KR20210130049A - 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적인 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이를 이용한 라싸 바이러스 검출 키트 - Google Patents
라싸 바이러스 핵단백질에 특이적인 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이를 이용한 라싸 바이러스 검출 키트 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 라싸 바이러스 항원(NP)의 신속 검출 키트에 적합한 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주, 상기 항체를 이용한 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기반의 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트 및 이를 이용한 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 라싸 바이러스 항원(NP)의 신속 검출 키트에 적합한 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주, 상기 항체를 이용한 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기반의 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트 및 이를 이용한 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법에 관한 것이다.
1969년 나이지리아 라싸 지방에서 처음 발견된 라싸 바이러스(Lassa virus)의 숙주는 야생쥐이다. 주로 감염된 쥐의 분비물에 직접 닿거나, 오염된 음식을 먹어 감염되는 것으로 알려져 있으며, 에어로졸 형태의 공기전파도 가능하고, 환자와의 직접 접촉이나 오염된 물건을 통해서도 감염될 수 있다. 기니, 라이베리아, 시에라리온, 나이지리아 등의 서아프리카에서 풍토 감염병으로 최근 나이지리아에서 라싸열 환자가 증가하고 있다. 서아프리카에서 매년 300,000명에서 500,000명 정도가 감염되고 약 5,000명이 사망한다고 알려져 있으나 정확한 집계는 되고 있지 않다. 잠복기는 2~21일이다. 두통, 인후염, 기침, 흉부 통증, 복통, 구토, 설사, 고열 등이 흔히 나타나는 증상으로, 발병 초기에는 비특이적 임상 증상을 보이나, 질병이 심해질 경우, 점막에서의 출혈 등 치명적인 증상이 발생한다. 라싸 바이러스 감염자의 약 1~3%, 유증상의 입원 환자에서 15~20%가 치명률을 보이며, 발병 후 6일 이내에 리바비린(ribavirin; 상품명 virazole®로 시판됨)을 다른 치료법들과 함께 사용하면 치사율을 낮출 수 있다.
감염병의 신속한 검사에 일반적으로 적용하는 방법인 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction, PCR)은 병원체의 표적 유전자를 증폭하여 검출하는 방법으로 민감도와 특이도가 높은 장점이 있다. 그러나 검사를 위하여 유전자 증폭을 수행하는 고가의 장비가 필요하며 숙련된 검사자가 필요하다는 단점이 있다.
병원체 검출을 위하여 항원-항체 반응 원리를 이용하는 것으로는 라싸 바이러스 항원을 검출하는 방법으로 효소면역측정법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA), 면역형광항체법(Immunofluorescence Antibody Assay, IFA) 등이 있다. 항원-항체 반응 원리를 이용하는 것에서는 신속 진단 키트와 유사하지만, 검사결과 판독을 위한 별도의 장비가 필요하며 상대적으로 검사시간이 오래 소요된다는 단점이 있다.
이에 신속 정확하며 소량의 시료를 이용하여 검출할 수 있는 현장진료기기(point of care, POC) 관련 기술에 대한 연구가 진행되고 있다. POC 테스트를 수행하기 위하여 다양한 종류의 디바이스를 기반으로 한 제품화가 이루어지고 있고, 이러한 POC 테스트는 현재 각종 병원, 연구기관 등에서 널리 적용되고 있다. 현재, 바이오센싱 및 POC 시스템에 적용하는 기술로서, (i) 고분자 기반의 미세 유체 디바이스, (ii) 멤브레인 기반의 디바이스 등이 이용되고 있다. 분석 또는 검출 가능한 물질은 글루코오스, 콜레스테롤, 단백질, 효소, 박테리아, 바이러스, 핵산 서열 등이다. 미세 유체 디바이스는, 미소 체적을 갖는 샘플 액체를 이용하여 복잡한 생물화학적 반응을 달성할 수 있기 때문에 최근 각광을 받고 있는 분야이다. 멤브레인 기반의 디바이스는 미세다공성 멤브레인의 모세관 작용 및 이동상 시료 용액에 포함된 검체(analytes)와 고정화된 포획 분자들(capture molecules) 간의 결합 친화도(affinity)를 이용하는 것이다. 멤브레인 기반의 디바이스는 저렴한 비용으로 바이오 물질을 간편하게 검출할 수 있기 때문에, 여러 연구 및 산업 분야에서 활용되고 있다. 통상적으로 사용하는 멤브레인의 재료로서, 니트로셀룰로오스(nitrocellulose)가 널리 알려져 있다. 니트로셀룰로오스는 기본적으로 친수성의 다공성(porous) 구조를 가질 것이 요구되는데, 이는 종래의 POC 테스트 또는 신속 검사 키트(rapid kit) 등에서 검체에 대한 흡습을 이용하기 때문이다. 또한, 니트로셀룰로오스는 비교적 저렴한 단가, 모세관 유동 특성, 높은 단백질 결합능, 상대적으로 용이한 조작법 등의 장점이 있다.
측방 유동 분석(lateral flow assay, LFA) 기반의 바이오센서는 멤브레인 기반 디바이스의 한 종류이다. 상기 방식은 검체(analyte)를 함유하는 액상 샘플(fluid sample)을, 검체와 상호작용할 수 있는 화학 성분 또는 분자가 부착되어 있는 테스트 스트립(test strip)을 통하여 이동시킴으로서, 상기 샘플과 상기 테스트 스트립 상의 화학 성분 또는 분자가 반응하여 스트립이 특성 변화를 일으키도록 하는 것이다. 이와 관련하여, 검출은 가정용 임신 검사기 등과 같이 육안 식별이 가능한 표시자를 사용할 수도 있고, 감응성 광학 센서, 열 대조 분석 판독기와 같은 판독 장치를 이용하여 검출 또는 판독의 정확도를 높일 수도 있다.
라싸 바이러스 항원 검출 방법에 관한 것으로서, 재조합 라싸 바이러스 핵단백질(LASV-rNP)과 이에 대한 단클론항체를 이용한 IgG-ELISA법, 간접 면역형광법(IIFA), Ag-capture ELISA법 등이 알려져 있다(비특허문헌1). 또한, capture line 및 detection reagent로서 LASV-NP 특이적 murine 단클론 항체를 이용하여 Lateral Flow Immunoassay modules을 통해 항원을 검출하는 방법이 알려져 있다(비특허문헌2).
그러나 위 공지된 방법들로는 여전히 라싸 바이러스 항원을 신속하고 정확하게 진단하는데 한계가 있어, 실험실 및 병원에서 편리하게 사용될 수 있는 라싸바이러스 항원 검출 방법이 요구되고 있다.
Masayuki Saijo, et al. CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY Vol. 14(9) : 1182-1189.
Jessica N Grove, et al. Virology Journal 2011 8 : 314.
본 발명은 라싸 바이러스 감염 현장 등에서의 신속한 대응을 위해, 라싸 바이러스 항원을 검출하는 방법 및 이를 위한 키트를 제공하고자 한다.
이를 위하여 본 발명은 라싸 바이러스 항원을 검출하는데 적합한 항체, 상기 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주, 상기 항체를 이용한 측방 유동 분석 기반의 라싸 바이러스 항원의 검출 방법 및 이에 사용되기 위한 키트를 제공하고자 한다.
본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포주를 제공한다. 상기 하이브리도마 세포주는 2020년 02월 28일 한국세포주연구재단(KCLRF)에 기탁번호 KCLRF-BP-00480 또는 KCLRF-BP-00481로 기탁된 것일 수 있다.
본 발명은 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주 또는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되고, 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 상기 항체는 단클론항체일 수 있다.
본 발명은 또한 포획 항체(Capture)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체; 및 검출 항체(Detector)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 포함하며, 상기 단클론항체는 기탁번호 KCLRF-BP-00480 또는 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산된 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트를 제공한다.
일 실시태양에서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-44 등)일 수 있고, 또다른 일 실시태양에서 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-88 등)일 수 있다. 바람직하게는, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-44 등)이고, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-88 등)일 수 있다. 일 실시태양에서 상기 검출 키트는 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기법을 이용한 것일 수 있다.
본 발명은 또한 포획 항체(Capture)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체; 및 검출 항체(Detector)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 포함하며, 상기 단클론항체는 기탁번호 KCLRF-BP-00480 또는 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산된 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트를 사용하여 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법을 제공한다.
일 실시태양에서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-44 등)일 수 있고, 또다른 일 실시태양에서 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-88 등)일 수 있다. 바람직하게는, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-44 등)이고, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체(mAb-Lassa-NP 1P-88 등)일 수 있다. 일 실시태양에서 상기 검출 키트는 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기법을 이용한 것일 수 있다.
본 발명은 측방 유동 분석 기반의 라싸 바이러스 항원(NP) 신속 검출 키트에 관한 것으로, 기존에는 340±80 ng/㎖ 수준의 라싸 바이러스 검출이 가능함을 보인데 비하여, 본 발명의 최소 검출 한계는 2 ng/㎖이고, 100% 특이도를 나타내며, 간섭반응도 없어 높은 민감도와 특이도로 신속하게 라싸 바이러스를 검출할 수 있다.
라싸 바이러스는 전파력과 감염력이 높은 특성상 신속한 검사와 대응이 중요하며 진단 결과에 따른 방역 시스템이 가동되어야한다. 본 발명은 특별한 장치 없이도, 소량의 검체로 실험실뿐만 아니라 병의원의 현장에서 라싸 바이러스 항원을 신속하게 검출할 수 있으므로, 라싸열 의심 사례 발생 시 신속한 검사를 통해 효과적으로 대응할 수 있다.
도 1은 재조합 라싸 바이러스 핵단백질의 제조를 확인한 전기영동(SDS-PAGE) 결과이다.
도 2는 측방 유동 분석법을 이용한 라싸 바이러스 항원(NP) 신속 검출 키트의 구조 및 원리를 나타낸 모식도이다.
도 3은 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트의 최소 검출 한계 시험 결과를 나타낸다.
도 4는 Color Scale chart를 나타낸 것이다.
도 2는 측방 유동 분석법을 이용한 라싸 바이러스 항원(NP) 신속 검출 키트의 구조 및 원리를 나타낸 모식도이다.
도 3은 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트의 최소 검출 한계 시험 결과를 나타낸다.
도 4는 Color Scale chart를 나타낸 것이다.
이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시태양 및 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시태양 및 실시예에 한정되지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
세포주
본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산할 수 있는 하이브리도마 세포주를 제공한다.
상기 하이브리도마 세포주는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 하이브리도마 세포는 면역원인 라싸 바이러스 핵단백질을 동물에 면역시키고, 상기 피면역 동물로부터 유래된 항체 생산세포인 B 세포를 골수종 세포(myeloma cell)와 융합시켜 하이브리도마를 제조한 다음, 그 중에서 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 생산하는 하이브리도마를 선택하는 방법으로 제조할 수 있다. 상기 피면역 동물은 실시예에서 사용된 마우스뿐만 아니라 염소, 양, 모르모트, 래트 또는 토끼와 같은 동물을 사용할 수 있다.
상기 피면역 동물을 면역시키는 방법으로는 당업계에 이미 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 마우스를 면역시키는 경우 면역원을 동량의 생리 식염수 및/또는 프로인드 어주번트(Freund's adjuvant) 등의 항원 보조제로 유화시켜, 상기 피면역 동물의 복부의 피하 또는 복강 내에 2-5주 마다 2-6회 접종시키는 방법으로 수행될 수 있다.
피면역 동물을 면역시킨 후에는 최종 면역 3-5일 후 비장 또는 림프절을 적출하여 당업계에서 이미 공지되어 있는 세포 융합법에 따라서, 융합 촉진제의 존재 하에 이들의 조직에 포함되어 있는 B 세포를 골수종 세포와 융합시키게 된다. 상기 융합 촉진제는 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 물질을 사용할 수 있다. 상기 골수종세포는 예를 들어, P3U1, NS-1, P3x63. Ag 8.653, Sp2/0-Ag14와 같은 마우스 유래 세포, AG1, AG2와 같은 래트 유래 세포를 사용할 수 있다. 또한 상기 당업계에 공지된 세포 융합법은 예를 들어, B 세포와 골수종세포를 1:1-10:1의 비율로 혼합시켜, 이에 분자량 1,000-6,000의 PEG를 10-80%의 농도로 첨가하여, 30-37℃에서 1-10분 동안 배양하는 방법으로 수행될 수 있다.
상기 방법으로 얻은 하이브리도마를 배양하여 단클론항체를 얻는다. 배양 방법은, 특별히 제한은 없고, 목적에 따라서 적절하게 선택할 수 있으며, 예컨대 상기 하이브리도마 세포주를, 마우스의 복강 내에 이식하여 배양하는 방법을 들 수 있다. 예를 들어, 상기 마우스의 복강 내에 이식하고 5 내지 14일 후에 복수를 회수하여, 얻어진 복수로부터 상기 단클론항체를 얻을 수 있다.
또한, 상기 하이브리도마는 예를 들어, 하이브리도마만이 생존가능한 HAT 배지 등의 선택 배지에서 배양하고, 하이브리도마 배양 상층액 중의 항체 활성을 ELISA 등의 방법을 이용하여 측정해 선택할 수 있다.
상기 하이브리도마가 생산하는 단클론항체는 정제하지 않고 사용할 수도 있으나, 최선의 결과를 얻기 위해서는 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려져 있는 방법에 따라 고순도(예컨대, 95% 이상)로 정제하여 사용하는 것이 바람직하다. 이러한 정제 기술로는, 예를 들어 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토 그래피, 친화성 크로마토그래피 등이 있으며, 이러한 정제 방법을 이용하여 배양 배지 또는 복수액으로부터 고순도의 단클론항체를 정제할 수 있다.
본 발명에서 상기 하이브리도마 세포주는 바람직하게는, 2020년 02월 28일 한국세포주연구재단(KCLRF)에 기탁번호 KCLRF-BP-00480 또는 KCLRF-BP-00481로 기탁된 하이브리도마 세포주일 수 있다.
항체
본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다.
본원에서 사용된 용어 "항체"는 천연 면역글로불린, 또는 부분적으로 또는 전체적으로 합성하여 생산된 면역글로불린이다. 상기 용어는 또한 항체의 항원 결합 도메인을 포함하는 임의의 폴리펩티드 또는 단백질을 포함한다. 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 단편은 Fab, scFv, Fv, dAb, Fd 및 다이아바디(diabody)와 같은 분자이다. 용어 "항체"는 광범위한 의미로 이용되며, 구체적으로 온전한 단클론항체, 다클론항체, 적어도 두 개의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적 항체)를 포함하며, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 항체 단편도 포함한다.
본원에 사용된 용어, "특이적으로 결합(specifically binding)"은 당업자에게 통상적으로 알려져있으며, 구체적으로, 항원 및 항체가 특이적으로 상호작용하여 항원-항체 복합체를 형성할 수 있으며, 또한 면역학적 반응을 하는 것을 의미할 수 있다.
일 실시태양에서, 상기 항체는 단클론항체일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "단클론항체(monoclonal antibody)"는 상기 항체 분자가 단일 분자로 구성되도록 제조된 것을 의미한다. 단클론항체는 동일한 에피토프를 갖는 항원에 대해서만 반응하는 특이성을 가지며, 또한 특정 에피토프에 대해서만 친화성을 나타낸다.
일 실시태양에서, 상기 단클론항체는 상기 하이브리도마 세포주에 의해 생산된 것일 수 있다.
검출 키트 및 진단 방법
본 발명은 또한 포획 항체(Capture)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체; 및 검출 항체(Detector)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체를 포함하며, 상기 단클론항체는 기탁번호 KCLRF-BP-00480 또는 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산된 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트를 제공한다.
일 실시태양에서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 mAb-Lassa-NP 1P-44일 수 있고, 또다른 일 실시태양에서 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 mAb-Lassa-NP 1P-88일 수 있다. 바람직하게는, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 mAb-Lassa-NP 1P-44이고, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 mAb-Lassa-NP 1P-88일 수 있다. 일 실시태양에서 상기 검출 키트는 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기법을 이용한 것일 수 있다.
일 실시태양에서, 상기 라싸 바이러스 검출 키트는 샘플패드, 골드패드, 멤브레인 및 흡습패드를 포함하는 스트립을 포함할 수 있다. 샘플패드와 흡습패드는 상기 스트립의 양 단부에 각각 위치하며, 골드패드는 샘플패드의 한 단부와 접해있고, 멤브레인은 골드패드와 흡습패드 사이에 위치한다. 상기 골드패드에는 골드가 접합된 검출 항체(Detector)가 존재할 수 있다. 상기 멤브레인에는 포획 항체(Capture)가 부착되어있는 검사선(Test line)과 대조선용 코팅 항체가 부착되어있는 대조선(Control line)이 포함될 수 있다. 상기 멤브레인은 미세다공성 물질로 구성되며, 바람직하게는 니트로셀룰로오스일 수 있다. 검체를 함유하는 액상 샘플을 샘플패드에 점적하면 모세관 현상에 의해 흡습패드 방향으로 전개가 진행되면서 검사선 및/또는 대조선에서 발색반응이 나타나게 된다.
상기 검체는 개체로부터 유래된 생물학적 물질일 수 있다. 상기 개체는 척추동물일 수 있다. 상기 척추동물은 포유동물, 바람직하게는 인간일 수 있다. 상기 시료는 개체로부터 채취되거나 분리된 것, 예를 들어, 혈액 또는 혈액 구성성분(blood constituent), 체액(bodily fluid), 타액, 가래, 또는 이들의 조합일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는, 전혈, 혈장 또는 혈청일 수 있다.
일 실시태양에서, 상기 라싸 바이러스 검출 키트에는 상술한 바와 같이 시료를 전개시키고, 반응물을 검출하는 스트립과 상기 스트립이 장착되는 하우징 또는 카트리지가 포함될 수 있고, 검체를 채취하기 위한 도구, 검출 시약을 적용하기 위한 도구, 항원-항체 결합을 확인하기 위한 시약 또는 장치 등 항체를 사용하여 검체로부터 항원 단백질의 존재유무를 확인하는 통상의 검출 또는 검출 키트에 포함될 수 있는 도구, 장치 또는 시약이 더 포함될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 검출 키트를 사용하여, 검체를 함유하는 액상 샘플을 샘플패드에 점적하고 검사선의 발색을 확인함으로서 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법을 제공한다.
일 실시태양에서, 검체를 함유하는 액상 샘플을 점적한 후 대조선에서 발색반응이 나타난 경우 유효한 진단으로 판단할 수 있고, 검사선에서 발색반응이 나타난 경우 라싸바이러스에 감염된 것으로 진단할 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
[실시예 1]
라싸 바이러스 핵단백질(NP) 항원의 제작
라싸 바이러스의 핵단백질(nucleoprotein: NP) 유전자가 도입된 재조합 항원 발현 벡터들을 제조하기 위해, 라싸 바이러스의 NP 유전자(Genebank Accession No. GU481072) 합성을 진행하였다. 라싸 바이러스 NP는 1,710bp의 염기서열 및 그에 상응하는 아미노산 서열로 이루어져 있다. 상기 라싸 바이러스 서열을 서열번호 1 및 2로 나타내었다.
클로닝이 확인된 Bacpak-Lassa DNA는 Top10F'에 형질전환하였고, 유전자재조합 항원에 포함된 Histidin-Tag를 이용한 Affinity chromatography 방법으로 SDS-PAGE를 수행하여 항원을 정제하였다.
그 결과는 도 1에 나타낸 바와 같이, 재조합 라싸 바이러스가 제조되었음이 확인되었다.
[실시예 2]
단클론 항체 생산
다음과 같은 방법을 통해 라싸 바이러스 NP 유전자가 도입된 재조합 항원에 대한 항체를 생산하였다.
하이브리도마 세포주의 개발에 필요한 면역화된 마우스를 얻기 위하여, 상기 실시예 1에서 제작한 유전자 재조합 라싸 바이러스 항원과 면역 보강제인 complete Freund's adjuvant를 같은 양으로 혼합하여 emulsion을 만든 후, 6주령 암컷 Balb/c 마우스의 복강 내에 100㎍~500㎍의 양을 주사하였다. 1주 후 복강 내에 주사한 것과 동일한 항원을 incomplete Freund's adjuvant와 동량으로 혼합하여 마우스의 복강 내에 100㎍~500㎍의 양으로 주사하고, 일주일 간격으로 2회 추가 면역을 수행하였다. 마지막 4차 면역 일주일 후, 세포융합 3일 전에 면역원으로 사용한 동일 항원을 면역 보강제 없이 1일 간격으로 3회 동일한 마우스의 꼬리정맥에 주사하여 부스팅(boosting)하였다.
세포융합을 수행하기 전 면역화된 마우스의 꼬리에서 채혈하여 혈청을 확보한 후, ELISA로 면역원에 대한 항체 역가 증가를 확인하여 면역 여부를 확인하였다. 그 후, 항체를 충분하게 얻을 수 있는 마우스를 선별하여 세포융합과정을 수행하였다. 면역화된 마우스의 비장(spleen)을 적출하여 비장세포(splenocyte)를 분리하고, 비장세포 1개와 쥐의 골수아종 암세포(SP2/0) 5개를 확보하여 세포융합 후, 융합한 aminoprotein이 함유된 HAT 배지를 이용하여 하이브리도마 세포주만을 선별하였다.
하이브리도마 세포군 중 라싸 바이러스 NP에 특이적으로 반응하는 항체를 분비하는 세포주를 선별하기 위해, Indirect ELISA 방법을 이용하였다. 즉, ELISA 플레이트(plate)에 항원을 흡착시킨 후 Casein 봉쇄액으로 플레이트를 blocking하고, 하이브리도마 세포 배양액의 상청액을 플레이트에 코팅된 항원과 반응시켰다. 이후 HRP가 결합(conjugation)된 anti-mouse IgG를 처리 후 TMB 기질액을 반응시켜 흡광도를 측정하였다. 이와 같은 방법으로 항체를 생산하는 세포주를 스크리닝하여 항원과 특이적으로 높은 결합력을 갖는 세포주만을 선별하였다.
선별된 하이브리도마 세포주는 HT가 포함된 소태아혈청 배지에서 배양하고, 마우스 복강에 배양된 세포를 주입하였다. 세포 주입 5~7일 후 복강 내 복수가 생산되면, 마우스 당 약 2~4㎖의 복수를 채취하였다. 채취한 복수는 원심분리를 통해 혈구, 피브린 등을 제거하고 이를 정제에 사용하였다. 마우스 복수는 Protein G column을 사용한 Affinity chromatography 방법으로 정제하여 단클론 항체를 획득하였다.
[실시예 3]
라싸 바이러스 항원 검출 키트에 적합한 항체 pair 선정
라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트에 적합한 항체 pair를 선정하기 위해 다음과 같이 포획 항체(Capture)와 검출 항체(Detector) 후보군을 각각 선별한 뒤, 선별된 후보군에 대한 matching test를 진행하였다.
Capture로서 반응성 있는 후보군 선별을 위해 항체 클론별로 멤브레인에 흡착시켜 각각의 반응성을 확인하였다. 구체적으로, 니트로셀룰로스 멤브레인(nitrocellulose membrane)에 후보군 항체를 흡착시키고, 양성 물질로는 Lassa baculo 항원에 골드를, 음성 물질로는 Lassa와 관련이 없는 Baculo 항원에 골드를 접합시켜 준비하였다. 96 well 플레이트에 골드-Lassa baculo 항원 복합체(양성), 골드-baculo 항원 복합체(음성)를 각각 넣고, 후보군 항체가 흡착되어있는 멤브레인을 꽂아주어 모세관 현상에 의해 흡습패드 방향으로 전개가 진행되도록 하였다. 후보군 항체가 골드-항원 복합체와 결합하여 나타나는 발색반응을 기준으로 골드-Lassa baculo 항원 복합체와 반응성이 좋은 후보군 항체를 선별하였다.
Detector로서 반응성 있는 후보군 선별을 위해 항체 클론별로 금입자를 접합시켜 각각의 반응성을 확인하였다. 구체적으로, 니트로셀룰로스 멤브레인에 양성 물질로는 Lassa baculo 항원을 흡착시키고, 음성 물질로는 Lassa와 관련이 없는 Baculo 항원을 흡착시켰다. 후보군 항체에는 각각 골드를 접합시켜 준비하였다. 96 well 플레이트에 골드를 접합시킨 후보군 항체를 넣고, Lassa baculo 항원이 흡착되어있는 멤브레인과 baculo 항원이 흡착되어 있는 멤브레인을 각각 꽂아주어 모세관 현상에 의해 흡습패드 방향으로 전개가 진행되도록 하였다. 골드가 접합된 후보군 항체가 멤브레인에 흡착된 항원과 결합하면서 나타나는 발색반응을 기준으로 Lassa baculo 항원과 반응하는 후보군 항체를 선별하였다.
Capture와 Detector 원료 후보를 선별한 후에, 선별된 각 항체에 대해 cross matching test를 실시하여 음성 검체에서는 비특이 반응이 없으면서 양성 검체에서는 반응성이 가장 좋은 Capture/Detector pair를 최종 선별하였다. 그 결과, Capture항체로서 mAb-Lassa-NP 1P-44와 Detector 항체로서 mAb-Lassa-NP 1P-88을 최종 항체 쌍으로 선정하였다. mAb-Lassa-NP 1P-44 항체를 생산하는 세포주(기탁번호 KCLRF-BP-00480) 및 mAb-Lassa-NP 1P-88 항체를 생산하는 세포주(기탁번호 KCLRF-BP-00481)를 2020.02.28자로 한국세포주연구재단(KCLRF)에 기탁하였다.
[실시예 4]
라싸 바이러스 항원(NP)의 신속 검출 키트 제작
실시예 3에 따라 선정한 Capture/Detector pair을 이용하여 측방 유동 분석 기반의 라싸 바이러스 항원(NP) 신속 검출 키트를 제작하였다.
라싸 바이러스 항원 검출 키트의 검사선(Test line) 위치에는 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체가 고정되어 있고, 골드 패드에는 골드에 접합되어 있는 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체가 존재하도록 하였다.
구체적으로, 검사선용 표지 항체(Detector)는 골드를 접합시켜 원료로 사용하였다. 염화금(Gold chloride)을 0.01%로 증류수에 용해한 뒤, 0.1% 구연산 나트륨(sodium citrate) 용액을 첨가하면서 약 10분간 가열한 후 냉각하여 냉장 보관하였다(콜로이드 골드용액의 제조). 이후 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체(Detector)를 생리식염액에 용해하고 최종 20㎍/㎖의 농도가 되도록 콜로이드 골드용액에 10분간 반응시켜 접합반응을 유도하였다. 골드 입자를 안정화시킨 후 10,000g에서 30분간 원심하여 침전을 만들었다. 침전을 다시 생리식염액에 용해하고 0.45㎛ 여과기로 여과한 뒤, 540nm에서 흡광도를 측정하여 최종 20이 되도록 희석하여 사용하였다.
검사선용 코팅 항체(Capture)는 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체(Capture)를 사용하였고, 멤브레인의 검사선에 분주하여 코팅하였다.
대조선(Control line)용 표지 항원은 재조합 GST 단백질(US biological사, US, Cat.#G8135-01H)에 골드를 접합시켜 원료로 사용하였다. 염화금을 0.01%로 증류수에 용해한 뒤, 0.1% 구연산 나트륨 용액을 첨가하면서 약 10분간 가열한 후 냉각하여 냉장 보관하였다. 이후 재조합 GST 단백질을 구입하여 생리식염액에 용해하고 최종 20㎍/㎖의 농도가 되도록 콜로이드 골드용액에 10분간 반응시켜 접합반응을 유도하였다. 골드 입자를 안정화시킨 후 10,000g에서 30분간 원심하여 침전을 만들었다. 침전을 다시 생리식염액에 용해하고 0.45㎛ 여과기로 여과한 뒤, 540nm에서 흡광도를 측정하여 최종 20이 되도록 희석하여 사용하였다.
대조선용 코팅 항체는 Anti-GST IgG (Pierce사, US, Cat.#CAB4169)를 사용하였고, 멤브레인의 대조선에 2.0㎎/㎖의 농도로 분주하여 코팅하였다.
검출 키트의 구조 및 원리(도 2)
라싸 바이러스 항원(NP) 신속 검출 키트의 검사선에는 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체(Capture)가 고정화 되어있고, 대조선에는 Anti-GST IgG가 고정화 되어있다. 골드패드에는 골드에 접합되어 있는 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체(Detector)와 골드에 접합되어 있는 재조합 GST 단백질이 존재한다.
검체 점적 부위(샘플패드)에 검체를 함유하는 액상 샘플를 점적하면 모세관 현상에 의해 흡습패드 방향으로 전개가 진행되는데, 검체 내에 라싸 바이러스 항원이 존재한다면, 바이러스 항원이 1차적으로 골드패드 내의 금입자 접합 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체와 결합한 후 검사선의 마우스 단클론 라싸 바이러스 항체와 2차적으로 반응하여 항체-항원-항체 복합체를 형성하여 direct sandwich 원리에 의해 보라색으로 발색반응이 나타난다. 검사선의 발색에 이용되지 않은 금입자 접합 재조합 GST 단백질은 대조선의 Anti-GST IgG와 반응하여 대조선에서의 발색반응을 일으키게 된다.
[시험예 1]
최소 검출 한계 시험
본 발명의 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트의 최소 검출 한계를 시험하기 위하여, 음성 전혈, 음성 혈장, 음성 혈청에 Lassa NP Baculo 항원을 각 1 ㎍/㎖의 농도로 희석한 다음, 2배씩 희석하면서 검사선의 발색반응을 확인하였다. 그 결과, 도 3에서 나타난 바와 같이 전혈, 혈장, 혈청 모두에서 2 ng/㎖의 농도까지 검출 가능함을 확인하였다. 도 3의 C.S (%)는 Color Scale로, ±는 0~1 %를 의미한다. Color Scale 값은 검사선의 발색도와 동일한 색상의 값을 도 4의 Color Scale chart 표에서 찾아 측정하였다.
[시험예 2]
특이도 시험
본 발명의 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트의 특이도 시험을 위해, 라싸 바이러스에 감염되지 않은 혈청 100개를 확보하여 평가를 진행하였다. 모든 혈청에 대한 검출 키트 검출 결과가 음성으로 나와, 특이도 100%임을 확인하였다. 시험 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
[시험예 3]
교차반응성 유무 시험
본 발명의 라싸 바이러스 항원(NP) 검출 키트의 다른 항원과의 교차반응성 유무를 확인하기 위해, 표 2에 나타낸 바이러스 검체를 대상으로 교차반응성을 평가하였다. 각각의 검체를 검사한 결과, 모든 검체에서 음성 결과를 나타내어 교차반응성이 없음을 확인하였다(표 2).
| Specimen No. | Type | Potential cross-reacting microorganisms | Results |
| 1 | Virus | Japanese encephalitis virus (NCCP41302) | Show no cross-reaction (음성) |
| 2 | Japanese encephalitis virus (NCCP41303) | ||
| 3 | Japanese encephalitis virus (NCCP41304) | ||
| 4 | Japanese encephalitis virus (NCCP41305) | ||
| 5 | Japanese encephalitis virus (NCCP41307) | ||
| 6 | Japanese encephalitis virus (NCCP41308) | ||
| 7 | Japanese encephalitis virus (NCCP43133) | ||
| 8 | Yellow fever virus | ||
| 9 | Dengue Type Ⅱ | ||
| 10 | Dengue Type Ⅲ | ||
| 11 | Dengue Type Ⅳ | ||
| 12 | Zika virus lysate | ||
| 13 | Protozoa | Malaria Plasmodium falciparum |
[시험예 4]
간섭반응 시험
방해물질에 의한 간섭반응을 확인하기 위해, 음성 혈장 및 음성 혈장에 Lassa NP Baculo 항원을 희석한 용액에 각각 Human anti-mouse antibody(HAMA), 헤모글로빈(Hemoglobin) 2g/L, 리바비린(Ribavirin) 1mg/ml, Doxycycline hyclate 70μM, 퀴닌(Quinine) 150μM, 아세트아미노펜(Acetaminophen) 200μM, 아스피린(Aspirin) 3.7μM, 이부프로펜(Ibuprofen) 2.5mM, 티니다졸(Tinidazole) 1mg/ml, 리팜피신(Rifampicin) 78.1㎛ol/L, EDTA 2mM, 헤파린(Heparin) 19USP unit/ml, 구연산 나트륨(Sodium citrate) 0.105M을 처리하여 간섭반응 여부를 확인하였다. 그 결과, 시험에 이용된 13가지 물질 모두에 대해 간섭반응이 없는 것으로 나타났다. 시험 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
| 간섭물질 종류 | 간섭물질 농도 | 양성 검체 | 음성 검체 | ||
| 판정 결과 | Color scale | 판정 결과 | Color scale | ||
| X | X | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Tinidazole | 1mg/ml | 양성 | 26 | 음성 | 0 |
| Ribavirin | 1mg/ml | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Doxycycline hyclate | 70μM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Quinine | 150μM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Acetaminophen | 200μM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Hemoglobin | 2g/L | 양성 | 34 | 양성 | 0 |
| Aspirin | 3.7μM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Rifampicin | 78.1㎛ol/L | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Ibuprofen | 2.5mM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| HAMA | N/A | 양성 | 40 | 음성 | 0 |
| EDTA | 2mM | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Heparin | 19USP unit/ml | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
| Sodium citrate | 0.105M | 양성 | 34 | 음성 | 0 |
<110> Korea Center for Disease Control and Prevention
Bionote, Inc.
<120> AN ANTIBODY SPECIFIC FOR NUCLEOPROTEIN OF LASSA VIRUS, HYBRIDOMA
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<130> KCD19P-0009-KR
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1710
<212> DNA
<213> Arenavirus sp.
<400> 1
atgagtgctt ccaaagaagt gaaatcattc ctgtggactc agtctctgag aagagagtta 60
tctggctatt gctccaatat aaaactccag gtggtaaagg atgctcaagc tctccttcat 120
ggtttggact tctctgaggt cagtaatgtt caacgcttga tgcgcaaaca aaaaagggac 180
gatggtgatc ttaaacggct aagagacctc aatcaagcag tcaacaacct tgttgaacta 240
aagtcaactc aacaaaagag tgtgctgagg gttggaaccc taagttcaga cgatctattg 300
gttttggctg ctgacctgga aaaactgaag tcaaaggttg ttaggacaga aagacccctg 360
agctcaggaa tttatatggg gaatctaagt tcacagcagc ttgatcagag gaaggccctc 420
ctcaacatga ttggcatgac tggtgggaat gggggaagga ataccactag tgatggtatt 480
gtgagagttt gggacgtcaa gaatgcagag ctgcttaaca atcagtttgg gacaatgcca 540
agtctaactc tagcatgttt gaccaaacaa gggcaagtgg atttgaatga tgctgttcag 600
gctttgacag atttgggatt gatttacacc gcaaaatacc ctaattcatc tgatttggac 660
aggctggccc agagccatcc gatattgaac atgattgata ctaagaagag ctcccttaac 720
atctctggtt acaattttag tttaggagcc gccgtcaagg ctggggcctg catgcttgat 780
ggaggcaata tgctagagac tataaaggtc tcacctcaaa ccatggatgg catcttgaag 840
tcaatcttga aagtcaagag aagcctggga atgttcatct cagatacgcc aggtgaaagg 900
aacccttatg aaaacatact gtacaaaatc tgcctctcag gagatgggtg gccttacatt 960
gcatcaagga cttcaattgt gggaagagct tgggagaaca ccgtggttga cttagagtca 1020
gacaacaaac cgcaaaagac cggcaatggg ggttcaaata agtcattgca atctgcaggg 1080
tttgctgcag gactgactta ttctcaactg atgaccttaa aggattcaat gcttcagctt 1140
gacccaaatg caaagacttg gatggatatt gagggaagac cagaagatcc agttgaaata 1200
gctctgtatc aaccaagttc aggctgctat atacacttct tcagggaacc gacagactta 1260
aagcagttta aacaggatgc aaaatattca catggtattg atgtgacaga tttgtttgct 1320
gcacagccag ggttaacaag tgcagtgata gaggctcttc ctagaaacat ggtcatcacc 1380
tgtcaagggt cagaagacat cagaaaactt ctggagtcac aggggaggag ggatataaaa 1440
ctgattgaca tttcccttag taaggtggac tcaagaaaat ttgagaatgc tgtgtgggat 1500
caattcaagg atttatgtca catgcacacc gggattgttg tggagaagaa aaagagggga 1560
ggcaaggagg aaataacacc tcattgtgca ttaatggact gcatcatgtt tgatgctgca 1620
gtctcaggag gagttgatgc aaaggtcctg agggctgtgc tccccagaga tatggtgttc 1680
agaacttcga cacccaaagt cgtcctgtaa 1710
<210> 2
<211> 569
<212> PRT
<213> Arenavirus sp.
<400> 2
Met Ser Ala Ser Lys Glu Val Lys Ser Phe Leu Trp Thr Gln Ser Leu
1 5 10 15
Arg Arg Glu Leu Ser Gly Tyr Cys Ser Asn Ile Lys Leu Gln Val Val
20 25 30
Lys Asp Ala Gln Ala Leu Leu His Gly Leu Asp Phe Ser Glu Val Ser
35 40 45
Asn Val Gln Arg Leu Met Arg Lys Gln Lys Arg Asp Asp Gly Asp Leu
50 55 60
Lys Arg Leu Arg Asp Leu Asn Gln Ala Val Asn Asn Leu Val Glu Leu
65 70 75 80
Lys Ser Thr Gln Gln Lys Ser Val Leu Arg Val Gly Thr Leu Ser Ser
85 90 95
Asp Asp Leu Leu Val Leu Ala Ala Asp Leu Glu Lys Leu Lys Ser Lys
100 105 110
Val Val Arg Thr Glu Arg Pro Leu Ser Ser Gly Ile Tyr Met Gly Asn
115 120 125
Leu Ser Ser Gln Gln Leu Asp Gln Arg Lys Ala Leu Leu Asn Met Ile
130 135 140
Gly Met Thr Gly Gly Asn Gly Gly Arg Asn Thr Thr Ser Asp Gly Ile
145 150 155 160
Val Arg Val Trp Asp Val Lys Asn Ala Glu Leu Leu Asn Asn Gln Phe
165 170 175
Gly Thr Met Pro Ser Leu Thr Leu Ala Cys Leu Thr Lys Gln Gly Gln
180 185 190
Val Asp Leu Asn Asp Ala Val Gln Ala Leu Thr Asp Leu Gly Leu Ile
195 200 205
Tyr Thr Ala Lys Tyr Pro Asn Ser Ser Asp Leu Asp Arg Leu Ala Gln
210 215 220
Ser His Pro Ile Leu Asn Met Ile Asp Thr Lys Lys Ser Ser Leu Asn
225 230 235 240
Ile Ser Gly Tyr Asn Phe Ser Leu Gly Ala Ala Val Lys Ala Gly Ala
245 250 255
Cys Met Leu Asp Gly Gly Asn Met Leu Glu Thr Ile Lys Val Ser Pro
260 265 270
Gln Thr Met Asp Gly Ile Leu Lys Ser Ile Leu Lys Val Lys Arg Ser
275 280 285
Leu Gly Met Phe Ile Ser Asp Thr Pro Gly Glu Arg Asn Pro Tyr Glu
290 295 300
Asn Ile Leu Tyr Lys Ile Cys Leu Ser Gly Asp Gly Trp Pro Tyr Ile
305 310 315 320
Ala Ser Arg Thr Ser Ile Val Gly Arg Ala Trp Glu Asn Thr Val Val
325 330 335
Asp Leu Glu Ser Asp Asn Lys Pro Gln Lys Thr Gly Asn Gly Gly Ser
340 345 350
Asn Lys Ser Leu Gln Ser Ala Gly Phe Ala Ala Gly Leu Thr Tyr Ser
355 360 365
Gln Leu Met Thr Leu Lys Asp Ser Met Leu Gln Leu Asp Pro Asn Ala
370 375 380
Lys Thr Trp Met Asp Ile Glu Gly Arg Pro Glu Asp Pro Val Glu Ile
385 390 395 400
Ala Leu Tyr Gln Pro Ser Ser Gly Cys Tyr Ile His Phe Phe Arg Glu
405 410 415
Pro Thr Asp Leu Lys Gln Phe Lys Gln Asp Ala Lys Tyr Ser His Gly
420 425 430
Ile Asp Val Thr Asp Leu Phe Ala Ala Gln Pro Gly Leu Thr Ser Ala
435 440 445
Val Ile Glu Ala Leu Pro Arg Asn Met Val Ile Thr Cys Gln Gly Ser
450 455 460
Glu Asp Ile Arg Lys Leu Leu Glu Ser Gln Gly Arg Arg Asp Ile Lys
465 470 475 480
Leu Ile Asp Ile Ser Leu Ser Lys Val Asp Ser Arg Lys Phe Glu Asn
485 490 495
Ala Val Trp Asp Gln Phe Lys Asp Leu Cys His Met His Thr Gly Ile
500 505 510
Val Val Glu Lys Lys Lys Arg Gly Gly Lys Glu Glu Ile Thr Pro His
515 520 525
Cys Ala Leu Met Asp Cys Ile Met Phe Asp Ala Ala Val Ser Gly Gly
530 535 540
Val Asp Ala Lys Val Leu Arg Ala Val Leu Pro Arg Asp Met Val Phe
545 550 555 560
Arg Thr Ser Thr Pro Lys Val Val Leu
565
Claims (14)
- 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 것을 특징으로 하는, 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주.
- 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 것을 특징으로 하는, 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주.
- 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되고, 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 단클론 항체.
- 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되고, 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 단클론 항체.
- 포획 항체(Capture)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체; 및
검출 항체(Detector)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체
를 포함하며, 상기 단클론항체는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 또는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트.
- 제5항에 있어서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트.
- 제5항에 있어서, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트.
- 제5항에 있어서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체이고, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트.
- 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 검출 키트는 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기법을 이용한 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 검출 키트.
- 포획 항체(Capture)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체; 및
검출 항체(Detector)로서 서열번호 1의 염기서열을 갖는 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적으로 결합하는 단클론항체
를 포함하며, 상기 단클론항체는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체 또는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는 라싸 바이러스 검출 키트를 사용하여, 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 포획 항체(Capture)는 기탁번호 KCLRF-BP-00480으로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체이고, 상기 검출 항체(Detector)는 기탁번호 KCLRF-BP-00481로 기탁된 세포주에 의해 생산되는 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.
- 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 검출 키트는 측방 유동 분석(lateral flow assay) 기법을 이용한 것을 특징으로 하는, 라싸 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| KR1020200048337A KR102404143B1 (ko) | 2020-04-21 | 2020-04-21 | 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적인 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이를 이용한 라싸 바이러스 검출 키트 |
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Family
ID=78231509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| KR1020200048337A KR102404143B1 (ko) | 2020-04-21 | 2020-04-21 | 라싸 바이러스 핵단백질에 특이적인 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이를 이용한 라싸 바이러스 검출 키트 |
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Citations (4)
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Also Published As
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