KR20220012318A - 융합 복소환 유도체 - Google Patents

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KR20220012318A
KR20220012318A KR1020217042038A KR20217042038A KR20220012318A KR 20220012318 A KR20220012318 A KR 20220012318A KR 1020217042038 A KR1020217042038 A KR 1020217042038A KR 20217042038 A KR20217042038 A KR 20217042038A KR 20220012318 A KR20220012318 A KR 20220012318A
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스콧 디. 쿠덕
샌드린 셀린 그로세
스테판 줄리앙 라스트
린제이 그라함 데라트
코엔 반디크
피에르 장-마리 버나드 라보이션
얀 마틴 버크
윔 게스톤 베르스에런
미쉘 오브링거
크리스텔 캐서린 쎄실 도에벨린
압델라 타리
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얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니
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Abstract

본 출원에는 하기 화학식 I:
[화학식 I]

Description

융합 복소환 유도체
본 출원은 융합 복소환 유도체 화합물, 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 이들 화합물을 제조하기 위한 화학적 방법 및 HBV 또는 HBV 감염과 관련된 질환의 치료에서의 이들의 용도에 관한 것이다.
관련 출원
본 출원은 2019년 5월 28일자로 출원된 유럽 특허 출원 제19177009.8호 및 2019년 5월 28일자로 출원된 미국 가출원 제62/853,528호에 대한 우선권을 주장하며, 이들의 내용은 그 전체가 본원에 포함된다.
만성 B형 간염 바이러스(HBV) 감염은 전 세계 인구의 5%를 넘는 인구(전 세계적으로 3억 5천만명이 넘는 사람, 및 미국에서 125만명이 넘는 개인)에서 발생하는 중대한 세계적 건강 문제이다.
예방용 HBV 백신의 이용가능성에도 불구하고, 만성 HBV 감염의 부담은 개발 도상국의 대부분의 지역에서 최적이 아닌 치료 옵션과 지속적인 신규 감염률로 인해 계속해서 중대한, 해결되지 않은 전 세계적 의료 문제가 되고 있다. 현행 치료법은 치유를 제공하지 않으며 단지 두 부류의 작용제(인터페론 알파 및 뉴클레오시드 유사체/바이러스 폴리머라아제의 억제제)에 한정되고; 약물 내성, 낮은 효능, 및 내용성 문제가 이들의 효과를 제한한다. 낮은 HBV 치유율은 적어도 부분적으로는, 바이러스 생성을 완전히 억제하는 것이 단일 항바이러스제에 의해서는 달성하기 어렵다는 사실에 기인한다. 그러나, HBV DNA의 지속적 억제는 간질환의 진행을 늦추고 간세포 암종의 예방을 돕는다. HBV-감염 환자에 대한 현행 치료법의 목표는 혈청중 HBV DNA를 낮은 수준 또는 검출불가능한 수준까지 감소시키고 궁극적으로는 간경변 및 간세포 암종의 발생을 감소시키거나 예방하는 것이다.
HBV 캡시드 단백질은 바이러스 생명 주기 동안 필수적인 기능을 한다. HBV 캡시드/코어 단백질은 세포간 통과 동안 바이러스 게놈을 보호하는 준안정성 바이러스 입자 또는 단백질 쉘을 형성하고, 또한 게놈 캡시드화, 게놈 복제, 및 비리온의 형태 형성 및 탈출을 포함하는 바이러스 복제 과정에서 중추적인 역할을 한다. 캡시드 구조는 또한 바이러스 침입 후 탈코팅을 허용하도록 환경 신호(environmental cue)에 반응한다. 이와 일관되게, 캡시드 조립 및 분해의 적절한 타이밍, 적절한 캡시드 안정성 및 코어 단백질 기능은 바이러스 감염성에 결정적인 것으로 밝혀졌다.
HBV 캡시드 단백질의 중요한 기능은 바이러스 캡시드 단백질 서열에 엄격한 진화적 제약을 부과하여, 낮은 서열 가변성 및 높은 보존성이 관찰되게 한다. 이와 일관되게, 조립을 방해하는 HBV 캡시드의 돌연변이는 치명적이며, 캡시드 안정성을 교란시키는 돌연변이는 바이러스 복제를 심각하게 약화시킨다. 많은 돌연변이가 기능에 해롭다는 점에서 다기능성 HBV 코어/캡시드 단백질에 대한 높은 기능적 제약은 높은 서열 보존성과 일치한다. 실제로, 코어/캡시드 단백질 서열은 HBV 유전자형들 전체에 걸쳐 >90% 동일하고 단지 소수의 다형성 잔기를 나타낸다. 따라서 HBV 코어/캡시드 단백질 결합 화합물에 대한 저항성 선택은 바이러스 복제 적합성에 큰 영향을 미치지 않고서 선택하는 것이 어려울 수 있다.
바이러스 캡시드에 결합하고 HIV, 리노바이러스 및 HBV의 복제를 억제하는 화합물을 설명하는 보고서는 항바이러스 약물 표적으로서의 바이러스 캡시드 단백질에 대한 개념의 강력한 약리학적 증거를 제공한다.
WO2018/005881 및 WO2018/005883에는 HBV의 치료를 위한 융합 삼환계 유도체가 개시되어 있다.
바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선 및/또는 예방할 수 있는 치료제가 당업계에 필요하다. 이러한 치료제를 단독요법으로 또는 다른 HBV 치료 또는 보조 치료와 병용하여 HBV 감염 환자에게 투여하면, 바이러스 부담이 현저히 감소하고, 예후가 개선되고, 질환의 진행이 감소하고, 혈청전환율이 향상될 것이다.
HBV의 임상적 중요성의 관점에서, 바이러스 생성의 억제를 증가시킬 수 있고 HBV 감염을 치료, 개선 및/또는 예방할 수 있는 화합물의 확인은 새로운 치료제의 개발에 대한 매력적인 방안을 나타낸다. 이러한 화합물이 본원에 제공된다.
본 발명은 본원에 참고로 포함된, 본원에 첨부된 독립항 및 종속항에 의해 각각 정의되는 일반적인 실시 형태 및 바람직한 실시 형태에 관한 것이다. 본 발명은 캡시드 조립 조절이 가능한 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 선행 기술 화합물에 대하여 특성들의 유리한 균형을 제공할 수 있다. 구체적으로, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다:
[화학식 I]
Figure pct00001
여기서,
Figure pct00002
는 1개, 2개 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴로서, 상기 헤테로원자는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 5원 헤테로아릴은 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환되며;
R1은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는
- N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;
- 수소, 할로겐, CN, CF3, CF2H, CFH2, CF2CH3, C1- 6알킬, OC1- 6알킬, OCF3, OCF2H 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며 ;
더 구체적으로 R1은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
R2는 H, C1- 4알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
J는 CHR3이며;
R3은 H, CH2OH, 및 C(=O)N(R4)(R5)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4 및 R5는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
K는 C(R6)(R7), C=CH2 및 C(=O)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R6 및 R7은 H, F, OH, OCH3, CH2OH, C(=O)R8 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R8은 OH 또는 모르폴린이며;
R9 및 R10은 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
n은 0 또는 1의 정수이며;
L은 C(R11)(R12), NH, O이며;
R11 및 R12는 H 및 C(=O)N(R13)(R14)로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R13 및 R14는 H, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
추가 실시 형태는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 화학식 I의 화합물의 제약적 활성 대사산물, 및 화학식 I의 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체와, 이들의 제약상 허용가능한 염을 포함한다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기술되거나 예시된 화학종으로부터 선택되는 화합물이다.
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I의 화합물, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 I의 제약적 활성 대사산물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제 또는 하나 이상의 다른 약제 또는 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 사용 방법 또는 용도에 관한 것이다. 실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 예방, 치료 또는 개선하고, HBV 생성의 억제를 증가시키고, HBV 캡시드 조립 또는 다른 HBV 바이러스 복제 단계 또는 이의 생성물을 방해하는 데 사용된다. 본 방법은 이러한 방법을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 하나 이상의 화학식 I의 화합물, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 I의 화합물의 제약적 활성 대사산물을 투여하는 단계를 포함한다. 치료 방법의 추가 실시 형태가 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기재되어 있다. 본원에 제공된 임의의 방법은 적어도 하나의 추가 치료제, 더 구체적으로 적어도 하나의 다른 HBV 억제제를 개체에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또한 본 발명은 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드, 또는 용매화물에 관한 것이다:
[화학식 Ia]
Figure pct00003
여기서,
R1b는 수소, C1- 4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1-4알킬, 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R1a는 독립적으로 수소이거나 또는 R1b와 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하며;
na는 0, 1, 또는 2인 정수이며;
R2a는 수소 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R3a는 Cl, CN, 및 C1-4할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4a는 H, 또는 F이며;
HET는 C1 - 4알킬, 브로모, 클로로, 플루오로, 및 히드록시(C1-4)알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 독립적으로 치환된 5 또는 6원 헤테로아릴이며;
X 및 Y는, 어떤 경우에도 X 및 Y 중 하나만이 N이 되도록, N 또는 C로부터 각각 독립적으로 선택되며;
Z1은 N 또는 C이며;
Z2는 N 또는 CF이다.
추가 실시 형태는 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물, 및 화학식 Ia의 화합물의 거울상이성질체 및 부분입체이성질체와, 이들의 제약상 허용가능한 염을 포함한다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기술되거나 예시된 화학종으로부터 선택되는 화합물이다.
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 Ia의 제약적 활성 대사산물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제 또는 하나 이상의 다른 약제 또는 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 Ia의 화합물의 사용 방법 또는 용도에 관한 것이다. 실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 B형 간염 바이러스(HBV) 감염을 치료 또는 개선하고, HBV 생성의 억제를 증가시키고, HBV 캡시드 조립 또는 다른 HBV 바이러스 복제 단계 또는 이의 생성물을 방해하는 데 사용된다. 본 방법은 이러한 방법을 필요로 하는 대상체에게 유효량의 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물을 투여하는 단계를 포함한다. 치료 방법의 추가 실시 형태가 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용]에 기재되어 있다.
본 발명의 목적은 종래의 방법론 및/또는 선행 기술의 단점 중 적어도 하나를 극복 또는 개선하거나, 또는 이에 대한 유용한 대안을 제공하는 것이다. 본 발명의 추가의 실시 형태, 특징 및 장점은 하기 [발명을 실시하기 위한 구체적인 내용] 및 개시된 주제의 실시를 통하여 명백해질 것이다.
본 발명의 주제의 추가의 실시 형태, 특징 및 장점은 이러한 개시의 다음의 상세한 설명 및 그 실시를 통하여 명백해질 것이다. 간결함을 위해, 본 명세서에 인용된 특허를 포함한 간행물은 본원에 참고로 포함된다.
화학식 I의 화합물, 및 이의 제약상 허용가능한 염, 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 개시된 화합물의 제약적 활성 대사산물이 본원에 제공된다. 이들 화합물은 선행 기술의 화합물과 비교하여 특성들의 유리한 균형을 제공할 수 있다.
일 양태에서, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다:
[화학식 I]
Figure pct00004
여기서,
Figure pct00005
는 1개, 2개 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴로서, 상기 헤테로원자는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 5원 헤테로아릴은 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환되며;
R1은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
R2는 H, C1- 4알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
J는 CHR3이며;
R3은 H, CH2OH, 및 C(=O)N(R4)(R5)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4 및 R5는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
K는 C(R6)(R7), C=CH2 및 C(=O)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R6 및 R7은 H, F, OH, OCH3, CH2OH, C(=O)R8 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R8은 OH 또는 모르폴린이며;
R9 및 R10은 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
n은 0 또는 1의 정수이며;
L은 C(R11)(R12), NH, O이며;
R11 및 R12는 H 및 C(=O)N(R13)(R14)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R13 및 R14는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R1이 하나 이상의 Cl 치환체로 치환된 페닐, 더 구체적으로 R1이 디클로로페닐인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R2가 H 또는 메틸인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R3이 H인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 K가 C(R6)(R7) 또는 C=CH2인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 K가 C(R6)(R7) 또는 C=CH2인 화합물이며, 여기서,
R6 및 R7은 H, F, OH, OCH3, CH2OH, C(=O)R8 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R8은 OH 또는 모르폴린이며;
R9 및 R10은 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R6 및 R7이 H, F, OH, CH2OH 및 C(=O)N(R9)(R10)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R6 및 R7이 H, OH 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 K가 C(R6)(R7)이며, R6 및 R7이 H, F, OH, CH2OH 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며, 더 구체적으로, R6이 H 또는 OH이며, R7이 H, F, OH, CH2OH 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 선택되며; R9 및 R10이 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 R9 및 R10이 C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 각각의 R11 및 R12가 수소인 화합물이다. 실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은
Figure pct00006
가 이속사졸, 피라졸, 이미다졸, 옥사졸 및 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되며,
Figure pct00007
가 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은
Figure pct00008
가 C1- 4알킬 및 NH2로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환된 이속사졸인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은
Figure pct00009
가 피라졸인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 n이 0인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 n이 1인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 I의 화합물은 hepG2.117 세포주에서 HBV DNA의 억제에 대하여 0.10 μM 미만의 EC50을 나타내는 화합물이다.
본 발명의 추가 실시 형태는 하기 기술된 화합물(표 1 참조), 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이다.
[표 1]
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
일 양태에서, 하기 화학식 Ia의 화합물, 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드, 또는 용매화물이 본원에 제공된다:
[화학식 Ia]
Figure pct00014
여기서,
R1b는 수소, C1- 4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1-4알킬, 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R1a는 수소이거나 또는 R1b와 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하며;
na는 0, 1, 또는 2인 정수이며;
R2a는 수소 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R3a는 Cl, CN, 및 C1- 4할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4a는 H, 또는 F이며;
HET는 C1- 4알킬, 브로모, 클로로, 플루오로, 및 히드록시(C1-4)알킬로부터 선택되는 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 독립적으로 치환된 5 또는 6원 헤테로아릴이며;
X 및 Y는, 어떤 경우에도 X 및 Y 중 하나만이 N이 되도록, N 또는 C로부터 각각 독립적으로 선택되며;
Z1은 N 또는 C이며;
Z2는 N 또는 CF이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R1b가 수소, C1-4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1- 4알킬, 또는 플루오로인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R1b 및 R1a가 R1b와 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하는 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 na가 1인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 na가 0인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 na가 2인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R2a가 H 또는 CH3인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R2a가 H인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R2a가 CH3인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R3a가 Cl, CN, 또는 CF3인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R4a가 H인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 R4a가 F인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Y가 N이고 X가 C인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Y가 C이고 X가 N인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Z1이 N인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Z1이 C인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Z2가 N인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 Z2가 CF인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은
Figure pct00015
가 3-시아노-4-플루오로페닐, 4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐, 또는 3-클로로-4-플루오로페닐인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은
Figure pct00016
가 3-시아노-4-플루오로페닐인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 HET가 이속사졸릴, 피리디닐, 트리아졸릴, 3-메틸-트리아졸릴, 피리다지닐, 피라졸릴, 또는 1-메틸피라졸릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로아릴인 화합물이다.
실시 형태들에서, 화학식 Ia의 화합물은 HET가 이속사졸릴 및 피라졸릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로아릴인 화합물이다.
본 발명의 추가 실시 형태는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물이다:
[표 2]
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
및 이들의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드, 또는 용매화물.
제약 조성물
본 발명에 따른 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 및 적어도 하나의 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다.
본 발명의 일 실시 형태는 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제 및 하기 기술된 화합물(표 3 참조), 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 포함하는 제약 조성물이다.
따라서, 다음을 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다:
(A) 적어도 하나의 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
[화학식 I]
Figure pct00024
(여기서
Figure pct00025
는 1개, 2개 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴로서, 상기 헤테로원자는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 5원 헤테로아릴은 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환되며;
R1은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
R2는 H, C1- 4알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
J는 CHR3이며;
R3은 H, CH2OH, 및 C(=O)N(R4)(R5)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4 및 R5는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
K는 C(R6)(R7), C=CH2 및 C(=O)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R6 및 R7은 H, F, OH, OCH3, CH2OH, C(=O)R8 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R8은 OH 또는 모르폴린이며;
R9 및 R10은 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
n은 0 또는 1의 정수이며;
L은 C(R11)(R12), NH, O이며;
R11 및 R12는 H 및 C(=O)N(R13)(R14)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
R13 및 R14는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨); 및
(B) 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제.
본 발명의 일 실시 형태는 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제 및 하기 기술된 화합물(표 3 참조), 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 포함하는 제약 조성물이다.
[표 3]
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
다음을 포함하는 제약 조성물이 또한 본원에 개시된다:
(A) 적어도 하나의 하기 화학식 Ia의 화합물:
[화학식 Ia]
Figure pct00030
(여기서,
R1b는 수소, C1- 4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1-4알킬, 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R1a는 수소이거나 또는 R1b와 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하며;
na는 0, 1, 또는 2인 정수이며;
R2a는 수소 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R3a는 Cl, CN, 및 C1- 4할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R4a는 H, 또는 F이며;
HET는 C1- 4알킬, 브로모, 클로로, 플루오로, 및 히드록시(C1-4)알킬로부터 선택되는 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 독립적으로 치환된 5 또는 6원 헤테로아릴이며;
X 및 Y는, 어떤 경우에도 X 및 Y 중 하나만이 N이 되도록, N 또는 C로부터 각각 독립적으로 선택되며;
Z1은 N 또는 C이며;
Z2는 N 또는 CF임);
및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염, 입체이성질체, 동위원소 변이체, N-옥시드 또는 용매화물; 및
(B) 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제.
본 발명의 일 실시 형태는 다음을 포함하는 제약 조성물이다: 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제 및 적어도 하나의, 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 Ia의 화합물:
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
및 이러한 화합물의 임의의 제약상 허용가능한 염, N-옥시드 또는 용매화물, 또는 이러한 화합물의 임의의 제약상 허용가능한 프로드러그, 또는 이러한 화합물의 임의의 제약적 활성 대사산물.
실시 형태들에서, 제약 조성물은 또한 적어도 하나의 추가의 활성제 또는 치료제를 포함할 수 있다. 추가의 활성 치료제는 예를 들어 항-HBV제, 예컨대 HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 면역조절제, 예컨대 TLR-작용제, 또는 HBV 생명 주기 및/또는 HBV 감염의 결과에 영향을 미치는 임의의 기타 약제를 포함할 수 있다. 본 발명의 활성제를 단독으로, 또는 하나 이상의 추가 활성제와 조합하여 사용하여 본 발명의 제약 조성물을 제형화한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본 발명 내에서 유용한 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 환자 또는 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 다수의 기술(정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안구, 폐, 및 국소 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)이 당업계에 존재한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구성체는 신체의 하나의 기관 또는 일부로부터 신체의 또 다른 기관 또는 일부로 운반되거나 수송된다. 각각의 담체는 본 발명 내에서 유용한 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액(Ringer's solution); 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질.
본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한 본 발명 내에서 유용한 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본 발명 내에서 유용한 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 실시에 사용되는 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)]에 기술되어 있다.
"제약상 허용가능한 부형제"는 비독성이고, 생물학적으로 내용성이며, 그렇지 않으면 대상체에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 물질, 예컨대 불활성 물질을 지칭하는 것으로서, 이는 약리학적 조성물에 첨가되거나, 또는 달리 비히클, 담체, 또는 희석제로서 사용되어 약제의 투여를 용이하게 하고, 이와 양립가능하다. 부형제의 예는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당 및 전분 유형, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 식물유 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.
활성제의 하나 이상의 투여 단위를 함유하는 제약 조성물의 전달 형태는 당업자에게 공지되거나 당업자가 이용가능하게 되는 적합한 제약 부형제 및 배합 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 조성물은 적합한 전달 경로, 예를 들어 경구, 비경구, 직장, 국소 또는 안구 경로에 의해, 또는 흡입에 의해 본 발명의 방법으로 투여될 수 있다.
제제는 정제, 캡슐, 사셰(sachet), 당의정, 산제, 과립, 로젠지, 재구성용 산제, 액체 제제 또는 좌제의 형태일 수 있다. 바람직하게는, 조성물은 정맥내 주입, 국소 투여 또는 경구 투여용으로 제형화된다.
경구 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 용액, 에멀젼 또는 현탁액으로 제공될 수 있다. 경구 조성물을 제조하기 위하여, 화합물은 예를 들어, 일일 약 0.05 내지 약 100 mg/kg, 또는 일일 약 0.05 내지 약 35 mg/kg, 또는 일일 약 0.1 내지 약 10 mg/kg의 투여량을 생성하도록 제형화될 수 있다. 예를 들어, 일일 약 5 mg 내지 5 g의 총 일일 투여량은 일일 1회, 2회, 3회 또는 4회 투약함으로써 달성될 수 있다.
경구 정제는 불활성 희석제, 붕해제, 결합제, 활택제, 감미제, 착향제, 착색제 및 보존제와 같은 제약상 허용가능한 부형제와 혼합된 본 발명에 따른 화합물을 포함할 수 있다. 적합한 불활성 충전제는 탄산나트륨 및 탄산칼슘, 인산나트륨 및 인산칼슘, 락토스, 전분, 당, 글루코스, 메틸 셀룰로오스, 스테아르산마그네슘, 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 예시적인 액체 경구 부형제는 에탄올, 글리세롤, 물 등을 포함한다. 전분, 폴리비닐-피롤리돈(PVP), 나트륨 전분 글리콜레이트, 미정질 셀룰로오스 및 알긴산이 적합한 붕해제이다. 결합제는 전분 및 젤라틴을 포함할 수 있다. 활택제는 존재하는 경우 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 원하는 경우, 정제는 위장관에서의 흡수를 지연시키기 위해 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 코팅될 수 있거나 장용 코팅으로 코팅될 수 있다.
경구 투여용 캡슐은 경질 및 연질 젤라틴 캡슐을 포함한다. 경질 젤라틴 캡슐을 제조하기 위하여, 본 발명의 화합물은 고체, 반고체 또는 액체 희석제와 혼합될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐은 본 발명의 화합물을 물, 오일, 예컨대 땅콩유 또는 올리브유, 액체 파라핀, 단쇄 지방산의 모노 및 디-글리세리드의 혼합물, 폴리에틸렌 글리콜 400, 또는 프로필렌 글리콜과 혼합함으로써 제조될 수 있다.
경구 투여용 리퀴드는 현탁액, 용액, 에멀젼 또는 시럽의 형태일 수 있거나, 또는 사용 전에 물 또는 기타 적합한 비히클을 이용하여 재구성하기 위한 건조 생성물로서 제공되거나 동결건조될 수 있다. 이러한 액체 조성물은 제약상 허용가능한 부형제, 예컨대 현탁제(예를 들어, 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 알긴산나트륨, 젤라틴, 히드록시에틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 등); 비수성 비히클, 예를 들어 오일(예를 들어, 아몬드유 또는 분획화된 코코넛유), 프로필렌 글리콜, 에틸 알코올 또는 물; 보존제(예를 들어, 메틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산); 습윤제, 예컨대 레시틴; 및 원하는 경우 착향제 또는 착색제를 선택적으로 함유할 수 있다.
본 발명의 활성제는 또한 비경구 경로에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 좌제로서 직장 투여하기 위한 것으로 제형화될 수 있다. 정맥내, 근육내, 복강내 또는 피하 경로를 포함하는 비경구 사용을 위하여, 본 발명의 화합물은 적절한 pH 및 등장성으로 완충된 살균 수성 용액 또는 현탁액으로 또는 비경구적으로 허용가능한 오일로 제공될 수 있다. 적합한 수성 비히클은 링거액 및 등장성 염화나트륨을 포함한다. 이러한 형태는 앰플 또는 일회용 주사 장치와 같은 단위 용량 형태, 적절한 용량이 인출될 수 있는 바이알과 같은 다중 용량 형태, 또는 주사가능 제형을 제조하는 데 사용될 수 있는 고체 형태 또는 예비농축물로 제공된다. 예시적인 주입 용량은 수 분 내지 수 일의 범위의 기간에 걸쳐 제약적 담체와 혼합된 화합물 약 1 내지 1000 μg/kg/분의 범위일 수 있다.
국소 투여를 위하여, 화합물은 약 0.1% 내지 약 10%의 약물 대 비히클의 농도로 제약적 담체와 혼합될 수 있다. 본 발명의 화합물을 투여하는 또 다른 방식은 경피 전달에 영향을 미치기 위하여 패치 제형을 이용할 수 있다.
본 발명은 또한 유효량의 본원에 개시된 화학식 I의 화합물을 제약상 허용가능한 담체와의 긴밀한 혼합물로 배합하는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 제약 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.
본 발명의 화합물은 대안적으로 본 발명의 방법에서 흡입에 의해, 비강 또는 경구 경로를 통하여, 예를 들어 적합한 담체를 또한 함유하는 스프레이 제형으로 투여될 수 있다.
사용 방법
HBV 감염 또는 HBV-관련(또는 HBV-유도성) 병태 또는 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에서 HBV 감염 또는 HBV-관련(또는 HBV-유도성) 병태 또는 질환의 치료 또는 예방에 특히 유용한 화합물, 예를 들어 화학식 I, 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다.
특정한 작용 기작에 구애됨이 없이, 이들 화합물은 HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 캡시드 조립 및 다른 HBV 코어 단백질(HBc)의 기능을 조절 또는 방해하는 것으로 여겨지고/지거나 HBV 캡시드 조립을 방해하여 감염성 또는 복제 능력이 크게 감소된 빈 캡시드를 초래할 수 있다. 환언하면, 본원에 제공된 화합물은 캡시드 조립 조절제 또는 코어 단백질 알로스테릭 조절제(CpAM)로 작용할 수 있다.
본원에 제공된 화합물은 강력한 항바이러스 활성을 가지며, 유리한 대사 특성, 조직 분포, 안전성 및 제약 프로파일을 나타내고 인간에서 사용하기에 적합한 것으로 여겨진다. 본 개시 화합물은 정상적인 바이러스 캡시드 조립 또는 분해를 조절하거나(예를 들어, 가속화하거나, 지연시키거나, 억제하거나, 방해하거나 또는 감소시키거나), 캡시드에 결합하거나 또는 세포 폴리단백질 및 전구체의 대사를 변경시킬 수 있다. 캡시드 단백질이 성숙할 때 또는 바이러스 감염 동안 상기 조절이 일어날 수 있다. 본 개시 화합물은 감염된 세포 내에서의 HBV RNA 입자의 생성 또는 방출, 또는 HBV cccDNA의 활성 또는 특성의 조절 방법에 사용될 수 있다.
본 출원의 화합물은 HBV 캡시드 조립의 동역학을 가속화하여 Pol-pgRNA 복합체의 캡시드화를 방지하거나 이와 경쟁하고 이에 따라 pgRNA의 역전사를 차단할 수 있다.
본 출원의 화합물은 예를 들어 B형 간염 바이러스 코어 단백질(HBc)의 스펙클링(speckling)을 유도하거나 유도하지 않는 화합물의 능력을 평가함으로써 평가될 수 있다.
HBc는 20면체 캡시드를 형성하는 약 21 kDa의 작은 단백질이다. HBc는 예를 들어 문헌[Diab et al. 2018 (Antiviral Research 149 (2018) 211-220)]에 기술되어 있다.
캡시드 조립 조절제는 형태학적으로 온전한 캡시드의 형성 또는 다형성 비캡시드 구조의 형성을 유도할 수 있다. 다형성 비캡시드 구조는 HBV 코어 단백질에 대한 면역형광 염색에 의해 안정한 HBV-복제 세포주에서 시각화될 수 있으며 핵 및 세포질에서 "코어 스펙클링"으로 나타날 수 있다.
따라서 용어 "HBc 스펙클링"은 이러한 다형성 비캡시드 구조의 형성을 유도하는 능력을 지칭한다.
일 양태에서, 본 출원은 더 구체적으로 HBc의 스펙클링을 유도하지 않는 화합물(본원에 기술된 바와 같음)에 관한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 출원은 더 구체적으로 HBc의 스펙클링을 유도하는 화합물(본원에 기술된 바와 같음)에 관한 것이다.
HBc 스펙클링을 유도하거나 유도하지 않는 능력은 당업자가 적절하다고 생각하는 임의의 수단에 의해, 예를 들어 다음에 의해 평가될 수 있다:
- 본 출원의 화합물을 HBV-감염된 세포(예를 들어, (안정한) HBV-감염된 세포주로부터의 세포 또는 HBV 환자로부터 이전에 수집된 HBV 감염된 세포)와 접촉시킴;
- 선택적으로 세포를 고정 및 투과화하거나 선택적으로 세포를 용해시킴; 및
- 이들 세포와 본 출원의 화합물의 접촉이 이들 세포에서 HBc 스펙클링을 유도하는지 유도하지 않는지를 결정함.
이들 세포와 본 출원의 화합물의 접촉이 HBc 스펙클링을 유도하는지 유도하지 않는지를 결정하는 것은 예를 들어 HBc에 대한 면역형광 염색, 더 구체적으로 항-HBc 항체를 사용한 HBc에 대한 면역형광 염색을 포함할 수 있다.
본 출원의 화합물이 HBc 스펙클링을 유도하는 능력을 갖는지 갖지 않는지를 결정하는 방법의 예는 하기 실시예에 기술된 방법 및 문헌[Corcuera et al. 2018, Antiviral Research (2018), doi/ 10.1016/j.antiviral.2018.07.011, "Novel non-heteroarylpyrimidine ( HAP ) capsid assembly modifiers have a different mode of action from HAPs in vitro"](문헌[Corcuera et al. 2018]의 §2.8 참조)에 기술된 면역형광 분석을 포함한다. 문헌[Corcuera et al. 2018]의 도 5는 테스트 화합물이 HBc 스펙클링을 유도할 때(도 5의 HAP-처리된 세포 참조) 및 테스트 화합물이 HBc 스펙클링을 유도하지 않을 때(도 5에서, HAP 이외의 CAM으로 처리된 세포 참조)의 HBV 코어 형태를 예시한다.
보완적으로, 분석적 크기 배제 크로마토그래피 및 전자 현미경 분석을 사용하여 그리고 재조합 HBV 코어 이량체를 사용하여(즉, HBV-감염 세포를 사용하지 않고 재조합 HBV 코어 이량체를 사용하여) 세포 무함유 생화학적 분석을 구현함으로써 화합물이 다형성 비캡시드 구조의 형성을 유도하고 있다는 것을 확인할 수 있다: 예를 들어, 문헌[Corcuera et al. 2018]의 §2.4~2.5. 및 도 2~3 참조; 예를 들어, 문헌[Berke et al. 2017 (Antimicrobial Agents and Chemotherapy August 2017 volume 61 Issue 8 e00560-17 "Capsid Assembly Modulators have a dual mechanism of action in primary human hepatocytes infected with Hepatitis B virus")]의 재료 및 방법과, 도 2 참조; 예를 들어, 문헌[Huber et al 2018 (ACS Infect Dis. 2018 Dec 24. doi: 10.1021/acsinfecdis.8b00235; "Novel Hepatitis B Virus Capsid-Targeting Antiviral that Aggregates Core Particles and Inhibits Nuclear Entry of Viral Cores")]의 실험 섹션 및 도 4 참조.
본 개시 화합물은 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물, 더 구체적으로 이를 필요로 하는 인간에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 유용하다.
비제한적인 양태에서, 이들 화합물은 (i) HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 기타 HBV 코어 단백질 기능을 조절 또는 파괴하거나, (ii) 감염성 바이러스 입자의 생성 또는 감염을 억제하거나, (iii) 캡시드 조립 조절제로서 작용하는 감소된 감염성 또는 복제 능력을 갖는 결함 바이러스 입자에 영향을 미치도록 HBV 캡시드와 상호작용할 수 있다. 특히, 그리고 임의의 특정 작용 기작에 얽매이지 않고, 본 개시 화합물은 정상적인 바이러스 캡시드 조립 및/또는 미성숙 또는 성숙 입자의 분해의 방해, 가속화, 감소, 지연 및/또는 억제에 의해 비리온 조립 및/또는 분해, 비리온 성숙, 바이러스 유출 및/또는 표적 세포 감염의 방해와 같은 항바이러스 효과를 초래하는 비정상적인 캡시드 형태를 유도함으로써 HBV를 치료하는 데 유용한 것으로 여겨진다. 본 개시 화합물은 캡시드의 안정성을 교란시키도록 성숙 또는 미성숙 바이러스 캡시드와 상호작용하는 캡시드 조립의 파괴자로서 작용하여 그의 조립 및/또는 분해에 영향을 미칠 수 있다. 본 개시 화합물은 바이러스 캡시드의 안정성, 기능 및/또는 정상적인 형태에 필요한 단백질 폴딩 및/또는 염 가교를 교란시켜 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 캡시드에 결합하고 세포 폴리단백질 및 전구체의 대사를 변경하여 단백질 단량체 및/또는 올리고머 및/또는 비정상적인 입자의 비정상적인 축적을 초래할 수 있는데, 이는 세포 독성 및 감염된 세포의 사멸을 야기한다. 본 개시 화합물은 최적 안정성의 캡시드의 형성 실패를 야기할 수 있으며, 이는 (예를 들어, 감염성 동안) 바이러스의 효율적인 코팅해제 및/또는 분해에 영향을 준다. 본 개시 화합물은 캡시드 단백질이 미성숙형인 경우 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 캡시드 단백질이 성숙형인 경우 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있다. 본 개시 화합물은 바이러스 감염성 동안 캡시드 조립 및/또는 분해를 방해 및/또는 가속화할 수 있으며, 이는 추가로 HBV 바이러스 감염성을 약화시키고/시키거나 바이러스 로드를 감소시킬 수 있다. 본 개시 화합물에 의한 캡시드 조립 및/또는 분해의 방해, 가속화, 억제, 지연 및/또는 감소는 바이러스를 숙주 유기체로부터 근절할 수 있다. 본 개시 화합물에 의한 대상체로부터의 HBV의 근절은 유리하게는 만성 장기 요법의 필요성을 제거하고/하거나 장기 요법의 지속 기간을 감소시킨다.
본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 I의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 단독요법에 적합하다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 자연 또는 천연 HBV 주에 대하여 효과적이다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 현재 공지된 약물에 대하여 저항성인 HBV 주에 대하여 효과적이다.
또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 화합물은 HBV cccDNA의 활성, 안정성, 기능 및 바이러스 복제 특성을 조절(예를 들어, 억제 또는 방해)하는 방법에 사용될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV cccDNA의 형성을 감소시키거나 예방하는 방법에 사용될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 화합물은 HBV cccDNA의 활성을 조절(예를 들어, 억제 또는 방해)하는 방법에 사용될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV cccDNA의 형성을 감소시키는 방법에 사용될 수 있다.
또 다른 실시 형태에서, 본 개시 화합물은 감염된 세포 내로부터의 HBV RNA 입자의 방출 또는 생성을 조절, 억제 또는 방해하는 방법에 사용될 수 있다.
추가 실시 형태에서, HBV RNA 입자의 총 부하(또는 농도)가 조절된다. 바람직한 실시 형태에서, HBV RNA의 총 부하가 감소된다.
또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여와 비교하여 개체에서 바이러스 로드를 더 큰 정도로 또는 더 빠른 속도로 감소시킨다.
일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 폴리머라아제 억제제, 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 특유의 캡시드 조립 조절제, 확실하거나 비공지된 기작의 항바이러스 화합물 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 투여보다 더 낮은 발생률의 바이러스 돌연변이 및/또는 바이러스 저항성을 야기한다.
또 다른 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은 개체에게 하나 이상의 HBV 백신, 뉴클레오시드 HBV 억제제, 인터페론 또는 이들의 임의의 조합물을 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 I의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출불가능하게 되는 일정 기간 동안 실시된다.
본 출원은 또한 의약으로 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 상기 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
일 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가 실시 형태는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 본 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 하나 이상의 화학식 Ia의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염과 관련된 바이러스 로드의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염과 관련된 바이러스 로드를 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 재발 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 재발을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재의 억제 또는 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV DNA-함유 입자 또는 HBV RNA-함유 입자의 형성 또는 존재를 억제하거나 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 유해한 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염의 유해한 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염에 의한 간 손상의 관해의 유도를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염에 의한 간 손상의 관해를 유도하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향의 감소를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 위한 장기간 항바이러스 요법의 생리학적 영향을 감소시키는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서, 개체는 잠복성 HBV 감염을 앓고 있고, 본 방법은 치료적 유효량의 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체의 HBV 바이러스 로드를 모니터링하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서, 본 방법은 HBV 바이러스가 검출불가능하게 되는 기간 동안 실시된다.
또한 본 출원은 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 화합물 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이러한 제약 조성물에 관한 것이다.
또한 본 출원은 만성 B형 간염의 예방, 이의 악화의 예방, 만성 B형 간염의 개선 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 화합물 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이러한 제약 조성물에 관한 것이다.
본 출원은 HBV-유도성 질환 또는 병태의 예방, 이의 악화의 예방, HBV-유도성 질환 또는 병태의 개선 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 화합물 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이러한 제약 조성물에 관한 것이다.
HBV-유도성 또는 관련 질환 또는 병태는 진행성 간 섬유증, 간경화를 초래하는 염증 및 괴사, 말기 간 질환 및 간세포 암종을 포함한다. 부가적으로, HBV는 델타 간염 바이러스(hepatitis delta virus; HDV)에 대하여 헬퍼(helper) 바이러스로서 작용하며, 전 세계적으로 1500만명 초과의 사람이 HBV/HDV 동시감염되어 있을 수 있다고 추정되고, 이때 HBV만을 앓고 있는 환자에 비해 간경변으로의 빠른 진행의 위험이 증가하고 비대상성 간경변(hepatic decompensation)이 증가한다(문헌[Hughes, S.A. et al. Lancet 2011, 378, 73-85]). 따라서 HDV는 HBV 감염을 앓고 있는 대상체를 감염시킨다. 특정 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 HBV/HDV 동시감염, 또는 HBV/HDV 동시감염과 관련된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다. 따라서, 특정 실시 형태에서, HBV 감염은 구체적으로 HBV/HDV 동시감염이고, 포유동물, 구체적으로 인간은 HBV/HDV 동시감염될 수 있거나 HBV/HDV 동시감염의 위험이 있다.
따라서, 본 출원은 또한, 상기 용도 중 임의의 것을 위한, 더 구체적으로 하기 항목 중 하나 이상의 예방, 이의 악화의 예방, 이의 개선 또는 치료에 사용하기 위한 이러한 화합물 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이러한 제약 조성물에 관한 것이다:
- 만성 간염, 더 구체적으로 만성 B형 간염 감염의 예방(즉, (B형) 간염 감염이 만성이 되는 것을 예방);
- 간염-관련 또는 간염-유도성 (만성) 질환 또는 병태, 더 구체적으로 B형 간염-관련 또는 B형 간염-유도성 (만성) 질환 또는 병태의 개선 또는 치료;
- 간염-관련 또는 간염-유도성 (만성) 질환 또는 병태, 더 구체적으로 B형 간염-관련 또는 B형 간염-유도성 (만성) 질환 또는 병태의 악화의 예방;
- (만성) 간염 감염, 더 구체적으로 (만성) B형 간염 감염에 의해 유도되는 간 섬유증의 병기 또는 간 손상 정도의 개선(퇴행, 또는 진행의 부재);
- (만성) 간염 감염의 섬유화 진행률의 개선(감소), 더 구체적으로 (만성) 간염 감염을 갖는 대상체에서의, 더 구체적으로 (만성) B형 간염 감염에 의한 간경변의 예방(예를 들어, 대상체가 섬유증의 간경변 병기에 도달하는 것을 예방).
조합물
하나 이상의 본 개시 화합물과 하나 이상의 추가 치료제의 조합물이 본원에 제공된다. 실시 형태들에서, 본원에 제공된 방법은 개체에게 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 실시 형태들에서, 본 개시 화합물은 병용 요법에 사용하기에 적합하다. 본 발명의 화합물은 HBV 감염을 치료하는 데 유용한 하나 이상의 추가 화합물과 조합되어 유용할 수 있다. 이들 추가 화합물은 HBV 감염의 증상 또는 영향을 치료, 예방 또는 감소시키는 것으로 공지된 화합물 또는 본 발명의 화합물을 포함할 수 있다.
예시적인 실시 형태에서, 추가 활성 성분은 HBV 감염과 관련된 병태 또는 장애의 치료에 효과적인 것으로 공지되거나 발견된 것들, 예컨대 또 다른 HBV 캡시드 조립 조절제 또는 HBV 감염과 관련된 특정 병태 또는 장애, 또는 HBV 감염 그 자체와 관련된 또 다른 표적에 대하여 활성인 화합물이다. 조합물은 (예를 들어, 조합물에 본 발명에 따른 활성제의 효력 또는 효과를 강화하는 화합물을 포함시킴으로써) 효능을 증가시키거나, 하나 이상의 부작용을 감소시키거나, 또는 본 발명에 따른 활성제의 필요한 용량을 감소시키는 역할을 할 수 있다. 추가 실시 형태에서, 본원에 제공된 방법은, HBV 감염의 예방적 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 예방적으로 치료하는 데 있어서 유사한 결과를 달성하는 데 필요한 단독의 상기 하나 이상의 추가 치료제의 투여와 비교하여 더 낮은 용량 또는 빈도로 상기 하나 이상의 추가 치료제를 투여하는 것을 허용한다.
이러한 화합물은 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않는다: HBV 병용 약물, HBV 백신, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제, 및 HBV 생명 주기에 영향을 주고/주거나 HBV 감염의 결과에 영향을 주는 임의의 기타 약제 또는 이들의 조합.
실시 형태들에서, 본 발명의 화합물은 HBV 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, 인터페론, 예컨대 페길화된 인터페론, 바이러스 침입 억제제, 바이러스 성숙 억제제, 캡시드 조립 조절제, 역전사효소 억제제, 시클로필린/TNF 억제제, TLR-작용제와 같은 면역조절제, HBV 백신, 및 HBV 생명 주기에 영향을 주고/주거나 HBV 감염의 결과에 영향을 주는 임의의 기타 약제 또는 이들의 조합과 병용될 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약제(또는 이의 염)와 병용될 수 있다:
라미부딘(lamivudine)(3TC, 제픽스(Zeffix), 헵토비르(Heptovir), 에피비르(Epivir), 및 에피비르-HBV), 엔테카비르(바라클루드(Baraclude), 엔타비르(Entavir)), 아데포비르 디피복실(헵사라(Hepsara), 프레베온(Preveon), 비스-POM PMEA), 테노포비르 디소프록실 푸마레이트(비리어드(Viread), TDF 또는 PMPA)를 포함하지만 이에 한정되지 않는, HBV 역전사효소 억제제, 및 DNA 및 RNA 폴리머라아제 억제제;
인터페론 알파(IFN-α), 인터페론 베타(IFN-β), 인터페론 람다(IFN-λ), 및 인터페론 감마(IFN-γ)를 포함하지만 이에 한정되지 않는 인터페론;
바이러스 침입 억제제;
바이러스 성숙 억제제;
BAY 41-4109과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 문헌에 기술된 캡시드 조립 조절제;
역전사효소 억제제;
TLR-작용제와 같은 면역조절제; 및
AT-61((E)-N-(1-클로로-3-옥소-1-페닐-3-(피페리딘-1-일)프로프-1-엔-2-일)벤즈아미드), AT-130((E)-N-(1-브로모-1-(2-메톡시페닐)-3-옥소-3-(피페리딘-1-일)프로프-1-엔-2-일)-4-니트로벤즈아미드), 및 유사한 유사체와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는, 확실하거나 비공지된 기작의 약제.
실시 형태들에서, 추가 치료제는 인터페론이다. 용어 "인터페론" 또는 "IFN"은 바이러스 복제 및 세포 증식을 억제하고 면역 반응을 조절하는 고도로 상동성인 종-특이적 단백질의 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. 인간 인터페론은 다음의 3가지 부류로 분류된다: 인터페론-알파(IFN-α), 인터페론-베타(IFN-β), 및 인터페론-오메가(IFN-ω)를 포함하는 I형, 인터페론-감마(IFN-γ)를 포함하는 II형, 및 인터페론-람다(IFN-λ)를 포함하는 III형. 개발되어 구매가능한 재조합 형태의 인터페론은 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다. 화학적으로 변형되거나 돌연변이된 인터페론과 같은 인터페론의 아형도 본원에서 사용되는 용어 "인터페론"에 포함된다. 화학적으로 변형된 인터페론은 페길화 인터페론 및 글리코실화 인터페론을 포함한다. 인터페론의 예는 또한, 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 인터페론-알파-n1, 인터페론-베타-1a, 인터페론-베타-1b, 인터페론-람다-1, 인터페론-람다-2, 및 인터페론-람다-3을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 페길화 인터페론의 예는 페길화 인터페론-알파-2a 및 페길화 인터페론 알파-2b를 포함한다.
따라서, 일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 인터페론 알파(IFN-α), 인터페론 베타(IFN-β), 인터페론 람다(IFN-λ), 및 인터페론 감마(IFN-γ)로 이루어진 군으로부터 선택되는 인터페론과 조합되어 투여될 수 있다. 특정한 일 실시 형태에서, 인터페론은 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 또는 인터페론-알파-n1이다. 또 다른 특정한 실시 형태에서, 인터페론-알파-2a 또는 인터페론-알파-2b는 페길화된다. 바람직한 실시 형태에서, 인터페론-알파-2a는 페길화 인터페론-알파-2a(PEGASYS)이다.
또 다른 실시 형태에서, 추가 치료제는 인터페론 부류에 속하는 생물학적 약제를 포함하는 면역 조절제 또는 면역 자극제의 요법제로부터 선택된다.
또한, 추가 치료제는 HBV 복제 또는 지속성에 필요한 다른 필수 바이러스 단백질(들) 또는 숙주 단백질의 기능을 방해하는 약제일 수 있다.
다른 실시 형태에서, 추가 치료제는 바이러스의 침입 또는 성숙을 차단하거나 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 또는 비-뉴클레오시드(뉴클레오티드) 폴리머라아제 억제제와 같이 HBV 폴리머라아제를 표적으로 하는 항바이러스제이다. 병용 요법의 추가 실시 형태에서, 역전사효소 억제제 및/또는 DNA 및/또는 RNA 폴리머라아제 억제제는 지도부딘(Zidovudine), 디다노신(Didanosine), 잘시타빈(Zalcitabine), ddA, 스타부딘(Stavudine), 라미부딘, 아바카비르(Abacavir), 엠트리시타빈(Emtricitabine), 엔테카비르(Entecavir), 아프리시타빈(Apricitabine), 아테비라핀(Atevirapine), 리바비린, 아시클로비르, 팜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 발간시클로비르, 테노포비르(Tenofovir), 아데포비르(Adefovir), PMPA, 시도포비르, 에파비렌츠(Efavirenz), 네비라핀(Nevirapine), 델라비르딘(Delavirdine) 또는 에트라비린(Etravirine)이다.
일 실시 형태에서, 추가 치료제는 자연적인 제한된 면역 반응을 유도하여 관련없는 바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 면역조절제이다. 즉, 면역조절제는 항원 제시 세포의 성숙, T-세포의 증식, 및 사이토카인 방출에 영향을 미칠 수 있다(예를 들어, 특히 IL-12, IL-18, IFN-알파, -베타, 및 -감마 및 TNF-알파).
추가 실시 형태에서, 추가 치료제는 TLR 조절제 또는 TLR 작용제, 예컨대 TLR-7 작용제 또는 TLR-9 작용제이다. 병용 요법의 추가 실시 형태에서, TLR-7 작용제는 SM360320(9-벤질-8-히드록시-2-(2-메톡시-에톡시)아데닌) 및 AZD 8848(메틸 [3-({[3-(6-아미노-2-부톡시-8-옥소-7,8-디히드로-9H-퓨린-9-일)프로필][3-(4-모르폴리닐)프로필]아미노}메틸)페닐]아세테이트)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 제공된 임의의 방법에서, 본 방법은 개체에게 하나 이상의 HBV 백신, 뉴클레오시드 HBV 억제제, 인터페론 또는 이들의 임의의 조합물을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, HBV 백신은 RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B, 또는 SHANVAC B 중 적어도 하나이다.
또 다른 양태에서, HBV 감염의 치료를 필요로 하는 개체에서 HBV 감염을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 본 방법은 단독의 또는 역전사효소 억제제와 조합된 본 발명의 화합물의 치료적 유효량을 개체에게 투여함으로써 HBV 바이러스 로드를 감소시키는 단계; 및 추가로 HBV 백신의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다. 역전사효소 억제제는 지도부딘, 디다노신, 잘시타빈, ddA, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르, 엠트리시타빈, 엔테카비르, 아프리시타빈, 아테비라핀, 리바비린, 아시클로비르, 팜시클로비르, 발라시클로비르, 간시클로비르, 발간시클로비르, 테노포비르, 아데포비르, PMPA, 시도포비르, 에파비렌츠, 네비라핀, 델라비르딘 또는 에트라비린 중 하나일 수 있다.
본원에 기술된 임의의 병용 요법에 있어서, 상승 효과는 예를 들어 Sigmoid-Emax 방정식(문헌[Holford & Scheiner, 1981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453]), 뢰베(Loewe) 가법성의 방정식(문헌[Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326]) 및 중간값-효과 방정식(문헌[Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55)]과 같은 적합한 방법을 사용하여 계산될 수 있다. 상기 언급된 각각의 방정식을 실험 데이터에 적용하여 상응하는 그래프를 생성하여 약물 조합의 효과의 평가에 도움을 줄 수 있다. 상기 언급된 방정식과 관련된 상응하는 그래프는 각각 농도-효과 곡선, 이소볼로그램 곡선 및 조합 지수 곡선이다.
따라서, 본 출원은 또한 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에서의 동시 사용, 개별 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 생성물을 제공하며, 여기서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 본원에 기술된 바와 같은 화합물 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 본 출원의 제약 조성물이고, 상기 제2 화합물은 또 다른 HBV 억제제이다.
예를 들어, 제2 화합물은 HBV 병용 약물, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌 아민 2,3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제 및 다른 HBV 약물로 이루어진 군으로부터 선택되는 또 다른 HBV 억제제이다
방법
본 출원은 본원에 기술된 바와 같은 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
실시 형태들에서, 본 방법은 다음의 단계 a), b), c), d), e), f), g), h), i), j), k), l), m), n), o), p), q), r) 및 s) 중에서 적어도 하나의 단계를 포함한다:
a) 하기 화학식 II:
[화학식 II]
Figure pct00035
의 화합물을
NaOCl과 반응시켜 하기 화학식 III의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 III]
Figure pct00036
(여기서,
m은 0 또는 1의 정수이며;
G1은 H 또는 CH3이며;
G2는 H, C1-4알킬, CF3 또는 페닐이며;
단, m이 1인 경우, G1 및 G2는 둘 다가 H인 것은 아님);
b) 하기 화학식 III:
[화학식 III]
Figure pct00037
의 화합물을
강산, 예컨대 염산(HCl), 또는 TFA와 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 IV]
Figure pct00038
(여기서,
m은 0 또는 1의 정수이며;
G1은 H 또는 CH3이며;
G2는 H, C1- 4알킬, CF3 또는 페닐임);
c) 비친핵성 염기, 예컨대 트리에틸아민(Et3N) 또는 탄산나트륨(Na2CO3)의 존재 하에 하기 화학식 IV:
[화학식 IV]
Figure pct00039
의 화합물을
하기 화학식 V:
[화학식 V]
Figure pct00040
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 VI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 VI]
Figure pct00041
(여기서,
m은 0 또는 1의 정수이며;
G1은 H 또는 CH3이며;
G2는 H, C1- 4알킬, CF3 또는 페닐이며;
G3은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G3은 3,4-디클로로페닐임);
d) 하기 화학식 VII:
[화학식 VII]
Figure pct00042
의 화합물을
하기 화학식 VIII:
[화학식 VIII]
Figure pct00043
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 IX의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 IX]
Figure pct00044
(여기서,
Figure pct00045
는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
Figure pct00046
는 방향족 고리이며;
G3은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G3은 3,4-디클로로페닐이며;
G4는 H 또는 CH3임);
e) 하기 화학식 X:
[화학식 X]
Figure pct00047
의 화합물을
히드라진과 반응시켜 하기 화학식 XI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XI]
Figure pct00048
(여기서, G5는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G3은 3,4-디클로로페닐임);
f) 하기 화학식 XXV:
[화학식 XXV]
Figure pct00049
의 화합물을
티오아세트아미드와 반응시켜 하기 화학식 XXVI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXVI]
Figure pct00050
(여기서, G6은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐임);
g) 하기 화학식 XII:
[화학식 XII]
Figure pct00051
의 화합물을
하기 화학식 XIII:
[화학식 XIII]
Figure pct00052
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XIV]
Figure pct00053
(여기서,
Figure pct00054
는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
Figure pct00055
는 방향족 고리이며;
X는 CH2 또는 C=CH2이며;
G7은 OH, NH2 또는 NH(CH3)이며;
G8은 H 또는 NH2이며;
단, G7이 NH2 또는 NH(CH3)이면, G8은 H이거나; 또는 G7이 OH이면, G8은 H 또는 NH2이며;
Y는 O, NH, N 또는 N(CH3)이며;
Z는 N 또는 O임);
h) 하기 화학식 XV:
[화학식 XV]
Figure pct00056
의 화합물을
강산, 예컨대 염산(HCl) 또는 TFA(트리플루오로아세트산)와 반응시켜 하기 화학식 XVI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XVI]
Figure pct00057
(여기서,
Figure pct00058
는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
Figure pct00059
는 방향족 고리이며;
Q는 C=CH2 또는 CG10G11이며;
G9는 H 또는 NH2이며;
G10 및 G11은 H, OH, CONHMe, CH2OH 및 CONH2로부터 독립적으로 선택되며;
Y는 O, N, NH 또는 N(CH3)이며;
Z는 N 또는 O이며;
실시 형태들에서, G6이 NH2이면, Q는 C=CH2이며, Y는 O이며, Z는 N임);
i) 비친핵성 염기, 예컨대 트리에틸아민(Et3N) 또는 탄산나트륨(Na2CO3)의 존재 하에 하기 화학식 XVI:
[화학식 XVI]
Figure pct00060
의 화합물을
하기 화학식 XVII:
[화학식 XVII]
Figure pct00061
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 XVIII의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XVIII]
Figure pct00062
(여기서,
Figure pct00063
는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
Figure pct00064
는 방향족 고리이며;
Q는 C=CH2 또는 CG10G11이며;
G9는 H 또는 NH2이며;
G10 및 G11은 H, OH, CONHMe, CH2OH 및 CONH2로부터 독립적으로 선택되며;
G12는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G12는 3,4-디클로로페닐이며;
Y는 O, N, NH 또는 N(CH3)이며;
Z는 N 또는 O이며;
실시 형태들에서, G6이 NH2이면, Q는 C=CH2이며, Y는 O이며, Z는 N임);
j) 하기 화학식 XIX:
[화학식 XIX]
Figure pct00065
의 화합물을
하기 화학식 XX:
[화학식 XX]
Figure pct00066
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 XXI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXI]
Figure pct00067
(여기서,
G13은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G12는 3,4-디클로로페닐이며;
G14 및 G15는 H, C1- 4알킬, 시클로프로필, CH2CH2OH, CH2CF3 및 페닐로부터 독립적으로 선택되며; 더 구체적으로, G14 및 G15 중 하나는 H이며; 더 구체적으로, G14 및 G15 중 어느 것도 H가 아니라면, G14는 CH3이고 G15는 CH3이거나;
또는 G14 및 G15는 함께 연결되어 모르폴린 고리를 형성함);
k) 4-메틸모르폴린 N-옥시드(NMO)의 존재 하에 하기 화학식 XXVII:
[화학식 XXVII]
Figure pct00068
의 화합물을
오스뮴산칼륨(K2OsO4)과 반응시켜 하기 화학식 XXVIII의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXVIII]
Figure pct00069
(여기서,
G17은 H 또는 NH2이며;
G16은 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G16은 OtBu 또는 3,4-디클로로페닐임);
l) 4-메틸모르폴린 N-옥시드(NMO)의 존재 하에 하기 화학식 XXIX:
[화학식 XXIX]
Figure pct00070
의 화합물을
산화제, 예컨대 테트라프로필암모늄 퍼루테네이트(TPAP)와 반응시켜 하기 화학식 XXX의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXX]
Figure pct00071
(여기서, G18은 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G18은 OtBu 또는 3,4-디클로로페닐임);
m) 하기 화학식 XXXI:
[화학식 XXXI]
Figure pct00072
의 화합물을
플루오르화 시약, 예컨대 (디에틸아민)설퍼 트리플루오라이드(DAST)와 반응시켜 하기 화학식 XXXII의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXXII]
Figure pct00073
(여기서, G19는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G19는 3,4-디클로로페닐임);
n) 9-BBN 및 수산화나트륨의 존재 하에 하기 화학식 XXXIII:
[화학식 XXXIII]
Figure pct00074
의 화합물을
과산화수소와 반응시켜 하기 화학식 XXXIV의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXXIV]
Figure pct00075
(여기서,
G20은 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G20은 OtBu 또는 3,4-디클로로페닐이며;
X는 NH 또는 O임);
o) 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 XXXV:
[화학식 XXXV]
Figure pct00076
의 화합물을
메틸화제와 반응시켜 하기 화학식 XXXVI의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXXVI]
Figure pct00077
(여기서,
G21은 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G21은 3,4-디클로로페닐이며;
G22 및 G23은 H 및 CH3으로부터 독립적으로 선택되고, 단, G22 및 G23 중 적어도 하나는 CH3이며;
실시 형태들에서, 메틸화제는 MeI이고 염기는 NaH이며; 실시 형태들에서, 메틸화제는 파라포름알데히드임)(그리고 염기가 NaOMe이면, NaBH4);
p) 비친핵성 염기, 예컨대 수소화나트륨의 존재 하에 하기 화학식 XXXVII:
[화학식 XXXVII]
Figure pct00078
의 화합물을
메틸화제, 예컨대 메틸 요오다이드와 반응시켜 하기 화학식 XXXVIII의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXXVIII]
Figure pct00079
(여기서, G24는 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G24는 3,4-디클로로페닐임);
q) 비친핵성 염기, 예컨대 수소화나트륨의 존재 하에 하기 화학식 XXXIX:
[화학식 XXXIX]
Figure pct00080
의 화합물을
메틸화제, 예컨대 메틸 요오다이드와 반응시켜 하기 화학식 XL의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XL]
Figure pct00081
(여기서, G25는 O-tert-부틸, 또는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G25는 3,4-디클로로페닐임);
r) 하기 화학식 XXII:
[화학식 XXII]
Figure pct00082
의 화합물을
하기 화학식 XXIII:
[화학식 XXIII]
Figure pct00083
의 화합물과 반응시켜
하기 화학식 XXIV의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XXIV]
Figure pct00084
(여기서,
G26은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며; 더 구체적으로, G26은 3,4-디클로로페닐이며;
W는 O 또는 S이며;
W'는 O, NH, S임);
s) 하기 화학식 XLI:
[화학식 XLI]
Figure pct00085
의 화합물을
마그네슘 에톡시드 및 클로로아세트알데히드와 반응시켜 하기 화학식 XLII의 화합물을 형성하는 단계:
[화학식 XLII]
Figure pct00086
실시 형태들에서, 공정은 단계 a), b), 및 c)를 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h) 및 i)를 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i)를 포함할 수 있으며, 단계 k)를 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i) 및 k)를 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i), k)를 포함할 수 있으며, 단계 q)를 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i), k)를 포함할 수 있으며, 단계 m)을 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i)를 포함할 수 있으며, 단계 o)를 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i)를 포함할 수 있으며, 단계 n)을 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i)를 포함할 수 있으며, 단계 l) 및 n)을 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 g), h), i), l), n)을 포함할 수 있으며, 단계 j)를 추가로 포함할 수 있다.
실시 형태들에서, 공정은 단계 r) 및 p)를 포함할 수 있다.
정의
본 발명을 설명하기 위해 사용된 다양한 용어의 정의가 아래에 열거되어 있다. 이들 정의는 특정한 경우에 달리 제한되지 않는 한, 개별적으로 또는 더 큰 그룹의 일부로서 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용되는 용어에 적용된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 일반적으로, 적용가능 분야의 숙련자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 세포 배양, 분자 유전학, 유기 화학, 및 펩티드 화학에서의 실험실 절차는 당업계에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것들이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 단수형 용어("a" 및 "an")는 하나 이상의(즉, 적어도 하나의) 이의 문법적 대상을 지칭한다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나보다 더 많은 요소를 의미한다. 더욱이, "포함하는"이라는 용어와, 다른 형태, 예컨대 "포함하고 있다", "포함하다", 및 "포함된"의 사용은 한정적인 것이 아니다.
명세서 및 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하는"은 "~으로 이루어진" 및 "~으로 본질적으로 이루어진" 실시 형태를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다", "포함하고 있다", "갖는", "갖다", "할 수 있다", "함유하다", 및 이들의 변이형은 지명된 성분들/단계들의 존재를 필요로 하고 다른 성분들/단계들의 존재를 허용하는 개방형 연결 문구(open-엔ded transitional phrase), 용어 또는 단어인 것으로 의도된다. 그러나, 이러한 설명은 조성물 또는 공정을 열거된 화합물로 "이루어진" 및 "본질적으로 이루어진" 것으로 설명하는 것으로도 해석되어야 하며, 이는 지명된 화합물만이 임의의 제약상 허용가능한 담체와 함께 존재하는 것을 허용하고, 다른 화합물은 배제한다.
본원에 개시된 모든 범위는 인용된 종점을 포함하고 독립적으로 조합가능하다(예를 들어, "50 mg 내지 300 mg"의 범위는 종점인 50 mg 및 300 mg과, 모든 중간 값을 포함한다). 범위의 종점 및 본원에 개시된 임의의 값은 정확한 범위 또는 값으로 한정되지 않으며; 이러한 범위 및/또는 값의 근사치를 포함하기에 충분히 부정확하다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 근사치에 대한 표현은 관련된 기본 기능을 변화시키지 않으면서 달라질 수 있는 임의의 정량적 표현을 수식하도록 적용될 수 있다. 따라서, "실질적으로"와 같은 용어(들)로 수식된 값은 경우에 따라서는 특정된 정확한 값으로 한정되지 않을 수 있다. 적어도 일부의 경우, 근사치에 대한 표현은 값을 측정하기 위한 기기의 정밀도에 해당할 수 있다.
용어 "알킬"은 사슬에 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸(Me, 이는 또한 기호, "/"로 구조적으로 도시될 수 있음), 에틸(Et), n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸(tBu), 펜틸, 이소펜틸, tert-펜틸, 헥실, 이소헥실, 및 당업계의 통상적인 기술 및 본원에 제공된 교시에 비추어 볼 때 전술한 예 중 어느 하나와 등가인 것으로 간주될 기를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 C1-4알킬은 사슬에 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 C1-6알킬은 사슬에 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다.
용어 "시클로알킬"은 탄소환당 3 내지 12개의 고리 원자를 갖는 포화 또는 부분 포화, 단환식, 융합 다환식, 또는 스피로 다환식 탄소환을 지칭한다. 시클로알킬 기의 예시적인 예는 적절하게 결합된 모이어티들의 형태의 하기 엔티티를 포함한다:
Figure pct00087
.
단환식, 이환식 또는 삼환식 방향족 탄소환은 1, 2 또는 3개의 고리로 이루어진 방향족 고리 시스템을 나타내고, 상기 고리 시스템은 탄소 원자만으로 구성되며; 방향족이라는 용어는 당업자에게 잘 알려져 있으며 4n + 2개의 전자, 즉 6, 10, 14개 등의 π-전자를 갖는 환형 공액(cyclically conjugated) 시스템을 나타낸다(
Figure pct00088
의 법칙).
단환식, 이환식 또는 삼환식 방향족 탄소환의 특정 예로는 페닐, 나프탈레닐, 안트라세닐이 있다.
용어 "페닐"은 하기 모이어티를 나타낸다:
Figure pct00089
.
용어 "헤테로아릴"은 N, O, 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자 및 탄소 원자를 함유하는 5 내지 10개의 고리 구성원을 갖는 방향족 단환식 또는 이환식 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 용어 헤테로아릴에는, 고리가 탄소 원자로 이루어지고 적어도 하나의 헤테로원자 구성원을 갖는, 5 또는 6원의 방향족 고리가 포함된다. 적합한 헤테로원자는 질소, 산소, 및 황을 포함한다. 5원 고리의 경우, 헤테로아릴 고리는 질소, 산소, 또는 황 중 하나의 구성원 및 추가로 최대 3개의 추가 질소를 함유하는 것이 바람직하다. 6원 고리의 경우, 헤테로아릴 고리는 바람직하게 1 내지 3개의 질소 원자를 함유한다. 6원 고리가 3개의 질소를 갖는 경우, 최대 2개의 질소 원자가 인접한다. 헤테로아릴 기의 예는 푸릴, 티에닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 옥사디아졸릴, 트리아졸릴, 티아디아졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 벤조푸릴, 벤조티에닐, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조트리아졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 및 퀴나졸리닐을 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 헤테로아릴은 안정한 구조를 발생시키는 임의의 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 펜던트 기에 부착된다.
당업자는 상기 열거되거나 예시된 헤테로아릴 기의 화학종이 총망라된 것이 아니며, 이러한 정의된 용어의 범주 내의 추가의 화학종이 또한 선택될 수 있음을 인식할 것이다.
용어 "시아노"는 기 -CN을 지칭한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 클로로, 플루오로, 브로모 또는 요오도를 나타낸다.
용어 "치환된"은 명시된 기 또는 모이어티가 하나 이상의 치환체를 가짐을 의미한다. 용어 "비치환된"은 명시된 기가 치환체를 갖지 않음을 의미한다. 용어 "선택적으로 치환된"은 명시된 기가 비치환되거나 하나 이상의 치환체로 치환됨을 의미한다. "치환된"이라는 용어가 구조 시스템을 설명하는 데 사용되는 경우, 치환은 상기 시스템의 임의의 원자가-허용 위치에서 일어남을 의미한다. 특정 모이어티 또는 기가 임의의 특정 치환체로 치환되거나 선택적으로 치환된 것으로 명시적으로 언급되지 않은 경우, 이러한 모이어티 또는 기는 비치환된 것으로 의도됨이 이해된다.
용어 "파라", "메타", 및 "오르토"는 당업계에서 이해되는 바와 같은 의미를 갖는다. 따라서, 예를 들어, 완전히 치환된 페닐 기는 페닐 고리의 부착점에 인접한 "오르토"(o) 위치 둘 모두, "메타"(m) 위치 둘 모두, 및 상기 부착점의 맞은편의 하나의 "파라"(p) 위치에 치환체를 갖는다. 페닐 고리 상의 치환체의 위치를 더 명확히 하기 위하여, 아래에 예시된 바와 같이 상기 2개의 다른 오르토 위치를 오르토 및 오르토'로 표기하고 상기 2개의 다른 메타 위치를 메타 및 메타'로 표기한다.
Figure pct00090
피리딜 기 상의 치환체를 언급할 때, 용어 "파라", "메타" 및 "오르토"는 피리딜 고리의 부착점에 대한 치환체의 배치를 지칭한다. 예를 들어, 아래의 구조는 오르토 위치에 X1 치환체, 메타 위치에 X2 치환체, 파라 위치에 X3 치환체가 있는 3-피리딜로 설명된다:
Figure pct00091
.
더욱 간결한 설명을 제공하기 위하여, 본원에 제공된 양적 표현의 일부는 "약"이라는 용어로 한정되지 않는다. 용어 "약"이 명시적으로 사용되는지 여부에 관계없이, 본원에 제공된 모든 양은 실제 주어진 값을 나타내려는 것이고, 또한 이러한 주어진 값에 대한 실험 및/또는 측정 조건으로 인한 근사치 및 등가물을 포함하여 당업계의 통상적인 기술에 기초하여 합리적으로 추론될 수 있는 이러한 주어진 값에 대한 근사치를 나타내려는 것으로 이해된다. 수율이 백분율로 주어질 때마다, 그러한 수율은, 특정한 화학량론적 조건 하에서 얻어질 수 있는 엔티티의 최대 양에 대한 수율이 주어지는 엔티티의 질량을 나타낸다. 백분율로 주어진 농도는 다르게 표시되지 않는 한 질량비를 지칭한다.
용어 "완충" 용액 또는 "완충제" 용액은 본원에서 이들의 표준 의미에 따라 상호교환가능하게 사용된다. 완충 용액은 배지의 pH를 조절하는 데 사용되며, 이의 선택, 용도 및 기능은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[G.D. Considine, ed., Van Nostrand's Encyclopedia of Chemistry, p. 261, 5th ed. (2005)]을 참조한다(이는 특히 완충제 용액과, 완충제 성분의 농도가 완충제의 pH와 어떻게 관련되는지를 설명함). 예를 들어, 완충 용액은 용액의 pH를 약 7.5에서 유지하도록 용액에 MgSO4 및 NaHCO3을 10:1(w/w)의 비로 첨가하여 얻는다.
본원에 제공된 임의의 화학식은 구조식에 의해 도시된 구조 및 특정 변형 또는 형태를 갖는 화합물을 나타내고자 한다. 특히, 본원에 제공된 임의의 화학식의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있으므로 상이한 거울상이성질체 형태로 존재할 수 있다. 상기 일반 화학식의 화합물의 모든 광학 이성질체 및 이의 혼합물은 상기 화학식의 범주 내에 있는 것으로 간주된다. 따라서, 본원에 제공된 임의의 화학식은 라세미체, 하나 이상의 거울상이성질체 형태, 하나 이상의 부분입체이성질체 형태, 하나 이상의 회전장애이성질체 형태, 및 이들의 혼합물을 나타내고자 한다. 또한, 특정 구조는 기하 이성질체(즉, 시스 및 트랜스 이성질체), 호변이성질체 또는 회전장애이성질체로 존재할 수 있다.
동일한 분자식을 갖지만 원자 결합의 성질 또는 시퀀스 또는 공간에서의 원자 배열이 상이한 화합물을 "이성질체"로 칭함이 또한 이해되어야 한다.
서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 "부분입체이성질체"라고 하고, 거울상들이 서로 겹쳐지지 않는 것을 "거울상이성질체"라고 한다. 예를 들어, 화합물이 비대칭 중심을 갖는 경우, 이것은 4개의 다른 기에 결합되고, 한 쌍의 거울상이성질체가 가능하다. 거울상이성질체는 비대칭 중심의 절대 배열에 의해 특성화될 수 있으며 Cahn 및 Prelog의 R- 및 S-시퀀싱 규칙에 의해 설명되거나 분자가 편광면을 회전시키고 우선성 또는 좌선성으로(즉, 각각 (+)- 또는 (-)-이성질체로서) 지정되는 방식에 의해 설명된다. 키랄 화합물은 개별 거울상이성질체 또는 이들의 혼합물로 존재할 수 있다. 동일한 비율의 거울상이성질체들을 포함하는 혼합물은 "라세미 혼합물"로 칭해진다.
"호변이성질체"는 특정 화합물 구조의 상호교환가능한 형태이고 수소 원자 및 전자의 변위가 다양한 화합물을 지칭한다. 따라서 두 구조는 π 전자 및 원자(보통 H)의 이동을 통하여 평형 상태에 있을 수 있다. 예를 들어, 엔올과 케톤은 산 또는 염기 처리에 의해 빠르게 상호전환되기 때문에 호변이성질체이다. 호변이성질체의 또 다른 예로는 페닐 니트로메탄의 산- 및 니트로-형태가 있으며, 이들도 마찬가지로 산 또는 염기 처리에 의해 형성된다.
호변이성질체 형태는 관심 화합물의 최적의 화학 반응성 및 생물학적 활성의 달성과 관련될 수 있다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있고; 따라서 이러한 화합물은 개별 (R)- 또는 (S)-입체이성질체로서 또는 이들의 혼합물로서 생성될 수 있다.
달리 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에서의 특정 화합물의 설명 또는 명명은 개별 거울상이성질체 및 이들의 혼합물(라세미 혼합물 또는 기타) 둘 다를 포함하고자 한다. 입체화학의 결정 방법 및 입체이성질체의 분리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
특정 예는 절대 거울상이성질체로 표시되지만 배열이 알려지지 않은 거울상순수 물질을 나타내고자 하는 화학 구조를 포함한다. 이러한 경우 (R*) 또는 (S*) 또는 (*R) 또는 (*S)를 명칭에 사용하여 상응하는 입체중심의 절대 입체화학이 알려져 있지 않음을 나타낸다. 따라서 (R*) 또는 (*R)로 지정된 화합물은 (R) 또는 (S)의 절대 배열을 갖는 거울상순수 화합물을 지칭한다. 절대 입체화학이 확인된 경우, 구조는 (R) 및 (S)를 사용하여 명명되며, 여기서, 절대 배열은 Cahn-Ingold-Prelog 시스템에 따라 특정된다.
기호
Figure pct00092
및
Figure pct00093
는 본원에 예시된 화학 구조에서 동일한 공간 배치를 의미하는 것으로 사용된다. 이와 유사하게, 기호
Figure pct00094
및
Figure pct00095
는 본원에 예시된 화학 구조에서 동일한 공간 배치를 의미하는 것으로 사용된다.
추가로, 본원에 제공된 임의의 화학식은 이러한 형태가 명시적으로 열거되지 않은 경우에도 이러한 화합물의 수화물, 용매화물 및 다형체, 및 이들의 혼합물을 또한 지칭하고자 한다. 특정한 화학식 I의 화합물, 또는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 용매화물로서 수득될 수 있다. 용매화물은 용액 상태의 또는 고체 또는 결정질 형태로서의, 본 발명의 화합물과 하나 이상의 용매와의 상호작용 또는 착물화로부터 형성된 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 용매는 물이고 용매화물은 수화물이다. 또한, 화학식 I의 화합물의 특정 결정질 형태, 또는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 공결정으로서 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 결정질 형태로 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물의 결정질 형태는 사실상 입방체였다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물의 제약상 허용가능한 염은 결정질 형태로 수득되었다. 또 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 여러 다형 형태 중 하나로, 결정질 형태들의 혼합물로서, 다형 형태로서, 또는 비정질 형태로서 수득되었다. 다른 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물들은 용액 중에서 하나 이상의 결정질 형태들 및/또는 다형 형태들 사이에서 전환된다.
본원에서 화합물에 대한 언급은 다음 중 어느 하나에 대한 언급을 의미한다: (a) 이러한 화합물의 실제로 인용된 형태, 및 (b) 명명될 때 이러한 화합물이 고려되는 매질에서의 그 화합물의 형태들 중 임의의 것. 예를 들어, R-COOH와 같은 화합물에 대한 본원에서의 언급은 예를 들어, R-COOH(s), R-COOH(sol), 및 R-COO- (sol) 중 어느 하나에 대한 언급을 포함한다. 이 예에서, R-COOH(s)는 예를 들어 정제 또는 일부 다른 고체 제약 조성물 또는 제제에 있을 수 있는 고체 화합물을 지칭하고; R-COOH(sol)는 용매 중 화합물의 비해리된 형태를 지칭하고; R-COO- (sol)는 용매 중 화합물의 해리된 형태, 예컨대 수성 환경에서의 화합물의 해리된 형태를 지칭한다(이러한 해리된 형태가 R-COOH로부터 유도되든지, 이의 염으로부터 유도되든지, 또는 고려 중인 매질에서 해리 시 R-COO-를 생성하는 임의의 다른 엔티티로부터 유도되든지 간에). 또 다른 예에서, "화학식 R-COOH의 화합물에 엔티티를 노출시키는 것"과 같은 표현은 그러한 노출이 일어나는 매질에 존재하는 화합물 R-COOH의 형태(들)에 대한 그러한 엔티티의 노출을 지칭한다. 또 다른 예에서, "엔티티를 화학식 R-COOH의 화합물과 반응시키는 것"과 같은 표현은 (a) 이러한 반응이 일어나는 매질에 존재하는 이러한 엔티티의 화학적 관련 형태(들)의 이러한 엔티티를, (b) 이러한 반응이 일어나는 매질에 존재하는 화합물 R-COOH의 화학적 관련 형태(들)과 반응시키는 것을 지칭한다. 이와 관련하여, 이러한 엔티티가 예를 들어 수성 환경에 있는 경우, 화합물 R-COOH가 이러한 상기 매질에 있으므로 엔티티가 R-COOH(aq) 및/또는R-COO- (aq)와 같은 화학종에 노출되고 있는 중임이 이해되며, 여기서, 하첨자 "(aq)"는 화학 및 생화학에서의 통상적인 의미에 따라 "수성"을 나타낸다. 이러한 명명 예에서 카르복실산 작용기가 선택되었지만; 이 선택은 제한으로 의도되는 것이 아니라 단지 예시일 뿐이다. 유사한 예가 당해 화합물을 함유하는 매질에서 공지된 방식에 따라 상호작용하거나 변환되는 임의의 다른 기, 및 아민에 있는 것과 같은 염기성 질소 구성원, 히드록실을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다른 작용기에 관하여 제공될 수 있음이 이해된다. 이러한 상호작용 및 변환은 해리, 회합, 호변이성, 가수분해를 포함하는 가용매분해, 수화를 포함하는 용매화, 양성자화 및 탈양성자화를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 이와 관련하여 추가의 예는, 주어진 매질에서의 이러한 상호작용 및 변형이 당업자에게 공지되어 있기 때문에 본원에 제공되지 않는다.
또 다른 예에서, 쯔비터이온성 화합물은 쯔비터이온 형태로 명시적으로 명명되지 않더라도 쯔비터이온을 형성하는 것으로 알려진 화합물을 언급함으로써 본원에 포함된다. 쯔비터이온, 쯔비터이온들, 및 이들의 동의어인 쯔비터이온성 화합물(들)과 같은 용어는 잘 알려져 있고 정의된 과학적 명칭의 표준 세트의 일부인 표준 IUPAC-승인 명칭이다. 이와 관련하여 쯔비터이온이라는 명칭은 ChEBI(Chemical Entities of Biological Interest) 분자 엔티티 사전에 의해 명칭 식별 CHEBI:27369로 지정된다. 일반적으로 잘 알려진 바와 같이, 쯔비터이온 또는 쯔비터이온성 화합물은 부호가 반대인 형식 단위 전하를 갖는 중성 화합물이다. 때때로 이러한 화합물은 "내부 염"이라는 용어로 지칭된다. 다른 출처에서는 이러한 화합물이 "쌍극성 이온"으로 지칭되지만, 다른 출처에서는 후자의 용어가 잘못된 명칭으로 간주된다. 구체적인 예로서, 아미노에탄산(아미노산 글리신)은 화학식 H2NCH2COOH를 가지며, 이것은 일부 매질에서(이 경우 중성 매질에서) 쯔비터이온 양쪽성 이온 +H3NCH2COO-의 형태로 존재한다. 이들 용어의 공지되고 잘 확립된 의미에서의 쯔비터이온, 쯔비터이온성 화합물, 내부 염 및 쌍극성 이온은 본 발명의 범주 내에 있으며, 이는 어떠한 경우에도 당업자에 의해 그렇게 인식되는 바와 같다. 당업자에 의해 인식될 각각의 모든 실시 형태를 명명할 필요는 없기 때문에, 본 발명의 화합물과 관련된 쯔비터이온성 화합물의 구조는 본원에 명시적으로 제공되지 않는다. 그러나 이들은 본 발명의 실시 형태들의 일부이다. 이와 관련하여 추가의 예는, 주어진 화합물의 다양한 형태를 초래하는 주어진 매질에서의 상호작용 및 변형이 당업자에게 공지되어 있기 때문에 본원에 제공되지 않는다.
본원에 제공된 임의의 화학식은 또한 비표지 형태 및 동위원소 표지 형태의 화합물을 나타내고자 한다. 동위원소 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는 본원에 제공된 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 125I를 포함한다. 이러한 동위원소 표지 화합물은 대사 연구(바람직하게는 14C 사용), 반응 역학 연구(예를 들어 중수소(즉, D 또는 2H) 또는 삼중수소(즉, T 또는 3H) 사용), 검출 또는 영상 기술, 예컨대 양전자 방출 단층 촬영(PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영(SPECT)(약물 또는 기질 조직 분포 분석을 포함함), 또는 환자의 방사선 치료에 유용하다. 구체적으로, 18F 또는 11C 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 추가로, 중수소(즉, 2H)와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 기인하는 특정한 치료적 장점(예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지 화합물 및 이의 프로드러그는 일반적으로 동위원소 비표지 시약을 용이하게 입수가능한 동위원소 표지 시약으로 치환하여 하기 기술된 반응식 또는 실시예 및 제조에 개시된 절차를 수행함으로써 제조될 수 있다.
본원에 제공된 임의의 화학식을 언급할 때, 특정 변수에 대한 가능한 화학종의 목록으로부터 특정 모이어티를 선택하는 것은 다른 곳에 나타나는 변수에 대한 화학종의 상기 선택을 정의하고자 하는 것이 아니다. 환언하면, 변수가 두 번 이상 나타나는 경우, 달리 기재되지 않는 한, 특정된 목록으로부터의 화학종의 선택은 화학식의 다른 곳에서의 상기 변수에 대한 화학종의 선택과 무관하다.
지정 및 명명법에 대한 전술한 해석적 고려 사항에 따르면, 본원에서 세트에 대한 명시적 언급은 화학적으로 유의미한 경우 그리고 달리 지시되지 않는 한, 그러한 세트의 실시 형태에 대한 독립적인 언급, 및 명시적으로 언급된 세트의 하위세트의 가능한 실시 형태의 각각의 모든 것에 대한 언급을 의미함이 이해된다.
치환체 용어에 대한 첫 번째 예로서, 치환체 S1 예가 S1 및 S2 중 하나이고 치환체 S2 예가 S3 및 S4 중 하나인 경우, 이러한 지정은 다음의 선택에 따라 주어진 본 발명의 실시 형태를 지칭한다: S1 예가 S1이고 S2 예가 S3임; S1 예가 S1이고 S2 예가 S4임; S1 예가 S2이고 S2 예가 S3임; S1 예가 S2이고 S2 예가 S4임; 및 등가의 개개의 이러한 선택. "S1 예는 S1 및 S2 중 하나이고, S2 예는 S3 및 S4 중 하나임"이라는 더 짧은 용어는 이에 따라 간결함을 위해 본원에서 사용되지만, 제한을 위한 것은 아니다. 일반적인 용어로 기재된 치환체 용어에 대한 전술한 첫 번째 예는 본원에 기술된 다양한 치환체 지정을 예시하기 위한 것이다. 치환체에 대해 본원에 제공된 전술한 규칙은 적용가능한 경우 R1, R2, R3, R4, R5, G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7, G8, G9, G10, G11, n, L, R, T, Q, W, X, Y, 및 Z 및 본원에 사용된 임의의 다른 일반 치환체 기호와 같은 구성원까지 확대된다.
또한, 임의의 구성원 또는 치환체에 대해 둘 이상의 지정이 주어지는 경우, 본 발명의 실시 형태는 독립적으로 취해지는 열거된 지정, 및 이의 등가물로부터 만들어질 수 있는 다양한 그룹을 포함한다. 치환체 용어에 대한 두 번째 예로서, 치환체 S예가 S1, S2, 및 S3 중 하나임이 본원에 기술된다면, 이 목록은 다음의 것인 본 발명의 실시 형태를 지칭한다: S예가 S1임; S예가 S2임; S예가 S3임; S예가 S1 및 S2 중 하나임; S예가 S1 및 S3 중 하나임; S예가 S2 및 S3 중 하나임; S예가 S1, S2 및 S3 중 하나임; 및 S예가 임의의 등가의 개개의 이러한 선택임. "S예가 S1, S2, 및 S3 중 하나임"이라는 더 짧은 용어는 이에 따라 간결함을 위해 본원에서 사용되지만, 제한을 위한 것은 아니다. 일반적인 용어로 기재된 치환체 용어에 대한 전술한 두 번째 예는 본원에 기술된 다양한 치환체 지정을 예시하기 위한 것이다. 치환체에 대해 본원에 제공된 전술한 규칙은 적용가능한 경우 R1, R2, R3, R4, R5, G1, G2, G3, G4, G5, G6, G7, G8, G9, G10, G11, n, L, R, T, Q, W, X, Y, 및 Z 및 본원에 사용된 임의의 다른 일반 치환체 기호와 같은 구성원까지 확대된다.
j > i인 명명법 "Ci-j"는, 본원에서 치환체의 부류에 적용되는 경우, i 및 j를 포함하는 i개에서 j개까지의 탄소 구성원의 모든 개개의 수가 독립적으로 실현되는 본 발명의 실시 형태를 지칭하는 것을 의미한다. 예로서, 용어 C1-4는 독립적으로 1개의 탄소 구성원(C1)을 갖는 실시 형태, 2개의 탄소 구성원(C2)을 갖는 실시 형태, 3개의 탄소 구성원(C3)을 갖는 실시 형태, 및 4개의 탄소 구성원(C4)을 갖는 실시 형태를 지칭한다.
용어 Cn-m은 n ≤ N ≤ m을 충족하고 이때 m > n인 사슬의 탄소 구성원의 총 수 N을 갖는, 직쇄 또는 분지형 지방족 사슬을 지칭한다. 본원에 언급된 임의의 이중치환체는 다양한 부착 가능성 중 하나 초과가 허용되는 경우 그러한 가능성을 포함함을 의미한다. 예를 들어, A ≠ B인 경우, 이중치환체 -A-B-에 대한 언급은 본원에서 A가 제1 치환 구성원에 부착되고 B가 제2 치환 구성원에 부착된 그러한 이중치환체를 지칭하며, 이것은 또한 A가 제2 치환 구성원에 부착되고 B가 제1 치환 구성원에 부착된 그러한 이중치환체를 지칭한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물, 바람직하게는 상기 기술된 것들 및 본원에 예시된 특정 화합물의 제약상 허용가능한 염, 및 이러한 염을 사용한 치료 방법을 포함한다.
용어 "제약상 허용가능한"은 미국 연방 또는 주 정부의 규제 기관 또는 미국 이외 국가의 해당 기관에서 승인되거나 승인받을 수 있다는 것, 또는 동물, 보다 구체적으로는 인간에 사용하기 위해 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 등재되어 있다는 것을 의미한다.
"제약상 허용가능한 염"은 비독성이거나, 생물학적으로 내약성이거나, 그렇지 않으면 대상체에 투여하기에 생물학적으로 적합한 화학식 I 및 화학식 Ia로 표시되는 화합물의 유리 산 또는 염기의 염을 의미하고자 한다. 이것은 모 화합물의 원하는 약리 활성을 가져야 한다. 일반적으로, 문헌[G.S. Paulekuhn, et al., "Trends in Active Pharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database", J. Med. Chem., 2007, 50:6665-72], 문헌[S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", J Pharm Sci., 1977, 66:1-19], 및 문헌[Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use, Stahl and Wermuth, Eds., Wiley-VCH and VHCA, Zurich, 2002]을 참조한다. 제약상 허용가능한 염의 예로는 약리학적으로 유효하고 과도한 독성, 자극 또는 알러지 반응 없이 환자의 조직과 접촉하기에 적합한 것이 있다. 화학식 I의 화합물은 충분히 산성인 기, 충분히 염기성인 기, 또는 이들 둘 다인 유형의 작용기를 가질 수 있고, 이에 따라 다수의 무기 또는 유기 염기, 및 무기 및 유기 산과 반응하여 제약상 허용가능한 염을 형성할 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 프로드러그, 및 이러한 제약상 허용가능한 프로드러그를 사용한 치료 방법에 관한 것이다. 용어 "프로드러그"는 표기된 화합물의 전구체를 의미하며, 상기 전구체는 대상체에게 투여한 후 가용매분해 또는 효소적 절단과 같은 화학적 또는 생리학적 과정을 통해 또는 생리학적 조건 하에 생체 내에서 그 화합물을 생성한다(예를 들어, 프로드러그는 생리학적 pH가 되면 화학식 I 또는 화학식 Ia의 화합물로 전환된다). "제약상 허용가능한 프로드러그"는 비독성이고, 생물학적 내약성이고, 그렇지 않으면 대상체에게 투여하기에 생물학적으로 적합한 프로드러그이다. 적합한 프로드러그 유도체의 선택 및 제조를 위한 예시적인 절차는 예를 들어 문헌["Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]에 기술되어 있다.
또한 본 발명은 본 발명의 방법에 또한 사용될 수 있는 화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물의 제약적 활성 대사산물에 관한 것이다. "제약적 활성 대사산물"은 화학식 I의 화합물 또는 이의 염 또는 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 염의 체내에서의 대사의 약리학적 활성 생성물을 의미한다. 화합물의 프로드러그 및 활성 대사산물은 당업계에 공지되어 있거나 이용가능한 통상적인 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Bertolini, et al., J Med Chem. 1997, 40, 2011-2016]; 문헌[Shan, et al., J Pharm Sci. 1997, 86 (7), 765-767]; 문헌[Bagshawe, Drug Dev Res. 1995, 34, 220-230]; 문헌[Bodor, Adv Drug Res. 1984, 13, 224-331]; 문헌[Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985)]; 및 문헌[Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen, et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991)]을 참조한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조성물" 또는 "제약 조성물"은 본원에 제공된 하나 이상의 화합물과 제약상 허용가능한 담체의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물은 환자 또는 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 다수의 기술(정맥내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안구, 폐, 및 국소 투여를 포함하지만, 이에 한정되지 않음)이 당업계에 존재한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 본원에 제공된 화합물을 환자 내로 또는 환자에게 운반하거나 수송하여 상기 화합물이 그의 의도된 기능을 수행할 수 있게 하는 데 관여하는, 제약상 허용가능한 물질, 조성물 또는 담체, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 안정제, 분산제, 현탁제, 희석제, 부형제, 증점제, 용매 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 전형적으로, 이러한 구성체는 신체의 하나의 기관 또는 일부로부터 신체의 또 다른 기관 또는 일부로 운반되거나 수송된다. 각각의 담체는 본원에 제공된 화합물을 비롯한 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 제약상 허용가능한 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: 당류, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로오스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; 분말형 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 표면 활성제; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장 식염수; 링거액; 에틸 알코올; 인산염 완충액; 및 제약 제형에 사용되는 다른 비독성 상용성 물질. 본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 또한, 본원에 제공된 화합물의 활성과 양립가능하고 환자에게 생리학적으로 허용가능한 모든 코팅, 항균 및 항진균제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 보충적 활성 화합물이 또한 조성물 내에 혼입될 수 있다. "제약상 허용가능한 담체"는 본원에 제공된 화합물의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 제공된 제약 조성물에 포함될 수 있는 다른 추가 성분은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 본원에 참고로 포함된 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Genaro, Ed., Mack Publishing Co., 1985, Easton, PA)]에 기술되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "안정화제"는 화학식 I의 화합물의 분해를 화학적으로 억제하거나 방지할 수 있는 중합체를 지칭한다. 안정화제는 당해 화합물의 화학적 및 물리적 안정성을 향상시키기 위해 화합물의 제형에 첨가된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정제"는 통상적인 타정 공정에 의해 원료의약품 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 적합한 부형제(예를 들어, 충전제, 붕해제, 활택제, 글리단트, 및/또는 계면활성제)와 함께 압축함으로써 생성될 수 있는 경구 투여성, 단회 용량, 고체 투여 형태를 나타낸다. 정제는 통상적인 과립화 방법, 예를 들어 습식 또는 건식 과립화를 사용하여 후속 압축 및 선택적 코팅과 함께 과립을 선택적으로 분쇄하여 제조할 수 있다. 정제는 또한 스프레이-건조에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡슐"은 약물이 경질 또는 연질 가용성 용기 또는 "쉘" 내에 봉입된 고체 투여 형태를 지칭한다. 용기 또는 쉘은 젤라틴, 전분 및/또는 기타 적합한 물질로 형성될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량", "제약적 유효량" 및 "치료적 유효량"은 원하는 생물학적 결과를 제공하기에 충분하면서도 비독성인 에이전트의 양을 지칭한다. 그 결과는 질환의 징후, 증상 또는 원인의 감소 또는 경감, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 임의의 개별적인 경우에 적절한 치료량은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "조합물", "치료적 조합물", "제약 조합물" 또는 "조합 생성물"은 2가지 이상의 치료제가 독립적으로, 동시에, 또는 시간 간격을 두고(특히, 이들 시간 간격이 조합 파트너가 협력 효과, 예를 들어 상승 효과를 나타내는 것을 허용하는 경우) 개별적으로 투여될 수 있는 병용 투여를 위한 비-고정 조합물 또는 부분들의 키트를 지칭한다.
용어 "조절제"는 억제제 및 활성화제 둘 다를 포함하며, 여기서, "억제제"는 HBV 복제 또는 감염성 입자의 생성에 필요한 HBV 조립 및 기타 HBV 코어 단백질 기능을 감소시키거나, 방지하거나, 불활성화하거나, 둔감화하거나 하향 조절하는 화합물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "캡시드 조립 조절제"는 정상적인 캡시드 조립(예를 들어, 성숙 동안) 또는 정상적인 캡시드 분해(예를 들어, 감염 동안)를 방해하거나 가속화하거나 억제하거나 저해하거나 지연시키거나 감소시키거나 변경시키거나, 또는 캡시드 안정성을 교란하고 이에 의해 비정상적인 캡시드의 형태 및 기능을 유도하는 화합물을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 캡시드 조립 또는 분해를 가속화함으로써 비정상적인 캡시드 형태를 유도한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 주요 캡시드 조립 단백질(CA)과 상호작용(예를 들어, 활성 부위에서의 결합, 알로스테릭 부위에서의 결합, 폴딩의 변경 및/또는 저해 등)을 함으로써 캡시드의 조립 또는 분해를 방해한다. 또 다른 실시 형태에서, 캡시드 조립 조절제는 CA의 구조 또는 기능(예를 들어, CA의 조립 능력, 분해 능력, 기질에의 결합 능력, 적합한 형태로의 폴딩 등)의 교란을 야기하며, 이는 바이러스 감염성을 약화시키고/시키거나 바이러스에 치명적이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성을 치유하거나, 고치거나, 경감시키거나, 완화하거나, 변경하거나, 해결하거나, 개선시키거나, 호전시키거나 영향을 줄 목적으로, 치료제, 즉 본 발명의 화합물(단독으로 또는 또 다른 약제와 조합하여)을, HBV 감염, HBV 감염의 증상 또는 HBV 감염이 발생할 가능성이 있는 환자에게 적용하거나 투여하는 것으로 정의되거나, 환자로부터의 단리된 조직 또는 세포주에 (예를 들어, 진단 또는 생체 외 적용을 위하여) 치료제를 적용하거나 투여하는 것으로 정의된다. 이러한 치료는 약물유전체학 분야에서 얻은 지식에 기초하여 구체적으로 조정되거나 변형될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 아무것도 발생하지 않은 경우 장애 또는 질환 발생이 없음, 또는 이미 장애 또는 질환의 발생이 있었던 경우 추가의 장애 또는 질환 발생이 없음을 의미한다. 또한 장애 또는 질환과 관련된 증상의 일부 또는 전부를 예방하는 능력이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "환자", "개체" 또는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물을 지칭한다. 비-인간 포유동물은 예를 들어 가축 및 애완 동물, 예컨대 양, 소, 돼지, 개, 고양이 및 쥣과 포유동물을 포함한다. 바람직하게는, 환자, 대상체 또는 개체는 인간이다.
본 발명에 따른 치료 방법에서, 유효량의 본 발명에 따른 의약제가 이러한 질환, 장애 또는 병태를 앓고 있거나 갖는 것으로 진단된 대상체에게 투여된다. "유효량"은 지정된 질환, 장애 또는 병태에 대해 이러한 치료를 필요로 하는 환자에서 일반적으로 원하는 치료적 또는 예방적 이점을 가져오기에 충분한 양 또는 용량을 의미한다. 본 발명의 화합물의 유효량 또는 유효 용량은 모델링, 용량 증량 연구 또는 임상 시험과 같은 일상적인 방법에 의해, 그리고 일상적인 요인, 예를 들어 투여 또는 약물 전달의 양식 또는 경로, 화합물의 약동학적 특성, 질환, 장애 또는 병태의 중증도 및 경과, 대상체의 이전의 요법 또는 진행 중인 요법, 대상체의 건강 상태 및 약물에 대한 반응, 및 치료 의사의 판단을 고려하여 확인될 수 있다. 용량의 예는 단일 또는 분할 투여 단위(예를 들어, BID, TID, QID)로, 대상체 체중 1 kg당 일일 약 0.001 내지 약 200 mg의 화합물, 바람직하게는 약 0.05 내지 100 mg/kg/일, 또는 약 1 내지 35 mg/kg/일의 범위 내에 있다. 70 kg 인간의 경우, 적합한 투여량에 대한 예시적인 범위는 약 0.05 내지 약 7 g/일, 또는 약 0.2 내지 약 2.5 g/일이다.
화합물의 용량의 예로는 약 1 mg 내지 약 2,500 mg이 있다. 일부 실시 형태에서, 본원에 개시된 조성물에서 사용되는 본 발명의 화합물의 용량은 약 10,000 mg 미만, 또는 약 8,000　mg 미만, 또는 약 6,000 mg 미만, 또는 약 5,000 mg 미만, 또는 약 3,000 mg 미만, 또는 약 2,000 mg 미만, 또는 약 1,000 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만이다. 이와 유사하게, 일부 실시 형태에서, 본원에 기술된 바와 같은 제2 화합물(즉, HBV 치료를 위한 또 다른 약물)의 용량은 약 1,000 mg 미만, 또는 약 800 mg 미만, 또는 약 600 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 400 mg 미만, 또는 약 300 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 100 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만, 또는 약 40 mg 미만, 또는 약 30 mg 미만, 또는 약 25 mg 미만, 또는 약 20 mg 미만, 또는 약 15 mg 미만, 또는 약 10 mg 미만, 또는 약 5 mg 미만, 또는 약 2 mg 미만, 또는 약 1 mg 미만, 또는 약 0.5 mg 미만, 및 이의 모든 전체적이거나 부분적인 증분이다.
환자의 질환, 장애 또는 병태가 개선되었으면 예방 또는 유지 치료를 위해 용량을 조정할 수 있다. 예를 들어, 투여량 또는 투여 빈도, 또는 이들 둘 다는 원하는 치료 또는 예방 효과가 유지되는 수준까지 증상의 함수로서 감소될 수 있다. 물론 증상이 적절한 수준까지 완화되었으면 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자는 증상의 임의의 재발시에 간헐적 치료를 장기적으로 필요로 할 수 있다.
개시된 방법에 따라 치료될 수 있는 HBV 감염은 HBV 유전자형 A, B, C, 및/또는 D 감염을 포함한다. 그러나, 일 실시 형태에서, 개시된 방법은 임의의 HBV 유전자형을 치료할 수 있다("범-유전자형 치료"). HBV 유전자형 결정은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, INNO-LIPA® HBV Genotyping(Innogenetics N.V., 벨기에 겐트 소재)을 사용하여 수행될 수 있다.
본 출원의 독자를 돕기 위해 설명은 다양한 단락 또는 섹션으로 분리되었다. 이러한 분리는 소정의 단락 또는 섹션의 요지를 또 다른 단락 또는 섹션의 요지에서 분리하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 반대로, 본 발명의 설명은 고려될 수 있는 다양한 섹션, 단락 및 문장의 모든 조합을 포함한다.
본원에 인용된 모든 참고 문헌의 각각의 관련 개시 내용이 구체적으로 참고로 포함된다. 하기 실시예는 예시로 제공되는 것으로서, 제한으로 제공되는 것이 아니다.
실시예
이제 본 발명의 방법에 유용한 예시적인 화합물을 아래의 그의 일반적인 제조를 위한 예시적인 합성 반응식 및 하기의 구체적인 실시예를 참조하여 설명할 것이다. 당업자는 본원의 다양한 화합물을 얻기 위해, 원하는 생성물을 생성하기 위하여 적절한 경우 보호를 이용하거나 이용하지 않고서 궁극적으로 원하는 치환체가 반응 반응식을 통하여 운반되도록 출발 물질을 적합하게 선택할 수 있음을 인식할 것이다. 대안적으로, 궁극적으로 원하는 치환체 대신에 반응 반응식을 통해 운반될 수 있고 적절한 경우 원하는 치환체로 대체될 수 있는 적합한 기를 사용하는 것이 필요하거나 바람직할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 변수는 화학식 I을 참조하여 상기 정의된 바와 같다. 반응은 용매의 융점과 환류 온도 사이, 바람직하게는 0℃와 용매의 환류 온도 사이에서 수행될 수 있다. 반응물을 통상적인 가열 또는 마이크로웨이브 가열을 사용하여 가열할 수 있다. 반응은 또한 용매의 정상 환류 온도보다 높은 온도에서 밀봉 가압 용기에서 수행될 수 있다.
화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 그의 상응하는 염으로 전환될 수 있다. 예를 들어, 화학식 I의 아민을 용매, 예컨대 Et2O, CH2Cl2, THF, MeOH, 클로로포름, 또는 이소프로판올에서 트리플루오로아세트산, HCl, 또는 시트르산으로 처리하여 상응하는 염 형태를 제공한다. 대안적으로, 역상 HPLC 정제 조건의 결과로 트리플루오로아세트산 또는 포름산 염이 수득된다. 화학식 I 및 화학식 Ia의 화합물의 제약상 허용가능한 염의 결정질 형태는 극성 용매(극성 용매들의 혼합물 및 극성 용매들의 수성 혼합물을 포함함) 또는 비극성 용매(비극성 용매들의 혼합물)로부터의 재결정화에 의해 결정질 형태로 수득될 수 있다.
본 발명에 따른 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 이에 따라 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 이들은 추가적으로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 이러한 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
"입체이성질체 혼합물"(둘 이상의 입체이성질체의 혼합물을 의미하고 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 이들의 조합을 포함함)로 표시된 화합물을 SFC 분해에 의해 분리한다.
화합물은 형태-특이적 합성에 의해 또는 분해에 의해 단일 거울상이성질체와 같은 단일 형태로서 수득될 수 있다. 화합물은 대안적으로 라세미(1:1) 또는 비-라세미(1:1이 아님) 혼합물과 같은 다양한 형태의 혼합물로서 수득될 수 있다. 거울상 이성질체의 라세미 및 비-라세미 혼합물이 수득되는 경우, 단일 거울상이성질체는 당업자에게 공지된 통상적인 분리 방법, 예컨대 키랄 크로마토그래피, 재결정화, 부분입체이성질체 염 형성, 부분입체이성질체 부가물로의 유도체화, 생체내변환 또는 효소적 변환을 이용하여 단리될 수 있다. 위치이성질체 또는 부분입체이성질체 혼합물이 수득되는 경우, 적용가능한 경우 단일 이성질체는 크로마토그래피 또는 결정화와 같은 통상적인 방법을 이용하여 분리될 수 있다.
1. 일반적 정보
화학명
다음의 화학 소프트웨어를 사용하여 화학명을 생성하였다: ACD/ChemSketch.
LCMS 방법
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정은 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기 및 컬럼(각각의 방법에 명시된 바와 같음)을 사용하여 수행하였다. 필요한 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).
컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량 분광계(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.
화합물들은 그들의 실험적 체류 시간(Rt) 및 이온에 의해 기술되어 있다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]+(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]- (탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접적으로 이온화가능한 것이 아닌 경우, 부가 생성물의 유형이 명시된다(즉, [M+NH4]+, [M+HCOO]- 등). 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.
이하에서, "SQD"는 단일 사중극자 검출기를, "MSD"는 질량 선택적 검출기를, "RT"는 실온을, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드를, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기를, "HSS"는 고강도 실리카를, "Q-Tof"는 사중극자 비행시간 질량 분광계를, "CLND"는 화학발광 질소 검출기를, "ELSD"는 증발 광 스캐닝 검출기를 의미한다.
LCMS 방법
(유량은 mL/분으로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분으로 표현됨).
Figure pct00096
Figure pct00097
SFC 방법
이산화탄소(CO2) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성된 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(Supercritical fluid chromatography; SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되는 경우, 컬럼으로부터의 유동물을 (MS)로 보냈다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 허용하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어로 데이터를 획득하였다.
분석적 SFC/MS 방법(유량은 mL/분 단위로 표현되며; 컬럼 온도(T)는 ℃ 단위로 표현되고; 실행 시간은 분 단위로 표현되며; 배압(backpressure; BPR)은 bar 단위로 표현됨).
SFC 방법:
Figure pct00098
NMR 분석
1H NMR 스펙트럼은 a) Bruker DRX 500 MHz 분광계 또는 b) Bruker Avance 400 MHz 분광계 또는 c) Bruker Avance III 400 MHz 분광계 또는 d) Bruker Avance 600 MHz 분광계 또는 e) Bruker DRX 400 MHz 분광계 또는 f) Bruker Avance NEO 400 MHz 분광계에서 기록되었다.
달리 기재되지 않는 한, 주위 온도에서의 NMR 스펙트럼을 기록하였다. 데이터를 다음과 같이 보고한다: 눈금의 TMS(δ = 0 ppm)에 대한 백만분율(ppm) 단위의 화학적 이동, 적분, 다중성 (s = 단일 피크, d = 이중 피크, t = 삼중 피크, q = 사중 피크, quin = 오중 피크, sext = 육중 피크, sept = 칠중 피크, m = 다중 피크, b = 브로드, 또는 이들의 조합), 헤르츠(Hz) 단위의 커플링 상수(들) J.
질량 스펙트럼
질량 스펙트럼은 달리 지시되지 않는 한 포지티브 모드에서 전자분무 이온화(ESI)를 사용하여 Shimadzu LCMS-2020-MSD 또는 Agilent 1200/G6110A MSD에서 얻었다.
2. 약어
Figure pct00099
Figure pct00100
3. 화합물의 합성
3.1. 6원 고리 화합물의 합성
3.1.1. 주요 중간체의 합성
3.1.1.1. 중간체 I1~I4, I6의 합성
중간체 I1
5-tert-부틸 3-에틸 2-(부트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00101
반응을 Ar 분위기 하에 무수 조건 하에 수행하였다.
DMF (30 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 4,5,6,7-테트라히드로-2H-인다졸-3,5-디카르복실레이트 (1.50 g, 5.08 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (1.65 g, 5.08 mmol) 및 4-브로모부틴 (477　μL, 5.08 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 추가량의 Cs2CO3 (1.65 g, 5.08 mmol) 및 4-브로모부틴 (477 μL, 5.08 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 반응이 완료될 때까지 상기 절차를 반복하였다 (6 당량의 Cs2CO3 및 4-브로모부틴을 첨가하였다). 반응 혼합물을 H2O (60 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 60 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: MeCN/H2O, 구배: 1:9로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I1 (897 mg, 51%)을 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I2
5-tert-부틸 3-에틸 2-(펜트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00102
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (40 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 4,5,6,7-테트라히드로-2H-인다졸-3,5-디카르복실레이트 (2.00 g, 6.78 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (4.41 g, 13.5 mmol) 및 메탄술폰산 펜트-3-이닐 에스테르 (2.20 g, 13.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시키고, H2O (100 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: MeCN/H2O, 구배: 1:9로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I2 (1.30 g, 53%)를 연한 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I3
5-tert-부틸 3-에틸 2-(헥스-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00103
중간체 I2에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I3 (1.18 g, 46%)을 제조하였다.
중간체 I4
5-tert-부틸 3-에틸 2-(4-페닐부트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00104
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
THF (6 mL) 중 중간체 I1 (500 mg, 1.44 mmol)의 용액에 요오도벤젠 (242 μL, 2.16 mmol) 및 Et3N (602 μL, 4.32 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 Ar로 탈기시켰다. Pd(PPh3)2Cl2 (50.5 mg, 0.072 mmol) 및 CuI (27.4 mg, 0.14 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 또 다른 분획 (0.14 mmol)과 합하고, EtOAc (80 mL)로 희석시키고, HCl (1 N, 수성) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 80:20까지)로 정제하여 중간체 I4 (475 mg, 70%)를 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I6
5-tert-부틸 3-에틸 (6R)-2-(부트-3-인-1-일)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00105
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (30 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 (6R)-6-메틸-4,5,6,7-테트라히드로-2H-인다졸-3,5-디카르복실레이트 I5 (1.50 g, 4.85 mmol) 및 메탄술폰산 부트-3-이닐 에스테르 (1.93 g, 9.70　mmol)의 용액에 Cs2CO3 (3.16 g, 9.70 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시키고, 그 후 실온에서 3일 동안 교반시켰다. 추가량의 메탄술폰산 부트-3-이닐 에스테르 (0.96 g, 4.85 mmol) 및 Cs2CO3 (1.58 g, 4.85 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 H2O (70 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: MeCN/H2O, 구배: 35:65으로부터 56:44까지)로 정제하여 중간체 I6 (930 mg, 89%)을 황색 오일로서 수득하였다.
3.1.1.2. 중간체 I11 의 합성
Figure pct00106
중간체 I7
5-tert-부틸 3-에틸 2-(4-에톡시-4-옥소부틸)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00107
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (100 mL) 중 Cs2CO3 (12.9 g, 39.7 mmol)의 현탁액에 5-(tert-부틸) 3-에틸 2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (10.2 g, 33.1　mmol) 및 에틸 4-브로모부티레이트 (5.21 mL, 36.4 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반시키고, 물 (150 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 150　mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 x 150 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I7을 황색 오일로서 제공하고 (15 g, 90%의 순도, 위치이성질체들의 66/33 혼합물), 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I8
2-tert-부틸 9-에틸 10-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-2,9(1H)-디카르복실레이트
Figure pct00108
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 THF (150 mL) 중 t-BuOK (7.42 g, 66.2 mmol)의 용액에 THF (150 mL) 중 중간체 I7의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물 (200 mL)로 켄칭하고, HCl (1 N, 150 mL)로 산성화하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 70:30으로부터 30:70까지)로 정제하여 중간체 I8 (8.62 g, 93%의 순도, 67% (2단계에 걸쳐))을 무색 검으로서 제공하였다.
중간체 I9
에틸 10-옥소-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-9-카르복실레이트 히드로클로라이드
Figure pct00109
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 55.4 mL, 222 mmol)을 실온에서 DCM (50 mL) 중 중간체 I8 (8.05 g, 22.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 교반시키고, Et2O (200 mL)로 희석시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, Et2O (100 mL)로 헹구었다. 고체를 진공 하에 건조시켜 중간체 I9를 백색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I10
에틸 2-(3,4-디클로로벤조일)-10-옥소-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-9-카르복실레이트
Figure pct00110
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 DCM (100 mL) 중 중간체 I9의 용액에 피리딘 (5.38 mL, 66.5　mmol)을 첨가하고, 이어서 DCM (50 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (5.10 g, 24.4 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (150 mL)으로 희석시키고, HCl (1 M, 수성, 2 x 150　mL), 및 염수 (150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 70:30까지)로 정제하여 중간체 I10 (8.72 g, 90% (2단계에 걸쳐))을 황백색 폼으로서 제공하였다.
중간체 I11
2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(7H)-온
Figure pct00111
DMSO (18 mL) 중 중간체 I10 (1.00 g, 2.3 mmol)의 용액에 H2O (2 mL) 및 LiCl (126 mg, 2.98 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 150℃에서 5시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시키고, H2O (100 mL)로 희석시켰다. 상기 용액을 추가 30분 동안 교반시켰다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 50℃에서 하룻밤 건조시켜 중간체 I11 (776 mg, 93%)을 백색 고체로서 수득하였다.
3.1.2. 이속사졸 유도체 화합물의 합성
3.1.2.1. 화합물 1 의 합성
Figure pct00112
중간체 I12
tert-부틸 2-(부트-3-인-1-일)-3-(히드록시메틸)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00113
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 THF (17 mL) 중 중간체 I1 (880 mg, 2.53 mmol)의 용액에 LiAlH4 (192 mg, 5.07 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 EtOAc (50 mL) 및 H2O (5 mL)로 켄칭하고, 로셸염의 용액 (1 M, 수성, 50 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시키고, 층들을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I12 (708 mg, 92%)를 연한 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I13
tert-부틸 2-(부트-3-인-1-일)-3-포르밀-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00114
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DME (30 mL) 중 중간체 I12 (705 mg, 2.31 mmol)의 현탁액에 MnO2 (803　mg, 9.24 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 추가량의 MnO2 (401 mg, 4.62 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 Celite® 패드에서 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DCM (30 mL)에 용해시키고, PCC (746 mg, 3.46 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 60:40까지)로 정제하여 중간체 I13 (282 mg, 40%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I14
tert-부틸 2-(부트-3-인-1-일)-3-[(히드록시이미노)메틸]-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00115
THF (6.5 mL), MeOH (6.5 mL) 및 H2O (13 mL) 중 중간체 I13 (200 mg, 0.66 mmol) 및 NaOAc (162 mg, 1.98 mmol)의 용액에 N-히드록실아민 히드로클로라이드 (91.6　mg, 1.32 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, H2O (10 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I14 (203 mg)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I15
tert-부틸 4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(11H)-카르복실레이트
Figure pct00116
0℃의 THF (13 mL) 및 H2O (0.8 mL) 중 중간체 I14 (200 mg, 0.63 mmol)의 용액에 차아염소산나트륨 (H2O 중 15%, 779 μL, 1.57 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (0.24 mmol)과 합하고, H2O (30 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3　x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/ EtOAc, 구배: 100:0으로부터 20:80까지)로 정제하여 중간체 I15 (116 mg, 42%)를 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I16
4,5,8,9,10,11-헥사히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘 히드로클로라이드
Figure pct00117
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DCM (2 mL) 중 중간체 I15 (110 mg, 0.35 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 1.74 mL, 6.95 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 건조상태까지 농축시켜 중간체 I16 (88 mg)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 1
(3,4-디클로로페닐)(4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(11H)-일)메타논
Figure pct00118
반응을 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 DCM (8 mL) 중 조 중간체 I16의 용액에 Et3N (144 μL, 1.03　mmol), 이어서 DCM (2 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (79.3 mg, 0.38 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석시키고, HCl (1 N, 수성, 20 mL), NaHCO3 (포화, 수성, 20 mL) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 95:5까지)로 정제하여 화합물 1 (115 mg, 84% (2단계에 걸쳐))을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 8.74 (s, 1H), 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.46 (dd, J=8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 2H), 4.30 (t, J=6.7 Hz, 2H), 3.81 - 3.71 (m, 2H), 3.12 (td, J=6.9, 0.9 Hz, 2H), 2.80 (t, J=5.9 Hz, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 9.6분, C18H14Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 388, m/z 실측치: 389 [M+H]+.
3.1.2.2. 화합물 2 의 합성
Figure pct00119
중간체 I17
tert-부틸 3-(히드록시메틸)-2-(펜트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00120
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 THF (30 mL) 중 중간체 I2 (1.25 g, 3.46 mmol)의 용액에 LiAlH4 (263 mg, 6.92 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 EtOAc (100 mL) 및 H2O (10 mL)로 켄칭하고, 로셸염의 용액 (1 M, 수성, 100 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시키고, 층들을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 20:80까지)로 정제하여 중간체 I17 (991 mg, 90%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I18
tert-부틸 3-포르밀-2-(펜트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00121
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DCM (30 mL) 중 중간체 I17 (985 mg, 3.08 mmol)의 현탁액에 PCC (997　mg, 4.62 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 50:50까지)로 정제하여 중간체 I18 (814　mg, 83%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I19
tert-부틸 3-[(히드록시이미노)메틸]-2-(펜트-3-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00122
THF (13 mL), MeOH (13 mL) 및 H2O (26 mL) 중 중간체 I18 (400 mg, 1.26 mmol) 및 NaOAc (310 mg, 3.78 mmol)의 용액에N-히드록실아민 히드로클로라이드 (175 mg, 2.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, H2O (20 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM (3 x 60 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I19 (378 mg, 90%)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I20
tert-부틸 3-메틸-4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(11H)-카르복실레이트
Figure pct00123
0℃의 THF (20 mL) 및 H2O (1.3 mL) 중 중간체 I19 (370 mg, 1.11 mmol)의 용액에 차아염소산나트륨 (H2O 중 15%, 1.38 mL, 2.78 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시키고, H2O (60 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 30:70까지)로 정제하여 중간체 I20 (108 mg, 29%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I21
3-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘 히드로클로라이드
Figure pct00124
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DCM (4 mL) 중 중간체 I20 (100 mg, 0.303 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 1.51 mL, 6.04 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시키고, 그 후 건조상태까지 농축시켜 중간체 I21을 수득하고, 이를 다음 단계에 그대로 사용하였다.
화합물 2
3-메틸-4,5,8,9,10,11-헥사히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘
Figure pct00125
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 DCM (5 mL) 중 중간체 I21의 용액에 Et3N (125 μL, 0.9 mmol), 이어서 DCM (5 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (69.1 mg, 0.330 mmol)의 용액을 첨가하였다 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (30　mL)으로 희석시키고, HCl (1 N, 수성, 20 mL), NaHCO3 (포화, 수성, 20 mL) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하여 화합물 2 (80 mg, 65% (2단계에 걸쳐))를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.73 - 7.64 (m, 2H), 7.45 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1H), 4.73 - 4.68 (m, 2H), 4.28 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.78 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.00 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.79 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.42 (s, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 9.9분, C19H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 402, m/z 실측치: 403 [M+H]+.
3.1.2.3. 화합물 3 의 합성
Figure pct00126
화합물 2에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 3을 제조하였다.
화합물 3, (3,4-디클로로페닐)(3-에틸-4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a: 4,3-c']디피리딘-10(11H)-일)메타논을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.72 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.66 (m, 2H), 4.28 (t, J=6.9 Hz, 2H), 3.82 - 3.73 (m, 2H), 3.04 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.87 - 2.77 (m, 4H), 1.28 (t, J=7.6 Hz, 3H); LCMS (방법 F): Rt = 4.90분, C20H18Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 416, m/z 실측치: 417 [M+H]+.
3.1.2.4. 화합물 4 의 합성
Figure pct00127
화합물 2에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 4를 제조하였다.
화합물 4, (3,4-디클로로페닐)(3-페닐-4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(11H)-일)메타논을 연한 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.85 - 7.78 (m, 2H), 7.72 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.63 - 7.52 (m, 3H), 7.47 (dd, J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.78 - 4.73 (m, 2H), 4.38 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.84 - 3.75 (m, 2H), 3.36 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.82 (t, J=5.8 Hz, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 11.4분, C24H18Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 464, m/z 실측치: 465 [M+H]+.
3.1.2.5. 화합물 5 의 합성
Figure pct00128
화합물 2에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 5를 제조하였다.
화합물 5, (3,4-디클로로페닐)[(9R)-9-메틸-4,5,8,9-테트라히드로[1,2]옥사졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(11H)-일]메타논을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 8.74 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 5.15 - 5.02 (m, 1H), 4.72 - 4.57 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.31 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.14 - 3.10 (m, 2H), 3.00 (dd, J=16.0, 5.6 Hz, 1H), 2.51 (d, J=16.0 Hz, 1H), 1.21 (d, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 9.9분, C19H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 402, m/z 실측치: 403 [M+H]+.
3.1.3. 피라졸 유도체 화합물의 합성
3.1.3.1. 화합물 6 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(2,4,5,8,9,11-헥사히드로-10H-피라졸로[3,4-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10-일)메타논
Figure pct00129
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
EtOH (5 mL) 중 중간체 I11 (210 mg, 0.58 mmol)의 용액에 N,N -디메틸포름아미드 디메틸 아세테이트 (536 μL, 4.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시키고, DCM (2x 10 mL)과 함께 동시증발시켰다. 잔사를 EtOH (5 mL)에 현탁시키고, 히드라진 일수화물 (559 μL, 11.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: MeCN/H2O, 구배: 10:90으로부터 60:40까지)로 수행하여 화합물 6 (119 mg, 53%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 12.59 (br.s, 1H), 7.71 - 7.67 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.45 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 2H), 4.20 (t, J=7.2 Hz, 2H), 3.83 - 3.71 (m, 2H), 3.02 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.76 (t, J=5.5 Hz, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 8.6분, C18H15Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 387, m/z 실측치: 388 [M+H]+.
3.1.3.2. 화합물 7 의 합성
Figure pct00130
중간체 I37
9-아세틸-2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(7H)-온
Figure pct00131
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
톨루엔 (4.8 mL) 및 DMSO (1.1 mL) 중 중간체 I11 (400 mg, 1.10 mmol)의 용액에 t-BuOK (370 mg, 3.30 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. EtOAc (1.40 mL, 14.3 mmol)를 적가하고, 생성된 반응 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석시키고, NH4Cl (포화, 수성, 100 mL)을 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (150 mL) 및 염수 (150 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 80:20으로부터 60:40까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97.5:2.5까지)로 수행하여 중간체 I37 (170 mg, 38%)을 백색 고체로서 수득하였다.
화합물 7
(3,4-디클로로페닐)(3-메틸-2,4,5,8,9,11-헥사히드로-10H-피라졸로[3,4-c]피라졸로-[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10-일)메타논
Figure pct00132
반응을 Ar 분위기 하에 수행하였다.
히드라진 일수화물 (401 μL, 8.27 mmol)을 실온에서 EtOH (4 mL) 중 중간체 I37 (168 mg, 0.41 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시키고, DCM (2 x 5 mL)과 함께 동시증발시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 90:10으로부터 72:28까지)로 정제하여 화합물 7 (70 mg, 42%)을 담황색 고체로서 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 12.31 (br.s, 1H), 7.72 - 7.67 (m, 2H), 7.44 (dd, J=8.0, 0.8 Hz, 1H), 4.72 - 4.65 (m, 2H), 4.18 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.81 - 3.72 (m, 2H), 2.89 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.74 (t, J=5.6 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 8.8분, C19H17Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 401, m/z 실측치: 402 [M+H]+.
3.1.3.3. 화합물 8 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(2-메틸-2,4,5,8,9,11-헥사히드로-10H-피라졸로[3,4-c]피라졸로-[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10-일)메타논
Figure pct00133
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
THF (4 mL) 중 화합물 6 (230 mg, 0.41 mmol, 70%의 순도)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 33.3 mg, 0.83 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반시키고, 그 후 요오도메탄 (51.9 μL, 0.83 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시키고, 실온까지 가온하고, 물 (10 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 또 다른 분획과 합하고 (0.33 mmol) 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (이동상: H2O/MeCN, 구배: 50:50으로부터 0:100까지)로 수행하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 99:1로부터 95:5까지)에 의한 또 다른 정제를 하여 화합물 8 (86.2 mg, 29%)을 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.44 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.19 (t, J=7.2 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.77 - 3.69 (m, 2H), 3.00 (m, 2H), 2.74 (t, J=6.0 Hz, 2H); LCMS (방법 G): Rt = 13.1분, C19H17Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 401, m/z 실측치: 402 [M+H]+.
3.1.3.4. 화합물 9 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(1-메틸-1,4,5,8,9,11-헥사히드로-10H-피라졸로[3,4-c]피라졸로- [1,5-a:4,3-c']디피리딘-10-일)메타논
Figure pct00134
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (10 mL) 중 중간체 I11 (400 mg, 1.10 mmol)의 용액에 N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈 (1.02 mL, 7.69 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 150℃에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시키고, DCM (2 x 4 mL)과 함께 동시증발시켰다. 잔사를 EtOH (10 mL)에 녹이고, 메틸히드라진 (1.16 mL, 22.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 건조상태까지 농축시키고, DCM (2 x 4 mL)과 함께 동시증발시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 90:10까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 분취용 HPLC (이동상: H2O/MeCN, 구배: 50:50으로부터 0:100까지)로 수행하였다. 잔사를 EtAOc에 미분화하고, 여과에 의해 수집하고, 건조시켜 화합물 9 (72 mg, 16%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.70 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.19 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.78 - 3.71 (m, 2H), 2.91 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J=6.0 Hz, 2H); LCMS (방법 G): Rt = 16.9분, C19H17Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 401, m/z 실측치: 402 [M+H]+.
3.1.4. 티아졸 유도체 화합물의 합성
3.1.4.1. 화합물 10 의 합성
Figure pct00135
중간체 I38
9-브로모-2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,8,9-헥사히드로피라졸로[1,5-a:4,3-c']디피리딘-10(7H)-온
Figure pct00136
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
실온의 EtOAc (6 mL) 중 CuBr2 (429 mg, 1.92 mmol)의 현탁액에 CHCl3 (4 mL) 중 중간체 I11 (500 mg, 1.37 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시키고, 추가량의 CuBr2 (61 mg; 0.28　mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. CuBr2 (61 mg, 0.28 mmol)의 첨가를 반복하고, 반응 혼합물을 65℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 서서히 EDTA 용액에 첨가하고, EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I38을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 10
(3,4-디클로로페닐)(2-메틸-4,8,9,11-테트라히드로[1,3]티아졸로[4,5-c]피라졸로[1,5-a:4,3-c']- 디피리딘-10(5H)-일)메타논
Figure pct00137
DMF (12 mL) 중 중간체 I38의 용액에 티오아세트아미드 (81.4 mg, 1.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반시키고, EtOAc 및 물로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 85:15으로부터 0:100까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 99:1로부터 95:5까지)로 수행하였다. 잔사를 EtOH (3회), 그 후 EtOAc/EtOH/DCM (1:1:1) 혼합물과 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 10 (111 mg, 19% (2단계에 걸쳐))을 백색 고체로서 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.72 - 7.64 (m, 2H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 4.78 (s, 2H), 4.30 (t, J=7.2 Hz, 2H), 3.78 - 3.68 (m, 2H), 3.30 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.68 (s, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 10.1분, C19H16Cl2N4OS에 대한 m/z 이론치: 418, m/z 실측치: 419 [M+H]+.
3.2. 7원 고리의 합성
3.2.1. 중간체의 합성
3.2.1.1. 중간체 I39 의 합성
5-tert-부틸 3-에틸 2-(펜트-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00138
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (60 mL) 중 Cs2CO3 (6.62 g, 20.3 mmol)의 현탁액에 5-tert-부틸 3-에틸 2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (3.00 g, 10.2　mmol) 및 5-클로로-1-펜틴 (2.15 mL, 20.3 mmol)을 실온에서 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 5시간 동안, 그 후 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, EtOAc (3 x 70 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 75:25로부터 5:95까지)로 정제하여 중간체 I39 (2.25 g, 57%, 93%의 순도)를 담황색 오일로서 제공하였다.
3.2.1.2. 중간체 I40 의 합성
5-tert-부틸 3-에틸 2-(헥스-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00139
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (80 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (4.00 g, 13.5 mmol)의 용액에 Cs2CO3 (13.2 g, 40.6 mmol) 및 6-클로로헥스-2-인 (7.52 g, 40.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시키고, H2O (100 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 90:10으로부터 50:50까지)로 정제하여 중간체 I40 (1.79 g, 35%)을 황색 오일로서 수득하였다.
3.2.1.3. 중간체 I41 의 합성
5-tert-부틸 3-에틸 2-(헵트-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00140
중간체 I40에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I41 (850 mg, 32%)을 제조하였다.
3.2.1.4. 중간체 I42 의 합성
5-tert-부틸 3-에틸 (6R)-6-메틸-2-(펜트-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00141
중간체 I39에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I42 (1.17 g, 45%, 94%의 순도)를 제조하였다.
3.2.1.5. 중간체 I43 의 합성
5-tert-부틸 3-에틸 (6R)-2-(헥스-4-인-1-일)-6-메틸-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00142
중간체 I39에 대하여 설명한 것과 유사하게 중간체 I43 (632 mg, 43%, 86%의 순도)을 제조하였다.
3.2.1.6. 중간체 I51 의 합성
Figure pct00143
중간체 I44
5-tert-부틸 3-에틸 2-알릴-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘 -3,5(4H)-디카르복실레이트
Figure pct00144
N2 분위기 하에 DMF (50 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (5.00 g, 16.9 mmol) 및 3-브로모프로프-1-엔 (3.07 g, 25.4 mmol)의 혼합물에 Cs2CO3 (13.8 g, 42.3 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반시키고, 물 (50 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 1분 동안 교반시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 15:1로부터 5:1까지)로 정제하여 중간체 I44 (2.70 g, 47%)를 황색 고체로서 제공하였다.
중간체 I45
tert-부틸 2-알릴-3-(히드록시메틸)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c] 피리딘-5(4H)-카르복실레이트.
Figure pct00145
N2 분위기 하에 THF (30.00 mL) 중 중간체 I44 (1.70 g, 5.07 mmol)의 혼합물에 LiAlH4 (288 mg, 7.60 mmol)를 -40℃에서 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시키고, 물 (10 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 1분 동안 교반시키고, 수성 상을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 10 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, DCM/MeOH, 구배: 50:1로부터 20:1까지)로 정제하여 중간체 I45 (1.10 g, 72%)를 황색 고체로서 수득하였다.
중간체 I46
tert-부틸 2-알릴-3-포르밀-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)-카르복실레이트
Figure pct00146
N2 분위기 하에 DCM (10.00 mL) 중 중간체 I45 (1.10 g, 3.75 mmol)의 혼합물에 MnO2 (3.26　g, 37.5 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 추가량의 MnO2 (3.26 g, 37.5 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 45℃에서 추가 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 10:1로부터 5:1까지)로 정제하여 중간체 I46 (620 mg, 57%)을 황색 고체로서 수득하였다.
중간체 I47
tert-부틸 2-알릴-3-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트
Figure pct00147
N2 분위기 하에 THF (5.00 mL) 중 중간체 I46 (800 mg, 2.75 mmol)의 혼합물에 알릴마그네슘 브로마이드 (THF 중 1 M, 8.24 mL, 8.24 mmol) -40℃에서 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 2시간 동안 교반시키고, 물 (20 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 1분 동안 교반시키고, 수성 상을 EtAOc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 10 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 3:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I47 (750 mg, 79%)을 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I48
tert-부틸 11-히드록시-3,4,10,11-테트라히드로-1H-피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트
Figure pct00148
N2 분위기 하에 DCM (1.20 L) 중 중간체 I47 (750 mg, 2.25 mmol)의 혼합물에 2세대 그럽스 (Grubbs' 2nd) (382 mg, 445 μmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 4:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I48 (650 mg, 90%)를 황색 고체로서 수득하였다.
중간체 I49
tert-부틸 11-히드록시-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2-카르복실레이트
Figure pct00149
중간체 I48 (2.31 g, 7.56 mmol)을 MeOH (100 mL)에 용해시켰다. Pd/C (10%, 697 mg, 0.65　mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 교반시켰다 (H2 분위기 하에 2시간 동안). 반응 혼합물을 여과시키고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I49 (1.94, 83%)를 백색 폼으로 수득하였다.
중간체 I50
tert-부틸 11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2-카르복실레이트
Figure pct00150
MeCN (75 mL) 중 중간체 I49 (1.89 g, 6.15 mmol), TPAP (432 mg, 1.23 mmol) 및 NMO (3.32　g, 24.6 mmol)의 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I50 (1.79 g, 95%)을 수득하였다.
중간체 I51
tert-부틸 (10E)-10-[(디메틸아미노)메틸리덴]-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2-카르복실레이트
Figure pct00151
N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈 (15 mL) 중 중간체 I50 (1.79 g, 5.86 mmol)을 75℃에서 72시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, 상기 혼합물을 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고, 건조상태까지 증발시켜 중간체 I51 (2.07 g, 98%)을 황색 오일로서 수득하였다.
3.2.1.7. 중간체 I62 및 I63 의 합성
Figure pct00152
중간체 I52
tert -부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c] 피리딘-5(4H)-카르복실레이트
Figure pct00153
N2 분위기 하에 THF (120 mL) 중 에틸 아세테이트 (20.9 g, 237 mmol)의 용액에 NaHMDS (THF 중 1 M, 474 mL, 474 mmol)를 -65℃에서 첨가하였다. THF (200 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (28.0 g, 94.8 mmol)의 용액을 -65℃에서 1시간에 걸쳐 상기 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 10시간 동안 교반시키고, HCl (1 N, 1.5 L)로 켄칭하였다. 수성 상을 EtOAc (1.5　L)로 추출하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 10:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I52 (28.4 g, 89%)를 황색 고체로서 제공하였다.
중간체 I53 및 I54
디-tert-부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디-tert-부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트
Figure pct00154
DCM (200 mL) 중 중간체 I52 (18.0 g, 53.4 mmol), Et3N (16.2 g, 160 mmol) 및 DMAP (652　mg, 5.34 mmol)의 혼합물에 Boc2O (11.6 g, 53.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시키고, HCl (1 N, 250 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (200 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 80:20까지)로 정제하여 중간체 I53 및 I54의 혼합물 (20 g, 43%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I55 및 I56
디-tert-부틸3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디-tert-부틸3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트
Figure pct00155
아세톤 (150 mL) 중 중간체 I53 및 I54 (14.0 g, 32.0 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (6.64g, 48.1 mmol), NaI (960 mg, 6.41 mmol) 및 2-(브로모메틸)알릴옥시-tert-부틸-디페닐 실란 (15.0 g, 38.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 4시간 동안 교반시키고, 0℃의 HCl (1 N, 400 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 EtOAc (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (500 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 30:1로부터 20:1까지)로 정제하여 중간체 I55 및 I56의 혼합물 (13.5 g, 53%)을 황색 오일로서 수득하였다.
중간체 I57
tert-부틸 3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트
Figure pct00156
MeOH (50 mL) 중 중간체 I55 및 I56 (13.5 g, 16.8 mmol)의 혼합물에 H2O (10 mL) 중 KOH (1.89 g, 33.7 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 3시간 동안 교반시키고, HCl (1 N, 300 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (200 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 3/1)로 정제하여 중간체 I57 (8.9 g, 92%)을 황색 오일로서 제공하였다.
중간체 I58
tert-부틸 3-(4-(히드록시메틸)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트.
Figure pct00157
THF (50 mL) 중 중간체 I57 (14.0 g, 22.0 mmol)의 용액에 TBAF (THF 중 1 M, 32.9 mL, 32.9 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시키고, H2O (100 mL)에 부었다. 수성 상을 EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 2:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I58 (6.3 g, 84%)을 백색 고체로서 제공하였다.
중간체 I59
tert-부틸 3-(4-(((메틸술포닐)옥시)메틸)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트
Figure pct00158
N2 분위기 하에 0℃에서 DCM (30　mL) 중 중간체 I58 (6.30 g, 18.4 mmol) 및 Et3N (5.59 g, 55.2 mmol)의 혼합물에 MsCl (4.73 g, 41.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시키고, 물 (60 mL)에 부었다. 수성 상을 EtOAc (3 x 60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (60 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I59를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I60
tert-부틸 8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트
Figure pct00159
N2 분위기 하에 30℃에서 THF (60 mL) 중 중간체 I59의 용액에 DBU (7.06 g, 46.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시키고, 물 (50　mL)에 부었다. 수성 상을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 10:1로부터 8:1까지)로 정제하여 중간체 I60 (4.2 g, 61% (2단계에 걸쳐), 85%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I61
(Z)-tert-부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트.
Figure pct00160
DMF-DMA (15 mL) 중 중간체 I60 (4.20 g, 11.3 mmol)의 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 물 (30 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I61 (4.5 g)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I62 및 I63
tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 및 tert-부틸 3-아미노-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00161
피리딘 (25 mL) 중 중간체 I61 (2.4 g, 조 물질)의 용액에 히드록실아민 히드로클로라이드 (2.24 g, 32.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 115℃에서 10시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 H2O (20 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 10:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I62 (1.4 g, 93%의 순도)를 백색 고체로서 수득하고, 중간체 I63 (0.9 g)을 황색 고체로서 수득하였다.
3.2.1.9. 중간체 I64 의 합성
tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00162
-10℃에서 THF (5 mL) 중 중간체 I62 (480 mg, 1.40 mmol)의 용액에 9-BBN (THF 중 0.5 M, 56.1 mL, 23 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -10℃에서 2시간 동안 교반시키고, H2O (5 mL) 중 NaOH (561 mg, 14.0 mmol)의 용액을 -30℃에서 첨가하고, 이어서 H2O2 (30%의 순도, 3.18 g, 28.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응물을 NaHSO3 (포화, 수성, 50 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 50:50까지)로 정제하여 중간체 I64 (460 mg, 88%)를 백색 고체로서 수득하였다.
3.2.1.10. 중간체 I67 의 합성
Figure pct00163
중간체 I65
tert-부틸 5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-(12H)-카르복실레이트
Figure pct00164
THF (20 mL) 및 H2O (10 mL) 중 중간체 I62 (300 mg, 0.88 mmol)의 용액에 NMO (154 mg, 1.31 mmol) 및 K2OsO4·2H2O (32.3 mg, 87.6 μmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 추가량의 NMO (154 mg) 및 K2OsO4·2H2O (50 mg)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 NaHSO3 (포화, 수성, 3 x 20 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I65 (334 mg)를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I66
tert-부틸 5-옥소-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00165
THF (3.3 mL) 및 H2O (3.3 mL) 중 중간체 I65의 용액에 NaIO4 (563 mg, 2.63 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 물 (50 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 40　mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I66 (320 mg)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I67
tert-부틸 5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00166
EtOH (3 mL) 중 중간체 I66의 용액에 NaBH4 (65.9 mg, 1.74 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, NH4Cl (포화, 수성, 20 mL)로 켄칭하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I67 (230 mg)을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
3.2.1.11. 중간체 I68 의 합성
tert-부틸 5-메틸렌-4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트
Figure pct00167
EtOH (20 mL) 중 중간체 I61 (1.4 g)의 용액에 히드라진 (376 mg, 7.37　mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10℃에서 12시간 동안 교반시키고, HCl (1 N, 40 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 1분 동안 교반시키고, 수성 상을 EtAOc (2 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2 x 30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 석유 에테르/EtOAc, 구배: 5:1로부터 1:1까지)로 정제하여 중간체 I68 (1.02 g)을 백색 고체로서 제공하였다.
3.2.1.11. 중간체 I74 의 합성
Figure pct00168
중간체 I69
5-tert-부틸 3-에틸 2-(5-에톡시-5-옥소펜틸)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure pct00169
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DMF (120 mL) 중 Cs2CO3 (16.2 g, 49.6 mmol)의 현탁액에 5-tert-부틸 3-에틸 2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5-디카르복실레이트 (12.2 g, 41.3　mmol) 및 에틸 5-브로모발레레이트 (7.19 mL, 45.4 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5일 동안 교반시키고, 물 (150 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 x 150 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켜 중간체 I69를 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에 그대로 참여시켰다.
중간체 I70
2-tert-부틸 10-에틸 11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2,10-디카르복실레이트
Figure pct00170
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 THF (190 mL) 중 t-BuOK (9.26 g, 82.6 mmol)의 용액에 THF (190 mL) 중 중간체 I69의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 물 (200 mL)로 켄칭하고, HCl (1 N, 수성, 200 mL)로 산성화하였다. 수성 상을 EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 70:30으로부터 30:70까지)로 정제하여 중간체 I70 (9.07 g, 55% (2단계에 걸쳐))을 무색 검으로서 제공하였다.
중간체 I71
에틸 11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-10-카르복실레이트 히드로클로라이드
Figure pct00171
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 57.1 mL, 228 mmol)을 DCM (50 mL) 중 중간체 I70 (9.07 g, 22.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반시키고, Et2O (200 mL)로 희석시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, Et2O (100 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 중간체 I71을 백색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에 그대로 참여시켰다.
중간체 I72
에틸 2-(3,4-디클로로벤조일)-11-옥소-1,3,4,7,8,9,10,11-옥타히드로-2H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-10-카르복실레이트
Figure pct00172
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 DCM (100 mL) 중 중간체 I71의 현탁액에 피리딘 (5.47 mL, 67.6　mmol), 이어서 DCM (50 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (5.19 g, 24.8 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 18시간 동안 교반시켰다. 추가량의 피리딘 (1.82 mL, 22.5 mmol) 및 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (2.36 g, 11.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가 24시간 동안 교반시켰다. 피리딘 (1.82 mL, 22.5 mmol) 및 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (2.36 g, 11.3 mmol)를 다시 첨가하고, 반응 혼합물을 5시간 동안 추가로 교반시켰다. 상기 혼합물을 DCM (150 mL)으로 희석시키고, HCl (1 M, 수성, 2 x 150 mL) 및 염수 (150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 99:1로부터 95:5까지)로 수행하였다. 잔사를 DCM과 MeOH의 혼합물 (9/1; 150 mL)에 녹이고, NaHCO3 (포화, 수성, 150 mL)으로 세척하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM과 MeOH의 혼합물 (9:1; 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I72 (9.00 g, 89% (2단계에 걸쳐))를 백색 폼으로 제공하였다.
중간체 I73
2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-온
Figure pct00173
DMSO (18 mL) 중 중간체 I72 (1.00 g, 2.22 mmol)의 용액에 H2O (2 mL) 및 LiCl (122 mg, 2.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 150℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 물 (500 mL)에 부었다. 상기 혼합물을 1시간 동안 교반시켰다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 50℃에서 하룻밤 건조시켜 중간체 I73 (709 mg, 84%)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 I74
10-브로모-2-(3,4-디클로로벤조일)-1,2,3,4,7,8,9,10-옥타히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-온
Figure pct00174
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
실온의 CHCl3 (15 mL) 중 CuBr2 (4.03 g, 18.0 mmol)의 현탁액에 중간체 I73 (3.79 g, 10.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 추가량의 CuBr2 (1.34 g, 6.01 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하여 중간체 I74의 두 분획인 분획 A (225 mg, 4%, 75%의 순도) 및 분획 B (불순물을 함유함)를 제공하였다. 분획 B를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 75:25로부터 0:100까지)로 정제하여 중간체 I74 (2.07 g, 40%, 90%의 순도)를 녹색 폼으로서 제공하였다.
3.2.2. 화합물의 합성
3.2.2.1. 이속사졸 유도체 화합물의 합성
3.2.2.1.1. 화합물 11 의 합성
Figure pct00175
중간체 I75
tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00176
피리딘 (5 mL) 중 중간체 I51 (100 mg, 0.28 mmol) 및 N-히드록실아민 히드로클로라이드 (116 mg, 1.66 mmol)의 혼합물을 100℃에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I75 (40 mg, 44%)를 수득하였다.
중간체 I76
5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00177
HCl (i-PrOH 중 6 M, 0.75 mL, 4.5 mmol)을 i-PrOH (5 mL) 중 중간체 I75 (40 mg, 0.12　mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안, 그 후 실온에서 하룻밤 및 80℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 중간체 I76을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 11
(3,4-디클로로페닐)(5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논
Figure pct00178
DCM (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 중간체 I76, 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (27.5 mg, 0.13 mmol) 및 Na2CO3 (25.7 mg, 0.24 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 유기 층을 실리카 카트리지에 로딩하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc)로 정제하여 화합물 11 (33.8 mg, 69% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 8.72 (br s, 1H), 7.65 - 7.69 (m, 2H), 7.42 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.43 - 4.49 (m, 2H), 3.68 - 3.79 (m, 2H), 2.88 - 2.92 (m, 2H), 2.73 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.07 - 2.14 (m, 2H); LCMS (방법 A): Rt = 1.02분, C19H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 402, m/z 실측치: 403 [M+H]+.
3.2.2.1.2. 화합물 12 의 합성
Figure pct00179
중간체 I77
tert-부틸 2-(헥스-4-인-1-일)-3-(히드록시메틸)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00180
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
THF (20 mL) 중 중간체 I40 (885 mg, 2.36 mmol)의 용액에 LiAlH4 (179　mg, 4.71 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 EtOAc (100 mL) 및 H2O (10 mL)로 켄칭하였다. 로셸염 용액 (1 M, 수성, 100 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 30분 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 80:20까지)로 정제하여 중간체 I77 (614 mg, 78%)을 연한 황색 오일로서 제공하였다.
중간체 I78
tert-부틸 3-포르밀-2-(헥스-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00181
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DCM (20 mL) 중 중간체 I77 (614 mg, 1.84 mmol)의 용액에 PCC (595 mg, 2.76 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 혼합물을 건조상태까지 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 60:40까지)로 정제하여 중간체 I78 (512　mg, 84%)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 I79
tert-부틸 2-(헥스-4-인-1-일)-3-[(히드록시이미노)메틸]-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00182
THF (15 mL), MeOH (15 mL) 및 H2O (30 mL) 중 중간체 I78 (512 mg, 1.55 mmol) 및 NaOAc (380 mg, 4.64 mmol)의 용액에N-히드록실아민 히드로클로라이드 (215 mg, 3.09 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 H2O (20 mL)로 희석시키고, 수성 상을 DCM (3 x 60 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3 x 60 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 건조상태까지 농축시켜 중간체 I79를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I80
tert-부틸 3-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00183
0℃의 DCM (31.6 mL) 중 중간체 I79의 용액에 차아염소산나트륨 (H2O 중 14%, 1.63 mL, 3.75 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, MeOH (16 mL), 물 (50 mL) 및 DCM (130 mL)으로 희석시켰다. 상기 혼합물을 K2CO3 (포화, 수성, 50 mL)으로 세척하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc 구배: 80:20으로부터 20:80까지)로 정제하여 중간체 I80 (199　mg, 36% (2단계에 걸쳐), 93%의 순도)을 제공하였다.
중간체 I81
3-메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00184
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
DCM (2 mL) 중 중간체 I80 (158 mg, 0.46 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 2.29 mL, 9.18 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 건조상태까지 농축시켜 중간체 I81을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 12
(3,4-디클로로페닐)(3-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논
Figure pct00185
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
0℃의 DCM (5 mL) 중 중간체 I81의 용액에 Et3N (192 μL, 1.38 mmol)을 첨가하고 DCM (5 mL) 중 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (125 mg, 0.60 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (30 mL)으로 희석시키고, HCl (1 N, 수성, 2 x 20 mL), NaHCO3 (포화, 수성, 2 x 20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 두 번째 정제를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 잔사를 DCM (20 mL)으로 희석시켰다. 상기 용액을 NaHCO3 (포화, 수성, 2 x 10 mL)으로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 다시 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 역상 컬럼 크로마토그래피를 통하여 또 다른 정제를 수행하였다. 생성물을 EtOH와 함께 동시증발시키고, 50℃에서 3일 동안 건조시켜 화합물 12 (95 mg, 50% (2단계에 걸쳐))를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.48 - 4.41 (m, 2H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 2.80 - 2.70 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 2.16 - 2.05 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 10.5분, C20H18Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 416, m/z 실측치: 417 [M+H]+.
3.2.2.1.3. 화합물 13 의 합성
Figure pct00186
화합물 12에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 13 (98 mg)을 제조하였다.
화합물 13, (3,4-디클로로페닐)(3-에틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.72 - 7.65 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 4.71 (s, 2H), 4.48 - 4.41 (m, 2H), 3.81 - 3.66 (m, 2H), 2.82 - 2.70 (m, 6H), 2.16 - 2.05 (m, 2H), 1.25 (t, J=7.5 Hz, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 11.0분, C21H20Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 430, m/z 실측치: 431 [M+H]+.
3.2.2.1.4. 화합물 14 의 합성
Figure pct00187
화합물 12에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 14 (22 mg)를 제조하였다.
화합물 14, (3,4-디클로로페닐)[(10R)-10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 8.75 (s, 1H), 7.71 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.68 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1H), 5.20 - 5.05 (m, 1H), 4.72 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 2H), 4.28 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.95 - 2.90 (m, 2H), 2.60 - 2.54 (m, 2H), 2.20 - 2.06 (m, 2H), 1.20 (d, J=6.9 Hz, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 10.4분, C20H18Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 416, m/z 실측치: 417 [M+H]+.
3.2.2.1.5. 화합물 15 의 합성
Figure pct00188
화합물 12에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 15 (60 mg)를 제조하였다.
화합물 15, (3,4-디클로로페닐)[(10R)-3,10-디메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 80℃) δ ppm 7.70 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.67 (d, J=1.8 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 1.8 Hz, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.72 - 4.56 (m, 1H), 4.47 (t, J=5.3 Hz, 2H), 4.26 (d, J=17.0 Hz, 1H), 2.95 - 2.92 (m, 1H), 2.79 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.56 (d, J=17.0 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.22 - 2.05 (m, 2H), 1.20 (d, J=6.9 Hz, 3H); LCMS (방법 E): Rt = 10.8분, C21H20Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 430, m/z 실측치: 431 [M+H]+.
3.2.2.1.6. 화합물 16 의 합성
Figure pct00189
중간체 I97
tert-부틸 3-(히드록시메틸)-2-(펜트-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00190
중간체 I77에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I97 (1.07 g, 82%, 89%의 순도)을 제조하였다.
중간체 I98
tert-부틸 3-포르밀-2-(펜트-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00191
중간체 I78에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I98 (757 mg, 72%, 90%의 순도)을 제조하였다.
중간체 I99
tert-부틸 3-포르밀-2-(6,6,6-트리플루오로헥스-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00192
반응을 무수 조건 하에 수행하였다.
DMF (12 mL) 중 CuI (567 mg, 2.98 mmol), K2CO3 (823 mg, 5.96 mmol) 및 TMEDA (446 μL, 2.98　mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 격렬하게 교반시켰다. 트리메틸(트리플루오로메틸)실란 (587 μL, 3.97 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 0℃의 DMF (12 mL) 중 중간체 I98 (630 mg, 1.99 mmol) 및 트리메틸(트리플루오로메틸)실란 (587 μL, 3.97 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 및 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (3 x 30 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: 시클로헥산/EtOAc, 구배: 100:0으로부터 60:40까지)로 정제하여 중간체 I99 (188 mg, 24%)를 무색 오일로서 제공하였다.
중간체 I100
tert-부틸 3-[(히드록시이미노)메틸]-2-(6,6,6-트리플루오로헥스-4-인-1-일)-2,4,6,7-테트라히드로-5H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5-카르복실레이트
Figure pct00193
중간체 I79에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I100 (202 mg)을 제조하였다.
중간체 I101
tert-부틸 3-(트리플루오로메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00194
중간체 I80에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I101 (78 mg, 39% (2단계에 걸쳐), 95%의 순도)을 제조하였다.
중간체 I102
3-(트리플루오로메틸)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00195
중간체 I81에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 중간체 I102를 제조하였다.
화합물 16
(3,4-디클로로페닐)[3-(트리플루오로메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논
Figure pct00196
화합물 12에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 16 (76 mg, 87% (2단계에 걸쳐))을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.77 - 4.73 (m, 2H), 4.55 - 4.50 (m, 2H), 3.80 - 3.72 (m, 2H), 3.07 - 3.02 (m, 2H), 2.77 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.23 - 2.17 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 11.5분, C20H15Cl2F3N4O2에 대한 m/z 이론치: 470, m/z 실측치: 471 [M+H]+.
3.2.2.1.8. 화합물 17 의 합성
Figure pct00197
중간체 I103
5-메틸리덴-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00198
HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 8.0 mL, 32.0 mmol) 중 중간체 I62 (1.02 g, 2.98 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I103을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 17
(3,4-디클로로페닐)(5-메틸리덴-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논
Figure pct00199
DCM (6 mL) 및 물 (6 mL) 중 중간체 I103의 용액에 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (749 mg, 3.58 mmol) 및 Na2CO3 (631 mg, 5.96 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 실리카에 흡착시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 50~80% 헵탄/EtOAc)로 정제하여 화합물 17 (916 mg, 74% (2단계에 걸쳐))을 백색 발포성 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.40 - 8.21 (m, 1H), 7.58 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.44 (m, 1H), 7.30 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.00 - 4.89 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.04 (s, 1H), 3.76 - 3.53 (m, 3H), 3.00 - 2.74 (m, 3H); LCMS (방법 C): Rt = 3.03분, C20H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 414, m/z 실측치: 415 [M+H]+.
3.2.2.1.9. 화합물 18 의 합성
(3,4-디클로로페닐)[5-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논
Figure pct00200
THF (1.4 mL) 및 물 (0.7 mL) 중 화합물 17 (250 mg, 0.60 mmol), K2OsO4·2H2O (22.2 mg, 60.2 μmol) 및 NMO (106 mg, 0.90 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다.
조 혼합물 분획 (50 mg)을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 0~10% MeOH/EtOAc)로 정제하여 화합물 18 (21 mg)을 백색 고체로서 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.85 (d, J=33.7 Hz, 1H), 7.87 - 7.67 (m, 2H), 7.48 (dd, J=8.2, 1.9 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 5.00 - 4.89 (m, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.67 - 4.22 (m, 3H), 3.93 (s, 1H), 3.58 (s, 1H), 3.40 (overlaps with solvent), 3.00 - 2.62 (m, 4H); LCMS (방법 C): Rt = 2.27분, C20H18Cl2N4O4에 대한 m/z 이론치: 448, m/z 실측치: 449 [M+H]+.
3.2.2.1.10. 화합물 19 의 합성
Figure pct00201
중간체 I104
5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-올·TFA
Figure pct00202
DCM (5 mL) 중 중간체 I67 (120 mg)의 혼합물에 TFA (1.54 g, 13.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I104를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 19
(3,4-디클로로페닐)(5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논
Figure pct00203
화합물 23에 대하여 설명한 것과 유사한 유사 방식으로 화합물 19를 제조하였다.
1 H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.00 - 8.75 (m, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 2H), 7.47 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 5.50 - 5.30 (m, 1H), 4.78 (br s, 1H), 4.66 - 4.39 (m, 3H), 4.25 (br s, 1H), 4.03 - 3.83 (m, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.05 - 2.89 (m, 2H), 2.83 - 2.62 (m, 2H).
3.2.2.1.11. 화합물 20 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(5-메톡시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논.
Figure pct00204
N2 분위기 하에 0℃에서 DMF (1 mL) 중 화합물 19 (12.0 mg, 28.6 μmol)의 용액에 NaH (광유 중 60% 분산액, 2.29 mg, 57.2 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반시키고, MeI (8.13 mg, 57.2 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 분위기 하에 10℃에서 16시간 동안 교반시키고, 물 (10 mL)에 부었다. 수성 상을 EtOAc (2 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (10　mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 또 다른 분획 (10 mg 규모)과 합하고, 역상 HPLC (Phenomenex Synergi C18 (10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18 (5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.225% FA를 포함함) 중 5~99% MeCN 및 그 후 100% MeCN에서 2분 동안 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC)로 정제하여 화합물 20 (9 mg, 69%, 95%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다.
MS (ESI): C20H18Cl2N4O3에 대한 m/z 이론치: 432.1; m/z 실측치: 433.1 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.37 - 8.27 (m, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.51 (d, J=9.6 Hz, 1H), 7.34 - 7.32 (m, 1H), 4.79 - 4.70 (m, 2H), 4.51-4.47 (m, 1H), 3.96 - 3.92 (m, 2H), 3.78 - 3.57 (m, 1H), 3.41 (s, 3H), 3.22 - 3.16 (m, 1H), 3.12 - 2.65 (m, 4H).
3.2.2.1.12. 화합물 21 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(5-플루오로-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)메타논
Figure pct00205
-78℃의 DCM (2.1 mL) 중 화합물 19 (42.8 mg, 0.10 mmol)의 용액에 DAST (18.8 μL, 0.15 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 가온하고, 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 NaHCO3 (포화, 수성)으로 켄칭하였다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM (3회)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 분취용 TLC (80% EtOAc/헵탄)로 정제하여 화합물 21 (7.5 mg, 17%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 8.65 (d, J=34.4 Hz, 1H), 7.78 - 7.59 (m, 2H), 7.43 (s, 1H), 5.47 - 5.20 (m, 1H), 4.90 (물 피크와 중첩), 4.80 - 4.49 (m, 2H), 4.23 - 3.90 (m, 1H), 3.71 (s, 1H), 3.30 (용매 피크와 중첩), 2.94 - 2.77 (m, 2H); LCMS (방법 D): Rt = 3.07분, C19H15Cl2FN4O2에 대한 m/z 이론치: 420, m/z 실측치: 421 [M+H]+.
3.2.2.1.13. 화합물 22 의 합성
Figure pct00206
중간체 I105
11-tert-부틸 5-메틸 5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5,11(12H)-디카르복실레이트
Figure pct00207
MeCN (3.5 mL) 중 중간체 I65 (375 mg, 1.00 mmol)의 용액에 TPAP (35.0　mg, 0.10 mmol) 및 NMO (1.17 g, 9.96 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 추가의 0.1 당량의 TPAP (35.0 mg, 0.10 mmol)를 첨가하고, 교반을 2시간 동안 계속하였다. 요오도메탄 (620 μL, 9.96 mmol) 및 K2CO3 (275 mg, 1.99 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 5시간 동안 교반시키고, EtOAc 및 HCl로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3회)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 60~100% EtOAc/헵탄)로 정제하여 중간체 I105 (89 mg, 22%)를 고체로서 수득하였다.
중간체 I106
tert-부틸 5-히드록시-5-(메틸카르바모일)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00208
중간체 I105 (89.0 mg, 0.22 mmol)를 메틸아민의 용액 (THF 중 2 M, 2.20 mL, 4.40 mmol)에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I106을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I107
5-히드록시-N-메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드 히드로클로라이드
Figure pct00209
1,4-디옥산 (2 mL) 중 중간체 I106의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 1　mL, 4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I107을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 22
11-(3,4-디클로로벤조일)-5-히드록시-N-메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00210
DCM (1 mL) 및 물 (1 mL) 중 중간체 I107의 용액에 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (69.1 mg, 0.33 mmol) 및 Na2CO3 (46.6 mg, 0.44 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 수성 상을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 0~10% MeOH/EtOAc)로 정제하였다. 잔사를 EtOAc 및 MeOH로 세척하여 화합물 22 (44 mg, 42% (3단계에 걸쳐))를 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 8.99 - 8.76 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.85 - 7.67 (m, 2H), 7.48 (dd, J=8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.10 (d, J=17.4 Hz, 1H), 4.89 - 4.36 (m, 4H), 3.93 (s, 1H), 3.59 (s, 1H), 3.33 - 3.18 (m, 1H), 3.13 - 2.89 (m, 1H), 2.85 - 2.69 (m, 2H), 2.65 (s, 3H); LCMS (방법 C): Rt = 2.70분, C21H19Cl2N5O4에 대한 m/z 이론치: 475, m/z 실측치: 476 [M+H]+.
3.2.2.1.14. 화합물 23 의 합성
Figure pct00211
중간체 I108
5-메틸리덴-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-3-아민 히드로클로라이드
Figure pct00212
중간체 I63 (300 mg, 0.84 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 6 mL, 24.0 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I108을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 23
(3-아미노-5-메틸리덴-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일)(3,4-디클로로페닐)메타논
Figure pct00213
DCM (6.17 mL) 중 중간체 I108 및 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (158 mg, 0.76 mmol)의 혼합물에 Et3N (1.00 mL, 7.19 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 70~100% EtOAc/헵탄)로 정제하여 화합물 23 (157 mg, 51% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, 아세톤-d 6 ) δ ppm 7.61 - 7.78 (m, 2H), 7.39 - 7.56 (m, 1H), 6.22 (m, 2H), 5.18 - 5.34 (m, 2H), 4.77 - 5.00 (m, 3H), 4.56 - 4.70 (m, 1H), 3.92 - 4.07 (m, 1H), 3.63 - 3.78 (m, 1H), 3.36 - 3.52 (m, 2H), 2.78 (m, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 2.85분, C20H17Cl2N5O4에 대한 m/z 이론치: 429, m/z 실측치: 430 [M+H]+.
3.2.2.1.15. 화합물 24 의 합성
[3-아미노-5-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일](3,4-디클로로페닐)메타논
Figure pct00214
THF (0.3 mL) 및 물 (0.15 mL) 중 화합물 23 (56.0 mg, 0.13 mmol), K2OsO4·2H2O (4.80 mg, 13.0 μmol) 및 NMO (22.9 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 H2O (15 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 0~10% MeOH/EtOAc)로 정제하였다. 잔사를 MeCN 및 물에 용해시키고, 동결건조시켜 화합물 24 (24.8 mg, 41%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 7.82 - 7.69 (m, 2H), 7.53 - 7.42 (m, 1H), 6.67 (d, J=26.7 Hz, 2H), 5.04 - 4.94 (m, 1H), 4.85 - 4.19 (m, 5H), 3.91 (s, 1H), 3.55 (s, 1H), 2.86 - 2.54 (m, 5H, 용매와 중첩); LCMS (방법 C): Rt = 2.31분, C20H19Cl2N5O4에 대한 m/z 이론치: 463, m/z 실측치: 464 [M+H]+.
3.2.2.1.16. 화합물 25 의 합성
(3,4-디클로로페닐)[3-(메틸아미노)-5-메틸리덴-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논
Figure pct00215
MeOH (1 mL) 중 화합물 23 (30.0 mg, 69.7 μmol) 및 파라포름알데히드 (30.0 mg)의 혼합물에 NaOMe (15.1 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 3시간 동안 교반시키고, 그 후 0℃까지 냉각시켰다. NaBH4 (10.5 mg, 0.28 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 환류 하에 하룻밤 교반시켰다. 용매를 증발시키고, EtOH를 첨가하고, 교반을 60℃에서 3시간 동안 계속하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 반응물을 NH4Cl (포화, 수성)로 켄칭하였다. 상기 혼합물을 물 및 EtOAc로 희석시켰다. 수성 상을 EtOAc (3회)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 DMSO에 용해시키고, 역상 컬럼에 로딩하고, HPLC (이동상 구배: 10~100% MeCN/물 (0.1% TFA 함유))로 정제하여 화합물 25 (7 mg)를 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.91분, C21H19Cl2N5O2에 대한 m/z 이론치: 444.3, m/z 실측치: 444.1 [M+H]+.
3.2.2.1.17. 화합물 26 의 합성
(3,4-디클로로페닐)[3-(디메틸아미노)-5-메틸리덴-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논
Figure pct00216
0℃의 THF (1.05 mL) 중 화합물 23 (25.0 mg, 58.1 μmol)의 용액에 NaH (95%의 순도, 2.20 mg, 87.2 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시키고, 요오도메탄 (4.00 μL, 63.9 μmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 하룻밤 교반시켰다. 추가량의 NaH (232 μmol) 및 요오도메탄 (0.58　mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가 5시간 동안 교반시켰다. 반응물을 NH4Cl (포화, 수성)로 켄칭하고, 물로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 분취용 TLC (이동상: 80% EtOAc/헵탄)로 정제하여 화합물 26 (13 mg, 49%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 7.57 - 7.74 (m, 2H), 7.33 - 7.46 (m, 1H), 5.19 - 5.33 (m, 2H), 4.79 - 4.86 (m, 2H), 4.52 - 4.70 (m, 2H), 3.96 - 4.12 (m, 1H), 3.53 - 3.76 (m, 3H), 2.99 - 3.17 (m, 6H), 2.73 - 2.92 (m, 2H); LCMS (방법 C): Rt = 3.49분, C22H21Cl2N5O2에 대한 m/z 이론치: 457, m/z 실측치: 458 [M+H]+.
3.2.2.1.18. 화합물 27 의 합성
Figure pct00217
중간체 I109
(5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-일)메탄올 히드로클로라이드
Figure pct00218
중간체 I64 (2.00 g, 5.55 mmol) 및 HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 20 mL, 80.0　mmol)의 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I109를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 27
(3,4-디클로로페닐)[5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-일]메타논
Figure pct00219
DCM (20 mL) 중 중간체 I109의 현탁액에 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (1.28 g, 6.10 mmol) 및 Et3N (7.71 mL, 55.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 40~100% EtOAc/헵탄)로 정제하여 화합물 27 (1.57 g, 65% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.39분, C20H18Cl2N4O3에 대한 m/z 이론치: 432, m/z 실측치: 433 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.90 - 8.82 (m, 1H), 7.76 - 7.73 (m, 2H), 7.48 (dd, J=1.51, 8.16 Hz, 1H), 4.95 (br s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.65 - 4.40 (m, 2H), 4.35 - 4.10 (m, 1H), 3.93 (br s, 1H), 3.59 (br s, 1H), 3.45 - 3.30 (m, 2H), 3.05 - 2.90 (m, 1H), 2.74 - 2.54 (m, 3H), 2.14 (br s, 1H).
3.2.2.1.19. 화합물 28 의 합성
Figure pct00220
중간체 I110
11-(tert-부톡시카르보닐)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복실산
Figure pct00221
MeCN (15 mL) 중 중간체 I64 (750 mg, 2.08 mmol), TPAP (73.1 mg, 0.21 mmol) 및 NMO (2.44　g, 20.8 mmol)의 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc, 물 및 HCl (1 N, 수성)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3회)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I110을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I111
11-tert-부틸 5-메틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5,11(12H)-디카르복실레이트
Figure pct00222
아세톤 (11 mL) 중 조 중간체 I110 및 K2CO3 (406 mg, 2.94 mmol)의 혼합물에 MeI (457 μL, 7.35 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 40~80% EtOAc/헵탄)로 정제하여 중간체 I111 (320 mg, 40% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.
중간체 I112
tert-부틸 5-카르바모일-5,6,9,10-테트라히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트
Figure pct00223
MeOH (1 mL) 중 중간체 I111 (130 mg, 0.34 mmol)의 용액에 NH3 (H2O 중 20%, 1.00 mL, 14.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤, 그 후 80℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (0.21 mmol)과 합하였다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 용액을 NaHCO3 (수성) (3회)으로 세척하였다. 유기 상을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I112를 수득하였다.
중간체 I113
5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드 히드로클로라이드
Figure pct00224
중간체 I112 및 HCl (1,4-디옥산 중 4 N, 1.5 mL, 6.00 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반시키고, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I113을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 28
11-(3,4-디클로로벤조일)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00225
DCM (2.0 mL) 중 중간체 I113 및 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (35.3 mg, 0.17 mmol)의 현탁액에 Et3N (0.11 mL, 0.77 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 EtOH로부터의 재결정화에 의해 정제하여 화합물 28 (30.7 mg, 45% (3단계에 걸쳐))을 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.15분, C20H17Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 445, m/z 실측치: 446 [M+H]+; 1 H NMR (DMSO-d 6 , 75℃) δ ppm 8.81 (s, 1H), 7.66-7.75 (m, 2H), 7.39-7.50 (m, 1H), 4.58-4.79 (m, 3H), 4.44-4.55 (m, 1H), 3.63-3.85 (m, 2H), 2.92-3.23 (m, 용매 피크와 중첩), 2.70-2.79 (m, 2H).
3.2.2.1.20. 화합물 29 의 합성
11-(3,4-디클로로벤조일)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복실산
Figure pct00226
MeCN (10 mL) 중 화합물 27 (200 mg)의 용액에 TPAP (40.6 mg, 115 μmol) 및 NMO (270 mg, 2.31 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, HCl (1 N, 25 mL)로 켄칭하였다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 역상 HPLC (Phenomenex Synergi C18 (10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18 (5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.225% FA를 포함함) 중 5~99% MeCN 및 그 후 100% MeCN에서 2분 동안 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC)로 정제하여 화합물 29 (12.5 mg)를 백색 고체로서 제공하였다.
MS (ESI): C20H16Cl2N4O4에 대한 m/z 이론치: 446.1; m/z 실측치:447.0 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.10 - 8.74 (m, 1H), 7.96 - 7.66 (m, 2H), 7.47 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 5.06 - 4.41 (m, 4H), 3.91 (br s, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.25 - 2.94 (m, 3H), 2.73 (br s, 2H).
3.2.2.1.21. 화합물 30 및 31의 합성
(5*R)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N-메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드 및 (5*S)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N-메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00227
DCM (7.66 mL) 중 화합물 29 (268 mg, 0.60 mmol)의 현탁액에 DMF (76.6　μL) 및 옥살릴 클로라이드 (DCM 중 2 M, 899 μL, 1.80 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 이 주황색 용액에 메틸아민 (THF 중 2 M, 1.50　mL, 3.00 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에 용해시키고, 유기 층을 NaHCO3 (수성), NaOH (1 M, 수성) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 또 다른 분획 (0.15 mmol)과 합하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 0~10% MeOH/EtOAc)로 정제하였다. 거울상이성질체들을 분취용 SFC (고정상: Chiralcel Diacel OJ 20 x 250 mm, 이동상: CO2, EtOH + 0.4% i-PrNH2)로 분리하여 화합물 30 (52 mg, 15%) 및 화합물 31 (56 mg, 16%)을 수득하였다.
화합물 30 : 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 8.77 (s, 1H), 7.64 - 7.77 (m, 3H), 7.42 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.65 - 4.76 (m, 2H), 4.57 - 4.64 (m, 1H), 4.41 - 4.51 (m, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.67 - 3.78 (m, 2H), 3.02 - 3.14 (m, 2H), 2.70 - 2.77 (m, 2H), 2.61 (d, J=4.6 Hz, 3H); LCMS (방법 B): Rt = 1.67분, C21H19Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 459, m/z 실측치: 460 [M+H]+.
화합물 31 : 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 8.77 (s, 1H), 7.69 - 7.75 (m, 2H), 7.64 - 7.70 (m, 1H), 7.42 (dd, J=8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.65 - 4.76 (m, 2H), 4.58 - 4.64 (m, 1H), 4.42 - 4.50 (m, 1H), 3.82 (s, 1H), 3.68 - 3.79 (m, 2H), 3.07 - 3.14 (m, 1H), 2.98 - 3.06 (m, 1H), 2.71 - 2.77 (m, 2H), 2.61 (d, J=4.6 Hz, 3H); LCMS (방법 B): Rt = 1.68분, C21H19Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 459, m/z 실측치: 460 [M+H]+.
3.2.2.1.22. 화합물 32 의 합성
11-(3,4-디클로로벤조일)-N-에틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00228
DCM (1 mL) 중 화합물 29 (35.0 mg, 78.3 μmol)의 현탁액에 DMF (10 μL, 0.13 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (DCM 중 2 M, 78.3 μL, 157 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 이 주황색 용액에 에틸아민 (THF 중 2 M, 0.20 mL, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 MeOH로 세척하여 화합물 32 (23.1 mg, 62%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.90 (d, J=33.9 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.81 - 7.66 (m, 2H), 7.47 (dd, J=8.5, 1.8 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.67 - 4.38 (m, 3H), 3.92 (s, 1H), 3.58 (s, 1H), 3.18 - 2.57 (m, 7H), 1.00 (t, J=6.8 Hz, 3H); LCMS (방법 C): Rt = 2.62분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+.
3.2.2.1.23. 화합물 33 의 합성
N-시클로프로필-11-(3,4-디클로로벤조일)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00229
화합물 32에 대하여 설명한 것과 유사한 방식으로 화합물 33을 제조하였다. 그러나, 교반 동안 생성물이 용액으로부터 침전되었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, MeOH로 세척하여 화합물 33 (31 mg, 81%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.62분, C23H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 485, m/z 실측치: 486 [M+H]+.
3.2.2.1.24. 화합물 34 의 합성
11-(3,4-디클로로벤조일)-N-(2-히드록시에틸)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00230
DCM (1.00 mL) 중 화합물 29 (60.0 mg, 0.13 mmol)의 현탁액에 DMF (1.04 μL, 13.4 μmol) 및 옥살릴 클로라이드 (DCM 중 2 M, 0.29 mL, 0.54 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 에탄올아민 (40.5 μL, 0.67 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 DCM 및 물로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM (3회)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고, 감압 하에 부분적으로 농축시켰다. 상기 혼합물을 분취용 TLC (100% EtOAc)로 정제하여 화합물 34 (13.2 mg, 20%)를 담황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.90 (d, J=33.9 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.52 - 7.42 (m, 1H), 4.83 - 4.41 (m, 5H), 3.92 (s, 1H), 3.58 (s, 1H), 3.20 - 2.64 (m, 8H); LCMS (방법 D): Rt = 2.38분, C22H21Cl2N5O4에 대한 m/z 이론치: 489, m/z 실측치: 490 [M+H]+.
3.2.2.1.25. 화합물 35 의 합성
11-(3,4-디클로로벤조일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00231
화합물 32의 합성에 대하여 보고된 절차에 따라 화합물 35를 제조하였다.
상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, MeOH를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실리카에 흡착시키고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 이동상 구배: 0~10% MeOH/EtOAc)로 정제하여 화합물 35 (18.4 mg, 52%)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.88분, C22H18Cl2F3N5O3에 대한 m/z 이론치: 527, m/z 실측치: 528 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.77-9.04 (m, 2H), 7.69-7.81 (m, 2H), 7.47 (br d, J=7.3 Hz, 1H), 4.78 (br s, 1H), 4.52-4.66 (m, 3H), 3.84-4.04 (m, 3H), 3.52-3.64 (m, 1H), 2.99-3.15 (m, 3H), 2.68-2.82 (m, 2H).
3.2.2.1.26. 화합물 36 의 합성
Figure pct00232
중간체 I115
11-(3,4-디클로로벤조일)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르보닐 클로라이드
Figure pct00233
N2 분위기 하에 DCM (0.6 mL) 및 DMF (54 μL) 중 화합물 29 (58.0 mg, 0.13 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (DCM 중 2 M, 0.13 mL, 0.26 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반시켜 중간체 I115를 수득하고, 상기 혼합물을 3개의 배치로 분할하고, 이를 후속 반응에서 사용하였다.
화합물 36
11-(3,4-디클로로벤조일)-N,N-디메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00234
중간체 I115의 용액에 디메틸아민 (THF 중 2 M, 0.11 mL, 0.22 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 분취용 TLC (이동상: 2% MeOH/EtOAc)로 정제하여 화합물 36 (18.7 mg, 91%)을 수득하였다.
LCMS (방법 D): Rt = 2.91분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 8.52-8.70 (m, 1H), 7.54-7.75 (m, 2H), 7.41 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.78 (m, 2H), 4.34 - 4.52 (m, 1H), 3.93 - 4.17 (m, 1H), 3.64 - 3.74 (m, 1H), 3.41 - 3.57 (m, 1H), 3.00 - 3.25 (m, 5H), 2.91 - 2.98 (m, 3H), 2.76 - 2.88 (m, 3H).
3.2.2.1.27. 화합물 37 의 합성
11-(3,4-디클로로벤조일)-N-페닐-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00235
DCM (1 mL) 중 중간체 I115 (30.0 mg, 64.4 μmol)의 용액에 아닐린 (29.3　μL, 0.32 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 역상 HPLC (Gilson, 100 mm x 30 mm, 10~100% ACN/물 (이들 둘 다 0.1% TFA를 함유함))로 정제하였다. 잔사를 DCM 및 MeOH로 세척하여 화합물 37 (7.6 mg, 23%)을 황백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 3.30분, C26H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 521, m/z 실측치: 522 [M+H]+; 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 10.13-10.30 (m, 1H), 8.82 - 9.11 (m, 1H), 7.70 - 7.82 (m, 2H), 7.41 - 7.63 (m, 3H), 7.31 (t, J=8.1 Hz, 2H), 7.02 - 7.09 (m, 1H), 4.51 - 4.87 (m, 4H), 3.85 - 3.98 (m, 1H), 3.52 - 3.66 (m, 1H), 3.05 - 3.29 (m, 3H), 2.68 - 2.83 (m, 2H).
3.2.2.1.28. 화합물 38 의 합성
[11-(3,4-디클로로벤조일)-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-일](모르폴린-4-일)메타논
Figure pct00236
중간체 I115의 용액에 모르폴린 (7.49 mg, 86 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 분취용 TLC (이동상: 2% MeOH/EtOAc)로 정제하여 화합물 38 (11.3 mg, 50%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (방법 C): Rt = 2.72분, C24H23Cl2N5O4에 대한 m/z 이론치: 515, m/z 실측치: 516 [M+H]+.
3.2.2.1.29. 화합물 39 의 합성
Figure pct00237
중간체 I116
tert-부틸 4,5,6,9,10,12-헥사히드로-11H-[1,2]옥사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-카르복실레이트
Figure pct00238
히드록실아민 히드로클로라이드 (68 μL, 1.11 mmol)를 MeOH (5 mL) 중 중간체 I51 (100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I116 (58　mg, 63%)을 수득하였다.
중간체 I117
5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-[1,2]옥사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00239
HCl (i-PrOH 중 6 M, 0.75 mL, 4.50 mmol)을 i-PrOH (5 mL) 중 중간체 I116 (58 mg, 0.18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안, 및 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 중간체 I117을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 39
(3,4-디클로로페닐)(4,5,6,9,10,12-헥사히드로-11H-[1,2]옥사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-일)메타논
Figure pct00240
DCM (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 중간체 I117, 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (39.8 mg, 0.18 mmol) 및 Na2CO3 (37.2 mg, 0.35 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 유기 층을 실리카 카트리지에 로딩하고, 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 화합물 39 (26.9　mg, 38% (2단계에 걸쳐))를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 8.46 (s, 1H), 7.69 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.44 (dd, J=8.3, 1.9 Hz, 1H), 4.80 (br s, 2H), 4.38 - 4.45 (m, 2H), 3.69 - 3.79 (m, 2H), 2.81 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.73 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.08 - 2.17 (m, 2H); LCMS (방법 A): Rt = 0.99분, C19H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 402, m/z 실측치: 403 [M+H]+.
3.2.2.2. 옥사졸 유도체 화합물의 합성
화합물 40 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(4,5,6,9,10,12-헥사히드로-11H-[1,3]옥사졸로[4,5-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11-일)메타논
Figure pct00241
반응을 무수 조건 하에 수행하였다.
포름아미드 (2 mL) 중 중간체 I74 (200 mg, 0.44 mmol)의 용액에 AgSbF6 (150 mg, 0.44 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 90℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (20 mL)으로 희석시키고, Celite® 패드를 통하여 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 98:2까지)로 정제하였다. 생성물을 50℃에서 하룻밤 건조시켜 화합물 40 (64 mg, 36%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 8.27 (s, 1H), 7.70 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.67 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.5, 1.9Hz, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.38 - 4.30 (m, 2H), 3.78 - 3.65 (m, 2H), 3.07 (t, J=5.6 Hz, 2H), 2.72 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.25 - 2.12 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 9.8분, C19H16Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 402, m/z 실측치: 403 [M+H]+.
3.2.2.3. 피라졸 유도체 화합물의 합성
3.2.2.3.1. 화합물 41 의 합성
Figure pct00242
중간체 I118
tert-부틸 2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-카르복실레이트
Figure pct00243
히드라진 일수화물 (H2O 중 50%, 34.56 μL, 0.55 mmol)을 MeOH (5 mL) 중 중간체 I51 (100 mg, 0.28 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I118 (57 mg, 62%)을 백색 분말로서 수득하였다.
중간체 I119
2,4,5,6,9,10,11,12-옥타히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00244
HCl (i-PrOH 중 6 M, 288 μL, 1.73 mmol)을 i-PrOH (5 mL) 중 중간체 I118 (57.0 mg, 0.17 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 중간체 I119를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 41
(3,4-디클로로페닐)(2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-일)메타논
Figure pct00245
DCM (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 중간체 I119, 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (39.2 mg, 0.18 mmol) 및 Na2CO3 (36.7 mg, 0.35 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 상기 혼합물을 실리카 카트리지에 로딩하고, 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하였다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: NH4HCO3 (물 중 0.25%)/MeCN)를 통하여 정제하여 화합물 41 (31.7 mg, 46% (2단계에 걸쳐))을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 12.39 - 12.93 (m, 1H), 7.62 - 7.68 (m, 2H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (dd, J=8.3, 1.8 Hz, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.33 - 4.39 (m, 2H), 3.64 - 3.80 (m, 2H), 2.92 (br s, 1H), 2.84 - 2.89 (m, 2H), 2.69 (t, J=5.9 Hz, 2H); LCMS (방법 A): Rt = 0.88분, C19H17Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 401, m/z 실측치: 402 [M+H]+.
3.2.2.3.2. 화합물 42 의 합성
Figure pct00246
중간체 I120
tert-부틸 2-메틸-2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-카르복실레이트
Figure pct00247
메틸히드라진 (29.8 μL, 0.56 mmol)을 MeOH (5 mL) 중 중간체 I51 (100 mg, 0.28　mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 잔사를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카 겔, 이동상 구배: 헵탄에서 EtOAc까지)로 정제하여 중간체 I120 (50 mg, 52%)을 백색 분말로서 수득하였다.
중간체 I121
2-메틸-2,4,5,6,9,10,11,12-옥타히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00248
HCl (i-PrOH 중 6 M, 500 μL, 3.00 mmol)을 i-PrOH (10 mL) 중 중간체 I120 (50 mg, 0.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안, 및 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 중간체 I121을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 42
(3,4-디클로로페닐)(2-메틸-2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-일)메타논
Figure pct00249
DCM (5 mL) 및 물 (5 mL) 중 중간체 I121, 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (33.0 mg, 0.15 mmol) 및 Na2CO3 (30.9 mg, 0.29 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 상기 혼합물을 실리카 카트리지에 로딩하고, 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc)로 정제하였다. 잔사를 분취용 HPLC (고정상: RP XBridge Prep C18 OBD-10 μm, 30x150 mm, 이동상: NH4HCO3 (물 중 0.25%)/MeCN)를 통하여 정제하여 화합물 42 (32.1 mg, 53% (2단계에 걸쳐))를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 100℃) δ ppm 7.64 - 7.69 (m, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.41 (dd, J=8.1, 2.0 Hz, 1H), 4.72 (br s, 2H), 4.31 - 4.37 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.65 - 3.75 (m, 2H), 2.79 - 2.85 (m, 2H), 2.68 (t, J=5.9 Hz, 2H), 2.02 - 2.09 (m, 2H); LCMS (방법 A): Rt = 1.00분, C20H19Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 415, m/z 실측치: 416 [M+H]+.
3.2.2.3.3. 화합물 43 의 합성
Figure pct00250
중간체 I122
5-메틸리덴-2,4,5,6,9,10,11,12-옥타히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 히드로클로라이드
Figure pct00251
HCl (1,4-디옥산 중 4 M, 6.0 mL, 24.0 mmol) 중 중간체 I68 (812 mg, 2.38 mmol)의 용액을 실온에서 3시간 동안 교반시키고, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 중간체 I122를 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I123
(3,4-디클로로페닐)(5-메틸리덴-2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-일)메타논
Figure pct00252
중간체 I122, 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 (257 mg, 1.23 mmol)의 혼합물에 DCM (34 mL) 및 H2O (34 mL)를 첨가하였다. Na2CO3 (247 mg, 2.33 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 격렬하게 교반시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. MeOH를 잔사에 첨가하였다. 상기 용액을 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 중간체 I123을 수득하고, 이를 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 43
(3,4-디클로로페닐)[5-(히드록시메틸)-2,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(4H)-일]메타논
Figure pct00253
중간체 I123을 THF (0.7 mL)에 용해시켰다. 9-BBN (THF 중 0.5 M, 0.60 mL, 0.30 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. NaOH (1 M, 수성, 0.1 mL, 0.1　mmol) 및 H2O2 (0.1 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 분취용 TLC (100% EtOAc)로 정제하여 화합물 43 (4.0 mg, 15% (3단계에 걸쳐))을 수득하였다.
LCMS (방법 D): Rt = 2.38분, C20H19Cl2N5O2에 대한 m/z 이론치: 431, m/z 실측치: 432 [M+H]+; 1 H NMR (400 Hz, MeOD) δ ppm 7.54 - 7.70 (m, 1H), 7.34 - 7.50 (m, 1H), 7.32 - 7.73 (m, 2H), 4.91 - 4.98 (m, 1H), 4.50 - 4.81 (m, 2H), 4.12 - 4.27 (m, 1H), 3.93 - 4.10 (m, 1H), 3.41 - 3.77 (m, 3H), 2.61 - 3.08 (m, 4H), 2.15 - 2.34 (m, 1H).
3.2.2.4. 이미다졸 유도체 화합물의 합성
3.2.2.4.1. 화합물 44 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(4,5,6,9,10,12-헥사히드로이미다조[4,5-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a]아제핀-11(3H)-일)메타논
Figure pct00254
반응을 Ar 분위기 하에 수행하였다.
포름아미드 (8.37 mL, 210 mmol) 중 중간체 I74 (800 mg, 1.75 mmol)의 용액에 H2O (0.88 mL, 49.0 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 조사 하에 160℃에서 1시간 동안 교반시키고, DCM (10 mL) 및 물 (3 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을역 플래시 컬럼 크로마토그래피 (C-18, 이동상: H2O/MeCN, 구배: 95:5로부터 50:50까지)로 정제하여 화합물 44의 두 분획인 분획 A (200 mg, 90%의 순도, 26%) 및 분획 B (158 mg, 92%의 순도, 21%)를 제공하였다. 분획 A를 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 98:2까지)로 정제하여 화합물 44 (130 mg, 18%)를 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 11.65 (s, 1H), 7.69 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.67 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.43 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 3.79 - 3.64 (m, 2H), 2.95 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.69 (t, J=5.6 Hz, 2H), 2.15 - 2.08 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 7.6분, C19H17Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 401, m/z 실측치: 402 [M+H]+.
3.2.2.4.2. 화합물 45 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(3-메틸-4,5,6,9,10,12-헥사히드로이미다조[4,5-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(3H)-일)메타논
Figure pct00255
반응을 무수 조건 하에 그리고 Ar 분위기 하에 수행하였다.
THF (4 mL) 중 화합물 44 (138 mg, 0.31 mmol, 91%의 순도)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 25.1 mg, 0.63 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반시켰다. 요오도메탄 (39.0 μL, 0.63 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 및 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 또 다른 분획 (0.13　mmol)과 합하였다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na2SO4), 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하여 화합물 45 (110 mg, 69%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 7.68 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.42 (dd, J=8.0, 2.0 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.32 - 4.25 (m, 2H), 3.78 - 3.65 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 2.89 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.68 (t, J=6.0 Hz, 2H), 2.19 -2.11 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 8.1분, C20H19Cl2N5O에 대한 m/z 이론치: 415, m/z 실측치: 416 [M+H]+.
3.2.2.4. 티아졸 유도체 화합물의 합성
화합물 46 의 합성
(3,4-디클로로페닐)(4,5,6,9,10,12-헥사히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,3]티아졸로[4,5-c]아제핀-11-일)메타논
Figure pct00256
1,4-디옥산 (2 mL) 중 오황화인 (340 mg, 0.77 mmol)의 용액 중에 포름아미드 (349 μL, 8.75 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시켰다. 고체를 여과 제거하고, 여과액을 1,4-디옥산 (1 mL) 중 중간체 I74 (200 mg, 0.437 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 DCM (15 mL)으로 희석시키고, Celite® 패드를 통하여 여과시켰다. 여과액을 진공 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 플래시 컬럼 크로마토그래피 (실리카, 이동상: DCM/MeOH, 구배: 100:0으로부터 97:3까지)로 정제하였다. 생성물을 진공 하에 50℃에서 하룻밤 건조시켜 화합물 46 (140　mg, 76%)을 백색 고체로서 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , 80℃) δ ppm 8.97 (s, 1H), 7.69 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.67 (d, J=1.7 Hz, 1H), 7.43 (dd, J=8.2, 1.7 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.45 - 4.33 (m, 2H), 3.78 - 3.66 (m, 2H), 3.24 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.73 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.25 - 2.18 (m, 2H); LCMS (방법 E): Rt = 10.3분, C19H16Cl2N4OS에 대한 m/z 이론치: 418, m/z 실측치: 419 [M+H]+.
3.2.2.5. 화합물 47 ~ 50 의 합성
중간체 I126의 합성
Figure pct00257
0℃의 에틸 이속사졸-3-카르복실레이트 [3209-70-9] (14.7 g, 104 mmol) 및 NBS [128-08-5] (55.7 g, 313 mmol)의 혼합물에, 트리플루오로메탄술폰산 [1493-13-6] (175 mL, 1.98 mol)을 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시키고, 실온까지 가온하고, 21시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NaHCO3 수용액 (500 mL)으로 켄칭하고, 고체 Na2CO3으로 중화시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (250 mL) 및 Et2O (250 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 층을 Et2O (4 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 건조상태까지 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100:0으로부터 80:20까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 I124 (10.3 g, 45%)를 백색 고체로서 수득하였다.
H2O (82 ml) 중 K2CO3 [584-08-7] (9.42 g, 68.2 mmol)의 용액을 0℃의 MeOH (165 ml) 중 I124 (10 g, 45.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 반응물을 실온까지 가온하고, 출발 물질이 소모될 때까지 교반시켰다. 반응 조 물질을 농축시키고, H2O 및 EtOAc를 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (2 x 40 ml)로 추출하고, 3 M HCl (pH: 대략 2)로 산성화하고, EtOAc (3 x 90 ml)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 I125 (8.6 g, 99%)를 백색 고체로서 수득하였다.
반응을 아르곤 분위기 하에 무수 조건에서 수행하였다.
CH2Cl2 (50 mL) 중 I125 (5.00 g, 26.0 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 [79-37-8] (6.6 mL, 78.1 mmol) 및 DMF (0.202 mL, 2.61 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 건조상태까지 농축시키고, DCM (3 x 20 mL)과 함께 동시증발시켜 I126을 황색 오일로서 수득하였다. 조 물질을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
화합물 47~50의 합성
Figure pct00258
Figure pct00259
중간체 I127 및 I127'
Figure pct00260
반응을 아르곤 분위기 하에 무수 조건에서 수행하였다.
-78℃의 THF (50 mL) 중 (2R)-2-메틸-4-옥소-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 [790667-43-5] (5.6 g, 26.0 mmol)의 용액에, LiHMDS [4039-32-1] (39 mL, 39 mmol, THF 중 1 M)를 적가하고, -78℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 캐뉼러를 통하여 -78℃의 THF (50 mL) 중 I126 (6 g, 28.7 mmol)의 용액에 첨가하고, 서서히 주위 온도까지 가온하고, 15시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 수용액 (120 mL)으로 켄칭하고, 수성 층을 EtOAc (3 x 120 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (100:0으로부터 0:100까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 I127과 I127'의 혼합물을 주황색 오일로서 생성하였다.
중간체 I128 및 I128'
Figure pct00261
-40℃의 EtOH (74 mL) 중 I127 및 I127' (6.19 g, 16.0 mmol)의 용액에, 히드라진 일수화물 [7803-57-8] (4.00 g, 79.9 mmol)을 첨가하고, 실온에서 17시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, 그 후 포화 NaHCO3 수용액 (100 mL)을 첨가하고, EtOAc (3 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100:0으로부터 50:50까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 I128과 I128'의 혼합물을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 I129 및 I129'
Figure pct00262
TFA [76-05-1] (1.0 mL, 13.07 mmol)를 CH2Cl2 (1 mL) 중 I128 및 I128' (100 mg, 0.261 mmol)의 용액에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액으로 염기성화하고, H2O (5 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 I129와 I129'의 혼합물을 백색 고체로서 생성하였다 (다음 단계에서 그대로 사용함).
중간체 I130 및 I130'
Figure pct00263
THF (80 mL) 중 I129와 I129'의 혼합물 (2.9 g, 10.24 mmol)의 용액에, Et3N [121-44-8] (4.3 mL, 30.7 mmol) 및 3,4-디클로로벤조일 클로라이드 [3024-72-4] (2.6 g, 12.3 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 포화 NH4Cl 수용액 (5 mL)을 첨가하고, 수성 층을 EtOAc (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (100/0으로부터 99/1까지의 DCM/MeOH)로 정제하여 I130과 I130'의 혼합물 (4.17 g, 83%)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 I131 , I131' , I131a 및 I131a'
Figure pct00264
반응을 아르곤 분위기 하에 수행하였다.
THF (20 mL) 중 I130 및 I130' (1.03 g, 2.26 mmol)의 용액에, NaH [7646-69-7] (135 mg, 3.39 mmol, 60%)를 0℃에서 첨가하였다. 15분 교반한 후, 2-(트리메틸실릴)에톡시메틸 클로라이드 [76513-69-4] (0.480 mL, 2.71 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시킨 후 포화 NH4Cl 수용액 (20 mL)을 첨가하였다. 수성 층을 EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 80/20까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 이성질체 I131, I131', I131a 및 I131a'의 혼합물 (961 mg, 72%)을 백색 고체로서 생성하였다.
중간체 I132 , I132a , I132' 및 I132a'
Figure pct00265
반응을 아르곤 분위기 하에 수행하였다.
THF (11 mL) 및 H2O (2.5 mL) 중 I131, I131', I131a 및 I131a' (823 mg, 1.40 mmol), 보론산 에스테르 [153989-28-7] (635 mg, 2.81 mmol) 및 Na2CO3 [497-19-8] (446 mg, 4.21 mmol)의 혼합물을 10분 동안 아르곤 버블링에 의해 탈기시켰다. 그 후, Pd(PPh3)4 [14221-01-3] (162 mg, 0.140 mmol)를 첨가하고, 아르곤으로 퍼지한 후 밀봉 튜브에서 95℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 보론산 에스테르 [153989-28-7] (635 mg, 2.81 mmol), Na2CO3 [497-19-8] (446 mg, 4.21 mmol) 및 Pd(PPh3)4 [14221-01-3] (162 mg, 0.140 mmol)을 첨가하고, 95℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 보론산 에스테르 [153989-28-7] (317 mg, 1.40 mmol), Na2CO3 [497-19-8] (223 mg, 2.11 mmol) 및 Pd(PPh3)4 [14221-01-3] (0.0811 g, 0.0702 mmol)를 첨가하고, 95℃에서 추가로 2시간 동안 교반시켰다. 조 물질을 물 (50 mL)로 희석시키고, 수성 층을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조 물질을 플래시 크로마토그래피 (100:0으로부터 70:30까지의 시클로헥산/EtOAc)로 정제하여 I132, I132a, I132' 및 I132a'의 혼합물을 누르스름한 오일로서 수득하였다 (다음 단계에서 그대로 사용함).
중간체 I133 및 I133'
Figure pct00266
CH2Cl2 (1.6 mL) 중 I132, I132a, I132' 및 I132a'의 혼합물 (490 mg, 0.81 mmol)의 용액에, TFA [76-05-1] (1.6 mL, 20.2 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. TFA [76-05-1] (1.6 mL, 20.2 mmol)를 첨가하고, 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 건조상태까지 농축시키고, EtOH (3 x 8 mL)와 함께 동시증발시켜 I133과 I133'의 혼합물을 주황색 오일로서 생성하였다. 생성물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 그대로 사용하였다.
중간체 I134 및 I134'
Figure pct00267
MeOH (18 mL) 중 I133과 I133'의 혼합물 (826 mg, 0.806 mmol)의 용액에 , KOH [1310-58-3] (266 mg, 4.03 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. KOH [1310-58-3] (133 mg, 2.02 mmol)를 첨가하고, 실온에서 3일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 HCl (1 M) 수성 용액으로 산성화하고 (pH가 대략 2가 될 때까지, 6 mL), 물 (20 mL)로 희석시키고, 그 후 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 역상 플래시 크로마토그래피 (80:20으로부터 0:100까지의 물/MeCN)로 정제하여 I134와 I134'의 혼합물을 백색 고체로서 수득하였다 (다음 단계에서 그대로 사용함).
화합물 47 ~ 50
Figure pct00268
반응을 아르곤 분위기 하에 무수 조건에서 수행하였다.
0℃의 CH2Cl2 (13 mL) 중 I134와 I134'의 혼합물 (840 mg, 0.80 mmol) 및 DIPEA [7087-68-5] (0.419 mL, 2.40 mmol)의 용액에 메틸아민 히드로클로라이드 [593-51-1] (81 mg, 1.20 mmol) 및 HATU [148893-10-1] (457 mg, 1.20 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온까지 가온하고, 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 수용액 (40 mL)으로 켄칭하고, DCM (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (100:0으로부터 95:5까지의 DCM/MeOH) 및 역상 플래시 크로마토그래피 (80:20으로부터 0:100까지의 물/MeCN)로 정제하고, 이어서 EtOH (3 x 10 mL)와 함께 동시증발시켰다. 그 후 백색 고체를 분취용 SFC (고정상: Chiralpak Daicel ID 20 x 250 mm, 이동상: CO2, iPrOH + 0.4 iPrNH2)로 정제하여 화합물 47 (22 mg), 화합물 48 (28 mg), 화합물 49 (22 mg) 및 화합물 50 (33 mg)을 백색 고체로서 생성하였다.
최종 화합물 47
(5R,10R)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N,10-디메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00269
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.15 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 2.54 (d, J=15.85 Hz, 1 H) 2.61 (d, J=4.62 Hz, 3 H) 2.91 - 2.97 (m, 3 H) 3.00 - 3.14 (m, 2 H) 4.23 (br d, J=17.39 Hz, 1 H) 4.40 - 4.52 (m, 1 H) 4.60 - 4.66 (m, 1 H) 5.02 - 5.22 (m, 1 H) 7.41 (dd, J=8.14, 1.98 Hz, 1 H) 7.65 - 7.78 (m, 3 H) 8.77 (s, 1 H)
SFC (방법: SFC_A): Rt: 8.52분, 100.00%, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z: 473.10, 실측치: 533 [M+iPrNH2]+.
LCMS (방법: B): Rt = 1.75분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+
최종 화합물 48
(5S,10R)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N,10-디메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00270
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.18 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 2.56 (d, J=15.85 Hz, 1 H) 2.60 - 2.63 (m, 3 H) 2.89 - 2.97 (m, 3 H) 2.98 - 3.15 (m, 2 H) 4.26 (br d, J=17.39 Hz, 1 H) 4.43 - 4.52 (m, 1 H) 4.63 (dt, J=14.64, 1.71 Hz, 1 H) 4.95 - 5.21 (m, 1 H) 7.40 (dd, J=8.14, 1.98 Hz, 1 H) 7.62 - 7.76 (m, 3 H) 8.78 (br s, 1 H)
SFC (방법: SFC_A): Rt: 7.24분, 100.00%, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z: 473.10, 실측치: 533 [M+iPrNH2]+.
LCMS (방법: B): Rt = 1.76분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+
최종 화합물 49
(5R,12R)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N,12-디메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00271
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.51 (d, J=6.60 Hz, 3 H) 2.62 (d, J=4.62 Hz, 3 H) 2.68 - 2.74 (m, 2 H) 2.87 - 2.98 (m, 4 H) 2.99 - 3.13 (m, 2 H) 4.39 - 4.48 (m, 1 H) 4.57 - 4.65 (m, 1 H) 7.36 (dd, J=8.25, 1.87 Hz, 1 H) 7.59 - 7.76 (m, 3 H) 8.79 (s, 1 H)
SFC (방법: SFC_A): Rt: 7.05분, 100.00%, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z: 473.10, 실측치: 533 [M+iPrNH2]+.
LCMS (방법: B): Rt = 1.77분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+
최종 화합물 50
(5S,12R)-11-(3,4-디클로로벤조일)-N,12-디메틸-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-5-카르복스아미드
Figure pct00272
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 1.40 - 1.46 (m, 3 H) 2.61 (d, J=4.62 Hz, 3 H) 2.66 - 2.83 (m, 2 H) 2.91 - 3.13 (m, 6 H) 4.34 - 4.49 (m, 1 H) 4.54 - 4.62 (m, 1 H) 7.38 (dd, J=8.14, 1.98 Hz, 1 H) 7.62 - 7.75 (m, 3 H) 8.79 (s, 1 H)
SFC (방법: SFC_A): Rt: 7.75분, 100.00%, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z: 473.10, 실측치: 533 [M+iPrNH2]+.
LCMS (방법: B): Rt = 1.76분, C22H21Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 473, m/z 실측치: 474 [M+H]+
3.2.2.6. 화합물 51 의 합성
(2-아미노-4,5,6,9,10,12-헥사히드로-11H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]티아졸로[4,5-c]아제핀-11-일)(3,4-디클로로페닐)메타논
Figure pct00273
반응을 아르곤 분위기 하에 무수 조건에서 수행하였다.
ACN (6 mL) 중 I74 (510 mg, 1.12 mmol)의 용액에, 티오우레아 [62-56-6] (84.9 mg, 1.12 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 18시간 동안 교반시켰다. H2O (10 mL) 및 EtOAc (3 x 30 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피 (100/0으로부터 95/5까지의 DCM/MeOH)로 정제하여 화합물 51 (102 mg, 21%)을 황색 고체로서 제공하였다.
LCMS (방법: E): Rt: 9.5분, C19H17Cl2N5OS에 대한 m/z 이론치: 433, m/z 실측치: 434 [M+H]+
3.2.2.7. 화합물 52 의 합성
Figure pct00274
EtOH (9.4 mL) 중 NaOH [1310-73-2] (103 mg, 2.56 mmol)의 용액에, I73 (650 mg, 1.72 mmol) 및 벤즈알데히드 [100-52-7] (174 μL, 1.72 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 교반시킨 후 이것을 DCM (40 mL) 및 물 (20 mL)로 희석시켰다. 층들을 분리하고, 수성 층을 DCM (2 x 150 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 I135 (770 mg, 74%)를 백색 고체로서 수득하였다.
반응을 아르곤 분위기 하에 무수 조건에서 수행하였다. 피리딘 (8 mL) 중 I135 (220 mg, 0.472 mmol)의 용액에, N-히드록실아민 히드로클로라이드 [7803-57-8] (164 mg, 2.36 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 5일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, 1 N HCl 수성 용액 (2 x 50 mL), 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피 (10/0으로부터 95/5까지의 DCM/MeOH)로 정제하였다. 수득된 고체를 EtOAc 및 EtOH와 함께 동시증발시키고, 진공 하에 50℃에서 건조시켜 화합물 52 (28 mg, 12 %)를 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS (방법: E): Rt: 11.6분, C25H20Cl2N4O2에 대한 m/z 이론치: 478, m/z 실측치: 479 [M+H]+
3.2.2.8. 화합물 53 의 합성
Figure pct00275
DCM (0.8 mL) 중 I104 (20 mg, 0.071 mmol) 및 5,6-디클로로-피리딘카르보닐 클로라이드 [54127-29-6]의 현탁액에, Et3N [121-44-8] (56 μL, 0.406 mmol, 0.728 g/mL)을 첨가하였다. 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 조 혼합물을 분취용 TLC (100% EtOAc-런(run) 플레이트 2x)로 정제하여 화합물 53 (19 mg, 65%)를 백색 고체로서 생성하였다.
1 H NMR (500 MHz, DMSO-δ6): δ 8.69-8.89 (m, 1H), 8.40-8.54 (m, 1H), 8.15-8.28 (m, 1H), 5.19 (br s, 1H), 4.60-4.86 (m, 2H), 4.40-4.56 (m, 2H), 4.24 (br s, 1H), 3.57-3.96 (m, 2H), 2.89-3.04 (m, 2H), 2.67-2.82 (m, 2H).
LCMS (방법: E): Rt: 2.38분, C18H15Cl2N5O3에 대한 m/z 이론치: 419, m/z 실측치: 420 [M+H]+
중간체 및 화학식 Ia의 화합물을 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
반응식 1
Figure pct00276
반응식 1에 따라, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고 PG가 BOC인 화학식 Va의 화합물은 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨, 수소화칼륨, 리튬 디이소프로필아미드(LDA), 리튬 헥사메틸디실릴아미드(LHMDS), 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(NaHMDS), 포타슘 부톡시드 등; 바람직하게는 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드(NaHMDS)의 존재 하에; 적합한 용매, 예컨대 테트라히드로푸란(THF), 디옥산, 디메톡시에탄, 톨루엔, 자일렌, 아세토니트릴(ACN), 디메틸술폭시드, 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMA), N-메틸피롤리돈 등; 바람직하게는 THF에서; -70 내지 100℃, 바람직하게는 -65 내지 40℃의 범위의 온도에서; 2시간 내지 24시간의 기간 동안; 에틸 아세테이트를 이용한 아실화 또는 클라이젠(Claisen)-타입 반응을 겪는다. 화학식 VIa의 화합물을 확립된 방법, 예컨대 문헌[T. W. Greene and P. G. M.　Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3 ed., John Wiley & Sons, 1999]에 기술된 것을 이용하여 보호하여, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고 PG가 BOC인 화학식 VIIa 및 화학식 VIIb의 화합물의 혼합물을 제공한다.
반응식 2
Figure pct00277
반응식 2에 따라, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고 PG가 BOC인 화학식 VIIa 및 VIIb의 β-케토에스테르 화합물의 알킬화를 적합한 용매, 예컨대 아세톤 등에서; 알킬 할라이드, 예컨대 ((2-(브로모메틸)알릴)옥시)(tert-부틸)디페닐실란, 염기, 예컨대 K2CO3; NaI를 이용하여 달성하여 화학식 VIIIa 및 VIIIb의 화합물의 혼합물을 제공한다. 화학식 VIIIa 및 VIIIb의 화합물의 혼합물의 가수분해/탈카르복실화를 적합한 용매, 예컨대 MeOH, H2O, 또는 이들의 혼합물에서 염기, 예컨대 수산화칼륨 등을 이용하여 달성하여 화학식 IXa의 화합물을 제공한다.
반응식 3
Figure pct00278
반응식 3에 따라, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, PG가 BOC이고, PG1이 TBDSP인 화학식 IXa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드(TBAF)로 탈실릴화한다. 적합한 용매, 예컨대 DCM 등에서의 메탄술포닐 클로라이드(메실 클로라이드), 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민(TEA)을 이용한 히드록시의 후속적인 메실화에 의해 화학식 XIIa의 화합물을 제공한다. 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서의 염기, 예컨대 DBU를 이용한 분자내 환화에 의해 na가 1인 화학식 XIIIa의 화합물을 제공한다. na가 0 또는 2인 화학식 XIIIa의 화합물을 na가 1인 화학식 XIIIa의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 4
Figure pct00279
반응식 4에 따라, 화학식 XIIIa의 화합물을 DMA로 처리하여 화학식 XIVa의 디메틸 엔아민 화합물을 수득하였으며, 이는 약 70~115℃의 온도에서 3차 염기, 예컨대 피리딘 등의 존재 하에; 히드록실아민 히드로클로라이드로 처리 시, 화학식 XVa의 화합물을 생성한다. 유사한 방식으로, 화학식 XIVa의 화합물을 메탄올의 존재 하에 히드록실아민 히드로클로라이드로 처리하여 화학식 XVIa의 화합물을 수득한다.
반응식 5
Figure pct00280
반응식 5에 따라, 화학식 XVa의 화합물의 알케닐 모이어티를 9-보라바이시클로[3.3.1]노난(9-BBN)의 작용에 의해 화학식 XVIIa의 상응하는 말단 알코올 화합물로 위치선택적으로 전환시키고, 이어서 과산화수소 및 수산화물로 처리하여 화학식 XVIIa의 화합물을 수득한다. 상기 말단 알코올을 당업자에게 잘 알려진 방법을 사용하여 추가로 유도체화한다. 예를 들어, 알코올을 산화망간과 같은 적합한 산화제의 작용에 의해 상응하는 알데히드로 산화시킨다. 대안적으로, 알코올 작용기는 또한 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서; 적합한 친전자체, 예컨대 2,2-디플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트; 적합한 염기, 예컨대 NaH를 이용하여 알킬화하여 화학식 XVIIIa의 화합물을 제공할 수 있다.
대안적으로, R4a가 H 또는 C1- 4알킬인 화학식 XVa의 화합물은 당업자에게 공지된 조건을 사용하여 오스뮴 촉매된 디히드록실화를 거쳐 화학식 XIXa의 화합물을 제공한다. 예를 들어, R4a가 H 또는 C1- 4알킬인 화학식 XVa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 THF, 아세톤, H2O 또는 이들의 혼합물에서; 산화제, 예컨대 오스뮴-함유 화합물, 예컨대 OsO4(또는 OsO4는 또한 NMO를 사용한 K2OsO2(OH)4의 산화에 의해 원위치에서 제조될 수 있음); 아민 옥시드 공산화제, 예컨대 NMO 등과 반응시켜 화학식 XIXa의 화합물을 제공한다. 산화제, 예컨대 과요오드산나트륨 등으로 처리 시 화학식 XIXa의 화합물은 화학식 XXa의 화합물을 제공한다. 화학식 XXa의 케톤을 화학식 XXIa의 알코올로 환원시키는 것은 적합한 용매, 예컨대 알코올 용매에서; 수소화물 공급원, 예컨대 수소화붕소나트륨 등의 반응에 의해 달성된다.
반응식 6
Figure pct00281
반응식 6에 따라, 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 알킬 할라이드, 예컨대 3-브로모프로프-1-엔을 적합한 용매, 예컨대 DMF, THF, 피리딘 등에서; R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 Va의 화합물; 무기 염기, 예컨대 Cs2CO3, 탄산칼륨 등과 반응시켜 화학식 XXIIa의 화합물을 제공한다. 화학식 XXIIa의 화합물의 에스테르 작용체를 -40℃ 내지 40℃의 범위의 온도에서; 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서; 수소화물 공급원, 예컨대 수소화알루미늄리튬, 수소화붕소나트륨 등에 의해 환원시켜 화학식 XXIIIa의 알코올을 제공한다. 화학식 XXIVa의 화합물을 2단계로 제조한다. 제1 단계에서, 상응하는 알데히드로의 산화는 당업자에게 공지된 조건, 예를 들어 스웨른(Swern) 산화 조건 ((COCl)2/DMSO), 또는 TPAP-NMO 조건을 사용하여 달성한다. 제2 단계에서, -40℃ 내지 40℃의 범위의 온도에서; 비양성자성 용매, 예컨대 THF 등에서; 그리냐르(Grignard) 시약, 예컨대 알릴 마그네슘 브로마이드와 알데히드 중간체의 반응에 의해 PG가 Boc이고 R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XXIVa의 화합물을 제공한다.
반응식 7
Figure pct00282
반응식 7에 따라, 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 디에틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트를 적합한 용매, 예컨대 DMF에서; tert-부틸 N-(2-브로모에틸)카르바메이트; 염기, 예컨대 Cs2CO3 등을 이용하여 알킬화하여 디에틸 1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트를 제공한다. 디에틸 1-(2-((tert-부톡시-카르보닐)아미노)에틸)-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트를 확립된 방법, 예컨대 문헌[T. W. Greene and P. G. M.　Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3 ed., John Wiley & Sons, 1999]에 기술된 것을 이용하여 탈보호하고; 그 후 후속적으로 염기성 조건 하에 처리하여 에틸 4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-카르복실레이트 및 메틸 4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-카르복실레이트의 혼합물을 형성한다. 에틸 4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-카르복실레이트 및 메틸 4-옥소-4,5,6,7-테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-카르복실레이트는 수소화물 공급원, 예컨대 LAH 등을 이용하고; 이어서 통상적인 방법을 사용하여, 예컨대 Boc-무수물을 이용한 처리에 의해 아미노 작용체를 보호하여 tert-부틸 2-(히드록시메틸)-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트를 수득한다.
반응식 8
Figure pct00283
반응식 8에 따라, tert-부틸 2-(히드록시메틸)-6,7-디히드로-피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트의 요오드화를 약 15℃의 온도에서; 적합한 용매, 예컨대 ACN 등에서; 할로겐화제, 예컨대 N-요오도숙신이미드 등을 이용하여 달성하고; tert-부틸 2-(히드록시메틸)-3-요오도-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]-피라진-5(4H)-카르복실레이트를 제공한다. tert-부틸 2-(히드록시메틸)-3-요오도-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트의 후속적인 산화를 약 0℃ 내지 약 25℃의 범위의 온도에서; 대략 0.5 내지 4시간의 기간 동안; 적합한 용매, 예컨대 디클로로메탄 등에서; 적합한 산화제, 예컨대 데스-마틴(Dess-Martin) 퍼요오디난(DMP)을 이용하여 달성하여 tert-부틸 2-포르밀-3-요오도-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트를 제공한다.
tert-부틸 2-포르밀-3-요오도-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트를 유기 용매, 예컨대 THF, 톨루엔 등에서 위티그(Wittig) 타입 시약, 예컨대 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드; 염기, 예컨대 NaHMDS 등과 반응시켜 tert-부틸 3-요오도-2-비닐-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트를 제공한다. tert-부틸 3-요오도-2-비닐-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트를 유기마그네슘 할라이드, 예컨대 i-PrMgCl 등의 존재 하에; 적합한 용매, 예컨대 THF 등에서; 통상적인 그리냐르 반응 조건 하에 펜트-4-에날과 반응시켜 R2a가 H인 화학식 XXVa의 화합물을 제공한다.
반응식 9
Figure pct00284
반응식 9에 따라, 화학식 XXIVa 및 XXVa의 화합물을 포함하는 화학식 XXVIa의 화합물은 용매, 예컨대 DCM 등에서; 16~24시간의 기간 동안; 디클로로[1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)- 2-이미다졸리디닐리덴](2-이소프로폭시페닐메틸렌)-루테늄(II)(호베이다(Hoveyda)-그럽스 II 촉매)를 사용하여 폐환 복분해 반응을 거치게 하여 화학식 XXVIIa의 화합물을 제공한다.
PG가 Boc이고, Y가 C이고, X가 N이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XXVII의 화합물을, 적합한 용매 또는 용매 시스템, 예컨대 DMF, 메탄올, 디옥산/물 등에서; 탄소상 Pd, Pd(dppf)Cl2 또는 Pd(PPh3)4를 포함하지만 이에 한정되지 않는 팔라듐 촉매의 존재 하에, 수소화 조건을 사용하여 환원시켜, PG가 Boc이고, Y가 C이고, X가 N이고, na가 1이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XXVIIIa의 화합물을 제공한다.
화학식 XXVIII의 화합물을 화학식 XXIXa의 화합물로 산화시키는 것은 당업자에게 공지된 조건을 사용하여 달성된다. 예를 들어, 화학식 XXVIIIa의 알코올 화합물을 적합한 용매, 예컨대 ACN, DCM, DMF 등에서; 산화 촉매인 테트라프로필암모늄 퍼루테네이트(TPAP); 및 공산화제로서 N-메틸모르폴린 N-옥시드(NMO)와 반응시켜 X는 N이고 Y는 C인 화학식 XXIXa의 화합물을 제공한다.
유사한 방식으로, X가 C이고 Y가 N인 화학식 XXVIIa의 화합물을 먼저, 이전에 기술된 TPAP 조건 하에 산화시키고, 이어서 이전에 기술된 수소화 조건을 사용하여 이중 결합을 환원시켜 PG가 Boc이고, Y가 N이고, X가 C이고, na가 1이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XXIX의 화합물을 제공한다.
na가 0 또는 2인 화학식 XXIXa의 화합물을 na가 1인 화학식 XXIXa의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 10
Figure pct00285
반응식 10에 따라, X가 N이고, Y가 C이고, R1b 및 R1a가 H이거나, 또는 R1b 및 R1a가 함께 메틸렌을 형성하고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, PG가 Boc인 화학식 XXXa의 케톤 화합물을 디메틸포름아미드디메틸 아세탈 (DMFDMA)과 축합시켜 Ra가 OH 또는 N(CH3)2이고, na가 1인 화학식 XXXIa의 화합물을 수득한다.
X가 N이고, Y가 C이고, R1b 및 R1a가 H이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, na가 1이고, PG가 BOC인 화학식 XXXa의 화합물을, 강한 유기금속 염기, 예컨대 LDA의 존재 하에; HMPA의 존재 하에; 비양성자성 유기 용매, 예컨대 THF 등에서; 알릴 브로마이드로 알킬화하여 화학식 XXXIIa의 화합물을 제공한다. 화학식 XXXIIa의 화합물을 화학식 XXXIIIa의 알데히드 화합물로 산화시키는 것은 당업자에게 공지된 조건, 예를 들어 사산화오스뮴, 과요오드산나트륨, 스웨른 산화 조건 등의 조건 하에 달성된다.
X가 N이고, Y가 C이고, R1b 및 R1a가 H이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, na가 1이고, PG가 BOC인 화학식 XXXa의 화합물을, 적합한 용매, 예컨대 EtOH 등에서; 아미노화/환화 조건 하에 프로파르길 아민; 금 촉매, 예컨대 NaAuCl4·2H2O 등과 반응시켜 화학식 XXXIVa의 화합물을 제공한다.
X가 C이고, Y가 N이고, R1b 및 R1a가 H이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, PG가 Boc인 화학식 XXXa의 케톤 화합물을 디메틸포름아미드-디메틸 아세탈 (DMF-DMA)과 축합시켜 화학식 XXXVa의 엔아미논 화합물을 수득한다. 대안적인 방법에서, 트리스(디메틸-아미노)메탄 (TDAM)을 용매, 예컨대 톨루엔 등에서; 약 115℃의 온도에서; 12~20시간의 기간 동안 화학식 XXXa의 화합물과 반응시켜 Ra가 N(CH3)2이고, na가 1인 화학식 XXXVa의 화합물을 제공한다.
na가 0 또는 2인 화학식 XXXIa, XXXIIIa, XXXIVa, 및 XXXVa의 화합물을 na가 1인 화학식 XXXIa, XXXIIIa, XXXIVa, 및 XXXVa의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 11
Figure pct00286
반응식 11에 따라, 화학식 XXXVIIa, XXXVIIb, XXXVIIc의 화합물은 X가 N이고, Y가 C이고, na가 1이고, Ra가 OH인 화학식 XXXVIa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 MeOH 등에서 히드라진, 예컨대 메틸히드라진 또는 히드라진 수화물과 반응시킴으로써 제조된다.
Ra가 OH 또는 N(CH3)2인 화학식 XXXVIa의 화합물을 70℃ 내지 115℃의 범위의 온도에서; 3차 염기, 예컨대 피리딘 등의 존재 하에; 히드록실아민 히드로클로라이드로 처리하여 화학식 XXXVIIIa의 이속사졸 화합물을 수득한다. 유사한 방식으로, 화학식 XXXVIa의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 MeOH 등에서 약 70℃의 온도에서 히드록실아민 히드로클로라이드로 처리하여 na가 1인 화학식 XXXIXa의 이속사졸 화합물을 제공한다.
na가 0 또는 2인 화학식 XXXVIIa, XXXVIIb, XXXVIIc, XXXVIIIa, 및 XXXIXa의 화합물을 na가 1인 화학식 XXXVIIa, XXXVIIb, XXXVIIc, XXXVIIIa, 및 XXXIXa의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 12
Figure pct00287
반응식 12에 따라, tert-부틸 11-옥소-10-(2-옥소에틸)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트를 히드라진 수화물로 처리하여 tert-부틸 4a,5,6,7,10,11-헥사히드로-4H-피리다지노[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]-아제핀-12(13H)-카르복실레이트를 수득한다. tert-부틸 4a,5,6,7,10,11-헥사히드로-4H-피리다지노[3,4-c]피리도
[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트를 약 0℃의 온도에서; 적합한 용매, 예컨대 THF에서; 시약, 예컨대 DDQ 등으로 산화시키고; na가 1이고, R2a가 H이고, PG가 Boc인 화학식 XLa의 방향족 화합물을 수득한다.
na가 0 또는 2이고, R2a가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XLa의 화합물을 na가 1인 화학식 XLa의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 13
Figure pct00288
반응식 13에 따라, 화학식 XLIa의 화합물을 로손(Lawesson) 시약을 사용하여 화학식 XLIIa의 티오아미드 화합물로 전환시킨다. 예를 들어, tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (PCT 국제 공개 WO2018005883(2018년 1월 4일)에 기술된 바와 같음)를 약 110℃의 온도에서; 적합한 용매, 예컨대 톨루엔 등에서; 로손 시약으로 처리하여 tert-부틸 11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트를 제공한다. 화학식 XLIIa의 화합물을 환화하여 화학식 XLIIIa의 화합물을 형성한다. 예를 들어, tert- 부틸 11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트를, 적합한 용매, 예컨대 ACN 등에서; Rb 치환 히드라지드 (여기서, Rb는 수소 또는 CH3임); Hg(OAc)2를 이용하여 환화하여 R2a가 H 또는 C1- 6알킬이고, PG가 Boc이고, na가 1이고, Rb가 H 또는 CH3인 화학식 XLIIIa의 화합물을 수득한다.
n이 0 또는 2이고, R2가 H 또는 C1- 6알킬인 화학식 XLIII의 화합물을 n이 1인 화학식 XLIII의 화합물과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
반응식 14
Figure pct00289
반응식 14에 따라, 화학식 XLIVa의 화합물 (이는 화학식 XVa, XVIa, XVIIIa, XXIa, XXXIVa, XXXVIIa, XXXVIIb, XXXVIIc, XXXVIIIa, XXXIXa, XLa, 및 XLIIIa의 화합물을 포함함)을 당업자에게 공지된 조건을 사용하여 탈보호한다. 적합한 용매, 예컨대 DCM 등에서; Z2, R3a, 및 R4a가 상기 정의된 바와 같은, 구매가능하거나 합성적으로 접근가능한 화학식 XLVa의 화합물; 적합한 염기, 예컨대 TEA 등과의 후속 반응에 의해 화학식 Ia의 화합물을 제공한다.
일반 절차
하기 특정 실시예는 본 발명 및 다양한 바람직한 실시 형태를 추가로 예시하기 위하여 제공된다.
하기 실시예에 기술된 화합물 및 상응하는 분석 데이터를 수득함에 있어서, 달리 지시되지 않는 한 하기 실험 및 분석 프로토콜을 따랐다.
달리 언급되지 않는 한, 반응 혼합물을 질소 분위기 하에 실온 (rt)에서 자기 교반하였다. 용액을 "건조"시킨 경우, 용액을 일반적으로 Na2SO4 또는 MgSO4와 같은 건조제로 건조시켰다. 혼합물, 용액 및 추출물을 "농축"시킨 경우, 이들을 전형적으로 감압 하에 회전 증발기에서 농축시켰다.
순상 실리카 겔 크로마토그래피 (FCC)를 사전패킹된 카트리지를 사용하여 실리카 겔 (SiO2)에서 수행하였다.
분취용 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP HPLC)를 다음 중 하나에서 수행하였다:
방법 A. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.225% FA를 함유함) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.
또는
방법 B. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.1% TFA를 함유함) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.
또는
방법 C. Phenomenex Synergi C18(10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Boston Green ODS C18(5 μm, 150 x 30 mm), 및 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.05% HCl) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.
또는
방법 D. Phenomenex Gemini C18 (10 μm, 150 x 25 mm), AD(10 μm, 250 mm x 30 mm), 또는 Waters XBridge C18 컬럼 (5 μm, 150 x 30 mm), 이동상: 10분에 걸쳐 물 (0.05% 수산화암모니아(v/v)를 함유함) 중 0~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.
또는
방법 E. Phenomenex Gemini C18 (10 μm, 150 x 25 mm), 또는 Waters XBridge C18 컬럼 (5 μm, 150 x 30 mm), 이동상: 10분에 걸쳐 물 (10 mM NH4HCO3) 중 5~99% ACN 및 그 후 2분 동안 100% ACN에서 유지, 유량: 25 mL/분을 이용하는 Gilson GX-281 반분취용-HPLC.
분취용 초임계 유체 고성능 액체 크로마토그래피(SFC)를 Thar 80 Prep-SFC 시스템 또는 Waters의 Waters 80Q Prep-SFC 시스템에서 수행하였다. ABPR은 SF 조건에서 CO2를 유지하기 위하여 100 bar로 설정하였으며, 유량은 화합물 특성에 따라 확인할 수 있고, 이때 유량의 범위는 50 g/분 내지 70 g/분이다. 컬럼 온도는 주위 온도였다.
질량 스펙트럼은 달리 지시되지 않는 한 포지티브 모드에서 전자분무 이온화(ESI)를 사용하여 SHIMADZU LCMS-2020 MSD 또는 Agilent 1200\G6110A MSD에서 얻었다. 질량의 이론치는 정확한 질량에 상응한다.
핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 Bruker 모델 AVIII 400 분광계에서 얻었다. 다중 피크에 대한 정의는 다음과 같다: s = 단일 피크, d = 이중 피크, t= 삼중 피크, q = 사중 피크, m = 다중 피크, br = 브로드. 교환가능한 양성자를 포함하는 화합물의 경우, 상기 양성자는 NMR 스펙트럼을 실행하는 데 사용되는 용매의 선택 및 용액 중 화합물의 농도에 따라 NMR 스펙트럼에서 가시적일 수도 있고 그렇지 않을 수도 있음이 이해될 것이다.
화학명은 ChemDraw Ultra 12.0, ChemDraw Ultra 14.0(CambridgeSoft Corp., 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재) 또는 ACD/Name 버전 10.01(Advanced Chemistry)을 사용하여 생성하였다.
R* 또는 S*로 지정된 화합물은 절대 배열이 결정되지 않은 거울상순수 화합물이다.
중간체 1: tert -부틸 5-메틸렌-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4] -피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00290
단계 A. tert -부틸 3-(3- 에톡시 -3- 옥소프로파노일 )-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 -65℃에서 THF (120 mL) 중 에틸 아세테이트 (20.88 g, 237.02 mmol, 23.20 mL)의 용액에 NaHMDS (1 M, 474.04 mL)를 첨가하였다. -65℃에서 1시간에 걸쳐 상기 혼합물에 THF (200 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (WO2018005881(공개일: 2018년 1월 4일)에 기술된 바와 같이 제조) (28 g, 94.81 mmol)의 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 45℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 HCl (1 M 수성, 1500 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (1500 mL)로 희석시켰다. 유기 상을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (28.4 g, 84.18 mmol, 88.79%의 수율, 100 %의 순도)을 황색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C16H23N3O5에 대한 이론치: 337.16; m/z 실측치: 360.1 [M+Na]+.
단계 B. 디- tert -부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디- tert -부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트의 혼합물.
DCM (200 mL) 중 tert-부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (18 g, 53.35 mmol), TEA (16.20 g, 160.06 mmol, 22.28 mL) 및 DMAP (651.82 mg, 5.34 mmol)의 용액에 Boc2O (11.64 g, 53.35 mmol, 12.26 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 1 M 수성 HCl (250 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (200 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 플래시 컬럼 크로마토그래피 (용출제: 0~20% 에틸 아세테이트/석유 에테르)로 정제하여 표제 화합물 (20 g, 22.86 mmol, 42.84%의 수율, 100%의 순도)을 무색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C21H31N3O7에 대한 이론치: 437.22; m/z 실측치: 460.1 [M+Na]+ /897.2 [2M+23]+.
단계 C. 디- tert -부틸3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)-펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디- tert -부틸3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트의 혼합물. 아세톤 (150 mL) 중 디-tert-부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디-tert-부틸 3-(3-에톡시-3-옥소프로파노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트 (14.00 g, 32.04 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (6.64g, 48.05 mmol), NaI (960.39 mg, 6.41 mmol) 및 2-(브로모메틸)알릴옥시-tert-부틸-디페닐-실란 (14.97 g, 38.44 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 55℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0℃의 HCl (400 mL, 1 M 수성)에 붓고, 에틸 아세테이트 (300 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (500 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=30/1~20/1)로 정제하여 표제 화합물 (13.5g, 16.83 mmol, 52.53%의 수율, 93%의 순도) (TLC, 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C41H55N3O3Si에 대한 이론치: 745.38; m/z 실측치: 768.5 [M+Na]+.
단계 D. tert - 부틸 3-(4-((( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 ) 메틸 ) 펜트 -4- 에노일 )-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. MeOH (50 mL) 중 디-tert-부틸 3-(4-(((tert-부틸-디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-2,5(4H)-디카르복실레이트 및 디-tert-부틸 3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)-2-(에톡시카르보닐)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1,5(4H)-디카르복실레이트 (13.5 g, 16.83 mmol)의 혼합물에 물 (10 mL) 중 KOH (1.89 g, 33.66 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 65℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 HCl (1 M, 수성, 300 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (200 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2: 석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1)로 정제하여 표제 화합물 (8.9 g, 15.51 mmol, 92.15%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C33H43N3O4Si에 대한 이론치: 573.3; m/z 실측치: 574.4 [M+H]+.
단계 E. tert -부틸 3-(4-( 히드록시메틸 ) 펜트 -4- 에노일 )-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로 [4,3-c]피리딘-5(4H)- 카르복실레이트. THF (50 mL) 중 tert-부틸 3-(4-(((tert-부틸디페닐실릴)옥시)메틸)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (14 g, 21.96 mmol)의 용액에 TBAF (1 M, 32.94 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (80 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=2/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (6.3 g, 18.41 mmol, 83.83%의 수율, 98%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI)/ 질량: C17H25N3O4에 대한 이론치: 335.2; m/z 실측치: 358.1 [M+Na]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 5.05 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.72 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.15 (s, 2H), 2.79 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.53 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H).
단계 F. tert -부틸 3-(4-((( 메틸술포닐 ) 옥시 ) 메틸 ) 펜트 -4- 에노일 )-6,7- 디히드로 -2H-피라졸로-[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 0℃에서 DCM (30 mL) 중 tert-부틸 3-(4-(히드록시메틸)펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c] 피리딘-5(4H) -카르복실레이트 (6.3 g, 18.41 mmol) 및 TEA (5.59 g, 55.23 mmol, 7.69 mL)의 용액에 MsCl (4.73 g, 41.29 mmol, 3.20 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (60 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (60 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (8.2 g, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H27N3O6S에 대한 이론치: 413.2; m/z 실측치: 414.1 [M+H]+.
단계 G. tert -부틸 8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 -[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. N2 하에 30℃에서 THF (60 mL) 중 tert-부틸3-(4-(((메틸술포닐)옥시)메틸)-펜트-4-에노일)-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c] 피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (8.2 g, 조 물질)의 용액에 DBU (7.06 g, 46.37 mmol, 6.99 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (50 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (실리카 겔, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1 ~ 8/1)로 정제하여 표제 화합물 (4.2 g, 11.25 mmol, 85%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H23N3O3에 대한 이론치: 317.2; m/z 실측치: 318.2 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 5.22 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 5.03 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.68 (s, 2H), 2.93 - 2.87 (m, 2H), 2.74 (s, 4H), 1.47 (s, 9H).
단계 H. tert -부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사-히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DMF-DMA (15 mL) 중 tert-부틸 8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (4.2 g, 11.25 mmol)의 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 물 (30 mL)에 붓고 에틸 아세테이트 (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (4.5 g, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C20H28N4O3에 대한 이론치: 372.2; m/z 실측치: 395.1 [M+Na]+.
단계 I. tert -부틸 5-메틸렌-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트. Py (50 mL) 중 tert-부틸10-((디메틸아미노)메틸렌)-8-메틸렌-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (4.5 g, 조 물질)의 용액에 NH2OH·HCl (5.04 g, 72.53 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 115℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 HCl (1 N, 수성, 40 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (40 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1~5/1)로 정제하여 표제 화합물 (2.1 g, 5.95 mmol, 97%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H22N4O3에 대한 이론치: 342.2; m/z 실측치: 343.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.32 (s, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.68 (s, 2H), 3.75 (s, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.79 (s, 2H), 1.50 - 1.47 (m, 9H).
중간체 2: tert -부틸 5-( 히드록시메틸 )-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00291
THF (5 mL) 중 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1, 단계 I로부터의 생성물, 480 mg, 1.40 mmol)의 용액에 1,9-BBN (0.5 M, 56.08 mL)을 -10℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 -10℃에서 2시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (5 mL) 중 NaOH (560.72 mg, 14.02 mmol)의 용액을 -30℃에서 첨가하고, 이어서 H2O2 (3.18 g, 28.04 mmol, 2.69 mL, 30%의 순도)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 NaHSO3 (50 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (80 mL × 3)로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=50%~100%)로 정제하여 표제 화합물 (460 mg, 1.24 mmol, 88.31%의 수율, 97%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H24N4O4에 대한 이론치: 360.18; m/z 실측치: 361.0 [M+H]+.
중간체 3: (5S*)- tert -부틸 5-((2,2- 디플루오로에톡시 ) 메틸 )-5,6,9, 10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00292
단계 A. ( 5S*)- tert -부틸 5-( 히드록시메틸 )-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 및 (5R*)- tert - 부틸5 -( 히드록시메틸 )-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로 [3,4-c] 피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트. tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 2)를 SFC (조건: 컬럼: IC (250 mm × 30 mm,10 um); 이동상: [0.1% NH3 H2O IPA]; B%: 45%~45%, 6.1분; 100분)로 단리하여 (5S*)-tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (SFC에서 피크 1 (IC-3S_4_40_3ML 컬럼: Chiralpak IC-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: CO2 중 40% 이소프로판올(0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간=1.369분, 136 mg, 97%의 순도)를 백색 고체로서 제공하고, (5R*)-tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (SFC에서 피크 2 (IC-3S_4_40_3ML 컬럼: Chiralpak IC-3 100×4.6 mm I.D., 3 um 이동상: CO2 중 40% 이소프로판올(0.05% DEA) 유량: 3 mL/분 파장: 220 nm), 체류 시간=1.627분, 82 mg, 97%의 순도)를 백색 고체로서 제공하였다.
단계 B. ( 5S*)- tert -부틸 5-((2,2- 디플루오로에톡시 ) 메틸 )-5,6,9, 10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트. THF (2 mL) 중 (5S*)-tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로 -4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]-아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (135.00 mg, 363.34 umol)의 용액에 NaH (30 mg, 750.07 umol, 60%의 순도)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반시키고, 그 후 2, 2-디플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트 (234 mg, 1.09 mmol)를 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반시키고, 그 후 얼음물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (140 mg, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C20H26F2N4O4에 대한 이론치: 424.2; m/z 실측치: 425.1 [M+H]+.
중간체 4. (5R*)- tert -부틸 5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00293
단계 B에서 (5S*)-tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트를 (5R*)-tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로 -4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트로 치환한 것을 제외하고는 중간체 3과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H26F2N4O4에 대한 이론치: 424.2; m/z 실측치: 425.1 [M+H]+.
중간체 5: tert -부틸 5-메틸렌-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4] -피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00294
MeOH (10 mL) 중 tert-부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-8-메틸렌-11-옥소- 3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 1, 단계 H로부터의 생성물, 0.32 g, 859.15 umol)의 용액에 NH2OH·HCl (358.21 mg, 5.15 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (30 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=20/1~2/1)로 정제하여 표제 화합물 (200 mg, 519.87 umol, 89%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H22N4O3에 대한 이론치: 342.2; m/z 실측치: 343.1 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.17 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 4.87 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 2.78 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 1.49 (s, 9H).
중간체 6: tert -부틸 5-히드록시-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4] -피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00295
단계 A. tert -부틸 5-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 THF (20 mL) 및 H2O (10 mL) 중 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1, 단계 I로부터의 생성물, 300 mg, 876.19 umol)의 용액에 NMO (153.97 mg, 1.31 mmol, 138.71 uL) 및 K2OsO4.2H2O (32.28 mg, 87.62 umol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 추가의 NMO (153.97 mg) 및 K2OsO4.2H2O (50 mg)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, 에틸 아세테이트 (20 mL×3)로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 수성 NaHSO3 (20 mL×2)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (334 mg, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H24N4O5에 대한 이론치: 376.2; m/z 실측치: 377.1 [M+H]+.
단계 B. tert -부틸 5-옥소-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트. THF (3.3 mL) 및 물 (3.3 mL) 중 tert-부틸 5-히드록시-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (330 mg)의 용액에 NaIO4 (562.56 mg, 2.63 mmol, 145.74 uL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시키고, EtOAc (40 mL×2)로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (320 mg, 조 물질)을 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS는 60%의 수화물 매스 및 24%의 원하는 매스를 나타냈다. MS (ESI): 질량: C17H20N4O4에 대한 이론치: 344.4; m/z 실측치: 345.2 [M+H]+
단계 C. tert -부틸 5-히드록시-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4] -피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트. EtOH (3 mL) 중 tert-부틸 5-옥소-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (300 mg)의 용액에 NaBH4 (65.92 mg, 1.74 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl (20 mL)로 켄칭하고, EtOAc (40 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (230 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H22N4O4에 대한 이론치: 346.4; m/z 실측치: 347.3 [M+H]+.
중간체 7: (10R)- tert -부틸 10- 메틸 -5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00296
단계 A. ( R)-5- tert -부틸 3-에틸 2-알릴-6- 메틸 -6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -3,5(4H)- 디카르복실레이트. 무수 DMF (200 mL) 중 (R)-5-tert-부틸 3-에틸 6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (PCT 국제 공개 　 WO　2018005883에 기술된 바와 같이 제조) (15 g, 48.49 mmol), 3-브로모프로프-1-엔 (8.80 g, 72.73 mmol), Cs2CO3 (39.50 g, 121.22 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 퍼지하고 (3회), 그 후 상기 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다 (N2 분위기 하에). 상기 혼합물을 물 (30 mL)에 붓고, 5분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (9.7 g, 26.26 mmol, 54.16%의 수율, 94.6%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H27N3O4에 대한 이론치: 349.2; m/z 실측치: 350.1 [M+H]+.
단계 B. ( R)- tert -부틸 2-알릴-3-( 히드록시메틸 )-6- 메틸 -6,7- 디히드로 -2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 -40℃에서 THF (80 mL) 중 (R)-5-tert-부틸 3-에틸 2-알릴-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (8 g, 22.89 mmol)의 용액에 LiAlH4 (1.30 g, 34.34 mmol)를 첨가하고, 그 후 N2 분위기 하에 -40℃에서 2시간 동안 상기 혼합물을 교반시켰다. 얼음-NaOH (3 mL, 15%, 수성)를 -40℃에서 상기 혼합물에 적가하고, 5분 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 15℃까지 가온하고, 여과시켰다. 여과액을 물 (40 mL)에 붓고 에틸 아세테이트 (30 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~0:1)로 정제하여 표제 화합물 (6.3 g, 20.29 mmol, 88.62%의 수율, 99%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C16H25N3O3에 대한 이론치: 307.2; m/z 실측치: 308.1 [M+H]+.
단계 C. ( R)- tert -부틸 2-알릴-3- 포르밀 -6- 메틸 -6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 -78℃에서 DCM (150 mL) 중 (COCl)2 (4.74 g, 37.33 mmol, 3.27 mL)의 용액에 DMSO (3.89 g, 49.77 mmol, 3.89 mL)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반시켰다. 그 후 (R)-tert-부틸 2-알릴-3-(히드록시메틸)-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (7.3 g, 24.88 mmol), 이어서 TEA (8.81 g, 87.09 mmol, 12.12 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 N2 분위기 하에 -78℃에서 2시간 동안 교반시키고, 그 후 혼합물을 -40℃의 물 (200 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시키고, 그 후 15℃까지 가온하였다. 수성 상을 DCM (100 mL×2)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (300 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~50/1)로 정제하여 표제 화합물 (6.4 g, 21.31 mmol, 85.63%의 수율, 97%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C16H23N3O3에 대한 이론치: 305.2; m/z 실측치: 306.1 [M+H]+.
단계 D. ( 6R)- tert -부틸 2-알릴-3-(1- 히드록시부트 -3-엔-1-일)-6- 메틸 -6,7-디히드로-2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)- 카르복실레이트. N2 하에 -40℃에서 THF (60 mL) 중 (R)-tert-부틸 2-알릴-3-포르밀-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (5.8 g, 18.99 mmol)의 용액에 알릴(브로모)마그네슘 (1 M, 56.98 mL)을 적가하였다. 상기 혼합물을 -40℃에서 30분 동안 교반시키고, 그 후 0℃까지 가열하고, 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 얼음-HCl (수성 1 N, 50 mL)로 켄칭하고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (60 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~1:1)로 정제하여 표제 화합물 (5.7 g, 15.70 mmol, 82.66%의 수율, 95.7%의 순도)을 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C19H29N3O3에 대한 이론치: 347.2; m/z 실측치: 348.1 [M+H]+.
단계 E. ( 3R)- tert -부틸 11-히드록시-3- 메틸 -3,4,10,11- 테트라히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 -[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DCM (1.6 L) 중 (6R)-tert-부틸 2-알릴-3-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-6-메틸-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (2.2 g, 6.33 mmol), [1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)이미다졸리딘-2-일리덴]-디클로로-[(2-이소프로폭시페닐)메틸렌] 루테늄 (396.77 mg, 633.18 umol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 퍼지하고 (3회), 그 후 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시켰다 (N2 분위기 하에). [1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)이미다졸리딘-2-일리덴]-디클로로-[(2-이소프로폭시페닐)-메틸렌]루테늄 (198.38 mg, 316.59 umol)을 질소 분위기 하에 15℃에서 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 N2 하에 34℃에서 추가 32시간 동안 교반시키고, 그 후 혼합물을 40℃에서 추가 32시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=100/1~3/1)로 정제하여 표제 화합물 (1.8 g, 5.58 mmol, 88.11%의 수율, 99%의 순도)을 흑갈색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H25N3O3에 대한 이론치: 319.2; m/z 실측치: 320.1 [M+H]+.
단계 F. ( 3R)- tert -부틸 11-히드록시-3- 메틸 -3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. N2 하에 MeOH (30 mL) 중 (3R)-tert-부틸 11-히드록시-3-메틸-3,4,10,11-테트라히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (750 mg, 2.35 mmol)의 용액에 Pd/C (75 mg, 10%)를 첨가하였다. 상기 현탁액을 감압 하에 탈기시키고, H2로 수 회 퍼지하였다. 상기 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (680 mg, 2.12 mmol, 90.10%의 수율)을 흑갈색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H27N3O3에 대한 이론치: 321.2; m/z 실측치: 322.1 [M+H]+.
단계 G. ( R)- tert -부틸 3- 메틸 -11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트.
아세토니트릴 (ACN) (10 mL) 중 (3R)-tert-부틸 11-히드록시-3-메틸-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (680 mg, 2.12 mmol), TPAP (148.70 mg, 423.13 umol) 및 NMO (991.36 mg, 8.46 mmol, 893.11 uL)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 퍼지하고 (3회), 그 후 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다 (N2 분위기 하에). 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (600 mg, 1.84 mmol, 87.02%의 수율, 98%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C17H25N3O3에 대한 이론치: 319.2; m/z 실측치: 320.1 [M+H]+.
단계 H. ( R)- tert -부틸 10-(히드록시메틸렌)-3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트.
DMF-DMA (13.46 g, 112.91 mmol, 15 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (400 mg, 1.25 mmol)의 용액을 75℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 75℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 물 (20 mL)에 붓고, 2분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (440 mg, 조 물질)를 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H25N3O4에 대한 이론치: 347.2; m/z 실측치: 348.1 [M+H]+.
단계 I. ( 10R)- tert -부틸 10- 메틸 -5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
MeOH (30 mL) 중 (R)-tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (200 mg, 575.69 umol)의 용액에 NH2OH·HCl (240.03 mg, 3.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다 (N2 하에 30℃에서). 상기 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (100 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (50 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 표제 화합물 (120 mg, 348.42 umol, 60.52%의 수율)을 연한 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H24N4O3에 대한 이론치: 344.2; m/z 실측치: 345.1 [M+H]+.
중간체 8: (11R)- tert -부틸 11- 메틸 -6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[2,3-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00297
EtOH (2 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (160 mg, 500.94 umol, 중간체 7에서의 단계 G의 생성물) 및 프로프-2-인-1-아민 (137.96 mg, 2.50 mmol, 160.41 uL)의 용액에 NaAuCl4*2H2O (49.82 mg, 125.24 umol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 80℃에서 72시간 동안 교반시켰다. 잔사를 물 (10 mL)로 희석시키고, 혼합물을 EtOAc (10 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (SiO2, 석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1~2/1)로 정제하여 표제 화합물 (90 mg, 190.44 umol, 38.02%의 수율, 75%의 순도)을 황색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C20H26N4O2에 대한 이론치: 354.2; m/z 실측치: 355.1 [M+H]+.
중간체 9: (10R)- tert -부틸 10- 메틸 -5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00298
N2 하에 Py (30 mL) 중 (R)-tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (200 mg, 575.69 umol)의 용액에 NH2OH*HCl (240.03 mg, 3.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 115℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 HCl (1 N 수성, 100 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (50 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (100 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 표제 화합물 (90 mg, 261.32 umol, 45.39%의 수율)를 연한 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H24N4O3에 대한 이론치: 344.2; m/z 실측치: 345.1 [M+H]+.
중간체 10: tert -부틸 6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,2,4]-트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00299
단계 A. tert -부틸 11- 티옥소 -3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. 톨루엔 (5 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[2,3]피라졸로 [2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (PCT 국제 공개 WO2018005883 (2018년 1월 4일)에 기술된 바와 같이 제조) (250.00 mg, 816.03 umol)의 용액에 로손 시약 (165.03 mg, 408.02 umol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 3시간 동안 110℃까지 가열하고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (EtOAc)로 정제하여 표제 화합물 (258.00 mg, 800.20 umol, 98.06%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 B. tert -부틸 6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트. MeCN (3.00 mL) 중 tert-부틸 11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 248.12 umol) 및 포르모히드라지드 (74.51 mg, 1.24 mmol)의 용액에 Hg(OAc)2 (118.61 mg, 372.18 umol)를 첨가하고, 그 후 상기 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)로 희석시키고, EtOAc (20 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 (20 mL×2), Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (100.00 mg, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 11: tert -부틸 3- 메틸 -6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00300
단계 A. tert -부틸 11- 티옥소 -3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. 단계 A에서 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 대신 tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (PCT 국제 공개 　 WO　2018005883에 기술된 바와 같이 제조)를 사용하여, 중간체 12와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. 표제 화합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.
단계 B: tert -부틸 3- 메틸 -6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a][1,2,4]-트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트. MeCN (3.00 mL) 중 tert-부틸 11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 248.12 umol) 및 아세토히드라지드 (91.90 mg, 1.24 mmol)의 용액에 Hg(OAc)2 (118.61 mg, 372.18 umol)를 첨가하고, 그 후 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (20 mL×3) 및 물 (30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 (20 mL×2), Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (100.00 mg, 조 물질)을 무색 오일로서 수득하였다.
중간체 12: (11R)- tert -부틸 11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트
Figure pct00301
단계 A. ( R)- tert -부틸 3- 메틸 -11- 티옥소 -3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트. 톨루엔 (3.00 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (PCT 국제 공개 　 WO　2018005883에 기술된 바와 같이 제조) (300.00 mg, 936.36 umol)의 용액에 로손 시약 (189.36 mg, 468.18 umol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 3시간 동안 110℃까지 가열하고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=30%~50%)로 정제하여 표제 화합물 (270.00 mg, 650.02 umol, 69.42%의 수율, 81%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다.
단계 B. (11R)- tert -부틸 11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트. MeCN (2.00 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (100.00 mg, 297.22 umol) 및 포르모히드라지드 (89.26 mg, 1.49 mmol)의 현탁액에 Hg(OAc)2 (142.08 mg, 445.83 umol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (50 mL)로 희석시키고, EtOAc (50 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 (50 mL×2), Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (90.00 mg, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H24N6O2에 대한 이론치: 344.2; m/z 실측치: 345.0 [M+H]+.
중간체 13: (11R)- tert -부틸 3,11-디메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00302
MeCN (3.00 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-메틸-11-티옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 12, 단계 A로부터의 생성물, 80.00 mg, 237.78 umol) 및 아세토히드라지드 (88.07 mg, 1.19 mmol)의 현탁액에 Hg(OAc)2 (113.66 mg, 356.67 umol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 물 (50 mL)로 희석시키고, EtOAc (50 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL×2)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (90.00 mg, 조 물질)을 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 14: tert -부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트
Figure pct00303
단계 A. 5 - tert -부틸 3-에틸 2-알릴-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -3,5(4H)-디카르복실레이트. N2 하에 DMF (50.00 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5 (4H)-디카르복실레이트 (WO2018005881(공개일: 2018년 1월 4일)에 기술된 바와 같이 제조) (5.00 g, 16.93 mmol) 및 3-브로모프로프-1-엔 (3.07 g, 25.40 mmol)의 혼합물에 Cs2CO3 (13.79 g, 42.33 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (50 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (50 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (50 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=15/1~5/1)로 정제하여 표제 화합물 (2.70 g, 7.89 mmol, 46.60%의 수율, 98%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H25N3O4에 대한 이론치: 335.1; m/z 실측치: 336.0 [M+H]+.
단계 B. tert -부틸 2-알릴-3-( 히드록시메틸 )-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 -40℃에서 THF (30.00 mL) 중 5-tert-부틸 3-에틸 2-알릴-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3,5(4H)-디카르복실레이트 (1.00 g, 2.98 mmol)의 혼합물에 LiAlH4 (169.72 mg, 4.47 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 HCl (1 N 수성 10 mL)로 켄칭하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올=100/1~20/1)로 정제하여 표제 화합물 (780.00 mg, 2.66 mmol, 89.22%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C15H23N3O3에 대한 이론치: 293.1; m/z 실측치: 294 [M+H]+.
단계 C. tert -부틸 2-알릴-3- 포르밀 -6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘 -5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 DCM (30.00 mL) 중 tert-부틸 2-알릴-3-(히드록시메틸)-6,7-디히드로-2H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (780.00 mg, 2.66 mmol)의 혼합물에 MnO2 (2.31 g, 26.60 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 45℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 추가의 MnO2 (2.31 g, 26.60 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 45℃에서 추가 24시간 동안 교반시켰다. 이때 상기 혼합물을 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=10/1~3/1)로 정제하여 표제 화합물 (450.00 mg, 1.54 mmol, 58.07%의 수율, 100%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C15H21N3O3에 대한 이론치: 291.1; m/z 실측치: 292 [M+H]+.
단계 D. tert -부틸 2-알릴-3-(1- 히드록시부트 -3-엔-1-일)-6,7- 디히드로 -2H- 피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트. N2 하에 -40℃에서 THF (5.00 mL) 중 tert-부틸 2-알릴-3-포르밀-6,7-디히드로-2H-피라졸로[4,3-c]피리딘- 5(4H)-카르복실레이트 (800.00 mg, 2.75 mmol)의 혼합물에 알릴(브로모)마그네슘 (1 M, 8.24 mL)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -40℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=3/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (750.00 mg, 2.16 mmol, 78.53%의 수율, 96%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C18H27N3O3에 대한 이론치: 333.2; m/z 실측치: 334 [M+H]+.
단계 E. tert -부틸 11-히드록시-3,4,10,11- 테트라히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a] 아제핀 -2(7H)- 카르복실레이트. N2 하에 DCM (1.20 L) 중 tert-부틸 2-알릴-3-(1-히드록시부트-3-엔-1-일)-6,7-디히드로- 2H-피라졸로[4,3-c]피리딘-5(4H)-카르복실레이트 (750.00 mg, 2.25 mmol)의 혼합물에 벤질리덴-[1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)이미다졸리딘- 2-일리덴]-디클로로-루테늄; 트리시클로헥실포스판 (381.94 mg, 449.88 umol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=4/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (650.00 mg, 2.02 mmol, 89.87%의 수율, 95%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C16H23N3O3에 대한 이론치: 305.1; m/z 실측치: 306 [M+H]+.
단계 F. tert -부틸 11-히드록시-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀 -2(7H)- 카르복실레이트. N2 하에 MeOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 11-히드록시-3,4,10,11-테트라히드로-1H-피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (150.00 mg, 491.21 umol)의 용액에 Pd/C (20.00 mg, 10%)를 첨가하였다. 상기 현탁액을 감압 하에 탈기시키고, H2로 수 회 퍼지하였다. 상기 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시켜 표제 화합물 (140.00 mg, 455.45 umol, 92.72%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C16H25N3O3에 대한 이론치: 307.1; m/z 실측치: 308 [M+H]+.
단계 G. tert -부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. N2 하에 MeCN (80.00 mL) 중 tert-부틸 11-히드록시-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (2.00 g, 6.51 mmol)의 혼합물에 NMO (3.05 g, 26.04 mmol, 2.75 mL) 및 TPAP (457.31 mg, 1.30 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트=4/1~1/1)로 정제하여 표제 화합물 (1.60 g, 5.24 mmol, 80.48%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C16H23N3O3에 대한 이론치: 305.1; m/z 실측치: 306 [M+H]+.
중간체 15: tert -부틸 6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리다지노[3,4-c]피리도[4',3':3,4] -피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00304
단계 A. tert -부틸 10-알릴-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀 -2(7H)- 카르복실레이트. -78℃의 THF (8.00 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 14, 300.00 mg, 982.41 umol) 및 HMPA (440.12 mg, 2.46 mmol, 431.49 uL)의 용액에 LDA (6 mL, 1.25 M, -65℃의 n-BuLi (2.5 M, 5.00 mL)를 첨가함으로써 THF (3.00 mL) 중 N-이소프로필프로판-2-아민 (1.22 g, 12.05 mmol, 1.69 mL)으로부터 신선하게 제조)를 첨가하고, 그 후 0.5시간 동안 -30℃까지 가온하였다. 3-브로모프로프-1-엔 (594.26 mg, 4.91 mmol)을 -78℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃까지 가온하고, 추가 1시간 동안 교반시켰다. 반응물을 HCl (1 N 수성, 10 mL)로 켄칭하고, EtOAc (20 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/1)로 정제하고, 추가로 RP HPLC (조건 A)로 정제하여 tert-부틸 10-알릴-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H- 피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (31.00 mg, 89.74 umol, 9.14%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C19H27N3O3에 대한 이론치: 345.2; m/z 실측치: 346.1 [M+H]+.
단계 B. tert -부틸 11-옥소-10-(2- 옥소에틸 )-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도 [4',3':3,4]- 피라졸로[1,5-a]아제핀 -2(7H)- 카르복실레이트. N2 하에 0℃에서 THF (4.00 mL) 및 H2O (4.00 mL) 중 tert-부틸 10-알릴-11-옥소-3,4,7,8,9, 10-헥사히드로-1H- 피리도[2,3]피라졸로[2,4-b]아제핀-2-카르복실레이트 (60.00 mg, 173.70 umol)의 혼합물에 OsO4 (13.25 mg, 52.11 umol, 2.70 uL) 및 NaIO4 (148.61 mg, 694.80 umol, 38.50 uL)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (10 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (5 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (60.35 mg, 조 물질)을 황색 오일로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C18H25N3O4에 대한 이론치: 347.1; m/z 실측치: 348.1 [M+H]+.
단계 C. tert -부틸 4a,5 ,6,7,10,11- 헥사히드로 -4H- 피리다지노[3,4-c]피리도 [4', 3':3, 4]피라졸로[1,5-a]아제핀 -12(13H)- 카르복실레이트. N2 하에 0℃에서 EtOH (10.00 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-10-(2-옥소에틸)-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[2,3]피라졸로[2,4-b]아제핀-2-카르복실레이트 (60.35 mg, 173.71 umol)의 혼합물에 N2H4*H2O (15.35 mg, 260.57 umol, 14.90 uL, 85%의 순도)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 직접적으로 다음 단계에서 사용하였다. MS (ESI): 질량: C18H25N5O2에 대한 이론치: 343.2; m/z 실측치: 344.1 [M+H]+.
단계 D. tert -부틸 6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리다지노[3,4-c]피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀 -12(13H)- 카르복실레이트. N2 하에 단계 C로부터의 반응 혼합물에 DDQ (47.32 mg, 208.46 umol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (DCM/MeOH=10/1)로 정제하여 표제 화합물 (17.00 mg, 48.95 umol, 28.18%의 수율, 98.3%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C18H23N5O2에 대한 이론치: 341.1; m/z 실측치: 342 [M+H]+.
중간체 16: tert -부틸 4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트.
Figure pct00305
단계 A. tert -부틸 10-( 히드록시메틸렌 )-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트. DMF-DMA (18.00 g, 151.07 mmol, 20.00 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-피리도[2,3]피라졸로 [2,4-a]아제핀-2-카르복실레이트 (200.00 mg, 654.94 umol, 중간체 14)의 혼합물을 75℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 75℃에서 추가 24시간 동안 교반시키고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 물 (20 mL)에 붓고, 2분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (20 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (210.00 mg, 629.91 umol, 96.18%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C17H23N3O4에 대한 이론치: 333.1; m/z 실측치: 334.1 [M+H]+.
단계 B. tert -부틸 4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀 -11(2H)- 카르복실레이트. N2 하에 30℃에서 MeOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 239.97 umol)의 혼합물에 N2H4*H2O (28.27 mg, 479.93 umol, 27.44 uL, 85%의 순도)를 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 표제 화합물 (54.00 mg, 163.93 umol, 68.31%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H23N5O2에 대한 이론치: 329.1; m/z 실측치: 330.1 [M+H]+.
중간체 17: tert -부틸 6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[2,3-c]피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트.
Figure pct00306
(R)-tert-부틸 3-메틸-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트를 tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트로 치환하여, 중간체 8과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C19H24N4O2에 대한 이론치: 340.2; m/z 실측치: 341.0 [M+H]+.
중간체 18: tert -부틸 2- 메틸 -4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트.
Figure pct00307
N2 하에 30℃에서 MeOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (130.00 mg, 389.95 umol, 단계 A로부터의 중간체 15 생성물)의 혼합물에 메틸히드라진 (89.82 mg, 779.90 umol, 102.07 uL)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 10시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 그 후 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 100 mg의 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로 RP HPLC (조건 A)로 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 2-메틸-4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로 [1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트 (70.00 mg, 203.83 umol, 52.27%의 수율)를 황색 고체로서 수득하고, 추가의 위치이성질체 tert-부틸 1-메틸-4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(1H)-카르복실레이트 (20.00 mg, 58.24 umol, 14.93%의 수율)를 황색 고체로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C18H25N5O2에 대한 이론치: 343.2; m/z 실측치: 344.2 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.19 (s, 1H), 4.63-4.77 (m, 2H), 4.38-4.53 (m, 2H), 4.06-4.20 (m, 1H), 3.84-3.94 (m, 3H), 3.84-3.94 (m, 3H), 3.64-3.67 (m, 1H), 3.72 (br s, 1H), 2.83-2.96 (m, 2H), 2.76 (br t, J=5.58 Hz, 2H), 2.13-2.30 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
중간체 19: tert -부틸 1- 메틸 -4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-11(1H)-카르복실레이트.
Figure pct00308
표제 화합물을 중간체 16으로부터 RP HPLC (조건 A)에 의해 단리하였다. MS (ESI): 질량: C18H25N5O2에 대한 이론치: 343.2; m/z 실측치: 344.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 (s, 1H), 4.43-4.65 (m, 2H), 4.11-4.25 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.76 (br s, 2H), 2.82 (br t, J=5.58 Hz, 2H), 2.71 (t, J=7.47 Hz, 2H), 2.22 (br dd, J=4.96, 6.71 Hz, 2H), 1.48 (s, 8H).
중간체 20: tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00309
N2 하에 Py (5.00 mL) 중 tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (80.00 mg, 239.97 umol, 단계 A로부터의 중간체 15 생성물)의 혼합물에 NH2OH*HCl (100.05 mg, 1.44 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 115℃에서 12시간 동안 교반시키고, 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 HCl (1 N 수성, 10 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (10 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (10 mL×2)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 표제 화합물 (48.00 mg, 116.23 umol, 48.44%의 수율, 80%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다. MS(ESI): 질량: C17H22N4O3에 대한 이론치: 330.1; m/z 실측치: 331.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17-8.37 (m, 1H), 4.70 (br s, 2H), 4.38-4.57 (m, 2H), 3.74 (br s, 2H), 3.50 (s, 3H), 2.87-3.03 (m, 2H), 2.65-2.82 (m, 2H), 2.16-2.39 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
중간체 21: tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4] 피라졸로[1,5-a]아제핀 -11(12H)- 카르복실레이트 .
Figure pct00310
N2 하에 30℃에서 MeOH (5.00 mL) 중 tert-부틸 10-(히드록시메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (70.00 mg, 209.97 umol, 단계 A로부터의 중간체 15 생성물)의 혼합물에 NH2OH*HCl (87.55 mg, 1.26 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 30℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (10 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고 (10 mL×2), 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르/에틸 아세테이트=1/2)로 정제하여 표제 화합물 (40.00 mg, 106.54 umol, 50.74%의 수율, 88%의 순도)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI): 질량: C17H22N4O3에 대한 이론치: 330.1; m/z 실측치: 331.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.15 (s, 1H), 4.78 (br s, 2H), 4.40-4.57 (m, 2H), 3.74 (br s, 2H), 2.86 (t, J=5.96 Hz, 2H), 2.77 (br s, 2H), 2.19-2.31 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
중간체 22: tert -부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 시클로헵타[3,4]피라졸로 -[1,5-a]피라진-2(7H)-카르복실레이트.
Figure pct00311
단계 A. 디에틸 1-(2-(( tert - 부톡시카르보닐 )아미노)에틸)-1H- 피라졸 -3,5- 디카르복실레이트.
DMF (1000 mL) 중 디에틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (45 g, 212.06 mmol) 및 Cs2CO3 (82.91 g, 254.47 mmol)의 용액에 tert-부틸 N-(2-브로모에틸)카르바메이트 (50.85 g, 226.91 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 N2 분위기 하에 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (500 mL)로 희석시키고, EtOAc (700 mL×3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1000 mL×3)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (67 g, 조 물질)을 백색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (s, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 3 H), 4.42 - 4.33 (m, 4 H), 3.63 - 3.62 (m, 2 H), 1.46 - 1.38 (m, 15 H).
단계 B. 에틸 4-옥소-4,5,6,7- 테트라히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -2- 카르복실레이트. MeOH (100 mL) 중 디에틸 1-[2-(tert-부톡시카르보닐아미노)에틸]피라졸-3,5-디카르복실레이트 (67 g, 188.53 mmol)의 용액에 HCl/MeOH (4 M, 100 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물 (54.9 g 조 물질, HCl 염)을 백색 고체로서 제공하였다. 생성된 고체에 디옥산 (560 mL)을 첨가하고, 이어서 물 (560 mL) 중 Na2CO3 (39.89 g, 376.36 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (500 mL ×2), 이어서 DCM/MeOH=20/1 (500 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 석유 에테르/EtOAc의 혼합물 (v/v=10/1, 150 mL)에 미분화하고, 그 후 여과시켰다. 수집된 고체를 건조시켜 표제 화합물 (34 g, 대략 60 mol%의 메틸 에스테르를 함유함)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 C. tert -부틸 2-( 히드록시메틸 )-6,7- 디히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -5(4H)-카르복실레이트. THF (640 mL) 중 tert-부틸 2-(히드록시메틸)-6,7-디히드로피라졸로[1,5-a]피라진-5(4H)-카르복실레이트 (32.00 g, 대략 60 mol%의 메틸 에스테르를 함유함)의 용액에 LAH (6.6 g, 173.91 mmol)를 N2 분위기 하에 -30℃에서 첨가하고, 그 후 상기 혼합물을 16시간 동안 75℃까지 가열하였다. LAH (6.6 g, 173.89 mmol)를 -30℃의 상기 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 75℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 포타슘 소듐 타르트레이트 사수화물 (30 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 1시간 동안 교반시키고, 여과시켰다. 상기 여과액에 Boc2O (50.12 g, 229.67 mmol, 52.76 mL)를 첨가하고, 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (600 mL)로 희석시키고, EtOAc (300 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (400 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 생성물 (33 g, 130.28 mmol, 85.09%의 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.04 (s, 1 H), 4.62 - 4.61 (m, 4 H), 4.13 -4.10 (m, 2 H), 3.86 - 3.84 (m, 2 H), 1.47 (s, 9 H).
단계 D. tert -부틸 2-( 히드록시메틸 )-3- 요오도 -6,7- 디히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -5(4H)-카르복실레이트. MeCN (300 mL) 중 tert-부틸 2-(히드록시메틸)-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (23 g, 90.80 mmol)의 용액에 NIS (30.64 g, 136.20 mmol)를 서서히 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반시켰다 (N2 분위기 하에). 상기 혼합물을 물 (400 mL)로 희석시키고, EtOAc (400 mL)로 추출하였다. 유기 상을 포화 Na2S2O3(400 mL)으로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 석유 에테르 / EtOAc = 20 / 1(300 mL)로 헹구고, 0.5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시켰다. 수집된 고체를 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (29.5 g, 77.80 mmol, 85.68%의 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.61 (s, 2H), 4.48 (s, 2H), 4.14 (m, 2 H), 3.86 (m, 2 H).
단계 E. tert -부틸 2- 포르밀 -3- 요오도 -6,7- 디히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -5(4H)-카르복실레이트. DCM (180 mL) 중 tert-부틸 2-(히드록시메틸)-3-요오도-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (9 g, 23.73 mmol)의 용액에 데스-마틴(Dess-Martin) (15.10 g, 35.60 mmol, 11.02 mL)을 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 DCM (300 mL)으로 희석시키고, 염수 (300 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (7.5 g, 19.88 mmol, 83.78%의 수율)을 황색 고체로서 제공하였다.
단계 F. tert -부틸 3- 요오도 -2-비닐-6,7- 디히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -5(4H)-카르복실레이트.
THF (50 mL) 중 메틸(트리페닐)포스포늄 브로마이드 (9.23 g, 25.85 mmol)의 용액에 NaHMDS (1 M, 25.85 mL)를 첨가하고 (N2 분위기 하에 -10℃에서), 이어서 0.5시간 후에 THF (30 mL) 중 tert-부틸 2-포르밀-3-요오도-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (7.5 g, 19.88 mmol)의 용액을 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 염수 (120 mL)로 켄칭하고, EtOAc (120 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 순수 표제 화합물 (2.8 g, 7.46 mmol)을 무색 오일로서 제공하였다.
단계 G. tert -부틸 3-(1- 히드록시펜트 -4-엔-1-일)-2-비닐-6,7- 디히드로피라졸로[1,5-a]피라진 -5(4H)-카르복실레이트. N2 분위기 하에 -10℃에서 THF (30 mL) 중 tert-부틸 3-요오도-2-비닐-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (1.8 g, 4.80 mmol)의 용액에 i-PrMgCl (2 M, 3.60 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반시키고, 그 후 THF (3 mL) 중 펜트-4-엔알 (605.31 mg, 7.20 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (1.0 g, 3.00 mmol, 62.52%의 수율)을 무색 오일로서 제공하였다.
단계 H. tert -부틸 11-히드록시-3,4,10,11- 테트라히드로 -1H- 시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진 -2(9H)-카르복실레이트. DCM (800 mL) 중 tert-부틸 3-(1-히드록시펜트-4-에닐)-2-비닐-6,7-디히드로-4H-피라졸로[1,5-a]피라진-5-카르복실레이트 (1.3 g, 3.90 mmol)의 용액에 [1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)이미다졸리딘-2-일리덴]-디클로로-[(2-이소프로폭시페닐)메틸렌]루테늄 (244.32 mg, 389.89 umol)을 N2 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (0.79 g, 2.59 mmol, 66.35%의 수율)을 갈색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C16H23N3O3에 대한 이론치: 305.2; m/z 실측치: 306.1 [M+H]+.
단계 I. tert -부틸 11-옥소-3,4,10,11- 테트라히드로 -1H- 시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진 -2(9H)-카르복실레이트. MeCN (10 mL) 중 tert-부틸 11-히드록시-1,3,4,9,10,11-헥사히드로시클로헵타-[2,3]피라졸로[2,4-a]피라진-2-카르복실레이트 (570 mg, 1.87 mmol), NMO (874.65 mg, 7.47 mmol, 787.97 uL) 및 TPAP (131.19 mg, 373.32 umol)를 탈기시키고 N2로 퍼지하고 (3회), 그 후 혼합물을 15℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다 (N2 분위기 하에). 상기 혼합물을 얼음-물 (50 mL)에 붓고, 1분 동안 교반시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (30 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 (405 mg, 1.34 mmol, 71.52%의 수율)을 흑갈색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C16H21N3O3에 대한 이론치: 303.2; m/z 실측치: 304.1 [M+H]+.
단계 J. tert -부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H- 시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진 -2(7H)-카르복실레이트. EtOH (30 mL) /MeOH (3 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,9,10-테트라히드로-1H-시클로헵타[2,3]-피라졸로[2,4-a] 피라진-2-카르복실레이트 (0.405 g, 1.34 mmol)의 용액에 Pd/C (0.08 g, 1.34 mmol, 10%의 순도)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (15 Psi) 분위기 하에 1시간 동안 15℃에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.39 g, 1.28 mmol, 95.66%의 수율)을 갈색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.77 (s, 2 H), 4.05 - 4.03 (m, 2 H), 3.81 - 3.79 (m, 2 H), 2.89 - 2.86 (m, 2 H), 2.62 - 2.59 (m, 2 H), 1.89 - 1.82 (m, 4 H), 1.44 (s, 9 H).
중간체 23: tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5'',4'':3',4'] 시클로헵타[1',2':3,4]-피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트.
Figure pct00312
단계 A. tert -부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2(7H)-카르복실레이트. DMF-DMA (3.59 g, 30.11 mmol, 4 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-시클로헵타[2,3]피라졸로[2,4-a]피라진-2-카르복실레이트 (0.08 g, 261.98 umol)의 용액을 56시간 동안 115℃까지 가열하였다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 EtOAc (30 mL)로 희석시키고, 염수 (30 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.09 g, 조 물질)를 황색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.
단계 B. tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로 [1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트.
MeOH (3 mL) 중 tert-부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2(7H)-카르복실레이트 (0.09 g, 249.69 umol) 및 히드록실아민 히드로클로라이드 (104.11 mg, 1.50 mmol)의 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (40 mL)로 희석시키고, 염수 (40 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 TLC (석유 에테르 / EtOAc)로 정제하여 표제 화합물 (0.051 g, 140.47 umol, 56.26%의 수율, 91%의 순도)을 무색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C17H22N4O3에 대한 이론치: 330.2; m/z 실측치: 331.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (s, 1 H), 4.97 (s, 2 H), 4.16 -4.13 (m, 2 H), 3.93 - 3.90 (m, 2 H), 3.02 - 2.99 (m, 2 H), 2.79 - 2.76 (m, 2 H), 2.05 - 2.00 (m, 2 H), 1.51 (s, 9 H).
중간체 24: tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로 [3'',4'':3',4'] 시클로헵타 [1',2':3,4] 피라졸로[1,5-a]피라진 -11(12H)- 카르복실레이트 .
Figure pct00313
단계 A. tert -부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11- 헥사히드로 -1H-시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2(7H)-카르복실레이트. 톨루엔 (15 mL) 중 tert-부틸 11-옥소-3,4,7,8,9,10-헥사히드로-1H-시클로헵타[2,3]피라졸로[2,4-a]피라진-2-카르복실레이트 (0.34 g, 1.11 mmol) 및 TDAM (1.29 g, 8.91 mmol, 1.54 mL)의 용액을 16시간 동안 115℃까지 가열하였다. TDAM (646.87 mg, 4.45 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 추가 16시간 동안 115℃까지 가열하였다. 추가의 TDAM (323.43 mg, 2.23 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 추가 16시간 동안 115℃까지 가열하였다. 이때, 상기 혼합물을 EtOAc (60 mL)로 희석시키고, 염수 (50 mL×3)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.385 g, 조 물질)을 황색 고체로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.
단계 B. tert -부틸 5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로 [1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트.
피리딘 (12 mL) 중 tert-부틸 10-((디메틸아미노)메틸렌)-11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-시클로헵타[3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-2(7H)-카르복실레이트 (0.235 g, 651.96 umol) 및 히드록실아민 히드로클로라이드 (271.83 mg, 3.91 mmol)의 혼합물을 115℃에서 24시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 농축시켜 황색 잔사를 제공하고, 이를 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, HCl (1 M 수성, 50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (조건 A)로 정제하여 위치이성질체 화합물 tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 2, 0.07 g, 211.88 umol, 32.50%의 수율)를 무색 오일로서 제공하고, 표제 화합물 (0.037 g, 111.99 umol, 17.18%의 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (s, 1 H), 4.90 (s, 2 H), 4.18 -4.15 (m, 2 H), 3.93 - 3.90 (m, 2 H), 3.07 - 3.04 (m, 2 H), 2.85 - 2.83 (m, 2 H), 2.01 - 1.98 (m, 2 H), 1.51 (s, 9 H).
실시예 1a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00314
단계 A. 5 -메틸렌-5,6,9,10,11,12- 헥사히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]이라졸로[1,5-a]아제핀.
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1, 0.06 g, 175.24 umol)의 용액에 TFA (770.00 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (63 mg, 조 물질, TFA 염)을 황색 오일로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C13H14N4O에 대한 이론치: 242.17; m/z 실측치: 243.1 [M+H]+.
단계 B. N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
DCM (5 mL) 중 5-메틸렌-5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀 (63 mg, 182.43 umol, TFA 염) 및 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 (44 mg, 154.55 umol)의 용액에 TEA (184.60 mg, 1.82 mmol, 253.92 uL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 RP HPLC (조건 A)로 정제하여 표제 화합물 (40.58 mg, 99.34 umol, 54.46%의 수율, 99%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C21H17FN6O2에 대한 이론치: 404.1; m/z 실측치: 405.1 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.36 (s, 1H), 7.77 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.65 - 7.61(m, 1H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 3.90 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 2.89 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
실시예 2a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00315
단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H17F4N5O2에 대한 이론치: 447.13; m/z 실측치: 448.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.36 (s, 1H), 7.68 (dd, J = 2.4, 6.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 1H), 7.13 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 5.39 (s, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 3.91 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 2.89 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
실시예 3a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로-[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00316
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]-아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 2)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19FN6O3에 대한 이론치: 422.15; m/z 실측치: 423.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.35 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.67 - 7.63 (m, 1H), 7.14 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 4.75 - 4.68 (m, 3H), 4.46 - 4.37 (m, 1H), 3.93 - 3.87 (m, 2H), 3.74 - 3.66 (m, 2H), 3.14 - 3.08 (m, 1H), 2.90 - 2.80 (m, 3H), 2.45 (d, J = 6.4 Hz, 1H).
실시예 4a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00317
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5-(히드록시메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]-아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 2)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19F4N5O3에 대한 이론치: 465.1; m/z 실측치: 466.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.34 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 2.4, 6.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 1H), 7.13 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 3H), 4.46 - 4.37 (m, 1H), 3.93 - 3.87 (m, 2H), 3.75 - 3.65 (m, 2H), 3.15 - 3.07 (m, 1H), 2.90 - 2.78 (m, 3H), 2.50 - 2.40 (m, 1H).
실시예 5a: (5S*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00318
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (5S*)-tert-부틸 5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 3)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21F3N6O3에 대한 이론치: 486.2; m/z 실측치: 487.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.35 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.66 -7.62 (m, 1H), 7.14 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.03 - 5.70 (m, 1H), 4.79 - 4.72 (m, 2H), 4.70 - 4.66 (m, 1H), 4.40 - 4.34 (m, 1H), 3.93 - 3.88 (m, 2H), 3.73 - 3.63 (m, 2H), 3.60 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.10 - 3.05 (m, 1H), 2.91 - 2.84 (m, 3H), 2.59 - 2.48 (m, 1H).
실시예 6a: (5S*)-5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00319
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (5S*)-tert-부틸 5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 3)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21F6N5O3에 대한 이론치: 529.2; m/z 실측치: 530.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.35 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 2.8, 6.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.14 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.03 - 5.71 (m, 1H), 4.80 - 4.73 (m, 2H), 4.70 - 4.66 (m, 1H), 4.40 - 4.34 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 2H), 3.71 - 3.63 (m, 2H), 3.60 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.10 - 3.05 (m, 1H), 2.91 - 2.84 (m, 3H), 2.60 - 2.48 (m, 1H).
실시예 7a: (5R*)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00320
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (5R*)-tert-부틸 5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 4)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21F3N6O3에 대한 이론치: 486.2; m/z 실측치: 487.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.36 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.64 (m, 1H), 7.14 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.02 - 5.71 (m, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 3H), 4.40 - 4.34 (m, 1H), 3.91 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.71 - 3.63 (m, 2H), 3.60 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.10 - 3.06 (m, 1H), 2.92 - 2.84 (m, 3H), 2.59 - 2.49 (m, 1H).
실시예 8a: (5R*)-5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00321
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (5R*)-tert-부틸 5-((2,2-디플루오로에톡시)메틸)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 4)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)-페닐)카르바메이트를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21F6N5O3에 대한 이론치: 529.2; m/z 실측치: 530.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.35 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 2.8, 6.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.13 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.03 - 5.70 (m, 1H), 4.77 - 4.64 (m, 3H), 4.40 - 4.34 (m, 1H), 3.94 - 3.88 (m, 2H), 3.73 - 3.63 (m, 2H), 3.60 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.13 - 3.05 (m, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 3H), 2.54 (s, 1H).
실시예 9a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00322
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 5)를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H17FN6O2에 대한 이론치: 404.1; m/z 실측치: 405.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.22 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.64 - 7.60 (m, 1H), 7.15 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
실시예 10a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00323
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 5)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H17F4N5O2에 대한 이론치: 447.13; m/z 실측치: 448.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.22 (s, 1H), 7.69 (dd, J = 2.8, 6.0 Hz, 1H), 7.64 - 7.59 (m, 1H), 7.14 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 5.36 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.82 (s, 2H), 3.89 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.60 (s, 2H), 2.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H).
실시예 11a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00324
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5-히드록시-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 6)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H17FN6O3에 대한 이론치: 408.1; m/z 실측치: 409 [M+H]+. 1H NMR(400MHz, CD3OD) δ = 8.63 (s,1H), 7.83 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J = 2.8, 4.8, 9.2 Hz, 1 H), 7.28 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.66 - 4.56 (m, 2 H), 4.40 (q, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.88 (t, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.14(d, J = 5.2 Hz, 2 H), 2.86 (t, J = 5.7 Hz, 2 H).
실시예 12a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00325
N2 하에 MeOH (2 mL) 중 N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10 -테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드 (45 mg, 98.57 umol)의 용액에 Pd-C (10%, 4 mg)를 첨가하였다. 상기 현탁액을 감압 하에 탈기시키고, H2로 수 회 퍼지하였다. 상기 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 25℃에서 10분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 RP HPLC (조건 A)로 정제하여 N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드 (24.11 mg, 53.11 umol, 53.88%의 수율, 99%의 순도)를 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C21H19F4N5O2에 대한 이론치: 449.2; m/z 실측치: 450.2 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.31 (s, 1H), 7.70 (dd, J = 2.8, 6.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 1H), 7.14 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.75 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.55 - 4.52 (m, 1H), 4.32 - 4.27 (m, 1H), 3.94 - 3.88 (m, 2H), 3.04 - 3.00 (m, 1H), 2.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.76 - 2.69 (m, 1H), 2.44 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.16 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 13a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00326
N-(4-플루오로-3-(트리플루오로-메틸)페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드 대신 N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드 (실시예 1)를 사용하여, 실시예 12와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19FN6O2에 대한 이론치: 406.2; m/z 실측치: 407.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.32 (s, 1H), 7.79 (dd, J = 2.8, 5.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.14 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 4.74 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 4.55 - 4.52 (m, 1H), 4.33 - 4.27 (m, 1H), 3.94 - 3.88 (m, 2H), 3.04 - 3.00 (m, 1H), 2.88 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.76 - 2.69 (m, 1H), 2.44 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 1.16 (d, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 14a: (10R)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00327
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (10R)-tert-부틸 10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 7)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19FN6O2에 대한 이론치: 406.2; m/z 실측치: 407.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8.20 - 8.19 (m, 1H), 7.84 - 7.79 (m, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 1H), 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.62 - 6.58 (m, 1H), 5.17 - 5.11 (m, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.60 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.09 - 3.00 (m, 1H), 2.91 - 2.86 (m, 2H), 2.72 - 2.65 (m, 1H), 2.32 - 2.24 (m, 2H), 1.22 - 1.19 (m, 3H).
실시예 15a: (10R)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00328
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (10R)-tert-부틸 10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 7)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19F4N5O2에 대한 이론치: 449.2; m/z 실측치: 450.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8.20 (s, 1H), 7.75 - 7.70 (m, 1H), 7.68 - 7.60 (m, 1H), 7.20 - 7.12 (m, 1H), 6.63 - 6.57 (m, 1H), 5.22 - 5.11 (m, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.62 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 4.52 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 3.11 - 3.01 (m, 1H), 2.90 (s, 2H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 2.35 - 2.23 (m, 2H), 1.21 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 16a: (11R)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도-[2,3-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00329
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (11R)-tert-부틸 11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[2,3-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 8)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21FN6O에 대한 이론치: 416.2; m/z 실측치: 417.2 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.60 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 7.25 (dd, J = 4.8, 7.6 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 5.19 - 5.05 (m, 1H), 4.97 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.54 (d, J=15.3 Hz, 1H), 4.32 - 4.22 (m, 2H), 3.10 (dd, J = 5.9, 15.8 Hz, 1H), 2.81 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.73 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.49 - 2.38 (m, 2H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 17a: (11R)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[2,3-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00330
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (11R)-tert-부틸 11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[2,3-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 8)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C23H21F4N5O에 대한 이론치: 459.2; m/z 실측치: 460.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.60 (dd, J = 1.7, 4.8 Hz, 1H), 7.68 - 7.59 (m, 3H), 7.24 (dd, J = 4.8, 7.6 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.15 - 5.04 (m, 1H), 4.96 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.11 (dd, J = 6.1, 15.5 Hz, 1H), 2.81 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.73 (d, J = 15.7 Hz, 1H), 2.47 - 2.40 (m, 2H), 1.27 (d, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 18a: (10R)-N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로-[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00331
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (10R)-tert-부틸 10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 9)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19FN6O2에 대한 이론치: 406.2; m/z 실측치: 407.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8.32 (s, 1H), 7.81 - 7.77 (m, 1H), 7.68 - 7.61 (m, 1H), 7.18 - 7.10 (m, 1H), 6.76 - 6.65 (m, 1H), 5.26 - 5.12 (m, 1H), 4.92 - 4.78 (m, 1H), 4.64 - 4.46 (m, 3H), 3.13 - 2.92 (m, 3H), 2.77 - 2.63 (m, 1H), 2.32 - 2.18 (m, 2H), 1.22 - 1.17 (m, 3H).
실시예 19a: (10R)-N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00332
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (10R)-tert-부틸 10-메틸-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 9)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H19F4N5O2에 대한 이론치: 449.2; m/z 실측치: 450.1 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8.33 (s, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.14 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.20 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.87 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 4.61 - 4.50 (m, 3H), 3.11 - 2.96 (m, 3H), 2.70 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.32 - 2.22 (m, 2H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 20a: N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로-[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00333
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 10)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C18H17ClFN7O에 대한 이론치: 401.1; m/z 실측치: 402 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.19 (s, 1 H), 7.65 (dd, J = 2.6, 6.7 Hz, 1 H), 7.29 (dd, J = 2.8, 4.1 Hz, 1 H), 7.00 - 7.10 (m, 2 H), 4.86 (s, 2 H), 4.63 - 4.70 (m, 2 H), 4.39 - 4.45 (m, 2 H), 3.91 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 2.87 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 2.49 - 2.59 (m, 2 H).
실시예 21a: N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-3-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]-피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00334
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 3-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 11)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C19H19ClFN7O에 대한 이론치: 415.1; m/z 실측치: 416 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.66 (dd, J = 2.7, 6.6 Hz, 1 H), 7.27 - 7.31 (m, 1 H), 7.12 (s, 1 H), 7.05 (t, J = 8.8 Hz, 1 H), 4.83 (s, 2 H), 4.61 - 4.66 (m, 2 H), 4.18 - 4.23 (m, 2 H), 3.91 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 2.85 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 2.49 - 2.56 (m, 5 H).
실시예 22a: (R)-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00335
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (11R)-tert-부틸 11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]-디아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 12)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C19H19ClFN7O에 대한 이론치: 415.1; m/z 실측치: 416 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.20 (s, 1 H), 7.67 (dd, J = 2.6, 6.5 Hz, 1 H), 7.28 - 7.31 (m, 1 H), 7.06 (t, J = 8.8 Hz, 1 H), 6.96 (br s, 1 H), 5.25 (quin, J = 6.5 Hz, 1 H), 5.00 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 4.58 - 4.74 (m, 3 H), 4.40 - 4.49 (m, 2 H), 3.06 (dd, J = 5.9, 15.9 Hz, 1 H), 2.69 (d, J = 15.8 Hz, 1 H), 2.55 (br d, J = 3.3 Hz, 2 H), 1.18 (d, J = 7.0 Hz, 3 H).
실시예 23a: (11R)-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-11-메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도-[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00336
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 (11R)-tert-부틸 3,11-디메틸-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,2,4]트리아졸로[3,4-c][1,4]디아제핀-12(13H)-카르복실레이트 (중간체 13)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H21ClFN7O에 대한 이론치: 429.1; m/z 실측치: 430 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.68 (dd, J = 2.7, 6.6 Hz, 1 H), 7.28-7.32 (m, 1 H), 7.06 (t, J = 8.8 Hz, 1 H), 6.98 (s, 1 H), 4.97 (m, 1 H), 4.57 - 4.68 (m, 3 H), 4.20 - 4.25 (m, 2 H), 3.05 (m, 1 H), 2.68 (m, 1 H), 2.54 (s, 5 H), 1.17 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).
실시예 24a: N-(3- 시아노 -4- 플루오로페닐 )-6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리다지노[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00337
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-피라졸-3-일)-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a][1,4]디아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 15)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C21H18FN7O에 대한 이론치: 403.1; m/z 실측치: 404 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.04 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.75-7.82 (m, 1H), 7.64 (ddd, J=2.8, 4.6, 9.2 Hz, 1H), 7.43 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.12 (t, J=8.7 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.40 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.94 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.87-3.00 (m, 4H), 2.44 (t, J=6.5 Hz, 2H)
실시예 25a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복스아미드.
Figure pct00338
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트 (중간체 16)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS(ESI): 질량: C19H18ClFN6O에 대한 이론치: 400.1; m/z 실측치: 401 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (dd, J=2.6, 6.4 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.21-7.26 (m, 1H), 7.00-7.08 (m, 1H), 6.63-6.70 (m, 1H), 4.76 (s, 2H), 4.44-4.57 (m, 2H), 3.87 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.92-3.03 (m, 2H), 2.86 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.16-2.30 (m, 2H).
실시예 26a: N-(3- 시아노 -4- 플루오로페닐 )-4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복스아미드.
Figure pct00339
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트 (중간체 16)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS(ESI): 질량: C20H18FN7O에 대한 이론치: 391.1; m/z 실측치: 392 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.79-7.85 (m, 1H), 7.71 (ddd, J=2.8, 4.7, 9.2 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.27 (t, J=9.0 Hz, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.39-4.46 (m, 2H), 3.80-3.89 (m, 2H), 2.93-3.02 (m, 2H), 2.80 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.12-2.23 (m, 2H).
실시예 27a: N-(3- 시아노 -4- 플루오로페닐 )-6,7,10,11- 테트라히드로 -5H- 피리도[2,3-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00340
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 17)를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C22H19FN6O에 대한 이론치: 402.16; m/z 실측치: 403.2 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.59 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 2.8, 5.4 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 7.27 - 7.23 (m, 1H), 7.13 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.91 (t, J =5.8 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.81 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.39 (m, 2H).
실시예 28a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-6,7,10,11-테트라히드로-5H-피리도[2,3-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-12(13H)-카르복스아미드.
Figure pct00341
단계 A에서 tert-부틸 5-메틸렌-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 11-옥소-3,4,8,9,10,11-헥사히드로-1H-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-2(7H)-카르복실레이트 (중간체 17)를 사용하고 단계 B에서 페닐 (3-시아노-4-플루오로페닐)카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C22H19F4N5O에 대한 이론치: 445.2; m/z 실측치: 446.1 [M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 8.59 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.59 (m, 3H), 7.24 (dd, J = 4.8, 7.6 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.26 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.91 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.92 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.81 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.39 (m, 2H).
실시예 29a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-2- 메틸 -4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로 [3,4-c]-피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복스아미드.
Figure pct00342
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 2-메틸-4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(2H)-카르복실레이트 (중간체 18)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS(ESI): 질량: C20H20ClFN6O에 대한 이론치: 414.1; m/z 실측치: 415.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (dd, J=2.6, 6.5 Hz, 1H), 7.21-7.26 (m, 2H), 7.06 (t, J=8.8 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 4.39-4.55 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 2.85 (s, 4H), 2.18 (br s, 2H).
실시예 30a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-1- 메틸 -4,5,6,9,10,12- 헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도 [4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(1H)-카르복스아미드.
Figure pct00343
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 1-메틸-4,5,6,9,10,12-헥사히드로피라졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(1H)-카르복실레이트 (중간체 19)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H20ClFN6O에 대한 이론치: 414.1; m/z 실측치: 415.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49-7.56 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.14-7.22 (m, 1H), 7.02-7.11 (m, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.16-4.25 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 2.91-3.00 (m, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.16-2.29 (m, 2H).
실시예 31a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[3,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00344
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 20)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C19H17ClFN5O2에 대한 이론치: 401.1; m/z 실측치: 402.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 7.60 (dd, J=2.2, 6.5 Hz, 1H), 7.24 (br d, J=3.3 Hz, 1H), 7.06 (t, J=8.7 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.53-4.61 (m, 2H), 3.90 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.93-3.03 (m, 2H), 2.87 (t, J=5.7 Hz, 2H), 2.19-2.31 (m, 2H).
실시예 32a: N-(3- 클로로 -4- 플루오로페닐 )-5,6,9,10- 테트라히드로 -4H- 이속사졸로[5,4-c]피리도 -[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00345
단계 A에서 tert-부틸 10-메틸-11-옥소-8-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1,3,4,7,8,9-헥사히드로피리도[2,3]피라졸로[2,4-b][1,4]디아제핀-2-카르복실레이트 (중간체 1) 대신 tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5,4-c]피리도[4',3':3,4]피라졸로[1,5-a]아제핀-11(12H)-카르복실레이트 (중간체 21)를 사용하고 단계 B에서 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 대신 페닐 (3-클로로-4-플루오로페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C19H17ClFN5O2에 대한 이론치: 401.1; m/z 실측치: 402.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19 (s, 1H), 7.60 (dd, J=2.7, 6.5 Hz, 1H), 7.21-7.26 (m, 1H), 7.08 (t, J=8.7 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.46-4.53 (m, 2H), 3.88 (t, J=5.8 Hz, 2H), 2.87 (td, J=6.0, 8.2 Hz, 4H), 2.27 (br dd, J=3.8, 6.1 Hz, 2H).
실시예 33a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']-시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00346
단계 A. 5,6,9,10,11,12- 헥사히드로 -4H- 이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로 -[1,5-a]피라진. DCM (2 mL) 중 tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']-시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트 (0.07 g, 211.88 umol)의 용액에 TFA (1.54 g, 13.51 mmol, 1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (0.073 g, 조 물질, TFA 염)을 황색 오일로서 제공하고, 이를 다음 단계에 직접적으로 사용하였다.
단계 B. N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타-[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복스아미드.
DCM (4 mL) 중 5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H 이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타 [1',2':3,4] 피라졸로 [1,5-a]피라진 (0.073 g, TFA 염), 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트 (54.33 mg, 212.03 umol) 및 Et3N (107.28 mg, 1.06 mmol, 147.56 uL)의 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 분취용 HPLC (조건 A)로 정제하여 표제 화합물 (0.048 g, 120.86 umol, 57.00%의 수율, 98.8%의 순도)을 백색 고체로서 제공하였다. MS (ESI): 질량: C20H17FN6O2에 대한 이론치: 392.1; m/z 실측치: 393.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.32 (s, 1 H),8.41 (s, 1 H), 7.95 -7.93 (m, 1 H), 7.78 - 7.78 (m, 1 H), 7.48 - 7.44 (m, 1 H), 5.01 (s, 2 H), 4.17 - 4.14 (m, 2 H), 3.99 - 3.97 (m, 2 H), 2.93 - 2.90 (m, 2 H), 2.76 - 2.73 (m, 2 H), 1.91 -1.89 (m, 2 H).
실시예 34a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']-시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00347
페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)-카르바메이트 대신 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트를 사용하여, 실시예 1, 단계 2와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H17F4N5O2에 대한 이론치: 435.1; m/z 실측치: 436.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.30 (s, 1 H),8.41 (s, 1 H), 7.93 -7.90 (m, 1 H), 7.80 - 7.77 (m, 1 H), 7.45 - 7.41 (m, 1 H), 5.01 (s, 2 H), 4.17 - 4.00 (m, 2 H), 3.99 - 3.98 (m, 2 H), 2.93 - 2.90 (m, 2 H), 2.75 - 2.73 (m, 2 H), 1.91 -1.89 (m, 2 H).
실시예 35a: N-(3-시아노-4-플루오로페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3'',4'':3',4']-시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00348
tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']-시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트 대신 tert-부틸 5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로[3'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복실레이트를 사용하여, 실시예 1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H17FN6O2에 대한 이론치: 392.1; m/z 실측치: 393.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.31 (s, 1 H),8.65 (s, 1 H), 7.94 -7.92 (m, 1 H), 7.78 - 7.77 (m, 1 H), 7.48 - 7.43 (m, 1 H), 4.90 (s, 2 H), 4.18 - 4.15 (m, 2 H), 3.99 - 3.95 (m, 2 H), 2.97 - 2.95 (m, 2 H), 2.82 - 2.79 (m, 2 H), 1.88 -1.86 (m, 2 H).
실시예 36a: N-(4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-5,6,9,10-테트라히드로-4H-이속사졸로-[3'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진-11(12H)-카르복스아미드.
Figure pct00349
5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[5'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진과 페닐 N-(3-시아노-4-플루오로-페닐)카르바메이트의 반응 대신 5,6,9,10,11,12-헥사히드로-4H-이속사졸로[3'',4'':3',4']시클로헵타[1',2':3,4]피라졸로[1,5-a]피라진과 페닐 (4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐)카르바메이트의 반응을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 1, 단계 2와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다. MS (ESI): 질량: C20H17F4N5O2에 대한 이론치: 435.1; m/z 실측치: 436.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.29 (s, 1 H),8.65 (s, 1 H), 7.92 -7.90 (m, 1 H), 7.79 - 7.77 (m, 1 H), 7.45 - 7.40 (m, 1 H), 4.90 (s, 2 H), 4.18 - 4.16 (m, 2 H), 4.00 - 3.99 (m, 2 H), 2.98 - 2.95 (m, 2 H), 2.81 - 2.80 (m, 2 H), 1.89 -1.86 (m, 2 H).
4. 화학식 I의 화합물의 항- HBV 활성
절차
안정한, 유도성 HBV 생산 세포주인 HepG2.117 세포주를 이용하여 항 HBV 활성을 측정하였는데, 상기 세포주는 독시사이클린의 부재 하에 HBV를 복제시킨다 (Tet-off 시스템). HepG2 세포주는 번호 HB-8065로 ATCC®로부터 입수가능하다. HepG2 세포주의 형질감염은 문헌[Sun and Nassal 2006 Journal of Hepatology 45 (2006) 636-645 "Stable HepG2 - and Huh7 -based human hepatoma cell lines for efficient regulated expression of infectious hepatitis B virus"]에 기술된 바와 같을 수 있다.
항바이러스 분석을 위해, HBV 복제를 유도하고, 이어서 96웰 플레이트에서 연속 희석 화합물로 처리하였다. 3일의 처리 후, 실시간 PCR 및 HBV 특이적 프라이머 세트 및 프로브를 사용한 세포내 HBV DNA의 정량화에 의해 항바이러스 활성을 결정하였다.
화합물들의 존재 하에 3일간 인큐베이션한 HepG2 또는 HepG2.117 세포를 사용하여 화합물들의 세포독성을 테스트하였다. PERKIN ELMER ATPlite Luminescence Assay System을 사용하여 세포의 생존력을 평가하였다.
결과:
[표 4]
Figure pct00350
Figure pct00351
HBC 스펙클링의 유도 또는 비-유도
HepG2.117 세포를 독시사이클린의 부재 하에 DMSO 또는 테스트 화합물의 존재 하에 배양하였다. 포름알데히드 고정 및 Triton-X-100 투과화 후, B형 간염 바이러스 코어 단백질 (HBc)을 일차 항-HBc 항체로 면역표지하였다. ALEXA 488-콘쥬게이션된 이차 항체를 일차 HBV 코어 신호의 형광 검출에 사용하였다. CELLMASK Deep Red 및 HOECHST 33258을 각각 세포질 및 핵의 검출에 사용하였으며, 이는 세포 구획의 분할을 가능하게 하였다. 상이한 형태학적 표현형을 검출할 수 있는 영상 분석 소프트웨어를 사용하여 세포질 또는 핵에서 HBV 코어의 수준을 결정하였다(고화질 영상 분석).
HBV 복제 억제 분석
본 개시 화합물에 의한 HBV 복제 억제를 HBV로 감염되거나 형질감염된 세포, 또는 HBV가 안정하게 통합된 세포, 예컨대 HepG2.2.15 세포에서 결정하였다(문헌[Sells et al. 1987]). 이 실시예에서, 10% 소 태아 혈청(FBS), 제네티신(Geneticin), L-글루타민, 페니실린 및 스트렙토마이신을 함유하는 세포 배양 배지에서 HepG2.2.15 세포를 유지하였다. HepG2.2.15 세포를 40,000개의 세포/웰의 밀도로 96웰 플레이트에 접종하고, 체커 박스 형식으로 약물들을 첨가함으로써 조합하여 또는 단독으로 0.5%의 최종 DMSO 농도의 연속 희석 화합물들로 처리하였다. 세포를 3일 동안 화합물과 함께 인큐베이션하고, 그 후 배지를 제거하고, 화합물을 함유하는 신선한 배지를 세포에 첨가하고, 추가 3일 동안 인큐베이션하였다. 제6일에 상청액을 제거하고, DNase로 37℃에서 60분 동안 처리하고, 이어서 75℃에서 15분 동안 효소를 불활성화시켰다. 캡시드화된 HBV DNA를 50℃에서 40분 동안 2.5 μg 프로테이나아제 K를 함유하는 용해 완충액(Affymetrix QS0010)에서 인큐베이션함으로써 비리온 및 공유 결합 HBV 폴리머라아제로부터 방출시켰다. HBV DNA를 0.2 M NaOH의 첨가에 의해 변성시키고, 제조사 권장 사항(Affymetrix)에 따라 분지형 DNA(BDNA) QuantiGene 분석 키트를 사용하여 검출하였다. 또한, QuickExtraction Solution(Epicentre Biotechnologies)을 사용한 캡시드화 HBV DNA 추출물의 증폭 및 정량화를 위한 형광 표지된 프로브 및 HBV DNA에 혼성화될 수 있는 HBV 특이적 PCR 프로브를 사용한 HBV DNA의 증폭을 기반으로 하여 qPCR을 사용하여 HBV DNA 수준을 정량화하였다. 또한, 단독의 또는 조합된 테스트 화합물들과 함께 인큐베이션한 HepG2.2.15 세포의 세포 생존력을 제조사 프로토콜(Promega)에 따라 CellTitre-Glo 시약을 사용하여 결정하였다. 배양 배지만을 함유하는 웰로부터의 평균 배경 신호를 모든 다른 샘플에서 차감하고, 하기 방정식 E1을 사용하여 0.5% DMSO로 처리된 HepG2.2.15 세포로부터의 신호에 대하여 정규화함으로써 각각의 화합물 농도에서의 억제 퍼센트를 계산하였다.
E1: 억제 % = ( DMSOave - Xi )/ DMSOave x 100%
여기서, DMSOave는 DMSO 대조군(0% 억제 대조군)으로 처리된 웰로부터 계산된 평균 신호이며, Xi는 개별 웰로부터 측정된 신호이다. 50% 억제 효과를 달성한 유효 농도인 EC50 값을 Graphpad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고) 및 하기 방정식 E2를 사용하여 비선형 피팅에 의해 결정하였다.
E2: Y = Ymin + ( Ymax - Ymin ) / (1+10( LogEC50 -X) x HillSlope )
여기서, Y는 억제 퍼센트 값을 나타내며, X는 화합물 농도의 로그를 나타낸다.
선택된 개시 화합물들을 상기 기술된 바와 같이 HBV 복제 분석(BDNA 분석)에서 분석하였으며, 이들 활성 화합물의 대표적인 군은 표 5에 예시되어 있다. 표 5는 선택된 화합물의 군에 대한 BDNA 분석으로 얻은 EC50 값을 보여준다.
[표 5]
Figure pct00352
Figure pct00353
Figure pct00354
Figure pct00355
개시된 주제는 본원에 설명된 특정 실시 형태 및 실시예에 의해 범주가 제한되는 것이 아니다. 실제로, 설명된 것 외에 본 발명의 다양한 변경이 전술한 설명 및 첨부된 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 변경은 첨부된 청구범위의 범주에 속하는 것으로 의도된다.
본원에 인용된 모든 참고 문헌(예를 들어, 간행물, 특허 또는 특허 출원)은 마치 각각의 개별 참고 문헌(예를 들어, 간행물, 특허 또는 특허 출원)이 모든 목적을 위하여 그 전체가 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 모든 목적을 위하여 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 다른 실시 형태가 하기 청구범위 내에 있다.

Claims (29)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 입체이성질체 또는 호변이성질체, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    Figure pct00356

    (여기서,
    Figure pct00357
    는 1개, 2개 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴로서, 상기 헤테로원자는 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 5원 헤테로아릴은 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환되며;
    R1은 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리로서, 상기 5원 내지 10원 단환식 또는 이환식 고리, 더 구체적으로 5원 내지 9원 단환식 또는 이환식 고리는
    - N, O 및 S로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 선택적으로 함유하고/하거나;
    - 수소, 할로겐, CN, CF3, CF2H, CFH2, CF2CH3, C1- 6알킬, OC1- 6알킬, OCF3, OCF2H 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며 ;
    더 구체적으로 R1은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
    R2는 H, C1- 4알킬, 및 하나 이상의 F로 치환된 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    J는 CHR3이며;
    R3은 H, CH2OH, 및 C(=O)N(R4)(R5)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R4 및 R5는 H, C1- 4알킬, 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
    K는 C(R6)(R7), C=CH2 및 C(=O)로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R6 및 R7은 H, F, OH, OCH3, CH2OH, C(=O)R8 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    R8은 OH 또는 모르폴린이며;
    R9 및 R10은 H, 페닐, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬으로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환되며;
    n은 0 또는 1의 정수이며;
    L은 C(R11)(R12), NH, O이며;
    R11 및 R12는 H 및 C(=O)N(R13)(R14)로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    R13 및 R14는 H, C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고, 여기서, C1- 4알킬은 OH 및 F로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환됨).
  2. 제1항에 있어서, R1은 하나 이상의 Cl 치환체로 치환된 페닐인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2는 H 또는 메틸인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 H인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, K는 C(R6)(R7) 또는 C=CH2인 화합물.
  6. 제5항에 있어서, R6 및 R7은 H, F, OH, CH2OH 및 C(=O)N(R9)(R10)으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물.
  7. 제6항에 있어서, R9 및 R10은 C1- 4알킬 및 C3- 4시클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R11 및 R12는 수소인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00358
    는 이속사졸, 피라졸, 이미다졸, 옥사졸 및 티아졸로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    Figure pct00359
    는 H, C1- 4알킬, CF3, CF2H, NH2, NH(CH3), N(CH3)2 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 선택적으로 치환된 것인 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00360
    는 C1- 4알킬 및 NH2로부터 선택되는 치환체로 선택적으로 치환된 이속사졸인 화합물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00361
    는 피라졸인 화합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염을 포함하고, 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  13. 제12항의 제약 조성물의 제조 방법으로서, 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물을 제약상 허용가능한 담체와의 긴밀한 혼합물로 배합하는 단계를 포함하는 방법.
  14. 의약으로 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
  15. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
  16. 만성 B형 간염의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물.
  17. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제12항의 제약 조성물의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  18. HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 포유동물에서의 HBV 감염 또는 HBV-유도성 질환의 예방 또는 치료에서의 동시 사용, 개별 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서 제1 화합물 및 제2 화합물을 포함하는 생성물로서, 상기 제1 화합물은 상기 제2 화합물과는 상이하고, 상기 제1 화합물은 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제약상 허용가능한 염 또는 제12항의 제약 조성물이며, 상기 제2 화합물은 또 다른 HBV 억제제인 생성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 제2 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 또 다른 HBV 억제제인 생성물: HBV 병용 약물, HBV 백신, HBV DNA 폴리머라아제 억제제, 면역조절제, toll-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 히알루로니다아제 억제제, b형 간염 표면 항원(HBsAg) 억제제, 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 시클로필린 억제제, HBV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제, HBV E 항원 억제제, 공유적 폐쇄 원형 DNA(covalently closed circular DNA; cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 작용제, HBV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 작용제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2, 3-디옥시게나아제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나아제(BTK) 억제제, KDM 억제제, HBV 복제 억제제, 아르기나아제 억제제, 및 다른 HBV 약물로부터 선택되는 치료제.
  20. 다음의 단계 a), b), c), d), e), f), g), h), i), j), k), l), m), n), o), p), q), r) 및 s) 중 하나 이상의 단계를 포함하는, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항의 화학식 I의 화합물의 제조 방법:
    a) 하기 화학식 II:
    [화학식 II]
    Figure pct00362
    의 화합물을
    NaOCl과 반응시켜 하기 화학식 III의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 III]
    Figure pct00363

    (여기서,
    m은 0 또는 1의 정수이며;
    G1은 H 또는 CH3이며;
    G2는 H, C1- 4알킬, CF3 또는 페닐이며;
    단, m이 1인 경우, G1 및 G2는 둘 다가 H인 것은 아님);
    b) 하기 화학식 III:
    [화학식 III]
    Figure pct00364
    의 화합물을
    염산(HCl), 또는 TFA 등의 강산과 반응시켜 하기 화학식 IV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 IV]
    Figure pct00365

    (여기서,
    m은 0 또는 1의 정수이며;
    G1은 H 또는 CH3이며;
    G2는 H, C1- 4알킬, CF3 또는 페닐임);
    c) 트리에틸아민(Et3N) 또는 탄산나트륨(Na2CO3) 등의 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 IV:
    [화학식 IV]
    Figure pct00366
    의 화합물을
    하기 화학식 V:
    [화학식 V]
    Figure pct00367
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 VI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 VI]
    Figure pct00368

    (여기서,
    m은 0 또는 1의 정수이며;
    G1은 H 또는 CH3이며;
    G2는 H, C1- 4알킬, CF3 또는 페닐이며;
    G3은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐임);
    d) 하기 화학식 VII:
    [화학식 VII]
    Figure pct00369
    의 화합물을
    하기 화학식 VIII:
    [화학식 VIII]
    Figure pct00370
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 IX의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 IX]
    Figure pct00371

    (여기서,
    Figure pct00372
    는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
    Figure pct00373
    는 방향족 고리이며;
    G3은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
    G4는 H 또는 CH3임);
    e) 하기 화학식 X:
    [화학식 X]
    Figure pct00374
    의 화합물을
    히드라진과 반응시켜 하기 화학식 XI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XI]
    Figure pct00375

    (여기서, G5는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐임);
    f) 하기 화학식 XXV:
    [화학식 XXV]
    Figure pct00376
    의 화합물을
    티오아세트아미드와 반응시켜 하기 화학식 XXVI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXVI]
    Figure pct00377

    (여기서, G6은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐임);
    g) 하기 화학식 XII:
    [화학식 XII]
    Figure pct00378
    의 화합물을
    하기 화학식 XIII:
    [화학식 XIII]
    Figure pct00379
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 XIV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XIV]
    Figure pct00380

    (여기서,
    Figure pct00381
    는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
    Figure pct00382
    는 방향족 고리이며;
    X는 CH2 또는 C=CH2이며;
    G7은 OH, NH2 또는 NH(CH3)이며;
    G8은 H 또는 NH2이며;
    단, G7이 NH2 또는 NH(CH3)이면, G8은 H이거나; 또는 G7이 OH이면, G8은 H 또는 NH2이며;
    Y는 O, NH, N 또는 N(CH3)이며;
    Z는 N 또는 O임);
    h) 하기 화학식 XV:
    [화학식 XV]
    Figure pct00383
    의 화합물을
    염산(HCl) 또는 TFA(트리플루오로아세트산) 등의 강산과 반응시켜 하기 화학식 XVI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XVI]
    Figure pct00384

    (여기서,
    Figure pct00385
    는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
    Figure pct00386
    는 방향족 고리이며;
    Q는 C=CH2 또는 CG10G11이며;
    G9는 H 또는 NH2이며;
    G10 및 G11은 H, OH, CONHMe, CH2OH 및 CONH2로부터 독립적으로 선택되며;
    Y는 O, N, NH 또는 N(CH3)이며;
    Z는 N 또는 O임);
    I) 트리에틸아민(Et3N) 또는 탄산나트륨(Na2CO3) 등의 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 XVI:
    [화학식 XVI]
    Figure pct00387
    의 화합물을
    하기 화학식 XVII:
    [화학식 XVII]
    Figure pct00388
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 XVIII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XVIII]
    Figure pct00389

    (여기서,
    Figure pct00390
    는 단일 또는 이중 결합을 나타내며;
    Figure pct00391
    는 방향족 고리이며;
    Q는 C=CH2 또는 CG10G11이며;
    G9는 H 또는 NH2이며;
    G10 및 G11은 H, OH, CONHMe, CH2OH 및 CONH2로부터 독립적으로 선택되며;
    G12는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
    Y는 O, N, NH 또는 N(CH3)이며;
    Z는 N 또는 O임);
    j) 하기 화학식 XIX:
    [화학식 XIX]
    Figure pct00392
    의 화합물을
    하기 화학식 XX:
    [화학식 XX]
    Figure pct00393
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 XXI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXI]
    Figure pct00394

    (여기서,
    G13은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
    G14 및 G15는 H, C1- 4알킬, 시클로프로필, CH2CH2OH, CH2CF3 및 페닐로부터 독립적으로 선택되거나;
    또는 G14 및 G15는 함께 연결되어 모르폴린 고리를 형성함);
    k) 4-메틸모르폴린 N-옥시드(NMO)의 존재 하에 하기 화학식 XXVII:
    [화학식 XXVII]
    Figure pct00395
    의 화합물을
    오스뮴산칼륨(K2OsO4)과 반응시켜 하기 화학식 XXVIII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXVIII]
    Figure pct00396

    (여기서,
    G17은 H 또는 NH2이며;
    G16은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐임);
    l) 4-메틸모르폴린 N-옥시드(NMO)의 존재 하에 하기 화학식 XXIX:
    [화학식 XXIX]
    Figure pct00397
    의 화합물을
    테트라프로필암모늄 퍼루테네이트(TPAP) 등의 산화제와 반응시켜 하기 화학식 XXX의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXX]
    Figure pct00398

    (여기서, G18은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐임);
    m) 하기 화학식 XXXI:
    [화학식 XXXI]
    Figure pct00399
    의 화합물을
    (디에틸아민)설퍼 트리플루오라이드(DAST) 등의 플루오르화 시약과 반응시켜 하기 화학식 XXXII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXXII]
    Figure pct00400

    (여기서, G19는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐임);
    n) 9-BBN 및 수산화나트륨의 존재 하에 하기 화학식 XXXIII:
    [화학식 XXXIII]
    Figure pct00401
    의 화합물을
    과산화수소와 반응시켜 하기 화학식 XXXIV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXXIV]
    Figure pct00402

    (여기서,
    G20은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐이며;
    X는 NH 또는 O임);
    o) 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 XXXV:
    [화학식 XXXV]
    Figure pct00403
    의 화합물을
    메틸화제와 반응시켜 하기 화학식 XXXVI의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXXVI]
    Figure pct00404

    (여기서,
    G21은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐이며;
    G22 및 G23은 H 및 CH3으로부터 독립적으로 선택되고, 단, G22 및 G23 중 적어도 하나는 CH3임);
    p) 수소화나트륨 등의 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 XXXVII:
    [화학식 XXXVII]
    Figure pct00405
    의 화합물을
    메틸 요오다이드 등의 메틸화제와 반응시켜 하기 화학식 XXXVIII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXXVIII]
    Figure pct00406

    (여기서, G24는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐임);
    q) 수소화나트륨 등의 비친핵성 염기의 존재 하에 하기 화학식 XXXIX:
    [화학식 XXXIX]
    Figure pct00407
    의 화합물을
    메틸 요오다이드 등의 메틸화제와 반응시켜 하기 화학식 XL의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XL]
    Figure pct00408

    (여기서, G25는 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 O-tert-부틸 또는 페닐임);
    r) 하기 화학식 XXII:
    [화학식 XXII]
    Figure pct00409
    의 화합물을
    하기 화학식 XXIII:
    [화학식 XXIII]
    Figure pct00410
    의 화합물과 반응시켜
    하기 화학식 XXIV의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XXIV]
    Figure pct00411

    (여기서,
    G26은 Cl, F, CF3, CF2H, CN, 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 치환된 페닐이며;
    W는 O 또는 S이며;
    W'는 O, NH, S임);
    s) 하기 화학식 XLI:
    [화학식 XLI]
    Figure pct00412
    의 화합물을
    마그네슘 에톡시드 및 클로로아세트알데히드와 반응시켜 하기 화학식 XLII의 화합물을 형성하는 단계:
    [화학식 XLII]
    Figure pct00413
    .
  21. 하기 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    [화학식 Ia]
    Figure pct00414

    (여기서,
    R1b는 수소, C1- 4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1-4알킬, 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R1a는 수소이거나 또는 R1b와 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하며;
    na는 0, 1, 또는 2인 정수이며;
    R2a는 수소 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R3a는 Cl, CN, 및 C1- 4할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    R4a는 H, 또는 F이며;
    HET는 C1- 4알킬, 브로모, 클로로, 플루오로, 및 히드록시(C1-4)알킬로부터 선택되는 1 내지 2개의 치환체로 선택적으로 독립적으로 치환된 5 또는 6원 헤테로아릴이며;
    X 및 Y는, 어떤 경우에도 X 및 Y 중 하나만이 N이 되도록, N 또는 C로부터 각각 독립적으로 선택되며;
    Z1은 N 또는 C이며;
    Z2는 N 또는 CF임).
  22. 제21항에 있어서, R1b는 수소, C1- 4알킬, 히드록시, 히드록시메틸, (2,2-디플루오로에톡시)메틸, OC1- 4알킬, 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 화합물.
  23. 제21항에 있어서, R1b 및 R1a는 함께 취해져서 메틸레닐을 형성하는 화합물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, na는 1인 화합물.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, R2a는 H 또는 CH3인 화합물.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    Figure pct00415
    는 3-시아노-4-플루오로페닐, 4-플루오로-3-(트리플루오로메틸)페닐, 또는 3-클로로-4-플루오로페닐인 화합물.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, HET는 이속사졸릴, 피리디닐, 트리아졸릴, 3-메틸-트리아졸릴, 피리다지닐, 피라졸릴, 또는 1-메틸피라졸릴로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 헤테로아릴인 화합물.
  28. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  29. HBV 감염 치료를 필요로 하는 개체에서의 HBV 감염의 치료 방법으로서, 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제28항의 제약 조성물의 치료적 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
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