KR20220010919A - Cosmetic composition for improving skin wrinkle comprising extract of crataegus pinnatifida fruit - Google Patents

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이춘몽
이광식
이건국
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Abstract

The present invention provides a cosmetic composition which comprises a Crataegus pinnatifida fruit extract or a separation compound thereof as an active ingredient and has an excellent effect in alleviating skin wrinkles through effects of increasing fibroblast proliferation, increasing cytochrome C oxidase, and increasing ATP biosynthesis.

Description

산사나무 열매 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN WRINKLE COMPRISING EXTRACT OF CRATAEGUS PINNATIFIDA FRUIT}COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVING SKIN WRINKLE COMPRISING EXTRACT OF CRATAEGUS PINNATIFIDA FRUIT comprising hawthorn fruit extract as an active ingredient

본 발명은 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물, 또는 이의 분리화합물인 우르솔릭산(ursolic acid) 및/또는 베타 시토스테롤(beta-sitosterol)을 유효성분으로 함유하여, 사이토크롬 C 옥시다제(cyhtochrome C oxidase) 증가 및 ATP 생합성 증가에 의해 피부 주름 개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention contains hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit extract, or an isolated compound thereof, ursolic acid and / or beta-sitosterol as an active ingredient, cytochrome C oxidase (cyhtochrome C oxidase) It relates to a cosmetic composition having an effect of improving skin wrinkles by increasing and increasing ATP biosynthesis.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. Human skin undergoes various physical and chemical changes during the aging process. The causes are largely divided into intrinsic aging and photo-aging, and studies on these have been actively conducted. Free radicals are activated and caused by UV rays, stress, disease states, environmental factors, wounds, and aging. and accelerate aging. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides, nucleic acids, etc., which are major constituents of the skin, are oxidized, and skin cells and tissues are destroyed, resulting in skin aging.

사람의 피부색은 멜라닌, 헤모글로빈, 카로틴 등에 의해 결정되는데 이 중에서도 멜라닌이 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정하는 것 이외에도 자외선 흡수 작용, 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger) 등과 같은 피부 보호작용을 수행한다. 그러나, 자외선의 과다 노출, 대기 오염, 스트레스 등과 같은 외부의 환경 변화에 의하여 멜라닌이 과다하게 생성되면 피부 내에서 색소 침착 현상을 일으켜 피부의 흑화 또는 기미, 주근깨 등의 원인이 된다. 피부의 흑화는 내적 및 외적 요인에 대한 피부 세포의 반응에 의하여 발생 하는 것으로, 대표적인 요인은 자외선 노출로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 타이로시나아제(Tyrosinase)가 활성화되는데, 상기 타이로시나아제가 피부조직에 존재하는 티로신에 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논을 생성시키는 산화 과정에 의하여, 피부 색소 세포인 멜라노사이트 내의 멜라노좀에서 멜라닌이라는 중합체가 합성되며, 이러한 멜라닌이 피부의 각질 형성 세포인 케라티노사이트로 전달되고 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. 따라서, 멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안 되는 자외선 방어제이며, 또한 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는 효과적인 자유 라디칼 소거제의 역할을 담당하고 있다.A person's skin color is determined by melanin, hemoglobin, and carotene, among which melanin plays the most important role. In addition to determining a person's skin color, melanin also performs skin protective actions such as UV absorption and free radical scavengers. However, when melanin is excessively generated by external environmental changes such as overexposure to ultraviolet rays, air pollution, stress, etc., it causes pigmentation in the skin, which causes skin blackening, blemishes, freckles, and the like. Blackening of the skin is caused by the reaction of skin cells to internal and external factors, and a representative factor is due to UV exposure. That is, when the skin is exposed to ultraviolet rays, tyrosinase is activated. By the oxidation process in which the tyrosinase acts on tyrosine present in the skin tissue to generate DOPA and dopaquinone, the skin A polymer called melanin is synthesized in melanosomes in melanocytes, which are pigment cells, and this melanin is transferred to keratinocytes, which are keratinocytes of the skin, and reaches the skin surface through keratinization to protect the skin from UV rays. Therefore, melanin is an essential UV protection agent for our human body, and also plays the role of an effective free radical scavenger that removes various radicals that modify biocomponents such as proteins, lipids, and nucleic acids.

특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유 라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.In particular, the oxidation of proteins cuts the connective tissues of the skin, such as collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycan, and fibronectin, causing severe hyperinflammatory reactions and disruption of skin elasticity. And if it gets worse, it leads to mutations, cancer induction, and decreased immune function due to DNA mutations. Therefore, it is necessary to protect the cell membrane by removing free radicals generated during the body's metabolic process, UV irradiation, and free radicals mediated by inflammatory reactions, and regenerate damaged cells through active metabolism to proliferate the cells. The skin can recover quickly and maintain healthy skin.

노화에는 자유 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.In aging, not only free radicals but also an enzyme called Matrix Metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades collagen, are also involved. That is, the synthesis and degradation of extracellular matrix, such as collagen, is appropriately regulated in vivo, but as aging progresses, collagen synthesis decreases, and the expression of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades collagen, is promoted, so that the skin The elasticity of the skin is reduced and wrinkles are formed. In addition, these decomposing enzymes are also activated by ultraviolet irradiation. Therefore, there is a need for the development of substances capable of regulating MMP expression induced in activation or inhibiting the activity in cells.

산소는 물과 더불어 우리가 살아가는데 없어서는 안 되는 물질이나, 그 산소가 일단 우리의 체내에 들어가면 여러 원인들에 의해 굉장히 활성이 강한 산소로 변하여 혈관 세포를 산화시킨다. 오늘날 질병의 원인의 약 90% 정도가 이 활성산소에 의한 것으로 규명되고 있다. 사람의 몸은 약 60조의 세포로 구성되어 있으며, 세포막은 임피질로 형성되어 있어 활성산소가 연결되기 쉽다. 산화반응이 발생하면 불포화 지방산은 과산화지질로 변화한다. 이 과산화지질이 유전자 DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포 구조 등에 손상을 주어 암이 되거나 여러 성인병의 원인이 되며, 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 바로 이러한 활성산소를 없애거나 중화시켜 세포가 산화하는 것을 막는 역할을 하는 물질을 항산화 물질이라고 한다. 일반적으로 피부세포의 구성성분인 지질의 활성산소로 인해 과산화가 일어나면 세포막의 구조가 변형되어 세포 투과성, 유동성, 막 효소와 운반 단백질의 불활성화, 단백질 사슬의 절단, DNA, RNA 손상 등이 발생하여 피부세포가 노화가 일어난다고 알려져 있다. 이러한 이유 때문에 활성산소를 제거하려고 하는 노력이 지속되었으며, 이러한 결과로 인해 많은 황산화 물질이 개발되었다. 지금까지 항산화 작용을 갖는 것으로 알려진 물질로는, 아스코르브산(ascorbic acid), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT), 디엘-알파 토코페롤(DL-α-tocopherol) 등이 있다. Oxygen, along with water, is an indispensable substance for our lives, but once it enters our body, it turns into highly active oxygen for various reasons and oxidizes blood vessel cells. Today, about 90% of the causes of disease have been identified as due to these free radicals. The human body is composed of about 60 trillion cells, and the cell membrane is formed of the lymphoid cortex, so it is easy to connect free radicals. When oxidation occurs, unsaturated fatty acids are converted into lipid peroxides. This lipid peroxide damages genetic DNA, RNA, proteins, cell membranes and cell structures, leading to cancer or various adult diseases, ultimately leading to aging. Substances that prevent cell oxidation by removing or neutralizing these free radicals are called antioxidants. In general, when peroxidation occurs due to free radicals in lipids, which are components of skin cells, the structure of the cell membrane is modified, causing cell permeability, fluidity, inactivation of membrane enzymes and carrier proteins, cleavage of protein chains, DNA and RNA damage, etc. It is known that skin cells are aging. For this reason, efforts to remove active oxygen continued, and as a result of this, many sulfated substances were developed. Substances known to have antioxidant activity so far include ascorbic acid, beta-carotene, dibutylhydroxyltoluene (BHT), and DL-α-tocopherol. .

현재까지 피부 노화를 억제하기 위해서 상기와 같은 다양한 물질들이 개발되었으며 최근에는 고주파기기, 초음파기기, 갈바닉 전류기, 리프팅기 등의 피부 미용기기들이 개발되어 피부 노화에 도움을 주고 있다. 이러한 기기들은 미세전류의 전기에너지를 세포에 공급함으로써 아데노신삼인산(adenosine triphosphate, ATP)의 생성을 증가시켜 세포의 복원과 치유를 유도하는 것으로 많이 알려져 있다. 본 발명자는 천연물 유래의 ATP 생성 촉진 소재의 연구를 통하여 본 발명을 완성하였다.To date, various substances as described above have been developed to suppress skin aging, and recently, skin care devices such as high-frequency devices, ultrasonic devices, galvanic current devices, and lifting devices have been developed to help skin aging. These devices are known to induce cell restoration and healing by increasing the production of adenosine triphosphate (ATP) by supplying electric energy of a microcurrent to the cells. The present inventors have completed the present invention through the study of ATP production promoting materials derived from natural products.

식물 추출물을 포함하여 피부 주름 개선 효과를 갖는 화장료 조성물에 대한 특허들이 다수 공개되어 있다. 한국등록특허 제10-1574248호에서는 왕호장(Reynoutria sachalinensis) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름개선용 화장료 조성물을 개시한다. 또한, 한국 등록특허 제10-1693931호에서는 고리매 (Scytosiphon lomentaria) 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 화장료 조성물을 개시한다.A number of patents on cosmetic compositions having an effect of improving skin wrinkles, including plant extracts, have been published. Korean Patent Registration No. 10-1574248 discloses a cosmetic composition for improving skin wrinkles comprising an extract of Reynoutria sachalinensis as an active ingredient. In addition, Korean Patent Registration No. 10-1693931 discloses a cosmetic composition for improving wrinkles comprising an extract of Scytosiphon lomentaria as an active ingredient.

본 발명자는 천연 식물 및 이의 분리 화합물에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물 및 이의 분리화합물인 우르솔릭산(ursolic acid)과 베타 시토스테롤 (beta-sitosterol)로부터 사이토크롬 C 옥시다제 활성 증가 및 ATP 생성 효능을 확인하고 본 발명을 완성하였다.As a result of searching for various skin physiological activities for natural plants and their isolated compounds, the present inventors found that among natural plant extracts, Hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit extract and its isolated compounds ursolic acid and beta-sitosterol (beta-sitosterol) ) from cytochrome C oxidase activity increase and ATP generation efficacy was confirmed and completed the present invention.

상기와 같은 목적은 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물 또는 이의 분리화합물인 우르솔릭산(ursolic acid) 또는 베타 시토스테롤(beta-sitosterol)을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 달성된다.The above object is achieved in a cosmetic composition for improving skin wrinkles comprising an extract of a hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit or an isolated compound thereof, ursolic acid or beta-sitosterol as an active ingredient.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 ATP 생합성 촉진 효과 또는 사이토크롬 C 옥시다제 활성 촉진 효과를 갖는다.Preferably, the cosmetic composition has an ATP biosynthesis promoting effect or cytochrome C oxidase activity promoting effect.

또한 바람직하게는, 상기 우르솔릭산은 0.0001 ~ 0.01 중량% 함유될 수 있다.Also preferably, the ursolic acid may be contained in an amount of 0.0001 to 0.01 wt%.

또한 바람직하게는, 상기 베타 시토스테롤을 0.0001 ~ 0.01 중량% 함유될 수 있다.Also preferably, the beta-sitosterol may be contained in an amount of 0.0001 to 0.01% by weight.

또한 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 우르솔릭산과 베타 시토스테롤을 1:1 내지 1:10의 중량비로 포함할 수 있다.Also preferably, the cosmetic composition may include ursolic acid and beta-sitosterol in a weight ratio of 1:1 to 1:10.

또한 바람직하게는 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.Also preferably, the cosmetic composition is selected from the group consisting of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays. It is characterized in that it has a selected formulation.

본 발명의 화장료 조성물은 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물 또는 이의 분리화합물인 우르솔릭산(ursolic acid), 베타 시토스테롤(beta-sitosterol) 또는 이들의 혼합물을 포함하여 ATP 생성 촉진 효과를 가지는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물은 섬유아 세포의 증식효과, 사이토크롬 C 옥시다제 활성 증가 및 ATP 생성 효과를 가짐으로써 피부에 주름 개선 효과를 제공한다.The cosmetic composition of the present invention contains an extract of Crataegus Pinnatifida fruit or an isolated compound thereof, ursolic acid, beta-sitosterol, or a mixture thereof, characterized in that it has an ATP production promoting effect. . The active ingredient, Crataegus Pinnatifida fruit extract, contained in the cosmetic composition of the present invention, provides a wrinkle improvement effect on the skin by having a fibroblast proliferation effect, an increase in cytochrome C oxidase activity, and an ATP generation effect.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.All technical terms used in the present invention, unless otherwise defined, have the following definitions and have the meanings as commonly understood by one of ordinary skill in the art of the present invention. In addition, although preferred methods and samples are described herein, similar or equivalent ones are also included in the scope of the present invention.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term "about" means 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, means an amount, level, value, number, frequency, percentage, dimension, size, amount, weight or length varying by 4, 3, 2 or 1%.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.Throughout this specification, unless the context requires otherwise, the terms "comprises" and "comprising" include, but are not limited to, a given step or element, or group of steps or elements, but any other step or element, or It is to be understood that a step or group of elements is not excluded.

본 발명은 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물 또는 이의 분리화?d물인 우르솔릭산(ursolic acid) 또는 베타 시토스테롤(beta-sitosterol)을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition comprising, as an active ingredient, a hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit extract or its isolated ?d water, ursolic acid or beta-sitosterol.

본 발명에 사용된 산사나무(Crataegus Pinnatifida)는, 장미목 장미과의 낙엽활엽으로써 일조량이 풍부한 곳에서 생육하는 교목으로써, 산사나무의 열매는 단맛과 신맛이 동시에 존재하여 예로부터 식자재로도 활용하였으며 한방에서는 산사자라 하여 소화불량, 장염, 요통 등의 치료에 사용하였다. The hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) used in the present invention is a deciduous broad-leaved tree in the Rosaceae family of Rosaceae, which grows in a place with abundant sunlight. As hawthorn, it was used to treat indigestion, enteritis, and back pain.

본 발명의 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출할 수 있다. The Hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit extract of the present invention may be prepared according to a conventional method known in the art, that is, under ordinary temperature and pressure conditions, using a conventional solvent, but preferably (a ) water, anhydrous or hydrous lower alcohols having 1-4 carbon atoms (e.g., methanol, ethanol, propanol and butanol), propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl Solvent extraction using a solvent selected from the group consisting of acetate, dichloromethane, chloroform, hexane, and mixtures thereof (b) supercritical extraction using reduced pressure and high temperature with carbon dioxide or (c) ultrasonic extraction. .

본 발명에서는 바람직하게는 추출 용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. 상기 추출 용매는, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다. In the present invention, preferably, a solvent extraction method using an extraction solvent was used. The extraction solvent is, for example, water, anhydrous or hydrous lower alcohols having 1-4 carbon atoms (eg, methanol, ethanol, propanol and butanol), propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, acetone, At least one extraction solvent selected from the group consisting of diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane and mixtures thereof may be used, preferably ethanol, 70% (v/v) ethanol or It is obtained using water, and most preferably is obtained using 70% (v/v) ethanol.

한편, 본 발명의 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하는 추출 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.On the other hand, it is apparent to those skilled in the art that, for the fruit extract of Crataegus Pinnatifida of the present invention, an extract exhibiting substantially the same effect can be obtained using other extraction solvents as well as the above-described extraction solvent. Decompression by carbon dioxide, extraction by supercritical extraction by high temperature, extraction by extraction using ultrasound, separation using an ultrafiltration membrane with a constant molecular weight cut-off value, various chromatography (depending on size, charge, hydrophobicity or affinity) The active fraction obtained through the extraction method for separation by the one prepared for separation) is also included in the extract of the present invention.

발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. The ingredients included in the cosmetic composition of the present invention may include ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the active ingredient as an active ingredient, for example, conventional adjuvants such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and fragrances. , and a carrier. The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream, spray, etc., but is not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, or a powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as a carrier component. can

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylglycol oil, glycerol fatty ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Adult cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In particular, in the case of a spray, additional chlorofluorohydrocarbon, propane /may contain propellants such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ether as carrier components Sulfate, alkylamidobetaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative or ethoxylated glycerol fatty acid ester may be used.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다. When the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation, or a surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, removed, or washed off with water. As a specific example, the soap is liquid soap, powder soap, solid soap, and oil soap, the surfactant-containing cleansing formulation is a cleansing foam, cleansing water, cleansing towel, and cleansing pack, and the surfactant-free cleansing formulation is a cleansing cream , cleansing lotion, cleansing water, and cleansing gel, but not limited thereto.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다. On the other hand, the makeup method of the present invention refers to all makeup methods using the cosmetic composition of the present invention. That is, all methods known in the art using the cosmetic composition belong to the cosmetic method of the present invention. The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention. In addition, the cosmetic composition according to the present invention can be used according to a conventional method of use, and the number of times of use can be varied according to the skin condition or taste of the user.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples according to the gist of the present invention.

본 발명에 있어서, 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물에서 분리된 분리화합물인 우르솔릭산(ursolic acid)은 하기의 화학식 1에, 베타 시토스테롤 (beta-sitosterol)은 화학식 2에 나타내었다.In the present invention, ursolic acid, an isolated compound isolated from the fruit extract of Crataegus Pinnatifida , is shown in Formula 1 below, and beta-sitosterol is shown in Formula 2.

[화학식 1] 우르솔릭산(ursolic acid)[Formula 1] Ursolic acid

Figure pat00001
Figure pat00001

[화학식 2] 베타 시토스테롤(beta-sitosterol)[Formula 2] beta-sitosterol (beta-sitosterol)

Figure pat00002
Figure pat00002

본 발명에 있어서 “추출물”은 산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매를 물, 에탄올 등의 용매를 이용하여 얻어지는 추출액으로써, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 이를 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물 등, 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 의미한다.In the present invention, "extract" is an extract obtained from hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) fruit using a solvent such as water or ethanol, and a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying it, and a prepared or purified product of the extract It refers to the extract of all formulations that can be formed using the extract, etc.

제조예 1 - 산사나무(Preparation Example 1 - Hawthorn ( Crataegus PinnatifidaCrataegus Pinnatifida ) 열매 추출물 제조) Preparation of fruit extract

산사나무 열매 10kg을 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 일정한(100mesh) 크기로 분쇄하여 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하여 농축기를 이용하여 산사나무 열매 추출물 2.1kg을 제조하였다.After washing 10 kg of hawthorn fruit with clean water, drying it, pulverize it to a constant (100 mesh) size, extract under reflux three times for 5 hours with 70% (V/V) ethanol aqueous solution, cool, and then cool with Whatman #4 filter paper 2.1 kg of hawthorn fruit extract was prepared by filtration using a concentrator.

제조예 2 - 우르솔릭산(ursolic acid)제조Preparation Example 2 - Preparation of ursolic acid

상기 제조예 1을 통해 획득한, 산사나무 열매 추출물 1.0kg에 10L의 5% 에탄올을 넣어 분산시킨 후 헥산 10L를 이용하여 비극성 성분을 제거하였으며(3회 반복), 이후 메틸렌클로라이드로 분획한 분획층을 감압 농축하여 35g의 분획물을 얻었다. 이를 실리카겔(60 ~ 120mesh) 컬럼을 이용하여 유효성분 분리를 진행하였으며, 이동상으로는 CH2Cl2-EtOAc 혼합액을 이용하여 분리·정제하였다. 전체 15개의 분획(fraction)을 회수하였으며, 사이토크롬 C 옥시다제 촉진효과를 가지는 1개의 분획으로부터 1.55g을 회수하였으며 NMR을 이용하여 분리 동정하였다. NMR 결과를 문헌자료와 비교 및 표준품(cas no: 77-51-1, ursolic acid)과 비교하여 분리 동정된 성분이 우르솔릭산임을 확인하였다(LABIB, Rola M., et al. Ursolic acid, a natural pentacylcic triterpene from Ochrosia elliptica and its role in the management of certain neglected tropical diseases. Pharmacognosy magazine, 2016, 12.48: 319). 제조예 2으로부터 우르솔릭산(ursolic acid)을 분리하였으며, 이의 구체적인 화학식은 상기 화학식 1에 나타내었다.After dispersing 10 L of 5% ethanol in 1.0 kg of the hawthorn fruit extract obtained in Preparation Example 1, the non-polar component was removed using 10 L of hexane (repeated 3 times), and then the fractionation layer fractionated with methylene chloride was concentrated under reduced pressure to obtain a fraction of 35 g. The active ingredient was separated using a silica gel (60 ~ 120mesh) column, and the mobile phase was separated and purified using a CH2Cl2-EtOAc mixture. A total of 15 fractions were recovered, and 1.55 g was recovered from one fraction having a cytochrome C oxidase promoting effect, and was separated and identified using NMR. By comparing the NMR results with literature data and standard products (cas no: 77-51-1, ursolic acid), it was confirmed that the isolated and identified component was ursolic acid (LABIB, Rola M., et al. Ursolic acid, a natural pentacylcic triterpene from Ochrosia elliptica and its role in the management of certain neglected tropical diseases. Pharmacognosy magazine, 2016, 12.48: 319). Ursolic acid was isolated from Preparation Example 2, and its specific chemical formula is shown in Formula 1 above.

제조예 3 - 베타 시토스테롤(β-sitosterol)제조Preparation 3 - Preparation of beta-sitosterol (β-sitosterol)

상기 제조예 1을 통해 획득한, 산사나무 열매 추출물 1.0kg에 10L의 5% 에탄올을 넣어 분산시킨 후 헥산 10L를 이용하여 비극성 성분을 제거하였으며(3회 반복), 이후 메틸렌클로라이드로 분획한 분획층을 감압 농축하여 35g의 분획물을 얻었다. 이를 실리카겔(60 ~ 120mesh) 컬럼을 이용하여 유효성분 분리를 진행하였으며, 이동상으로는 CH2Cl2-EtOAc 혼합액을 이용하여 분리·정제하였다. 전체 15개의 분획(fraction)을 회수하였으며, 사이토크롬 C 옥시다제 촉진 효과를 가지는 1개의 분획으로부터 0.21g을 회수하였으며 NMR을 이용하여 분리·동정하였다. NMR 결과를 문헌자료와 비교 및 표준품(cas no: 83-46-5, β-Sitosterol)과 비교하여 분리 동정된 성분이 베타 시토스테롤임을 확인하였다(ODODO, Mesfin Medihin; CHOUDHURY, Manash Kumar; DEKEBO, Ahmed Hussen. Structure elucidation of β-sitosterol with antibacterial activity from the root bark of Malva parviflora. SpringerPlus, 2016, 5.1: 1-11.). 제조예 3으로부터 베타 시토스테롤(β-sitosterol)을 분리하였으며, 이의 구체적인 화학식은 상기 화학식 2에 나타내었다.After dispersing 10 L of 5% ethanol in 1.0 kg of the hawthorn fruit extract obtained in Preparation Example 1, the non-polar component was removed using 10 L of hexane (repeated 3 times), and then the fractionation layer fractionated with methylene chloride was concentrated under reduced pressure to obtain a fraction of 35 g. The active ingredient was separated using a silica gel (60 ~ 120mesh) column, and the mobile phase was separated and purified using a CH2Cl2-EtOAc mixture. A total of 15 fractions were recovered, and 0.21 g was recovered from one fraction having a cytochrome C oxidase promoting effect, and separated and identified using NMR. By comparing the NMR results with literature data and with standard products (cas no: 83-46-5, β-Sitosterol), it was confirmed that the isolated and identified component was beta-sitosterol (ODODO, Mesfin Medihin; CHOUDHURY, Manash Kumar; DEKEBO, Ahmed). Hussen. Structure elucidation of β-sitosterol with antibacterial activity from the root bark of Malva parviflora ( SpringerPlus, 2016, 5.1: 1-11.). Beta sitosterol (β-sitosterol) was isolated from Preparation Example 3, and its specific chemical formula is shown in Formula 2 above.

실험예 1 - 세포 증식 효과Experimental Example 1 - Cell proliferation effect

인간 유래 섬유아 세포를 10% FBS 및 1% antibiotics (100 units/ml penicillin 및 100 ug/ml streptomycin)를 포함하는 DMEM 배지를 사용하여 배양한다. 3-4번째 passage의 섬유아세포를 실험에 사용하여 MTT assay로 섬유아세포의 성장 증식 효능을 확인하였다. 96-Well microplate에 1% FBS를 포함하는 DMEM 배지에 섬유아세포 (1×104 cells/㎖)를 넣고 24 시간 전배양하고, 제조예 1 및 2의 시료를 여러 농도로 처리한 다음 4일간 배양하였다. Human-derived fibroblasts were cultured using DMEM medium containing 10% FBS and 1% antibiotics (100 units/ml penicillin and 100 ug/ml streptomycin). The growth and proliferation efficacy of fibroblasts was confirmed by MTT assay using the fibroblasts of the 3rd and 4th passage. Fibroblasts (1×10 4 cells/ml) were put in a DMEM medium containing 1% FBS in a 96-well microplate and pre-cultured for 24 hours, and the samples of Preparation Examples 1 and 2 were treated at various concentrations, and then cultured for 4 days. did

3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT)를 50 ㎕ 첨가하고 4시간 더 배양한 다음, 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 여기에 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide)를 가하여 침전물을 용해시킨 다음 540 nm에서 흡광도를 측정하여, MTT의 환원에 따른 포르마잔(formazan) 침전물의 생성 정도로 인간유래 섬유아 세포의 증식 효과를 확인하였다. 그 결과를 표 1 및 표 2에 나타냈다.50 μl of 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) was added, incubated for another 4 hours, and then centrifuged to remove the supernatant. Herein, dimethylsulfoxide was added to dissolve the precipitate, and the absorbance was measured at 540 nm to confirm the proliferation effect of human-derived fibroblasts to the extent of the formation of a formazan precipitate according to the reduction of MTT. The results are shown in Tables 1 and 2.

시료명Sample name 농도(ppm)Concentration (ppm) 세포 증식 효과(%)(control 대비)Cell proliferation effect (%) (vs. control) 제조예 1Preparation Example 1 100100 120.74 % ± 1.07120.74% ± 1.07 1010 101.07 % ± 1.42101.07% ± 1.42 1One 98.84 % ± 2.0898.84% ± 2.08 제조예 2Preparation 2 5050 127.34 % ± 1.10127.34% ± 1.10 1010 119.46 % ± 1.42119.46% ± 1.42 1One 105.82 % ± 1.12105.82% ± 1.12 제조예 3Preparation 3 5050 105.43 % ± 0.70105.43% ± 0.70 1010 99.75 % ± 1.3399.75% ± 1.33 1One 99.10 % ± 0.8999.10 % ± 0.89

시료명 및 농도(ppm)Sample name and concentration (ppm) 세포 증식 효과(%)(control 대비)Cell proliferation effect (%) (vs. control) 제조예 2
(1ppm)
Preparation 2
(1ppm)
제조예 3
(10ppm)
Preparation 3
(10ppm)
130.00 % ± 1.69130.00% ± 1.69
제조예 3
(1ppm)
Preparation 3
(1ppm)
115.27 % ± 2.44115.27% ± 2.44

실험예 2 - 사이토크롬 C 옥시다제 활성Experimental Example 2 - Cytochrome C oxidase activity

인간 유래 섬유아 세포를 10% FBS 및 1% antibiotics (100 units/ml penicillin 및 100 ug/ml streptomycin)를 포함하는 DMEM 배지를 사용하여 배양한다. 3-4번째 passage의 섬유아세포를 실험에 사용하였다. 96-Well microplate에 1% FBS를 포함하는 DMEM 배지에 섬유아세포(1×104 cells/㎖)를 넣고 24 시간 전배양하고 제조예로부터 획득한 시료를 여러 농도로 처리한 다음 4일간 배양하였다. 세포를 수확하여 PBS로 2~3회 세척하고, 500㎕의 lysis buffer를 첨가한 다음, 1시간 동안 lysis 시킨 후 12,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 얻었으며, 단백질 농도는 BSA (bovine serum albumin)를 표준물질로 사용하여 Protein Assay Kit (BIO-RAD, HC, USA)를 사용하여 정량 하였다. 사이토크롬 c 옥시다제의 활성은 Cytochrome C Oxidase Assay Kit (ab239711)을 사용하여 측정하였다. Cytochrome c oxidase의 활성의 정도는 무처리구 대비로 하여 아래의 표 3 및 표 4에 나타내었다.Human-derived fibroblasts were cultured using DMEM medium containing 10% FBS and 1% antibiotics (100 units/ml penicillin and 100 ug/ml streptomycin). The fibroblasts of the 3rd and 4th passage were used for the experiment. Fibroblasts (1×10 4 cells/ml) were placed in a DMEM medium containing 1% FBS in a 96-well microplate, pre-cultured for 24 hours, and the samples obtained from Preparation Example were treated at various concentrations, and then cultured for 4 days. The cells were harvested, washed 2-3 times with PBS, 500 μl of lysis buffer was added, lysed for 1 hour, and then centrifuged at 12,000 rpm for 15 minutes to obtain a supernatant, and the protein concentration was BSA (bovine serum). albumin) was used as a standard material and quantified using Protein Assay Kit (BIO-RAD, HC, USA). The activity of cytochrome c oxidase was measured using the Cytochrome C Oxidase Assay Kit (ab239711). The degree of cytochrome c oxidase activity is shown in Tables 3 and 4 below as compared to the untreated group.

시료명Sample name 농도(ppm)Concentration (ppm) 사이도크롬 C 옥시다제 활성 증가율(%)Cydochrome C oxidase activity increase rate (%)
(무처리구 대비)(compared to the untreated group)
제조예 1Preparation Example 1 100100 15.59 % ± 0.9715.59% ± 0.97 5050 9.47 % ± 0.839.47 % ± 0.83 1010 3.02 % ± 0.443.02% ± 0.44 1One -- 제조예 2Preparation 2 5050 19.25 % ± 0.5719.25% ± 0.57 1010 10.54 % ± 0.7010.54% ± 0.70 1One 5.17 % ± 0.935.17% ± 0.93 제조예 3Preparation 3 5050 10.52 % ± 1.0110.52% ± 1.01 1010 4.85 % ± 0.674.85% ± 0.67 1One 0.55 % ± 0.270.55% ± 0.27

시료명 및 농도(ppm)Sample name and concentration (ppm) 사이도크롬 C 옥시다제활성 증가율(%) Cydochrome C oxidase activity increase rate (%)
(무처리구 대비)(compared to the untreated group)
제조예 2
(1ppm)
Preparation 2
(1ppm)
제조예 3
(10ppm)
Preparation 3
(10ppm)
14.19 % ± 1.0114.19% ± 1.01
제조예 3
(1ppm)
Preparation 3
(1ppm)
9.55 % ± 0.909.55 % ± 0.90

실험예 3 - ATP 생합성량Experimental Example 3 - ATP biosynthesis amount

인간 유래 섬유아 세포를 10% FBS 및 1% antibiotics (100 units/ml penicillin 및 100 ug/ml streptomycin)를 포함하는 DMEM 배지를 사용하여 배양한다. 3-4번째 passage의 섬유아세포를 실험에 사용하였다. 96-Well microplate에 1% FBS를 포함하는 DMEM 배지에 섬유아세포 (1×104 cells/㎖)를 넣고 24 시간 전배양하고 제조예로부터 획득한 시료를 여러 농도로 처리한 다음 4일간 배양하였다. 세포를 수확하여 PBS로 2~3회 세척하고, 500㎕의 lysis buffer를 첨가한 다음, 1시간 동안 lysis 시킨 후 12,000 rpm에서 15분간 원심분리하여 상층액을 얻었으며, 단백질 농도는 BSA (bovine serum albumin)를 표준물질로 사용하여 Protein Assay Kit (BIO-RAD, HC, USA)를 사용하여 정량 하였다. ATP 생합성량의 측정은 ViaLight Plus Cell Proliferation and Cytotoxicity BioAssay Kit를 사용하여 측정하였다. 생성된 ATP의 양은 무처리구 대비로 하여 아래의 표 5 및 6에 나타내었다.Human-derived fibroblasts were cultured using DMEM medium containing 10% FBS and 1% antibiotics (100 units/ml penicillin and 100 ug/ml streptomycin). The fibroblasts of the 3rd and 4th passage were used for the experiment. Fibroblasts (1×10 4 cells/ml) were put in a DMEM medium containing 1% FBS in a 96-well microplate, pre-cultured for 24 hours, and the samples obtained in Preparation Example were treated with various concentrations and then cultured for 4 days. The cells were harvested, washed 2-3 times with PBS, 500 μl of lysis buffer was added, lysed for 1 hour, and then centrifuged at 12,000 rpm for 15 minutes to obtain a supernatant, and the protein concentration was BSA (bovine serum). albumin) was used as a standard material and quantified using Protein Assay Kit (BIO-RAD, HC, USA). ATP biosynthesis was measured using ViaLight Plus Cell Proliferation and Cytotoxicity BioAssay Kit. The amount of generated ATP is shown in Tables 5 and 6 below in comparison with the untreated group.

농도(ppm)Concentration (ppm) ATP 증가율ATP increase rate
(무처리구 대비)(compared to the untreated group)
제조예1Preparation Example 1 100100 10.15 %10.15% 5050 5.08 %5.08% 1010 1.47 %1.47% 1One -- 제조예2Preparation Example 2 5050 23.97 %23.97% 1010 11.10 %11.10% 1One 5.38 %5.38% 제조예3Preparation 3 5050 14.96 %14.96% 1010 5.17 %5.17% 1One 2.44 %2.44%

시료명 및 농도(ppm)Sample name and concentration (ppm) ATP 증가율ATP increase rate
(무처리구 대비)(compared to the untreated group)
제조예 2
(1ppm)
Preparation 2
(1ppm)
제조예 3
(10ppm)
Preparation 3
(10ppm)
14.05 %14.05%
제조예 3
(1ppm)
Preparation 3
(1ppm)
10.75 %10.75%

처방예 1 - 크림Prescription Example 1 - Cream

상기의 제조예를 통하여 만들어진 산사나무 열매 추출물 및 이의 유효성분을 함유하는 제조예를 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 7과 같으며 본 처방예에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 샴푸, 트리트먼트, 두피 앰플, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다Prescription examples of creams among cosmetics containing the hawthorn fruit extract prepared through the above preparation examples and preparation examples containing the active ingredients thereof are shown in Table 7 below, and are not limited to this formulation example. More specifically, it can be prepared in the form of a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a shampoo, a treatment, a scalp ampoule, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder. have

제형예 1Formulation Example 1 제형예 2Formulation Example 2 제형예 3Formulation Example 3 제형예 4Formulation Example 4 함량
(중량%)
content
(weight%)
제조예1



글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠
셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 1



glycerin
betaine
Fiji 1500
allantoin
DL-Panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone - 9
hydroxyethyl
cellulose
Sodium Hyaluronate
Carboxyvinyl Polymer
triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeces -16
preservatives, fragrances, colors
Distilled water
제조예2



글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠
셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 2



glycerin
betaine
Fiji 1500
allantoin
DL-Panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone - 9
hydroxyethyl
cellulose
Sodium Hyaluronate
Carboxyvinyl Polymer
triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeces -16
preservatives, fragrances, colors
Distilled water
제조예3



글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠
셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation 3



glycerin
betaine
Fiji 1500
allantoin
DL-Panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone - 9
hydroxyethyl
cellulose
Sodium Hyaluronate
Carboxyvinyl Polymer
triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeces -16
preservatives, fragrances, colors
Distilled water
제조예 2+3
(ursolic acid, β-Sitosterol 각 1ppm)
글리세린
베타인
피이지 1500
알란토인
DL-판테놀
이.디.티.에이-2Na
벤조페논 - 9
히드록시에칠
셀룰로오스
소듐히아루로네이트
카르복시비닐폴리머
트리에탄올아민
옥틸도데칸올
옥틸도데세스 -16
방부제, 향, 색소
증류수
Preparation Example 2+3
(ursolic acid, β-Sitosterol 1ppm each)
glycerin
betaine
Fiji 1500
allantoin
DL-Panthenol
E.D.T.A-2Na
Benzophenone - 9
hydroxyethyl
cellulose
Sodium Hyaluronate
Carboxyvinyl Polymer
triethanolamine
Octyldodecanol
Octyldodeces -16
preservatives, fragrances, colors
Distilled water
1



3.0
10.0
5.0
2.0
0.1
0.3
0.02
0.04

0.1
8.0
0.2
0.18
6.0
미량
잔량
One



3.0
10.0
5.0
2.0
0.1
0.3
0.02
0.04

0.1
8.0
0.2
0.18
6.0
a very small amount
remaining amount
합 계Sum 100100

실시예 1: 주름 개선 효과 Example 1 : Wrinkle improvement effect

산사나무 열매 추출물과 이의 유효성분을 함유하는 제형예 1 ~ 4와 활성성분을 정제수로 대체한 비교예를 사용해 평가하였다. 100명의 30~40세 여성을 무작위로 5개군으로 나누어 제형예 1~4, 비교제형예 1의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 양볼을 중심으로 1개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 피부 탄력 개선 효과를 Cutometer(C+K, 독일)를 이용하여 탄력 증진 유무를 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 8에 나타낸 바와 같다Formulation Examples 1 to 4 containing the hawthorn fruit extract and its active ingredient and Comparative Examples in which the active ingredient was replaced with purified water were evaluated. 100 women aged 30-40 years were randomly divided into 5 groups, and the creams of Formulation Examples 1 to 4 and Comparative Formulation Example 1 were washed twice every morning and evening, and an appropriate amount of the cream was applied continuously for 1 month, centered on both cheeks. The skin elasticity improvement effect of each subject was evaluated using a Cutometer (C+K, Germany) to evaluate the elasticity improvement effect. The experimental results are as shown in Table 8 below.

구분division 사용전before use 사용 2주2 weeks of use 사용 4주 후4 weeks after use 제형예 1Formulation Example 1 20.4420.44 24.3524.35 25.1325.13 제형예 2Formulation Example 2 21.3721.37 25.0225.02 27.7927.79 제형예 3Formulation Example 3 19.1119.11 20.4120.41 21.5421.54 제형예 4Formulation Example 4 19.5719.57 24.7524.75 30.0730.07 비교제형예 1Comparative Formulation Example 1 22.0522.05 23.4923.49 22.9822.98

Claims (7)

산사나무(Crataegus Pinnatifida) 열매 추출물 또는 이의 분리화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.Hawthorn ( Crataegus Pinnatifida ) A cosmetic composition for skin wrinkle improvement comprising an extract or an isolated compound thereof as an active ingredient. 제1항에 있어서, 상기 분리화합물은 우르솔릭산 또는 베타 시토스테롤인 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 1, wherein the separation compound is ursolic acid or beta-sitosterol. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 ATP 생합성 촉진 효과 또는 사이토크롬 C 옥시다제 활성 촉진 효과를 갖는, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 1, wherein the cosmetic composition has an ATP biosynthesis promoting effect or cytochrome C oxidase activity promoting effect. 제2항에 있어서, 상기 우르솔릭산은 0.0001 ~ 0.01 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 2, wherein the ursolic acid is contained in an amount of 0.0001 to 0.01 wt%. 제2항에 있어서, 상기 베타 시토스테롤을 0.0001 ~ 0.01 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 2, wherein the beta-sitosterol is contained in an amount of 0.0001 to 0.01 wt%. 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 우르솔릭산과 베타 시토스테롤을 1:1 내지 1:10의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.The cosmetic composition for improving skin wrinkles according to claim 2, wherein the cosmetic composition contains ursolic acid and beta-sitosterol in a weight ratio of 1:1 to 1:10. 제1항에 있어서, 상기 화장료는 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
The group of claim 1, wherein the cosmetic is a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray. A cosmetic composition for improving skin wrinkles, characterized in that it has a formulation selected from
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