KR20220001315A - 백리향 추출물을 포함하는 숙취의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
백리향 추출물을 포함하는 숙취의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 및 숙취의 예방 및 치료용 조성물 및 건강기능식품에 대한 것이다. 본 발명의 백리향 추출물을 대상으로 한, 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정실험, 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정실험 등의 시험관내 실험 (실험예 1); 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가 동물실험(실험예 2) 등을 통하여 본 발명의 시료들이 강력한 간기능개선 및 숙취의 치료 및 예방효과를 발휘함을 확인하여 숙취의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 백리향 추출물을 포함하는 숙취의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
[문헌 1] Swift R et al., Alcohol Health Res World 1998;22:54-60
[문헌 2] 한국특허등록 제 10-0620093호
[문헌 3] 한국특허등록 제 10-1723022호
[문헌 4] 권 등, 한국응용약물학회지, 2005, 13,p. 107
[문헌 5] 대한민국 공개특허 제 10-2012-0044807호
[문헌 6] 대한민국 등록특허 제10-0828708호
[문헌 7] 대한민국 등록특허 제10-0620093호
[문헌 8] 대한민국 등록특허 제 10-1334887호
[문헌 9] 대한민국 등록특허 제 10-1723022호
[문헌 10] 정보섭등, 도해향약대사전, 영림사, 1990년, p868-869
[문헌 11] Blandino, A et al., Biotechnology letters, 1997;19:651-654
[문헌 12] Bostian, K et al., Biochemical Journal, 1978;173:787-798
[문헌 13] You, Y et al., J Korean Soc Food Sci Nutr, 2016;10:1508-1512
본 발명은 숙취의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 백리향 추출물을 포함하는 숙취의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
알코올은 뇌의 중추신경에 작용하여 일시적으로 기분을 좋게 하고 괴로움을 잊을 수 있으며, 사교 수단 및 스트레스 해소를 위한 식품으로 활용되고 있다. 하지만 음주 후 나타나는 숙취는 신체적, 정신적 현상으로 그 대표적인 증상으로는 메스꺼움, 구토, 현기증, 갈증, 무기력함, 두통, 근육통 등이 있다(Swift R et al., Alcohol Health Res World 1998;22:54-60).
정상적인 에틸알콜 대사과정은 체내로 유입된 에틸알콜이 위장 또는 소장에서 흡수되어 혈관 내로 들어가서 간장으로 옮겨지게 된다. 간세포에는 알콜 탈수소효소(ADH, alcohol dehydrogenase)가 있어 알콜을 아세트알데히드로 산화시키고, 상기 아세트알데히드는 간세포에 있는 아세트알데히드 탈수소효소(ALDH, acetaldehyde dehydrogenase)에 의해 아세트산으로 분해되어 전신의 근육이나 지방조직으로 옮겨져 최종적으로는 탄산가스와 물로 분해된다. 또한, 상기 아세트알데히드 탈수소효소에는 아세트알데히드가 저농도이더라도 산화를 개시하는 Ⅱ 형과 아세트알데히드가 고농도가 되지 않으면 작용을 하지 않는 I 형이 있으나, 동양인은 일반적으로 Ⅱ 형 아세트알데히드 효소가 결핍 또는 부족하기 때문에 아세트알데히드의 산화가 서양인에 비해 느린 편이다. 산화되지 못한 아세트알데히드 및/또는 에탄올은 정상적인 신진대사를 방해하여 다양한 숙취현상을 느끼게 한다.(한국특허등록 제 10-0620093호)
음주 후 알코올은 3가지 경로를 통해 대사되는데, 에탄올의 농도가 낮을 때는 위장관 또는 간에 존재하는 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase)와 아세트알데히드 탈수소효소 (Acetaldehyde dehydrogenase)의 작용에 의해, 에탄올의 농도가 높을 때는 소포체에 존재하는 마이크로좀 에탄올 산화체계 (MEOS: Microsomal ethanol oxidizing system)에 의해 아세트알데히드와 아세트산으로 대사되며, 이후 퍼옥시좀 (peroxisome)에 존재하는 카탈라제 (catalase)의 작용 등을 거쳐 이산화탄소 (CO2)와 물 (H2O)로 최종 분해된다. 적당량의 알코올이 유입되면 상기 기술한 대사체계가 원활하게 작용하여 알코올 때문에 일어나는 제반 증상이 일어나지 않지만, 다량의 알코올 유입 시 대사체계의 균형이 파괴되어 생체 항상성을 유지하지 못하게 되어 단기적으로는 두통 또는 두중감, 집중력 감퇴, 속쓰림 및 소화불량 등이 초래되고 장기적으로는 간 기능 장애가 발생할 수 있다.(한국특허등록 제 10-1723022호).
섭취된 알코올의 대사과정에서 필수적으로 생기는 아세트알데히드는 급성 알코올 숙취의 가장 큰 원인, 즉 메스꺼움, 구토, 현기증, 갈증, 무기력증, 근육통 등을 유발하여 일반인의 업무능력 저하로 인한 사회경제적 손실을 유발하게 된다.
숙취는 술을 마신 후에 나타나는 두통, 설사, 식욕부진, 오심, 구토, 오한, 식은땀 등의 증상을 뜻하며, 객관적인 증상으로는 인식, 운동능력 저하, 혈액학적 변화 및 호르몬의 변화를 일컫는다. 숙취의 원인은 탈수, 알코올 및 알코올 대사물 (아세트알데히드, 포름알데히드, 아세톤 등)의 독성, 흡수 장애에 의한 영양소 결핍 (혈당, 비타민, 무기질 결핍) 등인 것으로 알려져 있다. 숙취 정도는 유전에 따른 개인의 편차, 환경상태 (영양 상태, 운동 상태, 탈수 정도, 건강 상태)에 따라 정도의 차이가 매우 심하다 (권 등, 한국응용약물학회지, 2005, 13,p. 107)
기존에 다양한 추출물을 이용한 숙취해소용 조성물이 개발된 바 있다. 예를 들면, 대한민국 공개특허 제 10-2012-0044807호는 클로렐라를 유효성분으로 포함하는 간기능 개선 또는 숙취해소용 조성물; 대한민국 등록특허 제10-0828708호는 글루타치온 함유 효모 추출물, 유화 아연, 자리(Rosa roxburghi) 추출물, 황기(Engelgarditia chrysolpsis HANCE) 추출물, 및 연자육(Nelumbo nucifera) 추출물을 포함하는 숙취의 예방 또는 치료용 조성물; 대한민국 등록특허 제10-0620093호는 자리(Rosa roxburghii) 열매 추출물, 황기(Engelharditia chrysolepis HANCE) 잎 추출물, 연자육(Nelumbo nucifera) 추출물, 또는 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 추출물을 활성성분으로서 포함하는 숙취 방지 또는 치료용 조성물; 대한민국 등록특허 제 10-1334887호는 고삼 (Sophora flavescens) 추출물, 상기 추출물의 건조물, 및 상기 추출물의 농축물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 유효성분으로 함유하는 알코올성 숙취 예방 또는 숙취 해소용 약학 조성물; 대한민국 등록특허 제 10-1723022호는 개오동나무 추출물을 함유하는 숙취 예방 또는 해소용 조성물 등을 개시하고 있다.
상기와 같은 종래의 숙취해소용 조성물들보다 두통 또는 두중감, 위장관 불쾌감, 갈증, 발한, 무력감 등에 대해서는 보다 우수한 높은 체감 해소 효과를 나타내는 숙취해소용 조성물에 대한 지속적인 개발이 요구되어 왔다.
그러나, 상기 문헌의 어디에도 백리향 추출물 단독 성분 추출물의 숙취에 대한 치료효과에 대하여 개시되거나 교시된 바가 없다.
백리향 (Thymus quinquecostatus Celak.; 꿀풀과: Labiatae)의 전초는 한국 각지 고산지에 분포하며, 성분으로는 스쿠텔라린-헤테로시드(Scutellarein-heterosode), 루테올린(luteolin)-7-글루코시드(glucoside), 카바크롤(carvacrol), 우르산(ursolic acid) 등의 성분이 알려져 있으며, 기관지염, 신경염 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다 (정보섭등, 도해향약대사전, 영림사, 1990년, p868-869).
이에 본 발명자들은 숙취에 효과적인 치료제를 개발하기 위한 연구의 일환으로 백리향추출물을 대상으로 한, 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정실험, 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정실험 등의 시험관내 실험 (실험예 1); 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가 동물실험(실험예 2) 등을 통하여 본 발명의 시료들이 강력한 간기능개선 및 숙취의 치료 및 예방효과를 발휘함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 과제는 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취해소용 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품을 제공하기 위한 것이다.
상기 목적을 해결하기 위해 본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취 해소용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취해소용 건강기능식품을 제공한다.
본원에서 정의되는 백리향 추출물은 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 또는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 물 또는 10~80% 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다.
본원에서 정의되는 백리향은 전초, 뿌리, 잎, 가지, 열매 등의 부위를 포함한다.
이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 추출물은 하기와 같은 제조방법으로 수득될 수 있다.
예를 들어, 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 백리향 추출물은 하기와 같이 제조될 수 있다. 건조된 백리향을 세척 및 세절 후 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 또는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 물 또는 10~80% 에탄올을 수회 섞은 다음에 30℃ 내지 150℃, 바람직하게는 70℃ 내지 120℃의 온도에서 30분내지 48시간, 바람직하게는 1시간 내지 12시간 동안 초음파 추출법, 열수 추출법, 상온 추출법 또는 환류추출법, 바람직하게는 열수 추출법을 약 1 내지 20회, 바람직하게는 2 내지 10회 반복 수행하여 얻은 추출액을 여과, 감압 농축, 및 건조하여 본 발명의 백리향 추출물을 얻을 수 있다.
상기에서 수득된 백리향추출물을 대상으로 한, 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정실험, 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정실험 등의 시험관내 실험 (실험예 1); 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가 동물실험(실험예 2) 등을 통하여 본 발명의 시료들이 강력한 간기능개선 및 숙취의 치료 및 예방효과를 발휘함을 확인하여 간기능 개선 및 숙취의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품을 제공가능하다.
따러서, 본 발명은 상기 제조방법으로 수득된 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 및 숙취의 예방 및 치료용 약학조성물, 건강기능식품 또는 건강보조식품을 제공한다.
또한, 백리향은 오랫동안 식용되거나 생약으로 사용되어 오던 약재로서 독성 및 부작용 등의 문제가 없다.
본 발명의 약학 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량 %로 포함한다.
본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일 리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록 시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose), 락토오스 (lactose) 및 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트 및 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리 에틸렌 글리콜 및 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용 될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지 및 글리 세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 0.0001 ~ 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.00 1 ~ 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다. 조성물에서 본 발명의 추출물은 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 50 중량%의 함량으로 배합될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식 은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 및 뇌혈관내 (intracere broventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취의 예방 또는 개선용 건강기능 식품을 제공한다.
본원에서 정의되는 "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.01 내지 95%, 바람직하게는 1 내지 80% 중량백분율로 포함한다.
또한, 질환의 예방 또는 개선을 위한 목적으로 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 약학 투여형태 또는 티백제, 침출차, 건강 음료 등의 형태인 건강기능식품으로 제조 및 가공이 가능하다.
또한, 본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취 해소용 건강보조식품을 제공한다.
본 발명의 추출물은 목적 질환의 예방 및 치료를 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 및 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제 및 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
또한 상기 건강기능식품은 식품첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, "식품첨가물"로서의 적합여부는 다른 규정이 없는 한 식품의약품안전처에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
또한, 본 발명은 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취의 예방 또는 개선용 식품 또는 식품첨가물을 제공한다.
상기 "식품첨가물공전"에 수재된 품목으로 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀롤로오스, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨 가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류들을 들 수 있다.
본 발명의 추출물이 포함된 기능성 식품으로는 빵, 떡류, 건과류, 캔디류, 초콜릿류, 츄잉껌, 쨈류와 같은 과자류 아이스크림류, 빙과류, 아이스크림 분말류와 같은 아이스크림 제품류 우유류, 저지방 우유류, 유당분해우유, 가공유류, 산양유, 발효유류, 버터유류, 농축유류, 유크림류, 버터유, 자연치즈, 가공치즈, 분유류, 유청류와 같은 유가공품류 식육가공품, 알가공품, 햄버거와 같은 식육제품류 어묵, 햄, 소세지, 베이컨 등의 어육가공품과 같은 어육제품류 라면류, 건면류, 생면류, 유탕면류, 호화건먼류, 개량숙면류, 냉동면류, 파스타류와 같은 면류 과실음료, 채소류음료, 탄산음료, 두유류, 요구르트 등의 유산균음료, 혼합음료와 같은 음료 간장, 된장, 고추장, 춘장, 청국장, 혼합장, 식초, 소스류, 토마토케첩, 카레, 드레싱과 같은 조미식품 마가린, 쇼트닝 및 피자를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 상기 추출물은 목적 질환의 예방 및 치료를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 30 g, 바람직하게는 0. 3 내지 10 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리 사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상 기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.
상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량 부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 백리향 추출물을 대상으로 한, 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정실험, 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정실험 등의 시험관내 실험 (실험예 1); 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가 동물실험(실험예 2) 등을 통하여 본 발명의 시료들이 강력한 간기능개선 및 숙취의 치료 및 예방효과를 발휘함을 확인하여 숙취의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 백리향의 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가실험 결과이다.
이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 백리향 추출물의 제조
사단법인 서울 약령시협회에서 구매한 건조된 백리향 (Thymus quinquecostatus Celak) 전초 15 g에 1차 증류수 400 ml을 넣어 105℃에서 3시간 열수 추출한 뒤에, 적당히 식힌 뒤 진공 펌프를 연결하여 여과지 (1 ㎛, 150 mm filter paper)로 여과하였다. 여과된 추출물을 -80℃ 초저온 냉동고(908, Forma 900 series. Thermo scientific, USA)에 보관 후 동결건조기(FD8512, Ilshin, Seoul, Korea)를 통해 파우더 형태로 백리향 추출물 1.7g 를 만들어 -20℃에서 보관하였고 이를 하기 실험예에 사용하였다 (이하, “TQ”라 함).
실험예 1.
In vitro
활성 실험
상기 실시예의 시료들의 취 해소 및 간기능 개선에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기와 같이 실험을 수행하였다
1-1. 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정
상기 실시예의 시료들의 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 에 미치는 영향을 알아보기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Blandino, A et al., Biotechnology letters, 1997;19:651-654)
1-1-1. 실험 준비.
동결건조된 효소원 S9 rat liver homogenate (MOLTOXTM, cat. NO;11-01L.2)을 0.1% 소혈청 알부민 (bovine serum albumin, Sigma aldrich, cat NO;A9647) 용액 8 ml에 녹여 0.45 ㎛ syringe filter로 여과한 후에 사용하였다.
반응액 조성은 증류수 1.4 ml, 1.0 M tris-HCl buffer pH 8.8 (iNtRON, cat NO;IBS-BT080) 0.75 ml, 20 mM β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate (NAD+,Sigma aldrich, cat NO;N7004) 0.3ml, 100%에탄올 0.3 ml, 실시예 추출물 0.1 ml (시료 농도는 50, 200, 400, 800, 1200 ㎍/ml) 을 혼합해준다.
1-1-2.실험과정
효소원을 제외한 반응액을 조성비율로 혼합한 뒤, 효소원 0.15 ml을 혼합해주었다. 상기 혼합물을 96 well plate에 넣어준 뒤에 30℃ 에서 5분간 반응 후에 340 nm 에서 기기(EPOCH microplate reader, BioTek, USA)로 흡광도를 측정하였다.
최종적으로 활성도 계산법은 추출물을 첨가하지 않은 군을 대조군으로 하고 추출물의 활성도는 대조군에 대한 상대 활성(%)으로 측정하였다.
1-1-3.실험결과
상기 실험 결과, 백리향의 알코올 탈수소효소 (Alcohol dehydrogenase, ADH) 활성도 측정실험 결과, 50 ㎍/ml 농도에서 100.43±1.19 %, 200 ㎍/ml 농도에서 102.91±0.49 %, 400 ㎍/ml 농도에서 108.40±1.24 %, 800 ㎍/ml 농도에서 117.28±1.83 %, 1200 ㎍/ml 농도에서 128.06±1.36 %으로 농도 의존적으로 활성도가 증가함을 확인하였다. 또한 백리향 농도에 따라 유의한 차이가 나타남을 관찰하였고, 백리향 1200 ㎍/ml에서 대조군에 비해 ADH 활성도가 유의적으로 1.28배 증가하였다.(표 1 참조)
ADH의 상대적 활성도 | 실험군/대조군 비율 | ||
대조군(control) | 100.00±0.49e % | ||
실험군 | 50 ㎍/ml | 100.43±1.19e % | 1.00 |
200 ㎍/ml | 102.91±0.49d % | 1.03 | |
400 ㎍/ml | 108.40±1.24c,** % | 1.08 | |
800 ㎍/ml | 117.28±1.83b,** % | 1.17 | |
1200 ㎍/ml | 128.06±1.36a,** % | 1.28 | |
Note: Data are presented in 평균±표준편차. * p<0.05 versus 대조군, ** p<0.001 versus 대조군 |
1-2. 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정
상기 실시예의 시료들의 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도에 미치는 영향을 알아보기 위하여 문헌에 기재된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Bostian, K et al., Biochemical Journal, 1978;173:787-798)
1-2-1. 실험 준비.
동결건조된 효소원 S9 rat liver homogenate (MOLTOXTM, cat. NO;11-01L.2)을 0.1% 소혈청 알부민 (bovine serum albumin, Sigma aldrich, cat NO;A9647) 용액 8 ml에 녹여 0.45 ㎛ syringe filter로 여과한 후에 사용하였다.
본 반응액 조성은 증류수 2.1 ml, 1.0 M tris-HCl buffer pH 8.0 (iNtRON, cat NO; IBS-BT019) 0.3 ml, 20 mM β-Nicotinamide adenine dinucleotide hydrate (NAD+,Sigma aldrich, cat. NO; N7004) 0.1ml, 1M acetaldehyde (Sigma aldrich, cat. NO; 402788) 0.1ml, 3M KCl (potassium chloride, Sigma aldrich, cat. NO;P9541) 0.1ml, 0.33M2-mercaptoethanol (Sigma aldrich, cat. NO; M3148) 0.1ml, 실시예 시료 추출물 0.1 ml (시료 농도는 50, 200, 400, 800, 1200 ㎍/ml)을 혼합해 주었다.
1-2-2. 실험방법
효소원을 제외한 반응액을 조성비율로 혼합한 뒤에, 효소원 0.1 ml을 혼합해 주었다. 상기 혼합물을 96 well plate에 넣어준 뒤에 30℃ 에서 5분간 반응 후, 340 nm 에서 기기 (EPOCH microplate reader, BioTek, USA)로 흡광도를 측정하였다.
최종적으로 활성도 계산법은 추출물을 첨가하지 않은 군을 대조군으로 하고 추출물의 활성도는 대조군에 대한 상대 활성(%)으로 측정하였다.
1-2-3. 실험결과
상기 실험 결과, 백리향의 알데히드 탈수소효소 (Aldehyde dehydrogenase, ALDH) 활성도 측정결과, 50 ㎍/ml 농도에서 99.63±7.54 %, 200 ㎍/ml 농도에서 100.49±6.30 %, 400 ㎍/ml 농도에서 105.94±6.62 %, 800 ㎍/ml 농도에서 116.37±7.91 %, 1200 ㎍/ml 농도에서 128.54±7.78 %으로 농도 의존적으로 활성도가 증가하였다. 또한 백리향 농도에 따라 유의한 차이가 나타남을 관찰하였고, 백리향 1200 ㎍/ml에서 대조군에 비해 ALDH 활성도가 유의적으로 1.29배 증가하였다 (표 2 참조
ALDH의 상대적 활성도 | 실험군/대조군 비율 | ||
대조군 | 100.00±1.59c % | ||
실험군 | 50 ㎍/ml | 99.63±7.54c % | 1.00 |
200 ㎍/ml | 100.49±6.30c % | 1.00 | |
400 ㎍/ml | 105.94±6.62c % | 1.06 | |
800 ㎍/ml | 116.37±7.91b,* % | 1.16 | |
1200 ㎍/ml | 128.54±7.78a,** % | 1.29 | |
Note: Data are presented in 평균±표준편차. * p<0.05 versus 대조군, ** p<0.001 versus 대조군 |
실험예 2.
In vivo
효능 평가
상기 실시예의 시료들의 숙취해소 및 간기능 개선효능을 확인하기 위하여, 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가실험을 기존문헌에 기재된 방법을 응용하여 수행하였다 (You, Y et al., J Korean Soc Food Sci Nutr, 2016;10:1508-1512).
2-1.실험준비
본 연구는 실험 동물의 실험 윤리기준 (Institutional Animal Care and Use Committee, JSR-2020-02-004-001-A)에 따라 실험을 수행하였다.
실험동물은 생후 8주 된 250~300g Sprague-Dawley 흰쥐(수컷)를 ㈜DBL(음성군, 한국)에서 제공받아 1주일간의 적응기간을 거친 뒤에 플라스틱 케이지에 2마리씩 사육하였다.
사육장은 인공조명에 의하여 아침 7시부터 저녁 7시까지 12시간으로 조절하였으며, 실내온도는 18~23℃와 40~60%의 습도를 유지하고 정수된 식수와 사료를 자유롭게 먹게 하였다.
급성 알코올 동물 모델은 18시간 절식된 흰쥐에게 농도별 실시예 추출물 50, 200 mg/kg을 투여 30분 후에 30% 에탄올 3g/kg를 투여 후 시간대별로 경정맥에서 1 ml을 채혈하였다.
실험군은 (a)대조군, (b)에탄올 군, (c) 실시예 추출물 50 mg/kg 투여 후 에탄올 투여군 (실시예 50 + 에탄올 군), (d)실시예 추출물 200 mg/kg 투여 후 에탄올 투여군 (실시예 200 + 에탄올 군)으로 총 4군으로 나누었다.
채혈 시간은 실시예 추출물 투여 전 (0 분), 에탄올 투여 후 30 분, 60 분, 90 분, 300 분으로 5번 채혈하였다.
2-2.실험과정 (혈중 아세트알데하이드 수치 측정)
동물 경정맥에서 채혈한 혈액을 4℃ 에서 2000 rpm 으로 30분간 원심분리기(Combi 514R,(주)한일과학)로 원심분리한 후에 혈장을 분리해 아세트알데하이드 분석 kit (megazyme, K-ACHYD) 를 이용해 혈액내 아세트알데하이드 농도를 측정했다.
2-3.실험결과
백리향의 혈중 아세트알데하이드 수치를 측정한 결과, 알코올 투여전 0분에서 대조군이 15.40±3.68 g/㎖ 에탄올 군이 12.93±3.75 g/㎖, 백리향 50 + 에탄올 군이 13.21±3.44 g/㎖, 백리향 200 + 에탄올 군이 13.47±3.33 g/㎖ 으로 군간 아세트알데하이드 수치는 차이가 없었다. 알코올 투여후 30분에서 대조군이 12.35±2.14 g/㎖, 에탄올 군이 21.51±4.15 g/㎖, 백리향 50 + 에탄올 군이 18.85±3.43 g/㎖, 백리향 200 + 에탄올 군이 19.90±4.62 g/㎖ 으로 에탄올 투여군들이 대조군에 비해 높은 아세트알데하이드 수치를 보였다. 알코올 투여후 60분에서 대조군이 16.00±3.83 g/㎖, 에탄올 군이 23.91±4.05 g/㎖, 백리향 50 + 에탄올 군이 19.08±2.60 g/㎖, 백리향 200 + 에탄올 군이 11.30±3.53 g/㎖ 으로 백리향 투여군들이 에탄올만 투여한 군에 비해 낮은 아세트알데하이드 수치를 보였다. 알코올 투여후 90분에서 대조군이 17.23±2.38 g/㎖, 에탄올 군이 17.95±3.78 g/㎖, 백리향 50 + 에탄올 군이 15.60±5.10 g/㎖, 백리향 200 + 에탄올 군이 8.43±1.64 g/㎖로 백리향 투여군들이 에탄올만 투여한 군에 비해 낮은 아세트알데하이드 수치를 보였다. 알코올 투여후 300분에서 대조군이 11.65±1.19 g/㎖, 에탄올 군이 18.11±1.58 g/㎖, 백리향 50 + 에탄올 군이 12.10±1.86 g/㎖, 백리향 200 + 에탄올 군이 14.77±2.39 g/㎖으로 백리향 투여군들이 에탄올만 투여한 군에 비해 낮은 아세트알데하이드 수치를 보였다.
알코올 투여 후 90분에서 백리향 200 + 에탄올 군이 에탄올 군에 비해 현격하게 감소함을 관찰하였다. 또한 알코올 투여로 인해 혈중 아세트알데하이드 농도가 군간에 유의한 차이가 나타남을 관찰하였다. (표 3 참조) 백리향의 급성 알코올 동물 모델을 이용한 혈중 아세트알데하이드 (acetaldehyde) 농도 효능 평가실험에서 알코올 투여로 인해 혈중 아세트알데하이드 농도가 군간에 유의한 차이가 나타남을 확인하였고, 알코올 투여 90분에서 백리향 200 mg/kg 투여군이 에탄올군에 비해 아세트알데하이드 농도가 의미있게 감소하였다 (도 1).
0 min | 30 min | 60 min | 90 min | 300 min | |
대조군 | 15.40±3.68 | 12.35±2.14b,* | 16.00±3.83b | 17.23±2.38a | 11.65±1.19c,** |
에탄올 군 | 12.93±3.75 | 21.51±4.15a | 23.91±4.05a | 17.95±3.78a | 18.11±1.58a |
백리향 50 + 에탄올 군 | 13.21±3.44 | 18.85±3.43a | 19.08±2.60b | 15.60±5.10a | 12.10±1.86c,** |
백리향 200 + 에탄올 군 | 13.47±3.33 | 19.90±4.62a | 11.30±3.53c,** | 8.43±1.64b,* | 14.77±2.39b,* |
통계 분석
데이터는 평균(mean) ± SD으로 표기하고 통계 분석은 소프트웨어(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 수행하였다. *p<0.05, **p<0.001 을 통계상 유의성이 있는 것으로 간주하였다.
하기에 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------ 20 mg
유당 --------------------------------------------------- 100 mg
탈크 ---------------------------------------------------- 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
추출물 (TQ) ----------------------------------------- 10 mg
옥수수전분 -------------------------------------------- 100 mg
유당 -------------------------------------------------- 100 mg
스테아린산 마그네슘 ------------------------------------- 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------- 10 mg
결정성 셀룰로오스 --------------------------------------- 3 mg
락토오스 --------------------------------------------- 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 --------------------------------- 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------ 10 mg
만니톨 ------------------------------------------------ 180 mg
주사용 멸균 증류수 ----------------------------------- 2974 mg
Na2HPO4,12H2O ------------------------------------------- 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------- 20 mg
이성화당 ------------------------------------------------- 10 g
만니톨 ---------------------------------------------------- 5 g
정제수 --------------------------------------------------- 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖으로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------- 1000 ㎎
비타민 혼합물 -------------------------------------------- 적량
비타민 A 아세테이트 ------------------------------------- 70 ㎍
비타민 E ----------------------------------------------- 1.0 ㎎
비타민 B1 --------------------------------------------- 0.13 ㎎
비타민 B2 --------------------------------------------- 0.15 ㎎
비타민 B6 ---------------------------------------------- 0.5 ㎎
비타민 B12 --------------------------------------------- 0.2 ㎍
비타민 C ------------------------------------------------ 10 ㎎
비오틴 -------------------------------------------------- 10 ㎍
니코틴산아미드 ----------------------------------------- 1.7 ㎎
엽산 ---------------------------------------------------- 50 ㎍
판토텐산 칼슘 ------------------------------------------ 0.5 ㎎
무기질 혼합물 -------------------------------------------- 적량
황산제1철 --------------------------------------------- 1.75 ㎎
산화아연 ---------------------------------------------- 0.82 ㎎
탄산마그네슘 ------------------------------------------ 25.3 ㎎
제1인산칼륨 --------------------------------------------- 15 ㎎
제2인산칼슘 --------------------------------------------- 55 ㎎
구연산칼륨 ---------------------------------------------- 90 ㎎
탄산칼슘 ----------------------------------------------- 100 ㎎
염화마그네슘 ------------------------------------------ 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
추출물 (TQ) ------------------------------------------ 1000㎎
구연산 ------------------------------------------------- 1000 ㎎
올리고당 ------------------------------------------------- 100 g
매실농축액 ------------------------------------------------- 2 g
타우린 ----------------------------------------------------- 1 g
정제수를 가하여 ------------------------------------ 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (7)
- 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취해소용 약학조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 약학 조성물. - 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
- 제 3항에 있어서,
상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차, 또는 건강 음료 형태인 건강기능식품. - 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 간기능 개선 또는 숙취해소용 건강보조식품.
- 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취의 예방 또는 개선용 식품.
- 백리향 추출물을 유효성분으로 함유하는 숙취의 예방 또는 개선용 식품첨가물.
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