する抗体、Ｅ－セレクチンのアンタゴニスト、腫瘍抗原に結合する抗体、Ｔ細胞表面のマーカーに結合する抗体、骨髄細胞またはＮＫ細胞の表面マーカーに結合する抗体、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生剤、植物由来アルカロイド、ホルモン治療薬、ホルモンアンタゴニスト、アロマターゼ阻害剤、およびＰ糖タンパク質阻害剤、操作Ｔ細胞、操作ＮＫ細胞、または操作マクロファージ、二特異性抗体からなる群から選択される、１つまたは複数の薬物を投与するステップをさらに含みうる。

[00026]単離完全ヒト組換え抗体またはその抗原結合性断片は、これへと連結された抗腫瘍薬を含みうる。抗腫瘍薬は、光解離性リンカーを介して、前記抗体へと連結されうる。抗腫瘍薬は、酸感受性酵素切断型リンカーまたはグルタチオン感受性酵素切断型リンカーを介して、前記抗体へと連結されうる。抗腫瘍薬は、非切断型リンカーを介して、前記抗体へと連結されうる。抗腫瘍薬は、毒素、放射性同位元素、サイトカイン、ＳＴＩＮＧアゴニスト、または酵素でありうる。

[00027]別の実施形態では、試料または対象においてがん細胞またはがん幹細胞を検出する方法であって、（ａ）対象または対象に由来する試料を、本明細書で規定された抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと；（ｂ）前記対象または試料中における前記抗体のがん細胞またはがん幹細胞への結合を検出するステップとを含む方法が提供される。試料は、体液もしくは生検、または血液、骨髄、喀痰、涙液、唾液、粘液、血清、腹水、尿、もしくは糞便でありうる。検出は、免疫組織化学、フローサイトメトリー、イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなどを含む）、またはウェスタンブロットを含みうる。方法は、第２の時点において、ステップ（ａ）および（ｂ）を実施し、第１の時点と比較した検出レベルの変化を決定するステップをさらに含みうる。単離組換え抗体またはその抗原結合性断片は、ペプチドタグ、酵素、磁性粒子、発色団、蛍光分子、化学発光分子、または色素などの標識をさらに含みうる。単離組換え抗体またはその抗原結合性断片は、リポソームまたはナノ粒子へとコンジュゲートされうる。

[00028]なおさらなる態様では、対象における慢性ウイルス感染の影響を処置または改善する方法であって、対象に、治療有効量の本明細書で規定された抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む方法が提供される。抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内投与、動脈内投与、または皮下投与されうる。一部の実施形態では、慢性ウイルス感染は、Ｉ型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－Ｉ）、ＩＩ型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－ＩＩ）、３型ヘルペスウイルス、４型ヘルペスウイルス、５型ヘルペスウイルス、６型ヘルペスウイルス、パルボウイルスＢ１９、Ａ型コックサッキーウイルスおよびＢ型コックサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）から選択されるウイルスにより引き起こされる。

[00029]以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示のある特定の態様をさらに裏付けるように組み入れられる。本発明は、本明細書で提示される、これらの図面のうちの１つまたは複数の、具体的実施形態についての詳細な記載と組み合わせた参照により、よりよく理解されうる。

[00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00030]図１は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示された抗体である、Ｂ２－１９に由来する、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 [00031]図２は、Ｂ２－１９抗体変異体である、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６が、ＬＩＬＲＢ２に対して、Ｂ２－１９親抗体と同じ結合親和性を有することを示す。Ｂ２－１９および選り抜きのＢ２－１９由来変異体の、組換えＬＩＬＲＢ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質（Ｃ末端において、６×Ｈｉｓタグを伴う）に対する結合アフィニティーは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定した。測定された結合アフィニティーは、全て、ほぼ同様であり、実験誤差の範囲内にあり、Ｋ_Ｄは、約２．０ｎＭであった。 [00032]図３は、Ｂ２－１９抗体およびその変異体が、ＨＥＫ２９３細胞上で安定的に発現されたＬＩＬＲＢ２に対する、同等な結合能を有することを示す。ＬＩＬＲＢ２抗体の、ＬＩＬＲＢ２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞に対する結合能（ＥＣ_５０）を、フローサイトメトリーにより決定した。 [00033]図４は、Ｂ２－１９抗体およびその変異体が、健常ドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離された、初代ＣＤ１４^＋ＣＤ１６^－単球上で発現された内因性ＬＩＬＲＢ２に対する同等な結合能（ＥＣ_５０）を有することを示す。 [00034]図５は、Ｂ２－１９抗体およびその変異体が、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合することを示す。抗体の、ＬＩＬＲＢ２に対する結合特異性は、ＥＬＩＳＡにより解析した。 [00035]図６は、Ｂ２－１９抗体およびその変異体が、ヒト全血中の骨髄細胞に特異的に結合することを示す。ＬＩＬＲＢ２抗体の、健常ドナーから採取された全血に由来する白血球に対する反応性は、フローサイトメトリーにより特徴づけた。示されたデータは、試料の補正幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）、すなわち、ＬＩＬＲＢ２抗体を除外された試料の幾何ＭＦＩ（蛍光マイナスワン［ＦＭＯ］対照）を控除された、抗ＬＩＬＲＢ２染色試料の幾何ＭＦＩである。一例のドナーによる、代表的データを示す（Ｎ＝３例のドナー）。 [00036]図７は、Ｂ２－１９抗体およびその変異体が、ＬＩＬＲＢ２の、ＨＬＡ－Ｇへの結合を遮断する、同等な能力を有することを示す。抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＨＬＡ－Ｇの、ＬＩＬＲＢ２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞への結合を、フローサイトメトリーにより決定される効力（ＩＣ_５０）により、競合的に阻害した。 [00037]図８Ａおよび８Ｂは、Ｂ２－１９抗体およびＢ２－１９－１６抗体が、最適未満の濃度で、健常ドナーから単離され、抗ＣＤ３アゴニスト性モノクローナル抗体により刺激された、ＰＢＭＣ試料に対して、同等な炎症促進効果を有したことを示す。各直線は、個々のドナーからの結果の対応づけ（ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体対抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体）を表し、データは、６つの独立の実験からプールする。抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体が、炎症促進効果の増強と符合する、サイトカイン産生／分泌レベルの検出可能な変化をもたらすことを示すドナーの割合を、括弧内に示し、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊ｐ＝０．０００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１（対応のあるｔ検定）とする。図８Ａは、１０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体、および１５μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照またはＢ２－１９－１６で刺激されたＰＢＭＣのサイトカインレベルを示す。図８Ｂは、１０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体、および４μｇ／ｍＬもしくは１５μｇ／ｍＬ（実験による）のアイソタイプ対照またはＢ２－１９で刺激されたＰＢＭＣのサイトカインレベルを示す。 図８Ａおよび８Ｂは、Ｂ２－１９抗体およびＢ２－１９－１６抗体が、最適未満の濃度で、健常ドナーから単離され、抗ＣＤ３アゴニスト性モノクローナル抗体により刺激された、ＰＢＭＣ試料に対して、同等な炎症促進効果を有したことを示す。各直線は、個々のドナーからの結果の対応づけ（ヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体対抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体）を表し、データは、６つの独立の実験からプールする。抗ＬＩＬＲＢ２遮断抗体が、炎症促進効果の増強と符合する、サイトカイン産生／分泌レベルの検出可能な変化をもたらすことを示すドナーの割合を、括弧内に示し、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．００１、^＊＊＊ｐ＝０．０００１、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１（対応のあるｔ検定）とする。図８Ａは、１０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体、および１５μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照またはＢ２－１９－１６で刺激されたＰＢＭＣのサイトカインレベルを示す。図８Ｂは、１０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体、および４μｇ／ｍＬもしくは１５μｇ／ｍＬ（実験による）のアイソタイプ対照またはＢ２－１９で刺激されたＰＢＭＣのサイトカインレベルを示す。 [00038]図９は、Ｂ２－１９由来変異体が、改善バキュロウイルス粒子（ＢＶＰ）スコアにより証拠立てられる通り、Ｂ２－１９親抗体より低度の多特異性を裏付けることを示す。グラフは、０．５％のＢＶＰ（原液に対するｖ／ｖ；力価＝５．７１×１０^１２ｐｆｕ／ｍＬ）でコーティングされ、抗ヒトＩｇＧ二次抗体の、１／２０，０００希釈液を使用するプレートに結合した抗体についてのＥＬＩＳＡによるＯＤ_{４５０ｎｍ}を示す。文献は、ＢＶＰスコアが、バックグラウンドを５倍上回る抗体が、ヒトおよび非ヒト霊長動物において、薬物動態不良となる傾向があることを示した（Ｈｏｔｚｅｌら、２０１２、ｍＡｂｓ、７５３～７６０）。したがって、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６は、親抗体であるＢ２－１９より、治療剤の開発に適する。 [00039]図１０は、Ｂ２－１９の変異体が、熱ストレス下に置かれた後で結合活性を、感知可能な程度に喪失しないことを示す。データは、ＥＬＩＳＡにより測定される、ＬＩＬＲＢ２への結合についての用量反応曲線および効力の計算値（ＥＣ_５０）である。 [00040]図１１は、Ｂ２－１９の変異体が、凍結融解（Ｆ／Ｔ）時に、結合活性を喪失しないことを示す。データは、ＥＬＩＳＡにより測定される、抗体の、ＬＩＬＲＢ２への結合についての用量反応曲線およびＥＣ_５０の導出値である。 [00041]図１２は、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウスにおける、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６の薬物動態（ＰＫ）を示す。Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６のいずれも、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウスにおける、ヒトＩｇＧに典型的な範囲内の、薬物動態パラメータを呈する。 [00042]図１３Ａおよび１３Ｂは、Ｂ２－１９－１６が、固形腫瘍患者に由来する、固形腫瘍微小環境に浸潤する、全ての骨髄細胞の他、末梢血骨髄細胞に結合することを示す、フローサイトメトリーデータである。ＣＤ１１ｂは、汎骨髄細胞マーカーとして使用され、ＣＤ４５は、汎腫瘍浸潤性白血球マーカーとして使用される。図１３Ａは、３例の異なる固形腫瘍患者の腫瘍組織試料に由来する、フローサイトメトリーデータを示す。図１３Ｂは、固形腫瘍患者３の末梢血に由来するフローサイトメトリーデータを示す。黒で塗りつぶされたヒストグラム：Ｂ２－１９－１６と共にインキュベートされた試料；白で塗りつぶされたヒストグラム：ＩｇＧ４アイソタイプ対照と共にインキュベートされた試料である。 [00043]図１４は、Ｂ２－１９－１６抗体が、寛容原性マーカーである、ＣＤ２０９の発現レベルの低下により示される、単球由来樹状細胞の成熟／活性化に対する、リポ多糖（ＬＰＳ）の効果をさらに強化することを示す。各直線は、細胞表面上のＣＤ２０９レベルを、フローサイトメトリーにより解析した、異なる健常ドナー試料からの結果を表す。炎症促進効果の増強と符合する、ＣＤ２０９発現レベルの変化を示すドナー試料の割合を、括弧内に示し、^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１（対応のあるｔ検定）とする。 [00044]図１５は、単球由来樹状細胞が、ＬＰＳ刺激により成熟／活性化された場合に、Ｂ２－１９－１６抗体が、ＴＮＦ－αの産生／分泌を増強することを示す。各直線は、異なる健常ドナーからの結果を表す。炎症促進効果の増強と符合する、ＴＮＦ－α濃度レベルの変化を示すドナー試料の割合を、括弧内に示し、^＊ｐ＜０．０５（対応のあるｔ検定）とする。 [00045]図１６Ａおよび１６Ｂは、Ｂ２－１９－１６抗体が、初代単球の、活性化（ＣＤ８６^＋）樹状細胞（ＤＣ）への分化を、促進することを示す。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、単球の、ＤＣへの分化に対する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の効果は、フローサイトメトリーにより解析した。図１６Ａは、２例の健常ドナー試料に由来するフローサイトメトリーデータを示し、各ヒストグラムに表示の値は、各実験条件下の、６日間にわたる培養の終点において得られた、ＣＤ８６^＋ＤＣのパーセントを表す。図１６Ｂは、解析された７例全てのドナーからの結果の組合せを示し、^＊＊ｐ＝０．００２（対応のあるｔ検定）とする。 [00046]図１７は、Ｂ２－１９－１６が、単球由来の未成熟ＤＣ内における、成熟マーカー（ＣＤ８３）および活性化マーカー（ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ）の発現レベルを増強する一方で、寛容原性マーカーである、ＣＤ２０９の発現レベルを低下させることを示すフローサイトメトリーデータである。別の免疫阻害性受容体である、ＬＩＬＲＢ４の発現レベルは、不変を維持する。各直線は、異なる健常ドナー試料からの結果を表し、^＊ｐ＜０．０５、^＊＊ｐ＜０．００８、ｎ．ｓ．＝非有意（対応のあるｔ検定）とする。 [00047]図１８は、Ｂ２－１９－１６が、抗ＰＤ－１遮断抗体により刺激された、同種ＣＤ４^＋Ｔ細胞－マクロファージ共培養物中における、ＩＦＮ－γの産生／分泌を、増強することを示す。各直線は、１つの同種ＣＤ４^＋Ｔ細胞－マクロファージ共培養物からの結果を表し、ｐ＝０．００３２（測定の反復、一元ＡＮＯＶＡ）とする。 [00048]図１９は、Ｂ２－１９－１６が、健常ドナーに由来する、ＬＰＳ刺激ＰＢＭＣ試料中の、複数の炎症促進性サイトカインの産生／分泌を増強する一方で、抗炎症性サイトカインである、ＩＬ－１０の産生／分泌を低下させることを示す。各直線は、個々のドナー試料からの結果の対応づけを表し、データは、４つの独立の実験からプールする。炎症促進効果の増強と符合する、サイトカイン濃度レベルの変化を示すドナー試料の割合を、括弧内に示し、^＊＊ｐ＜０．００１（対応のあるｔ検定）とする。 [00049]図２０は、Ｂ２－１９－１６抗体が、ＬＰＳ刺激ＰＢＭＣによる、ＴＮＦ－αの産生／分泌レベルを、用量依存的に増強することを示す。結果は、５例のドナーＰＢＭＣ試料を表す。 [00050]図２１は、Ｂ２－１９－１６抗体が、全ての被験ドナー試料中で、ＳＴＩＮＧのアゴニストである、２’３’－ｃＧＡＭＰにより刺激された、単球由来マクロファージによるＴＮＦ－αの産生／分泌を、増強することを示す。 [00051]図２２Ａおよび２２Ｂは、Ｂ２－１９－１６抗体が、「腫瘍コンディショニング」により引き起こされる、ＰＢＭＣ由来骨髄細胞（ＣＤ３３^＋）の、寛容原性表現型を、旧復することを示す。各直線は、一例の骨髄細胞健常ドナーからの結果に対応する。図２２Ａは、骨髄細胞の免疫表現型解析時における、ＳＫ－ＭＥＬ－５黒色腫由来細胞系との共培養の結果を示す。図２２Ｂは、骨髄細胞の免疫表現型解析時における、Ａ５４９肺腺癌由来細胞系との共培養の結果を示す。 [00052]図２３は、Ｂ２－１９－１６が、２例の健常ドナーに由来する、単球由来マクロファージ内における、ＬＩＬＲＢ２の内部化を誘導しないことを示す。抗ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）抗体を、受容体：抗体複合体の内部化についての陽性対照として使用した。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ Ｌｉｖｅ－Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍを使用して、内部化について、最長で１２時間にわたりモニタリングした。 [00053]図２４は、Ｂ２－１９－１６が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ＬＩＬＲＢ２^＋細胞（ＰＢＭＣに由来する単球）のＦｃ媒介性枯渇を誘発しないことを示す。Ｂ２－１９－１６が、Ｆｃ媒介性単球枯渇を誘発する能力について査定するために、ＰＢＭＣを、最大で、４０μｇ／ｍＬのＢ２－１９－１６（またはアイソタイプ対照）と共に、２０時間にわたりインキュベートしたが、単球生存率の低下は観察されなかった。これに対し、Ｂ細胞を枯渇させることが公知のＩｇＧ１抗体である、リツキシマブは、同じドナーに由来するＰＢＭＣ試料との、同時的インキュベーションにおいて、Ｂ細胞生存率を、強力に低下させた。

[00054]本開示についての以下の記載は、本開示についての、多様な実施形態を例示することだけが意図される。このように、論じられる、具体的改変は、本開示の範囲に対する限定として見なされないものとする。当業者には、本開示の範囲から逸脱しない限りにおいて、多様な同等物、変化、および改変がなされうることが明らかであり、このような同等な実施形態も、本明細書に含まれることが理解される。刊行物、特許、および特許出願を含む、本明細書で引用される、全ての参考文献は、参照によりそれらの全体において、本明細書に組み込まれる。

[00055]Ｉ．定義
[00056]前出の一般的記載および以下の「発明を実施するための形態」のいずれも、例示的かつ探索的なものであるに過ぎず、特許請求される本発明に対して制限的なものではないことが理解されるものとする。本出願では、そうでないことが具体的に言明されない限りにおいて、単数形の使用は、複数形を含む。本開示において、「または」という用語は、代替物だけ、または代替物が、互いに除外的であることを指すことが明示的に指し示されない限りにおいて、「および／または」を意味するように使用される。本明細書で使用される、「別の」は、少なくとも第２のまたはこれより多数を意味しうる。さらに、「～を含むこと」という用語の他、「～を含む」および「含まれた」など、他の形態の使用は、限定的なものではない。また、「要素」または「構成要素」などの用語も、そうでないことが具体的に言明されない限りにおいて、１つを超えるサブユニットを含む、１つの単位および要素または構成要素を含む、要素または構成要素の両方を包含する。また、「部分」という用語の使用も、一部分または全部分を含みうる。

[00057]文脈により、そうでないことが明確に指示されない限りにおいて、本明細書で使用される、「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、複数の指示対象を含む。

[00058]量、時間的持続など、測定可能な値を指す場合に、本明細書で使用される、「約」という用語は、指定された値から、±１０％以下の変動を包含することが意図される。そうでないことが指し示されない限りにおいて、本明細書および特許請求の範囲において使用される、成分の数量、分子量、反応条件などの特性を表す、全ての数は、全ての場合において、「約」という用語により修飾されていると理解されるものとする。したがって、逆の指示がない限り、以下の本明細書および付属の特許請求の範囲に示された数値パラメータは、開示された対象物により得られることが求められた、所望の特性に応じて変動しうる近似値である。少なくとも、同等物についての原則の適用を、特許請求の範囲に限定しようとする試みとしてではなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効数字の桁数に照らして、通常の丸めの技法を適用することにより理解されるものとする。広範囲にわたる本発明を明示する、数値範囲およびパラメータは、近似値であるが、具体例において示された数値は、可能な限り正確に報告されている。しかし、任意の数値は、固有に、それらのそれぞれの試験測定値において見出された標準偏差から必然的に生じる、ある特定の誤差を含有する。

[00059]本明細書で使用される、「抗体」という用語は、特異的抗原に結合する、任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、多特異性抗体、または二特異性抗体を含む。天然の無傷抗体は、２つの重（Ｈ）鎖と、２つの軽（Ｌ）鎖とを含む。哺乳動物の重鎖は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと分類され、各重鎖は、可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）と、第１の定常ドメイン、第２の定常ドメイン、および第３の定常ドメイン（それぞれ、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）を含む定常領域とからなり；哺乳動物の軽鎖は、λまたはκと分類されるが、各軽鎖は、可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）と、定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）とからなる。典型的なＩｇＧ抗体は、「Ｙ」字型を有し、Ｙ字型のステムは、ジスルフィド結合を介して一体に結合された、２つの重鎖の、第２の定常ドメインと、第３の定常ドメインとから典型的になる。Ｙ字型の各アームは、単一の軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメインに結合された、単一の重鎖の可変ドメインおよび第１の定常ドメインを含む。軽鎖および重鎖の可変ドメインは、抗原への結合の一因となる。両方の鎖内の可変ドメインは、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる、３つの、高度に可変性のループを含有する。本明細書で開示される抗体および抗原結合性断片のための、ＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの慣例（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３（４）、９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（１９８５）、１８６（３）：６５１～６３；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．およびＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９８７）、１９６：９０１；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８９）、３４２（６２５２）：８７７～８３；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００３）、２７：５５～７７；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００５）、１（３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ」（第２版）、２６章、４８１～５１４、（２０１５））により規定または同定されうる。３つのＣＤＲは、ＣＤＲより高度に保存的であり、超可変ループを支持する土台を形成する、フレームワーク領域（ＦＲ）として公知である、フランキングの連なりの間に差し挟まれる。重鎖および軽鎖の定常ドメインは、抗原への結合には関与せず、多様なエフェクター機能を呈する。抗体は、それらの重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づき、クラスへと割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、それぞれ、アルファ重鎖、デルタ重鎖、イプシロン重鎖、ガンマ重鎖、およびミュー重鎖の存在により特徴づけられる、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭである。主要な抗体クラスのうちのいくつかは、ＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、またはＩｇＡ２（アルファ２重鎖）などのサブクラスへと分けられる。

[00060]「抗原」という用語は、獲得免疫応答を誘導することが可能な物質を指す。具体的に述べると、抗原は、抗体またはＴリンパ球の抗原受容体により特異的に結合される物質である。抗原は、通例、タンパク質および多糖であり、より低頻度で、また、脂質でもある。適切な抗原は、限定せずに述べると、細菌（例えば、コート、莢膜、細胞壁、鞭毛、線毛、および毒素）、ウイルス、および他の微生物の部分を含みうる。抗原はまた、腫瘍抗原、例えば、腫瘍内の突然変異によりもたらされる抗原も含む。本明細書で使用された、抗原はまた、免疫原およびハプテンも含む。

[00061]本明細書で使用される、「抗原結合性断片」という用語は、１つもしくは複数のＣＤＲ、または抗原に結合するが、無傷の天然抗体構造を含まない、他の任意の抗体断片を含む、抗体の部分から形成された抗体断片を指す。抗原結合性断片の例は、限定せずに述べると、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、二特異性抗体、多特異性抗体、ラクダ科動物化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、および二価ドメイン抗体を含む。抗原結合性断片は、親抗体が結合する、同じ抗原に結合することが可能である。

[00062]「Ｆａｂ断片」は、１つの軽鎖と、１つの重鎖のＣ_Ｈ１および可変ドメインとを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子と、ジスルフィド結合を形成することができない。

[00063]「Ｆａｂ’断片」は、１つの軽鎖と、Ｖ_ＨドメインおよびＣ_Ｈ１ドメインと、Ｃ_Ｈ２ドメインとの間の領域を含有し、また、Ｆ（ａｂ’）_２分子を形成するように、２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間で、鎖間ジスルフィド結合が形成されうるように、Ｃ_Ｈ１ドメインと、Ｃ_Ｈ２ドメインとの間の領域を含有する、１つの重鎖の一部とを含む。

[00064]「Ｆ（ａｂ’）_２断片」は、２つの軽鎖と、２つの重鎖の間で、鎖間ジスルフィド結合が形成されるように、Ｃ_Ｈ１ドメインと、Ｃ_Ｈ２ドメインとの間の定常領域の一部を含有する、２つの重鎖とを含有する。したがって、Ｆ（ａｂ’）_２断片は、２つの重鎖の間のジスルフィド結合により一体に保持された、２つのＦａｂ’断片から構成される。

[00065]抗体に関する「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合性部位を保有する、最小の抗体断片を指す。Ｆｖ断片は、単一の重鎖の可変ドメインに結合された、単一の軽鎖の可変ドメインからなる。

[00066]「単鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」とは、互いと、直接、またはペプチドリンカー配列を介して接続された、軽鎖可変ドメインと、重鎖可変ドメインとからなる操作抗体を指す（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９８８）、８５：５８７９）。

[00067]「Ｆｃ」領域は、抗体Ｃ_Ｈ２ドメインおよびＣ_Ｈ３ドメインを含む、２つの重鎖断片を含む。２つの重鎖断片は、２つまたはこれを超えるジスルフィド結合、およびＣ_Ｈ３ドメインの疎水性相互作用により、一体に保持される。抗体のＦｃ領域は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）など、多様なエフェクター機能の一因となるが、抗原への結合においては機能しない。

[00068]「単鎖Ｆｖ－Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」とは、抗体のＦｃ領域へと接続されたｓｃＦｖからなる、操作抗体を指す。
[00069]「ｄｓＦｖ」とは、単一の軽鎖の可変ドメインと、単一の重鎖の可変ドメインとの連結が、ジスルフィド結合である、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片を指す。一部の実施形態では、「（ｄｓＦｖ）_２」または「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖：ペプチドリンカー（例えば、長鎖の可撓性リンカー）により連結された、２つのＶ_Ｈドメインと、それぞれ、ジスルフィド架橋を介して結合された、２つのＶ_Ｌドメインを含む。一部の実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、各ジスルフィド対合重鎖および各ジスルフィド対合軽鎖が、異なる抗原特異性を有する、二特異性である。

[00070]「ラクダ科動物化単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、または「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶ_Ｈドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．およびＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．、１２月１０日、２３１（１～２）：２５～３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、６月、７４（４）：２７７～３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、元来、ラクダ科動物（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびラマ）に由来した。軽鎖を欠くが、ラクダ科動物化抗体は、真正の抗原結合性レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９９３）、３６３：４４６～８；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ（２００２）、５４：３９～４７；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００３）、１０９：９３～１０１）。重鎖抗体（ＶＨＨドメイン）の可変ドメインは、獲得免疫応答によりもたらされる、公知の最小の抗原結合性単位を表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．（２００７）、２１：３４９０～８）。

[00071]「ナノボディ」とは、重鎖抗体に由来するＶＨＨドメインと、２つの定常ドメインである、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインとからなる抗体断片を指す。
[00072]「ダイアボディ」または「ｄＡｂ」は、２つの抗原結合性部位を伴う、小型の抗体断片を含み、ここで該断片は同じポリペプチド鎖内で、Ｖ_Ｌドメインへと接続されたＶ_Ｈドメイン（Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）を含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．、７月１５日、９０（１４）：６４４４～８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。同じ鎖上の２つのドメインの間の対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインとの対合を余儀なくされ、これにより、２つの抗原結合性部位を創出する。抗原結合性部位は、同じ抗原（またはエピトープ）を標的化する場合もあり、異なる抗原（またはエピトープ）を標的化する場合もある。ある特定の実施形態では、「二特異性ｄｓダイアボディ」とは、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的化するダイアボディである。

[00073]ある特定の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」とは、２つのｓｃＦｖを連結することにより操作されうる、二価（ｄｉｖａｌｅｎｔ（または二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ））単鎖可変断片（ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ）である。二価ダイアボディまたは二価ｓｃＦｖ（ＢｓＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ）は、１つの部分のＶ_Ｈが、他の部分のＶ_Ｌと連係し、同じ抗原（またはエピトープ）を標的化する場合もあり、異なる抗原（またはエピトープ）を標的化する場合もある、２つの結合性部位を形成するように、別のＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ部分と二量体化されたＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ（ペプチドリンカーにより連結された）を含む。他の実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」とは、Ｖ_Ｈ１とＶ_Ｌ１とが連係し、Ｖ_Ｈ２とＶ_Ｌ２とが連係し、連係した各対が、異なる抗原特異性を有するように、Ｖ_Ｌ１－Ｖ_Ｈ２（これもまた、ペプチドリンカーにより連結された）と関連するＶ_Ｈ１－Ｖ_Ｌ２（ペプチドリンカーにより連結された）を含む、二特異性ダイアボディである。

[00074]「ドメイン抗体」とは、重鎖の可変ドメインまたは軽鎖の可変ドメインだけを含有する抗体断片を指す。ある特定の場合に、二価ドメイン抗体または多価ドメイン抗体を創出するように、２つまたはこれを超えるＶ_Ｈドメインが、ペプチドリンカーと共有結合的に接続される。二価ドメイン抗体の２つのＶ_Ｈドメインは、同じ抗原を標的化する場合もあり、異なる抗原を標的化する場合もある。

[00075]「二特異性」抗体とは、２つの異なるモノクローナル抗体に由来する断片を有し、２つの異なるエピトープに結合することが可能である人工抗体を指す。２つのエピトープは、同じ抗原上に存在する場合もあり、２つの異なる抗原上に存在する場合もある。

[00076]「結合親和性」とは、一般に、分子（例えば、抗体）の単一の結合性部位と、その結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総計の強度を指す。そうでないことが指し示されない限りにおいて、本明細書で使用される、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）の間の１：１の相互作用を反映する、内因性結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）により表される。親和性は、本明細書で記載される方法を含む、当技術分野で公知の一般的方法により測定されうる。低親和性抗体が、一般に、抗原に、緩徐に結合し、たやすく解離する傾向にあるのに対し、高親和性抗体は、一般に、抗原に、急速に結合し、長期にわたり、結合を維持する傾向がある。当技術分野では、結合親和性を測定する様々な方法が公知であり、これらのうちのいずれも、本発明の目的のために使用されうる。結合親和性を測定するための、具体的ないし例示的（ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｖｅおよびｅｘｅｍｐｌａｒｙ）実施形態については、以下に記載される。

[00077]特定のポリペプチド、または特定のポリペプチド上のエピトープ「に特異的に結合する」抗体、またはこれら「に特異的な」抗体とは、他の任意のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに実質的に結合せずに、特定のポリペプチド、または特定のポリペプチド上のエピトープに結合する抗体である。例えば、本発明のＬＩＬＲＢ２特異的抗体は、ＬＩＬＲＢ２に特異的である。一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体は、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍまたはこれ未満、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。本明細書で使用される解離定数である、Ｋ_Ｄとは、当技術分野で公知である、任意の常套的方法であって、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケール熱泳動法、ＨＰＬＣ－ＭＳ、ＢＬＩ法、およびフローサイトメトリー法を含むがこれらに限定されない方法を使用することにより決定されうる、解離速度の、会合速度に対する比（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）を指す。ある特定の実施形態では、Ｋ_Ｄ値は、フローサイトメトリーを使用することにより、適正に決定されうる。

[00078]本明細書で使用される、「がん」とは、悪性細胞の増殖もしくは新生物、異常な増殖、浸潤、または転移により特徴づけられる、任意の医学的状態を指し、固形腫瘍および白血病などの非固形がん（血液悪性腫瘍）の両方を含む。本明細書で使用される、「固形腫瘍」とは、新生物性細胞および／または悪性細胞の固形塊を指す。がんまたは腫瘍の例は、血液悪性腫瘍、口腔癌（例えば、口唇、舌、または喉頭）、消化器（例えば、食道、胃、小腸、結腸、大腸、または直腸）、腹膜、肝および胆道、膵、咽頭または肺（小細胞および非小細胞）などの呼吸器系、骨、結合組織、皮膚（例えば、黒色腫）、乳、生殖器（卵管、子宮、子宮頸、精巣、卵巣、または前立腺）、尿路（例えば、膀胱または腎）、脳、および甲状腺などの内分泌腺の癌を含む。ある特定の実施形態では、がんは、卵巣がん、乳がん、頭頸部がん、腎臓がん、膀胱がん、肝細胞がん、および結腸直腸がんから選択される。ある特定の実施形態では、がんは、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、およびＢ細胞リンパ腫から選択される。

[00079]本明細書で使用される、「キメラ」という用語は、１つの分子種に由来する、重鎖および／または軽鎖の一部と、異なる分子種に由来する、重鎖および／または軽鎖の残余を有する、抗体または抗原結合性断片を意味する。例示的な例では、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域と、マウスまたはウサギなどの非ヒト動物に由来する可変領域とを含みうる。一部の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターである。

[00080]本明細書で使用される、「特異的結合」または「～に特異的に結合する」という用語は、例えば、抗体と、抗原との間など、２つの分子の間における、ランダムではない結合反応を指す。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２に、≦１０^－６Ｍ（例えば、≦５×１０^－７Ｍ、≦２×１０^－７Ｍ、≦１０^－７Ｍ、≦５×１０^－８Ｍ、≦２×１０^－８Ｍ、≦１０^－８Ｍ、≦５×１０^－９Ｍ、≦４×１０^－９Ｍ、≦３×１０^－９Ｍ、≦２×１０^－９Ｍ、または≦１０^－９Ｍ）の結合親和性（Ｋ_Ｄ）で特異的に結合する。本明細書で使用されるＫ_Ｄとは、当技術分野で公知である、任意の常套的方法であって、表面プラズモン共鳴法、マイクロスケール熱泳動法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法、およびフローサイトメトリー法を含むがこれらに限定されない方法を使用することにより決定されうる、解離速度の、会合速度に対する比（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）を指す。ある特定の実施形態では、Ｋ_Ｄ値は、フローサイトメトリーを使用することにより、適正に決定されうる。

[00081]本明細書で使用される、「結合を遮断する」能力または「同じエピトープについて競合する」能力とは、抗体または抗原結合性断片が、２つの分子（例えば、ＬＩＬＲＢ２と、抗ＬＩＬＲＢ２抗体と）の間の結合相互作用を、任意の検出可能な程度で阻害する能力を指す。ある特定の実施形態では、２つの分子の間の結合を遮断する抗体または抗原結合性断片は、２つの分子の間の結合相互作用を、少なくとも８５％、または少なくとも９０％阻害する。ある特定の実施形態では、この阻害は、８５％を超える場合もあり、または９０％を超える場合もある。

[00082]当業者は、前者が、後者の、ＬＩＬＲＢ２抗原ポリペプチドへの結合を防止するのかどうかを確認することにより、不要な実験を伴わずに、所与の抗体が、本開示の抗体と同じエピトープに結合するのかどうかを決定することが可能であることを認識するであろう。本開示の抗体による、ＬＩＬＲＢ２抗原ポリペプチドへの結合の低下により示される通り、所与の抗体が、本開示の抗体と競合する場合、２つの抗体は、同じエピトープまたは近縁のエピトープに結合する。または所与の抗体の、ＬＩＬＲＢ２抗原ポリペプチドへの結合が、本開示の抗体により阻害される場合、２つの抗体は、同じエピトープまたは近縁のエピトープに結合する。

[00083]本明細書で使用される、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、抗原に対する所望の特異性を、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、およびマクロファージなどの免疫エフェクター細胞へとグラフトすることが可能な操作受容体を指す。典型的に、ＣＡＲタンパク質は、所望の特異性を導入する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および免疫エフェクター細胞が、抗原に結合した場合に、免疫エフェクター細胞へとシグナルを伝達する細胞内ドメインを含む。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、リーダーペプチド、抗原認識領域、およびスペーサー領域を含む。ある特定の実施形態では、抗原認識領域は、抗原に特異的に結合する抗体に由来する。ある特定の実施形態では、抗原認識領域は、抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ある特定の実施形態では、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、ヒト化抗体に由来する。ある特定の実施形態では、単鎖可変断片は、可撓性リンカーを介して軽鎖可変領域へと融合された重鎖可変領域を含む。

[00084]アミノ酸配列に言及した「保存的置換」とは、アミノ酸残基を、同様の物理化学的特性を伴う側鎖を有する、異なるアミノ酸残基で置き換えることを指す。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）を伴うアミノ酸残基の間で、中性親水性側鎖（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ）を伴う残基の間で、酸性側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）を伴う残基の間で、塩基性側鎖（例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）を伴うアミノ酸の間で、または芳香族側鎖（例えば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）を伴う残基の間でなされうる。当技術分野で公知の通り、保存的置換は、通例、タンパク質のコンフォメーション構造の、著しい変化を引き起こさないので、タンパク質の生体活性を保持しうるであろう。

[00085]本明細書で使用される、「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域の、Ｃ１複合体およびＦｃ受容体など、そのエフェクターへの結合へと帰せられる生体活性を指す。例示的なエフェクター機能は、Ｃ１複合体上の、抗体と、Ｃ１ｑとの相互作用により誘導される、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）；抗体のＦｃ領域の、エフェクター細胞上のＦｃ受容体への結合により誘導される、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）；および食作用を含む。

[00086]本明細書で使用される、「エピトープ」という用語は、抗体が結合する、抗原上の、特異的原子群または特異的アミノ酸群を指す。２つの抗体は、抗原についての競合的結合を呈する場合に、抗原内の、同じエピトープまたは近縁のエピトープに結合しうる。例えば、抗体または抗原結合性断片が、参照抗体の、抗原への結合を、少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％遮断する場合、抗体または抗原結合性断片は、参照抗体と同じ／近縁のエピトープに結合すると考えられうる。

[00087]本明細書で使用される、「相同体」および「相同の」という用語は、互換的に使用され、最適にアライメントされた場合に、他の配列に対する、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する、核酸配列（またはその相補鎖）またはアミノ酸配列を指す。

[00088]本明細書で使用される、「宿主細胞」という語句は、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターが導入された細胞を指す。
[00089]本明細書で使用される、「ヒト化された」という用語は、抗体または抗原結合性断片が、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域を含み、適切な場合、ヒトに由来する定常領域を含むことを意味する。

[00090]「単離」物質は、人為により、天然状態から変更されている。「単離」組成物または「単離」物質が、天然で生じる場合、それは、変化しているか、もしくはその元の環境から除去されている、またはこれらの両方である。例えば、生存動物において天然で存在する、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離」されていないが、実質的な純粋状態で存在するように、その天然状態の共存素材から、十分に分離されている場合、同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単離」されている。「単離核酸配列」とは、単離核酸分子の配列を指す。ある特定の実施形態では、「単離抗体またはその抗原結合性断片」とは、電気泳動法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動など）、またはクロマトグラフィー法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣなど）により決定される、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体または抗原結合性断片を指す。

[00091]「リーダーペプチド」とは、分泌経路の一部を形成する、新規に合成されたタンパク質のＮ末端において存在する、約５～３０アミノ酸の長さを有するペプチドを指す。分泌経路のタンパク質は、ある特定の細胞内小器官（小胞体、ゴルジ体、またはエンドソーム）の内部に常在し、細胞から分泌されるか、または細胞膜へと挿入されるタンパク質を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、リーダーペプチドは、タンパク質の膜貫通ドメインの一部を形成する。

[00092]白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢメンバー２（ＬＩＬＲＢ２）とは、ヒトにおいて、ＬＩＬＲＢ２遺伝子によりコードされるタンパク質である。この遺伝子は、染色体領域である、１９ｑ１３．４における遺伝子クラスター内で見出される、白血球免疫グロブリン様受容体（ＬＩＲ）ファミリーのメンバーである。コードされるタンパク質は、２つまたは４つの細胞外免疫グロブリンドメイン、膜貫通ドメイン、および２つ～４つの細胞質内免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する、ＬＩＲ受容体のサブファミリーである、Ｂクラスに属する。ＬＩＬＲＢ２受容体は、免疫細胞上で発現され、ＭＨＣクラスＩ分子および抗原提示細胞上の他のリガンドに結合し、免疫応答の刺激を阻害する、負のシグナルを伝達する。ＬＩＬＲＢ２受容体はまた、抗原の捕捉および提示においても、役割を果たしうる。ＬＩＬＲＢ２受容体は、炎症性応答および細胞傷害作用を制御して、免疫応答をフォーカシングし、自己反応性を制限する一助となると考えられる。この遺伝子については、異なるアイソフォームをコードする、複数の転写物変異体が見出されている。ＬＩＬＲＢ２は、ＰＴＰＮ６と相互作用することが示されている。

[00093]「抗ＬＩＬＲＢ２抗体」という用語は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合することが可能な抗体を指す。
[00094]本明細書で使用される、「ＬＩＬＲＢ２関連」疾患または状態とは、ＬＩＬＲＢ２の発現もしくは活性により引き起こされるか、これにより増悪するか、またはこの増大もしくは低下と、他の形で連結する、任意の疾患または状態を指す。一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２関連状態は、例えば、がん、自己免疫疾患、炎症性疾患、または感染性疾患などの免疫関連障害である。

[00095]本明細書で使用される、「連結」という用語は、分子内相互作用、例えば、共有結合、金属結合、および／もしくはイオン結合、または分子間相互作用、例えば、水素結合もしくは非共有結合を介する会合を指す。

[00096]「作動可能に連結された」という用語は、そのように記載された構成要素が、それらの通例の機能を果たすように構成された、エレメントの配置を指す。したがって、ポリペプチドに作動可能に連結された、所与のシグナルペプチドは、ポリペプチドの、細胞からの分泌を方向付ける。プロモーターの場合、コード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、コード配列の発現を方向付けるであろう。プロモーター、または他の制御エレメントは、その発現を方向付けるように機能する限りにおいて、コード配列と連続する必要はない。例えば、プロモーター配列と、コード配列との間には、翻訳されないが、転写される介在配列が存在する場合があり、プロモーター配列はなお、コード配列へと「作動可能に連結された」と考えられる。

[00097]アミノ酸配列（または核酸配列）に関する、「配列同一性パーセント（％）」は、最大の同一アミノ酸（または核酸）数を達成するように、配列をアライメントし、必要な場合、ギャップを導入した後における、参照配列内のアミノ酸（または核酸）残基と同一な、候補配列内のアミノ酸（または核酸）残基の百分率として規定される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一な残基と考えられる場合もあり、同一な残基と考えられない場合もある。アミノ酸（または核酸）配列の同一性パーセントを決定することを目的とするアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイト上で入手可能であるが、また、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９０）、２１５：４０３～４１０；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９７）、２５：３３８９～３４０２も参照されたい）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイト上で入手可能であるが、また、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（１９９６）、２６６：３８３～４０２；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（２００７）、２３：２９４７～８も参照されたい）、およびＡＬＩＧＮソフトウェアまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開ツールを使用して達成されうる。当業者は、ツールにより提供される、デフォルトのパラメータを使用することもでき、例えば、適切なアルゴリズムを選択することなどにより、アライメントに適切なパラメータをカスタマイズすることもできる。

[00098]特許請求の範囲における、「または」という用語は、代替物だけ、または代替物が、互いに除外的であることを指すことが明示的に指し示されない限りにおいて、「および／または」を意味するように使用されるが、本開示は、代替物だけを指す定義も、「および／または」を指す定義も支持する。本明細書で使用される、「別の」は、少なくとも第２のまたはこれより多数を意味しうる。

[00099]「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、一本鎖ヌクレオチドポリマーおよび二本鎖ヌクレオチドポリマーの両方を含む。ポリヌクレオチドを含むヌクレオチドは、リボヌクレオチドの場合もあり、デオキシリボヌクレオチドの場合もあり、いずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態の場合もある。前記修飾は、ブロモウリジン誘導体およびイノシン誘導体などの塩基修飾、２’，３’－ジデオキシリボースなどのリボース修飾、ならびにホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホルアニロチオエート、ホスホルアニラデート、およびホスホルアミデートなどのヌクレオチド間連結修飾を含む。

[000100]「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語は、ペプチド結合により、互いと連結された、少なくとも２つのアミノ酸の連なりを意味する。ポリペプチドおよびタンパク質は、アミノ酸に加えた部分を含む場合もあり（例えば、グリコシル化されうる）、かつ／または他の形で加工もしくは修飾される場合もある。当業者は、「ポリペプチド」または「タンパク質」が、細胞より産生される完全なポリペプチド鎖（シグナル配列を伴うか、またはこれを伴わない）の場合もあり、その機能的部分の場合もあることを察知するであろう。当業者は、ポリペプチドまたはタンパク質が、場合によって、例えば、１つもしくは複数のジスルフィド結合により連結されるか、または他の手段により会合された、１つを超えるポリペプチド鎖を含みうることをさらに察知するであろう。「ポリペプチド」または「タンパク質」という用語はまた、１つまたは複数のアミノ酸が、対応する自然発生のアミノ酸およびポリマーの化学的類似体である、アミノ酸ポリマーも含む。

[000101]本発明で有用な、薬学的に許容される担体は、常套的である。「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１５版（１９７５）は、本明細書で開示される融合タンパク質の、薬学的送達に適する組成物および製剤について記載している。一般に、担体の性質は、採用される特定の投与方式に依存するであろう。例えば、非経口製剤は、通例、水、生理食塩液、平衡塩溶液、デキストロース水溶液、グリセロールなど、薬学的かつ生理学的に許容される流体を媒体として含む注射用液を含む。固体組成物（例えば、粉末形態、丸剤形態、錠剤形態、またはカプセル形態）のために、常套的な非毒性固体担体は、例えば、医薬のグレードの、マンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムを含みうる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、保湿剤または乳化剤、保存剤、および、例えば、酢酸ナトリウムまたはモノラウリン酸ソルビタンなどのｐＨ緩衝剤など、少量の非毒性補助物質も含有しうる。

[000102]本明細書で使用される、「対象」という用語は、ヒトまたは任意の非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長動物）を指す。ヒトは、生前形態および生後形態を含む。多くの実施形態では、対象は、ヒトである。対象は、疾患の診断または処置のために、医療提供者へと来院するヒトを指す患者でありうる。「対象」という用語は、本明細書では、「個体」または「患者」と互換的に使用される。対象は、疾患または障害に罹患しうるか、または罹患しやすいが、疾患または障害の症状を提示する場合もあり、これらを提示しない場合もある。

[000103]本明細書で使用される、「治療有効量」または「有効投与量」という用語は、疾患または状態を処置するのに有効な、薬物の投与量または濃度を指す。例えば、がんを処置するための、本明細書で開示される、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の使用に関して、治療有効量は、腫瘍体積を退縮させるか、腫瘍の全部もしくは一部を根絶させるか、腫瘍の増殖もしくはがん細胞の、他の臓器への浸潤を阻害するか、もしくはこれを緩徐化させるか、がん性状態を媒介する細胞の成長または増殖を阻害するか、腫瘍細胞の転移を阻害するか、もしくはこれを緩徐化させるか、腫瘍もしくはがん性状態と関連する、任意の症状もしくはマーカーを改善するか、腫瘍もしくはがん性状態の発生を防止するか、もしくは遅延させるか、またはこれらの一部の組合せが可能である、モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片の投与量または濃度である。

[000104]本明細書で使用される、状態「を処置すること」または状態の「処置」は、状態を防止または緩和すること、状態の発生または発症速度を緩徐化させること、状態を発症させる危険性を低減すること、状態と関連する症状の発症を防止するか、または遅延させること、状態と関連する症状を軽減するか、または終止させること、状態の完全な退縮または部分的退縮をもたらすこと、状態またはその一部の組合せを治癒させることを含む。

[000105]本明細書で使用される、「ベクター」という用語は、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、このタンパク質の発現をもたらすように、作動可能に挿入された媒体を指す。ベクターは、それが保有する遺伝子エレメントの、宿主細胞内における発現をもたらすように、宿主細胞を形質転換するか、宿主細胞へと形質導入するか、または宿主細胞にトランスフェクトするのに使用されうる。ベクターの例は、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージ、および動物ウイルスを含む。ベクターとして使用される動物ウイルスの類型は、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）を含む。ベクターは、発現を制御するための、様々なエレメントであって、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能なエレメント、およびレポーター遺伝子を含むエレメントを含有しうる。加えて、ベクターは、複製起点を含有しうる。ベクターはまた、その細胞への侵入の一助となる素材であって、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパク質コーティングを含むがこれらに限定されない素材も含みうる。ベクターは、発現ベクターまたはクローニングベクターでありうる。本開示は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする、本明細書で提供される核酸配列と、核酸配列に作動可能に連結された、少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）と、少なくとも１つの選択マーカーとを含有するベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。ベクターの例は、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ラムダファージ、およびＭ１３ファージ、プラスミドである、ｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓなどを含むがこれらに限定されない。

[000106]ＩＩ．抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片
[000107]一態様では、本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示されている、ある特定の抗ＬＩＬＲＢ２抗体（その開示が、参照により本明細書に組み込まれる）に由来するか、またはこれから修飾される。一部の実施形態では、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示されている、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ファージディスプレイ法を使用して調製された。略述すると、ファージディスプレイ法は、標的タンパク質、すなわち、ＬＩＬＲＢ２に対してパニングされ、ファージディスプレイされた、ヒトｓｃＦｖについての大規模ライブラリーを伴う。標的タンパク質に特異的に結合するように選択されたヒトｓｃＦｖは、シーケンシングされ、次いで、所望の完全ヒト抗体を作製するように、ヒトＩｇＧ発現ベクターへとサブクローニングされうる。

[000108]一部の実施形態では、本明細書で開示される、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示されている、抗ＬＩＬＲＢ２抗体と比較して、ＬＩＬＲＢ２に、高度の親和性および特異性で結合する能力の他、同じ強力なリガンド遮断活性を保持するが、治療用生成物または診断用生成物の開発の点で、特性が改善されている。一部の実施形態では、このような抗体およびその抗原結合性断片は、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号に開示されている、抗ＬＩＬＲＢ２抗体と比較して、顕著に異なる物理化学的特性を有する結果として、製造可能性、安定性、および薬物動態特性の改善もたらす。ある特定の実施形態では、このような抗体およびその抗原結合性断片は、ヒトにおける免疫原性がより小さい。

[000109]特異的抗ＬＩＬＲＢ２抗体
[000110]ある特定の実施形態では、本明細書で開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、配列番号１の重鎖可変領域配列と、配列番号２の軽鎖可変領域配列とを有する抗体である、Ｂ２－１９に由来する。特定の実施形態では、本明細書で開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、Ｂ２－１９と比較して、製造可能性、安定性および／または薬物動態プロファイルが増強されているが、同じレベルの特異性および親和性で、ＬＩＬＲＢ２に結合する能力を、実質的に保持する。加えて、本明細書で開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、同じリガンド遮断活性を保持する。

[000111]ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＬＩＬＲＢ２抗体は、図１に提示される、クローン対合された重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を有する。

[000112]一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２６のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。

[000113]一実施形態では、本明細書で提供される、抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片は、本明細書で提供される、重鎖可変ドメインの全部または一部からなる、単一ドメイン抗体である。このような単一ドメイン抗体についての、さらなる情報は、当技術分野において入手可能（例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）である。

[000114]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。一部の実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、および／またはＣＨ２－ＣＨ３領域を含む。ある特定の実施形態では、重鎖定常領域は、Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、ＣκまたはＣλを含む。

[000115]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、二特異性抗体、標識化抗体、二価抗体、または抗イディオタイプ抗体でありうる。組換え抗体は、動物においてではなく、組換え法を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて調製された抗体である。

[000116]抗体変異体
[000117]本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片はまた、その多様な変異体も包含する。ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で提供される、例示的抗体の、多様な種類の変異体を包含する。

[000118]ある特定の実施形態では、抗体変異体は、本明細書で提供される、１つもしくは複数の可変領域配列内、および／または定常領域（例えば、Ｆｃ領域）内の、１つまたは複数の修飾または置換を含む。このような変異体は、それらの親抗体の、ＬＩＬＲＢ２に対する特異的結合親和性およびリガンド遮断能を保持するが、修飾（複数可）または置換（複数可）により付与される、１つまたは複数の所望の特性を有する。例えば、抗体変異体は、抗原結合性親和性が改善されている場合もあり、グリコシル化パターンが改善されている場合もあり、グリコシル化の危険性が低減されている場合もあり、脱アミド化または脱アミノ化が低減されている場合もあり、エフェクター機能（複数可）が改善されるか、または増大されている場合もあり、エフェクター機能（複数可）が低減されているか、または枯渇されている場合もあり、ＦｃＲｎ受容体への結合が改善されている場合もあり、薬物動態半減期が延長され、ｐＨ感受性が増大されている場合もあり、免疫原性および／またはコンジュゲーションへの適合性（例えば、１つまたは複数のシステイン残基の導入）が低減されている場合もある。

[000119]親抗体配列は、当技術分野で公知の方法、例えば、「アラニン走査突然変異誘発」を使用して、修飾または置換されるのに適切な残基または好ましい残基を同定するようにスクリーニングされうる（例えば、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１～１０８５を参照されたい）。略述すると、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕなどの帯電残基）は、同定され、中性アミノ酸または負帯電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置きかえられる場合があり、改変抗体は、目的の特性のために、作製され、これについてスクリーニングされる。特定のアミノ酸位置における置換が、目的の機能的変化を裏付ける場合、この位置は、修飾または置換のための潜在的な残基として同定されうる。潜在的な残基は、異なる種類の残基（例えば、システイン残基、正帯電残基など）で置換することにより、さらに評価されうる。

[000120]親和性変異体
[000121]親和性変異体は、本明細書で提供される重鎖可変領域配列内または軽鎖可変領域配列内に、修飾または置換を含有しうる。親和性変異体は、親抗体の、ＬＩＬＲＢ２に対する、特異的結合親和性を保持するか、なおまたはＬＩＬＲＢ２特異的結合親和性を、親抗体を上回って改善している。

[000122]当技術分野で公知の多様な方法は、この目的を達成するのに使用されうる。例えば、ファージディスプレイ技術により、抗体変異体（Ｆａｂ変異体またはｓｃＦｖ変異体など）のライブラリーが作出され、発現され、次いで、ＬＩＬＲＢ２に対する結合親和性についてスクリーニングされうる。別の例として述べると、コンピュータソフトウェアは、抗体の、ＬＩＬＲＢ２への結合を、仮想的にシミュレートし、結合インターフェースを形成する、抗体上のアミノ酸残基を同定するのに使用されうる。このような残基は、結合親和性の低減を防止するように、置換が回避される場合もあり、またはより強力な結合をもたらすように、置換のために標的化される場合もある。

[000123]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列内、および／または１つもしくは複数のＦＲ配列内に、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換を含む。ある特定の実施形態では、親和性変異体は、ＣＤＲ配列内および／またはＦＲ配列内に、合計で１０、９つ、８つ、７つ、６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つ以下の置換を含む。

[000124]ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片に対する少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有し、その一方で、ＬＩＬＲＢ２に対する結合親和性を、その親抗体と同等であるか、またはこれを超えるレベルで保持する、１つまたは複数の可変領域配列を含む。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲ領域内で生じる。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲ外の領域内で（例えば、ＦＲ内で）生じる。

[000125]グリコシル化変異体
[000126]本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片はまた、抗体または抗原結合性断片のグリコシル化の程度を増大させるために得られる場合もあり、これを減少させるために得られる場合もある、グリコシル化変異体も包含する。

[000127]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片は、特定のグリコシル化パターンを含む。例えば、無グリコシル化抗体が作製されうる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。抗体のグリコシル化パターンは、例えば、抗体の、抗原に対する親和性または結合力を増大させるように変更されうる。このような修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化部位のうちの１つまたは複数を変更することにより達せられうる。例えば、可変領域フレームワークのグリコシル化部位のうちの１つまたは複数の除去を結果としてもたらし、これにより、この部位におけるグリコシル化を消失させる、１つまたは複数のアミノ酸置換がなされうる。このような無グリコシル化は、抗体の、抗原に対する親和性または結合力を増大させうる。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号を参照されたい。

[000128]グリコシル化パターンが、低フコシル化グリカンまたは無フコシル化グリカンを含む抗体であって、グリカン上のフコシル残基の量が低減された、低フコシル化抗体または無フコシル化抗体などの抗体もまた、作製されうる。抗体はまた、二分岐型ＧｌｃＮａｃ構造の量を増大させたグリカンも含みうる。このようなグリコシル化パターンの変更は、抗体のＡＤＣＣ能を増大させることが裏付けられている。このような修飾は、例えば、グリコシル化経路が、特定のグリコシル化パターンを伴う糖タンパク質を産生するように遺伝子操作された宿主細胞内で、抗体を発現させることにより達せられうる。当技術分野では、これらの細胞について記載されており、本発明の組換え抗体を発現させて、これにより、グリコシル化が変更された抗体を作製するための宿主細胞として使用されうる。例えば、細胞系であるＭｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、Ｍｓ７０４細胞系内、Ｍｓ７０５細胞系内、およびＭｓ７０９細胞系内で発現された抗体が、それらの炭水化物上のフコースを欠くように、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子である、ＦＵＴ８（α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ）を欠く。２つの置換ベクターを使用する、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞内の、ＦＵＴ８遺伝子の破壊の標的化（米国特許公開第２００４０１１０７０４号を参照されたい）により、ＦＵＴ８－／－細胞系である、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９を創出した。別の例として述べると、ＥＰ１１７６１９５は、このような細胞系内で発現される抗体が、α－１，６結合関連酵素を低減するか、またはこれを消失させることにより、低フコシル化を呈するように、フコシルトランスフェラーゼをコードする、ＦＵＴ８遺伝子が、機能的に破壊された細胞系について記載する。ＥＰ１１７６１９５もまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ－アセチルグルコサミンへと、フコースを添加するための酵素活性が低度であるか、またはこの酵素活性を有さない細胞系、例えば、ラット骨髄腫細胞系である、ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６６２）について記載している。ＰＣＴ公開ＷＯ２００３／０３５８３５は、フコースを、Ａｓｎ（２９７）連結型炭水化物へと接合させる能力が低減され、これもまた、この宿主細胞内で発現される抗体の低フコシル化を結果としてもたらす、変異体のＣＨＯ細胞系である、Ｌｅｃ１３細胞について記載している。ＰＣＴ公開ＷＯ０６／０８９２３１において記載されている通り、グリコシル化プロファイルが修飾された抗体はまた、鶏卵内でも作製されうる。代替的に、グリコシル化プロファイルが修飾された抗体は、Ｌｅｍｎａ属などの植物細胞内でも作製されうる（米国特許第７，６３２，９８３号）。植物系において抗体を作製するための方法については、米国特許第６，９９８，２６７号および同第７，３８８，０８１号において開示されている。ＰＣＴ公開ＷＯ１９９９／０５４３４２は、操作細胞系内で発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増大を結果としてもたらす、二分岐型ＧｌｃＮａｃ構造の増大を呈するよう、糖タンパク質修飾型グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞系について記載している。抗体上におけるフコシル化が最小限である場合、低フコシル化はまた、無フコシル化とも呼ばれる。

[000129]代替的に、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断される場合もあり；例えば、フコシダーゼである、α－Ｌ－フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する。本明細書で開示される抗体は、下等真核宿主細胞、特に、酵母などの真菌宿主細胞内で作製される抗体をさらに含み、糸状菌は、哺乳動物グリコシル化パターンまたはヒト様グリコシル化パターンを有する糖タンパク質を作製するように、遺伝子操作されている。これらの遺伝子改変宿主細胞が、現在使用される哺乳動物細胞系を上回る、特定の利点は、特定のＮ－グリカン構造が優越する糖タンパク質組成がもたらされるように、細胞内で作製される糖タンパク質のグリコシル化プロファイルを制御する能力である（例えば、米国特許第７，０２９，８７２号および同第７，４４９，３０８号を参照されたい）。これらの遺伝子改変宿主細胞は、特定のＮ－グリカン構造を主に有する抗体を作製するのに使用されている。

[000130]加えて、酵母または糸状菌などの真菌は、フコシル化糖タンパク質を産生する能力を欠くので、このような細胞内で産生された抗体は、細胞が、フコシル化糖タンパク質を産生するための酵素経路を含むように、さらに修飾されない限りにおいて、フコースを欠くであろう（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２００８１１２０９２を参照されたい）。特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体は、下等真核生物の宿主細胞内で産生され、フコシル化Ｎ－グリカンと、非フコシル化Ｎ－グリカンとのハイブリッド型Ｎ－グリカンであり、かつ、二分枝型分子種と、多分枝型分子種とを含む、複合型Ｎ－グリカンでもあるＮ－グリカンであって、ＧｌｃＮＡｃ（１－４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ（１－４）ＧｌｃＮＡｃ（１－４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡ（１－４）Ｇａｌ（１－４）ＧｌｃＮＡｃ（１－４）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２などのＮ－グリカンを含むがこれらに限定されないＮ－グリカンを含む抗体をさらに含む。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体組成物は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される、少なくとも１つのハイブリッド型Ｎ－グリカンを有する抗体を含みうる。特定の態様では、ハイブリッド型Ｎ－グリカンは、組成物中の、主要なＮ－グリカン分子種である。さらなる態様では、ハイブリッド型Ｎ－グリカンは、組成物中のハイブリッド型Ｎ－グリカンのうちの、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％を含む、特定のＮ－グリカン分子種である。

[000131]特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体組成物は、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２；およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される、少なくとも１つの複合型Ｎ－グリカンを有する抗体を含む。特定の態様では、複合型Ｎ－グリカンは、組成物中の、主要なＮ－グリカン分子種である。さらなる態様では、複合型Ｎ－グリカンは、組成物中の複合型Ｎ－グリカンのうちの、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％を含む、特定のＮ－グリカン分子種である。特定の実施形態では、Ｎ－グリカンは、フコシル化Ｎ－グリカンである。一般に、フコースは、ＧｌｃＮＡｃＮ－グリカンの、還元末端において、ＧｌｃＮＡｃを伴う、α１，３結合型のフコース、ＧｌｃＮＡｃＮ－グリカンの、還元末端において、ＧｌｃＮＡｃを伴う、α１，６結合型のフコース、ＧａｌＮ－グリカンの、非還元末端において、Ｇａｌを伴う、α１，２結合型のフコース、ＧｌｃＮａｃＮ－グリカンの、非還元末端において、ＧｌｃＮａｃを伴う、α１，３結合型のフコース、またはＧｌｃＮＡｃＮ－グリカンの、非還元末端において、ＧｌｃＮＡｃを伴う、α１，４結合型のフコースである。

[000132]したがって、上記の糖タンパク質組成物についての特定の態様では、糖型は、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ）からなる群から選択される糖型を作製するように、α１，３結合型フコースまたはα１，６結合型フコースの糖型；ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＧａｌＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２（Ｆｕｃ１－２）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される糖型を作製するように、α１，３結合型フコースまたはα１，４結合型フコースの糖型；またはＧａｌ（Ｆｕｃ）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１－２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、ＮＡＮＡＧａｌ２（Ｆｕｃ１－２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２、およびＮＡＮＡ２Ｇａｌ２（Ｆｕｃ１－２）ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２からなる群から選択される糖型を作製するように、α１，２結合型フコースの糖型である。

[000133]さらなる態様では、抗体は、Ｍａｎ８ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ７ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ６ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２、Ｍａｎ４ＧｌｃＮＡｃ２、またはＮ－グリカンのＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２構造からなるＮ－グリカンを含むがこれらに限定されない、高マンノースＮ－グリカンを含む。上記についてのさらなる態様では、複合型Ｎ－グリカンは、フコシル化二分枝型分子種およびフコシル化多分枝型分子種、ならびに非フコシル化（または無フコシル化）二分枝型分子種および非フコシル化（または無フコシル化）多分枝型分子種をさらに含む。本明細書で使用される、「Ｎ－グリカン」および「糖型」という用語は、互換的に使用され、Ｎ結合型オリゴ糖、例えば、ポリペプチドのアスパラギン残基へと、アスパラギン－Ｎ－アセチルグルコサミン連結により接合される、Ｎ結合型オリゴ糖を指す。Ｎ結合型糖タンパク質は、タンパク質内のアスパラギン残基のアミド窒素へと連結された、Ｎ－アセチルグルコサミン残基を含有する。

[000134]システイン操作変異体
[000135]本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片はまた、１つまたは複数の遊離システインアミノ酸残基の導入を含む、システイン操作変異体も包含する。

[000136]遊離システイン残基は、ジスルフィド架橋の一部ではない、遊離システイン残基である。システイン操作変異体は、操作システイン部位における、例えば、マレイミドまたはハロアセチルを介する、例えば、とりわけ、細胞傷害性化合物および／もしくはイメージング化合物、標識、または放射性同位元素とのコンジュゲーションに有用である。当技術分野では、抗体または抗原結合性断片を操作して、遊離システイン残基を導入するための方法が公知であり、例えば、ＷＯ２００６／０３４４８８を参照されたい。

[000137]Ｆｃ変異体
[000138]本明細書で開示される、抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片はまた、典型的に、血清半減期、補体への結合、Ｆｃ受容体への結合、および／またはエフェクター機能（例えば、抗原依存性細胞性細胞傷害作用）など、抗体の、１つまたは複数の機能的特性を変更するよう、Ｆｃ領域内の修飾を含むように操作されうる。さらに、本明細書で開示される抗体は、化学修飾される場合もあり（例えば、１つまたは複数の化学的部分は、抗体へと接合されうる）、そのグリコシル化を変更するように修飾される場合もあり、また、抗体の、１つまたは複数の機能的特性を変更するように修飾される場合もある。これらの実施形態の各々については、下記で、さらに詳細に記載される。Ｆｃ領域内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔによるＥＵインデックスの番号付けである。本明細書で開示される抗体はまた、エフェクター機能の変更をもたらすように、Ｆｃ領域が修飾された（または遮断された）抗体も含む。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＵＳ２００４／０００２５８７；ＵＳ２００５／０１５２８９４；ＵＳ２００５／０２４９７２３；ＷＯ２００６／０１９４４７を参照されたい。このような修飾は、診断および治療における有益な効果が可能である、免疫系の多様な反応を増強または抑制するのに使用されうる。Ｆｃ領域の変更は、アミノ酸変化（置換、欠失、および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化、および複数のＦｃの付加を含む。Ｆｃへの変化はまた、治療用抗体内の、抗体の半減期も変更することから、投与頻度の低減を可能とするので、簡便さの増大および素材の使用の低減を可能としうる。この突然変異は、ヒンジ領域内の重鎖間ジスルフィド架橋の異質性を失効化させることが報告されている。

[000139]一実施形態では、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が、増大または低下されるように、ＣＨ１のヒンジ領域が修飾される。この手法については、米国特許第５，６７７，４２５号において、さらに記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易とするか、または抗体の安定性を増大もしくは減少させるように変更される。別の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を延長するように修飾される。多様な手法が可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号において記載されている通り、以下の突然変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆのうちの１つまたは複数が導入されうる。代替的に、生物学的半減期を延長するために、抗体は、米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号において記載されている通り、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから採取されたエピトープに結合するサルベージ受容体を含有するように、ＣＨ１領域内またはＣＬ領域内で変更されうる。さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更するように、少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なるアミノ酸残基で置き換えることにより変更される。例えば、抗体が、エフェクターリガンドに対する親和性を変更しているが、親抗体の、抗原への結合能を保持するように、アミノ酸残基である、２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される、１つまたは複数のアミノ酸は、異なるアミノ酸残基で置きかえられうる。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分でありうる。この手法については、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号において、さらに詳細に記載されている。

[000140]別の例では、アミノ酸位置２３１～２３９の範囲内の、１つまたは複数のアミノ酸残基が変更されて、これにより、抗体が、補体に結合する能力を変更する。この手法については、ＰＣＴ公開ＷＯ１９９４／０２９３５１において、さらに記載されている。さらに別の例では、Ｆｃ領域は、以下の位置：２３８、２３９、２４３、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、または４３９において、１つまたは複数のアミノ酸を修飾することにより、抗体が、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を媒介する能力、および／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増大もしくは減少させる能力を、増大または減少させるように修飾される。この手法については、ＰＣＴ公開ＷＯ２０００／０４２０７２において、さらに記載されている。さらに、ヒトＩｇＧ１上の、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対する結合性部位もマッピングされ、結合が改善された変異体についても記載されている。２５６、２９０、２９８、３３３、３３４、および３３９位における特異的突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。加えて、以下の組合せ突然変異体：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ、およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。

[000141]一実施形態では、Ｆｃ領域は、残基２４３および２６４を修飾することにより、抗体が、エフェクター機能を媒介する能力を低下させ、かつ／または抗炎症特性を増大させるように修飾される。一実施形態では、抗体のＦｃ領域は、２４３および２６４位における残基を、アラニンへと変化させることにより修飾される。一実施形態では、Ｆｃ領域は、残基２４３、２６４、２６７、および３２８を修飾することにより、抗体が、エフェクター機能を媒介する能力を低下させ、かつ／または抗炎症特性を増大させるように修飾される。

[000142]一実施形態では、Ｆｃ領域は、残基２３４、２３５、および３２９を、アラニンまたはグリシンへと修飾すること（Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）により、抗体が、エフェクター機能を媒介する能力を失効化させるように修飾される。

[000143]ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体または抗原結合性断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのｐＨ依存性結合を改善する、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。このような変異体は、ＦｃＲｎが、リソソーム内の分解を回避し、次いで、移行され、細胞から放出されることを可能とする、酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎに結合するので、薬物動態半減期が延長されている場合がある。当技術分野では、抗体およびその抗原結合性断片を操作して、ＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法が周知であり、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、６（１）：６３～７３、１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ら、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、１巻、２７章：「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ刊、２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１０）、７０：３２６９～３２７７；およびＨｉｎｔｏｎ，Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００６）、１７６：３４６～３５６を参照されたい。

[000144]ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体または抗原結合性断片は、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を変更する、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるある特定のアミノ酸残基は、ＡＤＣＣ活性の増強をもたらすように置換されうる。代替的に、または加えて、ＡＤＣＣ活性を増強するように、抗体上の炭水化物構造が変化する場合もある。当技術分野では、抗体の操作により、ＡＤＣＣ活性を変更する方法について記載されており、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．（２００１）、２７６（９）：６５９１～６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）、１６４（８）：４１７８～８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５）、１５５（３）：１１６５～７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）、１６６（４）：２５７１～５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ら、ＰＮＡＳ（２００６）、１０３（１１）：４００５～４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．（２００７）、６：３００９～３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ．ら、Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．（２００８）、７（８）：２５１７～２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２００２、２７７：２６７３３～２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ（２００３）、２７８：３４６６～３４７３を参照されたい。

[000145]ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体または抗原結合性断片は、例えば、Ｃ１ｑへの結合および／またはＣＤＣを改善または減殺することにより、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を変更する、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む（例えば、ＷＯ９９／５１６４２；ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ、３２２：７３８～４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＦｃ領域変異体の他の例に関する、ＷＯ１９９４／０２９３５１を参照されたい）。

[000146]ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体または抗原結合性断片は、ヘテロ二量体化を容易とし、かつ／または促進するように、Ｆｃ領域のインターフェース内に、１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む。これらの修飾は、突出部の、第１のＦｃポリペプチドへの導入と、空隙部の、第２のＦｃポリペプチドへの導入とを含み、この場合、突出部は、第１のＦｃポリペプチドと、第２のＦｃポリペプチドとの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するように、空隙部内に配置されうる。当技術分野では、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている通り、これらの修飾を伴う抗体をもたらす方法が公知である。

[000147]抗原結合性断片
[000148]当技術分野では、多様な種類の抗原結合性断片が公知であり、例えば、それらの可変配列が本明細書で提供される例示的抗体、およびこれらの異なる変異体（親和性変異体、グリコシル化変異体、Ｆｃ変異体、システイン操作変異体など）を含む、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体に基づき開発されうる。

[000149]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗原結合性断片は、ラクダ科動物化単一ドメイン抗体、ダイアボディ、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である。

[000150]単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、短い（通例、セリン、グリシン）リンカーにより、一体に連結された、免疫グロブリンの、重鎖可変領域と、軽鎖可変領域との融合体である。このキメラ分子は、定常領域の除去およびリンカーペプチドの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。この修飾は、通例、特異性を据え置く。これらの分子は、歴史的に、抗原結合性ドメインを、単一のペプチドとして発現させることが、極めて簡便である、ファージディスプレイを容易とするように創出された。代替的に、ｓｃＦｖは、ハイブリドーマからサブクローニングされた重鎖および軽鎖から、直接創出されうる。単鎖可変断片は、完全な抗体分子内で見出される、定常Ｆｃ領域を欠くので、抗体を精製するのに使用される、一般的結合性部位（例えば、プロテインＡ／Ｇ）を欠く。これらの断片は、プロテインＬは、カッパ軽鎖の可変領域と相互作用するので、プロテインＬを使用して精製／固定化されることが多い。

[000151]可撓性リンカーは、一般に、アラニン、セリン、およびグリシンなど、ヘリックス促進アミノ酸残基およびターン促進アミノ酸残基から構成される。しかし、他の残基もまた機能しうる。Ｔａｎｇら（１９９６）は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）のためのオーダーメイドリンカーを、タンパク質リンカーライブラリーから、迅速に選択するための手段として、ファージディスプレイを使用した。重鎖可変ドメインについての遺伝子と、軽鎖可変ドメインについての遺伝子とが、組成が可変的な、１８アミノ酸のポリペプチドをコードするセグメントにより連結された、ランダムリンカーライブラリーを構築した。ｓｃＦｖレパートリー（約５×１０^６の異なるメンバー）を、糸状ファージ上に提示し、ハプテンによる親和性選択にかけた。選択された変異体の集団は、結合活性の著しい増大を呈したが、大きな配列多様性を保持した。その後、１０５４の個別の変異体のスクリーニングは、可溶性形態において効率的に作製される、触媒的に活性のｓｃＦｖをもたらした。配列解析は、選択されたテザーの一般的特色が、リンカー内の、ＶＨのＣ末端の２残基後に保存されたプロリン、および他の位置における、アルギニンおよびプロリンの夥多だけであることを明らかにした。

[000152]本開示の組換え抗体はまた、受容体の二量体化または多量体化を可能とする配列または部分も伴いうる。このような配列は、Ｊ鎖と共に多量体の形成を可能とする、ＩｇＡに由来する配列を含む。別の多量体化ドメインは、Ｇａｌ４二量体化ドメインである。他の実施形態では、鎖は、２つの抗体の組合せを可能とする、ビオチン／アビジンなどの薬剤により修飾されうる。

[000153]別個の実施形態では、単鎖抗体は、非ペプチドリンカーまたは化学的単位を使用して、受容体の軽鎖と、重鎖とを接続することにより創出されうる。一般に、軽鎖および重鎖は、顕著に異なる細胞内で作製され、精製され、その後、適切な形で、一体に連結されるであろう（すなわち、適切な化学的架橋を介して、軽鎖のＣ末端へと接合された重鎖のＮ末端）。

[000154]架橋試薬、例えば、安定化剤および凝集剤は、２つの異なる分子の官能基を結びつける分子架橋を形成するのに使用される。しかし、異なる類似体から構成される、同じ類似体またはヘテロマー複合体の二量体または多量体が創出されうることが想定される。２つの異なる化合物を、段階的に連結するために、望ましくないホモポリマー形成を消失させる、ヘテロ二官能性架橋剤が使用されうる。

[000155]例示的ヘテロ二官能性架橋剤は、一方が、一級アミン基と反応し（例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）、他方が、チオール基と反応する（例えば、ピリジルジスルフィド、マレイミド、ハロゲンなど）、２つの反応基を含有する。一級アミン反応基を介して、架橋剤は、１つのタンパク質（例えば、選択された抗体または断片）のリシン残基（複数可）と反応することが可能であり、チオール反応基を介して、第１のタンパク質へと、既に結びつけられた架橋剤は、他のタンパク質（例えば、選択用薬剤）のシステイン残基（遊離スルフヒドリル基）と反応する。

[000156]血中の妥当な安定性を有する架橋剤が援用されることが好ましい。標的化剤と、治療／予防剤とをコンジュゲートさせるのに援用されて成功しうる、多種類のジスルフィド結合含有リンカーが公知である。立体障害されるジスルフィド結合を含有するリンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、より大きな安定性をもたらすことが分かり、作用部位に到達する前における、標的化ペプチドの放出を防止する場合がある。したがって、これらのリンカーは、連結剤の１つの群である。

[000157]別の架橋試薬は、隣接するベンゼン環およびメチル基により「立体障害される」ジスルフィド結合を含有する二官能性架橋剤である、ＳＭＰＴである。ジスルフィド結合による立体障害は、結合を、組織内および血液中に存在しうる、グルタチオンなどのチオレートアニオンによる攻撃から保護する機能を果たし、これにより、接合された薬剤の標的部位への送達の前におけるコンジュゲートの脱カップリングを防止する一助となると考えられる。

[000158]ＳＭＰＴ架橋試薬は、他の多くの公知の架橋試薬と同様に、システインのＳＨ、または一級アミン（例えば、リシンのイプシロンアミノ基）などの官能基を架橋する能力をもたらす。別の可能な種類の架橋剤は、スルホスクシンイミジル－２－（ｐ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオネートなどの切断型ジスルフィド結合を含有する、ヘテロ二官能性光反応性フェニルアジドを含む。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル基は、一級アミノ基と反応し、フェニルアジド（光分解時に）は、任意のアミノ酸残基と、非選択的に反応する。

[000159]障害型架橋剤に加えて、非障害型リンカーもまた、本明細書に従い援用されうる。保護型ジスルフィドを含有したり、もたらしたりしないと考えられる、他の有用架橋剤は、ＳＡＴＡ、ＳＰＤＰ、および２－イミノチオランを含む（ＷａｗｒｚｙｎｃｚａｋおよびＴｈｏｒｐｅ、１９８７）。このような架橋剤の使用は、当技術分野において十分に理解されている。別の実施形態は、可撓性リンカーの使用を伴う。

[000160]米国特許第４，６８０，３３８号は、とりわけ、キレート剤、薬物、酵素、検出可能な標識などとの抗体コンジュゲートを形成するための、アミン含有ポリマーおよび／またはアミン含有タンパク質との、リガンドのコンジュゲートを作製するために有用な二官能性リンカーについて記載している。米国特許第５，１４１，６４８号および同第５，５６３，２５０号は、様々な穏和な条件下で切断可能な、不安定性結合を含有する、切断型コンジュゲートについて開示している。このリンカーは、目的の薬剤が、リンカーに直接結合され、切断の結果として、活性薬剤の放出をもたらしうる点で、特に、有用である。特定の使用は、遊離アミノまたは遊離スルフヒドリル基の、抗体などのタンパク質、または薬物への付加を含む。

[000161]米国特許第５，８５６，４５６号は、融合タンパク質、例えば、単鎖抗体を作製するポリペプチド構成要素の接続における使用のためのペプチドリンカーを提供する。リンカーは、少なくとも１つの帯電アミノ酸（好ましくは、アルギニンまたはリシン）の存在に続き、プロリンを含有する、最長で、約５０アミノ酸の長さであり、安定性の増大および凝集の低減により特徴づけられる。米国特許第５，８８０，２７０号は、様々な免疫診断法および分離法において有用な、アミノオキシ含有リンカーについて開示している。

[000162]このような抗原結合性断片の産生のために、多様な技法が使用されうる。例示的な方法は、酵素による無傷抗体の消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９２）、２４：１０７～１１７；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）、２２９：８１を参照されたい）、Ｅ．Ｃｏｌｉなどの宿主細胞による組換え発現（例えば、抗体断片である、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ）、上記で論じられたファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖについての）、およびＦ（ａｂ’）_２断片を形成するための、２つのＦａｂ’－ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）、１０：１６３～１６７）を含む。当業者には、抗体断片を作製するための、他の技法が明らかであろう。

[000163]ある特定の実施形態では、抗原結合性断片は、ｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの作出については、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号において記載されている。ｓｃＦｖは、融合タンパク質をもたらすように、アミノ末端またはカルボキシル末端において、エフェクタータンパク質へと融合されうる（例えば、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編を参照されたい）。

[000164]多特異性抗体
[000165]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、多特異性である。本明細書で使用される、「多特異性」という用語は、１つを超える特異性、例えば、二特異性、三特異性、四特異性を有する分子を包含する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多特異性抗体およびその抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２の、第１のエピトープおよび第２のエピトープに特異的に結合することが可能であるが、ＬＩＬＲＢ２の、第１のエピトープと、第２のエピトープとは、互いと顕著に異なるか、または重複しない。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される多特異性抗体およびその抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２、およびＬＩＬＲＢ２と異なる、第２の抗原に特異的に結合することが可能である。

[000166]ある特定の実施形態では、第２の抗原は、免疫関連標的である。本明細書で使用される、免疫関連標的は、免疫応答、任意選択で、細胞性免疫応答の刺激、阻害、またはモジュレーションに関与する生体分子を包含する。免疫関連標的の例は、がん細胞、間質細胞（線維芽細胞、血管細胞など）、または免疫細胞により発現される免疫調節分子である。一部の実施形態では、免疫調節分子は、免疫応答を増進するように、共刺激シグナルを媒介する場合もあり、免疫応答を抑制するように、共阻害シグナルを媒介する場合もある。したがって、一部の実施形態では、第２の抗原は、免疫調節分子である。

[000167]一部の実施形態では、免疫調節分子は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、Ｆｃ受容体、ＦＣＲＬ（１～６）、Ａ２ＡＲ、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－βＲ、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、ＬＩＬＲＡ（１～６）、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＬＥＣ－１、ｃｌｅｖｅｒ－１／ｓｔａｂｉｌｉｎ－１、ＡＤＧＲＥ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ１２２、ＩＣＡＭ－１、ＩＤＯ、ＮＫＧ２Ｄ／Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＳＩＧＬＥＣ（７～１５）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ３００、ＣＤ１６３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲ２、ＴＬＲ（１－９）、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＣＤ１６、およびＣＤ８３である。

[000168]ある特定の実施形態では、第２の抗原は、腫瘍抗原を含む。本明細書で使用される、「腫瘍抗原」とは、腫瘍特異的抗原（例えば、腫瘍細胞に固有であり、正常の非腫瘍細胞上では見出されない）、および腫瘍関連抗原（例えば、腫瘍細胞および非腫瘍細胞のいずれでも見出されるが、腫瘍細胞内で示差的に発現されるか、または腫瘍微小環境内で見出される）を指す。腫瘍特異的抗原はまた、腫瘍ネオ抗原（例えば、タンパク質配列を変化させるか、または２つの非類縁配列の間で、融合タンパク質を創出する体細胞突然変異のために、がん細胞内で発現される）も含みうる。

[000169]腫瘍抗原の例は、限定せずに述べると、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＣＡ－１２５、ガングリオシドＧ（Ｄ２）、ガングリオシドＧ（Ｍ２）およびガングリオシドＧ（Ｄ３）、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＣＤ３３、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＣＥＡ、ボンベシン様ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ３／ＨＥＲ３、ｅｒｂＢ４、ＦＧＦＲ２ｂ、ＣＤ４４ｖ６、がん関連ムチン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ（例えば、ＶＥＧＦＲ３）、エストロゲン受容体、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＴＧＦβ１、ＩＧＦ－１受容体、ＥＧＦα、ｃ－ｋｉｔ受容体、トランスフェリン受容体、Ｃｌａｕｄｉｎ １８．２、ＧＰＣ－３、Ｎｅｃｔｉｎ－４、ＲＯＲ１、メトセリン、ＢＣＭＡ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２ＡＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＩＬ－２Ｒ、ＣＯ１７－１Ａ、ＴＲＯＰ２、エフリンＡ、またはＬＩＶ－１を含む。

[000170]本明細書で提供される多特異的抗体およびその抗原結合性断片は、当技術分野で公知の、適切なフォーマットでありうる。例えば、例示的な二特異性フォーマットは、二特異性ダイアボディ、ｓｃＦｖベースの二特異性フォーマット、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）－Ｉｇ、Ｑｕａｄｒｏｍａ、ノブイントゥーホール、共通軽鎖（例えば、ノブイントゥーホールを伴う共通軽鎖など）、ＢｉＴＥ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、Ｄｕｏｂｏｄｙ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ロイシンジッパー、二重作用型Ｆａｂ（ＤＡＦ）－ＩｇＧ、およびＭａｂ^２二特異性フォーマットでありうる（例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎら、２０１７、Ｍａｂｓ、９（２）：１８２～２１２を参照されたい）。二特異性分子は、対称性アーキテクチャーの場合もあり、非対称性アーキテクチャーの場合もある。

[000171]本明細書で提供される多特異性抗体および抗原結合性断片は、当技術分野で公知である、任意の適切な方法により作製されうる。一実施形態では、異なる抗原特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対は、組換え方式（例えば、ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７（１９８３）を参照されたい）で、二特異性抗体を作製するように、宿主細胞内で共発現されるのに続き、親和性クロマトグラフィーにより精製される。

[000172]コンジュゲート
[000173]一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、コンジュゲート部分をさらに含む。コンジュゲート部分は、抗体およびその抗原結合性断片へと連結されうる。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片へと接合されうる、タンパク質性部分または非タンパク質性部分である。様々なコンジュゲート部分は、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片へと連結されうることが想定される（例えば、「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」、Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｍ．ＣｒｕｓｅおよびＲ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（編）、Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）を参照されたい）。これらのコンジュゲート部分は、共有結合的結合、親和性結合、挿入、配位結合、複合体化、会合、ブレンディング、または付加などの方法により、抗体または抗原結合性断片へと連結されうる。

[000174]ある特定の実施形態では、本明細書で開示される抗体および抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分への結合に活用されうる、エピトープ結合性部分外の特異的部位を含有するように操作されうる。例えば、このような部位は、コンジュゲート部分への共有結合的連結を容易とするように、例えば、システイン残基またはヒスチジン残基など、１つまたは複数の反応性のアミノ酸残基を含みうる。

[000175]ある特定の実施形態では、抗体は、コンジュゲート部分へと、間接的に連結される場合もあり、別のコンジュゲート部分を介して連結される場合もある。例えば、抗体または抗原結合性断片は、ビオチンへとコンジュゲートされ、次いで、アビジンへとコンジュゲートされた第２のコンジュゲートへと間接的にコンジュゲートされうる。

[000176]コンジュゲート部分の例は、限定せずに述べると、免疫調節剤、抗腫瘍薬、ＳＴＩＮＧ（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｇｅｎｅｓ）アゴニスト、サイトカイン、クリアランス修飾剤、毒素（例えば、化学療法剤）、免疫細胞刺激因子（例えば、ＴＬＲアゴニスト）、検出可能な標識（例えば、放射性アイソトープ、ランタニド、発光標識、蛍光標識、または酵素－基質標識）、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または精製部分を含む。

[000177]免疫調節剤の例は、限定せずに述べると、本明細書で開示される免疫調節分子（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、Ｆｃ受容体、ＦＣＲＬ（１～６）、Ａ２ＡＲ、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－βＲ、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、ＬＩＬＲＡ（１～６）、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＬＥＣ－１、ｃｌｅｖｅｒ－１／ｓｔａｂｉｌｉｎ－１、ＡＤＧＲＥ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ１２２、ＩＣＡＭ－１、ＩＤＯ、ＮＫＧ２Ｄ／Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＳＩＧＬＥＣ（７～１５）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ３００、ＣＤ１６３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲ２、ＴＬＲ（１－９）、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＣＤ１６、およびＣＤ８３）、またはこれらの機能的断片、これらのリガンド、およびこれらのリガンド結合性タンパク質を含む。

[000178]抗腫瘍薬の例は、限定せずに述べると、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法において使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤、血小板由来増殖因子阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体であるイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、またはトレメリムマブ）、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）またはニボルマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）またはペムブロリズマブ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）またはアテゾリズマブ、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）またはアベルマブ、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）またはデュルバルマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）またはセミプリマブｒｗｌｃ、ＴＹＶＹＴ（登録商標）またはシンチリマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ペンプリマブ（ＡＫ１０５）、カムレリズマブ、トリパリマブ、ジムベレリマブ（ＧＬＳ－０１０）、レチファンリマブ、スゲマリマブ、またはＣＳ１００３）、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する二重標的化抗体（例えば、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体またはＡＫ１０４）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、ＬＡＧ－３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、サイトカイン、以下の標的であるＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＦＧＦＲ２ｂ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＩＤＨ１阻害剤、イボシデニブ、Ｔｉｂｓｏｖｏ（登録商標）、ＩＤＨ２阻害剤、エナシデニブ、Ｉｄｈｉｆａ（登録商標）、ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（ＳＭＯ）阻害剤、グラスデギブ、アルギナーゼ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、エパカドスタット、ＢＣＬ－２阻害剤、ベネトクラックス、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標）、白金錯体誘導体、オキサリプラチン、キナーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、イブルチニブ、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、アカラブルチニブ、ＣＡＬＱＵＥＮＣＥ（登録商標）、ザヌブルチニブ、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＩＣＯＳ抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ４０抗体、４－１ＢＢ抗体、ＣＤ４７抗体、ＯＸ４０抗体、ＴＮＦＲ２抗体、別のＬＩＬＲファミリーメンバーに対する抗体、Ｓｉｇｌｅｃ抗体、ＳＩＲＰ１ａ抗体またはＳＩＲＰ１ａ融合タンパク質、Ｅ－セレクチンのアンタゴニスト、腫瘍抗原に結合する抗体、Ｔ細胞表面のマーカーに結合する抗体、骨髄細胞またはＮＫ細胞の表面マーカーに結合する抗体、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生剤、植物由来アルカロイド、ホルモン治療薬、ホルモンアンタゴニスト、アロマターゼ阻害剤、およびＰ糖タンパク質阻害剤、操作Ｔ細胞、操作ＮＫ細胞、または操作マクロファージを含む。

[000179]「毒素」は、細胞に有害であるか、または細胞に損傷をもたらす場合もあり、これを死滅させる場合もある、任意の薬剤でありうる。毒素の例は、限定せずに述べると、タキソール、デルクステカン、シトカレシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メルタンシン、エムタンシン、ＤＭ１、マイタンシノイドＤＭ１、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、およびこれらの類似体、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシル、ダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロランブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスプラチンである、シス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧称：ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生剤（例えば、ダクチノマイシン（旧称：アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤、およびチューブリン結合剤を含む。

[000180]検出可能な標識の例は、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリン、またはＴｅｘａｓ Ｒｅｄ）、酵素－基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、またはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３Ｈ、^１１１Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１４Ｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^８６Ｙ、^８８Ｙ、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^２１１Ａｔ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^２１２Ｂｉ、および^３２Ｐ、他のランタニド）、発光標識、発色団部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子、または検出用の金を含みうる。

[000181]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、抗体の半減期を延長する一助となる、クリアランス修飾剤でありうる。例示的な例は、ＰＥＧなどの水溶性ポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマーなどを含む。ポリマーは、任意の分子量であることが可能であり、分枝状の場合もあり、非分枝状の場合もある。抗体へと接合されるポリマーの数は、変動する場合があり、１つを超えるポリマーが接合される場合、同じ分子の場合もあり、異なる分子の場合もある。

[000182]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、磁気ビーズなどの精製部分でありうる。
[000183]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、コンジュゲートのための基剤に使用される。

[000184]ポリヌクレオチドおよび組換え法
[000185]本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片をコードする、単離ポリヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、本明細書で提供される例示的抗体の可変領域をコードする、１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、常套的手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）たやすく単離およびシーケンシングされる。コードＤＮＡはまた、合成法によっても得られうる。

[000186]抗ＬＩＬＲＢ２抗体および抗原結合性断片をコードする、単離ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知の組換え法を使用して、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために、ベクターへと挿入されうる。多くのベクターが入手可能である。ベクターの構成要素は、一般に、以下：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および転写終結配列のうちの１つまたは複数を含むがこれらに限定されない。

[000187]本開示は、抗体または抗原結合性断片をコードする、本明細書で提供される核酸配列と、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）と、少なくとも１つの選択マーカーとを含有するベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。ベクターの例は、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ラムダファージ、およびＭ１３ファージ、プラスミドである、ｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓなどを含むがこれらに限定されない。

[000188]抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターは、クローニングまたは遺伝子発現のために、宿主細胞へと導入されうる。本明細書のベクター内の、ＤＮＡのクローニングまたは発現に適する宿主細胞は、上記で記載された、原核細胞、酵母細胞、または高等真核細胞である。この目的に適する原核生物は、グラム陰性菌またはグラム陽性菌、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｅｒｗｉｎｉａ属、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ属、Ｐｒｏｔｅｕｓ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ属、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、およびＳｈｉｇｅｌｌａ属などのＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ科の他、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓなどのＢａｃｉｌｌｕｓ属、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、ならびにＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属などの真正細菌を含む。

[000189]原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体をコードするベクターに適する、クローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは一般的なパン酵母は、下等真核宿主微生物の中で、最も一般的に使用される。しかし、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ；例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓなどのＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属宿主；Ｙａｒｒｏｗｉａ属（ＥＰ ４０２，２２６）；Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＥＰ １８３，０７０）；Ｃａｎｄｉｄａ属；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｆｒｅｅｓｉａ（ＥＰ ２４４，２３４）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ；Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓなどのＳｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ属；ならびに例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ属、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ属、ならびにＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒなどのＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属宿主などの糸状菌など、他の多数の属、種、および株も、市販されており、本明細書において有用である。

[000190]本明細書で提供されるグリコシル化抗体または抗原断片の発現に適する宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞および昆虫細胞を含む。多数のバキュロウイルス株および変異体、ならびにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（毛虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョウバエ）、およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉなどの宿主に由来する、対応する、許容性の昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための、多様なウイルス株、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１変異体およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰＶのＢｍ－５株が市販されており、このようなウイルスは、本発明に従う、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのための、本明細書のウイルスとして使用されうる。また、綿花、トウモロコシ、バレイショ、ダイズ、ペチュニア、トマト、およびタバコによる植物細胞培養物も、宿主として活用されうる。

[000191]しかし、最大の目的は、脊椎動物細胞であり、培養物（組織培養物）中の脊椎動物細胞の繁殖は、常套的な手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０により形質転換された、サル腎臓ＣＶ１細胞系（ＣＯＳ－７；ＡＴＣＣ：ＣＲＬ１６５１）；ヒト胎児由来腎臓細胞系（２９３細胞または懸濁培養物中で増殖させるためにサブクローニングされた２９３細胞；Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．（１９７７）、３６：５９）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、非ヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）活性を欠損させたＣＨＯ細胞である、ＣＨＯ－ＤＨＦＲ（Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８０）、７７：４２１６）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４；Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．（１９８０）、２３：２４３～２５１）；サル腎臓細胞（ＣＶ１；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ７０）；アフリカグリーンモンキー腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６；ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ；ＡＴＣＣ：ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２；ＡＴＣＣ：ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９８２）、３８３：４４～６８）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞およびヒトヘパトーマ細胞系（Ｈｅｐ Ｇ２）である。一部の好ましい実施形態では、宿主細胞は、２９３Ｆ細胞である。

[000192]宿主細胞は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の作製のための、上記において記載された発現ベクターまたはクローニングベクターをトランスフェクトされ、プロモーターを誘導する、形質転換体を選択する、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために適切であるように改変された、常套的栄養物質培地中において培養される。別の実施形態では、抗体は、当技術分野で公知の相同組換えにより作製されうる。

[000193]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片を作製するのに使用される宿主細胞は、様々な培地中において培養されうる。ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）など、市販の培地は、宿主細胞の培養に適する。加えて、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．、５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、（１９８０）１０２：２５５、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国特許再交付第３０，９８５号において記載されている培地のうちのいずれかも、宿主細胞のための培養培地として使用されうる。これらの培地のうちのいずれかは、必要に応じて、ホルモンおよび／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびリン酸塩など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生剤（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬など）、微量元素（通例、マイクロモル範囲の最終濃度において存在する無機化合物として規定される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー供給源を補充されうる。また、他の任意の必要な補充物質も、当業者に公知の適切な濃度で組み入れられうる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞と共に、既に使用されている培養条件であり、当業者に明らかであろう。

[000194]組換えＤＮＡ法を使用する場合、抗体は、細胞内において産生される場合もあり、細胞周辺腔内において産生される場合もあり、培地へと直接分泌される場合もある。抗体が、細胞内において産生される場合、最初のステップとして、宿主細胞または溶解された断片である粒子状破砕物は、例えば、遠心分離または限外濾過により除去される。Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）、１０：１６３～１６７は、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞周辺腔へと分泌された抗体を単離するための手順について記載している。略述すると、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分間にわたり融解させる。細胞破砕物は、遠心分離により除去されうる。抗体が、培地へと分泌される場合、このような発現系に由来する上清は、一般に、まず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ限外濾過ユニットまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮される。タンパク質分解を阻害するように、ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が、前出のステップのうちのいずれかに組み入れられる場合があり、偶発性の夾雑物の増殖を防止するように、抗生剤が組み入れられうる。

[000195]細胞から調製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥセルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、塩析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製されうるが、親和性クロマトグラフィーが、好ましい精製法である。

[000196]ある特定の実施形態では、固相上に固定化されたプロテインＡが、抗体およびその抗原結合性断片の、免疫親和性精製のために使用される。プロテインＡの、親和性リガンドとしての適性は、抗体内に存在する、任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトガンマ１重鎖、ヒトガンマ２重鎖、またはヒトガンマ４重鎖に基づく抗体を精製するのに使用されうる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．（１９８３）、６２：１～１３）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプおよびヒトガンマ３のために推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．（１９８６）、５：１５６７～７５）。親和性リガンドが接合されるマトリックスは、アガロースであることが極めて多いが、他のマトリックスも利用可能である。制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなど、力学的に安定なマトリックスは、アガロースにより達成されうる流量より大きな流量およびアガロースにより達成されうる加工時間より短い加工時間を可能とする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製のために有用である。また、イオン交換カラム上の分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリン上のクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂上またはカチオン交換樹脂上（ポリアスパラギン酸カラムなど）のＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿など、タンパク質精製のための他の技法も、回収される抗体に応じて利用可能である。

[000197]任意の予備的精製ステップ（複数可）に続き、目的の抗体と夾雑物とを含む混合物は、ｐＨを約２．５～４．５の間とする溶出緩衝液を使用し、好ましくは、低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）において実施される、低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけられる場合がある。

[000198]精製
[000199]ある特定の実施形態では、本開示についての抗体は、精製されうる。本明細書で使用される、「精製された」という用語は、他の構成要素から単離可能な組成物を指すように意図されるが、この場合、タンパク質は、その天然で得られる状態と比べて、任意の程度まで精製される。したがって、精製タンパク質はまた、それが自然発生しうる環境から遊離したタンパク質も指す。「実質的に精製された」という用語が使用される場合、この呼称は、タンパク質またはペプチドが、組成物中の、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、またはこれを超えるタンパク質を構成するなど、組成物の、主要な構成要素を形成する組成物を指すであろう。

[000200]当業者には、タンパク質精製法が周知である。これらの技法は、１つのレベルにおいて、細胞環境の、ポリペプチド画分および非ポリペプチド画分への粗画分化を伴う。ポリペプチドを、他のタンパク質から分離したら、目的のポリペプチドは、クロマトグラフィー法および電気泳動法を使用して、部分精製または完全精製（または均一性までの精製）を達成するように、さらに精製される場合がある。純粋ペプチドの調製に、特に適する解析法は、イオン交換クロマトグラフィー、除外クロマトグラフィー；ポリアクリルアミドゲル電気泳動；等電点電気泳動である。タンパク質精製のための他の方法は、硫酸アンモニウム、ＰＥＧ、抗体などによる沈殿、または熱変性に続く、遠心分離；ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、および親和性クロマトグラフィー；ならびにこのような技法および他の技法の組合せを含む。

[000201]本開示の抗体の精製では、ポリペプチドを、原核発現系内または真核発現系内で発現させ、変性条件を使用して、タンパク質を抽出することが所望されうる。ポリペプチドは、ポリペプチドのタグ付け部分に結合する親和性カラムを使用して、他の細胞構成要素から精製されうる。当技術分野で一般に公知である通り、多様な精製ステップを実行する順序が変化する場合もあり、ある特定のステップが除外されるが、実質的に精製されたタンパク質またはペプチドの調製に適する方法を、なおも結果としてもたらす場合もあると考えられる。

[000202]一般に、完全抗体は、抗体のＦｃ部分に結合する薬剤（すなわち、プロテインＡ）を活用して画分化される。代替的に、抗原は、適切な抗体を精製し、同時に、選択するのに使用されうる。このような方法は、カラム、フィルター、またはビーズなどの支持体に結合された選択用薬剤を利用することが多い。抗体は、支持体に結合され、夾雑物は、除去され（例えば、洗い流され）、抗体は、条件（塩、熱など）を適用することにより放出される。

[000203]当業者には、本開示に照らして、タンパク質またはペプチドの精製度を定量するための、多様な方法が公知である。これらの方法は、例えば、活性画分の特異的活性を決定するステップ、またはＳＤＳ／ＰＡＧＥ解析により、画分内のポリペプチド数について評価するステップを含む。画分の純度について評価するための、別の方法は、画分の特異的活性を計算し、これを、初期抽出物の特異的活性を比較し、これにより、純度を計算する方法である。活性量を表すのに使用される、実際の単位は、当然ながら、精製を追跡し、発現されたタンパク質またはペプチドが、検出可能な活性を呈するのかどうかを追跡するために選び出される、特定のアッセイ法に依存するであろう。

[000204]ポリペプチドの泳動は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ条件が異なると、場合によって、著しく変動しうることが公知である（Ｃａｐａｌｄｉら、１９７７）。したがって、精製されるか、または部分精製された発現生成物の見かけの分子量は、異なる電気泳動条件下で、変動しうることが察知されるであろう。

[000205]ＩＩＩ．医薬組成物
[000206]本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片と、１つまたは複数の薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物をさらに提供する。

[000207]本明細書で開示される医薬組成物における使用のための、許容可能な医薬担体は、例えば、薬学的に許容される液体担体、ゲル担体、または固体担体、水性媒体、非水性媒体、抗微生物剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁剤／分散剤、封鎖剤またはキレート剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または非毒性補助物質、当技術分野で公知である、他の成分、またはこれらの多様な組合せを含みうる。

[000208]適切な成分は、例えば、抗酸化剤、充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、滑沢剤、芳香剤、増粘剤、着色剤、乳化剤、または糖およびシクロデキストリンなどの安定化剤を含みうる。適切な抗酸化剤は、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニゾール、ブチル化ヒドロキシトルエン、および／または没食子酸プロピルを含みうる。本明細書で開示される通り、メチオニンなど、１つまたは複数の抗酸化剤の、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片およびコンジュゲートを含む組成物中の組入れは、抗体または抗原結合性断片の酸化を低下させる。この酸化の低減は、結合親和性の喪失を防止または低減し、これにより、抗体の安定性を改善し、保管寿命を最大化する。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で開示される、１つまたは複数の抗体または抗原結合性断片と、メチオニンなど、１つまたは複数の抗酸化剤とを含む、組成物が提供される。さらに、抗体または抗原結合性断片を、メチオニンなど、１つまたは複数の抗酸化剤と混合することにより、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の、酸化を防止し、保管寿命を延長し、かつ／または有効性を改善する方法が提供される。

[000209]さらなる例示のために述べると、許容可能な医薬担体は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、またはデキストロース、および乳酸加リンゲル注射液などの水性媒体、植物由来の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、またはラッカセイ油などの非水性媒体、静菌濃度または静真菌濃度の抗微生物剤、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性剤、リン酸緩衝液またはクエン酸緩衝液などの緩衝剤、重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、プロカイン塩酸塩などの局所麻酔剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンなどの懸濁剤および分散剤、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（ＴＷＥＥＮ－８０）などの乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）などの封鎖剤またはキレート剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸を含みうる。担体として活用される抗微生物剤であって、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のメチルエステルおよびｐ－ヒドロキシ安息香酸のプロピルエステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、ならびに塩化ベンゼトニウムを含む抗微生物剤が、複数回投与用容器内の医薬組成物へと添加されうる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩液、デキストロース、グリセロール、またはエタノールを含みうる。適切な非毒性補助物質は、例えば、保湿剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、可溶性増強剤、または酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、またはシクロデキストリンなどの薬剤を含みうる。

[000210]医薬組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、丸剤、カプセル、錠剤、持続放出製剤、または粉剤でありうる。経口製剤は、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的担体を含みうる。

[000211]ある特定の実施形態では、医薬組成物は、注射用組成物へと製剤化される。注射用医薬組成物は、例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、または溶液、懸濁液、もしくはエマルジョンをもたらすために適する固体形態など、任意の常套的形態で調製されうる。注射のための調製物は、注射の準備ができた、滅菌溶液および／または発熱物質非含有溶液、使用の直前に、溶媒と組み合わせる準備ができた、皮下錠剤を含む、凍結乾燥粉剤などの滅菌乾燥可溶性生成物、注射の準備ができた滅菌懸濁液、使用の直前に、媒体と組み合わせる準備ができた、滅菌乾燥不溶性生成物、および滅菌エマルジョンおよび／または発熱物質非含有エマルジョンを含みうる。溶液は、水溶液の場合もあり、非水溶液の場合もある。

[000212]ある特定の実施形態では、単位用量の非経口調製物は、アンプル内、バイアル内、または注射針を伴うシリンジ内にパッケージングされる。非経口投与のための、全ての調製物は、当技術分野で、公知であり、実施されている通り、滅菌調製物および発熱物質非含有調製物であるものとする。

[000213]ある特定の実施形態では、滅菌凍結乾燥粉剤は、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片を、適切な溶媒中に溶解させることにより調製される。溶媒は、粉剤または粉剤から調製された再構成溶液の、安定性を改善する賦形剤、または他の薬理学的成分を含有しうる。使用されうる賦形剤は、水、デキストロース、ソルビトール、果糖、トウモロコシシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の適切な薬剤を含むがこれらに限定されない。溶媒はまた、クエン酸緩衝液、リン酸ナトリウム緩衝液、もしくはリン酸カリウム緩衝液、または、一実施形態では、ｐＨをほぼ中性とする、当業者に公知である、他のこのような緩衝液などの緩衝液も含有しうる。後続する、溶液の滅菌濾過に続く、当業者に公知の、標準的な条件下における凍結乾燥処理は、所望の製剤をもたらす。一実施形態では、結果として得られる溶液は、凍結乾燥処理のためのバイアルへと分配されるであろう。各バイアルは、抗ＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合性断片またはこれらの組成物の単回投与のための投与量または複数回投与のための投与量を含有しうる。バイアルを、用量または用量のセットに必要とされる量を上回る少量により過充填すること（例えば、約１０％）は、正確な試料採取および正確な投与を容易とするように、許容可能である。凍結乾燥粉剤は、約４℃～室温など、適切な条件下で保存されうる。

[000214]注射のための、凍結乾燥粉末の、水による再構成は、非経口投与における使用のための製剤をもたらす。一実施形態では、再構成のために、滅菌水および／もしくは発熱物質非含有水、または他の適する液体担体が、凍結乾燥粉末へと添加される。正確な量は、施される選択治療に依存し、経験的に決定されうる。

[000215]ある特定の実施形態では、本明細書で記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片と共投与される、１つまたは複数のさらなる治療剤をさらに含む。さらなる治療剤の候補物質は、下記の第ＩＶ節で開示される。さらなる治療剤は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片と共製剤化される場合もあり、投与の直前に、第ＩＶ節の静注バッグ内などで、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片と混合される場合もあることが理解されうる。

[000216]ＩＶ．抗ＬＩＬＲＢ２抗体の使用法
[000217]ＬＩＬＲＢ２は、骨髄細胞表現型の、鍵となる調節因子として同定されている。ＬＩＬＲＢ２の活性化は、骨髄細胞の炎症促進活性を抑制する。抑制性／抗炎症性表現型を伴う骨髄細胞が、Ｔ細胞の活性化、増殖、および細胞傷害活性を下方調節しうるのに対し、ＬＩＬＲＢ２のモジュレーションは、がん、感染性疾患（例えば、慢性ウイルス感染性疾患）、自己免疫疾患、および炎症性疾患を含む状態および障害における治療的使用の潜在的可能性を有する。

[000218]したがって、本開示はまた、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２抗体または抗原結合性断片を使用する治療法も提供する。一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片を投与し、これにより、ＬＩＬＲＢ２関連状態またはＬＩＬＲＢ２関連障害を処置または防止するステップを含む。一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２関連状態またはＬＩＬＲＢ２関連障害は、がん、感染性疾患、自己免疫疾患、および炎症性疾患である。

[000219]がんの例は、一般に、固形腫瘍および血液悪性腫瘍へと類別される。固形腫瘍は、非小細胞肺がん（扁平上皮肺がん／非扁平上皮肺がん）、小細胞肺がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、結腸がん、卵巣がん、乳がん（基底細胞様乳癌、乳管癌、および小葉性乳癌を含む）、膵臓がん、胃癌、膀胱がん、食道がん、中皮腫、黒色腫、頭頸部がん、甲状腺がん、肉腫、前立腺がん、神経膠芽腫、子宮頸がん、胸腺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、菌状息肉症、メルケル細胞がん、肝細胞癌（ＨＣＣ）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、および他の肉腫、滑膜腫／滑膜肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、褐色細胞種、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、精上皮腫、マスト細胞由来腫瘍、ＥＢＶ陽性ＰＴＬＤおよび陰性ＰＴＬＤ、鼻咽頭癌、脊髄腫瘍、脳幹膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上皮腫、松果体腫、血管芽細胞種、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫を含むがこれらに限定されない。

[000220]固形腫瘍は、増殖性シグナル伝達の持続、増殖抑制からの逃避、細胞死への耐性、複製による不死性の付与、血管新生の誘導、浸潤および転移の活性化、腫瘍促進性炎症、免疫による破壊の回避、ゲノムの不安定性および突然変異、ならびに脱調節性の細胞エネルギー状態を含む、複数の生物学的顕徴により特徴づけられる。処置の取組みは、急速分裂細胞を標的化する細胞傷害性化学療法から、選り抜きのシグナル伝達経路を阻害する低分子を経て、細胞表面タンパク質を標的化するモノクローナル抗体へと進化した。より近年では、内因性抗腫瘍免疫の再活性化を介するがん免疫療法の概念、または合成免疫を活用する細胞療法を介するがん免疫療法の概念が、将来性を示している。これらの進歩にも拘わらず、進行性固形腫瘍を伴う、大半の患者は、やはり、長期にわたり生存することがない。抗ＣＴＬＡ－４または抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１など、免疫チェックポイント阻害剤の使用は、長期にわたる無進行生存および全生存をもたらしたが、少数の患者においてである。

[000221]免疫生物学の異なる側面を標的化する、新規の免疫療法、および骨髄細胞上で発現される阻害性受容体としてのＬＩＬＲＢ２を標的化する腫瘍浸潤細胞などの、異なる腫瘍浸潤細胞であって、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、寛容原性ＤＣ、および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭｓ）を含む腫瘍浸潤細胞が、転帰を改善するのに必要とされている。これらの骨髄細胞は、それらの免疫抑制性／抗炎症性表現型が、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の活性化、増殖、および細胞傷害活性を阻害するため、機能的に、免疫抑制細胞として記載されている。

[000222]一部の実施形態では、免疫抑制細胞の枯渇は、固形腫瘍を処置するために、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞に対する抑制効果を旧復させうる。
[000223]一部の実施形態では、骨髄細胞上のＬＩＬＲＢ２の遮断はまた、ＬＩＬＲＢ２を発現する、ＤＣ、単球、マクロファージ、好中球、または骨髄性白血病細胞を含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対するその阻害性効果も解除しうるであろう。抗原提示活性の増大は、Ｔ細胞の活性化、細胞傷害作用、およびＴ細胞によるサイトカイン産生をもたらしうる。

[000224]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、腫瘍微小環境内および／または腫瘍縁辺部における免疫抑制性骨髄細胞を、炎症促進性骨髄細胞へと再プログラム化し、Ｔ細胞の動員および活性化をもたらす。

[000225]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）に関与する、１つまたは複数のリガンドであって、ＨＬＡ－Ｇ、ＡＮＧＰＴＬ２、ＣＤ１ｃ／ｄ、ＣＳＰ、およびＳＥＭＡ４Ａなどのリガンドの結合を遮断する。

[000226]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、初代骨髄細胞および初代リンパ球細胞の活性化を促進する。
[000227]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、樹状細胞（ＤＣ）の分化、成熟、および活性化を増強する。

[000228]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、固形腫瘍のがん患者に由来する骨髄細胞を、炎症促進性表現型へと極性化させる。
[000229]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、患者由来単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ）の、自家Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの放出に対する抑制効果を緩和する。

[000230]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、がん細胞の、骨髄細胞に対する、「腫瘍コンディショニング」効果を旧復させかつ／または回避する。
[000231]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、抗ＣＤ３アゴニスト抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＬＲアゴニスト、および抗ＰＤ－１遮断抗体など、炎症促進性刺激の効果を増強する。

[000232]一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２を標的化する抗体は、単剤として、あるいは抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＴＬＡ－４、または他のＴ細胞もしくは骨髄細胞チェックポイント阻害剤と組み合わせて、動物モデルにおける腫瘍の増殖を阻害する。

[000233]血液悪性腫瘍は、急性リンパ性／リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞性白血病、芽球形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、重鎖疾患、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、リンパ性悪性腫瘍、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成、骨髄異形成性症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、前駆Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｐｒｅ－Ｂ ＡＬＬ）、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、骨髄増殖性腫瘍、およびワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含むがこれらに限定されない。

[000234]慢性ウイルス感染とは、ウイルスが、感染個体の特異的細胞内で除去されず、残存する疾患である。慢性ウイルス感染は、限定せずに述べると、Ｉ型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－Ｉ）、ＩＩ型単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－ＩＩ）、３型ヘルペスウイルス、４型ヘルペスウイルス、５型ヘルペスウイルス、６型ヘルペスウイルス、パルボウイルスＢ１９、Ａ型コックサッキーウイルスおよびＢ型コックサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を含む、様々なウイルスにより引き起こされうる。

[000235]自己免疫疾患および炎症性疾患は、後天性免疫不全症候群（自己免疫性構成要素を伴うウイルス疾患である、ＡＩＤＳ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑症（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアック病－疱疹状皮膚炎、慢性疲労症免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎（若年性）、円板状エリテマトーデス、本態性混合型寒冷グロブリン血症、線維筋痛症（線維筋炎）、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑症（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スティル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫症候群、リウマチ性多発筋痛、多発筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、全身性強皮症、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、腸粘膜の炎症、大腸炎と関連する消耗性疾患、ブドウ膜炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主病、溶血性貧血、骨関節炎、敗血症、脳卒中、組織および臓器の移植、血管炎、糖尿病網膜症、人工呼吸器誘導性肺損傷、ウイルス感染、自己免疫糖尿病などを含むがこれらに限定されない。炎症性障害は、例えば、慢性炎症性障害および急性炎症性障害を含む。

[000236]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の治療有効量は、例えば、体重、年齢、過去の医療歴、現在の投薬状況、対象の健康状態、および交差反応、アレルギー、過敏症、および有害な副作用の潜在的可能性の他、投与経路および疾患発生の程度など、当技術分野で公知の多様な因子に依存するであろう。投与量は、これらの状況または要件、および他の状況または要件により指し示されるのに応じて、当業者（例えば、医師または獣医師）により、低減される場合もあり、増大される場合もある。

[000237]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療有効投与量で投与されうる。これらの実施形態のうちの、ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、約５０ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満の投与量で投与され、これらの実施形態のうちの、ある特定の実施形態では、投与量は、１０ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満、５ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満、３ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満、１ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満、０．５ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満、または０．１ｍｇ／ｋｇまたはこれ未満である。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、約４０００ｍｇまたはこれ未満の投与量で投与され、これらの実施形態のうちの、ある特定の実施形態では、投与量は、約８００ｍｇまたはこれ未満、約４００ｍｇまたはこれ未満、約２４０ｍｇまたはこれ未満、約８０ｍｇまたはこれ未満、４０ｍｇまたはこれ未満、または０．８ｍｇまたはこれ未満である。ある特定の実施形態では、投与量は、処置経過にわたり変化しうる。例えば、ある特定の実施形態では、初期投与量は、後続の投与量より高投与量でありうる。ある特定の実施形態では、投与量は、対象の反応に応じて、処置経過にわたり変動しうる。

[000238]投与量レジメンは、所望される最適の応答（例えば、治療応答）をもたらすように調整されうる。例えば、単回投与が実施される場合もあり、複数回の分割投与が、時間経過にわたり実施される場合もある。

[000239]本明細書で開示される抗体および抗原結合性断片は、例えば、非経口経路（例えば、皮下経路、腹腔内経路、静脈内注入、筋内注射、または皮内注射を含む、静脈内経路）、または非経口経路以外の経路（例えば、経口経路、鼻腔内経路、眼内経路、舌下経路、直腸内経路、または局所）など、当技術分野で公知である、任意の経路により投与されうる。

[000240]一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片は、単独で投与される場合もあり、１つまたは複数のさらなる治療手段または治療剤と組み合わせて投与される場合もある。例えば、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片は、放射線療法と組み合わせて投与される場合もあり、かつ／または別の治療剤、例えば、別の免疫活性化因子、抗血管新生剤、化学療法剤、または抗がん薬と組み合わせて投与される場合もある。

[000241]これらの実施形態のうちの、ある特定の実施形態では、１つまたは複数のさらなる治療剤と組み合わせて投与される、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片は、１つまたは複数のさらなる治療剤と同時に投与されうるが、これらの実施形態のうちの、ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片と、さらなる治療剤（複数可）は、同じ医薬組成物の部分として投与されうる。しかし、別の治療剤と「組み合わせて」投与される、抗体または抗原結合性断片は、この薬剤と同時に投与されなくともよく、薬剤として同じ組成物中で投与されなくともよい。本明細書では、抗体または抗原結合性断片と、第２の薬剤とが、異なる経路を介して投与される場合であってもなお、「組み合わせて」という語句が使用されるので、別の薬剤の前または後に投与される抗体または抗原結合性断片は、この薬剤と「組み合わせて」投与されると考えられる。可能な場合、本明細書で開示される抗体または抗原結合性断片と組み合わせて投与される、さらなる治療剤は、さらなる治療剤についての医薬品情報シートに列挙されたスケジュールに従い、またはＰｒｅｓｃｒｉｂｅｒ’ｓ Ｄｉｇｉｔａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ｐｄｒ．ｎｅｔに限り、オンラインで利用可能）、もしくは当技術分野で周知のプロトコールに従い投与される。

[000242]ある特定の実施形態では、組合せ療法のための薬剤は、抗新生物性組成物である。本明細書で使用される、「抗新生物性組成物」とは、がんの処置において有用な組成物であって、少なくとも１つの活性治療剤を含む組成物を指す。治療剤の例は、例えば、化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法において使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス薬剤、抗チューブリン薬剤、ならびに抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体であるイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、またはトレメリムマブ）、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）またはニボルマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）またはペムブロリズマブ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）またはアテゾリズマブ、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）またはアベルマブ、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）またはデュルバルマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）またはセミプリマブｒｗｌｃ、ＴＹＶＹＴ（登録商標）またはシンチリマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ペンプリマブ（ＡＫ１０５）、カムレリズマブ、トリパリマブ、ジムベレリマブ（ＧＬＳ－０１０）、レチファンリマブ、スゲマリマブ、またはＣＳ１００３）、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する二重標的化抗体（例えば、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体またはＡＫ１０４）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、ＬＡＧ－３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、サイトカイン、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、以下の標的であるＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＦＧＦＲ２ｂ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＩＤＨ１阻害剤、イボシデニブ、Ｔｉｂｓｏｖｏ（登録商標）、ＩＤＨ２阻害剤、エナシデニブ、Ｉｄｈｉｆａ（登録商標）、ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（ＳＭＯ）阻害剤、グラスデギブ、アルギナーゼ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、エパカドスタット、ＢＣＬ－２阻害剤、ベネトクラックス、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標）、白金錯体誘導体、オキサリプラチン、キナーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、イブルチニブ、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、アカラブルチニブ、ＣＡＬＱＵＥＮＣＥ（登録商標）、ザヌブルチニブ、ＩＣＯＳ抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ４０抗体、４－１ＢＢ抗体、Ｓｉｇｌｅｃ抗体、ＯＸ４０抗体、ＴＮＦＲ２抗体、別のＬＩＬＲファミリーメンバーに対する抗体、ＣＤ４７抗体、ＳＩＲＰ１ａ抗体またはＳＩＲＰ１ａ融合タンパク質、Ｅ－セレクチンのアンタゴニスト、腫瘍抗原に結合する抗体、Ｔ細胞表面のマーカーに結合する抗体、骨髄細胞またはＮＫ細胞の表面マーカーに結合する抗体、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生剤、植物由来アルカロイド、ホルモン治療薬、ホルモンアンタゴニスト、アロマターゼ阻害剤、Ｐ糖タンパク質阻害剤、ならびに他の生体活性剤および有機化学剤など、がんを処置するための他の薬剤、操作Ｔ細胞、操作ＮＫ細胞、または操作マクロファージ、二特異性抗体を含むがこれらに限定されない。

[000243]ある特定の実施形態では、組合せ療法のための薬剤は、化学療法剤である。本明細書で使用される、「化学療法剤」とは、がんの処置において有用な化学化合物である。本明細書の方法で投与されうる化学療法剤の例は、チオテパおよびシクロホスファミドであるＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチオールメラミンを含む、エチレンイミンおよびメチルメラミン；アセトゲニン（とりわけ、ブラクタシンおよびブラクタシノン）；カンプトテシン（合成類似体であるトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン合成類似体、カルゼレシン合成類似体、およびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体である、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロランブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生剤（例えば、カリケアミシン、とりわけ、カリケアミシンガンマＩＩおよびカリケアミシンオメガＩＩ（例えば、Ａｇｎｅｗ、Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｉ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照されたい）；ジネミシンＡを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシンの他；ネオカルチノスタチン発色団および関連の色素タンパク質である、エンジイン抗生剤発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシンであるＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２－ピロリノドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生剤；メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎皮質抗体；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エフロルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシンおよびアンサミトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；イントラクリン；ペントスタチン；フェンメトラジン；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけ、Ｔ－２毒素、ベルカリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセルであるＴａｘｏｌ（登録商標）（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有アルブミン操作ナノ粒子製剤であるＡｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびドセタキセルであるＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲムシタビンであるＧｅｍｚａｒ（登録商標）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビンであるＮａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ－１１）（５－ＦＵおよびロイコボリンを伴うイリノテカンによる処置レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤であるＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン処置レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；細胞増殖を低減する、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））、およびＶＥＧＦ－Ａ、ならびに上記のうちのいずれかの、薬学的に許容される塩、酸、または誘導体を含むがこれらに限定されない。

[000244]本明細書の方法で投与されうる、さらなる非限定的な例示的化学療法剤は、例えば、タモキシフェン（タモキシフェンであるノルバデックス（Ｎｏｌｖａｄｅｘ）（登録商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびトレミフェンであるＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）を含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）など、ホルモンの、がんに対する作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤；例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロールであるＭｅｇａｓｅ（登録商標）、エキセメスタンであるＡｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾールであるＲｉｖｉｓｏｒ（登録商標）、レトロゾールであるＦｅｍａｒａ（登録商標）、およびアナストロゾ－ルであるＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）など、副腎内のエストロゲンの産生を調節する酵素であるアロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤の他；トロキサシタビン（シトシン類似体である、１，３－ジオキソランヌクレオシド）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、およびＨ－Ｒａｓなど、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路内の遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド；ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、リボザイムであるＡｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；遺伝子治療ワクチン、例えば、ワクチンであるＡｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）、ワクチンであるＬｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）、およびワクチンであるＶａｘｉｄ（登録商標）などのワクチン；ｒＩＬ－２であるＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）；トポイソメラーゼ１阻害剤であるＬｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）；ｒｍＲＨであるＡｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）；ならびに上記のうちのいずれかの、薬学的に許容できる塩、酸、および誘導体を含む。

[000245]ある特定の実施形態では、組合せ療法のための薬剤は、抗血管新生剤である。本明細書で使用される、「抗血管新生剤」とは、血管新生、血管形成、または所望されない血管透過性を、直接的に、または間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはこれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤は、血管新生因子またはその受容体に結合し、これらの血管新生活性を遮断する薬剤を含むことを理解されたい。例えば、本明細書の方法で投与されうる抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体、または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）））、またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－ｌ受容体）に対する抗体、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する低分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵｌ１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、または例えば、国際特許出願ＷＯ２００４／１１３３０４に記載されている低分子）を含みうる。抗血管新生剤はまた、天然の血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなども含む。例えば、ＫｌａｇｓｂｒｕｎおよびＤ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、５３：２１７～３９；ＳｔｒｅｉｔおよびＤｅｔｍａｒ（２００３）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２：３１７２～３１７９；ＦｅｒｒａｒａおよびＡｌｉｔａｌｏ（１９９９）、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５（１２）：１３５９～１３６４；Ｔｏｎｉｎｉら（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２：６５４９～６５５６；およびＳａｔｏ（２００３）、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、８：２００～２０６を参照されたい。

[000246]ある特定の実施形態では、組合せ療法のための薬剤は、増殖阻害剤である。本明細書で使用される、「増殖阻害剤」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の増殖を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、本明細書の方法において投与されうる増殖阻害剤は、Ｓ期にある細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の百分率を著しく低減する増殖阻害剤でありうる。増殖阻害剤の例は、Ｇ１期の停止およびＭ期の停止を誘導する薬剤など、細胞周期の進行を遮断する（Ｓ期以外の位相において）薬剤を含むがこれらに限定されない。古典的Ｍ期遮断剤は、ビンカアルカロイド（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、およびドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤を含む。Ｇ１期を停止させる薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤など、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、およびａｒａ－Ｃはまた、Ｓ期の停止へも波及する。さらなる情報は、ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編、「Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ」の、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる、「Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ， ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ， ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ」と題された１章（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９５）の、例えば、１３頁において見出される。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、いずれもがイチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体からの、微小管のアセンブリーを促進し、脱重合を防止することにより、微小管を安定化させる結果として、細胞内の有糸分裂の阻害をもたらす。

[000247]組合せ療法のための薬剤の用量は、特定の薬剤の投与に随伴しうる、任意の有害な副作用の存在、性質、および程度により決定されうる。典型的に、主治医は、年齢、体重、全般的健康状態、食餌、性別、投与される薬剤、投与経路、および処置される状態の重症度など、様々な因子を考慮に入れて、各個別の患者を処置するための、組合せ療法のための薬剤の投与量を決定するであろう。例を目的とするものであり、本開示を限定することが意図されるわけではないが、組合せ療法のための用量は、１日当たり、処置される対象の体重１ｋｇ当たり、約０．０００１～約１ｇ、１日当たり、体重１ｋｇ当たり、約０．０００１～約０．００１ｇ、または１日当たり、体重１ｋｇ当たり、約０．０１ｍｇ～約１ｇでありうる。投与量単位はまた、体表面積１平方メートル当たりのミリグラム単位の数量を指す、ｍｇ／ｍ^２単位でも表されうる。

[000248]本明細書で記載される組合せ療法における各治療剤は、同時に（例えば、同じ医薬中において、または同じ時点において）投与される場合もあり、共時的に投与される（すなわち、別個の医薬により、任意の順序で、相次いで、または任意の順序で、逐次的に投与される）場合もある。組合せ療法における治療剤、例えば、少なくとも毎日投与される化学療法剤と、毎週１回、隔週１回、または３週間ごとに１回など、低頻度で投与される生物療法剤とが、異なる剤形（１つの薬剤が、錠剤またはカプセルであり、別の薬剤が、滅菌液体である）であり、かつ／または異なる投与スケジュールで投与される場合に、逐次的投与は、有用でありうる。

[000249]ある特定の実施形態では、本開示のＬＩＬＲＢ２抗体と、第２の薬物とは、単一の剤形中に組み合わされるか、または共製剤化される。ある特定の実施形態では、本開示のＬＩＬＲＢ２抗体と、第２の薬物とは、個別に投与される。本開示のＬＩＬＲＢ２抗体と、第２の薬物との同時的投与が、処置期間を通して維持される場合もあるが、抗がん活性はまた、別個の１つの化合物の、後続の投与によっても達成されうる（例えば、初期組合せ処置に続く、ＬＩＬＲＢ２抗体、または代替的に、初期組合せ処置に続く、第２の薬物）。一部の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２抗体は、第２の薬物の投与の前に投与されるが、他の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２抗体は、第２の薬物の投与の後で投与される。一部の実施形態では、組合せ療法における治療剤のうちの少なくとも１つは、薬剤が、同じがんを処置するための単剤療法として使用される場合に、典型的に援用される、同じ投与レジメン（処置の用量、頻度、および持続期間）を使用して投与される。他の実施形態では、患者は、組合せ療法における治療剤のうちの少なくとも１つについて、薬剤が単剤療法として使用される場合より少ない総量、例えば、小用量、低投与頻度、および／または短い処置持続期間による総量を施される。

[000250]本発明の組合せ療法は、腫瘍を除去する手術の前に使用される場合もあり、この後に使用される場合もあり、放射線療法の前に使用される場合もあり、放射線療法時に使用される場合もあり、この後で使用される場合もある。本発明の組合せ療法は、触知により、またはＭＲＩ、超音波、もしくはＣＡＴスキャンなど、当技術分野で周知のイメージング法により、見出されるのに十分な程度に大きな腫瘍を処置するのに使用されうる。一部の実施形態では、本発明の組合せ療法は、少なくとも約２００ｍｍ^３、３００ｍｍ^３、４００ｍｍ^３、５００ｍｍ^３、７５０ｍｍ^３、または最長で、１０００ｍｍ^３の直径を有する、進行期腫瘍を処置するのに使用される。

[000251]本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を使用して、試料中のＬＩＬＲＢ２の存在または量を検出する方法であって、試料を、抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと、試料中のＬＩＬＲＢ２の存在または量を決定するステップとを含む方法をさらに提供する。抗ＬＩＬＲＢ２抗体を使用して、ＬＩＬＲＢ２を検出する方法は、限定せずに述べると、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、および免疫組織化学を含む。

[000252]一部の実施形態では、本開示は、対象においてＬＩＬＲＢ２に関連する疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象から得られた試料を、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと；ｂ）試料中のＬＩＬＲＢ２の存在または量を決定するステップと；およびｃ）ＬＩＬＲＢ２の存在を、対象におけるＬＩＬＲＢ２に関連する疾患または状態と相関させるステップとを含む方法を提供する。

[000253]一部の実施形態では、本開示は、任意選択で検出可能な部分とコンジュゲートされた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。キットは、ＬＩＬＲＢ２の検出またはＬＩＬＲＢ２関連疾患の診断において有用でありうる。

[000254]一部の実施形態では、本開示はまた、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の、対象においてＬＩＬＲＢ２に関連する疾患または状態を処置するための医薬の製造、ＬＩＬＲＢ２に関連する疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における使用も提供する。

[000255]Ｖ．キメラ抗原受容体
[000256]別の態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）タンパク質（抗ＬＩＬＲＢ２ ＣＡＲタンパク質）を提供する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗原認識領域、すなわち、本明細書で記載されるＬＩＬＲＢ２を認識する抗体または抗原結合性断片と、他の膜内構成要素および細胞内構成要素とを含む。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２ ＣＡＲタンパク質は、ＬＩＬＲＢ２抗原認識領域、膜貫通ドメイン、および細胞内共刺激シグナルドメインを含む。ある特定の実施形態では、単鎖抗ＬＩＬＲＢ２ ＣＡＲタンパク質はまた、リーダーペプチド、スペーサー領域、および細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインも含む。

[000257]ある特定の実施形態では、抗原認識領域は、複数のポリペプチド鎖を含む。
[000258]一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗体の重鎖可変ドメインを含む第１のポリペプチドと、抗体の軽鎖可変ドメインを含むポリペプチドとを含み、第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含み、抗体の重鎖可変ドメインと、抗体の軽鎖可変ドメインとは、一体となって、抗原認識領域を形成する。

[000259]一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗体の重鎖可変ドメインを含む、第１のポリペプチドと、抗体の軽鎖可変ドメインおよび抗体の軽鎖定常ドメインを含む、第２のポリペプチドとを含み、第１のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含み、抗体の重鎖可変ドメイン、抗体の軽鎖可変ドメイン、および抗体の軽鎖定常ドメインは、一体となって、抗原認識領域を形成する。一部の実施形態では、第１の部分は、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとをさらに含む。

[000260]一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗体の重鎖可変ドメインおよび抗体の重鎖定常ドメインを含む、第１のポリペプチドと抗体の軽鎖可変ドメインを含む、第２のポリペプチドとを含み、第１のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含み、抗体の重鎖可変ドメイン、抗体の重鎖定常ドメイン、および抗体の軽鎖可変ドメインは、一体となって、抗原認識領域を形成する。一部の実施形態では、第１の部分は、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとをさらに含む。

[000261]一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗体の重鎖可変ドメインを含む、第１のポリペプチドと、抗体の軽鎖可変ドメインを含む、第２のポリペプチドとを含み、第２のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含み、抗体の重鎖可変ドメイン、抗体の軽鎖可変ドメイン、および抗体の軽鎖定常ドメインは、一体となって、抗原認識領域を形成する。一部の実施形態では、第２の部分は、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとをさらに含む。

[000262]一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、抗体の重鎖可変ドメインおよび抗体の重鎖定常ドメインを含む、第１のポリペプチドと抗体の軽鎖可変ドメインを含む、第２のポリペプチドとを含み、第２のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含み、抗体の重鎖可変ドメイン、抗体の重鎖定常ドメイン、および抗体の軽鎖可変ドメインは、一体となって、抗原認識領域を形成する。一部の実施形態では、第２の部分は、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとをさらに含む。

[000263]ある特定の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、本明細書で記載される、抗ＬＩＬＲＢ２ ｓｃＦｖ、すなわち、リンカードメインにより連結された、抗ＬＩＬＲＢ２重鎖可変ドメインと、抗ＬＩＬＲＢ２軽鎖可変ドメインとを含む、単鎖ポリペプチドである。一実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと：リーダーペプチド、抗ＬＩＬＲＢ２重鎖可変ドメイン、リンカードメイン、抗ＬＩＬＲＢ２軽鎖可変ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激シグナルドメインを含む。一実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと：リーダーペプチド、抗ＬＩＬＲＢ２軽鎖可変ドメイン、リンカードメイン、抗ＬＩＬＲＢ２重鎖可変ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激シグナルドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲタンパク質は、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインをさらに含む。

[000264]ある特定の実施形態では、リンカードメインは、一般に、アラニン、セリン、およびグリシンなど、ヘリックス促進アミノ酸残基およびターン促進アミノ酸残基から構成される。しかし、他の残基もまた機能しうる。一部の実施形態では、リンカードメインは、ｓｃＦｖの、ＶＨと、ＶＬとの間に挿入される。一部の実施形態では、リンカードメインは、膜貫通ドメインと、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインとの間にある。一部の実施形態では、リンカードメインは、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインと、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインとの間にある。一部の実施形態では、リンカードメインは、配列であるＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２８）を含む。

[000265]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、自然発生のＣＤ８α膜貫通ドメインポリペプチド（配列番号１２９）と比較して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、ＣＤ８α膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号１３０の核酸配列によりコードされる。

[000266]一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、自然発生のＣＤ２８膜貫通ドメインポリペプチド（配列番号１３１）と比較して、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号１３２の核酸配列によりコードされる。

[000267]細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、抗原の、ＣＡＲへの結合に応答して、共刺激シグナル伝達をもたらすことが可能なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインのシグナル伝達は、サイトカインの産生と、サイトカインを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞の増殖とを結果としてもたらす。一部の実施形態では、細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、ＯＸ－４０細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、配列番号１３３のポリペプチド配列を有する。一部の実施形態では、ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１３４の核酸配列によりコードされる。一部の実施形態では、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１３５のポリペプチド配列を有する。一部の実施形態では、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１３６の核酸配列によりコードされる。

[000268]本明細書で提供される、「ヒンジ領域」とは、抗原結合性領域を、膜貫通ドメインと接続するポリペプチドである。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、重鎖可変領域を、膜貫通ドメインと接続する。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、重鎖定常領域を、膜貫通ドメインと接続する。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、軽鎖可変領域を、膜貫通ドメインと接続する。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、軽鎖定常領域を、膜貫通ドメインと接続する。一部の実施形態では、抗原結合性領域の、抗原に対する結合親和性は、ヒンジ領域の非存在と比較して増大される。一部の実施形態では、抗原結合性領域と、抗原との間の立体障害は、ヒンジ領域の存在下で低下される。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αヒンジ領域である。一部の実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ２８ヒンジ領域である。

[000269]一部の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、ヒトＣＤ３複合体のゼータ（ζ）鎖のシグナル伝達ドメイン、すなわち、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を伴うタンパク質であるＣＤ３ｚＩｓｏ１である。一部の実施形態では、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインは、配列番号１３９の核酸配列によりコードされる、配列番号１３８のアミノ酸配列を伴うタンパク質であるＣＤ３ｚＩｓｏ３である。

[000270]一例では、ＣＡＲタンパク質は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと：ＣＤ８αリーダーペプチド、抗ＬＩＬＲＢ２ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジ領域、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（またはＣＤ２８膜貫通ドメイン）、４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（またはＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、または４－１ＢＢ細胞内共刺激シグナル伝達ドメインが続くＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン）、および２つのアイソフォーム（ＣＤ３ｚＩｓｏ１またはＣＤ３ｚＩｓｏ３）のうちの１つのアイソフォームにある、ＣＤ３ζ細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインを含む単鎖ポリペプチドである。

[000271]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＬＩＬＲＢ２ ＣＡＲタンパク質は、ＬＩＬＲＢ２に対する、高結合親和性を裏付ける。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＣＡＲタンパク質は、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０９ｎＭ、０．０８ｎＭ、０．０７ｎＭ、０．０６ｎＭ、または０．０５ｎＭ未満の、ＬＩＬＲＢ２に対する結合親和性（ＥＬＩＳＡにより測定されるＥＣ_５０）を有する。本出願の目的のために、ＥＬＩＳＡによるＥＣ_５０値は、以下の通りに決定されうる。高結合９６ウェル透明プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ－Ｃｏｓｔａｒ、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に、組換えＬＩＬＲＢ２ ＥＣＤ－６×Ｈｉｓタグ付けタンパク質を、４℃、１μｇ／ｍｌの濃度（ウェル１つ当たり１００μｌ）で、１４～１６時間にわたりコーティングした。コーティングされたプレートを、ＰＢＳ、ｐＨ７．４で、手短に洗浄し、ＰＢＳ中に５％脱脂粉乳、ウェル１つ当たり２００μｌにより、３７℃で、２時間にわたりブロッキングする。結合のために、アッセイプレートにカバーを掛けて、３７℃で４５分間にわたりインキュベートすることにより、１０μｇ／ｍｌから始め、力価を３分の１ずつ、１２段階にわたり低下させながら、モノクローナル抗体（ＩｇＧまたはｓｃＦｖ断片）について調べる、系列希釈液を、９６ウェルプレートへと添加する。次いで、プレートを、Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳ（０．０５％の濃度）で、３回にわたり洗浄し、ＰＢＳで、１回洗浄する。ＨＲＰコンジュゲート（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を伴う、抗ヒト抗体もしくは抗ウサギ抗体、または他の種のＩｇＧ特異的抗体による二次抗体を、製造元により示唆される希釈率に従い、室温で、１時間にわたるインキュベーションのために添加する。検出は、１０分間にわたり、ＨＲＰ基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を添加することにより行い、２ＮのＨ_２ＳＯ_４、ウェル１つ当たり５０μｌを添加することにより停止させる。プレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ４、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を使用して、プレートを、４５０ｎｍの吸光度について読み取る。データを収集し、ＥＣ_５０の計算のために、ＧｒａｐＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７ソフトウェアによる、４パラメータの当てはめ曲線を使用してグラフ表示する。

[000272]別の態様では、本開示は、本明細書で記載されるＣＡＲタンパク質をコードするポリヌクレオチド分子を提供する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド分子は、真核細胞内で活性のプロモーターをさらに含む。一部の実施形態では、プロモーターは、ＪｅＴプロモーターである。ＪｅＴプロモーターは、多数の強力な哺乳動物のプロモーターと同等な転写活性を伴う、組換えプロモーターである。ＪｅＴプロモーターは、５つの鍵となるエレメント：（１）ＴＡＴＡボックス；（２）転写開始部位（Ｉｎｒ）；（３）ＣＡＴコンセンサス配列の他、（４）ＣＡｒＧエレメント、そして、最後に、（５）２つのタンデム配列内に配置された、４つのＳｐｌ転写結合性部位（ＧＧＧＣＧＧ）（ＵＳ２００２／００９８５４７Ａ１）からなる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド分子は、発現ベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のｐＬＶＸ－ＥＦ１ａｌｐｈａ－ＩＲＥＳ－ＺｓＧｒｅｅｎ、またはｐＳＩＮ－ＥＦ１ａｌｐｈａ－ＩＲＥＳ－ＰｕｒｏｍｙｃｉｎもしくはｐＳＩＮ－ＥＦ１ａｌｐｈａに基づき作出される。一例では、本開示のポリヌクレオチド分子は、順に、以下のエレメント：（１）ＪｅＴプロモーター；（２）ＣＤ８－アルファリーダーをコードする配列；（３）重鎖可変領域をコードする配列；（４）リンカーをコードする配列；（５）軽鎖可変領域をコードする配列；（６）ＣＤ８ヒンジドメインおよびＴＭドメインをコードする配列；（７）４－１ＢＢ共刺激性ドメインをコードする配列；（８）ＣＤ３－ゼータ活性化ドメインをコードする配列を含む。一例では、上記で記載されたエレメントは、標的遺伝子座、例えば、Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）遺伝子座への、ポリヌクレオチド分子の挿入を容易とする、５’側相同アームと、３’側相同アームとにより挟まれる。

[000273]ＶＩ．抗ＬＩＬＲＢ２ ＣＡＲタンパク質を発現する操作細胞
[000274]別の態様では、本開示は、本明細書で記載されるＣＡＲタンパク質を発現する、操作免疫細胞を提供する。免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、調節的Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、またはマクロファージでありうる。本明細書ではまた、免疫細胞を作製および操作する方法の他、養子細胞療法のために、細胞を使用および投与する方法も提供されるが、これらの場合、細胞は、自家細胞の場合もあり、同種細胞の場合もある。したがって、操作免疫細胞は、ＬＩＬＲＢ２^＋がん細胞を標的化する免疫療法などの免疫療法として使用されうる。

[000275]ＣＡＲタンパク質の発現は、標的細胞上に存在する抗原を認識することにより、操作免疫細胞が、がん細胞などの標的細胞に結合することを可能とする。標的細胞に結合すると、操作免疫細胞は、活性化され、次いで、増殖し、細胞傷害性となり、ついには、標的細胞を破壊するように進む。ＣＡＲ－Ｔ細胞免疫療法は、不応性急性Ｂ細胞性リンパ芽球性白血病およびＢ細胞性非ホジキンリンパ腫を処置するのに、臨床試験において成功が裏付けられ、米国ＦＤＡにより承認されている（Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｊら、ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ（２０１７）、９：１１８３～９７）。近年、ＣＡＲ－Ｔ細胞に加えて、ＣＡＲ ＮＫ細胞およびＣＡＲマクロファージも、免疫療法選択肢として開発されている（Ｋｌｏｅｓｓ Ｓら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（２０１９）、４６：４～１３；Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ Ｍら、ＡＡＣＲ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、２０１７、Ａｂｓｔｒａｃｔ、４５７５）。したがって、本開示についての、ある特定の実施形態では、本明細書で記載されるＣＡＲタンパク質を発現する免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージである。

[000276]免疫細胞は、対象、特に、ヒト対象から単離されうる。免疫細胞は、特定の疾患または状態を有することが疑われる対象、特定の疾患または状態に対する素因を有することが疑われる対象、特定の疾患または状態のための治療を受けつつある対象、健常ボランディアまたは健常ドナーである対象など、目的の対象から得られる場合もあり、血液バンクから得られる場合もある。免疫細胞は、それらが、対象において常在する、任意の場所であって、血液、臍帯血、脾臓、胸腺、リンパ節、および骨髄を含むがこれらに限定されない場所から回収されうる。単離された免疫細胞は、直接使用される場合もあり、凍結などにより、ある期間にわたり保管される場合もある。

[000277]免疫細胞は、それらが常在する、任意の組織であって、血液（血液バンクまたは臍帯血バンクにより収集された血液を含む）、脾臓、骨髄、手術手順において摘出され、かつ／または露出された組織、および生検手順を介して得られた組織を含むがこれらに限定されない組織からエンリッチ／精製されうる。免疫細胞が、エンリッチ、単離、および／または精製される組織／臓器は、生存対象および非生存対象のいずれからも単離されうるが、この場合、非生存対象は、臓器ドナーである。特定の実施形態では、免疫細胞は、末梢血または臍帯血などの血液から単離される。一部の態様では、臍帯血から単離された免疫細胞は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞またはＣＤ８陽性Ｔ細胞の抑制により測定されるような増強された免疫モジュレーション能を有する。具体的な態様では、免疫細胞は、免疫モジュレーション能の増強のために、プールされた血液、特に、プールされた臍帯血から単離される。プールされた血液は、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはこれを超える供給源（例えば、ドナー対象）など、２つまたはこれを超える供給源に由来しうる。

[000278]免疫細胞の集団は、治療を必要とする対象から得られる場合もあり、免疫細胞活性の低減と関連する疾患を患う対象から得られる場合もある。したがって、細胞は、治療を必要とする対象に対して、自家であろう。代替的に、免疫細胞の集団は、ドナー、好ましくは、組織適合性マッチドナーから得られうる。免疫細胞集団は、末梢血、臍帯血、骨髄、脾臓、または免疫細胞が、前記対象またはドナーにおいて常在する、他の任意の臓器／組織から採取されうる。免疫細胞は、プールされた臍帯血など、対象および／またはドナーのプールから単離されうる。

[000279]免疫細胞の集団が、対象と顕著に異なるドナーから得られる場合、得られる細胞が、対象へと導入されうるという意味で、対象適合性であることを条件として、ドナーは、好ましくは、同種ドナーである。同種ドナー細胞は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合性の場合もあり、そうでない場合もある。対象適合性とされるように、同種細胞は、例えば、移植片対宿主病を最小化するように、Ｔ細胞受容体を欠失させるか、またはＴ細胞シグナル伝達経路を阻害して、処置または遺伝子操作されうる（ＫｉｍおよびＣｈｏ、「Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ＣＡＲ－Ｔ Ｃｅｌｌｓ」、Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（２０２０）、１０：２６３を参照されたい）。

[000280]免疫細胞は、当技術分野で公知である、適切な修飾法を使用して、ＣＡＲを発現するように遺伝子操作されうる。例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＡｕｓｕｂｅｌ、「ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ」、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ、１９９４を参照されたい。一部の実施形態では、免疫細胞は、遺伝子操作を介して導入される、１つまたは複数の核酸であって、１つまたは複数のＣＡＲタンパク質をコードする核酸を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲタンパク質をコードする核酸は、遺伝子編集法、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術を使用して、免疫細胞のゲノム内に挿入される。一例では、ＣＡＲタンパク質をコードする核酸は、Ｔ細胞受容体アルファ定常（ＴＲＡＣ）遺伝子座に挿入される（例えば、Ｅｙｑｕｅｍ Ｊら、Ｎａｔｕｒｅ（２０１７）、５４３：１１３～１１７を参照されたい）。

[000281]また、有効量の本開示の免疫細胞を投与するステップを含む免疫療法も提供される。一部の実施形態では、医学的疾患または医学的障害は、免疫応答を誘発する、本明細書で記載される免疫細胞集団の移入により処置される。ある特定の実施形態では、医学的疾患または医学的障害は、がんである。ある特定の実施形態では、医学的疾患または医学的障害は、自己免疫疾患または炎症性疾患である。

[000282]以下の実施例は、特許請求される本発明をよりよく例示するために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。下記で記載される、全ての具体的な組成物、素材、および方法の全部または一部が、本発明の範囲内にある。これらの具体的な組成物、素材、および方法は、本発明を限定することが意図されるものではなく、本発明の範囲内に収まる、具体的実施形態を例示することだけが意図される。当業者は、発明的能力を行使せず、かつ、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の組成物、素材、および方法を開発することができる。本明細書に記載される手順において、本発明の境界内になおもとどまりながら、多くの変動が施されうることが理解されるであろう。このような変動も、本発明の範囲内に含まれることは、本発明者らの意図である。

実施例１
[000283]本実施例は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体変異体のデザインを例示する。
[000284]本発明者らは、かつて、Ｂ２－１９と名付けられ、ＬＩＬＲＢ２に対する、高結合親和性を有する、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を同定した（その開示が、その全体において本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１５３６２号を参照されたい）。ファージディスプレイ由来の親Ｂ２－１９抗体の可変ドメイン配列の解析は、他の臨床段階の抗体において、有害性であることが報告されている（Ｌｕら、ｍＡｂｓ、２０１９、１１：１、４５～５７；およびＹａｎｇら、ｍＡｂｓ、２０１７、９：４、６４６～６５３）、異性化モチーフ（ＤＧ、ＤＤ、ＤＤ、ＤＳ）、脱アミド化モチーフ（ＮＮ、ＮＧ）、および酸化モチーフ（Ｗ）の同定をもたらした。ＩｇＢＬＡＳＴを使用する、Ｂ２－１９の可変ドメインについての解析（Ｙｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ、２０１３、Ｗ３４～Ｗ４０）はまた、免疫原性の危険性を提示しうる、フレームワーク領域内の突然変異も同定した。こうして、ＣＤＲ内の有害性を消失させるように、Ｂ２－１９の点突然変異をデザインした：異性化モチーフ（Ｂ２－１９－１～Ｂ２－１９－６）、脱アミド化モチーフ（Ｂ２－１９－７～Ｂ２－１９－８）、酸化部位（Ｂ２－１９－９およびＢ２－１９－１０）。不要な免疫原性の危険性を最小化するように、ＶＨ可変ドメイン内およびＶＬ可変ドメイン内のフレームワーク残基を、生殖細胞系列化した（Ｂ２－１９－１１または生殖細胞系列化／生殖細胞抗体）。抗体変異体は、ｐｃＤＮＡ３．４ベクターへとクローニングし、哺乳動物Ｅｘｐｉ２９３Ｆ系内で発現させ、ＲｏｂｏＣｏｌｕｍｎ Ｅｓｈｍｕｎｏ Ａ ０．６ ｍＬで精製することにより作製した。結合アフィニティーは、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＨＦＣ）プローブを伴い、抗体を、５μｇ／ｍＬでロードし、組換えＬＩＬＲＢ２ ＥＣＤ－６Ｘ Ｈｉｓタグ付けタンパク質を滴定するＧａｔｏｒシステム（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ型番：８４２９－Ｔ４）を使用するＢＬＩにより測定した。データは、グローバルフィットにより解析した。Ｂ２－１９－１２は、結合親和性の著しい喪失を伴わずに、免疫原性の危険性を低減し、全ての異性化モチーフ消失させる突然変異を組み合わせることによりデザインした。

[000285]Ｂ２－１９をさらに最適化するように、さらなる変異体をデザインした。まず、変異体１４～１８は、脱アミド化モチーフを除去するように、変異体１２上に、さらなる突然変異を積み重ねた。変異体２０～３２および４１～６３は、高度の多特異性および薬物動態不良と相関した（Ｓｈａｒｍａら、ＰＮＡＳ、２０１４、１１１、５２、１８６０１～１８６０６；およびＳｈｅｈａｔａら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１９、２８、３３００～３３０８）、表面に露出した疎水性残基ならびにＡｒｇ残基およびＬｙｓ残基を低減するようにデザインした。熱安定性を、潜在的に改善するために、既に記載されている方法（Ｌｅｈｍａｎｎら、ｍＡｂｓ、７：６、１０５８～１０７１）を使用して、Ｂ２－１９ラムダ軽鎖ＣＤＲを、ヒトカッパ軽鎖１－３９フレームワークおよび同３－２０フレームワークへとグラフトすることにより、変異体３４および３５を操作した。同様に、ＣＤＲを、臨床段階の抗体において、良好な生物物理特性を有することが報告されている（Ｊａｉｎら、ＰＮＡＳ、２０１７、１１４、５、９４４～９４９）、ＶＨ３－２３フレームワークおよびＶＬ２－２３フレームワークへとグラフトすることにより、変異体３８～４０をデザインした。変異体３６および３７は、Ｆｖ電荷対称性パラメータ（ＦｖＣＳＰ）を改善して、高濃度製剤中の粘性を潜在的に低下させる（Ｓｈａｒｍａら、ＰＮＡＳ、２０１４、１１１、５２、１８６０１～１８６０６）ようにデザインした。これらの抗体変異体の全ては、文献（Ｔｉｌｌｅｒら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ、２００８、３２９、１１２～１２４）に記載されたベクターに基づき、カスタムの抗体ベクターへとクローニングし、Ｅｘｐｉ２９３発現系（約６ｍＬの培養物、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ型番：Ａ１４６３５）を使用して発現させた。表１に示される通り、オフ速度は、ＨＦＣプローブを伴い、抗体変異体をロードし、組換えＬＩＬＲＢ２ ＥＣＤ－６Ｘ Ｈｉｓタグ付けタンパク質への結合を測定するＧａｔｏｒシステム（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ型番：８４２９－Ｔ４）を使用する、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により、上清から測定した。

[000286]

実施例２
[000287]本実施例は、Ｂ２－１９抗体変異体の、結合親和性、特異性、および生物学的特性を例示する。

[000288]Ｂ２－１９および選り抜きの変異体の、組換えＬＩＬＲＢ２ ＥＣＤ－６Ｘ Ｈｉｓタグ付けタンパク質に対する結合アフィニティーは、ＢＬＩにより測定した。図２に示される通り、Ｂ２－１９抗体変異体は、ＬＩＬＲＢ２に対して、Ｂ２－１９親抗体と同じ結合親和性を有する。測定された結合アフィニティーは、全て、同様であり、実験誤差の範囲内にあり、Ｋ_Ｄは、約２．０ｎＭであった。

[000289]Ｂ２－１９抗体変異体の、ＬＩＬＲＢ２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞上の結合能は、フローサイトメトリー法により解析した。細胞５０，０００個を、１００μＬの最終容量中における、被験抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、４倍系列希釈液（１０～０．０００１５μｇ／ｍＬ）と共に、４℃で、３０分間にわたり、インキュベートした。洗浄の後、結合した抗体は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７へとコンジュゲートされたヤギ抗ヒトＦｃ特異的二次抗体を使用して検出した。結果は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより、用量反応曲線をプロットした。図３に示される通り、Ｂ２－１９抗体およびその変異体は、ＨＥＫ２９３細胞上で安定的に発現されたＬＩＬＲＢ２に対する、同等な結合能を有する。示されたデータは、二連プレート内で調べられた試料による幾何平均ＭＦＩであり、フローサイトメーター（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ）により解析した。

[000290]Ｂ２－１９抗体変異体の、単球上の結合能を測定するために、ＣＤ１４^＋ＣＤ１６^－単球５０，０００個を、健常ドナーのＰＢＭＣから単離し、ヒト血清に由来する、４００μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧと共に、４℃で、１０分間にわたりプレインキュベートして、Ｆｃガンマ受容体を遮断し、次いで、１００μＬの最終容量中におけるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７へと直接コンジュゲートされた被験抗ＬＩＬＲＢ２抗体の４倍系列希釈液（１０～０．００００３８μｇ／ｍＬ）と共に、４℃で、３０分間にわたり、速やかにインキュベートした。示されたデータは、フローサイトメーター（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ）内で、一例のドナーから得られた二連試料による、幾何平均ＭＦＩである。結果は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより、用量反応曲線をプロットした。図４に示される通り、Ｂ２－１９抗体およびその変異体は、初代ＣＤ１４^＋ＣＤ１６^－単球上の、内因性ＬＩＬＲＢ２に対する、同等な結合能を有する。

[000291]Ｂ２－１９抗体変異体の、ＬＩＬＲＢ２に対する結合特異性は、ＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＬＩＳＡプレートを、Ｃ末端で６×Ｈｉｓタグタンパク質と融合された、５μｇ／ｍＬのＬＩＬＲ／ＬＡＩＲ１の組換えＥＣＤでコーティングし、濃度を１０ｎＭ（パイロット実験で決定された、Ｂ２－１９抗体の、ＬＩＬＲＢ２への結合の飽和を結果としてもたらす濃度を１０倍上回る濃度）とする抗体と共にインキュベートし、室温で、２時間にわたりインキュベートした。結合した抗体は、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＦｃ特異的二次抗体およびＴＭＢ基質により検出した。４５０ｎｍにおける光学濃度は、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）により測定し、データは、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏにより解析した。図５に示される通り、Ｂ２－１９抗体およびその変異体は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する。

[000292]Ｂ２－１９抗体変異体の、骨髄細胞に対する結合特異性を測定するために、抗体の、健常ドナーから採取された全血に由来する白血球上の反応性を、フローサイトメトリーにより特徴づけた。Ｂ２－１９抗体およびその変異体を、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７と、直接コンジュゲートさせた。文献（Ｈｅｎｓｌｅｙら、Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ、２０１２、６７：４３０２）において入手可能なプロトコールに従い、１００マイクロリットルの全血を、細胞表面マーカーについての抗体、および抗ＬＩＬＲＢ２抗体と共にインキュベートした。試料は、フローサイトメーター（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ）により解析し、結果は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析した。図６に示される通り、Ｂ２－１９抗体およびその変異体は、全血中の骨髄細胞に特異的に結合する。示されたデータは、試料の補正幾何ＭＦＩ、すなわち、ＬＩＬＲＢ２抗体を除外された試料の幾何ＭＦＩ（ＦＭＯ対照）を控除された、抗ＬＩＬＲＢ２染色試料の幾何ＭＦＩである。一例のドナーによる、代表的データを示す（Ｎ＝３例のドナー）。

[000293]ＬＩＬＲＢ２の、ＨＬＡ－Ｇへの結合の遮断における、Ｂ２－１９抗体変異体の活性を測定するために、ＬＩＬＲＢ２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞５０，０００個を、抗ＬＩＬＲＢ２抗体の、４倍系列希釈液（１０～０．０００１５μｇ／ｍＬ）の存在下で、１０μｇ／ｍＬ（パイロット実験で決定された、結合についてのＥＣ_８０の概数に対応する濃度）の、Ｈｉｓタグ付け可溶性ＨＬＡ－Ｇと共にインキュベートした。洗浄の後、結合したＨＬＡ－Ｇは、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）へと直接コンジュゲートされた抗Ｈｉｓ抗体を使用して検出した。全てのインキュベーションは、４℃で、３０分間にわたり実施した。試料は、フローサイトメーター（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ）により解析した。結果は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにより、用量反応曲線をプロットした。図７に示される通り、Ｂ２－１９抗体およびその変異体は、ＨＬＡ－Ｇへの結合に対する、同等な遮断活性を有する。

[000294]Ｂ２－１９抗体変異体の、炎症促進効果を測定するために、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＰＢＭＣを、健常ドナーから単離し、９６ウェル丸底プレート内、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはアイソタイプ対照の存在下にある、１０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３ ｍＡｂ（ＨＩＴ３ａ）の存在下で、３日間にわたりインキュベートした。サイトカイン濃度のレベルは、Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｅｍｉｘｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ａｓｓａｙ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用する、３日間にわたるインキュベーションの終了時において、培養培地上清中で測定した。図８Ａおよび８Ｂに示される通り、Ｂ２－１９抗体およびＢ２－１９－１６抗体は、健常ドナーから単離され、最適未満の抗ＣＤ３ ｍＡｂ濃度で刺激されたＰＢＭＣ上における、同等な炎症促進効果を有する。

実施例３
[000295]本実施例は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体変異体の多特異性の低減を例示する。
[000296]抗体の高ＢＶＰ多特異性ＥＬＩＳＡスコアは、カニクイザルおよびヒトにおける、急速なクリアランスとの相関（Ｈｏｔｚｅｌら、ｍＡｂ、２０１２、４、６、７５３～７６０）、ならびにヒトにおける半減期の短縮（Ｓｈｅｈａｔａら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１９、２８、３３００～３３０８）を示した。したがって、どの抗体が、ヒトにおいて薬物動態不良（ＰＫ）を呈する危険性を低下させるのかを決定するように、Ｂ２－１９および選り抜きの変異体の多特異性について評価する、ＢＶＰ ＥＬＩＳＡを実施した。バキュロウイルス粒子は、ＬａｋｅＰｈａｒｍａにより作製された。略述すると、２ＬのＳｆ９細胞を、バキュロウイルスと共に培養し、単離し、ＰＢＳ ｐＨ７．４中に再懸濁させ、－８０℃で保管した。ブラッドフォード法を使用して、ＢＶＰ調製物の総タンパク質は、２．３ｍｇ／ｍＬであると測定し、力価は、５．７１×１０^１２ｐｆｕ／ｍＬであった。ＢＶＰ ＥＬＩＳＡを、既に記載されている（Ｈｏｔｚｅｌら、ｍＡｂ、２０１２、４、６、７５３～７６０）通りに実施した。略述すると、ＭａｘｉＳｏｒｐプレートを、炭酸緩衝液ｐＨ９．６中に０．５％のＢＶＰにより、４℃で、一晩にわたりコーティングし、ウェル１つ当たり３００μＬのＰＢＳにより、１回洗浄し、ウェル１つ当たり２００μＬのＰＢＳ＋０．５％のＢＳＡにより、１時間にわたりブロッキングした。洗浄の後、ウェル１つ当たり３００μＬのＰＢＳ、ＰＢＳ＋０．５％のＢＳＡ中に１５０μｇ／ｍＬの抗体により、３回にわたりブロッキングされたプレートを、１時間にわたりインキュベートするのに続き、ウェル１つ当たり３００μＬのＰＢＳにより、６回にわたり洗浄した。結合した抗体は、ＰＢＳ＋０．５％のＢＳＡ中で、１／２０，０００、または１／４０，０００に希釈された、ウェル１つ当たり１００μＬのヤギ抗ヒトＦｃ－ＨＲＰコンジュゲートを添加した後、１時間にわたり検出した。プレートは、ウェル１つ当たり３００μＬのＰＢＳによる、３回にわたる洗浄の後、ＴＭＢにより現像し、１０分後、塩酸により停止させた。ＢＶＰスコアは、試料のＯＤ_{４５０ｎｍ}を、ＢＶＰ上の二次抗体単独についてのバックグラウンドシグナルで除することにより計算した。１／２０，０００の二次希釈において、野生型Ｂ２－１９のＢＶＰスコアが、５倍のカットオフを上回ることは、これが、ヒトおよび非ヒト霊長動物におけるＰＫ不良の危険性を有することを指し示す。図９および表２に示される通り、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６のＢＶＰスコアが、いずれも、５倍のカットオフを下回ることは、これらが、ＰＫ不良をもたらす危険性を低下させていることを指し示す。市販の陽性対照（ＭＥＤＮＡ型番：Ｈ１３０８）および他の治療用抗体（例えば、リツキサン、イキセキズマブ、４Ｅ１０）を、アッセイにおいて、文献値（Ｊａｉｎら、ＰＮＡＳ、２０１７、１１４、５、９４４～９４９；およびＳｈｅｈａｔａら、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、２０１９、２８、３３００～３３０８）と相関する参照として使用した。

[000297]

実施例４
[000298]本実施例は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体変異体の熱安定性を例示する。
[000299]Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６の熱安定性について評価するために、抗体を、４０℃、ＰＢＳ ｐＨ７．５または製剤緩衝液（ＦＢ：２０ｍＭのヒスチジン－ＨＣｌ、７％のスクロース、０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０、ｐＨ５．５）中に、約２ｍｇ／ｍＬで、４週間にわたりインキュベートした。初期試料（Ｔ０）、ならびに２週間後（２Ｗ）および４週間後（４Ｗ）に回収されたアリコートを、サイズ除外クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により、凝集および断片化について解析した。表３に示される通り、ＰＢＳ中およびＦＢ中における、高分子量パーセント（％ＨＭＷ）の増大を、いずれの分子についても観察したが、６％未満を維持した。また、低分子量パーセント（％ＬＭＷ）の増大も、わずかに見られたが、これは、０．６％未満にとどまった。抗体の結合活性もまた、４０℃でのインキュベーションの前後における、ＰＢＳ中およびＦＢ中のＥＬＩＳＡにより評価した。図１０に示される通り、結合ＥＣ_５０のわずかな低下（約２～３倍）を、４週間にわたるインキュベーションの後に観察した。全体として、これらの結果は、いずれの分子も、熱ストレス下の時間経過にわたり、著しく凝集したり、断片化したり、結合活性を喪失したりしないことを示唆する。

[000300]

実施例５
[000301]本実施例は、凍結融解ストレス下における、抗ＬＩＬＲＢ２抗体変異体の安定性を例示する。

[000302]Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６の、凍結融解（Ｆ／Ｔ）ストレスに対する安定性について評価するために、抗体を、製剤緩衝液であるＦＢ（２０ｍＭのヒスチジン－ＨＣｌ、７％のスクロース、０．０２％ｗ／ｖのＰＳ８０、ｐＨ５．５）中に、２０ｍｇ／ｍＬで、１サイクル（１Ｃ）または３サイクル（３Ｃ）にわたる、－７０℃における凍結および室温（約２０℃）における融解へと曝露した。動的光散乱（ＤＬＳ）は、ＷｕＸｉ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓにより実施されたが、Ｚ平均（ｎｍ）／ＰＤＩ（多分散指数）により評価される凝集傾向を明らかにしなかった（表４を参照されたい）。凍結融解サイクルの前後における抗体の活性は、ＥＬＩＳＡにより評価した。図１１に示される通り、凍結融解の後で、Ｂ２－１９－１２またはＢ２－１９－１６のいずれについても、結合活性の著しい変化は観察されなかった。

[000303]

実施例６
[000304]本実施例は、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウスにおける、Ｂ２－１９抗体変異体の薬物動態を例示する。このモデルは、ヒトにおける抗体ＰＫを予測する能力を示したので、ヒトＦｃＲｎトランスジェニックマウスを、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６の薬物動態（ＰＫ）について評価するのに使用した（Ａｖｅｒｙら、ｍＡｂｓ、２０１６、８、１０６４）。具体的に述べると、６～８週齢の雌Ｆｃｇｒｔ^{ｍ１Ｄｃｒ}ホモ接合性マウス、雌Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒホモ接合性マウス（ＪＡＸ株番号：０１４５６５）１２匹を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た。表５に示されたスケジュールに従い、動物に、単回の静脈内注射により、５ｍｇ／ｋｇで投与し、６０μＬの血液を回収した。血清中の、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６の濃度は、サンドイッチＥＬＩＳＡフォーマットを使用して測定した。略述すると、アッセイは、９６平底ウェルマイクロ滴定プレート上にコーティングされる、組換えＬＩＬＲＢ２ ＥＣＤ－６Ｘ Ｈｉｓタグ付けタンパク質を、捕捉試薬として活用した。希釈された試料およびＢ２－１９－１２またはＢ２－１９－１６の標準物質を、コーティングされたプレートへと添加した。ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧを、Ｂ２－１９－１２またはＢ２－１９－１６と共に、免疫複合体を結果としてもたらす検出試薬として使用した。Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６についての血清濃度－時間プロットを作成した（図１２）。薬物動態パラメータ（表６）は、Ｂ２－１９－１２およびＢ２－１９－１６について、同様の曝露を指し示し、終末半減期およびクリアランスが、ＦｃＲｎトランスジェニックマウスにおけるヒトＩｇＧに典型的な範囲内にあることを指し示す。

[000305]

[000306]

実施例７
[000307]本実施例は、複数の初代免疫細胞系上における、Ｂ２－１９抗体変異体である、Ｂ２－１９－１６の、生体活性についての特徴づけを例示する。

[000308]機械的方法およびＰＢＳ－１０ｍＭ ＥＤＴＡを使用して、固形腫瘍に由来する組織試料を、単一細胞へと解離させた。場合によって、末梢血試料もまた、同じドナーから、腫瘍組織試料として得た。結果として得られる細胞を、標準的方法を使用して、４℃で、Ｂ２－１９－１６およびヒト骨髄細胞のマーカーについての抗体により染色し、染色試料は、フローサイトメトリーにより解析した。図１３Ａおよび１３Ｂに示される通り、Ｂ２－１９－１６は、固形腫瘍患者に由来する、固形腫瘍微小環境に浸潤する、全ての骨髄細胞の他、末梢血骨髄細胞に結合する。ＣＤ１１ｂは、汎骨髄細胞マーカーとして使用され、ＣＤ４５は、汎腫瘍浸潤性白血球マーカーとして使用される。

[000309]古典的単球を、健常ドナーＰＢＭＣから単離し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４により、６日間にわたり、未成熟樹状細胞へと分化させた。次いで、単球由来の未成熟樹状細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳの存在下で、抗体（１００ｎＭ）と共にインキュベートして、樹状細胞の成熟を誘導した。２日後、培地上清中で、ＴＮＦ－αのレベルを測定し、フローサイトメトリーにより、細胞を解析した。図１４に示される通り、Ｂ２－１９－１６抗体による処置は、寛容原性マーカーＣＤ２０９の発現レベルの低下をもたらした。加えて、図１５に示される通り、アイソタイプ処置条件と比較して、Ｂ２－１９－１６は、ＬＰＳ誘発性ＴＮＦ－α産生を、さらに増強した。これらの結果は、Ｂ２－１９－１６が、ＬＰＳの、単球由来の未成熟ＤＣに対する炎症促進効果を強化することを指し示す。このデータは、Ｂ２－１９－１６による、ＬＩＬＲＢ２の遮断が、ＴＬＲなどのＤＣ活性化経路に対するＬＩＬＲＢ２の阻害シグナルを緩和することを示唆する。

[000310]古典的単球を、調製したてのＰＢＭＣから単離し、６ウェルプレートを使用して、３ｍＬの完全ＤＣ培地（ＳｔｅｍＸＶｉｖｏ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｂａｓｅ Ｍｅｄｉａ、５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシン、５０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ、３５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－４）中に、１ｍＬ当たりの細胞１×１０^６個の密度における、６日間にわたる培養の間に、１５μｇ／ｍＬのＢ２－１９－１６またはアイソタイプ対照で処置した。ＧＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）およびＩＬ－４（３５ｎｇ／ｍＬ）を、３日目に、再度添加した。６日目に、結果として得られるＤＣを、フローサイトメトリーにより解析した。図１６Ａおよび１６Ｂに示される通り、Ｂ２－１９－１６による、初代単球の処置は、炎症促進性（ＣＤ８６^＋）ＤＣへの、それらの分化を促進した。寛容原性ＤＣを含む、多様な腫瘍微小環境関連の骨髄細胞集団は、循環単球に由来し、これらの細胞を、炎症促進性細胞へと再プログラム化するのに所望されるので、この所見は、鍵となる所見である。

[000311]古典的単球を、健常ドナーＰＢＭＣから単離し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４により、６日間にわたり、未成熟樹状細胞へと分化させた。次いで、単球由来の未成熟ＤＣを、他の任意の刺激の非存在下で、抗体（１００ｎＭ）と共にインキュベートし、２日後に、それらの表現型を、フローサイトメトリーにより解析した。図１７に示される通り、Ｂ２－１９－１６は、未成熟ＤＣ内の、成熟マーカー（ＣＤ８３）および活性化マーカー（ＣＤ８６、ＨＬＡ－ＤＲ）の発現レベルを増強する一方で、寛容原性マーカーである、ＣＤ２０９の発現を低下させる。これに対し、別の免疫阻害性受容体である、ＬＩＬＲＢ４の細胞表面発現レベルは、不変を維持した。したがって、Ｂ２－１９－１６は、未成熟ＤＣの、獲得免疫を誘発する能力の増強を提示するＤＣへの分化を促進する。

[000312]マクロファージは、１００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦにより、６日間にわたり、健常ドナーのＰＢＭＣから単離された、古典的単球から分化させた。６日目に、ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、健常の、非類縁ドナーのＰＢＭＣから単離し、１００ｎｇ／ｍＬのＭ－ＣＳＦおよび抗体（１００ｎＭずつ）を含有する、新鮮な培地中に懸濁させた。次いで、この混合物を、分化したマクロファージへと添加した。６日間の終点において、培地上清中のＩＮＦ－γレベルは、ＥＬＩＳＡにより測定した。使用された抗ＰＤ－１抗体は、クローンである、ＥＨ１２．２Ｈ７である。図１８に示される通り、抗ＰＤ－１遮断抗体と組み合わされたＢ２－１９－１６は、同種ＣＤ４^＋Ｔ細胞－マクロファージ共培養物中のＩＦＮ－γの産生を、各抗体単独と比較して増強する。

[000313]Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＰＢＭＣを、健常ドナーから単離し、９６ウェル丸底プレート内、抗ＬＩＬＲＢ２抗体である、Ｂ２－１９－１６またはアイソタイプ対照の、３倍の希釈系列の存在下で、５０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳと共に、３日間にわたりインキュベートした。サイトカイン濃度のレベルは、３日間にわたるインキュベーションの終点において、Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｐｒｅｍｉｘｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ａｓｓａｙを使用して、培養培地上清中で測定した。図１９に示される通り、Ｂ２－１９－１６抗体は、ＬＰＳ刺激に応答して産生される、多様な炎症促進性サイトカインの濃度レベルを増強した。加えて、図２０において、ＴＮＦ－αについて示される通り、Ｂ２－１９－１６抗体は、ＬＰＳ刺激ＰＢＭＣによる、サイトカイン産生を、用量依存的に増強する。

[000314]古典的単球単離キットを使用して、古典的単球を、調製したてのＰＢＭＣから単離した。古典的単球を、平底９６ウェルプレート内、完全マクロファージ培地（Ｘ－ＶＩＶＯ １０、４ｍＭのＬ－グルタミン、０．５ｍｇ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン、および１００ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ）中に、１ｍＬ当たりの細胞１×１０^６個の密度（ウェル１つ当たり１００μＬ）で培養した。細胞は、４日目に培地を交換して、７日間にわたり、マクロファージへと分化させた。７日目に、５μｇ／ｍＬのＳＴＩＮＧのアゴニストである、２’３’－ｃＧＡＭＰ、および１５μｇ／ｍＬのＢ２－１９－１６またはアイソタイプ対照を含有する完全マクロファージ培地で、培地を置きかえ、２日間にわたり、インキュベーションを継続させた。この２日間にわたるインキュベーションの間に、培地中に蓄積されたＴＮＦ－αのレベルは、ヒトサイトカインＬｕｍｉｎｅｘアッセイを使用して測定した。図２１に示される通り、Ｂ２－１９－１６は、ＴＮＦ－αの濃度レベルの上昇により指し示される通り、全ての被験ドナーに由来する、単球由来マクロファージ内における、ｃＧＡＳ－ＳＴＩＮＧ経路の刺激効果を強化する。

[000315]がん細胞系である、ＳＫ－ＭＥＬ－５およびＡ５４９を、平底９６ウェルプレート内、２００μＬの培養培地（ＤＭＥＭ、１０％の熱不活化ＦＢＳ）中に、１ｍＬ当たり１×１０^４個の密度で播種した。翌日、ＣＤ３３ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓを使用して、骨髄細胞を、健常ドナーから得られた、調製したてのＰＢＭＣ試料から単離した。がん細胞培養物の培地を、骨髄細胞１×１０^５個と、１５μｇ／ｍＬのＢ２－１９－１６またはアイソタイプ対照とを含有する、２００μｌの共培養培地（Ｘ－ＶＩＶＯ １０、５％のＦＢＳ、５０ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦ）で置きかえた。ウェル内に、がん細胞を伴わずに播種された骨髄細胞（ウェル１つ当たり１×１０^５個）を、腫瘍コンディショニング効果についての対照として使用した。培養物は、５日間にわたり維持した。５日目に、ＰＢＳ中に１０ｍＭのＥＤＴＡを使用して、細胞を剥離し、フローサイトメトリーにより解析した。前方散乱（ＦＳＣ）信号および側方散乱（ＳＳＣ）信号、ならびにＣＤ１１ｂ発現に基づき、骨髄細胞を、生細胞（７－ＡＡＤ^－）からゲーティングした。骨髄細胞の表現型は、抗炎症性（ＣＤ１６３およびＣＤ２０９）または炎症促進活性（ＣＤ６４）と関連する細胞表面マーカー発現レベルの変化を測定することにより査定した。図２２Ａおよび２２Ｂに示される通り、骨髄細胞の「腫瘍コンディショニング」は、阻害性受容体であるＣＤ２０９、およびスカベンジャー受容体であるＣＤ１６３の発現の上方調節をもたらした。これに対し、Ｆｃγ受容体であるＣＤ６４の発現が、腫瘍コンディショニングにより低下されたことは、結果として得られるマクロファージが、抗体媒介性食作用能の低減を提示することを指し示す。Ｂ２－１９－１６の、これらのがん細胞－骨髄細胞共培養物中の存在が、これらの変化を旧復させたことは、Ｂ２－１９－１６による処置が、がん内の骨髄細胞の、炎症促進性食作用の潜勢力を保存しうることを示唆する。重要なことは、Ｂ２－１９－１６の活性が、組織学的由来が顕著に異なるがん細胞系の存在下で観察されることは、Ｂ２－１９－１６が、広範な治療利益をもたらしうることを示唆することである。

[000316]古典的単球単離キットを使用して、古典的単球を、調製したてのＰＢＭＣから精製した。古典的単球を、平底９６ウェルプレート内、完全マクロファージ培地（Ｘ－ＶＩＶＯ １０、４ｍＭのＬ－グルタミン、０．５ｍｇ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン、１００ｎｇ／ｍｌのＭ－ＣＳＦ）中に、１ｍＬ当たりの細胞１×１０^６個の密度（ウェル１つ当たり１００μＬ）で培養した。細胞は、４日目に培地を交換して、７日間にわたり、マクロファージへと分化させた。７日目に、Ｂ２－１９－１６を、Ｆａｂｆｌｕｏｒ－ｐＨ Ｒｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｄｙｅで標識化した。この染料の蛍光発光レベルは、低ｐＨで上昇する。抗ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）抗体もまた、同時に標識化し、受容体：抗体複合体の内部化についての陽性対照として使用した。抗体：ＦａｂＦｌｕｏｒ複合体（最終濃度：４μｇ／ｍｌ）を、三連ウェル内の細胞へと添加した後、アッセイプレートを、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ Ｓ３ ｌｉｖｅ－ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）内に入れ、１０倍の拡大率で、位相画像および赤色蛍光画像について、速やかに走査し、次いで、２０分間ごとに、１２時間にわたり走査した。画像は、ＦａｂＦｌｕｏｒ標識化内部化抗体のレベルを決定するように、全積分強度について、Ｉｎｃｕｃｙｔｅソフトウェアを使用して解析した。図２３に示される通り、抗ＣＤ７１抗体が、効率的に内部化される（細胞内で検出される、時間経過にわたる蛍光の増大）のに対し、Ｂ２－１９－１６は、効率的に内部化されない。

[000317]Ｕ字底９４ウェルプレートを使用して、ＰＢＭＣ（ウェル１つ当たりの細胞１×１０^６個）を、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２を補充した総容量を２００μＬとするＸ－ＶＩＶＯ １０培地、およびＢ２－１９－１６、ＩｇＧ４（アイソタイプ対照）、またはリツキシマブ（陽性対照）の、３倍希釈系列（４０～０．００２μｇ／ｍＬ）中に播種した。各ドナーについて、上記の通りであるが、抗体の非存在下で播種されたＰＢＭＣを、そのそれぞれの非処置対照として使用した。細胞を、３７℃で、２０時間にわたりインキュベートした。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、Ｆｃγ受容体をブロッキングするように、ＦＡＣＳ緩衝液［ＰＢＳ、０．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のＢＳＡ］（ウェル１つ当たり５０μＬ）中で希釈された４００μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧと共に、室温で、１０分間にわたりインキュベートした。この直後に、ＦＡＣＳ緩衝液中で希釈された抗体カクテル（抗ＣＤ１４抗体である、クローンＭ５Ｅ２、および抗ＣＤ１９抗体である、クローンＨＩＢ１９）を添加し（ウェル１つ当たり５０μＬ）、ピペッティングにより、細胞懸濁液と混合し、細胞を、氷上で、３０分間にわたりインキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１：２０（ｖｏｌ／ｖｏｌ）に希釈された７－ＡＡＤを含有する、１００μＬのＰＢＳ中に再懸濁させた。細胞を、ハイスループット試料収集モジュールにより適合させた、ＢＤ ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａフローサイトメーター内に採取し、細胞１×１０^５個によるデータを記録した。データは、ＦｌｏｗＪｏ １０．５．３を使用して解析した。７－ＡＡＤの除外により、生細胞を同定した。生存ＰＢＭＣ集団内で、単球が、ＣＤ１４^＋細胞として同定されたのに対し、Ｂ細胞は、ＣＤ１９^＋細胞として同定された。各細胞型について、所与の抗体濃度における、細胞生存率を、同じＰＭＢＣドナーについて得られた、非処置対照値に対するパーセントとして計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９．１．０により、データをプロットすることにより、抗体濃度－細胞生存率曲線を作成した。図２４に示される通り、Ｂ２－１９－１６は、単球の、Ｆｃ依存性枯渇を誘発しない。これに対し、Ｂ細胞の枯渇は、リツキシマブの存在下における、同じドナー試料の、同時的インキュベーションにおいて観察される。

[000318]本開示に照らして、本明細書で開示され、特許請求される組成物および方法の全ては、不要な実験を伴わずに作製および実行されうる。本発明の組成物および方法について、好ましい実施形態との関係で記載されたが、当業者には、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱しない限りにおいて、本明細書で記載される方法、および方法のステップまたはステップの連鎖に、変動が適用されうることが明らかであろう。より具体的には、同じ結果または同様の結果が達成される一方で、化学的かつ生理学的に類縁である、ある特定の薬剤が、本明細書で記載される薬剤で代替されうることが明らかであろう。当業者に明らかな、全てのこのような同様の代替および改変は、付属の特許請求の範囲により規定される、本発明の精神、範囲、および概念の範囲内にあるものとみなされる。

Claims (50)

1. 図１に示される、クローン対合された重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片。
2. （ａ）重鎖可変領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号２６のアミノ酸配列を有するか；または
   （ｂ）重鎖可変領域が、配列番号３１のアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域が、配列番号３２のアミノ酸配列を有する、
   請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
3. 免疫グロブリン定常領域、任意選択でＩｇＧの定常領域、または任意選択でヒトＩｇＧの定常領域、または任意選択でＩｇＧ４の定常領域、または任意選択でヒンジ安定化ＩｇＧ４の定常領域をさらに含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
4. ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
5. ラクダ科動物化単一ドメイン抗体、ダイアボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ二量体、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、二特異性抗体、ｄｓダイアボディ、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価抗体である、請求項１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
6. ＬＩＬＲＢ２の１つまたは複数のリガンドへの結合を遮断する、請求項１から５のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片。
7. リガンドが、ＨＬＡ－Ｇ、古典的ＭＨＣ－Ｉ、ＡＮＧＰＴＬ、ＣＤ１ｃ／ｄ、ＣＳＰ、およびＳＥＭＡ４Ａからなる群から選択される、請求項６に記載の抗体または抗原結合性断片。
8. ＬＩＬＲＢ２の活性化をモジュレートする、請求項１から７のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
9. ＬＩＬＲＢ２の活性化を抑制する、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
10. ＬＩＬＲＢ２シグナル伝達をアンタゴナイズする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
11. 多特異性である、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
12. ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ－３、Ｆｃ受容体、ＦＣＲＬ（１～６）、Ａ２ＡＲ、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＴＧＦ－β、ＴＧＦ－βＲ、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ３、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ５、ＬＩＬＲＡ（１～６）、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＣＬＥＣ－１、ｃｌｅｖｅｒ－１／ｓｔａｂｉｌｉｎ－１、ＡＤＧＲＥ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＣＤ１２２、ＩＣＡＭ－１、ＩＤＯ、ＮＫＧ２Ｄ／Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＳＩＧＬＥＣ（７～１５）、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ１６０、ＣＤ１６１、ＣＤ３００、ＣＤ１６３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＬＦＡ－１、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＴＮＦＲ２、ＴＬＲ（１～９）、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＣＤ１６、およびＣＤ８３から選択される第２の抗原に特異的に結合する、請求項１１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
13. １つまたは複数のコンジュゲート部分へと連結される、請求項１から１２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
14. コンジュゲート部分が、免疫調節剤、抗腫瘍薬、クリアランス修飾剤、毒素、検出可能な標識、ＤＮＡ、ＲＮＡ、サイトカイン、または精製部分を含む、請求項１３に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
15. 請求項１から１４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
16. 請求項１から１４に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離ポリヌクレオチド。
17. 請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチドを含むベクター。
18. 請求項１７に記載のベクターを含む宿主細胞。
19. 抗体またはその抗原結合性断片を発現させる方法であって、請求項１８に記載の宿主細胞を、抗体またはその抗原結合性断片が発現される条件下で培養するステップを含む方法。
20. 請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗原結合性断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）タンパク質。
21. 請求項２０に記載のＣＡＲタンパク質をコードする単離核酸。
22. 請求項２１に記載の単離核酸を含むベクター。
23. 請求項２２に記載の単離核酸を含む操作細胞。
24. Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはマクロファージである、請求項２３に記載の操作細胞。
25. 対象におけるがんの影響を処置または改善する方法であって、対象に、治療有効量の請求項１から１４のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項１５に記載の医薬組成物、または請求項２３もしくは２４に記載の操作細胞を投与するステップを含む方法。
26. 対象における腫瘍量を低減または根絶する、請求項２５に記載の方法。
27. 腫瘍細胞の数を低減する、請求項２５に記載の方法。
28. 腫瘍サイズを低減する、請求項２５に記載の方法。
29. 腫瘍の転移を低減または防止する、請求項２５に記載の方法。
30. がんが、固形がんである、請求項２５に記載の方法。
31. 固形がんが、副腎がん、骨がん、脳がん、乳がん、結腸直腸がん、食道がん、胃食道接合部腺癌（ＧＥＡ）、眼がん、胃がん、頭頸部がん、腎がん、肝がん、肺がん、非小細胞肺がん、気管支肺胞細胞肺がん、中皮腫、頭頸部がん、扁平上皮がん、黒色腫、口腔がん、卵巣がん、子宮頸がん、陰茎がん、前立腺がん、膵臓がん、皮膚がん、肉腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がんからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
32. 単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、および他のＬＩＬＲＢ２^＋細胞が標的化される、請求項２５に記載の方法。
33. がんが、血液悪性腫瘍である、請求項２５に記載の方法。
34. 血液悪性腫瘍が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）、Ｂ細胞性白血病、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）、芽球形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、前駆Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｐｒｅ－Ｂ ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、有毛細胞白血病、重鎖病、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、形質芽細胞性リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞／組織球豊富型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性新生物、および真性多血症からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
35. 抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内、動脈内、腫瘍内、筋内、または皮下投与される、請求項２５から３４のいずれかに記載の方法。
36. 化学療法剤、増殖阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法において使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤、血小板由来増殖因子阻害剤、ＣＯＸ－２阻害剤、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体であるイピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、またはトレメリムマブ）、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）またはニボルマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）またはペムブロリズマブ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）またはアテゾリズマブ、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）またはアベルマブ、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標）またはデュルバルマブ、ＬＩＢＴＡＹＯ（登録商標）またはセミプリマブｒｗｌｃ、ＴＹＶＹＴ（登録商標）またはシンチリマブ、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ペンプリマブ（ＡＫ１０５）、カムレリズマブ、トリパリマブ、ジムベレリマブ（ＧＬＳ－０１０）、レチファンリマブ、スゲマリマブ、またはＣＳ１００３）、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する二重標的化抗体（例えば、抗ＰＤ－１／ＣＴＬＡ－４二特異性抗体またはＡＫ１０４）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、ＬＡＧ－３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）、サイトカイン、以下の標的であるＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＦＧＦＲ２ｂ、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つまたは複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ＩＤＨ１阻害剤、イボシデニブ、Ｔｉｂｓｏｖｏ（登録商標）、ＩＤＨ２阻害剤、エナシデニブ、Ｉｄｈｉｆａ（登録商標）、ｓｍｏｏｔｈｅｎｅｄ（ＳＭＯ）阻害剤、グラスデギブ、アルギナーゼ阻害剤、ＩＤＯ阻害剤、エパカドスタット、ＢＣＬ－２阻害剤、ベネトクラックス、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（登録商標）、白金錯体誘導体、オキサリプラチン、キナーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、ＰＩ３キナーゼ阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、イブルチニブ、ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、アカラブルチニブ、ＣＡＬＱＵＥＮＣＥ（登録商標）、ザヌブルチニブ、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＩＣＯＳ抗体、ＴＩＧＩＴ抗体、ＣＤ４０抗体、４－１ＢＢ抗体、ＣＤ４７抗体、ＯＸ４０抗体、ＴＮＦＲ２抗体、別のＬＩＬＲファミリーメンバーに対する抗体、Ｓｉｇｌｅｃ抗体、ＳＩＲＰ１ａ抗体またはＳＩＲＰ１ａ融合タンパク質、Ｅ－セレクチンのアンタゴニスト、腫瘍抗原に結合する抗体、Ｔ細胞表面のマーカーに結合する抗体、骨髄細胞またはＮＫ細胞の表面マーカーに結合する抗体、アルキル化剤、ニトロソウレア剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生剤、植物由来アルカロイド、ホルモン治療薬、ホルモンアンタゴニスト、アロマターゼ阻害剤、およびＰ糖タンパク質阻害剤、操作Ｔ細胞、操作ＮＫ細胞、または操作マクロファージからなる群から選択される、１つまたは複数の薬物を対象に投与するステップをさらに含む、請求項２５から３５のいずれかに記載の方法。
37. １つまたは複数の薬物が、抗体またはその抗原結合性断片と共に共投与される、請求項３６に記載の方法。
38. １つまたは複数の薬物が、（ａ）抗体もしくはその抗原結合性断片と共製剤化されるか、または（ｂ）対象に投与する前に、抗体もしくはその抗原結合性断片と、あらかじめ混合される、請求項３７に記載の方法。
39. 試料または対象においてがん細胞またはがん幹細胞を検出する方法であって、
    （ａ）対象または対象に由来する試料を、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と接触させるステップと；
    （ｂ）前記対象または試料中における前記抗体のがん細胞またはがん幹細胞への結合を検出するステップとを含む方法。
40. 試料が、体液または生検である、請求項３９に記載の方法。
41. 試料が、血液、骨髄、喀痰、涙液、唾液、粘液、血清、腹水、尿、または糞便である、請求項３９に記載の方法。
42. 検出が、免疫組織化学（ＩＨＣ）、フローサイトメトリー、イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなどを含む）、またはウェスタンブロットを含む、請求項３９に記載の方法。
43. 第２の時点において、ステップ（ａ）および（ｂ）を実施し、第１の時点と比較した検出レベルの変化を決定するステップをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
44. 前記単離抗体またはその抗原結合性断片が、標識をさらに含む、請求項３９に記載の方法。
45. 前記標識が、ペプチドタグ、酵素、磁性粒子、発色団、蛍光分子、化学発光分子、または色素である、請求項４４に記載の方法。
46. 前記単離モノクローナル抗体またはその抗原結合性断片が、リポソームまたはナノ粒子へとコンジュゲートされる、請求項３９から４５のいずれかに記載の方法。
47. 対象においてＴ細胞の活性化を増強するかまたは樹状細胞の成熟および活性化を増強するための方法であって、対象に、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項２３もしくは２４に記載の操作細胞を投与するステップを含む方法。
48. 対象において抗炎症性マクロファージおよび寛容原性ＤＣの表現型をモジュレートするための方法であって、対象に、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項２３もしくは２４に記載の操作細胞を投与するステップを含む方法。
49. 固形腫瘍のがん患者に由来する骨髄細胞を、炎症促進性表現型へと極性化させるための方法であって、対象に、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項２３もしくは２４に記載の操作細胞を投与するステップを含む方法。
50. 患者由来単球性ＭＤＳＣ（Ｍ－ＭＤＳＣ）の、自家Ｔ細胞の増殖およびサイトカインの放出に対する抑制効果を緩和するための方法であって、対象に、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または請求項２３もしくは２４に記載の操作細胞を投与するステップを含む方法。
    

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