KR20210127215A - 호중구 감소증을 예방하거나 또는 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키기 위한 지속성 g-csf - Google Patents

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세넴 엘탄-아흐메드
아뎀 사힌
하티스 온셀
오누르 피날바슬리
나게한 사라코글루
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일코겐 일라익 사나이 비 티카렛 에이.에스.
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Abstract

본 발명은, 차세대 G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor)로 개발된 인간 혼성(hy) Fc 융합 과립구 집락 자극 인자(G-CSF)의 치료적 유효량을 투여하여 환자의 호중구 감소증(neutropenia)을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

Description

호중구 감소증을 예방하거나 또는 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키기 위한 지속성 G-CSF
관련 출원의 상호 참조
본원은 2019.02.13.자로 출원된 미국 가출원 제62/804,988호의 이익을 주장한다.
발명의 분야
본 개시는 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF(long-acting hybrid Fc fusion G-CSF)를 투여하여 환자의 호중구 감소증(neutropenia)을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법에 관한 것이다.
감소된 수준의 백혈구(white blood cell; WBC)인 백혈구 감소증, 및 감소된 수준의 호중구인 호중구 감소증은 다양한 유형의 감염에 대한 감수성을 증가시키는 중요한 장애이다. 호중구 감소증은 예를 들어 HIV로 감염된 환자에서 만성일 수 있거나 예를 들어 화학요법 또는 방사선 요법을 행하는 암 환자에서 급성일 수 있다. 다양한 인자들 예를 들어 항암 화학요법 약물, 항암 방사선 요법, 감염성 질환, 선천성 결함 또는 비타민 B12/B9 결핍은 호중구 감소증을 유발할 수 있다. 환자를 세균 감염에 더 취약하게 만드는 호중구의 현저한 감소는 항암 요법(화학요법 및/또는 방사선 요법)을 받는 환자에서 흔하고 심각한 합병증이다.
호중구는 골수에서 만들어지며 몸 전체에 광범위하게 이동하는 수명이 짧은 세포이며; 다른 백혈구와 달리 정맥벽과 신체 조직으로 자유롭게 이동하여 모든 항원을 즉시 공격할 수 있다. 호중구 감소증은 호중구 수 및 감염의 상대적 위험도에 따라 분류된다. 그것은 약 1.0×109/L 미만의 절대 호중구 수(ANC) 값으로 정의된다. 호중구 수에 따라 다음과 같이 분류된다: 중등도 호중구 감소증(500 ~ 1000/μL) 또는 중증 호중구 감소증(< 500/μL). 열성 호중구 감소증(FN)은 상당한 호중구 감소증의 지속기간 동안 열이 발생하는 것을 뜻한다. 중등도 및 중증 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증은 화학요법에 사용되는 약물의 용량을 감소시키거나 치료를 지연시켜서 치료 과정이 덜 효과적으로 되게 한다. ANC 값이 약 0.5×109/L 미만인 중증 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증 환자의 경우 비교적 경미한 감염이더라도 중증이고 생명을 위협할 수 있다.
최근 다양한 형태의 백혈구 감소증 및 호중구 감소증이 과립구 집락 자극 인자(granulocyte colony-stimulating factor; G-CSF) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 변형된 G-CSF 유도체로 치료 또는 조절된다. 열성 호중구 감소증의 20% 이상의 가능성을 갖는 고위험 화학요법에서 G-CSF의 예방적 사용이 제안된다. 자가 말초 혈액 줄기 세포 이식을 받는 환자에서 G-CSF는 암 화학요법 완료 후 지정 34+(CD34+) 조혈 줄기 세포 클러스터를 말초 혈액으로 동원하는데 사용된다. G-CSF는 또한 교차 혈액 줄기 세포 이식(cross blood stem cell transplantation)을 받은 환자의 동종 조혈 모세포 이식을 위한 조혈 모세포 동원에 사용된다. 또한, G-CSF 제제는, 조혈 모세포 이식 후 호중구 수를 증가시키는 호중구 감소증, 골수 이형성 증후군, 재생 불량성 빈혈, 선천성 및 특발성 호중구 감소증, 인간 면역 결핍성 바이러스(HIV) 감염을 치료하는데 사용된다. 생체 내 G-CSF의 주요 생물학적 효과는 과립성 백혈구(granulocyte) 또는 호중구로 알려진 특정 백혈구의 성장 및 발달을 자극하는 것이다[문헌 「Welte et al., PNAS-USA 82:1526-1530, 1985, Souza et al, Science, 232:61-65, 1986」 참조].
골수에서 생성된 호중구는 G-CSF에 의해 조절된다. G-CSF가 골수 중의 세포의 표면 위의 과립구 집락 자극 수용체와 결합될때 효과가 나타나며; 수용체는 일반적으로 과립성 백혈구 및 성숙한 호중구의 전구체 세포로부터 생성되고, 분화 및 성숙 과정의 후기 단계에서 고밀도가 생성된다. 결과적으로, G-CSF는 수용체와 결합한 후 골수에서, 전구체 세포, 예를 들어 골수 아세포, 전골수구(promyelocyte) 및 골수구의 세포 주기로의 진입을 촉진하고; 그것은 더 빈번한 세포 분열을 유발하여 세포 증식을 촉진하고 과립구의 수명을 연장시킨다. 또한, G-CSF는 골수에서 단시간(4~24시간)에 혈류로의 이동을 촉진하여 호중구 수를 증가시키는데 기여한다. 게다가, G-CSF는 조혈 모세포, 예를 들어 CFU-G(집락 형성-단위 과립구)의 증식 및 분화에 기여한다.
인간 G-CSF(hG-CSF)의 아미노산 서열은 문헌 「Nagata et al. Nature 319:415-418, 1986」에 의해서 보고되었다. hG-CSF는 2개의 G-CSF 분자와 2개의 수용체의 2:2 복합체를 형성하여 G-CSF 수용체를 이량체화하는 단일체 단백질이다[문헌 「Horan et al. (1996), Biochemistry 35(15): 4886-96」 참조]. 175개의 잔기 단백질인 재조합, 메티오닐 인간 G-CSF(recombinant, methionyl human G-CSF; r-metHuG-CSF)가 대장균(E-coli)에서 처음 생산되었다[문헌 「Hill et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 5167-5171」 참조]. 이들 G-CSF-함유 약물(비-글리코실화 조합 메티오닐 인간 과립구 집락 자극 인자, rhuG-CSF) 중의 최초의 것인, 1991년 등록상표명 Neupogen®으로 판매된 필그라스팀(Filgrastim)은 짧은 반감기(3.5 내지 3.8시간) 때문에 화학요법 과정 동안 매일 투여되어야 한다. 상기 필그라스팀의 혈장 반감기는 18 내지 80시간까지 연장되어 G-CSF에서 단일 N-말단 연결된 20kDa의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 그룹을 함유하는 페그필그라스팀(pegfilgrastim)의 개발로 덜 자주 피하(SC) 투여될 수 있었다[문헌 「Frampton, Lee et al. 1994, Molineux 2003, Molineux 2004」 참조]. 상기 화합물은 2002년 등록 상표명 Neulasta®으로 FDA(미국 식품의약국)에 의해서 승인되었다. 따라서, 권장된 페그필그라스팀 투여량은 화학요법 주기당 1회이다.
최근, 면역글로불린(Ig)을 이용하여 제조된 융합 단백질이 연구 개발되고 있다. Ig는 혈액의 주성분이다. 인간 Ig(hIg)는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE와 같은 다양한 부류를 포함한다[문헌 「Roitt et al., "Immunology" 1989, Gower Medical Publishing, London, U. K.; New York, N. Y.」 참조]. 미국특허 제5,045,312호에 기술된 바와 같이, 인간 성장 호르몬은 가교제로 카르보디이미드 또는 글루타르알데히드를 사용하여 소 혈청 알부민 또는 마우스 면역글로불린에 콘쥬게이트된다. 상기 콘쥬게이트는 변형되지 않은 성장 호르몬과 비교하여 활성이 향상되었다. 글리코실화 부위를 변경시키는 것과 같은 Fc 도메인의 변형은 치료 효과를 향상시키는 것으로 알려져 있다[문헌 「R. J. Sola and K. Griebenow, (2009), J Pharm Sci. 98(4): 1223-1245」 참조]. 추가로, 활성 물질이 항체의 단편 결정화 가능한(Fragment crystallizable; Fc) 영역에 융합되면 연장된 순환 또는 임상 활성 또한 달성된다.
그러나, 세포 표면 수용체의 세포외 도메인과의 융합과 달리, IgG에 가용성 단백질의 융합은 융합되지 않은 사이토카인 또는 성장 인자에 비해 감소된 생물학적 활성을 유도한다. 그 이유는 키메라 단백질이 2개의 활성 단백질이 근접해 있는 이량체로 존재하기 때문이며, 이는 표적 분자에 대한 융합-IgG의 입체 장애로 이어진다. 따라서 효율적인 융합 단백질을 만들기 위해서는 이 문제를 극복해야 한다(예를 들어 미국출원공개공보 제US 20120276097 A1호, 상기 공보의 전체 내용이 본원에서 참조로 인용된다).
Fc 융합 기술의 또 다른 한계는 원치 않는 면역 반응의 발생이다. 면역글로불린의 Fc 도메인은 또한 항체 의존성 세포 매개 세포독성(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity; ADCC) 또는 보체 의존성 세포독성(complement-dependent cytotoxicity; CDC)과 같은 이펙터(effector) 기능을 갖는다. 상기 이펙터 기능은 일반적으로 Ig의 Fc 영역과 이펙터 세포 상의 Fc 수용체(FcR) 사이의 상호작용을 통해 또는 보체 결합을 통해 달성된다. 따라서 Fc의 이펙터 기능을 차단하여 원치 않는 반응 예를 들어 세포사, 사이토카인 방출 또는 염증을 감소시켜야 한다(미국출원공개공보 제US 20120276097 A1호).
전반적으로, G-CSF 기반 제품 예를 들어 필그라스팀(Neupogen®)은 짧은 반감기 때문에 변형 없이 사용하는데 한계가 있는 것으로 알려져 있다. 페그필그라스팀(Neulasta®)은 반감기가 비교적 증가했지만 PEG가 일부 부작용을 가질 수 있고 페길레이션(pegylation)은 추가 생산 단계를 초래하는 것으로 알려져 있다. Fc-융합 구조는 일반적으로 작은 단백질의 짧은 반감기 연장으로 인해 임상 응용 분야에서 특히 유용하고 일반적으로 사용되는 기술 플랫폼이다[문헌 「Czajkowsky, Hu, Shao, & Pleass, 2012; Strohl, 2015」 참조]. 그러나 Fc 융합 기술의 주요 한계 중 하나는 원치 않는 면역 반응의 존재이다.
본 발명의 구현예에서 사용되는 혼성 Fc(hybrid Fc; hyFc) 플랫폼은 결합 약물의 혈장 반감기를 더욱 향상시키고 세포독성 및 면역원성을 감소시키기 위해 개발된 것이다(EP20080766022, US8586038B2). US8586038B2의 전체 내용은 본원에서 참조로 인용된다. 이러한 목적으로, ADCC 및 CDC 반응이 없는 2개의 상이한 면역글로불린을 유전적으로 조합하였다. 혼성 Fc는 인간 IgG 서브클래스의 조합 또는 인간 IgD와 IgG의 조합에서 유래된다. 혼성 Fc는 인간 IgG 서브클래스의 조합 또는 인간 IgD와 IgG의 조합에서 유래된다. 혼성 Fc는 생물학적 활성 분자에 결합될 때 생물학적 활성 분자의 혈청 반감기를 증가시킬 뿐만 아니라 Fc-폴리펩티드 융합 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드가 발현될 때 폴리펩티드의 발현 수준을 증가시키는데 효과적이다. 따라서 혼성 Fc(hyFc)-융합된 G-CSF 또한 더 긴 혈장 반감기, 효율적인 발현 수준, 제거된 세포독성 및 감소된 면역원성을 갖는다(US8586048 B2). 이와 관련하여, hyFc 융합 G-CSF는 독특한 기원 분자(unique and originator molecule)이며, 여기서 Fc 부분 자체는 2개의 면역글로불린 분자의 융합이고 상기 첫번째 융합은 활성 분자에 추가로 융합된다.
따라서, 본 연구에서는, 3세대 G-CSF(3rd generation G-CSF)인 인간 혼성(hy) Fc 융합 과립구 집락 자극 인자(지속성 G-CSF)를 이용한 호중구 감소증을 예방하거나 또는 호중구 감소증의 지속기간을 감소시킬 목적으로 개발되었다.
발명의 간단한 설명
본 발명의 제 1 구현예는 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF가 치료적 유효량으로 대상체에게 투여될 수 있도록 하는 치료 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 한 구현예는 대상체에서 호중구 감소증을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하되, 여기서 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF가 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 투여된다.
본 발명의 또 다른 구현예는 항암요법(화학요법 또는 방사선 요법)을 받는 인간 대상체에서 호중구 감소증을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하되, 여기서 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF가 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 투여된다.
본 발명의 또 다른 구현예는 항암요법(화학요법 또는 방사선 요법)을 받는 인간 대상체에서 호중구 감소증을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하되, 여기서 지속성 G-CSF인 혼성 Fc 융합 G-CSF의 치료적 유효량이 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 피하(SC) 투여된다.
본 발명의 또 다른 구현예는 화학요법을 받는 인간 대상체에서 호중구 감소증을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공하되, 여기서 지속성 G-CSF인 혼성 Fc 융합 G-CSF의 치료적 유효량이 개선된 약동학적 특성, 예를 들어 페길레이션화된(PEGylated) G-CSF Neulasta®과 비교하여 증가된 혈청 반감기 및/또는 증가된 AUC 및 Cmax를 갖는 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 피하(SC) 투여된다.
용어 정의의 목록
하기 기술 및 청구범위에서, 하기 정의가 적용된다.
용어 '단백질'은 또한 '폴리펩티드'를 의미하며, 당업계에 잘 이해되는 바와 같이 천연 및/또는 비-천연 D- 또는 L-아미노산을 포함하는 아미노산 중합체를 지칭한다. G-CSF는 단백질 또는 폴리펩타이드로 지칭될 수 있다. 단백질은 펩티드 또는 이의 단편, 예를 들어 G-CSF의 단편을 지칭할 수 있다.
용어 'G-CSF'는 G-CSF 단백질, 및 그의 단편, 상동체 및 변이체를 의미한다. G-CSF 변이체의 한 형태는 미국 특허 제5,214,132호에 개시된 바와 같은 G-CSF 뮤테인이며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 인용된다. 천연 G-CSF와 동등하거나 또는 그 보다 우수한 특성을 가지며 G-CSF와 동일한 용도를 갖는 GCSF 뮤테인은 1, 3, 4, 5, 17번 위치를 제외하고는 천연 인간 G-CSF와 동일한 아미노산 서열을 가지되, 여기서 천연 G-CSF 아미노산 대신에 상기 뮤테인은 각각 Ala, Thr, Tyr, Arg 및 Ser을 갖는다. G-CSF 단백질은 자연 발생 변형 예를 들어 글리코실화를 포함할 수 있지만, 바람직한 형태는 글리코실화되지 않고 박테리아 세포로부터 발현된다. G-CSF는 인간, 마우스, 래트 등을 포함한 모든 종에서 유래할 수 있다. G-CSF의 바람직한 형태는 인간에 사용하기 위한 인간 G-CSF이다. G-CSF는 재조합 또는 천연일 수 있고, 당업계에 잘 이해되는 바와 같이 천연 및/또는 비-천연 D- 또는 L-아미노산을 포함할 수 있다.
용어 '치료적 유효량'은 G-CSF 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 원하는 치료 효과를 생성하도록 투여되는 활성제의 양을 지칭한다. "원하는 치료 효과"는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 1) 질환 또는 병태와 관련된 증상(들)의 개선; 2) 질환 또는 병태와 관련된 증상의 발병 지연; 3) 치료의 부재와 비교하여 증가된 수명; 4) 치료의 부재에 비해 더 나은 삶의 질.
용어 '주기'는 연속적인 화학요법 주기에서 화학요법제를 처음 투여한 날 사이의 기간을 의미한다.
본원에 사용된 용어 '대상체'는 인간 또는 인간이 아닌 동물을 포함한다. 바람직한 구현예에서, 대상체는 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 본 발명에서, '대상체', '환자' 및 '개인'이라는 용어는 혼용될 수 있다.
용어 '항암요법'은 대상체에서 암을 중지 또는 예방하기 위한 치료를 의미한다. 바람직한 구현예에서, 암을 제거하는 지점까지 암 퇴행을 촉진하기 위해 항암 요법으로서 화학요법 또는 방사선 요법이 사용된다.
용어 'Cmax'는 혈청 농도-시간 경과 프로파일에서 직접 취한 최대 관찰 농도를 나타낸다. 달리 명시되지 않는 한 'Cmax'는 기준선 조정 농도, 즉 각 개별 시점(Ct-Co)에서 개별 기준선을 뺀 농도를 기준으로 얻은 Cmax를 나타낸다.
용어 'tmax'는 관찰된 농도 대 시간 데이터에서 직접 얻은 최대 혈청 농도까지의 시간을 나타낸다.
용어 약물의 't1/2' 또는 '반감기'는 혈액 또는 혈청 내 농도가 절반으로 감소하는데 걸리는 시간이다.
용어 'AUC(Area Under the Curve)' 또는 '곡선 아래 면적'은 통상의 의미, 즉 시험 분자가 대상체에게 투여된 혈청 농도 대 시간 곡선 아래의 면적으로 사용된다. 실험 농도 시점이 결정되면 AUC는 GraphPad Prism 3.01과 같은 컴퓨터 프로그램으로 편리하게 계산할 수 있다.
용어 'AUClast'는 선형 업/로그 다운 사다리꼴 합계에 의해 계산된 시간 제로 내지 최종 측정가능한 농도까지의 곡선 아래의 면적을 나타낸다.
용어 'AUEClast'는 시간 제로로부터 정량화 가능한 효과의 마지막 지점까지의 효과-시간 곡선 아래의 면적을 나타낸다.
용어 'AUCinf'는 선형 업/로그 다운 사다리꼴 합산에 의해 계산되고 제거율 상수로 나눈 마지막 정량화 가능한 농도를 더하여 무한대로 외삽된 시간 제로로부터 무한대로 외삽된 곡선 아래의 면적을 나타낸다.
용어 '평균'은 달리 명시되지 않는 한 약동학적 값의 산술 평균값을 나타낸다.
용어 'AE(adverse event)' 또는 '이상 사례'는 의약품을 투여한 환자 또는 임상 조사 환자에서 발생하는 모든 부적절한 의학적 사건을 의미하며 반드시 이 치료와 인과 관계가 있어야 하는 것은 아니다.
본 발명이 용이하게 이해되고 실질적인 효과를 얻을 수 있도록, 바람직한 구현예는 첨부된 도면을 참조하여 예로서 설명될 것이다.
도 1은 IgG4의 힌지 도메인과 IgG4의 Fc 도메인의 혼성화된 형태의 동종이량체 구조를 갖는 융합 인간 G-CSF 단백질인 GX-G3의 단백질 구조이다.
도 2는 수컷 래트(male rat, 또는 수컷 쥐)에게 100 ㎍/kg의 Neutrogin®, 100 및 500 ㎍/kg의 GX-G3의 용량으로 IV 투여한 후의 세미-로그 혈청 농도-시간 프로파일이다.
도 3은 수컷 래트에 100 ㎍/kg의 Neutrogin®, 및 50, 100 및 500 ㎍/kg의 GX-G3의 용량으로 SC 투여한 후의 세미-로그 혈청 농도-시간 프로파일이다.
도 4는 호중구 감소증 유발 수컷 래트에 100 ㎍/kg의 Neutrogin® 및 Neulasta®, 25 및 100 ㎍/kg의 GX-G3의 용량으로 SC 투여한 후의 세미-로그 혈청 농도-시간 프로파일이다.
도 5는 정상 수컷 래트에게 100 ㎍/kg의 Neutrogin® 및 Neulasta®, 25 및 100 ㎍/kg의 GX-G3의 용량으로 SC 투여한 후의 세미-로그 혈청 농도-시간 프로파일이다.
도 6은 호중구 감소증 유발 및 정상 수컷 래트에 100 ㎍/kg의 Neutrogin® 및 Neulasta®, 25 및 100 ㎍/kg의 GX-G3의 용량으로 SC 투여한 후의 AUClast이다.
도 7은 정상 래트의 ANC 수치에 대한 GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta®의 IV 주사 효과를 나타낸다. [동물에게 GX-G3와 Neutrogin®, Neulasta®를 0일 동안 1일 1회 정맥 주사하였다. 각 점은 평균 SD를 나타낸다(n=3). 비히클과 확연히 다름(*p<0.05, **p<0.01)]
도 8은 정상 래트의 ANC 수치에 대한 GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta®의 SC 주사 효과를 보여준다. 동물에게 0일 동안 하루에 1회 GX-G3 및 Neutrogin®, Neulasta®를 피하 주사하였다. 각 점은 평균 SD를 나타낸다(n=5). 비히클과 상당히 다름(*p<0.05, **p<0.01).
도 9는 호중구 감소증 래트의 ANC에 대한 GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta®의 효과를 보여준다. 동물에게 GX-G3 및 Neutrogin®, Neulasta®를 0일 동안 하루에 1회 피하 주사하였다. 각 점은 평균 SD를 나타낸다(n=5). 비히클과 상당히 다름(*p<0.05, **p<0.01).
도 10은 GX-G3의 비임상 안전성 시험 결과(실시예 5-8)를 요약한 것이다.
도 11은 GX-G3의 비임상 독성 시험 결과(실시예 9-17)를 요약한 것이다.
도 12는 GX-G3의 단일 피하 투여 후 평균 혈청 GX-G3 농도 대 시간 플롯을 나타낸다. 도 12에서, 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다(좌하단: 선형 스케일, 우상단: 로그-선형 스케일).
도 13은 페그필그라스팀(pegfilgrastim) 6 mg의 단일 피하 투여 후 평균 혈청 페그필그라스팀 농도 대 시간 플롯을 나타낸다. 도 13에서, 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다(좌하단: 선형 스케일, 우상단: 로그-선형 스케일).
도 14는 GX-G3의 용량-정규화된 Cmax(상단) 및 AUClast(하단)의 박스 및 위스커 플롯을 나타낸다. 도 14에서, 기호, 수평선, 박스 높이 및 위스커는 각각 개별 값, 용량 그룹 중앙값, 사분위수 범위 및 최소값 및 최대값을 나타낸다.
도 15는 GX-G3, 페그필그라스팀 및 위약의 단일 피하 주사 후 평균 WBC(백혈구)-시간 곡선을 나타낸다. 도 15에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
도 16은 GX-G3, 페그필그라스팀 및 위약의 단일 피하 주사 후 신체에 대한 최대 WBC(상단) 및 총 WBC 노출(하단)을 나타낸다. 도 16에서, 기호, 수평선, 박스 높이 및 위스커는 각각 개별 값, 용량 그룹 중앙값, 사분위수 범위 및 최소값 및 최대값을 나타낸다.
도 17은 GX-G3, 페그필그라스팀 및 위약의 단일 피하 주사 후 평균 ANC(절대 호중구 수)-시간 곡선을 나타낸다. 도 17에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
도 18은 GX-G3, 페그필그라스팀 및 위약의 단일 피하 주사 후 신체에 대한 최대 ANC(상단) 및 총 ANC 노출(하단)을 나타낸다. 도 18에서, 기호, 수평선, 박스 높이 및 위스커는 각각 개별 값, 용량 그룹 중앙값, 사분위수 범위 및 최소값 및 최대값을 나타낸다.
도 19는 사이클 1(FAS)에 대한 평균 ANC 시간 프로파일을 나타낸다. 도 19에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
도 20은 사이클 2(FAS)에 대한 평균 ANC 시간 프로파일을 나타낸다. 도 20에서, 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 21은 두 사이클(FAS)에 대한 평균 ANC 시간 프로파일을 보여준다. 도 21에서, 오차 막대는 표준 편차를 나타낸다.
도 22는 사이클 1(PPS)에 대한 평균 ANC 시간 프로파일을 나타낸다. 도 22에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
도 23은 사이클 2(PPS)에 대한 평균 ANC 시간 프로파일을 나타낸다. 도 23에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
도 24는 GX-G3 및 페그필그라스팀(PPS)에 대한 평균 농도 대 시간 곡선을 나타낸다. 도 24에서, 오차 막대는 표준편차를 나타낸다.
상세한 설명
한 구현예는, 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF를 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 호중구 감소증을 예방하거나 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법을 제공한다.
상기 지속성 혼성 Fc 융합 G-CSF는 하기 일반식 (I)에 의해서 표시된다:
[일반식 (I)]
N'-G-Y-Z2-Z3-Z4-C'
상기 식에서,
G는 G-CSF이고;
N'는 폴리펩티드의 N-말단이고 C'는 폴리펩티드의 C-말단이며;
Y는 서열번호 2의 99번 내지 162번 위치의 아미노산 잔기 중 162번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 5 내지 64개의 연속된 아미노산 잔기(consecutive amino acid residues)를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 2의 163번 내지 199번 위치의 아미노산 잔기 중 163번 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 쪽으로 4 내지 37개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 3의 115번 내지 220번 위치의 아미노산 잔기 중 220번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 71 내지 106개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z4는 서열번호 3의 221번 내지 327번 위치의 아미노산 잔기 중 221번 위치의 아미노산 잔기로부터 C 말단 쪽으로 80 내지 107개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이다.
한 구현예에서, hyFc는 서열번호 4의 서열을 포함한다.
혼성 Fc 융합 G-CSF의 한 구체예는 서열번호 1의 아미노산 서열 아미노산 잔기 31 내지 449를 포함한다. 서열번호 1에서, 아미노산 잔기 1 내지 30은 신호 서열(signal sequence)이다. 혼성 Fc 융합 G-CSF의 구현예는 G-CSF-hyFc, GCSF-hFc, GX-G3 및 HyGrastim으로도 불린다(이하 GX-G3의 코드명을 사용함). 인간 G-CSF와 인간 hyFc가 융합된 융합 단백질인 GX-G3는 페그필그라스팀과 같은 지속형 집락 자극인자 제제를 목표로 개발되었다. 페그필그라스팀과 달리, GX-G3는 pAD15의 진핵생물 발현 벡터에 있는 G-CSF-hyFc 발현 유전자를 MCS(다중 클로닝 부위)에 삽입하여 제조되며 어떠한 콘쥬게이션 단계도 없이 얻어진다. 기존에 개발된 Fc 생성물 예를 들어 아바타세트(abatacept), 에타너셉트(etanercept), Fc-융합된 G-CSF 단백질과 달리, GX-G3에 사용되는 인간 Fc는, 혼성 Fc (hyFc)로 명명된, 혼성화된 형태의 인간 IgD-Fc 및 IgG4-Fc이다(Cox et al., 2014). GX-G3(도 1)은 분자식 C2072H3258N558O630S16인 838개 아미노산으로 구성된 이량체 단백질이다. 상기 아미노산 중에서, IgD 힌지 도메인의 30개의 아미노산, IgD CH2의 8개의 N-말단 산 및 107개의 아미노산은 IgG4 CH2 및 CH3의 C-말단 산을 구성한다. 9개의 디설파이드 결합 위치는 2개의 O-글리코실화 부위 및 2개의 N-글리코실화 부위를 갖는 GX-G3에서 확인되었다. 1개의 항체 Fc 부분 및 1개의 인간 G-CSF 분자를 각각 포함하는 2개의 분자 사슬의 동종이량체이다. GX-G3의 분자 크기는 98kDa이다.
일반적으로, 항체의 Fc는 인체에서 내피세포의 FcRn(신생아 Fc 수용체)에 결합하여 hyFc가 융합된 단백질의 재활용을 가능하게 하여 현저히 긴 반감기를 갖는 생성물을 생성한다(Strohl et al., 2015). hyFc 컨스트럭트에서 IgD의 힌지-CH2 도메인은 상당한 힌지 유연성을 갖지만 FcγR과 결합 친화력이 없어 항체-의존적 세포독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity; ADCC)을 유도하는 반면 hyFc에서 IgG의 CH2-CH3 도메인은 보체-의존적 세포독성(complement-dependent cellular cytotoxicity; CDC) 반응을 나타내지 않는다. 다른 Fc 융합제와 유사하게, GX-G3는 FcRn 결합 친화도 및 신장 클리어런스 감소로 인해 혈청 내에서 장기간 작용하는 특성을 가질 수 있을 것으로 예상된다. hyFc 플랫폼에는 돌연변이가 도입되지 않은 고유한 인간 G-CSF 아미노산 서열이 사용되었으며 hyFc의 lgD/lgG4 융합된 접합 부위가 노출되지 않은 영역에 묻혀 있어서 면역원성을 최소화한다. 결과적으로, 예상할 수 있는 바와 같이, GX-G3는 항체-의존적 세포 매개 세포독성(ADCC) 및 보체-의존적 세포성 세포독성(CDC) 반응 없이 장기간 작용하는 특성 및 낮은 면역원성을 나타낸다(Kim, An, Lim, Yang, & Jeong, 2016).
GX-G3는 pAD15의 진핵생물 발현 벡터에 있는 G-CSF-hyFc 발현 유전자를 MCS(multi-cloning site)에 삽입하여 제조하였다. 다른 G-CSF 제제와 달리, GX-G3 제조에 사용된 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary; CHO) DG44였다. 융합된 G-CSF 및 항체 Fc 부분을 별도로 생산하고 화학반응으로 결합시키는 대신에 하나의 단계에서 융합된 G-CSF-hyFc를 생성하는 것을 허용하는 특수한 생산 방법의 결과로서, GX-G3은 다른 G-CSF 제제보다 구조적 안정성이 우수하고 생산 비용이 저렴하다.
Fc 융합 단백질, 예를 들어 GX-G3의 경우, 체내 내피세포의 FcRn 수용체(신생아 Fc 수용체)와 Fc영역의 결합을 통한 재순환에 의해 생체 내에서 긴 반감기를 나타낸다.
또한, 기존의 다른 G-CSF 제제와 달리, GX-G3의 hyFc 영역은 혼성 형태이고; 항체 매개된 세포독성을 유발하는 높은 힌지 유연성을 갖는 FcγR의 결합 친화도를 갖지 않은 힌지-CH2 영역, 및 보전 활성 반응을 갖지 않는 FcRn(신생아 Fc 수용체)의 결합 친화도로 인한 혈청에서의 긴 반감기를 갖는 IgG4의 CH2-CH3 영역이 소수성 형태로 설계된다. 이러한 특성은 ADCC와 CDC를 감소시킴으로써 활성화를 증가시켰고 면역원성을 감소시켰다. GX-G3에 의한 면역원성을 감소시키기 위해서, 천연 인간 G-CSF 유전자 염기서열만이 hyFc용으로 사용되었고, 그 분자는 부작용을 일으킬 수 있는 돌연변이는 함유하지 않았다.
또한, 별도로 제작된 G-CSF 및 Fc영역을 결합하는 대신에, 발현 벡터로서 pAD15를 사용하여 CHO DG44 숙주세포로부터 함께 발현되는 제작방법을 적용하여 구조의 안정성을 증가시켰다.
본 발명의 약학 조성물에서, hyFc 플랫폼 및 G-CSF는 인간화된 유기체의 아미노산 서열을 갖는다. IgD와 IgG 사이의 융합물로서 추가 융합 반응은 사용되지 않으며, G-CSF와 면역글로불린 부분 사이에 단일 유전자 코드 및 단일 전사-번역 반응을 통해 제공된다. G-CSF와 hyFc 플랫폼 사이의 펩타이드 결합은 프롤린-아르기닌을 통해 이루어진다. hy-Fc 융합된 G-CSF 단량체의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다. 신호, G-CSF, N-말단 및 hyFc 서열은 해당 형식으로 표시된다. hyFc 융합된 G-CSF의 개략적인 단백질 구조는 아래와 같다.
Figure pct00001
암 화학요법을 받는 환자는 일반적으로 치료 후 중등도 내지 중증 호중구 감소증을 나타낸다. G-CSF-hyFc 변이체는 호중구 감소증을 예방하거나 절대 호중구 수 회복까지의 시간과 호중구 감소증의 지속기간을 감소시켜서 감염 위험에 노출되는 기간을 심각하게 줄이는데 효과적이다. 따라서, 호중구 감소증의 정도 및 기간은 본 발명의 구현예의 방법에 따라 치료적 유효량의 G-CSF-hyFc의 투여에 의해 상당히 예방되거나 감소된다.
한 구현예에서, 환자는 예를 들어 절대 호중구 수가 약 1.0×109/L 미만, 또는 약 0.5×109/L 미만인 중등도 내지 중증의 호중구 감소증을 앓고 있다. 한 구현예에서, 환자는 순환 호중구가 불충분하다.
한 구현예에서, 투여량은 혼성 Fc 융합 G-CSF의 치료 유효량이 약 200 ㎍/kg 내지 400 ㎍/kg, 또는 약 250 ㎍/kg 내지 350 ㎍/kg이 되도록 환자의 체중에 따라 결정된다.
한 구현예에 따르면, 혼성 Fc 융합 G-CSF는 약 200 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 210 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 220 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 230 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 240 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 250 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 260 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 270 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 280 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 290 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 300 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 310 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 320 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 330 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 340 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 350 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 360 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 370 ㎍/kg 또는 그 초과, 약 380 ㎍/kg 또는 그 초과, 또는 약 390 ㎍/kg 또는 그 초과, 또는 약 400 ㎍/kg의 용량으로 투여된다.
또 다른 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 약 250 ㎍/kg 이상, 약 260 ㎍/kg 이상, 약 270 ㎍/kg 이상, 약 280 ㎍/kg 이상, 약 290 ㎍/kg 이상, 약 300 ㎍/kg 이상, 약 310 ㎍/kg 이상, 약 320 ㎍/kg 이상, 약 330 ㎍/kg 이상, 약 340 ㎍/kg 이상, 또는 약 350 ㎍/kg의 용량으로 투여된다.
한 구현예에 따르면, G-CSF 치료를 필요로 하는 대상체는 항암 치료를 받았거나 받고 있는 암 환자일 수 있다. 예를 들어 상기 대상체는 방사선 요법, 화학요법 또는 수술 중 적어도 하나를 받았거나 받고 있을 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 200 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 210 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 220 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 230 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 240 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 250 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 260 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 270 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 280 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 290 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 300 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 310 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 320 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 330 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 340 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 350 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 360 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 370 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 380 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 390 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 주기에서 1회 약 400 ㎍/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 화학요법 주기에서 1회 약 200 ㎍/kg 내지 400 ㎍/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 대안의 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 2, 3, 4 이상의 주기마다 1회 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 화학요법 주기에서 1회, 약 250 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 260 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 270 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 280 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 290 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 300 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 310 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 320 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 330 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 340 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 350 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 360 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 370 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 약 380 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg, 또는 약 390 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량으로 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 후에 화학요법 주기에서 1회, 약 250 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 260 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 270 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 280 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 290 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 300 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 310 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 320 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 약 330 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg, 또는 약 340 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg의 용량으로 투여될 수 있다.
한 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF 또는 GX-G3을 포함하는 약학 조성물은 비경구, 근육내, 피하, 안과, 정맥내, 복강내, 피내, 안와내, 뇌내, 두개내, 척수내, 뇌실내, 척추강내, 조직내 또는 종양내에 투여될 수 있다. 한 구현예에서, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF 또는 GX-G3을 포함하는 약학 조성물은 비경구 또는 피하 투여될 수 있다.
상기 혼성 Fc 융합 G-CSF(즉, G-CSF-hyFc 또는 hyFc-G-CSF)는 하나 이상의 부형제와 함께 제형화될 수 있다. 활성 융합 단백질은 약학적으로 허용가능한 완충액과 조합될 수 있고, 허용가능한 안정성 및 비경구 투여와 같은 투여에 허용되는 pH를 제공하도록 pH를 조정할 수 있다.
한 구현예에 따르면, 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF를 위한 제형은 완충액 및/또는 계면활성제 및/또는 안정화제 및/또는 유기 용매를 포함한다. 한 구현예에 따르는 제형은, (i) 치료적 유효량의 혼성 Fc 융합 G-CSF, (ii) 완충 시스템, (iii) 적어도 하나의 안정화제 및 (iv) 적어도 하나의 계면활성제, 및 (v) 선택적으로 유기 용매인 프로필렌 글리콜을 포함하는 안정한 형태의 혼성 Fc 융합 G-CSF,를 포함하되, 상기 제형의 pH는, 국제출원 제PCT/TR2018/050208호(국제공개공보 제WO2019/212429호)에 기술된 바와 같은 3.8 내지 6.5, 바람직하게는 4.0 내지 4.6이며, 상기 국제출원은 본원에서 참조로 인용된다.
본 발명은 하기 비-제한적 실시예에 의해서 보다 구체적으로 기술된다.
실시예
먼저, 비-임상 및 임상 연구에 사용된 시험 생성물 및 비교 제품이 기술된다.
시험 제품
Figure pct00002
GX-G3는 pAD15의 진핵생물 발현 벡터에서 G-CSF-hyFc 발현 유전자를 MCS(multi-cloning site)에 삽입하여 제조하였다. GX-G3 제조에 사용된 숙주 세포는 중국 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary; CHO) DG44였다. IgG4의 Fc 도메인과 IgG의 힌지 도메인이 혼성화된 형태의 동종 이량체 구조를 갖는 인간 G-CSF 단백질이다. GX-G3는 멸균, 무색, 투명하고 방부제가 없는 용액으로 1회용 주사 바이알 제형으로 안정화된 제형으로 공급된다.
비교 제품
참조 제품 Neutrogin®(Filgrastim)을 비교 제품으로 사용하였다. Neutrogin®(Pharmaceutical, Co., Ltd)은 글리코실화된 재조합 인간 과립구-집락 자극 인자이다. 상기 제품은 바이알(33.6×106 IU(263 mcg) Neutrogin) 중의 무색 분말이며 앰플(1 mL) 중의 용매이다. 화학요법 과정에서 매일 투여되는 상기 제품의 용법을 기반으로 한 비임상 연구에만 선택되었다. 비교 제품으로서 참조 제품 Neulasta®(Pegfilgrastim)를 사용하였다. 상기 제품은 무색 투명한 액체이다. Neulasta®(Amgen)는 6 mg/0.6 mL 용량(단일 사전 충전 주사기)으로 1회 투여되고 세포독성 화학요법 후 적어도 24시간에 제공된 각각의 세포 화학요법 주기동안 권고된 상기 제품의 용법을 기반으로 한 비-임상 및 임상 연구용으로 선택되었다. 상기 농도는 시험 제품의 의도된 농도와 정확히 상응한다.
A. 비-임상 연구
GX-G3의 효능, 안전성 약리학 및 독성학에 대한 비-임상 연구는 다음과 같다:
실시예 1
비-임상 연구 - 효능 시험: 정상 래트의 생체이용률 평가
본 연구의 목적은 GX-G3를 정상 래트에게 1회 정맥 및 피하 투여했을 때의 흡수 및 생체이용률을 평가하는 것이다.
본 연구에서, 시험 제품 GX-G3와 Neutrogin®을 래트(240-260g, 약 8주령, 수컷)에게 정맥 및 피하 주사하고 매번 혈액 샘플을 채취하였다. 혈액 수집 시간 간격은, IV의 경우 투여 전(0), 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 및 336시간으로, SC 주사의 경우 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 및 336시간으로 설정되었다. 연구 그룹의 조성은 하기 표 1에 나타내었다.
표 1
Figure pct00003
분리된 혈청을 이용하여 생물학적 분석을 수행하였고, PhoenixTM WinNonlin®을 이용하여 약동학적 파라미터를 계산하였다. 각 시험 그룹의 약동학적 결과를 표 2에 기술하였고, 그래프를 도 2 및 3에 나타내었다. 연구 결과, GX-G3 100 ㎍/kg의 생체이용률은 4%이고, GX-G3 500 ㎍/kg의 생체이용률은 16%인 것으로 밝혀졌다.
표 2
Figure pct00004
실시예 2
비-임상 연구: 래트에서 단일 용량 피하 약동학적 연구
이 연구의 목적은 GX-G3를 호중구 감소증 유발 모델 래트 및 정상 모델 래트에 피하 투여했을 때의 약동학을 평가하는 것이다.
본 연구에서는 시험 제품 GX-G3, 비교 제품 Neutrogin® 및 Neulasta®을 호중구 감소증 유발 모델 래트(240-260g, 약 8주령, 수컷) 및 정상 모델 래트(240-260g, 대략 8주령, 수컷)에 1회 피하주사하였고, 이어서 매번 혈액 샘플을 수집하였다. 질환 모델 연구 그룹의 경우 약물 주입 전날 사이클로포스파미드(CPA) 50 mg/kg/5mL를 복강내 투여를 수행하였다. 시험 제품의 투여량은 100 ㎍/kg으로 하였으며, 비교 제품인 Neulasta®의 임상적 용량과 동일한 질량인 100 ㎍/kg으로 설정하였다. 추가 용량 의존성을 관찰하기 위해 25 ㎍/kg, ¼ 용량으로 동시에 설정하였다. 채혈 간격은 질환 모델 래트의 경우 사전 용량(pre-dose)(0), 1, 4, 8, 12, 24, 36시간, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11, 14일(5마리 동물의 크로스-매칭 혈액 샘플); 및 정상 모델 래트의 경우 사전 용량(0), 0.5, 1, 2, 4, 8, 12, 24 및 36시간, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 11 및 14일로 설정되었다. 상기 연구 그룹의 조성을 하기 표 3에 나타내었다:
표 3
Figure pct00005
분리된 혈청을 이용하여 생물학적 분석을 수행하였고, PhoenixTM WinNonlin®(ver. 6.0, Pharsight)을 이용하여 약동학적 파라미터를 계산하였다. 각 시험 그룹의 약동학적 값의 결과는 표 4와 같으며 그래프는 도 4 및 도 5에 나타내었다.
연구 결과, 시험 제품의 AUClast는 도 6과 같이 정상 모델에 비해 질환 모델에서 유의한 증가를 보였다. 그 이유는 G-CSF 수용체 매개 제거 작용이 질환 모델에 비해 정상 래트에서 활성인 것으로 추론된다. Cmax, tmax 및 t1/2는 질환 모델과 정상 모델 간에 유사하였다.
표 4
Figure pct00006
실시예 3
비-임상 연구 - 효능 시험: 정상 래트에서 단일 용량 피하 및 정맥 내 약력학적 연구
이 연구의 목적은 GX-G3를, 정상 모델 래트에 피하 및 정맥 투여했을 때의 약력학(pharmacodynamics)을 평가하는 것이다.
이 효능 연구에서, 상기 시험 제품 GX-G3, 비교 제품 Neutrogin® 및 Neulasta®를 정상 모델 래트(240-260g, 대략 8주령, 수컷)에게 1회 피하 및 정맥 주사한 후 혈액학적 수준이 평가 지표용으로 사용되었다. 정맥주사 연구에서, 시험 물질인 GX-G3의 용량은 Neulasta®의 임상용량인 100 ㎍/kg과 동일한 질량으로 설정하였다. 피하주사 연구의 경우, GX-G3의 용량 의존성을 조사하기 위해, 2배씩 증량하여 12.5, 25, 50, 100 ㎍/kg으로 설정하였고, 비교 제품은 최대 용량인 100 ㎍/kg으로 설정하였다. 채혈 간격은 정맥 주사용 사전 용량(0), 3, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 120, 144, 168시간(3마리 동물에 의한 크로스 혈액 샘플링); 및 피하 주사를 위한 사전 용량(0), 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11 및 14일로 설정되었다. 상기 연구 그룹의 조성을 하기 표 5에 나타내었다:
표 5
Figure pct00007
분리된 혈청을 이용하여 생물학적 분석을 수행하였고, 혈액학적 파라미터는 PhoenixTM WinNonlin®(ver. 6.0, Pharsight)을 사용하여 계산하였다. 래트에서 GX-G3, Neutrogin®, Neulasta® 투여의 효과를 표 6에 나타내었으며 그래프는 도 7 및 8에 표시된다.
표 6
Figure pct00008
GX-G3, Neutrogin®, Neulasta®를 래트에 1회 정맥 주사한 결과 ANC의 증가가 관찰되었다. ANC는 시험물질 주입 3시간 후부터 증가하기 시작하여 주입 시작 후 1-2일째에 최대치를 나타내다가 감소하는 경향을 보였다. 또한 모든 시험 제품의 ANC는 비히클 그룹에 비해 유의한 증가를 보였다. GX-G3의 ANC의 AUEClast는 Neutrogin®에 비해 유의한 증가를 보였고, GX-G3와 Neulasta® 간에는 유의한 차이가 없었다.
GX-G3, Neutrogin®, Neulasta®를 래트에 1회 피하주사한 결과 ANC의 증가가 관찰되었다. 시험물질 주입 후 1일째부터 ANC가 증가하기 시작하여 주입 시작 후 1-2일째에 최대치를 나타내다가 감소하는 경향을 보였다. 또한, 모든 시험 제품의 ANC는 비히클 그룹(G1)에 비해 유의한 증가를 보였다. GX-G3 12.5, 25, 50 및 100 ㎍/kg의 ANC는 비히클 그룹에 비해 용량 의존적 증가를 보였다. 동일한 질량을 주입한 GX-G3, Neutrogin®, Neulasta® 100 ㎍/kg에서 GX-G3의 ANC의 AUEClast는 Neutrogin® 및 Neulasta®에 비해 유의한 증가를 보였다.
그 결과를 종합해 볼 때, GX-G3의 정맥주사 및 피하주사 혈액학적 수준는 정상모델 래트에서 비히클 그룹 및 Neutrogin®에 비해 유의한 증가를 보였고, 피하주사 그룹에서만 Neulasta®에 비해 유의한 증가를 보였다.
연구 결과, GX-G3 정맥주사 시 Neutrogin® 대비 약 2.3배, Neulasta® 대비 0.9배의 효과를 보였다. 피하주사한 결과, GX-G3의 용량 의존적 반응을 확인하였고, GX-G3는 동일한 질량에서 Neutrogin® 대비 약 3.5배, Neulasta® 대비 약 1.8배 높은 효과를 나타냄을 확인하였다.
실시예 4
비-임상 연구 - 효능 테스트: 화학 요법으로 유도된 호중구 감소증 래트에 대한 단일 용량 피하 약력학적 연구
이 연구의 목적은 GX-G3를 호중구 감소증 유발 모델 래트에 피하 투여했을 때의 약력학을 평가하는 것이다. 이 효능 연구에서, 시험 제품 GX-G3, 비교 제품 Neutrogin® 및 Neulasta®을 호중구 감소증 유발 래트(240-260g, 대략 8주령, 수컷)에 1회 피하 주사한 후의 혈액학적 수준을 평가 지표용으로 사용하였다.
질환 모델에서 GX-G3의 용량 의존성을 조사하기 위해 25, 50, 100 ㎍/kg으로 2배 증가하여 설정하였으며, 최대 용량은 비교 약물인 Neulasta®의 임상 예상 용량과 동일하게 설정하였다. 호중구 감소증 유발 모델링 그룹의 경우 약물 주입 전날 사이클로포스파미드(cyclophosphamide; CPA) 80 mg/kg/5 mL를 복강내 투여하였다. 채혈 간격은 CPA 투여 후 사전 용량(0), 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 11, 14일로 설정하였다. 연구 그룹의 조성은 표 7에 나타내었다.
표 7
Figure pct00009
혈액학적 수준의 분석은 PhoenixTM WinNonlin®(ver. 6.0, Pharsight)을 사용하여 수행되었다. 호중구 감소증 래트에서 GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta® 투여의 효과는 표 8에 나타내었고 그래프는 도 9에 표시된다.
표 8
Figure pct00010
도 9의 비히클 그룹(G2)과 같이 사이클로포스파미드(CPA) 80 mg/kg을 1회 복강 주사한 결과, ANC 래트로 확인되었고, CPA 주입 후 1일째에 GX-G3, Neutrogin®, Neulasta®를 1회 주입하였으며, 주입 시작 후 5일째(CPA 주입 5일째)부터 ANC의 증가가 나타나기 시작하였다. GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta®는 주사 후 7-9일째에 최대값을 보인 후 감소하는 패턴을 보였다.
GX-G3, Neutrogin® 및 Neulasta®의 모든 용량에서 ANC는 비히클 그룹과 비교하여 CPA 주사 2일 후에 유의한 증가를 보였고 증가된 ANC는 11-14일에 정상화되었다.
GX-G3 100 ㎍/kg 그룹의 ANC 곡선에 대한 AUEClast는 동일한 질량의 Neutrogin® 그룹보다 약 3.3배, Neulasta® 그룹보다 약 2.1배 더 큰 효과를 보였다. GX-G3 25, 50 및 100 ㎍/kg에서 GX-G3 ANC의 AUEClast는 용량 의존적으로 증가하였다. Neulasta® 100 ㎍/kg에 대한 ANC의 AUEClast 및 Emax는 GX-G3 25 ㎍/kg에서 동등한 효과를 보였고(약 1회), 호중구 감소증에 대한 회복 기간은 GX-G3 25 ㎍/kg에서 유사한 기간을 보였다.
GX-G3, Neutrogin®, Neulasta® 1회 피하주사 후 2주간 관찰한 결과, GX-G3(ANC)의 혈액학적 수준은 CPA로 유도된 호중구 감소증 래트에서 비히클 그룹에 비해 유의하게 증가하였으며, 동일한 질량의 Neutrogin® 및 Neulasta®에 비해 약 3.3배 및 2.1배 더 큰 효능(AUClast 및 ANC 곡선)과 ¼ 용량(25 ㎍/kg)에 비해 약 1배 등가 효과를 나타냈다. 동일한 질량에서 GX-G3의 호중구 감소증의 지속기간은 Neurogin® 대비 약 3.3일, Neulasta® 대비 약 1.3일의 감소효과를 보였다.
실시예 5
비-임상 연구 - 안전성 약리학: CHO 세포에서 발현되는 복제된 hERG 채널 전류에 대한 효과
이 연구의 목적은 전체-세포 패치 클램프 방법(whole-cell patch clamp method)을 사용하여 CHO 세포에서 발현되는 클로닝된 hERG 채널(cloned hERG channel)에 대한 hERG 전류 분석법을 이용하여 심장 재분극에 대한 GX-G3의 잠재적 효과를 평가하는 것이다. 이 연구는 긴 QT 증후군에 대한 시험 항목의 가능성을 평가하기 위해 수행되었다.
hERG 전류를 안정화시킨 후, 정상 타이로이드 용액(normal Tyrode solution)(비히클 대조군)에서 0.3% GX-G3 제형 완충액(v/v)동안 런-다운 속도(run-down rate)를 기록하고 GX-G3를 5분 동안 관류시켰다. 비히클 제어 관류시 hERG 전류는 약 2.7%로 억제되었고, GX-G3 농도 6 ㎍/mL, 30 ㎍/mL 및 60 ㎍/mL 관류시 hERG 전류는 각각 대략 1.5, 4.6 및 2.4%로 억제되었다. GX-G3는 비히클 제어의 런-다운 비율과 비교하여 모든 그룹에서 통계적으로 유의하지 않았다. 동일한 조건에서 양성 대조군인 E-4031(100nM)의 hERG 채널 전류는 4개의 세포에서 79.4% 억제되었다.
따라서, GX-G3는 60 ㎍/mL까지 hERG 채널 전류의 억제에서 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 중국 햄스터 난소(CHO) 세포에서 발현되는 복제된 hERG 채널에 대한 비히클 대조군, GX-G3 및 E-4031(양성 대조군)의 효과를 표 9에 나타내었다.
표 9
Figure pct00011
실시예 6
비-임상 연구 - 안전성 약리학: 변형된 어빈 시험(Modified Irwin's test) 및 래트의 체온 연구
이 연구의 목적은 GX-G3 투여 후 래트의 신경 행동(변형된 어빈 시험) 및 체온에 대한 GX-G3의 효과를 평가하는 것이다.
이 연구에서, GX-G3는 래트의 신경 행동 기능(운동, 꼬리 올리기, 떨림, 경련, 복부 긴장, 강직, 견인, 교정(righting), 반사, 귓바퀴 반사, 입모, 피부 착색, 호흡률, 눈꺼풀, 안구 돌출, 눈물 분비, 타액 분비, 설사, 사망 및 놀람 반사) 및 체온에 변화를 일으킬 가능성에 대해 평가되었다. 래트(240-260g, 대략 8주령)에 각각 0(비히클), 1, 3 및 10 mg/kg의 용량 수준으로 GX-G3 용량을 피하 투여하였다. 신경 행동 관찰 및 체온 측정을 투여 전 및 투여 후 2, 4, 8, 24 및 48시간에 기록하였다.
GX-G3의 단일 피하 용량 10 mg/kg까지 남성과 여성 모두에서 신경 행동 기능에 대한 유의한 변화가 관찰되었다.
1 mg/kg 치료 그룹에서 수컷 래트의 2시간 및 4시간 시점에서 체온이 증가하였다(2시간: 38.1±0.3℃ 내지 38.5±0.2℃, 4시간: 37.8±0.2℃ 내지 38.3±0.2℃). 그러나 이러한 체온의 변화는 비히클 대조군(37.5 내지 38.8℃)의 개인차 범위 내에 있고 용량 의존적이지 않았기 때문에 이러한 증가는 시험물질과 관련된 것으로 고려되지 않았다. 다른 치료 그룹은 모든 시점에서 비히클 대조군과 비교하여 체온 변화가 없었다.
결론적으로, GX-G3의 피하 투여는 래트에서 10 mg/kg까지의 신경 행동 기능 및 체온에 영향을 미치지 않았다.
실시예 7
비-임상 연구 - 안전성 약리학: 단일 피하 투여 후 래트의 호흡 기능 연구
이 연구의 목적은 GX-G3의 단일 피하 투여 후 래트의 호흡수, 1회 호흡량 및 분당 부피에 대한 GX-G3의 효과를 평가하는 것이다.
래트(240-260g, 대략 8주령, 수컷)에게 각각 0(비히클), 1, 3 및 10 mg/kg의 용량 수준에서 GX-G3의 용량을 피하 투여하였다. 호흡 기능 파라미터는 투여 전과 투여 후 2, 4, 8, 24 및 48시간에 기록되었다.
GX-G3의 단일 피하 용량은 최대 10 mg/kg의 시험된 그룹에서 임의의 시점에서에서의 호흡 속도, 1회 호흡량 및 분당 호흡량에 유의한 변화를 일으키지 않았다. 결론적으로, GX-G3의 단일 피하 투여는 래트에서 10 mg/kg 이하의 호흡 기능에 영향을 미치지 않았다.
실시예 8
비-임상 연구 - 안전성 약리학: 원격 측정을 사용한 수컷 시노몰구스 원숭이(Cynomolgus Monkey)의 심혈관계에 대한 단일 피하 투여의 효과
이 연구의 목적은 원격 측정법(telemetry)을 이용하여 수컷 시노몰구스 원숭이에서 심혈관계(혈압, 심박수 및 심전도, ECG)에 대한 GX-G3의 피하 용량 효과를 관찰하고 조사하는 것이다.
GX-G3는 심혈관계에 대한 안전성 약리학적 효과를 조사하기 위해 0(비히클), 1 및 3 mg/kg의 용량 수준으로 수컷 사이노멀거스 멍키에게 단일 피하 투여되었다. 비히클 대조군(V.C) 투여 3일 후, 동일한 동물에 1 mg/kg(T1)을 투여하였다. 21일의 세척 간격으로 혈액학적 분석에서 호중구 정상화를 확인한 후 동물에게 3 mg/kg(T2)을 투여하였다. 이후, 혈압, 심박수 및 ECG는 투여 전과 투여 후 2, 6, 24, 72시간(3일), 168시간(7일) 및 312시간(13일)에 원격 측정법을 이용하여 측정하였다.
GX-G3 투여 후 호중구 변화를 표 10 및 11에 나타내었다. 그 결과에 따르면 모든 투여군에서 각 측정시 수축기, 이완기, 평균 혈압 및 심박수에서 비히클 대조 그룹에 비해 유의한 변화가 관찰되지 않았다. PR, QRS, RR, QT 및 QTcF 간격의 유의한 변화는 비히클 대조 그룹과 비교하여 다른 투여 그룹에서 각 측정 시간에서 발견되지 않았다. ECG 파형 분석에서, 모든 그룹에서 부정맥과 같은 비정상적인 ECG 파형은 없었다. 임상 증후 관찰에서, 비히클 대조 그룹을 포함한 투여 그룹에서 심혈관 평가에 영향을 미치는 임상 증후는 없었다.
혈액학적 분석 결과, 투여 후 20일째에 호중구가 증가하여 투여 전과 동일한 수준으로 회복되었다. 이러한 결과를 감안할 때 수컷 시노몰구스 원숭이에서 GX-G3 3 mg/kg 미만의 단일 피하 투여로 인해 혈압, 심박수 및 ECG 파형을 포함한 심혈관 기능에 대한 약리학적 효과는 없었다.
표 10
Figure pct00012
표 11
Figure pct00013
안전성 약리학적 시험에 대한 모든 연구에서는 GX-G3 투여가 안전성 관련 파라미터에 유의한 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 안전성 약리학 연구(실시예 5-9)를 도 10에 요약하였다.
실시예 9
비-임상 연구 - 독성 연구: 래트에서 단일 용량 피하 독성 연구
이 연구의 목적은 GX-G3를 래트에 피하로 단일 투여한 후 급성 독성을 평가하는 것이다. 단일 피하 투여 후 GX-G3의 급성 독성을 조사하기 위해 스프레이그-다윌리 래트(Sprague-Dawley rats)(240-260g, 대략 8주령)를 0(비히클), 1, 3 및 10 mg/kg으로 단일 투여하고 투여 종료 다음 15일 후에 부검하였다. 연구 기간 동안 사망률, 임상 관찰, 체중(BW) 측정 및 육안 관찰을 수행하였다.
GX-G3를 단일 피하 투여한 결과, 사망률, 임상 관찰 및 체중 변화에서 시험물질 관련 이상은 관찰되지 않았다. 부검 시, 수컷 1마리에서 각각 1 및 3 mg/kg, 모든 수컷에서 10 mg/kg에서 비장 비대가 관찰되었으나, 이러한 변화는 약동학적 효과로 고려되었다. 따라서 이 연구에서 대략적인 치사량(ALD)은 암컷과 수컷 모두에서 10 mg/kg 이상으로 고려되었다.
실시예 10
비-임상 연구 - 독성 연구: 래트에서 2주 피하 반복 투여량 범위 조사(DRF) 연구
이 연구의 목적은 래트에게 2주간의 피하 투여 후 GX-G3의 잠재적 독성을 조사하고 4주간의 독성 연구에서 적절한 용량 범위를 제안하는 것이다. GX-G3의 2주 반복 피하 투여를 조사하여 4주 반복 투여 독성시험의 용량범위를 설정하기 위해 0(비히클), 1, 3 및 5 mg/kg을 2주 동안 2일마다(총 7회)을 래트(240-260g, 약 8주령)에 피하 투여하였다. 사망률, 임상 관찰, 체중 측정, 음식 섭취 측정, 안과 검사, 소변 검사/소변 화학, 혈액학, 임상 화학, 육안 관찰, 장기 무게 측정 및 현미경 관찰을 수행하였다.
GX-G3를 0, 1, 3, 5 mg/kg의 용량 수준으로 2주동안 2일마다 래트에 반복 투여한 결과(총 7회) 사망률, 체중, 음식 섭취, 안과 검사 및 소변 검사/소변 화학 반응은 관찰되지 않았다. 비장 및 뒷다리의 조혈 효과 증가는 시험 항목에서 약리 작용으로 고려되었다. 5 mg/kg으로 2마리의 암컷에서 관찰된 뼈 흡수/골형성, 뒷다리의 피하 부종 및 관련된 증가된 ALP 및 뒷다리 부종(부검시)은 시험 제품-관련된 부작용이었다. 따라서 4주 이상 반복 투여 독성시험에서 최고용량은 2일마다 투여시 3 mg/kg 미만, 주 1회 투여시 10 mg/kg 미만으로 고려하였다.
실시예 11
비-임상 연구 - 독성 연구: 시노몰구스 원숭이에 대한 2주 피하 반복 투여량 범위 측정(DRF) 연구
이 연구의 목적은 시노몰구스 원숭이에서 2주간의 피하 투여 후 GX-G3의 잠재적 독성을 조사하고 4주간의 독성 연구에서 적절한 용량 범위를 제안하는 것이다. GX-G3, 시노몰구스 원숭이(수컷 3010-4237 g, 암컷 2571-3373 g, 대략 4세)의 2주 반복 피하 투여에 대한 조사를 통해 4주 반복 투여 독성 연구의 용량 범위를 설정하기 위해 0(비히클), 1, 5 및 10 mg/kg의 용량 수준으로 2주동안 2일마다 피하 주사로 투여하였다(총 7회). 사망률, 임상 관찰, 체중 측정, 음식 섭취 측정, 안과 검사, 소변 검사/소변 화학, 혈액학, 임상 화학, 육안 관찰 및 장기 무게 측정을 수행하였다.
GX-G3를 시노몰구스 원숭이에 반복적으로 피하 투여한 결과, 시험 제품 관련 사망률, 체중 변화, 안과 검사 및 요검사/소변 화학의 변화가 관찰되지 않은 것으로 나타났다. 10 mg/kg으로 암컷에서 시험 제품-관련된 부종, 피부 변색 또는 피부 분비물이 관찰되었고, 음식 섭취 감소가 관찰되었다. 백혈구 수, 특히 호중구 수는 5 mg/kg에서 현저하게 증가하였고, 적혈구 수, 헤모글로빈, 헤마토크릿(hematocrit) 및 혈소판 수는 현저하게 감소하였다. 또한 모든 치료 그룹에서 암수 모두에서 알칼리성 인산 분해 효소(ALP) 및 감마 글루타밀 트랜스펩티다제(GGT)가 증가하고 포도당(GLU)(암컷 10 mg/kg 제외)은 감소하였다. 장기 중량 측정(organ weight measurement)에서, 5 mg/kg에서 비장 무게는 육안 관찰에서 비장 비대에 따라 현저하게 증가하였다. 이러한 변화는 시험 제품-관련된 약리학적 효과로 고려되었다. 따라서 4주 이상 반복투여 독성시험에서 최고용량은 2일마다 투여시 5 mg/kg 미만, 주 1회 투여시 10 mg/kg 미만으로 고려하였다.
실시예 12
비-임상 연구 - 독성 연구: 4주 회복 기간을 가진 래트에서 4주 피하 반복 투여 독성 및 GX-G3의 독성 동태 연구(Toxicity and Toxicokinetic Study)
이 연구의 목적은 래트에게 4주 동안 반복적으로 피하 주사한 후 GX-G3의 독성 및 독성 동태 프로파일을 조사하는 것이다. GX-G3 치료의 가역성은 회복 4주 동안 랫트에서 평가되었다.
GX-G3를 4주 동안 반복적으로 피하 투여한 후 관찰된 독성 및 독성 동태 프로파일을 조사하고 4주의 회복 기간 동안의 가역성을 평가하기 위해, GX-G3를 스프레이그-다윌리 래트(수컷 184.5-226.1g 및 암컷 99.0-120.1 g, 대략 5주령)에 0, 1, 3 및 10 mg/kg(각 그룹에서 10 또는 15명의 수컷 및 암컷)으로 4주 동안 매주 1회(총 4회 투여) 투여하였고 래트는 치료 완료 후 4주의 회복 기간으로 지정되었다. 연구 전반에 걸쳐서, 사망률, 임상 증후 및 상세한 임상 증후, 체중 측정, 음식 섭취, 안과, 요검사/소변 화학, 혈액학, 응고, 임상 화학, 장기 체중 측정, 거시 및 현미경 검사, 독성 동태 및 면역원성 분석을 수행하였다.
GX-G3의 반복적 피하 투여 결과에 따르면, 피하주사된(총 4회 투여) GX-G3 치료의 4주 및 회본 기간의 4주 후의 사망률, 안과 및 요검사/소변화학에서 시험 제품-관련된 이상 변화는 관찰되지 않았다. 치료기간 동안, 3 mg/kg 이상의 양성 모두에서 비정상적 보행 및 뒷다리 부종이 관측되었으며, 고용량 그룹 중의 암컷에서 회복 기간까지 계속되는 감소된 체중 증가가 관찰되었다. 혈액학 및 현미경 검사에서, 조혈과 관련된 약리학적 효과가 관찰되었다. 임상화학에서 ALP(알칼리성 인산 분해 효소)의 증가는 활막 증식, 피하/활막 부종, 활막/근육 세포 침윤, 중등도 골형성/골흡수 등의 현미경 검사 결과와 상관관계가 있었으며, 이는 시험물질과 관련된 부작용인 것으로 판단되었다. 이러한 변화는 3 mg/kg 이상의 양성 모두에서 관찰되었고 일부 변화가 회복 기간 완료 후 회복되지 않았으므로, 양성 모두의 관측된 부작용 없음(No Observed Adverse Effect Level; NOAEL)은 1 mg/kg으로 고려된다.
실시예 13
비-임상 연구 - 독성 연구: 4주 회복 기간이 있는 시노몰구스 원숭이에 대한 4주 피하 반복 투여 독성 및 독성 동태 연구
이 연구의 목적은 멍키에게 4주 동안 반복적으로 피하 주사한 후 GX-G3의 독성 및 독성 동태 프로파일을 조사하는 것이다. GX-G3 치료의 가역성은 회복 4주 동안 멍키에서 평가되었다.
GX-G3를 4주 동안 반복적으로 피하 투여한 후 관찰된 독성 및 독성 동태 프로파일을 조사하고 4주의 회복 기간 동안의 가역성을 평가하기 위해, GX-G3를 시노몰구스 원숭이(수컷 2310-3009g, 암컷 2199-2704g, 대략 3세)에 0(비히클 대조군), 1, 3 및 10 mg/kg으로 4주 동안 주 1회(총 4회분) 투여하였다. GX-G3를 사용한 치료 효과의 가역성은 치료 완료 후 4주의 회복에 할당된 멍키의 하위 집합에서 평가되었다. 연구 전반에 걸쳐서, 사망률, 임상 증후, 체중 측정, 음식 섭취, 안과, 심전도, 소변 검사/소변 화학, 혈액학, 응고, 임상 화학, 장기 무게, 거시 및 현미경 검사, 독성 동태 및 면역원성 분석이 수행되었다.
10 mg/kg에서 양성 모두의 폐사율(빈사 상태 및 죽은 동물 발견) 및 뇌의 현미경 소견(뉴런 괴사, 신경교증 및 착색 조직구), 대퇴골/골수(과골수) 및 골수(섬유증)를 기반으로 한다. 주요 그룹과 회복 그룹의 양성 모두에서 관찰된 결과, 양성 모두의 NOAEL(No Observed Adverse Effect Level)은 3mg/kg으로 고려된다.
실시예 14
비-임상 연구 - 독성 연구: 래트에서 피하(SC) 배태자 발달 독성 연구
이 연구의 목적은 종의 유기 발생 기간, 즉 임신일(GD) 6-17일 동안 임신한 것으로 추정되는 스프레이그-다윌리 래트에게 GX-G3를 피하 투여했을 때의 잠재적인 모체 및 발달 독성을 조사하는 것이다. 각 용량 그룹에 대해 임신한 래트(220-291g, 대략 10주령)에 0(비히클), 1, 3 및 5mg/kg의 GX-G3(투여 부피 1mL/kg)에서 장기 형성 동안 4회, GD 6, 9, 12 및 15일에서 3일마다 1회 피하(SC) 치료하였다. 모든 여성은 일반적인 상태, 임신 경과, 임상 증후 및 사망률에 대해 매일 관찰하였다. 래트를 GD 20일에 제왕 절개하고 하기 파라미터를 기록하였다: 온전한 자궁 중량, 황체 및 착상수, 살아있는 태아 및 배태자 사망자 수, 태아 성별, 태아 및 태반 무게.
임신한 래트에게 피하주사한 GX-G3에 따라, 장기 유전 기간 동안 3일에 한 번, GD 6, 9, 12, 15일에서, 0(비히클), 1, 3, 5 mg/kg은 시험된 모든 용량에서 임신한 동물에게서 내약성이 우수하였다. 부은 뒷다리 및 확대된 비장은 GX-G3에 대한 이전 독성 연구에서 이미 관찰되었기 때문에 예상된 결과였다.
임신 과정에 대한 간섭은 관찰되지 않았다. 배태자 발달에 대한 부작용은 관찰되지 않았으며 모든 용량에서 기형발생(teratogenicity)의 증후는 입증되지 않았다. 현재의 치료 일정 및 기간으로 5mg/kg은 정상적인 동물 행동에 영향을 미치지 않고 약리학적으로 관련된 비장 비대 및 부은 뒷다리만 관찰되었기 때문에 모체(mother)에 대한 NOAEL으로 고려될 수 있다.
5 mg/kg의 용량(각각 1990 및 1530 ㎍·h/mL의 단일 및 반복 투여 후 AUC0-72h)은 약리학적으로 관련된 비장 비대의 존재를 기반으로 하여 배태자 발달에 대한 NOAEL로 고려되었다.
실시예 15
비-임상 연구 - 독성 연구: 래비트에서 피하(SC) 배태자 발달 독성 연구
이 연구의 목적은, 종의 유기 발생 기간, 즉 임신일(GD) 6-19일 동안, GX-G3를 임신한 것으로 추정되는 뉴질랜드 화이트 래비트(New Zealand White rabbit)에게 피하 투여했을 때의 잠재적 모체 및 발달 독성을 조사하는 것이다. 각 용량 그룹에 대해 임신한 래비트(2.75-4.09kg, 대략 4-5개월령)를 0(비히클, 1mL/kg), 0.035mg/kg(0.35mL/kg), 0.1, 0.3 및 1 mg/kg의 GX-G3(1 mL/kg)의 GX-G3(1 mL/kg), 장기 형성 동안 5회, 3일마다 1회, 임신일(GD) 6, 9, 12, 15 및 18에 피하(SC) 치료하였다. 모든 암컷은 일반적인 상태, 임신 경과, 임상 증후 및 사망률에 대해 매일 관찰하였다. 래비트를 GD 29일에 제왕절개하고 다음 파라미터를 기록하였다: 온전한 자궁 중량, 황체 및 착상수, 살아있는 태아 및 배태자 사망자 수, 태아 성별, 태아 및 태반 체중.
임신한 래비트에게 피하 투여된 GX-G3에 따르면, 0(비히클), 0.035, 0.1, 0.3 및 1 mg/kg에서 GD 6, 9, 12, 15 및 18일에, 장기 형성 기간 동안 3일에 1회는 대조군과 비교하여, 음식 섭취의 최소 감소 및 최대 0.1 mg/kg의 최소 체중 증가를 유도하였으며, 한편 이러한 효과는 0.3 및 1 mg/kg에서 중등도(moderate)였다. 0.3 및 1 mg/kg에서 GX-G3는 임신 유지를 방해하여 유산을 유발하고 흡수를 증가시켰다.
본 치료 일정 및 기간으로, 0.035mg/kg의 용량(2.13㎍.h/mL, Cmax 0.0612㎍/mL의 단일 투여 후 AUClast; 각각 임신 9일과 12일에 혈청 C24 값은 각각 GD 6일에서의 C24 값의 28% 및 24%를 차지하였고; GD 15일 및 18일에 혈청 24는 정량 한계 미만이었다)은 체중과 음식 섭취에 대한 최소한의 영향을 기반으로 하여 산모의 NOAEL인 것으로 고려된다. 태아 체중의 최소 감소만을 고려하면, 0.035mg/kg도 배태자 발달에 대한 NOAEL인 것으로 고려된다.
실시예 16
비-임상 연구 - 독성 연구: 스프레이그-다윌리 래트에서 26주 피하(SC) 독성 연구 후 8주 회복 기간
이 연구의 목적은 스프레이그-다윌리 래트에게 26주 연속 26주 동안 주 1회 피하 투여했을 때 화학요법으로 유발된 호중구 감소증 치료를 위한 GX-G3의 잠재적 독성을 조사하고 8주의 회복 기간 후 변화의 가역성을 조사하는 것이다.
GX-G3의 반복 피하 투여 후 관찰된 독성 프로파일을 조사하고 회복 기간의 가역성을 평가하기 위해, GX-G3는 스프레이그-다윌리 래트(수컷 205-261g, 암컷 173-220g, 대략 6-7주령)에 주 1회, 26주 반복 피하 투여(전체 26회)로 0(비히클), 1, 3 및 5 mg/kg의 용량으로 투여하였다. 두 성별의 추가 동물을 대조 그룹 및 고용량 그룹에 추가하고 동일한 일정으로 치료하고 8주의 회복 기간을 허용하였다. 매일 사망률 및 임상 증후에 대해 동물을 관찰하였다.
치료는 모든 용량에서 뒷다리의 부종 및 운동 곤란을 유발하였으며 수컷에서 더 심각한 영향을 미쳤다. 사지 변화에 의해 영향을 받은 동물은 또한 2차 효과로 체중 감소, 음식 소비 감소 및 때때로 헝클어진 털, 활동 감소, 드물게 호흡곤란 및 발색성 설사를 보였다. 그 결과, 임상 양상의 심각성으로 인해 저선량 수컷 1마리가 희생되었다.
조직학적 검사는 혈액학적 측정에서 언급된 호중구 및 림프구의 증가와 상관관계가 있는 골수형성 및 관련 색전증의 과장된 증가의 결과 및 형태학적 지표와 일치하는 몇가지 발견을 보여주었다. 적용된 실험 조건에서 중간 용량 및 고용량 그룹에서 언급된 괴사 병변을 기준으로 1 mg/kg에서 시험 항목에 대한 NOAEL(관측된 부작용 없음)을 확인할 수 있다.
실시예 17
비-임상 연구 - 독성 연구: 시노몰구스 원숭이에서 26주 피하(SC) 독성 연구 후 8주 회복 기간
이 연구의 목적은 시노몰구스 원숭이에게 26주 동안 주 1회 피하(SC) 투여했을때 화학요법으로 유발된 호중구 감소증의 치료를 위한 GX-G3의 잠재적 독성을 조사하고 8주의 회복 기간 후 변화의 가역성을 조사하는 것이다. 2차 투여 후 중간 및 최고 투여량에서 관찰된 소견 및 최고 투여량에서의 사망률로 인해, 투여 일정(신규 투여 일수: 1, 8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 106, 120, 134, 148, 162, 176일)이 2주 1회로 변경되었다.
시노멀구스 멍키 그룹(체중 2-4kg, 대략 2.5-3세)에는 대조군 비히클(0), 1, 3 또는 5mg/kg의 GX-G3가 제공되었으며, 대조군 및 고용량 그룹의 추가 동물은 8주 회복 기간 후 변화의 가역성을 조사하기 위해 상기 연구에 포함되었다. 임상 증후를 매일 확인하였다.
사망은 여러 장기에서 과립구로 구성된 색전을 형성하는 순환 혈액 세포의 심각한 증가와 함께 과도한 골수 생성 증가로 인해 17일 이내에(1일 및 8일에 투여 후) 최고 용량에서 발생하였다. 보다 낮은 용량에서 시험 항목의 약리학적 활성과 관련된 효과만이 발견되었으며 26주 동안 2주마다 3 mg/kg의 용량을 NOAEL인 것으로 고려된다.
독성학 및 독성 동태학 연구의 결과(실시예 9-17)에 따르면, GX-G3의 NOAEL은 설치류(래트)의 경우 1mg/kg, 비설치류(시노몰구스 원숭이)의 경우 3mg/kg으로 평가되었다. 이러한 결정된 NOAEL 용량은 2세대 G-CSF인 페그필그라스팀 NOAEL보다 낮다. 멍키에서 페그필그라스팀 NOAEL의 용량은 750 ㎍/kg이다[문헌 「FDA-Non-Clinical-Review (s) 2018」 참조]. 독성학 및 독성 동태학 연구(실시예 9-17) 연구가 도 11에 요약되었다.
시험관 내 분석 또는 동물 연구에서 얻은 데이터는 사람에게 사용하기 위한 다양한 용량을 제형화하는데 사용할 수 있다. 한 동물 모델에서 달성된 치료 유효 용량은 당업계에 공지된 전환 인자를 사용하여 인간을 비롯한 다른 동물에서 사용하기 위해 전환될 수 있다[문헌 「Freireich et al., Cancer Chemother. Reports, 1966, 50(4):219-244」 및 표 12 참조].
표 12
Figure pct00014
비-임상 연구 후, 12.5 ㎍/kg, 25 ㎍/kg, 50 ㎍/로 정해진 범위 내에서 상기 전제에 기초한 안전성 및 내약성을 충분히 고려한 GX-G3의 인간 대상 최초 임상 시험(first-in-human clinical trial)은 건강한 지원자와 함께 GX-G3의 12.5 ㎍/kg, 25 ㎍/kg, 50 ㎍/kg, 100 ㎍/kg, 200 ㎍/kg 및 400 ㎍/kg 용량으로 정해진 범위 내에서 계획되었다.
B. 임상 연구
본 발명에 대한 GX-G3 인간 연구의 임상 시험은 다음과 같다:
실시예 18
임상 연구: I 상
I 상 연구는 건강한 남성 대상자에서 단일 피하 투여 후 GX-G3의 안전성, 내약성 및 약동학/약력학을 조사하기 위해 수행되었다.
i. 목적
I 상의 경우, 1차 목적은 건강한 남성 대상자에서 GX-G3의 단일 피하 투여 후 내성을 평가하는 것이다.
2차 목적은 건강한 성인 남성 대상자에서 GX-G3의 단일 피하 투여 후 안전성(이상 반응, 활력 증후, 신체 검사, 심전도, 임상 실험실 검사 및 방사선 검사), 약동학(PK), 약력학(PD) 및 PK-PD 관계를 평가하고 Neulasta®의 단일 피하 투여와 비교하는 것이다. 또한, 또 다른 목적은 건강한 성인 남성 대상자에서 GX-G3의 단일 피하 투여 후 면역원성을 평가하는 것이다.
ii. 연구 설계 및 계획
이것은 건강한 남성 대상자에게 단일 피하 투여 후 GX-G3의 안전성, 내약성 및 약동학/약력학을 조사하기 위해 용량-차단 무작위, 이중-맹검(double-blinded), 위약-조절된(placebo-controlled), 활성-조절된(active-controlled), 용량-증량 I상 임상 시험(dose-escalation Phase I clinical trial)이다. 용량-제한 독성(dose-limiting toxicities; DLT)을 관찰하는 탐색적 임상 I 상이지만, 이중 맹검 및 무작위 설계는 부작용에 관한 리포트 동안 조사자 또는 대상자의 바이어스를 감소시키기 위해서 GX-G3 치료 그룹 및 위약 치료 그룹에 적용된다.
대상자에 대한 치료 및 관찰 기간은 약 6-10주(면역원성 시험 포함)이다. 시험약 투여일(1일차) 전 지난 28일 이내에 이력, 신체 검사 및 임상 실험실 시험에 대해 대상자를 선별하였다. 스크리닝에 따라 본 임상에 적합하다고 판단되는 대상자는 임상시험센터에 입원하여 시험약 투여 하루 전(-1일차)에 금식한다. 제 5 일(4일차)에 모든 검사를 마친 대상자는 퇴원하고 7회에 걸쳐 센터를 방문하여 추적 관찰한다.
각 투여 그룹에서 단일 투여 완료 후 3주 동안 내성 및 안전성을 관찰한다. GX-G3 치료 그룹에서 각 투여 그룹의 내약성 및 안전성 평가가 완료되면 다음 투여량으로 용량을 증가시킨다. 동일한 연속 G-CSF 제형인 Neulasta®가 활성 대조 그룹으로 선택되고 GX-G3 최대 용량 그룹과 병행하여 모집된다.
본 임상 시험에서 결정된 투여 및 관찰 기간은 내약성, 안전성, 약동학적 및 약력학적 변수의 평가에 적절한 것으로 판단된다.
따라서 본 임상에서 결정된 범위 내의 용량의 과립구 집락-자극 인자인 GX-G3가 1회 투여된다는 전제 하에 안전성 및 내약성을 충분히 고려한 인체 최초 임상시험이 될 것이다.
iii. 연구 집단(Study Population)
총 6명의 GX-G3 투여 그룹(시험약 6명 + 위약 2명)과 활성 대조 그룹 6명(Neulasta® 6mg 투여 6명)으로 각각의 투여 그룹에서 8명의 대상자-총 54명의 건강한 남성 대상자를 분석하였다. I 상의 경우, 대상자들은 하기 특징들 또는 파라미터를 기준으로 선별되었다.
포함 기준:
1. 본 임상 시험에 대한 상세한 설명을 숙지한 후 자발적으로 참여를 결정하고 동의서에 서명한 지원자.
2. 검진 당시 만 20세 이상 만 45세 미만의 건강한 남성.
3. 체중 60kg 내지 94.0kg이고 체질량지수(BMI) 19kg/m2 내지 27kg/m2인 대상자.
4. 선별 결과 본 임상 시험에 적합한 대상자.
배제 기준:
1. 간담도계, 신장계, 신경계(중추 또는 말초), 호흡기계, 내분비계(당뇨병, 고지혈증 등), 심혈관계(울혈성심부전, 관상동맥질환, 심근경색증 등), 혈액종양내과, 비뇨기계, 정신, 근골격계, 면역계(류마티스 관절염, 전신성 홍반성 루푸스 등), 또는 이비인후과 계통에서 임상적으로 유의한 질환이 있는 자, 또는 상기 질환의 병력이 있는 자.
2. 검진기간 중 백혈구(WBC) 또는 호중구 %값이 기준범위를 초과하는 자.
3. 검진기간 중 혈소판 수치가 100,000/mm3 미만인 자.
4. 검진시 상복부 초음파상 최대 비장 길이가 16cm를 초과하는 자.
5. 3분 이상 앉아서 안정을 취한 후 활력 증후를 측정했을 때 수축기 혈압 140mmHg 이상 또는 90mmHg 이하이거나 이완기 혈압 95mmHg 이상 또는 50mmHg 이하인 자.
6. 심전도상에서 임상적으로 유의한 부정맥이 있는 자.
7. 시험용 의약품 투여 전 1주일 이내에 활동성 감염 또는 38℃ 이상의 발열이 있는 자.
8. 만성 B형, C형 간염 또는 HIV 감염의 증거가 있는 자.
9. 약물 및 기타 과민반응의 병력이 있는 자.
10. 시험용 의약품 투여 전 8주 이내에 400mL 이상의 출혈이 있었거나 헌혈한 자.
11. 최근 3개월 동안 하루 평균 10개비 이상의 담배를 피우는 자.
12. 지속적으로 음주(21 유닛/주 이상, 1 유닛=10g의 순 알콜)를 하거나 입원 24시간 전부터 퇴원할 때까지 술을 끊을 수 없는 자.
13. 검진 전 6개월 이내에 알콜 및 약물 남용의 이력이 있는 자.
14. 검진 전 6개월 이내에 향정신성 약물 또는 마약성 진통제를 의존적으로 투여한 자.
15. 정신병 또는 기타 중추신경계 질환이 있는 사람으로서 임상시험의 평가에 적합하지 아니하다고 임상시험자가 인정하는 자.
16. 의사소통이 부적당하다고 인정되는 자.
17. 임상시험의 내용을 이해하지 못하고 협조적이지 않고(시험자를 예정대로 방문하거나 예정된 선택 수술을 미리 연기하기를 꺼려하는 자), 조사관에 의해서 시험을 완료하기에 부적합하다고 여겨지는 대상자.
18. 현재 임상시험에 참여하고 있거나 임상시험을 완료하였으나 아직 8주간의 기간이 지나지 아니한 자.
19. 시험자가 시험약 등의 투여에 의해서 위험할 수 있는 건강상태로 인하여 임상시험에 참가하기에 부적합한 자로 결정하고 명확하게 진술한 경우.
20. 다른 임상검사실 검사 결과에 따라 시험자가 임상시험 참여에 부적합하다고 고려되는 자.
21. G-CSF 투여 이력이 있는 자.
22. 시험용 의약품 투여 2주전에 처방약 또는 동양약(oriental medicine)을 투여받았거나 연구용 의약품 투여 1주일 전에 일반의약품 또는 비타민 보충제를 투여받은 자.
대상자의 개인사정 및/또는 의학적 또는 행정적 사유 등으로 인하여 임상시험 대상자의 중도 탈락, 임상시험용 시험약 투여의 중단, 임상시험의 조기 종료 또는 시험센터 폐쇄가 발생할 수 있으며 그 원인은 다음과 같다:
임상시험 참여는 대상자가 원하고 참여 종료 사유를 설명하지 않아도 언제든지 중단될 수 있다. 대상자는 다음 상황의 경우 임상 시험에서 제외되어야 한다:
1. 대상자 또는 법정대리인이 동의를 철회하는 경우.
2. 조사자가 임상시험에 계속 참여하는 것이 피험자에게 유해하다고 결정하는 경우.
3. 부작용이 너무 심하여 임상시험을 계속할 수 없는 경우.
4. 의뢰자 또는 조사자가 중대한 프로토콜 위반이라고 결정하는 경우.
5. 기타 사유로 참여를 중단하고자 하는 경우.
6. 대상자가 본 임상시험에서 배제되어야 하는 중대한 프로토콜 위반 사항은 다음과 같다.
7. 시험약의 유효성 또는 안전성 평가를 심각하게 왜곡하거나 대상자의 안전성에 영향을 미칠 수 있는 선택/배제 기준을 위반하여 대상자 또는 의뢰자의 임상시험 참여 철회가 필요하다고 결정하는 경우.
8. 대상자가 임상시험에서 표적화되는 질환에 대해 다른 약물이나 외과적 치료를 이용하고 있으나 조사자가 피험자가 그러한 치료 방법을 중단할 의사가 없다고 판단하는 경우.
9. 임상시험 동안 시험약 이외의 약물은 투여해서는 안된다. 그러나, 필요한 경우 조사자의 결정에 따라 투여될 수 있다. 조사자의 결정 없이 대상자가 약물을 복용하고 상기 약물은 본 임상시험에서 안전성 평가에 영향을 미쳤다고 판단되는 경우 대상자를 탈락시킨다.
iv. 투여된 치료
반복-투여 독성 연구의 결과는 인간 대상 최초 임상 시험에서 GX-G3의 초기 용법 및 용량을 계산하는 데 사용되었다. 시노몰구스 원숭이에서 4주 동안 GX-G3를 반복적으로 피하 투여한 전임상 연구(preclinical study)의 결과, 관찰된 NOAEL은 수컷 및 암컷 멍키 모두에서 3mg/kg이었다. 또한, 래트에서 4주동안 반복된 피하 투여 독성시험에서 관찰된 NOAEL은 1 mg/kg이었다. 본 연구에서는 관측가능한 부작용 없음(NOAEL)이 체중으로 환산되지 않는 인간 등가 용량(human equivalent dose; HED)보다 2.5~80배 적은 용량이 투여된다. 상기 용량은 유사 약물인 Neulasta®의 최대 인체 임상 시험 용량을 NOAEL로 변경할 때보다 4배 적다. 따라서, 반복 투여 독성 연구의 4주 동안 관찰된 비가역성 부작용(빈사, 체중 감소)은 건강한 성인 남성 대상자에서 단회 투여 과정에서 관찰될 가능성이 적다.
각 대상자에 대한 GX-G3의 용량은 체중을 기준으로 계산된다. 투여될 kg(체중)당 단일 용량은 12.5 ㎍, 25 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 200 ㎍ 및 400 ㎍이다. 예를 들어 25㎍ 용량 그룹에 배정된 60kg 대상자에게 단일 투여를 위한 용량은 1.5mg(1500 ㎍; 25㎍/kg/용량×60kg = 1500 ㎍/용량)이다. 상기 임상시험의 임상시험용 의약품인 GX-G3의 농도는 바이알(vial)당 1mg/mL 또는 10 mg/mL이고 상기 바이알은 1mL의 약물이 들어 있기 때문에 바이알에 1mg 또는 10mg의 GX-G3가 포함된다. 따라서 10 mg/mL의 시험약 제형이 투여되어야 하는 경우에는 0.15mL의 시험약이 대상자에게 투여된다.
위약 대조 그룹의 각 용량 그룹에 대한 용량은 투여 전 GX-G3에서와 동일한 방법으로 계산된다. 통상적인 용량인 Neulasta® 6mg은 상기 활성 대조 그룹에 투여된다. 각 투여 그룹은 시험약 또는 참조약의 1-3회 용량으로 피하 투여된다.
v. 방법론
I 상 연구는 6개의 용량 그룹 내에서 저용량 내지 고용량으로 점진적으로 수행되며 6명의 대상자가 시험 약물로 할당되고 2명의 대상자가 위약으로 할당되는 비율로 제 1의 5개의 용량 그룹에 8명의 대상자가 할당된다.
GX-G3의 최종 투여 그룹은 활성 대조 그룹에 할당되고, 14명의 대상자는 상기 시험약에 6명의 대상자, 위약에 2명의 대상자, Neulasta® 6명 대상자의 비율로 할당되었다. I 상 임상 연구의 투여는 표 13에 요약되어 있다.
표 13
Figure pct00015
vi. 효능 및 안전성 변수
이러한 임상시험의 1차 평가 목적은 건강한 남성 지원자를 대상으로 시험용 의약품인 GX-G3를 1회 피하 투여한 후 내약성을 평가하는 것이다.
최대 허용 용량(Maximum Tolerable Dose; MTD)은 용량-제한 독성(dose-limiting toxicities; DLT)의 발생 및 빈도의 평가, 이상 반응의 정도 및 특성, 활력 증후, 신체검사, 심전도, 임상 실험실 검사를 통한 내성 평가를 통해서 결정되며, 안전성 평가를 위해 방사선 검사를 병행한다.
2차 평가를 목적으로 GX-G3의 안전성 및 약동학, 약력학을 평가하고, 항체의 존재 여부를 판단하기 위해 면역원성을 평가한다. 또한 GX-G3와 Neulasta® 사이의 약동학적 및 약력학적 특성 안전성 및 면역원성의 차이를 비교한다.
vii. 통계학적 방법
연구용 제품의 적어도 1회 용량을 투여받고 상기 투여 이후에 방문한 모든 무작위 대상자를 통계 분석에 사용하였다. 유효성 평가는 치료 의향(Intention-to-Treat; ITT) 분석 그룹을 우선 고려하였으며, 프로토콜(Peprotocol; PP) 분석 그룹의 결과도 함께 제공하였다. 안전성 평가를 위해 안전성 분석 그룹을 사용하였다.
연구 결과 해석에 영향을 미치는 것으로 간주되는 심각한 프로토콜 편차를 통계 분석에 포함하는 것은 사례별로 분류하여 설명하였다. 이러한 프로토콜 일탈에 대해서는 일탈의 정도와 원인을 정확하게 기록해야 하며 임상 연구 보고서 작성 시 통계 분석에 포함하기 전에 조사자, 후원자, 모니터 및 통계학자가 영향을 조사해야 한다.
1차 오류는 24주차에 1차 효능 결과, HbA1c 변화에 대한 평가에서 각 다중 검사에 대해 2.5%의 유의 수준으로 조정되었다. 기타 변수에 대한 모든 가설은 양측에서 5%의 유의 수준으로 평가되었다. 통계 분석에는 SAS(버전 9.2)를 사용하였다.
효능의 ITT 분석에 포함된 누락 데이터에 대해 이월된 마지막 관찰(last observation carried forward; LOCF)을 적용하였다. 이용 가능한 데이터 세트는 각 방문시 효능 평가 및 안전성 분석에 사용되었다.
TT 모집단의 대상자의 인구 통계학적 및 병력에 대한 기술통계를 그룹별로 제공하고 평균 또는 비율의 차이에 대한 평가를 수행하였다. 평균, 표준편차, 중앙값, 최소값 및 최대값을 제공하고 ANOVA 또는 Kruskal-Wallis 테스트를 적용하여 그룹 간의 유의성을 평가하였다. 비연속 자료의 경우 발생빈도와 비율을 제시하고 카이-제곱 검정(Chi-square test) 또는 피셔 정확 검정(Fisher's exact test)을 적용하여 평가하였다.
기준선 WBC, ANC 및 CD34+에 의해 보정된 공변량 분석은 이러한 파라미터의 변화에 적용되었으며 그룹 간의 차이는 다중 비교에 의해 평가되었다. 쌍체 t-검정(paired t-test)는 투여 전과 투여 후의 차이를 평가하는데 사용되었다.
2차/3차 효능 결과에 대한 기술 통계가 제공되었고 각 투여 그룹에 대한 차이가 존재하는지 여부에 따라 평균 또는 비율이 평가되었다. 연속 데이터의 경우 기준선 또는 Kruskal-Wallis 검정으로 보정된 공변량 분석을 사용하여 그룹 간의 통계적 유의성을 평가하고 투여 전후 간의 그룹 내 차이를 쌍체 t-검정 또는 Wilcoxon의 부호 있는 순위 검정으로 평가하였다. 비연속 데이터에 대해서는 카이제곱 검정을 적용하여 분석하였다.
viii. I 상 임상 연구 결과
약동학적 결과
안전성, 약동학(PK), 약력학(PD) 및 면역원성 파라미터 및 관련된 데이터를 기술 통계적 방법을 사용하여 분석하였다. 순응도는 혈청 샘플에서 GX-G3의 생물학적 분석 평가에 의해 추가로 확인되었다. 본 연구에서 시험약의 정량하한은 1.25ng/mL이었다. 하기 PK 파리미터를 얻었다: Cmax, 최대 농도; AUClast, 0 내지 마지막 샘플링 지점까지의 농도-시간 곡선 아래 영역; AUCinf, 0 내지 무한대까지의 농도-시간 곡선 아래의 면적; tmax, 최대 혈장 농도에 도달하는 시간; t1/2, 말단 반감기. GX-G3 및 Neulasta®의 약동학적 파라미터는 표 14에 제시된다.
표 14
Figure pct00016
결과에 따르면, Neulasta® 6 mg을 투여한 결과 AUC 및 Cmax에서 약동학적 프로파일이 나타났으며, 이는 GX-G3의 100 ㎍/kg에서 200 ㎍/kg 범위였다. 또한, CV로 표시되는 약물 노출에 관한 파라미터(AUC 및 Cmax)에 대한 개인간 변동성은 용량 수준 및 참조약의 그것과 다르지 않은 것으로 보였다.
약동학적 파라미터는 용량의 비례 순서를 보여주었으며, Neulasta® 6 mg/mL는 GX-G3의 100 ㎍/kg과 200 μ/kg 사이의 범위를 보여주었다.
HyFC 기술의 지속형 GX-G3를 평가하기 위해, 반감기가 중요한 파라미터이다. GX-G3의 모든 용량은 25㎍/kg의 경우 78.1시간, 50 ㎍/kg의 경우 169.0시간, 100 ㎍/kg의 경우 151.6시간, 200 ㎍/kg의 경우 128.8시간 및 400 ㎍/mL의 경우 99.1시간의 상당히 긴 반감기를 나타냈으며, 따라서 Neulasta® 6 mg/mL(23.7시간)에 비해 상당히 긴 것으로 고려된다. 최대 혈장 농도에 도달하는 평균 시간은 GX-G3 12.5, 25, 50, 100, 200 및 40 ㎍/kg 용량 그룹에서 각각 5.0시간, 10.0시간, 10.0시간, 10.0시간, 12.0시간 및 16.2시간이었다. GX-G3 및 Neulasta®(페그필그라스팀)의 단일 피하 투여 후 혈장 농도 대 시간 프로파일이 각각 도 12 및 13에 제시되어 있다.
약동학적 프로파일은 도 14에 나타낸 바와 같이 용량이 증가함에 따라 AUC 및 Cmax가 초-비례적으로 증가함을 보여주었다. 용량 조정 AUClast는 GX.5G3 12.5, 25, 50, 100, 200 및 400 ㎍/kg 각각에 대해 5.7±5.2, 10.9±11.1, 19.0±16.4, 19.2±23.3, 58.0±36.7 및 89.3±74.3(hr.ng/mL)/(㎍/kg)이었다. 용량 조정된 Cmax는 각 용량 그룹에 대해 각각 0.29±0.20, 0.40±0.53, 0.50±0.75, 0.59±0.61, 1.69±0.91 및 1.78±1.69(ng/mL)/(㎍/kg)였다. 이러한 결과는 GX-G3의 비선형 약동학을 보여주었다
효능 결과
GX-G3 투여 후 WBC(백혈구) 수의 AUEC(영향 곡선 아래 면적) 평가는 표 15 및 도 15에 나타낸 바와 같이 비선형 방식으로 GX-G3 용량 증가에 따라 AUEC가 증가함을 입증하였다.
표 15
Figure pct00017
GX-G3와 Neulasta® 사이의 WBC의 기준선-보정된 AUEC와 비교했을 때, GX-G3 200 ㎍/kg(206,256±63,366 일.세포/mm3)을 투여받은 대상자의 평균 기준선-보정된 AUEC는 Neulasta® 6 mg 고정 용량(248,892±54,096 일.세포/mm3)을 투여받은 대상자에서의 그것과 유사하였다.
백혈구 수의 최대 변화(도 16)와 관련하여, Neulasta® 6 mg 고정 용량(36,783±65,993 세포/mm3)을 투여받은 대상자의 평균 최대 변화는 GX-G3 200 ㎍/kg(27,930±5,939 세포/mm3)을 투여받은 대상의 평균 최대 변화보다 크게 보였지만, GX-G3 400 ㎍/kg(49,367±23,582 세포/mm3)을 투여받은 대상자보다 작았다.
최대 백혈구 수(tmax)에 도달하는 시간은 용량이 증가함에 따라 지연되는 것처럼 보였다. tmax의 중앙값은 12.5 내지 100 ㎍/kg의 용량 수준에 대해 1일, 200 ㎍/kg의 용량 수준에 대해 2일 및 400 ㎍/kg의 용량 수준에 대해 3일이었다.
혈장 ANC 카운트-시간 프로파일은 도 17에 제시되어 있고 ANC 파라미터의 데이터는 표 16에 요약되어 있다.
표 16
Figure pct00018
GX-G3 투여 후 ANC 카운트의 AUEC 평가는 AUEC가 비선형 방식으로 GX-G3 용량의 증가에 따라 증가함을 보여주었다(도 18). GX-G3와 Neulasta® 사이의 ANC 수의 기준선-보정된 AUEC와 비교했을 때, GX-G3 200 ㎍/kg(161,856±45,304 일.세포/mm3)을 투여받은 대상자의 평균 기준선-보정된 AUEC는 Neulasta® 6 mg 고정된 용량(175,818±44,374 일.세포/mm3)를 투여받은 대상자와 유사하였다.
최대 ANC 수(tmax)에 도달하는 시간은 용량이 증가함에 따라 지연되는 것처럼 보였다. tmax의 중앙값은 12.5 및 25㎍/kg의 용량 수준에 대해 1일, 50 내지 200 ㎍/kg의 용량 수준에 대해 2일, 400 ㎍/kg의 용량 수준에 대해 3일이었다.
ANC 수의 AUEC 및 ANC 수의 최대 변화와 같은 약력학 파라미터에 대한 개인 간 변동성은 GX-G3의 용량 수준과 관련이 없는 것으로 보였으며(최대 ANC 변화의 CV%: 11.7~50.9; ANC의 AUEC: 14.5~47.4); 200 ㎍/kg의 용량 수준의 변동성(최대 ANC 변화의 CV%: 21.6; ANC의 AUEC: 26.1)은 Neulasta® 6mg 고정 용량(최대 ANC 변화의 CV%: 21.4; AUEC의 ANC: 24.2)이 그것과 유사하였다.
결론적으로, 절대 호중구 수(ANC), WBC 수 및 CD34+ 세포수는 GX-G3 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ㎍/kg, Neulasta® 6mg, 또는 위약의 단일-용량 투여 후 대상자에서 측정되었다.
WBC 및 ANC는 위약과 비교하여 GX-G3의 모든 용량 범위에서 증가하였다. ANC와 AUEC의 최대 변화는 더 높은 용량을 받은 대상자에서 더 컸다. 특히, 200 내지 400 ㎍/kg의 GX-G3 용량 범위는 약력학적 반응에서 활성 대조군에 비해 잠재적인 우월성을 보였다.
안전성 결과
이 연구에서 심각한 유해 사례 및 기타 중대한 유해 사례는 보고되지 않았다. 총 54명의 대상자가 안전성 집단에 있었고 133개의 기록 가능한 유해 사례(AE)가 있었으며 115개 등급(86.47%) 및 18개 등급 2(13.53%)로 구성되었다. 이러한 사건은 위약 및 Neulasta® 그룹을 포함하는 각 치료 그룹에 대해 음성 및 양성 대조군으로 각각 고르게 분포되었다.
기록된 이상 반응은, 위약에 대해 16건(12.03%, 경증만), Neulasta®에 대해 23건(17.29%, 경증 19건, 중등도 4건), 12.5㎍/kg 그룹에 대해 4건(3.01%, 경증 4건), 25㎍/kg 그룹에 대해 11건(8.27%, 경증 11건), 50 ㎍/kg 그룹에 대해 11건(8.27%, 경증 8건 및 중등도 3건), 100 ㎍/kg 그룹에 대해 19건(14.29%, 경증 18건 및 중등도 1건), 200 ㎍/kg 그룹에 대해 (21.80%, 경증 24건 및 중등도 5건) 및 400 ㎍/kg 그룹에 대해 20건(15.04%, 경증 15건 및 중등도 5건)으로 보고되었다. 용량과 AE 사이에는 강한 관계가 관찰되지 않았다.
면역원성 결과
면역원성 문제는 제기되지 않았다.
I 상 연구의 전체적인 결론
이 연구는 GX-G3를 사용한 최초의 인간 연구였으며 건강한 남성 대상자에서 GX-G3의 단일 용량의 안전성과 내약성을 조사하기 위해 수행되었다. 또한, 건강한 남성 대상자에서 단일 용량의 GX-G3의 PK 및 PD 프로파일을 특성화하기 위해 수행되었다. 이 연구의 전반적인 결과는 다음과 같다:
- 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ㎍/kg의 용량 범위에서 단일 피하 용량 GX-G3은 54명의 건강한 남성 대상자 그룹에 의해 안전하고 내약성이 우수하였다.
- 115건(86.47%) 등급 1(경증) 및 18건(13.53%) 등급 2(중등도) AE로 구성된 133건의 기록 가능한 AE 중에서, 투여 전후 모든 치료 그룹에서 유의하고 보고 가능한 AE가 관찰되지 않았다.
- 고용량 GX-G3 투여 그룹과 Neulasta® 투여 그룹 사이에 AE의 유의한 차이는 관찰되지 않았다.
- 대상자 중 단회 투여 후 GX-G3에 대한 항체가 발생했다는 증후는 없었다.
- GX-G3의 Cmax 및 AUC는 12.5 내지 400 ㎍/kg의 용량 범위에서 비선형 방식으로 용량에 따라 증가하였다.
- 전체적으로 GX-G3의 반감기는 78.1 내지 151.6시간의 범위이며 23.7시간의 반감기를 갖는 Neulasta®보다 3.3배 내지 7.13배 길다.
- GX-G3 1회 피하 주사 후, GX-G3의 모든 용량 범위에서 WBC 및 ANC가 용량 의존적으로 위약 그룹에 비해 증가하였다.
- ANC와 AUEC의 최대 변화는 GX-G3를 고용량 투여받은 대상자에서 더 컸다.
- GX-G3 200 ㎍/kg 투여시 약력학적 반응은 Neulasta®와 유사하고 GX-G3 400 ㎍/kg은 Neulasta®보다 잠재적인 우월성을 나타냈다.
- GX-G3 농도와 ANC 증가 사이에는 명확한 관계가 있었다.
- GX-G3의 적정 용량은 심각한 독성을 고려하지 않고 200 ㎍/kg 내지 400 ㎍/kg일 수 있다.
- GX-G3는 제품 특성의 지속성 및 Neulasta®와 유사한 효능으로 인해 화학 요법 유발 호중구 감소증으로 고통받는 환자에게 더 나은 환자 순응도를 제공할 수 있다.
실시예 19
임상 연구: II 상
II 상 연구는 GX-G3의 3가지 다른 용량의 효능, 안전성 및 내약성을 결정하고 III 상 투여를 위한 이상적인 용량 범위 및 최적 시점을 선택하기 위해 Neulasta®(페그필그라스팀)를 비교하기 위해 수행되었다.
i. 목적
II 상의 경우, 주요 목적는 GX-G3의 3가지 용량의 효능, 안전성 및 내약성을 평가하고 각 용량을 참조 제품(Neulasta®)과 비교하여 최적의 용량 범위를 선택하는 것이다. 지연된 투여(화학요법 투여 후 3일째에 GX-G3 250 ㎍/kg)를 갖는 한 그룹을 포함하는 또 다른 목적은 시험 제품의 투여를 위한 최적 시점을 평가하는 것이다.
2차 목적은 GX-G3의 약동학 및 GX-G3의 면역원성의 안전성을 조사하는 것이다.
ii. 연구 설계 및 계획
이것은 R-CHOP 요법을 받고 있는 비호지킨 림프종 환자와 비교한 GX-G3의 무작위, 병렬 그룹, 다기관 2상 연구이다. 본 시험(Neulasta®)에서 참조약의 제품 정보 요약(SmPC)에 정의된 G-CSF 투여 적응증은 다음과 같다: "악성 종양에 대해 세포독성 화학요법으로 치료받은 성인 환자에서 호중구 감소증 기간 및 열성 호중구 감소증 발병률 감소(만성 골수성 백혈병 및 골수이형성 증후군 제외)"[인터넷 게시 문헌 「Summary of Product Characteristics Neulasta®; https://www.medicines . org.uk/emc/medicine/11783. accessed on 13-July-2015)」 참조].
다양한 유형의 암에 대해 세포독성 화학요법의 수많은 계획이 사용되고 있다. 상이한 유형의 암과 상이한 유형의 세포독성 화학요법에 의해 야기되는 이질성을 줄이기 위해, 본 시험에서는 R-CHOP 화학요법으로 치료받은 비호지킨 림프종 환자만을 포함하기로 결정하였다. 이질성을 줄임으로써 테스트 제품의 다양한 용량을 더 잘 구별할 수 있다. 하나의 표준 R-CHOP 주기는 다음과 같이 구성된다:
· 리툭시맙 375 mg/m2 i.v. 1일차
· 사이클로포스파미드 750 mg/m2 i.v. 1일차
· 독소루비신 50 mg/m2 i.v. 1일차
· 빈크리스틴 1.4 mg/m2(최대 2 mg) i.v. 1일차
· 프레드니손 100 mg p.o. q.d. 1-5일차
이 연구는 5개의 평행한 그룹의 환자에서 공개, 다기관, 무작위 시험으로 수행되었다. 각 환자는 5가지 가능한 치료 중 하나에 무작위로 할당되었다.
§ 시험 (150 ㎍/kg BW/ R-CHOP 후 24 시간)
§ 시험 (250 ㎍/kg BW/ R-CHOP 후 24 시간)
§ 시험 (350 ㎍/kg BW/ R-CHOP 후 24 시간)
§ 시험 (250 ㎍/kg BW/ R-CHOP 후 72 시간)
§ 참조 (Neulasta® 6mg/0.6 mL/ R-CHOP 후 24 시간).
환자는 제 1 치료 주기의 첫째날인 1일차 이전의 4주의 최대 기간인 선별/기준선 단계를 거쳤으며 포함 기준 및 배제 기준의 체크 및 확인 후에만 치료를 받았다.
절대 호중구 수(ANC), 백혈구 수(WBC) 및 차등 혈구 수의 효능 파라미터를 결정하였다. 치료 후 발생한 유해 사례, 임상 검사, 안전성 검사 결과 및 GX-G3에 대한 항체의 안전성 파라미터를 결정하였다.
이 시험에서 치료 기간은 R-CHOP를 사용한 2개의 순차적 치료 주기로 구성되었다. 하나의 단일 주기 대신에 2 주기의 화학요법 동안 시험 제품의 효과를 평가함으로써 환자당 더 많은 데이터가 생성되었다.
치료 단계의 종료시에, 환자는 최종 검사를 받았다. 연구의 최대 기간은 개별 환자에 대해 약 11주이다.
iii. 연구 집단
포함 기준을 충족하고 배제 기준을 제시하지 않은 65명의 환자는 본 시험의 목적을 달성하기 위해 무작위 배정될 계획이었다.
II 상의 경우 대상자는 다음 특성 또는 파라미터에 따라 선별되었다.
포함 기준
1. 18세 이하의 남성 또는 여성 환자
2. 면역조직화학 또는 유세포분석에 의해 확인된 비호지킨 림프종 환자: III-IV기 여포성 림프종(앤 아버 스테이징(Ann Arbor staging)) 또는 CD20 양성 미만성 거대 B 세포 비-호지킨 림프종.
3. 각각 21일씩 최소 2주기 동안 R-CHOP(리툭시맙(rituximab), 사이클로포스파미드, 독소루비신(doxorubicin), 빈크리스틴(vincristine), 프레드니솔론(prednisolone)) 요법을 받기 위한 기준을 충족하는 환자.
4. 일련의 여러 주기 내에서 R-CHOP 요법의 처음 2주기를 받는 환자(이전 R-CHOP에 대한 노출은 허용되지만 본 시험에서 무작위화 이전 3개월 이상 다른 일련의 주기에서).
5. ECOG 수행 상태 0, 1 또는 2.
6. 최소 6개월의 치료를 받은 기대 수명.
7. 연구의 모든 측면에 참여할 의사와 능력(예를 들어 정신적 및 신체적 상태), 예정된 방문 참석, 서명된 서면 동의서를 제공하여 입증된 프로토콜 요구사항 준수.
배제/철회 기준:
다음 기준 중 하나를 나타내는 대상자는 시험에 포함되지 않았다:
1. 활성 물질 또는 연구 약물의 임의의 부형제(예를 들어 소르비톨, 과당, 또는 라텍스) 또는 R-CHOP 요법의 임의의 성분에 대한 과민증(hypersensitivity) 또는 불내성(intolerance)의 병력.
2. 대장균 유래 제품(예를 들어 필그라스팀(Filgrastim), Humulin® 인슐린, L-아스파라기나제, Humatrope® 그로쓰 호르몬(Growth Hormone), Intron A®)에 대한 알려진 과민증.
3. 버킷 또는 B 림프모구 림프종.
4. CNS 침범을 동반한 비-호지킨 림프종.
5. 기준선에서 전신(정맥내 또는 경구) 항감염제(항생제, 항진균제, 항바이러스제)로 치료를 요하는 활동성 감염.
6. 무작위 배정 전 지난 3개월 이내에 R-CHOP 요법 또는 페그필그라스팀에 대한 노출.
7. R-CHOP 요법에 사전에 노출된 환자에서 호중구 감소증의 알려진 결핍.
8. 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 항체, B형 간염 표면 항원(HBsAg) 및/또는 C형 간염 바이러스(HCV) 항체에 대한 양성 혈청학적 소견.
9. 임의의 전악성 골수성 상태 또는 골수성 특징을 갖는 임의의 악성(예를 들어 골수이형성 증후군, 급성 또는 만성 골수성 백혈병).
10. 수술로 치유된 기저 세포 암종, 편평 피부 세포 암종, 또는 자궁 경부의 제자리 암종을 제외한 지난 5년 이내의 이전 악성 종양.
11. 이전 골수 또는 줄기 세포 이식.
12. 심각한 간 장애: 51.3μmol/L(3mg/dL) 이상의 혈청 빌리루빈 또는 28g/L(2.8g/dL) 미만의 혈청 알부민.
13. 1.5×109/L 미만의 기준선 호중구 수 또는 100 x 109/L 미만의 혈소판 수.
14. 사르코-마리-투스(Charcot-Marie-Tooth) 증후군의 탈수초 형태(Demyelinating form).
15. 무작위화 이전의 마지막 달 동안 폐렴, 폐부종, 간질성 폐 질환, 폐 침윤 중의 임의의 것.
16. 겸상적혈구 특성 또는 겸상적혈구병.
17. 무작위화 전 2주 이내의 대수술.
8. 환자가 현재 등록되어 있거나 현재 임상 시험의 선별 검사 이전 30일 미만의 시험용 약물을 사용하는 다른 임상 시험을 완료하였다.
19. .이 연구에서 이전 등록(previous enrolment).
20. 가임기 여성은 임신 검사를 받을 수 없거나 원하지 않으며 적절한 피임법을 시행한다. 여성에게 신뢰할 수 있는 방법은 호르몬 피임약, 외과적 개입(예를 들어 난관 결찰), 자궁 내 장치(IUD) 및 성적 금욕이다.
21. 환자가 연구의 성격, 범위 및 가능한 결과를 이해할 수 없도록 하는 법적 무능력 및/또는 기타 상황.
22. 알콜/약물 의존 또는 남용(담배 남용 제외).
23. 신뢰할 수 없거나 협력 부족.
24. 소변 유출 장애.
25. 심장 기능 장애: 심근 기능 부전, 최근(지난 6개월) 심근 경색, 중증 부정맥.
26. 연구자의 의견으로 연구 치료제의 평가를 손상시킬 수 있거나 환자의 안전을 위태롭게 할 수 있는 환자의 기타 상태(예를 들어 심각하거나 불안정한 의학적 또는 심리적 상태, 급성 정신병, 심각하고 오래 지속되는 열성 호중구 감소증), 프로토콜 요구 사항 준수 또는 견지.
27. 임산부 또는 모유 수유 중인 여성.
28. 시험의 제 1 주기 이후에 R-CHOP 치료의 투여량의 임의의 변화.
무작위 배정 후 22~28번의 배제 기준 중 하나라도 등록되면 철회 기준으로 간주된다.
iv. 투여된 치료
현재 연구는 선량 범위를 찾는 연구이다. 선택된 용량은 전임상 연구 및 건강한 지원자에서 수행된 임상 연구 결과를 기반으로 하였다. I 상 데이터로부터 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ㎍/kg의 용량 범위에서 단일 피하 용량 GX-G3가 안전하고 내약성이 우수하다는 것이 입증되었으므로; GX-G3의 최적 용량 범위를 결정하기 위해 150 ㎍/kg, 250 ㎍/kg 및 350 ㎍/kg 용량으로 II 상 임상 연구를 수행하였다. 투여된 바이알(1mL)은 약품의 활성 성분 20mg을 함유한다.
시험 제품은 하기 기술된 치료를 이용하는 GX-G3 20 mg/mL 주사용 용액(피하 주사용)이다.
치료 A, B, C:
GX-G3 20 mg/mL 주사용액(피하주사)의 시험 제품은 다음과 같은 치료로 투여된다:
24시간 이상의 20 mg/mL 피하 주사로 1회 피하 주사 후 각 21일의 처음 2회 연속 R-CHOP 주기 동안 R-CHOP 투여(총 2회의 단일 용량).
치료 D:
Neulasta®의 참조 제품(페그필라그라스팀) 6 mg/0.6 mL 사전 충전형 주사기(피하 주사)는 하기 설명된 치료와 함께 투여된다:
24시간 이상의 6 mg/0.6 mL 피하 주사로 1회 피하 주사 후 각 21일의 처음 2회 연속 R-CHOP 주기 동안 R-CHOP 투여(총 2회의 단일 용량).
치료 A, B, C, D: R-CHOP 24시간 후 약물 연구
Figure pct00019
치료 E:
GX-G3 20 mg/mL 주사용액(피하주사)의 시험 제품은 하기 기술된 치료와 함께 투여된다:
72 시간 이상의 20 mg/mL 피하 주사로 1회 피하 주사 후 각 21일의 처음 2회 연속 R-CHOP 주기 동안 R-CHOP 투여(총 2회의 단일 용량).
치료 E: R-CHOP 72시간 후 약물 연구
Figure pct00020
v. 방법론
연구의 적응증은 R-CHOP 요법을 받는 비호지킨 림프종 성인 환자에서 호중구감소증의 예방 또는 호중구 감소증의 기간 및 열성 호중구감소증의 발생률 감소였다.
모든 환자는 본 시험 내에서 각 주기의 기간이 21일인 2회의 R-CHOP 요법 주기를 받았다.
vi. 효능 및 안전성 변수
절대 호중구 수(ANC), 백혈구 수(WBC) 및 감별 혈구 수의 파라미터를 결정하고 사례 보고서 양식에 기록하여 테스트 및 참조 제품의 효능을 평가하였다.
치료 후 발생한 이상 반응 평가, 임상 검사 결과 평가, 안전성 검사 결과 평가 및 GX-G3에 대한 항체 평가의 파라미터는 시험 및 참조 제품의 안전성에 대해 결정되었다.
본 시험의 1차 종료점은 주기 1 및 주기 2에서 R-CHOP 화학요법제를 각각 투여한 후 중증 호중구 감소증(ANC<0.5×109/L로 정의)에서 0.5×109/L 이상의 목표로 회복되는 시간이었다.
본 시험의 2차 종료점은 화학요법 유도 주기 1 및 2에서 중증 호중구 감소증의 총 기간, 주기 1 및 2에서 R-CHOP 화학요법제의 각각의 투여 후 중증 호중구 감소증(ANC<0.5×109/L로 정의됨)에서 치료 후 1×109/L 이상 및 2×109/L 이상의 목표로 회복되는 시간, 매우 심각한 호중구감소증의 발병률(<0.1×109/L로 정의됨) 및 감염의 발병률이었다.
vii. 통계학적 방법
통계학적 분석은 안전성 세트, 전체 분석 세트(FAS) 및 프로토콜별 세트(PPS)의 세 가지 다른 환자 집단에 대해 수행되었다.
안전성 세트는 연구 약물의 최소 1회 용량을 받은 모든 무작위 환자로 구성되었다. 전체 분석 세트는 연구 약물의 최소 1회 용량을 받고 1차 종료점에 대한 기준선 이후 평가를 1회 이상 받은 모든 무작위 환자로 구성되었다. 프로토콜 세트당은 유효성 평가에 영향을 미칠 수 있는 주요 프로토콜 위반 없이 전체 치료 기간을 완료한 전체 분석 세트의 모든 환자로 구성되었다.
1차 종료점(Primary Endpoints)에 대한 통계학적 분석은 SAS® 소프트웨어(버전 9.4 이상)를 사용하여 수행된다. 이 분석을 위한 모집단은 전체 분석 세트와 프로토콜 세트당이다. 달리 명시되지 않는 한 모든 통계학적 시험 및 비교는 5% 유의 수준(α=5%)으로 평가된다.
1차 종료점(주기 1 및 2에서 R-CHOP 화학요법제의 각각의 투여 후 중증 호중구 감소증(ANC<0.5×109/L로 정의됨)에서 0.5×109/L 이상의 목표로 회복되는 시간)은 시험 제품과 참조 제품의 각각의 용량들 사이에서 비교되었다.
1차 종료점의 결과 비교는 다음과 같다:
- GX-G3 150 ㎍/kg BW vs. 참조 약물
- GX-G3 250 ㎍/kg BW vs. 참조 약물
- GX-G3 250 ㎍/kg BW 지연된 투여 vs. 참조 약물
- GX-G3 350 ㎍/kg BW vs. 참조 약물
1차 목표, 즉 중증 호중구감소증으로부터 회복하는 시간(rec)의 비교 통계 평가는 치료, 주기 및 중심을 인자로 사용하고 기준선 ANC를 공변량으로 사용하는 공분산 분석(ANCOVA)을 통해 수행된다. 위에서 설명한 비교는 PPS와 FAS 모두에서 수행되었다.
2차 종료점은 기술적인 통계학적 평가를 받는다. 이 분석을 위한 모집단은 전체 분석 및 프로토콜 세트당이다. 약동학적 분석은 농도 시간 데이터가 이용 가능하고 평가 가능한 모든 환자에 대해 수행된다. 통계학적 분석은 프로토콜별 모집단에 대해 수행된다. 이 집단은 유효성 평가에 영향을 미칠 수 있는 주요 프로토콜 위반 없이 전체 치료 기간을 완료한 모든 FAS 평가 가능한 환자로 정의된다. 각각의 시험 및 참조 제품(GX-G3 및 페그필그라스틴)에 서로 다른 분석 물질이 포함되어 있으므로 비교 분석이 수행되지 않는다.
안전 세트는 안전 데이터 분석에 사용되었다. 이 시험에서 얻은 모든 안전성 데이터는 적절한 경우 기술적인 그룹 통계(평균, 표준 편차, 최소값, 최대값, 유효한 사례 수)와 함께 기술적으로 표로 작성되었다. 모든 유해 사례가 수록되었다.
viii. 임상 연구 - II 상 결과
일반적 특성
총 65명의 환자(여성 35명, 남성 30명)(안전 집단; 전체 분석 세트)가 치료를 시작하였다: 53명의 환자(여성 29명, 남성 24명)가 시험 약물(GX-G3 20 mg/mL)에 할당되었고, 12명의 환자(6명의 여성, 6명의 남성)가 참조 약물(Neulasta®)에 할당되었다. 프로토콜 세트에 따라 간주된 환자의 수는 51명(시험으로 치료된 환자 41명, 참조 약물로 치료된 환자 10명)이었다.
효능 결과
1차 종료점
본 시험의 1차 목적은 참조약(Neulasta®)과 비교하여 최적 용량 범위를 선택하는 것을 목표로 하면서 GX-G3의 3가지 용량의 효능, 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다. 또한, R-CHOP 투여 72시간 후 GX-G3 250 ㎍/kg 체중(BW)을 지연 투여하여 시험 제품의 최적 투여 시점을 평가하였다.
1차 종료점은 주기 1 및 2에서 R-CHOP 화학요법을 각각 투여한 후 중증 호중구 감소증(ANC<0.5×109/L로 정의됨)에서 0.5×109/L 이상의 목표로 회복되는 시간이었다. 연구의 1차 종료점인 중증 호중구 감소증 프로파일로부터 회복하는 평균 시간은 PPS 및 FAS에 대한 각 치료 주기 및 두 주기 모두에 대해 함께 제시된다. 중증 호중구 감소증으로부터 회복하는 평균 시간은 PPS 및 FAS에 대해 각각 표 17 및 표 18에 제시되어 있다.
표 17
Figure pct00021
표 18
Figure pct00022
표 17 및 표 18로부터 알 수 있는 바와 같이, 중증 호중구 감소증에서 회복되는 시간은 150 ㎍/kg의 GX-G3 치료 그룹에서 가장 길었다. 나머지 4개 그룹의 값은 250 ㎍/kg GX-G3으로 치료된 그룹의 값이 더 짧은 경향과 동등하였다.
2차 종료점
2차 종료점은 화학요법 유도 주기 1 및 2에서 중증 호중구 감소증의 총 기간, 주기 1 및 2에서 R-CHOP 화학요법제의 각각의 투여 후 중증 호중구 감소증(ANC<0.5×109/L로 정의됨)에서 치료 후 1×109/L 이상 및 2×109/L 이상의 목표로 회복되는 시간, 매우 심각한 호중구감소증의 발병률(<0.1×109/L로 정의됨) 및 감염의 발병률이었다. 이 시험에서 추가 효능 파라미터는 절대 호중구 수(absolute neutrophil count; ANC); 백혈구 수(WBC) 및 차등 혈구 수(differential blood count)였다. 중증 호중구 감소증의 총 기간은 치료 그룹별로 등록된 중증 호중구 감소증의 모든 개별 기간의 합계로 계산되었다. PPS 및 FAS에 대한 결과는 각각 표 19 및 표 20에 제시되어 있다. 두 분석 집단 모두에서, GX-G3 150 ㎍/kg으로 치료받은 환자 그룹에서 중증 호중구 감소증의 가장 긴 총 기간이 등록되었고 GX-G3 250 ㎍/kg으로 치료받은 환자 그룹에서 가장 짧은 총 중증 호중구 감소증 기간이 등록되었다.
표 19
Figure pct00023
표 20
Figure pct00024
표 21 및 표 22는 프로토콜 세트 및 전체 분석 세트에 따라 두 데이터 세트에서 심각한 호중구 감소증에서 1×109/L 이상의 목표 ANC 및 2×109/L 이상의 목표 ANC로 회복되는 시간을 보여준다.
표 21
Figure pct00025
표 22
Figure pct00026
표 21 및 표 22에서 알 수 있는 바와 같이, 중증 호중구 감소증에서 회복되는 시간은 150 ㎍/kg의 GX-G3로 치료된 그룹에서 가장 길었다. 나머지 4개 그룹의 값은 250 ㎍/kg GX-G3로 치료한 그룹의 가장 짧은 값과 동등하였다.
PPS 및 FAS에서 중증 호중구 감소증, 매우 중증 호중구 감소증 및 열성 호중구 감소증의 발생률에 대한 정보는 각각 표 23 및 표 24에 제시되어 있다. 중증 호중구감소증은 PPS에서 총 25건으로 등록되었다. 중증 호중구 감소증이 발생한 비율은 GX-G3 150 ㎍/kg으로 치료받은 환자 그룹에서 가장 높았고 GX-G3 250 ㎍/kg으로 치료받은 환자 그룹에서 가장 낮았다. 총 6명의 환자에서 매우 심각한 호중구 감소증이 PPS에 등록되었고 총 18명의 환자에서 매우 심각한 호중구 감소증이 FAS에 등록되었다. GX-G3 150 ㎍/kg 치료 그룹(n=6)과 지연형 GX-G3 250 ㎍/kg 치료 그룹(n=5)에서 중증 호중구 감소증 환자가 가장 많았다. 발열성 호중구 감소증은 PPS에 등록되지 않았다. 1명의 환자는 FAS에서 발열성 호중구 감소증을 가졌다. 이러한 환자는 GX-G3 350 ㎍/kg으로 치료를 받았다.
표 23
Figure pct00027
표 24
Figure pct00028
감염 발생률은 MedDRA에서 파생된 시스템 기관 등급(SOC) 및 선호 용어(PT)별 발생률로 주어진 표 25에 제시되어 있다. GX-G3 250 ㎍/kg 및 GX-G3 350 ㎍/kg으로 치료한 환자 그룹에서 감염이 등록되지 않았다. GX-G3 250 ㎍/kg을 지연 치료한 환자 그룹(그룹 E)에서 감염 환자가 가장 많았다. 다른 종료점과의 감염 발생률을 조사했을 때, 이 비율은 참조약인 Neulasta®를 사용한 환자에서 25%였으며, GX-G3를 250 ㎍/kg(그룹 B) 및 350 ㎍/kg(그룹 C) 용량으로 사용한 환자에서는 감염이 관찰되지 않았다.
표 25
Figure pct00029
GX-G3 및 페그필그라스팀의 농도를 측정하고 평균 농도 대 시간 곡선을 도 24에 나타내었다.
계산된 약동학적 파라미터의 요약은 표 26에 나타나 있다. II 상 연구에서 수행된 약동학적 분석은 GX-G3의 파라미터 AUC 및 Cmax가 비선형으로 증가함을 보여주었으며, 이는 용량 증가에 비례하지 않았다. 용량이 1.4배 증가했을 때(150에서 350 ㎍/kg으로), AUClast는 약 7.2배, Cmax는 약 4.9배 증가하였다.
표 26
Figure pct00030
효능 결과의 평가
모든 용량의 GX-G3 및 Neulasta®의 투여는 ANC 값의 현저한 증가로 이어졌고 R-CHOP 치료의 호중구 감소 효과를 효과적으로 상쇄하였다. GX-G3의 지연된 투여는 상응하는 지연된 ANC 반응과 관련이 있었다.
실험의 전반적인 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다:
● 250 ㎍/kg 및 350 ㎍/kg의 용량은 효능 및 안전성 측면에서 Neulasta®와 유사하였다.
● 최저 용량인 150 ㎍/kg과 250 ㎍/kg의 3일 지연 투여는 모두 Neulasta®에 비해 효과는 떨어지지만 안전성 측면에서는 Neulasta®와 다르지 않았다.
● GX-G3의 약동학적 파라미터 AUC 및 Cmax는 150 ㎍/kg과 350 ㎍/kg 사이의 용량 범위 내에서 비례 이상으로 비선형적으로 증가하였다.
2차 평가변수에 대해 얻은 결과는 1차 파라미터에 대해 얻은 결과를 확인하였다. FAS와 PPS 사이에는 관련 차이가 관찰되지 않았다.
안전성 결과
안전성 집단(n=65)에 대한 이러한 II 상 임상 시험에 대해 다음과 같은 안전성 종료점이 정의되고 분석되었다:
* 치료로 인한 이상 반응 평가
* 임상시험 결과 평가
* 안전 실험실 결과 평가
* GX-G3에 대한 항체 평가
이상 반응은 두 그룹으로 나눌 수 있다. 첫 번째 그룹은 비치료 긴급 유해 사례(연구 약물 투여 전에 발생한 모든 유해 사례)이고 두 번째 그룹은 치료 긴급 유해 사례이다.
총 252건의 치료 관련 부작용이 48명의 환자(그룹 A-C에 각각 10명의 환자, 그룹 D 및 E에 각각 9명의 환자)에 등록되었다. 심각한 유해 사례(SAE)의 총 수는 5명의 환자 중 9명(각 치료 그룹당 1명의 환자)이었다. 치료 그룹당 분포를 표시하는 요약은 표 27 및 표 28에 제공된다.
표 27
Figure pct00031
표 28
Figure pct00032
결과에 따르면, 4가지 상이한 용량의 GX-G3 및 Neulasta®는 일반적으로 내약성이 우수하였다. 부작용, 중대한 부작용 및 실험실 결과를 조사한 결과 시험약에 대한 안전성 문제는 관찰되지 않았다.
GX-G3에 대한 항체 측정을 위한 GX-G3 샘플의 면역원성을 평가하기 위해 (각 치료 주기 및 최종 검사에서 GX-G3 투여 전에) 다른 시점에서 채취하였다. 총 5명의 환자에서 항-GX-G3 항체가 검출될 수 있었다. 이들 환자 모두는 기준선에서 항-GX-G3 항체에 대해 양성이었다. 환자 중 3명은 최종 방문에서 음성이 되었고, 1명의 환자는 최종 방문까지 양성으로 기억되었으며 한 환자에 대한 추가 정보는 제공되지 않았다. 치료기간 중 새로 개발된 항-GX-G3 항체는 등록된 사례가 없었다.
안전성 결과 평가
GX-G3와 대조약의 4가지 상이한 용량 및/또는 투여 요법은 일반적으로 안전성 및 내약성 측면에서 GX-G3와 대조약 사이에 유의한 차이 없이 잘 내약성이 되었다.
AE, SAE, 활력 증후 및 실험실 검사 결과와 같은 안전과 관련된 추가 파라미터의 분석은 시험 제품과 관련된 특정 안전성 문제를 나타내지 않았다. 새로 개발된 항-GX-G3 항체의 사례가 관찰되지 않았다.
II 상 연구의 전체적인 결론
본 시험의 1차 목적은 GX-G3의 3가지 용량의 효능, 안전성 및 내약성을 평가하고 각 용량을 참조 제품(Neulasta®)과 비교하여 최적 용량 범위를 선택하는 것을 목적으로 하였다. 지연 투여(화학요법제 투여 후 3일째에 GX-G3 250 ㎍/kg)를 갖는 한 그룹을 포함하는 목적은 시험 제품의 투여에 대한 최적 시점을 평가하는 것이다.
모든 용량의 GX-G3 및 Neulasta®의 투여는 ANC 값의 현저한 증가로 이어졌고 R-CHOP 치료의 호중구 감소 효과를 효과적으로 상쇄하였다. GX-G3의 지연된 투여는 상응하는 지연된 ANC 반응과 관련이 있었다.
실험의 전반적인 결과는 다음과 같이 요약할 수 있다:
● 250 ㎍/kg 및 350 ㎍/kg의 용량은 효능 및 안전성 측면에서 Neulasta®와 유사하였다.
● 감염 발생률은 그룹 D(Neulasta®)에서 %25로 발견되었으며 그룹 B 및 C(250 및 350 ㎍/kg 용량)에서는 감염이 관찰되지 않았다.
● GX-G3의 약동학적 파라미터 AUC 및 Cmax는 150 ㎍/kg과 350 ㎍/kg 사이의 용량 범위 내에서 비례 이상으로 비선형적으로 증가하였다. 2차 종료점에 대해 얻은 결과는 1차 종료점에 대해 얻은 결과를 뒷받침한다.
● FAS와 PPS 사이의 효능 결과의 관련 차이는 관찰되지 않았다.
● 유해 사례 분석은 시험 제품과 참조 제품 사이의 안전성 및 내약성 차이를 나타내지 않았다.
● AE, SAE, 활력 증후 및 실험실 검사 결과와 같은 안전성과 관련된 추가 파라미터의 분석은 시험 제품과 관련된 특정 안전성 문제를 나타내지 않았다.
● 새로 개발된 항-GX-G3 항체의 사례는 관찰되지 않았다.
요약하면, 수행된 모든 연구(비임상 및 임상) 중에서, 화학요법 후 24시간에 투여된 200 ㎍/kg 내지 400 ㎍/kg, 바람직하게는 250 ㎍/kg 내지 350 ㎍/kg의 GX-G3가 추가 임상 연구 및 표적 제품 프로파일을 얻기 위한 최적의 요법인 것으로 결론지어진다.
본 발명은 여기에 기술된 특정 실시예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어남이 없이 본 발명의 방법 및 조성물에 다양한 수정 및 변형이 이루어질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구범위 및 그 균등물의 범위 내에 있는 한 본 발명의 수정 및 변형을 포함하도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> ILKOGEN ILAC SANAYI VE TICARET A.S. <120> A LONG-ACTING G-CSF FOR PREVENTING NEUTROPENIA OR REDUCING DURATION OF NEUTROPENIA <130> Q251608 <150> US 62/804,988 <151> 2019-02-13 <160> 4 <170> PatentIn 3.5.1 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of GX-G3 with signal sequence <400> 1 Met Ala Gly Pro Ala Thr Gln Ser Pro Met Lys Leu Met Ala Leu Gln 1 5 10 15 Leu Leu Leu Trp His Ser Ala Leu Trp Thr Val Gln Glu Ala Thr Pro 20 25 30 Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro Gln Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu 35 40 45 Glu Gln Val Arg Lys Ile Gln Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gln Glu Lys 50 55 60 Leu Cys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu 65 70 75 80 Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser 85 90 95 Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gly Cys Leu Ser Gln Leu His Ser Gly Leu 100 105 110 Phe Leu Tyr Gln Gly Leu Leu Gln Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu 115 120 125 Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gln Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala 130 135 140 Thr Thr Ile Trp Gln Gln Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu 145 150 155 160 Gln Pro Thr Gln Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gln Arg 165 170 175 Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gln Ser Phe Leu Glu 180 185 190 Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gln Pro Arg Asn Thr Gly 195 200 205 Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu 210 215 220 Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu 225 230 235 240 Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440 445 Lys <210> 2 <211> 384 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> amino acid sequence of human IgD constant region <400> 2 Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg 1 5 10 15 His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly 20 25 30 Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser 35 40 45 Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr 50 55 60 Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly 65 70 75 80 Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu 85 90 95 Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro 100 105 110 Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala 115 120 125 Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys 130 135 140 Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu 145 150 155 160 Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala 165 170 175 Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val 180 185 190 Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly 195 200 205 Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser 210 215 220 Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu 225 230 235 240 Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu 245 250 255 Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro 260 265 270 Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala 275 280 285 Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile 290 295 300 Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe 305 310 315 320 Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala 325 330 335 Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr 340 345 350 Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala 355 360 365 Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys 370 375 380 <210> 3 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> amino acid sequence of Partial human IgG4 constant region <400> 3 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 1 5 10 15 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110 Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 165 170 175 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 180 185 190 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 210 215 220 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 305 310 315 320 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 <210> 4 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of hyFc <400> 4 Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys 1 5 10 15 Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His 20 25 30 Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 35 40 45 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 50 55 60 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 65 70 75 80 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 85 90 95 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 100 105 110 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 115 120 125 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 130 135 140 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 145 150 155 160 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 165 170 175 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 180 185 190 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 195 200 205 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 210 215 220 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 225 230 235 240 Leu Ser Leu Gly Lys 245

Claims (21)

  1. 호중구 감소증(neutropenia)을 예방하거나 또는 이를 필요로 하는 대상체의 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키는 방법으로서,
    상기 대상체에 하기 일반식 (I)의 혼성 Fc 융합 G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor)를 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 투여하는 것을 포함하는 방법:
    [일반식 (I)]
    N'-G-Y-Z2-Z3-Z4-C'
    상기 식에서,
    G는 G-CSF이고;
    N'는 폴리펩티드의 N-말단이고 C'는 폴리펩티드의 C-말단이며;
    Y는 서열번호 2의 99번 내지 162번 위치의 아미노산 잔기 중 162번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 5 내지 64개의 연속된 아미노산 잔기(consecutive amino acid residues)를 갖는 아미노산 서열이고;
    Z2는 서열번호 2의 163번 내지 199번 위치의 아미노산 잔기 중 163번 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 쪽으로 4 내지 37개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
    Z3은 서열번호 3의 115번 내지 220번 위치의 아미노산 잔기 중 220번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 71 내지 106개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
    Z4는 서열번호 3의 221번 내지 327번 위치의 아미노산 잔기 중 221번 위치의 아미노산 잔기로부터 C 말단 쪽으로 80 내지 107개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열임.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 약 250 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg의 용량 범위로 투여되는, 방법.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 서열번호 1의 아미노산 잔기 31 내지 449의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 비경구 투여되는, 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 피하 투여되는, 방법.
  6. 제 1 항에 있어서,
    상기 대상체는 항암 요법을 받는 인간인, 방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 인간 대상체는 화학요법을 받는 것인, 방법.
  8. 제 6 항에 있어서,
    상기 인간 대상체는 방사선 요법을 받는 것인, 방법.
  9. 제 7 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 주기에서 상기 인간 대상체에 1회 투여되는, 방법.
  10. 제 7 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법 후 적어도 24시간 투여되는, 방법.
  11. 제 7 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 화학요법의 매 2, 3 또는 4 이상의 주기동안 1회 투여되는, 방법.
  12. 제 1 항에 있어서,
    상기 호중구 감소증은 중등도(moderate) 또는 중증(severe)인, 방법.
  13. 제 1 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 상기 혼성 Fc 융합 G-CSF 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물로 투여되는, 방법.
  14. 제 1 항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 용량의 증가에 따른 AUC의 초-비례적 증가(supra-proportional increase)에 따라 비-선형 약동학을 나타내는, 방법.
  15. 대상체에서 호중구 수준(neutrophil levels)을 증가시키는 방법으로서,
    상기 대상체에 하기 일반식 (I)의 혼성 Fc 융합 G-CSF의 치료적 유효량을 약 200 ㎍/kg 내지 약 400 ㎍/kg의 용량 범위로 투여하는 것을 포함하는 방법:
    [일반식 (I)]
    N'-G-Y-Z2-Z3-Z4-C'
    상기 식에서,
    G는 G-CSF이고;
    N'는 폴리펩티드의 N-말단이고 C'는 폴리펩티드의 C-말단이며;
    Y는 서열번호 2의 99번 내지 162번 위치의 아미노산 잔기 중 162번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 5 내지 64개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
    Z2는 서열번호 2의 163번 내지 199번 위치의 아미노산 잔기 중 163번 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 쪽으로 4 내지 37개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
    Z3은 서열번호 3의 115번 내지 220번 위치의 아미노산 잔기 중 220번 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 쪽으로 71 내지 106개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
    Z4는 서열번호 3의 221번 내지 327번 위치의 아미노산 잔기 중 221번 위치의 아미노산 잔기로부터 C 말단 쪽으로 80 내지 107개의 연속된 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열임.
  16. 제 15 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 약 250 ㎍/kg 내지 약 350 ㎍/kg의 용량 범위로 투여되는, 방법.
  17. 제 15 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 서열번호 1의 아미노산 잔기 31 내지 449의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  18. 제 15 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 비경구 투여되는, 방법.
  19. 제 15 항에 있어서,
    상기 혼성 Fc 융합 G-CSF는 피하 투여되는, 방법.
  20. 제 15 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 1.0×109/L 혈액 미만의 순환 호중구를 갖는 인간인, 방법.
  21. 제 15 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 0.5×109/L 혈액 미만의 순환 호중구를 갖는 인간인, 방법.
KR1020217029489A 2019-02-13 2020-01-21 호중구 감소증을 예방하거나 또는 호중구 감소증의 지속기간을 감소시키기 위한 지속성 g-csf KR20210127215A (ko)

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