KR20220009446A - 비-소세포 폐암의 치료를 위한 방법 및 조성물 - Google Patents

비-소세포 폐암의 치료를 위한 방법 및 조성물 Download PDF

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존 브이. 헤이막
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Abstract

본 발명의 측면은, 환자에서 EGFR-돌연변이 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료 방법으로서, CD70 표적화 분자를 상기 환자에게 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면은, 환자에서 상피-to-중간엽 전이(EMT) 양성 NSCLC의 치료 방법으로서, CD70 표적화 분자를 환자에게 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다.

Description

비-소세포 폐암의 치료를 위한 방법 및 조성물
발명의 배경
본 출원은 2019년 5월 15일자로 출원된 미국 가특허출원 제62/848,123호에 대해 우선권을 주장하며, 상기 가특허출원의 전문은 인용에 의해 본원에 포함된다.
본 발명은 국립 보건원에 의해 수여된 승인 번호 CA190628 하의 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명에 대한 특정 권리를 가지고 있다.
1. 기술분야
본 발명은 분자 생물학 및 의학 분야에 관한 것이다.
2. 배경
비-소세포 폐암종(NSCLC)은 소세포 폐암종(SCLC) 이외의 모든 유형의 상피성 폐암이다. NSCLC는 모든 폐암의 약 85%를 차지한다. 클래스로서, NSCLC는 소세포 암종에 비해 화학요법에 대해 상대적으로 둔감하다. 수술 전(네오애주번트 화학요법) 및 수술 후(애주번트 화학요법) 둘 다에 화학요법이 점점 더 많이 사용되어 왔지만, 가능한 경우 치료 목적으로 외과적 절제술로 주로 치료된다.
EGFR 돌연변이 NSCLC 환자는 초기에 EGFR 표적 요법에 대해 반응성이다. 그러나, 내성 질환이 필연적으로 나타나며, 내성 사례의 거의 절반에서 종양은 T790M과 같은 2차 EGFR 돌연변이가 없고, 2세대 및 3세대 EGFR 티로신 키나제 억제제(TKI)에 대해 불응성이다. 추가의 치료적 접근을 당업계에서 필요로 한다.
본 발명의 측면은 환자에서의 EGFR-돌연변이 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료 방법으로서, CD70 표적화 분자를 환자에게 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 측면은 환자에서의 상피-to-중간엽 전이(EMT) 양성 NSCLC의 치료 방법으로서, CD70 표적화 분자를 환자에게 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 CD70 표적화 분자 및 하나 이상의 추가의 치료제(들)를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
일부 양태에서, 환자는 EGFR-돌연변이 NSCLC를 갖는 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, NSCLC는 폐 선암종을 포함한다. 일부 양태에서, 환자는 비흡연자이다. 일부 양태에서, 환자는 인간이다.
용어 EGFR 돌연변이 암은 EGFR(표피 성장 인자 수용체)의 발현 또는 활성이 변경된 암을 나타낸다. 돌연변이는 EGFR의 암호화 영역에 있을 수 있고, 내인성 EGFR의 발현 수준 또는 생성된 단백질의 활성 수준에 영향을 미칠 수 있다. 돌연변이는 유전자의 비-암호화 부분, 예를 들면, 프로모터 영역, 3' 또는 5' UTR 또는 인트론 영역에 있을 수도 있다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 기능 획득 돌연변이이다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 기능 상실이다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 활성화 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, 활성화 돌연변이는 L858R을 포함한다. 일부 양태에서, 활성화 돌연변이는 엑손 19의 결손을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 상기 다른 돌연변이들 대신에 또는 이외에 다음 돌연변이들 중 하나 이상을 포함한다: G719S(c.2155G>A), G719C(c.2155G>T), G719A(c.2156G>C), S720F(c.2159C>T), 엑손 19 결손 또는 부분 결손, D761Y(c.2281G>T), D770_N771(insNPG), D770_N771(insNPG), D770_N771(insG), V765A(c.2294T>C), T783A(c.2347A>G), S7681I(c.2303G>T), T790M(c.2369C>T), V769L(c.2305), N771T(c.2312A>C), L858R(C.2573T>G), L861Q(c.2582T>A), L861R(c.2582T>G). 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 클래스 I, 클래스 II 또는 클래스 III EGFR 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 delE746-A750, delL747-P753insS, delL747-T751, delL747-A750insP, p.L747_S752del, K754insANKG, delT751_I759insN, delL747_A750insP, delE746_T751insV, delT751_I759insS, delE746_T751insI, delL747_A755insSKG, delE746_T751insVA, delL747_T751insP, delE746_S752insV 및 delE746_A750insAP 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 delE746-A750, delL747-P753insS, delL747-T751, delL747-A750insP, p.L747_S752del, K754insANKG, delT751_I759insN, delL747_A750insP, delE746_T751insV, delT751_I759insS, delE746_T751insI, delL747_A755insSKG, delE746_T751insVA, delL747_T751insP, delE746_S752insV 및 delE746_A750insAP로부터 선택되는 적어도 하나의 클래스 I 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 엑손 19의 인-프레임 결손 또는 부분 결손을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 G719S(c.2155G>A), G719C(c.2155G>T), G719A(c.2156G>C), S720F(c.2159C>T), D761Y(c.2281G>T), V765A(c.2294T>C), T783A(c.2347A>G), S7681I(c.2303G>T), T790M(c.2369C>T), V769L(c.2305G>T), N771T(c.2312A>C), L858R(C.2573T>G), L861Q(c.2582T>A) 및 L861R(c.2582T>G) 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 G719S(c.2155G>A), G719C(c.2155G>T), G719A(c.2156G>C), S720F(c.2159C>T), D761Y(c.2281G>T), V765A(c.2294T>C), T783A(c.2347A>G), S7681I(c.2303G>T), T790M(c.2369C>T), V769L(c.2305G>T), N771T(c.2312A>C), L858R(C.2573T>G), L861Q(c.2582T>A) 및 L861R(c.2582T>G)로부터 선택되는 적어도 하나의 클래스 II 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 단일 뉴클레오티드 치환을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 D770_N771(insNPG), D770_N771(insSVQ), D770_N771(insG) 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 D770_N771(insNPG), D770_N771(insSVQ), D770_N771(insG)로부터 선택되는 적어도 하나의 클래스 III 돌연변이를 포함한다. 일부 양태에서, EGFR 돌연변이는 엑손 20의 인-프레임 중복 또는 삽입을 포함한다. 이는 상기 돌연변이들 중 적어도 또는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)개가 측정될 수 있거나, 공지될 수 있거나 또는 본원에 기재된 양태에서 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 특정 양태에서, 상기 돌연변이들 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 또는 그 이상이 양태에서 제외될 수 있다.
일부 양태에서, 환자는 상기 환자의 암 세포에서의 CD70의 발현에 대해 시험되지 않았다. 일부 양태에서, 환자는 CD70-발현 암 세포를 갖는 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, 환자는 NSCLC에 대해 이전에 치료를 받은 적이 있다. 일부 양태에서, 환자는 이전의 치료에 대한 내성을 획득한 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, 이전의 치료는 EGFR 티로신 키나제 억제제(TKI) 요법을 포함하고, 상기 요법은 하나 이상의 EGFR TKI를 포함한다. 일부 양태에서, 이전의 치료는 단일 제제 EGFR TKI 요법을 포함한다. 일부 양태에서, 이전의 치료는 적어도 2종의 EGFR TKI의 병용을 포함한다. 일부 양태에서, 환자는 적어도 2종의 EGFR TKI에 대해 내성인 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, 연속적인 EGFR TKI 요법을 받는 동안 전신 질환 진행을 가진 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, EGFR TKI 요법은 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR TKI 요법은 에를로티닙, 제피티닙 및 오시머티닙 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR TKI 요법은 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 적어도 2종을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR TKI 요법은 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 적어도 3종을 포함한다. 일부 양태에서, EGFR TKI 요법은 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 적어도 4종을 포함한다. 이들 중 1종 이상이 EGFR TKI 요법으로서 배제될 수 있다는 것이 구체적으로 고려된다.
일부 양태에서, 본 발명의 방법은 추가의 요법의 투여를 추가로 포함하거나, 본 발명의 조성물은 추가의 치료제를 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 작용제는 화학요법, 방사선, 수술, TKI 요법 또는 면역요법을 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 두르발루맙, 아테졸리주맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 네시투무맙 및 베바시주맙 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 카보플라틴, 페메트렉세드, 납-파클리탁셀, 포토프린, 시스플라틴, 도세탁셀, 젬시타빈, 파클리탁셀 및 비노렐빈 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 알렉티닙, 로를라티닙 및 세리티닙 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙, 브리가티닙 및 이들의 조합 중 1종 이상을 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 오시머티닙을 포함한다. 일부 양태에서, 본 발명의 방법은 애주번트 및/또는 네오-애주번트 요법의 투여를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 추가의 요법은 CD70 표적화 요법에 접합되거나 링킹될 수 있다. 일부 양태에서, 링키지(linakge)는 화학적 링커를 통한 것이다. 일부 양태에서, 링키지는 펩티드 결합(예를 들면, CD70 표적화제 및 추가의 치료제를 포함하는 융합 단백질)을 통한 것이다.
일부 양태에서, 환자는 ALK 돌연변이인 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, 환자는 ALK 돌연변이가 아닌 것으로 결정되었다.
일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 항-CD70 항체 또는 이의 CD70-결합 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 인간화되었거나 키메라이다. 일부 양태에서, 항체는 분자에 접합된다. 일부 양태에서, 항체는 독성 분자에 접합된다. 일부 양태에서, 독성 분자는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 피롤로벤조디아제핀(PBD), 듀오카마이신 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 CD70 항체로부터의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 CD70 항체의 것일 수 있거나 CD70 항체로부터 유래될 수 있다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 단일 쇄 가변 단편(scFV)을 포함한다. scFv는 초가변(hypervariable) 영역, 예를 들면, 항-CD70 항체로부터의 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 항-CD70 항체로부터의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 항체는 쿠사투주맙 또는 보세투주맙을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 쿠사투주맙 또는 보세투주맙의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 쿠사투주맙의 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 쿠사투주맙의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 보세투주맙의 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 보세투주맙의 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명의 방법 및 조성물에서 추가의 요법 또는 제제는 독성 분자에 링킹된 2차 항체를 포함한다. 예를 들면, 병용 요법은, 독성 분자에 접합된 CD70 표적화 항체에 결합하는 2차 항체를 포함하는 접합체를 포함하는 제제와 병용된 CD70 표적화 항체를 포함할 수 있다. 따라서, 이러한 제제들의 병용은 2차 항체를 통해 독성 분자에 링킹된 항체를 전달한다. 일부 양태에서, 2차 항체 및 독성 분자는 절단가능한 링커를 통해 링킹된다.
일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE), 키메라 항원 수용체(CAR), CAR을 포함하는 T 세포, 또는 삼중 특이적 자연 살해 세포 인게이저 요법(TriNKET)을 포함한다. 일부 양태에서, BiTE, CAR 또는 TriNKET는 쿠사투주맙 또는 보세투주맙의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역으로부터 유래된다. 일부 양태에서, BiTE, CAR 또는 TriNKET는 쿠사투주맙 또는 보세투주맙의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및/또는 쿠사투주맙 또는 보세투주맙의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 쿠사투주맙-MMAE, 보세투주맙-MMAE 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 SGN-75, SGN-CD70A, AMG 172 및/또는 ARGX-110을 포함한다. SGN-75는, CD70-발현 종양 세포 내로 내재화되면 세포 살해제(cell-killing agent)를 방출하는 CD70-차단 IgG1 항체-약물 접합체(ADC)이다. SGN-CD70A는 세포독성제가 갖춰진 CD70-차단 항체를 포함한다. SGN-CD70A는 CD70-유도 항체에 대해 안정적으로 링킹된 매우 강력한 세포독성 피롤로벤조디아제핀 이량체를 포함한다. AMG 172는 CD70-발현 종양 세포 내로의 결합 및 내재화가 중기 정지를 유도한 후, 세포자멸 및 궁극적으로는 종양 세포 사멸을 유도하는 IgG1 ADC이다. ARGX-110은, 당 조작된(glycoengineered) Fc 도메인이 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 식세포 작용(ADCP) 성질 및 향상된 항체 의존성 세포 독성(ADCC)을 통해 CD70의 발현 종양 세포의 표적화된 사멸을 매개하는 CD70-차단 IgG1 모노클론 항체(mAb)를 포함한다. 일부 양태에서, 환자의 생물학적 샘플은 하나 이상의 EMT 마커에 대해 양성인 것으로 결정되었다. 일부 양태에서, 하나 이상의 EMT 마커는 상피 마커의 감소 및/또는 중간엽 마커의 증가를 포함한다. 일부 양태에서, EMT 마커는 CDH1, VIM, AXL, ZEB1 및 ZEB2 중 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 모두를 포함한다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 종양 세포 및/또는 종양 관련 세포를 포함한다.
본 발명의 방법 및 조성물에 유용한 CD70 표적화 분자는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들면, CD70 CAR이 개발되어 있으며, 본 발명의 양태에서 사용될 수 있다. 따라서, 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 CTX130을 포함한다. CTX130은 CRISPR Therapeutics에서 제조된, CD70을 표적으로 하는 동종 CRISPR/Cas9 유전자-편집된 CAR-T 세포 요법이다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 ALLO-316을 포함한다. ALLO-316은 Allogene이 개발 중인 항-CD70 AlloCAR T 세포 요법이다. 추가의 양태는 문헌[Wang, QJ. et al., Clin Cancer Res. 2017 May 1;23(9):2267-2276]에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 인용에 의해 본원에 포함된다. 다른 적응증에 유용한 것으로 기재된 CD70 표적화 분자가 본 발명의 방법 및 조성물의 양태에서 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 CD70 리간드, 예를 들면, CD27을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 끝이 절단된(truncated) CD27을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 CAR 분자, 예를 들면 41BB 및 CD3-제타의 막횡단 영역 및 세포내 신호전달 영역에 융합된 CD27 폴리펩티드인 CD27 CAR을 포함한다. CD27 폴리펩티드는 CD70과 상호 작용하고 이에 결합하는, 전장 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 끝이 절단된 버전일 수 있다. 본 발명의 CAR은 T 세포 또는 NK 세포 상에서 발현될 수 있다.
일부 양태에서, CD70 표적화 분자는 BiTE, CAR 또는 TriNKET를 포함하는 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 세포는 줄기 세포, 전구 세포, 면역 세포 또는 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 세포는 조혈 줄기 세포 또는 전구 세포, T 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC)로부터 분화된 세포 또는 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 유래된 세포를 포함한다. 일부 양태에서, 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 단리되거나 유래된다. 일부 양태에서, T 세포는 세포독성 T 림프구(CTL), CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 불변 NK T(iNKT) 세포, 감마-델타 T 세포, NKT 세포 또는 조절 T 세포를 포함한다.
일부 양태에서, 생물학적 샘플은 생검을 포함한다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 미세 니들 흡인, 코어 니들 생검, 진공 보조 생검, 절개 생검, 절제 생검, 펀치 생검, 셰이브 생검 또는 피부 생검과 같은 방법에 의해 얻어지는 것이다. 특정 양태에서, 샘플은 이전에 언급된 임의의 생검 방법에 의해 폐 조직의 생검으로부터 얻어진다. 다른 양태에서, 샘플은, 비-암성 또는 암성 조직, 및 혈청, 담낭, 점막, 피부, 심장, 폐, 유방, 췌장, 혈액, 간, 근육, 신장, 평활근, 방광, 결장, 장, 뇌, 전립선, 식도 또는 갑상선 조직의 비-암성 또는 암성 조직을 포함하지만 이로 제한되지 않는 본원에 제공되는 임의의 조직으로부터 얻어질 수 있다. 다르게는, 샘플은 혈액, 땀, 모낭, 협측 조직, 눈물, 월경, 대변 또는 타액을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 다른 공급원으로부터 얻어질 수 있다. 본 발명의 방법의 특정 측면에서, 의사, 간호사 또는 의료 기술자와 같은 모든 의료 전문가는 시험을 위한 생물학적 샘플을 얻을 수 있다. 또한, 의료 전문가의 도움 없이 생물학적 샘플이 얻어질 수 있다. 샘플은 조직, 세포, 또는 대상체의 세포로부터의 또는 대상체의 세포에서 유래한 생물학적 물질을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 생물학적 샘플은 세포 또는 조직의 불균일한 또는 균질한 군집일 수 있다. 생물학적 샘플은 본원에 설명된 분석 방법에 대해 적합한 샘플을 제공할 수 있는 당업계에 공지된 모든 방법을 사용하여 얻어질 수 있다. 샘플은 피부 또는 자궁경부의 스크랩핑, 뺨의 면봉 채취(swabbing), 타액 수집, 소변 수집, 대변 수집, 월경, 눈물 또는 정액 수집을 포함하지만 이에 제한되지 않는 비침습적 방법에 의해 얻어질 수 있다. 샘플은 당업계에 공지된 방법에 의해 얻어질 수 있다. 특정 양태에서, 샘플은 생검에 의해 얻어진다.
본원에서 사용되는 용어 "또는" 및 "및/또는"은 서로 조합하거나 배타적인 다수의 구성 요소를 설명하는 데 사용된다. 예를 들면, "x, y 및/또는 z"는 "x" 단독, "y" 단독, "z" 단독, "x, y 및 z", "(x 및 y) 또는 z", "x 또는 (y 및 z)" 또는 "x 또는 y 또는 z"를 나타낼 수 있다. x, y 또는 z는 양태들로부터 구체적으로 제외될 수 있는 것으로 구체적으로 생각된다.
본원 명세서 전반에 걸쳐, 용어 "약"은, 값을 측정하기 위해 사용되는 장치 또는 방법에 대한 오차의 표준 편차를 포함하는 값을 나타내기 위한 세포 생물학 분야에서의 평범하고 일반적인 의미에 따라 사용된다.
"포함하는(including)", "함유하는" 또는 "를 특징으로 하는"과 동의어인 용어 "포함하는(comprising)"은 포괄적이거나 개방형이며, 추가의 인용되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 어구 "~로 구성되는"은 지정되지 않은 요소, 단계 또는 성분을 제외한다. 어구 "~로 본질적으로 구성되는"은 기술되는 주제의 범위를 지정된 재료 또는 단계, 및 기본적이고 신규한 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것으로 제한한다. 용어 "포함하는"과 관련하여 설명되는 양태는 용어 "~로 구성되는" 또는 "~로 본질적으로 구성되는"의 맥락으로 구현될 수도 있는 것으로 생각된다.
본 발명의 일 양태와 관련하여 논의되는 임의의 제한이 본 발명의 임의의 다른 양태에 적용될 수 있는 것으로 구체적으로 생각된다. 또한, 본 발명의 임의의 조성물은 본 발명의 임의의 방법에 사용될 수 있고, 본 발명의 임의의 방법은 본 발명의 임의의 조성물을 생성하거나 사용하기 위해 사용될 수 있다. 실시예에 언급된 양태들의 측면도 상이한 실시예의 다른 곳에서, 또는 본원 명세서의 다른 곳, 예를 들면, 발명의 내용, 발명을 실시하기 위한 구체적인 설명, 청구범위 및 도면 범례의 시그니처에서 논의되는 양태들의 맥락에서 구현될 수 있는 실시예이다.
본 발명의 다른 목적, 특징적인 구성 및 이점은 이하의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 특정 양태는, 본 발명의 사상 및 범위 내에서 다양한 변경 및 개질이 상기 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백해질 것이기 때문에, 본 발명의 바람직한 양태를 나타내는 동시에 예시의 목적으로만 제공되는 것으로 이해되어야 한다.
이하의 도면들은 본원 명세서의 일부를 형성하며, 본 발명의 특정 측면을 추가로 설명하기 위해 포함된다. 본 발명은 이러한 도면들 중 하나 이상을 본원에 제시된 특정 양태의 상세한 설명과 함께 참조함으로써 보다 더 잘 이해될 수 있다.
도 1. HCC827 및 HCC4006(둘 다 EGFR 돌연변이임) 세포는 EGFR TKI 내성(ER) 변이체에 비해 에를로티닙 및 오시머티닙을 포함하는 EGFR TKI에 대해 민감성이다.
도 2A 내지 H. EGFR TKI 내성은 전사체 변경, 상피-to-중간엽 전이(EMT) 및 CD70의 상향 조절과 관련이 있다. (A) 본 발명자들은 모(parental) HCC827 및 HCC4006 세포와 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 세포 사이의 RNA seq에 의한 유전자 발현을 비교했다. (B) 유전자 세트 풍부화 분석은 모 세포에 비해 EGFR TKI 내성(ER) 세포에서 증가된 EMT 시그니처를 보여준다. ER 세포는 낮은 수준의 상피 마커 CDH1(C)을 발현하고, 중간엽 마커 VIM, AXL, ZEB1 및 ZEB2(D 내지 G)의 발현을 증가시켰다. (H) EGFR TKI 내성 세포는 CD70의 발현을 유의하게 상향 조절했다.
도 3. CD70의 단백질 수준은 EGFR TKI 내성 NSCLC 세포의 표면에서 상승한다. 유세포 분석은 HCC827 모 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성 세포 HCC827 ER1, ER3 및 ER6에서 증가된 CD70의 단백질 수준을 나타낸다.
도 4A 내지 D. EMT의 유도는 EGFR TKI 내성을 유도하기에 충분하다. (A) HCC827(EGFR TKI 민감성) 세포에서 ZEB1의 유도된 발현은, E-카드헤린의 손실 및 N-카드헤린, Axl 및 비멘틴의 증가된 발현에 의해 입증되는 바와 같이, 중간엽 표현형으로의 전환을 초래했다. ZEB1 발현은 HCC827 세포가, EGFR TKI인 에를로티닙, 오시머티닙 및 아파티닙(B 내지 D)에 대해 내성을 갖게 했다.
도 5A 및 B. 인간 NSCLC에서, EMT는 CD70의 높은 발현과 관련이 있다. CD70의 발현은 NSCLC 세포주(A) 및 TCGA의 임상 시험편(B)에서의 EMT 유전자 발현 시그니처와 유의하게 연관된다.
도 6A 내지 D. EGFR TKI 내성은 상피-to-중간엽 전이(EMT)와 관련이 있다. (A) 본 발명자들은 모 HCC827 및 HCC4006 세포와 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 세포 사이의 RNA seq에 의한 유전자 발현을 비교했다. 유전자 세트 풍부화 분석은 모 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성(ER) 세포에서 EMT 시그니처를 나타낸다. ER 세포는 낮은 수준의 상피 마커 CDH1을 발현했고, 중간엽 마커 VIM, AXL, ZEB1 및 ZEB2의 발현을 증가시켰다(B). (C 및 D) 에를로티닙 내성(ER) 및 오시머티닙 내성(OR) 세포를 포함하는 EGFR TKI 내성 세포는, 역상 단백질 어레이에 의해 측정되는 바와 같이 EMT와 일치하는 프로테옴 시그니처를 보여준다.
도 7A 내지 F. CD70은 T790M 음성 EGFR TKI 내성 세포에서 상승한다. (A) RNAseq 분석은 모 EGFR TKI 민감성 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성 세포에서 CD70의 과발현을 나타냈다. (B 내지 F) CD70의 세포 표면 발현은 유세포 분석에 의해 평가되었다. CD70의 발현은, 모 EGFR TKI 민감성 세포주(HCC4006, HCC827, H1975)와 비교하여 에를로티닙 내성(ER) 및 오시머티닙 내성(OR) 세포주를 포함하는 EGFR TKI 내성 세포에서 상승했다. CD70의 발현은 EGFR TKI에 대한 획득 내성이 2차 EGFR 돌연변이(T790M) 또는 MET 증폭에 의해 매개되는 세포에서 최소였다.
도 8. CD70은 EGFR TKI 내성인 유전자 조작 마우스 모델(GEMM)에서 상승한다. 획득한 EGFR 독립적 NSCLC의 마우스 모델을 발생시키기 위해, 독시사이클린(DOX)을 사용하여 DOX 유도성 L858R EGFR 마우스 모델에서 EGFR 돌연변이 NSCLC 종양을 유도했다. CT 이미징에 의해 종양이 보이면 DOX를 동물의 서브세트에서 제거했다. 종양 퇴행 기간 이후, 내성 종양이 다시 자라기 시작했다. 동물을 안락사시키고, CD70에 대한 면역조직화학적 염색을 위해 종양을 수집했다. CD70의 발현은 EGFR 독립성을 획득한 종양에서 증가했다.
도 9. CD70은 EGFR TKI 내성 후 NSCLC 임상 시험편에서 상승한다. CD70의 면역조직화학적 염색은 EGFR TKI 치료 나이브(naive) EGFR 돌연변이 NSCLC 종양에서 최소한의 CD70의 발현을 나타냈다. 그러나, CD70의 발현은 EGFR TKI 치료에 대한 치료 내성 후, EGFR 돌연변이 종양에서 현저하게 상승했다.
도 10A 내지 C. EMT의 유도는 EGFR TKI 내성을 유도하기에 충분하다. (A) HCC827(EGFR TKI 민감성) 세포에서 ZEB1의 유도된 발현은, E-카드헤린의 손실 및 N-카드헤린, Axl 및 비멘틴의 증가된 발현에 의해 입증되는 바와 같이, 중간엽 표현형으로의 전환을 초래했다. (B) ZEB1 발현은 HCC827 세포가, EGFR TKI인 에를로티닙, 오시머티닙 및 아파티닙에 내성을 갖게 했다. (C) ZEB1 발현은 CD70 mRNA 발현 및 CD70의 세포 표면 발현에서 상당한 증가를 유도한다.
도 11A 및 B. 인간 NSCLC 임상 시험편 및 NSCLC 세포주에서, EMT는 CD70의 높은 발현과 관련이 있다. CD70의 발현은 TCGA(A) 및 NSCLC 세포주(B)의 NSCLC 임상 시험편에서 EMT 유전자 발현 시그니처 및 ZEB1과 유의하게 연관된다.
도 12. CD70의 자극은 EGFR TKI 내성 세포의 신호 전달 경로를 활성화한다. HCC4006 오시머티닙 내성(OR) 세포를 CD70의 결합 파트너인 가용성 CD27로 처리하고, 다운스트림 신호 전달 경로에 대한 효과를 웨스턴 블롯팅으로 평가했다. CD70 활성화는 Akt 및 ERK의 인산화를 초래했다.
도 13A 내지 C. CD70의 녹다운은 EGFR TKI 내성 세포의 성장을 기능손상시킨다. CD70의 siRNA 매개 녹다운(A)은 H1975 OR5 세포(B)의 기능손상된 생존을 초래했다. HCC4006 OR 세포(C)에서도 유사한 결과가 얻어졌다.
도 14A 내지 C. CD70 항체-약물 접합체(ADC)는 시험관내에서 CD70+ EGFR TKI 내성 세포를 표적으로 한다. CD70 ADC인 쿠자투주맙-MMAE 및 보세투주맙-MMAE는 H1975 OR5 및 H1975 OR16을 포함하는 H1975 오시머티닙 내성(OR) 세포에 대한 항종양 세포 활성을 입증했다. (A)는 다양한 세포주에서 % CD70 양성 세포를 나타내고, 선 그래프는 (B) 쿠자투주맙-MMAE 및 (C) 보세투주맙-MMAE가 첨가된 세포주에서의 상대적인 세포 생존율을 나타낸다.
도 15. CD70 ADC는 시험관내에서 EGFR TKI 내성 세포의 오시머티닙(OSI) 활성을 향상시킨다. 막대 그래프는 OSI와 ADC 병용의 상대적인 세포 생존율을 보여준다.
도 16. CD70 ADC는 시험관내에서 EGFR TKI 내성 세포에 대한 활성을 갖는다. CD70 ADC인 쿠자투주맙-MMAE 및 보세투주맙-MMAE는 다음을 포함하는 H1975 오시머티닙 내성(OR) 세포에 대한 항종양 세포 활성을 입증했다.
EGFR 돌연변이 NSCLC 환자는 초기에 EGFR 티로신 키나제 억제제(TKI)에 반응하지만, 내성 질환은 필연적으로 나타난다. 본 발명은 NSCLC에 대한 신규한 치료 접근법을 제공한다. 추가의 양태들이 이하에 설명된다.
I. 정의
용어 "단백질", "폴리펩티드" 및 "펩티드"는 유전자 생성물을 나타내는 경우 본원 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다.
"상동성" 또는 "동일성"은 2개의 펩티드 사이 또는 2개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성을 나타낸다. 동일성은 비교 목적으로 정렬될 수 있는 각각의 서열에서의 위치를 비교함으로써 결정될 수 있다. 비교된 서열의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산에 의해 점유될 때, 분자들은 해당 위치에서 서열 동일성을 공유한다. 서열들 간의 동일성 정도는 서열들이 공유하는 일치하는 위치 또는 상동 위치의 수의 함수이다. "비관련된" 또는 "비-상동성" 서열은 본원 명세서의 서열들 중 하나와 60% 미만의 동일성, 50% 미만의 동일성, 40% 미만의 동일성, 30% 미만의 동일성 또는 25% 미만의 동일성을 공유한다.
본원에서 사용되는 용어 "아미노 부분", "N-말단", "아미노 말단" 등은 폴리펩티드 영역들의 순서를 나타내는 데 사용된다. 또한, 어떤 것이 영역에 대해 N-말단인 경우, 이는 반드시 전체 폴리펩티드의 말단(terminus)(또는 종말(end))에 있지는 않고, 상기 영역 또는 도메인의 N-말단에만 있다. 유사하게는, 본원에서 사용되는 용어 "카복시 부분", "C-말단", "카복시 말단" 등은 폴리펩티드의 영역들의 순서를 나타내기 위해 사용되며, 어떤 것이 영역에 대해 C-말단인 경우, 반드시 전체 폴리펩티드의 말단(또는 종말)에 있지는 않고, 상기 영역 또는 도메인의 C 말단에만 있다.
용어 "폴리뉴클레오티드", "핵산" 및 "올리고뉴클레오티드"는 상호 교환적으로 사용되며, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 또는 이들의 유사체와 같은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체 형태를 나타낸다. 폴리뉴클레오티드는 임의의 3차원 구조를 가질 수 있으며, 공지되었거나 공지되지 않은 모든 기능을 수행할 수 있다. 다음은 폴리뉴클레오티드의 비제한적인 예이다: 유전자 또는 유전자 단편(예를 들면, 프로브, 프라이머, EST 또는 SAGE 태그), 엑손, 인트론, 메신저 RNA(mRNA), 전달 RNA, 리보솜 RNA, 리보자임, cDNA, dsRNA, siRNA, miRNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지형 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브 및 프라이머. 폴리뉴클레오티드는 개질된 뉴클레오티드, 예를 들면, 메틸화 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 개질은 폴리뉴클레오티드의 어셈블리 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열은 비-뉴클레오티드 성분에 의해 중단될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예를 들면 표지화 성분과의 접합에 의해 중합 후에 추가로 개질될 수 있다. 상기 용어는 또한 이중 스트랜드 및 단일 스트랜드 분자 둘 다를 나타낸다. 달리 명시되거나 요구되지 않는 한, 폴리뉴클레오티드인 본 발명의 임의의 양태는 이중 스트랜드 형태, 및 상기 이중 스트랜드 형태를 구성하는 것으로 알려져 있거나 구성할 것으로 예측되는 2개의 상보적 단일 스트랜드 형태 각각 둘 다를 포함한다.
세포 또는 세포의 배양물은, 본원에서 사용되는 혈청, 신호전달 억제제, 동물 성분 또는 영양 세포, 외인성 유전 요소 또는 벡터 요소와 같은 특정 시약 또는 요소를 10% 미만으로 갖는 경우, 상기 요소(들)이 "실질적으로 없는" 것이며, 상기 요소(들)을 1% 미만으로 갖는 경우, 특정 시약 또는 요소가 "본질적으로 없는" 것이다. 그러나, 전체 세포 군집의 0.5% 미만 또는 0.1% 미만이 외인성 유전 요소 또는 벡터 요소를 포함하는 세포 군집이 더욱 더 바람직하다.
세포 또는 세포의 배양물은, 배양물, 기질 또는 배지 각각이, 혈청, 신호전달 억제제, 동물 성분 또는 영양 세포와 같은 특정 시약 또는 요소를, 당업자에게 공지된 통상적인 검출 방법을 사용하여 검출 가능한 수준보다 낮은 수준으로 갖는 경우, 또는 상기 제제가 배양물, 기질 또는 배지에 외부에서 첨가되지 않은 경우, 상기 시약 또는 요소가 "본질적으로 없는" 것이다. 무혈청 배지는 본질적으로 혈청이 없을 수 있다.
특정 단백질을 "암호화"하는 "유전자", "폴리뉴클레오티드", "암호화 영역", "서열", "분절", "단편" 또는 "이식 유전자"는 전사되고, 적절한 조절 서열의 제어 하에 놓일 때 시험관내 또는 생체내에서 임의로 유전자 생성물, 예를 들면 폴리펩티드로 번역된다. 암호화 영역은 cDNA, 게놈 DNA 또는 RNA 형태로 존재할 수 있다. DNA 형태로 존재하는 경우, 핵산 분자는 단일 스트랜드(즉, 센스 스트랜드) 또는 이중 스트랜드일 수 있다. 암호화 영역의 경계는 5'(아미노) 말단의 개시 코돈 및 3'(카복시) 말단의 번역 정지 코돈에 의해 결정된다. 유전자는 원핵생물 또는 진핵생물 mRNA로부터의 cDNA, 원핵생물 또는 진핵생물 DNA로부터의 게놈 DNA 서열, 및 합성 DNA 서열을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 전사 종결 서열은 일반적으로 유전자 서열의 3'에 위치할 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "세포"는 당업계의 가장 넓은 의미로 사용되며, 다세포 유기체의 조직을 구성하는 단위이고, 외부로부터 단리시키는 막 구조에 의해 둘러싸여 있고, 자기 복제 능력이 있고, 유전 정보 및 이를 발현하는 메커니즘을 갖고 있는 생체를 나타낸다. 본원 명세서에서 사용되는 세포는 자연 발생 세포 또는 인공적으로 개질된 세포(예를 들면, 융합 세포, 유전적으로 개질된 세포 등)일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료", "치료하는" 등은 원하는 약리학적 효과 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 나타낸다. 상기 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 점에서 예방적일 수 있고/있거나, 질환 및/또는 상기 질환에 기인할 수 있는 부작용에 대한 부분적인 또는 완전한 치유의 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용되는 "치료"는 포유동물, 예를 들면 인간의 질환의 모든 치료를 포함하며, (a) 질환에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 질환이 발병하지 않은 것으로 진단된 대상체에서 질환이 발생하는 것을 예방함; (b) 질환을 억제함, 즉 질환의 발현을 저지함; 및 (c) 질환을 경감시킴, 즉 질환의 퇴행을 유발함을 포함한다.
일부 양태에서, 본 발명의 방법은 종양의 크기 및/또는 세포 수를 감소시키는 데 유용하다. 일부 양태에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 종양, 예를 들면 고형 종양의 성장을 억제하는 데 유용하다.
용어 "항체"는 인간, 마우스, 인간화, 키메라일 수 있거나 다른 종으로부터 유래될 수 있는 모노클론 항체, 폴리클론 항체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체 및 항체 단편을 포함한다. "모노클론 항체"는 특정 항원 부위에 대해 지향되는 실질적으로 균질한 항체 군집으로부터 얻어지는 항체이다.
"항체 또는 이의 기능적 단편은 특정 항원 또는 에피토프에 대해 특이적으로 결합하거나 이들에 대해 면역학적으로 반응성인 면역글로불린 분자를 의미하고, 폴리클론 항체 및 모노클론 항체 둘 다를 포함한다. 용어 항체는 유전자 조작된 또는 그렇지 않은 경우에는 개질된 형태의 면역글로불린, 예를 들면 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 이종접합 항체(예를 들면, 이중특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디)를 포함한다. 항체는 천연 공급원에서 유래할 수 있거나, 부분적으로 또는 전체적으로 합성 생성될 수 있다. 항체는 모노클론 또는 폴리클론일 수 있다. 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 중 임의의 인간 클래스를 포함하는 임의의 면역글로불린 클래스의 구성원일 수 있다. 용어 기능적 항체 단편은 예를 들면 Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rlgG 및 scFv 단편을 포함하는 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 용어 scFv는 전통적인 2쇄 항체의 중쇄의 가변 도메인과 경쇄의 가변 도메인이 연결되어(joined) 하나의 쇄를 형성한 단일 쇄 Fv 항체를 나타낸다. 항체 단편은 임의로 단일 쇄 항체 단편일 수 있다. 다르게는, 단편은 예를 들면 디설파이드 링키지에 의해 함께 링킹된 다중 쇄를 포함할 수 있다. 단편은 임의로 다중분자 복합체일 수도 있다. 기능적 항체 단편은 전체 항체와 유사한 친화도로 동족 항원에 결합하는 능력을 보유한다.
본원에서 사용되는 용어 "모노클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체들의 군집으로부터 얻어진 항체를 나타내며, 예를 들면 상기 군집을 구성하는 개별 항체들은 소량으로 존재할 수 있는 가능한 돌연변이, 예를 들면 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 따라서, 수식어 "모노클론"은 항체의 특성이 개별 항체들의 혼합이 아님을 나타낸다. 특정 양태에서, 이러한 모노클론 항체는 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 일반적으로 포함하며, 여기서 표적-결합 폴리펩티드 서열은 복수의 폴리펩티드 서열로부터 단일 표적 결합 폴리펩티드 서열의 선택을 포함하는 과정에 의해 얻어진다. 예를 들면, 선택 과정은 복수의 클론, 예를 들면, 하이브리도마 클론, 파지 클론 또는 재조합 DNA 클론의 풀로부터 고유한 클론의 선택일 수 있다. 선택된 표적 결합 서열은 예를 들면 표적에 대한 친화도를 개선하고, 표적 결합 서열을 인간화하고, 세포 배양물에서의 이의 생성을 개선하고, 생체내 면역원성을 감소시키고, 다중특이적 항체를 포함하는 것 등을 위해 추가로 변경될 수 있고, 변경된 표적 결합 서열을 포함하는 항체도 본 발명의 모노클론 항체인 것이 이해되어야 한다. 상이한 결정부위(에피토프)에 대해 지향된 여러 상이한 항체를 일반적으로 포함하는 폴리클론 항체 제제와 대조적으로, 모노클론 항체 제제의 각각의 모노클론 항체는 항원 상의 단일 결정부위에 대해 지향된다. 이들의 특이성에 더하여, 모노클론 항체 제제는 일반적으로 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는다는 점에서 유리하다.
어구 "약제학적 조성물" 또는 "약리학적으로 허용되는 조성물"은 인간과 같은 동물에 적절하게 투여되는 경우에 유해한 알레르기성 반응 또는 기타 이상 반응을 일으키지 않는 분자적 개체 및 조성물을 나타낸다. 항체 또는 추가의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 제조는 본 발명에 비추어 당업자에게 공지될 것이다. 또한, 동물(예를 들면, 인간) 투여의 경우, 제제는 FDA 생물학적 표준 사무국에서 요구하는 무균, 발열성, 일반 안전성 및 순도 표준을 충족해야 한다.
본원에서 사용되는 "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 그리고 모든 수성 용매(예를 들면, 물, 알코올/수성 용액, 식염수, 비경구 비히클, 예를 들면, 염화나트륨 및 링거 덱스트로스), 비수성 용매(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 및 주사 가능한 유기 에스테르, 예를 들면 에틸올레이트), 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제(예를 들면, 항박테리아제 또는 항진균제, 항산화제, 킬레이트제 및 불활성 가스), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 약물, 약물 안정제, 겔, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미료, 향미제, 염료, 유체 및 영양 보충제, 예를 들면 당업계의 숙련가에게 공지된 이러한 물질들 및 이들의 병용물을 포함한다. 약제학적 조성물에서 다양한 성분의 pH 및 정확한 농도는 널리 공지된 파라미터에 따라 조정될 수 있다.
용어 "단위 용량" 또는 "투여량"은 대상체에서 사용하기에 적합한 물리적으로 이산된 단위를 나타내며, 각각의 단위는 이의 투여와 관련하여 본원에서 논의되는 원하는 반응, 즉 적절한 경로 및 치료 레지멘(regimen)을 생성하도록 계산된 치료적 조성물의 미리 결정된 양을 함유한다. 치료 횟수 및 단위 용량 둘 다에 따르는 투여되는 양은 원하는 효과에 따라 달라진다. 환자 또는 대상체에게 투여되는 본 발명의 양태의 조성물의 실제 투여량은 물리적 인자 및 생리학적 인자, 예를 들면 대상체의 체중, 연령, 건강 및 성별, 치료되는 질환의 유형, 질환 침투의 정도, 이전 또는 동시 치료 중재, 환자의 특발성, 투여 경로, 및 특정 치료 물질의 효능, 안정성 및 독성에 의해 결정된다. 예를 들면, 용량은 투여당 약 1 내지 약 1,000mg/kg/체중(이러한 범위는 중간 용량들을 포함함) 또는 그 이상 및 이들 내에서 유도 가능한 임의의 특정 용량을 포함할 수도 있다. 본원에 열거된 숫자들로부터 유도 가능한 범위의 비제한적인 예에서, 약 5㎍/kg/체중 내지 약 100mg/kg/체중, 약 5㎍/kg/체중 내지 약 500mg/kg/체중의 범위 등이 투여될 수 있다. 투여를 담당하는 의사는 어떠한 경우에도 개별 대상체에 대한 조성물 중의 활성 성분(들)의 농도 및 적절한 용량(들)을 결정할 것이다.
단일 쇄 가변 단편(scFv)의 사용이 특히 중요하다. scFv는 항원 결합 도메인을 암호화하는 면역글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 영역이 단일 폴리펩티드로 조작된 재조합 분자이다. 일반적으로, VH 및 VL 서열은 링커 서열에 의해 연결된다. 예를 들면, 인용에 의해 본원에 구체적으로 포함되는 문헌[Ahmad (2012) Clinical and Developmental Immunology Article ID 980250] 참조. 단일 폴리펩티드로 조작된 BCMA-결합 도메인을 암호화하는 면역글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 포함하는 BCMA-특이적 scFv 분자가 본원에 기재되어 있다. 유사하게는, 본원에 기재된 CS1-특이적 scFv 분자는, 단일 폴리펩티드로 조작된 CS1-결합 도메인을 암호화하는 면역글로불린 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "결합 친화도"는 2종의 제제의 가역적 결합에 대한 평형 상수를 나타내며, 해리 상수(Kd)로 표현된다. 결합 친화도는 관련되지 않은 아미노산 서열에 대한 항체의 결합 친화도보다 적어도 1배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 30배, 적어도 40배, 적어도 50배, 적어도 60배, 적어도 70배, 적어도 80배, 적어도 90배, 적어도 100배, 적어도 1,000배 (또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위) 또는 그 이상 더 클 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "결합능(avidity)"은 2종 이상의 제제 복합체의 희석 후 해리에 대한 내성을 나타낸다. 용어 "면역반응성" 및 "우선적으로 결합하는"은 항체 및/또는 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 상호 교환 가능하게 사용된다.
용어 "결합하는"은 예를 들면 염 다리 및 물 다리와 같은 상호 작용을 포함하는 공유, 정전기, 소수성 및 이온 및/또는 수소-결합 상호 작용으로 인한 2개의 분자 사이의 직접적인 회합을 나타낸다.
"치료적 유효량" 또는 "유효량"은, 질환을 치료하기 위해 포유동물 또는 다른 대상체에게 투여되는 경우, 질환에 대한 상기 치료에 영향을 미치기에 충분한 제제의 양 또는 2종의 제제의 병용되는 양을 나타낸다. "치료적 유효량"은 제제(들), 질환 및 이의 중증도, 및 치료되는 대상체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다.
"대상체" 및 "환자"는 인간 또는 비-인간, 예를 들면, 영장류, 포유동물 및 척추동물을 나타낸다. 특정 양태에서, 대상체는 인간이다.
본원 명세서 전체에 걸쳐, 용어 "약"은, 값이, 상기 값을 측정하기 위해 사용되는 장치, 방법에 대한 고유한 오차의 변동, 또는 연구 대상체들 사이에 존재하는 변동을 포함함을 나타내기 위해 사용된다.
II. CD70 표적화제
A. 항체
본 발명의 측면은 CD70 표적화제에 관한 것이다. 일부 양태에서, CD70 표적화제는 항-CD70 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 용어 "항체"는 표적 항원에 대한 특이적 결합을 위한 비손상(intact) 항체와 경쟁할 수 있는 임의의 아이소타입의 비손상 면역글로불린 또는 이의 단편을 나타내고, 키메라, 인간화, 완전 인간 및 이중특이적 항체를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 상호 교환적으로 사용되며, IgG, IgD, IgE, IgA, IgM 및 관련 단백질, 및 항원 결합 활성을 유지하는 항체 CDR 도메인을 포함하는 폴리펩티드를 포함하는, 동물의 면역 반응의 일부로 기능하는 구조적으로 관련된 단백질의 여러 클래스들 중 하나를 나타낸다.
용어 "항원"은 선택적 결합제, 예를 들면 항체에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 나타낸다. 항원은 상이한 항체와 상호 작용할 수 있는 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
용어 "에피토프"는 면역글로불린 또는 T-세포 수용체에 결합함으로써 면역 반응을 유발할 수 있는 분자의 임의의 영역 또는 부분을 포함한다. 에피토프 결정부위는 화학적 활성 표면 그룹, 예를 들면, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐 그룹을 포함할 수 있고, 특이적 3차원 구조적 특성 및/또는 특이적 전하 특성을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정 표적 항원에 대해 특이적인 항체는 복합체 혼합물 내의 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식한다.
주어진 폴리펩티드의 에피토프 영역은 x-선 결정학, 핵 자기 공명 분광법, 부위-지향 돌연변이유발 맵핑, 단백질 디스플레이 어레이를 포함하는 당업계에 널리 공지된 많은 상이한 에피토프 맵핑 기술을 사용하여 확인될 수 있으며, 예를 들면, 문헌[Epitope Mapping Protocols, (Johan Rockberg and Johan Nilvebrant, Ed., 2018) Humana Press, New York, N.Y.] 참조. 이러한 기술들은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들면 미국 특허 제4,708,871호; 문헌[Geysen et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998-4002 (1984); Geysen et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:178-182 (1985); Geysen et al. Molec. Immunol. 23:709-715 (1986)] 참조. 예를 들면, 상기 문헌[Epitope Mapping Protocols] 참조. 또한, 단백질의 항원성 영역은 표준 항원성 및 하이드로패시 플롯을 사용하여 예측 및 확인될 수도 있다.
비손상 항체는 일반적으로 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄로 구성되지만, 일부 경우에는 중쇄만을 포함할 수 있는 낙타과에서 자연적으로 발생하는 항체와 같이 보다 더 적은 쇄를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 항체는 단일 공급원으로부터 단독으로 유래될 수 있거나, "키메라"일 수 있으며, 즉 항체의 상이한 부분들이 2개의 상이한 항체들로부터 유래될 수 있다. 예를 들면, 가변 영역 또는 CDR 영역은 래트 또는 뮤린 공급원으로부터 유래될 수 있는 반면, 불변 영역은 인간과 같은 상이한 동물 공급원으로부터 유래될 수 있다. 항체 또는 결합 단편은, 재조합 DNA 기술에 의해, 또는 비손상 항체의 효소적 절단 또는 화학적 절단에 의해 하이브리도마에서 생성될 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 용어 "항체"는 이의 유도체, 변이체, 단편 및 뮤테인을 포함하며, 이들의 예는 이하에 설명되어 있다(Sela-Culang et al. Front Immunol. 2013; 4: 302; 2013).
용어 "경쇄"는 결합 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 경쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 경쇄는 분자량이 약 25,000Dalton이고, 가변 영역 도메인(본원에서 VL로 약칭됨) 및 불변 영역 도메인(본원에서 CL로 약칭됨)을 포함한다. 경쇄에는 카파(κ) 및 람다(λ)로 식별되는 두 가지 분류가 있다. 용어 "VL 단편"은 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 모노클론 항체의 경쇄 단편을 의미한다. VL 단편은 경쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함할 수 있다. 경쇄의 가변 영역 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단에 있다.
용어 "중쇄"는 결합 특이성을 부여하기에 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 분자량이 약 50,000Dalton이고, 가변 영역 도메인(본원에서 VH로 약칭됨) 및 3개의 불변 영역 도메인(본원에서 CH1, CH2 및 CH3으로 약칭됨)을 포함한다. 용어 "VH 단편"은 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 모노클론 항체의 중쇄 단편을 의미한다. VH 단편은 중쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함할 수 있다. 중쇄 불변 영역 도메인의 수는 이소타입에 따라 다르다. VH 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단에 있고, CH 도메인은 카복시 말단에 있으며 CH3는 -COOH 종말에 가장 가깝다. 항체의 이소타입은 IgM, IgD, IgG, IgA 또는 IgE일 수 있으며, 존재하는 중쇄에 의해 각각 뮤(μ) 쇄, 델타(δ) 쇄, 감마(γ) 쇄, 알파(α) 쇄 또는 엡실론(ε) 쇄의 5가지 분류로 정의된다. IgG에는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하지만 이에 제한되지 않는 여러 하위 유형이 있다. IgM의 하위 유형은 IgM1 및 IgM2를 포함한다. IgA의 하위 유형은 IgA1 및 IgA2를 포함한다.
항체는 임의의 이소타입 또는 분류의 전체 면역글로불린, 키메라 항체, 또는 둘 이상의 항원에 대해 특이성을 갖는 하이브리드 항체일 수 있다. 이는 하이브리드 단편을 포함하는 단편(예를 들면, F(ab')2, Fab', Fab, Fv 등)일 수도 있다. 면역글로불린은 복합체를 형성하기 위해 특정 항원에 결합함으로써 항체처럼 작용하는 천연, 합성 또는 유전적으로 조작된 단백질도 포함한다. 용어 항체는 예를 들면 다음과 같이 유전적으로 조작되거나 그렇지 않은 경우 개질된 형태의 면역글로불린을 포함한다.
용어 "단량체"는 하나의 Ig 단위만을 함유하는 항체를 의미한다. 단량체는 항체의 기본 기능 단위이다. 용어 "이량체"는 항체 중쇄의 불변 도메인(Fc 또는 결정화 가능한 단편 영역)을 통해 서로 부착된 2개의 Ig 단위를 함유하는 항체를 의미한다. 복합체는 연결(joining)(J) 쇄 단백질에 의해 안정화될 수 있다. 용어 "다량체"는 항체 중쇄의 불변 도메인(Fc 영역)을 통해 서로 부착된 2개 초과의 Ig 단위를 함유하는 항체를 의미한다. 복합체는 연결(J) 쇄 단백질에 의해 안정화될 수 있다.
용어 "2가 항체"는 2개의 항원 결합 부위를 포함하는 항체를 의미한다. 2개의 결합 부위는 동일한 항원 특이성을 가질 수 있거나 또는 이들이 이중특이적일 수 있으며, 이는 2개의 항원 결합 부위가 상이한 항원 특이성을 갖는다는 것을 의미한다.
이중특이적 항체는 2종 이상의 별개의 에피토프에 대해 상이한 결합 부위를 갖는 2개의 파라토프를 갖는 항체 클래스이다. 일부 양태에서, 이중특이적 항체는 이중파라토프(biparatopic)일 수 있으며, 여기서 이중특이적 항체는 동일한 항원으로부터의 상이한 에피토프를 특이적으로 인식할 수 있다. 일부 양태에서, 이중특이적 항체는 "나노바디"로 불리는 한 쌍의 상이한 단일 도메인 항체로 구성될 수 있다. 단일 도메인 항체는 연골 어류 및 낙타과로부터 공급되고 개질된다. 나노바디들은 당업자에게 일반적인 기술을 사용하여 링커에 의해 함께 연결될 수 있으며; 나노바디를 선택 및 연결하기 위한 이러한 방법은 PCT 공개공보 제WO2015044386A1호, 제WO2010037838A2호 및 문헌[Bever et al., Anal Chem. 86:7875-7882 (2014)]에 기재되어 있으며, 상기 문헌들 각각은 이들의 전문이 인용에 의해 구체적으로 본원에 포함된다.
이중특이적 항체는 전체 IgG, Fab'2, Fab'PEG, 디아바디로서 또는 다르게는 scFv로서 구성될 수 있다. 디아바디 및 scFv는 가변 도메인만을 사용하여 Fc 영역 없이 구성될 수 있으며, 잠재적으로는 항-이디오타입 반응의 효과를 감소시킬 수 있다. 이중특이적 항체는 하이브리도마들의 융합 또는 Fab' 단편들의 링킹을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들면, 문헌[Songsivilai and Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321(1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)]에 기재되어 있으며, 상기 문헌들 각각은 이들의 전문이 인용에 의해 구체적으로 본원에 포함된다.
특정 측면에서, 항원 결합 도메인은 상이한 항원에 결합하는 VH 영역 및 VL 영역 쌍으로 다량체화함에 의해 다중특이성 또는 이종특이성일 수 있다. 예를 들면, 항체는 (a) 세포 표면 항원, (b) 효과기 세포 표면 상의 Fc 수용체 또는 (c) 적어도 하나의 다른 성분에 결합할 수 있거나 이들과 상호 작용할 수 있다. 따라서, 측면은 에피토프 및 다른 표적, 예를 들면 효과기 세포 상의 Fc 수용체에 대한 이중특이적, 삼중특이적, 사중특이적 및 기타 다중특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
일부 양태에서, 다중특이적 항체가 사용될 수 있고, 당업계에 공지된 통상적인 방법을 사용하여 짧은 가요성 폴리펩티드 쇄를 통해 직접 링킹될 수 있다. 하나의 이러한 예는 2가 이중특이적 항체인 디아바디로서, 여기서 VH 도메인 및 VL 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄에서 발현되고, 동일한 쇄 상의 도메인들 사이의 페어링을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용하여 도메인이 2개의 항원 결합 부위를 생성하는 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍을 이루게 한다. 링커 기능성은 트리아바디, 테트라바디 및 보다 더 고차의 항체 다량체의 양태에 대해 적용할 수 있다. (예를 들면, 문헌[Hollinger et al., Proc Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Polijak et al., Structure 2:1121-1123 (1994); Todorovska et al., J. Immunol. Methods 248:47-66(2001)] 참조).
이중특이성 전체 항체와는 대조적으로, 이중특이성 디아바디는 이. 콜리(E. coli)에서 용이하게 구성되고 발현될 수 있기 때문에 유리할 수도 있다. 적절한 결합 특이성의 디아바디(및 다른 폴리펩티드, 예를 들면 항체 단편)는 라이브러리로부터의 파지 디스플레이(WO94/13804)를 사용하여 쉽게 선택할 수 있다. 예를 들면, 디아바디의 하나의 암(arm)이 단백질에 대해 특이성을 갖고 일정하게 유지된다면, 다른 암이 변하고 적절한 특이성의 항체가 선택되는 라이브러리가 만들어질 수 있다. 이중특이성 전체 항체는 문헌[Ridgeway et al., (Protein Eng., 9:616-621, 1996) and Krah et al., (N Biotechnol. 39:167-173, 2017)]에 기술된 바와 같은 대안적인 조작 방법에 의해 제조될 수 있으며, 상기 문헌들 각각은 이들의 전문이 인용에 의해 본원에 포함된다.
이종접합체 항체는 상이한 특이성을 갖는 2개의 공유 결합된 모노클론 항체로 구성된다. 예를 들면, 전문이 인용에 의해 본원에 포함되는 미국 특허 제6,010,902호 참조.
항원의 에피토프에 대해 높은 특이성으로 결합하는 항체 분자의 Fv 단편의 일부는 본원에서 "파라토프"로 나타낸다. 파라토프는 항원의 에피토프와 접촉하여 항원 인식을 촉진하는 아미노산 잔기로 구성된다. 항체의 2개의 Fv 단편 각각은 2개의 가변 도메인인 VH 및 VL로 이량체화된 구성으로 구성된다. 각각의 가변 도메인의 1차 구조는 프레임워크 영역(FR)에 의해 분리되고 이의 옆에 있는 3개의 초가변 루프를 포함한다. 초가변 루프는 모든 포유동물의 항체 분자 중에서 가장 높은 1차 서열 가변성 영역이다. 용어 초가변 루프는 종종 용어 "상보성-결정 영역(CDR)"과 상호 교환적으로 사용된다. 초가변 루프(또는 CDR)의 길이는 항체 분자마다 다르다. 주어진 포유동물로부터의 모든 항체 분자의 프레임워크 영역은 높은 1차 서열 유사성/컨센서스(consensus)를 갖는다. 프레임워크 영역의 컨센서스는 프레임워크 영역, 및 프레임워크 영역들 사이에 산재된 초가변 루프(또는 CDR) 둘 다를 식별하기 위해 당업자에 의해 사용될 수 있다. 초가변 루프는 폴리펩티드 내에서의 위치를 구별하고 어느 도메인에서 발생하는지 식별하는 이름이 제공된다. VL 도메인의 CDR은 L1, L2 및 L3으로 식별되며, L1은 최원위 말단에서 발생하고, L3은 CL 도메인에 가장 가깝게 발생한다. CDR에는 CDR-1, CDR-2 및 CDR-3이라는 이름이 부여될 수도 있다. L3(CDR-3)은 일반적으로 주어진 유기체에 의해 생성된 모든 항체 분자 중에서 가장 가변성이 높은 영역이다. CDR은 1차 구조에서 선형으로 배열된 폴리펩티드 쇄의 영역이며, 프레임워크 영역에 의해 서로 분리된다. VL 쇄의 아미노 말단(N-말단) 종말은 FR1으로 명명된다. FR2로 식별되는 영역은 L1 초가변 루프와 L2 초가변 루프 사이에서 발생한다. FR3은 L2 초가변 루프와 L3 초가변 루프 사이에서 발생하고, FR4 영역은 CL 도메인에 가장 가깝다. 이러한 구조 및 명명법은 VH 쇄에 대해 반복되며, H1, H2 및 H3으로 확인된 3개의 CDR을 포함한다. 가변 도메인 또는 Fv 단편(VH 및 VL)의 대부분의 아미노산 잔기는 프레임워크 영역의 일부이다(약 85%). 항체 분자의 3차원 구조 또는 3차 구조는, 프레임워크 영역이 분자의 보다 더 내부에 있고 구조의 대부분을 제공하도록 분자의 외부 표면에 CDR이 있는 구조이다.
각각의 상기 영역을 구성하는 정확한 아미노산을 확인하기 위한 몇 가지 방법이 개발되어 왔고, 당업자에 의해 사용될 수 있다. 이는 프레임워크 영역을 구성하는 보존된 아미노산 잔기를 식별하여, 길이가 다양할 수 있고 프레임워크 영역들 사이에 위치하는 CDR을 식별하는 다수의 다중 서열 정렬 방법 및 알고리즘 중 임의의 것을 사용하여 수행될 수 있다. 항체의 CDR을 식별하기 위해 일반적으로 사용되는 3가지 방법이 개발되어 있다: 카바트(Kabat)(문헌[T. T. Wu and E. A. Kabat, "AN ANALYSIS OF THE SEQUENCES OF THE VARIABLE REGIONS OF BENCE JONES PROTEINS AND MYELOMA LIGHT CHAINS AND THEIR IMPLICATIONS FOR ANTIBODY COMPLEMENTARITY," J Exp Med, vol. 132, no. 2, pp. 211-250, Aug. 1970]에 기재됨); 코티아(Chothia)(문헌[C. Chothia et al., "Conformations of immunoglobulin hypervariable regions," Nature, vol. 342, no. 6252, pp. 877-883, Dec. 1989]에 기재됨) 및 IMGT(문헌[M.-P. Lefranc et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains," Developmental & Comparative Immunology, vol. 27, no. 1, pp. 55-77, Jan. 2003]에 기재됨). 이러한 방법은 각각 가변 영역을 구성하는 아미노산 잔기를 식별하기 위한 고유한 넘버링(numbering) 시스템을 포함한다. 대부분의 항체 분자에서, 항원의 에피토프와 실제로 접촉하는 아미노산 잔기는 CDR에서 발생하지만, 일부 경우에는 프레임워크 영역 내의 잔기가 항원 결합에 기여한다.
당업자는 항체의 파라토프를 결정하기 위해 임의의 여러 방법을 사용할 수 있다. 이러한 방법은 다음을 포함한다: 1) 항체 가변 영역의 아미노산 서열 및 에피토프 조성의 화학적 성질에 기초한 항체/에피토프 결합 상호 작용의 3차 구조의 컴퓨터 예측; 2) 수소-중수소 교환 및 질량 분광법; 3) 폴리펩티드 단편화, 및 폴리펩티드의 전체 길이로부터 다중 중첩 펩티드 단편을 생성하고 에피토프에 대한 이들 펩티드의 결합 친화도를 평가하는 펩티드 맵핑 접근법; 4) 포유류의 유전자를 암호화하는 항체 Fab 단편이 박테리오파지에 의해 발현되어 파지의 코트 내에 포함되는 항체 파지 디스플레이 라이브러리 분석. Fab 발현 파지의 이러한 군집은 고정된 항원과 상호 작용하도록 허용되거나, 상이한 외인성 발현 시스템에 의해 발현될 수 있다. 비-결합 Fab 단편은 세척 분리되어, 항원에 부착된 특이적 결합 Fab 단편만 남게 된다. 결합 Fab 단편은 쉽게 단리될 수 있으며, 이를 암호화하는 유전자가 결정된다. 이러한 접근법은 Fv 단편 또는 특정 VH 및 VL 도메인을 적절하게 포함하는 Fab 단편의 보다 더 작은 영역에 대해서도 사용할 수 있다.
특정 측면에서, 친화도 성숙 항체는 이의 하나 이상의 CDR에서 하나 이상의 개질로 향상되며, 이는 이러한 변경(들)을 포함하지 않는 모 항체와 비교하여 항체의 표적 항원에 대한 친화도의 개선을 초래한다. 특정 친화도 성숙 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 피코몰 친화도를 가질 것이다. 친화도 성숙 항체는 당업계에 공지된 절차에 의해 생성되며, 예를 들면 문헌[Marks et al., Bio/Technology 10:779 (1992)]은 VH 도메인 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 설명하고, 파지 디스플레이에서 사용되는 CDR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이는 문헌[Tiller et al., Front. Immunol. 8:986 (2017)]에 입증된 바와 같은 계산 방법과 결합하여 문헌[Rajpal et al., PNAS. 24: 8466-8471 (2005) and Thie et al., Methods Mol Biol. 525:309-22 (2009)]에 기재되어 있다.
키메라 면역글로불린은 상이한 종들로부터 유래된 융합된 유전자의 생성물이고; "인간화" 키메라는 일반적으로 인간 면역글로불린에서 유래한 프레임워크 영역(FR)을 갖고, 하나 이상의 CDR은 비-인간 공급원에서 유래한다.
특정 측면에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 다른 특정 종의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 반면, 쇄(들)의 나머지는, 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 다른 종에서 유래하거나 다른 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속하는 항체, 및 상기 항체의 단편의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이다. 미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851 (1984)]. 키메라 항체와 관련된 방법은, 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1985)]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 이들의 전문이 인용에 의해 본원에 구체적으로 포함된다. CDR 이식은 예를 들면 미국 특허 제6,180,370호, 제5,693,762호, 제5,693,761호, 제5,585,089호 및 제5,530,101호를 참조.
일부 양태에서, 비-인간 종으로부터의 항체 폴리펩티드 서열을 최소화하는 것은 키메라 항체 기능을 최적화하고, 면역원성을 감소시킨다. 비-인간 항체의 비-항원 인식 영역으로부터의 특정 아미노산 잔기는 인간 항체 또는 이소타입의 상응하는 잔기와 상동성이 되도록 개질된다. 한 가지 예는 "CDR-이식된" 항체로서, 상기 항체는 특정 종에서 유래하거나 특정 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속하는 하나 이상의 CDR을 포함하는 반면, 항체 쇄(들)의 나머지 부분은 다른 종에서 유래하거나 다른 항체 클래스 또는 하위 클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열에 대해 동일하거나 상동성이다. 인간에서 사용하기 위해, 비-인간 면역글로불린의 경쇄 변이 영역 및 중쇄 변이 영역 둘 다에 대한 CDR1, CDR2 및 부분 CDR3로 구성된 V 영역이 인간 항체 프레임워크 영역으로 이식되어, 비-인간 CDR을 갖는 인간 항체의 자연 발생 항원 수용체를 대체한다. 일부 경우에, 상응하는 비-인간 잔기는 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 잔기를 대체한다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함하여 성능을 추가로 개선할 수 있다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 일반적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 수도 있다. 예를 들면, 문헌[Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593 (1992); Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol. 1:105 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions 23; 1035 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428 (1994); Verhoeyen et al., Science 239:1534-36 (1988)] 참조.
인트라바디는 세포외 공간에서 항원에 결합하는 분비된 항체와 대조적으로 세포내 항원에 결합하는 세포내 국소화 면역글로불린이다.
폴리클론 항체 제제는 일반적으로 상이한 결정부위(에피토프)들에 대한 상이한 항체들을 포함한다. 폴리클론 항체를 생성하기 위해, 토끼 또는 염소와 같은 숙주를 항원 또는 항원 단편, 일반적으로 애주번트로 면역화하고, 필요에 따라 담체에 커플링한다. 항원에 대한 항체는 후속적으로 숙주의 혈청에서 수집된다. 폴리클론 항체는 항원에 대해 친화성 정제되어 단일특이적이 될 수 있다.
모노클론 항체 또는 "mAb"는 배타적 모 세포로부터의 균질한 항체 군집으로부터 얻어진 항체를 나타내고, 예를 들면, 군집은 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 각각의 모노클론 항체는 단일 항원 결정부위에 대해 지향된다.
1. 기능성 항체 단편 및 항원-결합 단편
a. 항원-결합 단편
특정 측면은 항체 단편, 예를 들면, 염증 매개체에 결합하고/하거나 이를 중화하는 항체 단편에 관한 것이다. 용어 기능적 항체 단편은 항원에 특이적으로 결합하는 기능을 보유하는 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 이러한 단편은 가변 영역 중쇄(VH) 및/또는 경쇄(VL)의 다양한 배열로 구성되며; 일부 양태에서는, 불변 영역 중쇄 1(CH1) 및 경쇄(CL)를 포함한다. 일부 양태에서, 이는 중쇄 2(CH2) 및 3(CH3) 도메인으로 구성된 Fc 영역이 결여되어 있다. 항원-결합 단편 및 이의 개질의 양태는 (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 Fab 단편 유형; (ii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편 유형; (iii) VH 및 VL 도메인으로 구성된 Fv 단편 유형; (iv) 단일 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 단일 도메인 단편 유형인 dAb(Ward, 1989; McCafferty et al., 1990; Holt et al., 2003); (v) 단리된 상보성 결정 영역(CDR) 영역을 포함할 수 있다. 이러한 용어는 예를 들면 문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY (1989); Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers, R. A. (ed.), New York: VCH Publisher, Inc.); Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989) and in Day, E. D., Advanced Immunochemistry, 2d ed., Wiley-Liss, Inc. New York, N.Y. (1990); Antibodies, 4:259-277 (2015)]에 기재되어 있다. 본 단락의 인용문은 모두 인용에 의해 포함된다.
항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역으로부터의 상보성-결정 영역(CDR)을 정확히, 적어도 또는 최대 1, 2 또는 3개의 보유하는 항체 단편도 포함한다. Fc 영역(또는 이의 CH2 또는 CH3 영역)에 대한 CDR-함유 서열들의 융합은 예를 들면 본원에 포함되는 Fc 영역에 직접적으로 또는 간접적으로 융합된 scFv를 포함하는 상기 정의의 범위 내에 포함된다.
용어 Fab 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인을 함유하는 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미한다. 용어 Fab' 단편은 Fab 단편보다 더 큰 모노클론 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미한다. 예를 들면, Fab' 단편은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인, 및 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함한다. 용어 F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 디설파이드 가교에 의해 링킹된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 모노클론 항체의 2가 항원-결합 단편을 의미한다. F(ab')2 단편은 예를 들면, 2개의 VH 및 VL 도메인의 전부 또는 일부를 포함하고, 2개의 CL 및 CH1 도메인의 전부 또는 일부를 추가로 포함할 수 있다.
용어 Fd 단편은 CDR을 포함하는 VH의 전부 또는 일부를 포함하는 모노클론 항체의 중쇄 단편을 의미한다. Fd 단편은 CH1 영역 서열을 추가로 포함할 수 있다.
용어 Fv 단편은 VL 및 VH의 전부 또는 일부를 포함하고 CL 및 CH1 도메인이 부재하는 모노클론 항체의 1가 항원-결합 단편을 의미한다. VL 및 VH는 예를 들면 CDR을 포함한다. 단일 쇄 항체(sFv 또는 scFv)는 VL 및 VH 영역들이 유연한 링커에 의해 연결되어 항원-결합 단편을 형성하는 단일 폴리펩티드 쇄를 형성하는 Fv 분자이다. 단일 쇄 항체는 국제 특허출원 공개공보 제WO 88/01649호 및 미국 특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호에 개시되어 있으며, 이들의 내용은 인용에 의해 본원에 포함된다. 용어 (scFv)2는 힌지 영역에 의해 sFv로부터 분리된, 이의 C-말단에 올리고머화 도메인을 포함하는 2가 또는 이중특이성 sFv 폴리펩티드 쇄를 의미한다(Pack et al. 1992). 올리고머화 도메인은 자가 결합 a-나선, 예를 들면 류신 지퍼를 포함하며, 이는 추가의 디설파이드 결합에 의해 추가로 안정화될 수 있다. (scFv)2 단편은 "미니항체" 또는 "미니바디"로도 알려져 있다.
단일 도메인 항체는 VH 또는 VL 도메인만을 함유하는 항원-결합 단편이다. 일부 경우에, 2개 이상의 VH 영역은 펩티드 링커와 공유 연결되어 2가 도메인 항체를 생성한다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일하거나 상이한 항원을 표적으로 할 수 있다.
b. 단편 결정화 가능 영역 Fc
Fc 영역은 항체의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 함유한다. 2개의 중쇄 단편은 적어도 2개의 디설파이드 결합 및 CH3 도메인의 소수성 상호 작용에 의해 함께 유지된다. 본원에서 사용되는 용어 "Fc 폴리펩티드"는 항체의 Fc 영역으로부터 유래된 폴리펩티드의 천연 형태 및 뮤테인 형태를 포함한다. 이량체화를 촉진하는 힌지 영역을 함유하는 이러한 폴리펩티드의 끝이 절단된 형태가 포함된다.
c. 항체 CDR & CDR을 보여주는 스캐폴딩 도메인이 있는 폴리펩티드
상보성-결정 영역(CDR)과 같은 항원-결합 펩티드 스캐폴드는 양태에 따라 단백질-결합 분자를 발생시키기 위해 사용된다. 일반적으로는, 당업자는 CDR들 중 적어도 1개가 이식되는 단백질 스캐폴드의 유형을 결정할 수 있다. 최적으로는 스캐폴드는 다음과 같은 여러 기준을 충족해야 하는 것으로 알려져 있다: 우수한 계통발생학적 보존; 알려진 3차원 구조; 작은 크기; 전사 후 개질이 거의 또는 전혀 없음 및/또는 생산, 발현 및 정제가 용이함. Skerra, J Mol Recognit, 13:167-87(2000).
단백질 스캐폴드는 피브로넥틴 유형 III FN3 도메인("단일체"로 알려짐), 피브로넥틴 유형 III 도메인 10, 리포칼린, 안티칼린, 스타필로코쿠스 아우레우스의 단백질 A의 Z-도메인, 티오레독신 A, 또는 "안키린 반복", "아르마딜로 반복", "류신-풍부 반복" 및 "테트라트리코펩티드 반복"과 같은 반복된 모티프를 가진 단백질로부터 공급될 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 단백질은 미국 특허 공개공보 제2010/0285564호, 제2006/0058510호, 제2006/0088908호, 제2005/0106660호 및 PCT 공개공보 제WO2006/056464호에 기재되어 있으며, 이들 문헌 각각은 이들의 전문이 인용에 의해 본원에 구체적으로 포함된다. 전갈, 곤충, 식물, 연체동물 등의 독소에서 유래한 스캐폴드 및 뉴런 NO 합성효소(PIN)의 단백질 억제제도 사용할 수 있다.
B. 키메라 항원 수용체
일부 양태에서, CD70 표적화제는 CD70 특이적 CAR 분자 또는 세포, 예를 들면, CD70 특이적 CAR 분자를 포함하고/하거나 이를 발현하는 T 세포를 포함한다. 키메라 항원 수용체 T 세포 또는 CAR T 세포는 신호전달 도메인 및 공동-자극 분자와 함께 종양 항원에 대해 특이적인 키메라 수용체를 발현하도록 유전적으로 개질된, 환자, 기증자로부터의 또는 시험관내에서 생성된 T 세포이다. 항체-유래 단일 쇄 가변 단편과 T 세포 세포내 신호전달 도메인의 이러한 융합은 CAR T 세포에 비-MHC-제한 방식으로 종양 항원을 인식하는 능력을 부여한다.
CAR 분자는 일반적으로 하나 이상의 항체 결합 영역(들), 세포외 스페이서, 막횡단 도메인 및 세포질 영역을 포함한다. 이에 대해서는 이하에 추가로 설명한다.
1. 항원 결합 영역
항원-결합 영역은 CD70 항체로부터 유래된 단일 쇄 가변 단편(scFv)일 수 있다. "단일 쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 상기 도메인들은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 일부 양태에서, 항원-결합 도메인은 VH 도메인과 VL 도메인 사이에 펩티드 링커를 추가로 포함하며, 상기 도메인들은 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성하는 scFv를 촉진할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드의 항원-결합 도메인의 가변 영역은, VH 및/또는 VL CDR 1, CDR 2 및/또는 CDR 3 영역 내의 아미노산 잔기를 돌연변이시켜 항체의 하나 이상의 결합 성질(예를 들면, 친화성)을 개선함으로써 개질될 수 있다. 용어 "CDR"은 각각 B 세포 및 T 세포에 의해 발생된 면역글로불린(항체) 및 T 세포 수용체의 가변 쇄의 일부를 기반으로 하는 상보성-결정 영역을 나타내며, 상기 분자들은 이들의 특이적인 항원에 결합한다. 면역글로불린 및 T-세포 수용체와 관련된 대부분의 서열 변이가 CDR에서 발견되기 때문에, 이러한 영역은 종종 초가변 영역으로 나타낸다. 돌연변이는 부위-지향 돌연변이 유발 또는 PCR-매개 돌연변이 유발에 의해 도입될 수 있으며, 항체 결합에 대한 효과 또는 관심 있는 다른 기능적 성질은 적절한 시험관내 검정 또는 생체내 검정에서 평가될 수 있다. 바람직하게는, 보존적 개질이 도입되고 일반적으로 CDR 영역 내의 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 잔기가 변경된다. 돌연변이는 아미노산 치환, 부가 또는 결손일 수 있다.
프레임워크 개질은, 예를 들면 1개 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 생식계열 서열로 "역돌연변이"시킴으로써 항체로 만들어져 면역원성을 감소시킬 수 있다.
항원 결합 도메인은, 항원 결합 도메인을, 동일한 항원(다가) 또는 상이한 항원(다중 특이적)에 결합하는 VH 및 VL 영역 쌍으로 다량체화함으로써 다중-특이적 또는 다가가 될 수 있는 것으로도 생각된다.
2. 세포외 스페이서
세포외 스페이서는 항원-결합 도메인을 막횡단 도메인에 링킹할 수 있다. 세포외 스페이서는 항원 결합 도메인이 항원 결합을 용이하게 하기 위해 상이한 방향으로 배향될 수 있도록 충분히 유연해야 한다. 일 양태에서, 스페이서는 IgG로부터의 힌지 영역이다. 대안은 면역글로불린의 CH2CH3 영역 및 CD3의 일부를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "힌지"는, 구조적 유연성을 제공하고 측면(flanking) 폴리펩티드 영역에 대해 이격시키고 천연 또는 합성 폴리펩티드를 구성할 수 있는 가요성 폴리펩티드 커넥터 영역(본원에서 "힌지 영역" 또는 "스페이서"로도 나타냄)을 나타낸다. 면역글로불린(예를 들면, IgG1)으로부터 유래된 "힌지"는 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216로부터 Pro230으로의 스트레칭(stretching)으로 정의된다(Burton (1985) Molec. Immunol., 22: 161-206). 다른 IgG 이소타입의 힌지 영역은, 중쇄간 디설파이드(S-S) 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다. 힌지 영역은 이는 미국 특허 제5,677,425호에 기재된 바와 같은 변경된 힌지 영역을 포함하지만 이에 제한되지 않는 자연 발생 또는 비-자연 발생일 수 있다. 힌지 영역은 CH1 도메인의 클래스 또는 서브클래스와 상이한 클래스 또는 서브클래스의 항체로부터 유래된 완전한 힌지 영역을 포함할 수 있다. 용어 "힌지"는 유연성을 제공하고 측면 영역에 대해 이격하는데 있어서 유사한 기능을 제공하는 CD8 및 기타 수용체로부터 유래된 영역을 포함할 수도 있다.
3. 막횡단 도메인
막횡단 도메인은 막을 가로지르는 소수성 알파 나선이다. 상이한 막횡단 도메인은 상이한 수용체 안정성을 초래할 수 있다.
막횡단 도메인은 세포외 스페이서와 세포질 영역 사이에 삽입된다. 일부 양태에서, 막횡단 도메인은 세포외 스페이서와 하나 이상의 공동자극 영역 사이에 개재된다. 일부 양태에서, 링커는 막횡단 도메인과 하나 이상의 공동자극 영역 사이에 있다. 일부 양태에서, 막횡단 도메인은 CD28, CD8, CD4, CD3-제타, CD134 또는 CD7로부터 유래된다.
4. 세포질 영역
항원 인식 후, 수용체가 클러스터링되고, 신호가 세포질 영역을 통해 세포로 전달된다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 공동자극 도메인은 세포질 영역의 일부이다.
본 발명의 폴리펩티드에 사용하기에 적합한 세포질 영역 및/또는 공동자극 영역은, 항원 결합 도메인에 대한 항원의 결합 방식에 의한 활성화에 대한 반응으로 뚜렷하게 구별되고 검출 가능한 신호(예를 들면, 세포에 의한 하나 이상의 사이토카인의 생산 증가; 표적 유전자의 전사의 변화; 단백질의 활성 변화; 세포 거동의 변화, 예를 들면, 세포 사멸; 세포 증식; 세포 분화; 세포 생존; 세포 신호전달 반응의 조절 등)를 제공하는 임의의 바람직한 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 세포질 영역은 본원에 기재된 바와 같은 적어도 하나(예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 등)의 ITAM 모티프를 포함한다. 일부 양태에서, 세포질 영역은 DAP10/CD28 유형 신호전달 쇄를 포함한다.
본 발명의 폴리펩티드에 사용하기에 적합한 세포질 영역은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM)-함유 세포내 신호전달 폴리펩티드를 포함한다. ITAM 모티프는 YX1X2(L/I)이며, 여기서 X1 및 X2는 독립적으로 임의의 아미노산이다. 일부 경우에, 세포질 영역은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 ITAM 모티프를 포함한다. 일부 경우에, ITAM 모티프는 엔도도메인에서 2회 반복되며, 상기 ITAM 모티프의 첫 번째 경우 및 두 번째 경우는 6 내지 8개의 아미노산에 의해 서로 분리되며, 예를 들면, (YX1X2(L/I))(X3)n(YX1X2(L/I))(여기서, n은 6 내지 8의 정수이고, 6 내지 8개의 X3 각각은 임의의 아미노산일 수 있다)이다.
적합한 세포질 영역은 ITAM 모티프를 함유하는 폴리펩티드로부터 유래된 ITAM 모티프-함유 부분일 수 있다. 예를 들면, 적합한 세포질 영역은 임의의 ITAM 모티프-함유 단백질의 ITAM 모티프-함유 도메인일 수 있다. 따라서, 적합한 엔도도메인은 이것이 유래된 전체 단백질의 전체 서열을 함유할 필요는 없다. 적합한 ITAM 모티프-함유 폴리펩티드의 예는 DAP12, DAP10, FCER1G(Fc 엡실론 수용체 I 감마 쇄); CD3D(CD3 델타); CD3E(CD3 엡실론); CD3G(CD3 감마); CD3-제타 및 CD79A(항원 수용체 복합체 관련 단백질 알파 쇄)를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
세포질 영역에 포함된 것과 같은 적절한 공동자극 영역의 비제한적인 예는 4-1BB(CD137), CD28, ICOS, OX-40, BTLA, CD27, CD30, GITR 및 HVEM로부터의 폴리펩티드를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
C. 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE)
이중특이적 T 세포 인게이저는 암 치료를 위한 새로운 클래스의 면역치료 분자이다. BiTE라고 불리우는 이러한 분자는 T 세포를 종양 세포로 재표적화함으로써 종양에 대한 환자의 면역 반응을 향상시킨다. BiTE는 유연한 링커에 의해 직렬로 연결된 2개의 단일 쇄 가변 단편(scFv)으로 구성된다. 이러한 구조 및 특이성은 BiTE가 T 세포를 종양 세포에 물리적으로 링킹하도록 하여, 궁극적으로 T 세포 활성화, 종양 사멸 및 사이토카인 생산을 자극한다. 양태는 CD70-특이적 표적화 영역을 포함하는 BiTE, 예를 들면 CD70-특이적 scFV를 포함한다. BiTE는 추가의 암 관련 분자, 예를 들면, EGFR 또는 AXL에 대한 특이성을 추가로 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 양태는 CD70-특이적 scFV 및 EGFR-특이적 scFv를 포함하는 BiTE에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 양태는 CD70-특이적 scFv 및 AXL scFV를 포함하는 BiTE에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 양태는 CD70-특이적 scFv 및 종양 항원-특이적 scFv를 포함하는 BiTE에 관한 것이다. 일부 양태에서, 종양 항원은 비-소세포성 폐암과 관련된 종양 항원을 포함한다. 추가의 양태는 CD70-특이적 표적화 영역 및 TCR-특이적 표적화 영역을 포함하는 BiTE에 관한 것이다. 예를 들면, TCR-특이적 표적화 영역은 T 세포 상의 TCR 서브유닛, 예를 들면, CD3을 표적화할 수 있다.
D. 삼중특이적 자연 살해 세포 인게이저 요법(TriNKET)
TriNKET는 NK 세포 활성화 영역 및 항원 결합 영역을 포함하며, 상기 항원 결합 영역은 CD70에 결합한다. TriNKET는 종양과 NK 세포를 가교하도록 디자인되어 있다. 일부 양태에서, NK 세포 활성화 영역은 NK-활성화 분자, 예를 들면, 세포를 활성화할 수 있는 세포 표면 분자를 포함한다. NK 세포 활성화 영역 및/또는 항원 결합 영역은 각각 NK 활성화 단백질에 대해 특이적인 scFv 및 암 항원에 대해 특이적인 scFv를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, TriNKET는 CD16에 대해 특이적인 scFv 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, TriNKET는 CD70에 대해 특이적으로 결합하는 scFV를 포함한다. TriNKET는 IL-15 또는 IL-2 분자를 추가로 포함할 수 있다. TriNKET는 (A) 세포내 시냅스 형성을 촉진하여 NK 세포를 종양으로 지향시키고; (B) NK 세포 상의 CD16에 결합하여 ADCC를 촉발시키고; (C) IL-15 또는 IL-2의 발현을 통해 생체내 NK 세포 확장을 유도하는 역할을 할 수 있다.
III. 세포
특정 양태는 본 발명의 폴리펩티드 또는 핵산을 포함하는 세포, 예를 들면 CD70 표적화제에 관한 것이다. 일부 양태에서 상기 세포는 면역 세포 또는 T 세포이다. "T 세포"는 T-헬퍼 세포, 세포독성 T-세포, T-조절 세포(Treg) 감마-델타 T 세포, 자연 살해(NK) 세포 및 호중구를 포함하여 CD3을 발현하는 모든 유형의 면역 세포를 포함한다. T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 나타낼 수 있다.
적합한 포유동물 세포는 1차 세포 및 불멸화 세포주를 포함한다. 적합한 포유동물 세포주는 인간 세포주, 비-인간 영장류 세포주, 설치류(예를 들면, 마우스, 래트) 세포주 등을 포함한다. 적합한 포유동물 세포주는 HeLa 세포(예를 들면, American Type Culture Collection(ATCC) No. CCL-2), CHO 세포(예를 들면, ATCC No. CRL9618, CCL61, CRL9096), 인간 배아 신장(HEK) 293 세포(예를 들면, ATCC No. CRL-1573), Vero 세포, NIH 3T3 세포(예를 들면, ATCC No. CRL-1658), Huh-7 세포, BHK 세포(예를 들면, ATCC No. CCL10), PC12 세포(ATCC No. CRL1721), COS 세포, COS-7 세포(ATCC No. CRL1651), RATI 세포, 마우스 L 세포(ATCC No. CCLI.3), HLHepG2 세포, Hut-78, Jurkat, HL-60, NK 세포주(예를 들면, NKL, NK92 및 YTS) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 경우에, 세포는 불멸화 세포주가 아닌 개인으로부터 얻은 세포(예를 들면, 1차 세포)이다. 예를 들면, 일부 경우, 세포는 개인으로부터 얻은 면역 세포이다. 예를 들면, 세포는 개인으로부터 얻은 T 림프구이다. 또 다른 예로서, 세포는 개인으로부터 얻은 세포독성 세포이다. 또 다른 예로서, 세포는 개체로부터 얻은 줄기 세포 또는 전구 세포이다. 일부 양태에서, 환자의 요법에 사용되는 세포는 자가 조직이다. 일부 양태에서, 환자의 요법에 사용되는 세포는 비-자가조직이다.
IV. 게놈 DNA를 개질하기 위한 방법
특정 양태에서, 게놈 DNA는 추가의 돌연변이, 삽입 또는 결손을 포함하도록 개질되거나, 또는 본 발명의 특정 분자 구조들을 통합하여 상기 구조가 게놈 DNA로부터 발현되도록 개질된다. 일부 양태에서, 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 핵산은 세포의 게놈 DNA 내로 통합된다. 일부 양태에서, 통합은 표적화된 통합이다. 일부 양태에서, 표적화된 통합은 DNA 소화제/폴리뉴클레오티드 개질 효소, 예를 들면, 부위-특이적 재조합효소 및/또는 표적화 엔도뉴클레아제의 사용을 통해 달성된다. 용어 "DNA 소화제"는 핵산의 뉴클레오티드 서브유닛들 사이의 결합(즉, 포스포디에스테르 결합)을 절단할 수 있는 제제를 나타낸다. 하나의 특정 표적은 TRAC(T-세포 수용체 알파 불변) 유전자좌이다. 예를 들면, 세포는 먼저, TRAC(T-세포 수용체 알파 불변) 유전자좌를 표적으로 하는 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 복합체화된 Cas9 단백질로 구성된 리보핵단백질(RNP) 복합체로 전기 천공될 것이다. 전기 천공 15분 후, 세포는 CAR을 암호화하는 HDR 주형을 운반하는 AAV6으로 처리될 것이다.
따라서, 일 측면에서, 본 발명은 표적화된 통합을 포함한다. 이를 달성하는 한 가지 방법은, 적어도 하나의 폴리뉴클레오티드 개질 효소, 예를 들면 부위-특이적 재조합효소 및/또는 표적화 엔도뉴클레아제에 대한 적어도 하나의 인식 서열을 포함하는 외인성 핵산 서열(즉, 랜딩 패드)을 사용하는 것이다. 부위-특이적 재조합효소는 당업계에 널리 공지되어 있으며, 일반적으로 인버타제, 리졸바제 또는 인테그라제로 나타낼 수 있다. 부위-특이적 재조합효소의 비제한적 예는 람다 인테그라제, Cre 재조합효소, FLP 재조합효소, 감마-델타 리졸바제, Tn3 리졸바제, ΦC31 인테그라제, Bxb1-인테그라제 및 R4 인테그라제를 포함할 수 있다. 부위-특이적 재조합효소는 특정 인식 서열(또는 인식 부위) 또는 이의 변이체를 인식하며, 이들 모두는 당업계에 널리 공지되어 있다. 예를 들면, Cre 재조합효소는 LoxP 부위를 인식하고, FLP 재조합효소는 FRT 부위를 인식한다.
고려되는 표적화 엔도뉴클레아제는 아연 핑거 뉴클레아제(ZFN), 메가뉴클레아제, 전사 활성화제-유사 효과기 뉴클레아제(TALEN), CRIPSR/Cas-유사 엔도뉴클레아제, I-Tevl 뉴클레아제 또는 관련된 단량체 하이브리드, 또는 인공 표적화된 DNA 이중 스트랜드 파쇄 유도제를 포함한다. 예시적인 표적화 엔도뉴클레아제는 하기에 추가로 설명된다. 예를 들면, 일반적으로, 아연 핑거 뉴클레아제는 DNA 결합 도메인(즉, 아연 핑거) 및 절단 도메인(즉, 뉴클레아제)을 포함하며, 이들 둘 다는 하기에 기재되어 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드 개질 효소의 정의에는 당업자에게 공지된 임의의 다른 유용한 융합 단백질이 포함되고, 예를 들면 DNA 결합 도메인 및 뉴클레아제를 포함할 수 있다.
랜딩 패드 서열은 특정 폴리뉴클레오티드 개질 효소, 예를 들면, 부위-특이적 재조합효소 및/또는 표적화 엔도뉴클레아제에 의해 선택적으로 결합 및 개질되는 적어도 하나의 인식 서열을 포함하는 뉴클레오티드 서열이다. 일반적으로, 랜딩 패드 서열의 인식 서열(들)은 개질되는 세포의 게놈에 내인적으로 존재하지 않는다. 예를 들면, 개질되는 세포가 CHO 세포인 경우, 랜딩 패드 서열의 인식 서열은 내인성 CHO 게놈에 존재하지 않는다. 표적화된 통합의 속도는, 표적화된 세포의 게놈 내에 내인적으로 존재하지 않는 고효율 뉴클레오티드 개질 효소에 대한 인식 서열을 선택함으로써 개선될 수 있다. 내인적으로 존재하지 않는 인식 서열의 선택은 잠재적인 오프-표적(off-target) 통합도 감소시킨다. 다른 측면에서, 개질되는 세포에서 선천적인 인식 서열의 사용이 바람직할 수 있다. 예를 들면, 다중 인식 서열이 랜딩 패드 서열에 사용되는 경우, 하나 이상은 외인성일 수 있고 하나 이상은 선천적일 수 있다.
당업자는 부위-특이적 재조합효소 및/또는 표적화 엔도뉴클레아제에 의해 결합 및 절단된 서열을 쉽게 결정할 수 있다.
다중 인식 서열이 단일 랜딩 패드에 존재할 수 있어, 랜딩 패드가 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 개질 효소에 의해 순차적으로 표적화되어 2개 이상의 고유한 핵산(무엇보다도 수용체 유전자 및/또는 유도성 리포터를 포함함)이 삽입될 수 있다. 다르게는, 랜딩 패드에 다중 인식 서열이 존재하면 동일한 핵산의 다중 사본이 랜딩 패드 내로 삽입될 수 있다. 2개의 핵산이 단일 랜딩 패드를 표적으로 하는 경우, 랜딩 패드는 첫 번째 폴리뉴클레오티드 개질 효소(예를 들면, 첫 번째 ZFN 쌍)에 대한 첫 번째 인식 서열, 및 두 번째 폴리뉴클레오티드 개질 효소(예를 들면, 두 번째 ZFN 쌍)에 대한 두 번째 인식 서열을 포함한다. 다르게는 또는 추가적으로, 하나 이상의 인식 서열을 포함하는 개별 랜딩 패드는 다수의 위치에 통합될 수 있다. 증가된 단백질 발현은 페이로드의 다중 카피로 형질 전환된 세포에서 관찰될 수 있다. 다르게는, 동일한 랜딩 패드 또는 상이한 랜딩 패드에 있는지에 관계 없이, 상이한 발현 카세트를 포함하는 다중 고유 핵산 서열이 삽입되는 경우, 다중 유전자 생성물이 동시에 발현될 수 있다. 핵산의 수 및 유형에 관계 없이, 표적화 엔도뉴클레아제가 ZFN인 경우, 예시적인 ZFN 쌍은 인식 서열을 수반하는 hSIRT, hRSK4 및 hAAVS1을 포함한다.
일반적으로 말해서, 표적화된 통합을 용이하게 하기 위해 사용되는 랜딩 패드는 적어도 1개의 인식 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 랜딩 패드는 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개 또는 적어도 10개 또는 그 이상의 인식 서열을 포함할 수 있다. 1개 이상의 인식 서열을 포함하는 양태에서, 인식 서열들은 서로 고유할 수 있거나(즉, 상이한 폴리뉴클레오티드 개질 효소들에 의해 인식됨), 동일한 반복 서열, 또는 반복되고 고유한 서열들의 조합일 수 있다.
당업자는 랜딩 패드로 사용되는 외인성 핵산이 인식 서열(들) 이외에 다른 서열도 포함할 수 있음을 쉽게 이해할 것이다. 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 선택 가능하거나 스크리닝 가능한 유전자를 암호화하는 하나 이상의 서열, 예를 들면, 항생제 내성 유전자, 대사성 선택 마커 또는 형광 단백질을 포함하는 것이 편리할 수 있다. 전사 조절 및 제어 요소(즉, 프로모터, 부분 프로모터, 프로모터 트랩, 개시 코돈, 인핸서, 인트론, 절연자(insulator) 및 기타 발현 요소)와 같은 다른 보충 서열의 사용도 존재할 수 있다.
적절한 인식 서열(들)의 선택 이외에, 높은 절단 효율을 갖는 표적화 엔도뉴클레아제의 선택도 랜딩 패드(들)의 표적화된 통합 속도를 개선한다. 표적화 엔도뉴클레아제의 절단 효율은 예를 들면 PCR 앰플리콘에서 CEL-1 검정 또는 삽입/결손의 직접 시퀀싱(Indel)과 같은 검정을 사용하는 것을 포함하여 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
본원에 개시된 방법 및 세포에 사용되는 표적화 엔도뉴클레아제의 유형은 다양할 수 있고 다양할 것이다. 표적화 엔도뉴클레아제는 자연 발생 단백질 또는 조작된 단백질일 수 있다. 표적화 엔도뉴클레아제의 한 예는 아연-핑거 뉴클레아제이며, 이는 이하에 보다 자세히 논의된다.
사용될 수 있는 표적화 엔도뉴클레아제의 또 다른 예는 적어도 하나의 핵 국소화 신호를 포함하는 RNA-유도 엔도뉴클레아제이며, 이는 엔도뉴클레아제의 진핵 세포의 핵 내로의 진입을 허용한다. RNA-가이딩 엔도뉴클레아제는 적어도 1개의 뉴클레아제 도메인, 및 가이딩 RNA와 상호 작용하는 적어도 1개의 도메인을 포함한다. RNA-가이딩 엔도뉴클레아제는, RNA-가이딩 엔도뉴클레아제가 특정 염색체 서열을 절단하도록 가이딩 RNA에 의해 특정 염색체 서열에 대해 지향된다. 가이딩 RNA가 표적화 절단에 대한 특이성을 제공하기 때문에, RNA-가이딩 엔도뉴클레아제의 엔도뉴클레아제는 보편적이며, 상이한 가이딩 RNA와 함께 사용되어 상이한 표적 염색체 서열을 절단할 수 있다. 예시적인 RNA-가이딩 엔도뉴클레아제 단백질이 이하에 보다 자세히 논의된다. 예를 들면, RNA-가이딩 엔도뉴클레아제는 CRISPR/Cas 단백질 또는 CRISPR/Cas-유사 융합 단백질, 클러스터링된 규칙적으로 산재된 짧은 회귀성 반복(CRISPR)/CRISPR-연관(Cas) 시스템으로부터 유래된 RNA-가이딩 엔도뉴클레아제일 수 있다.
표적화 엔도뉴클레아제는 메가뉴클레아제일 수도 있다. 메가뉴클레아제는 큰 인식 부위, 즉 인식 부위가 일반적으로 약 12개 내지 약 40개의 염기쌍의 범위임을 특징으로 하는 엔도데옥시리보뉴클레아제이다. 이러한 요구 사항의 결과로서, 인식 부위는 일반적으로 임의의 주어진 게놈에서 한 번만 발생한다. 메가뉴클레아제들 중 "LAGLIDADG"라 불리는 호밍 엔도뉴클레아제 패밀리는 게놈 및 게놈 조작 연구에 있어 유용한 도구가 되었다. 메가뉴클레아제는 당업자에게 널리 공지된 기술을 사용하여 이의 인식 서열을 개질함으로써 특정 염색체 서열에 대해 표적화될 수 있다. 예를 들면, 문헌[Epinat et al., 2003, Nuc. Acid Res., 31(11):2952-62 and Stoddard, 2005, Quarterly Review of Biophysics, pp. 1-47] 참조.
사용될 수 있는 표적화 엔도뉴클레아제의 또 다른 예는 전사 활성제-유사 효과기(TALE) 뉴클레아제이다. TALE은 새로운 DNA 표적에 결합하도록 쉽게 조작될 수 있는 식물 병원체 크산토모나스의 전사 인자이다. TALE 또는 이의 끝이 절단된 버전은 FokI와 같은 엔도뉴클레아제의 촉매성 도메인에 링킹되어 TALE 뉴클레아제 또는 TALEN이라고 불리는 표적화 엔도뉴클레아제를 발생시킬 수 있다. 예를 들면, 문헌[Sanjana et al., 2012, Nature Protocols 7(1):171-192; Bogdanove A J, Voytas D F., 2011, Science, 333(6051):1843-6; Bradley P, Bogdanove A J, Stoddard B L., 2013, Curr Opin Struct Biol., 23(1):93-9] 참조.
또 다른 예시적인 표적화 엔도뉴클레아제는 부위-특이적 뉴클레아제이다. 특히, 부위-특이적 뉴클레아제는 이의 인식 서열이 게놈에서 거의 발생하지 않는 "희귀-절단제(rare-cutter)" 엔도뉴클레아제일 수 있다. 바람직하게는, 부위-특이적 뉴클레아제의 인식 서열은 게놈에서 한 번만 발생한다. 다르게는, 표적화 뉴클레아제는 인공 표적화된 DNA 이중 스트랜드 파손 유도제일 수 있다.
일부 양태에서, 표적화된 통합은 인테그라제의 사용을 통해 달성될 수 있다. 예를 들면, phiC31 인테그라제는 박테리오파지 phiC31의 게놈 내에 암호화된 서열 특이적 재조합효소이다. phiC31 인테그라제는 부착 부위(att)라고 하는 2개의 34 염기쌍 서열들 사이의 재조합을 매개하는데, 1개는 파지에서 발견되고 다른 1개는 박테리아 숙주에서 발견된다. 이러한 세린 인테그라제는 포유류 세포를 포함하는 다양한 상이한 세포 유형에서 효율적으로 기능하는 것으로 나타났다. phiC31 인테그라제가 존재하는 경우, attB-함유 공여자 플라스미드는, 자연 attP 부위와 서열 유사성을 갖는 부위(유사-attP 부위라고 함)에서의 재조합을 통해 표적 게놈 내로 단방향 통합될 수 있다. phiC31 인테그라제는 모든 크기의 플라스미드를 단일 사본으로서 통합할 수 있으며, 보조 인자를 필요로 하지 않는다. 통합된 이식유전자는 안정적으로 발현되고 유전될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 게놈 통합은 트랜스포사제의 사용을 통해 달성된다. 예를 들면, 정확하게 정의된 DNA 서열을 척추동물의 염색체 내로 도입하도록 디자인된 합성 DNA 트랜스포존(예를 들면, "슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty)" 트랜스포존 시스템)을 사용할 수 있다. 슬리핑 뷰티 트랜스포존 시스템은 슬리핑 뷰티(SB) 트랜스포사제, 및 특정 DNA 서열을 척추동물의 게놈 내로 삽입하도록 설계된 트랜스포존으로 구성된다. DNA 트랜스포존은 간단한 컷-앤드-페이스트(cut-and-paste) 방식으로 하나의 DNA 부위로부터 다른 부위로 전좌된다. 전위는 한정된 DNA 세그먼트가 하나의 DNA 분자로부터 절제되어 동일하거나 상이한 DNA 분자 또는 게놈의 다른 부위로 이동되는 정확한 과정이다.
다른 모든 Tc1/마리너 유형 트랜스포사제와 마찬가지로, SB 트랜스포사제는 수용체 DNA 서열의 TA 디뉴클레오티드 염기쌍 내로 트랜스포존을 삽입한다. 삽입 부위는 동일한 DNA 분자 또는 다른 DNA 분자(또는 염색체)의 다른 곳에 있을 수 있다. 인간을 포함하는 포유류 게놈에는 약 2억 개의 TA 부위가 있다. TA 삽입 부위는 트랜스포존 통합 과정에서 복제된다. TA 서열의 이러한 복제는 전위의 특징이며, 일부 실험에서는 메커니즘을 확인하는 데 사용된다. 트랜스포사제는 트랜스포존 내에서 암호화될 수 있거나 또는 트랜스포사제는 다른 공급원에 의해 공급될 수 있으며, 이 경우 트랜스포존은 비-자율적 요소가 된다. 비-자율적 트랜스포존은, 삽입 후 독립적으로 계속해서 절제 및 재삽입할 수 없기 때문에 유전적 도구로서 가장 유용하다. 인간 게놈 및 기타 포유동물 게놈에서 식별된 모든 DNA 트랜스포존은 비-자율적인데, 이는 상기 트랜스포존이 트랜스포사제 유전자를 함유하고 있어도 유전자가 비-기능성이고, 트랜스포존을 동원할 수 있는 트랜스포사제를 발생시킬 수 없기 때문이다.
I. 치료 방법
본 발명의 측면은 비-소세포성 폐암과 같은 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 추가의 양태에서, 본원에 기재된 CD70 표적화 분자는 면역 반응을 자극하기 위해 사용될 수 있다. 면역 반응 자극은 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 수행될 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 CD70 표적화 분자는 재발을 예방하기 위한 것이다. 본 발명의 방법은 일반적으로 CD70 표적화 분자를 환자에게 투여함을 포함한다. 일부 양태에서, CD70 표적화 분자는, 발현 벡터를 갖는 유전적으로 개질된 포유동물 세포, 또는 CD70을 표적화하는 폴리펩티드를 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 RNA(예를 들면, 시험관내 전사된 RNA)이다. 상기 세포는 면역 세포(예를 들면, T 림프구 또는 NK 세포), 줄기 세포, 전구 세포 등일 수 있다. 일부 양태에서, 상기 세포는 본원에 기재된 세포 또는 이의 자손이다.
본 발명의 양태는 생체외 방법을 포함한다. 예를 들면, T 림프구, 줄기 세포 또는 NK 세포(또는 본원에 기재된 세포)는 개인으로부터 얻어지고; 개인으로부터 얻어진 세포는 본 발명의 CD70 표적화 분자를 발현하도록 유전적으로 개질된다. 일부 경우에는, 유전적으로 개질된 세포가 생체외에서 활성화된다. 다른 경우에는, 유전적으로 개질된 세포가 개인(예를 들면, 세포를 얻은 개인) 내로 도입되고; 유전적으로 개질된 세포는 생체내에서 활성화된다.
일부 양태에서, 본 발명의 방법은 암을 치료하기 위한 세포 또는 CD70 표적화 분자의 투여 또는 암에 걸린 인간으로의 투여에 관한 것이다. 일부 양태에서, 암은 비-소세포성 폐암이다.
II. 약제학적 조성물
본 발명은 질환의 치료 및 면역 반응의 조절을 필요로 하는 대상체에서 질환을 치료하고 면역 반응을 조절하는 방법을 포함한다. 본 발명은 면역 반응을 유도하거나 개질하는데 사용될 수 있는 약제학적 조성물 형태일 수 있는 세포를 포함한다.
본 발명에 따른 조성물의 투여는 일반적으로 임의의 공통 경로를 통해 이루어질 것이다. 이는 비경구, 정위, 피내, 피하, 근육내, 복강내 또는 정맥내 주사를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일반적으로, 본 발명의 조성물은 투여 제형과 상용 가능한 방식으로, 그리고 치료적으로 유효하고 면역 개질이 되는 양으로 투여된다. 투여되는 양은 치료되는 대상체에 따라 다르다. 투여에 필요한 활성 성분의 정확한 양은 의사의 판단에 따른다.
적용 방식은 폭넓게 변경될 수 있다. 세포 성분을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하기 위해 임의의 통상적인 방법이 적용 가능하다. 약제학적 조성물의 투여량은 투여 경로에 따라 달라질 것이며, 대상체의 크기 및 건강에 따라 달라질 것이다.
많은 경우에, 최대 약 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 그 이상의 다중 투여를 갖는 것이 바람직할 것이다. 투여는 2일 내지 12주 간격, 보다 일반적으로는 1 내지 2주 간격의 범위일 수 있다. 투여 과정은 동종반응성 면역 반응 및 T 세포 활성에 대한 검정이 뒤따를 수 있다.
어구 "약제학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로 허용되는"은 동물 또는 인간에게 투여되는 경우 부반응, 알레르기성 반응 또는 기타 유해한 반응을 일으키지 않는 분자적 개체 및 조성물을 나타낸다. 본원에서 사용되는 "약제학적으로 허용되는 담체"는 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약제학적 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당업계에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 제제가 활성 성분과 양립할 수 없는 경우를 제외하고, 면역원성 및 치료 조성물에서의 이의 사용이 고려된다. 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 조성물이다.
본 발명의 조성물은 비경구 투여용으로 제형화될 수 있으며, 예를 들면 정맥내, 근육내, 피하 또는 심지어 복강내 경로를 통한 주사용으로 제형화될 수 있다. 일반적으로, 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사제로 제조될 수 있고, 제제는 유화될 수도 있다.
주사용으로 적합한 약제학적 형태는 멸균 수용액 또는 분산액; 참기름, 땅콩유 또는 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제형을 포함한다. 이는 또한 제조 및 저장 조건 하에 안정해야 하며, 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다.
멸균 주사 용액은, 필요한 양의 활성 성분(즉 본 발명의 세포)을 상기 열거된 다양한 다른 성분이 있는 적절한 용매에 혼입한 후, 필요에 따라 여과 멸균함으로써 제조된다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균 활성 성분을, 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 기타 성분을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입함으로써 제조된다.
조성물의 유효량은 의도된 목표에 기초하여 결정된다. 용어 "단위 용량" 또는 "투여량"은 대상체에게 사용하기에 적합한 물리적으로 이산된 단위를 나타내며, 각각의 단위는 이의 투여, 즉 적절한 경로 및 레지멘과 관련하여 본원에서 논의되는 원하는 반응을 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 조성물을 함유한다. 치료 횟수 및 단위 용량 둘 다에 따라 투여되는 양은 원하는 결과 및/또는 보호에 따라 다르다. 조성물의 정확한 양도 의사의 판단에 따르며, 각각의 개인에 대해 고유하다. 용량에 영향을 미치는 인자는 대상체의 신체적 및 임상적 상태, 투여 경로, 의도된 치료 목표(증상의 경감 대 치유), 및 특정 조성물의 효능, 안정성 및 독성을 포함한다. 제형화 시, 용액은 투여 제형과 상용 가능한 방식으로 그리고 치료적으로 또는 예방학적으로 유효한 양으로 투여될 것이다. 본 발명의 제형은 상기 설명한 주사 용액의 유형과 같은 다양한 투여 형태로 쉽게 투여된다.
V. 추가의 요법
본 발명의 방법 및 조성물은 당업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 기재된 하나 이상의 추가의 요법을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 추가의 암 치료제를 포함한다. 이러한 치료의 예가 본원에 설명되어 있다.
A. 면역요법
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 암 면역요법을 포함한다. 암 면역 요법(종종 면역-종양학, 약칭 IO라고도 함)은 암을 치료하기 위해 면역계를 사용하는 것이다. 면역 요법은 능동, 수동 또는 하이브리드(능동과 수동)로 분류할 수 있다. 이들 접근법은 암 세포가 이의 표면에, 종양 관련 항원(TAA)으로 알려진 면역계에 의해 감지될 수 있는 분자를 가지고 있다는 사실을 이용하며; 이는 종종 단백질 또는 기타 거대분자(예를 들면, 탄수화물)이다. 능동 면역 요법은 TAA를 표적화함으로써 면역계가 종양 세포를 공격하도록 지향시킨다. 수동 면역 요법은 기존의 항종양 반응을 향상시키고, 모노클론 항체, 림프구 및 사이토카인의 사용을 포함한다. 면역요법은 당업계에 공지되어 있으며, 일부는 하기에 기술된다.
1. 공동-자극 분자의 억제
일부 양태에서, 면역요법은 공동-자극 분자의 억제제를 포함한다. 일부 양태에서, 억제제는 B7-1(CD80), B7-2(CD86), CD28, ICOS, OX40(TNFRSF4), 4-1BB(CD137; TNFRSF9), CD40L(CD40LG), GITR(TNFRSF18)인 억제제 및 이들의 조합을 포함한다. 억제제는 억제 항체, 폴리펩티드, 화합물 및 핵산을 포함한다.
2. 수지상 세포 치료
수지상 세포 요법은 수지상 세포가 종양 항원을 림프구에 제시하도록 함으로써 항종양 반응을 유발하며, 이는 림프구를 활성화시키고, 항원을 제시하는 다른 세포를 사멸시키도록 자극한다. 수지상 세포는 포유동물 면역계의 항원 제시 세포(APC)이다. 암 치료에서 수지상 세포는 암 항원 표적화를 돕는다. 수지상 세포를 기반으로 한 세포 암 치료의 하나의 예는 시풀류셀-T이다.
수지상 세포가 종양 항원을 제시하도록 유도하는 한 가지 방법은, 자가 종양용해물 또는 짧은 펩티드(암 세포 상의 단백질 항원에 상응하는 단백질의 작은 부분)로 백신 접종하는 것이다. 이러한 펩티드는 면역 및 항종양 반응을 증가시키기 위해 종종 애주번트(고면역원성 물질)와 병용하여 제공된다. 다른 애주번트는 수지상 세포를 유인 및/또는 활성화하는 단백질 또는 기타 화학 물질, 예를 들면, 과립구 대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF)를 포함한다.
수지상 세포는 종양 세포가 GM-CSF를 발현하게 함으로써 생체내에서 활성화될 수도 있다. 이는 종양 세포를 GM-CSF를 생성하도록 유전적으로 조작함으로써 또는 종양 세포를 GM-CSF를 발현하는 종양용해성 바이러스로 감염시킴으로써 달성될 수 있다.
또 다른 전략은 환자의 혈액에서 수지상 세포를 제거하고 이를 신체 외부에서 활성화하는 것이다. 수지상 세포는 단일 종양 특이적 펩티드/단백질 또는 종양 세포 용해물(파쇄된 종양 세포의 용액)일 수 있는 종양 항원의 존재 하에 활성화된다. 이러한 세포(임의로 애주번트를 포함함)가 주입되어 면역 반응을 유발한다.
수지상 세포 요법은 수지상 세포 표면 상의 수용체에 결합하는 항체의 사용을 포함한다. 항원은 항체에 추가될 수 있으며, 수지상 세포가 성숙하도록 유도하여 종양에 대한 면역성을 제공할 수 있다. TLR3, TLR7, TLR8 또는 CD40과 같은 수지상 세포 수용체가 항체 표적으로서 사용되어 왔다.
3. CAR-T 세포 요법
키메라 항원 수용체(CAR, 키메라 면역수용체, 키메라 T 세포 수용체 또는 인공 T 세포 수용체로도 알려짐)는 암 세포를 표적화하기 위해 새로운 특이성을 면역 세포와 조합하는 조작된 수용체이다. 일반적으로, 이러한 수용체는 모노클론 항체의 특이성을 T 세포 상에 이식한다. 수용체는 상이한 공급원으로부터의 부분들이 융합되어 있기 때문에 키메라라고 불린다. CAR-T 세포 요법은 이러한 형질 전환된 세포를 암 요법에 활용하는 치료를 나타낸다.
CAR-T 세포 디자인의 기본 원리는 항원 결합 기능과 T 세포 활성화 기능을 결합하는 재조합 수용체를 포함한다. CAR-T 세포의 일반적인 전제는 암 세포 상에서 발견되는 마커를 표적으로 하는 T 세포를 인공적으로 발생시키는 것이다. 과학자들은 인간에서 T 세포를 제거하고 유전적으로 개질시킨 다음, 암 세포를 공격하도록 환자에게 다시 주입할 수 있다. T 세포가 CAR-T 세포가 되도록 조작되면 "리빙 약물(living drug)"로서 작용한다. CAR-T 세포는 세포외 리간드 인식 도메인과 세포내 신호전달 분자 사이에 링크를 생성하여 차례로 T 세포를 활성화한다. 세포외 리간드 인식 도메인은 일반적으로 단일 쇄 가변 단편(scFv)이다. CAR-T 세포 요법의 안전성의 중요한 측면은 정상 세포가 아닌 암성 종양 세포만 표적화하는 방법이다. CAR-T 세포의 특이성은 표적화된 분자의 선택에 의해 결정된다.
예시적인 CAR-T 요법은 티사젠레클류셀(Kymriah) 및 악시캅타진 실로류셀(Yescarta)을 포함한다. 일부 양태에서, CAR-T 요법은 CD19를 표적화 한다.
4. 사이토카인 요법
사이토카인은 종양 내에 존재하는 많은 유형의 세포에 의해 생성되는 단백질이다. 사이토카인은 면역 반응을 조절할 수 있다. 종양은 종종 종양을 성장시키고 면역 반응을 감소시키기 위해 사이토카인을 사용한다. 이러한 면역 조절 효과는 사이토카인을 면역 반응을 유발하는 약물로서 사용될 수 있게 한다. 일반적으로 사용되는 두 가지 사이토카인은 인터페론 및 인터류킨이다.
인터페론은 면역계에 의해 생성된다. 인터페론은 일반적으로 항바이러스 반응에 관여하지만 암에 대해서도 사용된다. 인터페론은 유형 I(IFNα 및 IFNβ), 유형 II(IFNγ) 및 유형 III(IFNλ)의 세 그룹으로 나뉜다.
인터류킨은 일련의 면역계 효과를 가지고 있다. IL-2는 예시적인 인터류킨 사이토카인 요법이다.
5. 입양 T 세포 요법
입양 T 세포 요법은 T 세포의 수혈(입양 세포 전달)에 의한 수동 면역화의 한 형태이다. 입양 T 세포는 혈액 및 조직에서 발견되며, 일반적으로 외래 병원체를 발견할 때 활성화된다. 특히 입양 T 세포는, T 세포의 표면 수용체가, 표면 항원 상에 외래 단백질의 일부를 표시하는 세포를 만날 때 활성화된다. 이는 감염된 세포 또는 항원 제시 세포(APC)일 수 있다. 입양 T 세포는 정상 조직 및 종양 조직에서 발견되며, 여기서 이는 종양 침윤 림프구(TIL)로 알려져 있다. 입양 T 세포는 APC, 예를 들면, 종양 항원을 제시하는 수지상 세포의 존재에 의해 활성화된다. 이들 세포는 종양을 공격할 수 있지만, 종양 내의 환경은 고도로 면역억제적이어서 면역 매개 종양 사멸을 예방한다.
종양 표적화된 T 세포를 생산하고 얻는 다양한 방법이 개발되어 있다. 종양 항원에 대해 특이적인 T 세포는 종양 샘플(TIL)로부터 제거될 수 있거나 혈액으로부터 여과될 수 있다. 후속적인 활성화 및 배양은 생체외에서 수행되고 생성물이 재주입된다. 활성화는 유전자 요법을 통해 또는 T 세포를 종양 항원에 노출시킴으로써 일어날 수 있다.
6. 체크포인트 억제제 및 병용 요법
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 면역 체크포인트 억제제를 포함한다. 특정 양태는 이하에 추가로 설명된다.
a. PD-1, PDL1 및 PDL2 억제제
PD-1은 T 세포가 감염 또는 종양과 만나는 종양 미세환경에서 작용할 수 있다. 활성화된 T 세포는 PD-1을 상향 조절하고, 말초 조직에서 계속해서 발현한다. IFN-감마와 같은 사이토카인은 상피 세포 및 종양 세포 상의 PDL1의 발현을 유도한다. PDL2는 대식세포 및 수지상 세포 상에서 발현된다. PD-1의 주요 역할은 말초에서 이펙터 T 세포의 활성을 제한하고, 면역 반응 동안 조직에 대한 과도한 손상을 예방하는 것이다. 본 발명의 억제제는 PD-1 및/또는 PDL1 활성의 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다.
"PD-1"에 대한 다른 명칭은 CD279 및 SLEB2를 포함한다. "PDL1"의 다른 이름은 B7-H1, B7-4, CD274 및 B7-H를 포함한다. "PDL2"의 다른 이름은 B7-DC, Btdc 및 CD273을 포함한다. 일부 양태에서, PD-1, PDL1 및 PDL2는 인간 PD-1, PDL1 및 PDL2이다.
일부 양태에서, PD-1 억제제는 PD-1이 이의 리간드 결합 파트너에 결합하는 것을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PD-1 리간드 결합 파트너는 PDL1 및/또는 PDL2이다. 또 다른 양태에서, PDL1 억제제는 PDL1의 이의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PDL1 결합 파트너는 PD-1 및/또는 B7-1이다. 또 다른 양태에서, PDL2 억제제는 PDL2의 이의 결합 파트너에 대한 결합을 억제하는 분자이다. 특정 측면에서, PDL2 결합 파트너는 PD-1이다. 억제제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역부착소(immunoadhesin), 융합 단백질 또는 올리고펩티드일 수 있다. 예시적인 항체는 미국 특허 제8,735,553호, 제8,354,509호 및 제8,008,449호에 기재되어 있으며, 이들은 모두 인용에 의해 본원에 포함된다. 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에 사용하기 위한 다른 PD-1 억제제는 미국 특허출원 제US2014/0294898호, 제US2014/022021호 및 제US2011/0008369호에 기재된 것과 같이 당업계에 공지되어 있으며, 상기 문헌들은 모두 인용에 의해 본원에 포함된다.
일부 양태에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체(예를 들면, 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체)이다. 일부 양태에서, 항-PD-1 항체는, 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 피딜리주맙으로 이루어지는 그룹으로부터 선택된다. 일부 양태에서, PD-1 억제제는 면역접착소(예를 들면, 불변 영역(예를 들면, 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PDL1 또는 PDL2의 세포외 부분 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 면역접착소)이다. 일부 양태에서, PDL1 억제제는 AMP-224를 포함한다. MDX-1106-04, MDX-1106, ONO-4538, BMS-936558 및 OPDIVO®로도 알려진 니볼루맙은 WO2006/121168에 기재된 항-PD-1 항체이다. MK-3475, Merck 3475, 람브롤리주맙, KEYTRUDA® 및 SCH-900475로도 알려진 펨브롤리주맙은 WO2009/114335에 기재된 항-PD-1 항체이다. CT-011, hBAT 또는 hBAT-1로도 알려진 피딜리주맙은 WO2009/101611에 기재된 항-PD-1 항체이다. B7-DCIg로도 알려진 AMP-224는 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재된 PDL2-Fc 융합 가용성 수용체이다. 추가의 PD-1 억제제는 AMP-514로도 알려진 MEDI0680, 및 REGN2810을 포함한다.
일부 양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PDL1 억제제, 예를 들면 MEDI4736로도 알려진 두르발루맙, MPDL3280A로도 알려진 아테졸리주맙, MSB00010118C로도 알려진 아벨루맙, MDX-1105, BMS-936559 또는 이들의 조합이다. 특정 측면에서, 면역 체크포인트 억제제는 PDL2 억제제, 예를 들면 rHIgM12B7이다.
일부 양태에서, 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 또는 피딜리주맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 VR을 포함한다. 따라서, 일 양태에서, 억제제는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 또는 피딜리주맙의 VH 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 니볼루맙, 펨브롤리주맙 또는 피딜리주맙의 VL 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 양태에서, 항체는 PD-1, PDL1 또는 PDL2 상의 상기 언급된 항체와 동일한 에피토프와 결합하기 위해 경쟁하고/경쟁하거나 이와 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체는 상기 언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 또는 99%(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)의 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
b. CTLA-4, B7-1 및 B7-2
본원에 제공된 방법에서 표적화될 수 있는 또 다른 면역 체크포인트는 CD152로도 알려진 세포독성 T-림프구-연관 단백질 4(CTLA-4)이다. 인간 CTLA-4의 완전한 cDNA 서열은 Genbank 수탁 번호 L15006을 가지고 있다. CTLA-4는 T 세포 표면 상에서 발견되며, 항원 제시 세포 표면 상의 B7-1(CD80) 또는 B7-2(CD86)에 결합되는 경우 "오프" 스위치 역할을 한다. CTLA4는 헬퍼 T 세포의 표면 상에 발현되고 억제 신호를 T 세포에 전달하는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 구성원이다. CTLA4는 T 세포 공동-자극 단백질인 CD28과 유사하며, 이들 두 분자 모두 항원 제시 세포 상의 B7-1 및 B7-2에 결합한다. CTLA-4는 억제 신호를 T 세포에 전달하는 반면, CD28은 자극 신호를 전달한다. 세포내 CTLA-4는 조절 T 세포에서도 발견되며, 조절 T 세포의 기능에 있어 중요할 수 있다. T 세포 수용체 및 CD28을 통한 T 세포 활성화는 B7 분자에 대한 억제 수용체인 CTLA-4의 발현을 증가시킨다. 본 발명의 억제제는 CTLA-4 활성, B7-1 활성 및/또는 B7-2 활성 중 하나 이상의 기능을 차단할 수 있다. 일부 양태에서, 억제제는 CTLA-4 및 B7-1의 상호 작용을 차단한다. 일부 양태에서, 억제제는 CTLA-4 및 B7-2의 상호 작용을 차단한다.
일부 양태에서, 면역 체크포인트 억제제는 항-CTLA-4 항체(예를 들면, 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체), 이의 항원-결합 단편, 면역부착소, 융합 단백질 또는 올리고펩티드이다.
본 발명의 방법에서 사용하기에 적합한 항-인간-CTLA-4 항체(또는 이로부터 유래된 VH 및/또는 VL 도메인)는 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 발생될 수 있다. 다르게는, 당업계에서 인정된 항-CTLA-4 항체가 사용될 수 있다. 예를 들면, US 8,119,129, WO 01/14424, WO 98/42752; WO 00/37504(CP675,206, 트레멜리무맙으로도 알려짐; 이전에는 티실리무맙이었음), 미국 특허 제6,207,156호; 문헌[Hurwitz et al., 1998]에 개지된 항-CTLA-4 항체가 본원 명세서에 개시된 방법에서 사용될 수 있다. 상기 언급된 각각의 간행물의 교시는 인용에 의해 본원에 포함된다. CTLA-4에 대한 결합에 대해 임의의 상기 당업계에 인정된 항체와 경쟁하는 항체도 사용될 수 있다. 예를 들면, 인간화 CTLA-4 항체는 국제 특허출원 제WO2001/014424호, 제WO2000/037504호 및 미국 특허 제8,017,114호에 기재되어 있으며, 이들은 모두 인용에 의해 본원에 포함된다.
본 발명의 방법 및 조성물에서 체크포인트 억제제로서 유용한 추가의 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(10D1, MDX-010, MDX-101 및 Yervoy®로도 알려짐) 또는 이의 항원 결합 단편 및 변이체이다(예를 들면, WO01/14424 참조).
일부 양태에서, 억제제는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 중쇄 및 경쇄 CDR 또는 VR을 포함한다. 따라서, 일 양태에서, 억제제는 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 VH 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인, 및 트레멜리무맙 또는 이필리무맙의 VL 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 도메인을 포함한다. 또 다른 양태에서, 항체는 PD-1, B7-1 또는 B7-2 상의 상기 언급된 항체와 동일한 에피토프와의 결합에 대해 경쟁하고/경쟁하거나 이와 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체는 상기 언급된 항체와 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95, 97 또는 99%(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)의 가변 영역 아미노산 서열 동일성을 갖는다.
B. 종양용해성 바이러스
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 종양용해성 바이러스를 포함한다. 종양용해성 바이러스는 암 세포를 우선적으로 감염시켜 살해하는 바이러스이다. 감염된 암 세포가 종양용해에 의해 파괴되면, 종양용해성 바이러스는 새로운 감염성 바이러스 입자 또는 비리온을 방출하여 남아 있는 종양을 파괴하는 것을 돕는다. 종양용해성 바이러스는 종양 세포를 직접 파괴할 뿐만 아니라, 장기 면역 요법을 위해 숙주의 항종양 면역 반응을 자극하는 것으로 생각된다.
C. 다당류
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 다당류를 포함한다. 버섯에서 발견되는 특정 화합물, 주로 다당류는 면역계를 상향 조절할 수 있고 항암 성질을 가질 수 있다. 예를 들면, 렌티난과 같은 베타 글루칸은 실험실 연구에서 대식세포, NK 세포, T 세포 및 면역계 사이토카인을 자극하는 것으로 나타났으며, 면역 애주번트로서 임상 시험에서 조사되었다.
D. 신생항원
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제는 신생항원 투여를 포함한다. 많은 종양이 돌연변이를 발현한다. 이러한 돌연변이는 잠재적으로 T 세포 면역요법에 사용하기 위한 새로운 표적화 가능한 항원(신생항원)을 생성한다. RNA 시퀀싱 데이터를 사용하여 식별된 바와 같이, 암 병변에서의 CD8+ T 세포의 존재는 돌연변이 부담이 높은 종양에서 더 높다. 자연 살해 세포 및 T 세포의 세포용해 활성과 관련된 전사체 수준은 많은 인간 종양에서의 돌연변이 부하와 양의 상관관계가 있다.
E. 화학요법
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제 또는 제제는 화학요법을 포함한다. 화학요법제의 적합한 클래스는 (a) 알킬화제, 예를 들면 질소 머스타드(예를 들면, 메클로레타민, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실), 에틸렌이민 및 메틸멜라민(예를 들면, 헥사메틸멜라민, 티오테파), 알킬 설포네이트(예를 들면, 부설판), 니트로소우레아(예를 들면, 카무스틴, 로무스틴, 클로로조티신, 스트렙토조신) 및 트리아진(예를 들면, 디카바진), (b) 항대사물, 예를 들면 엽산 유사체(예를 들면, 메토트렉세이트), 피리미딘 유사체(예를 들면, 5-플루오로우라실, 플록수리딘, 시타라빈, 아자우리딘) 및 퓨린 유사체 및 관련 물질(예를 들면, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 펜토스타틴), (c) 천연 생성물, 예를 들면 빈카 알칼로이드(예를 들면, 빈블라스틴, 빈크리스틴), 에피포도필로톡신(예를 들면, 에토포사이드, 테니포사이드), 항생제(예를 들면, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 블레오마이신, 플리카마이신 및 미톡산트론), 효소(예를 들면, L-아스파라기나제) 및 생물학적 반응 조절제(예를 들면, 인터페론-α) 및 (d) 기타 제제, 예를 들면 백금 배위 복합체(예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴), 치환된 우레아(예를 들면, 하이드록시우레아), 메틸하이디아진 유도체(예를 들면, 프로카바진) 및 부신피질 억제제(예를 들면, 탁솔 및 미토탄)를 포함한다. 일부 양태에서, 시스플라틴은 특히 적합한 화학요법제이다.
시스플라틴은 암, 예를 들면 전이성 고환 암종 또는 난소 암종, 진행성 방광암, 두경부암, 자궁경부암, 폐암 또는 기타 종양을 치료하는 데 널리 사용되어 왔다. 시스플라틴은 경구로 흡수되지 않으므로, 다른 경로, 예를 들면 정맥내, 피하, 종양내 또는 복강내 주사를 통해 전달되어야 한다. 시스플라틴은 특정 양태에서 고려되는 총 3개의 과정에 경우 3주마다 5일간 약 15 약 20mg/m2를 포함하여 임상 적용에 사용되는 효과적인 용량으로, 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 치료용 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 링킹된 Egr-1 프로모터를 포함하는 구조와 함께 세포 및/또는 대상체에 전달되는 시스플라틴의 양은, 시스플라틴 단독을 사용하는 경우에 전달되는 양보다 적다.
다른 적합한 화학요법제는 항미세관제, 예를 들면 파클리탁셀("탁솔") 및 독소루비신 하이드로클로라이드("독소루비신")를 포함한다. 아데노바이러스 벡터를 통해 전달되는 Egr-1 프로모터/TNFα 구조체와 독소루비신의 병용은 화학요법 및/또는 TNF-α에 대한 내성 극복에 효과적인 것으로 확인되었으며, 이는 구조체와 독소루비신의 병용 치료가 독소루비신 둘 다 및 TNF-α에 대한 내성을 극복함을 시사한다.
독소루비신은 잘 흡수되지 않아, 바람직하게는 정맥내 투여된다. 특정 양태에서, 성인에 대한 적절한 정맥내 투여량은 약 21일 간격으로 약 60 내지 약 75mg/m2, 약 3주 내지 약 4주 간격으로 각각 2일 또는 3일 연속 반복하여 약 25 내지 약30mg/m2. 또는 주 1회 약 20mg/m2를 포함한다. 고령 환자에서, 이전의 화학요법 또는 종양성 골수 침범으로 인한 이전의 골수 억제가 있는 경우, 또는 상기 약물을 다른 골수 형성 억제제와 병용하는 경우, 최저 용량을 사용해야 한다.
질소 머스타드는 본 발명의 방법에서 유용한 또 다른 적합한 화학요법제이다. 질소 머스타드는 메클로레타민(HN2), 사이클로포스파미드 및/또는 이포스파미드, 멜팔란(L-사르콜리신) 및 클로람부실을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다. 사이클로포스파미드(CYTOXAN®는 Mead Johnson으로부터 입수 가능하고, NEOSTAR®는 Adria로부터 입수 가능함)는 또 다른 적합한 화학요법제이다. 성인에게 적합한 경구 투여량은 예를 들면 약 1 내지 약 5mg/kg/일을 포함하고, 정맥내 투여량은 예를 들면 약 2 내지 약 5일 동안 초기에 약 40 내지 약 50mg/kg의 분할 용량, 또는 약 7 내지 약 10일 동안 약 10 내지 약 15mg/kg, 또는 주 2회 약 3 내지 약 5mg/kg, 또는 약 1.5 내지 약 3mg/kg/일을 포함한다. 위장관 부작용으로 인해 정맥내 경로가 선호된다. 약물은 또한 종종 침윤에 의해 근육내 투여되거나, 또는 체강 내로 투여된다.
추가의 적합한 화학요법제는 피리미딘 유사체, 예를 들면 시타라빈(시토신 아라비노사이드), 5-플루오로우라실(플루오로우라실; 5-FU) 및 플록수리딘(플루오로데옥시우리딘; FudR)을 포함한다. 5-FU는 약 7.5 내지 약 1,000mg/m2 사이의 임의의 투여량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 또한, 5-FU 투여 일정은 다양한 시간 기간 동안, 예를 들면 최대 6주 동안일 수 있거나, 본 발명이 속하는 기술분야의 숙련가에 의해 결정될 수 있다.
또 다른 적합한 화학요법제인 젬시타빈 디포스페이트(GEMZAR®, Eli Lilly & Co., "젬시타빈")는 진행성 및 전이성 췌장암의 치료에 권장되며, 따라서 이러한 암에 대해 본 발명에서도 유용할 것이다.
환자에게 전달되는 화학요법제의 양은 변경될 수 있다. 하나의 적합한 양태에서, 화학요법제는, 화학요법이 구조물과 함께 투여되는 경우, 숙주에서 암의 정지 또는 퇴행을 유발하기에 효과적인 양으로 투여될 수 있다. 다른 양태에서, 화학요법제는 화학요법제의 화학요법적 유효 용량보다 2 내지 10,000배 더 적은 양 중 임의의 양으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 화학요법제는 화학요법제의 화학요법적 유효 용량보다 약 20배 더 적은 양, 약 500배 더 적은 양 또는 심지어 약 5,000배 더 적은 양으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화학요법제는, 구성물과 병용하는 원하는 치료 활성에 대해, 그리고 유효 투여량의 결정에 대해 생체내에서 시험될 수 있다. 예를 들면, 이러한 화합물은 인간에서 시험하기 전에, 래트, 마우스, 닭, 소, 원숭이, 토끼 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 적합한 동물 모델 시스템에서 시험될 수 있다. 실시예에 기재된 바와 같은 적합한 병용 및 투여량을 결정하기 위해 시험관내 시험이 사용될 수도 있다.
F. 방사선 요법
일부 양태에서, 추가의 요법 또는 제제 또는 선행기술의 요법은 방사선, 예를 들면 이온화 방사선을 포함한다. 본원에서 사용되는 "이온화 방사선"은 이온화(전자의 획득 또는 손실)를 생성하기에 충분한 에너지를 갖거나 핵 상호 작용을 통한 충분한 에너지를 생성할 수 있는 입자 또는 광자를 포함하는 방사선을 의미한다. 예시적이고 바람직한 이온화 방사선은 x-방사선이다. x-방사선을 표적 조직 또는 세포에 전달하는 수단은 당업계에 널리 공지되어 있다.
일부 양태에서, 이온화 방사선의 양은 20Gy 초과이고, 1회 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 이온화 방사선의 양은 18Gy이고, 3회 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 이온화 방사선의 양은 적어도, 최대 또는 정확히 2, 4, 6, 8, 10, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 18, 19, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 40Gy(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)이다. 일부 양태에서, 이온화 방사선은 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10회 용량(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)으로 투여된다. 1회 이상의 용량이 투여되는 경우, 용량은 약 1, 4, 8, 12 또는 24시간 간격, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8일 간격, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 또는 16주 간격 또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위일 수 있다.
일부 양태에서, IR의 양은 IR의 총 용량으로 제시될 수 있으며, 이는 이후 분획된 용량들로 투여된다. 예를 들면, 일부 양태에서, 총 용량은, 각각 5Gy의 10회 분할 용량으로 투여되는 50Gy이다. 일부 양태에서, 총 용량은, 각각 2 내지 3Gy의 20 내지 60회 분할 용량으로 투여되는 50 내지 90Gy이다. 일부 양태에서, IR의 총 용량은 적어도, 최대 또는 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 125, 130, 135, 140 또는 150(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)이다. 일부 양태에서, 총 용량은 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50Gy(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)의 분할 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 적어도, 최대 또는 정확히 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100회(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)의 분할 용량이 투여된다. 일부 양태에서, 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)회의 분할 용량이 1일당 투여된다. 일부 양태에서, 적어도, 최대 또는 정확히 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)회 분할 용량이 1주당 투여된다.
G. 수술
암에 걸린 인간의 약 60%는 예방, 진단 또는 병기, 치유 및 완화 수술을 포함하는 일부 유형의 수술을 받을 것이다. 치유적 수술은 암성 조직의 전부 또는 일부를 물리적으로 제거, 절제 및/또는 파괴하는 절제술을 포함하며, 본 발명의 양태의 치료, 화학요법, 방사선 요법, 호르몬 요법, 유전자 요법, 면역 요법 및/또는 대체 요법과 같은 다른 요법과 함께 사용될 수 있다. 종양 절제술은 종양의 적어도 일부를 물리적으로 제거하는 것을 나타낸다. 수술에 의한 치료는, 종양 절제술 이외에, 레이저 수술, 냉동 수술, 전기 수술, 현미경으로 제어되는 수술(모스 수술)을 포함한다.
암성 세포, 조직 또는 종양의 일부 또는 전부의 절제시, 체내에 공동이 형성될 수 있다. 치료는 관류, 직접 주사, 또는 추가의 항암 요법을 포함하는 해당 부위의 국소 적용에 의해 달성될 수 있다. 이러한 치료는 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일마다, 또는 1, 2, 3, 4 및 5주마다, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월마다 반복될 수 있다. 이러한 치료는 다양한 투여량을 가질 수도 있다.
H. 기타 제제
치료의 치료 효능을 개선하기 위해 다른 제제가 본 양태의 특정 측면과 병용되어 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 이러한 추가의 제제는 세포 표면 수용체 및 GAP 연접의 상향 조절에 영향을 미치는 제제, 세포증식 억제제 및 분화제, 세포 부착 억제제, 과증식성 세포의 세포자멸사 유도제에 대한 민감성을 증가시키는 제제, 또는 기타 생물학적 제제를 포함한다. GAP 연접의 수를 상승시킴에 의한 세포간 신호전달의 증가는 이웃하는 과증식 세포 군집에 대한 항-과증식 효과를 증가시킬 것이다. 다른 양태에서, 치료의 항-과증식성 효능을 개선하기 위해 세포증식 억제제 또는 분화제가 본 양태의 특정 측면과 병용하여 사용될 수 있다. 본 발명의 양태의 효능을 개선하기 위해 세포 부착 억제제가 고려된다. 세포 접착 억제제의 예는 초점 접착 키나제(FAK) 억제제 및 로바스타틴이다. 세포자멸사에 대한 과증식성 세포의 민감성을 증가시키는 다른 제제, 예를 들면 항체 c225가 본 발명의 양태의 특정 측면과 병용되어 사용되어 치료 효능을 개선할 수 있는 것이 추가로 생각된다.
VI. 치료 조성물의 투여
본 발명의 방법은 치료제의 병용 투여 및/또는 치료제, 예를 들면 대변 및 치료 레지멘, 예를 들면 스테로이드 요법 또는 항-인테그린 요법의 투여를 포함한다. 요법은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 요법은 순차적으로 (상이한 시간에) 또는 동시에 (동일한 시간에) 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 요법은 별도의 조성물로 존재한다. 일부 양태에서, 요법은 동일한 조성물이다.
다양한 요법들의 병용이 사용될 수 있으며, 예를 들면 "A"로 지정된 하나의 요법 및 "B"로 지정된 다른 요법이 사용될 수 있다:
Figure pct00001
건강한 대상체로부터의 대변과 같은 본 발명의 요법은 동일한 투여 경로에 의해 또는 상이한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 요법은 결장내, 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내 투여되거나, 이식에 의해, 흡입에 의해 투여되거나, 척추강내, 뇌실내 또는 비강내 투여된다. 일부 양태에서, 미생물 조절제는 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내 투여되거나, 이식에 의해, 흡입에 의해 투여되거나, 척추강내, 뇌실내 또는 비강내 투여된다.
치료 횟수 및 단위 용량 둘 다에 따른 투여되는 양은 원하는 치료 효과에 따라 다르다. 유효량은 특정 효과를 달성하는 데 필요한 양을 나타내는 것으로 이해된다. 특정 양태의 실시에서, 10 내지 200mg/kg 범위의 용량이 상기 제제의 보호 능력에 영향을 미칠 수 있는 것으로 생각된다. 따라서, 용량은 약 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195 및 200, 300, 400, 500, 1,000μg/kg, mg/kg, μg/일 또는 mg/일 또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위의 용량을 포함하는 것으로 생각된다. 또한, 이러한 용량은 1일 동안 그리고/또는 수 일, 수 주 또는 수 개월에 걸쳐 수 회 투여될 수 있다.
일부 양태에서, 인간에게 투여되는 치료적 조성물의 치료적 유효량 또는 충분한 양은 1회 이상의 투여에 의해 약 0.01 내지 약 50mg/kg 환자 체중의 범위일 것이다. 일부 양태에서, 사용되는 치료제는 예를 들면, 매일 약 0.01 내지 약 45mg/kg, 약 0.01 내지 약 40mg/kg, 약 0.01 내지 약 35mg/kg, 약 0.01 내지 약 30mg/kg, 약 0.01 내지 약 25mg/kg, 약 0.01 내지 약 20mg/kg, 약 0.01 내지 약 15mg/kg, 약 0.01 내지 약 10mg/kg, 약 0.01 내지 약 5mg/kg 또는 약 0.01 내지 약 1mg/kg 투여된다. 일부 양태에서, 치료제는 15mg/kg으로 투여된다. 그러나, 다른 투여량 레지멘이 유용할 수 있다. 일 양태에서, 본원에 기재된 치료제는 21일 주기의 1일차에 약 100mg, 약 200mg, 약 300mg, 약 400mg, 약 500mg, 약 600mg, 약 700mg, 약 800mg, 약 900mg, 약 1,000mg, 약 1,100mg, 약 1,200mg, 약 1,300mg 또는 약 1,400mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 상기 용량은 단일 용량 또는 다중 용량(예를 들면, 2 또는 3회 용량), 예를 들면, 주입으로 투여될 수 있다. 이러한 요법의 진행은 통상 기술로 쉽게 모니터링할 수 있다.
특정 양태에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 유효 용량은 약 1 내지 150μM의 혈액 수준을 제공할 수 있는 유효 용량이다. 또 다른 양태에서, 유효 용량은 약 4 내지 100μM, 약 1 내지 100μM, 약 1 내지 50μM, 약 1 내지 40μM, 약 1 내지 30μM, 약 1 내지 20μM, 약 1 내지 10μM, 약 10 내지 150μM, 약 10 내지 100μM, 약 10 내지 50μM, 약 25 내지 150μM, 약 25 내지 100μM, 약 25 내지 50μM, 약 50 내지 150μM 또는 약 50 내지 100μM(또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위)의 혈액 수준을 제공한다. 다른 양태에서, 용량은 대상체에게 투여되는 치료제로부터의 결과인 다음 혈액 수준: 약, 적어도 약 또는 최대 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100μM 또는 이들 내에서 유도 가능한 임의의 범위의 제제를 제공할 수 있다. 특정 양태에서, 대상체에 투여되는 치료제는 체내에서 대사된 치료제로 대사되고, 이 경우 혈액 수준은 상기 제제의 양을 나타낼 수 있다. 다르게는, 치료제가 대상체에 의해 대사되지 않는 정도까지, 본원에서 논의되는 혈액 수준은 대사되지 않은 치료제를 나타낼 수 있다.
치료적 조성물의 정확한 양도 의사의 판단에 따르고 각각의 개인에 대해 고유하다. 용량에 영향을 미치는 요인은 환자의 신체적 및 임상적 상태, 투여 경로, 의도된 치료 목표(증상 완화 대 치료), 및 대상이 받을 수 있는 특정 치료 물질 또는 기타 요법의 효능, 안정성 및 독성을 포함한다.
당업자는 ㎍/kg 체중 또는 mg/kg 체중의 투여량 단위가 ㎍/ml 또는 mM(혈액 수준), 예를 들면, 4 내지 100μM의 상응하는 농도 단위로 변환 및 표현될 수 있음을 인지할 것이다. 또한, 흡수는 종 및 기관/조직에 따라 달라진다는 것이 이해된다. 흡수 및 농도 계측과 관련하여 만들어지는 적용 가능한 변환 인자 및 생리학적 가정은 널리 공지되어 있으며, 당업자가 하나의 농도 계측을 다른 농도 계측으로 변환하고 본원에 설명된 용량, 효능 및 결과에 관한 합리적인 비교 및 결론을 내릴 수 있게 한다.
VII. 키트
본 발명의 특정 측면은 본 발명의 방법, 예를 들면, 암의 검출, 암의 진단 또는 암의 치료를 수행하기 위한 키트도 포함한다. 이러한 키트는 쉽게 입수 가능한 재료 및 시약으로 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 키트는 효소, 반응 튜브, 완충액, 세제, 프라이머, 프로브, 항체 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 바람직한 양태에서, 상기 키트는 의사가 세포 용해물로부터 혈액, 눈물, 정액, 타액, 소변, 조직, 혈청, 대변, 가래, 뇌척수액 및 상청액 중의 신생물 세포의 샘플을 얻을 수 있게 한다. 또 다른 바람직한 양태에서, 상기 키트는 RNA 추출, RT-PCR 및 겔 전기영동을 수행하는 데 필요한 장치를 포함한다. 검정을 수행하기 위한 설명서도 키트에 포함될 수 있다.
키트는 서열을 평가하기 위한 키트를 사용하기 위한 설명서, 서열 데이터를 변환 및/또는 분석하여 예후를 발생시키기 위한 수단을 추가로 포함할 수 있다. 바이오마커 발현을 계측하기 위한 키트 내의 제제는 바이오마커의 발현을 평가하기 위한 복수의 PCR 프로브 및/또는 qRT-PCR용 프라이머 및/또는 이들의 복수의 항체 또는 단편을 포함할 수 있다. 또 다른 양태에서, 바이오마커 발현을 계측하기 위한 키트 내의 제제는 본 발명의 바이오마커의 mRNA에 대해 상보적인 폴리뉴클레오티드 어레이를 포함할 수 있다. 발현 데이터를 발현 값으로 변환하고, 발현 값을 분석하여 생존 또는 예후를 예측하는 스코어를 발생시키기 위한 사용 가능한 수단이 포함될 수도 있다.
키트는 라벨이 있는 용기를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들면 병, 바이알 및 시험관를 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기는 상기 기재된 바과 같은 예후 또는 비-예후 적용에 유용한 프로브를 포함하는 조성물을 보유할 수 있다. 용기 상의 라벨은 조성물이 특정 예후 또는 비-예후 적용에 대해 사용된다는 것을 나타낼 수 있고, 또한 상기 기재된 생체내 또는 시험관내 사용에 대한 지침을 나타낼 수도 있다. 키트는 완충제, 사용 설명서를 포함하여, 희석제, 필터, 니들, 시린지 및 패키지 삽입물을 포함하는 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 물질을 포함하는 상기 기재된 용기 및 하나 이상의 다른 용기를 포함할 수 있다.
추가의 키트 양태는 본 발명의 치료적 조성물을 포함하는 키트에 관한 것이다. 상기 키트는 본 발명의 치료 방법에서 유용할 수 있고, 사용 설명서를 포함한다.
VIII. 실시예
하기 실시예들은 본 발명의 바람직한 양태를 입증하기 위해 포함된다. 하기 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에서 잘 기능하기 위해 발명자가 발견한 기술을 나타내고, 따라서 이의 실시를 위한 바람직한 모드를 구성하는 것으로 간주될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 그러나, 당업자는 본 발명에 비추어, 개시되는 특정 양태에서 많은 변경이 이루어질 수 있고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 수도 있음을 인식해야 한다.
실시예 1 - EGFR TKI 내성은 중간엽 표현형 및 CD70의 증가된 발현과 관련이 있다
본 실시예에서, 본 발명자들은 CD70이 EGFR 돌연변이, TKI-저항성 종양에 대한 치료 표적임을 입증하고, CD70을 표적화하는 접근법, 예를 들면, CD70-항체 약물 접합체, 항-CD70 CAR-T 세포 또는 TriNKET, EGFR-CD70 BiTE, Axl-CD70 BiTEs 또는 CD70을 표적화하는 다른 접근법(총체적으로 CD70-지향 요법으로 나타냄)은 단독으로 또는 다른 치료와 병용하여 EGFR 돌연변이, TKI 내성 종양에 대해 효과적일 수 있음을 입증한다. 또한, EGFR 돌연변이는 CD70을 표적화하는 제제로 치료되는 환자를 선택하기 위한 바이오마커이다. 또한, 본 발명자들은 CD70의 표적화가 중간엽 NSCLC 종양에 대한 치료 전략이고, 유전자 발현 또는 단백질 마커(총체적으로 상피-to-중간엽 전이(EMT) 바이오마커로 나타냄)에 의해 결정되는 중간엽 상태가 CD70-표적 치료제로 치료하기 위한 환자를 선택하기 위한 바이오마커임을 기술한다.
EGFR 돌연변이, TKI 내성 NSCLC에서 잠재적인 표적을 식별하기 위해, 본 발명자들은 EGFR TKI, 에를로티닙, 제피티닙 및 오시머티닙에 대한 획득된 내성을 갖는 NSCLC 세포주의 패널을 유도했다. 전사유전자(transcriptomic) 및 단백질유전자(proteomic) 프로파일링은 내성 세포가 상피-to-중간엽 전이(EMT)를 겪은 것으로 나타냈다. 유전자 발현 분석은 CD70이 모(EGFR TKI 민감성) 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성 세포에서 유의하게 과발현되었음을 나타냈다. CD70의 유전자 발현이 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 NSCLC 세포에서 고도로 상향 조절된다는 본 발명자들의 발견은 유세포 분석에 의해 검증되었으며, 이는 내성 세포가 모(EGFR TKI 민감성) 세포와 비교하여 세포 표면에서 더 높은 수준의 CD70 단백질을 발현한다는 것을 입증한다. EMT를 겪은 NSCLC 임상 시험편에서 CD70이 증가하는지 여부를 평가하기 위해, 본 발명자들은 TCGA로부터의 RNAseq 데이터를 평가했다. CD70의 발현은 NSCLC 종양 시험편에서 중간엽 유전자 시그니처와 상관관계가 있었다.
CD70은 T 세포 및 B 세포, 및 또한 백혈병 세포 및 신세포 암종을 포함하는 일부 악성 세포에서 발현되는 것으로도 알려져 있다. CD70의 발현은, 조절 T 세포에 영향을 미치고/유인하고 T 세포 세포자멸 및 고갈을 촉진함으로써 면역억제 환경에 기여하는 것으로 생각된다. 또한, CD70을 발현하는 종양 세포는 항-CD70 항체-약물 접합체 또는 CAR T-세포를 사용하여 직접 표적화될 수 있다. 종합적으로, 본원에 제시된 데이터는 CD70이 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 NSCLC 세포에서 과발현되고, CD70 표적화가 이러한 환경에서 효과적인 치료 전략일 수 있음을 시사한다.
EGFR 돌연변이 NSCLC 환자는 초기에 EGFR 티로신 키나제 억제제(TKI)에 반응하지만, 내성 질환은 필연적으로 나타난다. 본 발명자들은 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 NSCLC 세포주의 패널을 유도했다. EGFR-TKI 내성(ER) 세포는 2차 EGFR 돌연변이에 대해 음성이었고, EGFR TKI에 대해 내성이었다(도 1). RNAseq 및 유전자 발현 분석을 사용하여, 본 발명자들은, EGFR TKI 내성 세포가, CDH1 발현의 손실, 및 VIM 및 AXL, 및 상피-to-중간엽 전이(EMT)의 주요 매개체인 ZEB1 및 ZEB2의 증가된 발현을 포함하는 중간엽 유전자 발현 시그니처를 나타냄을 결정했다(도 2A 내지 G). RNA 발현 분석은 EGFR TKI 내성 세포가 CD70을 고도로 과발현한다는 것을 추가로 밝혀냈다(도 2H). 유세포 분석 분석은 EGFR TKI 민감성 모 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성 세포의 표면 상의 CD70의 단백질 수준이 증가된 것을 밝혀냈다(도 3). 또한, HCC827 모(EGFR TKI 민감성) 세포에서 ZEB1의 강제 발현을 통한 EMT의 유도는, 에를로티닙, 오시머티닙 또는 아파티닙으로 세포를 EGFR 억제에 대한 내성으로 만들기에 충분했다(도 4). EGFR TKI 내성이 EMT와 연관되고, 이러한 세포가 CD70을 과발현한다는 발견을 감안할 때, 본 발명자들은 다음으로 TCGA 데이터베이스를 사용하여 CD70의 발현이 인간 폐 선암종의 중간엽 표현형과 연관되었는지 여부를 평가했다. 본 발명자들은 CD70의 발현이 폐 선암종 및 NSCLC 세포주의 광범위한 패널에서의 EMT 유전자 발현 시그니처와 유의하게 연관되어 있음을 확인했다(도 5). CD70은 일반적으로 T 세포 및 B 세포에서 발현되지만, 일부 악성 세포에 의해서도 발현될 수 있다. 종양 세포에 의한 CD70의 발현은, 조절 T 세포에 영향을 미치고/유인하고 T 세포 세포자멸 및 고갈을 촉진함으로써 면역 억제 환경에 기여하는 것으로 생각된다. EGFR TKI 내성 세포에서 CD70의 발현이 향상된다는 이러한 발견은 CD70을 표적화하는 것이 EGFR TKI 내성 NSCLC의 세팅에서 임상적으로 유용할 수 있음을 시사한다.
실시예 2: EGFR TKI 내성은 중간엽 표현형 및 CD70의 증가된 발현과 관련이 있다
본 실시예는 실시예 1의 복제 및/또는 재구성된 데이터를 포함할 수 있다.
EGFR 돌연변이 NSCLC 환자는 초기에 EGFR 티로신 키나제 억제제(TKI)에 반응하지만, 내성 질환은 필연적으로 나타난다. 본 발명자들은 EGFR TKI에 대한 획득 내성을 갖는 NSCLC 세포주의 패널을 유도했다. EGFR-TKI 내성(ER) 세포는 2차 EGFR 돌연변이에 대해 음성이었고, EGFR TKI에 대해 내성이었다(도 1). RNAseq 및 유전자 발현 분석을 사용하여, 본 발명자들은, EGFR TKI 내성 세포가, CDH1 발현의 손실, 및 VIM 및 AXL, 및 상피-to-중간엽 전이(EMT)의 주요 매개체인 ZEB1 및 ZEB2의 증가된 발현을 포함하는 중간엽 유전자 발현 시그니처를 나타냄을 결정했다(도 6). RNA 발현 분석은 EGFR TKI 내성 세포가 CD70을 고도로 과발현한다는 것을 추가로 나타냈다(도 7A). 유세포 분석 분석은 EGFR TKI 민감성 모 세포와 비교하여 EGFR TKI 내성 세포의 표면 상의 CD70의 단백질 수준이 증가된 것을 나타냈다(도 7B 내지 F). EGFR TKI 내성의 동물 모델에서 CD70이 상승되었는지 여부를 결정하기 위해, 본 발명자들은 독시사이클린의 투여가 돌연변이 EGFR 발현 및 폐 종양의 발달을 초래하는 독시사이클린-유도성 EGFR L858R GEMM 모델을 사용했다. CT 이미징에 의해 종양이 시각화되면, 독시사이클린이 동물의 서브세트에서 제거되어 EGFR 억제를 모방한다. 종양 퇴행 기간 후, CT 이미징에 의해 측정된 바와 같이 종양이 재성장하기 시작했다. 동물을 오시머티닙으로 처리하여 EGFR TKI 내성 표현형을 확인했다. 종양을 수집하여 CD70의 발현을 면역조직화학으로 분석했다. CD70의 발현은 획득된 EGFR-독립성을 갖는 종양에서 상승했다(도 8). 다음으로, 본 발명자들은 EGFR 돌연변이 EGFR TKI 나이브 NSCLC 임상 시험편 및 EGFR TKI 내성 후 수집된 EGFR 돌연변이 NSCLC 시험편에서의 CD70의 발현을 평가했다. CD70의 발현은 치료 나이브 조직에서는 최소인 반면, CD70은 EGFR TKI 내성 종양에서 높게 발현되었다(도 9).
다음으로, 본 발명자들은 EGFR 돌연변이 NSCLC 세포주에서의 CD70의 발현에 대한 EMT의 영향을 조사했다. 본 발명자들은 HCC827 모(EGFR TKI 민감성) 세포에서 ZEB1의 강제 발현을 통해 EMT를 유도했다. ZEB1 발현은 중간엽 표현형을 유도하였고, 세포가 에를로티닙, 오시머티닙 또는 아파티닙으로의 EGFR 억제에 대해 내성을 갖게 하기에 충분했다(도 10A & B). ZEB1 발현은 CD70 mRNA 수준 및 CD70의 세포 표면 발현에서 상당한 증가를 유도했다. 다음으로, 본 발명자들은 TCGA 데이터베이스를 사용하여 CD70의 발현이 NSCLC 세포주 및 인간 폐 선암종에서 중간엽 표현형과 연관되었는지 여부를 평가했다. 본 발명자들은 CD70의 발현이 폐 선암종 및 NSCLC 세포주의 광범위한 패널에서의 EMT 유전자 발현 시그니처 및 ZEB1 발현과 유의하게 연관됨을 확인했다(도 11).
CD27의 CD70에 대한 결합은 CD70의 신호 전달 경로 다운스트림의 활성화를 유도한다. EGFR TKI 내성 세포에 대한 CD70 신호전달의 잠재적 영향을 조사하기 위해, 본 발명자들은 EGR TKI 내성 세포를 재조합 가용성 CD27로 자극했다. CD27 처리는 EGFR TKI 내성으로 재활성화되는 것으로 알려진 중요한 신호 전달 분자인 Akt 및 ERK의 활성화를 초래했다(도 12). 다음으로, 본 발명자들은 CD70의 발현을 녹다운시키기 위해 siRNA를 사용하였고, CD70의 녹다운이 클론원성 검정에 의해 EGFR TKI 내성 세포의 성장을 손상시킴을 발견했다(도 13).
CD70 항체 약물 접합체(ADC)가 EGFR TKI 내성 세포를 표적화하기 위한 유효한 접근법인지 여부를 결정하기 위해, 본 발명자는 H1975 세포(CD70 낮고 EGFR TKI 민감성) 및 H1975 OR5 및 H1975 OR16(둘 다 EGFR TKI 내성이고 CD70 높음)을 CD70 ADC인 쿠자투주맙-MMAE 또는 보세투주맙-MMAE으로 증가된 농도로 처러했다. 예상대로, H1975 OR5 및 OR16 세포는 CD70 ADC에 대해 H1975 모 세포보다 더 민감성이었다(도 14 및 도 16). 본 발명자들은 오시머티닙이 항-CD70 ADC와 병용되는 경우의 부가적인 항종양 세포 효과를 추가로 관찰했다. (도 15).
CD70은 일반적으로 T 세포 및 B 세포에서 발현되지만, 일부 악성 세포에 의해서도 발현될 수 있다. 종양 세포에 의한 CD70의 발현은, 조절 T 세포에 영향을 미치고/유인하고 T 세포 세포자멸 및 고갈을 촉진함으로써 면역 억제 환경에 기여하는 것으로 생각된다. EGFR TKI 내성 세포에서 CD70의 발현이 향상된다는 이러한 발견은 CD70을 표적화하는 것이 EGFR TKI 내성 NSCLC의 세팅에서 임상적으로 유용할 수 있음을 시사한다.
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본원 명세서에 개시되고 청구되는 모든 방법은 본원 명세서에 비추어 과도한 실험 없이 만들어질 수 있고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 양태의 관점에서 설명되었지만, 본 발명의 개념, 정신 및 범위를 벗어나지 않으면서 본원에 기재된 방법 및 상기 방법의 단계 또는 단계들의 순서에 변형이 적용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 보다 구체적으로는, 화학적으로 그리고 생리학적으로 모두 관련된 특정 제제가 본원에 기재된 제제를 대체할 수 있는 동시에 동일하거나 유사한 결과가 달성되는 것이 명백할 것이다. 당업자에게 자명한 이러한 모든 유사한 대체물 및 개질물은 첨부되는 청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 사상, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다. 명세서에 열거된 간행물은, 예시적인 절차 또는 본원에 제시된 것을 보완하는 기타 세부 사항을 제공하는 정도로, 구체적으로 인용에 의해 본원에 포함된다.

Claims (74)

  1. 환자에서 EGFR(epidermal growth factor receptor)-돌연변이 비-소세포 폐암(non-small-cell lung cancer: NSCLC)을 치료하는 방법으로서, CD70 표적화 분자를 상기 환자에게 투여함을 포함하는, 방법.
  2. 환자에서 상피-to-중간엽 전이(epithelial-to-mesenchymal transition: EMT)-양성 NSCLC를 치료하는 방법으로서, CD70 표적화 분자를 상기 환자에게 투여함을 포함하는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 환자가 EGFR 돌연변이 NSCLC를 갖는 것으로 결정된, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NSCLC가 폐 선암종을 포함하는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 비흡연자인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 EGFR 돌연변이가 활성화 돌연변이를 포함하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 활성화 돌연변이가 L858R, 또는 엑손 19의 결손을 포함하는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 EGFR 돌연변이가 클래스 I, 클래스 II 또는 클래스 III EGFR 돌연변이를 포함하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 암 세포에서의 CD70의 발현에 대해 시험되지 않은, 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 CD70-발현 암 세포를 갖는 것으로 결정된, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 NSCLC에 대해 이전에 치료를 받은 적이 있는, 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 환자가 상기 이전의 치료에 대한 획득 내성을 갖는 것으로 결정된, 방법.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 이전의 치료가 EGFR 티로신 키나제 억제제(tyrosine kinase inhibitor: TKI) 요법을 포함하고, 상기 요법이 하나 이상의 EGFR TKI를 포함하는, 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이전의 치료가 단일 제제 EGFR TKI 요법을 포함하는, 방법.
  15. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이전의 치료가 적어도 2종의 EGFR TKI의 병용을 포함하는, 방법.
  16. 제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 연속적인 EGFR TKI 요법을 받는 동안 전신 질환 진행을 가진 것으로 결정된, 방법.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 EGFR TKI 요법이 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 1종 이상을 포함하는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 추가의 요법의 투여를 추가로 포함하는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 추가의 요법이 화학요법, 방사선, 수술, TKI 요법 또는 면역요법을 포함하는, 방법.
  20. 제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 추가의 요법이 두르발루맙, 아테졸리주맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 네시투무맙 및 베바시주맙 중 1종 이상을 포함하는, 방법.
  21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 요법이 카보플라틴, 페메트렉세드, 납-파클리탁셀, 포토프린, 시스플라틴, 도세탁셀, 젬시타빈, 파클리탁셀 및 비노렐빈 중 1종 이상을 포함하는, 방법.
  22. 제18항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 요법이 알렉티닙, 로를라티닙 및 세리티닙 중 1종 이상을 포함하는, 방법.
  23. 제18항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 요법이 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 1종 이상을 포함하는, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 추가의 요법이 오시머티닙을 포함하는, 방법.
  25. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 애주번트 및/또는 네오-애주번트 요법의 투여를 추가로 포함하는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 ALK 돌연변이인 것으로 결정된, 방법.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 ALK 돌연변이가 아닌 것으로 결정된, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 항-CD70 항체 또는 이의 CD70-결합 단편을 포함하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 추가의 요법이 독성 분자에 링킹된(linked) 2차 항체를 포함하는, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 2차 항체 및 독성 분자가 절단 가능한 링커(linker)를 통해 링킹되는, 방법.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화되었거나 키메라인, 방법.
  32. 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 쿠사투주맙 또는 보세투주맙을 포함하는, 방법.
  33. 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 분자에 접합되는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 분자가 독성 분자인, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 독성 분자가 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF), 피롤로벤조디아제핀(PBD) 또는 듀오카마이신을 포함하는, 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 쿠사투주맙-MMAE, 보세투주맙-MMAE 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 CD70 항체로부터의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 단일 쇄 가변 단편(single chain variable fragment: scFV)을 포함하는, 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 이중특이성(bi-specific) T 세포 인게이저(BiTE), 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor: CAR), CAR을 포함하는 T 세포, 또는 삼중특이성(tri-specific) 자연 살해 세포 인게이저 요법(TriNKET)을 포함하는, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 BiTE, CAR 또는 TriNKET를 포함하는 세포를 포함하는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 세포가 줄기 세포, 전구 세포, 면역 세포 또는 자연 살해(NK:natural killer) 세포를 포함하는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 세포가 조혈 줄기 세포 또는 전구 세포, T 세포, 중간엽 줄기 세포(mesenchymal stem cell: MSC)로부터 분화된 세포 또는 유도 만능 줄기 세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)를 포함하는, 세포.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 상기 세포가 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC)로부터 단리되거나 유래되는, 세포.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 T 세포가 세포독성 T 림프구(cytotoxic T lymphocyte: CTL), CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 불변 NK T(invariant NK T: iNKT) 세포, 감마-델타 T 세포, NKT 세포 또는 조절 T 세포를 포함하는, 세포.
  46. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 CTX130 또는 ALLO-316을 포함하는, 방법.
  47. 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 CD27 CAR을 포함하는, 방법.
  48. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 SGN-75, SGN-CD70A, AMG 172 및/또는 ARGX-110을 포함하는, 방법.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자로부터의 생물학적 샘플이 1개 이상의 EMT 마커에 대해 양성인 것으로 결정되는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 종양 세포 및/또는 종양 관련 세포를 포함하는, 방법.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 생검을 포함하는, 방법.
  52. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1개 이상의 EMT 마커가 상피 마커의 감소 및/또는 중간엽 마커의 증가를 포함하는, 방법.
  53. 제49항 또는 제52항에 있어서, 상기 EMT 마커가 CDH1, VIM, AXL, ZEB1 및 ZEB2 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
  54. CD70 표적화 분자 및 하나 이상의 추가의 치료제(들)를 포함하는, 조성물.
  55. 제54항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 화학요법, 방사선, 수술, TKI 요법, 면역요법 또는 이들의 조합을 포함하는, 조성물.
  56. 제54항 또는 제55항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 두르발루맙, 아테졸리주맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 네시투무맙 및 베바시주맙 중 1종 이상을 포함하는, 조성물.
  57. 제54항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 카보플라틴, 페메트렉세드, 납-파클리탁셀, 포토프린, 시스플라틴, 도세탁셀, 젬시타빈, 파클리탁셀 및 비노렐빈 중 1종 이상을 포함하는, 조성물.
  58. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 알렉티닙, 로를라티닙 및 세리티닙 중 1종 이상을 포함하는, 조성물.
  59. 제55항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 제피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다코미티닙, 오시머티닙 및 브리가티닙 중 1종 이상을 포함하는, 조성물.
  60. 제59항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 오시머티닙을 포함하는, 조성물.
  61. 제55항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 항-CD70 항체 또는 이의 CD70-결합 단편을 포함하는, 조성물.
  62. 제61항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 독성 분자에 링킹된 2차 항체를 포함하는, 조성물.
  63. 제62항에 있어서, 상기 2차 항체 및 독성 분자가 절단 가능한 링커를 통해 링킹되는, 조성물.
  64. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간화되었거나 키메라인, 조성물.
  65. 제61항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 쿠사투주맙 또는 보세투주맙을 포함하는, 조성물.
  66. 제61항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 분자에 접합되는, 조성물.
  67. 제66항에 있어서, 상기 분자가 독성 분자인, 조성물.
  68. 제67항에 있어서, 상기 독성 분자가 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE), 듀오카마이신, 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF) 또는 피롤로벤조디아제핀(PBD)을 포함하는, 조성물.
  69. 제67항 또는 제68항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 쿠사투주맙-MMAE, 보세투주맙-MMAE 또는 이들의 조합을 포함하는, 조성물.
  70. 제54항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 CD70 항체로부터의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 조성물.
  71. 제54항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 중쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 가변 영역으로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 조성물.
  72. 제54항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 CD70에 대해 특이적으로 결합하는 단일 쇄 가변 단편(scFV)을 포함하는, 조성물.
  73. 제54항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE), 키메라 항원 수용체(CAR), CAR을 포함하는 T 세포, 또는 삼중특이적 자연 살해 세포 인게이저 요법(TriNKET)을 포함하는, 조성물.
  74. 제54항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD70 표적화 분자가 SGN-75, SGN-CD70A, AMG 172 및/또는 ARGX-110을 포함하는, 조성물.
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CN114075548B (zh) * 2020-08-13 2023-11-21 广州医科大学附属第二医院 一种靶向axl的car-t细胞及其制备方法和应用
WO2023102119A1 (en) * 2021-12-01 2023-06-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multispecific t cell engager polypeptides in combination with t cells for cancer therapy
WO2023100153A1 (en) * 2021-12-03 2023-06-08 Crispr Therapeutics Ag Use of anti-cd70 antibodies for identifying subjects susceptible for treatment with nk cell-based anti-cd70 therapy

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012135841A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Emt signatures and predictive markers and method of using the same
EP3041868A2 (en) * 2013-09-05 2016-07-13 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Cd70-binding peptides and method, process and use relating thereto
WO2015127234A1 (en) * 2014-02-20 2015-08-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Use of ibrutinib to treat egfr mutant cancer
WO2017091611A1 (en) * 2015-11-23 2017-06-01 Immungene, Inc Enhanced cancer immunotherapy using antibody-interferon fusion molecules
WO2018091999A1 (en) * 2016-11-16 2018-05-24 Pfizer Inc. Combination of an egfr t790m inhibitor and a cdk inhibitor for the treatment of non-small cell lung cancer
EP3585389A4 (en) * 2017-02-22 2020-12-23 G1 Therapeutics, Inc. TREATMENT OF EGFR MEDIATED CANCER WITH LESS SIDE EFFECTS

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