KR20210150476A - 헤테로시클릭 화합물 및 그의 용도 - Google Patents

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KR20210150476A
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누베이션 바이오 인크.
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Abstract

Wee1 억제제로서의 헤테로시클릭 화합물이 제공된다. 화합물은 질환의 치료를 위한 치료제로서 사용될 수 있고, 특히 종양학에서 사용될 수 있다.

Description

헤테로시클릭 화합물 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 4월 9일에 출원된 미국 가출원 번호 62/831,665를 우선권 주장하며, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 개시내용은 일반적으로 세포-주기 정지 및 적절한 DNA 복구를 저지함으로써 유전자독성 화학요법을 강화시키는, DNA 손상 체크포인트 키나제, Wee1의 억제에 관여하는 치료제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 포함하는 제약상 허용되는 조성물 및 상기 경로와 연관된 질환의 치료에서 상기 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
Wee1은 Cdc2를 인산화하여 불활성화시키는 티로신 키나제이며 G 체크포인트 신호전달에 관여한다. 보다 특히, Wee1은 G2-M 체크포인트 신호전달에 관여한다. p53은 G 체크포인트에서의 주요 조절인자이기 때문에, p53-결핍 종양은 DNA 손상 후 G 체크포인트에만 의존한다. 보다 특히, p53은 G1-S 체크포인트에서의 주요 조절인자이기 때문에, p53-결핍 종양은 DNA 손상 후 G2-M 체크포인트에만 의존한다. 따라서, 이러한 종양은 Wee1 억제에 의해 DNA-손상 작용제에 대해 선택적으로 감작화된다.
Wee1은 시클린-의존성 키나제 1-결합된 시클린 B의 말단 인산화 및 불활성화에 수반되는 단백질 키나제의 패밀리에 속하며, DNA 손상에 반응하여 G 세포 주기 정지를 유발한다. Wee1은 분열 효모에서 처음 확인되었고, 여기서 Wee1 결핍은 보다 작은 크기의 효모의 복제 및 조기 유사분열 진입을 유발하였다. 이는 티로신의 억제 인산화를 담당하는 주요 키나제이다.
세포가 유사분열을 겪기 전에, 이들은 G1-S, S내 및 G2-M 체크포인트의 엄격하게 제어된 캐스케이드를 통해 진행된다. Wee1 키나제는 주요 G2-M 체크포인트 조절인자로서 부상하였다. 이 티로신 키나제는 Cdc2 (시클린-의존성 키나제 1 (CDK1)의 인간 상동체)의 티로신-15 (Y15) 상에서의 억제 인산화를 촉매함으로써 유사분열로의 진입을 음성적으로 조절한다. 이는 Cdc2/시클린 B 복합체의 불활성화를 유발하며, 이는 G2-M에서 세포를 정지시켜 DNA 복구를 가능하게 한다. 이러한 억제는 또한 Cdc2 상의 억제 인산화를 제거하는 Cdc25 포스파타제의 Chk1-매개 억제를 통해 일어난다. 따라서, 유사분열로의 진입은 Wee1과 Chk1/Cdc25의 반대 활성 사이의 균형에 달려있다. 따라서, Wee1 억제는 G2-M 정지를 저지하고 세포를 조기 유사분열로 추진시킬 것으로 예상되며, 이는 소분자 억제제 또는 소형 간섭 RNA에 의한 Wee1 억제가 유사분열로의 조기 진입 및 유사분열 카타스트로피 또는 아폽토시스를 통한 결과적 세포 사멸로 이어진다는 것을 입증하는 연구에 의해 확인된 가설이다. (S. Muller, J. Clinical. Oncology, 2015).
최근에, 몇몇 부류의 Wee1 억제제가 개시되었다. 이들 중에는 선택적 억제제인 AZD-1775 (1,2-알릴-1-(6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((4-(4-메틸피페라진-1-일)페닐)아미노)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3(2H)-온)가 있다. AZD-1775는 다양한 전임상 연구에서 단독요법으로서 또는 강화 화학요법 및 방사선요법에서 항종양 활성을 나타냈고, 현재 I/II상 임상 시험 중에 있다.
Wee1은 간세포성 암종, 유방암, 자궁경부암, 폐암, 편평 세포 암종, 미만성 내인성 뇌교 신경교종 (DIPG), 교모세포종, 수모세포종, 백혈병, 흑색종 및 난소암을 포함한 여러 암 유형에서 고도로 발현된다. (P. Reigan et al., Trends in Pharmacol. Sci., 2016).
몇몇 Wee1 억제제가 임상 개발 중에 있다. 특정 암 유형의 표적화를 가능하게 하는 Wee1 억제제 선택성 및 그 억제제의 특성을 개선시킬 여지가 존재한다.
발명의 간단한 개요
한 측면에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염이 제공된다:
Figure pct00001
여기서 Y, R1, R2, R3, R4, m 및 n은 본원에 상술된 바와 같다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염은 본원에 상술된 바와 같은 화학식 (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이다.
또 다른 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 개체에게 치료 유효량의 본원에 상술된 바와 같은 화합물, 예컨대 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 또한, 본원에 상술된 화합물 또는 그의 염을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 Wee1을 억제하는 방법이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본원에 상술된 화합물 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다. 본원에 상술된 화합물 또는 그의 염을 포함하는 키트가 또한 제공된다. 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염은 또한 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위해 제공된다.
정의
"알킬"은 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 (즉, C1-C10은 1 내지 10개의 탄소를 의미함) 포화 선형 및 분지형 1가 탄화수소 구조 및 그의 조합을 지칭하고 그를 포함한다. 특정한 알킬 기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C20 알킬")이다. 보다 특정한 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C8 알킬"), 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C3-C8 알킬"), 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C6 알킬"), 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C5 알킬"), 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C4 알킬")이다. 알킬의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 예를 들어 n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸의 동족체 및 이성질체 등과 같은 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알케닐"은 적어도 1개의 올레핀계 불포화 부위를 갖고 (즉, 적어도 1개의 화학식 C=C의 모이어티를 가짐), 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 (즉, C2-C10은 2 내지 10개의 탄소 원자를 의미함) 불포화 선형 또는 분지형 1가 탄화수소 쇄 또는 그의 조합을 지칭한다. 알케닐 기는 "시스" 또는 "트랜스" 배위이거나, 또는 대안적으로 "E" 또는 "Z" 배위일 수 있다. 특정한 알케닐 기는 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C20 알케닐"), 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C8 알케닐"), 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C6 알케닐"), 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C4 알케닐")이다. 알케닐의 예는 에테닐 (또는 비닐), 프로프-1-에닐, 프로프-2-에닐 (또는 알릴), 2-메틸프로프-1-에닐, 부트-1-에닐, 부트-2-에닐, 부트-3-에닐, 부타-1,3-디에닐, 2-메틸부타-1,3-디에닐, 그의 동족체 및 이성질체 등과 같은 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알킬렌"은 알킬과 동일하지만 2가를 갖는 잔기를 지칭한다. 특정한 알킬렌 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C6 알킬렌"), 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C5 알킬렌"), 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C4 알킬렌") 또는 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C1-C3 알킬렌")이다. 알킬렌의 예는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-CH2CH2CH2-), 부틸렌 (-CH2CH2CH2CH2-) 등과 같은 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "알키닐"은 적어도 1개의 아세틸렌계 불포화 부위를 갖고 (즉, 적어도 1개의 화학식 C≡C의 모이어티를 가짐), 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 (즉, C2-C10은 2 내지 10개의 탄소 원자를 의미함) 불포화 선형 또는 분지형 1가 탄화수소 쇄 또는 그의 조합을 지칭한다. 특정한 알키닐 기는 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C20 알키닐"), 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C8 알키닐"), 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C6 알키닐"), 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 것 ("C2-C4 알키닐")이다. 알키닐의 예는 에티닐 (또는 아세틸레닐), 프로프-1-이닐, 프로프-2-이닐 (또는 프로파르길), 부트-1-이닐, 부트-2-이닐, 부트-3-이닐, 그의 동족체 및 이성질체 등과 같은 기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"아릴"은 다중불포화 방향족 탄화수소 기를 지칭하고 그를 포함한다. 아릴은 추가적으로 융합된 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및/또는 헤테로시클릴 고리를 포함한 추가의 융합된 고리 (예를 들어, 1 내지 3개의 고리)를 함유할 수 있다. 하나의 변형에서, 아릴 기는 6 내지 14개의 환상 탄소 원자를 함유한다. 아릴 기의 예는 페닐, 나프틸, 비페닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"카르보닐"은 기 C=O를 지칭한다.
"시클로알킬"은 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 (예를 들어, C1-C10은 1 내지 10개의 탄소를 의미함), 완전 포화, 단일- 또는 다중불포화일 수 있으나 비-방향족인 시클릭 1가 탄화수소 구조를 지칭하고 그를 포함한다. 시클로알킬은 시클로헥실과 같이 1개의 고리로 이루어지거나 또는 아다만틸과 같이 다중 고리로 이루어질 수 있으나, 아릴 기는 제외한다. 1개 초과의 고리를 포함하는 시클로알킬은 융합, 스피로 또는 가교될 수 있거나, 또는 그의 조합일 수 있다. 바람직한 시클로알킬은 3 내지 13개의 환상 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소이다. 보다 바람직한 시클로알킬은 3 내지 8개의 환상 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소 ("C3-C8 시클로알킬")이다. 시클로알킬의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-시클로헥세닐, 3-시클로헥세닐, 시클로헵틸, 노르보르닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"할로" 또는 "할로겐"은 원자 번호 9 내지 85를 갖는 17족 시리즈의 원소를 지칭한다. 바람직한 할로 기는 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도를 포함한다. 잔기가 1개 초과의 할로겐으로 치환된 경우, 이는 부착되어 있는 할로겐 모이어티의 수에 상응하는 접두어를 사용함으로써 지칭될 수 있으며, 예를 들어 디할로아릴, 디할로알킬, 트리할로아릴 등은 2개 ("디") 또는 3개 ("트리")의 할로 기로 치환된 아릴 및 알킬을 지칭하고, 이는 동일한 할로일 수 있으나 반드시 그러한 것은 아니며; 따라서 4-클로로-3-플루오로페닐은 디할로아릴의 범주 내에 있다. 각각의 수소가 할로 기로 대체된 알킬 기는 "퍼할로알킬"로 지칭된다. 바람직한 퍼할로알킬 기는 트리플루오로알킬 (-CF3)이다. 유사하게, "퍼할로알콕시"는 할로겐이 알콕시 기의 알킬 모이어티를 구성하는 탄화수소에서의 각각의 H를 대신하는 알콕시 기를 지칭한다. 퍼할로알콕시 기의 예는 트리플루오로메톡시 (-OCF3)이다.
"헤테로아릴"은 1 내지 10개의 환상 탄소 원자, 및 헤테로원자 예컨대 질소, 산소 및 황을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 1개의 환상 헤테로원자를 갖는 불포화 방향족 시클릭 기를 지칭하고 그를 포함하며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화되고, 질소 원자(들)는 임의로 4급화된다. 헤테로아릴 기는 환상 탄소에서 또는 환상 헤테로원자에서 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다. 헤테로아릴은 추가적으로 융합된 아릴, 헤테로아릴, 시클로알킬 및/또는 헤테로시클릴 고리를 포함한 추가의 융합된 고리 (예를 들어, 1 내지 3개의 고리)를 함유할 수 있다. 헤테로아릴 기의 예는 피리딜, 피리미딜, 티오페닐, 푸라닐, 티아졸릴 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릴"은 1 내지 10개의 환상 탄소 원자 및 1 내지 4개의 환상 헤테로원자, 예컨대 질소, 황 또는 산소 등을 갖는 포화 또는 불포화 비-방향족 기를 지칭하며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화되고, 질소 원자(들)는 임의로 4급화된다. 헤테로시클릴 기는 단일 고리 또는 다중 축합된 고리를 가질 수 있으나, 헤테로아릴 기는 제외한다. 1개 초과의 고리를 포함하는 헤테로사이클은 융합, 스피로 또는 가교될 수 있거나, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. 융합된 고리계에서, 융합된 고리 중 1개 이상은 아릴 또는 헤테로아릴일 수 있다. 헤테로시클릴 기의 예는 테트라히드로피라닐, 디히드로피라닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 티아졸리닐, 티아졸리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 2,3-디히드로벤조[b]티오펜-2-일, 4-아미노-2-옥소피리미딘-1(2H)-일 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"옥소"는 모이어티 =O를 지칭한다.
"임의로 치환된"은 달리 명시되지 않는 한, 기가 비치환되거나 또는 그 기에 대해 열거되는 치환기 중 1개 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5개)에 의해 치환될 수 있으며 여기서 치환기는 동일하거나 상이할 수 있는 것을 의미한다. 한 실시양태에서, 임의로 치환된 기는 1개의 치환기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 임의로 치환된 기는 2개의 치환기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 임의로 치환된 기는 3개의 치환기를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 임의로 치환된 기는 4개의 치환기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 임의로 치환된 기는 1 내지 2, 2 내지 5, 3 내지 5, 2 내지 3, 2 내지 4, 3 내지 4, 1 내지 3, 1 내지 4 또는 1 내지 5개의 치환기를 갖는다.
"제약상 허용되는 담체"는 대상체에게 비독성인, 활성 성분 이외의 제약 제제 내의 성분을 지칭한다. 제약상 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "치료" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함한 유익하거나 목적하는 결과를 얻기 위한 접근법이다. 예를 들어, 유익하거나 목적하는 결과는 하기 중 하나 이상을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 질환으로부터 유발된 증상을 감소시키는 것, 질환을 앓고 있는 자의 삶의 질을 증가시키는 것, 질환을 치료하는 데 요구되는 다른 의약의 용량을 감소시키는 것, 질환의 진행을 지연시키는 것, 및/또는 개체의 생존을 연장시키는 것. 암 또는 다른 원치 않는 세포 증식과 관련하여, 유익하거나 목적하는 결과는 종양을 수축하는 것 (종양 크기를 감소시키는 것); 종양의 성장 속도를 감소시키는 것 (예컨대 종양 성장을 억제하는 것); 암 세포의 수를 감소시키는 것; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤을 어느 정도까지 억제, 지체 또는 둔화시키는 것 및 바람직하게는 정지시키는 것; 종양 전이를 억제하는 것 (어느 정도까지 둔화시키는 것 및 바람직하게는 정지시키는 것); 종양 성장을 억제하는 것; 종양의 발생 및/또는 재발을 방지 또는 지연시키는 것; 및/또는 암과 연관된 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 완화시키는 것. 일부 실시양태에서, 유익하거나 목적하는 결과는 예컨대 원치 않는 세포 증식의 발생 및/또는 재발을 방지 또는 지연시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된 "질환의 발생을 지연시키는 것"은 질환 (예컨대 암)의 발생이 연기, 저지, 둔화, 지체, 안정화 및/또는 연장되는 것을 의미한다. 이러한 지연은 병력 및/또는 치료받는 개체에 따라 다양한 시간 길이일 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 유의한 지연은, 사실상, 개체에서 질환이 발생하지 않는다는 점에서 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발생이 지연될 수 있다.
본원에 사용된, 화합물 또는 그의 염 또는 제약 조성물의 "유효 투여량" 또는 "유효량"은 유익하거나 목적하는 결과를 일으키기에 충분한 양이다. 예방적 사용의 경우, 유익하거나 목적하는 결과는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 질환의 발생 동안 나타나는 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 포함한 질환의 위험을 제거 또는 감소시키는 것, 그의 중증도를 경감시키는 것, 또는 그의 발병을 지연시키는 것과 같은 결과를 포함한다. 치료적 사용의 경우, 유익하거나 목적하는 결과는 질환으로부터 유발된 1종 이상의 증상을 호전, 완화, 경감, 지연 또는 감소시키는 것, 질환을 앓고 있는 자의 삶의 질을 증가시키는 것, 질환을 치료하는 데 요구되는 다른 의약의 용량을 감소시키는 것, 예컨대 표적화를 통해 또 다른 의약의 효과를 증진시키는 것, 질환의 진행을 지연시키는 것, 및/또는 생존을 연장시키는 것을 포함한다. 암 또는 다른 원치 않는 세포 증식과 관련하여, 유효량은 종양 수축을 유발하고/거나 종양의 성장 속도를 감소시키거나 (예컨대 종양 성장을 억제하거나) 또는 다른 원치 않는 세포 증식을 방지 또는 지연시키기에 충분한 양을 포함한다. 일부 실시양태에서, 유효량은 발생을 지연시키기에 충분한 양이다. 일부 실시양태에서, 유효량은 발생 및/또는 재발을 방지 또는 지연시키기에 충분한 양이다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있고, 암의 경우에는, 약물 또는 조성물의 유효량은 (i) 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고/거나; (ii) 종양 크기를 감소시킬 수 있고/거나; (iii) 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 어느 정도까지 억제, 지체, 둔화시키고 바람직하게는 정지시킬 수 있고/거나; (iv) 종양 전이를 억제할 수 있고/거나 (즉, 어느 정도까지 둔화시키고 바람직하게는 정지시킬 수 있고/거나); (v) 종양 성장을 억제할 수 있고/거나; (vi) 종양의 발생 및/또는 재발을 방지 또는 지연시킬 수 있고/거나; (vii) 암과 연관된 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 완화시킬 수 있다. 유효 투여량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 개시내용의 목적상, 화합물 또는 그의 염 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 예방적 또는 치유적 치료를 직접적으로 또는 간접적으로 달성하기에 충분한 양이다. 화합물 또는 그의 염 또는 제약 조성물의 유효 투여량은 또 다른 약물, 화합물 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있는 것으로 의도되고 이해된다. 따라서, "유효 투여량"은 1종 이상의 치료제의 투여와 관련하여 고려될 수 있고, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께 목적하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우 유효량으로 주어진 것으로 고려될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "개체"는 인간을 포함한 포유동물이다. 개체는 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류 또는 영장류를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 개체 (예컨대 인간)는 진행성 질환 또는 정도가 덜한 질환, 예를 들어 낮은 종양 부담을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 증식성 질환의 초기 병기 (예컨대 암)에 있다. 일부 실시양태에서, 개체는 증식성 질환의 진행 병기 (예컨대 진행성 암)에 있다.
본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그러한 값 또는 파라미터 그 자체에 관한 실시양태를 포함 (및 기재)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
본원에 기재된 측면 및 변형은 또한 측면 및 변형으로 "이루어지는" 및/또는 "본질적으로 이루어지는" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
화합물
한 측면에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염이 제공된다:
Figure pct00002
여기서,
Y는 수소 또는 R4이고;
m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
n은 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
R1은 독립적으로 F, Cl, 또는 메틸이고;
R2는 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 -(C1-C3 알킬렌)CF3이고;
R3은
Figure pct00003
이고 여기서,
Figure pct00004
는 방향족 고리를 나타내고;
M1은 CH, CR3b 또는 N이고;
M2는 CH, CR3b, 또는 N이거나, 또는 부재하고;
M3은 CH, CR3b, N, O, 또는 S이고;
M4는 CH, CR3b, N, O, 또는 S이고,
단:
(1) M4가 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M3은 CH, CR3b 또는 N이고,
(2) M3이 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M4는 CH, CR3b 또는 N이고;
R3a는 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 또는 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고, 단 R3a가 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬인 경우에, M1, M2, M3, 및 M4 중 적어도 1개는 CR3b이고;
R3b는 할로겐 또는 -CN이고;
각각의 R4는 독립적으로 옥소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 할로겐, -C(O)R17, -C(O)OR17, -C(O)NR17R18, -CN, -Si(C1-C6 알킬)3, -OR17, -NR17R18, -OC(O)NR17R18, -NR17C(O)R18, -S(O)2R17, -NR17S(O)2R18, -S(O)2NR17R18, C3-C6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, -(C1-C3 알킬렌)CN, -(C1-C3 알킬렌)OR17, -(C1-C3 알킬렌)NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)CF3, -(C1-C3 알킬렌)C(O)R17, -(C1-C3 알킬렌)C(O)NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)NR17C(O)R18, -(C1-C3 알킬렌)S(O)2R17, -(C1-C3 알킬렌)NR17S(O)2R18, -(C1-C3 알킬렌)S(O)2NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)(C3-C6 시클로알킬) 또는 -(C1-C3 알킬렌)(3- 내지 6-원 헤테로시클릴)이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 할로겐, 옥소, -OR19, -NR19R20, 또는 -C(O)R19에 의해 임의로 치환되거나,
또는 2개의 R4는, 동일한 탄소에 결합된 경우에, 이들이 부착되어 있는 탄소와 함께 C3-C6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 R19에 의해 임의로 치환되고;
각각의 R17, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 수소, C3-C6 시클로알킬, 3-6원 헤테로시클릴 또는 C1-C6 알킬이고, 이들 각각은 할로겐, 옥소 또는 -OH에 의해 임의로 치환되거나,
또는 R17 및 R18은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 할로겐, 옥소 또는 -OH에 의해 임의로 치환된 3-6원 헤테로시클릴을 형성한다.
화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 일부 실시양태에서, 화합물은 표 1X의 화합물 또는 그의 염 이외의 것이다. 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염의 일부 실시양태에서, 화합물은 표 1X의 화합물 번호 1x-39x 또는 그의 염 이외의 것이다.
표 1X
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (II)의 화합물이다.
Figure pct00010
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, 화합물은 하기 화학식 (III)의 화합물이다.
Figure pct00011
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R2는 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 이소프로필 또는 에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 이소프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 에틸이다. 일부 실시양태에서, R2는 C3-6 시클로알킬, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R2는 시클로프로필이다. 일부 실시양태에서, R2는 -(C1-C3 알킬렌)CF3이다. 일부 실시양태에서, R2는 -CH2CF3이다. 일부 실시양태에서, R2는 이소프로필, 에틸, 시클로프로필, 및 -CH2CF3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, M1은 CH이다. 일부 실시양태에서, M1은 CR3b이다. 일부 실시양태에서, M1은 N이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, M2는 CH이다. 일부 실시양태에서, M2는 CR3b이다. 일부 실시양태에서, M2는 N이다. 일부 실시양태에서, M2는 부재한다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, M3은 CH이다. 일부 실시양태에서, M3은 CR3b이다. 일부 실시양태에서, M3은 N이다. 일부 실시양태에서, M3은 S이다. 일부 실시양태에서, M3은 O이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, M4는 CH이다. 일부 실시양태에서, M4는 CR3b이다. 일부 실시양태에서, M4는 N이다. 일부 실시양태에서, M4는 S이다. 일부 실시양태에서, M4는 O이다. 일부 실시양태에서, M4가 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M3은 CH, CR3b 또는 N이다. 일부 실시양태에서, M3이 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M4는 CH, CR3b 또는 N이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R3은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00012
. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00013
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00014
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00015
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00016
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00017
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00018
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00019
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00020
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00021
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00022
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00023
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00024
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00025
이다. 일부 실시양태에서, R3은
Figure pct00026
이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R3a는 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 예컨대 각각이 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R3a는 비치환된 C3-6 시클로알킬, 예컨대 각각이 비치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R3a는 C1-C6 할로알킬에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 예컨대 각각이 C1-C6 할로알킬에 의해 임의로 치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R3a는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 예컨대 각각이 -CN에 의해 임의로 치환된 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00027
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00028
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00029
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00030
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00031
이다. 일부 실시양태에서, R3a는 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 예컨대 각각이 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R3a는 비치환된 C1-C6 알킬, 예컨대 각각이 비치환된 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R3a는 할로겐에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 예컨대 각각이 할로겐에 의해 임의로 치환된 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R3a는 -OH에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 예컨대 각각이 -OH에 의해 임의로 치환된 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R3a는 -OH에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 예컨대 각각이 -CN에 의해 임의로 치환된 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00032
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00033
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00034
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00035
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00036
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00037
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00038
이다. 일부 실시양태에서, R3a는
Figure pct00039
이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R3b는 -CN이다. 일부 실시양태에서, R3b는 할로겐, 예컨대 플루오로, 클로로, 브로모, 또는 아이오도이다. 일부 실시양태에서, R3b는 플루오로이다. 일부 실시양태에서, R3b는 클로로이다. 일부 실시양태에서, R3b는 브로모이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R3은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00040
Figure pct00041
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, m은 0이다. 일부 실시양태에서, m은 1이다. 일부 실시양태에서, m은 2이다. 일부 실시양태에서, m은 3이다. 일부 실시양태에서, m은 0, 1, 또는 2이다. 일부 실시양태에서, m은 0 또는 1이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, R1은 F이다. 일부 실시양태에서, R1은 Cl이다. 일부 실시양태에서, R1은 메틸이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, n은 0이다. 일부 실시양태에서, n은 1이다. 일부 실시양태에서, n은 2이다. 일부 실시양태에서, n은 3이다. 일부 실시양태에서, n은 4이다. 일부 실시양태에서, n은 0, 1, 2, 또는 3이다. 일부 실시양태에서, n은 0, 1, 또는 2이다. 일부 실시양태에서, n은 0 또는 1이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이거나, 또는 2개의 R4는, 동일한 탄소에 결합된 경우에, 이들이 부착되어 있는 탄소와 함께 C3-C6 시클로알킬을 형성한다. 일부 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다. 일부 실시양태에서, n은 1이고 R4는 C1-C6 알킬이다. 일부 실시양태에서, n은 2이고 각각의 R4는 독립적으로 C1-C6 알킬이다. 일부 실시양태에서, n은 2이고 각각의 R4는 메틸이다. 일부 실시양태에서, n은 2이고 2개의 R4는, 동일한 탄소에 결합된 경우에, 이들이 부착되어 있는 탄소와 함께 C3-C6 시클로알킬을 형성한다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, Y는 수소이다. 일부 실시양태에서, Y는 R4이다. 일부 실시양태에서, Y는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C3-C6 시클로알킬, 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴이다. 일부 실시양태에서, Y는 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, 또는 sec-부틸이다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 형성한다:
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 형성한다:
Figure pct00045
. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00046
를 형성한다. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00047
를 형성한다. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00048
를 형성한다. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00049
를 형성한다. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00050
를 형성한다. 일부 실시양태에서, 고리 A, 고리 B, Y, R1 및 R4는 모두 함께
Figure pct00051
를 형성한다.
화학식 (I)의 화합물의 일부 실시양태에서, 화합물은 하기 특색 중 1개 이상을 갖는다:
(I) R2는
(1) C1-C6 알킬, 예컨대 이소프로필 또는 에틸이거나,
(2) C3-C6 시클로알킬, 예컨대 시클로프로필이거나, 또는
(3) -(C1-C3 알킬렌)CF3, 예컨대 -CH2CF3임;
(II) R3은
(4)
Figure pct00052
이고, 여기서 R3a는 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 또는 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고, 단 R3a가 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬인 경우에, M1, M2, M3, 및 M4 중 적어도 1개는 CR3b이고, R3b는 할로겐 또는 -CN이거나, 또는
(5)
Figure pct00053
Figure pct00054
임;
(III) 고리 A, 고리 B, R1, 및 R4는 함께 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 형성함:
Figure pct00055
.
일부 실시양태에서, (1)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (2)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (3)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (4)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (5)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (I) 및 (4)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (I) 및 (5)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (1) 및 (4)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (1) 및 (5)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (2) 및 (4)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (2) 및 (5)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (3) 및 (4)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (3) 및 (5)가 적용된다. 일부 실시양태에서, (I) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (1) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (2) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (3) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (4) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (5) 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (I), (4), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (I), (5), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (1), (4), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (1), (5), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (2), (4), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (2), (5), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (3), (4), 및 (III)이 적용된다. 일부 실시양태에서, (3), (5), 및 (III)이 적용된다.
본원의 설명에서, 모이어티의 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면은 다른 모이어티의 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면과 조합될 수 있으며, 이는 설명의 각각의 및 모든 조합이 구체적으로 및 개별적으로 열거된 것과 같은 것으로 이해된다. 예를 들어, 화학식 (I)의 R1과 관련하여 본원에 제공된 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면은 R2, R3, R4, m, n 및 Y의 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면과 조합될 수 있으며, 각각의 및 모든 조합이 구체적으로 및 개별적으로 열거된 것과 같다. 또한, 화학식 (I)의 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면은, 적용가능한 경우에, 본원에 상술된 다른 화학식에 동등하게 적용되고, 각각의 및 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면이 모든 화학식에 대해 별개로 및 개별적으로 열거된 것과 같이 동등하게 기재된 것으로 이해된다. 예를 들어, 화학식 (I)의 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면은, 적용가능한 경우에, 본원에 상술된 임의의 화학식, 예컨대 화학식 (II) 및 화학식 (III)에 동등하게 적용되고, 각각의 및 모든 설명, 변형, 실시양태 또는 측면이 모든 화학식에 대해 별개로 및 개별적으로 열거된 것과 같이 동등하게 기재된다.
본원에 언급된 화합물의 염, 예컨대 제약상 허용되는 염이 또한 제공된다. 본 발명은 또한 기재된 화합물의 임의의 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 형태 및 임의의 호변이성질체 또는 다른 형태를 포함한 임의의 또는 모든 입체화학적 형태를 포함한다.
본원에 상술된 바와 같은 화합물은 한 측면에서 정제된 형태일 수 있고, 정제된 형태의 화합물을 포함하는 조성물이 본원에 상술된다. 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조성물, 예컨대 실질적으로 순수한 화합물의 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조성물은 실질적으로 순수한 형태이다. 달리 언급되지 않는 한, "실질적으로 순수한"은 35% 이하의 불순물을 함유하는 조성물을 의도하며, 여기서 불순물은 조성물의 대부분을 구성하는 화합물 또는 그의 염 이외의 화합물을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 이하의 불순물을 함유하는, 실질적으로 순수한 화합물 또는 그의 염의 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 이하의 불순물을 함유하는 실질적으로 순수한 화합물 또는 그의 염의 조성물이 제공된다.
대표적인 화합물을 표 1에 열거하였다.
표 1
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
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일부 실시양태에서, 표 1에 기재된 화합물 또는 그의 호변이성질체 또는 상기 중 임의의 것의 염 및 그의 용도가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 표 1에 기재된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 실시양태 및 변형은 적용가능한 경우에 본원에 상술된 임의의 화학식의 화합물에 적합하다.
본 개시내용에 따른 중간체 및 최종 화합물을 포함한 본원에 상술된 화합물의 대표적인 예가 본원에 도시된다. 한 측면에서, 화합물 중 임의의 것은, 적용가능한 경우에 단리되고 개체에게 투여될 수 있는 중간체 화합물을 포함하여, 본원에 상술된 방법에 사용될 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 도시된 화합물은 염이 도시되지 않더라도 염으로서 존재할 수 있고, 본 개시내용은 통상에 기술자에 의해 널리 이해되는 바와 같이, 본원에 도시된 화합물의 모든 염 및 용매화물, 뿐만 아니라 화합물의 비-염 및 비-용매화물 형태를 포괄하는 것으로 이해된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 화합물의 염은 제약상 허용되는 염이다. 1개 이상의 3급 아민 모이어티가 화합물에 존재하는 경우에, N-옥시드가 또한 제공되고 기재된다.
호변이성질체 형태가 본원에 기재된 화합물 중 임의의 것에 존재할 수 있는 경우에, 호변이성질체 형태 중 오직 하나 또는 일부가 명백하게 도시될 수 있더라도 각각의 및 모든 호변이성질체 형태가 의도된다. 구체적으로 도시된 호변이성질체 형태는 용액 중에서 또는 본원에 기재된 방법에 따라 사용되는 경우에 우세한 형태일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다.
본 개시내용은 또한 표 1의 화합물과 같은 기재된 화합물의 임의의 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체 형태를 포함한 임의의 또는 모든 입체화학적 형태를 포함한다. 구조 또는 명칭은 도시된 화합물의 모든 가능한 입체이성질체를 포괄하는 것으로 의도되고, 각각의 고유한 입체이성질체는 접미어 "a", "b" 등을 보유하는 화합물 번호를 갖는다. 화합물의 모든 형태, 예컨대 화합물의 결정질 또는 비-결정질 형태가 또한 본 발명에 의해 포괄된다. 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물, 예컨대 그의 특정 입체화학적 형태를 포함한 실질적으로 순수한 화합물의 조성물, 또는 2개 이상의 입체화학적 형태를 포함한 임의의 비의 본 발명의 화합물의 혼합물을, 예컨대 라세미 또는 비-라세미 혼합물로 포함하는 조성물이 또한 의도된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물의 동위원소-표지된 및/또는 동위원소-농축된 형태를 의도한다. 본원의 화합물은 이러한 화합물을 구성하는 원자 중 1개 이상에서 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물은 동위원소-표지된, 예컨대 화학식 (I)의 동위원소-표지된 화합물 또는 본원에 기재된 그의 변형이며, 여기서 1개 이상의 원자의 분획이 동일한 원소의 동위원소에 의해 대체된다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 예시적인 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 염소의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C 13N, 15O, 17O, 32P, 35S, 18F, 36Cl을 포함한다. 특정 동위원소 표지된 화합물 (예를 들어 3H 및 14C)은 화합물 또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 보다 무거운 동위원소 예컨대 중수소 (2H)의 혼입은 더 큰 대사 안정성으로부터 생성된 특정의 치료 이점, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기, 또는 감소된 투여량 요건을 제공할 수 있고, 따라서 일부 경우에 바람직할 수 있다.
본 발명의 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 방법 및 기술에 의해 또는 적절한 동위원소-표지된 시약을 상응하는 비-표지된 시약 대신에 대체하여 첨부된 실시예에 기재된 것과 유사한 절차에 의해 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 기재된 화합물 중 임의의 것의 임의의 또는 모든 대사물을 포함한다. 대사물은 기재된 화합물 중 임의의 것의 생체변환에 의해 생성되는 임의의 화학 종, 예컨대 화합물의 대사의 중간체 및 생성물, 예컨대 인간에의 투여 후에 생체내에서 생성될 것들을 포함할 수 있다.
적합한 용기 내에 본원에 기재된 화합물 또는 그의 염 또는 용매화물을 포함하는 제조 물품이 제공된다. 용기는 바이알, 자, 앰플, 사전로딩된 시린지, 정맥주사용 백 등일 수 있다.
바람직하게는, 본원에 상술된 화합물은 경구로 생체사용가능하다. 그러나, 화합물은 또한 비경구 (예를 들어, 정맥내) 투여를 위해 제제화될 수 있다.
본원에 기재된 1종의 또는 여러 화합물은 활성 성분으로서의 화합물 또는 화합물들을 관련 기술분야에 공지되어 있는 제약상 허용되는 담체와 조합함으로써 의약의 제조에 사용될 수 있다. 의약의 치료 형태에 따라, 담체는 다양한 형태일 수 있다. 하나의 변형에서, 의약의 제조는 본원에 개시된 방법 중 임의의 것에 사용하기 위한 것, 예를 들어, 암의 치료를 위한 것이다.
일반적 합성 방법
본 발명의 화합물은 일반적으로 하기에 및 보다 구체적으로 이하 실시예 (예컨대 하기 실시예에 제공된 반응식)에 기재된 바와 같은 다수의 공정에 의해 제조될 수 있다. 하기 공정 설명에서, 도시된 화학식에 사용된 기호는 본원의 화학식과 관련하여 상기 기재된 기를 나타내는 것으로 이해되어야 한다.
화합물의 특정한 거울상이성질체를 수득하고자 하는 경우에, 이는 거울상이성질체를 분리 또는 분해하기 위한 임의의 적합한 통상적인 절차를 사용하여 상응하는 거울상이성질체의 혼합물로부터 달성될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 부분입체이성질체 유도체는 거울상이성질체의 혼합물, 예를 들어, 라세미체, 및 적절한 키랄 화합물의 반응에 의해 생산될 수 있다. 이어서, 부분입체이성질체는 임의의 편리한 수단에 의해, 예를 들어 결정화에 의해 분리되고 목적하는 거울상이성질체가 회수될 수 있다. 또 다른 분해 공정에서, 라세미체는 키랄 고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분리될 수 있다. 대안적으로, 원하는 경우에 특정한 거울상이성질체는 기재된 공정 중 하나에서 적절한 키랄 중간체를 사용함으로써 수득될 수 있다.
화합물의 특정한 이성질체를 수득하거나 또는 달리 반응의 생성물을 정제하고자 하는 경우에, 크로마토그래피, 재결정화 및 다른 통상적인 분리 절차가 또한 중간체 또는 최종 생성물과 함께 사용될 수 있다.
본원에 제공된 화합물 또는 그의 염의 용매화물 및/또는 다형체가 또한 고려된다. 용매화물은 화학량론적 또는 비-화학량론적 양의 용매를 함유하고, 종종 결정화 공정 동안 형성된다. 용매가 물인 경우에 수화물이 형성되거나, 또는 용매가 알콜인 경우에 알콜레이트가 형성된다. 다형체는 원소 조성이 동일한 화합물의 상이한 결정 충전 배열을 포함한다. 다형체는 통상적으로 상이한 X선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 융점, 밀도, 경도, 결정 형상, 광학적 및 전기적 특성, 안정성, 및/또는 용해도를 갖는다. 다양한 인자 예컨대 재결정화 용매, 결정화 속도, 및 저장 온도는 단결정 형태가 우세하도록 할 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물은 반응식 1 내지 반응식 5에 따라 합성된다.
반응식 1
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반응식 2
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반응식 3
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반응식 4
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반응식 5
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여기서 m, n, Y, R1, R2, R3, 및 R4는 화학식 (I)에 대해 본원에 정의된 바와 같다. 특정한 예는 하기 실시예 섹션에 제공된다.
제약 조성물 및 제제
본원에 상술된 화합물 중 임의의 것의 제약 조성물은 본 개시내용에 의해 포괄된다. 따라서, 본 개시내용은 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 한 측면에서, 제약상 허용되는 염은 산 부가염, 예컨대 무기 또는 유기 산을 사용하여 형성된 염이다. 제약 조성물은 경구, 협측, 비경구, 비강, 국소 또는 직장 투여에 적합한 형태 또는 흡입에 의한 투여에 적합한 형태를 취할 수 있다.
본원에 상술된 바와 같은 화합물은 한 측면에서 정제된 형태일 수 있고, 정제된 형태의 화합물을 포함하는 조성물은 본원에 상술되어 있다. 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염을 포함하는 조성물, 예컨대 실질적으로 순수한 화합물의 조성물이 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 상술된 바와 같은 화합물 또는 그의 염을 함유하는 조성물은 실질적으로 순수한 형태이다.
하나의 변형에서, 본원의 화합물은 개체에게 투여하기 위해 제조된 합성 화합물이다. 또 다른 변형에서, 실질적으로 순수한 형태의 화합물을 함유하는 조성물이 제공된다. 또 다른 변형에서, 본 개시내용은 본원에 상술된 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 포괄한다. 또 다른 변형에서, 화합물을 투여하는 방법이 제공된다. 정제된 형태, 제약 조성물, 및 화합물을 투여하는 방법은 본원에 상술된 임의의 화합물 또는 그의 형태에 적합하다.
본원에 상술된 화합물 또는 그의 염은 경구, 점막 (예를 들어, 비강, 설하, 질, 협측 또는 직장), 비경구 (예를 들어, 근육내, 피하 또는 정맥내), 국소 또는 경피 전달 형태를 포함한 임의의 이용가능한 전달 경로를 위해 제제화될 수 있다. 화합물 또는 그의 염은 정제, 캐플릿, 캡슐 (예컨대 경질 젤라틴 캡슐 또는 연질 탄성 젤라틴 캡슐), 카쉐, 트로키, 로젠지, 검, 분산액, 좌제, 연고, 습포제 (찜질제), 페이스트, 분말, 드레싱, 크림, 용액, 패치, 에어로졸 (예를 들어, 비강 스프레이 또는 흡입기), 겔, 현탁액 (예를 들어, 수성 또는 비-수성 액체 현탁액, 수중유 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼), 용액 및 엘릭시르를 포함하나 이에 제한되지는 않는 전달 형태를 제공하기 위해 적합한 담체와 함께 제제화될 수 있다.
본원에 기재된 1종의 또는 여러 화합물 또는 그의 염은 활성 성분으로서의 화합물 또는 화합물들 또는 그의 염을 제약상 허용되는 담체, 예컨대 상기 언급된 것들과 조합함으로써, 제제, 예컨대 제약 제제의 제조에 사용될 수 있다. 시스템의 치료 형태 (예를 들어, 경피 패치 vs. 경구 정제)에 따라, 담체는 다양한 형태일 수 있다. 또한, 제약 제제는 보존제, 가용화제, 안정화제, 재-습윤제, 에멀게이터, 감미제, 염료, 조정제, 및 삼투압의 조정을 위한 염, 완충제, 코팅제 또는 항산화제를 함유할 수 있다. 화합물을 포함하는 제제는 또한 가치있는 치료적 특성을 갖는 다른 물질을 함유할 수 있다. 제약 제제는 공지된 제약 방법에 의해 제조될 수 있다. 적합한 제제는 예를 들어 본원에 참조로 포함된 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 20th ed. (2000)]에서 찾아볼 수 있다.
본원에 기재된 바와 같은 화합물은 개체에게 일반적으로 허용되는 경구 조성물의 형태, 예컨대 정제, 코팅된 정제, 및 경질 또는 연질 쉘로의 겔 캡슐, 에멀젼 또는 현탁액으로 투여될 수 있다. 이러한 조성물의 제조에 사용될 수 있는 담체의 예는 락토스, 옥수수 전분 또는 그의 유도체, 활석, 스테아레이트 또는 그의 염 등이다. 연질 쉘을 갖는 겔 캡슐을 위한 허용되는 담체는 예를 들어 식물 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이다. 또한, 제약 제제는 보존제, 가용화제, 안정화제, 재-습윤제, 에멀게이터, 감미제, 염료, 조정제, 및 삼투압의 조정을 위한 염, 완충제, 코팅제 또는 항산화제를 함유할 수 있다.
본원에 기재된 화합물 중 임의의 것은 기재된 임의의 투여 형태의 정제로 제제화될 수 있고, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 염은 10 mg 정제로서 제제화될 수 있다.
본원에 제공된 화합물을 포함하는 조성물이 또한 기재된다. 하나의 변형에서, 조성물은 화합물 또는 그의 염 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다. 또 다른 변형에서, 실질적으로 순수한 화합물의 조성물이 제공된다.
사용 방법
본원에 상술된 화합물 및 조성물, 예컨대 본원에 제공된 임의의 화학식의 화합물 또는 그의 염 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 함유하는 제약 조성물은 본원에 제공된 바와 같은 투여 및 치료 방법에 사용될 수 있다. 화합물 및 조성물은 또한 시험관내 방법, 예컨대 스크리닝 목적을 위해 및/또는 품질 관리 검정을 수행하기 위해 세포에 화합물 또는 조성물을 투여하는 시험관내 방법에 사용될 수 있다.
개체에게 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 본 발명의 화합물 또는 본원에 상술되거나 기재된 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 추가로, 개체에게 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 증식성 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 개체에게 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화합물은 본원에 기재된 투여량 및/또는 투여 방법에 따라 개체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 개체에서의 암은 1개 이상의 TP53 유전자 돌연변이를 갖거나 또는 돌연변이체 p53을 발현한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 TP53 유전자 돌연변이를 갖거나 또는 돌연변이체 p53을 발현하는 개체에서의 암은 교모세포종이다. TP53은 p53을 코딩하는 인간 유전자이다. 일부 실시양태에서, (a) (i) 암에서의 TP53 유전자의 1개 이상의 돌연변이의 존재, 또는 (ii) 암에서의 돌연변이체 p53의 발현에 기초하여 치료를 위한 개체를 선택하고, 개체에게 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 돌연변이체 p53의 발현에 대해 검정된다. 일부 실시양태에서, 암의 TP53 유전자를 서열분석하여 1개 이상의 돌연변이를 검출한다. 일부 실시양태에서, TP53 유전자는 암을 생검하고 생검 암으로부터의 TP53 유전자를 서열분석함으로써 서열분석된다. 일부 실시양태에서, TP53 유전자는 개체로부터의 순환-종양 DNA (ctDNA)를 서열분석함으로써 서열분석된다.
일부 실시양태에서, 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 임의의 실시양태를 사용하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 암의 치료를 위한 의약의 제조에서 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 임의의 실시양태를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 본원에 기재된 바와 같은 증식성 질환, 예컨대 암을 앓는 개체를 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 증식성 질환, 예컨대 암 발병 위험이 있다. 이들 실시양태 중 일부에서, 개체는 1종 이상의 위험 인자에 기초하여 암 발병 위험이 있는 것으로 결정된다. 이들 실시양태 중 일부에서, 위험 인자는 가족력 및/또는 암과 연관된 유전자이다.
본 발명의 화합물 또는 그의 염은 다양한 질환 및 장애를 치료하는데 효과적인 것으로 여겨진다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 증식성 질환, 예컨대 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서 암은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서 암은 성인 및 소아 종양학, 점액양 및 원형 세포 암종, 국부 진행성 종양, 전이성 암, 인간 연부 조직 육종 예컨대 유잉 육종, 암 전이 예컨대 림프 전이, 편평 세포 암종, 특히 두경부 암종, 식도 편평 세포 암종, 구강 암종, 혈액 세포 악성종양 예컨대 다발성 골수종, 백혈병 예컨대 급성 림프구성 백혈병, 급성 비림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수구성 백혈병, 및 모발상 세포 백혈병, 삼출액 림프종 (체강계 림프종), 흉선 림프종, 피부 T 세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 부신 피질암, ACTH-생산 종양, 폐암 예컨대 소세포 암종 및 비소세포암, 유방암 예컨대 소세포 암종 및 관 암종, 위장암 예컨대 위암, 결장암, 결장직장암, 결장직장 신생물과 연관된 폴립, 췌장암, 간암, 비뇨기암, 예컨대 방광암 예컨대 원발성 표재성 방광 종양, 방광의 침습성 이행 세포 암종, 및 근육-침습성 방광암, 전립선암, 여성 생식관의 악성종양 예컨대 난소 종양, 원발성 복막 상피 신생물, 자궁경부 암종, 자궁내막암, 질암, 외음부암, 자궁암 및 난소 여포에서의 고형 종양, 남성 생식관의 악성종양 예컨대 고환암 및 음경암, 신장암 예컨대 신세포 암종, 뇌암 예컨대 내재성 뇌 종양, 신경모세포종, 성상세포 뇌 종양, 신경교종, 교모세포종, 중추 신경계에서의 전이성 종양 세포 침습, 골암 예컨대 골종 및 골육종, 피부암 예컨대 흑색종, 인간 피부 각질세포의 종양 진행, 편평 세포암, 갑상선암, 망막모세포종, 신경모세포종, 복막 삼출, 악성 흉막 삼출, 중피종, 윌름스 종양, 담낭암, 영양막 신생물, 혈관주위세포종, 및 카포시 육종 중 임의의 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물 및 조성물은 세포 (예컨대 암 세포)에서 G2-M 체크포인트를 억제한다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 본원에 기재된 임의의 암 유형으로부터의 암 세포이다. G2-M DNA 손상 체크포인트의 억제는 세포의 조기 유사분열 및 결과적으로 아폽토시스를 유발한다. 일부 실시양태에서, 세포에 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 G2-M DNA 손상 체크포인트를 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, G2-M DNA 손상 체크포인트는 세포 집단 내 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상의 세포에서 억제된다. 일부 실시양태에서, G2-M DNA 손상 체크포인트는 세포 집단 내의 최대 약 99%, 최대 약 98%, 최대 약 97%, 최대 약 96%, 최대 약 95%, 최대 약 90%, 최대 약 85% 또는 최대 약 80%의 세포에서 억제된다.
일부 실시양태에서, 세포에 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 조기 유사분열을 유도하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 조기 유사분열은 세포 집단 내의 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상의 세포에서 유도된다. 일부 실시양태에서, 조기 유사분열은 세포 집단 내의 최대 약 99%, 최대 약 98%, 최대 약 97%, 최대 약 96%, 최대 약 95%, 최대 약 90%, 최대 약 85% 또는 최대 약 80%의 세포에서 유도된다.
일부 실시양태에서, 세포에 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 아폽토시스는 세포 집단 내의 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상의 세포에서 유도된다. 일부 실시양태에서, 아폽토시스는 세포 집단 내의 최대 약 99%, 최대 약 98%, 최대 약 97%, 최대 약 96%, 최대 약 95%, 최대 약 90%, 최대 약 85% 또는 최대 약 80%의 세포에서 유도된다.
일부 실시양태에서, 세포에 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 Wee1을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, Wee1은 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 약 95% 이상, 약 96% 이상, 약 97% 이상, 약 98% 이상 또는 약 99% 이상까지 억제된다. 일부 실시양태에서, Wee1은 최대 약 99%, 최대 약 98%, 최대 약 97%, 최대 약 96%, 최대 약 95%, 최대 약 90%, 최대 약 85%, 최대 약 80%, 최대 약 70% 또는 최대 약 60% 억제된다. 일부 실시양태에서, Wee1의 활성은 키나제 검정에 따라 측정된다.
일부 실시양태에서, Wee1을 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, Wee1을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1 μM 미만, 900 nM 미만, 800 nM 미만, 700 nM 미만, 600 nM 미만, 500 nM 미만, 400 nM 미만, 300 nM 미만, 200 nM 미만, 100 nM 미만, 50 nM 미만, 10 nM 미만, 5 nM 미만, 1 nM 미만 또는 0.5 nM 미만의 IC50으로 Wee1에 결합한다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 0.1 nM 내지 1 nM, 1 nM 내지 5 nM, 5 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 100 nM, 100 nM 내지 200 nM, 200 nM 내지 300 nM, 300 nM 내지 400 nM, 400 nM 내지 500 nM, 500 nM 내지 600 nM, 600 nM 내지 700 nM, 700 nM 내지 800 nM, 800 nM 내지 900 nM, 또는 900 nM 내지 1 μM의 IC50으로 Wee1에 결합한다. 일부 실시양태에서, IC50은 키나제 검정에 따라 측정된다. 일부 실시양태에서, IC50은 세포 세포독성 검정에 따라 측정된다.
일부 실시양태에서, 세포를 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 접촉시키는 것을 포함하는, 세포의 증식을 억제하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 5 μM 미만, 2 μM 미만, 1 μM 미만, 900 nM 미만, 800 nM 미만, 700 nM 미만, 600 nM 미만, 500 nM 미만, 400 nM 미만, 300 nM 미만, 200 nM 미만, 100 nM 미만 또는 50 nM 미만의 IC50으로 세포의 증식을 억제하는데 효과적이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 제약상 허용되는 염은 10 nM 내지 20 nM, 20 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 100 nM, 100 nM 내지 500 nM, 500 nM 내지 1 μM, 1 μM 내지 2 μM, 또는 2 μM 내지 5 μM의 IC50으로 세포의 증식을 억제하는데 효과적이다. 일부 실시양태에서, IC50은 세포 증식 검정에 따라 측정된다.
조합 요법
본원에 제공된 바와 같이, 본원에 개시된 화합물 또는 그의 염은, 예를 들어 암 세포의 아폽토시스를 유도하거나 또는 그의 유사분열을 억제함으로써 면역계를 활성화시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물 또는 그의 염은 종양 면역요법을 증진시키기 위해 다른 항암제와 조합하여 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체에게 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 본 발명의 화합물 또는 본원에 상술되거나 기재된 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 질환은 증식성 질환, 예컨대 암이다.
일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 암 면역요법제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 면역자극제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 체크포인트 단백질을 표적화 (예를 들어 면역 체크포인트 억제제)한다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 종양에 대한 면역 반응을 자극하거나, 증진시키거나, 개선시키는데 효과적이다. 일부 실시양태에서, 추가의 화학요법제는 DNA 알킬화제, 백금-기반 화학요법제, 키나제 억제제 또는 DNA 손상 복구 (DDR) 경로 억제제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 화학요법제는 DNA 알킬화제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 화학요법제는 백금-기반 화학요법제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 화학요법제는 키나제 억제제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 화학요법제는 DNA 손상 복구 (DDR) 경로 억제제이다.
또 다른 측면에서, 질환, 예컨대 암의 치료를 위한 조합 요법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 본 발명의 화합물 또는 본원에 상술되거나 기재된 화합물) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 방사선 요법과 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 추가의 화학요법제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 키나제 억제제 또는 1개 이상의 DNA 손상 복구 (DDR) 경로를 억제하는 작용제이다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 추가의 화학요법제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 추가의 화학요법제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용될 수 있는 화학요법제의 예는 DNA-표적화제, DNA 알킬화제 (예컨대 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 다카르바진, 테모졸로미드 또는 니트로소우레아), 토포이소머라제 억제제 (예컨대 토포이소머라제 I 억제제 (예를 들어, 이리노테칸 또는 토포테칸) 또는 토포이소머라제 II 억제제 (예를 들어, 에토포시드 또는 테니포시드)), 안트라시클린 (예컨대 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론 또는 발루비신), 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예컨대 보리노스타트 또는 로미뎁신), 브로모도메인 억제제, 다른 후성적 억제제, 탁산 (예컨대 파클리탁셀 또는 도세탁셀), 키나제 억제제 (예컨대 보르테조밉, 에를로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 베무라페닙 또는 비스모데깁), 항혈관신생 억제제, 뉴클레오티드 유사체 또는 전구체 유사체 (예컨대 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트 또는 티오구아닌), 또는 백금-기반 화학요법제 (예컨대 시스플라틴, 카르보플라틴 또는 옥살리플라틴), 페메트렉세드 또는 그의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 키나제 억제제 (예컨대 보르테조밉, 에를로티닙, 게피티닙, 이마티닙, 베무라페닙 또는 비스모데깁)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 키나제 억제제 전에, 그 후에 투여되거나 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 키나제 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 DNA 손상 작용제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DNA 손상 작용제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DNA 손상 작용제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 DNA 알킬화제 (예컨대 시클로포스파미드, 메클로레타민, 클로람부실, 멜팔란, 다카르바진, 테모졸로미드 또는 니트로소우레아)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DNA 알킬화제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DNA 알킬화제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 토포이소머라제 억제제 (예컨대 토포이소머라제 I 억제제 (예를 들어, 이리노테칸 또는 토포테칸) 또는 토포이소머라제 II 억제제 (예를 들어, 에토포시드 또는 테니포시드))를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 토포이소머라제 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 토포이소머라제 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 안트라시클린 (예컨대 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론 또는 발루비신)을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 안트라시클린 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 안트라시클린으로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 히스톤 데아세틸라제 억제제 (예컨대 보리노스타트 또는 로미뎁신)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 히스톤 데아세틸라제 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 히스톤 데아세틸라제 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 탁산 (예컨대 파클리탁셀 또는 도세탁셀)을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 탁산 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 탁산으로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 뉴클레오티드 유사체 또는 전구체 유사체 (예컨대 아자시티딘, 아자티오프린, 카페시타빈, 시타라빈, 독시플루리딘, 5-플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시우레아, 메르캅토퓨린, 메토트렉세이트 또는 티오구아닌)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 뉴클레오티드 유사체 또는 전구체 유사체 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 뉴클레오티드 유사체 또는 전구체 유사체로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 백금-기반 화학요법제 (예컨대 시스플라틴, 카르보플라틴 또는 옥살리플라틴)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 백금-기반 화학요법제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 백금-기반 화학요법제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 페메트렉세드를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 페메트렉세드 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 페메트렉세드로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 DDR 경로 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DDR 경로 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 DDR 경로 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다. DDR 경로의 억제제의 예는 폴리(ADP-리보스) 폴리머라제 (PARP) 억제제 (예컨대 올라파립, 루카파립, 니라파립 또는 탈라조파립), 모세혈관확장성 운동실조 돌연변이 (ATM) 단백질 억제제, 모세혈관확장성 운동실조 및 Rad3-관련 (ATR) 단백질 억제제, 체크포인트 키나제 1 (Chk1) 억제제 또는 그의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 PARP 억제제 (예컨대 올라파립, 루카파립, 니라파립 또는 탈라조파립)를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 PARP 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 PARP 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 ATM 단백질 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 ATM 단백질 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 ATM 단백질 억제제 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 ATR 단백질 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 ATR 단백질 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 ATR 단백질 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, (a) 유효량의 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 임의의 실시양태, 변형 또는 측면 (집합적으로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것, 및 (b) 유효량의 Chk1 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 Chk1 억제제 전에, 그 후에 투여되거나, 또는 그와 동시에 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 Chk1 억제제로부터 1시간 이상 (예컨대 2시간 이상, 4시간 이상, 8시간 이상, 12시간 이상, 24시간 이상 또는 48시간 이상) 전에 또는 그 후에 투여된다.
또 다른 측면에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 면역 반응을 자극하는 데 효과적인 1종 이상의 추가의 작용제와 공투여되어 (이는 개별적 또는 동시일 수 있음) 추가로 대상체에서 면역 반응을 증진, 자극 또는 상향조절하는 조합 요법이 본원에 제공된다. 예를 들어, 면역 반응이 대상체에서 자극되어 예를 들어 종양 성장을 억제하도록, 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 1종 이상의 면역자극 항체, 예컨대 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및/또는 항-CTLA-4 항체를 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 항-PD-1 항체가 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 항-PD-L1 항체가 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 대상체에게 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염 및 항-CTLA-4 항체가 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 면역자극 항체 (예를 들어, 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-CTLA-4 항체)는 인간 항체이다. 대안적으로, 면역자극 항체는 예를 들어 키메라 또는 인간화 항체 (예를 들어, 마우스 항-PD-1, 항-PD-L1 및/또는 항-CTLA-4 항체로부터 제조됨)일 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 증식성 질환 (예를 들어, 암)을 치료하는 방법을 제공한다. 추가 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 치료 용량 미만으로 투여되거나, 항-PD-1 항체가 치료 용량 미만으로 투여되거나, 또는 둘 다가 치료 용량 미만으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 치료 용량 미만의 항-PD-1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 면역자극제를 사용한 과다증식성 질환의 치료와 연관된 유해 사건을 변경시키는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 인간 서열 모노클로날 항체이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 과다증식성 질환 (예를 들어, 암)을 치료하는 방법을 제공한다. 추가 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 치료 용량 미만으로 투여되거나, 항-PD-L1 항체가 치료 용량 미만으로 투여되거나, 또는 둘 다가 치료 용량 미만으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 치료 용량 미만의 항-PD-L1 항체를 투여하는 것을 포함하는, 면역자극제를 사용한 과다증식성 질환의 치료와 연관된 유해 사건을 변경시키는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 항-PD-L1 항체는 인간 서열 모노클로날 항체이다.
특정 실시양태에서, 본원에 논의된 치료제의 조합은 제약상 허용되는 담체 중 단일 조성물로서 공동으로, 또는 각각 제약상 허용되는 담체 중 개별 조성물로서 공동으로 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 치료제의 조합은 순차적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 항-CTLA-4 항체 및 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 순차적으로 투여될 수 있으며, 예컨대 항-CTLA-4 항체가 첫 번째로 투여되고 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 두 번째로 투여되거나, 또는 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 첫 번째로 투여되고 항-CTLA-4 항체가 두 번째로 투여된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 항-PD-1 항체 및 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 순차적으로 투여될 수 있으며, 예컨대 항-PD-1 항체가 첫 번째로 투여되고 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 두 번째로 투여되거나, 또는 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 첫 번째로 투여되고 항-PD-1 항체가 두 번째로 투여된다. 추가적으로 또는 대안적으로, 항-PD-L1 항체 및 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 순차적으로 투여될 수 있으며, 예컨대 항-PD-L1 항체가 첫 번째로 투여되고 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 두 번째로 투여되거나, 또는 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염이 첫 번째로 투여되고 항-PD-L1 항체가 두 번째로 투여된다.
게다가, 하나 초과의 용량의 조합 요법을 순차적으로 투여하는 경우, 순차적 투여의 순서는 역전될 수 있거나 또는 각각의 투여 시점에 동일한 순서로 유지될 수 있거나, 순차적 투여를 공동 투여와 조합할 수 있거나, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다.
임의로, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염의 조합은 면역원성 작용제, 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원 (재조합 단백질, 펩티드 및 탄수화물 분자 포함), 세포, 및 면역 자극 시토카인을 코딩하는 유전자로 형질감염된 세포와 추가로 조합될 수 있다.
화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 또한 표준 암 치료와 추가로 조합될 수 있다. 예를 들어, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 화학치료 요법과 효과적으로 조합될 수 있다. 이들 경우에, 본 개시내용의 조합과 함께 투여되는 다른 화학요법제의 용량을 감소시키는 것이 가능하다 (Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304). 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염과의 다른 조합 요법은 방사선, 수술, 또는 호르몬 박탈을 포함한다. 혈관신생 억제제는 또한 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염과 조합될 수 있다. 혈관신생의 억제는 종양 세포 사멸로 이어지며, 이는 종양 항원이 숙주 항원 제시 경로 내로 공급되도록 하는 공급원일 수 있다.
또 다른 예에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 항신생물성 항체와 함께 사용될 수 있다. 예로서 및 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 항암 항체 또는 독소에 접합된 항암 항체를 사용한 치료는 암 세포 사멸 (예를 들어, 종양 세포)로 이어질 수 있으며, 이는 CTLA-4, PD-1, PD-L1 또는 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염에 의해 매개되는 면역 반응을 강화시킬 것이다. 예시적인 실시양태에서, 과다증식성 질환 (예를 들어, 암 종양)의 치료는 항암 항체를 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염 및 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-1 및/또는 항-PD-L1 항체와 조합하여, 공동으로 또는 순차적으로 또는 그의 조합으로 포함할 수 있으며, 이는 숙주에 의한 항종양 면역 반응을 강화시킬 수 있다. 숙주 면역 반응성을 활성화시키는 데 사용될 수 있는 다른 항체는 추가로 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염과 조합하여 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 항-CD73 요법, 예컨대 항-CD73 항체와 조합될 수 있다.
추가 실시양태에서, 화학식 (I), (II) 또는 (III)의 화합물 또는 그의 염은 또 다른 Wee1 억제제와 조합하여 투여된다.
투약 및 투여 방법
개체 (예컨대 인간)에게 투여되는 화합물의 용량은 특정한 화합물 또는 그의 염, 투여 방법, 및 특정한 질환, 예컨대 치료되는 암의 유형 및 병기에 의해 달라질 수 있다. 일부 실시양태에서, 화합물 또는 그의 염의 양은 치료 유효량이다.
화합물의 유효량은 한 측면에서 약 0.01 내지 약 100 mg/kg의 용량일 수 있다. 본 발명의 화합물의 유효량 또는 유효 용량은 상용 인자, 예를 들어, 투여 또는 약물 전달의 방식 또는 경로, 작용제의 약동학, 치료될 질환의 중증도 및 경과, 대상체의 건강 상황, 상태, 및 체중을 고려하여, 상용 방법, 예컨대 모델링, 용량 증량, 또는 임상 시험에 의해 확인될 수 있다. 예시적인 용량은 1일 약 0.7 mg 내지 7 g, 또는 1일 약 7 mg 내지 350 mg, 또는 1일 약 350 mg 내지 1.75 g, 또는 1일 약 1.75 내지 7 g 정도의 범위이다.
본원에 제공된 방법 중 임의의 것은 한 측면에서 개체에게 유효량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 염 및 제약상 허용되는 부형제를 함유하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 조성물은 개체에게 유효 투여 요법에 따라 바람직한 시간 기간 또는 지속기간, 예컨대 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 또는 적어도 약 12개월 또는 그 초과 동안 (이는 일부 변형에서 개체의 삶의 지속기간 동안일 수 있음) 투여될 수 있다. 하나의 변형에서, 화합물은 매일 또는 간헐적 스케줄 상에서 투여된다. 화합물은 개체에게 소정 시간 기간에 걸쳐 계속적으로 (예를 들어, 적어도 1일 1회) 투여될 수 있다. 투여 빈도는 또한 1일 1회 미만, 예를 들어, 매주 약 1회 투여일 수 있다. 투여 빈도는 1일 1회 초과, 예를 들어, 1일 2회 또는 3회일 수 있다. 투여 빈도는 또한 '휴약기'를 포함하여 간헐적일 수 있다 (예를 들어, 7일 동안 1일 1회 투여한 후 7일 동안 투여 없음, 이를 임의의 14일 시간 기간, 예컨대 약 2개월, 약 4개월, 약 6개월 또는 그 초과 동안 반복함). 투여 빈도 중 임의의 것은 본원에 기재된 화합물 중 임의의 것을 본원에 기재된 투여량 중 임의의 것과 함께 사용할 수 있다.
본원에 제공된 화합물 또는 그의 염은 개체에게 예를 들어 정맥내, 근육내, 피하, 경구 및 경피를 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 본원에 제공된 화합물은 낮은 용량으로 빈번하게 투여되거나 ('메트로놈 요법'으로 알려짐), 또는 화합물을 단독으로 또는 1종 이상의 추가의 약물과 조합하여 사용하는 유지 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 메트로놈 요법 또는 유지 요법은 본원에 제공된 화합물의 주기적인 투여를 포함할 수 있다. 메트로놈 요법 또는 유지 요법은 본원에 제공된 화합물의 종양내 투여를 포함할 수 있다.
한 측면에서, 본 발명은 개체 (예를 들어, 인간)에게 유효량의 화합물 또는 그의 염을 비경구로 투여함으로써 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 투여 경로는 정맥내, 동맥내, 근육내, 또는 피하이다. 일부 실시양태에서, 투여 경로는 경구이다. 또 다른 실시양태에서, 투여 경로는 경피이다.
본 발명은 또한 암의 발병 및/또는 발생을 치료, 예방, 및/또는 지연시키는 데 또는 본원에 기재된 다른 방법에 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 조성물 (제약 조성물 포함)을 제공한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 단위 투여 형태로 존재하는 제약 제제를 포함한다.
본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 적합한 포장 내에 본 개시내용의 화합물 또는 그의 염, 조성물 및 본원에 기재된 단위 투여량을 포함하는 제조 물품이 또한 제공된다. 적합한 포장은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 바이알, 용기, 앰플, 병, 자, 가요성 포장 등을 포함한다. 제조 물품은 추가로 멸균 및/또는 밀봉될 수 있다.
키트
본 개시내용은 1종 이상의 본원에 기재된 화합물 또는 본원에 기재된 화합물을 포함하는 조성물을 포함하는, 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 추가로 제공한다. 키트는 본원에 개시된 화합물 중 임의의 것을 사용할 수 있다. 하나의 변형에서, 키트는 본원에 기재된 화합물 또는 그의 염을 사용한다. 키트는 본원에 기재된 용도 중 어느 하나 이상에 사용될 수 있고, 따라서, 암의 치료에 대한 지침서를 함유할 수 있다.
키트는 일반적으로 적합한 포장을 포함한다. 키트는 본원에 기재된 임의의 화합물을 포함하는 1개 이상의 용기를 포함할 수 있다. 각각의 성분 (1종 초과의 성분이 존재하는 경우)은 개별 용기 내에 포장될 수 있거나, 또는 일부 성분은 교차-반응성 및 보관 수명이 허용되는 경우에 1개의 용기 내에 조합될 수 있다.
키트는 단위 투여 형태, 벌크 패키지 (예를 들어, 다중-용량 패키지) 또는 하위-단위 용량으로 존재할 수 있다. 예를 들어, 1주, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월, 4개월, 5개월, 7개월, 8개월, 9개월, 또는 그 초과 중 임의의 것과 같은 연장된 기간 동안 개체의 유효 치료를 제공하기 위해, 충분한 투여량의 본원에 개시된 바와 같은 화합물 및/또는 본원에 상술된 질환에 유용한 추가의 제약 활성 화합물을 함유하는 키트가 제공될 수 있다. 키트는 또한 다중 단위 용량의 화합물 및 사용에 대한 지침서를 포함할 수 있고, 약국 (예를 들어, 병원 약국 및 조제 약국)에서의 저장 및 사용에 충분한 양으로 포장될 수 있다.
본 발명의 방법의 성분(들)의 사용과 관련하여, 지침서를 함유하는 전자 저장 매체 (예를 들어, 자기 디스켓 또는 광 디스크)가 또한 허용되지만, 키트는 일련의 지침서, 일반적으로 서면 지침서를 임의로 포함할 수 있다. 키트에 포함된 지침서는 일반적으로 성분 및 그의 개체에의 투여에 관한 정보를 포함한다.
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 추가로 이해될 수 있으며, 이는 예시로서 제공된 것이고 제한하는 것으로 의도되지는 않는다.
실시예
실시예 S-1: 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.1)의 합성
Figure pct00095
단계-1: 2-(6-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)프로판-2-올의 합성: 디에틸-에테르 (30 mL) 중 2-브로모-5-플루오로피리딘 (2 g, 11.36 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 -78℃에서 n-부틸 리튬 (헥산 중 2.5 M, 7.8 mL, 12.49 mmol)을 천천히 첨가하였다. 생성된 황색 반응 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 건조 아세톤 (1.0 mL, 13.63 mmol)을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 교반을 -78℃에서 1시간 동안 계속하였다. HCl (2N, 50 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로 가온하였다. 혼합물의 pH를 2N HCl 용액을 사용하여 7로 조정하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 2-(6-브로모-3-플루오로-피리딘-2-일)-프로판-2-올 (1.5 g, 56.81%)을 황색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 234.1 [M+2]+.
단계-2: 6-브로모-3-플루오로-2-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘의 합성: DCM (10 mL) 중 2-(6-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)프로판-2-올 (0.500 g, 2.14 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에, DAST (0.38 mL, 2.36 mmol, 1.1 당량)를 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-10% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (200 mg, 39.66%)을 무색 액체로서 수득하였다. LCMS: 236.1 [M+2]+.
단계-3: 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (224 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량) 및 6-브로모-3-플루오로-2-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘 (236 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (276 mg, 2.0 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (38 mg, 0.2 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.4 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (200 mg, 52.6%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 380.2 [M+1]+.
단계-4: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (190 mg, 0.5 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (245 mg, 1.0 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (149 mg, 0.6 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (0.44 mL, 2.5 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (100 mg, 34.6%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 580.3 [M+1]+.
단계-5: 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (100 mg, 0.17 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1.0 mL) 중에 용해시키고, 이어서 4.0 M-HCl (1.0 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (45 mg, 55.5%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 457.3 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 포르메이트 염): δ 10.24 (br s, 1 H) 8.82 (s, 1 H) 8.69 (br s, 1 H) 8.39 (d, J = 7.45 Hz, 1H) 8.28 (br s, 1 H) 8.10 (t, J = 9.65 Hz, 1H) 7.96 (d, J = 8.33 Hz, 2H) 7.55 (br s, 1 H) 7.35-7.49 (m, 2H) 7.03 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 4.11-4.22 (m, 2H) 3.96 (br s, 2 H) 3.08-3.17 (m, 2H) 2.79 (br s, 2 H) 1.77 (s, 3 H) 1.71 (s, 3 H) 1.33 (d, J = 6.58 Hz, 6 H).
실시예 S-2: 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.2)의 합성
Figure pct00096
단계-1: 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (5 mL) 중 2-시클로프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (230 mg, 1.03 mmol, 1.0 당량) 및 6-브로모-3-플루오로-2-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘 (291 mg, 1.24 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (285 mg, 2.06 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (39.4 mg, 0.20 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.04 mL, 0.41 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (180 mg, 48.74%)을 황색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 378.11 [M+1]+.
단계-2: tert-부틸 6-((2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (190 mg, 0.50 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (174 mg, 1.00 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (150 mg, 0.60 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (0.4 mL, 0.55 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (130 mg, 44.77%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 578.3 [M+1]+.
단계-3: 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 디히드로클로라이드의 합성: tert-부틸 6-((2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (130 mg, 0.22 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (2 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (3 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고; 수득한 조 생성물을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (2 mg, 20.48%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 478.3 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, HCl 염): δ 10.17 (br s, 1H) 8.79 (s, 1 H) 8.31 (br s, 1H) 8.04-8.18 (m, 2H) 7.96 (dd, 1 H) 7.56 (br s, 1H) 7.40 (d, J = 7.89 Hz, 1H) 7.02 (d, 1 H) 3.91 (br s, 2H) 3.14 (br s, 2H) 3.07 (br s, 2H) 2.75 (br s, 2H)1.77 (s, 3 H) 1.72 (s, 3 H).
실시예 S-3: 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.4)의 합성
Figure pct00097
단계-1: tert-부틸 7-((1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (130 mg, 0.3 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (148 mg, 0.6 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (149 mg, 0.6 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (0.27 mL, 1.5 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (120 mg, 68.9%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 580.4 [M+1]+.
단계-2: 1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (120 mg, 0.21 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (2.0 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (2.0 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 증발시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (32 mg, 32.0%)을 회백색 고체로서 포르메이트 염으로서 수득하였다. LCMS: 480.5 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 포르메이트 염): δ 10.25 (br sbr s, 1 H) 8.82 (s, 1 H) 8.28 (br s, 1 H) 8.05-8.13 (m, 1H) 7.97 (d, J = 6.58 Hz, 1H) 7.52 (br sbr s, 1 H) 7.38 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.06 (d, J = 7.89 Hz, 1H) 4.12-4.19 (m, 2H) 3.96 (br sbr s, 2 H) 3.07 (br sbr s, 2 H) 2.73 (br sbr s, 2 H) 1.77 (s, 3 H) 1.71 (s, 3 H) 1.34 (d, J = 6.58 Hz, 6 H).
실시예 S-4: 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.464)의 합성
Figure pct00098
단계-1: 4-브로모-2-시클로프로필티아졸의 합성: 디옥산 (12 mL) 중 2,4-디브로모티아졸 (1.0 g, 4.11 mmol, 1.0 당량) 및 시클로프로필보론산 (424 mg, 4.93 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액에 K3PO4 (1.11 g, 8.08 mmol, 2 당량)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 Xanthphos (119 mg, 0.20 mmol, 0.2 당량) 및 Pd(OAc)2 (46 mg, 0.20 mmol, 0.4 당량)를 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징하고, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (250 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (250 mL) 및 염수 용액 (250 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (600 mg, 71.42%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 204.1 [M+1]+.
단계-2: 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (12 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (659 mg, 2.93 mmol, 1.0 당량) 및 4-브로모-2-시클로프로필티아졸 (600 mg, 2.93 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (810 mg, 5.86 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (112 mg, 0.58 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.13 mL, 1.17 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (250 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (250 mL) 및 염수 용액 (250 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (256 mg, 25.07%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 348.1 [M+1]+.
단계-3: tert-부틸 6-((1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (128 mg, 0.36 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (127 mg, 0.73 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (91 mg, 0.36 mmol, 1.0 당량) 및 DIPEA (0.25 mL, 1.47 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (86 mg, 42.62%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 548.3 [M+1]+.
단계-4: 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 히드로클로라이드의 합성: tert-부틸 6-((1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (86 mg, 0.15 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물 (30 mg, 39.47%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 448.3 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, HCl 염): δ 10.27 (br sbr s, 1 H) 9.20 (br sbr s, 2 H) 8.84 (s, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 7.67 (br sbr s, 1 H) 7.48 (d, J = 7.89 Hz, 1H) 7.11 (d, J = 8.77 Hz, 1H) 4.28 (dt, J = 13.59, 6.80 Hz, 1H) 4.19 (br sbr s, 2 H) 3.35 (br sbr s, 2 H) 2.92 (br sbr s, 2 H) 1.17-1.27 (m, 6 H) 1.07-1.17 (m, 2H) 0.88-0.97 (m, 2H).
실시예 S-5: 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.465)의 합성
Figure pct00099
단계-1: tert-부틸 7-((1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (128 mg, 0.36 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (127 mg, 0.73 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (91 mg, 0.36 mmol, 1.0 당량) 및 DIPEA (0.25 mL, 1.47 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (86 mg, 51.54%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 548.3 [M+1]+.
단계-2: 1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 히드로클로라이드의 합성: tert-부틸 7-((1-(2-시클로프로필티아졸-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (104 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물 (20 mg, 17.68%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 448.3 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, HCl 염): δ 10.28 (br s, 1 H) 9.40 (br s, 2 H) 8.83 (s, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 7.65 (br., 1 H) 7.47 (d, J = 7.89 Hz, 1H) 7.12 (d, J = 8.77 Hz, 1H) 4.21-4.33 (m, 2H) 4.17 (br s, 2 H) 3.33 (br s, 2 H) 2.94 (br s, 2 H) 1.22 (d, J = 7.02 Hz, 6 H) 1.16 (dd, J = 8.11, 2.41 Hz, 2H) 0.94 (br s, 2 H).
실시예 S-6: 2-시클로프로필-6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.5)의 합성
Figure pct00100
단계-1: 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일) 피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (5 mL) 중 (2-시클로프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (230 mg, 1.03 mmol, 1.0 당량) 및 6-브로모-3-플루오로-2-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘 (291 mg, 1.24 mmol, 1.2 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (285 mg, 2.06 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (40 mg, 0.26 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.04 mL, 0.413 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징하고, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (190 mg, 48.74%)을 황색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 378.2 [M+1]+.
단계-2: tert-부틸 6-((2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (190 mg, 0.5 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (245 mg, 1.0 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (150 mg, 0.6 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (0.4 mL, 2.0 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (70 mg, 23.14%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 606.32 [M+1]+.
단계-3: 2-시클로프로필-6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((2-시클로프로필-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (70 mg, 0.11 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1.5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (4 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 조 물질을 정제용 정제에 제공하여 목적 화합물 (2.5 mg, 3.9%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 506.4 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 유리 염기): δ 10.20 (br sbr s, 1 H) 8.81 (s, 1 H) 8.08-8.20 (m, 2H) 7.98 (d, J = 6.58 Hz, 1H) 7.58 (br s, 1 H) 7.45 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.30 (d, J = 7.89 Hz, 1H) 3.25 (br s, 1H), 3.14 (br s, 2H) 2.86 (br s, 2 H) 1.78 (s, 3 H) 1.72 (s, 3 H) 1.51 (s, 6 H) 0.82 (br s, 4 H).
실시예 S-7: 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.249)의 합성
Figure pct00101
단계-1: 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (287 mg, 1.28 mmol, 1.0 당량) 및 2-(6-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)프로판-2-올 (300 mg, 1.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (354.09 mg, 2.56 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (48.8 mg, 0.25 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.51 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 110℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 378.13 [M+1]+.
단계-2: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (275 mg, 0.73 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (251 mg, 1.46 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (199 mg, 0.80 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (0.5 mL, 2.92 mmol, 4.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 578.28 [M+1]+.
단계-3: 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (381 mg, 0.66 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (4 mL) 중에 용해시키고, 이어서 4.0 M-HCl (4 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 478.23 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.20 (br s, 1 H) 8.81 (s, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 7.93-8.03 (m, 1H) 7.83 (dd, J = 8.33, 2.63 Hz, 1H) 7.56 (br s, 1 H) 7.40 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.02 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 4.17-4.21 (m, 1H) 3.93 (s, 3 H) 3.09 (t, J = 5.92 Hz, 3 H) 2.76 (t, J = 5.48 Hz, 2H) 1.52 (s, 6 H) 1.32 (d, J = 6.58 Hz, 6 H).
실시예 S-8: 1-(6-(2-이소프로필-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.43)의 합성
Figure pct00102
단계-1: 2-(6-브로모피리딘-2-일)아세토니트릴의 합성: THF (30 mL) 중 MeCN (1.4 mL, 27.4 mmol, 3.6 당량)의 교반 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5M, 10 mL, 25.1 mmol, 3.3 당량)을 -78℃에서 첨가하고, -78℃에서 30분 동안 교반하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, THF (10 mL) 중 2,6-디브로모피리딘 (1.8 g, 7.6 mmol, 1.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 45분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [콤비플래쉬(Combiflash), 용리- 헥산 중 0-30% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 197.04 [M+1]+.
단계-2: 1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: THF (30 mL) 중 2-(6-브로모피리딘-2-일)아세토니트릴 (2.0 g, 10.15 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 LiHMDS (22.33 mL, 22.33 mmol, 2.2 당량)를 -78℃에서 적가하였다. -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 디브로모에탄 (2.0 g, 11.16 mmol, 1.1 당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 염화암모늄 (200 mL)으로 희석하고, EtOAc (250 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (250 mL) 및 염수 용액 (250 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 224.09 [M+1]+.
단계-3: 1-(6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (600 mg, 2.67 mmol, 1.0 당량) 및 (602 mg, 2.67 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (800 mg, 5.34 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (40 mg, 190.4 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.1 mL, 1.06 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 100℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 367.2 [M+1]+.
단계-4: tert-부틸 6-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (100 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (98.17 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (84 mg, 0.34 mmol, 1.5 당량) 및 DIPEA (0.2 mL, 1.42 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-70% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 567.3 [M+1]+.
단계-5: 1-(6-(2-이소프로필-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (90 mg, 0.19 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 4.0 M-HCl (0.5 mL)을 적가하고, 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 HPLC에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 467.4 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.29 (br s, 1 H) 8.82 (s, 1 H) 8.19 (s, 1 H) 8.09-8.16 (m, 1H) 7.84 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.63 (br s, 1 H) 7.57 (s, 1 H) 7.42 (d, J = 8.77 Hz, 1H) 7.06 (s, 1 H) 3.98-4.09 (m, 2H) 3.17 (br s, 4 H) 2.85 (br s, 2 H) 1.82-1.90 (m, 2H) 1.64-1.74 (m, 2H) 1.35 (d, J = 6.58 Hz, 6 H).
실시예 S-9: 1-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (화합물 번호 1.45)의 합성
Figure pct00103
단계-1: tert-부틸 6-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (100 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (138 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (94 mg, 0.34 mmol, 1.1 당량) 및 DIPEA (0.2 mL, 1.4 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 595.4 [M+1]+.
단계-2: 1-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (80 mg, 0.13 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (0.8 mL) 중에 용해시키고, 이어서 4.0 M-HCl (0.8 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 495.5 [M+1]++; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.18 (br s, 1 H) 8.80 (s, 1 H) 8.27 (s, 1 H) 8.10-8.13 (m, 1H) 7.83 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.57 (s, 1 H) 7.51 (br s, 1 H) 7.37 (br s, 1 H) 7.20 (d, J = 8.77 Hz, 1H) 4.09 (d, J = 6.58 Hz, 1H) 3.02 (br s, 2 H) 2.68 (d, J = 9.65 Hz, 2H) 1.85 (d, J = 3.51 Hz, 2H) 1.71 (d, J = 3.07 Hz, 2H) 1.29-1.44 (m, 12 H).
실시예 S-10: 2 1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.349)의 합성
Figure pct00104
단계-1: 2-브로모-4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸의 합성: ACN (20 mL) 중 2-브로모-4-(tert-부틸)티아졸 (1.21 g, 5.49 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 NCS (0.80, 6.04 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 254.2 [M+2]+.
단계-2: 1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (12 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (865 mg, 3.85 mmol, 1.0 당량) 및 2-브로모-4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸 (982 mg, 3.85 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (1.06 g, 7.71 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (146 mg, 0.77 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.16 mL, 1.54 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. LCMS:298.2 [M+1]+.
단계-3: tert-부틸 7-((1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (32 mg, 0.08 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (28 mg, 0.16 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (22 mg, 0.31 mmol, 1.1 당량) 및 Na2CO3 (34 mg, 0.32 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 598.3 [M+1]+.
단계-4: 2 1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((1-(4-(tert-부틸)-5-클로로티아졸-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (25 mg, 0.04 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (0.3 mL) 중에 용해시키고, 이어서 4.0 M-HCl (0.3 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물을 수득하였다. LCMS: 498.4 [M+1]+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.64 (br s, 1 H) 9.31 (br s, 1 H) 8.89 (s, 1 H) 7.72 (br s, 1 H) 7.58 (d, J = 8.77 Hz, 1H) 7.23 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 4.54-4.67 (m, 1H) 4.28 (br s, 2 H) 2.99 (t, J = 5.92 Hz, 2H) 1.54 (d, J = 6.58 Hz, 2H) 1.38-1.49 (m, 15 H).
실시예 S-11: 1-(6-(2-에틸-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.37)의 합성
Figure pct00105
단계-1: 1-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (200 mg, 0.95 mmol, 1.0 당량) 및 1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (212 mg, 0.95 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (262.9 mg, 2 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (36.23 mg, 0.19 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.04 mL, 0.381 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (216 mg, 64.43%)을 황색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 353.13 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 6-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (108 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (145.6 mg, 0.61 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (76.10 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (129.7 mg, 1.22 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (121 mg, 71.44%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 553.26 (M+1)+.
단계-3: 1-(6-(2-에틸-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (121 mg, 0.22 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고; 조 물질을 역상 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (10 mg, 10.00%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 453.21 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.27 (br s, 1H) 8.86 (s, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 8.11 (t, J = 7.89 Hz, 1H) 7.91 (d, J = 8.33 Hz, 1H) 7.62 (br s, 1H) 7.53 (d, J = 7.45 Hz, 1H) 7.39 (br s, 1H) 6.98-7.05 (m, 1H) 3.83-4.05 (m, 4 H) 3.10 (br s, 2H) 2.78 (br s, 2H) 1.82-1.96 (m, 2H) 1.61-1.74 (m, 2H) 0.96 (t, J = 7.02 Hz, 3 H).
실시예 S-12: 1-(6-(2-에틸-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.38)의 합성
Figure pct00106
단계-1: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-에틸-1-(6-(1-메틸시클로프로필)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (108 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (145.6 mg, 0.61 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (76.01 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (129.7 mg, 1.22 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (119 mg, 70.2%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 553.26 (M+1)+.
단계-2: 1-(6-(2-에틸-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 디히드로클로라이드의 합성: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (119 mg, 0.21 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (24 mg, 21.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 453.21 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.39 (br s, 1H) 9.26 (br s, 1H) 8.88 (s, 1 H) 8.15 (t, J = 7.6 Hz, 1H) 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.68 (br s, 1H) 7.43-7.56 (m, 2H) 7.20 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 4.26 (br s, 2H) 3.81-3.98 (m, 2H) 3.38 (d, J = 5.7 Hz, 2H) 2.97 (t, J = 5.9 Hz, 2H) 1.82-1.92 (m, 2H) 1.65-1.74 (m, 2H) 0.97 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 S-13: 1-(6-(2-이소프로필-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.44)의 합성
Figure pct00107
단계-1: 1-(6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: 디옥산 (6 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (100 mg, 0.45 mmol, 1.0 당량) 및 1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (100 mg, 0.45 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (123 mg, 0.89 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (17 mg, 0.089 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.02 mL, 0.178 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-40% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (102 mg, 62.4%)을 무색 액체로서 수득하였다. LCMS: 367.13 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (102 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (132 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (75.9 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (117.8 mg, 1.11 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (90 mg, 57.0%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 567.28 (M+1)+.
단계-3: 1-(6-(2-이소프로필-3-옥소-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (90 mg, 0.15 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (2 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (40 mg, 46.7%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: -467.22 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.35 (br s, 1H) 9.11 (br s, 2 H) 8.83 (s, 1 H) 8.08-8.20 (m, 1H) 7.87 (s, 1H) 7.65 (br s, 1H) 7.51 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 7.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H) 7.19 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.26 (br s, 2H) 4.09 (m, 1H) 3.39 (t, 2H) 2.96 (t, 2H) 1.87 (d, J = 3.5 Hz, 2H) 1.71 (d, J = 3.1 Hz, 2H) 1.36 (d, J = 6.5 Hz, 6H).
실시예 S-14: 1-(4-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (화합물 번호 1.67)의 합성
Figure pct00108
단계-1: 1-(4-브로모피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: 톨루엔 (10 mL) 중 시클로프로판카르보니트릴 (1.0 g, 14.5 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 0℃에서 LiHMDS (16 mL, 15.9 mmol, 1.1 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (5 mL) 중 2-플루오로-4-브로모피리딘 (2.56 g, 14.4 mmol, 1.0 당량)을 적가하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액으로 희석하고, 디에틸 에테르 (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (2.1 g, 65.0%)을 무색 고체로서 수득하였다. LCMS: 222.9 (M+1)+.
단계-2: 1-(4-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (224 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량) 및 1-(4-브로모피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (223 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (276 mg, 2.0 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (38 mg, 0.2 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.4 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 90℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (50 mg, 13.6%)을 수득하였다. LCMS: 367.2 (M+1)+
단계-3: tert-부틸 6-(1-(2-(1-시아노시클로프로필)피리딘-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(4-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (50 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (48 mg, 0.28 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (38 mg, 0.15 mmol, 1.1 당량) 및 Na2CO3 (58 mg, 0.55 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (40 mg, 51.9%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 567.4 (M+1)+.
단계-4: 1-(4-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-(1-(2-(1-시아노시클로프로필)피리딘-4-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (40 mg, 0.07 mmol, 1.0 당량)를 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, 이어서 트리플루오로 아세트산 (0.51 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 감압 하에 건조시키고, 역상 정제에 의해 정제된 생성물 (20 mg, 55.4%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 467.5 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.37 (br s, 1H) 8.85 (s, 1 H) 8.65 (d, J = 5.2 Hz, 1H) 7.56-7.65 (m, 2H) 7.42-7.56 (m, 2H) 7.06 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 3.87-4.03 (m, 3H) 3.08 (d, J = 5.7 Hz, 2H) 2.78 (br s, 2H) 1.84-1.95 (m, 2H) 1.65-1.79 (m, 2H) 1.37 (d, J = 7.0 Hz, 6H).
실시예 S-15: 2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.86)의 합성
Figure pct00109
단계-1: 2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (172.6 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량) 및 2-브로모-6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘 (189.0 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (227 mg, 1.64 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (31 mg, 0.16 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.03 mL, 0.33 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (213 mg, 72.8%)을 갈색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 360.12 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (213 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (405 mg, 1.64 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (204 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (348 mg, 3.28 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (60 mg, 18.1%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 560.27 (M+1)+.
단계-3: 2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (60 mg, 0.11 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 2.0 M-HCl/디옥산 (2.0 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (8 mg, 16.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 460.22 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.25 (br s, 1H) 8.87 (s, 1 H) 8.26 (s, 1H), 8.15 (t, J = 7.7 Hz, 1H) 8.00 (d, J = 7.9 Hz, 1H) 7.62 (br s, 1H) 7.58 (br s, 1H) 7.51 (d, J = 7.5 Hz, 1H) 7.05 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 3.99-4.12 (m, 2H) 3.92 (s, 2 H) 2.97-3.10 (m, 2H) 2.33 (br s, 2H) 2.00 (br s, 2H) 1.81 (d, J = 8.7 Hz, 2H) 1.00 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 S-16: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.91)의 합성
Figure pct00110
단계-1: 2-브로모-6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘의 합성: -78℃에서 DCM (40 mL) 중 (1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로필)메탄올 (1 g, 4.38 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 이어서 DAST (0.9 mL, 6.57 mmol, 1.5 당량)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 -78℃에서 NaHCO3 (20 mL)으로 염기성화시키고, DCM (100 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-40% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 점착성 물질로서 수득하였다. LCMS: 229.99 (M+1)+.
단계-2: 1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-브로모-6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘 (189 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량) 및 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (184.23 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (227 mg, 1.64 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (31 mg, 0.16 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.03 mL, 0.33 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (133 mg, 43.35%)을 갈색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 374.14 (M+1)+.
단계-3: tert-부틸 6-((1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (133 mg, 0.36 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (170 mg, 0.712 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (88.4 mg, 0.36 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (151 mg, 1.42 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (61 mg, 30.04%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 574.29 (M+1)+.
단계-4: 1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((1-(6-(1-(플루오로메틸)시클로프로필)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (61 mg, 0.106 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디에틸에테르 중 2.0 M-HCl (2.0 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (10 mg, 18.13%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 474.23 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.24 (br s, 1H) 8.83 (s, 1 H) 8.23 (br s, 1H) 8.14 (t, J = 8.1 Hz, 1H) 7.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.62 (br s, 1H) 7.52 (d, J = 7.5 Hz, 1H) 7.40 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.03 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 4.14-4.27 (m, 1H) 3.96 (br s, 2H) 3.12 (br s, 2H) 2.79 (br s, 2H) 2.67 (br s, 2H) 2.59 (d, J = 10.1 Hz, 1H) 2.01 (br s, 2H) 1.81 (dd, J = 16.8, 8.1 Hz, 1H) 1.38 (d, J = 7.0 Hz, 6H).
실시예 S-17: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.188)의 합성
Figure pct00111
단계-1: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (2.0 mL) 중 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (244 mg, 1.65 mmol, 1.0 당량) 및 6-브로모-3-플루오로-2-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘 (275 mg, 1.65 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (456 mg, 3.3 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (62.8 mg, 0.33 mmol, 0.2 당량) 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.06 mL, 0.66 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (234 mg, 55.2%)을 황색 반고체로서 수득하였다. LCMS: 366.11 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (100 mg, 0.27 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (130.5 mg, 0.55 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (74.7 mg, 0.30 mmol, 1.2 당량) 및 Na2CO3 (116.2 mg, 1.09 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (145 mg, 94.2%)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: 566.26 (M+1)+.
단계-3: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-플루오로프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (145 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (8 mg, 6.7%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS 466.21 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 10.28 (br s, 1H) 8.86 (s, 1 H) 7.99-8.18 (m, 2H) 7.56 (br s, 1H) 7.33-7.42 (m, 1H) 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.00 (br s, 4 H) 3.11 (br s, 2H) 2.76 (br s, 2H), 1.78 (s, 3 H) 1.72 (s, 3 H) 0.98 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 S-18: 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.250)의 합성
Figure pct00112
단계-1: tert-부틸 7-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (4.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (70 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (88 mg, 0.37 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (46 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (78.4 mg, 0.74 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (99 mg, 92.4%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 578.28 (M+1)+.
단계-2: 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (99 mg, 0.17 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 크로마토그래피에 의해 정제된 생성물 (51 mg, 51.3%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 478.25 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.33 (br s, 1H) 9.18 (br s, 2H) 8.84 (s, 1 H) 7.96-8.08 (m, 1H) 7.88 (d, J = 6.6 Hz, 1H) 7.67 (br s, 1H) 7.48 (d, J = 7.5 Hz, 1H) 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.09-4.33 (m, 4H) 3.37 (br s, 2H) 2.95 (br s, 2H) 1.42-1.58 (m, 6H) 1.33 (d, J = 6.6 Hz, 6H).
실시예 S-19: 2-(5-플루오로-6-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (화합물 번호 1.321)의 합성
Figure pct00113
단계-1: 2-(6-브로모피리딘-2-일)-2-시아노프로판-1-일륨의 합성: 톨루엔 (10 mL) 중 이소부티로니트릴 (1.0 g, 14.46 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 0℃에서 LiHMDS (17.4 mL, 17.35 mmol, 1.2 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 톨루엔 (5 mL) 중 2,6-디브로모-3-플루오로피리딘 (3.68 g, 14.46 mmol, 1.0 당량)을 적가하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액으로 희석하고, 디에틸 에테르 (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (2.0 g, 57.1%)을 무색 액체로서 수득하였다. LCMS: 242.9 (M+1)+.
단계-2: 2-(3-플루오로-6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (224 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량) 및 2-(6-브로모-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (243 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (276 mg, 2.0 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (38 mg, 0.2 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.4 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 목적 화합물 (250 mg, 64.7%)을 수득하였다. LCMS: 387.2 (M+1)+.
단계-3: tert-부틸 6-(1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-(3-플루오로-6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (75 mg, 0.19 mmol, 1.0 당량)에 m-CPBA (93 mg, 0.39 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (51 mg, 0.21 mmol, 1.05 당량) 및 Na2CO3 (83 mg, 0.78 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (70 mg, 61.9%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 587.4 (M+1)+.
단계-4: 2-(5-플루오로-6-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴의 합성: tert-부틸 6-(1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (70 mg, 0.12 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물 (40 mg, 68.9%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 487.4 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.34 (br s, 1H) 9.31 (br s, 1H) 8.83 (s, 1 H) 8.13-8.22 (m, 1H) 8.01 (dd, J = 8.7, 3.1 Hz, 1H) 7.59-7.68 (m, 1H) 7.46 (m, J = 8.77 Hz, 1H) 7.15 (m, J = 8.7 Hz, 1H) 4.09-4.25 (m, 3H) 3.35 (br s, 2H) 2.98 (t, J = 5.9 Hz, 2H) 1.73 (s, 6 H) 1.34 (d, J = 6.5 Hz, 6H).
실시예 S-20: 2-(5-플루오로-6-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (화합물 번호 1.322)의 합성
Figure pct00114
단계-1: tert-부틸 7-(1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-(3-플루오로-6-(2-이소프로필-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (75 mg, 0.19 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (93 mg, 0.39 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (51 mg, 0.21 mmol, 1.05 당량) 및 Na2CO3 (83 mg, 0.78 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (80 mg, 71.4%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 587.4 (M+1)+.
단계-2: 2-(5-플루오로-6-(2-이소프로필-3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일아미노)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴의 합성: tert-부틸 7-(1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (70 mg, 0.12 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 목적 화합물 (30 mg, 47.3%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 487.5 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.25 (br s, 1H) 8.82 (s, 1 H) 8.27 (br s, 1H) 8.16 (d, J = 10.1 Hz, 1H) 8.01 (dd, J = 8.7, 3.1 Hz, 1H) 7.50 (br s, 1H) 7.40 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 7.07 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 4.18 (dt, J = 13.8, 6.6 Hz, 1H) 3.95 (br s, 2H) 3.07 (br s, 2H) 2.73 (br s, 2H) 1.68-1.83 (m, 6H) 1.36 (d, J = 6.5 Hz, 6H).
실시예 S-21: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.262)의 합성
Figure pct00115
단계-1: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (359 mg, 1.71 mmol, 1.0 당량) 및 2-(6-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)프로판-2-올 (400 mg, 1.71 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (472 mg, 3.42 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (65 mg, 0.34 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.03 mL, 0.684 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물을 갈색 액체로서 수득하였다. LCMS: 364.12 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (5.0 mL) 중 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (100 mg, 0.27 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (95 mg, 0.55 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (75 mg, 0.30 mmol, 1.2 당량) 및 Na2CO3 (93 mg, 1.09 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (150 mg, 96.7%)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: 564.27 (M+1)+.
단계-3: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 7-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (150 mg, 0.26 mmol, 1.0 당량)를 에테르 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 HCl 중 2.0 M 에테르 (10 mL)를 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 정제에 의해 정제된 생성물 (70 mg, 46.7%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 464.21 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.33 (br s, 1H) 9.08 (br s, 2H) 8.86 (s, 1 H) 7.89-8.09 (m, 2H) 7.70 (br s, 1H) 7.47 (d, J = 7.5 Hz, 1H) 7.18 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 4.26 (br s, 2H) 4.00 (d, J = 7.4 Hz, 2H) 3.36 (br s, 3H) 2.94 (br s, 2H) 1.51 (s, 6H) 0.96 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 S-22: 6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.251)의 합성
Figure pct00116
단계-1: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (4.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (200 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (231 mg, 1.04 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (146 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (220 mg, 2.08 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (120 mg, 37.4%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 606.28 (M+1)+.
단계-2: 6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (92 mg, 0.15 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 정제에 의해 정제된 생성물 (21 mg, 27.3%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 506.6 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.29 (br s, 1H) 8.83 (s, 1 H) 8.02 (d, J = 10.1 Hz, 1H) 7.86 (d, J = 6.1 Hz, 1H) 7.64 (br s, 1H) 7.49 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.13-4.25 (m, 2H) 3.40 (br s, 2H) 2.98 (br s, 2H) 1.61 (s, 6H) 1.52 (s, 6H) 1.33 (d, J = 6.58 Hz, 6H).
실시예 S-23: 6-((2',3'-디히드로-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-7'-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.254)의 합성
Figure pct00117
단계-1: tert-부틸 7'-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (4.0 mL) 중 1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (200 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (249 mg, 1.05 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7'-아미노-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트 (146 mg, 0.52 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (220 mg, 2.08 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 604.28 (M+1)+.
단계-2: 6-((2',3'-디히드로-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-7'-일)아미노)-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 디히드로클로라이드의 합성: tert-부틸 7'-((1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-2-이소프로필-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트 (80 mg, 0.13 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1.5 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 역상 정제에 의해 정제하여 목적 화합물 (34 mg, 44.5%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 504.58 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.31 (br s, 1H) 9.23 (br s, 2H) 8.73-8.87 (m, 1H), 7.97-8.05 (m, 1H), 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.65 (br s, 1H), 7.48 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.83 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.36 (br s, 1H) 4.14-4.26 (m, 2H), 3.26 (br s, 2H), 1.52 (s, 6 H), 1.33 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 1.08 (br s, 4H).
실시예 S-24: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (화합물 번호 1.261)의 합성
Figure pct00118
단계-1: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (500 mg, 2.37 mmol, 1.0 당량) 및 2-(6-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)프로판-2-올 (556.6 mg, 2.37 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (657.6 mg, 4.75 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (90.5 mg, 0.47 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.09 mL, 0.951 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징하고, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (520 mg, 60.2%)을 갈색 액체로서 수득하였다. LCMS: 364.44 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 6-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트)의 합성: 톨루엔 (5.0 mL) 중 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (250 mg, 0.68 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (304 mg, 1.37 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (170.8 mg, 0.68 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (291.2 mg, 2.11 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (97 mg, 25.0%)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: 564.7 (M+1)+.
단계-3: 2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-6-((1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온의 합성: tert-부틸 6-((2-에틸-1-(5-플루오로-6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (90 mg, 0.16 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 HCl 중 4.0 M 디옥산 (10 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고; 역상 정제에 의해 정제된 생성물 (34 mg, 44.6%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 464.58 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.19 (br s, 1H) 8.84 (s, 1 H) 7.87-8.06 (m, 2H) 7.51 (br s, 1H) 7.38 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 5.25 (s, 1H) 4.01 (d, J = 7.0 Hz, 2H) 3.86 (s, 2 H) 2.98 (t, J = 5.7 Hz, 2H) 2.67 (d, J = 5.3 Hz, 2H) 1.41-1.65 (s, 6H) 1.17-1.29 (m, 2H) 0.97 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 S-25: 1-(6-(6-((4,4-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.40)의 합성
Figure pct00119
단계-1: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-4,4-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 1-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (100 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (134 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-4,4-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (78 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (120 mg, 1.132 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (51 mg, 30.9%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 581.29 (M+1)+.
단계-2: 1-(6-(6-((4,4-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일)아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: tert-부틸 7-((1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-4,4-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (51 mg, 0.087 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 조 물질을 정제용 정제에 제공하여 목적 화합물 (22 mg, 45.2%)을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 481.24 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.36 (br s, 1H) 9.11 (br s, 2H) 8.88 (s, 1 H) 8.14 (t, J = 7.7 Hz, 1H) 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.63 (br s, 1H) 7.49-7.60 (m, 1H) 7.45 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.26 (br s, 2H) 3.98 (m, J = 7.45 Hz, 2H) 3.24 (br s, 2H) 1.81-1.91 (m, 2H) 1.63-1.75 (m, 2H) 1.35 (s, 6H) 0.97 (t, J = 7.02 Hz, 3H).
실시예 S-26: 1-(6-(3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일아미노)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (화합물 번호 1.32)의 합성
Figure pct00120
단계-1: 1-(6-(6-(메틸티오)-3-옥소-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 6-(메틸티오)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3(2H)-온 (264 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량) 및 1-(6-브로모피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (245 mg, 1.1 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (276 mg, 2.0 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (38 mg, 0.2 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.4 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징한 다음, 130℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 생성물 (220 mg, 54.2%)을 담갈색 고체로서 수득하였다. LCMS: 407.3 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 7-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-3-옥소-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(6-(메틸티오)-3-옥소-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (102 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (122 mg, 0.5 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7-아미노-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (75 mg, 0.31 mmol, 1.2 당량) 및 Na2CO3 (106 mg, 1.0 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (100 mg, 72%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 607.4 (M+1)+.
단계-3: 1-(6-(3-옥소-6-(1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-7-일아미노)-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: tert-부틸 7-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-3-옥소-2-(2,2,2-트리플루오로에틸)-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (100 mg, 0.18 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하여 백색 고체를 수득하였다. 이 고체에 수성 NaHCO3 (10 mL)을 첨가하고, 생성물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 목적 생성물을 회백색 고체 (20 mg, 22%)로서 수득하였다. LCMS: 507.2 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.43 (br s, 1H) 8.95 (s, 1 H) 8.11 (t, J = 7.8 Hz, 1H) 7.91 (br s, 1H) 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 2H) 7.33 (br s, 1H) 7.04 (d, J = 8.3 Hz, 1H) 4.91 (d, J = 8.7 Hz, 2H) 3.85 (br s, 2H) 2.96 (d, J = 6.1 Hz, 2H) 2.67 (d, J = 1.75 Hz, 2H) 1.79-1.89 (m, 2H) 1.63-1.76 (m, 2H).
실시예 S-27: 1-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성 (화합물 번호 1.39)
Figure pct00121
단계-1: tert-부틸 6-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (125 mg, 0.35 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (172 mg, 0.7 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (107 mg, 0.39 mmol, 1.1 당량) 및 Na2CO3 (149 mg, 1.4 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (110 mg, 54.2%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 581.2 (M+1)+.
단계-2: 1-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (110 mg, 0.19 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (2 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (2 mL)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 증발시키고, 디에틸 에테르 (3 x 5 mL)로 연화처리하고, 건조시켜 목적 화합물 (76 mg, 83.3%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 481.5 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.34 (br s, 1H) 9.62 (br s, 2H) 8.77-8.94 (s, 1 H) 8.17 (t, J = 7.8 Hz, 1H) 7.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.68 (br s, 1H) 7.45-7.56 (m, 2H) 7.36 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 3.98 (q, J = 6.8 Hz, 2H) 3.40 (br s, 2H) 3.04 (t, J = 6.1 Hz, 2H) 1.81-1.93 (m, 2H) 1.58-1.77 (m, 8H) 0.97 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 S-28: 1-(6-(6-(2',3'-디히드로-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-7'-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (화합물 번호 1.42)의 합성
Figure pct00122
단계-1: tert-부틸 7'-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (2.0 mL) 중 1-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴 (125 mg, 0.35 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (172 mg, 0.7 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 7'-아미노-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트 (106 mg, 0.39 mmol, 1.1 당량) 및 Na2CO3 (149 mg, 1.4 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL) 및 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 목적 화합물 (90 mg, 44.6%)을 담황색 고체로서 수득하였다. LCMS: 579.2 (M+1)+.
단계-2: 1-(6-(6-(2',3'-디히드로-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-7'-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판카르보니트릴의 합성: tert-부틸 7'-(1-(6-(1-시아노시클로프로필)피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일아미노)-1'H-스피로[시클로프로판-1,4'-이소퀴놀린]-2'(3'H)-카르복실레이트 (90 mg, 0.16 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M-HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 4시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 디에틸 에테르 (3 x 5 mL)로 연화처리하고, 건조시켜 목적 화합물 (31 mg, 40.5%)을 회백색 고체로서 수득하였다. LCMS: 479.5 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.34 (br s, 1H) 9.36 (br s, 2H) 8.88 (s, 1 H) 8.16 (t, J = 7.9 Hz, 1H) 7.92 (d, J = 7.9 Hz, 1H) 7.67 (br s, 1H) 7.45-7.56 (m, 2H) 6.84 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 4.37 (br s, 2H) 3.89-4.03 (m, 2H) 3.26 (br s, 2H) 1.77-1.92 (m, 2H) 1.60-1.76 (m, 2H) 1.09 (d, J = 4.4 Hz, 4H) 0.97 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 S-29: 1-(4-(6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (화합물 번호 1.63)의 합성
Figure pct00123
단계-1: tert-부틸 6-((1-(2-(1-시아노시클로프로필)피리딘-4-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3 mL) 중 1-(4-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴 (100 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (126 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 60분 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (78.4 mg, 0.28 mol, 1.0 당량) 및 Na2CO3 (120 mg, 1.13 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL), 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 표제 화합물 (70 mg, 42.5%)을 수득하였다. LCMS: 581.69 (M+1)+.
단계-2: 1-(4-(6-((1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일)아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)피리딘-2-일)시클로프로판-1-카르보니트릴의 합성: tert-부틸 6-((1-(2-(1-시아노시클로프로필)피리딘-4-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (70 mg, 0.12 mmol, 1.0 당량)를 디클로로메탄 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 TFA (0.5 mL)를 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물 (4 mg, 6.3%)을 수득하였다. LCMS: 481.58 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.43 (br s, 1H) 8.84-8.95 (m, 1H) 8.69 (d, J = 5.2 Hz, 1H) 7.48-7.67 (m, 4H) 7.37 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 3.70-3.86 (m, 2H) 3.39 (br s, 2H), 2.97 (br s, 2H) 1.70-1.95 (m, 4H), 1.61 (s, 6H), 0.98 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 S-30: 2-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (화합물 번호 1.335)의 합성
Figure pct00124
단계-1: 2-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴의 합성: 디옥산 (10 mL) 중 2-(6-브로모-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (300 mg, 1.23 mmol, 1.0 당량) 및 2-에틸-6-(메틸티오)-1,2-디히드로-3H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-온 (259 mg, 1.23 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 탄산칼륨 (341.2 mg, 2.46 mmol, 2.0 당량)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 질소로 10분 동안 퍼징하고, 이어서 아이오딘화구리 (47 mg, 0.24 mmol, 0.2 당량), 및 N,N'-디메틸에틸렌디아민 (DMEDA) (0.05 mL, 0.49 mmol, 0.4 당량)을 첨가하고, 질소로 10분 동안 다시 퍼징하고, 90℃에서 밤새 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL), 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (106 mg, 23.1%)을 수득하였다. LCMS: 372.4 (M+1)+.
단계-2: tert-부틸 6-((1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트의 합성: 톨루엔 (3.0 mL) 중 2-(6-(2-에틸-6-(메틸티오)-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴 (106 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량)의 교반 용액에 m-CPBA (126.4 mg, 0.56 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. tert-부틸 6-아미노-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (79 mg, 0.28 mmol, 1.05 당량) 및 Na2CO3 (120 mg, 1.13 mmol, 4.0 당량)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (50 mL), 염수 용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 크로마토그래피 [실리카 겔 100-200 메쉬; 용리: 헥산 중 0-50% EtOAc]에 의해 정제하여 표제 화합물 (40 mg, 23.4%)을 수득하였다. LCMS: 600.7 (M+1)+.
단계-3: 2-(6-(6-(1,1-디메틸-1,2,3,4-테트라히드로이소퀴놀린-6-일아미노)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)-5-플루오로피리딘-2-일)-2-메틸프로판니트릴의 합성: tert-부틸 6-((1-(6-(2-시아노프로판-2-일)-3-플루오로피리딘-2-일)-2-에틸-3-옥소-2,3-디히드로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-일)아미노)-1,1-디메틸-3,4-디히드로이소퀴놀린-2(1H)-카르복실레이트 (40 mg, 0.06 mmol, 1.0 당량)를 디옥산 (1 mL) 중에 용해시키고, 이어서 디옥산 중 4.0 M HCl (1 mL)을 적가하고, 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 감압 하에 건조시켜 표제 화합물 (22 mg, 60.5%)을 수득하였다. LCMS: 501.5 (M+1)+; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.24 (br s, 1H) 8.87 (s, 1H) 8.26 (br s, 1H) 8.13-8.24 (m, 2H) 8.09 (d, J = 6.1Hz, 1H) 7.51 (br s, 1H) 7.45 (d, J = 8.3Hz, 1H) 7.27 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 3.95-4.09 (m, 2H) 3.10 (br s, 2H) 2.77 (br s, 2H) 1.76 (s, 6H) 1.43 (s, 6H) 0.98 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
본원에 개시된 화합물을 실시예 S1-S30 및 반응식 1 내지 반응식 5에 예시된 실험 세부사항에 따라 적절한 출발 물질 및 시약을 사용하여 제조하였다.
생물학적 실시예
실시예 B1. WEE1 IC50 결정
WEE1 키나제 효소에 대한 화합물의 IC50 값을 란타스크린(LanthaScreen)™ 테르븀 표지된 TR-FRET 검정에 의해 결정하였다. 키나제 검정을 1X 키나제 완충제 (#PV6135, 인비트로젠(Invitrogen), 라이프 테크놀로지스(Life Technologies), 뉴욕주 그랜드 아일랜드) 중에서 수행하였으며, 여기서 총 반응 부피는 저부피 384-웰 플레이트 (#4511, 코닝(Corning))에서 10 μL였다. 연속 희석된 화합물 (3배)을 WEE1 효소 (1 nM) (#PR7373A, 인비트로젠, 라이프 테크놀로지스, 뉴욕주 그랜드 아일랜드)와 함께 10분 동안 인큐베이션하고; ATP (10 μM) (#A1852, 시그마(Sigma), 미주리주 세인트 루이스) 및 형광-폴리GT 기질 (200 nM) (#PV3610, 인비트로젠, 라이프 테크놀로지스, 뉴욕주 그랜드 아일랜드)의 혼합물을 첨가하고, 암실에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 후, TR-FRET 희석 완충제 (# PV3574, 인비트로젠, 라이프 테크놀로지스, 뉴욕주 그랜드 아일랜드) 중 테르븀 표지된 항체 (4 nM) (#PV3529, 인비트로젠, 라이프 테크놀로지스, 뉴욕주 그랜드 아일랜드) 및 EDTA (#E5134, 시그마, 미주리주 세인트 루이스) (20 mM)를 함유하는 10 μL 정지 용액을 첨가하였다. 판독은 각각 340 nm의 단일 여기 및 495 nm 및 520 nm에서의 이중 방출에서 시너지 네오 플레이트(Synergy Neo Plate) 판독기 (바이오텍(BioTek), 버몬트주 위누스키)로 수행하였다.
시험 샘플의 % 활성을 (샘플 - 최소)*100/(최대 - 최소)로서 계산하였다. [최대: DMSO 대조군, 효소 & DMSO의 존재 하에 완전한 반응, 및 최소: 효소 없음 & DMSO]. 퍼센트 억제 (100 - % 활성)를 IC50 값의 결정을 위해 XLfit에서 "4-파라미터 로지스틱 모델"에 피팅하였다. 결과를 표 2에 나타냈다.
표 2
Figure pct00125
Figure pct00126
실시예 B2. PKMYT1 IC50 결정
시험 화합물에 의한 PKMYT1 키나제 활성의 억제를 리액션 바이올로지 코포레이션(Reaction Biology Corporation) (펜실베니아주 말번)에서 핫스팟(HotSpot) 키나제 검정에 의해 측정하였다. 간략하게, 미엘린(Myelin) 염기성 단백질 기질을 반응 완충제 (20 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.01% 브리즈35(Brij35), 0.02 mg/mL BSA, 0.1 mM Na3VO4, 2 mM DTT, 1% DMSO) 중에서 제조하였다. PKMYT1 키나제를 기질 용액 내로 전달하고, 부드럽게 혼합하였다. 100% DMSO 중 시험 화합물을 음향 기술 (에코550(Echo550); 나노리터 범위)에 의해 키나제 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 33P-ATP를 반응 혼합물로 전달하여 반응을 개시하였다. 반응을 10 μM ATP에서 수행하였다. 실온에서 2시간 인큐베이션한 후, 키나제 활성을 P81 필터-결합 방법에 의해 검출하였다. 화합물을 3-배 연속 희석에 의해 10-용량 IC50 방식으로 시험하였다. 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) (그래프패드 소프트웨어(GraphPad Software), 캘리포니아주 샌디에고) 내의 S자형 용량 반응 및 가변 기울기를 갖는 비선형 회귀 모델을 사용하여 개별 시험 화합물의 IC50 값을 계산하였다. 결과를 표 3에 나타냈다.
표 3
Figure pct00127
실시예 B3. A427 세포주에서의 세포독성 검정에서 화합물의 효력의 결정
폐 상피 세포주인 A427 (HTB-53; ATCC)을 96 웰 엣지 플레이트 (167425; 써모피셔(ThermoFisher))에서 웰당 100 μL당 1500개 세포의 세포 수로 배지 (MEM, 41090101; 깁코(Gibco))에 시딩하였다. 세포를 누에르(Nuaire) 인큐베이터 (가습)내에서 37℃에서 24시간 동안 5% CO2 환경 (배양 조건) 하에 성장시켰다. 목적하는 시험 농도 범위 내의 연속 희석된 시험 화합물 (100 μL)을 배양 플레이트에 첨가하고, 세포를 배양 조건 하에 72시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 배지를 배양 배지 중에 제조된 1 mM 레자주린 (R7017; 시그마) 100 μL로 대체함으로써 지정된 인큐베이션 시간에 실험을 종결시키고, 플레이트를 배양 조건 하에 4-6시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 형광을 535 nm의 여기 파장 및 590 nm의 방출 파장에서 다중모드 플레이트 판독기 (바이오텍 시너지 네오(Biotek Synergy Neo))를 사용하여 기록하여 상대 형광 단위를 수득하였다. 데이터를 하기와 같이 분석하였다: 백그라운드 형광 (배지만을 함유하는 블랭크) 값을 각각의 판독치로부터 차감하고, 비히클 대조군 (DMSO 처리된 세포)으로 정규화하여 퍼센트 생존/증식을 수득하였다. 퍼센트 생존을 100에서 차감하여 증식의 퍼센트 억제를 수득하였으며, 이를 사용하여 IC50 값을 계산하였다. 다른 세포주 (예컨대 A549, AsPc-1, Panc 10.05, A172, U-87MG)에서의 화합물의 효력을 유사한 방식으로 결정할 수 있다. 결과를 표 4에 나타냈다.
표 4
Figure pct00128
Figure pct00129
실시예 B4. 선택된 암 세포주에서의 세포 증식 검정에서 화합물의 효력 및 세포 PD 효과의 결정.
다양한 히스토타입을 갖는 추가의 세포주, 예컨대 LoVo 결장직장 선암종, NCI-H460 대세포 폐 암종, HCT-116 결장직장 암종 및 A2780 난소암 세포에서 시험 화합물의 효과를 연구한다. 암 세포를 대수 성장 기간 동안 수거하고 계수한다. 세포 농도를 적합한 배지를 사용하여 적절한 수로 조정하고, 90 μL 세포 현탁액을 96-웰 플레이트에 첨가한다. 세포를 시딩한 후, 플레이트를 부드럽게 진탕시켜 세포를 고르게 분포시키고, 제1일에 37℃, 5% CO2에서 인큐베이션한다.
세포를 제2일에, 시험 화합물 원액 (DMSO 중 10 mM)을 배양 배지를 사용하여 연속 희석함으로써 목적하는 농도 범위 (예를 들어 1.5 nM - 10 μM) 내의 9가지 농도의 시험 화합물로 처리한다. 세포 생존율은 프로메가(Promega)에 의해 권장된 바와 같이 셀 타이터-글로(Cell Titer-Glo)® (Cat. 번호: G7572, 프로메가)에 의해 전형적으로 처리 72시간 후에 평가한다.
세포 생존율 데이터를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) (버전 5, 그래프패드 소프트웨어, 인크.(GraphPad Software, Inc.), 캘리포니아주 샌디에고)을 사용하여 플롯팅한다. 또한, 그래프패드 프리즘 내의 S자형 용량 반응 및 가변 기울기를 갖는 비선형 회귀 모델을 사용하여 개별 시험 화합물의 IC50 값을 계산한다.
시험 화합물을, 세포 시딩 밀도 및/또는 인큐베이션 지속기간에 있어 가능한 변화를 갖는 유사한 증식 방법을 사용하여, 보고된 Wee1 억제 화합물에 대해 다양한 감수성을 갖는 동일한 암 세포주 및/또는 다른 암 세포주에서 연구할 수 있다.
실시예 B5. 세포 PD 효과의 검정에 의한 화합물의 효력의 결정.
포스포-CDC2 및 γ-H2AX는 Wee1 억제와 연관된 2종의 임상적으로 관련된 바이오마커이다. 세포에서의 CDC2Y15 인산화는 Wee1 억제제에 의해 제거되는 것으로 보고되었다 (Gavory G et al., Almac Discovery, AACR poster, 2016). DNA 이중-가닥 파괴 마커인 γ-H2AX는 Wee1 감수성 세포주에서 Wee1 처리에 의해 상향조절되었다 (Guertin AD et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2013). pCDC2 및 γ-H2AX에 대한 선택된 시험 화합물의 효과를 선택적 항체를 사용한 웨스턴 블롯팅 방법을 사용하여 선택된 암 세포주에서 24 또는 48시간 처리 후 평가한다 (Guertin AD et al., Molecular Cancer Therapeutics, 2013).
세포를 시험 화합물로 처리한 후 포스포-CDC2 수준의 변화를 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 평가하였다. A427 세포 또는 AsPC-1 세포를 6-웰 플레이트에 플레이팅하고, 24시간 동안 대략 80-90% 전면생장률까지 배양하였다. 배지를 교체하고, 세포를 비히클 대조군 또는 여러 상이한 농도의 시험 화합물로 처리하였다. 처리된 세포를 세포 배양 조건 하에 명시된 시간 (예를 들어, 24시간) 동안 인큐베이션한 후, 세포를 빙냉 PBS로 헹구고, 프로테아제 억제제 및 포스파타제 억제제를 함유하는 1X 세포 용해 완충제 중에 용해시켰다. 얼음 상에서 간단히 인큐베이션한 후 세포를 세포 스크레이퍼로 플레이트로부터 스크래핑하고, 원심분리 튜브로 옮긴 다음, 추가의 용해를 위해 액체 질소 및 37℃ 수조 중에서 3회의 동결-해동 주기에 적용하였다. 용해물을 원심분리하여 세포 파편을 펠릿화하고 (예를 들어, 4℃에서 2000 X g의 10분 원심분리를 사용함), 상청액을 얼음 상의 새로운 튜브로 옮겼다. 브래드포드(Bradford) 방법 또는 등가물에 의해 샘플의 단백질 농도를 추정하였다. 제조업체의 지침에 따라 패쓰스캔(PathScan)® 포스포-CDC2 (Tyr15) 샌드위치 ELISA 키트 (Cat. #7176, 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 매사추세츠주 댄버스)를 사용하여 ELISA를 수행하였다. 결과를 표 5에 나타냈다.
표 5
Figure pct00130
ND: 결정되지 않음
포스포-CDC2에 대한 1차 항체, 예컨대 포스포-CDC2 (Tyr15) (10A11) 토끼 mAb (Cat. #4539, 셀 시그널링 테크놀로지) 또는 토끼 폴리클로날 항-CDK1 (포스포 Y15) 항체 (Cat. #ab47594, 압캠(Abcam), 영국 캠브리지)를 사용한 샘플의 웨스턴 블롯팅에 의해 포스포-CDC2의 수준의 변화를 대안적으로 또는 추가로 분석한다.
실시예 B6. 마우스 이종이식 모델에서의 시험 화합물의 평가
시험 화합물 (단일 작용제로서, 및 다른 작용제, 예컨대 겜시타빈, nab-파클리탁셀 및 테모조미드와 조합하여)의 생체내 항종양 활성을 검사하기 위해, 종양 성장 실험을 세포주 이종이식 모델 및/또는 PDX 모델에서 수행한다. 세포주는 상기 기재된 시험관내 연구에 기초하여 선택된다. 사용될 PDX 모델은, 예를 들어 췌장관 선암종 (PDAC) 또는 교모세포종을 갖는 환자로부터 직접 취한 종양으로부터 확립된다.
세포 또는 종양 척을 누드 마우스의 옆구리에 피하 이식하고, 종양 크기가 200 mm3에 도달할 때까지 성장시킨다. 종양을 캘리퍼를 사용하여 측정하고, 종양 부피를 하기 식을 사용하여 계산한다: 종양 부피 = (a x b2/2) (여기서, 'b'는 최소 직경이고, 'a'는 최대 직경임). 확립된 종양이 대략 200 mm3에 도달하면, 이어서 마우스를 처리군으로 계층화한다. 처리군은, 예를 들어 군당 10마리 마우스의 비히클 대조군, 겜시타빈 + nab-파클리탁셀, 시험 화합물 단독, 겜시타빈 + nab-파클리탁셀 + 시험 화합물이다. 처리군은 대안적으로, 예를 들어 비히클 대조군, 테모졸로미드, 시험 화합물 단독, 테모졸로미드 + 시험 화합물이다. 정확한 치료군, 약물 용량 및 투여 스케줄은 표준 관례에 따라 각각의 연구에 대해 구체적으로 결정된다. 종양 성장을 모니터링하고, 규칙적인 간격으로 부피를 기록한다. 각 마우스의 개별 종양이 대략적인 종점 (종양 부피 > 1,500 mm3)에 도달하면, 마우스를 조절된 CO2로 희생시킨다. 종양 성장 억제 (TGI)는 대조군에서 미리 결정된 종점에 도달 시 대조군의 종양 측정치를 다른 연구군과 비교함으로써 계산된다. 대안적으로, 세포를 동소 이식하고, 전체 생존을 측정한다.
상기 발명은 이해의 명확성을 위해 예시 및 예로서 다소 상세하게 기재되었지만, 특정의 부차적 변화 및 변형이 상기 교시에 비추어 실시될 것임이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백하다. 따라서, 설명 및 예는 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

Claims (42)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00131

    여기서,
    Y는 수소 또는 R4이고;
    m은 0, 1, 2, 또는 3이고;
    n은 0, 1, 2, 3, 또는 4이고;
    R1은 독립적으로 F, Cl, 또는 메틸이고;
    R2는 C1-C6 알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 -(C1-C3 알킬렌)CF3이고;
    R3은
    Figure pct00132
    이고 여기서,
    Figure pct00133
    는 방향족 고리를 나타내고;
    M1은 CH, CR3b 또는 N이고;
    M2는 CH, CR3b, 또는 N이거나, 또는 부재하고;
    M3은 CH, CR3b, N, O, 또는 S이고;
    M4는 CH, CR3b, N, O, 또는 S이고,
    단:
    (1) M4가 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M3은 CH, CR3b 또는 N이고,
    (2) M3이 O 또는 S이고 M2가 부재하는 경우에, M4는 CH, CR3b 또는 N이고;
    R3a는 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬, 또는 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고, 단 R3a가 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬인 경우에, M1, M2, M3, 및 M4 중 적어도 1개는 CR3b이고;
    R3b는 할로겐 또는 -CN이고;
    각각의 R4는 독립적으로 옥소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 할로겐, -C(O)R17, -C(O)OR17, -C(O)NR17R18, -CN, -Si(C1-C6 알킬)3, -OR17, -NR17R18, -OC(O)NR17R18, -NR17C(O)R18, -S(O)2R17, -NR17S(O)2R18, -S(O)2NR17R18, C3-C6 시클로알킬, 3- 내지 6-원 헤테로시클릴, -(C1-C3 알킬렌)CN, -(C1-C3 알킬렌)OR17, -(C1-C3 알킬렌)NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)CF3, -(C1-C3 알킬렌)C(O)R17, -(C1-C3 알킬렌)C(O)NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)NR17C(O)R18, -(C1-C3 알킬렌)S(O)2R17, -(C1-C3 알킬렌)NR17S(O)2R18, -(C1-C3 알킬렌)S(O)2NR17R18, -(C1-C3 알킬렌)(C3-C6 시클로알킬) 또는 -(C1-C3 알킬렌)(3- 내지 6-원 헤테로시클릴)이고, 여기서 각각의 R4는 독립적으로 할로겐, 옥소, -OR19, -NR19R20, 또는 -C(O)R19에 의해 임의로 치환되거나,
    또는 2개의 R4는, 동일한 탄소에 결합된 경우에, 이들이 부착되어 있는 탄소와 함께 C3-C6 시클로알킬 또는 3- 내지 6-원 헤테로시클릴을 형성하고, 각각은 R19에 의해 임의로 치환되고;
    각각의 R17, R18, R19, 및 R20은 독립적으로 수소, C3-C6 시클로알킬, 3-6원 헤테로시클릴 또는 C1-C6 알킬이고, 이들 각각은 할로겐, 옥소 또는 -OH에 의해 임의로 치환되거나,
    또는 R17 및 R18은 이들이 부착되어 있는 원자와 함께 할로겐, 옥소 또는 -OH에 의해 임의로 치환된 3-6원 헤테로시클릴을 형성한다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 (II)를 갖는 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00134
    .
  3. 제1항에 있어서, 하기 화학식 (III)를 갖는 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00135
    .
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 C1-C6 알킬인 화합물 또는 그의 염.
  5. 제4항에 있어서, R2가 이소프로필 또는 에틸인 화합물 또는 그의 염.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 C3-C6 시클로알킬인 화합물 또는 그의 염.
  7. 제6항에 있어서, R2가 시클로프로필인 화합물 또는 그의 염.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 -(C1-C3 알킬렌)CF3인 화합물 또는 그의 염.
  9. 제8항에 있어서, R2가 -CH2CF3인 화합물 또는 그의 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00136
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R3a가 C1-C6 할로알킬 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C3-C6 시클로알킬인 화합물 또는 그의 염.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R3a가 할로겐, -OH 또는 -CN에 의해 임의로 치환된 C1-C6 알킬인 화합물 또는 그의 염.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R3a가 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00137
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R3b가 할로겐인 화합물 또는 그의 염.
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R3b가 -CN인 화합물 또는 그의 염.
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00138

    Figure pct00139
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, m이 0인 화합물 또는 그의 염.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, m이 1인 화합물 또는 그의 염.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, Y가 수소인 화합물 또는 그의 염.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, n이 0인 화합물 또는 그의 염.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1인 화합물 또는 그의 염.
  22. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, n이 2인 화합물 또는 그의 염.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로 C1-C6 알킬이거나, 또는 2개의 R4가, 동일한 탄소에 결합된 경우에, 이들이 부착되어 있는 탄소와 함께 C3-C6 시클로알킬을 형성하는 것인 화합물 또는 그의 염.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 고리 A, 고리 B, R1, 및 R4가 함께 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 형성하는 것인 화합물 또는 그의 염:
    Figure pct00140
  25. 표 1의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 또는 그의 염.
  26. 제25항에 있어서, 표 1의 화합물의 제약상 허용되는 염인 화합물.
  27. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  28. 암의 치료를 필요로 하는 개체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체에서 암을 치료하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 개체에게 방사선 요법을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 개체에게 치료 유효량의 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 추가의 치료제가 암 면역요법제 또는 화학요법제인 방법.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 추가의 치료제가 DNA 알킬화제, 백금-기반 화학요법제, 키나제 억제제 또는 DNA 손상 복구 (DDR) 경로 억제제인 방법.
  33. 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 돌연변이체 TP53 유전자를 포함하는 것인 방법.
  34. 제28항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 암에서의 TP53 유전자에서의 1개 이상의 돌연변이의 존재, 또는 (ii) 암에서의 돌연변이체 p53의 발현에 기초하여 치료를 위한 개체를 선택하는 것을 포함하는 방법.
  35. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 G2-M 체크포인트를 억제하는 방법.
  36. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 조기 유사분열을 유도하는 방법.
  37. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법.
  38. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 세포에 투여하는 것을 포함하는, 세포에서 Wee1을 억제하는 방법.
  39. Wee1을 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염과 접촉시키는 것을 포함하는, Wee1을 억제하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 억제제가 키나제 검정에 따라 1 μM 미만의 IC50으로 Wee1에 결합하는 것인 방법.
  41. 암의 치료를 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염의 용도.
  42. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 염을 포함하는 키트.
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