KR20210137489A

KR20210137489A - 인간 인터루킨-4 수용체 알파의 항체를 포함하는 액체 조성물

Info

Publication number: KR20210137489A
Application number: KR1020217031520A
Authority: KR
Inventors: 웨이 젱; 우빈 판; 신 양; 리민 장; 지에 지앙
Original assignee: 쑤저우 커넥트 바이오파마슈티컬즈, 엘티디.
Priority date: 2019-03-13
Filing date: 2020-03-13
Publication date: 2021-11-17
Also published as: BR112021017890A2; ZA202107515B; SG11202109975YA; CN111686247B; CN111686247A; EP3939609A1; CN113660950A; IL286235A; TW202100142A; JP2022524632A; EP3939609A4; CA3133138A1; MX2021010951A; US20220348666A1; AU2020235770A1; WO2020182197A1; TWI826665B

Abstract

본 발명은 인간 인터루킨-4 수용체 알파의 항체를 포함하는 액체 조성물을 제공한다. 액체 조성물은, 50-200mg/ml 농도의 항체; 및 보조제로서의 완충제, 보호제, 및 계면활성제를 포함한다. 액체 조성물은 5.4-6.4의 pH를 갖는다.

Description

인간 인터루킨-4 수용체 알파의 항체를 포함하는 액체 조성물

본 출원은 2019년 3월 13일에 출원된 중국 특허 출원 제201910187179.9호의 우선권을 주장하며, 이는 전문이 본원에 참고로 포함된다.

기술 분야

본 발명은 바이오의약품 제형 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 항체를 고농도로 포함하는 안정한 액상 제형에 관한 것이다.

인간 인터루킨-4 수용체는 T 세포에 의해 매개되는 IL-4 및 IL-5 상향조절에 의해 매개되는 세포 증식을 억제하는 가용성 형태의 단백질(shIL-4Rα)을 생성하는 것으로 알려져 있다. 수용체의 두 가지 형태는 알레르기 반응과 관련이 있으며, 이것은 알레르기 비염(allergic rhinitis), 부비동염(sinusitis), 천식(asthma), 습진(eczema) 등과 같은 질병으로 나타난다. 따라서, 단백질을 표적으로 하는 차단 항체가 이러한 질병을 치료하고 완화하는데 도움이 된다.

현재, 듀필루맙(Dupilumab)과 같은 hIL-4R을 표적으로 하는 단클론 항체 의약품이 임상 시험에 들어갔으며, 이것은 아토피성 피부염(atopic dermatitis)의 치료에 대해 2상 임상 시험에서 우수한 효능을 보였다. 그러나, 항체 의약품의 경우, 최상의 투여 방식은 피하 주사이고 이들의 효과를 발휘하기 위해서는 비교적 고용량이 필요하며, 따라서 일반적으로 고농도의 항체 제형을 조제해야 한다. 선행 기술에 공지된 바와 같이, 고농도 항체 제형의 제조 및 적용은 통상적으로 많은 어려움을 수반한다. 예를 들면, 이러한 제형의 높은 점도는 주사기로 인출 및 주사하기 어려울 수 있고, 제형을 담는 용기(container) 또는 카트리지에 높은 약물 잔류로 인해 투여량 편차가 크고, 주사 부위에 통증 등을 유발할 수 있다. 또한, 제형의 높은 점도는 제조 동안 심각한 공정 문제를 일으킬 수 있다. 예를 들면, 농축 및 여과 단계 동안 극도로 높은 압력이 필요할 수 있거나, 심지어 제형조차도 필터 막을 전혀 통과할 수 없다. 또는, 이러한 제형의 고농도 항체는 응집되어 불용성 입자를 형성하는 경향이 있어, 불안정한 제형, 증가된 면역원성, 및 더 많은 약물 부작용 등을 초래한다.

따라서, 특히 높은 항체 농도, 장기간 안정성, 무응집 및 낮은 점도에 대한 제조 및 임상 적용 요건을 충족할 수 있는 인간 인터루킨-4 수용체를 표적으로 하는 신규한 항체 제형을 개발할 필요성이 당업계에 남아 있다.

본 발명의 목적은 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체를 포함하는 액체 조성물 및 이의 제형을 제공하는 것이며, 이러한 액체 조성물 및 이의 제형은 항체가 고농도로 안정적으로 존재할 수 있고, 낮은 점도를 갖게 할 수 있다.

본 발명에 의해 제공되는 기술적 해결방안은 다음과 같다.

하나의 측면에서, 본 발명은 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체를 포함하는 액체 조성물을 제공하며, 여기서 액체 조성물은 50-200 mg/ml 농도의 항체; 및 부형제로서 역할을 하는 완충제(buffer), 보호제(protective agent) 및 계면활성제 등을 포함하며, 액상 조성물은 5.4-6.4의 pH를 갖는다.

액체 조성물에서, 항체는 경쇄 가변 영역(VL) 및 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역은 서열 번호 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열 번호 2에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2, 및 서열 번호 3에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2, 및 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함한다.

바람직하게는, 항체는 서열 번호 4에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.

본 발명의 특정 실시양태에 따르면, 항체는 카파 경쇄 불변 영역(CL) 및 감마 중쇄 불변 영역(CH)을 갖는다. 더욱 바람직하게는, 항체는 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역 및 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 보다 바람직하게는, 항체는 2개의 경쇄와 2개의 중쇄를 포함하는 단클론 항체이다.

서열 번호 1 (LCDR1): RASQSVSSSYLA;

서열 번호 2 (LCDR2): GASSRAT;

서열 번호 3 (LCDR3): QQYDHSAGWT;

서열 번호 4 (VL):

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIK.

서열 번호 5 (HCDR1): RNAMF;

서열 번호 6 (HCDR2): GIGTGGATSYADSVKGR;

서열 번호 7 (HCDR3): GRYYFDY;

서열 번호 8 (VH):

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSS.

서열 번호 9 (CL):

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.

서열 번호 10 (CH):

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG.

서열 번호 11 (L):

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYDHSAGWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC.

서열 번호 12 (H):

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRNAMFWVRQAPGKGLEWVSGIGTGGATSYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGRYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG.

바람직하게는, 항체는 100-200mg/ml, 보다 바람직하게는 130-165mg/ml, 및 더욱 바람직하게는 150±5mg/ml의 농도로 존재한다.

액체 조성물에서, 완충제는 아세트산염 완충제, 인산염 완충제 및 아미노산 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 완충제는 5-50mmol/L의 농도로 존재하고; 바람직하게는, 완충제는 5-50mmol/L 농도의 아미노산 완충제이다.

바람직하게는, 아세트산염 완충제는 아세트산나트륨 완충제이거나, 인산염 완충제는 인산이수소나트륨 완충제이거나, 아미노산 완충제는 염산히스티딘 완충제이다.

바람직하게는, 완충제는 5-20mmol/L의 농도로 존재한다.

바람직하게는, 완충제는 5-20mmol/L 농도의 염산히스티딘 완충제, 보다 바람직하게는 10mmol/L 농도의 염산히스티딘 완충제이다.

액체 조성물에서, 보호제는 당(sugar), 알콜, 아미노산 및 염화물 염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 보호제는 40-220mmol/L의 농도로 존재한다.

바람직하게는, 보호제는 당, 알콜 및 아미노산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 보호제는 40-220mmol/L의 농도로 존재하고/하거나, 보호제는 염화물 염이고, 보호제는 40-150mmol/L의 농도로 존재한다.

바람직하게는, 당은 40-150mmol/L, 보다 바람직하게는 60-150mmol/L 농도의 트레할로스 및/또는 수크로스이거나; 알콜은 40-220mmol/L, 보다 바람직하게는 110-150mmol/L 농도의 만니톨이거나; 아미노산은 40-220mmol/L, 보다 바람직하게는 120-220mmol/L 농도의 프롤린, 염산아르기닌 및 글리신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이거나; 염화물 염은 40-150mmol/L, 보다 바람직하게는 80-120mmol/L 농도의 염화나트륨이다.

보다 바람직하게는, 보호제는 트레할로스와 염화나트륨의 조합이고; 더욱 바람직하게는, 보호제는 40-150mmol/L 트레할로스와 40-150mmol/L 염화나트륨의 조합이고; 여전히 더욱 바람직하게는, 액체 조성물 중의 보호제는 60-150mmol/L 트레할로스와 80-120mmol/L 염화나트륨의 조합, 보다 바람직하게는 60mmol/L 트레할로스와 100mmol/L 염화나트륨의 조합이다.

액체 조성물에서, 계면활성제는 Tween 80, Tween 20, Poloxamer 및 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1종 이상과 같은 비이온성 중합체일 수 있고, 계면활성제는 0.01% 내지 0.2%의 농도로 존재한다.

바람직하게는, 계면활성제는 0.01-0.03% Tween 80, 보다 바람직하게는 0.02% Tween 80이다.

본 발명에 의해 제공되는 약제학적 조성물은 약간의 유백광을 갖는 무색 내지 담황색의 투명한 멸균 용액이다. 검출된 바와 같이, 본 발명에 의해 제공되는 액체 조성물은 230-330mOsmol/kg의 삼투압, < 30cP의 점도 및 6.2±0.2의 pH를 갖는다.

본 발명의 특정 실시양태에 따르면, 액체 조성물은 주사용, 바람직하게는 피하 또는 정맥내 주사용 제형이고; 바람직하게는 액체 조성물은 피하 또는 정맥내 주사용 제형이다.

바람직하게는, 액체 조성물은

130-165mg/ml, 바람직하게는 150±5mg/ml의 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체;

10mmol/L 염산히스티딘;

60mmol/L 트레할로스;

100mmol/L 염화나트륨;

0.02% Tween 80을 포함하고;

액체 조성물은 6.2±0.2, 바람직하게는 6.2±0.05의 pH를 갖는다.

본 발명에 의해 제공하는 제형은 유리한 장기 안정성(2-8℃에서 2년간 저장할 수 있고 품질 기준을 만족함) 응집물이 없는(≤10.0%) 무색 또는 담황색의 투명한 멸균 용액이다. 본 발명의 제형은 낮은 점도(< 30cP)를 가지며, 피하 주사에 적합한 pH 및 삼투압(290-310mOsmol/kg)을 특징으로 한다. 이에 대한 자세한 내용은 아래 표 14를 참조한다.

상기 언급된 농도는 모두 액체 조성물 또는 액체 제형의 총 용적 또는 총 중량을 기준으로 한다. 문맥에서, 용어 "액체 제형" 및 "액체 조성물"은 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.

본 발명의 특정 실시양태에 따르면, 액체 조성물은 피하 주사용 제형이며, 주사용 멸균수를 추가로 포함한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 염증 또는 알레르기 질환의 치료용 약제를 제조하기 위한 액체 조성물의 용도를 제공하고; 바람직하게는, 염증 또는 알레르기 질환은 알레르기성 피부염(allergic dermatitis), 천식(asthma), 호산구성 식도염(eosinophilic esophagitis), 습진(eczema), 알레르기성 비염(allergic rhinitis), 비용종(nasal polyp), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등과 같은 자가면역 질환을 포함한다.

여전히 또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 액체 조성물과 관련된 다른 제품을 제공한다.

본 발명은 본 발명의 액체 조성물을 포함하는 용기를 제공한다. 예를 들면, 용기는 액체 조성물의 충전 용적이 바이알당 1mL 초과인 중성 붕규산염 유리 튜브로 만들어진 2mL 주사 바이알일 수 있다.

본 발명은 본 발명에 의해 제공되는 용기를 포함하고; 지침서를 추가로 포함하는 키트(kit)를 제공한다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 액체 조성물을 이를 필요로 하는 대상체(subject)에게 투여함을 포함하여, 염증 또는 알레르기 질환을 예방, 치료 또는 개선(ameliorating)하는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 대상체는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다.

바람직하게는, 염증 또는 알레르기 질환은 알레르기성 피부염(allergic dermatitis), 천식(asthma), 호산구성 식도염(eosinophilic esophagitis), 습진(eczema), 알레르기성 비염(allergic rhinitis), 비용종(nasal polyp), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등과 같은 자가면역 질환을 포함한다.

본 발명에 의해 제공되는 액체 조성물은 주사에 의해, 예를 들면 피하 주사 또는 정맥내 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

다른 약제가 염증 또는 알레르기 질환을 예방, 치료 또는 개선하기 위해 액체 조성물과 조합되어 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 방법은 알부테롤 등과 같은 항천식제, 로라타딘 등과 같은 항히스타민제, 타크롤리무스 및 피메크롤리무스 등과 같은 면역억제제, 이프라트로피움 브로마이드 등과 같은 M 수용체 차단제, 몬테루카스트 등과 같은 류코트리엔 수용체 차단제, 테오필린 등과 같은 포스포디에스테라제 억제제, 5-아미노살리실산 등과 같은 비스테로이드성 항염증 약물 및 베클로메타손 및 부데소니드 등과 같은 호르몬으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나의 약제를 대상체에게 투여함을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 약제(들) 및 액체 조성물은 동시에 또는 순차적으로 투여된다.

본 발명자들은 약제의 제조를 위한 기초를 제공하는 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체를 위한 신규한 액체 조성물을 성공적으로 개발하였다. 본 발명에 의해 제공되는 액체 조성물은 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체를 고농도로 함유하고, 피하 또는 정맥내 투여될 때, 고용량의 항체를 제공하여 약물 요건을 충족시키고 치료 효과를 개선할 수 있다. 한편, 고농도의 항체를 포함하더라도, 본 발명의 액체 조성물은 항체의 응집을 나타내지 않는 반면 점도가 상당히 낮아, 미세침 및 침관을 통해 조성물을 용이하게 전달할 수 있어 환자의 불편을 최소화할 수 있다. 본 발명의 액체 조성물은 또한 제조 및 저장이 용이한 이점을 갖는다. 또한, 액체 조성물은 충분한 물리적 및 화학적 안정성을 가지며, 여기서 불용성 입자의 함량이 중국 약전에 규정된 범위(≥10μm의 입자 크기를 갖는 불용성 입자의 수는 ≤ 6000/바이알이고, ≥ 25μm의 입자 크기를 갖는 불용성 입자의 수는 ≤ 600/바이알) 내에 있다. 액체 조성물은 또한 동결 및 해동을 반복할 수 있고, 진탕에 내성이 있으며, 열 안정성이 양호하고, 약제의 제조를 위한 요건을 충족한다.

본 발명에 의해 제공되는 액체 조성물은 인간 인터루킨-4 수용체 알파와 결합하는 능력 및 STAT-6 신호 전달을 차단하는 생물학적 활성에 대해 평가되었다. 결과는 본 발명에 의해 제공되는 액체 조성물이 IL-4Rα 항원과 안정하고 효과적으로 결합할 수 있고, STAT-6 신호 전달을 효과적으로 차단할 수 있음을 보여준다.

본 발명의 실시양태는 첨부된 도면과 함께 이하에서 상세히 기술되며, 여기서:
도 1 및 2는 pH 스크리닝 동안 조사된 제형의 SEC 순도의 결과를 보여준다.
도 3 및 4는 pH 스크리닝 동안 조사된 제형의 nrCE-SDS 순도의 결과를 보여준다.
도 5 및 6은 pH 스크리닝 동안 조사된 제형의 rCE-SDS 순도의 결과를 보여준다.
도 7 및 8은 각각 pH 스크리닝 동안 조사된 제형의 CEX 중성 피크의 변화 결과를 보여준다.
도 9 및 10은 각각 보호제 스크리닝 동안 조사된 제형의 SEC 순도의 결과를 보여준다.
도 11 및 12는 각각 보호제 스크리닝 동안 조사된 제형의 nrCE-SDS 순도의 결과를 보여준다.
도 13 및 14는 각각 보호제 스크리닝 동안 조사된 제형의 rCE-SDS 순도의 결과를 보여준다.
도 15 및 16은 각각 보호제 스크리닝 동안 조사된 제형의 CEX 중성 피크의 변화 결과를 보여준다.
도 17은 보호제 스크리닝 동안 조사된 제형의 점도의 비교 결과를 보여준다.
도 18은 보호제 없이 조사된 상이한 농도에서의 제형의 점도의 결과를 보여준다.
도 19는 CBP-201의 생물학적 활성 검출 결과를 보여준다.

바람직한 실시양태의 상세한 설명

본 발명은 이하의 특정 실시양태와 조합하여 더욱 상세하게 기술될 것이다. 제공된 실시양태는 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하는 것이 아니라 단지 본 발명을 예시하기 위해 사용된다는 것을 당업계의 숙련가들은 인지할 것이다.

하기 실시예에서 실험 방법은 특별히 언급하지 않는 한 모두 통상적인 방법이다. 하기 실시예에서 사용된 원료 및 시약은 특별한 언급이 없는 한 모두 시판되는 제품이다.

하기 실시예에서 "CBP-201"로서 표현되는 항체는 서열 번호 4에 제시된 바와 같은 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 중쇄 가변 영역; 서열 번호 9에 제시된 바와 같은 경쇄 불변 영역 및 서열 번호 10에 제시된 바와 같은 중쇄 불변 영역; 또는 서열 번호 11에 제시된 바와 같은 경쇄 및 서열 번호 12에 제시된 바와 같은 중쇄를 포함하는 단클론 항체이다. 문맥에서, 용어 "CBP-201" 및 "단백질"은 상호교환 가능하게 사용될 수 있다. 또한, 용어 "CBP-201 제형" 및 "CBP-201 액체 조성물"은 상호교환 가능하게 사용될 수 있다.

하기 실시예에서 사용되는 일반적인 방법은 다음을 포함한다:

(1) pH 값의 결정:

pH 값의 측정은 문헌[General Rule 0631, Volume IV, Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 edition)]에 기술된 pH 측정 방법을 참조하여 수행된다.

(2) 40℃에서 가속된 안정성 시험:

안정성에 대한 연구는 제조된 제형의 시험 샘플을 제형의 안정성을 조사하기 위해 2주 또는 4주 동안 고온 및 고습(40℃±2℃/75±5% RH)에서 저장함으로써 수행된다.

(3) 단백질 농도의 검출:

단백질 농도는 흡광 계수(ε)를 사용하여 UV 분광광도계에 의해 검출된다. 람베르트-비어 법칙(Lambert-Beer law)에 따라, 샘플의 흡광도 값은 A=ε·C·L/N 공식에 따라 계산되며, 여기서 "C"는 샘플 중의 단백질 농도(mg/mL)를 나타내고; "L"은 1cm인 광로를 나타내고; "A"는 흡광도 값을 나타내고; "ε"은 흡광 계수(extinction coefficient)를 나타내고; "N"은 샘플의 희석 비율을 나타낸다. 이와 관련하여, 샘플의 단백질 농도는 C=A/ε×N 공식에 따라 계산된다.

단백질(항체)의 이론적인 흡광 계수는 다음 공식에 따라 계산될 수 있다: 질량 흡광 계수 ε = (5500nw + 1490ny + 125nc)·M^-1·cm^-1, 여기서 "nw"는 단백질의 아미노산 서열에서 Trp의 수를 나타내고; "ny"는 단백질의 아미노산 서열에서 Tyr의 수를 나타내고; "nc"는 단백질의 아미노산 서열에서 Cys의 수를 나타내고; "M"은 단백질의 분자량을 나타내고, "cm"는 광학 거리를 나타낸다.

CBP-201 항체의 서열에 따르면, 질량 흡광 계수 ε는 1.46으로 계산된다. 280nm에서의 샘플의 흡광도 값 A는 UV 분광광도계로 측정되며, 이에 따라 항체 농도가 계산된다.

(4) SEC에 의한 순도 검출:

하기 크로마토그래피 조건을 갖는 크기 배제 크로마토그래피(SEC-HPLC)가 사용된다:

컬럼: TSKgel G3000SW_XL 7.8*300mm 컬럼;

컬럼 온도: 실온;

검출기: DAD 검출기;

검출 파장: 280nm;

유속: 0.7mL/min;

샘플 희석: 초순수로 5.0mg/mL로 되도록 희석함;

주입 용적: 10μl;

이동상: 25mM 포스페이트 (pH 6.8 ± 0.1) 및 0.3M 염화나트륨;

용출 모드: 구배 용출

검출: 피크 면적 정규화 방법이 주요 피크의 피크 면적 백분율, 및 HMW 및 LMW 성분의 피크를 계산하는데 사용된다.

(5) nrCE-SDS에 의한 순도 검출:

CBP-201의 순도는 비환원 조건하에 분자량에 기반하여 정량적으로 결정된다.

검출: 면적 정규화 방법에 따라, 주요 피크의 순도는 모든 보정된 피크 면적의 합계에 대한 IgG 주요 피크의 보정된 피크 면적의 백분율로서 계산된다.

(6) rCE-SDS에 의한 순도 검출:

CBP-201의 순도는 환원 조건하에 분자량에 기반하여 정량적으로 결정된다.

검출: 면적 정규화 방법에 따라, LC, NGHC 및 HC(즉, CAP) 각각의 순도는 모든 보정된 피크 면적의 합계에 대한 LC, NGHC 및 HC 각각의 보정된 피크 면적의 백분율로서 각각 계산된다. 샘플의 순도는 LC와 HC의 순도의 합계이다.

(7) 전하 이질성 검출(CEX 중성 피크):

검출은 문헌[General Rule 0514, Volume III, Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 edition)]에 기술된 바와 같이 이온 크로마토그래피를 참조하여 수행된다. 사용된 컬럼은 Agilent로부터 입수 가능한 BiomAb NP5, PK, 4.6×250mm이고; 크로마토그래피 피크 통합 결과는 기준을 참조하여 평가되며, 가장 높은 피크가 주 피크이고, 주 피크의 체류 시간보다 먼저 통합된 피크는 산성 피크로 정의되고, 주 피크의 체류 시간보다 늦게 통합된 피크는 알칼리성 피크로 정의된다.

(8) DSC 검출:

시차 주사 열량법이라고도 하는 DSC 열 분석은 시차 주사 열량계로 샘플의 흡열 또는 발열 속도를 기록하고 열 유속 dH/dt(millijoules/초)를 세로 좌표로 사용하고 온도 T 또는 시간 t를 가로 좌표로 사용하여 샘플의 상전이 온도를 측정하는 기술이며, 그후 샘플의 안정성을 판단할 수 있다.

(9) 점도 검출:

검출은 Brook Field로부터 입수 가능한 DV2T 점도계를 사용하고 점도 측정 방법 - 문헌[General Rule 0633, Volume IV, Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 edition)]에 기술된 세 번째 방법(회전 점도 측정 방법)을 참조하여 수행된다.

(10) 눈에 보이는 이물질 검출:

검출은 눈에 보이는 이물질을 검사하는 방법 - 문헌[General Rule 0904, Volume IV, Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 edition)]에 기술된 첫 번째 방법(램프 테스트)을 참조하여 수행된다.

(11) 입자 크기 검출:

검출은 불용성 입자 검사법 - 문헌[General Rule 0903, Volume IV, Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 edition)]에 기술된 첫 번째 방법(빛 차단)을 참고하여 수행된다.

실시예 1 pH 및 완충제

당해 실시예에서는, 6개 pH 값, 즉 5.4, 5.6, 5.8, 6.0, 6.2 및 6.4와 아세트산나트륨, 염산히스티딘 및 인산이수소나트륨으로부터 선택된 완충제를 사용하여 CBP-201 제형에 대한 pH 범위 및 완충제를 연구하였다. 염화나트륨이 각 샘플에 추가로 첨가되었다. 구체적으로, 40℃에서의 가속 시험에서, 적절한 pH 범위 및 완충제를 결정하기 위해 133.6mg/ml CBP-201을 함유하는 하기 단백질 용액을 조사하였다(표 1 참조).

[표 1]

pH 및 완충제 스크리닝 용액

40℃에서 가속된 안정성 시험을 통해, 단백질 용액을 외관, 단백질 농도, SEC 순도, CE-SDS 순도, 전하 이질성, DSC 및 점도에 대해 시험하였다.

외관 검사의 결과: 모든 단백질 용액은 외관이 희끄무레하고 눈에 보이는 이물질은 관찰되지 않았다.

단백질 농도의 결과: 단백질 용액의 단백질 농도는 모두 133.6±5% mg/ml의 범위였으며, 뚜렷한 농도 증가 또는 감소는 관찰되지 않았다.

또한, 40℃에서 2주간 가속 후, 상이한 pH 값에서 단백질 용액으로부터 다음의 결과가 수득되었다:

1. SEC 순도의 결과는 도 1-2에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 SEC 순도의 절대값은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 6.2의 용액 > pH 6.4의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 5.6의 용액 > pH 5.4의 용액(도 1). 또한, (각각 0시간에서의 순도와 비교하여) 시험된 용액의 SEC 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 5.4의 용액 > pH 5.6의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 6.4의 용액(도 2).

2. nrCE-SDS의 결과는 도 3-4에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 nrCE-SDS 순도의 절대값은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 6.4의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 5.6 > pH 5.4의 용액(도 3). 또한, (각각 0시간에서의 순도와 비교하여) 시험된 용액의 nrCE-SDS 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 5.4의 용액 > pH 5.6의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 6.4의 용액(도 4). 또한, pH 6.0에서 용액의 nrCE-SDS 순도는 2주 가속된 저장 후 97.5%였으며, 이것은 다소 높은 순도이다. pH 6.2 및 6.4에서 용액의 nrCE-SDS 순도는 pH 6.0에서보다 높았다.

3. rCE-SDS의 결과는 도 5-6에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 rCE-SDS 순도의 절대값은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 6.4의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 5.6의 용액 = pH 5.4의 용액(도 5). 또한, 시험된 용액의 rCE-SDS 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 5.4의 용액 = pH 5.6의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 6.4의 용액(도 6).

4. CEX 중성 피크의 변화의 결과는 도 7-8에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 CEX 중성 피크의 비율은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 6.4의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 5.6의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 5.8의 용액 > pH 5.4의 용액(도 7). 또한, 2주 가속된 저장 후 (각각 0시간에서의 변화와 비교하여) 시험된 용액의 CEX 중성 피크의 비율 변화(감소)의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: pH 5.8의 용액 > pH 5.6의 용액 > pH 5.4의 용액 > pH 6.0의 용액 > pH 6.2의 용액 > pH 6.4의 용액(도 8).

5. DSC 결과:

표 1에 나타낸 바와 같이 상이한 pH 값 및 완충제를 갖는 6가지 용액의 단백질은 모두 안정하였으며, 이들 간에 유의한 차이는 없었다.

6. 점도의 결과:

상이한 완충제를 갖는 시험된 단백질 용액의 점도를 비교한 결과, His-HCl 완충제 시스템을 갖는 용액과 인산염 완충제 시스템을 갖는 용액 사이에 약간의 점도 차이가 있었고, 이들 용액 모두의 점도는 아세트산염 완충제 시스템을 갖는 용액의 점도보다 낮았다. His-HCl 완충제 시스템을 갖는 용액의 경우, 이들의 점도는 8.7±0.8 cP 범위였으며, 이것은 예상한 20 cP보다 낮았고, pH가 더 높은 용액은 더 낮은 점도를 보였다.

상기와 같은 SEC, nrCE-SDS, rCE-SDS, CEX, DSC 및 점도의 검출로부터 수득된 결과를 기반으로 하여, pH가 높을수록 단백질에 대한 안정화 효과가 우수하며, 이들의 안정화 효과에 따라, pH 값은 다음과 같이 순위가 매겨질 수 있는 것으로 결론지을 수 있다: pH 6.4 > pH 6.2 > pH 6.0. 즉, 단백질은 pH 6.2±0.2의 산-염기 조건하에서 잘 안정화될 수 있다.

실시예 2 보호제

당해 실시예에서는, CBP-201 제형에 적합한 보호제를 연구하였다. 6.0의 pH를 갖고 트레할로스, 수크로스, 만니톨, 프롤린, 염산아르기닌, 글리신 또는 염화나트륨이 첨가된 단백질 용액을 제조하였으며, 여기서 염화나트륨이 첨가된 용액이 대조군으로 사용되었다. 구체적으로, 40℃에서의 가속된 안정성 시험에서, 적합한 보호제를 결정하기 위해 133.6mg/ml CBP-201을 함유하는 하기 단백질 용액을 조사하였다(표 2 참조).

[표 2]

보호제

40℃에서 가속된 안정성 시험을 통해, 단백질 용액을 외관, 단백질 농도, SEC 순도, CE-SDS 순도, 전하 이질성, 점도 및 DSC에 대해 시험하였다.

외관 검사의 결과: 모든 단백질 용액은 외관이 희끄무레하였다.

단백질 농도의 결과: 단백질 용액의 단백질 농도는 모두 133.6±5% mg/ml의 범위였다.

또한, 40℃에서 2주간 가속 후, 상이한 보호제를 갖는 단백질 용액으로부터 다음의 결과가 수득되었다:

1. SEC 순도의 결과는 도 9-10에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 SEC 순도의 절대값은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Pro를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Tre를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액, 여기서 보호제로서 NaCl을 갖는 단백질 용액은 95.3%의 가장 낮은 SEC 순도를 갖지만 허용 가능한 수준이었다(도 9). 또한, (각각 0시간에서의 순도와 비교하여) 시험된 용액의 SEC 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Arg를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > Tre를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액. 보호제로서 Arg를 갖는 단백질 용액이 SEC 순도가 가장 크게, 즉, 3.04% 감소했지만, 2주 가속된 저장 후에도 여전히 허용 가능한 95.4%의 SEC 순도를 가졌다(도 10).

2. nrCE-SDS의 결과는 도 11-12에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 nrCE-SDS 순도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Tre를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액(도 11). 또한, (각각 0시간에서의 순도와 비교하여) 시험된 용액의 nrCE-SDS 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Arg를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Tre를 갖는 용액(도 12). 각각 0시간에서의 감소 정도에 비해 약간의 감소 정도를 나타내고 40℃에서 2주간 가속 후 비교적 높은 수준을 유지하는 nrCE-SDS 순도는 다음과 같이 순위가 매겨진다는 것을 알 수 있다: Tre를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액.

3. rCE-SDS의 결과는 도 13-14에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 rCE-SDS 순도의 절대값은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Suc를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 = Tre를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액(도 13). 또한, 각각 0시간에서의 감소 정도와 비교하여, 시험된 용액의 rCE-SDS 순도 감소의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Arg를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Tre를 갖는 용액 = Man를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액(도 14). 각각 0시간에서의 감소 정도에 비해 약간의 감소 정도를 나타내고 40℃에서 2주간 가속 후 비교적 높은 수준을 유지하는 rCE-SDS 순도는 다음과 같이 순위가 매겨진다는 것을 알 수 있다: Suc를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 = Tre를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액.

4. CEX 중성 피크의 변화의 결과는 도 15-16에 나타내어져 있다. 2주 가속 후, 시험된 용액의 CEX 중성 피크의 비율은 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Tre를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액(도 15). 또한, 2주 가속된 저장 후 (각각 0시간에서의 변화와 비교하여) 시험된 용액의 CEX 중성 피크의 비율 변화(감소)의 정도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Gly를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Suc를 갖는 용액(증가) > Tre(증가)(도 16). 결과로부터, 전하를 안정적으로 유지하는 것과 관련하여 Tre가 1위, Suc가 2위, Pro, Man, Arg, NaCl, Gly가 그 뒤를 있는 것으로 결론지을 수 있다.

5. 점도의 결과는 도 17에 나타내어져 있다. 상이한 보호제를 첨가한 후, 단백질 용액의 점도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: Suc를 갖는 용액 > Pro를 갖는 용액 > Tre를 갖는 용액 > Man를 갖는 용액 > Gly를 갖는 용액 > NaCl를 갖는 용액 > Arg를 갖는 용액.

6. DSC 결과: 각각 7개의 보호제를 포함하는 용액에 대해, Tm1 및 Tm2 값은 모두 허용 가능하였고 그 안의 단백질은 구조적으로 안정하였으며, 이들 사이에 유의한 차이는 없었다.

실시예 3 완충제만을 갖는 단백질 용액에 대한 점도 평가

당해 실시예는 완충제(10mmol/L His-HCl, pH 6.0)만을 갖는 CBP-201 제형(보호제가 첨가되지 않음)의 농도에 따른 점도 변화를 조사하여, 제형의 점도를 감소시키는데 있어서의 보호제의 효과를 평가하기 위해 수행되었다. 최대 농도를 갖는 제형을 제조하고 점도를 측정하여, 제형에서 단백질 농도 선택에 대한 기초를 제공하였다. 당해 실시예에서, 제형은 NaCl 없이 제조되었으며 상기 실시예에서 NaCl을 함유하는 제형과 비교되었다.

단백질을 투석 완충액(10mmol/L His-HCl, pH 6.0)에 투석하고, 투석된 단백질을 각각 71.23mg/ml, 89.04mg/ml, 106.85mg/ml, 133.56mg/ml, 및 >151.37mg/ml(검출된 단백질 농도)의 농도로 되도록 농축시킨 다음 제형을 여과하였다. 외관 및 점도를 검출하였다. 수득된 결과는 표 3 및 도 18에 나타내어져 있다.

[표 3]

CBP-201 제형의 외관 및 점도의 검출 결과

결과는 단백질 농도가 증가함에 따라 단백질 용액의 점도가 증가하는 것으로 나타났다. 목표 농도가 133.6mg/ml인 단백질 용액(실제 농도는 137.94mg/ml였음)의 점도는 50.33cP였으며, 실시예 2에서 적합한 보호제에 대한 스크리닝에서 Suc를 포함하는 단백질 용액만이 그 값보다 큰 점도(68.75cP)를 가졌다. 즉, 7가지 보호제 대안 중에서, Suc만이 단백질 용액의 점도를 증가시켰고, 다른 보호제는 단백질 용액의 점도를 상이한 수준으로 감소시켰다. 따라서, 제형의 점도를 감소시키는데 대한 효과와 관련하여 우선적으로 선택된 보호제는 다음과 같이 순위가 매겨질 수 있다: Arg, NaCl, Gly, Man, Tre 및 Pro.

실시예 4 : 제형에서 성분들의 조합

스크리닝 검사로부터 수득된 결과를 기반으로 하여, CBP-201 제형의 성분들의 조합에 대한 연구를 수행하였다. 연구된 단백질 용액의 조성은 표 4에 나타내어져 있다.

[표 4]

성분들의 조합

단백질 용액은 133.6mg/ml CBP-201을 함유하고 4℃ 및 40℃에서 가속된 안정성 시험을 통해 시험되었다. 4℃ 및 40℃에서 가속된 안정성 시험을 통해, 용액을 눈에 보이는 이물질, 특정 크기(MFI/FLOWCAM), 단백질 농도, SEC 순도, DSC, 삼투압, 점도, CE-SDS 및 CEX에 대해 검출하였으며, 수득된 결과가 표 5-11에 나타내어져 있다.

[표 5]

외관 검사의 결과

[표 6]

단백질 농도의 검출 결과

외관 및 단백질 농도의 결과는 4℃에서 2주간 및 40℃에서 4주간 저장한 후, 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합을 갖는 단백질 용액에 대해 단백질 농도의 유의한 감소는 관찰되지 않았으며, 단백질 용액은 모두 외관이 희끄무레했으며, 이것은 용액의 높은 단백질 농도 및 단백질 자체의 특성과 관련이 있다는 것을 보여주었다. 이와 관련하여, 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합은 외관 및 단백질 농도의 결과에 기초하여 모두 허용 가능하였다.

[표 7]

SEC 순도

표 7의 데이터는 2번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액이 4℃에서 2주간 저장한 후 가장 낮았지만 허용 가능한 96.8%의 SEC 순도를 가짐을 보여주었다. 또한, 0시간에서의 SEC 순도와 비교하여, 4번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액에 대해 SEC 순도의 감소 정도가 가장 큰 것으로 관찰되었으며 감소 정도는 1.44%였지만 감소된 SEC 순도(97.1%)는 여전히 허용 가능하였다. 이와 관련하여, 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합을 갖는 모든 용액은 4℃에서 2주간 저장한 후 허용 가능한 SEC 순도를 가졌다.

40℃에서 4주간 저장한 후, 5번과 8번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액은 (각각 0시간에서의 순도에 비해) SEC 순도가 유의하게 감소하여 허용 가능하지 않은 낮은 SEC 순도를 가졌다. 40℃에서 4주간 저장한 후 성분의 다른 상이한 조합을 갖는 단백질 용액의 SEC 순도, 이들의 SEC 순도는 다음과 같이 순위가 매겨질 수 있다: 6번 조합을 갖는 단백질 용액 > 9번 조합을 갖는 단백질 용액 > 1번 조합을 갖는 단백질 용액 > 3번 조합을 갖는 단백질 용액 > 4번 조합을 갖는 단백질 용액 > 2번 조합을 갖는 단백질 용액 > 7번 조합을 갖는 단백질 용액. SEC 순도의 감소 정도와 관련하여, 6번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액은 상대적으로 작은 감소 정도를 보이는 반면 성분의 다른 조합을 갖는 모든 단백질 용액은 여전히 허용 가능한 유사한 감소 정도를 보였다(약 1.5% 유지).

[표 8]

CE-SDS 순도

표 8의 데이터는 4℃에서 2주간 저장한 각각 성분의 9가지 조합을 갖는 단백질 용액 중에서, 가장 낮은 nrCE-SDS 순도는 99.7%임을 보여주었다. 즉, 9가지 성분의 조합을 갖는 단백질 용액 모두는 4℃에서 2주간 그 안의 단백질을 안정하게 유지하였다. 또한, 4℃에서 2주간 저장한 후의 HC+LC(rCE-SDS)의 값은 각각 0시간에서의 값과 비교하여 거의 변화가 없었으며, 즉 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합을 갖는 모든 단백질 용액은 4℃에서 비교적 안정하였다.

40℃에서 4주간 저장한 후, 7번과 8번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액은 (각각 0시간에서의 순도 감소에 비해) nrCE-SDS 순도의 유의한 감소를 보였으며 따라서 허용 가능하지 않은 낮은 nrCE-SDS 순도를 가졌다. 또한, 92.4%의 nrCE-SDS 순도를 갖는 1번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액을 제외하고는, 다른 모든 단백질 용액은 94.0% 초과의 nrCE-SDS 순도를 가졌으며 (각각 0시간에서의 감소 정도에 비해) 허용 가능한 약 5%의 감소 정도를 나타내었다.

반면, 40℃에서 4주 동안 저장한 후, 성분의 상이한 조합을 갖는 단백질 용액의 rCE-SDS 순도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: 9번 조합을 갖는 단백질 용액 > 3번 조합을 갖는 단백질 용액 > 2번 조합을 갖는 단백질 용액 = 4번 조합을 갖는 단백질 용액 > 1번 조합을 갖는 단백질 용액 > 6번 조합을 갖는 단백질 용액 = 5번 조합을 갖는 단백질 용액 > 7번 조합을 갖는 단백질 용액 = 8번 조합을 갖는 단백질 용액. 7번과 8번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액은 가장 낮은 순도, 96.6%를 나타내었으며, 각각은 (각각 0시간에서의 감소 정도에 비해) 성분들의 다른 조합을 갖는 단백질 용액보다 큰 약 3%의 감소 정도를 가졌음을 알 수 있다. 40℃에서 4주간 저장 후 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합을 갖는 모든 단백질 용액의 rCE-SDS 순도는 허용 가능하였다.

[표 9]

전하 이질성

표 9의 데이터는 1 내지 9로 번호 매겨진 성분들의 조합을 갖는 단백질 용액이 4℃에서 2주 동안 저장한 후 (각각 0시간에서의 것과 비교하여) CEX 중성 피크의 비율의 감소 및 증가의 정도가 상이함을 보여주었다. 감소를 보인 단백질 용액 중에서, 1번 성분의 조합이 1%의 가장 큰 감소를 나타내었고, CEX 중성 피크의 감소 비율은 여전히 허용 가능한 89.0%였다. 다른 한편으로, 5번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액도 4℃에서 2주간 저장한 후 88.5%의 가장 낮은 CEX 중성 피크의 비율을 나타냈지만, CEX 중성 피크의 비율은 0시간에서의 비율과 비교할 때 증가하였고 여전히 허용 가능하였다.

40℃에서 4주간 저장한 후 성분의 조합을 갖는 9개의 단백질 용액 모두에서 CEX 중성 피크의 비율은 유의하게 감소하였으며, 감소된 비율은 기본적으로 동일하며 이들의 대부분은 70%±2%의 범위를 유지하였고, 다음과 같이 순위가 매겨졌다: 2번 조합을 갖는 단백질 용액 > 3번 조합을 갖는 단백질 용액 = 6번 조합을 갖는 단백질 용액 > 1번 조합을 갖는 단백질 용액 = 5번 조합을 갖는 단백질 용액 > 8번 조합을 갖는 단백질 용액 > 4번 조합을 갖는 단백질 용액 > 9번 조합을 갖는 단백질 용액. 9번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액에 대해 가장 큰 감소 정도가 관찰되었으며, 저장 후 CEX 중성 피크의 비율과 비교하여, 9번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액의 감소 정도의 백분율은 39.7%였고, 성분의 다른 조합을 갖는 단백질 용액의 상응하는 백분율은 30%±5% 범위에서 유지되었다.

[표 10]

DSC

표 10의 데이터는, 단지 하나의 Tm 값(다른 8개의 단백질 용액과 비교하여 유의한 차이가 없음)이 수득된 7번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액을 제외하고, 다른 단백질 용액의 Tm1 및 Tm2 값은 모두 허용 가능했으며, 이들 사이에 유의한 차이가 없었음을 보여주었다.

[표 11]

점도 및 삼투압 (0 h)

표 11의 데이터는 1 내지 9로 번호매겨진 성분들의 조합을 갖는 모든 단백질 용액의 점도 감소의 상이한 정도를 보여주었으며, 용액의 점도는 다음과 같이 순위가 매겨졌다: 1번 조합을 갖는 단백질 용액 < 2번 조합을 갖는 단백질 용액 < 8번 조합을 갖는 단백질 용액 < 6번 조합을 갖는 단백질 용액 < 5번 조합을 갖는 단백질 용액 < 7번 조합을 갖는 단백질 용액 < 4번 조합을 갖는 단백질 용액 < 9번 조합을 갖는 단백질 용액 < 3번 조합을 갖는 단백질 용액. 또한, 3, 4 및 5번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액 간의 비교는 Tween 80이 단백질 용액의 점도를 감소시킬 수 있지만 감소 정도는 Tween 80의 농도에 선형적으로 비례하지 않는다는 것을 보여주었다. 예를 들면, 0.2% Tween 80을 포함하는 단백질 용액은 0.02% Tween 80을 포함하는 단백질 용액보다 약 0.94cP(6.2%) 낮은 점도를 나타냈다. 4, 7 및 9번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액 간의 비교는 4 및 7번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액이 유사한 점도를 가지며, 9번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액은 7번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액보다 2.27cP(13.0%) 더 높은 점도를 나타내고, 4번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액보다 2.20cP(12.6%) 더 높은 점도를 나타내었음을 보여주었으며, 이것은 pH 6.0 및 pH 6.2가 pH 6.4보다 단백질 용액의 점도를 감소시키는데 더 나은 역할을 했으며 pH 6.2가 합리적인 선택이었음을 나타낸다. 1, 2 및 4번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액 간의 비교는 4번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액이 2번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액보다 29.7% 더 높은 점도를 나타내고 1번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액보다 48.8% 더 높은 점도를 나타내었음을 보여주었으며, 이것은 NaCl가 Tre보다 단백질 용액의 점도를 감소시키는데 더 나은 영향을 미친다는 것을 나타낸다. 또한, NaCl만을 보호제로 함유한 단백질 용액 중의 단백질은 안정화되기 어려웠으며, 따라서 NaCl과 Tre의 적절한 비율의 조합이 필요하다.

실시예 5 : 제형의 점도에 대한 트레할로스의 효과

제형의 점도 시험(1):

102.8mg/ml 농도의 CBP-201 항체, 10mmol/L His-HCl 완충제액(pH 6.2), 및 40mmol/L NaCl을 포함하고 트레할로스를 포함하지 않는 단백질 용액을 제조한 다음 초원심분리 필터로 각각 133.6mg/ml, 151.4mg/ml 및 > 151.4mg/ml의 단백질 농도로 되도록 농축하였다. 농축된 단백질 용액의 점도를 시험한 다음 Tre를 함유한 단백질 용액의 점도와 비교하였다. 결과는 표 12에 나타나 있다.

[표 12]

점도의 검출 결과

표 12의 데이터는 단백질의 농도가 증가함에 따라 점도가 증가하며, 단백질 용액이 과농축된 경우 미리 과농축 정도에 주의해야 한다는 것을 보여주었다. 19.71cP(24.5℃)의 점도를 갖는 137.23mg/ml 농도의 단백질 용액과 실시예 4에서 3번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액(당해 실시예의 단백질 용액에 비해 Tre를 추가로 함유하고 25.64cP(25.1℃)의 점도를 가짐)의 비교는 Tre가 상기 조성을 갖는 단백질 용액의 점도를 증가시킬 수 있음을 나타내었다.

제형의 점도 시험(2):

CBP-201 항체를 포함하는 단백질 용액을 제조한 다음 접선 유동에 의해 150mmol/L 트레할로스 (1Х)가 보충된 투석 완충액(10mmol/L His-HCl, pH 6.2, 40mmol/L NaCl)에 투석하고 농축하였다. SEC 순도 및 점도를 검출하였으며 결과가 표 13에 나타나 있다.

[표 13]

점도의 검출 결과

SEC 순도의 결과는 SEC 순도가 투석 및 농축 동안 유의하게 감소하지 않았음을 보여주었으며, 이것은 투석 및 농축의 공정 및 방식이 단백질의 SEC 순도에 영향을 미치지 않음을 나타내었다.

점도의 검출 결과는 133.37mg/ml의 단백질 농도를 갖는 단백질 용액의 점도가 23.18cP(25.0℃)였으며, 이것은 기본적으로 실시예 4에서 3번 성분의 조합을 갖는 단백질 용액으로부터 수득된 결과(25.64cP(25.1℃)의 점도를 가짐)와 일치함을 보여주었으며, 이는 본 발명의 현재 기술적 해결방안이 반복성을 가짐을 나타낸다. 45.22cP(24.9℃)의 점도는 155.15mg/ml의 단백질 농도를 갖는 단백질 용액에서 나타났으며, 이것은 점도 시험(1)에서 156.85mg/ml의 단백질 농도를 갖는 단백질 용액에서 나타난 점도(23.07cP(24.9℃))보다 49.0% 더 높았다. 명백히, Tre의 첨가는 단백질 용액의 점도를 증가시켰으며, 이것은 단백질의 안정성 확보를 전제로 적절하게 첨가되어야 한다.

실시예 6: CBP-201 항체 제형의 제조

여과에 의한 정화

먼저 여과에 의한 정화 단계를 통해 세포 배양물 중의 찌꺼기를 제거하였다. 여과에 의한 정화의 공정에서, Millipore Corporation으로부터의 MD0HC 포드 필터와 MA1HC 포드 필터를 조합하여 사용하였다. 필터를 포드 홀더에 설치하고 고정한 다음 주사용수와 PBS로 각각 세정하였다. 세정이 완료될 때, 주입구의 액체를 세포 배양물로 전환하고, 주입구 압력을 0-20psi로 설정하였다. 공급이 끝날 때 포드 필터를 PBS로 세척하고, 배출된 모든 액체를 수거하였다.

친화성 크로마토그래피

크로마토그래피 컬럼을 18-22cm의 컬럼 높이를 수득하도록 MabSelect SuRe LX 수지로 채우고, 대칭 인자 0.8-1.0 및 이론 단수 ≥ 2000 N/m를 확보하였다. 친화성 크로마토그래피를 위한 4-6 컬럼 용적의 평형 완충액(0.025mol/L Tris, 0.10mol/L NaCl, pH7.40 ± 0.20)으로 컬럼을 평형화시키고, 여과에 의한 정화 동안 수거된 액체를 그 위에 부하하였다. 부하 후 친화성 크로마토그래피를 위한 3-4 컬럼 용적의 평형 완충액으로 칼럼을 추가로 평형화시켰다. 그후, 컬럼을 2-3 컬럼 용적의 세정 용액 1(0.025mol/L Tris, 1.00mol/L NaCl, pH7.40 ± 0.20) 및 세정 용액 2(0.05mol/L NaAc, pH 5.50 ± 0.10)로 각각 세정하였다. 세정이 완료되었을 때, 친화성 크로마토그래피를 위한 용출액(0.10mol/L NaAc-HAc, pH 3.60 ± 0.10)으로 단백질을 용출시켰다. UV 흡수 값이 0.1000-0.1500 AU/5mm로 상승했을 때 단백질의 수집을 시작하고, UV 흡수 값이 0.2000-0.3000 AU/5mm로 떨어졌을 때 중단하였다.

낮은 pH에서의 바이러스 불활성화

산성 적정제(1.00mol/L 아세트산)를 준비하여 친화성 크로마토그래피를 통해 용출된 단백질 용액의 pH를 3.50-3.70으로 조절하는데 사용하였으며, 수득된 단백질 용액을 낮은 pH에서 바이러스 불활성화를 위해 20-25℃에서 2-3시간 동안 두었다. 그후, 염기성 적정제(2.00mol/L Tris)를 사용하여 단백질 용액의 pH를 5.40-5.60으로 조절하고 단백질 용액의 전도도를 검출하였다. 멸균 필터를 사용함으로써, 단백질 용액을 일회용 액체 용기에 여과한 다음 단백질 농도, pH, 전도도, 세균 내독소, SEC-HPLC, CEX-HPLC, CE-SDS 및 미생물 한계 시험을 위해 샘플링하였다.

양이온-교환 크로마토그래피

양이온-교환 크로마토그래피에서, Capto S ImpAct 수지, 컬럼 높이 18-22cm, 대칭 인자 0.8-1.8 및 이론단수 ≥ 2000 N/m를 사용하였다. 양이온-교환 크로마토그래피를 위한 4-6 컬럼 용적의 평형 완충액(0.05mol/L NaAc, 0.05mol/L NaCl, pH 5.50 ± 0.05)으로 컬럼을 평형화시킨 다음 그 위에 단백질 용액을 부하하였다. 부하 후 양이온-교환 크로마토그래피를 위한 2-4 컬럼 용적의 평형 완충액으로 컬럼을 추가로 평형화시켰다. 그후, 양이온-교환 크로마토그래피를 위한 5-7 컬럼 용적의 세정 용액(0.05mol/L NaAc, 0.08mol/L NaCl, pH 5.50 ± 0.05)으로 컬럼을 세정하였다. 세정이 완료되었을 때, 양이온-교환 크로마토그래피를 위한 용출액(0.05mol/L NaAc, 0.22mol/L NaCl, pH 5.50 ± 0.05)으로 단백질을 용출시켰다. UV 흡수 값이 0.2000-0.3000 AU/5mm로 상승했을 때 단백질의 수집을 시작하고, UV 흡수 값이 1.0000-1.5000 AU/5mm로 떨어졌을 때 중단하였다.

음이온-교환 크로마토그래피

음이온-교환 크로마토그래피에서, POROS 50 HQ 수지, 컬럼 높이 18-22cm, 대칭 인자 0.8-1.8 및 이론단수 ≥ 2000 N/m를 사용하였다. 컬럼에 부하하기 전에 단백질 용액의 pH를 7.35-7.45로 조정한 다음 단백질 용액의 전도도를 검출하였다. 그후 멸균 필터(부하 용량 ≤ 3000g/m²)를 사용함으로써, 단백질 용액을 일회용 액체 용기에 여과하였다.

나노여과

나노여과 시스템을 조립하고 음이온-교환 크로마토그래피를 위한 평형 완충액으로 사전여과 막을 세정하였다. 막의 세정이 완료되었을 때, 멸균 필터를 나노여과 시스템에 연결하고 단백질의 나노여과를 28-32psi의 압력하에서 4시간 이내로 수행하였다.

투석에 의한 농축

Sartocon 카세트 30KD를 사용하였다. 먼저, 카세트를 한외여과 시스템에 조립하고 무결성 및 유수량을 시험하였다. 그후 시험을 통과하면 카세트의 막을 투석 완충액(0.060mol/L 트레할로스, 0.010mol/L 히스티딘-HCl, 0.10mol/L NaCl, pH 6.20 ± 0.05)으로 세정하였다. 세정 후, 상기와 같이 수득된 나노막 여과된 단백질 용액을 잘 혼합되도록 교반한 다음 막에 부하하고 40-60mg/mL로 되도록 사전-농축시켰다. 사전-농축 후, 사전-농축된 단백질 용액 용적의 10-12배 용적의 투석 완충액으로 투석을 수행하였다. 그후, 단백질 용액을 과농축시켜 170-190mg/mL의 단백질 농도를 수득하였다. 막을 투석 완충액으로 2회 세정하고 세정으로부터 수득된 액체를 수집하였다. 막을 세정하는데 매번 사용되는 투석 완충액의 용적은 시스템 유지 용적의 약 1.5배였고, 막을 세정하는데 사용된 총 용적은 시스템 유지 용적의 약 2-4배였다. 마지막으로, 용액의 단백질 농도를 140-180mg/ml로 조절하고, 최종 단백질 농도를 검출하였다.

스톡 용액의 제조(희석 및 부형제 첨가)

단백질 용액을 Tween 80 스톡 용액(2% Tween (w/v)) 및 투석 완충액(0.060mol/L 트레할로스, 0.010mol/L 히스티딘-HCl, 0.10mol/L NaCl, pH 6.20 ± 0.05)으로 150 ± 5mg/ml로 되도록 희석시켰으며, 그 안의 Tween 80의 최종 농도는 0.02%였다. 그후 희석된 단백질 용액을 일회용 액체 용기에 여과하였으며, 여과되어 수득된 단백질 용액이 스톡 용액이었다. 제조된 스톡 용액을 PETG 병에 나누어 -80 ± 10℃에서 저장하였다.

제형의 제조

스톡 용액을 채취하고, 상온에서 해동하고, 잘 혼합한 다음 여과하였다. 고무 마개와 알루미늄 커버를 포장하여 멸균한 다음 발열물질을 제거하기 위해 세척한 바이알을 충전을 위한 상응하는 부위로 옮겼다. 그후 모두 마개를 막은 채워진 바이알을 캡핑을 위해 캡핑실로 옮겼다. 그후, 육안 검사를 바이알별로 수행하여 부정확한 부하 용적, 붕괴, 눈에 보이는 입자, 이물질, 깨진 캡 및 빈 바이알과 같은 결함이 있는 바이알을 제거하였다. 그후, 바이알에 라벨을 붙이고 박스에 포장한 다음 박스의 윗면 중앙에 상자 라벨을 붙였다.

허용 기준 및 검출 결과는 표 14에 나타내어져 있다.

[표 14]

허용 기준 및 검출 결과

실시예 7: CBP-201 항체 제형의 결합 활성의 검출

간접 ELISA를 사용하여 항원 sIL-4Rα에 대한 본 발명의 제형의 결합 능력을 검출하였다.

항원(sIL-4Rα, NM_000418.4에 따라 발현됨)을 ELISA용 고체상 플레이트에 코팅 및 흡수시킨 다음 플레이트를 세척하고, 차단하며, 항원과의 결합을 위해 시험할 샘플을 첨가하기 전에 플레이트를 다시 세척하였다. 시험할 샘플은 본 출원의 실시예 6에 따라 제조된 제형의 희석액이며, 희석액은 제형을 1000ng/mL의 항체 농도로 되도록 1% BSA로 희석한 다음 1000ng/mL의 초기 농도에서 0ng/mL의 농도까지 구배 희석을 수행함으로써 수득하였다. 배양 후 세척을 통해 결합되지 않은 항체를 제거하고, 추가 배양을 위해 효소 표지된 2차 항체를 첨가하였다. 결합되지 않은 효소 표지된 2차 항체를 세척을 통해 제거한 후, 발색을 위해 효소 반응 기질을 첨가하였다. 마지막으로, 정지 용액을 첨가하여 반응을 정지시키고, 마이크로플레이트 판독기에서 450nm 및 655nm에서 흡광도 값을 판독하였다. 흡광도 값에 따라, 곡선 피팅에 의해 절반 유효 농도 EC₅₀을 계산하였다.

CBP-201 제형의 결합 활성의 검출 결과는 표 15에 나타내어져 있다.

[표 15]

결합 활성의 검출 결과

실시예 8: CBP-201 항체 제형의 생물학적 활성의 검출

HEK Blue^TM IL4/IL13 세포(Invivogen으로부터 이용 가능함)를 STAT-6 신호 전달 차단에 대한 CBP-201 제형의 활성을 검출하는데 사용하였다.

HEK Blue^TM IL4/IL13 세포를 384-웰 세포 배양 플레이트에 플레이팅하고 그 안에 시험할 샘플을 첨가하였다. 시험할 샘플은 본 출원의 실시예 6에 따라 제조된 제형의 희석액이며, 희석액은 제형을 5000ng/mL의 항체 농도로 되도록 10% FBS를 함유하는 DMEM으로 희석한 다음 5000ng/mL의 초기 농도에서 0ng/mL의 농도까지 구배 희석을 수행함으로써 수득하였다. 그후, IL4(Invivogen으로부터 이용 가능함)를 플레이트에 첨가하여 0.5ng/mL의 최종 농도를 수득하였다. 세포 배양기에서 22시간 동안 배양한 후, 상층액을 취하고 발색을 위해 그 안에 Quanti-blue를 첨가한 다음 마이크로플레이트 판독기에서 650nm에서 흡광도 값을 판독하였다. 흡광도 값에 따라, 곡선 피팅에 의해 절반 억제 농도 IC₅₀을 계산하였다.

CBP-201 제형의 생물학적 활성의 검출 결과는 표 16 및 도 19에 나타내어져 있다.

[표 16]

생물학적 활성의 검출 결과

제조된 CBP-201 제형의 활성을 HEK Blue^TM IL4/IL13 세포를 사용하여 검출하였으며, 두 배치의 IC50의 평균값은 각각 4.193ng/ml 및 4.513ng/ml이었다.

본 발명의 실시양태에 대한 상기 설명은 본 발명을 제한하려는 것이 아니며, 당업계의 숙련가들은 본 발명에 따라 다양한 변경 및 변형을 할 수 있으며, 이것은 본 발명의 취지를 벗어나지 않으면서 본 발명의 청구항의 보호 범위 내에 있다.

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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440

Claims

50-200mg/ml 농도의 항체; 및 부형제로서 작용하는 완충제(buffer), 보호제(protective agent) 및 계면활성제를 포함하고, 5.4-6.4의 pH를 갖는, 인간 인터루킨-4 수용체 알파에 대한 항체를 포함하는 액체 조성물.
제1항에 있어서, 액체 조성물에서, 항체가 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열 번호 2에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2, 및 서열 번호 3에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하고, 중쇄 가변 영역이 서열 번호 5에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR1, 서열 번호 6에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR2, 및 서열 번호 7에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하고;
바람직하게는, 항체가 서열 번호 4에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 서열 번호 8에 제시된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하고;
바람직하게는, 항체가 100-200mg/ml, 보다 바람직하게는 130-165mg/ml, 더욱 바람직하게는 150±5mg/ml의 농도로 존재하는 액체 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 완충제가 아세트산염 완충제, 인산염 완충제 및 아미노산 완충제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 완충제가 5-50mmol/L의 농도로 존재하고; 바람직하게는, 완충제가 5-50mmol/L 농도의 아미노산 완충제인 액체 조성물.
제3항에 있어서, 아세트산염 완충제가 아세트산나트륨 완충제이거나, 인산염 완충제가 인산이수소나트륨 완충제이거나, 아미노산 완충제가 염산히스티딘 완충제이고;
바람직하게는, 완충제가 5-20mmol/L의 농도로 존재하고;
바람직하게는, 완충제가 5-20mmol/L 농도의 염산히스티딘 완충제, 보다 바람직하게는 10mmol/L 농도의 염산히스티딘 완충제인 액체 조성물.
제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 보호제가 당(sugar), 알콜, 아미노산 및 염화물 염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 보호제가 40-220mmol/L의 농도로 존재하는 액체 조성물.
제5항에 있어서, 보호제가 당, 알콜 및 아미노산으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이고, 보호제가 40-220mmol/L의 농도로 존재하고/하거나 보호제가 염화물 염이고, 보호제가 40-150mmol/L의 농도로 존재하고;
바람직하게는, 당이 40-150mmol/L, 보다 바람직하게는 60-150mmol/L 농도의 트레할로스 및/또는 수크로스이거나; 알콜이 40-220mmol/L, 보다 바람직하게는 110-150mmol/L 농도의 만니톨이거나; 아미노산이 40-220mmol/L, 보다 바람직하게는 120-220mmol/L 농도의 프롤린, 염산아르기닌 및 글리신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상이거나; 염화물 염이 40-150mmol/L, 보다 바람직하게는 80-120mmol/L 농도의 염화나트륨이고;
바람직하게는, 보호제가 트레할로스 및 염화나트륨의 조합이고; 보다 바람직하게는, 보호제가 40-150mmol/L 트레할로스와 40-150mmol/L 염화나트륨의 조합이고; 더욱 바람직하게는, 액체 조성물 중의 보호제가 60-150mmol/L 트레할로스와 80-120mmol/L 염화나트륨의 조합, 보다 바람직하게는 60mmol/L 트레할로스와 100mmol/L 염화나트륨의 조합인 액체 조성물.
제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, 계면활성제가 Tween 80, Tween 20, Poloxamer 및 폴리에틸렌 글리콜로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상과 같은 비이온성 중합체이고, 계면활성제가 0.01%-0.2%의 농도로 존재하며;
바람직하게는, 계면활성제가 0.01-0.03% Tween 80, 보다 바람직하게는 0.02% Tween 80인 액체 조성물.
제1항 내지 제7항 중의 어느 한 항에 있어서, 액체 조성물이 주사용 제형, 바람직하게는 피하 또는 정맥내 주사용 제형이고;
바람직하게는, 액체 조성물이
130-165mg/ml, 바람직하게는 150±5 mg/ml의 항체;
10mmol/L 염산히스티딘;
60mmol/L 트레할로스;
100mmol/L 염화나트륨;
0.02% Tween 80을 포함하고;
액체 조성물이 6.2±0.2, 바람직하게는 6.2±0.05의 pH를 갖는 액체 조성물.
염증 또는 알레르기 질환의 치료용 약제를 제조하기 위한, 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 액체 조성물의 용도로서,
바람직하게는, 염증 또는 알레르기 질환이 알레르기성 피부염(allergic dermatitis), 천식(asthma), 호산구성 식도염(eosinophilic esophagitis), 습진(eczema), 알레르기성 비염(allergic rhinitis), 비용종(nasal polyp), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등과 같은 자가면역 질환을 포함하는 용도.
제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 액체 조성물을 포함하는 용기(container) 또는, 용기를 포함하는 키트(kit).
제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 따른 액체 조성물을 이를 필요로 하는 대상체(subject)에게 투여함을 포함하여, 염증 또는 알레르기 질환을 예방, 치료 또는 개선(ameliorating)하는 방법으로서,
바람직하게는, 대상체가 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이고;
바람직하게는, 염증 또는 알레르기 질환이 알레르기성 피부염(allergic dermatitis), 천식(asthma), 호산구성 식도염(eosinophilic esophagitis), 습진(eczema), 알레르기성 비염(allergic rhinitis), 비용종(nasal polyp), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis) 등과 같은 자가면역 질환을 포함하고;
바람직하게는, 액체 조성물이 주사에 의해, 예를 들면 피하 주사 또는 정맥내 주사에 의해 대상체에게 투여되는 방법.