KR20210133466A - 댕댕이나무 추출물을 포함하는 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents
댕댕이나무 추출물을 포함하는 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 댕댕이나무 추출물을 포함하는 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 내지 항암보조제에 대한 것이다.
본 발명의 댕댕이나무의 부위별 추출물은 대장암세포의 생존, 생육, 이주 내지 상처 치료(wound healing)를 억제시키며, β-카테닌 및 TCF4 단백질의 발현을 감소시킴으로써 효과적인 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 내지 항암보조제를 제공할 수 있다. 특히, 댕댕이나무의 잎 또는 가지 추출물의 경우 효과가 더욱 우수할 수 있다.
본 발명의 댕댕이나무의 부위별 추출물은 대장암세포의 생존, 생육, 이주 내지 상처 치료(wound healing)를 억제시키며, β-카테닌 및 TCF4 단백질의 발현을 감소시킴으로써 효과적인 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 내지 항암보조제를 제공할 수 있다. 특히, 댕댕이나무의 잎 또는 가지 추출물의 경우 효과가 더욱 우수할 수 있다.
Description
본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 내지 항암보조제에 대한 것이다.
의학 및 질병 진단 기술의 눈부신 발전과 더불어 건강에 대한 개인의 관심 증가로 인하여 우리나라를 포함한 경제선진국의 경우 인구 연령 분포가 고령화 사회를 넘어 초고령화 사회로 급격하게 진입하고 있고, 이에 따라 고령과 연관된 다양한 질병이 국가 보건 재정에 커다란 부담이 되고 있는 실정이다. 특히 암의 경우 전 세계적으로 발병 환자수가 매년 7~8%의 수준으로 꾸준히 증가하고 있으며, 우리나라도 서구화된 생활양식 및 질병 구조의 변화로 인해 암 발생 및 이로 인한 사망자수가 증가하는 추세에 있다. 2013년 국가 통계청에서 발표한 '2012년 한국인 주요 사망 원인' 통계를 살펴보면 3대 사망 원인으로 암을 포함하는 악성신생물이 부동의 1위를 차지하고 있다. 암을 치료하기 위해 화학 요법, 방사선 요법, 외과적 수술 등을 주로 사용하고 있으나, 암으로 발전한 후에는 완치가 어렵고 치료 요법 자체의 부작용 또한 심각할 뿐만 아니라 재발하는 경우가 많아서, 치료방법의 발전에도 불구하고 암발생률과 이로 인한 사망률은 계속 증가하고 있는 실정이다. 또한 단순히 암의 치료뿐만이 아니라 암 환자 삶의 질에 초점에 맞추어 치료를 해야 하며 암 치료과정에서 발생하는 부작용은 환자의 삶의 질을 저하시키기에 제어해야 할 중요한 미충족 의료수요로 대두되고 있다. 따라서 암발생 및 암으로 인한 사망률을 감소시키기 위해 암 치료보다 적극적이고 능동적인 방법으로서 암을 예방하는 것이 효과적이고 항암효능이 있으면서 부작용이 적은 천연성분들이 개발의 대상이 되고 있다. 서양에서 천연식물을 활용하는 한약 또는 생약에 의한 대사질환치료는 현재 주류의학의 일부로 인정되지 않고 있으며 여러 의료 및 건강 관련 이론, 시술, 제품 등을 통해 응용되는 보완대체의학(complementary and alternative medicine)으로 응용되고 있고 이러한 보완대체의학은 암을 포함한 모든 환자의 약 90% 에 응용되고 있다.
β-카테닌(β-catenin)은 생리적 항상성에 중심적인 역할을 하는 다기능 단백질로 알려져 있으나, β-카테닌의 과도한 발현은 세포증식과 관련된 c-myc, cyclin D1, MMP2 또는 MMP9 등의 발현을 증가시켜 암세포의 증식 및 침윤과 전이를 촉진시켜 암을 포함한 다양한 질병을 초래한다고 보고되고 있다. 정상세포에서의 β-카테닌 수준은 Axin, adenomatous polyposis coli(APC), glycogen synthase kinase 3(GSK3), casein kinase 1(CK1) 그리고 β-transducin repeat-containing protein(β-TrCP)로 구성된 파괴복합체에 의해 조절된다. 이 복합체는 β-카테닌의 세린-45, 트레오닌-41, 세린-37 또는 세린-33의 인산화를 매개하여 연속적인 유비퀴틴화 및 단백질 분해를 유도한다. 그러나 비정상적인 Wnt의 활성화는 파괴복합체를 억제하여 β-카테닌의 축적을 유도하고, 축적된 β-카테닌은 핵 내로 전이되어 T cell-specific transcription factor(TCF)/LEF-1와 결합하여 cyclin D1과 c-myc과 같은 발암단백질의 발현을 유도한다. 그리하여, Wnt/β-카테닌 신호전달경로의 핵심단백질인 β-카테닌의 발현을 억제할 수 있는 항암제 개발이 요구되고 있다.
대한민국 특허출원 제10-2017-0164556호는 댕댕이 추출물을 포함하는 항산화 또는 항염용 약학적 조성물에 대한 것으로서, 댕댕이나무 열매 추출물 내지 효소추출물에 항산화, 항염증 내지 간 보호 효과가 있음을 개시하고 있다.
그러나 댕댕이나무의 부위별 추출물의 대장암에 대한 항암효과를 연구 내지 기재는 개시된 바 없다.
본 발명자들은 항암효과가 우수하면서도 부작용이 적은 식물 유래 천연 추출물을 제공하고자 예의 노력한 결과, 댕댕이나무 추출물이 암, 특히 대장암에 대하여 유의적인 항암효과를 나타나는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 항암보조제를 제공하는 것이다.
본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 내지 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무의 꽃, 열매, 잎, 가지 및 뿌리 로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무를 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 항암보조제를 제공한다.
본 발명의 댕댕이나무의 부위별 추출물은 대장암세포의 생존, 생육, 이주 내지 상처 치료(wound healing)를 억제시키며, β-카테닌 및 TCF4 단백질의 발현을 감소시킴으로써 효과적인 대장암 예방, 개선 또는 치료용 조성물 내지 항암보조제를 제공할 수 있다. 특히, 댕댕이나무의 잎 또는 가지 추출물의 경우 효과가 더욱 우수할 수 있다.
도 1은 댕댕이나무의 잎(LCLE), 가지(LCBE) 또는 열매(LCFE) 추출물의 대장암세포에 대한 세포생존억제활성을 나타낸다. 상기 댕댕이나무 추출물들은 모두 대장암세포에 대한 세포생존억제활성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었다.
도 2는 댕댕이나무의 잎(LCLE), 가지(LCBE) 또는 열매(LCFE) 추출물의 대장암세포에 대한 세포생육억제활성을 나타낸다. 추출물들 중 LCLE 및 LCBE 는 대장암세포의 생육을 효과적으로 억제하였으나, LCFE는 억제하지 못하는 것을 확인할 수 있었다.
도 3은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 농도별로 대장암세포에 대한 세포생육억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 생육 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 4는 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 이주 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 세포 이주 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 5는 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 상처치료 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 상처치료 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 6은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 β-카테닌 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 β-카테닌의 단백질 수준은 감소시켰으나 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다.
도 7은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 TCF4 억제활성을 나타낸다. LCLE의 경우 TCF4의 단백질 및 유전자 수준을 모두 감소시켰으나, LCBE의 경우 TCF4의 단백질 수준은 감소시켰으나, 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다.
도 2는 댕댕이나무의 잎(LCLE), 가지(LCBE) 또는 열매(LCFE) 추출물의 대장암세포에 대한 세포생육억제활성을 나타낸다. 추출물들 중 LCLE 및 LCBE 는 대장암세포의 생육을 효과적으로 억제하였으나, LCFE는 억제하지 못하는 것을 확인할 수 있었다.
도 3은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 농도별로 대장암세포에 대한 세포생육억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 생육 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 4는 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 이주 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 세포 이주 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 5는 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 상처치료 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에 대하여 농도의존적으로 상처치료 억제 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
도 6은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 β-카테닌 억제활성을 나타낸다. LCLE 및 LCBE 모두 β-카테닌의 단백질 수준은 감소시켰으나 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다.
도 7은 댕댕이나무의 잎(LCLE) 또는 가지(LCBE) 추출물의 대장암세포에 대한 TCF4 억제활성을 나타낸다. LCLE의 경우 TCF4의 단백질 및 유전자 수준을 모두 감소시켰으나, LCBE의 경우 TCF4의 단백질 수준은 감소시켰으나, 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 ‘예방’ 이란, 본 발명의 댕댕이나무 추출물로 인해 암 내지 이와 관련된 질환이 억제되거나 그 발병이 지연되도록 하는 모든 행위를 의미한다. 특히 상기 암은 대장암일 수 있다.
본 발명의 ‘개선’ 또는‘치료’ 란, 본 발명의 댕댕이나무 추출물로 인해 당뇨병 내지 이와 관련된 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도가 호전되거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다. 특히 상기 암은 대장암일 수 있다.
본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무의 꽃, 열매, 잎, 가지 및 뿌리 로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 것일 수 있다. 바람직하게는 잎, 가지 및 열매로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 것일 수 있으며, 보다 바람직하게는 잎 또는 가지에서 추출한 것일 수 있다.
추출 용매는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물일 수 있으나, 바람직하게는 물 또는 C1 내지 C4의 저급알코올인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 물, 메탄올, 에탄올 또는 프로판올 인 것이 바람직하며 가장 바람직하게는 에탄올을 용매로 하는 것이 가장 바람직하다. 에탄올은 60 내지 100% 에탄올일 수 있으며, 바람직하게는 70 내지 80% 에탄올 일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 상기 조성물을 제형화할 경우에는 하나 이상의 완충제(예를 들어, 식염수 또는 PBS), 항산화제, 정균제, 킬레이트화제(예를 들어, EDTA 또는 글루타치온), 충진제, 증량제, 결합제, 아쥬반트(예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드), 현탁제, 농후제 습윤제, 붕해제 또는 계면활성제, 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분(옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분 등 포함), 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 덱스트로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 말티톨, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 예컨대, 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다.
또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 또는 보존제 등이 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있으며, 항응집제, 향료, 유화제, 가용화제, 분산제, 향미제, 항산화제, 포장제, 안료 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제 또는 좌제 등이 포함된다. 비수성용제 및 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있으며, 비경구 투여시 복강내, 직장, 정맥, 근육 또는 피하 주사하는 주사제; 의 형태로 당업계에 공지된 방법에 따라 제형화할 수 있다.
상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS (phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 약제학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량으로는, 비경구 투여 시 댕댕이나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 50 mg, 더 바람직하게는 0.1 내지 30 mg의 양으로 투여되도록, 그리고 경구 투여 시는 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 기준으로 하루에 체중 1 kg당 바람직하게 0.01 내지 100 mg, 더 바람직하게는 0.01 내지 10 mg의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공할 수 있다.
상기 댕댕이나무 추출물은 상기 약학적 조성물에 포함된 것과 동일하므로 설명은 상기 기재로 대신한다.
본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치이즈 등), 식용식물 유지, 마아가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 영양보조제로는 이에 한정되지 않지만 캡슐, 타블렛, 환 등에 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 본 발명의 댕댕이나무 추출물 자체를 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용(건강음료)할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 식품 첨가제의 형태로 사용하기 위해서는 분말 또는 농축액 형태로 제조하여 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 댕댕이나무 추출물과 암 예방 또는 개선 효과가 있다고 알려진 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
본 발명의 댕댕이나무 추출물을 건강음료로 이용하는 경우, 상기 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
또한, 본 발명의 댕댕이나무 추출물은 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 유효성분으로 함유될 수 있는데, 그 양은 암 예방 또는 개선 작용을 달성하기에 유효한 양으로 특별히 한정되는 것은 아니나, 전체 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%인 것이 바람직하다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 댕댕이나무 추출물과 함께 암에 효과가 있는 것으로 알려진 다른 활성 성분과 함께 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강기능식품은 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 항암보조제를 제공할 수 있다.
상기 댕댕이나무 추출물은 상기 약학적 조성물에 포함된 것과 동일하므로 설명은 상기 기재로 대신한다.
본 발명의 항암보조제는 항암제의 항암효과를 증대시키거나 항암제의 부작용을 억제 또는 개선시키기 위한 모든 형태를 의미한다. 본 발명의 항암보조제는 다양한 종류의 항암제 또는 항암보조제와 병용투여될 수 있으며, 병용투여시 통상적인 항암제의 투여량보다 낮은 수준으로 항암제를 투여하더라도 동등한 수준의 항암치료효과를 나타낼 수 있으므로 보다 안전한 항암치료를 수행할 수 있다.
상기 항암보조제의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 항암보조제는 목적하는 바에 따라 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 경구 투여, 폐 내 투여, 직장 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 상기 항암보조제는 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 항암보조제는 투여를 위해서 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 항암보조제로 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 항암치료 보조제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 항암보조제는 경구 또는 비경구 투여를 위한 제제일 수 있으며, 제제에 대한 설명은 상기 약학적 조성물의 제제에 대한 기재로 대신한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 제한되는 것으로 해석하지 않는 것은 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명한 것이다.
댕댕이나무 추출물 제조 댕댕이나무 추출물 제조 및 암세포 배양
댕댕이나무의 잎, 가지 또는 열매 시료 20 g에 70% 에탄올 400 ㎖을 가하여 상온에서 교반하면서 3일 동안 추출하고, 원심분리하여 70% 에탄올 추출물을 회수하였다. 댕댕이나무 잎, 가지 또는 열매 에탄올 추출물은 각각 40℃ 이하의 중탕에서 감압 환류 냉각장치(N-1110S, EYELA, Tokyo, Japan)로 감압농축 후 동결건조하여 약 3.7 g(회수율: 18.5%)의 에탄올 추출물의 얻었다. 동결건조 된 추출물은 -80℃의 냉동고에 보관하면서 분석을 위한 시료로 사용되었다. 댕댕이나무 잎(LCLE), 가지(LCBE) 또는 열매(LCFE) 추출물은 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 용해하여 실험에 사용되었다.
대장암세포 HCT116 또는 SW480(American Type Culture Collection; Manassas, VA, USA)는 각각 10% FBS, 100 U/㎖ 페니실린과 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신이 포함된 DMEM/F-12 배지로 37℃, 5% CO2 하에서 배양되었다.
댕댕이나무 추출물의 세포생존 억제활성
댕댕이나무의 부위별 추출물의 암세포에 대한 세포생존 억제활성을 MTT 분석으로 확인하고자 하였다.
구체적으로, 상기 [실시예 1]의 대장암세포 HCT116 또는 SW480를 각각 96-웰 플레이트에 1 × 104 세포/웰로 24 시간 배양한 후, 상기 [실시예 1] 에서 제조한 댕댕이나무 추출물 LCLE, LCBE 또는 LCFE를 각각 농도별로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후 웰에 MTT 용액(1 ㎎/㎖)을 50 ㎕씩 첨가하고 2시간 반응시킨 후, 상등액을 제거하고 DMSO를 100 ㎕씩 각 웰에 첨가하여 녹인 후 UV/Visible spectrophotometer(Xma-3000PC, Human Corporation Co., Seoul, Korea)를 이용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, [도 1]에서 나타나는 바와 같이 댕댕이나무 부위별 추출물 모두 대장암세포에 대한 세포생존 억제활성은 없는 것을 확인할 수 있었다.
댕댕이나무 추출물의 세포생육 억제활성
댕댕이나무의 부위별 추출물의 암세포에 대한 세포생육(cell proliferation) 억제활성을 확인한 결과, [도 2]에서 나타나는 바와 같이 LCLE 및 LCBE의 경우 대장암세포의 세포생육을 효과적으로 억제하였으나, LCFE는 대장암세포에 대한 세포생육 억제활성은 없는 것을 확인할 수 있었다. 이에 LCLE 및 LCBE의 농도별로 대장암세포에 대한 세포생육 억제활성을 추가적으로 측정한 결과, [도 3]에서 나타나는 바와 같이 LCLE 및 LCBE 는 농도의존적으로 대장암세포에 대한 세포생육 억제활성을 나타냈다.
댕댕이나무 추출물의 세포 이주 억제활성
대장암세포의 세포생육을 효과적으로 억제한 댕댕이나무 잎 추출물(LCLE) 및 가지 추출물(LCBE)의 대장암세포의 이주(cell migration) 및 상처치료(wound healing)에 미치는 영향을 확인한 결과, [도 4] 및 [도 5]에서 나타나는 바와 같이 LCLE 및 LCBE 모두 농도의존적으로 대장암세포의 이주 및 상처치료를 억제하는 것을 확인할 수 있었다.
댕댕이나무 추출물의 항암효과 기전 확인
Wnt 신호전달의 구성단백질인 β-카테닌(β-catenin) 및 TCF4 단백질의 발현 수준을 확인하고자 하였다.
구체적으로, RT-PCR은, 대장암세포 HCT116 또는 SW480 에 LCLE 또는 LCBE를 각각 처리한 후 세포에서 RNA를 추출하기 위해서 세포를 4℃에서 유지된 1×PBS로 2회 세척한 후, RNeasy Mini kit(QIAGEN GmbH., Hilden, Germany)를 이용하여 total RNA를 추출하였다. 1 ㎍의 total RNA를 Verso cDNA synthesis kit(Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA)를 이용하여 cDNA를 합성하였다. PCR은 PCR Master Mix Kit (Promega Co., Madison, WI, USA)를 이용하여 수행하였다.
웨스턴 블랏팅은, 대장암세포 HCT116 또는 SW480 에 LCLE 또는 LCBE를 각각 처리한 후 PBS로 세포를 세척하고 RIPA buffer를 첨가하여 세포를 용해시켰다. 세포 용해액을 원심분리하여 얻은 단백질은 BCA(Bicinchoninic acid protein assay; Pierce Biotechnology Inc., Waltham, MA, USA)법으로 정량하여 SDS-PAGE를 이용하여 전기영동 한 후 PVDF membrane에 옮긴 다음 5% skim milk로 30분간 blocking하였다. 그 후 1차 항체를 1:500으로 희석하여 넣고 16시간 동안 반응한 다음, 다시 2차 항체를 반응시키고, ECL 용액을 1 : 1 로 혼합하여 membrane 위에 가하여 발광시키고 WB scanner를 이용하여 확인하였다.
그 결과, [도 6] 에서 나타나는 바와 같이 LCLE 및 LCBE 모두 대장암세포에서 β-카테닌 단백질의 발현 수준은 감소시켰으나, 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다. 또한, [도 7] 에서 나타나는 바와 같이 LCLE 는 TCF4의 유전자 및 단백질의 발현을 모두 감소시켰으나, LCBE는 TCF4의 단백질 수준만을 감소시키고 유전자 발현에는 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다.
이는, LCLE는 TCF4의 전사활성을 억제함으로써, LCBE는 TCF4 단백질의 분해를 유도함으로써 TCF4 단백질 수준을 감소시키는 것을 의미하였다.
Claims (7)
- 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무의 꽃, 열매, 잎, 가지 및 뿌리 로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무를 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무의 꽃, 열매, 잎, 가지 및 뿌리 로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 부위에서 추출한 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무를 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출한 것을 특징으로 하는 건강기능식품 조성물.
- 댕댕이나무(Lonicera caerulea) 추출물을 포함하는 항암보조제.
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