KR20210125048A - 인산화 타우 펩티드 백신의 안전한 투여 방법 - Google Patents

Abstract

인간에서 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화된 타우 항체를 유도하는 방법이 설명된다. 방법은 대상에게 톨-유사 수용체 4 작용제 및 리포솜의 표면상에 제시되는 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜을 유효량 투여하는 것을 포함한다.

Description

인산화 타우 펩티드 백신의 안전한 투여 방법

전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조

본 출원은 파일명이 "Sequence Listing 689001_66U1"이고 2020년 2월 7일에 생성되었으며 22KB 크기로 ASCII 형식의 서열 목록으로 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록은 명세서의 일부이며 전체가 본원에 참조로 통합된다.

발명의 분야

본 발명은 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 특히 인산화된 타우(pTau) 펩티드의 리포솜 및 알츠하이머병과 같은 타우병증을 예방 또는 치료하기 위한 이의 용도에 관한 것이다.

알츠하이머병(AD)은 전 세계적으로 어림잡아 약 4 천 4 백만 명에 영향을 끼치는 진행성 쇠약성 신경변성 질환이다(Alzheimers.net). 현재 상용화된 AD 치료제는 임상 증상에 작용하는 것을 목표로 하고 질환 기저를 이루는 병원성 과정을 목표로 하지는 않는다(질환 조절 효과). 불행하게도, 현재의 치료법은 최소 효과만 있으므로 추가적인 예방 및 치료 방법을 개발하고 시험하는 것이 시급하다.

알츠하이머병에 대한 특징적인 병리는 특히 응집된 아밀로이드 베타 단백질을 포함하는 세포 외 플라크의 축적 및 과인산화된 타우 단백질의 세포 내 "매듭" 또는 응집이다. 이들 단백질의 축적을 초래하는 분자 사건은 잘 특성화되어 있지 않다. 아밀로이드의 경우, 아밀로이드 전구체 단백질의 비정상적 절단이 아미노산 1-42를 포함하는 응집되기 쉬운 단편의 축적을 초래한다고 가정하고 있다. 타우의 경우, 키나제, 포스파타제 또는 둘 다의 조절 장애가 타우의 비정상적인 인산화를 유발한다고 가정하고 있다. 일단 타우가 과인산화되면, 미세소관을 효과적으로 결합하고 안정화시키는 능력을 상실하고, 대신 영향받은 뉴런의 세포질에 축적된다. 결합되지 않은 과인산화된 타우는 제1 올리고머 및 이어서 고차 응집체를 형성하는 것으로 보이며, 이의 존재는 아마도 정상적인 축색 돌기 수송의 중단을 통해 이들이 형성하는 뉴런의 기능에 부정적인 영향을 미치는 것으로 보인다.

선진국에서, 알츠하이머병 또는 다른 치매성 타우병증으로 진단된 개인들은 일반적으로 콜린에스테라제 억제제(예를 들어, Aricept^®) 또는 메만틴(예를 들어, Namenda™)으로 치료된다. 이들 약물은 상당히 내약성이 있지만 효능은 대단치 않다. 예를 들어, Aricept^®는 치료받은 개인의 약 50%에서 6-12 개월 동안 증상 악화를 지연시킨다. 나머지 치료법은 비약리학적이며, 인지 능력이 떨어졌을때 환자가 일상 업무를 보다 잘 관리할 수 있도록 하는 데 중점을 둔다.

면역요법이 현재 AD의 예방 및 치료를 위해 개발중에 있다. AD와 관련된 항원으로의 능동 면역화는 잠재적으로 AD에 대한 항체 기반 및 세포 면역 모두의 반응을 자극할 수 있다. 그러나, 광범위하게 시험된 최초의 인간 항아밀로이드 베타 백신에 대한 평가는 2002년에 중단되었다. 치명적일 수 있는 중추 신경계 염증의 일종인 수막뇌염이 Aβ를 표적으로 하는 활성 면역치료제 AN-1792의 AD 환자에 대한 임상 연구에서 관찰되었다(Orgogozo et al., 2003). AN-1792에 노출된 환자의 6%에서 발생한 뇌염 반응은 원치 않는 Aβ-특이적 T-세포 활성화에 의해 유도된 것으로 생각된다.

현재까지 타우 병리를 특이적으로 표적화하는 제제에 대한 연구는 거의 수행되지 않았다. 타우 면역요법은 현재 임상 시험으로 옮겨가고 있지만 이 분야는 아직 걸음마 단계에 있으며 다양한 접근법의 효능과 안전성에 대한 기계론적 이해가 잘 확립되어 있지 않다(Sigurdsson, Neurodegener Dis. 2016; 16(0): 34-38). 뇌의 염증인 뇌염은 전장 타우 단백질에 대해 면역된 마우스에서도 보고되었다. 그러나, CNS 전염증성 환경하에서 인산화된 타우 펩티드의 단일 주사로 면역화된 동물로부터 부작용은 보고되지 않았다(Rosenmann H., 2013. Curr. Alzheimer Res. 10, 217-228).

경증 내지 중등도의 알츠하이머병에 걸린 인간 환자에서 비인산화된 타우 펩티드 백신(AADvac1)의 장기 안전성 프로파일이 최근에 발표되었다(Novak et al., Alzheimer's Research & Therapy(2018) 10:108). 백신은 N-말단 시스테인을 통해 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH)에 결합된 타우 서열의 아미노산 294 내지 305에서 유래된 합성 펩티드를 함유하고 있다. 이는 0.3 ml 부피 인산염 완충액 중 수산화알루미늄 애쥬번트(0.5 mg Al3⁺ 함유)와 함께, KLH에 결합된 40 ㎍의 펩티드(CKDNIKHVPGGGS) 용량으로 투여되었다. 연구에 등록되고 1 상 연구(FUNDAMANT 연구)에서 AADvac1 치료와 관련된 26 명의 환자로부터 관찰된 이상 반응(AE)은 주사 부위 반응(홍반, 부기, 온기, 가려움증, 통증, 결절)이었다. 이러한 AE 중 하나 이상이 AADvac1 치료를 받은 환자 50%에서 관찰되었다. 주사 부위 반응은 가역적이었고 주로 경미하게 나타났다. 6 건의 심각한 유해 사건(SAE)이 관찰되었다(복부 감돈 탈장, 탈수, 급성 정신증, 치매의 행동 및 정신 증상, 2 급 방실 차단 및 동서맥). 조사관에 의해 SAE 중 어느 것도 AADvac1 치료와 관련된 것이라고 판단되지 않았다. 알레르기 또는 아나필락시스 반응은 관찰되지 않았다. 실험실 평가(응고, 혈액 생화학, 혈액학 및 소변 검사), 활력 징후 평가 또는 신경 및 신체 검사에서 안전 신호는 나타나지 않았다. MRI 평가에서 안전 신호는 검출되지 않았다. 부종 변화는 발생하지 않았다. 수막 변화와 수막뇌염은 관찰되지 않았다. ApoE4 동형접합체 1 개에서 새로운 미세 출혈이 관찰되었고 ApoE4 이형접합체 1 개에서 표면 헤모시데린이 검출되었으며 두 사건 모두 임상적으로 무증상이었다. 이것은 알츠하이머병 환자 집단에서 그러한 병변의 배경 발생률과 일치하는 것으로 간주되었다.

그러나, 인간 환자에 대한 인산화된 타우 펩티드 백신의 안전성 프로파일은 보고되지 않았다. 알츠하이머병과 같은 신경변성 질환에 대한 안전하고 효과적인 치료제가 필요하다.

발명의 요약

본 발명은 리포솜 표면상에 제시되는 인산화된 타우 펩티드를 포함하는 리포솜 백신의 임상 연구로부터의 발견에 기초한다. 이 백신은 인간에게 내약성이 있는 것으로 나타났다. 타우 접합 백신 AADvac1 시험에서 사용된 것보다 훨씬 더 높은 용량에서, pTau 펩티드 리포솜 백신은 심각한 유해 사건을 유발하지 않고 인간 대상에서 항인산화 타우 항체를 유도하는 것으로 나타났다.

따라서, 하나의 일반적인 측면에서, 본 발명은 톨-유사 수용체 4 작용제 및 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 인간 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법을 제공하며, 여기서 타우 포스포펩티드는 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 예컨대 용량당 약 29.7 nmole 내지 약 742.5 nmole, 바람직하게는 약 90 nmole 내지 약 715 nmole, 예컨대 용량당 약 89.1 nmole 내지 약 712.8 nmole, 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 535 nmole, 예컨대 용량당 약 89.1 nmole 내지 약 534.6 nmole, 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 275 nmole, 예컨대 용량당 약 89.1 nmole 내지 약 267.3 nmole의 양으로 투여되고, 타우 포스포펩티드는 리포솜 표면에 제시된다. 특정 실시양태에서, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 29 및 서열 번호 31 내지 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어지고, 바람직하게는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진다. 하나의 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 톨-유사 수용체 4 작용제 및 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드를 포함하며, 여기서 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드는 리포솜의 표면상에 제시되고 용량당 100 ㎍ 내지 2500 ㎍(용량당 29.7 nmole 내지 742.5 nmole에 상응), 바람직하게는 용량당 300 ㎍ 내지 2400 ㎍(용량당 89.1 nmole 내지 712.8 nmol에 상응), 예를 들어 용량당 300 ㎍, 900, 1800 ㎍ 또는 2400 ㎍(용량당 89.1 nmole, 267.3 nmole, 534.6 nmole 또는 712.8 nmole에 상응)의 양으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 본 발명은 톨-유사 수용체 4 작용제 및 리포솜의 표면상에 제시되는 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 인간 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법을 제공하며, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 타우 포스포펩티드는 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole의 양으로 투여되고, 바람직하게는 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드이고, 용량당 약 300 ㎍, 약 900 ㎍, 약 1800 ㎍ 또는 약 2400 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 양으로 투여된다.

특정 실시양태에서, 본 발명은 톨-유사 수용체 4 작용제 및 리포솜의 표면상에 제시되는 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 인간 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법을 제공하며, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 29 및 서열 번호 31 내지 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 타우 포스포펩티드는 용량당 약 90 nmole 내지 약 715 nmole의 양, 예컨대 용량당 약 29.7 nmole, 약 267.3 nmole, 약 534.6 nmole, 또는 약 712.8 nmole, 또는 그 사이의 임의의 양으로 투여된다. 하나의 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 265 내지 275 nmole, 예를 들어, 용량당 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274 nmole 또는 275 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값의 양, 예컨대 용량당 약 267.3 nmole의 양으로 타우 포스포펩티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 530 내지 540 nmole, 예컨대 용량당 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 538, 539 또는 540 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값의 양, 예컨대용량당 534.6 nmole의 양으로 타우 포스포펩티드를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 710 내지 720 nmole, 예컨대 용량당 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719 또는 720 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값의 양, 예컨대 용량당 712.8 nmole의 양으로 타우 포스포펩티드를 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜은 피하 투여된다.

특정 실시양태에서, 리포솜은 근육내로 투여된다.

특정 실시양태에서, 방법은 초기 투여 후 1 내지 24 주에 유효량의 리포솜의 제2 용량을 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜은 헬퍼 T-세포 에피토프 및 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드 중 적어도 하나를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18 내지 서열 번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 갖고, 바람직하게는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 가지며, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 갖고, CpG 올리고뉴클레오티드는 링커, 바람직하게는 PEG 링커를 통해 적어도 하나의 친유성 기에 공유 결합된다.

특정 실시양태에서, 리포솜은 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG) 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지질을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에서, 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 23 내지 서열 번호 26으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 바람직하게는 서열 번호 23 내지 25의 아미노산 서열을 포함한다.

특정 실시양태에서, 톨-유사 수용체 4 작용제는 모노포스포릴 지질 A(MPLA)이다.

특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 30 ㎍ 내지 900 ㎍, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 585 ㎍의 양으로 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함한다. 특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 30 ㎍ 내지 900 ㎍, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 585 ㎍의 양으로 톨-유사 수용체 작용제 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실을 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 25 ㎍ 내지 625 ㎍, 바람직하게는 75 ㎍ 내지 450 ㎍의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 25 ㎍ 내지 625 ㎍, 바람직하게는 75 ㎍ 내지 450 ㎍의 양으로 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 약 2 nmole 내지 약 110 nmole, 예컨대 용량당 약 4.02 nmole 내지 약 100.44 nmole, 또는 용량당 약 4 nmole 내지 약 75 nmole, 예컨대 용량당 약 4.02 nmole 내지 약 72.32 nmole, 또는 용량당 약 10 nmole 내지 약 105 nmole, 예컨대 용량당 약 12.06 nmole 내지 약 100.44 nmole, 또는 용량당 약 70 내지 약 105 nmole, 예컨대 용량당 약 72.32 nmole 내지 약 100.44 nmole의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 약 3 nmole 내지 약 105 nmole, 바람직하게는 용량당 약 10 nmole 내지 약 105 nmole, 예컨대 용량당 약 12.06 nmole 내지 약 100.44 nmole의 양으로 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 하나의 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 2 내지 5 nmole의 양, 예를 들어, 용량당 2, 3, 4 또는 5 nmole 또는 그 사이의 임의의 값, 예컨대 용량당 약 3.82, 3.92, 4.02 또는 4.12 nmole의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 10 내지 15 nmole의 양, 예컨대 용량당 10, 11, 12, 13, 14 또는 15 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값, 예컨대 용량당 11.86, 11.96, 12.06, 12.16 nmole로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 70 내지 75 nmole의 양, 예컨대 용량당 70, 71, 72, 73, 74 또는 75 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값, 예컨대 72.02, 72.12, 72.22, 72.32, 72.42로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 98 내지 103 nmole의 양, 예컨대 용량당 98, 99, 100, 101, 102 또는 103 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값, 예컨대 용량당 100.24, 100.34, 100.44, 100.54 또는 100.64 nmole로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 50 ㎍ 내지 1250 ㎍, 바람직하게는 150 ㎍ 내지 800 ㎍의 양으로 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 리포솜의 유효량은 용량당 50 ㎍ 내지 1250 ㎍, 바람직하게는 150 ㎍ 내지 800 ㎍의 양으로 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열로 이루어진 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

특정 실시양태에서, 리포솜은 다음을 포함한다:

(1) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드;

(2) 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실을 포함하는 톨-유사 수용체 4 작용제;

(3) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 헬퍼 T-세포 에피토프;

(4) 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드; 및

(5) 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 지질(DMPG).

특정 실시양태에서, 대상은 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 경도 알츠하이머병, 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병과 같은 알츠하이머병의 치료를 필요로 한다. 다른 실시양태에서, 대상은 뇌에 아밀로이드 양성이지만 아직 상당한 인지 장애를 나타내지는 않는다.

본 발명은 또한 필요한 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유도하지 않으면서 항-인산화된 타우 항체를 유도하는데 사용하기 위한 백신 조합에 관한 것으로, 여기서 백신 조합은 프라이머 백신 및 본 발명의 실시양태에 따른 부스터 백신을 포함한다. 본 발명은 또한 필요한 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유도하지 않으면서 항인산화 타우 항체를 유도하기 위한 약제의 제조에서 백신 조합의 용도를 제공하며, 여기서 백신 조합은 프라이머 백신 및 본 발명의 실시양태에 따른 부스터 백신을 포함한다. 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유도하지 않고 항인산화 Tau 항체를 유도하는 방법과 관련하여 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 모든 측면 및 실시양태는 필요한 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유도하지 않으면서 항인산화 타우 항체를 유도하기 위한 의약 제조에서의 백신 조합의 사용 및/또는 용도를 위해 백신 조합에 적용될 수 있다.

본 발명의 추가 측면, 특징 및 이점은 본 발명 및 청구범위에 대한 다음의 상세한 설명을 읽으면 더 잘 이해될 것이다.

전술한 요약 및 본 출원의 바람직한 실시양태에 대한 다음의 상세한 설명은 첨부 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원은 도면에 도시된 정확한 실시양태로 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다.
도 1은 암컷 C57BL/6 마우스에 35 및 80 ㎍/용량의 ACI-35.030을 2 주에 1 회 근육내 투여한 후의 pTau IgG 역가를 나타낸다; 10 마리의 마우스 그룹당 기하 평균 + 95% CI가 표시된다.
도 2는 1200 ㎍/용량 및 2400 ㎍/용량의 ACI-35.030이 붉은털원숭이에서 항인산화된 타우 항체의 지속적인 역가를 유도함을 나타낸다; ELISA에 의해 측정되어 AU/mL로 표현된 그룹당 항체 역가의 기하 평균이 표시된다.
도 3은 2400 ㎍/용량의 ACI-35.030의 4 회 주사가 결장 섹션(패널 D)과의 교차 반응 없이 AD 뇌 섹션(패널 B) 상의 타우 탱글에 결합하는 항체를 유도함을 보여준다. 전처리 샘플은 AD 뇌 섹션(패널 A) 또는 결장 섹션(패널 C)에 결합하지 않았다.
도 4는 1800 ㎍/용량의 ACI-35.030의 근육내 주사가 동일한 용량의 동일한 백신의 피하 주사와 비교하여 더 낮은 그룹 내 변동성을 갖는 항-ePHF IgG 항체 역가를 유도함을 나타낸다.

발명의 상세한 설명

다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술과 본 명세서 전반에 걸쳐 인용 또는 기재되어 있으며; 이들 참고문헌은 각각 전체적으로 본 명세서에 참조로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 디바이스, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성한다고 인정하는 것은 아니다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용된 소정의 용어는 본 명세서에 제시된 바와 같은 의미를 갖는다.

본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.

달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10%(w/v)의 농도 범위는 0.9%(w/v) 내지 11%(w/v)를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.

달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소 앞에 있는 "적어도"라는 용어는 시리즈의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 본원에 기술된 본 발명의 특정 실시양태에 대한 많은 등가물을 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.

본원에 사용된 용어 "포함하다", "포함하는", "포함한다", "포함한", "가지고 있다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는" 또는 이의 임의의 다른 변형은 언급된 정수 또는 정수 그룹을 포함하지만 다른 정수 또는 정수 그룹을 배제하지 않는 것을 의미하며 비배타적이거나 개방적인 것으로 의도된 것임이 이해될 것이다. 예를 들어, 요소 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치는 반드시 이들 요소에만 한정되는 것은 아니며, 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치에 명시적으로 열거 또는 고유하지 않은 다른 성분을 포함할 수 있다. 또한, 반대로 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는"은 포괄적이고, 및/또는, 배타적이지 않은 것을 의미한다. 예를 들어, 조건 A 또는 B는 다음 중 어느 하나에 의해 충족된다. A가 사실 (또는 존재), B가 사실이 아님 (또는 존재하지 않음)이고, A가 사실이 아님 (또는 존재하지 않음), B가 사실 (또는 존재함)이고, A와 B가 모두 사실 (또는 존재함)이다.

또한, 본 발명의 구성 요소의 치수 또는 특성을 언급할 때 본원에 사용된 용어 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로" 및 유사한 용어는 기술된 치수/특성이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니며, 당업자에게 이해되는 바와 같이 기능상 동일하거나 유사한 작은 변형을 배제하지 않음을 가리키는 것으로 이해되어야 한다. 최소한, 수치 파라미터를 포함하는 이러한 참조는 당 업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리(예를 들어, 반올림, 측정 또는 다른 체계적 오차, 제조 공차 등)를 사용하여 최소 유효 자릿수를 변화시키지 않는 변형을 포함할 것이다.

본 발명은 이를 필요로 하는 인간 대상에서 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유도하지 않고 항-인산화된 타우 항체를 유도하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 상기 방법은 리포솜 표면에 제시된 타우 포스포펩티드 및 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하는 유효량의 리포솜을 대상에게 투여하는 것을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "항-인산화된 타우 항체"는 타우의 아미노산 서열의 하나 이상의 위치에서의 아미노산 잔기 상에서 인산화된 타우에 결합하는 항체를 지칭한다. 인산화된 아미노산 잔기는 예를 들어 세린(Ser), 트레오닌(Thr) 또는 티로신(Tyr)일 수 있다. 항인산화 타우 항체가 결합하는 인산화된 타우 상의 부위는 바람직하게는 알츠하이머병과 같은 신경변성 질환에서 특이적으로 인산화된 부위이다. 항인산화 타우 항체가 결합하는 인산화 타우 부위의 예는 예를 들어 Tyr18, Ser199, Ser202, Thr205, Thr212, Ser214, Ser396, Ser404, Ser409, Ser422, Thr427을 포함한다. 본 출원 전반에 걸쳐 사용된 아미노산 위치는 GenBank 수탁 번호 NP_005901.2로 표시되는 아미노산 서열을 갖는 인간 미세소관-연관 단백질 타우 동형 2의 서열을 참조하여 주어진다.

투여 시 항인산화 타우 항체를 유도하는 능력은 대상으로부터의 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청, PBMC, 소변, 타액, 대변, CSF 또는 림프액)에 대해 항체, 예를 들어 약학 조성물에 투여된 면역원성 타우 펩티드(들)에 대한 IgG 또는 IgM 항체의 존재를 검사하여 결정될 수 있다(예를 들어 Harlow, 1989, Antibodies, Cold Spring Harbor Press 참조). 예를 들어, 면역원을 제공하는 조성물의 투여에 반응하여 생성된 항체의 역가는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 기타 ELISA 기반 검정(예: MSD-Meso Scale Discovery), 도트 블롯, SDS-PAGE 겔, ELISPOT 또는 항체 의존성 세포 식세포 작용(ADCP) 분석으로 측정할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "유해 사건"(AE)은 의약품이 투여된 환자에서 발생하고 반드시 치료와 인과 관계가 반드시 있는 것은 아닌 임의의 좋지 않은 의학적 발생을 지칭한다. 본 발명의 실시양태에 따르면, AE는 하기 정의를 사용하여 증가하는 중증도의 3 점 척도로 평가된다: 경증(등급 1), 최소한의 불편함을 유발하고 정상적인 일상 활동을 방해하지 않는 대상이 잘 받아들일 수 있는 AE를 지칭함; 중등도(2 등급), 정상적인 일상 활동을 방해하고 개입이 필요할 수 있을 정도로 충분히 불편한 AE를 지칭함; 중증(3 등급), 정상적인 일상 활동을 방해하고 일반적으로 치료 또는 기타 중재가 필요한 AE를 지칭함. 중증 AE(SAE)는 하기 결과 중 임의의 것을 초래하는 임의의 용량에서 발생하는 임의의 AE일 수 있다: 사망, 여기서 사망은 사건이 아니라 결과임; 생명 위협, 사건 당시 환자가 사망할 위험에 처한 사건을 지칭함; 더 심각했다면 사망에 이르게 할 수 있었던 사건을 지칭하지 않음; 환자 입원, 즉 계획되지 않은 야간 입원 또는 기존 입원의 연장; 정상적인 생활 기능을 수행하는 능력의 지속적이거나 심각한 무능력 또는 상당한 장애; 선천적 기형/선천적 결함; 환자를 위태롭게 할 수 있거나 위에 나열된 다른 결과 중 하나를 예방하기 위해 의학적 또는 외과적 개입이 필요할 수 있는 중요한 의학적 사건(조사자에 의해 간주됨)(예를 들면, 알레르기성 기관지 경련 또는 혈액 병 또는 경련에 대해 응급실이나 집에서 집중 치료가 필요하나 입원으로 이어지지 않음). 입원은 공식적으로 병원에 입원하는 것이다. 입원 또는 입원 연장은 AE가 심각하다는 기준을 구성한다; 그러나, 그 자체로는 SAE로 간주되지 않는다. AE가 없는 경우, 참여 조사자는 입원 또는 입원 연장을 SAE로 보고해서는 안된다. 이것은 다음과 같은 상황의 경우일 수 있다: 프로토콜에서 요구하는 절차를 위해 입원 또는 입원 연장이 필요하거나; 또는 입원 또는 입원 연장이 센터에서 수행하는 일상적인 절차의 일부이다(예: 수술 후 스텐트 제거). 이것은 연구 파일에 기록되어야 한다. 연구 동안 악화되지 않은 기존 상태의 선택적 치료를 위한 입원은 AE로 간주되지 않는다.

입원 중에 발생하는 합병증은 AE이다. 합병증이 입원을 연장하거나 다른 SAE 기준을 충족하는 경우 이벤트는 SAE이다.

본원에 사용된 용어 "뇌염"은 감염성 및 비-감염성 원인으로 인해 발생할 수 있는 뇌의 염증을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "수막뇌염"은 뇌수막 및 뇌의 감염 또는 염증을 특징으로 하는 상태를 지칭한다. 뇌염 또는 수막뇌염의 진단은 본 개시을 고려하여 당업자에게 공지된 기술, 예를 들어 임상, 신경학적 및 정신과 검사, 혈액 및 CSF 샘플링을 포함하는 생물학적 샘플링, MRI 스캐닝 및 뇌파검사(EEG)에 의해 결정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "리포솜"은 일반적으로 인지질, 콜레스테롤과 같이 지질 함량이 높은 물질로 이루어진 지질 소포를 의미한다. 이러한 소포의 지질은 일반적으로 지질 이중층의 형태로 구성된다. 지질 이중층은 일반적으로 지질 이중층의 여러 양파 같은 껍질 사이에 산재되어 다중층 지질 소포(MLV)를 형성하거나 무정형 중앙 공동 내에 포함된 부피를 캡슐화한다. 무정형 중앙 공동을 갖는 지질 소포는 단층 지질 소포, 즉 공동을 둘러싸는 단일 주변 이중층을 갖는 것이다. 큰 단층 소포(LUV)는 일반적으로 직경이 100 nm 내지 수 마이크로미터, 예를 들어 100 내지 200 nm 이상인 반면, 작은 단층 지질 소포(SUV)는 일반적으로 100 nm 미만, 예를 들어 20 내지 100 nm, 전형적으로 15 내지 30 mm의 직경을 갖는다.

본원에 사용된 용어 "타우" 또는 "타우 단백질"(미세소관 관련 단백질 타우, MAPT, 신경원섬유 매듭 단백질, 쌍 나선형 필라멘트-타우, PHF-타우, MAPTL, MTBT1이라고도 함)은 다수의 동형을 갖는 풍부한 중추 및 말초 신경계 단백질을 지칭한다. 인간 중추 신경계(CNS)에는, 선택적 스플라이싱으로 인해 크기가 352 내지 441 아미노산 길이의 범위인 6개의 주요 타우 동형이 존재한다([Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009]). 타우의 예는 CNS에서의 타우 동형, 예컨대 4 개의 반복체 및 2 개의 삽입체를 갖는 441-아미노산 최장 타우 동형(4R2N)(미세소관 관련 단백질 타우 동형 2라고도 함), 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NP_005901.2에 제시된 아미노산 서열을 가지는 인간 타우 동형 2를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 타우의 다른 예는 3 개의 반복체를 갖고 삽입체를 갖지 않는 352-아미노산 최단(태아) 타우 동형(3R0N)(미세소관 관련 단백질 타우 동형 4라고도 함), 예를 들어 GenBank 수탁 번호 NP_058525.1에 제시된 아미노산 서열을 가지는 인간 타우 동형 4를 포함한다. 타우의 예는 또한 300 개의 추가 잔기(엑손 4a)를 함유하는 말초 신경에서 발현된 "빅 타우" 동형을 포함한다. Friedhoff et al., Biochimica et Biophysica Acta 1502 (2000) 122-132. 타우의 예는 mRNA 전사체 6762 뉴클레오티드 길이(NM_016835.4)에 의해 코딩된 758 아미노산-길이 단백질인 인간 빅 타우, 또는 이의 동형을 포함한다. 예시된 인간 빅 타우의 아미노산 서열은 유전자 은행 수탁 번호 NP_058519.3에 제시되어 있다. 본원에 사용된 용어 "타우"는 인간 이외의 종, 예컨대 필리핀 원숭이(Macaca Fascicularis)(게먹이원숭이), 붉은털원숭이 또는 Pan troglodytes(침팬지)으로부터의 타우 상동체를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "타우"는 돌연변이, 예를 들어, 전장 야생형 타우의 점 돌연변이, 단편, 삽입, 결실, 및 스플라이스 변이체를 포함하는 단백질을 포함한다. 용어 "타우"는 또한, 타우 아미노산 서열의 번역후 변형을 포함한다. 번역후 변형은 인산화를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.

본원에 사용된 용어 "펩티드" 또는 "폴리펩티드"는 아미노산 잔기, 관련 자연 발생 구조 변이체 및 펩티드 결합을 통해 연결된 이의 합성 비자연 발생 유사체로 구성된 중합체를 지칭한다. 상기 용어는 임의의 크기, 구조 또는 기능의 펩티드를 지칭한다. 전형적으로, 펩티드는 적어도 3 개의 아미노산 길이를 가진다. 펩티드는 자연 발생, 재조합 또는 합성, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다. 합성 펩티드는 예를 들어 자동 폴리펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 타우 펩티드의 예는 약 5 내지 약 30 개 아미노산 길이, 바람직하게는 약 10 내지 약 25 개 아미노산 길이, 더욱 바람직하게는 약 16 내지 약 21 개 아미노산 길이의 타우 단백질의 임의의 펩티드를 포함한다. 본 개시에서, 펩티드는 표준 3 또는 1 문자 아미노산 약어를 사용하여 N에서 C 말단으로 열거되며, 여기서 포스포 잔기는 "p"로 표시된다. 본 발명에 유용한 타우 펩티드의 예는 서열 번호 1 내지 12 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 타우 펩티드, 또는 서열 번호 1 내지 12 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 타우 펩티드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본원에 사용된 용어 "포스포펩티드" 또는 "포스포-에피토프"는 하나 이상의 아미노산 잔기에서 인산화된 펩티드를 지칭한다. 타우 포스포펩티드의 예는 하나 이상의 인산화된 아미노산 잔기를 포함하는 임의의 타우 펩티드를 포함한다.

본 발명의 타우 펩티드는 고상 펩티드 합성 또는 재조합 발현 시스템에 의해 합성될 수 있다. 자동 펩티드 합성기는 Applied Biosystems(캘리포니아 포스터 시티 소재)와 같은 수많은 공급업체로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 재조합 발현 시스템은 대장균과 같은 박테리아, 효모, 곤충 세포 또는 포유동물 세포를 포함할 수 있다. 재조합 발현 절차는 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual(C.S.H.P. Press, NY 2d ed., 1989)]에 의해 설명된다.

특정 실시양태에 따르면, 리포솜은 하나 이상의 타우 펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 리포솜의 타우 펩티드는 동일하거나 상이할 수 있다. 당업자에게 공지된 임의의 적합한 타우 펩티드가 본 개시에 비추어 본 발명에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 하나 이상의 타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 12 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 하나 이상의 타우 펩티드는 서열 번호 1 내지 12 중 하나의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 아미노산 잔기 중 어느 것도 인산화되지 않거나, 하나 이상의 아미노산 잔기가 인산화된다.

특정 실시양태에 따르면, 하나 이상의 타우 펩티드는 타우 포스포펩티드이다. 특정 실시양태에 따르면, 하나 이상의 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열 또는 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 제시된 아미노산 잔기 중 하나 이상은 인산화된다. 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 1 내지 3 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 타우 펩티드는 아미드화된 C-말단을 가질 수 있다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 타우 펩티드는 리포솜의 표면상에 제시된다. 타우 펩티드, 바람직하게는 타우 포스포펩티드는 본 개시에 비추어 당 업계에 공지된 방법을 사용하여 리포솜의 표면에 제시될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제8,647,631호 및 9,687,447호 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US18/57286의 관련 개시 내용을 참조하며, 그 내용은 본원에 참고로 포함된다. 특정 실시양태에 따르면, 포스포펩티드를 포함하는 하나 이상의 타우 펩티드는 타우 펩티드가 리포솜의 표면상에 제시될 수 있도록 팔미토일화 또는 도데실 변형과 같은 하나 이상의 변형을 추가로 포함한다. 추가 아미노산 잔기, 예컨대 Lys, Cys 또는 때로는 Ser 또는 Thr이 용이한 변형을 위해 타우 펩티드에 첨가될 수 있다. 지질 앵커의 위치는 상이한 구조형태의 펩티드 서열을 유도하는 것으로 보고되었다(Hickman et al., J. Biol. Chem. vol. 286, NO. 16, pp. 13966-13976, April 22, 2011). 이론에 구애없이, 양쪽 말단에 소수성 부분을 첨가하면 타우 펩티드의 병리학적 베타-시트 형태를 증가시킬 수 있다고 여겨진다. 따라서, 하나 이상의 타우 펩티드는 양쪽 말단에 소수성 부분을 추가로 포함한다. 변형된 타우 펩티드는 아미드화된 C-말단을 가질 수 있다. 바람직하게는, 리포솜의 표면상에 제시된 타우 펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 38 중 하나의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 발명에 유용한 타우 리포솜의 예는 미국 특허 제8,647,631호 및 제9,687,447호, 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US18/57286에 기재된 타우 리포솜을 포함하나 이에만 제한되지는 않으며, 상기 각각의 개시는 본원에 참조로 포함된다.

본원에 사용된 용어 "유효량"은 대상에서 목적하는 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 성분 또는 구성성분의 양을 지칭한다. 특정 유효 용량의 선택은 치료 또는 예방할 질환, 관련 증상, 환자의 체질량, 환자의 면역 상태 및 숙련된 기술자에 의해 알려진 기타 요인을 포함한 여러 요인을 고려하여 당업자에 의해 (예를 들어, 임상 시험을 통해) 결정될 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 용량은 또한 투여 방식, 투여 경로, 표적 부위, 환자의 생리적 상태, 투여되는 기타 약물 및 질환의 중증도에 따라 달라지며, 의사의 판단과 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 타우 포스포펩티드의 유효량은 또한 애쥬번트가 투여되는지 여부에 따라 달라지며 애쥬번트가 없는 경우 더 높은 투여량이 필요하다. 유효 용량은 시험관 내 또는 동물 모델 시험 시스템에서 파생된 용량-반응 곡선에서 외삽할 수 있다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 유효량의 리포솜은 뇌염과 같은 심각한 유해 사건을 유발하지 않으면서 항인산화된 타우 항체의 수준을 증가시키기에 충분한 양의 타우 포스포펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 유효량의 리포솜은 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 예컨대 용량당 약 29.7 nmole 내지 약 742.5 nmole, 바람직하게는 용량당 약 90 nmole 내지 약 715 nmole의 양, 예컨대 용량당 약 89.1 nmole 내지 약 712.8 nmole, 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 535 nmole, 예컨대 용량당 약 89.1 nmole 내지 약 534.6 nmole, 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 275 nmole, 예컨대 약 89. 용량당 nmole 내지 약 267.3 nmole로 타우 포스포펩티드를 포함한다. 투여되는 타우 포스포펩티드의 양은 또한 중량으로 표현될 수도 있다. 예를 들어, 용량당 29.7 nmole은 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 용량당 100 ㎍에 해당하고, 용량당 742.5 nmole은 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 용량당 2500 ㎍에 해당하고, 용량당 89.1 nmole은 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 용량당 300 ㎍에 상응하고, 용량당 712.8 nmole은 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 용량당 2400 ㎍에 상응하고, 용량당 534.6 nmole은 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 용량당 1800 ㎍에 상응한다. 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드는 리포솜 표면에 타우 포스포펩티드가 제시될 수 있도록 하는 4 개의 지질 사슬을 가진다. 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드의 300, 900, 1800 ㎍의 용량은 어떤 지질 사슬도 없는 상응하는 "네이키드" 펩티드 169, 508, 1016 ㎍에 각각 상응한다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 유효량의 리포솜은 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 예컨대 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열을 포함하는 타우 포스포펩티드 용량당 약 25 nmole, 약 30 nmole, 약 35 nmole, 약 40 nmole, 약 45 nmole, 약 50 nmole, 약 55 nmole, 약 60 nmole, 약 65 nmole, 약 70 nmole, 약 75 nmole, 약 80 nmole, 약 85 nmole, 약 90 nmole, 약 95 nmole, 약 100 nmole, 약 125 nmole, 약 150 nmole, 약 175 nmole, 약 200 nmole, 약 225 nmole, 약 250 nmole, 약 275 nmole, 약 300 nmole, 약 325 nmole, 약 350 nmole, 약 375 nmole, 약 400 nmole, 약 425 nmole, 약 450 nmole, 약 475 nmole, 약 500 nmole, 약 525 nmole, 약 550 nmole, 약 575 nmole, 약 600 nmole, 약 625 nmole, 약 650 nmole, 약 675 nmole, 약 700 nmole, 약 725 nmole, 약 750 nmole의 양으로 타우 포스포펩티드를 포함한다. 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 38 중 하나의 아미노산 서열로 이루어진다. 보다 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 리포솜의 유효량은 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드를 용량당 100 ㎍ 내지 2500 ㎍, 300 ㎍ 내지 2400 ㎍, 300 ㎍ 내지 1800 ㎍, 또는 300 ㎍ 내지 900 ㎍ per dose, 예컨대 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 400 ㎍, 500 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍, 900 ㎍, 1000 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 1300 ㎍, 1400 ㎍, 1500 ㎍, 1600 ㎍, 1700 ㎍, 1800 ㎍, 1900 ㎍, 2000 ㎍, 2100 ㎍, 2200 ㎍, 2300 ㎍, 2400 ㎍, 또는 2500 ㎍의 양으로 포함한다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 타우 포스포펩티드는 리포솜의 표면상에 제시된다. 본 출원의 실시양태에 따르면, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 3 또는 5 내지 12 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 38 중 하나의 아미노산 서열로 이루어진다. 보다 바람직하게는, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진다.

본 출원의 다른 실시양태에 따르면, 유효량의 리포솜은 용량당 30 ㎍ 내지 900 ㎍, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 585 ㎍의 양으로 톨-유사 수용체 4 작용제를 추가로 포함한다. 예를 들어, 리포솜의 유효량은 용량당 30 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 330 ㎍, 360 ㎍, 390 ㎍, 420 ㎍, 450 ㎍, 480 ㎍, 500 ㎍, 520 ㎍, 540 ㎍, 560 ㎍, 580 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍ 또는 900 ㎍의 양으로 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함할 수 있다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 톨-유사 수용체(4)는 3D-(6-아실) PHAD^®를 포함한다.

본 출원의 다른 실시양태에 따르면, 유효량의 리포솜은 용량당 25 ㎍ 내지 625 ㎍, 바람직하게는 75 ㎍ 내지 450 ㎍의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 추가로 포함한다. 예를 들어, 리포솜의 유효량은 25 ㎍, 50 ㎍, 75 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍, 600 ㎍, 또는 625 ㎍의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함할 수 있다.

본 출원의 다른 실시양태에 따르면, 유효량의 리포솜은 용량당 약 3 nmole 내지 약 105 nmole의 양, 예컨대 약 4 nmole, 약 5 nmole, 약 6 nmole, 약 7 nmole, 약 8 nmole, 약 9 nmole, 약 10 nmole, 약 15 nmole, 약 20 nmole, 약 25 nmole, 약 30 nmole, 약 35 nmole, 약 40 nmole, 약 45 nmole, 약 50 nmole, 약 55 nmole, 약 60 nmole, 약 65 nmole, 약 70 nmole, 약 75 nmole, 약 80 nmole, 약 85 nmole, 약 90 nmole, 약 95 nmole, 약 100 nmole, 또는 약 105 nmole의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 추가로 포함한다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프, 서열 번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 T46 헬퍼 T-세포 에피토프, 서열 번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 T48 헬퍼 T 세포 에피토프, 서열 번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 T51 헬퍼 T 세포 에피토프, 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 T52 헬퍼 T-세포 에피토프이며, 바람직하게는 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프이다.

특정 실시양태에서, 유효량의 리포솜은 용량당 50 ㎍ 내지 1250 ㎍, 바람직하게는 150 ㎍ 내지 800 ㎍의 양으로 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 예를 들어, 리포솜의 유효량은 용량당 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 350 ㎍, 400 ㎍, 450 ㎍, 500 ㎍, 550 ㎍, 600 ㎍, 650 ㎍, 700 ㎍, 750 ㎍, 800 ㎍, 850 ㎍, 900 ㎍, 950 ㎍, 1000 ㎍, 1050 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 또는 1250 ㎍의 양으로 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다

본 출원의 실시양태에 따르면, 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18 내지 22 중 하나의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 CpG 올리고뉴클레오티드이고, 바람직하게는 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 CpG 올리고뉴클레오티드이다. 본 출원의 실시양태에 따르면, 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 갖고 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하는 링커를 통해 콜레스테롤에 공유적으로 결합된 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 CpG 올리고뉴클레오티드이다.

실시양태에 따르면, 리포솜의 유효량은 PEG 링커를 통해 콜레스테롤에 공유 결합된 CpG 올리고뉴클레오티드를 용량당 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 350 ㎍, 400 ㎍, 450 ㎍, 500 ㎍, 550 ㎍, 600 ㎍, 650 ㎍, 700 ㎍, 750 ㎍, 800 ㎍, 850 ㎍, 900 ㎍, 950 ㎍, 1000 ㎍, 1050 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 또는 1250 ㎍으로 포함한다.

특정 실시양태에 따르면, 인간 대상은 신경변성 질환, 장애 또는 상태의 치료를 필요로 한다.

본원에 사용된 "신경변성 질환, 장애 또는 상태"는 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 신경변성 질환, 장애 또는 상태를 포함한다. 신경변성 질환, 장애 또는 상태의 예는 신경원섬유 병변의 형성에 의해 유발되거나 이와 관련된 신경변성 질환 또는 장애, 예컨대 타우병증으로 지칭되는 타우 관련 질환, 장애 또는 상태를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 신경변성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 크로이츠펠트-야콥병, 권투선수 치매, 다운 증후군, 게르스트만 슈트로이슬러 샤잉커(Gerstmann-Straeussler-Scheinker) 병, 봉입체 근염, 프리온 단백질 뇌 아밀로이드 맥관장애, 외상성 뇌 손상, 근위축성 측삭 경화증, 괌의 파킨슨증-치매 복합(parkinsonism-dementia complex of Guam), 신경원섬유 매듭을 동반하는 비-괌(non-Guamanian) 운동 신경세포병, 은친화성 과립성 치매(argyrophilic grain dementia), 피질기저핵변성, 루이 치매 근위축성 측삭 경화증, 석회화가 있는 확산성 신경원섬유 매듭, 전측두엽 치매, 바람직하게는 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 이마관자엽 치매, 할러포르텐-스파츠병(Hallervorden-Spatz disease), 다계통위축, C형 니만-픽병(Niemann-Pick disease type C), 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 진행성 핵상 마비(PSP), 아급성 경화성 범뇌염, 매듭 단독 치매, 뇌염 후 파킨슨증, 근긴장성 이영양증, 만성 외상성 뇌병증(CTE), 일차 연령 관련 타우병증(PART), 뇌혈관병증 또는 루이소체 치매(LBD)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 타우 및 아밀로이드 병리의 공존을 나타내는 임의의 질환 또는 장애를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 신경변성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병 또는 다른 타우병증이다. 바람직한 실시양태에 따르면, 신경변성 질환, 장애 또는 상태는 알츠하이머병이다.

알츠하이머병의 임상 경과는 인지 및 기능 장애의 진행 패턴을 갖는 단계로 나눌 수 있다. 단계는 예를 들어 NIA-AA 연구 프레임워크를 비롯해 당업계에 공지된 등급 척도를 사용하여 정의될 수 있다. 예를 들어, 각각의 내용이 그 전체가 참조로 본원에 포함되는 Dubois et al., Alzheimer's & Dementia 12 (2016) 292-323, Dubois et al., Lancet Neurol 2014; 13: 614-29, Jack et al., Alzheimer's & Dementia 14 (2018) 535-562 참조.

바람직한 실시양태에 따르면, 신경변성 질환, 장애 또는 상태는 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 경도 알츠하이머병, 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병이다.

일부 실시양태에서, 치료를 필요로 하는 대상은 뇌에서 아밀로이드 양성이지만 유의한 인지 장애를 아직 나타내지 않는다. 뇌에서의 아밀로이드 침착은 PET 스캔, 면역침전 질량 분석법 또는 기타 방법과 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 검출할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "톨-유사 수용체" 또는 "TLR"은 선천적 면역 반응에서 중요한 역할을 하는 패턴 인식 수용체(PRR) 부류를 지칭한다. TLR은 박테리아, 진균, 기생충 및 바이러스와 같은 미생물 병원체로부터 병원체 관련 분자 패턴(PAMP)을 인식하는데, 이는 숙주 분자와 구별될 수 있다. TLR은 전형적으로 이량 체로서 기능하고 항원-제시 수지상 세포 및 식세포 대식세포를 비롯한 선천적 면역 반응에 관여하는 세포에 의해 발현되는 막-스패닝 단백질이다. 적어도 10 종의 인간 TLR 패밀리 구성원, TLR1 내지 TLR10 및 적어도 12 종의 뮤린 TLR 패밀리 구성원, TLR1 내지 TLR9 및 TLR11 내지 TLR13이 있으며, 이들이 인식하는 항원의 유형은 상이하다. 예를 들어, TLR4는 다수의 그램 음성 박테리아에 존재하는 성분인 리포폴리사카라이드(LPS)뿐만 아니라 바이러스성 단백질, 다당류 및 저밀도 지단백질, 베타-데펜신 및 열 충격 단백질과 같은 내인성 단백질을 인식하며; TLR9는 원핵 생물 게놈에는 풍부하지만 척추 동물 게놈에는 드문 메틸화되지 않은 시토신-포스페이트-구아닌(CpG) 단일 가닥 또는 이중 가닥 디뉴클레오티드에 의해 활성화되는 뉴클레오티드-감지 TLR이다. TLR의 활성화는 I 형 인터페론(IFN), 염증성 사이토카인 및 케모카인의 생성 및 면역 반응의 유도를 야기하는 일련의 신호 전달 사건을 초래한다. 결국, 이 염증은 또한 적응 면역계를 활성화시켜 침입하는 병원체와 감염된 세포를 제거한다.

본원에 사용된 용어 "작용제"는 하나 이상의 TLR에 결합하고 수용체 매개 반응을 유도하는 분자를 지칭한다. 예를 들어, 작용제는 수용체의 활성을 유도, 자극, 증가, 활성화, 촉진, 향상 또는 상향 조절할 수 있다. 이러한 활성을 "작용적 활성"이라고 한다. 예를 들어, TLR4 또는 TLR9 작용제는 결합된 수용체를 통해 세포 신호 전달을 활성화 또는 증가시킬 수 있다. 작용제는 핵산, 소분자, 단백질, 탄수화물, 지질 또는 수용체와 결합하거나 상호 작용하는 임의의 다른 분자를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 작용제는 천연 수용체 리간드의 활성을 모방할 수 있다. 작용제는 서열, 입체 형태, 전하 또는 수용체에 의해 인식될 수 있는 다른 특성과 관련하여 이들 천연 수용체 리간드와 상동성일 수 있다. 이러한 인식으로 세포 내에서 생리학적 및/또는 생화학적 변화를 일으켜, 천연 수용체 리간드가 존재하는 것과 동일한 방식으로 세포가 작용제의 존재에 반응하도록 한다. 특정 실시양태에 따르면, 톨-유사 수용체 작용제는 톨-유사 수용체 4 작용제 및 톨-유사 수용체 9 작용제 중 적어도 하나이다.

본원에 사용된 용어 "유도" 및 "자극" 및 이의 변형은 세포 활성의 임의의 측정 가능한 증가를 지칭한다. 면역 반응의 유도는 예를 들어 면역 세포 집단의 활성화, 증식 또는 성숙, 사이토카인의 생성 증가 및/또는 증가된 면역 기능의 다른 지표를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 면역 반응의 유도는 B 세포의 증식 증가, 항원-특이적 항체 생성, 항원-특이적 T 세포의 증식 증가, 수지상 세포 항원 제시 개선 및/또는 특정 사이토카인, 케모카인 및 공동-자극 마커의 발현 증가를 포함할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "톨-유사 수용체 4 작용제"는 TLR4의 작용제로서 작용하는 임의의 화합물을 지칭한다. 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 적합한 톨-유사 수용체 4 작용제가 본 발명에 사용될 수 있다. 본 발명에 유용한 톨-유사 수용체 4 리간드의 예는 모노포스포릴 지질 A(MPLA)를 포함하지만 이에 제한되지 않는 TLR4 작용제를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "모노포스포릴 지질 A" 또는 MPLA"는 그램 음성 박테리아 리포폴리사카라이드(LPS) 내독소의 생물학적 활성 부분인 변형된 형태의 지질 A를 지칭한다. MPLA는 면역 자극 활성을 유지하면서 LPS보다 독성이 적다. 백신 애쥬번트로서, MPLA는 백신 항원에 대한 세포성 및 체액성 반응을 모두 자극한다. MPLA의 예는 3-O-데사실-4'-모노포스포릴 지질 A, 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실(Synthetic)(3D-(6-아실) PHAD^®라고도 함), 모노포스포릴 3-데아실 지질 A 및 이들의 구조적으로 관련된 변이체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 유용한 MPLA는 당 업계에 공지된 방법을 사용하여 수득할 수 있거나, 또는 Avanti Polar Lipids(미국 앨라배마 앨러배스터 소재) 제의 3D-(6-아실) PHAD®, PHAD®, PHAD®-504, 3D-PHAD® 또는 다양한 상업적 공급처로부터의 MPL^TM과 같이 상업적 공급처로부터 얻을 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 톨-유사 수용체 4 작용제는 MPLA이다. 특정 실시양태에 따르면, 타우 포스포펩티드 및 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하는 리포솜은 또한 대부분 또는 모든 HLA DR(인간 백혈구 항원 - 항원 D 관련) 분자에 결합할 수 있는 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다. 그런 다음 헬퍼 T 세포 에피토프는 CD4⁺ T 세포를 활성화할 수 있고 타우 특이적 B 세포에 필수적인 성숙 및 생존 신호를 제공한다. 타우 리포솜은 상동 또는 이종 면역 체계에서 pTau 항원에 대한 고품질 항체를 생성하는 데 사용될 수 있으며, 리포솜은 프라임 및/또는 부스트에 사용된다.

본원에 사용된 용어 "헬퍼 T-세포 에피토프"는 헬퍼 T-세포에 의해 인식될 수 있는 에피토프를 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 헬퍼 T-세포 에피토프의 예는 파상풍 톡소이드(예를 들어, P2 및 P30 에피토프, 또한 각각 T2 및 T30으로도 지칭됨), B 형 간염 표면 항원, 콜레라 독소 B, 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, 홍역 바이러스 F 단백질, 클라미디아 트라코마티스(Chlamydia trachomatis) 주요 외막 단백질, 열대열말라리아원충(Plasmodium falciparum) circumsporozite T, 열대열말라리아원충 CS 항원, 만손주혈흡충(Schistosoma mansoni) 트리오스 포스페이트 이소머라제, 백일해(Bordetella pertussis), 파상풍(Clostridium tetani), 퍼투사리아 트라키탈리나(Pertusaria trachythallina), 대장균(Escherichia coli) TraT, 및 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA)을 포함하나 이들에만 제한되지는 않는다.

당업자에게 공지된 임의의 적합한 헬퍼 T-세포 에피토프가 본 개시에 비추어 본 발명에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 23 내지 서열 번호 26으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 헬퍼 T-세포 에피토프는 하나 이상의 아미노산, 예를 들어 Val(V), Ala(A), Arg(R), Gly(G), Ser(S), Lys(K)을 포함하는 펩티드 링커와 같은 링커를 통해 함께 융합된 서열 23 내지 서열 26의 2 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 링커의 길이는 바람직하게는 1-5 아미노산으로 다양할 수 있다. 바람직하게는, 헬퍼 T-세포 에피토프는 VVR, GS, RR, RK로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 통해 함께 융합된 서열 번호 23 내지 서열 번호 26의 3 개 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 헬퍼 T-세포 에피토프는 아미드화된 C-말단을 가질 수 있다.

본 출원의 실시양태에 따르면, 헬퍼 T-세포 에피토프는 예를 들어 공유 결합된 소수성 모이어티에 의해 고정된 리포솜 표면에 도입될 수 있으며, 상기 소수성 모이어티는 알킬기, 지방산, 트리글리세리드, 디글리세리드, 스테로이드, 스핑고지 질, 당지질 또는 인지질, 특히 3 개 이상의 탄소 원자, 특히 4 개 이상의 탄소 원자, 특히 6 개 이상의 탄소 원자, 특히 8 개 이상의 탄소 원자, 특히 12 개 이상의 탄소 원자, 특히 16 개 이상의 탄소 원자의 탄소 백본을 갖는 알킬기 또는 지방산이다. 본 발명의 일 실시양태에서, 소수성 부분은 팔미트산이다. 대안적으로, 헬퍼 T-세포 에피토프는 리포솜에 캡슐화될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 헬퍼 T-세포 에피토프는 리포솜에 캡슐화된다.

헬퍼 T-세포 에피토프는 본 개시에 비추어 당 업계에 공지된 방법을 사용하여 리포솜에서 이의 원하는 위치에서 변형될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 본 발명에 유용한 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 39 내지 서열 번호 44 중 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 헬퍼 T 세포 에피토프는 서열 번호 13 내지 서열 번호 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진다.

특정 실시양태에 따르면, 타우 포스포펩티드 및 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하는 리포솜은 또한 톨-유사 수용체 9 작용제를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "톨-유사 수용체 9 작용제"는 TLR9의 작용제로서 작용하는 임의의 화합물을 지칭한다. 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 적합한 톨-유사 수용체 9 작용제가 본 발명에 사용될 수 있다. 본 발명에 유용한 톨-유사 수용체 9 리간드의 예는 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 TLR9 작용제를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "CpG 올리고뉴클레오티드", "CpG 올리고데옥시뉴클레오티드" 또는 "CpG ODN"은 적어도 하나의 CpG 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 본원에 사용된 "올리고뉴클레오티드", "올리고데옥시뉴클레오티드" 또는 "ODN"은 복수의 연결된 뉴클레오티드 단위로부터 형성된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 이러한 올리고뉴클레오티드는 기존의 핵산 공급원으로부터 수득될 수 있거나 합성 방법에 의해 생성될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "CpG 모티프"는 포스페이트 결합 또는 포스포디에스테르 골격 또는 다른 뉴클레오티드 간 연결에 의해 연결된 메틸화되지 않은 시토신-포스페이트-구아닌(CpG) 디뉴클레오티드(즉, 시토신(C)에 이어 구아닌(G))를 함유하는 뉴클레오티드 서열을 지칭한다.

특정 실시양태에 따르면, CpG 올리고뉴클레오티드는 지질화, 즉 지질 모이어티에 접합(공유 결합)된다.

본원에 사용된 "지질 모이어티"는 친유성 구조를 함유하는 모이어티를 지칭한다. 알킬기, 지방산, 트리글리세리드, 디글리세리드, 스테로이드, 스핑고지질, 당지질 또는 인지질, 특히 콜레스테롤과 같은 스테롤 또는 지방산 등의 지질 잔기가 핵산과 같은 고도로 친수성인 분자에 부착되는 경우, 친수성 분자의 혈장 단백질 결합 및 결과적으로 순환 반감기를 실질적으로 향상시킬 수 있다. 또한, 지단백질과 같은 특정 혈장 단백질에 대한 결합은 상응하는 지단백질 수용체(예를 들어, LDL-수용체 HDL-수용체 또는 스캐빈저 수용체 SR-B1)를 발현하는 특정 조직에서의 흡수를 증가시키는 것으로 나타났다. 특히, 포스포펩티드 및/또는 CpG 올리고뉴클레오티드에 접합된 지질 모이어티는 상기 펩티드 및/또는 올리고뉴클레오티드를 소수성 모이어티를 통해 리포솜의 막에 고정시킬 수 있다.

특정 실시양태에 따르면, 본 개시 내용의 관점에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 임의의 적합한 뉴클레오티드 간 연결을 포함할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "뉴클레오티드 연결"은 인 원자 및 인접한 뉴클레오시드 사이의 하전 또는 중성 그룹으로 구성된 그들의 당을 통해 두 뉴클레오티드를 연결하는 화학적 연결을 지칭한다. 뉴클레오티드 간 연결의 예는 포스포디에스테르(po), 포스포로티오에이트(ps), 포스포로디티오에이트(ps2), 메틸포스포네이트(mp) 및 메틸포스포로티오에이트(rp)를 포함한다. 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 메틸포스포네이트 및 메틸포스포로티오에이트는 뉴클레오티드 간 결합을 안정화시키는 반면, 포스포디에스테르는 자연 발생 뉴클레오티드 간 결합이다. 올리고뉴클레오티드 포스포로티오에이트는 전형적으로 Rp 및 Sp 포스포로티오에이트 연결의 랜덤 라세미 혼합물로서 합성된다.

당업자에게 공지된 임의의 적합한 CpG 올리고뉴클레오티드가 본 개시에 비추어 본 발명에 사용될 수 있다. 이러한 CpG 올리고뉴클레오티드의 예는 CpG2006(CpG 7909로도 알려짐)(서열 번호 18), CpG 1018(서열 번호 19), CpG2395(서열 번호 20), CpG2216(서열 번호 21) 또는 CpG2336(서열 번호 22)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.

CpG 올리고뉴클레오티드는 본 개시에 비추어 당업계에 공지된 방법을 사용하여 지질화될 수 있다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 콜레스테롤 분자에 직접 공유 결합된다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드의 3' 말단은 포스페이트 결합에 의해, 임의로 PEG 링커를 통해 콜레스테롤 분자에 공유 결합된다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드의 5' 말단은 포스페이트 결합에 의해, 임의로 PEG 링커를 통해 콜레스테롤 분자에 공유 결합된다. 다른 친유성 모이어티가 또한 CpG 올리고뉴클레오티드의 5' 또는 3' 말단에 공유적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, CpG 올리고뉴클레오티드는 리포솜의 인지질과 동일한 길이의 지질 앵커에 공유적으로 연결될 수 있다: 임의로 PEG 링커를 통해 하나의 팔미트산 사슬(Pal-OH 또는 유사물 사용, 커플링을 위해 활성화됨) 또는 2 개의 팔미트산(예를 들어, 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-(숙시닐) 또는 유사물 사용, 커플링을 위해 활성화됨). 예를 들어, 미국 특허 제7,741,297호의 관련 내용을 참조하며, 그 내용은 본원에 참조로 포함된다. PEG의 길이는 예를 들어 1 내지 5 개의 PEG 단위로 변할 수 있다.

다른 링커는 또한 CpG 올리고뉴클레오티드를 친유성 모이어티(예를 들어, 콜레스테롤 분자)에 공유적으로 연결하는데 사용될 수 있으며, 이의 예는 3 내지 12 개의 탄소를 갖는 알킬 스페이서를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 아미노디올로서 올리고뉴클레오티드 화학물질과 상용성인 짧은 링커가 필요하다. 일부 실시양태에서, 공유 결합에는 링커가 사용되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Ries et al., "Convenient synthesis and application of versatile nucleic acid lipid membrane anchors in the assembly and fusion of liposomes, Org. Biomol. Chem., 2015, 13, 9673]을 참조하며, 이의 관련 개시는 본원에 참고로 포함된다.

특정 실시양태에 따르면, 본 발명에 유용한 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18 내지 서열 번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 뉴클레오티드 서열은 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 뉴클레오티드 서열은 링커를 통해 적어도 하나의 콜레스테롤에 공유 결합된다. 바람직한 실시양태에 따르면, 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 가지며, 콜레스테롤에 공유 결합된다. 임의의 적합한 링커를 사용하여 CpG 올리고뉴클레오티드를 콜레스테롤 분자에 공유적으로 연결할 수 있다. 바람직하게는, 링커는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.

특정 실시양태에 따르면, 리포솜은 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG) 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지질을 추가로 포함한다.

특정 실시양태에 따르면, 리포솜은 완충제를 추가로 포함한다. 본 개시에 비추어 당업자에게 공지된 임의의 적합한 완충제가 본 발명에서 사용될 수 있다. 일 실시양태에서, 리포솜은 포스페이트-완충 염수를 포함한다. 특정 실시양태에 따르면, 완충제는 히스티딘 및 수크로스를 포함한다.

본 발명에 사용되는 예시적인 리포솜은 타우 펩티드의 각 말단에서 2개의 팔미트산을 통해 리포솜의 표면상에 제시되는 타우 테트라팔미토일화 포스포펩티드(pTau 펩티드 T3, 서열 번호 28); PEG 링커를 통해 CpG에 공유 결합된 콜레스테롤 분자를 통해 리포솜 막에 통합된 지질화된 CpG(애쥬번트 CpG7909-Chol; 서열 번호 18)를 포함하는 TLR-9 리간드; 막에 통합된 TLR-4 리간드(모노포스포릴 지질 A(예: 3D-(6-아실) PHAD®)); 캡슐화된 헬퍼 T-세포 에피토프(PAN-DR 결합제 T50; 서열 번호 13); 및 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포-콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세롤-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)]나트륨 염(DMPG) 및 콜레스테롤을 리포솜의 지질 성분으로 포함한다.

본 발명의 리포솜은 본 개시에 비추어 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 리포솜의 각 성분의 최적 비율은 본 개시을 고려하여 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.

리포솜은 예방적 및/또는 치료적 치료에 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에 따르면, 리포솜은 피하 또는 근육내 주사에 의해 투여된다. 근육 주사는 가장 일반적으로 팔이나 다리 근육에서 수행된다.

하나의 일반적인 측면에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본 발명의 리포솜을 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체는 당 업계에 잘 알려져 있다(Remington's Pharmaceutical Science (15th ed.), Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1980 참조). 약학 조성물의 바람직한 제형은 의도된 투여 방식 및 치료적 적용에 좌우된다. 조성물은 약학적으로 허용되는 비독성 담체 또는 희석제를 포함할 수 있으며, 이는 동물 또는 인간 투여용 약학 조성물을 제형화하는데 일반적으로 사용되는 비히클로 정의된다. 희석제는 조합물의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않도록 선택된다. 이러한 희석제의 예는 증류수, 생리적 인산 완충 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 행크 용액이다. 또, 약학 조성물 또는 제형은 또한 다른 담체, 애쥬번트, 또는 비독성, 비치료성, 비면역원성 안정화제 등을 포함할 수 있다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특성은 특정 적용을 위한 투여 경로에 좌우될 것이라는 것이 이해될 것이다.

백신의 표적 항원은 뇌에 위치하고, 뇌는 혈액 뇌 장벽(BBB)이라는 특수한 세포 구조에 의해 순환으로부터 분리된다. BBB는 순환계에서 뇌로 물질이 통과하는 것을 제한한다. 이것은 독소, 미생물 등이 중추 신경계로 유입되는 것을 방지한다. BBB는 또한 면역 매개체(예를 들어, 항체)가 뇌를 둘러싸는 간질액 및 뇌척수액으로 효율적으로 유입되는 것을 방지하는 잠재적으로 덜 바람직한 효과를 갖는다.

전신 순환에 존재하는 항체의 대략 0.1%가 BBB를 가로질러 뇌로 들어간다. 이는 CNS 항원을 표적으로 하는 백신에 의해 유도된 전신 역가가 뇌에서 효과적이 도록 최소 유효 역가보다 적어도 1000 배 더 커야함을 제시한다. 효능을 유발하는 데 필요한 혈청 내 항체의 최소 역가는 쉽게 알 수 없다. 또한, 신경변성 질환, 장애 또는 상태와 같은 CNS 장애를 표적으로 하는 안전하고 효과적인 면역 요법을 위해서는 면역 반응의 양뿐만 아니라 질(예: 친화성)도 고려해야 한다.

따라서 특정 실시양태에 따르면, 본 발명의 약학 조성물은 대상에서 원하는 면역 반응을 달성하기 위해 하나 이상의 적합한 애쥬번트를 추가로 포함한다. 적합한 애쥬번트는 본 발명의 리포솜의 투여 전, 후 또는 동시에 투여될 수 있다. 바람직한 애쥬번트는 정성적 형태의 반응에 영향을 미치는 면역원의 형태적 변화를 일으키지 않으면서 면역원에 대한 고유한 반응을 증강시킨다. 애쥬번트의 예는 수산화알루미늄, 인산알루미늄 및 황산알루미늄과 같은 알루미늄염(알룸)이다. 이러한 애쥬번트는 MPLA 류(3 De-O-아실화 모노포스포릴 지질 A(MPL^TM), 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A 3-데아실 합성(3D-(6-아실) PHAD®), PHAD™, PHAD®-504, 3D-PHAD®) 지질 A), 폴리글루탐산 또는 폴리리신과 같은 중합체 또는 단량체 아미노산 등의 다른 특정 면역자극제와 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 이러한 애쥬번트는 다른 특정 면역자극제, 예컨대 뮤라밀 펩티드(예를 들어, N-아세틸뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(nor-MDP), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE), N-아세틸글루코사미닐-N-아세틸뮤라밀-L-Al-D-이소글루-L-Ala-디팔미톡시 프로필아미드(DTP-DPP) Theramide™), 또는 다른 박테리아 세포벽 성분과 함께 또는 없이 사용될 수 있다. 수중유 에멀젼은 미세유동화기를 사용하여 서브미크론 입자로 제형화된 5% 스쿠알렌, 0.5% Tween 80 및 0.5% Span 85(임의로 다양한 양의 MTP-PE를 함유함)를 함유하는 MF59(WO 90/14837 참조); 서브마이크론 에멀젼으로 미세유동화되거나 더 큰 입자 크기의 에멀젼을 생성하기 위해 와동된 10% 스쿠알렌, 0.4% Tween 80, 5% 플루로닉-차단 중합체 L121 및 thr-MDP를 함유하는 SAF; 및 0.2% Tween 80, 및 모노포스포릴 지질 A(MPL^TM), 트레할로스 디마이콜레이트(TDM) 및 세포벽 골격(CWS)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 세균 세포벽 성분을 함유하는 Ribi™ 애쥬번트 시스템(RAS)(Ribi ImmunoChem, Hamilton, Mont.), 바람직하게는 MPL^TM + CWS(Detox™)를 포함한다. 다른 애쥬번트는 CFA(완전 프로인트 애쥬번트(Complete Freund's Adjuvant)) 및 인터루킨(IL-1, IL-2 및 IL-12)과 같은 사이토카인, 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF) 및 종양 괴사 인자(TNF)를 포함한다.

대상에게 2 이상의 요법을 투여하는 것과 관련하여 본원에 사용된 용어 "조합으로"는 복수 요법의 사용을 지칭한다. "조합하여"라는 용어의 사용은 요법이 대상에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제1 요법(예를 들어, 본원에 기술된 조성물)은 대상에게 제2 요법의 투여 전 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 전), 동시 또는 이후 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주, 또는 12 주 후)에 투여될 수 있다.

투여 시기는 1 일 1 회에서 1 년 1 회, 10 년 1회까지 상당히 다양할 수 있다. 전형적인 요법은 면역화 후 1 주 내지 24 주 간격과 같은 시간 간격으로 부스터 주사로 구성된다. 또 다른 요법은 면역화 후 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 개월 후 부스터 주사로 구성된다. 또 다른 요법은 평생 동안 2 개월마다의 주사를 포함한다. 대안적으로, 부스터 주사는 면역 반응의 모니터링에 의해 제시되는 바와 같이 불규칙적일 수 있다.

프라이밍 및 부스팅 투여를 위한 요법은 투여 후 측정된 면역 반응에 기초하여 조정될 수 있다는 것을 당업자들은 쉽게 인정할 것이다. 예를 들어, 부스팅 조성물은 일반적으로 프라이밍 조성물의 투여 후 몇 주 또는 몇 개월, 예를 들어, 프라이밍 조성물의 투여 후 약 1 주, 또는 2 주, 또는 3 주, 또는 4 주, 또는 8 주, 또는 16 주, 또는 20 주, 또는 24 주, 또는 28 주, 또는 32 주, 또는 36 주, 또는 40 주, 또는 44 주, 또는 48 주, 또는 52 주, 또는 56 주, 또는 60 주, 또는 64 주, 또는 68 주, 또는 72 주, 또는 76 주, 또는 1 내지 2 년에 투여된다.

특정 측면에 따르면, 하나 이상의 부스팅 면역화가 투여될 수 있다. 각각의 프라이밍 및 부스팅 조성물의 항원은 많은 부스팅 조성물이 사용되더라도 동일할 필요는 없지만 항원 결정기를 공유하거나 실질적으로 서로 유사해야 한다.

본 발명의 약학 조성물은 본 개시에 비추어 당업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 조성물 중 각 성분의 최적 비율은 본 개시을 고려하여 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 실시양태에 따른 약학 조성물의 투여를 통한 타우 펩티드의 투여는 대상에서 타우 펩티드 및 타우의 병리학적 형태에 대한 활성 면역 반응을 유도하여 관련 타우 응집체의 제거를 촉진하고, 타우 병리 관련 행동의 진행을 늦추고/거나 근본적인 타우병증을 치료한다.

타우는 인간 "자가" 단백질이다. 이것은 원칙적으로 타우에 특이적인 수용체를 갖는 모든 림프구가 발달 중에 결실되어야 하거나(중추 내성) 말초 내성 메카니즘에 의해 무반응이 되어야 한다는 것을 의미한다. 이 문제는 자가 또는 "변경된 자가" 단백질(예를 들어, 종양 항원)에 대한 백신 개발에 중요한 장애물로 판명되었다. 항원(자가 또는 감염성)에 대한 고품질 항체를 생성하려면 항체를 생성하는 B 림프구뿐만 아니라 CD4⁺ T "헬퍼" 림프구의 작용이 필요하다. CD4⁺ T 세포는 B 림프구에 중요한 생존 및 성숙 신호를 제공하고 CD4⁺ T 세포 결핍 동물은 면역이 완전히 억제된다. CD4⁺ T-세포는 또한 내성 메카니즘의 적용을 받으며, 강력한 항-자기(예를 들어 항-타우) 항체 반응을 생성하는 데 있어 추가 장애물은 타우-반응성 CD4⁺ T-세포가 또한 인간/동물 레퍼토리에 희귀 내지는 존재하지 않을 가능성이 있다는 것이다.

본 발명의 이러한 측면에 따르면, 면역 반응은 타우 펩티드에 대한 유익한 체액성(항체 매개성) 반응 및 T-세포 에피토프 또는 면역원성 담체에 대한 세포(항원성-특이적 T 세포 또는 이들의 분비 산물에 의해 매개됨) 반응의 발달을 포함한다.

본원에 사용된 타우 병리 관련 행동 표현형은 인지 장애, 초기 성격 변화 및 탈억제, 무관심, 무의지, 무언증, 운동불능, 고집증, 정형화 움직임/행동, 과탐식, 무체계, 순차적 작업의 계획 또는 조직화 불능, 이기심/냉담, 반사회적 특성, 공감 부족, 주저함, 빈번한 착어증 오류가 있지만 이해력은 있는 비문법적 말투, 이해력 장애 및 단어 찾기 결손, 서서히 진행되는 걸음걸이 불안정, 후방돌진, 쌀쌀맞음, 빈번한 낙상, 비-레보도파 반응성 축 경직, 핵상 응시 마비, 사각파 떨림, 느린 단속적 운동, 가성구마비, 사지 실행증, 긴장 이상, 피질 감각 상실 및 떨림을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 방법을 수행함에 있어서, 본 발명의 특정 실시양태에 따르면, 본 발명의 면역원성 펩티드 또는 항체를 투여하기 전에 알츠하이머병 또는 다른 타우병증을 앓고 있거나 걸릴 위험이 있는 대상, 뇌에 타우 응집체를 갖는 대상, 또는 매듭 관련 행동 표현형을 나타내는 대상을 선택하는 것이 바람직하다. 치료가 가능한 대상은 현재 증상을 보이는 환자뿐만 아니라 질환의 위험이 있지만 증상을 보이지 않는 개체를 포함한다. 알츠하이머병의 경우 사실상 거의 모든 사람이 알츠하이머병으로 고통받을 위험이 있다. 따라서, 본 방법은 대상 환자의 위험을 평가할 필요없이 일반 집단에게 예방적으로 투여될 수 있다. 본 방법은 알츠하이머병의 유전적 위험이 알려진 개인에게 특히 유용하다. 이러한 개체에는 질환을 경험한 친척이 있고 유전 또는 생화학적 마커의 분석에 의해 위험이 결정된 개체가 포함된다. 바람직한 실시양태에서, 대상은 알츠하이머병, 바람직하게는 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 경도 알츠하이머병, 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료가 필요하다.

무증상 환자에서, 치료는 임의의 연령(예를 들어, 10, 20, 30 대 연령)에서 시작할 수 있다. 그러나 보통 환자는 40, 50, 60 또는 70 세가 될 때까지 치료를 시작할 필요는 없다. 치료는 전형적으로 일정 기간에 걸쳐 다중 투여량을 수반한다. 치료는 경시적으로 치료제에 대한 항체, 또는 활성화된 T-세포 또는 B-세포 반응을 분석함으로써 모니터링될 수 있다. 반응이 감소하면 부스터 용량이 제시된다.

예방적 적용에서, 타우 펩티드를 함유하는 약학 조성물은 질환의 생화학적, 조직학적, 및/또는 행동 증상, 질환의 전개 중에 나타나는 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 포함하여, 알츠하이머병 또는 다른 타우병증에 걸리기 쉽거나 위험이 있는 환자에게 위험을 제거 또는 감소시키거나, 중증도를 경감시키거나 질환 발생을 지연시키기에 충분한 양으로 투여된다. 치료적 응용에서, 타우 펩티드를 함유하는 약학 조성물은 질환의 전개 중에 그의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 포함하여, 질환의 증상(생화학적, 조직학적, 및/또는 행동)을 치유하거나, 적어도 부분적으로 정지시키거나, 지연시키기에 충분한 양으로 이러한 질환이 의심되거나 이러한 질환을 이미 앓고 있는 환자에게 투여된다.

필요한 경우, 조성물은 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 함유할 수 있는 키트, 팩 또는 디스펜서로 제공될 수 있다. 예를 들어, 키트는 금속 또는 플라스틱 포일, 예컨대 블리스터 팩을 포함할 수 있다. 키트, 팩 또는 디스펜서에는 투여 설명서가 제공될 수 있다.

실시양태

본 발명은 또한 다음의 비제한적인 실시양태를 제공한다.

실시양태 1은 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 바람직하게는 용량당 약 90 nmole 내지 약 715 nmole, 용량당 약 90 nmole 내지 약 535 nmole 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 275 nmole, 예컨대 용량당 약 25 nmole, 약 30 nmole, 약 35 nmole, 약 40 nmole, 약 45 nmole, 약 50 nmole, 약 55 nmole, 약 60 nmole, 약 65 nmole, 약 70 nmole, 약 75 nmole, 약 80 nmole, 약 85 nmole, 약 90 nmole, 약 95 nmole, 약 100 nmole, 약 125 nmole, 약 150 nmole, 약 175 nmole, 약 200 nmole, 약 225 nmole, 약 250 nmole, 약 275 nmole, 약 300 nmole, 약 325 nmole, 약 350 nmole, 약 375 nmole, 약 400 nmole, 약 425 nmole, 약 450 nmole, 약 475 nmole, 약 500 nmole, 약 525 nmole, 약 550 nmole, 약 575 nmole, 약 600 nmole, 약 625 nmole, 약 650 nmole, 약 675 nmole, 약 700 nmole, 약 725 nmole, 약 750 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값의 양으로 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 타우 포스포펩티드 및 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 리포솜 표면상에 제시된다.

실시양태 1a는 용량당 100 ㎍ 내지 2500 ㎍, 바람직하게는 300 ㎍ 내지 2400 ㎍, 300 ㎍ 내지 1800 ㎍, 또는 300 ㎍ 내지 900 ㎍, 예컨대 용량당 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 400 ㎍, 500 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍, 900 ㎍, 1000 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 1300 ㎍, 1400 ㎍, 1500 ㎍, 1600 ㎍, 1700 ㎍, 1800 ㎍, 1900 ㎍, 2000 ㎍, 2100 ㎍, 2200 ㎍, 2300 ㎍, 2400 ㎍, 2500 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 값의 리포솜의 표면상에 제시되는 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드 및 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 뇌염을 유도하지 않고 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 2는 실시양태 1 또는 1a의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 29 및 서열 번호 31 내지 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3a는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3b는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3c는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 29의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3d는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 31의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3e는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 32의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3f는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 33의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3g는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 34의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3h는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 35의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3i는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 36의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3j는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 37의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 3k는 실시양태 1 내지 2 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 38의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 4는 실시양태 1 내지 3k 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜은 피하 투여된다.

실시양태 5는 실시양태 1 내지 3k 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜은 근육내로 투여된다.

실시양태 6은 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나의 방법으로서, 초기 투여 후 1 내지 24 주에 유효량의 리포솜의 제2 용량을 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.

실시양태 7은 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜은 헬퍼 T-세포 에피토프 및 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드 중 적어도 하나, 바람직하게는 헬퍼 T-세포 에피토프 및 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함한다.

실시양태 7a는 실시양태 7의 방법으로서, 여기서 리포솜의 유효량은 용량당 30 ㎍ 내지 900 ㎍, 바람직하게는 100 ㎍ 내지 585 ㎍, 예컨대 30 ㎍, 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 330 ㎍, 360 ㎍, 390 ㎍, 420 ㎍, 450 ㎍, 480 ㎍, 500 ㎍, 520 ㎍, 540 ㎍, 560 ㎍, 580 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍ 또는 900 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 값의 양으로 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함한다.

실시형태 7b는 실시형태 7 또는 7a의 방법으로서, 여기서 톨-유사 수용체 4 작용제는 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실이다.

실시양태 7c는 실시양태 7 내지 7b 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜의 유효량은 용량당 25 ㎍ 내지 625 ㎍, 바람직하게는 75 ㎍ 내지 450 ㎍, 예컨대 25 ㎍, 50 ㎍, 75 ㎍, 100 ㎍, 125 ㎍, 150 ㎍, 175 ㎍, 200 ㎍, 225 ㎍, 250 ㎍, 275 ㎍, 300 ㎍, 325 ㎍, 350 ㎍, 375 ㎍, 400 ㎍, 425 ㎍, 450 ㎍, 475 ㎍, 500 ㎍, 525 ㎍, 550 ㎍, 575 ㎍, 600 ㎍, 또는 625 ㎍의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함한다.

실시양태 7d는 실시양태 7 내지 7c 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프, 서열 번호 14의 아미노산 서열로 이루어진 T46 헬퍼 T-세포 에피토프, 서열 번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 T48 헬퍼 T 세포 에피토프, 서열 번호 16의 아미노산 서열로 이루어진 T51 헬퍼 T 세포 에피토프, 또는 서열 번호 17의 아미노산 서열로 이루어진 T52 헬퍼 T-세포 에피토프이다.

실시양태 7e는 실시양태 7d의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T-세포 에피토프이다.

실시양태 7f는 실시양태 7 내지 7e 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜의 유효량은 용량당 50 ㎍ 내지 1250 ㎍, 바람직하게는 150 ㎍ 내지 800 ㎍, 예컨대 50 ㎍, 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 350 ㎍, 400 ㎍, 450 ㎍, 500 ㎍, 550 ㎍, 600 ㎍, 650 ㎍, 700 ㎍, 750 ㎍, 800 ㎍, 850 ㎍, 900 ㎍, 950 ㎍, 1000 ㎍, 1050 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 또는 1250 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 값의 양으로 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다.

실시양태 8은 실시양태 7 내지 7f 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18 내지 서열 번호 22로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 9a는 실시양태 8의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 9b는 실시양태 8의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 19의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 9c는 실시양태 8의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 20의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 9d는 실시양태 8의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 21의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 9e는 실시양태 8의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 22의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 10은 실시양태 8 내지 9e 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 갖는다.

실시양태 11은 실시양태 8 내지 10 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 적어도 하나의 친유성 기에 공유 결합된다.

실시양태 11a는 실시양태 8 내지 10 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 PEG 링커를 통해 하나 이상의 친유성 기에 공유 결합된다.

실시양태 12는 실시양태 11 또는 11a의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 콜레스테롤 기에 공유 결합된다.

실시양태 12a는 실시양태 12의 방법으로서, CpG 올리고뉴클레오티드는 PEG 링커를 통해 콜레스테롤 기에 공유 결합된다.

실시양태 13은 실시양태 1 내지 12a 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 리포솜은 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG), 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 지질을 추가로 포함한다.

실시양태 14는 실시양태 1 내지 13 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 23 내지 서열 번호 26으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 15는 실시양태 14의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 23, 서열 번호 24, 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 16은 실시양태 14 또는 15의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13 내지 17 및 39 내지 44로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 17은 실시양태 1 내지 16 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 톨-유사 수용체 4 작용제는 모노포스포릴 지질 A(MPLA)이다.

실시양태 18은 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 바람직하게는 약 90 nmole 내지 약 715 nmole 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 535 nmole 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 275 mole, 예컨대 용량당 약 25 nmole, 약 30 nmole, 약 35 nmole, 약 40 nmole, 약 45 nmole, 약 50 nmole, 약 55 nmole, 약 60 nmole, 약 65 nmole, 약 70 nmole, 약 75 nmole, 약 80 nmole, 약 85 nmole, 약 90 nmole, 약 95 nmole, 약 100 nmole, 약 125 nmole, 약 150 nmole, 약 175 nmole, 약 200 nmole, 약 225 nmole, 약 250 nmole, 약 275 nmole, 약 300 nmole, 약 325 nmole, 약 350 nmole, 약 375 nmole, 약 400 nmole, 약 425 nmole, 약 450 nmole, 약 475 nmole, 약 500 nmole, 약 525 nmole, 약 550 nmole, 약 575 nmole, 약 600 nmole, 약 625 nmole, 약 650 nmole, 약 675 nmole, 약 700 nmole, 약 725 nmole, 약 750 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값, 또는 용량당 300 ㎍ 내지 2400 ㎍, 예컨대 300 ㎍ 내지 1800 ㎍, 또는 300 ㎍ 내지 900 ㎍, 예컨대 용량당 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 400 ㎍, 500 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍, 900 ㎍, 1000 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 1300 ㎍, 1400 ㎍, 1500 ㎍, 1600 ㎍, 1700 ㎍, 1800 ㎍, 1900 ㎍, 2000 ㎍, 2100 ㎍, 2200 ㎍, 2300 ㎍, 2400 ㎍, 2500 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 값의 양으로 리포솜 표면상에 제시된 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 심각한 유해 사건의 유도없이 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 리포솜은 모노포스포릴 지질 A(MPLA), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG), 콜레스테롤 및 완충제를 추가로 포함한다.

실시양태 18a는 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole, 바람직하게는 용량당 약 90 nmole 내지 약 715 nmole 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 535 nmole 또는 용량당 약 90 nmole 내지 약 275 nmole, 예컨대 용량당 약 25 nmole, 약 30 nmole, 약 35 nmole, 약 40 nmole, 약 45 nmole, 약 50 nmole, 약 55 nmole, 약 60 nmole, 약 65 nmole, 약 70 nmole, 약 75 nmole, 약 80 nmole, 약 85 nmole, 약 90 nmole, 약 95 nmole, 약 100 nmole, 약 125 nmole, 약 150 nmole, 약 175 nmole, 약 200 nmole, 약 225 nmole, 약 250 nmole, 약 275 nmole, 약 300 nmole, 약 325 nmole, 약 350 nmole, 약 375 nmole, 약 400 nmole, 약 425 nmole, 약 450 nmole, 약 475 nmole, 약 500 nmole, 약 525 nmole, 약 550 nmole, 약 575 nmole, 약 600 nmole, 약 625 nmole, 약 650 nmole, 약 675 nmole, 약 700 nmole, 약 725 nmole, 약 750 nmole, 또는 그 사이의 임의의 값, 또는 용량당 100 ㎍ 내지 2500 ㎍, 또는 300 ㎍ 내지 2400 ㎍, 예컨대 300 ㎍ 내지 1800 ㎍, 또는 300 ㎍ 내지 900 ㎍, 예를 들어 용량당 100 ㎍, 150 ㎍, 200 ㎍, 250 ㎍, 300 ㎍, 400 ㎍, 500 ㎍, 600 ㎍, 700 ㎍, 800 ㎍, 900 ㎍, 1000 ㎍, 1100 ㎍, 1200 ㎍, 1300 ㎍, 1400 ㎍, 1500 ㎍, 1600 ㎍, 1700 ㎍, 1800 ㎍, 1900 ㎍, 2000 ㎍, 2100 ㎍, 2200 ㎍, 2300 ㎍, 2400 ㎍, 2500 ㎍, 또는 그 사이의 임의의 값의 양으로 리포솜 표면상에 제시된 테트라팔미토일화 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상에서 뇌염을 유도하지 않고 항인산화 타우 항체를 유도하는 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 리포솜은 모노포스포릴 지질 A(MPLA), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG), 콜레스테롤 및 완충제를 추가로 포함한다.

실시양태 19는 실시양태 18 또는 18a의 방법으로서, 여기서 리포솜은 헬퍼 T-세포 에피토프 및 콜레스테롤 기에 공유 결합된 CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함한다.

실시양태 19a는 실시양태 19의 방법이며, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 PEG 링커를 통해 콜레스테롤 기에 공유 결합된다.

실시양태 19b는 실시양태 19 또는 19a의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 23, 서열 번호 24, 및 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 19c는 실시양태 19 또는 19a의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13 내지 17 및 39 내지 44로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 19d는 실시양태 19 또는 19a의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 19e는 실시양태 19 또는 19a의 방법으로서, 여기서 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함한다.

실시양태 19f는 실시양태 19 내지 19e 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 19g는 실시양태 19 내지 19e 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 19의 뉴클레오티드 서열을 갖는다.

실시양태 20a는 실시양태 18 내지 19g 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 20b는 실시양태 18 내지 19g 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 20c는 실시양태 18 내지 19g 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 타우 포스포펩티드는 서열 번호 29의 아미노산 서열로 이루어진다.

실시양태 21a는 실시양태 18 내지 20c 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 완충액은 인산염 완충액을 포함한다.

실시양태 21b는 실시양태 18 내지 20c 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 완충액은 히스티딘 및 수크로스 중 적어도 하나를 포함한다.

실시양태 22a는 실시양태 18 내지 21b 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 MPLA는 모노포스포릴 지질 A(예를 들어, 3D-(6-아실) PHAD^®)를 포함한다.

실시양태 23은 실시양태 1 내지 22a 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 대상은 알츠하이머병의 치료를 필요로 한다.

실시양태 24는 실시양태 1 내지 22a 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 대상은 알츠하이머병의 예방을 필요로 한다.

실시양태 25는 실시양태 23의 방법으로서, 여기서 대상은 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 경도 알츠하이머병 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료를 필요로 한다.

실시양태 26은 실시양태 1 내지 25 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 대상은 인간 대상이다.

실시예

본 발명의 하기 실시예는 본 발명의 특성을 추가로 설명하기 위한 것이다. 하기 실시예는 본 발명을 제한하지 않으며 본 발명의 범위는 이어지는 청구범위에 의해 결정되는 것으로 이해하여야 한다.

하기 실시예에 사용된 실험 방법은 달리 명시되지 않는 한 모두 통상적인 방법이다. 다음 실시예에서 사용된 시약은 달리 명시되지 않는 한 모두 일반 시약 공급업체에서 구입한 것이다.

다음 모든 실시예에서, ACI-35.030은 1200 ㎍/mL로 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 인산화된 타우 펩티드, MPLA(3D-(6-아실) PHAD®), DMPC, DMPG, 콜레스테롤, 300 ㎍/mL로 서열 번호 13의 헬퍼 T-세포 에피토프, PEG 링커를 통해 콜레스테롤기에 공유적으로 결합된 CpG 올리고뉴클레오티드, 및 완충액을 함유하는 본 발명의 실시양태에 따른 리포솜 제형이고, ACI-35는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 인산화된 타우 펩티드, MPLA, DMPC, DMPG, 콜레스테롤, 및 완충제를 함유하는 본 발명의 실시양태에 따른 리포솜 제형이다.

실시예 1: C57BL/6J 마우스에서 ACI-35.030의 용량-반응

목적: C57BL/6 암컷 마우스에 근육내(i.m.) 주사로 투여된 경우 ACI-35.030 백신의 면역원성을 평가하기 위함.

방법: 연구 설계는 표 1에 설명되어 있다.

실시예 1의 연구 설계

그룹	유전자형	마우스	처리	투여 경로	마우스 용량당 이론적 펩티드 농도
1	C57BL/6	10	ACI-35.030	근육내	80 ㎍
2	C57BL/6	10	ACI-35.030	근육내	35 ㎍

용량은 1 일, 15 일 및 29 일 간격으로 3 회 투여됨.

항체 측정을 위한 혈액 샘플은 -7, 8, 22 및 36 일의 간격으로 채취됨.

인산화된 타우 펩티드에 대한 특이적 IgG 항체 반응(ELISA에 의해 결정됨)을 측정하였다.

결과/결론:

ACI-35.030(1200:300) 백신에서 35 및 80 ㎍의 표적 용량에 의해 T3로 면역화하면 서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 T3.5 펩티드에 대한 항체가 유도되었다(도 1 참조)

실시예 2: 붉은털원숭이에서 ACI-35.030(리포솜 표면상의 테트라팔미토일화 T3 포스포-타우 펩티드, MPLA(3D-(6-아실) PHAD®) 및 CpG7909-Chol, 캡슐화된 T50 포함) 백신에 의해 유도된 IgG 반응의 평가

목적: ACI-35.030(리포솜 표면 상의 테트라팔미토일화 T3 포스포-타우 펩티드, MPLA(3D-(6-아실) PHAD®) 및 CpG7909-Chol, 캡슐화된 T50 포함) 백신의 면역원성을 평가하기 위해, 수컷 및 암컷 붉은털원숭이에게 피하 또는 근육 주사하여 최적의 투여 경로와 백신 농도를 결정한다.

방법: 연구 설계는 표 2에 설명되어 있다.

리포솜 백신에 대한 이론적 용량은 동물당 테트라팔미토일화 포스포펩티드(T3) 1800 ㎍ 및 T50 펩티드 1800 ㎍이었다.

용량은 1일, 29일, 85일 및 169일 간격으로 4회 투여되었다. 항체 측정을 위한 혈액 샘플은 -14 일, 8 일, 22 일, 36 일, 50 일, 64 일, 78 일, 92 일, 106 일, 120 일, 134 일, 148 일, 162 일, 176 일 및 190 일 간격으로 채취되었다.

인산화 및 비인산화된 타우 펩티드(각각 T3.5 및 T3.6; ELISA에 의해 결정됨), 전장 포스포-타우(pTau) 단백질(ELISA에 의해 결정됨) 및 알츠하이머병 환자의 뇌에서 추출한 병리학적 타우 형태(인간 PHF; MSD에 의해 결정됨)에 대한 특이적 IgG 항체 반응을 측정하였다. 동물에 대한 임상 징후(건강, 행동 변화 등)를 이전일부터 시작하여 연구 기간 내내 하루에 두 번 기록하였다. 모든 동물에 대해 체중을 치료 시작 전에 적어도 한 번, 그 후 매주 기록하였다.

결과/결론:

전반적으로, 모든 백신 요법으로 면역화한 후 전신 부작용이나 주사 부위에서의 지속적인 피부 민감성은 관찰할 수 없었다.

농축(1200:1200) 및 비농축(400:400) ACI-35.030 백신은 유사한 T3.5- 및 인간 PHF-특이적 IgG 역가를 유도하였다. 동일한 백신 제형의 s.c. 및 i.m. 투여 간에 T3.5- 및 인간 PHF-특이적 IgG 역가의 차이는 검출되지 않았다.

실시예 3: C57BL/6 마우스에서 2 주마다 ACI-35의 8 회 피하 주사 후 2 주의 무치료 기간(GLP) 후 반복 용량 독성 연구

목적: C57BL/6 마우스에서 14 주 동안 2 주마다 피하 주사 후 ACI-35의 잠재적인 독성을 평가하기 위함이다. 처리 기간이 끝나면, 결과의 가역성을 평가하기 위해서 지정된 동물을 2 주간 무처리 기간으로 유지하였다. 또한, 연구 동안 ACI-35의 면역원성을 평가하였다.

방법: 연구 설계는 표 3에 설명되어 있다.

^* = ACI-35-Empty는 투여된 백신에 활성 펩티드 T3가 포함되어 있지 않음을 의미한다.

용량은 다음 간격으로 8 회 투여되었다: 1 일, 15 일, 29 일, 43 일, 57 일, 71 일, 85 일 및 99 일.

혈액 샘플은 다음 간격으로 채취되었다: -2 주, 4 주, 6 주, 8 주, 19 주, 12 주, 14 주, 16 주 및 17 주.

그룹 1 및 5의 최종 6♂+6♀ 마우스는 연구 종료 시 2 주간 무치료 기간 동안 유지되었다.

결과/결론:

390 ㎍/주사의 최고 용량 수준에서 ACI-35-Empty 또는 ACI-35의 반복 주사는 8 회 주사 후 알부민/글로불린(A/G) 비율의 감소를 야기하였다. 면역화 동물에서 일반적으로 나타나는 이러한 변화는 글로불린(항체) 혈장 분획의 증가로 이어질 수 있으며 이것은 모든 ACI-35 처리 동물에서 항체(IgM 및 IgG 클래스)가 발생했기 때문으로 설명된다. 일반적으로, 반복 주사 후 IgG 역가는 IgM 역가보다 높았으며, 암컷이 수컷보다 항체가 더 많이 발생하는 경향이 있었다.

주사 부위에서, 98 또는 390 ㎍ 펩티드의 ACI-35로 처리된 그룹에서 국소 및 일시적 반응(비대)이 관찰되었다. 이들 용량에서, 비장과 간 중량 증가, 암컷과 수컷 모두에서 흉선 중량 감소, 암컷에서만 신장 중량 증가가 기록되었다. 주사 부위에서 거시적 소견은 주로 ACI-35 98 및 390 ㎍/주사에서 나타났다. 현미경적으로, PBS 대조군, ACI-35-Empty 또는 ACI-35를 24 ㎍/주사로 투여하면 국소적으로 잘 견뎠다. empty 리포솜과 관련된 거품성 대식세포 및 단핵 염증성 침윤물이 모든 용량 수준에서 용량 관련 중증성으로 관찰되었지만 PBS 대조군에서는 관찰되지 않았다. 섬유증을 동반한 아급성 염증 반응 및 간헐적인 피하 조직의 변성/괴사가 390 ㎍/주사에서 ACI-35로 약간 증가하였다.

ACI-35-Empty 또는 ACI-35를 390 ㎍/주사로 투여하면 비장 및 간에서 골수외 조혈이 유도되었고, 골수에서 골수 세포 수를 증가시켰다(이는 empty 리포솜 투여와 관련됨). 또한, 여러 전신 기관에서 단핵 염증 세포의 침윤이 주로 암컷에서 390 ㎍/주사량으로 ACI-35에서 관찰되었고 empty ACI-35 경우에는 그 정도가 덜하였다. 이러한 발견은 쉽게 유도할 수 있는 면역 체계를 갖는 것으로 잘 알려진 마우스 계통이기 때문에 이러한 동물에서 예상할 수 있는 반응 유형으로 간주되고 따라서 임상적으로 중요하지 않다. ACI-35를 98 ㎍/주사한 후 단 하나의 전신 소견은 비장과 간에서 골수외 조혈이었다. ACI-35를 24 ㎍/주사한 후 전신 소견은 없었다.

이들 발견 중 어느 것도 경증 내지 중등도의 중증성, 2 주 후 완전 또는 부분 회복, 및 유의한 임상 또는 임상 병리의 부재가 상관관계가 있다는 점에서 연구 정의에 따라 유해한 것으로 간주되지 않았다. 결과적으로, 본 연구의 실험 조건에서, C57BL/6J 수컷 및 암컷 마우스에 3 개월에 걸쳐 2 주마다 투여된 390 ㎍ 펩티드의 ACI-35 용량 수준은 NOAEL(전신 독성 징후 없음, 국소 수준에서 불리한 징후가 없음)로 간주되었다.

실시예 4: 4 주 회복 기간(GLP) 후 ACI-35에 의한 붉은털원숭이에서의 6 개월 피하 독성 연구

목적: 게먹이원숭이에게 4 주에 한 번 피하로 7 회 투여된 ACI-35의 누적 독성을 평가하기 위함이다. 치료 기간 후 일부 동물에 대해 4 주 회복 기간 동안 치료 관련 변화의 가역성 또는 진행 또는 임의의 지연 독성을 평가하였다.

방법: 연구 설계는 표 4에 설명되어 있다.

용량은 다음 간격으로 7 회 투여되었다: 1 일, 29 일, 57 일, 85 일, 113 일, 141 일 및 169 일.

혈액 샘플은 다음 간격으로 채취되었다: 15 일, 43 일, 71 일, 99 일, 127 일, 155 일, 183 일 및 208 일.

그룹 1 및 4의 최종 2♂+2♀ 원숭이는 연구 종료 시 4 주간 무치료 기간 동안 유지되었다.

결과/결론:

6 개월의 기간 동안 28 일마다 1 회 358, 716 및 1431 ㎍/주사로 게먹이원숭이에 ACI-35의 피하 투여는 모든 동물에서 내약성이 우수하였다.

치료와의 관계를 배제할 수는 없더라도, 호중구 수의 약간의 증가 및 포도당 수준의 약간의 감소는 모든 값이 배경 과거 데이터 내에 있고 예비 시험 값에 대한 관련 변동이 기록되지 않았기 때문에 불리한 것으로 간주되지 않았다.

모든 시험 제품 처리 그룹은 항체가 발생하였다. 첫 투여 2 주 후의 면역 반응은 모든 시험 제품 처리 그룹에서 유사하였다. 그 후, 평균 항-pTau 항체 역가가 용량-효과 관계에 대한 경향에 따라 치료 기간 내내 증가하였다. 4 주 동안 회복된 동물은 7 차 투여 후 2 주에 기록된 항체 수준과 관련하여 분명한 감소를 보였다.

얻어진 결과에 기초하여 이러한 연구 조건하에서, 6 개월 동안 28 일마다 1 회 투여된 1431 ㎍/주사 용량은 이 연구에 대해 NOAEL(부작용 수준이 관찰되지 않음)로 간주되었다.

실시예 5: 4 주의 회복 기간(GLP) 후 ACI-35.030에 의한 붉은털원숭이에서 3 개월 근육내 독성 연구

목적: 본 연구의 목적은 나이브 수컷 및 암컷 붉은털원숭이에게 근육내로 3 개월에 걸쳐 투여된 ACI-35.030의 잠재적 독성을 평가하기 위함이다. 가능한 치료 관련 변화의 가역성을 4 주의 회복 기간 동안 대조 그룹 및 고용량 그룹에서 성별당 원숭이 2 마리에 대해 평가하였다.

설계: 적용된 연구 프로토콜은 다음과 같다(표 5)

^# 그룹 1 및 3의 2♂+2♀ 원숭이는 4 주간 무치료 기간 동안 유지되었다.

^* ACI-E.030은 ACI-35.030과 동일한 성분으로 구성된 리포솜 제형으로, 타우 펩티드가 포함되어 있지 않다.

시험 및 참조 제품을 1 일, 29 일 및 85 일에 허벅지의 다른 세곳에 단일 근육 주사로 투여하였다. 연구 전반에 걸쳐 모든 동물에 대해 생존력/사망률 및 임상 징후를 매일 최소 2 회 관찰하였다. 투여일마다, 동물에게서 투여 전, 및 투여 후 6, 24 및 48 시간에 투여 부위에서 국소 반응(드레이즈 점수)에 대해 평가하였다.

연구 기간 동안 각 케이지에 대한 음식 소비를 정성적으로 추정하였다. 적응 기간부터 시작하여 연구 종료까지 매주 체중을 평가하였다. 예비 시험 중에 한 번, 마지막 투여 후 3/4일에 검안경 검사를 시행하였다. 예비 시험 중에 한 번, 마지막 투여 후 약 24 시간에 심전도(사지 리드 I, II 및 III 및 증강 리드 aVR(Augmented Volt Right), aVL(augmented Volt Left) 및 aVF(augmented Volt Foot))를 각 동물에 대해 기록하였다.

마지막 주사 2 일 후 예비 시험 기간(87 일) 동안 모든 동물에 대해 한 번, 모든 생존 동물에 대해 회복 기간 종료 시점(125 일)에 한 번 임상 병리학 평가(혈액학, 임상 화학, 응고 및 소변 검사)를 수행하였다.

ELISA에 의한 항-p-Tau 및 항 T50의 측정을 위한 혈청용 혈액 샘플을 -14, 8, 22, 36, 50, 64, 78, 92, 99, 106, 120 및 127 일(106, 120 및 127 일은 회복 동물에게서만)에 채취하였다.

-14 일, 모든 그룹에서 마지막 면역화 2 주 후 및 회복 그룹에서 부검 전에 PBMC를 수확하였다. IL-4 및 IFN-γ ELISPOT 분석을 수행하여 타우 특이적 T 세포 반응을 결정하였다.

예비 시험 및 부검 시 한 번 모든 동물에서 샘플링된 혈액에 대해 면역표현형을 평가하였다.

-14 일 및 99 일(주요 및 회복) 및 127 일(회복)에 PMBC(T3.5에 대한 T 세포 반응을 위한 ELISpot)를 위한 혈액을 수집하였다.

세포학 평가를 위해 예비 시험 및 각 사후 검사 전 모든 동물에게서 진정하에 뇌척수액(CSF) 샘플을 수집하였다.

예정된 치료 또는 회복 기간 종료 후, 모든 동물을 부검하고 다양한 장기의 무게를 쟀다. 모든 연구 동물의 뇌, 주사 부위 및 림프절에 대해 조직병리학적 검사를 수행하였다.

면역조직화학(IHC) 기술을 통해, 상이한 인간 조직에 대한 ACI-35.030에 의해 유도된 항체의 잠재적 결합 활성을 전용 연구 단계에서 평가하였는데, 여기서는 99 일째에 샘플링된 2400 ㎍ T3가 투여된 동물의 혈청을 사용하여 42 개의 동결된 인간 조직 및 관련 없는 세 개체의 혈액 도말 패널에서 인간 조직에 대해 ACI-35.030-유도된 원숭이 항체의 교차 반응성을 평가하였다.

결과:

사망이나, 또는 체중, 신체 변화, 식욕, 안과학, 심전도, 임상 병리학(혈액학, 응고, 임상 화학 및 소변 검사) 또는 면역표현형에 대한 ACI-35.030 관련 효과는 없었다.

주사 부위에서 일시적인 경미하거나 중간 정도의 피부 자극 징후(홍반 및 부종)가 면역화 후 모든 그룹에 대해 소수의 동물에서 관찰되었다. 29 일째 및 87 일째에, 48 시간에 2400 ㎍ T3/주사를 투여한 암컷 5 마리 중 1 마리의 처치된 뒷다리에서 일시적인 심한 국소 부종이 관찰되었다. 그러나 부종은 하루 후(30 일 및 88 일) 나아졌다.

대조 그룹과 시험 제품 투여 그룹 사이에 용량과 관련이 없는 평균 장기 중량에 일부 차이가 관찰되었다. 거시적으로는 서혜부, 장골 및 골반 림프절이 대조 그룹을 포함한 모든 그룹에 걸쳐 확대된 것으로 랜덤하게 묘사되었으며, 종종 현미경적으로 림프구 과세포성과 상관관계가 있었고, 4 주 회복 기간 후에 대부분 회복되었으며, 백신/백신 애쥬번트에 의한 자극으로 인한 가능성이 있는 것으로 해석되었다. 현미경적으로, 주사 부위의 골격근과 진피 및/또는 피하 조직에서 아주 적거나 경미한 염증이 관찰되었으며, 대조 그룹을 포함한 모든 그룹에서 골격근의 최소 변성 및/또는 재생이 동반되었다. 염증은 바늘 천자와 관련된 주입 절차와 주입 물질에 대한 국소 면역 반응의 조합에 의한 것일 수 있는 것으로 생각되었다. 이러한 변화는 불리한 것으로 간주되지 않았으며 4 주의 회복 기간 후에 회복되었다.

ACI-35.030의 투여와 관련된 뇌에서의 현미경적 변화는 없었다.

ACI-35.030은 1200 ㎍/용량 및 2400 ㎍/용량 모두에서 지속적인 항-pTau IgG 역가를 유도하였다(도 2).

치료 종료 시, 타우-특이적 T-세포 반응이 관찰되지 않았으며, 이는 수막뇌염과 같은 T-세포 활성화-관련 독성의 위험이 낮음을 시사한다.

42 개의 동결된 인간 조직 및 3 명의 비관련 개인으로부터의 혈액 도말에 대해 수행된 면역조직화학적 조사는 1/300 및 1/100에서 검사한 ACI-35.030-유도 원숭이 항체가 AD 뇌 섹션에서 특이적으로 염색된 타우 탱글임을 강조하였지만(도 3, 패널 A, ACI-35.030 처리 전, 패널 B: ACI-35.030을 2400 ㎍/용량으로 3 회 주사한 후, 혈청은 1/100로 희석), 시험한 임의의 대조 조직에서 온- 또는 오프-타겟 염색을 일으키지 않았다. 일례로, 치료 전 및 후 혈청(각각 패널 C 및 패널 D)으로의 결장 섹션 염색이 도 3에 나타나 있다.

결론:

종합적으로, 1 일, 29 일 및 85 일에 면역화 후 ACI-35-관련 변화가 없기 때문에, 2400 ㎍ T3의 최고 용량 수준은 무영향 수준(NOEL)으로 간주되었다.

실시예 6: 펩티드의 EpiScreen™ 면역원성 분석

목적 :

2 개의 16-mer 펩티드, Tau 393-408[pS396/pS404](서열 번호 2의 아미노산 서열을 갖는 T3.5) 및 Tau393-408(서열 번호 4의 아미노산 서열을 갖는 T3.6)을 EpiScreen™ 경시적 T-세포 분석법으로 51 명의 인간 공여자에서 CD4⁺ T-세포 반응을 유도하는 능력에 대해 검사하였다.

설계 :

EpiScreen™ 경시적 T-세포 증식 분석 및 IL-2 ELISPOT 분석

51 명의 인간 공여자로부터의 PBMC를 5 μM의 최종 농도로 두 펩티드 중 하나로 자극하였다. 각 공여자에 대해, 재현성 대조군(100 ㎍/mL KLH와 함께 배양된 세포), 벤치마크 임상 대조군(0.3 μM 인간화 A33과 함께 배양된 세포) 및 배양 배지만의 웰도 포함시켰다. 다양한 시점 후에 증식 및 IL-2 생산을 평가하였다.

EpiScreen™ 데이터 분석

증식 분석 및 IL-2 ELISPOT 분석의 경우, 2 이상의 자극 지수(SI)의 경험적 임계값(SI≥2.00)이 이전에 확립되었으며, 이에 따르면 이 임계값 이상의 반응을 유도하는 샘플은 양성으로 간주되는 반면 SI는 양성으로 간주된다. ≥1.90은 경계선 반응자로 간주되었다.

다양한 생물학적 제제를 사용한 이전의 EpiScreen™ 경시적 T-세포 분석은 EpiScreen™ 분석에서 공여자 T-세포 반응의 백분율과 임상에서 관찰된 면역원성 수준 사이에 명확한 상관관계를 보여주었다. 일반적으로, EpiScreen™ 분석에서 10% 초과 양성 반응을 유도하는 단백질 치료제는 임상에서 상당한 면역원성 위험과 관련이 된다.

결과 :

증식과 IL-2 ELISPOT 분석 간에는 전반적인 상관관계가 높았고(KLH의 경우 98%), 따라서 반응 공여자는 IL-2 ELISPOT 및 증식 분석 모두에서 각 샘플에 대해 양성 반응을 보인 것으로 정의되었다. 이 두 분석으로부터의 결합된 데이터 세트를 분석하였더니 51 명 중 1 명(2%) 공여자가 Tau 393-408[pS396/pS404]에 반응하였고 51 명 중 2 명(4%) 공여자가 Tau 393-408에 응답한 것으로 나타났다. 경계선 반응과 두 분석 중 하나에만 반응한 공여자를 고려할 때, 51 명의 공여자 중 4 명(8%)이 Tau 393-408[pS396/pS404]에 반응하였고 51 명의 공여자 중 4 명(8%)이 Tau 393-408에 반응하였다. 따라서, 공여자의 최대 8%가 반응하여 반응의 전체 빈도와 크기는 두 펩티드 모두에 대해 낮았다.

결론 :

증식 및 IL-2 분비에 의해 측정된 CD4⁺ T-세포 반응을 유도하는 시험 펩티드(Tau 393-408[pS396/pS404] 및 Tau 393-408)의 능력을 51 HLA-형 공여자의 코호트에 대해 시험하였다. 연구 데이터에 따르면 CD4⁺ T 세포 반응을 유도하는 전반적인 상대적 위험이 두 펩티드 모두에서 낮았다(2-8%).

EpiScreen™ 분석에서 시험된 단백질 치료제와 비교하여, 본 연구 데이터는 두 펩티드가 인간에서 CD4⁺ T-세포 반응을 유도할 잠재적 위험이 낮은 것으로 간주될 것임을 제시한다.

실시예 7: 인간에서 ACI-35의 안전성 및 효능

ACI-35 백신(ACI-35)의 안전성, 내약성 및 면역원성을 영국 및 핀란드에서 경도 내지 중등도의 AD 환자에서 수행된 임상 Ib 상 연구에서 평가하였다(ACI-35-1201: 경도 내지 중등도의 알츠하이머병 환자에서 ACI-35의 안전성, 내약성 및 면역원성에 대한 Ib 상 다시설 이중 맹검, 무작위, 위약 대조 연구).

목적: 안전성 및 내약성, 및 혈청에서 항-포스포-타우(pTau) 면역글로불린 G(IgG) 역가의 유도에 대해 경도 내지 중등도 AD 환자에서 3 회 용량 및 3 회 투여 요법으로 ACI-35를 예비적으로 평가하기 위함.

방법: 5 코호트는 각각 표 5에 기재된 바와 같이, 상이한 용량(300 ㎍, 900 ㎍ 또는 1800 ㎍의 테트라팔미토일화 포스포펩티드(pTau 펩티드 T3, 서열 번호 28)) 및/또는 6 개월에 걸친 투여 요법(2, 3 또는 5 회 용량 투여), 이어 마지막 주사 후 12-16 개월(코호트 1) 또는 6 개월(코호트 2-5)에 부스터 주사로 구성되었다.

약어: N = 환자수, W = 주수

24 명의 환자를 무작위로 배정하여 연구 약물 백신을 적어도 1 회 용량 투여하였다. 선별시 평균 환자 연령은 73.6±5.88 세였으며 MMSE 평균 점수는 23.3±2.71이었다. 15 명의 여성과 9 명의 남성이 무작위 배정되었다. 22 명의 환자가 연구를 완료하였다. 코호트 2의 환자 2 명(900 ㎍ 1 명, 위약 1 명)은 연구 완료를 심각하게 방해하거나 불가능하게 하는 ACI-35와 관련이 없는 심각한 의학적 상태로 인해 연구가 중단되었다.

포함 기준은 다음과 같다:

1. National Institute of Neurological and Communicative Diseases and Stroke- Alzheimer's Disease and Related Disorders 협회 기준에 따른 알츠하이머병 징후(AD)

2. 60 세 이상 85 세 이하

3. MMSE(간이 정신 상태 검사) 심사에서 18 - 28점

4. 환자는 선별 전 최소 3 개월 동안 안정적인 용량의 아세틸콜린에스테라제 억제제를 투여받았다.

5. 임상 평가를 지원하고 안전 문제를 보고하기 위해 서면 동의를 제공한 신뢰할 수 있는 배우자 또는 기타 동거 간병인이 돌보고 있는 환자

6. 서면 동의서를 이해하고 서명할 수 있고 모든 연구 절차를 준수할 수 있다고 연구자가 생각하는 환자(시험 관련 절차를 수행하기 전에 동의를 얻어야 함)

7. 여성은 적어도 1 년 동안 폐경 상태이고/이거나, 외과적으로 불임 수술을 받았음.

8. 폐경 후가 아니거나 외과적으로 불임 수술을 받지 않은 남성 환자의 여성 파트너는 신뢰할 수 있는 피임법, 예를 들어 이중 장벽 피임 또는 호르몬 피임법을 사용해야 함.

결과/결론:

전반적으로, ACI-35는 인간 대상에서 시험된 모든 용량 및 치료 요법에서 안전하고 내약성이 우수하였고, 주사는 모든 연구 코호트에서 최초 주사 직후에 항-pTau 항체의 신속한 유도를 유도하였다. 주사 부위 홍반, 주사 부위 반응 및 피로가 가장 흔한 연구 약물 관련 TEAE(치료중 발생하는 유해 반응)였다. 임상적 또는 실험실적 또는 방사선적 소견으로부터 CNS 염증의 발병을 시사하는 어떠한 증거도 없었다. 주사 부위 반응을 제외하고는 위약과 비교하여 AE 패턴은 연구 약물과의 관계를 시사하지 않았다. 일반적으로 경미하고 자가 제한적인 주사 부위 반응은 고용량에서 더 빈번했으며 코호트 4 및 5에서 활성 약물을 투여받은 모든 환자에서 보고되었다. 무증상 저혈당은 위약보다 활성 약물에서 더 일반적으로 관찰되었지만 이 현상의 알려진 자발적인 발생을 고려할 때 연구 약물과의 관계는 불확실하다. 5 건의 SAE가 보고되었으며, 모두 코호트 2의 환자에서 보고되었으며, 이 중 1 명의 환자는 위약으로 치료받았고 2 건의 SAE(요로패혈증 및 신우신염)를 경험하였다. 이들 두 SAE는 연구 약물과 관련되지 않았다. 연구 약물 관련 SAE(급성 신우신염, 부비동 결절 기능 장애 및 어지러움) 가능성이 있는 3 건이 ACI-35로 치료받은 2 명의 환자에서 보고된 유일한 부작용이었다. 이 연구에서는 사망이 보고되지 않았다.

실시예 7: 인간에서 ACI-35.030의 안전성 및 효능

ACI-35.030 백신(ACI-35.030)의 안전성, 내약성 및 면역원성을 유럽에서 초기 AD 환자(AD 및 경도 AD로 인한 경도 인지 장애(MCI))에서 수행된 임상 Ib 상/IIa 다시설 이중 맹검, 무작위, 위약 대조 연구에서 평가하였다(ACI-35-1802 연구).

목적: 74 주 기간 동안 초기 AD가 있는 참여자에서 안전성 및 내약성과, 혈청 내 항-포스포-타우(항-pTau) 유도를 비롯한 비정상적인 형태의 타우 단백질에 대한 면역 반응 유도에 대해, 초기 AD(예를 들어, AD 및 경도 AD로 인한 경도 인지 장애(MCI))가 있는 참여자에서 최대 3 회 용량의 ACI-35.030을 예비적으로 평가하기 위함.

2차 목적: 예를 들어, 혈청에서 Tau에 대한 IgG 역가 및 pTau 및 Tau에 대한 IgM 역가의 유도를 평가함으로써 연구 백신의 면역원성을 추가로 평가하고; 74 주의 기간 동안 면역화에 의해 유도된 항체의 결합력을 평가하기 위함.

탐구 목적: AD 진행의 추정 바이오마커, 즉 총 타우 및 pTau 단백질의 혈액 및/또는 CSF 농도에 대한 연구 백신의 효과를 탐구하고; 혈액 내 T 세포 활성화에 대한 연구 백신의 효과를 조사하고; 혈액 염증성 사이토카인(예: IL-1β, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ 및 TNF-α)에 대한 연구 백신의 효과를 조사하고; 행동, 인지 및 기능 수행에 대한 연구 백신의 효과를 조사하기 위함 - 각각 74 주의 기간.

방법: 3 코호트는 각각 조성물 중 pTau 펩티드 T3의 양(테트라팔미토일화 포스포펩티드 pTau 펩티드 T3 300 ㎍, 900 ㎍ 또는 1800 ㎍, 서열 번호 28)으로 제시되는 상이한 용량의 ACI-35.030을 48 주에 걸쳐 투여받고(0, 8, 24 및 48 주에 용량 투여), 이어 24 주(6 개월) 안전성 추적 기간이 이어진 환자로 구성된다.

24 명의 환자를 3 하위 코호트로 무작위로 배정하여, 각 하위 코호트에서 2 명의 환자에게는 위약을 투여하고 6 명의 환자에게는 ACI-35.030을 투여하였다. 투용량은 근육 내 투여되었다.

안전성 평가를 모든 연구 환자에 대해 각 투여 직후와, 48 내지 72 시간 후 전화 통화로 수행하였다. 각 하위 코호트에서, 현장 수석 연구원에 따라 48 내지 72 시간에 이전 환자의 안전성 평가를 수행한 후 연구 백신과 관련하여 임상적으로 관련된 안전성 문제가 없는 것이 확인되면, 첫 4 명의 환자에 대해 첫 번째 투여를 수행하였다.

모든 치료 환자는 치료 기간 종료 후 24 주(6 개월)의 안전성 추적 기간을 가졌다. 이 기간 동안, 환자에게 마지막 투여 후 19 주에 첫 번째 추적 관찰 방문을 하고 추적 관찰 기간 종료(최종 투여 후 26 주째) 후에 마지막 방문하라고 요청하였다. 참여자의 안전성을 데이터 및 안전 모니터링 위원회(DSMB)에 의한 정기적인 안전성 데이터 검토로 연구 전반에 걸쳐 모니터링하였다.

중간 분석은 다음과 같이 수행될 것이다:

첫 번째 중간 분석은 모든 코호트 1 환자들이 방문 4(10 주차), 즉 두 번째 주사 후 2 내지 4 주를 완료하면 수행된다. 목적은 코호트 2를 시작할지 여부를 결정하기 위해 이 시점까지의 안전성, 내약성 및 면역원성 데이터를 검토하는 것이다.

두 번째 중간 분석은 모든 코호트 2 환자들이 방문 4(10 주차), 즉 두 번째 주사 후 2 내지 4 주를 완료하면 수행된다. 목적은 코호트 3을 시작할지 여부를 결정하기 위해 이 시점까지의 안전성, 내약성 및 면역원성 데이터를 수집하는 것이다.

세 번째 중간 분석은 모든 코호트 3 환자들이 방문 6(26 주차), 즉 세 번째 주사 후 2 내지 4 주를 완료하면 수행된다. 목적은 면역원성, 안전성 및 내약성 측면에서 가장 유리한 프로파일을 나타내는 용량에서 추가 안전성/내약성 데이터를 수집하기 위해 코호트 1, 2 또는 3을 확장할지 결정하는 것이다.

네 번째 중간 분석은 치료 기간이 끝날 때(즉, 네 번째 주사 후 2 내지 4 주) 수행된다. 목적은 해당되는 경우 하위 코호트 확장 환자의 데이터를 포함하여 이 시점까지의 안전성/내약성 및 면역원성 데이터를 검토하는 것이다. 바이오마커 결과가 보조 탐구 데이터로 포함될 수 있다. 모든 연구 코호트 중에서 추가 임상 개발을 위한 최상의 전략을 선택하기 위해 결과를 다른 코호트에 대해 후속적으로 얻은 결과와 비교한다.

다섯 번째 중간 분석은 안전성 추적 기간이 끝나고, 즉 모든 코호트 1 환자들이 11 번 방문(74 주차)을 완료하면 수행된다. 목적은 네 번째 중간 분석에서와 동일하며 이후 모든 코호트에서의 결과가 비교된다.

연구 집단은 NIA-AA 기준에 따라 AD로 인한 경도 AD 또는 MCI의 진단을 받은 50 내지 75세(남성 및 여성)이다.

포함 기준은 다음과 같다:

1. 50 세 이상 75 세 이하의 남녀.

2. NIA-AA 기준에 따른 AD 또는 경도 AD로 인한 경도 인지 장애(MCI) 및 임상 치매 등급 척도(CDR) 전체 점수 0.5 또는 1.

3. MMSE(간이 정신 상태 검사) 점수 22 이상.

4. 선별 시 AD 병리에 대한 NIA-AA 2018 기준과 일치하는 CSF 아밀로이드 베타 42(Aβ42) 및 인산화된 Tau의 수준. CSF Aß42 수준이 경계선인 경우, 아밀로이드 양성을 결정하는 데 도움이 되는 다른 결과, 예를 들어, Aß42/Aß40 비율 및 경우에 따라 양성 아밀로이드 PET 스캔 또는 양성 CSF Aß42 수준의 병력이 고려될 수 있다. 선별 전 3 개월 이내에 수행된 CSF 샘플링의 결과는 아밀로이드 병리의 존재와 일치하고 해당 CSF 샘플이 시험을 위한 연구에 사용될 수 있다면, 사례별로 허용된다.

5. 기준선 이전 최소 3개월 동안 AD에 대해 시판되는 어떠한 치료제도 복용하지 않거나 안정 용량의 아세틸콜린에스테라제 억제제 및/또는 메만틴을 투여받고 있는 환자.

6. 순응을 보장하고, 임상 평가를 지원하고, 안전성 문제를 보고하기 위해 신뢰할 수 있는 정보 제공자 또는 간병인이 돌보고 있는 환자.

7. 여성은 최소 1 년 동안 폐경 상태 및/또는 외과적으로 불임 수술을 받았어야 한다. 가임 여성 또는 폐경 상태가 아닌 여성은 선별 검사 시 임신 검사에서 음성이어야 하며 선별 검사 방문부터 참여가 끝날 때까지 매우 효과적인 피임 방법을 기꺼이 사용해야 한다. 대상이 연구 백신을 계속 받을 수 있는지를 결정하기 위해 소변 임신 재검사가 치료 기간 내내 수행될 것이다. 가임기 파트너가 있는 남성 환자는 연구 기간 동안 적절한 피임법을 기꺼이 사용해야 한다.

8. 조사자의 의견에 따라 서면 동의서를 이해하고 제공할 수 있는 환자.

9. 환자와 정보 제공자 또는 간병인은 연구 언어 중 하나에 능통해야 하며 요추 천자를 포함한 모든 연구 절차를 따를 수 있어야 한다.

배제 기준은 다음과 같다:

1. 환자가 위약만으로 치료되었고 위약 제형이 특정 면역 반응을 유도하지 않을 것으로 예상되는 문서화된 증거 없이 활성 면역화를 사용한 AD 및/또는 신경계 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

2. 대상이 위약만으로 치료되었고 위약이 임의의 특정 면역 반응을 유발하지 않을 것으로 예상되는 문서화된 증거 없이 선별 전 지난 12 개월 이내에 수동 면역화를 사용한 AD 및/또는 신경 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

3. 선별 전 지난 3 개월 이내에 BACE-1 억제제를 포함하는 임의의 소분자 약물을 사용한 AD 및/또는 신경계 장애에 대한 이전 임상 시험에 참여.

4. 실험용 또는 승인된 약물 또는 요법을 사용하는 기타 임상 시험에 동시 참여.

5. 자가면역 질환의 임상 증상이 없는 환자에서 적어도 1/160의 희석 시 양성 항핵 항체(ANA) 역가의 존재.

6. 자가면역 질환의 현재 또는 과거 병력, 또는 자가면역 질환의 존재와 일치하는 임상 증상.

7. 선별 전 3 개월 이상 일시적으로 처방되지 않은 면역억제제 또는 전신 스테로이드의 사용을 포함하지만 이에 국한되지 않는 면역 억제.

8. 기존 백신 및/또는 약물에 대한 중증 알레르기 반응을 포함하나 이에 국한되지 않는 중증 알레르기 반응(예를 들면 아나필락시스)의 이력.

9. 임상적으로 유의한 저혈당 에피소드의 이전 이력.

10. DSM-V(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders-V) 기준에 따라 현재 충족하거나 지난 5 년 이내에 약물 또는 알코올 남용 또는 의존.

11. 연구 치료제의 안전성 및 내약성 평가 및/또는 전체 연구 방문 일정 준수를 방해할 가능성이 있는 임상적으로 유의한 의학적 상태.

12. 면역계에 영향을 미칠 가능성이 있거나 환자에서 연구 백신의 면역화 가능성을 잠재적으로 손상시킬 것으로 예상되는 임상적으로 유의한 의학적 상태(예를 들면, 후천성 또는 선천성 면역억제 장애의 병력).

13. 선별 전 지난 12 개월 이내에 하이드랄라진, 프로카인아미드, 퀴니딘, 이소니아지드, TNF-억제제, 미노사이클린의 사용.

14. 선별 전 적어도 3 개월 동안 안정적인 용량이 아닌 딜티아젬의 사용.

15. 대상이 자살 생각 질문 4 또는 5에 "예"로 대답: 지난 12 개월 이내에 자살 행동에 대해 "예"로 대답함으로써 콜롬비아 자살 심각도 척도(Columbia-Suicide Severity Rating Scale)을 사용하여 정의된 자살의 유의미한 위험.

16. 알츠하이머병과 관련된 것으로 간주되지 않는 정신 또는 신경학적 장애(예를 들면, 의식 상실을 동반한 두부 손상, 증상성 뇌졸중, 파킨슨병, 중증 경동맥 폐쇄성 질환, TIA).

17. 통제되지 않는 발작의 이력 또는 존재. 발작 이력이 있는 경우, 기준선 전 2 년 이내에 발작이 발생하지 않고 잘 제어되어야 한다. 항간질약의 사용은 선별 전 최소 3 개월 동안 안정적인 용량인 경우 허용된다.

18. 선별 전 지난 10 년 이내에 수막뇌염의 병력.

19. 출혈성 및/또는 비출혈성 뇌졸중의 병력이 있는 환자.

20. 말초 신경병증의 존재 또는 병력.

21. CNS 침범 가능성이 있는 염증성 신경 장애의 병력.

22. 환자의 증상을 유발할 수 있는 알츠하이머병과 일치하지 않는 대체 병리의 구조적 증거를 보여주는 MRI 스캔 스크리닝. 직경 1 cm 미만의 양성 수막종, 2 개 이상의 열공 경색 또는 직경이 1 cm보다 큰 하나의 단일 경색 또는 표재성 철침착증의 어느 한 영역 또는 10 mm 이상의 이전 대출혈의 증거 이외의 공간 점유 병변의 증거. T2* MRI의 미세 출혈은 위치에 관계없이 최대 10 개까지 허용된다.

23. MRI 연구에 금기인 금속 임플란트 및/또는 심각한 밀실 공포증을 포함하되 이에 국한되지 않는 어떤 이유로 MRI 검사를 수행할 수 없는 경우.

24. 프로토콜을 준수하고 결과 측정을 수행하는 것을 방해하는 중대한 청력 또는 시각 장애 또는 조사자가 적절하다고 판단한 기타 문제.

25. 선별 전 3 개월 이내에 임상적으로 유의한 감염 또는 주요 수술. 연구에 참여하는 동안 발생할 것으로 예상되는 계획된 수술은 선별 시 의료 모니터의 검토 및 승인을 받아야 한다.

26. 인플루엔자 백신을 포함하여 기준선 전 지난 2 개월 이내에 임의의 백신을 받음.

27. 선별시 ECG에서 임상적으로 유의한 부정맥 또는 기타 임상적으로 유의한 이상.

28. 기준선 이전 1 년 이내의 심근경색, 불안정 협심증 또는 심각한 관상동맥 질환.

29. 완전히 제거되어 완치된 것으로 간주되는 치료된 편평상피세포암, 기저세포암 및 제자리 흑색종, 제자리 전립선암 또는 제자리 유방암 이외의 과거 5 년 이내에 암의 병력이 있는 환자.

30. 현장 조사관의 의견에 따라 임상적으로 유의하다고 판단되는 혈액학적 매개변수, 간 기능 검사 및 기타 생화학적 측정에 대한 정상 값에서 임상적으로 유의미한 편차.

31. 선별 시 혈청 검사에 의해 확인된 임신 중이거나, 임신을 계획 중이거나 수유 중인 여성 대상.

32. 1 일 100 mg 미만 용량의 아스피린을 제외한 항응고제 또는 항혈소판제를 투여받은 환자(예정 또는 예정되지 않은 요추 천자 중 출혈 위험을 피하기 위함).

33. 불면증 치료를 위해 안정적인 저용량이 아닌 항정신병 약물을 투여받는 환자.

34. 선별 전 30 일 동안 혈액 또는 혈액 제제를 기증했거나 연구에 참여하는 동안 혈액을 기증할 계획이 있는 환자.

35. 선별 시 활성 매독과 일치하는 양성 VDRL(성병 연구 실험실).

36. 선별 시 HIV 검사 양성인 환자.

37. 선별 시 시험에 의해 측정된 활성 B 및/또는 C형 간염 환자.

38. 크레아티닌이 정상, 비정상 갑상선 기능 검사의 상한치의 1.5 배를 초과하거나 혈청 B12 또는 엽산 수치가 임상적으로 유의하게 감소한 환자(참고: 갑상선 대체제, B12 또는 엽산의 모든 경구 용량은 선별 전 적어도 3 개월 동안 안정해야 한다).

결과/결론:

하기 1차 종점이 평가될 것이다:

안전성 및 내약성 - 유해 사건, 즉각적 및 지연 반응원성(예를 들면, 아나필락시스, 통증, 발적, 면역 복합 질환, 붓기, 발열을 포함하는 국소 및 전신 반응원성); 내약성에 대한 종합적 평가; 자살 생각(C-SSRS); 행동(NPI); 안전성을 평가하기 위한 인지 및 기능 평가(RBANS, CDR-SB); 활력 징후; MRI 영상; 심전도; 혈액 및 소변의 일상적인 혈액학 및 생화학 평가; 혈액 내 항-DNA 항체를 포함한 자가면역 항체의 평가; 혈액 및 CSF의 염증 마커.

면역 반응 - 혈청 내 항-pTau IgG 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적).

하기 2차 종점이 평가될 것이다:

면역 반응 - 혈청 내 항-Tau IgG, 항-pTau 및 항-Tau IgM 역가(기하학적 평균, 기준선으로부터의 변화, 반응자 비율, 피크 및 곡선 아래 면적), 결합력 시험에 의한 IgG 반응 프로파일의 결정.

하기 탐구적 종점이 평가될 것이다:

혈액 및/또는 CSF(예를 들면, 총 Tau 및 pTau 단백질)에서 바이오마커 역가의 기준선으로부터의 변화, 혈액에서 T-세포 활성화 수준의 기준선으로부터의 변화, 혈액 내 염증성 사이토카인(예: IL-1B, IL-2, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-γ 및 TNF-α) 역가의 기준선으로부터의 변화, 자살 생각(C-SSRS), 행동(NPI), 인지 및 기능 수행(RBANS, CDR-SB) 점수의 기준선으로부터의 변화.

실시예 8: 근육내 주사는 피하 주사보다 더 균질한 면역 반응을 유도하였다

붉은털원숭이 그룹(그룹당 n=3 수컷 및 3 암컷)을 1 일, 29 일, 85 일 및 169 일에 1800 ㎍/용량의 ACI-35.030으로 백신 접종에 의해 근육내 또는 피하로 면역화시켰다.

Greenberg and Davies(1991, Proc Natl Acad Sci U S A, 87(15):5827-31)의 수정된 방법을 사용하여 불용성 타우의 사르코실 추출에 의해 조직학적으로 확인된 AD 대상의 사후 뇌 조직으로부터 농축된 쌍 나선형 필라멘트(ePHF) 제제를 얻었다. 농축 쌍 나선형 필라멘트(ePHF)에 특이적인 항체 역가를 Mesoscale Discovery(MSD) 플랫폼을 사용하여 평가하였다. AD 환자로부터 단리된 ePHF와 인큐베이션하기 전에 MSD 스트렙타비딘 플레이트를 비오티닐화 항-타우 포획 항체(HT7-비오틴, ThermoScientific)로 코팅하고, 원숭이 IgG 항체와 교차 반응하는 설포 태그-표지된 항-인간 IgG 항체를 사용하여 ePHF에 특이적인 IgG 항체를 추가로 검출하였다. 보다 구체적으로, ePHF를 사전에 1% BSA로 포화시키고 비오티닐화된 HT-7(Thermo Scientific)로 코팅된 MSD Gold 소 스폿 스트렙타비딘 96-웰 플레이트(MSD)에 첨가하였다. 1 시간의 인큐베이션 후, 플레이트를 PBST로 세척하고 연속 혈청 희석물을 첨가한 후, 2 시간 동안 인큐베이션하였다. Read 완충제 T를 첨가하기 전에 설포 태그(SulfoTag) 표지된 항-인간 IgG 항체를 사용하여 결합된 항체를 검출한 후 1% PFA에서 고정 단계를 수행하였다. Sector Imager(MSD)를 사용하여 플레이트를 분석하였다. 결과를 그룹당 기하 평균과 함께 각 개별 원숭이에 대해 밀리리터당 임의 단위(AU/mL)로 표현하였다. 제1 면역화 후 50일, 106일 및 190일에 ePHF에 특이적인 항체 역가를 표시하였다.

도 4는 리포솜 백신이 높은 ePHF-특이적 IgG 역가를 유도하고 근육내 주사가 피하 주사보다 더 균질한 항체 반응을 유도함을 보여준다.

서열 목록

서열 번호 1 - 포스포-타우 펩티드 (7.1)

GDRSGYS[pS]PG[pS]PG[pT]PGSRSRT

서열 번호 2 - 포스포-타우 펩티드 (T3.5)

VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

서열 번호 3 - 포스포-타우 펩티드 (22.1)

SSTGSIDMVD[pS]PQLA[pT]LA

서열 번호 4 - Tau 펩티드 (T3.6)

VYKSPVVSGDTSPRHL

서열 번호 5 - 포스포-타우 펩티드

RENAKAKTDHGAEIVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHL

서열 번호 6 - 포스포-타우 펩티드

RQEFEVMEDHAGT[pY]GL

서열 번호 7 - 포스포-타우 펩티드

PGSRSR[pT]P[pS]LPTPPTR

서열 번호 8 - 포스포-타우 펩티드

GYSSPG[pS]PG[pT]PGSRSR

서열 번호 9 - 포스포-타우 펩티드

GDT[pS]PRHL[pS]NVSSTGSID

서열 번호 10 - 포스포-타우 펩티드

PG[pS]PG[pT]PGSRSR[pT]P[pS]LP

서열 번호 11 - 포스포-타우 펩티드

HL[pS]NVSSTGSID

서열 번호 12 - 포스포-타우 펩티드

VSGDT[pS]PRHL

서열 번호 13 - T50 T 세포 에피토프

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂

서열 번호 14 - T46 T 세포 에피토프

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEK(Pal)K(Pal)-NH₂

서열 번호 15 - T48 헬퍼 T 세포 에피토프

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSLINSTKIYSYFPSVISKVNQ-NH₂

서열 번호 16 - T51 헬퍼 T 세포 에피토프

AKFVAAWTLKAAARRQYIKANSKFIGITELRRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂

서열 번호 17 - T52 헬퍼 T 세포 에피토프

AKFVAAWTLKAAARKQYIKANSKFIGITELRKFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-NH₂

서열 번호 18 - CpG 2006 (CpG 7909로도 알려짐)

5'-tcgtcgttttgtcgttttgtcgtt-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트(ps) 뉴클레오티드간 연결을 의미한다

서열 번호 19 - CpG 1018

5'-tgactgtgaacgttcgagatga-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 의미한다

서열 번호 20 - CpG2395

5'-tcgtcgttttcggcgcgcgccg-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 의미한다

서열 번호 21 - CpG2216

5'-ggGGGACGATCGTCgggggg-3'

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 의미하고 대문자는 포스포디에스테르(po) 연결을 의미한다

서열 번호 22 - CpG2336

5'-gggGACGACGTCGTGgggggg-3',

여기서 소문자는 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 의미하고 대문자는 포스포디에스테르 연결을 의미한다

서열 번호 23 - Pan DR 에피토프 (PADRE) 펩티드

AKFVAAWTLKAAA

서열 번호 24 - P2

QYIKANSKFIGITEL

서열 번호 25 - P30

FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

서열 번호 26 - TT_586-605　

LINSTKIYSYFPSVISKVNQ

서열 번호 27 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드 (팔미토일화 7.1)

K(pal)K(pal)GDRSGYS[pS]PG[pS]PG[pT]PGSRSRTK(pal)K(pal)

서열 번호 28 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드 (T3, 팔미토일화 T3.5)

K(pal)K(pal)VYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)

서열 번호 29 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드 (팔미토일화 22.1)

K(pal)K(pal)SSTGSIDMVD[pS]PQLA[pT]LAK(pal)K(pal)

서열 번호 30 - 팔미토일화 타우 펩티드

K(pal)K(pal)VYKSPVVSGDTSPRHLK(pal)K(pal)

서열 번호 31 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)RENAKAKTDHGAEIVYK[pS]PVVSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)

서열 번호 32 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)RQEFEVMEDHAGT[pY]GLK(pal)K(pal)

서열 번호 33 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)PGSRSR[pT]P[pS]LPTPPTRK(pal)K(pal)

서열 번호 34 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)GYSSPG[pS]PG[pT]PGSRSRK(pal)K(pal)

서열 번호 35 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)GDT[pS]PRHL[pS]NVSSTGSIDK(pal)K(pal)

서열 번호 36 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)PG[pS]PG[pT]PGSRSR[pT]P[pS]LPK(pal)K(pal)

서열 번호 37 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)HL[pS]NVSSTGSIDK(pal)K(pal)

서열 번호 38 - 팔미토일화 포스포-타우 펩티드

K(pal)K(pal)VSGDT[pS]PRHLK(pal)K(pal)

서열 번호39 - C-말단 아미드가 없는 T50

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

서열 번호 40 - C-말단에 -Lys(Pal)-Lys(Pal)-NH₂가 없는 T46

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

서열 번호 41 - C-말단 아미드가 없는 T48

AKFVAAWTLKAAAGSQYIKANSKFIGITELGSFNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSLINSTKIYSYFPSVISKVNQ

서열 번호 42 - C-말단 아미드가 없는 T51

AKFVAAWTLKAAARRQYIKANSKFIGITELRRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

서열 번호 43 - C-말단 아미드가 없는 T52

AKFVAAWTLKAAARKQYIKANSKFIGITELRKFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE

서열 번호 44 - T57

AKFVAAWTLKAAAVVRQYIKANSKFIGITELVVRFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-K(Pal)K(Pal)-NH2

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Pharmaceuticals, Inc. AC Immune S.A. <120> Method of safe administration of phosphorylated Tau peptide vaccine <130> 689001-66U1 <150> 62/802,870 <151> 2019-02-08 <160> 44 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide 7.1 <220> <221> phosphorylated serine <222> (8)..(8) <220> <221> phosphorylated serine <222> (11)..(11) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (14)..(14) <400> 1 Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly 1 5 10 15 Ser Arg Ser Arg Thr 20 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide T3.5 <220> <221> phosphorylated serine <222> (4)..(4) <220> <221> phosphorylated serine <222> (12)..(12) <400> 2 Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 10 15 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide 22.1 <220> <221> phosphorylated serine <222> (11)..(11) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (16)..(16) <400> 3 Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr 1 5 10 15 Leu Ala <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tau peptide <400> 4 Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 10 15 <210> 5 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (18)..(18) <220> <221> phosphorylated serine <222> (26)..(26) <400> 5 Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr 1 5 10 15 Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 20 25 30 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated tyrosine <222> (14)..(14) <400> 6 Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr Gly Leu 1 5 10 15 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated threonine <222> (7)..(7) <220> <221> phosphorylated serine <222> (9)..(9) <400> 7 Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg 1 5 10 15 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (7)..(7) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (10)..(10) <400> 8 Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg 1 5 10 15 <210> 9 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (4)..(4) <220> <221> phosphorylated serine <222> (9)..(9) <400> 9 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 1 5 10 15 Ile Asp <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (3)..(3) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (6)..(6) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (13)..(13) <220> <221> phosphorylated serine <222> (15)..(15) <400> 10 Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu 1 5 10 15 Pro <210> 11 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (3)..(3) <400> 11 His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> phospho-tau peptide <220> <221> phosphorylated serine <222> (6)..(6) <400> 12 Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 1 5 10 <210> 13 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T50 T cell epitope <220> <221> C-terminal amide <222> (55)..(55) <400> 13 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Val Val Arg 1 5 10 15 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Val 20 25 30 Val Arg Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys 35 40 45 Val Ser Ala Ser His Leu Glu 50 55 <210> 14 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T46 T cell epitope <220> <221> palmitoylated lysine <222> (54)..(54) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (55)..(55) <220> <221> C-terminal amide <222> (55)..(55) <400> 14 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu Lys Lys 50 55 <210> 15 <211> 75 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T48 helper T cell epitope <220> <221> C-terminal amide <222> (75)..(75) <400> 15 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu Gly Ser Leu Ile Asn Ser Thr Lys Ile Tyr Ser 50 55 60 Tyr Phe Pro Ser Val Ile Ser Lys Val Asn Gln 65 70 75 <210> 16 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T51 helper T cell epitope <220> <221> C-terminal amide <222> (53)..(53) <400> 16 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Arg Arg Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu 50 <210> 17 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T52 helper T cell epitope <220> <221> C-terminal amide <222> (53)..(53) <400> 17 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Arg Lys Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Arg Lys 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu 50 <210> 18 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 2006 <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (1)..(24) <400> 18 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 19 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 1018 <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (1)..(22) <400> 19 tgactgtgaa cgttcgagat ga 22 <210> 20 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 2395 <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (1)..(22) <400> 20 tcgtcgtttt cggcgcgcgc cg 22 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 2216 <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (1)..(3) <220> <221> phosphodiester (po) internucleotide linkages <222> (3)..(14) <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (14)..(20) <400> 21 gggggacgat cgtcgggggg 20 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CpG 2336 <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (1)..(4) <220> <221> phosphodiester (po) internucleotide linkages <222> (4)..(15) <220> <221> phosphorothioate (ps) internucleotide linkages <222> (15)..(21) <400> 22 ggggacgacg tcgtgggggg g 21 <210> 23 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Pan DR epitope (PADRE) peptide <400> 23 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 24 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2 <400> 24 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu 1 5 10 15 <210> 25 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P30 <400> 25 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 1 5 10 15 Ala Ser His Leu Glu 20 <210> 26 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TT586-605 <400> 26 Leu Ile Asn Ser Thr Lys Ile Tyr Ser Tyr Phe Pro Ser Val Ile Ser 1 5 10 15 Lys Val Asn Gln 20 <210> 27 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide (palmitoylated 7.1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (10)..(10) <220> <221> phosphorylated serine <222> (13)..(13) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (16)..(16) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (24)..(24) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (25)..(25) <400> 27 Lys Lys Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr 1 5 10 15 Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Lys Lys 20 25 <210> 28 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide (T3, palmitoylated T3.5) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (6)..(6) <220> <221> phosphorylated serine <222> (14)..(14) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (19)..(19) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <400> 28 Lys Lys Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg 1 5 10 15 His Leu Lys Lys 20 <210> 29 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide (palmitoylated 22.1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (13)..(13) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (18)..(18) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (21)..(21) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (22)..(22) <400> 29 Lys Lys Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu 1 5 10 15 Ala Thr Leu Ala Lys Lys 20 <210> 30 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (19)..(19) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <400> 30 Lys Lys Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg 1 5 10 15 His Leu Lys Lys 20 <210> 31 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (20)..(20) <220> <221> phosphorylated serine <222> (28)..(28) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (33)..(33) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (34)..(34) <400> 31 Lys Lys Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile 1 5 10 15 Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu 20 25 30 Lys Lys <210> 32 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated tyrosine <222> (16)..(16) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (19)..(19) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <400> 32 Lys Lys Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr Tyr 1 5 10 15 Gly Leu Lys Lys 20 <210> 33 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (9)..(9) <220> <221> phosphorylated serine <222> (11)..(11) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (19)..(19) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <400> 33 Lys Lys Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro 1 5 10 15 Thr Arg Lys Lys 20 <210> 34 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (9)..(9) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (12)..(12) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (19)..(19) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <400> 34 Lys Lys Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg 1 5 10 15 Ser Arg Lys Lys 20 <210> 35 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (6)..(6) <220> <221> phosphorylated serine <222> (11)..(11) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (21)..(21) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (22)..(22) <400> 35 Lys Lys Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr 1 5 10 15 Gly Ser Ile Asp Lys Lys 20 <210> 36 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (5)..(5) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (8)..(8) <220> <221> phosphorylated threonine <222> (15)..(15) <220> <221> phosphorylated serine <222> (17)..(17) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (20)..(20) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (21)..(21) <400> 36 Lys Lys Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro 1 5 10 15 Ser Leu Pro Lys Lys 20 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (5)..(5) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (15)..(15) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (16)..(16) <400> 37 Lys Lys His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Lys Lys 1 5 10 15 <210> 38 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> palmitoylated phospho-tau peptide <220> <221> palmitoylated lysine <222> (1)..(1) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (2)..(2) <220> <221> phosphorylated serine <222> (8)..(8) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (13)..(13) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (14)..(14) <400> 38 Lys Lys Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Lys Lys 1 5 10 <210> 39 <211> 55 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T50 without the C-terminal amide <400> 39 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Val Val Arg 1 5 10 15 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Val 20 25 30 Val Arg Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys 35 40 45 Val Ser Ala Ser His Leu Glu 50 55 <210> 40 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T46 without the palmitoylated lysines and C-terminal amide <400> 40 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu 50 <210> 41 <211> 75 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T48 without the C-terminal amide <400> 41 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly Ser 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu Gly Ser Leu Ile Asn Ser Thr Lys Ile Tyr Ser 50 55 60 Tyr Phe Pro Ser Val Ile Ser Lys Val Asn Gln 65 70 75 <210> 42 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T51 without the C-terminal amide <400> 42 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Arg Arg Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu 50 <210> 43 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T52 without the C-terminal amide <400> 43 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Arg Lys Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Arg Lys 20 25 30 Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 35 40 45 Ala Ser His Leu Glu 50 <210> 44 <211> 57 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T57 <220> <221> palmitoylated lysine <222> (56)..(56) <220> <221> palmitoylated lysine <222> (57)..(57) <220> <221> C-terminal amide <222> (57)..(57) <400> 44 Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Val Val Arg 1 5 10 15 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Val 20 25 30 Val Arg Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys 35 40 45 Val Ser Ala Ser His Leu Glu Lys Lys 50 55

Claims (18)

1. 항-인산화 타우 항체의 유도를 필요로 하는 인간 대상에서 심각한 유해 사건의 유도없이 항-인산화 타우 항체를 유도하는 방법으로서, 톨-유사 수용체 4 작용제 및 서열 번호 1 내지 서열 번호 3 및 서열 번호 5 내지 서열 번호 12로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한 타우 포스포펩티드를 포함하는 리포솜의 유효량을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 타우 포스포펩티드는 용량당 약 25 nmole 내지 약 750 nmole의 양으로 투여되고, 타우 포스포펩티드는 리포솜의 표면상에 제시되는 방법.
2. 제1항에 있어서, 타우 포스포펩티드는 서열 번호 27 내지 서열 번호 29 및 서열 번호 31 내지 서열 번호 38로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어지고, 바람직하게는 타우 포스포펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열로 이루어진, 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 100 ㎍ 내지 2500 ㎍의 타우 포스포펩티드, 바람직하게는 용량당 300 ㎍ 내지 2400 ㎍, 용량당 300 ㎍ 내지 1800 ㎍, 또는 용량당 300 ㎍ 내지 900 ㎍의 타우 포스포펩티드를 포함하는, 방법.
4. 제3항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 300 ㎍, 용량당 900 ㎍, 용량당 1800 ㎍ 또는 용량당 2400 ㎍의 타우 포스포펩티드를 포함하는, 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜은 피하 투여되는, 방법.
6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜은 근육내로 투여되는, 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 초기 투여 후 1 내지 24 주에 리포솜의 유효량 제2 용량을 대상에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜은 헬퍼 T-세포 에피토프 및 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 방법.
9. 제8항에 있어서, 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18 내지 서열 번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 갖고, 여기서 CpG 올리고뉴클레오티드는 하나 이상의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드간 연결을 갖고, CpG 올리고뉴클레오티드는 임의로 PEG 링커를 통해 적어도 하나의 친유성 기에 공유 결합된, 방법.
10. 제9항에 있어서, CpG 올리고뉴클레오티드는 PEG 링커를 통해 적어도 하나의 친유성 기에 공유 결합된, 방법.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜은 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤(DMPG) 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지질을 추가로 포함하는, 방법.
12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13 내지 서열 번호 17, 서열 번호 23 내지 서열 번호 26, 및 서열 번호 39 내지 서열 번호 44로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
13. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 약 2 nmole 내지 약 110 nmole의 양으로 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함하는, 방법.
14. 제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 25 ㎍ 내지 620 ㎍, 바람직하게는 용량당 75 ㎍ 내지 450 ㎍의 양으로 서열 번호 13 내지 서열 번호 17, 서열 번호 23 내지 서열 번호 26, 및 서열 번호 39 내지 서열 번호 44로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 헬퍼 T-세포 에피토프를 포함하고, 바람직하게는 헬퍼 T-세포 에피토프는 서열 번호 13의 아미노산 서열로 이루어진 T50 헬퍼 T 세포 에피토프인, 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 30 ㎍ 내지 900 ㎍, 바람직하게는 용량당 100 ㎍ 내지 585 ㎍의 양으로 톨-유사 수용체 4 작용제를 포함하고, 바람직하게는 톨 유사 수용체 4 작용제는 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실인, 방법.
16. 제8항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜의 유효량은 용량당 50 ㎍ 내지 1250 ㎍, 바람직하게는 용량당 150 ㎍ 내지 800 ㎍의 양으로 서열 번호 18 내지 서열 번호 22로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오티드 서열을 갖는 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 바람직하게는 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열로 이루어진, 방법.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜은
    (1) 서열 번호 28의 아미노산 서열을 갖는 타우 포스포펩티드;
    (2) 모노포스포릴 헥사-아실 지질 A, 3-데아실을 포함하는 톨-유사 수용체 4 작용제;
    (3) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 헬퍼 T-세포 에피토프;
    (4) 서열 번호 18의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 지질화된 CpG 올리고뉴클레오티드; 및
    (5) 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포콜린(DMPC), 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포릴-3'-rac-글리세롤 및 콜레스테롤로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지질(DMPG)을 포함하는, 방법.
18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 대상은 알츠하이머병, 바람직하게는 초기 알츠하이머병, 알츠하이머병으로 인한 경도 인지 장애(MCI), 또는 경도 내지 중등도 알츠하이머병의 치료를 필요로 하는 방법.

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