KR20210155936A - 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 RAW 264.7 세포에서 NO 생성을 촉진하고 사이토카인과 PGE2의 생성을 촉진하며, 또한 iNOS와 PGE2 생성 효소인 COX-2, 그리고 MAPKs의 활성화와 관련된 인산화 P-ERK, P-JNK, P-p38의 생성을 촉진하는 활성을 가진 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물을 개시한다.
Description
본 발명은 오크라(Okra, Abelmoschus esculentus) 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물에 관한 것이다.
면역은 인체가 자기 성분 이외의 물질이 생체의 항상성을 깨드리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 자기 보호 기작으로, 크게 선천적 면역(innate immunosurveillance)과 획득 면역(adaptive immunosurveillance)으로 구분된다(Korean J Oriental Physiol Pathol 23:1385-1391, 2009).
자연 면역이라고도 하는 선천적 면역은 대식세포, 자연살해세포 등을 포함하는 백혈구, TNF-α 등의 다양한 사이토카인 등으로 구성되어 있어 획득 면역이 발생하기 전에 미생물, 바이러스 침입 등의 감염성 병원체뿐만 아니라 노화된 정상세포와 암세포 등에 대해 대식작용(phagocytosis)을 일으켜 1차적인 방어 면역 역할을 담당한다(Biochem Biophys Res Commun 157: 87-94, 1998; J Clin Invest 79: 319-326, 1987; Biol. Pharm. Bull. 27:617, 2004). 획득 면역은 적응 면역이라고도 하는데, 항원 제시 세포가 포식하여 제시한 항원을 T세포가 인식하면서 이루어지며, T세포가 관여하는 세포성 면역과 B세포가 생산하는 항체에 의한 체액성 면역반응으로 이루어진다(Korean J Food Nutr 21: 275-282, 2008).
선천 면역에서 대식세포가 가장 중요한 역할을 담당하는데, 대식세포는 외부물질 침입을 가장 먼저 인지하여 체액성 면역과 세포성 면역에 관여하며, 활성화되면 증식과 확산능력의 향상, 대식능력 증진뿐만 아니라 NO(nitric oxide), TNF-α, IL-1β, IL-6 등의 사이토카인이나 PGE2를 분비하여 각종 미생물, 바이러스 등 감염성 병원체의 증식을 억제하고 암세포 등에 대해서도 독성을 나타내는 것으로 알려져 있다(Food Ind Nutr 5: 21-26, 2000; Biochem Biophys Res Commun 157: 87-94, 1998; J Clin Invest 79: 319-326, 1987, Biol. Pharm. Bull. 27:617, 2004; J. Immunol. 144:1425, 1990; Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 211:24, 1996; J. Exp. Med. 181:559, 1995; J. Exp. Med. 181:559, 1995).
대식세포의 활성화 특히 사이토카인이나 NO 생성 효소인 iNOS 등 면역 조절인자의 발현에 전사인자인 NF-κB이 핵심 인자로 작용한다. NF-κB는 평상시에는 IκB 단백질과 복합체를 이루어 세포질에 존재하다가, 면역 활성 자극이 받으면 IκB로 NF-κB가 유리되어 활성화는데, 활성화된 NF-κB는 핵 내로 이동하여 면역 조절 인자들의 발현을 유도한다(Curr Pharm Des 18, 5735-5745; Semin Immunol 26, 253-266).
최근 연구에서는 대식세포의 활성화가 MAPKs(mitogen-activated protein kinases)와 관련되어 있다고 보고되어 있다(KSBB J 2015, 30:182-190) MAPKs는 각종 세포증식인자, 발암 촉진제 등의 자극에 의하여 활성화되는 세린-트레오닌 단백질 인산화 효소로, 주요하게는 ERK(extra cellular signal-regulated kinase), JNK(c-jun NH2-terminal kinase), p-38 등이 있으며, 대식세포가 각종 미생물, 바이러스 등에 의해 자극을 받으면 신속하게 활성화되어 사이토카인의 생성을 유도한다(KSBB J 2015, 30:182-190; Microbiol Biotechnol Lett 2016, 44(4), 479-487).
본 발명은 오크라 추출물의 면역 증진 활성을 개시한다.
본 발명의 목적은 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.
본 발명은 아래의 실시예에서 확인되는 바와 같이, RAW 264.7 세포에서 오크라 추출물이 NO 생성을 촉진하고 사이토카인과 PGE2의 생성을 촉진하며, 또한 iNOS와 PGE2 생성 효소인 COX-2, 그리고 MAPKs의 활성화와 관련된 인산화 P-ERK, P-JNK, P-p38의 생성을 촉진함을 확인함으로써 완성된 것이다.
본 발명의 면역 증진용 조성물은 이러한 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로, 오크라 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 명세서에서, "오크라 추출물"이란 추출 대상인 오크라 잎, 열매, 줄기, 뿌리, 전초, 또는 이들의 혼합물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.
또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
본 발명의 면역 증진용 조성물에서 그 유효성분은 면역 증진 효과를 나타낼 수 있는 한, 용도, 제형 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함될 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.0001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 의도한 면역 증진 효과를 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
이러한 화합물 또는 추출물에는 각국 약전(한국에서는 "대한민국약전"), 각국 건강기능식품공전(한국에서는 식약처 고시인 "건강기능식품 기준 및 규격"임), 등의 공정서에 실려 있는 화합물 또는 추출물, 의약품의 제조·판매를 규율하는 각국의 법률(한국에서는 "약사법"임)에 따라 품목 허가를 받은 화합물 또는 추출물, 건강기능식품의 제조·판매를 규율하는 각국 법률(한국에서는 "건강기능식품에관한법률"임)에 따라 기능성, 안전성이 인정된 화합물 또는 추출물 등이 포함된다. 예컨대 그러한 화합물 또는 추출물로서 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 면역력 증진으로 기능성이 인정된, L-글루타민, 게르마늄 효모, 금사상황버섯, 당귀혼합추출물, 동충하초 주정추출물, 스피루리나, 클로렐라, 청국장균 배양 정제물(폴리감마글루탐산칼륨), 표고버섯 균사체, 효모 베타글루칸, 인삼 다당체 추출물 등을 들 수 있다. 이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서 식품 조성물로서 파악할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구루트 등의 가공 유류(乳類), 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 건강기능식품이거나, 한국 "식품위생법"의 식품공전(식약처 고시 "식품의 기준 및 규격"임)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 "식품위생법"임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 "식품첨가물 기준 및 규격")에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.
감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 식품 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.
풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위한 용도로 사용되는 것으로, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제로서는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.
보존제로서는 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등이 사용될 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다. 점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충·보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.
그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 법률에 따른 식품공전이나 식품첨가물공전을 참조할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.
약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.
약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면, 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 면역 증진용 조성물은 식품 또는 약품 등으로 제품화될 수 있다.
도 1은 세포 생존율 및 NO 생성 측정 결과이다.
도 2 내지 도 4는 사이토카인(TNF-α 및 IL-1β) 및 PGE2 측정 결과이다.
도 5 내지 도 7은 iNOS, COX-2 및 MAPKs의 활성화 인자의 웨스턴 블럿 결과이다.
도 2 내지 도 4는 사이토카인(TNF-α 및 IL-1β) 및 PGE2 측정 결과이다.
도 5 내지 도 7은 iNOS, COX-2 및 MAPKs의 활성화 인자의 웨스턴 블럿 결과이다.
이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
> 오크라 추출물의 면역 증진 활성
1. 시료 제조
오크라(Abelmoschus esculentus, 추출 부위: 잎) 건조 분말에 10배 중량의 물을 가하고 60 ℃에서 7시간동안 가열하여 추출한 후 여과하고, 감압농축 및 동결건조하여 분말상으로 제조하여 실험에 사용하였다.
2. 실험방법
2-1. 세포 배양
Murine macrophage cell line RAW 264.7 세포를 KCLB(Korean Cell Line Bank)로부터 분양받아 100 units/mL penicilin-streptomycin과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였으며, 3일에 한번 씩 계대배양을 시행하였다. Lipopolysaccharide(LPS, E, coli serotype 0111:B4)는 sigma로부터 구입하여 사용하였다.
2-2. 세포 생존율 측정
MTT 실험을 통해 시료의 세포 생존율을 측정 하였다.
RAW 264.7 세포를 24 well plate에 1 × 105 cells/well 만큼 접종하고 24시간 동안 37℃, 5% CO2 조건을 갖춘 배양기(incubator)에서 배양하였다. 그 후, 각 well의 세포에 농도별 상기 추출물 시료와 LPS(1 ㎍/mL) 처리한 다음 24시간 배양하였다. 다음 25 μL의 0.1% MTT로 처리하고 2시간 동안 배양하고, 이어서 배지를 조심스럽게 제거하고 500 μL의 DMSO(dimethyl sulfoxide)로 대체하여 형성된 포르마잔(formazan)을 세이커(shaker) 위에서 용해시키고 96 well plate로 옮긴 뒤 마이크로플레이트 리더기(microplate reader)(Tecan, Mannedorf, Swizerland)를 사용하여 540 nm에서 흡광도를 측정 하였다.
2-2. Nitric oxide (NO) assay
RAW 264.7 세포(1.5 × 105 cells/mL)를 DMEM 배지를 이용하여 24 well plate에 접종하여 24시간 배양한 후, 농도별 상기 추출물 시료와 LPS(1 ㎍/mL)를 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO양의 양을 Griess 시약을 이용하여 세포배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였다. 세포배양 상등액 100 ㎕와 Griess시약[1% (w/v) sulfani-lamide, 0.1%(w/v) naphylethylenediamine in 2.5%(v/v) phosphoric acid] 100 ㎕를 혼합하여 96 well plate에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO2)를 serial dilution(연속희석)하여 얻었다.
2-3. 면역 조절 바이오
마커인
사이토카인 및 PGE2 생성량 측정
RAW 264.7 세포를 24 well plate에 DMEM 배지를 이용하여 1.5 × 105 cells/mL로 동일하게 분주한 후, 5% CO2 항온기에서 24시간 배양 하였다. 이후 농도별 상기 추출물 시료와 LPS(1 ㎍/mL)를 동시 처리하고 상기 배양과 동일한 조건에서 배양하였다. 24 시간 배양 후 배양 배지를 원심분리(15,000 rpm, 15 min)하여 얻어진 상층액의 사이토카인 생성 함량을 측정하였다. 모든 시료는 정량 전까지 -20℃ 이하에 보관하였다. 사이토카인 정량은 mouse enzyme-linked immnunosorbent assay(ELISA) kit(ab cam)를 이용하여 제조사의 방법에 따라 정량하였다.
2-4. 웨스턴 블럿
RAW264.7 세포를 Cell culture dish 60x15mm 에 8×105 cell/well에 세포를 동일하게 분주한 후 24시간 배양하고, 추출물과 LPS (1 ㎍/mL)를 동시 처리하여 배양하였다. 이후 세포를 PBS 1회 세척하고 간백질분해효소 저해제가 함유된 RIPA buffer로 lysis시킨 후 원심분리 (15,000 rpm, 15 min, 4 ℃)하여 상층액을 분리하였다. 이 후 단백질 농도를 bovine serum albumin (BSA)를 기준으로 정량화하고 SDS-PAGE에 전기영동한 다음 PVDF mambrane 으로 이동시켰다. 전기영동시킨 membrane 은 실온에서 5% skim milk 로 3시간 동안 blocking 시킨 후 각각의 1차 antibody를 1:2500으로 희석하여 4℃에서 16시간 반동안 반응시키고 2차 antibody를 1:5000 비율로 희석하여 2시간동안 반응시킨 후 단백질은 Enhanced Chemiluminescene (ECL) 방법을 이용해 결과를 확인하였다.
1-6. 통계분석
모든 실험은 3회 이상 반복으로 이루어졌으며, 실험결과는 각 항목에 따라 평균치 표준편차(SD)를 구하여 신뢰수준 95%(p<0.05)에서 통계적 유의차를 평가하였다.
3. 실험 결과
2-1. 세포 생존율
세포 생존율 측정 결과를 도 1에 나타내었다. 실시예의 오크라 추출물은 특별한 세포독성을 나타내지 않았다.
2.2 NO 생성 측정 결과
NO 생성 측정 결과를 도 1에 함께 나타내었다. 도 1에서 확인되는 바와 같이, 오크라 추출물은 처리 농도에 비례하여 NO 생성을 촉진하였다.
2.3 사이토카인 및 PGE2 생성량 측정
사이토카인( TNF-α 및 IL-1β) 및 PGE2 측정 결과를 도 2 내지 4에 나타내었다. 도 2 내지 4를 참조하여 보면, 오크라 추출물의 처리 농도에 비례하여 사이토카인 및 PGE2의 생성이 증가하였다.
2.4 웨스턴 블럿 결과
결과를 도 5 내지 7에 나타내었다. NO 생성 효소인 iNOS와 PGE2 생성 효소인 COX-2, 그리고 MAPKs의 활성화와 관련된 인산화 P-ERK, P-JNK, P-p38의 생성이 대체로 처리 농도에 비례하여 증가하였다.
Claims (5)
- 오크라 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증진용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오크라 추출물은 오크라 잎의 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오크라 추출물은 물 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
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| KR1020200073460A KR102474681B1 (ko) | 2020-06-17 | 2020-06-17 | 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| KR1020200073460A KR102474681B1 (ko) | 2020-06-17 | 2020-06-17 | 오크라 추출물을 이용한 면역 증진용 조성물 |
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| KR20210155936A true KR20210155936A (ko) | 2021-12-24 |
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|---|---|
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Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH067115A (ja) * | 1992-06-25 | 1994-01-18 | Takasago Internatl Corp | 免疫増強用飲食品添加剤および飲食品の免疫増強効果付与方法 |
-
2020
- 2020-06-17 KR KR1020200073460A patent/KR102474681B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH067115A (ja) * | 1992-06-25 | 1994-01-18 | Takasago Internatl Corp | 免疫増強用飲食品添加剤および飲食品の免疫増強効果付与方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Carbohydrate polymers, 2014, 106, 335-342* * |
Also Published As
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| KR102474681B1 (ko) | 2022-12-07 |
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